ЭРИТРОПОЭТИН И АНАЛОГИ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ

1. Полипептид эритропоэтина (ЭПО), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 13, за исключением присутствия по меньшей мере одного N-связанного сайта гликозилирования, отсутствующего в SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 13, причем N-связанный сайт гликозилирования содержит последовательность аспарагин-xaa-серин или аспарагин-xaa-треонин, где xaa представляет собой любую аминокислоту, кроме пролина, и где один N-связанный сайт гликозилирования не перекрывается с другим N-связанным сайтом гликозилирования.
2. Полипептид ЭПО по п.1, в котором каждый из по меньшей мере одного N-связанного сайта гликозилирования присутствует в:
а) положении, выбранном из положений 47-49, 55-57, 56-58, 60-62, 61-63, 79-81, 82-84, 91-93, 92-94, 97-99, 98-100, 99-101, 112-114, 113-115, 114-116, 115-117, 116-118, 137-139, 140-142, 141-143, 142-144, 143-145, 144-146, 145-147, 146-148, 147-149, 148-150, 149-151, 150-152, 161-163, 162-164, 184-186 и 186-188 в SEQ ID NO: 2; или
b) положении, выбранном из положений 21-23, 29-31, 30-32, 34-36, 35-37, 53-55, 56-58, 65-67, 66-68, 71-73, 72-74, 73-75, 86-88, 87-89, 88-90, 89-91, 90-92, 111-113, 114-116, 115-117, 116-118, 117-119, 118-120, 119-121, 120-122, 121-123, 122-124, 123-125, 124-126, 135-137, 136-138, 158-160 и 162-164 в SEQ ID NO: 13.
3. Полипептид ЭПО по п.1 или 2, содержащий валин в положении, соответствующем положению 113 в SEQ ID NO: 4.
4. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-4, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 47 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 48 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 49 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 22 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 23 в SEQ NO: 13.
5. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-5, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 55 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 56 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 57 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 29 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 30 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 31 в SEQ NO: 13.
6. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-5, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 56 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 57 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 58 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 30 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 31 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 32 в SEQ NO: 13.
7. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-6, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 60 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 61 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 62 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 34 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 35 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 36 в SEQ NO: 13.
8. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-7, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 61 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 62 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 63 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 35 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 36 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 37 в SEQ NO: 13.
9. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-8, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 79 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 80 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 81 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 53 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 54 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 55 в SEQ NO: 13.
10. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-9, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 82 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 83 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 84 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 56 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 57 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 58 в SEQ NO: 13.
11. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-10, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 91 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 92 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 65 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 66 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 67 в SEQ NO: 13.
12. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-11, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 92 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 94 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 66 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 67 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 68 в SEQ NO: 13.
13. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-12, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 97 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 99 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 71 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 92 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 73 в SEQ NO: 13.
14. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-13, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 99 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 100 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 72 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 73 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 74 в SEQ NO: 13.
15. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-14, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 99 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 100 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 101 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 73 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 74 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 75 в SEQ NO: 13.
16. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-15, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 112 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 113 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 114 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 86 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 88 в SEQ NO: 13.
17. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-16, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 113 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 114 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 115 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 88 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 89 в SEQ NO: 13.
18. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-17, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 114 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 115 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 116 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 88 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 89 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 90 в SEQ NO: 13.
19. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-18, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 115 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 116 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 117 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 89 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 90 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 91 в SEQ NO: 13.
20. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-19, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 115 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 116 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 117 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 89 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 90 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 91 в SEQ NO: 13.
21. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-20, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 116 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 117 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 118 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 90 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 91 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 92 в SEQ NO: 13.
22. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-21, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 137 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 138 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 139 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 111 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 112 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 113 в SEQ NO: 13.
23. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-22, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 140 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 141 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 142 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 114 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 115 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 116 в SEQ NO: 13.
24. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-23, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 141 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 142 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 143 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 115 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 116 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 117 в SEQ NO: 13.
25. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-24, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 142 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 143 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 144 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 116 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 117 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 118 в SEQ NO: 13.
26. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-25, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 143 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 144 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 145 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 117 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 118 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 119 в SEQ NO: 13.
27. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-26, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 144 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 145 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 146 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 118 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 119 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 120 в SEQ NO: 13.
28. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-27, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 145 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 146 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 147 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 119 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 120 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 121 в SEQ NO: 13.
29. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-28, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 146 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 147 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 148 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 120 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 121 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 122 в SEQ NO: 13.
30. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-29, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 147 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 148 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 149 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 121 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 122 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 123 в SEQ NO: 13.
31. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-30, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 148 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 149 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 150 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 122 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 123 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 124 в SEQ NO: 13.
32. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-31, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 149 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 150 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 151 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 123 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 124 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 125 в SEQ NO: 13.
33. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-32, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 150 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 151 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 152 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 124 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 125 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 126 в SEQ NO: 13.
34. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-33, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 161 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 162 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 163 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 135 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 136 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 137 в SEQ NO: 13.
35. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-34, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 162 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 163 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 164 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 136 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 137 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 138 в SEQ NO: 13.
36. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-35, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 162 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 163 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 164 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 136 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 137 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 138 в SEQ NO: 13.
37. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-36, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 184 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 185 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 186 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 158 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 159 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 160 в SEQ NO: 13.
38. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-37, содержащий:
а) аспарагин в положении, соответствующем положению 186 в SEQ ID NO: 2, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 187 в SEQ ID NO: 2, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 188 в SEQ ID NO: 2; или
b) аспарагин в положении, соответствующем положению 162 в SEQ ID NO: 13, любую аминокислоту, кроме пролина, в положении, соответствующем положению 163 в SEQ ID NO: 13, и серин или треонин в положении, соответствующем положению 164 в SEQ NO: 13.
39. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-38, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.
40. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-39, в котором N-связанный сайт гликозилирования содержит производное аминокислоты.
41. Полипептид ЭПО по п.40, в котором производное аминокислоты представляет собой производное аспарагина, производное серина или производное треонина.
42. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-41, который является гликозилированным.
43. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-42, содержащий по меньшей мере один фрагмент гликана, присоединенный к N-связанному сайту гликозилирования.
44. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-43, который является пегилированным.
45. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-44, который является пегилированным по гликану.
46. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-45, который является пегилированным по первичному амину.
47. Полипептид ЭПО по любому из пп.1-46, который является пегилированным по N-концевому альфа-амину.
48. Композиция, содержащая множество полипептидов ЭПО по любому из пп.1-47, имеющих изоэлектрические точки в диапазоне от примерно 1 до примерно 3,5, от примерно 1,5 до примерно 3,5, от примерно 2 до примерно 3,5, от примерно 2,5 до примерно 3,5, от примерно 3 до примерно 3,5, примерно 3,5 или менее или примерно 3 или менее, определенные методом изоэлектрического фокусирования.
49. Композиция, содержащая множество полипептидов ЭПО по любому из пп.1-47, имеющих изоэлектрические точки в диапазоне от примерно 3,5 до примерно 6, от примерно 4 до примерно 6, от примерно 4,5 до примерно 6, от примерно 5 до примерно 6, от примерно 5,5 до примерно 6, от примерно 3,5 до примерно 5, от примерно 4 до примерно 5, от примерно 4,5 до примерно 5, примерно 3,5 или более, примерно 4 или более, примерно 4,5 или более, определенные методом изоэлектрического фокусирования.
50. Комбинация, содержащая композицию по п.48 и композицию по п.49.
51. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид ЭПО по любому из пп.1-41.
52. Нуклеиновая кислота по п.51, содержащая регуляторную последовательность.
53. Нуклеиновая кислота по п.52, в которой регуляторная последовательность представляет собой конститутивный промотор; индуцибельную регуляторную последовательность, такую как элемент ответа тетрациклина или индуцируемый гипоксией промотор; тканеспецифичный промотор; энхансер; сайленсер; или кодирует микроРНК или фактор транскрипции.
54. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид ЭПО, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 13; и гетерологичную регуляторную последовательность, при этом гетерологичная регуляторная последовательность не является конститутивным промотором.
55. Нуклеиновая кислота по п.54, в которой гетерологичная регуляторная последовательность представляет собой индуцибельную регуляторную последовательность, такую как элемент ответа тетрациклина или индуцируемый гипоксией промотор; тканеспецифичный промотор; энхансер; сайленсер; или кодирует микроРНК или фактор транскрипции.
56. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из пп.51-55.
57. Вектор по п.56, представляющий собой вирусный вектор или бактериальный вектор.
58. Вектор по п.56 или 57, представляющий собой ретровирусный вектор, герпесвирусный вектор, аденовирусный вектор, вектор аденоассоциированного вируса или поксвирусный вектор.
59. Система экспрессии, содержащая первый вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид ЭПО по любому из пп.1-41; и второй вектор, содержащий регуляторную последовательность.
