Разработка методики количественного определения суммы полифинольных соединений в подземных органах сабельника болотного Comarum palustre L

О. Л. Сайбель, Т.Д. Даргаева, ЛН Зайко. Разработка методики количественного определения суммы полифи-нольных соединений в подземных органах сабельника болотного COMARUMPALUSTREL.

3. Если у пациентов на фоне хронического течения хронического вирусного гепатита выявлена дискинезия желчевыводящих путей по гипомоторному типу или постхоле-цистэктомический синдром, то желательно дополнительно назначать овесол в терапевтических дозах в течение 3-4 недель. Средства фитотерапии позволяют получить стабильный лечебный эффект, повысить его результативность, уменьшить вероятность побочных эффектов при проведении лечения, а по материальным затратам значительно уступает полихимиотерапии .

Литература

1. Зверьков ИВ. Оценка терапии препаратом си-лимар хронического гепатита с синдромом холестаза / И.В. Зверьков, Л.В. Масловский, О Н. Минушкин // Человек и лекарство: тез. докл. IX Рос. нац. конгресса. -М., 2002. - С. 167.

2. Корсун В.Ф., Лекарственные растения в гепато-логии / В.Ф. Корсун, С.М. Николаев и соавт. - М., 2005. - 274 с.

3. Корсун Е.В. Обоснование возможности применения растительных лектинов при некоторых вирусных

инфекциях: дис. канд. ... мед. наук / Е.В. Корсун. - М., 2004. - 27 с.

4. Кривцова Л.А. Использование ЛИВ-52 в лечении детей с хроническими гепатитами / Л.А. Кривцова // Человек и лекарство: тез. докл. VIII рос. нац. конгресса. - М., 1999. - С. 186.

5. Масловский Л.В. Опыт применения препарата сибектан у больных хроническими вирусными гепатитами / Л.В. Масловский // Человек и лекарство: тез докл. IX Рос. нац. конгресса. - М., 2002. - С. 286.

6. Нартов П.В. Протефлазид в комплексном лечении больных с острым вирусным гепатитом В / П.В. Нартов, О.В. Волобуева // Гепатиты в практике терапевта, семейного врача и инфекциониста. Современные методы диагностики и терапии: материалы науч.-практ. конф. - Харьков, 2003. - С. 181-182.

7. Николаев С.М. Растительные лекарственные препараты при повреждениях гепатобилиарной системы / С.М. Николаев - Новосибирск, 1992. - 155 с.

8. Онищенко Г.Г. Вирусные гепатиты - проблема планетарного масштаба / Г.Г. Онищенко // Мед. курьер -2002,-№1-2.-С. 13-15.

9. Погорельская Л.В. Фитотерапия в инфекционной практике / Л.В. Погорельская, В.Ф. Корсун, М.Х. Гурьянов, Ю.С, Журавлев. -М., 1998. - 144 с.

10. Корсун Е.В. Фитотерапия хронических заболеваний печени: дис. д-ра ...мед. наук / Е.В. Корсун - М., 2007. - 28 с.

Корсун Елена Владимировна - доктор медицинских наук, доцент кафедры фитотерапии ФПКМР Российского университета дружбы народов, Москва.

УДК 615.9

Разработка методики количественного определения суммы полифинольных соединений в подземных органах сабельника болотного COMARUMPALUSTREL.

О.Л. Сайбель, Т.Д. Даргаева, Л.Н. Зайко

Корневища с корнями сабельника болотного являются перспективным лекарственным растительным сырьем для создания на его основе лекарственного средства для лечения и профилактики воспалительных заболеваний опорно-двигательного аппарата. С целью стандартизации этого растительного сырья разработана спектрофотометрическая методика количественного определения содержания суммы полифенольных соединений в пересчете на (Д-катехин С помощью разработанной методики определены оптимальные сроки заготовки сырья и норма содержания полифенольных соединений в корневищах с корнями сабельника болотного, включенная в проект нормативной документации.

Elaboration of the assay technique for the determination of the polyphenol compounds in subterranean parts of the COMARUM PALUSTRE L.

O.L. Saybel, T.D. Dargaeva, L.N Zayko

Rhizomes with roots of Comarum palustre L. ha\>e great potential as a plant raw material to create on its base a medicine for support-impellent apparatus inflammatory disease treatment and prophylactic. In order to standardize this plant raw material, the technique of spectrophotometry assay was developed to determine total content of polyphenols, recalculated with reference to (Д-catechin. With help of the elaborated technique the optimal period for laying-in of raw material and limit ofpolyphenols content in rhizomes with roots of Comarum palustre L., included into the normative documentation were determined.

