СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ОНКОЗАБОЛЕВАНИЙ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
METHOD OF TREATING ONCOLOGICAL DISEASES IN EXPERIMENT

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной онкологии, в частности к методам повышения эффективности цитостатической терапии онкозаболеваний, и может быть использовано для усиления непосредственной противоопухолевой и противометастатической активности лекарственных препаратов-цитостатиков, снижения их токсического воздействия на систему кроветворения и восстановления ее нарушенных функций.
Известно, что онкологические заболевания являются одной из основных причин смертности людей, занимая 18-20% в ее структуре. Одним из ведущих методов лечения злокачественных опухолей является химиотерапия цитостатиками. К наиболее часто применяемым препаратам этой группы относится циклофосфан. Главным недостатком цитостатической химиотерапии является развитие побочных эффектов, в том числе токсическое воздействие на кроветворную систему: для циклофосфана этот побочный эффект является основным /1/. В связи с вышесказанным, актуальным направлением современной экспериментальной медицины является разработка средств повышения эффективности цитостатической химиотерапии за счет снижения ее токсических побочных воздействий на организм и усиления специфической активности, в первую очередь антиметастатической. Поиск подобных препаратов, получивших название biological response modifiers (модификаторы биологических реакций), активно ведется как в России, так и за рубежом /20, 15/. Большая часть таких препаратов производится на основе растительного сырья. Для разработки противоопухолевых препаратов, в том числе и модификаторов биологических реакций, разработана эффективная система их исследований, предполагающая проведение на первом этапе экспериментов на мелких лабораторных животных (мышах, крысах) с целью отработки оптимальных доз и режимов применения изучаемых средств /5, 17, 20/.
Чрезвычайно актуальна проблема лечения онкозаболеваний и в сельском хозяйстве. Птицы занимают одно из первых мест по частоте обнаружения опухолей у разных видов животных. У птиц описаны опухоли, происхождение которых связано со всеми видами тканей (соединительная, мышечная, нервная, эпителиальная). Первое место по частоте обнаружения опухолевых заболеваний занимают куры. Опухолевые болезни птиц имеют инфекционную и неинфекционную природу. Наиболее часто у кур встречаются необластические, например болезнь Марека, при которой в различных органах птицы обнаруживают плотные или очаговые диффузные опухоли, лейкоз, характеризующийся поражением, главным образом, органов кроветворения, и ретикулоэндотелиоз. В хозяйствах РФ только на болезнь Марека приходится более 20% из инфекционных патологий, значительно меньший удельный вес (2-5%) занимают остальные /6, 13/. Кроме того, опухолевые болезни могут быть причиной болезней органов яйцеобразования, заболеваемость которыми составляет от 9 до 30% от всех болезней несушек, что причиняет значительный экономический ущерб в результате падежа, выбраковки, снижения и прекращения яйценоскости.
Известен способ комбинированной цитостатической терапии злокачественных опухолей /10/, заключающийся в применении п-тирозола в качестве средства для профилактики и лечения токсических энтеропатий, вызванных цитостатиком.
Недостатком способа является отсутствие широкого спектра биологической активности у синтетического соединения п-тирозола.
Известен способ лечения онкозаболеваний /3/, включающий лучевую терапию, химиотерапию и фитотерапию, т.е. лечение сборами различных растений, применяемых до операции во время курсов лучевой терапии и химиотерапии.
Недостатком способа является чрезвычайная трудоемкость составления композиции и сложность ее стандартизации по биологически активным веществам.
Известен способ лечения онкозаболеваний /11/, взятый за прототип, включающий химиотерапию цитостатиками и/или лучевую терапию и введение лекарственных средств, а в качестве лекарственных средств используют настойки калины обыкновенной, софоры японской, чеснока и чернобыльника в сочетании с бефунгином в терапевтической дозе, причем все компоненты смешивают за 5 минут до употребления и принимают за 20-30 минут до еды три раза в сутки.
