АНТИПАРАЗИТАРНАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ МАКРОЦИКЛИЧЕСКИЙ ЛАКТОН И ЛЕВАМИЗОЛ, И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ПАРАЗИТАРНОЙ ИНФЕСТАЦИИ
ANTI-PARASITIC COMPOSITION CONTAINING MACROCYCLIC LACTONE AND LEVAMISOLE, AND METHOD OF TREATING PARASITIC INFESTATION

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Изобретение относится к антипаразитарной композиции.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения данное изобретение относится к композиции для использования в лечении животных, таких как домашние и сельскохозяйственные животные.
Существует значительная потеря продуктивности во всем мире из-за воздействия паразитов на сельскохозяйственных животных. Такие паразиты могут включать желудочно-кишечные круглые гельминты, легочные гельминты, глазные гельминты, личинки паразитирующей стадии, кусающие и сосущие вши, зудни, клещи, личинки мясной мухи и малые коровьи жигалки.
Как следствие, значительное количество денег, времени и усилий было потрачено на разработку композиций для лечения животных от этих паразитов.
Обычно лечебные композиции основаны на использовании широкого спектра макроциклических лактонов в качестве первичного активного ингредиента.
Однако с широким распространением использования макроциклических лактонов у паразитов была выработана резистентность и лечебные композиции становятся менее эффективными.
Увеличение уровня дозировки не является готовым решением. Прежде всего, увеличение дозировки может вызвать значительные побочные эффекты и может сказываться на здоровье животного.
Основным опасением, однако, является то, что увеличение дозировок приводит к тому, что остаточные концентрации лекарства у животного становятся больше. Это вызывает более длительное время выдерживания пролеченных животных, прежде чем они могут быть забиты для потребления человеком. Поток от эффекта от несвоевременно забитых животных увеличивает расходы на содержание стада и соответственно потребительскую цену.
Следует, однако, принять во внимание, что может быть предложена композиция и способ лечения, который направлен на победу над устойчивостью среди паразитов и также минимальные побочные эффекты, и время удерживания.
Взяться за решение вышеизложенных проблем или, по крайней мере, предоставить общественности полезный выбор является целью настоящего изобретения.
Все ссылки, включающие любые патенты или заявки на патенты, процитированные в данном описании изобретения, включены в данный документ путем ссылок. Не сделано никаких допущений, что любая ссылка принадлежит известному уровню техники. Обсуждение ссылок излагает, что заявляют их авторы и заявители оставляют за собой право оспаривать правильность и релевантность процитированных документов. Будет вне всякого сомнения понято, что хотя здесь ссылаются на ряд публикаций предшествующего уровня техники, эти ссылки не означают принятие, что любой из этих документов составляет часть единого общего знания в данной технике в Новой Зеландии или любой другой стране.
На протяжении этого описания изобретения слово «составляют» или его вариации такие как «составляет» или «составляющий» будут поняты как означающие включение названного элемента, целого или стадии, или группы элементов, целые или стадии, но не исключение любого другого элемента, целого или стадии, или групп элементов, целых или стадий.
Другие особенности и преимущества настоящего изобретения станут очевидными из последующего описания, которое приведено только в качестве примера.
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В соответствии с одной особенностью настоящего изобретения предложена ветеринарная антипаразитарная растворенная композиция, включающая
макроциклический лактон или его фармацевтически эквивалентную соль и
левамизол или его фармацевтически эквивалентную соль,
отличающаяся тем, что pH композиции находится в пределах от 2,0 до 5,0 и композиция включает, по крайней мере, одно поверхностно-активное вещество и один антиоксидант.
В соответствии с другой особенностью настоящего изобретения представлен способ лечения животных от паразитарной инфестации композицией, включающей макроциклический лактон или его фармацевтически эквивалентную соль и левамизол или его фармацевтически эквивалентную соль, в которой pH композиции находится в пределах от 2,0 до 5,0, в котором композиция включает, по крайней мере, одно поверхностно-активное вещество и один антиоксидант, характеризующийся стадией введения ветеринарной антипаразитарной растворимой композиции животным, нуждающимся в нем.
