УЛУЧШЕНИЕ ИММУНОГЕННОСТИ ПЕПТИДА L2 ВПЧ
IMPROVED IMMUNOGENICITY OF L2 HPV PEPTIDE

В соответствии с настоящим изобретением предложен иммуногенный полипептид, содержащий множество N-концевых пептидов L2 вируса папилломы человека (ВПЧ), соответствующих аминокислотам 20-50 полипептида L2 HPV16, причем указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере двух разных генотипов ВПЧ. Настоящее изобретение также относится к указанному иммуногенному полипептиду для применения в медицине и для применения при вакцинации против инфекции ВПЧ. Помимо этого, в соответствии с настоящим изобретением предложен полинуклеотид, кодирующий иммуногенный полипептид, и клетка-хозяин, содержащая указанный полинуклеотид. Помимо этого, настоящее изобретение относится к наборам, способам и применению, относящимся к иммуногенному полипептиду согласно настоящему изобретению.
Рак шейки матки является вторым по частоте типом рака у женщин во всем мире. Клинические и молекулярные исследования показали, что этиологическими агентами этого заболевания являются определенные типы вируса папилломы человека (ВПЧ), называемые типами с высоким риском. Недавно две вакцины против ВПЧ для профилактики рака шейки матки были лицензированы компаниями Merck (Gardasil™) и GlaxoSmithKline (Cervarix™) (Schmiedeskamp et al, (2006), Ann Pharmacother, 40: 1344-1352). Обе вакцины основаны на основном белке капсида L1 в форме вирусоподобных частиц (VLP) в качестве антигена (Roden et al., (2006), Nat Rev Cancer, 6: 753-763); они защищают от типов ВПЧ, из которых были получены L1-VLP, но в целом неэффективны против всех типов ВПЧ, за исключением наиболее близкородственных к нему. Два наиболее известных типа ВПЧ с высоким риском, 16 и 18, являются основными мишенями обеих вакцин, несмотря на то, что существуют доказательства частичной перекрестной защиты против типов ВПЧ 31 и 45 (рассмотрено в Muller and Gissmann, (2007), Dis Markers, 23: 331-336; Huh and Roden, (2008), Gynecol Oncol, 109: S48-56). Ограниченная способность к перекрестной защите вакцин на основе L1, которая является основной причиной продолжающихся попыток разработать улучшенные стратегии вакцинации, вероятно, отражает специфичность нейтрализующих эпитопов L1 для конкретного типа ВПЧ (Giroglou et al., (2001), Vaccine, 19: 1783-1793).
in
vitro
Антитела против минорного капсидного белка L2 также нейтрализуют инфекцию ВПЧ и часто способны перекрестно нейтрализовать различные некогнатные вирионы, но с различной эффективностью (Kondo et al. (2007), Virology, 358: 266-272; Gambhira, R., (2007), J Virol, 81: 13927-13931). N-концевая область L2 взаимодействует с еще не идентифицированным вторичным рецептором на поверхности клеток-мишеней (Yang et al. (2003), J Virol, 77: 3531-3541), и такое взаимодействие может блокироваться антителами к L2. Точная идентичность области L2, участвующей во взаимодействии ВПЧ с поверхностью клетки, все еще остается предметом дискуссий. Первоначально было предложено, что эта область состоит из аминокислот (а.к.) 108-120, и антитела, нацеленные на эту конкретную область L2, как было показано, действительно блокируют вирусную инфекцию в условиях , хоть и при низких титрах (Kawana et al. (2001), Vaccine, 19: 1496-1502; Kawana et al. (2001b), J Virol, 75: 2331-2336). Последующие эксперименты выявили дополнительные нейтрализующие эпитопы в области аминокислот 1-88 (Pastrana et al. (2005), Virology, 337: 365-372), а также в более протяженных N- концевых областях, состоящих из аминокислот 11-200 и 18-144 (Kondo, там же). Возможно, наиболее известным из этих N-концевых эпитопов является эпитоп, который расположен между аминокислотами 17-36. Он был идентифицирован в качестве мишени для нейтрализующего и защитного моноклонального антитела к ВПЧ16 (RG-1), а также в качестве основной детерминанты нейтрализующей активности, обнаруженной в сыворотке крови кроликов и людей, иммунизированных протяженными вариантами L2 (аминокислоты 1-88, 11-200 или полноразмерный белок) (Gambhira, 2007, там же). Поскольку было обнаружено, что мутация аминокислот 18 и 19 или аминокислот 20 и 21 в L2 нарушает как связывание L2 с поверхностью клетки, так и заражение вирусом (Yang, R., et al. (2003), J. Virol. 77: 3531-3541), был сделан вывод, что эпитоп, распознаваемый антителом RG-1, перекрывает мотив связывания с поверхностью L2 ВПЧ16.
Помимо отсутствия точных данных о наиболее значимом (перекрестном) нейтрализующем (их) эпитопе (ах), основной проблемой при применении L2 в качестве инструмента для профилактики ВПЧ является низкая иммуногенность белка L2 и его пептидов по сравнению с L1-VLP. Недавно сообщалось о значительном повышении иммуногенности за счет химического связывания пептида L2 ВПЧ16 (17-36) с широко известным эпитопом T-хелперов и с лигандом Toll-подобного рецептора, дипальмитоил- S-глицерилцистеином (Alphs et al. (2008), Proc Natl Acad Sci U S A, 105: 5850-5855). Согласно другому варианту пептиды L2 были гибридизованы с поверхностными белками аденовируса (WO 2008/140474) или с другими белками ВПЧ для повышения иммуногенности (WO 2002/070004, de Jong et al. (2002), Vaccine, 20(29-30): 3456-3464). Также применяли мультимерные L2-вакцины, содержащие пептиды из разных генотипов (Jagu et al. (2013), PLOS One 8(1): e55538).
Разработанная недавно альтернативная стратегия повышения иммуногенности пептида основывается на применении тиоредоксина (Trx) в качестве каркасного белка, способного удерживать структуру однокопийных, а также мультимерных (тандемно повторяющихся) пептидных эпитопов, встроенных в его петлю активного центра, экспонированную на поверхности (Moretto et al. (2007), J Biol Chem, 282, 11436-11445). Эту стратегию также применяли для презентации пептидов L2 ВПЧ для иммунизации (WO 2010/070052). При применении тиоредоксина в качестве каркасного белка было обнаружено, что индукция антител хозяина к тиоредоксин-содержащим антителам может быть значительно снижена при применении вариантов Trx из архебактерий (Canali et al. (2014), Scientific Reports 4, Art. No 4729:1).
Таким образом, полипептид L1 является высокоиммуногенным, и антитела против него проявляют лишь ограниченную способность к перекрестной защите, тогда как антитела против полипептида L2 способны к перекрестной нейтрализации различных генотипов ВПЧ. Однако полипептид L2 обладает лишь ограниченной иммуногенностью.
Соответственно, крайне необходимы иммуногенные полипептиды, которые являются высокоиммуногенными и обеспечивают перекрестную нейтрализацию различных генотипов ВПЧ без недостатков, указанных выше. Техническая проблема, лежащая в основе настоящего изобретения, может рассматриваться как обеспечение средств и способов для удовлетворения вышеупомянутых потребностей. Техническая проблема решается с помощью вариантов реализации, описанных ниже в формуле изобретения и в настоящей заявке.
Соответственно, в настоящем изобретении предложен иммуногенный полипептид, содержащий множество N-концевых пептидов L2 вируса папилломы человека (ВПЧ), соответствующих аминокислотам с 20 по 50 полипептида L2 ВПЧ16, причем указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере двух разных генотипов ВПЧ.
В настоящей заявке термины «иметь», «содержать» или «включать», или любые их произвольные грамматические варианты используются неисключительным образом. Соответственно, эти термины могут относиться как к ситуации, при которой, помимо признака, представленного этими терминами, в объекте, описанном в данном контексте, отсутствуют дополнительные признаки, так и к ситуации, при которой присутствует один или более дополнительных признаков. Например, выражения «A имеет B», «A содержит B» и «A включает B» могут относиться к ситуации, при которой, помимо B, в А отсутствует другой элемент (т. е. к ситуации, при которой A состоит только и исключительно из B), и к ситуации, при которой, кроме B, в объекте A присутствует один или более дополнительных элементов, таких как элемент C, элементы C и D или даже дополнительные элементы.
Помимо этого, в настоящей заявке термины «предпочтительно», «более предпочтительно», «наиболее предпочтительно», «в частности», «конкретнее», «конкретно», «более конкретно» или подобные термины используются в сочетании с необязательными признаками, не ограничивая дополнительные возможности. Соответственно, признаки, представленные этими терминами, являются необязательными признаками и не предназначены для ограничения объема формулы изобретения каким- либо образом. Специалист в данной области техники поймет, что настоящее изобретение может быть осуществлено с использованием альтернативных признаков. Аналогичным образом, признаки, введенные выражениями «в варианте реализации настоящего изобретения» или аналогичными выражениями, предназначены для использования в качестве необязательных признаков, без какого-либо ограничения в отношении других вариантов реализации настоящего изобретения, без каких-либо ограничений в отношении объема настоящего изобретения и без какого-либо ограничения в отношении возможности комбинирования признаков, введенных таким образом, с другими необязательными или обязательными признаками настоящего изобретения. Помимо этого, если не указано иное, термин «приблизительно» относится к указанному значению с общепринятой технической точностью в соответствующей области, предпочтительно относится к указанному значению ±20%, более предпочтительно ±10%, более предпочтительно ±5%.
В настоящей заявке термин «иммуногенный полипептид» относится к предпочтительно неприродному полипептиду, содержащему множество N-концевых последовательностей L2, указанных в настоящей заявке. Иммуногенный полипептид, упоминаемый в настоящей заявке, содержит по меньшей мере множество N-концевых пептидов L2 вируса папилломы человека (ВПЧ), указанных в настоящей заявке. Как указано в настоящей заявке ниже, иммуногенный полипептид может содержать дополнительные домены, такие как предпочтительно каркасные полипептиды, например, тиоредоксин, усилители иммунитета, домены олигомеризации и тому подобное. Предпочтительно указанные домены соединены нековалентными связями и имеют константу диссоциации не более 10-6 моль/л, более предпочтительно не более 10-7 моль/л, наиболее предпочтительно не более 10-8 моль/л. Более предпочтительно по меньшей мере два домена ковалентным образом соединены, предпочтительно пептидной связью. Наиболее предпочтительно все домены иммуногенного полипептида ковалентным образом соединены, предпочтительно пептидными связями; т. е. предпочтительно иммуногенный полипептид представляет собой полипептид, имеющий непрерывную цепь аминокислот. Соответственно, предпочтительно иммуногенный полипептид кодируется одной открытой рамкой считывания. Предпочтительно иммуногенный полипептид имеет биологическую функцию иммуногенного полипептида, индуцирующего гуморальный и/или клеточный иммунный ответ у субъекта, более предпочтительно индуцирующего гуморальный иммунный ответ у субъекта. Наиболее предпочтительно иммуногенный полипептид обладает биологической функцией, которая заключается в индукции иммунитета по меньшей мере к одному, более предпочтительно по меньшей мере к трем, еще более предпочтительно по меньшей мере к восьми, наиболее предпочтительно по меньшей мере к десяти генотипам ВПЧ.
Предпочтительно термин «иммуногенный полипептид» включает варианты конкретных иммуногенных полипептидов, описанных в настоящей заявке. В настоящей заявке термин «вариант полипептида» относится к любой химической молекуле, содержащей по меньшей мере полипептиды, указанные в настоящей заявке, имеющие указанную активность, но отличающиеся по структуре от указанного полипептида, определенного в настоящей заявке. Предпочтительно вариант полипептида содержит пептид, имеющий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности от 25 до 500, более предпочтительно от 30 до 300, наиболее предпочтительно от 35 до 150 последовательных аминокислот, содержащихся в полипептиде, указанном в настоящей заявке. Помимо этого, в объем настоящего изобретения также включены другие полипептидные варианты вышеупомянутых полипептидов. Такие варианты полипептидов имеют по меньшей мере близкую существенную биологическую активность, как и конкретные полипептиды. Помимо этого, следует понимать, что вариант полипептида, который упоминается в соответствии с настоящим изобретением, должен иметь аминокислотную последовательность, которая отличается вследствие по меньшей мере одной замены, делеции и/или добавления аминокислоты, причем аминокислотная последовательность варианта все еще, предпочтительно по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98% или 99%, идентична аминокислотной последовательности конкретного полипептида. Степень идентичности между двумя аминокислотными последовательностями можно определить с помощью алгоритмов, хорошо известных в данной области техники. Предпочтительно степень идентичности должна быть определена путем сравнения двух оптимально выравненных последовательностей в окне сравнения, где фрагмент аминокислотной последовательности в окне сравнения может содержать вставки или делеции (например, пробелы или выступы) по сравнению с последовательностью, с которой его сравнивают для оптимального выравнивания. Процент рассчитывают путем определения, предпочтительно по всей длине пептида, количества положений, в которых идентичный аминокислотный остаток встречается в обеих последовательностях, чтобы получить количество совпадающих положений, с последующим делением количества совпадающих положений на общее количество положений в окне сравнения и умножения результата на 100, чтобы получить процент идентичности последовательностей. Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения может быть проведено с помощью алгоритма поиска локальной гомологии Smith and Waterman (1981), алгоритма выравнивания для оценки гомологии Needleman и Wunsch (1970), путем поиска сходства по методу Pearson and Lipman (1988), с помощью компьютеризированных внедрений этих алгоритмов (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA и TFASTA в пакете программного обеспечения Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group (GCG), 575 Саенс-драйв, Мэдисон, Висконсин, США) или с помощью визуальной проверки. При условии, что две последовательности были идентифицированы для сравнения, предпочтительно применяют GAP и BESTFIT для определения их оптимального выравнивания и, соответственно, степени идентичности. Предпочтительно применяют значения по умолчанию 5,00 для штрафа за открытие пробела и 0,30 для штрафа за увеличение длины пробела. Упомянутые выше варианты полипептидов могут происходить из аллельных вариантов или любых других видоспецифичных гомологов, паралогов или ортологов. Помимо этого, варианты полипептидов, упомянутые в настоящей заявке, включают фрагменты конкретных полипептидов или вышеупомянутые типы вариантов полипептидов, если эти фрагменты и/или варианты имеют биологическую активность, как указано выше. Такие фрагменты могут происходить или происходят, например, из продуктов распада или вариантов сплайсинга полипептидов. Также в объем настоящего изобретения включены варианты, которые отличаются посттрансляционными модификациями, такими как фосфорилирование, гликозилирование, убиквитинилирование, сумоилирование или миристилирование, включение неприродных аминокислот, и/или которые являются пептидомиметиками. Помимо этого, варианты иммуногенного полипептида согласно настоящему изобретению предпочтительно включают варианты, в которых по меньшей мере один домен представляет собой вариант домена, описанного в настоящей заявке.
Papillomaviridae
В настоящей заявке термин «вирус папилломы» (ВП) относится к ДНК-вирусу из семейства вирусов , который инфицирует кожу и слизистые оболочки млекопитающих, предпочтительно домашнего скота, более предпочтительно крупного рогатого скота и лошадей, наиболее предпочтительно человека. Для ВП человека (ВПЧ) было описано более 110 генотипов ВПЧ (de Villiers, E. M., C. Fauquet, T. R. Broker, H. U. Bernard, and H. zur Hausen. 2004. Classification of papillomaviruses. Virology 324:17-27). Известно, что слизистую оболочку инфицируют приблизительно 50 генотипов ВПЧ. Такие специфичные для слизистой генотипы подразделяются на три различные группы на основании их эпидемиологической связи с раком: папилломавирусы человека с «низким риском» (НР-ВПЧ), папилломавирусы человека с «высоким риском» (ВР-ВПЧ) и папилломавирусы человека «с предполагаемым высоким риском» (пВР-ВПЧ). Также известно, что ВР-ВПЧ могут вызывать рак вульвы, рак анального канала, рак влагалища, рак полового члена и рак ротоглотки, а также вагинальную интраэпителиальную неоплазию, анальную интраэпителиальную неоплазию, вульварную интраэпителиальную неоплазию и интраэпителиальную неоплазию полового члена. Предпочтительно ВПЧ представляют собой ВПЧ слизистой оболочки; более предпочтительно ВПЧ согласно настоящему изобретению представляют собой генотипы ВПЧ с высоким риском (ВР- ВПЧ), которые являются основной причиной развития рака шейки матки. Предпочтительно ВПЧ представляют собой ВПЧ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 и 82, более предпочтительно ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82, наиболее предпочтительно ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59.
