ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ СО СНИЖЕННЫМ ОБРАЗОВАНИЕМ ПЕНЫ
VACCINES WITH REDUCED FOAM FORMATION

Перекрестные ссылки на родственные заявки
По настоящей заявке испрашивается приоритет для предварительной заявки США, №62/062,180, поданной 10 октября 2014, раскрытие которой настоящим включено посредством ссылки во всей полноте.
Каждая из этих заявок, патентов, и каждый документ, цитированный в этом тексте, и каждый из документов, цитированных в каждой из этих заявок, патентов и документов («документов, цитированных в заявке»), и каждый документ, упомянутый или цитированный в документах, цитированных в заявке, в тексте или во время делопроизводства по заявкам и патентам, а также все аргументы в поддержку патентоспособности во время делопроизводства по ним, настоящим включены посредством ссылки по всей полноте.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к стабильной, уплотненной, прессованной вакцинной композиции, включающей прессованную вакцинную композицию, содержащую по меньшей мере один лиофилизированный антигенный компонент и агент, контролирующий пенообразование, и к способу её получения. Эта стабильная плотная вакцинная композиция сохраняет стабильность титра и при этом обеспечивает полное растворение в растворителе с минимальным образованием пены. Также обеспечивается способ вакцинации субъекта с применением стабильной вакцинной композиции.
Уровень техники
РСТ публикация № WO 99/21579 (Seager, et al.) раскрывает быстро диспергируемую композицию для ветеринарной вакцины, которая является лиофилизированной и слегка уплотненной. Патент США № 5,587,180 (Allen, Jr. et al.) описывает способ получения корпускулярного поддерживающего матрикса для быстрорастворимой таблетки. Патент США № 5,336,666 (Neway et al.) раскрывает лиофилизированную жидкую вакцину, которая может формировать таблетку для восстановления с получением жидкой формы.
Недостатком современных вакцинных препаратов является то, что они содержат стабилизаторы, подверженные образованию пены при смешивании с растворителем, вызывающие избыточное образование пены раствора после растворения композиции, что также создает проблемы для потребителя при помещении раствора в контейнер, в котором растворена композиция. Вытеснение раствора из контейнера из-за образования пены может приводить к потере продукта и повышенному воздействию вакцины на потребителя.
Раскрытие изобретения
Соответственно, задачей настоящего изобретения является обеспечение стабильной вакцинной композиции и способа иммунизации, заключающегося в простом растворении твердой, стабильной формы безводной вакцины в растворителе с минимальным образованием пены и минимальной потерей антигенной активности.
Другой задачей настоящего изобретения является обеспечение лиофилизированной живой или инактивированной вакцины, которая является уплотненной, прессованной или таблетированной в виде плотного стабильного твердого вещества, сохраняющего свою потенциальную иммунизирующую способность во время приготовления и в течение срока, необходимого для фармацевтическим пригодного периода времени, и способность к растворению в растворителе с минимальным образованием пены.
Другой задачей настоящего изобретения является обеспечение вакцинной композиции и способа иммунизации с большей гибкостью при вакцинации этой композицией, и её применение.
Другой задачей настоящего изобретения является обеспечение вакцинной композиции и способа иммунизации, снижающего потребность в избытке вакцинного материала, необходимого для компенсации присущих вакцине изменений титра, вызванных избыточным образованием пены и потерей продукта при растворении.
Другой задачей настоящего изобретения является обеспечение вакцинной композиции и способа иммунизации, облегчающих массовую иммунизацию птиц.
Эти и другие задачи могут быть решены настоящим изобретением, которое относится к стабильной вакцинной композиции, включающей по меньшей мере один предварительно титрованный лиофилизированный антигенный компонент, и агент, контролирующий образование пены, где вакцинная композиция находится в форме прессованной композиции. Кроме того, настоящее изобретение также обеспечивает способ иммунизации субъекта против заболевания, включающий этапы: растворения прессованной вакцинной композиции, содержащей агент, контролирующий образование пены, в фармацевтически пригодном растворителе; и применения полученного раствора у субъекта в количестве, эффективном для иммунизации субъекта против заболевания.
Изобретение с его конкретными характеристиками станет более понятным из следующего подробного описания со ссылкой на сопроводительные примеры. Следующее описание продолжает обсуждать проблемы и решения, обеспеченные настоящим изобретением, относящиеся к применению в ветеринарии.
Отмечаем, что изобретение не предназначено для охвата объема изобретения каким-либо ранее раскрытым продуктом, способом получения продукта или способом применения продукта, которые соответствуют описанию и требованиям USPTO (35 U.S.C. 112, первый параграф) или ЕПБ (Статья 83 ЕПК), так что заявитель(и) сохраняет право и настоящим раскрывает отказ от любого ранее описанного продукта, способа изготовления продукта или способа применения продукта.
Далее отмечается, что в данном описании, и в частности, в формуле изобретения и/или абзацах, такие термины, как «включать», «включающий», «включая» и тому подобные, имеют значения, определенные Патентным законом США; например, они могут означать «содержать», «содержит», «содержащий»; и что такие термины, как «состоящий по существу из» и «состоит по существу из» имеют значение, определенное Патентным законом США; например, они разрешают элементы, не упомянутые явно, но исключают элементы, найденные в предшествующем уровне техники, или влияющие на основные или новые характеристики изобретения.
Эти и другие варианты осуществления раскрыты или становятся явными и охватываются следующим подробным описанием.
