Эндотелиальные клетки в качестве мишеней и продуцентов цитокинов

Медицинская иммунология 2001, Т.З, №4, стр 499-514 © 2001, СПб РО РААКИ

Обзоры

ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ В КАЧЕСТВЕ МИШЕНЕЙ И ПРОДУЦЕНТОВ ЦИТОКИНОВ

Фрейдлин И.С., Шейкин Ю.А.

НИИ экспериментальной медицины РАМН, СПбГМУ им. акад.И.П.Павлова, Санкт-Петербург

Резюме. Эндотелиальные клетки сосудов участвуют в регуляции не только сосудистого тонуса и процессов свертывания крови, но также воспалительного и иммунного ответов. Поверхностные адгезионные молекулы эндотелиальных клеток контролируют миграцию лейкоцитов из кровеносного русла в ткани. Трансэндотелиальная миграция лейкоцитов зависит также от продукции эндотелиальными клетками определенных хемокинов. Экспрессия адгезионных молекул и продукция хемокинов эндотелиальными клетками находится под контролем про-воспалительных цитокинов, секретируемых активированными моноцитами и лимфоцитами. Определенные сочетания цитокинов вызывают перепрограммирование эндотелиальных клеток для участия в воспалении, специфическом иммунном ответе или в ангиогенезе. Сами эндотелиальные клетки являются активными продуцентами не только хемокинов, но и других цитокинов: провоспалительных, противовоспалительных и ростовых факторов.

Ключевые слова: цитокины, эндотелиальные клетки

Freidlin I.S., Sheikine Y.A.

ENDOTHELIAL CELLS AS TARGETS AND PRODUCERS OF CYTOKINES

Abstract. Vessel endothelial cells take part in the regulation of vessel wall tone and blood coagulation as well as inflammatory and immune responses. Surface adhesion molecules on endothelial cells control leukocyte migration from the bloodstream to tissues. Transendothelial migration of leukocytes also depends on the endothelial production of certain chemokines. Expression of adhesion molecules and production of chemokines by endothelial cells are controlled by proinflammatory cytokines, produced by activated monocytes and lymphocytes. Certain combinations of cytokines induce reprogramming of endothelial cells for their participation in inflammation, specific immune response and angiogen-esis. Endothelial cells themselves are active producers of chemokines as well as other cytokines: proinflammatory, antiinflammatory and growth factors.

1. Эндотелиальные клетки в качестве мишени действия цитокинов

1.1 Свойства и функции эндотелиальных клеток

Эндотелиальные клетки (ЕС) впервые были описаны в 19-м веке, в начале 20-го века было обосновано представление об их секреторной функции, но только к концу 20-го века сформировалось представ-

Адрес для переписки:

Фрейдлин Ирина Соломоновна - член-корр. РАМН, д. м. н., профессор, руководитель отдела иммунологии НИИ экспериментальной медицины РАМН 197376, Санкт-Петербург, ул. академика Павлова, 12 Тел.: (812) 234-29-29; факс: (812) 234-94-89. e-mail: immun@immun.iem.ras.spb.т.

ление об ЕС как полифункциональных участниках регуляции не только сосудистого тонуса и процессов свертывания крови, но и процессов воспаления и иммунного ответа [6].

Участие ЕС в регуляции потока крови опосредовано продукцией этими клетками молекул, регулирующих просвет сосудов и кровяное давление и активных антитромботических молекул. В физиологических условиях ЕС секретируют альтернативные медиаторы, контролирующие гемодинамику и кровяное давление. К ним относятся вазодилатато-ры: оксид азота (N0) и простациклин (PGI2) и вазоконстрикторы: эндотелии (ЕТ) и тромбоцит-ак-тивирующий фактор (PAF). N0 секретируется ЕС конститутивно, но его продукция модулируется многими факторами, в том числе, цитокинами, PGI2, эн-дотелином [33].

К физиологическим функциям ЕС относится облегчение тока крови за счет обеспечения антитром-

ботической поверхности, которая препятствует адгезии тромбоцитов и свертыванию крови.

Антикоагулянтный механизм включает контроль уровня тромбина - сериновой протеазы, которая запускает свертывание. Окружающий ЕС матрикс содержит гепарансульфат и глюкозамингликан, поддерживающие активность антитромбина и тромбо-модулина. Последний связывает тромбин, способствуя его эндоцитозу и деградации.

В условиях воспаления или гидродинамического стресса индуцируется продукция ЕС протромбо-тических и антифибринолитических молекул [6].

Основной прокоагулянтный механизм - это индукция синтеза ЕС тканевого фактора (TF), который экспрессируется только в ответ на повреждение. Индукторами синтеза TF ЕС могут служить: тромбин, ЛПС, цитокины, гипоксия, окисленные липопротеины низкой плотности (Low density lipoproteins, LDL).

EC экспрессируют рецептор для фибрина и его продукта деградации - витронектина - ауР3 интег-рина. Связывание фибрина способствует активации следующих функций ЕС: распластывания, пролиферации, миграции, ретракции, адгезии лейкоцитов и ингибиции синтеза PGI2. In vitro снижение экспрессии аД3 интегрина вызывает сочетание TNF-a с IFN-y [6]V. '

Многие разновидности ЕС способны продуцировать и секретировать активаторы плазминогена, в том числе, активатор плазминогена урокиназного типа (иРА), который не продуцируется покоящимися ЕС, а продуцируется только при вовлечении ЕС в процессы ангиогенеза. На ЕС, участвующих в ангиогенезе, были найдены специфические рецепторы для uPA - uPAR, связываясь с которыми иРА проявляет повышенную эффективность активатора плазминогена. С ЕС могут связываться и плазми-ноген, и плазмин, причем связанный с ЕС плазмин оказывается частично защищенным от ингибиторов.

Кроме активатора плазминогена ЕС способны продуцировать соответствующий ингибитор -PAI-I, который связывается с внеклеточным матриксом, чем стабилизируется его активность. Синтез PAI-I стимулируют: тромбин, ЛПС, многие цитокины, окисленные LDL.

В целом, у ЕС антифибринолитические свойства преобладают над профибринолитическими [33].

Действие тока крови постоянно влияет на ЕС, вызывая не только изменения цитоскелета, но и изменения экспрессии генов ЕС. Током крови регулируется продукция вазоактивных молекул (N0, ЕТ-1), ростовых факторов (basic fibroblast growth factor - bFGF, platelet derived growth factor - PDGF, transforming growth factor (3 - TGF-P), хемокина MCP-1 (monocyte chemotactic protein), факторов фибринолиза, молекул адгезии клеток (vascular cell adhesion molecule-1 - VCAM-1, intercelular adhesion

molecule-1 - ICAM-1), тромбомодулина, TF. Под действием тока крови повышается транскрипция молекул Nuclear factor-кВ (NF-кВ) и activating protein-1 (АР-1), опосредующих передачу сигналов активации от цитокиновых рецепторов ЕС [63].

ЕС экспрессируют поверхностные молекулы, контролирующие миграцию лейкоцитов в ткани при физиологических условиях и усиленную миграцию лейкоцитов в очаги инфекции и воспаления.

Взаимодействие лейкоцитов с ЕС складывается из следующих этапов: обратимое прилипание, активация прилипших клеток, более прочная адгезия, распластывание, трансэндотелиальная миграция.

Обратимое прилипание (скольжение) лейкоцитов опосредовано взаимодействием с соответствующими лигандами селектинов: Е-селектина на активированных ЕС, Р-селектина, который быстро перераспределяется из секреторных гранул на поверхность ЕС, стимулированных тромбином, и L-селек-тина на лейкоцитах. В ответ на активацию ЕС прежде всего экспрессируют преформированные Р-селек-тины, затем Е-селектины, которые при контакте с соответствующими лигандами на лейкоцитах обеспечивают их скольжение по поверхности эндотелия. Только в таких условиях конститутивно экспрессированные на лейкоцитах L-селектины могут дополнительно связываться со своими лигандами на ЕС для усиления сцепления клеток [3]. Селектины слабо связываются с сиалированными и фукозилирован-ными олигосахаридами, сиаломуцинами. Е-селектин и Р-селектин связываются с лигандами на лейкоцитах. L-селектин связывается с лигандами, конститутивно экспрессированными на высоком эндотелии венул в лимфоидной ткани, а также с лигандами, индуцированными на ЕС при воспалении [65].

Адгезия лейкоцитов к ЕС зависит от гидродинамических факторов. В физиологических условиях лейкоциты способны прикрепиться к ЕС только в посткапиллярных венулах, где давление тока крови минимально.

В условиях гидродинамического воздействия потока крови прилипание клеток к ЕС требует достаточной силы сцепления и быстрой смены состояний ассоциации/диссоциации. Адгезия может вести к шеддингу L-селектинов. Быстрота контакта обеспечивается расположением L-селектинов и лиганд других селектинов на концах микроворсин лейкоцитов. Низкая плотность скользящих лейкоцитов способствует контактам с хемокина-ми и эйкозаноидами, присутствующими вблизи апикальной поверхности ЕС. От этих медиаторов лейкоциты получают дополнительные сигналы активации, сопутствующие сигналам от молекул L-селектина и других лиганд селектинов. Активация лейкоцитов позволяет (32 интегринам на лейкоцитах связаться с ICAM-1, ICAM-2 на поверхности ЕС. Фибриноген плазмы способствует уп-

рочению связи лейкоцитов с ЕС, связываясь одновременно с лейкоцитами и с ЕС [46].

Дальнейшая миграция лейкоцитов между ЕС зависит от градиента определенных хемокинов, продуцируемых активированными ЕС, от активации (3j и Р2интегринов и от гомотопического взаимодействия адгезионных молекул platelet endothelial cell adhesion molecule-1 (PECAM-1). При этом происходит разрушение гомотипических связей кадгери-нов, нарушается взаимосвязь между отдельными ЕС [401.

1.2. Цитокины, действующие на ЕС, их рецепторы и пути передачи сигнала активации

ЕС служат мишенями действия цитокинов, продуцируемых лейкоцитами крови, клетками матрикса и клетками тканей. Цитокины служат медиаторами сложных двусторонних взаимодействий между лейкоцитами и эндотелием.

