Провосполительные цитокины у больных с актиномикотическими поражениями

УДК 616.992

ПРОВОСПОАИТЕАЬ-

НЫЕ цитокины

У БОЛЬНЫХ С АКТИНОМИКОТИЧЕСКИМИ ПОРАЖЕНИЯМИ

Агаева Н. А., Азизов Р.Ф., Караев З.О.*

Кафедра микробиологии и иммунологии Азербайджанского Медицинского Университета, г. Баку, Азербайджан

© Коллектив авторов, 2008

В представленной работе выявлены особенности изменения провоспалительных цитокинов — TNF-a и IL-1 в сыворотке крови больных шейно-лицевым актиномикозом (I группа) и различных групп больных с патологией полости рта - хронический пародонтоз, гингивит, одонтогенная флегмона и абсцесс (II группа). Установлено, что у всех обследуемых групп больных концентрации TNF-a и IL-1 увеличивались по сравнению с таковым в контроле. Это было особенно заметно у больных одонтогенной флегмоной и абсцессом, хроническим пародонтитом и гингивитом, вызванными актиномицетами в ассоциации с другими бактериальными агентами (Staphylococus spp., Veilonella, Pseudomonas и др.), что, видимо, свидетельствует об активности воспалительного процесса.

Ключевые слова: абсцесс, гингивит, одонтогенный, пародонтит, флегмона, цитокины

PROINFLAMMATION CYTOKINES IN PATIENTS WITH ACTINOMYCOTIC DISORDERS

Agaeva N.A., Azizov R.F., Karaev Z.O.

Azerbaijan Medical University, Department of Microbiology and Immunology, Baku, Azerbaijan

© Collective of authors, 2008

The present study was conducted to investigate the interleukin-1 (II-1) and tumor necrosis factor — alpha (TNF-a) in blood serum in patients with cervicofacial actinomycosis (I group) and in individuals with different diseases (chronic parodontitis, gingivitis, odontogenic phlegmon and abscess) of the oral cavity (II group), caused by Actinomyces spp. (I group), Actinomyces in the associations with other microorganisms (Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Veillonella, Porphyromonas, Pseudomonas and et all) (Ha subgroups) and without Actinomyces with other microorganisms (lib subgroups). The levels of cytokines varied widely between patients with cervicofacofacial

* Контактная информация: Караев Закир Омарович, тел.

(0099412) 495-49-78

actinomycosis and other groups. Concentrations of IL-1 and TNF-a increased significantly in of all group patients in comparison with control group, especially in patients with odontogenic phlegmon and abscess, parodontitis and gingivitis, caused by Actinomyces in the associations with other microorganisms (subgroups a) and without actinomyces, only by other bacteria (subgroups b). It is concluded that the increasing concentration of TNF-a and IL-1 may depend on activity of inflammation processes.

Key words: abscess, cervicofacial, cytokines, flegmon, gingivitis, odontogen, parodontitis

ВВЕДЕНИЕ

Актиномикоз - хроническое гнойное гранулематозное (инфекционное) заболевание человека и животных, вызываемое внедрением в организм так называемых «лучистых грибков -актиномицетов» - бактерий семейства Actinomycetaceae” [1-4]. Различают две формы актиномицета в культуре: в виде ветвистых нитей, растущих в присутствии кислорода (аэробы), и в виде мелких палочек, растущих только в отсутствии кислорода (анаэробы). Актиноми-цеты широко распространены в природе - на растениях, злаках, в воздухе, в воде и почве. У человека они обитают в большом количестве в полости рта, не причиняя ему никакого вреда; однако, при определенных, пока неизвестных условиях, они становятся потенциально патогенными и вызывают заболевание. Заражение человека происходит актиномицетами, преимущественно обитающими в полости рта, желудочно-кишечном тракте, при этом они приобретают патогенные свойства. Актиномицеты могут поражать все ткани и органы человеческого и животного организмов. Распространение актиномицетов по организму больного происходит по подкожной и подслизистой клетчаткам, по кровеносным и отчасти - по лимфатическим сосудам. Чаще всего описывают шейно-лицевой актиномикоз, актиномикоз легких и грудной стенки, брюшной полости, гениталий у женщин и т.д. Микроаэрофильные актиномицеты -Actinomyces viscosus, A. naeslundii, A. israelii являются обычными обитателями полости рта и могут быть изолированы из слюны зубно-десневого кармана у многих здоровых людей. При несоблюдении гигиенических требований некоторые актиномицеты могут образовывать бляшки на деснах зубов и тяжелые формы гингивитов. Актиномицеты могут быть также выделены из корневой поверхности кариесных зубов, из поражений других периодонтальных заболеваний. Вместе с тем патогенетическая роль актиномицетов во всех этих ситуациях остается не вполне ясной.

