Влияние мезенхимальных стромальных клеток на раннее восстановление лимфоцитов у больных злокачественными лимфомами с аутологичной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток

ВЛИЯНИЕ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК НА РАННЕЕ ВОССТАНОВЛЕНИЕ ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ЛИМФОМАМИ С АУТОЛОГИЧНОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИЕЙ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

Елена Рэмовна ЧЕРНЫХ, Егор Васильевич БАТОРОВ, Екатерина Яковлевна ШЕВЕЛА,

Наталья Викторовна ПРОНКИНА, Вера Васильевна СЕРГЕЕВИЧЕВА, Андрей Викторович ГИЛЕВИЧ, Дарья Сергеевна БАРАНОВА, Александр Анатольевич ОСТАНИН, Ирина Валентиновна КРЮЧКОВА

НИИ клинической иммунологии СО РАМН 630099, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14

В работе проанализировано влияние котрансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) на раннее восстановление лимфоцитов у больных злокачественными лимфомами с аутологичной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК). Котрансплантация аутологичных ММСК в средней дозе 0,16 х 106/кг была проведена 65 больным с ауто-ТГСК. Группу сравнения составили пациенты (п = 61), сопоставимые по возрасту, полу, структуре диагнозов, предлеченности, режимам мобилизации, количеству введенных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Раннее восстановление лимфоцитов в группе с котрансплантацией ММСК было зарегистрировано достоверно чаще (в 71 % случаев), чем в группе сравнения (43 %). Эффект ММСК проявлялся наиболее выражено у больных с относительно низким количеством вводимых CD34+-клеток (< 4,4 х 106/кг) и не зависел от абсолютного содержания лимфоцитов в продукте сепарации. В заключении обсуждаются возможные механизмы влияния ММСК на восстановление лимфоцитов.

Ключевые слова: реконституция лимфоцитов, мезенхимальные стволовые клетки, трансплантация гемопоэтических стволовых клеток.

Введение

Трансплантация аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК) является одним из наиболее эффективных методов лечения опухолевых заболеваний крови, однако даже при таком радикальном лечении 70 % пациентов погибают от рецидива заболевания [1]. Недавними исследованиями установлено, что показатели общей и безрецидивной выживаемости у больных с ауто-ТГСК коррелируют с ранним восстановлением лимфоцитов, что указывает на важную роль аутологичных лимфоцитов в противоопухолевой защите [2, 4]. Поэтому сокращение сроков восстановления лимфоцитов после ТГСК представляется перспективной стратегией повышения эффективности ауто-ТГСК.

Ранее нами был разработан и зарегистрирован метод котрансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК), направленный на улучшение приживления гемопоэти-ческих стволовых клеток (ГСК) при проведении ауто-ТГСК (ФС № 2008/014). Согласно данным литературы, гемопоэз-стимулирующий эффект ММСК обусловлен способностью этих клеток продуцировать гемопоэз-стимулирующие цитоки-ны и дифференцироваться в клетки кроветворного микроокружения [5, 6]. Учитывая повреждающее действие химио-, радиотерапии на гемопоэз-поддерживающую функцию стромальных клеток костного мозга [7-9], мы предположили, что одновременное введение аутологичных ММСК при проведении ТГСК будет способствовать улуч-

Черных Е.Р. — д.м.н., проф., зав. лабораторией клеточной иммунотерапии, e-mail: ct_lab@mail.ru Баторов Е.В. — аспирант, e-mail: ct_lab@mail.ru

Шевела Е.Я. — к.м.н., ст.н.с. лаборатории клеточной иммунотерапии, e-mail: ct_lab@mail.ru Пронкина Н.В. — к.б.н., зав. лабораторией клинической иммунологии, врач клинико-лабораторной диагностики, e-mail: ct_lab@mail.ru Сергеевичева В.В. — к.м.н., врач-гематолог гематологического отделения с блоком трансплантации костного мозга, e-mail: depsct@online.nsk.ru

Гилевич А.В. — к.м.н., зав. отделением реанимации и интенсивной терапии, e-mail: depsct@online.nsk.ru Баранова Д.С. — врач-гематолог гематологического отделения с блоком трансплантации костного мозга, e-mail: depsct@online.nsk.ru

Останин А.А. — д.м.н., проф., гл.н.с., e-mail: ct_lab@mail.ru

Крючкова И.В. — к.м.н., врач-гематолог, зав. гематологическим отделением

с блоком трансплантации костного мозга, e-mail: depsct@online.nsk.ru

шению приживления ГСК и сокращению сроков критической цитопении. Действительно, введение аутологичных ММСК пациентам с гемобластоза-ми сопровождается значимым сокращением продолжительности нейтро- и тромбоцитопении [10]. Однако эффект ММСК на восстановление лимфоцитов не исследовался.

