Пролиферативная активность эпителия, Особенности микроциркуляторного русла и лейкоцитарной инфильтрации эндометриоидных кист яичников

© Коллектив авторов, 2008 УДК 618.11.14-002:611-018.7

ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТь ЭПИТЕЛИЯ, ОСОБЕННОСТИ МИКРОЦИРКУЛЯТОРНОГО РУСЛА и лейкоцитарной инфильтрации эндометриоидных кист яичников

Р.В. Павлов, Н.В. Анисимова, А.А. Акобджанян Ставропольская государственная медицинская академия

В настоящее время эндометриоз является часто встречающимся заболеванием женских половых органов, оказывающим существенное влияние на уровень жизни и репродуктивное здоровье больных. Одной из наиболее частых локализаций наружного генитального эндометриоза является эндометриоз яичников (ЭЯ). Отсутствие единых взглядов на терминологию эндометриоза этой локализации и высокая частота рецидивов после проводимого лечения определяют актуальность дальнейшего изучения проблемы [6, 8].

В последнее время активно изучается роль ангиогенеза и иммунной системы в патогенезе эндометриоза. В работах отечественных и зарубежных авторов показана связь между степенью васкуляризации, особенностями перитонеального микроокружения, уровнем цитокинов и факторов роста в перитонеальной жидкости больных эндометриозом и пролиферативной активностью клеток эндометриоидных гетеротопий [2, 3, 4, 5, 7, 9, 10]. В то же время комплексное исследование пролиферативной активности клеток эпителия при различных гистологических вариантах эндометриоза

яичников с учетом особенностей их микроциркулятор-ного русла и характера лейкоцитарной инфильтрации не проводилось.

В связи с этим целью нашего исследования явилось изучение морфометрических особенностей эпителия и микроциркуляторного русла, а также клеточного состава лейкоцитарных инфильтратов при наиболее часто встречающихся гистологических вариантах эндометриоидных кист яичников.

Материал и методы. Исследование ткани эндометриоидных кист яичников было выполнено у 80 больных. Все больные были репродуктивного возраста (от 20 до 35 лет), ни одна из них до проведения оперативного лечения не получала гормональную терапию, не использовала внутриматочные средства контрацепции и не была беременной. Основными жалобами больных являлись боли внизу живота - 42 женщины (52,50%), нарушения менструальной функции в виде меномет-роррагий - 28 (35,00%) и бесплодие - 35 (43,75%).

Всем больным проводилось стандартное предоперационное обследование, включающее: общеклинические методы, ультразвуковое исследование органов

Таблица 1

Показатели пролиферативной активности эпителия разных гистологических вариантов эндометриоза яичников

Показатели Железисто-кистозный вариант(п=35) 1 Кистозный вариант (п=45) 2 Р

Высота клеток, мкм 14,05±1,20 9,12±1,25 Р1-2 <0,01

Площадь ядер, мкм2 15,43±1,34 8,28±1,14 Р1-2 <0,001

Плоидность клеток, с 2,37±0,14 2,12±0,13 Р1-2 >0,05

Количество ОЯОР в ядре 2,87±0,13 1,60+0,11 Р1-2 <0,001

Средняя площадь ОЯОР, мкм2 1,29±0,06 1,09±0,03 Р1-2 <0,01

Суммарная площадь ОЯОР, мкм2 3,70±0,17 1,74+0,11 Р1-2 <0,001

Таблица 2

Особенности микроциркуляторного русла разных гистологических вариантов эндометриоза яичников

Показатели Железисто-кистозный вариант(n=35) 1 Кистозный вариант (n=45) 2 Р

Площадь сосудов, % 13,40±0,80 7,16±1,02 Р1-2 <0,001

Средняя площадь просвета капилляров, мкм2 118,9±8,38 72,06+5,70 Р1-2 <0,001

Площадь ядер эндотелия, мкм2 11,80±0,80 8,95±0,51 Р1-2 <0,01

Плоидность эндотелия, с 2,05±0,12 2,03±0,09 Р1-2 >0,05

Количество ОЯОР в ядрах эндотелия 2,08±0,08 1,85±0,05 Р1-2 <0,05

Средняя площадь ОЯОР в ядрах эндотелия, мкм2 0,81±0,06 0,52±0,05 Р1-2 <0,001

Суммарная площадь ОЯОР в ядрах эндотелия, мкм2 1,68+0,15 0,96±0,08 Р1-2 <0,001

малого таза, определение уровня СА125 в периферической крови.

