Фармацевтическая композиция для терапии воспалительных заболеваний слизистых оболочек кишечника на основе штамма Lactobacillus brevis 47f, проявляющая местную противовоспалительную активность
PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF INTESTINAL MUCOSA INFLAMMATORY DISEASES ON THE BASIS OF LACTOBACILLUS BREVIS 47f STRAIN, MANIFESTING A LOCAL ANTI-INFLAMMATORY ACTIVITY

Область техники
Изобретение относится к пробиотическим фармацевтическим композициям, обладающим противовоспалительным действием в отношении слизистой оболочки кишечника, и состоит из штамма L. brevis 47f, продуцирующего антиоксидантные вещества, подавляющие свободнорадикальные процессы. Фармацевтическая композиция может быть использована для лечения и предотвращения воспалительных процессов слизистой оболочки кишечника, в частности при сопровождении химио- и лучевой терапии онкологических заболеваний, в том числе и мукозита.
Уровень техники
Одним из наиболее распространенных и тяжело протекающих побочных действий противораковых препаратов является лекарственная энтеропатия, приводящая к тяжелым воспалительным процессам. Химиотерапия является важнейшим способом лечения больных со злокачественными новообразованиями и используется почти во всех клинических ситуациях, показания к ней постоянно расширяются, совершенствуются препараты, изучаются их комбинации и сочетания с хирургическим и лучевым методами. Противоопухолевые препараты действуют и на неопухолевые клетки и особенно на делящиеся. Например, на постоянно обновляющийся эпителий кишечника, что приводит к лекарственной энтеропатии, проявляющейся тяжелыми нарушениями водно-солевого обмена (диспепсия, обезвоживание, болевой синдром). Патоморфологически это проявляется картиной мукозита, представляющей собой воспалительные (эритематозные и эрозивно-язвенные) поражения слизистой рта, глотки, пищевода, кишечника и в целом желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).
Воспаление слизистой кишечника проявляется в клинической симптоматике (боль, диарея, нарушения пищеварения, пищевая аллергия и т.п.), что приводит к увеличению продолжительности госпитализации, потребности в нутритивной поддержке и медикаментах, что существенно повышает расходы на лечение. [Телетаева Г.М. 2009. Профилактика и лечение желудочно-кишечных осложнений лекарственной терапии (тошнота и рвота, мукозиты, диарея). Практическая Онкология. Т. 10. No 3: 158-167.]. Проявления лекарственной энтеропатии могут привести к летальному исходу в результате тяжелой нутритивной недостаточности и ее осложнений. Непереносимость химиопрепаратов из-за выраженных клинических проявлений мукозита кишечника ограничивает лечение (отсрочка или прерывание курсов химиотерапии, уменьшение доз лекарств, удлинение сроков госпитализации, увеличение расходов на сопроводительную терапию и нутритивную поддержку).
Воспалительный процесс приводящий к мукозиту происходит следующим образом. В норме бокаловидные клетки эпителия слизистой оболочки тонкого кишечника продуцируют гликопротеин муцин, который образует гелеобразную среду, защищающую орган от атаки кишечной микрофлоры. Некоторые из противоопухолевых препаратов, включая 5-фторурацил, вызывают нарушения в функционировании и апоптоз бокаловидных клеток, что и приводит к истончению муцинового слоя. Это позволяет бактериям (находящимся в просвете кишечника или адсорбированным на слизистой оболочке) взаимодействовать с рецепторами врожденного иммунитета (Toll-подобными рецепторами) на поверхности эпителиоцитов. В результате запускаются каскады внутриклеточных сигналов, конвергирующих к активации транскрипционного фактора NFkB - механизма индукции генов воспаления. Развитие воспаления сопровождается накоплением окисленных молекул ("кислородный взрыв") и повреждением клеток слизистой оболочки, приводящим к мукозиту. Таким образом, меры предотвращения мукозита должны быть направлены на ограничение процессов, приводящих к воспалению, главным из которых является ограничение образования активных форм кислорода и свободнорадикального окисления биомолекул в клетках кишечника.