60. Система экспрессии, содержащая первый вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид ЭПО, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 13; второй вектор, содержащий регуляторную последовательность.
61. Система экспрессии по п.59 или 60, в которой регуляторная последовательность кодирует микроРНК или фактор транскрипции.
62. Система экспрессии по п.60 или 61, в которой первый вектор и/или второй вектор представляет собой вирусный вектор или бактериальный вектор.
63. Система экспрессии по любому из пп.60-62, в которой первый вектор и/или второй вектор представляет собой ретровирусный вектор, герпесвирусный вектор, аденовирусный вектор, вектор аденоассоциированного вируса или поксвирусный вектор.
64. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп.51-55, вектор по любому из пп.56-58 или систему экспрессии по любому из пп.59-63.
65. Способ получения композиции, содержащей полипептиды ЭПО, включающий культивирование клетки-хозяина по п.64 и выделение полипептидов ЭПО.
66. Способ по п.65, в котором полипептиды ЭПО выделяют методом колоночной хроматографии.
67. Способ по п.65 или 66, в котором полипептиды ЭПО выделяют с помощью ионообменной колоночной хроматографии.
68. Способ по любому из пп.65-67, в котором полипептиды ЭПО выделяют с помощью Capto Butyl колоночной хроматографии, катионообменной колоночной хроматографии или анионообменной колоночной хроматографии.
69. Способ по любому из пп.65-68, в котором полипептиды ЭПО выделяют с помощью колоночной хроматографии со смешанным режимом.
70. Способ по любому из пп.65-69, в котором полипептиды ЭПО выделяют колоночной хроматографией гидрофобного взаимодействия.
71. Способ по любому из пп.65-70, в котором полипептиды ЭПО выделяют с помощью комбинации хроматографических колонок.
72. Способ по любому из пп.65-71, дополнительно включающий инактивацию и/или удаление вирусов.
73. Способ по любому из пп.65-72, в котором полипептиды ЭПО имеют изоэлектрические точки в диапазоне от примерно 1 до примерно 3,5, от примерно 1,5 до примерно 3,5, от примерно 2 до примерно 3,5, от примерно 2,5 до примерно 3,5, от примерно 3 до примерно 3,5, примерно 3,5 или менее или примерно 3 или менее, определенные методом изоэлектрического фокусирования.
74. Способ по любому из пп.65-72, в котором полипептиды ЭПО имеют изоэлектрические точки в диапазоне от примерно 3,5 до примерно 6, от примерно 4 до примерно 6, от примерно 4,5 до примерно 6, от примерно 5 до примерно 6, от примерно 5,5 до примерно 6, от примерно 3,5 до примерно 5, от примерно 4 до примерно 5, от примерно 4,5 до примерно 5, примерно 3,5 или более, примерно 4 или более или примерно 4,5 или более, определенные методом изоэлектрического фокусирования.
75. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид ЭПО по любому из пп.1-47, композицию по п.48 или 49, комбинацию по п.50, нуклеиновую кислоту по любому из пп.51-55, вектор по любому из пп.56-58 или систему экспрессии по любому из пп.59-63; и фармацевтически приемлемый носитель.
76. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид ЭПО и фармацевтически приемлемый носитель, причем фармацевтически приемлемый носитель содержит а) фосфат натрия, хлорид натрия и полисорбат 80; b) фосфат натрия, хлорид натрия и полисорбат 20; с) цитрат натрия, хлорид натрия и полисорбат 80; или d) цитрат натрия, хлорид натрия и полисорбат 20.
77. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид ЭПО и фармацевтически приемлемый носитель, причем фармацевтически приемлемый носитель содержит цитрат натрия, хлорид натрия, полисорбат 80 и м-крезол.
78. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид ЭПО и фармацевтически приемлемый носитель, причем фармацевтически приемлемый носитель содержит фосфат натрия, хлорид натрия, полисорбат 20 и бензиловый спирт.
79. Фармацевтическая композиция по любому из пп.76-78, в которой концентрация хлорида натрия составляет примерно 140 мМ.
80. Фармацевтическая композиция по любому из пп.76-79, в которой концентрация фосфата натрия или цитрата натрия составляет примерно 20 мМ.
81. Фармацевтическая композиция по любому из пп.76-80, в которой концентрация полисорбата 20 или полисорбата 80 составляет примерно 650 нМ.
82. Фармацевтическая композиция по любому из пп.77 или 79-81, в которой концентрация м-крезола составляет примерно 0,2%.
