СПОСОБ СИНТЕЗА КОНЪЮГАТОВ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ (GAG) С БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ МОЛЕКУЛАМИ, ПОЛИМЕРНЫЕ КОНЪЮГАТЫ И ИХ СООТВЕТСТВУЮЩИЕ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Способ синтеза конъюгата гликозаминогликанов (GAG) с биологически активными молекулами, включающий следующие стадии:
a) модификация GAG по меньшей мере одной альдегидной группой (CHO) путем взаимодействия GAG со спейсерной молекулой (SP), где указанная спейсерная молекула включает в качестве первой функциональной группы одну или несколько альдегидных групп (SP-CHO), причем указанные альдегидные группы (SP-CHO) необязательно защищены, и в качестве второй функциональной группы нуклеофильную группу, подходящую для конъюгации с GAG;
a1) гидролиз активированного промежуточного соединения с помощью водных растворов кислот в случае, когда указанные одна или несколько альдегидных групп защищены;
b) взаимодействие аддукта, полученного на стадии a) или a1) по меньшей мере с одной биологически активной молекулой (TA), характеризующейся тем, что она включает функциональную группу, способную к взаимодействию с альдегидной группой и выбранной из группы, включающей полипептиды и белки, нуклеиновые кислоты и терапевтические средства, содержащие по меньшей мере одну аминогруппу, не принципиальную для биологического функционирования.
2. Способ по п.1, где указанная защита альдегидной группы осуществляется с использованием гемиацеталей или ацеталей посредством взаимодействия альдегидов с алифатическими или арилалифатическими спиртами или диолами, выбранными из метанола, этанола, н-пропанола, изопропанола, н-бутанола, втор-бутанола, трет-бутанола, изобутанола, этиленгликоля, пропиленгликоля, 1,3-пропандиола, 1,4-бутандиола, с образованием выделяемых ацеталей.
3. Способ по любому из пп.1 и 2, где указанная спейсерная молекула SP-(CHO) представляет собой аминоальдегид, предпочтительно защищенный, в виде ацеталя.
4. Способ по п.1, где стадию a1) гидролиза активированного промежуточного соединения с помощью водных растворов кислот для высвобождения альдегидной группы осуществляют при pH в интервале от 1,5 до 3,0, предпочтительно при pH в интервале от 2,0 до 2,5, при температуре в интервале от 25 до 65°C, предпочтительно от 40 до 60°C, в течение по меньшей мере 30 мин.
5. Способ по п.1, где нуклеофильная группа на стадии a) представляет собой аминогруппу в свободной форме или в форме соли или представляет собой спиртовую группу.
6. Способ по п.1, где функциональная группа биологически активной молекулы, способной к взаимодействию с альдегидами, представляет собой аминогруппу, которая может присутствовать естественным образом или может быть введена с помощью синтеза.
7. Способ по п.1, где указанный GAG выбран из группы, состоящей из гиалуроновой кислоты (HA), хондроитинсульфата, дерматансульфата, кератансульфата, гепарина, геперансульфата или их производных, выбранных из солей с щелочными или щелочноземельными металлами, выбранными из натрия, калия, магния, кальция; из четвертичных аммониевых солей; эфиров карбоновых кислот, O-эфиров; амидов, перкарбоксилированных производных; O-сульфатированных производных; N-деацетилированных производных; N-сульфатированных производных.
8. Способ по п.1, где биологически активную молекулу, представляющую собой полипептид или белок, выбирают из группы, состоящей из
иммуномодуляторов, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из интерферонов типа I, интерферонов типа II, интерферонов типа III;
факторов роста, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из эритропоэтинов и из молекул, в целом идентифицированных как ESA, факторов, стимулирующих эритропоэз, таких как факторы GM-CSF и G-CSF, факторы роста для костей и хрящей;
цитокинов, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из IL2, TNF и их рецепторов-антагонистов вместе с их растворимыми рецепторами, IL1-ra, и из растворимых рецепторов провоспалительных цитокинов;
гликопротеинов, предпочтительно лубрицина;
ферментов, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из супероксиддисмутазы, РНКазы и глюкоцереброзидазы;
антител;
гормонов, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из кальцитонина, инсулина и его аналогов, и гормона роста.
9. Способ по п.1, где биологически активная молекула, которая представляет собой терапевтическое средство, содержащее аминогруппы, не принципиальные для биологического функционирования, выбрана из группы, состоящей из
противоопухолевых лекарственных средств, выбранных из группы, состоящей из таксанов, алкалоидов барвинка, камптотецинов, замещенных мочевин; комплексов платины, золота, серебра или других металлов; метотрексата, триметрексата, пеметрекседа, тетрагидрофолата; аналогов пиримидина, цитидина, пурина; антибиотиков для лечения онкологических заболеваний и антрацендионов;
противовирусных средств и антибиотиков;
протеазных и полимеразных ингибиторов;
противовоспалительных, анальгезирующих, анестетических, обезболивающих лекарственных средств;
наркотиков;
стероидов;
миноксидила.
