Характеристика антигенной экспрессии острого промиелоцитарного лейкоза в Азербайджане

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Характеристика антигенной экспрессии острого промиелоцитарного лейкоза в Азербайджане

Р.А. Алиева, Ф.М. Ахундова, Р.К. Таги-заде, А.А. Керимов,

Г.В. Ибрагимова, Э.Г.Гаджиев

НИИ Гематологии и Трансфузиологии им.Б.Ейвазова г.Баку, Азербайджан

Острый промиелоцитарный лейкоз- ОПЛ (М3 по FAB-классификации)- вариант острого миелоидного лейкоза, при котором блок дифференцировки бластных клеток происходит на стадии промиелоцитов, на его долю приходится не более 10% среди всех острых нелимфобластных лейкозов [1]. ОПЛ является четко-очерченной нозологической формой, характеризуемой типичной морфологией клеток, тяжелым геморрагическим синдромом, ДВС синдромом, избыточно активированным фибринолизом. При данной форме острого лейкоза ген a-рецептора ре-тиноевой кислоты (RARA) на (17q12) соединяется с геном ядерного регуляторного фактора (PML, ген промиелоцитарного лейкоза) на (15q22), что приводит к образова- нию слитного гена PML-RARA [2]. Открытие феномена дифференцировки бластных клеток ОПЛ под влиянием дериватов ретиное-вой кислоты (ATRA) значительным образом повлияло на исходы лечения данного варианта лейкозов. В связи с этим необходима точная верификация диагноза ОПЛ. Диагностика ОПЛ основывается на морфологическое, цитохимическое, иммунофенотипиче-ское и генетическое исследования, при этом следует отметить,что ни один из них не яв-

ляется ключевым. Существуют два морфологических варианта ОПЛ. При типичном М3, на долю которого приходится 75-85% всех случаев, бласты с цитоплазмой голубого цвета с грубой, обильной, полиморфной азурофильной зернистостью, гранулы варьируют по величине, форме, крупные могут сливаться, образуя палочки Ауэра. Количество бластов с зернистостью составляет не менее 40% [3].

В 15-25% случаев встречается так называемый вариантный М3 (M3v- variant) с нетипичной морфологией бластных клеток, при котором зернистость в цитоплазме представлена очень мелкими гранулами, различимыми только с помощью электронной микроскопии, палочек Ауэра немного и они не образуют пучков. Такая морфология нередко является причиной трудностей, а иногда и ошибок в диагнозе и в таком случае правильный диагноз можно поставить основываясь на результаты иммунофенотипиче-ского и цитогенетического методов. Имму-нофенотип бластных клеток М3-варианта острого миелоидного лейкоза ассоциируется с выраженной экспрессией миелоидных антигенов- миелопероксидаза, CD13, CD33, CD65. Для гипер- и гипогранулярного вари-

антов острого промиелоцитарного лейкоза характерны низкий уровень экспрессии CD34 и отсутствие HLA-DR-антигена. Бласт-ные клетки при ОПЛ часто экспрессируют Т-линейные маркеры CD2, CD9, CD4 [5].

ЦЕЛЬЮ нашего исследования явилась проточно-цитометрическая характеристика острого промиелоцитарного лейкоза в Азербайджане.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Нами было проанализировано 40 больных c диагнозом ОПЛ. Среди больных было 22(55%) мужчин и 18(45%) женщин. Медиана возраста составила 55 лет (диапазон 18-75 лет).Исследование проводилось на 3х лазерном проточном цитометре FACS CANTO II(Beckton Discinson,США),с использованием моноклональных антител меченых разными флюорохромами (FITC, PE, Pecy7, APC, APCcy7, PerCP, Violet) к поверхностным и внутриклеточным дифферен-цировочным антигенам лимфоидного и мие-лоидного рядов : Миелоидные и моноцитар-ные: CD117, CD13, CD33, CD15, MPO, CD14, CD64, CD11B,CD11C;

Лимфоидный: В-клеточные: CD19, CD22, CD79a, CD10;

Т-клеточные: CD2, CD3, CD5, CD7, CD9, CD4, CD8, CD1a;

Мегакариоцитарные: CD41, CD61;

Эритроидные: Gly,CD71

Материалом служили образцы костного мозга и периферической крови больных, стандартно стабилизированные К2 EDTA. Окраску клеток моноклональными антителами производили с использованием лизи-рования с последующей отмывкой клеток. Положительной- считали экспрессию маркера более чем на 20% клеток.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ. Нами было проанализировано 40 случаев ОПЛ, из которых 22 мужчин и 18 женщин. Первым шагом в цитометрической диагностике ОПЛ является селективное гейтирова-ние по панлейкоцитарному маркеру CD45. Гейтирование по гистограмме SSC/CD45 является удобным средством идентификации патологических клеток. При анализе гистограммы параметров прямого и бокового светорассеяния (FSC/SSC), отражающей физические характеристики размера и грануляр-

