КОМПЛЕКСЫ БЕЛКОВ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСА

1. Способ получения выделенного комплекса мембранных белков HCMV, содержащего gH, gL и по меньшей мере один дополнительный гликопротеин HCMV, где указанный способ включает рекомбинантную экспрессию указанных gH, gL и по меньшей мере еще одного гликопротеина HCMV.
2. Способ экспрессии комплекса мембранных белков HCMV, содержащего gH, gL и по меньшей мере еще один гликопротеин HCMV, посредством:
- введения одной или более молекул рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующих gH, gL и по меньшей мере еще один гликопротеин HCMV, в систему экспрессии;
- экспрессии указанной одной или более нуклеиновых кислот в указанной системе экспрессии; и
- очистки указанного комплекса мембранных белков.
3. Способ по п. 2, включающий стадию трансфекции клеток млекопитающих первой конструкцией нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент gH, лишенный трансмембранного домена, второй конструкцией нуклеиновой кислоты, кодирующей белок gL; и третьей конструкцией нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере еще один гликопротеин HCMV.
4. Способ по любому из предшествующих пунктов, где комплекс мембранных белков HCMV состоит из gH, gL и gO.
5. Способ по п. 1 или п. 2, где комплекс мембранных белков HCMV состоит из gH, gL, pUL128, pUL130 и pUL131A.
6. Способ по п. 5, где указанный:
- pUL128 содержит любую из последовательностей, приведенных в SEQ ID NO: 13, 14, 15 или 33, или состоит из нее;
- pUL130 содержит любую из последовательностей, приведенных в SEQ ID NO: 16, 17 или 34, или состоит из нее; и/или
- pUL131A содержит любую из последовательностей, приведенных в SEQ ID NO: 18, 19, 20 или 35, или состоит из нее.
7. Способ по п. 1 или п. 2, где комплекс мембранных белков HCMV обладает чистотой >85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94% или >95% по массе.
8. Способ по п. 1 или п. 2, где один или несколько из gH, gL, gO, pUL128, pUL130 и pUL131A в указанном комплексе мембранных белков HCMV:
- имеют характер гликозилирования млекопитающих; и/или
- не имеют характера гликозилирования клеток насекомых.
9. Очищенный комплекс мембранных белков HCMV, содержащий gH, gL и по меньшей мере еще один гликопротеин HCMV.
10. Комплекс мембранных белков HCMV, содержащий gH, gL и по меньшей мере еще один гликопротеин HCMV, где указанный комплекс получают способом по любому из предшествующих пунктов.
11. Иммуногенная композиция, содержащая выделенный комплекс мембранных белков HCMV по п. 9 или п. 10.
12. Иммуногенная композиция по п. 11, где указанная композиция представляет собой вакцину.
13. Иммуногенная композиция по п. 11, где указанная композиция содержит адъювант.
14. Иммуногенная композиция по п. 12, где указанный адъювант представляет собой эмульсию масло-в-воде или соль алюминия.
15. Иммуногенная композиция, содержащая:
- самореплицирующуюся молекулу РНК, кодирующую комплекс мембранных белков HCMV; и
- комплекс мембранных белков HCMV по п. 9 или п. 10.
16. Набор, содержащий:
- примирующую композицию, содержащую самореплицирующуюся молекулу РНК, кодирующую комплекс мембранных белков HCMV; и
- бустерную композицию, содержащую комплекс мембранных белков HCMV по п. 9 или п. 10.
17. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующая gL, gH, лишенный трансмембранного домена, и по меньшей мере один дополнительный гликопротеин HCMV, где указанная рекомбинантная нуклеиновая кислота:
(a) не является самореплицирующейся молекулой РНК;
(b) не является репликоном альфавируса;
(c) не кодирует каких-либо неструктурных белков альфавируса, таких как NSP1, NSP2, NSP3 и NSP4;
(d) не содержит: внутреннего участка связывания рибосомы
(IRES), такого как в EMCV или EV71; и/или
(e) не содержит вирусного участка 2A, такого как в FMDV.
18. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 17, где указанная молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты кодирует:
- gL, gH, лишенный трансмембранного домена, pUL128, pUL130 и pUL131A; или
- gL, gH, лишенный трансмембранного домена, и gO.
19. Множество рекомбинантных нуклеиновых кислот, где указанное множество рекомбинантных нуклеиновых кислот кодирует gL, gH, лишенный трансмембранного домена, и по меньшей мере один дополнительный гликопротеин HCMV, где одна или несколько, или все из указанного множества рекомбинантных нуклеиновых кислот:
(a) не является самореплицирующейся молекулой РНК;
(b) не является репликоном альфавируса;
(c) не кодирует каких-либо неструктурных белков альфавируса, таких как NSP1, NSP2, NSP3 и NSP4;
(d) не содержит: внутреннего участка связывания рибосомы (IRES), такого как в EMCV или EV71; и/или
(e) не содержит вирусного участка 2A, такого как в FMDV.
20. Множество рекомбинантных нуклеиновых кислот по п. 19, содержащее:
- первую конструкцию, кодирующую gH, лишенный трансмембранного домена, и gL; и
- вторую конструкцию, кодирующую один дополнительный гликопротеин HCMV.
21. Множество рекомбинантных нуклеиновых кислот по п. 20, где указанная вторая конструкция кодирует:
- pUL128, pUL130 и pUL131A; или
- gO.
22. Множество рекомбинантных нуклеиновых кислот по п. 21, содержащее:
- первую молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующую gL;
- вторую молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующую фрагмент gH, лишенный трансмембранного домена; и
- одну или несколько третьих молекул рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующих один или несколько дополнительных белков HCMV.
23. Клетка, содержащая gH, gL и по меньшей мере один дополнительный гликопротеин HCMV, где указанная клетка не:
(a) содержит геном HCMV;
(b) продуцирует вирионы HCMV;
(c) содержит самореплицирующиеся молекулы РНК, кодирующие указанные gH, gL и по меньшей мере один дополнительный гликопротеин HCMV; и/или
(d) содержит репликоны альфавируса.
24. Способ получения выделенного или очищенного комплекса мембранных белков HCMV, содержащего gH, gL и по меньшей мере один дополнительный гликопротеин HCMV, где указанный способ включает рост клетки по п. 23 в среде для роста.
25. Способ по п. 24, где указанный комплекс мембранных белков HCMV секретируется в указанную среду для роста.
26. Способ по п. 25, где указанный комплекс мембранных белков HCMV накапливается до концентрации >0,8 мг, >0,85 мг, >0,88 мг, >0,9 мг, >0,95 мг, >1 мг, >1,5 мг, >2 мг, >2,5 мг, >3 мг, >3,5 мг, >4 мг, >4,5 мг, >5 мг комплекса на литр среды для роста.
27. Режим примирования РНК - белкового бустера, включающий:
- проведение одной или нескольких примирующих иммунизации(иммунизаций) с помощью РНК, кодирующей один или несколько из белковых компонентов комплекса мембранных белков HCMV, где указанный комплекс мембранных белков HCMV содержит gH, gL и по меньшей мере один дополнительный гликопротеин HCMV;
- проведение одной или нескольких бустерных иммунизации(иммунизаций) позже с помощью очищенного комплекса мембранных белков HCMV, где указанный очищенный комплекс мембранных белков HCMV содержит gH, gL и по меньшей мере один дополнительный гликопротеин HCMV.