13 России, как и в других разви тых странах мира, заболевания опорно-двигательного аппарата (ОДА) представляют собой важнейшую социальную проблему, принося страдание многим людям и огромные экономиче-

ские потери обществу. Медико-соииальное значение ревматических патологий определяется, в первую очередь, широким распростра-

нением хронических воспалительных и дегенеративных заболеваний опорно-двигательного аппарата (ревматоидный артрит, остео-артроз, подагра, спондилиты, остеопороз) [8]. Современные синтетические противовоспалительные средства для лечения подобных болезней являются в той или иной степени эффективными, однако их применение зачастую связано с возникновением побочных эффектов у больных [7]. Использование аналогичного1 действия препаратов на основе лекарственного растительного сырья (ЛРС) считается более безопасной терапией, поскольку комплекс биологически активных веществ (БАВ), обусловливающих терапевтическое действие фитопрепаратов, обладает малой токсичностью и лучшей переносимостью. Это особенно важно при длительном лечении и для профилактики хронических заболеваний [5].

В связи с этим актуальным является поиск и разработка новых лекарственных средств растительного происхождения, оказывающих противовоспалительное действие при патологиях ОДА. Перспективным в этом отношении представляется получение таких препаратов на основе сабельника болотного {Сотагит palustre L.) На протяжении многих лет сабельник болотный находит широкое применение в народной медицине. В настоящее время установлено, что настойка из подземной части сабельника оказывает выраженное противовоспалительное действие у больных с ревматоидным, реактивным артритом и другими заболеваниями ОДА в фазе обострения [4]. В ходе фармакологического исследования биологической активности сухого экстракта из корневищ сабельника болотного в опытах на животных нами выявлено, что он обладает противовоспалительным и диуретическим действием. С целью стандартизации нового вида лекарственного растительного сы-

рья, перспективного для внедрения в практику официальной медицины нами разработана методика количественного определения суммы полифенольных соединений в корневищах с корнями сабельника болотного.

Объектами исследования являлись образцы опытных партий корневищ с корнями сабельника болотного, заготовленные в 20032006 гг. на территории Московской, Новгородской, Смоленской и Пензенской областях. Согласно данным литературы, преобладающей группой БАВ в подземной части сабельника болотного являются полифенольные соединения, преимущественно конденсированного ряда (катехины). Опубликованные ранее работы [3, 6] содержат данные о количественном определении танинов в подземных органах сабельника методом перманганатометри-ческого титрования (метод Левенталя) с предварительным осаждением 5% раствором желатина и без него; а также методом спектро-фотометрического определения конденсированных и мономерных катехиновщ пересчете на танин. При разработке методики количественного определения катехинов предпочтительным является использование спектрофо-тометрического метода, который позволяет оценить содержание полифенолов, обладающих максимумом поглощения при длине волны 270-280 нм [2]. В связи с этим нами разработана методика количественного определения суммы полифенольных соединений методом спектрофотометрии с использованием стандартного образца (+)-катехина. С помощью спектрофотометра Сагу 100 Scan Varían (США) установлено, что УФ-спектр спиртового извлечения из корневищ с корнями сабельника болотного практически идентичен спектру (+)-кагехина и имеет максимум поглощения при 279±1 нм (рис. 1).

1 . o

О.Н Í

*Л

0.4 !

0.2 <

I

0.0 -

300

Wavelength

Рис. 1 УФ-спектр поглощения раствора (+)-катехина (1) и 50% спиртового извлечения из корневищ с корнями сабельника болотного (2) Таким образом, в качестве аналитической и проводить количественное определение длины волны возможно использовать 279 нм суммы полифенольных соединений в пере-

O .S --

250

350

200

О.Л. Сайбелъ, Т.Д. Даргаева, ЛН. Зайко. Разработка методики количественного определения суммы нолифи-нолъных соединений в подземных органах сабельника болотного COMARUMPALUSTREL.

счете на (±)-катехин. Ранее (±)-катехин был нами выделен из подземных органов сабельника болотного в кристаллическом состоянии [1]. Для количественного определения аналитическую пробу сырья следует измельчать до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм. Более мелкое измельчение приводит к получению после фильтрации мутного извлечения и, как следствие, к искажению результатов количественного определения. При использовании сырья, измельченного до 3 мм, достигается максимальный переход целевых БАВ в экстракт, который представляет собой прозрачное извлечение. Установлено также, что оптимальными условиями для экстракции является нагревание на водяной бане с обратным холодильником в течение 1 часа, при использовании в качестве экстрагента 50% спирта этилового, соотношение сырья и экстрагента 1:50. Расчет содержания суммы полифенолов осуществляли с использованием удельного показателя поглощения, значение которого установлено нами экспериментально на стандартном образце (  )-катехина фирмы «Sigma» (кат. № С1251). Для подавления ионизации фенольных гидроксилов и установления определенного значения pH при количественном определении измерение оптической плотности проводили в подкисленном спирте этиловом 50% Приготовление спирта этилового 50% подкисленного: в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мл спирта этилового 50%, прибавляют 1 мл 1% раствора кислоты хлористоводородной, перемешивают, объем раствора доводят спиртом этиловым 50% до метки, перемешивают.

