Способ исследования метаболизма билирубина
METHOD FOR STUDYING THE METABOLISM OF BILIRUBIN

Изобретение относится к медицине, к биохимии, гепатологии, лабораторной диагностике и, непосредственно, к оценке метаболизма билирубина.
Билирубин, желтый пигмент крови, образующийся в результате распада гемоглобина, миоглобина и цитохромов. В результате поэтапного катаболизма гемоглобина в клетках ретикуло-эндотелиальной системы образуется непрямой билирубин (билирубин не конъюгированный, свободный). Билирубин (свободный, несвязанный, непрямой) - токсичное, жирорастворимое вещество, способное разобщать окислительное фосфорилирование в клетках. Особенно чувствительны к нему клетки нервной ткани. Поступив в кровь, свободный билирубин соединяется с альбуминами и с током крови поступает в печень.
В печени несвязанный (непрямой, жирорастворимый, токсичный) билирубин связывается клетками печени с органической кислотой (глюкуроновой кислотой); при этом он теряет свою токсичность и приобретает растворимость. Такой билирубин называют прямым (связанным, конъюгированным).
Общий билирубин объединяет прямой и непрямой билирубин. Нормальные значения общего билирубина составляют 3,4 - 17,1 мкмоль/л. При этом содержание прямого (связанного) билирубина в плазме крови составляет 25%.
Следует отметить, что иногда нормальными показателями общего билирубина считаются значения, достигающие 20,5 мкмоль/л, а прямого 5,6 мкмоль/л. При этом существует мнение, нормальные значения прямого билирубина могут достигать 7,9 мкмоль/л (1. Биохимия метаболизма. Учебное пособие / Е. А. Бессолицына. - 2016. - 310 с. ISBN: 9785448336638;
2. Биохимия крови: Лабораторный практикум / Е. С. Барышева, К.М. Буров // Оренбургский государственный университет. - Оренбург: ОГУ, 2013. - 141 с.)
Таким образом, метаболизм билирубина имеет большую роль в обмене веществ на организменном уровне. Более того, накопление в организме непрямого, несвязанного билирубина, обладающего токсичными свойствами, создает предпосылки для нейроинтоксикации. При этом снижение уровня билирубина в крови, с позиции клинической патологии, не рассматривается.
Известен способ исследования метаболизма билирубина, заключающийся в том, что проводят определение содержание общего и прямого билирубина в плазме крови утром натощак (Северин Е.С., Алейникова Т.Л., Осипов Е.В., Силаева С.А. / Биологическая химия. - М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2008. - 364с.). При этом нормальными показателями считают показатели общего билирубина 3,4 - 17,1 мкмоль/л, а прямого 0,6 - 4,2 мкмоль/л.
Однако эта методика малоинформативна, поскольку позволяет оценить содержание билирубина в плазме крови только в конкретный момент времени, но не позволяет оценить метаболизм билирубина и суточные колебания его фракций с учетом таких показателей как объем циркулирующей крови (ОЦК) и гематокрита (Ht).
Особое значение имеет оценка состояния метаболизма билирубина в условиях отсутствия патологии печени, после перенесенных гепатитов, либо хронических гепатитов в стадии клинико-лабораторной ремиссии. Поскольку достаточно часто при нормальных показателях каждого из параметров, но оценивая их автономно, а не в комплексе с другими показателями, интерпретация общего состояния на организменном уровне может производиться ошибочно. Более того, не учитываются изменения исследуемых показателей в течение суток, которые и позволяют оценить особенности метаболизма билирубина в каждом конкретном случае.
Задачей предлагаемого изобретения является повышение достоверности оценки состояния метаболизма билирубина.
Это достигается тем, что применяют способ исследования метаболизма билирубина, включающий определение утром натощак в плазме крови содержания общего и прямого билирубина, объема циркулирующей крови и гематокрита, отличающийся тем, что вечером перед сном производят определение в плазме крови содержания общего и прямого билирубина, объема циркулирующей крови и гематокрита, после чего рассчитывают коэффициент метаболизма билирубина (К) по формуле:
где: К - коэффициент состояния метаболизма билирубина;
пр.утр
Б - содержание прямого билирубина в плазме крови утром;
общ.утр.
Б - содержание общего билирубина в плазме крови утром;
утр
ОЦК- объем циркулирующей крови утром;
утр
Ht- гематокрит утром;
пр.веч.
Б - содержание прямого билирубина в плазме крови вечером;
общ.веч..