Одной из важнейших задач раннего воспалительного ответа является рекрутирование максимального количества фагоцитирующих клеток в очаг инфекции или воспаления. Контакт с возбудителем является сигналом секреции моноцитами-макрофагами сначала провоспалительных цитокинов: IL-1, IL-6, IL-8, IL-12, TNF-a, GM-CSF, а затем и противовоспалительных цитокинов: IL-10, IL-13, TGF-p. Мишенями действия всех перечисленных молекул цитокинов становятся ЕС кровеносных сосудов [33].

ЕС экспрессируют оба рецептора для TNF: р55 и р75, однако TNF активирует ЕС преимущественно через р55. Лигандом для р75 на поверхности ЕС служат трансмембранные молекулы TNF в мембране моноцитов. Для IL-1 ЕС экспрессируют только рецепторы типа I. ЕС экспрессируют рецепторы для TGF-p. Кроме того, ЕС человека экспрессируют Fas, FasL, CD40, CD40L. Взаимодействие CD40 с CD40L индуцирует экспрессию Е-селектина, VCAM-1 и ICAM-1. Экспрессия CD40 на ЕС, в свою очередь, индуцируется IL-lp и IFN-y [33].

ЕС экспрессируют также P-цепь, общую для рецепторов GM-CSF, IL-3 и IL-5, aIL-З и aGM цепи. При этом TNF и IFN-y повышают экспрессию а-цепи IL-3R [33].

Что касается рецепторов IL-4 и IL-13, то ЕС не экспрессируют общую для них у-цепь. Возможно, с этим связаны различия эффектов этих цитокинов в отношении моноцитов/макрофагов (ингибирующих) и в отношении ЕС (амплифицирующих продукцию некоторых цитокинов) [33]. Вместе с тем IL-4 ингибирует IFN-y и TNF-a - индуцированную экспрессию RANTES эндотелием. Он так же является индуктором экспрессии VCAM-1 и ингибитором ICAM-1 и Е-селектина [52, 62].

Вопрос о наличии у ЕС рецепторов для 1Ь-6 и 1Ь-10 окончательно не решен. Тем не менее есть фрагментарные данные о том, что 1Ь-10 усиливает стимулирующее влияние на ЕС 1Ь-1 и Т№-а и является слабым стимулятором экспрессии некоторых хемокинов и 1Ь-6 в некоторых эндотелиальных линиях. В присутствии фитогемагглютинин-активиро-ванных моноцитов 1Ь-10 повышал экспрессию на ЕС УСАМ-1, но не 1САМ-1, молекул МНС или Е-селектина. Возможно, что этот эффект не прямой, а опосредован ингибицией 1Ь-10 синтеза №N-7 моноцитами [15]. Исследования, проведенные на 1Ь-10 -трансгенных мышах показывают, что 1Е-10 способен активировать эндотелий сосудов и усиливать адгезию и экстравазацию лейкоцитов. Влияние 1Ь-10 на продукцию ЕС 1Ь-8 описано как двунаправленное.

Была показана экспрессия шРНК для общей у-цепи рецепторов 1Ь-2, 1Ь-7, 1Ь-9, 1Ь-15.

Передача сигналов активации от всех названных цитокиновых рецепторов так или иначе связана с процессами фосфорилирования. Так например, последний этап активации №кВ зависит от фосфорилирования 1кВ ингибитора [И].

Фактор транскрипции ^кВ осуществляет передачу сигналов активации от цитокиновых рецепторов к генам, кодирующим молекулы Е-селектина, 1САМ и УСАМ-1, каждая из которых содержит как минимум один сайт кВ, распознаваемый гетеродимером №-кВ. В покоящихся ЕС ингибиторы 1-кВа связывают и удерживают в цитоплазме NF-кB. Взаимодействие лиганда (цитокина) с рецептором ведет к фосфорилированию и быстрой деградации 1-кВа, и освободившиеся молекулы ОТ-кВ транс-лоцируются в ядро клетки, где связываются со специфическими сайтами промоторов многих цитокин-индуцибельных генов ЕС: Е-селектина, УСАМ-1, 1САМ-1, ТР [11, 61].

Для ОТ-кВ характерна ауторегуляция, связанная с индукцией продукции 1-кВа, чем обеспечивается негативная регуляция и возвращение ЕС из активированного состояния в покоящееся.

Показана способность многих антиоксидантов (а-токоферол и др.) блокировать активацию №-кВ и соответственно стимулирующие эффекты цитокинов на ЕС [33]. Активация №-кВ зависит от формирования кислородных радикалов, а антиоксиданты поддерживают NF-кB в неактивной цитозольной форме, с чем связана ингибиция экспрессии генов, кодирующих адгезионные молекулы. Например, ^ацетил цистеин, который снижает формирование кислородных радикалов, ингибирует экспрессию и №-кВ, и УСАМ-1. Физиологическим механизмом регуляции экспрессии адгезионных молекул на ЕС служит продукция этими клетками нит-роксидных радикалов (N0), которые ингибируют цитокин-индуцированную экспрессию адгезионных

молекул через NF-кВ механизм. В частности, N0 существенно повышает экспрессию I-кВа - цитозольного ингибитора NF-kB [36].

Известно, что многие из цитокиновых рецепторов (а также рецепторов для некоторых других молекул) на поверхности ЕС связаны с определенной комбинацией молекул JAK/STAT (Janus tyrosine kinases / Signal Transducers and Activators of Transcription), обеспечивающих передачу сигнала активации внутрь клетки при связывании лиганда с рецептором. Например, действие IFN-y опосредовано активацией JAK1, JAK2 и STAT1. В области промотора гена ICAM-1, помимо участков связывания факторов транскрипции NF-кВ и SP1, дополнительно обнаружен элемент, связывающий STAT-

1, чем объясняется способность ЕС отвечать на контакт с IFNy изменением экспрессии ICAM-1 [20, 29].

IL-4 и IL-13 активируют фосфорилирование JAK1, JAK2, JAK3 и STAT6. Селективная индукция на ЕС VCAM-1 цитокинами IL-4 и IL-13 связана с активацией РТК, в частности, JAK2, которая взаимодействует со STAT6 фактором транскрипции.

Продуцируемый самими ЕС IL-6 не оказывает какого-либо влияния на их функции в связи с отсутствием на ЕС полноценного IL-6R. Под влиянием искусственных комплексов IL6/IL-6R в ЕС наблюдали активацию STAT3 [23, 33].

Эндотелий является мишенью действия многих хемокинов, так как экспрессирует некоторые хемо-киновые рецепторы (табл. 1) [41].

Экспрессия ЕС рецептора CCR2, лигандом которого является МСР-1, играет роль в заживлении ран и развитии воспалительного инфильтрата. Показано, что этот рецептор экспрессирован на эндотелии артерий, вен и венул, а также в первичной культуре эндотелиальных клеток вены пупочного канатика (human umbilical vein endothelial cells, HUVEC) [67].

Убедительных данных относительно экспрессии других CCR на ЕС на сегодняшний день не обнаружено, хотя в ряде работ показано наличие низких уровней mRNA для рецепторов CCR1, CCR3, CCR4 и CCR5 в цитоплазме ЕС [41].

При подкожном введении SDF-la мышам у них наблюдалось локальное образование кровеносных

сосудов и формирование лейкоцитарных инфильтратов. Так как рецептором 5БР-1а является CXCR4, обнаруженный на покоящихся ЕС, это позволило предположить, что 8БР-1а через СХСН4 стимулирует ангиогенез и миграцию эндотелиальных клеток [57].

1.3. Перепрограммирование ЕС

для участия в раннем воспалительном ответе

Пластичность ЕС проявляется при активации быстрым изменением антитромботического статуса на протромботический и антиадгезивного статуса на адгезивный.

Ранний защитный ответ эндотелиальных клеток на любую травму, инфекцию, интоксикацию связан с очень быстрым (через секунды или минуты) реагированием на связывание агонистов типа гистамина или тромбина. Такой ответ направлен на сохранение целости сосуда, для чего фенотип клеток быстро меняется на прокоагулянтный, вазоконстрик-торный, провоспалительный, причем эти изменения, как правило, обратимы. В отличие от этого, под влиянием провоспалительных цитокинов ЕС через несколько часов претерпевают глубокие изменения, затрагивающие экспрессию многих генов. Такое перепрограммирование ЕС приводит к их переходу в активированное состояние на более длительный период времени [11, 38].

Главные медиаторы воспаления 1Ь-1 и Т№ индуцируют экспрессию эндотелиальными клетками адгезионных молекул и хемокинов и вместе с тем регулируют продукцию эндотелиальными клетками вазоактивных молекул. 1Ь-1 и ТЫР индуцируют экспрессию функциональных программ воспаления и тромбоза [33].

Действие цитокинов на эндотелиальные клетки местных сосудов проявляется индукцией экспрессии адгезионных молекул, связывающих циркулирующие нейтрофилы и моноциты, чем резко повышается уровень миграции фагоцитирующих клеток из крови в ткани. Индукция адгезионных молекул происходит параллельно и на поверхности фагоцитов. Этим обеспечивается приток циркулирующих

Табл. 1. ХЕМОКИНОВЫЕ РЕЦЕПТОРЫ ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК И ИХ ОСНОВНЫЕ ЛИГАНДЫ

Рецепторы хемокинов, экспрессируемые эндотелиальными клетками Высокоаффинные лиганды - хемокины

CCR2 МСР-1

CXCR1 IL-8, GCP-2

CXCR2 IL-8, GRO-a, GRO-p, GRO-y, NAP-2,

ENA-78, GCP-2

CXCR4 SDF-1cc, SDF-1(3

DARC (Duffy Antigen Receptor for Chemokines) IL-8, GRO-a, RANTES, МСР-1, MCP-3, MCP-4, Eotaxin

нейтрофилов, а затем и моноцитов в очаг инфекции [40].

Цитокины П-Ы-у, 1Ь-1, ТЫР-а являются антагонистами пролиферации человеческих эндотелиальных клеток, влияют на их морфологию и экспрессию многих генов, в том числе генов, контролирующих адгезионные молекулы и продукцию цитоки-нов самими эндотелиальными клетками. Провоспа-лительные цитокины 1Ь-1, ТОТ-а в наномолярных концентрациях стимулируют экспрессию генов хе-мокинов: 1Ь-8, МСР-1 и генов адгезионных молекул: 1САМ-1, ЕЬАМ-1 у ЕС. Очевидно, ранние мак-рофагальные цитокины способны индуцировать адгезию лейкоцитов к эндотелию и продукцию ЕС более поздних хемокинов. 1Р1Ч-у ингибирует экспрессию Е- и Р-селектинов, индуцированную 1Ь-4, ТОТ-ос и РМА [37].

