ИНГИБИТОРЫ ПРОТЕИНТИРОЗИНФОСФАТАЗЫ ЧЕЛОВЕКА И СПОСОБЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
HUMAN PROTEIN TYROSINE PHOSPHATASE INHIBITORS AND METHODS OF USING SAID INHIBITORS

Область техники
Настоящее изобретение относится к соединениям, эффективным в качестве ингибиторов белка человека тирозинфосфатазы бета (НРТР-β), тем самым регулирующим ангиогенез. Кроме того, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим указанные ингибиторы протеинтирозинфосфатазы бета человека (НРТР-β), и к способам регулирования ангиогенеза.
Предшествующий уровень техники
Ангиогенез, прорастание (спрутинг) новых кровеносных сосудов из ранее существовавшей сосудистой сети, играет решающую роль в широком ряде физиологических и патологических процессов (Nguyen, L.L. et al., Int. Rev. Cytol., 204, 1-48, (2001)). Ангиогенез - сложный процесс, опосредованный коммуникацией между эндотелиальными клетками, которые выстраивают кровеносные сосуды и их окружающую среду. На ранних стадиях ангиогенеза тканевые или опухолевые клетки продуцируют и секретируют проангиогенные ростовые факторы в ответ на внешние стимулы, такие как гипоксия. Эти факторы диффундируют в близлежащие эндотелиальные клетки и стимулируют рецепторы, что ведет к продуцированию и секретированию протеаз, которые разрушают окружающий зкстрацеллюлярный матрикс. Активированные эндотелиальные клетки начинают мигрировать и пролиферировать в окружающую ткань по направлению к источнику этих факторов роста (Bussolino, F., Trends Biochem. Sci., 22, 251-256, (1997)). Затем эндотелиальные клетки прекращают пролиферацию и дифференциируются в тубулярные структуры, что представляет собой первую стадию в образовании стабильных зрелых кровеносных сосудов. Впоследствии периэндотелиальные клетки, такие как перициты и гладкомышечные клетки, поступают во вновь образовавшийся сосуд для участия в последующей стадии созревания сосуда.
Ангиогенез регулируется балансом природных про- и антиангиогенных факторов. Эндотелиальный фактор роста сосудов, фактор роста фибробластов и ангиопоэтин представляют незначительное число из многих потенциальных проангиогенных факторов роста. Эти лиганды связываются с их соответствующими рецептор-тирозинкиназами на поверхности эндотелиальных клеток и передают сигналы, которые стимулируют миграцию и пролиферацию клеток. Несмотря на то что многие регуляторные факторы были идентифицированы, молекулярные механизмы этого процесса все еще полностью остаются неясными.
Существует много патологических состояний, стимулируемых стойким нерегулируемым или неправильно (ошибочно) регулируемым ангиогенезом. При таких патологических состояниях нерегулируемый или ошибочно регулируемый ангиогенез может либо вызвать конкретную болезнь, либо обострить существующее патологическое состояние. Например, образование новых сосудов (образование сосудистого паннуса) в глазных тканях является наиболее распространенной причиной слепоты и лежит в основе патологии приблизительно 20 глазных заболеваний. При некоторых ранее диагностированных состояниях, таких как артрит, вновь образовавшиеся капиллярные кровеносные сосуды проникают в суставы и разрушают хрящ. При диабете новые капилляры, образовавшиеся в сетчатке, поражают стекловидное тело глаза, вызывая кровотечение и слепоту. Как рост, так и метастазирование солидных опухолей также являются ангиогенез-зависимыми процессами (Folkman et al., "Tumor Angiogenesis," Chapter 10, 206-32, in The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn et al., eds., W.B.Saunders, (1995)). Было показано, что опухоли, которые увеличиваются больше чем на 2 мм в диаметре, должны получать свое собственное кровоснабжение и обеспечивают его, индуцируя рост новых капиллярных кровеносных сосудов. После того как эти новые кровеносные сосуды оказываются встроенными в опухоль, они обеспечивают доставку питательных веществ и ростовых факторов, необходимых для роста опухоли, а также являются средством проникновения в кровоток опухолевых клеток и их метастазирование в отдаленные места, такие как печень, легкое или кость (Weidner, New Eng. J. Med., 324, 1, 1-8 (1991)). При использовании в качестве лекарственных средств для животных, имеющих опухоли, природные ингибиторы ангиогенеза могут предотвращать рост небольших опухолей (O′Reilly et al., Cell, 79, 315-28 (1994)). В некоторых протоколах применение таких ингибиторов приводит к уменьшению и остановке роста опухоли даже после прекращения лечения (O'Reilly et al., Cell, 88, 277-85 (1997)). Кроме того, доставка ингибиторов ангиогенеза в некоторые опухоли может потенциировать их реакцию на другие схемы лечения (Teischer et al., Int. J. Cancer, 57, 920-25 (1994)).
Хотя многие патологические состояния стимулируются стойким нерегулируемым или ошибочно регулируемым ангиогенезом, некоторые патологические состояния могут лечиться повышенным ангиогенезом. Рост и восстановление (заживление) ткани являются биологическими событиями, где происходит клеточная пролиферация и ангиогенез. Так, важным аспектом заживления раны является реваскуляризация поврежденной ткани посредством ангиогенеза.
Хронические, незаживляющиеся раны являются основной причиной увеличения длительности заболевания у населения старшего возраста. Это особенно имеет место в случае прикованных к постели или страдающих диабетом пациентов, у которых развиваются тяжелые незаживающие кожные язвы. Во многих из этих случаев замедление заживления является результатом недостаточного кровоснабжения либо в результате постоянного сдавливания, либо блокады сосуда. Недостаточное капиллярное кровоснабжение вследствие атеросклероза малых артерий либо венозного стаза способствует неблагоприятному исходу заживления поврежденной ткани. Такие ткани часто инфицированы микроорганизмами, которые пролиферируют неконтролируемым образом со стороны систем врожденной иммунной защиты организма, причем системы требуют хорошо васкуляризованной ткани для эффективного устранения патогенных микроорганизмов. В результате этого наибольшее лечебное (терапевтическое) воздействие концентрируется на восстановлении кровотока в ишемических тканях, тем самым давая возможность питательным веществам и иммунологическим факторам достигнуть области раны.
Атеросклеротическое поражение крупных сосудов может вызвать тканевую ишемию, которая может быть улучшена модулированием роста кровеносных сосудов в пораженной болезнью ткани. Например, атеросклеротическое поражение коронарных артерий может вызвать стенокардию и инфаркт миокарда, которые можно предотвратить, если можно было бы восставить кровоток путем стимулирования роста коллатеральных артерий. Аналогично, атеросклеротическое поражение крупных артерий, которые снабжают ноги, может вызвать ишемию в скелетной мышце, которая ограничивает подвижность и в некоторых случаях неизбежно влечет за собой ампутацию, что можно также предотвратить путем улучшения кровотока при помощи ангиогенной терапии.
Другие заболевания, такие как диабет и гипертензия, характеризуются снижением количества и плотности малых кровеносных сосудов, таких как артериолы и капилляры. Эти малые кровеносные сосуды важны для доставки кислорода и питательных веществ. Снижение количества и плотности этих сосудов способствует возникновению неблагоприятных осложнений гипертензии и диабета, включая перемежающую хромоту, ишемические язвы, прогрессирующий вариант гипертензии и почечную недостаточность. Эти общие расстройства и многие другие менее частые недомогания, такие как болезнь Бюргера, могут быть улучшены путем увеличения количества и повышения плотности малых кровеносных сосудов, используя ангиогенную терапию.
Было высказано предположение, что один из способов регулирования ангиогенеза заключается в лечении пациентов ингибитором белка человека тирозинфосфатазы бета (НРТР-β) (Kruegar et al., EMBO J., 9, (1990)), и в связи с этим появилась необходимость в удовлетворении потребности в соединениях по данному изобретению.
Краткое изложение существа изобретения
Соединения по данному изобретению представляют собой новый класс соединений, которые могут регулировать ангиогенез у людей.
Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтическим соединениям и их фармацевтически приемлемым солям и/или фармацевтическим композициям на их основе, содержащим
a) эффективное количество одного или более соединений по данному изобретению; и
b) наполнитель …
Кроме того, настоящее изобретение относится к способам регулирования ангиогенеза и тем самым разработке способа лечения заболеваний, находящихся под влиянием ангиогенеза, и эти указанные способы включают введение человеку эффективного количества соединения по данному изобретению.
Эти и другие цели, признаки и преимущества настоящего изобретения становятся очевидными для специалистов в данной области из рассмотрения приведенного ниже подробного описания и прилагаемой формулы изобретения. Все процентные содержания, отношения и пропорции являются массовыми, если не оговорено особо. Все температуры представлены в градусах Цельсия (°С), если не оговорено особо. Все цитированные документы, в уместной степени, включены в настоящее описание в виде ссылки; цитирование любого документа не следует истолковывать как признание того, что он представляет собой известный уровень техники в отношении настоящего изобретения.
Подробное описание изобретения
В этом описании и прилагаемой ниже формуле изобретения ссылаются на ряд терминов, которые, как будет определено ниже, имеют следующие значения:
Под термином "фармацевтически приемлемый" подразумевают вещество, которое не является ни биологически, ни в других отношениях нежелательным, т.е. такое вещество можно вводить индивидууму наряду с релевантным активным соединением без проявления клинически неприемлемых биологических воздействий или взаимодействия с отрицательными последствиями с любым из других компонентов фармацевтической композиции, в которой он содержится.
В описании изобретения и прилагаемой ниже формулы изобретения слово "содержать" и другие формы слова, такие как "содержащий" и "содержит", означают, но не ограничиваясь этим, включение, например, других добавок, компонентов, целых чисел или стадий.
"Необязательный" или "необязательно" означает, что позже описанное событие или обстоятельство может иметь место, а может и не иметь место, и что описание включает отдельные примеры, когда событие или обстоятельство случается, и отдельные примеры, когда оно не происходит.
В настоящем описании диапазоны могут быть выражены как от "около" одного конкретного значения и/или до "около" другого конкретного значения. Когда такой диапазон выражен, другой аспект включает от одного конкретного значения и/или до другого конкретного значения. Аналогично, когда значения выражены в виде приближенных представлений путем использования предшествующего слова "около," следует иметь в виду, что конкретное значение образует другой аспект. Кроме того, следует иметь в виду, что конечные точки каждого из диапазонов значимы как в отношении другой конечной точки, так и независимо другой конечной точки. Также очевидно, что существует ряд значений, раскрытых в описании, и что каждое значение раскрыто, помимо его конкретного значения, как такового, также в виде "около" этого конкретного значения. Например, если указано значение "10", то указано и "около 10". Также понятно, что когда указывается значение, то раскрываются и "менее чем или равно этому значению", "более чем или равно значению," и возможные диапазоны между значениями, что очевидно специалистам в данной области. Например, если указывается значение "10", то раскрываются и "менее чем или равно 10", а также "более чем или равно 10". Кроме того, имеется в виду, что в заявке данные приводятся в ряде различных форматов и что эти данные представляют собой конечные точки и исходные точки и диапазоны для любой комбинации этих базовых точек. Например, если указывают конкретную базовую точку "10" и конкретную базовую точку "15", то имеется в виду, что предполагаются раскрытыми и значения более чем, более чем или равно, менее чем, менее чем или равно, и равно 10 и 15, также как и значения между 10 и 15. Также очевидно, что каждая единица между двумя конкретными единицами также раскрыта. Например, если указываются 10 и 15, то раскрыты и 11, 12, 13 и 14.
Термин "органическая группа" описания относится к группам или частям, которые содержат один или более атомов углерода и которые образуют часть одного из соединений или их фармацевтически приемлемых солей. Например, многие из замещающих групп (заместителей), упоминаемые в описании где-то в другом месте, представляют собой органические группы. Для эффективного функционирования в контексте их присутствия в соединениях и/или солях, раскрытых в описании, органические группы должны иметь переменные диапазоны ограниченного размера и/или молекулярной массы, с тем чтобы обеспечить необходимое связывание с ферментами-мишенями, требуемую растворимость и требуемые характеристики биоабсорбции. Например, органическая группа может содержать, например, 1-26 атомов углерода, 1-18 атомов углерода, 1-12 атомов углерода, 1-8 атомов углерода или 1-4 атома углерода. Органические группы часто содержат водород, связанный с, по меньшей мере, несколькими атомами углерода органических групп, и могут необязательно содержать общие гетероатомы, обнаруженные в замещенных органических соединениях, такие как кислород, азот, сера и т.п., или неорганические атомы, такие как галогены, фосфор, и т.п. Один пример органического радикала, который не содержит никаких неорганических атомов, представляет собой 5,6,7,8-тетрагидро-2-нафтильный радикал. В некоторых вариантах органический радикал может содержать 1-10 неорганических гетероатомов, к тому же связанных между собой или находящихся в нем, включая галогены, кислород, серу, азот, фосфор, и т.п. Примеры органических радикалов включают, но не ограничиваясь ими, алкильные, замещенные алкильные, циклоалкильные, замещенные циклоалкильные, монозамещенные амино, дизамещенные амино, ацилокси, циано, карбокси, карбоалкокси, алкилкарбоксамидо, замещенные алкилкарбоксамидо, диалкилкарбоксамидо, замещенные диалкилкарбоксамидо, алкилсульфонильные, алкилсульфинильные, тиоалкильные, тиогалогеналкильные, алкокси, замещенные алкокси, галогеналкильные, галогеналкокси, арильные, замещенные арильные, гетероарильные, гетероцикликлические или замещенные гетероциклические радикалы, и эти термины определены здесь в другом месте. Несколько неограничивающих примеров органических радикалов, которые содержат гетероатомы, включают алкоксирадикалы, трифторметоксирадикалы, ацетоксирадикалы, диметиламинорадикалы и т.п.
1
2
3
3
3
4
4
4
4
4
5
6
1
1
1
1
2
2
2
3
3
4
Замещенные и незамещенные линейные, разветвленные или циклические алкильные группы включают следующие неограничивающие примеры: метил (C), этил (С), н-пропил (С), изопропил (С), циклопропил (С), н-бутил (С), втор-бутил (С), изобутил (С), трет-бутил (С), циклобутил (С), циклопентил (С), циклогексил (С), и т.п.; тогда как неограничивающие примеры линейного, разветвленного или циклического алкила включают гидроксиметил (C), хлорметил (C), трифторметил (С), аминометил (C), 1-хлорэтил (С), 2-гидроксиэтил (С), 1,2-дифторэтил (С), 2,2,2-трифторэтил (С), 3-карбоксилпропил (С), 2,3-дигидроксициклобутил (С) и т.п.
2
3
3
3
4
2
4
9
9
Замещенные и незамещенные линейные, разветвленные или циклические алкенилы включают этенил (С), 3-пропенил (С), 1-пропенил (также 2-метилэтенил) (С), изопропенил (также 2 метилэтен-2-ил) (С), бутен-4-ил (С), и т.п.; замещенный линейный или разветвленный алкенил, неограничивающие примеры которого включают 2-хлорэтенил (также 2-хлорвинил) (С), 4-гидроксибутен-1-ил (С), 7-гидрокси-7-метилокт-4-ен-2-ил (C), 7-гидрокси-7-метилокт-3,5-диен-2-ил (С) и т.п.
2
3
2
7
7
8
6
Замещенный и незамещенный линейный или разветвленный алкинил включают этинил (С), проп-2-инил (также пропаргил) (С), пропин-1-ил (С) и 2-метилгекс-4-ин-1-ил (С); замещенный линейный или разветвленный алкинил, неограничивающие примеры которого включают 5-гидрокси-5-метилгекс-3-инил (С), 6-гидрокси-6-метилгепт-3-ин-2-ил (С), 5-гидрокси-5-этилгепт-3-инил (C) и т.п.
100
100
Используемый в описании термин замещенный и незамещенный "алкокси" обозначает группу, имеющую общую формулу -OR, где R представляет собой алкильную, алкиленильную или алкинильную группу, определенную выше, например метокси, метоксиметил, метоксиметил.
Используемый в описании термин замещенный и незамещенный "галогеналкил" обозначает алкильную группу, имеющую атом водорода, замещенный одним или более атомами галогена, например трифторметил, 1,2-дихлорэтил и 3,3,3-трифторпропил.
6
10
10
6
6
6
6
6
6
6
6
10
10
10
Термин "арил", используемый в описании, обозначает циклические органические группы, которые содержат, по меньшей мере, одно бензольное кольцо, имеющее сопряженное и ароматическое шестичленное кольцо, неограничивающие примеры арила включают фенил (С), нафтилен-1-ил (С), нафтилен-2-ил (С). Арильные циклические структуры могут иметь один или более атомов водорода, замещенных другим органическим или неорганическим радикалом. Неограничивающие примеры замещенных арильных циклических структур включают 4-фторфенил (С), 2-гидроксифенил (С), 3-метилфенил (С), 2-амино-4-фторфенил (С), 2-(N,N-диэтиламино)фенил (С), 2-цианофенил (С), 2,6-ди-трет-бутилфенил (С), 3-метоксифенил (С), 8-гидроксинафтилен-2-ил (С), 4,5-диметоксинафтилен-1-ил (С) и 6-цианонафтилен-1-ил (С).
Термин "гетероарил" обозначает органическую группу, содержащую пяти- или шестичленное сопряженное и ароматическое кольцо, в котором, по меньшей мере, один из кольцевых атомов представляет собой гетероатом, выбранный из азота, кислорода или серы. Гетероарильные циклические структуры могут включать одно кольцо, например кольцо, содержащее 5 или 6 атомов, в котором, по меньшей мере, один кольцевой атом представляет собой гетероатом, не ограничиваемый азотом, кислородом или серой, например, такое как пиридиновое кольцо, фурановое кольцо или тиофурановое кольцо. Кроме того, "гетероарил" может также представлять собой конденсированную полициклическую и гетероароматическую структуру, в которой, по меньшей мере, один из циклов представляет собой ароматический цикл и, по меньшей мере, один атом ароматического цикла представляет собой гетероатом, включая азот, кислород или серу.
Нижеследующее представляет собой неограничивающие примеры гетероарильных циклических структур согласно данному изобретению:
; ; ;  и .
Термин "гетероцикл" означает циклическую систему, содержащую от 3 до 10 атомов, где, по меньшей мере, один из атомов циклической системы представляет собой гетероатом, не ограничиваемый азотом, кислородом или серой. Циклические системы могут быть моноциклическими структурами, конденсированными циклическими структурами или бициклическими структурами. Неограничивающие примеры гетероциклических структур включают:
;  и .
Все из вышеупомянутых гетероарильных или гетероциклических структур могут быть необязательно замещены одним или более заместителями по водороду, как описано в дальнейшем.
На протяжении описания настоящего изобретения термины, имеющие написание "тиофен-2-ил и тиофен-3-ил", используют для описания гетероарильных групп, имеющих соответствующие формулы:
; ;
тогда как в названии соединений по данному изобретению химическая номенклатура для этих частей обычно представлена как "тиофен-2-ил и тиофен-3-ил" соответственно. Специалисту следует иметь в виду, что термины "тиофен-2-ил и тиофен-3-ил" в настоящем описании используют при описании указанных циклических систем в качестве групп или частей, которые составляют соединения по данному изобретению.
8
3
Термин "замещенный" используют в описании изобретения. Термин "замещенный" определяют как "углеводородный радикал, независимо от того, ациклический он или циклический, который имеет один или более атомов водорода, замещенных заместителем или несколькими заместителями, определенными ниже." Группы, при замещении атомов водорода, способны заместить один атом водорода, два атома водорода или три атома водорода углеводородной части одновременно. Кроме того, эти заместители могут заместить два атома водорода на двух соседних углеродах с образованием указанного заместителя, новой части или группы. Например, замещенная группа, которая требует замещения одного атома водорода, включает галоген, гидроксил и т.п. Замещение двух атомов водорода включает карбонил, оксимино и т.п. Замещение двух атомов водорода с соседних атомов углерода включает эпокси и т.п. Замещение трех атомов водорода включает циано и т.п. Термин "замещенный" используют в настоящем описании, чтобы показать, что углеводородная часть, inter alia, ароматическое кольцо, алкильная цепь, может иметь один или более атомов водорода, замещенных заместителем. Если часть описана как "замещенная", то любое количество атомов водорода может быть замещено. Например, 4-гидроксифенил представляет собой "замещенное ароматическое карбоциклическое кольцо", (N,N-диметил-5-амино)октанил представляет собой "замещенную C алкильную группу", 3-гуанидинопропил представляет собой "замещенную С алкильную группу" и 2-карбоксипиридинил представляет собой "замещенную гетероарильную группу".
