КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИТЕЛА ПРОТИВ CD20 ТИПА II И СЕЛЕКТИВНОГО ИНГИБИТОРА BCL-2
COMBINATION THERAPY USING TYPE II ANTI-CD20 ANTIBODY AND SELECTIVE BCL-2 INHIBITOR

В данной заявке заявляется приоритет предварительной заявки на патент США № 61/698379, поданной 7 сентября 2012, полное описание которой включено в данную заявку посредством ссылки.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к комбинированной терапии с использованием антитела типа II против CD20 и селективного ингибитора Bcl-2 при лечении пациента, страдающего от онкологического заболевания, в частности, рака, экспрессирующего CD20.
Уровень техники
Молекула CD20 (которую также называют консервативным антигеном дифференцировки В-лимфоцитов человека, или Bp35) представляет собой гидрофобный трансмембранный белок с молекулярной массой приблизительно 35 кДа, который локализован на предшественниках В-клеток и зрелых В-лимфоцитах (Valentine, M.A. et al., J. Biol. Chem. 264 (19) (1989) 11282-11287; и Einfield, D.A. et al., EMBO J. 7(3) (1988) 711-717). CD20 обнаруживается на поверхности больше чем 90% В-клеток из периферической крови или лимфоидных органов, экспрессируется в течение раннего периода развития предшественников В клеток и сохраняется до дифференцировки плазматических клеток. CD20 присутствует как на нормальных В-клетках, так и на злокачественных В-клетках. В частности, CD20 экспрессируется в более чем 90% В-клеточных неходжкинских лимфомах (NHL) (Anderson, K.C., et al., Blood 63(6) (1984) 1424-1433), но не обнаруживается на гемопоэтических стволовых клетках, про-В-клетках, нормальных плазматических клетках или в других нормальных тканях (Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 135(2) (1985) 973-979).
Состоящий из 85 аминокислот карбоксил-концевой домен белка CD20 расположен в цитоплазме. Длина указанного домена существенно отличается от других специфичных для B-клеток поверхностных структур, таких как тяжелые цепи IgM, IgD и IgG или цепи антигенов гистосовместимости класса I1а или β, которые имеют относительно короткие внутрицитоплазматические области, состоящие из 3, 3, 28, 15 и 16 аминокислот, соответственно (Komaromy, M., et al., NAR 11 (1983) 6775-6785). Из последних 61 карбоксил-концевых аминокислот 21 представляют собой кислые остатки и лишь две являются основными, указывая на то, что этот домен имеет сильный суммарный отрицательный заряд. Регистрационный номер депозита в GenBank № 690605. Полагают, что CD20 может участвовать в регулировании ранних стадий активации и дифференцировки В-клеток (Tedder, T.F., et al., Eur. J. Immunol. 16 (1986) 881-887) и может функционировать как канал для ионов кальция (Tedder, T.F., et al., J. Cell. Biochem. 14D (1990) 195).
Существуют два различных типа антител против CD20, которые существенно отличаются по способу их CD20-связывания и биологической активности (Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743; и Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052). Антитела типа I, например, ритуксимаб, обладают мощной комплементзависимой цитотоксичностью, в то время как антитела типа II, например, тозитумомаб (B1), 11B8, AT80 или гуманизированные антитела B-Ly1, эффективно инициируют смерть клеток-мишеней посредством каспаза-независимого апоптоза вместе с воздействием фосфатидилсерина.
Сходные черты антител против CD20 типа I и типа II суммированы в приведенной ниже таблице 1.
Таблица 1Свойства антител против CD20 типа I и типа II
Антитела против CD20 типа I
Антитела против CD20 типа II
Эпитоп CD20 типа I
Эпитоп CD20 типа II
Локализует в CD20 липидных рафтах
Не локализует в CD20 липидных рафтах
Повышенная CDC (если изотип соответствует IgG1)
Пониженная CDC (если изотип соответствует IgG1)
ADCC активность (если изотип соответствует IgG1)
ADCC активность (если изотип соответствует IgG1)
Полная связывающая способность
Пониженная связывающая способность
Гомотипическая агрегация
Более сильная гомотипическая агрегация
Индуцирование апоптоза посредством перекрестного связывания
Сильное индуцирование гибели клеток без перекрестного связывания
Семейство белков Bcl-2 регулирует запрограммированную гибель клеток, вызванную стимуляторами развития и в ответ на многочисленные сигналы стресса (Cory. S., and Adams, J.M., Nature Reviews Cancer 2 (2002) 647-656; Adams, Genes und Development 17 (2003) 2481-2495; Danial, N.N., and Korsmeyer, S.J., Cell 116 (2004) 205-219). В то время как сам Bcl-2 и несколько близких его родственников (Bc1-xL, Bc1-W, Mc1-1 и A1), которые содержат три или четыре консервативные области Bcl-2 гомологии (ВН), способствует выживаемости клеток, апоптоз вызывается двумя другими подсемействами. Исходный сигнал гибели клеток передается разнообразной группой белков, содержащих единственную ВН3 область (ВН3-только белки), включая Bad, Bid, Bim, Puma и Noxa, которые в общем случае имеют лишь небольшой домен взаимодействия ВН3 (Huang and Strasser, Cel 1 103 (2000) 839-842). Тем не менее, Bax или Bak, многодоменные белки, содержащие BH1-BH3, необходимы для того, чтобы вызвать гибель клеток (Cheng, et al., Molecular Cell 8 (2001) 705-711; Wei, M.C., et al., Science 292 (2001) 727-730; Zong, W.X., et al., Genes and Development 15 148 (2001) 1-1486). При активации они могут пермеабизировать внешнюю мембрану митохондрий и высвобождать про-апоптогенных факторы (например, цитохром С), необходимые для активации каспазы, которая уничтожает клетку (Wang, K., Genes and Development 15 (2001) 2922-2933; (Adams, 2003 supra); Green, D.R., and Kroemer, G., Science 305 (2004) 626-629).
Взаимодействие между членами указанных трех фракций семейства Bcl-2 диктуют условия, при которых клетка живет или умирает. Если активируются BH3-только белки, например, в ответ на повреждение ДНК, то они могут связываться с помощью своего домена BH3 с бороздкой на способствующих выживанию родственниках (Sattler, et al., Science 275 (1997) 983-986). Тем не менее, недостаточно хорошо изучено, каким образом ВН3-только белки и Bcl-2-подобные белки регулируют активацию Bax и Bak (Adams, 2003 supra). Наибольшее внимание привлек Вах. Обычно нацеленный на мембрану домен этого водорастворимого мономерного белка (Hsu, Y.T., et al., Journal of Biological Chemistry 272 (1997) 13289-13834; Wolter, K.G., et al., Journal of Cell Biology 139 (1997) 1281-92) вставляется в бороздку, что, вероятно, и определяет его цитозольную локализацию (Nechushtan, A., et al., EMBO Journal 18 (1999) 2330-2341; Suzuki et al., Cell 103 (2000) 645-654; Schinzel, A., et al., J. Cell Biol. 164 (2004) 1021-1032). Обзор нескольких не связанных между собой пептидов/белков, которые были предложены для регулирования активности Bax, приводят Lucken-Ardjomande, S., and Martinou, J.C, J. Cell Sci. 118 (2005) 473-483, однако их физиологическую значимость еще предстоит установить. В качестве альтернативы, Вах может быть активирован за счет непосредственного участия некоторых ВН3-только белков (Lucken-Ardjomande, S., and Martinou, J.C, 2005 supra), при этом наиболее документирована усеченная форма Bid, tBid (Wei, M.C., et al., Genes und Development 14 (2000) 2060-2071; Kuwana, T., et al., Cell 111 (2002) 331-342; Roucou, X., et al., Biochemical Journal 368 (2002) 915-921; Cartron, P.F., et al., Mol. Cell 16 (2004) 807-818). Как обсуждалось в других источниках (Adams 2003 supra), старейшая модель, в которой Bcl-2 непосредственно взаимодействует с Bax (Oltvai, Z.N., et al., Cell 74 (1993) 609-619), проблематична, поскольку Bcl-2 связан с мембраной, в то время как Вах является цитозольным, и их взаимодействие, видимо, в значительной степени зависит от детергентов, используемых для лизиса клеток (Hsu, Y.T., and Youle, 1997 supra). Тем не менее, надежно установлено, что домен BH3 в Bax может опосредовать связывание с Bcl-2 (Zha, H., and Reed, J., Journal of Biological Chemistry 272 (1997) 31482-88; Wang, K., et al., Molecular und Cellular Biology 18 (1998) 6083-6089) и что Bcl-2 предотвращает олигомеризацию Bax, хотя гетеродимеры и не могут быть обнаружены (Mikhailov, V., et al., Journal of Biological Chemistry 276 (2001) 18361-18374). Таким образом, остается невыясненным, ограничивается ли прямо либо косвенно активация Bax под действием способствующих выживанию белков.
Несмотря на то, что Вах и Bak в большинстве случаев, видимо, функционально эквивалентны (Lindsten, T., et al., Molecular Cell 6 (2000) 1389-1399; Wei, M.C., et al., 2001 supra), существенных различий в их регулировании можно было бы ожидать в зависимости от их различной локализации в здоровых клетках. В отличие от Вах, который в значительной степени является цитозольным, Bak находится в комплексах на внешней мембране митохондрий и эндоплазматического ретикулума здоровых клеток (Wei, M.C., et al., 2000 supra; Zong, W.X., et al, Journal of Cel 1 Biology 162 (2003) 59-69). Тем не менее, при получении цитотоксических сигналов как Вах, так и Bak изменяют конформацию, и Вах перемещается к органеллам мембран, где и Bax, и Bak затем образуют гомоолигомеры, которые могут связываться друг с другом, что приводит к пермеабилизации мембраны (Hsu, Y.T., et al., PNAS 94 (1997) 3668-3672; Wolter, K.G., et al., 1997 supra; Antonsson, B., et al., Journal of Biological Chemistry 276 (2001) 11615-11623; Nechushtan, A., et al., Journal of Cell Biology 153 (2001) 1265-1276; Wei, M.C., et al., 2001 supra; Mikhailov, V., et al., Journal of Biological Chemistry 278 (2003) 5367-5376).
3
Существуют различные ингибиторы Bcl-2, которые все обладают одним и тем же свойством ингибировать способствующие выживанию члены семейства белков Bcl-2 и, следовательно, являются перспективными кандидатами для лечения онкологического заболевания. Подобными ингибиторами Bcl-2 являются, например, облимерсен, SPC-2996, РТА-402, госсипол, AT-101, облатоксакс мезилат, A-371191, A-385358, A-438744, ABT-737, ABT-263, AT-101, BL-11, BL-193, GX-15-003, 2-метоксиантимицин A, HA-14-1, KF-67544, пурпурогаллин, TP-TW-37, YC-137 и Z-24 и соединения, описанные, например, в Zhai, D., et al., Cell Death and Differentiation 13 (2006) 1419-1421.
Smith, M. R., et al., Molecular Cancer Therapeutics 3(12) (2004) 1693-1699 и Ramanarayanan, J. et al., British Journal of Haematology 127(5) (2004) 519-530 ссылаются на комбинацию антитела против CD20 типа I (ритуксимаб) и антисмысловых Bcl-2 олигонуклеотидов (облимерсен).
Сущность изобретения
В данном описании приведены способы лечения пациента, страдающего от онкологического заболевания, включающие совместное введение пациенту, нуждающемуся в подобном лечении, антитела против CD20 типа II и селективного ингибитора Bcl-2. Совместное введение может быть одновременным или последовательным независимо от порядка введения.