83. Фармацевтическая композиция по любому из пп.78-82, в которой концентрация бензилового спирта составляет примерно 1%.
84. Фармацевтическая композиция по любому из пп.76-83, отличающаяся тем, что указанный полипептид содержит:
а) фосфат натрия в концентрации примерно 20 мМ, хлорид натрия в концентрации примерно 140 мМ, полисорбат 80 в концентрации примерно 650 нМ или
b) фосфат натрия в концентрации примерно 20 мМ, хлорид натрия в концентрации примерно 140 мМ, полисорбат 20 в концентрации примерно 650 нМ.
85. Фармацевтическая композиция по любому из пп.76-84, в которой фармацевтически приемлемый носитель содержит цитрат натрия в концентрации примерно 20 мМ, хлорид натрия в концентрации примерно 140 нМ, полисорбат 80 в концентрации примерно 650 нМ и м-крезол в концентрации примерно 0,2%.
86. Фармацевтическая композиция по любому из пп.76-85, в которой фармацевтически приемлемый носитель содержит фосфат натрия в концентрации примерно 20 мМ, хлорид натрия в концентрации примерно 140 нМ, полисорбат 20 в концентрации примерно 650 нМ и бензиловый спирт в концентрации примерно 1%.
87. Фармацевтическая композиция по любому из пп.76-86, в которой полипептид ЭПО представляет собой полипептид ЭПО по любому из пп.1-47, композицию по п.48 или 49 или комбинацию по п.50.
88. Способ доставки полипептида ЭПО виду домашнего животного, включающий парентеральное введение полипептида ЭПО по любому из пп.1-47, композиции по п.48 или 49, комбинации по п.50 или фармацевтической композиции по п.75 или 87.
89. Способ доставки полипептида ЭПО виду домашнего животного, включающий внутримышечное, внутрибрюшинное, интрацереброспинальное, подкожное, внутриартериальное, интрасиновиальное, интратекальное или ингаляционное введение полипептида ЭПО по любому из пп.1-47, композиции по п.48 или 49, комбинации по п.50 или фармацевтической композиции по п.75 или 87.
90. Способ доставки выделенной нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид ЭПО, виду домашнего животного, включающий парентеральное введение нуклеиновой кислоты по любому из пп.51-55, вектора по любому из пп.56-58 или системы экспрессии по любому из пп.59-63.
91. Способ лечения вида домашнего животного, страдающего анемией, причем способ включает введение виду домашнего животного терапевтически эффективного количества полипептида ЭПО по любому из пп.1-47, композиции по п.48 или 49, комбинации по п.50 или фармацевтической композиции по п.75 или 87.
92. Способ лечения вида домашнего животного, страдающего анемией, причем способ включает введение виду домашнего животного терапевтически эффективного количества нуклеиновой кислоты по любому из пп.51-55, вектора по любому из пп.56-58 или системы экспрессии по любому из пп.59-63.
93. Способ по п.91 или 92, в котором полипептид ЭПО, композицию, нуклеиновую кислоту, вектор, систему экспрессии или фармацевтическую композицию вводят парентерально.
94. Способ по любому из пп.91-93, в котором полипептид ЭПО, композицию, нуклеиновую кислоту, вектор, систему экспрессии или фармацевтическую композицию вводят внутримышечно, внутрибрюшинно, интрацереброспинально, подкожно, внутриартериально, интрасиновиально, интратекально или ингаляционно.
95. Способ по любому из пп.88-94, в котором вид домашнего животного относится к кошачьим, псовым или лошадиным.
96. Способ по любому из пп.91-95, в котором анемия вызвана хроническим заболеванием почек, воспалительным заболеванием кишечника или миелодисплазией.
97. Способ по любому из пп.88-96, в котором полипептид ЭПО вводят в количестве от примерно 1 мкг/кг массы тела до примерно 10 мкг/кг массы тела или примерно от 1 мкг/кг массы тела до примерно 5 мкг/кг массы тела, или примерно 1 мкг/кг массы тела, или примерно 3 мкг/кг массы тела, или примерно 5 мкг/кг массы тела, или примерно 10 мкг/кг массы тела.
98. Способ по любому из пп.88-97, в котором полипептид ЭПО, композицию, нуклеиновую кислоту, вектор, систему экспрессии или фармацевтическую композицию вводят каждые 7-10 дней.
99. Способ по любому из пп.88-98, включающий введение декстрана железа.
