Нефтеокисляющий биопрепарат, биосорбент на его основе и способ его приготовления
OIL-OXIDIZING BIOPREPARATION, BIOSORBENT BASED ON IT AND METHOD FOR ITS PREPARATION

Изобретение относится к области биотехнологии и касается разработки состава нефтеокисляющего биопрепарата «БИОТРИН», биосорбента «ГЕОЛЕКС» для очистки грунтов, воды от нефти и нефтепродуктов и способа их приготовления.
Известен способ получения сухой формы биопрепарата с последующим хранением (Патент РФ № 2160992), заключающийся в культивировании микроорганизмов в подобранных условиях с последующим сублимационным высушиванием. Недостатком данного способа является то, что сублимационное высушивание требует значительных материальных затрат, а в процессе сушки из-за воздействия низких температур и вакуума может погибать значительная часть микроорганизмов.
Известен состав и способ получения биопрепарата для очистки морской воды от нефти (варианты) (Патент РФ № 2404138). Способ получения жидкой формы биопрепарата включает в себя глубинное культивирование концентрата суспензии штамма Phyllobacterium myrsinacearum ВКПМ В-9079 на жидкой питательной среде. Способ получения сухой формы биопрепарата включает инокуляцию жидкой бактериальной суспензией субстрата-носителя (стерильного адсорбента вермикулитового вспученного) в герметичных пакетах. После чего на адсорбенте осуществляют дополнительное поверхностное культивирование штамма. Недостатком данного способа является высокая трудоемкость получения субстрата-носителя.
Известен состав и способ получения биопрепарата для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов (Патент РФ № 2636343). Способ включает смешивание и культивирование штаммов бактерий Acinetobacter calcoaceticus ВКПМ-В-3780, Acinetobacter radioresistens BКПM-В-2838, Acinetobacter radioresistens BКПM-B-5064 до достижения оптической плотности суспензии ОD= 0,6-0,8, концентрирование до 1-5Ч1011 кл./мл, лиофильную сушку при остаточном давлении 30-50 Па, температуре источника теплоты 40 °С до остаточной влажности 0,5-1 % и упаковку в герметичную тару в среде инертного газа. Недостатком данного способа приготовления биопрепарата является высокая трудоемкость и использование лиофильной сушки, которая может привести к снижению жизнеспособности клеток бактерий.
Известен состав и способ получения биопрепарата для очистки территорий от загрязнений нефтью и нефтепродуктами (Патент РФ № 2434059), выбранный за прототип. Способ предполагает культивирование бактерий рода Pseudomonas или Rhodococcus в
жидкой питательной среде и смешивании с защитной средой (0,05 М натрий-калиевого фосфатного буфера рН 6,8 при следующем соотношении компонентов: 4 % полиглюкина,
10 % сахарозы, 4 % тиомочевины, 2 % аскорбиновой кислоты с последующим титрованием 45 % раствором гидроксида натрия до рН 6,8-7,2). Полученную смесь добавляют к сорбенту – вспученному перлитовому песку. Затем проводят контактную сушку препарата при t = 37°C до постоянной массы. Недостатком способа является трудоемкость и высокая стоимость.
Известен биосорбент для очистки воды от углеводородных загрязнений и способ его получения (Патент РФ № 2656146). Способ включает предварительную сушку измельченного до фракций 1-1,5 мм торфа при 40-50°С до влажности не более 3%, пиролиз под вакуумом при температуре 210-250°С, затем его внесение в суспензию консорциума нефтеокисляющих микроорганизмов штаммов Candida maltosa ВКПМ Y-3446 и Dietzia maris ВКПМ Ac-1824, взятых в соотношении 1:1. Изобретения обеспечивают увеличение сорбционной емкости биосорбента и повышение эффективности очистки водоемов от углеводородных загрязнений. Недостатком способа является трудоемкость.
