НОВЫЕ АНТИТЕЛА, ИНГИБИРУЮЩИЕ ДИМЕРИЗАЦИЮ c-МЕТ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Способ отбора анти-c-Met антитела или одного из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», способных ингибировать как лиганд-зависимую, так и лиганд-независимую активацию c-Met, характеризующийся тем, что он включает в себя следующие этапы:
i) скрининг полученных антител и отбор антител, способных специфично связываться с c-Met;
ii) оценка in vitro отобранных антител этапа i) и отбор антител, способных ингибировать по меньшей мере на 50% опухолевую пролиферацию клеток по меньшей мере одного типа опухоли; а затем
iii) тестирование отобранных антител этапа ii) и отбор антител, способных ингибировать c-Met-димеризацию.
2. Способ по п.1, где этап iii) состоит в оценке антител с помощью анализа BRET на клетках, экспрессирующих оба c-Met-RLuc/c-Met-YFP, и в отборе антител, способных ингибировать по меньшей мере на 30% сигнал BRET.
3. Изолированное антитело или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», которое может быть получено с помощью способа по п.1 или 2.
4. Антитело по п.3 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит по меньшей мере одну область, определяющую комплементарность, CDR, выбранную из CDR областей, содержащих аминокислотные последовательности SEQ ID №№1-17 и 56-61.
5. Антитело по п.3 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну CDR, выбранную из CDR областей, содержащих аминокислотные последовательности SEQ ID №№1-9 и 56-58.
6. Антитело по п.5 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую по меньшей мере одну CDR, выбранную из CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, где:
- CDR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №1, 4, 7 или 56,
- CDR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №2, 5, 8 или 57, и
- CDR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №3, 6, 9 или 58.
7. Антитело по п.6 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, где CDR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №1, CDR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №2, и CDR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №3.
8. Антитело по п.7 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь с последовательностью, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID №18.
9. Антитело по п.6 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, где CDR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №4, CDR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №5, и CDR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №6.
10. Антитело по п.9 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь с последовательностью, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID №19.
11. Антитело по п.6 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, где CDR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №7, CDR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №8, и CDR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №9.
12. Антитело по п.11 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь с последовательностью, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID №20.
13. Антитело по п.6 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, где CDR-H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №56, CDR-H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №57, и CDR-H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №58.
14. Антитело по п.13 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь с последовательностью, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID №62.
15. Антитело по п.3 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну CDR, выбранную из CDR, содержащих аминокислотную последовательность SEQ ID №№10-17 и 59-61.
16. Антитело по п.15 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит легкую цепь, содержащую по меньшей мере одну CDR, выбранную из CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, где:
- CDR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №10, 13, 15 или 59,
- CDR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №11, 16 или 60, и
- CDR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №12, 14, 17 или 61.
17. Антитело по п.16 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, где CDR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №10, CDR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №11, и CDR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №12.
18. Антитело по п.17 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит легкую цепь с последовательностью, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID №21.
19. Антитело по п.16 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, где CDR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №13, CDR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №11, и CDR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №14.
20. Антитело по п.19 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит легкую цепь с последовательностью, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID №22.
21. Антитело по п.16 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, где CDR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №15, CDR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №16, и CDR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №17.
22. Антитело по п.21 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит легкую цепь с последовательностью, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID №23.
23. Антитело по п.16 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, где CDR-L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №59, CDR-L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №60, и CDR-L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID №61.
24. Антитело по п.23 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит легкую цепь с последовательностью, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID №63.
25. Антитело по п.3 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №18, 19, 20 или 62, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №21, 22, 23 или 63.
26. Антитело по п.3 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, которые соответственно содержат аминокислотные последовательности SEQ ID №№1, 2 и 3; а также легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, которые соответственно содержат аминокислотные последовательности SEQ ID №№10, 11 и 12.
27. Антитело по п.26 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID №18 и легкую цепь с аминокислотной последовательностью SEQ ID №21.
28. Мышиная гибридома, способная секретировать антитело по п.27.
