Оценка эффективности применения криоконсервированных эритроцитов для коррекции состояния собак, больных бабезиозом

УДК:636.7:616.993.192.6:57.086.13:612.111

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ

ЭРИТРОЦИТОВ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ СОСТОЯНИЯ СОБАК, БОЛЬНЫХ БАБЕЗИОЗОМ

О. А. ПЕРВУШИНА

Харьковская государственная зооветеринарная академия, пгт. Малая Даниловка, Харьковская область, 62341

Резюме. В работе представлены результаты оценки клинической эффективности трансфузии криоконсервированных эритроцитов для собак больных бабезиозом. После переливания криоконсервированных эритроцитов и комплексной терапии наблюдался прирост количества гемоглобина, эритроцитов и уровня гематокрита, сопровождавшийся положительной динамикой в клиническом состоянии больных животных.

Ключевые слова: криоконсервированные эритроциты, бабезиоз, гемотрансфузия, клинический анализ крови.

Summary. The paper presents evaluation data for the clinical efficacy of transfusion of cryopreserved erythrocytes in dogs with canine babesiosis. After the transfusion of cryopreserved erythrocytes and combined therapy, increase in the amount of hemoglobin and red blood cells as well as in hematocrit rate, accompanied with positive changes in the clinical status of sick animals was observed.

Key words: cryopreserved erythrocytes, babesiosis, blood transfusion, complete blood count.

Введение. Лечение переливанием крови в ветеринарии за последние годы пережило быстрый рост, особенно у домашних животных, и некоторые исследования документально подтвердили его пользу при ряде гематологических заболеваний [1]. В последние годы бабезиоз (пироплазмоз) собак приобретает все более массовый характер - расширяется как география этого опаснейшего заболевания, так и уровень заболеваемости. Пироплазмоз - кровепаразитарное заболевание, которое вызывается простейшими микроорганизмами Babesia canis (Piroplasma canis) и сопровождается анемией, желтушностью и красно-коричневой окраской мочи. Переносчиком возбудителя являются иксодовые клещи. При укусе клеща Babesia попадает в кровь собаки и начинает активно размножаться в эритроцитах, вызывая их разрушение. При этом высвобождается большое количество токсичных веществ, действие которых и обуславливает клиническую картину болезни. Выделяют две основные стадии заболевания: острую и хроническую. Первая протекает от 3 до 5 дней, вторая от 3 до 5 недель. Выделяют три основных этапа лечения пироплазмоза:

1. Применение антипротозойных препаратов (азидин, пиросан, пиро-стоп и т. д.), направленных на борьбу с кровепаразитом.

2. Вспомогательная терапия для поддержания организма в зависимости от нарушений общего состояния - применение гепато-протекторов, сердечных препаратов, витаминов.

3. Ощелачивающая терапия для восстановления работы почек.

Анализ источников. Однако через несколько часов после применения антипротозойного препарата начинается гибель бабезий и массовое разрушение зараженных эритроцитов, впоследствии количеств эритроцитов и гемоглобина уменьшается, а иногда и вовсе приводит к критическому состоянию общей картины красной крови [2]. Поэтому представляло интерес использовать криоконсервированные эритроциты для восстановления субнормального количества эритроцитов, гемоглобина и повышения уровня гематокрита.

Цель работы - изучить эффективность переливания криоконсервированной эритромассы для коррекции состояния собак больных пироплазмозом.

Материал и методика исследований. У собаки донора кровь забирали из плечевой вены путем венопункции. Манипуляции с животными проводили согласно Международным принципам Европейской конвенции о защите позвоночных животных (Страсбург, 1985 г.). Собака-донор соответствовала следующим требованиям [6, 10]:

Масса составляла 25 кг. Возраст от 5 лет. Спокойный характер. Гематокрит 40 %. Регулярная вакцинация против основных инфекционных болезней, таких как чума, инфекционный гепатит, лепто-спироз, парвовирусная инфекция и бешенство. Клинически здорова.

Кровь заготавливали на глюкозо-цитратном консерванте и хранили не более 4 часов при 4 0С до проведения экспериментов. Эритроциты осаждали центрифугированием при 750 g 5 мин. После уда-

ления плазмы эритроциты трижды промывали 5-кратным объемом изотонического солевого раствора (150 мМ NaCl, 10 мМ трис-HCl, pH 7,4).

