Возрастные изменения референтных интегральных гематологических индексов неспецифической реактивности у здоровых лошадей

Возрастные изменения референтных интегральных гематологических индексов неспецифической реактивности у здоровых лошадей

А.П.Жуков, д.в.н., профессор, М.М.Жамбулов, к.б.н., А.П. Датский, аспирант, ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ

Самым простым и часто применяемым способом лабораторной диагностики для оценки состояния здоровья организма является общий анализ крови (ОАК). Анализ большого количества показателей ОАК нередко бывает трудоёмким, а при субклиническом течении болезни и неэффективным, не дающим врачу достаточной информации для постановки диагноза и назначения адекватной терапии [1]. В связи с этим в настоящее время всё большую значимость приобретает использование диагностических и прогностических возможностей интегральных гематологических индексов, поскольку определённое сочетание показателей гемограммы отражает интегральные характеристики гомеостатических систем организма животных, формирующих его неспецифическую реактив-ность[2].

К сожалению, в практической ветеринарной медицине данные методики используются ограниченно из-за отсутствия референтных значений индексов у здоровых животных [3, 4].

Целью нашего исследования явилась презентация интегральных гематологических индексов неспецифической реактивности у беспородных здоровых лошадей в постнатальном периоде онтогенеза.

Материал и методы исследования. Работа выполнена в 2014 — 2016 гг. в условиях ОАО «Спутник», государственной конюшни с ипподромом «Оренбургская», СПК «Приуральский» Оренбургской области на лошадях, начиная с первых суток жизни, затем через 15 сут., 1 мес., 3 мес., 6 мес. и до 10 лет

с годичным интервалом. Все животные содержались в типовых помещениях, нормы кормления соответствовали возрасту и особенностям эксплуатации. Согласно классификации Т. В. Овсянниковой (2007) [5], неспецифическую реактивность характеризуют индекс Бредекка (ИБ), индекс Кребса (ИК), индексы стресса (ИС) и адаптации (ИА), индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов (ИСНМ), индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов (ИСЛМ), индекс аллергизации (ИАЛ), индекс иммунореактивности (ИИР) и лейкоцитарный индекс (ЛИ).

Индексы рассчитывали по выведенным лей-кограммам, цифровые результаты исследования обработаны статистически с помощью программы Ехсе1-97. Оценку значимости различий средних арифметических проводили с использованием 1-критерия Стьюдента, различия считали статистически значимыми при Р <0,05.

Результаты исследования. Установлено, что к числу особенностей онтогенеза белой крови лошади следует отнести сравнительно выраженный нейтрофилез первого месяца жизни, короткий период гипоэозинофилии

За все периоды наблюдения отмечено стабильное представительство базофилов и моноцитов, с 6 мес. — палочкоядерных нейтрофилов, с 3 лет умеренно увеличиваются сегментоядерные нейтрофилы на фоне устойчиво убывающих лимфоцитов.

Индекс Кребса представляет соотношение общего количества нейтрофилов к лимфоцитам,

% 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

/ / * # * ^ % ' к ' ь Л % 4 * \ ' ' "о ' 4

^ ^ Возраст

Рис. — Возрастные взаимоотношения нейтрофилов и лимфоцитов в лейкограмме лошади

характеризует участие их в поддержании общей реактивности организма, а также активности факторов специфического иммунитета и фагоцитарной реакции. При оценке полученных результатов следует учитывать онтогенез лейкограммы у лошадей. Если при рождении количество нейтрофилов превышает представительство лимфоцитов, то это и отражается на коэффициенте ИК, который близок к трём условным единицам. Через 15 сут. после рождения их соотношение указывает на двухкратное превышение нейтрофилов. Далее следует первый перекрест, когда в крови месячных жеребят уже превалирует представительство лимфоцитов и ИК будет равен 0,95 ± 0,11 усл. ед. В последующие месяцы уровень индекса будет понижаться, с наименьшими значениями в 6-месячном возрасте, а у животных в возрасте 2 года ИК становится вновь близок к единице. В 3 года в лейкограмме находим главенство полиморфноядерных лейкоцитов над пулом лимфоцитов с показаниями ИК, превышающими единицу, после которого отмечается стабильное увеличение нейтрофилов, в основном за счёт зрелых клеток, вплоть до 10-летнего периода со значением индекса от 1,11± 0,13 до 1,76 ± 0,18 усл. ед.

