ЭФФЕКТИВНЫЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЪЮГАТОВ СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С КЛЕТКОЙ АГЕНТ ЦИТОТОКСИЧЕСКИЙ АГЕНТ

2
1. Способ получения конъюгата связывающийся с клеткой агент-цитотоксический агент, включающий стадию осуществления реакции связывающегося с клеткой агента с цитотоксическим агентом или соединением цитотоксический агент-линкер, содержащим реакционноспособную группу, способную образовывать ковалентную связь с указанным связывающимся с клеткой агентом, при pH от 4 до 9 в присутствии буферного раствора с высокой ионной силой, причем указанный связывающийся с клеткой агент содержит ε–NH группу лизина, которая образует ковалентную связь с цитотоксическим агентом или соединением цитотоксический агент-линкер, содержащим группу, способную вступать в реакцию с амином.
2. Способ по п. 1, где указанный pH составляет от 7,3 и 8,7.
3. Способ по п. 1, где указанный pH составляет от 7,3 до 8,4.
4. Способ по п. 1, где указанный pH составляет от 7,6 до 8,4.
5. Способ по п. 1, где указанный pH составляет от 7,7 до 8,3.
6. Способ по п. 1, где указанный pH составляет от 7,8 до 8,2.
7. Способ по п. 1, где указанный pH составляет от 7,9 до 8,1.
8. Способ по п. 1, где указанный pH составляет 8,0.
9. Способ по п. 1, где указанный pH составляет от 8,5 до 8,9.
10. Способ по п. 1, где указанный pH составляет от 8,6 до 8,8.
11. Способ по п. 1, где указанный pH составляет 8,7.
12. Способ по любому из пп. 1-11, где указанный буферный раствор имеет ионную силу от 20 мМ до 500 мМ.
13. Способ по п. 12, где указанный буферный раствор имеет ионную силу от 50 мМ до 100 мМ.
14. Способ по п. 12, где указанный буферный раствор имеет ионную силу от 60 мМ до 90 мМ.
15. Способ по п. 12, где указанный буферный раствор имеет ионную силу от 70 мМ до 80 мМ.
16.Способ по п. 12, где указанный буферный раствор имеет ионную силу 75 мМ.
17. Способ по п. 12, где указанный буферный раствор имеет ионную силу от 100 нМ до 200 мМ.
18. Способ по п. 12, где указанный буферный раствор имеет ионную силу от 100 нМ до 160 нМ.
19. Способ по п. 12, где указанный буферный раствор имеет ионную силу от 120 нМ до 140 нМ.
20. Способ по п. 12, где указанный буферный раствор имеет ионную силу 130 нМ.
21     Способ по п. 1, где указанный буферный раствор имеет pH от 7,8 до 8,9 и ионную силу от 50 мМ до 200 мМ.
22. Способ по п. 1, где указанный буфер имеет pH от 7,8 до 8,2 и ионную силу от 70 мМ до 80 мМ.
23. Способ по п. 1, где указанный буфер имеет pH 8,0 и ионную силу 75 мМ.
24. Способ по п. 1, где указанный буфер имеет pH от 8,5 до 8,9 и ионную силу от 120 мМ до 140 мМ.
25. Способ по п. 1, где указанный буфер имеет pH 8,7 и ионную силу 130 мМ.
