Применение 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-1,3-дифенил-9-(4-хлорбензоил)-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона в качестве средства, обладающего противотуберкулезной активностью
APPLICATION OF 8-HYDROXY-6-(2-HYDROXYPHENYL)-1,3-DIPHENYL-9-(4-CHLOROBENZOYL)-1,3,6-TRIAZASPIRO[4.4]NON-8-EN-2,4,7-TRIONE AS AN AGENT WITH ANTI-TUBERCULOSIS ACTIVITY

Изобретение относится к области органической химии, а именно к соединениям класса 9-ароил-8-гидрокси-6-(2-гидроксиарил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-трионов, проявляющим противотуберкулезную активность, которые могут быть использованы в качестве исходных продуктов для синтеза новых гетероциклических систем и в фармакологии.
Известен способ синтеза заявленного соединения 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-1,3-дифенил-9-(4-хлорбензоил)-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона, являющегося продуктом взаимодействия 3-(4-хлорбензоил)пирроло[2,1-с][1,4]бензоксазин-1,2,4-триона с дифенилмочевиной (Бабикова Н.В., Кобелев А.И., Белозерова А.И., Дмитриев М.В., Масливец А.Н. / Взаимодействие пирролобензоксазинтрионов с N,N'-замещенными мочевинами. Синтез замещенных спиро[имидазол-2,2'-пирролов] // ЖОрХ. 2021, 57 (9), 1336-1345. [Babikova N.V., Kobelev A.I., Belozerova A.I., Dmitriev M.V., Maslivets A.N. RJOC. 2021, 57 (9), 1441-1448.] doi 10.1134/S107042802109013X), образующегося по следующей схеме:
6
4
6
4
3
6
4
6
4
6
4
6
4
3
3
6
4
3
3
6
4
3
3
3
6
4
3
6
4
3
6
4
3
6
4
3
6
4
6
4
3
6
4
6
4
6
4
6
4
1a-j: Ar=Ph, R=H (a); Ar=Ph, R=Cl (b); Ar=CHCl-4, R=H (с); Ar=Ph, R=Br (d); Ar=CHBr-4, R=H (e); Ar=Ph, R=CH (f), Ar=CHOEt-4, R=H (g); Ar=CHOMe-4, R=H (h); Ar=CHF-4, R=H (i); Ar=CHMe-4, R=H (j) 2a-t: Ar=Ph, R=H, R'=CH (a); Ar=Ph, R=Cl, R'=CH (b); Ar=CHCl-4, R=H, R'=CH (с); Ar=Ph, R=Br, R'=CH (d); Ar=CHBr-4, R=H, R'=CH (e); Ar=Ph, R=CH, R'=CH (f), Ar=CHOEt-4, R=H, R'=CH (g); Ar=CHOMe-4, R=H, R'=CH (h); Ar=CHF-4, R=H, R'=CH (i); Ar=CHMe-4, R=H, R'=CH (j); Ar=Ph, R=H, R'=Ph (k); Ar=Ph, R=Cl, R'=Ph (1); Ar=CHCl-4, R=H, R'=Ph (m); Ar=Ph, R=Br, R'=Ph (n); Ar=CHBr-4, R=H, R'=Ph (o); Ar=Ph, R=CH, R'=Ph (p), Ar=CHOEt-4, R=H, R'=Ph (q); Ar=СНОМе-4, R=H, R'=Ph (r); Ar=CHF-4, R=H, R'=Ph (s); Ar=CHMe-4, R=H, R'=Ph (t)
Задачей изобретения является изыскание новых соединений, обладающих противотуберкулезной активностью, и расширение арсенала средств воздействия на живой организм.
Технический результат - выявлена ранее не известная противотуберкулезная активность 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-1,3-дифенил-9-(4-хлорбензоил)-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона.
Технический результат достигается получением 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-1,3-дифенил-9-(4-хлорбензоил)-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона, путем взаимодействия 3-(4-хлорбензоил)пирроло[2,1-с][1,4]бензоксазин-1,2,4-триона с дифенилмочевиной в среде растворителя с последующим выделением целевого продукта, по следующей схеме:
Процесс ведут при кипячении, а в качестве растворителя используют безводный толуол.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-трион (IIб).
