СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕВОМИЦЕТИНА (ХЛОРАМФЕНИКОЛА)
METHOD FOR INCREASING EFFICACY OF LAEVOMYCETIN (CHLORAMPHENICOL)

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии.
Известно, что левомицетин, продукт жизнедеятельности Streptomuces veneruelae - это природный антибиотик, токсичный для микроорганизмов и клеток животных и человека, применяемый для лечения риккетсиозов, хламидиоза, сыпного тифа менингитов, спиророхетоза и т.д., может инактивироваться ферментом хлорамфениколтрансферазой. Левомицетин используется в виде растворов и мазей - синтомицин, левомиколь. Наиболее тяжелые токсические осложнения с развитием анемии, агранулоцитоза, появлением слабости, рвоты, отеков, боли в сердце и появление левомицетнорезистентных микроорганизмов увеличивают противопоказания к его применению (Покровский В.И., Поздеев O.K. - Медицинская микробиология. М., Медицина, - 1999. - С. 150-153).
Однако исследования по снижению токсичности и повышению эффективности левомицетина не проводятся.
В настоящее время изучено, что альдегид глутаровой аминокислоты проявляет повышенные детоксицирующее и полимеризирующее действие и бактерицидную эффективность, чем альдегид муравьиной кислоты - формальдегид и особенно в сочетании с четвертичными аммонийными соединениями.
За прототип взят способ повышения эффективности антибиотиков путем детоксикации и полимеризации 0,15±0,05% раствором формальдегида (Евглевский А.А., Евглевский Д.А., Коломиец В.М. Способ повышения эффективности антибиотиков. - Патент №2400218 с приоритетом от 06 апреля 2009 г.).
Недостатком применения формальдегида является его канцерогенность, выпадение в осадок при +9°C и ниже и недостаточная эффективность в отношении грибов и вирусов, противопоказаний для орального применения. Поэтому использование его для изготовления формоланатоксинов и вакцин во многих странах запрещено (Медуницин Н.В. Экспертный комитет по биологической стандартизации ВОЗ. Биопрепараты №1, 2001 г. - С.21-22).
В настоящее время изучено, что альдегид глутаровой аминокислоты обладает более повышенным детоксицирующим, полимеризирующим, бактерицидными, вирусоцидными и фунгицидными свойствами отдельно и особенно в сочетании с четвертичными аммонийными соединениями, чем формальдегид.
Технической задачей изобретения является снижение токсичности и повышение эффективности левомицетина (хлорамфеникола).
Поставленная задача достигается полимеризацией левомицетина (хлорамфеникола) вначале 0,15±0,05% раствором глутарового альдегида при 38-40°C в течение 3-5 суток, а затем 0,1% раствором этония, или 0,1% раствором Биопага-Д, или 0,1% раствором алкилдиметилбензиламмония при 38-40°C в течение 3-5 суток.
Модифицированный левомицетин путем детоксикации и полимеризации был изучен на токсичность, безвредность и в отношении эффективности против микробов, вирусов и грибов в форме растворов и 3-5 и 10% мазей - линиментов синтомицина (хлорамфеникола).
Детоксикация и полимеризация левомицитина проводилась по принципу получения бактерийных анатоксинов, т.е. в основе модификации препарата использовано научно-биотехнологическое обоснование, позволяющее преодолеть бактериальную ферментативную деструкцию левомицетина снизить его токсичность и расширить спектр его применения. Полученные результаты иллюстрированы следующими примерами.
Пример 1. Получение модифицированного левомицетина проводили растворением 1 грамма препарата в 8,0 мл дистиллированной воды с прибавлением 1,0 мл 1% раствора глутарового альдегида при 38-40°C в течение 3-5 суток, а затем вносили 1,0 мл 1,0% раствора этония (1-2-этилен-бис (N-децилоксикарбонилметил NN-диметил) - аммония дихлорид или 1% раствора алкилдиметил бензил аммония или 1% раствора Биопага-Д, (полигексаметиленгидрохлорид), разработанный в институте эколого-технологических проблем (ИЭТП), г. Москва для проведения второго этапа в том же режиме.