26. Способ по любому из пп. 1-25, где указанный буферный раствор выбран из группы, состоящей из буфера MES ((2-(N-морфолино)этансульфоновой кислоты)), бис-трис-метанового (2-[бис(2-гидроксиэтил)амино]-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диольного) буфера, буфера ADA (N-(2-ацетамидо)иминодиуксусной кислоты), буфера ACES (N-2-аминоэтансульфоновой кислоты), PIPES (пиперазин-N,N′-бис(2-этансульфоновой кислоты)), буфера MOPSO (β-гидрокси-4-морфолинпропансульфоновой кислоты), бис-трис-пропанового (1,3-бис(трис(гидроксиметил)метиламино)пропанового) буфера, BES (N,N-бис(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфоновой кислоты), буфера TES (N-[трис(гидроксиметил)метил]-2-аминоэтансульфоновой кислоты), буфера HEPES (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этансульфоновой кислоты), DIPSO (3-(N,N-бис[2-гидроксиэтил]амино)-2-гидроксипропансульфоновой кислоты или N,N-бис(2-гидроксиэтил)-3-амино-2-гидроксипропансульфоновой кислоты), буфера MOBS (4-(N-морфолино)бутансульфоновой кислоты), буфера TAPSO (3-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]-2-гидроксипропан-1-сульфоновой кислоты), буфера тризма (трис или 2-амино-2-(гидроксиметил)-1,3-пропандиола), буфера HEPPSO (N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N'-(2-гидроксипропансульфоновой кислоты)), буфера POPSO (пиперазин-1,4-бис-(2-гидроксипропансульфоновой кислоты) дегидрата), буфера EPPS (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-пропансульфоновой кислоты), трицинового (N-(2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил)глицинового) буфера, глицил-глицинового (gly-gly), бицинового (2-(бис(2-гидроксиэтил)амино)уксусной кислоты) буфера, буфера HEPBS (N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N′-(4-бутансульфоновой кислоты)), буфера TAPS (3-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]пропан-1-сульфоновой кислоты), буфера AMPD (2-амино-2-метил-1,3-пропандиола), буфера TABS (N-трис(гидроксиметил)метил-4-аминобутансульфоновой кислоты), буфера AMPSO (N-(1,1-диметил-2-гидроксиэтил)-3-амино-2-гидроксипропансульфоновой кислоты) и их комбинации.
27. Способ по п. 26, где указанный буферный раствор представляет собой буфер EPPS.
28. Способ по п. 1, где указанный буферный раствор представляет собой 50 мМ – 200 мМ буфер EPPS, имеющий pH от 7,8 до 8,9.
29. Способ по п. 1, где указанный буферный раствор представляет собой 70 мМ – 80 мМ буфер EPPS, имеющий pH от 7,8 до 8,2.
30. Способ по п. 1, где указанный буферный раствор представляет собой 75 мМ буфер EPPS, имеющий pH 8,0.
31. Способ по п. 1, где указанный буферный раствор представляет собой 120 мМ – 140 мМ буфер EPPS, имеющий pH от 8,5 до 8,9.
32. Способ по п. 1, где указанный буферный раствор представляет собой 130 мМ буфер EPPS, имеющий pH 8,7.
2
33. Способ получения конъюгата связывающийся с клеткой агент-цитотоксический агент, включающий стадию осуществления реакции связывающегося с клеткой агента с цитотоксическим агентом или соединением цитотоксический агент-линкер в буферном растворе, имеющем pH от 7,3 до 9,0, причем указанный связывающийся с клеткой агент содержит ε–NH группу лизина, которая образует ковалентную связь с цитотоксическим агентом или соединением цитотоксический агент-линкер, содержащим группу, способную вступать в реакцию с амином.
34. Способ по п. 33, где указанный pH буферного раствора составляет от 7,3 до 8,4.
35. Способ по п. 33, где указанный pH составляет от 7,6 до 8,4.
36. Способ по п. 33, где указанный pH составляет от 7,7 до 8,3.
37. Способ по п. 33, где указанный pH составляет от 7,8 до 8,2.
38. Способ по п. 33, где указанный pH составляет от 7,9 и 8,1.
39. Способ по п. 33, где указанный pH составляет 8,0.
40. Способ по п. 33, где указанный pH составляет от 8,5 до 8,9.
41. Способ по п. 33, где указанный pH составляет от 8,6 до 8,8.
42. Способ по п. 33, где указанный pH составляет 8,7.
2
43. Способ получения конъюгата связывающийся с клеткой агент-цитотоксический агент, включающий стадию осуществления реакции связывающегося с клеткой агента с цитотоксическим агентом или соединением цитотоксический агент-линкер, содержащим реакционноспособную группу, способную образовывать ковалентную связь с указанным связывающимся с клеткой агентом, при pH от 4 до 9 в присутствии буферного раствора с высокой концентрацией, причем указанный связывающийся с клеткой агент содержит ε–NH группу лизина, которая образует ковалентную связь с цитотоксическим агентом или соединением цитотоксический агент-линкер, содержащим группу, способную вступать в реакцию с амином.
44. Способ по п. 43, где указанная концентрация буферного раствора составляет от 20 мМ до 750 мМ, от 20 мМ до 500 мМ, от 20 мМ до 200 мМ, от 25 мМ до 150 мМ, от 50 мМ до 150 мМ, от 50 мМ до 100 мМ, от 100 мМ до 200 мМ или от 100 мМ до 150 мМ.
