FAD-2-МУТАНТЫ И РАСТЕНИЯ С ВЫСОКИМ СОДЕРЖАНИЕМ ОЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок FAD2, обладающий пониженной активностью десатуразы, где молекула содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
a) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 1, в которой нуклеотид в положении 215 удален;
b) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 5, в которой нуклеотид в положении 215 удален;
c) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 3, ее комплемента или эквивалентных РНК;
d) нуклеотидной последовательности, по меньшей мере, на 80% идентичной нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 1, в которой нуклеотид в положении 215 удален;
e) нуклеотидной последовательности, по меньшей мере, на 80% идентичной нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 5, в которой нуклеотид в положении 215 удален;
f) фрагмента нуклеотидной последовательности, содержащего, по меньшей мере, 10 последовательных нуклеотидов выделенной молекулы нуклеиновой кислоты подпункта а), где фрагмент содержит мутантный кодон, полученный в результате делеции в положении 215;
g) фрагмента нуклеотидной последовательности, содержащего, по меньшей мере, 10 последовательных нуклеотидов выделенной молекулы нуклеиновой кислоты подпункта b), где фрагмент содержит мутантный кодон, полученный в результате делеции в положении 215;
h) нуклеотидной последовательности, которая гибридизуется с нуклеотидной последовательностью подпункта а) в условиях строгости, эквивалентных 0.1×SSC, 0,15 М NaCl, 0,015 М цитрата тринатрия, при температуре 50°C, и которая кодирует полипептид FAD2, обладающий пониженной активностью десатуразы по сравнению с полипептидом, кодируемым последовательностью SEQ ID NO 1; и
i) нуклеотидной последовательности, которая гибридизуется с нуклеотидной последовательностью подпункта b) в условиях строгости, эквивалентных 0.1×SSC, 0,15 М NaCl, 0,015 М цитрата тринатрия, при температуре 50°С, и которая кодирует полипептид FAD2, обладающий пониженной активностью десатуразы по сравнению с полипептидом, кодируемым последовательностью SEQ ID NO 5.
2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.1, дополнительно содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
a) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 9, в которой нуклеотид в положении 1421 удален;
b) нуклеотидной последовательности, по меньшей мере, на 80% идентичной нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 9, в которой нуклеотид в положении 1421 удален;
c) фрагмента нуклеотидной последовательности, содержащего, по меньшей мере, 10 последовательных нуклеотидов выделенной молекулы нуклеиновой кислоты подпункта а), где фрагмент содержит мутантный кодон, полученный в результате делеции в положении 1421; и
d) нуклеотидной последовательности, которая гибридизуется с нуклеотидной последовательностью подпункта а) в условиях строгости, эквивалентных 0.1×SSC, 0,15 М NaCl, 0,015 М цитрата тринатрия, при температуре 50°С, и которая кодирует полипептид FAD2, обладающий пониженной активностью десатуразы по сравнению с полипептидом, кодируемым последовательностью SEQ ID NO 9.
3. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок FAD2, обладающий пониженной активностью десатуразы, где молекула содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
a) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 9, в которой нуклеотид в положении 1421 удален;
b) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 10, в которой нуклеотид в положении 1421 удален;
c) нуклеотидной последовательности, по меньшей мере, на 80% идентичной нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 9, в которой нуклеотид в положении 1421 удален;
d) нуклеотидной последовательности, по меньшей мере, на 80% идентичной нуклеотидной последовательности SEQ ID NO 10, в которой нуклеотид в положении 1421 удален;
e) фрагмента нуклеотидной последовательности, содержащего, по меньшей мере, 10 последовательных нуклеотидов выделенной молекулы нуклеиновой кислоты подпункта а), где фрагмент содержит мутантный кодон, полученный в результате указанной делеции;
f) фрагмента нуклеотидной последовательности, содержащего, по меньшей мере, 10 последовательных нуклеотидов выделенной молекулы нуклеиновой кислоты подпункта b), где фрагмент содержит мутантный кодон, полученный в результате указанной делеции;
g) нуклеотидной последовательности, которая гибридизуется с нуклеотидной последовательностью подпункта а) в условиях строгости, эквивалентных 0.1×SSC, 0,15 М NaCl, 0,015 М цитрата тринатрия, при температуре 50°С, и которая кодирует полипептид FAD2, обладающий пониженной активностью десатуразы по сравнению с полипептидом, кодируемым последовательностью SEQ ID NO 9; и
h) нуклеотидной последовательности, которая гибридизуется с нуклеотидной последовательностью подпункта b) в условиях строгости, эквивалентных 0.1×SSC, 0,15 М NaCl, 0,015 М цитрата тринатрия, при температуре 50°С, и которая кодирует полипептид FAD2, обладающий пониженной активностью десатуразы по сравнению с полипептидом, кодируемым последовательностью SEQ ID NO 10.
4. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.
5. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.
6. Растение, стабильно трансформированное вектором по п.4.
7. Полипептид, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты по п.1.
8. Полипептид, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты по п.2.
9. Полипептид, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты по п.3.
10. Способ повышения содержания олеиновой кислоты в растении, включающий трансформацию растения вектором по п.4.
11. Способ получения линий растений с высоким содержанием олеиновой кислоты, причем способ включает
а) индукцию мутагенеза в клетке из растения, в котором содержание олеиновой кислоты составляет менее 70%;
b) регенерирование растений, по меньшей мере, из одной из указанных мутированных клеток;
c) селекцию регенерировавших растений, которые имеют последовательность нуклеиновой кислоты по п.1; и
d) получение следующих поколений растений из указанных регенерировавших растений.
12. Способ по п.11, где клеткой из растения является клетка растения рода Brassica.
13. Способ по п.12, где растением рода Brassica является растение Brassica napus.
14. Способ по п.11, где указанные регенерировавшие растения дополнительно содержат последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок FAD2, имеющий аминокислотную замену в положении 118 или в соответствующем ему положении в сравнении с белком FAD2 дикого типа с последовательностью SEQ ID NO 2.
15. Способ по п.11, где мутагенез индуцирован путем обработки этилметансульфонатом.
16. Растение, полученное способом по п.11.
17. Способ получения линий растений с высоким содержанием олеиновой кислоты, причем способ включает
a) скрещивание первого растения по п.6 со вторым растением,
b) получение семян после скрещивания на стадии а),
c) выращивание фертильных растений из таких семян,
d) получение семян потомства из растений стадии (с) и
e) идентификацию тех семян среди потомства, которые имеют высокое содержание олеиновой кислоты.
18. Способ получения линий растений с высоким содержанием олеиновой кислоты, причем способ включает
a) скрещивание первого растения по п.16 со вторым растением,
b) получение семян после скрещивания на стадии а),
c) выращивание фертильных растений из таких семян,
d) получение семян потомства из растений стадии (с) и
е) идентификацию тех семян среди потомства, которые имеют высокое содержание олеиновой кислоты.
19. Растительное масло, полученное из семян способом по п.17, причем содержание олеиновой кислоты в указанном масле выбрано из группы, состоящей из более чем приблизительно 72%, 75%, 80% и 85% олеиновой кислоты в расчете на общий вес присутствующих в масле жирных кислот.
20. Растительное масло по п.19, дополнительно содержащее линоленовую кислоту, содержание которой выбрано из группы, состоящей из менее чем приблизительно 4%, 3,5%, 3%, 2%, 1% и 0,5% линоленовой кислоты в расчете на общий вес присутствующих в масле жирных кислот.
21. Растительное масло, полученное из семян, идентифицированных способом по п.18, причем содержание олеиновой кислоты в указанном масле выбрано из группы, состоящей из более чем приблизительно 72%, 75%, 80% и 85% олеиновой кислоты в расчете на общий вес присутствующих в масле жирных кислот.
22. Растительное масло по п.21, дополнительно содержащее линоленовую кислоту, содержание которой выбрано из группы, состоящей из менее чем приблизительно 4%, 3,5%, 3%, 2%, 1% и 0,5% линоленовой кислоты в расчете на общий вес присутствующих в масле жирных кислот.
23. Продукт питания или корм, содержащий растительное масло по п.19 и/или приготовленный с его использованием.
24. Продукт питания или корм, содержащий растительное масло по п.21 и/или приготовленный с его использованием.
25. Набор для анализа, включающий первый контейнер, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.