ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НА СВОБОДНЫЙ ВИТАМИН D

1. Способ анализа образца крови и компонентов крови на присутствие свободного витамина D (включая витамин D и метаболиты витамина D, такие как 25-гидроксивитамин D и 1,25-дигидроксивитамин D), включающий
(a) добавление иммобилизованного связывающего белка или антитела к 25-(ОН)-витамину D в образец;
(b) смешивание образца с разбавителем, причем указанный разбавитель содержит фторалкильное поверхностно-активное вещество;
(c) инкубацию образца в течение периода времени, достаточного для того, чтобы обеспечить связывание необходимого количества витамина D со связывающим белком;
(d) удаление несвязанной сыворотки и компонентов сыворотки путем промывки;
(e) осуществление анализа иммобилизованных связывающих белков или антител, содержащих захваченный витамин D, методом конкурентного связывания с использованием меченого соединения витамина D;
(f) определение концентрации меченого соединения витамина D, связанного со связывающим белком.
2. Способ по п.1, в котором фторалкильное поверхностно-активное вещество представляет собой перфтрокарбоновую кислоту, предпочтительно выбранную из группы, состоящей из перфтороктановой килоты, перфторогептановой кислоты и их смесей.
3. Способ по п.1, в котором концентрация ПАВ составляет 0,05-0,5%масс., предпочтительнее 0,1-0,25%масс.
4. Способ по п.2, в котором концентрация ПАВ составляет 0,05-0,5%масс., предпочтительнее 0,1-0,25%масс.
5. Способ по п.1, в котором разбавитель представляет собой буферный раствор с буферным диапазоном рН от 6,0 до 8,0.
6. Способ по п.2, в котором разбавитель представляет собой буферный раствор с буферным диапазоном рН от 6,0 до 8,0.
7. Способ по п.3, в котором разбавитель представляет собой буферный раствор с буферным диапазоном рН от 6,0 до 8,0.
8. Способ по п.4, в котором разбавитель представляет собой буферный раствор с буферным диапазоном рН от 6,0 до 8,0.
9. Способ по любому из пп.1-8, в котором связывающий белок представляет собой антитело.
10. Способ по любому из пп.1-8, в котором связывающий белок представляет собой витамин D-связывающий белок.
11. Способ по любому из пп.1-8, в котором образец крови представляет собой используют плазму или сыворотку крови человека.
12. Способ по любому из пп.1-8, в котором связывающий белок используют в виде покрытия на магнитных частицах.
13. Способ по любому предыдущих пунктов, в котором меченое соединение витамина D содержит метку, выбранную из группы, состоящей из радиоизотопных меток, флуоресцентных меток, люминесцентных меток, биотиновых меток, золотых меток и ферментных меток.
14. Способ по любому из пп.1-8, в котором концентрацию свободного определяют с учетом концентрации калибратора для 25-(ОН)-витамина D.
15. Способ анализа образца крови или компонентов крови на присутствие свободного витамина D, включающий на первой стадии захват витамина D иммобилизованным связывающим агентом, и на следующей стадии осуществление анализа захваченного витамина D методом конкурентного связывания с использованием меченого соединения витамина D, причем захват свободного витамина D осуществляют путем секвестрирования количества связанного витамина D, достаточно малого для того, чтобы обеспечить возможность проведения повторного теста, в котором образец, из которого осуществляли захват витамина D, подвергают тем же стадиям захвата витамина, и анализа конкурентного связывания, причем измеренные концентрации витамина D, полученные после двух анализов конкурентного связывания, по существу, равны.
16. Способ по п.15, осуществляемый в соответствии с любым из пп.1-14.
17. Способ по п.15 или 16, в котором доля секвестированного витамина D составляет 0,1-10%масс. от общего количества витамина D, присутствующего в образце, и предпочтительно не превышает 5%масс.
18. Способ количественного определения свободного витамина D в образце сыворотки или плазмы, включающий стадии (а), (b), (с) и (d) по п.1, и количественный анализ захваченного витамина D методом масс-спектроскопии.
19. Тест-система для определения свободного витамина D в крови или компонентах крови, причем указанная тест-система реализует способ по любому из предыдущих пунктов.
20. Набор для проведения иммунологического анализа способом по любому из пп.1-14, содержащий витамин D-связывающий белок, иммобилизованный на твердой фазе, и меченое соединение витамина D.