Динамика цитохимических показателей при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у детей

УДК 616-053.2-342-002.44-074.5

Р. Т. Галеева, Г. В. Долгушкина, А. Н. Астафьева

ДИНАМИКА ЦИТОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ У ДЕТЕЙ

Проведено изучение энергетических и окислительно-восстановительных процессов у детей с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки по цитохимическим показателям лейкоцитов периферической крови. Изучена активность клеточных ферментов: кислой и щелочной фосфатазы, миелопероксида-зы, гликогена в лейкоцитах периферической крови (в лимфоцитах и сегментоядерных нейтрофилах). Выявлена зависимость цитохимической активности лимфоцитов и нейтрофилов от стадии язвенной болезни, длительности заболевания, проводимой терапии.

Актуальность проблемы

Широкое распространение язвенной болезни (ЯБ) в детском возрасте диктует дальнейшее и всестороннее изучение вопросов, связанных с данной патологией. При язвенной болезни в организме происходят значительные морфологические изменения.

Невозможно представить возникновение и развитие этого заболевания без глубоких нарушений в биоэнергетических, биохимических, иммунологических и других процессах. В клинических условиях наиболее доступным объектом исследования является кровь и ее составные части, по анализу которых с определенной точностью можно судить об изменениях в тканях организма.

Большой интерес вызывает изучение цитохимической активности лейкоцитов крови, отвечающих не только за местную защиту, но и за трофические и репаративные процессы. По мнению ряда авторов [1], переваривающая активность сегментоядерных нейтрофилов в значительной степени зависит от содержания в них энергетических источников (гликогена), активности ферментов азурофильных и специфических гранул (пероксидазы, щелочной фосфатазы, хлорацетатэстеразы).

Известно, что щелочная фосфатаза (ЩФ) нейтрофилов принимает участие в переносе метаболитов через клеточные мембраны, ее активность отражает остроту воспалительного процесса.

Кислая фосфатаза (КФ) является маркерным ферментом лизосом, участвующих в воспалительном процессе.

Изучение активности миелопероксидазы (МП), принимающей участие в окислительных процессах лейкоцитов крови, дает определенное представление о состоянии тканевого дыхания.

Гликоген (ГЛ) в лейкоцитах является важным энергетическим и пластическим материалом фагоцитирующей клетки [2-4].

Изучение локализации и степени активности ферментов в клетках периферической крови (КФ, ЩФ, МП, ГЛ), выполняющих различные функции в специфическом иммунитете и неспецифической защите, является важным этапом в познании закономерностей иммунологических реакций, биологической оценке взаимосвязи специфических и неспецифических механизмов в ответной реакции организма на применение противоязвенной терапии при ЯБ у детей.

Цель исследования: изучение энергетических и окислительновосстановительных процессов у детей с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ЯБДК) по цитохимическим показателям лейкоцитов периферической крови.

Методы и материалы исследования

Исследования проводили у 79 детей с разными стадиями ЯБДК (основная группа) и у 24 практически здоровых детей (контрольная группа).

В основной группе наблюдения по эндоскопическим проявлениям, согласно классификации П. Я. Григорьева и Э. П. Яковенко (2005), выделены 3 подгруппы: А - дети с I стадией ЯБДК («свежая язва») (28 человек), В - дети со II стадией ЯБДК («начало эпителизации язвенного дефекта») (26 человек), С - дети с III стадией ЯБДК («стадия рубца при сохраняющихся явлениях активного гастродуоденита») (25 человек). Группы больных выбраны равнозначными по полу и возрасту.

Цитохимическое обследование проводили также в подгруппах наблюдения до и после проведения традиционного противоязвенного лечения (ан-тисекреторные средства, прокинетики, цитопротекторы, по показаниям -эрадикационная терапия).

Для исследования активности цитохимических ферментов в лейкоцитах крови у детей с ЯБДК в зависимости от длительности заболевания в периоде ремиссии из основной группы были выделены две подгруппы: D - с длительностью заболевания от 1 года до 3 лет (29 человек), E - с длительностью заболевания от 5 до 8 лет (27 человек).

