ШТАММ "BARTHA ЩБК-61" ВИРУСА БОЛЕЗНИ АУЕСКИ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БОЛЕЗНИ АУЕСКИ ЖИВОТНЫХ (ВАРИАНТЫ)
STRAIN “BARTHA ЩБК-61” OF AUJESZKY'S DISEASE VIRUS FOR MANUFACTURE OF DIAGNOSTIC AND VACCINE PREPARATIONS, AND METHOD FOR PRODUCTION OF VACCINE AGAINST ANIMAL AUJESZKY'S DISEASE (OPTIONS)

Изобретение относится к области ветеринарии, ветеринарной биотехнологии для производства профилактических препаратов, используемых в научно-исследовательских институтах и предприятиях биологической промышленности при конструировании биопрепаратов, в частности вакцин против болезни Ауески.
Известен способ получения вакцины против болезни Ауески животных, включающий получение вируссодержащего материала из штамма вируса, выращенного в перевиваемой культуре клеток, и защитную среду [Патент РФ №2138289, Вирусвакцина против болезни Ауески, МПК А61К 39/245, А61К 39/12, опубликовано: 27.09.1999].
Недостаток этой вакцины заключается в недостаточной иммуногенности известной вакцины.
Известен штамм болезни Ауески и способ получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом [Патент РФ №1822345, Способ изготовления инактивированной концентрированной эмульгированной вакцины против болезни Ауески (вакцина "бак"), МПК А61К 39/295, опубликовано: 15.06.1993, Бюл. №22].
Однако известная вакцина не достаточно иммуногенна при более длительном сроке ее хранения.
Техническим решением предлагаемого изобретения является повышение иммуногенности целевого продукта при длительном хранении целевого продукта.
Предложена группа изобретений, объединенная единым изобретательским замыслом с достижением единого технического результата.
Поставленная задача достигается получением штамма «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски для изготовления диагностических и вакцинных препаратов, относящийся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Varicellavirus, депонированного 24.02.2017 в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» под №2882, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов (см. приложение - удостоверение)
50
3
Поставленная задача решается также в способе получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, тем, что в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД/см, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Инактивированный вируссодержащий материал и
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup>
48,00 - 52,0
Масляный адъювант
остальное
50
3
Поставленная задача также решается в способе получения вакцины против болезни Ауески животных, включающем получение вируссодержащего материала из штамма вируса болезни Ауески, выращенного в перевиваемой культуре клеток суспензионным способом, инактивацией его и смешивание с масляным адъювантом, тем, что в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит вируссодержащий материал из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦИД/см, который перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4-5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001-0,005% при рН 7,6-7,8 и температуре 35-39°С в течение 20-22 часов с периодическим перемешиванием, дополнительно содержит стабилизатор хитозан, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Хитозан 5,0 -10,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса
болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg
ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup> и масляного адъюванта, взятых в соотношении
1:0,8-1,2, соответственно
остальное.
Поставленная задача также решается в способе получения вакцины против болезни Ауески животных тем, что в качестве масляного адъюванта используют масляный адъювант ISA 201 VG, или ISA 206 VG.
Поставленная задача также решается в способе получения вакцины против болезни Ауески животных тем, что в качестве перевиваемой культуры клеток используют перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13, или перевиваемую культуру клеток ВНК-21/13-13 или первичную культуру клеток почки поросенка СП.
Известен делеционный по гликопротеину gE штамм вируса болезни Ауески, сем. Herpesviridae, подсем, Alphaherpesvirus, рода Varicellavirus, [Патент РФ №2242247, Вирусвакцина против болезни ауески, МПК А61К 39/245, C12N 7/00; А61Р 31/12, опубликовано: 20.12.2004, Бюл. №35].
Штамм «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски - ДНК-содержащий вирус, относящимся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Varicellavirus.
Родословная штамма: ФКП «Щелковский биокомбинат», прототип штамма «Скиф», получен из музея штаммов Федерального государственного бюджетного научного учреждения Всероссийского государственного Центра качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГБНУ «ВГНКИ»). Депонирован штамм 24.02.2017 в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» под №2882, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.
Новый штамм «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические свойства. Вирион штамм «Bartha ЩБК-61» вируса болезни Ауэски содержит 2-спиральную линейную ДНК. Вирионы имеют форму икосаэдра с кубическим типом симметрии, включающим 162 капсомера. Имеется внешняя оболочка, диаметр колеблется от 120 до 150 нм.
