ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ К BCMA

1. Химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий: внеклеточный домен, который содержит гуманизированное антитело к BCMA (антиген созревания B-клеток) или его антиген-связывающий фрагмент, которые связывают один или более эпитопов полипептида человеческого BCMA; трансмембранный домен, один или более внутриклеточных доменов передачи костимулирующего сигнала и домен передачи первичного сигнала.
2. CAR по п. 1, где гуманизированное антитело к BCMA или антиген-связывающий фрагмент, которые связывают полипептид человеческого BCMA, выбраны из группы, включающей: верблюжий Ig, IgNAR, Fab-фрагменты, Fab'-фрагменты, F(ab)'2-фрагменты, F(ab)'3-фрагменты, Fv, одноцепочечное Fv-антитело («scFv»), бис-scFv, (scFv)2, минитело, диатело, триатело, тетратело, стабилизированный дисульфидными связями Fv-белок («dsFv») и однодоменное антитело (sdAb, нанотело).
3. CAR по п. 2, где гуманизированное антитело к BCMA или антиген-связывающий фрагмент, которые связывают полипептид человеческого BCMA, представляют собой scFv.
4. CAR по любому из пп. 1-3, где гуманизированное антитело к BCMA или его антиген-связывающий фрагмент содержат один или более CDR, изложенных под любым из SEQ ID NO: 1-3.
5. CAR по любому из пп. 1-3, где гуманизированное антитело к BCMA или его антиген-связывающий фрагмент содержат один или более CDR, изложенных под любым из SEQ ID NO: 4-6.
6. CAR по любому из пп. 1-3, где гуманизированное антитело к BCMA или его антиген-связывающий фрагмент содержат последовательность вариабельной области легкой цепи, изложенную под любым из SEQ ID NO: 7-9.
7. CAR по п. 6, где последовательность вариабельной области легкой цепи содержит последовательности CDR, изложенные под SEQ ID NO: 1-3.
8. CAR по любому из пп. 1-3, 7, где гуманизированное антитело к BCMA или его антиген-связывающий фрагмент содержат последовательность вариабельной области тяжелой цепи, изложенную под любым из SEQ ID NO: 10-14.
9. CAR по п. 8, где последовательность вариабельной области тяжелой цепи содержит последовательности CDR, изложенные под SEQ ID NO: 4-6.
10. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, где трансмембранный домен получен из полипептида, выбранного из группы, включающей: альфа-, бета- или зета-цепь T-клеточного рецептора, CD3ε, CD3ζ, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD 16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD 134, CD137, CD152, CD 154 и PD1.
11. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, где трансмембранный домен получен из полипептида, выбранного из группы, включающей: CD8α; CD4, CD45, PD1 и CD152.
12. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, где трансмембранный домен получен из CD8α.
13. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, где трансмембранный домен получен из PD1.
14. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, где трансмембранный домен получен из CD152.
15. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, где один или более доменов передачи костимулирующего сигнала получены из костимулирующей молекулы, выбранной из группы, включающей: CARD11, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CD54 (ICAM), CD83, CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD152 (CTLA4), CD223 (LAG3), CD270 (HVEM), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1), CD278 (ICOS), DAP10, LAT, NKD2C SLP76, TRIM и ZAP70.
16. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, где один или более доменов передачи костимулирующего сигнала получены из костимулирующей молекулы, выбранной из группы, включающей: CD28, CD134 и CD137.
17. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, где один или более доменов передачи костимулирующего сигнала получены из костимулирующей молекулы, выбранной из группы, включающей: CD28, CD134 и CD137.
18. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, где один или более доменов передачи костимулирующего сигнала получены из CD28.
19. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, где один или более доменов передачи костимулирующего сигнала получены из CD134.
20. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, где один или более доменов передачи костимулирующего сигнала получены из CD137.
21. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, дополнительно содержащий полипептид шарнирной области.
22. CAR по п. 21, где полипептид шарнирной области содержит шарнирную область CD8α.
23. CAR по п. 21, где полипептид шарнирной области содержит шарнирную область PD1.
24. CAR по п. 21, где полипептид шарнирной области содержит шарнирную область CD152.
25. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, дополнительно содержащий спейсерную область.
