СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВООПИСТОРХОЗНЫМ ДЕЙСТВИЕМ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ
ANTIOPISTHORCHOSIS AGENT AND METHOD FOR MAKING THEREOF

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способов получения из растительного сырья лекарственного средства, обладающего противоописторхозным действием.
В комплексной терапии описторхоза применяются синтетические лекарственные средства: препарат празиквантел (бильтрицид) и его аналог азинокс. Перечисленные препараты имеют ряд побочных эффектов и противопоказаний, что весьма ограничивает область их применения [2].
Известен способ получения средства, обладающего противоописторхозным действием, на основе коры осины, который заключается в обработке лекарственного растительного сырья 70% этанолом методом реперколяции с периодом настаивания в 8 часов [3]. Взятый в качестве прототипа способ получения средства, наиболее близкий к предлагаемому решению, имеет ряд существенных недостатков: во-первых, получение жидкого экстракта из коры осины - сложный и длительный процесс с технологической точки зрения, во-вторых, терапевтическая эффективность прототипа недостаточно высока и уступает заявляемому средству.
Новая техническая задача - расширение арсенала противоописторхозных средств, получаемых из растительного сырья, обладающих более высокой активностью и меньшей токсичностью, а также способов их получения.
Для решения поставленной задачи примененяют в качестве противоописторхозного средства водный экстракт надземной части василька шероховатого (Centaurea scabiosa (L.) сем. Asteraceae), a в способе получения средства, обладающего противоописторхозным действием, заключающимся в зкстракции надземной растительного сырья, экстракции подвергают наземную части василька шероховатого водой очищенной при температуре 60-80°С в течение 1-1,5 часов, при соотношении сырье-экстрагент 1:20-1:25 и кратности экстракции 2 с последующим упариванием досуха полученного экстракта. Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства - впервые установлено, что в качестве средства, обладающего противоописторхозным действием, используют водный экстракт из надземной части василька шероховатого, причем для его получения надземную часть василька шероховатого подвергают экстракции водой очищенной при температуре 60-80°С в течение 1-1,5 часов, при соотношении сырье-экстрагент 1:20-1:25 и кратности экстракции 2, с последующим упариванием досуха полученного экстракта, что способствует повышению противоописторхозной активности целевого продукта.
Известно использование василька шероховатого в народной медицине: в качестве вяжущего, мочегонного и противовоспалительного средства, а также при малярии, желтухе, водянке. Свежую измельченную траву и отвар используют при дерматитах и зудящих сыпях. Кроме того, описано применение надземной части этого растения при гепатите, асците, аллергиях, головной боли. Настой травы рекомендуется при эпилепсии, радикулитах, лихорадке, гастралгии, меноррагии, фурункулах [5, 6, 7, 8, 9].
Способ осуществляют следующим образом
Измельченные воздушно-сухие листья, цветки и стебли василька шероховатого, собранного в фазу цветения, заливают водой очищенной и экстрагируют при температуре 60-80°С в течение 1-1,5 часов при соотношении сырье-экстрагент 1:20-1:25, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования. Далее сырье повторно заливают водой очищенной и экстрагируют при температуре 60-80°С в течение 1-1,5 часов при соотношении сырье-экстрагент 1:20-1:25, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Сухой водный экстракт представляет собой порошок коричневого цвета со своеобразным запахом. Выход целевого продукта по загруженному сырью составляет 23,4%.
Фармакологические испытания
Противоописторхозная активность сухого водного экстракта василька шероховатого исследована in vivo на модели хронического описторхоза [4]. Опыты проводили на золотистых хомячках, искусственно зараженных метацеркариями описторхов. В качестве препарата сравнения использовали синтетический противоописторхозный лекарственный препарат бильтрицид [1]. Сухой водный экстракт василька шероховатого в виде крахмальной взвеси вводили животным внутрижелудочно в дозах 2,0 г/кг массы 3 раза в день в течение пяти дней. Паразитологический контроль проводили через 14 дней после лечения.
Противоописторхозную активность оценивали по коэффициенту интенс-эффективности (ИЭ), который рассчитывали по формуле:
,
где К - количество описторхов у животных контрольной группы;
О - количество описторхов у пролеченных животных.
Коэффициент ИЭ сухого экстракта василька шероховатого составил 53,1%. Сравнительным фармакологическим исследованием установлено, что коэффициент ИЭ 70%-этанольного экстракта коры осины составляет 50,9% (Таблица 1, где представлены результаты сравнительного исследования противоописторхозной активности водного экстракта василька шероховатого, 70% этанольного экстракта коры осины и противоописторхозного препарата бильтрицид).
