СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОМОДУЛЯТОРНЫХ СВОЙСТВ КОСМЕТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ
METHOD FOR MEASURING IMMUNOMODULATORY PROPERTIES OF COSMETIC PRODUCTS

Изобретение относится к косметологии и медицине, в частности к иммунологии, и предназначено для определения иммуномодуляторных свойств косметических средств, исследования эффективности лечения кожи лица, рук и тела этими средствами, определения индивидуальной и групповой величины неспецифической защиты организма к микробам, для контроля и прогнозирования эффективности воздействия этими средствами, повышающими уровень устойчивости организма к микробам.
В настоящее время в медицине для оценки иммунного статуса и эффективности лечения различных заболеваний применяются в основном способы, основанные на исследовании или количества, или активности факторов иммунитета, циркулирующих в крови. Однако абсолютное большинство этих способов отличается трудоемкостью и недостаточной точностью. При этом необходимо соблюдение стерильных условий, имеется возможность инфицирования СПИДом и другими инфекциями, требуются дорогостоящие реактивы, сложная аппаратура. В связи с этим внимание иммунологов привлекают те способы, которые позволяют оценить величину неспецифической защиты организма по активности и количеству факторов иммунитета слюны, участвующих в иммунитете. В частности, с этой целью применяются способы исследования активности лизоцима (Бухарин О.В., Васильев Н.В., 1974), β-лизинов (Gelhard, 1982). Однако они также отличаются трудоемкостью, а для их проведения требуются дорогостоящие реактивы.
Прототипом предлагаемого технического решения является способ определения в слюне и сыворотке крови иммуноглобулинов A, М и G, для чего чаще всего используют способ радиарной иммунодиффузии по Манчини (Шляхов Э.Н., Андриеш Л.Н. Иммунология: справочное пособие. - Кишинев: Штинца, 1985. - С.107). Однако этот способ имеет ряд недостатков. К ним относятся: высокая трудоемкость, недостаточная точность способа, необходимость использования при исследовании дорогостоящих сывороток к иммуноглобулинам, дефицитных агаров, специальных пластинок, камер и т.д.
Изобретение направлено на решение задачи: упрощение процесса при высокой точности, экономичности и безопасности определения иммуномодуляторных свойств косметических средств «Карэль»™, оценки индивидуальной и групповой неспецифической защиты организма к микробам, особенно при массовых исследованиях, для контроля и прогнозирования эффективности лечения этими косметическими средствами, регулирующими уровень неспецифической защиты организма к микробам.
Решение задачи достигается способом определения иммуномодуляторных свойств косметических средств, характеризующимся тем, что проводят определение изменений титра антител слюны к дизентерийной группе микробов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в слюне, при этом до обработки поверхности кожи лица, рук или тела косметическим средством и после его нанесения на поверхность кожи в пробах слюны определяют изменение титра антител, при этом делят испытуемых лиц на две группы, у лиц первой группы с низким титром антител 1:128 и ниже после воздействия на кожу лица или тела косметическим средством определяют повышение содержания антител в слюне, т.е. иммуномодуляторные свойства, и, наоборот, у второй группы лиц при титрах антител 1:256 и выше реакция не определяется или отмечается нормализация содержания гуморальных факторов иммунитета в слюне.
Технический результат от использования существенных признаков предлагаемого решения состоит в упрощении процесса при высокой точности, экономичности и безопасности определения иммуномодуляторных свойств косметических средств.
Ниже приведена причинно-следственная связь существенных признаков предлагаемого технического решения с достигаемым результатом.
Новизна способа заключается в том, что неспецифическую защиту организма к микробам определяют по титру антител в слюне с использованием РПГА к дизентерийной группе микробов.
Результаты исследований свидетельствуют о том, что предлагаемый способ отражает уровень местного иммунитета и величину неспецифической гуморальной защиты организма в целом и позволяет определять иммуномодуляторные свойства различных видов косметических средств серии «Карэль»™.
Выявленные результаты исследований свидетельствуют о высокой информативности предлагаемого способа, позволяющего оценить иммуномодуляторные свойства различных видов косметических средств серии «Карэль»™.
Установлено, что предлагаемый способ позволяет оценить как величину местного гуморального иммунитета, так и уровень неспецифической защиты организма к микробам.
Использование РПГА для определения величины титра антител к дизентерийной группе микробов в слюне основано на результатах исследований, в которых нами установлена высокая прямая корреляционная связь между титрами антител слюны к шигеллам Зонне, Ньюкестла и Флекснера. У лиц с низкой исходной величиной титра антител к шигеллам Зонне отмечается невысокий аналогичный показатель в слюне к шигеллам Ньюкестла и Флекснера и, наоборот, у испытуемых с высоким титром антител к шигеллам Зонне определяется высокая концентрация гуморальных факторов в слюне к другим микробам.
