МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НОРО-, АСТРО-ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ И КАМПИЛОБАКТЕРИО ЗА У ДЕТЕЙ В КЫРГЫЗСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ 

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

НОРО-, АСТРО-ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ И КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА У ДЕТЕЙ В КЫРГЫЗСКОЙ

РЕСпУБЛИКЕ

С.Т. Абдикаримов, К.Т. Касымбекова, Г.О. Ландграф, Д.О. Ашыралиева

Департамент профилактики заболеваний и экспертизы Министерства здравоохранения

Кыргызской Республики Бишкек, Кыргызстан

Кыргыз Республикасындагы балдардагы норо-, астро-вирустук инфекцияларына жана кампилобактериозго молекулярдык-генетикалык изилдеелер

С.Т. Абдикаримов, К.Т. Касымбекова, Г.О. Ландграф, Д.О. Ашыралиева

Корутунду: Кыргыз Республикасындагы толук эмес изилденген курч ич еткек ооруларынын этиологиялык структурасы молекулярдык-генетикалык ыкма менен аныкталды.

Негизги сездер: вирустар, бактериялар, этиологиялык структура, ПЦР

Molecular-genetic studies of Noro-, Astro-virus infections and campylobacteri-osis in children in

Kyrgyz Republic

S.T. Abdikarimov, K.T. Kasymbekova, G.O. Landgraf, D.O. Ashyralieva

Актуальность

Диарея является одной из пяти основных причин смертности среди детей до 5 лет жизни. Согласно данным Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ), более 60% случаев острого инфекционного гастроэнтерита среди детей в возрасте младше пяти лет вызываются возбудителями вирусной природы. Среди них наиболее распространенными являются ротавирусы (РВ) и норовирусы, которые обуславливают возникновение вспышек острых гастроэнтеритов и пищевых отравлений в различных странах мира. Ежегодно в США норовирусы являются причиной около 5,5 млн случаев вспышек пищевых отравлений, в том числе 572 случаев смерти от данной инфекции [1-8].

Многолетний ретроспективный анализ заболеваемости ОКИ неустановленной этиологии по Кыр-

гызской Республике свидетельствует о стабильно высоком уровне заболеваемости, варьирующем от 156,5 до 342,5 на 100 тысяч населения. Отмечена тенденция к росту заболеваемости ОКИ неустановленной этиологии (рис.1).

Решение данной проблемы требует усовершенствования лабораторной диагностики ОКИ. Одним из подходов является внедрение молеку-лярно-генетических методов исследования ОКИ неустановленной этиологии. В литературе есть данные о этиологической роли малоизученных кишечных вирусов (норо-, астро-, ротавирусов), вызывающих ОКИ у детей раннего возраста [1-8]. Однако, молекулярно-генетическое обследование малоизученных ОКИ (норо-, астровирусной инфекций, кампилобактериозов) в центрально-азиатском регионе не проводилось. Широкораспространённые

400 350 | 300

х

аз

d 200 л

| 150 1 100 50 0

230,4 243.4

336,7

150,6

157,9

100,3 97 3

19921993199419951996199719981999200020012002200320042005200620072008200920102011

Рис. 1. Многолетняя динамика заболеваемости ОКИ неустановленной этиологии в Кыргызской

Республике

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ HOPO-, АСТРО-ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ...

Salmonella 3%

рис. 2. Этиологическая структура оКи у детей до 5 лет

бактериальные кишечные патогены в республике исследуются классическим бактериологическим методом, при котором отмечается низкий уровень подтверждаемости ОКИ, что зачастую обусловлено применением антибиотиков до проведения обследования. Учитывая, что молекулярно-генетические методы исследования не зависят от назначения антибиотикотерапии, мы применили данный метод для диагностики ОКИ неустановленной этиологии у детей.

Материал и методы исследования

В течение 2007-2009 года нами было проведено молекулярно - генетическое обследование 1152 детей до 5 лет жизни с ОКИ, госпитализированных в инфекционные отделения г. Бишкек и г. Ош, выбранные для сравнительного изучения распространенности в различных климато-гео-графических регионах Кыргызской Республики (северный, южный регионы).

