КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ КОМПОЗИЦИИ
PARENTERAL COMPOSITION, METHOD FOR PREPARING AND USING COMPOSITION

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к области ветеринарии и медицины. В частности, настоящее изобретение относится к композиции для парентерального введения на основе гидролизата, полученного из природных биоресурсов, способу получения указанной композиции, способу лечения и/или профилактики патологического состояния у нуждающегося в этом млекопитающего с помощью вышеуказанной композиции и различным применениям указанной композиции в лечебных и/или профилактических и иных целях. Более конкретно, настоящее изобретение относится к композиции, обладающей иммуномодулирующими свойствами на основе гидролизата, полученного из биоресурсов, для парентерального введения в организм нуждающегося млекопитающего.
Согласно настоящему описанию предложена композиция для парентерального введения на основе гидролизата, полученного из биоресурсов. Указанная композиция содержит широкий набор незаменимых аминокислот, меланоидины, выступающие в качестве антиоксидантов, регуляторные пептиды, насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты, витамины и микроэлементы в сбалансированном естественном природном соотношении, обладающая рядом положительных свойств, применяемая в лечебных и/или профилактических целях в ветеринарии и медицине. В частности, автором настоящего изобретения неожиданного было обнаружено, что композиция для парентерального введения, содержащая 1-10% водный раствор гидролизата, полученного из вышеуказанного биологического сырья для парентерального введения, обладает значительными преимуществами по сравнению с композициями, известными из уровня техники. Кроме того, ряд эффектов, присущих настоящей композиции при парентеральном введении, не наблюдается в случае перорального приема чистого гидролизата, или наблюдается, но через более длительный промежуток времени. С другой стороны, настоящая композиция также обладает рядом преимуществ по сравнению с известными парентеральными формами. При этом было установлено, что парентеральный прием композиции, раскрытой в настоящем описании, является безопасным и не вызывает аллергических реакций и иных нежелательных побочных эффектов.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Из уровня техники известны различные препараты и биологически активные добавки, представляющие собой белковые гидролизаты, полученные из сырья животного происхождения, в частности морепродуктов, таких как мидии, рыба, мясо млекопитающих и т.п. Указанные белковые гидролизаты, как правило, представляют собой биодобавки, предназначенные для перорального приема индивидуально или в комбинации с другими препаратами, а также в качестве добавки к пище.
Из патента Германии DE 4309339 известен биологически активный фармацевтический продукт натуральной природы, который содержит кислотный гидролизат из моллюсков рода Mytilus, содержащий аминокислоты, меланоидины и следы элементов из съедобной мидии (Mytilus edulis) и черноморской мидии (Mytilus galloprovincialis). Дополнительно изобретение включает различные варианты использования данного продукта. В частности, указанный продукт используется как профилактическое, терапевтическое радиофармацевтическое средство для человека и животных, обладает жаропонижающим эффектом, стимулирует производство крови особенно при радио- и химиотерапии.

Также из уровня техники известен продукт - МИГИ-К (МИГИ-К ЛП, жидкость для приема внутрь), представляющий собой раствор, полученный в результате гидролиза черноморских мидий, применяемый в качестве пищевой биодобавки.
Известна биологически активная добавка общеукрепляющего действия с близкими по свойствам МИГИ-К, полученная из мяса мидий Белого моря - МИДЭЛ. Лечебно-оздоровительный прием в сочетании с традиционными методами лечения или как самостоятельный препарат МИДЭЛ рекомендован при иммунодефицитных состояниях различной этиологии.
Одним из недостатков пероральных гидролизатов, полученных из мяса мидий, является относительно невысокая скорость достижения желаемого эффекта при их ежедневном приеме.
Из уровня техники также известны композиции, обладающие иммуномодулирующим действием, полученные из сырья животного происхождения, отличного от мидий.
В патенте РФ 2221456 предложено универсальное биологически активное вещество (БАВ), представляющее собой белковый гидролизат, полученный путем кислотного гидролиза и последующей нейтрализации мяса рыб, протеиносодержащих отходов при производстве продукции из животных или рыб, фильтрации с получением гидролизата и осадка с последующей сушкой гидролизата. В патенте указано, что заявленное БАВ используют в качестве пищевой добавки для животных, основы ветеринарного препарата, перорального питания, парфюмерно-косметического средства, молочного продукта, кондитерского изделия и др.
Помимо указанного источника различные препараты и композиции на основе гидролизатов, полученных из мяса рыб, известны из ЕР 1653981, US 2009111747, US 2011124570.
В патенте РФ 2402320 предложен препарат, содержащий различные аминокислоты, соли и микроэлементы, в виде водного раствора, а также способ профилактики и коррекции патологических состояний животных, заключающийся в инъекционном введении указанного препарата в организм животного с профилактической целью 2 раза в неделю в течение месяца в дозах 1,5-2,0 мл на 10 кг массы тела, с лечебной целью в дозе 3,0-5,0 мл на 10 кг массы тела 2 раза в сутки в течение 3-5 дней, при интоксикациях в связи с отравлением синтетическими и/или пищевыми ядами - в десятикратной лечебной дозе. В частности, за счет подкожного или внутримышечного введения указанного препарата обеспечивается более эффективная профилактика и лечение заболеваний различной этиологии. Однако получение указанного синтетического препарата представляет собой трудоемкий и энергозатратный процесс, при котором осуществляют разработку оптимальных качественных и количественных составов и методик приготовления водных растворов аминокислот, витаминов, микро- и макроэлементов, глюкозы, нормализирующих обменные процессы в организме животного.
Из уровня техники также известны различные препараты для инъекционного введения, такие как, например, эвинтон. Благодаря комплексу трех гомеопатических компонентов, входящих в его состав, эвинтон стимулирует фагоцитарную активность и барьерные функции лимфатических узлов, кожи, слизистых оболочек, а также других органов и тканей. Эвинтон представляет собой иммуномодулятор, используемый при болезнях бактериальной и вирусной этиологии - чуме плотоядных, панлейкопении, парвовирусном энтерите, вирусном гепатите, ринотрахеите и т.д. Эвинтон вводят ежедневно, курс лечения составляет от нескольких дней (вирусный энтерит) до 2-3 недель (вирусный гепатит).
Все из вышеуказанных технических решений обладают относительно низкой эффективностью в лечебно-профилактических целях. Положительный эффект при приеме пероральных препаратов, полученных из водных биоресурсов, как правило, наступает через длительный промежуток времени при условии его постоянного приема. Пероральные формы применяют в качестве биологически активных добавок к пище, при этом количество принимаемого препарата в течение всего курса приема варьируется и может достигать от десятков миллилитров до нескольких литров. С другой стороны, известные инъекционные формы не обладают широким спектром действия, возможно вследствие того, что их составы либо недостаточно сбалансированы, как, например, в случае искусственно получаемых составов, либо, в зависимости от природного происхождения, не содержат всего комплекса соединений, необходимого и достаточного для достижения быстрого профилактического или терапевтического эффектов у людей и животных, например, такие как рыбные гидролизаты.
Таким образом, в настоящем описании раскрыта композиция, обладающая различными терапевтическими и профилактическими свойствами, позволяющая достигнуть желаемого эффекта за относительно короткий промежуток времени вне зависимости от возможности и/или желания субъекта к приему пищи, способности и возможности проглатывания препарата и его усваивания через органы желудочно-кишечного тракта. Такая композиция может оказаться особенно полезной в области ветеринарии, где во многих случаях животное, страдающее патологическим состоянием или нуждающееся в средствах профилактики определенного заболевания, отказывается от приема пищи, содержащей пероральный препарат, из-за вкусовых характеристик последнего. Настоящая композиция также позволяет решить и указанную проблему.
Было неожиданно обнаружено, что свойства раскрытой в настоящем описании композиции включают иммуномодулирующую активность, фагоцитарную активность, гепатопротекторную активность, адаптогенную активность, антигерпетическую активность, дезинтоксикационную активность, антивирусную активность, антибактериальную активность, антиожоговые и ранозаживляющие свойства. При этом указанный лечебный эффект может быть достигнут после первых нескольких приемов композиции. В некоторых случаях положительная динамика лечения наблюдается с первого приема предложенной композиции для парентерального введения.
Также в настоящем описании раскрыт способ получения вышеуказанной композиции. Указанный способ является простым в техническом исполнении, а его реализация не требует специальных производственных мощностей и глубоких профессиональных навыков, что положительно сказывается на его экономической целесообразности.
Указанную композицию для парентерального введения применяют в лечении и/или профилактике патологического состояния у нуждающегося в этом млекопитающего. То есть, согласно другому аспекту в настоящем описании раскрыт способ лечения и/или профилактики патологического состояния различной этиологии у нуждающегося в этом субъекта с помощью вышеуказанной композиции. Указанный способ включает оптимальный режим приема вышеуказанной композиции, обеспечивающий достижение положительного профилактического и/или лечебного эффекта, при котором независимо от индивидуальных характеристик субъекта не было выявлено каких-либо побочных эффектов, в том числе ни одного случая индивидуальной непереносимости млекопитающим композиции.
Таким образом, в настоящем описании раскрыты иммуномодулирующая композиция для парентерального введения, содержащая гидролизат, полученный из биологического сырья животного происхождения, способы получения указанной композиции, способы лечения и/или профилактики патологического состояния у нуждающегося в этом млекопитающего с помощью вышеуказанной композиции и различные применения указанной композиции.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
Согласно первому аспекту предложена композиция для парентерального введения млекопитающему, содержащая от 1 до 10 масс.% гидролизата, полученного из биоресурсов, и воду.