Полученные результаты исследований с использованием предлагаемого способа полностью подтверждают выявленный универсальный характер изменения неспецифической защиты организма при лечении больных. Эта универсальность проявляется в том, что независимо от нозологической формы заболевания и способа лечения, в том числе иммуномодуляторами, определяется обратная корреляционная зависимость между исходной величиной неспецифической защиты организма и уровнем ее повышения (В.А.Черешнев, В.П.Рочев, Н.И.Аверьянова. Способ отбора лиц для лечения иммуностимуляторами. Патент №2007722 от 15.02.1994 г.; Черешнев В.А., Рочев В.П., Мозговая Л.А., Черешнева М.В., Фокина Н.Б., Чупракова Е.В., Платова О.А. Оценка неспецифической зашиты организма по определению гуморальных факторов в слюне: методические рекомендации. - Пермь, 1998. - 20 с.).
Полученные данные соответствуют правилу Вильдера или «закону исходного уровня», который состоит в том, что относительное или абсолютное приращение величины того или иного показателя находится в обратной зависимости от его исходного уровня (Васильев Н.В., Коляда Т.И. Закон исходного уровня и влияние иммуномодуляторов на иммунитет. Реабилитация иммунной системы: Тезисы 2-го Международного симпозиума. - Цхалтубо, 1990. - С.15).
Приведенные выше данные свидетельствуют о значительных преимуществах предлагаемого способа в сравнении с прототипом, которые заключаются, прежде всего, в том, что предлагаемый способ отличается простотой исполнения, высокой точностью, экономичностью и безопасностью для обследуемых лиц. В серийных исследованиях для определения иммуномодуляторных свойств косметических средств серии «Карэль»™ требуется не более 3-5 часов, из них на оценку титра антител в слюне до и после воздействия этих средств приходится 15-20 мин на одного испытуемого. Высокая точность исследования - процент ошибки в различных сериях исследований опытов составляет 1-3%, 100% воспроизводимость способа связана с тем, что титр антител в слюне определяется в РПГА с использованием коммерческих антигенных эритроцитарных диагностикумов. Экономичность способа основана на том, что не требуется стерильная посуда, инструменты для взятия крови, дорогостоящие дефицитные препараты, сыворотки к иммуноглобулинам, агары и стерильные условия для постановки опытов. В связи с этим способ можно использовать для определения иммуномодуляторных свойств различных косметических средств серии «Карэль»™ по месту работы, учебы обследуемых.
Дополнительным преимуществом предлагаемого способа является его безопасность для обследуемых лиц, что является очень важным в связи с широким распространением различных инфекций среди населения, в том числе ВИЧ-инфекции.
Осуществление изобретения
Результаты исследований о возможности использования предлагаемого способа для определения иммуномодуляторных свойств косметических средств (на примере средства «Карэль»™), оценки индивидуальной и групповой величины неспецифической защиты организма к микробам, контроля и прогнозирования эффективности оздоровления (лечения) кожи этими средствами изложены в нижеописанных примерах.
Пример 1. Общие условия проведения процесса
Способ осуществляется следующим образом: у обследуемого забирают слюну в пробирку в объеме 0.6-1.5 мл. Затем кожу лица или тела тщательно обрабатывают косметическим средством «Карэль»™, слюну повторно забирают через 30 мин - 1 час после обработки кожи кремом. Слюну дозатором переносят в объеме 0.5 мл в лунку первого ряда планшета для макроварианта постановки РПГА. Добавляют в первую лунку и в последующие лунки по 0.5 мл физиологического раствора и раститровывают дозатором путем последовательного двукратного разведения в объеме 0.5 мл. В каждую лунку приливают по 0.2 мл 1% взвеси эритроцитарного антигенного диагностикума к шигеллам Зонне, Ньюкестла или Флекснера. Планшеты осторожно встряхивают и выдерживают при t 10-20°С 18-24 час, затем оценивают результаты. Титром антител считают максимальное ее разведение, в котором гемагглютинация оценивается не менее чем в три креста, и при тифе антител 1:128 и ниже определяют повышение содержания антител в слюне, и, наоборот, при титрах антител 1:256 и выше реакция не определяется или отмечается снижение титра антител.
