Иммуногистохимические исследования рецепторов стероидных гормонов в аденокарциномах эндометрия

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ РЕЦЕПТОРОВ СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ В

АДЕНОКАРЦИНОМАХ ЭНДОМЕТРИЯ

М.Х. АШХАБ, Н.Н. ШЕЛЯСТИНА, И.И. БАБИЧЕНКО

Кафедра патологической анатомии РУДН. Ул. Миклухо- Маклая, 8, И 7198 Москва

Целью исследования являлось изучение корреляции между выраженностью экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону и степенью анапластических изменений в аденокарциномах эндометрия.

Иммуногистохимически исследовали аденокарциномы эндометриоидного типа строения с различной степенью дифференцировки (высоко дифференцированные - 8 случаев, умеренно дифференцированные - 5, низко дифференцированные - 8). Были выявлены корреляционные взаимосвязи между степенью морфологической дифференцировки опухолей и экспрессией рецепторов к стероидным гормонам в опухолевых клетках. Наибольшая экспрессия рецепторов отмечалась в высоко дифференцированных аденокарциномах, в ктороых 76,2+2,5% и 55,9+2,9% клеточных ядер интенсивно экспрессировали рецепторы к эстрогенам и прогестерону. В низко дифференцированных опухолях выраженная и умеренная экспрессия рецепторов к стероидным гормонам отсутствовала. Умеренно дифференцированные аденокарциномы характеризовались промежуточным уровнем экспрессии рецепторов. В этих опухолях 34,6+2,7% и 42,2+2,8% клеточных ядер интенсивно окрашивались на рецепторы к эстрогенам и прогестерону.

Иммуногистохимические исследования рецепторов к эстрогенам и прогестерону позволяют оценить степень гистологической дифференцировки гормонзависимых опухолей эндометрия и косвенно свидетельствуют о прогнозе течения болезни.

Эпителиальные клетки нормального эндометрия являются гормонально зависимыми элементами и подчиняются циклическим регуляторным влияниям стероидных гормонов. Подобные эффекты осуществляются за счет распределения в ядрах этих клеток специфических рецепторов к эстрогенам (Эг) и прогестерону (П) [2,4]. В ходе неопластической трансформации эндометрия часть его эпителиальных клеток сохраняет способность экспрессировать рецепторы к стероидным гормонам, однако клиническое значение этого феномена изучено недостаточно. Часть авторов считает, что экспрессия подобных рецепторов в опухолевых клетках свидетельствует о более благоприятном прогнозе течения заболевания [17], в то время как другие подобной связи не выявляли [9].

Целью настоящего исследования являлось изучение корреляции между выраженностью экспрессии рецепторов к эстрогенам и прогестерону и степенью анапластических изменений в аденокарциномах эндометрия.

Исследование проводилось в гинекологическом отделении Госпиталя для ветеранов войн № 2 г. Москвы и Московского областного онкодиспансера г. Балашихи.

Материалом для исследования служили гистологические срезы, фиксированные в нейтральном формалине и заключенные в парафин от 21-й больной после проведения гистерэктомии. Средний возраст пациенток составлял 62,5+8,4 лет. Исследовали аденокарциномы эндометриоидного типа строения с различной степенью дифференцировки. Высоко дифференцированные аденокарциномы эндометрия были выявлены в 8 случаях, умеренно дифференцированные - 5, низко дифференцированные - 8.

Материал исследовали иммуногистохимическим методом [1, 10]. Из фиксированных в нейтральном формалине и залитых в парафин кусочков ткани эндометрия делали тонкие срезы толщиной 4 мкм и помещали по 3-4 на стекла, покрытые поли-Ь-лизином.

Выявление тканевых антигенов проводили авидин-биотиновым методом, в котором биотинилированные вторичные антитела реагируют с соответствующими молекулами пероксидазно-коньюгированного стрептовидина.

При постановке иммуногистохимической реакции использовали универсальный пе-роксидазный DAKO LSAB+ kit (Dako, USA).

В качестве «демаскирующего» приема использовали нагревание стекол со срезами в микроволновой печи SAMSUNG М 745RYM735R [1]. Для иммуногистохимического исследования в качестве первичной иммунной сыворотки использовали мышиные моноклональные антитела к рецепторам к эстрогенам и прогестерону (Dako, USA). На каждом стекле один срез (контрольный) обрабатывали неиммунной мышиной сывороткой (Dako, USA). Все буферные растворы готовили на деионизированной воде.

