Композиция в форме ректальных суппозиториев, обладающая анальгетической активностью
COMPOSITION IN THE FORM OF RECTAL SUPPOSITORIES EXHIBITING ANALGESIC ACTIVITY

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента соединение триазатрициклотетрадекана, являющееся положительным аллостерическим модулятором, в частности композиции в форме суппозитория для ректального введения. Кроме того, изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции. Также изобретение относится к готовой лекарственной форме, полученной по способу для применения в качестве лекарственного средства для купирования болевых симптомов различной этиологии.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Соединениям на основе 3,7-диазабицикло[3.3.1]нонанового каркаса посвящено большое количество научно-исследовательских работ [1-4].
Более ранними исследованиями были получены данные о том, что активация АМРА рецепторов может сопровождаться увеличением экспрессии нейротрофических факторов, в частности, BDNF, в мозге. Приведенные данные о способности модуляторов АМРА рецепторов усиливать экспрессию ростовых факторов представляют интерес в плане возможного использования этих веществ в терапии целого ряда заболеваний ЦНС. Известно, что экспрессия BDNF может оказывать влияние на моноаминергические системы мозга, функционирование которых тесно связано с патогенезом депрессивных состояний, с одной стороны, и механизмом действия антидепрессантов и других психотропных препаратов - с другой. В ряде работ показано, что уровень экспрессии BDNF может быть снижен при депрессии, но в процессе лечения антидепрессантами наблюдается его нормализация. На основании этих данных возникло предположение о том, что активация экспрессии BDNF может иметь терапевтическое значение при лечении депрессии.
По данным ВОЗ, болевые синдромы составляют одну из основных причин (от 11 до 40%) обращения к врачу в системе первичной медицинской помощи. В основном последние исследования в области поиска лекарственных средств (ЛС) для купирования и лечения боли фокусируются на ноцицепции и сигнальных путях в спинном мозге, рассматривая некоторые из основных классических мишеней, а также таргеты, появляющиеся в процессе передачи импульсов боли. Есть надежда, что глубокое понимание боли приведет к выявлению ключевых вмешательств, что, скорее всего, обеспечит терапевтическую пользу в будущем. Лечение и ведение пациентов с болью в клинической и амбулаторной практике в последние десятилетия показало лишь ограниченный прогресс.
Несмотря на успехи и прогресс в исследованиях боли, фармакологические возможности в терапии ограничены. Опиоиды, нестероидные противовоспалительные средства (НПВС) и их комбинации с миорекласантами и «ко-анальгетиками», в частности с различными группами витаминов и минералов, являются наиболее сильными и эффективными средствами, применимыми в лечении боли. Ввиду отсутствия новых эффективных лекарственных препаратов, несмотря на все чаще выявляемые осложнения существующих тактик медикаментозной обезболивающей терапии, ограничивающих возможное лечение пациентов, фармакологическим арсеналом медицинских работников остаются НПВС и опиоидные анальгетики.
К сожалению, выраженный прогресс боли связан не только с воспалением и нейродегенеративными расстройствами. Сопутствующие - коморбидные состояния пациентов формируют «порочный круг» с усилением болевого проявления, вызванного ведущим стартовым звеном - ощущением страха со стороны пациента, что порождает неадаптивную стратегию преодоления боли и депрессивные эпизоды в анамнезе.
У многих пациентов с хронической болью возникают симптомы депрессии. Это утяжеляет состояние и требует комплексного лечения, направленного не только на устранение болевого симптома, но и сопутствующего психомоторного расстройства, поскольку оно значительно изменяет картину течения заболевания, эмоциональный статус, а также способна привести к затяжному течению. Более того, на разных стадиях заболевания удельный вес биопсихологических факторов может меняться. Подобные состояния пациентов диктуют требования по фармацевтической разработке инновационного ЛС для терапии боли.
В выборе терапии боли преобладают несколько классов ЛС, направленных на профилактику развития центральной сенситизации, фармакодинамические свойства которых проявляются на разных уровнях ноцицептивной системы (Таблица 1).
Таблица 1 - Предполагаемые основные механизмы действия ряда ключевых ЛС в терапии боли
Участок ноцицептивной системы
Группы ЛС
Нисходящий поток сигналов от гиппокампа
Трициклические антидепрессанты, селективные ингибиторы обратного захвата нейромедиаторов, опиоиды
Спинной мозг
Ингибиторы изоферментов циклооксигеназы (ЦОГ-1, ЦОГ-2), блокаторы Na<sup>+</sup> каналов, блокаторы Са<sup>2+</sup> каналов
Толперизон, Баклофен, Тизанидин и др.
Периферическая сенситизация (ноцицептивное афферентное волокно)
Блокаторы Na<sup>+</sup> каналов, миорелаксанты, инъекционноевведение глюкокортикостероидов
Карбамазепин, ламотриджин и др.
Рецепторы поверхности(кожа, мышцы)
Блокаторы Na<sup>+</sup> каналов
Лидокаин, капсаицин, ингибиторы изоферментов циклооксигеназы (ЦОГ-1, ЦОГ-2)
В течение последних двух десятилетий значительное внимание уделялось их безопасности по отношению к сердечно-сосудистой и желудочно-кишечной системе. После ранних исследований, указывающих на связь между использованием НПВС и повышенным риском развития сердечной недостаточности и артериальной гипертензии, последующее изучения обнаружили связь между использованием НПВС и повышенным риском тромботических явлений. Все чаще со стороны медицинских работников отмечается применение селективных ингибиторов циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2) (также известных как коксибы), сопряженное с возникновением побочных эффектов со стороны сосудистой системы крови. Более того, обеспокоенность со стороны врачей вызвана частым проявлением эффекта «риск, превышающий пользу» и с применением неселективных ингибиторов ЦОГ-2, такими как диклофенак. По мере роста обеспокоенности по поводу недостатков альтернатив НПВС (таких как опиоиды) для обезболивания, использование НПВС, вероятно, будет расти.
Сегмент анальгетиков является одним из крупнейших и быстрорастущих на фармацевтическом рынке. По данным Pharmaprojects в мире на разных стадиях (доклинических и клинических исследований находится 461 проект разработки новых анальгетиков - это пятый по величине сегмент в области фармацевтических разработок). Среди представленных на рынке анальгетиков, практически отсутствуют инновационные препараты (на основе новых фармацевтических субстанций), и основная конкурентная борьба ведется между хорошо известными торговыми марками за счет внедрения новых формуляций и комбинаций с использованием одних и тех же действующих веществ. Отсутствие действительно «прорывных» решений в области анальгетиков в мире и России, усиливает интерес российских разработчиков и производителей к выводу на рынок инновационного отечественного анальгетика с высоким профилем безопасности.
Таким образом существует необходимость не просто в расширении арсенала анальгетических средств, но в создании инновационных препаратов, которые могли бы потенциально избежать недостатков, которые на протяжении уже долгих лет не могут быть устранены с существующими представителями класса анальгетиков.
В частности авторы сформировали предлагаемый подход к реабилитации пациентов с острой и хронической болью посредством использования положительных аллостерических модуляторов рецепторов α-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолпропионовой кислоты (с англ. α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid - AMPA), являющимися участниками глутаматной сигнализации проведения болевых импульсов. Исследования показывают, что проведение импульсов боли осуществляется активацией Ca2+ проницаемыми AMPA. По сравнению с рецепторами, содержащими GluA2, Ca2+ проницаемые AMPA могут способствовать передаче сигналов внутриклеточного Ca2+, и имеют более высокую проводимость. Эти уникальные биофизические свойства лежат в основе патологических процессов, вызывающих долгосрочное потенцирование, на фоне которого развивается длительная депрессия и центральная сенситизация. Способность Ca2+ проницаемых AMPA рецепторов регулировать синаптическую пластичность позволяет управлять разнообразным набором поведения в ответ на боль в проводящем участке прилежащего ядра.
Глубокое изучение структуры AMPA рецепторов позволило установить, что необычная их экспрессия при хронических патофизиологических состояниях приводит к ненормальной передаче сигналов боли, таким образом вызывая стойкую боль.
