СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ АДЪЮВАНТНЫХ ВИРОСОМ И АДЪЮВАНТНЫЕ ВИРОСОМЫ, ПОЛУЧАЕМЫЕ УКАЗАННЫМИ СПОСОБАМИ

1. Способ получения адъювантных виросом, включающий этапы:
(i) обеспечения водной композиции безадъювантных виросом, содержащих белок слияния мембран;
(ii) растворения амфифильного адъюванта в фармацевтически приемлемом неводном растворителе, который может образовывать гомогенную смесь с водой; и
(iii) разведения указанного раствора адъюванта в указанной водной композиции виросом для индуцирования встраивания адъюванта в наружный слой мембраны виросомы с сохранением способности виросом сливаться с мембраной.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанный неводный растворитель для адъюванта имеет растворимость в воде, составляющую по меньшей мере 5 г/100 мл при 20°C, предпочтительно по меньшей мере 10 г/100 мл, более предпочтительно по меньшей мере 20 г/100 мл.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный растворитель для адъюванта представляет собой смешивающийся с водой растворитель.
4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что указанный растворитель для адъюванта выбран из группы, состоящей из ацетонитрила, 2-бутанола, метилацетата, этилацетата, уксусной кислоты, муравьиной кислоты, метанола, этанола, ДМСО, ДМФА, н-пропанола, изопропанола, 2-метил-1-пропанола и ТГФ или любой смеси указанных веществ.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанный растворитель для адъюванта представляет собой ДМСО или ДМФА.
6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что указанный белок слияния мембран представляет собой вирусный белок слияния, предпочтительно выбранный из группы, состоящей из белков gp120/gp41 ВИЧ, F-белков парамиксовирусов и белка гемагглютинина (НА) вируса гриппа, белка gp64 бакуловируса, Е-белков вируса леса Семлики и их вариантов, сохраняющих способность к слиянию.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что указанный белок слияния мембран представляет собой F-белок респираторно-синцитиального вируса (РСВ) или вариант, сохраняющий способность к слиянию.
8. Способ по любому из пп. 1-7, включающий обеспечение виросом путем функционального восстановления оболочечного вируса, предпочтительно вируса, выбранного из группы, состоящей из Retroviridae; rubellavirus; paramyxoviridae; Flaviviridae; Herpesviridae; Bunyaviridae; Arenaviridae; Hantaviridae; Baculoviridae; Coronaviridae; Papovaviridae; Rhabdoviridae; Alphaviridae, Arteriviridae, Filoviridae и Poxviridae.
9. Способ по n. 8, отличающийся тем, что указанное функциональное восстановление включает приведение оболочечного вируса в контакт с раствором, содержащим короткоцепочечный фосфолипид или детергент, что обеспечивает солюбилизацию вирусной оболочки указанного вируса, и также включает удаление короткоцепочечного фосфолипида или детергента из указанного раствора, что обеспечивает образование функционально восстановленной оболочки вируса, при этом предпочтительно указанный фосфолипид или детергент удаляют путем диализа, фильтрации или абсорбции на гидрофобных гранулах.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что указанный короткоцепочечный фосфолипид имеет критическую концентрацию мицеллообразования (cmc) более 0,1 мМ, предпочтительно более 0,3 мМ, более предпочтительно более 1 мМ.
11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что указанный фосфолипид представляет собой фосфатидилхолин, предпочтительно 1,2-дигептаноил-sn-фосфатидилхолин или 1,2-дикапроил-sn-фосфатидилхолин.
12. Способ по п. 9, отличающийся тем, что указанный детергент представляет собой октаэтиленгликоля моно-N-додециловый эфир.
13. Способ по п. 9, отличающийся тем, что указанные гидрофобные гранулы состоят из полистирол-дивинилбензола.
14. Способ по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что указанный амфифильный адъювант представляет собой соединение, узнаваемое Toll-подобным рецептором (TLR), предпочтительно выбранное из группы, состоящей из монофосфориллипида A и его производных, и липопептида.
