Характеристика ферментативной активности нейтрофильных лейкоцитов при экспериментальном бластоцистозе

УДК 612.11/.12

ХАРАКТЕРИСТИКА ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ БЛАСТОЦИСТОЗЕ

CHARACTERISTICS OF ENZYMATIC ACTIVITY OF NEUTROPHILIC LEUKOCYTES IN EXPERIMENTAL BLASTOTSISTOZE

Е. А. Карпеева, А. А. Захаров

E. A. Karpeeva, A. A. Zakharov

ГОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет имени И. Н. Ульянова», г. Ульяновск

Аннотация. Повышение активности ферментов щелочной фосфатазы, кислой фосфатазы, миелопероксидазы и катионных белков коррелировало со степенью выраженности проявлений экспериментального бластоцистоза у животных.

Abstract. Increased activity of enzymes of alkaline phosphatase, acid phosphatase, myeloperoxidase and cationic proteins correlated with the degree of symptom severity of blastotsistoze of experimental animals.

Ключевые слова: катионные белки, щелочная фосфатаза, кислая фосфатаза, нейтрофи-лы, миелопероксидаза.

Keywords: cationic proteins, alkaline phosphatase, acid phosphatase, neutrophils, myeloperoxidase.

Актуальность исследуемой проблемы. Ферментативная активность нейтрофиль-ных лейкоцитов при экспериментальном бластоцистозе является актуальной проблемой в биологии и медицине [1]. В связи с этим целью работы явилось изучение активности катионных белков (КБ), уровня кислой и щелочной фосфатазы (КФ, ЩФ), активности миелопероксидазы в динамике на 3, 6, 9, 12, 16, 21 и 28-е сутки от начала заражения животных простейшими Blastocystis spp.

Материалы и методика исследований. Экспериментальный бластоцистоз воспроизводили у лабораторных животных (крысы, мыши). В ходе работы нами были использованы цитохимические методы исследования, которые позволяют изучить химическую организацию клеток при максимальном сохранении их прижизненной морфологии [2, 5]. С помощью цитохимических исследований удалось проследить сдвиги в направленности метаболизма, ферментном спектре, координации обменных процессов в клетках и формировании характерных морфологических изменений. Результаты выражали через средний цитохимический коэффициент (СЦК) [3, 6].

Результаты исследований и их обсуждение. Бластоцистная инвазия приводит к значительному повышению уровня щелочной и кислой фосфатаз. Результаты изучения активности ЩФ и КФ представлены на рис. 1 и 2.

Как видно из рис. 1, уже на третий день исследований уровень щелочной фосфота-зы животных, инфицированных бластоцистами, был выше контрольного почти в 1,2 раза (2,11±0,05 и 1,77±0,02 соответственно, p<0,001). Дальнейшее динамическое повышение показателя мы отмечали до 12 суток, при этом уровень ЩФ в контрольной группе составил 2,66±0,05 ф<0,001). В дальнейшем ее уровень снижался и к 28 дню от начала эксперимента оставался незначительно повышенным (1,94±0,04 и 1,8±0,03 соответственно, p<0,01).

у си. ед.

Л 6 9 12 16 21

сутки

Опыт П Контроль

Рис. 1. Изменение активности щелочной фосфатазы у опытных и контрольных животных

Аналогичным образом изменялась активность кислой фосфатазы (рис. 2). Как видно, динамика ее активности была аналогична изменениям показателей щелочной фосфа-тазы: уже на 3 сутки после заражения статистически достоверно превосходил таковой в контрольной группе (0,91±0,04 и 0,82±0,02 соответственно; p<0,05).

\ от ед

:.о

1..'

1.0

0..'

0.0

1:

16 л

сутки

О Опыт  Контроль

Рис. 2. Изменение активности кислой фосфатазы у опытных и контрольных животных

В последующем уровень кислой фосфатазы достоверно динамически возрастал и на 12 сутки эксперимента составлял 1,73±0,05 (р<0,01). В дальнейшем ее содержание в крови имело тенденцию к снижению, и к концу эксперимента значение показателей статистически не отличалось от уровня данного фермента в контрольной группе (р>0,05).