Под термином «биоресурсы» следует понимать любое сырье животного или растительного происхождения. Например, в качестве биоресурсов могут быть использованы животные и/или растения морского или наземного происхождения.
Согласно одному варианту реализации биоресурсы выбраны из группы, включающей двустворчатых моллюсков, ракообразных, кольчатых червей, пиявок. Указанные биоресурсы позволяют получить гидролизат, обладающий сбалансированным химическим составом, включающим помимо прочего широкий набор аминокислот, в том числе незаменимых аминокислот, насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты, меланоидины, углеводы, микро- и макроэлементы, на основе которого может быть получена композиция, позволяющая достигнуть желаемый лечебно-профилактический эффект при ее парентеральном введении нуждающемуся в таких лечении или профилактике млекопитающему.
Указанная композиция может содержать гидролизат, полученный из одного и более видов сырья. В частности, композиция может содержать гидролизат, полученный из двустворчатых моллюсков и/или ракообразных и/или кольчатых червей и/или пиявок.
Согласно одному варианту реализации двустворчатые моллюски включают беззубки {Anodonta), перловицы (Unio), устрицы (Ostreidae), мидии (Mytilidae}, тридакны (Tridacna), жемчужницы (Pinctada}, морские гребешки (Pectinidae), корабельные черви (Teredinidae), гуидак (Panopea abrupta), исландскую циприну (Arctica Islandica) и другие промысловые виды моллюсков.
Согласно одному варианту реализации ракообразные включают криль, креветок, крабов, лангустов, лангустинов, раков, омаров и другие промысловые виды. Предпочтительно ракообразные включают криль (Meganyctiphanes norvegica) и/или североатлантического омара (Homarus americanus).
Согласно другому варианту реализации биоресурс представляет собой морского ежа Красного моря (Strongylocentrotus franciscanus).
Все из вышеуказанных биоресурсов позволяют получить композицию, обладающую рядом профилактических и терапевтических свойств. При этом двустворчатые моллюски и ракообразные являются распространенными промысловыми видами сырья и в связи с этим являются также удобными биоресурсами для получения указанной композиции с экономической точки зрения. Состав гидролизата, полученного из морских видов животных, может незначительно варьироваться в зависимости от места и внешних условий окружающей среды их обитания, однако основные свойства остаются в общем аналогичными. Кольчатых червей и пиявок предпочтительно выращивают в неизменяющихся производственных условиях, что обеспечивает строгое постоянство состава композиции, полученной с их использованием. Однако при отсутствии такой возможности последние также могут быть получены из естественных источников их обитания.
Под термином «гидролизат, полученный из биоресурсов» в контексте настоящего описания следует понимать жидкий раствор, полученный при гидролизе биоресурсов.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения количество гидролизата в композиции составляет от 2 до 8 масс.%, предпочтительно от 3 до 7 масс.%, более предпочтительно от 4 до 6%, наиболее предпочтительно около 5 масс.%. Согласно еще одному варианту реализации количество гидролизата может составлять от 1 до 4 масс.%, от 1 до 3 масс.%, от 1 до 2 масс.%, от 6 до 9 масс.%, от 7 до 9 масс.% и от 8 до 9 масс.%.
Как правило, количество гидролизата не превышает 10 масс.% композиции, поскольку в противном случае композиция не будет пригодна для отдельных видов парентерального введения, в частности инъекционного введения, из-за наличия высокой концентрации содержащейся в ней соли. С другой стороны, массовая доля гидролизата, как правило, составляет не менее 1 масс.% для обеспечения композиции с достаточным количеством компонентов для наступления желательного эффекта при лечении и/или профилактике различных состояний у нуждающегося субъекта.
Под термином «нуждающееся (в лечении или профилактике) млекопитающее» следует понимать любое животное из класса «млекопитающие» или человека, нуждающихся в лечении и/или профилактике патологического состояния, болезни, расстройства и т.д.
Согласно одному варианту реализации млекопитающее представляет собой животное или человека. Предпочтительно животное представляет собой сельскохозяйственное животное, выбранное из группы, включающей корову, буйвола, яка, оленя, свинью, козу, овцу, кролика, лошадь, осла, верблюда, ламу, соболя, лису, норку, хорька и др, либо животное может представлять собой домашнего питомца, например, такого как собака, кошка, крыса, хомяк, морская свинка и др. Согласно еще одному варианту реализации животное может представлять собой животное, обитающее в диких условиях.
Согласно одному варианту реализации «парентеральное введение» включает любые способы введения, исключающие попадание предложенной композиции в организм нуждающегося млекопитающего через желудочно-кишечный тракт.
Согласно одному варианту реализации, композиция представляет собой композицию для инъекционного введения. Указанное инъекционное введение может быть осуществлено внутривенно (в/в), внутрикожно, подкожно (п/к), внутримышечно (в/м) или внутрикостно. Автором настоящего изобретения неожиданно было обнаружено, что парентеральное введение вышеуказанной композиции значительно усиливает терапевтический и профилактический эффекты, достигаемые по сравнению с приемом неразбавленного гидролизата пероральным способом, а кроме того, значительно ускоряет время достижения таких эффектов. Кроме того, при парентеральном приеме указанной композиции удалось достигнуть некоторых эффектов, которые не были выявлены при пероральном приеме неразбавленного гидролизата, полученного из мяса мидий, а также инъекционных форм, известных из уровня техники. Необходимо также отметить, что в соответствии с проведенными клиническими исследованиями на животных указанная композиция не имела побочных эффектов и не вызывала аллергических реакций организма при ее систематическом парентеральном введении.
Согласно еще одному варианту реализации композицию используют для наружного применения. В частности, указанная композиция может представлять собой мазь, пасту, линимент, крем, лосьон и эквивалентные лекарственные формы, либо входить в состав указанных средств для наружного применения. Композиция может входить в состав накожных аппликаций, в том числе представлять собой накожную терапевтическую систему с пролонгированным действием. В частности, описанная композиция может быть нанесена на участок тела с тонким кожным покровом нуждающемуся млекопитающему. Кроме того, композиция для наружного применения может быть использована при лечении открытых ран, ожогов, отморожений, ушибов, вывихов, переломов и других накожных и подкожных повреждений.
Согласно еще одному варианту реализации указанная композиция характеризуется массовой долей аминного азота, составляющей по меньшей мере 0,01 масс.%. Предпочтительно массовая доля аминного азота составляет от 0,01 до 0, 5 масс.%. Более предпочтительно массовая доля аминного азота составляет от 0,05 до 0,5 масс.%, наиболее предпочтительно от 0,02 до 0,1 масс.%. Величина массовой доли аминного азота характеризует степень прохождения гидролиза биоресурсов и является фактором, позволяющим оценить завершенность указанного процесса. Указанная характеристика служит косвенным показателем наличия необходимых компонентов в составе конечной композиции для парентерального введения при использовании биоресурсов в соответствии с настоящим описанием.
Согласно другому варианту реализации предложенная композиция имеет величину рН от 4 до 7, предпочтительно от 5 до 7, наиболее предпочтительно от 5,5 до 6,5. Величина рН в вышеуказанном диапазоне указывает на достаточную степень нейтрализации гидролизата, а также на возможность применения указанной композиции в лечебных и/или профилактических целях для млекопитающих.
Согласно другому варианту реализации предложенная композиция имеет массовую долю сухих веществ от 0,5 до 5 масс.%, предпочтительно от 1 до 3 масс.%, наиболее предпочтительно от 1,2 до 1,8 масс.%.
Согласно еще одному варианту реализации композиция содержит широкий набор аминокислот в зависимости от вида биоресурсов, используемых для ее получения. В частности, композиция согласно настоящему изобретению включает аминокислоты, выбранные из группы, включающей таурин, аспарогиновую кислоту, треонин, серин, глутаминовую кислоту, саркозин, глицин, аланин, валин, цистин, метионин, цистатионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин, β-аланин, γ-аминоизомаслянную кислоту, γ-аминомаслянную кислоту, орнитин, лизин, гистидин, карнозин, аргинин, оксипролин, пролин. Возможно, указанная композиция содержит также другие аминокислоты.
Согласно еще одному варианту реализации настоящая композиция включает по меньшей мере одну или более незаменимых для организма человека аминокислот, выбранных из группы, включающей валин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, треонин, триптофан, фенилаланин, аргинин и гистидин.
Согласно одному варианту реализации композиция содержит следующие аминокислоты в массовом соотношении относительно общего количества аминокислот в указанной композиции:
таурин от 1 до 10%
аспаргиновая кислота от 1 до 30%
глутаминовая кислота, от 1 до 30%
глицин от 1 до 20%
аланин от 1 до 10%
лейцин от 1 до 15%
фенилаланин от 1 до 15%
лизин от 1 до 10%
аргинин от 1 до 20%
пролин от 1 до 50%
серин от 1 до 10%
гистидин от 1 до 10%
треонин от 0,5 до 10%
валин от 0,1 до 10%
метионин от 0,1 до 10%
изолейцин от 1 до 10%
Согласно одному варианту реализации одна и та же композиция может, но не обязательно, одновременно иметь массовую долю сухих веществ, величину рН, массовую долю аминного азота и качественное и количественное содержание аминокислот, как указано выше.
