Применение биологически активных добавок к пище из молок лососей в условиях отравления промышленными ядами

2004

Известия ТИНРО

Том 136

УДК 577.1

М.Б.Гуляков; Т.Н.Пивненко, Н.Н.Ковалев, Ю.М.Позднякова,

Л.М.Эпштейн (Институт физиологии им. И.П.Павлова РАН,

г. Санкт-Петербург; ТИНРО-центр, г. Владивосток)

ПРИМЕНЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК К ПИЩЕ ИЗ МОЛОК ЛОСОСЕЙ В УСЛОВИЯХ ОТРАВЛЕНИЯ ПРОМЫШЛЕННЫМИ ЯДАМИ

Проведено исследование защиты организма от промышленных ядов с помощью приема БАД к пище "Низкомолекулярная ДНК" из молок лососей на основании выявления закономерностей воздействия на ориентацию организма в пространстве и функциональное состояние мозга. Показано влияние реагентов различной природы (масляной кислоты и этилбензола) на пространственную ориентацию, суммарную биоэлектрическую активность и возбудимость фронтальной коры, гиппокампа и ретикулярной формации среднего мозга, а также защитный эффект БАД. Предварительное содержание животных на диете, обогащенной препаратом низкомолекулярной ДНК из молок лососей, позволило полностью нивелировать вредное влияние масляной кислоты и резко снизить последствия отравления этилбензолом. Полученные результаты позволяют рекомендовать применение ДНК при отравлении промышленными ядами в качестве профилактического средства.

Guljakov M.B., Pivnenko T.N., Kovalev N.N., Pozdnjakova Ju.M., Ep-shtein L.M. Application of the biologically active supplements to food extracted from salmon milts in conditions of industrial poisoning // Izv. TINRO. — 2004. — Vol. 136. — P. 304-314.

Animal organism protection from industrial toxins by means of the BASF preparation "Low molecular weight DNA" extracted from salmon milts was investigated by the observation of spatial orientation and functional status of the brain. The influence of reagents with various nature (butanolic acid and ethyl benzene) on spatial orientation , total bioelectrical activity , and excitability of frontal cortex , hippocampus and reticular formation of a midbrain is explained; a protective effect of the BASF is demonstrated. The preliminary diet enriched with the preparation allowed to avoid completely the harmful influence of butanolic acid and to lower sharply the consequences of ethyl benzene poisoning. The preparation "Low molecular weight DNA" is recommended for application at industrial poisoning as a preventive means.

Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из различных источников применяется как лекарственное средство или как биологически активная добавка к пище (Касьяненко и др., 1999). Как установлено, ее физиологическая активность зависит от молекулярной массы ДНК (Каплина, 2000), причем чем меньше ее молекулярная масса, тем более широкое применение она находит в фармацевтическом и пищевом производстве за счет усиления биологической активности. При этом молекулярная масса фрагментов не должна превышать 500 кДа. Неде-натурированная ДНК с исходной массой в несколько тысяч кДа, как правило, применяется редко из-за плохой растворимости и, как следствие, низкой физио-

логической активности, в то время как низкомолекулярная ДНК из молок лососей обладает выраженной физиологической активностью, проявляющейся в повышении физической и умственной активности живого организма (Гуляков, 2000; Беседнова, Э пштейн, 2002). Полученные данные позволили сделать вывод о том, что стимулирующий эффект ДНК основан не на истощении резервов организма, а на оптимизации его функциональных систем.

Дальнейшие биологические исследования в этой области представляют большой интерес с точки зрения защиты организма при химических отравлениях, сопровождающихся нарушением ориентации организма в пространстве (ООП) (Медведев, 1993). ОО П представляет собой целостный комплексный интегратив-ный механизм, включающий в качестве необходимых звеньев как сенсорные механизмы локализации сигналов в пространстве, так и память, внимание, вероятностное прогнозирование и т.д. К наиболее значимым интегративным образованиям мозга, обеспечивающим ООП, относятся лобная, височные и теменные отделы коры больших полушарий, гиппокамп и базальные ганглии (Адрианов и др., 1987; Батуев и др., 1988; Aguirre, D'Esposito, 1999).

Целью настоящей работы явилось исследование возможной защиты организма от промышленных ядов с помощью приема БАД "Низкомолекулярная ДНК" из молок лососевых рыб и закономерностей ее воздействия на ООП и функциональное состояние мозга. В случае положительного эффекта значение явления огромно, так как позволяет защитить человека и животных от предполагаемого экологического воздействия простым способом: предварительным приемом в течение определенного времени низкомолекулярной ДНК.

