РАДИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ПРОДУКТЫ
RADIOPHARMACEUTICAL PRODUCTS

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к улучшенным радиофармацевтическим композициям в герметичных контейнерах, где укупорочное средство контейнера имеет покрытие из ETFE (сополимер этилена и тетрафторэтилена).
Предшествующий уровень техники
Известно, что радиофармацевтические композиции поставляются в герметичных контейнерах, снабженных укупорочными средствами фармацевтической марки, предоставляющих, таким образом, возможность для отбора из контейнера одной или более предназначенных для введения пациенту доз.
Имеется в продаже огромное множество укупорочных средств фармацевтической марки в широком ассортименте материалов, форм и размеров вместе с возможными покрытиями, выполненными из ряда материалов [Hencken & Petersen, Pharm. Ind., 65(9a), 966-976 (2003)]. Поэтому выбор конкретного класса или типа укупорочного средства с оптимальными характеристиками для данного типа продукта не является простым.
111
111
В US 6162648 предложен способ очистки радиоизотопа In для радиофармацевтического применения. В US 6162648 сообщается (колонка 2), что если для In применяется пузырек, герметизированный укупорочным средством, то полезна каучуковая пробка, покрытая PTFE (политетрафторэтилен) на поверхностях, обращенных к раствору. Указывают, что данное покрытие предотвращает выщелачивание загрязнений из резины пробки в радиоактивный раствор. Предпочтительные пробки US 6162648 изготовлены из винилбутилкаучука с покрытием предпочтительно из PTFE торговой марки Teflon™.
82
В WO 2006/026603 раскрыты улучшенные контейнеры для радиоизотопных генераторов, в особенности для радиофармацевтических генераторов в отношении позитрон-излучающего радиоизотопа Rb. Описана улучшенная герметизация с помощью обжатой пробки, изготовленной из материала, устойчивого или терпимого к радиации и способного выдержать давление без вздутия. В плане пригодности, в особенности в отношении устойчивости к дозам радиации, сравнимым с дозами, превалирующими в течение срока службы генератора, был изучен ряд покрытых и непокрытых пробочных материалов. Три непокрытых эластомерных пробочных материала были определены как предпочтительные: 4588/40 изопрен/хлорбутил, 6720 бромбутил и 140/0 хлорбутил. Было указано, что наиболее предпочтительным пробочным материалом является 4588/40 изопрен/хлорбутил.
В листе технической документации Daikyo Seiko относительно Flurotec™-покрытых пробок (композиция D21), где Flurotec™ представляет собой ETFE торговой марки Daikyo, перечислены различные преимущества укупорочного средства, ламинированного пленкой из фторированного полимера:
(1) эффективный барьер к взаимодействию лекарственное средство - укупорочное средство, предотвращающий ухудшение лекарственного продукта и, таким образом, увеличивающий стабильность, сохраняющий эффективность и увеличивающий срок хранения. Применимо для лекарственных средств, упакованных при очень низких или очень высоких значениях pH;
(2) исключает эндогенные частицы от каучуковых пробок;
(3) превосходная устойчивость к адсорбции лекарственное средство - укупорочное средство и, таким образом, совместимость с низкими дозами и малыми объемами заполнения лекарственными средствами;
(4) ламинированное покрытие обеспечивает превосходную смазывающую способность, исключающее прилипание укупорочного средства или связанные с их скоплением проблемы при серийном производстве и исключающее необходимость силиконовых обработок укупорочного средства.
Из каталога Daikyo Seiko следует, что такие укупорочные средства полезны для лиофилизированных препаратов, порошкообразных препаратов, жидких препаратов и препаратов для трансфузии. В каталоге утверждается, что укупорочные средства не следует подвергать действию прямого солнечного света или интенсивному ультрафиолетовому излучению и они поставляются нестерильными (то есть для фармацевтических применений их необходимо стерилизовать перед применением). Как лист технической документации, так и каталог не содержат сведений о радиофармацевтических применениях и/или о том, являются ли укупорочные средства радиорезистентными (то есть могут выдержать дозу радиации).
Настоящее изобретение
Согласно настоящему изобретению предложены улучшенные контейнерные композиции радиофармацевтического продукта в герметичных контейнерах, где укупорочное средство контейнера имеет покрытие из ETFE (сополимер этилена и тетрафторэтилена). Было обнаружено, что выбор таких укупорочных средств из широкого ассортимента доступных укупорочных средств фармацевтической марки предоставляет особые преимущества для радиофармацевтических препаратов.
Радиофармацевтические препараты обычно существуют с чрезвычайно низкими (обычно микромолярными, наномолярными или более низкими) концентрациями химического продукта. Таким образом, содержание химического продукта намного ниже, чем даже в самой малой композиции лекарственного средства. Следовательно, даже низкие уровни выщелоченных из укупорочного средства примесей (например, ионов металлов или органических веществ) могут оказать значительное влияние на радиохимическую чистоту. Это могло бы происходить, например, путем замещения радиометалла из радиометаллических комплексов выщелоченными ионами нерадиоактивных металлов и, таким образом, увеличения уровней примеси свободного радиометалла. Такой свободный радиометалл мог бы затем генерировать дополнительные радиоактивные примеси путем претерпевания, например, окислительно-восстановительных реакций или комплексообразования с другими доступными лигандами. Аналогично проникновение на ничтожном уровне кислорода в газ в свободном пространстве может иметь непропорционально большой эффект вследствие чрезвычайно низких химических концентраций присутствующего радиофармацевтического продукта. Было показано, что герметичные контейнеры с ETFE-покрытыми укупорочными средствами по настоящему изобретению являются особенно пригодными для радиофармацевтических средств. В настоящем изобретении также показано, что контейнеры по настоящему изобретению также имеют преимущество для применения с наборами для приготовления радиофармацевтических средств, в частности с теми, которые имеют лиофилизированные предшественники.
Подробное описание изобретения
В первом аспекте согласно настоящему изобретению предложен продукт агент визуализации, включающий радиофармацевтическую композицию, поставляемую в герметичном контейнере, где:
(1) указанная радиофармацевтическая композиция содержит радиоизотоп, пригодный для медицинской визуализации, предоставленный в биосовместимом носителе, в форме, пригодной для введения млекопитающим;
(2) указанный герметичный контейнер снабжен укупорочным средством, пригодным для прокалывания иглой для подкожных инъекций, сохраняющим при этом целостность герметизации, и указанное укупорочное средство покрыто покрытием, включающим сополимер этилена и тетрафторэтилена (ETFE) или его модифицированные версии, на той (тех) ее поверхности(ях), которая(ые) находится(ятся) в контакте с содержимым контейнера.
Термин "радиофармацевтическое средство" имеет свое общепринятое значение, то есть радиоактивное фармацевтическое средство или соединение в пригодной для введения в организм млекопитающего, в особенности человека, форме. Радиофармацевтические средства применяют для диагностической визуализации или радиотерапии. Радиофармацевтические средства по настоящему изобретению предпочтительно применяют для диагностической визуализации.
3
2
Герметичные контейнеры по настоящему изобретению представляют собой контейнеры фармацевтической марки, пригодные для хранения и транспортировки радиофармацевтических средств, сохраняющие при этом стерильную целостность. Такие контейнеры могут содержать однократные или многократные предназначенные для пациента дозы радиофармацевтической композиции. Предпочтительные контейнеры для многократных доз включают одиночный объемный пузырек (например, объемом 10-30 см), содержащий несколько предназначенных для пациента доз, в соответствии с чем однократные предназначенные для пациента дозы могут, таким образом, быть отобраны в шприцы клинической марки в различные временные интервалы в течение срока годности препарата для удовлетворения требованиям клинической ситуации. Таким предпочтительным контейнером является пузырек фармацевтической марки. Пузырек надлежащим образом изготовлен из материала фармацевтической марки, обычно стекла или пластика, предпочтительно стекла. Стекло контейнера, возможно, может быть покрыто для блокирования выщелачиваемых из стекла продуктов, как это известно из уровня техники. Таким предпочтительным покрытием является диоксид кремния (SiO). Стеклянные пузырьки фармацевтической марки, покрытые диоксидом кремния высокой чистоты, имеются в продаже у Schott Glaswerke AG и других поставщиков.
99m
Радиофармацевтические композиции по настоящему изобретению находятся в стерильной форме, пригодной для введения млекопитающим, в особенности человеку. Таким образом, для того чтобы получить желаемый стерильный продукт, композиции могут быть приготовлены в условиях асептического производства. Также радиофармацевтические композиции могут быть приготовлены в нестерильных условиях с последующей завершающей стерилизацией с использованием, например, гамма-облучения, автоклавирования, обработки сухим теплом или химической обработки (например, этилендиоксидом). В общепринятой фармацевтической практике применяют автоклавирование, тем не менее укупорочные средства по настоящему изобретению предпочтительно стерилизуют гамма-облучением. Это делают вследствие того, что при автоклавировании в укупорочном средстве остаются следы остаточной влаги и того, что некоторые радиофармацевтические средства чувствительны к влаге. Myoview™ (Tс-тетрофосмин) является важным примером того, когда подавление влагосодержания укупорочного средства является весьма предпочтительным.
Газ в свободном пространстве над радиофармацевтической композицией в герметичном контейнере представляет собой подходящий химически нереакционноспособный газ. Под термином "химически нереакционноспособный газ" понимают газ, который можно было бы применять в химии для обеспечения "инертной атмосферы", как это известно из уровня техники. Такой газ не подвергается реакциям легкого окисления или восстановления (например, как могли бы подвергаться кислород и водород соответственно) или другим химическим реакциям с органическими соединениями (например, как мог бы подвергаться хлор) и поэтому совместим с широким кругом синтетических соединений без взаимодействия с синтетическим соединением даже при продолжительном хранении в течение многих часов или даже недель в контакте с газом. Такие подходящие газы включают азот или инертные газы, такие как гелий или аргон. Предпочтительно химически нереакционноспособный газ представляет собой азот или аргон. Химически нереакционноспособные газы фармацевтической марки имеются в продаже.
