Влияние дегидроэпиандростерона Сульфата на фенотип и функции Дендритных клеток in vitro

Медицинская Иммунология 2007, Т. 9, № 6, стр. 589-596 © 2007, СПб РО РААКИ

Оригинальные статьи

влияние дегидроэпиандростерона сульфата на фенотип и функции дендритных клеток in VITRO

Селедцова Н.В., Хонина Н.А., Тихонова М.А., Останин А.А., Пасман Н.М., Черных Е.Р.

ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

Резюме. Работа посвящена исследованию влияния дегидроэпиандростерона сульфата (ДГЭАС) на фенотип и свойства дендритных клеток (ДК) здоровых беременных, генерируемых из моноцитов крови в присутствии GM-CSF и IFNa. Показано, что добавление ДГЭАС (10-6М) с первых суток культивирования достоверно не влияет на субпопуляционный состав ДК. В то же время, добавление ДГЭАС на стадии дозревания приводит к увеличению количества зрелых CD83+ и активированных CD25^K, а также их предшественников (CDla+). Изменение фенотипа ДК под влиянием ДГЭАС сопровождается достоверным усилением их аллостимуляторной активности и снижением негативного контроля над количеством СD56+СD16+NK-клеток. Таким образом, ДГЭАС стимулирует генерацию, созревание и аллостимуляторную активность ДК, и одновременно ослабляет их негативную регуляцию в отношении количества СD56+СD16+NK-клеток. ДГЭАС-опосредованное изменение фенотипа и функции ДК обсуждается в качестве одного из возможных механизмов нарушения иммунологической толерантности к антигенам плода у беременных с надпочечниковой гиперандрогенией.

Ключевые слова: дегидроэпиандростерон сульфат, дендритные клетки, NK-клетки, гиперандрогения.

Seledzova N.V., Khonina N.A., Tikhonova M.A., Ostanin A.A., Passman N.M., Chernykh E.R.

effects of dehydroepiandrosterone sulfate upon phenotype and in VITBD functions of dendritic cells

Abstract. The study deals with evaluation of dehydroepiandrosterone sulfate

Адрес для переписки:

Селедцова Наталья Владимировна 630099, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская 14, НИИ клинической иммунологии СО РАМН. Тел.: (383) 228-21-01.

Факс: (383) 222-70-28.

E-mail: ct lab@mail.ru

Характерным проявлением гиперандроге-нии надпочечникового генеза является высокий уровень дегидроэпиандростерона сульфата (ДГЭАС) в сыворотке крови. Развитие беременности у женщин с гиперандрогенией сопряжено с повышенным риском самопроизвольного аборта [1, 5], в патогенезе кото-

рого значительная роль отводится не только эндокринным, но и иммунным нарушениям. В данном контексте, например, обсуждается сдвиг цитокинового баланса в сторону ТЫ медиаторов [24], а также увеличение количества и функциональной активности NK-клеток [9,

15, 31]. Наличие тесной взаимосвязи между иммунной и эндокринными системами подтверждается работами, в которых было показано прямое стимулирующее влияние ДГЭАС на цитотоксическую функцию NK-клеток [6, 28], на пролиферативную и цитокин-секреторную активность Т-лимфоцитов [21, 29, 27]. Таким образом, в период гестации повышенный уровень ДГЭАС может препятствовать формированию и/или снижать эффективность механизмов толерантности иммунной системы матери к аллоантигенам плода, что, по-видимому, и является основной причиной невынашивания беременности у женщин с ги-перандрогенией.

По данным литературы, стимулирующее действие ДГЭАС на иммунокомпетентные клетки реализуется через специфические рецепторы [19]. Однако не исключено также наличие непрямых эффектов гормона, которые могут быть связаны, например, с его регуляторным влиянием на функциональную активность дендритных клеток (ДК). Исследование непрямых, ДК-опосредованных эффектов ДГЭАС представляет особый интерес, учитывая сообщения о реципрокном взаимодействии ДК с NK-клетками [11], а также данные о важной роли ДК в поляризации ТЫ/ ^2 иммунного ответа [18, 32]. Тем не менее, в литературе практически отсутствуют сведения о характере взаимодействия ДГЭАС с ДК, о влиянии гормона на их дифференцировку, созревание и функциональную активность. Таким образом, целью настоящей работы стало исследование влияния ДГЭАС на фенотип и свойства ДК.