Задачей заявленного изобретения является расширение арсенала нефтеокисляющих биопрепаратов, биосорбентов и способов их получения. Биопрепарат БИОТРИН обладает повышенной нефтеокисляющей активностью. Биосорбент на его основе обеспечивает сохранность и выживаемость клеток микроорганизмов в экологически неблагоприятных условиях. Способ позволяет реализовать приготовление биосорбента в условиях опытного производства, с последующим использованием биопрепарата или биосорбента для очистки загрязненных нефтепродуктами воды и почвы. В этом состоит технический результат.
12
9
Технический результат биопрепарата достигается тем, что нефтеокисляющий биопрепарат, содержащий культивированные штаммы микроорганизмов, согласно изобретения, содержит смесь биомасс штаммов бактерии Pseudomonas yamanorum VKM B-3033D с титром клеток 10 КОЕ/мл и дрожжей Rhodotorula glutinis VKM Y-2998D с титром клеток 10 КОЕ/мл, взятых при соотношении:
- штамм бактерий Pseudomonas yamanorum B-3033D - 0,1-99,9%
- штамм дрожжей Rhodotorula glutinis VKM Y-2998D - 0,1-99,9%,
при этом биопрепарат дополнительно содержит биомассу штамма микроводорослей Chlorella vulgaris f. Globosa IPPAS-2024 с соотношением:
- смесь биомасс штаммов бактерий и дрожжей - 50 -70%
- биомасса штамма микроводорослей - 30-50%.
Технический результат биосорбента для очистки воды и грунта от нефтяных загрязнений, достигается тем, что содержит культивированные штаммы микроорганизмов иммобилизованные на носитель, согласно изобретения, в качестве штаммов
12
9
микроорганизмов используют вышеуказанные нефтеокисляющие биопрепараты, а именно смесь биомасс штаммов бактерии Pseudomonas yamanorum VKM B-3033D с титром клеток 10 КОЕ/мл, дрожжей Rhodotorula glutinis VKM Y-2998D с титром клеток 10 КОЕ/мл и микроводорослей Chlorella vulgaris f. Globosa IPPAS-2024 с титром клеток 108 кл./мл, при этом в качестве носителя используют минеральный ионит «Ionsorb™».
12
9
Технический результат способа приготовления биосорбента достигается тем, что берут инокуляты бактерий Pseudomonas yamanorum VKM B-3033D и дрожжей Rhodotorula glutinis VKM Y-2998D, в отдельных емкостях готовят питательные среды для культивирования микроорганизмов, затем питательные растворы стерилизуют, подают в ферментеры, засевают инокулятами и культивируют бактерии Pseudomonas yamanorum VKM B-3033D до титра клеток 10 КОЕ/мл и дрожжи Rhodotorula glutinis VKM Y-2998D до титра клеток 10 КОЕ/мл, после чего культивированные бактерии и дрожжи из ферментеров поступают в камеру смешивания, дополнительно готовят питательную среду для культивирования микроводорослей, питательный раствор подают в хемостат, засевают инокулятом и культивируют микроводоросли Chlorella vulgaris f. globosa IPPAS-2024 108 кл./мл, культуральная жидкость микроводорослей смешивается с культуральной жидкостью бактерий и дрожжей в камере смешивания, полученная смесь бактерий, дрожжей и микроводорослей из камеры смешивания наносится путем разбрызгивания на носитель в виде минерального ионита «Ionsorb™» с насыпной плотностью не больше 1 см, биосорбент высушивают в термостате при температуре не выше 30°С, после окончания сушки осуществляют фасовку биосорбента в упаковочную тару.
В частном случае, часть культуральной жидкости остается в ферментерах и хемостате для последующего цикла культивирования, при этом в ферментеры и хемостат вносится новая порция простерилизованных питательных растворов.
Ниже описаны штаммы микроорганизмов, входящих в состав биопрепарата «БИОТРИН».
Штамм бактерий Pseudomonas yamanorum выделен с грунта, отобранного с участка железнодорожного полотна в г. Сыктывкаре Республики Коми, способен активизировать деструкцию нефти и нефтепродуктов в воде, в дерново-подзолистой почве, а также в масляных грунтах на участках железной дороги. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов РАН им. Скрябина. Штамму присвоен номер VKM В-3033D.