ЕС разных кровеносных сосудов различаются по конститутивной и цитокин-индуцированной экспрессии адгезионных молекул. Например, на активацию ТОТ-а только венозные ЕС в отличие от артериальных отвечают экспрессией УСАМ-1, в то время как экспрессия 1САМ-1 возрастает под влиянием того же ТОТ на обоих типах ЕС. Но даже в случае повышения экспрессии обеих адгезионных молекул (1САМ-1 и УСАМ-1) активированные под влиянием ТОТ ЕС не приобретают свойства ко-сти-муляторов продукции 1Ь-2 Т-лимфоцитами. Эти адгезионные молекулы, ответственные за адгезию и рекрутирование лимфоцитов, оказались не столь существенны для ко-стимуляции и осуществления функции презентации антигена [22].

Трансэндотелиальную миграцию мононуклеаров контролирует хемокин класса ССЬ- МСР-1. Другой хемокин этого же класса КАЫТЕЗ в синергизме с 1Ь-8 обеспечивает адгезию и трансэндотелиальную миграцию базофилов и эозинофилов при посредстве Р2-интегрина С018. Трансэндотелиальная миграция эозинофилов резко возрастает после их предобработки 1Ь-5. Этому процессу способствуют также 1Ь2, 1Ь-3, СМ-СБЕ [67, 68].

Хемокин класса СХСЬ - СИО-а обеспечивает хемотаксис, адгезию и активацию нейтрофилов. Вместе с тем, не исключено влияние ИЮ-а на ЕС и в качестве проангиогенного фактора [25].

Цитокины (ТОТ-а) индуцируют также экспрессию на ЕС молекул, запускающих процесс свертывания крови в местных мелких сосудах, что ведет к их закупорке и прекращению кровотока в очаге инфекции. Тем самым предотвращается распространение возбудителей с током крови.

1Ь-1 и ТОТ-а облегчают тромбообразование, индуцируя прокоагулянтную активность, ингибируя тромбомодулин/протеин С антикоагулянтный путь и блокируя растворение фибрина путем стимуляции ингибитора I типа активатора плазминогена (иРАЫ) [18].

Стимуляция ЕС провоспалительными цитокина-ми влечет за собой микрососудистые тромбозы и микрокровоизлияния в разных тканях с поражением функций многих органов (легких, почек, надпочечников). Эндотоксический шок представляет пример острой коагулопатии, связанной с индукцией цитокинами экспрессии прокоагулянтных механизмов ЕС. Цитокины нарушают фибринолитический баланс поверхности эндотелия, сдвигая его в сторону свертывания путем усиления экспрессии РАМ. Суммарное действие провоспалительных цитокинов на ЕС приводит к усилению свертывания и ингиби-ции фибринолиза [18].

Те же цитокины резко усиливают продукцию эндотелиальными клетками РС12 и нитроксидных радикалов (N0), которые служат медиаторами вазо-дилатации [33]. Нитроксидные радикалы происходят из гуанидиновой группы Ь-аргинина под действием ферментов нитроксид-синтетаз (N08). ЕС конститутивно экспрессируют N08 типа III, а N08 типа II индуцируется провоспалительными цитокинами, которые повышают и активность N08 типа III, повышая стабильность соответствующих тРНК. Эффекты некоторых цитокинов достаточно противоречивы, например, ТСР-(3 ингибирует N08 типа II, но стимулирует N08 типа III. Наиболее выраженное усиление продукции N0 человеческими ЕС вызывает сочетание провоспалительных цитокинов: 11.-1, ТОТ, 1РИ-у [44, 47].

Экспрессия УСАМ-1, индуцированная Н.-1, 1Ь-4, ТОТ или ЛПС, снижается после контакта ЕС с донорами N0. Снижается при этом и экспрессия других адгезионных молекул: 1САМ-1, Е-селектин, Р-селектин и секреция цитокинов: 1Ь-6, МСР-1,

11.-8, М-СББ. Эти эффекты N0 опосредованы ин-гибицией ОТ-кВ за счет стабилизации ингибитора этого фактора трансдукции - 1кВ. Таким образом, индуцированный провоспалительными цитокинами N0 несколько смягчает провоспалительные эффекты этих же цитокинов. Этим же, по всей видимости опосредована антиатерогенная роль N0

[47]. Контролируя экспрессию N08, цитокины (ТОТ, 1Р^у, 1Ь-1) могут контролировать тонус сосудов. Кроме того, N0 ингибирует адгезию лейкоцитов к ЕС, препятствуя их эмиграции из сосудов [10, 35]. N0 обладает также аититромботическими свойствами, одним из механизмов осуществления которых является вмешательство в экспрессию эндотелием мощного протромботического фактора - ТР [44].

Стимулированные теми же цитокинами ЕС начинают продуцировать РАР. Экспрессированный на поверхности ЕС РАР в синергизме с Е и Р-селекти-нами способствует адгезии и трансмиграции лейкоцитов. РАР также выполняет функции вторичного медиатора ангиогенеза, индуцированного провоспалительными цитокинами [42].

Участие продуцируемых ЕС цитокинов в патогенезе воспалительных процессов (васкулиты, астма) различно: 1Ь-1, 1Ь-6 опосредуют острофазный ответ печени с усилением синтеза фибриногена, СИР. 1Ь-1 повышает экспрессию адгезионных молекул на ЕС и воспалительных клетках. 1Ь-8 и МСР-1 служат хе-моаттрактантами, обеспечивающими рекрутирование лимфоцитов и нейтрофилов, С-СБР, М-СБЕ, СМ-С5Р, 1Ь-11 способствуют выживанию и активации воспалительных клеток: нейтрофилов, эозинофилов, тромбоцитов.

ЮТа индуцирует продукцию кислородных радикалов ЕС и стимулирует транскрипцию фактора ЫБ-кВ, что ведет к активации транскрипции других проатерогенных молекул, таких как УСАМ-1, МСР-1, которые способствуют проникновению моноцитов в стенку сосуда [58].

В составе атеросклеротических бляшек иммуногистохимически выявлены все провоспалительные цитокины: 1Ь-1, тар, 1Ь-6, 1РЫ-у, которые продуцируются и секретируются Т-лимфоцитами, макрофагами, эндотелиальными и гладкомышечными клетками. Однако сведения о биологической активности этих цитокинов более фрагментарны. Показана способность ЕС отвечать на действие 1Р1\Г-у экспрессией НЬАН, ингибицией пролиферации и экспрессией адгезионных молекул, а также продукцией N0 [30].

Многие из циркулирующих в крови молекул индуцируют продукцию и секрецию ЕС хемокинов: 1Ь-8, МСР-1, которые привлекают мононуклеары в стенку артерий. Повреждение эндотелия ведет к утрате барьерной функции. Последующая пролиферация и миграция гладкомышечных клеток (ГМК) в участок повреждения являются результатом модуляции ростовыми факторами: РБСР, ТвР-Р, ЬРСР, М-СБР, СМ-СБР. 1Ь-6 способствует пролиферации ГМК. Таковы условия формирования ранней атеросклеротической бляшки [16].

Потеря эндотелием барьерной функции ведет к проникновению в стенку сосуда компонентов крови: тромбоцитов, мононуклеаров, липопротеинов, что также способствует атерогенезу. В частности, минимально модифицированные ЬОЬ вызывают в ЕС быструю и сильную индукцию экспрессии СМ-СБР, М-С5Р и С-СБЕ. СМУ-иифекция ЕС ингибирует продукцию С-СБР и СМ-СБР на поздних стадиях развития инфекции [55].

Имеются данные о том, что повышенный уровень оксидов холестерина в крови, наблюдаемый при развитии атеросклероза, оказывает отрицательное влияние на синтез N0, что в свою очередь усугубляет поражение сосудистой стенки при этом заболевании [44]. N0 является антипролиферативным агентом для ЕС и гладкомышечных клеток сосудов. Поэтому пониженная экспрессия гена N08 при атеросклерозе, приводит к усилению пролиферации клеток и ремоделирования сосудистой стенки [47].

Ростовые факторы G-CSF и GM-CSF оказывают выраженное влияние на миграцию и пролиферацию ЕС. GM-CSF регулирует миграцию нейтрофилов через эндотелий: повышает их выход через нестимулированный эндотелий, но ингибирует миграцию нейтрофилов через эндотелий, активированный IL-1. G-CSF и GM-CSF сами способны индуцировать пролиферацию и миграцию ЕС, но в отличие от IL-1 и TNF-a они никак не влияют на другие функции ЕС. In vivo G-CSF ведет себя как про-ангиогенный фактор, не вызывая воспаления. Стимулирующее действие G-CSF и GM-CSF на пролиферацию ЕС позволяет причислить их к стимуляторам ангиогенеза. Кроме того, G-CSF индуцирует секрецию ЕТ-1 ЕС [59].

Провоспалительные цитокины участвуют в повреждении самих ЕС, что проявляется васкулита-ми. При участии адгезионных молекул Е-селекти-на, ICAM-1 нейтрофилы прикрепляются к ЕС, активированным IL-1, TNF-a, IFN-y, причем возрастает их цитотоксическая активность, опосредованная N0.

Экспрессия Е-селектина, ICAM-1, ICAM-3 на ЕС синовия повышена у больных ревматоидным артритом (РА). Развитие васкулита у больных РА сопровождается повышением уровня растворимого Е-се-лектина в сыворотке крови. Введением анти-TNF-a моноклональных антител (МКА) удается купировать васкулит. Это говорит о том, что провоспалительные цитокины стимулируют ЕС к адгезии и активации гранулоцитов, с чем связано развитие васкулита [27].

1.4. Перепрограммирование ЕС для участия в специфическом иммунном ответе

Взаимодействие лимфоцитов с ЕС происходит в организме постоянно, составляя часть гомеостаза. Взаимодействием лимфоцитов с высоким эндотелием венул лимфоидной ткани обеспечивается их расселение во вторичных лимфоидных органах. Рециркуляция лимфоцитов обеспечивается их постоянным взаимодействием с ЕС.

ЕС сосудов могут играть двойную роль в специфическом иммунном ответе: участвовать в презентации антигена Т-лимфоцитам и обеспечивать рекрутирование Т-эффекторов в очаги иммунного воспаления [12, 13].