15. Способ по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что указанный амфифильный адъювант представляет собой гликолипид, предпочтительно выбранный из группы, состоящей из α-галактозилцерамида, фосфатидилинозитолманнозида, производных эндотоксичных липополисахаридов и производных указанных соединений.
16. Способ по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что указанный амфифильный адъювант представляет собой амфифильный пептид, предпочтительно содержащий аминокислотную последовательность, полученную из Jagged-1 или белка A S. Aureus, обладающий активностью адъюванта.
17. Способ по любому из пп. 1-16, отличающийся тем, что указанная виросома содержит по меньшей мере один дополнительный антиген, предпочтительно антиген опухоли или антиген, происходящий из вируса, паразита, гриба или бактерии.
18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что указанный антиген представляет собой вирусный антиген, предпочтительно полученный из вируса гриппа или РСВ.
19. Способ по п. 17 или 18, отличающийся тем, что указанный антиген представляет собой интегральный мембранный белок или антиген, присоединенный к группе, обеспечивающей заякоривание в мембране.
20. Способ по п. 19, отличающийся тем, что указанная группа, обеспечивающая заякоривание в мембране, представляет собой трансмембранный домен или аминокислотную последовательность, обеспечивающую заякоривание в мембране.
21. Способ по п. 19, отличающийся тем, что указанная группа, обеспечивающая заякоривание в мембране, представляет собой липидную группу, предпочтительно фосфолипид или ацильную цепь.
22. Адъювантная виросома, полученная способом по любому из пп. 1-21.
23. Адъювантная виросома, характеризующаяся тем, что адъювант представляет собой амфифильный адъювант, который по существу локализован в наружном слое мембраны указанной виросомы.
24. Адъювантная виросома по п. 23, отличающаяся тем, что указанный амфифильный адъювант представляет собой соединение, указанное в любом из пп. 14-16.
25. Адъювантная виросома по п. 23 или 24, содержащая по меньшей мере один дополнительный антиген, предпочтительно антиген опухоли или антиген, происходящий из вируса, паразита, гриба или бактерии.
26. Адъювантная виросома по п. 25, отличающаяся тем, что указанный антиген представляет собой вирусный антиген, предпочтительно полученный из вируса гриппа или РСВ.
27. Адъювантная виросома по п. 25 или 26, отличающаяся тем, что указанный антиген представляет собой интегральный мембранный белок или антиген, присоединенный к группе, обеспечивающей заякоривание в мембране, при этом предпочтительно указанная группа, обеспечивающая заякоривание в мембране, представляет собой трансмембранный домен, аминокислотную последовательность, обеспечивающую заякоривание в мембране, или липидную группу.
28. Фармацевтическая композиция, содержащая адъювантную виросому по любому из пп. 22-27 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество.
29. Иммуногенная композиция, содержащая адъювантную виросому по любому из пп. 22-27.
30. Композиция по п. 28 или 29, представленная в форме для интраназальной доставки, парентеральной доставки или перорального введения.
31. Адъювантная виросома по любому из пп. 22-27 для применения в качестве лекарственного средства.
32. Адъювантная виросома по любому из пп. 22-27 для применения в способе профилактики или лечения рака или инфекционного заболевания.
33. Способ оптимизации соотношения адъювант/антиген в вакцине на основе виросомы, включающий обеспечение по меньшей мере двух препаратов, содержащих адъювантные виросомы по любому из пп. 22-27, и/или применение способа по любому из пп. 1-21, при этом каждый препарат содержит различное соотношение адъювант/антиген, и оценку каждого препарата у тестируемого субъекта на предмет его эффективности при индуцировании иммунного ответа.
34. Способ иммунизации субъекта от рака или вирусного заболевания, включающий введение указанному субъекту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по п. 29 для выработки иммунного ответа.
35. Способ по п. 34, отличающийся тем, что указанное вирусное заболевание вызывается РСВ, вирусом гриппа, вирусом герпеса или цитомегаловирусом.