Ближайшими аналогами предполагаемого продукта являются соединения, описанные в следующих патентных документах:
Патентная заявка WO 2001089530 A2 «Combination therapy for treatment of depression comprising an antidepressant and an AMPA receptor potentiator» в которой раскрыто применение положительного аллострического модулятора АМПА-рецептора для терапии депрессии. Заявитель Eli Lilly. Приоритет 2000-05-24.
Патентная заявка WO 1998035950 A1 «Benzofurazan compounds which enhance AMPA receptor activity». Описаны потенциально активные модуляторы AMPA-рецепторов на основе производных бензофуразана, и их применение для стимулирования обучения, и лечения заболеваний, связанных с нарушениями памяти. Заявитель Cortex. Приоритет 1997-02-13.
В Патенте РФ RU 2489436 C2 «Алициклические производные 3,7-диазабицикло[3.3.1]нонанов, потенциально обладающие фармакологической активностью фармацевтические композиции на их основе и способ их применения» установлены возможные варианты 3,7-диазабицикло[3.3.1.]нононана, методы их синтеза, но не представлены возможные композиции для разработки состава и технологии производства лекарственной формы (ЛФ).
Стоит отметить, что запатентованные молекулы содержат в структурном фрагменте другую последовательность радикалов, чем в разрабатываемом инновационном препарате. Кроме того, в патентах WO 2001089530 A2 и WO 1998035950 A1 никаким образом не представлена фармацевтическая композиция на основе комбинации соединений.
Таким образом, отличие от существующих в уровне техники исследований заключается в том, что в том, авторы рассматривают триазатрициклотетрадекан в качестве активной фармацевтической субстанции (ФС) в новой готовой лекарственной форме для применения в качестве лекарственного средства для купирования болевых симптомов различной этиологии.
Из уровня техники было установлено, что отсутствует информация о разработке состава и технологии получения инновационного лекарственного средства (ЛС) на основе производного 3,7-диазабицикло [3.3.1] нонана - триазатрициклотетрадекана для лечения болевых симптомов.
ЗАДАЧИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задачей настоящего изобретения является создание инновационного лекарственного препарата, обладающего обезболивающим (анальгетическим) действием, в частности способным купировать болевые симптомы различной этиологии, который был бы максимально лишен недостатков препаратов с аналогичным профилем терапевтического действия и одновременно обладал бы высокими физико-химическими, биофармацевтическими и технологическими характеристиками, обладал бы максимальной биодоступностью, эффективностью и стабильностью.
Решение поставленной задачи заключается в создании лекарственного препарата в форме суппозитория с инновационным соединением триазатрициклотетрадекана ((1s,11s)-6-(3-((1H-pyrazol-1-yl)methyl)-4-methoxybenzyl)-1,11-dimethyl-3,6,9-triazatricyclo[7.3.1.13,11]tetrade- cane-4,8,12-trione) на основе производного 3,7-диазабицикло[3.3.1]нонана в качестве активного вещества, являющегося положительным аллостерическим модулятором, и обладающим заявленным терапевтическим действием, а именно способностью купировать болевые симптомы различной этиологии. Дополнительно поставленная задача решается разработкой оптимального состава готовой лекарственной формы, представленной в форме суппозитория для ректального введения, содержащего в качестве активного вещества соединение триазатрициклотетрадекана, а в качестве вспомогательных веществ поверхностно-активное вещество (ПАВ) и основу. Предпочтительно в качестве ПАВ выбран Эмульгатор Т-2, а в качестве основы Witepsol W35.
Кроме того, поставленная задача решается путем разработки технологии получения готовой лекарственной формы, благодаря которой заявленная готовая форма обладает высокими характеристиками и обладает высокой стабильностью.
ОПИСАНИЕ ФИГУР
Фиг. 1 - гистограмма распределения триазатрициклотетрадекана по размерам частиц.
Фиг. 2 - профиль растворения триазатрициклотетрадекана из модельных суппозиториев, полученный на приборе Л. Крувчинского.
Фиг. 3 - профиль растворения триазатрициклотетрадекана из модельных суппозиториев, полученный на приборе «Проточная ячейка».
ДЕТАЛЬНОЕ РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Разрабатываемое лекарственное средство обладает механизмом снижения скорости десенситизации и деактивации глутаматных AMPA рецепторов. В случае болевого симптома действие глутамата, являющегося наиболее распространенным нейромедиатором и передающим возбуждающие сигналы на нервные клетки с AMPA рецепторов, ведет к деполяризации мембран нейронов задних рогов спинного мозга и формированию потенциала действия в случае превышения порогового возбуждения. Более того, ампакин- триазатрициклотетрадекан способен быстро оказывать «антидепрессивные» эффекты, как было показано на животных моделях, благодаря его способности компенсировать дефицит функции синаптических рецепторов AMPA.
Показания к применению разрабатываемого ЛС, данного представителя класса ампакинов, потенциально будут включать в себя терапию болевого синдрома, как острого, так и хронического (в целях воздействия не только на постфизиологические, но и на биологические составляющие персистирующего заболевания), а также терапию биопсихологического состояния пациента, выраженного в пассивной психологической стратегии боли. Прогнозируется высокая безопасность применения и биодоступность ЛС, на основании ректального пути введения в виде суппозиториев.
Анальгетики центрального действия в форме ректальных суппозиториев на сегодняшний день представлены весьма ограниченным количеством препаратов. Более того, имеющиеся в настоящее время лекарственные препараты в форме суппозиториев, обладают широким перечнем нежелательных побочных эффектов.
Несмотря на разнообразие клеток-мишеней - рецепторов, которые вовлечены в модулирование проведения болевых импульсов, их поведение удивительно последовательно. В ответ на травму или повреждение, ненейрональные клетки выделяют нейромодулирующие вещества в тесном контакте с ноцицепторами, которые в ответ на это способствуют либо усилению, либо ослаблению сигналу боли в зависимости от специфичности вовлеченных медиаторов.
Выбор автором готовой лекарственной формы в виде ректального суппозитория опосредован следующими заключениями:
подобная лекарственная форма позволяет действующему лекарственному веществу быстро попасть непосредственно в системный кровоток через лимфатическую и венозную систему малого таза минуя печень, что характеризуется быстрым достижением максимальной концентрации (Cmax) за короткий промежуток времени (Tmax). По указанным фармакокинетическим параметрам ректальный путь введения сопоставим с инъекционным, поэтому для достижения требуемого фармакодинамического эффекта требуется меньшая доза действующего лекарственного вещества при сопоставлении с другими способами введения;
при использовании суппозиториев в силу использования меньшего количества действующего лекарственного вещества значительно уменьшается и количество побочных действий в общем, а также снижается степень и частота развития возможных аллергических реакций в частности;
в случае использования ректальных суппозиториев устраняется инактивирующее действие пищеварительных соков, поэтому в данной лекарственной форме возможно введение лекарственных веществ, подвергающихся разрушению в пищеварительном тракте;
ректальные суппозитории могут широко использоваться у лиц с возможным нарушением процесса глотания различной этиологии (в педиатрии, гериатрии, психиатрии), при наличии заболеваний, изменяющих фармакокинетику препаратов (болезни печени с нарушением печеночной функции, болезни желудочно-кишечного тракта с нарушением процессов всасывания, онкологические заболевания и т.д.);
в виде суппозиториев можно вводить вещества с неприятными органолептическими свойствами, несовместимые в других лекарственных формах, а также совмещать ингредиенты с различными физико-химическими и фармакологическими свойствами;
и совсем немаловажный аспект в современных условиях - соответствие требованиям надлежащих практик - доступность как для заводского производства, так и аптечного.
