СПОСОБ ПОНИЖЕНИЯ АДСОРБЦИИ ПУЗЫРЬКОВ
METHOD FOR BUBBLE ADSORPTION REDUCTION

Область техники, к которой относится изобретение
[0001] Представленное изобретение относится к способу понижения адсорбции пузырьков на боковой поверхности ячейки в иммуноанализе с использованием сухой пластмассовой ячейки.
Уровень техники
[0002] Метод иммунологического анализа широко используется в клинических исследованиях сыворотки, плазмы, мочи, фекалий, спинномозговой жидкости и тому подобном. В последнее время обычно используют автоматические анализаторы, допускающие автоматическое проведение серии анализов от реакции до измерения, потому что они предоставляют возможность простого и быстрого измерения.
[0003] Автоматические анализаторы подразделяют на два класса: анализаторы, ячейку которых, в которую помещают реакционную жидкость, промывают и повторно используют, и анализаторы, ячейка которых является одноразовой. Одноразовые ячейки во многих случаях представляют собой сухую пластмассовую ячейку.
[0004] В автоматических анализаторах с использованием сухой пластмассовой ячейки, когда используют реагент для автоматических анализаторов, использующих другие влажные ячейки, эффективность анализа может в некоторых случаях ухудшаться. Однако причины этого не выяснены, и проблемы не решены.
[0005] С другой стороны, добавление поверхностно-активного вещества к реагенту для иммунологического анализа является известным и часто используется в качестве средства для управления реакционной способностью, избегая, например, влияния на матрицу, или в качестве средства для усиления величины изменения спектральной поглощательной способности (см. патентные документы 1 и 2).
Список ссылок
Патентный документ
[0006] Патентный документ 1. JP-A-2005-241415.
Патентный документ 2. JP-A-2006-126166.
Сущность изобретения
Проблемы, которые должны быть решены с помощью изобретения
[0007] Представленное изобретение относится к предоставлению средства для улучшения точности измерения в иммуноанализе с использованием сухой пластмассовой ячейки.
Средство решения проблем
[0008] Авторы представленной заявки провели интенсивные исследования, при этом они обнаружили, что при иммуноанализе с использованием сухой пластмассовой ячейки пузырьки часто адсорбируются на боковой поверхности ячейки, которая является поверхностью, подлежащей освещению (спектрофотометрическая поверхность), ухудшая за счет этого точность измерения. Затем они обнаружили, что адсорбцию пузырьков можно легко уменьшить, обеспечивая возможность присутствия в системе реакции и измерения поверхностно-активного вещества.
[0009] Соответственно представленное изобретение состоит в следующем 1)-11).
1) способ предотвращения адсорбции пузырьков на боковой поверхности ячейки в иммуноанализе, при этом способ включает проведение реакции и/или измерения в присутствии поверхностно-активного вещества, при этом иммуноанализ включает проведение реакции антиген-антитело в сухой пластмассовой ячейке с использованием реагента для иммуноанализа, который иммунологически реагирует с веществом, которое необходимо измерить в образце, и проведение оптического измерения полученного в результате прореагировавшего продукта.
2) способ согласно пункту 1) выше, в котором поверхностно-активным веществом является неионное поверхностно-активное вещество.
3) способ согласно пункту 1) выше, в котором поверхностно-активным веществом является неионное поверхностно-активное вещество типа полиоксиэтилена.
4) способ согласно пунктам 1)-3) выше, в котором концентрация поверхностно-активного вещества в системе реакции и/или измерения составляет от 0,005 до 1,000%.
5) способ согласно пунктам 1)-4) выше, в котором иммуноанализом является иммуноагглютинационный анализ.
6) способ согласно пункту 5) выше, в котором иммуноагглютинационным анализом является латексный агглютинационный анализ.
7) реагент для иммуноанализа, подлежащий использованию в способе согласно пункту 1) выше, содержащий поверхностно-активное вещество.
8) реагент согласно пункту 7) выше, в котором поверхностно-активным веществом является неионное поверхностно-активное вещество.
