КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОПУХОЛИ
COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DISEASE

ОБЛАСТЬ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к композициям и способам для лечения опухолевого роста, включая рецидивирующий или рефрактерный опухолевый рост, с использованием антагонистов VEGF в режиме монотерапии или в комбинации с другими лекарственными средствами.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Опухоли характеризуются патологическим разрастанием клеток и могут быть злокачественными или доброкачественными. Плазматические клетки (также называемые плазматическими В-клетками или плазмоцитами) развиваются из зрелых В-лимфоцитов (В-клеток) и обычно секретируют антитела для борьбы с чужеродными элементами в организме (например, бактериями или вирусными инфекциями). Наличие плазмоклеточных опухолей может снизить активность здоровых эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Это состояние может привести к анемии или кровоточивости или снизить сопротивляемость инфекциям. Патологические плазматические клетки часто образуют опухоли в костях или мягких тканях организма. Плазмоклеточные опухоли также могут вырабатывать большое количество одного антитела, называемого М-белком (или моноклональным белком, миеломным белком или парапротеином), который не является необходимым для организма, не помогает бороться против инфекции и может вызвать повреждение почек. В некоторых случаях злокачественные плазматические клетки теряют способность синтезировать и соединять тяжелые и легкие цепи, в результате чего легкие цепи каппа и лямбда (также называемые белком Бенс-Джонса) выходят из клетки в кровь по отдельности и экскретируются с мочой. Примеры плазмоклеточных опухолей включают множественную миелому (MM, ММ), солитарную плазмоцитому кости (SPB, СПК), плазмоклеточные лейкозы и экстрамедуллярные плазмоцитомы (EMP, ЭМП).
2
Множественная миелома (MM, ММ) представляет собой злокачественную опухоль, характеризующуюся экспансией плазматических В-клеток, которые вырабатывают моноклональный иммуноглобулин (например, IgG, IgA, IgD, IgE или свободные каппа или лямбда-цепи). Общая выживаемость больных ММ сильно варьирует от нескольких месяцев до многих лет, составляя в среднем приблизительно пять лет. Анемия, гиперкальциемия и костные очаги коррелируют непосредственно с общей массой клеток миеломы и имеют важное прогностическое значение. Другие прогностические факторы включают возраст, пролиферативный индекс плазматических клеток, уровень β-микроглобулина сыворотки, C-реактивного белка, тимидинкиназы и растворимого рецептора интерлейкина-6. Серьезные осложнения, такие как инфекция и почечная недостаточность, являются самыми частыми причинами смерти больных миеломой. Почти у всех больных множественной миеломой существует риск возможного рецидива (Kyle, RK et al., (2004) N Engl J Med 351:1860-1873).
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к способу лечения рецидивирующей или рефрактерной к лечению ингибиторами протеасом опухоли у пациента, предусматривающему стадию введения антагониста VEGF. Настоящее изобретение также относится к способу лечения рецидивирующей или рефрактерной к алкилирующим средствам плазмоклеточной опухоли у пациента, предусматривающему стадию введения антагониста VEGF. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения рецидивирующей или рефрактерной опухоли у пациента, предусматривающему стадию введения антагониста VEGF и ингибитора протеасом. Настоящее изобретение дополнительно относится к способу лечения рецидивирующей или рефрактерной опухоли у пациента, предусматривающему стадию введения антагониста VEGF и талидомида или аналога талидомида.
Согласно одному варианту осуществления пациенту с рецидивирующей или рефрактерной опухолью дополнительно вводится талидомид или аналог талидомида. Согласно другому варианту осуществления пациенту с рецидивирующей или рефрактерной опухолью дополнительно вводится ингибитор протеасом. Согласно другому варианту осуществления пациенту с рецидивирующей или рефрактерной опухолью вводится антагонист VEGF в виде монотерапии.
Согласно еще одному варианту осуществления пациенту с рецидивирующей или рефрактерной опухолью дополнительно вводится дополнительное терапевтическое средство. Согласно одному варианту осуществления дополнительное терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из алкилирующего средства, стероида, бисфосфонатов и ингибитора протеасом. Согласно другому варианту осуществления дополнительное терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из мелфалана, преднизона, талидомида, адриамицина (доксорубицина), липосомного доксорубицина гидрохлорида для инъекций (Доксил), бортезомиба (Велкейд), леналидомида (CC-5013, Ревлимид), дексаметазона, винкристина (Онковин), кармустина и циклофосфамида (Цитоксан).
Согласно еще одному варианту осуществления пациенту с рецидивирующей или рефрактерной опухолью дополнительно проводится комбинированная терапия. В одном варианте осуществления комбинированная терапия выбрана из группы, состоящей из комбинации мелфалан/преднизон (MP), комбинации мелфалан/преднизон/талидомид (MPT), комбинации доксил/бортезомиб, комбинации талидомид/дексаметазон (TD), комбинации бортезомиб/доксорубицин/талидомид/дексаметазон (BATD), комбинации бортезомиб/талидомид (BT), комбинации бортезомиб/мелфалан/дексаметазон/талидомид (BMDT), комбинации бортезомиб/мелфалан/преднизон/талидомид(BMPT), комбинации бортезомиб/пэгилированный липосомальный доксорубицин/талидомид (BTD), бортезомиб/циклофосфамид/преднизон (BCP), комбинации винкристин/кармустин/мелфалан/циклофосфамид/преднизон (VBMCP) и комбинации винкристин/доксорубицин/дексаметазон (VAD).
В одном варианте осуществления ингибитор протеасом ингибирует протеасомы человека 20S или 26S. В другом варианте осуществления ингибитор протеасом выбран из группы, состоящей из бортезомиба, MG132, лактацистина, эпоксомицина и салиноспорамида A. В одном предпочтительном варианте осуществления ингибитором протеасом является бортезомиб. В другом варианте осуществления алкилирующим средством является мелфалан.
Согласно одному варианту осуществления опухоль представляет собой рак. Согласно другому варианту осуществления рак выбран из группы, состоящей из рака легкого (включая мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого и плоскоклеточный рак легкого), рака брюшины, гепатоцеллюлярного рака, рака желудка (включая рак желудочно-кишечного тракта), рака поджелудочной железы, глиобластомы, рака шейки матки, рака яичников, рака печени, рака мочевого пузыря, гепатомы, рака молочной железы, рака ободочной кишки, колоректального рака, рака эндометрия или матки, рака слюнной железы, рака почки или ренального рака, рака печени, рака простаты, рака вульвы, рака щитовидной железы, гепатокарциномы, рака носоглотки, глиомы, рака головы и шеи и гематологических злокачественных опухолей или гемобластозов (например, В-клеточная опухоль). Согласно одному варианту осуществления гемобластоз выбран из группы, состоящей из В-клеточных лимфом, В-клеточных лейкозов, Т-клеточных лимфом и Т-клеточных лейкозов. Согласно одному варианту осуществления B-клеточная лимфома представляет собой неходжкинскую лимфому (NHL, НХЛ). В следующем варианте осуществления NHL (НХЛ) выбрана из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы, мантийноклеточной лимфомы (MCL, МКЛ); и лимфомы маргинальной зоны. В другом варианте осуществления гемобластоз выбран из группы, состоящей из хронического лимфолейкоза (CLL, ХЛЛ); острого лимфобластного лейкоза (ALL, ОЛЛ); волосатоклеточного лейкоза; хронического миелоидного лейкоза и множественной миеломы.
Согласно одному варианту осуществления плазмоклеточная опухоль выбрана из группы, состоящей из множественной миеломы (MM, ММ), плазмоцитомы, макроглобулинемии, моноклональной гаммапатии неясного значения (MGUS, МГНЗ), плазмоклеточного лейкоза, гиперглобулинемической пурпуры и болезни Калера. Согласно одному предпочтительному варианту осуществления плазмоклеточная опухоль представляет собой множественную миелому.
Согласно одному варианту осуществления антагонист VEGF является антителом к VEGF, VEGF-Trap (например, продуктом слияния рецептора VEGF с Fc) или антителом к рецептору VEGF. Согласное еще одному варианту осуществления антитело к VEGF является антителом человека или гуманизированным антителом к VEGF. В одном предпочтительном варианте осуществления антитело к VEGF представляет собой антитело AVASTIN.