Однако, именно анальгетики центрального действия в форме ректальных суппозиториев представлены весьма ограниченным количеством препаратов. Более того, имеющиеся в настоящее время лекарственные препараты в форме суппозиториев обладают широким перечнем нежелательных побочных эффектов. Так, например, Трамадол, который наиболее часто используется в медицинской практике, может вызывать нежелательные побочные реакции, такие как головокружение, тошноту, головную боль и тяжелые расстройства ЦНС. Также следует отметить, что все представленные на сегодняшний день на рынке лекарственные средства центрального действия в виде ректальных суппозиториев не обладают антидепрессивным эффектом, который в свою очередь вносит колоссальный вклад в «эмоциональную окраску» болевого синдрома, в отличие от лигандов AMPA-рецепторов, которые обладают подобными свойствами.
На интенсивность и полноту высвобождения ФС из суппозиториев существенное влияние оказывают вид основообразующего материала, его температура плавления, а также физико-химические и структурно-механические свойства компонентов ЛФ. Кроме этих факторов, на процесс высвобождения ФС большое влияние оказывает природа и количество ПАВ, вводимого в состав суппозиториев. Наличие большого числа качественных и количественных факторов, а также критериев, по которым проводят контроль суппозиториев, требует принятия решения в отношении оптимального состава и технологии при получении суппозиториев. В такой ситуации рационально использовать математическое планирование эксперимента. Формирование стратегии эксперимента предполагает поиск рациональной последовательности получения всесторонних данных о свойствах изучаемой субстанции.
Важнейшими характеристиками при изучении физического состояния лекарственного средства являются степень его измельчения, характер кристаллической структуры и растворимость. Установлено, что скорость и полнота всасывания лекарственного средства, его концентрация и время пребывания в организме в значительной степени зависят от размера частиц. Различия в величине частиц могут привести к неодинаковым скоростям всасывания и содержанию в биологических жидкостях одного и того же лекарственного средства. Было установлено, что чем мельче твердые частицы, тем выше терапевтическая ценность ЛС, особенно для труднорастворимых и практически нерастворимых ФС. Наряду с повышением фармакологической активности микронизация порошков может привести к снижению терапевтического действия. В частности, чрезмерное измельчение резко снижает терапевтический эффект. Поэтому степень измельчения ФС в каждом конкретном случае должна быть научно обоснована и регламентирована.
Комбинирование спазмолитических, обезболивающих и жаропонижающих средств в суппозиториях способствует быстрому проявлению терапевтической эффективности, снижению нежелательных побочных эффектов отдельных компонентов [6]. Более того, ректальное применение существующих обезболивающих лекарственных препаратов способно значительно предупредить нежелательное ульцерогенное воздействие на ЖКТ, наблюдаемое при пероральном приеме.
Однако, значительное число субстанций, представленных на фармацевтическом рынке, для купирования болевого синдрома являются преметаболитами и требуют для положительного проявления фармакотерапии - эффект первичного прохождения через печень, что затрудняет их разработку в форме суппозиториев и делает ее практически невозможной. Расширение ассортимента обезболивающих средств остается важной задачей и заключается в поиске мишеней и создании новых молекул. Однако, после синтеза и изучения физико-химических свойств новой молекулы предполагаемого ЛС, необходимо провести теоретический анализ и подбор вспомогательных веществ для разработки состава и технологии получения ЛФ.  Будучи своеобразной матрицей ФС, постоянно контактируя с ними, вспомогательные вещества сами обладают определенными физико-химическими свойствами, которые в различных условиях могут проявляться по-разному. Вспомогательные вещества не являются индифферентными и во всех случаях их применения воздействуют на систему ФС-макроорганизм. С биофармацевтической точки зрения вспомогательные вещества, являясь неотъемлемыми компонентами ЛФ, несут определенную и значительную ответственность за терапевтический эффект. Эта ответственность, в основном, проявляется не столько в поддержании стабильности ЛФ (хотя и в этом аспекте роль вспомогательных веществ может быть весьма существенной), но преимущественно в изменении процессов всасывания ФС, характера их распределения в организме и элиминации, конечном итогом которых и является изменение терапевтической активности ЛС.
Несмотря на многочисленные публикации о получении суппозиториев, в литературе не встречаются данные о поэтапном подборе и стратегии выбора основы и вспомогательных веществ для ФС с заданными технологическими характеристиками.
Характер основы оказывает определяющее влияние на процесс всасывания ЛС, поэтому должен проводиться на базе изучения биофармацевтической доступности in vitro на этапе фармацевтической разработки. Реальная эффективность ЛС в суппозиториях во многом зависит от правильного выбора основ.
Различие в высвобождении ЛС из жировой и углеводородной основ определяется изменением межмолекулярной структуры, которая зависит от свойства лекарственного средства и реакционной способности основы.
Кроме того, на степень резорбции ЛС из суппозиториев влияют температура плавления, время полной деформации, поверхностное натяжение основы, полярность и концентрации активных фармацевтических ингредиентов, природа и концентрация поверхностно-активных веществ.
В каждом конкретном случае получения суппозиториев в зависимости от свойств ФС должны быть подобраны специфические переменные факторы (вспомогательные вещества, методы получения, а также вид лекарственной формы) с учетом изучения всестороннего их влияния на фармакологическую активность.
Принципиально новыми направлениями по фармацевтической разработке суппозиториев проводятся по трем основным направлениям: способность к адгезии, контроль высвобождения ФС и улучшение стабильности в процессе хранения при высоких температурах.
При разработке состава суппозиториев в качестве объекта исследования использовался порошок фармацевтической субстанции триазатрициклотетрадекана, по качественным и количественным показателям соответствующий требованиям спецификации.
Триазатрициклотетрадекан ((1s,11s)-6-(3-((1H-pyrazol-1-yl)methyl)-4-methoxybenzyl -1,11-dimethyl-3,6,9-triazatricyclo[7.3.1.13,11]tetradecane-4,8,12-trione) - фармацевтическая субстанция на основе производного 3,7-диазабицикло[3.3.1]нонана была впервые синтезирована на химическом факультете МГУ им. М.В. Ломоносова. Соединение представлено общей формулой:
,
где R -
Содержание триазатрициклотетрадекана по спецификации на ФС: 99,70%.
Описание.  ФС представляет собой белый кристаллический порошок со слабым ароматическим запахом, без вкуса.
Растворимость. Хорошо растворима в хлороформе, диметилсуфоксиде, диметилфорамиде, этиловом и метиловом спирте. Мало растворима в диэтиловом эфире, диоксане. Практически нерастворима в воде очищенной.
Температура плавления от 109-112°C.
Максимум поглощения при длине волны 233 нм.
Наличие большого числа качественных и количественных факторов, а также критериев, по которым проводят контроль качества суппозиториев, требуется экспериментальная работа в отношении оптимального состава и технологии получения ЛФ.
Пример 1. Изучение физико-химических характеристик ФС триазатрициклотетрадекана
Форма и размер кристаллических частиц определяются структурой кристаллической решетки и условием роста частиц в процессе кристаллизации. Для определения подойдет любой метод, известный из уровня техники, при этом средний специалист с легкостью подберёт и определит оптимальный.
ср.
ФС триазатрициклотетрадекана имела размеры частиц 10-50 мкм, неоднородной структуры. Средний размер частиц составлял 90-150 мкм, средний размер мелких частиц порошка ФС - 40-70 мкм. Дисперсионный анализ позволил рассчитать фактор формы (F ), который был равен соответственно для крупной фракции 3,2-3,9, для мелкой фракции 2,5-2,8.
Как видно из Фиг. 1, преобладающей фракцией для порошка ФС триазатрициклотетрадекана различной степени дисперсности является величина частиц 40-60 мкм.
Пример 2. Определение биофармацевтической растворимости порошка ФС триазатрициклотетрадекана
Термины «фармакопейная растворимость» и «биофармацевтическая растворимость» не синонимичны и не равнозначны.
Для точного выбора состава и вспомогательных веществ для модели ЛФ необходимо проведение фундаментального теста «Растворимость» для ФС по ОФС.1.2.1.0005.15. Данное испытание является «приблизительным» и не позволяет спрогнозировать степень ионизации молекулы, определить поведение кислотно-основных центров и таутомерных превращений ФС, влияющих на осмолярность среды растворения. Следует отметить, что эти параметры являются критическими характеристиками в выборе вспомогательных веществ и основы ЛФ, так как технологическая ошибка на данном этапе способна вызвать межмолекулярное взаимодействие действующего вещества с компонентами ЛФ в бинарной разрабатываемой системе «ФС/основа ЛФ» и ослабить ожидаемый терапевтический эффект. Однако это не исключает необходимость проведения теста «фармакопейной растворимости», так как с его помощью также возможно сократить число комбинаций составов ЛФ и вероятных сред растворения в разработке методики на основе природы ФС и места введения ЛФ.