Термин «N-концевой пептид L2» относится к пептиду, имеющему аминокислотную последовательность пептида, встречающегося на N-конце полипептида L2 ВПЧ. Полипептиды L2 ВПЧ известны в данной области техники. Полноразмерный полипептид L2 является одним из двух капсидных белков папилломавирусов и также называется минорным капсидным белком. Вместе с основным капсидным белком L1 полноразмерный полипептид L2 образует вирусные капсиды. N-концевой пептид L2, применительно к настоящему изобретению, соответствует аминокислотам с 20 по 50, предпочтительно аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ. Специалист в данной области техники поймет, что полипептиды L2 различных генотипов ВПЧ не обязательно являются точно коллинеарными из-за изменчивости последовательности, хотя предпочтительные иммуногенные эпитопы имеют сходную последовательность. Соответственно, для нумерации аминокислот часто делают ссылку на положения аминокислот, соотносящиеся с положениями соответствующих аминокислот в аминокислотной последовательности L2 ВПЧ16. Соответственно, предпочтительно N-концевой пептид L2, применительно к настоящему изобретению, соответствует аминокислотам с 20 по 50, предпочтительно аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ16. Предпочтительные N-концевые пептиды L2, соответствующие аминокислотам с 20 по 50 полипептида L2 ВПЧ16, представляют собой полипептиды, имеющие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 (ВПЧ 16), SEQ ID NO: 2 (ВПЧ 18), SEQ ID NO: 3 (ВПЧ 45), SEQ ID NO: 4 (ВПЧ 31), SEQ ID NO: 5 (ВПЧ 33), SEQ ID NO: 6 (ВПЧ 35), SEQ ID NO: 7 (ВПЧ 59), SEQ ID NO: 8 (ВПЧ 56), SEQ ID NO: 9 (ВПЧ 51), SEQ ID NO: 10 (ВПЧ 39), SEQ ID NO: 11 (ВПЧ 82) или SEQ ID NO: 12 (ВПЧ 6). Предпочтительные N-концевые пептиды L2, соответствующие аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ16, представляют собой пептиды, имеющие последовательность SEQ ID NO: 1 (ВПЧ 16), SEQ ID NO: 14 (ВПЧ 18), SEQ ID NO: 15 (ВПЧ 45), SEQ ID NO: 16 (ВПЧ 31), SEQ ID NO: 17 (ВПЧ 33), SEQ ID NO: 18 (ВПЧ 35), SEQ ID NO: 19 (ВПЧ 59), SEQ ID NO: 20 (ВПЧ 56), SEQ ID NO: 21 (ВПЧ 51), SEQ ID NO: 22 (ВПЧ 39), SEQ ID NO: 23 (ВПЧ 82) или SEQ ID NO: 24 (ВПЧ 6).
Предпочтительно термин N-концевой пептид L2 включает варианты конкретных N-концевых пептидов, указанных в настоящей заявке выше. Более предпочтительно варианты N-концевых пептидов представляют собой варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной делеции, вставки и/или замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. Более предпочтительно варианты N-концевых пептидов представляют собой варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты, предпочтительно консервативной замены, на один N- концевой пептид L2 ВПЧ.
Термин «множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ» относится к количеству, составляющему по меньшей мере 3, предпочтительно по меньшей мере 5, более предпочтительно 7, 8, 9, 10, 11 или 12, еще более предпочтительно 7, 8 или 9, наиболее предпочтительно 8 N-концевых пептидов L2 ВПЧ. Предпочтительно указанное множество представляет собой количество, составляющее от 3 до 11, предпочтительно от 5 до 10, более предпочтительно от 7 до 9, наиболее предпочтительно 8 N-концевых пептидов L2 ВПЧ. Предпочтительно иммуногенный полипептид содержит три копии, более предпочтительно две копии, наиболее предпочтительно одну копию каждого из указанных N-концевых пептидов L2 ВПЧ.
Предпочтительно по меньшей мере два, более предпочтительно по меньшей мере пять, наиболее предпочтительно по меньшей мере восемь N-концевых пептидов L2 ВПЧ, содержащихся в указанном иммуногенном полипептиде, не являются идентичными. Соответственно, предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в указанном иммуногенном полипептиде представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере двух, более предпочтительно по меньшей мере пяти, еще более предпочтительно 7, 8, 9, 10, 11 или 12, наиболее предпочтительно из 8 различных генотипов ВПЧ. Предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в указанном иммуногенном полипептиде содержат N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. Более предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в указанном иммуногенном полипептиде содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82. Также предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. Более предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в указанном иммуногенном полипептиде содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59.
Предпочтительно иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из них, N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. Более предпочтительно иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из нее, одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59 или представляет собой вариант указанного полипептида, содержащий множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ, содержащих не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. В настоящей заявке термин «иммуногенный полипептид, содержащий исключительно» конкретные N-концевые пептиды L2, относится к иммуногенному полипептиду, содержащему указанные N-концевые пептиды L2, но не содержащему дополнительные, не указанные N-концевые пептиды L2; следует понимать, что термин, соответственно, не исключает того, что указанный иммуногенный полипептид содержит дополнительные элементы, отличные от N-концевых пептидов L2, предпочтительно полипептидные домены. Соответственно, предпочтительно иммуногенный полипептид, содержащий исключительно N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59, может содержать любое количество N-концевых пептидов L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59, но не содержит N-концевые пептиды L2 других генотипов ВПЧ. Еще более предпочтительно иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из них, N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82. Еще более предпочтительно иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из них, N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59. Наиболее предпочтительно иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из нее, одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59. Предпочтительно иммуногенный полипептид содержит N-концевые пептиды L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-39-45-51-56-59-82, более предпочтительно содержит N-концевые пептиды L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-6-51-59. Более предпочтительно иммуногенный полипептид содержит одну копию пептида, содержащего одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-39-45-51-56-59-82; наиболее предпочтительно иммуногенный полипептид содержит одну копию пептида, содержащего одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-6-51-59. Предпочтительно иммуногенный полипептид не содержит N-концевой пептид L2 генотипа (ов) ВПЧ 39, 45, 56 и/или 82.
Предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержатся в иммуногенном полипептиде в полностью непрерывной последовательности, т. е. не содержащей промежуточные аминокислоты. Более предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в иммуногенном полипептиде отделены одной или более линкерными последовательностями, причем указанные линкерные последовательности могут быть идентичными или могут отличаться для соответствующих N-концевых пептидов L2, которые они отделяют. Предпочтительно линкер состоит из 5, 3 или 2 аминокислот, состоящих из остатков пролина (Р) и глицина (G). Более предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в иммуногенном полипептиде отделены линкерными последовательностями GGP и/или GGGP.
Предпочтительно множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ содержит аминокислотную последовательность, более предпочтительно множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25 или 26, предпочтительно SEQ ID NO: 25; или представляет собой вариант указанной последовательности, содержащий не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. Более предпочтительно множество N- концевых пептидов L2 ВПЧ содержит аминокислотную последовательность, более предпочтительно множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 25 или 26, предпочтительно SEQ ID NO: 25. Соответственно, предпочтительно иммуногенный полипептид содержит, предпочтительно состоит из нее, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 или 26, предпочтительно SEQ ID NO: 25, или представляет собой вариант указанной последовательности. Более предпочтительно иммуногенный полипептид содержит, предпочтительно состоит из нее, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 или 26, предпочтительно SEQ ID NO: 25.
Pyrococcus
furiosus
Pyrococcus
furiosus
P.
furiosus
P.
furiosus
Предпочтительно иммуногенный полипептид дополнительно содержит домен олигомеризации. Термин «домен олигомеризации» используется в его общепринятом значении и относится к полипептиду, который склонен к агрегации при включении в него указанного домена. Предпочтительно константа диссоциации для домена олигомеризации в виде отдельной молекулы составляет не более 10-4 моль/л, более предпочтительно не более 10-5 моль/л, наиболее предпочтительно по меньшей мере 10-6 моль/л. Следует понимать, что количество агрегирующих молекул будет, в частности, зависеть от типа выбранного домена олигомеризации. Подходящие домены олигомеризации известны в данной области техники. Предпочтительно иммуногенный полипептид содержит по меньшей мере один домен олигомеризации из (i) домена олигомеризации С4- связывающего белка, предпочтительно С4-связывающего белка млекопитающего, более предпочтительно С4-связывающего белка человека или мыши, наиболее предпочтительно С4-связывающего белка мыши; (ii) полипептида инкапсулина, предпочтительно полипептида инкапсулина из термофильной архебактерии, более предпочтительно полипептида инкапсулина ; (iii) полипептида ферритина, предпочтительно полипептида ферритина из термофильной архебактерии, более предпочтительно полипептида ферритина ; а также (iv) гибридного полипептида двух разных куриных С4-связывающих белков, предпочтительно полипептида IMX313 или его варианта, в частности, описанного в WO 2007/062819 A2, наиболее предпочтительно полипептида IMX313T (SEQ ID NO: 60, предпочтительно кодируемого SEQ ID NO: 61). Предпочтительно домен олигомеризации содержит последовательность SEQ ID NO: 55 (инкапсулин ); или содержит последовательность SEQ ID NO: 56 (ферритин ).
Plasmodium
vivax
Также предпочтительно иммуногенный полипептид дополнительно содержит усилитель иммуногенности, предпочтительно на N-конце и/или на C-конце указанного иммуногенного полипептида. Пептидные последовательности, функционирующие в качестве усилителей иммуногенности, по существу известны в данной области техники. Предпочтительно усилитель иммуногенности представляет собой эпитоп CD4+ Т-хелперов, предпочтительно эпитоп, содержащий по меньшей мере одно из (i) р25 из карбоксильной области белка спорозоита ; (ii) пептида p2 из столбнячного токсина; (iii) пептида р30 из столбнячного токсина; и (iv) универсального HLA-DR-реактивного эпитопа (PADRE). Более предпочтительно усилитель иммуногенности содержит, предпочтительно состоит из него, пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57 (PADRE), SEQ ID NO: 58 (p30) и/или SEQ IS NO: 59 (p25). Также предпочтительно усилитель иммуногенности представляет собой пептид, содержащий аминокислотную последовательность RGD, которая, как известно, является мотивом, связывающимся с интегринами.
Pyrococcus
furiosus
Methanosaeta
thermophila
E.
coli
P.
furiosus
M.
thermophila
Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения множество N-концевых пептидов L2 содержится в полипептиде тиоредоксина. Полипептиды тиоредоксина, подходящие для включения N-концевых пептидов L2, известны в данной области техники из WO 2010/070052. Предпочтительно тиоредоксин является тиоредоксином млекопитающего, более предпочтительно тиоредоксином человека, бактерии или архебактерии. Более предпочтительно тиоредоксин представляет собой тиоредоксин архебактерии, предпочтительно из термофильной архебактерии, предпочтительно  или . Соответственно, тиоредоксин предпочтительно имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49 (тиоредоксин человека), предпочтительно кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 50 или представляет собой ее вариант; или имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47 (тиоредоксин мыши), предпочтительно кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 48, или представляет собой ее вариант; или имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45 (тиоредоксин ), предпочтительно кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 46, или представляет собой ее вариант. Более предпочтительно тиоредоксин имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53 (тиоредоксин ), предпочтительно кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 54, или представляет собой ее вариант; или имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51 (тиоредоксин ), предпочтительно кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 52, или представляет собой ее вариант. Специалист в данной области техники поймет, что тиоредоксины согласно настоящему изобретению обладают биологической активностью в качестве каркаса для N-концевых пептидов L2, при этом окислительно-восстановительная активность не требуется. Соответственно, согласно настоящему изобретению, варианты тиоредоксинов, последовательность которых по меньшей мере на 50% идентична последовательности одного из вышеупомянутых тиоредоксинов, являются подходящими для применения в иммуногенном полипептиде. Предпочтительно множество N-концевых пептидов L2 вставлено в сайт дисплея тиоредоксина, как подробно описано в WO 2010/070052.
Предпочтительно аминокислотная последовательность тиоредоксина и/или домена олигомеризации, и/или усилителя иммуногенности менее чем на 50%, более предпочтительно менее чем на 35%, еще более предпочтительно менее чем на 25%, наиболее предпочтительно менее чем на 20% идентична последовательности полипептида человека, предпочтительно любого полипептида человека, указанного в сборке генома человека GRCh38.p7. Более предпочтительно аминокислотная последовательность тиоредоксина и/или домена олигомеризации менее чем на 50%, более предпочтительно менее чем на 35%, еще более предпочтительно менее чем на 25%, наиболее предпочтительно менее чем на 20% идентична последовательности полипептида человека, предпочтительно любого полипептида человека, указанного в сборке генома человека GRCh38.p7. Также предпочтительно тиоредоксин и/или домен олигомеризации, и/или усилитель иммуногенности представляют собой полипептиды, происходящие из полипептидов архебактерий. Более предпочтительно тиоредоксин и/или домен олигомеризации представляют собой полипептиды, происходящие из полипептидов. архебактерий
Следует понимать, что вышеупомянутые домены также можно комбинировать по существу произвольным образом. Предпочтительными комбинациями являются следующие:
- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 28.
- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 30.
- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 32.
- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33.
- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 35.
- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 37.
- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38.
- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 40.
- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 42.
- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 44.
В настоящей заявке термин «субъект» относится к животному, предпочтительно позвоночному животному, более предпочтительно млекопитающему, в частности, к домашнему скоту, такому как крупный рогатый скот, лошадь, свинья, овца и коза, или к лабораторному животному, такому как крыса, мышь и морская свинка. Наиболее предпочтительно субъект представляет собой человека.
В рамках работы, лежащей в основе настоящего изобретения, было неожиданно обнаружено, что полипептиды, содержащие множество неидентичных N-концевых пептидов L2 ВПЧ, индуцируют улучшенный иммунитет к ВПЧ и, в частности, обеспечивают улучшенный перекрестный иммунитет. Этот эффект был особенно выражен для полипептидов, содержащих пептиды из 8-11 генотипов ВПЧ, при этом полипептиды, содержащие пептиды из восьми генотипов, неожиданно обладали наилучшей эффективностью.
Определения, приведенные выше, применимы с необходимыми изменениями к следующему ниже. Дополнительные определения и пояснения, приведенные ниже, также применимы ко всем вариантам реализации, раскрытым в настоящем описании, с необходимыми изменениями.
Настоящее изобретение также относится к иммуногенному полипептиду согласно настоящему изобретению для применения в медицине. Настоящее изобретение также относится к иммуногенному полипептиду согласно настоящему изобретению для применения при вакцинации против инфекции ВПЧ.
В настоящей заявке термин «вакцинация против инфекции ВПЧ» предпочтительно относится к введению соединений, указанных в настоящей заявке, чтобы вызвать иммунный ответ против различных генотипов ВПЧ. Соответственно, вакцинация стимулирует иммунную систему и создает или улучшает иммунитет к инфекции различными генотипами ВПЧ. Предпочтительно вакцинация согласно настоящему изобретению позволяет создать или улучшить иммунитет к инфекции генотипами вируса папилломы человека 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59. Предпочтительно вакцина согласно настоящему изобретению также позволяет создать или улучшить иммунитет к инфекции по меньшей мере генотипами вируса папилломы человека 5, 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51 и 59. Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения вакцинация в соответствии с настоящим изобретением позволяет создать или улучшить иммунитет к инфекции генотипами вируса папилломы человека 31, 35 и 51. Следует понимать, что вакцина согласно настоящему изобретению может содержать дополнительные компоненты, в частности, как указано в настоящей заявке в другом месте. Специалист поймет, что вакцинация может не вызывать значительный иммунный ответ у всех вакцинированных субъектов. Также следует понимать, что вакцинация может быть неэффективной для предотвращения инфекции у всех вакцинированных субъектов. Однако термин предусматривает, что, предпочтительно статистически значимая, часть субъектов когорты или популяции эффективно вакцинирована. Специалист в данной области техники сможет определить без излишних экспериментов, является ли часть статистически значимой, используя различные хорошо известные инструменты статистической оценки, например, определение доверительных интервалов, определение значения p, t-критерий Стьюдента, критерий Манна-Уитни и т. д. Предпочтительные доверительные интервалы составляют по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% и по меньшей мере 99%. Значения р предпочтительно составляют 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 или 0,0001. Предпочтительно лечение должно быть эффективным для по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или по меньшей мере 90% субъектов данной когорты или популяции.
Предпочтительно вакцинация дополнительно включает введение адъюванта, предпочтительно одновременно с введением иммуногенного полипептида. Более предпочтительно иммуногенный полипептид и адъювант содержатся в общей смеси при введении. Соответственно, предпочтительно иммуногенный полипептид и адъювант смешивают перед введением. Предпочтительно адъювант содержит (i) квасцы и антагонист Toll-подобного рецептора 4 (TLR4), предпочтительно синтетический монофосфориллипид A (MPLA), и/или (ii) наноэмульсию типа «масло-в-воде» на основе сквалена, предпочтительно AddaVax™.
