СПОСОБЫ И МАТЕРИАЛЫ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СИМВАСТАТИНА И РОДСТВЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ

1. Способ получения симвастатина, включающий стадии:
(1) взаимодействия монаколина J; ацилтиоэфира, который отдает ацильную группу C8-гидроксильной группе монаколина J в присутствии ацилтрансферазы LovD; и ацилтрансферазы LovD; и
(2) региоселективного ацилирования C8-гидроксильной группы монаколина J ацилтрансферазой LovD, использующей ацильную группу ацилтиоэфира, с получением симвастатина.
in vitro
2. Способ по п.1, где симвастатин получают  в отсутствии выделенного организма.
3. Способ по п.1, где монаколин J; ацилтиоэфир и ацилтрансфераза LovD взаимодействуют в среде культивирования в присутствии выделенного организма, который продуцирует ацилтрансферазу LovD, и где дополнительно организм представляет собой Escherichia coli, Aspergillus terreus, Monascus ruber, Monascus purpureus, Monascus pilosus, Monascus vitreus, Monascus pubigerus, Candida cariosilognicola, Aspergillus oryzea, Doratomyces stemonitis, Paecilomyces virioti, Penicillum citrinum, Penicillin chrysogenum, Scopulariopsis brevicaulis или Trichoderma viride.
4. Способ по п.3, где выделенный организм представляет собой, по меньшей мере, один из:
(a) Aspergillus terreus, который экспрессирует полипептид LovD SEQ ID NO: 1;
(b) Aspergillus terreus, который не экспрессирует полипептид LovF SEQ ID NO: 3;
(c) Escherichia coli, которая экспрессирует полипептид LovD SEQ ID NO: 1; или
(d) Escherichia coli, которая не экспрессирует полипептид bioH SEQ ID NO: 4.
5. Способ по п.1, где ацилтрансфераза LovD имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.
6. Способ по п.1, где выбранный ацилтиоэфир обладает, по меньшей мере, одним из следующих свойств:
(a) является бутирил-тиоэфиром, N-ацетилцистаминтиоэфиром или метилтиогликолевым тиоэфиром;
(b) включает ацильную группу с цепью средней длины (C3-C6);
(c) способен проходить через мембраны клеток Escherichia coli или Aspergillus terreus, растущих в среде культивирования; или
(d) выбран из группы, состоящей из α-диметилбутирил-S-метил-меркаптопропионата (DMB-S-MMP), диметилбутирил-S-этилмеркаптопропионата (DMB-S-EMP) и диметилбутирил-S-метилтиогликолята (DMB-S-MTG) и диметилбутирил-S-метилмеркаптобутирата (DMB-S-MMB).
7. Способ по п.3, где ацилтиоэфир представляет собой α-диметилбутирил-S-метил-меркаптопропионат и где α-диметилбутирил-S-метил-меркаптопропионат присутствует в среде культивирования в диапазоне концентраций 1-100 мМ.
8. Способ по п.3, где монаколин J продуцируется выделенным организмом в среде культивирования.
9. Способ по п.3, где выделенный организм выращивают, по меньшей мере, при одном из следующих условий:
(a) при температуре в диапазоне 30-40°C,
(b) в течение периода времени, по меньшей мере, от 4 до, по меньшей мере, 48 ч,
(c) при pH 7-8; или
(d) в среде культивирования, включающей LB, F1 или TB среды.
10. Способ по п.1, дополнительно включающий очистку симвастатина, полученного указанным способом, посредством, по меньшей мере, одной стадии очистки, включающей:
(a) лизис клеток выделенного организма, присутствующего в смеси,
(b) центрифугирование,
(c) осаждение свободной кислотной формы симвастатина;
(d) превращение свободной кислотной формы симвастатина в соль симвастатина;
(e) фильтрацию; или
(f) высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ).
11. Способ по п.1, где способ:
(a) обеспечивает получение композиции веществ, включающей 0-1% монаколина J, который первоначально взаимодействовал с ацилтиоэфиром, который отдает ацильную группу C8-гидроксильной группе монаколина J в присутствии ацилтрансферазы LovD; и/или
(b) приводит к превращению, по меньшей мере, 95% монаколина J, добавленного к смеси, в симвастатин.
