ФЕРМЕНТ ЛИЗОСОМАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ НАКОПЛЕНИЯ

1. Композиция, содержащая выделенную рекомбинантную лизосомальную кислую липазу человека (ЛКЛ), включающую одну или более N-гликановых структур.
2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ состоит по существу из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2.
3. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что ЛКЛ состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2.
4. Композиция по п. 3, отличающаяся тем, что ЛКЛ представлена в N-присоединенной форме, гликозилированной, по меньшей мере, в одном положении, выбранным из группы, состоящей из Asn15, Asn51, Asn80, Asn140, Asn252 и Asn300 последовательности SEQ ID NO:2.
5. Композиция по п. 4, отличающаяся тем, что ЛКЛ представлена в N-присоединенной форме, гликозилированной в положении Asn15, Asn80, Asn140, Asn252 и Asn300 последовательности SEQ ID NO:2.
6. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановую структуру, включающую фосфорилированную маннозу в положении Asn80, Asn140 и Asn252 последовательности SEQ ID NO:2.
7. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановую структуру, включающую фосфорилированную маннозу в положении Asn80.
8. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что по меньшей мере 30% N-гликановой структуры, связанной с Asn80 содержит фосфорилированную маннозу.
9. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что по меньшей мере 50% N-гликановой структуры, связанной с Asn80, содержит фосфорилированную маннозу.
10. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановую структуру, включающую бифосфорилированную маннозу в положении Asn80.
11. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что по меньшей мере 50% N-гликановой структуры, связанной с Asn80, содержит бифосфорилированную маннозу.
12. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановую структуру, включающую фосфорилированную маннозу (M6P) в положении Asn140.
13. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что от примерно 10% до примерно 50% N-гликановых структур, ассоциированных с Asn140, включают M6P.
14. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановую структуру, включающую фосфорилированную маннозу (M6P) в положении Asn252.
15. Композиция по п. 14, отличающаяся тем, что по меньшей мере 50% N-гликановых структур в положении Asn252 включают M6P.
16. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановую структуру, включающую высокоманнозную группу в положении Asn80 или Asn252.
17. Композиция по п. 16, отличающаяся тем, что высокоманнозная группа включает 6, 7, 8, 9 или 10 манноз.
18. Композиция по п. 17, отличающаяся тем, что высокоманнозная группа включает 7, 8 или 9 манноз.
19. Композиция по п. 18, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановую структуру, включающую 7, 8 или 9 манноз в положении Asn80.
20. Композиция по п. 18, отличающаяся тем, что по меньшей мере 80% N-гликановых структур в положении Asn80 включает 7, 8 или 9 манноз.
21. Композиция по п. 18, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановую структуру, включающую 7, 8 или 9 манноз в положении Asn252.
22. Композиция по п. 18, отличающаяся тем, что по меньшей мере 70% N-гликановых структур в положении Asn252 включает 7, 8 или 9 манноз.
23. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановую структуру, включающую терминальную галактозу в положении Asn15, Asn140 или Asn300.
24. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что от примерно 2% до примерно 10% N-гликановых структур, ассоциированных с Asn15, включают терминальную галактозу.
25. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что по меньшей мере 5% N-гликановых структур, связанных с Asn140, содержит терминальную галактозу.
26. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что по меньшей мере 100% N-гликановых структур, связанных с Asn300, содержит терминальную галактозу.
27. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что положение Asn51 ЛКЛ остается агликозилированным или по существу агликозилированным.
28. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановые структуры, не содержащие ксилозу, и менее чем 15% N-гликановых структур содержат сиалиновую кислоту.
29. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановые структуры, не содержащие ксилозу, и менее чем 10% N-гликановых структур содержат сиалиновую кислоту.
30. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановые структуры, не содержащие ксилозу, и менее чем 5% N-гликановых структур содержат сиалиновую кислоту.
31. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановые структуры, не содержащие ксилозу, и менее чем 1% N-гликановых структур содержит сиалиновую кислоту.
32. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ по существу не содержит сиалиновую кислоту или ксилозу.
33. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановые структуры, при этом менее чем 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5% или 1% N-гликановых структур содержат фукозу.
34. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ не содержит фукозы.
35. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановые структуры, при этом, по меньшей мере, 30%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 95% N-гликановых структур содержат фосфорилированную маннозу (M6P).
36. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликановые структуры, при этом по меньшей мере 90% N-гликановых структур содержат фосфорилированную маннозу (M6P).
37. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает следующий N-присоединенный профиль гликозилирования:
е. в положении Asn15, GlcNAc4Man3GlcNAc2, или
GallGlcNAc4Man3GlcNAc2;
ж. В положении Asn80, Phos2Man7GlcNAc2;
з. в положении Asn140, Phos1Man6GlcNAc2,
GlcNAc1Phos1Man6GlcNAc2;
Man3GlcNAc2;
GlcNAc2Man3GlcNAc2;
GlcNAc3Man3GlcNAc2;
GlcNAc4Man3GlcNAc2, или
GallGlcNAc4Man3GlcNAc2;
и. в положении Asn252, Man7GlcNAc2,
Man8GlcNAc2, Man9GlcNAc2,
PhoslMan8GlcNAc2, или
Phos1Man9GlcNAc2; и
к. в положении Asn300, GlcNAc2Man3GlcNAc2,
GlcNAc3Man3GlcNAc2,
GlcNAc4Man3GlcNAc2,
GallGlcNAc4Man3GlcNAc2,
GlcNAc5Man3GlcNAc2,
Gal1GlcNAc5Man3GlcNAc2,
GlcNAc6Man3GlcNAc2, или
GallGlcNAc6Man3GlcNAc2,
где Man=манноза,
GlcNAc=N-ацетилглюкозамин,
Phos=фосфат,
Gal=галактоза.
38. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ представлена в N-присоединенной форме, гликозилированной в положении Asn15, Asn51, Asn80, Asn140, Asn252 и Asn300 последовательности SEQ ID NO:2.
39. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает N-гликаны, выбранные из следующих структур:
40. Композиция по п. 39, отличающаяся тем, что ЛКЛ получена в зародышевой линии трансгенной птицы.
41. Композиция по п. 40, отличающаяся тем, что ЛКЛ получена из клеток яйцевода гуманизированных трансгенных птиц.
42. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что структура олигосахарида получена из птицы.
43. Композиция по п.42, отличающаяся тем, что птица представлена цыпленком.
44. Композиция, включающая смесь рекомбинантной лизосомальной кислой липазы человека (ЛКЛ), при этом смесь включает по меньшей мере две ЛКЛ человека, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 19.
45. Композиция по п. 44, отличающаяся тем, что смесь ЛКЛ человека включает N-гликаны, выбранные из следующих структур:
46. Композиция по п. 44, отличающаяся тем, что ЛКЛ включает следующий N-присоединенный профиль гликозилирования:
а. GlcNAc4Man3GlcNAc2, или
Gal1GlcNAc4Man3GlcNAc2;
в положении Asn15, Asn13, Asn10 и Asn9 последовательности SEQ ID NOs:2, 3, 4 и 19, соответственно;
б. Phos2Man7GlcNAc2;
в положении Asn80, Asn78, Asn75 и Asn74 последовательности SEQ ID NOs:2, 3, 4 и 19, соответственно;
в. Phos1Man6GlcNAc2,
GlcNAc1Phos1Man6GlcNAc2,
Man3GlcNAc2,
GlcNAc2Man3GlcNAc2,
GlcNAc3Man3GlcNAc2,
GlcNAc4Man3GlcNAc2, или
Gal1GlcNAc4Man3GlcNAc2;
в положении Asn140, Asn138, Asn135 и Asn134 последовательности SEQ ID NOs:2, 3, 4 и 19, соответственно;
г. Man7GlcNAc2,
Man8GlcNAc2,
Man9GlcNAc2,
PhoslMan8GlcNAc2, или
Phos1Man9GlcNAc2;
в положении Asn252, Asn250, Asn247 и Asn246 последовательности SEQ ID NOs:2, 3, 4 и 19, соответственно; и
д. GlcNAc2Man3GlcNAc2,
GlcNAc3Man3GlcNAc2,
GlcNAc4Man3GlcNAc2,
GallGlcNAc4Man3GlcNAc2,
GlcNAc5Man3GlcNAc2,
GallGlcNAc5Man3GlcNAc2,
GlcNAc6Man3GlcNAc2, или
GallGlcNAc6Man3GlcNAc2;
в положении Asn300, Asn298, Asn295 и Asn294 последовательности SEQ ID NOs:2, 3, 4 и 19, соответственно.
