ПРОГНОЗИРОВАНИЕ АКУШЕРСКИХ КРОВОТЕЧЕНИЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ АЛЛЕЛЬНОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ГЕНА GP IIIα

ПРОГНОЗИРОВАНИЕ АКУШЕРСКИХ КРОВОТЕЧЕНИЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ АЛЛЕЛЬНОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ГЕНА вР Ша

В.Е. РАДЗИНСКИЙ, Л.В. КОЛОМИЕЦ, О.А. КУЗНЕЦОВА

Кафедра акушерства и гинекологии с курсом перинатологии Российский университет дружбы народов Ул. Миклухо-Маклая, д. 8. Медицинский факультет, Москва 117198, Россия

Обследовано 192 женщин, чьи роды осложнились кровотечением. Рассматривались виды акушерских кровотечений: гипотоническое, с частичным плотным прикреплением плаценты, с преждевременной отслойкой нормально расположенной плаценты и с предлежанием плаценты.

Цель: определить возможность прогнозирования акушерских кровотечений в зависимости от аллельной принадлежности.

Материал: изучали ДНК периферической крови с использованием полимеразной цепной реакции.

Проведенные исследования позволили сделать вывод, что диагностический тест на носительство аллеля РЬА2 гена СР Ша является информативным маркером для прогнозирования вероятности возникновения акушерских осложнений.

Вопросы профилактики и лечения кровотечений в акушерстве были и остаются чрезвычайно актуальными, поскольку акушерские кровотечения являются основной причиной материнской смертности в большинстве стран мира. В зависимости от того, как решается эта проблема, можно судить о квалификации медицинского персонала и об организации помощи в том или ином родовспомогательном учреждении.

В России причиной летального исхода является массивная кровопотеря в 30% случаев. При других причинах смерти беременных, в частности, абортов, перитонита, сепсиса, острой почечной недостаточности, полиорганной патологии, как правило, лежит массивная кровопотеря. Экспертный анализ причин кровотечений свидетельствует о возрастании роли врожденных и наследственных дефектов гемостаза, а также воздействия экологических факторов на гемостаз.

Достижения генетики позволили выйти на молекулярный уровень познания структур организма и наследования, вскрыть сущность многих серьезных болезней человека, вплотную подойти к генной терапии.

Получила развитие клиническая генетика - одно и важнейших направлений современной медицины, приобретающих реальное профилактическое значение. Выяснилось, что множество хронических болезней человека есть проявление «генетического груза», риск их развития может быть предсказан задолго до рождения ребенка на свет, и уже появились практические возможности снизить давление этого «груза».

Представления о пусковых факторах тромбогенеза основаны на изменениях гемо-статического потенциала крови и ингибиторов свертывания по отношению к осложнениям гестационного процесса, патологии фетоплацентарного комплекса и экстрагени-тальным заболеваниям в период беременности. В свою очередь, патологическое свертывание крови, развиваясь вследствие повреждающего воздействия на систему гемостаза, приводит к усугублению основного заболевания и развитию тяжелых акушерских осложнений. Нарушения циркуляторной адаптации системы гемостаза во время беременности и скрытые врожденные генетические дефекты тромбофшшческой направленности могут стать преморбидным фоном патологической активации тромбогенеза по типу диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови [1, 2, 3]. Значительное укорочение продолжительности жизни тромбоцитов отмечено при гестозе.

Вероятно, определенные генотипы женщин в сочетании с особенностями взаимодействия трофобласта и клеток эндометрия, а также дефицита факторов свертывания крови и патологии тромбоцитов позволяют выявить генетически обусловленные состояния геморрагической предрасположенности.

Несмотря на многочисленность научных исследований, в мире ненамного изменилась структура причин материнской смертности, в Российской Федерации кровотечения как причина смертности беременных, рожениц и родильниц с 2003 года занимают первое место. До настоящего времени надежные тесты прогнозирования акушерских кровотечений отсутствуют. Это обусловливает необходимость поиска ответов на вопрос о прогнозировании кровотечений на стыке генетики и практического акушерства в малоизученном ранее аспекте науки.

Частота встречаемости аллеля PLAII для населения Европы, по данным различных авторов, составляет 14-15% [4, 5]. Средние значения аллельного распределения гена для населения г. Москвы составляют: гомозиготы PLA1 - 73,1%; гетерозиготы - 24,8%; гомозиготы PLA2 - 2,1%. Наличие этого аллеля связывают с нарушениями циркуляции в системе коронарных артерий (ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда) [6].