45. Способ по п. 43 или 44, где указанный pH составляет от 7,3 до 8,9, от 7,3 до 8,4, от 7,6 до 8,4, от 7,7 до 8,3, от 7,8 до 8,2, от 8,5 до 8,9 или от 8,6 до 8,8.
46. Способ по п. 43, где указанный буферный раствор имеет концентрацию от 20 мМ до 200 мМ и pH от 7,1 до 8,5.
47. Способ по п. 43, где указанный буферный раствор имеет концентрацию от 50 мМ до 150 мМ и pH от 7,6 до 8,4.
48. Способ по п. 43, где указанный буферный раствор имеет концентрацию от 50 мМ до 100 мМ и pH от 7,7 до 8,3.
49. Способ по п. 43, где указанный буферный раствор имеет концентрацию от 60 мМ до 90 мМ и pH от 7,8 до 8,2.
50. Способ по п. 43, где указанный буферный раствор имеет концентрацию от 70 мМ до 80 мМ и pH от 7,9 до 8,1.
51. Способ по п. 43, где указанный буферный раствор имеет концентрацию от 50 мМ до 200 мМ и pH от 7,8 до 8,9.
52. Способ по п. 43, где указанный буферный раствор имеет концентрацию от 110 мМ до 150 мМ и pH от 8,5 до 8,9.
53.Способ по п. 43, где указанный буферный раствор имеет концентрацию от 120 мМ до 140 мМ и pH от 8,6 до 8,8.
54. Способ по любому из пп. 33-53, где указанный буферный раствор выбран из группы, состоящей из буфера MES ((2-(N-морфолино)этансульфоновой кислоты)), бис-трис-метанового (2-[бис(2-гидроксиэтил)амино]-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диольного) буфера, буфера ADA (N-(2-ацетамидо)иминодиуксусной кислоты), буфера ACES (N-2-аминоэтансульфоновой кислоты), PIPES (пиперазин-N,N′-бис(2-этансульфоновой кислоты)), буфера MOPSO (β-гидрокси-4-морфолинпропансульфоновой кислоты), бис-трис-пропанового (1,3-бис(трис(гидроксиметил)метиламино)пропанового) буфера, BES (N,N-бис(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфоновой кислоты), буфера TES (N-[трис(гидроксиметил)метил]-2-аминоэтансульфоновой кислоты), буфера HEPES (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этансульфоновой кислоты), DIPSO (3-(N,N-бис[2-гидроксиэтил]амино)-2-гидроксипропансульфоновой кислоты или N,N-бис(2-гидроксиэтил)-3-амино-2-гидроксипропансульфоновой кислоты), буфера MOBS (4-(N-морфолино)бутансульфоновой кислоты), буфера TAPSO (3-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]-2-гидроксипропан-1-сульфоновой кислоты), буфера тризма (трис или 2-амино-2-(гидроксиметил)-1,3-пропандиола), буфера HEPPSO (N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N'-(2-гидроксипропансульфоновой кислоты)), буфера POPSO (пиперазин-1,4-бис-(2-гидроксипропансульфоновой кислоты) дегидрата), буфера EPPS (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-пропансульфоновой кислоты), трицинового (N-(2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил)глицинового) буфера, глицил-глицинового (gly-gly), бицинового (2-(бис(2-гидроксиэтил)амино)уксусной кислоты) буфера, буфера HEPBS (N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N′-(4-бутансульфоновой кислоты)), буфера TAPS (3-[[1,3-дигидрокси-2-(гидроксиметил)пропан-2-ил]амино]пропан-1-сульфоновой кислоты), буфера AMPD (2-амино-2-метил-1,3-пропандиола), буфера TABS (N-трис(гидроксиметил)метил-4-аминобутансульфоновой кислоты), буфера AMPSO (N-(1,1-диметил-2-гидроксиэтил)-3-амино-2-гидроксипропансульфоновой кислоты) и их комбинации.
55. Способ по п. 54, где указанный буферный раствор представляет собой буфер EPPS.
56. Способ по п. 54, где указанный буферный раствор представляет собой 75 мМ буфер EPPS.
57. Способ по п. 54, где указанный буферный раствор представляет собой 130 мМ буфер EPPS.
58. Способ по любому из пп. 1-57, дополнительно включающий стадию смешивания с гасящим раствором с высокой ионной силой после реакции цитотоксического агента или соединения цитотоксический агент-линкер со связывающимся с клеткой агентом.