Штамм характеризуется следующими признаками:
I. Культурально-морфологические:
На среде МПА колонии точечные Ø < 1 мм, со слизистым чехлом (до 5 мм), палево-желтые, непрозрачные, блестящие, круглые, профиль выпуклый, край ровный. В среду диффундирует неоново-желтый пигмент. На средах Чапека-Докса, Виноградского и КАА окраска колоний палевая, на средах Виноградского и КАА не образует слизи. На средах Эндо и Гисса с глюкозой отмечено обильное образование слизи.
II. Физиолого-биохимические:
Аэроб с окислительным типом метаболизма. Не нуждается в факторах роста. Каталазаположительный. Способен к нитрификации. Обладает амилолитической активностью. Использует как единственный источник углеводов сахарозу, глюкозу, лактозу, маннит.
III. Данные молекулярно генетического анализа:
В классификации микроорганизмов по группам патогенности Санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 от 1 мая 2008 г. «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» данный вид (род) не значится.
4
2
0
Режим хранения штамма - длительное хранение в лиофилизированной форме в плотно запаянных стеклянных ампулах. Кратковременное хранение (для подготовки биомассы с целевым использованием) - периодические пересевы - 1 раз в 2 месяца с хранением выросшей чистой культуры на скошенном агаре среды следующего состава: на на 1000 мл воды – Пептон –  20 г, NaCl – 3,0 г; KCl – 1,0 г; MgSO×7HO –  0,5 г;  агар микробиологический – 20,0; в закрытых пробирках в холодильнике при температуре не выше +6 и не ниже +1 С.
Штамм Rhodotorula glutinis выделен в 2014 году из нефтяного шламонакопителя Усинского района Республики Коми, способный к нефтеокислению. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов РАН им. Скрябина. Штамму присвоен номер VKM Y-2998D.
Культурально-морфологические и физиолого-биохимические особенности штамма.
Колонии красные слизистые выпуклые блестящие гладкие, край ровный.
Клетки почкующиеся округлые, овальные, 2.5-6.0 Ч 4.0-8.5 мкм, с небольшой капсулой. Баллистоспоры и псевдомицелий отсутствуют.
Образование истинного мицелия и телиоспор не наблюдалось как в монокультуре, так и при скрещивании с типами спаривания Rhodosporidium babjevae Golubev, R. paludigenum Fell et Tallman и R. toruloides Banno.
Сахара не сбраживает.
Ассимилирует глюкозу, мальтозу, мелецитозу (слабо), L-арабинозу (слабо), рамнозу (медленно), сорбит, маннит, этанол. Не ассимилирует лактозу, эритрит, арабит, дульцит, инозит, глюкуронат.
Усваивает нитраты, нитриты (медленно), лизин, этиламин (слабо).
Крахмалоподобные вещества не образует.
При +37°С не растет.
В классификации микроорганизмов по группам патогенности Санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 от 1 мая 2008 г. «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» данный вид (род) не значится.
3
2
4
4
2
0
Режим хранения штамма - длительное хранение в лиофилизированной форме в плотно запаянных стеклянных ампулах. Кратковременное хранение (для подготовки биомассы с целевым использованием) – периодические пересевы – 1 раз в 2 месяца с хранением выросшей чистой культуры на скошенном агаре среды следующего состава: на 1000 мл воды - Сахароза 30 г, NaNO– 3,0 г; KHPO – 1,0 г; KCl – 0,5 г; MgSO×7HO - 0,5 г;  агар микробиологический – 20,0; в закрытых пробирках в холодильнике при температуре не выше +6 и не ниже +1 С.
Штамм микроводоросли Chlorella vulgaris f. globosa выделен в 2010 г. из почвы на стоянке оленеводов в Приполярном Урале, способен к нефтеокислению. Штамм депонирован в Коллекции микроорганизмов Института биологии Коми НЦ УрО РАН. Штамму присвоен номер IPPAS-2024.