Анализ ядер с положительной реакцией на рецепторы к стероидным гормонам осуществляли при увеличении х40. Для каждого случая подсчитывали по 300 ядер опухолевых клеток эндометрия. Интенсивность иммунохимической реакции оценивали по 3 бальной шкале: 0-отсутствие реакции, +-умеренная реакция, ++-сильная реакция. Для каждого случая подсчитывали процент окрашенных ядер.

Высоко дифферецированные аденокарциномы эндометриоидного типа строения состоят из компактно расположенных, железистых структур различной величины и формы, выстланных одно- или многорядным атипическим эпителием. Умеренно дифференцированные аденокарциномы (железисто-солидный рак) наряду с участками опухоли с прилегающими друг к другу железистыми структурами составляли также и участки солидного строения. Низко дифференцированные аденокарциномы имели солидное строение с разрозненным расположением в строме опухолевых клеток.

Проведенные иммуногистохимические исследования эндометрия выявили корреляционные взаимосвязи между степенью морфологической дифференцировки опухолей и экспрессией рецепторов к стероидным гормонам в анапластических клетках (табл. 1).

Таблица 1

Доля ядер опухолевых клеток эндометрия (%), экспрессирующих рецепторы к эстрогенам и прогестерону в зависимости от степени гистологической

дифференцировки

Показатель дифференцировки Рецепторы к эстрогенам Рецепторы к прогестерону

Интенсивность иммунохимической реакции

++ + 0 ++ + 0

Высоко дифференцированные аденокарциномы 76,2±2,5 23,5+2,4 0,3±0,3 55,9+2,9 39,3±2,8 4,8+1,2

Умеренно дифференцированные аденокарциномы 34,6+2,7 58,9+2,8 6,5±1,4 42,2+2,8 22,5+2,4 35,3+2,8

Низко дифференцированные аденокарциномы 0,3+0,3 1,0+0,6 98,7+0,7 0,5+0,4 1,1 ±0,7 96,3±1,1

Наибольшая экспрессия рецепторов к Э2 и П отмечалась в высоко дифференцированных аденокарциномах, при этом 76,2+2,5% и 55,9+2,9% клеточных ядер окрашивались интенсивно. В низко дифференцированных аденокарциномах выраженная и умеренная экспрессия рецепторов к Э2 и П практически отсутствовала. Умеренно дифференцированные аденокарциномы характеризовались промежуточным уровнем экспрессии рецепторов к Э2 и П между описанными выше типами аденокарцином. В этих опухолях 34,6+2,7% и 42,2+2,8% клеточных ядер интенсивно окрашивались на Э2 и П рецепторы. Как правило, экспрессия отмечалась преимущественно в железистом компоненте опухоли, в то время как в солидном компоненте экспрессия рецепторов к стероидным гормонам была минимальная.

В настоящем исследовании отмечены и определенные корреляции между выраженностью экспрессии различных видов рецепторов к стероидным гормонам и степенью дифференцировки опухолевых клеток. Так, в высоко дифференцированных аденокарциномах отмечена параллельно высокая иммуногистохимическая реакция на Э2 и П рецепторы, в то время как низко дифференцированные опухоли характеризуются одновременным снижением количества клеточных ядер с рецепторами к стероидным гормонам.

В настоящее время существует большое количество биохимических исследований, в которых показано важное значение данных о концентрации рецепторов к Э2 и П в опухолях эндометрия как одного из ведущих прогностических показателей опухолевого роста [5, 6, 8, 11, 19].

При неопластической трансформации клетки эндометрия частично, либо полностью утрачивают способность к восприятию стероидных гормонов [16], и этот феномен опре-

деляет частичную или полную утрату гормональной зависимости опухолей. Подобные опухоли проявляют более агрессивный фенотип, с более неблагоприятным прогнозом [5] и резистентностью к гормональной терапии [5, 29]. Эффект гормональной терапии в значительной степени связан с количеством клеток опухоли, обладающих рецепторами к эстрадиолу и прогестерону [3]. Изучение рецепторов в цитозоле клеток сопровождается определенными методическими сложностями как в их определении, так и в интерпретации полученных результатов. Эти результаты представляют собой некоторый общий показатель чувствительности к стероидным гормонам ткани в целом, не учитывая особенности ее клеточных компонентов. Иммуногистохимические методы исследования опухолей позволяют оценить содержание рецепторов в неопластических клеточных элементах [18]. В связи с этим полной корреляции между концентрацией рецепторов к Э2 и П в цитозоле и результатами иммуногистохимических исследований не отмечается. Последние методики позволяют оценить степень гистологической дифференцировки опухолей [12]. В данном исследовании показано, что более дифференцированные опухоли экспрессируют большее количество рецепторов к стероидным гормонам, чем менее дифференцированные опухоли.

