Способ приготовления анатомических препаратов головного мозга эмбриона
METHOD FOR MAKING ANATOMICAL PREPARATIONS OF THE BRAIN OF AN EMBRYO

Изобретение относится к медицине, а именно к нормальной морфологии, патологической анатомии, к музейной технике, необходимо для расширения арсенала наглядных медицинских учебных пособий на кафедрах нормальной, патологической и топографической анатомии. Способ позволяет после заморозки в холодильной установке выполнять распилы препарата в разных плоскостях на ленточнопильном станке.
В настоящее время активно развиваются такие направления медицины, как неонатология, фетальная хирургия, перинатальная помощь, что требует подробного топографо-анатомического обоснования и детальных сведений по анатомии внутренних органов и структур эмбриона. Адекватное макроскопическое описание структур исключительно важно для фундаментальных медицинских дисциплин и других естественных наук. Четкое представление полной картины формирования систем органов помогает находить причины возникновения различных патологий развития и подходы к их лечению [Лященко Диана Наилевна Закономерности становления топографии и анатомия сердца и крупных сосудов средостения в раннем плодном периоде онтогенеза человека и их прикладное значение. Диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук. Оренбург - 2013].
Современные инструментальные методы исследования, такие как компьютерная томография, МРТ, позволяющие достаточно подробно изучить прижизненное строение органов и систем, в то же время не обеспечивают полную визуализацию, и не способны заменить морфологические методы исследования.
Известен способ бальзамирования Мельникова-Разведенкова с сохранением естественного цвета тканей, основанный на обработке тканей трупа, после фиксации их в формалине, последовательно растворами спирта и глицерина с добавлением ацетата калия. Способ основан на применении жидкостей Мельникова-Разведенкова следующего состава: формалин - 100 мл, хлорид калия - 5 г, ацетат калия или натрия - 30 мл, вода - 1000 мл, глицерин - 600 мл [Кузнецов Л.Е., Хохлов В.В., Фадеев С.П., Шигеев В.Б. Бальзамирование и реставрация трупов: Руководство. - Смоленск-Москва, 1999. - 496 с.]. При применении данного метода фиксация материала осуществляется после препарирования [Богуславская Т.Б. Изготовление топографо-анатомических препаратов и методика некоторых анатомических исследований. - Москва, 1958. - 204 с.; Сапин М.Р., Ревазов B.C. Использование на кафедре анатомии механизированного устройства для долговременного хранения бальзамированных трупов // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1976. - №8. - С. 118-119]. Такая техника не подходит для изготовления препаратов эмбрионов, чьи ткани и органы легко деформируются при препарировании.
Известен способ патологоанатомического исследования мозга эмбрионов [пат RU 242208 от 27.06.2011], который включает фиксацию головного мозга целиком в 10% нейтральном формалине в течение 2-3 недель, после чего с помощью миллиметровой линейки измеряют ширину передних рогов. Недостаток способа - предназначен для уточнения патологоанатомического диагноза, длительное хранение, изготовление послойных срезов, использование в качестве музейного анатомического препарата при таком способе невозможно.
Известен способ приготовления анатомического препарата абортированного плода человека [пат.BY №15773]. Авторы предлагают абортированный плод помещать на 12 часов в 15%-ный раствор формалина, затем на 24 часа в 3%-ный раствор перекиси водорода, после чего на 12 часов в 15%-ный раствор формалина. Способ позволяет значительно увеличить информативность музейных препаратов. Средства для фиксации анатомического препарата плода выбраны из тех соображений, что формалин обладает выраженным антисептическим действием, уплотняет ткани, а слабая 15%-ная концентрация увеличивает его проникающую способность в ткани. Перекись водорода обладает антисептическим действием, а также вызывает депигментацию тканей. 3%-ная концентрация перекиси водорода выбрана с гарантией отсутствия деструкции мягких тканей плода в процессе восстановления цвета.