Способ предусматривает деление испытуемых лиц на две группы, у лиц первой группы с низким титром антител 1:128 и ниже после воздействия на кожу лица или тела косметическим средством определяют повышение содержания антител в слюне, т.е. иммуномодуляторные свойства, и, наоборот, у второй группы лиц при титрах антител 1:256 и выше реакция не определяется или отмечается нормализация содержания гуморальных факторов иммунитета в слюне.
Пример 2. Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль»™ крема дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи
Исследования иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль»™ крема дневного увлажняющего для кожи лица и шеи проведены со слюной 18 служащих в возрасте от 18 до 61 года до начала и после воздействия на кожу этого косметического средства.
Основным действующим началом крема «Карэль»™ для кожи лица и шеи является сложный комплекс биологически активных веществ экстракта шиповника, сверхкритических углекислотных экстрактов косточки облепихи и зародышей пшеницы. Экстракты, полученные с применением новых инновационных технологий, являются натуральными, экологически чистыми и эффективными компонентами косметического средства. Это активные поливитаминные препараты, в которых содержатся: каротиноиды (α-, β-, γ-каротин, ликопин); витамины Е (α-, β-, γ-, δ-токоферолы и др.); аскорбиновая кислота, витамины группы В (фолиевая кислота, пантотеновая кислота, рибофлавин и др.); флавоноиды (вещества Р-витаминного действия); витамин К (викасол), витамин F (полиненасыщенные жирные кислоты: линолевая, линоленовая); витамин Д, а также углеводы, гликофосфолипиды и фосфолипиды, жирные кислоты, стерины, органические и аминокислоты, дубильные вещества и др.
Благодаря сбалансированному составу крем дневной увлажняющий «Карэль»™ повышает регенерирующие свойства кожи, оказывает противовоспалительное, противотоксическое и антиоксидантное действие, способствует укреплению капилляров, заживлению кожи после ожогов и воспалений, восстановлению барьерных функций эпидермиса и сохранению влаги в коже, улучшает обмен веществ.
Состав средства: вода, масло оливковое, стеарин, глицерин, моноглицериды, цетиариловый спирт, экстракты зародышей пшеницы, облепихи и шиповника, ланолин, триэтаноламин, отдушка и катон.
Показания для применения. Косметический крем «Карэль»™ дневной увлажняющий успешно используется для профилактики увядания (старения) и поддерживания здорового состояния кожи. Это средство легко впитывается в кожу и удобно в применении в течение дня. Крем рекомендуется для сухой, увядающей или нормальной кожи, подвергающейся неблагоприятному воздействию вредных факторов внешней среды.
Противопоказания: индивидуальная непереносимость компонентов крема.
Способ применения: крем наносят тонким слоем на предварительно очищенную, сухую кожу лица и шеи. При этом не остается жирного блеска. Это средство может служить основой для макияжа.
Результаты исследований иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль»™ крема дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи у 18 пациентов отражены в табл.1.
Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль»™ крема дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи
№группы
Число испытуемых
Влияние крема «Карэль»™ дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи на титры антител слюны
до начала воздействия (М±m)
после воздействия
М±m
в % к исходной величине
I
15
<img file="00000001.tif" he="12" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000002.tif" he="12" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
257.33
II
3
<img file="00000003.tif" he="12" wi="32" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000004.tif" he="12" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
120.00
I-II
18
<img file="00000005.tif" he="12" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000006.tif" he="12" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
142.52
Примечание: 1) в числителе отражена средняя величина титра антител слюны (М) и средняя ошибка (±m), в знаменателе - индивидуальные его показатели;
2) *Р<0.05 по сравнению с титром антител слюны до начала воздействия косметического средства «Карэль»™ крема дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи.
Как видно из табл.1, исходная средняя величина титра антител составляет 170.11±66.22, индивидуальные его показатели равняются от 2 до 1024. После воздействия крема дневного увлажняющего «Карэль»™ титр антител повышается до 242.44±132.44, что составляет 142.52% к исходному титру антител. При этом определяется обратная корреляционная зависимость между исходной величиной титра антител и уровнем его повышения под влиянием косметического крема «Карэль»™ дневного увлажняющего для сухой и нормальной кожи. У лиц первой группы с низким исходным титром антител, составляющим 128 и менее, отмечается существенное повышение средней величины титра антител слюны от 33.47 до 86.13±18.77 (257.33% к исходной величине титра антител слюны), и это повышение носит статистически достоверный характер (Р<0.05). И наоборот, у испытуемых второй группы с высоким исходным титром антител, составляющим 256 и выше, наблюдается тенденция к незначительному повышению средней величины титра антител в слюне от 853.33±175.12 до 1024.00±525.36 (120.00% к исходной величине титра антител слюны).
