СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИНА
METHOD OF ENDOTOXIN DETECTION

Область техники
Данное изобретение относится к способу определения эндотоксина.
Уровень техники
Известно, что примеси пирогенов в растворах для инъекций могут вызывать такие симптомы, как жар и озноб. С целью исключения загрязнения пирогенами во время приготовления и контроля качества растворов для инъекций обычно проводится анализ на пироген. Однако этот анализ очень сложен, трудоемок и требует много времени (см. Непатентный Документ 1).
Известно, что пирогены состоят главным образом из эндотоксинов, которые представляют собой клеточные стенки грамотрицательных бактерий. Для обнаружения и количественного определения эндотоксинов, происходящих из грамотрицательных бактерий, существуют известные способы анализа на эндотоксин, основанные на принципе коагуляции эндотоксином экстрактов кровяных телец (лизатов) мечехвостов (таких как Limulus polyphemus или Tachypleus tridentatus) (см. Непатентный Документ 2). В последнее время вместо способов анализа на пироген для обнаружения пирогена чаще используются вышеупомянутые способы определения эндотоксина.
[Непатентный документ 1] Commentary of the Japanese Pharmacopoeia Fourteenth Edition, Hirokawa Publishing Co. 2001 B-493.
[Непатентный документ 2] Commentary of the Japanese Pharmacopoeia Fourteenth Edition, Hirokawa Publishing Co. 2001 B-63.
Описание изобретения
Проблемы, решаемые изобретением
Настоящее изобретение предоставляет способ, дающий возможность обнаружения и количественного анализа эндотоксина в образце, в котором эндотоксин из грамотрицательных бактерий не может быть определен и количественно проанализирован способом, описанным в Непатентном документе 2.
Способы решения проблем
В результате напряженных исследований авторов данного изобретения было установлено, что вышеуказанная проблема может быть решена с помощью проведения анализа на эндотоксин с использованием лизата, при котором лизат добавляется в образец в присутствии альбумина и/или глобулина; на основании чего было составлено данное изобретение.
Таким образом, данное изобретение относится к новому способу анализа эндотоксина, а также способу приготовления инъекций с концентрацией эндотоксинов меньше, чем установленный предел; а также относится к следующему.
(1) Способ анализа эндотоксина, включающий в себя добавление лизата к раствору или суспензии производного соединения камптотецина, тимиперона или производного таксана в присутствии альбумина и/или глобулина.
(2) Способ анализа в соответствии с (1), в котором альбумин и/или глобулин является сывороточным альбумином человека.
(3) Способ анализа в соответствии с (1) или (2), в котором производное соединение камптотецина является гидрохлоридом иринотекана.
(4) Способ приготовления инъекций, содержащих фармацевтически активный ингредиент и имеющих концентрацию эндотоксина меньше установленного предела, включающий стадию скрининга, которая состоит из: добавления лизата к раствору или суспензии фармацевтически активного ингредиента в присутствии альбумина и/или глобулина и определения наличия или отсутствия эндотоксина.
(5) Способ приготовления инъекций, содержащих производное соединение камптотецина, тимиперона или производное таксана и имеющих концентрацию эндотоксина меньше установленного предела, включающий стадию скрининга, которая состоит из: добавления лизата к раствору или суспензии производного камптотецина, тимиперона или производного таксана в присутствии альбумина и/или глобулина и определения наличия или отсутствия эндотоксина.
(6) Способ в соответствии с (4) или (5), в котором альбумин и/или глобулин является сывороточным альбумином человека.
(7) Способ в соответствии с (4) или (5), в котором производное соединение камптотецина является гидрохлоридом иринотекана.
Результат изобретения
Как следует из Примеров, описанных ниже, способ анализа данного изобретения дает возможность обнаружения и количественного определения эндотоксина, происходящего из грамотрицательных бактерий в образце, в котором эндотоксин не может быть в точности определен и количественно проанализирован стандартными способами анализа. В соответствии с данным изобретением приготовление и проверка качества инъекции может производиться без использования сложного анализа на пироген, а также предоставляется процесс приготовления инъекций с концентрацией эндотоксина меньше установленного предела. Более того, поскольку пироген может детектироваться без использования анализа пирогена на кроликах, данное изобретение является целесообразным с точки зрения защиты животных.