12. Композиция веществ, включающая:
монаколин J;
ацилтиоэфир, который отдает ацильную группу C8-гидроксильной группе монаколина J в присутствии ацилтрансферазы LovD;
ацилтрансферазу LovD; и
симвастатин.
13. Композиция по п.12, дополнительно включающая выделенный организм, где организм представляет собой Escherichia coli, Aspergillus terreus, Monascus ruber, Monascus purpureus, Monascus pilosus, Monascus vitreus, Monascus pubigerus, Candida cariosilognicola, Aspergillus oryzea, Doratomyces stemonitis, Paecilomyces virioti, Penicillum citrinum, Penicillin chrysogenum, Scopulariopsis brevicaulis или Trichoderma viride.
14. Композиция по п.13, где выделенный организм представляет собой, по меньшей мере, один из:
(a) Aspergillus terreus, который экспрессирует полипептид LovD SEQ ID NO: 1;
(b) Aspergillus terreus, который не экспрессирует полипептид LovF SEQ ID NO: 3;
(c) Escherichia coli, которая экспрессирует полипептид LovD SEQ ID NO: 1; или
(d) Escherichia coli, которая не экспрессирует полипептид bioH SEQ ID NO: 4.
15. Композиция по п.12, где ацилтиоэфир обладает, по меньшей мере, одним из следующих свойств:
(a) является бутирил-тиоэфиром, N-ацетилцистаминтиоэфиром или метилтиогликолевым тиоэфиром;
(b) включает ацильную группу с цепью средней длины (C3-C6);
(c) способен проходить через мембраны клеток Escherichia coli или Aspergillus terreus, растущих в среде культивирования; или
(d) выбран из группы, состоящей из α-диметилбутирил-S-метил-меркаптопропионата (DMB-S-MMP), диметилбутирил-S-этилмеркаптопропионата (DMB-S-EMP) и диметилбутирил-S-метилтиогликолята (DMB-S-MTG) и диметилбутирил-S-метилмеркаптобутирата (DMB-S-MMB).
16. Композиция по п.12, дополнительно включающая выделенный организм, трансформированный экспрессионным вектором, кодирующим LovD Aspergillus terreus (SEQ ID NO: 1).
17. Композиция по п.12, где композиция дополнительно включает ловастатин, причем количество симвастатина в композиции больше, чем количество ловастатина в композиции.
18. Композиция веществ, включающая:
гидролизованный правастатин в форме тетраола;
ацилтиоэфир, который отдает ацильную группу C8-гидроксильной группе гидролизованного правастатина в форме тетраола в присутствии ацилтрансферазы LovD;
ацилтрансферазу LovD; и
хувастатин.
19. Способ получения хувастатина, включающий стадии:
(1) взаимодействия гидролизованного правастатина в форме тетраола; ацилтиоэфира, который отдает ацильную группу C8-гидроксильной группе гидролизованного правастатина в форме тетраола в присутствии ацилтрансферазы LovD; и ацилтрансферазы LovD; и
(2) региоселективного ацилирования C8-гидроксильной группы гидролизованного правастатина в форме тетраола ацилтрансферазой LovD, использующей ацильную группу ацилтиоэфира, с получением хувастатина.
20. Способ получения симвастатина, включающий стадии:
(1) взаимодействия ловастатина; ацилтиоэфира, который отдает ацильную группу C8-гидроксильной группе монаколина J в присутствии ацилтрансферазы LovD; и ацилтрансферазы LovD; и
(2) воздействия ацилтрансферазы LovD, приводящее к:
(a) гидролизу ловастатина до монаколина J; и
(b) использованию ацильной группы ацилтиоэфира для региоселективного ацилирования C8-гидроксильной группе монаколина J;
с получением симвастатина.
21. Способ получения композиции веществ, включающей симвастатин или хувастатин, согласно настоящему описанию и примерам.