Восприимчивые животные: кошки, кролики, овцы.
Вирулентность: Авирулентен для естественно восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном способах введения.
Способность вируса к распространению в естественных условиях: не распространяется.
Антигенные свойства: Активен в РН, РНГА, РДП, не агглютинирует эритроциты домашних животных, птиц и человека.
Иммуногенность: Иммуногенен в составе вакцины для поросят, свиней, крупного и мелкого рогатого скота, северных оленей, лошадей, собак, пушных зверей.
Стабильность генетических свойств: Имеет делецию гена, кодирующего гликопротеин gE.
Известен аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ) [Патент РФ №2214276, Инактивированная эмульсионная вакцина против парвовирусной инфекции свиней, МПК А61К39/23, C12N7/00, опубликовано: 20.10.2003 Бюл. №29].
Известен также масляный адъювант ISA 201 VG и ISA 206 VG («The comparison of the efficacy of swine FMD vaccine emulsified with oil adjuvant of ISA 201 VG or ISA 206 VG", Journal of Biosciences and Medicines 01(03):22-25-January 2013 with 203 Rea).
Известна перевиваемая культура клеток ВНК-21/13 [Патент РФ №2614074, ВНК-21/13-02-перевиваемая монослойно-суспензионная сублиния клеток почки новорожденного сирийского хомячка, предназначенная для репродукции вируса ящура и вируса бешенства, МПК C12N 5/07, опубликовано: 22.03.2017, Бюл. №9].
Известна перевиваемая культура клеток ВНК-21/13-13 [Крюкова Е.Н. Параметры суспензионного культивирования культуры клеток внк-21/13-13 в масштабах биотехнологического производства / Крюкова Е.Н., Самуйленко А.Я., Мельник Р.Н. Ельников В.В., Красуткин С.Н., Литенкова И.Ю. Боровой В.Н. Мельник Н.В. Дресвянникова С.Г. // Ветеринария Кубани, - Краснодар, 2016 год, №3, с. 6-8].
Известна первичная культура клеток почки поросенка СП [Патент РФ №2646135, Способ хранения почки поросенка для получения монослоя первичнотрипсинизированных клеток и использования его в вирусологических исследованиях, МПК A01N 1/02, C12N 5/00, опубликовано: 01.03.2018, Бюл. №7]
В патентной и научно-технической литературе неизвестны технические решения аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию изобретения «новизна».
Заявленная композиция решает актуальную проблему ветеринарии -профилактики болезни Ауески, т.е. предложение «промышленно применимо».
В отечественной литературе не известно, что применение делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески для получения вакцины и сочетанное использование выше указанных отличительных признаков, взятых в определенных соотношениях компонентов, увеличивает сроки хранения целевого продукта с сохранением его иммуногенности против болезни Ауески, что приводит к достижению технического результата. Следовательно, изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».
Изобретение иллюстрируется на следующих примерах:
50
50
3
3
Пример 1. Вируссодержащий материал готовят известным способом [Патент РФ №2242247, Маркированная вирусвакцина против болезни ауески, МПК А61К 39/245, C12N 7/00, опубликовано: 20.12.2004, Бюл. №35] путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 48 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 201 VG, получая вакцину 1 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup>
48,00-52,0
Масляный адъювант
остальное
50
50
3
3
Пример 2. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 52 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД/см добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 201 VG, получая вакцину 2 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup>
48,00-52,0
Масляный адъювант
остальное
50
50
3
3
Пример 3. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Ваrthа ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 48 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 3 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup>
48,00-52,0
Масляный адъювант
остальное
50
50
3
3
Пример 4. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Ваrthа ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 52 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД/см добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 4 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса
болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup>
48,0-52,0
Масляный адъювант
остальное
50
50
3
3
Пример 5. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 48 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 5 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0-10,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup>
48,00-52,0
Масляный адъювант
остальное
50
50
3
3
Пример 6. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 52 кг инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД/см добавляют 52 кг масляного адъюванта ISA 206 VG, получая вакцину 6 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Инактивированный вируссодержащий материал из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup>
48,00-52,0
Масляный адъювант
остальное
50
50
3
3
Пример 7. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно, добавляют 5 кг хитозана, получая вакцину 7 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Хитозан
5,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup> и
масляного адъюванта, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно
остальное.