Согласно данным литературы, ММСК обладают выраженными иммуносупрессивными свойствами [11]. С одной стороны, это определяет перспективы их применения для профилактики и подавления трансплантационных реакций, с другой — вызывает опасения, что ММСК могут негативным образом сказываться на восстановлении лимфоцитов и, соответственно, исходах ТГСК [9, 12]. Следует, однако, отметить, что ингибирующий эффект проявляется при использовании достаточно высоких концентраций ММСК, тогда как в низких дозах эти клетки могут стимулировать пролиферацию лимфоцитов [13, 14]. При этом влияние ММСК на гомеостатическую пролиферацию лимфоцитов in vivo и тимопоэз до сих пор не изучено. Поэтому вопрос о том, как будет влиять трансплантация аутологичных ММСК на восстановление лимфоцитов у больных с ТГСК, остается открытым.

Исходя из этого, целью настоящей работы стало изучение влияния котрансплантации ММСК на эффективность раннего восстановления лимфоцитов при проведении ауто-ТГСК у больных злокачественными лимфомами.

Материал и методы

В исследование были включены 126 больных, в том числе 72 мужчины и 54 женщины в возрасте от 8 до 56 лет (медиана 33 года), которым проводилась ауто-ТГСК в отделении гематологии и трансплантации костного мозга клиники иммунопатологии НИИ клинической иммунологии СО РАМН в период с 2003 по 2010 гг. У 52 пациентов диагностировалась неходжкинская лимфома, у 46 — лим-фома Ходжкина и у 28 больных — множественная миелома. У всех пациентов оценивали абсолютное количество лимфоцитов до мобилизации, в продукте сепарации и после ТГСК — на момент выхода из цитопении (содержание лейкоцитов > 1 х 109/л) и при выписке. Забор крови и все иммунологические исследования проводили после получения письменного информированного согласия пациентов.

Мобилизацию ГСК у большинства больных проводили с использованием различных режимов химиотерапии с последующим введением препаратов гранулоцитарного колоние-стимулирующего фактора (Г-КСФ) в дозе 5 мкг/кг в день. Г-КСФ в режиме монотерапии (10 мкг/кг в день) применяли только у 13 больных. Процедуру афереза начинали по достижении концентрации 1 х 104 CD34+-клеток/мл периферической крови и продолжали до получения > 2,0 х 106 CD34+-клеток/кг, используя сепараторы клеток крови AS TEC 204 («Fresenius», Германия) и Spectra LRS 07 («COBE», США).

Пациенты получали режимы кондиционирования: BEAM (77 человек) и мелфалан 140—200 мг/м2 (49 человек).

Аспират костного мозга в количестве 50 мл получали из крыла подвздошной кости. Фракцию мононуклеарных клеток выделяли стандартно путем центрифугирования клеток аспирата в градиенте плотности фиколла-верографина (1,078 г/л) в течение 20 мин при 3000 об/мин. Для получения ММСК костномозговые моно-нуклеарные клетки инкубировали в пластиковых флаконах («Nunclon», Дания) в питательной среде aMEM («БиолоТ», Санкт-Петербург), дополненной 100 мкг/мл гентамицина и 5 % пулированного лизата тромбоцитов, при 37 °C в COj-инкубаторе. Через 48 ч неприкрепленные к пластику клетки удаляли, а прилипающую фракцию клеток культивировали до получения конфлюэнтного слоя. Отделение ММСК от поверхности флакона осуществляли с использованием 0,25%-ного раствора трипсина и 0,02%-ного раствора ЭДТА.

Количество лейкоцитов считали в камере Горяева, относительное число лимфоцитов определяли с помощью проточного цитометра FACSCalibur («Becton Dickinson», США). Раннее восстановление лимфоцитов (РВЛ) считалось наступившим, если выход из цитопении (содержание лейкоцитов > 1 х 109/л) наступал не позднее 15 дня, а количество лимфоцитов в периферической крови при этом составляло 500 и более клеток /мкл.