201
67
123
11
18
11
18
3
14
3
"Радиоизотоп, пригодный для медицинской визуализации" радиофармацевтического средства по настоящему изобретению может присутствовать во множестве химических форм. Одна из возможностей заключается в том, что радиоизотоп находится в ионной форме и растворен в биосовместимом носителе. Примерами этого являются Tl в виде хлорида таллия, цитрат Ga или I-йодид натрия. Радиоизотопы, которые являются радиометаллами, могут также присутствовать в ковалентной форме в виде комплексов металлов с лигандами, как описано ниже. Радиофармацевтическое средство также может включать обеспечивающую направленную доставку к биологической мишени молекулу, которая мечена радиоизотопом. Термин "мечена" означает, что или функциональная группа содержит радиоизотоп, или радиоизотоп присоединен в виде дополнительной частицы. Если функциональная группа содержит радиоизотоп, то это означает, что радиоизотоп образует часть химической структуры и является радиоактивным изотопом, присутствующим на уровне, который значительно превышает уровень распространенности указанного изотопа в природе. Такие повышенные или обогащенные уровни изотопа по меньшей мере в 5 раз, чем уровень распространенности рассматриваемого изотопа в природе, являются подходящими, по меньшей мере в 10 раз - предпочтительными, по меньшей мере в 20 раз - наиболее предпочтительными и по меньшей мере в 50 раз или когда изотопы присутствуют на уровне, где степень обогащения рассматриваемого изотопа составляет 90-100%, - идеальными. Примеры таких функциональных групп включают группы CH с повышенными уровнями C и фторалкильные группы с повышенными уровнями F, при условии, что визуализирующий радиоизотоп представляет собой меченный изотопом атом C или F в пределах химической структуры. Радиоизотопы H и C непригодны для радиофармацевтической визуализации.
Под термином "группировка, обеспечивающая направленную доставку к биологической мишени" понимают 3-100-мерные пептиды или пептидные аналоги, которые могут быть линейными пептидами или циклическими пептидами, или их комбинациями; моноклональные антитела или их фрагменты; или субстраты ферментов или ингибиторы; синтетические соединения, связывающиеся с рецепторами; олигонуклеотиды или фрагменты олиго-ДНК или олиго-РНК. Группировка, обеспечивающая направленную доставку к биологической мишени, может быть синтетического или естественного происхождения, но предпочтительно является синтетической. Предпочтительные группировки, обеспечивающие направленную доставку к биологической мишени, представляют собой 3-20-мерные пептиды, которые могут быть синтетического или естественного происхождения, но предпочтительно являются синтетическими. Под термином "циклический пептид" понимают последовательность из 5-15 аминокислот, в которой две концевые аминокислоты связаны вместе ковалентной связью, которая может быть пептидной или дисульфидной связью или синтетической непептидной связью, такой как тиоэфирная, фосфодиэфирная, дисилоксановая или уретановая связь.
Под термином "аминокислота" понимают L- или D-аминокислоту, аминокислотный аналог или аминокислотный миметик, которые могут быть природного или чисто синтетического происхождения и могут быть оптически чистыми, то есть одиночным энантиомером и, следовательно, хиральным или смесью энантиомеров. Предпочтительно аминокислоты по настоящему изобретению являются оптически чистыми. Под термином "аминокислотный миметик" понимают синтетические аналоги природных аминокислот, которые являются изостерами, то есть построенными таким образом, чтобы имитировать пространственную и электронную структуру природного соединения. Такие изостеры хорошо известны специалистам в данной области техники и включают депсипептиды, ретро-инверсопептиды, тиоамиды, циклоалканы или 1,5-дизамещенные тетразолы [смотри М.Goodman, Biopolymers, 24, 137 (1985)], но не ограничиваются ими.
Подходящие пептиды для применения в настоящем изобретении включают:
- соматостатин, октреотид и аналоги,
- пептиды, которые связываются с ST рецептором, где ST относится к термостойкому токсину, продуцируемому E.coli и другими микроорганизмами;
- фрагменты ламинина, например YIGSR, PDSGR, IKVAV, LRE и KCQAGTFALRGDPQG,
- N-формильные пептиды для направленной доставки к местам скопления лейкоцитов,
- тромбоцитарный фактор 4 (PF4) и его фрагменты,
- RGD-содержащие пептиды, мишенью которых может быть, например, ангиогенез [R.Pasqualini et al., Nat Biotechnol., 15(6): 542-6 (1997)]; [E.Ruoslahti, Kidney Int., 51(5); 1413-7 (1997)],
2
2
2
- пептидные фрагменты α-антиплазмина, фибронектина или бета-казеина, фибриногена или тромбоспондина. Аминокислотные последовательности α-антиплазмина, фибронектина, бета-казеина, фибриногена и тромбоспондина можно найти в следующих ссылках: предшественник α-антиплазмина [M.Tone et at., J. Biochem, 102, 1033, (1987)]; бета-казеин [L.Hansson et al, Gene, 139, 193 (1994)]; фибронектин [A.Gutman et al, FEBS Lett., 207. 145 (1996)]; предшественник тромбоспондина-1 [V.Dixit et al, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 83, 5449 (1986)]; R.F.Doolittle, Ann. Rev. Biochem., 53, 195 (1984),
- пептиды, которые являются субстратами или ингибиторами ангиотензина, например:
ангиотензин II Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe (E.С.Jorgensen et al, J. Med. Chem., 1979, Vol 22, 9, 1038-1044)
[Sar, lle] ангиотензин II: Sar-Arg-Val-Tyr-lle-His-Pro-Ile (R.K.Turker et al., Science, 1972, 177, 1203).
- Ангиотензин I: Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu.
Предпочтительно пептиды по настоящему изобретению включают RGD- или ангиотензин II-пептиды. Синтетические пептиды по настоящему изобретению могут быть получены традиционным твердофазным синтезом, как описано Р.Lloyd-Williams, F.Albericio and E.Girald в Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, CRC Press, 1997.
Пригодные моноклональные антитела или их фрагменты для применения в настоящем изобретении включают антитела к антигену CD-20, который экспрессируется на поверхности В-клеток; антилейкоцитарные или антигранулоцитарные антитела; антимиозиновые антитела или антитела к карциноэмбриональному антигену (СЕА).
Подходящие ферментные субстраты, антагонисты или ингибиторы включают глюкозу и аналоги глюкозы, такие как фтордезоксиглюкоза; жирные кислоты или ингибиторы эластазы, Ангиотензина II или металлопротеиназы. Предпочтительным непептидным антагонистом Ангиотензина II является лозартан.
Подходящие синтетические соединения, связывающиеся с рецепторами, включают эстрадиол, эстроген, прогестин, прогестерон и другие стероидные гормоны; лиганды допаминового D-1 или D-2 рецептора или допаминового транспортера, такие как тропаны, и лиганды серотонинового рецептора.
Группировка, обеспечивающая направленную доставку к биологической мишени, предпочтительно имеет молекулярную массу менее 5000, более предпочтительно менее 4000, идеально менее 3000.
"Радиоизотоп, пригодный для медицинской визуализации" может быть обнаружен или вне организма млекопитающего, или посредством использования детекторов, спроектированных для применения in vivo, таких как внутрисосудистые радиационные детекторы или радиационные детекторы, спроектированные для интраоперационного применения. Такими предпочтительными радиоизотопами являются радиоизотопы, которые могут быть обнаружены внешним неинвазивным образом после введения in vivo. Наиболее предпочтительно такие радиоизотопы выбраны из ионов радиоактивных металлов, гамма-излучающих радиоактивных галогенов и позитрон-излучающих радиоактивных неметаллов, в частности тех, которые пригодны для визуализации с использованием ОФЭКТ (однофотонная эмиссионная компьютерная томография) или ПЭТ (позитронная эмиссионная томография).
64
48
52
55
94m
68
99m
111
113m
67
99m
64
68
111
99m
Если радиоизотоп представляет собой ион радиоактивного металла, то есть радиометалла, то пригодные радиометаллы могут представлять собой или излучатели позитронов, такие как Cu, V, Fe, Со, Тс или Ga, или γ-излучатели, такие как Tс, In, In или Ga. Предпочтительными радиометаллами являются Тc, Cu, Ga и In. Наиболее предпочтительными радиометаллами являются γ-излучатели, особенно Тс.
123
131
77
123
Если радиоизотоп представляет собой гамма-излучающий радиоактивный галоген, то радиогалоген подходящим образом выбирают из I, I или Вr. Предпочтительным гамма-излучающим радиоактивным галогеном является I.
11
13
15
17
18
75
76
124
11
13
18
124
11
18
18
Если радиоизотоп представляет собой позитрон-излучающий радиоактивный неметалл, то такие пригодные излучатели позитронов включают C, N, O, F, F, Br, Br или I. Предпочтительными позитрон-излучающими радиоактивными неметаллами являются С, N, F и I, особенно С и F, главным образом F.
Если радиоизотоп представляет собой ион радиоактивного металла, то радиофармацевтическое средство предпочтительно содержит металлический комплекс иона радиоактивного металла с синтетическим лигандом. Под термином "металлический комплекс" понимают координационный комплекс иона металла с одним или более лигандом. Термин "синтетический лиганд", используемый в данном описании изобретения, означает углеродсодержащее соединение, которое содержит по меньшей мере один гетероатом, пригодный для координации с металлом, такой как N, O, S, P или Se или их комбинации. Такие соединения имеют преимущество, заключающееся в том, что их изготовление и профиль примесей можно контролировать в полном объеме.
Весьма предпочтительно, чтобы металлический комплекс являлся "устойчивым к трансхелатированию", то есть, чтобы он быстро не подвергался лигандному обмену с другими потенциально конкурирующими за места координации с металлами лигандами. Потенциально конкурирующие лиганды включают другие эксципиенты в препарате in vitro (например, радиопротекторы или противомикробные консерванты, применяемые в препарате) или эндогенные соединения in vivo (например, глутатион, трансферрин или белки плазмы). Термин "синтетический" имеет свое общепринятое значение, то есть изготовленный людьми в противоположность выделяемому из природных источников, например из организма млекопитающего.