Также рассматриваются композиции, содержащие комбинации терапевтических средств, представленных в настоящем изобретении. В одном варианте осуществления композиция содержит антагонист VEGF и ингибитор протеасом. В другом варианте осуществления композиция дополнительно содержит другое терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из алкилирующего средства, стероида, бисфосфонатов и другого антагониста VEGF. Также рассматривается применение антагонистов VEGF, в отдельности или в комбинации с другими терапевтическими средствами, описанными в данном документе, для изготовления лекарственного препарата для лечения по показаниям, перечисленным в данном документе.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг.1 показаны уровни IgG человека у мыши после имплантации опухоли LAGκ-1A и последующего лечения антителом к VEGF: (A) табличная форма и (B) графическая форма.
На фиг.2 изображен объем опухоли LAGκ-1A у мыши после имплантации опухоли и последующего лечения антителом к VEGF: (A) табличная форма и (B) графическая форма.
На фиг.3 показаны уровни IgG человека у мыши после имплантации опухоли LAGκ-1B и последующего лечения антителом к VEGF: (A) табличная форма и (B) графическая форма.
На фиг.4 изображен объем опухоли LAGκ-1B у мыши после имплантации опухоли и последующего лечения антителом к VEGF: (A) табличная форма и (B) графическая форма.
На фиг.5A показаны уровни IgG человека у мыши после имплантации опухоли LAGκ-1B и последующего введения антитела к VEGF на 21-й день.
На фиг.5B изображен объем опухоли LAGκ-1B у мыши после имплантации опухоли и последующего введения антитела к VEGF на 21-й день.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Протеасомы представляют собой цилиндрические протеазы, состоящие из множества субъединиц, которые были обнаружены у эукариот, эубактерий и архебактерий. Активные сайты протеасомы ориентированы в сторону центральной камеры, погруженной в толщу цилиндрической частицы. Эукариотические протеасомы имеют два размера: 20S-протеасома и значительно более крупная АТФ-зависимая 26S-протеасома. Последняя образуется, когда 20S-протеасома связывает одну или две мультисубъединичные, содержащие АТФазу частицы, известные как 19S регуляторные комплексы. 26S-протеасома отвечает за разрушение повсеместно распространенных белков и поэтому является неотъемлемой частью самых разных клеточных процессов, включая цикл деления клетки, контроль транскрипции, регулировку уровня ферментов и апоптоз. Как 20S-, так и 26S-протеасомы могут ассоциироваться с другими белковыми комплексами.
«Ингибитор протеасом» относится к средству, которое ингибирует протеазную активность протеасом (например, любую или все активности - химотрипсиновую, трипсиновую и пептидилглутамилпептид-гидролизующую). Согласно одному предпочтительному варианту осуществления протеасома является 20S- и/или 26S-протеасомой человека. Примеры ингибиторов протеасом включают бортезомиб, MG132, лактацистин, эпоксомицин и салиноспорамид A (NPI-0052, Nereus Pharmaceutical). См., например, структуры, раскрытые Voorhees, PM et al., (2006) 46:189-213, альдегиды пептидов из WO 95/24914, WO 91/13904, Iqbal et al. (1995) J. Med. Chem. 38:2276-2277, пептид-бороновые кислоты из WO 96/13266, лактацистин и аналоги лактацистина (Fenteany et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:3358; WO 96/32105), а также салиноспорамид A (Macheria, VR, et al., (2005) 48:3684-7.
165
Термин «VEGF» или «VEGF», как используется в данном документе, относится к сосудистому фактору роста клеток эндотелия человека длиной 165 аминокислот и к близким ему сосудистым факторам роста клеток эндотелия человека длиной 121, 189 и 206 аминокислот, которые описаны Leung et al. Science, 246:1306 (1989), и Houck et al. Mol. Endocrin., 5:1806 (1991), вместе с встречающимися в природе аллельными и процессированными их формами. Термин «VEGF» также относится к VEGF видов, отличающихся от человека, таких как мышь, крыса или примат. Иногда VEGF конкретного вида указан термином, таким как hVEGF для VEGF человека, mVEGF для VEGF мыши и т.д. Термин «VEGF» также используется по отношению к укороченным формам полипептида, содержащим аминокислоты 8-109 или 1-109 сосудистого фактора роста эндотелиальных клеток человека длиной 165 аминокислот. Ссылка на любые такие формы VEGF может быть идентифицирована в настоящей заявке, например, «VEGF (8-109)», «VEGF (1-109)» или «VEGF». Положения аминокислот в «укороченном» природном VEGF нумеруются, как указано для природной последовательности VEGF. Например, аминокислота в 17 положении (метионин) в укороченном природном VEGF тоже является 17 положением (метионин) в природном VEGF. Укороченный природный VEGF обладает аффинностью к KDR и рецепторам Flt-1, сопоставимой с таковой природного VEGF.
«Антагонист VEGF» относится к молекуле, способной нейтрализовать, блокировать, ингибировать, уничтожать, снижать или вмешиваться в активность VEGF, включая его связывание с одним и более рецепторами VEGF. Антагонисты VEGF включают антитела к VEGF и их фрагменты, связывающие антиген; аптамер; рецепторные молекулы и производные, которые специфично связываются с VEGF, тем самым препятствуя его связыванию с одним или более рецепторами; антитела к рецептору VEGF и антагонисты рецептора VEGF, такие как малые молекулы-ингибиторы тирозинкиназ VEGFR. Примеры антагонистов VEGF включают, но не ограничиваются ими, FLT-Fc, KDR-Fc, FLT/KDR-Fc, ваталаниб (PTK-787/ZK222584), SU-5416 (семаксаниб), SU-6668, SU-11248, SU-14813, AZD-6474, AZD-2171, CGP-41251, CEP-5214, BIBF1000, VGA1102, CP-547632, CEP-7055, AG-013736, IM-842 (дипептид L-глутамила и L-триптофана) или GW-786034, а также антагонисты, описанные в WO 02/36564, WO 99/52869, WO 00/18734, WO 00/73297, WO 01/27080, WO 01/27081, WO 01/32651, WO 01/60814, WO 99/48868 и WO 98/35958.
«Антитело к VEGF» является антителом, которое связывается с VEGF с достаточной аффинностью и специфичностью. Предпочтительно, антитело к VEGF по изобретению может быть использовано как терапевтическое средство для «нацеливания» или воздействия на заболевание или состояние, связанное с активностью VEGF. Антитело к VEGF обычно не будет связываться с другими гомологами VEGF, например VEGF-B или VEGF-C, и другими факторами роста, например P1GF, PDGF или bFGF. Предпочтительное антитело к VEGF является моноклональным антителом, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и моноклональное антитело к VEGF A4.6.1, вырабатываемое гибридомой ATCC HB 10709. Более предпочтительно антитело к VEGF представляет собой рекомбинантное гуманизированное моноклональное антитело к VEGF, полученное по Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599, включая, без ограничения, антитело, известное как бевацизумаб (BV; антитело AVASTIN).
Антитело к VEGF «бевацизумаб (BV)», также известное как «rhuMAb VEGF» или «AVASTIN», является рекомбинантным гуманизированным моноклональным антителом к VEGF, полученным по Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599. Бевацизумаб содержит мутантные каркасные области IgG1 человека и антигенсвязывающие, определяющие комплементарность области от мышиного моноклонального антитела к hVEGF A.4.6.1, которое блокирует связывание VEGF человека с его рецепторами. Приблизительно 93% аминокислотной последовательности бевацизумаба, включая большинство каркасных областей, получено от IgG1 человека, и приблизительно 7% последовательности получены от мышиного антитела A4.6.1. Бевацизумаб имеет молекулярную массу приблизительно 149000 Да и гликозилирован.
«Рефрактерный» относится к устойчивости или отсутствию ответа заболевания или состояния на лечение (например, количество опухолевых плазматических клеток возрастает, несмотря на проводимое лечение). Если не указано иначе, термин «рефрактерный» относится к устойчивости или отсутствию ответа на любое предыдущее лечение, включая, но не ограничиваясь ими, химиотерапию и трансплантацию стволовых клеток.