Морфологическая характеристика штамма:
Форма клеток – шаровидная, размер от 3.3 до 13.3 мкм в диаметре. Пириноид округлый с 2-4 крахмальными зернами, хорошо заметный. Хроматофор чашевидный, зеленый. Жгутиков нет, автоспоры освобождаются путем разрыва материнской оболочки и имеют форму от неправильно шаровидной до тетраэдрической, пустые оболочки материнских клеток двух-трехдольчатые. Особенности морфологии при длительном хранении: увеличение размеров клеток за счет вакуолизации, образование бесцветных капель масла в клетках. Особенности морфологии в условиях оптимального роста: большая часть клеток находится в диапазоне 6-8 мкм.
В классификации микроорганизмов по группам патогенности Санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08 от 1 мая 2008 г. «Безопасность работы с микроорганизмами III – IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» данный вид (род) не значится.
Режим хранения штамма – для подготовки биомассы с целевым использованием – периодические пересевы – 1 раз в 2 месяца с хранением выросшей чистой культуры на скошенном агаре среды Болда следующего состава (табл. 1):
Таблица 1. Состав среды Болда
В 936 мл дистиллированной воды необходимо добавить по 10 мл раствора каждого из 6 макроэлементов и по 1 мл каждого микроэлемента и по 1 мл каждого раствора микроэлементов, затем автоклавировать. рН конечного раствора – 6.6. Среда хранится в закрытых пробирках в холодильнике при температуре не выше +6 и не ниже +1 єС.
Носитель - минеральный ионит «Ionsorb™» - глауконитовый песчаник Бондарского месторождения Тамбовской области. Предназначен для иммобилизации клеток штаммов после их смешивания в симбиотический комплекс. «Ionsorb™» выступает в качестве базы-транспорта для бактерий. При получении биосорбентов на основе «Ionsorb™» повышается эффективность закрепления (удержания) клеток микроорганизмов, сохранения их жизнеспособности и жизнеспособности внеклеточных ферментов, путем замены лиофильной сушки на иммобилизацию микроорганизмов на сорбент. В экологически неблагоприятных условиях «Ionsorb™» позволяет жить микроорганизмам в анабиозе до 10 лет.
Приготовление посевного материала (инокулята) осуществляется следующим образом.
Из пробирок с косяками штаммов Rhodotorula glutinis VKM Y-2998D, Pseudomonas yamanorum VKM В-3033D, Chlorella vulgaris f. globosa IPPAS-2024 делают бактериологической петлей пересев в конические колбы с жидкими питательными средами Чапека, МПА и Тамия, соответственно.
3
2
4
4
2
Штамм Rhodotorula glutinis готовят на стерильной питательной среде Чапека: вода сахароза, NaNO; KHPO; KCl ; MgSO×7HO г;
4
2
Штамм Pseudomonas yamanorum готовят на стерильной питательной среде МПА: вода, пептон, NaCl; KCl; MgSO×7HO
3
2
4
2
4
2
4.
Штамм Chlorella vulgaris f. globosa готовят на стерильной питательной среде Тамия: вода, КNO, KHPOХ3HO, MgSO×7HO, FeSO
Колбы ставят на шейкер для наработки инокулята при 180 об/мин, комнатной температуре, естественном освещении. После наработки инокулята, спустя 3-7 суток содержимое колб стерильно перемещают в ферментер с предварительно подготовленной и простерилизованной в автоклаве средой.
Далее инокулят в количестве от 100 мл оставляют в ферментере для приготовления следующей партии препарата.
Ниже описан состав питательных сред для приготовления биомассы культур Pseudomonas yamanorum, Rhodotorula glutinis, Chlorella vulgaris f. globosa.
4
2
Питательная среда для культивирования штамма Pseudomonas yamanorum следующего состава: вода, гидролизат куриного белка (HCP Premium), NaCl; KCl; MgSO×7HO г.
2
4
2
4
4
Питательная среда для культивирования штамма Rhodotorula glutinis следующего состава (М9): вода, дизельное топливо марки «Л», NaHPO; KHPO; NaCl; NHCl .