Предпочтительные синтетические лиганды для применения в настоящем изобретении, которые образуют металлические комплексы, устойчивые к трансхелатированию, включают хелатирующие агенты, где 2-6, предпочтительно 2-4, металлодонорных атома расположены таким образом, чтобы после координации получались 5- или 6-членные хелатные кольца (посредством того, что имеют некоординирующую основную цепь или из атомов углерода, или из некоординирующих гетероатомов, связывающих металлодонорные атомы); или монодентатные лиганды, содержащие донорные атомы, которые прочно связываются с ионом металла, такие как изонитрилы, фосфины или диазениды. Синтетический лиганд по настоящему изобретению предпочтительно включает одну или более фосфиновых, тиольных или изонитрильных групп, связывающих металл.
Примерами типов донорных атомов, которые хорошо связываются с металлами как части хелатирующих агентов, являются амины, тиолы, амиды, оксимы и фосфины. Фосфины образуют такие сильные металлические комплексы, что даже монодентатные или бидентатные фосфины образуют пригодные металлические комплексы. Линейная геометрия изонитрилов и диазенидов такова, что они неохотно предоставляют себя для включения в хелатирующие агенты, и поэтому обычно их применяют в качестве монодентатных лигандов. Примеры пригодных изонитрилов включают простые алкилизонитрилы, такие как трет-бутилизонитрил, и эфир-замещенные изонитрилы, такие как миби (то есть 1-изоциано-2-метокси-2-метилпропан). Примеры предпочтительных фосфинов включают тетрофосмин и монодентатные фосфины, такие как трис(3-метоксипропил)фосфин. Тетрофосмин является особенно предпочтительным фосфином.
2
2
2
2
Тетрофосмин может быть получен, как описано Chen et al [Zhong. Heyix. Zazhi, 17 (1) 13-15 (1997)] или Reid et al. [Synth. Appl. Isotop. Lab. Comp., Vol 7, 252-255 (2000)]. Обычный синтез включает сначала приготовление 1,2-бис(фосфино)этана или HPCHCHPH [Inorganic Synthesis, Vol 14, 10], а затем свободнорадикальное присоединение избытка этилвинилового эфира с использованием свободнорадикального инициатора.
Примеры пригодных диазенидов включают HYNIC серию лигандов, то есть гидразин-замещенных пиридинов или никотинамидов.
Примеры пригодных хелатирующих агентов для технеция, которые образуют металлические комплексы, устойчивые к трансхелатированию, включают, без ограничения ими:
(1) диаминдиоксимы формулы:
,
1
6
где E-Е каждый независимо представляет собой группу R';
1-10
3-10
2-10
1-10
1-10
2-10
1-10
каждый R' представляет собой Н или Cалкил, Салкиларил, Салкоксиалкил, Сгидроксиалкил, Сфторалкил, Скарбоксиалкил или Саминоалкил или две или более групп R' вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют карбоциклическое, гетероциклическое, насыщенное или ненасыщенное кольцо, и где одна или более групп R' конъюгирована с молекулой, обеспечивающей направленную доставку к биологической мишени;
f
Q представляет собой мостиковую группу формулы -(J)-,
где f равен 3, 4 или 5 и каждый J независимо представляет собой -O-, -NR'- или
2
f
-C(R')- при условии, что -(J)- содержит максимально одну группу J, которая представляет собой -О- или -NR'-.
Предпочтительными группами Q являются следующие:
2
2
Q представляет собой -(CH)(CHR')(CH)-, то есть пропиленаминоксим (РnАО) или производные РnАО;
2
2
2
2
Q представляет собой -(CH)(CHR')(CH)-, то есть пентиленаминоксим (PentAO) или производные PentAO;
2
2
2
2
Q представляет собой -(CH)NR'(CH)-.
1
6
1
6
1-3
3
Е-Е предпочтительно выбраны из C алкила, алкиларилалкоксиалкила, гидроксиалкила, фторалкила, карбоксиалкила или аминоалкила. Наиболее предпочтительно каждая группа Е-Е представляет собой СН.
1
6
2
2
2
2
2
2
Молекула, обеспечивающая направленную доставку, предпочтительно конъюгирована или с Е, или с Е группой R', или с группой R' группировки Q. Наиболее предпочтительно, молекула, обеспечивающая направленную доставку, конъюгирована с группой R' группировки Q. Если молекула, обеспечивающая направленную доставку, конъюгирована с группой R' группировки Q, то группа R' предпочтительно находится в положении головы мостика. В этом случае Q предпочтительно представляет собой -(CH)(CHR')(CH)-, -(CH)(CHR')(CH)- или
2
2
2
2
2
2
2
2
-(CH)NR'(CH)-, наиболее предпочтительно -(CH)(CHR')(CH)-. Особенно предпочтительный бифункциональный диаминдиоксимовый хелатор имеет формулу:
2
2
2
так что молекула, обеспечивающая направленную доставку, конъюгирована посредством группы -CHCHNH в голове мостика.
3
3
(2) NS лиганды, имеющие тиолтриамидную донорную совокупность, такую как МАG (меркаптоацетилтриглицин), и родственные лиганды или имеющие диамидпиридинтиольную донорную совокупность, такую как Pica;
2
2
(3) NS лиганды, имеющие диаминдитиольную донорную совокупность, такую как ВАТ или ECD (то есть этилцистеинатный димер), или амидаминдитиольную донорную совокупность, такую как МАМА;
4
(4) N лиганды, которые представляют собой лиганды с открытой цепью или макроциклические лиганды, имеющие тетраминовую, амидтриаминовую или диамиддиаминовую донорную совокупность, такую как циклам, монооксоциклам или диоксоциклам;
2
2
2
2
3
94m
99m
64
67
48
52
55
(5) NO лиганды, имеющие диаминдифенольную донорную совокупность. Вышеописанные лиганды являются особенно пригодными для комплексобразования с технецием, например Тс или Tс, и более подробно описаны Jurisson et al. [Chem.Rev., 99, 2205-2218 (1999)]. Также лиганды применимы для других радиометаллов, таких как медь (Сu или Сu), ванадий (например, V), железо (например, Fe) или кобальт (например, Со). Другие пригодные лиганды описаны Sandoz в документе WO 91/01144, в который включены лиганды, пригодные, в частности, для индия, иттрия и гадолиния, в особенности лиганды на основе макроциклического аминокарбоксилата и аминофосфоновой кислоты. Если ион радиометалла представляет собой технеций, то лиганд предпочтительно представляет собой хелатирующий тетрадентатный агент. Предпочтительными хелатирующими агентами для технеция являются диаминдиоксимы или такие, которые имеют NS или NS донорную совокупность, как описано выше.
"Биосовместимый носитель" представляет собой текучую среду, в особенности жидкость, в которой радиофармацевтическое средство может быть суспендировано или растворено, так что композиция является физиологически приемлемой, то есть может быть введена в организм млекопитающего без токсичности или чрезмерного дискомфорта. Соответственно, биосовместимый носитель представляет собой инъецируемый носитель-жидкость, такой как стерильная апирогенная вода для инъекций; водный раствор, такой как солевой раствор (который преимущественно может быть сбалансирован таким образом, чтобы конечный продукт для инъекций был изотоническим); водный раствор одного или более веществ, регулирующих тонус (например, солей катионов плазмы с биосовместимыми противоионами), сахаров (например, глюкозы или сахарозы), сахарных спиртов (например, сорбита или маннита), гликолей (например, глицерина) или других неионных полиольных веществ (например, полиэтиленгликолей, пропиленгликолей и тому подобного). Предпочтительно биосовместимый носитель представляет собой апирогенную воду для инъекций или изотонический солевой раствор.
Укупорочное средство по настоящему изобретению герметично закрывает контейнер, где целостность герметизации такова, что сохраняется чистота и стерильная целостность радиофармацевтической композиции. Целостность герметизации также означает сохранность газа в свободном пространстве над радиофармацевтической композицией внутри контейнера, а также что герметизация может выдержать перепады давлений, такие как при использовании вакуума в процессе лиофилизации для сушки содержимого контейнера сублимацией. Целостность герметизации также означает, что стерильная целостность продукта сохраняется во время производства, транспортировки и клинического применения.
Укупорочные средства по настоящему изобретению пригодны для однократного прокалывания иглой для подкожных инъекций (например, укупорочное средство для герметизации в виде обжатой мембраны) при сохранении целостности герметизации. Это означает, что укупорочное средство имеет достаточную эластичность для восстановления необходимой герметичности после образования отверстия в результате прокалывания. Для однократного прокалывания контейнер может быть спроектирован таким образом, чтобы содержать однократную дозу для человека или "стандартную дозу" радиофармацевтического средства. Предпочтительно укупорочные средства являются пригодными для многократного прокалывания иглой для подкожных инъекций при условии, что контейнер может содержать в себе многократные дозы радиофармацевтического средства. Каждая стандартная доза, отобранная из контейнера, предназначена для индивидуального пациента, и поэтому для последующего введения ее отбирают подходящим образом в шприц клинической марки. Предпочтительно пригодный для клинического применения шприц является одноразовым с целью минимизации риска перекрестного загрязнения между пациентами. Заполненный шприц, возможно, может быть снабжен защитой шприца для предохранения оператора от радиоактивной дозы. Такие подходящие защиты для радиофармацевтических шприцов известны специалистам в данной области техники и предпочтительно выполнены или из свинца, или из вольфрама.
Укупорочное средство по настоящему изобретению, то есть основа укупорочного средства, в отличие от его покрытия, предпочтительно изготовлено из синтетического эластомерного полимера. Основа укупорочного средства предпочтительно изготовлена из хлорированного или бромированного бутилкаучука или неопрена, так как такие полимеры обладают низкой проницаемостью для кислорода. Наиболее предпочтительно основа укупорочного средства изготовлена из хлорированного бутилкаучука. Радиационная стойкость зависит от состава эластомерного полимера. Радиационная стойкость является значимой для применения радиофармацевтических композиций, а также для возможности стерилизации укупорочных средств посредством гамма-облучения. Авторы настоящего изобретения считают, что бутилполимеры могут выдержать дозу радиации около 50 кГр. PTFE может выдержать только 5 кГр, что означает что пленки PTFE не пригодны для гамма-облучения. Пленка ETFE по настоящему изобретению может выдержать 25-36 кГр, что делает ее особенно пригодной для настоящего изобретения, так как гамма-облучение является предпочтительным способом стерилизации.