Низкомолекулярную ДНК получали из мороженых молок лососей Ш-ГУ стадии зрелости. Метод выделения ДНК включал солевую экстракцию с последующим осаждением конечного вещества из раствора и удалением влаги сушкой на воздухе при комнатной температуре (Пат. РФ № 915446).

Количественное содержание ДНК в сырье определяли по методу Дише в препаратах — по разнице поглощения азотистых оснований (при 270 и 290 нм), полученных в результате гидролиза ДНК 0,5 %-ной хлорной кислотой при 100105 °С (Карклиня и др., 1989; С еверин, С оловьева, 1989).

Для определения молекулярной массы препарата проводили разделение ДНК методом электрофореза в 20 %-ном ПААГ. В качестве буфера использовали 0,05 М трис-борат, рН 8,3, с 1 мМ ЭДТА. Персульфат аммония вносили в концентрации 3 мМ, ТЕМЕД — до концентрации 0,017 % (1,5 мМ). Полимеризация геля в пластине 13,0 х 12,2 х 0,15 см длилась 30 мин. В препараты ДНК добавляли мочевину (до 5 М) и по 0,025 % лидирующих красителей (бромфено-лового синего и ксиленцианола). Для разрушения возможных агрегатов перед нанесением на гель препараты прогревали в течение 15 с при 90 °С. Разделение вели при температуре 20 оС и напряжении 100-150 В на пластину (Остер-ман, 1981). Фиксацию и окрашивание проводили в течение 10 ч в смеси ледяная уксусная кислота: этиловый спирт: вода в соотношении 1 : 1 : 1, содержащей 0,5 % метиленового синего. Денситограммы с пластинок снимали на денситометре и ltroscan X Ь ("ЬКВ", Ш веция). М олекулярную массу ДНК определяли по калибровочным графикам, построенным в координатах зависимости Н! от молекулярной массы по значениям, соответствующим наборам стандартных маркеров рВН 322/А1и I ("СибЭнзим", Россия): 241,8, 312,6, 395,4, 544,8 кДа.

Растворимость препарата ДНК определяли визуально. Для этого навеску препарата растворяли в 500-кратном количестве растворителя, непрерывно встряхивали в течение 10 мин при заданной температуре. Препарат считали прозрачным, если при рассмотрении его невооруженным глазом при освещении матовой лампой на черном фоне не наблюдалось присутствия нерастворенных частиц. Для каждой точки опыта готовили раствор, содержащий 0,2 г препарата на 100 мл растворителя (максимальное количество, растворимое в воде при 80 °С) и определяли зависимость растворимости от рН, температуры и концентрации №С1 с целью получения жидких форм БАД.

Биологические испытания проводили на 48 белых крысах-самцах линии Ви-стар массой 250-300 г. Пространственная ориентация изучалась на модели ус-ловнорефлекторного выбора безопасного рукава Т-образного лабиринта при избегании удара электротоком. Одновременно исследовалась суммарная биоэлектрическая активность (БА) и возбудимость фронтальной коры, гиппокампа и ретикулярной формации среднего мозга. Эксперименты проводились на бодрствующих свободноподвижных крысах с хронически вживленными биполярными электродами.

Регистрация БА осуществлялась на 17-канальном электроэнцефалографе фирмы "Нихон Кохен" (Япония). Анализ частотного спектра электрограмм производился на автоматическом анализаторе частот МАФ-5 той же фирмы. Показателем возбудимости мозговой структуры служила величина, обратная минимальной пороговой величине раздражающего структуру электрического тока, при которой возникали специфические поведенческая и электрическая реакции. Стимуляция при помощи электростимулятора ЭСЛ-2 производилась через те же электроды, с которых регистрировалась электрограмма, длительность стимуляции составляла 5 с, длительность импульсов — 1 мс для фронтальной коры и гиппокампа и 0,5 мс — для ретикулярной формации, частота — соответственно 50 и 250 Гц. В качестве химического воздействия, изменяющего функциональное состояние организма, использовалось внутрибрюшинное введение масляной кислоты (в дозе 0,1 LD50 — 450 мг/кг) или этилбензола (в дозе 0,1 LD50 — 500 мг/кг) в виде 20 %-ного раствора на растительном масле. Статистическая обработка результатов осуществлялась по t-критерию Стьюдента.