Питательная среда Люка (Патент РФ № 2556126) для культивирования штамма Chlorella vulgaris f. globosa: водопроводная вода, минеральный ионит «Ionsorb™», стабилизированный гашенной известью и минеральным ионитом «Ionsorb™» куриный помет при следующем соотношении компонентов:
На рис. 1 приведена технологическая линия для получения биопрепарата.
2
Технологическая линия включает: 1 – емкость с инокулятом бактерий Pseudomonas yamanorum 2 – емкость с инокулятом дрожжей Rhodotorula glutinis, 3 – емкость с инокулятом микроводорослей Chlorella vulgaris f. globosa, 4 – автоклав, 5 – емкость с питательной средой для приготовления бактерий, 6 – емкость с питательной средой для приготовления дрожжей, 7 –  емкость с питательной средой для приготовления микроводорослей, 8 – ферментер для культивирования биомассы бактерий, 9 – ферментер для культивирования биомассы дрожжей, 10 – хемостат для приготовления биомассы микроводорослей, 11 – камера смешения, 12 – трубы-разбрызгиватели, 13 – транспортерная лента, 14 – термостат, 15 – емкость с пеногасителем, 16 – баллон с CO.
Приготовление биопрепарата «БИОТРИН» осуществляется следующим образом.
3
3
12
Питательную среду для культивирования бактерий Pseudomonas yamanorum, объемом 4.5 л стерилизуют в емкости (5) в автоклаве (4) при температуре 121°С, атмосферном давлении 1.2 в течении 20 минут. Охлаждают до температуры 23-27 °С и подают в ферментер объемом на 5 литров (8). Добавляют заранее приготовленный или оставленный после предыдущего ферментирования инокулят штамма Pseudomonas yamanorum по 100 мл из емкости (1). Параметры культивирования: температура 25-30 ºС, перемешивание среды с помощью лопастной мешалки 150 об/мин, рН 6-7, аэрация через стерильный фильтр 0.5 дм воздуха на 1 дм культуральной жидкости. Культивирование жидкого препарата продолжается от 3 до 5 суток. Наработанная культуральная жидкость должна иметь титр клеток 10 КОЕ/мл.
3
3
9
Питательную среду для культивирования дрожжей Rhodotorula glutinis, объемом 4.5 л стерилизуют в емкости (6) в автоклаве (4) при температуре 121°С, атмосферном давлении 1.2, в течении 20 минут. Охлаждают до температуры 23-27°С и подают в ферментер объемом на 5 литров (9). Добавляют заранее приготовленный или оставленный после предыдущего ферментирования инокулят культуры Rhodotorula glutinis, по 100 мл из емкости (2). Параметры культивирования: температура 25-30 ºС, перемешивание среды с помощью лопастной мешалки 150 об/мин, рН 6-7, аэрация через стерильный фильтр 0.5 дм воздуха на 1 дм культуральной жидкости. Культивирование жидкого препарата продолжается от 3 до 5 суток. Наработанная культуральная жидкость должна иметь титр клеток 10 КОЕ/мл.
При интенсивном пенообразовании в качестве пеногасителя используют стерилизованное подсолнечное масло. Пеногаситель вносят из емкости (15) в ферментеры.
8
Питательную среду для культивирования микроводорослей Chlorella vulgaris f. globosa объемом 4.5 л стерилизуют в емкости (7) в автоклаве (4) при температуре 121°С, атмосферном давлении 1.2, в течении 20 минут. Охлаждают до температуры 23-27 °С и подают в стеклянный хемостат объемом на 5 литров (10). Добавляют заранее приготовленный или оставленный после предыдущего культивирования инокулят культуры Chlorella vulgaris f. globosa по 100 мл из емкости (3). Параметры культивирования: за хемостатом располагают 6 люминесцентных ламп мощностью 20 Ватт каждая. Аэрирование с помощью аквариумного насоса, подача углекислого газа 1 г/ литр /час из баллона (16) в течение трех суток. Температура 25-27 ºС. Наработанная культуральная жидкость должна иметь титр клеток 10 кл./мл.