Укупорочные средства по настоящему изобретению покрыты покрытием, включающим сополимер этилена и тетрафторэтилена (ETFE) или его модифицированные версии, на той (тех) его поверхности(тях), которая(ые) находится(ятся) в контакте с содержимым контейнера. "Модифицированными версиями" являются те версии, которые запущены Daikyo Seiko в коммерческое производство как Flurotec™. Покрытие предпочтительно представляет собой пленку, которая является ламинированной на укупорочном средстве. Толщина пленки ETFE, применяемой для ламинирования поверхности пробки, предпочтительно находится в диапазоне 0,01-0,2 мм. Если толщина пленки менее 0,01 мм, то пленка имеет тенденцию к разрушению в процессе формовки или обработки, в то время как, если толщина превышает 0,2 мм, то жесткость ламината слишком велика для сохранения надлежащих свойств самогерметизации и прокалывания иглой.
Предпочтительным ETFE-покрытием является модифицированное ETFE покрытие Flurotec™. Предпочтительно покрытие покрывает все поверхности укупорочного средства за исключением тех, которые образуют с контейнером герметизирующую зону. "Герметизирующая зона" представляет собой часть укупорочного средства, которая контактирует со стенками контейнера (например, со стеклом пузырька) и является ответственной за обеспечение воздухонепроницаемой герметизации. Для укупорочного средства пузырька это означает, что покрытие не наносится на нижнюю часть боковой поверхности фланца, поскольку указанная зона используется для достижения эффективной герметизации между пробкой и поверхностью пузырька. На Фиг.1 показана герметизирующая зона для имеющегося в продаже Flurotec™ - покрытого укупорочного средства пузырька. Отсутствие покрытия из фторированного полимера на герметизирующей зоне является важным, так как уменьшенное трение покрытия означает, что полностью покрытые укупорочные средства проявляют неудовлетворительную целостность герметизации. Это приводит к проблемам, связанным с проникновением воздуха в газ в свободном пространстве пузырька, а также к трудностям при использовании вакуума (например, в условиях лиофилизации).
Предпочтительные укупорочные средства по настоящему изобретению обладают куполообразной формой для одиночного воздушного клапана. В частности, эта форма является благоприятной для лиофилизированных продуктов, особенно когда в приборе для лиофильной сушки перед закрытием пузырька является необходимым удаление из пузырька воды/воздуха (иногда с обратным заполнением азотом). Куполообразная форма для одиночного воздушного клапана не имеет острых или прямых кромок, и это делает ее более пригодной для ламинирования по сравнению с пробками с двумя "ножками" (two-legged), у которых кромки являются очень прямыми, и любое покрытие могло бы разрушиться в процессе ламинирования.
Покрытие ETFE также обеспечивает превосходную защиту от потенциальных органических и неорганических экстрагируемых веществ для минимизации взаимодействия между лекарственным продуктом и укупорочным средством. Фторуглеродная пленка также обладает низкой поверхностной энергией, предоставляя хорошую смазывающую способность без необходимости силиконового масла и удаляя один из источников загрязнения частицами. Пленка также гарантирует то, что не будет прилипания пробок к полкам в камерах для лиофилизации или не будет их скопления во время операций при серийном производстве.
Является предпочтительным, чтобы укупорочные средства по настоящему изобретению были предварительно обработаны для удаления газообразного кислорода, растворенного внутри материала укупорочного средства и/или покрытия, и чтобы укупорочные средства снова были уравновешены в атмосфере химически нереакционноспособного газа, как определено выше, предпочтительно азота или аргона. Это может быть осуществлено посредством множества способов, включая:
(1) сухое тепло для вытеснения воздуха/кислорода с последующим охлаждением в присутствии нереакционноспособного газа;
(2) использование высокого вакуума (например, в приборе для лиофильной сушки) с последующим введением нереакционноспособного газа;
(3) комбинации (1) и (2).
Было установлено, что такая предварительная обработка является особенно полезной для чувствительных к воздуху радиофармацевтических средств, так как она предполагает, что содержание кислорода в газе в свободном пространстве контейнера может сохраняться на очень низком и стабильном уровне. Основной причиной является то, что покрытие ETFE и/или каучуковая композиция основы укупорочного средства способны абсорбировать кислород, и что небольшое количество газообразного кислорода могло бы медленно высвобождаться в пузырек при хранении. Полагают, что газообразный кислород обладает высокой растворимостью в пленочном покрытии ETFE и газ выделялся бы в пузырек посредством диффузионного процесса. Этот процесс ускорялся бы всякий раз, когда давление внутри контейнера было бы меньше атмосферного давления (что иногда имеет место в случае лиофилизированных агентов). Таким предпочтительным способом предварительной обработки является способ (1), то есть сухое тепло.
99m
Чувствительные к воздуху радиофармацевтические агенты описаны выше. Таким предпочтительным агентом по настоящему изобретению является Тс-тетрофосмин.
Пригодные для применения в настоящем изобретении укупорочные средства имеются в продаже у West Pharmaceutical Services Inc. (www.westpharma.com. 101 Gordon Drive, PO Box 645 Lionville, PA 19341, USA) или Daikyo Seiko Ltd (38-2 Sumida 3-Chome, Sumida-Ku, Tokyo, 131-0031, Japan) и имеют модифицированное ETFE покрытие Flurotec™. Предпочтительным укупорочным средством является серия D21 от Daikyo Seiko. Предпочтительное укупорочное средство для пузырька из данной серии имеет конфигурацию V10 F451 W и хлорбутилкаучуковую композицию, обозначенную D21-7S. Это соответствует укупорочному средству 5 Примера 1 (ниже). Частично покрытые укупорочные средства по настоящему изобретению изготавливают двустадийным формовочным способом. Сначала пробку формуют, подравнивают и промывают, а затем прикладывают к кромке. Эта методика очень отличается от аэрозольного покрытия, при котором покрывают всю площадь поверхности укупорочного средства.
Предпочтительные радиофармацевтические средства для применения в продуктах по настоящему изобретению представляют собой такие, которые чувствительны к воздуху или предрасположены к адсорбции укупорочным средством, или склонны к проблемам взаимодействия, например, вследствие липофильности, имея коэффициент распределения в системе октанол - вода более 0,5.
99m
95m
99m
99m
+
99m
2
2
3
2
2
Если радиофармацевтическое средство содержит металлический комплекс радиоактивного металла с синтетическим лигандом, то предпочтительными синтетическими лигандами являются такие, которые содержат фосфиновые, тиольные или изонитрильные группы, связывающие металл. Если радиоизотоп представляет собой Тc или Тс, то предпочтительные группы, связывающие металл, включают тетрофосмин; МIВI (1-изоциано-2-метокси-2-метилпропан); ВАТ (бис-аминотиол NS хелатор) или MAG3 (NS меркаптоацетилтриглицин). Особенно предпочтительным радиофармацевтическим средством для применения в продуктах по настоящему изобретению является Тс-тетрофосмин в состоянии окисления Tc(V), то есть Tc(O)(тeтpoфocмин) (Myoview™). Сообщают, что Тс-тетрофосмин испытывает проблемы пластической адсорбции [Rodrigues et al, Nucl. Med. Comm., 22(1), 105-110 (2001)] и Gunasekera et al., Nucl. Med. Comm., 22(5), 493-497 (2001)], так что ожидают, что он выиграет от уменьшения или устранения возможности возникновения проблем взаимодействия, приводящих, например, к потере радиоактивности.
18
Если радиоизотоп представляет собой излучатель позитронов, предпочтительно F, то герметичный контейнер по первому воплощению предпочтительно применяют в качестве части автоматического синтезатора. Под термином "автоматический синтезатор" понимают автоматический модуль, основанный на принципе единичных операций, как описано Satyamurthy et al [Clin. Positr. Imag., 2(5), 233-253 (1999)]. Термин "единичные операции" означает, что сложные процессы преобразовываются в последовательность простых операций или реакций, которые можно применять в отношении ряда материалов. Такие автоматические синтезаторы являются предпочтительными для способа по третьему аспекту (ниже) и имеются в продаже у ряда поставщиков [Satyamurthy et al, выше], включая CTI Inc, GE Healthcare and Ion Beam Applications S.A. (Chemin du Cyclotron 3, B-1348 Louvain-La-Neuve, Belgium). Коммерческие автоматические синтезаторы спроектированы также таким образом, чтобы или обеспечивать соответствующую защиту от облучения, или чтобы быть без защиты, но размещаться в защищенной горячей камере (то есть в производственной камере, специально спроектированной для проведения радиохимических работ) для защиты оператора от возможной дозы радиации. Такие коммерческие синтезаторы также содержат подходящие контейнеры для жидких радиоактивных отходов, образующихся в результате радиофармацевтического приготовления.
Предпочтительными автоматическими синтезаторами являются такие, которые включают одноразовую или однократного применения кассету, содержащую все нерадиоактивные реагенты, реакционные сосуды и аппарат, необходимые для осуществления приготовления данной партии радиофармацевтического средства. Кассета подразумевает, что автоматический синтезатор обладает гибкостью в отношении способности изготовления множества разнообразных радиофармацевтических средств с минимальным риском перекрестного загрязнения путем простой замены кассеты. Под термином "кассета" понимают часть аппарата, спроектированную так, чтобы соответствовать аппарату, представляющему собой автоматический синтезатор, с возможностью съема и замены (как определено выше) таким образом, чтобы механическое движение двигающихся частей синтезатора контролировало функционирование кассеты с ее внешней стороны, то есть внешним образом. Пригодные кассеты содержат линейный ряд клапанов, каждый из которых связан с портом, к которому могут быть присоединены реагенты или пузырьки либо путем прокалывания иглой перевернутого герметичного пузырька с мембраной, либо с помощью газонепроницаемых соединительных узлов. Каждый клапан имеет соединение с наружной-внутренней резьбой, которое связано с соответствующей движущейся рукой автоматического синтезатора. Таким образом, если кассета присоединена к автоматическому синтезатору, то внешнее вращение руки контролирует открывание или закрывание клапана. Дополнительные движущиеся части автоматического синтезатора спроектированы для захватывания концов поршней шприцов и, таким образом, увеличения или понижения давления в цилиндрах шприцов.