Недостатком прототипа является способность алкалоидов одного из компонентов предлагаемого состава - софоры - вызывать выраженные побочные эффекты на организм и трудоемкость приготовления обязательно свежего раствора смеси компонентов непосредственно перед употреблением как для одного больного, так и для стационара.
Заявляемый способ лечения онкозаболеваний в эксперименте направлен на устранение указанных недостатков и включает цитостатическую химиотерапию опухолей циклофосфаном и применение лекарственного средства на основе растительного сырья, а в качестве лекарственного средства на основе растительного сырья применяют средство из торфа, содержащее гуминовые кислоты, фульвокислоты, аминокислоты, витамины, макро- и микроэлементы, полученное путем обработки торфа аммиаком в присутствии перекиси водорода при 140°С. Средство из торфа вводят в состав корма или питьевой воды в количестве 100-200 мг/кг один раз в сутки.
Заявляемый способ отличается от прототипа тем, что в составе терапии злокачественных опухолей в качестве растительного лекарственного средства применяют средство из торфа, которое содержит широкий спектр биологически активных веществ, способствующих выздоровлению: гуминовые кислоты, фульвокислоты, витамины, аминокислоты, макро- и микроэлементы.
Показано, что гуминовые вещества обладают способностью усиливать активность обменных процессов в организме, повышать его резистентность к неблагоприятным факторам внешней среды, в том числе и токсическим воздействиям химических соединений /19/. В Институте торфа АН Белоруссии в 80-х годах прошлого века проводились работы по изучению противоопухолевой активности различных препаратов из торфа - полисахаридов, гуминоподобных веществ и их суммарной фракции, а также соединений, обладающих противовирусной и интерфероногенной активностью /9/. Показано, что препарат на основе гуминовых соединений торфа НСТ (нитрогумат аммония) активизирует кроветворную функцию организма, повышая содержание эритроцитов, гемоглобина, а также стимулирует естественную резистентность организма сельскохозяйственных животных /8/. Гуминовые вещества обладают выраженной антиоксидантной активностью, что крайне важно, поскольку активация процессов перекисного окисления является основным механизмом развития токсических эффектов при химиотерапии цитостатиками /4, 16/.
Наличие в средстве из торфа витаминов, макро-, микроэлементов обогащает рацион и позволяет предотвратить дефицитные состояния по данным элементам в организме животных и птиц.
Аминокислоты, в том числе незаменимые аминокислоты, нормализуют обменные процессы в организме. Преобладающими аминокислотами по количественному содержанию являются аспарагиновая и глутаминовая кислоты, пролин, гистидин, аланин. Аспарагиновая кислота играет важную роль в углеводном обмене и обезвреживании аммиака. Глутаминовая кислота является нейромедиатором, а также может использоваться клетками мозга в качестве источника энергии. Пролин предельно важен для правильного функционирования связок и суставов и укрепления сердечной мышцы. Аргинин замедляет рост опухолей, в том числе раковых, за счет стимулирования иммунной системы организма, способствует дезинтоксикационным процессам в печени (прежде всего обезвреживанию аммиака). Валин - незаменимая аминокислота, участвующая в восстановлении поврежденных тканей и для поддержания нормального обмена азота в организме /12/.
Из витаминов, входящих в состав препарата из торфа, наибольшее значение для применения его в комплексе цитостатической химиотерапии опухолей, имеют витамин Е и бета-каротин, обладающие выраженным антиоксидантным эффектом и широко используемым в клинической онкологии /14/. Способностью усиливать данный эффект обладает цинк. Данный микроэлемент является одним из основных факторов формирования иммунитета 111. Железо, также являющееся компонентом препарата, является неотъемлемым элементом процесса кроветворения, нарушаемого при химиотерапии.
Таким образом, применение в способе лечения онкозаболеваний средства из торфа, содержащего биологически активные вещества, выполняющие жизненно важную для организма роль и являющиеся регуляторами многих биохимических и физиологических процессов, способствует повышению эффективности лечения онкозаболеваний.