«Рецидивирующий» относится к возвращению заболевания к предыдущему состоянию, особенно к возобновлению симптомов после явного или частичного выздоровления. Если не указано иначе, «рецидивирование» относится к процессу возвращения или к возвращению заболевания, имевшего место до предыдущего лечения, включая, но не ограничиваясь ими, химиотерапию и трансплантацию стволовых клеток.
Термины «рак» и «раковый» относятся к физиологическому состоянию или описывают физиологическое состояние у млекопитающих, которое обычно характеризуется нерегулируемым ростом клеток. Примеры рака включают, но не ограничиваются ими, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз. Более конкретные примеры таких типов рака включают плоскоклеточный рак, рак легкого (включая мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого и плоскоклеточный рак легкого), рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, рак желудка (включая рак желудочно-кишечного тракта), рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичников, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак ободочной кишки, колоректальный рак, рак эндометрия или матки, рак слюнной железы, рак почки или ренальный рак, рак печени, рак простаты, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному печени, рак носоглотки, глиому и различные типы рака головы и шеи, а также гематологические злокачественные опухоли или гемобластозы, например, В-клеточную лимфому (включая лимфому низкой степени злокачественности/фолликулярную неходжкинскую лимфому (NHL, НХЛ), НХЛ из мелких лимфоцитов (SL), НХЛ промежуточной степени злокачественности/фолликулярную НХЛ, диффузную НХЛ промежуточной степени злокачественности; иммунобластную НХЛ высокой степени злокачественности; лимфобластную НХЛ высокой степени злокачественности; НХЛ высокой степени злокачественности из мелких клеток с нерасщепленными ядрами; массивную НХЛ; мантийноклеточную лимфому (MCL, МКЛ); СПИД-ассоциированные лимфомы и макроглобулинемию Вальденстрема); хронический лимфолейкоз (CLL, ХЛЛ); острый лимфобластный лейкоз (ALL, ОЛЛ); волосатоклеточный лейкоз; хронический миелоидный лейкоз, множественную миелому и посттрансплантационное лимфопролиферативное заболевание (PTLD).
«В-клеточная опухоль» относится к патологическому росту В-клеток, который может быть злокачественным или доброкачественным и который часто характеризуется бесконтрольным делением клеток. В-клеточная опухоль включает, но не ограничивается ими, плазмоклеточную опухоль, болезнь Ходжкина, включая болезнь Ходжкина с лимфоидным преобладанием (LPHD); неходжкинскую лимфому (NHL, НХЛ); фолликулярные центроклеточные лимфомы (FCC); острый лимфолейкоз (ALL, ОЛЛ); хронический лимфолейкоз (CLL, ХЛЛ); волосатоклеточный лейкоз и CD20-положительные опухоли. Неходжкинская лимфома включает НХЛ низкой степени злокачественности/фолликулярную НХЛ, НХЛ из мелких лимфоцитов (SL), НХЛ промежуточной степени злокачественности/фолликулярную НХЛ, диффузную НХЛ промежуточной степени злокачественности, иммунобластную НХЛ высокой степени злокачественности, лимфобластную НХЛ высокой степени злокачественности, НХЛ высокой степени злокачественности из мелких клеток с нерасщепленными ядрами, массивную НХЛ, плазмоцитоидную лимфоцитарную лимфому; мантийноклеточную лимфому; СПИД-ассоциированные лимфомы и макроглобулинемию Вальденстрема. Лечение рецидивов этих типов рака также рассматривается. LPHD представляет собой тип болезни Ходжкина, которая имеет тенденцию к частым рецидивам, несмотря на химиотерапию или лучевую терапию. CLL (ХЛЛ) представляет собой один из четырех основных типов лейкоза. Опухоль из зрелых В-клеток, называемых лимфоцитами, CLL (ХЛЛ), проявляется прогрессирующим накоплением клеток в крови, костном мозге и лимфатических тканях. Индолентная лимфома является медленно развивающимся, неизлечимым заболеванием, при котором средняя продолжительность жизни варьирует от 6 до 10 лет, сопровождаясь многочисленными периодами ремиссии и рецидивов.
Термин «неходжкинская лимфома» или «NHL, НХЛ», как используется в данном документе, относится к раку лимфатической системы, отличающемуся от лимфомы Ходжкина. Лимфому Ходжкина, как правило, можно отличить от неходжкинской лимфомы по наличию в лимфоме Ходжкина клеток Рид-Штернберга и отсутствию указанных клеток в неходжкинской лимфоме. Примеры неходжкинских лимфом, охватываемых использующимся в настоящем документе термином, включают любую НХЛ, которая могла быть идентифицирована как таковая специалистом в данной области (например, онкологом или патоморфологом) по схемам классификации, известным в данной области, например по схеме Revised European-American Lymphoma (REAL), как описано в Color Atlas of Clinical Hematology, Third Edition; A. Victor Hoffbrand and John E. Pettit (eds.) (Harcourt Publishers Limited 2000) (см., в частности, Fig. 11.57, 11.58 и/или 11.59). Более конкретные примеры включают, но не ограничиваются ими, рецидивирующую или рефрактерную НХЛ, первичную НХЛ низкой степени злокачественности, НХЛ III/IV стадии, резистентную к химиотерапии НХЛ, лимфобластную лимфому и/или лейкоз из предшественников В-клеток, мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, В-клеточный хронический лимфолейкоз и/или пролимфоцитарный лейкоз и/или лимфому из мелких лимфоцитов, В-клеточную пролимфоцитарную лимфому, иммуноцитому и/или лимфоплазмоцитарную лимфому, В-клеточную лимфому маргинальной зоны, лимфому маргинальной зоны селезенки, экстранодальную лимфому маргинальной зоны - MALT, нодальную лимфому маргинальной зоны, волосатоклеточный лейкоз, плазмоцитому и/или плазмоклеточную миелому, лимфому низкой степени злокачественности/фолликулярную лимфому, лимфому промежуточной степени злокачественности/фолликулярную НХЛ, мантийноклеточную лимфому, лимфому центра фолликула (фолликулярную), диффузную НХЛ промежуточной степени злокачественности, диффузную В-крупноклеточную лимфому, агрессивную НХЛ (включая агрессивную первичную НХЛ и рецидив НХЛ), рецидив НХЛ после аутотрансплантации стволовых клеток или рефрактерную к нему НХЛ, первичную медиастинальную В-крупноклеточную лимфому, первичную лимфому серозных оболочек, высокозлокачественную иммунобластную НХЛ, высокозлокачественную лимфобластную НХЛ, высокозлокачественную НХЛ из мелких клеток с нерасщепленными ядрами, НХЛ с массивным поражением, лимфому Беркитта, лимфобластный лейкоз и/или лимфому из предшественников (периферических) Т-клеток, Т-клеточную лимфому и/или лейкоз взрослых, Т-клеточный хронический лимфоцитарный и/или пролимфоцитарный лейкоз, лейкоз из крупных гранулярных лимфоцитов, грибовидный микоз и/или синдром Сезари, экстранодальную лимфому (назального типа) из естественных киллерных клеток/Т-клеточную лимфому, энтеропатическую лимфому Т-клеточного типа, гепатоспленическую Т-клеточную лимфому, подкожную панникулитоподобную Т-клеточную лимфому, кожные лимфомы, анапластическую крупноклеточную лимфому, ангиоцентрическую лимфому, интестинальную Т-клеточную лимфому, периферическую Т-клеточную лимфому (без дополнительного уточнения) и ангиоиммунобластную Т-клеточную лимфому.
«Плазмоклеточная опухоль», как используется в данном документе, относится к патологическому росту плазматических клеток, который может быть злокачественным или доброкачественным и который часто характеризуется бесконтрольным делением клеток. Примеры плазмоклеточных опухолей включают множественную миелому (ММ), плазмоцитому (например, экстрамедуллярную плазмоцитому (EMP), солитарную плазмоцитому кости (SPB), злокачественную плазмоцитому), макроглобулинемию (например, макроглобулинемию Вальденстрема или лимфоплазмоцитарный лейкоз), моноклональную гаммапатию неясного значения (MGUS, МГНЗ), плазмоклеточный лейкоз, гиперглобулинемическую пурпуру и болезнь Калера.