Наилучший способ осуществления изобретения
В данном изобретении образец (раствор или суспензия фармацевтически активного ингредиента) подвергается реакции с лизатом в присутствии альбумина и/или глобулина, и реакция между эндотоксином в образце и лизатом определяется и измеряется количественно.
Примеры альбумина и/или глобулина в соответствии с данным изобретением могут включать в себя вещества, полученные очисткой или частичной очисткой плазмы крови или сыворотки крови, а также вещества, содержащие альбумин и/или глобулин в качестве компонента. Из таких альбуминов или глобулинов предпочтительными являются те, которые происходят из сыворотки крови человека. Примерами веществ, содержащих альбумин и/или глобулин в качестве компонента, могут быть фракции Коэна, фракции альбумина или глобулина, полученные электрофорезом, коммерчески доступная свежезамороженная плазма (например, плазма, имеющаяся в Обществе Красного Креста Японии), температурно-обработанный белок плазмы человека (например, белки, которые можно приобрести у NIHON PHARMACEUTICAL CO., LID.), человеческий сывороточный альбумин (например, альбумин, имеющийся в Обществе Красного Креста Японии, Mitsubishi Pharma Corporation or Baxter Limited) и человеческий иммуноглобулин (например, иммуноглобулины, которые можно приобрести в Обществе Красного Креста Японии, Mitsubishi Pharma Corporation or Baxter Limited). В данном изобретении с учетом чувствительности детектирования эндотоксина предпочтительным является человеческий сывороточный альбумин.
Объектом данного изобретения является образец, в котором эндотоксин не может быть определен или количественно измерен стандартными способами. Здесь под обычными способами понимаются способы анализа, описанные в Непатентном документе 2, и другие в значительной степени сходные способы. Способ, описанный в Непатентном документе 2, в значительной степени схож со способами, описанными в фармакопее США (United States Pharmacopeia), европейской фармакопее (the European Pharmacopeia), JIS и Минимальных Требованиях к Биологической Продукции (JIS and Minimal Requirements for Biological Products). Примерами образцов являются производные камптотецина, тимиперон и производные таксана. Производные камптотецина являются производными, имеющими структуру камптотецина и обычно известными как противораковые агенты. Примерами известных производных камптотецина являются гидрохлорид иринотекана, гидрохлорид ногитекана, Рубитекан, Луртотекан, 9-аминокамптотецин и производные, описанные в международной публикации WO 98/07727, международной публикации WO 98/015573, международной публикации WO 99/17804, международной публикации WO 99/011646, и в опубликованном патенте Японии No 10-72467. Производные таксана являются производными, имеющими структуру баккатина и обычно известными как противораковые агенты. Примерами известных производных таксана являются паклитаксель, гидрат доцетакселя, (-)-(1S, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S)-4-ацетокси-2-бензоилокси-9,10-[(1S)-2-(диметиламин)этилиденезокси]-5,20-эпокси-1-гидрокситакс-11-ен-13-ил(2R, 3S)-3-(терт-бутоксикарбониламино)-3-(3-фтор-2-пиридил)-2-гидроксипропионат и производные, описанные в опубликованном патенте Японии No. 7-149779, национальной публикации международной заявки No. 8-508497, опубликованном патенте Японии No. 7-12578 и международной публикации WO 96/01259. В способе анализа эндотоксина и в процессе приготовления инъекций, имеющих концентрацию эндотоксина ниже установленного предела, описанных в данном изобретении, может использоваться любое из упомянутых выше веществ.