Нижеследующее представляет собой неограничивающие примеры групп, которые могут заместить водородные атомы углеводородной или другой группы:
1
12
1
2
2
2
3
3
3
3
3
3
3
3
4
4
4
4
4
4
5
6
i) С-С линейный, разветвленный или циклический алкил, алкенил и алкинил; например, метил (C), этил (С), этенил (С), этинил (С), н-пропил (С), изопропил (С), циклопропил (С), 3-пропенил (С), 1-пропенил (также 2-метилэтенил) (С), изопропенил (также 2-метилэтен-2-ил) (С), проп-2-инил (также пропаргил) (С), пропин-1-ил (С), н-бутил (С), втор-бутил (С), изобутил (С), трет-бутил (С), циклобутил (С), бутен-4-ил (С), циклопентил (С), циклогексил (С);
6
10
10
10
ii) замещенный или незамещенный С или С арил; например, фенил, нафтил (также называемый нафтилен-1-ил (С) или нафтилен-2-ил (С));
1
9
iii) замещенные или незамещенные С-С гетероциклические структуры; описанные в настоящем описании;
1
9
iv) замещенные или незамещенные С-С гетероарильные циклические структуры; описанные ниже;
13a
13b
12
z
2
3
2
3
2
3
2
2
3
2
2
3
2
2
2
3
v) -(CRR)OR; например, -ОН, -СНОН, -ОСН, -СНОСН, -ОСНСН, -СНОСНСН, -ОСНСНСН и -СНОСНСНСН;
13a
13b
12
z
3
2
3
2
3
2
2
3
2
2
3
2
2
2
3
vi) -(CRR)C(О)R; например, -СОСН, -СНСОСН, -ОСНСН, -СНСОСНСН, -СОСНСНСН и -СНСОСНСНСН;
13a
13b
12
z
2
3
2
2
3
2
2
3
2
2
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
vii) -(CRR)C(О)OR; например, -COCH, -CHCOCH, -COCHCH, -CHCOCHCH, -COCHCHCH и -CHCOCHCHCH;
13a
13b
12
z
2
2
2
2
3
2
3
3
2
2
3
2
viii) -(CRR)C(O)N(R); например, -CONH, -CHCONH, -CONHCH, -CHCONHCH, -CON(CH) и -CHCON(CH);
13a
13b
12
2
2
2
2
2
3
3
2
2
3
2
3
2
3
2
2
2
3
ix) -(CRR)N(R); например, -NH, -CHNH, -NHCH, -N(CH), -NH(CHCH), -CHNHCH, -CHN(CH) и -CHNH (CHCH);
x) галоген; -F, -Cl, -Br и -I;
13a
13b
z
xi) -(CRR)CN;
13a
13b
z
2
xii) -(CRR)NO;
j
k
2
2
3
3
3
xiii) -CHX; где X представляет собой галоген, j равно от 0 до 2, j+k=3; например, -CHF, -CHF, -CF, -CCl или -CBr;
13a
13b
12
z
2
3
2
3
6
5
2
6
5
xiv) -(CRR)SR; -SH, -CHSH, -SCH, -CHSCH, -SCH и -CHSCH;
13a
13b
12
2
2
2
2
2
2
3
2
2
3
2
6
5
2
2
6
5
xv) -(CRR)SOR; -SOH, -CHSOH, -SOCH, -CHSOCH, -SOCH и -CHSOCH; и
13a
13b
12
z
3
3
2
3
3
3
2
3
3
3
6
5
2
3
6
5
xiii) -(CRR)SOR; например, -SOH, -CHSOH, -SOCH, -CHSOCH, -SOCH и -CHSOCH;
12
12
13a
13b
1
4
1
4
где каждый R представляет собой независимо водород, замещенный или незамещенный С-С линейный, разветвленный или циклический алкил, фенил, бензил; или два радикала R могут быть взяты вместе, образуя кольцо, содержащее 3-7 атомов; R и R представляют собой, каждый, независимо водород или С-С линейный или разветвленный алкил; индекс р равен от 0 до 4.
Для настоящего изобретения термины "соединение," "аналог" и "композиция" означают также и другие раскрытые в описании химические соединения, включая все энантиомерные формы, диастереомерные формы, соли и т.п., и термины "соединение," "аналог" и "композиция (механическая смесь ингредиентов)" используют взаимозаменяемо на протяжении всего настоящего описания.
Настоящее изобретение направлено на решение нескольких неудовлетворенных медицинских потребностей, среди которых, inter alia:
1) Разработка композиций, эффективных в качестве ингибиторов белка человека тирозинфосфатазы бета (НРТР-β); и благодаря этому разработка способа регулирования ангиогенеза при нарушении, болезни, заболевании или состоянии, в котором ангиогенез повышен;
2) Разработка композиций, эффективных в качестве ингибиторов белка человека тирозинфосфатазы бета (НРТР-β); и благодаря этому разработка способа регулирования ангиогенеза при нарушении, болезни, заболевании или состоянии, и
3) Разработка композиций, эффективных в качестве ингибиторов белка человека тирозинфосфатазы бета (НРТР-β); и благодаря этому разработка способа регулирования ангиогенеза при нарушении, болезни, заболевании или состоянии, в котором ангиогенез занижен.
Эти и другие неудовлетворенные медицинские потребности решаются путем разработки ингибиторов белка человека тирозинфосфатазы бета (НРТР-β) по данному изобретению, которые способны регулировать ангиогенез, и благодаря этому служащих средством для разработки на их основе способа лечения повышенного или пониженного ангиогенеза у людей или способа лечения заболеваний, которые вызваны недостаточной регуляцией белка человека тирозинфосфатазы бета (НРТР-β).
Предлагаемые в описании соединения включают все фармацевтически приемлемые солевые формы, например соли основных групп, inter alia, аминов, а также соли кислотных групп, inter alia, сульфаминовых и карбоновых кислот. Нижеследующее представляет собой неограничивающие примеры анионов, которые могут образовать соли с основными группами: хлорид, бромид, иодид, сульфат, бисульфат, карбонат, бикарбонат, фосфат, формиат, ацетат, пропионат, бутират, пируват, лактат, оксалат, малонат, малеат, сукцинат, тартрат, фумарат, цитрат и т.п. Нижеследующее представляет собой неограничивающие примеры катионов, которые могут образовать соли кислотных групп: натрий, литий, калий, кальций, магний, висмут и т.п.
Соединения по данному изобретению имеют формулу (I):
где атом углерода, имеющий аминогруппу, имеет стереохимию (S), как указано в формуле.
R представляет собой замещенную или незамещенную тиазолильную группу, имеющую формулу
или
4
5
6
R, R и R представляют собой заместители, которые могут быть независимо выбраны из целого ряда неорганических (водород, гидроксил, амино, галоген или т.п.) или органических замещающих групп (заместителей), таких как алкилы, циклоалкилы, гетероциклы, гетероарилы и т.п., и эти указанные заместители могут необязательно содержать от 1 до 12 атомов углерода, или от 1 до 10 атомов углерода, или от 1 до 6 атомов углерода.
Один пример соединений формулы (I), радикалы R относятся к тиазолил-2-ильной группе, имеющей формулу
4
5
где R и R, каждый, независимо выбран из
i) водорода;
1
6
ii) замещенного или незамещенного C-С линейного, разветвленного или циклического алкила;
iii) замещенного или незамещенного фенила;
iv) замещенного или незамещенного гетероарила; или
4
5
R и R могут быть взяты вместе, образуя насыщенное или ненасыщенное кольцо, имеющее от 5 до 7 атомов.
Один пример соединений формулы (I) включает радикал R формулы
5
4
1
2
3
3
4
4
4
4
5
5
5
5
5
6
6
6
где R представляет собой водород и R представляет собой группу, выбранную из метила (C), этила (С), н-пропила (С), изопропила (С), н-бутила (С), втор-бутила (С), изобутила (С), трет-бутила (С), н-пентила (С), 1-метилбутила (С), 2-метилбутила (С), 3-метилбутила (С), циклопропила (С), н-гексила (С), 4-метилпентила (С) и циклогексила (С).
4
5
1
2
3
3
4
4
4
4
1
2
Другой пример соединений формулы (I), радикалы R включают группы, где R представляет собой группу, выбранную из метила (C), этила (С), н-пропила (С), изопропила (С), н-бутила (С), втор-бутила (С), изобутила (С) и трет-бутила (С); и R представляет собой группу, выбранную из метила (C) или этила (С). Неограничивающие примеры этого аспекта R включают 4,5-диметилтиазол-2-ил, 4-этил-5-метилтиазол-2-ил, 4-метил-5-этилтиазол-2-ил и 4,5-диэтилтиазол-2-ил.
5
4
Дополнительный пример соединений формулы (I), радикалы R включают группы, где R представляет собой водород и R представляет собой замещенную алкильную группу, при этом указанные заместители выбраны из
i) галогена: -F, -Cl, -Br и -I;
11
2
ii) -N(R) и
11
iii) -OR;
11
1
4
где каждый R представляет собой независимо водород или С-С линейный или разветвленный алкил.
2
2
3
2
3
2
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
2
3
2
3
2
2
2
3
Неограничивающие примеры групп, которые могут представлять собой заместитель водорода на радикалах R, включают -CHF, -CHF, -CF, -CHCF, -CHCHCF, -CHCl, -CHOH, -CHOCH, -CHCHOH, -CHCHOCH, -CHNH, -CHNHCH, -CHN(CH) и -CHNH (CHCH).
Другие неограничивающие примеры групп, которые содержат радикалы R, включают 2,2-дифторциклопропил, 2-метоксициклогексил и 4-хлорциклогексил.
5
4
4
Следующий дополнительный пример соединений формулы (I), радикалы R включают группы, где R представляет собой водород и R представляет собой фенил или замещенный фенил, где неограничивающие примеры радикалов R включают фенил, 3,4-диметилфенил, 4-трет-бутилфенил, 4-циклопропилфенил, 4-диэтиламинофенил, 4-(трифторметил)фенил, 4-метоксифенил, 4-(дифторметокси)фенил, 4-(трифторметокси)фенил, 3-хлорфенил, 4-хлорфенил и 3,4-дихлорфенил, которые при включении в определение R, дают следующие R группы: 4-фенилтиазол-2-ил, 3,4-диметилфенилтиазол-2-ил, 4-трет-бутилфенилтиазол-2-ил, 4-циклопропилфенилтиазол-2-ил, 4-диэтиламинофенилтиазол-2-ил, 4-(трифторметил)фенилтиазол-2-ил, 4-метоксифенилтиазол-2-ил, 4-(дифторметокси)фенилтиазол-2-ил, 4-(трифторметокси)фенилтиазол-2-ил, 3-хлорфенил, 4-хлорфенилтиазол-2-ил и 3,4-дихлорфенилтиазол-2-ил.
4
5
Следующий дополнительный пример соединений формулы (I) включает радикалы R, где R выбран из водорода, метила, этила, н-пропила и изопропила и R представляет собой фенил или замещенный фенил. Неограничивающий пример радикала R согласно пятому аспекту первой категории радикалов R включает 4-метил-5-фенилтиазол-2-ил и 4-этил-5-фенилтиазол-2-ил.
5
4
Другой дополнительный пример соединений формулы (I) включает радикалы R, где R представляет собой водород и R представляет собой замещенную или незамещенную гетероарильную группу, выбранную из 1,2,3,4-тетразол-1-ила, 1,2,3,4-тетразол-5-ила, [1,2,3]триазол-4-ила, [1,2,3]триазол-5-ила, [1,2,4]триазол-4-ила, [1,2,4]триазол-5-ила, имидазол-2-ила, имидазол-4-ила, пиррол-2-ила, пиррол-3-ила, оксазол-2-ила, оксазол-4-ила, оксазол-5-ила, изоксазол-3-ила, изоксазол-4-ила, изоксазол-5-ила, [1,2,4]оксадиазол-3-ила, [1,2,4]оксадиазол-5-ила, [1,3,4]оксадиазол-2-ила, фуран-2-ила, фуран-3-ила, тиофен-2-ила, тиофен-3-ила, изотиазол-3-ила, изотиазол-4-ила, изотиазол-5-ила, тиазол-2-ила, тиазол-4-ила, тиазол-5-ила, [1,2,4]тиадиазол-3-ила, [1,2,4]тиадиазол-5-ила и [1,3,4]тиадиазол-2-ила.
4
Дополнительный неограничивающий пример соединений формулы (I) включает радикалы R, где R представляет собой замещенный или незамещенный тиофен-2-ил, например тиофен-2-ил, 5-хлортиофен-2-ил и 5-метилтиофен-2-ил.
4
Следующий дополнительный пример соединений формулы (I) включает радикалы R, где R представляет собой замещенный или незамещенный тиофен-3-ил, например тиофен-3-ил, 5-хлортиофен-3-ил и 5-метилтиофен-3-ил.
4
5
Другой пример соединений формулы (I) включает радикалы R, где R и R, взятые вместе, образуют насыщенное или ненасыщенное кольцо, имеющее от 5 до 7 атомов. Неограничивающие примеры шестого аспекта первой категории групп R включают 5,6-дигидро-4Н-циклопента[d]тиазол-2-ил и 4,5,6,7-тетрагидробензо[d]тиазол-2-ил.
Дополнительные примеры соединений формулы (I) включают радикалы R, которые представляют собой тиазол-4-ильные группы, имеющие формулу
6
где R представляет собой группу, выбранную из
i) водорода;
1
6
ii) замещенного или незамещенного C-C линейного, разветвленного или циклического алкила;
iii) замещенных или незамещенных фенильных циклических структур, имеющих от 5 до 10 атомов в циклической структуре; или
iv) замещенной или незамещенной гетероарильной циклической структуры, имеющей от 5 до 10 атомов в структуре.
6
Пример соединений формулы (I) включает радикалы R, где R представляет собой водород.
6
1
2
3
3
4
4
4
4
Дополнительный пример соединений формулы (I) включает радикалы R, где R представляет собой группу, выбранную из метила (C), этила (С), н-пропила (С), изопропила (С), н-бутила (С), втор-бутила (С), изобутила (С) и трет-бутила (С). Неограничивающие примеры этого аспекта R включают 2-метилтиазол-4-ил, 2-этилтиазол-4-ил, 2-(н-пропил)тиазол-4-ил и 2-(изопропил)тиазол-4-ил.
6
Следующий дополнительный пример соединений формулы (I) включает радикалы R, где R представляет собой замещенный или незамещенный фенил, неограничивающие примеры которого включают фенил, 2-фторфенил, 2-хлорфенил, 2-метилфенил, 2-метоксифенил, 3-фторфенил, 3-хлорфенил, 3-метилфенил, 3-метоксифенил, 4-фторфенил, 4-хлорфенил, 4-метилфенил и 4-метоксифенил.
6
Другой дополнительный пример соединений формулы (I) включает радикалы R, где R представляет собой замещенный или незамещенный гетероарил, неограничивающие примеры которого включают тиофен-2-ил, тиофен-3-ил, тиазол-2-ил, тиазол-4-ил, тиазол-5-ил, 2,5-диметилтиазол-4-ил, 2,4-диметилтиазол-5-ил, 4-этилтиазол-2-ил, оксазол-2-ил, оксазол-4-ил, оксазол-5-ил и 3-метил-1,2,4-оксадиазол-5-ил.
6
Дополнительный пример соединений формулы (I) включает радикалы R, где R представляет собой группу, имеющую формулу
7
6
1
4
где R представляет собой C-C замещенный или незамещенный алкил и замещенный или незамещенный фенил, неограничивающие примеры R включают 4-хлорбензолсульфонилметил и трет-бутилсульфонилметил.
6
Дополнительный пример соединений формулы (I) включает радикалы R, где R представляет собой группу, выбранную из замещенного или незамещенного пиридинила, пиразинила и пиримидинила, неограничивающие примеры которого включают пиразин-2-ил и (2-метил)пиридин-5-ил.
1
Радикалы R
1
1
1
Один пример радикала R включает соединения, где R представляет собой водород. Соединения по данному изобретению, где R соответствует водороду, имеют формулу
и поэтому сединения этой категории не содержат второго хирального центра.
1
Другой пример соединений формулы (I) включает радикалы R, имеющие второй хиральный центр, и такие соединения, например, имеют формулы
или
(S),(S)-Диастереомер S), (R)-Диастереомер и указанную стереохимию. Раскрытые соединения могут представлять собой отдельные диастереомеры или их смеси, и такие соединения можно получить любым из нижеследующих способов:
i) в виде смеси (S),(S)- и (S),(R)-диастереомеров и использовать в виде смеси для регуляции ангиогенеза;
ii) в виде смеси (S),(S)- и (S),(R)-диастереомеров, которую затем позже разделяют на отдельные диастереомеры перед тем, как использовать последние для регуляции ангиогенеза; или
iii) их непосредственно получают в виде отдельного (S),(S)- или (S), (R)-диастереомера, и этот способ получения описан ниже.
1
Один пример соединений согласно формуле (I) включает радикалы R, которые представляют собой бензил, неограничивающие примеры таких соединений включают 4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовую кислоту, 4-{(S)-2-(S)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо-2-(2-фенилтиазол-4-ил)}фенилсульфаминовую кислоту, 4-{(S)-2-(4-этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовую кислоту и 4-{(S)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(2-этилтиазол-4-ил)этил}фенилсульфаминовую кислоту, а также другие соединения, описанные ниже.
1
Другой пример соединений согласно формуле (I) включает радикалы R, которые представляют собой замещенный бензил, неограничивающие примеры которых включают 4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-(4-гидроксифенил)пропанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовую кислоту; 4-{(S)-2-(S)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-(4-хлорфенил)пропанамидо-2-(2-фенилтиазол-4-ил)}фенилсульфаминовую кислоту и 4-{(S)-2-(4-этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-(4-метилфенил)пропанамидо]этил}фенилсульфаминовую кислоту.
1
Дополнительный пример соединений согласно формуле (I) включает радикалы R, которые представляют собой фенил, неограничивающие примеры таких соединений включают 4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-фенилэтанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовую кислоту, 4-{(S)-2-(S)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-2-фенилэтанамидо-2-(2-фенилтиазол-4-ил)}фенилсульфаминовую кислоту и 4-{(S)-2-(4-этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-2-фенилэтанамидо]этил}фенилсульфаминовую кислоту.
1
1
4
Следующий дополнительный пример соединений согласно формуле (I) включает радикалы R, которые представляют собой С-С линейный или разветвленный алкил, неограничивающие примеры таких соединений включают 4-{(S)-2-(4-этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилбутанамидо]этил}фенилсульфаминовую кислоту, 4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метилпентанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовую кислоту и 4-{(S)-2-(4-этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-4-метилпентанамидо]этил}фенилсульфаминовую кислоту, а также другие соединения, описанные ниже.
2
R представляет собой группу, выбранную из
1
6
i) C-C линейного или разветвленного алкила или
1
6
ii) C-C линейного или разветвленного алкокси.
2
1
6
Один пример R включает C-С линейные или разветвленные алкоксигруппы, имеющие формулу
8
-OR
8
1
6
1
2
3
3
4
4
4
4
5
6
где R представляет собой группу C-С линейного или разветвленного алкила, выбранную из метила (C), этила (С), н-пропила (С), изопропила (С), н-бутила (С), втор-бутила (С), изобутила (С), трет-бутила (С), н-пентила (С) или н-гексила (С).
2
1
6
1
2
3
3
4
4
4
4
5
6
Другой пример соединений согласно формуле (i) включает радикалы R, которые представляют собой C-C линейный или разветвленный алкил, выбранный из метила (C), этила (С), н-пропила (С), изопропила (С), н-бутила (С), втор-бутила (С), изобутила (С), трет-бутила (С), н-пентила (С) или н-гексила (С).
3
1
4
R представляет собой водород или C-C линейный или разветвленный алкил.
3
3
Один пример R включает соединения, где R представляет собой водород.
3
3
Другой пример R включает соединения, где R представляет собой метил.
3
3
2
3
3
4
4
4
4
Дополнительный пример R включает соединения, где R выбран из этила (С), н-пропила (С), изопропила (С), н-бутила (С), втор-бутила (С), изобутила (С) и трет-бутила (С).
Соединения формулы (I) могут быть систематизированы по нескольким категориям для строго неограничивающей цели описания альтернатив синтетических стратегий получения подродов соединений в пределах объема формулы (I), которые в линейный форме в настоящем описании не проиллюстрированы. Эта мысленная систематизация на категории не подразумевает ничего относительно увеличения или понижения биологической активности в отношении любого из соединений или композиций, описанных в настоящем описании.
Первый аспект категории I настоящего изобретения относится к соединениям, имеющим формулу
1
1
где R представляет собой замещенную или незамещенную тиазол-2-ильную группу и неограничивающие примеры R и R и, кроме того, стереохимии у R представлены в таблице 1.
Таблица I
№
R
R<sup>1</sup>
1
тиазол-2-ил
(S)-бензил
2
4-метилтиазол-2-ил
(S)-бензил
3
4-этилтиазол-2-ил
(S)-бензил
4
4-пропилтиазол-2-ил
(S)-бензил
5
4-изопропилтиазол-2-ил
(S)-бензил
6
4-циклопропилтиазол-2-ил
(S)-бензил
7
4-бутилтиазол-2-ил
(S)-бензил
8
4-трет-бутилтиазол-2-ил
(S)-бензил
9
4-циклогексилтиазол-2-ил
(S)-бензил
10
4-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
11
4-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
12
4-(2,2-дифторциклопропил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
13
4-(метоксиметил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
14
4-(этиловый эфир карбоновой кислоты)тиазол-2-ил
(S)-бензил
15
4,5-диметилтиазол-2-ил
(S)-бензил
16
4-метил-5-этилтиазол-2-ил
(S)-бензил
17
4-фенилтиазол-2-ил
(S)-бензил
18
4-(4-хлорфенил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
19
4-(3,4-диметилфенил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
20
4-метил-5-фенилтиазол-2-ил
(S)-бензил
21
4-(тиофен-2-ил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
22
4-(тиофен-3-ил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
23
4-(5-хлортиофен-2-ил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
24
5,6-дигидро-4Н-циклопента[d]тиазол-2-ил
(S)-бензил
25
4,5,6,7-тетрагидробензо[d]тиазол-2-ил
(S)-бензил
Соединения, охватываемые первым аспектом Категории I настоящего изобретения, можно получить способом, в общих чертах представленным на схеме I и описанным в примере 1, приведенном ниже.