Множественная миелома характеризуется, среди прочего, разрушением костей, почечной недостаточностью, анемией и гиперкальциемией. Общие симптомы ММ включают слабость, костную боль и рецидивирующие инфекции. По мере того как возрастает число клеток миеломы, уменьшается число эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Клетки миеломы также повреждают и ослабляют твердые части костей. Однако иногда множественная миелома не вызывает симптомов. В редких случаях множественная миелома может вызывать органную недостаточность. Это может быть обусловлено состоянием, именуемым амилоидозом. Белки-антитела синтезируются и могут связываться друг с другом и накапливаться в органах, таких как почки и сердце. В результате органы могут стать неэластичными и перестать функционировать.
Плазмоцитома представляет собой тип плазмоклеточной опухоли, при которой патологические плазматические клетки (клетки миеломы) собираются в одном месте и образуют единственную опухоль. Плазмоцитома может образоваться в костном мозге или может быть экстрамедуллярной (находиться в мягких тканях за пределами костного мозга). Плазмоцитома кости часто трансформируется во множественную миелому. Экстрамедуллярные плазмоцитомы обычно образуются в тканях глотки и придаточных пазух носа.
При макроглобулинемии патологические плазматические клетки образуются в костном мозге, лимфатических узлах и/или селезенке. Клетки производят слишком много М-белка, который становится причиной повышенной вязкости крови. Лимфатические узлы, печень и селезенка могут увеличиваться. Повышенная вязкость крови может вызвать проблемы с кровотоком в мелких кровеносных сосудах. Симптомы макроглобулинемии зависят от того, какие органы поражены. У большинства больных макроглобулинемией нет никаких симптомов. При этом типе плазмоклеточной опухоли имеются патологические плазматические клетки в костном мозге, но рак отсутствует. Патологические плазматические клетки продуцируют М-белок, который может быть обнаружен во время обычных исследований крови или мочи. У большинства пациентов количество М-белка остается постоянным и нет никаких симптомов или проблем. У некоторых пациентов MGUS (МГНЗ) может позже трансформироваться в более серьезное заболевание, такое как множественная миелома или лимфома.
Макроглобулинемия Вальденстрема (WM, МВ) является редкой индолентной (медленно растущей) неходжкинской лимфомой (рак, который возникает в клетках иммунной системы). МВ также называют лимфоплазмоцитарной лимфомой. МВ возникает в плазматических клетках, которые происходят от лейкоцитов, называемых В-лимфоцитами или B-клетками. Макроглобулинемия, поражающая пожилых, особенно женщин, характеризуется анемией, гиперглобулинемией и пролиферацией клеток, напоминающих лейкоциты или плазматические клетки, в костном мозге. При МВ патологические плазматические клетки размножаются неконтролируемо, продуцируя большое количество белка, названного моноклональным макроглобулином (IgM). Высокие уровни IgM в крови вызывают гипервязкость (сгущение или вязкость) крови, которая служит причиной многих симптомов Вальденстрема.
Примеры терапевтических средств и комбинации терапевтических средств, применимых по настоящему изобретению, включают антитело AVASTIN, бисфосфонаты, аналоги талидомида, бортезомиб, мелфалан; преднизон; талидомид; адриамицин (доксорубицин); липосомальный доксорубицина гидрохлорид для инъекций (Доксил), бортезомиб (Велкейд); леналидомид (CC-5013, Ревлимид); дексаметазон; винкристин (Онковин), кармустин, циклофосфамид (Цитоксан), комбинацию мелфалан/преднизон/талидомид (MPT); комбинацию талидомид/дексаметазон (TD); комбинации бортезомиб/доксорубицин/талидомид/дексаметазон (BATD); комбинации бортезомиб/мелфалан/дексаметазон/талидомид (BMDT); комбинации бортезомиб/мелфалан/преднизон/талидомид(BMPT); комбинации бортезомиб/пэгилированный липосомальный доксорубицин/талидомид (BTD) и другие комбинации, включающие алкилирующие средства, и комбинации, включающие кортикостероиды.
Алкилирующие средства включают, но не ограничиваются ими, мелфалан и циклофосфамид. Пример комбинированной терапии на основе алкилирующих средств включает, но не ограничивается ими, винкристин, кармустин, мелфалан, циклофосфамид, преднизон (VBMCP).
«Стероиды» включают, но не ограничиваются ими, кортикостероиды, такие как дексаметазон и преднизон. Пример комбинированной терапии на основе кортикостероида включает, без ограничения, винкристин/доксорубицин/дексаметазон (VAD).
«Бисфосфонаты» включают, но не ограничиваются ими, памидронат (например, Аредиа и другие), золедроновую кислоту (например, Зомета) и клодронат (например, Бонефос).
«Аналоги талидомида» относятся к иммуномодулирующим аналогам талидомида, включая, но не ограничиваясь ими, леналидомид (Ревлимид), CC-4047 (Актимид™), CC11006, ENMD-0995 и CC11006,. См. также, Machado, AL et al., (2002) Bioorganic & Med. Chem. Lets. 15:1169-1172; Lepper, ER et al., (2004)) J. Med. Chem. 47:2219-2217; патенты США №№7719106 и 7041680.
«Терапия ингибитором протеасом» относится к любому терапевтическому лечению, предусматривающему стадию введения ингибитора протеасом.
«Терапия алкилирующим средством» относится к любому терапевтическому лечению, предусматривающему стадию введения алкилирующего средства.
«Лечение талидомидом или аналогом талидомида» относится к любому терапевтическому лечению, предусматривающему стадию введения талидомида или аналога талидомида соответственно.
«Хроническое» введение относится к непрерывному введению средства или средств в противоположность «острому» введению, чтобы поддержать начальный терапевтический эффект (активность) длительное время.
«Прерывистое» введение представляет собой лечение, которое проводится не непрерывно, а циклично.
Введение «в комбинации с» одним или более дополнительными терапевтическими средствами включает одновременное и последовательное введение терапевтических средств в любом порядке.
«Эффективное количество» терапевтического средства, как раскрыто в данном документе, является количеством, достаточным для выполнения конкретно сформулированной цели. «Эффективное количество» может быть определено эмпирически и рядом способов, относящихся к сформулированной цели.
Термин «терапевтически эффективное количество» относится к количеству терапевтического средства по настоящему изобретению, эффективно «лечащего» заболевание или расстройство у млекопитающего (также называемого пациентом). В случае рака терапевтически эффективное количество лекарственного средства может уменьшить число раковых клеток; уменьшить размер опухоли; ингибировать (то есть до некоторой степени замедлить, а предпочтительно остановить) инфильтрацию раковых клеток в периферические органы; ингибировать (то есть до некоторой степени замедлить, а предпочтительно остановить) метастазирование опухоли; ингибировать до некоторой степени рост опухоли; и/или уменьшить до некоторой степени один или более симптомов, связанных с раком. См. определение в данном документе термина «лечение». В зависимости от того, предупреждает ли лекарственное средство рост и/или уничтожает существующие раковые клетки, его можно отнести к цитостатическому и/или цитотоксическому. Терапевтически эффективное количество может быть количеством, подавляющим рост, или цитотоксическим количеством в зависимости от терапевтического средства и заболевания, подвергаемого лечению.
«Лечение» или «облегчение» относится к терапевтическим мероприятиям, при которых у объекта предупреждают или замедляют (уменьшают) целевое патологическое состояние или расстройство. Те, которым необходимо лечение, включают тех, у кого расстройство уже имеется, а также тех, которые склонны к развитию расстройства, или тех, у которых необходимо предупредить развитие расстройства. Эти термины указывают, что терапевтическое и профилактическое применение в данном документе считаются успешными, если они ослабляют, уменьшают или облегчают симптомы, осложнения или другие проблемы, связанные с заболеванием, или уменьшают или снижают вероятность появления или частоту симптомов, осложнений или других проблем, связанных с заболеванием.
