БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА К HER2 И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Биспецифическое антитело, специфически связывающееся с HER2, которое содержит первый антигенсвязывающий сайт, специфический в отношении внеклеточного домена II HER2, и второй антигенсвязывающий сайт, специфический в отношении внеклеточного домена IV HER2, где биспецифическое антитело является одновалентным в отношении обоих внеклеточных доменов II и IV HER2.
2. Биспецифическое антитело по п. 1, где указанное антитело индуцирует комплементзависимую цитотоксичность в более высокой степени, чем комбинация пертузумаба и трастузумаба.
3. Биспецифическое антитело по п. 2, где комплементзависимую цитотоксичность биспецифического антитела определяют с помощью анализа ЛДГ или анализа комплемента и сравнивают с комплементзависимой цитотоксичностью комбинации пертузумаба и трастузумаба, определенной с помощью такого же анализа.
4. Биспецифическое антитело по п. 2 или 3, где комплементзависимую цитотоксичность определяют in vitro на раковых клетках, предпочтительно на клетках рака молочной железы.
5. Биспецифическое антитело по одному из предыдущих пунктов, содержащее первую молекулу Fab, которая обладает способностью специфически связываться с внеклеточным доменом II HER2, и вторую молекулу Fab, которая обладает способностью специфически связываться с внеклеточным доменом IV HER2, при этом последовательность вариабельной легкой цепи первой молекулы Fab идентична последовательности вариабельной легкой цепи второй молекулы Fab.
6. Биспецифическое антитело по п. 5, содержащее
(а) первую тяжелую цепь, которая содержит
CDR1 тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 58 и SEQ ID NO: 14;
CDR2 тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 77; SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 60, и
CDR3 тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 56 или SEQ ID NO: 59 и SEQ ID NO: 16, и
(б) вторую тяжелую цепь, которая содержит CDR1 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 20, CDR2 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 29, и CDR3 тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 30 и SEQ ID NO: 79,
(в) первую и вторую легкие цепи, в которых вариабельные легкие цепи первой и второй легких цепей содержат CDR, имеющие SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90 и SEQ ID NO: 19.
7. Биспецифическое антитело по п. 5, которое содержит две вариабельные легкие цепи, содержащие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54, первую тяжелую цепь, содержащую вариабельную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 70 и SEQ ID NO: 68, и вторую тяжелую цепь, содержащую вариабельную тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 92 и SEQ ID NO: 117.
8. Биспецифическое антитело по одному из пп. 1-4, содержащее первую молекулу Fab, которая обладает способностью специфически связываться с внеклеточным доменом II HER2, и вторую молекулу Fab, которая обладает способностью специфически связываться с внеклеточным доменом IV HER2, в котором либо вариабельные области, либо константные области тяжелой и легкой цепей по меньшей мере одного Fab-фрагмента обменены.
9. Биспецифическое антитело по п. 8, в котором первая молекула Fab содержит
CDR1 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 14, CDR2 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 15, и CDR3 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 16; и CDR1 легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 11; CDR2 легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 12, и CDR3 легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 13, и в котором вторая молекула Fab содержит
CDR1 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 20; CDR2 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 108; CDR3 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 79; и CDR1 легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 107, CDR2 легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 18, и CDR3 легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 19.
10. Биспецифическое антитело по п. 8, в котором первая молекула Fab содержит
CDR1 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 14, CDR2 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 15, и CDR3 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 16; и CDR1 легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 11; CDR2 легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 12, и CDR3 легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 13, и в котором вторая молекула Fab содержит
CDR1 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 20, CDR2 тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 29, и CDR3 тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88; и CDR1 легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 103 и SEQ ID NO: 158; CDR2 легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 18, и CDR3 легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 19.
11. Биспецифическое антитело по п. 8 или 9, в которой первая молекула Fab содержит
вариабельную тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, и вариабельную легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, и в котором вторая молекула Fab содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную SEQ ID NO: 106.
12. Фармацевтическая композиция, содержащая биспецифическое антитело по пп. 1-11.
13. Биспецифическое антитело по пп. 1-11, предназначенное для лечения рака.
14. Биспецифическое антитело по пп. 1-11, предназначенное для применения в качестве лекарственного средства.
15. Применение биспецифического антитела по пп. 1-11 для приготовления лекарственного средства.
16. Применение по п. 15, в котором лекарственное средство предназначено для лечения рака.
17. Нуклеотидная последовательность, содержащая последовательность, которая кодирует тяжелую цепь биспецифического антитела по пп. 1-11.
18. Нуклеотидная последовательность, содержащая последовательность, которая кодирует легкую цепь биспецифического антитела по пп. 1-11.
19. Экспрессионный вектор, содержащий нуклеотидную последовательность по пп. 17 и/или 18.
20. Прокариотическая или эукариотическая клетка-хозяин, содержащая вектор по п. 19.
21. Способ получения антитела, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 20, для того, чтобы получать антитело.