Примером антитела против CD20 типа II для использования по настоящему изобретению является антитело GA101.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения антитело против CD20 типа II обладает увеличенной антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичностью (ADCC).
В одном варианте осуществления настоящего изобретения, по меньшей мере, 40% олигосахаридов в Fc-области указанного антитела против CD20 типа II не фукозилированы.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения селективным ингибитором Bcl-2 является GDC-0199 (также известный как ABT-199) или его фармацевтически приемлемая соль.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения онкологическим заболеванием является несолидная опухоль.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются способы лечения онкологического заболевания у нуждающегося в этом человека, включающие введение указанному человеку антитела GA101 и/или GDC-0199 в виде нескольких циклов дозирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения каждый цикл дозирования из многократных циклов дозирования продолжается, по меньшей мере, 1 неделю. В одном варианте осуществления настоящего изобретения каждый цикл дозирования из многократных циклов дозирования продолжается, по крайней 2, по меньшей мере, 3, по крайней мере, 4, по меньшей мере, 5 или, по крайней мере, 6 недель.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения, где антитело GA101 и GDC-0199 вводят человеку в виде нескольких циклов дозирования, антитело GA101 может, например, назначаться один раз в течение одного цикла дозирования или в течение нескольких циклов дозирования из многократных циклов дозирования. Количество GA101, которое вводят с каждой дозой, может, например, находиться в диапазоне от приблизительно 300 мг до приблизительно 3000 мг, или от приблизительно 500 мг до приблизительно 3000 мг, или от приблизительно 500 мг до приблизительно 1200 мг.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения, где антитело GA101 и GDC-0199 назначают человеку в виде нескольких циклов дозирования, GDC-0199 можно, например, вводить ежедневно в цикле дозирования в течение одного или нескольких циклов дозирования из многократных циклов дозирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, GDC-0199 вводят меньше, чем во все дни изначального цикла дозирования, и вводят каждый день цикла дозирования из многократных циклов дозирования, которые следуют за изначальным циклом дозирования. Количество GDC-0199, которое вводят ежедневно, может составлять от приблизительно 10 мг до приблизительно 1000 мг, от приблизительно 20 мг до приблизительно 800 мг, от приблизительно 20 мг до приблизительно 500 мг или от приблизительно 50 мг до приблизительно 300 мг.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения как антитело GA101, так и GDC-0199 назначают пациенту, по меньшей мере, в течение 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или больше чем 8 циклов дозирования из многократных циклов дозирования.
В некоторых вариантах осуществления способов по настоящему изобретению предлагается лечение онкологического заболевания у нуждающегося в этом человека, которое включает введение указанному человеку как антитела GA101, так и GDC-0199 в виде нескольких циклов дозирования, а в течение последнего цикла дозирования из нескольких циклов дозирования, можно вводить человеку один лишь GDC-0199 без антитела GA101 или же одно антитело GA101 можно вводить пациенту в отсутствие GDC-0199. Например, когда человеку вводят один лишь GDC-0199 (например, в течение последнего из нескольких циклов дозирования, где человеку назначают как GDC-0199, так и антитело GA101), GDC-0199 может назначаться человеку в течение по меньшей менее 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 дней или в течение 10 или больше дней, в течение 20 или больше дней или в течение 30 или больше дней.
Наконец, в еще одном варианте осуществления способов по настоящему изобретению антитело GA101 и GDC-0199 назначают пациенту в течение многократных циклов дозирования, при этом многократные циклы дозирования включают цикл дозирования с возрастанием дозы, при этом во время цикла с возрастанием дозы GDC-0199 вводят пациенту с ежедневно увеличивающейся дозой.
В настоящем изобретении предлагается использование антитела GA101 для изготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения онкологического заболевания, в сочетании с GDC-0199. В настоящем изобретении предлагается также использование GDC-0199 для изготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения онкологического заболевания в сочетании с антителом GA101.
В соответствии с другим аспектом, в настоящем изобретении предлагается комбинация антитела GA101 и GDC-0199 для лечения онкологического заболевания у человека. Указанное сочетание можно, например, вводить человеку в соответствии со схемами дозирования, которые описаны ниже.
Описание чертежей
Фигура 1. Противоопухолевая активность комбинированного лечения с использованием антитела против CD20 типа II (антитело GA101, в данном случае, обинутузумаб) с ингибитором Bcl-2 (ABT-199, известный как GDC-0199). Стрелки и линии под осью абсцисс указывают дни дозирования GA101 и GDC-0199, соответственно.
Фигура 2. Примерная схема дозирования для введения GDC-199 с обинутузумабом.
Фигура 3. Приблизительная схема дозирования для введения GDC-199 с обинутузумабом.
Фигура 4. Противоопухолевая активность антитела против CD20 типа II (обинутузумаба, известного также как RO5072759), которое используют отдельно или в комбинации с GDC-0199, и антитела против CD20 типа I (ритуксимаба), которое используют отдельно или в комбинации с GDC-0199, по отношению к лимфомным клеткам Z138 из клеток мантийной зоны.
Фигура 5. Результаты модели ксенотрансплантата агрессивной лимфомы, демонстрирующие, что однокомпонентное лечение с использованием GDC-0199 с последующей комбинацией GDC-0199 с антителом против CD20 типа II (антитела GA101, в данном случае, обинутузумаба) задерживает повторный рост опухоли.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к описанному выше способу.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения нуждающегося в этом человека, который включает введение указанному человеку эффективного количества антитела GA101 или 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли в течение одного или нескольких периодов дозирования, а затем совместное введение эффективного количество указанного антитела GA101 и 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли в течение одного или нескольких периодов дозирования.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения нуждающегося в этом человека, который включает введение указанному человеку эффективного количества антитело GA101 или 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида в течение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, или 14 дней с последующим совместным введением эффективного количества указанного антитела GA101 и 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли в течение одного или нескольких периодов дозирования.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения нуждающегося в этом человека, который включает введение эффективного количества указанного антитела GA101 в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, или 7 дней с последующим совместным введением эффективного количества указанного антитела GA101 и 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли в течение одного или нескольких периодов дозирования.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения нуждающегося в этом человека, который включает введение эффективного количества 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дней с последующим совместным введением эффективного количества указанного антитела GA101 и 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли в течение одного или нескольких периодов дозирования.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения нуждающегося в этом человека, который включает введение эффективного количества указанного антитела GA101 один раз в течение каждого периода дозирования для 1, 2, 3, 4, 5 или 6 циклов с последующим совместным введением эффективного количества указанного антитела GA101 один раз в период дозирования и 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли один, два или три раза в день в течение одного или нескольких периодов дозирования.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения нуждающегося в этом человека, который включает введение эффективного количества 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли один, два или три раза в день в течение 1, 2, 3, 4, 5 или 6 периодов дозирования с последующим совместным введением эффективного количества указанного антитела GA101 один раз в период дозирования и 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли один, два или три раза в день в течение одного или нескольких периодов дозирования.
Настоящее изобретение также относится к любому из указанных выше способов, где эффективное количество указанного антитела GA101 составляет 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, или 3000 мг, а эффективное количество 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли составляет 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720 , 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 810, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990 или 1000 мг.
Настоящее изобретение также относится к любому из указанных выше способов, в котором эффективное количество указанного антитела GA101 составляет 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400 или 1500 мг, а эффективное количество 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли составляет 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 или 300 мг.
Настоящее изобретение также относится к любому из указанных выше способов, в котором, когда указанным онкологическим заболеванием является NHL, эффективное количество указанного антитела GA101 составляет 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400 или 1500 мг, а эффективное количество 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли составляет 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760 770, 780, 790, и 800 мг.
Настоящее изобретение также относится к любому из указанных выше способов, в котором, когда указанным онкологическим заболеванием является AML, эффективное количество указанного антитела GA101 составляет 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400 или 1500 мг, а эффективное количество 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамида или его фармацевтически приемлемой соли составляет 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760 770, 780, 790, и 800 мг.
Настоящее изобретение также относится к любому из указанных выше способов, когда указанное антитело GA101 и 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамид или его фармацевтически приемлемую соль совместно вводят последовательно в течение каждого периода дозирования, при этом каждый период дозирования составляет 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 дней.
Термин "антитело" в данном описании используется в самом широком смысле и охватывает различные структуры антител, включая, однако этим не ограничиваясь, моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифичные антитела (например, биспецифичные антитела) и фрагменты антител при условии, что они проявляют требуемую антиген-связывающую активность.
Термин "моноклональное антитело" в данном описании относится к антителу, полученному из популяции практически гомогенных антител, т.е. индивидуальные антитела, составляющие популяцию, идентичны и/или связывают один и тот же эпитоп, за исключением возможных вариантов антител, например, содержат природные мутации или мутации, возникающие в процессе производства препарата моноклональных антител, и подобные варианты обычно присутствуют в незначительных количествах. В отличие от препаратов поликлональных антител, которые обычно включают различные антитела, направленные против различных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело в препарате моноклонального антитела направлено против одной детерминанты на антигене. Таким образом, определение "моноклональное" указывает на характер антитела, полученного из практически гомогенной популяции антител, и его не следует истолковывать как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела, которые должны использоваться в соответствии с настоящим изобретением, могут быть получены различными методами, в том числе, однако этим не ограничиваясь, методом гибридомы, методами рекомбинантной ДНК, методами фагового дисплея и методами, в которых используются трансгенные животные, содержащие все или часть локусов иммуноглобулина человека, а также подобными способами и другими примерными способами получения моноклональных антител, которые приводятся в данном описании.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанное антитело против CD20 типа II является моноклональным антителом.
Термин "химерное антитело" относится к моноклональному антителу, содержащему вариабельную область, т.е. связывающую область, полученную из одного источника или вида и, по меньшей мере, часть константной области, полученной из другого источника или вида, как правило, полученную методами рекомбинантной ДНК. Химерные антитела, включающие мышиную вариабельную область и константную область человека, являются наиболее предпочтительными. Подобные химерные антитела мыши/человека являются продуктом экспрессированных генов иммуноглобулина, которые содержат сегменты ДНК, кодирующие вариабельные области иммуноглобулина мыши, и сегменты ДНК, кодирующие константные области иммуноглобулина человека. Другие формы "химерных антител", которые охватывает настоящее изобретение, являются такими химерными антителами, в которых класс или подкласс был модифицирован или изменен, по сравнению с исходным антителом. Такие "химерные" антитела также называют "антителами с переключением классов". Способы получения химерных антител включают обычные технологии рекомбинантной ДНК и трансфекции генов, которые в настоящее время хорошо известны в данной области техники. См., например, Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 6851-6855; патент США № 5202238 и патент США № 5204244.
Термин "гуманизированное антитело" относится к антителам, в которых каркасная область или "определяющие комплементарность области" (CDR) были модифицированы таким образом, что они содержат CDR иммуноглобулина различной специфичности, по сравнению с родительским иммуноглобулином. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения мышиный CDR прививают к каркасной области антитела человека, чтобы получить "гуманизированное антитело". См., например, Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327; и Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270. Наиболее предпочтительные CDRs соответствуют тем, которые представляют собой последовательности, распознающие антигены, указанные выше для химерных и бифункциональных антител.
Следует понимать, что термин "антитело человека" в данном описании включает антитела, имеющие вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека. Антитела человека хорошо известны в данной области техники (van Dijk, M.A., and van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Pharmacol. 5 (2001) 368-374). На основе подобной технологии могут быть получены антитела человека против самых разнообразных мишеней. Примеры антител человека описаны, например, в Kellermann, S. A., et al., Curr. Opin. Biotechnol. 13 (2002) 593-597.