Предпочтительные макроциклические лактоны выбирают из производных авермектина и милбемицина, включая, но не ограничиваясь этим, абамектин, дорамектин, эприномектин, ивермектин, моксидектин и милбемектин.
TM
Особенно предпочтительным макроциклическим лактоном является  дорамектин, который признан как эффективный в качестве антипаразитарного средства. Популярным препаратом, который включает дорамектин является Dectomax, который широко применяется в Новой Зеландии для крупного рогатого скота.
Однако как многие другие макроциклические лактоны, дорамектин полностью эффективен только против части паразитов в результате созданной увеличивающейся резистентности. Несмотря на это все еще существует меньшая резистентность к дорамектину, чем к другим препаратам (таким как ивермектин) и он является сравнительно экономичным (по сравнению, например с моксидектином).
Левамизол был выбран как другое активное вещество, предназначенное для использования в композиции, потому что авторы осознали, что это приведет к синергетическому эффекту в эффективности против тех паразитов, которые резистентны к дорамектину.
Комбинация дорамектина и левамизола не является единственной, которая исходя из знаний авторов должна быть рассмотрена, потому что эти два активных вещества считаются несовместимыми друг с другом из-за очень различных их предпочтительных диапазонов pH.
В предпочтительных вариантах осуществления изобретения настоящее изобретение предоставляется в форме инъекционной композиции. Однако это может быть введено другими способами, такими как орально или путем окатывания.
TM
Обсуждение результатов испытаний следует, но в резюме были обнаружены значительные и неожиданные преимущества при использовании настоящего изобретения для крупного рогатого скота, когда сравнили с применением используемого препарата Dectomax и нелеченых животных.
Опыт заявителей в ветеринарной индустрии приводит к предположению, что настоящее изобретение будет также эффективно при применении к другим видам сельскохозяйственных животных, таким как овцы. Например, они ожидают более низкие остатки в участках введения, чем для крупного рогатого скота, и лучшую эффективность, так как резистентность к дорамектину у овец становится более обычной.
TM
Эти результаты включают значительное улучшение эффективности, когда обнаруживается наличие резистентности к дорамектину. В частности, настоящее изобретение было высокоэффективно по сравнению с Dectomax против таких резистентных, как Cooperia и Trichostrongylus.
Другое значительное преимущество, обнаруженное при использовании настоящего изобретения, заключается в том, что обнаружено, что остатки, особенно в области инъекции, не сохраняются также долго и на высоких уровнях, обнаруженных для стандартного препарата дорамектина.
TM
В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения эффективное количество макроциклического лактона внутри композиции составляет порядка от 0,2 до 1,2% вес/объем. Это сравнимо с эффективным количеством макролактона (дорамектина) в Dectomax, которое составляет порядка 1% вес/объем.
В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения эффективное количество левамизола в композиции находится в пределах от 6 до 27% вес/объем. Заявителями было подтверждено, что это является эффективным количеством с точки зрения уничтожения паразитов, но при этом сохранения здоровья животного и сосуществует с дорамектином в стабильном растворе.
Предполагается, что левамизол может быть предоставлен в виде левамизола гидрохлорида или левамизола фосфата. Левамизол фосфат является предпочтительнее, чем левамизол гидрохлорид, так как существует меньше проявлений раздражения в месте инъекции. В композиции предпочтительно он должен быть в диапазоне от 10 до 40% вес/объем.
Одной из трудностей создания рецептуры с левамизолом является то, что его предпочтительным pH является около 3, в то время как другие активные вещества проявляют стабильность в растворах при более нейтральном pH.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения диапазон pH композиции является порядка от 2,0 до 5,0.
Наиболее предпочтительным диапазоном pH композиции является порядка от 3,0 до 4,5.