Для криоконсервации эритроцитов использовали криопротектор гидроксиэтилкрахмал (ГЭК) в 17,5 % концентрации. Раствор криопротекторов смешивали с эритромассой (ЭМ) в соотношении 1:1 и выдерживали 30 мин. при 22 0С. Замораживание осуществляли в микротюбиках «EPENDORFF» объемом 5 мл и 2 мл. Размораживание проводили на водяной бане (40-42 0С).

ГЭК относится к группе непроникающих криопротекторов и не требует удаления после размораживания, однако нами было проведено отмывание эритроцитов от криопротектора путем серийного центрифугирования для улучшения реологических свойств эритроцитов, используя только 1 этап. К суспензии размороженных эритроцитов добавляли равный объем 0,6 М раствора NaCl. Гематокрит определяли путем центрифугирования на гематокритной центрифуге (ELMI CM-70).

Расчет необходимого количества эритроцитов для гемотрансфузии проводили по формуле[14]:

К х МТ х (HbT J , НЬД

где К постоянный коэффициент (К=70); МТ - масса тела репициента(кг), НЬТ (г/л) - требуемый гемоглобин для реципиента, НЬР(г/л) - гемоглобин репициента, НЬД(г/л) - гемоглобин донора.

Переливание ЭМ осуществлялось внутривенным путем при помощи специальной системы для переливания крови и внутривенного катетера. ЭМ предварительно была согрета до 37 0С, а так же разведена 1:1 физиологическим раствором NaCl, гематокрит которой составлял 45 %. (Согласно инструкции по применению компонентов крови №164 от 05.07.99 г.).

Основными критериями эффективности применения ЭМ служили показатели прироста гемоглобина, гематокрита, общего количества эритроцитов.

Клинический анализ крови выполнен на автоматическом гематологическом анализаторе «Abacus Vet»; биохимический - на полуавтоматическом биохимическом анализаторе «Chiron Diagnostics LTD».

Для оценки достоверности различий между группами использовали критерий Манна-Уитни, считая достоверными различия с уровнем значимости р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение. У собак, как признано, естественно возникающие антитела являются очень редкими и, если они присутствуют в сыворотке, то в низких титрах или вступают в реакцию при температурах, отличных от температуры тела. Именно вследствие этих им-муногематологических особенностей крайне редко встречается реакция на первую трансфузию при переливании собаке несовместимой крови [10, 11]. Поэтому были проведены гемотрансфузии без предварительного определения групп крови.

Проанализированы 20 историй болезней собак, зараженных Babisia canis. Из них 6 случаев были с легкой степенью заболевания и 4 - с тяжелой. Обе подгруппы были сопоставимы по массе тела и объему ЭМ на момент выполнения трансфузии: средняя масса тела собак в подгруппе на ранней стадии заболевания составила 21,1 кг ±450,7 г, а в подгруппе на поздней стадии - 18,9 кг ±279,9 г (p>0,05); объем переливаемой ЭМ первой подгруппе в среднем составила 217,8±9,3 мл, во второй подгруппе - 315±7,7 мл (p>0,05). Скорость внутривенной трансфузии в первые 30 мин. не превышала 0,25 мл/кг массы тела, дальнейшее увеличение скорости введения ЭМ проводили постепенно до 5 мл/кг каждый час в течении 4 часов однократно. Для контроля была сформирована группа из клинически здоровых животных с той же массой тела и возрастными границами.

Т а б л и ц а. 1. Общий клинический анализ крови у здоровых собак, собак-доноров

Показатели Обозначения Среднее значение для здоровых собак (контроль) Собаки-доноры

Эритроциты 1012/л 5,5 - 8,5 7,46

Гемоглобин г/л 120 - 180 187

Гематокрит % 39 - 56 54,2

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците % 32 - 38 34

Среднее содержание гемоглобина в эритроците пг 18 - 28 25,0

Средний объем эритроцита фл 60 - 75 72,7

Для специфического лечения бабезиоза собак во всех опытных группах использовали однократно, внутримышечно антипротозойный препарат Пиро-Стоп (в 1 мл содержит имидокарба дипропионат -120 мг) в дозе 0,25 мл/кг массы тела животного.

В качестве симптоматической терапии всем опытным животным назначали сульфокамфокаин, Эс-сенциале, рибоксин, цианкобаламин, фуросемид, папаверин, Феррум Лек, гамавит. Дозы препаратов подбирали для каждого животного индивидуально в зависимости от массы тела, курс составлял 5 дней. Однако для усиления эффекта лечения собакам спустя сутки переливали криоконсервирован-ную кровь.