29. Мышиная гибридома по п.28, депонированная в CNCM, Институт Пастера, Париж, 14 марта 2007 года под номером I-3731.
30. Антитело по п.3 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, которые соответственно содержат аминокислотные последовательности SEQ ID №№4, 5 и 6; а также легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, которые соответственно содержат аминокислотные последовательности SEQ ID №№13, 11 и 14.
31. Антитело по п.30 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №19 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №22.
32. Мышиная гибридома, способная секретировать антитело по п.31.
33. Мышиная гибридома по п.32, депонированная в CNCM, Институт Пастера, Париж, 14 марта 2007 года под номером I-3732.
34. Антитело по п.3 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, которые соответственно содержат аминокислотные последовательности SEQ ID №№7, 8 и 9; а также легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, которые соответственно содержат аминокислотные последовательности SEQ ID №№15, 16 и 17.
35. Антитело по п.34 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №20 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №23.
36. Мышиная гибридома, способная секретировать антитело по п.35.
37. Мышиная гибридома по п.36, депонированная в CNCM, Институт Пастера, Париж, 6 июля 2007 года под номером I-3786.
38. Антитело по п.3 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, которые соответственно содержат аминокислотные последовательности SEQ ID №№56, 57 и 58; а также легкую цепь, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, которые соответственно содержат аминокислотные последовательности SEQ ID №№59, 60 и 61.
39. Антитело по п.38 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №62 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID №63.
40. Мышиная гибридома, способная секретировать антитело по п.39.
41. Мышиная гибридома по п.40, депонированная в CNCM, Институт Пастера, Париж, 14 марта 2007 года под номером I-3724.
42. Антитело по пп.3-27, 30, 31, 34, 35, 38 или 39 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно является моноклональным антителом.
43. Антитело по п.42 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что оно является химерным антителом и кроме того содержит константные участки легкой цепи и тяжелой цепи, полученные из антитела вида, гетерологичного мыши.
44. Химерное антитело по п.43 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что указанным гетерологичным видом является человек.
45. Гуманизированное антитело по п.44 или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных», характеризующееся тем, что константные участки легкой цепи и тяжелой цепи, полученные из человеческого антитела, представляют собой каппа-участок для легкой цепи и гамма-1, гамма-2 или гамма-4 участок для тяжелой цепи соответственно.
46. Изолированная нуклеиновая кислота, характеризующаяся тем, что она выбрана из следующих нуклеиновых кислот:
a) нуклеиновая кислота, ДНК или РНК, кодирующая антитело или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных» по одному из пп.3-27, 30, 31, 34, 35, 38, 39 и 42-45;
b) нуклеиновая кислота, содержащая последовательность ДНК, выбранную из группы, включающей последовательности:
- нуклеиновая последовательность, содержащая последовательности SEQ ID №24, SEQ ID №25, SEQ ID №26 и последовательности SEQ ID №33, SEQ ID №34 и SEQ ID №35;
- нуклеиновая последовательность, содержащая последовательности SEQ ID №27, SEQ ID №28, SEQ ID №29 и последовательности SEQ ID №36, SEQ ID №34 и SEQ ID №37;
- нуклеиновая последовательность, содержащая последовательности SEQ ID №30, SEQ ID №31, SEQ ID №32 и последовательности SEQ ID №38, SEQ ID №39 и SEQ ID №40, и
- нуклеиновая последовательность, содержащая последовательности SEQ ID №64, SEQ ID №65, SEQ ID №66 и последовательности SEQ ID №67, SEQ ID №68 и SEQ ID №69;
c) нуклеиновая кислота, содержащая последовательность ДНК, выбранную из группы, включающей последовательности:
- нуклеиновая последовательность, содержащая последовательности SEQ ID №41 и SEQ ID №44;
- нуклеиновая последовательность, содержащая последовательности SEQ ID №42 и SEQ ID №45;
- нуклеиновая последовательность, содержащая последовательности SEQ ID №43 и SEQ ID №46;
- нуклеиновая последовательность, содержащая последовательности SEQ ID №70 и SEQ ID №71;
d) РНК, соответствующая нуклеиновым кислотам, определенным в b) или с);
e) нуклеиновые кислоты, комплементарные нуклеиновым кислотам, определенным в а), b) и с); и
f) нуклеиновая кислота по меньшей мере из 18 нуклеотидов, способная к гибридизации в условиях высокой жесткости по меньшей мере с одной из CDR областей с последовательностью SEQ ID №№24-40 и 64-69.
47. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.46.
48. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.47.
49. Трансгенное животное за исключением человека, содержащее по меньшей мере одну клетку, трансформированную вектором по п.47.
50. Способ производства антитела или одного из его функциональных «двухвалентных фрагментов» по п.3-27, 30, 31, 34, 35, 38, 39 и 42-45, характеризующийся тем, что он включает следующие этапы:
a) культивирование клетки по п.48 в среде в соответствующих культуральных условиях; и
b) выделение наработанных таким образом указанных антител или одного из их функциональных «двухвалентных фрагментов», из культуральной среды или указанных культивируемых клеток
51. Антитело или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов», которое может быть получено с помощью способа по п.50.
52. Антитело по пп.3-27, 30, 31, 34, 35, 38, 39, 42-45 и 51 в качестве лекарственного средства.
53. Композиция, содержащая в качестве действующего начала соединение, представляющее собой антитело или один из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или производных по одному из пп.3-27, 30, 31, 34, 35, 38, 39, 42-45 и 51 или наработанных с помощью гибридомы по пп.28, 29, 32, 33, 36, 37, 40 или 41.
54. Композиция по п.53, характеризующаяся тем, что она в качестве комбинированного продукта для одновременного, раздельного или последовательного применения помимо прочего содержит противоопухолевое антитело.
55. Композиция по п.53 или 54, характеризующаяся тем, что она в качестве комбинированного продукта для одновременного, раздельного или последовательного применения помимо прочего содержит цитотоксический/цитостатический агент.
56. Композиция по п.53, характеризующаяся тем, что по меньшей мере одно из указанных антител или один из их функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных» конъюгировано с клеточным токсином и/или радиоактивным элементом.
57. Композиция по п.55, характеризующаяся тем, что указанный цитотоксический/цитостатический агент или указанный токсин и/или радиоактивный элемент химически связан по меньшей мере с одним из элементов указанной композиции для одновременного применения.
58. Композиция по п.53 в качестве лекарственного средства.
59. Применение антитела или одного из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных» по пп.3-27, 30, 31, 34, 35, 38, 39, 42-45 и 51 или антитела, наработанного с помощью гибридомы по пп.28, 29, 32, 33, 36, 37, 40 или 41 и/или композиции по пп.53-58 для изготовления лекарственного средства, направленного на ингибирование роста и/или пролиферации опухолевых клеток.
60. Применение антитела или одного из его функциональных «двухвалентных фрагментов» или «производных» по пп.3-27, 30, 31, 34, 35, 38, 39, 42-45 и 51 или антитела, наработанного с помощью гибридомы по пп.28, 29, 32, 33, 36, 37, 40 или 41 и/или композиции по пп.53-58 или применение по п.59 для изготовления лекарственного средства, направленного на профилактику или лечение рака.
61. Применение по п.60, характеризующееся тем, что указанный рак является раком, выбранным среди рака простаты, остеосарком, рака легкого, рака молочной железы, рака эндометрия, глиобластомы или рака толстой кишки.
62. Применение по п.60 или 61, характеризующееся тем, что указанный рак является раком, связанным с HGF-зависимой и HGF-независимой Met-активацией.
63. Способ диагностики in vitro заболеваний, индуцированных сверхэкспрессией или недостаточной экспрессией c-Met-рецептора, в котором исходным объектом является биологический образец, в котором подозревается ненормальное присутствие c-Met-рецептора, который характеризуется тем, что включает этап, на котором указанный биологический образец приводят в контакт с антителом по пп.3-27, 30, 31, 34, 35, 38, 39, 42-45 и 51 или наработанным с помощью гибридомы по пп.28, 29, 32, 33, 36, 37, 40 или 41, причем при необходимости указанное антитело можно пометить.