9) реагент согласно пункту 7) выше, в котором поверхностно-активным веществом является неионное поверхностно-активное вещество типа полиоксиэтилена.
10) реагент согласно пунктам 7)-9) выше, дополнительно содержащий иммуноагглютинационный реагент.
11) реагент согласно пункту 10) выше, в котором иммуноагглютинационным реагентом является латексный агглютинационный реагент.
Результаты изобретения
[0010] Согласно способу представленного изобретения, простое средство, обеспечивающее наличие поверхностно-активного вещества в системе реакции и измерения, предоставляет возможность эффективного предотвращения адсорбции пузырьков на спектрофотометрической поверхности сухой пластмассовой ячейки, в результате чего стабилизируется значение измерения и повышается точность измерения в иммуноанализе с помощью автоматического анализатора с использованием ячейки. За счет этого уменьшается разница в эффективности, зависящая от типов автоматических анализаторов, и расширяется диапазон применяемых автоматических анализаторов.
Способы осуществления изобретения
[0011] Далее описан способ представленного изобретения. Сейчас необходимо отметить, что "%" в представленном описании обозначает массовую основу (м/о%), если не оговорено иное. Согласно представленному изобретению, способ предотвращения адсорбции пузырьков на боковой поверхности ячейки в иммуноанализе включает проведение реакции и/или измерения в присутствии поверхностно-активного вещества, при этом иммуноанализ включает проведение реакции антиген-антитело в сухой пластмассовой ячейке с использованием реагента для иммуноанализа, который иммунологически реагирует с веществом, которое необходимо измерить в образце, и проведение оптического измерения полученного в результате прореагировавшего продукта.
[0012] Иммуноанализ, к которому применяется способ представленного изобретения, относится к способу анализа, включающему проведение реакции антиген-антитело в сухой пластмассовой ячейке с использованием реагента для иммуноанализа, который иммунологически реагирует с веществом, которое необходимо измерить в образце, и проведение оптического измерения полученного в результате прореагировавшего продукта. Иммуноанализом может быть любой известный иммуноанализ. Однако среди них предпочтительным является иммуноагглютинационный анализ, а особенно предпочтительным является латексный агглютинационный анализ с использованием частиц латекса в качестве нерастворимых частиц-переносчиков. Иммуноагглютинационный анализ хорошо известен как способ оптического обнаружения агглютинации сенсибилизированных частиц, которые сенсибилизируют антигеном или антителом, а для обнаружения предпочтительно используют турбидиметрический способ или колориметрический способ. Например, свет от видимой области до почти инфракрасной области, например свет обычно при 300-1000 нм, предпочтительно 500-900 нм, излучают снаружи ячейки для выявления изменения спектральной поглощательной способности или изменения интенсивности рассеянного света, посредством чего измеряют степень агглютинации сенсибилизированных частиц.
[0013] Когда иммуноанализ проводят посредством иммуноагглютинационного анализа, нерастворимые частицы-переносчики, подлежащие использованию, отдельно не ограничивают, и они могут представлять собой хорошо известные частицы, которые общепринято используют в реагенте для иммуноанализа. Примеры нерастворимых частиц-переносчиков включают латексные частицы, например, полиэтилен и полистирол, алюминиевые частицы, кремниевые частицы, коллоидное золото и магнитные частицы. Среди них подходящим образом используют нерастворимые латексные частицы-переносчики, в частности, полистироловые латексные частицы. Размер латексной частицы отдельно не ограничен, но диаметр частиц предпочтительно составляет 30-600 нм.
