Иммунотропная терапия

Медицинская Иммунология 2002, Т. 4, №2 © 2002, СПб РО РААКИ

ИММУНОТРОПНАЯ ТЕРАПИЯ

ИММУНОКОРРИГИРУЮЩАЯ ТЕРАПИЯ В ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ПИЕЛОНЕФРИТОМ

Алонова С.В.. Вагапова Д.Р., Нуртдинова Г.М.,

Республиканская клиническая больница им. Г. Г. Куватова, Башкирский государственный медицинский университет, Уфа, Башкортостан

Целью нашей работы явилось оценка эффективности применения оксиметацила в комплексном лечении больных хроническим пиелонефритом на основе анализа показателей неспецифического, гуморального и клеточного иммунитета.

Материалы и методы. Исследование состояния иммунитета проведено у 30 больных в возрасте от 18 до 56 лет со средней длительностью заболевания 15± 1,4 года. Больные хроническим пиелонефритом получали антибактериальную терапию с включением препарата оксиметацил в дозе 50 мг 2 раза в сутки в течении 10 дней. Контрольную группу составили 30 практически здоровых лиц.

Оценка иммунного статуса включала определение содержания субпопуляций лимфоцитов методом непрямой иммунофлюоресценции (CD3, CD4, CD8, CD22, CD 16) с помощью моноклональных антител (“Медбиоспектр”, Москва), исследование фагоцитарной активности нейтрофилов с частицами латекса с расчетом фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа, метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тесте, количественное определение сывороточных иммуноглобулинов классов G, А, М методом радиальной иммунодиффузии.

Результаты. Применение оксиметацила у больных хроническим пиелонефритом способствовало купированию воспалительного процесса уже на 7 день лечения Больные отмечали уменьшение болей в поясничной области, общей слабости, нормализацию температуры тела.

Проведенные исследования показали значительное улучшение показателей иммунного статуса больных хроническим пиелонефритом, которые получали комплексную терапию с включением оксиметацила. Установлено повышение числа CD3 клеток (69,3+1,2%, до лечения 54,3±0,9%; р<0,001), CD4 клеток (38,0±0,7%, до лечения 24,6±0,5%; р<0,001), CD16 клеток (13,6±0,4%, до лечения 6,0±0,3%; р<0,001), CD22 клеток (11,8+0,4%, до лечения 7,8±0,6%; р<0,001). Выявлены достоверные связи между повышением Т-лимфоцитов и увеличением числа Т-хелперов (г=0,46; р<0,05), цитотоксических Т-лимфоцитов (г=0,47; р<0,05). У больных, в комплекс лечения которых был включен оксиметацил уровень IgA увеличился 1,2 раза и составил 3,3±0,1 г/л (до лечения 2,6±0,09 г/л; р<0,001).

В процессе комплексного лечения у больных хроническим пиелонефритом наблюдалось значительное улучшение состояния неспецифических клеточных и гуморальных факторов защиты. Фагоцитарный индекс увеличился в 1,3 раза и составил 68,9±1,4% (до лечения 50,1 + 1,0%; р<0,001), фагоцитарное число повысилось в 1,6 раза и составило 7,5+0,2 (до лечения 4,5±0,1; р<0,001). Усилилась метаболическая активность нейтрофилов, что выразилось в увеличении числа клеток восстанавливающий нитросиний тетразолий (14,6±0,2%, до лечения 10,5+0,4%; р<0,001).

Проведенный анализ показал, что применение оксиметацила в комплексном лечении хронического пиелонфрита нормализует соотношение иммунокомпетентных клеток, повышает содержание клеток с маркерами естественных киллеров, восстанавливает фагоцитарную активность лейкоцитов, усиливает метаболическую активность нейтрофилов, положительно влияет на гуморальное звено иммунитета, что подтверждается достоверным увеличением концентрации ^А.

Таким образом, оксиметацил обладает высокой иммуномодулирующей активностью и может быть рекомендован для включения его в комплексную терапию хронического пиелонефрита.

ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ЛЕЙКОЦИТАРНОГО ИНТЕРФЕРОНА И ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В КАЧЕСТВЕ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ ПРИ КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКОЙ ХИРУРГИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИЕЙ

Алсынбаев М.М.. Медведев Ю.А.,

Корженевский А.А., Бобкова Е.В., Кулагин В.Ф., Исрафилов А.Г., Попова Е.П., Гизатуллин Р.Х. Пахомов Д.В.

ГУП “Иммунопрепарат ”, Башкирский государственный медицинский университет, Уфа, Башкортостан

На основании результатов лечения более 700 больных разными видами гнойно-септических хирургических инфекций проанализирован характер иммуномодулирующего действия при этих заболеваниях препаратов лейкоцитарного интерферона и нормальных иммуноглобулинов производства ГУП "Иммунопрепарат” (г.Уфа). В процессе комплексного консервативного и хирургического лечения пациентов лейкоцитарный человеческий интерферон в виде свечевой (“Суппо-зитоферон”) и инъекционной (“Инферон”) форм - ЛИФ, назначался 2-3 кратно в суммарной дозе 60000-80000 МЕ (243 больных), а препарат человеческого иммуноглобулина нормального для внутривенного введения (“Иммуновенин”) -ИГВ, применяли 2-3 кратно в суммарной дозе 200-300 мг (112 больных). Иммунный статус больных до и в процессе лечения контролировали с помощью общепринятых методов.

Было показано, что при септических состояниях в группах больных, получавших в процессе лечения ЛИФ и ИГВ, выявляется достоверно более высокое, чем в контрольной группе, содержание в крови лимфоцитов, в том числе - Т-лимфоцитов, и достоверно более низкое (приближающееся к значениям норма) содержание иммуноглобулинов класса ^М. При этом назначение ЛИФ вызывало достоверное возрастание содержания в крови больных 1§А, в то время как ВИГ даже несколько снижало его в сравнении с таковым у контрольной группы. У больных с острыми местными гнойно-воспалительными процессами (абсцессы и флегмоны различной локализации, перитониты и другие) назначение в лечении ЛИФ и ИГВ также усиливало лимфопоэз и способствовало возрастанию числа Т-лимфоцитов. Кроме того, использование этих иммуномодуляторов увеличивало поглотительную

активность фагоцитов крови (ЛИФ достоверно сильнее, чем ВИГ). Помимо этого, в группе больных, получавших ЛИФ, отмечено более высокое, чем в контрольной группе, содержание иммуноглобулинов классов и (в группе получавших ИГВ - на уровне контроля). При локализованных хронических гнойно-воспалительных заболеваниях (хронические остеомиелиты и длительно сохраняющиеся нагноитсльные процессы другой локализации) назначение использованных в работе препаратов в указанных дозах не проявляло существенного иммуностимулирующего действия. Более того, в группе таких больных, получавших ИГВ, средние показатели содержания Т-лимфоцитов (СЭЗ+-клетки) и иммуноглобулинов класса ^А достоверно уменьшалось и было ниже, чем в контрольной группе. При хронических гнойно-воспалительных процессах позитивный иммунотропный эффект был отмечен только у категорий больных с определенными вариантами иммунодефицитных состояний: на фоне дефицитов фагоцитоза или Т-лимфоцитарного звена - для ЛИФ (возрастание поглотительной активности фагоцитов, числа Т-лимфоцитов и Т-активных лимфоцитов), и дефицитов В-звсна - для ИГВ (стимуляция продукции иммуноглобулинов и лимфоцитопо-эза). Приведенные данные обосновывают возможности дифференцированного применения ЛИФ и ИГВ в качестве иммуномодуляторов при лечении гнойно-септических заболеваний.

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ НА АКТИВНОСТЬ СИСТЕМЫ КОМПЛЕМЕНТА В МОДЕЛЬНЫХ СИСТЕМАХ

Анташев А.В., Сускова В.С.

НИИ Трансплантологии и Искусственных Органов М3 РФ, Москва, Россия

При анализе литературы нам не удалось найти данных о влиянии имуномодуляторов на систему комплемента (СК). В связи с этим нами было изученно влияние отечественных имуномодуляторов: миелопид, полиоксидоний, ликопид, тимлин, иммунофан на СК.

С этой целью к 100 мкл. цельной крови человека добавляли 100 мкл раствора изучаемого препарата (концентрация в-ва составляла 0,1мг/мл) в качестве контроля использовали ту же кровь с добавлением физраствора 1:1. Образцы инкубировали в течение 1ч. при 37°С, после чего в них определялась активность СК методом кинетического титрования ( Шкурко В.И.1973).

Наиболее выраженное влияние на СК оказывает ликопид в 15 из 16 образцов крови (94%), полиоксидоний 14 из 16 (87,5%), миелопид 12 из 16 (75%), тималин 10 из 16 (62,5%), имунофан 6 из 13 (46,5%).

Сила ответа на вводимую дозу препарата была разной. Отвечаемость измеряемая отношением активности СК в контроле и опыте равнялась; на ликопид Д=0,9, максимально, Д=4,6, в среднем по всем 15 образцам А=2,27; на полиоксидоний минимально Д=0,3, максимально Д=3,9, в среднем Д=1,5; на миелопид минимально Д=0,9, максимально Д=1,8, в среднем Д=1,3; на тимолин минимально Д=0,4, максимально Д=2,6, в среднем Д= 1,1; на иммунофан минимально Д=0,5, максимально Д=2,5, в среднем Д=1,03.

Как видно из представленных данных система комплемента обладает индивидуальной чувствительностью к иммуно-коррегирующим препаратам, что обусловленно влиянием этих препаратов не только на СК но и на клетки иммунной системы, выбрасывающей биологически активные вещества влияющие на СК. В зависимости от клинического состояния больного и состояния его иммунной системы действие иммуно-

коррегирующих препаратов на СК может быть рзлично. Так у больного С. при первом обследовании выявлялась чувствительность ко всем исследуемым препаратам. При повторном исследовании чувствительность сохранялась только к лико-пиду. У больного Д. наблюдалась обратная картина: при первом исследовании отвечаемость СК была только на ликопид при повторном исследовании на все препараты.

У больного А. наблюдалось нарастание чувствительности С'К ко всем иммуннокоррекгорам, с последующим его снижением. У больного М. наблюдалось постепенное нарастание чувствительности ко всем препаратам. Расхождение динамики чувствительности СК к иммунотропным препаратам можно объяснить различным клиническим течением, и различной терапией применяемой у них.

Эти данные позволяют сделать вывод о необходимости индивидуального подбора иммунокорректоров поскольку в различные сроки заболевания чувствительность иммуной системы и СК в часности к различным препаратам может быть разным.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОДЕЛИ ОСЛОЖНЕННОГО ТЕЧЕНИЯ РАНЕВОГО ПРОЦЕССА ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ВОЗМОЖНОСТИ МЕСТНОГО ПРИМЕНЕНИЯ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ

Анциферова М. А.. Александров Г. А., Варюшина Е. А., Казаков А. А.

ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург, Россия

Заживление раны представляет собой сложный процесс, включающий в себя воспаление, реэпителизацию, ангиогенез, формирование грануляционной ткани и восстановление ткани. Для осуществления этих процессов необходимо взаимодействие множества клеточных типов между собой и с внеклеточным матриксом. Цитокины играют важнейшую роль в регуляции всех процессов, принимающих участие в заживлении раны. В настоящее время представляется довольно перспективным местное применение рекомбинантных цитокинов для лечения ран, особенно осложненных длительно незаживающих. Осложненное течение раневого процесса наблюдается при таких патологиях как диабет, нарушение кровообращения, тяжелые ожоги и иммунодефициты. Для изучения возможности применения цитокинов для лечения длительно незаживающих ран необходима адекватная экспериментальная модель. Данная работа была предпринята с целью отработки модели осложненного течения раневого процесса и предварительной оценки возможности использования провоспали-тельных цитокинов для лечения патологий, связанных с замедленным заживлением кожных ран.

Нарушение репаративных процессов может быть связано как с недостаточной функциональной активностью лейкоцитов, так и с неполноценной продукцией цитокинов в раневом очаге. Известно, что кортикостероиды являются сильнейшими противовоспалительными агентами. При ранении на фоне введения кортикостероидов наблюдается неадекватное течение воспалительной фазы, что обусловлено сниженной миграцией лейкоцитов в очаг воспаления, подавленной функциональной активностью лейкоцитов и ингиби-цией синтеза провоспалительных цитокинов, что ведет к замедлению заживления раны. Для моделирования осложненного течения раневого процесса экспериментальным животным вводился гидрокортизон, и наносились подкожные раны. Беспородным мышам вводили гидрокортизон в течение 12 дней. На следующий день после первой инъек-

ции гидрокортизона животных анестезировали Каллипсолом и наносили по 2 раны диаметром 4 мм. Для изучения возможности применения рекомбинантных цитокинов для лечения осложненных ран животные были разбиты на три группы, одной группе мышей раны смазывали каждый день мазевой формой II--1(3, другой - 1Ь-8, контрольная группа получала лечение плацебо. На разные сроки после ранения производили измерение площади раны, также отмечали сроки отхождения струпа. На 3, 7, 10 и 14 дни после ранения по 3 мыши из каждой группы забивали, раневое поражение, и часть прилежащей здоровой ткани брали для гистологического и иммуногистохимического исследования. Также на 3, 7, 10 и 14 дни у животных брали кровь для оценки системного проявления раневого процесса.

Внутримышечное введение гидрокортизона в дозе 5 мг/ кг массы тела вызывает значительное замедление заживления раны. При этом отхождение струпа наблюдается на более поздние сроки по сравнению с контрольной группой и снижается скорость реэпителизации. Меньшая доза (1 мг/ кг) гидрокортизона не оказывала заметного влияния на скорость заживления ран. При введении больших доз гидрокортизона (10 и 25 мг/кг) значительно снижалась выживаемость животных в течение проведения эксперимента. Местное использование 1Ь-1(3 и 1Ь-8 ускоряло заживление ран у им-муносупрессированных животных. На 10 день после ранения у мышей, получающих лечение 1Ь-1 или 1Ь-8, площадь раны составляла в среднем 25% от исходной площади, тогда как у контрольной группы это значение было равно 48%. Отхождение струпа к 10 дню после ранения наблюдалось в 25% случаев при лечении 1Ь-1(3, в 7% случаев при лечени 1Ь-8, тогда как в контрольной группе к этому сроку отхождение струпа не наблюдалось ни в одном случае. На 12 день после ранения отхождение струпа наблюдалось в 60% случаев для группы, получавшей 1Ь-1, в 13% случаев при лечении 1Ь-8 и в 33% случаев в контрольной группе. Для оценки системной реакции на течение раневого процесса мы использовали анализ люминол-зависимой хемилюминссценции цельной крови. На 10 день после ранения у животных из группы плацебо индуцированная зимозаном хемилюминес-ценция значительно повышалась, что говорит о наличии тяжелого воспалительного процесса на системном уровне. У животных, получавших местное лечение 1Ь-1, этот показатель не отличался от контрольного уровня.

Таким образом, в ходе проведенной работы нами была разработана модель осложненного течения раневого процесса, позволяющая изучать местное действие провоспалитель-ных цитокинов. Использование 1Ь-1 и 1Ь-8 представляется перспективным для лечения осложненных и длительно незаживающих ран. Для изучения деталей и механизмов местного действия этих медиаторов необходимы дальнейшие исследования.

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА СУПЕРЛИМФ НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ

Баранова.В.В- Снимщикова И.А.*,

Крестинин В.О., Юдина С.М., Русанова Т.С.

Курский медицинский университет, Курск, *Орловский госуниверситет, Орел, Россия

В настоящее время установлена важная роль нейтрофи-лов и продуцируемых ими медиаторов в патогенезе острого воспаления. Известно, что секреторный потенциал нейтрофи-лов значительно расширяет эффекторные возможности фаго-

цитов и во многом определяет течение и исход воспалительного процесса.

Учитывая это, а также данные ряда авторов о цитоки-новой регуляции системы нейтрофильных гранулоцитов, нами было изучено in vitro влияние препарата Суперлимф на функциональную активность нейтрофилов доноров и больных с гнойно-воспалительными процессами матки и ее придатков. При этом оценивали адгезивную, цитотокси-чсскую, метаболическую и апоптотическую способности клеток. Нейтрофилы выделяли, используя двойной градиент плотности фиколл-верографина, и обрабатывали препаратом Суперлимф в дозах 5 и 10 мкт/мл. Результаты проведенных исследований показали, что инкубация нейтрофилов доноров с указанным препаратом приводила к повышению как спонтанной, так и стимулированной продукции миелопероксидазы, причем эффект был более выражен при использовании Суперлимфа в дозе 10 мкг/мл. Вместе с тем. обработка препаратами нейтрофилов больных сопровождалась дозозависимым снижением данных показателей. Как известно, наряду с .. миелопероксидазой, в формировании бактерицидности имеют значение свободные радикалы (супероксидный анион, синглетный кислород, гидроксильный радикал) и перекись водорода, продуцируемые фагоцитами и обладающие не только защитным действием, но и большим деструктивным потенциалом по отношению к клеткам и тканям. Экспериментально установлено, что обработка Суперлимфом нейтрофилов доноров приводила к усилению спонтанной и люминолиндуци-рованной хемилюминссценции (XJI), что, вероятно, связано с примирующим действием цитокинов. При анализе этих показателей у больных воспалительными заболеваниями матки и ее придатков выявлено иммуномодулирующее действие препарата на нейтрофилы: повышение исходно сниженной спонтанной и люминолиндуцированной ХЛ и снижение - исходно повышенной. В обоих случаях наиболее выраженный эффект наблюдался при использовании дозы Суиерлцмфа 10 мкг/мл. Кроме того, установлено, что инкубация нейтрофилов больных с препаратом сопровождалась дозозависимым снижением их адгезивной и цитоток-сической активности, что имеет важное значение в течении и исходе воспалительного процесса. В последние годы доказано, что некоторые цитокнны (IL-1J3, IL-6, TNFa, GM-CSF, IFNy) оказывают позитивное влияние на жизненный цикл нейтрофильных гранулоцитов, защищая их от апоп-гоза, как результата негативной активации, вызванноилдей-ствием различных апопгогенов (ионизирующего излучения, глюкокортикостероидов, микробных агентов и др.) и тем самым увеличивая количество функционально полноценных клеток, обеспечивающих эффективную защиту от микроорганизмов в очаге воспаления. Учитывая это, мы исследовали влияние Суперлимфа на апоптотическую активность нейтрофилов. Апоптоз нейтрофилов оценивали методом цитофлюоресцентного анализа и по экспрессии индукторного фактора апоптоза CD95. При этом установлено, что обработка in vitro нейтрофилов доноров и больных препаратом приводила к значительному снижению апоптоза нейтрофилов.

Таким образом, результаты экспериментальных исследований показывают, что Сунерлимф оказывает дозозависимое влияние на функциональную активность нейтрофилов, патогенетически значимо модулируя их провоспали-гельные эффекты: снижает адгезию, цито-токсичность и апоптоз, корригирует, в зависимости от исходного состояния, кислородзависимый метаболизм и продукцию миелопероксидазы.

ИЗМЕНЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК СИСТЕМЫ КОМПЛЕМЕНТА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ СОЧЕТАННОЙ КОМБИНИРОВАННОЙ СПИНАЛЬНО-ЭПИДУРАЛЬНОЙ АНЕСТЕЗИИ

Бельтюков П.П.. Мамедов А.Д.,

Страшное В.И., Забродин О.Н.

Санкт- Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова, Россия

Для оценки влияния различных видов анестезии в ходе оперативного вмешательства на состояние системы комплемента исследовали параметры активации комплемента по классическому (КПК) и альтернативному (АПК) путям в сыворотках крови больных, оперированных по поводу различных заболеваний желудочно-кишечного тракта. Обследованы две группы больных, получавших различные виды анестезии: сочетанную комбинированную спинально - эпи-дуральную анестезию (СКСЭА) - I группа или общую анестезию (ОА) на основе тиопентала, кетамина, фентанила и ингаляции смеси Ы20/02- II группа. Для контроля использовали сыворотки крови здоровых лиц. Определяли индукционный период, скорость гемолиза при активации КПК и АПК в сыворотках, полученных от больных до операции, на разных этапах операции и после оперативного вмешательства. Кроме того, для оценки состояния симпатико-адреналовой системы у всех больных определена экскреция катехоламинов с мочой до, во время и после оперативного вмешательства.

Исходные характеристики функциональной активности КПК и АПК в группах больных и в группе здоровых лиц достоверно не отличались друг от друга. Больных I группы (СКСЭА), вводили в наркоз внутривенной инъекцией тиопентала № (3-3,5 мг/кг) и оксибутирата №. Больным группы II (ОА) тиопентал вводили в дозе 6-7 мг/кг массы тела, кроме тиопентала вводили фентанил и кетамин в общепринятых дозировках.

У всех больных после операции наблюдались изменения кинетических параметров активности комплемента, выразившиеся в снижении скорости гемолиза и в относительном увеличении индукционного периода комплемент - зависимого лизиса. В группе I относительное увеличение индукционного периода комплемент - зависимого лизиса после операции составило от 0 до 67% по АПК и до 25% по КПК. В группе II этот же параметр составил от 36 до 340% по АПК и от 30 до 200% по КПК. Корреляционный анализ показал, что в группе II наблюдается высокая прямая корреляция между изменениями индукционного периода по АПК и КПК (г=0,93), в группе I корреляция не выявлена. Сравнение параметров экскреции катехоламинов и активации комплемента по АПК и КПК не позволило выявить четкой зависимости между этими параметрами. Однако в группе II на фоне более выраженной активации комплемента, связанной с оперативным вмешательством, наблюдался достоверно более высокий уровень экскреции катехоламинов после операции.

Менее выраженные изменения кинетических параметров активации комплемента при применении СКСЭА обусловлены, главным образом, более адекватной анестезией, применение которой позволяет уменьшить дозы внутривенных

анестезирующих средств, способных оказывать воздействие на процессы активации системы комплемента.

ПОЛУЧЕНИЕ ИММУНОТРОПНОГО РИБОНУКЛЕИНОВОГО ПРЕПАРАТА РИБОТИМ СВЯЗАНО СО СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ФРАГМЕНТАЦИЕЙ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКИХ РНК ИЗ ТИМУСА

Бекман Э.М.. Баранова О.А.

Научно-исследовательский институт физико-химической медицины М3 РФ, Москва, Россия

В наших предыдущих исследованиях продемонстрирована иммунобиологическая активность тимического рибонуклеинового препарата Риботим (РТ), а именно: индукция Т -зависимого антителообразования у мышей, влияние на функциональную активность нейтрофилов и подвижность лейкоцитов при ожоговой травме у крыс, усиление репарационных процессов в коже при различных патологиях. Показано, что РТ, выделенный специально разработанным нами методом из тимуса представляет собой набор цитоплазматических РНК (цРНК) с молекулярными массами от (М) ~ 16 до ~ бОкД (~3-7Б РНК). Полученные результаты давали возможность предположить, что в процессе выделения РТ происходит фрагментация высокомолекулярных цРНК с образованием смеси низ-комолекулярных РНК.

Цель настоящей работы - систематическое исследование спектра компонентов РТ в сравнении с изученными нами ранее цРНК из других объектов, а также с литературными данными по специфической фрагментации высокомолекулярных цРНК.

Материалы и методы. РТ выделяли оригинальным “де-тергентным” методом из замороженного тимуса крупного рогатого скота; для модельных экспериментов цРНК выделяли модифицированным “фенольным” методом из свежей ткани тимуса крыс и мышей, а также из опухолевых клеток и печени. В модельных экспериментах цРНК подвергали специальной процедуре автолиза: инкубации РНК в условиях, приближенным к физиологическим (рН~7,5,1°~37°С, различные концентрации Mg2+). Спектры рибонуклеиновых компонентов анализировали с помощью электрофореза (ЭФ) в ПААГ-7М мочевина. Размеры компонентов оценивали по калибровочным прямым с учётом пропорциональной зависимости ^М - электрофоретическая подвижность. Всего обработано свыше 40 собственных и опубликованных в литературе электрофореграмм.

Основные результаты. Установлено, что ЭФ-граммы РТ содержат до 18 дискретных полос; соответствующие молекулярные массы мРНК-компонентов приведены в таблице.

Полосы 4, 6, 10 и 11 соответствуют 5,88, 55, 4,55 и 45 РНК, которые обычно детектируются в “нативных” препаратах цРНК. Что касается остальных, то, по крайней мере, часть из них могут быть продуктами фрагментации более высокомолекулярных цРНК. Для подтверждения этого предположения проведено сравнение спектра компонентов РТ с аналогичными спектрами в препаратах цРНК из свежей ткани тимуса мышей и крыс, выделенных “фенольным” методом, которые позволяют получить более “нативные” препараты. Кро-

N2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

М(кД) 56 50 44 45 40 35 34 СО СО 32 30 25 24 22 21 20 19 17 16

ме того, сделан сравнительный анализ электрофореграмм цРНК из тимуса, печени, опухолевых клеток и их автолизатов, полученных в модельных экспериментах. В отдельных сериях экспериментов исследованы автолизаты высокомолекулярных цРНК, элюированных из геля после препаративного ЭФ. Выявлено следующие:

1. После автолиза элюированных из геля высокомолекулярных цРНК в последующем ЭФ не выявляются исходные цРНК, но зато обнаруживаются относительно низкомолекулярные фрагменты, в основном, совпадающие с теми, которые детектируются в РТ и в других препаратах цРНК из тимуса.

2. Спектры компонентов изучаемых РНКовых препаратов воспроизводятся при соблюдении одинаковых условий выделения или автолиза РНК (т.е. фрагментация специфична).

3. Наблюдается явная общность процесса фрагментации цРНК в наших экспериментах с описанным в литературе специфическим эндонуклеолитическим расщеплением высокомолекулярных цРНК при апоптозе, аутоиммунных патологиях, вирусных инфекциях и т.п.

Заключение. Полученные результаты указывают на то, что в процессе выделения из тимуса происходит многоступенчатая специфическая фрагментация высокомолекулярных цРНК, которая и приводит к образованию иммунотропного препарата РТ. Совокупность собственных и литературных данных свидетельствует в пользу того, что эта фрагментация имеет биологический смысл и получающиеся фрагменты обладают регуляторными свойствами, проявление которых мы регистрируем при изучении иммуно-биологической активности РТ.

ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ БЕТА-КАРОТИНА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Болиева Л.З.

Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Владикавказ, Россия

Известно, что злокачественные новообразования любой локализации развиваются на фоне снижения защитных сил организма и сопровождаются патологическими изменениями различных звеньев иммунной системы.

Целью настоящего исследования явилось изучение возможности коррекции вторичного иммунодефицита, индуцированного канцерогенным воздействием, при помощи препарата бета - каротина.