Полученные значения биофармацевтической растворимости следует интерпретировать следующим образом. Если отношение D/S (максимальной дозировки D, FDA, или высшая разовая доза ВОЗ к растворимости S) меньше или равно 250 мл, то такая ФС характеризуется значением высокой растворимости. Если же это отношение составляет более 250 мл, то такая ФС характеризуется низкой растворимостью.
Использовать фармакопейную растворимость в период фармацевтической разработки ЛФ вместо биофармацевтической недопустимо, поскольку данные параметры могут существенно различаться.
Определение биофармацевтической растворимости проводили путем перемешивания среды с навеской ФС триазатрициклотетрадекана в колбе с возможностью термостатирования в течение 24-72 ч. Среды для растворения были выбраны на основании химического скелета триазатрициклотетрадекана, имеющего основный третичный азот и амидную группировку способные к ионизации.  На основании этих теоретических данных, места введения принятой к разработке ЛФ - ректальные суппозитории, а также руководства FDA были установлены три интервала pH: 6,8-7,4-8,0 что отражает значения рН нижнеампулярного, среднеампулярного и верхнеампулярного отделов прямой кишки и не превышало допустимо разрешенные значения pH согласно руководству FDA.
Среды растворения могут быть приготовлены любыми известными из уровня техники и подходящими для данного эксперимента способами. Авторами были подготовлены фосфатные забуференные физиологические растворы рН 6,8, 7,4 и 8,0
Определение биофармацевтической растворимости триазатрициклотетрадекана проводили на приборе - термошейкере Electrolab в течение 24 ч при 1000 об/мин. С поддержанием температуры в области 37°С в трёх средах и трёх повторностях для каждой среды растворения. В пробирку Eppendorf вместимостью 10 мл со средой растворения в объёме 9 мл помещали по 0,1 г исследуемой субстанции. По истечении 24 ч после начала испытания пробы подвергали центрифугированию со скоростью 5000 об/мин.
Взятые пробы супернатанта в объеме 1000 мкл упаривали досуха, а сухой остаток растворяли в 5 мл 95% этанола, фильтровали. В отобранных пробах определяли содержание триазатрициклотетрадекана методом ВЭЖХ с диодно-матричным детектированием.
Около 100,00 мг (точная навеска) стандартного образца ФС триазатрициклотетрадекана переносили в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяли в 25 мл ацетатного буферного раствора с рН 6,8, доводили объем раствора до метки тем же растворителем и тщательно перемешивали (концентрация полученного раствора триазатрициклотетрадекана составила 1 мг/мл).
Для определения биофармацевтической растворимости ФС триазатрициклотетрадекана в соответствующем буферном растворе проводили расчет отношения значений дозы к растворимости, согласно формулам, рекомендуемым FDA и ВОЗ:
D/S=Dmax/S, (11)
где:
D/S - отношение дозы к растворимости, мл;
S - биофармацевтическая растворимость, определенная методом ВЭЖХ, мг/мл;
Dmax - максимальная дозировка ФС, зарегистрированная на территории РФ к медицинскому применению, мг. Критерий приемлемости соответствует - Do ≥ 1.
Растворимость ФС принято считать «высокой», если величина D/S принимала значение менее 250 мл. Расчет дозового числа (Do, мг) осуществлялся по формуле:
Do = 250 х S/ Dmax, (12)
Полученные данные представлены в таблице 1.
Таблица 1 - Полученные данные в результате изучения биофармацевтической растворимости.
Образец
Среда растворения
Биофармацевтическая растворимость S, мг/мл
Дозовое число Do, мг
Отношение дозы к растворимости D/S, мл
Растворимость
Триазатрициклотетрадекан
Фосфатный забуференный физиологический раствор рН 6,8
0,40
1,00
250,06
«низкая»
Фосфатный забуференный физиологический раствор рН 7,4
0,45
1,12
220,45
«высокая»
Фосфатный буферный раствор рН 8,0
0,43
1,07
230,26
«высокая»
0
Полученные данные в таблице 4 интерпретировали следующим образом. Принимая во внимание полученные значения параметров - биофармацевтическую растворимость и дозовое число (D), показывающее вероятное значение фракции дозы ФС, которая может содержаться в «растворяющей среде», свидетельствуют о высокой степени ионизации вещества, а, следовательно, его всасываемости в среде ректальной жидкости. Полученные результаты исследований позволили утвердить принятую к фармацевтической разработке ЛФ - суппозитории, а также, опираясь на эти данные, возможно сократить в дальнейшем число основ в фармацевтической разработке ЛФ.
Следует отметить, что триазатрициклотетрадекан является «относительно» липофильным и растворимым соединением с низким значением D/S, поэтому растворонасыщение in vivo будет одним из определяющих факторов всасываемости, данной ФС в системный кровоток. Такая структура молекулы определяет его «положительную» фармакокинетическую способность распределения in vivo, так как более высокий уровень липофильности определяет более значительную тканевую аффиность ФС (то есть способность оказывать свое терапевтическое действие не только в кровотоке, но и непосредственно в тканях).
Пример 3. Влияние дисперсности ФС триазатрициклотетрадекана на высвобождение из суппозиторных основ
Дисперсность труднорастворимых ФС оказывает существенное влияние на биологическую доступность создаваемых на их основе ЛФ. Особенно этот фактор необходимо учитывать при разработке суппозиториев, так как скорость седиментации твердой дисперсной фазы зависит от степени дисперсности порошка и вязкости основы, что главным образом оказывает влияние на фармакокинетические процессы. Экспериментальным путем было изучено влияние степени измельчения порошка ФС на скорость его высвобождения из суппозиториев. Результаты статистического анализа представлены в таблице 2.
Таблица 2 - Дисперсионный анализ экспериментальных данных по определению высвобождения триазатрициклотетрадекана из суппозиториев с учетом влияния дисперсности частиц
Источник изменчивости
Число степеней свободы (F)
Сумма квадратов (SS)
Средний квадрат отклонений (MS)
F эксп.
F табл.
Дисперсность частиц
3
46,19
15,39
10,40
3,49
Ошибка
12
17,78
1,48
-
-
Общая сумма
15
63,97
-
-
-
Исходя из полученных данных видно, что F эксп. > F табл., следовательно, дисперсность частиц ФС влияет на высвобождение триазатрициклотетрадекана из суппозиториев. Для подтверждения данных статистических результатов и дальнейшего проведения фармацевтической разработки был проведен модельный тест «Растворение» для ЛФ.
Пример 4. Выбор метода и разработка методики определения высвобождения триазатрициклотетрадекана из суппозиториев
Профиль высвобождения ФС из ЛФ может существенно повлиять на эффективность in vivo, поэтому в процессе разработки необходимо точно измерить данную характеристику. Более того, на этапах разработки испытания растворения полезны для того, чтобы определить, как технология получения и составы могут потенциально повлиять на эффективность in vivo.
В соответствии с физико-химическими свойствами, а также с результатами определения биофармацевтической растворимости ФС для обеспечения однородности дозирования, достижения высоких значений высвобождения активной ФС резорбтивного действия для разработки лекарственной формы были выбраны липофильные основы.
Для подтверждения данных статистических результатов влияния дисперсности частиц ФС на высвобождение триазатрициклотетрадекана из суппозиториев, а также для дальнейшей фармацевтической разработки ЛФ были проведены модельные тесты «Растворения» двумя методами: с помощью приборов «Проточная ячейка» и Л. Крувчинского для проведения диализа. Оба метода известны и понятны специалисту среднего уровня.