[0014] Ниже в качестве одного примера описан случай, когда веществом, которое необходимо измерить в иммуноагглютинационном анализе, является антиген. На упомянутых выше нерастворимых частицах-переносчиках иммобилизуют антитело, которое иммунологически реагирует с антигеном, который необходимо измерить, или его антигенсвязывающим фрагментом. Способ иммобилизации также хорошо известен и проводится посредством хорошо известного способа, например, способа, использующего физическую адсорбцию или ковалентную связь. Когда суспензию полученных сенсибилизированных частиц и тестируемый образец смешивают друг с другом, сенсибилизированные частицы агглютинируются веществом, которое необходимо измерить (антигеном), содержащемся в тестируемом образце, и изменяется спектральная поглощательная способность суспензии сенсибилизированных частиц. Измеряют величину изменения (метод конечных точек) или скорость изменения (метод скорости) спектральной поглощательной способности. Получают множество стандартных образцов, содержащих антиген, который необходимо измерить, с различными известными концентрациями, и с помощью упомянутого выше способа измеряют их величину изменения или скорость изменения спектральной поглощательной способности. Концентрацию антигена, который необходимо измерить в стандартном образце, откладывают на абсциссе, а величину изменения или скорость изменения измеренной спектральной поглощательной способности откладывают на ординате для того, чтобы нарисовать калибровочную кривую. Что касается неизвестного тестируемого образца, величину изменения или скорость изменения спектральной поглощательной способности измеряют с помощью того же самого способа, а результаты его измерения наносят на упомянутую выше калибровочную кривую. За счет этого можно количественно определить антиген в тестируемом образце. Автоматические устройства, допускающие проведение подобного иммуноагглютинационного анализа, предлагаются на коммерческой основе, и иммуноагглютинационный анализ может быть легко и просто проведен с использованием предлагаемых на коммерческой основе автоматических устройств для иммуноагглютинационного анализа.
[0015] Примеры вещества, которое необходимо измерить с помощью иммуноанализа, в представленном изобретении включают, в качестве антигенов, белковые маркеры, например CRP (С-реактивный белок), простатспецифический антиген, ферритин, β-2 микроглобулин, миоглобин, гемоглобин, альбумин и креатинин; иммуноглобулины, например IgG, IgA и IgM; различные опухолевые маркеры; липопротеин, например LDL, HDL и TG; антигены вирусов, таких как вирус гриппа типа A, вирус гриппа типа B, РС-вирус (RSV), риновирус, ротавирус, норовирус, аденовирус, астровирус, HAV, HBs, HCV, HIV и EBV; антигены бактерий, таких как Chlamydia trachomatis, hemolytic streptococcus, Bordetella pertussis, Helicobacter pylori, Leptospira, Treponema pallidum, Toxoplasma gondii, Borrelia, бактерии Legionella, Bacillus anthracis и MRSA; токсин, продуцируемый бактериями; антиген липидов микоплазмы; пептидные гормоны, например, хорионический гонадотропин человека; стероиды, например стероидные гормоны; физиологически активные амины, например эпинефрин и морфин; витамины, например витамин Bs; простагландины; антибиотики, например тетрациклин; сельскохозяйственные химикаты и гормоны окружающей среды, но вещество, которое необходимо измерить, этим не ограничивается. Предпочтительные примеры включают антигены, например, CRP, простатспецифический антиген, ферритин, β-2 микроглобулин и гемоглобин.
[0016] Когда веществом, которое необходимо измерить, является антитело, примеры включают антитела, которые специфически реагируют с антигенами, включая упомянутые выше белковые маркеры, различные опухолевые маркеры, липопротеины, вирусные антигены, бактериальные антигены, токсины, продуцируемые бактериями, пептидные гормоны, стероиды, физиологически активные амины, витамины, антибиотики, сельскохозяйственные химикаты и гормоны окружающей среды.
[0017] Образец, подлежащий использованию в иммуноанализе, отдельно не ограничен при условии, что образец заключает в себе вещество, которое необходимо измерить, и примеры его включают текучие среды организма, например кровь, сыворотку, плазму, мочу, фекалии, слюну, интерстициальную жидкость, спинномозговую жидкость и их мазок или разведения. Предпочтительные примеры включают кровь, сыворотку, плазму, мочу, фекалии и спинномозговую жидкость или их разведения.