Другим отличием заявляемого способа является то, что применение средства из торфа не требует предварительной операции по приготовлению настоек, дозированию и смешиванию окисляющих друг друга компонентов, как в прототипе, что упрощает способ лечения.
Немаловажным преимуществом заявляемого способа лечения онкозаболеваний по сравнению с прототипом является то, что применяемое в способе средство из торфа относится к классу малоопасных веществ, не обладает кумулятивным действием, не проявляет эмбриотоксичности и стандартизовано по компонентному составу.
Дозировка средства из торфа подобрана экспериментальным путем. Оптимальная доза для мышей составляет 200 мг/кг, для крыс - 100 мг/кг.
Способ лечения онкозаболеваний, включающий наряду с химиотерапией применение средства из торфа, возможен благодаря выявленным свойствам средства повышать противоопухолевый и противометастатический эффекты цитостатика циклофосфана, а также снижать повреждающее действие цитостатика на кроветворную систему.
Эксперименты по оценке противоопухолевого и противометастатического эффектов средства из торфа и его комбинаций с циклофосфаном были проведены на мышах линии С57В1/6 с аденокарциномой Эрлиха или меланомой В16 и крысах линии Wistar с лимфосаркомой Плисса в соответствии с классическими методами экспериментальной химиотерапии опухолей /5/. Средство из торфа вводили с помощью зонда в желудок. Для пересчета доз использовали широко применяемую в онкофармакологии формулу Freirech (1966) /18/. Полученные данные обработаны с применением методов непараметрической статистики /2/. Результаты исследований приведены в таблицах.
Ниже приведен пример получения из торфа концентрированного маточного раствора.
Пример 1. Торф смешивают с 1,0%-ным раствором водного аммиака и 1,75%-ным водным раствором перекиси водорода в соотношении 1:5:5, нагревают до 140°С при постоянном перемешивании и отделяют жидкую фазу, которую сгущивают до содержания 80 мг сухого вещества в 1 мл средства.
Пример 2. Влияние средства из торфа на противоопухолевый эффект циклофосфана у мышей с аденокарциномой Эрлиха (табл.1-2)
Проведены две серии экспериментов. Средство из торфа начинали вводить животным через 24 часа после перевивки опухоли один раз в сутки в дозе 200 мг/кг с помощью зонда в желудок и продолжали ежедневно в течение 8 суток, циклофосфан вводили внутримышечно в дозе 100 мг/кг на 4 и 7-е сутки после перевивки. Оценку эффективности лечебных воздействий проводили на 9-е сутки после трансплантации карциномы Эрлиха.
При комбинировании препаратов противоопухолевый эффект в 1,5-2,6 раза возрастает по сравнению с группой животных, получавших один цитостатик. Во второй серии экспериментов средство из торфа также достоверно снижает токсичность циклофосфана по отношению к системе кроветворения, препятствуя снижению количества лейкоцитов.
Таким образом, в этих двух сериях экспериментов показано, что в способе лечения онкозаболеваний применение средства из торфа повышает его эффективность, достоверно усиливая противоопухолевую активность циклофосфана и также достоверно повышая количество лейкоцитов периферической крови, сниженное в результате применения цитостатика.
Таблица 1
Влияние средства из торфа на эффективность лечения циклофосфаном (ЦФ) мышей с аденокарциномой Эрлиха (серия 1)
№ п/п
Группа наблюдения
Число животных в группе
Объем осадка опухолевых клеток, мл
Торможение роста опухоли, %
1
Контроль
10
1,6±0,1
-
2
ЦФ
10
1,1±0,3*
31
3
Средство из торфа
10
1,0±0,2*
38
4
ЦФ + средство из торфа
10
0,3±0,08* **
81
Примечание: в данной и последующей таблицах:
*) различия достоверны по сравнению с группой Контроль при Р≤0,05,
**) различия достоверны по сравнению с группой Циклофосфан при Р≤0,05.
Таблица 2
Влияние средства из торфа на эффективность лечения циклофосфаном (ЦФ) мышей с аденокарциномой Эрлиха (серия 2)
Группа
Кол-во мышей
Объем осадка опухолевых клеток, мл
Торможение роста опухоли, %
Кол-во лейкоцитов периферической крови, 10<sup>9</sup>/л
Кол-во эритроцитов периферической крови, 10<sup>12</sup>/л
Контроль
10
1,20±0,09
-
12,81±1,40
6,1±0,52
ЦФ
10
0,62±0,07*
48,3
3,14±0,25*
3,6±0,40
Средство из торфа
10
0,70±0,09*
41,7
13,62±1,29
3,3±0,38
ЦФ+средство из торфа
10
0,33±0,04* **
72,5
5,40±0,60 **
2,73±0,31
Пример 3. Влияние средства из торфа на противоопухолевый и противометастатический эффекты циклофосфана у мышей с метастазирующей опухолью меланома В-16 (табл.3).
Для оценки влияния средства из торфа на противометастатическую активность цитостатической терапии циклофосфаном проведен эксперимент на метастазирующей опухоли мышей меланоме В-16. Средство из торфа вводили один раз в сутки в дозе 200 мг/кг с 9 по 19 сутки после перевивки опухоли, циклофосфан - двукратно в дозе 100 мг/кг на 13 и 17 сутки. Противоопухолевый эффект оценивали на 22-е сутки после трансплантации по изменению массы опухолей, противометастатический эффект - по количеству метастазов на животное и частоту метастазирования.
В способе лечения онкозаболеваний применение препарата из торфа на фоне лечения цитостатиком позволяет усилить его противоопухолеый эффект и в три раза снизить частоту метастазирования опухоли по сравнению с монотерапией циклофосфаном. Торможение активности процесса метастазирования было в группе комбинированной цитостатической терапии также наиболее существенным.
φ
Кроме того, проведение терапии только циклофосфаном привело к гибели 33% мышей, в то время как в группе с комбинированной терапией с применением средства из торфа гибели животных не наблюдалось (Р=0,02).
Таблица 3
Влияние средства из торфа на эффективность лечения циклофосфаном (ЦФ) мышей с меланомой В-16
Группа
Кол-во мышей
Масса опухоли
Торможение роста опухоли, %
Количество метастазов/мышь, шт
Частота метастазирования, %
Торможение активности процесса метастазирования, %
Контроль
10
5,50±0,63
-
13,6±2,40
100
-
Средство из торфа
10
4,35±0,52
20,90
4,20±0,12*
80
69,2
ЦФ
10
2,76±0,34*
49,82
7,14±0,95
90
47,8
ЦФ + средство из торфа
10
2,34±0,27*
57,50
2,25±1,12* **
30**
83,0
Полученные данные свидетельствуют, что средство из торфа не только повышает выраженность противоопухолевого и противометастатического эффектов цитостатика циклофосфана, но и достоверно снижает его токсическое воздействие на организм животных в способе лечения онкозаболеваний.
Пример 4. Влияние средства из торфа на противоопухолевый и противометастатический эффекты циклофосфана у крыс с метастазирующей опухолью лимфосаркома Плисса (табл.4).
Эксперимент проведен на другом виде животных - крысах линии Wistar с метастазирующей опухолью лимфосаркома Плисса. Средство из торфа начинали вводить один раз в сутки в дозе 100 мг/кг на 7-е сутки после перевивки опухоли и продолжали ежедневно в течение 14 суток. Циклофосфан вводили двукратно в дозе 100 мг/кг с интервалом 96 часов на 3 и 7 сутки после начала применения препарата из торфа. Противоопухолевый эффект оценивали на 22-е сутки после трансплантации.