Для разработки суппозиториев были использованы 4 фракции порошка ФС:
1 - неизмельченный порошок триазатрициклотетрадекана;
2 - измельченный порошок триазатрициклотетрадекана с размером частиц 40-50 мкм;
3 - измельченный порошок триазатрициклотетрадекана с размером частиц 30-40 мкм;
4 - измельченный порошок триазатрициклотетрадекана с размером частиц 20-30 мкм.
Принимая во внимание физико-химические свойства ФС, а также кислотно-основные центры молекулы триазатрициклотетрадекана в качестве модельной основы использовали Твердый жир типа А с добавлением 2,5 % эмульгатора Т-2.
На основании проведенного многофакторного эксперимента доклинических исследований терапевтически установленная дозировка единичной ЛФ составила 100,00 мг. Суппозитории с содержанием триазатрициклотетрадекана 100,00 мг и массой 2,00 г готовили методом выливания в формы.
Акцепторная среда растворения была выбрана с целью приближения условий определения к физиологическим условиям процессов всасывания действующих веществ в кишечнике. Количественное содержание триазатрициклотетрадекана проводили методом ВЭЖХ с диодно-матричным детектированием. Полученные профили растворения из суппозиториев, содержащих различные фракции триазатрициклотетрадекана представлены на фиг. 2 и 3. Разработанная методика и рекомендуемые условия проведения испытания «Растворение» суппозиториев триазатрициклотетрадекана отражены в таблице 3.
Таблица 3 - Рекомендуемые условия проведения теста «Растворение» для разрабатываемой ЛФ
Условия
Суппозитории ректальные триазатрициклотетрадекана
Тип аппарата
Проточная ячейка
Режим
Система с открытым контуром
Гидродинамика потока
8,0 мл/мин
Перемешивание
Поток акцепторной среды (насос)
Среда
Фосфатный забуференный физиологический раствор со значением pH 7,4±0,05
Размер ячейки
Диаметр ячейки составляет 16 мм
Объем
900 мл
Время отбора проб, мин
0; 15; 30; 45; 60; 90 и 120
Аналитический метод
ВЭЖХ с диодно-матричным детектированием
Показатель стандартизации:Количество триазатрициклотетрадекана, перешедшего в среду растворения (Q):на стадии S<sub>1</sub>на стадии S<sub>2</sub>на стадии S<sub>3</sub>
Q = 80 %- для каждой из 6 испытуемых единиц не менее Q + 5 % от заявленного количества ФС;- среднее количество высвобождаемого в среду растворения ФС из 12 испытуемых единиц должно быть не менее Q, и не должно быть ни одной единицы, где в среду растворения перешло бы Q - 15 % от заявленного содержания ФС;- среднее количество высвобождаемого в среду растворения ФС из 24 испытуемых единиц должно быть не менее Q, и только у 2 единиц в среду растворения может перейти менее Q - 25 % от заявленного содержания ФС.
За время, мин
90
В результате проведенных исследований установлено, что стадия измельчения порошка ФС является необходимым этапом в технологии получения суппозиториев, а величина частиц ФС должна находиться в пределах 20-30 мкм.
Пример 5. Разработка лекарственного средства
При разработке оптимального состава суппозиторий триазатрициклотетрадекана было изучено влияние различных основ и ПАВ, которые широко используются в производстве суппозиториев, при одновременном контроле показателей спецификации. Все компоненты состава были установлены экспериментальным путем.
В соответствии с физико-химическими свойствами ФС для обеспечения однородности дозирования, достижения высоких значений высвобождения активной ФС резорбтивного действия были выбраны липофильные основы.
1
Для определения точного состава и выбора эмульгатора были рассчитаны факторы различия (f) по формуле:
× 100, (17)
t
t
где n - число временных точек, R- количество ФС, перешедшее в раствор из ЛФ сравнения в точке t (в среднем, в процентах), T- количество ФС, перешедшее в раствор из исследуемого ЛФ в точке t (в среднем, в процентах). Расчет факторов различия представлены в таблице 4.
Таблица 4 - Факторы различия для основ для выбора вида ПАВ
№
Основа
Фактор различия f<sub>1</sub>
1.
Witepsol<sup></sup> H15 + ПАВ эмульгатор Т-2 5 %
22
2.
Witepsol<sup> </sup>H15 + ПАВ фосфатидный концентрат 5 %
16
3.
Witepsol<sup></sup> W35 + ПАВ эмульгатор Т-2 5 %
21
4.
Witepsol<sup></sup> W35 + ПАВ фосфатидный концентрат 5 %
14
1
1
1)

На основании посчитанных факторов различия (f), представленных в таблице 13, значения были максимальными у композиций 1 и 3 (Witepsol H15 + ПАВ эмульгатор Т-2 5% и Witepsol W35 + ПАВ эмульгатор Т-2 5%). У композиций образцов №2 и № 4 были достаточно низкие значения факторов различия (f). Принимая во внимание использование в качестве акцепторной среды забуференный физиологический раствор (который максимально приближен к условиям in vivo), физико-химические свойства ФС и анионоктивные свойства Фосфатидного концентрата, а также фактор различия (f для получения суппозиториев был выбран эмульгатор Т-2.
Результаты проведенных реологических исследований позволили сделать вывод о том, что суппозитории триазатрициклотетрадекана являются дисперсными системами с коагуляционным типом структуры, для которых характерны упруго-вязко-пластичные свойства.

Принимая во внимание все аспекты проведенных исследований и структурно-механические характеристики суппозиториев, для создания высокоэффективной ректальной лекарственной формы следует использовать основу Witepsol W35 с добавлением 5 % эмульгатора Т-2.
Таким образом после ряда экспериментов был предложен оптимальный состав ректальных суппозиториев с ФС триазатрициклотетрадекана. Состав композиции представлен в таблице 5.
Таблица 5 - Состав ректальных суппозиториев
Компонент
Количество
ФС триазатрициклотетрадекана
0,100 г
Эмульгатор Т-2
0,105 г
ОсноваWitepsol<sup></sup> W35
Достаточное количество для получения суппозиториев массой 2,100±0,050 г
Пример 6. Изучение микробиологической чистоты суппозиториев
Аналитический образец готовили в виде эмульсии следующим образом: суппозитории с ФС триазатрициклотетрадекана массой 10,0 г смешивали с минимальным количеством стерильного ПАВ - Твина-80 (Полисорбата-80) (в количестве 0,09 г) в стерильной круглодонной колбе. Смесь нагревали на водяной бане до температуры не выше 40°C. Затем в колбу добавляли предварительно доведенный до температуры 40°C стерильный фосфатный буферный раствор с асептически чистыми стеклянными бусами диаметром 6 мм. Объем колбы доводили до 90 мл. Смесь осторожно перемешивали до образования гомогенной эмульсии.
Приготовленную эмульсию вносили по 1 мл в каждую из двух пробирок с 10 мл стерильного фосфатного буферного раствора до разведения в соответствующих значениях 1:100 и 1:1000, затем по 1 мл из каждого разведения вносили в стерильные пробирки, содержащие 4 мл среды № 1 (мясопептонный агар), охлажденной до температуры 45-50°С. Быстро перемешивали и переносили в чашки Петри диаметром 90 мм, содержащие 15-20 мл застывшей питательной среды №1, равномерно распределяя на слое агара. После застывания среды чашки Петри переворачивали и инкубировали в течение 5 суток при температуре от 30 до 35°С. Через 48 и окончательно через 5 суток подсчитывали число выросших бактериальных колоний на двух чашках, находили среднее значение, и умножая его на показатель разведения, устанавливали число бактерий в 1 мл образца.
Испытание на общее количество грибковых колоний проводили двуслойным агаровым методом, описанным выше, используя среду № 2 (среда Сабуро). Посевы инкубировали в течение 5 суток, подсчитывая общее число колоний дрожжевых и плесневых грибов на двух чашках Петри, находили среднее значение и, умножая его на показатель разведения, вычисляли число грибов в 1 мл образца.