Материалы и методы. Эксперимент проводился на мышах линий С57В1/6, Ва1Ь/с, полученных из питомника “Столбовая” РАМН. Животные находились на стандартном рационе вивария и получали питьевую воду без ограничений. Иммунодепрессия была индуцирована подкожным введением 7,12-диметилбензантрацена в дозах 0,5, 1,0 и 2,5 мг/мышь 2 раза в неделю в течение 4-х недель. Синтетический бега-каротин (производство НПО “Витамины”), вводился ежедневно с кормом в дозе 50 мг/кг начиная за две недели до введения ДМБА. Животные были разделены на 4 группы, при этом мыши 1-й группы служили интактным контролем, животные 2-й и 3-й групп получали только ДМБА или бета-каротин соответственно, животные 4-й группы получали ДМБА и бета-каротин. Исследования проводились на 2-й, 4-й, 6-й и 8-й неделях от начала канцерогенного воздействия. Изучали влияние указанных средств на пролиферативный ответ лимфоцитов, стимулированный митогеном Кон А и на цитолитичес-кую и пролиферативную активность лимфоцитов в смешанной культуре лимфоцитов.

Результаты. В результате проведенных экспериментов показано, что ДМБА вызывает иммунодепрессию, степень которой прямо зависит от дозы и продолжительности канцерогенного воздействия. Наибольшее угнетение иммунного ответа было достигнуто при введении данного вещества в дозе

2,5 мг/мышь к 4-8-й неделе исследования. Введение бета -каротина приводило к повышению функциональной активности лимфоцитов, что в условиях канцерогенного воздействия способствовало коррекции развившегося иммунодефицита.

Заключение. Результаты проведенного исследования подтверждают имеющиеся к настоящему времени данные об иммуномодулирующей активности бета - каротина как одном из механизмов его антиканцерогенного действия. Указанные свойства препарата, наряду с относительно низкой токсичностью, позволяют рекомендовать исследуемое вещество с целью профилактики развития злокачественных новообразований в группах повышенного риска.

ТАКТИКА ИММУНОКОРРИГИРУЮЩЕЙ ТЕРАПИИ У ПАЦИЕНТОВ С ОСТРЫМ ДЕСТРУКТИВНЫМ ПАНКРЕАТИТОМ

Боровкова Н.В.. Булава Г.В., Гришин А.В., Бердников Г.А., Никулина В.П.

Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. Склифосовского, Москва, Россия

Введение. Хирургическое лечение тяжелых деструктивных осложнений 2-й фазы острого панкреатита (ОП) часто бывает малоэффективным и сопровождается высокой летальностью, достигающей 40-60%. В этой связи важное значение в профилактике и лечении гнойных осложнений приобретают консервативные методы, включающие иммунокорригирующую терапию.

Целью настоящей работы явилось клинико-иммунологическое обоснование к проведению иммунокоррекции у больных с ОП в зависимости от характера изменений иммунного статуса.

Материалы и методы. Иммунологическое исследование проводилось в 1-2, 4-5, 10-13 и 14-17 сутки ОП у 72 пациентов. Определяли общее число лейкоцитов и лимфоцитов венозной крови; субпопуляции, маркируемые как CD3+, CD20+, CD4% CD8*; фагоцитарную и метаболическую активность нейтрофилов в латекс-тесте, спонтанном (НСТ) и активированном НСТ-тестах (акт.НСТ) и с помощью хемилюминес-центного анализа на автоматическом хемилюминометре “Lucifer”. Рассчитывали удельные спонтанную (УАеп.) и индуцированную (УАинд.) хемилюминесцентные активности нейтрофилов.

14 пациентов с 3-м типом иммунного ответа получали иммунокоррекцию (ИК) с 1-4 суток ОП в виде трансфузий гипериммунных плазм или иммуноглобулина в/в, введения тактивина, иммуноглобулина в/м или полиоксидония.

Основные результаты. В 1-2 сутки ОП выявлены существенные различия в показателях иммунограмм пациентов, что позволило выделить 3 типа ответа иммунной системы на воспалительный процесс в поджелудочной железе (см. таблицу).

Для 1-го типа иммунного ответа (ИО) (15 человек) характерны: умеренный лейкоцитоз, увеличение метаболической активности нейтрофилов. К 4-5 суткам число лейкоцитов венозной крови нормализуется, а к 10-13 суткам восстанавливается метаболическая активность нейтрофилов. У пациентов с этим типом ИО течение ОП бывает неосложненным, назначения иммунокорректоров не требуется.

Табл. ПАРАМЕТРЫ ИММУНОГРАММЫ ПАЦИЕНТОВ С ОП В 1-2 СУТКИ ЗАБОЛЕВАНИЯ

Параметры Норма 1 тип Д% 2 тип Д% 3 тип Д%

Лейкоциты, х109/л 6,57+0,05 11,4±1,2* +73 11,1+0,8* +69 21,7+2,9* +230

Т-лимфоциты,х106/л 990+45 972+87 -2 484+58* -51 976±173 -1

Сп.СНТ-тест,% 10,0+1,1 23,6±4,8* +136 22,6+2,9* +126 13,6+1,9 +36

УАсп, имп./мин./тыс.кл. 82+9 126±14 +54 91+17 +11 23+5* -72

УАинд.имп./мин./тыс.кл. 970+116 701 ±76 -28 879+76 -9 472+108* -51

Примечание: * - обозначены достоверные (р<0,05) отличия от нормы.

Для 2-го типа ИО (33 человека) характерны: умеренный лейкоцитоз, дефицит лимфоцитов, преимущественно за счет Т-лимфоцитов, незначительное увеличение метаболической активности нейтрофилов. Нормализация показателей клеточного звена иммунитета наблюдается после 10-13 суток, метаболическая активность нейтрофилов восстанавливается после 14-17 суток ОП. При таком типе ИО во 2-й фазе ОП развиваются асептические деструктивные осложнения. Этим пациентам целесообразно назначение препаратов нормализующих метаболическую активность нейтрофилов (полиоксидоний, иммуноглобулин для в/м введения) с 1-4 суток заболевания.

Для 3-го типа ИО (24 человека) характерны высокий лейкоцитоз и снижение хемилюминесцентной активности нейтрофилов. У 9 из 10 пациентов с этим типом ИО, не получавших ИК к 10-13 суткам ОП развиваются гнойно-деструктивные осложнения на фоне лейкоцитоза, дефицита Т-лимфоци-тов, снижения ИРИ. У пациентов с 3-м типом ИО после курса ИК гнойно-деструктивные осложнения развились только у 4 человек из 14. На 10-13 сутки у этих больных показатели клеточного иммунитета и хемилюминесцентная активность нейтрофилов регистрируются в пределах нормы.

Таким образом, включение в комплекс лечебных мероприятий ОП пациентов с 3-м типом ИО иммунокорригирующей терапии позволяет в 60% случаев предотвратить развитие гнойных осложнений.

ИММУНОКОРРИГИРУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ СПИРУЛИНЫ ПРИ АЛЛЕРГИЧЕСКОМ ВОСПАЛЕНИИ У ДЕТЕЙ

Борткевич Л.Г., Суковатых Т.Н., Сагальчик К.А., Бадыгина Н.А., Сапунова Т.А., Пашкова О.Л., Ниничук О.М., Скачко А.И., Дечко Е.В.,

Дубовик Ж.В., Дыгун А.Г.

ОО ‘‘Белорусский Зеленый Крест (БЗК) ”, УП “Санаторий Белорусочка ”, Минск, Республика Беларусь

Цель исследования - определить наличие антиаллерги-ческой и энтеросорбентной активности препарата “Спирули-на” фирмы “Marcus Rohrer”, Нидерланды, получаемого БЗК в форме гуманитарной помощи для детей Чернобыльской зоны. Исследования проведены на базе аллергологического отделения УП “Санаторий “Белорусочка” и районной поликлиники г.Хойники Гомельской области. Объектами исследования явились дети в возрасте 6-12 лет, вошедшие в 4 группы: дети с пищевой аллергией или бронхиальной астмой, леченные согласно протоколу (1 и 3), и с теми же диагнозами, но принимавшие дополнительно спирулину (комбинированная терапия) (2 и 4 группы). Суточная доза препарата - 400 мг на 10 кг массы тела, прием проводился 3 курсами в течение года. Дети

всех групп трижды - до начала приема препарата, через 24 дня и через год от начала исследований - обследовались клиническими и иммунологическими методами. Через 24 дня от начала поступления в организм спирулины сыпь и зуд кожи значительно ослабли у всех детей 2 группы, а у 12 детей (40%) исчезли полностью. Стандартное лечение детей 1 группы было эффективным только у 6 (20%) (р<0,05). Через 11 месяцев остаточные явления в виде легкого зуда и сухости кожных покровов сохранились у 11 из 30 детей (36,6%) 2 группы. В группе сравнения число детей с частыми обострениями пищевой аллергии, составило 63,3%. В сыворотке крови детей 2 группы обнаружено выраженное снижение тотального IgE -с 653±70 МЕ/мл до 199±26МЕ/мл, lgG4 - с 1.57±0.12 до

1,08±0,07г/л, минимализация 36,7% специфических IgE и 25% специфических IgG4.

После первого этапа комбинированной терапии детей с бронхиальной астмой (группа 4) у 13 лиц (65%) исчезли приступы обструкции или кашля в ночное время. Исходная частота приступов составила 2.9±0.4, при втором обследовании

- 1.1±0.2, через И месяцев 1,0±0.12. Уровень снижения среднего объема форсированного выдоха (ОФВ) по отношению к норме у детей до приема спирулины составил 25.85±3.1%. Через 24 дня от начала дефицит ОФВ снизился до 19.4±2.7%, ачерез 11 месяцев-до 16.8±1.19%. В группе детей с бронхиальной астмой, принимавших препарат, имело место достоверное снижение концентрации тотального IgE с 827±54 до 512±32 МЕ/мл, эозинофильной инфильтрации носового секрета, специфических IgE к этиотропным аллергенам (бытовой пыли - в 4,6 раза, D. pteronissinus - в 3,9 раза, перу подушки- в 3,2 раза и др.), нормализовался уровень содержания IgG2. В эксперименте in vitro исследована зависимость степени сорбции IgE от концентрации спирулины. Для этого препарат спирулины смешивался в концентрациях от 0 до 6250 мкг/мл с пуллированной сывороткой крови детей, содержащей 1268 МЕ/мл. Выявлена дозозависимая способность спирулины удалять тотальный IgE из сыворотки крови.

ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ИММУНОКОРРЕКЦИЯ У ПОСТРАДАВШИХ С ПРОНИКАЮЩИМИ РАНЕНИЯМИ И МАССИВНОЙ КРОВОПОТЕРЕЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ТИПА ИММУННОГО РЕАГИРОВАНИЯ

Булава Г.В., Даниелян Ш.Н., Никулина В.П., Андросова М.В., Ветошкин А.И.

НИИ скорой помощи им. Н.В.Склифосовского, Москва, Россия

Введение. Несмотря на значительные успехи военно-по-левой и гражданской хирургии, микробиологии и иммунологии, вопросы профилактики и лечения гнойно-воспалительных осложнений при травме груди и живота остаются дале-

кими от разрешения. Острая кровопотеря, эмоциональный, операционный и наркозный стресс сопровождаются подавлением иммунологических механизмов, обеспечивающих резистентность к инфекции. Трактовка иммунных нарушений по среднестатистическим результатам не позволяет оценить индивидуальные последствия комплексного действия иммуно-супрессивных факторов и разграничить их с изменениями, носящими характер саногенеза, что часто ведет к необоснованному назначению иммуностимулирующих препаратов.

Цель. Разработать показания к профилактической иммунокоррекции пострадавших с огнестрельными и ножевыми ранениями груди и живота, осложненными острой кровопо-терей, для предупреждения развития гнойно-септических осложнений.

Задачи: определить влияние объема кровопотери на степень изменения параметров иммунограммы, выявить прогностически неблагоприятные варианты реагирования ИС в 1-3 сутки после операции у раненых в грудь и живот и оценить эффективность адресной иммунокоррекции.

Материалы и методы. С 1-х суток после операции в динамике обследовано 509 пострадавших с изолированными и сочетанными ранениями груди и живота в возрасте от 18 до 62 лет. Объем учтенной острой кровопотери составил у 279 пациентов от 1000 до 2000 мл (1 группа), у 156 - от 2100 до 3000 мл (2 группа), у 53 от 3100 до 4000 мл (3 группа) и у 19

- 4100-6500 мл (4 группа). Иммунокоррекция проведена у 230 пациентов основной группы. В группу контроля вошли 279 человек с сопоставимыми характером, локализацией ранения и числом повреждений. Границы нормы определены при обследовании 105 доноров крови и плазмы. Исследовали венозный и капиллярный лейкоцитоз, относительное и абсолютное число лимфоцитов, CD3, CD4, CD8, CD 16, CD20, -клеток, фагоцитарную и метаболическую активность нейтро-филов с помощью латекс-, НСТ-теста и хемилюминесцент-ного анализа (XJ1) в спонтанном и индуцированном варианте, концентрацию IgA, G, М, уровень ЦИК трех размеров, концентрацию С-реактивного белка (СРБ), фибронектина (ФН) и церулоплазмина (ЦП).

Основные результаты. Разработан принцип ранжирования параметров иммунограммы с учетом отклонения их величин от средних нормальных значений. Величины в преде-лах±30% от нормы считали соответствующими нормоэрги-ческой, а выходящие за пределы нормы более чем на 30% -гипо- или гиперэргической реакцией ИС. Доля пациентов с гиперэргической реакцией по лейкоцитам, числу спонтанно активированных нейтрофилов, С-реактивному белку и с ги-поэргической реакцией по числу лимфоцитов, иммуноглобулинов, больших ЦИК, ФН, ЦП возрастала в соответствующих группах по мере увеличения объема кровопотери. Установлены типы реагирования иммунной системы и частота их встречаемости в периоды срочной и долговременной адаптации после ранения. В 1-3 сутки только у 45% обследованных реакция ИС была адекватной имеющемуся воспалительному процессу. У остальных выявлено 6 основных типов реагирования, отражающих прогностически неблагоприятное функциональное состояние иммунной системы. Критическими изменениями параметров, указывающими на необходимость проведения профилактической иммунокоррекции, считали: отсутствие лейкоцитарной реакции или более чем трехкратное превышение нормального числа лейкоцитов; снижение или более чем четырехкратное превышение нормального числа спонтанно активированных нейтрофилов; снижение или увеличение абсолютного числа лимфоцитов, в том числе Т- и (или) В-клеток, более чем на 45%, дисбаланс уровня IgG, IgM и ЦИК за счет резкого снижения БЦИК и более чем трехкрат-

ного повышения уровня СЦИК и МЦИК при одновременном снижении уровня ФН и ЦП. При оценке эффективности иммунокоррекции учитывали сроки восстановления параметров ИС, число гнойных осложнений и продолжительность лечения у пациентов основной и контрольной группы.

Заключение. Проведение профилактической иммунокоррекции лейкинфероном, тимическими или миелопептидамн в сочетании с внутримышечным или внутривенным иммуноглобулином или антибактериальными плазмами в соответствии с типом реагирования иммунной системы позволило ускорить процесс иммунореабилитации на 4-6 суток, уменьшить экономические затраты на лечение за счет снижения числа осложнений инфекционного характера с 37,8% до 9,4% и сокращения сроков стационарного лечения - с 37,6 до 16,3 к/дией.

СОСТОЯНИЕ КЛЕТОЧНЫХ ФАКТОРОВ ИММУНИТЕТА РОТОВОЙ ПОЛОСТИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ПАРАДОНТИТОМ ПРИ ЛЕЧЕНИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЛЕЙКОЦИТАРНОГО ИНТЕРФЕРОНА И МИЕЛОПИДА

Булгакова А.И.. Медведев Ю.А., Алсынбаев М.М., Валеев И.В., Ярмухамедова А.Г.

Башкирский государственный медицинский университет, ГУП “Иммунопрепарат", г. Уфа, Башкортостан

Хронические парадонтиты (ХП) различной степени тяжести сопровождаются существенными изменениями состава и функциональной активности клеток периферической крови десны и ротовой жидкости. В исследовании оценено состояние клеточных факторов иммунной защиты ротовой полости больных ХП легкой (ЛХГ1), среднетяжелой (СХП) и тяжелой (ТХП) степени при лечении с использованием лейкоцитарного интерферона - ИФ(свечевая форма препарата сублингвально по 40000-60000 МЕ на курс) и миелонида (инъекциями в десну 0,0006 г на курс).Состояние клеточных факторов иммунной резистентности ротовой полости оценивали с помощью цитологических методов (определение содержания клеточных элементов в жидкости пародонтального кармана); оценки поглотительной активности полиморТЫР-ядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) вычислением фагоцитаного числа при индукции фагоцитоза частицами латекса, а также теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) в спонтанном варианте и при индукции латексом. Типирование лимфоцитов периферической крови десны проводилось в реакции непрямой иммунофлюоресценции при визуальном контроле результатов с использованием моноклональных антител против СОЗ, С04, С08, СИ 16, С022, С025, С095, С071 и НЬА-

-антигенов.

В период, предшествовавший лечению, в жидкости пара-донтального кармана больных отмечено увеличенное число разрушенных клеток до 19% - 34% и нормализовавшееся (3-5%) при любых вариантах успешного лечения. Состав клеток характеризовался снижением числа эпителиоцитов и возрастанием ПМЯЛ (максимальным, до 59%, при СХП) и лимфоцитов (ЛФ) (максимальным, до 10%, при СХП). Лечение с использованием как традиционных методов, так и с ИФ и МП, сопровождалось нормализацией соотношения этих клеток (не более 40% ПМЯЛ и 5% ЛФ. При типировании ЛФ установлено, что лечение всеми методами приводило к восстановлению сниженного содержания Т-ЛФ (СЭЗ+) и дальнейшему возрастанию повышенного уровня Т-хелперов (С04+), достоверно более выраженному при использовании

МП при СХП и ТХП. Содержание Т - цитотоксических ЛФ (CD8+), сниженное при ЛХП и СХП, а также В-лимфоцитов (CD22+) и естественных киллеров (CD16+), сниженное при всех степенях тяжести процесса, нормализовалось также после использования всех методов терапии. Возрастал и уровень экспрессии на ЛФ ряда сниженных при ХП маркеров активации (CD25, HLA-DR).

Исследование функциональной активности ПМЯЛ показало, что успешная терапия с помощью традиционных методов приводила к частичному восстановлению подавленной поглотительной активности фагоцитов. При использовании в терапии ХП любой степени тяжести ИФ ее стимуляция была достоверно выше, чем при традиционной терапии. МП обеспечивал достоверно более выраженную активацию фагоцитоза только у больных с СХП; при ЛХП и ТХП ИФ активировал фагоцитоз достоверно сильнее, чем МП. При ЛХП вызываемое традиционным лечением снижение в спонтанном НСТ

- тесте при применении ИФ и МП усиливалось (для МП - достоверно); при среднетяжелых и тяжелых ХП значения этих показателей после лечения, наоборот, возрастали , и применение ЛИФ и МП делали его более выраженным. Вызванное лечением увеличение активности кислородзависимого метаболизма фагоцитов в индуцированном НСТ - тесте при СХП и ТХП также усиливалось (МП - достоверно).

Таким образом, дополнение традиционной терапии иммуномодуляторами - ИФ и МП, может существенно изменять эффект влияния лечения больных ХП разных степеней тяжести на состояние клеточных факторов иммунитета ротовой полости.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРИНЦИПА ТВЕРДОФАЗНОЙ КОНТАКТНОЙ ГЕМОМОДУЛЯЦИИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЗАБОЛЕВАНИЙ СОСУДОВ НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ

Буркова Н.В.. Кузнецов С.И., Эйсмонт Ю.А., Нохрин С.П., Крецер И.В., Багненко С.Ф., Жирков А.М., Киселев В.А., Курыгин А.А., Стойко Ю.М., Сорока В.В., Джурко Б.И., Канаев П.А., Арсениев Н.А., Кузнецова Л.А.

Медицинская академия последипломного образования, Санкт-Петербург, Россия Государственный НИИ скорой помощи им. И. И.Джанел идзе,

Санкт-Петербург, Россия

Несмотря на значительные успехи сосудистой хирургии, внедрение в клиническую практику микрохирургических и эндоваскулярных вмешательств, проблема лечения больных с сосудистыми заболеваниями нижних конечностей остается одной из самых сложных и актуальных. В условиях резкого снижения кровотока в магистральных и коллатеральных артериях при облитерирующем эндартериите и облитерирую-щем атеросклерозе особенно важным является поиск эффективных способов “доставки” лекарственных препаратов к тканям дистальных отделов ишемизированной конечности.

Для лечения больных с заболеваниями сосудов нижних конечностей использовали метод целевой малообъемной гемоперфузии (ЦМОГ), основанный на принципе твердофазной контактной гемомодуляции: в результате контакта крови с чужеродной поверхностью (гранулами сорбента) происходит активация всех гуморальных каскадных систем плазмы, а также прямая (на сорбенте) или опосредованная цитомодуляция. В процессе данной процедуры короткоживущие активные “валентности” доставляются в очаг поражения, что приводит к корригирующему эффекту.

Метод ЦМОГ был апробирован у 14 больных с облитери-рующим эндартериитом и облитерирующим атеросклерозом сосудов нижних конечностей (у 13 из 14 человек - IV степень ишемии). Для проведения процедуры ЦМОГ использовали гемоконтактную колонку с сорбентом (10 мл угля СКТ-6А-ВЧ). На пораженной конечности пунктировали бедренную артерию, через сорбент медленно забирали кровь (40-50 мл) и возвращали обратно. Продолжительность эксфузии-инфу-зии - 3-5 мин. Каждому больному проведено 3-4 процедуры ЦМОГ с интервалом 2-4 дня.

В пробах артериальной и венозной крови исследовали: 1) Динамику клеточного состава; 2) Степень генерации клетками активных форм кислорода (АФК) в спонтанном и индуцированном (зимозан) режимах методом люминолзависимой хемилюминесценции (ХЛ); 3) Флюоресценцию плазмы крови, что является отражением выраженности процессов пере-кисного окисления.

Полученные результаты свидетельствуют, что от процедуры к процедуре индекс ХЛ имел тенденцию к повышению. Индукция генерации нейтрофильными лейкоцитами АФК является подтверждением развития активационных процессов в клетках в результате твердофазной контактной гемомодуляции, так как количество клеток в пробах имело тенденцию к снижению. Показатели флуоресценции на протяжении всего периода исследования практически не изменялись.

За 1,5 года наблюдения за больными было выполнено 2 ампутации (у одного - в в/3 бедра через месяц после завершения лечения методом ЦМОГ, у другого - через год на уровне голени), что составило 14,3% больных. В контрольной группе ампутация конечностей на уровне в/3 бедра выполнена у 70% больных.

Таким образом, использование ЦМОГ у больных с заболеваниями сосудов нижних конечностей приводит к усилению биоцидного потенциала лейкоцитов и к улучшению микроциркуляции в перфузируемой конечности. Результаты наблюдения за больными свидетельствуют о положительном эффекте данного метода лечения в отдаленные сроки.

ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЦИКЛОФЕРОНА В ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ПИЕЛОНЕФРИТОМ

Вагапова Д.Р.. Кляшева М.Н., Нуртдинова Г.М., Алонова С.В

Республиканская клиническая больница им. Г. Г. Куватова,

Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа, Башкортостан

Целью работы явилось оценка эффективности применения циклоферона в комплексном лечении больных хроническим пиелонефритом на основе анализа показателей клеточных и гуморальных факторов защиты.

Материалы и методы. Исследование состояния иммунитета проведено у 30 больных в возрасте от 19 до 55 лет со средней длительностью заболевания 10±1,1 года. Больные хроническим пиелонефритом получали антибактериальную терапию с применением препарата циклоферон внутримышечно 2 мл 1 2,5% водного раствора один раз в день на 1, 2, 4, 6, 8,

11, 14, 17 сутки. Контрольную группу составили 30 практически здоровых лиц.

Оценка иммунного статуса включала определение содержания субпопуляций лимфоцитов методом иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител, исследование фагоцитарной активности нейтрофилов с частицами латекса,

метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тссте, количественное определение сывороточных иммуноглобулинов классов G, А, М методом иммунодиффузии.

Результаты. Применение данного способа лечения у больных хроническим пиелонефритом способствовало быстрому купированию воспалительного процесса: уже на 5-7 день лечения больные отмечали значительное уменьшение болей в поясничной области, общей слабости, нормализацию температуры тела.

Мониторинг иммунологических показателей, характеризующих состояние неспецифической резистентности показал повышение фагоцитарной активности лейкоцитов: фагоцитарный индекс и фагоцитарное число составили до лечения 47,3±1,2% и 4,2±0,1, после лечения 61,6± 1,9% и 7,7±0,3 (р<0,001; р<0,001 соответственно). Бактерицидная способность нейтрофилов усилилась до 10,8±0,3% после лечения (до лечения- 14,2±0,3%; р< 0,01).

После проведенного комплексного лечения увеличились показатели клеточного звена иммунитета: Т-лимфоци гы (CD3) составили 66,7±0,7% (до лечения- 52,5+0,7%; р< 0,01), Т-хел-перы/индукторы (CD4) - 33,4±0,5% (до лечения- 25,5±0,1%; р< 0,01), цитотоксические Т-лимфоциты (CD8) - 24,2+0,6% (до лечения- 13,2±0,4%; р< 0,001), естественные киллеры (CD 16)- 11,7±0,5% (до лечения- 6,9±0,6%; р< 0,001), В-лим-фоциты (CD22)- 14,1 ±0,4%> (до лечения- 9,5±0,7%; р< 0,001).

Результаты исследования гуморального звена иммунитета показали увеличение содержания в крови IgA (до лечения-2,7±0,1 г/л, после лечения-3,4±0,1 г/л; р< 0,05). Установлена прямая зависимость между повышением количества IgA и увеличением В-лимфоцитов (г=0,43; р< 0,05).

Таким образом, мы наблюдали положительную клиническую динамику на фоне улучшения показателей фагоцитарной активности лейкоцитов, микробоцидных механизмов клеток крови, клеточного и гуморального звеньев иммунитета.

Анализ опыта применения циклоферона свидетельствует

о целесообразности использования иммунокоррекции в комплексной терапии хронического пиелонефрита, что позволяет значительно улучшить состояние иммунитета и повысить эффективность проводимого лечения.

БЕСТИМ В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ

Васильева Г.Ю.. Иванова Л.А., Балаеанянц Г.С., Павлова М.В., Сахарова И.Я., Симбирцев А.С.

