ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИЙ АНТГЕЛЬМИНТНЫЙ ПРЕПАРАТ
IMMUNOMETABOLIC ANTHELMINTIC MEDICATION

Изобретение относится к ветеринарии, в частности, к ветеринарной иммунологии, гельминтологии и гепатологии.
В настоящее время приобретенные иммунодефициты и нарушения обменных процессов являются актуальнейшими проблемами ветеринарной и гуманной медицины. Эти патологии тесно связаны между собой и зачастую обусловлены токсикозами алиментарного, инфекционного и инвазионного происхождения.
В последнее время ведется интенсивный поиск средств для стимулирования иммунной системы и метаболических процессов при разного генеза патофизиологических состояниях. Это, как правило, комплексные препараты.
Задачей настоящего изобретения является разработка комплексного препарата, обладающего иммунометаболическим и противонематозным действием, введение которого вызывало бы системный лечебно-профилактический эффект, направленный на нормализацию обменных и иммунных процессов, а также гепатопротекторной и антгельминтной активностью.
В качестве наиболее близкого аналога нами взят комплексный препарат для лечения гепатоза животных (патент РФ № 2200547, 2003 г.). Данный препарат содержит в своем составе аминокислоту L-аргинин, нуклеинат натрия и раствор Хенкса. Препарат оказывает выраженное иммуностимулирующее действие на Т-систему иммунитета и обеспечивает восстановление репаративных процессов в печени при инвазионном гепатозе. Однако препарат не обладает антгельминтной активностью и недостаточно эффективен при токсикозах и гепатозах.
В качестве прототипа взят антгельминтный комплексный препарат против нематодозов животных (патент РФ №2200548, 2003 г.). Данный препарат включает в своем составе антгельминтик нилверм (на основе левамизола), нуклеинат натрия - иммуномодулятор, аминокислоту L-аргинин и в качестве растворителя, раствор Хенкса.
Данный препарат обеспечивает высокую антгельминтную активность. Однако, как свидетельствуют наблюдения, он недостаточно эффективен при токсикозах, гепатозах и обладает побочным действием на организм животных.
Для усиления гепатопротекторной активности в состав заявляемого препарата была включена янтарная кислота.
Янтарная кислота (ЯК) является мощным стимулятором обмена веществ живой клетки. Объектом ее действия являются клетки и ткани, находящиеся в состоянии возбуждения или патологически измененные. Практически при всех патофизиологических состояниях ЯК и ее соли дают нетипично высокий лечебный эффект. Положительное влияние ЯК на организм обнаруживается при относительно низких дозах - 0,5-1 мг/кг массы тела.
В настоящее время ЯК активно используется для получения лекарственных препаратов с улучшенными фармакологическими свойствами, в клинике оперативного лечения токсикозов и гепатитов разного генеза.
В качестве антгельминтика и иммуномодулятора в состав комплексного препарата включен левамизол.
Левамизол - высокоэффективный антгельминтик и иммуномодулятор преимущественно клеточной системы иммунитета. Однако обладает выраженным побочным, преимущественно судорожным, действием на организм, в связи с чем его неохотно используют в клинике лечения больных животных.
Предложенный иммунометаболический противонематозный препарат в качестве антгельминтика и иммуностимулятора содержит левамизол, а в качестве метаболика - янтарную кислоту при рН 4-4,5, при этом компоненты, входящие в его состав, взяты в следующем соотношении, мас.%:
Левамизол - 7,5
Янтарная кислота - 1,0
Вода - Остальное
Получили комплексный препарат путем добавления в стандартный раствор левамизола (75 мг/мл - действующего вещества), порошка янтарной кислоты - 10 мг/ мл. При нагревании до 38-40°С и постоянном перемешивании янтарная кислота растворилась, не изменив физикохимических свойств стандартного раствора. Добавлением 10% раствора гидроокиси натрия довели рН до исходной величины, равной 4-4,5. Полученный препарат расфасовали по флаконам емкостью 50,0 мл и подвергли стерилизации автоклавированием в режиме 1-1,1 атм. в течение 20 минут. Стерилизация автоклавированием не изменила физико-химических и антгельминтных свойств комплексного препарата.
Полученный комплексный иммунометаболический препарат представляет собой прозрачный бесцветный стерильный раствор. Качественный и количественный состав предлагаемого препарата, по сравнению со стандартным раствором левамизола и прототипом, позволяет выраженно снизить токсичность антгельминтика - иммуностимулятора левамизола, обеспечить высокий гепатопротекторный, иммунометаболический и противонематозный эффект. Качественный и количественный состав предлагаемого препарата обеспечивает достижение синергетического эффекта, что иллюстрируется примерами его экспериментального испытания.