Животные были разделены на 2 группы равной численности (по 24 особи), первая содержалась на стандартном пищевом рационе, вторая получала в качестве пищевой добавки раствор низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб из расчета 12 мг/кг. Однократные инъекции масляной кислоты или этилбензола животным второй группы производились после 3-недельного содержания на обогащенной диете.

Состав и свойства БАД. Препарат низкомолекулярной ДНК включает 80 % ДНК, 8 % белка, 2 % липидов и 10 % влаги (Беседнова, Эпштейн, 2002). При электрофоретическом разделении (рис. 1) обнаружена только одна фракция ДНК с молекулярной массой около 300 кДа, что свидетельствует о высокой чистоте препарата.

Рис. 1. Денситограмма электрофоретического разделения низкомолекулярной ДНК из молок лососей

Fig. 1. Densitogram of electrophoretic division low molecular weight DNA from salmon milt

Для успешной работы с препаратом и повышения его усвояемости необходимо прежде всего найти эффективные способы его растворения. Наибольшая растворимость ДНК наблюдалась при рН 8 и выше, температуре 60-65 оС, в 0,9 %-ном растворе NaCl. При рН, соответствующем физиологическим жидкостям (6,8-6,9), скорость растворения ДНК составляла около 15 мин. Таким образом, нами в дальнейшем для растворения препарата при проведении физиологических опытов были выбраны следующие условия: рН 6,8, время 15 мин, температура 65 оС. После полного растворения ДНК раствор охлаждали до комнатной температуры, при этом осадок не образовывался.

Эксперименты по влиянию реагентов различной природы и возможности устранения их токсического действия с помощью низкомолекулярной ДНК из молок лососей позволили получить следующие результаты. Введение масляной кис-

лоты крысам, получавшим стандартное питание, вызывало ухудшение пространственной ориентации начиная со 2-го часа (84 % от нормы). Максимум дезориентации наблюдался в промежутке между 3 и 4-м часами действия вещества. В этот период число правильных ответов при выборе направления движения в Т-образном лабиринте составляло 76 % по сравнению с 96 % в норме (рис. 2). Спустя 5 ч после инъекции начиналось постепенное восстановление ориентации. К началу вторых суток после введения кислоты ориентация в Т-образном лабиринте не отличалась от нормы.

Рис. 2. Выбор крысами направления движения в Т-образном лабиринте в норме (N) и после инъекции масляной кислоты в контрольной и опытной (ДНК весь период) группах

Fig. 2. A rat's choice of movement direction in a Т-figu-rative labyrinth in norm (N) and after injection of butanol-ic acid in control and test (DNA at all times) groups

Масляная кислота вызывала изменения частотного состава БА фронтальной коры и гиппокампа начиная со 2-го часа после введения (рис. 3). Во фронтальной коре происходил сдвиг ритмики БА в низкочастотную область: доминирование частотных составляющих в диапазоне д-ритма (2-4 Гц) и угнетение частот в диапазоне 8-30 Гц (а- и Ь1-ритмы). В гиппокампе наблюдалось угнетение характерного для этой структуры q-ритма (4-8 Гц). Как в гиппокампе, так и во фронтальной коре ритмика БА достигала максимальных изменений к 4-му часу и возвращалась к норме через сутки после введения кислоты. Достоверных изменений частотных характеристик БА ретикулярной формации не наблюдалось.

Возбудимость фронтальной коры под действием масляной кислоты снижалась начиная с 1-го часа после инъекции, достигала минимума (72 % от нормы) на 4-м часу действия вещества, затем постепенно повышалась (рис. 4). Через 24 ч после введения кислоты возбудимость фронтальной коры не отличалась от нормы. Возбудимость гиппокампа снижалась на 2-м часу действия кислоты, достигала минимального значения на 4-м часу (82 % от нормы) и восстанавливалась к 5-му часу. Возбудимость ретикулярной формации была повышенна (в среднем на 12 %) в течение 4 ч после инъекции.

Иная картина наблюдалась в группе крыс, содержащихся на пищевом рационе, обогащенном низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб. При отравлении масляной кислотой эти крысы не продемонстрировали достоверных изменений пространственной ориентации. Частотные характеристики электрограмм и возбудимость фронтальной коры, гиппокампа и ретикулярной формации достоверно от нормы не отличались. Таким образом, использование в качестве пищевой добавки низкомолекулярной ДНК из молок лососевых практически нивелировало вредное влияние масляной кислоты на ЦНС.

