КОМПОЗИЦИЯ НАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ГРИППА
NASAL INFLUENZA VACCINE COMPOSITION

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к композиции вакцины против гриппа для введения путем распыления в слизистую оболочку носа.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Грипп является острой инфекцией дыхательных путей, вызванной вирусом гриппа, в частности грипп становится эпидемией зимой год за годом. Кроме того, грипп иногда приводит к пандемии и многие люди заболевают настолько серьезно, что это приводит к смерти. Для гриппа известно, что вакцинация с помощью вакцины против гриппа может привести к некоторым превентивным результатам, поэтому люди широко вакцинируются до сезона эпидемии.
Вакцина против гриппа, одобренная в Японии, является только инактивированным белковым компонентом антигена вируса гриппа, предназначенным для подкожной вакцинации, и в настоящее время соответствующая расщепленная вакцина используется в качестве сезонной вакцины против гриппа. Такая вакцина для подкожной вакцинации высокоэффективна для предотвращения тяжести заболевания при инфекции гриппа, как, например, пневмонии, но она имеет низкую активность индуцированных антител в верхней дыхательной мембране слизистой, которая является областью, инфицированной вирусом гриппа, что является недостаточным в качестве защитной активности от инфекции.
Для решения вышеизложенной проблемы вакцинации против гриппа до настоящего времени были предприняты самые разные попытки, в которых вакцина для назального введения привлекла внимание как новая вакцинация. Однако было сообщено, что невозможно индуцировать высокий иммунный ответ на вирус гриппа, даже хотя расщепленная вакцина, которая была широко использована в существующей в настоящее время клинической практике, вводится напрямую назально экспериментальным животным или людям.
При таких условиях первая в мире расщепленная вакцина против вируса гриппа для назального введения, которая включает неустойчивый к нагреванию токсин Esherichia coli в качестве адъюванта, была одобрена в Швейцарии [Berna Biotech, Швейцария; Коммерческое название: Назалфлу] и ее продажа началась в октябре 2000, но ее клиническое применение было отозвано в феврале 2004 из-за токсичности адъюванта. И Патентная ссылка 1 также раскрывает вакцину против гриппа для назального введения, которая включает адъювант, что указывает на то, что иммунная индукция может быть улучшена путем использования адъюванта. Однако токсичность адъювантов является причиной для беспокойства для практического использования.
Для назального введения необходимо также учитывать сложное строение назальной полости и желательно делать вакцину от гриппа широко распыляемой, прикрепляемой и удерживаемой длительное время в носовой полости. Например, основа (вещество), раскрытая в Патентной ссылке 2, может быть использована для введения распылением.
Как было упомянуто выше, было желательно разработать вакцину против гриппа для назального введения как вакцину против гриппа следующего поколения и ввести ее в практическое применение, что имеет место с общепринятой вакциной против гриппа для подкожного или внутримышечного введения. Однако существует ряд проблем для практического применения, например, как следует уменьшить токсичность адъюванта, используемого для увеличения иммунной индукции.
ПРЕДЫДУЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[Патентная ссылка]
[Патентная ссылка 1] WO 2010/114169
[Патентная ссылка 2] WO 2007/123193
CУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Одной из целей настоящего изобретения является предоставить композицию вакцины против вируса гриппа для введения путем распыления в слизистую носа, которая готовится с применением инактивированного целого вириона гриппа в качестве антигена, который был уже одобрен, но без использования адъюванта, которая проявляет высокую эффективность и низкие побочные эффекты несмотря на низкий уровень антигена; ее производство и способ для предотвращения гриппа. Настоящие авторы всесторонне изучили вышеуказанную проблему и обнаружили, что комбинация (i) гелевой основы (вещество) для введения распылением в слизистую носа, включающей карбоксивинил полимер, который обрабатывают путем приложения внешней силы сдвига, чтобы увеличить выполнение распыления и (ii) инактивированного целого вириона гриппа, может усилить иммунную индукцию в человеке без адъюванта. На основании новых сведений было выполнено настоящее изобретение. Настоящее изобретение может предоставить следующие варианты осуществления изобретения.
[1] Композиция вакцины против гриппа для введения путем распыления в слизистую носа, включающая
(i) инактивированный целый вирион гриппа и (ii) гелевое основное вещество, включающее карбоксивинил полимер, который обрабатывают путем добавления внешней силы сдвига для усиления выполнения распыления,
которая не включает адъювант.
