НАТУРАЛЬНОЕ ВИРУЛИЦИДНОЕ СРЕДСТВО И ВИРУЛИЦИДНЫЙ ПРЕПАРАТ НА ЕГО ОСНОВЕ (ВАРИАНТЫ)
NATURAL VIRUCIDAL AGENT AND VIRUCIDAL PREPARATION ON ITS BASIS (OPTIONS)

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, а именно к созданию и производству натуральных вирулицидных дезинфектантов, безопасных для здоровья человека, животных и окружающей среды.
Распространение в мире различных заболеваний, вызываемых вирусными агентами, привело к возрастающему спросу на антисептические препараты. Большинство этих препаратов основано на таких традиционных антисептиках, как формалин, глютаровый альдегид, перекись водорода, хлорамин и т.д. (McDonnell G., Russell A.D. Anticeptics and disinfectants: action and resistance. Clin. Microbiol. Rev., 1999, Vol.12, p. 147-179). Однако эти антисептики применяются в значительных концентрациях, и не все проявляют вирулицидное действие. В условиях развития пандемии H1N1 гриппа разработка средств массовой защиты от вирусных инфекций является особенно актуальной, так как контактный путь передачи этой инфекции наряду с аэрозольным играет важнейшую роль в распространении инфекции. Следует также отметить, что подавляющее большинство гигиенических средств для рук не содержат вирулицидных компонентов и ни одно из них не сертифицировано в этом отношении.
Вторая не менее важная проблема состоит в том, что масштабы применения традиционных антисептиков настолько велики, что возникает реальная угроза загрязнению окружающей среды достаточно токсичными химикатами ионами металлов, альдегидов, поверхностно активных веществ синтетического происхождения (Voss J.G. Effect of Inorganic Cations on Bactericidal Activity of Anionic Surfactants. Journal of Bacteriology. 1963, vol. 36, pp. 207-211; Pal В., Heda B.I.D., P.V. Khadikar, S.G. Kaskedikar, Antimicrobial Activity of Metal Chelates of Salicyclic Acid. Indian Journal of Microbiology, 1981, vol. 21, pp. 331-334). Фактически, это относится ко всем современным дезинфектантам.
Наиболее функциональным дезинфектантом с виросептическими свойствами является препарат, разработанный фирмой Novavax (CIF). Антимикробный виросептик широкого спектра действия включает широко известный неионный детергент Тритон-Х-100, растворитель три-n-бутилфосфат, в суспензии воды/соевое масло (US 6034073 А, 07.03.2000). По данным авторов разработки такой антисептик активен как против бактерий сибирской язвы, так и против вирусов гриппа. При этом следует отметить, что Тритон-Х-100 в большей степени используется в технологических целях в качестве детергента и эмульгатора. Масляная основа таких антисептиков также не представляется удобной для индивидуального применения и тем более для пропитывания салфеток. Несмотря на несовершенство состава, интересным является использование эмульгаторов для получения стабильных эмульсий основных гидрофобных компонентов вирулицидных препаратов. Однако данный антисептик также не удовлетворяет экологическим требованиям.
В целом, проблема создания доступных и относительно простых виросептиков настолько актуальна, что разрабатываются и апробируются даже простейшие спиртовые смеси и виросептическое мыло, чтобы предотвратить контактную передачу пандемического вируса H1N1sw в период активного развития пандемии (Grayson ML, Melvani S, Druce J, et al. Efficacy of soap and water and alcohol-based hand-rub preparations against live H1N1 influenza virus on the hands of human volunteers. Clin Infect Dis. 2009; 48(3): 285-291). За рубежом самыми доступными средствами дезинфекции являются просто растворы этанола.
Известны различные вирулицидные средства, содержащие дезинфицирующий агент, спирт и/или воду, при этом в качестве дезинфицирующего агента используют алкилдиметилбензиламмоний хлорид (RU 2235558 C1; RU 2286145 С1), клатрат карбамид дидецилдиметиламмоний бромид (RU 2158143 С1), молочную кислоту, лимонную кислоту и цинксодержащее соединение (RU 2436304 С2), органическую кислоту или ангидрид органической кислоты (RU 2366460 С2).