«Подавляющее рост количество» терапевтического средства по настоящему изобретению является количеством, способным ингибировать рост клеток, особенно опухолевых, например раковых клеток in vitro или in vivo. «Подавляющее рост количество» терапевтического средства по настоящему изобретению для целей ингибирования роста опухолевых клеток можно определить эмпирически, с помощью известных способов или примеров, приведенных в данном документе.
«Цитотоксическое количество» терапевтического средства по настоящему изобретению является количеством, способным вызывать деструкцию клетки, особенно опухолевой, например раковой клетки in vitro или in vivo. «Цитотоксическое количество» для целей ингибирования роста опухолевых клеток можно определить эмпирически и с помощью способов, известных в данной области техники.
Термин «антитело» используется в самом широком смысле и конкретно охватывает, например, одиночные моноклональные антитела (включая агонистические, антагонистические и нейтрализующие антитела), композиции антител с полиэпитопной специфичностью, поликлональные антитела, одноцепочечные антиантитела и фрагменты антител (см. ниже), при условии, что они специфично связываются с природным полипептидом и/или проявляют биологическую активность или иммунологическую активность по настоящему изобретению. Согласно одному варианту осуществления антитело связывается с олигомерной формой целевого белка, например с тримерной формой. Согласно другому варианту осуществления антитело специфично связывается с белком, причем связывание может ингибироваться моноклональным антителом по настоящему изобретению (например, осажденным антителом по настоящему изобретению и т.д.). Фраза «функциональный фрагмент или аналог» антитела относится к соединению, имеющему качественную биологическую активность, общую с антителом, к которому он относится. Например, функциональный фрагмент или аналог антитела по настоящему изобретению может быть фрагментом или аналогом, который может специфично связываться с VEGF. В одном варианте осуществления антитело может предупредить или, по существу, ослабить способность VEGF вызывать пролиферацию клеток. Термин «иммуноглобулин» (Ig) в данном документе используется взаимозаменяемо с термином «антитело».
«Выделенное антитело» представляет собой антитело, которое было идентифицировано и отделено и/или выделено из компонента своей природной среды. Загрязняющими компонентами природной среды являются вещества, которые могли бы препятствовать диагностическому или терапевтическому использованию антитела; они могут включать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные вещества. В предпочтительных вариантах осуществления антитело будет очищено 1) до более 95 мас.% антитела, что определяется способом Lowry, и наиболее предпочтительно до более 99 мас.%, 2) в известной степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков, относящихся к N-концу или внутренней аминокислотной последовательности, при помощи секвенатора с вращающейся чашей или 3) до однородности путем SDS-PAGE (ДСН-ПААГ) при восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с использованием синего Кумасси или, предпочтительно, серебрения. Выделенное антитело включает антитело in situ внутри рекомбинантных клеток, поскольку в таком случае будет отсутствовать по меньшей мере один компонент природной среды антитела. Однако, как правило, выделенное антитело будет получено в ходе по меньшей мере одной стадии очистки.
H
H
H
L
L
L
H
L
H
H
L
Основная 4-цепочечная единица антитела представляет собой гетеротетрамерный гликопротеин, состоящий из двух идентичных легких (L) цепей и двух идентичных тяжелых (H) цепей (антитело IgM состоит из 5 основных гетеротетрамерных единиц наряду с дополнительным полипептидом, называемым J-цепью, и поэтому содержит 10 антигенсвязывающих участков, в то время как секретируемые антитела IgA могут полимеризироваться с образованием поливалентных скоплений, содержащих 2-5 основных 4-цепочечных единиц наряду с J-цепью). В случае IgG 4-цепочечная единица обычно имеет молекулярную массу приблизительно 150000 дальтон. Каждая L-цепь связана с H-цепью одним ковалентным дисульфидным мостиком, в то время как две H-цепи связаны друг с другом одним и более дисульфидными мостиками в зависимости от изотипа Н-цепи. Каждая H- и L-цепь также содержит регулярно расположенные внутрицепочечные дисульфидные мостики. Каждая Н-цепь имеет на N-конце вариабельный домен (V), за которым следуют три константных домена (C) для каждой из α и γ-цепей, и четыре домена C для каждого из изотипов µ и ε. Каждая L-цепь имеет на N-конце вариабельный домен (V), за которым следует константный домен (C), расположенный у другого конца. V выровнен с V, а C выровнен с первым константным доменом тяжелой цепи (C1). Определенные аминокислотные остатки, как полагают, образуют стык между вариабельными доменами легкой цепи и тяжелой цепи. Пара V и V вместе образует один антигенсвязывающий сайт. Структуру и свойства различных классов антител см., например, в Basic and Clinical Immunology, 8th edition, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6.
H
H
L-цепь от любого вида позвоночного может быть отнесена к одному из двух явно различных типов, названных каппа и лямбда на основании аминокислотной последовательности их константных доменов. В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена тяжелых цепей (C), иммуноглобулины можно разделить на различные классы или изотипы. Существует пять классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, тяжелые цепи которых обозначаются α, δ, γ, ε и µ соответственно. Классы γ и α дополнительно делятся на подклассы на основе относительно незначительных различий в последовательности и функции C, например, у человека экспрессируются следующие подклассы: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2.
Термин «вариабельный» относится к тому факту, что у антител определенные сегменты вариабельных доменов экстенсивно отличаются последовательностью. V-домен опосредует связывание антигена и определяет специфичность конкретного антитела по отношению к конкретному антигену. Однако по участку из 110 аминокислот вариабельных доменов вариабельность распределена неравномерно. V-области состоят из относительно инвариантных отрезков, названных каркасными областями (FR) из 15-30 аминокислот, разделенных более короткими областями чрезвычайной вариабельности, названными «гипервариабельными областями», длина каждой из которых составляет 9-12 аминокислот. Каждый вариабельный домен природных тяжелых и легких цепей содержит четыре FR, в значительной степени находящихся в конфигурации *-листа, соединенных тремя гипервариабельными областями, которые образуют соединенные петли и в некоторых случая образуют часть структуры *-листа. Гипервариабельные области каждой цепи удерживаются в непосредственной близости за счет FR и вместе с гипервариабельными областями другой цепи участвуют в образовании антигенсвязывающего сайта антител (см. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Константные домены не вовлечены непосредственно в связывание антитела с антигеном, но проявляют различные эффекторные функции, такие как участие антитела в антителозависимой клеточной токсичности (ADCC).
L
H
L
H
Термин «гипервариабельная область», когда он используется в данном документе, относится к аминокислотным остаткам антитела, которые отвечают за связывание антигена. Гипервариабельная область, как правило, содержит аминокислотные остатки от «области, определяющей комплементарность», или «CDR» (например, расположенной приблизительно в области остатков 24-34 (L1), 50-56 (L2) и 89-97 (L3) в V, и приблизительно в области остатков 1-35 (H1), 50-65 (H2) и 95-102 (H3) в V (в одном варианте осуществления H1 находится вблизи остатков 31-35); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) и/или остатков «гипервариабельной петли» (например, остатки 26-32 (L1), 50-52 (L2) и 91-96 (L3) в V, и 26-32 (H1), 53-55 (H2) и 96-101 (H3) в V; Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)).
Термин «моноклональное антитело», используемый в данном документе, относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, то есть индивидуальные антитела, составляющие популяцию, идентичны за исключением возможных встречающихся в природе мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными, будучи направленными против одного антигенного сайта. Кроме того, в отличие от препаратов поликлональных антител, которые содержат различные антитела, направленные против различных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты на антигене. В дополнение к их специфичности, преимущество моноклональных антител состоит в том, что их можно синтезировать без загрязнения другими антителами. Модификатор «моноклональное» не должен рассматриваться как требование получения антитела любым конкретным способом. Например, моноклональные антитела, применимые по настоящему изобретению, могут быть получены в соответствии с методологией гибридомы, впервые описанной Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), или синтезированы методами рекомбинантной ДНК в бактериальных, эукариотических животных или растительных клетках (см., например, патент США № 4816567). «Моноклональные антитела» также могут быть выделены из фаговых библиотек антител с использованием методов, описанных Clackson et al, Nature. 352:624-628 (1991), Marks et al., J Mol. Biol., 222:581-597 (1991) и, например, в примерах ниже.