Осуществление изобретения
Изобретение обеспечивает стабильную прессованную вакцинную композицию, включающую по меньшей мере один лиофилизированный антигенный компонент, и агент, контролирующий образование пены.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция растворяется полностью и быстро в растворителе.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция находится в форме твердой таблетки, капсулы, гранулы, вскрываемой капсулы, брикета, шарика, пилюли, или лиофилизированной плитки.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает агент для растворения, который является шипучим агентом или парой агентов.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает агент для растворения, включающий пару шипучих агентов.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает пару шипучих агентов, включающую соль и кислоту, например, лимонную кислоту, а солью является бикарбонат.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает агент, контролирующий образование пены, составляющий примерно от 25% до 40% от массы композиции.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает агент для растворения, составляющий примерно 60% от массы композиции.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает агент для растворения, составляющий примерно 35% от массы композиции.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает лиофилизированный антигенный компонент, составляющий до 90% от массы композиции.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает лиофилизированный антигенный компонент, составляющий до 80% от массы композиции.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция характеризуется полным растворением примерно за 90-700 секунд при контакте с растворителем.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения стабильность композиции характеризуется снижением титра не больше разницы, показанной в примерах.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает агент, контролирующий образование пены, такой как сахароспирт.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает агент, контролирующий образование пены, такой как ксилитол, маннитол и сорбитол.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает агент, контролирующий образование пены, которым является маннитол.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает антигенный компонент, которым является IB88 или IBH120.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция имеет ломкость менее примерно 2%.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает живой вирус, выбранный из группы, состоящей из: вируса болезни Ньюкасла, вируса инфекционного бурсита, вируса оспы птиц, вируса ларинготрахеита, вируса инфекционного бронхита птиц, вируса овечьей оспы, вируса чумы, или смеси одного или нескольких из вышеуказанных вирусов, являющихся натуральными, рекомбинантными или модифицированными.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает антигенный компонент, выбранный из группы, состоящей из бацилл сибирской язвы, сальмонелл SPP, E. coli, или смеси одного или нескольких из вышеуказанных, являющихся натуральными, рекомбинантными или модифицированными.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вакцинная композиция включает антигенный компонент, который является живым вирусом, а композиция дополнительно включает нейтрализующие антитела против вируса.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения способ вакцинации субъекта против заболевания включает этапы: растворения вакцинной композиции из настоящего изобретения, обеспечивающей защиту против такого заболевания, растворителем для получения раствора; и применения полученного раствора у субъекта в эффективном количестве для иммунизации субъекта против заболевания.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения в способе вакцинации субъекта против заболевания этап растворения дополнительно характеризуется полным растворением вакцинной композиции.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения в способе вакцинации субъекта растворение происходит примерно за 90-700 секунд при контакте с растворителем, где этап применения включает опрыскивание субъекта аэрозолем, полученным из раствора.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения способ получения стабильной прессованной быстрорастворимой вакцинной композиции из настоящего изобретения включает этапы: лиофилизации по меньшей мере одного антигенного компонента; смешивания лиофилизированного антигенного компонента и агента, контролирующего образование пены; и прессование смеси лиофилизированного антигенного компонента и агента, контролирующего образование пены, по меньшей мере с одним агентом для растворения для получения прессованной быстрорастворимой вакцинной композиции.
Другие варианты осуществления настоящего изобретения далее описаны в следующих пронумерованных абзацах.
1. Способ снижения образования пены в твердой вакцинной композиции при смешивании с жидким растворителем, где композиция включает (i) по меньшей мере один антигенный компонент, включающий стабилизатор, подверженный образованию пены; где способ включает: (а) добавление эффективного количества сахароспирта к твердой вакцинной композиции.
2. Способ по п.1, дополнительно включающий: (b) прессование твердой вакцинной композиции до получения стабильной прессованной вакцинной композиции.
3. Способ по п.п.1 или 2, где безводный антигенный компонент является лиофилизированным или высушенным.
4. Способ по любому из п.п.1-3, где стабилизатор включает одну или несколько аминокислот или их солей, белков или их солей, альбумин, желатин, или их комбинации.
5. Способ по любому из п.п.1-4, где антигенный компонент является вирусом болезни Ньюкасла, вирусом инфекционного бронхита, вирусом оспы птиц, вирусом птичьего энцефаломиелита, вирусом болезни Марека, трихофитоном бородавчатым (Тrichophyton verrucosum), парамиксовирусом птиц, микобактерией паратуберкулеза (Мycobacterium paratuberculosis), герпесвирусом индеек, вирусом контагиозного пустулезного дерматита, или вирусом овечьей оспы.
6. Способ по любому из п.п.1-4, где антигенный компонент является вирусом болезни Ньюкасла, или вирусом инфекционного бронхита.
7. Способ по любому из п.п.1-6, где композицию смешивают посредством ультразвука, механическими или химическими средствами.
8. Способ по любому из п.п.1-6, где композицию смешивают посредством ультразвука или механическими средствами.
9. Способ по любому из п.п.1-6, где композицию смешивают химическими средствами.
10. Способ по п.9, где химическими средствами является шипучая реакция.
11. Способ по любому из п.п.1-10, где композиция дополнительно включает агент для растворения.
12. Способ по п.11, где агент для растворения является шипучим агентом или парой шипучих агентов.
13. Способ по п.11, где агент для растворения включает пару шипучих агентов.
14. Способ по п.13, где пара шипучих агентов включает соль и кислоту.
15. Способ по п.14, где кислота является лимонной кислотой, виннокаменной кислотой, яблочной кислотой, фумаровой кислотой, адипиновой кислотой, янтарной кислотой, ангидридами кислот, или их смесями.
16. Способ по п.14, где соль является карбонатными солями, бикарбонатными солями, сесквикарбонатными солями, или их смесями.
17. Способ по любому из п.п.1-16, где эффективное количество сахароспирта составляет примерно 10-40% от массы композиции.
18. Способ по любому из п.п.1-16, где эффективное количество сахароспирта составляет примерно 10-35% от массы композиции.
19. Способ по любому из п.п.1-16, где эффективное количество сахароспирта составляет примерно 15-35% от массы композиции.
20. Способ по любому из п.п.11-19, где агент для растворения составляет примерно до 60% от массы композиции.
21. Способ по любому из п.п.11-19, где агент для растворения составляет примерно 30-60% от массы композиции.
22. Способ по любому из п.п.1-21, где безводный антигенный компонент составляет примерно 20-50% от массы композиции.
23. Способ по любому из п.п.1-21, где безводный антигенный компонент составляет примерно 20-40% от массы композиции.
24. Способ по любому из п.п.1-23, где твердая вакцинная композиция характеризуется полным растворением композиции в растворителе примерно за 60-700 секунд при контакте с растворителем.
25. Способ по любому из п.п.1-24, где твердая вакцинная композиция характеризуется полным растворением композиции в растворителе примерно за 60-300 секунд при контакте с растворителем.
26. Способ по любому из п.п.1-25, где образование пены в твердой вакцинной композиции снижается по сравнению с образованием пены в композиции при отсутствии сахароспирта.
27. Способ по любому из п.п.1-26, где сахароспиртом является ксилитол, маннитол или сорбитол, или их смесь.
28. Стабильная вакцинная композиция, включающая:
(i) по меньшей мере один безводный антигенный компонент, включающий стабилизатор, склонный к образованию пены, когда композицию смешивают с жидким растворителем; и
(ii) эффективное количество агента, контролирующего образование пены, который является сахароспиртом.
29. Стабильная вакцинная композиция по п.28, где безводный антигенный компонент является лиофилизированным или высушенным.
30. Стабильная вакцинная композиция по п.п.28 или 29, где вакцинная композиция прессована в таблетку.
31. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-30, где стабилизатор включает одну или несколько аминокислот или их солей, белков или их солей, альбумин, желатин, или их комбинации.
32. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-30, где стабилизатор является аминокислотой или её солями, белками или их солями, или их комбинациями.
33. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-32, где антигенный компонент является вирусом болезни Ньюкасла, вирусом инфекционного бронхита, вирусом оспы птиц, вирусом птичьего энцефаломиелита, вирусом болезни Марека, трихофитоном бородавчатым, парамиксовирусом птиц, микобактерией паратуберкулеза, герпесвирусом индеек, вирусом контагиозного пустулезного дерматита, или вирусом овечьей оспы.
34. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-33, где антигенный компонент является штаммом CR88121 вируса инфекционного бронхита, штаммом Н120 вируса инфекционного бронхита, или штаммом VG/GA вируса болезни Ньюкасла.
35. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-34, дополнительно включающая агент для растворения.