Санкт-Петербургский НИИ фтизиопульмонологии М3 РФ; НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург, Россия

С целью повышения эффективности комплексной терапии у больных деструктивным туберкулезом легких, нами был использован новый иммунномодулятор бестим.

Были обследованы 20 впервые выявленных больных деструктивным туберкулезом легких. У всех пациентов определяли фазу распада, у 85% - бактериовыделение. До начала применения бестима была установлена недостаточность клеточного звена иммунитета: снижение CD3 - у 51,5% (46,1%±2,5); функциональной активности Т-лимфоцитов по РБТЛ с ФГА - у 91,6%> (44,1±2,5%), отрицательный специфический ответ по РБЛТ с Г1ПД - у 75%, снижение индукции IL-

2 на ФГА - у 57,8% (6,7±3,5 ед/мл) больных. Бестим назначался на фоне 4 туберкулостатиков в дозе 0,1 мг в/м ежедневно, курс - 5 дней.

В качестве контроля было обследовано 15 больных теми же формами туберкулеза легких. Клинико-рентгено-иммун-

нологическая характеристики больных группы контроля совпадали с основной группой.

Результаты: После окончания терапии бестимом у 42,5% больных основной группы отмечали повышение СОЗ (54,4±2,5%), через месяц СОЗ клетки нормализовались у 55,0% (55,4±3,2%). В контрольной группе к первому сроку нормализации уровня клеток не было, ко второму повышение СОЗ было отмечено у единичных больных (р<0,05).

В основной группе РБЛТ с ФГА имела тенденцию к нормализации через 1 месяц после окончания терапии; РБТЛ с ПГ1Д возрастала с отрицательных значений до 3,4±0,6%, в контрольной группе - до 2,7±0,1%. Установлено повышение 1Ь-2 на ФГА до 16,9±5 ед/мл в основной группе к концу первой недели. Через месяц тенденция сохранялась (р<0,05). В контрольной группе по этим показателям существенных изменений не было.

Закрытие полостей распада после окончания курса бестимом отмечено у 11,7% (в контроле - 3%), к 3-му месяцу - у 25% (контроль - 13,3%). Абациллировано в те же сроки 35,2%против 13,3%, и 76,5% против 33,3%.

Выводы: применение бестима в комплексной терапии деструктивного туберкулеза легких существенно улучшает состояние клеточного иммунитета, как по количественным, так и качественным показателям, и повышает эффективность лечения.

ВЛИЯНИЕ БРОМАНТАНА НА ПРОЛИФЕРАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ И АП0ПТ03 АКТИВИРОВАННЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ

Вахитова Ю.В., Сибиряк С.В., Курчатова Н.Н., Вахитов В.А.

Институт биохимии и генетики АН РБ,

Отдел иммунологии Всероссийского центра глазной и пластической хирургии, г. Уфа, Россия

Среди фармакологических препаратов, обеспечивающих коррекцию гомеостаза при воздействии на организм экстремальных физико-химических и информационно-семантичес-ких факторов производные аминоадамантана, в первую очередь бромантан, рассматриваются как наиболее эффективные. Ценным свойством бромантана является отчетливая иммунокорригирующая активность, в особенности при стресс - индуцированных иммунодефицитах (Т.Г. Галушкина и соавторы., 1996; Н.Г. Арцимович и соавторы, 1997). Механизм иммуномодулирующего действия бромантана неясен и в настоящее время связывается с нормализацией психо - нейро - эн-жокринной регуляции иммунных функций. Нормальная реактивность иммунной системы в значительной мере определяется балансом между позитивной активацией (пролиферацией, клональной экспансией) и негативной активацией (апоп-тозом). Естественно, что влияние того или иного препарата на механизмы, обеспечивающие эти процессы может лежать в основе его иммунотропной активности. Существенно, что релизация эффскута любого ксенобиотика может очуществ-ляться также через внутриклеточные ферментные системы, обеспечивающие его биотрансформацию. В первую очередь это касается А1]-рецепгор - зависимых изоформ цитохрома Р450 (СУР4501А1), непосредственно участвующих в регуляции клеточной пролиферации и апоптоза.

В настоящей работе изучено влияние бромантана (0.1 -10 |ДМ) на митогенез и апоптоз (активность каспазы 3, флюо-риметрический метод) активированных антиСОЗ МКА (клон 1СО-90, 2.5 мкг/мл) Т-лимфоцитов периферической крови

Табл.1. ВЛИЯНИЕ БРОМАНТАНА НА МИТОГЕНЕЗ, АКТИВНОСТЬ КАСПАЗЫ 3 И ЭРОД-АКТИВНОСТЬ В АКТИВИРОВАННЫХ АНТИ СйЗ МКА Т-ЛИМФОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ

Индекс стимуляции пролиферации, ИС, М±т Активность каспазы 3, Ю, М±т ЭРОД-активность, пмоль/ мин/106 лимфоцитов, М ± т

Контроль 24.8 ± 5.8 72.3 ± 24.7 0.120 + 0.047

Бромантан 0.1 цМ 32.5 ± 5.5 * 88.5 ± 26.1 0.118 ± 0.058

Бромантан 1.0 |аМ 32.2 ± 6.8 83.5 ± 22.4 0.116 ± 0.047

Бромантан 10 цМ 27.4 ± 5.0 84.1 ± 24.6 0.096 ± 0.032

* - различия статистически значимы (Р<0.05). I-критерий Стыодешпа для сопряженных пар признаков

человека, а также экспрессию в клетках СУР1А1 изоформо-специфической 7-этоксирезоруфин-О-деэтилазной активности (ЭРОД-активности).

В использованном диапазоне концентраций бромантан, в отсутствии митогена не проявлял собственного митогенного эффекта и не изменял ферментативной активности каспазы 3. В присутствии антиСОЗ МКА (табл. 1) бромантан, при использовании в низких концентрациях, проявлял отчетливый ко-митогенный эффект, причем в минимальной концентрации наблюдался статистически значимый эффект.

При анализе активности каспазы 3 выявлена тенденция (различия статистически несущественны) к увеличению активности фермента, что скорее всего, связано с закономерным увеличением пула апоптотирующих лимфоцитов в условиях усиления пролиферативной активности, но не с прямым воздействием препарата на активность каспазы 3. В не зависимости от использованной концентрации бромантан не изменял СУР1А1-изоформо-специфической ЭРОД - активности в лимфоцитах, что свидетельствует об отсутствии влияния препарата на АИ - рецептор - зависимые механизмы регуляции пролиферативной активности.

АЛГОРИТМ ПРИМЕНЕНИЯ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПОСЛЕ ОПЕРАЦИИ В ХИРУРГИЧЕСКОЙ КЛИНИКЕ

Винницкий Л.И... Бунятнн К.А., Инвияева Е.В.

Российский научный центр хирургии РАМН,

Москва, Россия

В течение последних лет в лечебной практике хирургической клиники для лечения послеоперационных осложнений широко применяются иммуномодулирующие препараты. Основой для назначения является выраженная клинически и подтвержденная иммунологическими методами вторичная иммунная недостаточность. Последняя выявлена нами у 95% хирургических больных, поступающих в клинику для хирургического лечения врожденной и приобретенной сердечной патологии, различной этиологии легочной патологии, заболеваний органов брюшной полости.

При диагностике вторичной иммунной недостаточности более чем в 85% был выявлен комбинированный тип иммунных нарушений.

Наш опыт лечения вторичной иммунной патологии, наличие которой сопровождается развитием гнойно-воспалительных осложнений в раннем послеоперационном периоде, основан на наблюдении за более 550 больными. Мы применяли такие иммуномодулирующие препараты как иолиоксидо-ний, имунофан, ликопид, галовит на фоне общепринятой фармакотерапии.

Тяжелым больным проводим определение иммунных показателей в дооперационном периоде и при выявлении выраженных отклонений результатов исследования назначаем курс иммунокоррекции одним из препаратов. Его эффективность подтверждаем результатами проведенного в конце курса исследования субпопуляционного состава лимфоцитов, оценки уровней иммуноглобулинов, показателей функциональной активности нейтрофилов.

Нами показано, что хирургическое вмешательство со всем комплексом воздействия фармакологических препаратов усугубляет имеющиеся нарушения звеньев нейрогуморально-иммунной системы. Для коррекции этих нарушений, которые приводят не только к функциональным отклонениям органов, но и к созданию условий для развития гнойно-воспалительных процессов в тканях, мы проводим оценку иммунного состояния больного на 3-5 день послеоперационного периода. При выявлении нарушений - проводим курс иммуномодулирующей терапии. Оценку действия этой терапии проводим перед выпиской больного, которая чаще всего совпадает с окончанием курса лечения иммуномодулятором.

Комплекс иммуномодулирующей терапии и всего необходимого реанимационного фармакологического и инструментального арсенала позволяет значительно снизить количество гнойно-воспалительных осложнений в послеоперационном периоде.

Примером может служить отсутствие развития гнойновоспалительных и септических осложнений в послеоперационном периоде у больных с инфекционным эндокардитом в последние годы при применении иммуномодуляторов. В предыдущие годы на фоне антибактериальной терапии без коррекции нарушений иммунного гомеостаза развитие гнойносептических осложнений у больных после хирургической коррекции пороков сердца с явлениями инфекционного эндокардита составляло 5,6%.

Предлагаемый алгоритм коррекции вторичной иммунной недостаточности у больных в хирургической клинике позволяет резко снижает количество воспалительных послеоперационных осложнений, сокращает послеоперационный койко-день, и, таким образом, уменьшает экономические затраты на лечение больного.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИМУНОФАНА ПРИ ИММУНОКОРРЕКЦИИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ОСТЕОМИЕЛИТОМ

Гаврилова Е.Ю.. Белохвостикова Т.С., Промтов М.В., Леонова С.Н., Кирдей Е.Г.

НЦ РВХВСНЦ СО РАМН, Иркутск, Россия

Особенностью современной патологии является рост числа заболеваний, основой которых является неадекватная ре-

акция системы иммунитета в ответ на патологические воздействия или так называемые вторичные иммунодефициты (ВИД). Остеомиелит является хроническим рецидивирующим заболеванием, в основе которого лежит патология иммунной системы, требующая изучения особенностей ее развития и разработки методов иммунокорригирующего лечения. Известно, что применение тимических пептидов позволяет добиться положительных результатов лечения при хронических остеомиелитах. (Агаджанян В.В., Кожевников B.C., 1996; Крмо-лович Е.Ю. с соавторами, 1996).

Принципиальным отличием имунофана от других иммуномодуляторов является его модулирующее действие на многие системы гомеостаза организма человека. Обработка клеток препаратом повышает их защитный потенциал, оцениваемый по степени повреждения ДНК. При исследовании влияния имунофана на структуру ДНК лимфоцитов и нейтрофи-лов периферической крови выявлена нормализация этих показателей (Хаитов P.M. с соавторами, 1998; Караулов А.В., 2000).

Под нашим наблюдением находились 48 больных хроническим остеомиелитом. Все больные были разделены на 2 группы. Первая группа являлась контрольной (17 больных). Больные первой группы получали традиционный комплекс лечения: антибактериальную терапию, санирующее оперативное вмешательство. Вторая группа из 3 1 больного в послеоперационном периоде получала имунофан стандартно внутримышечно по 5 мг через день, 50 мг на курс. Оценку иммунного статуса проводили при поступлении больного в клинику НЦ РВХ ВСНЦ СО РАМН, после оперативного лечения и после проведенного курса иммунокоррекции. При этом определяли общее число лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови, уровень Т-лимфоцитов (Е-РОК). Ет.р.-РОК (гео-филлинрсзистентных Т-лимфоцитов), Е т.ч.-РОК (теофиллин-чувствительных Т-лимфоцитов) с последующим вычислением иммунорегуляторного индекса (ИРИ), а именно соотношения Ет.р.-РОК /Ет.ч.-РОК. Исследовали также концентрацию сывороточных иммуноглобулинов G А, М методом радиальной иммунодиффузии по Манчини, фагоцитарную активность нейтрофилов по отношению частиц латекса, функциональную активность нейтрофилов в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ) в спонтанном и индуцированном вариантах, а также титры гетерогемагглютининов к эритроцитам барана.

В качестве клинических критериев оценки иммунокоррекции использовали показатели среднего пребывания больного в клинике, сроки заживления рай, динамику показателей ан-тибиотикорезистентности.

Обсуждение и результаты. Полученные результаты в группе больных, леченых имунофаном, отражены в таблице. При внутримышечном введении препарата во второй группе больных наблюдалось увеличение большинства исследован-

ных количественных показателей, характеризующих систему иммунитета. Из них наиболее значимым явилось увеличение числа моноцитов, а также показатели внутриклеточной окислительной активности фагоцитирующих лейкоцитов - НСТ сп и НСТ ст, ^ М, Е тч-РОК (р<0.01). Общим между результатами, полученными при лечении больных первой и второй групп было достоверное увеличение числа моноцитов. Нормализация общего количества Т-клсток, Е тч-РОК и ИРИ свидетельствовало о выраженном торможении воспалительного процесса в костной ткани при использовании иммунокоррекции. Вместе с тем увеличение числа моноцитов косвенно свидетельствовало о продолжающемся процессе репарации: активной миграции предшественников клеток моноцитарного ряда в очаг воспаления.

Выводы.

1. Иммунокоррекция имунофаном является необходимым компонентом комплексного лечения больных хроническим остеомиелитом.

2. Имунофан нормализует количество и субпопуляционую структуру Т-лимфоцитов.

3. Иммунокоррекция имунофаном оказывает комплексное модулирующее влияние на процессы регенерации, что позволяет сократить сроки госпитализации, фиксации в аппаратах внешней фиксации при лечении больных хроническим остеомиелитом.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВЛИЯНИЯ АНТИЛИМФОЦИТАРНОГО ГЛОБУЛИНА ПРИ ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ АПЛАСТИЧЕСКОЙ АНЕМИЕЙ

Гананиев Б.А.. Афанасьев Б.В.

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И,П.Павлова, Россия

Апластическая анемия (АА) является тяжелым заболеванием системы крови, которое характеризуется депрессией костномозгового кроветворения с развитием панцитопении в периферической крови. Основными методами лечения АА являются трансплантация костного мозга от НЬА-совместимого донора (ТКМ) и иммуносупрсссивная терапия с помощью антилимфоцитарного глобулина (АЛ Г) и циклоспорина А (ЦсА). Известно, что около 70% молодых пациентов в возрасте до 45-50 лет с тяжелой формой АА не имеют НЬА-идентичных сиблингов. В связи с этим, иммуносупрессивная терапия (ИТ) получила широкое распространение в клинической гематологии и к настоящему времени конкурирует по эффективности с ТКМ. “Золотым” стандартом терапии АА является применение антилимфоцитарного глобулина (АЛГ), который впервые был использован с лечебной целью в начале 70-х годов. Механизмы действия АЛГ до насто-

Табл. РЕЗУЛЬТАТЫ ПОЛУЧЕННЫЕ В ГРУППЕ БОЛЬНЫХ ХО, ЛЕЧЕНЫХ ИМУНОФАНОМ

Показатели До иммунокоррекции После иммунокоррекции

Моноциты 5±0.52 6.7+0.66

р=0.012

Е т.ч -РОК. отн. 2.5+0.91 12.75+2.67

р=0.002

Е т.ч -РОК. Абс. 0.044+0.01 0.3+0.07

р=0.003

ИРИ 45.07±7.39 15.09+5.41

р=0.004

ящего времени окончательно не ясны. Однако установлено, что он оказывает, главным образом, иммуносупрессивное влияние, которое реализуется посредством индукции деструкции цито-токсических лимфоцитов, ингибирующих гемопоэтические стволовые клетки. АЛГ является поликлональным глобулином, и функционально содержит активирующие (антиСЭЗ, антиС02) и блокирующие (антиС04, aHraCDl 8, aHTnCDl la и антиНЬА-DR) антитела. Блокирующая способность АЛГ реализуется в прямом связывании моноклональными антителами антигенов Т-клеток и натуральных киллеров, также как и рецепторов 1L-2. Со всей очевидностью доказано также, что АЛГ оказывает иммуностимулирующее действие у больных АА, которое обусловлено митогенным эффектом на лимфоциты, вследствие чего наблюдается индуция клеточной пролиферации и улучшение колониестимулирующей активности in vitro. То обстоятельство, что у больных АА, которые получали курс АЛГ наблюдается продолжающееся медленное улучшение костномозгового кроветворения свидетельствует о том, что АЛГ оказывает прямое стимулирующее действие на пролиферацию ранних гемопотгических клеток, способных к самоподдержаиию. Более того, известно, что стимулирующий эффект на клетки-предшественники осуществляется через anTnCD45RO. Обсуждается также непрямой стимулирующий эффект АЛГ на клетки-предшественники путем высобождения цитокинов из лимфоцитов и стромальных клеток. С лечебной целью у 125 больных различными формами АА нами был использован отечественный АЛГ производства Российского НИИ гематологии и трансфузиологии М3 РФ (г. Санкт-Петербург) и НИИ геронтологии М3 РФ (г. Москва). Из них у 63 мужчин и 62 женщин в возрасте от 6 до 75 лет. По тяжести заболевания терапия АЛГ применялась у 59 пациентов нетяжелой АА (11АА) и 66 - тяжелой АА (ТАА). При неэффективности лечения, АЛГ применялся повторно у 25 больных и у 8

- третий курс. Общая 5-летняя выживаемость больных НАА составила 76%, ТАА-71%. Таким образом, иммунные механизмы нарушения гемопоэза играют важную роль в патогенезе АА. При отсутствии HLA-совместимого донора костного мозга методом выбора является иммуносупрессивная терапия АЛГ.

ОЦЕНКА ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ СИНТЕТИЧЕСКОЙ ФРАКЦИИ ИММУНОМОДУЛИНА

Гариб Ф.Ю., Badamchian М. *, Ризопулу А.П. ** , Петрова Т.А.***, Каххаров Б.А.

Ташкентский НИИ вакцин и сывороток ГАК “Узфармпром”,

*The George Washington University, USA ,

**Институт иммунологии АН РУз ,

***Ташкентский Институт усовершенствования врачей М3 РУз, Узбекистан

В предварительных исследованиях природный коммерческий препарат иммуномодулин (пр-ва ТашНИИВС, Узбекистан), выделенный из фетального тимуса овец, был разделен на 15 фракций методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в департаменте биохимии и молекулярной биологии Вашингтонского Университета (рук.- проф. A.Goldstein). Наибольшей иммунобиологической активностью обладала фракция №6, первичная структура которой была прочитана и синтезирован ее фрагмент с м.м. около 400 Да, содержащий 3 аминокислотных остатка (Ис).

Цель работы: оценить влияние Ис на ФГА - индуцированный бластогенез Т-лимфоцитов, экспрессию рецепторов Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарную активность нейтрофилов и активность антителогенеза при экспериментальном иммунодефиците.

Использованы культуры лимфоцитов и фагоцитов от здоровых и больных со вторичным иммунодефицитом. Ис добавляли к лимфоцитам или лейкоцитам (2x106/ мл) в конечной концентрации от 1:1 (100 мкг/мл) до 1:40 000 (25x10-* мкг/мл). Одновременно в параллельных пробах проводили инкубацию лимфоцитов с культуральной средой (контроль), значения которых принимали за 100%.

Установлено костимулирующее влияние Ис в дозе 1:1000 (0,1 мкг/мл) на ФГА-индуцированный (10 мкг/мл) бластогенез Т-лимфоцитов, который составил 50,7±3,3 против 39,7±2,0 тыс. имп/мин в контроле (Р<0,05).

Препарат стимулировал экспрессию высокоаффинных Е -рецепторов (E-R) при всех дозах в среднем на 69% по сравнению с контролем. Максимальная стимуляция экспрессии E-R была отмечена при использовании концентрации препарата 1:1000, где прирост составил 91%. Минимальная стимуляция была выявлена при разведении препарата 1:40000 и составила 37%. По нашим расчетам, конечная концентрация Ис 1:10000 соответствует таковой в крови человека, которому введена одна лечебная доза (100 мкг). При указанной концентрации экспрессия E-R возросла на 64%, a CD4 и CD8 рецепторов на 40 и 76% (соответственно).

Наиболее выраженное влияние Ис было зарегистрировано при изучении числа В-лимфоцитов с фенотипом EM-R+. Выраженность стимуляции соответствующих рецепторов достигала максимальных значений при конечных концентрациях Ис 1:1000 и 1:10000 и составляла 149 и 138% (соответственно). Причем препарат был высокоактивен в диапазоне доз от 1:1 до 1:20000.

Фагоцитарная активность нейтрофилов возрастала под влиянием Ис в концентрации 1:10 в среднем на 42% по сравнению с контролем.

В эксперименте на мышах со вторичным иммунодефицитом, индуцированным четыреххлористым углеродом было установлено, что пятикратное введение препарата в курсовой дозе 5 мкг/ кг массы тела приводит к увеличению числа антителообразующих клеток в селезенке до 9437±537, что в 3,5 раза превышает значения контроля (2700±250, Р<0,001) и приближается к показателям у интакггных животных (10612±637). Увеличение числа АОК в селезенке связано с возрастанием числа спленоцитов в 1,7 раза и двухкратным усилением удельной антителообразующей активности в расчете на млн. спленоцитов.

Таким образом, синтетический аналог фрагмента фракции иммуномодулина (Ис) обладает выраженной иммуностимулирующей активностью, что проявилось в костимуляции ФГА-индуцированного бластогенеза, усилении экспрессии мембранных рецепторов лимфоцитов: высокоаффинных E-R, CD4, CD8, EM-R и активации фагоцитоза нейтрофилами в системе in vitro, а также возрастании антителогенеза у иммунодефи-цитных мышей с токсическим гепатитом.

ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ ОЧАГА ВОСПАЛЕНИЯ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГНОЙНЫМ РИНОСИНУСИТОМ В ДИНАМИКЕ МЕСТНОЙ ИММУНОТЕРАПИИ “БЕТАПЕЙКИНОМ”

Гуломов З.С, Симбирцев А.С., Ланцов А.А., Тырнова Е.В.

Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования, Государственный НИИ особо чистых биопрепаратов, ГУ Санкт-Петербургский НИИ уха, горла, носа и речи, Санкт-Петербург, Россия

Цель исследования: провести цитологическое исследование смывов верхнечелюстных пазух и оценить функцио-

нальное состояние нейтрофилов очага воспаления у больных хроническим гнойным риносинуситом в динамике местной традиционной терапии и иммунотерапии препаратом рекомбинантного интерлейкина-1Р "Беталейкином”.

Под наблюдением находились 82 больных хроническим гнойным риносинуситом (ХГРС) (односторонний и двусторонний процесс). Продолжительность заболевания составляла не менее 5 лет. Контрольную группу составили 25 практически здоровых некурящих добровольцев.

Материалом для лабораторного исследования служила клеточная взвесь, полученная при пункции или синус-катетеризации верхнечелюстной пазухи, смывы со слизистой оболочки носа практически здоровых лиц.

Изучение функциональной активности нейтрофилов очага воспаления включало исследование бактерицидной функции нейтрофилов в НСТ-тесте; фагоцитарной активности нейтрофилов в тесте фагоцитоза пекарских дрожжей; изучение спонтанной и индуцированной (с раствором ФМА) адгезии нейтрофилов к пластику. Цитологическое исследование смывов верхнечелюстных пазух включало оценку жизнеспособности клеток очага воспаления и изучение продукции цито-кинов клетками методом непрямой иммуноцитохимии.

Всем больным проводилось местное лечение ХГРС. Группа сравнения - 21 человек - получали традиционное лечение с применением антисептика диоксидина. Основная группа - 61 человек - получали местное лечение препаратом “Беталейкин”, производства НИИ особо чистых биопрепаратов (С.-Петербург). Курс лечения составил 5 процедур в течение 8-12 дней.

Иммунологические и цитологические исследования проводили до начала лечения и после курса местной терапии ХГРС. Для разработки референтных величин исследуемых иммунологических показателей использованы данные лиц контрольной группы.

При первичном исследовании клеточного состава пун-ктата гайморовой пазухи преобладали нейтрофилы (88-92%) различной степени деструкции; отмечено низкое содержание лимфоцитов (6-8%) и, особсннно, макрофагов (1-2%). После курса иммунотерапии обнаружено изменение клеточного представительства иммунокомпетентных клеток в пунктате: снижение доли нейтрофилов до 64-67%, повышение доли лимфоци тов и макрофагов (24-26% и 5-6%, соответственно).

Функциональная активность нейтрофилов пунктатов верхнечелюстных пазух больных ХГРС до лечения снижена по сравнению со здоровыми лицами: жизнеспособность нейтрофилов при двухстороннем процессе - на I 5%, фагоцитарное число - на 20-22%; спонтанпый НСТ-тест -на 23-30%; индуцированный НСТ-тест - на 19 25%; спонтанная адгезия - на 22-29%; индуцированная адгезия - на 20-35%; продукция цитокииов - на 29-39%. Снижение функциональных свойств нейтрофилов очага воспаления до начала лечения более выражено при двухстороннем процессе.

Жизнеспособность клеток после традиционной терапии возросла на 20% и достигла данных контрольной группы, после иммунотерапии “Беталейкином” - на 37-39% и превысила показатели практически здоровых лиц на 28%. Фагоцитарное число после иммунотерапии увеличилось более значительно, чем после традиционного лечения: на 39-45% против 20%. Фагоцитарный индекс возрос после иммунотерапии менее значительно, чем после традиционного лечения (10-40% против 60-70%). Спонтанный НСТ-тест в динамике иммунотерапии возрос на 62-69%) и достиг диапазона нормальных значений, а после традиционной терапии спонтанный НСТ-тест практически не изменился и не достиг нижней границы нор-

мы. Индуцированный НСТ-гест повысился в результате иммунотерапии на 27-30%, после традиционного лечения повышение индуцированного НСТ-теста составило 17-19%. После иммунотерапии спонтанная адгезия увеличилась 2,3 раза, индуцированная - в 2-2,6 раза; после традиционной терапии усиление спонтанной адгезии отмечено на 76-79%, индуцированной адгезии - на 77-100%. После курса иммунотерапии продукция цитокинов повысилась на 65-69% и превысила верхнюю границу диапазона нормы, после традиционной терапии продукция цитокинов увеличилась на 32-62% и приблизилась к нижней границе нормы.

Таким образом, изучение функциональной активности нейтрофилов очага воспаления при ХГРС обнаружило местную активацию фагоцитоза, бактерицидной и других функций лейкоцитов, более выраженную после иммунотерапии "Беталейкином” по сравнению с традиционным лечением.

ВЛИЯНИЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНОГО СТРЕССА И ВИЛОНА НА НЕКОТОРЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА И ГЕМОСТАЗА ПРИ ОЖОГОВОЙ БОЛЕЗНИ У КРЫС

Джулай М.А.. Обыденно В.И.. Патеюк А.В.