Примеры конкретного выполнения способа
Сырье собрано в фазу цветения в окрестностях г.Новокузнецка и использовано во всех примерах.
Пример 1
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 400 мл воды очищенной и нагревают при температуре 60°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования. Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще один раз аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 23,4%.
Полученный водный экстракт в виде суспензии на 1% крахмальной слизи вводили внутрижелудочно экспериментальным животным (золотистые хомяки), зараженным описторхозом, в дозе 2,0 г/кг 3 раза в день в течение пяти дней. Учет результатов проводили через 14 дней после окончания лечения. Коэффициент ИЭ водного экстракта василька шероховатого составил 53,1%.
Пример 2
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 200 мл воды очищенной и нагревают при температуре 60°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 18,9%.
Пример 3
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 300 мл воды очищенной и нагревают при температуре 60°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 22,9%.
Пример 4
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 400 мл воды очищенной и нагревают при температуре 60°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 26,3%.
Пример 5
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 500 мл воды очищенной и нагревают при температуре 60°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 26,7%.
Пример 6
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 600 мл воды очищенной и нагревают при температуре 60°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 26,9%.
Пример 7
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 400 мл воды очищенной и нагревают при температуре 70°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 26,4%.
Пример 8
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 400 мл воды очищенной и нагревают при температуре 80°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 26,7%.
Пример 9
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 400 мл воды очищенной и нагревают при температуре 90°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 28,0%.
Пример 10
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 400 мл воды очищенной и нагревают при температуре 95°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 28,9%.
Пример 11
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 400 мл воды очищенной и нагревают при температуре 60°С а течение 0,5 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 20,0%.
Пример 12
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 400 мл воды очищенной и нагревают при температуре 60°С в течение 1,5 часов, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 26,5%.
Пример 13
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 400 мл воды очищенной и нагревают при температуре 60°С в течение 2,0 часов, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще трижды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 26,5%.
Пример 14
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого; заливают 400 мл воды очищенной и нагревают при температуре 60°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования. Растворитель из экстракта удаляют путем упаривания
Выход целевого продукта составляет 17,8%.
Пример 15
20,0 г измельченного сырья, состоящего из листьев, стеблей и цветков василька шероховатого, заливают 400 мл воды очищенной и нагревают при температуре 60°С в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры, отделяют полученный экстракт от сырья путем процеживания. Отделенный экстракт очищают от механических включений путем фильтрования.
Далее экстракцию обработанного сырья повторяют еще дважды аналогично экстракции, описанной выше. Полученные экстракты объединяют и растворитель удаляют путем упаривания.
Выход целевого продукта составляет 25,5%.
ОБОСНОВАНИЕ РЕЖИМА
В процессе поиска оптимальных условий получения экстракта из растительного сырья, состоящего из измельченных листьев, цветков и стеблей василька шероховатого, было изучено влияние на противоописторхозную активность и выход целевого продукта следующих факторов: соотношение сырье-экстрагент, температура экстракции, время экстракции и кратность экстракции.
При этом установлено, что экстракцию следует вести водой очищенной при соотношении сырье-экстрагент 1:20-1:25, температуре 60-80°С в течение 1,0-1,5 часов и кратности экстракции 2 с последующим упариванием досуха полученного экстракта.
При соотношении сырье-экстрагент 1:10 наблюдается низкий выход целевого продукта и экстракцию в этих условиях вести нецелесообразно, при соотношениях 1:15, 1:20 и 1:25 выход целевого продукта заметно увеличивается, наибольший выход наблюдается при соотношениях 1:20-1:25. Дальнейшее увеличение соотношения (1:30) не приводит к значительному возрастанию выхода целевого продукта (таблица 2, где представлены результаты влияния соотношения сырье-экстрагент на выход экстрактивных веществ, Примечание: температура экстракции - 60°С; время экстракции - 1 час; кратность экстракции - 4), поэтому рекомендуем вести экстракцию при соотношении сырье-экстрагент 1:20-1:25.
При увеличении температуры экстракции до 70-80°С выход целевого продукта увеличивается на 0,4-1,5% в сравнении с температурой экстракции 60°С. При нагревании до 90-95°С выход целевого продукта заметно увеличивается, но возрастает риск разрушения действующих веществ ввиду их термолабильности, особенно при температуре 95°С (Таблица 3, где представлены результаты влияния температуры экстракции на выход экстрактивных веществ. Примечание: соотношение сырье-экстрагент - 1:20; время экстракции - 1 час; кратность экстракции - 4), поэтому рекомендуем вести экстракцию при температуре 60-80°С.
