Конверсия фенотипа наивных Т-клеток в Т-клетки памяти при адоптивном переносе сублетально облученным мышам

© коллектив авторов, 2014 удк 612.017.1.014.482.084

Митин А.Н., Литвина М.М., Комогорова В.В., Шевелев С.В., Шарова Н.И.,\Ярилин А.А.

конверсия фенотипа наивных т-клеток в т-клетки памяти при адоптивном переносе сублетально облученным мышам

ФГБУ «ГНЦ - Институт иммунологии» ФМБА России, 115478, г. Москва, Российская Федерация

Данная статья готовилась к специальному выпуску журнала, посвященному А.А. Ярилину. Однако авторство Александра Александровича в данной статье - это не просто дань уважения, это его научная идея, большей частью воплощенная еще при его жизни. В работе обосновывается связь гомеостатической пролиферации с конверсией фенотипа наивных Т-клеток в центральные Т-клетки памяти при пострадиационном восстановлении на модели адоптивного переноса наивных (CD44lo/") клеток, выделенных из лимфатических узлов здоровых мышей и окрашенных CFSE, сублетально облученным мышам.

Ключевые слова: Т-лимфоциты; лимфатические узлы; селезенка; ионизирующая радиация; гомеостатическая пролиферация; конверсия фенотипа наивных Т-клеток; адоптивный перенос; проточная ци-тометрия.

Mitin A.N., Litvina M.M., Komogorova V.V., Shevelev S.V., Sharova N.I., Yarilin A.A.

PHENOTYPIC CONVERSION OF NAIVE T CELLS IN CENTRAL MEMORY T CELLS AFTER ADOPTIVE TRANSFER TO SUBLETHALLY IRRADIATED MICE

National Research Centre «Institute of Immunology» FMBA of Russia, 115478, Moscow, Russian Federation The article was written for the special issue of the journal dedicated to A.A. Yarilin. Alexander Alexandrovich authorship in this article is not just a tribute, it's his scientific idea mostly embodied during his life. This work proves the relationship between homeostatic proliferation and conversion of naive T cells into memory-phenotype cells during restoration after irradiation-induced lymphopenia on the model of adoptive transfer of isolated from normal mouse lymphnodes CFSE-stained naive (CD44lo/-) T cells to sublethally irradiated mice.

Key words: T lymphocytes; lymphnodes; spleen; irradiation; homeostatic proliferation; conversion of naive T cells into memory-phenotype cells; adoptive transfer; CFSE; flow cytometry.

В нормальных условиях постоянство количества Т-клеток определяется балансом между тимопоэзом и гибелью Т-лим-фоцитов на периферии, что определяет адекватное заполнение лимфоцитарных ниш [1]. При гиперлимфоидных состояниях усиливается апоптоз. Снижение функции тимуса или лимфопе-нические состояния различной природы приводят к нарушению равновесия и сопровождаются включением механизма гомео-статической пролиферации. Среди признаков гомеостатиче-ской пролиферации особого внимания заслуживает конверсия фенотипа участвующих в ней клеток. Этот феномен состоит в том, что наивные Т-клетки, вступившие в деление, выходят из него измененными: на их поверхности экспрессируется молекула CD44, служащая у мышей маркером Т-клеток памяти [2, 3]. Поскольку при этом наивные Т-клетки не утрачивают маркеров CD62L и CCR7, они и фенотипически, и по миграционным характеристикам оказываются идентичными центральным клеткам памяти [4-6], однако в силу поликлональности не выполняют защитных функций (поэтому их иногда называют суррогатными Т-клетками памяти). Накопление этих клеток, как полагают, порождает ряд серьезных проблем вплоть до повышения риска развития аутоиммунной патологии [7].