Хемокины, связанные внеклеточным матриксом, активируют адгезионные молекулы LFA-1 на Т-клет-ках, повышая их аффинность к молекулам ICAM-2, конститутивно экспрессированным на поверхности всех ЕС, и ICAM-1, экспрессированным только на ЕС венул лимфоузлов. ICAM-1 в мембране клеток ассоциирован с рецепторами для IL-2, эта молекула опосредует взаимодействие с праймированными

лимфоцитами. Аффинность и авидность ЬЕА-1 повышается под влиянием 1Ь-2 и других активирующих факторов.

В отличие от первичного иммунного ответа, при котором презентация и распознавание антигена происходят в лимфоидной ткани, при вторичном иммунном ответе циркулирующий пул Т-лимфоцитов включает клетки-эффекторы и клетки памяти, которые могут распознавать антиген, презентирован-ный непосредственно в периферических тканях тканевыми макрофагами или ЕС местных микрососудов. Культивируемые ЕС из разных сосудов конститутивно экспрессируют МНС1. №N-7 усиливает экспрессию МНС1 и индуцирует на ЕС экспрессию МНСП [7]. Было показано формирование на поверхности ЕС комплексов пептид-МНС, что косвенно свидетельствует о способности этих клеток презентировать антигены. Кроме того, у Н1)УЕС была выявлена способность ко-стимулировать пролиферацию Т-лимфоцитов периферической крови, стимулированных ФГА, и продукцию ими 1Ь-2. Связывание Т-лимфоцитов с 1САМ-1 или УСАМ-1 повышает экспрессию СБ28 на Т-лимфоцитах для связывания с В-7, но на ЕС нет молекул В-7. Очевидно, ЕС используют какой-то альтернативный путь ко-стимуляции, например, через взаимодействие ЬБА-З с СБ2, возможно, за счет повышения транскрипции гена 1Ь-2. Артериальные и венозные ЕС ко-стимулировали продукцию 1Ь-2 и ^N-7, но не 1Ь-4. Ранее было показано, что именно продукция 11,-2 и №N-7 в отличие от продукции 1Ь-4 нуждается в ко-стимуляции [22].

Функция рекрутирования Т-клеток в очаг иммунного воспаления зависит от активации Т-клеток памяти при встрече со своим антигеном на поверхности ЕС. При этом параллельно идет активация ЕС: контактными сигналами от С040Ь Т-клеток на СБ40 ЕС или цитокинами, секретируемыми Т-лимфоцитами: ТОТ, ^N7, 1Ь-4. На эти сигналы активации ЕС отвечают: -продукцией вазодилата-торов для усиления выхода лейкоцитов, -экспрессией адгезионных молекул для связывания лейкоцитов, - синтезом хемокинов, способствующих трансэндотелиальной миграции и выходу плазменных белков, формирующих матрикс для миграции вышедших лейкоцитов.

Экспрессия разных адгезионных молекул на поверхности ЕС меняется со временем, способствуя первоначальному выходу нейтрофилов (Е-селек-тин), а позднее других лейкоцитов (УСАМ-1). Хе-мокины тоже меняются: вначале продуцируются активирующие нейтрофилы СХСЬ, а позднее ССЬ для других лейкоцитов. Это проявляется изменением состава воспалительного инфильтрата с ней-трофильного на Т-клеточный и макрофагальный при реакциях ГЗТ или на Т-клеточный, эозино-фильно-базофильный при поздней фазе атопичес-

ких реакций. Разница между этими двумя типами воспаления отражает различия в местной продукции №N-7, или 1Ь-4, 1Е-5, которая в свою очередь зависит от преобладания ТЫ или ТЬ2. Избирательное рекрутирование ТЫ в реакцию ГЗТ опосредовано Е- и Р-селектинами, Р-селектин связывает только ТЫ [46].

После формирования инфильтрата образуется обогащенная цитокинами среда, которая поддерживается до полной элиминации антигена. Хроническая экспозиция цитокинов оказывает особое действие на ЕС. Адгезионные молекулы, ранее экспрессированные диффузно на люменальной поверхности ЕС, перераспределяются в межклеточные щели. Базальная мембрана обогащается сульфати-рованными глюкозамингликанами. ЕС приобретают морфологию, характерную для высокого эндотелия венул лимфоузлов, способного обеспечить усиленный выход лимфоцитов. В более поздних стадиях хронического иммунного воспаления ЕС участвуют в ангиогенезе и перестройке тканей, ведущей к фиброзу [5].

ТОТ и №N-7, продуцируемые активированными Т-лимфоцитами, синергидно действуют на ЕС, повышая выход защитных клеток и молекул из сосудов в ткани, где разыгрывается иммунное воспаление.

1Ь-8, секретируемый позднее других провоспа-лительных цитокинов, служит хемоаттрактантом не только для нейтрофилов, но и для лимфоцитов. Кроме того, он индуцирует секрецию гистамина ба-зофилами, обеспечивает приток эозинофилов, участвуя таким образом в патогенезе атопических реакций. 1Ь-8 служит медиатором трансэндотелиальной миграции нейтрофилов, индуцированной ТОТ-

а. Этому хемокину приписывается также роль про-ангиогенного фактора. Во многих отношениях 1Ь-8 является антагонистом 1Ь-2, ингибируя его системные и противоопухолевые эффекты [1, 43].

Продуцируемый активированными ТЫ 1Ш-7 оказывает выраженное активирующее действие на ЕС: индуцирует экспрессию МНСН, усиливает экспрессию МНС1, облегчает ответ ЕС на ТОТ-а, слабо стимулирует экспрессию 1САМ-1 и повышает ЛПС-ин-дуцированный синтез 1Ь-1. ^N-7, как и 1Е1\Г-|3, 1Е-1 и ТОТ, повышает экспрессию СБ40 на ЕС, облегчая их взаимодействие с СВ40Ь-экспрессирующими клетками. От фибробластов, ГМК и эпителиальных клеток ЕС отличаются повышенной чувствительностью к индуцирующему действию №N-7 [7].

1Е-12, очевидно, сам не действует на ЕС, а действует через индукцию №N-7.

При отторжении трансплантата местная продукция цитокинов ЕС играет важную роль. Через 1-2 суток после трансплантации почки у реципиента повышается уровень 1Ь-1 в крови, а в трансплантате повышается экспрессия тРНК для 1Ь-2, 1Ь-4,

1Ь-10, №N-7 и ТСР-(31. Эти цитокины способствуют реакции отторжения [54].

Противовоспалительные цитокины, продуцируемые активированными ТЬ2, оказывают на ЕС разное действие. 1Ь-4 проявляет активность ростового фактора и индуцирует синтез иРА, но только в случае ЕС микрососудов. 1Ь-4 и 1Ь-13, но не 1Ь-10 ингибируют индукцию экспрессии хемокинов ИАКТЕБ про-воспалительными цитокинами (№N-7, ТОТ) [34]. Отмечена способность 1Ь-4 селективно индуцировать экспрессию УСАМ-1 и Е-селектина. 1Е-4 слабо индуцирует 1Ь-6 и МСР-1 у ЕС, но может выступать в качестве синергиста других индукторов. Аналогичной активностью обладает 1Ь-13. Стимулирующее действие этих цитокинов на функции ЕС может иметь значение при индукции местной экспрессии ТЬ2-типа ответа, например, при индукции рекрутирования эозинофилов и базофилов и при переходе аллергической реакции в позднюю фазу [51].

Для 1Ь-10 в отношении ЕС тоже описан ряд стимулирующих эффектов (стимуляция экспрессии хемокинов и 1Е-6) в отличие от выраженной ингиби-ции продукции цитокинов моноцитами. 1Е-10 при действии на ЕС может усиливать стимулирующие эффекты 1Ь-1, ^N-7 и ТОТ. Однако было описано ингибирующее действие 1Е-10 на презентацию антигена ЕС микрососудов кожи человека. Крайне противоречивы данные относительно характера влияния 1Ь-10 на продукцию 1Ь-8 [15].

НиУЕС экспрессируют МНС1 А, В, С, ТАР-1 и ТАР-2 белки. Экспрессию МНС1 усиливают ТОТ и 1Е1Ч, а П.-1, СМ-СБЕ, 1Е-4, 1Ь-10 не влияют на нее. Активирующее действие ТОТ опосредовано через ОТ-кВ. Обработка НиУЕС ТОТ, 1ЕМ-ос или 7 вызывает пятикратный прирост экспрессии МНС1 за 24 ч и прирост в 20 раз за 7 дней. Комбинация ТОТ с 1ЕК дает синергидный эффект. При этом усиливается синтез ТАР-1. Экспрессированные молекулы МНС1 отличаются стабильностью (период по-лужизни 24 ч). Как большинство тканевых клеток, ЕС экспрессируют МНСП только в ответ на ^N-7. 1ЕМ-а, напротив, ингибирует экспрессию МНСП на ЕС. При стандартных условиях культивирования

НИУЕС не экспрессируют МНСП, после обработки оптимальной концентрацией ^N-7 экспрессия их повышается через 12 ч и достигает пика через 7 дней. Чаще выявляются НЬА-БР, НЬА-ОК, чем НЕА-БЦ, что является чертой сходства с макрофагами, но отличает от В-лимфоцитов, имеющих более высокий уровень экспрессии БЦ по сравнению с БР. Будучи экспрессирована, молекула НЬАИ также является стабильной и сохраняется в течение 4 недель после удаления цитокина [49].

К числу цитокинов, не индуцирующих экспрессию НЬАП на поверхности НЕГУЕС, относятся: ТОТ, ^N-(*/(3,1Ь-1,1Ь-4, СМ-СБЕ. ТОТ и ^N-«/[3 ингибируют опосредованную ^N7 индукцию экспрессии НЕАИ. 1Ь-10 оказался не эффективным ингибитором экспрессии НЕАП на НЕГУЕС (табл. 2).

1.5. Участие цитокинов в регуляции ангиогенеза

Самообновление и восстановление утраченных капилляров обеспечивается функцией ангиогенеза, в основе которой лежат процессы миграции и пролиферации ЕС, ростовыми факторами для которых являются ЬБСБ и УЕСБ. Цитокинами контролируются процессы пролиферации и миграции ЕС, которые лежат в основе ангиогенеза. Ангиогенез - это рост новых сосудов из ранее существовавших, который прекращается во взрослом организме и в физиологических условиях ограничивается репродуктивной сферой у женщин (формирование желтого тела и плаценты). Однако без ангиогенеза невозможна репарация при заживлении ран (формирование и регрессия грануляций). Ангиогенез играет ключевую роль при опухолях, при атеросклерозе, при ревматоидном артрите и других заболеваниях [5].

