Диагностические свойства клеточного антигена протосколексов Echinococcus multilocularis

лимфоцитов крови при лечении празиквантелем с ибупрофеном и комплексом витаминов с Se достоверно не отличался от контрольного уровня.

Выводы:

1. Инвазия кошачьими сосальщиками у человека сопровождаются генотоксическим и цитотоксическим эффектами в лимфоцитах периферической крови пациентов, которые характеризуются ростом количества одноцепочечных разрывов, щелочно-лабильных сайтов ядерной ДНК до 5,16 % и апоптотических клеток до 3,4 %.

2. Применение монотерапии празиквантелем для лечения описторхоза приводит к снижению генотоксического эффекта в лимфоцитах крови пациентов, но эти величины достоверно превышают показатели доноров крови. Монотерапия празиквантелем не изменяет высокий уровень апоптотических клеток. Применение для лечения описторхоза празиквантеля с ибупрофеном элиминирует генотоксический эффект инвазии, но не устраняет ее цитотоксический эффект.

3. Наиболее эффективно защиты генома пациентов с описторхозом обладает комбинированное лечение празиквантелем с ибупрофеном и комплексом витаминов С, Е, Р-каротин с Se. Эта схема терапии приводит к снижению уровней первичных повреждений ДНК и апоптотических клеток до показателей доноров крови.

The combined treatment of human Opisthorchis felineus infection with praziquntel, ibuprofen, antioxidant therapy with C, E vitamins and p-carotin with selenium use. Bekish V.J., Zorina V.V., Kuzhel D.C. Vitebsk State Medical University.

Summary. The aim of that study was development of the combined method of O.felineus infection treatment with specific (praziquntel), pathogenetic (ibuprofen) and antioxidant therapy with C, E vitamin and P-carotin with selenium based on damages of lymphocyte DNA of peripheral blood and their apoptosis. It was established that the patients with O.felineus infection had genotoxic and cytotoxic changes in lymphocytes of peripheral blood. The most effective way of genome protection in patients with O.felineus infection was the combined treatment by praziquntel in combination with ibuprofen and complex of vitamin C, E, p-carotin with selenium.

ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА КЛЕТОЧНОГО АНТИГЕНА ПРОТОСКОЛЕКСОВ ECHINOCOCCUS MULTILOCULARIS

БережкоВ.К., КленоваИ.Ф.

ГНУ ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина Россельхозакадемии

Введение. Клеточная инженерия относится к числу перспективных направлений биотехнологии и может успешно использоваться в получении специфических антигенов паразитов диагностической направленности. Хотя работ по культивированию клеток тканей и органов гельминтов немного, тем не менее, имеющиеся научные публикации по этой проблеме свидетельствуют о такой возможности, особенно с клетками цестод.

Так, культивированием изолированных клеток ларвоцист Echinococcus granulosus занималась Л.С. Красюкова (6), которая в культуральной среде реакцией иммунодиффузии в геле выявила четыре антигенных компонента, два из которых не имели подобных в цистной жидкости.

J.J. Fengetal (7) отметили рост зародышевых клеток из вторичных цист E. granulosus от мышей и наличие в экскретах и секретах герминативных клеток антигенов паразита мол. массы 52 и 38 кДа. Антигенную активность авторы регистрировали также НРИФ на поверхности культивируемых клеток. Культивированием клеток цестод и получением антигеноактивных продуктов занимались В.К. Бережко, А.С. Бессонов (1); В.К. Бережко, И.Ф. Кленова (2); И.Г. Гламаздин (3); И.Ф. Кленова (5). Преимуществом клеточной технологии является то, что культуры клеток можно приготовить из различных антигеноактивных органов и тканей паразитов и длительное время сохранять их в функциональном состоянии в питательных средах путем пассирования.

Цель настоящей работы - получить клеточный антиген из протосколексов E. multilocularis и оценить его диагностическую эффективность.