Основные процессы, приводящие к развитию мукозита кишечника, исследованы на экспериментальной модели с использованием 5-фторурацила (5-ФУ) [Song М.K., Park M.Y, Sung M.K.J. 2013. 5-Fluorouracil-induced changes of intestinal integrity biomarkers in BALB/c mice. Cancer Prev. V.18: 322-329]. В клинической онкологической практике 5-ФУ применяется при лечении рака различной локализации: рак толстой и прямой кишки, рак молочной железы, пищевода, желудка, поджелудочной железы, и др. 5-ФУ является противоопухолевым препаратом из группы антиметаболитов, ведет к изменению структуры РНК и подавлению деления патологических опухолевых клеток (антагонист пиримидинов). 5-ФУ ингибирует процесс деления клеток путем блокирования синтеза ДНК (вследствие угнетения активности фермента тимидилатсинтетазы) и образования структурно несовершенной РНК (вследствие внедрения фторурацила в ее структуру). Цитотоксическое действие 5-ФУ проявляется не только в отношении опухолевых клеток, но и касается наиболее часто делящихся клеток эпителиальных тканей и костного мозга [Телетаева Г.М. 2009. Профилактика и лечение желудочно-кишечных осложнений лекарственной терапии (тошнота и рвота, мукозиты, диарея). Практическая Онкология. Т. 10.No 3: 158-167.]
Одним из подходов для предотвращения тяжелого осложнения химиотерапии мукозита кишечника является использование противовоспалительных свойств пробиотиков - продуцентов веществ, обладающих антиоксидантной активностью [Probiotics as potential antioxidants: A Systematic Review // V. Mishra, et. al. // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 03/2015; 6914]
Показано, что ряд пробиотических компонентов микрофлоры кишечника обладает антиоксидантными (Probiotics and Oxidative Stress T. Kullisaar. E Songisepp and M. Zilmer. University of Tartu, Bio-competence Centre of Healthy Dairy products LCC, Estonia, 2012) Lin J, Zou Y, Cao K, Ma C, Chen Z (2016) The impact of heterologous catalase expression and superoxide dismutase overexpression on enhancing the oxidative resistance in Lactobacillus casei. J Ind Microbiol Biotechnol 43:703-711. doi: 10.1007/s10295-016-1752-8; Lyu C, Hu S, Huang J, Luo M, Lu T, Mei L, Yao S (2016) Contribution of the activated catalase to oxidative stress resistance and γ-aminobutyric acid production in Lactobacillus brevis. Int J Food Microbiol 238:302-310. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2016.09.023, антимутагенными и противоопухолевыми свойствами (Effects of Lactobacillus strains on cancer cell proliferation and oxidative stress in vitro. S.S. Choi, Y. Kim, K.S. Han, S. You, S. Oh and S.H. Kim. Letters in Applied Microbiology 42 (2006) 452-458). Пробиотические микроорганизмы, в частности лактобациллы, являются продуцентами антиоксидантных веществ: глутатионпероксидазы, цистеина, цистаемина и различных низкомолекулярных тиолов (Antioxidative potential of lactobacilli isolated from the gut of Indian people. Achuthan, AA.. et. al. // Mol. Biol. Rep. 2012, 39, 7887-97; Probiotics as potential antioxidants: A Systematic Review IN. Mishra, et. al. // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 03/2015; 63(14); Falony G, Joossens M, Vieira-Silva S, Wang J, Darzi Y, Faust K, Kurilshikov A et al (2016) Population-level analysis of gut microbiome variation. Science352:560-564. doi: 10.1126/science.aad3503).
Лактобациллы являются пробиотическими микроорганизмами и считаются безопасными (GRAS - generally regaded as safe), они широко используются в функциональных пищевых продуктах, биологически активных добавках, лекарственных средствах. Пробиотики, и лактобациллы в частности, все чаще используются в комбинированном лечении начальных стадий различных заболеваний (язвенного колита, синдрома воспаленного кишечника, аллергических заболеваний). Существует большой интерес к пробиотикам - естественным симбионтам человека, синтезирующим биологически активные вещества, в том числе антиоксиданты (Tang W, Xing Z, Li С, Wang J, Wang Y (2017) Molecular mechanisms and in vitro antioxidant effects of Lactobacillus plantarum MA2. Food Chem 221:1642-1649. doi: 10.1016/j.foodchem.2016.10.124);. A bioluminescent test system reveals valuable antioxidant properties of lactobacillus strains from human microbiota. Marsova M.V., Abilev S.K., Poluektova E.U., Damlenko V.N. // World Journal of Microbiology and Biotechnology, 2018, 34:27 doi.org/10.1007/sll274-018-2410-2).