Изучение активности клеточных ферментов проводили в лейкоцитах периферической крови, а именно в лимфоцитах и сегментоядерных ней-трофилах. Для определения КФ и ЩФ использовали метод Goldberg, Barka (1962), основанный на гидролизации нафтол-ЛБ-фосфата кислой и щелочной фосфатазой в соответствующем интервале pH, образуя с парарозанилином гранул ярко-красного цвета в местах локализации фермента. При исследовании МП применяли метод Lole, описанный В. Т. Морозовой с соавторами (1990). Метод основан на реакции окисления бензидина системой «перекись водорода - пероксидаза» в коричневый цвет. ГЛ в лейкоцитах определяли по методу McManus (1962). Принцип метода основан на реакции альдегидов с реактивом Шиффа. Длинная цепь молекул глюкозы, из которых состоит ГЛ, соединена кислородными мостиками. В конце цепи имеются свободные OH-группы (гликоген). Под влиянием йодной кислоты гликольные группы окисляются до альдегидов. В местах, где имеются альдегиды, происходит их взаимодействие с реактивом Шиффа, в состав которого входит красящее вещество фуксин. В результате реакции образуется пурпурно окрашенное соединение, которое свидетельствует о присутствии полисахарида - гликогена.

Цитохимическую активность клеточных ферментов оценивали в условных единицах с учетом количества гранул и интенсивности окрашивания конечного продукта реакции. Подсчитывали число ферментположительных клеток в процентах, а также активность ферментов на 100 клеток и на 1 ферментсодержащую клетку.

Результаты исследования и их обсуждение

С целью изучения энергетических и окислительно-восстановительных процессов у детей с ЯБДК в зависимости от стадии язвенного процесса исследования проводили в подгруппах основной группы. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1

Цитохимические показатели активности ферментов (в усл. ед., М ± т) лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови у детей с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки в зависимости от стадии заболевания

Статистический показатель Лимфоциты Сегментоядерные нейтрофилы

КФ ЩФ МП ГЛ КФ ЩФ МП ГЛ

I стадия («свежая язва»), п = 28

М ± т 103 ± 3,2 44 ± 1,3 64 ± 1,7 57 ± 1,5 98 ± 3 48 ± 1,1 86 ± 2,2 234 ± 6,1

Р <0,001 <0,05 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001

II стадия («начало эпителизации язвенного дефекта»), п = 26

М ± т 98 ± 3 42 ± 1,1 89 ± 2,2 46 ± 1,1 84 ± 2,1 37 ± 0,9 97 ± 3 202 ± 5,4

Р <0,05 <0,05 <0,01 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,01

Рі <0,05 <0,05 <0,001 <0,001 <0,01 <0,001 <0,01 <0,001

Ш стадия («стадия рубца при сохраняющихся явлениях активного гастродуоденита»), п = 25

М ± т 93 ± 2,7 39 ± 0,9 91 ± 2,7 41 ± 0,9 67 ± 1,8 28 ± 0,6 132 ± 4,4 194 ± 4,9

Р <0,05 <0,05 <0,05 <0,001 <0,01 0,001 <0,001 <0,05

Рі <0,05 <0,01 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001

Р2 <0,05 <0,05 <0,05 <0,01 <0,001 <0,001 <0,001 <0,05

Здоровые дети (контрольная группа), п = 24

М ± т 86 ± 2,3 36 ± 0,7 102 ± 3,7 34 ± 0,6 59 ± 1,6 25 ± 0,4 189 ± 4,8 180 ± 4,7

Примечание. р - достоверность различий по отношению к здоровым детям; р1 -достоверность различий по отношению к I стадии язвенной болезни двенадцатиперстной кишки; р2 - достоверность различий по отношению к II стадии язвенной болезни двенадцатиперстной кишки.