Читинская государственная медицинская академия, Россия

Согласно современным представлениям, ожоги вызывают в организме комплекс патологических изменений, затрагивающих почти все системы организма. Исходы ожоговой болезни во многом зависят от функции таких защитных систем, как иммунитет и гемостаз. Термическая травма вызывает функциональные расстройства иммунной системы и ведет к так называемому вторичному иммунодефициту. Кроме того, при ожогах страдает система гемостаза , что проявляется в развитии ДВС-синдрома. Механизм данных нарушений можно объяснить не только разрушением тканей, но и тем, что сам по себе ожог является довольно мощным стрессом для организма, ( стресс же опосредованно через эндокринную систему еще больше углубляет патологические изменения в системах иммунитета и гемостаза. Также ожоговая болезнь часто сопровождается вторичной инфекцией, которая еще в большей степени усугубляет данные нарушения и процессы регенерации.

Исходя из вышеизложенного, мы решили изучить, как будет влиять дополнительный стресс на течение ожоговой болезни, а так же скорректировать патологические изменения в системе иммунитета и гемостаза при помощи ви-лона.

Ожоги вызывали путем термокоагуляции участка кожи размером 1x1 см, на затылочной поверхности головы у крыс с повреждением всех слоев. Вторую группу животных, кроме термокоагуляции участка кожи, подвергали дополнительному стрессу методом иммобилизации в течении 24 часов. Затем каждую группу делили и одной части вводили физ. раствор, а другой вилон в дозе 0.1 мг на 1 кг массы ежедневно в течении 10 дней. Показатели иммунитета и гемостаза оценивали на 1, 3, 5, 14 и 21 сутки.

Нами установлено, что в первые сутки после ожога практически в 1,5 раза снижалось общее количество лейкоцитов, содержание Т лимфоцитов падало почти в 2 раза и В-лимфо-цитов в 1,7 раза. Так же уменьшалось число АОК в 2,2 раза и снижался титр гемагглютининов в 2,1 раза. Кроме того наблюдалось укорочение времени рекальцификации плазмы в

1.6 раза, прогромбинового и тромбинового времени в 1.3 раза и торможение эуглобулинового фибринолиза в 1.4 раза, эта-

ноловый тест был положительным. На третьи сутки исследования показатели иммунитета и гемостаза оставались практически такими же. К концу пятых суток повышалось содержание лейкоцитов практически до нормы, но количество Т-и В-лимфоцитов оставалось меньше нормы в 1,3 раза. Также сохранялись признаки гиперкоагуляции: было укорочено время свертывания крови, тромбиновое и протромбиновое время и удлинен эуглобулиновый фибринолиз приблизительно в

1,4 раза.

На пятые сутки исследования в данной группе животных отмечалось повышение содержания лейкоцитов периферической крови в 1,5 раза по сравнению с интактными животными. Кроме того увеличивалось количество Т-лим-фоцитов в 1,2 раза и В-лимфоцитов - в 1,3 раза, повышалось содержание АОК в 1,1 раза и пропорционально возрастал титр гемагглютининов. Показатели гемостаза практически оставались на прежнем уровне. На 14 сутки выявлялось значительное повышение количества лейкоцитов (в 1,8 раза), причем возрастало число Т-лимфоцитов в 1,5 раза , а число В- лимфоцитов в 1,9 раза. АОК было в 1,6 раз больше по сравнению с интактными животными. Титр гемагглютининов превышал исходный уровень в 1,5 раз. Со стороны системы гемостаза отмечались признаки нормализации, что выражалось в значительно меньшем укорочении всех изучаемых показателей свертывания крови. На 21 сутки все изучаемые показатели были близки к таковым у интактных животных.

У животных испытавших дополнительный стресс отмечалось более выраженное угнетение показателей иммунитета, и заметно медленнее они возвращались к норме.

Также проявления ДВС - синдрома были более значительными.

При введении вилона отмечалось сокращение времени патологических проявлений со стороны систем иммунитета и гемостаза, возникающих при ожогах, а также более раннее рубцевание ожогового дефекта кожи. Так у крыс первой группы отторжение ступа происходило на 13 сутки, у крыс дополнительно подвергнутых стрессу - на 15 сутки и у крыс получавших вилон, - на 10 сутки. Полное заживление происходило вторичным натяжением в первой группе животных на 25 сутки, во второй - на 30 сутки и у получавших вилон на 21 сутки с момента ожога.

Также при морфометрическом исследовании на светооптическом уровне поврежденных участков кожи отмечалось резкое увеличение диаметра всех сосудов до 196,4 +18,7 мкм по сравнению с контролем ЮОмкм, но при этом уменьшалось их количество на единицу площади. Эти изменения указывают на формирование отека. Расширение сосудов сопровождалось активной миграцией лейкоцитов в очаг воспаления. Применение вилона снижало данные изменеия, что способствовало более быстрой регенерации.

Из полученных данных можно сделать вывод, что дополнительный стресс усугубляет течение ожоговой болезни, что проявляется в более глубоком угнетении показателей иммунитета и развитии выраженного ДВС-синдрома, а так же более длительного восстановительного периода заживления поврежденного участка кожи. Применение же вилона оказывало положительное влияние на течение ожоговой болезни, что проявлялось сокращением эпитализа-ции поврежденного участка кожи на 4 дня по сравнению с первой группой крыс и на 7 суток - со второй. Одновременно быстрее восстанавливались показатели иммунитета и гемостаза. Следовательно, вилон стимулируя иммуногенез, способен оказывать положительное влияние на течение ожоговой болезни.

ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ БЕТАЛЕЙКИНА

ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ЖЕЛУДКА

И ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ

Долгушина А.И.. Никушкина К.В., Владыкина О.В., Прокопьева О.Б.,

Абрамовских О.С.

Медицинская академия, Челябинск, Россия

Целью нашего исследования являлась оценка эффективности применения рекомбинантного интерлейкина-ф-бета-лейкина при лечении язвенной болезни (ЯБ).

Материал и методы. Беталейкин назначали на фоне базисной терапии группе из 39 мужчин в возрасте от 16 до 72 лет с различным течением ЯБ. 25 человек страдали ЯБ двенадцатиперстной кишки, 14 - ЯБ желудка. . Среди обследованных больных у 5 течение ЯБ было тяжелым, у 14 - средней и у 7 -легкой степени тяжести. У 13 человек ЯБ выявлялась впервые. В 5 случаях течение ЯБ осложнялась кровотечением, в 1 - компенсированным стенозом привратника. Беталейкин вводили в дозе 5 нг/кг внутривенно капельно на изотоническом растворе хлорида натрия медленно, в течение 2-4 часов. Курс лечения включал 3-5 ежедневных инфузий. Эффективность лечения оценивалась по клиническим, инструментальным и лабораторным данным. Для оценки динамики рубцевания язв, степени микробной обсемененности и фонового гастрита всем больным при поступлении, а также на 14 и 21 дни проводилась ФГС с биопсией из краев и дна язвенного дефекта, из антрального отдела желудка. Исследовали также абсолютное и относительное содержание лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов; количество СЭЗ, С04, С08, СШ1Ь. СО 16, СЭ22, СБЮ, С025, НЬА-ОЯ, СЭ56, С095-лимфоцитов; функцию нейтрофилов крови; уровень иммуноглобулинов; уровень провоспалитель-ных цитокинов; компоненты комплемента.

При анализе результатов у пациентов, получавших беталейкин, отмечалось увеличение количества лимфоцитов, СОЗ , С04 , хелперно-супрессорного индекса, фагоцитарной активности нейтрофилов, уменьшение количества провоспа-лительных цитокинов. После лечения наблюдалось увеличение скорости рубцевания язв, морфологически - уменьшение признаков неполноценности грануляционной ткани, степени обсеменености Н.ру1оп.

Выводы. Полученные данные свидетельствуют о перспективности применения иммуномодулятора беталейкина в комплексе терапии ЯБ желудка и двенадцатиперстной кишки.

МОДУЛЯЦИЯ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ТРАНСКУТАННЫМ ОБЛУЧЕНИЕМ КРОВИ ПОЛИХРОМАТИЧЕСКИМ ВИДИМЫМ И ИНФРАКРАСНЫМ СВЕТОМ

Жеваго Н.А., Самойлова К.А., Оболенская К.Д.

Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия

В последние годы для коррекции иммунологических нарушений широко используются инвазивные фототерапевти-ческие методы, основанные на экстракорпоральном и внут-рисосудистом облучении небольших объемов крови пациента. Созданный в Швейцарии новый фототерапевтический аппарат “Биоптрон” позволяет воздействовать на кровь транс-кутанно видимым и инфракрасным поляризованным (ВИП) светом, близким по спектральному диапазону к естественной солнечной радиации, но лишенным ее УФ компоненты (400-3000 нм).

Цель настоящей работы - изучить влияние этого излучения в терапевтической дозе (12 Дж/см2) на основные показатели гуморального иммунитета практически здоровых добровольцев.

Материалы и методы. Облучали пояснично-крестцовую область (15см2) 23-29 добровольцев обоего пола в возрасте от 20 до 65 лет и в различные сроки проводили забор крови для исследований. Контрольную группу составили необлученные лица (п=14), у которых гемоэксфузия проводилась в те же сроки и в том же объеме (90 мл за 10 дней). Уровень сывороточных иммуноглобулинов (^О, ^А, ^М) исследовали турби-диметрическим методом (автоматический анализатор “Копе-ярес1Лс”, тест-системы “Копе-ЬаЬ”, Финляндия), а циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) - стандартным методом преципитации 5%-раствором полиэтиленгликоля.

Основные результаты. Через 0,5 и 24 час после 1 сеанса светотерапии в крови добровольцев достоверно возрастает количество (в среднем, с 1.11. до 1.25-1.31 г/л); оно продолжает увеличиваться и после 4-х и 9 ежедневных облучений, достигая к концу курса 1.37-1.49 г/л. К этому сроку достоверно возрастает и уровень ^А (с 1.90 до 2.23 г/л), который сохраняется и через 1 неделю после окончания облучений. Достоверные изменения содержания не выявляются. В контрольной группе уровень обнаруживал тенденцию к снижению, а содержание других ^достоверно не менялось. Установлен быстрый нормализующий эффект ВИП света на содержание 1цМ (показатель дисперсии Фишера р<0.05), а также высокая обратная зависимость изменений количества и в меньшей степени -от их исходного уровня. Это свидетельствует о регулирующем характере влияния ВИП света на данные показатели.

С аналогичной закономерностью к концу курса фототерапии изменялось и содержание ЦИК. Более того, что во всех случаях, когда уровень ЦИК был выше нормы (п=5), наблюдалось наиболее значительное падение этого показателя (в среднем с 83.8 уел. ед. до 63.8 уел. ед. через 0.5 час и до 68.0 усл.ед.- после 9 ежедневных сеансов фототерапии).

Заключение. Полученные данные свидетельствуют о прогностически благоприятном действии ВИП света на показатели гуморального иммунитета и возможности применения данного фототерапевтического метода с целью иммунокоррекции при заболеваниях различного этиопатогенеза.

ВЛИЯНИЕ ХИТОЗАНА НА СИСТЕМУ ИММУНОГЕНЕЗА И РЕПАРАТИВНЫЕ ПРОЦЕССЫ

Жоголев К.Д.. Никитин В.Ю., Цыган В.Н., Егоров В.Н.

Военно-медицинская академия,

Санкт-Петербург, Россия

Нами совместно с Санкт-Петербургской Университетской Инновационной Компанией “ЛИТОРАЛЬ" предложена биологически активная добавка к пище (БАД) “ХИТОЗАН Альга плюс”, приготавливаемая из мелкодисперсного порошка хи-тозана, полученного из панциря камчатского краба и бурых морских водорослей (морская капуста и фукус). “ХИТОЗАН Альга плюс” повышает неспецифическую резистентность организма к действию неблагоприятных факторов среды. Показана его способность стимулировать рост бифидобактерий и полезной кишечной флоры, выявлены противоопухолевые свойства. Аминогруппы хитозана обуславливают его липот-ропные и эмульгирующие свойства, эффективно притягивая жиры и выводя их из организма, тем самым способствуя, снижению уровня холестерина в крови. Кроме того, хитозан обогащает организм биодоступным легкоусвоясмым кальцием,

что приобретает особое значение при лечении остеопатий различного генеза для регенерации костной ткани. Известны также иммуноадъювантные, противоинфекционные и ранозаживляющие свойства хитозана.

Цели настоящего исследования: экспериментальное изучение влияния хитозана на систему иммуногенеза и репаративные процессы; разработка новых иммуномодулирующих препаратов и различных лекарственных форм на основе хитозана.

Производные хитина и хитозана, как и другие полисахариды оказывают выраженное влияние на иммунитет и неспецифические факторы защиты организма. Изучение иммуномодулирующих свойств хитозана показало, что они обусловлены главным образом активизацией фагоцитарной функции макрофагов. Именно этот механизм обеспечивает запуск целого ряда каскадных реакций, активирующих все звенья иммунной системы. Кроме того, хитозан, являясь природным полиэлектролитом, обладает тем же механизмом действия, что и синтетические полиэлектролиты, т.е. обеспечивает более тесное контактное взаимодействие между иммунокомпетентными клетками, что приводит к усилению иммунного ответа.

Интегральным показателем эффективности воздействия препарата на иммуногенез может служить его влияние на про-тивоинфскционный иммунитет. В результате доклинических испытаний, проведенных на животных (мышах, крысах, кроликах, поросятах), установлено, что препараты хитозана эффективны при бактериальных и вирусных инфекциях, а также при раневой болезни. Данные, полученных при изучении влияния различных лекарственных форм хитозана (растворов, гелей, пленок) на процесс заживления кожной раны у крыс и кроликов, показали, что они обеспечивают достоверное ускорение процесса репарации кожи на 25% по сравнению с контролем.

Хитозан оказался эффективным стимулятором остеогенеза. Это свойство хитозана было выявлено при его применении в виде губки для устранения экспериментально созданного костного дефекта нижней челюсти у кроликов. Морфометрическое исследование тканевого состава посттравматического регенерата в различные сроки эксперимента и статистический анализ полученного при морфометрии цифрового материала выявили благоприятное влияние хитозановой губки на регенерацию костной ткани. Отчетливо прослеживается тормозящее действие хитозана на рост соединительной ткани и стимулирующее влияние на пролиферацию клеток высокодифференцированных клеточных структур пластинчатой костной ткани.

Исследование механизмов стимулирующего эффекта хитозана при заживлении ран показало, что в основе его лежит активация фазы биологического очищения раны. Главная роль при этом принадлежи! повышению функциональной активности фагоцитов: ускорению миграции фагоцитов в рану (очаг воспаления), а также усилению фагоцитарной активности макрофагов вследствие увеличения положительного заряда их поверхностной мембраны, что, является основным механизмом активации начальных фаз фагоцитоза (хемотаксис, адгезия). Изучение цитохимическими методами метаболизма фагоцитирующих клеток показало, что хитозан вызывает достоверное увеличение активности ферментов гликолиза, гек-созомонофосфатного шунта и цикла Кребса. По данным НСТ-теста применение хитозана приводит к достоверной активации кислородзависимых систем бактерицидное™ макрофагов. Препараты хитозана усиливают антителогенез и увеличивают титры циркулирующих в крови антител.

Использование препаратов хитозана оптимизирует процессы иммуногенеза и остеогенеза, значительно сокращает сроки регенерации тканей. Тормозящее воздействие хитозана на развитие соединительной ткани способствует безрубцовому заживлению ран.

ПРИМЕНЕНИЕ НОВОГО ЦИТОКИНОВОГО ПРЕПАРАТА СУПЕРЛИМФА В ЛЕЧЕНИИ ПОСТЛУЧЕВЫХ ТРОФИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ КОЖИ И СЛИЗИСТЫХ У ОНКОБОЛЬНЫХ

Златник Е.Ю., Розенко Л.Я., Ганковская Л.В., Ковальчук Л.В.

Научно-исследовательский онкологический институт Ростов-на-Дону,

Российский Государственный медицинский университет, Москва, Россия

Известно, что лучевая терапия, являющаяся одним из этапов лечения онкологических заболеваний, вызывает угнетение регенеративных способностей тканей и оказывает мощное им-мунодепрессивное действие. Образование длительно незаживающих трофических язв относится к ее нередким осложнениям, лечение которых является актуальной задачей.

Цель работы состояла в изучении возможности применения препарата суперлимфа для лечения постлучевых трофических изменений кожи и слизистых, а также в качестве иммуномодулятора у онкологических больных.

Материалы и методы. 23 больных, из которых 16 имели рак кожи лица и 5 рак нижней губы Т ,ЫхМо стадии, подвергались короткофокусной рентгенотерапии (КФР) на аппарате ТА-

02 при традиционных условиях облучения РОД 3-5 Гр, СОД 45-55 Гр. Еще 2 больных имели поздние лучевые повреждения на коже передней поверхности голени и стопе после неадекватно проведенной КФР в других медучреждениях и неэффективного противовоспалительного лечения в течении 5-6 месяцев. Всем пациентам после КФР 2 раза в день осуществлялись аппликации водного раствора нового отечественного препарата “суперлимф”, представляющего собой комплекс естественных цито-кинов (МИФ, 1И, 2, 6, Т№-альфа, ТОБ- бета) и предназначенный для стимуляции регенерации и функции фагоцитарного звена иммунной системы. Характер и продолжительность течения ранних лучевых реакций сравнивали с контрольной группой из 18 пациентов аналогичных по диагнозу, стадии идозовой лечебной нагрузке, использовавших аппликации облепихового масла.

Результаты. Установлено, что явления мукозига, сухого или влажного эпидермита у основной группы больных купировались в среднем через 14±3 день, в контрольной через 38±4 дня (р<0,01). Поздние трофические изменения завершились полным восстановлением кожных покровов после 2,5 недель лечения препаратом “суперлимф”. Оценка иммунного статуса, которую проводили перед началом лечения и через 7-10 дней после его окончания, продемонстрировала статистически достоверное возрастание исходно низкого содержания С04 клеток (с 28,5±1,8 до

Таблица

35±2,24), что при стабильном уровне С08 лимфоцитов (29%) привело к повышению иммунорегуляторного индекса (с 1,0±0,023 до 1,2±0,05). Одновременно отмечено возрастание функциональной активности Т- и В-клеток в РБТЛ с ФГА и Л ПС. У больных контрольной группы позитивной иммунологической динамики не наблюдалось, уровень С04 составлял 26,6±2,7, им-мунорегуляторный индекс был ниже 1,0.

Таким образом, применение препарата суперлимфа для лечения постлучевых трофических изменений кожи и слизистых у онкологических больных обеспечивает существенный клинический и иммунологический эффект.

ПРИМЕНЕНИЕ ВИЛОНА ПРИ ХИМИОТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Златник Е.Ю.. Владимирова Л.Ю., Закора Г.И.

Научно-исследовательский онкологический институт, Ростов-на-Дону, Россия

Дипептид вилон является новым препаратом из группы тимомиметических цитомединов, разработанным С-Петербур-гским институтом биорегуляции и геронтологии, и рекомендован для клинического применения при нарушениях иммунитета и для стимуляции регенерации.

Цель работы: изучить возможности применения вилона с целыо иммунокоррекции при проведении химиотерапии (ХТ) у больных раком молочной железы.

Материалы и методы: больным генерализованным раком молочной железы проводили 2 курса ХТ, по окончании которых применяли вилон внутримышечно по 10 мг в сутки в течение 10 дней. Оценку иммунного статуса проводили до лечения, но окончании курса химиотерапии и после введения вилона. В контрольной группе после проведения химиотерапии вилон не применяли.

Результаты представлены в таблице, из которой видно, что у больных, как до лечения, так и после ХТ без иммуномодулятора наблюдалось выраженное угнетение факторов клеточного иммунитета, проявляющееся в резком снижении содержания СЭ2+, С04+ клеток и иммуннорегуляторного индекса (ИРИ). Отмечалась лейкопения 1-11 степени но критериям ВОЗ. Через 2 недели в контрольной группе продолжали регистрироваться явления иммунодепрессии и лейкопении. Применение вилона оказало стимулирующие действие на параметры Т- и [ЧК-клеточно-го звеньев: статистически значимо возросло количество С04\ СБ16+ клеток, а также ИРИ по сравнению с фоном и с данными после курса ХТ. Улучшились гематологические показатели с восстановлением количества лейкоцитов. Клинически у больных была достигнута частичная регрессия процесса.

Показатели иммунного статуса,% Этап обследования больных

до лечения после ХТ после вилона

CD2+ 46,4±2,64 49,0+2,42 51,8+1,76*

CD4+ 23,4±1,98 27,6+1,32 37,6+4,18*, **

CD8+ 26,6+3,52 32,0+4,84 30,4+4,2

CD16+ 17,0+0,44 16,6±0,88 21,6+1,98**

CD4+/CD8+ 0,937+0,145 0,908+0,176 1,32±0,2**

Примечание: * - статистически достоверное отличие от исходных данных (р<0,05); ** - статистически достоверное отличие от данных после ХТ (р<0,05).

Заключение: применение вилона у больных раком молочной железы, подвергшихся XT, позволяет улучшить иммунный статус и ликвидировать явления лейкопении.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 (РОНКОЛЕЙКИНА) ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ГЕМАТОГЕННОГО ОСТЕОМИЕЛИТА У ДЕТЕЙ

Золотарев А.В., Жгенти Г.Р.

Читинская государственная медицинская академия, Чита, Россия

Проблема лечения детского остеомиелита остается актуальной по сей день. Существующие методы лечения не дают быстрого клинического эффекта, в результате чего пожизненно у таких детей остается деформация костей. В настоящее время в клиническую практику внедряются препараты, оказывающие действие на защитные системы организма. К таким веществам относятся цитокиновые лекарственные средства. Однако до сих пор не существует принципов цитокинотерапии, поэтому изучение их действия является актуальной задачей современной медицины. Целью настоящего исследования явилось изучение влияния рекомбинантного интерлейкина-2 (ронколейкина - БиоТех, СПб) на состояние иммунитета у больных детей с острым гематогенным остеомиелитом длинных трубчатых костей. Установлено, что у больных детей с остеомиелитом повышено общее число лейкоцитов, но снижено количество лимфоцитов. Содержание Т-клеток у больных по сравнению со здоровыми детьми уменьшено в 2 раза, более чем в 2 раза понижено количество Т-хелперов и Т-супрессоров, а также уменьшен иммунорегулятор-ный индекс (соотношение Тх/Тс). Выраженные изменения выявлены при остром гематогенном остеомиелите со стороны иммуноглобулинов. У всех больных наблюдалось падение уровня IgG. Содержание IgM и IgA снижалось менее значительно. Под воздействием ронколейкина у больных наблюдалось значительное увеличение общего числа лимфоци тов, Т-лимфоцитов, в том числе Т-хелперов. Количество Т-супрессоров возрастало в меньшей степени, в связи с чем повысился иммунорегуля горный индекс. У больных контрольной группы, получавших традиционное лечение, содержание IgM и IgA восстанавливалось практически до нормы, тогда как концентрация IgG оставалась сниженной. У больных, леченных ронколейкином, уровень IgG и IgM нормализовался, а концентрация IgA значительно превысила норму. Таким образом, применение ронколейкина у больных детей острым гематогенным остеомиелитом приводит к улучшению показателей клеточного и гуморального иммунитета и благоприятному клиническому течению заболевания.

СРАВНЕНИЕ КАЧЕСТВЕННЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРЕПАРАТОВ ВНУТРИВЕННОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА, ОТЛИЧАЮЩИХСЯ СОСТАВОМ И СПОСОБОМ ПОЛУЧЕНИЯ

Исрафилов А.Г.. Мостовская Е.В., Алсынбаев М.М., Кудашева Г.Б., Кулагин В.Ф., Хабибуллина В.В.

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова, Уфа, Россия

На рынке внутривенных иммуноглобулинов

- пепсиновый, безпенсиновый, составом стабилизаторов (Ст), содержанием натрия хлорида (NaCl). АКА ВВИГ определяли

классическим способом (М3 РСФСР, Горький 1988). Препараты ВВИГ оценивались в тестах на перемешивание (аналоге условий транспортировки)- 80 горизонтальных осцилляций в мин. в течение 2 ч и в тесте на ускоренное старение (аналог условий хранения в течение 2 лет) - при 37°С в течение 4 недель. Титры антици-томегаловирус-ных (антиЦМВ) антител (АТ) изучали иммунофер-ментной тест-системой Биосервис (ВФС 42-2787-96). В качестве стабилизаторов использовали мальтозу (М) в концентрации 2,0; 3,3; 6,7; 10%, глицин 0,1 М, маннит, сорбит-5%. Для сохранения изотоничносги добавляли недостающее количество NaCl. В связи с тем, что оптимальным значением конечного препарата ВВИГ оказался рН5,5 все получаемые экспериментальные серии ВВИГ имели то же значение pH. Было изучено влияние различных Ст, пепсина (П) при обработке ВВИГ с pi 15,5 в следовых количествах 1:10' и в гомеопатической дозе 1:10'’.

АКА ниже допустимого предела 10 мг/2СН50 наблюдали при обработке II при концентрации NaCl 0 и 0,6%, а выше 15 мг/ 2СН50 при NaCl - 0,3 и 0,72%. Анализ теста на перемешивание (Пер) показал стабильность АКА при обработке П в большей дозе (1:10')- пи в одном образце не наблюдали снижения показателей АКА, а при меньшей дозе Г1 (1:10'’) наблюдали снижение АКА при концентрации NaCl 0,3 и 0,72% и в присутствии 0,1 М глицина. Интересно, что при содержании М - 10% наблюдали улучшение АКА в тестах на Пер и термостатирование (Тер) в 1,5-5 раз независимо от дозы Пив его отсутствии. Однако, использование П в препаратах, содержащих 10% М приводило к АКА ниже 10 мг/2СН50 в только что полученном препарате. АКА же безП препарата, содержащего 10% М составляла не <15 мг/2СН50. Тер приводило к улучшению АКА при всех Ст и различной концентрации П, поэтому оно может быть использо-вано в качестве технологического этапа доведения АКА ВВИГ до допустимого уровня.