[0018] Сухая пластмассовая ячейка, подлежащая использованию в способе представленного изобретения, означает ячейку одноразового типа, которая изготовлена из материала, например полиэтилена, полипропилена, сополимера полиэтилена и полипропилена и полиметилметакрилата, и которая находится в сухом состоянии при использовании.
[0019] В качестве поверхностно-активного вещества представленного изобретения может быть использовано любое из ионных поверхностно-активных веществ (анионные поверхностно-активные вещества, катионные поверхностно-активные вещества и амфотерные поверхностно-активные вещества) и неионное поверхностно-активные вещества. Среди них предпочтительным является неионное поверхностно-активное вещество.
[0020] Примеры неионного поверхностно-активного вещества включают поверхностно-активное вещество полиоксиэтиленового типа, поверхностно-активное вещество, относящееся к типу жирнокислотного сложного эфира полиспирта, поверхностно-активное вещество, относящееся к типу алкилового эфира полиспирта, поверхностно-активное вещество азотсодержащего типа, неионное поверхностно-активное вещество силиконового типа и неионное поверхностно-активное вещество фторированного типа. Среди них предпочтительным является поверхностно-активное вещество полиоксиэтиленового типа.
[0021] Примеры поверхностно-активного вещества полиоксиэтиленового типа включают поли(оксиэтилен)алкиловый эфир, поли(оксиэтилен)алкилфениловый эфир, поли(оксиэтилен) поли(оксипропилен)алкиловый эфир, поли(оксиэтиленовый) сложный эфир жирной кислоты и поли(оксиэтиленовый) сложный эфир сорбита и жирной кислоты. Среди них предпочтительные примеры поли(оксиэтилен)алкилового эфира включают поли(оксиэтилен)алкиловый эфир, содержащий алкильную группу, имеющую 12 или более атомов углерода, например полиоксиэтиленлауриловый эфир, полиоксиэтиленмиристиловый эфир, полиоксиэтиленцетиловый эфир, полиоксиэтиленстеариловый эфир и полиоксиэтиленолеиловый эфир. Кроме того, подобная алкильная группа может быть линейной или разветвленной алкильной группой. Предпочтительные примеры поли(оксиэтиленового) сложного эфира жирной кислоты включают полиэтиленгликоль монолаурат, полиэтиленгликоль моностеарат, полиэтиленгликоль дистеарат и полиэтиленгликоль моноолеат. Предпочтительные примеры поли(оксиэтиленового) сложного эфира сорбита и жирной кислоты включают полиоксиэтилен сорбитанмонолаурат, полиоксиэтилен сорбитанмонопальмитат, полиоксиэтилен сорбитанмоностеарат и полиоксиэтилен сорбитантристеарат.
[0022] Примеры поверхностно-активного вещества, относящегося к типу сложного эфира полиспирта и жирной кислоты, включают пропиленгликолевый сложный эфир жирной кислоты, глицериновый сложный эфир жирной кислоты, полиглицериновый сложный эфир жирной кислоты, сложный эфир сорбита и жирной кислоты и сложный эфир сахарозы и жирной кислоты.
[0023] Примеры поверхностно-активного вещества, относящегося к типу алкилового эфира полиспирта, включают алкилполигликозид. Примеры азотсодержащего типа поверхностно-активного вещества включают алкилдиэтаноламид и алкиламиноксид.
[0024] Примеры поверхностно-активного вещества силиконового типа включают модифицированный полиэфиром силикон и модифицированный полиглицерином силикон. Кроме того, структуры подобных модифицированных силиконов подразделяются на модифицированную разновидность с боковой цепью, модифицированную разновидность с двойным концом (ABA тип), модифицированную разновидность с единственным концом (AB тип), модифицированную разновидность с двойным концом и боковой цепью, неразветвленную цепь блокового типа (ABn тип) и разветвленный тип, но может быть использована любая структура.
