CRYSTALLINE FORMS OF {[1-CYANO-5-(4-CHLOROPHENOXY)-4-HYDROXY-ISOQUINOLINE-3-CARBONYL]-AMINO}-ACETIC ACID
КРИСТАЛЛИЧЕСКИЕ ФОРМЫ { [1-ЦИАНО-5-(4-ХЛОРОФЕНОКСИ)-4-ГИДРОКСИИЗОХИНОЛИН-3-КАРБОНИЛ]-АМИНО} -УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно §119(e) раздела 35 Свода законов США (U.S.С.) на основании предварительной заявки на патент США №61/756361, поданной 24 января 2013 г., содержание которой включено в настоящую заявку посредством ссылки.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Область техники
[0002] Настоящее описание относится к кристаллическим формам {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), способу получения кристаллических форм Соединения A, содержащим их фармацевтическим композициям и способам их применения.
Уровень техники
[0003] {[1-Циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусная кислота (далее - Соединение A) является мощным ингибитором пролилгидроксилазы индуцируемого гипоксией фактора (ИГФ, англ.: HIF). Ингибиторы ИГФ-пролилгидроксилазы являются подходящими для повышения стабильности и/или активности ИГФ и являются подходящими для лечения и предотвращения расстройств, связанных с ИГФ, включая анемию, ишемию и гипоксию. В патенте США №7928120, содержание которого включено в настоящее описание, описано семейство соединений, которое включает Соединение A, в том числе структуры, синтез и способы применения указанных соединений.
[0004] Соединение может существовать в одной или более кристаллических формах. Кристаллические формы лекарственного вещества могут иметь различные химические и физические свойства, включая температуру плавления, химическую активность, растворимость, скорость растворения, оптические и механические свойства, давление пара, гигроскопичность, форму частиц, плотность, текучесть (сыпучесть) и совместимость. Эти свойства могут иметь прямое влияние на возможность обработки и/или получения соединения в виде лекарственного продукта. Кристаллические формы могут также иметь различную стабильность и биодоступность. Наиболее стабильную кристаллическую форму лекарственного продукта обычно выбирают в ходе разработки лекарственного средства на основании минимальной возможности преобразования в другую кристаллическую форму и по ее большей химической стабильности. Для обеспечения качества, безопасности и эффективности лекарственного продукта важно выбрать кристаллическую форму, которая является стабильной, получена воспроизводимым образом и имеет подходящие физико-химические свойства. Соответственно, в настоящем описании предложены кристаллические формы Соединения A, которые могут быть получены в виде лекарственного продукта и могут быть применены для лечения и предотвращения связанных с ИГФ расстройств, в том числе состояний, включающих анемию, ишемию и гипоксию.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0005] Настоящее описание относится к кристаллическим формам Соединения A и способам получения кристаллических форм.
[0006] Один из аспектов настоящего описания относится к кристаллической форме {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), имеющей следующую структуру:
[0007] В одном варианте реализации предложена кристаллическая Форма 1 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A). В одном варианте реализации Соединение A, Форма 1, характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции (XRPD), содержащей по меньшей мере один пик, выбранный из 7,7, 11,2, 13,8, 14,7, 15,3, 15,8, 18,3, 21,1 и 22,2 °2θ ± 0,2 °2θ, определенных по дифрактограмме с использованием излучения Cu-Kα. В одном варианте реализации Форма 1 характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей пик при 18,3 ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 1 дополнительно содержит пик при 11,2 ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 1 дополнительно содержит пики при 7,7, 13,8, 21,1 и 22,2 °2θ ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 1 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 1.
[0008] В одном варианте реализации Соединение A, Форма 1, характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), которая содержит эндотерму при примерно 251°C. В другом варианте реализации кривая ДСК Формы 1 дополнительно содержит экзотерму при примерно 210°C. В другом варианте реализации кривая ДСК Формы 1 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 2.
[0009] В одном варианте реализации Соединение A, Форма 1, характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей по меньшей мере один пик, выбранный из 7,7, 11,2, 13,8, 14,7, 15,3, 15,8, 18,3, 21,1 и 22,2 °2θ ± 0,2 °2θ, определенных по дифрактограмме с использованием излучения Cu-Kα; и кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), содержащей эндотерму при примерно 251°C. В одном варианте реализации Форма 1 характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей пик при 18,3 ± 0,2 °2θ; и кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), содержащей эндотерму при примерно 251°C. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 1 дополнительно содержит пики при 11,2, 7,7, 13,8, 21,1 и 22,2 °2θ ± 0,2 °2θ; и кривая ДСК Формы 1 дополнительно содержит экзотерму при примерно 210°C. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 1 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 1; и кривая ДСК Формы 1 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 2.
[0010] Согласно одному из вариантов реализации в настоящем описании предложена кристаллическая Форма 2 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A). В одном варианте реализации Соединение A, Форма 2, характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей по меньшей мере один пик, выбранный из 8,1, 10,6, 11,5, 14,5, 16,2, 19,3, 21,5, 21,9, 22,7, 24,5 и 26,6 °2θ ± 0,2 °2θ, определенных по дифрактограмме с использованием излучения Cu-Kα. В одном варианте реализации Форма 2 характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей пик при 19,3 ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 2 дополнительно содержит пики при 10,6 и 11,5 °2θ ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 2 дополнительно содержит пики при 14,5, 16,2, 24,5 и 26,6 °2θ ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 2 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 3.
[0011] В одном варианте реализации Соединение A, Форма 2, характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), которая содержит эндотерму при примерно 249°C. В другом варианте реализации кривая ДСК Формы 2 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 4.
[0012] В одном варианте реализации Соединение A, Форма 2 характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей по меньшей мере один пик, выбранный из 8,1, 10,6, 11,5, 14,5, 16,2, 19,3, 21,5, 21,9, 22,7, 24,5 и 26,6 °2θ ± 0,2 °2θ, определенных по дифрактограмме с использованием излучения Cu-Кα; и кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), содержащей эндотерму при примерно 249°C. В одном варианте реализации Форма 2 характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей пик при 19,3 ± 0,2 °2θ; и кривой ДСК, содержащей эндотерму при примерно 249°C. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 2 дополнительно содержит пики при 10,6, 11,5, 14,5, 16,2, 24,5 и 26,6 °2θ ± 0,2 °2θ; и кривой ДСК, содержащей эндотерму при примерно 249°C. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 2 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 3; и кривая ДСК Формы 2 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 4.
[0013] Согласно другому аспекту настоящее описание относится к способу получения кристаллической Формы 1 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A). В одном варианте реализации указанный способ включает:
a) нагревание смеси, содержащей соль {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), необязательно в присутствии основания;
b) охлаждение указанной смеси; и
c) добавление кислоты к указанной смеси.
[0014] В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 1 Соединения A.
[0015] В некоторых вариантах реализации способ получения кристаллической Формы 1 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A) включает:
a) нагревание смеси, содержащей этил-1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбоксилат, глицин и метоксид натрия в метаноле;
b) охлаждение указанной смеси; и
c) добавление хлороводородной кислоты к указанной смеси.
[0016] В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 1 Соединения A.
[0017] В одном варианте реализации способ получения кристаллической Формы 1 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A) включает нагревание Соединения A в подходящем растворителе. В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 1 Соединения A.
[0018] Согласно другому аспекту настоящее описание относится к способу получения кристаллической Формы 2 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A). В одном варианте реализации указанный способ включает:
a) нагревание смеси, содержащей соль {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A);
b) добавление кислоты к указанной смеси и продолжение нагревания; и
c) охлаждение указанной смеси.
[0019] В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 2 Соединения A.
[0020] В некоторых вариантах реализации способ получения кристаллической Формы 2 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A) включает:
a) нагревание смеси, содержащей натриевую соль {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A) в воде, до примерно 80-85°C;
b) добавление уксусной кислоты к указанной смеси и продолжение нагревания при примерно 80-85°C; и
с) охлаждение указанной смеси.
[0021] В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 2 Соединения A.
[0022] В одном варианте реализации способ получения кристаллической Формы 2 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A) включает нагревание Соединения A в подходящем растворителе. В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 2 Соединения A.
[0023] В одном варианте реализации способ получения кристаллической Формы 2 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), включает нагревание Формы 1 Соединения A.
[0024] В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 2 Соединения A.
[0025] Согласно другому аспекту настоящее описание относится к фармацевтической композиции, содержащей одну или более кристаллических Форм {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), имеющей следующую структуру:
и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
[0026] В одном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, Форму 1, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, по меньшей мере 90% которого находится в Форме 1, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В еще одном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, по меньшей мере 95%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8%, 99,9%, 99,95%, 99,98% или 99,99% которого находится в Форме 1, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, по меньшей мере от 90% до 99,99% которого находится в Форме 1, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
[0027] В одном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, Форму 2, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, по меньшей мере 90% которого находится в Форме 2, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В еще одном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, по меньшей мере 95%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8%, 99,9%, 99,95%, 99,98% или 99,99% которого находится в Форме 2, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, по меньшей мере от 90% до 99,99% которого находится в Форме 2, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В одном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, не более 10%, 5%, 2%, 1%, 0,5%, 0,2%, 0,1%, 0,05%, 0,02% или 0,01% которого находится в Форме 1, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В одном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, не более чем от 0,1% до 10% которого находится в Форме 1, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
[0028] В одном варианте реализации фармацевтическая композиция дополнительно содержит дополнительный терапевтический агент, выбранный из группы, состоящей из витамина В12, фолиевой кислоты, сульфата железа, рекомбинантного эритропоэтина человека и эритропоэзстимулирующего агента (ЭСА). В другом варианте реализации фармацевтическая композиция приготовлена для пероральной доставки. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция приготовлена в виде таблетки или капсулы.
[0029] Согласно другому аспекту настоящее описание относится к способу лечения, предварительного лечения или задержки начала состояния, связанного с индуцируемым гипоксией фактором (ИГФ) или опосредованного указанным фактором по меньшей мере частично, где указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей одну или более кристаллических форм Соединения A. В одном варианте реализации настоящего изобретения состояние, связанное с ИГФ или опосредованное указанным фактором по меньшей мере частично, представляет собой повреждение ткани, связанное с ишемией или гипоксией. В другом варианте реализации настоящего изобретения ишемия связана с ишемическим событием, выбранным из группы, состоящей из инфаркта миокарда, эмболии легких, инфаркта кишечника, хронической почечной недостаточности, ишемического инсульта, ишемического и реперфузионного повреждения почки, цирроза сердца, транзиторной ишемической атаки, дегенерации желтого пятна, заболевания периферических артерий и застойной сердечной недостаточности. В одном варианте реализации указанного способа фармацевтическая композиция содержит Соединение A, Форму 1. В одном варианте реализации указанного способа фармацевтическая композиция содержит Соединение A, Форму 2.
[0030] Согласно другому аспекту настоящее описание относится к способу лечения, предварительного лечения или задержки начала состояния, связанного с эритропоэтином (ЭПО) или опосредованного ЭПО по меньшей мере частично, где указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей одну или более кристаллических форм Соединения A. В одном варианте реализации указанного способа фармацевтическая композиция содержит Форму 1 Соединения A. В одном варианте реализации указанного способа фармацевтическая композиция содержит Форму 2 Соединения A.