Смешивание биомассы бактерий, дрожжей и в частном случае, микроводорослей происходит путем сливания через нижнюю часть ферментеров (8, 9) биомассы дрожжей Rhodotorula glutinis, бактерий Pseudomonas yamanorum и нижнюю часть хемостата (10) биомассы микроводорослей Chlorella vulgaris f. globosa. Часть культуральной жидкости остается для последующего цикла культивирования при этом в ферментеры и хемостат вносится новая порция простерилизованных питательных сред.
Пример 1. Проводилось изучение свойств биопрепарата в зависимости от соотношения культур микроорганизмов. В таблице 2 приведены соотношение культур и свойства биопрепарата
Таблица 2. Свойства биопрепарата «БИОТРИН» в зависимости от соотношения
Культуры микроорганизмов
Соотношение
Свойства
бактерии P. yamanorum :дрожжи R. glutinis
50%:50%
Снижение концентрации растворенных в воде углеводородов за 14 суток на 53 %. За 14 суток происходит снижение до 80 % низкомолекулярных ПАУ (от флуорена до пирена). Снижение содержания нефтепродуктов в грунте (песчанно-гравийной смеси железнодорожного полотна) за 3 суток составило 40 %.
бактерии P. yamanorum :дрожжи R. glutinis
60%:40%
Снижение концентрации растворенных в воде углеводородов за 14 суток на 50 %. За 14 суток происходит снижение до 75 % низкомолекулярных ПАУ (от флуорена до пирена). Снижение содержания нефтепродуктов в грунте (песчанно-гравийной смеси железнодорожного полотна) за 3 суток составило 42%
бактерии P. yamanorum :дрожжи R. glutinis
0.1%:99.9%
Снижение концентрации растворенных в воде углеводородов за 14 суток на 46 %. За 14 суток происходит снижение до 72 % низкомолекулярных ПАУ (от флуорена до пирена), а также отмечен прирост высокомолекулярных ПАУ (от хризена до бенз[а]пирена) на 4 %. В значительной степени за 7 суток произходит снижение доли отдельных ПАУ: флуорена, фенантрена, пирена и бенз[а]антрацена
бактерии P. yamanorum :дрожжи R. glutinis
99.9%:0.1%
Снижение содержания остаточных углеводородов за 14 суток  в воде, загрязненной отработанным маслом на 36.8 %, загрязненной нефтью на 96%, в грунте за 90 суток на 35%.
Пример 2. В частном случае проводилось изучение свойств биопрепарата в зависимости от соотношения культур бактерий, дрожжей и микроводорослей. В таблице 3 приведены соотношение культур и свойства биопрепарата
Таблица 3. Свойства биопрепарата «БИОТРИН» в зависимости от соотношения
Культуры микроорганизмов
Соотношение
Свойства
(бактерии P. yamanorumдрожжи R. glutinis):микроводоросли C. vulgaris
50%:50%
Снижение концентрации растворенных в воде углеводородов на 90-92 % за 14 суток. За 14 суток метаболизируются 83 % низкомолекулярных ПАУ (от флуорена до пирена). В значительной степени за 14 суток произошло снижение доли отдельных ПАУ: флуорена, фенантрена, флуорантена и пирена. эффективно трансформирует н-алканы С<sub>13</sub> – С<sub>25</sub> ( 35 %)
(бактерии P. yamanorumдрожжи R. glutinis):микроводоросли C.vulgaris
70%:30%
Снижение концентрации растворенных в воде углеводородов на 84 % за 30 суток. За 7 суток метаболизируются 81 % низкомолекулярных ПАУ (от флуорена до пирена). В значительной степени за 7 суток произошло снижение доли отдельных ПАУ: флуорена, фенантрена, флуорантена и пирена. эффективно трансформирует н-алканы С<sub>13</sub> – С<sub>25</sub> ( 35 %)
Приготовление биосорбента «ГЕОЛЕКС» на основе биопрепарата «БИОТРИН» осуществляется следующим образом:
Полученные культуральные жидкости микроорганизмов поступают в камеру смешения (11) и далее по трубам (12) происходит разбрызгивание биопрепарата «БИОТРИН» на носитель – минеральный ионит «Ionsorb™», который подается транспортерной лентой (13) насыпной плотностью не толще 1 см.