[0025] Кроме того, примеры анионного поверхностно-активного вещества включают поверхностно-активное вещество, относящееся к типу алкилового сложного эфира серной кислоты, поверхностно-активное вещество, относящееся к типу полиоксиэтиленового сложного эфира серной кислоты и алкилового эфира, поверхностно-активное вещество, относящееся к типу алкилбензолсульфоновой кислоты, поверхностно-активное вещество, относящееся к типу жирных кислот, поверхностно-активное вещество, относящееся к типу конденсата нафталинсульфокислоты и формалина, поверхностно-активное вещество, относящееся к типу поликарбоксильных кислот и поверхностно-активное вещество, относящееся к типу полистирольных сульфоновых кислот; примеры катионного поверхностно-активного вещества включают поверхностно-активное вещество аминового типа, поверхностно-активное вещество метилового типа, поверхностно-активное вещество бензилового типа и поверхностно-активное вещество, относящееся к типу четвертичного аммония; и примеры амфотерного поверхностно-активного вещества включают поверхностно-активное вещество алкилбетаинового типа и поверхностно-активное вещество, относящееся к типу алкиламиновых оксидов.
[0026] В способе представленного изобретения поверхностно-активное вещество может содержаться в системе реакции и/или измерения (которая также упоминается как "система реакции-измерения") на любой стадии между началом реакции антиген-антитело и завершением обнаружения и количественного определения величины реакции антиген-антитело. Предпочтительно, что поверхностно-активное вещество должно содержаться на протяжении периода от начала реакции антиген-антитело до обнаружения и количественного определения. Вследствие этого предпочтительно, что поверхностно-активное вещество добавляют к реакционной системе перед или одновременно с началом реакции антиген-антитело. Конкретно его можно добавлять, когда образец разводят, или его можно добавлять, когда антитело или антиген перемешивают с образцом.
[0027] Кроме того, поверхностно-активное вещество может быть заключено заранее в различные реагенты, подлежащие использованию в иммуноанализе, и представленное изобретение также предоставляет реагент для иммуноанализа, содержащий подобное поверхностно-активное вещество. В данном описании примеры различных реагентов, подлежащих использованию в иммуноанализе, включают разбавитель образца, разбавитель антитела/антигена, твердофазное антитело/антиген, суспензию сенсибилизированных частиц, промывающий раствор, ферментный раствор, субстратный раствор и стандартный раствор тестируемого образца для подготовки калибровочной кривой. Примеры реагента для иммуноанализа, содержащего поверхностно-активное вещество, включают реагент, полученный за счет добавления поверхностно-активного вещества к данным реагентам, например буферный раствор для разбавления образца и реагент и тому подобное, содержащий антитело или антиген, в который включено поверхностно-активное вещество.
Когда используют иммуноагглютинационный анализ, например иммуноагглютинационный реагент, содержащий нерастворимые частицы-переносчики (сенсибилизированная частица), на которых иммобилизуют антитело или антиген (сенсибилизируют), он может содержать поверхностно-активное вещество.
В данном случае концентрация сенсибилизированных частиц в реагенте для иммуноанализа предпочтительно, но не обязательно, ограничена, 0,01-0,5%. Количество антител и количество антигенов в суспензии сенсибилизированных частиц могут быть такими же, как в стандартном способе, и они отдельно не ограничены. Однако когда, например, используют латекс с сенсибилизированными антителами, количество антител в латексной суспензии предпочтительно составляет 0,01-2,0 мг/мл.
[0028] Концентрация поверхностно-активного вещества в системе реакция-измерение предпочтительно составляет от 0,005 до 1%, более предпочтительно 0,01-0,5% и даже более предпочтительно 0,01-0,3% с точки зрения снижения адсорбции пузырьков. Вследствие этого, когда поверхностно-активное вещество заблаговременно заключают в реагент для иммуноанализа, поверхностно-активное вещество может содержаться в реагенте для иммуноанализа таким образом, что концентрация в системе реакция-измерение падает до упомянутой выше концентрации.
[0029] Холостой образец, подлежащий использованию в иммуноанализе, отдельно не ограничен при условии, что он не может содержать вещество, которое необходимо измерить, но предпочтительно является очищенной водой, физиологическим раствором, буферным раствором, негативным образцом или его разбавителем.