Лапароскопия проводилась по общепринятой методике с использованием оборудования фирмы «Karl Storz» (Германия). После осмотра брюшной полости исключалась другая патология, при наличии спаечного процесса производилось разъединение спаек, после которого эндометриоидные кисты удалялись в пределах здоровыхтканей.

Макроскопически все эндометриоидные кисты были однокамерными тонкостенными образованиями (толщина стенки от 3 до 8 мм) с гладкой внешней и внутренней поверхностью, от 2 до 12 см в диаметре, с мелкими красными или синими пятнами на поверхности и «шоколадным» содержимым.

У 21 больной (26,25%) эндометриоидные кисты были двухсторонними, у 28 больных (35,00%) сопровождались наличием эндометриоидных эксплантов на брюшине малого таза, у 25 больных был выявлен выраженный спаечный процесс (31,25%).

Для проведения гистологического и гистохимического исследования кусочки эндометриоидных кист фиксировались в 10% нейтральном формалине и 96%, охлажденном до 20С этаноле. На ротационном микротоме «МПС-2» после парафиновой заливки получали срезы толщиной 5-7 мкм.

Для оценки пролиферативной активности клеток эпителия эндометриоидных кист и эндотелия сосудов использовались критерии, рекомендованные Г.Г Автандиловым: площадь ядер, плоидность клеток и активность областей организаторов ядрышек (ОЯОР) [1]. Степень васкуляризации стенки эндометриоидных кист оценивалась по суммарной площади сосудов и среднему просвету капилляров, а активность ангеоге-неза на основании морфологических критериев пролиферации эндотелиальных клеток капилляров.

Для обзорных целей, оценки степени васкуляризации эндометриоидных кист, проведения кариометрии, подсчета основных популяций иммунокомпетентных клеток и оценки активности ОЯОР срезы, полученные

Таблица 3

Особенности лейкоцитарной инфильтрации разных гистологических вариантов эндометриоза яичников

Показатели Железистокистозный вариант (n=35) 1 Кистозный вариант (n=45) 2 Р

Лейкоциты, в 1 мм2 2303,0+162,7 2505,0±155,3 Р1-2 >0,05

Эозинофилы, % 0,70+0,11 0,95 ±0,19 Р1-2 >0,05

Тучные клетки, % 1,35±0,41 0,99±0,33 Р1- 2 >0,05

Нейтрофилы, % 5,88±0,67 2,99±0,96 Р1-2 <0,05

Лимфоциты, % 80,90+0,55 88,98±1,15 Р1-2 <0,001

Плазматические клетки, % 4,70±0,39 2,56±0,36 Р1-2 <0,001

Макрофаги, % 6,46±0,36 3,51±0,57 Р1-2 <0,001

из препаратов, фиксированных в 10% нейтральном формалине, окрашивали гематоксилином и эозином, по Ван-Гизону, по Романовскому-Гимзе и импрегни-ровали азотнокислым серебром. Для цитофотомет-рического изучения закономерностей распределения ДНК в ядрах клеток срезы, полученные из препаратов, фиксированных в 96% охлажденном этаноле, окрашивали акридиновым оранжевым при рН=2,0.

Системный морфометрический анализ выполняли с помощью микротелефотометрического анализатора изображения (рационализаторское предложение №1044 от 19. 10. 2000), состоящего из видеокамеры «ВКМ 380», полифункционального микроскопа «ЛЮ-МАМ Р-8», блока оцифровки изображения и компьютера PENTIUM III, с использованием программы «Видео Тест-Морфо» производства ООО «Истра-ВидеоТест» (Россия).

Статистическую обработку полученных данных проводили на компьютере PENTIUM III с использованием программы «Primer Biostatistic 4.03. for Windows». Для всех показателей определяли средние значения (М), а также стандартную ошибку среднего (m). Для оценки степени достоверности различий между значениями использовался простой критерий Стьюдента (t). Различия между показателями считали достоверными при р<0,05 и абсолютно достоверными при р<0,01.