Материалы и методы

В исследование были включены 20 здоровых доноров крови и 17 женщин с физиологически протекающей беременностью во II триместре гестации. Все исследования проводили после получения информированного согласия женщин.

Мононуклеарные клетки (МНК) получали центрифугированием гепаринизированной венозной крови в градиенте плотности фиколла-верографина. Дозозависимый эффект ДГЭАС

(Sigma-Aldrich, Cat.No D5297) на функциональную активность МНК оценивали по уровню спонтанного и митоген-индуцированного пролиферативного ответа. Для этого МНК в концентрации 0,1 х 106/лунку культивировали в 96-луночных круглодонных планшетах в среде RPMI-1640 (Sigma-Aldrich), дополненной 0,3 мг/мл L-глютамина, 5 мМ HEPES-буфера, 100 мкг/мл гентамицина и 10% инактивированной сыворотки доноров IV (АВ) группы крови при 37°С в СО2-инкубаторе. Для стимуляции клеток использовали анти-CD3 моноклональные антитела (анти-CD3мАТ, Медбиоспектр, Москва) в конечной концентрации 1 мкг/мл в течение 72 ч. Интенсивность пролиферации оценивали по включению 3Н-тимидина (1 мкКю/лунку).

Моноциты выделяли на чашках Петри 33 мм2 (Nunclon, Дания) путем прилипания к пластику МНК (2-5 х 106/мл) в присутствии 10% сыворотки крови AB(IV) группы. ДК генерировали путем культивирования прилипающей фракции МНК во флаконах для культивирования (Falcon, UK) в течение 3 сут. в среде RPMI-1640, дополненной 10% сыворотки плодов коровы (БиолоТ, Санкт-Петербург), в присутствии GM-CSF (1000 Ед/мл, Leucomax, Шеринг-Плау, Швейцария) и IFNa (1000 Ед/мл, Роферон-А, Roche, Швейцария) с последующим дозреванием с липополисахаридом (10 мкг/мл, ЛПС Е. coli 0114:B4, Sigma-Aldrich) в течение 24 ч. Влияние ДГЭАС на фенотип ДК оценивали, добавляя гормон либо в начале культивирования, либо на стадии дозревания за 24 ч до окончания культивирования.

Фенотипирование ДК и NK-клеток проводили методом одноцветной или двуцветной проточной цитофлюориметрии (FACSCalibur, Becton Dickinson) с использованием программы Cell Quest (Becton Dickinson, США). Использовали меченые PE анти-СD1а, анти-СD123 мАТ (BD PharMingen, США), анти-СD14, анти-CD16 мАТ (Сорбент, Москва), меченые АРС анти-СD11с мАТ (BD PharMingen, США), меченые FITC анти-CD25, анти-СD83 мАТ (BD PharMingen, США) и анти-CD56 мАТ (Сорбент, Москва).

Аллостимуляторную активность ДК оценивали в реакции смешанной культуры лимфоцитов (СКЛ). В качестве отвечающих клеток использовались МНК доноров (0,1 х 106/лунку). Стимуляторами служили дендритные клетки в соотношении МНК:ДК = 10:1. Пролиферативный ответ оценивался на 5 сут. ра-

диометрически по включению 3Н-тимидина (1 мкКю/лунку), вносимого за 18 ч до окончания культивирования.

Влияние ДК, полученных в стандартных условиях или в присутствии ДГЭАС, на количество CD56+СD16- и CD56+СD16+ NK-клеток оценивали в культурах МНК, инкубированных с ДК в соотношении 3:1 в течение 24 ч.

Математическая обработка полученных результатов проводилась на персональном компьютере с использованием пакета программ <^ТАТОТЮА 5.0».