Материалы и методы. Материалом исследований служили вторичныеларвоцисты E. multilocularis, выделенные от крысы-донора. Клеточные культуры из протосколексов паразита готовили в стерильном боксе в ламинаре с вертикальным потоком воздуха по методу В.К. Бережко, А.С. Бессонова (1) и И.Ф. Кленовой (5).

Культивирование проводили в СО2-инкубаторе фирмы “Heraeus” с заданными параметрами температуры (37°С) и газовой среды (СО2 - 5%, О2 -95%) при 70%-ной влажности в питательной среде RPMI-1640. Отбор клеточных метаболитов проводили в период формирования монослоя (7 -10 дней), после чего культуру клеток пересевали в новую порцию среды, подогретой до 37°С. Используя сыворотки больных альвеолярной формой эхинококкоза (положительный контроль) и сыворотки пациентов-доноров (отрицательный контроль), проводили ИФР отбор антигеноактивных серий клеточных метаболитов. Наличие антигенов паразита в метаболитах культивируемых клеток подтверждали реакцией иммунодиффузии (РИД) в геле по методике А.И. Гусева и В.С. Цветкова (4). Отобранные серии клеточных метаболитов, содержащие антигены паразита, объединяли и, полученный клеточный антиген проверяли на диагностическую эффективность с 85 сыворотками пациентов, в том числе 5 проб с подтвержденным диагнозом

альвеолярного эхинококкоза; 35 -цистного эхинококкоза; 10 - токсокароза“1агуа migrans” и 35 - условно здоровых.

Результаты и обсуждение. Иммуноферментным анализом с

положительными и отрицательными контрольными сыворотками отобрали 14 серий клеточных метаболитов протосколексов E. multilocularis, имеющих в своем составе антигены паразита. Критерием отбора была разница в оптической плотности (не менее 1,5 раза) между контрольными сыворотками. Иммунопреципитационным методом на основе РИД с использованием сывороток крови человека с подтвержденным диагнозом альвеолярного эхинококкоза и сывороток крови мышей, экспериментально зараженных E. multilocularis, подтвердили наличие в отобранных клеточных метаболитах не менее 2-3 антигенных компонентов, идентичных функциональным антигенам паразита. Все антигеноактивные серии клеточных метаболитов объединили в клеточный антиген, диагностическую эффективность которого оценили в ИФР с 85 сыворотками пациентов с известным гельминтологическим статусом (таблица).

Таблица

Оценка диагностической эффективности клеточного антигена протосколексов Echinococcus multilocularis

'с % Сыворотки больных пациентов и условно здоровых Кол-во проб Результаты иммуно ферментной реакции

И1ЧНЧ1ГЭ1ИЖ01Г0Ц Отрицательный Чувствительность, % Специфичность, %

1. Альвеококкоз 5 5 - 100 82,2

2. Эхинококкоз 35 28 7 80

3. Т оксокароз“1агуат igrans” 10 2 8

4. Условно здоровые 35 6 29

Анализ полученных результатов показал 100%-ную чувствительность иммунотеста при альвеолярном эхинококкозе. Однако, учитывая малочисленное количество (5 проб) пациентов с этой инвазией, полученный результат нельзя

считать объективным в характеристике диагностических качеств клеточного антигена. Тем не менее, данные могут служить основанием для дальнейших иммунодиагностических исследований с этим антигеном. Довольно большой процент

Заключение. На основании полученных данных можно сделать заключение, что клеточный антиген из протосколексов E. multilocularis можно использовать в сероэпидемиологических и сероэпизоотологических

исследованиях при цистном и альвеолярном эхинококкозе. Для дифференциальной серологической диагностики этих инвазий желательно исследования проводить с антигенами обоих видов паразитов и оценивать по степени проявления иммунореакции в гомологичной и гетерологичной системе.

Литература: 1. Бережко В.К., Бессонов А.С.//Труды Всес. ин-та

гельминтол. - 1996. - Т. 32. - С. 18-22. 2. Бережко В.К., Кленова И.Ф. //Труды Всеросс. ин-та гельминтол. - 1999. - Т. 35. - С. 39-45. 3. Гламаздин И.Г. //Актуальные проблемы ветсанконтроля сельскохозяйственной продукции. - М.