[2]. Композиция (1) вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа,
где количество (i) инактивированного целого вириона гриппа равно 1-500 мкг HA/мл в расчете на тип штамма вируса вакцины.
[3] Композиция вакцины против гриппа [1] или [2] для введения распылением в слизистую носа, которая включает от 0,1 масс./об.% до 1,0 масс./об.% карбоксивинил полимера.
[4]. Композиция вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа по любому из от [1] до [3], где выполнение распыления происходит для контролирования (1) распределения частиц распыляемой композиции по размеру, (2) постоянной плотности спрея и/или (3) угла распыления.
[5]. Композиция вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа по любому из от [1] до [4], которая приготовлена путем обработки основного гелевого вещества, включающего от 0,5 масс./об.% до 2,0 масс./об.% карбоксивинил полимера, путем приложения внешней силы сдвига для контролирования (1) распределения частиц распыляемой композиции по размеру, (2) постоянства плотности спрея или (3) угла распыления, относительно осуществления распыления, создания основного гелевого вещества для введения путем распыления и последующего
равномерного, без стресса в течение короткого времени, смешивания полученного основного гелевого вещества с запасным раствором вируса, включающего инактивированный целый вирион гриппа.
[6]. Композиция вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа по любому из от [1] до [5], которую готовят с основным гелевым веществом для введения распылением, включающим карбоксивинил полимер, который обрабатывают путем приложения внешней силы сдвига для увеличения осуществления распыления, которое состоит в том, чтобы контролировать, что (1) распределение частиц по размерам распыляемой композиции было таким, чтобы средний размер частиц находился в диапазоне от 30 мкм до 80 мкм и распределение частиц между 10 мкм и 100 мкм составляло 80% или более,
(2) плотность спрея является равномерной для образования однородной «цельнозерновой» формы;
(3) угол распыления регулируется в диапазоне от 30º до 70º.
[7]. Композиция вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа по любому из от [1] до [5], которую готовят для введения распылением с основным гелевым веществом, включающим карбоксивинил полимер, которое обрабатывают путем приложения внешней силы сдвига для увеличения осуществления распыления, которое состоит в том, чтобы контролировать, что (1) распределение частиц по размерам распыляемой композиции было таким, чтобы средний размер частиц находился в диапазоне от 40 мкм до 70 мкм и распределение частиц между 10 мкм и 100 мкм составляло 90% или более,
(2) плотность спрея являлась постоянной для образования однородной формы целого зерна и
(3) угол распыления регулировался в диапазоне от 40° до 60°.
[8]. Композиция вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа по любому из от [1] до [5], которую готовят с основным гелевым веществом для введения распылением, содержащим карбоксивинил полимер, которое обрабатывают путем приложения внешней силы сдвига для увеличения осуществления распыления, чтобы контролировать (1) распределение частиц распыляемой композиции по размерам, (2) постоянную плотность спрея и (3) угол распыления, для того, чтобы позволить распылительному устройству осуществлять введение распылением без функции накачивания.
[9] Способ предотвращения гриппа, включающий введение композиции вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа по одному из от [1] до [8] нуждающемуся индивидууму с применением устройства, которое может распылять вязкий состав от ноздри до слизистой внутри носа.
[10]. Применение композиции вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа по одному из от [1] до [8] для предупреждения гриппа.
[Эффект изобретения]
Настоящее изобретение сделало возможным предоставить композицию вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа, включающую инактивированный целый вирион гриппа, в качестве активного ингредиента, но не содержащую адъювант, которая индуцирует высокий иммунный ответ несмотря на низкий уровень антигена, и небольшие побочные эффекты, потому что композиция не включает адъюванта. Ожидается, что композиция вакцины против гриппа будет подходящей для использования во время эпидемии гриппа.
Композиция вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа по настоящему изобретению может быть широко распространена, прикреплена и удержана в течение долгого времени в слизистой носа, так как композиция включает основное гелевое вещество для введения распылением в слизистую носа, включающее карбоксивинил полимер, которое обработано путем приложения внешней силы сдвига для увеличения осуществлении распыления, таким образом, композиция вакцины от гриппа настоящего изобретения индуцирует высокий иммунный ответ несмотря на низкий уровень антигена.
В соответствии с процессом приготовления композиции вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа по настоящему изобретению, может быть предоставлена композиция вакцины от гриппа для введения распылением в слизистую носа, которая хорошо сохраняет антигенность инактивированного целого вириона потому, что вирион обрабатывается в течение короткого времени без стресса и индуцирует высокий иммунный ответ и небольшие побочные эффекты.
