СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ РАДИОИММУНОКОНЪЮГАТОВ

1. Способ получения радиоконъюгата актиния-225 (Ac-225), включающий стадии
(a) конъюгирования хелатообразующего агента с биологической молекулой в конъюгирующей реакционной смеси для получения конъюгированной биологической молекулы,
(b) очистки реакционной смеси ддя удаления неконъюгированных хелатообразующих агентов и
(c) хелатирования одного или нескольких Ас-225 радионуклидов с конъюгированной биологической молекулой в хелатообразующей реакционной смеси для получения Ас-225 радиоконъюгата.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что конъюгирование на стадии (a) включает инкубацию конъюгирующей реакционной смеси в течение приблизительно 1,5 часов при температуре приблизительно 37ºC.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что конъюгирование на стадии (a) включает инкубацию конъюгирующей реакционной смеси в течение приблизительно 24 часов при температуре от приблизительно 16ºC до приблизительно 20ºC.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что очистка включает фильтрацию конъюгирующей реакционной смеси через фильтр таким образом, чтобы очистить конъюгированную биологическую молекулу.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что конъюгирующая реакционная смесь содержит бикарбонатный буфер.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что конъюгирующая реакционная смесь содержит фосфатный буфер.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что конъюгирующая реакционная смесь имеет уровень pH от приблизительно 8,0 до приблизительно 9,2.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что фильтрация выполняется в ГЭПЭС буфере.
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что фильтрация выполняется в NaAc буфере.
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что фильтрация включает отсечение молекулярной массы, по меньшей мере приблизительно равной 10000 Да, по меньшей мере приблизительно 20000 Да, или по меньшей мере приблизительно 40000 Да.
11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что хелатообразующая реакционная смесь содержит гентизиновую кислоту или аскорбиновую кислоту.
12. Способ по п. 1, отличающийся тем, что хелатообразующая реакционная смесь имеет уровень pH, равный от приблизительно 5,5 до приблизительно 7,0.
13. Способ по п. 1, отличающийся тем, что хелатирование на стадии (c) включает инкубирование одного или более радионуклидов Ac-225 с конъюгированной биологической молекулой в течение приблизительно 1,5 часов при температуре, приблизительно равной 37ºC.
14. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дополнительно включает стадию добавления терминирующего хелатора к хелатообразующей реакционной смеси.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что терминирующий хелатор представляет собой диэтилентриаминпентауксусную кислоту (ДТПК).
16. Способ по п. 14, отличающийся тем, что дополнительно включает стадию инкубирования хелатообразующей реакционной смеси в течение приблизительно 30 минут при температуре, приблизительно равной 37ºC, следующую за стадией добавления терминирующего хелатора.
17. Способ по п. 1, отличающийся тем, что биологическая молекула содержит белок, пептид, полинуклеотид, их комбинацию или их производные.
18. Способ по п. 1, отличающийся тем, что биологическая молекула представляет собой антитело, его антигенсвязывающий фрагмент, одноцепочечный белок, содержащий антигенсвязывающие полипептидные последовательности антитела, однодоменное антитело, аналог любого из вышеизложенных или производное любого из вышеизложенных.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что антигенсвязывающий фрагмент представляет собой вариабельный регион моноклонального антитела.
20. Способ по п. 1, отличающийся тем, что биологическая молекула представляет собой белок, включающий антигенсвязывающую последовательность антитела.
21. Способ по п. 1, отличающийся тем, что биологическая молекула является белком, полученным естественным, синтетическим или рекомбинантным образом, включающим антигенсвязывающую последовательность антитела, которое связывает антиген на поверхности клетки.
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что антиген на поверхности клетки-мишени представляет собой CD-33.
23. Способ по п. 1, отличающийся тем, что биологическая молекула представляет собой HuM195.
24. Способ по п. 1, отличающийся тем, что радиоконъюгат является радиоиммуноконъюгатом.
25. Способ по п. 1, отличающийся тем, что хелатообразующий агент представляет собой бифункциональный хелатообразующий агент.
26. Способ по п. 25, отличающийся тем, что бифункциональный хелатообразующий агент представляет собой S-2-(4-изотиоцианатобензил)-1,4,7,10-тетраазациклододекантетрауксусную кислоту (пара-SCN-Bn-ДОТУК).