При соотношении П 1:105 наблюдали линейное снижение димеризации с увеличением концентрации NaCl в интервале от 0,3 до 0,72% (коэффициент корреляции ц=-0,9999; п=5; Р<0,05). Поэтому для препаратов ВВИГ, полученных с использованием П в соотношении 1:10s можно рекомендовать оптимум концентрации NaCl от 0,6 до 0,72% (содержание димеров менее 10%). Однако дальнейшее введение в состав препаратов NaCl до физиологической концентрации (0,9%) приводило к значительному ухудшению всех параметров-агрегаты превышали 1% в свежеприготовленном препарате, - и 4% после теста на Пер и кроме того данный препарат не проходил по АКА. При соотношении I I 1:10'' и в безП ВВИГ наблюдали наоборот увеличение димеризации е возрастанием концентрации NaCl в интервале от 0,1 до 0,6% (ц=0,954; п=7; Р<0,05). Поэтому для безП ВВИГ можно рекомендовать концентрацию NaCl не более 0,1 % (содержание димеров не более 6%).

Сравнение препаратов аналогичного состава показало более низкое содержание димеров при обработке П в более низкой дозе (ПО6) и в безП препарате. Дальнейшее сравнение этих двух подходов выявило преимущество безП препарата в тесте на Тер - содержание агрегатов минимум ниже в

1,6 раза, димеров - в 2,4 раза, фрагментов - в 3,6 раза, АКА -лучше в 3 раза; в тесте на Пер - АКА лучше в 2,9 раза.

Анализ сохранности титров антиЦМВ АТ в тесте на Тер показал наибольшую стабильность безП препарата, содержащего 10% М. При этом снижение титров составило не более 10%. В процессе изучения титров обнаружился интересный феномен - повышение титра антиЦМВ АТ в только что полученных сериях в зависимости от состава формулирования. Было изучено влияние различных параметров возможно влияющих на уровень титра АТ - содержание агрегатов, димеров, титр АТ к контрольному АГ. Обнаружилась сильная корреляционная связь между содержанием димеров и процен-

том повышения титров АТ (ц=0,8478; п=7; Р<0,05). Следовательно, за повышение титра антиЦМВ АТ в препаратах ВВИГ ответственна димеризация.

Таким образом, анализ молекулярных параметров, анти-комплементарной активности и стабилыюсти антицитомегал-вовирусных антител в различных тестах показал, что наилучшим является немодифицированный безпепсиновый препарат иммуноглобулина, содержащий в качестве стабилизатора

- 10% концентрацию мальтозы.

АДАПТАЦИОННО-БИОРИТМОЛОГИЧЕСКИЙ ПОДХОД К ИЗУЧЕНИЮ ВЛИЯНИЯ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ НА ПОКАЗАТЕЛИ ИММУННОЙ И НЕЙРОЭНДОКРИННОЙ СИСТЕМ

Кирилличева Г.Б., Соловьева М.С., Пронин А.В.

Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН,

Москва, Россия

В ходе настоящей работы впервые применен биоритмологический подход к изучению влияния иммуномодуляторов на показатели иммунной и нейроэндокринной системы у мышей с генетически обусловленными четкими различиями в функциональных характеристиках иммунной и нейроэндокринной систем (НЭ). В работе использованы иммуномодуляторы различной структуры и происхождения, различающиеся механизмом иммуномодулирующего эффекта.

Показано, что разнонаправленность иммуномодулирующего эффекта во многих случаях объясняется особенностями биоритмов изучаемых показателей у интактных животных.

Экспериментально установлена зависимость иммуномодулирующего эффекта от фазы биоритма изучаемого показателя у контрольных животных.

Установлено, что оценка иммуномодулирующего эффекта должна проводиться с позиции единой общебиологической концепции о гомеостазе и существующей классификацией адаптационных реакций и иерархических уровней регуляции.

Планирование и проведение иммунологических экспериментов с учетом суточных биоритмов функционирования иммунной системы может способствовать повышению точности и воспроизводимости результатов опытов и открыть ряд новых подходов к изучению механизмов регуляции иммунного гомеостаза в норме и при патологии, индивидуализации применения иммунотропных средств в клинике.

Показано, что проблема невоспроизводимое™ иммуномодулирующего эффекта, его вариабельности, является чисто методологической, которая устраняется путем изменения тактики построения эксперимента и оценки опытных данных. Разработана новая методология изучения иммуномодулирующего эффекта.

ИЗМЕНЕНИЯ ИММУННОГО СТАТУСА У ХИРУРГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ С ТЯЖЕЛЫМ ЭНДОТОКСИКОЗОМ НА ФОНЕ ВВЕДЕНИЯ РОНКОЛЕЙКИНА

Климентов А.А., Ким И.Ч., Быков А.В., Антонов Ю.В.

Волгоградская медицинская академия, кафедра хирургии ФУ В, Волгоград, Россия

Цель работы. Изучение иммунного статуса у хирургических больных с тяжелым эндотоксикозом, получающих в комплексном лечении ронколейкин.

Материалы и методы. Настоящее исследование носит предварительный характер и основано на 9 клинических наблюдениях. 8 больных оперированы по поводу разлитого гнойного перитонита, в 4 случаях имеющего осложненное течение. Одному пациенту с окклюзионным пиелонефритом и инфекционно-токсическим шоком выполнено малоинвазивное дренирование правой почки. Проводилось полное клинико-лабораторное и иммунологическое обследование больных до введения, а также через 1 неделю, 3 недели, 1 месяц после введения ронколейкина. Ронколейкин применялся внутривенно капельно по 1,0 млн. МЕ.

Основные результаты. Лабораторно-иммунологические показатели больных до введения ронколейкина характеризовались относительной и абсолютной лимфоцитопенией, снижением относительного и абсолютного количества Т-лимфо-цитов, Т-цитотоксических лимфоцитов, естественных киллеров, снижением абсолютного количества Т-хелперов, что свидетельствует о развитии иммунодефицитного состояния. После введения ронколейкина у всех больных наблюдалось увеличение по сравнению с исходным общего относительного и абсолютного количества лимфоцитов, увеличение относительного и абсолютного количества Т-лимфоцитов, Т-цитотокси-ческих лимфоцитов, Т-активированных лимфоцитов, при этом иммунорегуляторный индекс СБ4/С08 достоверно снижался за счет увеличения С08+ Т-цитотоксических лимфоцитов. Относительное содержание палочкоядерных нейтрофилов при неизменных количественных показателях зрелых нейтрофилов снизилось в 2 раза. В гуморальном звене отмечено незначительное увеличение уровня ^А, ^М, ^С. Летальных исходов не было.

Заключение. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о позитивных сдвигах иммунного статуса в процессе комплексного лечения, включающего применение ронколейкина, очень тяжелых хирургических больных с выраженным эндотоксикозом. Следует отмстить, что улучшение иммунологических показателей носило довольно однотипный характер и совпадало с началом лечения ронколейкином.

ДЕЙСТВИЕ ВИЛОНА

НА ОРГАНОТИПИЧЕСКУЮ КУЛЬТУРУ ТИМУСА И СЕЛЕЗЕНКИ МОЛОДЫХ И СТАРЫХ КРЫС

Князькин И.В.. Южаков В.В., Чалисова Н.И., Григорьев Е.Н., Синицкая Н.С.

Санкт-Петербургский Институт биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН, Санкт-Петербург, Россия

Многочисленные наблюдения за пожилыми пациентами показывают, что большинство возрастных патологий непосредственно связаны с ослаблением системы клеточного и гуморального иммунитета. Известно, что ключевую роль в возрастном изменении иммунной системы играет инволюция тимуса. Истощение тимуса сопровождается глубокими изменениями морфологии клеток микроокружения и недостаточной выработкой нейропептидов и тимусных гормонов, регулирующих функциональную активность органов иммунной системы и созревание Т-клеток.

Целью данного исследования является изучение действия дипептида вилона (Ьуя-С1и), сконструированного по результатам анализа аминокислотного состава пептидов вилочковой железы на органотипическую культуру тимуса и селезенки.

Материалы и методы. Исследование проведено на орга-нотипичсских культурах тимуса и селезенки крыс различного возраста (3 дня, 3 недели, 2 года). Вилон добавляли в куль-

туру клеток в количестве 0.5 мкг/мл. Изучение органитипи-ческих культур тимуса и селезенки проводили иммуногисто-химическими и морфометрическими методами.

Основные результаты. Полученные результаты свидетельствуют об интенсификации пролиферативных процессов в культурах тимуса и селезенки под действием вилона: статистически достоверно возрастало количество РСЫА положительных клеток и снижалось число клеток, гибнущих в форме апоптоза. Напротив, без воздействия вилона индекс пролиферации был ниже в 2 раза, а апоптотический индекс превышал тот же показатель под действием вилона на 40%.

Выводы. Представленные данные позволяют рассматривать вилон в качест ве потенциального геропротекгорного средства и рекомендовать его применение для ускорения и усиления процессов репарации тканей и органов у пожилых пациентов.

ДИФФЕРЕНЦИРОВАННАЯ ИММУНОКОРРЕКЦИЯ ПРИ ВТОРИЧНЫХ ИММУНОДЕФИЦИТАХ

Колесников А.П., Хабаров А.С., Цигулева О.А.

Алтайский государственный медицинский университет, г. Барнаул, Россия

Обследовано 678 больных с осложненным течением ин-фекционно - воспалительных заболеваний (ИВЗ). Иммунологическое обследование включало: количественное содержание основных популяций иммунокомпетентных клеток: СОЗ, С04, С08, СО 16, НЬА-Ог, эффекторные функции нейтрофиль-ных лейкоцитов (НЛ) по фагоцитарной активности (латекс-тест), спонтанной и индуцированной эндотоксином листерий биоцидности; В-клеток по уровню ^А,М,С, ЦИК; ГЗТ- эффекторов в реакции РТМЛ. Функциональное состояние Т-клеток оценивалось в РБТЛ на ФГА, Кон-А. При анализе результатов обследования выявлена патогенетическая гетерогенность нарушений в иммунной системе при различных формах осложненного течения ИВЗ: инфекционно- токсический шок, острый сепсис в 75% случаев сопровождался 2-3 ст. недостаточностью эффекторных функций НЛ, прогрессирующим в динамике заболевания снижением уровня (42%) клеточно- гуморальным ИД (92%). В первые дни манифестации заболевания определялась выраженная фагоцитарная активность НЛ (ФИ более 75%), повышение спонтанной и индуцированной биоцидности, повышение иммуннорегуляторного индекса (ИРИ) в сочетании с Т - лимфопенией и снижением ответа на ФГА, Кон-А. Затяжное течение острой пневмонии в 30% случаев сопровождалось активацией фагоцитоза НЛ, повышением уровня и/или М, редко А: у 48% боль-

ных определяли недостаточность эффекторных функций НЛ 1-2 ст. , снижение уровня 24% гуморально- клеточный

ИД - 62%. При острой гнойной инфекции в 92% диагностировали клеточно-гуморальный ИД; хронической-71%; снижение ИРИ , недостаточность эффекторных функций НЛ (35%), повышение уровня ^М. У 9% больных с длительно текущей гнойной инфекцией выявлена поликлональная активация В- клеток, в 3% случаев сопровождающаяся клинически выраженными аутоиммунными реакциями иммунокомн-лексного типа. При ХВЗ в стадии ремиссии изменение иммунологических показателей определялось в 32% случаев и носило умеренно выраженный характер. Па частоту изменений иммунологических показателей существенное влияние оказывали: полиорганность поражения, степень функциональной недостаточности органа - мишени (ДН, ст., ХИН , сиид-ром маладсорбции). Иммунологическая характеристика обострения ХОБЛ мало отличалась от показателей затяжных форм острой пневмонии.

Часто рецидивирующие вирусные инфекции в межреци-дивном периоде характеризовались Т-лимфопенией (56%) , снижением ответа на Кон-А, уменьшением функциональной активности ГЗТ-эффекторов.

Иммунокоррекция проводилась в соответствии с выявле-ными типами нарушений в ИС: при недостаточности эффекторных функций НЛ 2-3 ст.- дезинтоксикация, плазмаферез, лейкинферон; снижение уровня менее 8 гр/л - плазма, иммуноглобулин, для в/в введения; клеточный, клеточно-гум-моральный ИД-полиоксидоний, ликопид с последующим переводом на тимические гормоны или их синтетические аналоги; гуморальный ИД-миелопид, нуклеинат натрия; синдроме системного воспаления - глюкокортикоиды; поликлональной активации В-клеток - 3-5 дневные курсы преднизолона (20-30 мг) в сочетании с тимическими гормонами. Разработана программа иммунореабилитации больных ХВЗ и часто рецидивирующими вирусными инфекциями.

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ ПРИ КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКОЙ ХИРУРГИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИЕЙ С РАЗНЫМИ ТИПАМИ ИММУНОДЕФИЦИТНЫХ СОСТОЯНИЙ

Корженевский А.А.. Алсынбаев М.М., Медведев Ю.А., Кулагин В.Ф., Исрафилов А.Г., Гизатуллин Р.Х.

ГУП "Иммунопрепарат ", Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа, Башкортостан, Россия

Молекулы иммуноглобулинов наряду с участием в эффекторных реакциях иммунитета способны обеспечивать различные процессы иммунорегуляции. Благодаря этому препараты нормальных иммуноглобулинов человека могут применяться не только как средство заместительной терапии, но и для лечебной иммуномодуляции. В проведенном исследовании оценено иммуномодулирующее влияние препарата человеческого иммуноглобулина нормального для внутривенного введения (“Иммуновенин” производства ГУП “Иммунопрепарат”, г.Уфа) - ИГ’В, при гнойно-септических заболеваний, протекающих в условиях различного состояния процессов антите-логенсза. Препарат использован при лечении 112 больных местными и системными инфекциями хирургического профиля (гнойно-воспалительные поражения висцеральных органов, костно-суставного аппарата, кожи, в том числе - осложненные развитием септического состояния). ВИГ применяли в концентрации, характеризуемой как иммуномодулирующая - по 100 мг двух-трехкратно с интервалом в 1-2 дня после хирургической санации очагов, иммунный статус пациентов оценивали с помощью набора общепринятых методов. В зависимости от проявлений функционального состояния В-звсна иммунной системы среди больных были выделены группы: с недостаточностью гуморального иммунитета (содержание в крови ниже границы нормы - 7 г/литр), ареактивностыо гуморальных механизмов иммунитета (содержание в крови в пределах нормальных показателей - 7-20 г/литр) и нормальной гуморальной реактивностью (содержание 1уО в крови на уровне показателей нормальной реакции -более 20 г/литр).

Установлено, что у больных с недостаточностью гуморального иммунитета лечение с ВИГ приводило к достоверному возрастанию содержания 1^0 и 1цА (при остающемся сниженным ^М), что сопровождалось формированием лимфоцито-

за без достоверного увеличение числа T-CD3* и B-CD22+ лимфоцитов), увеличением количества Т-хелперов-индукторов (С04*-клеток) и усилением поглотительной активности фагоцитов. При ареактивности гуморальных механизмов иммунитета после лечения с использованием ВИГ у больных отмечено достоверное возрастание концентрации IgM и IgA (но не IgG). Помимо этого, у данных больных также формировался лимфоцитоз, связанный с увеличением общего числа Т-лимфоцитов (CD3*) и их основных субпопуляций - Т-хелперов-индукторов (CD4+-wictok), и особенно - Т-цитоток-сических лимфоцитов (CD8+), а также клеток с маркерами В-лимфоцитов (CD22, HLA-DR). У больных с нормальной гуморальной реактивностью применение ВИГ, в отличии от других групп, вызывало снижение уровня иммуноглобулинов всех основных классов (IgA и IgM - достоверное) и, также в отличии от других групп, достоверное снижение (до уровня нормы) содержания в крови лейкоцитов. При этом незначительное увеличение числа лимфоцитов сопровождалось почти двукратным увеличение количества CD3+ клеток без достоверных изменений количества лимфоцитов, экспрессирующих CD4 и CD8. В отсутствии увеличения числа В-лим-фоцитов (CD22+) отмечено возрастание числа лимфоцитов, экспрессирующих HLA-DR (маркер активации). Таким образом, в условиях гнойно септической патологии препарат ВИГ проявляет свойства иммуномодулятора. При этом его иммуномодулирующее действие касается как непосредственно процессов антителогенеза, так и функционирования Т-лимфо-цитарного звена, а характер такого действия может варьировать в зависимости от состояния иммунной системы.

ПОЛУЧЕНИЕ ИММУНОЛИПОСОМАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ

Кортава М.А.. Оборотова Н.А., Полозкова А. П., Суровой А.Ю.*, Заботина Т.Н., Буркова А.А., Полосухина Е.Р., Гриневич А.С., Палкина Т.Н., Барышников А.Ю.

Российский Онкологический Научный Центр им. Н.Н. Блохина,

*Институт Биоорганической Химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова

Цель наш-ей работы - получить иммунолипосомы, используя высокую аффинность стрептавидина к биотину.

Для получения липосом использовались фосфатидилхо-лин, холестерол, кардиолипин в соотношении (12:6:1), и модифицированный биотиновым эфиром полиэтиленгликоль, а также краситель-родамин. Липосомы получены методом экструзии. В качестве вектора были использованы моноклональные антитела к Т-клеточному антигену CD5 (1С080), меченые флуоресцентным красителем (F1TC) и обработанные гид-роксисукцинимидобиотиновым эфиром. Моноклональные антитела были обработаны стрептавидином и освобождены от избытка стрептавидина методом гель-фильтрации.

Методом поверхностной цитофлуоримегрии было показано специфическое связывание комплекса ICO 80 F1TC / био-тин/стрептавидин с клетми Т-лимфобластоидной линии Jurkat, равное 90%. Анализ специфического связывания липосом с комплексом ICO 80 F1TC / биотин / стрептавидин проводили по оценке двойного свечения (по F1TC и родамину), на проточном цитофлуориметре FACScan (Becton Dickenson). Было показано специфическое связывание иммунолипосом с клетками Т-лимфобластоидной линии Jurkat, равное 84%. В качестве негативного контроля были использованы клетки линии Raji (В-клсточная лимфома).

ИЗМЕНЕНИЕ РЕПЛИКАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ВИРУСА У БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СОСТОЯНИЯ ^-СТАТУСА НА ФОНЕ ВВЕДЕНИЯ “РЕАФЕРОНА”

Кузнецов С.И.. Латаш В.Г.

Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования, Научно-исследовательский институт гриппа РАМН, Санкт-Петербург, Россия

Настоящее исследование предполагало отследить влияние активности репликации вируса на показатели 1РМ-статуса больных хроническим вирусным гепатитом С. Основная задача состояла в оценке перспективы снижения вирусной нагрузки в отдаленные сроки на фоне лечения “Реафероном”.

Было обследовано 21 человек, которым проводился 3-х недельный курс ежедневного в/м введения рекомбинантного интерферона а2Р в суммарной дозе 52,5 МЕ. У больных оценивали 1БЫ-статус и вирусную нагрузку методом ПЦР до, после и в отдаленные сроки лечения. Вирусную нуклеиновую кислоту до лечения выявили у 64.7% больных, сразу после лечения ее определяли в 38.9% и через 1-3 месяца она возросла до 52.6%. Интересно проанализировать репликативную активность вируса в зависимости от изменения ^[Ч-ста-туса больных в процессе 1РИ-терапии “Реафероном”. Для этого колебания наличия вирусной РНК определяли в подгруппах, которые также формировали в зависимости от первичной реакции системы IFN больного на введение начальной дозы рекомбинантного цитокина - повышение или понижение общего сывороточного 1РК Как свидетельствуют результаты в обеих подгруппах сразу после лечения были примерно одинаковыми: в подгруппе №1,где первичная реакция системы - возрастание общего сывороточного 1Р'Ы, процент ПЦР - позитивных больных снизился в 1.54 раза, а в подгруппе №2 , где первичная реакция - снижение общего сывороточного интерферона, процент таких больных снизился в 2 раза. Однако, анализ результатов в отдаленные сроки показал, что в подгруппе №1 процент позитивных по вирусной РНК больных снизился еще больше и составил 40%. В подгруппе №2 процент ПЦР - положительных больных повысился, составил 66.7% и даже превысил их процент до начала лечения. Очевидно, в период 1РЫ-тсрапии репликативная активность вируса была подавлена за счет действия экзогенного препарата. Однако, после окончания лечения, когда антивирусная и иммуномоделирующая активность “Реаферона” была снята , оказалось, что больные с первым типом реагирования (подгруппа №1) способны более адекватно восстанавливать собственную систему 1Р1М и более эффективно противостоять репликативной активности вируса. Таким образом, первичная реакция организма через сутки после первой инъекции экзогенного 1РЫ в плане повышения или понижения общего сывороточного 1РЫ, очевидно, может служить прогностическим критерием в оценке нормализации функционирования аутосистемы 1РЫ и се эффективности в противовирусной активности вируса.

Следующим моментом, который рассматривался в данном исследовании - это вопрос о влиянии репликативной активности вируса на состояние 1РЫ-статуса больных в разные периоды 1ГМ-терапии. Все больные на разных этапах обследования ( до, после лечения и в отдаленные сроки) были разбиты на подгруппы в зависимости от наличия (ПЦР «+») или отсутствия (ПЦР «-» ) у них в сыворотке вирусной нуклеиновой кислоты на момент определения. Анализ результатов показал, что в обеих подгруппах ( ПЦР «+» и ПЦР «-») идет достоверное снижение общего сывороточного 1РЫ и возрас-

тание индуцированной продукции IFN in vitro как после окончания курса IFN-терапии, так и в отдаленные сроки после завершения лечения. В этом плане динамика изменений IFN-статуса больных полностью соответствовала динамике IFN-показателей в общей группе пациентов и никак не зависела от репликативной активности вируса. Отсутствие влияния вирусной нуклеиновой кислоты на существенные колебания показателей активности системы IFN подтверждает тот факт, что не получено ни одного достоверно отличающегося показателя при сравнении данных двух соответствующих подгрупп на любом этапе обследования больных. Даже тенденции изменений были выражены слабо и они разнонаправлены. Если сравнивать подгруппы в отдаленный период (1-3 месяца) обследования, то полученные в них результаты практически имеют одни и те же цифровые значения. Таким образом, наличие активной репликации вируса практически не влияет на показатели IFN-статуса больных, но и не препятствует его изменению в сторону снижения общего циркулирующего IFN и возрастания индуцированной продукции IFN in vitro, то есть нормализации показателей в процессе терапии экзогенным IFN.

ВЛИЯНИЕ IFN-ТЕРАПИИ НА IFN-СТАТУС И СИСТЕМУ С У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ “С”

Латаш В.Г.. Кузнецов С.И.

Научно-исследовательский институт гриппа РАМН, Санкт-Петербург, Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования, Россия

IFN-терапия рекомбинантными препаратами является признанным методом лечения больных с хроническими гепатитами вирусной этиологии. Доказано, что экзогенный IFN оказывает антивирусное действие и нормализует IFN-статус больных, что способствует развитию положительной динамики в течение патологического процесса. Вирусная инфекция также способна активировать систему комплимента С, как по классическому, так и по альтернативному пути. Система С может активироваться при непосредственном взаимодействии с вирусным агентом, а также с клетками, пораженными вирусом. Активация может протекать как в присутствии антител, так и без них. В данном исследовании анализировали влияние экзогенного IFN-a (“Реаферона”) на состояние IFN-ста-туса больных хроническим гепатитом “С” и на параметры системы С. Пациентам проводили трехнедельный курс “Реа-фероном”. Препарат вводили внутримышечно в суммарной дозе 52,5 ME. У больных оценивали IFN-статус (общий сывороточный IFN и индуцированную продукцию IFNa/p и IFNy in vitro ) и состояние системы С (общую гемолитическую активность по классическому пути КС'50, по альтернативному пути АС'50,а также концентрацию компонентов СЗ,С4 и Cl-ингибитора). Параллельно регистрировали репликативную активность вируса методом ПЦР. Вышеназванные показатели определяли до начала лечения, спустя сутки после первой инъекции “Реаферона” (кроме ПЦР), через два дня после окончания лечения и в отдаленные сроки (1-3 месяца после лечения).

До начала лечения у данной группы больных общий сывороточный IFN колебался в пределах 20-30 МЕ/мл (N 0-4МЕ/ мл), при этом индуцибельная активность клеток in vitro была значительно снижена и составляла чуть более 20% от репли-кативности здоровых доноров. Через сутки после первой инъекции существенных изменений выявлено не было. Прове-

денное лечение экзогенным интерфероном существенно повлияло на интерфероновый статус больных. Общий сывороточный интерферон достоверно снизился, также достоверно возросла индуктивная активность лейкоцитов in vitro для IFNa/p и IFNy. Еще более значительные сдвиги в IFN статусе наблюдали у больных в удаленные сроки после окончания лечения.

Функциональные и количественные показатели системы С в группе до лечения практически не отличались от нормальных показателей здоровых доноров. Единственным параметром, который превышал верхнюю границу нормального диапазона функционирования был показатель активации системы С по альтернативному пути (АС'50). После проведения IFN терапии и в отдаленные сроки после неё, все исследуемые показатели претерпевали незначительные изменения, но они были несущественными и оставались в пределах нормальных значений. Исключение составлял АС'50. После окончания курса лечения активность системы С по альтернативному пути достоверно снизилась и вошла в диапазон нормальной активности здоровых доноров. Однако, в отдаленные сроки активность АС'50 опять достоверно возросла до исходного уровня перед началом лечения.

IFN терапия экзогенным препаратом IFNa влияла на репликативную активность вируса. До начала лечения РНК вируса выявлялась у 65% больных, после курса IFN терапии этот процент снизился до 38,9%. Однако, через 1-3 месяца после окончания лечения больных с положительной ПЦР слало 52,6%.

Таким образом, под влиянием экзогенного IFNa в системе эндогенного IFN больных наметилась тенденция к сдвигу показателей IFN статуса в сторону нормализации: снижение общего сывороточного IFN и возрастание индуктивной активности клеток крови in vitro. У обследованных больных синтетическая функция печени не нарушена, о чём свидетельствует нормальная концентрация компонентов системы С в сыворотке крови, особенно СЗ. Классический путь активации системы С не задействован. Слабо выражена активация системы по альтернативному пути, причем активность АС'50 напрямую связана с нагрузкой чужеродной нуклеиновой кислотой. Терапия больных “Реафероном” не меняет параметры системы С, за исключением кратковременной нормализации активности альтернативного пути.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СИСТЕМНОЙ ЭНЗИМОТЕРАПИИ ПРИ НЕКОТОРЫХ РЕВМАТИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

Лила А.М.. Мазуров В.И.

Медицинская академия последипломного образования, Санкт-Петербург

Системная энзимотерапия (СЭТ) в последние годы нашла широкое применение при различных заболеваниях внутренних органов, в том числе и ревматических, ввиду своего противовоспалительного и иммуномодулирующего эффектов. Доказано, что препараты СЭТ (вобэнзим, флогэнзим) модулируют активность ряда провоспалительных цитокинов (IL-P, TNF-a, 1L-6, IL-8 и др.), играющих ключевую роль в патогенезе ревматических заболеваний. Энзимные препараты оказыват также регулирующее влияние и на активность адгезионных молекул различных классов (селектинов, ин гег-ринов, иммуноглобулинов и др.).