В ранее проведенных исследованиях при анализе спектра наивных Т-клеток/Т-клеток памяти в популяции Т-лимфоцитов регенерирующих лимфоидных органов после сублетального облучения мы установили факт высокой эффективности восстановления Т-клеток памяти и неполноценности этого процесса для наивных Т-клеток [8]. Мы предположили, что значительный вклад в восстановление Т-клеток памяти вносит пул, формирующийся при конверсии фенотипа пролиферирующих наивных Т-клеток. Косвенное подтверждение тому - накопление во фракции с фенотипом центральных Т-клеток

Для корреспонденции: Митин Александр николаевич, e-mail: mitin@inbox.ru

For correspondence: Mitin Alexander Nikolaevich, e-mail:mitin@ inbox.ru

памяти клеток, слабоэкспрессирующих молекулу CD49d (CD3+CD62LhiCD44hiCD49dl0), что, по данным как минимум одного исследования, является признаком суррогатных Т-клеток памяти [9].

Цель настоящей работы - устранение возможностей неоднозначной трактовки полученных ранее результатов и подтверждение феномена конверсии фенотипа наивных Т-клеток в Т-клетки памяти без контакта с антигеном при пострадиационном восстановлении лимфоидных органов, для чего были выполнены опыты с адоптивным переносом CFSE-окрашенных CD44lo/-клеток лимфатических узлов здоровых мышей сублетально облученным реципиентам.

Материалы и методы

Объектом исследования стали мыши линии C57BL/6, самки массой 18-20 г, полученные из питомника РАМН «Столбовая».

Для получения фракции СD44lо/-клеток лимфатических узлов использовали метод истощения клеточной популяции по cD44 на магнитных шариках, связывающихся с биотини-лированными антителами (АТ) к cD44 на поверхности удаляемых клеток. Использовали шарики Dynabeads Biotin Binder фирмы Invitrogen™, catalog No. 11047 (США), моноклональ-ные биотинилированные АТ Anti-Human/Mouse CD44 Biotin фирмы eBioscience (США). Выделение проводили согласно протоколу фирмы Invitrogen™ (США), прилагаемого к набору для выделения.

Окрашивание Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE). Полученные при негативной селекции клетки ресу-спендировали в 1 мл PBS в пробирке объемом 15 мл. Пробирку ориентировали под углом 30° к горизонтальной поверхности и на стенку пробирки помещали 110 мкл PBS, не смешивая с суспензией клеток. Дальнейшие процедуры проводили в темноте. Добавляли к 110 мкл PBS 1,1 мкл 5 мМ CFSE (конечная концентрация после смешивания с суспензией клеток 5 мкМ), пробирку быстро переворачивали, чтобы смешать краситель с суспензией, перемешивали на

Рис. 1. Возрастная структура Т-лимфоцитов после истощения клеток лимфатических узлов мышей линии С57В1/6 по CD44. Здесь и на рис. 2: результаты представлены в виде графиков "дот-плот", где по осям отмечена интенсивность свечения флюорохрома, соответствующего исследуемому маркеру. Сами клетки представлены в виде точек. В углах квадрантов - процент клеток соответстствующих фракций. а - процент от всех СБ3+-клеток; б - от СБ3+4+-клеток; в - от СБ3+8+-клеток.

шейкере 5 с и инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре. Окрашенные клетки отмывали дважды путем разбавления в 10 объемах PBS при 20С, разводили в PBS и по 1 мл вводили мышам в вену хвоста.

Опытных мышей подвергали воздействию у-излучения 137Cs на установке «Стебель» в дозе 4 Гр. На 4-е сутки после облучения мышам вводили CFSE-окрашенные клетки из лимфоузлов сингенных мышей, истощенных по CD44. Забой мышей и исследование органов проводили через 8 сут после облучения. Контролем служили мыши соответствующего возраста и того же помета, что и мыши, облученные в соответствующие сроки. В исследовании использовали по 6 мышей в опытной и контрольной группах.

Костный мозг получали из 2 берцовых и 2 бедренных костей, промывая их PBS под давлением с помощью шприца, далее обрабатывали аналогично суспензии клеток, полученной из селезенки. Кровь забирали из сердца. Тимус, селезенку и 4 лимфатических узла (два подмышечных и два подколенных) извлекали, освобождали от соединительной ткани, суспензировали в PBS с добавлением 1% BSA и 0,1% NaN3, удаляли эритроциты с помощью лизирующего буфера, дважды отмывали физиологическим раствором. Численность клеток в органе определяли путем подсчета в камере Горяева.