Хотя настоящее изобретение не включает адъювант в качестве вещества, усиливающего иммунный ответ, настоящее изобретение может предоставить равную или более сильную иммунную индукцию для верхней респираторной слизистой мембраны и целого тела, по сравнению с композицией, включающей вакцину против вируса гриппа и адъювант.
ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение предоставляет композицию вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа, включающую основанное на геле вещество для введения распылением, содержащее карбоксивинил полимер, которое обрабатывают путем приложения внешней силы сдвига для увеличения осуществления распыления, и инактивированный целый вирион гриппа, которая характеризуется тем, что не включает адъювант.
«Основанное на геле вещество для введения распылением, содержащее карбоксивинил полимер, которое обрабатывают путем приложения внешней силы сдвига для увеличения осуществления распыления», используемое здесь, означает, например, «основанное на геле вещество, включающее кожа/слизистое адгезивное вещество», раскрытое в WO 2007/123193, которое является основным веществом, включающим геллановую камедь, вязкость которой увеличивается путем приложения внешней силы сдвига. Основное вещество характеризуется тем, что его вязкость может быть увеличена до ряда значений путем приложения внешней силы сдвига, и распыляющий угол спрея из контейнера со спреем и плотность спрея могут контролироваться для удовлетворения цели. Для прививки многим людям в развивающихся странах и при пандемии контейнер для распыления безвоздушного типа с рельефом верхнего давления, раскрытый в WO 2007/123193 и WO 2007/123207 в качестве контейнера для многократного распыления, может быть использован для данной цели, так как контейнер для распыления может быть установлен для распыления под любым углом или любым диапазоном углов и может быть использован без остатка в контейнере. Когда используют такое основанное на геле вещество для введения распылением настоящего изобретения, свойство распыляться и свойство прикрепляться к слизистой носа инактивированного целого вириона гриппа может быть сильно улучшено в течение длительного периода времени, тем самым может быть улучшена иммуногенность вакцины.
Карбоксивинил полимер, который является веществом основного вещества для введения распылением в слизистую носа настоящего изобретения, является гидрофильным полимером, приготовленным путем полимеризации акриловой кислоты в качестве основного ингредиента, которое может использовать без каких-либо ограничений фармацевтические добавки, которые обычно используют для приготовления водных гелевых веществ.
Содержание основного гелевого вещества, включающего карбоксивинил полимер, которое обрабатывают путем приложения внешней силы сдвига для увеличения осуществления распыления, равно 0,1-1,0 масс./об.%, предпочтительно 0,3-0,7 масс./об.% по содержанию карбоксивинил полимера.
Вакцина по настоящему изобретению характеризуется содержанием в качестве антигена инактивированного целого вириона гриппа. Инактивированный целый вирион гриппа, используемый в данном документе, означает вирион, который готовят путем культивирования вируса гриппа для создания суспензии этого вируса и очистки суспензии вируса с сохранением его вирусной морфологии. Таким образом, вакцина гриппа по настоящему изобретению означает вакцину за исключением расщепленной вакцины (включая субвирионную) и субъединичной вакцины (включая очищенный HA или NA), и на нее также ссылаются как на цельновирусную вакцину.
Упомянутый выше инактивированный целый вирион гриппа предпочтительно является таким вирионом, который выделяют из суспензии вируса в отсутствие поверхностно-активных веществ или эфиров. Запасной раствор вируса, используемый в настоящем документе, означает раствор вируса, включающий инактивированный целый вирион гриппа, который выделяют или концентрируют, чтобы смешать с основным гелевым веществом для введения распылением в слизистую носа. С точки зрения вакцины по настоящему изобретению, концентрация инактивированного целого вириона гриппа равна предпочтительно 1-500 мкг HA/мл (в эквиваленте HA), более предпочтительно 20-250 мкг HA/мл (в эквиваленте HA) на тип штамма вирусной вакцины. Вышеупомянутая концентрация может быть определена путем измерения концентрации HA белка.