Методика проведения анализа: около

1,0000 г (точная навеска) сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь

сито с отверстиями диаметром 3 мм, помещают в плоскодонную колбу с притертой пробкой вместимостью 200 мл, прибавляют 50 мл спирта этилового 50%. Колбу закрывают, взвешивают с погрешностью ±0,01 г, затем присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 ч с момента закипания растворителя. Колбу с извлечением охлаждают до комнатной температуры, закрывают пробкой, взвешивают и доводят массу колбы до первоначальной спиртом этиловым 50%, перемешивают. Извлечение фильтруют через складчатый бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата.

0,5 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 10 мл спирта этилового 50% подкисленного, перемешивают и объем раствора доводят до метки тем же растворителем (раствор А). Оптическую плотность раствора А измеряют на спектрофотометре при длине волны 279 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют спирт этиловый 50% подкисленный.

Содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на (±)-катехин (X) пересчете и абсолютно сухое сырье в процентах рассчитывают по формуле:

Х= Р • 50 • 25 • 100 144  ш • 0,5 • (ЮОЛУ),

где В - оптическая плотность испытуемого раствора; ш навеска сырья в граммах, 144 -удельный показатель поглощения (±)-катехина при 279 нм в спирте этиловом 50% подкисленном, \У - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Метрологические характеристики количественного определения суммы полифеноль-ных соединений представлены в таблице 1.

Таблица 1

Метрологические характеристики методики количественного определения содержания суммы полифе-нольных соединений в пересчете на)-катехин в корневищах с корнями сабельника болотного

f X S2 S Р,% t(f,P) АХ Е,%

9 13,62 0,7889 0,8882 95 2,23 0,6263 ±4,6

Относительная ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет ± 4,6%. Отсутствия систематической ошибки методики подтверждено в «опы-

тах с добавками» (±)-катехина непосредственно к навеске сырья перед экстракцией. Полученные результаты приведены в таблице 2.

Относительная ошибка результатов опы- нами изучено содержание суммы полифе-

Результаты опытов с добавками (+)-катехина Таблица 2

Найдено полифенольных соединений в сырье, г Добавлено (+)-катехина, г Должно быть, г Найдено, г Относительная ошибка,%

0,2360 0,0024 0,2384 0,2459 + 3,13

0,2433 0,0039 0,2472 0,2468 -0,16

0,2495 0,0059 0.2554 0,2505 - 1,90

тов с добавками не превышает относительную ошибку единичного определения и имеет отклонения в сторону как положительных, так и отрицательных значений, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки в предлагаемой методике анализа.

Поскольку накопление БАВ значительно варьирует в процессе онтогенеза растений,

нольных соединений в сырье в зависимости от фазы вегетации сабельника болотного. Исследование проведено на двух образцах сырья, собранных в Солнечногорском районе Московской области (образец 1) и Валдайском районе Новгородской области в 2006 г. (образец 2). Данные представлены в таблице 3.

Таблица 3

Динамика накопления суммы полифенольных соединений в корневищах с корнями сабельника болотного по фазам вегетации

Фаза вегетации растения Содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин и абсолютно сухое сырье

Образец 1 Образец 2

Начало вегетации 10,66 10,29

Период бутонизации 11,52 10,35

Массовое цветение 11,37 10,44

Плодоношение 11,86 10,79

Конец вегетации 12,09 10,81

Приведенные данные свидетельствуют, что наибольшее содержание полифенольных соединений наблюдается в фазе конца вегетации (увядания). В связи с этим заготовку лекарственного растительного сырья сабельника болотного целесообразно проводить осенью после завершения плодоноше-

ния. Образование и накопление веществ в растении зависит также от места его произрастания. В связи с этим нами исследованы образцы сырья, заготовленные в фазе конца вегетации в различных регионах РФ. Полученные данные представлены в таблице 4.