31
20
3
6
К раствору 1.0 ммоль 3-(4-хлорбензоил)пирроло[2,1-с][1,4]бензоксазин-1,2,4-триона в 15 мл сухого толуола добавляли 1.0 ммоль дифенилмочевины, кипятили 60 мин (до исчезновения фиолетовой окраски исходного пирролдиона), охлаждали, выпавший осадок отфильтровывали. Выход 78%, т.пл. 210-214°С (разл., толуол). CHClNO.
Найдено, %: С, 65.77; Н, 3.55; N, 7.45.
Вычислено, %: С, 65.79; H, 3.56; N, 7.42.
8-Гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-трион - желтое высокоплавкое кристаллическое вещество, плавящееся с разложением, легкорастворимое в ДМСО и ДМФА, растворимое в ацетоне, хлороформе, 1,2-дихлорэтане, 1,4-диоксане, этилацетате, труднорастворимое в ароматических углеводородах, четыреххлористом углероде, нерастворимое в алканах и воде. Устойчиво при хранении в обычных условиях.
-1
2
4
7
-7
-1
В ИК спектре 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона, снятого в виде пасты в вазелиновом масле, присутствуют полосы валентных колебаний групп ОН и NH при 3336 см, лактамных карбонильных групп С=O, С=O, С=O при 1794, 1720 см, ароильной карбонильной группы при 1671 см.
1
6
В спектре ЯМР Н 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона, снятом в растворе ДМСО-d, кроме сигналов протонов алифатических заместителей, ароматических колец и связанных с ними групп, присутствуют уширенные синглеты протона фенольной группы ОН в области 10.18 м.д.
Пример 2. Фармакологическое исследование 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона на наличие противомикробной активности.
Исследование синтезированного соединения на противотуберкулезную активность проводилось в бактериологической лаборатории ГБУЗ ПК «КФМЦ» г. Перми.
37
Для изучения бактерицидной активности химического соединения в отношении микобактерий туберкулеза штамма HRv использовали стандартную радиометрическую ростовую систему ВАСТЕС MGIT 960 (Becton Dickinson) [Journal of Medicinal Chemistry. - 2000. - №17. - P. 3304-3314; Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ: учеб. пособие для послевуз. проф. образования врачей; Р.У. Хабриева (ред)., Медицина, Москва (2005)].
Исследуемые вещества в количестве 10 мг растворяли в 1 мл «Диметилсульфоксида», после чего добавляли 9 мл бульона Мидлбрук 7Н9, тем самым получая исходный раствор в 1,0 мг/мл. После чего добавляли в экспериментальные пробирки MGIT в количествах, обеспечивающих получение конечной концентрации от 100 до 1,0 мкг/мл, используя двукратные разведения, в двух повторностях. В пробирках MGIT содержалось по 7 мл стерильного питательного бульона Мидлбрук 7Н9. В каждую пробирку вносили по 0,8 мл обогатительной добавки ВАСТЕС MGIT OADC (олеиновая кислота, альбумин, декстроза и каталаза). Кроме жидкой среды в пробирке содержался бескислородный флюорохром - пентагидрат трис-4,7-дифенил-1,10-фенантролин хлорид рутения, помещенный на дно пробирки и покрытый силиконом.
37
7
5
Из культуры М. tuberculosis штамм HRv готовили бактериальную суспензию, которая была стандартизирована по оптическому стандарту мутности №5 (500 млн микробных тел в 1 мл) с использованием денситометра. Далее готовили раствор путем разведения исходной суспензии в 10 раз стерильным физиологическим раствором, таким образом получена 5×10 микробных тел в 1 мл. Затем суспензию микобактерий туберкулеза в количестве 0,5 мл добавляли в каждую из исследуемых пробирок MGIT. Параллельно инокулят культуры микобактерий туберкулеза в количестве 10 высевали в контрольные пробирки MGIT со средой Мидлбрук 7Н9 по 0,5 мл без содержания химических соединений. Для сравнения проводили аналогичные исследования с туберкулостатиком первого ряда - изониазидом.
Все пробирки инкубировали при температуре 37°С градусов с последующим анализом. Если тестируемое вещество активно по отношению к выделенным микобактериям, оно будет ингибировать рост и подавлять флюоресценцию, при этом в контрольной пробирке рост не ингибируется и, соответственно, уровень флуоресцентности в данной пробирке будет выраженнный. Данные представлены в таблице. Анализ полученных данных показал:
- что соединение 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-трион обладает противотуберкулезным действием в концентрации 50,0 мкг/мл в течение всего инкубационного времени (41 день)