[0031] Согласно другому аспекту настоящее описание относится к способу лечения, предварительного лечения или задержки начала анемии, где указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей одну или более кристаллических форм Соединения A. В одном варианте реализации настоящего изобретения анемия связана с хроническим заболеванием или состоянием, выбранным из группы, состоящей из диабета, рака, язв, заболевания почек, иммунодепрессивного заболевания, инфекции и воспаления. В другом варианте реализации настоящего изобретения анемия связана с процедурой или лечением, выбранными из группы, состоящей из радиационной терапии, химиотерапии, диализа и хирургического вмешательства. В другом варианте реализации настоящего изобретения анемия связана с потерей крови, вызванной нарушениями свертываемости крови, травмой, хирургическим вмешательством и т.п. В еще одном варианте реализации настоящего изобретения анемия связана с аномальным гемоглобином, аномальными эритроцитами или недостатками в транспорте, переработке или утилизации железа. В одном варианте реализации указанного способа фармацевтическая композиция содержит Форму 1 Соединения A. В одном варианте реализации указанного способа фармацевтическая композиция содержит Форму 2 Соединения A.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0032] Фиг. 1 представляет собой дифрактограмму XRPD кристаллической Формы 1 Соединения A.
[0033] Фиг. 2 представляет собой кривую ДСК кристаллической Формы 1 Соединения A.
[0034] Фиг. 3 представляет собой дифрактограмму XRPD кристаллической Формы 2 Соединения A.
[0035] Фиг. 4 представляет собой кривую ДСК кристаллической Формы 2, Соединения A.
[0036] На фиг. 5 представлены дифрактограммы XRPD для сольватов Соединения A, XRPD3 и XRPD4.
[0037] На фиг. 6 представлены дифрактограммы XRPD для Формы 2 Соединения A и сольватов Соединения A, XRPD 3, XRPD 4, XRPD 5, XRPD 6 и XRPD 7.
1
[0038] На фиг. 7 представлены спектры Н-ЯМР для Формы 2 Соединения A и сольватов Соединения A, XRPD 3, XRPD 4, XRPD 5, XRPD 6 и XRPD 7.
[0039] Фиг. 8 демонстрирует, что Соединение A увеличивает уровни гематокрита и гемоглобина у мышей после 1-й недели прерывистого введения.
[0040] Фиг. 9 демонстрирует, что Соединение A увеличивает уровни гематокрита и гемоглобина у нормальных обезьян после 2 недель.
[0041] Фиг. 10 демонстрирует, что Соединение A увеличивает уровни гемоглобина и гематокрита при анемии хронических заболеваний у крыс.
[0042] Фиг. 11 демонстрирует, что Соединение A облегчает течение анемии хронических заболеваний у крыс.
[0043] На фиг. 12 показано, что Соединение A увеличивает средние максимальные уровни эритропоэтина в плазме у человека.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[0044] Как указано выше, настоящее описание относится, частично, к кристаллическим формам {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), имеющей следующую структуру:
[0045] Перед приведением подробного описания следует определить следующие термины.
1. Определения
[0046] При использовании в настоящем описании следующие термины имеют следующие значения.
[0047] Неопределенные и определенные формы единственного числа и подобные им формы включают формы множественного числа, если из контекста явно не следует обратное. Таким образом, например, указание на "соединение" включает как одно соединение, так и множество различных соединений.
[0048] Термин «примерно» при использовании перед числовым обозначением, например, температуры, времени, количества и концентрации, в том числе диапазона, указывает приближения, которые могут варьироваться на ±10%, ±5% или ±1%.
[0049] Термин «введение» относится к введению агента в пациента. Может быть введено терапевтическое количество, которое может быть определено лечащим врачом или т.п. Для кристаллических форм Соединения A согласно настоящему описанию пероральный путь введения является предпочтительным. Соответствующие термины и фразы «осуществление введения» и «введение» чего-либо, при использовании в отношении соединения или фармацевтической композиции (и грамматических эквивалентов) относятся как к непосредственному введению, которое может представлять собой введение пациенту медицинским работником или самостоятельно пациентом, и/или косвенному введению, которое может представлять собой акт назначения лекарственного средства. Например, врач, который инструктирует пациента в отношении самостоятельного введения лекарственного средства и/или предоставляет пациенту рецепт на лекарственное средство, вводит лекарственное средство пациенту. В любом случае введение влечет за собой доставку лекарственного средства пациенту.
13
1
[0050] Термин «характеристика» относится к получению данных, которые могут быть использованы для идентификации и отличают твердую форму соединения, например, для определения того, является ли твердая форма аморфной или кристаллической и является ли она несольватированной или сольватированной. Способ, посредством которого характеризуются твердые формы, включает анализ данных, собранных для полиморфных форм таким образом, чтобы позволить среднему специалисту в данной области техники отличить одну твердую форму от других твердых форм, содержащих одно и то же вещество. Химическую идентичность твердых форм часто можно определить с помощью методов с веществом в растворе, таких как С ЯМР или Н ЯМР. Несмотря на то, что указанные методы могут позволить идентифицировать вещество и молекулы растворителя для сольвата, такие методики с веществом в растворе сами по себе не могут предоставить информацию о твердом состоянии. Существуют, однако, твердотельные аналитические методы, которые могут быть использованы для того, чтобы получить информацию о структуре в твердом состоянии и различить полиморфные твердые формы, и к таким методам относятся рентгеновская дифракция монокристаллов, рентгеновская порошковая дифракция (XRPD), твердотельный ядерный магнитный резонанс (ТТ-ЯМР) и инфракрасная спектроскопия и рамановская спектроскопия, а также термические методы, такие как дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК), термогравиметрия (ТГ), определение температуры плавления и высокотемпературная микроскопия.
[0051] Для того чтобы «характеризовать» твердую форму соединения, можно, например, собрать данные XRPD о твердых формах соединения и сравнить пики XRPD для данных форм. Например, если сравнивают только две твердые формы, 1 и 2, и на дифрактограмме формы 1 есть пик при угле, где нет пиков появляются на дифрактограмме формы 2, то данный пик для данного соединения позволяет отличить форму 1 от формы 2 и далее действует для характеристики формы 1. Набор пиков, которые отличают форму 1 от других известных форм, представляет собой набор пиков, которые могут быть использованы для характеристики формы 1. Специалистам в данной области будет понятно, что для характеристики твердых форм часто существует множество способов, включая множество способов с использованием одного и того же аналитического метода. Также, но не обязательно, для характеристики формы могут быть использованы дополнительные пики, вплоть до полной дифрактограммы. Несмотря на то, что для характеристики такой формы могут быть использованы все пики в полной дифрактограмме XRPD, для характеристики формы, как правило, может быть использовано подмножество этих данных.
[0052] «Кристаллическая форма» Соединения A представляет собой кристаллическую твердую форму Соединения A, например, Форму 1 или Форму 2. Форма 1 или Форма 2 кристаллической решетки по существу не содержат растворителей кристаллизации. Тем не менее, любой присутствующий растворитель не входит в кристаллическую решетку и случайным образом распределен вне кристаллической решетки. Поэтому кристаллы Формы 1 или Формы 2 в объеме могут содержать, вне кристаллической решетки, небольшие количества одного или более растворителей, таких как растворители, используемые при синтезе или кристаллизации. Приведенные выше термины «по существу не содержит» и «малые количества» относятся к присутствию растворителей в количестве предпочтительно менее 10000 частей на миллион (ppm) или, более предпочтительно, менее 500 ppm.
[0053] Используемый в настоящем описании термин «вспомогательное вещество» означает инертное или неактивное вещество, используемое при получении фармацевтических продуктов, включая, без ограничения, любое вещество, используемое в качестве связующего, разрыхлителя, покрытия, добавки для прессования/инкапсулирования, крема или лосьона, смазывающего агента, парентерального агента, подсластителя или ароматизатора, суспендирующего/гелирующего агента или агента для влажной грануляции. Связующие вещества включают, например, карбопол, повидон, ксантановую камедь и т.д.; покрытия включают, например, ацетат-фталат целлюлозы, этилцеллюлозу, геллановую камедь, мальтодекстрин и т.д.; добавки для прессования/инкапсулирования включают, например, карбонат кальция, декстрозу, фруктозу DC, мед DC, лактозу (безводную или моногидрат, необязательно в комбинации с аспартамом, целлюлозой, микрокристаллической целлюлозой), крахмал DC, сахарозу и т.д.; разрыхлители включают, например, кроскармеллозу натрия, геллановую камедь, крахмалгликолят натрия и т.д.; кремы и лосьоны включают, например, мальтодекстрин, каррагинаны и т.д.; смазывающие агенты включают, например, стеарат магния, стеариновую кислоту, стеарилфумарат натрия и т.д.; материалы для жевательных таблеток включают, например, декстрозу, фруктозу DC, лактозу (моногидрат, необязательно в комбинации с аспартамом или целлюлозой) и т.д.; парентеральные агенты включают, например, маннит, повидон и т.д.; пластификаторы включают, например, дибутилсебацинат, поливинилацетат-фталат и т.д.; суспендирующие/гелирующие агенты включают, например, каррагинан, крахмалгликолят натрия, ксантановую камедь и т.д.; подсластители включают, например, аспартам, декстрозу, фруктозу DC, сорбит, сахарозу DC, и т.д.; и агенты для влажной грануляции включают, например, карбонат кальция, мальтодекстрин, микрокристаллическую целлюлозу и т.д.
[0054] «Выдерживание» или «осуществление выдерживания» относится к инкубации смеси твердого материала в конкретном растворителе при осуществлении циклов нагревание/охлаждение в течение определенного периода времени. Например, выдерживание проводили при комнатной температуре в течение 4 ч с последующей инкубацией при 50°C в течение еще 4 ч (инкубация при 50°C/комнатной температуре (циклы по 4 ч)) в течение периода от 16 до 24 ч.
[0055] Термин «комнатная температура» относится к (22±5)°C.
[0056] «Терапевтически эффективное количество» или «терапевтическое количество» относится к количеству лекарственного средства или агента, которое при введении пациенту, страдающему определенным состоянием, будет обеспечивать предполагаемый терапевтический эффект, например, облегчение, улучшение, временное ослабление или устранение одного или более проявлений состояния у пациента. Терапевтически эффективное количество будет варьироваться в зависимости от субъекта и состояния, подлежащего лечению, веса и возраста субъекта, тяжести состояния, конкретной выбранной композиции или вспомогательного вещества, режима дозирования, которому необходимо следовать, времени введения, способа введения и т.п., причем все из указанных показателей могут быть легко определены средним специалистом в данной области техники. Полный терапевтический эффект не обязательно проявляется при введении одной дозы и может проявляться только после введения серии доз. Таким образом, терапевтически эффективное количество может быть введено в один или несколько приемов. Например, и без ограничения, терапевтически эффективное количество агента, в контексте лечении анемии, относится к количеству агента, которое облегчает, улучшает, временно ослабляет или устраняет один или более симптомов анемии у пациента.
[0057] Термины «лечение», «осуществление лечения» и «лечить» означают действие с агентом в отношении заболевания, расстройства или состояния для уменьшения или смягчения вредных или любых других нежелательных эффектов заболевания, расстройства или состояния и/или их симптомов. В контексте настоящего описания лечение охватывает лечение пациента-человека и включает: (а) уменьшение риска возникновения состояния у пациента, определяемого как имеющего предрасположенность к заболеванию, но у которого еще не диагностировали указанное состояние, (b) препятствование развитию состояния и/или (с) облегчение состояния, то есть обеспечение регрессии состояния и/или ослабление одного или более симптомов состояния.
