СПОСОБ ОЦЕНКИ СОДЕРЖАНИЯ НИТРОСОЕДИНЕНИЙ В ПЛАЦЕНТЕ БЕРЕМЕННОЙ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
METHOD OF PLACENTA NITROCOMPOUND IN PREGNANT WOMAN SUFFERING ACUTE CONDITION OF HERPESVIRAL INFECTION

2
-
Цель изобретения заключается в установлении процесса накопления в плаценте беременных нитросоединений при обострении во время гестации герпес-вирусной инфекции и показать, что чем выше был титр антител к вирусу герпеса у беременной, тем больше в гомогенате плаценты родильниц содержалось NO .
2
-
Вирусные и бактериальные эндотоксины усиливают синтез NOS и соответственно секрецию NO. Выделяемая NO быстро проникает в клетки, где может ингибировать жизненно важные группы ферментов: Н-электроннотранспортирующие, ферменты цикла Кребса и синтеза ДНК. В этих условиях энергопродукция и деление клеток становится невозможным, что ведет к их преждевременной гибели. Оксид азота, накапливаясь в клетке в большом количестве, может вызвать повреждение ДНК. Таким образом, нитросоединения вызывают цитотоксический эффект при эндотоксическом шоке, инфекционных повреждениях. Не менее важным оказывается вопрос, почему простые молекулы как NO  обладают широким спектром токсического действия.
2
2
2
2
-
-
Установлено, что NO  может превращаться в NO. Свободнорадикальные продукты NO и NO обладают способностью повреждать белки и ненасыщенные жирные кислоты, уменьшать активность большинства ферментных систем, нарушать целостность клеточных и субклеточных структур, разобщать окислительное фосфорилирование, ингибировать транспорт электронов по дыхательной цепи митохондрий, снижать уровень АТФ в крови и тканях (Ажипа Я.И., Реутов В.П., Каюшин Л.П., 1990; Волкова Н.В., 1980; Реутов В.П., 1988; Реутов В.П., Каюшин Л.П., 1994; Реутов В.П., Охотин В.Е., Шуклин А.В. и др., 2007; Северина И.С., 1995; Punjabi C.J., Laskin J., Pendini K. et. al., 1995). Эти же авторы доказывают, что NO в организме становится базой для формирования NO. Поэтому следует ожидать, что при нарастании содержания в ткани NO  усиливается выработка NO и появляется опасность усиления токсического действия NO на эти ткани.
2
-
В отличие от описанных прототипов приводятся исследования, свидетельствующие, что при герпес-вирусной инфекции, обостряющейся при беременности, резко нарастает содержание нитросоединений (NO ) в плаценте.
Заявленный способ имеет следующие приемы.
а) Исследовались плаценты после родов у 20 беременных, перенесших в третьем триместре вспышку герпес-вирусной инфекции, и 20 беременных, не болевших в течение всего периода гестации (контроль). Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.
2
-
б) Для оценки содержания NO  в плаценте приготовляли гомогенат плаценты, взятой через 10-15 мин после родов. Плацента отмывалась физраствором (ФР). Кусочки плаценты помещались для просушивания на фильтровальную бумагу, взвешивались. Затем их растирали в ступке и к полученному гомогенату добавляли ФР в объеме, равном изначальному весу ткани (на 1 г - 1 мл ФР). Затем его размораживали и центрифугировали при 4000 об/мин при температуре +4°С. Надосадочную жидкость разливали мелкими аликвотами и хранили при -20°С до проведения иммуноферментного анализа (ИФА).
2
-
В размороженном супернатанте определяли на ридере «Stat-Fax-2100» (USA) с использованием «Nitric Oxide Assy Kit» (USA) NO . Титр антител к вирусу герпеса (1:1600; 1:6400; 1:12800) определяли на ридере «Stat-Fax-2100» (USA). Титр антител к вирусу герпеса (ВПГ-1) определялся по динамике антител IgG в периферической крови беременных с помощью стандартных наборов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск) иммуноферментным методом (ИФА) на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).
