СПОСОБЫ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭТАПОВ ОЧИСТКИ БЕЛКА, НАХОДЯЩИХСЯ НИЖЕ ПО ПОТОКУ, С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕМБРАННОЙ ИОНООБМЕННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Способ усиления эффективности этапов хроматографии для очистки белков ниже по потоку, включающий:
a. пропускание композиции, содержащей представляющий интерес полипептид и различные загрязняющие вещества сквозь ионообменную мембрану, отличающуюся тем, что полипептид и мембрана имеют противоположный заряд, при рабочих условиях, которые состоят из буфера, имеющего pH, достаточно отличающийся от pI полипептида с целью повышения заряда полипептида, и низкой ионной силы, эффективной для предотвращения экранирования зарядов буферных ионов, которые приводят к тому, что мембрана связывает полипептид и по крайней мере одно загрязняющее вещество;
b. перегрузку ионообменной мембраны таким образом, что по меньшей мере одно загрязняющее вещество остается связанным с мембраной, тогда как представляющий интерес полипептид находится, главным образом, в элюате;
c. улавливание элюата из ионообменной мембраны, которая содержит представляющий интерес полипептид;
d. этап ионообменной хроматографии, которая имеет аналогичный предыдущей мембране заряд, которому подвергают элюат мембраны, содержащий представляющий интерес полипептид, и
e. извлечение очищенного полипептида из элюата этапа ионообменной хроматографии.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что ионообменная мембрана имеет размер пор от 0,1 до 100 нм.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что ионообменную мембрану заменяют на монолит или объемный фильтр.
4. Способ усиления эффективности этапов хроматографии для очистки белков ниже по потоку, включающий:
a. пропускание композиции, содержащей представляющий интерес полипептид и различные загрязняющие вещества, сквозь катионообменную мембрану, отличающуюся тем, что полипептид и мембрана имеют противоположный заряд, при рабочих условиях, состоящих из буфера, имеющего pH на от около 1 до около 5 единиц ниже pI полипептида, и проводимости < около 40 мСм/см, которые приводят к тому, что мембрана связывает полипептид и по крайней мере одно загрязняющее вещество;
b. перегрузку ионообменной мембраны таким образом, что по меньшей мере одно загрязняющее вещество остается связанным с мембраной, тогда как представляющий интерес полипептид находится, главным образом, в элюате;
c. улавливание элюата ионообменной мембраны, которая содержит представляющий интерес полипептид;
d. этап очистки с помощью катионообменной хроматографии, которому подвергают элюат мембраны, содержащий интересующий полипептид, и
e. извлечение очищенного полипептида из элюата этапа катионообменной хроматографии.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что катионобменная мембрана представляет собой катионобменный монолит или объемный фильтр.
6. Способ усиления эффективности этапов хроматографии для очистки белков ниже по потоку, включающий:
a. пропускание композиции, содержащей представляющий интерес полипептид и различные загрязняющие вещества, сквозь анионообменную мембрану, отличающуюся тем, что полипептид и мембрана имеют противоположный заряд, при рабочих условиях, состоящих из буфера, имеющего pH на от около 1 до около 5 единиц выше pI полипептида, и проводимости < около 40 мСм/см, которые приводят к тому, что мембрана связывает полипептид и по крайней мере одно загрязняющее вещество;
b. перегрузку анионообменной мембраны таким образом, что по меньшей мере одно загрязняющее вещество остается связанным с мембраной, тогда как представляющий интерес полипептид находится, главным образом, в элюате;
c. улавливание элюата анионообменной мембраны, которая содержит представляющий интерес полипептид;
d. этап очистки с помощью анионообменной хроматографии, которому подвергают элюат мембраны, содержащий интересующий полипептид, и
e. извлечение очищенного полипептида из элюата этапа анионообменной хроматографии.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что анионообменную мембрану заменяют анионообменным монолитом или объемным фильтром.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что мембрана представляет собой адсорбер смешанного типа.
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что загрязняющее вещество представляет собой белок клетки-хозяина.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что белок клетки-хозяина представляет собой белок яичника китайского хомячка (CHOP).
11. Способ по п. 9, отличающийся тем, что белок клетки-хозяина представляет собой белок E. coli (ECP).
12. Способ по п. 1, отличающийся тем, что загрязняющее вещество представляет собой аминогликозидный антибиотик.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что аминогликозидный антибиотик представляет собой гентамицин.
14. Способ по п. 1, отличающийся тем, что загрязняющее вещество представляет собой ионный полимер.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что ионный полимер представляет собой полиэтиленимин (PEI).
16. Способ по п. 1, отличающийся тем, что полипептид содержит область CH2/CH3.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что полипептид представляет собой антитело.
18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что антитело представляет собой моноклональное антитело.
19. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дополнительный этап(ы) очистки содержит ионообменную хроматографию.
20. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дополнительный этап(ы) очистки непрерывно осуществляют во время этапов от а до е, а указанным этапом очистки является ионообменная хроматография.
21. Способ по п. 19, отличающийся тем, что ионообменная хроматография содержит катионообменную колонку.
22. Способ по п. 19, отличающийся тем, что ионообменная хроматография содержит анионообменную колонку.
23. Способ по п. 1, который дополнительно включает получение фармацевтической композиции путем объединения очищенного полипептида с фармацевтически приемлемым носителем.