36. Стабильная вакцинная композиция по п.35, где агент для растворения является шипучим агентом или парой шипучих агентов.
37. Стабильная вакцинная композиция по п.35, где агент для растворения включает пару шипучих агентов.
38. Стабильная вакцинная композиция по п.36, где пара шипучих агентов включает соль и кислоту.
39. Стабильная вакцинная композиция по п.28, где эффективное количество сахароспирта составляет примерно 10-40% от массы композиции.
40. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-39, где эффективное количество сахароспирта составляет примерно 10-35% от массы композиции.
41. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-39, где эффективное количество сахароспирта составляет примерно 15-35% от массы композиции.
42. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.35-41, где агент для растворения составляет примерно до 60% от массы композиции.
43. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.35-41, где агент для растворения составляет примерно 30-60% от массы композиции.
44. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-43, где лиофилизированный антигенный компонент составляет до 90% от массы композиции.
45. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-43, где лиофилизированный антигенный компонент составляет до 80% от массы композиции.
46. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-45, где композиция характеризуется полным растворением композиции в растворителе примерно за 60-700 секунд при контакте с растворителем.
47. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-46, где композиция характеризуется снижением образования пены композиции при контакте с растворителем, по сравнению с композицией при отсутствии сахароспирта.
48. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-47, где сахароспиртом является ксилитол, маннитол, сорбитол, или их смесь.
49. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-47, где сахароспиртом является маннитол.
50. Стабильная вакцинная композиция по п.35, имеющая ломкость менее примерно 2%.
51. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-50, где антигенный компонент является живым вирусом, а композиция дополнительно включает нейтрализующие антитела против вируса.
52. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-51, являющаяся стабильной при 5°С в безводных условиях в течение по меньшей мере 9 месяцев.
53. Стабильная вакцинная композиция в соответствии с любым из составов 2, 4, 6, II, III, B, D или Е, показанных в примерах.
52. Стабильная вакцинная композиция по любому из п.п.28-53, где пена уменьшается примерно на 50%, примерно на 60% или примерно на 80%, по сравнению с композицией без сахароспирта.
56. Способ вакцинации субъекта против заболевания, включающий этапы:
(а) растворения вакцинной композиции по любому из п.п.28-55 обеспечивающей защиту против этого заболевания, растворителем до получения раствора; и
(b) применения полученного раствора у субъекта в количестве, эффективном для иммунизации субъекта против заболевания.
57. Способ по п.54, где этап применения включает опрыскивание субъекта аэрозолем, полученным из раствора.
Уплотненные, прессованные и твердые таблетки вакцинной композиции могут быть приготовлены на аппарате MANESTY F3 с одним пуансоном 12 мм, с плоским фасочным соединением, или 6 мм стандартными вогнутыми пуансонами. Вакцинная композиция в форме твердой таблетки может быть под давлением максимум 4 тонны. Жесткость таблеток может быть тестирована на аппарате для анализа жесткости таблеток ERWEKA, модель ТВН20, как описано выше, и было установлено, что все они имеют твердость больше 3,0 seD. Классическая таблетка, обычно ассоциируемая с терапевтическими агентами, подразумевается в виде такой «таблетки». Однако необходимо понять, что подразумевается любая уплотненная или прессованная твердая форма, включая те, которые реже применяются в области фармацевтики. Например, большие «брикеты» могут быть пригодными, если для итогового применения необходим большой объем материала.
В частности, наполнители для таблеток являются веществами, которые составляют объем таблетки и действуют в первую очередь как носители. Типичные наполнители таблеток включают кальция сульфат, кальция фосфат, кальция карбонат, крахмал, модифицированные крахмалы (карбоксиметилкрахмал, и т.д.), микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, сахарозу, декстрозу, маннитол и сорбитол, но не ограничиваются ими. Количество наполнителей для таблеток составляют примерно 0-90% от массы таблетки.
Связующие агенты действуют в качестве «клея», который удерживает порошки вместе для формирования гранул. Связующие агенты включают натуральные полимеры, такие как крахмалы или камеди акации, трагаканта и желатин, или синтетические полимеры, такие как ПВП и метил-, этил- и гидроксипропилцеллюлоза, но не ограничиваются ими. Количество связующих агентов составляет примерно 0-20% от массы композиции.
Средства растворения стимулируют растворение вакцинной композиции. Типичные примеры включают шипучие агенты, дезинтегранты, сурфактанты и солюбилизаторы, но не ограничиваются ими.
Дезинтегранты способствуют разлому прессованных таблеток. Типичные примеры включают крахмал, микрокристаллическую целлюлозу, очищенный древесный крахмал, альгиновую кислоту, натрия крахмал гликолят, гуаровую камедь, перекрестно-сшитый поливинилпирролидон (ПВП), ионообменную смолу и целлюлозу, такую как метилцеллюлоза, кроскармеллоза натрия, натрия карбоксиметил- и гидроксипропилметил-целлюлоза, но не ограничиваются ими. Количество агентов для растворения составляет примерно 1-95% от массы композиции.
Любриканты снижают трение между прессуемым материалом и стенкой пуансона во время прессования и выталкивания. Большинство любрикантов являются нерастворимыми в воде и включают стеараты (магния, кальция и натрия), стеариновую кислоту, тальк и воски. Водорастворимые любриканты включают ПЭГ, натрия бензоат, натрия олеат, натрия ацетат, натрия лаурилсульфат и магния лаурилсульфат. Количество любрикантов составляет 0-5% от массы композиции.
Красители добавляют для идентификации типов вакцинных составов, таких как в форме таблеток с эстетическими и функциональными целями, например, красители, раскрытые в примерах А-D из израильского патента №46189, но не ограничивая ими настоящее изобретение. Количество красителей составляет примерно <1% от состава. В одном варианте осуществления композиция из настоящего изобретения является твердой таблеткой, приготовленной с шипучим агентом в качестве средства растворения. Как понятно специалисту в данной области техники, шипучая таблетка должна содержать основной компонент и кислый компонент, такой как пара шипучих агентов, чтобы при растворении происходила подходящая реакция с генерацией углекислого газа и угольной кислоты. Подходящие шипучие компоненты включают карбонатное семейство основных соединений и неорганические или органические кислые соединения. Среди карбонатного семейства основных соединений предпочтительными шипучими агентами для применения в композициях из настоящего изобретения являются натрия карбонат, натрия бикарбонат, глицина карбонат, калия карбонат, калия бикарбонат, калия дигидроцитрат, и кальция карбонат. Наиболее предпочтительным основным соединением является натрия бикарбонат. Предпочтительными кислыми компонентами для применения в композициях из настоящего изобретения являются лимонная кислота, адипиновая кислота, виннокаменная кислота, малеиновая кислота, борная кислота, бензойная кислота, гидроксибензойная кислота, метоксибензойная кислота, миндальная кислота, малоновая кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, глутаровая кислота, аспарагиновая кислота, соляная кислота, щавелевая кислота, салициловая кислота, янтарная кислота и уксусная кислота. Наиболее предпочтительным кислым шипучим компонентом является лимонная кислота.