Вирус гриппа, используемый в настоящем документе, включает все типы известного в настоящее время вируса гриппа и все его подтипы, а также все типы и все подтипы вируса гриппа, выделенные или идентифицированные в будущем. Кроме того, с точки зрения необходимости также эффективно предупреждать инфекцию, которая не стала до настоящего времени эпидемической среди людей, но может стать эпидемической для людей в будущем, комбинация вируса гриппа подтипа А, выбранного из группы, включающей подтипы H1 - H16, за исключением подтипов H1 и H3 (то есть H2, H4-H16), и вируса гриппа А подтипа N1-N9 является предпочтительной. На эти подтипы также ссылаются как на новый тип вируса гриппа. В качестве упомянутых выше подтипов, комбинация подтипа, выбранного из группы, состоящей из подтипов H5, H7 и H9, и подтипа, выбранного из группы, состоящей из подтипов N1-N9, является более предпочтительной. Вирус гриппа может происходить из типа штамма, двух или более типов штаммов, принадлежащих одному и тому же подтипу, или двух или более типов штаммов, принадлежащих разным подтипам.
Вирус гриппа, используемый в данном документе, включает штамм, выделенный из инфицированных животных или людей, и рекомбинантный вирус, созданный генетически в культивируемых клетках. В качестве метода для культивирования вируса гриппа, вирус может быть посеян в аллантоисной полости куриных яиц и культивирован, или может быть инфицирован в культивируемые клетки и культивирован.
Адъювант - это обобщенный термин веществ, обладающих модулирующей активностью иммунного ответа, как, например, увеличением или подавлением, и используется как вещество, усиливающее иммунный ответ, предназначенное для добавления в вакцину для увеличения иммуногенности антигена. До настоящего времени было изучено много адъювантов. Применение адъюванта усиливает иммунное действие вакцины, но оно имеет недостатки побочных эффектов, как, например, воспаление. Некоторые адъюванты могут быть выбраны в качестве кандидатов для использования в вакцине для назального введения, но не существует ни одной утвержденной вакцины для назального введения, содержащей адъювант, поскольку не было адъюванта, обладающего повсеместной безопасностью.
Настоящие авторы обнаружили, что является возможным приготовить вакцину, обладающую высокой эффективностью и небольшими побочными эффектами, несмотря на отсутствие адъюванта и более низкий уровень антигена, когда с вышеупомянутой цельновирусной вакциной используется основное гелевое вещество для введения распылением в слизистую носа, которое имеет вышеупомянутое полезное проведение распыления, такое как высокое адгезивное свойство к слизистой носа. Кроме того, настоящие авторы обнаружили также, что с применением устройства, которое может распылять даже основное гелевое вещество, имеющее высокую вязкость, композицию вакцины против гриппа для введения распылением в слизистую носа, когда средний размер частиц распыляемой композиции находится в подходящем диапазоне от 30 мкм до 80 мкм (предпочтительно в диапазоне от 40 мкм до 70 мкм), распределение частиц по размеру между 10 мкм и 100 мкм равно 80% или более (предпочтительно 90% или более), угол распыления из приспособления установлен в диапазоне от 30° до 70° (предпочтительно в диапазоне от 40° до 60°) так, что композиция может быть введена в желаемое место носовой полости и плотность спрея является равномерной, чтобы образовывать однородную «полнозерновую» форму, которая может быть распылена в слизистую носа. Далее настоящие авторы также открыли его процесс и способ для предотвращения гриппа с применением композиции. Основываясь на новых открытиях, было выполнено настоящее изобретение.
Вакцина по настоящему изобретению, кроме инактивированного целого вириона гриппа и основного гелевого вещества для введения распылением в слизистую носа, может включать дополнительный фармацевтически приемлемый носитель(ли). Носитель, используемый в настоящем изобретении, может быть таким носителем, который обычно используют при приготовлении вакцины или препарата для введения в носовую полость, который включает, например, физиологический раствор, забуференный физиологический раствор, декстрозу, воду, глицерин, изотонический водный буферный раствор и их комбинации. Также вакцина по настоящему изобретению может, если необходимо, включать консервант (например, тимеросал), изотоническое вещество, регулятор pH, поверхностно-активное вещество и инактивирующее вещество (например, формалин).
Вакцину по настоящему изобретению используют для введения распылением в носовую полость.
Вакцина по настоящему изобретению может предотвращать грипп или убирать его симптомы.
Для введения вакцины может быть использован контейнер для многоразового использования или распыляющее устройство в обе ноздри без функции накачивания, обычно одноразовое распыляющее устройство в обе ноздри без функции накачивания.
Дозировка вакцины должна быть определена, учитывая возраст, пол и вес пациента или другие факторы, и фактически вакцина может вводиться один или более раз в количестве обычно 1 мкг HA- 150 мкг HA, предпочтительно 5 мкг HA - 50 мкг HA в качестве антигена на тип штамма вируса вакцины. Предпочтительно вакцину вводят многократно. В таком случае интервал между введениями составляет предпочтительно от 1 до 4 недель.