Следует понимать, что термин "рекомбинантное антитело человека" в данном описании включает все антитела человека, которые получены, экспрессированы, разработаны или выделены рекомбинантными способами, например, антитела, выделенные из клетки-хозяина, такой как клетка NS0 или СНО, или выделенные из животного (например, мыши), которое является трансгенным для генов иммуноглобулина человека, или включает антитела, экспрессированные с использованием рекомбинантного вектора экспрессии, трансфицированного в клетку-хозяина. Подобные рекомбинантные антитела человека имеют вариабельные и константные области, которые получены из последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека в преобразованной форме. Рекомбинантные антитела человека по настоящему изобретению подвергают соматической гипермутации в условиях in vivo. Так, аминокислотные последовательности в областях VH и VL рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые хотя и получены из последовательностей зародышевой линии VH и VL человека и связаны с последовательностями зародышевой линии VH и VL человека, не обязательно могут естественным образом существовать в наборе зародышевой линии антител человека в условиях in vivo.
-8
-8
-13
-9
-13
-10
-12
D
В данном описании термины "специфически связывается" или "специфически связывается с" относятся к связыванию, которое достаточно селективно по отношению к мишени, чтобы его можно было отличить от связывания с нежелательными или неспецифическими мишенями (например, антитело, которое специфически связывается с CD20 человека). В одном варианте осуществления настоящего изобретения антитело GA101 по настоящему изобретению имеет сродство связывания для CD20 человека (Kd), равное ≤1мкΜ, ≤100 нМ, ≤10 нМ, ≤1 нМ, ≤0,1 нМ, ≤0,01 нМ или ≤0,001 нМ (например, 10М или меньше, например, от 10М до 10М,  например, от 10М до 10 М). В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения K равно 10 моль/л или меньше (например, 10 моль/л). Сродство связывания определяется с помощью стандартного анализа на связывание, такого как анализ по распределению Скэтчарда, для клеток, экспрессирующих CD20.
Следует понимать, что термин "молекула нуклеиновой кислоты" в данном описании включает молекулы ДНК и молекулы РНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть одноцепочечной или двухцепочечной. В одном варианте осуществления настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислоты представляет собой двухцепочечную ДНК.
"Константные домены" непосредственно не участвуют в связывании антитела с антигеном, но участвуют в эффекторных функциях (ADCC, связывание комплемента и CDC).
th
Термин "вариабельный участок" или "вариабельный домен" относится к домену тяжелой или легкой цепи антитела, который участвует в связывании антитела с антигеном. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи (VH и VL соответственно) интактного антитела обычно имеют аналогичные структуры, при этом каждый домен, содержит четыре консервативные каркасные области (FR) и три гипервариабельные области (HVRs). (См., например, Kindt et al. Kuby Immunology, 6 ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007).)
Термин "гипервариабельная область", или "HVR", в данном описании относится к каждой из областей вариабельного домена антитела, которые являются гипервариабельными в последовательности ("определяющие комплементарность области" или "CDR,") и/или образуют петли определенной структуры ("гипервариабельные петли"), и/или содержат контактирующие с антигеном остатки ("контакты антигена"). Как правило, антитела содержат шесть HVRs: три в VH (H1, Н2, Н3) и три в VL (L1, L2, L3). Примеры HVRs в данном описании включают:
(а) гипервариабельные петли, возникающие при аминокислотных остатках 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (Н2) и 96-101 (Н3) (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987));
th
(b) CDRs, возникающие при аминокислотных остатках 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (Н2) и 95-102 (H3) (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5 Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991));
(с) контакты антигена, возникающие при аминокислотных остатках 27c-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (Н2) и 93-101 (Н3) (MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)); и
(d) комбинации (а), (b) и/или (с), включающие HVR остатки аминокислот 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49 -56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (Н2), 93-102 (Н3) и 94-102 (Н3).
Синонимы CD20, принятые в данной области техники, включают антиген CD20 B-лимфоцитов, антиген B1 поверхностности B-лимфоцитов, Leu-16, Bp35, BM5 и LF5.
Термин "антитело против CD20", в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой антитело, которое специфически связывается с антигеном CD20. В зависимости от связывающих свойств и биологической активности антител против CD20 к антигену CD20, в соответствии с Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743; и Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052, можно выделить два типа антител против CD20 (антитела против CD20 типа I и типа II), см. таблицу 2.
Таблица 2Свойства антител против CD20 типа I и типа II
Антитела против CD20 типа I
Антитела против CD20 типа II
Эпитоп CD20 типа I
Эпитоп CD20 типа II
Локализует в CD20 липидных рафтах
Не локализует в CD20 липидных рафтах
Повышенная CDC (если изотип соответствует IgG1)
Пониженная CDC (если изотип соответствует IgG1)
ADCC активность (если изотип соответствует IgG1)
ADCC активность (если изотип соответствует IgG1)
Полная связывающая способность
Пониженная связывающая способность
Гомотипическая агрегация
Более сильная гомотипическая агрегация
Индуцирование апоптоза посредством перекрестного связывания
Сильное индуцирование гибели клеток без перекрестного связывания
Одним из свойств антител против CD20 типа I и типа II является их способ связывания. Антитела против CD20 типа I и типа II могут быть классифицированы по степени связывающей способности данного антитела против CD20 с CD20 на клетках Raji (ATCC-No. CCL-86), по сравнению с ритуксимабом.
Антитела против CD20 типа II демонстрируют степень связывающей способности данного антитела против CD20 с CD20 на клетках Raji (ATCC-No. CCL-86), по сравнению с ритуксимабом, равную от 0,3 до 0,6, и в одном варианте осуществления настоящего изобретения, равную от 0,35 до 0,55, а в другом варианте осуществления настоящего изобретения, равную от 0,4 до 0,5. Примеры подобных антител против CD20 типа II включают, например, тозитумомаб (B1 IgG2a), антитело GA101 IgG1 (химерное гуманизированное антитело IgG1, раскрытое в WO 2005/044859), 11B8 IgG1 (раскрыт в WO 2004/035607) и AT80 IgG1. В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанное антитело против CD20 типа II представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с тем же эпитопом, что и антитело GA101 (как раскрыто в WO 2005/044859).
"Степень связывающей способности антитела против CD20 с CD20 на клетках Raji (ATCC-No. CCL-86), по сравнению с ритуксимабом," определяют прямым измерением иммунофлуоресценции (измеряют среднюю интенсивность флуоресценции (MFI)), используя указанное антитело против CD20, конъюгированное с Су5, и ритуксимаб, конъюгированный с Су5, из массива данных FACS (Becton Dickinson) с клетками Raji (АТСС No. CCL-86), как описано в примере 2, и рассчитывают следующим образом:
MFI обозначает среднюю интенсивность флуоресценции. "Коэффициент маркирования Су5" в данном описании обозначает количество меченых молекул Cy5 на одну молекулу антитела.
Обычно указанное антитело против CD20 типа II показывает степень связывающей способности с CD20 на клетках Raji (АТСС-No. CCL-86) указанного второго антитела против CD20, по сравнению с ритуксимабом, равную от 0,3 до 0,6, и в одном варианте осуществления настоящего изобретения равную от 0,35 до 0,55, а в еще одном варианте осуществления настоящего изобретения равную от 0,4 до 0,5.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанное антитело против CD20 типа II, например антитело GA101, обладает повышенной антителозависимой клеточной цитотоксичностью (ADCC).
Под "антителом, обладающим повышенной антителозависимой клеточной цитотоксичностью (ADCC)," понимают антитело, как этот термин определен в данном описании, обладающее повышенной ADCC, которую определяют любым подходящим способом, известным специалистам из данной области техники. Один признанный in vitro ADCC анализ заключается в следующем:
1) в анализе используют клетки-мишени, которые, как известно, экспрессируют антиген-мишень, распознаваемый антиген-связывающей областью антитела;
2) в качестве эффекторных клеток в анализе используют мононуклеарные клетки периферической крови (РВМСs) человека, выделенные из крови случайно выбранного здорового донора;
3) анализ проводят в соответствии со следующей методикой:
6
(i) РВМСs выделяют, используя стандартную методику центрифугирования в градиенте плотности и суспендируют в количестве 5×10 клеток/мл в среде RPMI для культивирования клеточной культуры;
51
5
(ii) клетки-мишени выращивают, используя стандартные способы культивирования тканевых культур, собирают на экспоненциальной фазе роста с жизнеспособностью выше 90%, промывают в клеточной культуральной среде RPMI, маркируют с помощью 100 микрокюри изотопа Cr, дважды промывают клеточной культуральной средой и повторно суспендируют в среде для культивирования клеточной культуры с плотностью 10 клеток/мл;
iii) 100 мкл приготовленной, как указано выше, конечной суспензии клеток-мишеней переносят в каждую лунку 96-луночного планшета для микротитрования;
iv) антитело серийно разводят от начальной концентрации 4000 нг/мл до 0,04 нг/мл в среде для культивирования клеток и 50 мкл полученных растворов антител добавляют к клеткам-мишеням в 96-луночном планшете для микротитрования, при этом тестирование повторяют с тремя различными концентрациями антител, охватывающими весь вышеуказанный диапазон концентраций;
v) для контрольных образцов максимального высвобождения (MR) в 3 дополнительные лунки на планшете, содержащие меченные клетки-мишени, помещают 50 мкл 2%-ного (VN) водного раствора неионогенного детергента (Nonidet, Sigma, Сент-Луис) вместо раствора антитела (пункт iv выше);
vi) для контрольных образцов спонтанного высвобождения (SR) в 3 дополнительные лунки на планшете, содержащие меченные клетки-мишени, помещают 50 мкл клеточной культуральной среды RPMI вместо раствора для антитела (пункт iv выше);
vii) 96-луночный планшет затем центрифугируют при 50 x g в течение 1 мин и инкубируют в течение 1 час при температуре 4°С;
2
viii) 50 мкл суспензии РВМС (пункт i выше) добавляют в каждую лунку, получая отношение эффектор : клетка-мишень, равное 25:1, и планшеты на 4 час помещают в инкубатор в атмосферу с 5% СO с температурой 37°С;
ix) не содержащий клетки супернатант из каждой лунки собирают, и высвобожденную в ходе эксперимента радиоактивность (ER) количественно оценивают с помощью гамма-счетчика;
x) процент специфического лизиса вычисляется для каждой концентрации антитела в соответствии с формулой (ER-MR)/(MR-SR)×100, где ER обозначает среднее количество обнаруженной радиоактивности (см. пункт ix выше) для данной концентрации антитела, MR обозначает среднее количество обнаруженной радиоактивности (см. пункт ix выше) для контрольных образцов MR (см. пункт v выше), а SR обозначает среднее количество обнаруженной радиоактивности (см. пункт ix выше) для контрольных образцов SR (см. пункт vi выше);
4) "повышенная ADCC" определяется или как увеличение максимального процента специфического лизиса, который наблюдают в вышеуказанном диапазоне протестированных концентраций антитела, и/или как снижение концентрации антитела, необходимое для достижения половины от максимального процента специфического лизиса, который наблюдают в вышеуказанном диапазоне протестированных концентраций антитела. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, увеличение ADCC наблюдают по отношению к ADCC, измеренной с помощью вышеуказанного анализа, опосредованной одним и тем же антителом, которое продуцирует тот же самый тип клеток-хозяев, с использованием тех же самых стандартных способов получения, очистки, приготовления препаратов и хранения, которые известны специалистам из данной области техники, за исключением того, что препарат антитела сравнения (у которого отсутствует повышенная ADCC) не продуцируется клетками-хозяевами, разработанными для сверхэкспрессии GnTIII и/или разработанными таким образом, чтобы они обладали сниженной экспрессией из гена фукозилтрансферазы 8 (FUT8) (в частности, клетками, включающими клетки, разработанные для нок-аута гена FUT8).