Наиболее близким к предложенному является вирулицидное средство, содержащее алкилдиметилбензиламмоний хлорид, этиловый спирт, пропиленгликоль, глицерин и масло на основе виноградных косточек, 5,0-33,5% раствор токоферол ацетата и воду в следующих соотношениях, мас. %:
этиловый спирт
75,0-80,0
алкилдиметилбензиламмоний хлорид
0,05-0,15
глицерин дистиллированный
0,01-0,3
пропиленгликоль
0,01-0,3
масло из виноградных косточек
0,1-0,3
токоферол ацетат
0,005-0,1
вода
остальное (RU 2235558 С1, опубл. 10.09.2004)
Недостаток известного средства заключается в том, что алкилдиметилбензиламмония хлорид оказывает неблагоприятное побочное действие, загрязняя окружающую среду.
В связи с этим представляет особую актуальность изыскание природных антисептических соединений, биодеградация которых в окружающей среде вовлекает их в естественные процессы биотрансформации и биодеградации.
Технической проблемой, решаемой изобретением, является создание безопасного вирулицидного препарата, удовлетворяющего следующим требованиям:
1. Препарат должен иметь естественное происхождение и подвергаться биотрансформации в природе или происходить из полусинтетических веществ частично природного происхождения.
2. Вызывать необратимые изменения в структуре вирусов и особенно тех компонентов вирусных частиц, которые ответственны за инфекционную активность.
3. Обладать высокой биодоступностью и не вызывать раздражения кожных покровов и слизистых.
4. Быть безопасным при попадании в желудочно-кишечный тракт.
5. Длительно храниться.
6. Быть совместимым с некоторыми другими антисептиками.
По мнению авторов изобретения, этим критериям в наибольшей степени соответствуют норборнаны как природные соединения с высокой липофильностью. В большинстве лечебных растительных масел именно борнеол и изоборнеол являются основным действующим компонентом бактерицидного действия. Однако для инактивации бактерий они используются в чрезвычайно высоких концентрациях (US 2008/0214518 А, 04.09.2008; El-Zemity. Synthesis and molluscitidial activity of novel N-methyl carbamate derivatives based on naturally occurring monoterpenoids. J. of Appl. Sci. Res., 2006, Vol. 2(2), p. 86-94). Данные вещества используются не только поверхностно, но прописываются для приема внутрь и хорошо известны в традиционной народной китайской медицине (Chang Minyi, Chinese Medicinal Herbs, 1973 Georgetown Press, San Francisco, CA.; Hong-Yen Hsu, et al., Oriental Materia Medica: A Concise Guide, 1986 Oriental Healing Arts Institute, Long Beach, CA, Pharmacopoeia Commission of PRC, Pharmacopoeia of the PRC, (English edition) 1988 People's Medical Publishing House, Beijing., Anticancer Medicinal Herbs, 1992 Hunan Science and Technology Publishing House, Changsha., Smith F.P. and Stuart G.A.).
Борнеолы и изоборнеолы являются наиболее распространенными бициклическими соединениями, относящимися к классу монотерпенов. У борнеола гидроксильная группа находится в эндо-положении (endo-1,7,7-Trimethyl-bicyclo[2.2.1]heptan-2-ol), а у изоборнеола - в экзо (ехо-1,7,7-Trimethyl- bicyclo[2.2.1]heptan-2-ol), то есть изоборнеол является экзо-изомером борнеола (http://en.wikipedia.org/wiki/Borneol).
В связи с высокой гидрофобностью борнеол и изоборнеол проявляют высокую липофильность и поэтому в высоких концентрациях токсичны для клеток животных и человека.
Монотерпены представляют собой обширный класс соединений. Не менее широк и спектр их действия. Монотерпены обладают антимикробной и противовоспалительной активностью [McPartland J.М., Russo Е.В. Cannabis and Cannabis extracts; greater than the sum of their parts? J. of Cannabis therapeutics. The Haworth Press, Inc. 2001, Vol. 1, p. 103-132], (http://www.cannabis-med.org/data/pdf/2001-03-04-7.pdf).