Результаты

Согласно экспериментальным данным, ДГЭАС стимулирует пролиферативную и цитокин-секреторную активность лимфоцитов крыс F344 в митоген-стимулированных культурах [21]. Кроме того, ОкаЬе Т. с соавт. было показано, что активированные Т-клетки человека также экспрессируют функциональные ДГЭАС рецепторы [19]. Учитывая эти факты, задачей первого этапа работы стала оценка влияния ДГЭАС на спонтанную и анти-CD3-индуцированную пролиферацию Т-клеток. С этой целью был проведен сравнительный анализ интенсивности пролиферативного ответа в культурах МНК доноров крови и беременных женщин в присутствии ДГЭАС в диапазоне концентраций от 10-7 до 10-5 М (рис. 1). Из данных рисунка 1Б видно, что ДГЭАС дей-

ствительно усиливает пролиферацию активированных Т-лимфоцитов, стимулированных анти-CD3-антителами. Наиболее выраженный эффект ДГЭАС проявлялся в дозе 10-6 М в культурах МНК как здоровых доноров, так и беременных женщин с исходно сниженной митогенной реактивностью Т-клеток, которая, как известно, является одним из проявлений работы механизмов гестационной иммуносупрессии [3, 4]. Интересно отметить, что ДГЭАС в дозе 10-6 М усиливал также интенсивность спонтанной пролиферации МНК (рис. 1А). Данный факт может свидетельствовать об экспрессии функциональных ДГЭАС рецепторов не только на активированных, но и на покоящихся клетках, а также о наличии среди свежевыделенных МНК крови определенного числа лимфоцитов, предакти-вированных in vivo. Таким образом, полученные нами данные, во-первых, подтвердили чувствительность МНК доноров, в том числе женщин с физиологической беременностью, к ДГЭАС-опосредованным сигналам, и, во-вторых, позволили определить оптимальную дозу гормона для последующей оценки его влияния на фенотип и свойства ДК in vitro.

Традиционно ДК получают путем культивирования прилипающей фракции монону-клеарных клеток с GM-CSF и IL-4 в течение 5-7 дней (незрелые CD^+ДК) с последующим их дозреванием в течение 24-48 ч в при-

А

беременные

Концентрация ДГЭАС (Моль) доноры

Рисунок 1. Влияние различных концентраций ДГЭАС на пролиферацию МНК здоровых доноров и беременных женщин

Примечание. Представлены средние значения (№^£.) спонтанной (А) и анти^3-стимулиированной (Б) пролиферации МНК здоровых доноров (п = 6) и женщин с физиологической беременностью (п = 10) в присутствии ДГЭАС в различных концентрациях.

Б

ТАБЛИЦА 1. ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДК, ГЕНЕРИРУЕМЫХ В СТАНДАРТНЫХ УСЛОВИЯХ И ПРИ ДОБАВЛЕНИИ ДГЭАС

Показатель Стандартные условия

В течение всего периода генерации ДК

0083+ 17,0±2,4 17,5±2,8 21,5±3,1**

CD1а+ 4,1±0,3 4,9±0,7 6,3±0,8*

CD11с+ 18,4±2,8 19,6±3,0 19,3±3,0

CD123+ 21,6±3,4 23,0±3,8 21,5±4,1

CD14+ 14,3±2,2 12,8±1,9 14,4±2,2

0025+ 8,8±2,2 9,4±1,6 12,0±2,1*

примечания: данные представлены в виде М±Б.Е.; *Ри < 0,05, **Ри < 0,01 - достоверность различий по сравнению с ДК, полученными в стандартных условиях (и - критерий Вилкоксона-Манна-Уитни в сопряженных парах).

сутствии различных стимулов (зрелые СD83+ ДК) [30]. В то же время существуют протоколы [25, 26], в которых вместо ^-4 используют интерферон-а (IFNа), что позволяет сократить сроки культивирования и получить популяцию ДК промежуточной степени зрелости, характеризующихся высокой способностью к захвату антигена, миграции и активации ТЫ-ответа за счет экспрессии СС-хемокиновых рецепторов (ССR5, CCR7) [13, 22, 26].