Цель настоящего исследования — изучение особенностей изменений содержания провоспалительных цитокинов — TNF-a и IL-1 у больных актиномикозом ротовой полости и шейно-лицевой области.

** Примечание: актиномицеты и актиномикоз в России до сих пор являются объектами микологических лабораторий и клиник

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В исследование включены 209 пациентов, проходивших клинико-лабораторное обследование и лечение в профильных медицинских учреждениях города Баку: в отделении челюстно-лицевой хирургии Бакинского медицинского клинического центра, в отделении челюстно-лицевой хирургии республиканской клинической больницы имени М.Э. Миркаси-мова, в стоматологической поликлинике Азербайджанского медицинского университета. Возраст больных — от 15 до 67 лет, мужчин — 120 (47,5%), женщин — 89 (42,5%). Среди них у 14 больных (I группа) был выявлен актиномикоз шейно-лицевой области, у 178 пациентов (II группа) — различные инфекции полости рта, вызванные актиномицетами в ассоциации с другими бактериями, в частности: у 50 больных хроническим пародондитом, у 83 больных гингивитом, у 46 больных одонтогенной флегмоной, у 17 больных одонтогенным абсцессом. Контрольную III группу составили 40 практически здоровых человек соответствующего возраста (табл.1). Обследование больных и постановку диагноза проводили клиницисты-стоматологи на основании анамнеза, клинических наблюдений и лабораторных данных. Микробиологическое исследование включало бакте-риоскопическое и бактериологическое изучение патологических материалов, взятых из ротовой полости (смывная жидкость, гной из флегмон и абсцессов, материалы из пародонтального кармана зубов и из гингивиальной щели).

Ротовую нестимулированную смывную жидкость собирали у пациентов утром натощак в сухую чистую пробирку, находящуюся в контейнере со льдом, в количестве 10 мл и центрифугировали при 2500 оборотах в течение 15 минут. Надосадочную жидкость отделяли и использовали для исследования. Первоначально было проведено микроскопическое исследование мазков, приготовленных из патологических материалов больных.

Одновременно проводили бактериологическое изучение материалов, взятых у больных и контрольных лиц. Посев материала производили на крахмально-аммиачном агаре, мясопептонном агаре (МПА), на середе Сабуро, кровяном агаре и при инкубировании их (37 °С) в течение 7-15 дней одновременно в аэробных и анаэробных условиях по общепринятым методам. Выделенные культуры микроорганизмов идентифицировали до вида. Определение концентрации TNF-a и IL-1 проводили в сыворотке крови соответствующих групп больных. С этой целью сыворотку крови больных и контрольных лиц исследовали с помощью коммерческого набора реагентов фирмы «Рго-Соп» (СПб., РФ), предназначенного для количественного определения TNF-a и IL-1 в сыворотке крови методом твердофазного иммуно-ферментного анализа. Концентрации TNF-a и IL-1 выражали в пг/мл. Микробиологические и иммунологические исследования патологических материа-

лов, взятых у больных, проводили на кафедре микробиологии и иммунологии АМУ.

Полученные результаты подвергали статистической обработке с помощью программной системы Statistica for Windows 6.0 с использованием критерия достоверности Стьюдента (t), с расчетом средней арифметической величины (м) и ошибкой средней (т). Различия сопоставляемых данных считали достоверными при р<0,05, т.е. доверительный интервал 95%.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