весь период

Время после инъекции, ч

ФК

59 ар р N

ГК

5 0 a pi pj N

РФ

30

«

ч о

ад

30

20 --

10

ДНК весь период

Дъ

SL

24

%

40 30 20 10

ДНК весь период

24

%

40 30 20 10 —

8 е a Pj р2 N

ДНК весь период

2 4 5

Время после инъекций, ч

24

Рис. 3. Влияние масляной кислоты на частотный состав биоэлектрической активности фронтальной коры (ФК), гиппокампа (ГК) и ретикулярной формации (РФ) в норме (N) и после инъекции масляной кислоты в контрольной и опытной (ДНК весь период) группах. Бины гистограмм соответствуют (слева направо) d, q, a, b1 и b2 ритмам ЭЭГ. Темные бины соответствуют ритмам, доля которых в частотном спектре достоверно (р > 0,05) отличается от нормы

Fig. 3. Influence of a butanolic acid on frequency structure of bioelectrical activity frontal cortex (ФК), hippocampus (ГК) and midbrain reticular formation ^Ф) in norm (N) and after injection of a butanolic acid in control and test (DNA at all times) groups. Bins by each of bar correspond (from left to right) to d, q, a, b1 и b2 rhythms EEG. Dark bins correspond to rhythms, which part in frequency spectrum is authentic (р > 0.05) differs from norm

Fig. 4. Excitability rat's frontal cortex, hippocampus and midbrain reticular formation in norm (N) and after injection of a butanolic acid in control and test (DNA at all times) groups

Отравление этилбензолом крыс, содержащихся на стандартном пищевом рационе, вызывало ухудшение пространственной ориентации, которое отмечалось с 1-го часа действия вещества (60 % правильных ответов) (рис. 5). Со 2-го часа начиналась полная дезориентация (около 50 % правильных ответов). К концу первых суток отмечались частые отказы животных выполнять выработанную реакцию (покидание стартовой камеры лабиринта). Восстановление ориентации наблюдалось к 3-м сут.

100 -,

0 J —— —— !—1 L-L-1 !—1 L-L-1 <->-

N 1 2 4 24 48 72

Время после инъекции, ч

Ряд?

Ряд2

Рис. 5. Выбор крысами направления движения в Т-образном лабиринте в норме (N) и после инъекций этилбен-зола. Ряд 1 — опытная группа (кормление ДНК), ряд 2 — контрольная группа Fig. 5. Rat's choice of a direction of movement in a Т-figurative labyrinth in norm (N) and af-ter ethyl benzene injection: ряд 1 — test group (feeding DNA), ряд 2 — control group

В частотном спектре электрограммы фронтальной коры уже в течение 1-го часа после инъекции этилбензола наблюдались рост низкочастотных компонентов и уменьшение удельного веса высокочастотных составляющих спектра (рис. 6). К 4-му часу вклад низкочастотного д-ритма (2-4 Гц) составлял около 60 % всего частотного спектра, что почти вдвое превышало нормальный показатель. Снижение высокочастотных составляющих ритмики БА фронтальной коры наблюдалось в течение вторых суток после введения этилбензола. В гиппокампе, в отличие от фронтальной коры, в течение суток был отмечен рост высокочастотных компонентов ритма БА. В ретикулярной формации в течение 1-го часа после инъекции этил-бензола наблюдались рост удельного веса высокочастотных и снижение низкочастотных составляющих спектра БА. Начиная со 2-го часа действия вещества частотный состав электрограммы ретикулярной формации возвращался к нормальному виду и далее не изменялся.

Возбудимость фронтальной коры уменьшалась с 1-го часа после введения этилбензола, достигала своего минимального значения (50 % от нормы) к концу первых суток после инъекции и приходила в норму к 3-м сут (рис. 7). Возбудимость гиппокампа к первому часу после введения этилбензола повышалась в -

ФК

Ik

60 --

50

40 430 20 410

_L

5 e a Pj p2 N

tb

24

48

Контроль - 72 ч ДНК - 24 ч

2

4

ГК

40 30 20 h 10

8 е a р! р2 N

24

Контроль - 48 ч ДНК - 24 ч

4

2

РФ

40 - —

30

20 - —

10

п

8 е a Pj р2 N

24

48 Контроль - 72 ч ДНК - 24 ч

Время после инъекций, ч

Рис. 6. Влияние этилбензола на частотный состав биоэлектрической активности фронтальной коры (ФК), гиппокампа (ГК) и ретикулярной формации (ФК) в норме (N) и после инъекции масляной кислоты в контрольной и опытной (ДНК весь период) группах. Условные обозначения как на рис. 3