27. Способ по п. 1, отличающийся тем, что хелатообразующий агент выбирают из группы соединений, состоящей из диэтилентриаминпентауксусной кислоты ("ДТПК"); 1,4,7,10-тетраазациклододекан-N,N',N'',N'''-тетрауксусной кислоты ("ДОТУК"); пара-изотиоцианатобензил-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусной кислоты ("пара-SCN-Bz-ДОТУК"); 1,4,7,10-тетраазациклододекан-N,N',N''-триуксусной кислоты ("ДО3УК"); 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетракис(2-пропионовой кислоты) ("ДОТПК"); 3,6,9-триаза-12-окса-3,6,9-трикарбоксиметилен-10-карбокси-13-фенилтридеканоевой кислоты ("B-19036"); 1,4,7-триазациклононан-N,N',N''-триуксусной кислоты ("НОТУК"); 1,4,8,11-тетраазациклотетрадекан-N,N',N'',N'''-тетрауксусной кислоты ("ТЕТУК"); триэтилентетраамингексауксусной кислоты ("ТТГУК"); транс-1,2-диаминогексантетрауксусной кислоты ("трансДТУК"); 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-(2-гидроксипропил)-4,7,10-триуксусной кислоты ("ГП-ДО3УК"); транс-циклогександиаминтетрауксусной кислоты ("ЦДТУК"); транс-(1,2)-циклогександиэтилентриаминпентауксусной кислоты ("ЦДТПУК"); 1-окса-4,7,10-триазациклододекан-N,N',N''-триуксусной кислоты ("ОТТУК"); 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетракис-{3-(4-карбоксил)бутановой кислоты}; 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетракис(уксусной кислоты метиламид); 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетракис(метиленфосфоновой кислоты); 2,2',2''-(10-(2-(2,5-диоксопирролидин-1-илокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триил)триуксусной кислоты (ДОТУК-NHS эфира) и их производных, аналогов и смесей.
28. Способ получения [Ac-225]-пара-SCN-Bn-ДОТУК/HuM195 радиоиммуноконъюгата, включающий стадии
(a) конъюгирования пара-SCN-Bn-ДОТУК с антителом HuM195 в конъюгирующей реакционной смеси, содержащей бикарбонатный буфер и имеющей уровень pH, равный от приблизительно 8,0 до приблизительно 9,2, в течение приблизительно 1,5 часов при температуре приблизительно 37ºC для получения пара-SCN-Bn-ДОТУК/HuM195 иммуноконъюгата,
(b) фильтрации конъюгирующей реакционной смеси через фильтр, имеющий отсечение молекулярной массы по меньшей мере приблизительно 10000 Да, по меньшей мере приблизительно 20000 Да, или по меньшей мере приблизительно 40000 Да таким образом, чтобы очистить p пара-SCN-Bn-ДОТУК/HuM195 иммуноконъюгат, где фильтрация осуществляется с помощью ГЭПЭС буфера или NaAc буфера,
(c) хелатирования одного или нескольких радионуклидов актиния-225 с иммуноконъюгатом пара-SCN-Bn-ДОТУК/HuM195 в хелатообразующей реакционной смеси, включающей гентизиновую кислоту и имеющую уровень pH, равный от приблизительно 5,5 до приблизительно 7,0, в течение приблизительно 1,5 часов при температуре приблизительно 37ºC для получения [Ac-225]-пара-SCN-Bn-ДОТУК/HuM195 радиоиммуноконъюгата,
(d) добавления ДТПК к хелатообразующей реакционной смеси и
(e) инкубации хелатообразующей реакционной смеси в течение приблизительно 30 минут при температуре приблизительно 37ºC.
29. Способ по п. 1 или 28, отличающийся тем, что дополнительно включает стадию гель-проникающей (эксклюзионной) хроматографии через эксклюзионную смолу перед фильтрацией стадии (b).
30. Способ по п. 29, отличающийся тем, что эксклюзионная смола имеет ограничение размера эксклюзии, равное приблизительно 5000 Да.
31. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дополнительно включает очистку радиоконъюгата путем гель-проникающей (эксклюзионной) хроматографии через эксклюзионную смолу.
32. Способ по п. 28, отличающийся тем, что дополнительно включает очистку [Ac-225]-пара-SCN-Bn-ДОТУК/HuM195 радиоиммуноконъюгата путем гель-проникающей (эксклюзионной) хроматографии через эксклюзионную смолу.
33. Способ по п. 31 или 32, отличающийся тем, что эксклюзионная смола имеет ограничение размера эксклюзии, равное приблизительно 6000 Да.
34. Способ по п. 31 или 32, отличающийся тем, что эксклюзионная смола имеет ограничение размера эксклюзии, равное приблизительно 5000 Да.
35. Радиоиммуноконъюгат An Ac-225, полученный согласно способу по п. 1 или 28.