Формирование новых сосудов начинается с частичного разрушения базальной мембраны, что позволяет ЕС мигрировать из стенки сосуда, пролиферировать в участке инициации миграции, а затем синтезируется новая базальная мембрана при формировании сосуда. В регуляции первого этапа ангиогенеза участвуют: и-РА и его ингибитор - РА1-1.

Табл. 2. ВЛИЯНИЕ ЦИТОКИНОВ НА ЭКСПРЕССИЮ МОЛЕКУЛ МНС I И II НА ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТКАХ

Экспрессия молекул Цитокины

нз эндотелиальных клетках Стимулирующие Ингибирующие Не влияющие

МНС 1 (А, В, С) ^N-7, Т^-а, ^-сс, ^N-7 + Т^-а И-1, И-4, П.-10, ОМ-СЭР

МНС II (НЬА-йР, НЬА-ОЯ) ^N-7 Т^ и 1Р1М-а ингибируют экспрессию, индуцированную ^N-7, а 11.-10 не ингибирует Т^, 1РМ-а, 11.-1,И.-4, вМ-СЭР

и-РА конвертирует плазминоген в сериновую про-теазу - плазмин, способный разрушать фибрин и другие неколлагеновые компоненты матрикса и активировать металлопротеиназы матрикса. Этим обеспечивается просвет для миграции эндотелиальных клеток. При этом высвобождаются пептиды, контролирующие активность дальнейшего ангиогенеза. В частности, были идентифицированы, а в дальнейшем искусственно синтезированы два пептида: ангиостатин и эндостатин, способные подавлять ангиогенез и опухолевый рост [14].

TNF-a и IL-1 повышают продукцию PAI-1 ЕС и параллельно индуцируют синтез u-РА ЕС. Экспрессия рецепторов для u-РА на ЕС усиливается ангиогенны-ми факторами bFGF и VEGF. TNF, который индуцирует ангиогенез без стимуляции пролиферации, тоже повышает экспрессию рецепторов для u-РА на ЕС. Все три фактора в этом отношении являются синергиста-ми. Экспрессия u-РА и его рецептора у ЕС находятся под контролем продуцируемых моноцитами провоспа-лительных цитокинов (TNF-a, IL-1P), которые оказывают существенное влияние на ангиогенез.

IL-1 и TNF по разному регулируют продолжительность жизни ЕС и ангиогенез. Эндогенный IL-la снижает продолжительность жизни ЕС, действуя внут-риклеточно на уровне ядра. Ни IL-1, ни TNF не являются ростовыми факторами для ЕС, но TNF индуцирует миграцию и ангиогенез ЕС in vivo, возможно, какими-то непрямыми путями. И IL-1, и TNF индуцируют продукцию ЕС хемокинов, которые выполняют функции про- или противоангиогенных факторов. IL-6 способен индуцировать ангиогенез опосредованно - через индукцию экспрессии VEGF [53].

В эндогенной регуляции ангиогенеза участвуют: bFGF, VEGF и PDGF. Первые два фактора оказывают прямое ангиогенное действие, стимулируя миграцию, пролиферацию и протеолитическую активность ЕС. Действие PDGF может быть опосредовано через активацию фибробластов или гладкомышечных клеток, которые начинают продуцировать bFGF и VEGF.

Все изоформы VEGF стимулируют через свои рецепторы процессы аутофосфорилирования, репликации и миграции ЕС. Однако способность ЕС формировать капиллярные трубки зависит не только от цитокинов, но и от белков внеклеточного матрикса (коллагена, фибронектина и др.), взаимодействие с которыми опосредовано молекулами интегринов. Формирование трубок зависит от межклеточных взаимодействий ЕС, которые обеспечиваются адгезионными молекулами: РЕСАМ-1 и кадгерином-5 (cadherin-5). Последний встречается только у ЕС, контролирует межклеточную гомотипическую адгезию с участием Са-зависимых механизмов. В присутствии ионов Са кад-герин-5 одной ЕС связывается с кадгерином-5 на другой ЕС. Это сравнительно слабая взаимосвязь, которая укрепляется другими типами взаимосвязей клеток по мере созревания сосуда [45].

Ингибиция может быть опосредована молекулами ТGF-(31, проявляющими антиангиогенную активность. Вместе с тем TGF-(31 способствует выживанию и дифференцировке новых микрососудов, усиливая формирование внеклеточного матрикса и межклеточных взаимосвязей между ЕС

[48].

Выраженной антиангиогенной активностью обладает IL-12. Возможно, этот цитокин оказывает непрямое действие, опосредованное индукцией IFN-y. Антиангиогенной активностью обладают и IFN-y и IFN-a, который даже пытаются использовать для лечения гемангиом у людей. Антиангио-генное действие IFN-y, в свою очередь, опосредовано индукцией CXCL хемокина - interferon-inducible protein (IP-10), ингибирующего ангиогенез, проявляющего ангиостатическое действие, который изучается как антиангиогенный фактор [4]. CCL хемокины, в частности, МСР-1,2,3 не влияют на миграцию и пролиферацию ЕС. IL-8 является хемоаттрактантом и для эндотелиальных клеток, в условиях in vivo этот хемокин может функционировать как ангиогенный фактор [17]. Аналогичная активность обнаружена и у других CXCL хемокинов, способных индуцировать миграцию и пролиферацию ЕС.

Из 15 известных ангиогенных цитокинов 3 доступны в рекомбинантной форме и проходят клинические испытания: bFGF, VEGF и PDGF. Особое место среди событий активации ангиогенеза занимает индукция гена VEGF, а кроме того, IL-1 выполняет важные функции в каскаде событий ангиогенеза. Эти препараты проходят клинические испытания при лечении: ишемической болезни сердца, тяжелой болезни периферических сосудов, не поддающихся лечению диабетических язвах, пептической язвенной болезни. Круг испытуемых антианги-огенных препаратов также включает некоторые цитокины (IFN-a, IL-12) [32].

2. Эндотелиальные клетки в качестве продуцентов цитокинов

За последние годы показано, что продуцентами цитокинов являются не только клетки костномозгового происхождения. Цитокины рассматриваются как универсальные медиаторы межклеточных связей и взаимодействий, в которых участвуют и эндотелиальные клетки. ЕС являются продуцентами цитокинов, регулирующих: гемопоэз, дифферен-цировку Т- и В-лимфоцитов, рекрутирование лейкоцитов в очаг инфекции (табл. 3). При выраженной гетерогенности ЕС разных тканей по морфологии, поверхностному фенотипу и функциям экспрессия транскриптов цитокинов существенно не различается в культурах ЕС разного происхождения. Клетки разных линий ЕС однотипно отвечали экс-

прессией IL-8 на синергидное воздействие IL-1(3 и TNF-a и снижением экспрессии IL-8 на действие глюкокортикоидов [25].

В различных патологических процессах показано участие следующих цитокинов, продуцируемых ЕС: IL-1, МСР-1, M-CSF, IL-6, IL-8 [28].

Не стимулированные ЕС коронарных артерий экспрессируют транскрипты IL-6, IL-8, GM-CSF, GRO-a, IP-10, МСР-1, MIP-la по данным RT-PCR (reverse transcription polymerase chain reaction), a также IL-1 и IL-5 транскрипты, но не удалось выявить секреции всех соответствующих белков.

Продукция и секреция цитокинов ЕС наблюдается в ответ на активацию ЕС. В качестве индукторов активации ЕС могут выступать: цитокины, эндотоксин, гипоксия, гидродинамический стресс, вирусные инфекции, окисленные липопротеины [2, 8].

2.1. Провоспалительные цитокины

ЕС не способны спонтанно продуцировать и сек-ретировать биологически активный IL-1. Продукция IL-1 свидетельствует об активации ЕС, вызван-

ной факторами микробного происхождения, цито-кинами, гидродинамическим стрессом или атероген-ными липопротеинами. Способность ЕС продуцировать и секретировать обе изоформы IL-1 в ответ на активацию бактериальным эндотоксином (ЛПС) доказана на уровне транскрипции шРНК и на уровне продукции и секреции самого цитокина. ЕС в отличие от других продуцентов IL-1 не способны продуцировать параллельно рецепторный антагонист (IL-1RA), и нуждаются в экзогенном антагонисте для блокирования эффектов IL-1. Продуцируемый ЕС IL-1 аутокринно индуцирует экспрессию генов IL-6 и IL-8 и усиливает продукцию колониестимулирующих факторов. IL-1 аутокринно индуцирует экспрессию гена ЕТ в культуре ЕС [25].

Наряду с макрофагами и Т-лимфоцитами ЕС служат важнейшим источником IL-6 в условиях in vivo. Активированные бактериальным эндотоксином, TNFa или IL-1 ЕС способны не только к транскрипции гена IL-6, но и к его трансляции и секреции IL-6. Отмечено, что и IL-1, и TNF индуцируют продукцию ЕС больших количеств IL-6, который известен своими местными и системными эффектами,

Табл. 3. ЦИТОКИНЫ, ПРОДУЦИРУЕМЫЕ ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫМИ КЛЕТКАМИ

Функции цитокинов Семейства цитокинов

Факторы роста Интерлейкины Хемокины

CXCL CCL

Регуляция гемопоэза GM-CSF G-CSF M-CSF IL-5

Регуляция экспрессии адгезионных молекул IL-1 IL-4 IL-8 RANTES

Регуляция хемотаксиса лейкоцитов GM-CSF IL-8 GRO-a MCP-1 MCP-2 RANTES

Регуляция синтеза острофазных белков IL-1 IL-6

Регуляция иммунного ответа IL-1, IL-5 IL-6, IL-15 IL-8 RANTES

Регуляция тонуса сосудов CSF—>ЕТ-1 IL-1—>N0

Регуляция свертывания крови IL-1

Регуляция ангиогенеза GM-CSF G-CSF PDGF IL-1, IL-8, IL-4, IL-13, IL-6—>VEGF IL-8 GRO-a IP-10

но лишен аутокринного активирующего действия на ЕС. Продукцию IL-6 ЕС индуцируют IL-1, TNF, IL-4, IL-13, IL-17, гипоксия. Интересно, что и IFN-y, и IL-4, и IL-10, и IL-13 могут играть роль ко-стимуляторов, усиливая продукцию IL-6 в ответ на ЛПС или IL-1. В отличие от IL-1 IL-6 не оказывает столь выраженного действия на стенку сосудов и не проявляет ни антагонизма, ни синергизма в отношении провоспалительных и протромботических эффектов IL-1. Главными мишенями этого цитокина являются Т- и В-лимфоциты и гепатоциты (продукция острофазных реактантов), действие на которые обеспечивается его циркуляцией в качестве растворимого длиннодистантного медиатора. Продукция IL-6 ЕС позволяет включить эти клетки в число иммунокомпетентных клеток, участвующих в регуляции острофазного ответа. Показано участие IL-6 в патогенезе поздней фазы аллергических реакций сосудистых воспалительных процессов (вас-кулитов) и в атерогенезе [64].