Использование микроорганизмов, являющихся естественными симбионтами человека, в качестве источника антиоксидантов (АО), имеет ряд преимуществ перед другими способами повышения антиоксидантного статуса организма. В отличие от химических фармацевтических препаратов, применение пробиотиков позволяет поддерживать постоянную продукцию АО в физиологических дозах непосредственно в слизистой толстого кишечника, исключая воздействие желудочного сока и желчи и возможную модификацию АО молекул. Такой подход особенно перспективен при лечении воспалительных заболеваний кишечника, спровоцированных приемом токсичных лекарственных средств. (Probiotics as potential antioxidants: A Systematic Review // V. Mishra, et. al. // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 03/2015; 63(14); Health benefits of probiotics: are mixtures more effective than single strains? Chapman, СМ.; Gibson, GR.; Rowland, I. // EurJ Nutr. 2011, 50, 1-17; Antioxidative potential of lactobacilli isolated from the gut of Indian people. Achuthan, AA.. et. al. // Mol. Biol. Rep. 2012, 39, 7887-97; Kleniewska P, Hoffmann A, Pniewska E, Pawliczak R (2016) The influence of probiotic Lactobacillus casei in combination with prebiotic inulin on the antioxidant capacity of human plasma. Oxidative Medicine and Cellular Longevity: 1340903. doi: 10.1155/2016/1340903).
Среди литературных и патентных данных мы не обнаружили сведения о пробиотических средствах на основе лактобацилл, апробированных на экспериментальной модели 5-ФУ-индуцированного мукозита. На данный момент не существует фамацевтической композии (ФК) на основе пробиотика для терапии и профилактики мукозита, индуцированного противоопухолевыми препаратами, в частности 5-ФУ.
Раскрытие изобретения
Рисунок 1. Воспаление тонкой кишки, сопровождающееся картиной мукозита, у мыши, получавшей 5-фторурацил.
Рисунок 2. Восстановление структуры эпителия тонкой кишки при введении ФК, включающей L. brevis 47, и последующим введением 5-фторурацила.
Рисунок 3. Мукозит толстой кишки в ответ на введение 5-фтоурацила.
Рисунок 4. Защитный эффект ФК, против мукозита толстой кишки, вызванного введением 5-фторурацила.
Технический результат
Предлагаемая фармацевтическая композиция на основе штамма L. brevis 47f отличается:
1. Способностью восстанавливать нарушения архитектоники эпителия тонкой и толстой кишки (Пример 3, рисунок 1, 2, 3, 4)
2. Способностью восстанавливать пролиферацию клеток эпителия слизистой оболочки кишечника (Пример 3, рисунок 2).
3. Способностью продуцировать антиоксидантные вещества, приводящие к снижению уровня процессов свободнорадикального окисления, что помогает предотвратить развитие воспалительного процесса.
Перечисленные особенности предлагаемой фармацевтической композиции установлены на модели мукозита - воспалительного процесса, индуцированного у мышей противоопухолевым препаратом 5-фторурацилом. В качестве препарата сравнения был использован гастропротектор Ребамипид (Маклеодз Фармасьютикалз, Индия), который по всем показателям уступал заявляемой ФК.
На модели экспериментального мукозита показано, что 5-фторурацил вызывает в слизистой оболочке кишечника мышей изъязвления, истончение ворсин, снижение количества бокаловидных (слизеобразующих) клеток, резкое падение пролиферативной активности энтероцитов. Происходит развитие мукозита. Применение штамма Lactobacillus brevis 47f в комбинации с 5-фторурацилом способствует восстановлению нарушений структуры эпителия тонкой и толстой кишки, способствует пролиферации клеток эпителия слизистой оболочки кишечника, приводящей к восстановлению продуцирующих муцин бокаловидных клеток. Для определения антиоксидантной активности веществ, выделяемых штаммом Lactobacillus brevis 47f, в опытах на мышах использовали стандартный метод определения малонового диальдегида в крови и в других тканях, являющегося индикатором свободнорадикальных процессов.
Характеристика свойств и источников выделения штамма, фармацевтической композиции
Штамм L. brevis 47f выделен из фекалий здоровой женщины в возрасте 38 лет, которая на момент обследования была клинически здорова, не имела в анамнезе инфекционных и соматических заболеваний желудочно-кишечного тракта и других систем органов, в 2010 г. Ферментирует различные сахара и спирты, фенотипически апатогенен, т.е. не обладает гемолитической, протеазной, ДНК-азной, РНК-азной и казеиназной активностью. Не является зоопатогенными, не является фитопатогенными, не представляет опасности по другим причинам.