Испытания на определение количества Escherichia coli: образцы суппозиториев в количестве 10,0 г переносили в среду №11 (лактозный бульон), эмульгировали с небольшим количеством стерильного ПАВ - Твина-80 (Полисорбата-80), проводили инкубирование в течение 4 часов при температуре 32,5°C. Засеянную среду №11 в количестве 10 мл переносили в 100 мл среды №3 (среда для роста сем. Enterobacteriacea). Инкубирование проводили при 32,5°C в течение 24 ч. После этого совершали пересев выросших колоний с помощью бактериальных петель на среду №4 (агар Эндо). Бактерии Escherichia coli образовывали характерные колонии малинового цвета диаметром 2-3 мм с металлическим блеском или без него. При отсутствии роста колоний выдавался отрицательный результат о наличии Escherichia coli в пробе. Контролем служили пробирки с питательными средами, в которые вместо ЛС вносили аналогичное количество очищенной воды. Оценка показателя качества «Микробиологическая чистота» ЛФ проводилась как сразу после изготовления ЛФ, так и по истечению года хранения при температуре 2-8°C.
Определение показателя качества «Микробиологическая чистота» ЛФ триазатрициклотетрадекана отражено в таблице 6.
Проведены испытания на микробиологическую чистоту, которые свидетельствуют о высокой микробиологической чистоте основы и суппозиториев, и их соотвествие категории 3А согласно ГФ РФ.
Таблица 6 - Определение показателя качества «Микробиологическая чистота» ЛФ триазатрициклотетрадекана
Серия №
Определение количества аэробных бактерий в 1,0 г пробы
Определение общего числа грибов в 1,0 г пробы
Определение E.coli в 1,0 г пробы
Количества выросших аэробных бактерий при разведении
Число бактерий в 1,0 г
Количество грибковых колоний при разведении
Количество грибов в пробе 1,0 г
1:10
1:100
1:1000
1:10
1:100
Микробиологическая чистота суппозиториев после года хранения при температуре 2–8 <sup>0</sup>С
1
15
1
-
1,5×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
2
8
-
-
8,0×10<sup>1</sup>
-
-
-
отриц.
3
27
-
-
2,7×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
4
9
-
-
9,0×10<sup>1</sup>
-
-
-
отриц.
5
41
6
-
4,1×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
6
36
4
-
3,6×10<sup>2</sup>
3
-
3×10<sup>1</sup>
отриц.
7
12
2
-
1,2×10<sup>2</sup>
1
-
1×10<sup>1</sup>
отриц.
8
10
-
-
1,0×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
9
11
-
-
1,1×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
10
29
2
-
2,9×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
Среднее значение
19,8
1,5
-
2,25×10<sup>2</sup>
0,4
-
0,4×10<sup>1</sup>
1
11
1
-
1,1×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
2
6
-
-
6,0×10<sup>1</sup>
-
-
-
отриц.
3
20
-
-
2,0×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
4
8
-
-
8,0×10<sup>1</sup>
-
-
-
отриц.
5
30
3
-
3,0×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
6
31
3
-
3,1×10<sup>2</sup>
3
-
3×10<sup>1</sup>
отриц.
7
8
2
-
8,0×10<sup>1</sup>
-
-
-
отриц.
8
9
-
-
9,0×10<sup>1</sup>
-
-
-
отриц.
9
8
-
-
8,0×10<sup>1</sup>
-
-
-
отриц.
10
25
1
-
2,5×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
Среднее значение
15,6
1,0
-
1,65×10<sup>2</sup>
0,3
-
0,3×10<sup>1</sup>
1
15
1
-
1,5×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
2
8
2
-
8,0×10<sup>1</sup>
-
-
-
отриц.
3
26
-
-
2,6×10<sup>2</sup>
1
-
1×10<sup>1</sup>
отриц.
4
8
-
-
8,0×10<sup>1</sup>
-
-
-
отриц.
5
43
6
-
4,3×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
6
37
4
-
3,7×10<sup>2</sup>
3
-
3×10<sup>1</sup>
отриц.
7
12
2
-
1,2×10<sup>2</sup>
1
-
1×10<sup>1</sup>
отриц.
8
10
-
-
1,0×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
9
11
-
-
1,1×10<sup>2</sup>
-
-
-
отриц.
10
29
2
-
2,9×10<sup>2</sup>
1
-
1×10<sup>1</sup>
отриц.
Среднее значение
19,9
1,7
-
2,32×10<sup>2</sup>
0,6
-
0,6×10<sup>1</sup>
Контроль разводящей жидкости
Рост микроорганизмов не выявлен
Контроль среды
Рост микроорганизмов не выявлен
Пример 7. Технология получения суппозитория.
Технология получения ЛС с содержанием в качестве действующего вещества ФС триазатрициклотетрадекана состоит из трех последующих стадий:
- I. Получение суппозиторной основы;
- II. Плавление основы, сплавление компонентов и их гомогенизация;
- III. Формование суппозиториев;
Получение суппозиторной основы

Суппозиторную основу изготавливали с помощью реактора для отлива суппозиториев и помад PFM-L Pharmag GmbH с глицериновом обогревательным и охладительным контуром. Перед началом смешения включали обогревательный контор глицериновой рубашки и доводили температуру в смесительной камере до 55°C. Эмульгатор Т-2 и основу Witepsol W35 поочередно вносили в зону вращения мешалок (температура не должна превышать выше 60°C). Устанавливали вращение мешалок на скорость 40-50 об/минуту, одновременно контролируя температуру в зоне смешивания. Процесс получения композиции основы считали завершенным путем визуального контроля и осмотра зоны реактора: отсутствие расслоения и налипания смеси на стенках и достижения точки гомогенизации после расплавления всех компонентов (среднее значение времени составляло 15-20 минут). Затем проводили охлаждение смеси до температуры 40-45°C путем отключения обогревательного контура с подачей холодного глицерина в рубашку реактора.
Плавление основы, сплавление компонентов и их гомогенизация
По физико-химическим характеристикам ФС относится к трудно измельчаемым веществам. Поэтому с целью измельчения ФС необходимо использовать прибор для микроинизации ФС до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром 20-30 мкм.
В реакторную зону вводят ФС триазатрициклотетрадекана. Смесь выдерживают при температуре 40°C в течение 40 минут. Заданную температуру обеспечивают путем периодического включения обогрева контура. Смесь перемешивают в течение 5 минут со скоростью 90-110 об/мин, а затем периодически через 20-30 минут со скоростью 40-50 об/мин. Осуществляют периодический контроль за температурой реакторной смеси, не допуская перегрева.
Расчет ФС триазатрициклотетрадекана для получения партии проводят по следующей формуле:
, (18)
1
где X - масса ФС триазатрициклотетрадекана, г;
0,1 - содержание ФС триазатрициклотетрадекана на 1 суппозиторий, г;
М - масса получаемой партии, кг;
В - содержание триазатрициклотерадекана по спецификации, %;
S - масса 1 суппозитория, г.
Расчет количества Эмульгатора Т-2 для получения проводят по следующей формуле:
, (19)
2
где X - технологическая масса Эмульгатора Т-2, г;
5 - содержание Эмульгатора Т-2 в % от общей массы;
М - масса получаемой партии, кг.

Расчет количества суппозиторной основы Witepsol W35 для получения ЛФ осуществляется по следующей формуле:
, (20)
3

где X - технологическая масса суппозиторной основы Witepsol W35, г;
М - масса получаемой партии, кг;
1
X - технологическая масса ФС триазатрициклотетрадекана, г;
2
X - технологическая масса Эмульгатора Т-2, г.