26. CAR по п. 25, где полипептид спейсерной области содержит области CH2 и CH3 из IgG1 или IgG4.
27. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, дополнительно содержащий сигнальный пептид.
28. CAR по п. 27, где сигнальный пептид предусматривает сигнальный полипептид тяжелой цепи IgG1, сигнальный полипептид CD8α или сигнальный полипептид альфа-субъединицы рецептора GM-CSF человека.
29. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под любым из SEQ ID NO: 15-29, 71 и 73.
30. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 15.
31. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 16.
32. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 17.
33. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 18.
34. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 19.
35. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 20.
36. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 21.
37. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 22.
38. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 23.
39. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 24.
40. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 25.
41. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 26.
42. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 27.
43. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 28.
44. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 29.
45. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 71.
46. CAR по любому из пп. 1-3, 7, 9, 22-24, 26, 28, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 73.
47. Полинуклеотид, кодирующий CAR по любому из пп. 1-46.
48. Полинуклеотид, кодирующий CAR, где полинуклеотидная последовательность изложена под любым из SEQ ID NO: 30-44, 70 и 72.
49. Вектор, содержащий полинуклеотид по п. 47 или 48.
50. Вектор по п. 49, где вектор представляет собой вектор экспрессии.
51. Вектор по п. 49, где вектор представляет собой эписомный вектор.
52. Вектор по п. 49, где вектор представляет собой вирусный вектор.
53. Вектор по п. 49, где вектор представляет собой ретровирусный вектор.
54. Вектор по п. 49, где вектор представляет собой лентивирусный вектор.
55. Вектор по п. 49, где лентивирусный вектор выбран из группы, по существу состоящей из: вируса иммунодефицита человека 1 (HIV-1); вируса иммунодефицита человека 2 (HIV-2); вируса висна-маэди (VMV); вируса артрита-энцефалита коз (CAEV); вируса инфекционной анемии лошадей (EIAV); вируса иммунодефицита кошек (FIV); вируса иммунодефицита крупного рогатого скота (BIV) и вируса иммунодефицита обезьян (SIV).
56. Вектор по любому из пп. 52-55, содержащий левый (5') ретровирусный LTR, Psi (Ψ) сигнал упаковки, центральный полипуриновый тракт/ДНК-флэп (cPPT/FLAP), ретровирусный экспортный элемент; промотор, функционально связанный с полинуклеотидом по п. 47 или 48; и правый (3') ретровирусный LTR.
57. Вектор по п. 56, дополнительно содержащий гетерологичную последовательность полиаденилирования.
58. Вектор по п. 57, дополнительно содержащий посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита B (HPRE) или посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурков (WPRE).
59. Вектор по п. 58, где промотор 5' LTR замещен гетерологичным промотором.
60. Вектор по п. 59, где гетерологичный промотор представляет собой промотор цитомегаловируса (CMV), промотор вируса саркомы Рауса (RSV) или промотор вируса обезьян 40 (SV40).
61. Вектор по любому из пп. 57-60, где 5' LTR или 3' LTR представляют собой LTR лентивируса.
62. Вектор по любому из пп. 57-60, где 3' LTR содержит одну или более модификаций.
63. Вектор по любому из пп. 57-60, где 3' LTR содержит одну или более делеций.
64. Вектор по любому из пп. 57-60, где 3' LTR представляет собой самоинактивирующийся (SIN) LTR.
65. Вектор по любому из пп. 57-60, где последовательность полиаденилирования представляет собой последовательность полиаденилирования бычьего гормона роста или сигнальную последовательность полиаденилирования β-глобина кролика.
66. Вектор по любому из пп. 59, 60, где полинуклеотид по п. 47 или 48 содержит оптимизированную последовательность Козак.
67. Вектор по любому из пп. 57-60, где промотор, функционально связанный с полинуклеотидом по п. 47 или 48, выбран из группы, включающей: промотор немедленно-раннего гена цитомегаловируса (CMV), промотор фактора элонгации 1-альфа (EF1-α), промотор фосфоглицераткиназы-1 (PGK), промотор убиквитина-C (UBQ-C), промотор из энхансера цитомегаловируса/промотора куриного бета-актина (CAG), промотор из энхансера полиомавируса/промотора тимидинкиназы вируса простого герпеса (MC1), промотор бета-актина (β-ACT), промотор вируса обезьян 40 (SV40) и промотор (MND) с энхансером вируса миелопролиферативной саркомы, с удаленным участком отрицательного контроля, с сайтом связывания праймера, замещенным на последовательность из dl587rev.