За животными велось наблюдение в течение 10 дней, оценивали общее состояние и клинический анализ крови.

Раннее нами было установлено, что гидроксиэтилкрахмал (ГЭК) в 17,5 % концентрации обладает высоким криозащитным действием для эритроцитов собаки [3]. ГЭК был выбран в качестве криопро-тектора, так как он является производным крахмала, не токсичен, используется в качестве кровезаменителя. Кроме этого, имеются литературные данные об успешном его применении в качестве крио-протектора [15].

Из табл. 2 видно, что у больных бабезиозом собак в двух подопытных группах происходило снижение уровня гемоглобина на 49-67,9 %, эритроцитов на 67,2-90,5 %. Такое значительное уменьшение этих показателей обусловлено внутрисосудистым гемолизом эритроцитов и появлением анти-эритроцитарных антител.

Т а б л и ц а 2. Клинический анализ крови больных собак до и после лечения Пиро-Стоп

Показатели Контрольная группа Подопытные группы животных

первая (ранняя стадия) заболевания вторая (поздняя стадия) заболевания

До лечения 1-е сутки 10-е сутки До лечения 1-сутки 10-е сутки

Гематокрит (Ш), % 40,5±0,35 19,56±0,34 21,9±0,74* 25,2±0,77 10,6±0,77* 11,8±0,61* 25,1±0,64

Гемоглобин (НЬ), г/л 140,5±0,87 71,8±0,94 78,8±1,81* 86,8±1,91* 45,40±0,28* 55±1,80* 64±0,154

Эритроциты (КВС), 1012/л 5,86±0,82 1,9±0,09 2,2±0,09* 2,7±0,09* 0,55±0,09* 0,99±0,10* 2,09±0,21

Среднее содержание НЬ в эритроците (МСН), Пг 24,09±0,25 37,7±0,21 35,8±0,19* 32±0,94 82,9±0,23* 55,5±0,21* 41,6±0,21

Средняя концентрация НЬ в эритроците (МСНС), % 34,7±0,55 36,8±0,28 36±0,25* 34,4±0,24 43±0,28* 46,6±0,41* 34,6±0,44

Средний объем эритроцита (М^), мкм3 69,5±0,64 102,6±0,98 99,5±1,02* 93,3±1,06 192±0,94* 119±0,43* 120±0,78

Примечание: * - р < 0,05-0,001 по отношению к показателям в контрольной группе.

Уровень гематокрита снизился на 51,8-73,8 % по сравнению с контролем и указал на резкое уменьшение объема эритроцитов в объеме плазмы крови.

При этом из клинических симптомов (табл. 4) наблюдалось отсутствие аппетита, угнетение общего состояния (астеновегетативный синдром), повышение температуры тела, учащение пульса, его аритмичность. В некоторых случаях наблюдалась рвота, иногда с примесью желчи, а также признаки энтерита или энтероколита (жидкие каловые массы, выделяющиеся нерегулярно). Видимые слизистые оболочки сначала анемичны. На поздней стадии заболевания отмечали также иктеричность слизистых оболочек, нарушение периодичности мочеотделения, гемоглобинурия.

После первых суток специфической и симптоматической терапии в группе на ранней стадии заболевания происходило повышение уровня гемоглобина на 9,7 %, эритроцитов на 15,7 % и гематокрита на 12,3 %, а к 10-м суткам гемоглобин вырос на 10,1 %, количество эритроцитов увеличилось на 22,7 % и уровень гематокрита повысился на 15 %.

В группе подопытных животных на поздней стадии заболевания на фоне специфической и симптоматической терапии бабезиоза собак после первых суток происходило повышение гемоглобина на 21,1 %, эритроцитов на 80 % и уровня гематокрита на 11,3 %. Однако из табл. 2 видно, что уже к 10 суткам лечения происходит повышение количества гемоглобина на 16,3 %, эритроцитов на 111 % и уровень гематокрит вырос на 1 12 %. Таким образом, данная схема лечения хотя и активизировала эритропоэз, но его активности было недостаточно, чтобы и на 10-е сутки после лечения компенсировать признаки микроцитарной гипохромной анемии средней тяжести. Поэтому в данную схему лече-

ния бабезиоза для коррекции гемолитической анемии спустя сутки было проведено переливание эритроцитарной массы больным собакам однократно.