ности клеток для гипергранулярного варианта ОПЛ характерно распределение клеточных элементов в повышенных значениях гранулярности, и как правило клетки имеют иммунофенотип CD34+/-, Hladr+/-dim, CD117+/-dim, CD13+, CD33+, CD64+/-, CD15-/+dim, CD9+ Наряду с миелоидными маркерами бластные клетки при ОПЛ нередко экспрессируют Т-линейные маркеры CD2, CD9, CD4 [4]. Для гипогранулярного варианта ОПЛ распределение атипичных промиелоцитов в пониженных значениях гранулярности (SSC low) и имеют фенотип CD34+/-, Hladr+/-dim, CD117+/-dim, CD13+, CD33+, CD64+/-, CD15-/+dim, CD2+/-, CD9+.

Принимая во внимание фенотипические характеристики клеток миелоидного ряда, представляется возможным дифференцировать их на разных этапах созревания. Так фенотипический профиль (CD34+HLADR +CD117+CD13high+CD33high+)- характерен для миело/монобластов, (CD117+CD13high+ CD33high +CD15+)- для промиелоцитов, (CD13dim+CD33dim+CD15+ CD11b+) - для миелоцитов, (CD13+CD33dim +CD15+ CD11b +CD16+)- для метамиелоцитов, (CD13high +CD33 +CD15+ CD11bhigh+ CD16high)- для нейтрофилов. Из вышеизложен- ного ясно, что экспрессия CD11b характерна для терминальной стадии дифференцировки клеток миелоидного ряда и не встречается на нормальных миелобластах и промиелоцитах. Также следует подчеркнуть маркер HLADR, который экспрессируется на нормальных миелобластах и исчезает на стадии диффе-ренцировки промиелоцитов. Отсутствие экспрессии HLADR и CD11B, CD11C дает возможность детекции промиелоцитов и является ключевым моментом в цитометриче-ской диагностике ОПЛ. Кроме того, исследование экспрессии HLADR, CD11B, CD11C важно для дифференцировки ОПЛ и острого монобластного лейкоза, которому характерен фенотипический профиль- (HLADR+ /CD11b+/-/CD11C+)[5]. Экспрессия CD64 характерна и для ОПЛ и для острого моно-бластного лейкоза, но как правило для ОПЛ характерна умеренная экспрессия CD64dim, а для монобластного варианта яркая эл-спрессия CD64 bright. Следует отметить, что 100% исследованных нами случаев были по-

зитивными для СБ33,СБ13 и СБ9, в 53% случаев выявлялась экспрессия СБ64, в 46.6% случаях экспрессировался СБ2( рис.1). Результаты экспрессии маркеров представлены в таблице 1.

Коэкспрессия СБ2 и СБ34 ассоциировалась с микрогранулярным вариантом ОПЛ . Следовательно, одновременная экспрессия СБ2, СБ34, СБ9 с другими диагностически важными маркерами позволяет использовать этот критерий для дифференциальной диагностики ОМЛ М3v с другими вариантами острых лейкозов.

А

На дот-плоте (А) бокового светорассеяния и СБ45 гейтирована бластная популяция. На дот-плоте (В) в квадранте Q2-1 показаны клетки одновременно позитивные по двум антигенам СБ13 и СБ33. На дот-плоте (С) в квадранте квадранте Q2-1 показаны клетки одновременно позитивные по двум антигенам СБ13 и СБ9. На дот-плоте (Б) прослеживается позитивная экспрессия 117 и слабая экспрессия 11Ь. На дот-плоте (Е): негативная экспрессия СБ34 и НЬАБК

В

л

О О.

у

Фо а. с.

л

л

СеЬгауНоуа Зеууаге-ТиЬе_001

: " .  . к .сгмч"

дз-1- Ус. 1.. ' . ..  . 04-1 " "

10

10 10 С013РЕ-А

ю

С

Б

<'о

Ш 0.

л

о 5-

, 41-1  т

^у'-Гп,.;^.^ .!  .... -

10 10 10 10 С013 РЕ-Су7-А

ш -0_ -О

ч—

"7 СП

=-

О

'  - ? ; V - 1 -Г""1, ЧЁ^ШЯ ^щшш   -  . ч; ч^ЙЧЖ РВЕЯНЯ!; Г V •

10

10 10 С0117 АРС-А

ю

Е

Cebravilova Sevvare-Tube 005

; .' Q2..

iiiiiP'

. - 'j. - • f • "  . *

102 юг m4 io5

HLA-DR PerCP-Cy5-5-A

Рис. 1. Проточно-цитометрический анализ образца костного мозга больного ОМЛ М3v

с коэкспрессией СD9

Следует отметить, что иммунофенотипиче- могут быть оценены как независимый пара-

ский профиль ОПЛ не зависит от основной метр для диагностики ОПЛ, даже если цито-

