ГЕННАЯ ТЕРАПИЯ ДЛЯ РЕЦЕССИВНОГО ДИСТРОФИЧЕСКОГО БУЛЛЕЗНОГО ЭПИДЕРМОЛИЗА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕНЕТИЧЕСКИ КОРРЕКТИРОВАННЫХ АУТОЛОГИЧНЫХ КЕРАТИНОЦИТОВ

1. Популяция клеток роговицы для использования в способе лечения эрозии роговицы у субъекта, где клетки роговицы трансдуцированы вирусом, содержащим генетическую конструкцию, кодирующую функционаьный белок коллагена VII (COL7A1); и где число копий провирусного генома (PGCN) в указанной популяции трансдуцированных клетках роговицы составляет не более 3, и предпочтительно менее чем 2, 1.5, 1, или 0.5.
2. Слой клеток роговицы для использования в способе лечения эрозии роговицы у субъекта, где в указанном способе трансплантат слоя клеток роговицы пересаживается на поверхность роговицы субъекта, страдающего от эрозии роговицы, и где слой клеток роговицы получают способом, включающем стадии:
трансдукции кдеток роговицы генетической конструкцией, кодирующей функционаьный белок коллагена VII (COL7A1); где число копий провирусного генома (PGCN) в трансдуцированных клетках роговицы составляет не более 3, и предпочтительно менее чем 2, 1.5, 1, или 0.5; и
культивирование генетически трансдуцированных клеток с образованием слоя клеток роговицы.
3. Популяция клеток роговицы, трансдуцированных вирусом, содержащим генетическую конструкцию, кодирующую функционаьный белок коллагена VII (COL7A1); и где число копий провирусного генома (PGCN) в указанной популяции трансдуцированных клетках роговицы составляет не более 3, и предпочтительно менее чем 2, 1.5, 1, или 0.5.
4. Композиция, содержащая слой клеток роговицы, где слой клеток роговицы получают способом, включающем стадии:
трансдукции кдеток роговицы генетической конструкцией, кодирующей функциональный белок коллагена VII (COL7A1); где число копий провирусного генома (PGCN) в трансдуцированных клетках роговицы составляет не более 3, и предпочтительно менее чем 2, 1.5, 1, или 0.5;
культивирование генетически трансдуцированных клеток с образованием слоя клеток роговицы.
5. Популяция клеток роговицы по п.1 или 3, или слой по п.2, или композиция по п.4, где вирус является ретровирусом, аденоассоциированным вирусом (AAV) или лентивирусом.
6. Популяция клеток роговицы по п.5, или слой клеток роговицы по п.5, или композиция по п.5, где ретровирус представляет собой LZRSE-вирус или GalV-псевдотипированный вирус.
7. Популяция клеток роговицы по пп.1, 3, 5, или 6, или слой клеток роговицы по пп.2, 5 или 6, или композиция по пп.4-6, где клетки роговицы получены от субъекта, страдающего от эрозии роговицы.
8. Популяция клеток роговицы по пп.1, 3, 5-7, или слой по пп.2, 5-7, или композиция по пп.4-7, где клетки роговицы содержат эпителиальные клетки роговицы.
9 Популяция клеток роговицы по пп.1, 3, 5-7, или слой по пп.2 или 5-7, или композиция по пп.5-7, где клетки роговицы содержат стволовые клетки, где необязатеьно дополнительно предусмотрена дифференцировка стволовых клеток в эпителиальные клетки роговицы.
10. Популяция клеток роговицы по пп.1, 3, 5-9, или слой по пп.2 или 5-9, или композиция по пп.4-9, где клетки роговицы отвечают критериям до высвобождения по эффективности вирусной трансдукции (VTE)>50%.
11. Популяция клеток роговицы по пп.1, 3, 5-10 или слой по пп.2 или 5-10, или композиция по пп.5-10, где субъект страдает рецессивным дистрофическим буллезным эпидермолизом (РДБЭ), необязательно где субъект является человеком.
12. Популяция клеток роговицы по пп.1, 3, 5-11, или слой по пп.2 или 5-11, или композиция по пп.5-11, где слой клеток роговицы подвергают одному или нескольким тестам, выбранным из группы, состоящей из теста VTE, теста PGCN, теста на стерильность, теста на эндотоксин, теста на микоплазму, теста на стерильность окрашиванием по Граму, теста на жизнеспособность LEAES, теста после высвобождения, теста RCR, анализа Т-клеточной цитотоксичности, характеристики анти-C7 LH24 мкАТ, электронной микроскопии, иммуноэлектронной микроскопии, иммунофлуоресцентного окрашивания, экспрессии C7 и анализ ЯФ, необязательно где иммунофлуоресцентное окрашивание включает прямое или непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание.
13. Популяция клеток роговицы по пп.1,3, 5-12, или слой по пп.2 или 5-12, или композиция по пп.5-12, где слой клеток роговицы помещают на бесклеточный матрикс, коллагеновый матрикс или биосовместимый волокнистый материал, необязательно где биосовместимый волокнистый материал изготавливают из термопластичной смолы, полиэтилена, полиэтилена с ультравысокой молекулярной массой, полиолефина с высокой молекулярной массой, непокрытого моноволокна полипропилена, полиэфирэфиркетона, полиэтилентерефталата, политетрафторэтилена, вспененного политетрафторэтилена, нейлона, силикона или любой их комбинации.
14. Популяция клеток роговицы по пп.1, 3, 5-13, или слой по пп.2 или 5-13, или композиция по пп.5-13, где функциональный белок COL7A1 представляет собой полноразмерный белок человека COL7A1 дикого типа.
15. Популяция клеток роговицы по пп.1, 3, 5-14, или слой по пп.2 или 5-14, или композиция по пп. 5-14, где функциональный белок COL7A1 представляет собой генетически модифицированный полноразмерный белок человека COL7A1 дикого типа, необязательно где модификация включает вставку, делецию и/или мутацию.