Гистамин индуцирует продукцию IL-6 ЕС, связываясь с соответствующими рецепторами. Эндо-телины (ЕТ-1 и ЕТ-2), которые продуцируются поврежденным или ишемическим эндотелием, являются сильными стимуляторами продукции IL-6 ЕС. Тромбин в синергизме с ЕТ, IL-1 и TNF стимулирует продукцию IL-6 ЕС.

Многие инфекционные агенты и их компоненты усиливают секрецию ЕС IL-6 и IL-8. Кроме бактериальных ЛПС таким действием обладают капсульные полисахариды стафилококка. Среди вирусов HIV и CMV активируют продукцию IL-6 ЕС, что может вести к срыву иммунорегуляции, характерному для соответствующих вирусных инфекций.

Многие ЕС экспрессируют транскрипты шРНК IL-5, но секреции белка не было обнаружено даже после активации ЕС. Слабую секрецию IL-11 наблюдали при активации некоторых типов ЕС IL-1|3, или TNF-a. IL-11 интересен своей способностью индуцировать тромбоцитоз [25].

Была показана экспрессия отдельными типами ЕС шРНК IL-15 и секреция ими IL-15 в ответ на стимуляцию. Экспрессия теми же клетками рецепторов IL-15R позволяет предположить участие этого цитокина в аутокринной регуляции ЕС. В частности, было выявлено повышение трансэндотелиальной миграции Т-лимфоцитов памяти (CD45RO+), но не наивных Т-клеток (CD45RA+) под влиянием IL-15 [31].

2.2. Хемокины

ЕС продуцируют различные хемокины в ответ на сигналы воспаления, иммунного ответа или тромбоза. Обработанные IL-1 ЕС начинают продуцировать ингибитор адгезии лейкоцитов, который оказался идентичным IL-8.

Человеческие ЕС продуцируют 1Е-8 в ответ на многие стимулы: ТОТ-а, ЛПС, гипоксию, инфекцию. ТОТ-а и 1Е-1|3 являются эффективными стимуляторами секреции 1Е-8 ЕС и проявляют при этом синергизм. Оба эти цитокина продуцируются активированными моноцитами, которые играют главную роль в активации ЕС при инфекциях, эндотоксемии или иммунном воспалении.

Что касается IЕ-4 и 1Е-10, то сами цитокины не влияют на продукцию 1Е-8, но усиливают индуцирующее влияние ЛПС. 1РЫ-у, не оказывающий собственного влияния на продукцию 1Е-8 ЕС, в комбинации с высокими концентрациями 1Е-1а ведет себя как синергист. А 1Е-3 проявляет синергизм с ЮТ-а при активации продукции 1Е-8.

Гистамин индуцирует продукцию 1Е-8 и является ко-стимулятором ТОТ-а, что свидетельствует в пользу участия гистамина в регуляции через продукцию 1Е-8 ЕС поздней фазы аллергических реакций.

N0 угнетает цитокин-индуцированную активацию ЕС, в том числе продукцию 1Е-8 [66].

Фибрин стимулирует продукцию 1Е-8 ЕС, чем может объясняться корреляция депозитов фибрина с лейкоцитарной инфильтрацией при остром и хроническом воспалении. Избыточная депозиция фибрина при избыточном свертывании крови ведет к усиленному накоплению лейкоцитов.

Описан также ряд ингибиторов продукции 11^-8 ЕС, в частности глюкокортикостероиды [43]. Мак-ролид - ингибитор протеинкиназы - гелданамицин ингибирует продукцию 1Е-8, индуцированную 1Е-1. Ингибитор протеаз улинастатин ингибирует продукцию 1Е-8.

Местная продукция 1Е-8 ЕС стенки сосуда может быть причиной усиленного рекрутирования гра-нулоцитов при острых васкулитах. 1Е-8 и другие хемокины изменяют конформацию интегринов С011а/СБ18 на моноцитах, усиливая их адгезию к эндотелию.

1Е-8 повышает адгезивность нормальных грану-лоцитов к нормальным ЕС. В отличие от этого, 1Е-8 эндотелиального происхождения ингибировал адгезию гранулоцитов на активированных ЕС. При локальном введении 1Е-8 усиливал выход гранулоцитов из сосудов, а при системном (внутривенном) введении ингибировал рекрутирование. Кажущиеся парадоксальными противовоспалительные эффекты высоких концентраций 11^-8 могут быть результатом реверсии хемотаксического градиента и деактивации лейкоцитов, что может служить механизмом защиты от повреждения с обратной связью. Роль 1Е-8, местно продуцируемого ЕС, несомненна в трансэндотелиальной миграции лейкоцитов. ЕС посткапиллярных венул связывают 1Е-8 за счет ге-парино-подобных молекул. Местно продуцируемый 1Е-8 может быть удержан на поверхности ЕС для

участия в активации адгезии и трансмиграции. IL-8, экспрессированный на ЕС, опосредует миграцию лейкоцитов за счет взаимодействия с рецептором CXCR2, экспрессированным на поверхности нейтрофилов, моноцитов, а также самих ЕС. Показано, что у LDLR knockout мышей, у которых клетки костного мозга были заменены клетками, лишенными CXCR2, атеросклеротические бляшки развивались медленнее и были меньшего размера по сравнению с контролем [24]. Активирующее действие провоспалительных цитокинов на продукцию IL-8 частично опосредовано активацией NF-kB.

ЕС продуцируют также хемокин из CCL семейства - МСР-1, продукцию которого усиливают те же провоспалительные цитокины IL-1, IL-6, IL-8, TNF и ЛПС. TNF-индуцированный синтез этого хемокина усиливают IL-4, IL-10 и IL-13. Индукторами этого хемокина могут служить модифицированные LDL и тромбин. Окисленные LDL индуцируют экспрессию ЕС многих белков, участвующих в атерогенезе: МСР-1, M-CSF, VCAM-1 и др. [50]. При этом ЕС от чувствительных к атерогенезу мышей линии C57B1/6J отвечают на контакт с LDL выраженным усилением секреции МСР-1 и M-CSF, в отличие от ЕС мышей резистентной к атерогенезу линии СЗИ/HeJ, что рассматривается как доказательство существенного вклада генетического компонента в атерогенез [59, 60].

Продукция МСР-1 усиливается при взаимодействии моноцитов с ЕС. В отличие от моноцитов и макрофагов ЕС слабо реагируют повышением продукции МСР-1 на действие IFNy, однако именно IFNy избирательно индуцирует продукцию МСР-1 эндотелиальными клетками. Показана решающая роль тирозинкиназ при цитокин-индуцированной экспрессии гена МСР-1.

МСР-1, который связывается с CCR2 - хемоки-новым рецептором, служит хемоаттрактантом для моноцитов, базофилов, активированных Т-лимфо-цитов, дендритных клеток и естественных киллеров. Кроме того, этот хемокин активирует функции моноцитов/макрофагов. Рецепторы CCR2 для этого хемокина моноциты экспрессируют конститутивно, а Т-лимфоциты - только после активации. Экспрессия CCR2 на моноцитах снижается под влиянием бактериального ЛПС.

Главной функцией МСР-1 является рекрутирование мононуклеаров в очаги инфекции и воспаления. Например, при вирусном менингите уровень МСР-1 в цереброспинальной жидкости повышен, что ассоциируется с мононуклеарной инфильтрацией мозговых оболочек. МСР-1 индуцирует хемотаксис моноцитов, усиливает их адгезию, фагоцитоз, микробицидность, связанную с продукцией суперок-сидных радикалов и метаболитов арахидоновой кислоты. МСР-1 служит хемоаттрактантом и для Т-лим-фоцитов. Этот хемокин модулирует хемотаксис туч-

ных клеток и базофилов, секрецию ими гистамина и синтез лейкотриенов [56, 67].

Ему приписывается существенная роль в патогенезе атеросклероза, при котором формирование атеросклеротической бляшки начинается с инфильтрации сосудистой стенки мононуклеарными фагоцитами. Гистохимическое изучение экспрессии хе-мокинов в атеросклеротических поражениях сосудов показало, что ЕС наряду с макрофагами являются главными продуцентами МСР-1 в ранних атеросклеротических поражениях. ЬОЬ индуцируют продукцию МСР-1 ЕС. Дальнейшая адгезия моноцитов и инфильтрация моноцитами зависят от присутствия этого хемокина. Мононуклеарная инфильтрация стенки сосуда, характерная для некоторых васкулитов, может быть обусловлена действием того же хемокина [50].

Единственный известный на сегодняшний день хемокин семейства СХ3С - фракталкин имеет свойства традиционных хемокинов и адгезионных молекул. Его продукция ЕС стимулируется провоспали-тельными цитокинами (например 1Ь-1). Он, вероятно, играет важную роль в процессе развития атеросклеротической бляшки, так как является сильным хемоаттрактантом для моноцитов и Т-лимфоцитов. Известно, что в мембранно-связанном состоянии он, через свой рецептор СХ^СН!, опосредует адгезию лейкоцитов к эндотелию, независимую от состояния экспрессии интегринов [19, 21].

