ГЕННАЯ ТЕРАПИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕМОФИЛИИ A

1. Рекомбинатный аденоассоциированный вирус (rAAV), используемый как направленное на печень терапевтическое средство для лечения гемофилии A, причем указанный rAAV содержит капсид AAV и упакованный в него векторный геном, при этом указанный векторный геном содержит
(a) последовательность AAV с 5' инвертированным концевым повтором (ITR);
(b) энхансер транстиретина (enTTR);
(c) промотор транстиретина (TTR);
(d) кодирующую последовательность, кодирующую человеческий фактор VIII, обеспечивающий функцию обеспечения коагуляции;
(e) 3' ITR AAV.
2. Вирус rAAV по п. 1, отличающийся тем, что человеческий фактор VIII представляет собой фактор VIII SQ с удаленным B-доменом, содержащий в длину около 1457 аминокислот.
3. Вирус rAAV по п. 1 или п. 2, отличающийся тем, что кодирующая последовательность из (d) выбрана из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.
4. Вирус rAAV по любому из пп. 1–3, отличающийся тем, что капсид rAAV представляет собой капсид hu37.
5. Вирус rAAV по любому из пп. 1–4, отличающийся тем, что 5' ITR AAV и/или 3' ITR AAV взяты из AAV2.
6. Вирус rAAV по любому из пп. 1–5, отличающийся тем, что векторный геном дополнительно содержит полиA, которая имеет размер около 75 п. н.
7. Вирус rAAV по любому из пп. 1–6, отличающийся тем, что векторный геном имеет размер от около 5 т. п. н. до около 5,5 т. п. н.
12
14
8. Водная суспензия, пригодная для введения пациенту с гемофилией A, причем указанная суспензия содержит водную суспендирующую жидкость и от около 1 x10 ГК/мл до около 1 x10 ГК/мл рекомбинатного аденоассоциированного вируса (rAAV), используемого как направленное на печень терапевтическое средство для лечения гемофилии A, при этом указанный rAAV содержит капсид AAV и упакованный в него векторный геном, содержащий
(a) последовательность AAV с 5' инвертированным концевым повтором (ITR);
(b) энхансер транстиретина (enTTR);
(c) промотор транстиретина (TTR);
(d) кодирующую последовательность, кодирующую человеческий фактор VIII, обеспечивающий функцию обеспечения коагуляции;
(e) 3' ITR AAV.
9. Суспензия по п. 8, отличающаяся тем, что суспензия пригодна для внутривенной инъекции.
10. Суспензия по п. 8 или п. 9, отличающаяся тем, что суспензия дополнительно содержит поверхностно-активное вещество, консервант и/или буфер, растворенные в водной суспендирующей жидкости.
12
14
11. Способ лечения пациента с гемофилией A с использованием rAAV по п. 1, в котором rAAV доставляют в водной суспензии в дозе от около 1 x 10 до около 1 x 10 геномных копий (ГК)/кг, причем ГК рассчитывают при определении на основе окПЦР (оптимизированная кПЦР).
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что rAAV вводят повторно в более поздний момент времени.
13. Вирус rAAV по п. 1, отличающийся тем, что векторный геном содержит нуклеотиды 1–5110 из SEQ ID NO: 13.
14. Вирус rAAV по п. 13, отличающийся тем, что капсид rAAV представляет собой капсид hu37.
15. Вирус rAAV по п. 1, отличающийся тем, что
enTTR представляет собой SEQ ID NO:5;
промотор TTR представляет собой SEQ ID NO:7;
кодирующая последовательность представляет собой SED ID NO:2.
16. Вирус rAAV по п. 15, отличающийся тем, что 5' ITR AAV представляет собой SEQ ID NO:11, а 3' ITR AAV представляет собой SEQ ID NO:12.
17. Вирус rAAV по любому из пп. 15 или 16, дополнительно содержащий последовательность полиA SEQ ID NO:10.
18. Вирус rAAV по любому из пп. 15–17, отличающийся тем, что капсид rAAV представляет собой капсид hu37.