2
2
-
-
Полученные данные показали, что содержание NO  в гомогенате плаценты у беременных, перенесших герпес-вирусную инфекцию, резко нарастает по мере агрессивности инфекции. Содержание NO  в гомогенате плаценты при титре 1:1600 к вирусу герпеса увеличивается до 38,8±1,1 мкмоль/л; при титре 1:6400 - до 92,1±1,2 мкмоль/л, а при титре 1:12800 - до 105,7±1,5 мкмоль/л (контроль - 25,6±0,1 мкмоль/л).
Пример №1
Беременная Б. (34 недели) находилась в акушерском стационаре Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН с диагнозом - угроза прерывания беременности.
2
2
-
-
На тридцатой неделе гестации беременная перенесла вспышку герпес-вирусной инфекции (титр антител - 1:12800). После родов у родильницы была взята плацента, получен гомогенат и иммуноферментным методом определено содержание NO . У данной беременной в плаценте определялось 85,0 мкмоль/л NO  (контроль - 25,6±0,1 мкмоль/л).
2
-
Можно предполагать, что повышенное содержание в плаценте NO  могло привести к состоянию угрозы прерывания беременности, поскольку других осложнений на всем протяжении гестации у нее не отмечалось.
Пример №2
Беременная К. поступила на 36 неделе беременности в акушерское отделение Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН с угрозой прерывания беременности. Родила благополучно, но в пуповинной крови плода определялось:
O2
Р - 3,5 кПа
CO2
Р - 2,95 кПа
рН - 7,3
Эти показатели характерны для признаков гипоксии плода.
Беременная на 32 неделе беременности перенесла обострение герпес-вирусной инфекции с титром 1:12800.
2
-
В гомогенате плаценты после родов определяли 90 мкмоль/л NO .
Здоровый доношенный новорожденный:
CO2
Р - 2,95 кПа
рН - 7,4
O2
Р - 5,3±0,18 кПа
Пример №3
2
2
-
-
Беременная С. поступила на обследование перед родами в стационар на 36 неделе беременности. Никаких заболеваний во время инфекции не переносила. После родов была взята плацента и приготовлен гомогенат, в котором определяли содержание NO . Количество NO  равнялось 18 мкмоль/л.
Литература
1. Ажипа Я.И., Реутов В.П., Каюшин Л.П. Экологические и медико-биологические аспекты проблемы загрязнения окружающей среде нитратами и нитритами//Физиология человека. 1990. 16. (3). 131-135.
2. Волкова Н.В. Влияние нитритов и нитратов натрия на синтез ДНК, митотическую активность и ядерно-цитоплазматические отношения клеток печени крыс и их потомства // Гигиеническое нормирование факторов экологической среды человека: Л.: Тр. Ленингр. санит-гигиент. ин-та. 1980. 130. 38.
3. Реутов В.П. Изучение механизмов восстановления ионов NO в крови и митохондриях клеток тканей млекопитающих: Автореф. дис… канд. биол. наук. Москва. 1988. 20.
4. Реутов В.П., Каюшин Л.П., Сорокина Г.Г. Физиологическая роль цикла окиси азота в организме человека и животных // Физиология человека. 1994. 20 (3). 165-174.
5. Реутов В.П., Охотин В.Е., Шуклин А.В. и др. Оксид азота (NO) и цикл NO в миокарде: молекулярные, биохимические и физиологические аспекты // Успехи физиологических наук. 2007. 38. 4. 39-58.
6. Северина И.С. Растворимая форма гуанилатциклазы в молекулярном механизме физиологических эффектов окиси азота и в регуляции процесса агрегации тромбоцитов // Бюл. экспер. биол. и мед. 1995. (3). 230-235.
7. Punjabi C.J, Laskin J., Pendini K., et. al Production of nitric oxide by rat type II preumocytes increased of inducibic nitric oxide syntase following inhalation of a pulmonary irritant // Amer. J. Respirat, and Crit. Care Med. 1995. 151(1). 116-122.