Таким образом, в ткани эндометрия малигнизация сопровождается потерей гормональной зависимости, что, как правило, отражает параллельную утрату рецепторов к эстрогенам и прогестерону. Соотношение Э2/П рецепторов в ядрах клеток различных аденокарцином отличается, что связано, в основном, со степенью морфологической дифференцировки опухолей.

Сведения о соотношении количества рецепторов к эстрогенам и прогестерону и гистологического типа аденокарцином противоречивы, и зависят от эндометриоидного и неэндометриоидного типа строения опухолей. По данным литературы в различных видах аденокарцином концентрация рецепторов к эстрогенам и прогестерону варьирует от 35% до 70% [7, 16]. В связи с этим в настоящем исследовании были изучены только аденокарциномы эндометриоидного типа строения. Наши результаты свидетельствовали о более выраженной экспрессии рецепторов стероидных гормонов в аденокарциномах. Это, по-видимому, связано с более высокой степенью дифференцировки опухолевых клеток в изучаемых образцах ткани эндометрия.

Иммуногистохимия рецепторов к прогестерону и эстрогенам при аденокарциномах эндометрия в значительной степени связана с прогнозом течения болезни, и является наиболее надежным показателем, предсказывающим выживаемость пациентов по сравнению с другими клинико-патологическими параметрами [7].

Многие исследователи [13,14,15,20] отмечали, что иммуногистохимические исследования рецепторов стероидных гормонов более достоверны в прогнозе течения болезни, чем биохимические анализы. Они считают экспрессию рецепторов к прогестерону более значимой по сравнению с рецепторами к эстрогенам [6,8,19]. Ряд авторов придают предпочтение экспрессии рецепторов к эстрогенам [11,14,15]. Поскольку в настоящем исследовании по мере увеличения степени дифференцировки опухолевых клеток отмечено параллельное увеличение экспрессии рецепторов как к эстрогенам, так и к прогестерону, скорее всего оба эти показателя можно оценивать как прогностические факторы.

Таким образом, иммуногистохимические исследования с использованием моноклональных антител к рецепторам к эстрогенам и прогестерону являются наиболее точным и достоверным методом оценки неопластических изменений в эндометрии, и позволяют оценить степень гистологической дифференцировки гормонзависимых опухолей и свидетельствовать о прогнозе течения болезни.

Литература

1. Гуревич Л.Е. Исаков В.А. Использование иммуногистохимического исследования метода восстановления антигенной специфичности воздействием микроволн на ткани, фиксированные формалином и заключенные в парафин // Архив патологи, 1999; т. 61, вып. 1.- С. 48-50.

2. Сергеев П.В., Шиманович Н.Л., Петров В.И. Рецепторы физиологически активных веществ. - Волгоград.: Семь ветров, 1999.

3. Хмельницкий ОК. Цитологическая и гистологическая диагностика заболеваний шейки и тела матки. СПб.: СОТИС, 2000.

4. Bayard F„ Damilano S., Robel P. Cytoplasmic and nuclear estradiol and progesterone receptors in human endo-metriuum. // J. clin Endocrinol Metab., 1978; v. 46, p. 635.

5. Chambers J.T., Carcangiu M.L., Voynick l.M. Immunohistochemical evaluation of estrogen and progesterone receptor content in 183 patients with endometrial carcinoma. Part II: correlation between biochemical and immunohistochemical methods and survival. //Am. J. Clin. Pathol., 1990. - V 94. - P. 255-260.

6. Creasman W.T. Prognostic significance of hormone receptors in endometrial cancer // Cancer, 1993. - V 71 (Suppl 4). - P. 1467-1470.

7. Fukuda K„ Mori M„ Uchiyama M. et al. Prognostic significance of progesterone receptor immunohistochemistry in endometrial carcinoma // Gynecol. Oncol., 1998. - V 69. _ P. 220-225.

8. Kleine W„ Maier T„ Geyer H., Pfleiderer A. Estrogen and progesterone receptors in endometrial caner and their prognostic relevance // Gynecol. Oncol., 1990. - V 38. - P. 59-65.