[0058] «Дифрактограмма XRPD» представляет собой график (x-y), на котором по оси x отложены углы дифракции (как правило,°2θ), а по оси y - интенсивность. Пики в пределах этой дифрактограммы могут быть использованы для характеристики кристаллической твердой формы. Как и для любого снятия данных, в данных XRPD существуют различия. Данные XRPD часто представлены исключительно в виде угла дифракционных пиков без указания интенсивности пиков, поскольку интенсивность пика может быть чувствительна к подготовке образцов (например, на чувствительность влияют размер частиц, содержание влаги, содержание растворителя и предпочтительные ориентационные эффекты), поэтому образцы одного и того же материала, полученного при различных условиях может дать несколько различных дифрактограмм; эта изменчивость, как правило, больше, чем изменчивость углов дифракции. Изменчивость углов дифракции может быть также чувствительна к подготовке образцов. Другими источниками изменчивости являются параметры прибора и обработка исходных рентгеновских данных: различные рентгеновские приборы работают с использованием различных параметров, и это может привести к получению несколько различных дифрактограмм XRPD для одной и той же твердой формы, аналогичным образом, различные программные пакеты обрабатывают рентгеновские данные по-разному, и это также приводит к изменчивости. Эти и другие источники изменчивости известны средним специалистам в области фармации. Ввиду таких источников изменчивости, для углов дифракции в дифрактограммах XRPD обычно назначают изменчивость ±0,2 °2θ.
2. Получение кристаллических форм Соединения A
[0059] Согласно одному из аспектов настоящее описание относится к способу получения кристаллической Формы 1 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A). В одном варианте реализации указанный способ включает:
a) нагревание смеси, содержащей соль {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), необязательно в присутствии основания;
b) охлаждение указанной смеси; и
c) добавление кислоты к указанной смеси.
Как правило, для данного способа основание, в случае его добавления, находится в избытке по отношению к соли. Например, на 1 эквивалент соли добавляют от примерно 2 до примерно 20 эквивалентов основания, от примерно 5 до примерно 15 эквивалентов основания, от примерно 10 до примерно 15 эквивалентов основания, или примерно 10, примерно 11, примерно 12, примерно 13, примерно 14, или примерно 15 эквивалентов, основания. Как правило, для данного способа нагревание проводят при примерно 60°C до примерно 85°C, при примерно 65°C до примерно 82°C или при примерно 65°C, примерно 80°C или примерно 82°C до завершения реакции по данным ЖХ-МС. Как правило, кислоту добавляют для доведения pH смеси до pH от примерно 1 до примерно 4, до pH от примерно 2 до примерно 3 или до pH примерно 3.
[0060] В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 1 Соединения A.
[0061] В одном варианте реализации соль {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A) обеспечивают путем смешивания этил-1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбоксилата, глицина и основания. Как правило, для данного способа на 1 эквивалент этил-1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбоксилата добавляют от примерно 15 до примерно 25 эквивалентов глицина и от примерно 10 до примерно 20 эквивалентов основания, или примерно 20 эквивалентов глицина и примерно 15 эквивалентов основания.
[0062] В одном варианте реализации указанное основание представляет собой метоксид натрия.
[0063] В одном варианте реализации указанная кислота представляет собой хлористоводородную кислоту.
[0064] В одном варианте реализации способ осуществляют в метаноле.
[0065] В другом варианте реализации способ получения кристаллической Формы 1 Соединения A включает:
a) нагревание смеси, содержащей этил-1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбоксилат, глицин и метоксид натрия в метаноле;
b) охлаждение указанной смеси;
c) добавление хлороводородной кислоты к указанной смеси; и
d) выделение Формы 1 Соединения A.
Как правило, для данного способа на 1 эквивалент этил-1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбоксилата добавляют от примерно 15 до примерно 25 эквивалентов глицина и от примерно 10 до примерно 20 эквивалентов метоксида натрия, или примерно 20 эквивалентов глицина и примерно 15 эквивалентов метоксида натрия. Как правило, для данного способа нагревание проводят с обратным холодильником до завершения реакции по данным ЖХ-МС. Как правило, кислоту добавляют для доведения pH смеси до pH от примерно 1 до примерно 4, до pH от примерно 2 до примерно 3 или до pH примерно 3.
[0066] Согласно одному из вариантов реализации в настоящем описании предложен способ получения кристаллической Формы 1 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), включающий нагревание Соединения A в подходящем растворителе. В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 1 Соединения A.
[0067] В одном варианте реализации подходящий растворитель представляет собой ацетонитрил, и нагревание проводят с обратным холодильником (как правило, при примерно 81-82°C). Как правило, нагревание проводят до тех пор, пока не образуется прозрачный раствор. Как правило, указанный раствор охлаждают до примерно комнатной температуры и затем до более низкой температуры, например, до примерно 5°C.
[0068] В одном варианте реализации подходящий растворитель представляет собой чистую (neat) уксусную кислоту, и нагревание проводят при примерно 80°C.
[0069] В другом варианте реализации способ получения кристаллической Формы 1 Соединения A включает:
a) нагревание Соединения A в ацетонитриле с обратным холодильником;
b) охлаждение указанной смеси; и
c) выделение Формы 1 Соединения A.
Как правило, охлаждение проводят до примерно комнатной температуры.
[0070] В другом варианте реализации способ получения кристаллической Формы 1 Соединения A включает:
a) нагревание Соединения A в чистой уксусной кислоте при примерно 80°C;
b) охлаждение указанной смеси; и
c) выделение Формы 1 Соединения A.
Как правило, нагревание проводят до примерно комнатной температуре.
[0071] Согласно одному из вариантов реализации в настоящем описании предложен способ получения кристаллической Формы 1 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), включающий нагревание форм XRPD 3 или XRPD 4 Соединения A до температуры более примерно 40°C.
[0072] В приведенных выше вариантах реализации стадия выделения может включать одно или более из следующего: охлаждение смеси, перемешивание смеси, фильтрование, промывку и сушку твердого вещества в вакуумной печи до постоянного веса.
[0073] Согласно другому аспекту настоящее описание относится к способу получения кристаллической Формы 2 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A). В одном варианте реализации указанный способ включает:
a) нагревание смеси, содержащей соль {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A);
b) добавление кислоты к указанной смеси и продолжение нагревания; и
c) охлаждение указанной смеси.
Как правило, добавляют от примерно 3 до примерно 6 эквивалентов, или примерно 5 эквивалентов, кислоты. Как правило, нагревание проводят до примерно 80°C. Как правило, охлаждение проводят до примерно комнатной температуры.
[0074] В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 2 Соединения A.
[0075] В одном варианте реализации соль Соединения A обеспечивают путем смешивания Соединения A с основанием. Как правило, добавляют примерно от 1 до 1,5 эквивалента, или примерно 1,25 эквивалента, основания.
[0076] В одном варианте реализации основание представляет собой гидроксид натрия.
[0077] В одном варианте реализации способ осуществляют в воде.
[0078] В одном варианте реализации нагревание соответствует температуре более примерно 80°C. В некоторых вариантах реализации нагревание соответствует температуре примерно 80-85°C.
[0079] В одном варианте реализации кислота представляет собой уксусную кислоту.
[0080] В одном варианте реализации соль Соединения A обеспечивают путем смешивания этил-1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбоксилата, глицина и основания.
[0081] В одном варианте реализации указанное основание представляет собой метоксид натрия.
[0082] Согласно другому варианту реализации в настоящем описании предложен способ получения кристаллической Формы 2 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), включающий:
a) нагревание смеси, содержащей натриевую соль {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A) в воде, до примерно 80-85°C;
b) добавление уксусной кислоты к указанной смеси и продолжение нагревания при примерно 80-85°C;
c) охлаждение указанной смеси; и
d) выделение Формы 2 Соединения A.
[0083] В одном варианте реализации натриевую соль Соединения A обеспечивают путем смешивания Соединения A с гидроксидом натрия. Как правило, к Соединению A добавляют примерно от 1 до 1,5 эквивалента, или примерно 1,25 эквивалента, гидроксида натрия.
[0084] В одном варианте реализации способ получения кристаллической Формы 2 Соединения A включает:
a) нагревание смеси, содержащей Соединение A и гидроксид натрия в воде, до примерно 80-85°C;
b) добавление уксусной кислоты к указанной смеси и продолжение нагревания при примерно 80-85°C;
c) охлаждение указанной смеси; и
d) выделение Формы 2 Соединения A.
[0085] Согласно другому варианту реализации в настоящем описании предложен способ получения кристаллической Формы 2 {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), включающий нагревание Соединения A в подходящем растворителе. В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 2 Соединения A.
[0086] В одном варианте реализации подходящий растворитель представляет собой изопропилацетат, и нагревание проводят с обратным холодильником. Как правило, в данном варианте реализации нагревание проводят в течение периода, составляющего от 1 часа до периода «в течение ночи».
[0087] В одном варианте реализации подходящий растворитель представляет собой воду, и нагревание проводят при примерно 80°C. Как правило, в данном варианте реализации нагревание проводят в течение периода, составляющего от 1 часа до периода «в течение ночи».
[0088] В одном варианте реализации способ получения кристаллической Формы 2 Соединения A включает:
a) нагревание Соединения A в изопропилацетате с обратным холодильником; и
b) выделение Формы 2 Соединения A.
[0089] В другом варианте реализации способ получения кристаллической Формы 2 Соединения A включает:
a) нагревание Соединения A в воде при примерно 80°C;
b) выделение Формы 2 Соединения A.
[0090] В другом варианте реализации способ получения кристаллической Формы 2 Соединения A включает выдерживание Формы 1 Соединения A при повышенной температуре (например, при примерно 50°C), и при определенной относительной влажности (ОВ) (например, при примерно ОВ 75%), в результате чего образуется Форма 2 Соединения A. В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 2 Соединения A.
[0091] В другом варианте реализации способ получения кристаллической Формы 2 Соединения A включает нагревание кристаллической Формы 1 Соединения A, в результате чего образуется Форма 2 Соединения A. В одном варианте реализации указанное нагревание включает температуру примерно 200°C. В одном варианте реализации указанный способ дополнительно включает выделение Формы 2 Соединения A.
[0092] В другом варианте реализации способ получения кристаллической Формы 2 Соединения A включает нагревание форм XRPD 5, XRPD 6 или XRPD 7 Соединения A до температуры более примерно 40°C.
[0093] В приведенных выше вариантах реализации стадия выделения может включать одно или более из следующего: охлаждение смеси, перемешивание смеси, фильтрование, промывку и сушку твердого вещества в вакуумной печи до постоянного веса.
3. Характеристика кристаллических форм Соединения A
[0094] Кристаллическая форма {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A) может быть охарактеризована множеством способов, обсуждение которых приведено ниже.
Рентгеновская порошковая дифракция (XRPD)
[0095] В одном варианте реализации Форма 1 Соединения A характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей по меньшей мере один пик, выбранный из 7,7, 11,2, 13,8, 14,7, 15,3, 15,8, 18,3, 21,1 и 22,2 °2θ ± 0,2 °2θ, определенных по дифрактограмме с использованием излучения Cu-Kα. В одном варианте реализации Форма 1 характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей пик при 18,3 ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 1 дополнительно содержит пик при 11,2 ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 1 дополнительно содержит пики при 7,7, 13,8, 21,1 и 22,2 °2θ ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 1 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 1.
[0096] В одном варианте реализации Форма 2 Соединения характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей по меньшей мере один пик, выбранный из 8,1, 10,6, 11,5, 14,5, 16,2, 19,3, 21,5, 21,9, 22,7, 24,5 и 26,6 °2θ ± 0,2 °2θ, определенных по дифрактограмме с использованием излучения Cu-Kα. В одном варианте реализации Форма 2 характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей пик при 19,3 ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 2 дополнительно содержит пики при 10,6 и 11,5 °2θ ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 2 дополнительно содержит пики при 14,5, 16,2, 24,5 и 26,6 °2θ ± 0,2 °2θ. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 2 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 3.
Дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК)
[0097] В одном варианте реализации Форма 1 Соединения A характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), которая содержит эндотерму при примерно 251°C. В другом варианте реализации кривая ДСК Формы 1 дополнительно содержит экзотерму при примерно 210°C. В другом варианте реализации кривая ДСК Формы 1 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 2.
[0098] В одном варианте реализации Форма 2 Соединения A характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), которая содержит эндотерму при примерно 249°C. В другом варианте реализации кривая ДСК Формы 2 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 4.
[0099] В одном варианте реализации Форма 1 Соединения A характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей по меньшей мере один пик, выбранный из 7,7, 11,2, 13,8, 14,7, 15,3, 15,8, 18,3, 21,1 и 22,2 °2θ ± 0,2 °2θ, определенных по дифрактограмме с использованием излучения Cu-Kα; и кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), содержащей эндотерму при примерно 251°C. В одном варианте реализации Форма 1 характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей пик при 18,3 ± 0,2 °2θ; и кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), содержащей эндотерму при примерно 251°C. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 1 дополнительно содержит пики при 11,2, 7,7, 13,8, 21,1 и 22,2 °2θ ± 0,2 °2θ; и кривая ДСК Формы 1 дополнительно содержит экзотерму при примерно 210°C. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 1 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 1; и кривая ДСК Формы 1 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 2.
[0100] В одном варианте реализации Форма 2 Соединения A характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей по меньшей мере один пик, выбранный из 8,1, 10,6, 11,5, 14,5, 16,2, 19,3, 21,5, 21,9, 22,7, 24,5 и 26,6 °2θ ± 0,2 °2θ, определенных по дифрактограмме с использованием излучения Cu-Kα; и кривой дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), содержащей эндотерму при примерно 249°C. В одном варианте реализации Форма 2 характеризуется дифрактограммой рентгеновской порошковой дифракции, содержащей пик при 19,3 ± 0,2 °2θ; и кривой ДСК, содержащей эндотерму при примерно 249°C. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 2 дополнительно содержит пики при 10,6, 11,5, 14,5, 16,2, 24,5 и 26,6 °2θ ± 0,2 °2θ; и кривой ДСК, содержащей эндотерму при примерно 249°C. В другом варианте реализации дифрактограмма Формы 2 Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 3; и кривая ДСК Соединения A является по существу такой, как представлено на фиг. 4.
Термогравиметрический анализ (ТГА)
[0101] В одном варианте реализации термогравиметрический анализ Формы 1 Соединения A показывает отсутствие потери массы до разложения, начинающегося при примерно 260°C.
[0102] В одном варианте реализации термогравиметрический анализ Формы 2 Соединения A показывает отсутствие потери массы до разложения, начинающегося при примерно 260°C.
4. Стабильность кристаллических форм Соединения A
[0103] Относительную стабильность Формы 1 и Формы 2 исследовали при различных условиях (см. Пример 3). Обе формы: Форма 1 и Форма 2 - являются стабильными к влажности и температуре вплоть до по меньшей мере ~200°C, и обе формы демонстрируют низкую гигроскопичность.
[0104] В ряде экспериментов (см. пример 3) было показано, что Форма 1 превращается в Форму 2 при различных условиях: нагревание до температуры выше 200°C; выдерживание в изопропилацетате (IPAc) при 5°C, 25°C и 50°C; выдерживание в воде при 50°C / комнатной температуре; и при кипячении с обратным холодильником в воде. Преобразования Формы 2 в Форму 1 не наблюдалось. Тем не менее, Форма 1 остается неизменной в воде при 25°C в течение шести дней.
[0105] Следовательно, Форма 2 термодинамически более стабильна, чем Форма 1, в исследованных условиях и, таким образом, Форма 2 может обеспечивать преимущества при получении Соединения A и приготовлении составов с ним.
5. Другие сольваты Соединения A
[0106] В настоящем описании также предложены сольваты Соединения A. Выдерживание Формы 1 Соединения A в различных растворителях приводит к получению нескольких сольватов Соединения A (см. пример 4). Данные сольваты охарактеризованы посредством XRPD и названы по их соответствующим дифрактограммам XRPD:
XRPD 3 и XRPD 4, группа изоструктурных сольватов из толуола, н-гептана, тетрагидрофурана (ТГФ), этилацетата (EtOAc), изопропилового спирта (IPА), этанола (EtOH), нитрометана или EtOH-воды;
XRPD 5, диметилформамидный (ДМФА) сольват;
XRPD 6, N-метилпирролидоновый (NMP) сольват; и
XRPD 7-1,4-диоксановый сольват.
1
[0107] Результаты Н ЯМР-анализа, а также термических анализов посредством ДСК и ТГА подтверждают, что данные твердые вещества являются сольватами, а не полиморфами (см. пример 4).
6. Фармацевтические композиции, составы и способы введения
[0108] В одном аспекте настоящее описание относится к фармацевтической композиции, содержащей одну или более кристаллических форм {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), имеющего следующую структуру:
и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
[0109] В одном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Форму 1 Соединения A и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, по меньшей мере 90% которого находится в Форме 1, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В еще одном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, по меньшей мере 95%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8%, 99,9%, 99,95%, 99,98% или 99,99% которого находится в Форме 1, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
[0110] В одном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Форму 2 Соединения A и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, по меньшей мере 90% которого находится в Форме 2, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В еще одном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, по меньшей мере 95%, 98%, 99%, 99,5%, 99,8%, 99,9%, 99,95%, 99,98% или 99,99% которого находится в Форме 2, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В одном варианте реализации фармацевтическая композиция содержит Соединение A, не более 10%, 5%, 2%, 1%, 0,5%, 0,2%, 0,1%, 0,05%, 0,02% или 0,01% которого находится в Форме 1, и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
[0111] В одном варианте реализации фармацевтическая композиция дополнительно содержит дополнительный терапевтический агент, выбранный из группы, состоящей из витамина В12, фолиевой кислоты, сульфата железа, рекомбинантного эритропоэтина человека и агента, стимулирующего эритропоэз (ESA). В другом варианте реализации фармацевтическая композиция приготовлена для пероральной доставки. В другом варианте реализации фармацевтическая композиция приготовлена в виде таблетки или капсулы.
[0112] Кристаллические формы согласно настоящему описанию могут быть доставлены непосредственно или в фармацевтических композициях вместе с подходящими вспомогательными веществами, хорошо известными в данной области. Различные способы лечения, варианты реализации которых приведены в настоящем описании, могут включать введение эффективного количества кристаллической формы согласно настоящему описанию нуждающемуся субъекту, например, субъекту, имеющий анемию или риск анемии из-за, например, хронической почечной недостаточности, сахарного диабета, рака, СПИДа, лучевой терапии, химиотерапии, диализа почек или хирургического вмешательства. В одном варианте реализации субъект представляет собой млекопитающее, а в одном варианте реализации субъект представляет собой человека.
[0113] Эффективное количество кристаллической формы может быть легко определено с помощью обычных экспериментов, также как и наиболее эффективный и удобный способ введения и наиболее подходящий состав. В одном варианте реализации доза может составлять от 0,1 мг/кг до примерно 700 мг/кг в день. В данной области техники доступны различные составы и системы доставки лекарств. См., например, выше, источник Gennaro, A.R., ed. (1995) Remington's Pharmaceutical Sciences.
[0114] Подходящие способы введения могут, например, включать пероральное, ректальное, чресслизистое, назальное или интестинальное введение и парентеральную доставку, включая внутримышечные, подкожные, интрамедуллярные инъекции, а также интратекальные, прямые внутрижелудочковые, внутривенные, внутрибрюшинные, интраназальные или внутриглазные инъекции. Кристаллическую форму или содержащую ее композицию можно вводить скорее местным, нежели системным способом. Например, кристаллическая форма или содержащая ее композиция может быть доставлена с помощью инъекции или системы нацеленной доставки лекарственного средства, такой как состав-депо или состав с замедленным высвобождением. В одном варианте реализации способ введения представляет собой пероральный способ.
[0115] Фармацевтические композиции согласно настоящему описанию могут быть получены любым из способов, хорошо известных в данной области техники, например, путем обычного смешивания, растворения, гранулирования, изготовления драже, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсулирования, захватывания или лиофилизации. Как отмечено выше, композиции могут включать одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, которые облегчают обработку активных молекул с получением лекарственных средств для фармацевтического применения.
[0116] Соответствующее приготовление состава зависит от выбранного пути введения. Например, композиция для инъекции может быть приготовлена в водных растворах, предпочтительно в физиологически совместимых буферах, таких как раствор Хэнкса, раствор Рингера или физиологический солевой буфер. Для чресслизистого или назального введения в составе используют проникающие агенты, подходящие для проникновения через соответствующий барьер. Такие проникающие агенты обычно известны в данной области техники. В предпочтительном варианте реализации настоящего описания кристаллические формы согласно настоящему описанию готовят в виде состава, предназначенного для перорального введения. Для перорального введения они могут быть легко приготовлены посредством комбинации кристаллических форм с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, хорошо известными в данной области техники. Такие вспомогательные вещества делают возможным приготовление кристаллических форм согласно настоящему описанию в виде таблеток, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, взвесей, суспензий и т.п. для перорального приема субъектом. Кристаллические формы также могут быть приготовлены в виде ректальных композиций, таких как суппозитории или удерживающие клизмы, например, содержащих обычные основы для суппозиториев, такие как масло какао или другие глицериды.
[0117] Фармацевтические препараты для перорального применения могут быть получены с использованием твердых вспомогательных веществ, необязательного измельчения полученной смеси и обработки смеси гранул после добавления, при желании, подходящих вспомогательных ингредиентов с получением ядер таблеток или драже. Подходящие вспомогательные вещества представляют собой, например, наполнители, такие как сахара, включая лактозу, сахарозу, маннит или сорбит; целлюлозные препараты, такие как, например, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, желатин, трагакантовая камедь, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза и/или поливинилпирролидон (ПВП или повидон). При желании могут быть добавлены разрыхляющие агенты, такие как поперечно-сшитый поливинилпирролидон, агар, кроскармеллоза натрия или альгиновая кислота или ее соль, такая как альгинат натрия. Кроме того, могут быть включены смачивающие агенты, такие как додецилсульфат натрия или стеарат магния.
[0118] Ядра драже снабжают подходящими покрытиями. Для этого могут быть использованы концентрированные растворы сахара, которые могут необязательно содержать гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, гель карбопола, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, лаковые растворы и подходящие органические растворители или смеси растворителей. К покрытиям таблеток или драже могут быть добавлены красители или пигменты для идентификации или характеристики различных комбинаций активных доз.
[0119] Фармацевтические препараты для перорального введения включают твердые капсулы из двух частей, входящих одна в другую («push-fit»), изготовленные из желатина, а также мягкие герметичные капсулы, изготовленные из желатина и пластификатора, такого как глицерин или сорбитол. Указанные твердые капсулы могут содержать активные ингредиенты в смеси с наполнителем, таким как лактоза, связывающими агентами, такими как крахмалы, и/или агентами, способствующими скольжению, такими как тальк или стеарат магния, и, необязательно, стабилизаторами. В мягких капсулах кристаллические формы могут быть растворены или суспендированы в подходящих жидкостях, таких как жирные масла, жидкий парафин или жидкие полиэтиленгликоли. Кроме того, могут быть добавлены стабилизаторы. Все препараты для перорального введения должны быть в дозах, подходящих для такого введения.