Согласно одному варианту реализации изобретения раскрытая в настоящем описании композиция характеризуется, тем что
массовая доля аминного азота составляет от 0,01 до 0,5 масс.%, и/или
значение рН составляет от 4 до 7, и/или
массовая доля сухих веществ составляет от 0,5 до 2 масс.%
Помимо аминокислот композиция, раскрытая в настоящем описании, содержит жирные насыщенные и ненасыщенные кислоты, выбранные из группы, включающей кислоты с длинной углеводородной цепи от 12 до 25 атомов углерода. В частности, указанная композиция предпочтительно содержит одну или более жирных кислот, выбранных из группы, включающей тридециловую кислоту С13:0, миристиновую кислоту С14:0, тетрадеценовую кислоту С14:1, пентадекановую кислоту С15:0, пальмитиновую кислоту С16:0, пальмитолеиновую кислоту С16:1, гексадекадиеновую кислоту С16:2, гексадекапентаеновую кислоту С16:5, гептадекановую кислоту С17:0, гептадеценовую кислоту С17:1, гептадиеновую кислоту С17:2, стеориновую кислоту С18:0, олеиновую кислоту С18:1, линолевую кислоту С18:2, линоленовую кислоту С18:3, октадекатетраеновую кислоту С18:4, эйкозеновую кислоту С20:1, эйкозадиеновую кислоту С20:2, эйкозатриеновую кислоту С20:3, арахидоновую кислоту С20:4, эйкозапентаеновую кислоту С20:5, гептакозапентаеновую кислоту С21.-5, докозановую кислоту С20:0, докозадиеновую кислоту С 22:1, докозеновую кислоту С22:2, докозатетраеновую кислоту С22:4, докозагексаеновую кислоту С22:6, трикозатетраеновую кислоту С23:4, трикозапентаеновую кислоту С23:5, тетракозеновую кислоту С24:1.
Согласно другому варианту реализации указанная композиция содержит микроэлементы, такие как калий, кальций, магний, железо, цинк, медь, кадмий, марганец, никель, хром, селен, йод.
Дополнительно указанная композиция может содержать известные в данной области техники биологически активные добавки, известные в ветеринарии и медицине средства и препараты для профилактики и лечения патологических состояний, болезней и расстройств у человека и животных, макро- и микроэлементы, аминокислоты, меланоидины, углеводы, пептиды, витамины. Предпочтительно к указанной композиции добавляют соли необходимые для получения физиологического раствора, пригодного для парентерального введения. Согласно одному варианту реализации изобретения указанную композиции перед введением смешивают с глюкозой.
Согласно второму аспекту в настоящем описании предложен способ получения иммуномодулирующей композиции для парентерального введения нуждающемуся в профилактике или лечении млекопитающему. В частности, предложен способ получения композиции для парентерального введения млекопитающему, включающий:
(a) ферментативный гидролиз и/или кислотный гидролиз биоресурсов, выбранных из группы, включающей двухстворчатых моллюсков, ракообразных, кольчатых червей, пиявок с получением первого раствора;
(b) фильтрование первого раствора с получением второго раствора;
(c) смешивание второго раствора с водой с получением композиции, с массовым содержанием второго раствора от 1 до 10 масс.%.
Согласно одному варианту реализации стадия (а) включает ферментативный и кислотный гидролиз. В качестве фермента могут быть использованы ферменты животного, растительного или микробного происхождения. В частности, указанные ферменты без ограничения включают протомегатерин, протакрин, протосубтилин, трипсин, пепсин и другие взаимозаменяемые ферменты. Количество фермента, величина рН, температура и прочие условия подбирают опытным путем в зависимости от вида фермента и сырья, подвергаемого ферментативному гидролизу. Значение рН при ферментативном гидролизе составляет от 1 до 12, более предпочтительно от 1 до 10, наиболее предпочтительно от 1 до 9. Температуру при ферментативном гидролизе поддерживают в диапазоне от 20 до 80°С, более предпочтительно от 30 до 70°С, наиболее предпочтительно от 30 до 60°С. Фермент добавляют в виде сухого порошка в сырье при перемешивании. Указанная стадия не требует расхода дополнительной пресной воды, и может быть проведена в местах промысла указанного сырья. Ферментативный гидролиз проводят в течение от 10 мин до 5 часов, предпочтительно от 20 мин до 3 часов, наиболее предпочтительно от 30 мин до 1 часа.
В том случае, если указанное биологическое сырье представляет собой двустворчатые моллюски, ферментативный гидролиз может быть необходим для ослабления запирающей мышцы моллюсков и, тем самым, отделения мягкой ткани моллюсков от раковин, а также для первичного гидролиза мягкой ткани моллюсков. После окончания ферментативного гидролиза раковины моллюсков отделяют от мягкой ткани с помощью фильтров, таких как вакуумный фильтр или напорный фильтр, и/или вибрационного грохота. После отделения мягкой ткани проводят ее последующий кислотный гидролиз или дальнейший ферментативный гидролиз с применением одного или нескольких ферментов.
Альтернативно створки и раковины двухстворчатых моллюсков могут быть отделены механическим способом вручную и/или с помощью способов, исключающих использование ферментов, например, с помощью горячего пара. Также двухстворчатые моллюски могут быть раздроблены и подвергнуты кислотному гидролизу без использования ферментов.
Сырье, отличное от двухстворчатых моллюсков, такое как ракообразные, в частности, криль, а также пиявки, кольчатые черви, может быть также подвергнуто ферментативному гидролизу.
Согласно одному варианту реализации после проведения ферментативного гидролиза или вместо проведения ферментативного гидролиза проводят кислотный гидролиз сырья. Кислотный гидролиз проводят с помощью кислоты, выбранной из группы, включающей распространенные кислоты, такие как серная и/или соляная кислота, а также другие взаимозаменяемые минеральные и органические кислоты. Кислотный гидролиз проводят в течение примерно от 10 до 30 часов, более предпочтительно от 12 до 27 часов, наиболее предпочтительно от 14 до 24 часов. Время гидролиза определяется количеством и видом сырья, а также степенью его обработки до начала кислотного гидролиза. Проведение ферментативного гидролиза, как правило, способствует снижению времени проведения последующего кислотного гидролиза в среднем на 3-7 часов.
Согласно одному варианту реализации при кислотном гидролизе используют кислоту в количестве от 5 до 20 масс.%, предпочтительно от 5 до 15 масс.%, более предпочтительно от 5 до 10 масс.% от количества обрабатываемого сырья. Указанное количество кислоты, как правило, достаточно для обеспечения полноты прохождения процесса гидролиза. Однако количество кислоты может быть подобрано эмпирическим путем с учетом вида биоресурсов и глубины прохождения гидролиза.
Согласно одному варианту реализации температуру при кислотном гидролизе устанавливают в диапазоне от 80 до 120°С, предпочтительно от 90 до 110°С, наиболее предпочтительно от 95 до 105°С. В частности, кислотный гидролиз проводят при кипении раствора.
Кислотный гидролиз проводят в эмалированном или стеклянном реакторе, снабженном термометром или термопарой для контроля температуры и перемешивающим устройством.
Альтернативно исходное сырье можно не подвергать кислотному гидролизу, когда в таковом отсутствует необходимость. В частности, полнота гидролиза может быть обеспечена только за счет ферментативного гидролиза. В том случае, если кислотный гидролиз был осуществлен, на следующей стадии проводят стадию нейтрализации первого раствора, включающую добавление нейтрализующего агента в первый раствор, полученный в результате кислотного гидролиза, в количестве, достаточном до доведения рН раствора до значений 4-7, предпочтительно от 5 до 7, наиболее предпочтительно от 5,5 до 6,5. В качестве нейтрализующего агента используют агенты, образующие воду и нейтральную соль, например щелочь, такую как NaOH и/или КОН, в твердом агрегатном состоянии либо в виде раствора, а также основные соли и их растворы. В частности, качестве соли могут быть использованы карбонаты и/или гидрокарбонаты натрия или калия. Предпочтительно нейтрализующий агент представляет собой твердый гидроксид натрия.
Далее осуществляют фильтрование полученного первого раствора с получением второго раствора.
Согласно одному варианту реализации перед фильтрованием первого раствора осуществляют его отстаивание при температуре от 1 до 25°С, предпочтительно от 4 до 15°С, наиболее предпочтительно от 4 до 6°С в течение по меньшей мере 10 суток, предпочтительно от 10 до 20 суток, наиболее предпочтительно от 10 до 30 суток. Указанная стадия обеспечивает более полное осаждение нерастворимых компонентов из первого раствора и их отделение на последующей стадии, что способствует повышению стабильности конечной композиции для парентерального введения.
После осаждения осадка и его отделения получают второй раствор. Стадию фильтрования первого раствора с получением второго раствора осуществляют с помощью механических фильтров, предпочтительно вакуумных фильтров. Указанная стадия может быть разбита на несколько этапов и включать фильтрацию горячего первого раствора после завершения ферментативного и/или кислотного гидролиза, а также одну или более повторных стадий фильтрации охлажденного первого раствора с получением второго раствора. Предпочтительно стадию фильтрования проводят после стадии отстаивания первого раствора в условиях определенных выше.
На следующей стадии осуществляют смешивание второго раствора с водой с получением композиции с массовым содержанием второго раствора 1 до 10 масс.%, предпочтительно от 2 до 8 масс.%, либо от 3 до 7 масс.%, более предпочтительно от 4 до 6%, наиболее предпочтительно около 5 масс.%. Согласно еще одному варианту реализации массовое содержание второго раствора может составлять от 1 до 4 масс.%, от 1 до 3 масс.%, от 1 до 2 масс.%, от 6 до 9 масс.%, от 7 до 9 масс.% и от 8 до 9 масс.%. Вода представляет собой дистиллированную воду или воду для инъекций. Указанное массовое содержание второго раствора в композиции соответствует такому его количеству, при котором в результате образуется композиция, пригодная для парентерального введения, в частности внутривенного введения. Согласно одному варианту реализации в результате получают композицию, изотоничную крови млекопитающего, нуждающегося в профилактике или лечении с помощью указанной композиции. Перед непосредственным применением указанная композиция может быть смешана с другими ингредиентами, такими как витамины, углеводы, дополнительные аминокислоты, микро- и макроэлементы, глюкоза и т.п.