Результаты и обсуждение. При микроскопическом исследовании эндометриоидные поражения яичников можно было разделить на 2 основных варианта: железисто-кистозный (ЖКВ) - 35 и кистозный (KB) - 45 больных. Для ЖКВ эндометриоза яичников было характерно наличие кист диаметром до 5 см (в среднем 2,8±0,4 см), с эпителием пролиферативного типа и цитогенной стромой с разнообразными клеточными элементами. В цитогенной строме ЖКВ эндометриоза яичников выявлялось большое количество капилляров, венул и артериол, расположенных с одинаковой плотностью по всей толщине капсулы. Этот вариант эндометриоидного поражения яичников в 40% случаев сопровождался наличием перитонеальных трансплантатов, в 45% случаев был двухсторонним, а в 85% наблюдался выраженный спаечный процесс.

При KB эндометриоидные кисты были диаметром от 5 до 12 см (в среднем 8,3±0,3 см), с дистрофическим эпителием (вплоть до его отсутствия), с фибрози-рованной стромой, практически лишенной клеточных элементов. В строме KB определялись единичные капилляры, венулы и артериолы, плотность которых несколько увеличивалась к периферии их капсулы. KB эндометриоза яичников сопровождался перитонеальными эксплантами только в 12% случаев, двухсторонние кисты были в 20%, а спаечный процесс выявлялся в 15%.

При морфометрическом анализе было установлено, что при ЖКВ эндометриоза яичников эпителиальные клетки имеют достоверно большую высоту и площадь ядер, чем при КВ. При определении плоидности клеток эпителия эндометриоидных кист было установлено, что вне зависимости от их макро- и микроскопического строения с некоторыми колебаниями клетки несут количество ДНК, соответствующее диплоидному набору хромосом. При определении показателей активности ОЯОР было установлено достоверное увеличение их количества, средней и суммарной площади в ядрах эпителиальных клеток ЖКВ эндометриоза яичников по сравнению с KB (табл. 1).

Таким образом, согласно полученным данным эндометриоидные клетки при ЖКВ эндометриоза яичников обладают большей пролиферативной активностью, чем при КВ.

При анализе плотности сосудистого русла и средней площади просвета капилляров в строме эндометриоидных кист яичников было установлено их достоверное снижение при КВ по сравнению с ЖКВ. При морфометрическом определении пролиферативной активности клеток эндотелия капилляров было установлено достоверное увеличение площади ядер, увеличение количества, средней и суммарной площади ОЯОР в ядрах клеток эндотелия при ЖКВ эндометриоза яичников по сравнению с КВ. В отличие от площади ядер и активности ОЯОР в клетках эндотелия капилляров эндометриоидных кист яичников, количество ДНК, содержащееся в них, не зависело от макро- и микроскопических особенностей препаратов и соответствовало диплоидному набору хромосом (табл. 2).

Таким образом, степень васкуляризации стромы ЖКВ эндометриоза яичников была достоверно выше, чем стромы КВ.

При изучении интенсивности лейкоцитарной инфильтрации эндометриоидных кист яичников было установлено, что количество лейкоцитов в их строме достоверно не зависело от гистологического варианта кисты. Однако при анализе популяционного состава лейкоцитарных инфильтратов, было установлено, что в строме ЖКВ эндометриоза яичников достоверно больше макрофагов, нейтрофилов, плазматических клеток и меньше лимфоцитов, чем в строме КВ (табл. 3).

Таким образом, с увеличением в строме эндометриоидных кист яичников количества лимфоцитов и снижением количества макрофагов, нейтрофилов и плазматических клеток происходит уменьшение пролиферативной активности клеток эндометриоид-ного эпителия.

Заключение. Анализируя представленные данные можно утверждать, что при ЖКВ эндометриоза яичников наблюдается более активная пролиферация клеток эпителия, чем при КВ, что позволяет их расценивать как прогрессирующую форму эндометриоза этой локализации. Увеличение степени васкуляризации и пролиферативной активности эндотелия капилляров стромы эндометриоидных кист яичников сопровождается увеличением пролиферативной активности клеток эпителия, что убедительно подтверждает значение неоангиогенеза в прогрессировании эндометриоза этой локализации. Напротив, увеличение количества лимфоцитов и снижение количества макрофагов, ней-трофилов и плазматических клеток в лейкоцитарной инфильтрации стенок эндометриоидных кист ведет к снижению пролиферативной активности клеток эндо-метриоидного эпителия.

Полученные данные убедительно подтверждают роль иммунной системы и ангиогенеза в прогрессировании эндометриоза яичников и позволяют предполагать, что ЖКВ и КВ эндометриоза этой локализации являются разными этапами одного и того же процесса.

Литература

1. Автандилов, ГГ. Компьютерная микротелефотометрия вдиагностической гистоцитопатологии I Г. Г. Автандилов - М.: РМАПO, 1996. - 256 с.