Как будет видно в последующих данных испытаний, тщательный выбор предпочтительных наполнителей и концентраций был необходим, чтобы помочь поддерживать оба_ и макроциклический лактон, и левамизол, в растворе и при соответствующем рН.
В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения одним из наполнителей является хелатирующий агент, предназначенный для хелатирования любых тяжелых металлов, которые способствовали бы окислению активных веществ. Предпочтительным хелатирующим агентом является ЭДТА динатрия, хотя могут быть использованы другие агенты. Другие соли ЭДТА могут быть также использованы, включая натрий, кальций и калий. Еще хелатирующие агенты, которые могут быть использованы, включают моногидрат лимонной кислоты, фумаровую и маликовую кислоты.
В предпочтительных вариантах осуществления изобретения композиция также содержит антиоксидант. Это является предпочтительным включением в композицию, так как он стабилизирует активные вещества в препарате от окисления. В частности, авторы обнаружили, что включение антиоксиданта является полезным в предотвращении деградации макроциклического лактона, который в противном случае может быть нестабильным при предпочтительном низком pH композиции.
Подходящие антиоксиданты включают BHA, витамин Е, пропилгаллат, TBHQ, метабисульфат натрия.
Предпочтительным антиоксидантом является бутилгидрокситолуол (BHT), поскольку BHT является обычным стабилизатором для мектинов.
Предпочтительно антиоксидант присутствует в композиции в или больше 0,15% вес/объем.
Более предпочтительно антиоксидант присутствует в композиции в или больше 0,20% вес/объем.
Наиболее предпочтительно антиоксидант присутствует в композиции в около 0,25% вес/объем.
Неожиданно авторы обнаружили, что традиционное количество антиоксиданта (от 0,1 до 0,15% вес/объем), использованное в инъекционных композициях, может быть недостаточно для стабилизации активных веществ и, в частности, макроциклического лактона. Тем не менее, когда уровень антиоксиданта был увеличен выше общепринятых количеств, стабильность могла быть значительно улучшена, что было трудно достичь при таких более низких pH. Считается, что в сочетании с другими наполнителями, такими как стабилизаторы и/или поверхностно-активные вещества, эта стабильность может быть синергически улучшена.
Предпочтительно композиция также включает консерванты. Подходящие консерванты включают парабены, тиомерсалы, крезолы и хлорбутанол.
Предпочтительным консервантом является бензиловый спирт, так как он действует одновременно как солюбилизатор и консервант.
Предпочтительно композиция также включает стабилизатор. Подходящие стабилизаторы включают полиолы с предпочтительным стабилизатором стабилизированным глицерин формалем, поскольку он уже находится в стабилизированной форме.
В предпочтительных вариантах изобретения композиция также включает поверхностно-активное вещество, которое в настоящем изобретении помогает в стабилизации макроциклического лактона (например, дорамектина) от низкого pH препарата. Следует отметить, что более низкий pH требуется для стабилизации левамизола.
Предпочтительно количество поверхностно-активного вещества в композиции составляет выше 15% вес/объем.
Более предпочтительно количество поверхностно-активного вещества в композиции составляет приблизительно 20% вес/объем.
Это отличается от многих последних композиций, в частности тех, которые стремились, хотя безуспешно, достичь стабильной растворимой композиции при низких pH ниже 4,0 (например, NZ 508969). Авторы обнаружили, что увеличение уровня поверхностно-активного вещества помогло стабилизировать макроциклический лактон, в частности, от кристаллизации при pH в промежутке от 2,0 до 5,0.
К тому же авторы увидели, что стабильность может быть синергически улучшена, когда поверхностно-активное вещество включено одновременно со стабилизатором и/или антиоксидантом.
Подходящие поверхностно-активные вещества включают полисорбат 20, кремофор и ПЭГ-12 олеат. Предпочтительным поверхностно-активным веществом является полисорбат-80, он является растворимым в воде и широко используемым в веществах для инъекций.
Особенности настоящего изобретения теперь будут описаны только посредством примера со ссылкой на различные эксперименты и испытания, проведенные заявителем.