Схема I
Реагенты и условия: (a) (i) (изобутил)OCOCl, NMM, ДМФА; 0°С, 2 0 мин.
3
(ii) NH; 0°С в течение 30 мин.
Реагенты и условия: (b) реагент Лавессона, ТГФ; комнатная температура, 3 ч.
3
Реагенты и условия: (с) CHCN; кипячение с обратным холодильником, 3 ч.
Реагенты и условия: (d) Boc-Phe, EDCI, HOBt, DIPEA, ДМФА; комнатная температура, 18 ч.
2
3
4
Реагенты и условия: (e) (i) H:Pd/C, MeOH; (ii) SO-пиридин, NHOH; комнатная температура, 2 ч.
Пример 1
4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота (5)
3
3
2
4
Получение трет-бутилового эфира [1-(S)-карбамоил-2-(4-нитрофенил)зтилкарбаминовой кислоты (1): К раствору 2-(S)-трет-бутоксикарбониламино-3-(4-нитрофенил)пропионовой кислоты, охлажденному до 0°С, и N-метилморфолина (1,1 мл, 9,65 ммоль) в ДМФА (10 мл), охлажденному до 0°С, добавляют по каплям изобутилхлорформиат (1,25 мл, 9,65 ммоль). Смесь перемешивают при 0°С в течение 20 минут, после чего через реакционную смесь пропускают NH (г) в течение 30 минут при 0°С. Реакционную смесь концентрируют и остаток растворяют в EtOAc, промывают последовательно 5% лимонной кислотой, водой, 5% NaHCO, водой и насыщенным раствором соли, сушат (NaSO), фильтруют и концентрируют в вакууме, получая остаток, который растирают в смеси EtOAc/петролейный эфир с получением 2,2 г (74%) требуемого продукта в виде белого твердого вещества.
Получение трет-бутилового эфира [2-(4-нитрофенил)-1-(S)-тиокарбамоилэтил]карбаминовой кислоты (2): К раствору трет-бутилового эфира [1-(S)-карбамоил-2-(4-нитрофенил)этилкарбаминовой кислоты, 1, (0,400 г, 1,29 ммоль) в ТГФ (10 мл) добавляют реагент Лавессона (0,262 г, 0,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 часов и концентрируют до остатка, который очищают на силикагеле, получая 0,350 г (83%) требуемого продукта.
1
3
Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,29 (с, 1Н), 8,10 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 8,01 (с, 1Н), 7,42 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 5,70 (д, J=7,2 Гц, 1Н), 4,85 (д, J=7,2 Гц, 1Н), 3,11-3,30 (м, 1Н), 1,21 (с, 9Н).
3
Получение 1-(S)-(4-этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этиламина (3): Смесь трет-бутилового эфира [2-(4-нитрофенил)-1-(S)-тиокарбамоилэтил]карбаминовой кислоты, 2, (0,245 г, 0,753 ммоль), 1-бром-2-бутанона (0,125 г, 0,828 ммоль) в CHCN (5 мл) кипятят с обратным холодильником 3 часа. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и к раствору добавляют диэтиловый эфир и осадок, который образуется, выделяют фильтрацией. Твердое вещество сушат в вакууме, получая 0,242 г (выход 90%) требуемого продукта. ESI+MS (Масс-спектрометрия с электрораспылительной ионизацией) 278 (М+1).
3
2
4
Получение трет-бутилового эфира {1-[1-(4-этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этилкарбамоил]-2-фенилэтил}карбаминовой кислоты (4): К раствору гидробромида 1-(S)-(4-этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этиламина, 3, (0,393 г, 1,1 ммоль), (S)-(2-трет-бутоксикарбониламино)-3-фенилпропионовой кислоты (0,220 г, 0,828 ммоль) и 1-гидроксибензотриазола (HOBt) (0,127 г, 0,828 ммоль) в ДМФА (10 мл) при 0°С, добавляют 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид (EDCI) (0,159 г, 0,828 ммоль), а затем диизопропиламин (0,204 г, 1,58 ммоль). Смесь перемешивают при 0°С в течение 30 минут, затем при комнатной температуре на протяжении ночи. Реакционную смесь разбавляют водой и экстрагируют EtOAc. Объединенную органическую фазу промывают 1N водной HCl, 5% водным NaHCO, водой и насыщенным раствором соли и сушат над NaSO. Растворитель удаляют в вакууме, получая 0,345 г требуемого продукта, который используют без дополнительной очистки. LC/MS ESI+ (Сочетание жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии с электрораспылительной ионизацией) 525 (М+1).
3
4
Получение 4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовой кислоты (5): трет-бутиловый эфир {1-[1-(4-этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этилкарбамоил]-2-фенилэтил}карбаминовой кислоты, 4, (0,345 г) растворяют в МеОН (4 мл). Каталитическое количество Pd/C (10% мас./мас.) добавляют и смесь перемешивают в атмосфере водорода 2 часа. Реакционную смесь фильтруют через слой CELITE™ и растворитель удаляют при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяют в пиридине (12 мл) и обрабатывают SO-пиридином (0,314 г). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут, после чего добавляют 7% раствор NHOH (50 мл). Затем смесь концентрируют и полученный остаток очищают хроматографией с обращенной фазой, получая 0,222 г требуемого продукта в виде соли аммония.
1
3
Н (CDOD): δ 7,50-6,72 (м, 10Н), 5,44-5,42 (д, 1Н, J=6,0 Гц), 4,34 (с, 1Н), 3,34-2,79 (м, 4Н), 2,83-2,76 (кв, 2Н, J=7,2 Гц), 1,40 (с, 9Н), 1,31 (т, 3Н, J=7,5 Гц).
Конечные соединения по данному изобретению могут быть также выделены в виде свободной кислоты. Неограничивающий пример методики этого выделения описан ниже в примере 4.
Нижеследующее представляет собой неограничивающие примеры соединений, охватываемых первым аспектом категории I настоящего изобретения.
1
3
4-{(S)-2-[(R)-2-(трет-бутоксикарбонил)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,22-7,02 (м, 10Н), 5,39 (с, 1Н), 4,34 (с, 1Н), 3,24-2,68 (м, 6Н), 1,37 (с, 9Н), 1,30 (т, 3H, J=7,5 Гц).
1
4
трет-Бутиловый эфир {1-[1-(4-этилтиазол-2-ил)-(S)-2-(4-сульфоаминофенил)этилкарбамоил]-(S)-2-фенилэтил}метилкарбаминовой кислоты: Н ЯМР (300 МГц, МеОН-d) δ 8,36 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,04-7,22 (м, 9Н), 5,45 (с, 1Н), 3,01-3,26 (м, 2Н), 2,60-2,88 (м, 4Н), 2,33 (с, 3H), 1,30 (с, 9Н).
1
4
Трет-Бутиловый эфир {1-[1-(4-фенилтиазол-2-ил)-(S)-2-(4-сульфоаминофенил)этилкарбамоил]-(S)-2-фенилэтил}метилкарбаминовой кислоты: Н ЯМР (300 МГц, МеОН-d) δ 8,20 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,96-7,99 (м, 2Н), 7,48-7,52 (м, 3H), 7,00-7,23 (м, 7Н), 6,89 (с, 1Н), 5,28 (кв, J=7,5 Гц, 1Н), 4,33 (т, J=6,6 Гц, 1Н), 3,09-3,26 (м, 2Н), 3,34 (дд, J=13,2 и 8,4 Гц, 1Н), 2,82 (дд, J=13,2 и 8,4 Гц, 1Н), 1,38 (с, 9Н).
Второй аспект категории I настоящего изобретения относится к соединениям, имеющим формулу
1
1
где R представляет собой замещенную или незамещенную тиазол-4-ильную группу и неограничивающие примеры R и R и, кроме того, стереохимии у R описаны в таблице II.
Таблица II
№
R
R<sup>1</sup>
26
тиазол-4-ил
(S)-бензил
27
2-метилтиазол-4-ил
(S)-бензил
28
2-этилтиазол-4-ил
(S)-бензил
29
2-пропилтиазол-4-ил
(S)-бензил
30
2-изопропилтиазол-4-ил
(S)-бензил
31
2-циклопропилтиазол-4-ил
(S)-бензил
32
2-бутилтиазол-4-ил
(S)-бензил
33
2-трет-бутилтиазол-4-ил
(S)-бензил
34
2-циклогексилтиазол-4-ил
(S)-бензил
35
2-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
36
2-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
37
2-(2,2-дифторциклопропил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
38
2-фенилтиазол-4-ил
(S)-бензил
39
2-(4-хлорфенил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
40
2-(3,4-диметилфенил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
41
2-(тиофен-2-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
42
2-(тиофен-3-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
43
2-(3-хлортиофен-2-ил)тиофен-4-ил
(S)-бензил
44
2-(3-метилтиофен-2-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
45
2-(2-метилтиазол-4-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
46
2-(фуран-2-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
47
2-(пиразин-2-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
48
2-[(2-метил)пиридин-5-ил]тиазол-4-ил
(S)-бензил
49
2-(4-хлорбензолсульфонилметил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
50
2-(трет-бутилсульфонилметил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
Соединения, охватываемые вторым аспектом категории I настоящего изобретения, можно получить способом, в общих чертах представленным на схеме II и описанным в нижеследующем примере 2.
Схема II
3
Реагенты и условия: (a) (i) (изобутил) OCOCl, EtN, ТГФ; 0°С, 20 мин.
2
2
(ii) CHN; комнатная температура в течение 3 часов.
Реагенты и условия: (b) 48% HBr, ТГФ; 0°С, 1,5 часа.
3
Реагенты и условия: (с) (i) тиобензамид, CHCN; кипячение с обратным холодильником, 2 ч.
(ii) Boc-Phe, HOBt, DIPEA, ДМФА; комнатная температура, 18 ч.
2
3
4
Реагенты и условия: (d) (i) H:Pd/C, MeOH; (ii) SO-пиридин, NHOH; комнатная температура, 12 ч.
Пример 2
4-{(S}-2-(S)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо-2-(2-фенилтиазол-4-ил)}фенилсульфаминовая кислота (9)
2
4
Получение трет-бутилового эфира (S)-[3-диазо-1-(4-нитробензил)-2-оксопропил]карбаминовой кислоты (6): К охлажденному до 0°С раствору 2-(S)-трет-бутоксикарбониламино-3-(4-нитрофенил)пропионовой кислоты (1,20 г, 4,0 ммоль) в ТГФ (20 мл) добавляют по каплям триэтиламин (0,61 мл, 4,4 ммоль), а затем изобутилхлорформиат (0,57 мл, 4,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 20 минут и фильтруют. Фильтрат обрабатывают эфирным раствором диазометана (~16 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов, затем концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в EtOAc и промывают последовательно водой и насыщенным раствором соли, сушат (NaSO), фильтруют и концентрируют. Остаток очищают на силикагеле (смесь гексан/EtOAc 2:1), получая 1,1 г (выход 82%) требуемого продукта в виде слегка желтого твердого вещества.
1
3
H ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,16 (д, J=8,7 Гц, 2Н), 7,39 (д, J=8,7 Гц, 2Н), 5,39 (с, 1Н), 5,16 (д, J=6,3 Гц, 1Н), 4,49 (с, 1Н), 3,25 (дд, J=13,8 и 6,6 Гц, 1Н), 3,06 (дд, J=13,5 и 6,9 Гц, 1Н), 1,41 (с, 9Н).
2
3
2
4
Получение (S)-трет-бутил 4-бром-1-(4-нитрофенил)-3-оксобутан-2-илкарбамата (7): К раствору трет-бутилового эфира (S)-[3-диазо-1-(4-нитробензил)-2-оксопропил]карбаминовой кислоты, 6, (0, 350 г, 1,04 ммоль) в ТГФ (5 мл), охлажденному до 0°С, добавляют по каплям 48% водный HBr (0,14 мл, 1,25 ммоль). Полученную смесь перемешивают при 0°С в течение 1,5 часов, затем реакционную смесь гасят при 0°С насыщенным NaCO. Смесь экстрагируют EtOAc (3×25 мл) и объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором соли, сушат (NaSO), фильтруют и концентрируют, получая 0,400 г продукта, который используют на следующей стадии без дополнительной очистки.
1
3
Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,20 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,39 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 5,06 (д, J=7,8 Гц, 1Н), 4,80 (кв, J=63 Гц, 1Н), 4,04 (с, 2Н), 1,42 (с, 9Н).
3
3
2
4
Получение трет-бутил (S)-1-(S)-2-(4-нитрофенил)-1-(2-фенилтиазол-4-ил)этиламино-1-оксо-3-фенилпропан-2-илкарбамата (8): Смесь тиобензамида (0,117 г, 0,85 ммоль) и (S)-трет-бутил-4-бром-1-(4-нитрофенил)-3-оксобутан-2-илкарбамата, 7, (0,300 г, 0,77 ммоль) в CHCN (4 мл) кипятят с обратным холодильником 2 часа. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и добавляют диэтиловый эфир, осаждая промежуточный продукт, 2-(нитрофенил)-(S)-1-(4-фенилтиазол-2-ил)этиламин, который выделяют фильтрацией в виде гидробромидной соли. Гидробромидную соль растворяют в ДМФА (3 мл) наряду с диизопропилэтиламином (0,42 мл, 2,31 ммоль), 1-гидроксибензотриазолом (0,118 г, 0,7 9 ммоль) и (S)-(2-трет-бутоксикарбониламино)-3-фенилпропионовой кислотой (0,212 г, 0,80 ммоль). Смесь перемешивают при 0°С в течение 30 минут, затем при комнатной температуре на протяжении ночи. Реакционную смесь разбавляют водой и экстрагируют EtOAc. Объединенную органическую фазу промывают 1н. водной HCl, 5% водным NaHCO, водой и насыщенным раствором соли и сушат над NaSO. Растворитель удаляют в вакууме, получая 0,395 г (выход 90%) требуемого продукта, который используют без дополнительной очистки. LC/MS ESI+573 (М+1).
3
4
Получение 4-{(S}-2-(S)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо-2-(2-фенилтиазол-4-ил)}фенилсульфаминовой кислоты (9): трет-бутил (S)-1-(S)-2-(4-нитрофенил)-1-(2-фенилтиазол-4-ил)этиламино-1-оксо-3-фенилпропан-2-илкарбамат, 8, (0,360 г) растворяют в МеОН (4 мл). Добавляют каталитическое количество Pd/C (10% мас./мас.) и смесь перемешивают в атмосфере водорода 12 часов. Реакционную смесь фильтруют через слой CELITE™ и растворитель удаляют при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяют в пиридине (12 мл) и обрабатывают SO-пиридин (0,296 г). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут, после чего добавляют 7% раствор NHOH (10 мл). Затем смесь концентрируют и полученный остаток очищают хроматографией с обращенной фазой, получая 0,050 г требуемого продукта в виде соли аммония.
1
4
Н ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 8,20 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,96-7,99 (м, 2Н), 7,48-7,52 (м, 3Н), 7, 00-7,23 (м, 7Н), 6,89 (с, 1Н), 5,28 (кв, J=7,5 Гц, 1Н), 4,33 (т, J=6,6 Гц, 1Н), 3,09-3,26 (м, 2Н), 3,34 (дд, J=13,2 и 8,4 Гц, 1Н), 2,82 (дд, J=13,2 и 8,4 Гц, 1Н), 1,38 (с, 9Н).
Первый аспект категории II настоящего изобретения относится к соединениям, имеющим формулу
1
1
где R представляет собой замещенную или незамещенную тиазол-2-ильную группу и неограничивающие примеры R и R и, кроме того, стереохимии при R приведены в таблице III.
Таблица III
№
R
R<sup>1</sup>
51
тиазол-2-ил
(S)-бензил
52
4-метилтиазол-2-ил
(S)-бензил
53
4-этилтиазол-2-ил
(S)-бензил
54
4-пропилтиазол-2-ил
(S)-бензил
55
4-изопропилтиазол-2-ил
(S)-бензил
56
4-циклопропилтиазол-2-ил
(S)-бензил
57
4-бутилтиазол-2-ил
(S)-бензил
58
4-трет-бутилтиазол-2-ил
(S)-бензил
59
4-циклогексилтиазол-2-ил
(S)-бензил
60
4-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
61
4-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
62
4-(2,2-дифторциклопропил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
63
4-(метоксиметил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
64
4-(этиловый эфир карбоновой кислоты)тиазол-2-ил
(S)-бензил
65
4,5-диметилтиазол-2-ил
(S)-бензил
66
4-метил-5-этилтиазол-2-ил
(S)-бензил
67
4-фенилтиазол-2-ил
(S)-бензил
68
4-(4-хлорфенил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
69
4-(3,4-диметилфенил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
70
4-метил-5-фенилтиазол-2-ил
(S)-бензил
71
4-(тиофен-2-ил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
72
4-(тиофен-3-ил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
73
4-(5-хлортиофен-2-ил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
74
5,6-дигидро-4Н-циклопента[d]тиазол-2-ил
(S)-бензил
75
4,5,6,7-тетрагидробензо[d]тиазол-2-ил
(S)-бензил
Соединения, охватываемые первым аспектом категории II настоящего изобретения, можно получить способом, в общих чертах представленным на схеме III и описанным в примере 3, представленном ниже.
Схема III
Реагенты и условия: (a) (i) 4М HCl, диоксан; комнатная температура, 1 ч;
3
(ii) метилхлорформиат, пиридин, CHCl, 0°С до комнатной температуры, 48 ч.
2
3
4
Реагенты и условия: (b) (i) H:Pd/C, MeOH; (ii) SO-пиридин, NHOH; комнатная температура, 4 ч.
Пример 3
4-{(S)-2-(4-Этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота (11)
3
3
3
2
4
Получение метил-(S)-1-[(S)-1-(4-этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этиламино]-1-оксо-3-фенилпропан-2-илкарбамата (10): трет-бутил (S)-1-(S)-2-(4-нитрофенил)-1-(2-фенилтиазол-4-ил)этиламино-1-оксо-3-фенилпропан-2-илкарбамат, 8, (0,460 мг, 0,881 ммоль) растворяют в растворе 4М гидрохлорида в 1,4 диоксане (4 мл). Реакционную смесь перемешивают 1 час и растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученный неочищенный амин растворяют в CHCl (8 мл) и добавляют пиридин (1 мл). Температуру смеси охлаждают до 0°С и по каплям добавляют метилхлорформиат (0,083 г, 0,881 ммоль). Реакционной смеси предоставляют возможность нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение 2 дней. Добавляют воду, раствор перемешивают в течение 15 минут и затем экстрагируют несколько раз CHCl. Объединенные органические слои промывают 1н. HCl, 5% NaHCO и насыщенным раствором соли, сушат над NaSO и фильтруют. Растворитель удаляют в вакууме, получая 0,297 г требуемого продукта.
3
4
Получение 4-{(S)-2-(4-этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовой кислоты (11): Метил-(S)-1-[(S)-1-(4-этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этиламино]-1-оксо-3-фенилпропан-2-илкарбамат, 10, (0,297 г) растворяют в МеОН (4 мл). Добавляют каталитическое количество Pd/C (10% мас./мас.) и смесь перемешивают в атмосфере водорода 4 часа. Реакционную смесь фильтруют через слой CELITE™ и растворитель удаляют при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяют в пиридине (12 мл) и обрабатывают SO-пиридином (0,196 г). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут, после чего добавляют 7% раствор NHOH (25 мл). Затем смесь концентрируют и полученный остаток очищают хроматографией с обращенной фазой на силикагеле, получая 0,172 г требуемого продукта в виде соли аммония.
1
3
Н (CDOD): δ 7,26-7,00 (м, 10H), 5,39 (т, 1Н, J=5,7 Гц), 4,38 (т, 1Н, J=5,7 Гц), 3,62 (с, 3H), 3,34-2,75 (м, 6Н), 1,30 (т, 3H, J=7,5 Гц).
Нижеследующее представляет собой неограничивающие примеры первого аспекта категории II настоящего изобретения.
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-тиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,78-7,75 (м, 1Н), 7,51-7,47 (м, 1Н), 7,30-7,02 (м, 9Н), 5,49-5,43 (м, 1Н), 4,39 (т, 1Н, J=8,1 Гц), 3,56 (с, 3H), 3,51-2,71 (м, 4Н).
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-метилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,52-8,49 (м, 1Н), 7,20-6, 99 (м, 10H), 5,37 (ушир.с, 1Н), 4,36 (ушир.с, 1Н), 3,62-3,48 (м, 3H), 3,32-3,22 (м, 1Н), 3,11-3,01 (м, 2Н), 2,80-2,72 (м, 1Н), 2,42 (с, 3H).
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-пропилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,51-8,49 (м, 1Н), 7,22-6,99 (м, 10H), 5,39 (т, J=6,0 Гц, 1Н), 4,38 (дд, J=14,4, 9,0 Гц, 1Н), 3,62 (с, 2Н), 3,59-3,48 (м, 1Н), 3,27 (дд, J=13,5, 6,3 Гц, 1Н), 3,12-3,02 (м, 2Н), 2,81-2,71 (м, 3H), 1,81-1,68 (м, 2Н), 0,985 (т, J=7,5 Гц, 3H).
.
1
3
4-{(S)-2-(4-трет-Бутилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,23-7,19 (м, 5Н), 7,10-6,98 (м, 5Н), 5,42-5,38 (м, 1H), 4,37 (дд, J=8,4, 5,4 Гц, 1H), 3,61 (с, 2Н), 3,48 (ушир.с, 1H), 3,32-3,25 (м, 1H), 3,13-3,07 (м, 2Н), 2,77 (дд, J=13,5, 9,3 Гц, 1H), 1,36 (с, 9Н).