59. Способ по п. 58, где указанный гасящий раствор имеет ионную силу от 200 мМ до 3000 мМ, от 200 мМ до 2000 мМ, от 200 мМ до 1000 мМ, от 500 мМ до 1000 мМ, от 550 мМ до 1000 мМ или от 600 мМ до 1000 мМ.
60. Способ по п. 58, где указанный гасящий раствор имеет ионную силу от 700 мМ до 1000 мМ.
61. Способ по любому из пп. 58-60, где указанный гасящий раствор содержит EPPS.
62. Способ по любому из пп. 58-60, где указанный гасящий раствор содержит EPPS и гистидина гидрохлорид.
63. Способ по любому из пп. 1-57, дополнительно включающий стадию смешивания с гасящим раствором, содержащим буфер с высокой концентрацией, после реакции цитотоксического агента или соединения цитотоксический агент-линкер со связывающимся с клеткой агентом.
64. Способ по п. 63, где указанная концентрация буфера в указанном гасящем растворе составляет от 200 мМ до 3000 мМ, от 200 нМ до 2000 мМ, от 200 мМ до 1000 мМ, от 500 мМ до 1000 мМ, от 550 мМ до 1000 мМ или от 600 мМ до 1000 мМ.
65. Способ по п. 63 или 64, где после смешивания конечная концентрация буфера составляет от 150 мМ до 750 мМ, от 150 мМ до 600 мМ, от 200 мМ до 500 нМ, от 200 мМ до 400 нМ или от 250 мМ до 350 мМ.
66. Способ по любому из пп. 58-65, где указанный гасящий раствор имеет pH от 5 до 9.
67. Способ по п. 66, где указанный гасящий раствор имеет pH от 5 до 7.
68. Способ по п. 66, где указанный гасящий раствор имеет pH от 5 до 6.
69. Способ по п. 66, где указанный гасящий раствор имеет pH 5,5.
70. Способ по п. 69, где указанный гасящий раствор содержит 750 мМ EPPS и 150 мМ гистидина гидрохлорида.
71. Способ по любому из пп. 58-70, где указанное добавление гасящего буфера снижает количество соединений с высокой молекулярной массой.
72. Способ по любому из пп. 1-71, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен (-о) одной из следующих структурных формул
или представляет собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений, где:
L представлен следующей формулой:
5
a
b
m
-NR-P-C(=O)-(CRR)-C(=O)E (A1) или
5
a
b
m
s1
-NR-P-C(=O)-(CRR)-S-Z  (A3);
где:
5
1
3
R представляет собой -H или (C-C)алкил;
P представляет собой аминокислотный остаток или пептид, содержащий от 2 до 20 аминокислотных остатков;
a
b
1
3
R и R для каждого случая каждый независимо представляет собой -H, (C-C)алкил, или заряженный заместитель, или ионизируемую группу Q;
m представляет собой целое число от 1 до 6; и
s1
Z выбран из любой из следующих формул
где q представляет собой целое число от 1 до 5;
M представляет собой -H или катион; и
-C(=O)Eпредставляет собой реакционноспособную сложноэфирную группу.
a
b
5
73. Способ по п. 72, где R и R оба представляют собой H; и R представляет собой H или Me.
74. Способ по п. 72 или 73, где P представляет собой пептид, содержащий от 2 до 5 аминокислотных остатков.
75. Способ по п. 74, где P представляет собой пептид, расщепляемый протеазой.
76. Способ по п. 75, где P представляет собой пептид, расщепляемый протеазой, экспрессируемой в опухолевой ткани.
9
9
77. Способ по любому из пп. 72-74, где P выбран из Gly-Gly-Gly, Ala-Val, Val-Ala, Val-Cit, Val-Lys, Phe-Lys, Lys-Lys, Ala-Lys, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Phe-Ala, Phe-N-тозил-Arg, Phe-N-нитро-Arg, Phe-Phe-Lys, D-Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Leu-Ala-Leu, Ile-Ala-Leu, Val-Ala-Val, Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:21), β-Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:22), Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO:23), Val-Arg, Arg-Val, Arg-Arg, Val-D-Cit, Val-D-Lys, Val-D-Arg, D-Val-Cit, D-Val-Lys, D-Val-Arg, D-Val-D-Cit, D-Val-D-Lys, D-Val-D-Arg, D-Arg-D-Arg, Ala-Ala, Ala-D-Ala, D-Ala-Ala, D-Ala-D-Ala, Ala-Met и Met-Ala.