Как видно из данных, представленных в табл. 3, в первой группе животных после лечения и гемотрансфузии ЭМ уровень гемоглобина и гематокрита вырос соответственно на 11,4 и 16,4 %, а количество эритроцитов на 26,3 %, однако уже к 10-м суткам уровень гемоглобина и гематокрита вырос на 12,5 и 28,6 % соответственно, тогда как прирост эритроцитов составил 27 %.

Т а б л и ц а 3. Клинический анализ крови больных собак до, после лечения и гемотрансфузии

Показатели Контрольная группа Подопытные группы животных

первая (ранняя стадия) заболевания вторая (поздняя стадия) заболевания

до лечения 1-е сутки 10-е сутки до лечения 1-сутки 10-е сутки

Гематокрит (Ш), % 40,5±0,35 19,56±0,34 22,7±0,74* 29,2±0,77 10,6±0,77* 12,18±0,61* 15,1±0,64

Гемоглобин (НЬ), г/л 140,5±0,87 71,8±0,94 80,03±1,81* 90,1±1,91* 45,40±0,28* 56,6±1,80* 65,9±0,154

Эритроциты (ЯВС), 1012/л 5,86±0,82 1,9±0,09 2,4±0,09* 3,03±0,09* 0,55±0,09* 1,01±0,10* 2,15±0,21

Среднее содержание НЬ в эритроците (МСН), Пг 24,09±0,25 37,7±0,21 33,3±0,19* 29±0,94 82,9±0,23* 57,1±0,21* 30,6±0,21

Средняя концентрация НЬ в эритроците (МСНС), % 34,7±0,55 36,8±0,28 35,2±0,25* 30,01±0,24 43±0,28* 46,7±0,41* 32,7±0,44

Средний объем эритроцита (МСУ), мкм3 69,5±0,64 102,6±0,98 94,5±1,02* 96,3±1,06 192±0,94* 122,2±0,43* 93,4±0,78

Примечание: * - р < 0,05-0,001 по отношению к показателям в контрольной группе.

Следовательно, все показатели возросли в 2 раза, по сравнению с результатами, полученными после специфического лечения без гемотрансфузии.

Во второй группе больных животных после первых суток лечения в комплексе с гемотрансфузией наблюдалось повышение уровня гемоглобина и гематокрита на 24,6 и 14,9 % соответственно, тогда как количество эритроцитов возросло на 83,6 %. К 10-м суткам после начала курса лечения и трансфузии криоконсервированной ЭМ наблюдалось повышение уровня гемоглобина и гематокрита на 16,4 и 24,7 % соответственно, тогда как прирост эритроцитов составил 113 %.

Следует отметить, что клинические признаки у собак больных пироплазмозом после специфического лечения, симптоматической терапии и гемотрансфузии криоконсервированной ЭМ в двух подопытных группах постепенно исчезают и приходят в физиологическую норму к 10-м суткам курса терапии (табл. 4).

Т а б л и ц а 4. Клинические признаки собак зараженных бабезиозом до и после лечения и переливания ЭМ

Симптомы До лечения После лечения и переливания ЭМ

ранняя стадия поздняя стадия ранняя стадия поздняя стадия

Угнетение общего состояния + + - -

Потеря аппетита + + - -

Повышение температуры тела + + - -

Аритмия + + - -

Рвота + + - -

Симптомы энтерита + + - -

Анемичность слизистых оболочек + + - -

Иктеричность слизистых оболочек - + - -

Гемоглобинурия + - -

Примечание: «+» - клинический признак присутствует; «-» - клинический признак отсутствует.

Полученные данные свидетельствуют, что комплексная схема лечения бабезиоза должна содержать не только препараты, способствующие уничтожению возбудителя и детоксикации организма, но и при необходимости включать в себя гемотрансфузию и лекарственные средства, корректирующие анемию.

Заключение.

1. Таким образом, представленные данные позволяют подтвердить эффективность трансфузий криоконсервированной эритроцитарной массы в коррекции заболевания пироплазмозом у собак на ранней и тяжелой стадии заболевания.

2. В обоих случаях прирост лабораторных показателей сопровождался положительной клинической динамикой - отмечалась нормализация и стабилизация показателей артериального давления, частоты сердечных сокращений и частоты дыхания.

3. Переливание криоконсервированной эритроцитарной массы можно использовать в комплексе лечения со специфической и симптоматической терапией для восстановления ОЦК и стимуляции эритропоэза.

ЛИТЕРАТУРА

1. Клиническая фармакология по Гудману и Гилману / Под общ. ред. А. Г. Гилмана // Практика, 2006. - 1648 с.