Математическую обработку данных производили при помощи параметрических и непараметрических методов с использованием программных пакетов для статистической обработки Statistica 6.0 («StatSoft», США). Для оценки значимости различий между подгруппами больных использовали критерий х2 (Px2) и точный критерий Фишера (РТКФ) для дискретных переменных и критерий Вилкок-сона — Манна — Уитни (PU) — для непрерывных переменных. Корреляционные взаимосвязи между признаками в группах больных определяли величиной коэффициента корреляции Спирмена.

Результаты и обсуждение

Чтобы оценить влияние ММСК на РВЛ, был проведен сравнительный анализ абсолютного количества лимфоцитов в сроки выхода из лейкопении (количество лейкоцитов > 1 х 109 клеток/л) у пациентов с наличием и отсутствием котрансплан-тации ММСК (табл.). Первую группу (ММСК+) составили 65 больных, которым ТГСК дополняли введением полученных предварительно аутологичных ММСК. Доза ММСК варьировала от 0,01 до 1,1 х 106 /кг (медиана 0,16 х 106/кг). Вторую группу (ММСК-) составил 61 пациент, ауто-ТГСК проводили стандартно в отсутствие ММСК. Как видно из данных таблицы, сравниваемые группы значимо не различались по возрасту, соотношению мужчин и женщин, распределению больных по нозологическим формам, статусу на момент проведения

Таблица

Характеристика больных исследуемых групп

Параметр Группы больных Достоверность различий

ММСК-, n = 61 ММСК+, n = 65

Возраст

Пол: мужчины женщины 38 (62 %) 23 (38 %) 34 (52 %) 31 (48 %) Рх2 = 0,34

Количество больных с диагнозом: неходжкинская лимфома лимфома Ходжкина множественная миелома 28 (46 %) 19 (31 %) 14 (23 %) 24 (37 %) 27 (41,5 %) 14 (21,5 %) 908 339 0, 0, 0, 2 2 2 РРР

Статус: полная ремиссия частичная ремиссия прогрессия 1G (16,4 %) 36 (59 %) 15 (24,6 %) 21 (32 %) 34 (53 %) 1G (15 %) 668 ,0 ,5 ,2 0, 0, 0, 2 2 2 РРР

Количество курсов химиотерапии: первой линии второй линии 8,3 і 0,73 1,8 і 0,2 7,0 і 0,4 1,6 і 0,2 ,2 ,7 0, 0, U U РР

Режимы мобилизации: ** химиотерапия + Г-КСФ Г-КСФ 55 (91,8 %) 6 (9,8 %) 58 (89,2 %) 7 (10,8 %) Р 2 0, 9 О

Режимы кондиционирования: BEAM мелфалан 36 (59 %) 25 (41 %) 41 (63 %) 24 (37 %) 78 ,4 ,7 0, 0, 2 2 РР

Количество СБ34+-клеток (х 106/кг), M ± m (медиана) 5,94 і 0,74 (4,4) 4,6 і 0,29 (4,4) ,61 0, U Р

Количество лимфоцитов (х 109/л) перед мобилизацией, M ± m (медиана) 1,4 і 0,1 (1,16) 1,6 і 0,13 (1,4) Ри = 0,27

Абсолютное количество лимфоцитов (х 109) в продукте сепарации, M ± m (медиана) 11,9 і 1,5 (10,7) 13,8 і 1,7 (10,5) 8 ,4 0, U Р

День выхода из лейкопении (> 1,0 х 109/л), M ± m (медиана) 17,2 і 1,8 (14) 13,5 і 0,3 (13) Ри = 0,09

Количество лимфоцитов (х 106/л) на момент выхода из лейкопении, M ± m (медиана) 0,61 і 0,04 (0,56) 0,68 і 0,04 (0,69) Ри = 0,23

Ранняя реконституция лимфоцитов, количество/процент больных*** 25/58 (43 %) 44/62 (71 %) Рх2 = 0,0037

Примечание: * — в подгруппе ММСК— п = 53 (с целью стандартизации пациентов по статусу на момент ТГСК).

В последующих расчетах п = 61; полученные данные значимо не отличаются от таковых при п = 53; ** — химиотерапия: высокие дозы циклофосфамида (4 г/м2; п = 106), курсы БехаВЕЛМ (п = 5), Е8НЛР (п = 2); *** — у 3 пациентов из группы ММСК— и у 3 больных из группы ММСК+ не определяли восстановление лимфоцитов.