Для исследования свойств из всех известных монотерпенов авторы выбрали борнеол и изоборнеол, т.к. они имеют длительную историю использования в народной медицине [Smith F.P, Stuart G.A, Chinese Medicinal Herbs, 1973. Georgetown Press, San Francisco, CA.]. Авторами исследованы свойства этих природных соединений. Впервые установлена неизвестная ранее их вирулицидная активность в отношении вируса гриппа типа А и предложено их использование с принципиально новой целью - для создания вирулицидного препарата для стерилизации рук, лица и окружающих предметов обихода. Таким образом, изобретение направлено на изучение свойств природного изоборнеола и борнеола и создание на их основе высокоэффективных препаратов, проявляющих активность в отношении актуальных пандемических вирусов, в частности вируса HINlsw - 2009 года.
Техническая проблема решается применением изоборнеола в качестве вирулицидного средства, активного в отношении вирусов гриппа типа А.
В рамках настоящего изобретения предложено два варианта вирулицидного препарата с применением изоборнеола.
Вирулицидный препарат по первому варианту содержит вирулицидное средство, этиловый спирт и воду, при этом в качестве вирулицидного средства он содержит изоборнеол и дополнительно тсодержит полимерный компонент, образующий комплекс с изоборнеолом - полисорбит, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
изоборнеол
0,01-10
этиловый спирт
0,2-20
полимерный компонент полисорбит
0,05-10
вода
остальное
Вирулицидный препарат по второму варианту содержит вирулицидное средство, этиловый спирт и воду, при этом в качестве вирулицидного средства содержит смесь природного борнеола и природного изоборнеола в эквимолярном количестве, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
смесь борнеола и изоборнеола
0,01…10
этиловый спирт
0,2…20
вода
остальное
Кроме того, препарат по любому варианту может дополнительно содержать парфюмерную добавку в количестве 0,05…0,5 мас. %.
Кроме того, в качестве парфюмерной добавки препарат по любому варианту может содержать по меньшей мере, одно эфирное масло, выбранное из группы: масло герани, масло лайма, масло лимона, масло бергамота, масло лимона.
Кроме того, препарат по любому варианту может иметь форму геля, или спрея, или мази, или парфюмерного изделия, или пасты.
Введение дополнительных компонентов усиливает действие вирулицидного средства на вирусы и обеспечивает необходимые потребительские качества препаратов.
Созданный вирулицидный препарат отвечает всем названным выше критериям, что подтверждается приведенными примерами.
Сущность изобретения подтверждается иллюстрациями.
На фиг. 1 приведены структурные формулы борнеола (слева) и изоборнеола (справа).
На фиг. 2 - фотографии, иллюстрирующие вирулицидное действие изоборнеола на концентрат вируса А/Duck/ Potsdam (H5N2):
слева: концентрат вируса гриппа птиц А/Duck/ Potsdam (H5N2); видны округлые вирионы, окруженные ясно выраженной «щеткой» поверхностных антигенов - рецепторов (НА, NA);
справа: тот же вирусный концентрат, экспонированный в объемном соотношении 1:1 с 1% раствором изоборнеола в течение 10 мин (конечная концентрация средства составила 0,2%); видно полное разрушение вирионов.
На фиг. 3 - концентрат вируса гриппа птиц A/Duck/Potsdam (H5N2), экспонированный в объемном соотношении 1:1 с 0,1% раствором изоборнеола в течение 10 мин (конечная концентрация изоборнеола 0,05%); сильное разрушение вирионов; стрелками отмечены полуразрушенные вирионы, лишенные поверхностных рецепторов; негативное контрастирование, pH 7,0; масштабный отрезок 100 нм.
На фиг. 4 - электронная микрофотограмма вируса H1N1 А // Санкт-Петербург / 2009 H1N1sw после обработки 10% раствором изоборнеола (время экспозиции 15 мин и 1 час обозначено на микрофотограммах).
