АНТИТЕЛА ПРОТИВ ИНГИБИТОРА ПУТИ ТКАНЕВОГО ФАКТОРА И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с эпитопом в домене Кунитца 2 (K2) ингибитора пути тканевого фактора (TFPI), где указанный эпитоп содержит остатки, выбранные из группы, состоящей из:
(а) остатков Ile105, Arg107 и Leu131 согласно нумерации SEQ ID NO: 2;
(б) остатков Ile105, Arg107, Leu131 и одного или более чем одного остатка, выбранного из группы, состоящей из Cys106, Gly108, Cys130 и Gly132 согласно нумерации SEQ ID NO: 2;
(в) остатков Ile105, Arg107, Leu131 и одного или более чем одного остатка, выбранного из группы, состоящей из Asp102, Arg112, Tyr127, Gly129, Met134 и Glu138 согласно нумерации SEQ ID NO: 2;
(г) остатков Ile105, Arg107, Leu131 и одного или более чем одного остатка, выбранного из группы, состоящей из Cys106, Gly108, Cys130 и Gly132, и дополнительно содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из Asp102, Arg112, Tyr127, Gly129, Met134 и Glu138 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.
2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, содержащее следующие остатки тяжелой (Н) цепи и легкой (L) цепи (нумерация согласно Kabat): Н33 Ala, Н58 Tyr, Н95 Leu, Н96 Gly, Н97 Ala, Н98 Thr, H99 Ser, H100 Leu, H100A Ser, L29 Ala, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser и L95B Gly.
3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 2, содержащее следующие остатки (нумерация согласно Kabat):
(а) Н33, представляющий собой Ala или Val;
(б) Н47, представляющий собой Trp;
(в) Н50, представляющий собой Ala;
(г) Н51, представляющий собой Ile;
(д) Н52, представляющий собой Ser, Arg, Lys, Phe или Tyr;
(е) Н56, представляющий собой Ser, Arg или Lys;
(ж) Н58, представляющий собой Tyr;
(з) Н95, представляющий собой Leu;
(и) Н96, представляющий собой Gly, Ala, Arg, Asn, Lys, Pro, Ser или Val;
(к) H97, представляющий собой Ala;
(л) Н98, представляющий собой Thr, His, Ile, Leu, Met, Phe или Tyr;
(м) Н99, представляющий собой Ser;
(н) H100, представляющий собой Leu, Phe, Trp или Tyr;
(о) Н100А, представляющий собой Ser, Arg, Asn, Gln, Glu, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro или Trp;
(п) L29, представляющий собой Ala;
(p) L31, представляющий собой Tyr;
(с) L91, представляющий собой Tyr;
(т) L95A, представляющий собой Ser, Phe, Trp или Tyr;
(у) L95B, представляющий Gly; и
(ф) L95C, представляющий собой Ser, Arg, Asn, Gln, Glu, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Trp, Tyr или Val;
и возможно содержащее следующие остатки: (х) L93, представляющий собой Ser;
(ц) L96, представляющий собой Gly.
4. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с K2 TFPI, где указанное антитело выбрано из группы, состоящей из антитела, содержащего:
(а) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую определяющую комплементарность область один VH (CDR-H1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40;
(б) VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41;
(в) VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63;
(г) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую определяющую комплементарность область один VL (CDR-L1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO: 35;
(д) VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36;
(е) константную область тяжелой цепи (СН), которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
(ж) константную область легкой цепи (CL), которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26;
(з) тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64;
(и) тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42;
(к) легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37;
(л) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50;
(м) VL, содержащую CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
(н) VH, содержащую CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40, и VL, содержащую CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35;
(о) VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, и VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36; и
(п) тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 64, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 37.
5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, где указанный эпитоп дополнительно содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из Glu100, Glu101, Asp102, Gly104 и Tyr109 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.
6. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с K2 TFPI, где указанный эпитоп содержит остатки Glu101, Pro103, Tyr109, Thr111, Ser119, Gln121, Glu123, Arg124, Lys126 и Leu140 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.