Указанная "увеличенная ADCC" может быть получена, например, путем мутации и/или гликоинжиниринга указанных антител. В одном варианте осуществления настоящего изобретения антитело подвергают гликоинжинирингу с тем, чтобы оно содержало 2-антенарный олигосахарид, присоединенный к Fc-области антитела, которое GlcNAc делит пополам, например, в WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); патенте США № 6602684 (Umana et al.); заявке на патент США 2005/0123546 (Umana et al.), Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180). В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело подвергают гликоинжинирингу, чтобы в углеводе, прикрепленном к Fc-области, отсутствовала фукоза, путем экспрессии антитела в клетке-хозяине, которая имеет дефицит в фукозилировании белка (например, клетки Lec13 СНО или клетки, у которых удален ген альфа-1,6-фукозилтрансферазы (FUT8), или клетки, у которых снижена экспрессия гена FUT (см., например, Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); и WO 2003/085107) В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения последовательность разработана таким образом, что Fc-область антитела усиливает ADCC (например, в одном варианте осуществления настоящего изобретения подобный разработанный вариант антитела содержит Fc-область с одной или несколькими заменами аминокислот в позициях 298, 333 и/или 334 Fc-области (EU нумерация остатков)).
51
51
Термин "комплементзависимая цитотоксичность (CDC)" относится к лизису опухолевых клеток-мишеней человека под действием антител по настоящему изобретению в присутствии комплемента. CDC может быть определена при лечении препаратом клеток, экспрессирующих CD20, с антителом против CD20 по настоящему изобретению в присутствии комплемента. CDC обнаруживают, если антитело при концентрации 100 нМ индуцирует лизис (гибель клеток) 20% или большего количества опухолевых клеток по прошествии 4 час. В одном варианте осуществления настоящего изобретения анализ проводят с мечеными атомами Cr или Eu опухолевыми клетками и измеряют высвободившиеся Cr или Eu. Контрольные образцы включают инкубирование опухолевых клеток-мишеней с комплементом, но без антитела.
Термин "антитело GA101" в данном описании относится к любому из следующих антител, которые связываются с CD20 человека: (1) антитело, которое включает HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1; HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2; HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3; HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4; HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:5, и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:6; (2) антитело, которое включает домен VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7, и VL домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, (3) антитело, которое включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10; (4) антитело, известное как обинутузумаб, или (5) антитело, включающее аминокислотную последовательность, которая, по крайней мере, на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9, и включающее аминокислотную последовательность, которая, по крайней мере, на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:10. В одном варианте осуществления настоящего изобретения антитело GA101 является изотипом антитела IgG1.
Олигосахаридный компонент может значительно влиять на свойства, относящиеся к эффективности терапевтического гликопротеина, в том числе, на физическую стабильность, устойчивость к атаке протеазы, взаимодействие с иммунной системой, фармакокинетику и специфическую биологическую активность. Подобные свойства могут зависеть не только от наличия или отсутствия олигосахаридов, но и от конкретных структур олигосахаридов. Можно сделать некоторые обобщения между структурой олигосахаридов и функцией гликопротеина. Например, некоторые олигосахаридные структуры опосредуют быстрое выведение гликопротеина из кровотока за счет взаимодействия с конкретными связывающимися с углеводами белками, в то время как другие могут связываться антителами и вызывать нежелательные иммунные реакции (Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981).
Клетки млекопитающих являются предпочтительными хозяевами для продуцирования терапевтических гликопротеинов, благодаря их способности гликозилировать белки в форме, наиболее подходящей для применения для человека. (Cumming, D.A., et al., Glycobiology 1 (1991) 115-130; Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981). Бактерии очень редко гликозилируют белки и, как и другие виды обычных хозяев, такие как дрожжи, мицелиальные грибы, клетки насекомых и растений, дают профиль гликозилирования, связанный с быстрым выведением из кровотока, нежелательными иммунными взаимодействиями, а в некоторых особых случаях, со сниженной биологической активностью. Среди клеток млекопитающих в течение последних двух десятилетий наиболее часто используются клетки яичников китайского хомячка (СНО). Помимо подходящих профилей гликозилирования, указанные клетки позволяют осуществить последовательную генерацию генетически устойчивых, высокопродуктивных клонированных клеточных линий. Они могут быть выращены до высоких плотностей в простых биореакторах при использовании не содержащих сыворотку сред и позволяют разработать безопасные и воспроизводимые биопроцессы. Другие часто используемые клетки животных включают клетки почки детеныша хомячка (ВНК), клетки миеломы мыши NSO и SP2/0. Совсем недавно также было испытано продуцирование с использованием трансгенных животных. (Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981).
Все антитела содержат углеводные структуры в консервативных позициях в константных областях тяжелой цепи, при этом каждый изотип обладает определенным набором N-связанных углеводных структур, которые регулируемым образом влияют на сборку, секрецию или функциональную активность белка. (Wright, A., and Monison, S. L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32). Структура прикрепленного N-связанного углевода значительно изменяется в зависимости от степени процессирования и может включать олигосахариды с большим количеством маннозы, множеством разветвлений, а также комплексные 2-антенарные олигосахариды. (Wright, A., and Morrison, S. L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32). Как правило, гетерогенное процессирование внутренней структуры олигосахаридов, прикрепленных к конкретным участкам гликозилирования, происходит таким образом, что даже моноклональные антитела существуют в виде множества гликоформ. Кроме того, было показано, что существенные различия в гликозилировании антител возникают между клеточными линиями, и лишь незначительные различия наблюдаются для данной линии клеток, выращенных в различных условиях культивирования. (Lifely, M. R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822).
Один из способов значительного повышения действенности препарата при сохранении простого способа получения и возможности избежать значительных нежелательных побочных эффектов заключается в усилении природных, клеточно-опосредованных эффекторных функций моноклональных антител путем конструирования их олигосахаридных компонентов, как описано в Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 и патенте США № 6602684. Антитела типа IgG1, наиболее часто используемые антитела в иммунотерапии онкологических заболеваний, представляют собой гликопротеины, которые имеют консервативный N-связанный участок гликозилирования при Asn297 в каждом домене CH2. Два сложных 2-антенарных олигосахарида, прикрепленные к Asn297, спрятаны между доменами CH2, образуя обширные контакты с полипептидным скелетом, и их присутствие имеет важное значение для антитела для того, чтобы опосредовать эффекторные функции, такие как антителозависимая клеточная цитотоксичность (ADCC) (Lifely, M. R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A., and Morrison, S. L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32).
Ранее было показано, что сверхэкспрессия в клетках яичников китайского хомячка (СНО) β(1,4)-N-ацетилглюкозоаминилтрансферазы III ("GnTIII), гликозилтрансферазы, которая катализирует образование разделенных пополам олигосахаридов, значительно увеличивает в условиях in vitro ADCC активность химерного моноклонального антитела против нейробластомы (chCE7), продуцируемого разработанными клетками СНО (См Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180; и WO 99/154342, полное содержание которых включено в данное описание посредством ссылки). Антитело chCE7 принадлежит к большому классу неконъюгированных моноклональных антител, которые проявляют высокое сродство и специфичность к опухолям, но обладают слишком малой действенностью, чтобы быть клинически пригодными, когда их продуцируют в стандартных промышленных клеточных линиях, не имеющих фермент GnTIII (Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180). Это было первое исследование, в котором было показано, что значительное увеличение ADCC активности может быть достигнуто путем разработки клеток, продуцирующих антитела, чтобы экспрессировать GnTIII, что также привело к увеличению доли связанных с константной областью (Fc) разделенных пополам олигосахаридов, в том числе разделенных пополам не фукозилированных олигосахаридов, сверх того уровня, который обнаруживается во встречающихся в природе антителах.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая антитело GA101 по настоящему изобретению, включает антитела GA101, разработанные таким образом, чтобы они имели повышенную ADCC активность.
Термин "Bcl-2" в данном описании относится к белку Bcl-2 (Swiss Prot ID No. P10415), члену семейства белков Bcl-2 (Cory, S., and Adams, J.M., Nature Reviews Cancer 2 (2002) 647-656; Adams, Genes und Development 17 (2003) 2481-2495; Danial, N.N., and Korsmeyer, S.J., Cell 116 (2004) 205-219; Petros, A. M., Biochim. Biophys. Acta 1644 (2004) 83-94).
Термин "селективные ингибиторы Bcl-2" в данном описании относится к 2-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамиду (также обозначаемому как ABT-199 или GDC-0199), ингибитору Bcl-2 формулы I, описанному в Международной публикации № WO 2010/138588 и в заявке на патент США No. US 2010/0305122, которые включены в данное описание посредством ссылки.
2-(1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)-4-(4-((2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-енил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(3-нитро-4-((тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метиламино)фенилсульфонил)бензамид
Формула I
Следует понимать, что термин "экспрессия CD20 антигена" обозначает значительный уровень экспрессии антигена CD20 в клетке, в частности, T- или B-клетке. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, пациенты, которые должны получать лечение в соответствии со способами по настоящему изобретению, экспрессируют значительные уровни CD20 на В-клетках опухоли или онкологического заболевания. Пациентов, имеющих "рак, экспрессирующий CD20", можно определить с помощью стандартных анализов, известных из данной области техники, в частности, экспрессию антигена CD20 определяют с помощью иммуногистохимического исследования (IHC), FACS или посредством ПЦР-обнаружения соответствующих мРНК.