78. Способ по п. 77, где P представляет собой Gly-Gly-Gly, Ala-Val, Ala-Ala, Ala-D-Ala, D-Ala-Ala или D-Ala-D-Ala.
3
79. Способ по любому из пп. 72-78, где Q представляет собой -SOM.
80. Способ по п. 72, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен(-о) одной из следующих формул
или представляет собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений.
81. Способ по п. 72, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен(-о) одной из следующих структурных формул
или представляет собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений.
82. Способ по любому из пп. 72-81, где указанная реакционноспособная сложноэфирная группа выбрана из N-гидроксисукцинимидного сложного эфира, N-гидроксисульфосукцинимидного сложного эфира, нитрофенилового (например, 2- или 4-нитрофенилового) сложного эфира, динитрофенилового (например, 2,4-динитрофенилового) сложного эфира, сульфотетрафторфенилового (например, 4-сульфо-2,3,5,6-тетрафторфенилового) сложного эфира и пентафторфенилового сложного эфира.
83. Способ по п. 82, где указанная реакционноспособная сложноэфирная группа представлена следующей формулой
..,
3
где U представляет собой H или –SOM.
84. Способ по п. 82, где указанная реакционноспособная сложноэфирная группа представлена следующей формулой
.
85. Способ по п. 72, где указанный цитотоксический агент представлен следующей структурной формулой
или представляет собой фармацевтически приемлемую соль указанного соединения.
86. Способ по п. 72, где указанный цитотоксический агент представлен следующей структурной формулой
или представляет собой фармацевтически приемлемую соль указанного соединения.
87. Способ по любому из пп. 72-79 и 82-84, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен (-о) структурной формулой (I) и его получают путем осуществления реакции соединения структурной формулы (II) с сульфирующим реагентом.
88. Способ по любому из пп. 80 и 82-84, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер получают путем осуществления реакции соединения, представленного одной из следующих структурных формул
или представляющего собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений, с сульфирующим реагентом.
89. Способ по п. 85, где указанный цитотоксический агент получают путем осуществления реакции соединения, представленного одной из следующих формул
или представляющего собой фармацевтически приемлемую соль указанного соединения, с сульфирующим реагентом.
90. Способ по любому из пп. 72-79 и 82-84, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен (-о) структурной формулой (II), и при этом указанный способ дополнительно включает осуществление реакции конъюгата связывающийся с клеткой агент-цитотоксический агент с сульфирующим реагентом.
91. Способ по любому из пп. 72-79 и 82-84, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен (-о) структурной формулой (II), и при этом указанный способ включает осуществление реакции связывающегося с клеткой агента с цитотоксическим агентом или соединением цитотоксический агент-линкер, представленным структурной формулой (II), в присутствии сульфирующего реагента.
92. Способ по любому из пп. 81-84 и 86, где указанный способ дополнительно включает осуществление реакции конъюгата связывающийся с клеткой агент-цитотоксический агент с сульфирующим реагентом.
93. Способ по любому из пп. 81-84 и 86, где указанный способ включает осуществление реакции связывающегося с клеткой агента с цитотоксическим агентом или соединением цитотоксический агент-линкер в присутствии сульфирующего реагента.
94. Способ по любому из пп. 1-71, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен (-о) одной из следующих структурных формул
или представляет собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений, где:
x1
x2
1
6
R и R независимо представляют собой (C-C)алкил;
e1
1
6
R представляет собой -H или (C-C)алкил;
e2
k
2
2
n
R представляет собой -(CH-CH-O)-R;
n представляет собой целое число от 2 до 6;
k
R представляет собой -H или -Me;
s1
Z выбран из любой из следующих формул
(b1);  (b2);  (b3);
(b4);  (b5),
(b6),
(b7); (b8);  (b9) и
(b10),
где q представляет собой целое число от 1 до 5;
M представляет собой -H или катион; и
-C(=O)E представляет собой реакционноспособную сложноэфирную группу.
e1
x1
x2
f
g
f
g
2
p
1
4
95. Способ по п. 94, где R представляет собой H или Me; R и R независимо представляют собой -(CH)-(CRR)-, где каждый из R и R независимо представляет собой -H или (C-C)алкил; и p равен 0, 1, 2 или 3.
f
g
96. Способ по п. 95, где R и R являются одинаковыми или различными и выбраны из -H и -Me.