Согласно другому варианту реализации композицию после добавления дистиллированной воды и/или воды для инъекций стерилизуют и заправляют в емкости для хранения. В качестве емкостей для хранения композиции могут быть использованы ампулы, флаконы, бутылки, пакеты и т.п. Способ получения проводят в асептических условиях с соблюдением всех требований предусмотренных государственной фармакопеей к конкретным формам для парентерального введения. Емкости с полученной композицией хранят при температуре от 0 до 25°С, предпочтительно от 4 до 6°С. Срок хранения композиции при поддержании соответствующих условий может составлять не менее 2 лет. Предпочтительно при соблюдении всех вышеуказанных условий композиция остается стабильна и пригодной к применению в течение 5 лет и более.
Согласно третьему аспекту указанную композицию применяют в лечении и/или профилактике патологического состояния у нуждающегося в этом млекопитающего, при котором указанную композицию вводят парентерально нуждающемуся субъекту.
Согласно другому варианту реализации в настоящем описании предложен способ лечения и/или профилактики патологического состояния у нуждающегося в этом млекопитающего, включающий парентеральное введение указанной композиции нуждающемуся в таком лечении или профилактике млекопитающему.
Указанное парентеральное введение включает любые виды введения, исключающие попадание указанной композиции в организм млекопитающего через органы желудочно-кишечного тракта. В частности, парентеральное введение представляет собой инъекционное введение, выбранное из группы, включающей подкожное инъекционное введение, внутрикожное инъекционное введение, внутримышечное инъекционное введение, внутривенное инъекционное введение или внутрикостное инъекционное введение. Указанное парентеральное введение может также представлять собой наружное применение вышеуказанной композиции.
Согласно одному варианту реализации указанную композицию вводят в количестве от 0,05 мл/кг до 10 мл/кг массы указанного млекопитающего от 1 до 5 раз в сутки в течение от 1 до 50 суток. Более предпочтительно, композицию вводят в количестве от 0,1 до 1 мл/кг в течение 1-15 суток.
Согласно другому варианту реализации указанную композицию вводят один раз в количестве от 0,05 мл/кг до 10 мл/кг массы указанного млекопитающего каждые 1-5 суток в количестве от 0,05 до 10 мл/кг в течение от 1 до 50 суток. Более предпочтительно, композицию вводят в количестве от 0,1 до 1 мл/кг в течение 1-15 суток.
Согласно другому варианту реализации композицию возможно применяют 1 раз в 45-120 дней в течение года в количестве от 0,05 мл/кг до 10 мл/кг массы указанного млекопитающего. Более предпочтительно, композицию вводят в количестве от 0,1 до 1 мл/кг 1 раз в 90 суток.
Кроме того, режим введения композиции может быть установлен в зависимости от вида патологического состояния, самочувствия нуждающегося млекопитающего или конкретного назначения указанной композиции.
Согласно одному варианту реализации указанное патологическое состояние, лечение и/или профилактику наступления которого осуществляют, представляет собой поражение печени различной этиологии, гепатоз, интоксикацию организма, заболевание кожи, заболевание шерстного и/или волосяного покрова, дерматит, нарушение целостности кожного покрова в результате ранения или ожога, обструктивные заболевания легких, пневмонию, острую респираторную вирусную инфекцию (ОРВИ), вирус гриппа, цирковирусную инфекцию, ацидоз, герпес, стрессовое состояние, слабость в послеоперационном состоянии, воспалительные процессы слизистой оболочки кишечника, остеодистрофию, рахитоподобные состояния, артроз, остеохондроз, атеросклероз и другие заболевания.
Согласно другому варианту реализации указанная композиция пригодна для быстрого и эффективного повышения иммунитета, нормализации обмена веществ, в частности, кальцийфосфорного обмена, набора массы тела в случае необходимости и ее снижении в случае имеющегося избыточного веса, повышении белково-синтетической функции печени, в качестве средства, способствующего заживлению ран и ожогов, сдерживания роста доброкачественных и злокачественных опухолей средства, стимулирующего рост волосяного покрова, средства для приведения сельскохозяйственных животных в состояние эструса и повышения репродуктивной функции у животных.
Согласно одному варианту реализации указанную композицию применяют при любых интоксикациях, в частности интоксикациях экзогенной и эндогенной природы, например. Таким образом, указанную композицию применяет в качестве средства для дезинтоксикации. При этом композицию вводят в количестве от 0,1 до 10 мл/кг массы нуждающегося млекопитающего единовременно. В большинстве случаев нуждающееся млекопитающее избавляется от симптомов интоксикации при введении дозировки от 0,1 до 0,5 мл/кг. При возобновлении симптомов отравления композицию вводят в аналогичной дозировке от 1 до 5 раз.
Согласно другому варианту реализации указанную композицию применяют для повышения иммунного статуса у нуждающегося млекопитающего. Другими словами, настоящая композиция является иммуномодулирующей композицией. В частности, указанную композицию применяют при общей слабости организма вследствие разного рода заболеваний, а также в тех случаях, когда организм млекопитающего ослаблен, например, в результате предшествующего лечения антибиотиками и/или препаратами, ослабляющими иммунитет. Например, указанную композицию вводят нуждающемуся в восстановлении млекопитающему в послеоперационный период или период, следующий за проведением химиотерапии, или в период после беременности, при кормлении потомства и т.д. В качестве профилактического средства указанную композицию вводят при эпидемии инфекционных заболеваний, таких как грипп, ОРВИ и других заболеваний.
Согласно другому варианту реализации указанную композицию применяют для нормализации обмена веществ у нуждающегося в этом млекопитающего. При этом в дополнение к основным показателям, нормализацию обмена веществ косвенно оценивают по повышению или снижению массы тела у млекопитающего, нуждающегося в таких повышении или снижении соответственно, увеличению волосяного или шерстного покрова, повышению подвижности и общей активности у возрастных животных и другим показателям.
Согласно другому варианту реализации указанную композицию применяют для нормализации кальцийфосфорного обмена у нуждающегося в этом млекопитающего. При этом нормализацию кальцийфосфорного обмена оценивают по содержанию кальция и фосфора в организме млекопитающего.
Согласно другому варианту реализации указанную композицию применяют для приведения животного в состояние эструса и общего улучшения его репродуктивной функции. В частности, было обнаружено, что внутримышечное введение сельскохозяйственным животным от 1 до 3 доз настоящей композиции в количестве от 0,005 до 1 мл/кг, предпочтительно от 0,01 до 0,1 мл/кг, более предпочтительно от 0,01 до 0,05 мл/кг массы животного в течение суток перед осеменением позволяет достигнуть вышеуказанного эффекта. В частности, достижение указанного эффекта наблюдалось при внутримышечном введение композиции коровам в количестве от 0,01 до 0,05 мл/кг дважды в течение суток.
Согласно другому варианту реализации указанную композицию применяют для снижения стресса у нуждающегося в этом млекопитающего. В частности, на опытных моделях животных было показано, что указанная композиция проявляет ряд адаптогенных/антистрессовых свойств. Например, как было показано, указанная композиция обеспечивала повышение выживаемости и увеличение привеса поросят в постнатальный период их развития, а также давала положительные результаты на модели транспортного стресса у лошадей.
Согласно другому варианту реализации указанную композицию применяют в качестве ранозаживляющего средства у нуждающегося в этом млекопитающего. При этом указанные раны могут быть следствием различных физических повреждений, в частности повреждений целостности кожного и покрова, а также различными заболеваниями, такими как дерматит, псориаз, герпес и других поражений кожного покрова различной этиологии.
Согласно другому варианту реализации указанную композицию применяют в качестве ростостимулирующего средства у млекопитающего. В частности, ростостимулирующее действие указанной композиции было оценено по величине прироста массы сельскохозяйственных животных, получающих указанную композицию, в сравнении с контрольной группой животных, не получающих указанную композицию или получающих только гидролизат для перорального введения.
Эти и другие преимущества настоящего изобретения будут более подробно продемонстрированы в нижеизложенном разделе «подробное описание» на конкретных примерах его реализации.
ПОДБРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Получение композиции для парентерального введения
Пример 1
100 кг циприны исландской (Arctica Islandica) поместили в ферментатор и при постоянном механическом перемешивании произвели нагрев аппарата горячей водой до 42°С. В ферментатор добавили 1 кг протосубтилина. Осуществляли контроль рН, соответствующий нейтральной реакции среды по показанию рН-метра.
Ферментативный гидролиз проводили в течение 40 минут при постоянном перемешивании, после чего створки раковин отделяли с помощью грохота. К полученному раствору добавили концентрированную соляную кислоту и проводили кислотный гидролиз в течение 16 часов в эмалированном аппарате с мешалкой при температуре 100-105°С. По окончании процесса гидролиза образовавшийся раствор при помощи вакуума перекачивали в нейтрализатор, охлаждали с помощью водяного контура и нейтрализовали сухой щелочью до значения рН среды в диапазоне значений 4-6 при постоянном охлаждении. Нейтрализованный гидролизат выстаивали в течение 15 суток при температуре окружающей среды 20°С. Далее произвели фильтрацию на вакуумной установке для отделения образовавшегося осадка с получением не содержащего твердых примесей раствора гидролизата. К полученному раствору гидролизата массой около 10 кг при перемешивании добавили необходимое количество дистиллированной воды («вода для инъекций») с получением раствора с концентрацией гидролизата 5% по массе. Перед заполнением емкостей с композицией для конечного применения, проводили термическую стерилизацию композиции и, при необходимости, последующую фильтрацию раствора. Емкости с готовой композицией хранили при температуре 4-6°С вне зоны воздействия прямых солнечных лучей. Результаты химического анализа полученной композиции представлены ниже.