Для постановки иммуноферментного анализа клетки инкубировали с моноклональными АТ в том же буфере в течение 30 мин при 4°С. Отмывали и сразу без фиксации анализировали на проточном цитометре. Лазерную цито-метрию клеток осуществляли на проточном цитометре BD FACSCanto™ II («Becton Dickinson») в стандартном режиме. Данные анализировали с помощью программного обеспечения BD FACSDiva и FCS Express.

Использовали следующую комбинацию моноклональных АТ фирмы eBioscience (США) (препараты для изотипиче-ских контролей той же фирмы): анти-CD3-APC + анти-CD4-PerCP-Cy5.5 + анти^8-АРС^1иог780 + анти^44-РЕ-Cy7 + анти-СCR7-PE.

Статистическую обработку данных проводили с помощью общепринятых методов вариационной статистики; результаты выражали в виде M ± SD, где М - средняя арифметическая, SD - стандартное отклонение. Достоверность различия сравниваемых величин оценивали с помощью i-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Задача данного исследования - показать связь гомеоста-тической пролиферации наивных Т-клеток при пострадиа-

Рис. 2. Алгоритм цитометрического гейтирования при адоптивном переносе наивных CFSE-окрашенных Т-клеток сублетально облученным мышам на примере клеток лимфатических узлов подопытных мышей.

а - все клетки лимфатических узлов; б -пролиферирующие CFSE+CD3+-клетки; в - покоящиеся CFSE+CD3+-клетки.

Таблица 1

распределение CFSE-окрашенных Т-клеток в органах облученных и контрольных реципиентов

Объект исследования Процент СР8Б+-клеток среди СБ3+-клеток Количество СР8Б+-Т-клеток, тыс.

контроль опыт опыт/контроль контроль опыт опыт/контроль

Кровь 1,7±0,8 4,2±1,4 2,42 6,7±3,2 0,1±0,04** 0,01

Лимфоузлы 3,2±0,5 16,8±5,33* 5,33 159,5±73,7 317,7±112,5** 1,99

Селезенка 1,5±0,3 7,6±1,0* 5,09 398,7±139,7 777,4±368,3 1,95

Костный мозг 0,29±0,1 0,37±0,05 1,28 1,2±0,29 0,5±0,09** 0,39

Примечание. * - р < 0,001. Здесь и в табл. 2: ** - р < 0,05.

Таблица 2

Процент пролиферирующих CFSE-окрашенных Т-клеток во вторичных лимфоидных органах мышей на 4-е сутки после адоптивного переноса сублетально облученным мышам

Объект СБ3+ СБ3+4+ СБ3+8+

исследования контроль опыт опыт/контроль контроль опыт опыт/контроль контроль опыт опыт/контроль

Лимфоузлы 3,2±0,8 12,6±6,9** 4,0 2,2±0,7 8,4±5,9** 3,86 3,7±0,9 16,5±7,8** 4,45

Селезенка 5,4±1,1 8,3±1,3** 1,54 4,9±1,2 5,7±0,6** 1,16 5,2±1,1 9,8±1,8** 1,88

ционном восстановлении лимфоидных органов с конверсией фенотипа этих клеток в Т-клетки памяти. В соответствии с этими задачами разработали следующую схему опыта.

1. Выделить наивные Т-клетки из лимфатических узлов здоровых мышей методом магнитной сепарации шариками, нагруженными АТ к CD44. Лимфатические узлы в качестве источника наивных Т-клеток выбрали из-за наибольшего процентного содержания в них данных клеток.

2. Окрасить истощенные по CD44 клетки CFSE. Данное окрашивание позволяет отличить не только введенные клетки от клеток реципиента, но и покоящиеся клетки от проли-ферирующих, так как при делении клетки происходят равномерное распределение красителя между дочерними клетками и пропорциональное снижение интенсивности свечения.

3. Ввести окрашенные клетки облученным реципиентам и контрольным мышам.

4. Через определенный срок мышей забить и исследовать периферические лимфоидные органы на наличие СFSE-окрашенных клеток, их пролиферативную активность и феноти-пические отличия пролиферирующих и покоящихся Т-клеток.