Тем не менее, при таком способе приготовления, мягкая консистенция тканей не позволяет выполнять распилы препарата и подробно изучать строение эмбриона.
Классический вариант приготовления анатомических препаратов, разработанный Н.И. Пироговым, позволяет выполнять многочисленные распилы замороженных человеческих трупов в трех измерениях. Распилы выполняли механической пилой [Пирогов Н.И. Иллюстрированная топографическая анатомия распилов, произведенных в трех измерениях через замороженное человеческое тело. Петербург, 1883; Шевченко Ю.Л., Китаев В.М. «Ледяная анатомия» Н.И. Пирогова - прообраз современных лучевых изображений / Ю.Л. Шевченко, В.М. Китаев // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова, 2010. - С. 4-11]. Классический способ также не применим для получения препаратов эмбрионов, имеющих мягкую консистенцию тканей. Только холодовая заморозка не предполагает длительного хранения и использования в качестве наглядного учебного пособия.
Цель, на которую направлено изобретение - получение достоверной визуализации топографо-анатомических соотношений эмбриона, особенно его головного мозга с использованием элементов «Ледяной анатомии» по Н.И. Пирогову.
Цель достигали следующим образом. Брали плодный материал млекопитающих, например, крысы, кролики, второго триместра беременности, полученный в результате естественного спонтанного аборта млекопитающих, или абортированный по медицинским показаниям, с соблюдением всех юридических, этических и деонтологических норм. Первый этап - фиксация головного мозга. С помощью шприца осуществляли капельное введение 10% формалиновой наливки через большой родничок. Скорость введения 20 кап/мин, объем формалина не более 1/10 от объема головы. Расчет объема производили при помощи формулы V=4/3(πR3), где радиус (R) путем внешнего измерения диаметра головы в горизонтальной плоскости на уровне расположения глазных яблок при помощи малого толстотного циркуля. На втором этапе препарат фиксируют полностью, путем погружения в контейнер с 10% раствором формалина на срок в 72 часа. По истечении вышеуказанного срока консервации осуществляют третий этап - подготовка материала к заморозке. Препарат извлекают из контейнера с формалиновым раствором и обрабатывают одноразовой салфеткой для удаления избыточной влаги раствора. Далее следует непосредственно этап заморозки: анатомический материал, убранный в пластмассовый контейнер, помещают в морозильную камеру с температурой -15°С на 24 часа. Таким образом достигают достаточной фиксации структур.
Следующим этапом является препарирование. Для этого замороженные препараты помещают на ленточнопильный станок, например, JET модели JWBS-10S. Далее препарат фиксируют на столике станка, и с помощью циркулярной пилы осуществляют распилы в разных плоскостях (фиг. 1).
Заключительным этапом производят фиксацию препарата для длительного сохранения - полученные распилы погружают на постоянное хранение в контейнер с 10% раствором формалина.
Установлено, что при использовании разработанного метода сохраняется точное топографо-анатомическое соотношение систем плода, четко видны все структуры головного мозга, имеющие недостаточно сформированные ткани. Холодовая фиксация прошедшего этапы обработки в формалиновом растворе анатомического препарата обеспечивает сохранение синтопии органов, которая, при использовании классических методов препарирования, легко нарушалась по причине незрелости и недостаточной прочности тканевых структур плода. В то же время, точность и прицельность распилов, достигнутых работой ленточной пилы, исключают присущее другим методам избыточное трение и возможность повреждения анатомических структур. Пример анатомического препарата головного мозга млекопитающего, приготовленного предлагаемым способом, представлен на фото, на сагиттальном разрезе четко видна морфологическая организация коры головного мозга.
Описание к фигуре.
Фиг. 1. Препарат головы млекопитающего, полученный в результате аборта по медицинским показаниям во втором триместре беременности, сагиттальный разрез.
1 - кость черепа,
2 - кора головного мозга.