Массовая доля аминного азота - 0,08%
Массовая доля сухих веществ - 1,5 масс.% РН-5,7
Микроэлементы (качественный состав):
1.Калий
2.Кальций
3. Магний
4. Железо
5. Цинк
6. Медь
7.Кадмий
8. Марганец
9. Никель
10. Хром
11. Селен
12. Йод
Аминокислотный состав (в т.ч. незаменимые)
Жирные кислоты (липиды)
1. Таурин
1. Тридециловая С 13:0
2. Фосфоэтаноламин
2. Миристиновая С14:0
3. Аспарогиновая к-та
3. Тетрадеценовая С14:1
4. Треонин
4. Пентадекановая С15:0
5. Серин
5. Пальмитиновая С16:0
6. Глутаминовая к-та
6. Пальмитолеиновая С16:1
7. Саркозин
7. Гексадекадиеновая С16:2
8. Глицин
8. Гексадекапентаеновая С16:5
9. Аланин
9. Гептадекановая С17:0
10. Валин
10. Гептадеценовая С17:1
11. Цистин
11. Гептадиеновая С17:2
12. Метионин
12. Стеориновая С18:0
13. Цистатионин
13. Олеиновая С18:1
14. Изолейцин
14. Линолевая С18:2
15. Лейцин
15. Линоленовая С18:3
16. Тирозин
16. Октадекатетраеновая С18:4
17. Фенилаланин
17. Эйкозеновая С20:1
18. β-аланин
18. Эйкозадиеновая С20:2
19. γ-аминоизомаслянная
19. Эйкозатриеновая С20:3
20. γ-аминомаслянная
20. Арахидоновая С20:4
21. Этаноламин
21. Эйкозапентаеновая С20:5
22. Орнитин
22. Гептакозапентаеновая С21:5
23. Лизин
23. Докозановая С С20:0
24. Гистидин
24. Докозадиеновая С22:1
25. Карнозин
25. Докозеновая С22:2
26. Аргинин
26. Докозатетраеновая С22:4
27. Оксипролин
27. Докозагексаеновая С22:6
28. Пролин
28. Трикозатетраеновая С23:4
29. Трикозапентаеновая С23:5
30. Тетракозеновая С24:1
Пример 2
50 кг криля (Meganyctiphanes norvegica) поместили в реактор при постоянном перемешивании и добавили концентрированную соляную кислоту. Кислотный гидролиз в течение 24 часов в эмалированном аппарате с мешалкой при температуре 100-105°С. По окончании процесса гидролиза образовавшийся раствор при помощи вакуума перекачивали в нейтрализатор, охлаждали с помощью водяного контура и нейтрализовали сухой щелочью до значения рН среды в диапазоне значений 4-6 при постоянном охлаждении. Нейтрализованный гидролизат выстаивали в течение 20 суток при температуре окружающей среды 20°С. Далее произвели фильтрацию на вакуумной установке для отделения образовавшегося осадка с получением не содержащего твердых примесей раствора гидролизата. К полученному раствору гидролизата при перемешивании добавили необходимое количество дистиллированной воды («вода для инъекций») с получением раствора с концентрацией гидролизата 5% по массе. Перед заполнением емкостей с композицией для конечного применения, проводили термическую стерилизацию композиции и, при необходимости, последующую фильтрацию раствора. Емкости с готовой композицией хранили при температуре 4-6°С, вне зоны воздействия прямых солнечных лучей. Результаты химического анализа полученной композиции представлены ниже.
Массовая доля аминного азота - 0,10%
Массовая доля сухих веществ - 0,8 масс.%
рН - 5,5
№
Аминокислота
Содержание аминокислот, масс.%
Жирнокислотный состав липидов
Микроэлементы
1
таурин
0,020
миристиновая кислота С14:0
Калий
2
аспаргиновая кислота
0,042
пальмитиновая кислота С16:0
Кальций
3
глутаминовая кислота
0,045
пальмитолеиновая кислота С16:1
Магний
4
Глицин
0,030
гептадиеновая кислота С17:2
Железо
5
аланин
0,017
стеориновая кислота С18:0
Цинк
6
цистин
0,003
олеиновая кислота С18:1
Медь
7
лейцин
0,031
линоленовая кислота С18:3
Хром
8
тирозин
0,0063
эйкозеновая кислота С20:1
Иод
9
фенилаланин
0,041
арахидоновая кислота С20:4
10
гамма-аминомасляная кислота
0,002
эйкозапентаеновая кислота С20:5
11
Этаноламин
0,003
докозеновая кислота С22:2
12
лизин
0,018
докозагексаеновая кислота С22:6
13
аргинин
0,023
трикозатетраеновая кислота С23:4
14
пролин
0,114
трикозапентаеновая кислота С23:5
15
серин
0,018
тетракозеновая кислота С24:1
16
гистидин
0,008
докозеновая кислота С22:2
17
треонин
0,015
18
валин
0,012
19
метионин
0,006
20
изолейцин
0,014
Токсикологические исследования композиции на основе двухстворчатых моллюсков
В задачи первого этапа исследований композиции для парентерального введения, содержащей 5% водный раствор гидролизата, полученной по Примеру 1 (далее композиция А) входило:
1. Проведение токсико-биологических исследований: определение острой и подострой токсичности (в т.ч. раздражающего и аллергизирующего действия).
2. Определение эмбриотропного действия (эмбриотоксическое и тератогенное).
3. Проведение опытов по определению возможной субхронической токсичности на разных видах животных.
Материалы и методы исследований
Опыты проведены на 115 белых крысах и 55 белых мышах с использованием существующих фармакологических, токсикологических, гематологических, биохимических и иммунологических методов. Отдельные методики и схемы опытов по определению токсичности препарата на лабораторных и других видах животных представлены по ходу изложения экспериментальных исследований.
Опыты проведены дважды со статистической обработкой полученных результатов.
Определение острой и подострой токсичности (в том числе раздражающего и аллергизирующего действия)
50
Острую токсичность композиции А определяли путем однократного внутримышечного введения терапевтической дозы 0,2 мл/голову и доз, увеличенных в 2 и 4, раза, то есть - 0,4; 0,8 мл/голову, что составляло 1600 и 3200 мг/кг. Никаких видимых отклонений в поведении животных не наблюдали, крысы охотно поедали корм и пили воду. По токсикологической классификации при ЛД свыше 1000 мг/кг препарат относится к малотоксичным веществам. Для исследуемой композиции этот показатель в несколько раз превышал дозу 1000 мг/кг.
При определении субхронической токсичности препарат в дозе 0,2 мл/голову (или 800 мг/кг) вводили крысам на протяжении 10 дней подряд. Как и в остром опыте не было отмечено негативного влияния композиции на организм животных.
Раздражающее действие определяли с помощью метода эпикутанных аппликаций. Для определения возможного раздражающего, аллергического действия препарата создали две группы белых крыс, массой тела 250-270 г. В каждой группе по пять животных. На выбритые участки спины (1,5×2 см), бедра (1×0,5 см) и на конъюнктиву глаза животным наносили в течение 20 суток: первой группе - композицию для парентерального введения, второй группе - 0,9%-й раствор натрия хлорида.
При проведении опыта учитывали следующие показатели: появление гиперемии конъюнктивы, наличие отека кожи и век, развитие воспаления, кожную реакцию (покраснение кожи, сыпь) при применении препаратов. Наблюдая за подопытными лабораторными животными, не было выявлено аллергического и местно-раздражающего действия композиции. Кожной реакции в виде покраснения, сыпи в области выбритых участков бедер и спины не наблюдалось.
Результаты действия композиции для парентерального введения, а также изотонического раствора натрия хлорида на слизистую оболочку глаза и выбритые участки бедер и спины белых крыс представлены в Таблице 1.
Таблица 1
Показатели
1-я группа
2-я группа
Гиперемия кожи
отсутствует
отсутствует
Отек кожи
отсутствует
отсутствует
Состояние век
без изменений
без изменений
Конъюнктивит
отсутствует
отсутствует
Кератит
отсутствует
отсутствует
Слезотечение
отсутствует
отсутствует
Болевая реакция
отсутствует
отсутствует
Из представленных данных видно, что композиция А не обладает местным раздражающим, аллергическим действием. Слизистая оболочка глаз белых крыс, состояние век оставались удовлетворительными, признаки воспаления, отек и гиперемия кожи, слезотечение отсутствовали, и не наблюдалось болевой реакции после применения растворов. Общее состояние белых крыс было удовлетворительным, они были подвижны, охотно пили воду и поедали корм.
В качестве дополнительного показателя раздражающего действия определяли проницаемость капилляров кожи, используя пробу Мак Клюра-Олдрича. Проба заключалась во внутрикожном введении экспериментальным животным на 15 день опыта 0,2 мл физиологического раствора в область нанесения испытуемого препарата и на симметрично расположенный контрольный участок. Фиксировали время рассасывания солевого волдыря на обоих участках. Как показали исследования, препараты не влияют на проницаемость капилляров кожи.
Определение эмбриотропного действия композиции (эмбриотоксическое и тератогенное)
Оценку эмбриотоксического и тератогенного действия композиции А проводили согласно методическим рекомендациям, опубликованным А.Г.Третьяковым (1988).