Согласно этому плану, провели селекцию CD44lo/--клеток, истощив 80 млн клеток, выделенных из лимфатических узлов 12 здоровых мышей, на магнитных шариках, нагруженных моноклональными АТ к CD44. Чистоту выделения определили на ци-тометре, внутри CD3+-фракции она составила для CD3+4+-клеток более 99%, а для CD3+8+-лимфоцитов - около 97%. Данные представлены на рис. 1. После этого все клетки окрасили CFSE и в равных долях ввели внутривенно 12 мышам: 6 облученным и 6 контрольным.

Опираясь на результаты предшествующих опытов, в которых увеличение процента проли-ферирующих Т-клеток при пострадиационном восстановлении наблюдалось уже на 4-е сутки, достигая в лимфатических узлах максимума на 8-е сутки, после сублетального облучения мышей [8], а также с учетом того, что после 5-6 делений разведение CFSE в клетках достигает уровня, неразличимого методом проточной цитометрии, введение CFSE-окрашенных клеток лимфатических узлов, истощенных по CD44hi, здоровых мышей сублетально облученным реципиентам проводили на 4-е сутки, а забой и последующий анализ - на 8-е сутки после облучения.

Распределение наивных донорских Т-клеток по органам. После вскрытия мышей CFSE-окрашенные Т-клетки обнаружили в крови, селезенке, лимфатических узлах и единичные

клетки в костном мозге как опытных, так и контрольных мышей (табл. 1). Закономерно эти клетки отсутствовали в тимусе (данные не представлены). Процент донорских Т-клеток в селезенке и лимфатических узлах подопытных мышей в 5 раз, а абсолютное количество в 2 раза превышали соответствующие показатели контрольных мышей. В лимфатических узлах оба показателя были статистически значимыми, в селезенке значимым было различие только в проценте CFSE+CD3+-клеток. Очень интересным оказалось соотношение окрашенных донорских Т-клеток в крови облученных и контрольных мышей. Несмотря на больший, в 2,42 раза, процент, абсолютное количество этих клеток в крови подопытных мышей было в 10 раз меньше, чем у контрольных мышей. В целом эти результаты свидетельствуют о преимущественном заселении наивными Т-клетками лимфатических узлов и селезенки, а также о незаполненности Т-клеточной ниши у сублетально облученных мышей. На это указывают большее количество окрашенных донорских Т-клеток во вторичных лимфоидных органах и их меньшее количество в крови подопытных мышей по сравнению с таковым в контрольной группе при изначально одинаковом количестве введенных клеток.

Учитывая то, что основной пул донорских Т-клеток со-

Таблица 3

возрастная структура в процентах от исследуемой субпопуляции донорских CFSE+ Т-клеток в лимфатических узлах сублетально облученных мышей на 4-е сутки после адоптивного переноса

СБ3+ СБ3+4+ СБ3+8+

Показатель покоя- пролифе- покоя- пролифе- покоя- пролифе-

щиеся рирующие щиеся рирующие щиеся рирующие

ССИ7+С0441о/- 66,5±2,5 22,1±4,3 75,8±3,0 47,0±5,6 54,4±2,3 9,1±1,6

ССК7+СЭ44Ы 3,1±0,4 31,4±3,1 2,6±0,3 27,8±4,8 3,3±0,5 31,9±2,2

ССИ7-С044Ы 1,5±0,3 39,0±3,7 0,5±0.1 15,2±3,5 2,7±0,7 52,7±3,3

ССИ7-СЭ441о/- 29,0±2,5 7,5±1,6 21,2±2,9 9,9±2,4 39,6±2,4 6,3±1,1

Таблица 4

возрастная структура в процентах от исследуемой субпопуляции донорских CFSE+ Т-клеток в селезенке сублетально облученных мышей на 4-е сутки после адоптивного переноса

СБ3+ СБ3+4+ СБ3+8+

Показатель покоя- пролифе- покоя- пролифе- покоя- пролифери-

щиеся рирующие щиеся рирующие щиеся рующие

ССИ7+СЭ441о/- 76,9±1,8 17,5±2,5 88,5±2,4 25,4±5,9 65,5±3,9 14,9±2,7

ССК7+СЭ44Ы 3,8±0,2 35,4±5,2 2,9±0,2 47,9±9,2 4,1±0,3 25,0±1,3

ССИ7-С044Ы 1,8±0,1 37,5±4,8 0,4±0,03 22,2±3,6 3,0±0,3 46,8±3,7

ССИ7-СЭ441о/- 17,6±1,8 9,7±1,4 8,2±2,5 4,4±0,5 27,3±3,8 13,3±1,6

Рис. 3. Соотношение наивных (Тпагее) и центральных Т-клеток памяти (Тст) среди покоящихся (1) и пролиферирующих (2) CFSE-окрашенных донорских клеток в лимфатических узлах (а) и селезенке (б) сублетально облученных мышей.

