АНАЛИЗ БЕЛКА

1. Способ определения активности, или функциональности, или первого реактивного компонента, или второго реактивного компонента в не вступившей в реакцию смеси первого реактивного компонента и второго реактивного компонента, включающий стадии
(а) обратимого ингибирования первого реактивного компонента для получения смеси, содержащей инактивированные первый реактивный компонент и второй реактивный компонент;
(b) добавления к смеси известного количества второго реактивного компонента при оценке активности первого реактивного компонента, или известного количества первого реактивного компонента при оценке активности второго реактивного компонента;
(с) обратимой активации первого реактивного компонента;
(d) предоставления возможности первому реактивному компоненту взаимодействовать со вторым реактивным компонентом, первоначально присутствующим в смеси, с известным количеством второго реактивного компонента, или предоставления возможности первому реактивному компоненту взаимодействовать со вторым реактивным компонентом, первоначально присутствующим в смеси, с известным количеством первого реактивного компонента; и
(е) определения активности или функциональности первого или второго реактивного компонента, первоначально присутствовавшего в сухой смеси.
2. Способ по п.1, где первый реактивный компонент представляет собой тромбин, а второй реактивный компонент представляет собой фибриноген.
3. Способ по п.2, где тромбин является рекомбинантным или полученным из животного или человеческого источника, и фибриноген является рекомбинантным или полученным из животного или человеческого источника.
4. Способ по п.2, где стадии (b) и (c) выполняются одновременно.
5. Способ по п.4, где смесь представлена в форме порошка, и стадия обратимого ингибирования первого реактивного компонента включает растворение смеси первого реактивного компонента и второго реактивного компонента в ингибиторном или первом растворе, имеющем рН в диапазоне от 8,5 до 11,5.
6. Способ по п.5, где ингибиторный или первый раствор имеет рН от 9,5 до 10,5.
7. Способ по п.6, где ингибиторный или первый раствор имеет рН 10.
8. Способ по п.5, где ингибиторный или первый раствор включает щелочной раствор, по меньшей мере, одного компонента, выбранного из группы, состоящей из карбоната, TRIS (Tris(гидроксиметил)аминометана)основания, бората, глицина, фосфата, метиламина, 2-(циклогексиламино)этансульфоновой кислоты (CHES), 3-(циклогексиламино)-1-пропансульфоновой кислоты (CAPS) или 3-(циклогексиламино)-2-гидрокси-1-пропансульфоновой кислоты (CAPSO).
9. Способ по п.8, где известное количество второго реактивного компонента содержится во втором растворе, который способен снизить рН ингибиторного или первого раствора, содержащего инактивированный первый реактивный компонент и второй реактивный компонент, до уровня от примерно 6,0 до менее чем 8,5.
10. Способ по п.9, где известное количество второго реактивного компонента содержится во втором растворе, который способен снизить рН ингибиторного или первого раствора, содержащего инактивированный первый реактивный компонент и второй реактивный компонент, до уровня от примерно 7,0 до менее чем 8,5.
11. Способ по п.10, где известное количество второго реактивного компонента содержится во втором растворе, который способен снизить рН ингибиторного или первого раствора, содержащего инактивированный первый реактивный компонент и второй реактивный компонент, до уровня примерно 7,5.
12. Способ по п.9, где второй раствор способен снизить рН ингибиторного или первого раствора, представляет собой раствор, по меньшей мере, одного компонента, выбранного из группы, состоящей из TRIS-HCl, имидазола, 4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этансульфоновой кислоты (HEPES), фосфата, барбитала, 4-морфолинпропансульфоновой кислоты (MOPS), 3-морфолин-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (MOPSO), 1,4-пиперазиндиэтансульфоновой кислоты (PIPES), N,N-бис(2-гидроксиэтил)-2-аминэтансульфонвой кислоты (BES), цитрата или карбоната.
13. Способ по п.12, где второй раствор способен снизить рН ингибиторного или первого раствора, включает от 25 до 500 мМ буфера TRIS-HCl.
14. Способ по п.13, где второй раствор способен снизить рН ингибиторного или первого раствора, включает от 100 до 150 мМ буфера TRIS-HCl.
15. Способ по п.9, где известное избыточное количество второго реактивного компонента добавляется к ингибиторному или первому раствору, имеющему первый реактивный компонент и второй реактивный компонент, на стадии (b).
16. Способ по п.2, где стадия (b) включает добавление второго раствора, имеющего известное количество второго реактивного компонента, к ингибиторному или первому раствору, имеющему инактивированный первый реактивный компонент и второй реактивный компонент, для формирования третьего раствора, имеющего рН в диапазоне от 8,5 до 11,5.
17. Способ по п.16, где стадия (с) обратимой активации первого реактивного компонента включает доведение рН третьего раствора до уровня примерно от 6,0 до 8,5.