В данном изобретении, в случае когда образец (фармацевтически активный ингредиент) не находится в виде раствора или суспензии, необходимо приготовить образец в виде раствора или суспензии, используя соответствующий растворитель (например, контрольный раствор для анализа эндотоксина, воду для инъекций, физиологический раствор, раствор Рингера или буфер). Концентрация образца (фармацевтически активного ингредиента) в растворе или суспензии и количество альбумина и/или глобулина, который необходимо добавлять в раствор или суспензию образца, могут быть соответствующим образом исследованы и определены. Например, в случае когда образцом является гидрохлорид иринотекана, раствор или суспензия образца могут приготавливаться по известному методу. Наряду с этим может использоваться коммерческий материал с концентрацией гидрохлорида иринотекана - 20 мг/мл (Topotecin injection (Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd.), Campto injection (Yakult Hosha Co., Ltd.)), и соответствующие коэффициент растворения или концентрация могут быть определены по способу, описанному в Непатентном документе 2. В данном изобретении раствор гидрохлорида иринотекана с концентрацией 20 мг/мл желательно разбавляется в 100 раз или более и до концентраций, при которых эндотоксин на уровне установленного предела может быть определен желательно в 3000 раз или менее. Однако коэффициент разбавления не ограничивается этим интервалом.
В случае когда образец (фармацевтически активный ингредиент) является производным соединением таксана, его раствор или суспензия могут приготавливаться по известному способу. Наряду с этим может использоваться коммерческое вещество, содержащее паклитаксель в концентрации 5 мг/мл в качестве производного таксана (Taxol injections Briston-Meyers K.K.), или коммерческое вещество, содержащее гидрат доцетакселя в концентрации 40 мг/мл (Taxotere injection sanofi-aventis K.K.), а соответствующий коэффициент разбавления может быть определен по способу, описанному в Непатентном Документе 2. В случае когда производной таксана является (-)-(1S, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S)-4-ацетокси-2-бензоилокси-9,10-[(1S)-2-(диметиламин)этилиденезокси]-5, 20-эпокси-1-гидрокситакс-11-ен-13-ил(2R, 3S)-3-(терт-бутоксикарбониламино)-3-(3-фтор-2-пиридил)-2-гидроксипропионат, его раствор в концентрации 2 мг/мл желательно разбавляется в 16 раз или более до концентраций, при которых эндотоксин на уровне установленного предела может быть определен желательно в 200 раз или менее. Однако коэффициент разбавления не ограничивается этим интервалом.
В случае когда образцом (фармацевтически активным ингредиентом) является тимиперон, его раствор или суспензия могут приготавливаться известным способом. Наряду с этим может использоваться коммерческое вещество, содержащее тимиперон в концентрации 2 мг/мл (Tolopelon injection (Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd.)), а соответствующий коэффициент разбавления может быть определен по способу, описанному в Непатентном документе 2. В данном изобретении раствор тимиперона в концентрации 2 мг/мл желательно разбавляется более чем в 8 раз и до концентраций, при которых эндотоксин на уровне установленного предела может быть определен, желательно в 9600 раз или менее. Однако коэффициент разбавления не ограничивается этим интервалом.
В анализе эндотоксина, описанном в данном изобретении, pH раствора или суспензии образца может подводиться до значений между 6,0 и 8,0.
В настоящем изобретении, в то время как количество добавляемого альбумина и/или глобулина соответствующим образом исследуется и определяется на основании концентрации образца в растворе или суспензии, как описано выше, предпочтительно, чтобы добавлялось от 0,5 до 50 весовых частей альбумина и/или глобулина на одну весовую часть образца. В случае когда образцом является производное соединение камптотецина, на 1 весовую часть производной камптотецина предпочтительно добавляется от 1 до 50 весовых частей альбумина и/или глобулина. В случае когда образцом является тимиперон, на 1 весовую часть тимиперона предпочтительно добавляется от 0,5 до 7 весовых частей альбумина и/или глобулина. В случае когда образцом является производное соединение таксана, на 1 весовую часть производного таксана предпочтительно добавляется от 0,08 до 0,3 весовых частей альбумина и/или глобулина.
Кроме того, концентрация добавляемого в раствор или суспензию образца альбумина и/или глобулина предпочтительно меньше концентрации, при которой они действуют как ингибиторы реакции между лизатом и эндотоксином.
Лизатом в соответствии с данным изобретением может быть вещество, содержащее экстракт кровяных телец (лизат) мечехвостов (таких как Limulus polyphemus или Tachypleus tridentatus). Этот реагент, который может использоваться в данном изобретении, может быть приобретен, например, из Daiichi Pure Chemicals, Co., Ltd., Wako Pure Chemical Industries, Ltd. or SEIKAGAKU CORPORATION. В то время как лизат может использоваться в количестве, указанном в инструкции к реагенту или к измерительному устройству, его количество не всегда ограничивается этим.
В данном изобретении для измерения эндотоксина может быть использован любой способ при условии, что реакция между эндотоксином и лизатом может быть количественно измерена. Например, измерения могут производиться в соответствии со способом, описанном в Непатентном документе 2. Известные способы анализа эндотоксина включают в себя метод образования геля, основанный на процессе образования геля в реакции лизата с эндотоксином, метод турбидиметрии, основанный на изменениях мутности лизата при образовании геля, а также хромогенные методы, основанные на появлении цвета, вызванного гидролизом синтетического субстрата в реакции между эндотоксином и лизатом. Однако в данном изобретении может использоваться любой способ без каких-либо особых ограничений.
Для измерений эндотоксина могут использоваться коммерчески доступные устройства для измерения эндотоксина, которые могут быть приобретены, например, из CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN, INC., Wako Pure Chemical Industries, Ltd. и SEIKAGAKU CORPORATION.
Желательно, чтобы реакция проводилась при температуре от 30 до 40°С, в частности при 37±1°С.
В данном изобретении способ анализа эндотоксина используется в процессе приготовления инъекций из образца (фармацевтически активного ингредиента) или для контроля качества инъекций. Другими словами, способ анализа эндотоксина, описанный в данном изобретении, дает возможность оценивать наличие или отсутствие эндотоксина, а при помощи стадии скрининга с определением наличия или отсутствия эндотоксина могут приготавливаться раствор или суспензия с концентрацией эндотоксина меньше установленного предела. Соответствующим образом, данное изобретение делает возможным приготовление инъекций с концентрацией эндотоксина меньше установленного предела.
Данное изобретение может быть применимо к любому виду инъекций, включая водные инъекции, масляные инъекции и инъекции, высушенные замораживанием. Обычно установленный предел эндотоксина в инъекции определяется на основании способа ее введения независимо от вида инъекции следующим образом.
Предел эндотоксина=K/M
Значение K обозначает количество эндотоксина (EU(единица эндотоксина)/кг) на 1 кг веса тела, который считается, что вызывает повышенную температуру. В зависимости от способа введения инъекции K=5 в случае внутривенной инъекции, K=2,5 в случае внутривенной инъекции (радиофармацевтической) и K=0,2 в случае внутримышечной инъекции. Значение M обозначает максимальное количество инъекции, вводимое на 1 кг веса тела за один час. Детальное описание находится в параграфе F-20, «4. определение предела эндотоксина» в Commentary of the Japanese Pharmacopoeia Fourteenth Edition, Hirokawa Publishing Co., 2001.
Данное изобретение может быть применимо к процессу изготовления или контроля качества фармакологической продукции, в которой эндотоксин не может быть определен способом, описанном в Непатентном документе 2, и в которую для решения проблемы может добавляться альбумин и/или глобулин. Соответственно, образец, к которому применяется данный способ анализа, и процесс, описанный в данном изобретении, не должны ограничиваться только производными камптотецина, тимипероном и производными таксана, как показано в вышеописанных примерах.
ПРИМЕРЫ
Данное изобретение будет проиллюстрировано в нижеприведенных примерах, но оно не ограничивается ими.
Пример 1
[Реагент]
Образец
Использовалась инъекция гидрохлорида иринотекана (концентрация 20 мг/мл; Topotecin injection (Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd.)) в соответствующем разбавлении водой для инъекций.
Эндотоксин (в дальнейшем ЭТ)
Использовался контрольный стандартный ЭТ (полученный из штамма E.coli 055:В5) в соответствующем разбавлении водой для инъекций.
Раствор человеческого сывороточного альбумина (в дальнейшем ЧСА)
Использовался раствор человеческого сывороточного альбумина (2%) в соответствующем разбавлении водой для инъекций.
Лизат
Использовался Пирогент 5000 (Daiichi Pure Chemicals, Co., Ltd.), растворенный в буфере для растворения (Daiichi Pure Chemicals, Co., Ltd.).
[Процедура]
Образец разбавлялся водой для инъекций и в раствор добавлялся ЭТ в предварительно установленной концентрации. После добавления соответствующего количества раствора ЧСА, лизата и перемешивания концентрация ЭТ в растворе определялась с помощью устройства измерения эндотоксина (Toxinometer ET-301 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)) по скорости выделения ЭТ, который был предварительно добавлен.