Результаты исследований свидетельствуют о том, что предлагаемый способ отражает уровень местного иммунитета и величину неспецифической гуморальной защиты организма в целом. Использование предлагаемого способа помогло установить, что воздействие на поверхность кожи лица и шеи косметического средства «Карэль»™ крема дневного выявляет его иммуномодуляторные свойства. При этом у лиц с низким тиром антител, составляющим 128 и ниже, определятся существенное статистически достоверное повышение содержания антител в слюне как гуморального фактора иммунитета, как местного, так и общего иммунитета.
Пример 3. Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль»™ крема для рук
Проведены исследования иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль»™ крема для рук со слюной у 15 пациентов в возрасте от 17 до 61 года. Слюну брали до начала и после воздействия на кожу косметического средства «Карэль»™ крема для рук.
Показания к применению. Косметическое средство «Карэль»™ крем для рук используется для ухода за кожей, повышения сопротивляемости кожи рук к неблагоприятным факторам внешней среды, улучшения процесса регенерации, профилактики преждевременного старения и восстановления эластичности кожи.
Состав: вода, масло оливковое, стеарин, глицерин, моноглицериды, цетиариловый спирт, ланолин, воск пчелиный, экстракты облепихи и календулы, триэтаноламин, парфюмерная композиция и катон.
Способ применения: средство наносят тонким слоем на кожу вымытых рук и проводят легкий массаж.
Противопоказания: индивидуальная непереносимость компонентов средства.
Результаты исследований представлены в табл.2.
Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль»™ крема для рук
№ группы
Число испытуемых
Влияние косметического средства «Карэль»™ крема для рук на титры антител слюны
до начала воздействия (М±m)
после воздействия
М±m
в % к исходной величине
I
7
<img file="00000007.tif" he="12" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000008.tif" he="12" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
357.16
II
8
<img file="00000009.tif" he="12" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000010.tif" he="12" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
45.16
I-II
15
<img file="00000011.tif" he="12" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000012.tif" he="12" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
64.26
Примечание: 1) в числителе отражена средняя величина титра антител слюны (М) и средняя ошибка (±m), в знаменателе - индивидуальные его показатели;
2) *Р<0.05 по сравнению с титром антител слюны до начала воздействия косметического средства «Карэль»™ крема для рук.
Как видно из табл.2, у 15 служащих средняя исходная величина титра антител составляет 561.07±151.32, индивидуальные его показатели равняются от 16 до 2048. После воздействия косметического средства «Карэль»™ для рук средняя величина титра антител имеет тенденцию к снижению до 360.53±74.51 (до 64.26% к исходной величине). При этом, как и в примере 1, определяется обратная корреляционная связь между исходной величиной тира антител и уровнем его повышения в слюне: у лиц первой группы с низкой исходной величиной титра антител, равняющейся 128 и ниже, средний показатель составляет 32.00±6.71. Под влиянием воздействия косметического средства «Карэль»™ крема для рук средняя величина титра антител в слюне у них повышается существенно - до 114.29±31.31 (357.16%), и это повышение имеет статистически достоверный характер (Р<0.05). И наоборот, у испытуемых второй группы с высоким исходным титром антител, составляющим 256 и выше, наблюдается тенденция к снижению средней величины титра антител в слюне от 1133.71±222.18 до 512.00±119.03 (45.16% к исходной величине тира антител).
Таким образом, подтверждаются данные исследования, изложенные в примере 2, свидетельствующие об обратной корреляционной связи между исходной величиной титра антител и уровнем его изменения под влиянием косметических средств серии «Карэль»™. У лиц первой группы с низким исходным титром антител, составляющим 128 и менее, отмечается существенное повышение его уровня, и, наоборот, у испытуемых второй группы с высоким исходным титром антител, составляющим 256 и выше, наблюдается тенденция к снижению, реакция не определяется или отмечается несущественное повышение титра антител в слюне.
Результаты исследований свидетельствуют о том, что предлагаемый способ отражает уровень местного иммунитета и величину неспецифической гуморальной защиты организма в целом и позволяет определять иммуномодуляторные свойства различных видов косметических средств серии «Карэль»™.