18. Способ по п.9, где активность или функциональность первого или второго реактивного компонента, первоначально присутствующего в смеси, определяется кинетическим анализом свертывания, который измеряет время свертывания, и время свертывания коррелируется с известными видами активности или функциональности первого или второго активного компонента.
19. Способ по п.18, где активность или функциональность первого или второго реактивного компонента переводится в единицы активности или функциональное количество.
20. Способ по п.9, где активность или функциональность первого или второго реактивного компонента, первоначально присутствующего в смеси, определяется с использованием турбидиметрии, нефелометрии, или вискозиметрии, или механического способа анализа граничной точки.
21. Способ по п.2, где смесь первого реактивного компонента и второго реактивного компонента в форме порошка находится на подложке, и стадия (b) проводится помещением подложки, имеющей смесь инактивированного первого реактивного компонента и второго реактивного компонента, во второй раствор, имеющий известное количество второго реактивного компонента.
22. Способ по п.2, где смесь первого реактивного компонента и второго реактивного компонента представляет собой неводную суспензию.
23. Способ по п.22, где неводная суспензия включает спирт, тромбин и фибриноген.
24. Способ по п.23, где спирт представляет собой этанол.
25. Способ определения функциональности фибриногена в не вступившей в реакцию смеси тромбина и фибриногена, включающий стадии
(а) ингибирования тромбина для получения смеси, содержащей инактивированный тромбин и фибриноген, растворением смеси тромбина и фибриногена в ингибиторном или первом растворе, имеющем рН в диапазоне от 8,5 до 11,5;
(b) добавления к смеси известного количества тромбина во втором растворе, который способен снизить рН ингибиторного или первого раствора, имеющего инактивированный первый реактивный компонент и второй реактивный компонент, от примерно 6,0 до менее чем 8,5;
(с) предоставления возможности тромбину взаимодействовать с фибриногеном; и
(d) определения функциональности фибриногена, первоначально присутствовавшего в смеси.
26. Способ по п.25, где стадия ингибирования первого реактивного компонента, кроме того, включает добавление ингибитора тромбина.
27. Способ по п.26, где ингибитор тромбина выбран из группы, состоящей из антитромбина, гепарина, гепарина низкой молекулярной массы, аналогов гепарина низкой молекулярной массы, аргатробана, мелагатрана, эфегатрана, иногатрана, дабигатрана, бивалирудина, гирудана и производных гирудана, таких как лепирудин и десирудин.
28. Способ определения функциональности фибриногена в не вступившей в реакцию смеси тромбина и фибриногена, включающий стадии
(а) ингибирования тромбина для получения смеси, содержащей инактивированный тромбин и фибриноген, растворением смеси тромбина и фибриногена в ингибиторном или первом растворе, имеющем рН в диапазоне от 8,5 до 11,5;
(b) добавления к смеси известного количества подобного тромбину фермента и, необязательно, снижения рН ингибиторного или первого раствора, имеющего инактивированный первый реактивный компонент и второй реактивный компонент, до уровня от примерно 6,0 до менее чем 8,5;
(с) предоставления возможности подобному тромбину ферменту взаимодействовать с фибриногеном; и
(d) определения функциональности фибриногена, первоначально присутствовавшего в смеси.
29. Способ по п.28, где стадия ингибирования первого функционального компонента, кроме того, включает добавление ингибитора тромбина.
30. Способ по п.28, где ингибитор тромбина выбран из группы, состоящей из антитромбина, гепарина, гепарина низкой молекулярной массы, аналогов гепарина низкой молекулярной массы, аргатробана, мелагатрана, эфегатрана, иногатрана, дабигатрана, бивалирудина, гирудана и производных гирудана, таких как лепирудин и десирудин.
31. Способ по п.28, где подобный тромбину фермент представляет собой батроксобин или анкрод.
32. Способ определения активности тромбина в не вступившей в реакцию смеси тромбина и фибриногена, включающий стадии:
(а) обратимого ингибирования тромбина для получения смеси, содержащей инактивированный тромбин и фибриноген, растворением смеси тромбина и фибриногена в ингибиторном или первом растворе, имеющем рН в диапазоне от 8,5 до 11,;
(b) добавления второго раствора, который способен снизить рН ингибиторного или первого раствора примерно от 6,0 до менее чем 8,5;
(с) предоставления возможности фибриногену взаимодействовать с тромбином; и
(d) оценки образования сгустка.
33. Способ определения активности тромбина в не вступившей в реакцию смеси тромбина и фибриногена, включающий стадии:
(а) обратимого ингибирования тромбина для получения смеси, содержащей инактивированный тромбин и фибриноген;
(b) добавления к смеси известного количества хромогенной или флуорогенной тромбиновой подложки;
(с) обратимой активации тромбина; и
(d) предоставления возможности тромбину вступить в реакцию с хромогенной или флуорогенной тромбиновой подложкой;
(е) определения активности тромбина, первоначально присутствовавшего в смеси.