[Результат]
Результаты представлены в Таблице 1 и Таблице 2. Как показано в Таблице 1, ЭТ в растворе гидрохлорида иринотекана (концентрация 20 мг/мл) с соответствующим разбавлением обычным способом анализа эндотоксин не обнаруживался. В то же время при добавлении от 1 до 50 весовых частей ЧСА на одну весовую часть гидрохлорида иринотекана скорость выделения эндотоксина улучшилась, и анализ эндотоксина был успешно проведен.
Таблица 1
Скорость выделения ЭТ (%)
Концентрация ЧСА (мг/мл)
0
0,2
0,5
1
2
4
Концентрация гидрохлорида иринотекана (мг/мл)
2
Становятся белыми(выпадение в осадок фармацевтического ингредиента)
0,2
53,4
121,2
100,6
98,6
66,3
36,6
0,02
54,4
102,2
92,9
87,7
64,2
33,3
В случае когда ЧСА добавляется до концентрации 0,1% (основываясь на результатах, представленных в Таблице 1), скорость выделения значительно улучшалась при разбавлении раствора гидрохлорида иринотекана (концентрация 20 мг/мл) в 100-3000 раз и анализ на эндотоксин был успешно проведен, как показано в таблице 2. В соответствии с Непатентным документом 2 анализ является эффективным, если скорость выделения ЭТ находится в интервале от 50 до 200%.
Таблица 2
Коэффициент разбавления (кратность)
100
500
1000
2000
3000
Концентрация гидрохлорида иринотекана (мг/мл)
0,2
0,04
0,02
0,01
0,007
Концентрация ЧСА (мг/мл)
1
Скорость выделения (%)
100,5
141,3
123,9
109,2
91,2
Пример 2
Три партии инъекций гидрохлорида иринотекана (коммерчески доступные из Daiichi Pharmeceutical Co., Ltd.; название продукции Topotecin injection) были соответствующим образом разбавлены, и на 1 весовую часть гидрохлорида иринотекана было добавлено 5 весовых частей ЧСА. Определение ЭТ производилось таким же способом, как и в Примере 1 по скорости выделения ЭТ, который был предварительно добавлен. Результаты представлены в Таблице 3.
Таблица 3
Концентрация гидрохлорида иринотекана (мг/мл)
0,2
0,04
0,02
0,01
Коэффициент разбавления (кратность)
100
500
1000
2000
Концентрация ЧСА (мг/мл)
1
0,2
0,01
0,005
Скорость выделения (%)
Партия A
74,7
90,7
103,3
97,6
Партия B
84,4
105,2
107,2
94,1
Партия C
95,8
125,3
144,5
111,4
Как легко видеть из Таблицы 3, скорость выделения ЭТ была очень хорошей. Таким образом, был разработан контроль качества процесса по приготовлению инъекций гидрохлорида иринотекана и может быть предложен процесс приготовления инъекций гидрохлорида иринотекана с концентрацией ЭТ меньше установленного предела.
Пример 3
[Реагент]
Образец
К тимиперону добавлялась вода для инъекций и растворение тимиперона производилось посредством добавления соответствующего количества 0,1 моль/мл соляной кислоты для получения 2 мг/мл раствора тимиперона. Раствор тимиперона использовался после соответствующего разбавления.
(2) ЭТ
Использовались контрольный стандартный ЭТ (полученный из E.coli UKT-B) в соответствующем разбавлении водой для инъекций.
(3) Раствор ЧСА
Использовался раствор человеческого сывороточного альбумина (2%) в соответствующем разбавлении водой для инъекций.
(4) Лизат
Для определения ЭТ (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) использовался лизат Limulus HS-J Test Wako (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), растворенный в буфере Tris-HCl.