Модифицированный полимеризацией и детоксикацией левомицетин сохранял прозрачность, не изменял цвет при отсутствии выпадения в осадок в течение 2 лет хранения от +5 до 25°C.
Пример 2. Изучение модифицированного левомицетина на токсичность
Подкожное и внутримышечное введение модифицированного левомицетина 9 белым мышам по 0,1 мл (10 мг), 7 морским свинкам по 2,0 мл (200 мг), 17 поросятам массой 3-4 кг по 10 мл (1 г) и 13 телятам массой 40-50 кг по 15-20 мл (1,5-2,0 г) не вызывало некротических изменений на месте введения и клинически выраженных токсических признаков при отсутствии падежа животных.
Пример 3. Лечение коров, больных маститом
Интрацистерное введение 28 коровам, больных гнойнокатаральным маститом коммерческого левомицетина в объеме 4-5 мл вызывало выздоровление животных через 8-10 дней, а при лечении 36 коров модифицированным левомицетином выздоровление животных происходило через 4-5 суток, т.е. практически вдвое сократились сроки лечения. При этом выделение из пораженных долей вымени стафилококков отсутствовало.
Пример 4
Лечение 14 свиней и 12 собак при химических ожогах (5-10% раствором фенола) 2-й и 3-й степени, осложненных (обсемененной) патогенной микрофлорой, вызывало улучшение общего состояния животных и раневой поверхности после 2-3 перевязок с модифицированным левомицетином. В таблице 1 приведены сводные данные спектра действия модифицированного и коммерческого хлортетрациклина (МНИК, ЕД, мкг/мл).
Где ИД - содержание инфекционных доз в 1 мл культуральной и эмбриональной жидкости.
Из данных, представленных в таблице, следует, что модифицированный левомицетин проявляет повышенную эффективность в 4-5 раз в отношении золотистого стафилококка, кишечной и синегнойной палочки и сальмонелл вирусоцидное действие к поксвирусам, парвовирусам собак, панлейкимии кошек и б. Ньюкасла и плесневым грибам в минимальных концентрациях. В то же время коммерческий (производственный) левомицетин не действовал на вирусы и плесневые грибы.
Таблица 1
Сводные данные спектра действия модифицированного и коммерческого хлортетрациклина (МНИК, ЕД, мкг/мл)
№ п/п
Активность в отношении возбудителей
Концентрация микроорганизмов
Коммерческий левомицетин
Модифицированный левомицетин
1.
S.aureus
100000/мл
1-1,5 мг/мл
250-500 мкг/мл
2.
E.coli
100000/мл
1,0-1,2 мг/мл
200-300 мкг/мл
3.
S.enteriditis
100000/мл
1,2-1,3 мг/мл
250-350 мкг/мл
4.
Pseudomonas aeruginosa
100000/мл
1,3-1,5 мг/мл
500-600 мкг/мл
5.
Поксвирус (миксоматоз)
10<sup>6</sup> ИД/мл
Не действует
200-250 мкг/мл
6.
Поксвирус (фиброматоз)
10<sup>6</sup> ИД/мл
-
200-250 мкг/мл
7.
Парамиксовирус (б. Ньюкасла)
10<sup>6</sup> ИД/мл
-
250-300 мкг/мл
8.
Парвовирус собак
10<sup>6</sup> ИД/мл
-
250-300 мкг/мл
9.
Панлейкимия кошек
10<sup>6</sup> ИД/мл
-
250-300 мкг/мл
10.
Candida albicans
Сплошной рост
-
10-25 мкг/мл
11.
Aspergillus niger
Сплошной рост
-
10-25 мкг/мл
12.
Aspergillus flavus
-
-
10-25 мкг/мл