СПОСОБ ОЦЕНКИ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ ПО СТЕПЕНИ ИХ ДЕФОРМИРУЕМОСТИ
METHOD FOR ESTIMATING THE DISTRIBUTION OF ERYTHROCYTES ACCORDING TO THE DEGREE OF THEIR DEFORMABILITY

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки распределения эритроцитов по степени их деформируемости. В отличие от существующих аналогов, основанных на принципе лазерной дифрактометрии, предлагаемый способ позволяет измерять не только среднюю деформируемость эритроцитов, но и их распределение по степени деформируемости в исследуемом образце крови.
Деформируемость эритроцитов есть мера способности клеток крови изменять свою форму под действием внешних сил. Известно, что деформируемость эритроцитов является одним из основных микрореологических параметров крови (Левтов В.А., Регирер С.А., Шадрина Н.Х. Реология крови. М.: Медицина, 1982; Муравьев А.В., Чепоров С.В. Гемореология (экспериментальные и клинические аспекты реологии крови). Ярославль, 2009). Измерение и постоянный контроль деформируемости эритроцитов важен для диагностики и лечения заболеваний различного генеза.
Одним из наиболее удобных методов измерения деформируемости эритроцитов является лазерная дифрактометрия эритроцитов в сдвиговом потоке (эктацитометрия) (Bessis М., Mohandas N.A diffractometric method for the measurement of cellular deformability. Blood Cells, 1975, v. 1, p. 307-313; Musielak M. Red blood cell-deformability measurement: Review of techniques. Clinical Hemorheology and Microcirculation, 2009, v. 42, p. 47-64). Однако с помощью этого метода можно оценить только один параметр - среднюю деформируемость эритроцитов.
Известен способ измерения параметров распределения эритроцитов по деформируемости (Никитин С.Ю., Устинов В.Д., Приезжев А.В., Луговцов А.Е. Способ измерения параметров распределения эритроцитов по деформируемости, Патент 2585113 РФ, 2016), взятый за прототип. Однако для этого требуется дорогостоящее, дефицитное оборудование - лазерный эктацитометр. Кроме того, для измерения параметров распределения эритроцитов по деформируемости требуется создание определенного алгоритма.
Технический результат - упрощение способа измерения параметров распределения эритроцитов по деформируемости.
Технический результат достигается тем, что способ оценки распределения эритроцитов по степени их деформируемости состоит в микрофотосъемке и обработке фотографий деформированных в сдвиговом потоке и фиксированных глутаровым альдегидом эритроцитов, с последующим вычислением средней деформируемости клеток и их распределением по степени деформируемости.
2
4
Способ осуществляется следующим образом. 0,05 мл цельной крови добавляют к 1,5 мл забуференного физиологического раствора (рН 7,4). Полученную суспензию эритроцитов вводят через отверстие во внутреннем цилиндре в зазор между цилиндрами специально сконструированного устройства (Левин Г.Я., Яхно В.Г., Царевский Н.Н., Котяева Н.П., Устройство для деформации эритроцитов в сдвиговом потоке. А. с. СССР №1363065, 1987). Устройство состоит из наружного вращающегося цилиндра и крышки, в которой укреплен внутренний цилиндр коаксиально наружному. Верхняя часть внутреннего цилиндра закреплена зажимом для обеспечения его неподвижности при вращении наружного цилиндра (фиг. 1). Через 20 с после деформации эритроцитов при напряжении сдвига 21 Па через отверстие во внутреннем цилиндре вводят 1 мл 0,7% раствора глутарового альдегида, приготовленного на фосфатном буфере (10 мМ NaHPО, 150 мМ NaCl, рН 7,4), а еще через 10 с вращение прекращают. Фиксированные эритроциты помещают в поле зрения светового микроскопа и проводят микрофотосъемку. На полученных фотографиях определяют длину и ширину деформированных клеток (100 клеток) и рассчитывают индекс удлинения эритроцитов (ИУЭ, отн. ед.) как показатель деформируемости по формуле:
где L - длина деформированной клетки; W - ее ширина.
Оценку распределения количества эритроцитов (%) по степени их деформируемости согласно их ИУЭ проводят по следующим группам: 0,30-0,35; 0,36-0,40; 0,41-0,45; 0,46-0,50; 0,51-0,55; 0,56-0,60; 0,61-0,65; 0,66-0,70.
Пример 1. Суспензию эритроцитов здорового донора вводили в зазор между цилиндрами применяемого устройства, создавали напряжение сдвига 21 Па, фиксировали глутаровым альдегидом, помещали в поле зрения светового микроскопа, проводили их микрофотосъемку (фиг. 2), рассчитывали среднюю деформируемость эритроцитов и распределение по степени их деформируемости (таблица).
Пример 2. Суспензию эритроцитов больного болезнью Крона вводили в зазор между цилиндрами применяемого устройства, создавали напряжение сдвига 21 Па, фиксировали глутаровым альдегидом, помещали в поле зрения светового микроскопа, проводили их микрофотосъемку (фиг. 3), рассчитывали среднюю деформируемость эритроцитов и распределение по степени их деформируемости (таблица). Из таблицы видно, что у больного болезнью Крона снижается средняя деформируемость эритроцитов и изменяется распределение по степени их деформируемости в изучаемых группах.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что предлагаемый способ оценки распределения эритроцитов по степени их деформируемости позволяет достаточно четко определить различие между интактными эритроцитами и эритроцитами больного не только по средней деформируемости, но и по степени их деформируемости.