ФЕРМЕНТАЦИОННЫЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИФТЕРИЙНОГО ТОКСИНА

2
1. Способ ферментации, включающий ферментационную стадию выращивания штамма Corynebacterium diphtheriae в среде в ферментаторе при условиях перемешивания, достаточных для поддержания гомогенной культуры, и ограниченной аэрации, так что парциальное давление кислорода (pO) в культуре падает до уровня менее 4% на протяжении большей части ферментационной стадии.
2
2. Способ ферментации по п.1, где pO падает до уровня, близкого к нулю, на протяжении большей части ферментационной стадии.
2
2
3. Способ по п.1 или 2, где pO менее 4% поддерживают с момента времени, когда Corynebacterium diphtheriae выращена до плотности, достаточной для того, чтобы pO упало до уровня менее 4% вследствие быстрого потребления кислорода, до завершения ферментационной стадии.
4. Способ по п.1, где ферментационную стадию проводят при постоянном значении объемного коэффициента массопередачи кислорода (KLa).
5. Способ по п.1, где ферментационную стадию проводят при постоянной скорости перемешивания и скорости аэрации.
6. Способ по п.1, где ферментационную стадию проводят при условиях варьирующего KLa.
-1
7. Способ по п.1, где ферментационную стадию проводят при KLa 10-50 ч.
-1
8. Способ по п.1, где ферментационную стадию осуществляют в 10-30-литровом ферментаторе и при KLa 10-30 ч.
-1
9. Способ по п.1, где ферментационную стадию осуществляют в 100-250-литровом ферментаторе при KLa 30-60 ч.
-1
10. Способ по п.1, где ферментационную стадию осуществляют в 250-800-литровом ферментаторе при KLa 60-150 ч.
11. Способ по п.8, где ферментационную стадию осуществляют с использованием потока сжатого воздуха 1-5 л/мин и со скоростью перемешивания 200-400 об/мин.
12. Способ по п.9, где ферментационную стадию осуществляют с использованием потока сжатого воздуха 15-25 л/мин и со скоростью перемешивания 150-250 об/мин.
13. Способ по п.1, где среда представляет собой CY, SOC или аналогичную среду, и рН в ферментаторе поддерживают при значении от 7,0 до 7,8 интенсивностью аэрации без необходимости добавления кислоты или основания.
14. Способ по п.1, где штамм Corynebacterium diphtheria продуцирует дифтерийный токсин или его мутант, в частности CRM197.
15. Способ по п.1, где штамм Corynebacterium diphtheria представляет собой АТСС39255.
16. Способ по п.1, где данный способ является достаточно устойчивым к присутствию солей железа в среде, так что перед применением не требуется обработка среды для удаления железа.
-1
17. Способ по п.1, где среда содержит 10-4000 млрд железа.
18. Способ изготовления препарата антигена С.diphtheriae, включающий стадии проведения способа ферментации по любому из пп.1-17 и выделения антигена С.diphtheriae из культуры.
19. Способ по п.18, где антиген С.diphtheriae представляет собой дифтерийный токсин или его фрагмент или мутант (например CRM197).
20. Способ по любому из пп.18 и 19, включающий стадию добавления одного или более чем одного дополнительного антигена(ов) к антигену С.diphtheriae.
21. Способ по п.20, дополнительно включающий стадию конъюгации дифтерийного токсина или его фрагмента или мутанта с одним или более чем одним дополнительным антигеном(ами).
22. Способ изготовления фармацевтической композиции, включающий стадию смешивания антигена или дифтерийного токсина или его мутанта (либо конъюгированного, либо неконъюгированного), полученных способом по любому из пп.18-21, с фармацевтически приемлемым носителем.
23. Применение антигена, дифтерийного токсина или его мутанта, полученных способом по любому из пп.18-21, в изготовлении лекарственного средства для лечения или предупреждения бактериального заболевания.
24. Способ предупреждения или лечения бактериальной инфекции, включающий введение пациенту фармацевтической композиции, полученной способом по п.22.