Предпочтительно вакцинация против инфекции ВПЧ согласно настоящему изобретению индуцирует гуморальный иммунный ответ у субъекта, т. е. предпочтительно индуцирует выработку антител, распознающих, предпочтительно специфически распознающих, полипептид L2 ВПЧ. Под термином «специфически распознающий» специалист в данной области техники понимает свойство связывающего агента, например, антитела, специфически связываться с конкретным типом молекулы, тогда как другие молекулы из этого же химического класса молекул, например, белки, не распознаются или распознаются в значительно меньшей степени. Предпочтительно константа связывания антитела, специфически распознающего полипептид L2 ВПЧ, в отношении полипептида L2 ВПЧ ниже на по меньшей мере коэффициент 100, более предпочтительно на по меньшей мере коэффициент 1000, наиболее предпочтительно на по меньшей мере коэффициент 10000, чем величина в отношении любого полипептида, не являющегося L2 ВПЧ. Предпочтительно антитела, специфически распознающие полипептид L2 ВПЧ, представляют собой антитела, специфически распознающие капсид ВПЧ. Предпочтительно антитела, специфически распознающие полипептид L2 ВПЧ, представляют собой антитела, нейтрализующие капсид ВПЧ. Предпочтительно вакцинация против инфекции ВПЧ вызывает у субъекта гуморальный и клеточный иммунный ответ.
Соответственно, настоящее изобретение также относится к иммуногенному полипептиду в соответствии с настоящим изобретением для применения при создании антител, специфически распознающих полипептид L2 ВПЧ.
Настоящее изобретение также относится к полинуклеотиду, кодирующему иммуногенный полипептид в соответствии с настоящим изобретением.
В настоящей заявке термин «полинуклеотид» предпочтительно включает варианты конкретно указанных полинуклеотидов. Более предпочтительно термин полинуклеотид относится к указанным конкретным полинуклеотидам. В настоящей заявке термин «вариант полинуклеотида» относится к варианту полинуклеотида, относящемуся к настоящему изобретению, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, которая характеризуется тем, что последовательность может быть получена из указанной выше конкретной последовательности нуклеиновой кислоты с помощью по меньшей мере одной замены, добавления и/или делеции нуклеотида, причем вариант полинуклеотида должен иметь активность, указанную для конкретного полинуклеотида. Помимо этого следует понимать, что вариант полинуклеотида, на который ссылаются в соответствии с настоящим изобретением, должен иметь последовательность нуклеиновой кислоты, которая отличается за счет по меньшей мере одной замены, делеции и/или добавления нуклеотида. Предпочтительно указанный вариант полинуклеотида представляет собой ортолог, паралог или другой гомолог конкретного полинуклеотида. Также предпочтительно указанный вариант полинуклеотида представляет собой природный аллель конкретного полинуклеотида. Варианты полинуклеотидов также включены в полинуклеотиды, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, которая способна гибридизоваться с вышеупомянутыми конкретными полинуклеотидами, предпочтительно в жестких условиях гибридизации. Такие строгие условия известны специалисту и могут быть найдены в Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Предпочтительным примером жестких условий гибридизации являются условия гибридизации в 6× хлориде натрия/цитрате натрия (=SSC) при приблизительно 45°C с последующим одним или более этапами промывки в 0,2× SSC, 0,1% ДСН при 50-65°C. Специалист осведомлен, что такие условия гибридизации различаются в зависимости от типа нуклеиновой кислоты и, например, в присутствии органических растворителей, в отношении температуры и концентрации буфера. Например, в «стандартных условиях гибридизации» в зависимости от типа нуклеиновой кислоты температура различается от 42 до 58°C в водном буфере, при этом концентрация SSC составляет от 0,1× до 5× (рН=7,2). Если в вышеуказанном буфере присутствует органический растворитель, например, 50% формамид, температура в стандартных условиях составляет приблизительно 42°C. Условия гибридизации для гибридов ДНК:ДНК предпочтительно составляют, например, 0,1× SSC и от 20 до 45°C, предпочтительно от 30 до 45°C. Условия гибридизации для гибридов ДНК:РНК предпочтительно составляют, например, 0,1× SSC и от 30 до 55°C, предпочтительно от 45 до 55°C. Вышеупомянутые значения температуры гибридизации определены, например, для нуклеиновой кислоты длиной приблизительно 100 п.о. (=пары оснований) и содержанием G+C 50% в отсутствие формамида. Специалист осведомлен о том, как определить требуемые условия гибридизации, обращаясь к руководствам, таким как упомянутое выше руководство, или следующие руководства: Sambrook et al., «Molecular Cloning», Cold Spring Harbor Laboratory, 1989; Hames and Higgins (Ed.) 1985, «Nucleic Acids Hybridization: A Practical Approach», IRL Press at Oxford University Press, Oxford; Brown (Ed.) 1991, «Essential Molecular Biology: A Practical Approach», IRL Press at Oxford University Press, Oxford. Альтернативно, варианты полинуклеотидов можно получить с помощью методик на основе ПЦР, таких как амплификация ДНК на основе смешанных олигонуклеотидных праймеров, т. е. с использованием вырожденных праймеров против консервативных доменов полипептида согласно настоящему изобретению. Консервативные домены полипептида могут быть идентифицированы путем сравнения последовательности нуклеиновой кислоты полинуклеотида или аминокислотной последовательности полипептида согласно настоящему изобретению с последовательностями других организмов. В качестве матрицы можно использовать ДНК или кДНК из бактерий, грибков, растений или предпочтительно из животных. Помимо этого варианты включают полинуклеотиды, содержащие последовательности нуклеиновых кислот, которые по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны конкретно указанным последовательностям нуклеиновых кислот. Помимо этого в объем настоящего изобретения также включены полинуклеотиды, которые содержат последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны конкретно указанным аминокислотным последовательностям. Значения процента идентичности предпочтительно рассчитывают по всей области аминокислотной последовательности или последовательности нуклеиновой кислоты. Для сравнения различных последовательностей квалифицированному специалисту доступен ряд программ, основанных на различных алгоритмах. В данном случае алгоритмы Нидлмана и Вунша или Смита и Уотермана обеспечивают особенно надежные результаты. Чтобы выполнить выравнивание последовательностей следует применять программу PileUp (J. Mol. Evolution., 25, 351-360, 1987, Higgins et al., CABIOS, 5 1989: 151-153) или программы Gap и BestFit [Needleman and Wunsch (J. Mol. Biol. 48; 443-453 (1970)) и Smith and Waterman (Adv. Appl. Math. 2; 482-489 (1981))], которые являются частью пакета программного обеспечения GCG (Genetics Computer Group, 575 Саенс-драйв, Мэдисон, Висконсин, США 53711 (1991)). Значения идентичности последовательности, указанные выше в процентах (%), должны быть определены предпочтительно с помощью программы GAP по всей области последовательности со следующими настройками: штраф за открытие пробела: 50, штраф за удлинение пробела: 3, среднее совпадение: 10000 и среднее несовпадение: 0,000, которые, если не указано иное, всегда должны применяться в качестве стандартных настроек для выравнивания последовательностей.
Полинуклеотид, содержащий фрагмент любой из конкретно указанных последовательностей нуклеиновых кислот, также включен в качестве варианта полинуклеотида согласно настоящему изобретению. Фрагмент должен по-прежнему кодировать иммуногенный полипептид, который сохраняет указанную активность. Соответственно, кодируемый иммуногенный полипептид может содержать или состоять из доменов иммуногенного полипептида согласно настоящему изобретению, придающих указанную биологическую активность. Фрагмент, как подразумевается в настоящей заявке, предпочтительно содержит по меньшей мере 50, по меньшей мере 100, по меньшей мере 250 или по меньшей мере 500 последовательных нуклеотидов любой из конкретных последовательностей нуклеиновых кислот или кодирует аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере 20, по меньшей мере 30, по меньшей мере 50, по меньшей мере 80, по меньшей мере 100 или по меньшей мере 150 последовательных аминокислот любой из конкретных аминокислотных последовательностей.
Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению состоят, по существу состоят из них или содержат вышеупомянутые последовательности нуклеиновых кислот. Соответственно, они также могут содержать дополнительные последовательности нуклеиновых кислот. В частности, полинуклеотиды согласно настоящему изобретению могут кодировать гибридные белки, в которых один из партнеров гибридного белка представляет собой иммуногенный полипептид, кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты, указанной выше. Такие гибридные белки могут содержать в качестве дополнительной части полипептиды для мониторинга экспрессии (например, зеленые, желтые, синие или красные флуоресцентные белки, щелочную фосфатазу и тому подобное) или так называемые «метки», которые могут служить в качестве детектируемого маркера или в качестве вспомогательной меры для целей очистки. Метки для различных целей хорошо известны в данной области техники и описаны в настоящей заявке в другом месте.
Полинуклеотид согласно настоящему изобретению должен быть обеспечен предпочтительно в виде выделенного полинуклеотида (т. е. выделенного из его естественного окружения) или в генетически модифицированной форме. Полинуклеотид предпочтительно представляет собой ДНК, включая кДНК, или представляет собой РНК. Термин включает как одноцепочечные, так и двухцепочечные полинуклеотиды. Помимо этого в объем настоящего изобретения также предпочтительно включены химически модифицированные полинуклеотиды, включая природные модифицированные полинуклеотиды, такие как гликозилированные или метилированные полинуклеотиды, или искусственно модифицированные, такие как биотинилированные полинуклеотиды.
Помимо этого настоящее изобретение относится к вектору, содержащему полинуклеотид в соответствии с настоящим изобретением.
in
vitro
Термин «вектор» предпочтительно включает фаговые, плазмидные, вирусные или ретровирусные векторы, а также искусственные хромосомы, такие как бактериальные или дрожжевые искусственные хромосомы. Помимо этого термин также относится к нацеливающим конструкциям, которые обеспечивают случайное или сайт-направленное встраивание нацеливающей конструкции в геномную ДНК. Такие нацеливающие конструкции предпочтительно содержат ДНК достаточной длины для гомологичной или гетерологичной рекомбинации, как подробно описано ниже. Вектор, содержащий полинуклеотид согласно настоящему изобретению, предпочтительно дополнительно содержит селективные маркеры для размножения и/или отбора у хозяина. Вектор может быть включен в клетку-хозяина с помощью различных методик, хорошо известных в данной области техники. Например, плазмидный вектор может быть введен в осадок, такой как осадок фосфата кальция или осадок хлорида рубидия, или в комплекс с заряженным липидом или в кластеры на основе углерода, такие как фуллерены. Согласно другому варианту плазмидный вектор может быть введен с помощью методик теплового шока или электропорации. Если вектор представляет собой вирус, он может быть упакован в условиях  с использованием подходящей упаковывающей клеточной линии до применения к клеткам хозяина. Ретровирусные векторы могут быть компетентными по репликации или дефектными по репликации. В последнем случае размножение вируса обычно будет происходить только в дополняющих хозяевах/клетках. Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения вектор представляет собой бактериальный вектор, предпочтительно имеющий точку начала репликации p15A и/или несущий ген устойчивости к канамицину.
lac,
trp
tac
E.
coli
AOX1
GAL1
tet
lac
Более предпочтительно полинуклеотид в векторе согласно настоящему изобретению функционально соединен с последовательностями, контролирующими экспрессию, которые обеспечивают экспрессию в прокариотических или эукариотических клетках или их выделенных фракциях. Экспрессия указанного полинуклеотида включает транскрипцию полинуклеотида, предпочтительно в транслируемую иРНК. Регуляторные элементы, обеспечивающие экспрессию в эукариотических клетках, предпочтительно клетках млекопитающих, хорошо известны в данной области техники. Они предпочтительно содержат регуляторные последовательности, обеспечивающие инициацию транскрипции, и необязательно полиА-сигналы, обеспечивающие прекращение транскрипции и стабилизацию транскрипта. Дополнительные регуляторные элементы могут включать как транскрипционные, так и трансляционные энхансеры. Возможные регуляторные элементы, обеспечивающие экспрессию в прокариотических клетках-хозяевах, включают, например, промотор  или  в , и примеры регуляторных элементов, обеспечивающих экспрессию в эукариотических клетках-хозяевах, включают промотор  или  в дрожжах или промотор ЦМВ, SV40, RSV (вирус саркомы Рауса), энхансер ЦМВ, энхансер SV40 или интрон глобина в клетках млекопитающих и других животных. Помимо этого в векторе экспрессии, включенном в объем настоящего изобретения, можно применять индуцибельные последовательности, контролирующие экспрессию. Такие индуцибельные векторы могут содержать последовательности операторов  или  или последовательности, индуцируемые тепловым шоком или другими факторами окружающей среды. Подходящие последовательности, контролирующие экспрессию, хорошо известны в данной области техники. Помимо элементов, которые отвечают за инициацию транскрипции, такие регуляторные элементы также могут содержать сигналы терминации транскрипции, такие как сайт SV40-полиA или сайт tk-полиA, расположенные в 3ʹ-направлении от полинуклеотида. В данном случае подходящие векторы экспрессии известны в данной области техники, такие как вектор экспрессии кДНК Окаямы-Берга pcDV1 (Pharmacia), pBluescript (Stratagene), pCDM8, pRc/CMV, pcDNA1, pcDNA3 (InVitrogene) или pSPORT1 (GIBCO BRL). Предпочтительно указанный вектор представляет собой вектор экспрессии и вектор переноса гена или нацеливающий вектор. Векторы экспрессии, происходящие из вирусов, таких как ретровирусы, вирус осповакцины, аденоассоциированный вирус, вирусы герпеса или вирус бычьей папилломы, можно применять для доставки полинуклеотидов или вектора согласно настоящему изобретению в целевую клеточную популяцию. Для конструирования рекомбинантных вирусных векторов можно применять способы, которые хорошо известны специалистам в данной области техники; см., например, методики, описанные в Sambrook, Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1989) N.Y. и Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y. (1994). Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения вектор представляет собой бактериальный вектор экспрессии, несущий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую иммуногенный полипептид под контролем tac-промотора; более предпочтительно указанный вектор дополнительно несет ген, кодирующий экспрессируемый ген, кодирующий функциональный ингибитор lac.
Соответственно, согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения вектор представляет собой бактериальный вектор экспрессии, предпочтительно имеющий точку начала репликации р15А, несущий ген устойчивости к канамицину, ген, кодирующий экспрессируемый ген, кодирующий функциональный ингибитор lac, и кодирующий иммуногенный полипептид под контролем tac-промотора. Более предпочтительно вектор представляет собой вектор, содержащий последовательность SEQ ID NO: 82.
Настоящее изобретение также относится к клетке-хозяину, содержащей полинуклеотид согласно настоящему изобретению и/или вектор согласно настоящему изобретению.
Escherichia
E.
coli
В настоящей заявке термин «клетка-хозяин» относится к любой клетке, способной получать и предпочтительно сохранять полинуклеотид и/или вектор согласно настоящему изобретению. Более предпочтительно клетка-хозяин способна экспрессировать иммуногенный полипептид согласно настоящему изобретению, кодируемый указанным полинуклеотидом и/или вектором. Предпочтительно клетка представляет собой бактериальную клетку, более предпочтительно клетку обычного лабораторного бактериального штамма, известного в данной области техники, наиболее предпочтительно штамма , в частности, штамма . Также предпочтительно клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку, предпочтительно дрожжевую клетку, например, клетку штамма пекарских дрожжей, или представляет собой клетку животного. Более предпочтительно клетка-хозяин представляет собой клетку насекомого или клетку млекопитающего, в частности, клетку мыши или крысы. Наиболее предпочтительно клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей иммуногенный полипептид в соответствии с настоящим изобретением, полинуклеотид в соответствии с настоящим изобретением, вектор в соответствии с настоящим изобретением и/или клетку-хозяина в соответствии с настоящим изобретением; и фармацевтически приемлемый носитель.
В настоящей заявке термин «фармацевтическая композиция» относится к композиции, содержащей соединение или соединения согласно настоящему изобретению в фармацевтически приемлемой форме и фармацевтически приемлемый носитель. Соединения согласно настоящему изобретению могут быть изготовлены в виде фармацевтически приемлемых солей. Приемлемые соли включают ацетат, сложный эфир метила, HCl, сульфат, хлорид и тому подобное. Фармацевтические композиции предпочтительно вводят местно или системно. Подходящие способы введения, обычно применяемые для введения лекарственного препарата, включают пероральное, внутривенное или парентеральное введение, а также ингаляцию. Предпочтительно фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению вводят парентеральным путем, предпочтительно подкожно, внутримышечно или внутрибрюшинно. В том случае, если субъектом является человек, введение предпочтительно является внутримышечным. Однако полинуклеотидные соединения также можно вводить в рамках подхода генной терапии с применением вирусных векторов, вирусов или липосом и также можно вводить местно, например, в виде мази. Помимо этого соединения можно вводить в комбинации с другими лекарственными препаратами как в общей фармацевтической композиции, так и в виде отдельных фармацевтических композиций, где указанные отдельные фармацевтические композиции могут быть обеспечены в форме набора частей. В частности, предусмотрено совместное введение адъювантов, как указано в настоящей заявке в другом месте. Предпочтительно иммуногенный полипептид, полинуклеотид и фармацевтическая композиция обеспечены в лиофилизированной форме.