ЛУЧШИЕ ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Как упоминалось ранее в описании патента, может быть очень трудным изготовить стабильную композицию, содержащую эффективное количество макроциклического лактона (такого как дорамектин) и левамизола.
Что касается настоящего изобретения, следует принять во внимание, что авторы являются высокоопытными химиками-технологами, особенно в области ветеринарной медицины. Поэтому важно, что авторам пришлось сделать более сорока попыток при разработке настоящего изобретения, прежде чем был найден препарат, который хранился стабильным и не имел кристаллического состава при ключевых температурах.
Таблица 1 ниже - это обобщенные результаты некоторых из опробованных препаратов.
ТАБЛИЦА 1Опробованные препараты
PF-1
PF-2
PF-3
PF-4
PF-5
PF-6
PF-7
PF-8
PF-9
PF-10
PF-11
PF-12
PF-13
№
Ингредиенты
% вес/ об.
% вес/ об.
% вес/ об.
% вес/ об.
% вес/ об.
% вес/ об.
% вес/ об.
% вес/ об.
% вес/ об.
% вес/ об.
% вес/ об.
% вес/ об.
% вес/ об.
1
Дорамектин**
0,42
0,525
0,42
0,525
0,42
0,525
0,525
0,525
0,525
0,63
0,84
0,525
0,525
2
Левамизол гидрохлорид**
15,8
21
15,8
21
15,8
21
21
21
21
31,5
42
0
0
3
Левамизол фосфат**
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
26,25
26,25
4
Динатрия эдетат
0
0
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
5
Бутилгидрок-ситолуол
0,25
0,05
0,25
0,25
0,25
0,25
0,25
0,25
0,25
0,25
0,25
0,25
0,25
6
Бензиловый спирт
0
0
2,5
2,5
2
2,5
3
3
3
4
4
3
3
7
Стабилизиро-ванный глицерин формаль
40
40
0
0
0
0
0
0
20
0
0
0
20
8
Пропилен-гликоль
qs
qs
0
0
0
0
0
20
0
20
20
20
0
9
Полисорбат 80
0
0
8
8
10
12
20
20
20
20
20
20
20
10
Лимонная кислота
0
0
2
2
2
2
2,2
2,2
2,2
2,2
2,2
2,2
2,2
11
Гидроокись натрия
0
0
0,6
0,6
0,6
0,6
0,6
0,5
0,5
0,4
0,4
0,3
0,3
12
Вода для инъекции
0
0
qs
qs
qs
qs
qs
qs
qs
qs
qs
qs
qs
** 5% добавленный избытокPF-01 - на основе растворителя - результат стабильности - не стабиленPF-02 - на основе растворителя - результат стабильности - не стабиленPF-03 - на основе воды - результат стабильности - не стабиленPF-04 - на основе воды - результат стабильности - не стабиленPF-05 - на основе воды - результат стабильности - не стабиленPF-06 - на основе воды - результат стабильности - не стабиленPF-07, 08 и 09 - на основе воды - образование кристаллов при 4ºСPF-11 - на основе воды - заменен на левамизол фосфат из-за раздражения от левамизола гидрохлоридаPF-12 - на основе воды - образование кристаллов при 4º и 40ºСQs - следы
Различные наполнители, концентрации активных веществ и буферная система были проварьированы для определения воздействия на стабильность активных веществ макроциклического лактона и левамизола.
Неожиданно было обнаружено, что возможно предотвратить или значительно снизить деградацию макроциклического лактона в водной композиции при низком pH. Это позволяет использовать pH, подходящий для стабилизации компонента левамизола, растворенного в водной композиции. Этот подход является предпочтительным по сравнению с компромиссом, который требовал бы pH в промежутке низкого значения, подходящего для левамизола, и нейтрального pH, подходящего для макроциклического лактона.