Другой хемокин, продуцируемый ЕС при реакциях ГЗТ, RANTES вносит существенный вклад в аккумуляцию макрофагов и Т-лимфоцитов памяти в гранулемах при ГЗТ. Для оптимальной индукции синтеза RANTES ЕС необходимо сочетание №N-7 с ТОТ-а, которое характерно для очагов ГЗТ и формирования гранулем. Синергизм ^N-7 с ТОТ-а при индукции продукции RANTES описан и для других клеток-продуцентов [34]. Механизм синергизма связан со способностью 1РЫ-у повышать экспрессию TNFR на ЕС. Синергизм 1РЫ-у с ТОТ-а отмечен также на уровне факторов транскрипции. Одновременное присутствие 1Е14-у и ТЮТ-а в очаге ГЗТ обеспечивает максимальную продукцию хемокина RANTES, который является хемоаттрактантом как для С04+ Т-лимфоцитов памяти, так и для макрофагов. В гранулеме макрофаги продуцируют ТЫРос, а ТЫ продуцируют 1ЕЫ-у. Эти цитокины индуцируют продукцию RANTES ЕС, чем замыкается каскад самоподдерживающейся реакции ГЗТ.

Альтернативные ТЬ2 цитокины 1Ь-4, 1Ь-10, 1Ь-13 ингибируют продукцию 1РМ-у Т-лимфоцита-ми и ТОТ-а - макрофагами, тем самым снижая продукцию RANTES ЕС. 1Ь-4 и 1Е-13 ингибируют стимулирующие эффекты ТЫБ-а и №N-7 на продукцию RANTES. 1Ь-10 не ингибирует продукцию НАМТЕБ ЕС, но ингибирует продукцию RANTES макрофагами.

ЕС присутствуют в окружении ГЗТ-гранулемы, на границе циркуляции и очага иммунного воспаления и вносят вклад в селективное рекрутирование циркулирующих клеток. В качестве сигналов из гранулемы в сосуды поступают: TNF-a, IFN-y. Этот комбинированный сигнал нужен для индукции продукции RANTES ЕС. В случае преобладания Th2 в микроокружении продукция RANTES подавлена [34].

Хемокины IL-8, МСР-1 дважды участвуют в рекрутировании лейкоцитов: стабилизируют связывание клеток с ЕС через интегрины и обеспечивают их направленную миграцию к очагу инфекции. Это достигается за счет связывания мелких растворимых хемокинов с молекулами протеогликанов во внеклеточном матриксе и на поверхности ЕС. Такие матрикс-ассоциированные молекулы хемокинов направляют движение лейкоцитов после их выхода из сосуда. Параллельно происходит активация лейкоцитов под влиянием хемокинов [39].

Тромбин стимулирует продукцию ЕС хемокина GRO-a, действуя через свой рецептор и индуцируя синтез GRO-a через РКС-путь. Продукцию GRO-a, усиливает контакт ЕС с минимально модифицированными LDL и гепарином. Предполагается, что продуцируемые ЕС хемокины GRO-a остаются связанными с их мембраной и способствуют адгезии моноцитов в присутствии атерогенных липопротеинов.

Хемокины в сочетании с PAF индуцируют быстрый шеддинг TNFp75R и IL-IR II типа, что оказывает противовоспалительное действие.

2.3. Ростовые факторы

ЕС способны продуцировать колониестимулирующие факторы: G-CSF, M-CSF и GM-CSF. Индукторами могут служить: адгезия моноцитов к ЕС, вирусная инфекция, вызванная CMV, или IL-1.

IFNy как и IL-4 ингибирует продукцию GM-CSF ЕС, индуцированную IL-1 или TNF-a. Возможно участие этих цитокинов в регуляции лейкоцитоза при воспалении через ингибицию продукции GM-CSF. Однако данные по эффектам IL-4 противоречивы.

Показана способность онкостатина повышать продукцию G-CSF и GM-CSF.

Модифицированные LDL стимулируют экспрессию M-CSF эндотелиальными клетками сосудов. Роль этого цитокина в атерогенезе несомненна. Этот цитокин способен активировать макрофаги, индуцировать экспрессию на их поверхности ске-венжер-рецепторов для модифицированных LDL. При этом повышается способность макрофагов к трансформации в пенистые клетки. Более того, М-CSF индуцирует экспрессию макрофагами аполи-попротеина Е, который связывается с рецепторами LDL и может способствовать удалению избытка холестерина [9].

Ангиогенез способствует росту опухолей, в частности тем, что активированные внутриопухолевые ЕС продуцируют и секретируют важные для опухолевых клеток паракринные ростовые факторы: bFGF, IGF, PDGF, CSF [14].

Многие вирусы инфицируют ЕС и модифицируют продукцию цитокинов, например, EBV, CMV, инфицируя ЕС, индуцируют продукцию IL-6. При HIV-инфекции в цереброспинальной жидкости и в ЕС мозга больных с CMV-энцефалитом обнаружен высокий уровень МСР-1. Взаимодействие HIV-ин-фицированных моноцитов с ЕС усиливает репликацию вирусов либо за счет непосредственного контакта, либо за счет индукции синтеза цитокинов: IL-6, GM-CSF, IL-1. Высказано предположение о том, что гиперплазия ЕС и ангиогенез, характерные для саркомы Капоши у больных СПИД, являются результатом длительной гиперпродукции провоспа-лительных цитокинов.

За последние годы у многих вирусов обнаружена способность экспрессировать секретируемые белки, получившие название “вирокины”, мимикрирующие функции хемокинов, или так называемые “ви-роцепторы”, мимикрирующие функции хемокино-вых рецепторов, следствием чего является ограничение притока защитных клеток в очаги вирусной инфекции и воспаления [26].

Следует отметить существенные различия процессов продукции и секреции цитокинов эндотелиальными клетками в условиях in vitro и in vivo. Выявленная транскрипция гена того или иного цитокина далеко не всегда совпадает с продукцией и секрецией биологически активного продукта. С этим связаны трудности изучения секреторной функции эндотелиальных клеток.

Работа поддержана грантом РФФИ №00-04-48064.

Список литературы

1. Baggiolini М., Loetscher P. Chemokines in inflammation and immunity // Immunol Today. - 2000.

- Vol.21. - P.418-420.

2. Balkwill F.R. Cytokines: a practical approach // IRL Press at Oxford University Press. - 1995. - P.xxxiii, 417

3. Bazzoni G., Dejana E., Lampugnani M.G. Endothelial adhesion molecules in the development of the vascular tree: the garden of forking paths // Curr Opin Cell Biol. - 1999. - Vol.ll. - P.573-581.

4. Belperio J.A., Keane M.P., Arenberg D.A., Addison C.L., Ehlert J.E., Burdick M.D., Strieter R.M. CXC chemokines in angiogenesis //J Leukoc Biol. - 2000. -Vol.68. - P.l-8.

5. Carmeliet P., Jain R.K. Angiogenesis in cancer and other diseases // Nature. - 2000. - Vol.407. - P.249-257.

6. Cines D.B., Poliak E.S., Buck C.A., Loscalzo J., Zimmerman G.A., McEver R.P., Pober J.S., Wick T.M., Konkle B.A., Schwartz B.S., Barnathan E.S., McCrae K.R., Hug B.A., Schmidt A.M., Stern D.M. Endothelial cells in physiology and in the pathophysiology of vascular disorders // Blood. - 1998. - Vol.91. - P.3527-3561.

7. Collins T., Korman A.J., Wake C.T., Boss J.M., Kappes D.J., Fiers W., Ault K.A., Gimbrone M.A., Jr., Strominger J.L., Pober J.S. Immune interferon activates multiple class II major histocompatibility complex genes and the associated invariant chain gene in human endothelial cells and dermal fibroblasts // Proc Natl Acad Sci USA.- 1984. - Vol.81. - P.4917-4921.

8. Curfs J.H., Meis J.F., Hoogkamp-Korstanje J.A. A primer on cytokines: sources, receptors, effects, and inducers // Clin Microbiol Rev. - 1997. - Vol.10. -P.742-780.

9. Dart A.M., Chin-Dusting J.P. Lipids and the endothelium // Cardiovasc Res. - 1999. - Vol.43. -P.308-322.

10. De Caterina R., Libby P., Peng H.B., Thannickal V.J., Rajavashisth T.B., Gimbrone M.A., Jr., Shin W.S., Liao J.K. Nitric oxide decreases cytokine-induced endothelial activation. Nitric oxide selectively reduces endothelial expression of adhesion molecules and proinflammatory cytokines // J Clin Invest. - 1995. -Vol.96. - P.60-68.

11. De Martin R., Hoeth M., Hofer-Warbinek R., Schmid J.A. The transcription factor NF-kappa B and the regulation of vascular cell function // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2000. - Vol.20. - P.E83-88.

12. Delves P.J., Roitt I.M. The immune system. First of two parts // N Engl J Med. - 2000. - Vol.343. - P.37-49.

13. Delves P.J., Roitt I.M. The immune system. Second of two parts //N Engl J Med. - 2000. - Vol.343.

- P. 108-117.

14. Desai S.B., Libutti S.K. Tumor angiogenesis and endothelial cell modulatory factors // J Immunother. -

1999. - Vol.22. - P.186-211.

15. Fiehn C., Paleolog E.M., Feldmann M. Selective enhancement of endothelial cell VCAM-1 expression by interleukin-10 in the presence of activated leucocytes // Immunology. - 1997. - Vol.91. - P.565-571.

16. Glass C.K., Witztum J.L. Atherosclerosis: the road ahead // Cell. - 2001. - Vol.104. - P.503-516.

17. Gualandris A., Rusnati M., Belleri M., Nelli E.E., Bastaki M., Molinari-Tosatti M.P., Bonardi F., Parolini S., Albini A., Morbidelli L., Ziche M., Corallini A., Possati L., Vacca A., Ribatti D., Presta M. Basic fibroblast growth factor overexpression in endothelial cells: an autocrine mechanism for angiogenesis and angioproliferative diseases // Cell Growth Differ. -

1996. - Vol.7. - P.147-160.

18. Hajjar K.A., Deora A. New Concepts in Fibrinolysis and Angiogenesis // Curr Atheroscler Rep.

- 2000. - Vol.2. - P.417-421.

19. Harrison J.K., Jiang Y., Wees E.A., Salafranca M.N., Liang H.X., Feng L., Belardinelli L. Inflammatory agents regulate in vivo expression of fractalkine in endothelial cells of the rat heart // J Leukoc Biol. -

1999. - Vol.66. - P.937-944.

20. Horvath C.M., Darnell J.E. The state of the STATs: recent developments in the study of signal transduction to the nucleus // Curr Opin Cell Biol. -

1997. - Vol.9. - P.233-239.