В своих исследованиях мы также использовали интерфероновый протокол для генерации ДК из периферической крови женщин с физиологической беременностью. В результате культивирования моноцитов периферической крови с GM-CSF и IFNa в течение 3-4 суток клетки теряли способность прилипать к пластику и приобретали типичные морфоло-

гические черты дендритных клеток. Фенотипический анализ показал (табл. 1), что полученные ДК представляли смешанную популяцию, включающую как зрелые CD83+ (17,0±2,4%), так и незрелые CD1а+ (4,1 ±0,3%) дендритные клетки. Относительное количество CD14+ моноцитов составляло 14,3±2,2% (в исходной популяции прилипающих клеток — 82,4±2,8%). При этом наряду с присутствием типичных миелоидных ДК (CD11c+ДК 18,4±2,8%) в полученной популяции идентифицировались также ДК, экспрессирующие маркеры плазмацито-идных ДК ^123+ДК 21,6±3,4%). Количество зрелых активированных CD25+ДК с рецепторами к ^-2 составило 8,8±2,2%. Добавление ДГЭАС с первых суток культивирования достоверно не влияло на субпопуляционный состав ДК, генерируемых в стандартных условиях.

ТАБЛИЦА 2. ВЛИЯНИЕ ДГЭАС ТАБЛИЦА 3. ВЛИЯНИЕ ДГЭАС НА ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ

НА АЛЛОСТИМУЛЯТОРНУЮ АКТИВНОСТЬ ДК ДК С МК-КЛЕТКАМИ

Условия культивирования Пролиферация (имп./мин) ИВ

МНК 420±55

МНК + ДК0 (10:1) 7460±1660 23,8±4,7

МНК + ДКдГэАс (10:1) 12615±2425* 38,9±7,0 *

примечания: данные представлены в виде М±Б.Е.

МНК доноров (п = 4) инкубировали в отсутствии и в присутствии ДК здоровых беременных (п = 8), генерированных в стандартных условиях (МНК+ДК0) и с ДГЭАС (МНК+ДКДГЭАС). Индексы влияния (ИВ) рассчитывали как соотношение пролиферативного ответа МНК доноров при стимуляции дендритными клетками к уровню спонтанной пролиферации; * Ри < 0,05, достоверность различий по сравнению с МНК+ДК0; (и-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни в сопряженных парах).

Условия культивирования Субпопуляции NK-клеток

CD56+СD16- CD56+СD16+

МНК 4,0±0,4 14,0±0,7

МНК+ДК0 (3:1) 3,5±0,6 8,1±0,7*

МНК+ДКдгэас (3:1) 3,4±0,5 10,1±0,6* #

примечания: данные представлены в виде М±Б.Е. Количество ЫК-клеток оценивали в 24-часовых культурах МНК доноров, инкубированных в отсутствии и в присутствии ДК здоровых беременных (п = 8) генерированных в стандартных условиях (МНК+ДК,,) и с ДГЭАС (МНК+ДКДГЭАС). * Ри < 0,05 - достоверность различий по сравнению с МНК, # Ри < 0,05 - достоверность различий по сравнению с МНК+ДК0 (и-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни в сопряженных парах).

В то же время при добавлении ДГЭАС на стадии дозревания (совместно с LPS за 24 ч до окончания культивирования) регистрировалось увеличение доли как незрелых CD1a+ДК (с 4,1±0,3 до 6,3±0,8%, ри < 0,05), так и зрелых CD83+ДК (с 17,0±2,4 до 21,5±3,1%, ри < 0,01), в том числе активированных CD25-позитивных клеток (с 8,8±2,2 до 12,0±2,1%, ри < 0,05).