.
1
3
4-{(S)-2-(4-Циклопропилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: H (CDOD): δ 7,13-6,91 (м, 10H), 6,81 (с, 1Н), 5,23 (т, 1H, J=7,8 Гц), 4,24 (т, 1H, J=8,4 Гц), 3,50 (с, 3H), 3,12-2,66 (м, 4Н), 1,94 (т, 1H, J=5,1 Гц), 0,84-0,73 (м, 4Н).
.
1
3
4-{(S)-2-(4-Циклогексилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,21-6,97 (м, 10H), 5,45-5,25 (м, 1Н), 5,42-5,36 (м, 1Н), 5,10-5,02 (м, 1Н), 4,03-4,35 (м, 1Н), 3,63 (с, 2Н), 3,60-3,49 (м, 1Н), 3,12-3,06 (м, 1Н), 2,95 (дд, J=14,1, 9,9 Гц, 1Н), 2,82-2,72 (м, 2Н), 2,07-1,77 (м, 3H), 1,56-1,31 (м, 10H).
.
1
3
4-{(S)-2-(4,5-Диметилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,45 (д, J=7,8 Гц, 1Н), 7,22-7,03 (м, 9Н), 5,28 (т, J=7,2 Гц, 1Н), 4,36 (т, J=7,8 Гц, 1Н), 3,62 (с, 2Н), 3,52-3,46 (м, 1Н), 3,22 (дд, J=14,1, 6,3 Гц, 1Н), 3,07-2,99 (м, 2Н), 2,77 (дд, J=13,5, 8,4 Гц, 1Н), 2,32 (с, 3H), 2,30 (с, 3H).
.
1
3
4-{(S)-2-(4-Этил-5-метилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: H ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,45 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,36-7,00 (м, 9Н), 5,31 (ушир.с, 1Н), 4,37 (ушир.с, 1Н), 3,62-3,46 (м, 3H), 3,28-2,64 (м, 6Н), 2,34 (д, J=5,4 Гц, 3H), 1,37-1,20 (м, 3H).
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[4-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-2-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,40 (д, J=11,1 Гц, 1Н), 7,30-7,15 (м, 5Н), 7,12-7,00 (м, 5Н), 5,41 (дд, J=8,4, 5,1 Гц, 1Н), 4,42-4,36 (м, 1Н), 3,77-3,52 (м, 5Н), 3,33-3,23 (м, 1Н), 3,15-3,02 (м, 2Н), 2,97-2,91 (м, 1Н), 2,82-2,70 (м, 1Н).
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо)-2-[4-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-2-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,23-7,03 (м, 10H), 5,46-5,34 (м, 1Н), 4,54-4,44 (м, 1Н), 3,63 (с, 2Н), 3,62-3,35 (м, 1Н), 3,34-3,24 (м, 1Н), 3,17-2,99 (м, 4Н), 2, 82-2,74 (м, 1Н), 2,69-2,56 (м, 2Н).
.
1
3
4-{(S)-2-[4-(2,2-Дифторциклопропил)тиазол-2-ил]-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: H ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,28-7, 00 (м, 10H), 5,42-5,37 (м, 1Н), 4,41-4,38 (м, 1Н), 3,60 (с, 2Н), 3,61-3,52 (м, 1Н), 3,35-3,23 (м, 1Н), 3,04-2,91 (м, 2Н), 2,78-2, 68 (м, 1Н), 1,99-1,90 (м, 2Н).
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[4-(метоксиметил)тиазол-2-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота: H ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,55 (д, J=6,6 Гц, 1Н), 7,31 (с, 1Н), 7,21-7,05 (м, 9Н), 5,41 (ушир.с, 1Н), 4,53 (с, 2Н), 4,37 (ушир.с, 1Н), 3,62 (с, 2Н), 3,59-3, 46 (м, 1Н), 3,41 (с, 3H), 3,28-3,22 (м, 1Н), 3,13-3,00 (м, 3H), 2,80-2,72 (м, 1Н).
.
1
3
4-{(S)-2-(4-(Этоксикарбонил)тиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: H ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,25 (с, 1Н), 7,20-7,07 (м, 10H), 5,40 (дд, J=7,5 Гц, 1Н), 4,45-4,36 (м, 3H), 3,63 (с, 2Н), 3,60-3,51 (м, 1Н), 3,34-3,27 (м, 1Н), 3,17-3,00 (м, 2Н), 2,79 (дд, J=13,5, 8,4 Гц, 1Н), 1,42 (т, J=7,5 Гц, 3H).
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(5-фенилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,63 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,96 (с, 1Н), 7,59 (д, J=7,8 Гц, 2Н), 7,47-7,36 (м, 3H), 7,19-7,10 (м, 10H), 5,42-5,40 (м, 1Н), 4,41 (т, J=7,2, 1Н), 3,65-3,50 (м, 3H), 3,16-2,77 (м, 4Н).
.
1
3
4-{(S)-2-(4-Этил-5-фенилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,50-7,38 (м, 4Н), 7,21-7,11 (м, 10H), 5,45-5,35 (м, 1Н), 5,42-4,37 (м, 1Н), 3,63-3,50 (м, 3H), 3,34-3,29 (м, 3H), 3,15-3,03 (м, 2Н), 2,84-2,74 (м, 3H), 1,31-1,21 (м, 3H).
.
1
3
4-{(S)-2-[4-(3,4-Диметилфенил)тиазол-2-ил]-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,60 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,73 (с, 1Н), 7,65 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,57 (с, 1Н), 7,21-7,11 (м, 10H), 5,47 (д, J=7,2 Гц, 1Н), 4,44-4,38 (м, 1Н), 3,63 (с, 2Н), 3,62-3,51 (м, 1Н), 3,40-3,32 (м, 1Н), 3,20-3, 05 (м, 2Н), 2,84-2,77 (м, 1Н), 2,35 (с, 3H), 2,32 (с, 3H).
.
1
3
4-{(S)-2-[4-(4-Хлорфенил)тиазол-2-ил]-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,65 (д, J=8,4 Гц, 1Н), 7,95-7,91 (м, 2Н), 7,70 (с, 1Н), 7,46-7,41 (м, 2Н), 7,19-7,10 (м, 9Н), 5,50-5,45 (м, 1Н), 4,41 (т, J=6, 6 Гц, 1Н), 3,63 (с, 2Н), 3,62-3,51 (м, 1Н), 3,41-3,33 (м, 1Н), 3,20-3,04 (м, 2Н), 2,81 (дд, J=13,8, 9,0 Гц, 1Н).
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-фенилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,94-7,92 (д, 2Н, J=7,3 Гц), 7,65 (с, 1Н), 7,45-7,31 (м, 3H), 7,22-7,10 (м, 9Н), 5,46 (т, 1H, J=6,8 Гц), 4,39 (м, 1Н), 3,62 (с, 3H), 3,36-2,79 (м, 6Н).
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[4-(тиофен-2-ил)тиазол-2-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,63 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,52-7,51 (м, 2Н), 7,39 (дд, J=5,1, 1,2 Гц, 1Н), 7,20-7,08 (м, 10H), 5,50-5,40 (м, 1Н), 4,39 (т, J=8,1 Гц, 1Н), 3,63 (с, 2Н), 3,50 (ушир.с, 1Н), 3,39-3,32 (м, 1Н), 3,18-3,04 (м, 2Н), 2,80 (дд, J=13,5, 8,7 Гц, 1Н).
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[4-(тиофен-3-ил)тиазол-2-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,60 (д, J=7,8 Гц, 1Н), 7,83 (д, J=1,5 Гц, 1Н), 7,56-7,46 (м, 3H), 7,14 (д, J=25,2 Гц, 10H), 5,46-5,43 (м, 1Н), 4,40-4,38 (м, 1Н), 3,62 (с, 3H), 3,55-3,45 (м, 1Н), 3,19-3,04 (м, 4Н), 2,84-2,75 (м, 1Н).
.
1
4
4-{(S)-2-(4-Этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропионамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: H ЯМР (300 МГц, МеОН-d) δ 8,45-8,56 (м, 1Н), 7,01-7,25 (м, 9Н), 7,03 (с, 1Н), 5,40-5,50 (м, 1Н), 3,48-3,65 (м, 3H), 3,36 (дд, J=14,4 и 6,0 Гц, 1Н), 3,23 (дд, J=14,4 и 6,0 Гц, 1Н), 2,95-3,10 (м, 1Н), 2,75-2,86 (м, 3H), 2,57-2,64 (м, 3H), 1,30 (т, J=7,5 Гц, 3H).
.
1
3
4-{(S)-2-(5,6-Дигидро-4Н-циклопента[d]тиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,46 (ушир.с, 1Н), 7,16-7,05 (м, 9Н), 5,31 (ушир.с, 1Н), 4,35 (ушир.с, 1Н), 3,61 (с, 2Н), 3,52-3,43 (м, 1Н), 3,28-3,18 (м, 1Н), 3,10-2,98 (м, 2Н), 2,92-2,74 (м, 4Н), 2,58-2,44 (м, 2Н).
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4,5,6,7-тетрагидробензо[d]тиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,21-7,08 (м, 9Н), 5,45-5,25 (м, 1Н), 4,45-4,30 (м, 1Н), 3,63 (с, 2Н), 3,64-3,34 (м, 1Н), 3,33-3,20 (м, 1Н), 3,09-3,02 (м, 2Н), 2,75 (ушир.с, 5Н), 1,90 (ушир.с, 4Н).
.
1
3
4-{(S)-2-[4-(5-Хлортиофен-2-ил)тиазол-2-ил]-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,63 (д, J=8,7 Гц, 1Н), 7,55 (с, 1Н), 7,39-7,31 (м, 1Н), 7,23-7,10 (м, 9Н), 7,00-6,97 (м, 1Н), 5,43-5,40 (м, 1Н), 5,39 (т, J=14,7 Гц, 1Н), 3,63 (с, 2Н), 3,60-3,51 (м, 1Н), 3,34-3,27 (м, 1Н), 3,17-3,03 (м, 2Н), 2,80 (дд, J=14,1, 8,4 Гц, 1Н).
2
2
3
Дополнительная итерация первого аспекта категории II относится к соединениям, где R содержит -ОСНСН (этокси); нижеследующее представляет собой неограничивающий пример такого соединения.
.
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Этоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,22-7, 00 (м, 10H), 5,39 (т, 1H, J=6,0 Гц), 4,37 (т, 1H, J=6,1 Гц), 4,08-4,00 (кв, 2Н, J=7,1 Гц), 3,25-2,74 (м, 6Н), 1,30 (т, 3H, J=7,5 Гц), 1,20 (т, 3H, J=6,9 Гц).
Второй аспект категории II настоящего изобретения относится к соединениям, имеющим формулу
1
1
где R представляет собой замещенную или незамещенную тиазол-4-ильную группу и неограничивающие примеры R и R и, кроме того, стереохимии у R представлены в таблице IV.
Таблица IV
№
R
R<sup>1</sup>
76
тиазол-4-ил
(S)-бензил
77
2-метилтиазол-4-ил
(S)-бензил
78
2-этилтиазол-4-ил
(S)-бензил
79
2-пропилтиазол-4-ил
(S)-бензил
80
2-изопропилтиазол-4-ил
(S)-бензил
81
2-циклопропилтиазол-4-ил
(S)-бензил
82
2-бутилтиазол-4-ил
(S)-бензил
83
2-трет-бутилтиазол-4-ил
(S)-бензил
84
2-циклогексилтиазол-4-ил
(S)-бензил
85
2-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
86
2-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
87
2-(2,2-дифторциклопропил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
88
2-фенилтиазол-4-ил
(S)-бензил
89
2-(4-хлорфенил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
90
2-(3,4-диметилфенил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
91
2-(тиофен-2-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
92
2-(тиофен-3-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
93
2-(3-хлортиофен-2-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
94
2-(3-метилтиофен-2-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
95
2-(2-метилтиазол-4-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
96
2-(фуран-2-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
97
2-(пиразин-2-ил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
98
2-[(2-метил)пиридин-5-ил]тиазол-4-ил
(S)-бензил
99
2-(4-хлорбензолсульфонилметил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
100
2-(трет-бутилсульфонилметил)тиазол-4-ил
(S)-бензил
Соединения, охватываемые вторым аспектом категории II настоящего изобретения, можно получить способом, в общих чертах представленным на схеме IV и описанным в нижеследующем примере 4.
Схема IV
3
Реагенты и условия: (a)(i) пропантиоамид, CHCN; кипячение с обратным холодильником, 2 ч.
(ii) Boc-Phe, HOBt, DIPEA, ДМФА; комнатная температура, 18 ч.
Y
2
3
4
Реагенты и условия: (b) (i) H:Pd/C, МеОН; (ii) SO-пиридин, NHOH; комнатная температура, 18 ч.
Пример 4
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(2-этилтиазол-4-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота (13)
3
3
2
4
Получение метил (S)-1-[(S)-1-(2-этилтиазол-4-ил)-2-(4-нитрофенил)этил]амино-1-оксо-3-фенилпропан-2-илкарбамата (12): Смесь пропантиоамида (69 мг, 0,78 ммоль) и (S)-трет-бутил 4-бром-1-(4-нитрофенил)-3-оксобутан-2-илкарбамата 7, (0,300 г, 0,77 ммоль) в CHCN (4 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и добавляют диэтиловый эфир, осаждая промежуточный 2-(нитрофенил)-(S)-1-(4-этилтиазол-2-ил)этиламин, который выделяют фильтрацией в виде гидробромидной соли. Гидробромидную соль растворяют в ДМФА (8 мл) вместе с диизопропилэтиламином (0,38 мл, 2,13 ммоль), 1-гидроксибензотриазолом (107 мг, 0,71 ммоль) и (S)-(2-метоксикарбониламино)-3-фенилпропионовой кислотой (175 мг, 0,78 ммоль). Смесь перемешивают при 0°С в течение 30 минут, затем при комнатной температуре на протяжении ночи. Реакционную смесь разбавляют водой и экстрагируют EtOAc. Объединенную органическую фазу промывают 1н. водной HCl, 5% водным NaHCO, водой и насыщенным раствором соли и сушат над NaSO. Растворитель удаляют в вакууме, получая 0,300 г (выход 81%) требуемого продукта, который используют без дополнительной очистки. LC/MS ESI+MS 483 (М+1).
3
4
Получение аммониевой соли 4-((S)-2-((S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо)-2-(2-этилтиазол-4-ил)этил)фенилсульфаминовой кислоты (13): трет-Бутил (S)-l-(S)-2-(4-нитрофенил)-1-(2-этилтиазол-4-ил)этиламино-1-оксо-3-фенилпропан-2-илкарбамат, 12, (0,300 г) растворяют в МеОН (4 мл). Добавляют каталитическое количество Pd/C (10% мас./мас.) и смесь перемешивают в атмосфере водорода 18 часов. Реакционную смесь фильтруют через слой CELITE™ и растворитель удаляют при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяют в пиридине (12 мл) и обрабатывают SO-пиридином (223 мг, 1,40 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут, после чего добавляют 7% раствор NHOH (12 мл). Затем смесь концентрируют и полученный остаток очищают хроматографией с обращенной фазой, получая 25 мг требуемого продукта в виде соли аммония.
1
4
Н ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 7,14-7,24 (м, 6Н), 6,97-7,0 (м, 4Н), 6,62 (с, 1Н), 5,10-5,30 (м, 1Н), 4,36 (т, J=7,2 Гц, 1Н), 3,63 (с, 3H), 3,14 (дд, J=13,5 и 6,3 Гц, 1Н), 2,93-3,07 (м, 5Н), 2,81 (дд, J=13,5 и 6,3 ГЦ, 1Н), 1,39 (т, J=7,8 Гц, 3H).
В другой итерации способа настоящего изобретения, соединение 13, а также другие аналоги, которые входят в настоящее изобретение, могут быть выделены в виде свободной кислоты, модифицируя способ, описанный ниже.
2
Реагенты и условия: (a) H:Pd/C, МеОН; комнатная температура, 40 ч.
3
3
Реагенты и условия: (b) SO-пиридин, CHCN; нагрев, 45 мин.
Пример 4а
4-((S)-2-((S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо)-2-(2-этилтиазол-4-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота [форма свободной кислоты] (13)
2
2
2
2
2
2
Получение метилового эфира {1-[2-(S)-(4-(S)-аминофенил)-1-(2-этилтиазол-4-ил)этилкарбамоил]-2-фенилэтил}карбаминовой кислоты (12а): Сосуд аппарата для гидрирования Парра загружают трет-бутил (S)-1-(S)-2-(4-нитрофенил)-1-(2-этилтиазол-4-ил)этиламино-1-оксо-3-фенилпропан-2-илкарбаматом, 12, (18,05 г, 37,4 ммоль, 1,0 экв.) и Pd/C (10% Pd на С, 50% влажный, Degussa-type Е101 NE/W, 2,68 г, 15% мас.) в виде твердых веществ. Добавляют МеОН (270 мл, 15 мл/г), получая суспензию. Сосуд оснащают оборудованием, необходимым для аппарата Парра для гидрирования. Сосуд подвергают операции дегазирования путем его неоднократного наполнения N (3×20 фунт/кв.дюйм) и последующего вакуумирования до инертного состояния, за которой следует аналогичная операция с использованием Н (3×40 фунт/кв.дюйм). Сосуд наполняют Н и сосуд встряхивают при давлении Н 40 фунт/дюйм в течение ~40 ч. Сосуд вакуумируют и создают в нем инертную атмосферу продуванием N (5×20 фунт/кв.дюйм). Аликвоту фильтруют и анализируют методом ВЭЖХ для контролирования полноты превращения. Суспензию фильтруют через слой целлита, удаляя катализатор, и гомогенный желтый фильтрат концентрируют роторным испарением, получая 16,06 г (выход 95%) требуемого продукта в виде желтовато-коричневого твердого вещества, которое используют без дополнительной очистки.
3
3
2
3
4
Получение 4-((S)-2-((S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо)-2-(2-этилтиазол-4-ил)этил)фенилсульфаминовой кислоты (13): 100 мл RBF загружают метиловым эфиром {1-[2-(S)-(4-(S)-аминофенил)-1-(2-этилтиазол-4-ил)этилкарбамоил]-2-фенилэтил}карбаминовой кислоты, 12а, (10,36 г, 22,9 ммоль, 1,0 экв.), полученным на стадии, описанной выше. Добавляют ацетонитрил (50 мл, 5 мл/г) и желтую суспензию перемешивают при комнатной температуре. Вторую 3-горлую 500-мл RBF загружают SO·пир (5,13 г, 32,2 ммоль, 1,4 экв.) и ацетонитрилом (50 мл, 5 мл/г) и белую суспензию перемешивают при комнатной температуре. Обе суспензии осторожно нагревают до тех пор, пока реакционный раствор, содержащий метиловый эфир {1-[2-(S)-(4-(S)-аминофенил)-1-(2-этилтиазол-4-ил)этилкарбамоил]-2-фенилэтил}карбаминовой кислоты, не станет красно-оранжевым, по окраске (обычно для этого примера около 44°С). Этот субстрат-содержащий раствор выливают одной порцией в перемешиваемую суспензию SO·пир при 35°С. Полученную непрозрачную смесь (39°С) энергично перемешивают, предоставляя ей возможность охладиться до комнатной температуре. После перемешивания в течение 45 мин реакция, как определяют методом ВЭЖХ, завершается. К оранжевой суспензии добавляют НО (200 мл, 20 мл/г), получая желто-оранжевый гомогенный раствор, имеющий pH приблизительно 2,4. Концентрированную HPO добавляют медленно на протяжении 12 минут, понижая pH до приблизительно 1,4. Во время этого доведения pH образуется не совсем белый осадок и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Суспензию фильтруют и фильтровальный осадок промывают фильтратом. Фильтровальный осадок сушат на воздухе на фильтре на протяжении ночи, получая 10,89 г (выход 89%) требуемого продукта в виде желтовато-коричневого твердого вещества.
Нижеследующее представляет собой дополнительные неограничивающие примеры второго аспекта категории II настоящего изобретения.
1
4
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(2-метилтиазол-4-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 8,15 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,16-7,25 (м, 5Н), 6,97-7,10 (м, 4Н), 6,61 (с, 1Н), 5,00-5,24 (м, 1Н), 4,36 (т, J=7,2 Гц, 1Н), 3,64 (с, 2Н), 3,11-3,19 (с, 1Н), 2,92-3,04 (с, 2Н), 2,81 (дд, J=13,5 и 8,1 Гц, 1Н), 2,75 (с, 3H).
1
4
4-{(S)-2-(2-Этилтиазол-4-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 7,16-7,29 (м, 5Н), 7,02-7,12 (м, 4Н), 6,83 (с, 1Н), 5,10-5,35 (м, 1Н), 3,52-3,67 (м, 3H), 3,18-3,25 (м, 2Н), 3,05 (кв, J=7,5 Гц, 2Н), 2,82-2,95 (м, 2Н), 2,65 (с, 3H), 1,39 (т, J=7,5 Гц, 3H).
1
3
4-{(S)-2-(2-Изопропилтиазол-4-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (CDOD) δ 8,16 (д, 1H, J=8,1 Гц), 7,22-7,13 (м, 3H), 7,07 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,96 (д, 1H, J=8,1 Гц), 6,62 (с, 1Н), 5,19 (т, 1H, J=7,2 Гц), 4,36 (т, 1H, J=7,8 Гц), 3,63 (с, 3H), 3,08 (1Н, А из АВХ, J=3,6, 14,5 Гц), 2,99 (1Н, В из АВХ, J=7,2, 13,8 Гц), 2,85-2,78 (м, 1Н), 1,41 (д, 6Н, J=6,9 Гц).