В дополнение к основным и кислым шипучим ингредиентам таблеток, описанным выше, композиция для таблеток может из настоящего изобретения может также содержать другие обычно применяемые вспомогательные вещества.
Определения
Используемые термины имеют свое обычное значение в области техники, если не указано иное.
Термин «антигенный компонент» или «антиген», как применяется в настоящей заявке, означает вещество, которое распознается иммунной системой и индуцирует иммунный ответ. Вещество может включать целый организм, убитый, ослабленный или живой; субъединицу или часть организма; рекомбинантный вектор, содержащий вставку с антигенными свойствами; нуклеиновокислотную частицу или фрагмент, способный к индукции иммунного ответа при презентации животному-хозяину; белок, полипептид, гликопротеин, эпитоп, гаптен, углевод, сахар, или любую их комбинацию. Альтернативно, антиген может включать токсин или антитоксин. Подобным термином, применяемым взаимозаменяемо в данном контексте, является «иммуноген» или «антигенный».
3
Термин «сжатый», как применяется в настоящей заявке, означает вакцину, имеющую плотность больше 1,0 г/см, но не измеряемую твердость при анализе в единицах Стронга-Кобба (SCU), и твердость, анализируемую посредством анализатора твердости таблеток ERWEKA, модель ТВН20.
Термин «прессованный», как применяется в настоящей заявке, означает вакцинную композицию, имеющую твердость по меньшей мере 2,0 SCU.
Термин «твердая таблетка», как применяется в настоящей заявке, означает вакцинную композицию в форме таблетки или в иной твердой форме с жесткостью по меньшей мере 3,0 SCU.
Термин «полностью растворенный», как применяется в настоящей заявке, означает отсутствие растворимого компонента, оставшегося нерастворенным.
Термин «быстро дезинтегрируемый» или «быстро растворимый», как применяется в настоящей заявке, означает полную дезинтеграцию или полное растворение в пределах нескольких минут или меньше, когда применяют большой объем воды для небольшого объема прессованной лиофилизированной вакцинной композиции, например, 100 мл воды на 400 мг шипучей таблетки. Время увеличивается, когда объем разбавителя сопоставимо снижается. Таким образом, для одной и той же таблетки может требоваться 70 секунд для объема воды 10 мл, и 80 секунд для 2 мл воды.
Термин «время дезинтеграции» или «время растворения», как применяется в настоящей заявке, означает время растворения или дезинтеграции таблетки при смешивании в отмеренном количестве воды при комнатной температуре.
Термин «стабильный», как применяется в настоящей заявке, означает, что композиции из настоящего изобретения сохраняют свою (потенциальную) иммунизирующую способность во время приготовления и в течение времени, требующегося для срока годности коммерческой вакцины.
Термин «вспомогательное вещество», как применяется в настоящей заявке, относится к растворителям или растворам, используемым в составе вакцинной композиции. Вспомогательные вещества могут включать: растворители или наполнители, связующие агенты или адгезивные средства, средства растворения, любриканты, антиадгезивные средства, глиданты или противослеживающие агенты, красители, ароматизаторы, подсластители и адсорбенты.
Термин «стабилизатор», как применяется в настоящей заявке, относится к химическим соединениям, используемым для стабилизации антигенного материала во время хранения при низкой температуре или лиофилизации. Примеры таких стабилизаторов включают аминокислоты, такие как аланин, аргинин, аспарагиновая кислота, цистин, глутаминовая кислота, глицин, гистидин, гидроксипролин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, пролин, серин, треонин, тирозин и валин; соли аминокислот, такие как L-аргинина гидрохлоридная соль и соли глутаминовой кислоты и щелочных металлов, такие как мононатрия глутамат и монокалия глутамат; белки или их соли, такие как белковый гидролизат, коровий белок, мышиный сывороточный белок, телячий сывороточный белок, дрожжевой белок, куриный белок, яичный белок; альбумин, такой как бычий альбумин и овальбумин; желатин и гидролизованный желатин.
Стабилизатор также включает моносахарид, например, сорбитол, или дисахарид, например, сахарозу, лактозу или мальтозу. Предпочтительной является сахароза.
2
Термин «смешанный», как применяется в настоящей заявке, означает смешивание вещества посредством ультразвука, механическими или химическими средствами. Примеры механического смешивания включают перемешивание, встряхивание, магнитное перемешивание, и пропускание вещества через подходящий шприц. Примеры химического смешивания включают шипучую реакцию, вызывающую местное образование газа (посредством химической реакции одного или нескольких ингредиентов, включающей образование углекислого газа (COгаза)), достаточное для обеспечения смешивания, когда высвобождающиеся в итоге пузырьки газа проходят через жидкость к поверхности.
Антигенный компонент, как определено в настоящей заявке, может содержать живые аттенуированные патогены, такие как живые аттенуированные вирусы, бактерии, грибки или паразиты. Однако активный антигенный компонент может также включать убитые вирусы, рекомбинантные гетерологичные иммуногены, антигены, антигенные субъединицы (например, белки, полипептиды, пептиды, эпитопы, гаптены) или эпитопы иммуногенов или антигенов, полученные или происходящие из одного или нескольких патогенов, описанных в настоящей заявке, которые могут быть экспрессированы вирусными векторами, бактериальными векторами, плазмидными векторами, и тому подобными.
Активный антигенный компонент из настоящего изобретения может содержать один или несколько иммуногенов, выбранных из собачьего патогена, включая вирус бешенства, собачий аденовирус 2 типа (CAV2), собачий герпесвирус (CHV), собачий парвовирус (CPV), собачий коронавирус, Leptospira canicola, Leptospira icterohaemorragiae, Leptospira grippotyphosa, Borrelia burgdorferi, Bordetella bronchiseptica и тому подобные, включая их комбинации. Активный антигенный компонент может включать HA, F, NP гены из CDV, капсидный ген из CPV, ген S-белка, M, N гены из собачьего коронавируса, HN и F гены из cPi2, гены из Leptospira, гены из Bordetella, гены из Borrelia, и gB, gC и gD гены из собачьего герпесвируса, среди прочего. Эти компоненты могут быть пригодными в качестве антигенных композиций или вакцинных композиций для защиты собак против заболеваний, вызванных этими патогенами.
Собачий аденовирус 2 типа (CAV2) широко распространен и является высоко контагиозным для собак. Он вызывает симптомы, напоминающие простуду. Как правило, первыми признаками инфекционного заболевания является жар, который обычно ослабевает за один-два дня. У заболевших собак может развиваться тонзиллит, болезненность живота, увеличение печени, рвота и диарея. Острое заболевание обычно заканчивается смертельным исходом. CAV2 можно инактивировать или аттенуировать и объединить с CDV (и/или cPi2) для получения поливалентной вакцины. Альтернативно, можно применять иммуногены или антигены CAV2, или эпитопы CAV2 иммуногенов, такие как капсидные, матриксные или гексоновые белки.
