СПОСОБ ОЦЕНКИ РАЗВИТИЯ СИНГЕННОГО ПЕРЕВИВНОГО ЛИМФОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА У МЫШЕЙ ЛИНИИ AKR/JY
METHOD FOR ASSESSING DEVELOPING SYNGENEIC GRAFTED LYMPHOBLASTIC LEUKAEMIA IN AKR/JY MICE

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной гематологии, и может найти применение в научно-исследовательской работе при оценке развития лейкозного процесса у мышей линии AKR/JY способом перевивки им клеток селезенки от мышей с лимфобластным лейкозом. В настоящее время для оценки развития лейкоза применяют морфологические, гистологические, молекулярно-генетические и биохимические критерии (Клиническая онкогематология: руководство для врачей; под ред. М.А.Волковой. - 2-е изд., перераб., доп. - М.: Медицина, 2007. - 120 с.); [WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues.- Ed. Steven H.Swerdlow, Elias Campo, Nancy Lee Harris [et al].-Interntional Agency for Research of Cancer, Lyon,2008. - 439 p.]; В.Н.Титов, Д.М.Лисицин, С.Д.Разумовский /Методические вопросы и диагностическое значение определения перекисного окисления липидов в липопротеинах низкой плотности. Олеиновая жирная кислота как биологический антиоксидант. //Клиническая лабораторная диагностика. - 2005. - № 4. - С.3-10; А.Е.Бигильдеев, Н.И.Дризе /Динамика заселения печени опухолевыми клетками при перевиваемом миелоидном лейкозе у мышей: гистологическое исследование // Гематология и трансфузиология. - 2010, Т.55. - N 4. - С.37-40.
Основными недостатками используемых методов являются трудоемкость и высокая затратность. Положительные результаты при оценке развития сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/GY возможны при комплексной оценке лейкозного процесса с включением биохимических, морфологических, физиологических показателей и органных нарушений у подопытных животных.
Задачей предлагаемого изобретения является упрощение способа и снижение затратности при оценке развития сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.
Поставленная задача решается тем, что через 5-7 дней после введения в брюшную полость здоровым мышам линии AKR/JY взвеси лейкозных селезеночных клеток определяют уровень липопротеинов низкой и очень низкой плотности в плазме крови, массу тимуса, содержание в нем лимфобластов и по этим показателям оценивают развитие лейкозного процесса.
Известен способ оценки развития перевивного лейкоза La у мышей линии C57B1/6jG путем определения антиоксидантного комплекса витаминов А, Е, С (В.А.Кувшинников и др. «Применение антиоксидантного комплекса витаминов А, Е и С при лейкозе мышей» / Гематология и трансфузиология - 1989. - т.34, № 8. - С.23-28). Этот способ является наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению, позволяет оценить развитие лейкоза La у подопытных животных по биохимическим и физиологическим параметрам и может быть использован для диагностики развития опухолевого процесса у мышей лейкозной линии (см. табл.1).
Недостатками известного способа являются трудоемкость, низкая информативность и затратность. В частности:
а) известный способ требует проведения большого количества тестов и расходных материалов;
б) отсутствуют данные о массе тимуса и содержании в нем лимфобластов.
Предлагаемый способ по сравнению с известным имеет следующие преимущества:
а) проще известного способа в методическом отношении и более экономичен;
б) проведенные тесты более специфичны для оценки развития сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.
Результаты сравнительного анализа заявляемого и известного способов оценки развития перевивных лейкозов у мышей представлены в таблице 1.
Таблица 1
Способы оценки развития перевивных лейкозов у мышей
Известный способ
Лейкоз La(Исследуемые биохимические показатели)
Исследуемые морфологические и физиологические показатели
Супероксиддисмутаза, глутатионредуктаза, глутатион-SH, токоферол, убихинон, ретинол, аскорбиновая, дигидроаскорбиновая и дикетоглютаровая кислоты, уровень белка, малоновый диальдегид (в печени, селезенке и эритроцитах).
Масса органов и количество бластных элементов не определяется
Заявляемый способ
Сингенный перевивной лимфобластный лейкоз(Исследуемые биохимические показатели)
Исследуемые морфологические и физиологические показатели
Определение липопротеинов низкой и очень низкой плотности в плазме крови
Определяется количество лимфобластов в тимусе и масса тимуса
В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предлагаемого изобретения.
Заявляемое изобретение разработано в лаборатории патоморфологии крови ФГУ «КНИИГиПК ФМБА России» в соответствии с планом НИР.