1
3
4-{(S)-2-(2-Циклопропилтиазол-4-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,15-7,02 (м, 5Н), 6,96-6,93 (д, 2Н, J=8,4 Гц), 6,86-6,83 (д, 2Н, J=8,3 Гц), 6,39 (с, 1Н), 5,01 (т, 1Н, J=5,0 Гц), 4,22 (т, 1Н, J=7,4 Гц), 3,51 (с, 3H), 2,98-2,69 (м, 2Н), 2,22-2,21 (м, 1Н), 1,06-1,02 (м, 2Н), 0,92-0,88 (м, 2Н).
1
3
4-{(S)-2-{2-[(4-Хлорфенилсульфонил)метил]тиазол-4-ил}-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,96-7,93 (д, 2Н, J=8,6 Гц), 7,83-7,80 (д, 2Н, J=8,6 Гц), 7,44-7,34 (м, 5Н), 7,29-7,27 (д, 2Н, J=8,4 Гц), 7,14-7,11 (д, 2Н, J=8,4 Гц), 6,97 (с, 1Н), 5,31 (т, 1Н, J=6,8 Гц), 5,22-5,15 (м, 2Н), 4,55 (т, 1Н, J=7,3 Гц), 3,84 (с, 3H), 3,20-2,96 (м, 4Н).
1
3
4-{(S)-2-[2-(трет-Бутилсульфонилметил)тиазол-4-ил]-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,40-7,30 (м, 5Н), 7,21-7,10 (м, 4Н), 7,02 (с, 1Н), 5,37 (т, 1Н, J=6,9 Гц), 5,01-4,98 (м, 2Н), 4,51 (т, 1H, J=7,1 Гц), 3,77 (с, 3H), 3,34-2,91 (м, 4Н), 1,58 (с, 9Н).
1
6
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропионамидо]-2-(2-фенилтиазол-4-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, DMSO-d) δ 7,96-7,99 (м, 2Н), 7,51-7,56 (м, 3H), 7,13-7,38 (м, 6Н), 6,92-6,95 (м, 4Н), 5,11-5,16 (м, 1Н), 4,32-4,35 (м, 1Н), 3,51 (с, 3H), 3,39-3,40 (м, 2Н), 3,09-3,19 (м, 1Н), 2,92-3,02 (м, 2Н), 2,75 (дд, J=10,5 Гц и 9,9 Гц, 1Н).
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[2-(тиофен-2-ил)тиазол-4-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,61-7,56 (м, 2Н), 7,25-7,01 (м, 10H), 6,75 (с, 1Н), 5,24-5,21 (кв, 1H, J=7,2 Гц), 4,38 (т, 1H, J=7,2 Гц), 3,60 (с, 3H), 3,23-3,14 (м, 1Н), 3,08-3,00 (м, 2Н), 2,87-2,80 (м, 1Н).
1
3
4-{(S)-2-[2-(3-Хлортиофен-2-ил)тиазол-4-ил]-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,78-7,76 (д, 1Н, J=5,4 Гц), 7,36-7,14 (м, 10H), 7,03 (с, 1Н), 5,39 (т, 1Н, J=6,9 Гц), 4,54 (т, 1Н, J=7,3 Гц), 3,80 (с, 3H), 3,39-2,98 (м, 4Н).
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[2-(3-метилтиофен-2-ил)тиазол-4-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,38 (д, 1Н, J=5,1 Гц), 7,15-6,93 (м, 10H), 6,73 (с, 1Н), 5,17 (т, 1Н, J=6,9 Гц), 4,31 (т, 1Н, J=7,3 Гц), 3,57 (с, 3H), 3,18-3,11 (м, 1Н), 3,02-2,94 (м, 2Н), 2,80-2,73 (м, 1Н), 2,46 (с, 3H).
1
3
4-{[(S)-2-(2-(Фуран-2-ил)тиазол-4-ил]-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,54-7,46 (м, 1Н), 7,02-6,79 (м, 10H), 6,55-6,51 (м, 1Н), 6,44-6,41 (м, 1Н), 5,02-5,00 (кв, 1Н, J=6,4 Гц), 4,16-4,14 (кв, 1H, J=7,1 Гц), 3,43 (с, 3H), 2,96-2,58 (м, 4Н).
1
4
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[2-(2-метилтиазол-4-ил)тиазол-4-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота: H ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 8,27 (д, J=5,4 Гц, 1Н), 7,97 (с, 1Н), 6,99-7,21 (м, 8Н), 5,18-5,30 (м, 1Н), 4,30-4,39 (м, 1Н), 3,64 (с, 3H), 3,20 (дд, J=14,1 и 6,6 Гц, 1Н), 2,98-3,08 (м, 2Н), 2,84 (дд, J=14,1 и 6,6 Гц, 1Н), 2,78 (с, 3H).
1
4
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(2-пиразин-2-ил)тиазол-4-ил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 9,34 (с, 1Н), 8,65 (с, 2Н), 8,34 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,00-5,16 (м, 9Н), 5,30 (кв, J=7,2 Гц, 1Н), 4,41 (т, J=7,2 Гц, 1Н), 3,65 (с, 3H), 3,23 (дд, J=13,8 и 6,9 Гц, 1Н), 2,98-3,13 (м, 2Н), 2,85 (дд, J=13,8 и 6,9 Гц, 1Н).
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[2-(6-метилпиридин-3-ил)тиазол-4-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 8,90 (с, 1Н), 8,19-8,13 (м, 1Н), 7,39-7,36 (д, 1Н, J=8,2 Гц), 7,07-6,88 (м, 9Н), 6,79 (с, 1Н), 5,17 (т, 1Н, J=7,0 Гц), 4,29 (т, 1Н, J=7,4 Гц), 3,54 (с, 3H), 3,10-2,73 (м, 4Н), 2,53 (с, 3H).
Категория III настоящего изобретения относится к соединениям, имеющим формулу
1
1
где R представляет собой замещенную или незамещенную тиазол-2-ильную группу и неограничивающие примеры R и R и, кроме того, стереохимии у R представлены в таблице V.
Таблица V
№
R
R<sup>1</sup>
101
тиазол-2-ил
(S)-бензил
102
4-метилтиазол-2-ил
(S)-бензил
103
4-этилтиазол-2-ил
(S)-бензил
104
4-пропилтиазол-2-ил
(S)-бензил
105
4-изопропилтиазол-2-ил
(S)-бензил
106
4-циклопропилтиазол-2-ил
(S)-бензил
107
4-бутилтиазол-2-ил
(S)-бензил
108
4-трет-бутилтиазол-2-ил
(S)-бензил
109
4-циклогексилтиазол-2-ил
(S)-бензил
110
4-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
111
4-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
112
4-(2,2-дифторциклопропил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
113
4-(метоксиметил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
114
4-(этиловый эфир карбоновой кислоты)тиазол-2-ил
(S)-бензил
115
4,5-диметилтиазол-2-ил
(S)-бензил
116
4-метил-5-этилтиазол-2-ил
(S)-бензил
117
4-фенилтиазол-2-ил
(S)-бензил
118
4-(4-хлорфенил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
119
4-(3,4-диметилфенил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
120
4-метил-5-фенилтиазол-2-ил
(S)-бензил
121
4-(тиофен-2-ил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
122
4-(тиофен-3-ил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
123
4-(5-хлортиофен-2-ил)тиазол-2-ил
(S)-бензил
124
5,6-дигидро-4Н-циклопента[d]тиазол-2-ил
(S)-бензил
125
4,5,6,7-тетрагидробензо[d]тиазол-2-ил
(S)-бензил
Соединения, охватываемые категорией IV настоящего изобретения, можно получить способом, в общих чертах представленным на схеме VI и изложенным в примере 6, ниже.
Схема V
Реагенты и условия: (a) Ac-Phe, EDCI, HOBt, DIPEA, ДМФА; комнатная температура, 18 ч.
2
3
4
Реагенты и условия: (b) (i) H:Pd/C, MeOH;. (ii) SO-пиридин, NHOH.
Пример 5
4-[(S)-2-((S)-2-Ацетамидо-3-фенилпропанамидо)-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил]фенилсульфаминовая кислота (15)
3
2
4
Получение (S)-2-ацетамидо-1H-[(S)-1-(4-этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этил]-3-фенилпропанамида (14): К раствору гидробромида 1-(S)-(4-этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этиламина, 3, (0,343 г, 0,957 ммоль), N-ацетил-L-фенилаланина (0,218 г), 1-гидроксибензотриазола (HOBt) (0,161 г), диизопропилэтиламина (0,26 г) в ДМФА (10 мл) при 0°С добавляют 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид (EDCI) (0,201 г). Смесь перемешивают при 0°С в течение 30 минут, затем при комнатной температуре на протяжении ночи. Реакционную смесь разбавляют водой и экстрагируют EtOAc. Объединенную органическую фазу промывают 1н. водной HCl, 5% водным NaHCO, водой и насыщенным раствором соли и сушат над NaSO. Растворитель удаляют в вакууме, получая 0,313 г (выход 70%) требуемого продукта, который используют без дополнительной очистки. LC/MS ESI+ 467 (М+1).
3
4
Получение 4-((S)-2-((S)-2-ацетамидо-3-фенилпропанамидо)-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовой кислоты (15): (S)-2-ацетамидо-N-[(S)-1-(4-этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этил]-3-фенилпропанамид, 14, (0,313 г) растворяют в МеОН (4 мл). Добавляют каталитическое количество Pd/C (10% мас./мас.) и смесь перемешивают в атмосфере водорода 2 часа. Реакционную смесь фильтруют через слой CELITE™ и растворитель удаляют при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяют в пиридине (12 мл) и обрабатывают SO-пиридином (0,320 г). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут, после чего добавляют 7% раствор NHOH (30 мл). Затем смесь концентрируют и полученный остаток очищают хроматографией с обращенной фазой, получая 0,215 г требуемого продукта в виде соли аммония.
1
3
Н (CDOD): δ 7,23-6,98 (м, 10H), 5,37 (т, 1Н), 4,64 (т, 1Н, J=6,3 Гц), 3,26-2,74 (м, 6Н), 1,91 (с, 3H), 1,29 (т, 3H, J=7,5 Гц).
Нижеследующее представляет собой дополнительные неограничивающие примеры соединений, охватываемых категорией III настоящего изобретения.
1
3
4-[(S)-2-((S)-2-Ацетамидо-3-фенилпропанамидо)-2-(4-трет-бутилтиазол-2-ил)этил]фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,22-7,17 (м, 5Н), 7,06 (дд, J=14,1, 8,4 Гц, 4Н), 6,97 (д, J=0,9 Гц, 1Н), 5,39 (дд, J=8,4, 6,0 Гц, 1Н), 4,65 (т, J=7,2 Гц, 1Н), 3,33-3,26 (м, 1Н), 3,13-3,00 (м, 3H), 2,80 (дд, J=13,5, 8,7 Гц, 1Н), 1,91 (с, 3H), 1,36 (с, 9Н).
1
3
4-{(S)-2-((S)-2-Ацетамидо-3-фенилпропанамидо)-2-[4-(тиофен-3-ил)тиазол-2-ил]этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,58 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,83-7,82 (м, 1Н), 7,57-7,46 (м, 3H), 7,28-6,93 (м, 11Н), 5,54-5,43 (м, 1Н), 4,69-4,55 (м, 2Н), 3,41-3,33 (м, 1Н), 3,14-3,06 (3H), 2,86-2,79 (м, 1Н), 1,93 (с, 3H).
Первый аспект категории IV настоящего изобретения относится к соединениям, имеющим формулу
1
1
где R представляет собой замещенную или незамещенную тиофен-2-ил группу и неограничивающие примеры R и R и, кроме того, стереохимии у R представлены в таблице VI.
Таблица VI
№
R
R<sup>1</sup>
126
тиазол-2-ил
водород
127
4-метилтиазол-2-ил
водород
128
4-этилтиазол-2-ил
водород
129
4-пропилтиазол-2-ил
водород
130
4-изопропилтиазол-2-ил
водород
131
4-циклопропилтиазол
водород
132
4-бутилтиазол-2-ил
водород
133
4-трет-бутилтиазол-2-ил
водород
134
4-циклогексилтиазол-2-ил
водород
135
4,5-диметилтиазол-2-ил
водород
136
4-метил-5-этилтиазол-2-ил
водород
137
4-фенилтиазол-2-ил
водород
138
тиазол-2-ил
(S)-изопропил
139
4-метилтиазол-2-ил
(S)-изопропил
140
4-этилтиазол-2-ил
(S)-изопропил
141
4-пропилтиазол-2-ил
(S)-изопропил
142
4-изопропилтиазол-2-ил
(S)-изопропил
143
4-циклопропилтиазол-2-ил
(S)-изопропил
144
4-бутилтиазол-2-ил
(S)-изопропил
145
4-трет-бутилтиазол-2-ил
(S)-изопропил
146
4-циклогексилтиазол-2-ил
(S)-изопропил
147
4,5-диметилтиазол-2-ил
(S)-изопропил
148
4-метил-5-этилтиазол-2-ил
(S)-изопропил
149
4-фенилтиазол-2-ил
(S)-изопропил
150
4-(тиофен-2-ил)тиазол-2-ил
(S)-изопропил
Соединения, охватываемые категорией III настоящего изобретения, можно получить способом, в общих чертах представленным на схеме V и описанным в нижеследующем примере 5.
Схема VI
Реагенты и условия: (a) Boc-Val; EDCI, HOBt, DIPEA, ДМФА; комнатная температура, 18 ч.
2
3
4
Реагенты и условия: (b) (i) H:Pd/C, MeOH; (ii) SO-пиридин, NHOH, комнатная температура, 2 ч.
Пример 6
4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)-3-метилбутанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота (17)
3
2
4
Получение трет-бутилового эфира {1-[1-(этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этилкарбамоил]-2-метилпропил}карбаминовой кислоты (16): К раствору гидробромида 1-(S)-(4-этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этиламина, 3, (0,200 г, 0,558. ммоль), (S)-(2-трет-бутоксикарбониламино)-3-метилмасляной кислоты (0,133 г) и 1-гидроксибензотриазола (HOBt) (0, 094 г) в ДМФА (5 мл) при 0°С добавляют 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид (EDCI) (0,118 г), а затем диизопропиламин (0,151 г). Смесь перемешивают при 0°С в течение 30 минут, затем при комнатной температуре на протяжении ночи. Реакционную смесь разбавляют водой и экстрагируют EtOAc. Объединенную органическую фазу промывают 1н. водной HCl, 5% водным NaHCO, водой и насыщенным раствором соли и сушат над NaSO. Растворитель удаляют в вакууме, получая 0,219 г (выход 82%) требуемого продукта, который используют без дополнительной очистки. LC/MS ESI+ 477(М+1).
3
4
Получение 4-{(S)-2-[(S}-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-метилбутанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовой кислоты (17): трет-бутиловый эфир {{1-[1-(этилтиазол-2-ил)-2-(4-нитрофенил)этилкарбамоил]-2-метилпропил}карбаминовой кислоты, 16, (0,219 г) растворяют в МеОН (4 мл). Добавляют каталитическое количество Pd/C (10% мас./мас.) и смесь перемешивают в атмосфере водорода 2 часа. Реакционную смесь фильтруют через слой CELITE™ и растворитель удаляют при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяют в пиридине (5 мл) и обрабатывают SO-пиридином (0,146 г). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут, после чего добавляют 7% раствор NHOH (30 мл). Затем смесь концентрируют и полученный остаток очищают хроматографией с обращенной фазой, получая 0,148 г требуемого продукта в виде соли аммония.
1
3
H (CDOD): δ 7,08 (с, 4Н), 7,02 (с, 1Н), 5,43 (с, 1Н), 3,85 (с, 1Н), 3,28-2,77 (м, 4Н), 1,94 (с, 1Н), 1,46 (с, 9Н), 1,29 (с, 3H, J=7,3 Гц), 0,83 (с, 6Н).
Нижеследующее представляет собой дополнительные неограничивающие примеры первого аспекта категории IV настоящего изобретения.
1
3
(S)-4-{2-[2-(трет-Бутоксикарбониламино)ацетамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,09-6,91 (м, 5Н), 5,30 (т, 1H, J=8,4 Гц), 3,60-2,64 (м, 6Н), 1,34 (с, 9Н), 1,16 (т, 3H, J=7,5 Гц).
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)-4-метилпентанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (CDOD) δ 7,19-7,00 (м, 4Н), 5,50-5,40 (м, 1Н), 4,13-4,06 (м, 1Н), 3,32 (1Н, А из АВХ, J=7,5,18 Гц), 3,12 (1Н, В из АВХ, J=8,1, 13,8 Гц), 2,79 (кв, 2Н, J=7,8, 14,7 Гц), 1,70-1,55 (м, 1Н), 1,46 (с, 9Н), 1,33 (т, 3H, J=2,7 Гц), 0,92 (кв, 6Н, J=6, 10,8 Гц).
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)-4-метилпентан-амидо]-2-[2-(тиофен-2-ил)тиазол-4-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (CDOD) δ 8,06 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,61-7,58 (м, 1Н), 7,57 (с, 1Н), 7,15 (т, 1Н, J=0,6 Гц), 7,09-6,98 (м, 6Н), 5,30-5,20 (м, 1Н), 4,10-4,00 (м, 1Н), 3,19-3,13 (м, 2Н), 1,63-1,55 (м, 2Н), 1,48-1,33 (м, 10H), 0,95-0, 89 (м, 6Н).
Нижеследующее представляет собой неограничивающие примеры второго аспекта категории IV настоящего изобретения.
1
3
(S)-4-{2-(4-этилтиазол-2-ил)-2-[2-(метоксикарбониламино)-ацетамидо]этил}-фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (CDOD) δ 7,12-7,07 (м, 4Н), 7,03 (с, 1Н), 5,42 (т, 1Н, J=5,7 Гц), 3,83-3,68 (кв, 2H, J=11,4 Гц), 3,68 (с, 3H), 3,34-3,04 (м, 2Н), 2,83-2,76 (кв, 2H, J=7,8 Гц), 1,31 (т, 3H, J=7,5 Гц).
1
3
4-{(S)-2-(4-этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилбутанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (CDOD) δ 8,56 (д, 1Н, J=7,8 Гц), 7,09 (с, 4Н), 7,03 (с, 1Н), 5,26-5,20 (м, 1Н), 3,90 (д, 1Н, J=7,8 Гц), 3,70 (с, 3H), 3,30 (1Н, А из АВХ, скрытый растворителем), 3,08 (1Н, В из АВХ, J=9,9, 9 Гц), 2,79 (кв, 2H, J=11,1, 7,2 Гц), 2,05-1,97 (м, 1Н), 1,31 (т, 3Н, J=7,5 Гц), 0,88 (с, 3Н), 0,85 (с, 3Н), 0,79-0,75 (м, 1Н).
1
3
4-{(S)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-4-метилпентанамидо]-2-[2-(тиофен-2-ил)тиазол-4-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (CDOD) δ 8,22 (д, 1Н, J=9 Гц), 7,62-7,57 (м, Н), 7,15 (т, 1Н, J=0,6 Гц), 7,10-6,97 (м, 4Н), 5,30-5,20 (м, 1Н), 4,16-4,11 (м, 1Н), 3,67 (с, 2Н), 3,22 (1Н, А из АВХ, J=6,9, 13,5 Гц), 3,11 (1Н, В из АВХ, J=7,8, 13,6 Гц), 1,65-1,58 (м, 1Н), 1,50-1,45 (м, 2Н), 0,95-0,88 (м, 6Н).
1
3
4-{(S)-2-(4-Этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-4-метилпентанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (CDOD) δ 7,12-7,03 (м, 5Н), 6,84 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 5,40 (т, 1Н, J=5,7 Гц), 4,16 (т, 1Н, J=6,3 Гц), 3,69 (с, 3Н), 3,61-3,55 (м, 1Н), 3,29-3,27 (м, 1Н), 3,14-3,07 (м, 1Н), 2,81 (кв, 2Н, J=3,9, 11,2 Гц), 1,66-1,59 (м, 1Н), 1,48-1,43 (м, 2Н), 1,31 (т, 3Н, J=4,5 Гц), 0,96-0,90 (м, 6Н).
l
3
4-((S)-2-(4-Этилтиазол-2-ил)-2-{(S)-2-[2-(метоксикарбонил)ацетамидо]-3-фенилпропанамидо}этил)фенилсульфаминовая кислота: H (CDOD): δ 7,22-7,01 (м, 9Н), 6,97 (с, 1Н), 5,37-5,32 (м, 1Н), 4,64 (т, 1Н, 3=1,1 Гц), 3,71-3,68 (м, 2Н), 3,64 (с, 3H), 3,28-3,26 (м, 1Н), 3,03-2,96 (м, 2Н), 2,83-2,72 (м, 3H), 1,28 (т, 3H, J=7,5 Гц).
Категория V настоящего изобретения относится к неограничивающим примерам второго аспекта:
2
где R представляет собой замещенную или незамещенную тиофен-2-ильную или тиофен-4-ильную группу и неограничивающие примеры R далее представлены в таблице VII.