1
Штамм L. brevis 47f при культивировании на твердой среде MRS в течение 48 часов образует колонии S-формы с диаметром 2 мм, выпуклые, гладкие, белого цвета с ровными краями. При культивировании в жидкой среде MRS в течение 18 и более часов происходит равномерное помутнение среды по всему ее объему, кроме зоны аэробиоза, с образованием осадка. При микроскопировании обнаруживаются одиночные грамположительные палочки правильной формы с округлыми концами, 2-5 мкм. Проявляет высокую антагонистическую активность по отношению к патогенным и условно-патогенным штаммам микроорганизмов (Staphylococcus aureus АТСС 25923, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853, Shigella sonnei I фазы 941, Bacillus subtillis 534, E.coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae K 5054).
Антиоксидантная активность штамма Lactobacillus brevis 47f была определена методом тролоксного эквивалента in vitro с использованием набора (Sigma-Aldrich), позволяющего регистрировать образование катион-радикала. Культуральная жидкость и бесклеточные экстракты показали радикал-инактивирующу способность от 1.87 до 2.23 mM в торолоксовм эквиваленте [М. Marsova, S. Abilev, E. Poluektova, V Danilenko / World Journal of Microbiology and Biotechnology (2018) 34:27]
Штамм L. brevis 47f депонирован в ВКПМ (г. Москва) 26.03.2015 г. В-12237. Штамм L. brevis 47f представлен известной нуклеотидной последовательностью генома. Последовательность генома охарактеризована и депонирована в международную базу GenBank (LBHR00000000). Установлено наличие генов, отвечающих за синтез белков антиоксидантов. (Пример 1)
Биотехнология производства и хранения ФК
8
9
8
Культура пробиотического штамма L. brevis 47f выращивается в ферментере при анаэробных условиях в среде MRS до концентрации 10-10 КОЕ, переносится в защитную среду для высушивания (раствор, содержащий 1% желатина (желатин пищевой марки К-13 ГОСТ 11293-89), 10% сахарозы (сахар белый ГОСТ Р 53396-2009)), лиофилизируется, смешивается со вспомогательными веществами (магния стеарат - антислеживающий агент) и стерильно расфасовывается в кишечнорастворимые капсулы. Жизнеспособность штамма в составе ФК сохраняется неизменной в течение 18 месяцев (10 КОЕ). Более длительное хранение не тестировалось.
Исследование токсичности ФК
6
10
6
10
9
12
Определение различных видов токсичности было проведено при использовании различных доз штамма L. brevis 47f в составе ФК на беспородных белых мышах (10-10 КОЕ), крысах линии Вистар (10-10 КОЕ) и кроликах породы Шиншилла (10-10 КОЕ) при внутрижелудочном и внутрибрюшинном способах введения. Были проверены следующие виды токсичности: острая, хроническая, иммунотоксичность, мутагенность и тератогенность.
Полученные результаты позволяют отнести ФК при использовании в терапевтических дозах к нетоксичным лекарственным веществам.
Исследование фармакокинетики ФК
8
Исследования по изучению фармакокинетики (времени выведения из кишечника животных) проведены на 2-х видах животных: мышах линии BALB/c и на крысах линии Вистар. Препарат вводился перорально в течение 5 дней в дозе 10 КОЕ. После 5-го дня введения ФК ежедневно в течение 20 дней проводился забор фекалий для определения количества пробиотических бактерий при помощи ПНР с праймерами, специфичными для штамма L. brevis 47f. Показано, что ФК на основе штамма L. brevis 47f обнаруживаются в фекалиях крыс и мышей после 1 дня и на протяжении 20 дней после окончания внутрижелудочного введения. На 28-й день эксперимента ФК полностью выводится из организма экспериментальных животных (Пример 2).
Исследование противовоспалительной активности
Введение 5-фторурацила приводит к лекарственной энтеропатии, сопровождающейся картиной мукозита, что выражается в местных и общерезорбтивных проявлениях: нарушения архитектоники эпителия тонкой и толстой кишки, повреждение эпителиоцитов и торможение пролиферации камбиальных элементов (нарушение репарации эпителия), выраженными нарушениями водно-солевого обмена (диспепсия). В слизистой оболочке кишечника могут возникать изъязвления, лейкоцитарная инфильтрация, картина острой дистрофии эпителия: истончение ворсин, снижение количества бокаловидных (слизеобразующих) клеток, резкое падение пролиферативной активности энтероцитов. В крови регистрируется дисбаланс цитокинов.