Индекс стресса (ИС) определяется как частное от деления сегментоядерных нейтрофилов на лимфоциты и отражает взаимоотношение клеточного и гуморального звеньев иммунной системы [6].

Если учесть, что в группе полиморфноядерных клеток сегментоядерные — самые представительные, то следует предположить, что у ИК и ИС будут очень близкие значения. И это действительно так, различия между группами не достоверны. Так, при рождении у жеребят в крови в 2,5 раза больше сег-ментоядерных нейтрофилов, в 15-суточном возрасте их больше в 1,8 раза и далее первый перекрест, когда лимфоцитов уже больше в возрасте 1 мес., при индексе стресса, равном 0,83+0,13 усл. ед. Гегемония лимфоцитов заканчивается в 2-летнем возрасте лошади, а потом нарастает концентрация сегментоядерных нейтрофилов и ИС будет выше единицы до 10-летнего возраста, изменяясь в пределах от 1,02+ 0,14 до 1,64+ 0,24 усл. ед.

Таким образом, показатели ИК и ИС имеют общий тренд распределения на всех этапах онтогенеза лошади, образуя три кластера: первый — от рождения и до возраста 1 мес. с максимальными значениями; второй — в возрасте от 1 мес. до 2 лет с минимальными показателями; третий — от 3 и до 10 лет с нарастающими и стабильными признаками.

Л. Х. Гаркави и соавторы [7] доказали, что существует ряд последовательно возникающих неспецифических адаптационных реакций организма, сопровождающихся в том числе определёнными взаимоотношениями лимфоцитов и сегментоядер-ных нейтрофилов, для оценки качества которых они предложили ввести индекс адаптации (ИА). Используя относительное содержание лимфоцитов

в качестве сигнального показателя оценки вида адаптационных реакций, мы определили, что ИА является прямо противоположным по значениям индексам стресса и Кребса. Все полученные данные консолидированы в три группы результатов, Так, в 1-й группе объединены результаты ИА с первых суток после рождения и до 1-месячного возраста, которые имеют наименьшие показатели за все периоды наблюдения — 0,39+0,03 — 0,56+0,09 усл. ед. Далее следует 2-я группа результатов, с первого месяца жизни и до 2 лет, при этом ИА превышает единицу и колеблется от 1,19+0,26 до 2,11+0,38. В 3-й группе сгруппированы результаты меньше единицы, т.е. с 3-летнего возраста ИА уменьшается вплоть до 10-летнего возраста в силу преобладания в крови пула зрелых нейтрофилов. В период с 4 и до 6 лет ИА укладывается в пределах 0,72 +0,03 — 0,78+0,17 усл. ед., а с 7 и до 10 лет он также стабилен, но в интервале 0,61+0,12 — 0,69+0,14.

Лейкоцитарный индекс (ЛИ) — индекс неспецифической реактивности, отражает взаимоотношение гуморального и клеточного звеньев иммунной системы. ЛИ — это отношение количества (%) лимфоцитов ко всему пулу нейтрофилов, поэтому результаты данного индекса должны быть близки с ИА, в формуле которого используются значения сегментоядерных, а у лошадей они являются самой представительной формой. Действительно, полученные данные по 15 возрастным группам являются очень близкими со значениями индекса адаптации. Также чётко прослеживается влияние смены гегемонии нейтрофилов и лимфоцитов, которые разделяют ЛИ на три комплекса, первый — с минимальными результатами от 0,34+0,08 до 0,51+0,16 усл. ед. у жеребят первого месяца жизни, с максимальными — от 1,05+0,18 до 1,86+0,26 у жеребят в возрасте от 1 мес. до 2 лет и стабильно средними результатами — от 0,56+0,13 до 0,89 + 0,18 усл. ед. у лошадей от 3 до 10 лет.