Таблица VII
№
R
R<sup>2</sup>
151
тиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
152
4-метилтиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
153
4-этилтиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
154
4-циклопропилтиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
155
4-трет-бутилтиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
156
4-циклогексилтиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
157
4-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
158
4-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
159
4-(2,2-дифторциклопропил)тиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
160
4,5-диметилтиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
161
4-метил-5-этилтиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
162
4-фенилтиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
163
4-(4-хлорфенил)тиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
164
4-(3,4-диметилфенил)тиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
165
4-метил-5-фенилтиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
166
4-(тиофен-2-ил)тиазол-2-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
167
тиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
168
2-метилтиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
169
2-этилтиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
170
2-циклопропилтиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
171
2-трет-бутилтиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
172
2-циклогексилтиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
173
2-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
174
2-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-4-ил
-OC(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
175
2-(2,2-дифторциклопропил)тиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
178
2-фенилтиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
179
2-(4-хлорфенил)тиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
180
2-(3,4-диметилфенил)тиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
182
2-(тиофен-2-ил)тиазол-4-ил
-ОС(СН<sub>3</sub>)<sub>3</sub>
183
тиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
184
4-метилтиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
185
4-этилтиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
186
4-циклопропилтиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
187
4-трет-бутилтиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
188
4-циклогексилтиазол-2-ил
-OCH<sub>3</sub>
189
4-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
190
4-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
191
4-(2,2-дифторциклопропил)тиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
192
4,5-диметилтиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
193
4-метил-5-этилтиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
194
4-фенилтиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
195
4-(4-хлорфенил)тиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
196
4-(3,4-диметилфенил)тиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
197
4-метил-5-фенилтиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
198
4-(тиофен-2-ил)тиазол-2-ил
-ОСН<sub>3</sub>
199
тиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
200
2-метилтиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
201
2-этилтиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
202
2-циклопропилтиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
203
2-трет-бутилтиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
204
2-циклогексилтиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
205
2-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
206
2-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
207
2-(2,2-дифторциклопропил)тиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
210
2-фенилтиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
211
2-(4-хлорфенил)тиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
212
2-(3,4-диметилфенил)тиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
213
2-метил-5-фенилтиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
214
2-(тиофен-2-ил)тиазол-4-ил
-ОСН<sub>3</sub>
215
тиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
216
4-метилтиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
217
4-этилтиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
218
4-циклопропилтиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
219
4-трет-бутилтиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
220
4-циклогексилтиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
221
4-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
222
4-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
223
4-(2,2-дифторциклопропил)тиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
224
4,5-диметилтиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
225
4-метил-5-этилтиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
226
4-фенилтиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
227
4-(4-хлорфенил)тиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
228
4-(3,4-диметилфенил)тиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
229
4-метил-5-фенилтиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
230
4-(тиофен-2-ил)тиазол-2-ил
-СН<sub>3</sub>
231
тиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
232
2-метилтиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
233
2-этилтиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
234
2-циклопропилтиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
235
2-трет-бутилтиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
236
2-циклогексилтиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
237
2-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
238
2-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
239
2-(2,2-дифторциклопропил)тиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
242
2-фенилтиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
243
2-(4-хлорфенил)тиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
244
2-(3,4-диметилфенил)тиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
245
2-метил-5-фенилтиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
246
2-(тиофен-2-ил)тиазол-4-ил
-СН<sub>3</sub>
Соединения, охватываемые категорией V настоящего изобретения, можно получить способом, в общих чертах представленным на схеме VI и описанным в нижеследующем примере 7.
Схема VI
3
Реагенты и условия: (a) (i) CHCN; кипячение с обратным холодильником, 1,5 ч.
2
2
2
(ii) BocO, пиридин, CHCl; комнатная температура, 2 ч.
2
Реагенты и условия: (b) (i) H:Pd/C, MeOH; кипячение с обратным холодильником
3
4
(ii) SO-пиридин, NHOH; комнатная температура, 12 ч.
Пример 7
трет-Бутиловый эфир [1-(S)-(фенилтиазол-2-ил)-2-(4-сульфоаминофенил)этил]карбаминовой кислоты (19)
3
2
2
2
2
4
Получение трет-бутилового эфира [2-(4-нитрофенил)-1-(S)-(4-фенилтиазол-2-ил)этил]карбаминовой кислоты (18): Смесь трет-бутилового эфира 2-(4-нитрофенил)-1-(S)-тиокарбамоилэтил]карбаминовой кислоты, 2, (0,343 г, 1,05 ммоль), 2-бромацетофенона (0,231 г, 1,15 ммоль) в CHCN (5 мл) кипятят с обратным холодильником 1,5 часа. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток вновь растворяют в CHCl, затем добавляют пиридин (0,24 мл, 3,0 ммоль) и BocO (0,24 мл, 1,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов и к раствору добавляют диэтиловый эфир, и осадок, который образуется, удаляют фильтрацией. Органический слой сушат (NaSO), фильтруют и концентрируют до остатка, который очищают на силикагеле, получая 0,176 г (39%) требуемого продукта ESI+ MS 426 (М+1).
3
4
Получение трет-бутилового эфира [1-(S)-(фенилтиазол-2-ил)-2-(4-сульфоаминофенил)этил]карбаминовой кислоты (19): трет-бутиловый эфир [2-(4-нитрофенил)-1-(S)-(4-фенилтиазол-2-ил)этил]карбаминовой кислоты, 18, (0,176 г, 0,41 ммоль) растворяют в МеОН (4 мл). Добавляют каталитическое количество Pd/C (10% мас./мас.) и смесь перемешивают в атмосфере водорода 12 часов. Реакционную смесь фильтруют через слой CELITE™ и растворитель удаляют при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяют в пиридине (12 мл) и обрабатывают SO-пиридином (0,195 г, 1,23 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут, после чего добавляют 7% раствор NHOH (10 мл). Затем смесь концентрируют и полученный остаток очищают хроматографией с обращенной фазой, получая 0,080 г требуемого продукта в виде соли аммония.
1
4
Н ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 7, 93 (д, J=6,0 Гц, 2Н), 7,68 (с, 1Н), 7,46-7,42 (м, 3H), 7,37-7,32 (м, 1Н), 7,14-7,18 (м, 3H), 5,13-5,18 (м, 1Н), 3,40 (дд, J=4,5 и 15,0 Гц, 1Н), 3,04 (дд, J=9,6 и 14,1 Гц, 1Н), 1,43 (с, 9Н).
Нижеследующее представляет собой дополнительные неограничивающие примеры категории V настоящего изобретения.
1
3
(S)-(4-(2-(4-Метилтиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенил)-сульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,31 (с, 4Н), 7,20 (с, 1Н), 5,61-5,56 (м, 1Н), 3, 57-3,22 (м, 2Н), 2,62 (с, 3H), 1,31 (с, 3H).
1
4
(S)-(4-(2-(4-Этилтиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенил)-сульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 7,92 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,12-7,14 (м, 4Н), 7,03 (с, 1Н), 5,38-5,46 (м, 1Н), 3,3-3,4 (м, 1Н), 3,08 (дд, J=10,2 и 13,8 Гц, 1Н), 2,79 (кв, J=7,2 Гц, 2Н), 1,30 (т, J=7,2 Гц, 3H), 1,13 (с, 9Н).
1
4
(S)-(4-(2-(4-(Гидроксиметил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)-фенил)сульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, МеОН-d) δ 7,92 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,24 (с, 1Н), 7,08 (д, J=8,7 Гц, 2Н), 7,00 (д, J=8,7 Гц, 2Н), 5,29-5,37 (м, 1Н), 4,55 (с, 2Н), 3,30 (дд, J=4,8 и 13,5 Гц, 1Н), 2,99 (дд, J=10,5 и 13,5 Гц, 1Н), 0,93 (с, 9Н).
1
4
(S)-4-(2-(4-Фенилтиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, МеОН-d) δ 7,94-8,01 (м, 3H), 7,70 (с, 1Н), 7,42-7,47 (м, 2Н), 7,32-7,47 (м, 1Н), 7,13-7,20 (м, 3H), 5,48-5,55 (м, 1Н), 3,50 (дд, J=5,1 и 14,1 Гц, 1Н), 3,18 (дд, J=10,2 и 14,1 Гц, 1Н), 1,67 (с, 9Н).
1
3
4-((S)-2-(4-(3-Метоксифенил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,96-7,93 (д, 1H, J=8,1 Гц), 7,69 (с, 1Н), 7,51-7,49 (д, 2Н, J=7,9 Гц), 7,33 (т, 1H, J=8,0 Гц), 7,14 (с, 4Н), 6,92-6,90 (д, 1Н, J=7,8 Гц), 5,50 (т, 1H, J=5,1 Гц), 3,87 (с, 3H), 3,50-3,13 (м, 2Н), 1,15 (с, 9Н).
1
3
4-((S)-2-(4-(3-метоксифенил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,98-7,85 (м, 3H), 7,53 (с, 1Н), 7,26-7,12 (м, 3H), 7,03-6,98 (м, 2Н), 5,54-5,46 (м, 1Н), 3,52-3,13 (м, 2Н), 1,15 (с, 9Н).
1
3
4-((S)-2-(4-(2,4-Диметоксифенил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 8,11-8,09 (д, 1Н, J=7,8 Гц), 7,96-7,93 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,74 (с, 1Н), 7,18-7,16 (м, 4Н), 6,67-6,64 (д, 2Н, J=9,0 Гц), 5,55-5,47 (м, 1Н), 3,95 (с, 3H), 3,87 (с, 3H), 3,52-3,13 (м, 2Н), 1,17 (с, 9Н).
1
3
(S)-4-(2-(4-Бензилтиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (CDOD) δ 7,85 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7, 38-7,20 (м, 4Н), 7,11-7,02 (м, 1Н), 7,00 (с, 1Н), 5,42-5,37 (м, 1Н), 4,13 (с, 2Н), 3,13-3,08 (м, 2Н), 1,13 (с, 9Н).
1
3
(S)-4-(2-Пиваламидо-2-(4-(тиофен-2-илметил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: H ЯМР (CDOD) δ 7,88-7,85 (д, 1Н), 7,38-7,35 (м, 1Н), 7,10-7,01 (м, 4Н), 7,02 (с, 1Н), 5,45-5,38 (м, 1H), 4,13 (с, 2Н), 3,13-3,05 (м, 2Н), 1,13 (2, 9Н).
1
3
(S)-4-(2-(4-(3-Метоксибензил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (CDOD) δ 7,85 (д, 1H, J=8,4 Гц), 7,25-7,20 (м, 1Н), 7,11-7,02 (м, 4Н), 7,01 (с, 1Н), 6,90-6,79 (м, 2Н), 5,45-5,40 (м, 1Н), 4,09 (с, 2Н), 3,79 (с, 3H), 3,12-3,08 (м, 2Н), 1,10 (с, 9Н).
1
3
4-((S)-2-(4-(2,3-Дигидробензо[b][1,4]диоксин-6-ил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 7,53 (с, 1Н), 7,45 (с, 1Н), 7,42-7,40 (д, 1H, J=8,4 Гц), 7,19-7,15 (м, 4Н), 6,91-6,88 (д, 2Н, J=8,4 Гц), 5,51-5,46 (м, 1Н), 4,30 (с, 4Н), 3,51-3,12 (м, 2Н), 1,16 (с, 9Н).
1
3
(S)-4-(2-(5-Метил-4-фенилтиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота: H (CDOD): δ 7,63-7,60 (д, 2Н, J=7,1 Гц), 7,49-7,35 (м, 3H), 7,14 (с, 4Н), 5,43-5,38 (м, 1Н), 3,42-3,09 (м, 2Н), 2,49 (с, 3H), 1,14 (с, 9Н).
1
3
(S)-4-(2-(4-(Бифенил-4-ил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота: Н (CDOD): δ 8,04-8,01 (м, 2Н), 7,72-7,66 (м, 5Н), 7,48-7,35 (м, 3H), 7,15 (с, 4Н), 5,50 (т, 1H, J=5,0 Гц), 3,57-3,15 (д, 2Н), 1,16 (с, 9Н).
1
2
(S)-4-(2-(трет-Бутоксикарбониламино)-2-(2-метилтиазол-4-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, DO) δ 6,99-7,002 (м, 4Н), 6,82 (с, 1Н), 2,26 (дд, J=13,8 и 7,2 Гц, 1Н), 2,76 (дд, J=13,8 и 7,2 Гц, 1Н), 2,48 (с, 3H), 1,17 (с, 9Н).
1
3
(S)-(4-(2-((трет-Бутоксикарбонил)амино)-2-(4-пропилтиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: H ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,18-7,02 (м, 5Н), 5,06-5,03 (м, 1Н), 3,26 (дд, J=13,8, 4,8 Гц, 1Н), 2,95 (дд, J=13,8, 9,3 Гц, 1Н), 2,74 (дд, J=15,0, 7,2 Гц, 2Н), 1,81-1,71 (м, 2Н), 1,40 (с, 7Н), 1,33 (ушир.с, 2Н), 0,988 (т, J=7, 5 Гц 3H).
1
3
(S)-(4-(2-((трет-Бутоксикарбонил)амино)-2-(4-трет-бутилтиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,12 (с, 4Н), 7,01 (с, 1Н), 5,11-5,06 (м, 1Н), 3,32-3,25 (м, 1Н), 2,96 (м, 1Н), 1,42 (с, 8Н), 1,38 (с, 9Н), 1,32 (с, 1Н).
1
3
(S)-(4-(2-((трет-Бутоксикарбонил)амино)-2-(4-(метоксиметил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,36 (с, 1Н), 7,14-7,05 (м, 4Н), 5,06 (дд, J=9,0, 5,1 Гц, 1Н), 4,55 (с, 2Н), 3,42 (с, 3H), 3,31-3,24 (м, 1Н), 2,97 (дд, J=13,8, 9,9 Гц, 1Н), 1,47-1,31 (м, 9Н).
1
4
(S)-(4-(2-((трет-Бутоксикарбонил)амино)-2-(4-(2-гидроксиметил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, МеОН-d) δ 7,22-7,25 (м, 1Н), 7,09-7,15 (м, 4Н), 5,00-5,09 (м, 1Н), 4,32-4,35 (м, 1Н), 3,87 (т, J=6, 6 Гц, 2Н), 3,23-3,29 (м, 1Н), 3,09-3,18 (м, 1Н), 2,98 (т, J=6,6 Гц, 2Н), 1,41 (с, 9Н).
1
4
(S)-(4-(2-((трет-Бутоксикарбонил)амино)-2-(4-(2-этокси-2-оксоэтил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 7,29 (с, 1Н), 7,09-7,16 (м, 4Н), 5,04-5,09 (м, 1Н), 4,20 (кв, J=6,9 Гц, 2Н), 3,84 (с, 2Н), 3,30 (дд, J=4,8 и 14,1 Гц, 1Н), 2,97 (дд, J=9,6 Гц и 13,8 Гц, 1Н), 1,41 (с, 9Н), 1,29 (т, J=7,2 Гц, 3H).
1
4
(S)-(4-(2-((трет-Бутоксикарбонил)амино)-2-(4-(2-(2-метокси-2-оксоэтиламино)-2-оксоэтил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: H ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 7,31 (с, 1Н), 7,01-7,16 (м, 4Н), 5,04-5,09 (м, 1Н), 4,01 (с, 2Н), 3,78 (с, 2Н), 3,74 (с, 3H), 3,29 (дд, J=5,1 и 13,8 Гц, 1Н), 2,99 (дд, J=9,3 и 13,8 Гц, 1Н), 1,41 (с, 9Н).
1
2
(S)-4-(2-(трет-Бутоксикарбониламино)-2-(2-пивалоилокси)-тиазол-4-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, DO) δ 6,95 (с, 4Н), 6,63 (с, 1Н), 2,94 (дд, J=13,5 и 4,8 Гц, 1Н), 2,75 (дд, J=13,5 и 4,8 Гц, 1Н), 1,16 (с, 9Н), 1,13 (с, 9Н).
1
3
(S)-(4-(2-(трет-Бутоксикарбониламино)-2-(5-фенилтиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,98 (с, 1Н), 7,62 (д, J=7,2 Гц, 2Н), 7,46-7,35 (м, 4Н), 7,14 (с, 4Н), 5,09 (ушир.с, 1Н), 3,07-2,99 (м, 2Н), 1,43 (с, 9Н).
1
3
4-((S)-(2-(трет-Бутоксикарбониламино)-2-(4-(3-(трифторметил)фенил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: H ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 8,28 (с, 1Н), 8,22-8,19 (м, 1Н), 7,89 (с, 1Н), 7,65 (д, J=5,1 Гц, 2Н), 7,45 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 7,15 (с, 4Н), 5,17-5,14 (м, 1Н), 3,43-3,32 (м, 1Н), 3,05 (дд, J=14,1, 9,6 Гц, 1Н), 1,42 (с, 9Н).
1
3
(S)-4-(2-(трет-Бутоксикарбониламино)-2-(4-фенилтиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,98 (с, 1Н), 7,94 (д, J=7,2 Гц, 2Н), 7,46-7,35 (м, 4Н), 7,14 (с, 4Н), 5,09 (ушир.с, 1Н), 3,07-2,99 (м, 2Н), 1,43 (с, 9Н).
1
4
(S)-{4-[2,2-Диметилпропиониламино)-2-(2-фенилтиазол-4-ил)этил]фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 7,92-7,96 (м, 2Н), 7,65 (д, J=8,4 Гц, 1Н), 7,45-7,49 (м, 3H), 7,18 (с, 1Н), 7,08-7,15 (м, 4Н), 5,34-5,41 (м, 1Н), 3,26 (дд, J=14,1 и 6,0 Гц, 1Н), 3,08 (дд, J=13,8 и 9,0 Гц, 1Н), 1,47 (с, 9Н).
1
4
(S)-4-(2-трет-Бутоксикарбониламидо)-2-(4-фенил)-2-(4-фенилтиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 7,93 (д, J=6,0 Гц, 2Н), 7,68 (с, 1Н), 7,46-7,42 (м, 3H), 7,37-7,32 (м, 1Н), 7,14-7,18 (м, 3H), 5,13-5,18 (м, 1Н), 3,40 (дд, J=4,5 и 15,0 Гц, 1Н), 3,04 (дд, J=9,6 и 14,1 Гц, 1Н), 1,43 (с, 9Н).
1
4
Метиловый эфир (S,S)-2-(2-{2-[2-трет-бутоксикарбониламино-2-(4-сульфоаминофенил)этил]тиазол-4-ил}ацетиламидо)-3-фенилпропионовой кислоты: Н ЯМР (300 МГц, MeOH-d) δ 6,85-6,94 (м, 9Н), 6,64 (с, 1Н), 4,83 (с, 1Н), 4,54-4,58 (м, 1Н), 3,49 (с, 3H), 3,39 (с, 2Н), 2,80-2,97 (м, 1Н), 2,64-2,78 (м, 1Н), 1,12 (с, 9Н).
4
1
4
Трет-Бутиловый эфир (S)-[1-{1-оксо-4-[2-(1-фенил-1Н-тетразол-5-сульфонил)этил]-1Н-1λ-тиазол-2-ил}-2-(4-сульфаминофенил)этил]карбаминовой кислоты: Н ЯМР (300 МГц, МеОН-d) δ 7,22-7,75 (м, 2Н), 7,62-7,69 (м, 2Н), 7,55 (с, 1Н), 7,10-7,20 (м, 5Н), 5,25 (м, 1Н), 4,27-4,36 (м, 1Н), 4,11-4,21 (м, 1Н), 3,33-3,44 (м, 4Н), 2,84-2,90 (м, 1Н), 1,33 (с, 9Н).
1
3
4-((S)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)-2-(4-(тиофен-3-ил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, CDOD): δ 7,84 (дд, J=3,0, 1,5 Гц, 1Н), 7,57-7,55 (м, 2Н), 7,47 (дд, J=4,8, 3,0 Гц, 1Н), 7,15 (с, 4Н), 5,15-5,10 (м, 1Н), 3,39-3,34 (м, 1Н), 3,01 (дд, J=14,1, 9,6 Гц, 1Н), 1,42 (с, 8Н), 1,32 (с, 1Н).
1
3
(S)-4-(2-(Бензо[d]тиазол-2-иламино)-2-(трет-бутоксикарбонил)этил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (CDOD) δ 7,86-7,82 (м, 2Н), 7,42 (т, 2Н, J=7,1 Гц), 7,33 (т, 1Н, J=8,2 Гц), 7,02 (с, 4Н), 5,10-5,05 (м, 1Н), 2,99-2,91 (м, 2Н), 1,29 (с, 9Н).
1
2
(S)-4-(2-трет-Бутоксикарбониламино)-2-(2-метилтиазол-4-ил)фенилсульфаминовая кислота: Н ЯМР (300 МГц, DO) δ 6,99-7,002 (м, 4Н), 6,82 (с, 1Н), 2,26 (дд, J=13,8 и 7,2 Гц, 1Н), 2,76 (дд, J=13,8 и 7,2 Гц, 1Н), 2,48 (с, 3H), 1,17 (с, 9Н).
Регуляция НРТР-β обеспечивает способ модулирования активности ангиопоэтин рецептор-типа тирозинкиназы Tie-2 и тем самым опосредует патологические состояния, где ангиогенез ошибочно регулируется человеческим организмом. Соединения по данному изобретению служат в качестве средства для обеспечения регулирования ангиогенеза. По существу, настоящее изобретение направлено на обеспечение нескольких неудовлетворенных медицинских потребностей, среди которых inter alia:
1) разработка композиций, эффективных в качестве ингибиторов белка человека тирозинфосфатазы бета (НРТР-β); и посредством этого обеспечивает разработку способа регулирования ангиогенеза при нарушении, в котором ангиогенез повышен;
2) разработка композиций, эффективных в качестве ингибиторов белка человека тирозинфосфатазы бета (НРТР-β); и посредством этого обеспечивает разработку способа регулирования ангиогенеза при нарушении; и
3) разработка композиций, эффективных в качестве ингибиторов белка человека тирозинфосфатазы бета (НРТР-β); и посредством этого обеспечивает разработку способа регулирования ангиогенеза при нарушении, в котором ангиогенез занижен.