Здесь и на рис. 4: во врезках - обозначения субпопуляций по часовой стрелке начиная с 12 ч.

средоточен в лимфатических узлах и селезенке, дальнейший анализ проводили для CFSE-положительных Т-клеток только в этих органах. Алгоритм гейтирования при цитоме-трическом исследовании представлен на рис. 2. По уровню разведения CFSE определяли покоящиеся и пролиферирую-щие CD3+-клетки (см. рис. 2, а), затем по экспрессии ССЯ7 и CD44 устанавливали возрастную структуру пролиферирующих (см. рис. 2, б) и покоящихся (см. рис. 2, в) Т-клеток. Аналогичный алгоритм использовали для отдельного анализа субпопуляций CD3+4+- и CD3+8+-лимфоцитов.

Гомеостатическая пролиферация донорских CFSE+ Т-клеток в пострадиационном периоде. При определении процента пролиферирующих клеток установили наибольший процент пролиферирующих донорских Т-клеток в лимфатических узлах облученных мышей - 12,6% от CD3+CFSE+-лимфоцитов, что в 4 раза превышает аналогичный показатель контрольных мышей (табл. 2). Процент пролиферирующих CFSE-положительных Т-клеток в селезенке составил 8,3% и в 1,5 раза превысил уровень в контроле. Уровень пролиферации CD8+ Т-клеток примерно в 2 раза превосходил таковой у CD4+ Т-клеток, в лимфатических узлах 16,5% против 8,4%, в селезенке 9,8% против 5,7% соответственно. Наблюдаемая пролиферация Т-клеток, развивающаяся в ответ на Т-лимфопению опытных мышей, трактована как гомеостатическая. Таким образом, показано, что пострадиационное восстановление лимфоидных органов сопровождается усилением гомеоста-тической пролиферации наивных Т-клеток преимущественно в лимфатических узлах, а также большей чувствительностью к вызывающим гомеостатическую пролиферацию факторам CD3+8+-клеток по сравнению с таковой CD3+4+-лимфоцитов.

Конверсия фенотипа пролиферирующих наивных Т-клеток. Следующая и последняя цель нашего исследования - установить связь гомеостатической пролиферации с конверсией фенотипа наивных Т-клеток в центральные Т-клетки памяти. При определении возрастной структуры Т-лимфоцитов мы исходили из фенотипических характеристик, определяемых экспрессией маркеров и CD44. Наивные Т-клетки име-

ют фенотип CCR7+CD44lo/-; центральные Т-клетки памяти -CCR7+CD44hi; эффекторные Т-клетки памяти - CCR7-CD44hi; терминально дифференцированные Т-клетки - CCR7-CD44lo/-. Данные по возрастной структуре в процентах от исследуе-

Рис. 4. Отличия содержания наивных (Тпа^е) и центральных Т-клеток памяти (Тст) в CD3+4+ (1) и CD3+8+ (2) субпопуляциях пролиферирующих CFSE-окрашенных донорских клеток в лимфатических узлах (а) и селезенке (б) сублетально облученных мышей.

мой субпопуляции пролиферирующих и покоящихся CFSE+ Т-клеток представлены в табл. 3 для лимфатических узлов и табл. 4 для селезенки. Из этих данных видно, что в пуле проли-ферирующих Т-клеток по сравнению с таковым покоящихся Т-клеток наблюдается уменьшение процента наивных клеток и увеличение количества клеток памяти. Из всех возрастных субпопуляций наибольший интерес в плане конверсии фенотипа для нас представляют наивные Т-клетки и центральные Т-клетки памяти (рис. 3). Их соотношение в покоящихся клетках составляет 95 и 5% соответственно, что практически полностью совпадает с изначальным соотношением введенных донорских Т-клеток. В пролиферирующих Т-клетках это соотношение изменяется на 45% наивных против 55% центральных Т-клеток памяти в лимфатических узлах и на 34% против 66% в селезенке, что однозначно указывает на конверсию фенотипа части наивных Т-клеток в центральные Т-клетки памяти.