Пример 4. Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль»™ - крема для тела с охлаждающим эффектом
Показания к применению. Косметическое средство «Карэль»™ крем для тела с охлаждающим эффектом применяется в качестве вспомогательного или профилактического средства при различных заболеваниях и повреждениях костно-мышечной системы. Данное средство используется для восстановления работоспособности людей, занимающихся физическим трудом, особенно лиц пожилого возраста. Механизмы оздоровления с помощью данного средства связаны с нормализацией крово- и лимфообращения в костно-мышечной системе, восстановлением в ней нормального обмена веществ, ускоренным выведением в мышцах продуктов метаболизма, уменьшением или прекращением болей в костно-мышечной системе. Средство обладает антимикробным, противовоспалительным, тонизирующим, улучшающим регенерацию поврежденных тканей, обезболивающим, противозудным, иммуностимулирующим и охлаждающим действием. Особенно показано применение при острых закрытых травмах в первые двое суток.
Состав: масло пихтовое, содержащее эфирное масло, дубильные вещества, аскорбиновую кислоту, каротин, токоферолы и др.;
- масло кедровое и облепиховое, содержащие насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты (витамин F), в т.ч. линолевую, линоленовую; каротиноиды (провитамин А) и токоферолы (витамин Е), стерины, фосфолипиды и др.;
- сверхкритический углекислотный экстракт хвои содержит хлорофилл, β-каротин, терпены, терпеноиды, дубильные вещества, витамины (С, Е, К, Р, группы В, РР), флавоноиды и др.;
- воск пчелиный является комплексной смесью органических веществ, содержит жирные кислоты, витамин А и др.;
- экстракт прополиса содержит: душистую смолу, состоящую из аминокислот, белков, углеводов, бальзаминов и др.; ферменты, витамины, микроэлементы и др.;
- ментол;
- камфора.
Способ применения: средство наносят тонким слоем на чистую сухую кожу легкими массажными движениями.
Противопоказания: индивидуальная непереносимость компонентов средства.
Проведены исследования иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль»™ с охлаждающим эффектом со слюной 17 человек в возрасте от 18 до 60 лет. Результаты исследований введены в табл.3.
Исследование иммуномодуляторных свойств косметического средства «Карэль»™ крема для тела с охлаждающим эффектом
№ группы
Число испытуемых
Влияние косметического средства «Карэль»™<sup></sup>крема для тела с охлаждающим эффектом на титры антител слюны
до начала воздействия (М±m)
после воздействия
М±m
в % к исходной величине
I
13
<img file="00000013.tif" he="12" wi="28" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000014.tif" he="12" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
276.49
II
4
<img file="00000015.tif" he="12" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000016.tif" he="12" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
102.66
1-II
17
<img file="00000017.tif" he="12" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000018.tif" he="12" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
143.01
Примечание: в числителе отражена средняя величина титра антител слюны (М) и средняя ошибка (±m), в знаменателе - индивидуальные его показатели.
Как видно из табл.3, исходная средняя величина титра антител слюны равняется 196.12±69, индивидуальные его показатели колеблются от 2 до 1024. После воздействия косметического средства «Карэль»™ крема для тела с охлаждающим эффектом средняя величина титра антител имеет тенденцию к повышению до 280.47±138 (143.01% к исходной величине). При этом, как и в примерах 2 и 3, определяется обратная корреляционная связь между исходной величиной титра антител и уровнем его повышения в слюне: у лиц первой группы с низкой исходной величиной титра антител, равняющейся 128 и ниже, средний показатель составляет 59.54±10.45. После воздействия на поверхность кожи косметического средства «Карэль»™ с охлаждающим эффектом средняя величина титра антител в слюне повышается очень существенно - до 164.62±84.60 (276.49%). И наоборот, у испытуемых второй группы с высоким исходным титром антител, составляющим 256 и выше, со средней величиной титра антител (640.00±155.34) средний уровень реакции со стороны гуморальных факторов иммунитета слюны носит незначительный характер: средняя величина титра антител после воздействия косметического крема равняется 657.00±159.47 (102.66% к исходной величине титра антител слюны).
Таким образом, полностью подтверждаются данные исследования, изложенные в примерах 2 и 3, свидетельствующие об обратной корреляционной связи между исходной величиной титра антител и уровнем его изменения под влиянием косметических средств серии «Карэль»™. У лиц первой группы с низким исходным титром антител, составляющим 128 и менее, отмечается существенное повышение его уровня, и, наоборот, у испытуемых второй группы с высоким исходным титром антител, составляющим 256 и выше, наблюдается тенденция к снижению, реакция не определяется или отмечается несущественное повышение титра антител в слюне.
С учетом вышеизложенного, предлагаемый способ можно рекомендовать для широкого использования при исследовании иммуномодуляторных свойств различных косметических средств серии «Карэль»™, при исследовании индивидуальной величины гуморального фактора иммунитета и уровня неспецифической защиты организма к микробам, а также в других областях медицины и косметологии.