ТГСК, т. е. были достаточно однородны. Пациенты обеих групп характеризовались сходными показателями предлеченности (т. е. одинаковым количеством проведенных курсов программной полихимиотерапии первой и второй линии), режимами мобилизации и кондиционирования и количеством вводимых СБ34+-клеток. Абсолютное количество лимфоцитов перед началом мобилизации и в продукте сепарации также достоверно не различалось.

По сравнению с группой ММСК-, пациенты с котрансплантацией ММСК характеризовались выраженной тенденцией к более раннему выходу из лейкопении (в среднем на 13-й день вместо 17-х суток) и более высокому содержанию абсолютного количества лимфоцитов к этому сроку. Раннее восстановление лимфоцитов в этой группе регистрировалось у 71 % пациентов и в 1,7 раза превышало аналогичный показатель в группе со стандартной ТГСК (ММСК-).

Исследование возможных взаимосвязей между эффективностью РВЛ и анализируемыми параметрами периферической крови/продукта сепарации при стандартной ТГСК (ММСК-) показало, что продолжительность лейкопении (< 1,0 х 106/л) обратно коррелировала с количеством вводимых СБ34+-клеток (г8 = -0,3; Р8 = 0,02). Учитывая этот факт, мы сравнили выраженность стимулирующего влияния ММСК на восстановление лимфоцитов в группах больных с относительно низким (группа А) и высоким (группа В) количеством вводимых ГСК. Критерием разделения больных на группы явилось медианное значение дозы вводимых СБ34+-клеток, соответствующее 4,4 х 106/кг. Группа А включала 65 больных, в том числе 33 пациента с котрансплантацией ММСК. Группа В насчитывала 60 человек, среди которых котрансплантацию

ММСК проводили 32 пациентам. Среднее значение числа вводимых СБ34+-клеток в группах А и В составило соответственно 2,8 и 6,3 х 106/кг. Как видно из представленных на рисунке 1 данных, при стандартной ТГСК (ММСК-) частота РВЛ у больных с низким количеством СБ34+-клеток была в 2 раза ниже, чем у пациентов с высоким количеством трансплантируемых ГСК. Именно в этой группе эффект ММСК был наиболее выраженным. Так, у больных группы А ранняя реконституция лимфоцитов на фоне введения ММСК регистрировалась в 2 раза чаще, чем в подгруппе ММСК-. В группе В различия были менее выражены и проявлялись лишь в виде тенденции. Таким образом, стимулирующий эффект ММСК на РВЛ более ярко проявлялся у больных с трансплантацией относительно невысоких количеств СБ34+-клеток.

Ретроспективный анализ клинико-лабораторных параметров при стандартной ТГСК в подгруппах пациентов с наличием и отсутствием РВЛ не выявил различий в возрасте, структуре нозологических форм, статусе заболевания на момент трансплантации, предлеченности, количеству вводимых ГСК и абсолютному количеству лимфоцитов в периферической крови на момент проведения мобилизации (данные не представлены). Однако эффективность РВЛ зависела от абсолютного количества лимфоцитов в продукте сепарации. Так, средние значения абсолютного содержания лимфоцитов в сепарате больных с РВЛ в 2 раза превышали аналогичные показатели у пациентов с отсутствием ранней реконституции лимфоцитов (соответственно 14,9 ± 0,5 и 7,6 ± 0,6 х 109/л; Ри = 0,019). Характерно, что взаимосвязь РВЛ с большим количеством лимфоцитов не была обусловлена более высоким содержанием СБ34+-клеток в продукте сепарации, поскольку

Рис. 1. Влияние ММСК на раннее восстановление лимфоцитов в группах больных с низким (А) и высоким (В) количеством трансплантируемых ГСК

По оси ординат представлены значения частоты встречаемости больных с ранним восстановлением лимфоцитов у пациентов с количеством трансплантируемых ГСК < 4,4 х 106/кг СБ34+-клеток (группа А; п = 65) и > 4,4 х 106/кг СБ34+-клеток (группа В; п = 60). Подгруппа ММСК— - больные со стандартной трансплантацией ГСК (в отсутствие ММСК), подгруппа ММСК+ - больные с котрансплантацией ММСК. * ^тМФ = 0,022 - достоверность различий в подгруппах ММСК— и ММСК+ группы А; # РТМФ = 0,07 — достоверность различий в подгруппах ММСК— у больных группы А и В

100 і сшмск-

со

0.