Даже более неожиданно было найдено, что комбинация макроциклического лактона и левамизола может быть стабилизирована в композиции, содержащей относительно высокие концентрации активных веществ, которые обычно требовались бы для инъекционного препарата. Разработка композиции, подходящей для инъекции, может быть осложнена из-за желания увеличить концентрацию активных веществ по сравнению с другими видами композиций, ограничить или уменьшить объем композиции, предназначенной для инъекции.
Макроциклический лактон растворяется с использованием растворителя, который полностью растворим в составе композиции. Поэтому скорее образуется истинный раствор или мицеллярный раствор, чем эмульсия. Предпочтительным растворителем является бензиловый спирт, который является эффективным растворителем для макроциклических лактонов и при этом действует как консервант. Растворимость растворителя внутри композиции может быть увеличена при использовании корастворителей, таких как смешивающиеся с водой растворители глицерин формаль и пропиленгликоль, которые могут также действовать как стабилизаторы. Квалифицированный человек легко определит другие системы растворителей, которые также могут быть подходящими.
Использование поверхностно-активных веществ для увеличения растворимости и/или стабильности активных веществ особенно предпочтительно. Создание мицеллярного раствора является предпочтительным способом растворения макроциклического лактона внутри водной композиции.
Таблица 2 ниже представляет предпочтительную композицию в соответствии с настоящим изобретением. Композиция содержит дорамектин и левамизол в количествах, которые, как было показано, являются высокоэффективными против паразитов. Препарат является стабильным, без образования кристаллов и обладает минимальными, если имеются, побочными эффектами на животных.
Таблица 2Предпочтительная композиция
DL-инъекция
Название ингредиента
CAS номер
Количество г/л
Функция
Дорамектин
117704-25-3
4,2*
Активный ингредиент
Левамизол фосфат
32093-35-9
210*
Активный ингредиент
ЕДТА динатрий
139-33-3
1
Хелатирующее вещество
Бутилгидрокситолуол (BHT)
128-37-0
2,5
Антиоксидант
Бензиловый спирт
100-51-6
35
Консервант
Стабилизированный глицерин формаль
4740-78-75464-28-8
200
Стабилизатор
Полисорбат 80
9005-65-6
200
Поверхностно-активное вещество
Лимонная кислота
77-92-9
22
pH-регулятор
Гидроокись натрия
1310-73-2
3
pH-регулятор
Вода для инъекции
7732-18-5
qs
Растворитель/ носитель
*5% добавленный избытокQs - следы
pH композиции был доведен до около 3,9 при помощи цитратной буферной системы.
В частности, было отмечено, что для достижения стабильности и сохранения композиции в растворе был необходим высокий процент поверхностно-активного вещества. Без наличия поверхностно-активного вещества в достаточном количестве наблюдалась кристаллизация и изменения цвета раствора.
Способ производства
Предпочтительный способ производства предпочтительного варианта изобретения состоит из этапов:
Этап 1:
а. В чистый и сухой производственный сосуд помещают 30% воду для инъекции.
b. Добавляют и растворяют при перемешивания ЭДТА динатрий
c. Добавляют и растворяют при перемешивании лимонную кислоту
d. Добавляют и растворяют при перемешивания гидроокись натрия
e. Добавляют и перемешивают стабилизированный глицерин формаль
f. Добавляют и растворяют при перемешивании левамизол фосфат
g. Проверяют прозрачность раствора
Этап 2:
h. В отдельный чистый и сухой производственный сосуд помещают бензиловый спирт и нагревают до 50-55°С
i. Добавляют и растворяют при перемешивании BHT
j. Добавляют и растворяют при перемешивании дорамектин
k. Добавляют теплый полисорбат 80 и хорошо перемешивают
l. Проверяют прозрачность раствора
Этап 3:
m. Добавляют «Этап 1» к «Этапу 2» и хорошо перемешивают
n. Ополаскивают сосуд от Этапа 2 некоторым количеством воды для инъекции и добавляют промывную воду к основному объему.
o. Доводят до конечного объема водой для инъекции и хорошо перемешивают
p. Проверяют pH - он должен быть 3,6-4,2
TM
Значительное число испытаний было проведено с использованием композиции в соответствии с настоящим изобретением и в сравнении ее эффектов относительно Detomaxи контрольной нелеченой группой.