Для настоящего изобретения термин "регулировать" определяют согласно его общепринятым словарным значениям. Так, значение термина "регулировать" включает, но этим не ограничиваясь, повышать уровень регуляции или понижать уровень регуляции, фиксировать, привносить порядок или единообразие, управлять или направлять различными способами. В одном аспекте антитело может быть использовано в способе лечения "нарушения с повышенным ангиогенезом" или "нарушения с пониженным ангиогенезом. Используемый термин "нарушение с повышенным ангиогенезом" представляет собой нарушение, которое включает нежелательный или повышенный ангиогенез в биологическом проявлении болезни, нарушении и/или состоянии; в биологическом каскаде, ведущем к нарушению; или как симптом нарушения. Аналогично, "нарушение с пониженным ангиогенезом" представляет собой нарушение, которое включает нежелательный или пониженный ангиогенез в биологических проявлениях. Это "вовлечение" ангиогенеза в нарушение с повышенным/пониженным ангиогенезом включает, но этим не ограничивается, нижеследующее:
1. Ангиогенез как "причина" нарушения или биологического проявления, независимо от того, является ли уровень ангиогенеза повышенным или пониженным генетически, из-за инфекции, аутоиммунитета, травмы, биомеханических причин, образа жизни или по некоторым другим причинам.
2. Ангиогенез как часть наблюдаемого проявления болезни или нарушения. Т.е., болезнь или нарушение можно измерить в показателях повышения или снижения ангиогенеза. С клинической точки зрения, ангиогенез указывает на болезнь; однако ангиогенез необязательно является "признаком (маркером)" болезни или нарушения.
3. Ангиогенез - часть биохимического или клеточного каскада, который приводит к развитию болезни или нарушения. В этом отношении, регуляция ангиогенеза может нарушить (прервать) каскад и может управлять болезнью. Неограничивающие примеры регулируемых ангиогенезом нарушений, которые можно лечить согласно данному изобретению, описаны в настоящем описании ниже.
Готовые лекарственные формы
Настоящее изобретение также относится к композициям или готовым лекарственным формам, которые содержат ингибиторы калиевого канала Kvl.5 согласно настоящему изобретению. В общем, композиции по данному изобретению содержат
a) эффективное количество одной или более фенилсульфаминовых кислот и их солей согласно данному изобретению, которые являются эффективными в качестве ингибиторов белка человека тирозинфосфатазы бета (НРТР-β); и
b) один или более наполнителей.
Для настоящего изобретения термин "наполнитель" и "носитель" используют взаимозаменяемо на протяжении всего описания настоящего изобретения и указанные термины определяют здесь как "ингредиенты, которые используют в практике составления надежной и эффективной композиции."
Для составителя рецептуры очевидно, что наполнители используют в основном для обеспечения доставки сохранного, стабильного и функционального фармацевтического средства, выполняя при этом роль не только части общего наполнителя для доставки, но также и средства для достижения эффективной абсорбции активного ингредиента у реципиента. Наполнитель может исполнять роль простого и непосредственного инертного наполнителя, или используемый в описании наполнитель может быть частью pH-стабилизирующей системы или покрытия, обеспечивающего доставку ингредиентов, в сохранности, в желудок. Составитель рецептуры может также воспользоваться тем фактом, что соединения по данному изобретению имеют повышенную клеточную активность, улучшенные фармакокинетические свойства, а также повышенную биологическую доступность при пероральном приеме.
Неограничивающие примеры композиций по данному изобретению включают
a) от около 0,001 мг до около 1000 мг одной или более фенилсульфаминовых кислот по данному изобретению; и
b) один или более наполнителей.
Другой вариант согласно изобретению относится к следующим композициям:
a) от около 0,01 мг до около 100 мг одной или более фенилсульфаминовых кислот по данному изобретению и
b) один или более наполнителей.
Дополнительный вариант согласно настоящему изобретению относится к следующим композициям:
a) от около 0,1 мг до около 10 мг одной или более фенилсульфаминовых кислот по данному изобретению и
b) один или более наполнителей.
Используемый в описании термин "эффективное количество" означает "количество одной или более фенилсульфаминовых кислот, эффективное при дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения требуемого или лечебного результата". Эффективное количество может варьироваться в соответствии с факторами, известными в данной области, такими как патологическое состояние, возраст, пол и масса тела человека или животного, подлежащего лечению. Хотя конкретные схемы приема лекарственного средства могут быть описаны в представленных в описании примерах, специалисту в данной области очевидно, что для обеспечения оптимальной терапевтической реакции схема приема препарата может изменяться. Таким образом, невозможно определить точное "эффективное количество". Например, можно вводить несколько небольших доз лекарственного средства, повторяемых через определенные интервалы времени ежедневно, или доза может пропорционально уменьшаться, как показано острой необходимостью терапевтической ситуации. Кроме того, композиции по данному изобретению можно вводить так часто, как необходимо для достижения терапевтического количества.
Способ использования
Настоящее изобретение относится к способам регулирования ангиогенеза у человека, включающим введение человеку одного или более заявляемых соединений.
Один пример предлагаемых способов включает способ лечения регулируемого ангиогенезом нарушения у субъекта, в котором регулируемое ангиогенезом нарушение представляет собой нарушение с повышенным ангиогенезом, и это указанное нарушение выбрано из диабетической ретинопатии, дегенерации желтого пятна, рака, серповидно-клеточной анемии, саркоида, сифилиса, псевдоксантомы эластической, болезни Педжета, окклюзии венозных сосудов, окклюзии артерии, окклюзии сонной артерии, хронического увеита/витрита, микобактериозов, болезни Лайма, системной красной волчанки, юношеской ретинопатии, болезни Илза, болезни Бехчета, инфекций, вызывающих ретинит и хориоидит, предположительно глазного гистоплазмоза, болезни Беста, миопии, врожденных ямок в диске зрительного нерва, болезни Stargardt; клинического синдрома, включающего воспаление периферии сетчатки и ресничного кружка; хронического отслоения сетчатки, синдрома повышенной вязкости, токсопламоза, травматических осложнений и последствий лазерного лечения; заболеваний, связанных с покраснением; и пролиферирующей витреоретинопатии.
Другой пример предлагаемых способов включает способ лечения регулируемого ангиогенезом нарушения у субъекта, в котором регулируемое ангиогенезом нарушение представляет собой нарушение с повышенным ангиогенезом, и это указанное нарушение выбрано из воспалительных заболеваний кишечника, таких как болезнь Крона и неспецифический язвенный колит, псориаза, саркоидоза, ревматоидного артрита, гемангиом, болезни Рандю-Вебера-Ослера или наследственной геморрагической телеангиэктазии, солидных опухолей или опухолей системы крови и синдрома приобретенного иммунного дефицита.
Дополнительный пример предлагаемых способов включает способ лечения регулируемого ангиогенезом нарушения у субъекта, в котором регулируемое ангиогенезом нарушение представляет собой нарушение с пониженным ангиогенезом и выбрано из ишемии скелетных мышц и миокарда, удара, ишемической болезни сердца, болезни периферических сосудов (артерий).
Следующий дополнительный пример предлагаемых способов включает способ васкуляризации ишемической ткани. Используемый в описании термин "ишемическая ткань" означает ткань, которая лишена необходимого и достаточного кровотока. Примеры ишемической ткани включают, но ими не ограничиваются, ткань, которая не имеет необходимого и достаточного кровоснабжения, что является результатом инфарктов миокарда и головного мозга, мезентериальной ишемии или ишемии конечностей или результатом окклюзии сосуда или стеноза. В одном примере прерывание подачи оксигенированной крови может быть вызвано окклюзией сосуда. Окклюзия сосудов может быть вызвана атеросклерозом, травмой, хирургическим вмешательством, болезнью и/или другими этиологиями. В пределы способов лечения по данному изобретению также включены лечение ишемии скелетных мышц и миокарда, удара, ишемической болезни сердца, болезни периферических сосудов (артерий).
Очередной пример раскрытых способов включает способ восстановления (заживления) ткани. Используемый в описании термин "восстановление ткани" означает стимуляцию заживления (восстановления), регенерации, роста и/или жизнедеятельности тканей, включая, но не ограничиваясь ими, заживление раны или тканевую инженерию. Специалисту в данной области очевидно, что для восстановления тканей требуется образование новых кровеносных сосудов. В свою очередь, ткань может быть повреждена в результате, включая, но этим не ограничиваясь, нанесения травм или наличия состояний, включая артрит, остеопороз и другие нарушения скелета, и ожогов. Ткань может быть повреждена травмами вследствие хирургического вмешательства, облучения, образования рваной раны, воздействия токсических химических веществ, вирусных или бактериальных инфекций или ожогов. Ткань, нуждающаяся в таком восстановлении, включает незаживляющиеся раны. Примеры незаживляющихся ран включают незаживляющиеся кожные язвы, являющихся результатом диабетической патологии; или переломы, которые быстро не консолидируются.
Предлагаемые соединения также подходят для использования их для воздействия на восстановление ткани в контексте методов управляемой (контролируемой) регенерации ткани (GTR). Такие методы в настоящее время используются специалистами в данной области для ускорения заживления раны после инвазивных хирургических операций.
Очередной дополнительный пример раскрытых способов включает способ стимуляции восстановления ткани, характеризуемый усиленным ростом ткани во время процесса тканевой инженерии. Используемый в описании термин "тканевая инженерия" определяют как разработку, проектирование (конструирование) и изготовление биологических протезов, в комбинации с применением синтетических или природных материалов, для наращивания или замены тканей или органов тела. Таким образом, настоящие способы можно использовать для наращивания и роста человеческих тканей вне организма, с последующей имплантацией для восстановления или замены пораженных болезнью тканей. Например, антитела могут быть использованы для стимуляции роста образцов-заменителей полнослойного кожного лоскута (трансплантата), которые используют в качестве терапии при лечении ожогов.
Другие примеры раскрытых способов, имеющих отношение к тканевой инженерии, включают содержащие клетки или бесклеточные устройства, которые индуцируют регенерацию функциональных тканей человека при имплантации в место, которое требует регенерации. Как обсуждалось в настоящем описании, биоматериал - управляемая регенерация ткани, может быть использована для стимулирования возобновления роста костной ткани при, например, пародонтозе. Таким образом, антитела могут быть использованы для стимулирования роста реконструированных тканей, собранных в пространственных (объемных) конфигурациях, на месте раны или другой ткани, нуждающейся в таком восстановлении.
Другие примеры раскрытых способов, имеющих отношение к тканевой инженерии, состоят в том, что раскрытые в настоящем описании соединения могут быть включены в наружные или внутренние устройства, содержащие человеческие ткани, предназначенные для замены функционирования пораженных болезнью внутренних тканей. Этот подход включает выделение клеток из организма, размещение их в структурных матрицах и имплантацию новой системы внутрь тела или использование системы снаружи тела. Например, антитела могут быть включены в выстланный (насыщенный) клетками сосудистый трансплантат для стимулирования роста клеток, содержащихся в трансплантате. Представляется, что способы по данному изобретению могут быть использованы для стимулирования восстановления, регенерации и инженерии тканей в таких составляющих организма человека, как хрящ и кость, ткани центральной нервной системы, мышца, печень и клетки островка Лангерганса (продуцирующие инсулин).
Настоящее изобретение также относится к использованию раскрытых фенилсульфаминовых кислот для получения лекарственного средства для стимулирования роста образцов-заменителей полнослойного кожного лоскута (трансплантата).
Настоящее изобретение также относится к использованию раскрытых фенилсульфаминовых кислот по данному изобретению для получения лекарственного средства для использования, для воздействия на восстановление ткани в контексте методов управляемой регенерации тканей (GTR).
Раскрытые соединения могут быть использованы для получения одного или более лекарственных средств, неограничивающие примеры этих лекарственных средств представляют собой
Лекарственные средства для лечения регулируемого ангиогенезом нарушения у субъекта, в котором регулируемое ангиогенезом нарушение представляет собой нарушение с повышенным ангиогенезом.
Лекарственные средства для лечения регулируемого ангиогенезом нарушения у субъекта, в котором регулируемое ангиогенезом нарушение представляет собой нарушение с повышенным ангиогенезом, выбранное из болезни Крона и неспецифического язвенного колита, псориаза, саркоидоза, ревматоидного артрита, гемангиом, болезни Рандю-Вебера-Ослера или наследственной геморрагической телеангиэктазии, солидных опухолей или опухолей системы крови и синдрома приобретенного иммунного дефицита.
Лекарственные средства, используемые для инженерии тканей, индуцирующие при этом повышенный рост тканей.
Лекарственные средства для лечения регулируемого ангиогенезом нарушения у субъекта, при этом регулируемое ангиогенезом нарушение представляет собой нарушение с пониженным ангиогенезом.
Методы
Скрининг-тесты, использующие модели ангиогенеза in vitro и in vivo
Антитела по данному изобретению могут быть скринированы в анализах ангиогенеза, которые известны в данной области. Такие анализы включают анализы in vitro, когда измеряют суррогаты роста кровеносных сосудов в культивируемых клетках или образование сосудистых структур из тканевых эксплантатов, и анализы in vivo, когда измеряют рост кровеносных сосудов непосредственно или косвенно (Auerbach. R., et al. (2003). Clin Chem 49, 32-40, Vailhe. В., et al. (2001). Lab Invest 81, 439-452).
1. Модели ангиогенеза in vitro
Модели in vitro, которые подходят для использования в настоящем изобретении, используют культивируемые эндотелиальные клетки или тканевые эксплантаты и измеряют действие средств на реакции "ангиогенных" клеток или на образование кровеносных капилляроподобных структур. Неограничивающие примеры анализа ангиогенеза in vitro включают, но не ограничиваются ими, миграцию и пролиферацию эндотелиальных клеток, образование капилляров, спрутинг эндотелиальных клеток, пробу эксплантата, аортального кольца и пробу аортальной дуги цыпленка.
2. Модели ангиогенеза in vivo
In vivo средства или антитела, которые являются подходящими для использования в настоящем изобретении, вводят локально или системно в присутствии или в отсутствие факторов роста (т.е. VEGF или ангиопоэтин 1) и измеряют рост новых кровеносных сосудов путем непосредственного наблюдения или путем измерения маркера суррогатов, такого как содержание гемоглобина или флуоресцентный индикатор. Неограничивающие примеры анализов ангиогенеза in vivo включают, но не ограничиваясь этим, анализ хориоаллантоисной мембраны цыпленка, анализ ангиогенеза роговицы глаза и анализ Matrigel пробки (тромба).
3. Методы определения васкуляризации ишемической ткани
Для определения, имеет ли ткань риск быть пораженной ишемией в результате нежелательной окклюзии сосуда, подходят стандартные общепринятые методы. Например, при заболеваниях миокарда эти методы включают различные методы визуализации (например, используя радиоактивные метки, рентгеновские лучи; и MRI магнитно-резонансную томографию) и физиологические тесты. Следовательно, индуцирование ангиогенеза как эффективного способа предотвращения или ослабления симптомов ишемии в тканях, пораженных или с риском быть пораженными вследствие окклюзии сосуда, может быть легко определено.
Специалист в области использования стандартных методов может измерить васкуляризацию ткани. Неограничивающие примеры измерения васкуляризации у субъекта включают SPECT (однофотонная эмиссионная компьютерная томография, ОЭКТ); PET (позитронно-эмиссионная томография, ПЭТ); MRI (магнитно-резонансная томография, МРТ); и их комбинацию, путем измерения кровотока в ткани до и после лечения. Ангиография может быть использована для оценки (макроскопического) наличия кровеносных сосудов в участке ткани. Гистологическая оценка может быть использована для количественного определения наличия кровеносных сосудов на уровне малых сосудов. Эти и другие методы рассматриваются в Simons, et al., "Clinical trials in coronary angiogenesis," Circulation, 102, 73-86 (2000).
50
50
В нижеследующей Таблице VIII приводятся неограничивающие примеры ингибиторов HPTPβ и РТР1В и соответствующие им значения активностей ингибирования НРТРβ (IC мкМ) и РТР1В (IC мкМ).