А В

Рис. 2. Влияние ММСК на раннее восстановление лимфоцитов (РВЛ) в группах больных с низким (А) и высоким (В) абсолютным количеством лимфоцитов в продукте сепарации

По оси ординат представлены значения частоты раннего восстановления лимфоцитов у больных с абсолютным количеством лимфоцитов в продукте сепарации < 10,7 х 10Р/л (группа А; п = 37) и > 10,7 х 10Р/кг СБ34+-клеток (группа В; п = 38). Подгруппа ММСК— - больные со стандартной трансплантацией ГСК (без ММСК), подгруппа ММСК+— больные с котрансплантацией ММСК.

# РТМФ = 0,04 — достоверность различий с подгруппой ММСК+ больных группы А

между этими параметрами не выявлялось прямой взаимосвязи и, более того, обнаруживалась тенденция к обратной зависимости (г8 = -0,29, р = 0,09). Чтобы исследовать, зависит ли стимулирующее действие ММСК от исходного содержания лимфоцитов в продукте сепарации, мы сравнили эффективность РВЛ в присутствии и в отсутствие ММСК в группах больных с абсолютным содержанием лимфоцитов ниже и выше медианного значения, составляющего 10,7 х 109/л (рис. 2). Обнаружено, что эффективность РВЛ на фоне котрансплантации ММСК возрастала в одинаковой степени в обеих группах. При этом у больных с высоким содержанием лимфоцитов в сепарате и котрансплантацией ММСК эффективность РВЛ достигала 95 %.

ММСК костного мозга обладают выраженной способностью поддерживать гемопоэз, поскольку входят в состав гемопоэтического окружения стволовых кроветворных клеток, стимулируют пролиферацию и дифференцировку гемопоэтиче-ских предшественников и способны активировать регенерацию клеток стромы после повреждающих воздействий [9]. Клиническая апробация ММСК с целью улучшения приживления гемопоэтиче-ских стволовых кроветворных клеток и ускорения восстановления гемопоэза при ауто-ТГСК показала хорошую переносимость котрансплантации ММСК, отсутствие токсических эффектов и раннее восстановление гемопоэза [10, 15]. Однако широкое применение ММСК в клинической практике требует более детального изучения возможных побочных эффектов этих клеток, поскольку им-муносупрессивные свойства ММСК могут приводить к нарушению иммунной реконституции и ослаблению противоопухолевой активности.

Раннее восстановление лимфоцитов является независимым фактором увеличения общей выживаемости и времени до прогрессии заболевания

при проведении ауто-ТГСК у пациентов с острым миелоидным лейкозом [3], лимфомой Ходжкина и неходжкинскими лимфомами [3, 4], раком легкого [16] и раком яичников [17]. Учитывая важную прогностическую роль данного маркера, мы сконцентрировали внимание на исследовании влияния ММСК на процессы раннего восстановления лимфоцитов после ауто-ТГСК. Проведенные исследования показали, что внутривенное введение относительно низких концентраций аутологичных ММСК, средняя доза которых составляла 0,16 х 106/кг, не оказывало ингибирующего действия на раннее восстановление лимфоцитов и, более того, в 1,7 раза повышало частоту больных с РВЛ. Эффект ММСК был наиболее выражен в подгруппе пациентов с относительно меньшим количеством вводимых ГСК. Сходные данные были получены нами и при анализе влияния ММСК на сокращение сроков критической нейтропении и тромбоцитопении. Стимулирующий эффект ММСК на восстановление кроветворения проявлялся в наибольшей степени при введении СБ34+-клеток в дозе менее 3,5 х 106/кг. Это позволило сделать заключение, что котрансплантация ММСК может являться альтернативой повторных мобилизаций периферических стволовых кроветворных клеток (ПСКК) при неэффективной мобилизации и субоптимальном количестве сепарированных СБ34+-клеток [10]. Полученные в настоящем исследовании данные указывают, что котрансплантация ММСК в условиях введения субоптимальных доз ГСК будет также способствовать раннему восстановлению лимфоцитов. Вместе с тем мы не выявили различий в выраженности стимулирующего эффекта котрансплантации ММСК на РВЛ в зависимости от абсолютного содержания лимфоцитов в продукте сепарации.