Собачий парвовирус (CPV) является обычным кишечным вирусом, который может вызвать рвоту, диарею, гастроэнтерит, миокардит и гепатит у молодых собак. Было установлено, что он широко распространен у собак. CPV может присутствовать в антигенных композициях, суспензиях или растворах из настоящего изобретения в виде инактивированного, живого аттенуированного, или CPV иммуногенов, антигенов или эпитопов CPV иммуногенов, таких как продукты генов VP1, VP2 (капсида).
Другой активный антигенный компонент, пригодный в композициях и способах из настоящего изобретения, может включать один или несколько иммуногенов, выбранных из птичьих патогенов, включая Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis, вирус инфекционного бронхита (IBV), вирус болезни Ньюкасла (NDV), вирус синдрома снижения яйценоскости (EDS), вирус инфекционного бурсита (IBDV), вирус индеек, вирус птичьего гриппа, вирус болезни Марека; герпесвирусы, такие как вирус инфекционного ларинготрахеита, вирус инфекционного бронхита птиц, птичий реовирус; поксвирусы, включая вирус оспы птиц, вирус оспы кур, канарипокс, вирус оспы голубей, вирус оспы перепелов и вирус dovepox; птичий полиомавирус, птичий пневмовирус, вирус птичьего ринотрахеита, вирус птичьего ретикулоэндотелиоза, птичьи ретровирусы, птичий эндогенный вирус, вирус птичьего эритробластоза, вирус птичьего гепатита, вирус птичьей анемии, вирус птичьего энтерита, вирус болезни Пачеко, вирус птичьей лейкемии, птичий парвовирус, птичий ротавирус, вирус птичьего лейкоза, вирус птичьей мышечно-апоневротической фибросаркомы, вирус птичьего миелобластоза; вирус, ассоциированный с птичьим миелобластозом; вирус птичьего миелоцистоматоза, вирус птичьей саркомы, вирус птичьего некроза селезенки, и их комбинации; но не ограничиваясь ими.
В качестве специфических иммуногенов, активный антигенный компонент может также быть HN и F генами вируса болезни Ньюкасла, полипротеином и VP2 генами вируса инфекционного бурсита, и S и N генами вируса инфекционного бронхита, и gB и gD генами вируса болезни Марека. Эти компоненты можно применять в качестве антигенных композиций или вакцинных композиций для защиты птиц против заболевания, вызванного этими патогенами.
Альтернативно, активный антигенный компонент включает один или несколько иммуногенов из кошачьего патогена, такого как кошачий герпесвирус (FHV), кошачий калицивирус (FCV), вирус кошачьей лейкемии (FeLV), вирус кошачьего инфекционного перитонита, вирус кошачьей панлейкопении, вирус кошачьего иммунодефицита (FIV), вирус бешенства, и тому подобные, и их комбинации, но не ограничиваясь ими.
Активный антигенный компонент может также включать gB, gC и gD гены из кошачьего герпесвируса; env и gag/pro гены из FeLV; env, gag/pol и tat гены из FIV вируса; капсидный ген из кошачьего калицивируса; S модифицированный ген, M и N ген из вируса кошачьего инфекционного перитонита, и VP2 ген из кошачьего парвовируса. Эти компоненты могут быть пригодными в качестве антигенных или вакцинных композиций для защиты кошек против заболеваний, вызванных этими патогенами.
Активный антигенный компонент может содержать один или несколько иммуногенов из лошадиного патогена, такого как лошадиный герпесвирус (типа 1 или типа 4), вирус лошадиного гриппа, вирус лошадиного энцефаломиелита (EEV), вирус столбняка, вирус лихорадки Западного Нила, и тому подобные, или их комбинации.
Активный антигенный компонент может включать gB, gC, gD и немедленно-ранние гены из лошадиного герпесвируса 1 типа; gB, gC, gD и немедленно-ранние гены из лошадиного герпесвируса 4 типа; HA, NA, M и NP из вируса лошадиного гриппа; гены из восточного вируса лошадиного энцефалита, гены из западного вируса лошадиного энцефалита, гены из венесуэльского вируса лошадиного энцефалита, prM--M-E гены из вируса Западного Нила, и гены из вируса лошадиного артериита, но не ограничиваясь ими. Эти компоненты могут быть пригодными в качестве антигенных композиций или вакцинных композиций для защиты лошадей против заболеваний, вызванных этими патогенами.
Активный антигенный компонент может включать один или несколько иммуногенов из бычьего патогена, такого как вирус бешенства, бычий ротавирус, вирус бычьего парагриппа 3 типа (bCPI2-3), бычий коронавирус, вирус бычьей вирусной диареи (BVDV), вирус ящура (FMDV), бычий респираторно-синцитиальный вирус (BRSV), вирус бычьего инфекционного ринотрахеита (IBR), Escherichia coli, Pasteurella multocida, Pasteurella haemolytica, и тому подобные, и их комбинации.
Активный антигенный компонент может также быть выбран из gB, gC, gD и немедленно-ранних генов бычьего герпесвируса 1 типа, F и G генов из BRSV, полипротеина, E1, E2 генов из BVDV, HN и F генов из PI3 вируса или генов из ротавируса. Эти компоненты могут быть пригодными в качестве антигенных или вакцинных композиций для защиты коров от заболевания, вызванного этими патогенами.
Далее, активный антигенный компонент может включать один или несколько иммуногенов из свиного патогена, такого как вирус свиного гриппа (SIV), свиной цирковирус 2 типа (PCV-2), вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV), вирус псевдобешенства (PRV), свиной парвовирус (PPV), вирус классической чумы свиней (HCV), FMDV, Mycoplasma hyopneumoniae, Erysipelothrix rhusiopathiae, Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica, Escherichia coli, и тому подобное, и их комбинации, но не ограничиваясь ими.
Активный антигенный компонент может также включать gB, gC, gD и немедленно-ранние гены из PRV, HA, NA, M и NP гены из вируса свиного гриппа, полипротеин, E1, E2 из вируса классической чумы свиней, ORF1 и ORF2 гены из PCV2 вируса, ORF3, ORF4, ORF5, ORF6, или ORF7 из PRRSV вируса, или гены из Mycoplasma hyopneumoniae. Эти компоненты могут быть пригодными в качестве антигенных композиций или вакцинных композиций для защиты свиней от заболевания, вызванного этими патогенами.
Активный антигенный компонент может включать последовательности, кодирующие белок, экспрессируемый в таких патогенах, как РНК или ДНК вирусы, такие как HIV, HCV, HBV, HPV, EBV, HSV, CMV, HTLV, хантавирус, вирус Эбола, вирус Марбург, вирус лихорадки долины Рифт, вирус Ласса и вирус гриппа, вирус геморрагического энтерита (HEV), вирус инфекционного ринотрахеита (IBRV), среди прочего. Такие иммуногены можно предпочтительно применять в качестве антигенных композиций или вакцинных композиций для защиты субъектов, таких как люди, против заболевания, вызванного этими патогенами.