Пример
Здесь и далее изобретение иллюстрируется на основе примеров, но не ограничивается этим.
В соответствии со способами, продемонстрированными ниже, были приготовлены основное гелевое вещество и три вида запасных растворов вируса, и основное гелевое вещество и каждый запасной раствор вируса были смешаны, как показано ниже для приготовления композиций вакцин против гриппа в качестве примеров.
<Приготовление основного гелевого вещества>
Пример основного гелевого вещества (1)
Ингредиенты
Количество
Процесс Приготовления
Карбоксивинил полимер
11,0 мг
Каждый ингредиент, демонстрируемый в левой колонке,смешивали в отношении, соответствующем каждому весу, представленному там, и перемешивали до гомогенного состояния. Затем смеси придавали внешнюю силу сдвига путем высокоскоростного вращения с типом переменно образующего струйный поток высокоскоростного вращающего типа эмульгирующего устройства. Полученное основное вещество, вязкость которого была достаточно дополнена внешней силой сдвига, нагревали до 90°С в течение 20 минут для образования основного гелевого вещества для введения распылением.Аспект: прозрачное и бесцветное основное гелевое вещество, почти без запахаpH: 7, 15Вязкость: 4,000 мПа сек
L-аргинин
24,0 мг
Концентрированный глицерин
20,0 мг
Очищенная вода
q.s.
суммарный
1,0 мл
<Приготовление запасного вирусного раствора, включающего инактивированный целый вирион гриппа >
Пример запасного раствора вируса (1)
Ингредиенты
Количество
Процесс Приготовления
Инактивированный целый антиген вируса гриппа A/Victoria/210/2009 (H3N2)
180 мкг HA
Штамм для приготовления вакцины был посеян в аллантоисную полость оплодотворенных яиц и культивирован, и затем была собрана суспензия вируса. Для очистки суспензии вируса она была центрифугирована или профильтрована и ультрафильтрована, чтобы сконцентрировать. Затем с целью очистки вируса фильтрат был ультрацентрифугирован при, например, центрифугировании в градиенте плотности сахарозы для получения чистого раствора вируса. Очищенный раствор вируса был инактивирован формалином для получения очищенного раствора инактивированного вируса. И затем этот раствор был ультрафильтрован для получения запасного раствора вируса.
Гидрофосфат натрия гидрат
3,53 мг
Дигидрофосфат натрия
0,54 мг
Хлорид натрия
8,50 мг
Очищенная вода
Суммарный 1,0 мл
Пример запасного раствора вируса (2)
Ингредиенты
Количество
Процесс Приготовления
Инактивированный целый антиген вируса гриппа A/Indonesia/5/05 (H5N1)
180 мкг HA
Штамм для приготовления вакцины был посеян в аллантоисную полость оплодотворенных яиц и культивирован, и затем была собрана суспензия вируса. Для очистки суспензии вируса она была центрифугирована или профильтрована и ультрафильтрована, чтобы сконцентрировать. Затем с целью очистки вируса фильтрат был ультрацентрифугирован при, например, центрифугировании в градиенте плотности сахарозы для получения чистого раствора вируса. Очищенный раствор вируса был инактивирован формалином для получения очищенного раствора инактивированного вируса. И затем этот раствор был ультрафильтрован для получения запасного раствора вируса.
Гидрофосфат натрия гидрат
3,53 мг
Дигидрофосфат натрия
0,54 мг
Хлорид натрия
8,50 мг
Очищенная вода
Суммарный 1,0 мл
Пример запасного раствора вируса (3)
Ингредиенты
Количество
Процесс Приготовления
Инактивированный целый антиген вируса гриппа A/California/7/2009 (H1N1) pdm09
60 мкг HA
Штамм для приготовления вакцины был посеян в аллантоисную полость оплодотворенных яиц и культивирован, и затем была собрана суспензия вируса. Для очистки суспензии вируса она была центрифугирована или профильтрована и ультрафильтрована, чтобы сконцентрировать. Затем с целью очистки вируса фильтрат был ультрацентрифугирован при, например, центрифугировании в градиенте плотности сахарозы для получения чистого раствора вируса. Очищенный раствор вируса был инактивирован при помощи β-пропиолактона и формалина для получения очищенного инактивированного раствора вируса. И затем этот раствор был ультрафильтрован для получения запасного раствора вируса.