Опыты по определению возможного эмбриотоксического действия препарата проводили на 15 беременных самках крыс, массой 150-180 г и 3 самцах первого и второго поколения.
К самкам, в стадии эструса и проэструса, в вечерние часы подсаживали самцов, из расчета один самец на четыре самки. Обнаружение спермиев во влагалищном мазке на следующее утро считали первым днем беременности. Исследования начинали при введении композиции в терапевтической дозе - 0,2 мл на голову. Препарат вводили внутримышечно в период с 1 по 17-й день беременности. Контрольным животным в эти же сроки вводили внутримышечно изотонический раствор натрия хлорида в такой же дозе.
За течением беременности наблюдали путем исследования влагалищных мазков самок на четвертый - пятый дни после оплодотворения и течением беременности, на 10-11-й дни беременности и путем взвешивания самок на 1, 7, 14 и 20-й дни беременности. На 20-й день беременности самок декапитировали, подсчитывали количество желтых тел беременности в яичниках и количество мест имплантации.
Для определения эмбриотоксического действия композиции А подсчитывали предимплантационную гибель зигот (разность между количеством желтых тел беременности в яичниках и количеством мест имплантации в матке от общего числа желтых тел), постимплантационную гибель эмбрионов (разность между количеством мест имплантации и количеством живых плодов в матке от числа мест имплантации) и общую эмбриональную смертность (разность между числом желтых тел беременности и живыми плодами в процентах от числа желтых тел в яичниках).
При введении композиции А беременным крысам в дозе 0,2 мл на голову в указанные сроки эмбриогенеза и органогенеза (с 1-17-ый дни беременности) нарушений в течение беременности не обнаружено, животные охотно пили воду и поедали корм. Нарушений не было обнаружено также при исследовании внутренних органов по Вильсону и костной системы по Даусону.
Основные показатели - предимплантационая гибель зигот в подопытной группе равнялась 1,90, а в контрольной - 2,3%, постимплантационная гибель эмбрионов - 1,92 и 2,0% соответственно, общая эмбриональная смертность - 3,3 и 3,46% соответственно - были в близких показателях, что свидетельствовало об отсутствии эмбриотоксического действия композиции. Масса, размеры, число плодов и плодоплацентный коэффициент в подопытной и контрольной группах не имели статистических различий и находились в пределах колебаний физиологической нормы. Так, среднее число плодов на одну самку при введении препарата было 8,9±0,06, а в контроле - 8,7±0,06, соответственно масса - 2093,3±8,3 и 2010,2±5,1 мг и размеры - 2,7±0,9 и 2,7±0,1 см.
При визуальном осмотре и микроскопическом исследовании внутренних органов по Вильсону от крыс, которым вводили препарат, не выявлено уродливых плодов (внешние и внутренние аномалии отсутствовали).
При микроскопическом исследовании костей скелета плодов по Даусону установлено, что исследуемая композиция в течение всего периода эмбриогенеза не вызвала отклонений в костной системе плодов.
Отсутствие отклонений в костной системе плодов подтверждается идентичной массой подопытных и контрольных животных, а также плодоплацентарным коэффициентом (26,97 и 27,60 соответственно).
Установили, что композиция А в дозе 0,2 мл на голову ежедневно в течение всей беременности (с 1-го по 17-й дни) не проявляла ни эмбриотоксического, ни тератогенного действий. Животные хорошо переносили ежедневное введение препарата и результаты исследований материала от них - масса и размер плодов, состояние внутренних органов и костной системы - были идентичными (в отдельных показателях - масса, размер плодов и размер отдельных костей даже больше) в сравнении с таковыми от контрольных животных, что подтверждено и уровнем вероятности, который был равен или больше 0,05 (Р≥0,05).
Таким образом, композиция А не вызывает во втором поколении эмбриотоксического и тератогенного действия на лабораторных животных.
Локальные производственные опыты по определению возможной субхронической токсичности композиции на разных видах животных
Опыты провели на коровах, телятах, поросятах-отъемышах и собаках. Композицию, А вводили внутримышечно на протяжении 10 дней - в следующих дозах: коровам - 10 мл/голову; телятам (живая масса - 30-33 кг) - 5 мл/голову; поросятам (живая масса 9,3 кг) - 2 мл/голову; собакам (живая масса 35-40 кг) - 5 мл/голову. При ежедневном наблюдении за животными учитывали общее клиническое состояние, аппетит, возможные негативные проявления в поведении животных. В крови, взятой в начале и в конце опыта, определяли некоторые гематологические и иммунобиохимические показатели. У поросят и телят определяли начальную и конечную живую массу тела.
Опыты на коровах. Установили, что ежедневное введение коровам вышеуказанной композиции в дозе 10 мл/голову не влияло отрицательно на внешнее поведение животных, которые привычно поедали кормовой рацион и пили воду. Каких-либо негативных факторов в поведении животных обнаружено не было. При гематологическом исследовании крови также не обнаружили статистически достоверных различий в содержании эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина. Биохимические исследования показали некоторое уменьшение в сыворотке крови каротина и общего белка, однако эти изменения были недостоверны. Содержание количества кальция и фосфора в сыворотке крови было в пределах нормы, изменений в показателях полученных до и в конце опыта не отмечено. Позитивным моментом введения композиции явилась возможность более раннего (на 7-10 дней) оплодотворения 6 из 10 подопытных коров.
Опыты на телятах. Композицию вводили телятам сразу после рождения. Негативных моментов в их поведении замечено не было. Наоборот, из 10 телят заболели диареей только 3, тогда как этот показатель в среднем составляет около 67-75%. При исследовании крови выяснили, что гематологические показатели были почти одинаковыми, как до начала, так и после введения композиции. Из биохимических показателей наблюдалась тенденция увеличения общего белка, хотя статистически различие было недостоверно. В то же время в месячном возрасте подопытные телята имели более высокую живую массу (51,3+2,1 кг, против 50,1+2,7 кг у контрольных телят) и среди этих животных меньше регистрировали случаев возникновения бронхопневмоний.
Опыты на поросятах. Поросятам композицию А инъецировали за 10-13 дней до отъема. Каких-либо отклонений от поведения поросят замечено не было. В крови также не было установлено изменений от начальных и конечных данных по содержанию форменных элементов крови, Са и Р. Отмечалась лишь тенденция увеличения содержания общего белка, что впоследствии проявилось более высокой живой массой на 3,7±0,2%, по сравнению с контрольными животными.
Опыты на собаках. Опыты провели на собаках средней возрастной группы (5-7 лет). Выяснили, что внутримышечное введение композиции А в дозе 5 мл/голову на протяжении 10 дней не влияло отрицательно на поведенческие реакции собак. Животные охотно поедали корм и пили воду. Гематологические показатели крови также не отличались от начала и конца эксперимента.
Вышеприведенные исследования на лабораторных и домашних животных подтвердили низкую токсичность композиции А, в том числе и отсутствие эмбриотропного действия.
ПРИМЕР 3. Иммуностимулирующее, адаптогенное, ростостимулирующее и ранозаживляющее действия композиции А
Материалы и методы
3
Опыты проводили на 84 белых крысах и 36 белых мышах с использованием существующих фармакологических, гематологических, биохимических и иммунологических методов. При изучении позитивного влияния композиции А на организм лабораторных животных учитывали некоторые гематологические и иммунобиологические показатели подопытных и контрольных животных. Гематологические показатели определяли существующими методами в пробах крови: количество лейкоцитов в 1 мм подсчетом в камере Горяева. Из иммунобиологических показателей учитывали: содержание в крови белка, глюкозы, фагоцитоз и ряд других показателей, характеризующих состояние организма. Количество общего белка в сыворотке крови определяли рефрактометрическим методом. В сыворотке крови величина рефракции зависит главным образом от количества белков.
Концентрацию глюкозы определяли орто-толуидиновым методом, основанным на окрашивании соединения глюкозы орто-толуидином в растворе уксусной кислоты, интенсивность которого пропорциональна концентрации глюкозы.
Содержание иммуноглобулина G в сыворотке крови определяли по методу Манчини (1965) в модификации Л.С.Колабской и соавт. (1975). Метод заключается в образовании кольца преципитации в результате взаимодействия смеси агара с антисывороткой к иммуноглобулину и антигена исследуемой сыворотки, внесенной в лунки агаровой пластинки. Площадь преципитата, как квадрат диаметра кольца, прямо пропорциональна концентрации антител в агаре. При этом между концентрацией испытуемого антигена и площадью преципитата имеется линейная зависимость.
Исследование фагоцитарной активности основано на определении в условиях in vitro способности нейтрофилов периферической крови исследуемых животных (постановки опсоно-фагоцитарной реакции - ОФР) фагировать (поглощать) микробные клетки. В качестве тест-культуры для ОФР используется белый стафилококк - Staph. albus.
Интенсивность фагоцитоза устанавливали по фагоцитарной активности (ФА), фагоцитарному числу (ФЧ) и фагоцитарному индексу (ФИ).
Фагоцитарная активность (ФА) - это процент фагоцитирующих нейтрофилов к общему числу подсчитанных. Фагоцитарный индекс (ФИ) - число поглощенных микробных клеток (м.к.), в пересчете на один нейтрофил, от общего количества подсчитанных нейтрофилов. Фагоцитарное число (ФЧ) - число микробных клеток в пересчете на один активный (фагоцитирующий) нейтрофил.
Опыты проведены дважды со статистической обработкой полученных результатов.