TM
Нижеприведенная таблица 3 показывает значение подсчетов фекальных яиц, обнаруженных у незабитого крупнорогатого скота, после лечения настоящим изобретением (DL-инъекция) и Detomax. Размер опытной партии здесь - 36 крупнорогатых животных.
TM
Как, несомненно, видно, подсчеты яиц через 35 дней после лечения в случае настоящего изобретения остаются все еще нулевыми, в то время как крупный рогатый скот, леченный Dectomax или нелеченый, имеют значительные подсчеты фекальных яиц. Эта предположенная резистентность может быть представлена в этом испытании.
Таблица 3Средние подсчеты фекальных яиц у незабитого крупного рогатого скота после лечения DL инъекцией или Dectomax
Примененный препарат
Дни после лечения
-3
7
14
21
28
35
42
49
DL-инъекция
121,4
0 (100)
0 (100)
0 (100)
0 (100)
0 (100)
50,0 (73,1)
50,0 (70,8)
Dectomax
128,6
57,1 (71,5)
21,4 (85,7)
28,6 (80,0)
57,1 (63,7)
107,1 (40,0)
135,7 (26,9)
128,6 (25)
Нелеченые
128,6
200,0
150,0
142,9
157,1
178,6
185,7
171,4
TM
Таблица 4 ниже представляет средние подсчеты фекальных яиц в забитых крупных рогатых животных в таком же испытании. Также она указывает на то, что, когда присутствует резистенция к дорамектину, настоящее изобретение может значительно улучшить результаты по сравнению с промышленным стандартом Dectomax.
Таблица 4Средние подсчеты фекальных яиц у забитого крупного рогатого скота после лечения DL инъекцией, Dectomax или нелеченых
Примененный препарат
Дни после лечения
-3
7
13/14
DL-инъекция
288
0(100)
0(100)
Dectomax
250
22,2(90,5)
77,8(67,0)
Нелеченые
271,4
233,3
235,7
TM
Аналогичным образом Таблица 5 показывает значительные различия между эффектом настоящего изобретения на личиночные культуры по сравнению с Dectomax.
Таблица 5Количественные данные по личиночной культуре для 50 г образцов, собранных у незабитого крупнорогатого скота в различные времена после лечения DL инъекцией, Dectomax или нелеченых
Примененный препарат
Дни после лечения
-3
7
15
21
28
35
42
DL-инъекция
22000
0 (100)
15 (99,7)
0 (100)
8 (99,8)
0 (100)
6500 (19,8)
Dectomax
22000
7600 (19,1)
490 (90,9)
410 (94,6)
2300 (53,1)
1100 (64,5)
3100 (61,7)
Нелеченые
22000
9400
5400
7600
4900
3100
8100
Число в скобках относится к % проверки, сверенной с нелеченой группой
Интерпретация этих данных совместно с более детальными данными (не приведены в описании) представлены ниже.
Количественное измерение числа личинок может предоставить более чувствительное измерение эффективности тестируемого препарата, чем подсчеты яиц, и результаты по незабитому крупному рогатому скоту показали, что оказалось, что DL-инъекция эффективно подавляет экскрецию жизнеспособных яиц за период, по крайней мере, в 35 дней.
Существенно, что уровень контроля, заданный этим единственным ингредиентом препаратом дорамектина, был относительно низким в течение всего исследования, наиболее вероятно благодаря резистентным Trichostrongylus и Cooperia.
Количественные результаты по личиночной культуре также предоставили информацию о видах, маскирующихся от выделяемых яиц. В обоих случаях в забитых и незабитых частях исследования Cooperia были доминантными видами личинок, обнаруженными в группе леченной Dectomax через 7, 13/14, 15, 21 и 28 дней после лечения. Кроме того, значительные числа для личинок Trichostrongylus были обнаружены в каждом после лечебном отборе проб у крупного рогатого скота леченного Dectomax. Интересно, что эта тенденция согласуется с системой, обнаруженной в результатах подсчета совокупности личинок.