100. Способ по любому из пп.88-99, в котором до введения полипептида ЭПО, композиции, нуклеиновой кислоты, вектора, системы экспрессии или фармацевтической композиции вид домашнего животного имеет исходный уровень гематокрита от примерно 15% до примерно 30%, от примерно 15% до примерно 25%, от примерно 20% до примерно 25%, от примерно 25% до примерно 30%, менее примерно 15%, менее примерно 18%, менее примерно 20%, менее примерно 25%, менее примерно 29% или менее примерно 30%.
101. Способ по любому из пп.88-100, в котором после введения полипептида ЭПО, композиции, нуклеиновой кислоты, вектора, системы экспрессии или фармацевтической композиции процент гематокрита у вида домашнего животного увеличивается до по меньшей мере 25%, или до по меньшей мере 26%, или до по меньшей мере 27%, или до по меньшей мере 28%, или до по меньшей мере 29%, или до по меньшей мере 30%, или до по меньшей мере 32%, или до по меньшей мере 35%, или до по меньшей мере 38%, или до по меньшей мере 40%, или до по меньшей мере 42%, или до по меньшей мере 45%, или до по меньшей мере 48%.
102. Способ по п.101, в котором процент гематокрита у вида домашнего животного увеличивается до по меньшей мере 25%, или до по меньшей мере 27%, или до по меньшей мере 30%, или до по меньшей мере 32%, или до по меньшей мере 35% через 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель или 6 недель после первого введения полипептида ЭПО, композиции, нуклеиновой кислоты, вектора, системы экспрессии или фармацевтической композиции.
103. Способ по любому из пп.88-102, в котором масса тела вида домашнего животного сохраняется или увеличивается по сравнению с исходным уровнем после введения полипептида ЭПО, композиции, нуклеиновой кислоты, вектора, системы экспрессии или фармацевтической композиции.
104. Способ по п.103, в котором масса тела вида домашнего животного сохраняется или увеличивается через 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель или 6 недель после первого введения полипептида ЭПО, композиции, нуклеиновой кислоты, вектора, системы экспрессии или фармацевтической композиции.
105. Способ по любому из пп.88-104, в котором уровень симметричного диметиларгинина или сывороточного креатина в качестве почечного биомаркера снижается по сравнению с исходным уровнем после введения полипептида ЭПО, композиции, нуклеиновой кислоты, вектора, системы экспрессии или фармацевтической композиции.
106. Способ экспрессии полипептида ЭПО в клетке-мишени, включающий:
а) перенос нуклеиновой кислоты, вектора или системы экспрессии в клетку-мишень, причем нуклеиновая кислота, вектор или система экспрессии содержит:
i) нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид ЭПО по любому из пп.1-41, и
ii) регуляторную последовательность; и
b) культивирование клетки в условиях, поддерживающих экспрессию полипептида ЭПО.
107. Способ экспрессии полипептида ЭПО в клетке-мишени, включающий:
а) перенос нуклеиновой кислоты, вектора или системы экспрессии в клетку-мишень, причем нуклеиновая кислота, вектор или система экспрессии содержит:
i) нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид ЭПО, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, или полипептид ЭПО, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, и
ii) регуляторную последовательность, причем регуляторная последовательность не является конститутивным промотором; и
b) культивирование клетки в условиях, поддерживающих экспрессию полипептида ЭПО.
108. Способ по п.106 или 107, в котором регуляторная последовательность представляет собой индуцибельную регуляторную последовательность, такую как элемент ответа тетрациклина или индуцируемый гипоксией промотор; тканеспецифичный промотор; энхансер; сайленсер; или кодирует микроРНК или фактор транскрипции.
109. Способ по любому из пп.106-108, в котором вектор представляет собой вирусный вектор или бактериальный вектор.
110. Способ по любому из пп.106-109, в котором вектор представляет собой ретровирусный вектор, герпесвирусный вектор, аденовирусный вектор, вектор аденоассоциированного вируса или поксвирусный вектор.
111. Способ по любому из пп.106-110, в котором клетка представляет собой клетку вида домашнего животного.
112. Способ по любому из пп.106-111, в котором клетка находится в организме живого вида домашнего животного.
113. Способ по п.111 или 112, в котором вид домашнего животного относится к псовым, кошачьим или лошадиным.