[0030] Как показано в примерах ниже, когда в системе реакция-измерение обеспечивают возможность присутствия поверхностно-активного вещества, предотвращается адсорбция пузырьков на боковой поверхности ячейки в качестве спектрофотометрической поверхности, которая представляет собой поверхность сухой пластмассовой ячейки, подлежащую освещению. Тогда по сравнению со случаем, когда не обеспечивают возможности присутствия поверхностно-активного вещества, точность измерения существенно улучшается. Вследствие этого при использовании способа представленного изобретения диапазон применения автоматического анализатора с использованием сухой пластмассовой ячейки может быть расширен.
Примеры
[0031] Далее представленное изобретение описано более конкретно со ссылкой на примеры. Однако представленное изобретение не ограничено следующими примерами.
Примеры 1-6
(1) Приготовление реагентов
Реагенты для измерения для иммуноагглютинационного анализа получали следующим образом с использованием антитела против ферритина.
i) Сенсибилизированные частицы, которые содержат 0,045 мг антител против ферритина для 1 мл суспензии полистиролового латекса, имеющие средний диаметр частиц, равный 300 нм, суспендировали в буферном растворе (глицин, pH 7,3) с концентрацией, равной 0,056%, для приготовления таким образом латексной суспензии.
ii) Для приготовления упомянутых ниже реагентов от A до F к буферному раствору (Tris, pH 8,5) добавляли различные поверхностно-активные вещества. В качестве сравнительных примеров получали реагент G, в котором поверхностно-активный компонент не был добавлен, и реагент H, в котором вместо поверхностно-активного компонента был добавлен белок.
[0032]
Таблица 1
Реагент
Поверхностно-активное вещество (концентрация)
A
Поли(оксиэтилен)алкиловый эфир (0,1%)
B
Полиоксиэтилен (80) сорбитанмонолаурат (0,3%)
C
Полиоксиэтилен–полиоксипропиленовый конденсат (0,1%)
D
Полиоксиэтилентрибензилфениловый эфир (0,2%)
E
Аммонийная соль сополимера олефинмалеиновой кислоты (0,01%)
F
Полистирол натрия сульфонат (0,1%)
G
Не включен
H
Не включен
А-D: соответственно использовали неионные поверхностно-активные вещества (A: "EMULGEN 707" (Kao Corporation), B: "Tween 80" (Wako Pure Chemical Industries, Ltd)., C: "Pluronic F68" (ADEKA) и D: "EMULGEN B66" (Kao Corporation)).E и F: соответственно использовали анионные поверхностно-активные вещества (E: "POLYSTER OM" (NOF CORPORATION) и F: "PS-1" (Tosoh Corporation)).G: только буферный растворH: Буферный раствор + белок (2,0%, альбумин бычьей сыворотки).
[0033] (2) Измерение с помощью автоматического анализатора
Автоматическое измерение провели с помощью метода граничных точек с использованием автоматического анализатора VITROS 5600 (производимого Ortho Clinical Diagnostics). Измерение контрольного образца (100 нг/мл) проводили в общем 10 раз с использованием упомянутых выше буферных растворов реагентов A-H. К 10,0 мкл раствора образца добавляли 100 мкл соответствующих буферных растворов реагентов A-H, и перемешанный раствор встряхивали и перемешивали вместе при 37°C. После того как перемешанному раствору позволяли отстаиваться в течение 5 мин, добавляли 100 мкл латексной суспензии, приготовленной выше, с последующим дополнительным встряхиванием и перемешиванием вместе при 37°C. Реакцию агглютинации измеряли в течение приблизительно 5 минут в показателях величины изменения спектральной поглощательной способности и рассчитывали стандартные отклонение и коэффициент вариации (КВ (%)). В дополнение наблюдали наличие или отсутствие пузырьков, адсорбированных на боковой поверхности ячейки. Результаты показаны в таблице 2 ниже.