В способе лечения онкозаболеваний применение препарата из торфа на фоне лечения циклофосфаном не влияет на его противоопухолевый эффект, но снижает частоту метастазирования опухоли в три раза по сравнению с монолечением цитостатиком. В данной группе крыс показатели массы лимфоузлов в два раза меньше, чем у животных, получавших цитостатик.
При применении циклофосфана количество лейкоцитов периферической крови существенно снизилось, что свидетельствовало о выраженном гематотоксическом эффекте цитостатика. При комбинировании циклофосфана со средством из торфа количество лейкоцитов достоверно превышает их уровень в группе крыс, получавших один цитостатик.
Таким образом, в способе лечения онкозаболеваний с применением комбинации цитостатической терапии циклофосфаном и средства из торфа применение средства из торфа способствовало повышению противометастатической активности циклофосфана и снижению его гематотоксичности, судя по изменению количества лейкоцитов в периферической крови животных.
Таблица 4
Влияние средства из торфа на эффективность лечения циклофосфаном (ЦФ) крыс линии Wistar с лимфосаркомой Плисса
Группы
Кол-во крыс в группе
Масса опухоли, г
Торможение роста опухоли, %
Масса лимфоузлов на одну крысу, мг
Количество метастазов на одну крысу
Частота метастазирования, %
Количество лейкоцитов, 10<sup>9</sup>/л
Интактные
7
-
-
94,6±8,8
-
-
9,4±1,2
Контроль
12
41,2±6,4
-
345,4±28,6*
8
100
14,6±1,8
ЦФ
10
23,8±5,4
42,3
252,6±34,8
4
60
4,4±0,6**
Средство из торфа
10
32,6±3,8
20,9
230,4±26,8**
4
50*
10,2±1,2
ЦФ + средство из торфа
10
24,8±3,6**
40,0
132,0±15,4
1
20**
8,6±1,0***
Примечание:
*) различия достоверны по сравнению с интактными животными при Р≤0,05,
**) различия достоверны по сравнению с группой Контроль при Р≤0,05,
***) различия достоверны по сравнению с группой Циклофосфан при Р≤0,05.
Пример 5. Протекторное действие средства из торфа на показатели периферической крови здоровых (без опухолей) мышей на фоне применения циклофосфана
Эксперимент был проведен в соответствии с требованиями одобренных Фармкомитетом МЗ России (Москва, май 1991) рекомендаций, вступивших в силу с 1992 г. Здоровые мыши были выбраны постольку, поскольку опухоль оказывает выраженное воздействие на систему кроветворения, что могло повлиять на объективность полученных данных (табл.5).
Оценивали показатели периферической крови мышей линии С57В1/6 на фоне применения цитостатика циклофосфана и средства из торфа.
Средство из торфа применяли один раз в сутки в дозе 200 мг/кг в течение 10 дней. Циклофосфан в дозе 100 мг/кг вводили на 4 и 7-е сутки от начала введения средства из торфа. Оценку эффективности лечебных воздействий проводили на 11-е сутки эксперимента.
После применения цитостатика у мышей в периферической крови развивается лейкопения, эритропения и ретикулоцитопения. При введении средства из торфа животным, получавшим циклофосфан, наблюдаются значительные улучшения со стороны картины крови: существенно возрастает скорость восстановления показателей белой и красной крови, о чем свидетельствует менее выраженные анемия и лейкопения. Возрастает число палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, содержание ретикулоцитов в периферической крови увеличивается до 70% от уровня интактных животных (против 38% у группы Циклофосфан).