Б - содержание общего билирубина в плазме крови вечером;
веч
ОЦК - объем циркулирующей крови вечером;
веч
Ht - гематокрит вечером,
оценивая состояние метаболизма билирубина, отмечают его снижение у мужчин при K <1,32; а у женщин при K <1,26.
Способ позволяет повысить достоверность оценки состояния метаболизма билирубина.
В дневное время основные ресурсы организма направлены на удовлетворение процессов жизнедеятельности в условиях повышенной суточной активности организма, которые, согласно доминанте Ухтомского, в данный момент являются приоритетными. Соответственно, энергообеспечение других функций организма. При этом традиционное однократное исследование содержания в плазме крови утром натощак различных фракций билирубина не отражает их суточных колебаний показателей, обусловленных более интенсивным образованием непрямого, несвязанного (токсичного) билирубина в период дневной активности (гемолиз, более интенсивное расщепление миоглобина и активное использование цитохромов для окислительно-восстановительных реакций), а также поступление большого количества прямого билирубина с желчью в пищеварительный тракт во время приема пищи, что приводит к снижению его содержания в плазме крови.
Соответственно, в ночное время происходит восстановление организма, утилизация и нейтрализация эндотоксинов, преобладают процессы анаболизма, в частности более активный синтез прямого билирубина, образующегося при переводе токсичного несвязанного билирубина в связанную нетоксичную форму.
Более того, часто при интерпретации результатов, в первую очередь обращают внимание на содержание общего билирубина, без целенаправленного анализа показателей прямого билирубина и его удельного веса в составе общего билирубина. Так, например, при верхней границе нормы общего билирубина и нижней границе нормы прямого билирубина интерпретация анализа производится как нормальная, в то время как происходит снижение нейтрализации свободного токсичного непрямого билирубина и перевод его в связанную нетоксичную форму прямого билирубина.
Способ исследования метаболизма билирубина отличается от известного тем, что вечером перед сном производят определение в плазме крови содержание общего и прямого билирубина, объема циркулирующей крови и гематокрита после чего рассчитывают коэффициент метаболизма билирубина (К) по формуле:
где:
К - коэффициент состояния метаболизма билирубина;
пр.утр
Б - содержание прямого билирубина в плазме крови утром;
общ.утр.
Б - содержание общего билирубина в плазме крови утром;
утр
ОЦК- объем циркулирующей крови утром:
утр
Ht- гематокрит утром;
пр.веч.
Б - содержание прямого билирубина в плазме крови вечером;
общ.веч..
Б - содержание общего билирубина в плазме крови вечером;
веч
ОЦК - объем циркулирующей крови вечером;
веч
Ht - гематокрит вечером;
оценивая состояние метаболизма билирубина, отмечают его снижение у мужчин при K <1,32; а у женщин при K <1,26.
Предлагаемый способ исследования метаболизма билирубина позволяет оценить состояние метаболизма билирубина с учетом суточного колебания его фракций и восстановления баланса в режиме текущего времени.
Способ осуществляется следующим образом: вечером перед сном и утром натощак определяют в плазме крови содержание общего и прямого билирубина, объем циркулирующей крови и гематокрит, после чего рассчитывают коэффициент метаболизма билирубина (К) по формуле:
где:
К - коэффициент состояния метаболизма билирубина;
пр.утр
Б - содержание прямого билирубина в плазме крови утром;
общ.утр.
Б - содержание общего билирубина в плазме крови утром;
утр
ОЦК- объем циркулирующей крови утром:
утр
Ht- гематокрит утром
пр.веч.
Б - содержание прямого билирубина в плазме крови вечером;
общ.веч..
Б - содержание общего билирубина в плазме крови вечером;
веч
ОЦК - объем циркулирующей крови вечером;
веч
Ht - гематокрит вечером;
оценивая состояние метаболизма билирубина отмечают его снижение у мужчин при K <1,32; а у женщин - при K <1,26.
Способ исследования белоксинтезирующей функции печени был разработан при оценке биохимических анализов крови у 148 условно здоровых волонтеров при отсутствии патологии печени, в возрасте от 24 до 43 лет. Исследования у каждого обследуемого проводили 3 раза с недельным интервалом. Из них было 73 мужчин и 75 женщин.
Все участники подписали информированное согласие на участие в исследовании и соглашение о конфиденциальности личных данных.
По результатам обследования условно нормальные показатели (К) для мужчин составили 1,32 и более; а для женщин - 1,26 и более.