Обследовано 82 больных ревматоидным артритом (РА) и 38 больных системной красной волчанкой (СКВ), которые были подразделены на две группы: одна получала базисную

терапию, вторая — базисную терапию и препарат вобэнзим по 7 драже 3 раза в сутки. Контроль параметров заболевания осуществлялся на протяжении 3-х месяцев наблюдения.

При анализе клинических показателей у больных РА 2-й группы отмечалось более значимое уменьшение длительности утренней скованности, снижение индексов Ritchie и Lee, уровня СОЭ, концентрации глобулиновых белковых фракций и IgM при одновременном увеличении содержания С08+лим-фоцитов (12,4±0,7% и 15,5±1,1%, р<0,05) и снижении уровня В-лимфоцитов (40,4±4,3% и 30,6±3,5%, р<0,05). У всех обследованных больных РА отмечалось достоверное снижение концентрации ЦИК в сыворотке крови по истечении 3-х месячного курса терапии. Однако, если у больных 1-й группы снижение содержания иммунных комплексов в процессе лечения составило 24,3%, то у больных 2-й группы этот показатель равнялся 40,9% (р<0,01). У больных РА обнаружена прямая корреляционная зависимость между концентрацией ЦИК и длительностью утренней скованности (г=+0,41, р<0,05) и индексом Ritchie (г=+0,47, р<0,01).

У больных СКВ снижение воспалительной активности заболевания на фоне проводимой терапии подтверждалось также положительной динамикой иммунологических показателей. В частности, у пациентов 2-й группы установлено более выраженное снижение концентрации иммуноглобулинов А, М, G, ЦИК и антинуклеарных антител (АНА) по сравнению с показателями больных 1-й группы.

Следует отметить, что на фоне приема вобэнзима как у больных РА, так и СКВ наряду с положительной динамикой лабораторных показателей отмечался более быстрый регресс и системных проявлений заболеваний, в частности, васкули-та, периферической лимфоаденопатии, а также восстановление показателей периферической крови. Положительный эффект терапии наблюдался при резистентных формах РА, что проявлялось в подавлении ревматоидного синовита. Кроме того, у 15 (34,1%) больных РА 2-й группы назначение вобэнзима позволило снизить дозу принимаемых нестероидных противовоспалительных препаратов на 50-75% уже в первые

2 недели терапии, а у 6 (27,3%) больных СКВ уменьшить поддерживающую дозу преднизолона до 5-7,5 мг в сутки, что существенно снижало риск развития побочных эффектов.

ВЛИЯНИЕ ТИМАЛИНА И ВИЛОНА НА СОСТОЯНИЕ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ НЕСПЕЦИФИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЛЁГКИХ У ВЗРОСЛЫХ И ДЕТЕЙ

Лиханов И.Д., Кузник Б.И., Даренская С.Д., Цыбенова Б.Ц., Будажапова Т.И.

Читинская государственная медицинская академия, Россия

Наши наблюдения проведены на 112 взрослых и 189 детях, больных хроническими неспецифическими заболеваниями лёгких. Среди диагнозов преобладали больные с обострениями хронической пневмонии, абсцессами лёгких, гнойным плевритом и бронхоэктатической болезнью. Все больные взрослые и дети были разделены на 3 группы: 1) Контрольная, получавшая традиционное лечение; 2) Больные, наряду с традиционным лечением получавшие тималин по 10 мг в сутки ежедневно на протяжении от 5 до 10 дней; 3) Больные, в комплексную терапию которых был включен тимомиметик ви-лон (Lys-Glu) по 10 мкг ежедневно в течение 5-10 дней. У всех больных до и после лечения определялись основные показатели клеточного и гуморального иммунитета, свёртываемости крови и фибринолиза. Полученные результаты сравни-

вались с показателями, обнаруженными у здоровых взрослых и детей приблизительно одного и того же возраста.

Проведенные наблюдения показали, что у большинства больных имеется выраженный лейкоцитоз с нейтрофильным сдвигом влево. Число лимфоцитов оставалось в пределах нормы и у отдельных больных, особенно у детей, было снижено. В то же время количество Т-лимфоцитов (CD3 ), Т-хелперов (CD4 ) и В-лимфоцитов (CD22 ) оказалось значительно сниженным, тогда как содержание ЦТЛ (CD8 ) сохранялось в пределах нормы или было даже увеличено. Иммунорегуля-торный индекс у всех больных был резко уменьшен.

У подавляющего числа больных отмечалось увеличение концентрации всех основных классов иммуноглобулинов.

Одновременно с нарушениями в иммунитете отмечалось развитие гиперкоагуляции, уменьшение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ), протромби-нового и тромбинового времени, резкое увеличение концентрации фибриногена и продуктов деградации фибрина (ПДФ), снижение уровня антитромбина III (A-III), торможение тотального эуглобулинового и хагеманзависимого фибринолиза. У подавляющего числа взрослых (от 80 до 100%) в зависимости от характера заболевания выявлялось наличие положитель-ныых реакций на этанол и протаминсульфат. Более чем у 1/3 больных детей выявлялись растворимые фибринмономерные комплексы (РФМК).

Представленные данные свидетельствуют о наличии у исследуемых больных не только вторичного иммунодефицита, по и диссеминированного внутрисосудистого свёртывания (ДВС) крови.

В процессе лечения у всех больных как контрольной, так и опытной групп, произошли сдвиги в иммунограмме, однако у получавших тималин или вилон они оказались более существенными.

У больных, находящихся на традиционном лечении, число лейкоцитов уменьшалось, тогда как количество лимфоцитов проявляло слабую тенденцию к повышению. Число CD3*, CD4\ CD8+ и CD22* практически не изменялось. Со стороны иммуноглобулинов в процессе лечения каких-либо существенных изменений также не произошло. Хотя у таких больных проявления ДВС-синдрома уменьшились, однако окончательно не исчезли. У многих больных (от 25 до 35%) сохранялись положительные реакции на этанол и протаминсульфат, оставались повышенными уровень фибриногена и концентрация ПДФ (у детей - РФМК) и сниженной активность A-III.

В группах, где применялся тималин или вилон, резко возросло число лимфоцитов, более чем в 1,5 раза увеличилось количество CD3+, нормализовалось содержание CD4+, значительно увеличилось, хотя и не достигло нормы, количество CD22* и повысилась концентрация IgM. Иммунорегулятор-ный коэффициент приблизился или достиг нормы.

Практически у всех больных, леченных тималином или вилоном, исчезли явления ДВС, нормализовалось время коагуляции крови и плазмы, а также скорость растворения фибринового сгустка.

Предпринятое лечение с использованием иммуномодуляторов помогло значительно уменьшить летальность (у взрослых более чем в 2 раза) и резко сократить сроки пребывания больных в стационаре и на листке нетрудоспособности.

Представленные данные свидетельствуют о целесообразности применения иммуномодулирующих тимомиме-тиков - тималина и вилона - в комплексной терапии больных с хроническими неспецифическими заболеваниями лёгких.

МЕСТНАЯ ТЕРАПИЯ БОЛЬНЫХ С ВИРУСНЫМИ ДЕРМАТОЗАМИ ПРЕПАРАТАМИ ИММУНОМОДУЛЯТОРА СПЛЕНОПИДА-М

Макаров А.А.. Колпаков О.Ф.

Научно-исследовательский инст итут трансплантологии и искусственных органов М3 РФ, г. Москва, ГКБ №52, г. Москва

Лечение дерматозов, обусловленных рецидивирующей герпетической инфекцией, представляет определённые трудности и не всегда эффективно по ряду причин. Это и отсутствие чёткого понимания механизма инфекционного процесса, неблагоприятная экологическая среда, состояние иммуно-депрессии и др.

Наряду с системным применением химиопрепаратов и иммуномоделирующих средств, широко используются лекарственные формы для местного применения, которые обладают противовирусным действием.

Целью исследования было изучение возможности использования для местного лечения вирусных дерматозов препаратов спленопид и спленопид-М, созданных нами в 1990 году и апробированных в клинике. Спленопид содержит биологически активные вещества селезёнки, широкий спектр природных цитокинов, обладает иммуномодулирующим, актибак-териальным действием, способен стимулировать клетки фагоцитарной системы. Препарат успешно использовался рядом авторов для местного лечения инфицированных ран, активно влияя на местный иммунитет.

Препарат спленопид вводился в нейтральный крем и в виде мази сплемакин (условное название) применялся для лечения герпетических поражений кожи у 18 больных путём двухразового ежедневного нанесения мази на пораженные участки кожи до получения клинического эффекта. У 82% больных наблюдалось обратное развитие герпетического процесса, которое проходило в 2-3 раза быстрее, чем при традиционном лечении. Количество ранних рецидивов заболевания снизилось на 60,4%.

Наблюдавшееся улучшение герпетических поражений кожи при местном применении спленопида, очевидно, можно связать в первую очередь с действием имеющихся в препарате цитокинов на местный иммунитет, активным влиянием на фагоцитарное звено.

Результаты исследовании свидетельствуют о перспективности использования препаратов спленопида для терапии вирусных дерматозов.

ГУМОРАЛЬНЫЕ ФАКТОРЫ ИММУНИТЕТА РОТОВОЙ ПОЛОСТИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ПАРАДОНТИТОМ ПРИ ЛЕЧЕНИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЛЕЙКОЦИТАРНОГО ИНТЕРФЕРОНА И МИЕЛОПИДА

Медведев Ю.А.. Булгакова А.И., Алсынбаев М.М., Валеев И.В., Азнабаева Л.Ф.

Башкирский государственный медицинский университет, ГУП "Иммунопрепарат ", г. Уфа, Башкортостан, Россия

У больных хроническим парадонтитом (ХП) разной степени тяжести в процессе лечения традиционными методами и с использованием лейкоцитарного интерферона (ИФ) и ми-елопида (МП) исследована активность ряда гуморальных факторов иммунитета ротовой полости. ИФ в виде свечевой фор-

мы препарата назначали сублингвально

- с помощью иммуноферментных гсст-систем.

Лечение ХП с использованием ИФ и МП вызывало выраженные изменения состава местных иммуноглобулинов в секрете ротовой полости. Применение ИФ при заболевании любой степени тяжести оказывало нормализующее (снижение до нормального уровня) влияние на содержание и вызывало достоверное увеличение содержания секреторных иммуноглобулинов (8^А) после СХП и ТХП. В отличии от ИФ, МП вызывал достоверное снижение содержаня только при СХП и ТХП и достоверно стимулировал накопление в слюне й^А - при ЛХП.

При оценке цитокинового статуса ротовой полости показано, что в результате лечения в слюне больных всех степеней тяжести отмечено уменьшение содержания резко повышающегося при заболевании ведущего провоспалительного цитокина ТЫР-а. В условиях ЛХП ИФ (но не МП) обеспечивает его достоверно более низкий уровень в сравнении с традиционным лечением. Также при ЛХП назначение ИФ усиливает увеличение содержания в слюне ИЛ -1 (3 (помимо участия в острофазовой реакции активно поддерживает регене-ративно-пролиферативные процессы), а МП обусловливает снижение его содержания до уровня нормы. Включение в лечебные мероприятия назначения ИФ и МП сопровождается резким (до 15-20 раз) снижением секреции другого ведущего провоспалительного цитокина - ИФ-у (подобное снижение при лечении больных с ЛХП и СХП отмечается только при использовании ИФ и МП, а при ТХП- в ходе традиционного лечения, при использовании ИФ, и достоверно более глубокое - при применении МП). По окончании лечения у больных ЛХП и СХП отмечается достоверное возрастание содержания ведущего противовоспалительного цитокина -1Ь-4, а при ТХП, протекающем на фоне его повышенного уровня - снижение. ИФ и МП, не влияя на величину показателей концентрации в слюне 1Ь-4 при лечении ЛХП и СХП, при ТХП обеспечивали сохранение повышенного уровня этого цитокина в сравнении с таковым при лечении традиционными методами.

Можно заключить, что использование в терапии ХП как ИФ, так и, в меньшей степени, МП, в сравнении с традиционными методами лечения обеспечивает излечение при сниженных показателях остаточных явлений воспалительного процесса.

БЕТАЛЕЙКИН - КАК ПРОТЕКТОР ГЕМ0П0ЭЗА ПРИ ИНТЕНСИВНОЙ ПОЛИХИМИОТЕРАПИИ

Михайлова Н.Б.. Кетлинский С.А.*, Симбирцев А.С.*, Зарицкий А.Ю.,

Зубаровская Л.С., Ганапиев Б.А., Пугачев А.А., Сологуб Г.Н., Афанасьев Б.В.

Центр Гематологии, Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова, *ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов М3 РФ, Санкт-Петербург, Россия

Цель. Определить эффективность п/к введения 1Ь-1 как протектора гемопоэза.

Методы. Беталсйкин (БЛ) (человеческий рекомбинантный 1Ь-1) вводился подкожно в дозе 8-10 веса больного за

24 часа до начала полихимиотерапии (ПХТ) и в течении всего времени ПХТ. 1 группа больных (9 больных с лимфомами, 1 больной с герминогенной опухолью) получила интенсивную ПХТ фехаВЕАМ, ЭНАР, РЕ1), 2 группу составили 5 пациентов с высокодозной (ВД) ПХТ под защитой стволовых гемо-поэтических клеток. Контрольные группы 1а и 2а получили аналогичную ПХТ без БЛ. 3 группу составили 3 пациента с длительной аплазией костного мозга вследствии неприжив-ления аутотрансплантата (1-М08, 2-лимфомы). Последняя группа больных получала БЛ совместно с Г-КСФ.

Результаты. Период цитопении (лейкоциты <1x10 /1, тромбоциты<20х10 /1) был короче в группе 1 по сравнению с контрольной группой 1а и составил 1.3±1.4 ул. 5.5±1.4 дней для лейкоцитов (р=0.0001) и 3.1±2.4 у.б. 5.4±0.9 дней для тромбоцитов (р=0.01). В группе 2 не было выявлено существенных различий в скорости восстановления и выраженности цитопении по сравнению с контрольной группой. В 3 группе на фоне постоянного ежедневного введения цитокинов в течении более 3 месяцев удавалось поддерживать уровень ней-трофилов >0.5x10/1, однако зависимость от переливаний тромбоцитов сохранялась. Тяжелых осложнений, связанных с введением беталейкина не было. У большинства больных имелась местная гиперемия в месте инъекции препаратав. У 2/18 больных наблюдалась папулезная сыпь неясного генеза.

Заключение. БЛ в дозе 8-10г^/1^* веса больного хорошо переносится и обладает протекторным действием на гемопо-эз у больных с немиелоаблативными режимами ПХТ. БЛ в сочетании с Г-КСФ восстанавливает и эффективно поддерживает гранулопоэз у больных с длительной гипоплазией костного мозга, вызванной предшествующей интенсивной ПХТ.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИММУНОКОРРЕКЦИИ БЕТАЛЕЙКИНОМ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ПАПИЛЛОМАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

Москалев А.В.. Сбойчаков В.Б., Осипова О.Н., Ботиева В.И.

Военно-медицинская академия,

Балтийская клиническая центральная бассейновая больница, Санкт-Петербург, Россия

Введение. В настоящее время существует выраженная тенденция увеличения количества больных с папилломави-русной инфекцией (ПВИ). Персистирование ПВИ связывают с генетическими изменениями, приводящими к нейтрализации опухолевых супрессорных генов, снижении местного иммунитета, уменьшении количества и нарушении функции клеток Лангерганса. В результате такой иммуносупрессии существующие методы лечения не приводят к безрецидивно-му течению и нуждаются в иммунокоррекции.

Материалы и методы. Нами были обследованы 38 больных ПВИ: 22 мужчин и 16 женщин, с давностью заболевания от трех месяцев до трех лет, с ограниченными формами инфекции. 20 из них наряду с комплексной терапией вводили подкожно по разработанной нами методике беталейкин. 18 больных получали только комплексную терапию.

У обследуемых изучали состояние цитокиновых профилей (1ИР, 1Ь-8, Т№а) в супернатантах с помощью диагностических тест-систем ООО “Протеиновый Контур”. Уровни сывороточных иммуноглобулинов А, М, в определяли по МапсЫш.

Результаты. У больных с ПВИ эндогенная продукция провоспалительных цитокинов (1Ь-1р, 11-8, ТЫРа) была существенно снижена (р<0,001), что характеризует обследуемых

как больных с вторичными иммунодефицитными состояниями. Продукция сывороточных иммуноглобулинов также была снижена. Особенно была депрессирована продукция IgG -7,79±0,08 и 14,2±1,4 г/л в контрольной группе (р<0,001) и IgA

- 0,51±0,06 и 2,9±0,05 г/л в контрольной группе (р<0,001). Уровни IgM достоверно не различались, но у больных с ПВИ имели тенденцию к снижению.

Применение беталейкина в комплексной терапии больных с ПВИ значительно ускоряло эпителизацию мест деструкции на 4,5±0,6 сут., в сравнении с больными, получавшими только комплексную терапию. Уровни провоспалительных цитокинов в данной группе восстанавливались также быстрее и достоверно не отличались от показателей контрольной группы. Уровни IgG были практически такими же как в контрольной группе, a IgA оставались достоверно сниженными у больных получавших только комплексную терапию.

При наблюдении в течение 1 года рецидив у больных, в комплексном лечении которых применялся беталейкин, была выявлена у двух человек (10%), а в группе больных, находящихся только на комплексном лечении у 7 человек (38,9%).

Заключение. Клиническое течение ПВИ связано с выраженной иммуносупрессией. Различные способы хирургического лечения не предотвращают развитие рецидива заболевания. Применение в комплексной терапии беталейкина восстанавливает функциональную активность иммунокомпетентных клеток и существенно препятствует развитию рецидива заболевания. В периоде динамического наблюдения целесообразно через 4-5 месяцев проводить иммуномодулирующую терапию бетапейкином.

СРАВНЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ВНУТРИВЕННЫХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ С РАЗЛИЧНЫМИ ЗНАЧЕНИЯМИ PH

Мостовская Е.В.. Исрафилов А.Г., Кудашева Г.Б., Алсынбаев М.М., Кулагин В.Ф., Хабибуллина В.В.

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.И .И.Мечникова,

Уфа, Россия

К основным показателям качества и безопасности применения внутривенных иммуноглобулинов (ВВИГ) относятся молекулярные параметры (МП) и антикомплементар-ная активность (AKA). АКА ВВИГ определялась согласно Европейской Фармакопее (1995), МП методом гель-хроматографии на Ультрагеле АкА34. Препараты ВВИГ оценивались в тестах на перемешивание (аналог условий транспортировки) - 80 горизонтальных осцилляций в мин. в течение 2 ч и в тесте на ускоренное старение (аналог условий хранения в течение 2 лет) - при 37°С в течение 4 недель. Титры антицитомегаловирусных (антиЦМВ) антител (АТ) изучали иммуноферментной тест-системой Биосервис (ВФС 42-2787-96).

По данным представленным в таблице видно, что среди только что полученных препаратов (исходные) ВВИГ агрегаты отсутствовали и содержание димеров было менее 5% при pH ВВИГ от 4 до 5,5. Однако, в испытательных тестах на перемешивание и термостабиьность оптимальным оказался препарат с pH 5,5 - минимальное содержание агрегатов и фрагментов. Тест на ускоренное старение также показал максимальное содержание мономерной фракции при значении pH 5,5. Интересно, что нестабильными при хранении оказались препараты с крайними значениями pH: при pH 4 более 20% димеров и при pH 7 более 10%.

При применении технологии pH 4,0-4,4 ультрафильтрации центрифугата III по Кону все только что изготовленные препа-

Табл. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ПАРАМЕТРЫ ВНУТРИВЕННЫХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ С РАЗЛИЧНЫМИ ЗНАЧЕНИЯМИ PH

Исходные После теста на перемешивание После теста на термостатирование

pH А Д М Ф А Д М Ф А Д М Ф

4 0 2,52 97,48 0 0,32 3,89 94,36 1,42 0 21,52 74,35 4,13

5 0 4,71 95,29 0 0,25 3,92 93,96 1,87 1,9 5,72 88,61 3,77

5,5 0 4,87 95,13 0 0,17 5,62 94,04 0,17 0,47 3,91 93,52 2,1

6,2 0,56 6,52 92,92 0 0,29 8,16 91,33 0,22 1,67 7,14 91,19 0

7 0,45 7,66 91,89 0 0,42 8,04 91,21 0,33 1,23 11,13 87,64 0

Примечание: А - агрегаты, Д - димеры, М - мономеры, Ф - фрагменты

раты ВВИГ с pH от 4 до 7 проходили по тесту на АКА согласно Европейской Фармакопее, однако, наилучшими были ВВИГ с pH 4 и 5,5 - АКА близка к нулю. Тест на термостатирование показал, что препарат с pH 7 стал обладать значительной АКА

- более 2 СН50/мг белка при норме не более 1 СН50/мг.

Исследуемые препараты ВВИГ были проанализированы на сохранность функциональной способности антител, в частности титров антиЦМВ АТ. Наибольшей стабильностью титров антиЦМВ АТ обладал препарат с pH 5,5. При других значениях pH происходило значительное снижение титров (на 38,5-63%) после термостатирования при 37°С в течение 4 недель. Интересно, что при pH 4 в тесте на перемешивание наблюдалось значительное (на 42%) повышение титра антиЦМВ АТ, а при термостатировании - еще более существенное (на 80%), которое можно объяснить при термостатировании изменением нативности молекул ВВИГ, а возможно и денатурацией. Доказательством этому является повышение титра АТ к контрольному антигену (фибробластам эмбриона человека) - более чем в 4 раза, т.е. наблюдается появление антител новой специфичности.

Таким образом, сравнение препаратов с различным значением pH показало преимущество внутривенного иммуноглобулина формулированного при pH 5,5 по основным показателям качества - антикомплементарной активности, молекулярным параметрам и титрам антицитомегаловирусных антител. Препарат с pH 5,5 также оказался наиболее стабильным в испытательных тестах на перемешивание и термостабильность.

ОЦЕНКА КЛИНИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИММУНОМОДУЛЯТОРА ВИЛОНА В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ ГНОЙНОЙ ХИРУРГИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ

Намоконов Е.В.

Читинская государственная медицинская академия, Чита, Россия

В последние годы все больше исследований подтверждают ключевую роль иммунной системы в развитии многих патологических процессов, в том числе и инфекционного гене-за. Профилактика и лечение иммунопатологических состояний, сопровождающих гнойно-воспалительные процессы в хирургии, являются важными направлениями клинической медицины.

Целью работы явилась оценка клинической эффективности синтетического пептида вилочковой железы"Вилона" в комплексной терапии местной гнойной хирургической инфекции.

Под наблюдением находилось 40 больных с различными гнойно-воспалительными осложнениями до, и после прове-

дения иммунотерапии. В число обследованных вошло 15 человек с нагноением послеоперационных ран, 25 - с нагноением мягких тканей и остеомиелитом после открытых переломов. После вскрытия и дренирования гнойника в комплексной терапии назначался внутримышечно вилонв дозе 10 мкг один раз в сутки, в течение пяти дней. Контролем служили 20 больных с аналогичной патологией, но не получавших в комплексе лечения цитомединов. Кровь для исследования брали до вскрытия гнойника, на 6- е сутки и перед выпиской.

Для оценки иммунного статуса проводили определение сывороточных иммуноглобулинов классов IgM, IgA, IgG методом рокетного иммуннофореза, анализ субпопуляционного состава лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD 19)) иммунофлюо-ресцентным методом.

Установлено, что при использовании в комплексной терапии вилона уже к 6 суткам с момента вскрытия и дренирования гнойников, содержание лейкоцитов снижалось и приближалось к норме. При этом увеличивалось CD3, CD 19 и приходило к норме соотношение CD4/CD8. Содержание иммуноглобулинов у больных в данной группе, каким либо существенным колебаниями не подвергалось, и находились в пределах физиологической нормы.

Таким образом, применение вилона при указанной патологии ликвидирует явления вторичной иммунной недостаточности, что приводит к уменьшению процента осложнений и значительному сокращению сроков пребывания больных в стационаре.

ИММУНОКОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ АНТРО-ПИЛОРО-ДУОДЕНАЛЬНОЙ МОТОРИКИ У БОЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕННОЙ СТЕНОЗОМ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ

Нестерова И.В., Оноприев В.В.,

Роменская В.А.. Рожкова Г.Г.

Российский центр функциональной хирургической гастроэнтерологии, Краснодар, УНЦ и ОБП Медицинского Центра УД Президента РФ, Москва, Россия

В настоящее время продолжается поиск способов коррекции двигательных нарушений гастродуоденального комплекса при язвенной болезни (ЯБ). Известно, что ряд цитокинов (TNF-a, IFN-a, 1L-1, IL-6, IL-8) участвуют в регуляции двигательных нарушений гладкой мускулатуры.

Исходя из этого, мы предположили, что отечественный препарат лейкинферон (ЛФ), представляющий собой комплекс цитокинов первой фазы иммунного ответа (IFN-a, 1L-1, IL-6, IL-8, 1L-12, TNF-a, МИФ, ЛИФ) в их естественном со-

отношении, может оказывать влияние на гиперактивность ДПК индуцируемую воспалительно-эрозивными изменениями при обострении язвенной болезни.

Целью данной работы явилось - изучить эффект “цитоки-нового коктейля” - лейкинферона на моторную функцию двенадцатиперстной кишки в острой фармакологической пробе.

Материалы и методы. Обследовано 12 пациентов обоего пола в возрасте от 21 до 59 лет с язвенной болезнью ДПК осложненной стенозом. Диагноз ЯБ устанавливали на основании клинико-эндоскопического исследования. При ФГДС выявлен в 100% случаев рубцово-язвенный стеноз луковицы ДПК III- IV степени, верифицированный ренгенологически. Проводилось манометрическое исследование моторики ант-ропилородуоденальной зоны с помощью комплекса “Полиграф” (Швеция). Продолжительность наблюдения составляла не менее 7 часов, регистрировали не менее 2 циклов периодической моторной активности, затем внутримышечно вводили 2,0 мл лейкинферона и исследование продолжалось 3 часа. Данные описывались М±5; т, достоверность различия проверялась 1-тестом.

Результаты. У пациентов обнаружено снижение антро-пилородуоденальной координации до 73,4±7,0% и наличие кластерных сокращений средней продолжительностью 25,7±6,9 с., и средней площадью 623±131,1мм.рт.ст/с, с амплитудой 71 ±8,7 мм.рт.ст. После введения ЛФ нами отмечено уменьшение продолжительности, амплитуды и средней площади спастических сокращений, увеличение координации и снижение ретроградных волн почти в 2 раза.