Термин "рак, экспрессирующий CD20" в данном описании относится ко всем онкологическим заболеваниям, в которых раковые клетки демонстрируют экспрессию антигена CD20. Подобным раком, экспрессирующим CD20, могут быть, например, лимфомы, лимфоцитарные лейкозы, рак легких, немелкоклеточный рак легких (NSCL), рак бронхиолоальвиолярных клеток легкого, костный рак, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак головы или шеи, кожная или внутриглазная меланома, рак матки, рак яичника, рак прямой кишки, рак анальной области, рак желудка, рак желудочно-кишечного тракта, рак толстого кишечника, рак молочной железы, рак матки, карцинома фаллопиевых труб, карцинома эндометрия, карцинома шейки матки, карцинома влагалища, карцинома вульвы, болезнь Ходжкина, рак пищевода, рак тонкого кишечника, рак эндокринной системы, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак надпочечников, саркома мягких тканей, рак уретры, рак полового члена, рак предстательной железы, рак мочевого пузыря, рак почки или мочеточника, почечно-клеточная карцинома, карцинома почечной лоханки, мезотелиома, гепатоцеллюлярный рак, онкологическое заболевание печени, новообразования центральной нервной системы (ЦНС), опухоли позвоночника, глиома стволовой части мозга, мультиформная глиобластома, астроцитомы, шванномы, онкологические заболевания эпендимы, медуллобластомы, менингиомы, плоскоклеточный рак, аденома гипофиза, в том числе трудно поддающиеся лечению версии любого из указанных выше видов онкологических заболеваний или комбинации одного или нескольких вышеуказанных видов онкологических заболеваний.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения рак, экспрессирующий CD20, как указано в данном описании, относится к лимфомам (например, В-клеточным неходжкинским лимфомам (NHL)) и лимфоцитарным лейкозам. Подобные лимфомы и лимфоцитарные лейкозы включают, в частности, a) фолликулярные лимфомы, b) лимфомы малых клеток с нерасщепленным ядром/лимфому Беркитта (включая эндемическую лимфому Беркитта, спорадическую лимфому Беркитта и лимфому, отличную от лимфомы Беркитта), c) лимфому маргинальной зоны (в том числе лимфому экстранодальной маргинальной зоны B-клеток (лимфому лимфоидной ткани слизистых оболочек, MALT), лимфому нодальной маргинальной зоны В-клеток и лимфому маргинальной зоны селезенки, d) лимфому клеток мантийной зоны (MCL), е) крупноклеточную лимфому (в том числе диффузную крупноклеточную лимфому B-клеток (DLCL), диффузную смешанно-клеточную лимфому, иммунобластную лимфому, первичную лимфому средостения B-клеток, лимфангиому - легочную B-клеточную лимфому), f) лейкоз ворсистых клеток, g) лимфоцитарную лимфому, макроглобулинемию Вальденстрема, h) острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL)/мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому (SLL), пролимфоцитарный лейкоз B-клеток, i) новообразования плазматических клеток, миелому плазматических клеток, множественную миелому, плазмоцитому, j) болезнь Ходжкина, k) острый миелоидный лейкоз (AML); другие виды лимфом и лимфоцитарных лейкозов.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения рак, экспрессирующий CD20, представляет собой неходжкинскую лимфому В-клеток (NHL). В другом варианте осуществления настоящего изобретения рак, экспрессирующий CD20, представляет собой лимфому клеток мантийной зоны (MCL), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), диффузную крупноклеточную лимфому B-клеток (DLCL), острый миелоидный лейкоз (AML), лимфому Беркитта, лейкоз ворсистых клеток, фолликулярную лимфому, множественную миелому, лимфому маргинальной зоны, посттрансплантационное лимфопролиферативное расстройство (PTLD), ВИЧ-ассоциированную лимфому, макроглобулинемию Вальденстрема или первичную лимфому ЦНС.
"Рецидивирующий или резистентный" CLL, как используется в данном описании, включает CLL пациентов, которые проходили, по крайней мере, 1 предшествующую линию химиотерапии, включающую схемы лечения. У пациентов с рецидивом заболевания после ответа на предшествующую терапию, включающую режимы лечения с использованием химиотерапевтических препаратов, как правило, развивается прогрессирующее заболевание. Трудно поддающиеся лечению пациенты, как правило, не дают ответа на предшествующую химиотерапию или у них возникает рецидив в течение 6 месяцев после последней предшествующей терапии с применением химиотерапевтических препаратов.
"Ранее не получавший лечения" CLL, как используется в данном описании, включает пациентов с диагнозом CLL, которые в общем случае не получали никакой предшествующей химиотерапии или иммунотерапии. Пациентов, имеющих в анамнезе случаи оказания неотложной помощи, местно-региональной лучевой терапии (например, для облегчения признаков или симптомов компрессии) или назначения кортикостероидов, все еще можно считать ранее не получавшими лечение.
Термин "курс лечения" в данном описании, если не указано иное, означает средства для реверсии, облегчения, подавления развития или предотвращения, частичного или полного, роста опухолей, метастазов опухоли или других опухолей, вызывающих рак или опухолевые клетки у пациента. Термин "лечение" в данном описании, если не указано иное, относится к отдельному акту курса лечения.
Термин "способ лечения" или его эквивалент, когда его применяют, например, по отношению к онкологическому заболеванию, относится к методике или типу воздействий, которые предназначены для уменьшения количества или устранения раковых клеток у пациента или для облегчения симптомов онкологического заболевания. "Способ лечения" онкологического заболевания или другого пролиферативного расстройства не обязательно означает, что раковые клетки или другие расстройства будут фактически устранены, что количество клеток или расстройство можно фактически уменьшить или что симптомы онкологического заболевания или другого расстройства будут фактически облегчены. Часто способ лечения онкологического заболевания будет применяться даже при низкой вероятности успеха, но, тем не менее, учитывая анамнез и ожидаемую продолжительность выживания пациента, окажет, как полагают, общее благотворное воздействие. Термины "совместное назначение" или "совместное введение" относятся к введению указанного антитела против CD20 типа II и селективного ингибитора Bcl-2 в виде двух отдельных препаратов. Совместное введение может быть одновременным или последовательным в любом порядке. В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения существует период времени, в течение которого оба (или все) активные агенты одновременно проявляют свою биологическую активность. Указанное антитело против CD20 типа II и указанный селективный ингибитор Bcl-2 совместно вводят одновременно или последовательно (например, внутривенно путем непрерывного вливания (одного для антитела и затем одного для ингибитора Bcl-2; или же ингибитор Bcl-2 вводят перорально)). Когда оба терапевтических агента совместно вводят последовательно, агенты назначают в виде двух отдельных введений, разделенных "определенным периодом времени". Термин "определенный период времени" означает любой период от 1 часа до 15 дней. Например, один из агентов может быть введен в течение приблизительно 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 дня или в течение 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 часа после введения другого агента, и в одном варианте осуществления настоящего изобретения определенный период времени составляет 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 день или 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18,17,16,15,14,13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 час.
Термин "одновременно" означает в одно и то же время или в течение короткого периода времени, обычно составляющего меньше 1 часа.
Период дозирования в данном описании означает период времени, в течение которого каждый терапевтический агент вводят, как минимум, один раз. Цикл дозирования, как правило, составляет приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 дней, а в одном варианте осуществления настоящего изобретения составляет 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 дней, например, 7 или 14 дней.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения период дозирования равен циклу дозирования.
Должно быть вполне очевидным, что антитела вводят пациенту в "терапевтически эффективном количестве" (или просто в "эффективном количестве"), которое представляет собой количество соответствующего соединения или комбинации соединений, вызывающих биологический или терапевтический ответ у ткани, системы, животного или человека, который ожидает исследователь, ветеринар, лечащий врач или другой медицинский работник. Введение эффективного количества терапевтического агента может представлять собой однократное введение либо введение дробной дозы, при этом под "введением дробной дозы" подразумевается, что эффективное количество разбивается на несколько доз, предпочтительно, на 2 дозы, которые вводят в течение 1 или 2 дней. Например, если эффективной считается доза 100 мг селективного ингибитора Bcl-2, то ее можно назначить в виде одного введения 100 мг или двух введений по 50 мг. Введение в виде дробной дозы иногда желательно в начальный период дозирования, чтобы уменьшить побочные эффекты. Когда эффективное количество вводят в виде дробной дозы, она по-прежнему считается одним введение эффективного количества. Например, когда 100 мг представляет собой эффективное количество селективного ингибитора Bcl-2 и когда указанное количество вводят в виде двух доз по 50 мг в течение определенного периода времени, например, в течение 2 дней, то в течение этого периода времени вводят лишь одно эффективное количество.
Количество совместно введенного указанного антитела против CD20 типа II и указанного ингибитора Bcl-2 и сроки совместного введения зависят от типа (вида, пола, возраста, веса и т.д.) и состояния пациента, лечение которого проводят, а также от тяжести заболевания или состояния, которое лечат. Указанное антитело против CD20 типа II и указанный ингибитор Bcl-2 удобно совместно вводить пациенту одновременно или в виде нескольких курсов лечения. В зависимости от типа и тяжести заболевания начальная возможная дозировка для совместного введения обоих препаратов пациенту может составить от приблизительно 1 мкг/кг до 50 мг/кг (в частности, 0,1-20 мг/кг) указанного антитела против CD20 типа II и от 0,1 мг/кг до 200 мг/кг (в частности, 10-150 мг/кг) указанного селективного ингибитора Bcl-2. Если введение осуществляют внутривенно, то начальное время вливания для указанного антитела против CD20 типа II или указанного ингибитора Bcl-2 может быть больше, чем последующие времена вливания, например, может равняться приблизительно 90 мин для начального вливания и приблизительно 30 мин для последующих вливаний (если первоначальное вливание хорошо переносится).
В одном варианте осуществления настоящего изобретения предпочтительная доза указанного антитела против CD20 типа II находится в диапазоне от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг, предпочтительно, от 1 мг/кг до 30 мг/кг; или базовая доза составляет 500 мг-3000 мг. Так, пациенту можно совместно вводить одну или несколько дозировок, равных приблизительно 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг, 10 мг/кг или 30 мг/кг, или базовую дозу 500 мг - 3000 мг (или любую их комбинацию). Предпочтительная доза указанного ингибитора Bcl-2 находится в диапазоне от 20 мг/кг до приблизительно 150 мг/кг, предпочтительно, в диапазоне от 1 мг/кг до 10 мг/кг. В зависимости от типа (вида, пола, возраста, веса и т.д.) и состояния пациента и в зависимости от типа антитела против CD20 и ингибитора Bcl-2, доза и схема введения указанного антитела против CD20 может отличаться от дозы ингибитора Bcl-2. В частности, указанное антитело против CD20 может вводиться, например, каждую неделю или раз в три недели, а указанный ингибитор Bcl-2 может вводиться ежедневно или раз в 2 дня, или раз в 7 дней. Может также назначаться начальная повышенная ударная доза лекарственного средства, а затем одна или несколько меньших доз.
Настоящее изобретение, в частности, относится к композиции, содержащей антитело против CD20 типа II и селективный ингибитор Bcl-2.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция по настоящему изобретению пригодна для предотвращения или уменьшения метастазов или дальнейшей диссеминации у пациента, страдающего от рака, экспрессирующего CD20. Композиция пригодна для увеличения продолжительности выживания подобного пациента, увеличения выживаемости без прогрессирования заболевания подобного пациента, увеличения продолжительности ответной реакции, что приводит к статистически значимому и клинически значимому улучшению у пациента, лечение которого проводят, что определяют по продолжительности выживания, увеличению выживаемости без прогрессирования заболевания, степени ответной реакции или продолжительности ответной реакции. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция пригодна для увеличения степени ответной реакции у группы пациентов.
В контексте настоящего изобретения при комбинированном лечении рака, экспрессирующего CD20, с использованием антитела против CD20 типа II и ингибитора Bcl-2 могут применяться другие дополнительные цитотоксические, химиотерапевтические или противораковые агенты или соединений, которые усиливают воздействие подобных агентов (в частности, цитокины). Подобные молекулы могут, предпочтительно, присутствовать в комбинации в количествах, которые эффективны для указанного назначения. Комбинированное лечение с использованием антитела против CD20 типа II и ингибитора Bcl-2, предпочтительно, применяют без подобных дополнительных цитотоксических химиотерапевтических или противораковых агентов или соединений, которые усиливают эффект подобных агентов.