Соединения предпочтительно вводят в обычных лекарственных формах, полученных путем комбинирования лекарственных препаратов со стандартными фармацевтическими носителями в соответствии с общепринятыми процедурами. Эти процедуры могут включать смешивание, гранулирование и прессование или растворение ингредиентов соответствующим образом для желательного препарата. Следует понимать, что форма и характер фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя определяется количеством активного ингредиента, с которым его необходимо комбинировать, путем введения и другими хорошо известными переменными.
Носитель (и) должен (должны) быть приемлемым (и) в том смысле, что он (и) совместим (ы) с другими ингредиентами состава и не является (являются) вредным (и) для его реципиента. Применяемый фармацевтический носитель может представлять собой, например, твердое вещество, гель или жидкость. Примеры твердых носителей включают лактозу, каолин, сахарозу, тальк, желатин, агар, пектин, камедь, стеарат магния, стеариновую кислоту и тому подобное. Примеры жидких носителей включают забуференный фосфатом физиологический раствор, сироп, масло, такое как арахисовое масло и оливковое масло, воду, эмульсии, различные типы смачивающих агентов, стерильные растворы и тому подобное. Аналогичным образом, носитель или разбавитель может включать материал, задерживающий высвобождение, хорошо известный в данной области техники, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, по отдельности или с воском. Указанные подходящие носители включают носители, упомянутые выше, и другие, хорошо известные в данной области техники, см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania.
Разбавитель (и) предпочтительно выбирают так, чтобы он (они) не влиял (и) на биологическую активность иммуногенного полипептида, полинуклеотида, вектора или клетки-хозяина и потенциальных дополнительных фармацевтически активных ингредиентов. Примерами таких разбавителей являются дистиллированная вода, физиологический раствор, растворы Рингера, раствор декстрозы и раствор Хэнка. Помимо этого фармацевтическая композиция или состав также может содержать другие носители, адъюванты или нетоксичные, нетерапевтические, неиммуногенные стабилизаторы и тому подобное.
Терапевтически эффективная доза относится к количеству соединений, которые будут применять в фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, которое предотвращает, облегчает или лечит состояние, указанное в настоящей заявке. Терапевтическая эффективность и токсичность соединений могут быть определены с помощью стандартных фармацевтических процедур в культуре клеток или у экспериментальных животных, например, путем определения ЭД50 (дозы, терапевтически эффективной у 50% популяции) и/или ЛД50 (дозы, летальной у 50% популяции). Соотношение доз для терапевтических и токсических эффектов представляет собой терапевтический индекс, и его можно выразить как соотношение ЛД50/ЭД50.
Схема дозирования будет определена лечащим врачом, предпочтительно с учетом соответствующих клинических факторов и предпочтительно в соответствии с любым из способов, описанных в настоящей заявке в другом месте. Как хорошо известно в области медицины, доза для любого пациента может зависеть от многих факторов, включая размер пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретное соединение, которое будет введено, пол, время и путь введения, общее состояние здоровья и другие лекарственные препараты, вводимые одновременно. Прогресс можно контролировать с помощью периодической оценки. Обычная доза может быть в пределах диапазона, например, от 1 мкг до 10000 мкг предпочтительно в сутки; однако предусмотрены дозы, которые ниже или выше этого примерного диапазона, особенно с учетом вышеупомянутых факторов. Обычно схема, как регулярное введение фармацевтической композиции, должна быть в пределах диапазона от 1 мкг до 10 мг в сутки. Если схема лечения представляет собой непрерывную инфузию, она также должна быть в пределах диапазона от 1 мкг до 10 мг единиц на килограмм массы тела в час, соответственно. Однако в зависимости от субъекта и способа введения количество вводимого вещества может варьироваться в широких пределах, чтобы обеспечить предпочтительно от приблизительно 0,01 мг на кг массы тела до приблизительно 10 мг на кг массы тела. Фармацевтические композиции и составы, упомянутые в настоящей заявке, вводят по меньшей мере один раз для лечения или предотвращения заболевания или состояния, указанного в настоящей заявке. Однако указанные фармацевтические композиции можно вводить более одного раза, например, от одного до четырех раз в сутки в течение неограниченного количества суток.
Конкретные фармацевтические композиции получают способом, хорошо известным в области фармацевтики, и они содержат по меньшей мере иммуногенный полипептид, полинуклеотид, вектор или клетку-хозяина в качестве активного соединения в смеси или иным образом связанных с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Для изготовления этих конкретных фармацевтических композиций активное (ые) соединение (я) обычно смешивают с носителем или разбавителем либо заключают или инкапсулируют в капсулу, саше, крахмальную капсулу, бумагу или другие подходящие контейнеры или среды. Полученные составы должны быть адаптированы к способу введения, т. е. в форме таблеток, капсул, суппозиториев, растворов, суспензий или тому подобного. Рекомендации по дозам должны быть указаны в рецепте или инструкциях для пользователя, чтобы спрогнозировать корректировку дозы в зависимости  от рассматриваемого реципиента.
Настоящее изобретение также относится к набору, содержащему иммуногенный полипептид в соответствии с настоящим изобретением и адъювант.
Помимо этого настоящее изобретение относится к способу вакцинации субъекта против инфекции ВПЧ, включающему:
(a) приведение указанного субъекта в контакт с иммуногенным полипептидом в соответствии с настоящим изобретением, полинуклеотидом в соответствии с настоящим изобретением, вектором в соответствии с настоящим изобретением и/или клеткой-хозяином в соответствии с настоящим изобретением; и
(b) вакцинацию тем самым указанного субъекта против инфекции ВПЧ.
in
vivo
Способ вакцинации согласно настоящему изобретению предпочтительно представляет собой способ в условиях . Помимо этого он может включать дополнительные этапы помимо тех, которые явно упомянуты выше. Например, дополнительные этапы могут относиться, например, к приведению указанного субъекта в контакт с адъювантом, как указано в настоящей заявке в другом месте, и/или к повторению указанного контакта с соединением согласно настоящему изобретению для усиления иммунного ответа. В способе вакцинации субъект предпочтительно представляет собой млекопитающее, более предпочтительно представляет собой человека.
Помимо этого настоящее изобретение относится к способу получения антител против полипептида L2 ВПЧ, включающему:
(а) приведение субъекта в контакт с иммуногенным полипептидом в соответствии с настоящим изобретением, полинуклеотидом в соответствии с настоящим изобретением, вектором в соответствии с настоящим изобретением и/или клеткой-хозяином в соответствии с настоящим изобретением; и
(б) сбор антител, которые вырабатываются у указанного субъекта, из жидкости организма указанного субъекта и/или сбор клеток, вырабатывающих указанные антитела, у указанного субъекта.
in
vivo
Способ получения антител согласно настоящему изобретению предпочтительно представляет собой способ в условиях , который выполняют у субъекта, предпочтительно отличного от человека. Предпочтительно субъекта, отличного от человека, умерщвляют после выполнения способа. Помимо этого способ может включать дополнительные этапы помимо тех, которые явно упомянуты выше. Например, дополнительные этапы могут относиться, например, к очистке собранных антител или слиянию собранных клеток для получения клеточных линий, вырабатывающих моноклональные антитела, в соответствии с хорошо известными способами. Также один или более этапов способа могут быть выполнены с помощью автоматического оборудования.
С учетом изложенного выше предпочтительными являются следующие варианты реализации:
1) Иммуногенный полипептид, содержащий множество N-концевых пептидов L2 вируса папилломы человека (ВПЧ), соответствующих аминокислотам 20-50 полипептида L2 ВПЧ16, причем указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере двух разных генотипов ВПЧ.
2) Иммуногенный полипептид согласно варианту реализации 1, который характеризуется тем, что указанное множество представляет собой количество, составляющее по меньшей мере 3, предпочтительно по меньшей мере 5, более предпочтительно 7, 8, 9, 10, 11 или 12, еще более предпочтительно 7, 8 или 9, наиболее предпочтительно 8 N-концевых пептидов L2 ВПЧ.
3) Иммуногенный полипептид согласно варианту реализации 1 или 2, который характеризуется тем, что указанное множество представляет собой количество, составляющее от 3 до 11, предпочтительно от 5 до 10, более предпочтительно от 7 до 9, наиболее предпочтительно 8 N-концевых пептидов L2 ВПЧ.
4) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-3, который характеризуется тем, что указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой пептиды, соответствующие аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ16.
5) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-4, который характеризуется тем, что указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере четырех, предпочтительно по меньшей мере пяти, более предпочтительно 7, 8, 9, 10, 11 или 12, наиболее предпочтительно из 8 разных генотипов ВПЧ; или представляют собой их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.
6) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-5, который характеризуется тем, что указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере четырех, предпочтительно по меньшей мере пяти, более предпочтительно 7, 8, 9, 10, 11 или 12, наиболее предпочтительно из 8 разных генотипов ВПЧ.
7) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-6, который характеризуется тем, что указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ; причем предпочтительно указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.
8) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-7, который характеризуется тем, что указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82; причем предпочтительно указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59.
9) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-8, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит три копии, более предпочтительно две копии, наиболее предпочтительно одну копию каждого из указанных N-концевых пептидов L2 ВПЧ.
10) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-9, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из них, N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.
11) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-10, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из них, N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82.
12) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-11, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из нее, одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59, или представляет собой вариант указанного полипептида, содержащий множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ, содержащих не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.
13) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-12, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из нее, одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59.
14) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-13, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-39-45-51-56-59-82, более предпочтительно в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-6-51-59, предпочтительно в полностью непрерывной последовательности, более предпочтительно отделенной линкером из 5, 3 или 2 аминокислот.
15) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-14, который характеризуется тем, что указанное множество N-концевых пептидов ВПЧ L2 содержит, предпочтительно состоит из нее, SEQ ID NO: 25 или 26, или представляет собой вариант указанного иммуногенного полипептида, содержащего не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.
16) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-15, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит, предпочтительно состоит из нее, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 или 26.
17) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-16, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид не содержит N-концевой пептид L2 генотипа (ов) ВПЧ 39, 45, 56 и/или 82.
18) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-17, дополнительно содержащий домен олигомеризации, причем предпочтительно указанный домен олигомеризации представляет собой по меньшей мере один из:
i) домена олигомеризации С4-связывающего белка, предпочтительно С4-связывающего белка млекопитающего, более предпочтительно С4-связывающего белка человека или мыши, наиболее предпочтительно С4-связывающего белка мыши;
Pyrococcus
furiosus
ii) полипептида инкапсулина, предпочтительно полипептида инкапсулина из термофильной архебактерии, более предпочтительно полипептида инкапсулина ;
Pyrococcus
furiosus
iii) полипептида ферритина, предпочтительно полипептида ферритина из термофильной архебактерии, более предпочтительно полипептида ферритина ; и
iv) гибридного полипептида двух различных куриных С4-связывающих белков, предпочтительно полипептида IMX313T.
19) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-18, который характеризуется тем, что указанный домен олигомеризации содержит, предпочтительно состоит из нее, SEQ ID NO: 55 или 56.
20) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-19, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид дополнительно содержит усилитель иммуногенности, предпочтительно на N-конце и/или на С-конце указанного иммуногенного полипептида.
21) Иммуногенный полипептид согласно варианту реализации 20, который характеризуется тем, что указанный усилитель иммуногенности представляет собой эпитоп CD4+ T-хелперов или представляет собой пептид, содержащий аминокислотную
последовательность RGD.
22) Иммуногенный полипептид согласно варианту реализации 21, который характеризуется тем, что указанный эпитоп CD4+ T-хелперов содержит по меньшей мере одно из:
Plasmodium
vivax
i) р25 из карбоксильной области белка спорозоита ;
ii) пептид p2 из столбнячного токсина;
iii) пептид р30 из столбнячного токсина; и
iv) универсальный HLA-DR реактивный эпитоп (PADRE).
23) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 21 или 22, который характеризуется тем, что указанный эпитоп CD4+ T-хелперов содержит, предпочтительно состоит из нее, SEQ ID NO: 57.
24) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-23, который характеризуется тем, что указанное множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ содержится в полипептиде тиоредоксина.
25) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-24, который характеризуется тем, что указанный тиоредоксин представляет собой тиоредоксин человека, бактерии или архебактерии.
Pyrococcus
furiosus
26) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-25, который характеризуется тем, что указанный тиоредоксин представляет собой тиоредоксин термофильной архебактерии, предпочтительно , предпочтительно имеющий последовательность SEQ ID NO: 53.
27) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-26, который характеризуется тем, что указанное множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ содержится в сайте дисплея указанного тиоредоксина.
28) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-27, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид представляет собой гибридный полипептид, при этом предпочтительно элементы указанного иммуногенного полипептида являются смежными по аминокислотной последовательности.
29) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28 для применения в медицине.
30) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28 для применения при вакцинации против инфекции ВПЧ.
31) Иммуногенный полипептид для применения согласно варианту реализации 27, который характеризуется тем, что указанная вакцинация представляет собой вакцинацию против инфекции по меньшей мере генотипом ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59, предпочтительно представляет собой вакцинацию против инфекции по меньшей мере генотипом ВПЧ 5, 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51 и 59.
32) Иммуногенный полипептид для применения согласно варианту реализации 30 или 31, который характеризуется тем, что указанная вакцинация представляет собой вакцинацию против инфекции генотипом ВПЧ 31, 35 и 51.
33) Иммуногенный полипептид для применения согласно любому из вариантов реализации 30-32, который характеризуется тем, что указанная вакцинация дополнительно включает введение адъюванта, причем указанный адъювант предпочтительно содержит (i) квасцы и антагонист Toll-подобного рецептора 4 (TLR4), предпочтительно синтетический монофосфориллипид A (MPLA)); и/или (ii) наноэмульсию типа «масло-в-воде» на основе сквалена, предпочтительно AddaVax™.
34) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28 для применения при создании антител, специфически узнающих полипептид L2 ВПЧ.
35) Полинуклеотид, кодирующий иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28.
36) Вектор, содержащий полинуклеотид согласно варианту реализации 35.
37) Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид согласно варианту реализации 35 и/или вектор согласно варианту реализации 36.
38) Фармацевтическая композиция, содержащая иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28, полинуклеотид согласно варианту реализации 35, вектор согласно варианту реализации 36 и/или клетку-хозяина согласно варианту реализации 37; и фармацевтически приемлемый носитель.
39) Набор, содержащий иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28 и адъювант, причем указанный адъювант предпочтительно содержит (i) квасцы и антагонист Toll-подобного рецептора 4 (TLR4), предпочтительно синтетический монофосфориллипид A (MPLA), и/или (ii) наноэмульсию типа «масло-в-воде» на основе сквалена, предпочтительно AddaVax™.
40) Способ вакцинации субъекта против инфекции ВПЧ, включающий:
(a) приведение указанного субъекта в контакт с иммуногенным полипептидом согласно любому из вариантов реализации 1-28, полинуклеотидом согласно варианту реализации 35, вектором согласно варианту реализации 36 и/или клеткой-хозяином согласно варианту реализации 37; и
(b) вакцинацию тем самым указанного субъекта против инфекции ВПЧ.
41) Способ вакцинации субъекта согласно варианту реализации 40, дополнительно включающий введение адъюванта, причем указанный адъювант предпочтительно содержит (i) квасцы и антагонист Toll-подобного рецептора 4 (TLR4), предпочтительно синтетический монофосфориллипид A (MPLA), и/или (ii) наноэмульсию типа «масло-в- воде» на основе сквалена, предпочтительно AddaVax™.
42) Способ получения антител против полипептида L2 ВПЧ, включающий:
(a) приведение субъекта в контакт с иммуногенным полипептидом согласно любому из вариантов реализации 1-28, полинуклеотидом согласно варианту реализации 35, вектором согласно варианту реализации 36 и/или клеткой-хозяином согласно варианту реализации 37; и
(b) сбор антител, которые вырабатываются у указанного субъекта, из жидкости организма указанного субъекта и/или сбор клеток, вырабатывающих указанные антитела, у указанного субъекта.
Все литературные ссылки, процитированные в данном описании, включены в него посредством ссылки в отношении полного содержания их раскрытия и содержания раскрытия, конкретно упомянутого в данном описании.
Подписи
к
чертежам
Фиг. 1: Индукция титров нейтрализующих антител с помощью различных иммуногенных полипептидов, содержащих последовательности PADRE, у мышей; конструкции гетеромерных PfTrx-8-мер и PfTrx-11-мер сравнивали со смесью гомотримеров PfTrx (смесь 16/18/51). На панелях показаны титры нейтрализующих антител, измеренные у мышей, против A) ВПЧ16, B) ВПЧ18, C) ВПЧ31, D) ВПЧ45, E) ВПЧ33, F) ВПЧ51, G) ВПЧ35, H) ВПЧ52 и I) ВПЧ58; каждое указанное значение представляет одну мышь, горизонтальные линии указывают средние значения.
Фиг. 2: Индукция титров нейтрализующих антител с помощью различных иммуногенных полипептидов, содержащих последовательности IMX, у мышей; гомотримерный N-концевой пептид L2 ВПЧ16 использовали в качестве IMX-гибрида, в качестве PfTrx-гибрида или в качестве гибридного белка, содержащего как IMX, так и PfTrx. На панелях показаны титры нейтрализующих антител, измеренные у мышей, против A) ВПЧ16, B) ВПЧ18 и C) ВПЧ45; каждое указанное значение представляет одну мышь, горизонтальные линии указывают средние значения.
Фиг. 3: Сравнение адъювантов. PfTrx, содержащий гомотримерный N-концевой пептид L2 ВПЧ16 и дополнительно содержащий IMX или не содержащий его, применяли в качестве антигена (Trx-L2-IMX, pfTrx-L2-IMX и Trx-L2), A) и B. Помимо этого конструкции сравнивали со смешанными 8-мерными и 11-мерными конструкциями, C)-G). На панелях показаны титры нейтрализующих антител, измеренные у 9-10 мышей, против A) ВПЧ16, B) ВПЧ18; C) ВПЧ16, D) ВПЧ18, E) ВПЧ33, F) ВПЧ51 и G) ВПЧ58. A/M: Alum/MPLA; каждое указанное значение представляет одну мышь, горизонтальные линии указывают средние значения.
Фиг. 4: Индукция титров нейтрализующих антител с помощью различных иммуногенных полипептидов, содержащих последовательности IMX, у мышей; гомотримерный N-концевой пептид L2 ВПЧ16 сравнивали с гетеромерными конструкциями PfTrx-8-мер и PfTrx-11-мер. На панелях показаны титры нейтрализующих антител, измеренные у мышей, против A) ВПЧ16, B) ВПЧ18, C) ВПЧ31, D) ВПЧ33, E) ВПЧ35, F) ВПЧ39, G) ВПЧ45, H) ВПЧ51, I) ВПЧ52 и K) ВПЧ58; каждое указанное значение представляет одну мышь, горизонтальные линии указывают средние значения.
Фиг. 5: Индукция титров нейтрализующих антител с помощью различных иммуногенных полипептидов, как указано. На панелях показаны титры нейтрализующих антител, измеренные у мышей, против A) ВПЧ16, B) ВПЧ18, C) ВПЧ31, D) ВПЧ33, E) ВПЧ35, F) ВПЧ39, G) ВПЧ45, H) ВПЧ51, I) ВПЧ52 и K) ВПЧ58; каждое указанное значение представляет одну мышь, горизонтальные линии указывают средние значения.
P.
furiosus
P.
furiosus
Фиг. 6: Аминокислотные последовательности иммуногенных полипептидов согласно настоящему изобретению: A) 11-мерный гетеромерный полипептид (SEQ ID NO: 25), B) 8-мерный гетеромерный полипептид (SEQ ID NO: 26), C) 11-мерный гетеромерный полипептид, содержащийся в тиоредоксине  (SEQ ID NO: 27), D) 11-мерный гетеромерный полипептид, содержащийся в тиоредоксине  (SEQ ID NO: 29).
Фиг. 7: Нейтрализующие титры сывороток от мышей (N = 10; А) и морских свинок (N=2; В) в количественном исследовании нейтрализации на основе псевдовириона (PBNA); использованный антиген представлял собой PfTrx-8-мер-IMX3T3 (SEQ ID NO:43); каждая точка представляет значение, полученное для сыворотки от одного животного.
Фиг. 8: Нейтрализующие титры сывороток от мышей (N = 10; A) и морских свинок (N=2; B) в L2-усиленном количественном исследовании нейтрализации на основе псевдовириона (L2-PBNA); использованный антиген представлял собой PfTrx-8-мер- IMX3T3 (SEQ ID NO:43); каждая точка представляет значение, полученное для сыворотки от одного животного.
Следующие примеры представлены исключительно для иллюстрации настоящего изобретения. Они не должны быть истолкованы как ограничивающие объем настоящего изобретения.
Пример
1:
Получение
иммуногенов
и
иммунизация
P.
furiosus
P.
furiosus
P.
furiosus
В экспериментах использовали различные конструкции: PfTrx8-мер представлял собой тиоредоксин  с N-концевыми пептидами L2 ВПЧ, соответствующими аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ16 в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-6-51-59; PfTrx11-мер представлял собой тиоредоксин  с N-концевыми пептидами L2 ВПЧ, соответствующими аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ16 в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-39-45-51-56-59-82. Термин «смесь 16/31/51» относился к смеси тиоредоксинов , содержащей три N-концевых идентичных пептида L2 ВПЧ16, соответствующих аминокислотам 20-38 полипептида L2 ВПЧ16, происходящих из ВПЧ16, ВПЧ31 и ВПЧ51, соответственно. Иммуногены, содержащие обозначение «PADRE», содержали дополнительную последовательность PADRE, иммуногены, содержащие обозначение «imx», содержали дополнительный домен imx. Для сравнения использовали соответствующие конструкции, содержащие гомотримерные или мономерные N-концевые пептиды L2 ВПЧ16 (SEQ ID NO: 62-81).
E.
coli
Указанные конструкции получали с помощью стандартных методик рекомбинантной ДНК и молекулярного клонирования в соответствии со способами, известными из руководств, с последующей наработкой в  и очисткой, как описано в настоящей заявке ниже. Иммуногенные полипептиды получали по существу как описано ранее (WO 2010/070052), и как описано в настоящей заявке ниже.
Самок мышей BALB/c в возрасте 6-8 недель приобретали в Charles River Laboratories и содержали в помещении для животных в определенных стерильных условиях. Мышей иммунизировали внутримышечно четыре раза с интервалами в две недели антигенами, смешанными с адъювантами. Для эксперимента с Alum/MPLA 20 мкг антигена дополняли 50 мкг гидроксида алюминия (Brenntag) и 10 мкг синтетического монофосфориллипида А (MPLA, AvantiLipids) в качестве адъювантов. В случае Montanide ISA720 (Seppic, France) и AddavaxTM (InvivoGen) 20 мкг антигена смешивали с 50% (об./об.) адъюванта. Морских свинок иммунизировали в соответствии со стандартными протоколами.
Пример
2:
Количественные
исследования
нейтрализации
на
основе
псевдовириона
Gaussia
Количественные исследования нейтрализации на основе псевдовириона (PBNA) по существу выполняли, как описано в WO 2011/151335. В общих чертах, 50 мкл разбавленной сыворотки комбинировали с 50 мкл разбавленного псевдовириона и инкубировали при комнатной температуре в течение 20 мин. Затем 50 мкл Т-клеток HeLa (2,5×105 клеток/мл) добавляли к смеси псевдовирион-антитело и инкубировали в течение 48 ч при температуре 37°C в увлажненном инкубаторе. Количество секретированной люциферазы  определяли в 10 мкл среды для культивирования клеток с использованием набора Gaussia glow juice (PJK, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Испускание света образцов измеряли через 15 минут после внесения субстрата.
Для L2-усиленного количественного исследования нейтрализации на основе псевдовириона (L2-PBNA), которое обладает по существу аналогичной чувствительностью к антителам к L1, но значительно повышенной чувствительностью к антителам к L2, PBNA модифицировали по существу, как описано в Day et al. (2012), Clinical and Vaccine Immunology 19(7):1075. В общих чертах, в L2-PBNA псевдовирионы ВПЧ связывали с внеклеточным матриксом и обрабатывали фурином, что вызывало более эффективное воздействие L2. Фактический PBNA выполняли лишь после такой обработки. Результаты L2-PBNA с сыворотками мыши и морской свинки показаны на Фиг. 8.
Пример
3.
Получение
и
очистка
вакцины
IMX-Trx-L2(20-38)8-мер
Для трансформации бактерий и IPTG-опосредуемой индукции экспрессии рекомбинантного антигена (в течение ночи при 30°C) использовали стандартные процедуры. После лизиса бактериальных клеток с помощью обработки ультразвуком, выделения растворимой фракции с помощью центрифугирования (10000×g, 15 мин), одного цикла замораживания/оттаивания, примененного к супернатанту, и дополнительного этапа центрифугирования, как указано выше, солюбилизированный бактериальный лизат загружали на колонку для аффинной хроматографии, содержащую в качестве сорбента гепарин (Hi-Trap Heparin, GE Healthcare), уравновешенную в 25 мМ Трис-HCl, pH=7,5, 100 мМ NaCl, при скорости потока 1,0 мл/мин. При обычном среднемасштабном получении 50 мл растворимого лизата, полученного из 500 мл бактериальной культуры, вносили в колонку с гепарином Hi-Trap объемом 1 мл и элюировали 30 мл линейного градиента 0,1 М-2,0 М NaCl в исходном буфере. Результаты исследования элюированного белка методом электрофореза в ДСН-ПААГ (нативная мол. масса: 248339; мол. масса субъединицы: 35477) выявили, что аффинное фракционирование с использованием гепарина обеспечивало почти 90% очистку антигена за один этап. При необходимости дальнейшая очистка (практически до гомогенности, уровень 100%) была достигнута с помощью гель-фильтрационной хроматографии на колонке Superdex 200 (24 мл; GE Healthcare), уравновешенной и проанализированной в 25 мМ Трис/HCl-150 мМ NaCl при скорости потока 0,7 мл/мин.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ДОЙЧЕС КРЕБСФОРШУНГСЦЕНТРУМ
<120> УЛУЧШЕНИЕ ИММУНОГЕННОСТИ ПЕПТИДА ВПЧ L2
<130> DK13729EP
<150> EP 16173313.4
<151> 2016-06-07
<160> 82
<170> PatentIn версия 3.3
<210> 1
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 1
Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val
1 5 10 15
Glu Gly Lys Thr Ile Ala Asp Gln Ile Leu Gln Tyr Gly Ser
20 25 30
<210> 2
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 2
Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val
1 5 10 15
Glu Gly Thr Thr Leu Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Ser Ser
20 25 30
<210> 3
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 3
Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Asn Lys Val
1 5 10 15
Glu Gly Thr Thr Leu Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Ser Ser
20 25 30
<210> 4
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 4
Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile
1 5 10 15
Glu His Thr Thr Ile Ala Asp Gln Ile Leu Arg Tyr Gly Ser
20 25 30
<210> 5
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 5
Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val
1 5 10 15
Glu Gly Ser Thr Ile Ala Asp Gln Ile Leu Lys Tyr Gly Ser
20 25 30
<210> 6
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 6
Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val
1 5 10 15
Glu Gly Asn Thr Val Ala Asp Gln Ile Leu Lys Tyr Gly Ser
20 25 30
<210> 7
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 7
Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val
1 5 10 15
Glu Gly Thr Thr Leu Ala Gly Lys Ile Leu Gln Trp Thr Ser
20 25 30
<210> 8
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 8
Thr Cys Lys Leu Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val Asn Lys Ile
1 5 10 15
Glu Gln Lys Thr Trp Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Gly Ser
20 25 30
<210> 9
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 9
Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val
1 5 10 15
Glu Gly Thr Thr Leu Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Ser Gly
20 25 30
<210> 10
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 10
Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys Val
1 5 10 15
Glu Gly Thr Thr Leu Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Thr Ser
20 25 30
<210> 11
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 11
Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val
1 5 10 15
Lys Gly Thr Thr Leu Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Ser Gly
20 25 30
<210> 12
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 12
Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val
1 5 10 15
Glu His Asn Thr Ile Ala Asp Gln Ile Leu Lys Trp Gly Ser
20 25 30
<210> 13
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 13
Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys
1 5 10 15
Val Glu Gly
<210> 14
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 14
Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys
1 5 10 15
Val Glu Gly
<210> 15
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 15
Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Asn Lys
1 5 10 15
Val Glu Gly
<210> 16
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 16
Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys
1 5 10 15
Ile Glu His
<210> 17
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 17
Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys
1 5 10 15
Val Glu Gly
<210> 18
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 18
Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys
1 5 10 15
Val Glu Gly
<210> 19
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 19
Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys
1 5 10 15
Val Glu Gly
<210> 20
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 20
Lys Thr Cys Lys Leu Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val Asn Lys
1 5 10 15
Ile Glu Gln
<210> 21
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 21
Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys
1 5 10 15
Val Glu Gly
<210> 22
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 22
Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys
1 5 10 15
Val Glu Gly
<210> 23
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 23
Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 24
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Папилломавирус человека
<400> 24
Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys
1 5 10 15
Val Glu His
<210> 25
<211> 240
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> пептиды различных типов ВПЧ 11-мер
<400> 25
Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys
1 5 10 15
Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys
35 40 45
Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly
50 55 60
Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile
65 70 75 80
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr
85 90 95
Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr
100 105 110
Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys Val Glu
115 120 125
Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp
130 135 140
Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala
145 150 155 160
Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro
165 170 175
Lys Thr Cys Lys Leu Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val Asn Lys
180 185 190
Ile Glu Gln Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro
195 200 205
Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys
210 215 220
Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Lys Gly Gly
225 230 235 240
<210> 26
<211> 174
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> пептиды различных типов ВПЧ 8-мер
<400> 26
Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys
1 5 10 15
Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro
20 25 30
Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys
35 40 45
Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly
50 55 60
Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile
65 70 75 80
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr
85 90 95
Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr
100 105 110
Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu
115 120 125
His Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp
130 135 140
Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala
145 150 155 160
Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly
165 170
<210> 27
<211> 342
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PfTrx 11-мер
<400> 27
Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val
1 5 10 15
Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln
20 25 30
Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly
35 40 45
Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro
50 55 60
Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys
65 70 75 80
Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys
85 90 95
Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly
100 105 110
Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val
115 120 125
Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly
130 135 140
Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg
145 150 155 160
Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Asn Lys Val
165 170 175
Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro
180 185 190
Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Leu
195 200 205
Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val Asn Lys Ile Glu Gln Gly Gly
210 215 220
Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn
225 230 235 240
Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys
245 250 255
Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Lys Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu
260 265 270
Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln
275 280 285
Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe
290 295 300
Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu
305                310                315                320
Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys
325 330 335
Leu Lys Glu Leu Gln Glu
340
<210> 28
<211> 1029
<213> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> PfTrx 11-мер, кодирующая
<400> 28
atgattatcg agtatgacgg cgaaatcgac ttcaccaaag gtcgtgttgt actgtggttt    60
agcattccgg gatgcggtcc gaagacgtgc aaacaagcgg gcacctgtcc gcccgatatt   120
atcccgaaag tcgagggtgg tgggccgaaa acgtgcaaac agtctggaac atgcccgccg   180
gatgtggtgc cgaaagtgga aggaggaggt ccgcaaacgt gcaaagcagc agggacctgt   240
ccgtcagatg tgattccgaa gattgaacat ggtgggccac agacctgtaa agccaccggc   300
acgtgtccgc cagacgtaat ccctaaagtc gaaggtggtg gccctcgtac gtgcaaagct   360
gcgggcacat gccctccgga tgttattccg aaagtagaag gcggcggccc acgcacttgc   420
aaacagagtg gtacctgccc gccggacgtc gtggataaag ttgaaggcgg tggtcctcgc   480
acgtgcaagc aaagcggcac atgcccaccc gacgtaatca ataaggtcga aggcggtggg   540
ccatcgactt gtaaggcggc cgggacttgt ccgccagatg tggttaacaa agtggaaggc   600
ggcggaccta aaacttgcaa actgagtgga acctgtccgg aggatgtagt caacaaaatc   660
gaacagggcg gcccgaaaac ctgtaaacaa gcaggcacct gtccatcgga tgtgattaac   720
aaagttgaag gtggtggtcc gagcacgtgt aaagccgctg gtacatgccc tcccgatgtt   780
atccccaaag ttaaaggcgg cggtccgtgt cgtctggttg aacgcttcat gaccgaactg   840
agcgagtatt ttgaggatat ccaaattgtc catatcaatg ccggcaaatg gaaaaacatc   900
gtagacaaat tcaatattct gaacgtgccg accctggtat atctgaaaga tggccgtgag   960
gttggacgcc aaaacctgat tcgttctaaa gaagagattc tgaaaaaact gaaagagctg  1020
caggagtaa                                                          1029
<210> 29
<211> 276
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PfTrx 8-мер
<400> 29
Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val
1              5                  10                 15
Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln
20 25 30
Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly
35 40 45
Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro
50 55 60
Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys
65                 70                 75                 80
Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys
85 90 95
Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly
100 105 110
Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val
115 120 125
Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly
130 135 140
Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu His Gly Gly Pro Ser
145 150 155 160
Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val
165 170 175
Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser
180 185 190
Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu
195 200 205
Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val
210 215 220
His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile
225 230 235 240
Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly
245 250 255
Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys
260 265 270
Glu Leu Gln Glu
275
<210> 30
<211> 831
<213> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> PfTrx 8-мер, кодирующая
<400> 30
atgattatcg agtatgacgg cgaaatcgac ttcaccaaag gtcgtgttgt actgtggttt    60
agcattccgg gatgcggtcc gaagacctgt aaacaggccg ggacttgccc accggatatt   120
attccaaagg tagaaggtgg tggacccaaa acgtgcaaac aaagcgggac gtgcccacca   180