Для оценки способности ДК, обработанных ДГЭАС (ДКДГЭАС), презентировать антигены и активировать Т-клетки была исследована аллости-муляторная активность ДК женщин с физиологической беременностью в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ). Из данных таблицы 2 видно, что ДК, генерируемые в стандартном интерфе-роновом протоколе, обладали выраженной ал-лостимуляторной активностью (ИВ 23,8±0,3) и индуцировали эффективный пролиферативный ответ МНК в соотношении 1:10. Добавление ДГЭАС (10-6 М) на стадии дозревания ДК сопровождалось достоверным усилением их аллости-муляторной активности (ИВ 38,9±7,0), что свидетельствует о стимулирующем влиянии гормона на антигенпрезентирующую функцию ДК.

Среди иммунных дисфункций, выявляемых у беременных с угрозой самопроизвольного аборта, нередко регистрируют увеличение доли циркулирующих CD56+СD16+ NK клеток [9, 15, 31]. Учитывая сообщения о реципрокном взаимодействии ДК и NK-клеток [11], представлялось интересным исследовать влияние ДК, полученных в стандартных условиях и в присутствии ДГЭАС, на количество CD56+СD16-и CD56+СD16+ клеток в культурах МНК (табл. 3). Видно, что совместное культивирование МНК с ДК не влияет на количество CD56+СD16- клеток, но в то же время сопровождается достоверным снижением доли CD56+СD16+ клеток в среднем на 40%. При этом ингибирующее влияние ДКДГЭАС на количество CD56+СD16+NK-клеток было менее выраженным по сравнению с ДК, генерированными в стандартных условиях. Таким образом, ДК здоровых беременных способны влиять на субпопуляционный состав NK-клеток, снижая среди них долю клеток, ко-экспрессирующих CD56 и СD16 молекулы. В то же время обработка дендритных клеток ДГЭАС приводит к ослаблению (частичной отмене) их регуляторного влияния в отношении количества CD56+СD16+ NK-клеток.

Обсуждение

Ранее нами было показано, что беременные с гиперандрогенией в отличие от женщин

с физиологической беременностью характеризуются повышенным уровнем митогенной реактивности Т-клеток [2], что согласуется с результатами проведенных нами витральных исследований и данными других авторов [8, 21], демонстрирующих дозозависимый, стимулирующий эффект ДГЭАС на пролиферацию МНК. По-видимому, усиление пролиферации Т-клеток под влиянием ДГЭАС реализуется через RACK-1-зависимый механизм активации, поскольку было показано, что добавление ДГЭАС в культуры клеток приводит к увеличению экспрессии на Т-лимфоцитах рецепторов к активированной C-киназе 1 (RACK-1) [8].

Однако влияние ДГЭАС на пролиферативную активность Т-лимфоцитов, очевидно, может быть не только прямым, но и опосредоваться непрямыми механизмами, например, через модуляцию свойств антигенпрезенти-рующих дендритных клеток. Действительно, фенотипический анализ показал, что добавление ДГЭАС на стадии дозревания ДК сопровождается достоверным увеличением количества зрелых (CD83+), в том числе активированных (CD25+) ДК. Canning M.O. с соавт. также показали, что добавление ДГЭАС к ДК, генерируемым из моноцитов периферической крови в присутствие GM-CSF и IL-4, приводит к образованию ДК с более зрелым фенотипом, что проявляется увеличением экспрессии кости-муляторных молекул CD80 и снижением экспрессии молекул адгезии CD43 [7].

Изменение фенотипических характеристик ДК мы наблюдали только при добавлении ДГЭАС на этапе их конечного дозревания, что, по-видимому, может быть обусловлено постепенным увеличением плотности рецепторов на ДК, через которые реализуются эффекты гормона, а также костимуляторным действием специфического сигнала созревания (LPS). В любом случае, наши данные свидетельствуют о различной чувствительности ДК к ДГЭ-АС в зависимости от стадии дифференцировки и зрелости.

В качестве функциональных характеристик ДК, генерируемых в присутствии ДГЭАС, нами оценивалась их аллостимуляторная активность в СКЛ и влияние на субпопуляционный состав NK-клеток. Установлено, что ДКДГЭАС отличаются более выраженной способностью активировать пролиферацию Т-клеток в ответ на аллоантигены по сравнению с ДК, генерируемыми в стандартных условиях. Полученные результаты согласуются с данными литерату-

ры [7] и свидетельствуют о возможном участии ДГЭАС в нарушении механизмов толерантности к аллоантигенам плода у беременных с ги-перандрогенией.