Активный антигенный компонент может также быть, например, из любой из следующих патогенных бактерий и их антигенов: видов Actinobacillus, таких как Actinobacillus pleuropneumoniae; Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica, Bordetella avium, Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci; видов Klebsiella, таких как Klebsiella pneumonia; Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium pseudotuberulosis, Mycobacterium pneumoniae, Группы А Streptococcus, Streptococcus equi, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans, Neisseria gonorrhoeae, видов Erysipelothrix, энтеротоксигенной Escherichia coli, Vibrio cholerae, Bacillus anthracis, Haemophilus influenzae, Haemophilus somnus, Haemophilus parasuis, видов Salmonella, Salmonella agona, Salmonella blockley, Salmonella enteriditis, Salmonella hadar, Salmonella Heidelberg, Salmonella montevideo, Salmonella senftenberg, Salmonella cholerasuis, видов Rickettsia, Helicobacter pylori, Helicobacter felis, видов Shigella, видов Listeria, Legionella pneumoniae, Pseudomonas species, видов Borrelia, Borellia burgdorferi, Neisseria meningitides, видов Clostridium, Clostridium difficile, Ureaplasma urealyticum, видов Staphylococcus, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Pasteurella pestis, видов Campylobacter, Campylobacter jejuni, видов Treponema, видов Leptospira, Corynebacterium diphtheria, Hemophilus ducreyi, Hemophilus influenza, видов Erlichhia, среди прочего.
Активный антигенный компонент может также быть получен из грибка или плесени, такого как Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatis, видов Penicillium, видов Fusarium, видов Candida, таких как Candida trichophyton, Candida parapsilosis, Candida glabrata, Candida dubliniensis, и Candida albicans; видов Rhizopus, видов Cryptococcus, таких как Cryptococcus neoformans, Cryptococcus grubii, Cryptococcus gattii, Paracoccidiodes brasiliensis, Histoplasma capsulatum, и других грибков и плесени.
Активный антигенный компонент может также быть выбран из паразитарных антигенов, полученных из паразитарных видов, включая виды Plasmodium, виды Trypanosome, виды Giardia, виды Boophilus, виды Babesia, виды Entamoeba, виды Eimeria, виды Leishmania, виды Schistosoma, виды Brugia, виды Fascida, виды Dirofilaria, виды Wuchereria, виды Onchocerea, виды Treponema, виды Toxoplasma, виды Cryptococcus, виды Coccidia, виды Histomoniasis, виды Hexamitiasis, виды Giardia, среди прочего; нематоды, включая виды Ascaris, виды Trichinella, и тому подобные; гельминты, такие как трематоды, ленточные черви, среди прочего; и другие подобные патогенные организмы, но не ограничиваясь ими. Способы приготовления иммуногенов, полученных из вирусов, бактерий, грибков, плесени, простейших, нематод и гельминтов, известны в данной области техники.
Другими подходящими иммуногенами могут быть, например, очищенные секретируемые антигенные факторы вирулентности, такие как токсины, цитотоксины, и тому подобные. Антигены токсинов, детоксицированные путем модификации (токсоиды), которые можно применять в комбинации с адъювантом, таким как алюминия гидроксид, можно использовать для стимуляции образования антител, нейтрализующих токсин. Примеры токсинов, которые можно применять в качестве иммуногенов, включают бактериальные эндотоксины, такие эндотоксины, как липополисахарид; энтеротоксины, включая термолабильные энтеротоксины (LT), термостабильные энтеротоксины (ST), веротоксин (VT), и тому подобные. Иммуногены бактериальных экзотоксинов секретируются в окружающую среду, и включают, например, дифтерийный токсин (Corynebacterium diphtheriae), столбнячный токсин (Clostridium tetani), энтеротоксины, секретируемые Staphylococcus aureus, ботулинические токсины (Clostridium botulinum); и токсины, вырабатываемые водорослями, такие как нейротоксины; и тому подобные. Термостабильные токсины, высвобождаемые при аутолизе бактерий, включают, например, холерные токсины, высвобождаемые из грамотрицательного Vibrio cholerae, колицины, вырабатываемые кишечными бактериями, такими как E. coli (бактериоцин).
Иммуногены, полученные или происходящие из вирусов, бактерий, грибков и тому подобного, могут быть получены посредством способов культивирования in vitro с применением подходящей культуральной среды или клеточных линий-носителей, и обычных способов, хорошо известных рядовым специалистам в данной области техники. Например, PRRSV можно культивировать в подходящей клеточной линии, такой как клеточная линия МА-104 (см. патенты США №№ 5,587,164; 5,866,401; 5,840,563; 6,251,404, среди прочего). Подобным образом, PCV-2 можно культивировать с применением клеточной линии PK-15 (см. патент США № 6,391,314); SIV можно культивировать в яйцах (патент США № 6,048,537); а Mycoplasma hyopneumoniae можно культивировать в подходящей среде для культивирования (патенты США №№ 5,968,525; 5,338,543; Ross R. F. et al., (1984) Am. J. Vet. Res. 45: 1899-1905). Предпочтительно, CDV можно культивировать в клетках легких норки, так как описано в патенте США № 5,178,862. Другие методики приготовления иммуногенов, полученных из вирусов, известны в данной области техники, и описаны, например, в Ulmer et al., Science 259: 1745 (1993); Male et al., Advanced Immunology, p.14.1-14.15, J.B. Lippincott Co., Philadelphia, Pa. (1989).
Также пригодны антигенные синтетические пептиды, которые имитируют антигенные пептидные последовательности. Такие иммуногены могут быть синтезированы с применением твердофазной методики, как описано, например, в R. B. Merrifield, Science 85:2149- 2154 (1963); очищены и при необходимости связаны с белком-носителем, таким как мурамил-дипептид (MDP), бычий сывороточный альбумин (BSA), гемоцианин лимфы улитки (KLH), и тому подобные, с применением бифункционального связывающего агента, такого как глутаровый альдегид, и тому подобного.
th
Синтетические антигены также включены в определение, например, полиэпитопы, фланкирующие эпитопы, и другие рекомбинантные или синтетические антигены. См., например, Bergmann et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23, 2777-2781; Bergmann et al. (1996) J. Immunol. 157, 3242-3249; Suhrbier, A. (1997) Immunol. Cell Biol. 75, 402-408; Gardner et al. (1998) 12World AIDS Conference, Geneva, Switzerland, Jun. 28-Jul. 3, 1998. Антигенные фрагменты, для целей настоящего изобретения, могут, как правило, включать по меньшей мере примерно 3 аминокислоты, предпочтительно по меньшей мере примерно 5 аминокислот, более предпочтительно по меньшей мере примерно 10-15 аминокислот, и наиболее предпочтительно 25 или более аминокислот из молекулы. Не имеется критического верхнего предела длины фрагмента, который может включать почти полноразмерную последовательность белка, или даже гибридный белок, включающий два или больше, или по меньшей мере один эпитоп белка.