Исследование проводилось на наиболее распространенные этиологические агенты ОКИ: норовирусы, ротавирусы, астровирусы, аденовирусы F, кампилобактерии, шигеллы, сальмонеллы. При этом был использован метод мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с использованием коммерческих тест - систем производства АмплиСенс (Россия). Учет реакции проводили на приборе Real-Time PCR "Corbett Research"(Австралия). Для исследования отбирали пробы стула от детей с диареей, отвечающих стандартному определению случая. Детей обследовали при поступлении в стационары.

Анализ результатов осуществлялся с использованием компьютерной базы данных EPI INFO, включающей клинические параметры, результаты лабораторных исследований и эпидемиологические данные.

результаты и обсуждение

Впервые в Центрально - азиатском регионе

нами проведено молекулярно-генетическое исследование норовирусной,астровирусной инфекций. Кроме того была изучена этиологическая роль таких бактериальных патогенов как шигеллы, сальмонеллы, кампилобактерии и широко распространенных энтеральных вирусов (рота-, аденовирусов), значимость которых была показана ранее в работах Алымбаевой Д.Б., Касымбековой К.Т.(1,2).

По результатам молекулярно-генетического обследования нами установлено, что в этиологической структуре ОКИ превалировали кишечные вирусы: ротавирусы, норовирусы и аденовирусы ^ составившие 35,9% , 16,9% и 11,7% соответственно из числа положительных находок. Среди бактериальных патогенов чаще выявляли бактерии рода шигелла (11,4%). Этиологическая роль кампилобактерий и сальмонелл была существенно ниже и составляла 3,5% и 3% соответственно (рис.2).

При обследовании детей одновременно выявлялись ассоциации нескольких вирусов и бактерий в 223 случаях, что составило 20% из числа обследованных. Наиболее часто этиологическим агентом заболевания были 2 возбудителя (85%), реже определяли 3 и 4 патогена (12% и 3% соответственно).

норовирусная инфекция

Норовирусы (сем.СаПсм^ае, род Norovirus) являются причиной многочисленных вспышек и спорадических случаев ОКИ во всех возрастных группах населения, как в развивающихся, так и в развитых странах. Норовирусы зачастую обуславливают вспышки ОКИ в стационарах, санаториях, школах, круизных лайнерах и т.д. Наиболее опасны норовирусы для физически ослабленных лиц, детей и людей пожилого возраста. Однако, по данным некоторых авторов норовирусная инфекция может проходить без симптоматики (7).

Таблица 1.

Возрастная структура лабораторно - подтвержденных случаев норовирусной инфекции у детей до 5 лет жизни с ОКИ

Возр. группы Кол-во обсл. пол. рез-т Достоверность различий

абс. %+т

0-3 мес 134 12 6.2+1.7 1111=0, 1112=-2.6, 1113=-8.8. 1114=-6.2, 1115=0, 1116 =1.5, 1117=2.4

4-6 мес 173 27 13.8+2.5 1211=2.6, 1212=0, 1213=-6.2. 1214=-3.6, 1215=2.6, 1216 =3.9, 1217=4.7

7-12 мес 437 79 40.5+3.5 1311=8.8, 1312=6.2, 1313=0. 1314=2.5, 1315=8.8, 1316 =10.0, 1317=10.8

13-23 мес 300 56 28.7+3.2 1411=6.2, 1412=3.6, 1413=-2.5. 1414=0, 1415=6.2, 1416 =7.4, 1417=8.1

24-35 мес 62 12 6.2+1.7 1511=0, 1512=-2.6, 1513=-8.8. 1514=-6.2, 1515=0, 1516 =1.5, 1517=2.4

36-47 мес 33 6 3.1+1.2 1611=-1.5,1612=-3.9, 1613=-10.0, 1614=-7.4, 1615=-1.5, 1616 =0, 1617=1

48-60 мес 13 3 1.5+0.9 1711=-2.4,1712=-4.7, 1713=-10.8, 1714=-8.1, 1715=-2.4, 1716 =-1.0, 1717=0

Всего 1152 195 100%

Контагиозность норовирусов чрезвычайно высока, что связано с их крайне низкой инфекционной дозой, а также высокой устойчивостью к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды. Различают несколько геногрупп норовируса и наиболее часто у человека обнаруживается геногруппа СИ. В Кыргызской Республике исследований по изучению распространения норовирусов и их роли в развитии ОКИ ранее не проводились, не были разработаны подходы и алгоритмы лабораторной диагностики норовирусной инфекции.

