СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ФЕНИЛКЕТОНУРИИ

1. Векторный геном на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), содержащий: последовательность 5'-инвертированного концевого повтора (ITR); промотор; кодон-оптимизированную последовательность, кодирующую фенилаланингидроксилазу человека (hPAH); 3'-ITR AAV.
2. Вектор rAAV по п.1, где кодон-оптимизированная последовательность PAH представляет собой SEQ ID NO: 7.
3. Вектор rAAV по п. 1 или 2, где промотор представляет собой последовательность синтетического промотора, содержащую части промотора hAAT и энхансера HCR/энхансера ApoE.
4. Вектор rAAV по пп. 1-3, где последовательность промотора представляет собой SEQ ID NO: 6.
5. Вектор rAAV по пп. 1-4, где 5'-ITR AAV и/или 3'-ITR AAV происходят из AAV2.
6. Вектор rAAV по пп. 1-5, где векторный геном дополнительно содержит сигнальную последовательность полиаденилирования.
7. Вектор rAAV по п.6, где сигнал полиаденилирования представляет собой сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста (bGH).
8. Вектор rAAV по пп. 1-7, где геном вектора дополнительно содержит интрон.
9. Вектор rAAV по п. 8, где интрон представляет собой составную последовательность интрона глобина/AIAT.
10. Вектор rAAV по п. 8 или 9, где последовательность интрона представляет собой SEQ ID NO: 14.
11. Вектор rAAV по пп. 1-10, где векторный геном имеет размер от приблизительно 2 т.п.н. до приблизительно 3 т.п.н., от приблизительно 3 т.п.н. до приблизительно 4 т.п.н., или от приблизительно 4 т.п.н. до приблизительно 5 т.п.н.
12. Вектор rAAV по пп. 1-11, где последовательность векторного генома представляет собой SEQ ID NO: 18.
13. Частица рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), содержащая капсид AAV и векторный геном по любому из пп. 1-12.
14. Частица rAAV по п. 13, где капсид AAV представляет собой капсид AAV5.
15. Частица rAAV по п. 13 или 14, где частица rAAV представляет собой ApoE-HCR-hAAT.cG-AIATI.hPAHcol.bGH.
16. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% гомологию с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 7, и кодирующая функциональный PAH.
17. Кодон-оптимизированная нуклеиновая кислота PAH, имеющая уменьшенное содержание динуклеотида CpG.
18. Нуклеиновая кислота по п. 17, где количество динуклеотидов CpG составляет менее 25.
19. Фармацевтическая композиция, содержащая векторный геном по любому из пп. 1-12 или частицу rAAV по любому из пп. ‎13-15 и фармацевтически приемлемый носитель.
20. Иммуногенная композиция, содержащая векторный геном по любому из пп. 1-12 или частицу rAAV по любому из пп. ‎13-15 и фармацевтически приемлемый носитель.
21. Терапевтическое средство, включающий векторный геном по любому из пп. 1-12 или частицу rAAV по любому из пп. 13-15 и фармацевтически приемлемый носитель.
22. Способ экспрессии белка у индивидуума, включающий введение индивидууму композиции, содержащей частицу rAAV по любому из пп. 1-13, с обеспечением тем самым экспрессии кодируемого белка PAH в печени индивидуума.
23. Способ лечения ФКУ у пациента, где указанный способ включает введение пациенту векторного генома rAAV по любому из пп. 1-12, частицы rAAV по любому из пп. 13-15, фармацевтической композиции по п. 19, иммуногенной композиции по п. 20 или терапевтического средства п .21.
12
15
24. Способ по п. 22 или 23, где частицу rAAV доставляют в дозе от приблизительно 1×10 до приблизительно 1×10 вг/кг в водной суспензии.
25. Применение векторного генома по любому из пп. 1-12, частицы rAAV по любому из пп. 13-15, фармацевтической композиции по п. 19, иммуногенной композиции по п. 20 или терапевтического средства по п. 21 для лечения ФКУ у индивидуума.
26. Способ лечения индивидуума, имеющего фенилкетонурию (ФКУ), включающий введение эффективного количества терапевтического средства против ФКУ индивидууму, где эффективное количество терапевтического средства против ФКУ представляет собой количество, которое изменяет уровни одного или более нейротрансмиттеров или метаболитов нейротрансмиттеров в биологическом образце индивидуума.
27. Способ смягчения нейрокогнитивного симптома фенилкетонурии (ФКУ) у индивидуума, имеющего ФКУ, включающий введение эффективного количества терапевтического средства против ФКУ индивидууму, где эффективное количество терапевтического средства против ФКУ представляет собой количество, которое изменяет уровни одного или более нейротрансмиттеров или метаболитов нейротрансмиттеров в биологическом образце индивидуума.
