СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКА

1. Способ получения гликозилированного белка в культуре клеток млекопитающего, причем способ включает стадии:
a) получения инокулята с подходящей концентрацией клеток во время роста посевного материала,
b) инокулирования инокулята с подходящей концентрацией клеток в производственный биореактор,
c) культивирования клеток в производственном биореакторе при подходящих условиях, где подходящее условие представляет собой температурное условие однофазного способа; и
d) получения гликозилированного белка из культуры клеток.
2. Способ по п. 1, где температура однофазного способа выбрана из диапазона от приблизительно 32 до приблизительно 37°C.
3. Способ по п. 1, где температура однофазного способа выбрана из диапазона от приблизительно 34 до приблизительно 37°C.
4. Способ по п. 2 или 3, где температура однофазного способа составляет приблизительно 33°C.
5. Способ по п. 2 или 3, где температура однофазного способа составляет приблизительно 34°C.
6. Способ по п. 2 или 3, где температура однофазного способа составляет приблизительно 35°C.
7. Способ по п. 2 или 3, где температура однофазного способа составляет приблизительно 36°C.
8. Способ по п. 1, где температура однофазного способа не характеризуется сдвигом температуры.
9. Способ по п. 1, где клетка млекопитающего выбрана из клетки CHO.
10. Способ по п. 9, где клетка CHO представляет собой клетку dhfr-CHO.
11. Способ по любому из предыдущих пп., где клетки млекопитающего культивируют в режиме с подпиткой в производственном биореакторе.
12. Способ по любому из предыдущих пп., где способ культивирования клеток характеризуется отсутствием разделенных фазы роста и фазы продуцирования.
13. Способ по п. 1, где подходящие условия дополнительно включают pH, выбранный от 6,7 до 7,4.
14. Способ по п. 13, где подходящие условия дополнительно включают pH, составляющий приблизительно 7.
15. Способ по п. 1, где подходящие условия дополнительно включают осмоляльность от приблизительно 250  до приблизительно 550 мосм/кг.
16. Способ по п. 15, где осмоляльность составляет приблизительно 270  .
17. Способ по любому из предыдущих пп., где клетки млекопитающего культивируют в среде, содержащей сыворотку, или среде, не содержащей сыворотку.
18. Способ по п. 17, где клетки млекопитающего культивируют в среде, не содержащей сыворотку.
19. Способ по любому из предыдущих пп., где клетки млекопитающего культивируют в среде, практически не содержащей алкановой кислоты или ее соли.
20. Способ по п. 19, где алкановая кислота или ее соль выбраны из масляной кислоты, маслянокислого натрия или дибутил-цАМФ.
21. Способ по п. 1, где подходящие условия дополнительно включают концентрацию растворенного кислорода от приблизительно 30 до приблизительно 70%.
6
6
22. Способ по п. 1, где подходящая концентрация инокулята выбрана из от приблизительно 4x10 до приблизительно 7x10 клеток/мл.
23. Способ по п. 1, где подходящую концентрацию инокулята получают по меньшей мере через 72 часа.
24. Способ по п. 1, где белок представляет собой гликозилированный белок, выбранный из слитых белков, и моноклональных антител, и их фрагмента.
25. Способ по п. 24, где слитый белок, и моноклональное антитело, и их фрагмент выбраны из абциксимаба; абатацепта; адалимумаба; абрилумаба; афутузумаба; афлиберцепта; алемтузумаба; алефацепта; алацизумаб-пегола; анакинры; арцитумомаба; атацицепта; атлизумаба; аторолимумаба; базиликсимаба; баминерцепта; бектумомаба; белимумаба; бесилесомаба; бевацизумаба; бициромаба; белатацепта; брентуксимаб-ведотина; бродалумаба; канакинумаба; капромаб-пендетила; катумаксомаба; цертолизумаб-пегола; цетуксимаба; кливатузумаб-тетраксетана; даклизумаба; деносумаба; экулизумаба; эдреколомаба; эфализумаба; эфунгумаба; элоктата; эртумаксомаба; этанерцепта; этарацизумаба; фанолесомаба; фарлетузумаба; фонтолизумаба; гемтузумаб-озогамицина; гирентуксимаба; голимумаба; ибритумомаб-тиуксетана; иговомаба; имциромаба; инфликсимаба; ипилимумаба; лабетузумаба; меполизумаба; мотавизумаба; муромонаб-CD3; натализумаба; нимотузумаба; нофетумомаб-мерпентана; обинутузумаба; офатумумаба; омализумаба; ореговомаба; паливизумаба; панитумумаба; пемтумомаба; пертузумаба; рамуцирумаба; ранибизумаба; раксибакумаба; ритуксимаба; рилонацепта; ровелизумаба; руплизумаба; сулесомаба; такатузумаб-тетраксетана; тефибaзумаба; тоцилизумаба; трастузумаба; адо-трастузумаб-эмтансина; тоситумомаба; TRBS07; устекинумаба; ведолизумаба; висилизумаба; вотумумаба; залутумумаба; занолимумаба.
