СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ SERRATIA MARCESCENS

1. Способ получения рекомбинантной эндонуклеазы Serratia marcescens, продуцируемой в E.coli, включающий стадии отмывки и растворения телец включения, рефолдинга и хроматографии белка, отличающийся тем, что рефолдинг проводится методом разбавления при концентрации рефолдируемого белка приблизительно от 0,3 до 0,5 г/л.
2. Способ по п. 1, где растворение отмытых телец включения проводят в растворе 6М мочевины в присутствии восстановителя 20 мМ 2-меркаптоэтанола при рН 8,2.
3. Способ по п. 1, где буфер для рефолдинга содержит денатурирующий агент мочевину в концентрации 1 М и подавитель агрегации глицерин в концентрации 10%.
4. Способ по п. 1, где рефолдинг проводится при использовании окислительно/восстановительной пары 0,3 mM L-цистин/5 mM 2-меркаптоэтанол.
5. Способ по п. 1, где хроматографическая очистка денатурированного и восстановленного белка из раствора телец включения проводится на сорбенте IMAC -Ni в восстанавливающих и денатурирующих условиях.
6. Способ по п. 1, где рефолдинг для получения активной формы фермента за счет образования двух внутрицепочечных дисульфидных связей проводят после проведения металлохелатной хроматографии на Ni2+IMAC Sepharose FF.
7. Способ по п. 6, где хроматографическую очистку белка из рефолдируемой смеси проводят металлохелатной хроматографией на Ni2+IMAC Sepharose FF.
8. Способ по п. 6, где полировочную очистку белка после металлохелатной хроматографии на Ni2+IMAC Sepharose FF проводят анионообменной хроматографией на DEAE Sepharose FF.
9. Способ по п. 8, где после проведения хроматографической очистки на DEAE Sepharose FF перевод в буфер готовой формы осуществляется добавлением стабилизирующих добавок непосредственно в элюат.
10. Способ по п. 1, где генно-инженерная конструкция для экспрессии в E.coli кодирует полноразмерный белок эндонуклеазы S. Marcescens, слитой с С-концевым гистагом.