Взаимодействия нейтрофил-эндотелиоцит при сепсисе различного генеза и степени тяжести

ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ НЕЙТРОФИЛ-ЭНДОТЕЛИОЦИТ

ПРИ СЕПСИСЕ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА И СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ

Большакова Е.В., Салмина А.Б., Малиновская Н.А.

Красноярская государственная медицинская академия,

кафедра биохимии с курсами медицинской, фармацевтической и токсикологической химии, г. Красноярск

Эндотелиальной дисфункции отводится важная роль в механизмах запуска развернутого системного воспалительного ответа (SIRS), который отражает системные изменения в организме при воспалении и возникает после перенесенных оперативных вмешательств, а также является одним из диагностических критериев сепсиса. В последнее время акцент в изучении эндотелиальной дисфункции перенесен на оценку роли межклеточных взаимодействий. В частности, стал активно изучаться механизм взаимодействия нейтрофилов периферической крови и клеток эндотелия. Объектом исследования являлась венозная периферическая кровь пациентов с сепсисом. Пациенты были разделены на 2 группы, в зависимости от тяжести процесса. Критерием включения являлась реаниматологическая шкала тяжести состояния больных APACHE II, первая группа сравнения включала 10 больных с 1-10 баллами по APACHE II (легкий сепсис), вторая группа сравнения включала 10 больных с 11-25 баллами по APACHE II (тяжелый сепсис). Контрольная группа состояла из 20 человек, не имеющих в анамнезе ИБС, ГБ. Нейтрофилы выделяли из цельной гепаринизированной периферической крови с использованием четырехступенчатого градиента плотности фиколл-верографин. Нейтрофилы в концентрации использовали для детекции апоптоза с помощью системы Annexin-V Apoptosis Detection Kit (Caltag, USA). Определяли 4 популяции клеток: жизнеспособные; апоптотические; клетки в состоянии вторичного некроза; и собственно некротические клетки (расчет проводили на 100 клеток). Экспрессию CD31 на нейтрофилах периферической крови определяли иммуноцитохимическим методом с использованием моноклональных антител (anti-CD31, FITC-меченные, Caltag, USA). Функциональную активность митохондрий нейтрофилов измеряли, определяя их мембранный потенциал с помощью флуоресцентного зонда Rhodamine-123. Детекцию флуоресценции осуществляли с использованием спектрофлуориметра СМ 2203 (“SOLAR”, Беларусь). В настоящем исследовании количество жизнеспособных нейтрофилов периферической крови достоверно снижалось при тяжелом - 72,4±2,31% и легком сепсисе 75±0,86% (p<0,001). Количество апоптотических клеток было достоверно выше при легком сепсисе (16,1±0,6%), чем в контрольной - 13,4±1,3%; (p<0,001), а при тяжелом - достоверно снижалось (9,2±1,4%) (p<0,01). Число некротизированных клеток при легком (8±0,86%) и тяжелом (17,1±3,2%) сепсисе достоверно возрастало в сравнении с контролем (6,95±1,06%) (p<0,001). Количество клеток, находившихся в состоянии вторичного некроза в группах сравнения с сепсисом различной степени тяжести достоверно падало по сравнению с контролем (1,3±0,42% при тяжелом и 0,9±0,3% при легком сепсисе против контроля - 2,8±0,4%) (p<0,01). Определяя функциональную активность митохондрий нейтрофилов мы обнаружили достоверное (p<0,001) уменьшение мембранного потенциала при сепсисе различной степени тяжести (0,45±0,12 усл. ед. при тяжелом и 0,47±0,14 усл. ед. при легком сепсисе) относительно контрольной группы (0,61±0,04 усл. ед.). Количество клеток, экспрессирующих CD31, было достоверно выше при легком сепсисе (18,4±1,01%) относительно контрольной группы (16,7 ± 0,96%); (p<0,001). В группе с тяжелым сепсисом наблюдалось незначительное снижение CD31+ нейтрофилов в сравнении с контролем (16,2 ±1,23%). Таким образом, анализ результатов позволяет нам сделать следующие выводы: 1) при легком сепсисе достоверно увеличивается экспрессия CD31 нейтрофилами периферической крови, что сопровождается увеличением интенсивности апоптоза нейтрофилов периферической крови; 2) между экспрессией CD31 и некрозом нейтрофилов при легком сепсисе существует умеренная положительная корреляционная связь, таким образом, экспрессия CD31 может запускать оба вида клеточной гибели; 3) нейтрофилы периферической крови гибнут митохондрия-зависимым апоптозом; 4) у пациентов с тяжелым сепсисом экспрессия CD31 на нейтрофилах периферической крови снижается, что сопровождается дизрегуляциейй процессов их клеточной гибели (инициация некроза и торможение апоптоза).

ЛИТЕРАТУРА

1. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2007. Т. 9. № 4.

2. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2006. Т. 8. № 4.

3. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2005. Т. 7. № 4.

4. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2004. Т. 6. № 4.

5. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2003. Т. 5. № 4.

6. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2002. Т. 4. № 4.

7. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2001. Т. 3. № 4.

8. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2000. Т. 2. № 4.

9. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2007. Т. 9. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.

10. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2006. Т. 8. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.

11. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2005. Т. 7. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.

Материалы IX международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва

12. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2004. Т. 6. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.

13. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2003. Т. 5. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.

14. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2002. Т. 4. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.

15. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2001. Т. 3. № 1. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.

16. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2000. Т. 2. № 1. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.

МатериалыIIX международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва