БИФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СЛИТЫЕ БЕЛКИ АЛЬФА-МЕЛАНОЦИТОСТИМУЛИРУЮЩЕГО ГОРМОНА (АЛЬФ-MSH) И АТРИАЛЬНОГО НАТРИЙУРЕТИЧЕСКОГО БЕЛКА (ANP) И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ ГИПЕРТОНИИ И ОСТРОМ ПОВРЕЖДЕНИИ ПОЧЕК

1. Бифункциональный гормон, содержащий:
(a) первый домен, содержащий альфа-MSH пептид или фрагмент, вариант или вариант фрагмента указанного пептида, причем указанный фрагмент, вариант или вариант фрагмента обладает гормональной активностью, соответствующей активности альфа-MSH; и
(b) второй домен, ковалентно связанный с указанным первым доменом, причем указанный второй домен содержит натрийуретический пептид или фрагмент, вариант или вариант фрагмента указанного пептида, причем указанный фрагмент, вариант или вариант фрагмента обладает гормональной активностью, соответствующей активности натрийуретического пептида.
2. Бифункциональный гормон по п.1, в котором когда указанный первый домен представляет собой альфа-MSH пептид с последовательностью SEQ ID NO:1; то указанный второй домен представляет собой указанный фрагмент, вариант или вариант фрагмента, обладающий гормональной активностью, соответствующей активности натрийуретического пептида и если указанный второй домен представляет собой натрийуретический пептид с последовательностью SEQ ID NO: 2, 3, 4 или 5, то указанный первый домен представляет собой указанный фрагмент, вариант или вариант фрагмента, обладающий гормональной активностью, соответствующей активности альфа-MSH.
3. Бифункциональный гормон по п.1, в котором указанный первый домен содержит фрагмент, состоящий по меньшей мере из 4 аминокислот, пептида с последовательностью SEQ ID NO:1, или вариант указанного фрагмента, гомологичный указанному фрагменту по меньшей мере на 75%.
4. Бифункциональный гормон по п.1, в котором указанный вариант альфа-MSH пептида содержит аминокислотную последовательность, гомологичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1 по меньшей мере на 75%.
5. Бифункциональный гормон по п.1, в котором указанный первый домен содержит аминокислотную последовательность формулы I (SEQ ID NO: 47)
X<sup>2</sup>-H-X<sup>1</sup>-R-W-X<sup>3</sup>,
(I)
в которой:
1
X представляет собой L-Phe или D-Phe;
2
X представляет собой E, M-E или отсутствует;
3
4
X представляет собой G-K-P-X, G-K-P, G-K, G или отсутствует;
4
X представляет собой M, V или Nle.
6. Бифункциональный гормон по п.5, в котором указанный первый домен содержит следующие последовательности:
1
4
(i) H-X-R-W-G-K-P-X (SEQ ID NO: 48);
1
(ii) M-E-H-X-R-W-G (SEQ ID NO: 17);
1
(iii) H-X-R-W-G (SEQ ID NO: 49);
1
(iv) E-H-X-R-W-G (SEQ ID NO: 50); или
1
(v) H-X-R-W (SEQ ID NO: 20); или
1
4
в которых X представляет собой L-Phe или D-Phe, а X представляет собой M, V или Nle.
7. Бифункциональный гормон по п.6, в котором указанный первый домен содержит следующие последовательности:
(i) H-f-R-W-G-K-P-V (SEQ ID NO: 51);
(ii) H-f-R-W-G-K-P-M (SEQ ID NO: 52);
(iii) H-f-R-W-G-K-P-Nle (SEQ ID NO: 53);
(iv) H-f-R-W-G-K-P (SEQ ID NO: 54);
(v) M-E-H-F-R-W-G (SEQ ID NO: 11);
(vi) H-f-R-W-G (SEQ ID NO: 55);
(vii) E-H-F-R-W (SEQ ID NO: 56);
(ix) E-H-f-R-W-G (SEQ ID NO: 57); или
(iv) H-f-R-W (SEQ ID NO: 6);
в которых f представляет собой D-фенилаланин.
8. Бифункциональный гормон по п.7, в котором указанный первый домен содержит следующие последовательности:
(i) H-f-R-W-G-K-P-V (SEQ ID NO: 51);
(ii) H-f-R-W-G-K-P-M (SEQ ID NO: 52);
(iii) H-f-R-W-G-K-P-Nle (SEQ ID NO: 53);
(iv) H-f-R-W-G-K-P (SEQ ID NO: 54);
(v) M-E-H-F-R-W-G (SEQ ID NO: 11);
(vi) H-f-R-W-G (SEQ ID NO: 55);
(vii) E-H-F-R-W (SEQ ID NO: 56);
(ix) E-H-f-R-W-G (SEQ ID NO: 57); или
(iv) H-f-R-W (SEQ ID NO: 6);
в которых f представляет собой D-фенилаланин.
9. Бифункциональный гормон по любому из пп.1-8, в котором указанный второй домен содержит фрагмент, состоящий по меньшей мере из 15 аминокислот с последовательностью SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:5, или вариант указанного фрагмента, гомологичный указанному фрагменту по меньшей мере на 75%.
10. Бифункциональный гормон по любому из пп.1-8, в котором указанный вариант натрийуретического пептида содержит аминокислотную последовательность, гомологичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO: 5 по меньшей мере на 75%.
11. Бифункциональный гормон по п.1, в котором второй домен содержит аминокислотную последовательность формулы II (SEQ ID NO:58)
X<sup>5</sup>-X<sup>6</sup>-X<sup>7</sup>-F-G-G-R-X<sup>8</sup>-D-R-I-X<sup>9</sup>,
(II),
в которой
5
X представляет собой M, Nle, R-R-S-S, S-L-R-R-S-S или отсутствует;
6
X представляет собой C;
7
X представляет собой H или отсутствует;
8
X представляет собой M или Nle;
9
X представляет собой S-C-Y-R или G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y;
6
9
в которой остаток C группы X образует дисульфидный мостик с остатком C группы X; и
5
когда X представляет собой Nle, указанный первый домен является N-концевым по отношению к указанному второму домену.
12. Бифункциональный гормон по п.11, в котором указанный второй домен содержит следующие последовательности:
(i) M-C-H-F-G-G-R-M-D-R-I-S-C-Y-R, в которой остатки C в положениях 2 и 13 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 22);
(ii) Nle-C-H-F-G-G-R-Nle-D-R-I-S-C-Y-R, в которой остатки C в положениях 2 и 13 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 23);
(iii) C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 1 и 17 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 24);
(iv) C-F-G-G-R-Nle-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 1 и 17 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 25);
(v) R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 5 и 21 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 26);
(vi) S-L-R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 7 и 23 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 59); или
(vii) M-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 2 и 18 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 60).
13. Бифункциональный гормон по п.12, в котором указанный второй домен содержит следующие последовательности:
(i) M-C-H-F-G-G-R-M-D-R-I-S-C-Y-R, в которой остатки C в положениях 2 и 13 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 22);
(ii) Nle-C-H-F-G-G-R-Nle-D-R-I-S-C-Y-R, в которой остатки C в положениях 2 и 13 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 23);
(iii) C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 1 и 17 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 24);
(iv) C-F-G-G-R-Nle-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 1 и 17 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 25);
(v) R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 5 и 21 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 26);
(vii) S-L-R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 7 и 23 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 59); или
(viii) M-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 2 и 18 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 60).
14. Бифункциональный гормон по п.1, в котором указанный первый домен является N-концевым по отношению к указанному второму домену.
2
16
15. Бифункциональный гормон по п.1, в котором аминоконцевой остаток указанного бифункционального гормона ацилирован C-C ацильной группой.
16. Бифункциональный гормон по п.15, в котором аминоконцевой остаток указанного бифункционального гормона ацетилирован.
17. Бифункциональный гормон по п.1, в котором карбоксиконцевой остаток указанного бифункционального гормона амидирован.
18. Бифункциональный гормон по п.1, в котором указанный первый и второй домены ковалентно связаны пептидной связью.
