Морфофункциональная оценка репарации тканей гнойнонекротических ран на основе идентификации экспрессии синтеза про- и антиапоптотических протеинов

A. P. Poordabbagh [et al.] // J. Emerg. Med. - 2008. - V 35, № 2. - P. 189-191.

4. Relationship between Trendelenburg tilt and internal jugular vein diameter / S. Clenaghan, R. E. McLaughlin, C. Martyn [et al.] // Emerg. Med. J. - 2005. - V 22. - P. 867-868.

5. Respiratory jugular venodilation: its anatomic rationale as a landmark for right internal jugular vein puncture as determined by ultrasonography / H. Hayashi, C. Ootaki, M. Tsuzuku [et al.] // J. Cardiothorac. Vasc. Anesth. - 2000. - V. 14, № 4. - P. 425-427.

6. The anterior jugular venous system: variability and clinical impact. / W. Schummer, C. Schummer, D.

Bredle [et al.] // Anesth. Analg. - 2004. - К 99, № 6. - P. 1625-1629.

7. The Accuracy of the central landmark used for central venous catheterization of the internal jugular vein / P. L. Bailey, E. E. Whitaker, L. S. Palmer [et al.] // Anesth. Analg. - 2006. - V. 102. - P. 1327-1332.

8. Николаев, В. Г. Методология современной клинической антропологии / В. Г. Николаев, Л. В. Николаева, Н. Н. Николаева // Сибирское мед. обозрение. - 2006. - Т. 1, № 38. - С. 50-54.

9. Шевкуненко, В. Н. Типовая анатомия человека / В. Н. Шевкуненко, А. М. Геселевич. - Л. : Огиз-Биомедгиз, 1935. - 231 с.

УДК 616-001.615.22

ПРУДНИКОВ1 А. В., СТАДНИКОВ2 А. А., НУЗОВА2 О. Б.

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОЦЕНКА РЕПАРАЦИИ ТКАНЕЙ ГНОЙНО-НЕКРОТИЧЕСКИХ РАН НА ОСНОВЕ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЭКСПРЕССИИ СИНТЕЗА ПРО- И АНТИАПОПТОТИЧЕСКИХ ПРОТЕИНОВ

1 Городская клиническая больница № 3 г. Оренбурга

2 Оренбургский государственный медицинский университет

PRUDNIKOV A. V., STADNIKOV A. A., NUZOVA O. B.

MORPHOFUNCTIONAL ASSESS OF THE PYOGENIC-NECROSIS WOUNDS TISSUES IN FAUNDATION EXPRESIONAL PRO- AND ANTYAPOPTOSIS PROTEINES SYNTESIS IDENTIFICATION

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: РАНЫ, ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ, МИЛИАЦИЛ.

РЕЗЮМЕ.

Оценка морфофункциональных изменений в гнойных ранах проведена в эксперименте на 36 белых беспородных крысах-самцах, у которых моделировали инфицированный (Staphylococcus aureus) раневой процесс мягких тканей задних конечностей (у 28 животных в качестве лечебного средства местно использовался милиацил). Проведена иммуноцито-химическая идентификация экспрессии синтеза протеинов каспаза-3, Ki-67 для установления характера течения и прогнозированиярепаративных гистогенезов в области раневого дефекта. Доказана высокая эффективность применения милиацила в лечении гнойных ран.

Прудников Александр Владимирович - к. м. н., врач-хирург; 8(3532)974159; drprav@bk.ru

Стадников Александр Абрамович - з. д. н. РФ, д. б. н., профессор, зав. кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии; 8(3532)772275; Alexander.stadnikov@yandex.ru Нузова Ольга Борисовна - д. м. н., профессор кафедры факультетской хирургии; 8(3532)576362; nuzova_27@mail.ru

KEY WORDS: WOUNDS, IMMUNOCYTOLOGY REACTIONS, MILIACYLUM.

SUMMARY.

Assess of the morphofunctional soft tissues wounds changes in 36 laboratory experimental rats(infected by Staphylococcus aureus)carry out (in 28 animals used Miliacylum). Immucytochemical identification of thepro-teins caspasa-3 and Ki-67 synthesis du to estimates of the characteristics reparative histogenesis in wounds defects were made.High effective Miliacylus in reparative processus are proved.

ВВЕДЕНИЕ.

Лечение гнойно-воспалительных процессов мягких тканей является одной из важнейших проблем хирургии, ибо в общей структуре хирургической заболеваемости раневая инфекция занимает одно из ведущих мест [1, 3]. Постоянное внимание к этой проблеме объясняется увеличением такого рода заболеваний, тяжестью их клинического течения, прогрессирующим возрастанием антибиоти-коустойчивых штаммов микроорганизмов.

Несомненно, что успех лечения больных с гнойной хирургической инфекцией во многом зависит от местного применения препаратов, обладающих

разносторонним воздействием, обеспечивающим антимикробный, противовоспалительный и репа-ративный эффекты.

Таким требованиям обладает разработанный профессором Л. Е. Олифсоном и профессором Б. Г. Нузовым в Оренбургской государственной академии препарат милиацил-просяное масло (Miliacylum). Приказом Министерства здравоохранения и медицинской промышленности N 292 от 27.10.1995 г. данный лекарственный препарат разрешен для медицинского использования и промышленного выпуска.

К настоящему времени показано, что лечебный эффект милиацила обусловлен наличием в нем ряда биологически активных соединений мембранопро-текторного действия [3]. Тем не менее не до конца изучены изменения в клетках и тканях гнойных ран при использовании данного препарата в аспектах их ультраструктурного и молекулярно-генетиче-ского анализа (в частности, относительно реализация клетками апоптозной доминанты).