Осуществление изобретения иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Получение вирулицидных средств и их тестирование
1. Растворы борнеола и изоборнеола получали, растворяя кристаллические вещества в этиловом спирте для приготовления маточных концентрированных растворов. В качестве первой серии маточных растворов использовали 5%-ные растворы на 96% этиловом спирте. В качестве второй серии маточных растворов использовали растворы борнеола или изоборнеола в концентрации 2,5% в 50% этиловом спирте. Для тестирования готовили разведения маточного раствора от 2% до 0,01% с соответствующим разведением этилового спирта. В растворах с концентраций борнеола 1%, конечная концентрация этилового спирта составляла 20%. (Все % массовые). Этанол в этой концентрации и ниже не оказывал влияния на инфекционность вирусов гриппа и не приводил к преципитации белков культуральной среды или аллантоисной жидкости куриных эмбрионов. Стабилизация растворов при низком содержании этанола, в случае необходимости, достигалась добавлением 10% полиэтиленгликоля или альгината - натрия.
Рабочие растворы вирулицидных препаратов готовили ex tempore путем смешивания соответствующих количеств препаратов (реагентов), этилового спирта и воды. Исследовались рабочие растворы следующих концентраций: от 0,01% до 10%. Все приготовленные растворы были прозрачными и длительно сохраняли свои свойства при комнатной температуре (длительность наблюдения до 2 месяцев).
В таблице 1 приведены составы полученных препаратов.
Таблица 1
2. Выбор и характеристика вирусов в качестве объекта воздействия вирулицидных препаратов.
Как уже указывалось, наибольшую опасность передачи воздушно-капельным и контактным путями представляют собой вирусы гриппа (сезонные H1N1, H3N2 В) и вирусы птичьего гриппа H5N1. Анализ распространения пандемического свиного вируса H1N1sw в мире, начиная с весны 2009 года, показал, что вирус активно распространяется не только воздушно-капельным, но и контактными путями.
Практически все респираторные вирусы, кроме аденовирусов, относятся к так называемым оболочечным вирусам. Вирусные частицы (вирионы) окружены липопротеидной оболочкой, в состав которой входят липиды, заимствованные от клеток хозяина, а также поверхностные белки гемагглютинин (ГА) и нейраминидаза (НА), играющие ключевую роль в поддержании инфекционной активности вирионов. Поверхность вирионов представляет собой белково-липидную мембрану, высоко чувствительную к неионным детергентам и любым другим липофильным субстанциям. К таким субстанциям относятся монотерпены и, в частности, борнеол или изоборнеол.
Изучение дезинфицирующих свойств вирулицидных растворов и композиций проводилось в соответствии с методиками, изложенными в сборнике «Методы испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности», Москва, 1998 г., в соответствии с «Нормативными показателями безопасности и эффективности средств, подлежащих контролю при проведении обязательной сертификации» №01-12/75-97 и «Методическими рекомендациями по определению вирулицидной активности препаратов №1119-73 от 06.09.73 г.», принятыми в Российской Федерации. Также принимались во внимание ряд других рекомендаций, действующих в других странах (Eggers H.J. Experiments on antiviral activity of hand disinfectants. Some theoretical and practical consideration. Zentralbl. Bakteriol., Mikrobiol. Hyg. Abt. 1 Orig. B, Vol. 273, p. 36-51; Springthorpe V.S., Sattar S.A. Chemical disinfection of virus -contaminating surface. Crit. Rev., Environ. Control. 1990, Vol. 20, p. 169-229]
Вирусы и клеточные культуры
50
В качестве тест-вируса использовали штамм вируса гриппа птиц А/Утка/Потстдам (H5N2) из А/С. - Петербург 05.2009 H1N1sw из коллекции ГУ НИИ гриппа РАМН. В эксперименте использовали вирус, накопленный в течение 48 часов при 36°С в аллантоисной полости 10-12 дневных куриных эмбрионов до титров не ниже 5,5 (-lg ИД).
50
50
В соответствии с общепринятыми методиками за титр вируса принимали величину, равную обратному десятичному логарифму наибольшего разведения вируса, способного вызвать положительную реакцию гемагглютинации и выражали в логарифмах 50% инфекционной дозы вируса (-lg ИД). Инфекционный титр вируса, использованного в эксперименте, составлял 5,5 (-lg ИД).