У больных I группы актиномикотическое поражение шейно-лицевой области проявлялось формированием плотных болезненных подкожных узлов размером 4x6 см на щеках, подчелюстной и заушной областях, которые быстро увеличивались. Кожные покровы над ними были багрово-цианотичного оттенка, гиперемированы, при пальпации в центре ощущали размягчение и флюктуацию. При микробиологическом исследовании инфильтрата, полученного пункцией пораженного участка, было обильное количество желтоватого гноя в виде комков с примесью крошкообразных масс. Данные лабораторного исследования пунктата: гной желтоватого цвета с белесоватыми крупинками, большое количество лейкоцитов в стадии распада; обнаружены друзы ак-тиномицета. При культивировании этого же патологического материала были выделены актиномицеты (A. viscosus - 6,0-106 КОЕ/г, A. odontolyticus - 5,8-106 КОЕ/г, A. israelii - 4,0-106 КОЕ/г и др.). Mycobacterium tuberculosis и других микроорганизмов не выявляли. У больных второй группы результат микробиологического исследования несколько отличался. В патологических материалах у этой группы больных практически во всех случаях исследования актиномицеты были изолированы в ассоциациях с другими микроорганизмами — Fusobacterim, Porphyromonas, Staphylococcus, Streptococcus, Prevotella, Bacterioides, Actinobacillus, Haemophillus и др. (табл.). При этом следует отметить, что при гистологическом изучении ни в одном случае не удалось выявить актиномикотические друзы.

Из представленных в таблице 1 данных обращает на себя внимание также то обстоятельство, что у больных второй группы (подгруппы а) частота выделения Actinomyces spp. из патологических материалов в ассоциации с другими бактериями была фактически одинаковой. Так, у больных пародонтитом Actinomyces spp. был выявлен у 23 лиц (48%) из 50 обследованных, у больных гингивитом — у 33 (39,8%) из 83, у больных одонтогенной флегмоной и абсцессом, соответственно, у 17 (37%) из 45 и у 7(41%) из 17 больных. При этом основными ассоци-антами с Actinomyces spp. являлись Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Porphyromonas, Veillonella spp., Pseudomonas spp. и Candida spp.

Следует отметить, что у второй, относительно большой части, этих же больных

Результаты микробиологического исследования и содержания ТМР-а и 11.-1 (пг/мл) в сыворотке крови у исследуемых больных

Таблица 1

Группа и характеристика больных Количество больных Основные этиологические агенты заболеваний, изолированных из пораженных участков Содержание цит кен TNF-a

1 — Актиномикоз шейнолицевой части 14 Actinomyces spp., в том числе A. israelii — у 3 больных, A.naeslundii—у 2-х, A. odontolyticus — у 4-х, A.viscosus—у 2-х 58,7* ±0,02 62,3*±0,7

II- инфекции слизистых оболочек полости рта и зубов Пародонтит 50 а) Actinomyces spp. в ассоциациях с Streptococcus spp., Veillonella и др. — V 23 (46%) больных 71,8*±0,09 72,3*±0,5

б) Porphyromonas, Streptococcus spp., Actinobacillus и др. — у 27 (54%) больных 169,6*±0,06 236,8*±0,3

Гингивит 83 а) Actinomyces spp .в ассоциациях с Streptococcus spp., Candida spp -у 33 (39,8%) больных 77,3*±1,0 78,4*±1,1

б) Porphyromonas, Fusobacterium, Streptococcus spp.-y 50 (60,2%) больных 102,5*±1,1 106,5*±1,3

Одонтогенная флегмона 45 a) Actinomyces spp. в ассоциациях с Staphylococcus spp. — у 17 (37%) больных 144,8*±0,05 151,3*±0,07

б) Staphylococcus spp., Streptococcus spp., C.albicans др. — у 28 (63%) больных Ш,1*±0,04 189,7*±0,04

Одонтогенный абсцесс 17 a) Actinomyces spp. в ассоциациях Staphylococcus spp., Actinobacillus и др. — у 7 (41%) больных 135,9*±0,01 154,1 *±0,03

б) Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Pseudomonas и др. — v 10 (59%) больных 138,7*±0,55 166,5*±0,08

III-Контрольная группа 40 Candida spp., Streptococcus spp., Neisseria и др. 41,9±0,01 40,5±1,45

*Различия показателей в группах достоверны прир<0,05 по сравнению с контролем

из соответствующих патологических материалов Actinomyces spp. выделить не удалось. При этом практически во всех подгруппах этиология заболевания носила полимикробный характер. Так, в частности, у больных пародонтитом (27 человек) ассоцианта-ми были Porphyromonas, Streptococcus, Actinobacillus и др., у больных гингивитом - Porphyromonas, Fusobacterium, Streptococcus и др., у больных одон-тогенной флегмоной и абсцессом, соответственно, Staphylococcus spp., Streptococcus spp., С. albicans и Streptococcus, Staphylococcus, Pseudomonas и др.

