СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЦЕЛЛЮЛАЗЫ В ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОМ ТРАКТЕ КРОЛИКОВ IN VIVO
METHOD TO DETERMINE ACTIVITY OF CELLULASE IN ALIMENTARY CANAL OF RABBITS IN VIVO

Изобретение относится к области симбионтного пищеварения у животных, а именно к определению активности целлюлазы в слепой кишке кроликов in vivo.
От степени переваривания клетчатки и главной ее составляющей целлюлозы у кроликов зависит переваримость всех других компонентов корма, а следовательно, скорость роста и последующая продуктивность. Клетчатка переваривается только под действием микроорганизмов-симбионтов, населяющих слепую кишку кроликов. В связи с этим важно иметь сведения об активности целлюлазы симбионтных микроорганизмов, позволяющие прогнозировать переваримость клетчатки, что необходимо для уточнения системы кормления кроликов.
Известны способы определения активности целлюлазы в пищеварительном тракте животных.
Один из них заключается в том, что источник целлюлозы - обеззоленный фильтр - помещают в профильтрованную через марлю рубцовую жидкость, разведенную в отношении 1:1 забуференной питательной средой, содержащей глюкозу, макро- и микроэлементы, и инкубируют в течение суток в термостате. Активность целлюлазы оценивают по убыли массы источников целлюлозы и выражают в процентах (Чурлис Т.К. О методике определения активности расщепляющей целлюлозу микрофлоры преджелудков у крупного рогатого скота. // Кормление сельскохозяйственных животных. - М., - 1958. - С.470-475) [1].
Недостатком данного способа является то, что в нем используется питательная среда, существенно изменяющая численность и видовой состав микроорганизмов, что отрицательно сказывается на эффективности способа.
Наиболее близким к заявляемому является способ определения активности целлюлазы в рубце жвачных животных. Сущность способа состоит в том, что источник целлюлозы - измельченную солому - помещают в капроновый мешочек и вводят через фистулу в рубец на 24 часа, затем извлекают, промывают содержимое мешочка, высушивают и взвешивают. Активность целлюлазы оценивают по убыли массы измельченной соломы и выражают в процентах (Курилов Н.В. Использование физиологических и биохимических методов в изучении пищеварения жвачных // Новые методы и модификации биохимических и физиологических исследований в животноводстве: сборник научных трудов ВНИИФБиП. - Боровск. - 1972 - С.96-105) [2].
Недостатками данного способа является то, что он недостаточно эффективен при определении активности целлюлазы у кроликов в слепой кишке, содержащей более вязкий химус по сравнению с рубцом жвачных животных, из-за слабого контакта источника целлюлозы с химусом слепой кишки, а также то, что в качестве источника целлюлозы используют измельченную солому, химический состав которой непостоянен.
Задачей изобретения является повышение эффективности определения активности целлюлазы в пищеварительном тракте кроликов in vivo за счет постоянного состава источника целлюлозы и большего его контакта с химусом слепой кишки.
Поставленная задача достигается тем, что в известном способе определения активности целлюлазы, заключающемся в том, что источник целлюлозы вводят через фистулу в пищеварительный тракт на 24 часа, затем извлекают, промывают, высушивают, взвешивают, а активность целлюлазы оценивают по убыли массы источника целлюлозы и выражают в процентах, согласно изобретению в качестве источника целлюлозы используют гофрированную полоску обеззоленного фильтра, помещаемую в капсулу, выполненную из отрезка поливинилхлоридной трубки длиной 25 и диаметром 7 мм, снабженную 4 продольными отверстиями, расположенными равномерно по ее окружности и запаянную с одного конца, вводимую в пищеварительный тракт на 12 часов.
Способ определения активности целлюлазы в пищеварительном тракте кроликов in vivo состоит в следующем. Вначале источник целлюлозы - полоску обеззоленной фильтровальной бумаги - гофрируют путем многократного перегибания, высушивают при 105°С в течение двух часов в сушильном шкафу, взвешивают на аналитических весах и помещают в капсулу, выполненную из отрезка поливинилхлоридной трубки длиной 25 и диаметром 7 мм, снабженную 4 продольными отверстиями, расположенными равномерно по ее окружности и запаянную с одного конца. Капсулу с полоской фильтровальной бумаги вводят в слепую кишку кролика через фистулу на капроновой нити, конец которой остается снаружи и служит для извлечения капсулы из фистулы. Через 12 часов капсулу вынимают из слепой кишки, полоску фильтровальной бумаги извлекают из капсулы, промывают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу при 105°С в течение двух часов, а затем взвешивают на аналитических весах. Активность целлюлазы определяют следующим образом. Находят разность между первоначальной массой полоски фильтровальной бумаги и ее массой после инкубации в слепой кишке, затем полученное значение делят на первоначальную массу и полученный результат умножают на 100. Активность целлюлазы выражают в процентах.
Для определения активности целлюлазы в пищеварительном тракте кроликов in vivo были проведены эксперименты на 5 кроликах с хронической фистулой слепой кишки. Поскольку величина данного показателя зависит от уровня содержания клетчатки в рационе животных, соотношение концентрированных и грубых кормов в рационе варьировалось таким образом, чтобы содержание сырой клетчатки составляло соответственно 12,8; 14,4; 16,0; 17,6 и 19,2%. Все опытные кролики получали вначале рацион с содержанием клетчатки 12,8%, затем - 14,4%, затем - 16,0% и т.д. Они находились на рационах с указанными уровнями клетчатки в течение 5 суток, затем в течение 2 суток осуществлялось определение активности целлюлазы. У всех кроликов активность целлюлазы определялась известным и предлагаемым способом. В первом случае в качестве капсулы использовался капроновый мешочек, а в качестве источника целлюлозы - измельченная солома, при этом капсула находилась в слепой кишке в течение 24 часов. Во втором случае в качестве капсулы применялся отрезок поливинилхлоридной трубки указанной конструкции, в качестве источника целлюлозы -гофрированная полоска обеззоленного фильтра, а капсула находилась в слепой кишке в течение 12 часов. Величины активности целлюлазы, зафиксированные у каждого из 5 кроликов, подвергались статистической обработке с вычислением средней арифметической и ошибки средней арифметической. Данные по активности целлюлазы представлены в таблице.
Таблица
Активность целлюлазы у кооликов
Способы определения целлюлозолитической активности
Содержание клетчатки в рационе, %
12,8
14,4
16,0
17,6
19,2
известный
10,6±5,76
8,4±4,32
7,3±4,47
5,7±3,20
4,2±3,75
предлагаемый
16,6±1,24
14,8±1,34
11,8±1,49
9,3±0,55
8,9±0,79
Результаты свидетельствуют о том, что величина активности целлюлазы в пищеварительном тракте кроликов, определяемая предлагаемым способом, выше величины, определяемой известным способом, при этом время анализа ниже в 2 раза.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить эффективность определения активности целлюлазы в пищеварительном тракте кроликов in vivo за счет постоянного состава источника целлюлозы и большего его контакта с химусом слепой кишки. Это позволит более точно прогнозировать величину переваримости клетчатки различных кормов и рационов кроликами и уточнять системы их кормления.