[0120] В одном варианте реализации кристаллические формы согласно настоящему описанию могут быть введены чрескожно, например, с помощью кожного пластыря, или местно. В одном аспекте составы для чрескожного или местного применения могут дополнительно содержать один или множество усилителей проницаемости или другие эффекторы, включая агенты, усиливающие миграцию доставляемого соединения. Чрескожное или местное введение может быть предпочтительным, например, в ситуациях, в которых желательна доставка в определенное место.
[0121] Для введения путем ингаляции кристаллические формы для применения в соответствии с настоящим описанием обычно доставляют в виде аэрозольного спрея из упаковок под давлением или распылителя с применением подходящего пропеллента, например, дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, диоксида углерода или любого другого подходящего газа. В случае аэрозоля под давлением соответствующая единичная доза может быть определена с помощью клапана для доставки отмеренного количества. Могут быть приготовлены капсулы и картриджи, например, желатиновые, для применения в ингаляторе или инсуффляторе. Они, как правило, содержат порошковую смесь кристаллической формы и подходящей порошковой основы, такой как лактоза или крахмал.
[0122] Композиции, приготовленные для парентерального введения путем инъекции, например, болюсной инъекцией или непрерывной инфузии, могут быть представлены в единичной лекарственной форме, например в ампулах или в многодозовых контейнерах с добавлением консерванта. Композиции могут быть представлены в таких формах, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных носителях и могут содержать вспомогательные агенты для получения составов, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Составы для парентерального введения включают водные растворы или другие композиции в водорастворимой форме.
[0123] Суспензии кристаллических форм также могут быть получены в виде подходящих масляных инъекционных суспензий. Подходящие липофильные растворители или носители включают жирные масла, такие как кунжутное масло, и синтетические сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. Водные инъекционные суспензии могут содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии, такие как натрий-карбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран. Необязательно, суспензия может также содержать подходящие стабилизаторы или агенты, которые повышают растворимость кристаллических форм, чтобы обеспечить получение высококонцентрированных растворов. В качестве альтернативы активный ингредиент может находиться в форме порошка для разведения подходящим носителем, например стерильной апирогенной водой, перед применением.
[0124] Как упоминалось выше, композиции согласно настоящему описанию могут быть также приготовлены в виде лекарственного средства типа депо. Такие составы длительного действия могут быть введены путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или путем внутримышечной инъекции. Так, например, кристаллические формы согласно настоящему описанию могут быть приготовлены с подходящими полимерными или гидрофобными материалами (например, в виде эмульсии в приемлемом масле) или ионообменными смолами, или в виде умеренно растворимых производных, например в виде умеренно растворимой соли.
50
[0125] Для любой композиции, применяемой при различных видах лечения, варианты реализации которых приведены в настоящем описании, терапевтически эффективная доза может быть оценена первоначально с применением различных методов, хорошо известных в данной области техники. Например, в исследовании на культуре клеток доза может быть подобрана с использованием моделей на животных для достижения диапазона циркулирующих концентраций, который должен включать IC, определенную на культуре клеток. Диапазоны величин доз, подходящих для субъектов, представляющих собой людей, могут быть определены, например, с использованием данных, полученных в результате исследований на культурах клеток и исследований на животных, отличных от человека.
50
50
50
50
[0126] Терапевтически эффективная доза соединения относится к такому количеству соединения, которое приводит к ослаблению симптомов или продлению жизни субъекта. Токсичность и терапевтическая эффективность таких молекул может быть определена с помощью стандартных фармацевтических методов на культурах клеток или экспериментальных животных, например, путем определения LD (дозы, летальной для 50% популяции) и ED (дозы, терапевтически эффективной для 50% популяции). Соотношение токсичных и терапевтических эффектов дозы представляет собой терапевтический индекс, который может быть выражен как отношение LD/ED. Предпочтительны соединения, которые демонстрируют высокие терапевтические индексы.
50
[0127] Дозировки предпочтительно находятся в пределах диапазона циркулирующих концентраций, который включает ED с небольшой токсичностью или отсутствием токсичности. Дозировки могут варьироваться в пределах этого диапазона в зависимости от используемой лекарственной формы и способа введения. Точный состав, способ введения и дозировка должны быть выбраны в соответствии со способами, известными в данной области техники, с учетом специфики состояния субъекта.
[0128] Дозировку и интервал можно регулировать индивидуально для обеспечения уровней активного компонента в плазме, которые достаточны для модулирования нужного параметра, например уровней эндогенного эритропоэтина в плазме, то есть минимальной эффективной концентрации (МЭК). МЭК будет варьироваться для каждого соединения, но может быть оценена, например, на основании данных, полученных in vitro. Дозы, необходимые для достижения МЭК, будет зависеть от индивидуальных характеристик и способа введения. Соединения или их композиции следует вводить с применением схемы, в которой поддерживаются уровни в плазме выше МЭК в течение приблизительно 10-90% периода лечения, предпочтительно примерно 30-90% периода лечения и наиболее предпочтительно от 50 до 90%. В случаях местного введения или селективного поглощения эффективная локальная концентрация лекарственного средства может быть не связана с концентрацией в плазме. В альтернативном случае модуляция нужного параметра, например, стимуляция эндогенного эритропоэтина, может быть достигнута путем 1) введения ударной дозы, а потом поддерживающей дозы, 2) введения индукционной дозы для быстрого достижения требуемого параметра, например, уровня эритропоэтина, в пределах целевого диапазона, а затем более низкой поддерживающей дозы для поддержания, например, гематокрита, в пределах желаемого целевого диапазона, или 3) повторного прерывистого введения.
[0129] Количество вводимого соединения или композиции будет, конечно, зависеть от множества факторов, в том числе пола, возраста и веса пациента, подвергаемого лечению, тяжести заболевания, способа введения и решения лечащего врача.
50
[0130] Эффективная доза (или терапевтически эффективная доза) может быть оценена первоначально с использованием различных методов, хорошо известных в данной области техники. Например, в исследовании на культуре клеток доза может быть подобрана с использованием моделей на животных для достижения диапазона циркулирующих концентраций, который включает IC, определенную на культуре клеток. Диапазоны величин доз, подходящих для субъектов, представляющих собой людей, могут быть определены, например, с использованием данных, полученных в результате исследований на культурах клеток и исследований на животных, отличных от человека. В одном варианте реализации доза может составлять от 0,001 мг/кг до примерно 100 мг/кг. Как правило, доза может составлять от примерно 0,002 мг/кг до примерно 50 мг/кг, от примерно 0,005 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 0,008 мг/кг до примерно 1 мг/кг, от примерно 0,01 мг/кг до примерно 0,5 мг/кг, от примерно 0,05 мг/кг до примерно 0,4 мг/кг, или от примерно 0,15 мг/кг до примерно 0,4 мг/кг. Например, доза может составлять примерно 0,01 мг/кг, примерно 0,02 мг/кг, примерно 0,03 мг/кг, примерно 0,04 мг/кг, примерно 0,05 мг/кг, примерно 0,06 мг/кг, примерно 0,07 мг/кг, примерно 0,08 мг/кг, примерно 0,09 мг/кг, примерно 0,1 мг/кг, примерно 0,15 мг/кг, примерно 0,2 мг/кг, примерно 0,25 мг/кг, примерно 0,3 мг/кг, примерно 0,4 мг/кг, примерно 0,5 мг/кг, примерно 0,6 мг/кг, примерно 0,7 мг/кг, примерно 0,8 мг/кг, примерно 0,9 мг/кг или примерно 1 мг/кг. Дозы можно вводить с различными интервалами, например, четыре раза в день, три раза в день, два раза в день, каждый день, раз в два дня, 1, 2 или 3 раза в неделю и т.д.
[0131] Композиции согласно настоящему описанию могут, при желании, быть представлены в упаковке или в дозирующем устройстве, содержащем одну или более единичных лекарственных форм, содержащих активный ингредиент. Такая упаковка или устройство может, например, содержать металлическую или пластиковую фольгу, такую как блистерная упаковка. Упаковка или дозирующее устройство могут также содержать инструкции для введения. Композиции, содержащие кристаллическую форму согласно настоящему описанию, приготовленные в совместимом фармацевтическом вспомогательном веществе, также могут быть получены, помещены в соответствующий контейнер и помечены для лечения указанного состояния. Подходящие состояния, указанные на этикетке, могут включать лечение состояний, расстройств или заболеваний, при которых анемия является основным показанием.
7. Способ применения
[0132] В одном аспекте настоящего описания предложено применение одной или более кристаллических форм {[1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбонил]-амино}-уксусной кислоты (Соединения A), или композиции, содержащей одну или более кристаллических форм Соединения A, для получения лекарственного средства для применения для лечения различных состояний и расстройств, описанных в настоящем документе. В настоящем описании также предложены способы применения кристаллической формы, или содержащей ее композиции или лекарственного средства, для лечения, предварительного лечения, или замедления прогрессирования, или задержки начала различных состояний или расстройств, описанных в настоящем документе. В одном варианте реализации кристаллическая форма Соединения A, применяемая в указанном способе, представляет собой Форму 1. В одном варианте реализации кристаллическая форма Соединения A, применяемая в указанном способе, представляет собой Форму 2.
[0133] Указанные лекарственные средства или композиции могут быть применены для модулирования стабильности и/или активности ИГФ, и, таким образом, для активации экспрессии ИГФ-регулируемых генов. Кристаллическая форма, или содержащая ее композиция или лекарственное средство, могут быть применены в способах лечения, предварительного лечения, или замедления прогрессирования, или задержки начала состояний, связанных с ИГФ, включая, но не ограничиваясь ими, анемические, ишемические и гипоксические состояния. В различных вариантах реализации кристаллическую форму, или содержащую ее композицию или лекарственное средство, вводят сразу после состояния возникновения острой ишемии, например, инфаркта миокарда, эмболии легочной артерии, кишечного инфаркта, ишемического инсульта и ишемического и реперфузионного повреждения почек. В другом варианте реализации кристаллическую форму, или содержащую ее композицию или лекарственное средство, вводят пациенту с диагнозом состояния, связанного с развитием хронической ишемии, например, сердечного цирроза печени, макулярной дегенерации, легочной эмболии, острой дыхательной недостаточности, респираторного дистресс-синдрома новорожденных и застойной сердечной недостаточности. В еще одном варианте реализации кристаллическую форму, или содержащую ее композицию или лекарственное средство, вводят сразу после травмы или повреждения. В других вариантах реализации кристаллическую форму, или содержащую ее композицию или лекарственное средство, можно вводить субъекту, она основании предрасполагающих состояний, например, гипертензии, диабета, окклюзионного заболевания артерий, хронической венозной недостаточности, болезни Рейно, хронических язв кожи, цирроза, застойной сердечной недостаточности и системного склероза. В других вариантах реализации кристаллическую форму, или содержащую ее композицию или лекарственное средство, можно вводить для предварительного лечения субъекта для уменьшения или предотвращения развития повреждений тканей, связанного с ишемией или гипоксией.
[0134] Кристаллическая форма или содержащие ее композиции или лекарственные средства могут быть также применены для повышения эндогенного эритропоэтина (ЭПО). Кристаллическую форму или содержащую ее композицию или лекарственное средство можно вводить для предотвращения, предварительного лечения или лечения связанных с ЭПО состояний, включая, например, состояния, связанные с анемией, и неврологические расстройства. Состояния, связанные с анемией, включают расстройства, такие как острое или хроническое заболевание почек, диабет, рак, язвы, инфекция вируса, например, ВИЧ, бактерии или паразитов; воспаление и т.д. Анемические состояния могут также включать состояния, связанные с процедурами или лечением, включая, например, лучевую терапию, химиотерапию, диализ и хирургическое вмешательство. Расстройства, связанные с анемией, дополнительно включают аномальный гемоглобин и/или эритроциты, например, обнаруживаемые при расстройствах, таких как микроцитарная анемия, гипохромная анемия, апластическая анемия и т.д.