8
У экспериментальных животных, мышей, мукозит вызывали введением 5-фторурацила внутрибрюшинно в объеме 250 мкл в 0,9% водном растворе NaCl (однократная доза 2 мг/кг). Этот препарат применяется в российских клиниках для лечения больных. ФК в дозе 10 КОЕ и препарат сравнения Ребамипид (Маклеодз Фармасьютикалз, Индия) вводили атравматичным зондом (пероральное введение). Вначале животные получали ФК в дни 3, 7 и 14, начиная с 21 дня вводили 5-фторурацил в течение двух дней подряд. Затем наблюдали поведение животных еще 14 дней (всего длительность эксперимента 35 дней). По окончании наблюдения мышей выводили из эксперимента дислокацией шейных позвонков, вскрывали, осматривали органы брюшной полости, иссекали участки тонкой и толстой кишки ножницами. Изучались изменения в морфофункциональных характеристиках кишечника по сравнению с контрольной группой и группами, получавшими препарат сравнения Ребамипид. (Пример 3)
ФК на основе штамма L. brevis 47f, вводимый в монотерапии, не вызывал отклонений показателей гомеостаза (клеточный и биохимический состав крови и мочи, морфология кишечника). В комбинации с 5-фторурацилом ФК проявляет защитный эффект, уменьшая проявления энтеропатии (нормализация физиологических отправлений, сохранение структуры эпителия, поддержание пролиферации энтероцитов), нормализует макро- и микроскопическую картину мукозита (Рисунок 1-4). Препарат сравнения, Ребамипид, показал более слабую, по сравнению с ФК, протективную активность в отношении повреждения слизистой оболочки кишечника в ответ на 5-фторурацил. Ребамипид является гастропротектором. Оказывает цитопротекторное действие путем повышения содержания простагландина Е2 (PGE2) в слизистой желудка, способствует активации ферментов, ускоряющих биосинтез высокомолекулярных гликопротеинов, и повышает содержание слизи на поверхности стенки желудка и кишечника.
Исследование антиоксидантной активности
Малоновый диальдегид (МДА) является интегральным показателем процессов свободнорадикального окисления, возникающего в организме при деградации полиненасыщенных жиров активными формами кислорода, служит маркером оксидативного стресса в организме. Изучение концентрации МДА в крови и в других тканях позволяет оценивать уровень воспалительного процесса, с одной стороны, антиоксидантной защиты, с другой.
8
Исследование было проведено на модели мукозита, вызванного 5-фторурацилом у крыс линии Вистар и мышей линии BALB/c. Изучалось изменение уровня маркера оксидативного стресса МДА в плазме крови и тканях кишечника у животных, получавших фармацевтическую композицию, по сравнению с контрольной группой и группой, получавшей препарат сравнения Ребамипид. Применение 5-фторурацила повышало уровень МДА в плазме крови в 1,1-6,5 раз и в тканях кишечника в 1,2-13 раз, в зависимости от пола животных и получаемого лечения. На модели мукозита кишечника, индуцированного приемом 5-фторурацила показано, что ФК в дозе 10 КОЕ при пероральном введении, снижает концентрацию МДА в плазме крови и тканях кишечника лабораторных животных от 2-х до 3-х раз, (Пример 4).
Пример 1
Пример 2
Изучение фармакокинетики ФК
8
Исследования по изучению фармакокинетики (времени выведения из кишечника животных) проведены на 2-х видах животных: мышах линии BALB/c и на крысах линии Вистар. Препарат вводился перорально в течение 5 дней в дозе 10 КОЕ. После 5-го дня введения ФК ежедневно в течение 20 дней проводился забор фекалий для определения количества пробиотических бактерий при помощи ПЦР с праймерами, специфичными для штамма L. brevis 47f.
В таблице 3 приведены данные содержание ФК в фекалиях мышей-самок и мышей-самцов во время эксперимента.
*Для наглядности результатов приведены данные через каждые 2 и 4 дня.
В таблице 4 приведены данные содержание ФК в фекалиях крыс-самок и крыс-самцов во время эксперимента.
*Для наглядности результатов приведены данные через каждые 2 и 4 дня.
8
При внутрижелудочном введении ФК в дозе 1×10 КОЕ на одну особь 2-х видов животных показано, что ФК на основе штамма L. brevis 47f обнаруживаются в фекалиях крыс и мышей после 1 дня и на протяжении 20 дней после окончания внутрижелудочного введения. На 28-й день эксперимента ФК полностью выводится из организма экспериментальных животных.
