КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИЗМЕНЕНИЯ УРОВНЕЙ ХОЛЕСТЕРИНА

1. Композиция, содержащая
(a) полинуклеотид, кодирующий мутант LDLR, у которого одна или более аминокислот заменены, так что указанный мутант LDLR является дефицитным в отношении связывания PCSK9, и
(b) полинуклеотид, кодирующий CYP7A1, в приемлемом разбавителе или носителе.
2. Композиция по п. 1, где указанный полинуклеотид, кодирующий мутант LDLR, содержит:
(i) первую область связанных нуклеозидов, кодирующую указанный мутант LDLR;
(ii) первую фланкирующую область, расположенную на 5'-конце указанной первой области, содержащую последовательность связанных нуклеозидов, включающую 5'-нетранслируемую область (UTR);
(iii) вторую фланкирующую область, расположенную на 3'-конце указанной первой области, содержащую последовательность связанных нуклеозидов, включающую 3'-UTR; и
(iv) 3'-хвостовую последовательность связанных нуклеозидов.
3. Композиция по п. 2, где вторая фланкирующая область кодирует по меньшей мере один участок связывания miR.
4. Композиция по п. 1, где полинуклеотид, кодирующий указанный мутант LDLR, содержит по меньшей мере одну химическую модификацию.
5. Композиция по п. 1, которая составлена в липиде.
6. Композиция по п. 5, где указанный липид выбран из группы, состоящей из DLin-DMA, DLin-K-DMA, DLin-KC2-DMA, 98N12-5, C12-200, DLin-МС3-DMA, reLNP, PLGA, PEG, PEG-DMA и пегилированных липидов и их смесей.
7. Композиция по п. 1, где у указанного мутанта LDLR две или более аминокислот заменены, так что указанный мутант LDLR является дефицитным в отношении связывания PCSK9.
8. Композиция по п. 1, где у указанного мутанта LDLR одна или более замененных аминокислот соответствуют аминокислоте 316 SEQ ID NO: 19, аминокислоте 317 SEQ ID NO: 19, аминокислоте 331 SEQ ID NO: 19, аминокислоте 336 SEQ ID NO: 19, аминокислоте 339 SEQ ID NO: 19 или любой их комбинации.
9. Композиция по п. 8, где аминокислотные замены включают одну или более из N316A, Е317А, D331A, Y336A, L339D, D331E и любой их комбинации.
10. Способ лечения заболевания или нарушения у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение указанному индивидууму композиции, содержащей эффективное количество (а) полинуклеотида, кодирующего мутант LDLR, у которого одна или более аминокислот заменены, так что указанный мутант LDLR является дефицитным в отношении связывания PCSK9, и (b) полинуклеотид, кодирующий CYP7A1, в приемлемом разбавителе или носителе, где указанные заболевание или нарушение выбраны из группы, состоящей из жировой болезни печени, печеночноклеточной карциномы, NASH, стеатоза, семейной гиперхолестеринемии (FH), гиперхолестеринемии и аберрантного профиля липопротеинов.
11. Способ по п. 10, где указанная композиция составлена в липиде.
12. Способ по п. 10, где заболевание или нарушение представляют собой семейную гиперхолестеринемию (FH).
13. Способ понижения уровней холестерина у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение указанному индивидууму полинуклеотида, кодирующего мутант LDLR, у которого одна или более аминокислот заменены, так что указанный мутант LDLR является дефицитным в отношении связывания PCSK9, где указанный полинуклеотид, кодирующий мутант LDLR, вводят в комбинации с полинуклеотидом, кодирующим CYP7A1.
14. Способ по п. 13, где указанная комбинация составлена в липиде.
15. Способ по п. 10 или 13, где указанному индивидууму дополнительно вводят статин, выбранный из группы, состоящей из аторвастатина, церивастатина, флувастатина, ловастатина, мевастатина, питавастатина, правастатина, симвастатина и их сочетаний.
16. Способ по п. 10 или 13, где указанный полинуклеотид, кодирующий мутант LDLR, содержит
(i) первую область связанных нуклеозидов, кодирующую указанный мутант LDLR;
(ii) первую фланкирующую область, расположенную на 5'-конце указанной первой области, содержащую последовательность связанных нуклеозидов, включающую 5'-нетранслируемую область (UTR);
(iii) вторую фланкирующую область, расположенную на 3'-конце указанной первой области, содержащую последовательность связанных нуклеозидов, включающую 3'-UTR; и
(iv) 3'-хвостовую последовательность связанных нуклеозидов.
17. Способ по п. 16, где вторая фланкирующая область кодирует по меньшей мере один участок связывания miR.
18. Способ по п. 10 или 13, где полинуклеотид, кодирующий указанный мутант LDLR, содержит по меньшей мере одну химическую модификацию.
19. Способ по п. 10 или 13, где у указанного мутанта LDLR две или более аминокислот заменены, так что указанный мутант LDLR является дефицитным в отношении связывания PCSK9.
20. Способ по п. 10 или 13, где у указанного мутанта LDLR одна или более замененных аминокислот соответствуют аминокислоте 316 SEQ ID NO: 19, аминокислоте 317 SEQ ID NO: 19, аминокислоте 331 SEQ ID NO: 19, аминокислоте 336 SEQ ID NO: 19, аминокислоте 339 SEQ ID NO: 19 или любой их комбинации.
21. Способ по п. 20, где аминокислотные замены включают одну или более из N316A, Е317А, D331A, Y336A, L339D, D331E и любой их комбинации.
22. Способ по п. 10 или 13, где указанный мутант LDLR экспрессируется на поверхности клеток у индивидуума, и где время полужизни рецепторов, которые связывают LDL на поверхности клеток у индивидуума, дольше после экспрессии указанного мутанта LDLR по сравнению с временем полужизни рецепторов, которые связывают LDL на поверхности клеток у индивидуума, приведенного в контакт с полинуклеотидом, кодирующим LDLR дикого типа, состоящий из последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 19.
23. Способ по п. 11 или 14, где указанный липид выбран из группы, состоящей из DLin-DMA, DLin-K-DMA, DLin-KC2-DMA, 98N12-5, С12-200, DLin-МС3-DMA, reLNP, PLGA, PEG, PEG-DMA и пегилированных липидов и их смесей.
24. Способ понижения уровней холестерина, включающий приведение гепатоцита у индивидуума в контакт с композицией по п. 1.
25. Способ по п. 24, дополнительно включающий приведение указанного гепатоцита в контакт со статином.
26. Способ по любому из пп. 10, 13 и 24, где индивидуум представляет собой человека.
27. Способ по п. 26, где указанный человек несет полиморфизм в CYP7A1.
28. Способ по п. 13 или 24, где индивидуум имеет заболевание или нарушение, выбранные из группы, состоящей из жировой болезни печени, печеночно-клеточной карциномы, NASH, стеатоза, семейной гиперхолестеринемии (FH), гиперхолестеринемии и аберрантного профиля липопротеинов.
29. Способ по п. 28, где заболевание или нарушение представляют собой семейную гиперхолестеринемию (FH).
30. Способ понижения уровней холестерина в плазме индивидуума, включающий приведение указанного индивидуума в контакт с композицией по п. 1.