R
Во втором аспекте согласно настоящему изобретению предложен набор для приготовления продукта агент визуализации по первому воплощению, включающий герметичный контейнер с укупорочным средством, как определено в первом воплощении, в котором находится нерадиоактивный предшественник, пригодный для приготовления радиофармацевтической композиции, как определено в первом воплощении, где указанный предшественник содержит реакционноспособный заместитель (Х), способный взаимодействовать с источником радиоизотопа по первому воплощению с образованием указанной радиофармацевтической композиции.
Радиофармацевтическое средство продукта агент визуализации и его предпочтительные аспекты являются такими, как описано в первом воплощении (выше).
GP
Соответственно, "предшественник" включает нерадиоактивное производное, сделанное таким образом, чтобы химическая реакция с удобной химической формой желаемого радиоизотопа протекала сайт-специфично; могла проводиться с минимальным количеством стадий (идеально - в одну стадию) и без необходимости какой-либо значительной очистки (идеально - без дополнительной очистки) и давала желаемое радиофармацевтическое средство. Такие предшественники являются синтетическими и могут быть легко получены с хорошей химической чистотой. "Предшественник", возможно, может содержать защитную группу (Р) для определенных функциональных групп любой присутствующей молекулы, обеспечивающей направленную доставку к биологической мишени. Пригодные мишени описаны Bolton в J. Lab. Comp. Radiopharm., 45, 485-528 (2002).
GP
Под термином "защитная группа" (Р) понимают группу, которая ингибирует или подавляет нежелательные химические реакции, но которая задумана таким образом, чтобы быть достаточно реакционноспособной, для того чтобы можно было отщепиться от рассматриваемой функциональной группы в достаточно мягких условиях, которые не приводят к видоизменению остальной части молекулы. После снятия защиты получают целевой продукт. Защитные группы хорошо известны специалистам в данной области техники и соответственно выбраны из для аминных групп: Воc (где Воc представляет собой трет-бутилоксикарбонил), Fmoc (где Fmoc представляет собой флуоренилметоксикарбонил), трифторацетил, аллилоксикарбонил, Dde [то есть 1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)этил] или Npys (то есть 3-нитро-2-пиридинсульфенил); для карбоксильных групп: сложный метиловый эфир, трет-бутиловый эфир или бензиловый эфир. Для гидроксильных групп пригодными защитными группами являются метил, этил или трет-бутил; алкоксиметил или алкоксиэтил; бензил; ацетил; бензоил; тритил (Trt) или триалкилсилил, такой как трет-бутилдиметилсилил. Для тиольных групп пригодными защитными группами являются тритил и 4-метоксибензил. Применение других защитных групп описано в "Protective Groups in Organic Synthesis", Theorodora W. Greene and Peter G.M. Wuts (Third Edition, John Wiley &Sons, 1999).
Наборы по второму воплощению предпочтительно содержат такой предшественник в стерильной апирогенной форме, что взаимодействие со стерильным источником радиоизотопа дает желаемое радиофармацевтическое средство с минимальным количеством манипуляций. Такие соображения особенно важны для радиофармацевтических средств, у которых радиоизотоп имеет относительно короткий период полураспада, и для удобства манипулирования и, следовательно, уменьшенной дозы радиации для радиофармацевта. Поэтому реакционной средой для воссоздания таких наборов предпочтительно является "биосовместимый носитель", как определено выше; наиболее предпочтительно является водная среда.
Герметичные контейнеры наборов и их предпочтительные воплощения являются такими, как описано для первого воплощения.
R
Подходящие реакционноспособные заместители (Х) включают:
(1) синтетический лиганд, способный к комплексообразованию с ионом радиоактивного металла;
(2) металлоорганическое производное, такое как триалкилстаннан или триалкилсилан;
(3) алкилгалогенид, алкилтозилат или алкилмезилат для нуклеофильного замещения;
(4) производное, содержащее активированное для нуклеофильного или электрофильного замещения ароматическое кольцо;
(5) производное, содержащее функциональную группу, которая легко подвергается алкилированию;
(6) производное, которое алкилирует тиолсодержащие соединения с образованием тиоэфирсодержащего продукта;
(7) производное, которое подвергается конденсации с альдегидом или кетоном;
(8) производное, которое ацилируется активной сложноэфирной группой.
R
Если радиоизотоп включает ион радиоактивного металла, то предпочтительными предшественниками являются такие предшественники, у которых Х включает синтетический лиганд. Подходящие синтетические лиганды, включая их предпочтительные аспекты, являются такими, как описано для первого воплощения. Как указано в первом воплощении, синтетический лиганд, возможно, может быть конъюгирован с молекулой, обеспечивающей направленную доставку к биологической мишени.
R
Если радиоизотоп включает гамма-излучающий радиоактивный галоген или позитрон-излучающий радиоактивный неметалл, то предпочтительными предшественниками являются такие предшественники, у которых X включает производное, которое либо подвергается непосредственному электрофильному или нуклеофильному алкилированию; легко подвергается алкилированию меченым алкилирующим агентом, выбранным из алкил- или фторалкилгалогенида, тозилата, трифлата (то есть трифторметансульфоната), мезилата, малеимида или меченой N-галогенацетильной группировки; алкилирует тиольные группировки с образованием тиоэфирных связей; либо подвергается конденсации с меченым активным сложным эфиром, альдегидом или кетоном. Примерами предшественников первой категории являются:
(а) металлоорганические производные, такие как триалкилстаннан (например, триметилстаннил или трибутилстаннил) или триалкилсилан (например, триметилсилил);
(б) нерадиоактивный алкилйодид или алкилбромид для галогенного обмена и алкил-тозилат, мезилат или трифлат для нуклеофильного галогенирования;
(в) активированные для электрофильного галогенирования ароматические кольца (например, фенолы) и активированные для нуклеофильного галогенирования ароматические кольца (например, арилйодониевые, арилдиазониевые, арилтриалкиламмониевые соли или нитроарильные производные).
Предпочтительными производными, которые легко подвергаются алкилированию, являются спирты, фенолы, аминные или тиольные группы, в особенности тиолы и стерически незатрудненные первичные или вторичные амины. Предпочтительными производными, алкилирующими тиолсодержащие радиоизотопные реагенты, являются малеимидные производные или N-галогенацетильные группы. Предпочтительными примерами последних являются N-хлорацетильные и N-бромацетильные производные.
Предпочтительными производными, которые подвергаются конденсации с меченой активной сложноэфирной группировкой, являются амины, в особенности стерически незатрудненные первичные или вторичные амины.
Предпочтительными производными, которые подвергаются конденсации с меченым альдегидом или кетоном, являются аминоокси и гидразидные группы, в особенности аминооксипроизводные.
18
18
"Предшественник", возможно, может поставляться ковалентно присоединенным к матрице твердого носителя. В этом случае желаемый продукт агент визуализации образуется в растворе, в то время как исходные материалы и примеси остаются связанными с твердой фазой. Предшественники для твердофазного электрофильного фторирования F-фторидом описаны в WO 03/002489. Предшественники для твердофазного нуклеофильного фторирования F-фторидом описаны в WO 03/002157. Поэтому предшественник, связанный с твердым носителем, может быть предложен в наборе в виде картриджа, который можно вставлять в приспособленный соответствующим образом автоматический синтезатор. Картридж, кроме предшественника, связанного с твердым носителем, может содержать колонку для удаления нежелательного фторид-иона и соответствующий сосуд, соединенный таким образом, чтобы позволить упарить реакционную смесь и приготовить требуемый продукт. Реагенты, растворители и другие расходные материалы, требующиеся для синтеза, могут быть также включены вместе с компакт-диском, содержащим программу, позволяющую управлять синтезатором таким образом, чтобы удовлетворять требованиям потребителя в отношении радиоактивной концентрации, объемов, времени доставки и так далее. Удобно, когда все компоненты набора являются одноразовыми для минимизации возможности загрязнения между циклами программы и будут обладать гарантированными стерильностью и качеством.
R
Если радиоизотоп представляет собой радиогалоген, то Xсоответственно включает нерадиоактивный атом галогена предшественника, например арил-йодид или бромид (для предоставления возможности обмена с радиоактивным йодом); активированное арильное кольцо предшественника (например, фенольные или анилиновые группы); имидазольное кольцо; индольное кольцо; металлоорганическое соединение предшественник (например, триалкилолово или триалкилсилил) или органический предшественник, такой как триазены, или хорошую уходящую группу для нуклеофильного замещения, такую как соль йодония.
123
18
Способы введения радиоактивных галогенов (включая I и F) описаны Bolton в J. Lab. Comp. Radiopharm., 45. 485-528 (2002). Примеры подходящих арильных групп предшественника, к которым можно присоединить радиоактивные галогены, в особенности йод, приведены ниже:
.
Обе группы содержат заместители, предоставляющие возможность для их легкого замещения радиоактивным йодом по ароматическому кольцу. Альтернативные заместители, содержащие радиоактивный йод, могут быть синтезированы прямым йодированием посредством обмена радиогалогеном, например:
Если радиогалоген включает радиоактивный изотоп йода, то атом радиойода предпочтительно соединен посредством прямой ковалентной связи с ароматическим кольцом, таким как бензольное кольцо, или с винильной группой, так как известно, что связанные с насыщенными алифатическими системами атомы йода предрасположены к метаболизму in vivo и, следовательно, к потере радиойода. Было обнаружено, что в некоторых условиях атом йода, связанный с активированным арильным кольцом, подобным фенольному, также имеет ограниченную стабильность in vivo.
123
18
R
Если радиоизотоп включает радиоактивный галоген, такой как I или F, то X предпочтительно включает функциональную группу, которая будет селективно реагировать с меченным радиоактивным изотопом синтоном и, таким образом, после конъюгации образует радиофармацевтическое средство. Под термином "меченный радиоактивным изотопом синтон" понимают небольшую молекулу синтетического происхождения, которая:
1) уже мечена радиоактивным изотопом таким образом, что радиоактивная метка прочно связана с синтоном;
2) содержит функциональную группу, сделанную для селективного и специфичного взаимодействия с соответствующей функциональной группой, являющейся частью желаемого соединения, которое следует пометить. Этот подход дает лучшие возможности для создания радиофармацевтических средств с улучшенной стабильностью радиоактивной метки in vivo по сравнению с подходами, связанными с прямым мечением радиоактивным изотопом.