Инактивированный целый антиген вируса гриппа A/Victoria/365/2010 (H3N2)
60 мкг HA
Инактивированный целый антиген вируса гриппа B/Wisconsin/01/2010
60 мкг HA
Гидрофосфат натрия гидрат
3,53 мг
Дигидрофосфат натрия
0,54 мг
Хлорид натрия
8,50 мг
Очищенная вода
Суммарный 1,0 мл
<Смесь основного гелевого вещества и запасного раствора вируса>
Пример основного гелевого вещества (1) и каждый из Примеров запасного раствора вируса (1)-(3), упомянутых выше, были смешаны в отношении 1:1 при перемешивании для создания каждой гомогенной композиции вакцины против гриппа Примеров 1, 2 и 3 соответственно. Композиции каждого примера и их физические свойства/проведения распыления демонстрируются ниже. Смешивание при перемешивании может быть выполнено мягко за короткое время без стрессирования инактивированного целого антигена вируса. Количества каждого ингредиента в получаемых композициях вакцин против гриппа, их физические свойства и проведение их распыления, получаемое путем распыления композиций подходящим устройством, также демонстрируются ниже.
Пример 1
Ингредиенты
Количество
Физическое свойство/выполнение распыления
Инактивированный целый антиген вируса гриппа A/Victoria/210/2009 (H3N2)
90 мкг HA
pH: 7,25Вязкость: 500 мПа секВыполнение распыления при распылении 250 мкл раствора с помощью приспособления без функции накачиванияСредний размер частиц распыленного препарата: 52,7 мкмПроцент размера частиц между 10 мкм и 100 мкм равен 91,5%Угол распыления из устройства: 53ºПлотность спрея: «цельнозерновой» равномерный круг.
Карбоксивинил полимер
5,50 мг
L-аргинин
12 мг
Концентрированный глицерин
10,00 мг
Гидрофосфат натрия гидрат
1,765 мг
Дигидрофосфат натрия
0,27 мг
Хлорид натрия
4,25 мг
Очищенная вода
q.s.
суммарный
1,0 мл
Пример 2
Ингредиенты
Количество
Физическое свойство/выполнение распыления
Инактивированный целый антиген вируса гриппа A/Indonesia/5/05 (H5N1)
90 мкг HA
pH: 7,10Вязкость: 430 мПа секОсмотическое давление: 293 мОсмВыполнение распыления при распылении 250 мкл раствора с помощью приспособления без функции накачивания:Средний размер частиц распыленного препарата: 55,2 мкмПроцент размера частиц между 10 мкм и 100 мкм равен 95,0%Угол распыления из устройства: 51ºПлотность спрея: «цельнозерновой» равномерный круг.
Карбокси винил полимер
5,50 мг
L-аргинин
12 мг
Концентрированный глицерин
10,0 мг
Гидрофосфат натрия гидрат
1,765 мг
Дигидрофосфат натрия
0,270 мг
Хлорид натрия
4,25 мг
Очищенная вода
q.s.
суммарный
1,0 мл
Пример 3
Ингредиенты
Количество
Физическое свойство/выполнение распыления
Инактивированный целый антиген вируса гриппа A/California/7/2009 (H1N1) pdm09
30 мкг HA
pH: 7,15Вязкость: 520 мПа секОсмотическое давление: 295 мОсмВыполнение распыления при распылении 250 мкл раствора с помощью приспособления без функции накачиванияСредний размер частиц распыленного препарата: 57,4 мкмПроцент размера частиц между 10 мкм и 100 мкм равен 95%Угол распыления из устройства: 52ºПлотность спрея: «цельнозерновой» равномерный круг.
Инактивированный целый антиген вируса гриппа A/Victoria/365/2011 (H3N2)
30 мкг HA
Инактивированный целый антиген вируса гриппа B/Wisconsin/01/2010
30 мкг HA
Карбоксивинил полимер
5,50 мг
L-аргинин
12 мг
Концентрированный глицерин
10,0 мг
Гидрофосфат натрия гидрат
1,765 мг
Дигидрофосфат натрия
0,270 мг
Хлорид натрия
4,25 мг
Очищенная вода
q.s.
суммарный
1,0 мл
В качестве композиции вакцины против гриппа без основного гелевого вещества были приготовлены Сравнительные примеры 1-4 в соответствии с композициями, продемонстрированными в следующих таблицах путем использования в некоторых случаях инактивированного целого антигена, примененного в вышеупомянутых примерах.
