-

2
2
2
Способ, включающий в себя приготовление липосом при включении в состав фолиевой кислоты путем предварительного синтеза фолат-конъюгированного липида и включения в состав липосом методом обращения фаз, отличающийся тем, что первоначально осуществляют синтез ФК-ПЭГ-NH: фолиевую кислоту в количестве 26,5 мг и NH-ПЭГ-NH 167,5 мг растворяют в 1 мл в диметилсульфоксиде, затем к раствору добавляют 8,6 мг NHS и 15,5 мг ДЦК, реакция протекает в течение 12 часов при комнатной температуре, затем полученное ФК-ПЭГ-NH2, очищают с помощью хроматографии; затем осуществляют синтез CHEMS-NHS, где CHEMS - 3β-гидрокси-5-холестен-3-гемисукцинат: осуществляют реакцию CHEMS в количестве 1 г с 475 мг NHS и 1,25 г ДЦК в тетрагидрофуране в течение 12 часов при комнатной температуре, затем очищают рекристаллизацией; далее осуществляют синтез ФК-ПЭГ-CHEMS: ФК- ПЭГ- NH2 (137 мг, 40 мкмоль) и CHEMS-NHS (29,2 мг, 50 мкмоль) растворяют в CHCl3 в количестве 50 мл при комнатной температуре. Растворитель CHCl3 затем удаляют вращательным испарением, а остаток гидратируют в 50 мм Na2CO3 (10 мл) с образованием мицелл ФК-ПЭГ-CHEMS; затем полученные мицеллы диализуют с помощью деионизированной воды, после чего продукт ФК-ПЭГ-CHEMS сушат лиофилизацией до получения порошка жёлтого цвета в количестве 130 мг; далее осуществляют получение липосом А путем гидратации тонкой пленки с последующей экструзией поликарбонатной мембраны путем растворения лецитина в количестве 85 мг с 0,5 моль\л % ФК-ПЭГ-CHEMS в CHCl3 и сушат до получения тонкой пленки путем роторного испарения и сушки в вакууме; липидную пленку гидратируют в количестве 2 мл из 250 г/моль сульфата аммония ((NH4)2SO4) в течение 30 мин при температуре 60°С с периодическим вихревым перемешиванием; полученную суспензию липидов экструдируют 5 раз через поликарбонатные мембраны размером пор 0,1 мкм с помощью экструдера, приводимого в движение азотом под давлением при температуре 60°C, для получения однослойных везикул. (NH4)2SO4 вне липосом удаляют тангенциальной проточной диафильтрацией против фосфатно-буферного физиологического раствора при pH 7.4. Затем для получения мультиламеллярных везикул (липосом Б) лецитин в количестве 30 мг с 0,1 моль% (липосом А) растворяют в смеси эфира с хлороформом в соотношении 2:1 и вносят полученный раствор в круглодонную колбу роторного испарителя: большие моноламеллярные везикулы (липосомы с грузом инсулина) формируют путем добавления в полученный состав инсулина (в 0,01 М фосфатном буфере рН 7,5) в объеме 1 мл к раствору фосфолипидов в органической фазе и обрабатывают ультразвуком частотой 22 кГц и мощностью 500 Вт в течение 30 секунд дважды; колбу с образовывавшейся эмульсией типа «вода в масле» присоединяют к роторному испарителю и при вращении колбы постепенно понижают давление так, чтобы не происходило кипения органического растворителя, после чего растворитель полностью удаляют; об окончании выпаривания судят по образованию геля в колбе и исчезновению запаха органического растворителя; колбу снимают с испарителя, к образовавшемуся гелю добавляют 5 мл 0,01 М фосфатного буфера (рН 7,5) и встряхивают до образования гомогенной структуры суспензии.