21. Imai T., Hieshima K., Haskell C., Baba M., Nagira M., Nishimura M., Kakizaki M., Takagi S., Nomiyama H., Schall T.J., Yoshie O. Identification and molecular characterization of fractalkine receptor CX3CR1, which mediates both leukocyte migration and adhesion // Cell. - 1997. - Vol.91. -P.521-530.

22. Johnson D.R., Hauser I.A., Voll R.E., Emmrich

F. Arterial and venular endothelial cell costimulation of cytokine secretion by human T cell clones //J Leukoc Biol. - 1998. - Vol.63. - P.612-619.

23. Keller E.T., Wanagat J., Ershler W.B. Molecular and cellular biology of interleukin-6 and its receptor // Front Biosci. - 1996. - Vol.l. - P. 340-357.

24. Knowles J.W., Maeda N. Genetic modifiers of atherosclerosis in mice // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2000. - Vol.20. - P.2336-2345.

25. Krishnaswamy G., Kelley J„ Yerra L., Smith J.K., Chi D.S. Human endothelium as a source of multifunctional cytokines: molecular regulation and possible role in human disease //J Interferon Cytokine Res. - 1999. - Vol.19. - P.91-104.

26. Lalani A.S., Barrett J.W., McFadden G. Modulating chemokines: more lessons from viruses // Immunol Today. - 2000. - Vol.21. - P.100-106.

27. Lewis A.J., Manning A.M. New targets for antiinflammatory drugs // Curr Opin Chem Biol. - 1999. -Vol.3. - P.489-494.

28. Libby P. Vascular cells produce and respond to cytokines // Immune function of the vessel wall / ed. Hansson G., Libby P. - Harwood acad.publ, 1996. -P.45-64

29. Liu K.D., Gaffen S.L., Goldsmith M.A. JAK/ STAT signaling by cytokine receptors // Curr Opin Immunol. - 1998. - Vol.10. - P.271-278.

30. Lusis A.J. Atherosclerosis // Nature. - 2000. -Vol.407. - P.233-241.

31. Ma A. Pleiotropic functions of IL-15 in innate and adaptive immunity // Mod Asp Immunobiol. -

2000. - Vol.l. - P.102-104.

32. Malonne H., Langer I., Kiss R., Atassi G. Mechanisms of tumor angiogenesis and therapeutic implications: angiogenesis inhibitors // Clin Exp Metastasis. - 1999. - Vol.17. - P.l-14.

33. Mantovani A., Garlanda C„ Introna M., Vecchi A. Regulation of endothelial cell function by pro- and anti-inflammatory cytokines // Transplant Proc. - 1998.

- Vol.30. - P.4239-4243.

34. Marfaing-Koka A., Devergne O., Gorgone G., Portier A., Schall T.J., Galanaud P., Emilie D. Regulation of the production of the RANTES chemokine by endothelial cells. Synergistic induction by IFN-gamma plus TNF-alpha and inhibition by IL-4 and IL-13 //J Immunol. - 1995. - Vol.154. - P.1870-1878.

35. Mattila P., Majuri M.L., Mattila P.S., Renkonen R. TNF alpha-induced expression of endothelial adhesion molecules, ICAM-1 and VCAM-1, is linked to protein kinase C activation // Scand J Immunol. -1992. - Vol.36. - P.159-165.

36. Meager A. Cytokine regulation of cellular adhesion molecule expression in inflammation // Cytokine Growth Factor Rev. - 1999. - Vol.10. - P.27-39.

37. Melrose J., TsurushitaN., Liu G., Berg E.L. IFN-gamma inhibits activation-induced expression of E- and P-selectin on endothelial cells //J Immunol. - 1998. -Vol.161. - P.2457-2464.

38. Mercie P., Belloc F., Bihlou-Nabera C., Barthe C., Pruvost A., Renard M., Seigneur M., Bernard P., Marit G., Boisseau M.R. Comparative methodologic study of NFkappaB activation in cultured endothelial cells//J Lab Clin Med. - 2000. - Vol.136. - P.402-411.

39. Moser B., Loetscher P. Lymphocyte traffic control by chemokines //Nat Immunol. - 2001. - Vol.2.

- P.123-128.

40. Muller W.A., Randolph G.J. Migration of leukocytes across endothelium and beyond: molecules involved in the transmigration and fate of monocytes / / J Leukoc Biol. - 1999. - Vol.66. - P.698-704.

41. Murdoch C., Finn A. Chemokine receptors and their role in vascular biology // J Vase Res. - 2000. -Vol.37. - P. 1-7.

42. Nauck M., Roth M., Tamm M„ Eickelberg O., Wieland H., Stulz P., Perruchoud A.P. Induction of vascular endothelial growth factor by platelet-activating factor and platelet-derived growth factor is downregulated by corticosteroids // Am J Respir Cell Mol Biol. - 1997. - Vol.16. - P.398-406.

43. Nyhlen K., Linden M., Andersson R., Uppugunduri

S. Corticosteroids and interferons inhibit cytokine-induced production of IL-8 by human endothelial cells // Cytokine.

- 2000. - Vol. 12. - P.355-360.

44. Oeckler R.A., Wolin M.S. New Concepts in Vascular Nitric Oxide Signaling // Curr Atheroscler Rep. - 2000. - Vol.2. - P.437-444.

45. Olofsson B., Jeltsch M., Eriksson U., Alitalo K. Current biology of VEGF-B and VEGF-C // Curr Opin Biotechnol. - 1999. - Vol.10. - P.528-535.

46. Parkin J., Cohen B. An overview of the immune system // Lancet. - 2001. - Vol.357. - P.1777-1789.

47. Peng H.B., Spiecker M., Liao J.K. Inducible nitric oxide: an autoregulatory feedback inhibitor of vascular inflammation // J Immunol. - 1998. - Vol.161. - P.1970-1976.

48. Pepper M.S. Transforming growth factor-beta: vasculogenesis, angiogenesis, and vessel wall integrity // Cytokine Growth Factor Rev. - 1997. - Vol.8. - P.21-

43.

49. Pober J.S. Immunobiology of human vascular endothelium // Immunol Res. - 1999. - Vol.19. - P.225-232.

50. Reape T.J., Groot P.H. Chemokines and atherosclerosis // Atherosclerosis. - 1999. - Vol.147. -P.213-225.

51. Rengarajan J., Szabo S.J., Glimcher L.H. Transcriptional regulation of Thl/Th2 polarization // Immunol Today. - 2000. - Vol.21. - P.479-483.

52. Renkonen R., Mattila P., Majuri M.L., Paavonen T., Silvennoinen O. IL-4 decreases IFN-gamma-induced endothelial ICAM-1 expression by a transcriptional mechanism // Scand J Immunol. - 1992. - Vol.35. -P.525-530.

53. Risau W. Mechanisms of angiogenesis // Nature.

- 1997. - Vol.386. - P.671-674.

54. Rose M.L. Endothelial cells as antigen-presenting cells: role in human transplant rejection // Cell Mol Life Sci. - 1998. - Vol.54. - P.965-978.

55. Ross R. Atherosclerosis—an inflammatory disease // N Engl J Med. - 1999. - Vol.340. - P.l 15-126.

56. Rossi D., Zlotnik A. The biology of chemokines and their receptors // Annu Rev Immunol. - 2000. -Vol.18. - P.217-242.

57. Salcedo R., Wasserman K., Young H.A., Grimm M.C., Howard O.M., Anver M.R., Kleinman H.K., Murphy W.J., Oppenheim J.J. Vascular endothelial growth factor and basic fibroblast growth factor induce expression of CXCR4 on human endothelial cells: In vivo neovascularization induced by stromal-derived factor-lalpha // Am J Pathol. - 1999. - Vol.154. -P. 1125-1135.

58. Schoonbroodt S., Piette J. Oxidative stress interference with the nuclear factor-kappa B activation pathways // Biochem Pharmacol. - 2000. - Vol.60. -P.1075-1083.

59. Shi W., Haberland M.E., Jien M.L., Shih D.M., Lusis A.J. Endothelial responses to oxidized lipoproteins determine genetic susceptibility to atherosclerosis in mice // Circulation. - 2000. - Vol.102. - P.75-81.

60. Shi W., Wang N.J., Shih D.M., Sun V.Z., Wang X., Lusis A.J. Determinants of atherosclerosis susceptibility in the C3H and C57BL/6 mouse model: evidence for involvement of endothelial cells but not blood cells or cholesterol metabolism // Circ Res. -

2000. - Vol.86. - P.1078-1084.

61. Tak P.P., Firestein G.S. NF-kappaB: a key role in inflammatory diseases // J Clin Invest. - 2001. -Vol.107. - P.7-11.

62. Thornhill M.H., Wellicome S.M., Mahiouz D.L., Lanchbury J.S., Kyan-Aung U., Haskard D.O. Tumor necrosis factor combines with IL-4 or IFN-gamma to selectively enhance endothelial cell adhesiveness for T

cells. The contribution of vascular cell adhesion molecule-1-dependent and -independent binding mechanisms //J Immunol. - 1991. - Vol.146. - P.592-598.

63. Topper J.N., Gimbrone M.A. Blood flow and vascular gene expression: fluid shear stress as a modulator of endothelial phenotype // Mol Med Today.

- 1999. - Vol.5. - P.40-46.

64. Vanden Berghe W., Vermeulen L., De Wilde

G., De Bosscher K., Boone E., Haegeman G. Signal transduction by tumor necrosis factor and gene regulation of the inflammatory cytokine interleukin-6 // Biochem Pharmacol. - 2000. - Vol.60. - P.l 185-1195.

65. Vestweber D., Blanks J.E. Mechanisms that regulate the function of the selectins and their ligands // Physiol Rev. - 1999. - Vol.79. - P.181-213.

66. Villarete L.H., Remick D.G. Nitric oxide regulation of IL-8 expression in human endothelial cells // Biochem Biophys Res Commun. - 1995. - Vol.211. -P.671-676.

67. Weber K.S., Nelson P.J., Grone H.J., Weber C. Expression of CCR2 by endothelial cells : implications for MCP-1 mediated wound injury repair and in vivo inflammatory activation of endothelium // Arterioscler Thromb Vase Biol. -1999. - Vol.19. - P.2085-2093.

68. Zeiher A.M., Fisslthaler B., Schray-Utz B., Busse R. Nitric oxide modulates the expression of monocyte chemoattractant protein 1 in cultured human endothelial cells // Circ Res. - 1995. - Vol.76. - P.980-986.

поступила в редакцию 03.05.2001 принята к печати 09.10.2001