Таблица VIII
Соединение
НРТРβ IC<sub>50</sub> мкМ
РТР1В IC<sub>50</sub> мкМ
А1
<img file="00000125.tif" he="48" wi="74" img-content="undefined" img-format="tif" />
0,000157
0,722
(S)-{4-[2-(4-этилтиазол-2-ил)-2-фенилацетиламино)этил]фенил}сульфаминовая кислота
<img file="00000026.tif" he="56" wi="88" img-content="undefined" img-format="tif" />
А2
4-{(S)-2-[(R)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
0,004
7,12
<img file="00000027.tif" he="56" wi="95" img-content="undefined" img-format="tif" />
A3
трет-бутиловый эфир {1-[1-(5-этилтиазол-2-ил)-(S)-2-(4-сульфоаминофенил)этилкарбамоил]-(S)-2-фенилэтил}метилкарбаминовой кислоты
0,031
7,05
<img file="00000028.tif" he="56" wi="95" img-content="undefined" img-format="tif" />
А4
трет-бутиловый эфир {1-[1-(5-фенилтиазол-2-ил)-(S)-2-(4-сульфоаминофенил)этилкарбамоил]-(S)-2-фенилэтил}метилкарбаминовой кислоты
<5×10<sup>-8</sup>
0,754
<img file="00000126.tif" he="56" wi="88" img-content="undefined" img-format="tif" />
А5
4-{(S)-2-(S)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо-2-(2-фенилтиазол-4-ил)}фенилсульфаминовая кислота
<5×10<sup>-8</sup>
0,905
<img file="00000127.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А6
4-{(S)-2-(4-Этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,000162
0,49
<img file="00000037.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А7
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(тиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
0,006
1,02
<img file="00000038.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А8
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-метилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
0,001
0,48
<img file="00000039.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А9
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-пропилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
0,0001
1,03
<img file="00000040.tif" he="57" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
0,0002
0,708
А10
4-{(S)-2-(4-трет-Бутилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-этил}фенилсульфаминовая кислота
<img file="00000041.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
A11
4-{(S)-2-(4-Циклопропилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,00001
0,3
<img file="00000042.tif" he="56" wi="86" img-content="undefined" img-format="tif" />
A12
4-{(S)-2-(4-Циклогексилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота
<5×10<sup>-8</sup>
1,78
<img file="00000043.tif" he="63" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
0,001
0,31
А13
4-{(S)-2-(4,5-Диметилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-этил}фенилсульфаминовая кислота
<img file="00000044.tif" he="63" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
0,0001
1,12
А14
4-{(S)-2-(4-Этил-5-метилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино) -3-фенилпропанамидо]этил}-фенилсульфаминовая кислота
<img file="00000045.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А15
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[4-(2,2,2-трифторэтил)тиазол-2-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,0003
1,63
<img file="00000046.tif" he="56" wi="86" img-content="undefined" img-format="tif" />
А16
4-{(S)-2-[(S}-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо)-2-[4-(3,3,3-трифторпропил)тиазол-2-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,00008
0,12
<img file="00000048.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А17
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[4-(метоксиметил)тиазол-2-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,001
0,64
<img file="00000049.tif" he="56" wi="88" img-content="undefined" img-format="tif" />
А18
4-{(S)-2-(4-(Этоксикарбонил)тиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,0002
0,07
А19
<img file="00000050.tif" he="76" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
0,0003
0,81
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(5-фенилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
А20
<img file="00000051.tif" he="76" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
<5×10<sup>-8</sup>
0,39
4-{(S)-2-(4-Этил-5-фенилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-этил}фенилсульфаминовая кислота
<img file="00000054.tif" he="56" wi="86" img-content="undefined" img-format="tif" />
<2×10<sup>-6</sup>
0,597
А21
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-фенилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
<img file="00000055.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А22
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[4-(тиофен-2-ил)тиазол-2-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота
<5×10<sup>-8</sup>
0,99
<img file="00000056.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А23
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[4-(тиофен-3-ил)тиазол-2-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,00009
0,44
<img file="00000128.tif" he="62" wi="83" img-content="undefined" img-format="tif" />
А24
4-{(S)-2-(5,6-Дигидро-4Н-циклопента[d]тиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,001
0,18
<img file="00000059.tif" he="63" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А25
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4,5,6,7-тетрагидробензо[d]тиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
0,0004
0,089
<img file="00000060.tif" he="56" wi="91" img-content="undefined" img-format="tif" />
А26
4-{(S)-2-[4-(5-Хлортиофен-2-ил)тиазол-2-ил]-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота
<5×10<sup>-8</sup>
0,37
<img file="00000061.tif" he="56" wi="83" img-content="undefined" img-format="tif" />
А27
4-{(S)-2-[(S)-2-(Этокси-карбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
0,00014
0,68
<img file="00000129.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А28
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(2-этилтиазол-4-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
0,0001
1,01
<img file="00000066.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А29
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(2-метилтиазол-4-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
0,001
1,16
<img file="00000069.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
A30
4-{(S)-2-(2-Циклопропилтиазол-4-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино) -3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,0002
1,35
<img file="00000070.tif" he="56" wi="104" img-content="undefined" img-format="tif" />
А31
4-{(S)-2-{2-[(4-Хлорфенилсульфонил)метил]тиазол-4-ил}-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино) -3-фенилпропанамидо]-этил}фенилсульфаминовая кислота
0,00008
2,54
<img file="00000071.tif" he="56" wi="89" img-content="undefined" img-format="tif" />
А32
4-{(S)-2-[2-(трет-Бутилсульфонилметил)тиазол-4-ил]-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}-фенилсульфаминовая кислота
0,002
1,21
<img file="00000072.tif" he="56" wi="86" img-content="undefined" img-format="tif" />
А33
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропионамидо]-2-(2-фенилтиазол-4-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
7×10<sup>-7</sup>
0,508
<img file="00000073.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А34
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[2-(тиофен-2-ил)тиазол-4-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота
5×10<sup>-8</sup>
0,604
<img file="00000074.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
A35
4-{(S)-2-[2-(3-Хлортиофен-2-ил)тиазол-4-ил]-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота
<5×10<sup>-8</sup>
0,95
<img file="00000075.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
A36
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[2-(3-метилтиофен-2-ил)тиазол-4-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота
<5×10<sup>-8</sup>
1,09
<img file="00000076.tif" he="56" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
0,0004
5
A37
4-{[(S)-2-(2-(Фуран-2-ил)тиазол-4-ил]-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино) -3-фенилпропанамидо]-этил}фенилсульфаминовая кислота
<img file="00000078.tif" he="56" wi="86" img-content="undefined" img-format="tif" />
A38
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-[2-(пиразин-2-ил)тиазол-4-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,003
0,295
<img file="00000130.tif" he="56" wi="76" img-content="undefined" img-format="tif" />
A39
4-[(S)-2-((S)-2-Ацетамидо-3-фенилпропанамидо)-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил]фенилсульфаминовая кислота
0,001
1,97
<img file="00000083.tif" he="59" wi="78" img-content="undefined" img-format="tif" />
А40
4-[(S)-2-((S)-2-Ацетамидо-3-фенилпропанамидо)-2-(4-трет-бутилтиазол-2-ил)этил]фенилсульфаминовая кислота
0,0003
1,52
<img file="00000084.tif" he="59" wi="83" img-content="undefined" img-format="tif" />
А41
4-{(S)-2-((S)-2-Ацетамидо-3-фенилпропанамидо)-2-[4-(тиофен-3-ил)тиазол-2-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,00024
1,16
<img file="00000088.tif" he="46" wi="88" img-content="undefined" img-format="tif" />
А42
4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)-3-метилбутанамидо]-2-(4-этилтиазол]-2-ил)этил}-фенилсульфаминовая кислота
0,006
1,06
<img file="00000087.tif" he="40" wi="88" img-content="undefined" img-format="tif" />
А43
(S)-4-{2-[2-(трет-Бутоксикарбониламино)ацетамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
0,028
16,0
<img file="00000131.tif" he="40" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А44
(S)-4-{2-(4-Этилтиазол-2-ил)-2-[2-(метоксикарбониламино)-ацетамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,020
5,26
<img file="00000091.tif" he="42" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А45
4-{(S)-2-(4-Этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-3-метилбутанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,003
1,03
<img file="00000088.tif" he="46" wi="88" img-content="undefined" img-format="tif" />
А46
4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)-4-метилпентанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота
0,001
0,48
<img file="00000093.tif" he="46" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А47
4-{(S)-2-(4-Этилтиазол-2-ил)-2-[(S)-2-(метоксикарбониламино)-4-метилпентанамидо]этил}фенилсульфаминовая кислота
0,0003
0,07
<img file="00000094.tif" he="56" wi="91" img-content="undefined" img-format="tif" />
А48
4-((S)-2-(4-Этилтиазол-2-ил)-2-{(S)-2-[2-(метоксикарбонил)-ацетамидо]-3-фенилпропанамидо}этил)-фенилсульфаминовая кислота
0,0003
0,299
<img file="00000132.tif" he="37" wi="63" img-content="undefined" img-format="tif" />
А49
4-{(S)-2-[(S)-2-(Метоксикарбониламино)-4-метилпентамидо]-2-[2-(тиофен-2-ил)тиазол-4-ил]этил}фенилсульфаминовая кислота
<5×10<sup>-8</sup>
0,52
<img file="00000133.tif" he="31" wi="67" img-content="undefined" img-format="tif" />
А50
(S)-4-{2-[2-(трет-Бутоксикарбониламино)ацетамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}-фенилсульфаминовая кислота
0,028
16,0
<img file="00000134.tif" he="32" wi="58" img-content="undefined" img-format="tif" />
А51
трет-Бутиловый эфир [1-(S)-(фенилтиазол-2-ил)-2-(4-сульфоаминофенил)этил]карбаминовой кислоты
0,049
33,02
<img file="00000098.tif" he="38" wi="71" img-content="undefined" img-format="tif" />
А52
(S)-4-(2-(4-Метилтиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота
0,112
50
<img file="00000135.tif" he="30" wi="60" img-content="undefined" img-format="tif" />
А53
(S)-4-(2-(4-Этилтиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота
0,085
142
<img file="00000136.tif" he="38" wi="78" img-content="undefined" img-format="tif" />
А54
(S)-4-{2-[4-(гидроксиметил)тиазол-2-ил]-2-пиваламидоэтил}фенилсульфаминовая кислота
0,266
50
<img file="00000137.tif" he="41" wi="84" img-content="undefined" img-format="tif" />
А55
(S)-4-{[2-(4-Этоксикарбонил)тиазол-2-ил]-2-пиваламидоэтил}фенилсульфаминовая кислота
0,584
44,9
<img file="00000138.tif" he="43" wi="84" img-content="undefined" img-format="tif" />
А56
(S)-4-(2-(4-Фенилтиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота
0,042
82,3
<img file="00000102.tif" he="43" wi="95" img-content="undefined" img-format="tif" />
А57
4-((S)-2-(4-(3-Метоксифенил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота
0,110
40,1
<img file="00000103.tif" he="43" wi="99" img-content="undefined" img-format="tif" />
А58
4-((S)-2-(4-(2,4-Диметоксифенил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил) фенилсульфаминовая кислота
0,086
43,1
<img file="00000104.tif" he="38" wi="87" img-content="undefined" img-format="tif" />
А59
(S)-4-(2-(4-Бензилтиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота
0,113
38,2
<img file="00000106.tif" he="38" wi="87" img-content="undefined" img-format="tif" />
А60
(S)-4-(2-(4-(3-Метоксибензил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота
0,132
50
<img file="00000107.tif" he="43" wi="96" img-content="undefined" img-format="tif" />
А61
4-((S)-2-(4-(2,3-Дигидробензо[b][1,4]диоксинбил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота
0,138
38,3
<img file="00000108.tif" he="45" wi="84" img-content="undefined" img-format="tif" />
А62
(S)-4-(2-(5-Метил-4-фенилтиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота
0,098
50,5
<img file="00000109.tif" he="49" wi="104" img-content="undefined" img-format="tif" />
А63
(S)-4-(2-(4-(Бифен-4-ил)тиазол-2-ил)-2-пиваламидоэтил)фенилсульфаминовая кислота
0,381
28,6
<img file="00000110.tif" he="44" wi="71" img-content="undefined" img-format="tif" />
А64
(S)-4-(2-трет-Бутоксикарбониламино)-2-(2-метилтиазол-4-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота
0,033
18,9
<img file="00000139.tif" he="44" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А65
(S)-4-(2-(трет-Бутоксикарбониламино)-2-(4-пропилтиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота
0,04
35,6
<img file="00000140.tif" he="47" wi="78" img-content="undefined" img-format="tif" />
А66
(S)-4-(2-(трет-Бутоксикарбониламино) -2-(4-трет-бутилтиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота
0,027
50
<img file="00000141.tif" he="44" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А67
(S)-4-(2-(трет-Бутоксикарбониламино) -2-(4-(метоксиметил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота
0,18
27,6
<img file="00000142.tif" he="44" wi="78" img-content="undefined" img-format="tif" />
А68
(S)-4-(2-(трет-Бутоксикарбониламино) -2-(4-(гидроксиметил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота
0,644
31,6
<img file="00000143.tif" he="42" wi="86" img-content="undefined" img-format="tif" />
А69
(S)-4-(2-трет-Бутоксикарбониламино)-2-(4-(2-этокси-2-оксоэтил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота
0,167
50
<img file="00000144.tif" he="43" wi="87" img-content="undefined" img-format="tif" />
А70
(S)-4-(2-(трет-Бутоксикарбонил)-2-(4-(2-(2-метокси-2-оксоэтиламино)-2-оксоэтил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота
0,132
50
<img file="00000145.tif" he="44" wi="90" img-content="undefined" img-format="tif" />
А71
(S)-4-(2-(трет-Бутоксикарбониламино)-2-(2-пивалокситиазол-4-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота
0,555
9,12
<img file="00000118.tif" he="64" wi="70" img-content="undefined" img-format="tif" />
А72
(S)-4-(2-(трет-Бутоксикарбониламино) -2-(5-фенилтиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота
0,308
11,4
<img file="00000119.tif" he="44" wi="89" img-content="undefined" img-format="tif" />
А73
4-((S)-2-(трет-Бутоксикарбониламино) -2-(4-(3-(трифторметил)фенил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота
0,253
11,8
<img file="00000123.tif" he="44" wi="82" img-content="undefined" img-format="tif" />
А74
4-((S)-2-(трет-Бутоксикарбониламино)-2-(4-(тиофен-3-ил)тиазол-2-ил)этил)фенилсульфаминовая кислота
0,045
14,6
Модель задней конечности крысы используют для оценки ангиогенных характеристик новых ингибиторов НРТРβ. В частности, для опредения того, повышается ли кровоток в коллатераль-зависимой области конечности после ишемии в том случае, когда животное находится в состоянии спровоцированной физической нагрузки. Конкретным соединением, подлежащим оценке в этом примере, является (4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовая кислота.
Модель развития коллатерали на задней конечности крысы
Отбор животного
Для достижения возможности контролирования переменных, влияющих на выполнение бега на тренажере, крыс знакомят с характером испытания на тренажере ("бегущая дорожка") за неделю до хирургического вмешательства. Оно заключалось в беге крысы на тренажере на протяжении прерывистых заездов, составляющих ежедневно 5 минут, при скоростях в диапазоне 20-25 м/сек и угле возвышения 7°. Предварительный опыт показал, что животные, которые не выполняли правильно бег (на тренажере) во время периода ознакомления, выступали также плохо и во время последующих определений кровотока, возможно воздействуя на измерения коллатерального кровотока. Исходя из этого опыта, крыс, которые не осуществляли правильно это упражнение во время периода ознакомления, в это исследование не включали.
Хирургические методики
2
Проводят первоначальную хирургическую операцию для того, чтобы вызвать ишемию задних конечностей и имплантировать осмотические насосы в основном, как описано ранее, с незначительными изменениями. Кратко, взрослых крыс-самцов линии Sprague-Dawley (массой 340-390 г) сначала помещают в камеру для вводного наркоза с интенсивностью подачи O 1 л/мин и содержанием изофлурана (ISO) при 2,5%, температуру тела поддерживают при помощи электрогрелки, находящейся под камерой. После индукции животных перемещают на хирургическую подстилку и продолжают анестезию при помощи наркозного аппарата открытого типа. Лампу для обогрева позиционируют над крысой и для контролирования температуры тела в животного размещают ректальный зонд. Паховые области двусторонне клипируют и проводят обработку-чистку щеткой, чередуя Бетадин и спирт (3×), и накрывают крысу стерильной хирургической салфеткой. Левую бедренную артерию обнажают путем рассечения кожи и затем эту артерию лигируют в двух положениях на расстоянии 1 см; дистально паховой связке и проксимально бедренной огибающей артерии. Кожу сшивают, используя либо сшивающий аппарат для кожной ткани, либо Vetbond. Такую же процедуру повторяют с правой стороны. Животные в группах с непрерывным вливанием имели насос Alzet 2ML2 (уже заправленный), вставленный в SubQ пространство на их спинах, который доставлял либо 15 мг/кг/день, либо 5 мг/кг/день 4-{(S)-2-[(S)-2-(трет-бутоксикарбонил)-3-фенилпропанамидо]-2-(4-этилтиазол-2-ил)этил}фенилсульфаминовой кислоты, или наполнитель, в зависимости от групп обработки. Животные в группе с обработкой VEGF подвергались дополнительной операции по размещению осмотического насоса (Alert™ model # 2004) на их шее. До имплантации осмотические насосы заполняют раствором VEGF165 при дозе 15 мкг/кг/день и погружают на ночь в лабораторные стаканы со стерильным физиологическим раствором в водяном термостате (37°С). Присоединяют удлиненные РЕ50 катетеры, покрытые PPG (полиэтиленгликоль Aldrich # 20-235-5), используя стерильную технику и в соответствии с инструкциями производителя в послеполуденный период, предшествующий операции. Для размещения насоса делают надрез, обнажая правую яремную вену, пробивают проход в SubQ с правой стороны шеи к спине и насос помещают в полученный карман SubQ. Сосуд лигируют с помощью шелка 4-0, делают разрез в сосуде дистально к узлу и катетер от осмотического насоса продевают в направлении по течению (приблизительно 2 см) и закрепляют вторым узлом. Кожу сшивают таким же способом, как указано выше.
Оценка кровотока
Размещение катетера
Через две недели после операции лигирования крысу подвергают второй острой хирургической операции, заключающейся в размещении постоянно находящихся катетеров для измерений микросфер. Крыс анестезируют, как описано выше. Животное клипируют, препарируют и на каждое место входа (катетера) наносят крем EMLA. Сначала делают разрез в продольном направлении на вентральном основании хвоста, используя лезвие 10. Клинообразный РЕ50 катетер вставляют приблизительно на 3 см в вентральную хвостовую артерию и надежно закрепляют. Затем конец катетера обертывают вокруг хвоста и пробивают проход в SubQ на спине, выходя между телами лопаток. После катетеризации хвостовой артерии делают разрез срединной линии шеи, обнажая левую сонную артерию для обтурирующей катетеризации. Клиноообразный РЕ 50 катетер помещают на 3 см в сонную артерию и дистальный конец прокладывают в SubQ, выходя между телами лопаток. Шею сшивают либо с помощью сшивающего аппарата для кожной ткани, либо Vetbond и наносят крем EMLA. Место выхода ушивают вокруг катетеров кисетным швом. Концы катетеров закрывают прижиганием и крысам предоставляют возможность восстановиться от анестезии на протяжении, по меньшей мере, 4 часов.
Протокол испытания на тренажере и измерение микросфер
6
Для измерений кровотока крыс помещают на бегущую дорожку и катетеры соединяют с удлиняющей системой труб при помощи входящих друг в друга коннекторов 22 размера. Для отбора микросфер и измерений кровяного давления катетер хвостовой артерии соединяют со шприцом (покрытым твином или гепарином), который связан "Т" Ed с аспиратором и датчиком давления. Катетер сонной артерии используют для впрыскивания микросфер. Крыса начинала бег со скоростью 20 м/мин и при угле возвышения 7°. После 1 минуты бега включают насос со скоростью подачи 0,5 мл/мин, через десять минут в линию сонной артерии вливают 0,5 мл (1×10 сфер/мл) флуоресцирующих микросфер с последующей 0,5 мл промывкой на протяжении 30 секунд. Насос отрегулирован на остановку на 90 сек. Бегущую дорожку останавливают, удлиняющую систему линий заменяют и линии животного промывают, и животному предоставляют возможность отдохнуть. Шприц и линии удаляют из насоса и эталонную пробу крови помещают в помеченную пробирку для обработки. Изъятый шприц и удлиняющую систему линий промывают три раза 2% твином, потери (промывные воды) смывают в пробирку с эталонной пробой крови. Новый шприц и новые линии размещают на насосе и процедуру повторяют с животным, бегущим при более быстрой скорости (25 м/мин), и впрыскивают микросферы другого цвета. По завершении второго забега животное подвергают эвтаназии посредством 0,3 мл Buthaneasia.
Сбор и анализ ткани
После эвтаназии ткани извлекают, подрезают (приводят в порядок), взвешивают, регистрируют и помещают в маркированные пробирки для обработки. Пробы представляют собой следующее, как для правой, так и левой стороны: Soleus, Plantaris, Gastroc, Red Quads и почки. Образцы крови переваривают посредством 0,75 мл 16н. КОН на протяжении ночи. Ткань переваривают посредством 5 мл 4н. КОН на протяжении ночи. Затем пробы фильтруют в вакууме, используя 8-микронные поликарбонатные фильтры, и фильтровальную бумагу помещают в помеченную пробирку с 1 мл 2-этоксиэтилацетата (2ЕЕА). После переваривания на протяжении ночи пробы считывают, используя черный полипропиленовый планшет на флуориметре, настроенном на длины волн 495-506 и 534-552. Точно 270 мл пробы пипетируют в каждую лунку. Любая дополнительная потребность в разведении отмечается в форме для записи данных животного, и с учетом этого разведения вводится поправка в флуоресценцию необработанных (предварительных) данных. Необработанные данные преобразуют в кровоток, выраженный в единицах мл/мин/100 г ткани, согласно уравнению ({(флуоресценция ткани/масса ткани г)/(Флуоресценция эталонной пробы крови/Скорость отбора крови мл/мин)}*100 г). Значения кровотока для тканей левой и правой конечностей усредняют, получая одно значение для каждого животного, поскольку имеет место равномерное распределение между почками.
В этом исследовании группы с обработкой VEGF имели ожидаемое существенное улучшение в GPS кровотоке по сравнению с контрольными группами, обработанными наполнителем. Исходя из гемодинамических данных, в кровяных давлениях обработанных групп наблюдается просто значимое различие между любыми из групп. Эти давления, в действительности, ниже, чем у групп с обработкой VEGF и/или групп с обработкой наполнителем, что указывает на то, что перфузионные давления в GPS должны также быть достаточно низкими. Это означает, что любые изменения, измеренные в кровотоке, являются реальными, не являются артефактом расчета. Кровотоки в результате непрерывного вливания в SubQ показали существенное улучшение кровотока в икроножной области по сравнению с наполнителем для двух доз (5 мг/кг/день и 15 мг/кг/день) соединения. Данные также обнаружили, что более низкая доза (5 мг/кг/день) не вызывает максимальной реакции VEGF, что указывает на наличие дозовой зависимости в случае этого соединения.
Результаты этого эксперимента суммированы ниже.
Таблица IX
Кровяное давление и частота сердечных сокращений
Непрерывное вливание в SubQ
VEGF 15 мкг/кг/день
Наполнитель
Низкая 5 мг/кг/день
Высокая 15 мг/кг/день
ANOVA значение р
Кровяное давление
До нагрузки
146±2,5
141±3,1
132±3,9<sup>†</sup>
137±4,5
Без спецификации Wt (NS)
Нагрузка
156±2,3
151±4,6
142±3,2<sup>†</sup>
144±4,6
Без спецификации Wt
После нагрузки
149±2,8
148±5,3
135±3,1
133±3,7*<sup>†</sup>
<0,05
Частота сердечных сокращений
До нагрузки
452±29,5
463±18,1
429+19,8
428±13,5
Без спецификации Wt
Нагрузка
489±10,0
577±15,2
487+10,1
456+13,0
Без спецификации Wt
После нагрузки
476±18,1
468+15,9
465+18,8
462±14,8
Без спецификации Wt
N
10
8
10
10
Данные выражены как среднее ±CO(SE). ANOVA анализ, используя тест Туки; * достоверно отличный от наполнителя, <sup>† </sup>достоверно отличный р<0,05 относительно VEGF
Таблица X
Кровяное давление и масса тела
Непрерывное вливание в SubQ
VEGF 15 мкг/кг/день
Наполнитель
Низкая 5 мг/кг/день
Высокая 15 мг/кг/день
ANOVA значение р
Кровоток
Во время нагрузки
Икроножнаяобласть (GPS)
76±1,1*
53±1,4
69±2,0*<sup>†</sup>
75±1,7*
<0,001
Почки
296±32,3
248±24,9
318±30,1
319±37,9
Без спецификации
Массы
Начальная масса тела
372±3,6
369±2,7
365±4,8
364±4,8
Без спецификации
Конечная масса тела
421±5,5
411±5,5
413±5,6
409±5,5
Без спецификации
N
10
8
9
8
данные выражены как среднее ±CO(SE). ANOVA анализ, используя тест Туки; * достоверно отличный от наполнителя; <sup>† </sup>достоверно отличный р<0,05 относительно VEGF
Следует иметь в виду, что размерности и значения, указанные здесь, строго не ограничены цитируемыми точными численными значениями. Взамен, если не оговорено особо, каждая такая размерность, как предполагают, означает как цитированное значение, так и функционально эквивалентный диапазон, окружающий это цитированное значение. Например, размерность, указанная как "40 мм", как предполагают, означает "около 40 мм."
Все документы, цитированные в разделе ′Подробное описание изобретения′, в уместной степени, включены в настоящее описание в виде ссылки; цитирование любого документа не следует толковать как признание того, что он представляет собой известный уровень техники в отношении настоящего изобретения. В том смысле, что любое значение или определение термина в этом документе противоречит любому значению или определению такого же термина в документе, включенного в виде ссылки, значение или определение, приписываемое этому термину, в этом документе будет определяющим.
Несмотря на проиллюстрированные и описанные выше конкретные варианты осуществления изобретения, специалистам в данной области должны быть очевидны различные модификации изобретения и внесение в него различных других изменений, не выходящих за рамки существа и объема изобретения. В связи с чем подразумевается, что данное изобретение охватывает все такие изменения и модификации, находящиеся в пределах объема (охраны) изобретения, сформулированного в прилагаемой ниже формуле изобретения.