Как было упомянуто ранее, настоящее изобретение оказалось особенно эффективным по отношению к видам резистентным к дорамектину, и это было подтверждено путем подсчета тотальных личинок, как можно видеть в таблице 6.
Таблица 6Эффективность(%)<sup>1</sup> теста и используемых препаратов против Trichostrongylus spp.и Cooperia spp., основанная на подсчетах совокупности личинок
Препарат
Виды паразитов и стадия жизни
Trichostrongylus axei
Trichostrongylus spp. тонкого кишечника
Cooperia spp.
DL-инъекция
>99,9
>99,9
>99,9
Dectomax
79,3
83,8
97,6
<sup>1</sup>Основано на среднем геометрическом
Присутствие резистентных к дорамектину видов в этом испытании однозначно подтверждено для Trichostrongylus spp. сычуга и тонкой кишки, когда индивидуальный суммарный подсчет личинок у забитых животных, полученный для Dectomax, сравнивается с настоящим изобретением (DL-инъекция), см. нижеприведенную таблицу 7. Результаты от индивидуальных подсчетов личинок и среднеарифметический % снижения по отношению к Cooperia также очень наводят на мысль о появлении резистентности к дорамектину у этих видов. Также можно отметить, что в Новой Зеландии была задокументирована резистентность Coperia spp. к макроциклическим лактонам у крупного рогатого скота.
Таблица 7
DL-инъекция
Trichostrongylus axei
Trichostrongylus spp. тонкого кишечника
Cooperia spp.
Метка №
5-ая стадия
5-ая
5-ая
48
-
-
-
57
-
-
-
239
-
-
-
242
50
-
-
309
-
-
-
438
-
-
-
PVS080
-
-
-
R74
-
-
-
АМ
6,3
0,0
0,0
GM
0,6
0,0
0,0
% снижения АМ
>99,9%
>99,9%
>99,9%
% снижения GM
>99,9%
>99,9%
>99,9%
59
450
200
450
236
600
-
400
237
500
250
8600
560
11000
100
-
573
15500
450
-
1039
850
350
2750
2066
6250
200
-
65
300
100
5150
233
3750
-
250
АМ
4356
183,3
1956
GM
1728
63,1
120,8
% снижения АМ
71,9
76,5
83,8
% снижения GM
79,3
83,8
97,6
АМ = среднее арифметическое, GM = среднее геометрическое
В частности, результаты можно суммировать, как указано ниже:
1. DL инъекция обеспечивает >99,9% от контроля, основанном на среднегеометрическом значении  для Ostertagia spp, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus spp тонкого кишечника, Cooperia spp, Oesophagostomum spp, Chabertia sp и Trichuris spp.
TM
2. Dectomax и DL инъекция представили сравнимые уровни контроля Ostertagia spp, Oesophagostomum spp, Chabertia sp и Trichuris spp.
TM
3. Dectomax дал низкий уровень эффективности по отношению к T. axei и Trichostrongylus spp. тонкого кишечника, что значительно отличалось от того, что далала DL-инъекция.
Вне всякого сомнения, можно видеть что настоящее изобретение высоко эффективно само по себе, но также по сравнению с существующим препаратом, когда присутствует резистентность к дорамектину.
Использование настоящего изобретения имеет также дополнительное преимущество в обладании значительно меньшими остатками дорамектина, чем стандартный препарат дорамектина, особенно в месте инъекции. JECFA (1996) Монография по дорамектину в “Residues of Some Veterinary Drugs in Animals and Foods, FAO Food and Nutrition Paper”, № 41/8, pp 85-98  отметила высокие концентрации дорамектина в месте инъекции в течение 35 дневного периода после первичного введения немеченой дозы инъекции дорамектина в количестве, рекомендованном на этикетке. Носитель, использованный в этой инъекционной композиции, содержал 75% кунжутного масла и 25% этилолеата.