Полученные результаты свидетельствуют о существенном повышении эффективности цитостатической терапии онкозаболеваний за счет усиления непосредственной противоопухолевой и противометастатической активности лекарственных препаратов-цитостатиков, снижения их токсического воздействия на систему кроветворения и восстановления ее нарушенных функций
Таблица 5
Влияние средства из торфа на показатели периферической крови мышей на фоне применения цитостатика циклофосфана (ЦФ)
Группы
Эритроциты, 10<sup>12</sup>/л
Ретикулоциты, ‰
Лейкоциты 10<sup>9</sup>/л
Лейкоцитарная формула (%)
Палочкоядерные нейтрофилы
Сегментоядерные нейтрофилы
лимфоциты
моноциты
Интактные
7,83±0,48
32,17±2,26
8,3±0,7
1,0
42,0
47,6
9,4
ЦФ
3,50±0,22*
12,17±1,13*
3,3±0,2*
2,1*
47,1*
40,0*
11,8
Средство из торфа
8,50±0,50
33,30±2,0
9,0±0,6
2,0
51,3
37,3
10,4
Средство из торфа + ЦФ
5,61±0,34**
22,71±2,14**
4,2±0,3**
4,0**
54,0**
29,5*
12,5
Примечание к данной таблице и таблице 6:
*) различия достоверны по сравнению с интактными животными при Р≤0,05
**) различия достоверны по сравнению с группой Циклофосфан при Р≤0,05
Пример 6. Протекторное действие средства из торфа на показатели костномозгового кровообращения здоровых (без опухолей) мышей линии СВА на фоне применения циклофосфана.
Оценивали показатели костномозгового кроветворения мышей линии С57В1/6 на фоне применения цитостатика циклофосфана и средства из торфа.
Средство из торфа применяли один раз в сутки в дозе 200 мг/кг в течение 10 дней. Циклофосфан в дозе 100 мг/кг вводили на 4 и 7-е сутки от начала введения средства из торфа. Оценку эффективности лечебных воздействий проводили на 11-е сутки эксперимента.
После применения цитостатика у мышей наблюдается угнетение костномозгового кроветворения: снижается общее количество миелокариоцитов за счет зрелых и незрелых гранулоцитарных и эритроидных форм, при этом значительно уменьшается число эритроидных и гранулоцито-макрофагальных клеток-предшественников - элементов, за счет которых происходит восстановление подавленного кроветворения (табл.6).
При введении средства из торфа животным, получавшим циклофосфан, наблюдаются существенные улучшения со стороны костнозгового кроветворения: увеличивается общее количество миелокариоцитов, практически до уровня фона. Особый интерес вызывает тот факт, что под действием добавки возрастает число как эритроидных, так и гранулоцитарно-макрофагальных клеток-предшественников.
Таким образом, средство из торфа оказывает защитное действие на кроветворную ткань при циклофосфановой гемодепрессии - стимулирует эритроидный и миелоидный росток гемопоэза как на уровне морфологически дифференцированных (эритроциты и лейкоциты), так и родоначальных клеток крови - предшественников этих элементов.
Результаты экспериментов свидетельствуют о том, что в способе лечения онкозаболеваний применение средства из торфа не только усиливает специфический противоопухолевый и, в большей степени, противометастатический эффекты цитостатика циклофосфана, но и снижает выраженность его гематотоксичности, усиливает противоопухолевую и противометастатическую активность лекарственных препаратов-цитостатиков, снижает их токсическое воздействия на систему кроветворения и восстановления ее нарушенных функций.
Таблица 6
Влияние средства из торфа на показатели костномозгового кроветворения у мышей на фоне применения цитостатика циклофосфана (ЦФ)
Вид воздействия
Общая клеточность костного мозга (ОКК) количество клеток (×10<sup>6</sup>)
Миелограмма (×10<sup>6</sup>)
Колониеобразующие единицы, эритроцитарные (×10<sup>5</sup>)
Колониеобразующие единицы, грануломакрофагальные (×10<sup>5</sup>)
Гранулоциты незрелые
Гранулоциты зрелые
Эритроидные клетки
Интактные
19,7±0,8
3,10±0,35
5,17±0,38
9,20±1,05
1,12±0,08
1,34±0,09
ЦФ
12,0±0,9*
1,17±0,07*
4,14±0,16*
6,33±0,64*
0,25±0,04*
0,50±0,04*
Средство из торфа
20,0±1,1
2,00±0,40
6,00±0,30
9,17±0,98
1,25±0,05
1,50±0,06
Средство из торфа + ЦФ
18,2±1,3**
1,83±0,17**
5,17±0,36**
8,67±0,83**
3,63±0,19**
4,10±0,21**
Источники информации
1. Гершанович М.Л. Осложнения при химио- и гормонотерапии злокачественных опухолей. - М.: Медицина, 1982. - 224 с.
2. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. - Л.: Медицина, 1978. - 294 с.
3. Заявка РФ №98101398, кл. Ф61К 31/00, опубл. 2000.01.27. Способ лечения онкозаболеваний.
4. Кузьменко Д.И., Серебров В.Ю., Удинцев С.Н. Свободнорадикальное окисление липидов, активные формы и антиоксиданты: роль в физиологии и патологии клетки. - Томск: Издательство ТПУ, 2007. - 214 с.
5. Ларионов Л.Ф. Химиотерапия злокачественных опухолей. - М.: Медицина, 1962. - 463 с.
6. Лечение и профилактика болезней сельскохозяйственных животных и птиц. / А.К.Хлевный, А.Ф.Барабаш, О.А.Кузнецов и др. - М.: ООО «Изд-во ACT»; Донецк «Сталкер», 2003. - 155 с.
7. Минделл Э. Справочник по витаминам и минеральным веществам. М.: Медицина и питание; Техлит, - 1997. - 320 с.
8. Нитрогумат аммония из торфа - эффективная кормовая добавка / B.C.Патров, В.В.Попсуй, В.П.Круглов, Г.Н.Белова // Торфяная промышленность. - 1988. - №10. - С.9-10.
9. О противоопухолевых свойствах препаратов, выделенных из торфа / И.И.Лиштван, П.А.Глебов, Г.В.Наумова и др. // Доклады АН БСССР. - 1981. - Т.25, №9. - С.815-817.
10. Патент РФ №2058148, кл. А61К 35/, опубл. 1996.04.20. Средство для профилактики и лечения токсических энтеропатий, вызванных цитостатиком.
11. Патент РФ №2137495, кл. А61К 35/78, опубл. 1999.09.20. Способ лечения онкозаболеваний.
12. Петрухин И.В. Корма и кормовые добавки. - М.: Росагропромиздат, 1989. - 526 с.
13. Придыбайло Н., Коровин Р. Опухолевые болезни: меры борьбы и профилактики // Птицеводство. - 2004. - №8. - С.9-13.
14. Суколинский В.Н. Перспективы применения антиоксидантов в комбинированном лечении злокачественных опухолей // Вопросы онкологии. - 1990. - №2. - С.136-141.
15. Удинцев С.Н. Механизмы повышения эффективности цитостатической химиотерапии опухолей адаптогенами природного происхождения (экспериментальное исследование). Дис. … докт. мед. наук. - Томск, 1993. - 284 с.
16. Федько И.В., Гостищева М.В., Исматова P.P. К вопросу об использовании биологически активных гуминовых веществ в медицине // Химия растительного сырья. - 2005. - №1. - С.49-52.
17. Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США / Под ред. З.П.Софьиной, А.Б.Сыркина, А.Голдина, А.Кляйна. - М.: Медицина, 1979. - 296 с.
18. Freireich E.J. Quantitative comparison of toxicity of anticancer agents in mouse, rat, dog, monkey and man // Cancer Chemother. Repts. - 1966. - Vol.25. - №4. - P.219-244.
19. Lotosh T.D., Chaly A.S., Ternovskaya K.A. The bioregulating action of peat humic acids // Proc. VIII Intern. Peat Congress. - L., 1988. P.101-104.
20. Talmadge J.E., Herberman R.B. The preclinical screening, laboratory evaluation and therapeutic properties of biological response modifiers // Cancer Treatm Repts. - 1986. - V.70. - №1. - P.171-182.