Изменение субпопуляционного состава NK-клеток под влиянием ДК, которое проявляется снижением числа CD56+CD16+ клеток, может быть связано с усилением апоптоза клеток, снижением уровня экспрессии CD^-молекул или «слущивания» FcyRIII с NK-клеток [17]. В пользу апоптоза свидетельствуют данные, демонстрирующие возможность апоптотической гибели NK-клеток после стимуляции через СD16-рецептор [14, 20]. В литературе встречаются сообщения о способности активированных NK-клеток к контакт-зависимому лизису незрелых ДК, тогда как зрелые CD83^K являются NK-резистентными [23]. Поэтому не исключено, что одним из возможных механизмов снижения CD56+СD16+клеток в культурах ДК-NK является запуск активационного апопто-за NK-клеток через стимуляцию CD16 в процессе лизиса ими незрелых ДК. Аналогичным образом апоптоз NK-клеток под влиянием ДК может осуществляться и через стимуляцию Fas или CD2 молекул [12]. Кроме того, известно, что ДК, в том числе генерируемые в интер-фероновом протоколе, экспрессируют TRAIL (TNF-related apoptosis-inducing ligand — лиганд, принадлежащий к семейству TNF и индуцирующий апоптоз) [10], тогда как в NK-клетках содержится мРНК для всех рецепторов к этому лиганду [16]. Эти данные не исключают участия TRAIL-опосредованного апоптоза NK-клеток при их совместном культивировании с дендритными клетками. При этом различный уровень снижения/гибели NK-клеток в культурах с ДК0 и ДКДГЭАС может быть связан с особенностями экспрессии перечисленных лигандов и их рецепторов на взаимодействующих клетках.

В своих предыдущих работах нами было показано, что у беременных с надпочечниковой гиперандрогенией отмечается увеличение доли активированных CD16+CD56+ NK-клеток в периферической крови [2], однако механизмы этого феномена оставались неясными. Проведенные витральные исследования свидетельствуют о возможном участии ДГЭАС, который через модуляцию свойств ДК, ослабляет их контроль над количеством CD16+CD56+ NK-клеток.

Таким образом, ДГЭАС в культуре in vitro стимулирует генерацию и созревание ДК,

а также усиливает их аллостимуляторную активность. Можно полагать, что изменение фенотипических и функциональных характеристик ДК под влиянием данного гормона может быть одним из возможных механизмов нарушения иммунологической толерантности к антигенам плода и развития гестационных осложнений у беременных с надпочечниковой гиперандрогенией.

Благодарности

Работа поддержана грантом РФФИ № 07-0400967.

Список литературы

1. Абдурахманова Р.А, Омаров С.М.А. Влияние гиперандрогении у женщин на течение гестации и лактационную функцию // Рос. вестн. акушера-гинеколога. — 2002. — № 5. — С. 4-6.

2. Селедцова Н.В., Хонина Н.А., Дударева А.В., Тихонова М.А., Останин А.А., Пас-ман Н.М., Черных Е.Р. Нарушение иммунорегу-ляторных механизмов у беременных с гиперандро-генией // Бюл. СО РАМН. - 2006. - № 1. - С. 35-40.

3. Хонина Н.А., Дударева А.В., Тихонова М.А., Леплина О.Ю., Останин А.А., Пас-ман Н.М., Черных Е.Р. Нарушение механизмов активной иммуносупрессии при беременности, осложненной гестозом // Бюл. СО РАМН. - 2003. - № 3. - С. 73-76.

4. Хонина Н.А., Пасман Н.М., Останин А.А., Черных Е.Р. Особенности продукции цитокинов при физиологической и осложненной беременности // Акушерство и гинекология. - 2006. - № 2. - С. 11-15.