Моноклональные антитела в данном документе включают «химерные» антитела, у которых часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, полученных от конкретного вида или принадлежащих конкретному классу или подклассу антител, хотя остаток от цепи(ей) является идентичным или гомологичным соответствующим последовательностям в антителах, полученных от другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антител, а также фрагменты таких антител, пока они демонстрируют биологическую активность по настоящему изобретению (см. патент США № 4816567; и Morrison et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 81:6851-6855 (1984)). Представляющие интерес химерные антитела включают «приматизированные» антитела, содержащие антигенсвязывающие последовательности вариабельного домена, полученные от примата, отличающегося от человека (например, мартышка, человекообразная обезьяна и т.д.), и последовательности константной области человека.
L
Н
Н
Н
«Интактное» антитело представляет собой антитело, которое содержит антигенсвязывающий сайт, а также C и по меньшей мере константные домены тяжелой цепи, С1, С2 и С3. Константные домены могут быть константными доменами природной последовательности (например, константными доменами природной последовательности человека) или вариантами их аминокислотной последовательности. Предпочтительно, интактное антитело обладает одной или более эффекторными функциями.
«Фрагменты антитела» содержат часть интактного антитела, предпочтительно антигенсвязывающую или вариабельную область интактного антитела. Примеры фрагментов антитела включают Fab, Fab', F(ab')2 и фрагменты Fv; диатела (димерные антитела); линейные антитела (см. патент США №5641870, Пример 2; Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]); одноцепочечные молекулы антител; и мультиспецифичные антитела, образованные из фрагментов антител.
Выражение «линейные антитела», как правило, относится к антителам, описанным Zapata et al., Protein Eng., 8(10): 1057-1062 (1995). Кратко, эти антитела содержат пару тандемных сегментов Fd (VH-CH1-VH-CH1), которые вместе с комплементарными полипептидами легкой цепи образуют пару антигенсвязывающих областей. Линейные антитела могут быть биспецифичными или моноспецифичными.
H
H
Расщепление антител папаином позволяет получить два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, названных «Fab» фрагментами, и остаточный фрагмент «Fc», название которого отражает способность легко кристаллизоваться. Фрагмент Fab состоит из целой L-цепи наряду с вариабельной областью домена Н-цепи (V) и первым константным доменом одной тяжелой цепи (C1).
2
Н
2
Каждый фрагмент Fab является моновалентным по отношению к связыванию антигена, то есть он имеет один антигенсвязывающий сайт. Обработка антитела пепсином дает один большой фрагмент F(ab'), который примерно соответствует двум, соединенным дисульфидными связями фрагментам Fab, обладающим бивалентной антигенсвязывающей активностью и все еще способным к перекрестному связыванию антигена. Фрагменты Fab' отличаются от фрагментов Fab наличием нескольких дополнительных остатков с С-конца домена С1, включая один или более цистеинов от шарнирной области антитела. Fab'-SH является обозначением в настоящем документе для Fab', в котором остаток(ки) цистеина константных доменов несут свободную тиольную группу. Фрагменты антитела F(ab') первоначально были получены как пара фрагментов Fab' с шарнирными цистеинами между ними. Другие химические связи фрагментов антител также известны.
Фрагмент Fc содержит карбокситерминальные части обеих Н-цепей, скрепленных дисульфидами. Эффекторные функции антител определяются последовательностями в области Fc, причем данная область также является частью, распознаваемой рецепторами Fc (FcR), которые обнаружены на определенных типах клеток.
«Fv» представляет собой минимальный фрагмент антитела, который содержит полный антигенраспознающий и -связывающий сайт. Этот фрагмент состоит из димера домена вариабельной области одной тяжелой и одной легкой цепей в тесной, нековалентной связи. Фолдинг этих двух доменов приводит к образованию 6 гипервариабельных петель (по 3 петли на каждой H- и L-цепи), в которых участвуют аминокислотные остатки для связывания антигена и которые придают антителу специфичность связывания антигена. Однако даже единичный вариабельный домен (или половина Fv, содержащая только 3 CDR, специфичных для антигена) обладает способностью распознавать и связывать антиген, хотя и с более низкой аффинностью, чем целый связывающий сайт.
H
L
H
L
«Одноцепочечные Fv», также сокращенно «sFv» или «scFv», являются фрагментами антитела, которые содержат домены антитела V и V, связанные в одну полипептидную цепь. Предпочтительно полипептид sFv дополнительно содержит полипептидный линкер между доменами V и V, который позволяет sFv образовывать желаемую структуру для связывания антигена. Для обзора sFv см. Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994); Borrebaeck 1995, ниже.
H
L
H
L
Термин «диатела» относится к малым фрагментам антитела, полученным путем конструирования фрагментов sFv (см. предыдущий абзац) короткими линкерами (приблизительно 5-10 остатков) между такими доменами V и V, которые находятся между цепями, но возникает внутрицепочечное спаривание доменов V, которое приводит к бивалентному фрагменту, то есть фрагменту, имеющему два антигенсвязывающих сайта. Биспецифичные диатела представляют собой гетеродимеры, состоящие из двух «перекрестных» фрагментов sFv, в которых домены V и V двух антител находятся в разных полипептидных цепях. Более полно диатела описаны, например, в EP 404097; WO 93/11161; и Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993).
«Гуманизированные» формы антител, отличающихся от человеческих (например, антител грызуна), представляют собой химерные антитела, которые содержат минимальную последовательность, полученную из антитела, отличающегося от человеческого. По большей части, гуманизированные антитела представляют собой иммуноглобулины человека (антитело-реципиент), в которых остатки гипервариабельной области реципиента заменены остатками гипервариабельной области отличающегося от человека вида (антитело-донор), такого как мышь, крыса, кролик или примат, не являющийся человеком, имеющий желаемую специфичность, аффинность и способность антител. В некоторых случаях остатки каркасной области иммуноглобулина человека заменены соответствующими остатками, отличающимися от человеческих. Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые не обнаружены в антителе-реципиенте или антителе-доноре. Эти модификации осуществляются для того, чтобы сделать функционирование антитела более чистым. Как правило, гуманизированное антитело будет содержать, по существу, все из по меньшей мере одного, а обычно двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все гипервариабельные петли соответствуют таковым иммуноглобулина, отличающегося от человеческого, и все или по существу все FR являются таковыми из последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело необязательно также будет содержать по меньшей мере часть константной области (Fc) иммуноглобулина, обычно области иммуноглобулина человека. О дополнительных деталях см. Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); и Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992).
-7
-8
-9
«Видоспецифичное антитело» является антителом, обладающим более сильной аффинностью связывания по отношению к антигену млекопитающего первого вида, чем к гомологу этого антигена, полученного от млекопитающего второго вида. Обычно видоспецифичное антитело «специфично связывается» с антигеном человека (то есть имеет аффинность связывания (Kd) не больше, чем приблизительно 1×10 М, предпочтительно не более приблизительно 1×10 М и наиболее предпочтительно не более приблизительно 1×10 М), но имеет аффинность связывания с гомологом антигена млекопитающего второго вида, отличающегося от человека, которая по меньшей мере примерно в 50 раз или по меньшей мере примерно в 500 раз, или по меньшей мере примерно в 1000 раз слабее, чем его аффинность связывания с антигеном человека. Видоспецифичное антитело может принадлежать к любому из различных типов антител, описанных выше, но предпочтительно является гуманизированным антителом или антителом человека.