Индекс Бредекка (ИБ) является интегральным критерием оценки функционального состояния организма, выражающим отношение количества лимфоцитов к палочкоядерным нейтрофилам. Если охарактеризовать онтогенез палочкоядерных нейтрофилов, то следует отметить их стабильность независимо от возраста с показателями от 3,95+0,28 до 6,83+0,56% за период наблюдения с первых сут. жизни до 10 лет. Лимфоциты за этот же возрастной период изменяются значительно динамичнее: до первого перекреста их представительство увеличивается от 24,23+1,78 до 31,68+ 3,61%, затем - от 48,12+3,74 до 49,74+4,36%, после второго перекреста — от 43,58+3,69 до 32,2+2,44%. Стало быть, изменчивость индекса всецело зависит от насыщения крови лимфоцитами. В первые сутки жизни индекс укладывается в значения от 3,54+0,53 до 4,93+0,59 усл. ед., начиная с первого месяца жизни ИБ увеличивается от 8,96+0,78 до 14,03 + 2,13 усл. ед. в 2-летнем

возрасте. А с третьего года жизни лошадей индекс стабилизируется в интервале 8,71+1,17 — 9,47+ 1,75 усл. ед. В 10-летнем возрасте индекс снижается до 6,54+ 0,47 усл. ед. на фоне снижения количества лимфоцитов в крови лошадей.

Индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов (ИСНМ) позволяет судить о соотношении компонентов микрофагально — макрофагальной системы и показывает равновесие между пулами нейтрофилов и моноцитов. Если нейтрофилы динамично изменяются в крови лошадей до 2-летнего возраста, то моноциты — это стабильная по представительству в крови клетка, не превышающая 6 % в лейкограмме. Вместе с тем эта клетка формирует в организме животного систему мононуклеарных фагоцитов, т.е. следующую генерацию клеток, являясь полидифферонными предшественниками клеток различных тканей и органов, в которую входят гистиоциты соединительной ткани, клетки Купфера печени, альвеолярные макрофаги лёгких и т.п. Как показали исследования, величина индекса зависима от показателей в знаменателе и в результате распределение его всецело связано с насыщением крови нейтрофилами. Поэтому предсказуемо он максимален в первый месяц жизни — с результатом от 14,41+ 1,83 до 15,74+2,12 усл. ед., с последующим спадом вплоть до 2-летнего возраста, знаменуя уменьшение в крови нейтро-филов после первого перекреста, а затем следует второй перекрест, после которого начинается увеличение ИСНМ от 11,62+1,21 до 16,12+1,93 усл. ед., объединяя результаты у животных в возрасте от 3 до 10 лет.

Индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов (ИСЛМ) показывает баланс аффекторного и эф-фекторного звеньев иммунологического процесса, учитывая что иммунная система высших животных призвана поддерживать антигенно-структурный гомеостаз индивидуума, осуществляет свои функции за счёт неспецифической резистентности и иммунитета. Исходя из анализа лейкограммы крови лошади, следует предположить, что наименьшие показатели индекса нужно ожидать у животных первых дней жизни и у 10-летних, именно в эти периоды представительство лимфоцитов в крови минимальное. По совокупности сходных результатов установлены три группы в их иерархии. Первая объединяет результаты индексов у жеребят при рождении (5,02+0,63), 15-суточных (7,92+0,69), а также 10-летних лошадей (7,97+0,53). Максимальные показатели в интервале от 10,94+0,87 до 16,66+1,59 усл. ед. объединены во второй гр., которая представляет результаты у животных в возрасте от 1 мес. до 2 лет жизни. Третья представляет ИСЛМ у животных от 3 до 10 лет с результатом от 8,06+0,67 до 9,89+ 0,93 усл. ед. Таким образом, ИСНМ и ИСЛМ имеют прямо противоположные результаты в трёх возрастных группах.