Формование суппозиториев
3
Суппозитории получали методом выливания в формы. Для формовки использовали специальные разъемные пластины с вместимостью ячеек в значении 2,0 см. Перед установкой форм в прибор для разлива суппозиторной массы их хорошо промывали и сушили. Затем их охлаждали до температуры 2-8°C и смазывали спиртоглицериновой смесью. Формы для заполнения устанавливали на платформу прибора, регулируя высоту выпускающего конуса. Максимальное расстояние должно составлять не более 2 см, для исключения вспенивания и пресыщения кислородом воздуха суппозиторной массы. Температура композиции для розлива должна быть в интервале не выше 32±2°C. После контроля температуры осуществляли подачу суппозиторной композиции в ячейки для заполнения. Заполненные формы оставляли для застывания на ровную поверхность на 2-3 минуты, затем с помощью ножа снимали с поверхности форм лишний слой массы. Затем формы подвергали замораживанию при температуре минус 10°C в течение 30 минут. Излишки массы собирали и подвергали возвращению в производственную среду. После охлаждения и выдерживания 30 минутного интервала формы переносили в фасовочную зону и освобождали зажимные узлы для освобождения суппозиториев из ячеек. Затем осуществлялся контроль по показателям массы, внешнего вида и количественному содержанию ФС. Суппозитории некондиционной формы, установленной при визуальном контроле, отправляли на формование повторно. После получения положительного физико-химического и микробиологического анализа ЛФ, по мере необходимости, отправляют на фасовку.
Полученная готовая лекарственная форма, согласно описанной технологии, представляет собой суппозиторий от белого до белого со слегка желтоватым оттенком цвета, со слабым ароматическим запахом массой 2,100±0,050 г. Концентрация ПАВ составила 5 % от массы суппозиториев, содержание триазатрициклотетрадекана - 0,100 г в каждом суппозитории.
Пример 8. Определение подлинности триазатрициклотетрадекана в готовой лекарственной форме.
Определение подлинности триазатрициклотетрадекана в готовой лекарственной форме, содержащей 100,00 мг ФС, относится к методу анализа ВЭЖХ. Для испытуемого раствора было получено 3 хроматограммы, для раствора стандартного образца (СО) было получено 3 хроматограммы.
Таблица 7 - Результаты испытаний для оценки специфичности методики
Образец
Время удерживания пика, мин
Среднее время удерживания пика, мин
Модельный образец исследуемого раствора ЛФ
3,937
3,938
3,940
3,938
Модельный образец раствора СО
3,928
3,931
3,933
3,932
Модельный образец «Плацебо»
-
-
Время удерживания основных пиков на хроматограмме испытуемого раствора соответствуют времени удерживания пиков триазатрициклотетрадекана на хроматограмме раствора СО, что свидетельствует о подлинности триазатрициклотетрадекана в ЛС «Суппозитории ректальные, обезболивающие». Результаты испытаний для оценки специфичности представлены в таблице 7.
Наблюдается совпадение времени удерживания основного пика на хроматограмме модельного образца испытуемого раствора ЛС и основного пика в модельном образце стандартного раствора и отсутствие аналогичного пика на хроматограмме модельного образца «Плацебо».
Отсутствие различий между временем удерживания основного пика на хроматограмме модельного образца ЛС и временем удерживания основного пика на хроматограмме модельного образца стандартного раствора и отсутствие сигналов (пиков) на хроматограмме модельного образца «Плацебо» свидетельствует об отсутствии влияния присутствующих в анализируемом образце веществ на идентификацию триазатрициклотетрадекана.
В результате валидации методики контроля качества по показателю подлинность триазатрициклотетрадекана в ЛФ методом ВЭЖХ доказано, что отсутствует влияние вспомогательных веществ ЛФ на точность воспроизведения результатов определения.
На основании экспериментальных данных, полученных в процессе валидации аналитической методики контроля качества по показателю - подлинность триазатрициклотетрадекана в ЛС методом ВЭЖХ доказано, что результаты испытаний соответствуют требованиям критериев приемлемости по всем изученным показателям, что подтверждает соответствие данной методики установленным критериям и позволяет лаборатории корректно воспроизводить данную методику с получением достоверных результатов.
Пример 9. Исследование влияния условий и сроков хранения суппозиториев на их стабильность
Одним из важнейших требований, предъявляемых к ЛП, является их стабильность в процессе хранения. Для исследования стабильности суппозиториев разработанного состава было изучено влияние сроков и условий хранения на изменение не только структурно-механических свойств суппозиториев, а также получение данных об изменении качества ЛФ с течением времени под влиянием внешних факторов согласно требованиям Решения ЕЭК № 69 «Об утверждении Требований к исследованию стабильности лекарственных препаратов и фармацевтических субстанций» от 10.05.2018, ГФ РФ ОФС.1.1.0009.18 «Стабильность и сроки годности лекарственных средств» и  ГОСТ Р 57129-2016 «Лекарственные средства для медицинского применения. Изучение стабильности новых фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов. Общие положения».
Для изучения влияния условий хранения на качество ЛС готовили 3 серий суппозиториев, упаковывали в ячейковую ленту из поливинилхлорида (ПВХ) по 5 штук, а затем в картонные пачки по 10 штук:
- Серия №1-13052019 от 13.05.2019 г. в количестве - 30 картонных пачек, вместимостью на 10 ячеек из поливинилхлорида (ПВХ), содержащих по 10 суппозиториев.
- Серия №2-14052019 от 14.05.2019 г. в количестве - 30 картонных пачек, вместимостью на 10 ячеек из поливинилхлорида (ПВХ), содержащих по 10 суппозиториев.
- Серия №3-15052019 от 15.05.2019 г. в количестве - 30 картонных пачек, вместимостью на 10 ячеек из поливинилхлорида (ПВХ), содержащих по 10 суппозиториев.
Перед началом испытания был проведен контроль качества образцов по показателям в соответствии со спецификацией проекта нормативной документации (НД) на ЛС «Суппозитории ректальные, обезболивающие»:
1. Описание;
2. Подлинность;
3. Размер частиц;
4. Температура плавления;
5. Однородность массы;
6. Однородность дозирования;
7. Время полной деформации;
8. Микробиологическая чистота;
9. Количественное определение.
Все исследования проводили на основании выбранных показателей качества, методов их определения и критериев приемлемости, которым должно соответствовать ЛС «Суппозитории ректальные, обезболивающие».
э
Рекомендуемая и оптимальная температура экспериментального хранения (t) для испытания стабильности ЛФ «Суппозитории ректальные, обезболивающие», методом «Ускоренного старения» составляет 30±2°С согласно ОФС.1.1.0009.18 «Стабильность и сроки годности лекарственных средств». Влажность, при которой проводилось изучение стабильности 65±5%.
Для полноты изучения и расширения экспериментальной разработки для формирования спецификации на ЛС, серии ЛФ были заложены на долгосрочные испытания стабильности при температуре 5±3°С. Влажность, при которой проводилось изучение стабильности 65±5%.
Для изучения стабильности ЛС «Суппозитории ректальные, обезболивающие» помещали в климатическую камеру Memmert HPP110 (Германия), квалифицированную в соответствии с требованиями, представленными в ICH Q1A «Испытание новых лекарственных веществ и препаратов на стабильность».
Образцы ЛС, находящиеся на исследовании стабильности, подлежали проверке по показателям качества проекта НД в установленные сроки, согласно ОФС.1.1.0009.18 «Стабильность и сроки годности лекарственных средств»:
- в течение первого года хранения - через каждые 3 месяца;
- в течение второго и третьего года хранения - через каждые 6 месяцев;
- после третьего года хранения - через каждые 12 месяцев.
Результаты контроля качества образцов ЛС «Суппозитории ректальные, обезболивающие» серий 1-13052019, 2-14052019, 3-15052019 представлены в таблице 8.
Таблица 8. Результаты контроля качества образцов ЛС
СРОКХРАНЕНИЯ,МЕС.
ОПИСАНИЕ
ПОДЛИННОСТЬ
РАЗМЕР ЧАСТИЦ
ТЕМПЕ-РАТУРА ПЛАВЛЕНИЯ
ОДНОРОДНОСТЬ МАССЫ
ОДНОРОДНОСТЬ ДОЗИРОВАНИЯ
ВРЕМЯ ПОЛНОЙ ДЕФОРМАЦИИ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЧИСТОТА
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ВЭЖХ
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Суппозитории от белого до белого со слегка желтоватым оттенком цвета, со слабым ароматическим запахом торпедообразной формы
На хроматограмме испытуемого раствора должен наблюдаться основной пик, соотвествующий по времени удерживания пику триазатрициклотетрадекана на хроматограмме стандартного раствора
В поле зрения микроскопа должны отсутствовать частицы, размер которых превышает 30 мкм
Должна быть не выше 37,0 °С
Допустимое отклонение массы единичного суппозитория - 5 % от средней массы; не более 2 суппозиториев из 20 - от 5 % до 10 % от средней массы.