Подобные агенты включают, например: алкилирующие агенты или агенты с алкилирующим действием, такие как циклофосфамид (СТХ; в частности, CYTOXAN), хлорамбуцил (CHL; в частности, LEUKERAN), цисплатин (CisP; в частности, PLATINOL), бусульфан (в частности, MYLERAN), мелфалан, кармустин (BCNU), стрептозотоцин, триэтиленмеламин (TEM), митомицин С и т.п.; антиметаболиты, такие как метотрексат (МТХ), этопозид (VP16; в частности, VEPESID), 6-меркаптопурин (6MP), 6-тиогуанин (6TG), цитарабин (Ara-C), 5-фторурацил (5-FU) капецитабин (в частности, XELODA), дакарбазин (DTIC) и т.п.; антибиотики, такие как актиномицин D, доксорубицин (DXR; в частности, ADRIAMYCIN), даунорубицин (дауномицин), блеомицин, митрамицин и т.п.; алкалоиды, такие как алкалоиды винка, такие как винкристин (VCR), винбластин и т.п.; и другие противоопухолевые средства, такие как паклитаксел (в частности, TAXOL) и производные паклитаксела, цитостатические агенты, глюкокортикоиды, такие как дексаметазон (DEX; в частности, DECADRON) и кортикостероиды, такие как преднизон, нуклеозидные ингибиторы ферментов, такие как гидроксимочевина, истощающие аминокислоты ферменты, такие как аспарагиназа, лейковорин и другие производные фолиевой кислоты и подобные разнообразные противоопухолевые агенты. Следующие средства также могут быть использованы в качестве дополнительных агентов: арнифостин (в частности, ETHYOL), дактиномицин, мехлорэтамин (азотистый иприт), стрептозоцин, циклофосфамид, ломустин (CCNU), доксорубицин липосомальный (в частности, DOXIL), гемцитабин (в частности, GEMZAR), даунорубицин липосомальный (в частности, DAUNOXOME), прокарбазин, митомицин, доцетаксел (в частности, TAXOTERE), алдеслейкин, карбоплатин, оксалиплатин, кладрибин, камптотецин, СРТ 11 (иринотекан), 10-гидрокси 7-этил-камптотецин (SN38), флоксуридин, флударабин, ифосфамид, идарубицин, месна, интерферон бета, интерферон альфа, митоксантрон, топотекан, лейпролид, мегестрол, мелфалан, меркаптопурин, пликамицин, митотан, пегаспаргаза, пентостатин, пипоброман, пликамицин, тамоксифен, тенипозид, тестолактон, тиогуанин, тиотепа, урамустин, винорелбин, хлорамбуцил. Комбинированное лечение с использованием антитела против CD20 типа II и ингибитора Bcl-2, предпочтительно, применяют без подобных дополнительных агентов.
Применение вышеуказанных цитотоксических и противораковых агентов, а также антипролиферативных мишень-специфических противораковых препаратов, таких как ингибиторы протеинкиназы в схемах назначения химиотерапевтических препаратов, в общем случае хорошо известно в области терапии онкологических заболеваний, и их использование в данном описании, с некоторыми изменениями, следует рассматривать с точки зрения тех же соображений, с целью мониторинга переносимости и эффективности и для контролирования путей введения и дозировки. Например, фактические дозы цитотоксических агентов могут изменяться в зависимости от ответной реакции выращенных клеток, которую определяют с использованием метода гистокультур. В общем случае дозировка будет снижена, по сравнению с количеством, которое используют в отсутствие других дополнительных агентов.
Типичные дозы эффективного цитотоксического агента могут попадать в диапазон, рекомендованный производителем, и там, где указано в ответных реакциях в условиях in vitro, и ответных реакциях на животных моделях величина концентрации или количество могут быть уменьшены приблизительно на один порядок. Таким образом, фактическая доза будет зависеть от диагноза врача, состояния пациента, а также эффективности терапевтического метода, который основывается на восприимчивости в условиях in vitro первичных культивированных злокачественных клеток или образца гистокультуры ткани, или ответных реакциях, наблюдаемых в подходящих животных моделях.
В контексте настоящего изобретения при комбинированном лечении рака, экспрессирующего CD20, в дополнение к антителу против CD20 типа II и ингибитора Bcl-2, может быть использовано эффективное количество ионизирующего излучения и/или радиофармацевтического препарата. Источник излучения может быть либо внешним, либо внутренним для пациента, который проходит лечение. Когда источник является внешним для пациента, лечение называют наружной дистанционной лучевой терапией (EBRT). Если источник радиации является внутренним для пациента, лечение называют брахитерапией (BT). Радиоактивные атомы для использования в контексте настоящего изобретения могут быть выбраны из группы, включающей, однако этим не ограничиваясь, радий, цезий-137, иридий-192, америций-241, золото-198, кобальт-57, медь-67, технеций-99, иод-123, иод-131 и индий-111. Можно также пометить антитела подобными радиоактивными изотопами. Комбинированное лечение с использованием антитела против CD20 типа II и ингибитора Bcl-2, предпочтительно, применяют без подобного ионизирующего излучения.
Лучевая терапия является стандартом лечения при борьбе с нерезектабельными или неоперабельными опухолями и/или метастазами опухолей. Улучшенные результаты были отмечены в том случае, когда лучевую терапию применяют в сочетании с химиотерапией. Лучевая терапия основана на том принципе, что большие дозы радиации, направленные в область-мишень, ведут к смерти репродуктивных клеток как в опухолевых, так и нормальных тканях. Режим дозы облучения, как правило, определяется поглощенной дозой излучения (Gy), временем и фракционированием, и должен быть тщательно определен онкологом. Количество радиации, которое получает пациент, зависит от различных факторов, однако двумя наиболее важными факторами являются локализация опухоли по отношению к другим критическим структурам или органам тела и степень распространения опухоли. Типичный курс лечения для пациента, подвергающегося лучевой терапии, включает схему лечения в течение от 1 до 6 недель при общей дозе от 10 до 80 Gy, которую вводят пациенту в виде одной суточной доли, приблизительно равной от 1,8 до 2,0 Gy, 5 дней в неделю. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения наблюдается синергизм, когда опухоли у больных людей лечат с применением комбинированной терапии по данному изобретению и излучения. Другими словами, ингибирование роста опухоли с использованием агентов, включающих комбинацию по настоящему изобретению, усиливается в сочетании с излучением, необязательно с дополнительными химиотерапевтическими или противоопухолевыми агентами. Параметры вспомогательной лучевой терапии, например, указаны в WO 99/60023.
Антитела против CD20 типа II назначают пациенту в соответствии с известными способами, например, путем внутривенного введения в виде болюса или путем непрерывного вливания в течение определенного периода времени, посредством внутримышечного, внутрибрюшинного, интрацереброспинального, подкожного, интраартикулярного, внутрисуставного или внутриоболочечного введения. Предпочтительными являются внутривенное или подкожное введение антител.
Ингибиторы Bcl-2 назначают пациенту в соответствии с известными методами, например, путем внутривенного введения в виде болюса или путем непрерывного вливания в течение определенного периода времени, посредством внутримышечного, внутрибрюшинного, интрацереброспинального, подкожного, интраартикулярного, внутрисуставного, внутриоболочечного или перорального введения. Предпочтительными являются внутривенное, подкожное или пероральное введение ингибиторов Bcl-2.
Настоящее изобретение касается набора реагентов, содержащего антитело против CD20 типа II и селективный ингибитор Bcl-2 для комбинированного лечения пациента, страдающего от онкологического заболевания, которое экспрессирует CD20.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанный набор реагентов дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель. Набор может дополнительно включать стерильный разбавитель, который предпочтительно хранят в отдельном контейнере. Набор может дополнительно включать вкладыш в упаковку лекарственного препарата, содержащий печатные инструкции по использованию комбинированной терапии в качестве способа лечения ракового заболевания, экспрессирующего CD20, преимущественно, неходжкинской лимфомы В-клеток (NHL).
Термин "вкладыш в упаковку" относится к инструкциям, которые обычно включают в промышленные упаковки терапевтических препаратов, которые могут содержать информацию относительно показаний, использования, дозировки, способа введения, противопоказаний и/или предупреждений, касающихся применения подобных терапевтических препаратов.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения контейнеры готового препарата могут дополнительно включать фармацевтически приемлемый носитель. Готовое изделие может дополнительно включать стерильный разбавитель, который предпочтительно хранят в отдельном контейнере.
Следует понимать, что в данном описании "фармацевтически приемлемый носитель" включает любые и все вещества, совместимые с фармацевтическим введением, в том числе растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические средства, задерживающие всасывание агенты и другие вещества и соединения, совместимые с фармацевтическим введением. За исключением тех случаев, когда обычная среда или агент не совместимы с активным соединением, предполагается, что фармацевтический носитель может применяться в композициях по настоящему изобретению. В композиции могут быть также включены дополнительные активные соединения.
Фармацевтические композиции и способы
Фармацевтические композиции могут быть получены путем технологической обработки антитела против CD20 типа II или активного агента против Bcl-2 в соответствии с настоящим изобретением вместе с фармацевтически приемлемыми неорганическими или органическими носителями. В качестве подобных носителей для таблеток, таблеток с покрытием, драже и твердых желатиновых капсул могут быть использованы, например, лактоза, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновая кислота или его соли и т.п. Подходящими носителями для мягких желатиновых капсул являются, например, растительные масла, воски, жиры, полутвердые и жидкие полиолы и т.п. В зависимости от типа активного вещества никаких носителей, однако, обычно не требуется в случае мягких желатиновых капсул. Подходящими носителями для получения растворов и сиропов являются, например, вода, полиолы, глицерин, растительное масло и т.п. Подходящими носителями для суппозиториев являются, например, натуральные или отвержденные масла, воски, жиры, полужидкие или жидкие полиолы и т.п.
Кроме того, фармацевтические композиции могут содержать консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, подсластители, красители, ароматизаторы, соли для изменения осмотического давления, буферные добавки, маскирующие агенты или антиоксиданты. Они также могут содержать и другие терапевтически полезные вещества.
Указанная фармацевтическая композиция может дополнительно содержать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей.
В настоящем изобретение предлагается также фармацевтическая композиция, в частности, композиция против онкологического заболевания, которая включает (i) эффективное первое количество антитела против CD20 типа II или (ii) эффективное второе количество селективного ингибитора Bcl-2. Подобная композиция необязательно содержит фармацевтически приемлемые носители и/или наполнители.
Фармацевтические композиции одного лишь антитела против CD20 типа II, которые используют в соответствии с настоящим изобретением, готовят для хранения в форме лиофилизованных композиций или водных растворов путем смешиванием антитела, имеющего требуемую степень чистоты, с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или стабилизаторами (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)). Приемлемые носители, наполнители или стабилизаторы нетоксичны для реципиентов в используемых дозах и концентрациях и включают буферные добавки, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, в том числе аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония; бутилфенол или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехин; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные (менее чем приблизительно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, в том числе глюкоза, манноза или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТК; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, Zn-белковые комплексы); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™, PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ).
Фармацевтические композиции одного лишь активного вещества против Bcl-2, например, ингибитора Bcl-2, зависят от их фармацевтических свойств; например для малых химических соединений, таких как, например, ABT-737, ABT-199 или ABT-263 одна композиция могла быть иметь, например, следующий состав:
a) Состав таблетки (Влажная грануляция):
Пункт
Ингредиенты
Мг/таблетка
1
Соединение формулы (I)
5
25
100
500
2
Безводная лактоза DTG
125
105
30
150
3
Sta-Rx 1500
6
6
6
30
4
Микрокристаллическая целлюлоза
30
30
30
150
5
Стеарат магния
1
1
1
1
Всего
167
167
167
831
Методика изготовления:
1. Смешивание веществ по пп.1, 2, 3 и 4 и гранулирование с использованием очищенной водой.
2. Сушка гранул при 50°С.
3. Пропускание гранул через соответствующее помольное оборудование.
4. Добавление вещества по п.5 и перемешивание в течение трех минут; прессование с помощью подходящего пресса.
b) Состав капсулы:
Пункт
Ингредиенты
Мг/гранула
1
Соединение формулы (I)
5
25
100
500
2
Безводная лактоза
159
123
148
---
3
Кукурузный крахмал
25
35
40
70
4
Тальк
10
15
10
25
5
Стеарат магния
1
2
2
5
Всего
200
200
300
600
Методика изготовления:
1. Смешивание веществ по п.1, 2 и 3 в подходящем смесителе в течение 30 мин.