Заключение. Впервые установленное выраженное влияние лейкинферона на анормальную фазовую активность стенки кишки, связанную с избытком сократительной и недостатком релаксационной ее способности, что, по-видимому, связано с действием цитокинов первой фазы иммунного ответа. Обосновано проведение дальнейших исследований по выявлению механизмов действия лейкинферона на гладкомышечные клетки при различных патологиях пищеварительной тракта.

СПОСОБНОСТЬ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ К ПРОДУКЦИИ НЕКОТОРЫХ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ У БОЛЬНЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ СПЛЕНЭКТОМИЮ

Павлова И.Е.. Бубнова Л.Н., Каргин В.Д.

Российский НИИ гематологии и трансфузиологии, Санкт-Петербург, Россия

Ранее нами было показано, что спленэктомия, выполненная по жизненным показаниям в связи с травмой, является иммунокомпроментирующей операцией и приводит к существенным нарушениям числа целого ряда субпопуляций иммунокомпетентных клеток. При этом у пациентов, перенесших посттравматическую спленэктомию, как правило, не наблюдается клинических проявлений клеточного иммунодефицита. Известно, что эффекторные и регуляторные функции Т-лимфоцитов опосредованы определенными секрети-руемыми молекулами цитокинов, поэтому представляет су-

щественный интерес изучение секреторной активности клеток иммунной системы у пациентов, перенесших указанное оперативное вмешательство.

Цель нашей работы: изучить способность мононуклеа-ров периферической крови к спонтанной и индуцированной продукции провоспалительных цитокинов (ТЫР-ос, №N-7,1Ь-1(3,1Ь-6).

Материалы и методы: нами обследован 21 пациент в возрасте от 12 до 40 лет через 1-9 лет после спленэктомии, выполненной в связи с травмой (1-ая гр.). Все пациенты на момент обследования жалоб не предъявляли, симптомов острого или хронического воспалительного процесса у них не выявлено. Группу сравнения составили 15 доноров крови (2-ая гр.). Для оценки способности мононуклеаров периферической крови к продукции провоспалительных цитокинов проводили определение концентрации ТЫБ-а, 1РМ-у, Ш-1(3,Ш-6 с помощью стандартного метода твердофазного иммунофер-ментного анализа (тест-системы ООО “Протеиновый контур”, Санкт-Петербург) в супернатантах мононуклеарных клеток периферической крови после их 24-часового культивирования при 37°С с 5% С02. В качестве индукторов использовали: для ТОТ-а и 1Ь-1 (3 раствор ЛПС содержащего препарата (пи-рогенал), в дозе 0,1 мкг на 2x105 клеток; для 1Р1Ч-у и 1Ь-6 использовали фитогемагглютинин - 10 мкг на 2х105 клеток. Полученные результаты представлены в таблице.

У больных, перенесших посттравматическую спленэктомию, значительно повышена спонтанная способность мононуклеаров периферической крови к синтезу изученных провоспалительных цитокинов: ТЫБ-а , №N-7, 1Ь-1(3, 1Ь-6. Наиболее значительное отклонение от показателей контрольной группы установлено при исследовании спонтанного синтеза 1Ь-6. При этом стимулированная продукция снижена (ТЫР-а, [БЫ-у) или не отличается от показателей контрольной группы (1Ь-1(3,1Ь-6). Повышение спонтанной продукции как цитокинов-продуктов ТЫ (ТОТ-а, 1РЫ-у, 1Ь-1Р), так и цитокинов - продуктов ТЬ2 (Ш-6) может приводить к стимуляции эффскторных функций и макрофагов, и В-лимфоцитов, что можно расценивать как компенсаторную реакцию на развитие клеточного дефицита. В тоже время такие изменения ци-токинового звена иммунитета создают предпосылки для формирования аутоиммунных нарушений.

ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ РОНКОЛЕЙКИНА У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ В

Панина А.А.. Антонов Ю.В., Недогода В.В.

Консультативно-диагностическая поликлиника аллергологии и клинической иммунологии,

Волгоград, Россия

Не представляет сомнения актуальность внедрения в клиническую практику новых эффективных методов лечения хронических вирусных гепатитов. Широко используемые на настоящий момент времени методы обладают рядом недостатков, а именно, они дороги, достаточно плохо переносятся больными и не всегда эффективны. Кроме того, практически ни

Группы Т^-сс пкг/мл га-у пкг/мл 1-1(3 пкг/мл И-6 пкг/мл

сравнения Спонт. ЛПС-инд. Спонт. ФГА-инд. Спонт. ЛПС-инд. Спонт. ФГА-инд.

1-ая гр. 177,5±35,0* 328,1 ±85,0* 177,2+25,0* 224,8+98,0* 209,7+69,0* 364,5+77,4 1231,4±204,8** 1495,7±78,7

2-ая гр. 43,6+23,0 1099,5+175,1 41,8±16,7 1095,3+75,8 32,3±14,1 764,5+104,9 51,0+15,5 1063,6±68,8

Где: *-р<0,05, ** - р<0,01.

один из применяемых методов лечения не приводит к элиминации вируса.

Целью настоящей работы явилось изучение влияния рон-колейкина (PJ1) на специфические и неспецифические параметры иммунитета больных хроническим вирусным гепатитом В. В процессе исследования предполагалось оценить состояние иммунного статуса и эффективность применения РЛ у больных хроническим вирусным гепатитом.

Группа больных ХВГ В, находившихся под наблюдением, состояла из 10 пациентов в возрасте от 17 до 48 лет ( средний возраст составил 28 лет), трёх мужчин, семерых женщин. У всех больных методом ПЦР было подтверждено наличие в крови ДНК вируса гепатита В. Перед началом лечения был исследован иммунный статус пациентов (CD3, CD4, CD8, CD4/CD8, CD22, CD 16, HLA-DR in CD3, ЦИК, ФЧ, ФП, НСТ спонт., НСТинд., С1-С1). Наиболее часто выявлялось уменьшение количества В-лимфоцитов, количества активированных Т-лимфоцитов (в 6 случаях), снижение показателя завершённости фагоцитоза и стимулированной активности фагоцитов в НСТ-тесте (в 9 случаях) и изменение иммунорегуляторного индекса (он был увеличен у 5 больных, уменьшен - у 4).

Кроме того, у большинства больных обнаруживались изменения в рутинных печёночных пробах (увеличение АлАт, тимоловой пробы), была повышена активность некоторых печёночноспецифических ферментов (уроканиназы, Ь-сериндегидратазы,Ь-треониндегидратазы) и ферментов системы перекисного окисления липидов (супероксиддисмута-зы, каталазы, малонового диальдегида).

Курс лечения РЛ включал 15 подкожных иньекций, проводимых по схеме в амбулаторных условиях с интервалами 2-3 дня. Параметры иммунного статуса, ДНК ВГВ, печёночноспецифические ферменты исследовались перед началом лечения, после 7 иньекции и по окончании терапии.

После проведения 7 инъекций РЛ существенное улучшение иммунограммы, заключавшееся в нормализации показателей, отмечалось у 5 больных. У трёх из них регистрировалась элиминация вируса. У всех пациентов нормализовались уровни L-сериндегидратазы, L-треониндегидратазы.

По окончании терапии РЛ полная нормализация иммунного статуса отмечалась у 6 пациентов, частичная ( увеличение количества В-лимфоцитов, корректировка иммунорегуляторного индекса) - у трёх. У шести пациентов при неоднократном исследовании крови методом ПЦР ДНК вируса гепатита В не выявлялась. Следует подчеркнуть, что субъективное улучшение самочувствия в процессе лечения отмечали абсолютно все больные.

Таким образом, в процессе проведённого исследования была показана эффективность применения ронколейкина в терапии хронического вируенного гепатита В.

ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТА “ЦИТОВИР-3”

ДЛЯ КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ ИММУНИТЕТА ПРИ СИНДРОМЕ ХРОНИЧЕСКОЙ УСТАЛОСТИ И ИММУННОЙ ДИСФУНКЦИИ У ЛИКВИДАТОРОВ ПОСЛЕДСТВИЙ РАДИАЦИОННОЙ АВАРИИ

Петленко С.В.. Жекалов А.Н., Смирнов B.C., Богданова Е.Г., Парфилова Т.В.

Военно-медицинская академия, ГМБНПК “ЦИТОМЕД ", Санкт-Петербург, Россия

За три десятилетия изучения синдром хронической усталости и иммунной дисфункции (CFIDS) прошел все стадии эволюции от категорического отрицания до признания в ка-

честве самостоятельной нозологической формы. Установлено, что CFIDS имеет ряд симптомов, позволяющих верифицировать его, но в то же время он достаточно многолик и эта многоликость зависит от природы и интенсивности фаторов, вызывающих заболевание или определяющих клиническую форму его проявления.

Нами была предпринята попытка оценить соответствие регистрируемых у ликвидаторов психосоматических расстройств критериям CFIDS, а также оценить возможность применения препарата “Цитовир-3” для коррекции иммунологических нарушений.

Объектом исследования являлись лица, участвовавшие в ликвидации последствий аварии на ЧАЭС.

Методом изучения было амбулаторное обследование указанной категории лиц с использованием опросника для скрининговой диагностики синдрома хронической усталости и иммунной дисфункции, лабораторных и инструментальных методов, а также проведения медикаментозной коррекции выявленных нарушений.

Установлено, что у 84,2% обследованных в той или иной степени отмечается симптоматика, характерная для синдрома хронической усталости и иммунной дисфункции. В более чем 90% случаев психоневрологические проявления заболевания сочетались с соматической патологией сердечно-сосу-дистой системы и желудочно-кишечного тракта.

При лабораторном исследовании не было получено достаточно четких объективных иммунологических критериев, патогномоничных для CF1DS, за исключением аллергического компонента.

В комплексной терапии синдрома хронической усталости и иммунной дисфункции у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС достаточно эффективным оказалось применение препарата “Цитовир-3”, которое способствовало более быстрой нормализации (по сравнению с контрольной группой) психосоматических и иммунологических нарушений, а также купированию или значительному снижению аллергических проявлений.

ОЦЕНКА ПРОЛИФЕРАТИВНОГО ОТВЕТА Т-ЛИМФОЦИТОВ БОЛЬНЫХ ИДИОПАТИЧЕСКОЙ ТРОМБОЦИТОПЕНИЧЕСКОЙ ПУРПУРОЙ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ПРЕПАРАТОВ ВНУТРИВЕННОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА IN VITRO

Пешняк Ж.В., Цвирко Д.Г., Потапова С.М.

Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови, Минск, Республика Беларусь

Известно, что препараты внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ) эффективны в лечении многих аутоиммунных заболеваний, и в первую очередь при идиопатической тромбо-цитопенической пурпуре (ИТП).

Цель: дать сравнительную оценку действия in vitro отечественного препарата ВВИГ (производства Республиканской станции переливания крови и НИИ ГПК) в сравнении с коммерческими препаратами Venimmun (7S) и Gamma-Venin (5S) фирмы “Behring” (Германия) на пролиферативную активность Т-лимфоцитов больных ИТП и здоровых лиц.

Материалы и методы: обследовали 18 больных ИТП (из них 94%- женщины), находившихся на лечении в гематологическом отделении 9-ой ГКБ г.Минска. Средний возраст больных составил 41,2±4,9 лет. Больные были разделены на 2 группы: 1-я - в схему лечения включены глюкокортикостероиды (КС) (преднизолон в дозе от 60 до 100

мг/сутки) и 2-я - без КС. Контрольную группу составили здоровые доноры крови (п=15). Пролиферативную активность Т-лимфоцитов оценивали по способности к активации по классическому (МКАТ анти-СЭЗ в соотношении 1:300) и альтернативному путям (форбол-12-миристат-13-ацетат 20 нг/мл+аутоэритроциты). Учет проводили по включению 3Н-тимидина. Препараты ВВИГ вносили в культуры клеток в начале эксперимента в концентрации

2,5 мг/мл.

Результаты. В 1-ой группе больных ИТП (КС+) отмечался высокий уровень спонтанной пролиферации лимфоцитов (р<0,01) и низкий пролиферативный ответ Т-лимфоцитов по классическому пути активации по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Пролиферативная активность лимфоцитов больных не принимавших КС не отличалась от таковой у здоровых лиц.

Добавление в культуру лимфоцитов больных препаратов ВВИГ не оказывало влияния на спонтанную пролиферативную активность. У здоровых лиц только препарат Gamma-Venin (5S) вызывал снижение спонтанного пролиферативного ответа (р<0,05).

Отечественный и коммерческий (Venimmun (7S)) препараты ВВИГ, содержащие цельные молекулы иммуноглобулина оказывают супрессивное действие на пролиферативную активность лимфоцитов через классический путь активации. На лимфоцитах здоровых лиц этот супрессивный эффект выражен гораздо ярче, чем на лимфоцитах больных. Причем у больных, находящихся на лечении КС, препараты ВВИГ оказывают наиболее выраженную супрессию на пролиферативный ответ лимфоцитов. Коммерческий препарат Gamma- Venin (5S), содержащий F(ab')2 фрагменты молекулы иммуноглобулина, вызывает угнетение пролиферативного ответа по альтернативному пути активации только у здоровых лиц и не оказывает никакого влияния на активность лимфоцитов больных ИТП.

Выводы: отечественный препарат ВВИГ супрессирует пролиферативный ответ лимфоцитов больных ИТП и здоровых лиц через классический путь активации лимфоцитов. По силе и направленности действия отечественный препарат ВВИГ сходен с препаратом Venimmun (7S), содержащим цельную молекулу.

ТИМОДЕПРЕССИН - НОВЫЙ ИММУНОДЕПРЕССАНТ, ОБЛАДАЮЩИЙ ГЕМИНГИБИРУЮЩИМИ СВОЙСТВАМИ

Семина О.В., Семенец Т.Н., Абакушин Д.Н., Виноградова Ю.Е., Малютина Я.В.,

[Поверенный А.]УЦ Дейгин В.И.

Медицинский радиологический научный центр РАМН, Обнинск, Россия

Тимодепрессин (ТД) новый отечественный лекарственный препарат - синтетический дипептид состоящий из правовращающих аминокислотных остатков, в котором Тгр подсоединен к у-карбоксилу 01ц. Мы представляем результаты экспериментов по изучению биологических свойств данного препарата.

Исследовано действие ТД на клеточный иммунитет. Выявлена способность препарата по тесту спленомегалии ингибировать развитие хронической аутоиммунной РТПХ (на 60-90%). Учитывая полученные результаты, ТД был использован для предупреждения РТПХ при трансплантации аллоген-ного костного мозга летально облученным мышам. Развитие

реакции тестировали по изменению веса экспериментальных животных. О степени восстановления гемопоэза судили по числу лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови реципиентов на 45-ые сутки после трансплантации. Вес мышей, пролеченных ТД, оставался на исходном уровне, в то время как в контрольной группе имеет место его снижение. В экспериментальной группе количество лейкоцитов и лимфоцитов на 45-ые сутки после трансплантации практически не отличается от такового у интактных животных. У нелеченых мышей численность лейкоцитов почти в 3 раза ниже, чем у интактных, и, кроме того, наблюдается почти полное отсутствие лимфоцитов в периферической крови. Таким образом, применение ТД для лечения облученных мышей, получивших аллогенный костный мозг, приводит к торможению развития РТПХ и лучшему приживлению костномозгового трансплантата.

При исследовании влияния ТД на начальные этапы гемопоэза с помощью метода селезеночных колоний выявлено, что данный препарат вдвое уменьшает количество коммитирован-ных (КОЕ-С-8) клеток-предшественников. Следует подчеркнуть, что наблюдаемый эффект обратим и может быть полностью отменен дополнительным введением тимоцитов. Исходя из полученных данных, мы предположили, что действие ТД на предшественники опосредовано Т-лимфоцитами, входящими в состав гемопоэтического микроокружения и контролирующими процессы пролиферации. Действительно, с помощью метода “тимидинового самоубийства” установили, что ТД ингибирует пролиферацию КОЕ-С-8 в активно пролиферирующем костном мозге.

Обнаруженная способность ТД ингибировать пролиферацию предшественников была использована для защиты гемопоэза от повреждающего действия таких факторов как радиация, химиотерапевтические агенты или гипертермия. Установлено, что ТД, введенный мышам за 2 суток до облучения в дозе 4 Гр, способствует более интенсивному восстановлению популяции кроветворных клеток-предшественников. Выявлена способность ТД (при различных схемах применения) обеспечивать восстановление размеров популяций КОЕ-С-8 и КОЕ-С-12 в более ранние сроки после воздействия цитостатика Цигозара, и защищать эти клетки от действия гипертермии (42°С), увеличивая их выживаемость в 2 раза. При этом в отношении опухолевых клеток подобный эффект ТД отсутствовал (тимома ЕЬ-4, мышиный миелобластоз М1 и лейкоз Раушера). Выявлено, что ТД способен усиливать противоопухолевое и антиметастатическое действие облучения и цитос-татиков.

Применение ТД в клинике только начинается. Результаты клинических испытаний подтвердили данные экспериментальных исследований о действии препарата на самые ранние этапы гемопоэза, иммуногенеза и на активацию зрелых лимфоцитов. Получены весьма обнадеживающие результаты применения ТД в клинике при аутоиммунных цитопениях в качестве иммуносупрессора. ТД применялся у больных одноростковыми (аутоиммунная гемолитическая анемия, аутоиммунная тромбоцитопения), двух-и трехростковыми цитопениями с тяжелым рецидивирующим течением заболеваний. Положительные результаты получены также при лечении вторичных иммунных цитопений, развивающихся на фоне лимфатических и других гематологических опухолей. Преимуществом ТД следует считать отсутствие токсических и аллергических реакций на препарат, что подтверждает его безвредность, особенно по сравнению со стероидными гормонами, циклоспорином, цитостатическими иммунодепрессантами и колониестимулирующими факторами.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ НОВОГО ПЕПТИДНОГО СОЕДИНЕНИЯ “БЕСТИМ”

Симбирцев А.С.. Колобов А.А., Пигарева Н.В., Бокованов В.Е., Котов А.Ю., Калинина Н.М., Заболотных Н.В., Кауров О.А., Кетлинский С.А.

ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов М3 РФ, Санкт-Петербург, Россия

Изучение структурно-функциональной организации в ряду коротких пептидов с у-связью между аминокислотными остатками привело к обнаружению соединения, имевшего структуру y-D-Glu-L-Trp и получившего название “Бестим”. Бестим вызывает дифференцировку предшественников Т-лимфоцитов путем усиления экспрессии Thy-1 антигена костномозговыми предшественниками и L3T4 антигена тимоцитами. Бестим увеличивает пролиферативную активность лимфоцитов, усиливает продукцию IL-2 и экспрессию рецептора IL-2 лимфоцитами человека в культуре. Высокая удельная биологическая активность Бестима, по-видимому, определяется наличием у-пептидной связи и D аминокислоты, что приводит к появлению новых фармакологических свойств и обусловливает стабильность препарата к действию протеолитичес-ких ферментов. При введении in vivo Бестим дозозависимо усиливал иммунный ответ на растворимые и корпускулярные антигены, повышая титры IgG антител и анти-ген-специфическую продукцию лимфоцитами IL-2 и INF-у. но не IL-4. В то же время под влиянием Бестима происходило снижение титров специфических IgE антител. Использование Бестима на модели экспериментального туберкулезного процесса у мышей приводило к снижению летальности, уменьшению индекса поражения легких и высеваемости микобактерий. Механизм противотуберкулезного действия препарата связан с усилением продукции цитокинов Т-хелперов 1 типа, IL-2 и INF-y, на фоне снижения синтеза IL-4. Изменение баланса Т-хелперных клонов при введении Бестима, вероятно, может быть использовано для лечения инфекционных заболеваний и коррекции аллергических состояний. Клинические испытания Бестима для лечения больных туберкулезом легких показали, что препарат вызывает существенное улучшение течения заболевания, положительную рентгенологическую динамику и приводит к сокращению сроков специфической химиотерапии.

РОЛЬ ИММУНОРЕАБИЛИТИРУЮЩЕГО ПРЕПАРАТА ГЛУТОКСИМА В КУРСОВОМ ЛЕЧЕНИИ ПАЦИЕНТОВ С ГЕПАТИТОМ “С”

Сурнакова Н.Е., Шатихин А.И., Кунчулия Н.П.

Институт клинической фармакологии НЦ ЭГК ЛС М3 РФ, ММ А им. И. М. Сеченова, Москва, Россия

Глутоксим является иммунореабилитирующим препаратом нового поколения, механизм действия которого не вполне ясен. С одной стороны он обладает мультицитокиновой активностью в нормальных клетках, а с другой стороны, индуцирует р53-зависимый и р53-независимый пути апоптоза, причем только в нестандартных клетках. Его широко используют при различных патологиях вирусной природы. В задачу работы входило выяснить механизм положительного фарма-

кологического действия глутоксима на группу пациентов с гепатитом “С” используя панель моноклональных антител (МАТ). Проточной цитометрией были изучены 14 поверхностных рецепторов лимфоцитов: CD3, CD4, CD8, CD1 lb, CD 14, CD16, CD22, CD25, CD38, CD54, CD56, CD72, CD95 , HLA-DR. Пациенты получали внутримышечные инъекции по 1 мл 3% препарата 3 раза в неделю 5 месяцев. При оценке экспрессии поверхностных рецепторов лимфоцитов методом проточной цитометрии просчитывали около 5000 клеток. Регистрировали количество флуоресцирующих клеток при подсчете флуоресцирующих и нефлуоресцирующих клеток каждой субпопуляции.

Типичные изменения иммунитета были обнаружены у 42 летней больной Ф. После курсового лечения глутокси-мом экспрессия активационных рецепторов CD25, CD1 lb, CD54 и HLA-DR увеличилась на 100%. Экспрессия CD8 (супрессоры) , CD 16 и CD56 ( натуральные киллеры и агрессивные киллеры) возрасла в 5-20 раз. Динамика экспрессии поверхностного рецептора CD95 оказалась более сложной. До курсового лечения 16,7% клеток CD95 , через месяц-41,2%, через 2 месяца лечения -31%, через 3 месяца -18%, а через 5 месяцев лечения - всего 9%. Количество других рецепторов на поверхности лимфоцитов, практически, не изменилось.

Оценивая результаты проведеных исследований, можно заключить, что увеличение экспрессии активационных рецепторов лимфоцитов на 100% и CD95 рецептора опосредующего апоптоз до 41-31% в течение 1-2 месяцев терапией глутоксимом приводит к значительному уменьшению нестандартных клеток, к развитию костиммуляции и кооперативное™ иммунного ответа и к нормализации клинической ситуации. Расширенные иммунологические исследования с использованием панели МАТ позволяют выявлять возможный механизм положительго фармакологического действия глутоксима.

МИЕЛОПЕПТИДЫ В ИММУНОКОРРЕКЦИИ ПРИ РАНЕНИИ ГЛАЗА

Черешнева М.В.. Гаврилова Т.В., Гейн С.В., Шилов С.Ю., Шилов Ю.И., Черешнев В.А., Михайлова А.А.

Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь, Россия,

Екатеринбургский филиал Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН,

Екатеринбург, Россия,

Институт биорганической химии

им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН,

Москва, Россия

Ранения глаз - одна из причин не только снижения зрения, но и потери органа. Для коррекции иммунологических нарушений при ранении глаза перспективны миелопеп-тиды, в том числе миелопид. Однако иммунокорригирующее действие этих соединений при травме глаза изучено недостаточно. Цель работы - исследовать иммуномодулирующие эффекты миелопида, миелопептидов МП-1 и МП-

3 в экспериментально-биологической модели проникающего ранения глаза и проанализировать изменения иммунологических параметров при включении миелопида в комплексную терапию больных с проникающим и непроникающим ранением глаза.

Материалы и методы. Экспериментальное проникающее ранение правого глаза наносилось крысам-самцам популяции Wistar, которые были разделены на 4 группы: 1-я - без введе-

ния препаратов, 2-я - введение миелопида (5 инъекций через день по 0,06 мг/кг массы тела подкожно), 3-я - введение МП-

1 (по 0,01 мг на крысу внутрибрюшинно по той же схеме), 4-я - введение МП-3 (по 0,01 мг на крысу внутрибрюшинно по той же схеме). Оценку функций фагоцитирующих клеток периферической крови проводили до нанесения травмы, через 360 мин, 1, 3,5, 7 и 14 сут после нее. Помимо этого оценивали изменения функций фагоцитирующих клеток перитонеального смыва, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга и тимуса на 14-е сутки после ранения. Функциональную активность фагоцитов периферической крови оценивали в комплексе микротестов, который включал определение фагоцитарной активности лейкоцитов и кислородозависимой микроби-цидности в спектрофотометрическом варианте с нитросиним тетразолием (НСТ-тест). Клинико-иммунологическое обследование с использованием стандартного набора тестов проведено в динамике у 9 больных с ранением глаза в возрасте от 16 до 48 лет. Проникающее ранение глаза было у 6 пациентов: у 4-х - 3-й степени, у 2-х - 4-й степени тяжести по классификации П.П. Лебехова. Непроникающее ранение глаза было у 3 больных: у 2-х - осложненное язвой роговицы, у 1-го -абсцессом. Миелопид в составе комплексной терапии вводили всем больным внутримышечно ежедневно по 3-6 мг в течение 5 дней.

Основные результаты. Установлено, что при экспериментальном проникающем ранении глаза развивается глубокая депрессия микробицидного потенциала фагоцитирующих клеток в ранний посттравматический период по показателям НСТ-теста, несмотря на увеличение суммарного числа гранулоцитов и моноцитов крови, а также увеличение абсолютных и относительных показателей фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов. Введение миелопида приводило к снижению абсолютных показателей нейтро-фильного и моноцитарного фагоцитоза в ранний посттравматический период, а также отменяло увеличение относительных показателей эозинофильного фагоцитоза на 5-й день эксперимента. Несмотря на определенное сходство эффектов МП-1 и МП-3 с миелопидом, при введении МП-1 и МП-

3 отмены снижения абсолютных показателей нейгрофиль-ного фагоцитоза не наблюдалось, МП-1 приводил к более длительной активации нейтрофильного и моноцитарного фагоцитоза. Все препараты смягчали выраженность травматического угнетения микробицидного потенциала фагоцитирующих клеток. МП-3 повышал суммарное число грапу-лоцитов и мононуклеарных фагоцитов в брюшной полости. Введение МП-1 и МП-3 увеличивало показатели кислородозависимой микробицидности перитонеальных фагоцитов, однако изменений абсолютных показателей поглотительной активности этих клеток не выявлено. Миелопид, МП-1 и МП-

3 оказывали выраженный ингибирующий эффект на фагоцитарную активность перитонеальных тучных клеток. Установлено, что включение миелопида в комплексную терапию больных с проникающими ранениями глаза приводит к снижению выраженности депрессии относительных показателей клеточного иммунитета и повышению абсолютного числа различных субпопуляций Т-лимфоцитов, развитию лимфоцитоза, снижению избыточной активации фагоцитоза. У пациентов с непроникающим ранением глаза наряду со снижением степени депрессии клеточного и гуморального иммунитета отмечено повышение микробицидного потенциала фагоцитирующих клеток в НСТ-тесте.

