Анализ многокомпонентных лекарственных препаратов при помощи микроколоночных хроматографов серии "Милихром"

УДК 543.544

АНАЛИЗ МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ ПОМОЩИ МИКРОКОЛОНОЧНЫХ ХРОМАТОГРАФОВ СЕРИИ "МИЛИХРОМ"

Г.Б. Голубицкий*, В.М. Иванов

На примере анализа некоторых двух-, трех- и пятикомпонентных лекарственных препаратов показаны возможности использования микроколоночных хроматографов серии "Мили-хром". Доказано, что модификации приборов с одним шприцевым насосом можно успешно применять для анализа сложных смесей как в изократическом, так и в градиентном режимах. Разработанные методики, включенные в нормативно-техническую документацию, в течение нескольких лет применяли для контроля качества выпускаемых препаратов.

Микроколоночные хроматографы серии "Мили-хром" более 20 лет выпускает Орловский завод научных приборов. Наиболее широко используют в лабораториях разных отраслей промышленности хроматографы модификаций "Милихром 4" и "Милихром 5". Удобство их применения определяется практически полной автоматизацией, простотой эксплуатации, относительно невысокими требованиями к качеству применяемых воды и органических растворителей и их небольшим расходом. В последние годы начат выпуск хроматографов "Милихром 5-3" и "Милихром 6", наиболее характерным отличием которых от приборов предшествущего поколения является наличие двух шприцевых насосов вместо одного. Эти приборы по своим характеристикам приблизились к современным зарубежным хроматографам. В отечественной литературе опубликовано много работ о применении хроматографов "Милихром" для анализа многокомпонентных лекарственных препаратов, например [1-7]. В табл. 1 приведены некоторые характеристики этих методик. На наш взгляд, даже эта сравнительно небольшая выборка работ отражает некоторые тенденции в использовании хроматографов "Милихром". Большинство работ основано на методах обращенно-фазовой ВЭЖХ [1-5, 7], значительно реже описано применение нормально-фазовой хроматографии [6]. Чаще всего разделение осуществляют в изократическом режиме [16], градиентное элюирование применяют относительно редко [7]. Если первая из указанных тенденций характерна для работ с использованием ВЭЖХ в це-

лом, то вторая связана с техническими особенностями хроматографов "Милихром", на которых осуществление градиентного элюирования затруднительно. Вместе с тем опыт авторов данной статьи показывает, что и на этих приборах возможно успешное разделение и количественный анализ сложных смесей веществ как в изократическом, так и в градиентном режимах. Изложение некоторых результатов этой работы - цель данной публикации.

Экспериментальная часть

Реагенты. Для приготовления подвижных фаз (ПФ), а также для растворения стандартных и испытуемых препаратов использовали ацетонитрил для хроматографии ("Криохром", Россия) и бидистиллят. В качестве стандартов определяемых лекарственных веществ использовали фармацевтические субстанции, проверенные отделом контроля качества предприятия и соответствующие всем требованиям нормативной документации. Все остальные использованнные реактивы имели квалификацию не ниже "ч.д.а."

Аппаратура. Хроматографический анализ проводили на хроматографах "Милихром 4" и "Милихром 5". Использовали колонки размером 80x2,0 мм, заполненные обращенно-фазовыми сорбентами "Сепа-рон 8СХ С18" и "Нуклеосил 100 С18" с размером частиц 7,0 мкм. С помощью рН-метра-милливольт-метра "рН-673М" со стеклянным индикаторным электродом и хлоридсеребряным электродом сравнения контролировали рН буферных растворов для приготовления подвижных фаз.

*ОАО "Фармстандарт-Лексредства", Курск

Т а б л и ц а 1

Характеристики некоторых методик анализа многокомпонентных лекарственных препаратов при помощи

хроматографов "Милихром"

Препараты, вещества Колонка Подвижная фаза и ее расход Длина волны, нм Литература

Местные анестетики: новокаин, анестезин, папаверина гидрохлорид 64x2,0 мм "Сепарон С18" СН3С№ФБ, рН 2,5, 0,1 мл/мин 60 : 40 80 : 20 290 290;260 [1]

Кортикостероиды в мазях: преднизолон, синафлан, гидрокортизон 64x2,0 мм "Сепарон С18" С2Н5ОН 0,05 мл/мин 240 [2]

Таблетки «Абергин»: 2-бром-а-эргокриптин мезилат; 2-бром-Р-эргокриптин мезилат 64x2,0 мм "БЦазогЬ С18" (5,0 мкм) ТГФ:0,01М(ЫН4)2НР04 = 47:53 0,03 мл/мин 254 [3]

Пероральные контрацептивы: этинилэстрадиол, левоноргестрел 120x2,0 мм "ВаХ-ЯР-Б-ОБВ" (8,0 мкм) СН3С№Н20 = 3:2 0,15 мл/мин 220 [4]

Поливитаминные препараты: ретинола ацетат, эргокальциферол, а-токоферола ацетат 120x2,0 мм "Сепарон БОХ" (5,0 мкм) СН30Н:Н20 = 99:1 326 264 286 [5]

Масляные растворы витаминов: А, Е, КЗ 64x2,0 мм "Силасорб 600" (5,0 мкм) Гексан:диэтиловый эфир = 6:94 220 320 [6]

Многокомпонентная лекарственная форма: водорастворимые витамины, кальция пантотенат СН30Н:ФБ рН 7,0 (ступенчатый градиент) 210 260 [7]

Примечание. ФБ - фосфатный буферный раствор; ТГФ - тетрагидрофуран.

