СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЛОГЕННЫХ T-КЛЕТОК С CAR

1. Среда для выращивания клеток для размножения Т-клеток, содержащая:
первый стимулятор и второй стимулятор клеточной пролиферации, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 и IL-15, и
внеклеточный модулятор клеточного метаболизма, который представляет собой внеклеточный калий, в концентрации от приблизительно 4 мМ до приблизительно 40 мМ,
где первый стимулятор и второй стимулятор присутствуют при отношении концентраций от приблизительно 1000:1 до приблизительно 4:1.
2. Среда для выращивания клеток по п. 1, где первый стимулятор клеточной пролиферации представляет собой IL-7.
3. Среда для выращивания клеток по п. 1 или 2, где второй стимулятор клеточной пролиферации представляет собой IL-15.
4. Среда для выращивания клеток по любому из пп. 1-3, где первый стимулятор и второй стимулятор присутствуют при отношении концентраций от приблизительно 500:1 до приблизительно 10:1, от приблизительно 250:1 до приблизительно 10:1, от приблизительно 200:1 до приблизительно 10:1, от приблизительно 150:1 до приблизительно 10:1, от приблизительно 100:1 до приблизительно 10:1, от приблизительно 500:1 до приблизительно 50:1, от приблизительно 250:1 до приблизительно 50:1, от приблизительно 200:1 до приблизительно 50:1, от приблизительно 150:1 до приблизительно 50:1, от приблизительно 100:1 до приблизительно 50:1, от приблизительно 500:1 до приблизительно 75:1, от приблизительно 250:1 до приблизительно 75:1, от приблизительно 200:1 до приблизительно 75:1, от приблизительно 150:1 до приблизительно 75:1, от приблизительно 100:1 до приблизительно 75:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 4:1, от приблизительно 8:1 до приблизительно 4:1 или от приблизительно 7:1 до приблизительно 6:1.
5. Среда для выращивания клеток по любому из пп. 1-3, где первый стимулятор и второй стимулятор присутствуют при отношении концентраций приблизительно 150:1, приблизительно 140:1, приблизительно 130:1, приблизительно 120:1, приблизительно 110:1, приблизительно 100:1, приблизительно 90:1, приблизительно 80:1 или приблизительно 70:1.
6. Среда для выращивания клеток по любому из пп. 1-5, где
первый стимулятор представляет собой IL-7, присутствующий в концентрации от приблизительно 100 МЕ/мл до приблизительно 5000 МЕ/мл; и
второй стимулятор представляет собой IL-15, присутствующий в концентрации от приблизительно 1 МЕ/мл до приблизительно 100 МЕ/мл.
7. Среда для выращивания клеток по п. 6, где IL-7 присутствует в концентрации от приблизительно 300 МЕ/мл до приблизительно 5000 МЕ/мл, и IL-15 присутствует в концентрации, которая составляет от приблизительно 25 МЕ/мл до приблизительно 50 МЕ/мл.
8. Среда для выращивания клеток по п. 7, где IL-7 присутствует в концентрации приблизительно 5000 МЕ/мл, и IL-15 присутствует в концентрации, которая составляет приблизительно 50 МЕ/мл.
9. Среда для выращивания клеток по любому из пп. 1-8, где внеклеточный калий присутствует в концентрации от приблизительно 20 мМ до приблизительно 35 мМ или от приблизительно 20 мМ до приблизительно 30 мМ.
10. Среда для выращивания клеток по п. 9, где внеклеточный калий присутствует в концентрации приблизительно 20 мМ или приблизительно 25 мМ.
11. Среда для выращивания клеток по любому из пп. 1-10, где внеклеточный калий присутствует в виде KCl.
12. Способ получения популяции Т-клеток in vitro, включающий культивирование исходной популяции Т-клеток со средой для выращивания клеток, содержащей
первый стимулятор и второй стимулятор клеточной пролиферации, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 и IL-15, и
внеклеточный модулятор клеточного метаболизма, который представляет собой внеклеточный калий, в концентрации от приблизительно 4 мМ до приблизительно 40 мМ,
где первый стимулятор и второй стимулятор присутствуют при отношении концентраций от приблизительно 1000:1 до приблизительно 4:1.
13. Способ по п. 12, где среда для выращивания клеток представляет собой среду для выращивания клеток по любому из пп. 1-11.
СМ
SCM
14. Способ по п. 12 или 13, где полученную популяцию Т-клеток обогащают Т- и/или T-клетками.
SCM
15. Способ по любому из пп. 12-14, где полученная популяция Т-клеток содержит по меньшей мере приблизительно 30%, 35%, 40% или 45% T-клеток.
SCM
16. Способ по п. 15, где полученная популяция Т-клеток содержит по меньшей мере приблизительно 40% T-клеток.
CM
SCM
CM
SCM
17. Способ по любому из пп. 12-16, где полученная популяция Т-клеток обогащена в от приблизительно 100 раз до приблизительно 1000 раз большим количеством T- и/или T-клеток, чем количество T- и/или T-клеток в исходной популяции Т-клеток, как измерено за период приблизительно 7-16 дней.
CM
SCM
CM
SCM
18. Способ по п. 17, где полученная популяция Т-клеток обогащена в от приблизительно 100 раз до приблизительно 1000 раз большим количеством T- и/или T-клеток, чем количество T- и/или T-клеток в исходной популяции Т-клеток, как измерено за период приблизительно 10-14 дней.
CM
SCM
CM
SCM
19. Способ по п. 18, где полученная популяция Т-клеток обогащена в по меньшей мере приблизительно 100 раз или приблизительно 200 раз большим количеством T- и/или T-клеток, чем количество T- и/или T-клеток в исходной популяции Т-клеток.
20. Способ по любому из пп. 12-19, где исходная популяция Т-клеток представляет собой популяцию сконструированных Т-клеток.
21. Способ по п. 20, где исходная популяция Т-клеток представляет собой популяцию Т-клеток, экспрессирующих один или более химерных антигенных рецепторов.
22. Способ по любому из пп. 12-21, где Т-клетки являются аллогенными Т-клетками.
23. Способ по любому из пп. 12-21, где Т-клетки являются аутологичными Т-клетками.
24. Популяция сконструированных иммунных клеток, где указанная популяция содержит Т-клетки, экспрессирующие один или более химерных антигенных рецепторов (Т-клетки с CAR), и где указанные Т-клетки с CAR получены с использованием среды для выращивания клеток по любому из пп. 1-11.
25. Популяция сконструированных иммунных клеток, где указанная популяция содержит Т-клетки, экспрессирующие один или более химерных антигенных рецепторов (Т-клетки с CAR), и где указанные Т-клетки с CAR получены с использованием способа по любому из пп. 12-23.
SCM
26. Популяция сконструированных иммунных клеток по п. 24 или 25, где Т-клетки с CAR содержат по меньшей мере приблизительно 30%, 35%, 40% или 45% T-клеток.
SCM
27. Популяция сконструированных иммунных клеток по п. 26, где Т-клетки с CAR содержат по меньшей мере приблизительно 40% T-клеток.
28. Фармацевтическая композиция, содержащая популяцию сконструированных иммунных клеток по любому из пп. 24-27.
29. Способ лечения заболевания или нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту популяции сконструированных иммунных клеток по любому из пп. 24-27 или фармацевтической композиции по п. 28.
30. Способ по п. 29, где заболевание или нарушение представляет собой рак.
31. Изделие, содержащее популяцию сконструированных иммунных клеток по любому из пп. 24-27 или фармацевтическую композицию по п. 28.