-4
-5
-6
-7
-8
-9
-10
-11
-12
Терапевтическое средство по настоящему изобретению, «которое связывается» с представляющей интерес мишенью, является средством, которое связывается с мишенью с достаточной аффинностью, так что терапевтическое средство является применимым в качестве терапевтического средства при воздействии на клетку или ткань, экспрессирующие мишень(и), и лишено, по существу, перекрестной реактивности по отношению к другим мишеням. В таких вариантах осуществления степень связывания терапевтического средства с «не-мишенью» будет составлять менее приблизительно 10% связывания терапевтического средства с его конкретной мишенью, как определяется с помощью, например, анализа на основе сортировки флуоресцентных активированных клеток (FACS) или радиоиммунопреципитации (RIA). По отношению к связыванию терапевтического средства с молекулой-мишенью термин «специфичное связывание» или «специфично связывается с», или «специфично для» конкретной мишени или эпитопа на конкретной мишени, означает связывание, которое измеримо отличается от неспецифического взаимодействия. Специфичное связывание может быть измерено, например, путем определения связывания молекулы по сравнению со связыванием контрольной молекулы, которая, как правило, является молекулой аналогичной структуры, которая не обладает связывающей активностью. Например, специфичное связывание может быть определено путем конкуренции с контрольной молекулой, которая подобна мишени, например, избытку немаркированной мишени. В этом случае на специфичное связывание указывает, если связывание маркированной мишени с зондом конкурентно ингибируется избытком немаркированной мишени. Термин «специфичное связывание» или «специфично связывается с», или «специфичен для» конкретного полипептида или эпитопа на конкретной полипептидной мишени, как используется в данном документе, может проявляться, например, молекулой, имеющей Kd для мишени по меньшей мере приблизительно 10 М, альтернативно по меньшей мере приблизительно 10 М, альтернативно по меньшей мере приблизительно 10 М, альтернативно по меньшей мере приблизительно 10 М, альтернативно по меньшей мере приблизительно 10 М, альтернативно по меньшей мере приблизительно 10 М, альтернативно по меньшей мере приблизительно 10 М, альтернативно по меньшей мере приблизительно 10 М, альтернативно по меньшей мере приблизительно 10 М или более. В одном варианте осуществления термин «специфичное связывание» относится к связыванию, при котором молекула связывается с конкретной мишенью или эпитопом на конкретной мишени(ях), по существу, не связываясь ни с какой другой мишенью или эпитопом.
«Пациент» относится к субъекту, который будет подвергаться лечению. В предпочтительном варианте осуществления субъектом является млекопитающее.
«Млекопитающее» для целей лечения относится к любому животному, отнесенному к млекопитающему, включая человека, бытовых и сельскохозяйственных животных, приматов, отличающихся от человека, и зоологических, спортивных или домашних животных, например собак, лошадей, кошек, коров и т.д. В одном предпочтительном варианте осуществления млекопитающим является человек.
Композиции по настоящему изобретению могут содержать одно или более терапевтических средств по данному изобретению и носитель. «Носители», как используется в данном документе, включают фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы, которые нетоксичны по отношению к клетке или млекопитающему, подвергаемому их воздействию в используемых дозах и концентрациях. Часто физиологически приемлемый носитель представляет собой водный pH-забуференный раствор. Примеры физиологически приемлемых носителей включают буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту; низкомолекулярный (менее приблизительно 10 остатков) полипептид; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие средства, такие как ЭДТА; сахарные спирты, такие как маннит или сорбит; образующие соль противоионы, такие как натрий; и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN, полиэтиленгликоль (ПЭГ) и PLURONICS.
Доза
2
В зависимости от показания к лечению и факторов, относящихся к дозировке, с которыми должен быть знаком врач, имеющий опыт в данной области, терапевтические средства по настоящему изобретению будут вводиться в дозе, которая эффективна для лечения по показанию и минимизирует токсичность и побочные эффекты. Например, начальный режим дозирования для антител к VEGF может предусматривать введение 5-10 мг/кг каждые две недели. В одном варианте осуществления стартовая доза бортезомиба составляет 1,3 мг/м дважды в неделю в течение двух недель, за которыми следует 10-дневный перерыв. В другом варианте осуществления стартовая доза леналидомида составляет 10 мг 1 раз в сутки. Терапевтические средства по настоящему изобретению можно вводить хронически, периодически, последовательно или одновременно, по необходимости.
Все публикации (включая патенты и заявки на патент), процитированные в данном документе, тем самым включены во всей их полноте посредством ссылки, включая предварительную заявку на патент США № 60/874460, поданную 11 декабря 2006 г.
По всему описанию изобретения и пунктам формулы изобретения слово «содержать» или его варианты, такие как «содержит» или «содержащий», подразумевают включение указанного целого числа или группы целых чисел, но не исключение любого другого целого числа или группы целых чисел.
Предшествующее письменное описание считается достаточным, чтобы позволить специалисту в данной области техники осуществить изобретение на практике. Нижеследующие примеры приведены только для иллюстративных целей и не предназначены для того, чтобы любым способом ограничить объем настоящего изобретения. Действительно, различные модификации изобретения, в дополнение к показанным и описанным в данном документе, станут очевидными специалистам в данной области техники из предшествующего описания и будут находиться в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1 - Материалы и методы
Получали биоптаты костного мозга от пациентов с диагнозом множественной миеломы. Изотипы тяжелых и легких цепей Ig определяли при диагностике методом электрофореза с иммунофиксацией (IFE). Один образец, обозначенный как LAGλ-1 (Los Angeles IgG λ light chain-1), получали из агрессивной опухоли, резистентной к мелфалану (Campbell, RA et al., (2006) Int. J. Onc. 28:1409-1417). LAGκ-1A выделяли из опухоли, чувствительной к бортезомибу. LAGκ-1B происходит от опухоли, резистентной к бортезомибу. LAPCLκ-1 - плазмоклеточный лейкоз.
Антитела к VEGF, известные как G6-31, используемые в этих исследованиях, были описаны ранее (WO 2005/012359). В качестве контроля использовали mIgG2a к амброзии. Как правило, перед введением моноклональные антитела (MAb) к VEGF разбавляли 100% PBS. MAb к VEGF вводили внутрибрюшинной (в/б) инъекцией 2 раза в неделю в дозе 5 мг/кг. Контрольный IgG (то есть антитело к амброзии) перед введением разбавляли 100% PBS. Контрольный IgG вводили в/б 2 раза в неделю в дозе 5 мг/кг.
Определение уровней IgG человека (hIgG). Уровни IgG человека подкласса 1 определяли твердофазным иммуноферментным анализом (ELISA). Профильные наборы для ELISA на IgA, IgM, IgG и IgG человека приобретали в Zymed Laboratories (South San Francisco, CA). У мышей с опухолями еженедельно брали кровь из ретроорбитальных сосудов. Пробы крови центрифугировали при 13000 об./мин в течение 30 мин и собирали сыворотку. Набор для ELISA на IgG подкласса 1 подготавливали согласно инструкции производителя. Поглощение света при 450 нм с референтной длиной волны 550 нм определяли на спектрофотометре µQuant для считывания планшетов с использованием программного обеспечения Junior software (BioTek Instruments, Winooski, VT).
Пример 2 - Изучение монотерапии множественной миеломы (MM) антителом к VEGF
3
Для этого исследования использовали самцов мыши в возрасте 6-8 недель с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (SCID). Каждой мыши хирургически имплантировали 2,0-4,0 мм LAGκ-1A или LAGκ-1B в поверхностную ягодичную мышцу левой задней конечности. Опухоли росли в течение 14 дней; к этому моменту в сыворотке мышей стал определяться IgG человека, и мышей слепым методом распределяли по двум лечебным группам.
Мышей лечили следующим образом:
Мыши LAGκ-1A (MM, чувствительная к бортезомибу)
Контроль - mIgG2a (5 мг/кг, в/б, 2 раза в неделю)
MAb к VEGF G6-31 (5 мг/кг, в/б, 2 раза в неделю)
Мыши LAGκ-1В (MM, резистентная к бортезомибу)
Контроль - mIgG2a (5 мг/кг, в/б, 2 раза в неделю)
MAb к VEGF G6-31 (5 мг/кг, в/б, 2 раза в неделю)
Лечение антителами к VEGF начинали на 14-й или 21-й день. Как правило, мышей взвешивали один раз в день, 5 раз в неделю до окончания исследования. Объем опухоли измеряли каждые две недели, используя стандартные кронциркули. Пробы крови брали еженедельно и уровни hIgG в мышиной сыворотке определяли методом ELISA.