В связи с этим нами проведено обследование 1152 детей до 5 лет жизни, в 195 случаях (16,9%) лабораторно подтверждена норовирусная инфекция. Анализ возрастной структуры свидетельствует, что чаще норовирус поражал детей 7-12, 13-23 и 4-6 месяцев жизни. Удельный вес данных возрастных групп в структуре норовирусной инфекции составил 40,5%, 28,7% и 13,8% соответственно. Существенно реже норовирусы выявляли у детей до 3 месяцев жизни, 24-35, 36-47 и 48-60 месяцев жизни (6,2%, 6,2%, 3,1% и 1,5% соответственно) (табл. 1). Такое возрастное распределение, по-видимому, связано с особенностями поведенческого характера детей, т.е. дети более старшего возраста немного владеют навыками личной гигиены. Анализ частоты обнаружения норовирусной инфекции по возрастным группам в двух климато-географи-чески различных регионах республики (северный и южный регион) существенных различий не выявил.

Астровирусная инфекция

Астровирусы (сем. Astroviridae) являются одним из трех ведущих вирусов, вызывающих чаще гастроэнтериты и реже вспышки ОКИ. В настоящее время известно 8 серотипов астровируса человека. По данным некоторых авторов к трем годам жизни

большинство детей становятся серопозитивными (8). До настоящего времени в Центрально-азиатском регионе (ЦАР) не была изучена этиологическая значимость астровирусов.

Для оценки значимости астровирусов в заболеваемости острыми гастроэнтеритами нами было обследовано 1152 детей до 5 лет жизни в двух регионах страны (г.Бишкек-север, г.Ош-юг республики). Астровирусная инфекция была обнаружена в 100 случаях (9%). При этом моноинфекция была установлена в 28 (28%) случаях, ассоциации с другими кишечными вирусами и бактериями в 68 (68%) случаях. При анализе частоты распределения астровирусной инфекции среди детей до пяти лет жизни было установлено, что инфекция чаще выявлялся у детей 7-12, 13-23 месяцев жизни 35%, 37% соответственно. Существенно реже ас-тровирус поражал детей более старшего возраста 24-35, 36-47, 48-60 месяцев жизни (1-3%) (табл.2). Аналогичное распределение было выявлено при анализе норовирусной инфекции, что видимо связано фекально-оральным механизмом передачи инфекции, который чаще реализуется при отсутствии навыков личной гигиены детей данного возрастной категории.

Кампилобактериозная инфекция

Лабораторная диагностика кампилобактериоза в странах Европейского Союза и США налажена и считается одной из самых значимых причин бактериальных ОКИ, составляя 60-90 на 100 тыс. населения в год.

Гастроинтестинальную форму кампилобакте-риоза необходимо дифференцировать от других гастроэнтеритов (сальмонеллеза, дизентерии Зон-не, ротавирусных заболеваний, гастроэнтеритов, обусловленных вирусом Норволк, воздействия стафилококкового энтеротоксина и др.).

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НОРО-, АСТРО-ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ...

Таблица 2.

Возрастная структура лабораторно - подтвержденных случаев астровирусной инфекции у детей до 5 лет жизни с ОКИ

Возр. группы Кол-во исслед. полож. рез. Всего по регионам

абс. %+m достоверность различий

0-3 мес 134 10 10.0+3.0 t1t1=0, t1t2=-0.2, t1t3=-4.4. t1t4=-4.8, t1t5=2.0, t1t6 =2.0, t1t7=2.8

4-6 мес 173 11 11+3.1 t2t1=0.2, t2t2=0, t2t3=-4.2. t2t4=-4.5, t2t5=2.2, t2t6 =2.2, t2t7=3.0

7-12 мес 437 35 35+4.8 t3t1=4.4, t3t2=4.2, t3t3=0. t3t4=-0.3, t3t5=6.3, t3t6 =6.3, t3t7=7.0

13-23 мес 300 37 37+4.8 t4t1=4.8, t4t2=4.5, t4t3=0.3. t4t4=0, t4t5=6.6, t4t6 =6.6, t4t7=7.3

24-35 мес 62 3 3.0+1.7 t5t1=-2.0, t5t2=-2.2, t5t3=-6.3. t5t4=-6.6, t5t5=0, t5t6 =0, t5t7=1.0

36-47 мес 33 3 3.0+1.7 t6t1=-2.0, t6t2=-2.2, t6t3=-6.3, t6t4=-6.6, t6t5=0, t6t6 =0, t6t7=1.0

48-60 мес 13 1 1.0+1.0 t7t1=-2.8, t7t2=-3.0, t7t3=-7.0, t7t4=-7.3, t7t5=1.0, t7t6 =-1.0, t7t7=0

Всего 1152 100 100+0

Таблица 3.