[0034]
Таблица 2
Примеры
Сравнительные примеры
1
2
3
4
5
6
1
2
Реагент
A
B
C
D
E
F
G
H
Среднее значение (mAbs)
55,7
31,3
40,5
40,1
40,9
43,2
Не изме-ряемо
44,9
Стандартное отклонение (mAbs)
2,4
1,6
2,2
1,9
2,3
3,5
-
4,2
КВ (%)
4,3%
4,9%
5,5%
4,6%
5,7%
8,1%
-
9,5%
Адсорбция пузырьков
Не наблю-далось
Не наблю-далось
Не наблю-далось
Не наблю-далось
Не наблю-далось
Не наблю-далось
Наблю-далось
Наблю-далось
[0035] Таблица 2 показывает, что с добавлением поверхностно-активных веществ, предотвращается адсорбция пузырьков на боковой поверхности ячейки, уменьшается стандартное отклонение и повышается точность. Кроме того, показано, что эффект добавления упомянутых выше реагентов A-F может быть получен независимо от типов поверхностно-активных веществ.
[0036] Примеры 7-12
Реагенты для измерения для иммуноагглютинационного анализа получали следующим образом с использованием антитела против ферритина.
(1) Приготовление реагентов
i) Сенсибилизированные частицы, которые содержат 0,045 мг антител против ферритина для 1 мл суспензии полистиролового латекса, имеющие средний диаметр частиц, составляющий 300 нм, суспендировали в буферном растворе (глицин, pH 7,3) с концентрацией, равной 0,056%, для приготовления таким образом латексной суспензии.
ii) для приготовления реагентов I-N к одному или и тому и другому из буферного раствора (Tris, pH 8,5) и латексной суспензии, приготовленной в упомянутом выше i), добавляли поверхностно-активное вещество. В качестве сравнительных примеров готовили реагент О, в котором не был добавлен поверхностно-активный компонент.
[0037]
Таблица 3
Реагент
I
(i) буферный раствор + 0,2% поверхностно-активное вещество, (ii) латексная суспензия
J
(i) буферный раствор + 0,1% поверхностно-активное вещество, (ii) латексная суспензия
K
(i) буферный раствор, (ii) латексная суспензия + 0,2% поверхностно-активное вещество
L
(i) буферный раствор, (ii) латексная суспензия + 0,1% поверхностно-активное вещество
M
(i) буферный раствор + 0,1% поверхностно-активное вещество, (ii) латексная суспензия + 0,1% поверхностно-активное вещество
N
(i) буферный раствор + 0,05% поверхностно-активное вещество, (ii) латексная суспензия + 0,05% поверхностно-активное вещество
O
(i) буферный раствор, (ii) латексная суспензия
поверхностно-активное вещество: полиоксиэтилентрибензилфениловый эфир ("EMULGEN B66" (Kao Corporation))
[0038] (2) Измерение с помощью автоматического анализатора
Автоматическое измерение проводили методом граничных точек с использованием автоматического анализатора VITROS 5600 (производимого Ortho Clinical Diagnostics). Измерение для контрольного образца (100 нг/мл) проводили в общей сложности 10 раз с использованием упомянутых выше реагентов I-O. К 10,0 мкл раствора образца добавляли 100 мкл соответствующих буферных растворов реагентов I-О, приготовленных выше, а затем перемешанный раствор встряхивали и перемешивали вместе при 37°C. После того как перемешанному раствору позволяли отстояться в течение 5 мин, добавляли 100 мкл соответствующих латексных суспензий реагентов I-О, приготовленных выше, с последующим дополнительно встряхиванием и перемешиванием вместе при 37°C. Реакцию агглютинации измеряли в течение приблизительно 5 минут в показателях величины изменения спектральной поглощательной способности, и рассчитывали стандартное отклонение и коэффициент вариации (КВ (%)). В дополнение наблюдали наличие или отсутствие пузырьков, адсорбированных на боковой поверхности ячейки. Результаты показаны в таблице 4 ниже.