Сравнительный пример 1
Ингредиенты
Количество
Инактивированный расщепленный антиген вируса гриппа A/Uruguay/716/2007 (H3N2)
90 мкг HA
Гидрофосфат натрия гидрат
3,53 мг
Дигидрофосфат натрия
0,54 мг
Хлорид натрия
8,50 мг
Очищенная вода
q.s.
суммарный
1,0 мл
Сравнительный пример 2
Ингредиенты
Количество
Инактивированный целый антиген вируса гриппа A/Indonesia/5/05 (H5N1)
90 мкг HA
Гидрофосфат натрия гидрат
3,53 мг
Дигидрофосфат натрия
0,54 мг
Хлорид натрия
8,50 мг
Очищенная вода
q.s.
суммарный
1,0 мл
Сравнительный пример 3
Ингредиенты
Количество
Инактивированный целый антиген вируса гриппа A/California/7/2009 (H1N1) pdm09
30 мкг HA
Инактивированный целый антиген вируса гриппа A/Victoria/365/2010 (H3N2)
30 мкг HA
Инактивированный целый антиген вируса гриппа B/Wisconsin/01/2010
30 мкг HA
Гидрофосфат натрия гидрат
3,53 мг
Дигидрофосфат натрия
0,54 мг
Хлорид натрия
8,50 мг
Очищенная вода
q.s.
суммарный
1,0 мл
Сравнительный пример 4
Ингредиенты
Количество
Инактивированный расщепленный антиген вируса гриппа A/California/7/2009 (H1N1) pdm09
30 мкг HA
Инактивированный расщепленный антиген вируса гриппа A/Victoria/365/2010 (H3N2)
30 мкг HA
Инактивированный расщепленный антиген вируса гриппа B/Wisconsin/01/2010
30 мкг HA
Гидрофосфат натрия гидрат
3,53 мг
Дигидрофосфат натрия
0,54 мг
Хлорид натрия
8,50 мг
Очищенная вода
q.s.
суммарный
1,0 мл
Исследование для оценки иммунного ответа (1)
Каждой композицией вакцины против гриппа, приготовленной в Примере 1 и Сравнительном примере 1, были вакцинированы путем назального введения распылением при помощи соответствующего одноразового приспособления в количестве 0,25 мл для одной ноздри (эквивалент 45 мкг HA для обеих ноздрей) дважды с интервалом в 3 недели две группы, состоящие из 4 взрослых волонтеров в каждой группе.
Кровь и смывы из носовой полости были последовательно собраны, и был измерен и проанализирован титр их нейтрализующего антитела к штамму вакцины. Результаты представлены в таблице 1 для Примера 1 и в Таблице 2 для Сравнительного примера 1.
Таблица 1
No.
Пол
Нейтрализующее антитело титр в сыворотке
Нейтрализующее антитело титр смывов из носовой полости
Первона-чальный (до)
через 3 недели
через 6 недель
Первона-чальный (до)
через 3 недели
через 6 недель
01
м
80
≥1280
≥1280
40
640
640
02
м
5
5
40
<20
<20
40
03
F
20
160
320
<20
40
40
04
F
640
≥1280
≥1280
40
40
160
Таблица 2
No.
Пол
Нейтрализующее антителотитр в сыворотке
Нейтрализующее антителотитр смывов из носовой полости
Первона-чальный (до)
через 3 недели
через 6 недель
Первона-чальный (до)
через 3 недели
через 6 недель
01
M
40
160
160
20
80
160
02
M
<10
<10
10
20
20
80
03
M
20
20
20
40
80
320
04
M
<10
<10
<10
20
20
80
При сравнении результатов вакцины Примера 1 (запасной раствор вируса + основное гелевое вещество для введения распылением) и вакцины Сравнительного примера 1 (композиция, включающая инактивированный расщепленный антиген вируса гриппа без основного гелевого вещества) титр нейтрализующего антитела в сыворотке 3/4 субъектов, вакцинированных вакциной Сравнительного примера 1, не увеличился, в то время как титр нейтрализующего антитела в сыворотке 4/4 субъектов, вакцинированных вакциной Примера 1, увеличился и значительно увеличился. Титр нейтрализующего антитела в смывах с носовой полости увеличился во всех случаях в вакцинах как Примера 1, так и Сравнительного примера 1, но вакцина Примера 1 продемонстрировала большее увеличение.