Возрастная структура лабораторных подвержденных случаев кампилобактериозной инфекции у детей

до 5 лет жизни с ОКИ

Возр. группы Кол-во исслед. Полож. рез. Всего по регионам

абс. %+m достоверность различий

0-3 мес 134 1 2.5+2.5 t1t1=0, t1t2=-1.4, t1t3=-4.1. t1t4=-5.2, t1t5=-1.0, t1t6 =1.0, t1t7=1.0

4-6 мес 173 4 10+4.7 t2t1=1.4, t2t2=0, t2t3=-2.8. t2t4=-3.8, t2t5=0.4, t2t6 =2.1, t2t7=2.1

7-12 мес 437 14 35+7.5 t3t1=4.1, t3t2=2.8, t3t3=-0. t3t4=-0.9, t3t5=3.2, t3t6 =4.6, t3t7=4.6

13-23 мес 300 18 45+7.9 t4t1=5.2, t4t2=3.8, t4t3=0.9. t4t4=0, t4t5=4.2, t4t6 =5.7, t4t7=5.7

24-35 мес 62 3 7.5+4.2 t5t1=1.0, t5t2=-0.4, t5t3=-3.2. t5t4=-4.2, t5t5=0, t5t6 =1.8, t5t7=1.8

36-47 мес 33 0 0.0+0.0 t6t1=-1.0, t6t2=-2.1, t6t3=-4.6, t6t4=-5.7, t6t5=-1.8, t6t6 =0, t6t7=0

48-60 мес 13 0 0.0+1.0 t7t1=-1.0, t7t2=-2.1, t7t3=-4.6, t7t4=-5.7, t7t5=-1.8, t7t6 =0, t7t7=0

Всего 1152 40 100+0

Схожесть симптомов при других ОКИ не позволяет клинически установить кампилобактериоз, необходимо лабораторное подтверждение. К сожалению, при классическом бактериологическом обследовании не всегда удается выделить бактерии рода Campylobacter, это связано с тем, что возбудитель чувствителен к воздействию атмосферного кислорода и продуктам метаболизма сопутствующей фекальной флоры, снижающих эффективность культурального метода. Из-за затратности и длительности (от забора материала до получения результата требуется до 6 дней, когда больные уже пролечены), бактериологический метод диагностики кампилобактериозов не используется. В связи с этим отсутствуют истинные данные о распространенности этой инфекции в республике. Введение современных молекулярно-генети-ческих методов исследования позволяет проводить диагностику кампилобактериоза не зависимо от

предшествующего лечения антибиотиками.

Впервые в Кыргызской Республике нами было проведено изучение значимости кампилобактерио-за в структуре диарей неустановленной этиологии у детей. Из 1582 обследованных детей в 40 случаях (3%) выявлена кампилобактериозная инфекция, в том числе в 32 случаях (80%) в ассоциации с вирусами и бактериями. Анализ возрастной структуры кампилобактериозов показал, что чаще всего кампилобактерии поражали детей 13-23, 7-12 жизни (45% и 35%, соответственно). Среди детей старших возрастных групп 36-47 и 48-60 месяцев жизни кампилобактерии не выявлены (табл. 3).

Выводы

1. В этиологической структуре ОКИ за 20072009гг превалировали кишечные вирусы: ротави-русы, норовирусы и аденовирусы ^ составившие 35,9% , 16,9% и 11,7% соответственно из числа

положительных находок.

2. Этиологическая роль шигелл, сальмонел и кампилобактерий была существенно ниже, составляла 11,7%, 3,5% и 3% соответственно.

3. Норовирусная инфекция чаще поражала детей 7-12, 13-23 и 4-6 месяцев жизни.

4. Кампилобактериозы, астровирусная инфекции чаще выявлялись у детей 13-23 месяцев жизни.

Список литературы

1. Касымбекова К.Т. Проблема острых кишечных инфекций в Кыргызской Республике //Актуальные вопросы эпидемиологии инфекционных болезней. - М., 2004. - Вып.6.