Оценку степени аллергизации в периферической крови устанавливают по индексу аллергизации (ИАЛ), который определяют как соотношение лимфоцитов на эозинофилы, делённое на сумму процентов всех нейтрофилов, моноцитов и базофилов. Все полученные результаты можно сгруппировать исходя из возраста животных. Так, у жеребят с первых сут. жизни до 1-месячного возраста индекс аллергизации укладывается в интервале от 0,45+0,08 до 0,61+ 0,11 усл. ед. На 3-м мес. жизни ИАЛ увеличивается в 5 раз, в возрасте 6 мес. он ещё удерживается, и далее до 3 лет он стабилен в пределах 4,15+ 0,48 усл. ед. У взрослых лошадей индекс равен 2,5 с недостоверной разницей в возрастной ассоциации 4 — 10 лет.

Индекс иммунореактивности (ИИР) отражает дисбаланс основных клеток продуцентов цитокинов и дисбаланс в цитокиновом профиле при наличии лимфопении. Дефицит эозинофилов в свою очередь означает недостаток антимедиаторов воспаления, следовательно, недостаток дезинтоксикационного компонента в спектре медиаторов рассчитывается по формуле, где в числителе сумма % лимфоцитов и эозинофилов, а в знаменателе — процент моноцитов в лейкограмме.

Индекс иммунореактивности близок по значе-ням с ИСЛМ и имеет также три группы родственных элементов статистической совокупности. Первая — с минимальными показателями у жеребят 1-го мес. жизни — 5,03+ 0,43 — 8,02 + 0,68 усл. ед., вторая — с максимальными значениями от 12,02+1,18 до 18,87 + 1,83 усл. ед. у животных с 1-го месяца жизни до 3-летнего возраста и третий — стабильный, с минимальной разницей в результатах, у лошадей от 3 до 10 лет, с показателями от 10,03+0,73 до 11,84+1,68 усл. ед..

На основании проведённого исследования были сделаны следующие выводы:

1. При анализе возрастных изменений интегральных гематологических индексов, полученных при математической обработке лейкограммы, следует учитывать двойной перекрест кривых ней-трофилов и лимфоцитов. До и после перекрестов лейкограмма имеет нейтрофильный тип, а внутри перекреста —лимфоцитарный.

2. Определены референтные величины для девяти индесов в 15 возрастных группах здоровых беспородных лошадей. Установлено, что значения индексов, характеризующих неспецифическую реактивность, объединены в три кластера: первый представлен результатами у жеребят в возрасте от рождения до 1 мес., второй — близкими результатами у животных в возрастной ассоциации от 1 мес. до 3 лет и третий — общностью показателей у лошадей старше 3 лет.

3. Особенности возрастных изменений ИАЛ представляет второй кластер, который декларирует сходные данные обследованных животных с 1-месячного возраста и до 3 лет.

Литература

1. Козинец Г.И., Макарова В. А. Исследования системы крови в клинической практике. М.: Триада-Х, 1997. С. 204 — 243.

2. Мустафина Ж.Г., Крамаренко Ю.С., Кобцева В. Ю. Интегральные гематологические показатели в оценке иммунологической реактивности организма больных с офтальмопа-тологией // Клиническая лабораторная диагностика. 1999. № 5. С. 47 - 48.

3. Кавцевич Н.Н., Минзюк Т. В. Лейкоцитарные индексы и активность организаторов ядрышка лимфоцитов крови щенков серых тюленей // Вестник Южного научного центра РАН. 2010. Т. 6. № 4.С. 76 - 83.

4. Жуков А.П., Бикчентаева Г.Ю., Ростова Н. Ю. Морфологические показатели и индексы крови голштинов канадской селекции в процессе длительной адаптации // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2012. № 2 (34). С. 86 - 90.

5. Овсянникова Т. В. Особенности нарушения гемолимфо-циркуляции в патогенезе обострения хронического воспалительного процесса органов малого таза у женщин и их коррекция лимфогенными технологиями. Автореф. дисс.... докт. мед. наук. Новосибирск, 2007. 37с.