Для заражения в опытах использовали фрагменты переживающих хорионаллантоисных оболочек (ХАО) куриных эмбрионов. Исследования проводили по модифицированному методу Fazekas de St.Growts [Hyng J., 1958, С. 151]. Фрагменты ХАО готовили из хорионаллантоисной оболочки 10-12 дневных куриных эмбрионов после предварительной их стерилизации этанолом и удаления эмбриона вместе с желточным мешком. Кусочки ХАО размером (20×25) мм размещали в лунки панелей из полистирола, содержащие по 0,5 мл поддерживающей среды DMEM с 2% сыворотки КРС.
Оценка вирулицидного действия
Вируссодержащую аллантоисную жидкость смешивали в соотношении 1:1 с исследуемым средством в различных концентрациях и выдерживали в стерильных пластиковых пробирках в течение 2-60 минут при температуре 20±2°C.
По истечении этого срока готовили серию десятикратных разведений исследуемых препаратов аллантоисной жидкости и добавляли к фрагментам ХАО в лунки панелей. Панели покрывали стеклом, выдерживали 48 ч при температуре 37°С, удаляли фрагменты ХАО и вносили по 0,5 мл 1%-ной суспензии куриных эритроцитов в физиологическом растворе.
Уровень репродукции вируса в лунках панели после воздействия средства и в контроле оценивали по реакции гемагглютинации (РГА) эритроцитов. Остаточную инфекционную активность вируса после воздействия средства оценивали по снижению титра вируса в опыте по сравнению с контролем.
Лабораторный контроль.
Одновременно выполнялся контроль следующих фрагментов ХАО:
а) Чистые (незараженные) фрагменты ХАО (отсутствие вируса в контроле).
-4
б) Фрагменты ХАО, зараженные вирусом гриппа птиц в разведении 10 (контроль вируса).
в) Фрагменты ХАО с добавлением дезинфектанта (вместо суспензии вируса и нейтрализатора добавляется соответствующий объем среды).
г) Фрагменты ХАО с добавлением нейтрализатора (вместо суспензии вируса и дезинфектанта добавляется соответствующий объем среды).
Электронно-микроскопические исследования
Длительный опыт исследования вирулицидных препаратов показал, что наряду с применением тестов на инактивацию вирусов наиболее объективным контролем деструкции вирусов является трансмиссионная электронная микроскопия (ТЕМ), которая не только позволяет зарегистрировать морфологическую деструкцию вирионов, но также и определить механизм их действия, оценить аддитивный эффект добавок и представить визуальные доказательства деструктивного действия дезинфектанта.
Электронно-микроскопические исследования проводили в соответствии с методиками, описанными в руководствах (Almeida JD. Practical aspects of diagnostic electron microscopy. Yale J Biol Med 1980 Jan-Feb; 53(1): 5-18.; Doane FW, Anderson N. Electron Microscopy in Diagnostic Virology, a Guide and Atlas. Cambridge, 1986)
Каплю исследуемого препарата помещали на поверхность парафильма в пластиковой чашке Петри. На каплю опускали медную сетку с углеродной подложкой. После адсорбции в течение 30-60 сек. сетку отмывали в капле дистиллированной воды 2 раза, затем препарат контрастировали 1,5% раствором калиевой соли фосфорно-вольфрамовой кислоты (рН 6,7), удаляли избыток жидкости краем фильтровальной бумаги и высушивали сетку с препаратом в течение 1-2 минут при комнатной температуре.
Просмотр препаратов производили на электронном микроскопе JEM-100S (JEOL, Япония) при инструментальном увеличении 20000-50000. Исследовали не менее 20 полей зрения каждого препарата.
В электронно-микроскопических исследованиях использовали концентрат вируса гриппа, полученный осаждением аллантоисной жидкости на ультрацентрифуге L-8 (Beckman, USA) в режиме 100000 g, 1,5 часа. Вирусный концентрат хранили при -70°С в аликвотах и перед исследованием размораживали и разводили буферным раствором STE (рН 7.4).
Съемку производили на листовую фотопленку ФТ-41МД, негативы сканировали на сканере Epson 4870.