цитогенетической аномалии t (15;17) ^2; генетические результаты отрицательные[6]. q21), и результаты проточной цитометрии

Таблица 1.Иммунофенотипический профиль ОПЛ

Маркер Чатота встречаемости (%) Вариант экспрессии

CD2 46.6 dim

CD4 13.3 dim

CD7 0.5

CD9 100 Moderate to bright

CD11b 0

CD11C 0

CD13 100 Dim to moderate

CD14 0

CD15 13 dim

CD19 2.5

CD33 100 Moderate to bright

CD34 33.3

CD45 100 moderate

CD64 53 Dim to moderate

CD117 100 Moderate

Hladr 0.5

Бластные клетки ОПЛ имеют уникальный иммунофенотипичекий профиль, благодаря чему все случаи ОПЛ могут быть распознаны с помощью проточно- цитомет рического анализа. Следовательно, иммунофенотипи-рование бластных клеток ОПЛ имеет неоть-емлимое значение при первичной диагностике, при определении остаточной болезни в период ремиссии и при рецидиве заболевания. ЛИТЕРАТУРА

1.Vardiman J.W., Thiele J., Arber D A. et al. The 2008 revision of the World Health Organization (WHO) classification of myeloid ne plasms and acute leukemia: rationale and important changes//Blood,2009,vol.114,p.937-951.

2. Golomb H.M., Rowley J., Vardiman J. et al. Partial deletion of long arm of chromosome 17: a specific abnormality in acute promyelocyte leukemia // Arch Intern Med., 1976, vol.136, p.825-8.

3. Kantarjan H.M., Keating M.J., Walters R.S. et al. Acute promyelocytic leukemia: MD

Anderson Hospital experience // Am J Med., 1986, vol.80, p.789-97.

4.Хороших О.В., Белохвостикова Т.С., Мусинцева Я.А., Киселева Н.В. Опыт лабораторной диагностики острых лей- козов на территории Иркутской области методом проточ- ной цитофлуориметрии // Сибирский медицинский журнал (Иркутск), 2010, №6, c.257-259.

5.Ihsan M.O., Amira A.K. Humeida O.E. at al. Flowcytometric immunophenotypic Characterization of Acute Miyeloid Leukemia in Sudan // International Journal of Hematological Disorders, 2015, vol.2, No.I, p.10-17.

6. Rowley J., Golomb H.M., Dougherty C. 15/17 translocation: a consistent chromosomal change in acute promyelocytic leukemia // Lancet, 1977, N1, p.549-50. Summary

Characterization of antigen expression of acute promyelocytic leukemia in Azerbaijan. R-А. Аliyеva, F-М. Аkhundova, R-К. Tagi-zade, А.А. Kerimov, G.V.Ibragimova

The retrospective research of the 40 cases of acute promyelocytic leukemia (APL) has been conducted. Submitted phenotypic characterization of APL. Studied the frequency of occurence of lymphoid antigens in APL.

_Поступила: 26.04.2016

О хирургическом аспекте клинического значения инфекции, вызванной вирусом гепатита С, у больных раком молочной железы

Как известно, важнейшее место среди методов радикального лечения больных раком молочной железы (РМЖ) до настоящего времени занимает хирургическое вмешательство, которое применяется во всех случаях местнораспространенного поражения этого органа [1].

Тот факт, что более 8% обследованных нами больных РМЖ, находившихся в стационаре Национального центра онкологии в г.Баку, оказались инфицированными вирусом гепатита С (ВГС) [2], предопределил наш интерес к этой инфекции, как к потенциальному фактору, способному ограничивать возможности применения хирургического метода лечения этих больных.

Появление интереса к данному вопросу связано с тем, что ранее мы исследовали способность выступать в такой же роли у больных РМЖ инфекции, вызванной вирусом гепатита В. В нашем наблюдении, также в свое время проведенном в Национальном центре онкологии в г.Баку, было

С.Э.Рагимзаде, ТЛ.Мамедова

Национальный центр онкологии, г.Баку

показано, что при определенных ситуациях и формах течения указанная инфекция способна выступать в качестве фактора, так или иначе, ограничивающего возможности хирургического лечения данного контингента онкологических больных [3, 4].

Предполагая, что наличие у этих больных ВГС-инфекции также может выступать в качестве фактора, способного ограничивать возможности хирургического лечения этих больных (выступать в роли противопоказания к проведению вмешательства или негативно влиять на течение послеоперационного периода лечения), то инфицированные ВГС пациенты, подлежащие лечению хирургическими методами должны быть выделены в особую клиническую группу.

Детализируя данный аспект этой проблемы, следует отметить, что хирургическое вмешательство, сопровождающееся нарушением целостности не только покровных, но и глубоких тканей, само по себе, является, агрессивным воздействием на организм.