К
К
Способ исследования метаболизма билирубина был применен в динамике у 34 больных с патологией печени (хронические гепатиты в стадии ремиссии). Из них 21 мужчина и 13 женщин. При первичном обследовании отмечалось уменьшение коэффициента метаболизма билирубина  у мужчин до 1,12-1,23. В процессе поддерживающей терапии отмечалась тенденция к постепенной нормализации коэффициента  до 1,32-1,41, то есть отмечалась положительная динамика в состоянии метаболизма билирубина.
Пример: Больной С., 41 год. Диагноз: Хронический гепатит в стадии клинико-лабораторной ремиссии. При первичном обследовании: содержание в крови вечером общего билирубина - 19,8 мкмоль/л; прямой билирубин 3,2 мкмоль/л, ОЦК - 4,8 л. Ht - 48%. При повторном обследовании утром общий билирубин 18,1 мкмоль/л; прямой билирубин - 3,7 мкмоль/л, ОЦК - 4,7 л, Ht - 49%. Коэффициент К=1,21, что свидетельствовало о снижении метаболизма билирубина. После проведенной поддерживающей терапии улучшилось общее состояние больного, отмечалось вечером содержание общего билирубина 18,4 мкмоль/л; прямого билирубина 3,7 мкмоль/л, ОЦК - 4,8 л, Ht - 47% При повторном обследовании утром содержание в крови общий билирубин - 17,4 мкмоль/л; прямой билирубин - 4,9 мкмоль/л, ОЦК - 4,6, Нt - 48%. Коэффициент К=1,32. Положительная динамика коэффициента метаболизма билирубина К совпадала с положительной динамикой других биохимических показателей (общий белок, креатинин, мочевина, мочевая кислота, общий белок щелочная фосфатаза, тимоловая проба, лейкоцитарная формула).
К
Аналогичные результаты были получены у женщин, у которых при поступлении коэффициент метаболизма билирубина К снизился до 1,11 -1,17. На фоне проводимого лечения отмечалась положительная динамика и показатели коэффициента билирубина  возросли до 1,24 -1,36.
Пример: Больная Е., 36 лет. В анамнезе перенесла острый вирусный гепатит, осложненный печеночной недостаточностью. Проходила комплексное обследование перед планируемой беременностью. Лабораторные показатели в пределах нормативных значений. При первичном обследовании состояния метаболизма билирубина: содержание в крови вечером общего билирубина - 18,2 мкмоль/л; прямой билирубин 3,4 мкмоль/л, ОЦК - 4,2 л, Ht - 48. При повторном обследовании утром общий билирубин 18,4 мкмоль/л; прямой билирубин - 3,9 мкмоль/л, ОЦК 4,3 л, Ht - 49%. Коэффициент К=1,13, что свидетельствовало о снижении метаболизма билирубина. После проведенной поддерживающей коррегирующей терапии улучшилось общее состояние больной, отмечалось вечером содержание общего билирубина 19,1 мкмоль/л; прямого билирубина 3,6 мкмоль/л, ОЦК - 4,3 л, Ht - 46%. При повторном обследовании утром содержание в крови общий билирубин - 18,2 мкмоль/л; прямой билирубин - 4,6 г/л, ОЦК - 4,2 л. Ht - 47. Коэффициент К=1,28. Параллельно с нормализацией показателей коэффициента метаболизма билирубина К отмечалась положительная динамика других биохимических показателей (АЛАТ, АСАТ, щелочная фосфатаза, тимоловая проба, азотистый баланс, лейкоцитарная формула).
Полученные результаты свидетельствовали о том, что применение предлагаемого способа исследования метаболизма билирубина позволяет не только оценить ее состояние в текущий момент времени, но и может являться критерием эффективности проводимого лечения при патологии печени.
Определение лабораторных показателей при исследовании крови утром и вечером производили по одной методике и выражали в одних и тех же единицах измерения (мочевина - ммоль/л; общий белок - г/л). Кроме того, при проведении исследования проводили определение гематокрита и объема циркулирующей крови, при этом динамика этих величин оказывала значимое влияние на результаты исследования метаболизма билирубина. Следует отметить, что результаты утром и вечером выражали в одних и тех же единицах измерения. При проведении расчетов единицы измерения в числителе и знаменателе взаимно сокращаются, что позволяет получить коэффициент К в числовом выражении.
Таким образом, способ исследования метаболизма билирубина позволяет решить поставленную задачу, а именно повысить достоверность оценки метаболизма билирубина.