КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИНГИБИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА ALAS1

1. Двунитевая рибонуклеиновая кислота (днРНК) для ингибирования экспрессии ALAS1, при этом указанная днРНК содержит смысловую нить и антисмысловую нить длиной 15-30 пар оснований, и антисмысловая нить комплементарна, по меньшей мере, 15 непрерывно следующим друг за другом нуклеотидам последовательности SEQ ID NO: 1 или 382.
2. Двунитевая рибонуклеиновая кислота (днРНК) для ингибирования экспрессии ALAS1, при этом указанная днРНК содержит смысловую нить и антисмысловую нить и при этом антисмысловая нить содержит область комплементарности с РНК-транскриптом ALAS1, и такая антисмысловая нить содержит, по меньшей мере, 15 непрерывно следующих друг за другом нуклеотидов, отличающихся не более чем 3 нуклеотидами от одной из антисмысловых последовательностей, перечисленных в любой из таблиц 2, 3, 6, 7, 8, 9, 14 или 15.
3. ДнРНК по п. 1, в которой указанная днРНК содержит, по меньшей мере, один модифицированный нуклеотид.
4. ДнРНК по п. 1, в которой область комплементарности имеет длину, по меньшей мере, 17 нуклеотидов.
5. ДнРНК по п. 4, в которой область комплементарности имеет длину от 19 до 23 нуклеотида.
6. ДнРНК по п. 1, в которой каждая нить имеет длину не более чем 30 нуклеотидов.
7. ДнРНК по п. 1, дополнительно содержащая лиганд.
8. ДнРНК по п. 7, в которой указанным лигандом является лиганд GalNAc.
9. ДнРНК по п. 7, в которой лиганд конъюгирован с 3′-концом смысловой нити днРНК.
10. ДнРНК по п. 1, в которой днРНК содержит смысловую нить, состоящую из смысловой последовательности, выбранной из смысловых последовательностей, указанных в таблицах 2, 3, 6, 7, 8, 9, 14 и 15, и антисмысловую нить, состоящую из антисмысловой последовательности, выбранной из антисмысловых последовательностей, указанных в таблицах 2, 3, 6, 7, 8, 9, 14 и 15.
11. Клетка, содержащая днРНК по п. 1.
12. Фармацевтическая композиция для ингибирования экспрессии гена ALAS1, при этом композиция содержит днРНК по п. 1.
13. Фармацевтическая композиция по п. 12, в которой указанную композицию вводят внутривенно или подкожно.
14. Способ ингибирования экспрессии ALAS1 в клетке, при этом способ включает в себя:
(a) введение в клетку днРНК по п. 1, и
(b) поддержание клетки со стадии (а) в течение периода времени, достаточного для получения распада транскрипта мРНК гена ALAS1 и, тем самым, ингибируя экспрессию гена ALAS1 в клетке.
15. Способ лечения расстройства, связанного с экспрессией ALAS1, включающий в себя введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества днРНК по п. 1.
16. Способ по п. 15, в котором субъект подвергается риску развития порфирии, или у него диагностирована порфирия.
17. Способ снижения уровня порфирина или предшественника порфирина в клетке, включающий в себя осуществление контакта клетки с днРНК по п. 1 в количестве, эффективном для снижения уровня порфирина или предшественника порфирина в клетке.
18. Вектор, кодирующий, по меньшей мере, одну нить днРНК по п. 1.
19. Клетка, содержащая вектор по п. 18.
20. ДнРНК по п. 1, в которой днРНК содержит смысловую нить, содержащую последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 202, SEQ ID NO: 451, SEQ ID NO: 330, SEQ ID NO: 334, SEQ ID NO: 342, SEQ ID NO: 344, SEQ ID NO: 346, SEQ ID NO: 356, SEQ ID NO: 358, SEQ ID NO: 362, SEQ ID NO: 366, SEQ ID NO: 376, and SEQ ID NO: 380.
21. ДнРНК по п. 1, в которой днРНК содержит антисмысловую нить, содержащую последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей 203, SEQ ID NO: 452, SEQ ID NO: 331, SEQ ID NO: 335, SEQ ID NO: 343, SEQ ID NO: 345, SEQ ID NO: 347, SEQ ID NO: 357, SEQ ID NO: 359, SEQ ID NO: 363, SEQ ID NO: 367, SEQ ID NO: 377, and SEQ ID NO: 381.
22. ДнРНК по п. 1, в которой днРНК содержит смысловую нить, содержащую последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 172, SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 190.
23. ДнРНК по п. 1, в которой днРНК содержит антисмысловую нить, содержащую последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 173, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 187, и SEQ ID NO: 191.