gacgtggtgc ccaaagttga aggcggcggg ccgcaaacgt gtaaggccgc tggtacgtgc   240
ccgagtgatg ttattccgaa aattgaacat ggtggtccac agacctgtaa agcgaccggc   300
acatgcccgc cggatgtgat tcctaaagtg gaaggtggag gccctcgtac atgcaaggcg   360
gctggtacat gcccgcctga tgtcatcccg aaagtcgaag gtggcgggcc gcagacgtgc   420
aagttgaccg gcacctgtcc gccggatgtt atcccgaaag ttgagcatgg cggcccgtct   480
acgtgcaaag cagcagggac ctgtccgcct gatgtcgtaa acaaagtcga gggtggcggt   540
cccaaaacct gtaaacaagc gggaacttgt ccgtcagacg tcatcaacaa agtagaaggc   600
ggcggtccgt gtcgtctggt tgaacgcttc atgaccgaac tgagcgagta ttttgaggat   660
atccaaattg tccatatcaa tgccggcaaa tggaaaaaca tcgtagacaa attcaatatt   720
ctgaacgtgc cgaccctggt atatctgaaa gatggccgtg aggttggacg ccaaaacctg   780
attcgttcta aagaagagat tctgaaaaaa ctgaaagagc tgcaggagta a            831
<210> 31
<211> 387
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PADRE2x PfTrx 11-мер
<400> 31
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1              5                  10                 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
50 55 60
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr
85 90 95
Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu
100 105 110
His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp
115 120 125
Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala
130 135 140
Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro
145 150 155 160
Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys
165 170 175
Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro
180 185 190
Pro Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys
195 200 205
Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly
210 215 220
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Leu Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val
225 230 235 240
Asn Lys Ile Glu Gln Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr
260 265 270
Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Lys
275 280 285
Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser
290 295 300
Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp
305 310 315 320
Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val
325 330 335
Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser
340 345 350
Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly
355 360 365
Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly
370 375 380
Arg Gly Asp
385
<210> 32
<211> 1164
<213> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> PADRE2x PfTrx 11-мер, кодирующая
<400> 32
atgcgcggcg atggcgccaa attcgttgcg gcatggaccc tgaaagcggc agcaggccct 60
ggaccgggta tgattatcga gtatgacggc gaaatcgact tcaccaaagg tcgtgttgta 120
ctgtggttta gcattccggg atgcggtccg aagacgtgca aacaagcggg cacctgtccg   180
cccgatatta tcccgaaagt cgagggtggt gggccgaaaa cgtgcaaaca gtctggaaca   240
tgcccgccgg atgtggtgcc gaaagtggaa ggaggaggtc cgcaaacgtg caaagcagca   300
gggacctgtc cgtcagatgt gattccgaag attgaacatg gtgggccaca gacctgtaaa   360
gccaccggca cgtgtccgcc agacgtaatc cctaaagtcg aaggtggtgg ccctcgtacg   420
tgcaaagctg cgggcacatg ccctccggat gttattccga aagtagaagg cggcggccca   480
cgcacttgca aacagagtgg tacctgcccg ccggacgtcg tggataaagt tgaaggcggt   540
ggtcctcgca cgtgcaagca aagcggcaca tgcccacccg acgtaatcaa taaggtcgaa   600
ggcggtgggc catcgacttg taaggcggcc gggacttgtc cgccagatgt ggttaacaaa   660
gtggaaggcg gcggacctaa aacttgcaaa ctgagtggaa cctgtccgga ggatgtagtc   720
aacaaaatcg aacagggcgg cccgaaaacc tgtaaacaag caggcacctg tccatcggat   780
gtgattaaca aagttgaagg tggtggtccg agcacgtgta aagccgctgg tacatgccct   840
cccgatgtta tccccaaagt taaaggcggc ggtccgtgtc gtctggttga acgcttcatg   900
accgaactga gcgagtattt tgaggatatc caaattgtcc atatcaatgc cggcaaatgg   960
aaaaacatcg tagacaaatt caatattctg aacgtgccga ccctggtata tctgaaagat  1020
ggccgtgagg ttggacgcca aaacctgatt cgttctaaag aagagattct gaaaaaactg  1080
aaagagctgc aggagggtcc gggtccaggg gcgaagtttg tggccgcttg gacgttaaaa  1140
gccgctgcgg ggcgtgggga ctaa                                         1164
<210> 33
<211> 387
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> (RGD_PADRE)2x_PfTrx 11-мер
<400> 33
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1              5                  10                 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
50 55 60
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr
85 90 95
Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu
100 105 110
His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp
115 120 125
Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala
130 135 140
Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro
145 150 155 160
Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys
165 170 175
Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro
180 185 190
Pro Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys
195 200 205
Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly
210 215 220
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Leu Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val
225 230 235 240
Asn Lys Ile Glu Gln Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr
260 265 270
Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Lys
275 280 285
Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser
290 295 300
Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp
305 310 315 320
Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val
325 330 335
Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser
340 345 350
Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly
355 360 365
Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly
370 375 380
Arg Gly Asp
385
<210> 34
<211> 321
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PADRE2x PfTrx 8-мер
<400> 34
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
50 55 60
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr
85 90 95
Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu
100 105 110
His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp
115 120 125
Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala
130 135 140
Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro
145 150 155 160
Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys
165 170 175
Val Glu His Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro
180 185 190
Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys
195 200 205
Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly
210 215 220
Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr
225                230                235                240
Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn
245 250 255
Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu
260 265 270
Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu
275 280 285
Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly Pro Gly
290 295 300
Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Arg Gly
305                310                315                320
Asp
<210> 35
<211> 966
<213> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> PADRE2x PfTrx 8-мер, кодирующая
<400> 35
atgcgcggcg atggcgccaa attcgttgcg gcatggaccc tgaaagcggc agcaggccct    60
ggaccgggta tgattatcga gtatgacggc gaaatcgact tcaccaaagg tcgtgttgta   120
ctgtggttta gcattccggg atgcggtccg aagacctgta aacaggccgg gacttgccca   180
ccggatatta ttccaaaggt agaaggtggt ggacccaaaa cgtgcaaaca aagcgggacg   240
tgcccaccag acgtggtgcc caaagttgaa ggcggcgggc cgcaaacgtg taaggccgct   300
ggtacgtgcc cgagtgatgt tattccgaaa attgaacatg gtggtccaca gacctgtaaa   360
gcgaccggca catgcccgcc ggatgtgatt cctaaagtgg aaggtggagg ccctcgtaca   420
tgcaaggcgg ctggtacatg cccgcctgat gtcatcccga aagtcgaagg tggcgggccg   480
cagacgtgca agttgaccgg cacctgtccg ccggatgtta tcccgaaagt tgagcatggc   540
ggcccgtcta cgtgcaaagc agcagggacc tgtccgcctg atgtcgtaaa caaagtcgag   600
ggtggcggtc ccaaaacctg taaacaagcg ggaacttgtc cgtcagacgt catcaacaaa   660
gtagaaggcg gcggtccgtg tcgtctggtt gaacgcttca tgaccgaact gagcgagtat   720
tttgaggata tccaaattgt ccatatcaat gccggcaaat ggaaaaacat cgtagacaaa   780
ttcaatattc tgaacgtgcc gaccctggta tatctgaaag atggccgtga ggttggacgc   840
caaaacctga ttcgttctaa agaagagatt ctgaaaaaac tgaaagagct gcaggagggt   900
ccgggtccag gggcgaagtt tgtggccgct tggacgttaa aagccgctgc ggggcgtggg   960
gactaa                                                              966
<210> 36
<211> 356
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> RGD-PADRE-PfTrx(8-мер)-IMX
<400> 36
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1              5                  10                 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
50 55 60
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr
85 90 95
Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu
100 105 110
His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp
115 120 125
Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala
130 135 140
Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro
145 150 155 160
Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys
165 170 175
Val Glu His Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro
180 185 190
Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys
195 200 205
Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly
210 215 220
Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn
245 250 255
Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu
260 265 270
Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu
275 280 285
Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Asp Gly Ser Lys Lys Gln
290 295 300
Gly Asp Ala Asp Val Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val
305                310                315                320
Ser Asp Cys His Val Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile
325 330 335
Arg Lys Leu Phe Leu Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg
340 345 350
Arg Arg Arg Ser
355
<210> 37
<211> 1074
<213> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> RGD-PADRE-PfTrx(8-мер)-IMX, кодирующая
<400> 37
atgcgcggcg atggcgccaa attcgttgcg gcatggaccc tgaaagcggc agcaggccct    60
ggaccgggta tgattatcga gtatgacggc gaaatcgact tcaccaaagg tcgtgttgta   120
ctgtggttta gcattccggg atgcggtccg aagacctgta aacaggccgg gacttgccca   180
ccggatatta ttccaaaggt agaaggtggt ggacccaaaa cgtgcaaaca aagcgggacg   240
tgcccaccag acgtggtgcc caaagttgaa ggcggcgggc cgcaaacgtg taaggccgct   300
ggtacgtgcc cgagtgatgt tattccgaaa attgaacatg gtggtccaca gacctgtaaa   360
gcgaccggca catgcccgcc ggatgtgatt cctaaagtgg aaggtggagg ccctcgtaca   420
tgcaaggcgg ctggtacatg cccgcctgat gtcatcccga aagtcgaagg tggcgggccg   480
cagacgtgca agttgaccgg cacctgtccg ccggatgtta tcccgaaagt tgagcatggc   540
ggcccgtcta cgtgcaaagc agcagggacc tgtccgcctg atgtcgtaaa caaagtcgag   600
ggtggcggtc ccaaaacctg taaacaagcg ggaacttgtc cgtcagacgt catcaacaaa   660
gtagaaggcg gcggtccgtg tcgtctggtt gaacgcttca tgaccgaact gagcgagtat   720
tttgaggata tccaaattgt ccatatcaat gccggcaaat ggaaaaacat cgtagacaaa   780
ttcaatattc tgaacgtgcc gaccctggta tatctgaaag atggccgtga ggttggacgc   840
caaaacctga ttcgttctaa agaagagatt ctgaaaaaac tgaaagagct gcaggacgga   900
tccaagaaac agggcgatgc cgatgtatgc ggagaagtgg cgtatatcca gtctgtggtc   960
agtgattgcc atgtgccgac agcggaatta cgcactcttc tggaaattcg caaactgttt  1020
ctggaaattc agaaactgaa ggtagagggt cgtcgtcgtc gccgttcata ataa        1074
<210> 38
<211> 320
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> (RGD_PADRE)2x_PfTrx 8-мер
<400> 38
Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala
1              5                  10                 15
Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp
20 25 30
Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly
35 40 45
Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro
50 55 60
Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys
65                 70                 75                 80
Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys
85 90 95
Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His
100 105 110
Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val
115 120 125
Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly
130 135 140
Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln
145 150 155 160
Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val
165 170 175
Glu His Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro
180 185 190
Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln
195 200 205
Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly
210 215 220
Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe
225 230 235 240
Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile
245 250 255
Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys
260 265 270
Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu
275 280 285
Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly Pro Gly Ala
290 295 300
Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Arg Gly Asp
305 310 315 320
<210> 39
<211> 374
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> RGD-PADRE-PfTrx(8-мер)-PADRE-IMX
<400> 39
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
50 55 60
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr
85 90 95
Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu
100 105 110
His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp
115 120 125
Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala
130 135 140
Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro
145 150 155 160
Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys
165 170 175
Val Glu His Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro
180 185 190
Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys
195 200 205
Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly
210 215 220
Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr
225 230 235 240
Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn
245 250 255
Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu
260 265 270
Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu
275 280 285
Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Asp Gly Ser Gly Pro Gly
290 295 300
Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Ser Lys
305 310 315 320
Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser
325 330 335
Val Val Ser Asp Cys His Val Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu
340 345 350
Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly
355 360 365
Arg Arg Arg Arg Arg Ser
370
<210> 40
<211> 1128
<213> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> RGD-PADRE-PfTrx(8-мер)-PADRE-IMX, кодирующая
<400> 40
atgcgcggcg atggcgccaa attcgttgcg gcatggaccc tgaaagcggc agcaggccct    60
ggaccgggta tgattatcga gtatgacggc gaaatcgact tcaccaaagg tcgtgttgta   120
ctgtggttta gcattccggg atgcggtccg aagacctgta aacaggccgg gacttgccca   180
ccggatatta ttccaaaggt agaaggtggt ggacccaaaa cgtgcaaaca aagcgggacg   240
tgcccaccag acgtggtgcc caaagttgaa ggcggcgggc cgcaaacgtg taaggccgct   300
ggtacgtgcc cgagtgatgt tattccgaaa attgaacatg gtggtccaca gacctgtaaa   360
gcgaccggca catgcccgcc ggatgtgatt cctaaagtgg aaggtggagg ccctcgtaca   420
tgcaaggcgg ctggtacatg cccgcctgat gtcatcccga aagtcgaagg tggcgggccg   480
cagacgtgca agttgaccgg cacctgtccg ccggatgtta tcccgaaagt tgagcatggc   540
ggcccgtcta cgtgcaaagc agcagggacc tgtccgcctg atgtcgtaaa caaagtcgag   600
ggtggcggtc ccaaaacctg taaacaagcg ggaacttgtc cgtcagacgt catcaacaaa   660
gtagaaggcg gcggtccgtg tcgtctggtt gaacgcttca tgaccgaact gagcgagtat   720
tttgaggata tccaaattgt ccatatcaat gccggcaaat ggaaaaacat cgtagacaaa   780
ttcaatattc tgaacgtgcc gaccctggta tatctgaaag atggccgtga ggttggacgc   840
caaaacctga ttcgttctaa agaagagatt ctgaaaaaac tgaaagagct gcaggacgga   900
tccggtccag gggcgaagtt tgtggccgct tggacgttaa aagccgctgc cggatccaag   960
aaacagggcg atgccgatgt atgcggagaa gtggcgtata tccagtctgt ggtcagtgat  1020
tgccatgtgc cgacagcgga attacgcact cttctggaaa ttcgcaaact gtttctggaa  1080
attcagaaac tgaaggtaga gggtcgtcgt cgtcgccgtt cataataa               1128
<210> 41
<211> 399
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PfTrx 11-мер-IMX313T
<400> 41
Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val
1 5 10 15
Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln
20 25 30
Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly
35 40 45
Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro
50 55 60
Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys
65 70 75 80
Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys
85 90 95
Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly
100 105 110
Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val
115 120 125
Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly
130 135 140
Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg
145 150 155 160
Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Asn Lys Val
165 170 175
Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro
180 185 190
Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Leu
195 200 205
Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val Asn Lys Ile Glu Gln Gly Gly
210 215 220
Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn
225 230 235 240
Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys
245 250 255
Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Lys Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu
260 265 270
Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln
275 280 285
Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe
290 295 300
Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu
305 310 315 320
Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys
325 330 335
Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Ser Lys Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val
340 345 350
Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val Ser Asp Cys His Val
355 360 365
Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu
370 375 380
Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser
385                390                395
<210> 42
<211> 1203
<213> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> PfTrx 11-мер-IMX313T, кодирующая
<400> 42
atgattatcg agtatgatgg cgagattgac ttcaccaaag gtcgcgtcgt actgtggttt    60
agcattcccg gttgcggtcc gaagacgtgc aaacaagcgg gcacctgtcc gcccgatatt   120
atcccgaaag tcgagggtgg tgggccgaaa acgtgcaaac agtctggaac atgcccgccg   180
gatgtggtgc cgaaagtgga aggaggaggt ccgcaaacgt gcaaagcagc agggacctgt   240
ccgtcagatg tgattccgaa gattgaacat ggtgggccac agacctgtaa agccaccggc   300
acgtgtccgc cagacgtaat ccctaaagtc gaaggtggtg gccctcgtac gtgcaaagct   360
gcgggcacat gccctccgga tgttattccg aaagtagaag gcggcggccc acgcacttgc   420
aaacagagtg gtacctgccc gccggacgtc gtggataaag ttgaaggcgg tggtcctcgc   480
acgtgcaagc aaagcggcac atgcccaccc gacgtaatca ataaggtcga aggcggtggg   540
ccatcgactt gtaaggcggc cgggacttgt ccgccagatg tggttaacaa agtggaaggc   600
ggcggaccta aaacttgcaa actgagtgga acctgtccgg aggatgtagt caacaaaatc   660
gaacagggcg gcccgaaaac ctgtaaacaa gcaggcacct gtccatcgga tgtgattaac   720
aaagttgaag gtggtggtcc gagcacgtgt aaagccgctg gtacatgccc tcccgatgtt   780
atccccaaag ttaaaggcgg cggtccgtgc cgtcttgtgg aacggtttat gaccgagtta   840
tccgaatact tcgaggacat tcagatcgtg cacattaatg cgggcaaatg gaagaacatc   900
gttgacaaat tcaacatcct caatgtccct accctggttt acctcaaaga tggtcgcgaa   960
gttgggcgcc agaacttgat tcgcagcaaa gaagagattc tgaagaaact gaaagaattg  1020