Полученные данные свидетельствуют о том, что цитохимическая активность лимфоцитов и нейтрофилов прямо зависима от стадии ЯБДК. Так, при

I стадии ЯБДК накопление гликогена в лимфоцитах составило 57 ± 1,5 усл. ед.,

II стадии - 46 ± 1,1 усл. ед. и III стади - 41 ± 0,9 усл. ед. (р < 0,05; р1 < 0,05). Достоверно также снижалась активность кислой и щелочной фосфатазы (р < 0,05). Активность миелопероксидазы наоборот возрастала с 64 ± 1,7 усл. ед. при I стадии ЯБДК, до 89 ± 2,2 усл. ед. при II стадии (р < 0,01) и до 91 ± 2,7 усл. ед. при III стадии (р < 0,05; р1 < 0,001). Аналогичная динамика цитохимической активности изучаемых показателей в зависимости от стадии ЯБДК отмечена и в сегментоядерных нейтрофилах.

В качестве иллюстрации приводим следующее наблюдение.

Больная К., 14 лет, находилась на стационарном лечении с диагнозом «язвенная болезнь луковицы двенадцатиперстной кишки, неосложненная форма, стадия обострения». Длительность заболевания - 3 года. Настоящее

обострение наступило за неделю до госпитализации. При поступлении жаловалась на ноющие боли в животе до и после приема пищи, нередко ночного характера. Объективно: болезненность при пальпации в пилородуоденальной зоне. Печень не увеличена. Со стороны сердечно-сосудистой системы, органов дыхания, мочевыделительной системы патологических изменений не обнаружено.

Анализ крови: лейкоциты - 6,9х109/л; эозинофилы - 2%; палочкоядерные нейтрофилы - 4%; сегментоядерные нейтрофилы - 61%; моноциты - 3%; лимфоциты - 30%; СОЭ - 2 мм/ч.

При эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС): язвенный дефект 6 х 5 мм («свежая язва») на передней поверхности луковицы двенадцатиперстной кишки. Края язвы высокие, ровные, четко очерченные. Выражено периульце-розное воспаление: вблизи язвы слизистая оболочка отечна, гиперемирована, имеет повышенную ранимость.

В стационаре больная получала противоязвенную терапию: антисекре-торные средства, прокинетики, цитопротекторы. Для оценки динамики язвенного процесса были сделаны две контрольные ЭГДС с интервалом в две недели, на которых фиксированы соответственно II стадия ЯБ («начало эпителиза-ции язвенного дефекта») и III стадия ЯБ («стадия рубца при сохраняющихся явлениях активного гастродуоденита»). Общие сроки заживления язвы составили 21 день. Динамика содержания цитохимических компонентов лейкоцитов выражалась в значительном накоплении гликогена в лейкоцитах и повышении активности кислой и щелочной фосфатазы лейкоцитов в I стадию ЯБДК (лимфоциты: ГЛ - 56 усл. ед., КФ - 99 усл. ед., ЩФ - 44 усл. ед.; нейтрофилы: ГЛ -229 усл. ед., КФ - 99 усл. ед., ЩФ - 49 усл. ед.). Вместе с тем при I стадии ЯБДК у больной К. достоверно и максимально была снижена активность мие-лопероксидазы (лимфоциты: МП - 63 усл. ед.; нейтрофилы: МП - 85 усл. ед.). В последующие стадии ЯБДК у ребенка наблюдалось постепенное приближение исследуемых показателей к показателям здоровых детей. Так, во II стадию в лимфоцитах накопление ГЛ составило 46 усл. ед., активность КФ - 96 усл. ед., ЩФ - 41 усл. ед., МП - 87 усл. ед.; в нейтрофилах: ГЛ - 203 усл. ед., КФ -86 усл. ед., ЩФ - 37 усл. ед., МП - 98 усл. ед. В III стадию в лимфоцитах: ГЛ -40 усл. ед., КФ - 91 усл. ед., ЩФ - 40 усл. ед., МП - 92 усл. ед.; в нейтрофилах: ГЛ - 197 усл. ед., КФ - 66 усл. ед., ЩФ - 27 усл. ед., МП - 136 усл. ед.