50
50
3
3
Пример 8. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной культуре клеток почки поросенка СП, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД/см и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:1,2, соответственно, добавляют 10 кг хитозана, получая вакцину 8 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Хитозан
10,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup> и
масляного адъюванта, взятых в соотношении 1,2, соответственно
остальное.
50
50
3
3
Пример 9. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно, добавляют 5 кг хитозана, получая вакцину 9 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Хитозан
5,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески
с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup> и масляного
адъюванта, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно
остальное.
50
50
3
3
Пример 10. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13-13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД/см и масляного адъюванта ISA 206 VG, взятых в соотношении 1:1,2, соответственно, добавляют 10 кг хитозана, получая вакцину 10 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Хитозан
10,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup> и масляного
адъюванта, взятых в соотношении 1,2, соответственно
остальное.
50
50
3
3
Пример 11. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 4% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,001% при рН 7,6 и температуре 35°С в течение 20 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД/см и масляного адъюванта ISA 201 VG, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно, добавляют 5 кг хитозана, получая вакцину 11 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Хитозан
5,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 8,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup> и масляного
адъюванта, взятых в соотношении 1:0,8, соответственно
остальное.
50
50
3
3
Пример 12. Вируссодержащий материал готовят известным способом, как и в примере 1, путем размножения на 2-3-суточной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/13, которую заражают лиофилизированным вирусом болезни Ауески из делеционного по гликопротеину gE штамма «Bartha ЩБК-61». Сбор вируса производят через 46-52 часа, когда вирус болезни Ауески накапливается с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД/см. Далее вируссодержащий материал перед смешиванием с адъювантом инактивируют добавлением 5% раствора аминоэтилэтиленимина до конечной концентрации 0,005% при рН 7,8 и температуре 39°С в течение 22 часов с периодическим перемешиванием. Затем к 95 кг смеси инактивированного вируссодержащего материала из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД/см и масляного адъюванта ISA 201 VG, взятых в соотношении 1:1,2, соответственно, добавляют 10 кг хитозана, получая вакцину 12 при следующем соотношении компонентов, мас. %:
Хитозан
10,0
Смесь инактивированного вируссодержащего материала из
делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни
Ауески с инфекционной активностью 10,0 lg ТЦД<sub>50</sub>/см<sup>3</sup> и
масляного адъюванта, взятых в соотношении 1,2,
соответственно
остальное.
3
3
Пример 13. Испытание иммуногенной активности вакцины по изобретению, полученной по примерам 1-12, проводят на экспериментальных животных - на поросятах живой массой 15-20 кг 6-8 недельного возраста в сравнении с прототипом. Были сформированы 14 групп животных по 10 голов: из них опытных (с первого по двенадцатый номер) - 12 групп, которым вводили вакцины 1-12, полученные по примерам 1-12) и две группы контрольные (контрольная группа 1 - не вакцинированные животные, контрольная группа 2 - вакцинированные вакциной-прототипом). Животных опытных групп 1-12 иммунизируют вакцинами 1-12, приготовленными по примеру 1-12 после хранении вакцин при температуре 4°С в течение 24 месяцев из расчета 2,0 см внутримышечно в область шеи за ухом однократно; контрольную группу 2 - иммунизируют известной вакциной (прототипом) после хранении вакцин при температуре 4°С в течение 24 месяцев из расчета 2,0 см внутримышечно в область шеи за ухом однократно. Контрольную группу 1 не вакцинируют. У животных до вакцинации, через 7 и 21 день после вакцинации были отобраны пробы крови и исследованы в ИФА (набор IDEXX PRV/ADVgB США) на наличие специфических антител к антигену gB. Их оценка проводилась по значению величины S/N против вируса болезни Ауески (см. данные таблицы 1). Контрольное заражение животных проведено через 21 день после вакцинации. Иммуногенную активность вакцины оценивают по результатам контрольного заражения вакцинированных и контрольных животных (см. данные таблицы 1).
Таким образом, полученная вакцина против болезни Ауески животных из делеционного по гликопротеину gE штамма вируса болезни Ауески обладает более высокой иммуногенной активностью при длительном ее хранении в сравнении с известным техническим решением. Вакцинирование обеспечивает высокий уровень антител в сыворотке крови у привитых животных предлагаемой вакциной (уровень антител в группах опытных животных в 3,7-6,8 раз выше, чем в группе животных, которым вводили известную вакцину). Процент заражения после применения предлагаемой вакцины снижается на 46,7%.