2. Добавление веществ по пп.4 и 5 и перемешивание в течение 3 мин.
3. Заполнение подходящих капсул.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции по настоящему изобретению представляют собой две отдельные композиции для указанного антитела против CD20 типа II и указанного ингибитора Bcl-2.
th
Активные ингредиенты могут быть также заключены в микрокапсулы, приготовленные, например, способами коацервации или путем полимеризации на границе раздела, например, в микрокапсулы гидроксиметилцеллюлозы или желатиновые микрокапсулы и в микрокапсулы поли(метилметакрилата), соответственно, в коллоидных системах доставки лекарственных средств (например, липосомах, микросферах альбумина, микроэмульсиях, наночастицах и нанокапсулах) или макроэмульсиях. Подобные способы описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences 16 edition, Osol, A. Ed. (1980).
Могут быть приготовлены препараты с замедленным высвобождением лекарственного средства. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие антитело, где матрицы находятся в виде формованных изделий, в частности, пленок или микрокапсул. Примеры матриц с замедленным высвобождением включают сложные полиэфиры, гидрогели (например, поли(2-гидроксиэтилметакрилат) или поли(виниловый спирт)), полилактиды (US 3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и гамма-этил-L-глутамата, не разлагаемый этиленвинилацетат, разлагаемые сополимеры молочной кислоты - гликолевой кислоты, такие как LUPRON DEPOT™ (вводимые путем инъекции микросферы, состоящие из сополимеров молочной кислоты - гликолевой кислоты и ацетата лейпролида) и поли-D-(-)-3-гидроксимасляной кислоты.
Композиции, которые предназначены для использования в условиях in vivo, должны быть стерильными. Это легко достигается путем фильтрации через стерильные фильтрационные мембраны.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются способы получения, в которых эффективное количество антитела GA101 приготавливают для лечения онкологического заболевания в комбинации с эффективным количеством GDC-0199.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются способы получения, в которых эффективное количество GDC-0199 приготавливают для лечения онкологического заболевания в комбинации с эффективным количеством антитела GA101.
В предлагаемых способах получения приготовленное эффективное количество антитела GA101 может, например, находиться в диапазоне от 500 мг до 1 г, или может, например, представлять собой эффективные количества, которые обсуждаются в приведенных выше параграфах. В предлагаемых способах получения эффективное количество GDC-0199 можно, например, находиться в диапазоне от 20 мг до 1 г, или может, например, представлять собой эффективные количества, которые обсуждаются в приведенных выше параграфах. Подлежащим лечению онкологическим заболеванием может, например, быть любое из онкологических заболеваний, которое уже обсуждалось ранее в данной заявке на изобретение.
Настоящее изобретение относится, в частности, к способу лечения пациента, страдающего от онкологического заболевания, в частности, от рака, экспрессирующего CD20, который включает совместное введение пациенту, нуждающемуся в подобном лечении, антитела против CD20 типа II и селективного ингибитора Bcl-2. Указанное антитело против CD20 типа II и активное вещество против Bcl-2 вводят в эффективных количествах.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения цикла дозирования составляет 28 дней.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предлагается способ лечения онкологического заболевания у пациента, приведенный в данном описании, при этом указанный способ включает введение пациенту антитела против CD20 типа II и селективного ингибитора Bcl-2 в течение одного или более циклов дозирования. Один вариант осуществления настоящего изобретения включает один или несколько циклов дозирования, каждый из которых продолжается, по крайней мере, одну неделю. Другой вариант осуществления настоящего изобретения включает один или несколько циклов дозирования, каждый из которых продолжается, по крайней мере, две недели, три недели, четыре недели, пять недель, шести недель, семь недель, восемь недель, девять недель или больше девяти недель. В одном варианте осуществления настоящего изобретения каждый цикл дозирования длится четыре недели.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения терапевтические агенты вводят пациенту в течение одного цикла дозирования.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения, терапевтические агенты вводят пациенту в течение больше чем одного цикла дозирования, например, в течение двух, трех, четырех, пяти, шести, семи или более семи циклов дозирования. В качестве примера, цикл дозирования продолжается четыре недели, и пациенту назначают один или оба терапевтических агента в течение шести циклов дозирования, при этом режим лечения составляет 24 недели, например, как показано на схемах дозирования, приведенных на фигуре 3.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предлагаются способы лечения онкологического заболевания у нуждающегося в этом пациента, которые включают введение указанному пациенту антитела GA101 и/или GDC-0199 в течение многократных циклов дозирования.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения как антитело GA101, так и GDC-199 вводят пациенту в течение одного или нескольких циклов дозирования в многократных циклах дозирования, и одно из антитела GA101 и GDC-0199 вводят в течение одного или нескольких циклов дозирования в многократных циклах дозирования.
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, приведенных в данном описании, терапевтические агенты вводят в рамках схемы дозирования, включающей две или три фазы лечения, при этом каждая фаза лечения имеет, по меньшей мере, один цикл дозирования, который отличается от цикла дозирования в другой фазе лечения. Например, в одном варианте осуществления настоящего изобретения, где цикл дозирования включает четыре недели, антитело против CD20 типа II может быть введено пациенту один раз в неделю в течение двух или нескольких недель первого цикла дозирования (например, в первой фазе лечения) и может быть введено один раз за цикл дозирования в дозирующих циклах, которые следуют за первым циклом дозирования (например, во второй фазе лечения).
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, приведенных в данном описании, антитело против CD20 типа II вводят пациенту один раз в неделю в течение, по меньшей мере, одной недели цикла дозирования. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, где цикл дозирования длится в течение двух или более недель, антитело против CD20 типа II вводят пациенту один раз в течение цикла дозирования.
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, приведенных в данном описании, GDC-0199 вводят один раз в день в течение цикла дозирования.
Как GDC-0199, так и антитело против CD20 типа II могут, например, назначаться пациенту в одном цикле дозирования. В некоторых циклах дозирования пациенту вводят только один терапевтический агент.
В некоторых вариантах осуществления способов, приведенных в данном описании, терапевтические агенты вводят пациенту в соответствии со схемами дозирования, включающими многократные циклы дозирования, при этом многократные циклы дозирования содержат первую фазу лечения, включающую циклы дозирования, в которых в каждом цикле дозирования антитело против CD20 типа II вводят один раз за цикл дозирования, а GDC-0199 назначают каждый день цикла дозирования. Каждый из подобных циклов дозирования в первой фазе лечения может, например, продолжаться в течение четырех недель. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения многократные циклы дозирования могут дополнительно содержать вторую фазу лечения, где пациенту вводят лишь антитело против CD20 типа II или где пациенту вводят лишь GDC-0199 (например, во время поддерживающей фазы).
В некоторых вариантах осуществления способов, приведенных в данном описании, как антитело против CD20 типа II, так и GDC-0199 вводят пациенту в течение одного или нескольких циклов дозирования (например, в фазе лечения), а затем пациенту может вводиться только GDC-0199 (например, во время поддерживающей фазы).
В некоторых вариантах, где GDC-0199 в одиночку вводят пациенту после комбинированной терапии, GDC-0199 можно, например, вводить один раз в день, раз в два дня, один раз в три дня, раз в четыре дня, раз в пять дней или раз в шесть дней или один раз в неделю.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, лишь антитело против CD20 типа II вводят пациенту после комбинированной терапии, при этом антитело против CD20 типа II можно, например, вводить один раз в неделю, раз в две недели или раз в месяц.
В некоторых вариантах осуществления способов лечения, приведенных в данном описании, количество GDC-0199 на дозу, которую назначают пациенту, увеличивается во время проведения первого цикла дозирования. (См., например, фигуру 2 как пример схемы дозирования, где количество GDC-0199, назначенное пациентам в первом цикле дозирования, увеличивается от 50 мг дозы в первую неделю до 100 мг дозы во вторую неделю и до 300 мг в третью неделю.)
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения возрастающие дозы GDC-0199 вводят пациенту перед введением антитела против CD20 типа II. В других вариантах осуществления настоящего изобретения возрастающие дозы GDC-0199 вводят пациенту после того, как пациенту ввели антитело против CD20 типа II.
В некоторых вариантах осуществления способа лечения, приведенного в данном описании, количество GDC-0199, которое вводят пациенту за одну дозу, увеличивается в ходе первого цикла дозирования от начальных количеств в диапазоне от 10 мг до 80 мг до конечных количеств в диапазоне от 190 мг до 400 мг. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения количество GDC-0199 на дозу, которое вводят пациенту, начинается с 50 мг или 100 мг и повышается до 300 мг на дозу. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения количество GDC-0199 в начальных дозах, назначаемых пациенту, может, например, находиться в диапазоне от 20 мг до 60 мг (например, доза может составлять 20 мг, 25 мг, 30 мг, 35 мг, 40 мг, 45 мг, 50 мг, 55 мг или 60 мг) с последующими дозами 100 мг, 200 мг, 300 мг или больше GDC-0199.
В некоторых вариантах осуществления способов, приведенных в данном описании, дозы GDC-0199 вводят пациенту в возрастающих количествах до первого введения антитела против CD20 типа II. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дозы GDC-0199 вводят пациенту в возрастающих количествах после первого введения антитела против CD20 типа II.
В настоящем описании термин "пациент", как правило, относится к человеку, нуждающемуся в лечении с использованием антитела против CD20 типа II (в частности, к пациенту, страдающему от рака, который экспрессирует CD20) для любых целей, и в одном варианте осуществления настоящего изобретения относится к человеку, нуждающемуся в подобном лечении, с целью лечения онкологического заболевания, или предракового состояния, или патологического изменения. Однако термин "пациент" может также относиться к животным, отличным от человека, предпочтительно, к млекопитающим, таким как, среди прочих, собаки, кошки, лошади, коровы, свиньи, овцы и отличные от человека приматы.
Кроме того, настоящее изобретение включает антитела против CD20 типа II для лечения рака, экспрессирующего CD20, в комбинации с селективным ингибитором Bcl-2.
Кроме того, настоящее изобретение включает антитела против CD20 типа II для лечения пациента, страдающего от рака, экспрессирующего CD20, в комбинации селективным ингибитором Bcl-2.
Кроме того, настоящее изобретение включает антитело против CD20 типа II и селективный ингибитор для использования при лечении рака, экспрессирующего CD20.
Кроме того, изобретение включает антитело против CD20 типа II и селективный ингибитор Bcl-2 для применения при лечении пациента, страдающего от рака, экспрессирующего CD20.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения, указанным селективным ингибитором Bcl-2 является ABT-199.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанное антитело против CD20 типа I имеет отношение связывающей способности к CD20 на клетка Raji (АТСС-No. CCL-86) указанного антитела против CD20 типа II, по сравнению с ритуксимабом, равное от 0,3 до 0,6, и в одном варианте осуществления настоящего изобретения от 0,35 до 0,55, а в другом варианте осуществления настоящего изобретения от 0,4 до 0,5.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанным антителом против CD20 типа II является антитело GA101.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанное антитело против CD20 типа II обладает повышенной антителозависимой клеточной цитотоксичностью (ADCC).
