СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ПРОИСХОДЯЩИХ ИЗ ПУПОВИННОЙ КРОВИ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ ZNF281

1. Способ выделения происходящих из пуповинной крови стволовых клеток, экспрессирующих ZNF281, где способ включает культивирование выделенных из пуповинной крови моноцитов в культуральном сосуде, содержащем фибронектин, и получение из культуры стволовых клеток.
2. Способ по п.1, где моноциты выделяют, смешивая пуповинную кровь с Hetasep для удаления эритроцитов, и затем используют Фиколл-пак.
3. Способ получения происходящих из пуповинной крови стволовых клеток, где способ включает выделение из пуповинной крови клеток, обладающих положительной иммунологической характеристикой по отношению к ZNF281.
4. Способ по п.1, где стволовые клетки получают из клеточных колоний, образованных после 5-30 сут. после начала культивирования.
5. Способ по п.1, где фибронектин наслаивают на культуральный сосуд или где фибронектин содержится в среде для культивирования в форме сфер или трехмерных структур.
6. Способ по п.5, где культуральный сосуд покрыт фибронектином, фибронектин содержится из расчета плотности от 0,1 до 1 мг/мл.
7. Способ по п.3, где клетки, обладающие положительной иммунологической характеристикой по отношению к ZNF281, культивируют в сферической культуре или трехмерной культуре.
8. Способ по п.1, где моноциты культивируют в среде EGM-2 или SNU-1, обогащенной 20% эмбриональной телячьей сывороткой (FBS), 1~40 нг/мл bFGF, аскорбиновой кислотой 0,1~5,0 мкг/мл, 1~40 нг/мл EGF, гидрокортизоном 0,1~1 мкг/мл, 1~40 нг/мл IGF-I или 1~5 нг/мл VEGF и гепарином 20~25 мкг/мл.
9. Способ по п.1, где стадия получения стволовых клеток из культуры включает использование иммунологических свойств стволовых клеток для разделения стволовых клеток.
10. Происходящие из пуповинной крови стволовые клетки, демонстрирующие положительную иммунологическую характеристику по отношению к фактору транскрипции ZNF281.
11. Происходящие из пуповинной крови стволовые клетки по п.10, которые представляют собой плюрипотентные или мультипотентные стволовые клетки.
12. Происходящие из пуповинной крови стволовые клетки по п.10, выделенные с использованием способа по п.1, обладающие по меньшей мере одним из следующих свойств:
(a) демонстрируют положительные иммунологические характеристики по отношению к фактору транскрипции c-myc;
(b) прикрепляются к поверхности, покрывающей внеклеточный матрикс и образуют через 5-30 сут. после прикрепления клеточные колонии веретенообразной или сферической формы;
(c) демонстрирует CPDL (кумулятивный уровень удвоения популяций) со значением от 30 до 45;
(d) демонстрирует негативную иммунологическую характеристику по отношению CD14, CD31, CD34, CD45 и HLA-DR;
(e) способны дифференцироваться в мезодермальные, эндодермальные и эктодермальные клетки; и
(f) секретируют по меньшей мере один цитокин или хемокин, выбранный из группы, состоящей из TIMP-2, TGF-β, RANTES CINC-3, ЭОТАКСИНА, GM-CSF, IFN-γ, IL-1b, IL-3, IL-6, IL-8, IL-10, IL12p40, IL13, IL-16, IP-10, Лептина, MCP-2, MIG, MIP-3a, b-NGFm, sTNFRI и PFGF-bb.
13. Клеточное терапевтическое средство, содержащее происходящие из пуповинной крови стволовые клетки по п.10 или дифференцированные из них клетки.
14. Среда для культивирования стволовых клеток, включающая среду EGM-2 или SNU-1, обогащенную 20% эмбриональной телячьей сывороткой (FBS), 1~40 нг/мл bFGF, аскорбиновой кислотой 0,1~5,0 мкг/мл, 1~40 нг/мл EGF, гидрокортизоном 0,1~1 мкг/мл, 1~40 нг/мл IGF-I или 1~5 нг/мл VEGF и гепарином 20-25 мкг/мл.
15. Среда для культивирования по п.14, где стволовые клетки представляют собой взрослые стволовые клетки.
16. Способ культивирования стволовых клеток, где способ включает использование среды для культивирования по п.14 или п.15.
17. Способ увеличения «стволовости» стволовых клеток с использованием сферической культуры или трехмерной культуры стволовых клеток.
18. Способ по п.17, где для трехмерной культуры используют MEF (клетки-эмбриональные фибробласты мыши).