Также синтонный подход является более гибким в условиях, используемых для введения радиоизотопа. Это важно в тех случаях, когда, например, молекула, обеспечивающая направленную доставку к биологической мишени, проявляет значительную нестабильность в основных условиях. Более того, они, следовательно, непригодны для общепринятых подходов прямого мечения посредством реакций нуклеофильного замещения в основных условиях.
R
R
R
2
2
Примерами предшественников, пригодных для создания агентов визуализации по настоящему изобретению, являются такие предшественники, у которых Х включает аминооксигруппу, тиольную группу, аминную группу, малеимидную группу или N-галогенацетильную группу. Предпочтительный способ селективного мечения заключается в использовании в качестве предшественников аминооксипроизводных пептидов, как указано Poethko et al в J. Nuc. Med., 45. 892-902 (2004). Такие предшественники затем конденсируют с радиогалогенированным бензальдегидным синтоном в кислых условиях (например, pH 2-4) с образованием желаемого радиогалогенированного агента посредством стабильной оксим-эфирной связи. Поэтому X предпочтительно включает аминооксигруппу формулы -NH(C=O)CH-O-NH. Другим предпочтительным способом мечения является способ, при котором Xвключает тиольную группу, алкилируемую радиогалогенированным малеимид-содержащим синтоном в нейтральных условиях (pH 6,5-7,5), например, как указано для мечения тиолсодержащих пептидов Toyokuni et al в Bioconj. Chem. 14, 1253-1259 (2003).
R
123
Дополнительным предпочтительным способом мечения является способ, при котором X включает аминную группу, конденсируемую с синтоном N-сукцинимидил-4-[I]йодбензоатом при pH 7,5-8,5 с образованием продуктов с амидной связью. Применение N-гидроксисукцинимидного сложного эфира для мечения пептидов описано Vaidyanathan et al в Nucl. Med. Biol., 19(3), 275-281 (1992) и Johnstrom et al в Clin. Sci., 103 (Suppl. 48), 45-85 (2002).
18
18
Если радиоизотоп включает радиоактивный изотоп фтора, то атом радиофтора может являться частью фторалкильной или фторалкокси группы, так как алкилфториды устойчивы к метаболизму in vivo. Радиофторирование можно осуществлять посредством прямого мечения с использованием реакции F-фторида с соответствующим предшественником, имеющим хорошую уходящую группу, таким как алкилбромид, алкилмезилат или алкилтозилат. Альтернативно атом радиофтора можно присоединять к ароматическому кольцу, такому как бензольное кольцо, посредством прямой ковалентной связи. Для таких арильных систем предшественник соответственно включает активированное нитроарильное кольцо, соль арилдиазония или соль арилтриалкиламмония. Однако прямое радиофторирование биомолекул часто наносит вред чувствительным функциональным группам, так как такие нуклеофильные реакции проводят с безводным [F]фторидом в полярных апротонных растворителях в сильно основных условиях.
Если предшественник по второму воплощению является нестабильным в основных условиях, то прямое радиофторирование предшественников не является предпочтительным способом мечения. При таких условиях предпочтительные способы радиофторирования включают в себя использование меченных радиоактивным изотопом синтонов, которые селективно конъюгируют с предшественником, как обсуждалось выше для мечения радиогалогенами в общем.
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
2
3
2
3
2
3
2
3
2
3
2
3
2
2
3
2
3
2
2
3
2
3
F также можно вводить путем N-алкилирования аминных предшественников алкилирующими агентами, такими как F(СН)ОМs (где Ms представляет собой мезилат) с образованием N-(CH) F, путем O-алкилирования гидроксильных групп с помощью F(СH)ОМs, F(CH)OTs или F(СH)Br или путем S-алкилирования тиольных групп с помощью F(ОH)ОМs или F(СH)Вr. F также можно вводить путем алкилирования N-галогенацетильных групп с помощью реагента F(ОH)ОН с образованием -NН(СO)СНO(СН) F производных или с помощью реагента F(CH)SH с образованием -NH(CO)CHS(CH) F производных. F также можно вводить путем взаимодействия малеимидсодержащих предшественников с F(СH)SН. Для арильных систем подходящими путями к арил-F-меченным синтонам, пригодным к конъюгации с предшественниками, являются нуклеофильное замещение F-фторидом, начиная с арилдиазониевой соли, арилнитросоединения или соли арил-четвертичного аммония.
R
18
18
6
4
2
2
2
Предшественники, у которых X включает первичную аминную группу, также можно метить F путем восстановительного аминирования с использованием F-СН-СНО, как описано Kahn et al в J. Lab. Comp. Radiopharm. 45, 1045-1053 (2002) и Borch et al в J. Am. Chem. Soc. 93, 2897 (1971). Также этот подход можно успешно применять по отношению к арильным первичным аминам, таким как соединения, содержащие группы фенил-NН или фенил-CHNH.
18
R
18
2
2
6
4
Особенно предпочтительным способом F-мечения предшественников на основе пептидов является способ, при котором X включает аминооксигруппу формулы -NH(C=O)CH-O-NH, которую конденсируют с F-СН-СНО в кислых условиях (например, pH 2-4). В частности, этот способ полезен для чувствительных к основаниям предшественников.
18
Дополнительные подробности путей синтеза F-меченных производных описаны Bolton в J. Lab. Comp. Radiopharm., 45, 485-528 (2002).
Нерадиоактивные наборы по второму воплощению, возможно, могут дополнительно содержать добавочные компоненты, такие как радиопротектор, антимикробный консервант, pH-регулирующий агент или наполнитель.
Под термином "радиопротектор" понимают соединение, которое ингибирует реакции разложения, такие как окислительно-восстановительные процессы, путем захвата высокореакционноспособных свободных радикалов, таких как кислородсодержащие свободные радикалы, возникающие в результате радиолиза воды. Радиопротекторы по настоящему изобретению подходящим образом выбирают из аскорбиновой кислоты, пара-аминобензойной кислоты (то есть 4-аминобензойной кислоты), гентизиновой кислоты (то есть 2,5-дигидроксибензойной кислоты) и их солей с биосовместимым катионом. Под термином "биосовместимый катион" понимают положительно заряженный противоион, который образует соль с ионизированной, отрицательно заряженной группой, где указанный положительно заряженный противоион является к тому же нетоксичным и, следовательно, пригодным для введения в организм млекопитающего, в особенности в организм человека. Примеры подходящих биосовместимых катионов включают щелочные металлы натрий или калий; щелочноземельные металлы кальций и магний и ион аммония. Предпочтительными биосовместимыми катионами являются натрий и калий, наиболее предпочтительно натрий.
Под термином "антимикробный консервант" понимают агент, который ингибирует рост потенциально вредных микроорганизмов, таких как бактерии, дрожжи или плесени. Антимикробный консервант может также проявлять некоторые бактерицидные свойства, в зависимости от дозы. Основная роль антимикробного(ых) консерванта(ов) по настоящему изобретению заключается в ингибировании роста любого такого микроорганизма в радиофармацевтической композиции после ее восстановления, то есть в самом радиоактивном диагностическом продукте. Однако антимикробный консервант также можно применять для ингибирования роста потенциально вредных микроорганизмов в одном или более чем одном компоненте нерадиоактивного набора по настоящему изобретению до восстановления. Подходящий(е) антимикробный(е) консервант(ы) включает(ют) парабены, то есть метил-, этил-, пропил- или бутилпарабен или их смеси; бензиловый спирт; фенол; крезол; цетримид и тиомерсал. Предпочтительным(и) антимикробным(и) консервантом(ами) являются парабены.
Термин "pH-регулирующий агент" означает соединение или смесь соединений, полезных для обеспечения того, чтобы pH восстановленного набора находился в пределах, приемлемых для введения человеку или млекопитающему (приблизительно pH от 4,0 до 10,5). Такие подходящие рН-регулирующие агенты включают фармацевтически приемлемые буферы, такие как трицин, фосфат или TRIS [то есть трис(гидроксиметил)аминометан], и фармацевтически приемлемые основания, такие как натрия карбонат, бикарбонат натрия или их смеси. Если конъюгат применяют в форме кислой соли, то pH-регулирующий агент, возможно, может быть предложен в отдельном пузырьке или контейнере, так чтобы пользователь набора мог регулировать pH, и это было частью многостадийного процесса.
Под термином "наполнитель" понимают фармацевтически приемлемый агент для увеличения объема, который может облегчить обращение с материалом при производстве и лиофилизации. Подходящие наполнители включают неорганические соли, такие как хлорид натрия, и водорастворимые сахара или сахарные спирты, такие как сахароза, мальтоза, маннит или трегалоза.
Предпочтительными наборами по настоящему изобретению являются наборы, содержащие описанные выше предпочтительные предшественники для каждого класса радиоизотопа, то есть ионов радиоактивных металлов, гамма-излучающих радиогалогенов или позитрон-излучающих радиоактивных неметаллов.
99m
95m
2
2
3
Наборы по настоящему изобретению являются, в частности, полезными для предшественников, лиофилизированных и предназначенных для получения стерильных апирогенных препаратов. Такие наборы при необходимости могут иметь пригодный срок хранения несколько месяцев, и поэтому любые проблемы, связанные с чувствительностью к воздуху или адсорбцией, по-видимому, могут усилиться. Если набор предназначен для приготовления радиофармацевтического средства, содержащего металлический комплекс радиоактивного металла с синтетическим лигандом, то предпочтительными предшественниками синтетического лиганда являются такие, которые содержат фосфиновые, тиольные или изонитрильные группы, связывающие металл. Если радиоизотоп представляет собой Тс или Тс, то предпочтительные группы, связывающие металл, включают Тетрофосмин; MIBI (1-изоциано-2-метокси-2-метилпропан); ВАТ (бис-аминотиольный NS хелатор), такой как тропановый хелаторный конъюгат TRODAT-1 [Meegalla et al, J. Med. Chem., 40, 9-17 (1997)], или MAG3 (NS меркаптоацетилтриглицин). Особенно предпочтительной группой, связывающей металл, является Тетрофосмин.