В некоторых вариантах осуществления способов лечения онкологического заболевания у пациента, приведенных в данном описании, онкологическим заболеванием является несолидная опухоль. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, несолидная опухоль представляет собой не солидную опухоль, экспрессирующую CD20. Примеры несолидной опухоли, которую можно лечить с использованием способов, приведенных в данном описании, включают, например, лейкоз или лимфому. В одном варианте осуществления настоящего изобретения несолидной опухолью является лимфома В-клеток.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения раком, экспрессирующим CD20, является В-клеточная неходжкинская лимфома (NHL).
В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанным антителом против CD20 типа II является моноклональное антитело.
Следующие примеры, перечень последовательностей и цифры приведены для облегчения понимания настоящего изобретения, истинный объем которого изложен в прилагаемой формуле изобретения. Должно быть понятно, что в приведенные методики могут быть внесены модификации, которые не противоречат сущности настоящего изобретения.
Примеры
Пример 1. Лечение лимфомы с помощью комбинации GDC-0199 и обинутузумаба.
Данные доклинических исследований подтверждают гипотезу, что комбинация GDC-0199 и GA101 (в данном случае, обинутузумаба) демонстрирует бóльшую противоопухолевую активность, чем каждый из препаратов, когда их вводят в одиночку. В исследовании в качестве ксенотрансплантатной модели агрессивной лимфомы используют неходжкинскую лимфому (NHL), клеточная линия SU.DHL-4, полученную из диффузной крупноклеточной лимфомы В-клеток (DLBCL). Обинутузумаб вводят внутривенно с дозой 1 мг/кг один раз в неделю в течение 3 недель и добиваются стаза опухоли с последующей задержкой ее роста. GDC-0199 вводят один раз в день с дозой 100 мг/кг в течение 21 дней и также добиваются стаза с последующей задержкой роста опухоли. Однако сочетание GDC-0199 и обинутузумаба вызывает больше, чем аддитивный эффект, который приводит к регрессу опухоли (5 из 8 частичных регрессов (PRs), см. фигуру 1). Три недели комбинированной терапии дают повышенное ингибирование роста опухоли (TGI) (118% TGI), по сравнению с 76% (GA101) и 80% (GDC 0199) TGI, который наблюдается при введении лишь одного агента (см. фигуру 1). Повышенный регресс опухоли (5 PRs) также наблюдается, когда GA101 комбинируют с GDC 0199, по сравнению с введением лишь одного агента. Кроме того, TGI поддерживается в группе комбинированного лечения после того, как лечения было завершено в день 21, поскольку 116% TGI наблюдался в день 31 (10 дней после окончания дозирования), по сравнению с 30% TGI при использовании GA101 и 25% TGI при использовании GDC 0199 в качестве единственных агентов. Таким образом, GA101 в сочетании с GDC 0199 приводит к увеличению TGI и регрессу опухоли, по сравнению с каждым агентом по отдельности, которые вводят в модели ксенотрансплантата NHL.
В данном исследовании в качестве носителей для GA101 и GDC-0199 используют физиологический раствор и 60%-ный фосал, соответственно. На фигуре 1 доза GDC-0199 выражена как эквивалент свободного основания в мг/кг веса тела. Результаты приведены в виде аппроксимированного объема опухоли, который определяют линейным моделированием со смешанными эффектами для каждой группы в зависимости от времени обработки, выраженного в днях, где день 0 является первым днем лечения.
Пример 2. Фаза Ib многоцентрового исследования GDC-0199 и обинутузумаба для пациентов с рецидивирующим, или резистентным, или ранее не получавшим лечение хроническим лимфолейкозом.
Оценивают две схемы лечения: Схема A (Фигура 2), включающая введение GDC-0199 в возрастающих дозах в течение 3 недель до первого вливания обинутузумаба, и Схема B (Фигура 3), включающая вначале введение обинутузумаба с последующими возрастающими уровнями дозирования GDC-0199. Схему 1 и группу 1 Схемы B включают в исследование параллельно. Кроме того, на этапе подбора дозировок определяют, приведет ли введение GDC-0199 до первого вливания обинутузумаба (Схема А) к снижению числа случаев инфузионных реакций и тем самым снижают потребность в применении фракционированных доз обинутузумаба и кортикостероидной премедикации.
Фаза расширения включает два расширения групп до 20 пациентов в каждой (рецидивирующие/трудноизлечимые и ранее не получавшие лечения CLL) и оценку безопасности и предварительной эффективности выбранного сочетания дозы и схемы введения лекарственного средства.
В Схеме А комбинированное лечение с использованием GDC-0199 и обинутузумаб назначают в общей сложности в течение 7 циклов по 28 дней в каждом, в оно включает в общей сложности 8 вливаний обинутузумаба и GDC-0199 один раз в день.
В Схеме B комбинированное лечение с использованием GDC-0199 и обинутузумаба назначают в общей сложности в течение 6 циклов по 28 дней в каждом, и оно включает в общей сложности 9 вливаний обинутузумаба (8 доз; первую дозу разделяют на два вливания) и GDC-0199 один раз в день.
Монотерапия с использованием GDC-0199 может быть продолжена для пациентов сверх 6-7 циклов описанной выше комбинированной терапии (например, если они имеют приемлемую токсичность и еще не достигли максимальной клинической реакции (т.е. продолжают оказывать улучшающее действие/сокращают опухолевую массу, которая еще не стабилизировалось, по крайней мере, в течение 2 месяцев)). Для подобных пациентов монотерапия с использованием GDC-0199 может продолжаться до тех пор, пока не будет достигнут максимальный ответ, или вплоть до 1 года после того, как был включен последней пациент, в зависимости от того, какое событие наступит раньше.
Пример 3. Противоопухолевая активность комбинированной терапии с использованием GDC-0199 и антитела против CD20 типа II (обинутузумаба) в сравнении с комбинированной терапией с использованием GDC-0199 и антитела против CD20 типа I (ритуксимаба).
Тестируемые агенты. В качестве антитела против CD20 типа II используют антитело GA101 IgG1 (химерное гуманизированное антитело IgG1, раскрытое в WO 2005/044859 (под названием B-HH6-B-KV1 GE, а также известное как обинутузумаб или RO5072759), которое поставляется в виде маточного раствора (концентрация 9,4 мг/мл) компанией Roche GlycArt, Шлирен, Швейцария. Буферный раствор для антитела включает гистидин, трегалозу и полисорбат 20. Перед инъекцией раствор антитела разбавляют надлежащим образом с помощью PBS из маточного раствора. GDC-0199 получают от компании Genentech Inc., Калифорния, США.
2
Клеточная линии и условия культивирования. Клеточную линию Z138 лимфомы из клеток мантийной зоны человека культивируют обычным образом в среде DMEM, дополненной 10% сывороткой плода коровы (PAA Laboratories, Австрия) и 2 мМ L-глутамина, при температуре 37°С в атмосфере, насыщенной водой и содержащей 5% CO. Клетки вводят совместно с матригелем.
Животные. Самки SCID мышей с врожденным отсутствием естественных клеток-киллеров; возраст 5-6 недель на момент поступления (приобретают у компании Charles River, Зульцфельд, Германия), которых содержат в специфических свободных от патогенов условиях с дневными циклами 12 час света/12 час темноты в соответствии с прилагающимися руководствами (GV-Solas; Felasa; TierschG). Методика экспериментального исследования была рассмотрена и одобрена муниципальными властями (Regierung von Oberbayern; регистрационный номер 55.2-1-54-2531.2-26-09). После поступления животных содержат в карантинной части вивария в течение одной недели, чтобы они привыкли к новой среде и с целью наблюдения. Непрерывный мониторинг состояния здоровья проводят на регулярной основе. Диетическое питание (Altromin Spezialfutter GmbH & Co. KG) и воду (отфильтрованную) предоставляют без ограничений.
Мониторинг. Животные находятся под ежедневным контролем на наличие клинических симптомов и выявление побочных эффектов. Для мониторинга в процессе эксперимента массу тела животных фиксируют два раза в неделю, и объем опухоли измеряют штангенциркулем после стадирования.
Лечение животных. Лечение животных начинают в день рандомизации через 18 дней после инокуляции опухолевых клеток. RO5072759 или ритуксимаб внутрибрюшинно вводят в качестве единственного агента один раз в неделю (день 18, 25, 32) в течение 3 недель с дозой 1 мг/кг. В те же дни вводят соответствующий носитель. GDC-0199 вводят перорально один раз в день (в период от дня 18 до дня 34) в течение 17 дней с дозой 100 мг/кг. В группах комбинированной терапии антитела и GDC-0199 вводят с теми же дозами и в те же дни.
Исследование ингибирования роста опухоли в условиях in vivo. Результаты терапевтического действия на развитие объема опухоли показаны на фигуре 4. В день 35 после инокуляции опухолевых клеток ингибирование роста опухоли составляет 32%, 59%, 73%, 96% или 106%) (регресс) у животных, которым давали ритуксимаб, GDC-0199, RO5072759, комбинацию GDC-0199 плюс ритуксимаб или комбинацию GDC-0199 плюс RO5072759, соответственно, по сравнению с контрольной группой.
Пример 4. Введение GDC-0199 в качестве единственного агента с последующей комбинацией с обинутузумабом приводит к значительной задержке в возобновлении роста опухоли.
Данный пример описывает результаты с использованием модели ксенотрансплантата DLBCL SU-DHL-4, которые обсуждались выше в примере 1. Вначале GDC-0199 вводят перорально непрерывно 21 день в сочетании с GA101 (в данном примере, с обинутузумабом) с дозой 1 мг/кг в течение 3 недель. Последние результаты приводят к повышению TGI (91%), по сравнению со значениями 54% (GA101) и 24% (GDC-0199) TGI, которые наблюдаются с каждым агентом по отдельности (фигура 5). В день 22 мышам с опухолями в комбинированной группе по-прежнему вводят только GDC-0199 с дозой 100 мг/кг в течение еще 24 дней. Последнее приводит к значительной задержке в возобновлении роста опухоли, по сравнению с мышами, которых лечат комбинацией GA101 и GDC-0199 в течение 21-дневного периода (время до прогрессирования опухоли в комбинированной группе=38 дней против продолжения лечения с GDC-0199=45 дней (Фигура 5)). Таким образом, лечение с помощью одного препарата GDC-0199 после комбинации с GA101 сохраняет эффективность в условиях in vivo. Указанные результаты подтверждают пользу поддерживающей терапии с использованием GDC-0199.
⎯
На фигуре 5 контролем является физиологический раствор для GA101 плюс носитель 60%-ный фосал для GDC-0199. GA101 вводят внутривенно один раз в неделю (QW) в течение 3 недель, а GDC-0199 вводят перорально и ежедневно (QD) в течение 21 дней (QD×21) в качестве отдельного агента или в комбинации. Как указано выше, группе мышей с опухолями также вводят один лишь GDC-0199 в течение еще 24 дней после завершения комбинированного лечения в день 21 (QD×45). Под осью х периоды лечения обозначены сплошными черные линиями () для комбинированных групп, а продолжающееся лечение с использованием единственного агент GDC-0199 обозначается пунктирной черной линией (---).
Все публикации и патентные заявки, цитируемые в данном описании, включены в настоящую заявку посредством ссылки так, как если бы каждая индивидуальная публикация или патентная заявка специально и индивидуально была указана для включения в настоящую заявку посредством ссылки. Хотя данное изобретение было описано с определенными подробностями в качестве иллюстрации и примера, с целью облегчить понимание настоящего изобретения, специалистам в данной области техники с учетом приведенного описания должно быть понятно, что в него могут быть внесены определенные изменения и модификации, которые не отходят от сущности или не выходя за объем прилагаемой формулы изобретения.