Используя стандартный раствор левамизола с активностью 75 мг/мл в его состав ввели янтарную кислоту в количестве 10, 20 и 30 мг/мл. После чего были изготовлены экспериментальные растворы с концентрацией 5, 7,5 и 10,0 предельных терапевтических доз для мышей массой 20 г. Аналогично были приготовлены разведения левамизола без янтарной кислоты (контроль).
Пример 1. Оценка противосудорожного и летального эффекта. Опыты провели на белых мышах массой 19-21 г. В первой серии опытов опытной группе мышей (n=5) внутрибрюшинно в объеме 0,25 мл ввели комплексный состав левамизола с янтарной кислотой, контрольной группе мышей (n=5) аналогично ввели стандартный раствор левамизола в объеме 0, 24 мл. Спустя 2-3 минуты у всех контрольных мышей наблюдали бурно выраженные судороги. Все контрольные мыши погибли в течении 3-5 минут после введения левамизола. Напротив, у мышей опытной группы развитие судорог и гибель мышей наблюдали спустя 10-15 минут.
Практически аналогичные данные были получены на группах мышей, которым вводился раствор левамизола с активностью 7,5 и 5 терапевтических доз. Результаты сравнительного испытания комплексного состава левамизола с янтарной кислотой и стандартного раствора левамизола представлены в таблице 1.
Таким образом, введение в состав стандартного раствора левамизола 1% янтарной кислоты обеспечило выраженное снижение противосудорожной активности. Следует отметить, что в сериях опытов на белых мышах включение в состав стандартного раствора левамизола янтарной кислоты 20 и 30 мг/мл не обеспечивало улучшение фармакологических свойств препарата. Таким образом включение в состав стандартного раствора левамизола ЯК в количестве 1% (10 мг/мл) является наиболее рациональным, позволяющем обеспечить выраженный эффект снижения токсичности левамизола.
Пример 2. Изучение иммуностимулирующего и метаболического действия комплексного препарата провели на поросятах-гипотрофиках 25-30 дневного возраста. Опытной группе поросят (n=5) внутримышечно инъецировали комплексный препарат (левамизол + ЯК) в объеме 1,0 мл. Контрольной группе (n=5) аналогично ввели стандартный раствор левамизола. Спустя 10-15 минут у всех поросят контрольной группы были отмечены выраженные признаки нервного возбуждения, позывы на рвоту и рвота. Признаки возбуждения проявлялись в течение часа. Поросята опытной группы хорошо перенесли инъекции препарата. Побочного действия не отмечено.
Контрольные исследования влияния препаратов на иммунобиохимический статус поросят провели на 5 и 14 сутки. Результаты иммунобиохимических исследований представлены в таблице 2.
Пример 3. Изучение гепатопротекторной активности предлагаемого комплексного препарата провели на коровах в период регистрации у них биохимических нарушений, свойственных заболеванию гепатитом. В качестве сравнения использовали стандартный раствор левамизола и опытной образец препарата, приготовленного согласно описанию в изобретении № 2200547 (препарат для лечения гепатоза животных).
По результатам биохимических и клинических исследований было отобрано 20 коров с симптомокомплексом гепатодистрофии, из которых сформировали 4 подопытных группы, по 5 особей в каждой. Коровам первой группы однократно в объеме 10 мл внутримышечно ввели левамизол + ЯК; животным второй группы - в аналогичном объеме левамизол, коровам третьей группы - препарат для лечения гепатоза (аналог), коровам четвертой группы - физиологический раствор - 10,0 мл.