[Процедура]
Образец разбавлялся водой для инъекций и в раствор добавлялся ЭТ в предварительно установленной концентрации. После добавления раствора ЧСА в концентрации 0,01%, лизата и перемешивания концентрация ЭТ в растворе измерялась с помощью устройства для измерения эндотоксина (Toxinometer ET-201 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)) по скорости выделения ЭТ, который был предварительно добавлен. Эксперимент проводился так же, как описано выше, за исключением того, что вместо добавления раствора ЧСА доводился pH или добавлялся цитрат натрия для нейтрализации факторов, мешающих анализу эндотоксина.
[Результат]
Результаты представлены в Таблице 4 и Таблице 5.
Таблица 4
Коэффициент разбавления (кратность)
8
16
32
64
128
256
512
Скорость выделения ЭТ (%)
ЧСА добавлен
Становится белым
96
100
91
82
-
-
ЧСА не добавлен
37
40
44
62
59
50
35
Таблица 5
Коэффициент разбавления (кратность)
1
10
100
1000
Скорость выделения ЭТ (%)
Доведение pH
102*
17
32
38
Добавление цитрата натрия
-
17
20
40
*: ложноположительный из-за выпадения тимиперона в осадок
Как показано в Таблице 4, в случае когда на 1 весовую часть тимиперона добавлялось от 0,5 до 7 весовых частей ЧСА, скорость выделения ЭТ существенно улучшалась, и анализ эндотоксина успешно проводился при разбавлении 2 мг/мл раствора тимиперона в 16 или более раз. Однако анализ эндотоксина был неудачным, когда производились доведение pH или добавление цитрата натрия - известные способы нейтрализации факторов, мешающих анализу эндотоксина.
Пример 4
[Реагент]
Образец
Соответствующее количество воды для инъекций и раствор 0.1 моль/мл соляной кислоты добавлялись к (-)-(1S, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S)-4-ацетокси-2-бензоилокси-9,10-[(1S)-2-(диметиламин)этилиденезокси]-5,20-эпокси-1-гидрокситакс-11-ен-13-ил(2R, 3S)-3-(терт-бутоксикарбониламино)-3-(3-фтор-2-пиридил)-2-гидроксипропионату (в дальнейшем соединение «А») для приготовления 2 мг/мл раствора соединения «А». Перед использованием раствор соединения «А» соответствующим образом разбавлялся водой для инъекций.
ЭТ
Использовался EC-6, эталонный стандарт по USP (SEIKAGAKU CORPORATION).
Раствор ЧСА
Использовался раствор человеческого сывороточного альбумина (2%), разбавленный водой для инъекций.
Лизат
Использовался лизат, включенный в набор Kinetic-QCL Kit (Daiichi Pure Chemicals, Co., Ltd.).
[Процедура]
Образец разбавлялся водой для инъекций и ЭТ добавлялся в предварительно установленной концентрации. После добавления соответствующего количества раствора ЧСА, лизата и перемешивания концентрация ЭТ в растворе определялась с помощью устройства по измерению эндотоксина (ELx 808 Reader (Daiichi Pure Chemicals, Co., Ltd.)) по скорости выделения ЭТ, который был предварительно добавлен.
[Результат]
Результаты представлены в Таблице 6. В растворе соединения «А» (концентрация 2 мг/мл), разбавленном соответствующим образом, обычный способ анализа эндотоксина не позволил определить ЭТ. Однако при добавлении от 0,08 до 0,3 весовых частей ЧСА на 1 весовую часть соединения «А» скорость выделения ЭТ улучшилась, и анализ эндотоксина был успешно проведен.
Таблица 6
Коэффициент разбавления (кратность)
4
8
16
32
64
Концентрация соединения «А» (мг/мл)
0,5
0,25
0,125
0,0625
0,0312
Концентрация ЧСА (мг/мл)
0
0
0
0
0,02
0,01
0,005
0
Скорость выделения (%)
0
0
15
23
87
84
78
40
Промышленная применимость
Как ясно указано в Примерах, описанных выше, способ анализа эндотоксина настоящего изобретения дает возможность определения и количественного анализа эндотоксина, полученного из грамотрицательных бактерий в образце, в котором эндотоксин не может быть с точностью определен и количественно проанализирован обычными способами.
В соответствии с данным изобретением процесс приготовления и контроля качества инъекций может быть достигнут без использования сложного анализа на пироген, а также может быть предложен процесс приготовления инъекций, имеющих концентрации эндотоксина меньше установленного предела.