Таким образом, глубина цитохимических изменений изучаемых величин у данного больного прямо зависели от стадии ЯБДК.

Одной из задач работы явилось изучение динамики цитохимических показателей до и после проведения традиционного противоязвенного лечения (антисекреторные средства, прокинетики, цитопротекторы, по показаниям - эрадикационная терапия). Результаты этих исследований приведены в таблице 2.

Как показано в таблице 2, после проведенного традиционного медикаментозного лечения имело место снижение активности КФ и ЩФ, повышение активности МП и уменьшение накопления гликогена в лейкоцитах (р < 0,05). В итоге цитохимические показатели приближались к показателям здоровых детей.

Таблица 2

Цитохимические показатели активности ферментов (в усл. ед., М ± т) лейкоцитов периферической крови у детей с ЯБДК при традиционном медикаментозном лечении

Статистический показатель Лимфоциты Сегментоядерные нейтрофилы

КФ ЩФ МП ГЛ КФ ЩФ МП ГЛ

Дети с ЯБДК (га = 26) до лечения

М ± т 93 ± 2,7 40 ± 1,0 79 ± 1,7 49 ± 1,3 85 ± 2,2 49 ± 1,3 79 ± 1,8 210 ± 5,6

Дети с ЯБДК (га = 26) после лечения

М ± т 90 ± 2,6 37 ± 0,9 98 ± 3,0 41 ± 1,0 70 ± 1,6 28 ± 0,6 127 ± 4,1 194 ± 4,9

Р <0,05 <0,05 <0,05 <0,01 <0,001 <0,001 <0,001 <0,05

Рі >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 >0,01 >0,05 >0,05 >0,05

Здоровые дети

М ± т 86 ± 2,3 36 ± 0,7 102 ± 3,1 34 ± 1,6 59 ± 0,4 25 ± 4,8 189 ± 4,7 180 ± 0,6

Примечание. р - достоверность различий по отношению к показателям здоровых детей; рі - достоверность различий с показателями детей, получивших традиционную медикаментозную терапию.

Большой интерес представляло исследование цитохимических компонентов лейкоцитов у детей с ЯБДК в периоде ремиссии в зависимости от длительности заболевания, которую определяли по анамнезу. Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3

Активность цитохимических ферментов (в усл. ед., М ± т) в лейкоцитах крови у детей с ЯБДК (в периоде ремиссии) в зависимости от длительности заболевания

Статистический показатель Лиме оциты Сегментоядерные нейтрофилы

КФ ЩФ МП ГЛ КФ ЩФ МП ГЛ

Группа Б - 29 человек с длительностью заболевания ЯБДК от 1 года до 3 лет

М ± т 85 ± 4,3 34 ± 1,6 98 ± 2,9 38 ± 2,6 57 ± 1,0 26 ± 1,0 149 ± 5,9 168 ± 6,2

Г руппа Е - 27 человек с длительностью заболевания ЯБДК от 5 до 8 лет

М ± т 124 ± 5,1 67 ± 2,7 101 ± 3,1 26 ± 1,6 69 ± 1,8 32 ± 1,3 182 ± 7,1 142 ± 5,8

Р <0,001 <0,001 >0,05 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,01

Здоровые дети

М ± т 86 ± 2,3 36 ± 0,7 102 ± 3,1 34 ± 1,6 59 ± 04 25 ± 4,8 189 ± 4,7 180 ± 0,6

Р1 <0,001 <0,001 >0,05 <0,01 <0,001 <0,001 <0,05 <0,01

Примечание. р - достоверность различий показателей детей с длительностью заболевания от 1 до 3 лет по отношению к показателям детей с длительностью заболевания от 5 до 8 лет; р1 - достоверность различий по отношению к показателям здоровых детей.