97. Способ по п. 94, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен(-о) одной из следующих формул
;
или представляет собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений.
98. Способ по п. 94, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен(-о) одной из следующих формул
или представляет собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений.
99. Способ по любому из пп. 94-98, где указанная реакционноспособная сложноэфирная группа выбрана из N-гидроксисукцинимидного сложного эфира, N-гидроксисульфосукцинимидного сложного эфира, нитрофенилового (например, 2- или 4-нитрофенилового) сложного эфира, динитрофенилового (например, 2,4-динитрофенилового) сложного эфира, сульфотетрафторфенилового (например, 4-сульфо-2,3,5,6-тетрафторфенилового) сложного эфира и пентафторфенилового сложного эфира.
100. Способ по п. 99, где указанная реакционноспособная сложноэфирная группа представлена следующей формулой
,
3
где U представляет собой H или –SOM.
101. Способ по п. 100, где указанная реакционноспособная сложноэфирная группа представлена следующей формулой:
.
102. Способ по п. 94, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен(-о) одной из следующих структурных формул
или представляет собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений.
103. Способ по п. 94, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен(-о) одной из следующих структурных формул
или представляет собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений.
104. Способ по любому из пп. 94-96 и 99-101, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен(-о) структурной формулой (III) и его получают путем осуществления реакции соединения структурной формулы (IV) с сульфирующим реагентом.
105. Способ по любому из пп. 94-96 и 99-101, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен(-о) структурной формулой (V) и его получают путем осуществления реакции соединения структурной формулы (VI) с сульфирующим реагентом.
106. Способ по любому из пп. 97 и 99-101, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер получают путем осуществления реакции соединения, представленного одной из следующих структурных формул
или представляющего собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений, с сульфирующим реагентом.
107. Способ по любому из пп. 97 и 99-101, где указанное соединение цитотоксический агент-линкер получают путем осуществления реакции цитотоксического агента, представленного одной из следующих структурных формул
или представляющего собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений, с линкерным соединением, представленным одной из следующих структурных формул
108. Способ по п. 102, где указанное соединение цитотоксический агент-линкер получают путем осуществления реакции соединения одной из следующих структурных формул
или фармацевтически приемлемой соли указанных соединений с сульфирующим реагентом.
109. Способ по п. 102, где указанное соединение цитотоксический агент-линкер получают путем осуществления реакции цитотоксического агента, представленного следующей структурной формулой
или представляющего собой фармацевтически приемлемую соль указанных соединений, с линкерным соединением следующей структурной формулы
110. Способ по любому из пп. 94-96 и 99-101, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен (-о) структурной формулой (IV) или (VI), и при этом указанный способ дополнительно включает осуществление реакции конъюгата связывающийся с клеткой агент-цитотоксический агент с сульфирующим реагентом.
111. Способ по любому из пп. 94-96 и 99-101, где указанный цитотоксический агент или указанное соединение цитотоксический агент-линкер представлен(-о) структурной формулой (IV) или (VI), и при этом указанный способ включает осуществление реакции соединения, представленного структурной формулой (IV) или (VI), в присутствии сульфирующего реагента.
112. Способ по любому из пп. 98-101 и 103, где указанный способ дополнительно включает осуществление реакции конъюгата связывающийся с клеткой агент-цитотоксический агент с сульфирующим реагентом.
113. Способ по любому из пп. 98-101 и 103, где указанный способ включает осуществление реакции связывающегося с клеткой агента с цитотоксическим агентом или соединением цитотоксический агент-линкер в присутствии сульфирующего реагента.
3
114. Способ по любому из пп. 87-93 и 104-113, где указанный сульфирующий реагент представляет собой NaHSO.
+
+
115. Способ по любому из пп. 72-113, где M представляет собой -H, Na или K.
+
116. Способ по п. 115, где M представляет собой Na.
117. Способ по любому из пп. 1-116, где указанный связывающийся с клеткой агент представляет собой антитело.
118. Способ по п. 117, где указанное антитело представляет собой моноклональное антитело.
119. Способ по п. 118, где указанное антитело представляет собой гуманизированное моноклональное антитело.