Т а б л и ц а 2

Порядок приготовления растворов для анализа некоторых лекарственных препаратов с помощью

хроматографов типа "Милихром"

Препарат 0пределяемые вещества Масса навески, г

"Аскофен" таблетки парацетамол, кофеин, аспирин 0,125 СН3С№Н20:СН3С00Н = 30:67:3

"Пенталгин 1С№' таблетки парацетамол, анальгин, кофеин, кодеина фосфат, фенобарбитал 0,160 0,120 г Ка2БО3 в смеси СН3С№Н20= 15:85

"Нео-теофедрин" таблетки парацетамол, теофиллин, кофеин, эфедрина гидрохлорид, фенобарбитал 0,160 СН3СЩ0,025М К2НР04; рН 3,0) = 15:85

"Проходол форте" таблетки парацетамол, кофеин, кодеина фосфат 0,160 СН3С№0,025М К2НР04 = 1:9

"Коделак-фито" сироп кодеина фосфат, нипагин, нипазол (5,0) СН3С№Н20 = 3:7

"Кларисенс" сироп лоратадин, нипагин, нипазол (5,0) СН3С№Н20 = 3:7

"Ко-тримоксазол" суспензия триметоприм, сульфаметоксазол, нипагин, нипазол 2,5 СН3С№Н20 = 1:4

16 ВМУ, химия, № 4

Порядок приготовления растворов для анализа некоторых препаратов указан в табл. 2.

Все растворы фильтровали через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (предпочтительны фторопластовые фильтры, устойчивые в водно-ацетонитрильныгс растворах).

Проведение анализа. Хроматографировали испытуемый раствор и раствор стандартного образца сравнения (PCO). Расход ПФ составил 0,15 мл/мин, объем инжектируемой пробы 5,0 мкл. Состав ПФ указан в табл. 3.

Результаты и их обсуждение Общие особенности хроматографического разделения на хроматографе "Милихром". Основным отличием хроматографического процесса на хроматографах "Милихром" является его периодичность. Если на стандартном приборе подвижная фаза течет через колонку непрерывно, то на "Милихроме" -только во время анализа. Этот недостаток приводит к ухудшению стабильности условий разделения и снижению точности количественных результатов. Для частичной компенсации такого негативного влияния в приборах предусмотрена регенерация - предварительная промывка колонки подвижной фазой в течение 1-2 мин до анализа, после чего инжектируют пробу.

Кроме этого, до и после набора пробы в иглу набирают по 5-10 мкл буферных объемов. Такой прием уменьшает влияние "реакции на ввод пробы". При разделении в градиентном режиме есть дополнительная особенность, связанная с конструкцией прибора "Милихром". При использовании изократического режима положение шприцевого насоса прибора не играет роли. Для градиента насос должен обязательно располагаться таким образом, чтобы поршень при вытеснении подвижной фазы двигался сверху вниз. Это связано с тем, что перед анализом в насос набираются все ступени подвижной фазы, причем ступени с большим содержанием органического модификатора, имеющие более низкую плотность, набираются в первую очередь. Эти ступени должны занимать в шприце насоса верхнее положение, что замедляет перемешивание растворителя. При нарушении этого правила провести градиентное элюирование при помощи такого прибора практически невозможно.

Результаты анализа. На рис. 1-2 для примера представлены хроматограммы испытуемых растворов, полученные при анализе некоторых многокомпонентных препаратов на хроматографе "Милихром 5". Условия хроматографического разделения указаны в подписях к рисункам. И в изократическом, и в градиентном режимах получено четкое разделение и удов-

Рис. 1. Хроматограмма испытуемого раствора таблеток "Аскофен". Колонка 2,0х80 мм, "Нуклеосил 100 С18" с размером частиц 7,0 мкм. ПФ - CH3CN:H20:CH3C00H = 30:67:3. Детектирование при 220 нм

Т а б л и ц а 3

Результаты анализа некоторых многокомпонентных лекарственных препаратов методом ВЭЖХ