Соответственно, минимальная структура нуклеиновой кислоты, экспрессирующей эпитоп, может включать нуклеотиды, кодирующие эпитоп, иммуноген, или антиген белка или полипротеина. Нуклеиновая кислота, кодирующая фрагмент всего белка или полипротеина, более предпочтительно, включает или по существу состоит из минимум примерно 21 нуклеотида, предпочтительно по меньшей мере 42 нуклеотидов, и предпочтительно по меньшей мере примерно 57, примерно 87 или примерно 150 последовательных или смежных нуклеотидов из последовательности, кодирующей весь белок или полипротеин. Процедуры определения эпитопа, такие как генерация перекрывающихся пептидных библиотек (Hemmer B. et al., (1998) Immunology Today 19(4), 163-168), Pepscan (Geysen et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 3998-4002; Geysen et al., (1985) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 82, 178-182; Van der Zee R. et al., (1989) Eur. J. Immunol. 19, 43-47; Geysen H.M., (1990) Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health 21, 523-533; Multipin Peptide Synthesis Kits de Chiron) и алгоритмы (De Groot A. et al., (1999) Nat. Biotechnol. 17, 533-561, и PCT заявка № PCT/US2004/022605); все из которых включены посредством ссылки во всей полноте, можно применять для осуществления изобретения, без нежелательных экспериментов. Другие документы, цитированные и включенные в настоящей заявке, можно также использовать для способов определения эпитопов иммуногена или антигена, и таких молекул нуклеиновых кислот, которые кодируют такие эпитопы.
Также в настоящем изобретении обеспечивается способ получения лиофилизированной стабильной антигенной композиции или вакцинной композиции, включающей, например, вирус болезни Ньюкасла, включающий этап лиофилизации стабилизированной суспензии или раствора, полученных из суспензии или раствора живого аттенуированного вируса болезни Ньюкасла, смешанных со стабилизатором в соответствии с настоящим изобретением, и сахароспиртом в соответствии с настоящим изобретением.
«Сублимационная сушка» или «лиофилизация» означает способ, при котором суспензию замораживают, после чего воду удаляют путем сублимации при низком давлении. Как применяется в настоящей заявке, термин «сублимация» означает изменение физических свойств композиции, когда композиция переходит непосредственно из твердого состояния в газообразное состояние, минуя жидкое. Как применяется в настоящей заявке, значение «Тс» означает температуру стеклования, которая соответствует температуре, ниже которой замороженная композиция становится стекловидной.
Способ лиофилизации антигенной суспензии или раствора в соответствии с изобретением может включать этапы: (а) обеспечения контакта антигенной суспензии или раствора со стабилизатором из настоящего изобретения, с получением стабилизированной антигенной суспензии или раствора; (b) охлаждения, при атмосферном давлении, стабилизированной антигенной суспензии или раствора до температуры ниже примерно значения Тс стабилизированной антигенной суспензии или раствора; (с) сушки стабилизированной антигенной суспензии или раствора (т.е. этапа первичной сушки или сублимации) путем сублимации льда при низком давлении; и (d) удаления избытка остаточной влаги (т.е. этапа вторичной сушки или десорбции) путем дополнительного снижения давления и повышения температуры стабилизированной антигенной суспензии или раствора.
Этап охлаждения (b) можно проводить при температурах менее примерно -40°С (этап замораживания воды). Сушку стабилизированных антигенных суспензий или раствора путем сублимации льда при низком давлении (с) можно осуществлять, например, под давлением примерно 200 мкбар или ниже, в то время как дополнительное снижение давления можно осуществлять до значения, равного примерно 100 мкбар или ниже. Наконец, температура стабилизированной антигенной суспензии или раствора во время удаления избыточной остаточной влаги (d) составляет, например, около 20-30°С.
Способ лиофилизации можно также осуществлять с антигенной суспензией или раствором, включающим живой аттенуированный вирус болезни Ньюкасла и по меньшей мере один активный антигенный компонент, полученный из иного патогена, чем парамиксовирус, который смешивают со стабилизатором в соответствии с настоящим изобретением для получения лиофилизированной стабилизированной поливалентной антигенной или вакцинной композиции.
Содержание влаги в лиофилизированном материале может быть в диапазоне примерно от 0,5 масс.% до 5 масс.%, предпочтительно примерно от 0,5 масс.% до 3 масс.%, и более предпочтительно примерно от 1,0 масс.% до 2,6 масс.%.
Каждый этап, включая замораживание воды и её удаление во время первичной и вторичной сушки, подвергает биологические ингредиенты, такие как патогены, в антигенных суспензиях или растворах из настоящего изобретения механическому, физическому и биохимическому шоку, который потенциально оказывает побочное влияние на структуру, внешний вид, стабильность, антигенность, инфективность и жизнеспособность патогенов или биологических ингредиентов.
10
10
10
Стабилизаторы из настоящего изобретения обеспечивают хорошую стабильность живых аттенуированных патогенов, таких как собачий парамиксовирус, и поддерживают инфективность, в частности, CDV и cPi2 во время процесса лиофилизации и при хранении. Стабильность можно рассчитать по разнице между титром инфективности до и после этапа лиофилизации, и титру инфективности спустя 12 месяцев хранения лиофилизированной стабилизированной антигенной композиции или вакцинной композиции при 4°С. Хорошая стабильность может предпочтительно включать разницу лишь 1,2 log, и предпочтительно лишь 1,0 log. Способы определения титра инфективности хорошо известны специалистам в данной области техники. Некоторые способы определения титра инфективности описаны в Примерах. Кроме того, стабильность можно установить путем подгонки титра logи значений времени титрования во время периода хранения с применением расчетов и/или алгоритмов линейной регрессии.
Кроме того, стабилизаторы настоящего изобретения обеспечивают лиофилизированные таблетки, обладающие хорошими свойствами, другими словами, имеющие правильную форму и однородную окраску. Неправильная форма может характеризоваться наличием прилипания всей таблетки или её части ко дну контейнера, и неподвижность после переворачивания и встряхивания (липкая конфигурация). Кроме того, таблетка, имеющая форму катушки (конфигурация катушки), или разделение таблетки на две части, располагающиеся горизонтально (разделенная конфигурация), или таблетка, имеющая характеристику пены с неоднородными отверстиями (губчатая конфигурация), или таблетка в форме неровной пены (конфигурация безе), являются неприемлемыми.
Стабилизированные лиофилизированные антигенные композиции или вакцинные композиции с применением стабилизатора в соответствии с настоящим изобретением и полученные посредством способа лиофилизации, описанного выше, охватываются настоящим изобретением.
В другом аспекте настоящего изобретения обеспечивается набор, включающий первый контейнер, содержащий лиофилизированную стабилизированную антигенную композицию или вакцинную композицию из изобретения, и второй контейнер, содержащий растворитель.
Для своего использования и применения у субъекта, лиофилизированную стабилизированную антигенную композицию или вакцинную композицию можно восстановить путем регидратации растворителем. Растворитель, как правило, является водой, такой как деминерализованная или дистиллированная вода, но также может включать физиологические растворы или буферы, известные в данной области техники.
Восстановленные готовые к применению антигенные композиции или вакцинные композиции можно применять у животного посредством инъекции, парентеральным или мукозальным способом, или предпочтительно пероральным или окулярным применением посредством распыления. Однако применение таких восстановленных готовых к применению антигенных композиций или вакцинных композиций может также включать интраназальное, внутрикожное или местное применение.