Fig. 6. Influence of a ethyl benzene on frequency structure of bioelectrical activity frontal cortex (ФК), hippocampus (ГК) and midbrain reticular formation ^Ф) in norm (N) and after ethyl benzene injection in control and test (DNA at all times) groups. Legend as fig. 3

2

4

Рис. 7. Возбудимость фронтальной коры, гиппокампа и ретикулярной формации в норме

Fig. 7. Excitability ratys frontal cortex, hippocampus and midbrain reticular formation in norm

3-м сут после инъекции. Возбудимость ретикулярной формации также повышалась на 1-м часу действия этилбензола (120 % от нормы), затем снижалась (89 % от нормы), оставалась в таком состоянии в течение суток и восстанавливалась на 2-е сут.

Таким образом, в развитии отравления этилбензолом выделяются две фазы. Первая фаза — 1-й час действия этилбензола — характеризуется активацией структур лимбико-ретикулярной системы — гиппокампа и ретикулярной формации среднего мозга. Вторая фаза характеризуется значительным по величине и длительным (до 2 сут) угнетением всех исследуемых структур.

При предварительном использовании ДНК-содержащей диеты в случае отравления этилбензолом общий характер двухфазной картины электрофизиологических показателей сохранялся. Но при этом доминирование низкочастотных составляющих БА коры составляло не 60 % (чистое отравление), а не более 35 % (отравление на фоне диеты с ДНК). Возбудимость коры не уменьшалась более чем на 20 % (по сравнению с 50 %), уменьшение возбудимости ретикулярной формации было недостоверным. Восстановление электрофизиологических показателей наблюдалось к концу первых, а не вторых суток. В пространственной ориентации отсутствовал период равновероятного выбора, минимальное число правильных ответов составило почти 75 %, не наблюдалось отказов от выполнения задачи, восстановление ориентации происходило к началу 2-х сут. Таким образом, предварительное использование указанной БАД значительно повышает устойчивость ЦНС к повреждающему воздействию этилбензола.

Разработанная технология выделения низкомолекулярной ДНК из молок лососей позволяет получить препарат, умеренно растворимый в воде с рН около 7, что, в свою очередь, дает возможность проводить любые физиологические опыты.

Полученные данные показывают, что в зависимости от природы и силы повреждающего реагента происходят закономерные изменения функционального состояния исследованных структур головного мозга.

Важно отметить, что при введении как масляной кислоты, так и этилбензола изменяется не просто состояние отдельных структур мозга, но и взаимодействие между ними в целом, на что указывает рассогласование между состояниями фронтальной коры и ретикулярной формации. Если в норме ретикулярная формация является активирующей системой коры и ее возбуждение ведет к возбуждению коры (Moruzzi, Magoun, 1949; Steriade, McCarley, 1990), то в случае отравления масляной кислотой и в первой фазе отравления этилбензолом активация ретикулярной формации сопровождалась угнетением фронтальной коры.

Обнаружено четкое соответствие между функциональным состоянием фронтальной коры, гиппокампа и ретикулярной формации среднего мозга и правильностью ООП, которые одновременно ухудшались по мере развития отравления и практически одновременно улучшались в восстановительный период.

Ухудшение ориентации в Т-образном лабиринте наблюдается при нарушениях работы различных нейромедиаторных систем фронтальной коры: дофами-нергической (Murphy et al., 1996; Verma, Moghaddam, 1996; Mizoguchi et al., 2000), глутаматергической и ГАМК-ергической, а также холинергической системы гиппокампа (Izquierdo et al. , 1998). Таким образом , нейрохимическая система обеспечения ориентации организма в пространстве носит полимедиаторный характер. Практически невозможно выделить какой-либо один компонент, защита которого определяет сохранение всей системы ориентации.

В исследованиях на здоровых людях было показано, что применение низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб приводит к оптимизации корково-подкорковых отношений в центральной нервной системе, которая выражалась в увеличении индекса альфа-ритма на фоне снижения индексов медленных волн и бета-активности (Гуляков, 2000; Беседнова, Эпштейн, 2002). Полученные в настоящей работе результаты показывают, что способность низкомолекулярной ДНК оптимизировать внутрицентральные взаимоотношения в головном мозге

проявляется и на фоне отравлений. В ероятно, эта стабилизация внутрицентраль-ных взаимоотношений и является механизмом защиты ООП от воздействия ксенобиотиков.