Препарат Определяемые вещества Норма по НД, г/табл (г/5 мл) Хср 5 5Хср 8,%

"Аскофен" парацетамол 0,190-0,210 0,19800 0,00150 0,00050 0,60

таблетки кофеин 0,037-0,043 0,00395 0,00005 0,00002 1,00

аспирин 0,190-0,210 0,20140 0,00210 0,00070 0,82

"Пенталгин ГСЫ" парацетамол 0,285-0,315 0,30210 0,00340 0,00113 0,89

таблетки анальгин 0,285-0,315 0,29640 0,00260 0,00087 0,69

кофеин 0,04625-0,05375 0,50120 0,00630 0,00210 0,99

кодеина фосфат 0,0072-0,0088 0,00789 0,00009 0,00003 0,90

фенобарбитал 0,009-0,011 0,09760 0,00180 0,00060 1,45

"Нео-теофедрин" парацетамол 0,285-0,315 0,30230 0,00230 0,00077 0,60

таблетки теофиллин 0,0925-0,1075 0,10120 0,00200 0,00067 1,55

кофеин 0,04625-0,05375 0,05065 0,00070 0,00023 1,09

эфедрина гидрохлорид 0,0185 0,0215 0,01940 0,00027 0,00009 1,09

фенобарбитал 0,009-0,011 0,00986 0,00011 0,00004 0,88

"Проходол форте" парацетамол 0,475-0,525 0,50340 0,00640 0,00213 1,00

таблетки кофеин 0,04625-0,05375 0,05004 0,00064 0,00021 1,01

кодеина фосфат 0,0072-0,0088 0,00786 0,00008 0,00003 0,80

"Коделак-фито" кодеина фосфат (0,004-0,005) 0,00475 0,00006 0,00002 0,99

сироп нипагин (0,0034-0,0041) 0,00370 0,00002 0,00001 0,43

нипазол (0,0011-0,0014) 0,00120 0,00002 0,00001 0,98

"Кларисенс" лоратадин (0,0045-0,0055) 0,00486 0,00006 0,00002 0,97

сироп нипагин (0,0013-0,0020) 0,00165 0,00002 0,00001 0,95

нипазол (0,00065-0,00100) 0,00084 0,00001 0,00000 0,94

"Ко-тримоксазол" триметоприм (0,036-0,044) 0,03950 0,00040 0,00013 0,80

суспензия сульфаметоксазол (0,180-0,220) 0,20250 0,00340 0,00113 1,32

нипагин (0,0012-0,0018) 0,00155 0,00002 0,00001 1,02

нипазол (0,000375-0,000675) 0,00050 0,00001 0,00000 1,59

17 ВМУ, химия, № 4

Параметры i Хрометограмма; qttd Таблица пиков

оерищ .Мдп Т^ШПННвО-тофвфИН Оп34 (т£Еф1б<ЛЫ| T = 007.731 тин A=04S4J(in.

4.50 Парщявдлоп-Ж .538 2И~

4JOO

3.50

3JOO Т* о фнппта mfr -103568

2.50 I \ Кофеина7^-502512

2JOO

1.50

1JOO

0.50 j 111 1 Фенобарбитал-19 590 \ j \ j \ Д ЭфедриЕагЛ{-20Й59 V/ V 1 V /V /ч Tj.n-н

OJOO ^ ) 2 4 6 8 10 12 14

Рис. 2. Хроматограмма испытуемого раствора для анализа таблеток "Нео-теофедрин". Колонка 2,0x80 мм "Сепарон SGXС18" с размером частиц 7,0 мкм. ПФ - ступенчатыш градиент: CH3CN : Н2О = 1 : 9 (700 мкл) -CH3CN : Н2О = 3 : 7 (800 мкл) - CH3CN : 0,025М КН2РО4 = 3 : 2 (800 мкл). Детектирование при 207 нм

летворительная форма пиков. Разработанные методики использованы для контроля опытно-экспериментальных образцов, приготовленных в лаборатории при

разработке технологии препаратов. Полученные результаты соответствовали технологическим загрузкам (табл. 3).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Лайпаное А.Х., Сланский В.Э. // Хим. фарм. журн. 1991. 25.

С. 75.

2. Гаерилин М.В., Компанцееа Е.В., Ушакоеа Л.С. //Фарма-

ция. 1994. 43. С. 64.

3. Комароеа Е.Л., Пинеее С.А. // Хим.фарм.журн. 1995. 29.

С. 54.

4. Васиярое Г.Г., Малахое В.Ю., Лифшиц И.В. // Фармация.

1994. 43. С. 66.

5. Козлое Э.И., Солунина И.А., Любарееа М.Л., Надточий

М.А. // Хим. фарм. журн. 2003. 37. С. 50.

6. Староеерое В.М., Дейнека В.И., Кричкоеская Л.В. // Хим.

фарм. журн. 1990. 24. С. 85.

7. Малолеткина Т.С. // Пат. РФ 2134883. Бюлл. изобр. 1999.

№ 11. С . 199.

Поступила в редакцию 20.09.07

THE ANALYSIS OF SOME MULTICOMPONENT MEDICINALS USING MICROCOLUMN CHROMATOGRAPH OF "MILICHROM" SERIES

G.B. Golubitskii, V.M. Ivanov

On an example of the analysis some two, three and fivecomponents of medicinal preparations the opportunities of use microcolumn chromatograph of a series "Milichrom" are shown. Is proved, that the updatings of devices with one shprice by the pump can successfully be applied to the analysis of complex(difficult) mixes both in isocratic, and in gradiend modes. The developed techniques included in the normative-engineering specifications, within several years applied to quality surveillance of let out preparations.