Степень гранулярного синего окрашивания цитоплазмы пропорциональна содержанию катионных белков в клетках. Поскольку катионные белки обладают протеолити-ческими и бактерицидными свойствами, по количеству гранул и интенсивности их окраски можно судить о состоянии кислороднезависимой биоцидной системы нейтрофилов [4]. Снижение ее показателей ниже 2,4±0,25 свидетельствует о дефектности кислородне-зависимых антимикробных систем нейтрофилов.

Наряду с увеличением показателей активности миелопероксидазы, щелочной и кислой фосфатаз при экспериментальном бластоцистозе нами установлено снижение уровня катионного белка у животных опытной группы (рис. 3).

Как видно из представленной диаграммы, через трое суток от начала эксперимента у животных экспериментальной группы значение активности КБ снижалось и составило 1,98±0,04 условных единиц, что было в 1,1 раза ниже, чем у животных контрольной группы (2,22±0,03; р<0,05).

усл. ед.

сутки

Опыт  Контроль

Рис. 3. Изменение активности катионных белков у опытных и контрольных животных

Минимальное значение показателя в группе опытных мышей было отмечено к девятым суткам от начала эксперимента. В это время активность КБ у опытных животных составила 1,23±0,07 условных единиц, при этом различие в показателях по сравнению с контрольной группой было статистически достоверным (р<0,05).

В дальнейшем отмечалась тенденция к увеличению уровня КБ у инвазированных животных. Так, на двенадцатые сутки СЦК катионных белков у опытных мышей превышал показатель контроля в 1,6 раза (1,40±0,09), к шестнадцатым суткам - в 1,3 раза (1,65±0,07), к двадцать первым суткам - в 1,3 раза (1,70±0,1). Все указанные показатели высоко статистически достоверно отличались от уровня контрольных групп (р<0,05). К концу эксперимента значения СЦК активности КБ составило 1,96±0,05 (р<0,05).

Резюме. Изучение ферментативной активности нейтрофильных лейкоцитов в динамике экспериментального бластоцистоза выявило изменение активности миелоперок-сидазы, щелочной фосфатазы, кислой фосфатазы и уровня катионных белков. Так, максимальное угнетение катионных белков на фоне повышения значений активности мие-лопероксидазы, кислой и щелочной фосфатазы нами отмечено на двенадцатые сутки эксперимента. В дальнейшем наблюдались разнонаправленные сдвиги активности МПО, КФ, ЩФ и КБ в сторону их нормализации, т. е. повышался уровень катионных белков при динамическом снижении миелопероксидазной и фосфатазной активности лейкоцитов, направленных на отграничение и удаление из организма чужеродного антигенного материала.

ЛИТЕРАТУРА

1. Артемова, А. Г. Реакция торможения миграции лейкоцитов в капиллярах / А. Г. Артемова // Медицинские лабораторные технологии : справочник / под ред. А. И. Карпищенко. - СПб. : Интермедика, 1999. -Т. 2. - С. 302-303.

2. Асадов, Ч. Д. Связь между фагоцитарной функцией и цитохимическими показателями нейтрофилов крови / Ч. Д. Асадов, Л. С. Нумерова, М. Э. Мирзоева // Лабораторное дело. - 1990. - № 3. - С. 19-21.

3. Зинкин, В. Ю. Способ количественной оценки кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов человека / В. Ю. Зинкин, М. А. Г одков // Клиническая и лабораторная диагностика. - 2004. -№ 8. - С. 26-29.

4. Губжокова, Е. Б. Цитохимия катионного белка при острых пневмониях / Е. Б. Губжокова // Успехи современного естествознания. - 2004. - № 1. - С. 49.

5. Хаитов, Р. М. Иммунология : учебник / Р. М. Хаитов, Г. А. Игнатьева, И. Г. Сидорович. - М. : Медицина, 2000.- 432 с.

6. Goldsby, R. A. Immunology / R. A. Goldsby. - W. H. : Freeman & Company, 2002. - P. 39.