При анализе пролиферирующих CD3+4+- и CD3+8+-субпопуляций в селезенке соотношение клеток с фенотипом наивных и центральных Т-клеток памяти было практически идентичным, а в лимфатических узлах наивные CD3+4+-клетки составили 67% против 33% центральных клеток памяти, тогда как соотношение наивных и центральных CD3+8+-клеток памяти было практически противоположным - 24 и 76% соответственно (рис. 4). Тем не менее такая разница в соотношении наивных и центральных Т-клеток памяти в пролиферирующих CD4+- и CD8+-субпопуляциях обусловлена не столько накоплением центральных Т-клеток памяти в CD8+-субпопуляции, сколько уменьшением количества наивных CD8+ Т-клеток и значительным увеличением количества клеток с фенотипом эффекторных клеток памяти в лимфатических узлах облученных мышей (см. табл. 3). В задачу данного исследования не входило определение роли эффекторных Т-клеток памяти в процессе пострадиационного восстановления Т-клеточного звена иммунной системы. Однако большой процент клеток с таким фенотипом в пролиферирующем пуле, особенно среди CD3+8+-лимфоцитов, уровень пролиферации которых в 2 раза выше, чем у CD3+4+-клеток, наводит на мысль о связи уровня пролиферации с накоплением клеток с фенотипом эффекторных Т-клеток памяти. Причины появления и судьба этих клеток представляют большой теоретический интерес и требуют отдельного исследования с другими методическими подходами.

Подводя итоги, можно констатировать, что усиленная гомеостатическая пролиферация при пострадиационном вос-

становлении лимфоидных органов приводит к конверсии фенотипа части наивных Т-клеток в центральные Т-клетки памяти, при этом более высокий уровень пролиферации особенно CD8+-Т-клеток скорее всего является причиной накопления клеток с фенотипом эффекторных Т-клеток памяти.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований РАН России; грант 11-04-01741-а.

литература

2. Ярилин А.А. Гомеостатические процессы в иммунной системе. Контроль численности лимфоцитов. Иммунология. 2004; 25 (5): 312-20.

8. Митин А.Н., Литвина М.М., Комогорова В.В., Шарова Н.И., Ярилин А.А. Вклад гомеостатической пролиферации и связанных с ней процессов в восстановление популяции периферических Т-клеток в условиях лимфопении, индуцированной облучением. Иммунология. 2013; 34 (5): 242-7.

Поступила 25.04.14

references

1. Sprent J., Cho J.-H., Boyman O., Surh C.D. T cell homeostasis. Immunol. Cell Biol. 2008; 86: 312-9.

2. Yarilin A.A. Homeostatic processes in immune system. Lymphocytes quantity control. Immunologiya. 2004; 25

3. Sprent J., Surh C.D. Normal T cell homeostasis: the conversion of naive cells into memory-phenotype cells. Nature. Immunology. 2011; 12: 478-84.

4. Cho B.K., Rao V.P., Ge Q., Eisen H.N., Chen J. Homeostasis-stim-ulated proliferation drives naive T cells to differentiate directly into memory T cells. J. Exp. Med. 2000; 192: 549-56.

5. Goldrath A.W., Bogatzki L.Y., Bevan M.J. Naive T cells transiently acquire a memory-like phenotype during homeostasis driven proliferation. J. Exp. Med. 2000; 192: 557-64.

6. Sallusto F., Geginat J., Lanzavecchia A., Central memory and effector memory T cell subsets: function, generation, and maintenance. Annu. Rev. Immunol. 2004; 22: 745-63.

7. Gleeson P.A., Toh B.H., van Driel I.R. Organ-specific autoimmu-nity induced by lymphopenia. Immunol. Rev. 1996; 149: 97-125.