Заключение. В целом полученные результаты указывают на перспективность дальнейших исследований иммуномодулирующих эффектов миелопептидов при ранении глаза.

ВЛИЯНИЕ АНТИГОМОТОКСИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ТРАУМЕЛЬ С, УБИХИНОН К0МП03ИТУМ И ОСТЕОХЕЛЬ НА ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ ИММУННОГО ГОМЕОСТАЗА ПРИ ТРАВМАТИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ Чеснокова И.Г.

Самарский государственный медицинский университет, Самара, Россия

Введение. Травматизм - это актуальная медико-социальная проблема века. По нашим представлениям травматическая болезнь представляет собой синдромокомплекс компенсатор-но-приспособительных и патологических реакций всех систем организма в ответ на травму различной этиологии, характеризующийся стадийностью и длительностью течения, определяющий ее исход и прогноз для жизни и трудоспособности (Г.П. Котельников, И.Г. Чеснокова, 1996). Изменения в иммунной системе, как одной из триггерных систем организма, носят длительный характер и требуют адекватной коррекции.

Цель и задачи - обосновать применение комплекса Трау-мель С, Убихинон композитум и Остеохель для коррекции иммунных нарушений у больных травматической болезнью.

Материалы и методы. Проведено комплексное лечение 100 человек, из них 55 больных травматической болезнью получали антигомотоксические (гомеопатические) препараты (Траумель С, Убихинон композитум, Остеохель), 45 пациентов использовали плацебо. Проводили оценку основных субъективных и объективных клинических симптомов. Иммунологические методы исследования включали определение субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с помощью моноклональных антител серии ЛТ (СЭЗ , С04 , С08 С072 , НЬА-ОЛ клетки), изучение чувствительности Т-лимфоцитов к теофиллину, исследование содержания иммуноглобулинов классов А, М, О в сыворотке крови, фагоцитарной функции, активности комплемента, циркулирующих иммунных комплексов. Комплексную оценку функционального состояния иммунологической системы осуществляли с помощью системного многофакторного анализа и математического моделирования (Б.А. Углов, М.В. Углова, 1987,1988, 1994).

Основные результаты. Основные субъективные и объективные показатели при использовании предложенной схемы восстанавливались раньше, чем в группе сравнения (плацебо): так, болевой синдром купировался к 8-м - 9-м суткам от начала лечения (при плацебо - к 21-м сут. только у части больных), проявления гематомы проходили на 7-е сутки (при плацебо - на 16-е сут.). Отек сохранялся не более 7-и суток (при плацебо - до 16-х сут.). Субфебрилитет имел место до 4-х суток (при плацебо - до 15-и - 20-и сут.). Повышение СОЭ выявлялось до 7-и суток (при плацебо - до 21-х сут.). Лейкоцитоз держался не более 7-и - 10-и суток (при плацебо - до 21 -х сут.). Признаки постгеморрагической анемии купировались к 7-м - 10-м суткам (при плацебо - к 18-м сут.). На втором этапе проведено математическое моделирование функционального состояния иммунной системы на фоне антигомотокси-ческой коррекции, сравнение ранних и отдаленных достоинств данной схемы, а также количества осложнений и возможные исходы травматической болезни в изучаемых группах. Получено, что изначальное отклонение интегрального показателя системы иммуногенеза в обеих группах, практически, одинаково (Хк=-0,2016±0,0032; Хв=-0,2400±0,0030 соответственно у больных, получавших антигомотоксическое лечение и плацебо), в дальнейшем при использовании гомеопатического комплекса обобщенный показатель к 14-м суткам увеличи-

вался в 3 раза (X =-0,0710±0,0022), а к одному месяцу болезни нормализовался, достигая значений здоровых доноров, и стабилизировался на этом уровне до окончания обследования (Хв=0,0020±0,0001 на 360-е сутки). Там, где назначали плацебо, преобладало отрицательное отклонение интегрального показателя во все сроки обследования. Особенно он снижался на 7-е сутки и составлял Хв=- 0,3715±0,0042. Характерным оказалось отсутствие нормализации иммунных реакций у этих больных даже к 1 году болезни и формирование патологических синдромов недостаточности системы в целом, так какХв=-0,0890±0,0037 на 180-е сутки, Хв=-0,1200±0,0032 на 360-е сутки. Количество инфекционных и воспалительных осложнений в сроки до 1 месяца с момента травмы в случае использования гомеопатических препаратов составило 9,3%, плацебо - 35,1%; в отдаленные сроки (6 месяцев-1 год) наличие гнойно-воспалительных осложнений было соответствен-ноу 3,1%, и 25% обследованных. Следовательно, предложенный антигомотоксический комплекс способствует уменьшению иммуновоспалительных осложнений в ранние сроки травматической болезни в 3,77 раза, в отдаленные - в 8 раз, аллергических реакций - в 3,6 раза.

Заключение. Представленные данные свидетельствуют о положительном терапевтическом эффекте антигомотоксичес-кого (гомеопатического) медикаментозного комплекса. Отмечена безопасность их использования, простота применения, хорошая переносимость, способность к нормализации иммунных показателей, уменьшению патологических симптомов и синдромов травматической болезни. Ценность их в интегральном действии на функциональную деятельность и резервный потенциал всего организма. Все это расширяет возможности патогенетической терапии больных травматической болезнью.

АМИРОН КАК ПРОИЗВОДНОЕ ИММУНОДЕПРЕССАНТА И ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО СРЕДСТВА ФЕНТИРИНА

Чикинева Н.А.. Голубева И.С., Яворская Н.П., Смирнова Л.И., Глибин Е.Н.1, Оборотова Н.А.

Российский Онкологический Научный Центр им. Н. Н. Блохина РАМН, Санкт-Петербургский Технологический Институт

В Российском Онкологическом научном центре постоянно проводится поиск новых активных соединений с различ-

ным механизмом действия. На основе оригинального отечественного препарата фентирина - хлорэтиламинного производного тиронина - создан новый препарат - амирон, представляющий собой ОЬ-ос-амино-р{ п-ди(2-хлорэтил)аминофе-нокси] фенил }-пропионовую кислоту. Фентирин создан в 50 -х годах 20 века, разрешен с 1977 г для широкого клинического применения при хроническом лимфолейкозе и лимфоре-тикулезе. Был также выявлен значительный иммуносупрес-сивный эффект соединения. Дальнейшие исследования фентирина выявили неоднородность его состава: оказалось, что препарат представляет смесь ВЬ-сс-амино-Р {п-ди(2-хлорэти-л)аминофенокси]фенил}-пропионовой кислоты дигидрохлорида и этилового эфира этого соединения в соотношениях 22-35% и 65-78% соответственно. Трудности промышленной стандартизации препарата привели к исключению фентирина из реестра противоопухолевых средств. В сотрудничестве с Санкт-Петербургским Технологическим университетом удалось усовершенствовать методы синтеза и на основе фентирина получить индивидуальные вещества: это продукт промежуточной стадии синтеза в виде основания фентирина, названный амироном, и его производные - гидрохлорид и этиловый эфир. Цель работы - сравнительное изучение противоопухолевой активности и токсического действия амирона и его производных.

Исследования противоопухолевой активности этих соединений проводили на мышах-самках гибридах первого поколения ВОР, с перевиваемой аденокарциномой молочной железы мыши Са-755 по принятой в РОНЦ РАМН методике. Препараты вводили рег ох в терапевтических дозах, определенных в ходе предыдущих опытов. Как видно из данных таблицы, амиронин и его производные по данным четырех измерений показали высокую противоопухолевую активность, адекватную фентирину. Проценты ТРО на 7-й и 17-й дни от начала опыта у всех трех соединения близки к таковым фентирина.

Преимущества при сопоставлении данных о продолжительности жизни и% ее увеличения выявлены у группы животных, леченных гидрохлоридом амирона (СПЖ - 35 дней и 47% - УПЖ). Наименьшую продолжительность жизни и% УПЖ показала группа животных, леченных амироном (26 дней и 10% соответственно). При сравнении изменения массы животных за время опыта выявилась тенденция к его увеличению как в группе, леченной фентирином, так и у животных, получавших производные амирона. Исключение составила

Табл. ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ ФЕНТИРИНА, АМИРОНА И ЕГО ПРОИЗВОДНЫХ НА МОДЕЛИ СА-755

Соединение Доза: мг/кг х число введений/ интервал

Дни после перевивки

7 10 14 17

амирон 200 х 5/24 95* 88 86 77 26 10 -3 186

эфир

амирона 120 х 5/24 96 87 81 65 30 27 +25 208

гидрохлорид

амирона 200 х 5/24 97 95 87 69 35 47 +33 230

фентирин 200 х 5/24 97 93 75 70 28 20 +9 285

контроль - 23 +5 144

достоверность к контролю, р<0,05

группа, у которой был применен амирон (потеря массы составила 3%). Максимальное увеличение массы животных за время опыта наблюдалась у животных, леченных гидрохлоридом амирона. Увеличение массы составило 33% при наибольшей массе опухоли (15 г) и продолжительности жизни (35 дней) из всех изученных групп животных.

Таким образом, по результатам проведенных исследований можно говорить о небольшом преимуществе гидрохлорида амирона по сравнению с самим амироном и вторым его производным - этиловым эфиром. Сопоставление данных о противоопухолевых свойствах и токсическом действии исследуемых веществ позволяет склониться к выбору гидрохлорида амирона для дальнейшей работы.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЛЕЙКИНФЕРОНА

Шабашова Н.В., Кузнецов В.П., Бабанина Н.В., Семакина Е.П., Фролова Е.В., Учеваткина А.Е., Банов С.М., Бабаянц А.А., Беляев Д.Л.

Медицинская Академия последипломного образования, Санкт-Петербург, Научно-производственное объединение “Интекор ", Городская клиническая больница №11,

Москва, Россия

Введение. В настоящее время в комплексное лечение больных с онкологическими заболеваниями все чаще включаются иммуномодуляторы. Это позволяет добиться снижения частоты послеоперационных осложнений и замедляет прогрессирование онкологического процесса. Однако при каждой конкретной локализации опухоли и в зависимости от стадии процесса необходимо разрабатывать различные курсы иммунотерапии.

Цель. Клинико-иммунологическое обоснование включение ЛФ в терапию больных РПК.

Задачи. Установить влияние ЛФ на клинические, гематологические и иммунологические показатели у больных РПК на различных этапах лечения.

Материалы и методы. Под наблюдением было 142 больных с диагнозом РПК, из которых 72 человека получали ЛФ по 1 ампуле (амп.) 3 раза в неделю в/м. Клеточный состав лимфоцитов крови исследовали с моноклональными антителами (“Сорбент”) в тесте непрямой иммунофлюоресценции. Спонтанную и индуцированную продукцию 1Ь-1 (3 и Т№-ос изучали иммуноферментным методом в коммерческих наборах (ТОО”Цитокин”СПбНИИОЧБ).Функциональную активность нейтрофилов учитывали в НСТ-тесте, а ЕК по их цито-патогенному действию на клетки-мишени К-562. Оценивали число гнойно-ссптических осложнений , длительность пребывания больных в стационаре, течение репаративных процессов в послеоперационный период и течение опухолевого процесса, и его метастазирование. Результаты исследований обработаны статистически по методу Стьюдента.

Результаты. У 46 больных оценку иммунного статуса проводили до иммунотерапии, в первые сутки и через 2 недели после операции. ЛФ приводил к достоверному повышению функциональной активности нейтрофилов, количества лейкоцитов, лимфоцитов, С04'\С08+,СВ20*клеток в ранний послеоперационный период, при достоверном снижении спонтанной продукции 1Ь-1(3 и ТЫР-сс. Через две недели после операции в группе с ЛФ достоверно выше было содержание лимфоцитов, С04*,С08*,С025*клеток. Значительно возросла

продукция 1Р!М-у и функциональная активность ЕК, но для нормализации этих показателей требовалось дальнейшее введение ЛФ. Ни в одном случае не возникло послеоперационных осложнений (в группе сравнения были у 25% больных), сокращался период интоксикации и количество койко-дней. 20 больных с послеоперационным рецидивом РПК получали комплексное лечение: дистанционная лучевая терапия и курсы химиотерапии (цисплатина, адриамицина, 5-Ри, кампо). Суммарная доза 70-80 Гр и 3-4 курса химиотерапии. Применение ЛФ позволило достаточно быстро компенсировать лейкопении и тромбоцитопении, что способствовало реализации полной программы комплексного лечения. Даже короткий курс из 5-10 ампул ЛФ позволял восстановить количество лейкоцитов (до 4,0-5,0х10’кл/л) и тромбоцитов (до 180х105кл/л). Из 75 больных с генерализованной формой РПК IV клинической группы 25 получали ЛФ в/м (на курс 10-30 амп.). У всех больных наблюдались различные формы анемии (НЬ от 40 до 90 г/ л крови). У части отмечалась панцитопения как следствие лечения или поражения костного мозга метастазами рака, либо угнетения его на фоне опухолевой интоксикации. Применение ЛФ позволило существенно улучшить гематологические показатели: НЬ до 80-100 г/л, лейкоциты до 3,5 -8,0х109кл/л, лимфоциты до 1,5-2,5х10чкл/л и тромбоциты до 150-250х103кл/ л. Одновременно снижалась интенсивность диспепсии (тошнота, рвота, диарея). У стомированных больных улучшалось качество жизни с устранением явления распада метастазов (капиллярные кровотечения, мацерация), что дало возможность вновь применять калоприемник и позволило повысить социальную адаптацию больных. У 48% больных отмечалась стабилизация опухолевого процесса при отсутствии развития новых метастазов.

Заключение. Включение ЛФ в комплексную терапию РПК повышает эффективность лечения: снижает риск возникновения послеоперационных осложнений и стабилизирует течение опухолевого процесса на фоне улучшения гематологических и иммунологических показателей.

ВЛИЯНИЕ ФТОРУГЛЕРОДНЫХ ЭМУЛЬСИЙ, СТАБИЛИЗИРОВАННЫХ ПРОКСАНОЛОМ 268, НА НЕКОТОРЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ОРГАНИЗМА

Шехтман Д.Г.,Сафронова В.Г. ,Склифас А.Н., Миллер А.В., Евдокимов В.А.

Институт биофизики клетки РАН,

Пущина, Московская обл., Россия

Введение. Эмульсии перфторорганических соединений (ПФОС) используются в качестве кровезаменителей с газотранспортной функцией. Молекулы ПФОС химически инертны, однако эмульсии этих соединений являются биологически активными. При введении в организм чужеродных эмульсионных частиц в первую очередь реагируют фагоцитирующие клетки иммунной системы (нейтрофилы и макрофаги). Кроме того, эмульсии вызывают и другие реакции со стороны иммунной системы, которые, по-видимому, обусловлены сорбцией компонентов плазмы на поверхности частиц, их электрическим зарядом, типом стабилизатора.

Цель и задачи. Целью настоящей работы является изучение реакций клеток иммунной системы на специфические стимулы и изменение некоторых показателей иммунной системы в присутствии эмульсии ПФОС.

Материалы и методы. В работе использовались 10 об.% эмульсии ПФОС, стабилизированные проксанолом 268 (блок-сополимер окиси этилена и окиси пропилена) и фосфолипи-

дами яичного желтка. Средний диаметр частиц эмульсии составлял 100 нм.

Нейтрофилы из очага воспаления

В экспериментах in vitro эмульсии инкубировали с плазмой крови человека и кролика при 37°С . Белки, сорбированные на частицах эмульсии, анализировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ). IgG идентифицировали методом белкового иммуноблотинга , используя в качестве антител атитела против IgG кролика с присоединенной пероксидазой хрена. Сорбцию иммуноглобулинов плазмы крови человека определяли с использованием антисывороток к различным иммуноглобулинам путем радиальной иммунодиффузии. Степень активации системы комплемента в экспериментах in vitro определяли по методике кинетического титрования комплемента. Плазмаферез проводили по стандартной методике для удаления циркулирующих малых и средних иммунных комплексов .

Результаты и обсуждения. Добавление эмульсии ПФОС не изменяло базальный уровень хемилюминесценции интак-тных нейтрофилов. Эмульсия перфторорганических соединений (ПФОС), стабилизированная проксанолом 268, ингибировала продукцию активных форм кислорода (АФК) нсйтро-филами, индуцированную ФМА. Степень ингибирования за-висилаот концентрации эмульсии Максимальное подавление ответа клеток наблюдалось при концентрации эмульсии в ячейке хемилюминометра 6 об%. При дальнейшем увеличении концентрации эмульсии уровень ингибирования не менялся. Показано, что ингибирование ответа клеток на ФМА может быть обусловлено конкуриренцией между эмульсией и ФМА за влияние на протеинкиназу С. С другой стороны в присутствии эмульсии индуцированный ФМЛП ответ нейтрофилов усиливался с увеличением концентрации эмульсии. Максимальное усиление ответа наблюдали при концентрации эмульсии 12 об/%. Экспериментально доказано, что значительную роль в процессе усиленной генерации АФК в присутствии эмульсии ПФОС в ответ на активацию ФМЛФ играет нейтро-фильная миелопероксидаза: при се блокаде азидом натрия с увеличением концентрации эмульсии отмечено уменьшение ответа нейтрофилов.

При контакте эмульсии ПФОС, стабилизированной проксанолом 268, с плазмой крови кролика и с плазмой крови человека происходит сорбция плазменных белков на поверхности частиц. Сорбция белков на частицах эмульсии происходит достаточно быстро и через 3-5 минут сорбируется значительное количество белков плазмы. На поверхности частиц эмульсии сорбируются, в основном, белки с молекулярными массами около 14, 26,43, 67, 94 кДа и выше. Эмульсии, стабилизированные фосфолипидами яичного желтка, не сорбируют компоненты плазмы крови, что может обуславливать отсутствие реакций при их внутривенном введении. Среди сорбированных белков плазмы крови кролика идентифицирован IgG, а плазмы крови человека идентифицированы IgG и IgA.

Агрегированный на частицах эмульсии IgG, по-видимому, способен связывать комплемент и в экспериментах in viiro показано, что эмульсия ПФОС активирует систему комплемента: максимум активации наступает через 30-40 минут после

контакта эмульсии с кровью . Опыты с плазмаферезом показали, что активация системы комплемента связана с сорбцией циркулирующих иммунных комплексов на поверхности эмульсий ПФОС, стабилизированных проксанолом 268. Предварительные результаты исследований дают основание предполагать, что с сорбцией плазменных белков частицами эмульсий ПФОС связана активация других систем организма, в частности, системы свертывания крови.

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о том, что эмульсии ПФОС, стабилизированные проксанолом 268, оказывают влияние на функциональное состояние клеток иммунной системы и активируют систему комплемента. Проведение этих исследований позволит понять причины побочных эффектов при применении фторуглеродных кровезаменителей, как, впрочем, и других внутривенных корпускулярных препаратов.

ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОСУПРЕССИВНОЙ ТЕРАПИИ У БОЛЬНЫХ АПЛАСТИЧЕСКОЙ АНЕМИЕЙ

Шишина Р.Н.. Рахманова Д.Ф., Савенко Т.Н., Столпникова В.Н.

Российский научно-исследовательский институт геронтологии Минздрава РФ,

Москва

Сегодня наиболее оптимальными методами лечения ап-ластической анемии (АА) являются трансплантация костного мозга (ТКМ) и иммуносупрессивная терапия (ИСТ) - анти-лимфоцитарный (АЛГ) и антитимоцитарный (АТГ) глобулины и циклоспорин А (ЦСА), причем последняя явилась надежной альтернативой ТКМ. Целью работы явилось определение эффективности ИСТ при АА на основе изучения показателей иммунитета.

Метод определения иммунологических характеристик иммунокомпетентных клеток периферической крови заключался в оценке состояния клеточного иммунитета по данным проточной цитофлюорометрии. В перечень исследуемых показателей были включены процентное и абсолютное содержание: всей популяции зрелых Т-лимфоцитов (Т-лф), характеризующихся поверхностными маркерами CD3 ; субпопуляция хелперных CD3 CD4 Т-лф (Тх), субпопуляция цитоток-сических CD3 CD8 Т-лф (Тц), популяция естественных кил-лерных CD16 CD3 Лф (ЕКК); лимфоидных клеток, несущих маркер активации-рецептор для интерлейкина-2 (pIL-2), маркируемый моноклональным антителом анти-С025; CD95+(Fas/APO-l) с помощью дифференцировочных моноклональных антител (МКА). Исследования проводились до лечения, через 1,3,6 и 12 месяцев после него. 32 пациентам АА была проведена иммуносупрессия отечественным АТГ-козьим в дозе 20 мг/кг массы тела в течение 5 дней. Препарат вводился внутривенно капельно в асептических условиях. Они составили I группу больных. Лечебное действие АТГ основано на временной супрессии регулирующей функции Т-лимфоцитов за счет снижения их количества. Анализ результатов иммунологического обследования показал, что до начала лечения характеристики иммунокомпетентных клеток (ИКК) отличались некоторой разнородностью, тем не менее имели общую направленность. В 87,7% случаев определялось увеличение содержания CD3 CD8 . У 97,6% больных имелось изменение соотношения CD3CD4/CD3CD8 . В 80,5% случаев обнаружено снижение процентного и абсолютного числа В-клеток. У 71,4% пациентов выявлено'зпачительное снижение количества CD3 CD16 . Уровень 1L-6 у 78,5% больных оказался выше нормы и в 91,4% случаев было увеличено ко-

личество клеток с Fas/APO-1 антигеном. Восстановление численности популяции ИКК проходило несинхронно в течение 1-6 месяцев после введения АТГ-кз. У 23 больных АА, леченных ЦСА, исходный уровень ИКК был практически аналогичным. Поскольку один из механизмов действия ЦСА определяется на уровне блокады выхода ИКК из фазы G0-G1, дополнительно определяли CD25 клетки. Этот показатель оказался наиболее информативным. Практически у всех больных процент CD25 ИКК был выше нормы. Через 1 -6 месяцев после лечения ЦСА число CD25 ИКК снижалось и соответствовало норме. С летальным исходом коррелировало нарастающее увеличение ИКК с pIL-2, начиная с ранних сроков введения препарата. Таким образом, метод иммунологической оценки ИСТ позволил выделить характеристики клеток, ассоциирующиеся с исходом болезни и эффективностью терапии. Благоприятным для течения заболевания после лечения АТГ является транзиторное снижение Т-лф в течение первого месяца, сочетающееся с улучшением показателей гемограммы. Снижение количества CD25 лф (менее 5%) можно рассматривать как благоприятный фактор в исходе лечения ЦСА.

ИММУНОГЕНЕЗ У ДЕТЕЙ С ЭРОЗИВНО-ЯЗВЕННЫМИ ПОРАЖЕНИЯМИ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ЗОНЫ

Шербак В.А.. Аксенова Т.А., Малежик Л.П.

Читинская государственная медицинская академия, Россия

Хронический гастродуоденит и язвенная болезнь являются одними из самых распространенных видов патологии у детей, при этом результаты лечения этой группы больных остаются не всегда удовлетворительными, часты рецидивы заболевания. Цель работы состояла в улучшении результатов лечения детей с язвенной болезнью и эрозивным гастродуоденитом.

Определение концентрации иммуноглобулинов классов G, А, М проводилось методом ракетного иммуноэлектрофореза с использованием моноспецифических антисывороток (“Sevac”, г. Прага). Проводилась непрямая реакция поверхностной иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител к кластерам дифференцировки лимфоцитов производства “ДиагноТех”, г. Москва.

Под нашим наблюдением находились 25 детей в возрасте 7-15 лет, страдающих эрозивным гастродуоденитом и язвенной болезнью. Всем детям проведена фиброгастродуоденос-копия до и после лечения. 12 детей получали общепринятое лечение (диета, антихеликобактерные препараты), 13 больных дополнительно получали вентрамин (цитамин желудка). Вен-

трамин получен из слизистой оболочки желудка крупного рогатого скота и свиней и представляет собой комплекс белков и нуклеопротеидов, обладающих избирательным действием на клетки слизистой желудка, способствуя ускорению восстановления её функций. Контрольную группу составили 15 здоровых детей.

Нами установлено, что при эрозивно-язвенных процессах в гастродуоденальной зоне в периферической крови наблюдается увеличение числа лейкоцитов и лимфоцитов. При традиционном лечении наблюдалась тенденция к нормализации числа лейкоцитов и абсолютного числа лимфоцитов. При добавлении вентрамина в комплекс противоязвенной терапии данный процесс усиливался, и содержание исследуемых клеток не отличалось от контроля. Данный эффект цитаминов желудка мы расцениваем как положительный.

У наблюдаемой группы пациентов мы выявили нарушение развития субпопуляций тимусзависимых лимфоцитов: снижалось процентное содержание Т-общих и Т-хелперов, при росте абсолютного и относительного числа Т-супрессоров . В результате этого соотношение Tx/Ts достоверно уменьшалось. При применении вентрамина возрастало относительное содержание CD3 и CD4, CD8 понижались, не достигая, однако, контрольных цифр. Иммуно-регуляторный индекс при традиционной терапии не изменялся, а при лечении вентрами-ном достоверно возрастал. Значительных изменений содержания NK-клеток не выявлено.

Мы наблюдали снижение процентного содержания В-лим-фоцитов при обострении язвенной болезни. Общепринятое лечение и его сочетание с цитамином желудка способствовали росту В-лимфоцитов, причем в последнем случае наблюдался больший эффект.

При исследовании гуморального звена иммунитета нами выявлено, что у детей с эрозивно-язвенными процессами в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки достоверно повышается содержание IgM, другие классы иммуноглобулинов также имеют тенденцию к возрастанию. Как общепринятое, так и лечение вентрамином еще больше стимулирует выработку IgA и IgG. При этом снижается концентрация IgM, наиболее это выражено при приеме органоспецифичного полипептида.

Таким образом, использование вентрамина при лечении язвенной болезни и эрозивных гастродуоденитов у детей приводит к скорейшему купированию клинических проявлений заболевания, нормализации дифференцировки и развития Т- и В-лимфоцитов, стимуляции выработки защитных белков

- иммуноглобулинов А и G, при нормализации уровня IgM.