Как показано в таблице 3, дети с длительностью заболевания от 1 до 3 лет в периоде ремиссии ЯБДК имеют цитохимические показатели в лейкоцитах крови, приближенные к таковым у здоровых детей. Для детей с длительностью заболевания от 5 до 8 лет характерна более высокая активность КФ и

ЩФ (р < 0,001), а накопление гликогена в лейкоцитах снижено (р < 0,01). Полученные данные могут указывать на усиление катаболических процессов в элементах гемопоэза и, по-видимому, могут рассматриваться как отражение неспецифического проявления действия длительности заболевания на организм детей, больных ЯБДК.

Таким образом, изучение активности внутриклеточных лизосомальных ферментов (КФ, ЩФ, МП), содержания гликогена в лейкоцитах при ЯБДК у детей позволяет судить о степени активности патологического процесса и состояния неспецифической резистентности организма при этом заболевании. Можно полагать, что изменение активности ферментов является результатом дестабилизирующего действия Helicobacter pylori и его эндотоксина на мембраны лейкоцитов. Снижение уровня микробицидного компонента лейкоцитов - миелопероксидазы, по-видимому, объясняется расходованием его в процессе дегрануляции лизосомальных компонентов при контакте с Helicobacter pylori или в процессе фагоцитоза и переваривания поглощенных бактерий. Эти вопросы весьма интересно было бы изучить в будущем.

Определение активности цитохимических показателей в лейкоцитах периферической крови позволяет получить необходимую информацию для диагностики ранних метаболических нарушений у детей, в том числе под влиянием длительности заболевания язвенной болезнью.

Выводы

1. Изменение активности цитохимических показателей (кислая фосфатаза, щелочная фосфатаза, миелопероксидаза, гликоген в лейкоцитах) отмечается уже в начальной стадии язвенной болезни двенадцатиперстной кишки и позволяет прогнозировать ранние метаболические нарушения у детей, в том числе под влиянием длительности заболевания.

2. Выраженность цитохимических изменений (кислая фосфатаза, щелочная фосфатаза, миелопероксидаза, гликоген в лейкоцитах) прямо зависит от стадии язвенного процесса. Наибольшие изменения выявлены в стадию «свежей язвы», и по мере наступления ремиссии цитохимические показатели приближались к уровню показателей здоровых детей.

3. Традиционное противоязвенное лечение оказывает благоприятное действие на цитохимические показатели крови (после проведения лечения отмечено снижение активности кислой и щелочной фосфатазы, повышение активности миелопероксидазы и уменьшение накопления гликогена в лейкоцитах, тем самым эти значения приближались к показателям здоровых детей).

4. Исследование динамики цитохимических показателей при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у детей может применяться для определения степени активности патологического процесса, состояния неспецифической резистентности организма и оценки эффективности терапии.

Список литературы

1. Асадов, Ч. Д. Связь между фагоцитарной функцией и цитохимическими показателями нейтрофилов крови / Ч. Д. Асадов, Л. С. Нумерова, М. Э. Мирзоева // Лаб. дело. - 1990. - № 11. - С. 19.

2. Баулина, Н. И. Морфологические и цитохимические особенности лимфоцитов при патологических и физиологических состояниях : автореф. дис. ... канд. мед. наук / Н. И. Баулина. - М., 1991.

3. Долгушин, И. И. Секреторные продукты нейтрофилов и иммунный ответ / И. И. Долгушин, А. В. Зурочка, А. В. Власов // Иммунология. - 1990. - № 3. - С. 35-37.

4. Ионов, А. Ю. Диагностическая информативность определения цитохимических свойств нейтрофилов крови и синовиальной жидкости у больных ревматоидным артритом и деформирующим остеоартрозом / А. Ю. Ионов, А. А. Фишер, М. Г. Шубич // Тер. архив. - 1990. - № 5. - 62 т. - С. 51-54.