Способ выделения свободных и экзосомальных микроРНК из слюны

Способ выделения микроРНК из слюны, при котором осуществляют забор образца слюны из ротовой полости пациента посредством ватной палочки, затем наносят на образец каплю раствора поливинилсульфоновой кислоты в концентрации 15 мг/мл и каплю раствора 20% метанола и деионизированной воды, 0,5 М ацетата натрия и 5% уксусной кислоты, затем помещают ватную палочку с образцом слюны в конверт и высушивают при комнатной температуре в течение 6 часов, далее из образца слюны выделяют экзосомы, для чего ватную палочку с образцом слюны помещают в физиологический раствор объем 500 мкл на 1 час, затем проводят последовательное центрифугирование в режиме 2000 g и 10000 g, затем проводят ультрацентрифугирование в режиме 100000 g в течение 2 часов, далее из образовавшихся в процессе ультрацентрифугирования надосадочной жидкости и осадка выделяют фракции свободных микроРНК и экзосомальных микроРНК соответственно, а именно, к упомянутому осадку добавляют 5 мкл протеиназы К, инкубируют при 56°С в течение 1 часа, далее наносят на колонку Exiqon, после чего проводят центрифугирование при 2000 g, затем колонку промывают 3 раза промывочным буфером, после каждого промывания проводят центрифугирование при 2000 g на центрифуге eppendorf 5104, потом на колонку наносится 20 мкл безнуклеазной воды, далее колонку оставляют на 10 минут при комнатной температуре, а затем центрифугируют при 3000 g, при этом к упомянутой надосадочной жидкости добавляют 5 мкл протеиназы К, инкубируют при 56°С в течение 1 часа, далее наносят на колонку Exiqon, после чего проводят центрифугирование при 2000 g, затем колонку промывают 3 раза промывочным буфером, после каждого промывания проводят центрифугирование при 2000 g на центрифуге eppendorf 5104, потом на колонку наносится 20 мкл безнуклеазной воды, далее колонку оставляют на 10 минут при комнатной температуре, а затем центрифугируют при 3000 g.