114. Полипептид эритропоэтина (ЭПО), содержащий:
а) по меньшей мере, одну аминокислотную замену в положении, соответствующем положению, выбранному из положения: 5, 8, 10, 11, 14, 15, 78, 96, 97, 99, 100, 103, 104, 107, 108 или 110 в SEQ ID NO: 13;
b) по меньшей мере, одну аминокислотную замену в SEQ ID NO: 9, которая соответствует положению, выбранному из положения: 5, 8, 10, 11, 14, 15, 78, 96, 97, 99, 100, 103, 104, 107, 108 или 110 в SEQ ID NO: 13;
c) по меньшей мере, одну аминокислотную замену в SEQ ID NO: 10, которая соответствует положению, выбранному из положения: 5, 8, 10, 11, 14, 15, 78, 96, 97, 99, 100, 103, 104, 107, 108 или 110 в SEQ ID NO: 13;
d) по меньшей мере одну аминокислотную замену в SEQ ID NO: 11, которая соответствует положению, выбранному из положения: 5, 8, 10, 11, 14, 15, 78, 96, 97, 99, 100, 103, 104, 107, 108 или 110 в SEQ ID NO: 13; или
е) по меньшей мере, одну аминокислотную замену в SEQ ID NO: 12, которая соответствует положению, выбранному из положения: 5, 8, 10, 11, 14, 15, 78, 96, 97, 99, 100, 103, 104, 107, 108 или 110 в SEQ ID NO: 13.
115. Полипептид ЭПО по п.114, в котором по меньшей мере одна аминокислотная замена представляет собой:
а) замену в положении, соответствующем положению 103 в SEQ ID NO: 13;
b) замену в SEQ ID NO: 9, которая соответствует положению 103 в SEQ ID NO: 13;
c) замену в SEQ ID NO: 10, которая соответствует положению 103 в SEQ ID NO: 13;
d) замену в SEQ ID NO: 11, которая соответствует положению 103 в SEQ ID NO: 13; или
е) замену в SEQ ID NO: 12, которая соответствует положению 103 в SEQ ID NO: 13.
116. Полипептид ЭПО по п.114 или 115, в котором аланин замещен в положении, соответствующем положению 103 в SEQ ID NO: 13.
117. Полипептид ЭПО по любому из пп.114-116, в котором по меньшей мере одна аминокислотная замена содержит замену производным аминокислоты.
118. Полипептид ЭПО по любому из пп.114-117, в котором полипептид ЭПО содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 19.
119. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 19.
120. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид ЭПО по любому из пп.114-119.
121. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п.120.
122. Способ получения композиции, содержащей полипептиды ЭПО, включающий культивирование клетки-хозяина по п.121 и выделение полипептидов ЭПО.
123. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид ЭПО по любому из пп.114-119 и фармацевтически приемлемый носитель.
124. Фармацевтическая композиция по любому из пп.76-86, в которой полипептид ЭПО представляет собой полипептид ЭПО по любому из пп.114-119.
125. Полипептид, содержащий внеклеточный домен полипептида рецептора кошачьего эритропоэтина (ЭПОр), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 31; и гетерологичную полипептидную последовательность.
126. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 31; и гетерологичную полипептидную последовательность.
127. Полипептид по п.125 или 126, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 22.
128. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по любому из пп.125-127.
129. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п.128.
130. Способ получения полипептида, включающий культивирование клетки-хозяина по п.130 и выделение полипептида.
131. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по любому из пп.126-127 и фармацевтически приемлемый носитель.
132. Способ лечения субъекта, страдающего полицитемией, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества полипептида ЭПО по любому из пп.114-119, полипептида по любому из пп.125-127, нуклеиновой кислоты по п.120 или 128, или фармацевтической композиции по пп.123, 124 или 131.
133. Способ по п.132, в котором полипептид ЭПО, полипептид, нуклеиновую кислоту или фармацевтическую композицию вводят парентерально.
134. Способ по п.132 или 133, в котором полипептид ЭПО, полипептид, нуклеиновую кислоту или фармацевтическую композицию вводят внутримышечно, внутрибрюшинно, интрацереброспинально, подкожно, внутриартериально, интрасиновиально, интратекально или ингаляционно.
135. Способ по любому из пп.132-134, в котором субъект представляет собой вид домашнего животного.
136. Способ по п.135, в котором вид домашнего животного относится к псовым, кошачьим или лошадиным.
137. Способ по любому из пп.132-134, в котором субъект представляет собой человека.
138. Способ по любому из пп.132-137, в котором полицитемия вызвана мутацией в JAK2, избыточным продуцированием и/или секрецией ЭПО из опухоли.