2. Первушина, О. А. Влияние криопротекторов и криоконсервирования на сохранность эритроцитов домашних животных / О. А. Первушина, О. Н. Денисова, Г. Ф. Жегунов // Биофизика живой клетки. Криоконсервация генетических ресурсов: матер. межд. конф. - Пущино. - 2014. - С. 143-145.

3. Санин, А. В. Бабезиоз собак - новое решение старой проблемы / А. В. Санин, И. К. Васильев // Зооиндустрия. - 2007. -№ 7. - С. 19.

4. Уркхарт, Г. Ветеринарная паразитология / Г. Уркхарт, Д. Эрмур, Д. Дункан. - М.: Аквариум ЛТД, 2000. - 352 с.

5. Фелдман, Б. Ф. Рекомендации по переливанию крови / Б. Ф. Фелдман // Современный курс ветеринарной медицины Кирка. - Аквариум, 2005. - С. 461-465.

6. Authement, J. M. Canine blood component therapy: product preparation, storage, and administration / J. M. Authement, К. J. Wolfsheimer, S. Catchings // Journal of the American Animal Hospital Association, 1987.23: 483A93.

7. Bell, К. The blood groups of domestic mammals. Agar, N. S. and Board, P. G. (eds). Red Blood Cells of Domestic Mammals. Elsevier Science Publishers, Amsterdam, pp. 1983, 163-164.

8. Clapisson, G. Cryopreservation with hydroxyethylstarch (HES) + dimethylsulphoxide (DMSO) gives better results than only DMSO / G. Clapisson // Bull Cancer. - 2004. - Vol. 91. - № 4. - P. 97-102.

9. Chabanne, L. I gruppi sanguigni dei carnivori domestici. Trasfusioni e malattie emolitiche neonatali / L. Chabanne, L. Pey-ronnet, C. Fournel, F. Meyer, D. Rigal. - Summa, 1994.11: 5-17.

10. Dodds, W. J. Update on animal blood banking services / W. J. Dodds // Veterinary Practice Staff. - 1993. - Р. 2-7.

11. Hohenhaus, A. E. Transfusion medicine. Problems in Veterinary Medicine, 4. J. B. Lippincott, Philadelphia, 1992. - P. 670.

12. Kim, H. A comparative study of the effects of glycerol and hydroxyethyl starch in canine red blood cell cryopreservation H. Kim, S. Tanaka // J. Vet. Med. Sci. - 2004 Dec; 66(12): 1543-1547.

13. Koch, N. Massive hepatic necrosis associated with accidental imidocarb dipropionate toxicosis in a dog / N. Koch, P. Kelly // J. Comp. Pathol. - 1991. - Vol. 104. - №. 1. - P. 113-116.

14. Lubas, G. Recenti acquisizioni sulle caratteristiche immunoematologiche del gatto e relative applicazioni nella clinica / G. Lubas, R. Continanza // Veterinaria. - 1993, 7: 5-11.

15. Sputtek, A. Method for freezing red blood cells for transfusion using hydroxyethyl starch (HES) / A. Sputtek, D. Meuser, P. Kuhnl // Cryobiology. Pellerin-Mendes C. - P. 544-545.

УДК 619:618.19-002

ЧАСТОТА И ПРОЯВЛЕНИЕ МАСТИТА У ПЕРВОТЕЛОК

О. Т. ЭКХОРУТОМВЕН, Г. Ф. МЕДВЕДЕВ

УО «Белорусская государственная сельскохозяйственная академия», г. Горки, Могилевская область, Республика Беларусь, 213407

Резюме. Изучены причины и частота заболеваемости маститом первотелок. Выявлены основные возбудители при клиническом проявлении мастита. Проведенное на основании бактериологического исследования лечение обеспечивало выздоровление 28,6 % - 100 % первотелок с клиническим проявлением заболевания и 42,5 % - 100 % при субклиническом проявлении.

Ключевые слова: первотелки, возбудители маститов, проявление, эффективность лечения.

Summary. Causes and incidence of mastitis in first-calf cows were studied. Dominant agents in case of clinical manifestation of mastitis were determined. Treatment provided on the basis of bacteriological examination ensured the cure of 28.6 % - 100 % of first-calf cows with clinical manifestation and 42.5 % - 100 % of those with subclinical evidence of disease.

Key words: first-calf cows, mastitis agent, manifestation, treatment efficacy.