У лиц контрольной группы со слизистых оболочек полости рта, в основном, удалось выделить Streptococcus spp., иногда — Neisseria sp. и Candida SPP-

Следовательно, в результате микробиологического изучения исследуемых пациентов выделены три основные группы:

1) больные, у которых этиологическим агентом являлся Actinomyces spp.;

2) Actinomyces spp. в ассоциации с другими микроорганизмами;

3) группа, где патологические процессы обусловлены полиморфной микробной ассоциацией без Actinomyces spp.

Правомерно предположить, что одним из аспектов выявленных особенностей могут быть предшествующие состояния местных и системных факторов иммунной реактивности организма. В связи с этим, мы попытались изучить состояние провоспалитель-ных цитокинов у исследуемых нами больных.

Из представленных в таблице данных следует, что по сравнению с данными в контрольной группе (TNF-a 41,9±0,01 пг/мл, 11-1 40,5± 1,45 пг/мл), концентрации провоспалительных цитокинов у боль-

ных как I, так и II групп существенно увеличивались. При этом обращают на себя внимание наиболее высокие показатели уровня цитокинов у больных одонтогенной флегмоной и абсцессом, обусловленные как Actinomyces spp. в ассоциации с другими микроорганизмами, так и без них. Относительно более высокое содержание цитокинов в сыворотке крови также у больных пародонтитом и гингивитом, где этиологическими агентами заболеваний являлись другие микроорганизмы без ассоциации с Actinomyces spp. Что касается больных актиномико-зом шейно-лицевой области (I группа), а также больных пародонтитом и гингивитом (II группа а), у которых заболевания были вызваны актиномицетами в сочетании с другими микроорганизмами, то у них уровни цитокинов в сыворотке крови были практически одинаковы. Можно полагать, что отмеченные изменения в концентрации цитокинов обусловлены у больных остротой воспалительных процессов. По всей вероятности, как актиномикозу шейно-лицевой области, так и пародонтиту и гингивиту, обусловленных актиномицетами в ассоциации с другими микроорганизмами, было свойственно хроническое течение. Напротив, у больных одонтогенной флегмоной и абсцессом, обусловленных актиномицетами в ассоциации с другими микроорганизмами и без них, а также у больных пародонтитом и гингивитом, вызванных другими микроорганизмами, воспалительный процесс (как гнойный, так и без него) протекал остро, что сказывалось на содержании провоспалительных цитокинов (TNF-a, 11-1) в сыворотке крови и способствовало более значительному увеличению их концентрации.

На основании вышеизложенного можно заключить, что у больных с актиномикозами шейно-

лицевой области, а также ротовой полости с разными патологическими процессами, которые были обусловлены актиномицетами в ассоциации с другими микроорганизмами и без них, были выявлены существенные изменения в состоянии иммунной реактивности организма. Эти результаты представляют

интерес для понимания этиопатогенетических механизмов патологических процессов, обусловленных актиномицетами, и для совершенствования принципов диагностики и лечения больных с соответствующими воспалительными заболеваниями челюстнолицевой области и полости рта.

J1I/ITEPATYPA

1. Langevelde P., Joop K., et.al. Endotoxin, cytokines, and procalcitonin in febrile patients admitted to the hospital: identification of subjects at high risk of mortality // Clin. Infect. Dis. - 2000,- Vol. 31.- P. 1343-8.

2. Van Diesel J.T., Van langevelde P., et.al. An anti-inflammatory cytokine profile is associated with mortality in febrile patients admitted to the hospital //Lancet.- 1998.- Vol. 351.- P. 950-3.

3. De Werra I. Jaccard C., Corradin B., et.al. Cytokines, nitrite (nitrate, soluble tumor necrosis factor receptors, and procalcitonin concentrations: comparison in potions with septic shock, cardiogenic shock and bacterial pneumonia// Crit. Care Med. - 1997,- Vol. 25,- P. 607-13.

4. Martin G.T. and Bernard M. Cytokine and chemokines in meningeal inflammation: biology and clinical implications // Clin. Infect. Dis.- 1999,- Vol. 28,- P. 1-12.

Поступила в редакцию журнала 23.06.08 Рецензент: А.Е. Учеваткина