- МГУПБ - 1997. 4. Гусев А.И., Цветков В.С. // Лабор. дело. - 1961. - №2. - С. 43. 5. Кленова И.Ф. //Труды Всеросс. ин-та гельминтол. - 1997. - Т. 33. - С. 8993. 6. Красюкова Л.С. // Дис. канд. биол. наук. - М. - 1987. 7. Feng J.J., Wang J.Y., Qu J.A., Xiao S.H. Chin J.// Parasitol and Parasit Diseases. - 1993. - v. 11, N 1.

- P. 63-65. 8. Gottstein B., Eckert J., Fey H. // Z. Parasitenc. - 1983. - v. 69, N3. - p. 347-356. 9. Leykina E.S., Dalin M.V., Ballad N.E. et al. //Helmintologia. - 1981. - v. 18. - P. 273-280.

Diagnostic properties of Echinococcus multilocularis protoscolices cell antigen. Bereahko V.K., Klenova I.F. All-Russian K.I. Skryabin Scientific Research Institute of Helminthology.

Summary. One represented the main results of evaluation of diagnostic efficacy of E. multilocularis protoscolices cell antigen in immunoezymatic assay (IEA) of ELISA type at alveolar echimococcosis. The cell antigen may be defined as metabolites of the protoscolices cultured cells of a parasite in artificial growth medium RPMI-1640.

The IEA sensitivity appeared to be 100% as while the specificity value was 82,2% with out account of the results of reaction with sera of patients with cystic echinococcosis.

ВЗАИМОСВЯЗЬ ЭПИЗООТОЛОГИИ ЭХИНОКОККОЗА ОВЕЦ И СОБАК С УЧЕТОМ ВЕРТИКАЛЬНОЙ ПОЯСНОСТИ СЕВЕРНОГО КАВКАЗА

*Берсанукаева Р.Б., Шахбиев И.Х., Тохаева А.И., ***Тхакахова А.А., *Шахбиев Х.Х., *Мантаева C. Ш., **Белиев С-М. М.

*ФГБОУ ВПО Чеченский государственный университет **ГКУ Курчалойская станция по борьбе с болезнями животных ФГБОУ ВПО Кабардино-Балкарский государственный аграрный университет им. В.М. Кокова ***ГНУ ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина Россельхозакадемии

Введение. Биологический цикл развития Echinococcus granulosus у овец и собак в современных условиях характеризуется качественным своеобразием с активизацией механизмов передачи возбудителя инвазии, что привело к формированию активных штаммов [1]. В этом аспекте уже определены активно функционирующие циклы E. granulosusв разных регионах СНГ, установлены различия свиного, бычьего, овечьего и верблюжьего штаммов E. granulosus по срокам развития у дефинитивного хозяина (собаки), особенностям развития вторичных ларвоцист у лабораторных мышей, морфологии личинок и взрослых форм паразита [3]. При этом в регионе Северного Кавказа до настоящего времени нет убедительных данных о взаимосвязи эпизоотологии эхинококкоза овец и собак с учетом вертикальной поясности и фертильности штаммов E. granulosus у овец.

Материалы и методы. Эпизоотический процесс эхинококкоза овец изучали на основании полных гельминтологических вскрытий (К.И. Скрябин, 1928) печени, легких и других паренхиматозных органов овец при подворном убое. Для подсчета количества онкосфер в мл эхинококковой жидкости с целью определения фертильности штаммов E. granulosus использовали счетную камеру ВИГИС (1987). Отпрепарированных и собранных при вскрытии печени, легких и др. органов ларвоцист от каждой овцы подсчитывали и определяли среднюю интенсивность инвазии, а также рассчитывали экстенсивность инвазии. Вскрытию подвергали комплекты внутренних органов (за исключением желудочно-кишечного тракта) 600 овец и 30-ти безнадзорных собак. Результаты обработали статистически с расчетом средних величин количества цист эхинококков, обнаруженных у одного животного.