5. Эндокринные заболевания и синдромы / Под ред. М.С. Бирюковой. - М., 2000. - 165 с.

6. Aspinall R. Ageing and the immune system in vivo // Immunity & Ageing. - 2004. - VOl. 2. - P. 5.

7. Canning M.O., Grotenhuis K., de Wit H.J., Drexhage H.A. Opposing effects of dehydroe-piandrosterone and dexamethasone on the generation of monocyte-derived dendritic cells // Eur. J. Endocrinol. - 2000. - Vol. 143, N 5. -P. 687-695.

8. Corsini E., Racchi M., Sinforiani E., Lucchi L., Viviani B., Rovati G.E., Govoni S., Galli C.L., Marinovich M. Age-related decline in RACK-1 expression in human leukocytes is correlated to plasma levels of dehydroepiandrosterone // J. Leukoc. Biol. - 2005. - Vol. 77, N 2. - P. 247-256.

9. Dosiou C., Giudice L.C. Natural killer cells in pregnancy and recurrent pregnancy loss: endo-

crine and immunologic perspectives // Endocrine Reviews. - 2005. - Vol. 26, N 1. - P. 44-62.

10.Fanger N.A., Maliszewski C.R., Schooley K., Griffith T.S. Human dendritic cells mediate cellular apoptosis via tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) // J. Exp. Med. - 1999. - Vol. 190. - P. 1155-1164.

11. Gerosa F., Baldani-Guerra B., Nisii C., Marchesini V., Carra G., Trinchieri G. Reciprocal activating interaction between natural killer cells and dendritic cells // J. Exp. Med. - 2002. - Vol. 195, N 3. - P. 327-333.

12. Ida H., Utz P.J., Anderson P., Eguchi K. Gran-zyme B and natural killer cell death // Mod. Rheumatol. - 2005. - Vol. 15. - P 315-322.

13. Ito T., Amakawa R., Inaba M., Ikehara S., Inaba K., Fukuhara S. Differential regulation of human blood dendritic cell subsets by INFs // J. Immunol. - 2001. - Vol. 166. - P 2961-2969.

14. Jewett A., Cavalcanti M., Bonavid B. Pivotal role of endogenous TNF-alpha in the induction of functional inactivation and apoptosis in NK cells // J. Immunol. - 1997. - Vol. 159. -P 4815-4822.

15. Kwak J.Y., Beaman K.D., Gilman-Sachs A., Ruiz J.E., Schewitz D., Beer A.E. Up-regulated expression of CD56+, CD56+/CD16+ and CD19+ cells in peripheral blood lymphocytes in pregnant women with recurrent pregnancy losses // Am. J. Reprod. Immunol. - 1995. - Vol. 34. - P 93-99.

16. Mirandola P, Ponti C., Gobbi G., Sponzilli I., Vaccarezza M., Cocco L., Zauli G., Secchiero P, Manzoli F. A., Vitale M. Activated human NK and CD8+ T-cells express both TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) and TRAIL receptors but are resistant to TRAIL-mediated cytotoxicity // Blood. - 2004. - Vol. 104. -P. 2418-2424.

17. Moldovan I., Galon J., Maridonneau P, Roman S., Mathiot C., Fridman W.H., Sautes-Fridman C. Regulation of production of soluble Fc gamma receptors type III in normal and pathological conditions // Immunol. Lett. - 1999. - N 1. -P. 125-134.

18. Nouri-Shirazi M., Banchereau J., Fay J., Palucka K. Dendritic cell based tumor vaccines // Immunol. Lett. - 2000. - N. 7. - P 5-10.

19.Okabe T., Haji M., Takayanagi R., Adachi M., Imasaki K., Kurimoto F., Watanabe T., Nawata H. Up-regulation of high-affinity dehydroepiandroster-one binding activity by dehydroepiandrosterone in activated human T-lymphocytes // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1995. - Vol. 80. - P 2993-2996.