8. Mitin A.N., Litvina M.M., Komogorova V.V., Sharova N.I., Yarilin A.A. Contribution of homeostatic proliferation and related processes to restoration of peripheral T cell population in irradiation induced lymphopenia. Immunologiya. 2013; 34

9. Haluszczak C., Akue F.D., Hamilton S.E. et al. The antigen-specific CD8+ T cell repertoire in unimmunized mice includes memory phenotype cells bearing markers of homeostatic expansion. J. Exp. Med. 2009; 206: 435-48.

Received 25.04.14

о коллектив авторов, 2014 удк 612.017.1.084-053

Топтыгина А.П.1, Семикина Е.Л.2 3, Копыльцова Е.А.2, Алешкин В.А.1

ВОЗРАСТНАЯ ДИНАМИКА ЭКСПРЕССИИ ИЗОФОРМ CD45-Т-ХЕЛПЕРАМИ И Т-ЦИТОТОКСИЧЕСКИМИ ЛИМФОЦИТАМИ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ

1Лаборатория цитокинов, ФБУН «МНИИЭМ им. ПН. Габричевского», Роспотребнадзора, 125212, г Москва; Централизованная клинико-диагностическая лаборатория ФГБУ «Научный центр здоровья детей», РАМН, г. Москва; 3Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова, г. Москва

Целью настоящей работы было исследование возрастной динамики экспрессии различных изоформ CD45 на Т-лимфоцитах периферической крови здоровых людей. Когорта исследования состояла из 337 человек (166 лиц мужского пола и 171 - женского) в возрасте от рождения (включая пробы пуповинной крови) до 88 лет. Четырехцветные комбинации CD45RA/CD45R0/CD3/CD4 и CD45RA/CD45R0/CD3/CD8 были использованы для оценки различных субпопуляций Т-лимфоцитов методом проточной цитофлуорометрии с помощью цитометра FACSCalibur (BD Biosciences, США). Была выявлена зависящая от возраста динамика наивных лимфоцитов и Т-клеток памяти. Обнаружено, что количество CD45RA+CD3+CD4+-клеток снижалось, а количество CD45R0+CD3+CD4+ клеток повышалось быстрее, чем в соответствующих субпопуляциях CD3+CD8+-лимфоцитов. Обсуждается вклад периферической пролиферации недавних мигрантов из тимуса и гомеостатической пролиферации наивных Т-клеток в соотношение субпопуляций Т-лимфоцитов.

Ключевые слова: возрастная динамика Т-клеток; наивные Т-клетки; Т-клетки памяти; CD45RA/CD45R0. ToptyginaA.P.1, SemikinaE.L.23, Kopyl'tsovaE.A.2, Alioshkin V.A.1

AGE-DEPENDENT DYNAMICS OF THE CD45 ISOFORMS EXPRESSION ON THE T- HELPER AND T-CYTOTOXIC LYMPHOCYTES IN THE BLOOD OF THE HEALTHY PEOPLE

'G.N. Gabrichevsky Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Moscow, Russia; 2Scientific Center of Children's Health RAMS, Moscow, Russia; 3Russian State Medical University

The aim of the study was the age-dependent dynamics of CD45 isoforms expression on the main T-cell subsets investigation. Examined cohort was 337 people (166 male and 171 female) aged from birth (cord probe included) up to 88 years old. Four-colour combinations CD45RA/CD45R0/CD3/CD4 and CD45RA/CD45R0/CD3/CD8 were used to estimate different subsets of T-lymphocytes by flow cytometer FACSCalibur (BD Biosciences, USA). Age-dependent dynamics of T-naïve and T-memory cell subsets was shown. It was found the CD45RA+CD3+CD4+cells decreased and the CD45R0+CD3+CD4+ cells increased rapidly than CD3+CD8+ lymphocyte subsets did. The peripheral proliferation of the recent thymic emigrant subset and homeostatic proliferation of the T-naïve cells contribution in T-subsets proportion is discussed.

Key words: age-dependent dynamics of T-cells; T-naïve cells; T-memory cells; CD45RA/CD45RO.

Для корреспонденции: Топтыгина Анна Павловна, e-mail: toptyginaanna@rambler.ru For correspondence: Toptygina Anna Pavlovna, e-mail: toptyginaanna@rambler.ru