[0135] Настоящее описание также относится к применению кристаллической формы или содержащей ее композиции или лекарственного средства, для лечения, предварительного лечения или задержки начала состояния, связанного с расстройством, выбранным из группы, состоящей из анемических расстройств; неврологических расстройств и/или повреждений, включая случаи инсульта, травмы, эпилепсии и нейродегенеративные заболевания; ишемии сердца, включая, но не ограничиваясь ими, инфаркт миокарда и застойную сердечную недостаточность; ишемии печени, включая, но не ограничиваясь им, сердечный цирроз; ишемии почек, включая, но не ограничиваясь ими, острую почечную недостаточность и хроническую почечную недостаточность; периферийных сосудистых нарушений, язв, ожогов и хронических ран; легочной эмболии и ишемического и реперфузионного повреждения.
[0136] Настоящее описание также относится к способу ингибирования активности по меньшей мере одного гидроксилазного фермента, который модифицирует альфа-субъединицу индуцируемого гипоксией фактора. ИГФ-гидроксилазный фермент может представлять собой пролилгидроксилазу, включая, но не ограничиваясь ими, группу, состоящую из EGLN1, EGLN2 и EGLN3, описанных Тэйлором (Taylor, 2001, Gene 275: 125-132) и охарактеризованных авторами Аравиндом и Куриным (Aravind and Koonin, 2001, Genome Biol 2: RESEARCH0007), Эпштейном и др. (Epstein et al., 2001, Cell 107: 43-54) и Брюком и МакНайтом (Bruick and McKnight, 2001, Science 294: 1337-1340). Указанный способ включает приведение фермента в контакт с ингибирующим эффективным количеством одной или более кристаллических форм Соединения A.
[0137] Несмотря на то, что настоящее описание было приведено в связи с конкретными вариантами реализации и примерами, среднему специалисту в данной области техники с учетом собственных знаний и настоящего описания будет очевидно, что эквиваленты конкретно раскрытых материалов и способов будут также применимы по отношению к настоящему описанию, и предполагается, что такие эквиваленты включены в следующую формулу изобретения.
ПРИМЕРЫ
[0138] Если не указано иное, следующие аббревиатуры, используемые в описании, имеют в следующие определения:
d
дуплет
ДХМ
дихлорметан, метиленхлорид
ДМФА
диметилформамид
ДМСО
диметилсульфоксид
ДСК
дифференциальная сканирующая калориметрия
ЭДТА
этилендиаминтетрауксусная кислота
экв.
эквивалент
ЕtАс
этил ацетат
EtOH
этанол, этиловый спирт
г
грамм
ВЭЖХ
высокоэффективная жидкостная хроматография
ч
час
Гц
Герц
IPA
изопропиловый спирт, пропан-2-ол
IPAc
изопропилацетат
ИК
инфракрасный
J
константа взаимодействия
кг
килограмм
кВ
киловольты
л
литр
LOD
предел определения
M
молярный
m
мультиплет
mA
миллиампер
Me
метил
MeO
метокси
MeOH
метанол
мг
миллиграмм
мин
минута
мл
миллилитр
мм
миллиметр
МТБЭ
метил-трет-бутиловый эфир
н.
нормальный
NaOMe
метоксид натрия
нМ
наномолярный
NMP
N-метилпирролидон
ЯМР
ядерный магнитный резонанс
s
синглет
OB
относительная влажность
ТФ-ЯМР
твердофазный ядерный магнитный резонанс
ТГА
термогравиметрический анализ
ТГФ
тетрагидрофуран
XRPD
рентгеновская порошковая дифракция
VT-XRPD
рентгеновская порошковая дифракция при переменной температуре
ДСК - Дифференциальная сканирующая калориметрия
[0139] Данные ДСК получали на приборе Mettler DSC 823е, снабженном 50-позиционным автоматическим дозатором. Прибор был откалиброван по энергии и температуры с использованием сертифицированного индия. Как правило, 0,5-3 мг каждого образца в алюминиевом тигле с точечным отверстием нагревали при 10°C/мин от 25°C до 350°C. Осуществляли продувку азотом с расходом 50 мл/мин по образцу. Для управления прибором и анализа данных использовали программное обеспечение STARe v 9.10.
[0140] Модулированные данные ДСК получали на приборе ТА Instruments Q2000, снабженном 50-позиционным автоматическим дозатором. Калибровку по теплоемкости проводили с использованием сапфира, и калибровку по энергии и температуре проводили с использованием сертифицированного индия. Как правило, 0,5-2 мг каждого образца в алюминиевом тигле с точечным отверстием нагревали при использовании основной скорости нагрева 2°C/мин и параметрах модуляции температуры ±0,2°C/мин и 40 секунд. Для управления прибором использовали программное обеспечение Advantage for Q Series v2.8.0.392 и Thermal Advantage v4.8.3, данные анализировали с использованием Universal Analysis v4.3A.
1
13
ЯМР - ядерный магнитный резонанс: Н и С ЯМР
6
[0141] ЯМР-спектры получали на приборе Bruker 400 MHz, снабженном автоматическим дозатором и контролируемым консолью DRX400. Автоматизированные эксперименты проводили с помощью ICON-NMR v4.0.4 (билд 1), работающего Topspin v 1.3 (патч-уровень 8) с использованием стандартных экспериментов, заложенных в Bruker. Для нестандартной спектроскопии данные получали с использованием только Topspin. Образцы готовили в d-ДМСО, если не указано иное. Анализ оффлайн проводили с использованием ACD SpecManager v 9.09 (билд 7703).
ТГА - термогравиметрический анализ
[0142] Данные ТГА получали на приборе TGA/SDTA 851е, снабженном 34-позиционным автоматическим дозатором. Прибор был откалиброван по температуре с использованием сертифицированного индия. Как правило, 5-30 мг каждого образца загружали в предварительно взвешенный алюминиевый тигель и нагревали при 10°C/мин от комнатной температуры до 350°C. Осуществляли продувку азотом с расходом 50 мл/мин по каждому образцу. Для управления прибором и анализа данных использовали программное обеспечение STARe v 9.10.
XRPD - рентгеновская порошковая дифракция
[0143] Дифрактограммы рентгеновской порошковой дифракции получали на дифрактометре Bruker AXS С2 GADDS с использованием излучения Cu Kα (40 кВ, 40 мА), автоматизированным трехкоординатным столиком, лазерным видеомикроскопом для автоматического размещения образцов и двумерный детектор площади HiStar. Рентгеновская оптика состояла из одного многослойного зеркала Gobel в сочетании с точечным коллиматором 0,3 мм.
[0144] Расходимость пучка, то есть эффективный размер рентгеновского луча на образце, составляла приблизительно 4 мм. Режим непрерывного сканирования 0-0 включал расстояние образец-детектор 20 см, которое дает эффективный диапазон углов 2θ, составляющий 3,2°-29,7°. Как правило, образец подвергали действию рентгеновского излучения в течение 120 секунд. Для сбора данных использовали программное обеспечение GADDS для WNT 4.1.16, данные анализировали и представляли с использованием Diffrac Plus EVA v 9.0.0.2 или v 13.0.0.2.
[0145] Образцы, анализ которых проводили в условиях окружающей среды, готовили в виде плоских пластинчатых образцов с использованием порошка, полученного без измельчения. Приблизительно 1-2 мг образца слегка прижимали на предметном стекле для получения плоской поверхности.
-1
[0146] Образцы, анализ которых проводили не в условиях окружающей среды, монтировали на силиконовой пластине с теплопроводящим соединением. Далее образец нагревали до подходящей температуры при приблизительно 20°C.мин и затем выдерживали при одинаковой температуре в течение приблизительно 1 минуты, после чего начинали сбор данных.
[0147] Дифрактограммы рентгеновской порошковой дифракции также получали на дифрактометре Bruker D8 с использованием излучения Cu Kα (40 кВ, 40 мА), θ-2θ гониометра и расхождения V4 и получающих щелей, германиевого монохроматора и детектора Lynxeye. Работу прибора проверяли с использованием сертифицированного корундового стандарта (NIST 1976). Для сбора данных использовали программное обеспечение Diffrac Plus XRD Commander v 2.5.0, данные анализировали и представляли с использованием Diffrac Plus EVA v 11.0.0.2 или v 13.0.0.2.
[0148] Анализ образцов проводили в условиях окружающей среды в виде плоских пластинчатых образцов, полученных с использованием порошка, полученного в примерах 1 и 2. Приблизительно 50-100 мг образца аккуратно помещали в полость, вырезанную в полированной силиконовой пластине с нулевым фоном (510). При анализе образец вращали вокруг собственной плоскости. Подробная информация о сборе данных:
- Диапазон углов: от 2 до 42 °2θ
- Размер шага: 0,05 °2θ
-1
- Время сбора данных: 0,5 с.шаг.
Пример 1. Получение кристаллической Формы 1 Соединения A
Способ 1
[0149] Этил-1-циано-5-(4-хлорфенокси)-4-гидроксиизохинолин-3-карбоксилат (74,4 г, общие методы синтеза см. в патенте США 7,928,120) и глицин (302,9 г, 20 экв.) суспендировали в метаноле (4,0 л) при комнатной температуре. Добавляли NaOMe (25%, 692 мл, 15 экв.), и полученную смесь нагревали с обратным холодильником до кипения и перемешивали в течение ночи. После завершения реакции по данным ЖХ-МС полученную суспензию охлаждали и подкисляли до pH~3 посредством 1 н. HCl. Полученную смесь фильтровали, промывали водой и сушили в вакуумной печи (40°C) до постоянного веса с получением твердого вещества грязно-белого цвета, Формы 1 Соединения A (77,8 г).
Способ 2
[0150] Соединение A (12 г, общие методы синтеза см. в патенте США 7,928,120) суспендировали в ацетонитриле (620 мл). Данную смесь перемешивали и нагревали с обратным холодильником до кипения в течение 30 минут с получением прозрачного раствора бледно-желтого цвета. Данный раствор медленно охлаждали до комнатной температуры и далее до 5°C, перемешивали в течение 30 минут, фильтровали, промывали холодным ацетонитрилом и сушили в вакуумной печи (65°C) до постоянного веса с получением твердого вещества белого цвета, Формы 1 Соединения A (10,0 г).
Способ 3
[0151] Соединение A (0,5 г) суспендировали в чистой уксусной кислоте (10 мл) и перемешивали при 80°C в течение 16 ч. Данную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали в вакуумной печи (80°C) до постоянного веса с получением твердого вещества грязно-белого цвета, Формы 1 Соединения A (0,44 г).
[0152] При XRPD Формы 1 Соединения A была получена дифрактограмма, представленная на фиг. 1. Пики находились при углах 7,7, 11,2, 13,8, 14,7, 15,3, 15,8, 18,3, 21,1, 22,2, 23,2, 25,2, 25,9° и 27,7 °2θ ± 0,2 °2θ, определенных по дифрактограмме с использованием излучения Cu-Kα. Для характеристики использовали по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере два, более предпочтительно по меньшей мере три из указанных пиков.
[0153] При анализе Формы 1 Соединения A посредством ДСК была получена кривая, представленная на фиг. 2. На кривой ДСК, представленной на фиг. 2, можно видеть эндотерму при примерно 251°C и экзотерму при примерно 210°C.