При экстракции надземной части василька шероховатого в течение 30 минут выход целевого продукта существенно уменьшается (на 24%) в сравнении с продолжительностью экстракции в течение 1 часа. При увеличении времени экстракции с 1 часа до 1,5 и 2,0 часов выход целевого продукта увеличивается незначительно (Таблица 4, где представлены результаты влияния времени экстракции на выход экстрактивных веществ, Примечание: соотношение сырье-экстрагент - 1:20; температура экстракции - 60°С; кратность экстракции - 4), достигая максимума при экстракции в течение 1,5 часов, поэтому рекомендуем вести экстракцию в течение 1,0-1,5 часов.
При проведении однократной экстракции выход целевого продукта значительно уменьшается. При проведении 3- и 4-кратной экстракции выход целевого продукта увеличивается (Таблица 5, Влияние кратности экстракции на выход экстрактивных веществ. Примечание: соотношение сырье-экстрагент - 1:20; температура экстракции -60°С; время экстракции - 1 час), но это нерационально с точки зрения затрат времени для получения целевого продукта и большого объема получаемого жидкого экстракта, требующего значительных затрат энергии на его упаривание. Поэтому рекомендуем проводить 2-кратную экстракцию.
Таблица 1
Наименование препарата
Кол-во животных
Доза, г/кг
Схема лечения
ИЭ,%
Водный экстракт василька шероховатого по заявляемому способу
5
2,0
3 раза в день - 5 дней
53,1
70% этанольный экстракт коры осины (прототип)
5
2,0
3 раза в день - 5 дней
50,9
Бильтрицид
5
0,02
2 раза в день - 1 день
75,3
Таблица 2
№ п/п
Соотношение сырье-экстрагент
Выход экстрактивных веществ, %
1.
1:10
18,9
2.
1:15
22,9
3.
1:20
26,3
4.
1:25
26,7
5.
1:30
26,9
Таблица 3
№ п/п
Температура экстракции, °С
Выход экстрактивных веществ, %
1.
60
26,3
2.
70
26,4
3.
80
26,7
4.
90
28,0
5.
95
28,9
Таблица 4
№ п/п
Время, ч
Выход экстрактивных веществ, %
1.
0,5
20,0
2.
1,0
26,3
3.
1.5
26,5
4.
2,0
26,5
Таблица 5
№ п/п
Кратность экстракции
Выход экстрактивных веществ, %
1.
1
17,8
2.
2
23,4
3.
3
25,5
4.
4
26,3
Источники информации
1. Бронштейн М.А. Трематодозы печени: описторхоз, клонорхоз / А.М.Бронштейн, В.И.Лучшев // Русский медицинский журнал. - 1998. - Т.6, - №3. - С.17-27.
2. Вышковский Г.Л. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. - Вып.10 - М.: «РЛС», 2003. - 1438 с.
3. Краснов Е.А., Балашова И.И., Лепехин А.В. и др. Способ получения средства, обладающего противоописторхозным действием / Пат. №1695542 РФ.
4. Методические указания по моделированию экспериментальных гельминтозов для скрининга противогельминтных препаратов / Под ред. Фармакологического комитета МЗ СССР. - Москва, 1988. - 35 с.
5. Дудко В.В., Алексеюк Н.В., Клименко В.Г. Химические исследования растений рода соссюрея и василек // 2-я Респ. конф. по мед. ботанике. - Киев, 1988. - С.234.
6. Перспективы выявления растений, содержащих сесквитерпеновые лактоны: Растительные подтрибы Centaurae О. Hoffm. сем. Aster. / К.С.Рыбалко, Д.А.Бакаин, Р.И.Евстратова, А.И.Шретер // Растит. ресурсы. - 1975. - Т.II, вып.11. - С.131-144.
7. Крылов Г.В. Зеленая аптека Кузбасса / Г.В.Крылов, Э.В.Степанов. - Кемерово: Кемеровское кн. изд-во, 1975. - 232 с.
8. Телятьев В. В. Полезные растения Центральной Сибири / В.В.Телятьев. - Иркутск, 1985.-383 с.
9. Турова А.Д. Лекарственные средства растительного происхождения / М.Н.Чукичева, Б.С.Никольская. - М.: Высш. шк., 1954. - 176 с.