- С.97-99.

2. Алымбаева Д.Б. Материалы изучения ротавирусных ГЭ в Киргизии // Тезисы докладов I съезда гигиенистов, эпидемиологов, инфекционистов Киргизии. - Фрунзе, 1986.

- С.145-147.

3. Кудин А.П., Лагир Г.М. Инфекционные диареи у детей.

- Минск, 2008. - С.10-12.

4. Stephan S. Monroe. Control and Prevention ofViral Gastroenteritis

//Emerging Infection Diseases. 2011. - Vol.17, N 8.

5. Elissavet Gkogka, Martine W.Reij, Arie H.Havelaar, Marcel H. Zwietering, and Leon G.M.Gorris. Risk-based Estimate of Effect of Foodborne Diseases on Public Health, Greece //Emerging Infectious Diseases. - 2011. - Vol.17, N 9.

6. Leon W. Nitiema, Johan Nordgren, Djeneba Ouermi, Dayeri Dianou, Alfred S. Traore, LennartSvensson, Jacques Simpore Burden of rotavirus and other enteropathogens among children with diarrhea in Burkina Faso // International Journal of Infectious Diseases. - 2011. - Vol.15, Issue 9. - P.e646-e652.

7. Aron J. Hall, Marina Rosenthal, Nicole Gregoricus, Sharon A.Greene, Jeana Ferguson, Olga L.Henao, Jan Vinje, Ben A.Lopman, Umesh D.Parashar, and Marc-Alain Widdowson. Incidence of Acute Gastroenteritis and Role of Norovirus, Georgia, USA, 2004-2005 // Emerging Infectious Diseases.

- 2011. - Vol.17, N 8.

8. Salva F. Ahmed, Peter J.Sebeny, John D.Klena, Guillermo Pimentel, AdelMansour, AmelM.Naguib, JodyBruton, Sylvia Y.N.Young, Lori R.Holtz, and David Wang. Novel Astroviruses in children, Egypt // Emerging Infectious Diseases. - 2011.

- Vol.17, N12.

ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ФОРМИРОВАНИЯ МЕХАНИЗМА ПЕРЕДАЧИ ЗООНОЗНОГО ХЛАМИДИОЗА В УСЛОВИЯХ РЕГИОНОВ КЫРГЫЗСТАНА

А.А. Абдыкадырова

КГМА им. И.К. Ахунбаева г. Бишкек, Кыргызстан

Кыргызстандын аймактарынын шарттарында жаныбарлардан жуккан хламидиоздун жугуу механизминин калыптанышынын эпидемиологиялык баамдоосу

А.А. Абдыкадырова И.К.Ахунбаев атындагы КММА Бишкек, Кыргызстан

Корутунду: Статьяда республикадагы бруцеллез боюнча абалыберилген. Аны мене бирге бруцеллез булагындагы эпидемиялогикалык изулдонун жыйнтыгы даназаланган.

Негизги сездер: хламидиялар, эпизоотология, эпидемиология, таркалышы, жугушуусу.

Epidemiological assessment of the formation of zoonotic chlamydiosis transmission mechanism in

different regions of Kyrgyzstan

A. A. Abdykadyrova I.K. Akhunbaev KSMA, Bishkek, Kyrgyzstan

Abstract. The article presents a review of the epidemiologic situation regarding brucellosis and data of epidemiologic inspection of brucellosis foci in the Naryn Region.

Key words: Chlamydia, epizootology, epidemiology, infectivity, prevalence

Природно-климатические условия Кыргызстана способствуют развитию многоотраслевого сельского хозяйства. Профилирующим направлением народного хозяйства является животноводство, что, в свою очередь, увеличивает потенциальную угрозу заболеваний людей такими зоонозными инфекциями, как бруцеллез, сибирская язва, хламидиоз. Этому способствуют и происходящие с начала 90-х годов XX столетия существенные изменения социально-экономических отношений в сельском

хозяйстве республики, связанные с возникновением новых форм ведения животноводства и, как следствие, смещением эпизоотических очагов из общественного сектора в частный. Республика по своим ландшафтно-географическим и климатическим характеристикам, наличию неблагополучных по бруцеллезу и зоонозному хламидиозу является территорией, где совокупность природных, социальных и эпизоотологических факторов способствует длительной циркуляции возбудителя этих