Пример 3
Исследование противовоспалительной активности
8
Модель экспериментального мукозита разрабатывали на мышах BALB/c. Масса тела мышей перед началом экспериментов 20-22 г, возраст 10-12 недель. Животные получали 0,9% NaCl (контроль), 5-фторурацил (2 мг/кг), ФК (10 КОЕ) или препарат сравнения ребамипид (150 мг/кг). Последовательность воздействий: вначале вводили ФК (или препарат сравнения) в дни 3, 7 и 14, на 21-й день начинали введение 5-фторурацила (2 мг/кг) ежедневно на протяжении 2 дней. Контрольная когорта получала 0,9% NaCl в дни 3, 7 и 14. Физиологический раствор и 5-фторурацил вводили внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл 1 раз в день. ФК или ребамипид вводили через зонд в пищевод в виде водной суспензии. Животных наблюдали 14 дней после начала введения 5-фторурацила. Общая продолжительность эксперимента 35 дней. В ходе эксперимента ежедневно отслеживали наличие диспепсических симптомов, измеряли вес животных.
Введение 5-фторурацила лабораторным мышам вызывает мукозит, сопровождающейся местными и общерезорбтивными проявлениями: нарушениями архитектоники эпителия тонкой и толстой кишки, повреждением эпителиоцитов и торможением пролиферации камбиальных элементов (нарушение репарации эпителия), выраженными нарушениями водно-солевого обмена (диспепсия). Комбинированное применение ФК и 5-фторурацила предотвращает микроанатомические изменения. Сохраняется структура эпителиоцитов и присутствие бокаловидных клеток в слизистой оболочке толстой кишки, которые повреждаются данным противоопухолевым препаратом. Именно нарушение структуры и функций бокаловидных клеток, в которых образуется и транспортируется в апикальную зону защитный гликопротеин муцин, есть важный патогенетический механизм мукозита в ответ на 5-фторурацил. Следует полагать, что снижение интенсивности кислородного "взрыва" с помощью ФК благоприятно сказывается на состоянии бокаловидных клеток толстой кишки, за счет чего продукция и выведение муцина сохраняют защитную функцию слизистой оболочки кишки.
*препарат сравнения.
Оценка пролиферации, приводящая к восстановлению эпителия слизистой оболочки кишечника, проводилась иммуногистохимическим методом. Для этого использовали моноклональные антитела Ki-67 к гистону Ki-67, имеющийся только в делящихся клетках. Гистон Ki-67 является индикатором нахождения клетки в фазе подготовки к делению и самого деления (стадии пролиферации). Индекс Ki-67 - соотношение Ki-67-позитивных клеток, то есть находящихся в стадии пролиферации, ко всем клеткам, и выражается в процентном соотношении.
Индекс пролиферации определяли путем подсчета количества Ki-67-позитивных клеток на 100 клеток эпителия слизистой оболочки кишечника с последующим вычислением показателя в процентах. В группе интактных животных экспрессия Ki-67 выявлена преимущественно в области крипт тонкого отдела кишечника; индекс пролиферации 84,3±2,3%. В толстом отделе кишечника у интактных мышей индекс пролиферации 54,3±3,4%. У животных, получавших 5-фторурацил, в тонком и толстом отделах кишечника выявлено значительное снижение пролиферативной активности покровного эпителия. Индекс пролиферации в тонком отделе кишечника составляет 14,3±0,4%, а в толстом отделе 2,5±0,2%. У мышей, получавших 5-фторурацил в комбинации с ФК на основе штамма L. brevis 47f с антиоксидантной активностью, наблюдается восстановление пролиферативного пула энтероцитов, индекс пролиферации составил 60±5,3% в тонком кишечнике и 45±2,7%. в толстом отделе кишечника.
Пример 4
Исследование антиоксидантной активности на модели мукозита
Результаты проведенного исследования показали, что применение 5-фторурацила повышает уровень МДА в плазме крови в 1,1-6,5 раз и в тканях кишечника в 1,2-13 раз, в зависимости от пола животных и получаемого лечения. Уровень МДА в плазме крови каждой группы животных в дни 3, 7 и 10 изменяется незначительно, в пределах погрешности. Применение ФК приводит к некоторому снижению базового уровня МДА в плазме крови, ребамипид не снижает его.
8
Сравнение эффектов ФК и ребамипида показало, что ФК в дозе 10 КОЕ/мышь снижает рост концентрации МДА в плазме крови самцов и самок при индуцированном 5-фторурацилом мукозите кишечника. При применении ФК финальная концентрация МДА в плазме крови и тканях кишечника самцов и самок на 60% ниже, чем при отсутствии лечения.
3