ЛС должно выдерживать требования ГФ РФ ОФС.1.4.2.0008.18 (резульат удовлетворительный, если при n = 10 первый показатель приемлемости AV ≤ L1)
Величина времени полной деформации не должна превышать 15 мин
В соотвествии с требованиями ГФ РФ  ОФС.1.2.4.0002.18 Категория 3А
Содержание триазатрициклотетрадекана должно составлять от 99,00-101,00 %
Серия № 1-13052019 от 13.05.2019 г.при температуре 30±2°С и относительной влажности 65±5%
0
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,2±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,05
Соответствует
99,85
3
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,1±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,05
Соответствует
99,85
6
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,4±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,08
Соответствует
98,24
9
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,4±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,08
Соответствует
97,98
При температуре 5±3°С и относительной влажности 65±5 %
0
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,5±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,08
Соответствует
99,95
3
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,5±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,05
Соответствует
99,88
6
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,4±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,06
Соответствует
99,82
9
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,4±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,05
Соответствует
99,80
12
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,4±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,04
Соответствует
99,75
18
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,5±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,05
Соответствует
99,73
24
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,4±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,05
Соответствует
99,71
Серия № №2-14052019 от 14.05.2019 г.при температуре 30±2°С и относительной влажности 65±5 %
0
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,0±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,05
Соответствует
99,95
3
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,6±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,05
Соответствует
99,75
6
Соответствует
Соответствует
Соответствует
37,7±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,05
Соответствует
98,44
9
Соответствует
Соответствует
Соответствует
37,8±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,05
Соответствует
98,27
При температуре 5±3°С и относительной влажности 65±5 %
0
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,0±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,06
Соответствует
99,94
3
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,4±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,06
Соответствует
99,87
6
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,3±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,08
Соответствует
99,85
9
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,3±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,07
Соответствует
99,85
12
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,4±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,08
Соответствует
99,78
18
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,4±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,06
Соответствует
99,75
24
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,4±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,06
Соответствует
99,75
Серия № 3-15052019 от 14.05.2019 г.при температуре 30±2°С и относительной влажности 65±5%
0
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,0±0,4
Соответствует
Соответствует
8±0,06
Соответствует
99,97
3
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,6±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,07
Соответствует
99,85
6
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,7±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,07
Соответствует
99,22
9
Соответствует
Соответствует
Соответствует
37,4±0,4
Соответствует
Соответствует
10±0,07
Соответствует
98,75
При температуре 5±3°С и относительной влажности 65±5 %
0
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,0±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,06
Соответствует
99,94
3
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,0±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,07
Соответствует
99,87
6
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,0±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,06
Соответствует
99,85
9
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,0±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,07
Соответствует
99,85
12
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,0±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,06
Соответствует
99,84
18
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,0±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,07
Соответствует
99,76
24
Соответствует
Соответствует
Соответствует
36,0±0,4
Соответствует
Соответствует
9±0,06
Соответствует
99,75
э
На основании проведенных исследований было установлено, что при температуре экспериментального хранения (t) 30°С серии 1-13052019, 2-14052019, 3-15052019 имели отклонения по показателям «Температура плавления» и «Количественное определение», которые прослеживались на временной точке с 6 месяца. Для чистоты эксперимента и анализа полученных данных все три серии были сняты с дальнейшего проведения эксперимента на 9 месяце хранения.
На 18 месяце суппозитории отвечали всем требованиям значений проекта спецификации при температуре хранения 5±3°С. Количественное содержание триазатрициклотетрадекана изменялось в допустимом интервале значений. Температура плавления находилась в интервале допустимых отклонений.
Таким образом, исследуемые суппозитории остаются стабильными при хранении в течение двух лет при температуре при температуре 5±3°С.
Для определения срока годности была использован методика расчета, основанная на правиле Вант-Гоффа о 2-4-кратном росте скоростей химических реакций при увеличении температуры на 10°С согласно ОФС.1.1.0009.18 «Стабильность и сроки годности лекарственных средств».
Температурный коэффициент скорости химической реакции (А) принят равным 2,5.
э
xp
э
Температура экспериментального хранения (t) ≥ температуру хранения (t) не менее чем на 10°С (на 25°С, t= 5°С).
э
Рекомендуемая и оптимальная температура экспериментального хранения (t) для испытания стабильности ЛС «Суппозитории ректальные, обезболивающие», методом «ускоренного старения» составляет 30±2°С.
xp
Для расчета коэффициента соответствия использовали среднюю температуру 30±2°С, как температуру хранения (t):
30-5/10
2,5
К = 2,5= 2,5= 9,8821≈ 10.
В результате проведенных исследований стабильности опытных образцов 3-х серий ЛС «Суппозитории ректальные, обезболивающие», суппозитории в процессе хранения в сухом, защищенном от света месте при температуре 30±2°С были обнаружены отклонения от требований спецификации, начиная с 6 месяца исследования.
Соответственно, ЛС «Суппозитории ректальные, обезболивающие», может храниться 3 месяца при температуре 30±2°С без отклонений от требований проекта спецификации.
Рассчитывали срок хранения при экспериментальном хранении методом «ускоренного старения» при температуре 5±3°С в течение 3 месяцев.
3 месяца = 91 суток.
С = 9 * 91 = 819 суток при температуре 5±3°С.
Соотношение срока экспериментального хранения и срока хранения в месяцах указано в таблице 9.
Таблица 9. Соотношение срока экспериментального хранения и срока хранения
Срок экспериментального хранения методом «ускоренного старения»при температуре 30±2°С, мес.
Срок хранения, мес.
3
≈ 27
Хранение 3-х серий ЛС «Суппозитории ректальные, обезболивающие», при температуре 30±2°С может рассматриваться как условия «Ускоренного старения» с разницей температур экспериментального и рекомендованного хранения на 25°С.
Воздействия повышенной температуры в течение 6 месяцев не повлияло на качество 3-х серий ЛС «Суппозитории ректальные, обезболивающие», что позволяет обеспечить соответствие требованиям НД и утвердить рекомендуемый срок хранения: не более 2 лет при температуре от 2 до 8°С.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Лавров, М.И. Новые модуляторы AMPA рецепторов: дизайн и исследование: диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук, специальности: 02.00.03 - Органическая химия, 02.00.16 - Медицинская химия / Лавров Мстислав Игоревич; Московский государственный университет М.В. Ломоносова. - Москва, 2011. - 150 с.
2. Государственная фармакопея Российской Федерации. - XIV изд. - В 4-х тт.: утверждена приказом Министерства здравоохранения 31 октября 2018 г. № 749. - Москва, 2018.
3. Воюцкий, С.С. Курс коллоидной химии: для хим.-технол. специальностей вузов / С.С. Воюцкий. - Москва: Химия. 1976. - 512 с. - Текст: непосредственный.
4. Вузовский, А.Н. Разработка состава и технологии суппозиторной основы дифильного типа / А.Н. Вузовский, И.А. Казарян. // Фармация. - 1989. - № 4. - С. 21-23.
5. Du, J. et al. The anticonvulsants lamotrigine, riluzole, and valproate differentially regulate AMPA receptor membrane localization: relationship to clinical effects in mood disorders / J. Du, K. Suzuki, Y. Wei, Y. Wang, R. Blumenthal, Z. Chen, C. Falke, C.A. Zarate, Jr. Manji. // Neuropsychopharmacology. - 2007. Apr. - № 32(4). - P.793-802. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16936714 (date of treatment: 03.03.2020).
6. Головкин, В. А. Влияние лекарственных форм и путей введения препаратов на их фармакокинетику и биодоступность / В. А. Головкин. // Врачебное дело. - 1987. - № 11. - С. 85-89.