Опыты проведены на 18 мышах линии AKR/JY обоего пола, массой 23,5±1,6 г, в возрасте 113±5,1 суток без признаков лейкоза. Перевивку лейкозных клеток от мышей линии AKR/JY с лимфобластным лейкозом начинали с введения в наркоз мыши-донора, лапаротомии, удаления селезенки, ее измельчения, фильтрации фрагментов и приготовления 1% суспензии лейкозных клеток на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 5-7 дней после внутрибрюшинного введения 0,5 мл 1%-ной суспензии лейкозных клеток и развитии сингенного перевивного лимфобластного лейкоза животных забивали декапитацией, определяли массу тимуса и подсчитывали количество бластных элементов в мазках отпечатках тимуса после их окрашивания азур-эозином с использованием метода световой микроскопии. В плазме крови определяли содержание липопротеинов низкой плотности и очень низкой плотности с использованием диагностических наборов «Ольвекс Диагностикум» (С.-Петербург), метод основан на том, что липопротеины низкой и очень низкой плотности образуют нерастворимые комплексы с фосфорновольфрамовой кислотой и ионами магния (B.C.Камышников «Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике», М., 2000. - Т.2 - 463 С.).
Способ оценки развития сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/GY, характеризуется тем, что измеряют уровень липопротеинов в плазме крови и при содержании липопротеинов низкой плотности меньше 0,5 ммоль/л, липопротеинов очень низкой плотности меньше 0,2 ммоль/л, массе тимуса выше 0,17 г и содержании в нем лимфобластов более 20%, констатируют развитие сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии АKR/JY.Подтверждением возможности реализации указанного способа оценки развития сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKP/GY является известный «Способ диагностики сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии АKR/GY (патент на изобретение N 2430363 от 17.08.2010).
Заявляемое изобретение обладает новизной, существенными отличиями, дает при использовании положительный эффект, заключающийся в упрощении способа и снижении затратности при оценке развития сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.
Примеры конкретного использования
1.Мыши линии AKR/JY, возраст 110 суток, вводили внутрибрюшинно 0,5 мл 1% суспензии лейкозных клеток селезенки на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 5 дней животное забивали декапитацией под наркозом, вскрывали, извлекали и взвешивали тимус (масса 0,18 г). В мазках отпечатках тимуса подсчитывали содержание лимфобластов (21%) и определяли уровень липопротеинов в плазме крови: низкой плотности 0,49 ммоль/л и очень низкой плотности 0,19 ммоль/л. На основании этих показателей констатировали развитие сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/GY.
2.Мыши линии AKR/JY, возраст 110 суток, вводили внутрибрюшинно 0,5 мл 1% суспензии лейкозных клеток селезенки на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 6 дней животное забивали декапитацией под наркозом, вскрывали, извлекали и взвешивали тимус (масса 0,23 г). В мазках отпечатках тимуса подсчитывали содержание лимфобластов (26%) и определяли уровень липопротеинов в плазме крови: низкой плотности 0,46 ммоль/л и очень низкой плотности 0,18 ммоль/л. На основании этих показателей констатировали развитие сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/GY.
3. Мыши линии AKR/JY, возраст 110 суток, вводили внутрибрюшинно 0,5 мл 1% суспензии лейкозных клеток селезенки на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 6 дней животное забивали декапитацией под наркозом, вскрывали, извлекали и взвешивали тимус (масса 0,27 г). В мазках отпечатках тимуса подсчитывали содержание лимфобластов (29%) и определяли уровень липопротеинов в плазме крови: низкой плотности 0,43 ммоль/л и очень низкой плотности 0,15 ммоль/л. На основании этих показателей констатировали развитие сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/GY.
4. Мыши линии AKR/JY, возраст 110 суток, вводили внутрибрюшинно 0,5 мл 1% суспензии лейкозных клеток селезенки на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 6 дней животное забивали декапитацией под наркозом, вскрывали, извлекали и взвешивали тимус (масса 0,35 г). В мазках отпечатках тимуса подсчитывали содержание лимфобластов (38%) и определяли уровень липопротеинов в плазме крови: низкой плотности 0,30 ммоль/л и очень низкой плотности 0,13 ммоль/л. На основании этих показателей констатировали развитие сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/GY.
5. Мыши линии AKR/JY, возраст 110 суток, вводили внутрибрюшинно 0,5 мл 1% суспензии лейкозных клеток селезенки на 0,9% растворе хлорида натрия. Через 7 дней животное забивали декапитацией под наркозом, вскрывали, извлекали и взвешивали тимус (масса 0,38 г). В мазках отпечатках тимуса подсчитывали содержание лимфобластов (40%) и определяли уровень липопротеинов в плазме крови: низкой плотности 0,25 ммоль/л и очень низкой плотности 0,10 ммоль/л. На основании этих показателей констатировали развитие сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/GY.
Предлагаемый способ более прост в реализации, менее затратный и дает стабильный положительный результат при оценке развития сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY. Предлагаемая технология может быть использована в учреждениях медицинского и биологического профиля для оценки развития сингенного перевивного лимфобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY как с диагностической целью, так и на отдельных этапах химиотерапии при тестировании применяемых противоопухолевых препаратов.