19. Бифункциональный гормон по п.1, в котором указанный бифункциональный гормон содержит следующие последовательности:
(i) H-f-R-W-G-K-P-M-C-H-F-G-G-R-M-D-R-I-S-C-Y-R, в которой остатки C в положениях 9 и 20 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 61);
(ii) H-f-R-W-G-K-P-M-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 9 и 25 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 62);
(iii) H-f-R-W-G-K-P-Nle-C-H-F-G-G-R-Nle-D-R-I-S-C-Y-R, в которой остатки C в положениях 9 и 20 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 63);
(iv) H-f-R-W-G-K-P-Nle-C-F-G-G-R-Nle-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 9 и 25 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 64);
(v) M-E-H-F-R-W-G-R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 12 и 28 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 65);
(vi) H-F-R-W-G-R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 10 и 26 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 66);
(vii) H-f-R-W-G-R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 10 и 26 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 67); или
(viii) E-H-f-R-W-G-R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y, в которой остатки C в положениях 11 и 27 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 69);
в которых f представляет собой D-фенилаланин.
20. Бифункциональный гормон по п.19, в котором указанный бифункциональный гормон содержит следующие последовательности:
2
(i) Ac-H-f-R-W-G-K-P-M-C-H-F-G-G-R-M-D-R-I-S-C-Y-R-NH, в которой остатки C в положениях 9 и 20 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 31);
2
(ii) Ac-H-f-R-W-G-K-P-M-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y-NH, в которой остатки C в положениях 9 и 25 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 33);
2
(iii) Ac-H-f-R-W-G-K-P-Nle-C-H-F-G-G-R-Nle-D-R-I-S-C-Y-R-NH, в которой остатки C в положениях 9 и 20 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 34);
2
(iv) Ac-H-f-R-W-G-K-P-Nle-C-F-G-G-R-Nle-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y-NH, в которой остатки C в положениях 9 и 25 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 35);
2
(v) M-E-H-F-R-W-G-R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y-NH, в которой остатки C в положениях 12 и 28 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 36);
2
(vi) Ac-H-F-R-W-G-R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y-NH, в которой остатки C в положениях 10 и 26 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 38);
2
(vii) Ac-H-f-R-W-G-R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y-NH, в которой остатки C в положениях 10 и 26 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 39); или
2
(viii) Ac-E-H-f-R-W-G-R-R-S-S-C-F-G-G-R-M-D-R-I-G-A-Q-S-G-L-G-C-N-S-F-R-Y-NH, в которой остатки C в положениях 11 и 27 образуют дисульфидный мостик (SEQ ID NO: 42); в которых
Ac представляет аминоконцевое ацетилирование;
2
NH представляет карбоксиконцевое амидирование; и
f представляет собой D-фенилаланин.
21. Композиция, содержащая бифункциональный гормон по любому из пп.1-20, и фармацевтически приемлемый носитель.
22. Фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения почечного расстройства у индивида, содержащая бифункциональный гормон по любому из пп.1-20, и фармацевтически приемлемый носитель.
23. Фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения гипертонии у индивида, содержащая бифункциональный гормон по любому из пп.1-20, и фармацевтически приемлемый носитель.
24. Способ профилактики и/или лечения почечного расстройства у индивида, включающий введение эффективного количества по меньшей мере одного из (a) бифункционального гормона по любому из пп.1-20 или (b) композиции по п.21 указанному индивиду.
25. Способ по п.24, в котором указанное почечное расстройство представляет собой острое повреждение почек.
26. Способ по любому из пп.24 или 25, в котором указанное введение осуществляют путем внутривенной инфузии.
27. Способ профилактики и/или лечения гипертонии у индивида, включающий введение эффективного количества по меньшей мере одного из (a) бифункционального гормона по любому из пп.1-20 или (b) композиции по п.21 указанному индивиду.
28. Применение по меньшей мере одного из (a) бифункционального гормона по любому из пп.1-20 или (b) композиции по п.21 для получения лекарственного средства для профилактики и/или лечения почечного расстройства у индивида.
29. Применение по меньшей мере одного из (a) бифункционального гормона по любому из пп.1-20 или (b) композиции по п.21 для профилактики и/или лечения почечного расстройства у индивида.
30. Применение по меньшей мере одного из (a) бифункционального гормона по любому из пп.1-20 или (b) композиции по п.21 для профилактики и/или лечения гипертонии у индивида.
31. Применение по меньшей мере одного из (a) бифункционального гормона по любому из пп.1-20 или (b) композиции по п.21 для получения лекарственного средства для профилактики и/или лечения гипертонии у индивида.
32. Применение по п.28 или 29, в котором указанное почечное расстройство представляет собой острое повреждение почек.
33. Применение по п.28 или 29, в котором указанный бифункциональный гормон или композицию применяют для введения путем внутривенной инфузии.