caagaaggct cgaagaaaca gggcgatgcc gatgtatgcg gagaagtggc gtatatccag  1080
tctgtggtca gtgattgcca tgtgccgaca gcggaattac gcactcttct ggaaattcgc  1140
\aaactgtttc tggaaattca gaaactgaag gtagagggtc gtcgtcgtcg ccgttcataa  1200
taa                                                                1203
<210> 43
<211> 333
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PfTrx 8-мер-IMX313T
<400> 43
Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val
1              5                  10                 15
Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln
20 25 30
Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly
35 40 45
Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro
50 55 60
Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys
65                 70                 75                 80
Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys
85 90 95
Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly
100 105 110
Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val
115 120 125
Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly
130 135 140
Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu His Gly Gly Pro Ser
145 150 155 160
Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val
165 170 175
Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser
180 185 190
Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu
195 200 205
Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val
210 215 220
His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile
225 230 235 240
Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly
245 250 255
Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys
260 265 270
Glu Leu Gln Glu Gly Ser Lys Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val Cys Gly
275 280 285
Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val Ser Asp Cys His Val Pro Thr
290 295 300
Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu Glu Ile
305 310 315 320
Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser
325 330
<210> 44
<211> 1005
<213> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> PfTrx 8-мер-IMX313T, кодирующая
<400> 44
atgattatcg agtatgatgg cgagattgac ttcaccaaag gtcgcgtcgt actgtggttt    60
agcattcccg gttgcggtcc gaagacctgt aaacaggccg ggacttgccc accggatatt   120
attccaaagg tagaaggtgg tggacccaaa acgtgcaaac aaagcgggac gtgcccacca   180
gacgtggtgc ccaaagttga aggcggcggg ccgcaaacgt gtaaggccgc tggtacgtgc   240
ccgagtgatg ttattccgaa aattgaacat ggtggtccac agacctgtaa agcgaccggc   300
acatgcccgc cggatgtgat tcctaaagtg gaaggtggag gccctcgtac atgcaaggcg   360
gctggtacat gcccgcctga tgtcatcccg aaagtcgaag gtggcgggcc gcagacgtgc   420
aagttgaccg gcacctgtcc gccggatgtt atcccgaaag ttgagcatgg cggcccgtct   480
acgtgcaaag cagcagggac ctgtccgcct gatgtcgtaa acaaagtcga gggtggcggt   540
cccaaaacct gtaaacaagc gggaacttgt ccgtcagacg tcatcaacaa agtagaaggc   600
ggcggtccgt gccgtcttgt ggaacggttt atgaccgagt tatccgaata cttcgaggac   660
attcagatcg tgcacattaa tgcgggcaaa tggaagaaca tcgttgacaa attcaacatc   720
ctcaatgtcc ctaccctggt ttacctcaaa gatggtcgcg aagttgggcg ccagaacttg   780
attcgcagca aagaagagat tctgaagaaa ctgaaagaat tgcaagaagg ctcgaagaaa   840
cagggcgatg ccgatgtatg cggagaagtg gcgtatatcc agtctgtggt cagtgattgc   900
catgtgccga cagcggaatt acgcactctt ctggaaattc gcaaactgtt tctggaaatt   960
cagaaactga aggtagaggg tcgtcgtcgt cgccgttcat aataa                  1005
<210> 45
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Escherichia coli
<400> 45
Met Gly Asp Lys Ile Ile His Leu Thr Asp Asp Ser Phe Asp Thr Asp
1              5                  10                 15
Val Leu Lys Ala Asp Gly Ala Ile Leu Val Asp Phe Trp Ala Glu Trp
20 25 30
Cys Gly Pro Cys Lys Met Ile Ala Pro Ile Leu Asp Glu Ile Ala Asp
35 40 45
Glu Tyr Gln Gly Lys Leu Thr Val Ala Lys Leu Asn Ile Asp Gln Asn
50 55 60
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Tyr Gly Ile Arg Gly Ile Pro Thr Leu Leu
65                 70                 75                 80
Leu Phe Lys Asn Gly Glu Val Ala Ala Thr Lys Val Gly Ala Leu Ser
85 90 95
Lys Gly Gln Leu Lys Glu Phe Leu Asp Ala Asn Leu Ala
100 105
<210> 46
<211> 330
<213> ДНК
<213> Escherichia coli
<400> 46
atgggcgata aaattattca cctgactgac gacagttttg acacggatgt actcaaagcg    60
gacggggcga tcctcgtcga tttctgggca gagtggtgcg gtccgtgcaa aatgatcgcc   120
ccgattctgg atgaaatcgc tgacgaatat cagggcaaac tgaccgttgc aaaactgaac   180
atcgatcaaa accctggcac tgcgccgaaa tatggcatcc gtggtatccc gactctgctg   240
ctgttcaaaa acggtgaagt ggcggcaacc aaagtgggtg cactgtctaa aggtcagttg   300
aaagagttcc tcgacgctaa cctggcgtga                                    330
<210> 47
<211> 105
<212> БЕЛОК
<213> Mus musculus
<400> 47
Met Val Lys Leu Ile Glu Ser Lys Glu Ala Phe Gln Glu Ala Leu Ala
1              5                  10                 15
Ala Ala Gly Asp Lys Leu Val Val Val Asp Phe Ser Ala Thr Trp Cys
20 25 30
Gly Pro Cys Lys Met Ile Lys Pro Phe Phe His Ser Leu Cys Asp Lys
35 40 45
Tyr Ser Asn Val Val Phe Leu Glu Val Asp Val Asp Asp Cys Gln Asp
50 55 60
Val Ala Ala Asp Cys Glu Val Lys Cys Met Pro Thr Phe Gln Phe Tyr
65                 70                 75                 80
Lys Lys Gly Gln Lys Val Gly Glu Phe Ser Gly Ala Asn Lys Glu Lys
85 90 95
Leu Glu Ala Ser Ile Thr Glu Tyr Ala
100 105
<210> 48
<211> 318
<213> ДНК
<213> Mus musculus
<400> 48
atggtgaagc tgatcgagag caaggaagct tttcaggagg ccctggccgc cgcgggagac    60
aagcttgtcg tggtggactt ctctgctacg tggtgcggtc cgtgcaaaat gatcaagccc   120
ttcttccatt ccctctgtga caagtattcc aatgtggtgt tccttgaagt ggatgtggat   180
gactgccagg atgttgctgc agactgtgaa gtcaaatgca tgccgacctt ccagttttat   240
aaaaagggtc aaaaggtggg ggagttctcc ggtgctaaca aggaaaagct tgaagcctct   300
attactgaat atgcctaa                                                 318
<210> 49
<211> 105
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 49
Met Val Lys Gln Ile Glu Ser Lys Thr Ala Phe Gln Glu Ala Leu Asp
1              5                  10                 15
Ala Ala Gly Asp Lys Leu Val Val Val Asp Phe Ser Ala Thr Trp Cys
20 25 30
Gly Pro Cys Lys Met Ile Lys Pro Phe Phe His Ser Leu Ser Glu Lys
35 40 45
Tyr Ser Asn Val Ile Phe Leu Glu Val Asp Val Asp Asp Cys Gln Asp
50 55 60
Val Ala Ser Glu Cys Glu Val Lys Cys Met Pro Thr Phe Gln Phe Phe
65                 70                 75                 80
Lys Lys Gly Gln Lys Val Gly Glu Phe Ser Gly Ala Asn Lys Glu Lys
85 90 95
Leu Glu Ala Thr Ile Asn Glu Leu Val
100 105
<210> 50
<211> 318
<213> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 50
atggtgaagc agatcgagag caagactgct tttcaggaag ccttggacgc tgcaggtgat    60
aaacttgtag tagttgactt ctcagccacg tggtgtgggc cttgcaaaat gatcaagcct   120
ttctttcatt ccctctctga aaagtattcc aacgtgatat tccttgaagt agatgtggat   180
gactgtcagg atgttgcttc agagtgtgaa gtcaaatgca tgccaacatt ccagtttttt   240
aagaagggac aaaaggtggg tgaattttct ggagccaata aggaaaagct tgaagccacc   300
attaatgaat tagtctaa                                                 318
<210> 51
<211> 138
<212> БЕЛОК
<213> Methanosaeta thermophila
<400> 51
Met Asp Glu Leu Asp Glu Ile Arg Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Lys
1              5                  10                 15
Arg Glu Leu Ala Ala Arg Ser Gln Gly Thr Pro Thr Ile Glu Tyr Pro
20 25 30
Asp Arg Pro Val Leu Val Thr Asp Ser Ser Ile Asp Ala Gly Ile Arg
35 40 45
Gln Tyr Pro Val Phe Val Val Asp Cys Trp Ala Glu Trp Cys Gly Pro
50 55 60
Cys Arg Ala Ile Ala Pro Val Ile Asp Glu Met Ala Arg Glu Leu Lys
65                 70                 75                 80
Gly Arg Val Val Phe Gly Lys Leu Asn Val Asp Gln Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Ser Arg Lys Tyr Gly Ile Thr Ala Ile Pro Thr Leu Leu Val Phe Arg
100 105 110
Asn Gly Arg Leu Val Asp Arg Leu Val Gly Ala Tyr Pro Lys Gln Ile
115 120 125
Leu Met Ser Arg Val Arg Lys Tyr Leu Asp
130 135
<210> 52
<211> 417
<213> ДНК
<213> Methanosaeta thermophila
<400> 52
atggacgagc tggacgaaat ccgccgtaaa aaactggaag aactgaaacg tgaactggct    60
gcccgtagtc aaggaacacc gacgatcgag tatcctgacc gccctgtact ggttactgat   120
tctagcattg atgccgggat ccgccaatat cctgtctttg tggtggactg ttgggctgaa   180
tggtgcggtc cgtgtcgtgc tattgctccg gtgatcgatg aaatggcccg tgagctgaaa   240
ggacgtgtgg tattcgggaa actgaacgtg gaccaaaatc cgctgacgag tcgtaaatat   300
ggcattaccg ccatccctac actgctggtt ttccgtaacg gtcgtctggt tgatcgcctg   360
gttggtgctt atccgaaaca aattctgatg tctcgtgtcc gtaaatatct ggactag      417
<210> 53
<211> 100
<212> БЕЛОК
<213> Pyrococcus furiosus
<400> 53
Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val
1              5                  10                 15
Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu
20 25 30
Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val
35 40 45
His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile
50 55 60
Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly
65                 70                 75                 80
Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys
85 90 95
Glu Leu Gln Glu
100
<210> 54
<211> 303
<213> ДНК
<213> Pyrococcus furiosus
<400> 54
atgattatcg agtatgacgg cgaaatcgac ttcaccaaag gtcgtgttgt actgtggttt    60
agcattccgg gatgcggtcc gtgtcgtctg gttgaacgct tcatgaccga actgagcgag   120
tattttgagg atatccaaat tgtccatatc aatgccggca aatggaaaaa catcgtagac   180
aaattcaata ttctgaacgt gccgaccctg gtatatctga aagatggccg tgaggttgga   240
cgccaaaacc tgattcgttc taaagaagag attctgaaaa aactgaaaga gctgcaggag   300
taa                                                                 303
<210> 55
<211> 259
<212> БЕЛОК
<213> Pyrococcus furiosus
<400> 55
Met Arg Lys Ser Lys Glu Leu Thr Gly Ile Glu Ala His Ile Asn Asp
1              5                  10                 15
Asn Lys Lys Glu Glu Ser Asn Val Glu Tyr Phe Glu Lys Leu Arg Ser
20 25 30
Ala Leu Leu Asp Gly Val Asn Lys Gly Arg Ser Leu Leu Lys His Leu
35 40 45
Pro Val Thr Arg Ile Glu Gly Gln Ser Phe Arg Val Asp Ile Ile Lys
50 55 60
Phe Glu Asp Gly Val Arg Val Val Lys Gln Glu Tyr Lys Pro Ile Pro
65                 70                 75                 80
Leu Leu Lys Lys Lys Phe Tyr Val Gly Ile Arg Glu Leu Asn Asp Gly
85 90 95
Thr Tyr Asp Val Ser Ile Ala Thr Lys Ala Gly Glu Leu Leu Val Lys
100 105 110
Asp Glu Glu Ser Leu Val Ile Arg Glu Ile Leu Ser Thr Glu Gly Ile
115 120 125
Lys Lys Met Lys Leu Ser Ser Trp Asp Asn Pro Glu Glu Ala Leu Asn
130 135 140
Asp Leu Met Asn Ala Leu Gln Glu Ala Ser Asn Ala Ser Ala Gly Pro
145 150 155 160
Phe Gly Leu Ile Ile Asn Pro Lys Arg Tyr Ala Lys Leu Leu Lys Ile
165 170 175
Tyr Glu Lys Ser Gly Lys Met Leu Val Glu Val Leu Lys Glu Ile Phe
180 185 190
Arg Gly Gly Ile Ile Val Thr Leu Asn Ile Asp Glu Asn Lys Val Ile
195 200 205
Ile Phe Ala Asn Thr Pro Ala Val Leu Asp Val Val Val Gly Gln Asp
210 215 220
Val Thr Leu Gln Glu Leu Gly Pro Glu Gly Asp Asp Val Ala Phe Leu
225 230 235 240
Val Ser Glu Ala Ile Gly Ile Arg Ile Lys Asn Pro Glu Ala Ile Val
245 250 255
Val Leu Glu
<210> 56
<211> 174
<212> БЕЛОК
<213> Pyrococcus furiosus
<400> 56
Met Leu Ser Glu Arg Met Leu Lys Ala Leu Asn Asp Gln Leu Asn Arg
1 5 10 15
Glu Leu Tyr Ser Ala Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Ala Ala Tyr Phe Glu
20 25 30
Asp Leu Gly Leu Glu Gly Phe Ala Asn Trp Met Lys Ala Gln Ala Glu
35 40 45
Glu Glu Ile Gly His Ala Leu Arg Phe Tyr Asn Tyr Ile Tyr Asp Arg
50 55 60
Asn Gly Arg Val Glu Leu Asp Glu Ile Pro Lys Pro Pro Lys Glu Trp
65 70 75 80
Glu Ser Pro Leu Lys Ala Phe Glu Ala Ala Tyr Glu His Glu Lys Phe
85 90 95
Ile Ser Lys Ser Ile Tyr Glu Leu Ala Ala Leu Ala Glu Glu Glu Lys
100 105 110
Asp Tyr Ser Thr Arg Ala Phe Leu Glu Trp Phe Ile Asn Glu Gln Val
115 120 125
Glu Glu Glu Ala Ser Val Lys Lys Ile Leu Asp Lys Leu Lys Phe Ala
130 135 140
Lys Asp Ser Pro Gln Ile Leu Phe Met Leu Asp Lys Glu Leu Ser Ala
145 150 155 160
Arg Ala Pro Lys Leu Pro Gly Leu Leu Met Gln Gly Gly Glu
165 170
<210> 57
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> универсальный HLA-DR-реактивный эпитоп (PADRE)
<400> 57
Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210> 58
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> p2p30
<400> 58
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
1 5 10 15
<210> 59
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> p25
<400> 59
Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn Cys Thr Lys Ala Glu
1 5 10 15
Leu
<210> 60
<211> 55
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> последовательность олигомеризации
<400> 60
Lys Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln
1 5 10 15
Ser Val Val Ser Asp Cys His Val Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu
35 40 45
Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser
50 55
<210> 61
<211> 165
<213> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Последовательность, кодирующая полипептид олигомеризации IMX313T
<400> 61
aagaaacagg gcgatgccga tgtatgcgga gaagtggcgt atatccagtc tgtggtcagt 60
gattgccatg tgccgacagc ggaattacgc actcttctgg aaattcgcaa actgtttctg 120
gaaattcaga aactgaaggt agagggtcgt cgtcgtcgcc gttca 165
<210> 62
<211> 189
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> (RGD_PADRE)1x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3
<400> 62
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
50 55 60
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr
85 90 95
Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu
100 105 110
Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser
115 120 125
Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp
130 135 140
Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val
145 150 155 160
Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser
165 170 175
Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu
180 185
<210> 63
<211> 211
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> (RGD_PADRE)2x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3
<400> 63
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
50 55 60
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr
85 90 95
Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu
100 105 110
Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser
115 120 125
Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp
130 135 140
Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val
145 150 155 160
Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser
165 170 175
Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly
180 185 190
Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly
195 200 205
Arg Gly Asp
210
<210> 64
<211> 215
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> (RGD_p2p30)1x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3
<400> 64
Met Arg Gly Asp Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly
1 5 10 15
Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp
20 25 30
Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser His Leu Glu Gly Pro Gly Pro
35 40 45
Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg
50 55 60
Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys
65 70 75 80
Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly
85 90 95
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
100 105 110
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr
115 120 125
Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg
130 135 140
Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile
145 150 155 160
Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys
165 170 175
Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg
180 185 190
Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys
195 200 205
Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu
210 215
<210> 65
<211> 263
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> (RGD_p2p30)2x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3
<400> 65
Met Arg Gly Asp Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly
1 5 10 15
Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp
20 25 30
Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser His Leu Glu Gly Pro Gly Pro
35 40 45
Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg
50 55 60
Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys
65 70 75 80
Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly
85 90 95
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
100 105 110
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr
115 120 125
Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg
130 135 140
Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile
145 150 155 160
Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys
165 170 175
Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg
180 185 190
Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys
195 200 205
Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly Pro Gly Gln Tyr Ile Lys
210 215 220
Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn
225 230 235 240
Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser
245 250 255
His Leu Glu Gly Arg Gly Asp
260
<210> 66
<211> 193
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> (RGD_p25)1x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3
<400> 66
Met Arg Gly Asp Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn
1 5 10 15
Cys Thr Lys Ala Glu Leu Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr
20 25 30
Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser
35 40 45
Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro
50 55 60
Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys
65 70 75 80
Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly
85 90 95
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
100 105 110
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met
115 120 125
Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn
130 135 140
Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val
145 150 155 160
Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn
165 170 175
Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln
180 185 190
Glu
<210> 67
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> (RGD_p25)2x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3
<400> 67
Arg Gly Asp Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn Cys
1 5 10 15
Thr Lys Ala Glu Leu Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp
20 25 30
Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile
35 40 45
Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro
50 55 60
Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln
65 70 75 80
Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly
85 90 95
Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro
100 105 110
Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr
115 120 125
Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala
130 135 140
Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro
145 150 155 160
Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu
165 170 175
Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu
180 185 190
Gly Pro Gly Pro Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn
195 200 205
Cys Thr Lys Ala Glu Leu Gly Arg Gly Asp
210 215
<210> 68
<211> 211
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> (RGD_PADRE)2x_PfTrx_ВПЧ51_L2(20-38)3
<400> 68
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val
50 55 60
Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr
85 90 95
Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu
100 105 110
Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser
115 120 125
Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp
130 135 140
Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val
145 150 155 160
Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser
165 170 175
Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly
180 185 190
Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly
195 200 205
Arg Gly Asp
210
<210> 69
<211> 211
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> (RGD_PADRE)2x_PfTrx_ВПЧ31_L2(20-38)3
<400> 69
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile
50 55 60
Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr
85 90 95
Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu
100 105 110
His Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser
115 120 125
Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp
130 135 140
Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val
145 150 155 160
Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser
165 170 175
Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly
180 185 190
Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly
195 200 205
Arg Gly Asp
210
<210> 70
<211> 175
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> EcTrx ВПЧ16 L2(20-38)3
<400> 70
Met Gly Asp Lys Ile Ile His Leu Thr Asp Asp Ser Phe Asp Thr Asp
1 5 10 15
Val Leu Lys Ala Asp Gly Ala Ile Leu Val Asp Phe Trp Ala Glu Trp
20 25 30
Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile
35 40 45
Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly
50 55 60
Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys
65 70 75 80
Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val
85 90 95
Glu Gly Gly Gly Pro Cys Lys Met Ile Ala Pro Ile Leu Asp Glu Ile
100 105 110
Ala Asp Glu Tyr Gln Gly Lys Leu Thr Val Ala Lys Leu Asn Ile Asp
115 120 125
Gln Asn Pro Gly Thr Ala Pro Lys Tyr Gly Ile Arg Gly Ile Pro Thr
130 135 140
Leu Leu Leu Phe Lys Asn Gly Glu Val Ala Ala Thr Lys Val Gly Ala
145 150 155 160
Leu Ser Lys Gly Gln Leu Lys Glu Phe Leu Asp Ala Asn Leu Ala
165 170 175
<210> 71
<211> 189
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PADRE1x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3
<400> 71
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
50 55 60
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr
85 90 95
Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu
100 105 110
Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser
115 120 125
Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp
130 135 140
Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val
145 150 155 160
Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser
165 170 175
Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu
180 185
<210> 72
<211> 211
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PADRE2x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3
<400> 72
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
50 55 60
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr
85 90 95
Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu
100 105 110
Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser
115 120 125
Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp
130 135 140
Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val
145 150 155 160
Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser
165 170 175
Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly
180 185 190
Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly
195 200 205
Arg Gly Asp
210
<210> 73
<211> 215
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> p2p301x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3
<400> 73
Met Arg Gly Asp Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly
1 5 10 15
Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp
20 25 30
Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser His Leu Glu Gly Pro Gly Pro
35 40 45
Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg
50 55 60
Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys
65 70 75 80
Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly
85 90 95
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
100 105 110
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr
115 120 125
Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg
130 135 140
Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile
145 150 155 160
Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys
165 170 175
Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg
180 185 190
Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys
195 200 205
Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu
210 215
<210> 74
<211> 263
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> p2p302x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3
<400> 74
Met Arg Gly Asp Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly
1 5 10 15
Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp
20 25 30
Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser His Leu Glu Gly Pro Gly Pro
35 40 45
Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg
50 55 60
Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys
65 70 75 80
Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly
85 90 95
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
100 105 110
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr
115 120 125
Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg
130 135 140
Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile
145 150 155 160
Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys
165 170 175
Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg
180 185 190
Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys
195 200 205
Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly Pro Gly Gln Tyr Ile Lys
210 215 220
Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn
225 230 235 240
Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser
245 250 255
His Leu Glu Gly Arg Gly Asp
260
<210> 75
<211> 193
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> p251x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3
<400> 75
Met Arg Gly Asp Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn
1 5 10 15
Cys Thr Lys Ala Glu Leu Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr
20 25 30
Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser
35 40 45
Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro
50 55 60
Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys
65 70 75 80
Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly
85 90 95
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
100 105 110
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met
115 120 125
Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn
130 135 140
Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val
145 150 155 160
Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn
165 170 175
Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln
180 185 190
Glu
<210> 76
<211> 219
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> p252x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3
<400> 76
Met Arg Gly Asp Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn
1 5 10 15
Cys Thr Lys Ala Glu Leu Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr
20 25 30
Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser
35 40 45
Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro
50 55 60
Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys
65 70 75 80
Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly
85 90 95
Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile
100 105 110
Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met
115 120 125
Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn
130 135 140
Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val
145 150 155 160
Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn
165 170 175
Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln
180 185 190
Glu Gly Pro Gly Pro Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu
195 200 205
Asn Cys Thr Lys Ala Glu Leu Gly Arg Gly Asp
210 215
<210> 77
<211> 211
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PADRE2x PfTrx ВПЧ31 L2(20-38)3
<400> 77
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile
50 55 60
Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr
85 90 95
Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu
100 105 110
His Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser
115 120 125
Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp
130 135 140
Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val
145 150 155 160
Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser
165 170 175
Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly
180 185 190
Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly
195 200 205
Arg Gly Asp
210
<210> 78
<211> 211
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PADRE2x PfTrx ВПЧ51 L2(20-38)3
<400> 78
Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile
20 25 30
Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys
35 40 45
Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val
50 55 60
Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr
65 70 75 80
Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr
85 90 95
Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu
100 105 110
Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser
115 120 125
Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp
130 135 140
Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val
145 150 155 160
Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser
165 170 175
Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly
180 185 190
Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly
195 200 205
Arg Gly Asp
210
<210> 79
<211> 223
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3-IMX313T
<400> 79
Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val
1 5 10 15
Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln
20 25 30
Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly
35 40 45
Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro
50 55 60
Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys
65 70 75 80
Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu
85 90 95
Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln
100 105 110
Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe
115 120 125
Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu
130 135 140
Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys
145 150 155 160
Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Ser Lys Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val
165 170 175
Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val Ser Asp Cys His Val
180 185 190
Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu
195 200 205
Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser
210 215 220
<210> 80
<211> 179
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)1-IMX313T
<400> 80
Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val
1 5 10 15
Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln
20 25 30
Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly
35 40 45
Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe
50 55 60
Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile
65 70 75 80
Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys
85 90 95
Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu
100 105 110
Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Ser Lys Lys Gln Gly
115 120 125
Asp Ala Asp Val Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val Ser
130 135 140
Asp Cys His Val Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile Arg
145 150 155 160
Lys Leu Phe Leu Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg Arg
165 170 175
Arg Arg Ser
<210> 81
<211> 127
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<220>
<223> ВПЧ16 L2(20-38)3-IMX313T
<400> 81
Met Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp
1 5 10 15
Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala
20 25 30
Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro
35 40 45
Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys
50 55 60
Val Glu Gly Gly Gly Pro Gly Ser Lys Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val
65 70 75 80
Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val Ser Asp Cys His Val
85 90 95
Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu
100 105 110
Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser
115 120 125
<210> 82
<211> 5196
<213> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> экспрессионный вектор для TfTrx8-мер-IMX3T3
<400> 82
cgctgttttg gcggatgaga gaagattttc agcctgatac agattaaatc agaacgcaga    60
agcggtctga taaaacagaa tttgcctggc ggcagtagcg cggtggtccc acctgacccc   120
atgccgaact cagaagtgaa acgccgtagc gccgatggta gtgtggggtc tccccatgcg   180
agagtaggga actgccaggc atcaaataaa acgaaaggct cagtcgaaag actgggcctt   240
tcgttttatc tgttgtttgt cggtgaacgc tctcctgagt aggacaaatc cgccgggagc   300
ggatttgaac gttgcgaagc aacggcccgg agggtggcgg gcaggacgcc cgccataaac   360
tgccaggcat caaattaagc agaaggccat cctgacggat ggcctttttg cgtttctaca   420
aactcttact agttacgtag atcgtaatct aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac   480
tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg   540
ataatctcat gaccaaacga tcgccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc   600
ccttaataag atgatcttct tgagatcgtt ttggtctgcg cgtaatctct tgctctgaaa   660
acgaaaaaac cgccttgcag ggcggttttt cgaaggttct ctgagctacc aactctttga   720
accgaggtaa ctggcttgga ggagcgcagt caccaaaact tgtcctttca gtttagcctt   780
aaccggcgca tgacttcaag actaactcct ctaaatcaat taccagtggc tgctgccagt   840
ggtgcttttg catgtctttc cgggttggac tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag   900
cggtcggact gaacgggggg ttcgtgcata cagtccagct tggagcgaac tgcctacccg   960
gaactgagtg tcaggcgtgg aatgagacaa acgcggccat aacagcggaa tgacaccggt  1020
aaaccgaaag gcaggaacag gagagcgcac gagggagccg ccagggggaa acgcctggta  1080
tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacca ctgatttgag cgtcagattt cgtgatgctt  1140
gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgg ctttgccgcg gccctctcac ttccctgtta  1200
agtatcttcc tggcatcttc caggaaatct ccgccccgtt cgtaagccat ttccgctcgc  1260
cgcagtcgaa cgaccgagcg tagcgagtca gtgagcgagg aagcggaata tatcctgtat  1320
cacatattct gctgacgcac cggtgcagcc ttttttctcc tgccacatga agcacttcac  1380
tgacaccctc atcagtgcca acatagtaag ccagtataca ctccgctagc gctgaggtct  1440
gcctcgtgaa gaaggtgttg ctgactcata ccaggcctga atcgcccggg catcatccag  1500
ccagaaagtg agggagccac ggttgatgag agctttgttg taggtggacc agttggtgat  1560
tttgaacttt tgctttgcca cggaacggtc tgcgttgtcg ggaagatgcc ggcgccatag  1620
tggcgcgtga tctgatcctt caactcagca aaagttcgat ttattcaaca aagccacgtt  1680
gtgtctcaaa atctctgatg ttacattgca caagataaaa atatatcatc atgaacaata  1740
aaactgtctg cttacataaa cagtaataca aggggtgtta tgagccatat tcaacgggaa  1800
acgtcttgca gcaggccgcg attaaattcc aacatggatg ctgatttata tgggtataaa  1860
tgggctcgcg ataatgtcgg gcaatcaggt gcgacaatct atcgattgta tgggaagccc  1920
gatgcgccag agttgtttct gaaacatggc aaaggtagcg ttgccaatga tgttacagat  1980
gagatggtca gactaaactg gctgacggaa tttatgcctc ttccgaccat caagcatttt  2040
atccgtactc ctgatgatgc atggttactc accactgcga tcccagggaa aacagcattc  2100
caggtattag aagaatatcc ggattcaggt gaaaatattg ttgatgcgct ggcagtgttc  2160
ctgcgccggt tgcattcgat tcctgtttgt aattgtcctt ttaactctga tcgcgtattt  2220
cgtctcgctc aggcgcaatc acgaatgaat aacggtttgg ttgatgcgag tgattttgat  2280
gacgagcgta atggctggcc tgttgaacaa gtctggaaag aaatgcataa acttttgcca  2340
ttctcaccgg attcagtcgt cactcatggt gatttctcac ttgataacct tatttttgac  2400
gaggggaaat taataggttg tattgatgtt ggacgagtcg gaatcgcaga ccgataccag  2460
gatcttgcca tcctatggaa ctgcctcggt gagttttctc cttcattaca gaaacggctt  2520
tttcaaaaat atggtattga taatcctgat atgaataaat tgcagtttca tttgatgctc  2580
gatgagtttt tctaatcaga attggttaat tggttgtaac actggcagag cattacgctg  2640
acttgacggg acggccatag tggcctttgt tgaataaata aagcctgggg tgcctaatga  2700
gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc gggaaacctg  2760
tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg  2820
cgccagggtg gtttttcttt tcaccagtga gacgggcaac agctgattgc ccttcaccgc  2880
ctggccctga gagagttgca gcaagcggtc cacgctggtt tgccccagca ggcgaaaatc  2940
ctgtttgatg gtggttaacg gcgggatata acatgagctg tcttcggtat cgtcgtatcc  3000
cactaccgag atatccgcac caacgcgcag cccggactcg gtaatggcgc gcattgcgcc  3060
cagcgccatc tgatcgttgg caaccagcat cgcagtggga acgatgccct cattcagcat  3120
ttgcatggtt tgttgaaaac cggacatggc actccagtcg ccttcccgtt ccgctatcgg  3180
ctgaatttga ttgcgagtga gatatttatg ccagccagcc agacgcagac gcgccgagac  3240
agaacttaat gggcccgcta acagcgcgat ttgctggtga cccaatgcga ccagatgctc  3300
cacgcccagt cgcgtaccgt cttcatggga gaaaataata ctgttgatgg gtgtctggtc  3360
agagacatca agaaataacg ccggaacatt agtgcaggca gcttccacag caatggcatc  3420
ctggtcatcc agcggatagt taatgatcag cccactgacg cgttgcgcga gaagattgtg  3480
caccgccgct ttacaggctt cgacgccgct tcgttctacc atcgacacca ccacgctggc  3540
acccagttga tcggcgcgag atttaatcgc cgcgacaatt tgcgacggcg cgtgcagggc  3600
cagactggag gtggcaacgc caatcagcaa cgactgtttg cccgccagtt gttgtgccac  3660
gcggttggga atgtaattca gctccgccat cgccgcttcc actttttccc gcgttttcgc  3720
agaaacgtgg ctggcctggt tcaccacgcg ggaaacggtc tgataagaga caccggcata  3780
ctctgcgaca tcgtataacg ttactggttt cacattcacc accctgaatt gactctcttc  3840
cgggcgctat catgccatac cgcgaaaggt tttgcgccat tcgatggtgt caacgtaaat  3900
gcatgccgct tcgccttccg gccaccagaa tagcctgcga ttcaacccct tcttcgatct  3960
gttttgctac ccgttgtagc ggaattcggt acctgtacaa gggcctcgtg atacgcctcg  4020
agatttttat aggttaatgt catgataata atggtttctt agacgtctgc gccgacatca  4080
taacggttct ggcaaatatt ctgaaatgag ctgttgacaa ttaatcatcg gctcgtataa  4140
tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaga tatcatatga ttattgagta  4200
cgatggcgag attgacttta ccaagggccg tgtggtgctg tggtttagca ttccgggttg  4260
cggtccgaag acctgcaaac aggcgggtac ctgcccgccg gacatcattc cgaaagtgga  4320
aggtggcggt ccgaagacct gcaaacaaag cggtacctgc ccgccggatg ttgttccgaa  4380
agtggagggc ggtggcccgc aaacctgcaa ggcggcgggt acctgcccga gcgacgttat  4440
cccgaagatt gaacatggtg gcccgcagac ctgcaaggcg accggcacct gcccgccgga  4500
cgtgatcccg aaggttgagg gtggcggtcc gcgtacctgc aaagcggcgg gcacctgccc  4560
gccggatgtg attccgaagg ttgaaggcgg tggccctcag acttgcaaac tgactggcac  4620
ttgcccgccg gacgttattc cgaaggttga gcatggtggc ccgagcacct gcaaagctgc  4680
tggaacttgc ccgccggatg tggttaacaa ggttgaaggt ggcggtccga aaacctgcaa  4740
gcaagcgggc acctgcccga gcgatgtgat taacaaagtt gaaggcggtg gcccgtgccg  4800
tctggttgag cgtttcatga ccgagctgag cgaatacttt gaggacatcc aaattgtgca  4860
catcaacgcg ggcaagtgga aaaacatcgt tgacaagttc aacattctga acgtgccgac  4920
cctggtttat ctgaaagatg gtcgtgaggt gggtcgtcag aacctgatcc gtagcaaaga  4980
ggagattctg aagaaactga aagaactgca ggaaggtagc aagaagcaag gcgacgcgga  5040
tgtgtgcggt gaagttgcgt acatccaaag cgtggttagc gattgccacg ttccgaccgc  5100
ggaactgcgt accctgctgg agattcgtaa gctgttcctg gaaatccaaa aactgaaggt  5160
tgaaggtcgt cgtcgtcgtc gtagctaata aggatc                            5196
<---