СПОСОБ ХРАНЕНИЯ ПЛАЗМЫ КРОВИ, СОДЕРЖАЩЕЙ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ВЕЩЕСТВА С НЕСТАБИЛЬНЫМИ ФЕНОЛЬНЫМИ ГИДРОКСИЛАМИ
METHOD FOR STORAGE OF BLOOD PLASMA CONTAINING DRUGS WITH UNSTABLE PHENOLIC HYDROXILES

Изобретение относится к фармации, а именно к фармацевтической химии.
Одним из важнейших направлений фармацевтических разработок является создание воспроизведенных препаратов, не уступающих по показателям качества оригинальным патентованным лекарственным препаратам. Для подтверждения биоэквивалентности дженерика необходимо проведение исследований сравнительной фармакокинетики. Одной из наиболее сложных аналитических задач является изучение фармакокинетики веществ, содержащих нестабильные функциональные группы, способные разрушаться на различных этапах: отбор крови, хранение, замораживание и размораживание образцов, выполнение аналитических процедур. Примером таких функциональных групп являются фенольные гидроксилы, легко подвергающиеся окислительным процессам. Причем чем больше в структуре молекулы препарата данных групп, тем выше ее нестабильность. Согласно требованиям международной нормативной документации, 5-10% образцов, полученных от добровольцев, после окончания исследования необходимо подвергать повторному анализу. В связи с этим большое значение имеет обеспечение возможности работы с плазмой крови, содержащие данные лекарственные вещества через длительный промежуток времени после отбора.
Известен способ хранения плазмы крови, содержащей лекарственные вещества, при комнатной температуре без применения специального оборудования. Недостатками данного способа являются короткий срок хранения плазмы, отсутствие возможности измерения концентрации лекарственных веществ через длительное время после отбора крови (Guideline on bioanalytical method validation, EMEA, 192217, 2009).
Наиболее близким аналогом (прототипом) предлагаемого решения является способ, заключающийся в том, что плазму крови, полученную от пациента, подвергают заморозке до температуры не выше -20°C в морозильной камере. Однако данный способ имеет недостаток: отсутствует возможность измерения концентрации веществ, содержащих нестабильные фенольные гидроксилы, через длительное время после отбора крови вследствие их разложения (А.Н. Миронов (ред.). Руководство по экспертизе лекарственных средств, т. 1, Москва, 2013).
Цель предлагаемого способа - увеличение времени хранения плазмы.
Поставленная цель достигается тем, что перед заморозкой к плазме добавляют водный раствор стабилизатора, в состав которого входят аскорбиновая кислота в концентрации 50-55 мг/мл, натрия сульфит - 2-4 мг/мл, натрия гидрокарбонат - 23-25 мг/мл из расчета 0,2 мл раствора стабилизатора на 1 мл плазмы (т.е. 1 объемная часть водного раствора стабилизатора на 5 объемных частей плазмы).
Новизна способа заключается в добавлении к плазме перед заморозкой водного раствора стабилизатора, в состав которого входят аскорбиновая кислота в концентрации 50-55 мг/мл, натрия сульфит - 2-4 мг/мл, натрия гидрокарбонат - 23-25 мг/мл из расчета 0,2 мл раствора стабилизатора на 1 мл плазмы.
Технические решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого способа, не выявлены, что позволяет сделать вывод о соответствии предлагаемого способа критерию «изобретательский уровень».
Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.
У пациента, получающего лекарственные вещества, в состав которых входят нестабильные фенольные гидроксилы, осуществляют забор крови, путем центрифугирования отделяют плазму. Затем к плазме вливают водный раствор стабилизатора, который содержит аскорбиновую кислоту от 5,0 до 5,5 г, натрия гидрокарбонат от 2,3 до 2,5 г, натрия сульфит от 0,2 до 0,4 г и деионизированную воду, добавленную до 100 мл раствора. Этот раствор добавляют в плазму из расчета 0,2 мл раствора стабилизатора на 1 мл плазмы (т.е. 1 объемная часть водного раствора стабилизатора на 5 объемных частей плазмы). После этого плазму помещают в холодильную камеру при температуре не выше -20°C.
Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Пациентка А., 28 лет, с диагнозом гипертоническая болезнь, принимала препарат «Допегит», содержащий метилдопу в дозировке 250 мг по 1 таблетке 2 раза в день. Данное лекарственное вещество содержит химически нестабильные фенольные гидроксилы. Для проведения терапевтического лекарственного мониторинга концентрации метилдопы в крови у пациентки была взята кровь из вены предплечья через установленный катетер спустя 4 часа после приема таблетки. Сразу после отбора из крови путем центрифугирования была получена плазма. Затем к части полученной плазмы добавляли водный раствор стабилизатора, содержащий аскорбиновую кислоту в концентрации 53 мг/мл, натрия сульфит - 3 мг/мл, натрия гидрокарбонат - 24 мг/мл из расчета 0,2 мл раствора стабилизатора на 1 мл плазмы и перемешивали. В аликвоте полученной смеси, а также в аликвоте плазмы без стабилизатора сразу определяли концентрацию метилдопы. Затем часть полученной смеси и часть нестабилизированной плазмы оставляли хранится при комнатной температуре, другую часть замораживали до температуры не выше -20°C. Через определенные промежутки времени из данных образцов отбирались аликвоты и в них проводилось измерение концентрации метилдопы. Расчет относительной концентрации метилдопы проводили по формуле:
отн
кон
нач
отн
кон
нач
С=С⋅100%/С, где С - относительная концентрация метилдопы, С - концентрация метилдопы после определенного времени хранения образца, С - концентрация метилдопы сразу после приготовления стабилизированной смеси или в нативной плазме. Полученные данные представлены в таблице 1.
Из данных, приведенных в таблице 1, видно, что без добавления стабилизатора метилдопа разлагается: при комнатной температуре окисляется 70,1% от исходной концентрации лекарственного вещества, при температуре -20°C - 22,7%, что не укладывается в критерии приемлемости (концентрация должна быть в диапазоне 85-115% от исходной). При добавлении раствора стабилизатора к плазме концентрация метилдопы укладывалась в данный диапазон.
Пример 2. Пациентка А., 23 лет, с диагнозом гипертоническая болезнь, принимала препарат «Допегит», содержащий метилдопу в дозировке 250 мг по 1 таблетке 3 раза в день. Для проведения терапевтического лекарственного мониторинга концентрации метилдопы в крови у пациентки была взята кровь из вены предплечья через установленный катетер спустя 3 часа после приема таблетки. Сразу после отбора из крови путем центрифугирования была получена плазма. Затем к части полученной плазмы был добавлен водный раствор стабилизатора, содержащий аскорбиновую кислоту в концентрации 50 мг/мл, натрия сульфит - 2 мг/мл, натрия гидрокарбонат - 23 мг/мл (раствор 1), из расчета 0,2 мл раствора стабилизатора на 1 мл плазмы, к другой части был добавлен водный раствор стабилизатора, содержащий аскорбиновую кислоту в концентрации 55 мг/мл, натрия сульфит - 4 мг/мл, натрия гидрокарбонат - 25 мг/мл (раствор 2) в том же количественном соотношении. Полученные смеси перемешивали. Затем из полученных смесей сразу отбирали аликвоты и в них определяли концентрацию метилдопы. Затем данные образцы замораживали до температуры не выше - 20°C и через определенные промежутки времени из них также отбирались аликвоты для измерения концентрации метилдопы. Расчет относительной концентрации метилдопы проводили по формуле:
отн
кон
нач
отн
кон
нач
С=С⋅100%/С, где С - относительная концентрация метилдопы, С - концентрация метилдопы после определенного времени хранения образца, С - концентрация метилдопы сразу после стабилизации плазмы. Полученные данные представлены в таблице 2.
Из данных, приведенных в таблице 2, видно, что полученные результаты отвечают критериям приемлемости - полученная концентрация находится в диапазоне 85-115% от исходной. Следовательно, при использовании данного способа хранения можно точно измерять концентраций лекарственных веществ, содержащих нестабильные фенольные гидроксилы, в плазме через длительный промежуток времени после отбора, что необходимо при исследованиях сравнительной фармакокинетики для повторного анализа образцов.
Предлагаемый способ применен для хранения образцов плазмы, содержащих лекарственные вещества с нестабильными фенольными гидроксилами, в лаборатории ООО «Квинта-Аналитика Ярославль».