Результаты лечения опухоли LAGκ-1A (чувствительной к бортезомибу) приведены на фиг.1A-B и 2A-B. Результаты лечения опухоли LAGκ-1В (резистентной к бортезомибу) приведены на фиг.3A-B, 4A-5A-B. У мышей, которые получали антитело к VEGF, наблюдали заметное ингибирование роста опухоли (p=0,0005) и снижение уровней парапротеина (p=0,0002) по сравнению с мышами, получавшими контрольное антитело. На 42-й день у мышей с LAGκ-1A, получавших антитело к VEGF, регистрировали снижение уровней парапротеина человека на 70% и уменьшение объема опухоли на 80% по сравнению с животными, которых лечили контрольным антителом. Лечение антителом к VEGF не было связано с видимой токсичностью.
Следует отметить, что у мышей с опухолью LAGκ-1B (резистентной к бортезомибу), получавших антитела к VEGF, наступало существенное снижение уровней парапротеина человека и объема опухоли по сравнению животными, получавшими контрольное антитело. Таким образом, антитело к VEGF в режиме монотерапии эффективно уменьшало чувствительные и резистентные к бортезомибу опухоли в данном исследовании. Если опухоли позволяли расти в течение 21 дня, объем опухоли был значительным перед лечением антителом к VEGF. На фиг.5A-B показано, что антитело к VEGF в режиме монотерапии эффективно для снижения уровней IgG1 человека и объема опухоли LAGκ-1B, несмотря на увеличенный размер опухоли.
Пример 3 - Исследование комбинации антитело к VEGF/бортезомиб
3
Мышей с SCID и опухолями MM/PCL, как описано в примере 1, произвольно распределяли (рандомизировали) в лечебные группы (n=10 мышей/группу), когда опухоль достигала среднего размера примерно 100 мм. Лечение начинали, когда мыши были рандомизированы в соответствующие лечебные группы.
Перед введением подходящую дозу бортезомиба разбавляли в 0,9% физиологическом растворе. Бортезомиб вводили посредством внутривенной (в/в) инъекции 3 раза в неделю в дозе 0,1 мг/кг. В качестве контроля готовили растворы низкомолекулярных ингибирующих носителей (SMIv) в 0,5% растворе метилцеллюлозы: 0,2% Твин-80, 99,3% разбавитель. SMIv вводили перорально через зонд ежедневно в запланированной дозе.
Мышей лечили следующим образом:
Группа
Препарат
Доза
Путь введения
Число мышей
Схема введения
1
Контроль mIgG2a
5 мг/кг
в/б
10
QD×2 дня в неделю
2
Растворитель (бортезомиб)
в/в
10
QD×2 дня в неделю
3
Бортезомиб
0,25 мг/кг
в/в
10
QD×2 дня в неделю
4
Бортезомиб
0,5 мг/кг
в/в
10
QD×2 дня в неделю
5
Антитело к VEGF
5 мг/кг
в/б
10
QD×2 дня в неделю
6
Бортезомиб+
0,25 мг/кг
в/в
10
QD×2 дня в неделю
Антитело к VEGF
5 мг/кг
в/б
QD×2 дня в неделю
7
Бортезомиб+
0,5 мг/кг
в/в
10
QD×2 дня в неделю
Антитело к VEGF
5 мг/кг
в/б
QD×2 дня в неделю
Мышей взвешивали один раз в день, 5 раз в неделю до окончания исследования. Объем опухоли измеряли каждые две недели, используя стандартные кронциркули. Пробы крови брали еженедельно и уровни hIgG в мышиной сыворотке определяли методом ELISA. Средние значения объема опухоли, массы опухоли и уровней hIgG указывали для каждой группы. Растворители сравнивали с монотерапией и комбинированной терапией.
Пример 4 - Исследование комбинации антитело к VEGF/бортезомиб/леналидомид
3
Мышей с SCID и опухолями MM/PCL, как описано в примере 1, произвольно распределяли в лечебные группы (n=10 мышей/группу), когда опухоль достигала среднего размера примерно 100 мм. Лечение начинали, когда мыши были рандомизированы в соответствующие лечебные группы.
Перед введением подходящую дозу бортезомиба разбавляли в 0,9% физиологическом растворе. Бортезомиб вводили посредством внутривенной (в/в) инъекции 3 раза в неделю в дозе 0,1 мг/кг. В качестве контроля готовили растворы низкомолекулярных ингибирующих носителей (SMIv) в 0,5% растворе метилцеллюлозы: 0,2% Твин-80, 99,3% разбавитель. SMIv вводили перорально через зонд ежедневно в запланированной дозе.
Леналидомид растворяли в ДМСО до концентрации 10 мг/мл. Исходный раствор разбавляли стерильным 0,9% физиологическим раствором до концентрации 1 мг/мл. Конечная концентрация леналидомида во всех экспериментах составляла менее 0,01%.
Мышей лечили следующим образом:
Группа
Препарат
Доза
Путь введения
Число мышей
Схема введения
1
Контроль mIgG2a
5 мг/кг
в/б
10
2 дня в неделю
2
Растворитель (леналидомид)
НП
в/б
10
5 дней в неделю
3
Растворитель (бортезомиб)
НП
в/б
10
2 дня в неделю
4
Леналидомид
50 мг/кг
в/б
10
5 дней в неделю
5
Бортезомиб
0,25 мг/кг
в/б
10
2 дня в неделю
6
Бортезомиб
0,5 мг/кг
в/б
10
2 дня в неделю
7
Леналидомиб + антитело к VEGF
50 мг/кг5 мг/кг
в/б
10
5 дней в неделю2 дня в неделю
8
Только антитело к VEGF
5 мг/кг
в/б
10
2 дня в неделю
9
Бортезомиб + антитело к VEGF
0,25 мг/кг5 мг/кг
в/б
10
2дня в неделю2 дня в неделю
10
Бортезомиб + антитело к VEGF
0,5 мг/кг5 мг/кг
в/б
10
2дня в неделю2 дня в неделю
НП - неприменимо
Мышей взвешивали один раз в день, 5 раз в неделю до окончания исследования. Объем опухоли измеряли каждые две недели, используя стандартные кронциркули. Пробы крови брали еженедельно и уровни hIgG в мышиной сыворотке определяли методом ELISA. Средние значения объема опухоли, массы опухоли и уровней hIgG указывали для каждой группы. Растворители сравнивали с монотерапией и комбинированной терапией.
Пример 3 - Модели MM, резистентной к мелфалану
Использовали самцов мыши в возрасте 6-8 недель с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (SCID). Каждой мыши хирургически имплантировали LAGλ-1 в поверхностную ягодичную мышцу левой задней конечности. Опухолям позволяли вырасти, после чего мышей слепым методом распределяли по двум группам.
Мыши LAGλ-1 (MM, резистентная к мелфалану)
Контрольный mIgG2a (5 мг/кг, в/б раз в 2 недели)
MAb к VEGF G6-31 (5 мг/кг, в/б раз в 2 недели)
Мышей взвешивали один раз в день, 5 раз в неделю до окончания исследования. Объем опухоли измеряли каждые две недели, используя стандартные кронциркули. Пробы крови брали еженедельно и уровни hIgG в мышиной сыворотке определяли методом ELISA. Средние значения объема опухоли, массы опухоли и уровней hIgG указывали для каждой группы. Растворители сравнивали с монотерапией и комбинированной терапией.
Пример 4 - Модели плазмоклеточного лейкоза
Использовали самцов мыши в возрасте 6-8 недель с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (SCID). Каждой мыши хирургически имплантировали LAPCLκ-1 в поверхностную ягодичную мышцу левой задней конечности. Опухолям позволяли вырасти, после чего мышей слепым методом распределяли по двум группам.
Мыши LAPCLκ-1 (плазмоклеточный лейкоз)
Контрольный mIgG2a (5 мг/кг, в/б 2 раза в неделю)
MAb к VEGF G6-31 (5 мг/кг, в/б 2 раза в неделю)
Мышей взвешивали один раз в день, 5 раз в неделю до окончания исследования. Объем опухоли измеряли каждые две недели, используя стандартные кронциркули. Пробы крови брали еженедельно и уровни hIgG в мышиной сыворотке определяли методом ELISA. Средние значения объема опухоли, массы опухоли и уровни hIgG указывали для каждой группы. Растворители сравнивали с монотерапией и комбинированной терапией.