3
3
3
99m
Набор по второму воплощению, возможно, может быть приготовлен в виде многодозового набора, где набор приготовлен таким образом, что из одного набора можно получить от 4 до 30 стандартных предназначенных для пациента доз радиофармацевтического средства. Многодозовый набор должен быть достаточно надежным для того, чтобы выдержать значительно более высокие уровни радиоактивности, а также большие объемы раствора по сравнению с традиционным набором. Подходящие контейнеры для многодозового пузырька имеют объем 20-50 см, предпочтительно 20-40 см, наиболее предпочтительно - объем 30 см. Многодозовый набор содержит достаточно материала для многократных предназначенных для пациента доз (например, вплоть до 100 ГБк Тc в пузырьке), в соответствии с чем стандартные предназначенные для пациента дозы могут, таким образом, быть отобраны в шприцы клинической марки в различные временные интервалы в течение срока годности стабильного препарата для удовлетворения требованиям клинической ситуации. Многодозовые наборы по настоящему изобретению приготовлены таким образом, чтобы быть пригодными для получения воспроизводимым образом от 4 до 30, предпочтительно от 6 до 24 таких стандартных доз радиофармацевтического средства.
Такие многодозовые наборы, по определению, должны быть способны выдержать значительные количества проколов укупорочного средства, сохраняя при этом стерильную целостность, без образования нежелательных частиц укупорочного средства ("частиц в результате прокола"), которые могли бы отделиться и упасть в радиофармацевтическую композицию. Как было показано, укупорочные средства по настоящему изобретению способны успешно выдержать такие многочисленные прокалывания.
Особенно предпочтительным предшественником синтетического лиганда для применения в наборах по настоящему изобретению является тетрофосмин. Особенно предпочтительная композиция тетрофосминового набора соответствует композиции агента визуализации сердца Myoview™ (GE Healthcare), то есть лиофилизированной композиции:
Тетрофосмин
0,23 мг
Дигидрат хлорида олова (II)
30 мкг
Сульфосалицилат динатрия
0,32 мг
D-Глюконат натрия
1,0 мг
Гидрокарбонат натрия
1,8 мг
pH после восстановления
8,3-9,1
99m
99m
которую герметично закрывают под газообразным азотом USP/NF стеклянном пузырьке на 10 мл  и которая после восстановления посредством инъекции стерильного (Tc) пертехнетата натрия USP/Ph.Eur. приводит к раствору, содержащему радиофармацевтический Тс-тетрофосмин для визуализации сердца.
99m
Тетрофосминовый набор, возможно, может содержать радиопротектор, как определено выше. Было обнаружено, что включение радиопротектора аскорбиновой кислоты в такие наборы предоставляет преимущество, заключающееся в том, что Тс-тетрофосминовый комплекс приготавливают с хорошей радиохимической чистотой (РХЧ) и с хорошей стабильностью после восстановления, вплоть до 12 часов после приготовления, без необходимости в стадии добавления воздуха, отмеченной как специалистами в данной области техники [Murray et al, Nucl. Med. Comm., 21, 845-849 (2000)], так и Инструкцией для упаковки Myoview™. Это является полезным упрощением, так как устраняет стадию процесса, что означает на одну операцию меньше, и поэтому приводит к уменьшенной дозе радиации для оператора, а также делает процесс быстрее и проще в осуществлении. К тому же стадия добавления воздуха несколько необычна в радиофармацевтической практике, и поэтому существует риск, что она может быть непреднамеренно опущена с соответствующим неблагоприятным влиянием на РХЧ.
3
3
3
Подходящая концентрация радиопротектора для применения в тетрофосмин-содержащих наборах по настоящему изобретению является 0,0003-0,7 молярной, предпочтительная 0,001-0,07 молярной, наиболее предпочтительная 0,0025-0,01 молярной. Для аскорбиновой кислоты это соответствует подходящей концентрации от 0,05 до 100 мг/см, предпочтительно от 0,2 до 10 мг/см, наиболее предпочтительно от 0,4 до 1,5 мг/см.
99m
Тетрофосминсодержащий набор по настоящему изобретению предпочтительно приготовлен таким образом, чтобы pH раствора после восстановления водой или солевым раствором составлял от 8,0 до 9,2, наиболее предпочтительно от 8,0 до 8,6. Это означает, что если радиопротектором является аскорбиновая кислота, то есть кислота, то количество pH-регулирующего агента необходимо откорректировать. Это необходимо для обеспечения оптимального значения pH набора для поддержания радиоактивного мечения тетрофосмина Tс; стабильности и пригодности после восстановления для введения пациенту. Такой предпочтительной композицией набора для представления в виде 30 мл многодозового пузырька является:
Тетрофосмин
0,69 мг
Дигидрат хлорида олова (II)
90 мкг
Сульфосалицилатдинатрия
0,96 мг,
D-глюконат натрия
3,0 мг
Аскорбиновая кислота
5,0 мг
Гидрокарбонат натрия
11,0 мг
pH после восстановления солевым раствором
от 8,3 до 9,1
Радиопротекторы для тетрофосминсодержащих наборов предпочтительно выбраны из аскорбиновой кислоты и ее солей с биосовместимым катионом. Радиопротекторы по настоящему изобретению имеются в продаже у ряда поставщиков.
Тетрофосмин представляет собой третичный фосфин и является умеренно чувствительным к воздуху. Поэтому тетрофосминсодержащие наборы, в частности, чувствительны к любому проникновению кислорода в газ в свободном пространстве. Окисление до фосфиноксида является по существу необратимым и влияет на пригодный срок хранения нерадиоактивного набора. Авторы настоящего изобретения отмечают, что содержание кислорода в свободном пространстве является не просто функцией пористости укупорочного средства. Так, также чрезвычайно важным для лиофилизированных наборов является эффективность герметизации контейнера укупорочным средством в течение процесса лиофилизации. Укупорочные средства по настоящему изобретению отвечают обоим критериям, тогда как многие укупорочные средства, покрытые фторуглеродным покрытием, не всегда пригодны для лиофилизированных продуктов. Покрытие ETFE также помогает подавить адсорбцию предшественника на укупорочном средстве, и это, как было обнаружено, является особенно полезным для тетрофосмина.
Это приводит к значительным преимуществам. Во-первых, пригодный срок хранения нерадиоактивных наборов может быть продлен от 35 до приблизительно 52 недель (когда используют предварительно обработанные укупорочные средства). Во-вторых, для сохранения эффективности набора наборы Myoview™ в настоящее время транспортируют при температуре от 2 до 8°С. Это достигают путем упаковки наборов в ледяные пакеты в изолированных контейнерах. Ожидают, что наборы с улучшенным укупорочным средством и процедурой предварительной обработки по настоящему изобретению будут достаточно стабильными при перевозке при температуре окружающей среды (около 25°С), устраняя, таким образом, необходимость в дополнительном упаковывании для поддержания охлаждения.
123
18
111
99m
-
4
Широкий ряд источников радиоизотопа для применения в сочетании с предшественником имеется в продаже у ряда поставщиков или в виде изотопа как такового, или в виде радиоизотопного генератора. Источники включают галогенид-ионы, такие как I-иодид или F-фторид, или ионы радиометаллов, такие как хлорид In-индия или Tс-пертехнетат. Если радиоизотоп представляет собой технеций, то обычным исходным технециевым материалом является пертехнетат, то есть ТсO , в котором технеций находится в состоянии окисления Tc(VII). Сам по себе пертехнетат нелегко образует металлические комплексы, поэтому приготовление комплексов технеция обычно требует добавления подходящего восстановителя, такого как ион двухвалентного олова, для облегчения комплексообразования путем снижения состояния окисления технеция до более низких состояний окисления, обычно Tc(I)-Tc(V). Растворитель может быть органическим или водным или может представлять собой их смеси и предпочтительно является биосовместимым носителем. Биосовместимый носитель и его предпочтительные аспекты являются такими, как описано выше.
rd
Другие радиоизотопы доступны посредством стандартных способов [McQuade et al, Curr. Med. Chem., 12(7), 807-818 (1995); Finn et al в "Principles & Practice of Positron Emission Tomography", R.L.Wahl et al (Eds), Chapter 1, pages 1-15 (2002), и Elliott et al в "Textbook of Radiopharmacy", 3 edition, C.B.Sampson (Ed), Chapter 2, pages 19-29 (1999)].
В третьем аспекте согласно настоящему изобретению предложен способ получения продукта агент визуализации по первому воплощению, включающий взаимодействие:
(1) предшественника по второму воплощению с
(2) источником радиоизотопа по первому воплощению
либо в герметичном контейнере по первому воплощению, либо в отдельном реакционном сосуде с последующим переносом продукта взаимодействия в герметичный контейнер по первому воплощению.
Предпочтительные аспекты предшественника-реагента (1) способа являются такими, как описано во втором воплощении. Радиоизотопный источник-реагент (2) способа является таким, как описано для первого и второго воплощений (выше). Предпочтительно способ осуществляют таким образом, что предшественник поставляют в виде набора по второму воплощению. Источник радиоизотопа предпочтительно поставляют в биосовместимом носителе, как описано в первом воплощении. Предпочтительно способ получения осуществляют внутри герметичного контейнера по пп.1-6 формулы изобретения, так что нет необходимости в стадии переноса.
Если радиоизотоп представляет собой излучатель позитронов, то способ получения (то есть взаимодействие и/или перенос продукта взаимодействия) осуществляют с использованием аппарата, представляющего собой автоматический синтезатор.
Ожидается, что радиофармацевтические препараты, требующие нагрева для получения продукта агент визуализации, в частности, приобретут выгоду от применения укупорочных средств или наборов по настоящему изобретению, так как нагрев увеличивает вероятность взаимодействий с укупорочным средством и/или выщелачивания примесей из укупорочного средства.
В четвертом аспекте согласно настоящему изобретению предложено применение укупорочных средств, как определено в первом воплощении, для герметизации контейнеров, содержащих или:
(1) радиофармацевтическую композицию по первому воплощению или
(2) набор по второму воплощению.