Пример 2.
Исследований вирулицидного действия изоборнеола и смеси изоборнеол + борнеол in vitro
Результаты исследований в опытах in vitro приведены в таблице 2.
Как видно из данных, приведенных в таблице 2, вирус гриппа птиц на примере вируса H5N2 и H1N1sw полностью инактивировался in vitro 0,01%-5,0% растворами средств в течение 2-30 мин. При концентрации тестируемых средств выше 0,1% полная инактивация вируса гриппа птиц достигалась за очень короткое время (менее 2 мин). Например, при концентрации 0,1% инактивация вируса происходила за 10 мин, что соответствует следующему интервалу изменения.
Аллантоисная жидкость по количественному содержанию белков близка к плазме крови, поэтому дополнительных опытов in vitro с белковой нагрузкой не проводили. Как уже указывалось, норборнаны являются гидрофобными веществами, и коэффициент их связывания с белками не превышает 1%. Липофильность этих реагентов делает их аттрактивными к мембранам, в данном случае к мембранам вирусных частиц. Вместе с тем, протективную роль компонентов аллантоисной жидкости исключить нельзя, поэтому на гладкой поверхности материалов или кожных покровах скорость инактивации может существенно возрастать.
В таблице 2 приведена остаточная инфекционная активность вируссодержащей аллантоисной жидкости после экспозиции с изоборнеолом и смесью изоборнеол + борнеол.
Как видно из приведенной таблицы 2, изоборнеол и смесь изоборнеол + борнеол характеризуются высоким уровнем вирулицидной активности и уже при концентрации 0,1% полностью инактивируют вирусы гриппа H5N2 и H1N1sw - 2009 (пандемический изолят).
Пример 3.
Действие изоборнеола и смеси изоборнеол + борнеол на обеззараживание поверхности материалов, контаминированных вирусом гриппа типа H5N2.
Результаты исследований по обеззараживанию различных тест-объектов, контаминированных аллантоисной жидкостью куриных эмбрионов, содержащей вирус гриппа птиц, приведены в таблице 3. В качестве тест-объектов выбраны фильтровальная бумага и фрагменты полиэтиленовой пленки. Данные, приведенные в таблице 3, свидетельствуют о том, что изоборнеол и смесь изоборнеол + борнеол в концентрациях 0,1-0,3%) проявляют сильную вирулицидную активность с полной инактивацией вируса в течение 2-10 мин.
Пример 4.
Изучение вирулицидного действия изоборнеола методом трансмиссионной электронной микроскопии
При электронно-микроскопическом морфологическом исследовании вирусного концентрата до и после экспозиции с изоборнеолом было обнаружено, что кратковременная обработка вирусных частиц приводит к полной деструкции вирионов.
Наблюдалась прямая зависимость между концентрацией изоборнеола и времени экспозиции и скоростью и степени деструкции вирусных частиц (в пределах исследованных концентраций от 0,01% до 0,5%).
Результаты исследований приведены на фиг. 2, 3.
По результатам электронно-микроскопического исследования можно сделать вывод, что изоборнеол без дополнительных активаторов в виде раствора эффективно разрушает частицы вируса гриппа птиц. Поэтому можно рекомендовать растворы изоборнеола для обтирания или орошения в целях инфекционной инактивации вирусных контаминаций различных поверхностей, вплоть до кожи рук, при концентрации препарата от 0,1% до 1,0%. В этих условиях происходит значительное нарушение интактности вирусных частиц (фиг. 4, внизу), коррелирующее с полной инфекционной инактивацией исследованных вирусов.
Пример 5.
Инактивация пандемических вирусов гриппа с помощью растворов изоборнеола
Для применения разрабатываемых натуральных вирулицидных дезинфектантов необходимо подтверждение эффективности изоборнеола, как основного компонента в отношении прямого вирулицидного действия на пандемические вирусы гриппа H1N1sw - 2009, продолжение циркуляции которых прогнозируется на ближайшие 3-5 лет. Для этих целей был выбран сезонный изолят вируса гриппа H1N1sw, изолированный в Санкт-Петербурге осенью 2009 года (А/Санкт-Петербург/05/2009 H1N1sw). Исследования проводились в соответствии с процедурой, описанной в примерах 1 и 2. Данный объект является адекватным по отношению к вирусу H1N1sw, вызвавшему пандемию «свиного» гриппа, начавшуюся в Мексике, так как полностью идентичен этому вирусу по структуре генов и белков.