1
1
6
[0154] Н-ЯМР Соединения A в растворе соответствовал его структуре. H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d, 298К): 14,92 (s, 1Н), 12,88 (bs, 1Н), 9,61 (bt, 1Н, J 6,06), 8,10 (dd, 1H, J 1,01, 8,34), 8,03 (dd, 1H, J 7,58, 8,34), 7,51 (dd, 1H, J 1,01, 7,58), 7,42 (d, 2H, J 9,09), 6,99 (d, 2H, J 9,09) и 4,02 (d, 2H, J 6,32) ppm.
Пример 2. Получение кристаллической Формы 2 Соединения A
Способ 1
[0155] Натриевую соль Соединения A (1,22 кг) растворяли в воде, перемешивали и нагревали до 80°C. Медленно добавляли уксусную кислоту (830 г) в течение 3 ч. Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч при 80°C (чтобы убедиться, что твердое вещество превратилось в Форму 2). Смесь охлаждали до 20-25°C, перемешивали в течение 1 ч, фильтровали и промывали водой (31 л). Твердое вещество сушили в вакуумной печи (80°C) до постоянного веса с получением твердого вещества грязно-белого цвета, Соединение A, Форма 2 (880 г).
Способ 2
[0156] Соединение A (7,5 г) и 1 н. NaOH (23,6 мл) перемешивали в воде и нагревали до 80°C до тех пор, пока твердые вещества не были растворены. Медленно добавляли уксусную кислоту (2,25 г). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 2 ч. Смесь охлаждали до примерно 20°C, фильтровали, промывали водой и сушили в вакуумной печи (80°C) до постоянного веса с получением твердого вещества белого цвета, Формы 2 Соединения A (7,25 г).
Способ 3
[0157] Соединение A (0,6 г) нагревали с обратным холодильником с изопропилацетатом (примерно 30 мл) в течение ночи, охлаждали до комнатной температуры, фильтровали и промывали изопропилацетатом и сушили до постоянного веса с получением твердого вещества белого цвета, Формы 2 Соединения A (0,4 г).
Способ 4
[0158] Соединение A (26 г) суспендировали в воде, нагревали до 80°C, перемешивали в течение 1 ч, охлаждали до комнатной температуры, фильтровали, промывали водой и сушили в вакуумной печи (80°C) до постоянного веса с получением твердого вещества грязно-белого цвета, Формы 2 Соединения A (25,3 г).
[0159] В результате XRPD Формы 2 Соединения A была получена дифрактограмма, представленная на фиг. 3. Наблюдались пики при 7,2, 8,1, 10,6, 11,5, 13,9, 14,5, 16,2, 19,3, 21,5, 21,9, 22,7, 23,2, 24,5, 25,9, 26,6, 27,8 и 29,1 °2θ ± 0,2 °2θ, определенные по дифрактограмме с использованием излучения Cu-Kα. Для характеристики использовали по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере два, более предпочтительно по меньшей мере три из указанных пиков.
[0160] В результате анализа Формы 2 Соединения A посредством ДСК была получена кривая, представленная на фиг. 4. На кривой ДСК, представленной на фиг. 4, видна эндотерма при примерно 249°C.
1
1
6
[0161] Н-ЯМР Соединения A в растворе соответствовал его структуре. Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d, 298К): 14,92 (s, 1H), 12,88 (bs, 1Н), 9,61 (bt, 1Н, J 6,06), 8,10 (dd, 1Н, J 1,01, 8,34), 8,03 (dd, 1H, J 7,58, 8,34), 7,51 (dd, 1H, J 1,01, 7,58), 7,42 (d, 2H, J 9,09), 6,99 (d, 2H, J 9,09) and 4,02 (d, 2H, J 6,32) ppm.
Пример 3. Стабильность Формы 1 и Формы 2 Соединения A
Эксперименты с перекрестными затравками
[0162] Твердую смесь, содержащую примерно 50% Формы 1 и примерно 50% Формы 2 (полученной при выдерживании в IP Ас) (~10 мг) помещали в шесть различных флаконов. Содержимое трех из указанных флаконов обрабатывали ДХМ (~50 мкл в каждый), а содержимое других трех обрабатывали IPАс (~50 мкл в каждый). Суспензии твердой смеси в ДХМ и IPАс встряхивали при 5°C, 25°C и 50°C в течение 10 дней.
[0163] Твердые вещества из ДХМ после сушки в условиях окружающей среды анализировали посредством XRPD, дифрактограммы кристаллической структуры соответствовали Форме 1.
[0164] Твердые вещества из IPАс после сушки в условиях окружающей среды анализировали посредством XRPD, дифрактограммы кристаллической структуры соответствовали Форме 2.
Выдерживание Формы 1 в воде с затравками Формы 2
[0165] Суспензию твердой смеси Формы 1 и Формы 2 (1:1) в воде инкубировали при 50°C/комнатной температуре (циклы по 4 ч) и при ОВ 75% в течение четырех дней. После этого полученное твердое вещество анализировали посредством XRPD. Дифрактограмма кристаллической формы соответствовала Форме 2, и в данном анализе следов Формы 1 обнаружено не было.
Выдерживание Формы 1 в воде без затравок Формы 2
[0166] Форму 1 суспендировали в воде и инкубировали при 50°C/комнатной температуре (циклы по 4 ч) и при ОВ 75%. В данном случае преобразование Формы 1 в Форму 2 шло медленнее. Через 4 дня было четко показано, что образуется Форма 2, но также присутствовало значительное количество оставшейся Формы 1. Через 15 дней при данных условиях Форма 1 полностью перешла в Форму 2.
Стабильность Формы 2
[0167] Форма 2 оставалась неизменной по истечении недели, проведенной в камере с поддерживаемой влажностью при 40°C и ОВ 75%.
Нагревание Формы 1 в воде с обратным холодильником
[0168] Форму 1 нагревали в воде с обратным холодильник, и контролировали кристалличность твердого вещества посредством XRPD. Через 2,5 ч уже можно было наблюдать несколько новых дифракционных пиков, соответствующих Форме 2. По истечении 10 ч с обратным холодильником преобразование Формы 1 в Форму 2 было завершено.
Стабильность Формы 1 в воде при 25°C
[0169] Форму 1 суспендировали в воде при 25°C, и анализировали кристалличность твердого вещества посредством XRPD в течение некоторого периода времени. Изменений в дифрактограмме кристаллической Формы 1 через шесть дней нахождения в водной суспензии при 25°C не наблюдалось.
[0170] Данные исследования показали, что Форма 2 термодинамически более стабильна, чем Форма 1.
Пример 4. Получение и характеристика сольватов Соединения A
Получение и характеристика посредством XRPD
[0171] Форму 1 (200 мг) суспендировали в соответствующем растворителе (см. таблицу 1) и инкубировали при 40°C/комнатной температуре (циклы по 4 ч) в течение 16 ч. Далее растворитель удаляли под вакуумом (кроме эксперимента с 1,4-диоксаном, в котором сушку проводили при условиях окружающей среды), и полученные твердые вещества анализировали посредством XRPD. На фиг. 5 представлены дифрактограммы XRPD для сольватов Соединения A: XRPD3 и XRPD4. На фиг. 6 представлены дифрактограммы XRPD для Формы 2 Соединения A и сольватов Соединения A, XRPD3, XRPD4, XRPD5, XRPD6 и XRPD7.
Стабильность
[0172] Полученные твердые вещества затем выдерживали в камере с поддерживаемой влажностью при 40°C и ОВ 75% в течение недели для оценки стабильности в данных условиях, и проводили повторный анализ посредством XRPD.
[0173] Форма 2 оставалась неизменной по истечении недели нахождения в камере с поддерживаемой влажностью при 40°C и ОВ 75%. Оба твердых вещества: XRPD 3 и XRPD 4 - преобразовались в Форму 1 после выдерживания в течение недели в данных условиях. Твердые вещества XRPD 5, XRPD 6 и XRPD 7 преобразовались в Форму 2 по истечении одной недели нахождения при 40°C и ОВ 75%. В случае твердого вещества, полученного из NMP (XRPD 6), преобразование было неполным, и на дифрактограмме порошка можно было наблюдать некоторые пики, соответствующие исходным кристаллическим формам. Результаты представлены в таблице 1.
1
Анализ посредством Н-ЯМР
1
[0174] Анализы посредством Н-ЯМР проводили для Формы 2 Соединения A и сольватов Соединения A (фиг. 7). Спектры соответствовали предложенной структуре. Для твердых веществ, соответствующих дифрактограммам кристаллических веществ XRPD 3, XRPD 4, XRPD 5, XRPD 6 и XRPD 7 путем интеграции сигналов, выделенных на фиг. 7, были идентифицированы и количественно оценены некоторые количества остаточного растворителя. Данный результат позволил предположить, что данные твердые вещества были сольватами, а не новыми полиморфами.
Термический анализ
[0175] Термические анализы проводили для Формы 2 Соединения A и сольватов Соединения A.
[0176] На термограмме ТГА Формы 2 потерю массы не наблюдали до начала разложения при ~260°C. Термограмма ДСК только продемонстрировала эндотермический эффект, который соответствовал расплаву Формы 2 (начало 249°C, энтальпия плавления -132,5 Дж/г).
1
[0177] На термограмме ТГА твердого вещества XRPD 3 наблюдали потерю массы -7,5% между 45 и 140°C. Данная потеря массы коррелировала с количеством остаточного ТГФ, наблюдаемым в спектре Н-ЯМР, и она соответствовала широкой эндотерме на термограмме ДСК, предположительно соответствующей десольватации с получением Формы 1. Небольшой экзотермический эффект с началом при ~200°C означал, что имел место переход Формы 1 с получением Формы 2. Далее полученное вещество расплавлялось при 251°C. Разложение образца начиналось при ~260°C.
1
[0178] На термограмме ТГА твердого вещества XRPD 4 наблюдали потерю массы ~4,5% между 60 и 160°C. Данная потеря массы коррелировала с количеством остаточного толуола, наблюдаемым в спектре Н-ЯМР, и она соответствовала эндотермическому эффекту на термограмме ДСК, предположительно десольватации с получением Формы 1. Небольшой экзотермический эффект с началом при ~193°C означал, что имел место переход твердое вещество-твердое вещество Формы 1 с получением Формы 2. Далее вещество плавилось при 251°C. Разложение образца начиналось при ~260°C.
1
[0179] На термограмме ТГА твердого вещества XRPD 5 наблюдали потерю массы ~15,3% между 100 и 150°C. Данная потеря массы коррелировала с количеством остаточного ДМФА, наблюдаемым в спектре Н-ЯМР, и она соответствовала эндотермическому эффекту на термограмме ДСК, предположительно десольватации с получением Формы 2. Отсутствие экзотермического эффекта при ~200°C, наблюдаемое для XRPD 3 и XRPD 4, означало, что при десольватации данных веществ образовывалась не Форма 1, а Форма 2, которая была подтверждена расплавом при 250°C. Разложение образца начиналось при ~260°C.
1
[0180] На термограмме ТГА твердого вещества XRPD 6 наблюдали потерю массы ~19,8% между 100 и 170°C. Данная потеря массы коррелировала с количеством остаточного NMP, наблюдаемым в спектре Н-ЯМР, и она соответствовала эндотермическому эффекту на термограмме ДСК, предположительно десольватации с получением Формы 2. Для вещества XRPD 5 при его десольватации образовывалась не Форма 1, а Форма 2. Далее вещество плавилось при 250°C. Разложение образца начиналось при ~260°C.
1
[0181] На термограмме ТГА твердого вещества XRPD 7 наблюдали потерю массы ~16,9% между 80 и 110°C. Данная потеря массы коррелировала с количеством остаточного 1,4-диоксана, наблюдаемым в спектре Н-ЯМР, и она соответствовала эндотермическому эффекту на термограмме ДСК, предположительно десольватации с получением Формы 2. Далее вещество плавилось при 249°C. Разложение образца начиналось при ~260°C.