Принимая во внимании, что ведущим звеньями патогенеза акушерских осложнений являются нарушение адаптационных процессов гемостаза, нами было проведено исследование распространения двух основных аллелей. Ген GP Ша контролирует синтез клеточных рецепторов - интегринов (подсемейство цитоадгезинов).

Для решения поставленных задач исследование проводилось в три этапа. Начальным этапом исследований явилось определение медико-социальных особенностей контингента женщин, имеющих акушерское кровотечение в анамнезе, оценка особенностей течения беременности, родов и их исхода на основании анализа 192 историй родов.

Общеклинические исследования включали сбор анамнестических данных, изучение соматической и гинекологической заболеваемости, репродуктивного здоровья. В родах обращали внимание на их динамику, продолжительность, характер течения, время отделения плаценты и рождения последа.

На втором этапе работы проведена клинико-статистическая обработка данных, полученных при анализе историй родов. Полученные результаты исследования обработаны статистически. Для создания базы данных и обработки статистического материала использовался персональный компьютер IBM PC, в качестве основного программного обеспечения выбран пакет модулей для статистической обработки данных STATISTICA for Windows, Release 6.0 компании Stat Soft Inc., США (2002).

Каждому параметру выкопировки отводилась одна переменная в созданной базе данных, позиции по которым шифровались традиционным способом (0, 1, 2, 3...). Количественные признаки заносились в базу данных без изменений. За достоверную принимали разность средних при р<0,05 (Т>2). При проведении корреляционного анализа связь оценивалась как сильная при абсолютном значении коэффициента корреляции г>0,7, как имеющую среднюю силу при г=0,69-0,3 и как слабую - при г<0,29.

С помощью пакета Statistica 6.0, проводили достоверность отличия частоты генотипов в исследуемых группах от средней по популяции. Программа «непараметрическая статистика», сравнение наблюдаемых и ожидаемых значений.

Увеличение вероятности развития заболевания у гетерозигот PLA1/PLA2 по сравнению со средней популяционной частотой (А) рассчитывали по формуле:

H^PLAI/PLA2 в популяции) (% PLA1/PLAI в популяции) f

Третьим этапом явилось определение аллеля PLA] и PLA2 гена GP Ша.

Для исследования у женщин отбирали 100 мкл периферической крови в пробирку, содержащую 25 мкл 50 мМ раствора нейтрального Na-ЭДТА ("Sigma", США) и перемешивали. В таком виде кровь может храниться 15-20 суток в бытовом морозильнике

(около -12° С). Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили с использованием ам-плификатора ДНК многоканального МС 2 ("Терцик", Россия).

В работе использовали синтезированные в лаборатории биоорганической химии РУДН ДНК - матрицы и праймеры.

Исследование аллельного распределения гена GP Ша проводится на кафедре биологии и общей генетики под руководством д.б.н., профессора А.В. Иткеса.

У 124 женщин, чьи роды осложнились кровотечением проведено исследование аллеля PLA2 гена GP Ша. Все обследованные с акушерскими осложнениями были разбиты на 4 группы:

1-я группа: 48 женщин с предлежанием плаценты;

2-я группа: 36 пациенток с ПОНРП;

3-я группа: 33 женщины с частичным плотным прикреплением плаценты;

4-я группа: 21 женщина с гипотоническим кровотечением.

Установлено, что 82 (66,1%) женщин из 124 с акушерскими кровотечениями являлись носительницами аллеля PLA1, при этом ни в одном случае не было выявлено гомозиготного носительства аллеля PLA2.

После исследования на носительство аллеля PLA2 гена GP Ша провели распределение обследованных женщин по группам (табл.1).

Таблица 1

Аллельное распределение женщин по гену GPIIIa

Группы

РЬА2 (%) 9 (40,9) 2 (НЛ) 1 (6,3) 30 (44,0) 22

РЬА1/РЬА1 (%) 13 (59,1) 16 (88,9) 15 (93,7) 38 (56,0) 76

Частота РЬА1/РЬА2 по сравнению со средней в популяции 1,9 0,50 0,29 2,0 1,0

Вероятность по сравнению со средней частотой в популяции 2,4 0,43 0,23 2,7 -

Достоверность отличия частоты РЬА1/РЬА от средней в популяции р<0,04 р<0,3 р<0,2 р<0,01 -

Первую группу составили женщины, имеющие только аллель PLA1 (генотип А1А1). Во вторую группу вошли носительницы аллеля PLA2 (генотип А1А2).