20. Ortaldo J.R., Winkler-Pickett R.T, Shigeka-zu N., Ware C.F. Fas involvement in human NK cell apoptosis: lack of a requirement for CD16-mediat-ed events // J. Leukoc. Biol. — 1997. — Vol. 61. — P. 209-215.

21. Pahlavani M.A., Harris M.D. Effect of dehydroepiandrosterone on mitogen-induced lymphocyte proliferation and cytokine production in young and old F344 rats // Immunol. Lett. — 1995. - Vol. 47, N 1-2. - P 9-14.

22. Parlato S., Santini S.M., Lapenta C., Di Puc-chio T., Logozzi M., Spada M., Giammarioli A.M., Malorni W., Fais S., Belardelli F. Expression of CCR-7, MIP-3ß and Th1-chemokines in type I IFN-induced monocyte-derived dendritic cells -importance for the rapid acquisition of potent migratory and functional activities // Blood. -2001. - Vol. 98. - P 3022-3029.

23. Piccioli D., Sbrana S., Melandri E., Valiante N.M. Contact-dependent stimulation and inhibition of dendritic cells by natural killer cells // J. Exp. Med. - 2002. - Vol. 195, N 3. -P. 335-341.

24. Raghupathy R. Pregnancy: success and failure within the Th1/Th2/Th3 paradigm // Semin. Immunol. - 2001. - Vol. 13. - P 219-227.

25. Santini S.M., Lapenta C., Logozzi M., Parlato S., Spada M., Pucchio T.D., Belardelli F. Type I interferon as a powerful adjuvant for monocyte-derived dendritic cell development and activity in vitro and in Hu-PBL-SCID mice // J. Exp. Med. - 2000. - Vol. 191. - P. 1777-1788.

26. Santini S.M., Di Pucchio T., Lapenta C., Parlato S., Logozzi M., Belardelli F. A new type 1 IFN-mediated pathway for the rapid differentiation of monocytes into highly active dendritic cells // Stem cells. - 2003. - Vol. 21. - P 357-362.

27. Schifitto G., McDermott M.P, Evans T., Fitzgerald T., Schwimmer J., Demeter L., Kie-burtz K. Autonomic performance and dehydroepi-androsterone sulfate levels in HIV-1-infected individuals: relationship to Th1- and Th2- cytokine profile // Arch. Neurol. - 2000. - Vol. 57, N 7. -P 1027-32.

28. Solerte B., Precerutti S., Gazzaruso C., Loca-telli E., Zamboni M., Schifino N., Bonacasa R., Ron-danelli M., Taccani D., Ferrari E., Fioravanti M. Defect of a subpopulation of natural killer immune cells in Graves’ disease and Hashimoto’s thyroiditis: normalizing effect of dehydroepiandrosterone sulfate // Eur. J. Endocrin. - 2005. - Vol. 152, N 5. - P. 703-712.

29. Suzuki T., Suzuki N., Daynes R.A., Engle-man E.G. Dehydroepiandrosterone enhances IL-2

production and cytotoxic effector function of human T-cells // Clin. Immunol. Immunopathol. -1991. - Vol. 61. - P. 202-211.

30. Thurner B., Röder C., Dieckmann D., Heuer M., Kruse M., Glaser A., Keikavoussi P, Kämpgen E., Bender A., Schuler G. Generation of large numbers of fully mature and stable dendritic cells from leukapheresis products for clinical applications // J. Immunol. Meth. - 1999. - Vol. 223. -P 1-15.

31. Yamada H., Kato E.H., Kobashi G., Ebina Y., Shimada S., Morikawa M., Sakuragi N., Fujimoto S.

High NK cell activity in early pregnancy correlates with subsequent abortion with normal chromosomes in women with recurrent abortion // Am. J. Reprod. Immunol. — 2001. — Vol. 46. — P 132-136.

32. Xiao B.G., Huang Y.M., Link H. Dendritic cell vaccine design: strategies for eliciting peripheral tolerance as therapy of autoimmune diseases // BioDrugs. - 2003. - Vol. 17, N. 5. - P 103-111.

поступила в редакцию 18.05.2007 принята к печати 08.06.2007