[0039]
Таблица 4
Примеры
Сравни-тельный пример
7
8
9
10
11
12
3
Реагент
I
J
K
L
M
N
O
Среднее значение (mAbs)
40,1
42,8
55,2
54,3
42,7
45,6
Не измеряемо
Стандартное отклонение (mAbs)
1,9
2,8
2,8
4,6
1,6
2,1
-
КВ (%)
4,6%
6,5%
5,0%
8,4%
3,8%
4,6%
-
Адсорбция пузырьков
Не наблю-далось
Не наблю-далось
Не наблю-далось
Не наблю-далось
Не наблю-далось
Не наблю-далось
Наблюдалось
[0040] Из таблицы 4 видно, что даже когда поверхностно-активное вещество добавляют в любом варианте, предотвращается адсорбция пузырьков на боковой поверхности ячейки и повышается точность измерения с зависимостью от концентрации. Кроме того, показано, что когда поверхностно-активное вещество добавляют и к буферному раствору и к латексной суспензии, точность измерения дополнительно повышается.
[0041] Примеры 13-14
Реагенты для измерения для иммуноагглютинационного анализа получали следующим образом с использованием антител против ферритина и гемоглобина.
(1) Реагенты, подлежащие использованию
i) Сенсибилизированные частицы, которые содержат 0,045 мг антител против ферритина или антител против гемоглобина для 1 мл суспензии полистиролового латекса, имеющего средний диаметр частиц, равный 300 нм, суспендировали в буферном растворе (глицин, pH 7,3) с концентрацией, равной 0,056%, для приготовления таким образом латексной суспензии.
ii) для приготовления реагента P (реагент для измерения ферритина) и реагента Q (реагент для измерения гемоглобина), к буферному раствору (Tris, pH 8,5) и латексной суспензии, приготовленной в упомянутом выше i), добавляли поверхностно-активное вещество.
[0042]
Таблица 5
Реагент
P
(i) буферный раствор + 0,1% поверхностно-активное вещество, (ii) латексная суспензия + 0,1% поверхностно-активное вещество
Q
(i) буферный раствор + 0,1% поверхностно-активное вещество, (ii) латексная суспензия + 0,1% поверхностно-активное вещество
поверхностно-активное вещество: полиоксиэтилентрибензилфениловый эфир ("EMULGEN B66" (Kao Corporation))
[0043] (2) Измерение с помощью автоматического анализатора
Автоматические измерение проводили методом граничных точек с использованием автоматического анализатора VITROS 5600 (производимого Ortho Clinical Diagnostics). Измерение для контрольного образца (100 нг/мл) проводили в общей сложности 10 раз с использованием упомянутых выше реагентов P и Q. К 10,0 мкл раствора образца добавляли 100 мкл буферного раствора реагента P или Q, приготовленного выше, и перемешанный раствор встряхивали и перемешивали вместе при 37°C. После того как перемешанному раствору позволяли отстояться в течение 5 мин, к смеси добавляли 100 мкл латексной суспензии реагента P или Q, приготовленного выше, с последующим дополнительным встряхиванием и перемешиванием вместе при 37°C. Реакцию агглютинации измеряли в течение приблизительно 5 минут в показателях величины изменения спектральной поглощательной способности, и рассчитывали стандартное отклонение. В дополнение наблюдали наличие или отсутствие пузырьков, адсорбированных на боковой поверхности ячейки. Результаты показаны в таблице 6 ниже.
[0044]
Таблица 6
Примеры
13
14
Реагент
Р
Q
Среднее значение (мAbs)
42,7
36,7
Стандартное отклонение (мAbs)
1,6
1,9
КВ (%)
3,8%
5,2%
Адсорбция пузырьков
Не наблюдалась
Не наблюдалась
[0045] Из таблицы 6 видно, что даже когда используют различные антитела, адсорбция пузырьков на боковой поверхности ячейки при добавлении поверхностно-активного вещества предотвращается, результатом чего является улучшение точности измерения.