26. Способ по п. 24 или 25, где слитый белок представляет собой этанерцепт.
27. Способ по п. 1, где при помощи условий культивирования поддерживают высокое количество жизнеспособных клеток.
6
6
28. Способ по п. 27, где количество жизнеспособных клеток выбрано из от приблизительно 5x10 до приблизительно 13x10 клеток/мл.
6
29. Способ по п. 28, где количество жизнеспособных клеток составляет 11x10 клеток/мл.
30. Способ по любому из предыдущих пп., при котором улучшают необходимую конформацию гликозилированных белков.
31. Способ по любому из предыдущих пп., при котором улучшают необходимую конформацию слитых белков TNFR-Fc, например этанерцепта.
32. Способ по п. 1, где клетки млекопитающего культивируют в производственном биореакторе в течение по меньшей мере от приблизительно 10 до приблизительно 13 дней.
33. Способ по п. 32, где клетки млекопитающего культивируют в производственном биореакторе в течение по меньшей мере 11 дней.
34. Способ получения слитого белка, и моноклонального антитела, и их фрагмента в культуре клеток млекопитающего, причем способ включает стадии:
a) получения инокулята с подходящей концентрацией клеток во время роста посевного материала;
b) инокулирования инокулята с подходящей концентрацией клеток в производственный биореактор;
c) культивирования клеток в производственном биореакторе при подходящих условиях, где подходящее условие представляет собой температурное условие однофазного способа; и
d) получения гликозилированного белка из культуры клеток,
где подходящими условиями являются:
i) температура однофазного способа, выбранная из от приблизительно 34 до приблизительно 37°C,
ii) значение pH, выбранное из от 6,7 до 7,4,
iii) осмоляльность от приблизительно 250 до приблизительно 550 мосм/кг.
35. Способ получения слитого белка, и моноклонального антитела, и их фрагмента в культуре клеток млекопитающего, причем способ включает стадии:
a) получения инокулята с подходящей концентрацией клеток во время роста посевного материала;
b) инокулирования инокулята с подходящей концентрацией клеток в производственный биореактор;
c) культивирования клеток в производственном биореакторе при подходящих условиях, где подходящее условие представляет собой температурное условие однофазного способа; и
d) получения гликозилированного белка из культуры клеток,
где подходящими условиями являются:
i) температура однофазного способа, выбранная из от приблизительно 34 до приблизительно 37°C,
ii) значение pH, выбранное из от 6,7 до 7,4,
iii) осмоляльность от приблизительно 250 до приблизительно 550 мосм/кг,
где среда практически не содержит алкановой кислоты или ее соли; и
где способ культивирования клеток характеризуется отсутствием разделенных фазы роста и фазы продуцирования.
36. Способ получения слитого белка TNFR-Fc в культуре клеток млекопитающего, причем способ включает стадии:
a) получения инокулята с подходящей концентрацией клеток во время роста посевного материала;
b) инокулирования инокулята с подходящей концентрацией клеток в производственный биореактор;
c) культивирования клеток в производственном биореакторе при подходящих условиях, где подходящее условие представляет собой температурное условие однофазного способа; и
d) получения гликозилированного белка из культуры клеток,
где подходящими условиями являются:
i) температура однофазного способа, выбранная из от приблизительно 34 до приблизительно 37°C,
ii) значение pH, выбранное из от 6,7 до 7,4,
iii) осмоляльность от приблизительно 250 до приблизительно 550 мосм/кг.
37. Способ по любому из предыдущих пп., где клетка выбрана из CHO DUKX-B11, CHO S, CHO K1 или CHO DG44.
38. Слитый белок или моноклональное антитело и их фрагмент, получаемые при помощи способа по любому из предыдущих пп.