47. Композиция, включающая выделенные молекулы лизосомальной кислой липазы (ЛКЛ), при этом ЛКЛ получают из клеток яйцевода трансгенных цыплят и выделяют из белка яйца трансгенного цыпленка, который содержит трансген, кодирующий ЛКЛ.
48. Композиция по п. 47, отличающаяся тем, что ЛКЛ представлена ЛКЛ человека.
49. Композиция по п. 48, отличающаяся тем, что клетка яйцевода представлена клеткой трубчатой железы.
50. Композиция по п. 49, отличающаяся тем, что выделенная ЛКЛ человека включает схему гликозилирования, полученную у цыпленка.
51. Способ лечения пациента, страдающего от состояния, вызванного дефицитом ЛКЛ, и такой способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции, включающей рекомбинантную ЛКЛ человека.
52. Способ по п. 51, отличающийся тем, что рекомбинантная ЛКЛ человека представлена композицией по пп. 1-33.
53. Способ по п. 51, отличающийся тем, что состояние представлено болезнью накопления эфиров холестерина (БНЭХ).
54. Способ по п. 51, отличающийся тем, что состояние представлено болезнью Вольмана.
55. Способ по п. 51, отличающийся тем, что пациенту вводят от примерно 0,35 до примерно 5,0 мг/кг композиции ЛКЛ.
56. Способ по п. 51, отличающийся тем, что пациенту вводят от примерно 0,35 до примерно 3,0 мг/кг композиции ЛКЛ.
57. Способ по п. 51, отличающийся тем, что пациенту вводят дозу от одного раза каждые семь дней до одного раза каждые 45 дней.
58. Способ по п. 51, отличающийся тем, что пациенту вводят дозу один раз каждые 3 дня, один раз каждые 5 дней, один раз каждую неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые 20 дней, один раз каждые 28 дней, один раз каждые 30 дней или один раз каждый месяц.
59. Способ по п. 51, отличающийся тем, что пациенту вводят эффективную дозу от примерно 1,0 до 3,0 мг/кг каждые две недели.
60. Способ получения гликозилированной лизосомальной кислой липазы человека (ЛКЛ), включающий получение гуманизированных трансгенных птиц с трансгеном, кодирующим ЛКЛ человека, которая функционально связана с промотором и экспрессирует ЛКЛ человека в клетке яйцевода, при этом ЛКЛ гликозилируется в клетке яйцевода и депонируется на скорлупе яйца, откладываемого трансгенной птицей.
61. Трансгенная птица, которая вырабатывает гликозилированную лизосомальную кислую липазу человека (ЛКЛ).
62. Яйцо, отложенное трансгенной птицей согласно п. 61.
63. Белок яйца, содержащий ЛКЛ человека, произведенную трансгенной птицей по п. 61.
64. Вектор, несущий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантную лизосомальную кислую липазу человека по п. 1.
65. Клетка-хозяин, трансформированная вектором по п. 64.
66. Способ лечения пациента, страдающего от состояния, вызванного дефицитом ЛКЛ, и такой способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции, включающей рекомбинантную ЛКЛ человека и введение пациентам второго терапевтического агента.
67. Способ по п. 66, отличающийся тем, что второй терапевтический агент представлен агентом понижения уровня холестерина, выбранным из группы, состоящей из аторвастатина, флувастатина, ловастатина, питавастатина, правастатина, розувастатина и симвастатина.
68. Способ по п. 66, отличающийся тем, что второй терапевтический агент представлен иммуносупрессантом.
69. Фармацевтическая композиция, включающая композицию по п. 1 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или вспомогательным веществом.
70. Фармацевтическая композиция по п. 69, отличающаяся тем, что композиция включает по меньшей мере один агент, выбранный из группы, состоящей из тринатрия цитрат дегидрата, лимонной кислоты и человеческого сывороточного альбумина.
71. Фармацевтическая композиция по п. 69, отличающаяся тем, что композиция представлена в водном растворе с поддерживаемым уровнем рН от примерно 5,6 до примерно 6,2.
72. Фармацевтическая композиция по п. 71, отличающаяся тем, что рН композиции поддерживается от примерно 5,7 до примерно 6,1.