Результаты исследования. Проведенные исследования позволили сделать вывод, что носительницы аллеля PLA2 гена GP Ilia отличаются высокой частотой распространения заболеваний сердечно-сосудистой системы, а также гинекологических заболеваний и нарушений (бесплодие, эктопия цилиндрического эпителия шейки матки и хронический сапьпингоофорит). Диагностический тест на носительство аллеля PLA2 гена GP

Ша является информативным для выделения групп риска по гипотоническому кровотечению и предлежанию плаценты. Тест может быть рекомендован для обследования женщин при подготовке к родам.

Частота PLA1/PLA2 по сравнению со среднепопуляционным показателем в 2 раза выше у женщин в группах с предлежанием плаценты и с гипотоническим кровотечением. Это соответствует повышению вероятности возникновения предлежания плаценты в 2,4 раза, а гипотонического кровотечения в - 2,7 раза.

Достоверные различия частоты PLA1/PLA2 от средней в популяции отмечены в группах с предлежанием плаценты и с гипотоническим кровотечением.

В нашей работе также зарегистрирована тенденция, которая заключается в том, что носительство PLA2 снижает вероятность ПОНРП и частичного плотного прикрепления плаценты. Среди родильниц с гипотоническим кровотечением частота генотипа PLA1/PLA2 (44,0%) в 2 раза превышает среднепопуляционный показатель. Это соответствует повышению вероятности возникновения гипотонического кровотечения в 2,7 раза.

В группе беременных с предлежанием плаценты частота генотипа PLA1/PLA2 (40,9%) примерно в 1,9 раза превышает среднепопуляционный показатель. Таким образом, вероятность предлежания плаценты для женщин с генотипом PLA2 повышена по сравнению со средним значением в 2,4 раза.

Диагностический тест на носительство аллеля PLA2 гена GPIIIa является информативным маркером для прогнозирования вероятности возникновения акушерских осложнений. Наличие в генотипе аллеля PLA2 повышает риск возникновения акушерских кровотечений.

Литература

1. Макацария А.Д., Ьицадзе В О. Тромбофилические состояния в акушерской практике: (клинич., молекуляр., и генетические аспекты) 2002. С.. 5-218

2. Хотайт Г.Я., Галина Т.В.. Радзинский В.Е. Носительство аллеля PLA2 гена GPllla и его связь с задержкой роста плода и гестозом // Вестник РУДН, сер. «Медицина», 2001, № 1, с. 27-30.

3. Harisson G.A., Humphrey К.Е., Jones N. el a! A genomewide linkage stade of preeclampsia / eklampsia reveals evidence for a candidadate region 4 g // Am. J. Hum. Genet., 1997, 60, p. 1158-1167.

4. Ridker P.M.. Ilennekens C.H.. Schmitz C„ StampferMJ.il Lanset, 1979, vol. 349, p. 385-388.

5. Simsek S.. Faber N.M.. Blecker P.M.. Vlekke A.B., Huiskes E.. Goldschmeding R., Von dem Borne A.E. II Blood, 1993, vol. 81, p. 835-840.

6. Humphries M.J. II Biochem. Soc. Symp., 1999. vol. .65, p.63-78

FORECASTING OF OBSTETRIC BLEEDINGS DEPENDING ON ALLELIC ACCESSORIES OF THE WOMAN ON GENE GP IIIA

V.E. RADZINSKY, L.V. KOLOMIETS, O.A. KYZNETSOVA

Department of Obstetrics and Gynaecology with course of Perinatology Peoples’ Friendship University of Russia 8, Miklukho-Maklaya str., Medical Faculty, 117198 Moscow, Russia

192 women who have delivery complicated by a bleeding are surveyed. There were considered different kinds of obstetric bleedings: hypotonic, with a partial dense attachment of a placenta, with premature detachment of normally located placenta and with prelying a placenta.

Objective, to define an opportunity of forecasting obstetric bleedings depending on allele accessories.

The material: studied DNA of peripheral blood with use polymerase chain reaction. The lead researches have allowed to draw a conclusion, that trouble-shooting test on presence of allele PLA2 in gene GP Ilia is an informative marker for forecasting probability of occurrence obstetric complications.