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ - обосновать эффективность местного использования милиацила в лечении гнойных ран на основе ультраструктурной и иммуноцитохимической оценки экспрессии синтеза про- и антиапоптотических протеинов в ходе репаративных гистогенезов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Экспериментально-гистологические исследования проведены на 36 лабораторных беспородных крысах-самцах массой 280 г, у которых вызывали раневой дефект мягких тканей задних конечностей (в области бедра) с введением 1 мл взвеси суточной культуры Staphylococcus aureus (2 млрд микробных тел) и 0,25% раствора сульфата магния. Через 7 сут. проводили хирургическую обработку и у 28 животных при местном лечении гнойных ран применяли ежедневно 0,3 мл милиацила. Опыты осуществляли с соблюдением «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ МЗ СССР N 755 от 12.08.1977 г.) и согласно ФЗ «О защите животных от жестокого обращения» от 01.12.1999 г., Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (Страсбург, 1985 г). Животных выводили из опыта в условиях ингаляции летальной дозы эфира через 3,7 и 14 сут. эксперимента. Для электронной микроскопии объекты обрабатывали по стандартной методике [5] с последующим изучением и фотографированием в электронном микроскопе ЭМВ 100АК при увеличениях х20000-50000. Для идентификации экспрессии синтеза проапоптотического белка каспаза-3 и

антиапоптотического (пролиферативного) протеина Ю-67 серийные гистологические срезы инкубировали с соответствующими моноклональными антителами (фирма ДАКО, Дания). Полученные количественные данные обработаны на ЭВМ с помощью программы «Статистика 6.1» с использованием непараметрических методов (критерий Ман-на-Уитни).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Раневой процесс у животных, не получавших лечения, развивался по дегенеративно-некротическому типу с признаками нагноения. Гистологический анализ объектов (кусочков тканей из раневой зоны) показал, что в первые 3 суток происходят некротические изменения эпидермиса, сосочкового и сетчатого слоев дермы, гиподермы, волосяных фолликулов, сальных и потовых желез. Через 14 суток область раны ограничивалась слабо развитой грануляционной тканью без явлений эпителизации сформированных дефектов. Во всех слоях кожи отмечены сосудистые расстройства в виде отека, полнокровия и геморрагий.

Ультраструктурные и иммуноцитохимические исследования показали, что применение милиа-цила обеспечивало оптимизацию фаз репарации в раневой зоне, инфицированной стафилококком. На стадиях альтерации и экссудации воспалительного процесса установлено усиление лейкоцитарной инфильтрации и макрофагальной реакции, ускорялось очищение ран от некротических структур. Достоверно снижалось число деструктивно измененных лейкоцитов, пикнотизированных эн-дотелиоцитов. Эффективным оказалось формирование грануляционной (малодифференцированной соединительной) ткани за счет интенсификации васкулогенеза, мобилизации адвентициальных клеток и фибробластов (включая миофибробластов). При этом происходило ускорение эпителизации раневых дефектов. Новообразованные эпителиальные пласты носили органотипический характер с формированием дериватов кожи. В прилегающих участках раны регистрировались процессы репаративно-го миогенеза поперечнополосатых миосимпластов.

Сегодня ни у кого не возникает сомнений относительно того, что реализация тканями своих гисто- и органотипических потенций определяется главными биологическими процессами: характером репаративных свойств, спецификой цитодиф-ференцировок и особенностями апоптоза [1, 4]. Главным признаком апоптоза (программированной гибели клеток) является его зависимость от синтеза специфических пептидов, приводящих к деградации ДНК и распаду клеток. Одним из таких протеинов является каспаза-3.

По нашим данным, на 3 сутки лечения милиаци-лом количество каспаза-3 позитивных фибробла-стов и эпителиоцитов уменьшалось в 2,6 и 1,7 раза (соответственно) по сравнению с нелеченными животными. Подобная тенденция сохранялась и через 7 суток. Напротив, численность Ю-67 положительных подобных клеток при местном применении милиацила возрастала на 3 сутки в 3-3,5 раза, а к 7 суткам в 2-2,4 раза (по сравнению с нелеченными крысами). В этой связи мы получили новые факты относительно того, что апоптоз представляет собой процесс, противоположный митозу [2].

Можно полагать, что пролиферативная фаза воспаления, устанавливаемая по идентификации экспрессии синтеза протеина Ю-67 и определяющая вступление клеток в митотический цикл, может иметь существенное прогностическое значение в гнойной хирургии.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Михайлов, В. П. Тканевой гомеостаз и его механизмы / В. П. Михайлов, Г. С. Катинас // Арх. анат., гистол., эмбриол. - 1984. - N 9. - С. 5-13.

2. Новиков, В. С. Программированная клеточная гибель / В. С. Новиков // СПб. : Наука, 1996. -276 с.

3. Нузов, Б. Г. Оптимизация репаративной регенерации тканей / Б. Г. Нузов, А. А. Стадников, О. Б. Нузова // М.: Медицина, 2012. - 200 с.

4. Стадников, А. А. Роль гипоталамических нейропептидов во взаимодействии про- и эука-риот: структурно-функциональные аспекты / А. А. Стадников // Екатеринбург : УрО РАН, 2001. - 244 с.

5. Hayat, M. A. Principles and Techniques of electron microscopy / M. A. Hayat // Macmillan Press LTD, 1989. - 469 p.