Таблица 3
Сравнительная оценка влияния комплексного препарата левамизол + янтарная кислота, левамизола и препарата для лечения гепатоза на некоторые биохимические показатели крови коров при гепатозе
показатели
препараты
левамизол + ЯК
левамизол
препарат для лечения гепатоза
физиологический раствор
Белок, г/л
до введения
9,75±0,53
9,52±0,84
9,28±1,22
9,27±0,48
через 7 дней
8,12±0,75
9,96±1,12
8,74±0,82
9,15±0,62
через 14 дней
8,10±0,84
9,84±0,64
8,96±1,15
9,28±0,56
Резервная щелочность, мг %
до введения
32,62±7,14
33,63±5,72
32,28±6,14
38,74±6,21
через 7 дней
49,32±5,41
32,92±6,14
39,12±5,38
39,62±7,14
через 14 дней
46,23±4,35
31,78±5,46
36,21±4,68
37,39±5,12
Кетоновые тела, мг %
до введения
15,22±1,75
14,37±2,14
15,63±1,24
14,38±1,76
через 7 дней
7,45±1,52
15,14±1,28
10,46±1,32
14,52±1,84
через 14 дней
8,14±2,37
15,26±1,36
13,64±1,56
14,75±1,82
Кальций, мг %
до введения
7,52±0,36
7,48±0,32
7,22±0,54
7,17±0,22
через 7 дней
9,88±0,14
7,44±0,27
7,36±0,22
7,19±0,17
через 14 дней
9,54±0,28
7,32±0,18
7,26±0,31
7,14±0,36
Фосфор, мг %
до введения
7,46±0,52
7,35±0,68
7,28±0,44
7,52±0,22
через 7 дней
5,34±0,48
7,42±0,36
7,25±0,37
7,49±0,48
через 14 дней
5,32±0,76
7,84±0,22
7,37±0,23
7,48±0,56
Общие липиды, г/л
до введения
2,34±0,12
2,36±0,04
2,52±0,06
2,68±0,08
через 7 дней
4,48±0,10
2,33±0,06
3,88±0,05
2,46±0,07
через 14 дней
4,29±0,08
2,35±0,07
3,62±0,04
2,45±0,04
Холестирин, моль/л
до введения
1,48±0,12
1,52±0,10
1,46±0,15
1,52±0,14
через 7 дней
3,06±0,14
1,44±0,06
2,85±0,22
1,48±0,16
через 14 дней
3,02±0,18
1,45±0,11
2,78±0,18
1,52±0,12
Глюкоза, мг %
до введения
32,36±5,18
32,48±6,02
34,27±5,94
34,26±5,07
через 7 дней
48,54±4,37
31,74±5,96
39,82±5,78
35,18±4,76
через 14 дней
46,28±4,29
32,12±5,48
40,15±4,84
35,22±5,84
Таким образом, применение левамизола + ЯК оказало более выраженное повышение функциональной активности печени, что обусловило: - снижение уровня котоновых тел (устранение кетоза); - повышение резервной щелочности (устранение ацидоза); - нормализацию содержания кальция и фосфора (перевод антагонистического в синергетическое взаимодействие микроэлементов); - нормализацию белкового обмена и стимуляцию углеводного обмена.
Нормализация биохимических показателей оказала позитивное воздействие на клинический статус животных (исчезла болезненность при пальпации печени, значительно улучшился аппетит и повысилась молочная продуктивность).
Пример 4. Изучение антгельминтной активности. Опыт проведен на поросятах 2-2,5 месячного возраста, спонтанно инвазированных аскаридами и трихоцефалюсами. Из подопытных поросят были сформированы три подопытные группы. Животным первой группы внутримышечно инъецировали предложенный препарат в дозе 1 мл на 10 кг массы тела (данная доза рекомендована для стандартного раствора левамизола). Поросятам второй группы инъецировался стандартный раствор левамизола в аналогичной дозе. Животным третьей группы применяли антгельминтный препарат на основе нилверма (левамизола), изготовленного согласно описанию изобретения № 2200548 (прототип).
При клиническом наблюдении за подопытными животными установлено, что в ответ на введение стандартного раствора левамизола, спустя 20-30 минут у всех животных стали проявляться выраженные симптомы нервного возбуждения и рвота. У поросят 3 группы, которым вводился антгельминтный препарат (прототип), также отмечены признаки возбуждения, а у некоторых отмечалась и рвота. У поросят первой группы признаков возбуждения не обнаружено. Это свидетельствовало о том, что включение ЯК в состав препарата позволило выражено снизить токсическое действие левамизола на нервную систему организма животных.
Оценку антгельминтной активности провели по результатам копрологического исследования на 18 сутки после введения препаратов, результаты которых отражены в таблицах 4 и 5.
Таким образом, на основании проведенных экспериментальных исследований следует, что комплексный препарат на основе антгельминтика-иммуномодулятора левамизола и метаболика-янтарной кислоты выражено снижает токсический эффект на организм животных и обеспечивает более высокую иммунометаболическую, гепатопротектную, антгельминтную активность по отношению к стандартному раствору левамизола, аналогу и прототипу. Рекомендовано парентеральное введение в дозе 1 мл на 10 кг массы тела животного.