6. Жуков А.П., Шарафутдинова Е.Б., Датский А. П. Возрастные изменения интегральных гематологических индексов у крупного рогатого скота // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2016. № 4 (60). С. 213 - 216.

7. Гаркави Л.Х., Толмачев Г.Н., Михайлов Н. Ю. Адаптационные реакции и уровни реактивности как эффективные диагностические показатели донозологических состояний // Вестник Южного научного центра РАН. 2007. Т. 3. № 1. С. 61 - 66.

Коррекция показателей белкового обмена при гепатозе у собак

Д.Р.Ахмедова, аспирантка, ФГБОУ ВО Южно-Уральский ГАУ

Печень играет многоплановую роль в процессе пищеварения, промежуточном метаболизме, биосинтезе и выделении продуктов распада.

Белковый метаболизм является центральным звеном среди всех биохимических процессов, лежащих в основе жизни, и во многом зависит от физиологического состояния печени [1,2]. Критерием, позволяющим судить о состоянии белко-вообразовательной функции печени, служат белки сыворотки крови — их уровень и соотношение [3].

В общей структуре гепатопатий у собак 41,95% составляют гепатозы [4], в результате которых уменьшается функциональная активность печени и нарушается белковый метаболизм.

Исходя из вышесказанного целью научных исследований стало изыскание оптимального способа коррекции обмена белков в организме собак при гепатозе.

Материал и методы исследования. Исследование проводили в условиях ОГБУ «Чебаркульская ветеринарная станция по борьбе с болезнями животных» на собаках, больных гепатозом. Диагноз устанавливали на основании данных анамнеза, выявленных симптомов, гематологических исследований. Биохимические показатели крови определяли на автоматическом биохимическом анализаторе марки «81псЬгоп-4» фирмы Вектап.

На фоне диетического кормления применялось комплексное лечение: инфузионная терапия солевыми растворами Рингера—Локка, Рингера (60—100 мл/кг в сут.) и 5—10-процентным раствором глюкозы (0,5 мг/кг в сут.); лечение аллохолом (внутрь по 2 табл. 3—4 раза в день), аскорбиновой кислотой (30 мг/кг 2 раза в день внутримышечно; цианкобаламином (10 мг/кг в день внутримышечно), Гептралом (внутрь по 2 таблетки или внутривенно 1 мл/кг в день).

Гептрал — гепатопротектор с антидепрессивным действием, содержит адеметионин (биологически активное соединение, аналогичное внутриклеточному адеметионину). Адеметионин как исключительно важная биологическая субстанция присутствует во всех органах и тканях, но максимальное его содержание отмечено в печени и головном мозге. Известно, что адеметионин — это ключевое звено в реакциях детоксикации, происходящих в печени, определяет способность клеток этого органа к восстановлению и регенерации, участвует в антиоксидантной защите. Гептрал восполняет недостаток адеметионина в организме, вызванный повышенным потреблением этого вещества при различных заболеваниях печени. Эквивалентность гептрала эндогенному адеметионину определяет высокий уровень эффективности препарата и быстрое достижение лечебного эффекта за счёт полного и быстрого включения в биохимические реакции в организме, что позволяет не только восполнить дефицит адеметионина, но и стимулировать его синтез в гепатоцитах. Гептрал оказывает многофункциональное действие и способен в короткие сроки уменьшить клинические проявления заболеваний печени, тревогу и проявления депрессии, восстановить работоспособность, улучшить функцию жизненно важных органов, в том числе печени. Многофункциональность Гептрала проявляется в его свойствах:

— холеретическое — стимулирует выработку и отток желчи, а также поступление желчных кислот из гепатоцитов в желчевыводящую систему;

— холекинетическое — нормализует моторику желчевыводящих путей, обеспечивает физиологическое продвижение желчи к желчному пузырю и далее, в 12-перстную кишку, что способствует улучшению пищеварения, разрешает внутрипечё-ночный холестаз и нормализует биохимические показатели крови;