28. Способ по п. 26 или 27, дополнительно включающий измерение уровней одного или более нейротрансмиттеров в биологическом образце, полученном от индивидуума, после введения эффективного количества терапевтического средства против ФКУ, где эффективное количество терапевтического средства против ФКУ представляет собой количество, которое изменяет уровни одного или более нейротрансмиттеров у индивидуума.
29. Способ по любому из пп. 26-28, где один или более нейротрансмиттеров или метаболитов нейротрансмиттеров выбраны из группы, состоящей из фенэтиламина, фенилэтаноламина, тирамина, дофамина, норадреналина, адреналина, триптамина, гидрокситриптамина, фенилуксусной кислоты, фенилацетилглутамина, миндальной кислоты, гидроксифенилуксусной кислоты, DOPAC, гомованилиновой кислоты, DOMA, MOPEG, ваниллилминдальной кислоты, индолуксусной кислоты и 5-гидроксииндолуксусной кислоты.
30. Способ по любому из пп. 26-29, где биологический образец индивидуума выбран из группы, состоящей из крови, сыворотки, плазмы, цереброспинальной жидкости (CSF) и мочи.
31. Способ по любому из пп. 26-30, где биологическим образцом индивидуума является кровь.
32. Способ по любому из пп. 26-30, где биологическим образцом индивидуума является сыворотка.
33. Способ по любому из пп. 26-31, где биологическим образцом индивидуума является плазма.
34. Способ по любому из пп. 26-30, где биологическим образцом индивидуума является CSF.
35. Способ по любому из пп. 26-30, где биологическим образцом индивидуума является моча.
36. Способ по любому из пп. 26-35, где терапевтическое средство против ФКУ выбрано из группы, состоящей из сапроптерина, пегвалиазы-pqpz и генной терапии против ФКУ.
37. Способ по п. 36, где генная терапия против ФКУ включает вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV), который экспрессирует трансген, включающий фенилаланингидроксилазу (PAH).
38. Способ по п. 37, где эффективное количество средства генной терапии против ФКУ составляет 1E12 вг/кг массы тела индивидуума.
39. Способ по любому из пп. 26-38, где уровни одного или более нейротрансмиттеров или метаболитов нейротрансмиттеров измеряют по меньшей мере через один месяц после введения терапевтического средства против ФКУ.
40. Способ по любому из пп. 26-39, где уровни одного или более нейротрансмиттеров или метаболитов нейротрансмиттеров измеряют по меньшей мере через три месяца после введения терапевтического средства против ФКУ.
41. Способ по любому из пп. 26-40, где уровни одного или более нейротрансмиттеров или метаболитов нейротрансмиттеров измеряют по меньшей мере через шесть месяцев после введения терапевтического средства на основе ФКУ.
42. Способ по любому из пп. 26-41, где измененные уровни одного или более нейротрансмиттеров находятся в пределах 5% от эталонного уровня одного или более нейротрансмиттеров, где эталонный уровень получен в качестве среднего значения уровней одного или более нейротрансмиттеров, полученных для по меньшей мере десяти индивидуумов, которые являются нейротипическими.
43. Способ по любому из пп. 26-42, где измененные уровни одного или более нейротрансмиттеров находятся в пределах 10% от эталонного уровня одного или более нейротрансмиттеров, где эталонный уровень получен в качестве среднего значения уровней одного или более нейротрансмиттеров, полученных для по меньшей мере десяти индивидуумов, которые являются нейротипическими.
44. Способ по любому из пп. 26-43, где измененные уровни одного или более нейротрансмиттеров находятся в пределах 20% от эталонного уровня одного или более нейротрансмиттеров, где эталонный уровень получен в качестве среднего значения уровней одного или более нейротрансмиттеров, полученных для по меньшей мере десяти индивидуумов, которые являются нейротипическими.
45. Способ по любому из пп. 26-44, где индивидуумом является человек.
46. Способ по п.27, где нейрокогнитивный симптом выбран из группы, состоящей из снижения IQ, дефицита внимания и дефицита способности к целенаправленной деятельности, включая стратегическое планирование, тормозной контроль, кратковременную память и когнитивную гибкость.
47. Способ измерения уровня нейротрансмиттера или метаболита нейротрансмиттера в биологическом образце от индивидуума, включающий: получение биологического образца от индивидуума; преципитацию образца с холодным ацетонитрилом, содержащим меченный тяжелой меткой внутренний стандарт; осаждение образца центрифугированием; перенос супернатанта в свежий контейнер; добавление карбоната натрия и бензоилхлорида или этилхлорформиата и пиридина к супернатанту; добавление муравьиной кислоты к супернатанту после ее реакции с карбонатом натрия и бензоилхлоридом или этилхлорформиатом и пиридином; и анализ полученного супернатанта реагентов посредством LC/MS, тем самым выявляя и измеряя уровень нейротрансмиттера или метаболита нейротрансмиттера.
48. Способ по любому из пп. 26-47, где уровень нейротрансмиттера или метаболита нейротрансмиттера измеряют способом по п. 21.