Следующие примеры иллюстрируют приготовление и активность вакцинной композиции из настоящего изобретения при использовании для иммунизации субъекта против различных инфекционных заболеваний. Также представлены исследования стабильности с анализом титра прессованной лиофилизированной таблетки для различных вакцинных составов. Производство композиции из настоящего изобретения может быть осуществлено рядовым специалистом в данной области техники, следующим учениям из US 2003/0026813 и WO 01/13896, которые включены посредством ссылки во всей полноте.
Примеры, приведенные для дополнительной иллюстрации и разъяснения настоящего изобретения, не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение каким-либо образом. Если в примерах и где-либо в описании и формуле изобретения не указано иное, все части и проценты являются массовыми. Значения температуры приведены в градусах Цельсия.
Исследования стабильности
Также исследовали влияние маннитола на стабильность вакцинных композиций. Готовили шесть различных составов, как описано в Таблице 1, чтобы показать, что агент, контролирующий образование пены (маннитол), не оказывает какого-либо отрицательного влияния на стабильность составов с интервалом 6 месяцев и 9 месяцев. Таблетки, полученные из составов, хранили примерно при 5°С, в стандартных герметичных алюминиевых блистерных упаковках в течение времени до восстановления в растворителе и измерения титра. Определение вирусного титра лиофилизированных вакцин проводили путем расчета среднего титра по трем титрованиям, повторенным для одной и той же вакцины. Результаты титрования показаны в Таблице 2.
Таблица 1
Состав 1
Состав 2
Состав 3
Состав 4
Состав 5
Состав 6
Формула для 100 кг
Лиофилизированный антиген истабилизатор
30,00 кг
35,00 кг
33,00 кг
40,00 кг
25,00 кг
35,00 кг
Натрия бикарбонат
41,02 кг
28,92 кг
39,25 кг
19,50 кг
43,97 кг
28,92 кг
Маннитол
0
15,00 кг
0
26,00 кг
0
15,00 кг
Безводная лимонная кислота
28,48 кг
20,08 кг
27,25 кг
13,50 кг
30,53 кг
20,08 кг
Магния стеарат
0,50 кг
1,00 кг
0,50 кг
1,00 кг
0,50 кг
1,00 кг
Характеристики таблетки
Диаметр
12 мм
12 мм
15 мм
15 мм
12 мм
12 мм
Твердость
70-200 N
70-200 N
70-200 N
70-200 N
70-200 N
70-200 N
Масса (г)
0,74-0,90
0,63-0,77
1,10–1,34
0,90–1,10
0,74–0,90
0,527– 0,645
Толщина (мм)
4,5 – 4,9
< 5
4,5 – 4,9
< 5
4,5 – 4,9
3,5 – 3,9
Таблица 2. Результаты определения титра
Состав #
Антиген
Стабилизатор
Средний титр (0 месяцев)
Средний титр (3 месяца)
Средний титр (6 месяцев)
Средний титр (9 месяцев)
1
Вирус болезни Ньюкасла, штамм VG/GA
Белковый гидролизатКалия глутаматБычий альбумин
9,4
9,0
9,0
9,1
2
Вирус болезни Ньюкасла, штамм VG/GA
Белковый гидролизатКалия глутаматБычий альбумин
9,5
9,3
9,2
9,4
3
Вирус инфекционного бронхита, штамм CR88121
Белковый гидролизат
7,6
7,1
7,3
7,0
4
Вирус инфекционного бронхита, штамм CR88121
Белковый гидролизат
7,9
7,8
7,8
7,8
5
Вирус инфекционного бронхита, штамм H120
Белковый гидролизат
9,4
7,1
7,4
-
6
Вирус инфекционного бронхита, штамм H120
Белковый гидролизат
7,5
7,6
7,7
-
Единицы титра: Log10 DICC50/cp
Результаты показывают очень хорошую стабильность составов, содержащих маннитол, в течение долгого периода хранения при 5°С.
Исследования контроля пенообразования
а) Концентрации агента, контролирующего образование пены
Три состава готовили, как показано в таблице 3, для оценки влияния агента, контролирующего образование пены, на снижение пены в растворе. Эти составы таблетировали с применением обычных средств получения шипучих таблеток. Таблетки смешивали с водой при комнатной температуре и измеряли образование пены на пике формирования пены. Натрия бикарбонат и лимонная кислота действовали в качестве шипучего агента, способствующего перемешиванию композиции в воде. Результаты, показанные на фигуре 1, демонстрируют, что Состав II (содержащий 15% маннитола), и Состав III (содержащий 33% маннитола), образуют меньше пены, чем Состав I (контроль, содержащий 0% маннитола). Это показывает снижение образования пены при увеличении количества маннитола в композиции.
Таблица 3
Композиция
Состав I
Состав II
Состав III
Плацебо и стабилизатор
33%
33%
33%
Натрия бикарбонат и безводная лимонная кислота
66%
51%
33%
Маннитол
0%
15%
33%
Магния стеарат
1%
1%
1%
b) Исследование влияния маннитола на различные вакцинные композиции.
Готовили шесть вакцинных композиций, как показано в Таблице 4. Эти композиции таблетировали с применением обычных средств изготовления шипучих таблеток. Таблетки перемешивали в воде при комнатной температуре, и измеряли образующуюся пену на пике образования пены. Натрия бикарбонат и лимонная кислота действуют в качестве шипучего агента, способствуя смешиванию композиции с водой. Результаты, показанные на фигуре 2, демонстрируют, что Состав В (содержащий 15% маннитола), образует примерно на 50% меньше пены, чем Состав А (содержащий 0% маннитола). Фигура 3 демонстрирует, что Состав D (содержащий 15% маннитола) образует примерно на 60% меньше пены, чем Состав С (содержащий 0% маннитола). Фигура 4 демонстрирует, что Состав Е (содержащий 26% маннитола) образует примерно на 80% меньше пены, чем Состав F (содержащий 0% маннитола).
Таблица 4
Композиция
Состав A
Состав B
Состав C
Состав D
Состав E
Состав F
Лиофилизированный антиген и стабилизатор
Вирус болезни Ньюкасла, штамм VG/GA (30%)
Вирус болезни Ньюкасла, штамм VG/GA (35%)
I Вирус инфекционного бронхита, штамм H120 (25%)
I Вирус инфекционного бронхита, штамм H120(35%)
I Вирус инфекционного бронхита, штамм CR88121 (40%)
I Вирус инфекционного бронхита, штамм CR88121 (33%)
Натрия бикарбонатБезводная лимонная кислота
69%
49%
74%
49%
33%
66
Маннитол
0%
15%
0%
15%
26%
0%
Магния стеарат
1%
1%
1%
1%
1%
1%
При анализе подробно описанных предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения необходимо понять, что изобретение, определенное формулой изобретения, не ограничивается конкретными деталями, приведенными в вышеприведенном описании, поскольку их многие явные вариации возможны без отделения от его сущности или объема.