7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 6, содержащее
(a) VH, содержащую CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 87, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 89; и
(б) VL, содержащую CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 83.
8. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, где указанное антитело выбрано из группы, состоящей из:
(а) антитела, содержащего по меньшей мере один остаток паратопа (нумерация согласно Kabat), который находится в пределах 4,0  от по меньшей мере одного остатка эпитопа TFPI (нумерация согласно SEQ ID NO: 2) как указано далее: остаток эпитопа 102 Asp находится в пределах 4,0  от остатка паратопа Н58 Tyr; остаток эпитопа 104 Gly находится в пределах 4,0  от остатка паратопа Н58 Tyr; остаток эпитопа 105 Ile находится в пределах 4,0  от остатков паратопа Н33 Ala, Н50 Ala, Н51 Ile, Н52 Ser, Н56 Ser, Н58 Tyr, Н95 Leu; остаток эпитопа 106 Cys находится в пределах 4,0  от остатков паратопа Н100 Leu, Н100А Ser; остаток эпитопа 107 Arg находится в пределах 4,0  от остатков паратопа Н96 Gly, Н97 Ala, Н98 Thr, Н99 Ser, H100 Leu; остаток эпитопа 108 Gly находится в пределах 4,0  от остатка паратопа H100 Leu; остаток эпитопа 112 Arg находится в пределах 4,0  от остатка паратопа L29 Ala, L31 Tyr; остаток эпитопа 127 Tyr находится в пределах 4,0  от остатка паратопа L31 Tyr; остаток эпитопа 129 Gly находится в пределах 4,0  от остатка паратопа L31 Tyr; остаток эпитопа 130 Cys находится в пределах 4,0  от остатка паратопа L91 Tyr, L95B Gly; остаток эпитопа 131 Leu находится в пределах 4,0  от остатка паратопа Н47 Trp, Н50 Ala, Н58 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, L95C Ser; остаток эпитопа 132 Gly находится в пределах 4,0  от остатка паратопа Н58 Tyr, L95A Ser; Н58 Tyr, L95A Ser; остаток эпитопа 134 Met находится в пределах 4,0  от остатка паратопа L95A Ser; и остаток эпитопа 138 Glu находится в пределах 4,0  от остатка паратопа L29 Ala;
(б) содержит по меньшей мере один остаток паратопа (нумерация согласно Kabat), который может образовывать водородную связь с остатком эпитопа TFPI (нумерация согласно SEQ ID NO: 2) как указано далее: остаток эпитопа 102 Asp может образовывать водородную связь с остатком паратопа Н58 Tyr; остаток эпитопа 107 Arg может образовывать водородную связь по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из Н96 Gly, Н97 Ala, Н98 Thr, Н99 Ser и H100 Leu; остаток эпитопа 112 Arg может образовывать водородную связь с остатком паратопа L29 Ala; остаток эпитопа 127 Tyr может образовывать водородную связь с остатком паратопа L31 Tyr; и остаток эпитопа 131 Leu может образовывать водородную связь с остатком паратопа L95B Gly; и
(в) антитела, содержащего по меньшей мере один остаток паратопа (нумерация согласно Kabat), который содержит ненулевое изменение в скрытой области поверхности из-за взаимодействия с остатком эпитопа (нумерация согласно SEQ ID NO: 2) как указано далее: остаток эпитопа 102 Asp взаимодействует с остатком паратопа Н58 Tyr; остаток эпитопа 104 Gly взаимодействует с остатком паратопа Н58 Tyr; остаток эпитопа 105 Ile взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из Н33 Ala, Н34 Met, Н50 Ala, Н51 Ile, Н52 Ser, Н56 Ser, H58 Tyr и Н95 Leu; остаток эпитопа 106 Cys взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из Н95 Leu, H100 Leu, H100A Ser и L91 Tyr; остаток эпитопа 107 Arg взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из Н96 Gly, Н97 Ala, Н98 Thr, Н99 Ser и H100 Leu; остаток эпитопа 108 Gly взаимодействует с остатком паратопа H100 Leu; остаток эпитопа 112 Arg взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из L29 Ala, L31 Tyr и L93 Ser; остаток эпитопа 127 Tyr взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из L31 Tyr и L95B Gly; остаток эпитопа 129 Gly взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из H100A Ser, L31 Tyr и L91 Tyr; остаток эпитопа 130 Cys взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из Н95 Leu, H100A Ser, L31 Tyr, L91 Tyr и L95B Gly; остаток эпитопа 131 Leu взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из Н47 Trp, Н50 Ala, Н58 Tyr, Н95 Leu, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, L95C Ser и L96 Gly; остаток эпитопа 132 Gly взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из Н58 Tyr и L95A Ser; остаток эпитопа 133 Asn взаимодействует с остатком паратопа L95A Ser; остаток эпитопа 134 Met взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из L93 Ser, L94 Ser и L95A Ser; и остаток эпитопа 138 Glu взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из L28 Gly, L29 Ala и L93 Ser.