Пример 5. Соединение A увеличивает уровни гемоглобина и гематокрита у мышей
[0182] Соединение A (2, 6, 20, 60, 100 или 200 мг/кг через оральный зонд), или используемый в качестве контроля носитель вводили перорально 3 раза в течение одной недели в понедельник, среду и пятницу (4-8 самцов мышей линии Swiss Webster на группу). Спустя три дня после введения последней дозы всех животных умерщвляли и собирали образцы крови и сыворотки для проведения общего анализа крови и биохимического анализа сыворотки.
[0183] Средние уровни гемоглобина (Hb), гематокрита (НСТ) и содержания эритроцитов (RBC) были значимо выше во всех группах, получавших Соединение A по сравнению с получавшими используемый в качестве контроля носитель (фиг. 8). Средние значения всех трех параметров демонстрировали дозозависимость при дозах от 2 до 20 мг/кг с выходом на плато между 20 и 60 мг/кг. При наименьшей дозе 2 мг/кг, протестированной в данном однонедельном исследовании на мышах линии Swiss-Webster, уровни гемоглобина увеличивались более чем на 1 г/дл. Введение Соединения A приводило к значимому дозозависимому увеличению гематологических показателей эритропоэза.
Пример 6. Соединение A увеличивает уровни гемоглобина и гематокрита у обезьян
[0184] Самцам макак-крабоедов (n=5 на дозовую группу) ежедневно вводили перорально 0, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 и 30 мг/кг Соединения A в течение 14 дней. Образцы крови для общего анализа крови были собраны перед первым введением и перед введением дозы на 8-й и 14-й дни.
[0185] Пероральному (через оральный зонд) введению Соединения A макакам-крабоедам в дозах 0, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 и 30 мг/кг в течение 14 последовательных дней сопутствовало изменение гематологических показателей при дозировках ≥1 мг/кг в день. На 8-й и 14-й дни при дозировках ≥1 мг/кг в день наблюдали дозозависимое увеличение содержания ретикулоцитов (RETI) (от 54 до 724%), а при дозировках ≥3 мг/кг в день также наблюдали увеличение содержания эритроцитов (от 13 до 41%), Hb (от 18 до 38%) и НСТ (от 14 до 46%). На фиг. 9 показаны величины НСТ, Hb и RBC после 2 недель ежедневного введения.
Пример 7. Лечение анемии хронических заболеваний
[0186] Анемия хронических заболеваний (АХЗ) сопутствует разнообразным воспалительным состояниям, включая артрит и неопластические заболевания. Для этого вида анемии характерны недостаточная продукция ЭПО, изменения метаболизма железа, сниженная продолжительность жизни эритроцитов и нарушение эритропоэтической реакции костного мозга.
[0187] Самкам крыс Lewis вводили пептидогликан-полисахаридные полимеры (ПГ-ПС), чтобы вызвать артрит и анемию. Развитие артрита и анемии происходило в течение 28 суток до начала введения Соединением А (введение через оральный зонд, 8 или 20 мг/кг) или носителем (n=8 в группе). Введение производили 3 раза в неделю (понедельник, среда и пятница) в течение 2 недель. За развитием модельного заболевания следили, измеряя отек лап и гематологические параметры. В образцах крови измеряли параметры, характеризующие гемопоэз и содержание железа. В исследовании также были задействованы три контрольных группы, (n=5 на группу), получавшие инъекции физиологического раствора вместо ПГ-ПС, а затем получавшие либо носитель, либо Соединение A (8 или 20 мг/кг) по той же схеме, что и животные, получавшие ПГ-ПС.
[0188] Стимуляция самок крыс линии Lewis с помощью ПГ-ПС полимеров приводила к развитию анемии, которая приобретала выраженный характер спустя 4 недели после стимуляции. В этой модели проявлялись характерные признаки функционального дефицита железа, включая микроцитоз (уменьшение среднего размера клеток) и гипохромию (уменьшение среднего содержания гемоглобина в эритроците), сниженное содержание железа в сыворотке и увеличенные общую железосвязывающую способность (ОЖСС) и ненасыщенную железосвязывающую способность (НЖСС). Проявлялись и признаки анемии, включая значительное снижение содержания гемоглобина, гематокрита и числа эритроцитов. В дополнение к анемии, у обработанных ПГ-ПС крыс развивались системное воспаление и артрит, на что указывали повышение количества лейкоцитов и опухание конечностей. У животных с анемией, вызванной стимуляцией ПГ-ПС, которые получали носитель, значимых изменений гематологических характеристик в ходе исследования не наблюдалось.
[0189] Прерывистое лечение Соединением A (8 или 20 мг/кг) в течение 2 недель корректировало вызванные стимуляцией ПГ-ПС снижение Hb, НСТ, количества эритроцитов, эритроцитарного гемоглобина и увеличение НЖСС, при этом статистически значимый эффект достигался при дозе 20 мг/кг (фиг. 10).
[0190] Можно сделать вывод, что прерывистое лечение Соединением A существенно облегчало течение анемии, аналогичной анемии хронических заболеваний.
Пример 8. Лечение анемии, вызванной хронической болезнью почек
[0191] Почки являются основным местом выработки эритропоэтина у взрослых млекопитающих, поэтому анемия и снижение выработки эритропоэтина являются распространенными осложнениями почечной недостаточности. Модельный лоскут крысиной почки (получаемый 5/6-нефрэктомией) является общепринятой моделью анемии, вызванной прогрессирующей почечной недостаточностью.
[0192] Чтобы вызвать хроническую болезнь почек, самок крыс линии Wistar подвергали субтотальной (5/6) операции нефрэктомии. При этом левую почку перевязывали так, чтобы вызвать инфаркт 2/3 почки, а правую почку одновременно подвергали тотальной нефрэктомии. Для использования в качестве контроля, дополнительных животных подвергли плацебо-операции без выполнения нефрэктомии. Спустя пять недель после операции развитие анемии и хронической болезни почек у животных, подвергшихся нефрэктомии, подтвердили клинической диагностикой, после чего животных распределили по трем группам лечения (n=8 на группу) и вводили им 0 (носитель), 8 или 20 мг/кг Соединения A. Группа с имитацией операции получала дозу 0 мг/кг (носитель). Начиная с 6 недели после операции, все животные получали препарат трижды в неделю (по понедельникам, средам и пятницам) через оральный зонд в течение 2 недель. Образцы цельной крови отбирали спустя 5, 7 и 8 недель после операции.
[0193] Спустя 5 и 8 недель после операции демонстрировали классические признаки анемии, а именно: снижение Hb, НСТ и числа эритроцитов в сравнении с группой с имитацией операции, а также увеличение систолического кровяного давления. Кроме того, у получавших носитель нефрэктомированных животных спустя 5 недель после операции наблюдалась хроническая болезнь почек, диагностируемая по значительным изменениям биохимических параметров сыворотки. После 2 недель лечения, введение Соединения A в дозах 8 и 20 мг/кг приводило к значительному увеличению Hb, НСТ и числа эритроцитов по сравнению с введением используемого в качестве контроля носителя (фиг. 11). Введение Соединения A в дозе 20 мг/кг нормализовало все три параметра до уровней, соответствующих (неанемической) контрольной группе с имитацией операции. Кроме того, оказалось, что лечение Соединением A привело к более высоким значениям среднего объема эритроцита (MCV) и среднего содержания гемоглобина в эритроците (МСН) у нефрэктомированных животных, однако в дозовой группе 20 мг/кг значимо повышен спустя 2 недели лечения был только MCV.
[0194] Был сделан вывод, что прерывистое лечение Соединением A в течение 2 недель корригировало анемию и улучшало утилизацию железа, что было подтверждено частичной коррекцией микроцитоза и гипохромии, вызванных 5/6-нефрэктомией.
Пример 9. Соединение A увеличивает уровни эритропоэтина, ретикулоцитов и гемоглобина у человека
[0195] Однократную дозу Соединения A (Форма 2, капсулы) перорально вводили здоровым добровольцам мужского пола. Соединение A было предоставлено в виде капсул, содержащих 1 и 5 мг, поэтому дозы округляли до ближайшего целого числа капсул. В когортах 1-4 дозы составляли 0,05 мг/кг, 0,15 мг/кг, 0,3 мг/кг и 0,4 мг/кг, соответственно. Сбор образцов крови производили в следующих временных точках: до приема, спустя 8, 12, 16, 20, 24, 30, 48, 72, 96 и 120 часов, а также на 8-й, 10-й, 12-й и 15-й дни после приема.
Эритропоэтин
[0196] На фиг. 12 показано, что средние максимальные уровни эритропоэтина в плазме увеличиваются после приема Соединения A.
[0197] У всех членов когорты 1 концентрация эритропоэтина в плазме после приема Соединения A была повышена по сравнению с исходным уровнем (до приема). Пиковые уровни эритропоэтина были достигнуты спустя примерно 16,8 часов, при этом средняя максимальная концентрация эритропоэтина возрастала до 27,2 мМЕ/мл по сравнению с исходным уровнем в 11,4 мМЕ/мл.
[0198] У всех членов когорты 2 концентрация эритропоэтина в плазме повышалась после приема Соединения A примерно пропорционально дозе, за исключением одного человека, у которого наблюдалась более сильная эритропоэтическая реакция. Пиковый уровень эритропоэтина в среднем достигался через 14 часов после приема Соединения A, при этом средняя максимальная концентрация эритропоэтина составляла 81,7 мМЕ/мл. Спустя примерно 5 дней средний уровень эритропоэтина проявлял тенденцию к снижению до исходного.
[0199] У членов когорты 3 пиковый уровень эритропоэтина достигался в среднем через 23 часа после приема при средней максимальной концентрации около 620 мМЕ/мл. Уровень эритропоэтина в когорте 3 увеличивался сильнее, чем пропорционально дозе, если сравнивать с когортой 2.
[0200] У всех членов когорты 4 концентрация эритропоэтина в плазме повышалась после приема Соединения A по сравнению с исходным уровнем (до приема). Максимальные концентрации (Cmax) эритропоэтина (ЭПО) и Сmax ЭПО за вычетом исходного уровня (Cmax-ИУ) увеличивались сильнее, чем пропорционально дозе, если сравнивать когорты 3 (0,3 мг/кг) и 4 (0,4 мг/кг), что показано на фиг. 12. Средняя максимальная концентрация эритропоэтина в плазме всех членов когорты 4 составила 2900 мМЕ/мл, ожидается результат повторного анализа одного образца, в котором обнаружили превышение предела количественного определения. Среднее время достижения максимальной концентрации ЭПО составило 20 часов.
Количество ретикулоцитов
[0201] Имела место тенденция к увеличению числа ретикулоцитов в когортах 1-4, указывающая на то, что Соединение A проявляло активность в отношении своей биологической мишени и посредством этого вызывало эритропоэтическую реакцию (таблица 2).
Уровни гемоглобина
[0202] В когорте 1 средний уровень гемоглобина не изменялся между 0-м и 8-м днями. В когорте 2 среднее содержание гемоглобина возросло к 8-му дню на 0,3 г/дл; в когорте 3 среднее содержание гемоглобина возросло к 8-му дню на 0,8 г/дл; в когорте 4 среднее содержание гемоглобина возросло к 8-му дню на 0,7 г/дл, а к 15-му дню на 1,1 г/дл.
[0203] Эти данные показывают, что при введении в виде кристаллической Формы 2 Соединение A способно эффективно увеличивать содержание ЭПО в плазме, уровни ретикулоцитов и средние уровни гемоглобина.