Исследование для оценки иммунного ответа (2)
Каждой композицией вакцины против гриппа, приготовленной в примере 2 и Сравнительном примере 2, две группы, составленные из 25 взрослых волонтеров для Примера 2 и 24 взрослых волонтера для Сравнительного примера 2, были вакцинированы путем назального введения распылением при помощи соответствующего одноразового приспособления в количестве 0,25 мл для одной ноздри (эквивалент 45 мкг HA для обеих ноздрей), дважды с интервалом в 3 недели и еще один раз примерно через полгода, в совокупности три раза.
Кровь и смывы с носовой полости были собраны через 3 недели после третьей вакцинации, и был измерен и проанализирован титр их нейтрализующего антитела к штамму вакцины. Результаты представлены в Таблице 3.
Таблица 3
Вариация титра нейтрализующего антитела к A/Indonesia/5/05(H5N1)
Сыворотка
Смывы с носовой полости
Пример 2
Сравнительный пример 2
Пример 2
Сравнительный пример 2
до
после
до
После
до
после
до
После
Геометрический средний титр* (ГСТ)
5,0(<10)
164,5
5,0(<10)
84,8
10,0(<20)
105,6
10,0(<20)
46,2
ГСТ процента роста
32,9
17,0
10,5
4,6
Сравнивая результаты вакцины Примера 2 (запасной раствор вируса + основное гелевое вещество для введения распылением) и вакцину Сравнительного примера 2 (только запасной раствор вируса), было показано, что вакцина Примера 2, включающая основное гелевое вещество для введения распылением, увеличила иммунный ответ значительно больше, чем вакцина Сравнительного примера 2.
Известно, что человек в «наивном» состоянии, который никогда не контактировал с антигеном вируса гриппа (как например, младенцы и дети), индуцирует меньший иммунный ответ. Считалось, что иммунный ответ у таких чувствительных индивидуумов к вакцине гриппа может быть приблизительно оценен путем оценки иммунного ответа у здоровых взрослых на вакцину высоко патогенного птичьего вируса гриппа (H5N), поскольку почти все здоровые взрослые никогда не контактировали с птичьим вирусом гриппа (то есть в «наивном» состоянии).
Как показано в вышеизложенных результатах, было обнаружено, что даже для чувствительных индивидуумов титр нейтрализующего антитела в сыворотке и смывах с носовой полости может быть индуцирован на высоком уровне в три раза путем назального вакцинирования вакциной Примера 2 (запасной раствор вируса + основное гелевое вещество для введения распылением).
Аналитическое исследование иммунного ответа (3)
Каждой композицией вакцины против гриппа, приготовленной в Примере 3 и Сравнительном примере 3, две группы, состоящие из 26 взрослых волонтеров для Примера 3 и 25 взрослых волонтеров для Сравнительного примера 3, были вакцинированы путем назального введения распылением в количестве 0,25 мл для одной ноздри (в сумме 15 мкг HA для обеих ноздрей) дважды с интервалом в 3 недели соответствующим одноразовым устройством. И композицией вакцины против гриппа, приготовленной в Сравнительном примере 4 (используемая в настоящая время), была вакцинирована подкожно один раз в количестве 0,5 мл (15 мкг HA/штамм/0,5 мл) группа, состоящая из 38 взрослых волонтеров.
Кровь и смывы с носовой полости были собраны через 3 недели после последней вакцинации (2ая или 1ая), и в них был измерен и проанализирован титр нейтрализующих антител к штамму вакцины. Результаты представлены в Таблице 4.
Таблица 4
Вариация титра нейтрализующего антитела к A/Victoria/365/2011(H3N2)
Титр нейтрализующего антитела в сыворотке
Пример 3
Сравнительный пример 3
Сравнительный пример 4
носовой
носовой
подкожный
до
после
до
после
до
после
Геометрический средний титр* (ГСТ)
55,1
182,8
62,3
146,0
121,7
297,5
ГСТ процента роста
3,32
2,34
2,44
Сравнивая результаты назально введенной вакцины Примера 3(запасной раствор вируса + основное гелевое вещество для введения распылением), назально введенной вакцины Сравнительного примера 3 (только запасной раствор вируса) и введенной подкожно вакцины Сравнительного примера 4 (используемая в настоящее время вакцина для подкожного введения), было показано, что назально введенная вакцина Примера 3, включающая основное гелевое вещество для введения распылением, увеличила иммунный ответ значительно больше, чем назально введенная вакцина Сравнительного примера 3 или подкожно введенная вакцина Сравнительного примера 4.