МОЛЕКУЛЫ EphA2-BiTE И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Биспецифичное одноцепочечное антитело, содержащее
(a) первый вариабельный домен тяжелой цепи (VH-домен) антитела, которое иммуноспецифично связывается с CD3, и первый вариабельный домен легкой цепи (VL-домен) антитела, которое иммуноспецифично связывается с CD3, причем указанный первый VH-домен ковалентно связан с указанным первым VL-доменом с помощью первого линкера подходящей длины, так что указанный первый VH-домен и указанный первый VL-домен собираются в структуру с образованием первого связывающего домена, который связывается с CD3; и
(b) второй VH-домен и второй VL-домен антитела, которое иммуноспецифично связывается с эпитопом EphA2, представленным на клеточной поверхности, указанный второй VH-домен является ковалентно связанным с указанным вторым VL-доменом с помощью второго линкера подходящей длины, так что указанный второй VH-домен и указанный второй VL-домен собираются в структуру с образованием второго связывающего домена, который связывается с указанным эпитопом из EphA2;
где указанный первый связывающий домен и указанный второй связывающий домен ковалентно связаны с помощью третьего линкера подходящей длины, так что указанный первый связывающий домен и указанный второй связывающий домен собираются в структуру независимо друг от друга.
2. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.1, где первый связывающий домен, который иммуноспецифично связывается с CD3, связывается с ε-субъединицей CD3.
3. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, где первый связывающий домен, специфичный для ε-субъединицы CD3, располагается в N-концевой области по отношению ко второму связывающему домену.
4. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, где первый связывающий домен, специфичный для ε-субъединицы CD3, располагается в С-концевой области по отношению ко второму связывающему домену.
5. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, где первый связывающий домен и второй связывающий домен располагаются в порядке
CD3
CD3
EphA2
EphA2
VH-VL-VH-VL.
6. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, где первый связывающий домен, который иммуноспецифично связывается с ε-субъединицей CD3, является деиммунизированным.
7. Биспецифичное антитело по п.2, где домены VH и/или VL второго связывающего домена представляют собой домены VH и/или VL из антител EA2, EA3, EA4, EA5, 3F2, 4H5, 2A4, 2E7, 12E2, Eph099B-102.147, Eph099B-208.261, Eph099B-210.248, Eph099B-233.152, Eph101.530.241, 233 или G5.
8. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, где длина первой, второй и третьей линкерных последовательностей включает по меньшей мере 5 остатков, по меньшей мере 10 остатков, по меньшей мере 15 остатков, по меньшей мере 20 остатков, по меньшей мере 25 остатков или по меньшей мере 30 остатков.
9. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, где указанный первый линкер между первым вариабельным доменом тяжелой цепи и первым вариабельным доменом легкой цепи указанного первого связывающего домена, который связывается с ε-субъединицей CD3, включает последовательность SEQ ID NO:57.
10. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, где указанный второй линкер между вторым вариабельным доменом тяжелой цепи и вторым вариабельным доменом легкой цепи указанного второго связывающего домена, который связывается с EphA2, включает последовательность SEQ ID NO:59.
11. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, где третий линкер между указанным первым связывающим доменом и указанным вторым связывающим доменом включает последовательность SEQ ID NO:58.
12. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, где домены VH и/или VL первого связывающего домена представляют собой домены VH и/или VL антитела к CD3, которое является гуманизированным.
13. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, где домены VH и/или VL второго связывающего домена представляют собой домены VH и/или VL антитела против EphA2, которое является гуманизированным.
14. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, где указанный первый связывающий домен связывается с ε-субъединицей CD3 с меньшей аффинностью, чем указанный второй связывающий домен связывается с EphA2.
-7
15. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.14, где константа диссоциации первого связывающего домена, который связывается с ε-субъединицей CD3, составляет 4×10 M.
-7
16. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.14, где константа диссоциации второго связывающего домена, который связывается с EphA2, составляет 1,13×10 M.
17. Биспецифичное одноцепочечное антитело по п.2, которое включает последовательность из SEQ ID NO:65.
18. Фармацевтическая композиция, содержащая биспецифичное одноцепочечное антитело любого из пп.1-17 и фармацевтически приемлемый носитель.
19. Способ лечения, профилактики или терапии рака, при котором раковые клетки экспрессируют EphA2, у индивида, причем указанный способ включает введение указанному индивиду терапевтически эффективного количества биспецифичного одноцепочечного антитела по любому из пп.1-17 и фармацевтически приемлемого носителя.
20. Способ по п.19, где указанное биспецифичное одноцепочечное антитело связывается с EphA2, экспрессирующимся на поверхности клетки, а не в области межклеточных контактов.
21. Способ по п.19, где указанный рак представляет собой метастазирующий рак.
22. Способ по п.19, включающий введение дополнительной противораковой терапии, отличной от введения биспецифичного одноцепочечного антитела.
23. Способ по п.22, где указанная дополнительная противораковая терапия выбрана из группы, состоящей из химиотерапии, биологической терапии, иммунотерапии, радиационной терапии, гормональной терапии и хирургического вмешательства.
24. Способ лечения, профилактики или терапии инфекции у индивида, причем указанный способ включает введение указанному индивиду терапевтически эффективного количества биспецифичного одноцепочечного антитела по любому из пп.1-17 и фармацевтически приемлемого носителя.
25. Способ по п.24, где указанная инфекция представляет собой внутриклеточную патогенную инфекцию.
26. Способ по п.24, где указанная инфекция представляет собой инфекцию респираторно-синцитиальным вирусом (RSV).
27. Способ по п.24, включающий проведение дополнительной терапии.
28. Способ по п.27, где указанная дополнительная терапия представляет собой противовирусную терапию, противогрибковую терапию, противобактериальную терапию или противопротозойную терапию.
29. Способ лечения, профилактики или терапии неракового заболевания с клеточной гиперпролиферацией, причем указанный способ включает введение указанному индивиду терапевтически эффективного количества биспецифичного одноцепочечного антитела по любому из пп.1-17 и фармацевтически приемлемого носителя.
30. Способ по п.29, где указанное нераковое заболевание с гиперпролиферацией клеток представляет собой астму, COPD, фиброз легкого, асбестоз, IPF, DIP, UIP, фиброз почки, фиброз печени, другие фиброзы, бронхиальную гиперчувствительность, псориаз, себорейный дерматит, кистозный фиброз, или заболевание с гиперпролиферацией эндотелиальных клеток, такое как рестеноз, заболевание с гиперпролиферацией сосудов, синдром Бехчета, атеросклероз, дегенерация желтого пятна или заболевание с гиперпролиферацией фибробластов.
31. Способ по п.29, включающий введение дополнительной терапии.
32. Способ по п.31, где указанная дополнительная терапия представляет собой противовирусную терапию или терапию с иммуномодулирующим агентом.
33. Способ по пп.19, 24 или 29, где указанным индивидом является человек.