2. Бурлев, В.А. Ангиогенез эктопического эндометрия у больных с перитонеальной формой эндометриоза (обзор литературы) I В.А. Бурлев, Н.А. Ильясова, Е.Д. Дубинская II Проблемы репродукции - 2005. - №1.

- С. 7-13.

3. Бурлев, В.А. Пролиферативная и ангиогенная активность эутопического и эктопического эндометрия у больных с перитонеальной формой эндометриоза I В.А. Бурлев II Проблемы репродукции. - 2006. - № 21.

- С. 78-87.

4. Махмудова, Г.М. Роль некоторых факторов перитонеальной жидкости в патогенезе эндометриоза I Г.М. Махмудова, А.В. Попов II Российский вестник акушера-гинеколога. - 2004. - №2. - С. 27-30.

5. Михалева, Л.М. Эндометриоз яичника: характе-

ристика гемомикроциркуляторного русла I Л.М. Михалева, Н.Н. Воробьева, М.В. Самсонова II Архив патологии. - 2006. - №4. - С. 20-22.

пролиферативная активность ЭПИТЕЛИЯ,

ОСОБЕННОСТИ МИКРОЦИРКУЛЯТОРНОГО РУСЛА

и лейкоцитарной инфильтрации

ЭНДОМЕТРИОИДНыХ КИСТ ЯИЧНИКОВ

Р.В. ПАВЛОВ, Н.В. АНИСИМОВА,

А.А. АКОБДЖАНЯН

В статье представлены результаты морфометрической оценки пролиферативной активности клеток эпителия, особенностей васкуляризации и лейкоцитарной инфильтрации 80 эндометриоидных кист яичников. Доказано, что клетки эпителия железисто-кистозного варианта эндометриоза яичников обладают большей пролиферативной активностью, чем кистозного. Установлено, что увеличение степени васкуляризации и превалирование в лейкоцитарных инфильтратах макрофагов, нейтрофилов и плазматических клеток ведет к увеличению пролиферативной активности эпителия эндометриоидных кист яичников.

Ключевые слова: эндометриоз, ангиогенез, иммунология, морфология

6. Савицкий, Г.А. Перитонеальный эндометриоз и бесплодие (клинико-морфологические исследования) I Г.А. Савицкий, С.М. Горбушин. - СПб.: «ЭЛБИ-СПб», 2002. - 170 с.

7. Сельков, С.А. Oсoбеннoсти локальной продукции интерлейкинов и ростовых факторов при наружном генитальном эндометриозе I С.А. Сельков, Н.Г. Соло-довникова, O^. Павлов, Д.А. Ниаури II Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2005. - Т. 139, №4. - С. 439 - 442.

8. Сидорова, И.С. Клинико-морфологические осо-

бенности эндометриоза яичников I И.С. Сидорова, Е.А. Коган, А.Л. Унанян, Т.Д. Гуриев II Акушерство и гинекология. - 2005. - №6. - С. 43 - 46.

9. Nap, A.W. Pathogenesis of endometriosis I A.W. Nap, PG. Groothuis, A.Y. Demir, J.L. Evers, G.A. Dunselman II Best. Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. - 2004. - Vol. 18, №2. - P 233 - 244.

10. Regidor, PA. Morphometric analyses of endometriotic tissues to determine their grade of activity I PA. Regidor, I. Wagner, M. Ruwe, M. Regidor, A.E. Schindler II Gynecol. Endocrinol. - 2002. - Vol. 16, №3.- P. 235-243.

EPITHELIAL PROLIFERATIVE ACTIVITY, PECULIARITIES OF MICROCIRCULATION AND LEUKOCYTIC INFILTRATION OF ENDOMETRIOID OVARIAN CYSTS

PAVLOV R.V., ANISIMOVA N.V.,

ACOBDZHANYAN A.A.

The authors presented the results of morphometric assessment of epithelial cells proliferative activity, peculiarities of vascularization and leukocytic infiltration in 80 endometrioid ovarian cysts. Epithelial cells of adenoid cystic type ovarian endometriosis possessed high proliferative activity as compared to cystic type. It was determined that increased vascularization and prevailing of macrophages, neutrophils and plasmatic cells in leukocytic infiltrates leads to the enhanced proliferative activity of endometrioid ovarian cysts epithelium.

Key words: endometriosis, angiogenesis, immunology, morphology