24. Способ по п. 15, в котором указанный способ
(i) ослабляет симптом, ассоциированный с расстройством, связанным с ALAS1 (например, порфирией),
(ii) ингибирует экспрессию ALAS1 у субъекта,
(iii) снижает уровень предшественника порфирина или порфирина у субъекта,
(iv) снижает частоту острых приступов симптомов, ассоциированных с порфирией у субъекта, или
(v) снижает частоту возникновения острых приступов симптомов, ассоциированных с порфирией у субъекта в том случае, когда субъект подвергается воздействию провоцирующего фактора.
25. Двунитевая РНК- и (днРНК), содержащая смысловую нить, комплементарную антисмысловой нити, при этом указанная антисмысловая нить содержит область комплементарности с транскриптом РНК ALAS1, при этом каждая нить имеет длину примерно от 14 до примерно 30 нуклеотидов и при этом указанная днРНК представлена формулой (III):
p
a
i
b
b
j
a
q
смысловая: 5′ n-N-(Χ Χ X)-N-Y Y Y-N-(Ζ Ζ Ζ)-N-n3′
ρ
a
k
b
b
l
a
q
антисмысловая: 3′ n′-N′- (Χ′X′X′)-N′-Y′Y′Y′-N′-(Ζ′Z′Z′)-N′-n′ 5′ (III)
где:
i, j, k и l каждый независимо означают 0 или 1;
p, p′, q и q′ каждый независимо равен 0-6;
a
a
каждый N и N′ независимо означает олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-25 нуклеотидов, которые либо модифицированы, либо немодифицированы, либо представлены сочетанием модифицированных и немодифифированных нуклеотидов, при этом каждая последовательность содержит, по меньшей мере, два по-разному модифицированных нуклеотида;
b
b
каждый N и N′ независимо означает олигонуклеотидную последовательность, содержащую 0-10 нуклеотидов, которые либо модифицированы, либо немодифицированы, либо представлены сочетанием модифицированных и немодифифированных нуклеотидов;
p
p
q
q
каждый n, n′, n и n′ независимо означает выступающий нуклеотид;
XXX, ΥΥΥ, ZZZ, Χ′Χ′Χ′, Y′Y′Y′ и Ζ′Ζ′Ζ′ каждый независимо означает один мотив из трех идентичных модификаций трех непрерывно следующих друг за другом нуклеотидов;
b
b
модификации на N отличаются от модификации на Y, и модификации на N′ отличаются от модификации на Y′, где указанная днРНК содержит смысловые и антисмысловые последовательности дуплекса, указанные в таблицах 3, 8, 9 или 15.
26. ДнРНК по п. 25, в которой смысловая нить конъюгирована, по меньшей мере, с одним лигандом.
27. ДнРНК по п. 25, в которой модификации нуклеотидов выбраны из группы, состоящей из LNA, HNA, CeNA, 2′-метоксиэтила, 2′-O-алкила, 2′-O-аллила, 2′-С-аллила, 2′-фтора, 2′-дезокси, 2′-гидроксила и их сочетаний.
28. ДнРНК по п. 27, в которой модификациями нуклеотидов являются 2′-O-метил, 2′-фтор или обе модификации.
29. ДнРНК по п. 7, в которой лиганд связан через линкер.
30. ДнРНК по п. 7, в которой лигандом является
31. ДнРНК по п. 7, в которой лиганд связан через линкер, и где лигандом и линкером являются лиганд и линкер, показанные в формуле XXIV:
32. Способ по п. 15, в котором порфирия представляет собой печеночную порфирию, выбранную из острой интермиттирующей порфирии (AIP), наследственной копропорфирии (НСР), смешанной порфирии (VP), порфирии вследствие недостаточности ALA-дегидратазы (ADP) и гепатоэритропоэтической порфирии.
33. Способ по п. 15, в котором днРНК или композицию, содержащую днРНК, вводят до, во время или после острого приступа порфирии.
34. Способ по п. 15, в котором днРНК или композицию, содержащую днРНК, вводят во время продрома.
35. Способ по п. 34, в котором продром характеризуется болью, тошнотой, психологическими симптомами, беспокойством или бессонницей.
36. Способ по п. 15, в котором субъект имеет повышенный уровень ALA и/или PBG.
37. Способ лечения субъекта с повышенным уровнем ALA и/или PBG, при этом способ включает в себя введение субъекту двунитевой рибонуклеиновой кислоты (днРНК), при этом указанная днРНК содержит смысловую нить и антисмысловую нить длиной 15-30 пар оснований, и антисмысловая нить комплементарна, по меньшей мере, 15 непрерывно следующим друг за другом нуклеотидам последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 382.