Механизмы позитивного влияния ММСК на реконституцию лимфоцитов остаются во многом

неясными. Несмотря на наличие иммуносупрес-сивной активности, в определенных условиях, например, при низком уровне базовой пролиферации лимфоцитов или низких количествах ММСК, мезенхимальные клетки способны усиливать пролиферативный ответ лимфоцитов на аллоантигены и стимуляцию гомеостатическими цитокинами [13, 14]. Поскольку в наших исследованиях использовались относительно низкие дозы ММСК, вводимые клетки могли стимулировать гомеостатическую пролиферацию лимфоцитов. Не исключено также, что ММСК могут повышать эффективность восстановления лимфоцитов за счет усиления ти-мопоэза. Известно, что ММСК необходимы для создания тимического микроокружения и поддержания функций эпителиальных клеток, играющих важную роль в развитии тимоцитов [18, 19]. Химиотерапия оказывает повреждающее действие на эпителиальные клетки тимуса и тимопоэз. Соответственно можно полагать, что ММСК, способствуя восстановлению тимического микроокружения, могут активировать тимопоэз. Исследования соотношения недавних мигрантов из тимуса и центральных наивных Т-клеток в условиях котран-сплантации ММСК могли бы отчасти прояснить, посредством каких механизмов ММСК стимулируют реконституцию лимфоцитов.

Список литературы

1. Crump M. Management of Hodgkin lymphoma in relapse after autologous stem cell transplant // Hematology. 2008. (1). 326-333.

2. Porrata L.F., Litzow M.R., Tefferi A. et al. Early lymphocyte recovery is a predictive factor for prolonged survival after autologous hematopoietic stem cell transplantation for acute myelogenous leukemia // Leukemia. 2002. 16. 1311-1318.

3. Porrata L.F., Litzow M.R., Inwards D.J. et al. Infused peripheral blood autograft absolute lymphocyte count correlates with day 15 absolute lymphocyte count and clinical outcome after autologous peripheral hematopoietic stem cell transplantation in non-Hodgkin’s lymphoma // Bone Marrow Transplant. 2004. 33. 291-298.

4. Gordan L.N., Sugrue M.W., Lynch J.W. et al. Correlation of early lymphocyte recovery and progression-free survival after autologous stem-cell transplant in patients with Hodgkin’s and non-Hodgkin’s lymphoma // Bone Marrow Transplantation. 2003. 31. 1009-1013.

5. Majumdar M.K., Thiede M.A., Haynesworth S.E. et al. Human marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) express hematopoietic cytokines and support long-term hematopoiesis when differentiated toward stromal and osteogenic lineages // J. Hematother. Stem Cell Res. 2000. 9. 841-848.

6. Angelopoulou M., Novelli E., Grove J.E. et al. Cotransplantation of human mesenchymal stem cells enhances human myelopoiesis and megakaryocytopoiesis in NOD/SCID mice // Exp. Hematol. 2003. 31. 413-420.

7. Uhlman D.L., Verfaillie C., Jones R.B., Luikart S.D. BCNU treatment of marrow stromal monolayers rever-sibly alters haematopoiesis // Br. J. Haematol. 1991. 78. 3304-3309.

8. O ’Flaherty E., Sparrow R., Szer J. Bone marrow stromal function from patients after bone marrow transplantation // Bone Marrow Transplant. 1995. 15. 207-212.

9. Battiwalla M., Hematti P. Mesenchymal stem cells in hematopoietic stem cell transplantation // Cy-totherapy. 2009. 11. 5. 503—515.

10. Sergeevicheva V.V., Shevela E.Y., Sizikova S.A. et al. Autologous mesenchymal stromal cells of hemo-blastosis patients efficiently support hematopoietic recovery after stem cell transplantation // Cell. Therapy Transplant. 2010. 1. 4. 98-105.

11. Ghannam S., Bouffi C., Djouad F. et al. Immunosuppression by mesenchymal stem cells: mechanisms and clinical applications // Stem Cell Res. Ther. 2010. 1. 2.

12. Toubai T., Paczesny S., Shono Y. et al. Mesenchymal stem cells for treatment and prevention of graft-versus-host disease after allogeneic hematopoietic cell transplantation // Curr. Stem Cell Res. Ther. 2009. 4. 252-259.

13. Le Blanc K., Tammik L., Sundberg B. et al. Mesenchymal stem cells inhibit and stimulate mixed lymphocyte cultures and mitogenic responses independently of the major histocompatibility complex // Scand. J. Immunol. 2003. 57. 11-20.