3.1. Определение иммуностимулирующего действия
Подопытным белым крысам (три группы по 6 голов в каждой) в течение 5 суток вводили внутримышечно композицию А в дозе 0,2 мл/голову. В крови определяли фагоцитарный индекс (ФИ), фагоцитарную активность (ФА) и фагоцитарное число (ФЧ), а из иммунологических показателей иммуноглобулины А и G (Табл.2, 3). Фагациторную активность композиции сравнивали с известным иммуномодулятором - эвинтоном. В состав эвинтона входит: Thuja D6, Vincetoxicum D4, Echinacea purpurea D4 и изотонический раствор хлорида натрия.
Таблица 2
Группы животных
Фагоцитарный индекс
Фагоцитарная активность
Фагоцитарное число
Композиция А
8,2±1,42
50,0±1,24
19,6±1,47
Эвинтон
10,0±1,34
60,0±1,45
15,33±1,29
Контроль
6,72±1,87
33,33±1,39
8,0±1,64
Таблица 3
Группы животных
Иммуноглобулин А
Иммуноглобулин G
Композиция А
2,99±0,59
8,06±1,57
Эвинтон
2,9±0,62
7,42±1,32
Контроль
1,85±0,37
6,85±0,32
Полученные результаты показали, что применение композиции способствовало повышению фагоцитарной активности нейтрофилов по сравнению с контрольной группой и несколько выше была выработка количества иммуноглобулина G по сравнению с действием препарата Эвинтон и контрольной группой белых крыс.
Следовательно, композиция А обладает определенным иммуностимулирующим действием на организм подопытных животных и повышает клеточный и гуморальный показатели иммунитета.
3.2. Определение адаптогенных (антистрессовых) свойств
Опыт проводили на 12 крысах, по 4 головы в каждой группе. Стресс у подопытных белых крыс вызывали с помощью шуттель-аппарата, имитирующего транспортный (механический) стресс. На шуттель-аппарат помещали коробку с животными и выдерживали их в течение 30-40 мин при включенном аппарате. В крови белых крыс определяли наиболее информативные показатели, характеризующие возникновение и течение стрессовой реакции (стрессовые медиаторы): глюкозу, общий белок, и количество лейкоцитов.
Предварительно за 3 дня до стрессирования животным 1-ой группы внутримышечно вводили композицию А в дозе 0,2 мл. Животным 2-ой группы вводили 2,5%-й раствор аминазина, относящийся к группе нейролептиков, в дозе 0,5 мг на голову. Животным 3-ей группы (контрольная) вводили внутримышечно изотонический раствор хлорида натрия. Исследование крови у крыс для определения вышеперечисленных показателей проводили через 1 и 24 ч после стрессирования.
По данным лабораторных исследований было установлено, что при стрессе содержание глюкозы, лейкоцитов увеличивается, и снижается содержание общего белка.
Например, уже через 1 ч после стрессирования концентрация глюкозы в группе с композиции А составила 4,97±0,1 ммоль/л, против 6,46±0,45 ммоль/л в группе с аминазином и 10,0±0,7 ммоль/л в контрольной группе. Через сутки после стресса этот показатель увеличился до 5,42±0,2 ммоль/л, 6,25±0,3 ммоль/л и 8,33±0,4 ммоль/л соответственно. Данные по результатам лабораторных анализов крови, через 1 ч и через 24 ч после стресса отражены в таблицах 4 и 4' соответственно.
Таблица 4
Показатели крови через 1 час после стресса
Группа
Глюкоза ммоль/л
Общий белок, г/л
Лейкоциты, 10<sup>3</sup>/мкл
Композиция А
4,97±0,1
67,5±1,2
5,6±1,7
Аминазин
6,46±0,45
66,0±0,5
4,3±0,4
Изотонический раствор NaCl
10,0±0,7
66,0±0,9
5,8±0,52
Таблица 4'
Показатели крови белых крыс через 24 часа после стресса
Группа
Глюкоза, ммоль/л
Общий белок, г/л
Лейкоциты, 10<sup>3</sup>/мкл
Композиция А
5,42±0,2
72,7±2,3
5,6±0,1
Аминазин
6,25±0,3
72,4±1,6
6,1±0,3
Изотонический раствор NaCl
8,33±0,4
66,2±2,5
7,05±0,2
3.3. Изучение ростостимулирующего действия
Влияние композиция А на рост и развитие лабораторных животных изучили на 18 белых мышах, массой 19-23 г. Создали 3 группы животных в каждой по 6 голов. В качестве препарата сравнения использовали комплексный гомеопатический препарат для животных «Эвинтон». Всех животных взвешивали перед началом и в конце эксперимента. В конце опыта была взята кровь для клинических и иммунобиохимических исследований. За время эксперимента, который продолжался 15 суток, животные не проявляли признаков беспокойства, охотно поедали корм и пили воду. Наибольшая подвижность отмечалась у животных подопытной группы, которым подкожно вводили указанную композицию А в дозе 0,1 мл на голову. Животным группы сравнения подкожно вводили комплексный гомеопатический препарат для животных «Эвинтон», в дозе 0,1 мл на голову. Для контрольной группы был использован изотонический раствор хлорида натрия, который вводили подкожно в дозе 0,1 мл на голову. Курс введения препаратов составил 3 дня.
Наилучшие показатели прироста массы по сравнению с контрольными животными были получены при использовании композиции А. Данные представлены в Таблице 5.
Таблица 5
Ростостимулирующее действие препаратов
Группы животных
Масса до опыта (г)
Масса в конце опыта (г)
Прирост массы за 10 сут. (г)
Прирост массы по отношению к контролю (%)
Композиция А
25,75±0,692
32,0±0,75
6,25±0,62
113,6
Эвинтон
24,75±0,56
30,75±0,56
6,0±0,56
105,1
Контроль
21,5±1,19
27,0±1,4
5,5±1,34
100,0
3.4. Изучение ранозаживляющего действия композиции
Заживление раны проходит три основных фазы: воспаления, регенерации и реорганизации рубца и эпителизации. В любой фазе заживления возможно затяжное течение раневого процесса с вялым ростом грануляций и замедленной эпителизацией.
Опыты по определению ранозаживляющего действия композиции А проводили на 6 крысах, массой 250 г, в каждой группе по 4 животных. Предварительно были выбриты участки спины 2×2 см, депилированная кожа очищена от загрязнений, затем хирургическим пинцетом захватывали кожу и скальпелем делали надрез длиной 1 см.
О ходе заживления экспериментальной раны судили по следующим показателям:
1. Визуальное наблюдение
- время появления грануляций в ране
- закрытие дна раны грануляции
- заполнение грануляциями полости раны
- качество грануляций
- ход эпителизации
- состояние тканей вокруг раны.
2. Регистрация изменений площади раны
3. За срок окончательного заживления раны принимали момент отпадения струпа
Подопытной группе в ходе эксперимента вводили вышеуказанную композицию А внутримышечно в терапевтической дозе 0,2 мл на голову, в течение 4 дней. Контрольным животным в эти же сроки вводили внутримышечно изотонический раствор натрия хлорида в такой же дозе.
Грануляции в ране появились на 2-е сутки в обеих группах, закрытие дна раны и выполнение грануляциями полости раны в подопытной группе, как и контрольной, отмечено на 5 сутки от начала эксперимента. В ходе проведения эксперимента в подопытной группе отмечено сокращение площади раны на 4-й день - на 0,3 см, в контрольной группе сокращение площади раны на этот период не отмечено.
Срок окончательного заживления раны составил в подопытной группе - 6 дней, а в контрольной - 8.
Вышеуказанные исследования позволили установить ряд позитивных фармакологических эффектов композиции А, таких как иммуностимулирующее, адаптогенное, ростостимулирующее и ранозаживляющее действие. На основании проведенных исследований и полученных результатов были разработаны рекомендации по применению композиции А для повышения продуктивности и естественной резистентности организма животных.
Полученные данные клинических исследований на лабораторных животных дали основание для проведения испытаний на сельскохозяйственных и домашних животных, результаты которых приведены ниже.
ПРИМЕР 4. Влияние композиции на показатели лейкограммы и метаболизм костной ткани, в крови поросят, находящихся на доращивании
Исследование проводили в течение 2-х недель на поросятах в возрасте 45 и 65 дней (n=15), содержащихся в условиях свинокомплекса. Были сформированы 2 группы животных: опытная группа - животные, которым 1раз в сутки вводили внутримышечно композицию А в дозе 2 мл на голову через день в течение 14 дней, и контрольная - животные без специфического лечения. Животных в группы отбирали по методу аналогов.
Результаты исследований: о влиянии композиции на обмен электролитов и метаболизм костной ткани в крови поросят в крови поросят представлены в Таблице 6.
Таблица 6
№ п/ п
Показатель
Ед. изм.
Контрольная группа
Опытная группа
До начала
После
До
После
эксперимента
эксперимента
1
кальций
ммоль/л
2,32±0,3
2,4±0,5
2,52±0,5
2,4±0,6
2
фосфор
ммоль/л
1,83±0,3
1,78±0,5
1,76±0,3
1,84±0,27
3
щелочная фосфатаза
МЕ/л
87,8±7,8
86,2±5,5
60,9±2,7
39,5±1,2
Из результатов проведенных исследований можно заключить следующее: в контрольной группе у поросят наблюдается дисбаланс соотношения между кальцием и фосфором, а также повышение уровня щелочной фосфатазы, что может указывать (несмотря на возрастные изменения) на воспалительные процессы на слизистой оболочке кишечника, ювенильную остеодистрофию, рахитоподобные состояния.
После двух недель применения препарата у поросят опытной группы в отличие от контрольной была отмечена положительная динамика: нормализовался аппетит, животные были более активны.