9. Liao D.S., Twiggs L„ Leung B. et al. Cytoplasmic estrogen and progesterone receptors as prognostic parameters in primary endometrial carcinoma // Obstet. Gynecol., 1986. - V 67. - P. 463-467.

10. Madhabananda S. Application of avidin - biotin complex technique for the localization of estradiol receptor in tarssues using monoclonal antibodies // Techniques in immunocytochemiestry. London. New-York. Tokyo.: Acad. Press., 1985.- P. 43-45.

11. Morris P.C., Anderson J.R., Anderson B„ Buller R.E. Steroid hormone receptor content and lymph node status in endometrial cancer// Gynecol. Oncol., 1995. - V 56. - P. 406-411.

12. Mutch D.G., Soper J.T., Budwit-Novotny D.A. et al. Endometrial adenocarcinoma estrogen receptor content: association of clinicopathologic features with immunohistochemical analysis compared with standard biochemical methods// Am. J. Obstet. Gynecol., 1987. - V. 157. - P. 924-931.

13. Nyholm H.C.J., Neilsen A.L., Lyndrup J. et al. Estrogen and progesterone receptors in endometrial carcinoma: comparison of immunohistochemical and biochemical analysis II Int. J. Gynecol. Pathol., 1993. - V 12. - P. 246-252.

14. Pertschuk L.P., Feldman J.G., Kim Y D. et al. Estrogen receptor immunocytochemistry in paraffin embedded tissues with ER 1D5 predicts breast cancer in frozen sections on cytosol-based ligand-binding assays // Cancer, 1996.-V 77.-P. 2514-2519.

15. Pertschuk L.P., Masood S., Simone J. et al. Estrogen receptor immunocytochemistry in endometrial carcinoma: a prognostic marker for survival // Gynecol. Oncol., 1996. - V 63. - P. 28-33.

16. Runowicz C.D., Nuchtern L.M., Braunstein J.D., Jones J.G. Iatrogeneity in hormone receptor status in primary and metastatic endometrial cancer // Gynecol. Oncol., 1990. - V 38. - P. 437-441.

17. Siviridis E„ Giotromanolaki A., Konkourakis M„ Anastasiodis P. Endometrial carcinoma: association of steroid hormone receptor expression with low angiogenesis and bcl-2 expression II Virchows Arch., 2001. - V 438. - P. 470-477.

18. Soper J. T„ Sergeti E.M., Novothy D.B. et al. Estrogen and progesterone receptor content of endomentrial carcinomas: Comparison of total tissue versus cancer component analysis // Gynecol. Oncol., 1990. - V 36. - P. 363-368.

19. Vecek N.. Nola M., Marusic M. et al. Prognostic value of steroid hormone receptors concentration in patients with endometrial carcinoma // Acta obstet. Gynecol. Scand., 1994. - V 73. - P. 730-733.

20. Zeimet A.G., Muller-Holzner E„ Marth C„ Daxenbichler G. Immunocytochemical versus biochemical receptor determination in normal and tumorous tissues of the female reproductive tract and the breast // Steroid Biochem. Mol. Biol., 1994. - V49. - P. 365-372.

IMMUNOHISTOCHEMICAL RESEACH OF ESTROGENS AND PROGESTERON RECEPTORS AT ENDOMETRIAL ADENOCARCINOMAS

M.K. ASHHAB, N.N. SHELYASTINA, I.I. BABICHENKO

Department of Pathology RPFU. 8 Miklukho-Maklaya St., 117198 Moscow, Russia

The purpose of research was the study of correlation between expression of estrogens and progesterone receptors and degree of neoplastic changes in endometrial adenocarcinomas.

The greatest receptors expression was revealed in highly differentiated tumors (8 cases). About 76,2+2,5 % and 55,9+2,9 % of cells nuclei contained estrogens and progesterone receptors. We can not fined high and moderate type of receptors expression in low differentiated adenocarcinomas (8 cases). Moderately differentiated tumors were characterized by an intermediate level of expression (5 cases). In these cells 34,6+2,7 % and 42,2+2,8 % of nuclei were intensively stained on estrogens and progesterone receptors.Thus immunohistochemical study of estrogens and progesterone receptors allow to estimate degree of differentiation in endometrial type adenocarcinomas and indirectly testify to the forecast of current of illness.