14. Bocelli-Tyndall C., Bracci L., Schaeren S. et al. Human bone marrow mesenchymal stem cells and chondrocytes promote and/or suppress the in vitro proliferation of lymphocytes stimulated by interleukins 2, 7 and 15 // Ann. Rheum. Dis. 2009. 68. 1352-1359.

15. Koc O.N., Gerson S.L., Cooper B.W. et al. Rapid hematopoietic recovery after coinfusion of autologous blood stem cells and culture-expanded marrow mesenchymal stem cells in advanced breast cancer patients receiving high-dose chemotherapy // J. Clin. Oncol. 2000. 18. 307-316.

16. Nieto Y., Shpall E.J., McNiece I.K. et al. Prognostic analysis of early lymphocyte recovery in patients with advanced breast cancer receiving high-dose chemotherapy with an autologous hematopoietic progenitor cell transplant // Clin. Cancer Res. 2004. 10. 5076-5086.

17. Ferrandina G., Pierelli L., Perillo A. et al. Lymphocyte recovery in advanced ovarian cancer patients after high-dose chemotherapy and peripheral blood stem cell plus growth factor support: clinical implications // Clin. Cancer Res. 2003. 9. 195-200.

18. Itoi M., Tsukamoto N., Yoshida H., Amagai T. Mesenchymal cells are required for functional development of thymic epithelial cells // Int. Immunol. 2007. 19. 953-964.

19. Suniara R.K., Jenkinson E.J., Owen J.J. An essential role for thymic mesenchyme in early T cell development // J. Exp. Med. 2000. 191. 1051-1056.

EFFECT OF MESENCHYMAL STROMAL CELLS ON EARLY LYMPHOCYTE RECOVERY IN PATIENTS RECEIVING AUTOLOGOUS HEMATOPOIETIC STEM CELL TRANSPLANTATION FOR MALIGNANT LYMPHOMAS

Elena Removna CHERNYKH, Egor Vasiljevich BATOROV, Ekaterina Yakovlevna SHEVELA,

Nataljya Viktorovna PRONKINA, Vera Vasiljevna SERGEEVICHEVA, Andrey Viktorovich GILEVICH, Darjya Sergeevna BARANOVA, Alexandr Anatoljevich OSTANIN, Irina Valentinovna KRYUCHKOVA

Institute of Clinical Immunology SB RAMS 630099, Novosibirsk, Yadrintsevskaya st., 14

The influence of multipotent mesenchymal stromal cells (MMSC) on early lymphocyte recovery in patients receiving autologous hematopoietic stem cell transplantation (auto-HSCT) for malignant lymphomas has been investigated. Cotransplantation of MMSC in a mean dose of 0,16 x 106/kg was conducted in 65 patients with auto-HSCT. The control group included 61 patients that were related by age, sex, diagnosis, previous treatment, mobilization regimens and dose of transplanted CD34+ cells. Early lymphocyte recovery in MMSC+ group was shown to be revealed significantly frequently (in 71 vs 43 % cases). MMSC effect was more prominent in patients with lower doses of CD34+ cells (< 4,4 x 106/kg) and did not depend on absolute lymphocyte count in separation product. The possible mechanisms of MMSC effect has been discussed in conclusion.

Key words: lymphocyte reconstitution, mesenchymal stem cells, hematopoietic stem cell transplantation.

Chernykh E.R. — doctor of medical sciences, professor, head of the laboratory for cellular therapy, e-mail: ct_lab@mail.ru

Batorov E.V. — post-graduate student, e-mail: ct_lab@mail.ru

Shevela E.Ya. — candidate of medical sciences, senior researcher of the laboratory for cellular therapy, e-mail: ct_lab@mail.ru

Pronkina N.V. — candidate of biological sciences, head of the laboratory of clinical immunology,

physician of clinical and laboratory diagnostics, e-mail: ct_lab@mail.ru

Sergeevicheva V.V. — candidate of medical sciences, hematologist of the department

of hematology and bone marrow transplantation, e-mail: depsct@online.nsk.ru

Gilevich A.V. — candidate of medical sciences, head of the department of intensive care,

e-mail: depsct@online.nsk.ru

Baranova D.S. — hematologist of the department of hematology and bone marrow transplantation, e-mail: depsct@online.nsk.ru

Ostanin A.A. — doctor of medical sciences, professor, chief researcher, e-mail: ct_lab@mail.ru Kryuchkova I.V. — candidate of medical sciences, head of the department of hematology and bone marrow transplantation, e-mail: depsct@online.nsk.ru