Динамика биохимических показателей следующая: уровень щелочной фосфатазы снизился на 35,1%, значения уровня кальция и фосфора приблизились к физиологическим нормам в отличие от животных контрольной группы, у которой изменение данных биохимических показателей не наблюдалось.
Таким образом, применение вышеуказанной композиции А способствует нормализации кальцийфосфорного обмена, что позволяет рекомендовать ее использование в комплексном лечении костно-суставных патологий.
Результаты исследований: о влиянии композиции на показатели лейкограммы в крови поросят-отъемышей приведены в Таблице 7.
Таблица 7
Показатель
Ед.изм.
норма
Контрольная группа
Опытная группа
До начала эксперимента
После эксперимента
До начала эксперимента
После эксперимента
Лейкоциты
тыс./мкл; 10<sup>9</sup>/л
8,7-37,9
10,9±1,2
15,1±2,1
11,05±1,6
16,1±2,5
Нейтрофилы Ю
%
0-2
0,15±0,02
0,17±0,01
0,14±0,02
0,17±0,12
Нейтрофилы П
%
2-4
1,9±0,04
1,01±0,011
1,85±0,3
3,5±0,7
Нейтрофилы С
%
40-48
65,45±12,1
59,21±9,8
64,3±14,4
55,2±8,9
Эозинофилы
%
1-3
0,8±0,01
0,9±0,012
0,85±0,03
1,6±0,04
Базофилы
%
0-1
0,7±0,013
0,78±0,01
0,73±0,13
1,3±0,3
Моноциты
%
2-6
3,5±0,24
4,2±0,9
3,6±0,23
3,1±0,07
Лимфоциты
%
40-50
27,5±3,1
32,73±3,6
28,53±4,7
37,13±4,9
Из полученных данных видно, что у поросят отмечается снижение уровня лимфоцитов, базофилов, эозинофилов, вместе с тем уровень сегментоядерных нейтрофилов повышается, данные изменения могут свидетельствовать о защитно-приспособительной реакции организма животных на стресс. После двух недель применения препарата у поросят опытной группы, в отличие от контрольной, была отмечена положительная динамика: нормализовался аппетит, животные становились более активны. Гематологические показатели крови стали приближаться к физиологическим значениям у опытной группы, в отличие от контрольной. Таким образом, композицию А можно рекомендовать для комплексной терапии при корректировке послеотъемного стресса у сельскохозяйственных животных.
ПРИМЕР 5. Исследование дезинтоксикационных свойств композиции
Под наблюдением находились 17 животных, у которых диагноз «острый пироплазмоз» был подтвержден наличием паразитов бабезий в мазках периферической крови. Состояние всех животных расценивалось как тяжелое: ректальная температура до 41,0°С, слизистые бледные с желтушным оттенком, моча темная с кровью, снижение аппетита вплоть до отказа от корма, нарушение походки, общая слабость, в нескольких случаях - потеря сознания.
В качестве специфической терапии применялся препарат Пиро-Стоп (внутримышечно двукратно с интервалом 24 часа). Кроме обычно используемого лечения (раствор Рингера-Локка внутривенно, 60 капель/мин, 10-15 мл/кг 2 раза в сутки, сердечных препаратов) применяли композицию А по 5-15 мл (в зависимости от веса животного) внутривенно (струйно) 1 раз в сутки. В особенно тяжелых случаях препарат вводили в первые 2-3 суток внутривенно по 2 раза в сутки, затем переходили на внутримышечное введение 1 раз в сутки.
Было отмечено, что использование вышеуказанной композиции значительно повышало эффективность лечения в сравнении с традиционной терапией. Так, общее состояние всех больных животных значительно улучшалось спустя 3-5 часов уже после первого введения препарата. У животных быстро восстанавливался аппетит, снижалась температура, уменьшалась частота сердечных сокращений. У всех собак показатели гемоглобина пришли к норме к концу 2 недели от начала лечения.
Детоксикационное действие вышеуказанной композиции объясняется ее гепатопротекторными свойствами, что подтверждается результатами динамического анализа функций печени у заболевших животных. Даже после однократного внутривенного введения композиции отмечали нормализацию уровня АЛТ, ACT, альбумина, ГГТП, глобулинов, общего белка, протромбина и щелочной фосфатазы, положительная динамика уровня общего билирубина и непрямой фракции билирубина, амилазы.
Таким образом, предложенная в настоящем описании композиция обладает выраженным дезинтоксикационным действием, в частности, за счет наличия гепатопротекторных свойств.
ПРИМЕР 6. Влияние композиции А на опорно-двигательную систему у собак
Композицию А использовали в качестве моно- и комплексной терапии собак с возрастными изменениями опорно-двигательной системы. В группу входили 5 собак с нормальным и избыточным весом. Основные симптомы проявлялись в апатии животных, отсутствии аппетита, нежелании гулять, хромоте различной тяжести, различных болевых синдромах. При осмотре животных выявлены тугоподвижность в суставах, болевая реакция при пальпации в области позвоночного столба (грудной и поясничные отделы). На рентгенограммах выявлены различные степени артроза ТБС, остеохондроз позвоночника.
Трем русским псовым борзым в возрасте 13 лет, весом около 25 кг (норма) вводили внутримышечно по 5 мл композиции, содержащей 5% водный раствор гидролизата, полученного из мяса двустворчатых моллюсков, через день, в количестве 15 инъекций.
Эредельтерьеру в возрасте 12 лет (сука), страдающей избыточным весом с болезненностью позвоночника, вышеуказанная композиция была назначена по 4 мл внутримышечно через день в количестве 10 инъекций. Английскому бульдогу в возрасте 10 лет, страдающему ожирением и отсутствием активности, вышеуказанная композиция была назначена в составе комплексной терапии: внутримышечно по 4 мл через день в количестве 10 инъекций, бонхарен внутривенно 2 мл 1 раз в неделю в количестве 4 инъекций, киносил 10 мл 1 раз в день в течение 2 месяцев. У собак до и после приема препаратов были взяты клинический и биохимический анализы крови. После курса лечения состояние животных разительно отличалось: у всех собак восстанавливался аппетит, повышалась двигательная активность, отмечалось снижение уровня щелочной фосфатазы с повышенного до нормального, снижалась активность аланиновой трансаминазы (АЛТ), повышался уровень мочевины в пределах нормы, что в совокупности говорит о положительном действии композиции А на состояние опорно-двигательной системы, а также функцию печени.
ПРИМЕР 7. Лечение патологических состояний у собак
Ниже представлены результаты применения композиции А при лечении различных патологий у собак.
1. Английский бульдог
Возраст: 1 год 3 мес.
Вес: 30 кг
Диагноз: Демодекоз, мочекислый диатез, стрептодермия: поражена вся голова, щеки, лоб, между и за ушами, все в гнойной корке, мокнущая экзема.
Назначено: общее симптоматическое лечение и Композиция по 3 мл внутримышечно, один раз в день, 5 дней.
Результат через неделю: кожа сухая, зарастает; отечности и зуда нет, гноя нет.
Чистая, зарастающая кожа.
2.Доберман
Возраст: 2 года 6 мес.
Вес: 23 кг
Диагноз: Сильная худоба, несмотря на хорошее питание, отсутствие глистов и паразитов. Перхоть на коже, билирубин в моче.
Назначено: Композиция по 5 мл в/м, один раз в день, 5 дней.
Результат через месяц: увеличение массы на 2 кг, билирубин в норме, шерсть чистая, блестящая.
3. Американский бульдог
Возраст: 5 лет
Вес: 60 кг
Диагноз: Лептоспироз. Симптомы: гнойный отит, кровавый понос, рвота.
Назначено: Капельница и симптоматическое лечение, а также Композиция по 5 мл в/м, один раз в день, 5 дней.
Результат: в течение 2 дней прекратились рвота и понос, через неделю после начала лечения клиническая кровь и моча в норме. Через 4 месяца рецидивов не наблюдалось.
4. Далматин
Возраст: 1 год 7 мес.
Вес: 22 кг
Диагноз: Трихофития, осложненная аллергическим дерматитом. Поражена вся спина и бока.
Назначено: симптоматическое лечение.
Лечение в течение месяца не дало результатов.
Назначено: Композиция по 3 мл в/м, через день, 5 инъекций.
Результат через две недели: все симптомы исчезли, волос чист.
5. Йоркширский терьер
Возраст: 1,5 мес.
Вес:1 кг
Диагноз: Комплексную повторную прививку сделали на неделю раньше срока - через 4 дня температура 41,6°, бронхопневмония, одностороннее гнойное истечение из глаза и носа.
Назначено: симптоматическое лечение и Композиция 5:0 по 1 мл в/м, один раз в день, 5 дней.
Результат через два дня: нормализовалась температура, отсутствие гнойных истечений и хрипов в легких.
6. Курцхаар
Возраст: 12 лет
Вес: 17 кг
Диагноз: Хронический лептоспироз. Температура около 40° в течение двух месяцев, болезненность в области печени и почек, истощенность, перхоть, запах от кожи, еле ходит, отсутствие аппетита. Традиционные методы лечения не помогают.
Назначено: первую неделю - большие дозы антибиотиков и симптоматическое лечение. Клиническая кровь нормализовалась, но все симптомы остались.
Назначено: Отмена антибиотиков, симптоматическое лечение печени и почек и Композиция по 3 мл в/м, один раз в день, 5 дней.
Результат через два дня: температура в норме, в течение 3 недель улучшилось состояние печени и почек, исчезла перхоть, улучшился шерстный покров, появился аппетит.
Через два месяца рецидив: инфекционный артрит - две инъекции Композиции по 3 мл в/м, один раз в день.
Все симптомы исчезли.