На фиг. 3 на электронных микрофотограммах (ТЕМ) представлено действие изоборнеола на вирусные частицы вируса H1N1 в течение 15 мин и 1 час. Фактически, деструкция и частичная агрегации вирионов происходит в самом начале экспозиции. Изоборнеол как липофильный агент повреждает мембраны вирусов с отделением поверхностных антигенов и излиянием внутреннего содержимого - рибонуклеопротеида, что приводит к полной инактивации вируса.
На фиг. 4 видны разрушенные вирионы с элементами агрегации и «излияния» нуклеоида. Длительность экспозиции указана на микрофотограммах. Принципиальных различий между экспозицией в течение 15 мин или 1 ча. практически не наблюдается. Фактически, деструкция вирионов происходит в течение первых 1-2 мин контакта раствора изоборнеола с вирусными частицами. Значительный интерес представляют мини-вирусоподобные частицы, лишенные внутреннего (РНП) содержимого. Такой способ обработки может быть использован для получения иммуногенных безопасных вирусопободных частиц.
Пример 6.
Получение растворов изоборнеола и смеси изоборнеол + борнеол с высокими потребительскими качествами путем использования парфюмерных добавок и полимерного компонента
Растворы изоборнеола обладают достаточно резким запахом с хвойным компонентом. В этом отношении особенно уступает борнеол. Для улучшения потребительских свойств изоборнеола и смеси изоборнеол + борнеол в качестве дезинфектантов были проведены органолептические исследования растворов изоборнеола, борнеола и смеси изоборнеол + борнеол с парфюмерными и полимерными добавками. Данные оценки представлены в таблице 4*.
* - для оценки органолептических свойств растворов условно принята 5 - бальная шкала, где 5 - высокое качество, 4 - хорошее, 3 - удовлетворительное, 2 - плохое.
Анализ парфюмерных свойств растворов изоборнеола с полимерным компонентом (полисорбитом) и эфирными маслами, использующимися в парфюмерной промышленности, показал, что большинство эфирных масел существенно улучшают парфюмерные (потребительские) качества растворов изоборнеола, делая их подобными традиционным лосьонам и туалетным водам, широко представленным на потребительском рынке всех стран. Более того, некоторые из масел сильно потенцировали вирулицидную активность изоборнеола. Борнеол обладает в растворах более резким запахом по сравнению с изоборнеолом, и смягчить и сделать растворы более приемлемыми для применения трудно. Поэтому по этим качествам преимущество имеют растворы изоборнеола.
Дополнительно на вирулицидную активность и органолептические свойства были исследованы кальвеол, эугенол, карвакрол, терпинеол. Многие из монотерпенов обладают различным уровнем вирулицидной активности, однако, в большинстве случаев они уступают изоборнеолу в удельной активности и органолептических качествах. Преимущества изоборнеола не только в высокой вирулицидной активности, но также и в том, что для изоборнеола известен широкий ряд производных, что позволяет усовершенствовать как основной состав предлагаемого виросептика, так и расширять спектр его действия (ЕР 0456843 А1, 21.11.1991; US 5166348 А, 24.11.1992).
Полученные дезинфицирующие растворы совместимы с таким репеллентом, как параметан-3,8-диол (р-methane-3,8-diol), что позволяет предложенную композицию использовать в качестве дезинфектанта-репеллента в условиях опасности заражения инфекцией, передающейся насекомыми, в частности москитами, например, лихорадки Денге (US 2007/0166342, 19.07.2007).
Таким образом, авторами получен препарат со всеми искомыми свойствами. Препарат имеет естественное происхождение, вызывает необратимые изменения в структуре вирусов, обладает высокой биодоступностью и не вызывает раздражения кожных покровов и слизистых. Он является безопасным при попадании в желудочно-кишечный тракт и может длительно храниться.