68. Иммунная эффекторная клетка, содержащая вектор по любому из пп. 49-67.
69. Иммунная эффекторная клетка по п. 68, где иммунная эффекторная клетка выбрана из группы, включающей: T-лимфоцит и естественную клетку-киллер (NK).
70. Композиция, содержащая иммунную эффекторную клетку по п. 68 или 69 и физиологически приемлемый наполнитель.
71. Способ получения иммунной эффекторной клетки, содержащей CAR по любому из пп. 1-46, включающий введение в иммунную эффекторную клетку вектора по любому из пп. 49-67.
72. Способ по п. 71, дополнительно включающий стимуляцию иммунной эффекторной клетки и индукцию клетки к пролиферации посредством приведения клетки в контакт с антителами, которые связывают CD3, и антителами, которые связываются с CD28, с получением тем самым популяции иммунных эффекторных клеток.
73. Способ по п. 72, где иммунную эффекторную клетку стимулируют и индуцируют к пролиферации до введения вектора.
74. Способ по п. 72, где иммунные эффекторные клетки предусматривают T-лимфоциты.
75. Способ по п. 72, где иммунные эффекторные клетки предусматривают NK-клетки.
76. Способ лечения состояния, связанного с В-клетками, у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества композиции по п. 70.
77. Способ по п. 76, где состояние, связанное с B-клетками, представляет собой множественную миелому, неходжкинскую лимфому, формы пролиферации В-клеток с неопределенным злокачественным потенциалом, лимфогранулематоз, посттрансплантационное лимфопролиферативное расстройство, иммунорегуляторное нарушение, ревматоидный артрит, миастению гравис, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, антифосфолипидный синдром, болезнь Чагаса, болезнь Грейвса, гранулематоз Вегенера, нодозный полиартериит, синдром Шегрена, обыкновенную пузырчатку, склеродермию, рассеянный склероз, антифосфолипидный синдром, ANCA-ассоциированный васкулит, болезнь Гудпасчера, болезнь Кавасаки, аутоиммунную гемолитическую анемию и быстропрогрессирующий гломерулонефрит, болезнь тяжелых цепей, первичный или иммуноцит-ассоциированный амилоидоз или моноклональную гаммапатию неясного генеза.
78. Способ по п. 76, где состояние, связанное с В-клетками, представляет собой В-клеточное злокачественное новообразование.
79. Способ по п. 78, где В-клеточное злокачественное новообразование представляет собой множественную миелому (MM) или неходжкинскую лимфому (NHL).
80. Способ по п. 79, где MM выбрана из группы, включающей: клинически выраженную множественную миелому, вялотекущую множественную миелому, плазмоцитарный лейкоз, несекреторную миелому, IgD-миелому, остеосклеротическую миелому, солитарную плазмоцитому кости и экстрамедуллярную плазмоцитому.
81. Способ по п. 79, где NHL выбрана из группы, включающей: лимфому Беркитта, хронический лимфолейкоз/мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (CLL/SLL), диффузную В-крупноклеточную лимфому, фолликулярную лимфому, иммунобластную крупноклеточную лимфому, лимфобластную лимфому из B-клеток-предшественников и лимфому из клеток мантийной зоны.
82. Способ по п. 76, где состояние, связанное с В-клетками, представляет собой плазмоцитарное злокачественное новообразование.
83. Способ по п. 76, где состояние, связанное с В-клетками, представляет собой аутоиммунное заболевание.
84. Способ по п. 83, где аутоиммунное заболевание представляет собой системную красную волчанку.
85. Способ по п. 83, где состояние, связанное с В-клетками, представляет собой ревматоидный артрит.
86. Способ по п. 83, где состояние, связанное с В-клетками, представляет собой идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, или миастению гравис, или аутоиммунную гемолитическую анемию.