Высушивание происходит в термостате (14) при температуре не выше 30°С. Фасовка биосорбента ручная в упаковочную тару.
Упаковка:
Биосорбент фасуют от 1 до 15 кг в полиэтиленовый двойные пакеты, которые герметично запаяны со всех сторон.
Маркировка:
Каждую единицу упаковки снабжают этикеткой, характеризующей продукцию:
- наименование организации, в систему которой входит предприятие-изготовитель;
- наименование предприятия-изготовителя;
- масса нетто;
- дата изготовления;
- номер партии;
- гарантийный срок хранения;
- условия хранения;
- количество единиц фасовки;
- обозначение ТУ.
К каждой партии прилагается инструкция по применению биосорбента.
Транспортирование биосорбента должно производиться в соответствии с ГОСТ 59.04.070.24-83. Биосорбент транспортируется всеми видами транспорта с предохранением его от температур выше + 40 ºС и ниже - 25 ºС.
Хранение должно производится с ГОСТом 59.04.070.24-83 при температуре от +4 до +25 ºС.
Гарантийный срок хранения препарата 2-3 года со дня изготовления.
Пример 3. Проводилось изучение свойств биосорбента в зависимости от его состава. В таблице 4 приведены свойства биосорбента.
Таблица 4. Свойства биосорбента «ГЕОЛЕКС» в зависимости от состава
Состав
Свойства
Биосорбент (бактерии P. yamanorumдрожжи R. glutinis)
Снижение концентрации растворенных в воде углеводородов на 85-90 % за 7 суток. Снижение содержания нефтепродуктов в грунте (песчано-гравийной смеси железнодорожного полотна) за 3 суток составило 30 %. Срок хранения составляет 2 года
Биосорбент (бактерии P. yamanorumдрожжи R. glutinisмикроводоросли C. vulgaris)
Снижение концентрации растворенных в воде углеводородов на 90-95 % за 7 суток. Снижение содержания нефтепродуктов в грунте (песчано-гравийной смеси железнодорожного полотна) за 3 суток составило 45 %.Срок хранения составляет 3 года
Стадии производственного процесса описаны ниже.
Стадия 1.
1.1. Получение посевного материала (инокулята) бактерий, Pseudomonas yamanorum VKM В-3033D, дрожжей Rhodotorula glutinis VKM Y-2998D, микроводорослей Chlorella vulgaris f. globosa IPPAS-2024: в лаборатории (пробирка-колба), в цехе чистой культуры.
1.2. Подготовка питательных сред.
1.3. Стерилизация питательных сред в автоклаве.
1.4.Засев питательных сред инокулятом.
Стадия 2.
2.1. Культивирование (ферментация) биомассы бактерий, дрожжей, микроводорослей.
Стадия 3.
3.1. Смешивание культуральной жидкости бактерий, дрожжей и микроводорослей в камере смешения.
3.2. Разбрызгивание биопрепарата «БИОТРИН» на носитель – минеральный ионит «Ionsorb™», подаваемый на транспортерной ленте.
Стадия 4.
4.1. Высушивание биосорбента на носителе в термостате.
Стадия 5.
5.1. Расфасовка биосорбента.
К вспомогательным технологическим стадиям относятся:
- очистка и стерилизация воздуха;
- подготовка посуды и оборудования;
2
- подготовка баллона к подаче и подача CO;
- подача пеногасителя;
- этикетировка и упаковка готовой продукции.
Таким образом, предлагаемый нами биопрепарат «БИОТРИН» и на его основе биосорбент «ГЕОЛЕКС» получен на опытном производстве, опробован и показал высокую эффективность.