Полученные в работе данные указывают на успешность применения в качестве мер, защищающих ОО П от воздействия ксенобиотиков, БАД системного, общеукрепляющего действия. Предварительное 3-недельное содержание животных на диете, обогащенной препаратом низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб, полностью нивелировало вредное влияние масляной кислоты и резко снизило последствия отравления этилбензолом, что позволяет в дальнейшем применять низкомолекулярную ДНК при отравлении и другими промышленными ядами в качестве профилактического средства.

Литература

Адрианов О.С., Молодкина Л.Н., Ямщикова Н.Г. Ассоциативные системы мозга и экстраполяционное поведение. — М., 1987. — 188 с.

Батуев А.С., Демьяненко Г.П., Орлов А.А., Шеффер В.И. Нейронные механизмы бодрствующего мозга обезьян. — Л., 1988. — 238 с.

Беседнова Н.Н., Эпштейн Л.М. Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок рыб — перспективы клинического применения. — Владивосток: ТИНРО-центр, 2002. — 38 с.

Гуляков М.Б. Корково-подкорковые механизмы принятия решения и коррекция их функционального нарушения // 30-е Всерос. совещ. по проблемам высшей нервной деятельности, посвященное 150-летию со дня рождения И.П.Павлова. — СПб.: Ин-т физиологии им. И.П.Павлова РАН, 2000. — Т. 1. — С. 110.

Каплина Э.Н. Некоторые итоги клинического применения препарата Деринат с 1976 по 2000 г. // Использование препарата Деринат в различных областях медицины: Тез. докл. 1-й Всерос. конф. — М., 2000. — С. 3-6.

Карклиня В.А., Бирска И.А., Лимаренко Ю.А. Количественное определение нуклеиновых кислот в молоках лососевых различными методами // Химия природных соединений. — 1989. — Т. 1. — С. 122-126.

Касьяненко Ю.И., Эпштейн Л.М., Гажа А.К. и др. Биологически активная пищевая добавка — дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок лососевых // Изв. ТИНРО. — 1999. — Т. 125. — С. 139-146.

Медведев В.И. Экстремальные состояния человека в процессе деятельности // Физиология трудовой деятельности. — СПб.: Наука, 1993. — С. 153-161.

Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. — М.: Наука, 1981. — 286 с.

Пат. № 915446 СССР. Способ получения ДНК из молок рыб / Гаймула М.А., Кална В.Х., Микстайс У.Я., Эпштейн Л.М. — Заявлено 10.10.80; Опубл. 01.07.91.

Северин С.Е., Соловьёва Г.А. Практикум по биохимии. — М.: МГУ, 1989. — 163 с.

Aguirre G.K., D'Esposito M. Topographical disorientation: a synthesis and taxonomy // Brain. — 1999. — Vol. 122, № 9. — P. 1613-1628.

Izquierdo I., Izquierdo L.A., Barros D.M. et al. Differential involvement of cortical receptor mechanisms in working, short-term and long-term memory // Behav. Pharmacol. — 1998. — № 9. — P. 421-427.

Mizoguchi K., Yuzurihara M., Ishige A. et al. Chronic Stress Induces Impairment of Spatial Working Memory Because of Prefrontal Dopaminergic Dysfunction // J. Neurosci. — 2000. — № 20(4). — P. 1568-1574.

Moruzzi G., Magoun H.W. Brainstem reticular formation and activation of the EEG // Electroencephalogr Clin. Neurophysiol. — 1949. — № 1. — P. 455-473.

Murphy B.L., Arnsten A.T.F., Goldman-Rakic P.S., Roth R.H. Increased dopam-ine turnover in the prefrontal cortex impairs spatial working memory performance in rats and monkeys // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1996. — № 96. — P. 1325-1329.

Verma A., Moghaddam B. NMDA receptor antagonists impair prefrontal cortex function as assessed via spatial delayed alternation performance in rats: modulation by dopamine // J. Neurosci. — 1996. — № 16. — P. 373-379.

Steriade M., McCarley R. Brainstem control of wakefulness and sleep. — N.Y.: Plenum, 1990.