9. Выделенное моноклональное антитело, которое конкурирует за связывание с TFPI и/или связывается с тем же самым эпитопом, что и антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 4.
-8
-10
10. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с TFPI со значением аффинности связывания (Kd) от примерно 1×10 до примерно 1×10 М.
11. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1(a), где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент: (1) уменьшает время свертывания при измерении в анализе протромбинового времени в плазме с разведением; (2) уменьшает время свертывания в цельной крови при измерении посредством тромбоэластографии; (3) увеличивает образование тромбина; (4) увеличивает активность FXa в присутствии TFPI; (5) увеличивает накопление тромбоцитов в присутствии TFPI; (6) увеличивает образование фибрина в присутствии TFPI; или (7) приводит к их любой комбинации.
12. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 11, где указанная плазма или цельная кровь является дефицитной по Фактору VIII или Фактору IX.
13. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1.
14. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело по п. 4.
15. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 14, где нуклеотидная последовательность кодирует VH, содержащую CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40, и VL, содержащую CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.
16. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 15, где нуклеотидная последовательность кодирует VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, и VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36.
17. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 14, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
(а) последовательности SEQ ID NO: 175;
(б) последовательности SEQ ID NO: 176;
(в) последовательности SEQ ID NO: 177;
(г) последовательности SEQ ID NO: 178;
(д) последовательности вставки, присутствующей в плазмиде, депонированной под № АТСС РТА-122328; и
(е) последовательности вставки, присутствующей в плазмиде, депонированной под № АТСС РТА-122329.
18. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1 и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.
19. Способ уменьшения активности ингибитора пути тканевого фактора (TFPI), включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по п. 1.
20. Способ уменьшения активности ингибитора пути тканевого фактора (TFPI), включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по п. 4(н) или 4(о).
21. Способ по п. 19, включающий введение антитела по п. 7.
22. Способ сокращения времени кровотечения, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по п. 1.
23. Способ сокращения времени кровотечения, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по п. 4(н) или 4(о).
24. Способ по п. 22, включающий введение антитела по п. 7.
25. Способ по п. 22, где указанный субъект страдает от или подвержен гемофилии А, гемофилии В, болезни фон Виллебранда (vWD) или тромбоцитарному расстройству.
26. Способ по п. 23, где указанный субъект страдает от или подвержен гемофилии А, гемофилии В, болезни фон Виллебранда (vWD) или тромбоцитарному расстройству.
27. Способ по п. 19, дополнительно включающий введение терапевтически эффективного количества FVIIa.
28. Способ по п. 20, дополнительно включающий введение терапевтически эффективного количества FVIIa.
29. Способ сокращения времени кровотечения у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение терапевтически эффективного количества антитела по п. 1 или его антигенсвязывающего фрагмента и свертывающего агента.
30. Способ по п. 29, где указанный субъект страдает от или подвержен гемофилии А или гемофилии В, и указанный свертывающий агент выбран из группы, состоящей из фактора Vila, фактора VIII, фактора IX и транексамовой кислоты.
31. Способ по п. 30, включающий введение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по п. 4(н) или 4(о).