10. Способ по п.1, где биологически активная молекула, представляющая собой нуклеиновую кислоту, выбрана из группы, состоящей из малой интерферирующей РНК, микроРНК, антисмысловой РНК.
11. Способ по п.1, включающий следующие стадии:
a) модификация HA или соли HA, растворимой в апротонном органическом полярном растворителе, по меньшей мере одной альдегидной группой (CHO), путем взаимодействия HA с защищенными аминоальдегидами в водной среде в EDC + NHS с образованием амида или в апротонном растворителе;
a1) гидролиз промежуточных соединений стадии a) для высвобождения альдегидной группы, осуществляемый в фосфорной кислоте при pH в интервале от 1,5 до 3,0, предпочтительно при pH в интервале от 2,0 до 2,5, в температурном интервале от 25 до 65°C, предпочтительно от 40 до 60°C, в течение по меньшей мере 30 мин;
b) взаимодействие промежуточного соединения, полученного на стадии a) или a1) с биологически активной молекулой (TA), характеризующейся тем, что она включает функциональную группу, способную к взаимодействию с альдегидной группой.
12. Способ по п.11, где гиалуроновая кислота или ее производные выбраны из гиалуроновой кислоты, образующей соль с органическими и/или неорганическими основаниями; из эфиров гиалуроновой кислоты со спиртами алифатического, арилалифатического, циклоалифатического, ароматического, циклического и гетероциклического ряда с процентом этерификации в интервале от 20 до 80%; из амидов HA с аминами алифатического, арилалифатического, циклоалифатического, ароматического, циклического и гетероциклического ряда с процентом амидирования в интервале от 0,1 до 50%; O-сульфатированных производных гиалуроновой кислоты вплоть до четвертой степени сульфатирования; внутренних эфиров гиалуроновой кислоты с процентом этерификации ниже чем 20%; деацитилированных соединений гиалуроновой кислоты с процентом деацитилирования 0,1-30%; перкарбоксилированных производных гиалуроновой кислоты со степенью перкарбоксилирования 0,1-100%, предпочтительно от 25 до 75%.
13. Способ по п.11 или 12, где биологически активная молекула представляет собой белок или полипептид и функциональная группа представляет собой аминогруппу.
14. Способ по п.13, где белок или полипептид добавляют к промежуточному продукту, полученному на стадии a) или a1) в восстанавливающих условиях с применением цианоборгидрида натрия, или алюмогидрида лития, или боргидрида натрия.
15. Способ по п.11, где полипептид или белок выбирают из группы, состоящей из интерферонов, эритропоэтинов, факторов, стимулирующих гемопоэз, факторов роста кости/хряща, гормона роста, лубрицина, инсулина, кальцитонина, IL1-ra.
16. Способ по п.11, где соль HA представляет собой HATBA.
17. Конъюгат гликозаминогликанов (GAG) с биологически активными молекулами, полученный способом по пп.1-16.
18. Конъюгат гиалуроновой кислоты (HA) с биологически активными молекулами, полученный способом по пп.11-16.
19. Конъюгат по п.18, выбранный из группы, состоящей из HA-IFN, HA-EPO, HA-GCSF, HA-факторы роста кости/хряща, HA-hGH, HA-лубрицин, HA-инсулин, HA-sCT, HA-IL1-ra.
20. Конъюгат по любому из пп.17-19 для применения в области медицины.
21. Применение конъюгата по п.20 для получения лекарственного средства, обладающего противовирусным или противоопухолевым действием.
22. Применение по п.21, где указанным конъюгатом является HA-IFN.
23. Фармацевтическая композиция, включающая в качестве активного компонента конъюгат, определенный по любому из пп.17-20 в качестве активного компонента, в сочетании с одним или несколькими фармакологически приемлемыми вспомогательными веществами.
24. Фармацевтическая композиция по п.23 для перорального, ректального, внутривагинального, подъязычного, внутриглазного применения; или в форме растворов для инъекции с помощью внутрикожной, внутривенной, внутримышечной, подкожной, внутриартериальной, внутриоболочечной, внутрисердечной, внутрисиновиальной, внутрисуставной, внутрибрюшинной, внутрипузырной инъекции, или фармацевтическая композиция, составленная для местного применения, такая как гели, кремы, мази, пены, сухие порошки, спреи, кожные или чрескожные пластыри.
25. Фармацевтическая композиция по п.24, составленная в форме растворов для внутривенных инъекций для печеночной и/или легочной локализации или в форме систем с контролируемым высвобождением для подкожного, и/или внутрикожного, и/или внутрисуставного введения.
26. Биоматериал, характеризующийся матриксом, включающим конъюгат, определенный по любому из пп.17-19.