В том отчете таблица 8, представленная ниже для дней 21, 28 и 35, имела средние остатки дорамектина в месте инъекции 1900, 380 и 930 мкг/кг после 21, 28 и 35 дней соответственно после лечения немеченым дорамектином в количестве 0,2 мг/кг веса тела.
Таблица 8Остатки дорамектина (мкг/кг) в тканях крупного рогатого скота после лечения немеченым дорамектином в количестве 0,2 мг/кг веса тела
Ткань
День 21
День 28
День 35
мышечная
<7
<4
<3
печень
107
66
29
почки
11
8,8
<4,5
жир
182
94
57
инъекция
1900
380
930
По сравнению с этим, лечение крупного рогатого скота нашей DL-инъекцией имело средние остатки дорамектина в месте инъекции 6,1; 13,7; и 2,8 мкг/кг. Наш уровень в ткани был также ниже, как показано ниже в таблице 9.
Таблица 9Средние остатки дорамектина (мкг/кг) в различных тканях крупного рогатого скота, леченного DL-инъекцией с дорамектином, 0,25 мг/кг веса тела
Ткань
День 21
День 28
День 35
мышечная
2,5
2,5
2,5
печень
15
2,5
2,5
почки
4,8
2,5
2,5
периренальный жир
19,1
2,5
2,5
подкожный жир
28,0
2,5
2,5
место инъекции
6,1
13,7
2,8
Предпочтительный режим дозировки, который сопровождал все предыдущие результаты, приведен ниже в Таблице 10.
Таблица 10Инструкции этикированной дозировки инъекции Дорамектина+Левамизола
вес (кг)
объем (мл)
61-70
3,5
71-80
4,0
81-100
5,0
101-120
6,0
121-140
7,0
141-160
8,0
161-180
9,0
181-220
11,0
221-260
13,0
261-300
15,0
Величина дозы для DL-инъекции для крупного рогатого скота больше 300 кг будет 1 мл/20 кг (0,2 мг/кг дорамектина и 10 мг/кг левамизол фосфата).
TM
Таблица 11 - это инструкции этикированной дозировки Dectomax.
Таблица 11Инструкции этикированной дозировки Dectomax
Живая масса
Доза
Объем (мл)
40-50
1
51-75
1,5
75-100
2,0
101-150
3,0
151-200
4,0
201-250
5,0
251-300
6,0
301-350
7,0
351-400
8,0
Крупный рогатый скот тяжелее 400 кг должен получать дозировку величиной 1 мл/50 кг.
Побочные реакции на DL инъекций
Изучение безопасности было проведено для оценки безопасности предпочтительного состава изобретения. Исследование было проведено на четырех группах крупного рогатого скота, когда вводили дозу подкожно 1х единичной дозой и с разделенной дозой и 2х максимальной этикетированной величиной дозы и внутримышечно 1х максимальной этикированной величиной дозы.
Набухание места инъекции наблюдалось в большинстве групп в течение первых четырех дней после лечения. Исчезновение набухания в местах инъекции практически завершалось за 7 дней у животных в группе с внутримышечным введением, но продолжало исчезать свыше следующих 14 дней после лечения у животных других групп.
Было отмечено, что большая часть набуханий была детектирована только потому, что место инъекции было тщательно изучено как часть требований исследования. Однако при нормальных фермерских условиях, где место инъекции не рассматривается тщательно, исследователями и фермерами было замечено, что большинство побочных реакций, которые оказались в настоящем исследовании, не были бы замечены. Было сделано заключение, что применение DL инъекции, как рекомендовано, не сопровождалось чрезмерной болью, воспалением или недомоганием.
Особенности настоящего изобретения были описаны путем примера только, и следовало бы принять во внимание, что модификации и дополнения могут быть сделаны к этому, не выходя за рамки такового, как определено в приложенной формуле изобретения.