Таблица 4

Содержание суммы полифенольных соединений в корневищах с корнями в зависимости от места произрастания сабельника болотного

Место сбора Дата сбора Содержание суммы полифе-нольных соединений в пересчете на (+)-катехин и абсолютно сухое сырье

Московская обл. Август 2003 12,3

Московская обл., Шатурский р-он (зарастающий карьер) Август 2004 13,26

Московская обл., Шатурский р-он (зарастающий карьер) Август 2005 11,33

Пензенская обл., Выезд из д. Чаадаевка (болото) Август 2005 13,17

Смоленская обл., Велижский р-он, окрестности д. Цы-ганы (затопленный берег пруда) Август 2005 12,65

Новгородская обл., Валдайский р-он, пос. Шуя (болото) Август 2005 11,72

Владимирская обл., Гусь-Хрустальный р-он (болото, берега рек, озер) Сентябрь 2004 11,33

О.Л. Сайбель. Перспективы использования травы мальвы лесной в качестве лекарственного растительного сырья

Алтайский край, г. Барнаул Август 2005 10,19

Бурятия, Кабанский р-он, окрестности пос. Боярск Август 2005 11,94

Бурятия, Баргузинский р-он, окрестности пос. Монахово берег озера Байкал Август 2005 14,20

Московская обл., Солнечногорский р-он Сентябрь 2006 12,09

В сырье сабельника, заготовленном в разных местах ареала растения, содержится различное количество полифенольных соединений. Норму по этому показателю в проекте нормативной документации предлагаем установить не менее 10%.

Разработан метод количественного определения в корневищах с корнями сабельника болотного содержания суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)-катехин. Ошибка единичного определения с 95% доверительной вероятностью составляет ± 4,6%. С

Литература

1. Жукова О.Л. Выделение (+)-катехина из корневищ сабельника болотного Comarum palustre L. / О.Л. Жукова, В.А Стихии, В.И. Шейченко, Т.Д. Дар-гаева // Сборник трудов ВИЛАР. - М., 2006. - С. 260-265.

2. Запрометов М.Н. Основы биохимии природных соединений / М.Н. Запрометов. - М., 1974.

3. Наумчик Г.Н. Фитохимическое исследование сабельника болотного и приготовление из него некоторых лекарственных препаратов: дис. ... канд. фарм. наук /Г.Н. Наумчик. - Л., 1964.

4. Прокопьева Л.Г. и др. Об исследовании влияния БАД «Сабельник-Эвалар» в комплексном лечении воспалительных и обменно-дистрофических заболеваний опорно-двигательного аппарата / Л.Г. Прокопьева, А.К. Виноградов, Л.Г. Калачикова и др. //

помощью разработанного метода установлены рекомендуемые сроки заготовки подземных органов сабельника болотного: август-сентябрь.

На основании результатов анализа образцов сырья различных лет и мест заготовки установлена норма содержания этих БАВ в корневищах с корнями сабельника болотного не менее 10%, включенная в проект нормативной документации.

Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы VII междунар. съезда. - Пушкин, 2003. -С. 454-457.

5. Фитотерапия с основами клинической фармакологии / под ред. В Г. Кукеса. - М, 1999.

6. Чемесова И.И. Определение дубильных веществ в корневищах Comarum palustre L и настойки из него спектрофотометрическим методом / И.И. Чемесова, Д.В. Чижиков // Растительные ресурсы. - 2003. -Т.40 -Вып. 3.-С. 122-130.

7. Шварц Г.Я. Современные нестероидные противовоспалительные средства / Г.Я. Шварц. - М., 2002.

8. Эрдес Ш.Ф. Проблема ревматических заболеваний в России / ШФ. Эрдес, О.М. Фоломеева // Русский медицинский журнал. - 2004. - Т.12. - №12. - С. 1121-1123.

Сайбель Ольга Леонидовна- кандидат медицинских наук, ВИЛАР, Москва.

Даргаева Тамара Дарижаповна - доктор фармацевтических наук, профессор, ВИЛАР, Москва. ЗайкоЛюдмила Николаевна- доктор фармацевтических наук, профессор, ВИЛАР, Москва.

УДК 615.9

Перспективы использования травы мальвы лесной в качестве лекарственного растительного сырья

О.Л. Сайбель

Состав в виде сухого вещества позволяет определить его оптимальное количество для профилактики и лечения болезней почек.

Prospects of use of a grass of MALVA SILVESTRISL. as medicinal vegetative raw materials

O.L. Saibel

The original and a composition with substitutes in the form of dry extracts are transferred to preliminary pharmacological examination which will allow to define an optimum composition for preventive maintenance and treatment of diseases of kidneys.

В настоящее время все большее внима- болеваний уделяется препаратам растигель-

ние в лечении и профилактике различных за- ного происхождения. Эффективность приме-