Предпочтительные радиофармацевтические средства и наборы являются такими, как описано в первом и втором воплощениях соответственно. Предпочтительными укупорочными средствами являются такие, которые определены в первом воплощении. Если радиоизотоп в радиофармацевтической композиции представляет собой излучатель позитронов, то контейнер предпочтительно является частью аппарата, представляющего собой автоматический синтезатор. Предпочтительные аспекты аппарата, представляющего собой автоматический синтезатор, являются такими, как описано выше. Полагают, что преимущества от применения таких укупорочных средств для радиофармацевтических применений ранее были не распознаны.
Изобретение проиллюстрировано неограничивающими Примерами, подробно описанными ниже. Пример 1 показывает, что для тетрофосминсодержащих наборов многие укупорочные средства имели менее чем идеальные свойства и что укупорочные средства по настоящему изобретению предлагают важное улучшение. Пример 2 показывает то, как можно еще более улучшить укупорочные средства по настоящему изобретению посредством предварительной обработки для удаления растворенного газа кислорода и замещения азотом. Пример 3 показывает, что профиль РХЧ лиофилизированного тетрофосминсодержащего набора, приготовленного с применением укупорочного средства по настоящему изобретению, был идентичен профилю контрольного набора Myoview™ (непокрытая пробка). Это показывает, что для ETFE-покрытого укупорочного средства нет никаких новых радиоактивных примесей. Пример 4 показывает, что комбинации укупорочных средств по настоящему изобретению пригодны для применения с многодозовыми радиофармацевтическими пузырьками. Пример 5 предлагает усовершенствованный процесс предварительной обработки для минимизации уровней кислорода в газе в свободном пространстве в герметичных пузырьках по настоящему изобретению в течение срока хранения. Пример 6 показывает, что укупорочные средства по настоящему изобретению демонстрируют преимущества в отношении применения с лиофилизированными радиофармацевтическими наборами.
На фиг.1 показана герметизирующая зона для имеющегося в продаже Flurotec™ - покрытого укупорочного средства пузырька. На фиг.2 представлены данные о содержании кислорода в газе в свободном пространстве как функции от времени при хранении после приготовления.
Пример 1. Укупорочные средства для лиофилизированных тетрофосминсодержащих наборов.
Испытывали следующие укупорочные средства.
Таблица 1
Укупорочное cpeдcтвo<sup>$
Композиция
Конфигурация
Форма
Покрытие
Состав§
1
4432/50
1178
А
Нет
хлорбутил
2
4588/40
1178
А
Нет
хлорбутил /изопрен
3
D777-1
V10-F451 W
В
Flurotec™
IIR
4
D777-1
V10-F597 W
В
Flurotec™
IIR
5
D21-7S
V10-F451 W
В
Flurotec™
хлорбутил
6
D21-7S
V10-F597 W
В
Flurotec™
хлорбутил
7
FM259/0
V9154
А
Omniflex Plus™
бромбутил
8
FM259/0
V9172
В
Omniflex Plus™
бромбутил
9
Ph701/40
F1018
В
Нет
хлорбутил
10
4416/50
S87T
А
Нет
бромбутил
11
В0344С
РТ23
А
Elastoshield™
хлорбутил
12
В0344С
РТ24
А
Elastoshield™
хлорбутил
13
GR02019900
SL 13619
Нет
хлорбутил
14
6720GC 5
С1558
А
Нет
бромбутил
$ </sup>Имеющиеся в продаже укупорочные средства получены от поставщиков: 1, 2, 9 и 10 West Pharma; 3-6 Daikyo; 7 и 8 Helvoet; 11 и 12 Itran-Tomkins; 13 Seal line и 14 Stelmi.
* Форма А: с двумя "ножками" (Two leg) (двойной воздушный клапан).
* Форма В: куполообразная (одиночный воздушный клапан).
<sup>§</sup> IIR: сополимер изобутилена и изопрена.
Лиофилизированные композиции тетрофосминового набора (согласно композиции Myoview™, процитированной во втором воплощении) получали с применением укупорочных средств 1-14 из таблицы 1. Содержание тетрофосмина и содержание кислорода в газе в свободном пространстве анализировали через определенные интервалы времени после приготовления набора. Содержание кислорода в свободном пространстве измеряли путем продувки пузырька чистым азотом и пропускания выходящего потока газа через электрохимический анализатор кислорода. Интегрированный сигнал дает общее содержание кислорода. Результаты сравнения с находящимся в употреблении коммерческим продуктом Myoview™ (который имеет непокрытое хлорбутильное укупорочное средство West formulation PH701/45, красно-коричневое, форма 1178) суммированы в таблице 2.
Таблица 2
Сравнительные результаты тестирования укупорочных средств
Укупорочное средство
Результаты
1
Нет доказательства уменьшенных потерь тетрофосмина.
2
Нет доказательства уменьшенных потерь тетрофосмина.
3
Не соответствовало техническим условиям в отношении кислорода после 6 недель теста на стабильность в напряженном состоянии.
4
Не соответствовало техническим условиям в отношении кислорода после 6 недель теста на стабильность в напряженном состоянии.
5
Соответствовало техническим условиям в отношении кислорода после 6 недель теста на стабильность в напряженном состоянии.
6
Не соответствовало техническим условиям в отношении кислорода после 6 недель теста на стабильность в напряженном состоянии.
7
Не соответствовало первоначальным требованиям по кислороду (LT 10 мкл) вследствие выталкивания укупорочных средств.
8
Не соответствовало первоначальным требованиям по кислороду (LT 10 мкл) вследствие выталкивания укупорочных средств.
9
Не уменьшало потери тетрофосмина. Первоначальное содержание кислорода слишком велико.
10
Не уменьшало потери тетрофосмина. Первоначальное содержание кислорода слишком велико
11
Не соответствовало первоначальным требованиям по кислороду (LT 10 мкл) вследствие выталкивания укупорочных средств.
12
Не соответствовало первоначальным требованиям по кислороду (LT 10 мкл) вследствие выталкивания укупорочных средств.
13
Не уменьшало потери тетрофосмина. Первоначальное содержание кислорода слишком велико.
14
Не уменьшало потери тетрофосмина. Первоначальное содержание кислорода слишком велико
Пример 2. Предварительная обработка укупорочных средств.
ETFE-покрытые укупорочные средства (укупорочное средство №5 Примера 1) предварительно обрабатывали путем нагревания в печи сухим теплом в двух различных вариантах условий. Условия были следующими: 123°C в течение 15 часов и 80°C в течение 20 часов. Укупорочным средствам давали охладиться и затем упаковывали в полиэтиленовые мешки и стерилизовали (с использованием гамма-облучения). Пробки применяли для герметизации пустых стеклянных пузырьков в пределах 1-2 суток (чтобы предотвратить реадсорбцию газообразного кислорода в пробку). Содержание кислорода в газе в свободном пространстве пузырька измеряли в определенные интервалы времени, и, как было обнаружено, оно было на очень низком и стабильном уровне (ниже 2 мкл вплоть до 11 недель после герметизации).
Пример 3. Пригодность укупорочного средства для радиофармацевтического применения.
99m
Применяли лиофилизированный набор Примера 1 с укупорочным средством №5. Набор восстанавливали Тс пертехнетатом в солевом растворе (8 мл при 1,1 ГБк/мл) и инкубировали в течение 15 минут при комнатной температуре. Затем в течение 12 часов проводили анализы способом ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) для исследования того, не появились ли какие-либо новые и/или необычные радиохимические пики в продукте Myoview 10 мл, приготовленном с новой пробкой по сравнению с Myoview с широко распространенной непокрытой пробкой. Никаких различий в количестве пиков или в величинах пиков не было обнаружено. Восстановление не оказало влияния на механические свойства или физические свойства пробки.
Пример 4. Пригодность укупорочного средства для радиофармацевтических пузырьков многоразового применения.
36 пустых пузырьков были снабжены укупорочными средствами из трех различных партий укупорочного средства №5 Примера 1 (по 12 пузырьков на партию). Каждую партию укупорочных средств подвергали тесту на фрагментацию по Европейской Фармакопее, включающем прокалывание иглой для подкожных инъекций (наружный диаметр 0,8 мм) в 4 различных местах прокола. Все укупорочные средства прошли тест. В дополнительном эксперименте 6 пузырьков, снабженных укупорочным средством №5, прокалывали иглой (калибр 21 G) 35 раз. Количество отделившихся фрагментов все еще оставалось в пределах требований Европейской Фармакопеи.
Пример 5. Альтернативная предварительная обработка укупорочных средств.
ETFE-покрытые укупорочные средства (укупорочное средство №5 Примера 1) подвергали процессу промывки и сушке в автоклаве Fedegari. После промывочной части цикла следовали 2-минутный впуск пара и фаза нагрева 105°C в течение 10 минут. Следующей частью цикла была сушка под вакуумом 200 миллибар (20 кПа) в течение 10 минут, за которые температура падает от 105°C до около 60°C. После удаления из камеры автоклава все укупорочные средства являются сухими. Укупорочные средства применяли для герметизации пустых стеклянных пузырьков, как описано в Примере 2. Результаты показаны на фиг.2.
Пример 6. Пригодность укупорочного средства для лиофилизированных радиофармацевтических наборов.
Лиофилизированные композиции набора Myoview™ 30 мл приготавливали, как описано во втором аспекте, применяя укупорочное средство №5 Примера 1. Осуществляли 100%-ный визуальный контроль двух партий, состоявших каждая из приблизительно 21500 пузырьков. Пузырьки забраковывали, если лиофилизированный порошок был виден вокруг укупорочного средства. Количество пузырьков, забракованных из-за дефектов укупорочного средства, было значительно ниже, чем в случае обычного непокрытого укупорочного средства (РН 701/45, красно-коричневое), применяемого в партиях наборов Myoview™ 10 мл. При применении укупорочного средства №5 количество забракованных пузырьков было 73 в первой партии и 103 во второй партии. Это соответствует проценту брака приблизительно от 0,3 до 0,5%. Процент брака из-за недостатка пробки в отношении обычного непокрытого укупорочного средства составляет около 2%.