Физические свойства пищи как фактор постнатального морфогенеза печени (экспериментально-морфологическое исследование)

функциональных состояния или болезни. По данным наших исследований, наиболее высокий уровень заболеваемости среди сельских дошкольников Ставропольского края приходился на болезни органов дыхания (класс Х, X) - 25,3%, в том числе на первом месте хроническая патология ЛОР-органов (хронический аденоидит 13,5%, хронический тонзиллит 12,6%, синусит 9,3%). Высокая ЛОР-заболеваемость дошкольников является одной из причин формирования группы часто и длительно болеющих детей (ЧБД).

Таблица 2

Распределение сельских дошкольников Ставропольского края по группам здоровья

Возраст (годы) I группа здоровья II группа здоровья III группа здоровья Всего

абс. % абс. % абс. % абс.

3 35 16,4 143 66,8 36 16,8 214

4 27 9,8 163 59,1 86 31,1 276

5 11 4,9 126 57,1 84 38,0 221

6 17 7,8 105 47,9 97 44,2 219

Болезни органов пищеварения (класс XI, К) составляли 17,6% общей заболеваемости. Кариес выявлялся в 29,6%, чаще всего встречающийся в возрасте в 5-6 лет, в некоторых случаях имело место множественное поражение зубов. Дискинезию желчевыводящих путей имели 11,0%, гастрит и/или гастродуоденит - 5,0% дошкольников. Болезни костно-мышечной системы и соединительной ткани (класс XIII, М) находились на третьем месте (11,0%). С возрастом ежегодно увеличивалось количество детей с нарушениями осанки, достигая максимума к 6 годам (27,4%). Плоскостопие, плоско-вальгусные и уплощённые стопы диагностировались у 11,0% детей 5-7 лет. Каждый четвертый ребёнок, посещающий детский сад, имел неврологические проблемы. В их число входят: минимальная церебральная дисфункция - 13%, резидуальная энцефалопатия - 7%, энурез - 4%,. Патология нервной системы преобладала над другими в возрасте 2-4 года. Часто встречающимися заболеваниями в каждой возрастной группе были аллергические состояния (15,3%), в структуре которых значительную часть занимала пищевая аллергия.

Структура заболеваемости сельских детей края значительно отличалась от таковой у городских учащихся. Так, первое место у городских дошкольников [2] занимали болезни костно-мышечной системы и соединительной ткани (класс XIII, М) - 17,2%, второе место - болезни органов дыхания (класс X, I) - 16,3% общей заболеваемости, третье - болезни пищеварительной системы (класс XI, К) - 19,4%. Комплексная оценка физического развития и состояния здоровья сельских дошкольников показала, что 2/3 их развиваются гармонично. Состояние здоровья дошкольников сельских образовательных учреждений не может быть признано удовлетворительным: только каждый 5 ребенок приходит в школу здоровым, почти 40% имеют хроническую патологию. В структуре заболеваемости первые три места занимает патология органов дыхания, пищеварения и опорно-двигательного аппарата, нагрузка на которые в течение обучения очень велика.

Причинами этого являются возросшая социализация, напряжённое течение адаптационных процессов на фоне незавершённого иммуногенеза, физиологической гиперплазии лимфоидной ткани, частой повышенной аллергизации, это говорит о необходимости разработки профилактических мероприятий, предупреждающих хронизацию функциональных отклонений в состоянии здоровья детей дошкольного возраста в период посещения ими детских организованных коллективов.

Литература

1. Доскин ВА.// Морфо-функциональные константы детского организма // Доскин В. А. и др.: Спр-к. М.: Медицина, 1997. 288 с.

2. Евсигнеева Ю.В. // Физическое развитие детей дошкольного возраста г. Ставрополя.Метод. реком. Ставрополь, 2002.23 с.

3. Кучма В.Р. Изучение влияния образа жизни на физическое развитие и состояние здоровья школьников / Кучма В.Р., Суханова Н.Н., Кашечкина Н.А., Каретина С.А. // Гигиена и санитария. 1996. № 1. С.27-29.

4. Мазурин А.В., Воронцов ИМ. // Пропедевтика детских болезней. СПб.: ИКФ «Фолиант», 1999.

5. Максимова Т.М. Комплексная индивидуальная оценка физического развития детей 1-11 лет по единым межгрупповым стандартам / Максимова Т.М., Янина В.Н., Сеглениеце К.Б. и др. // Педиатрия. 1990. №3. С. 56-60.

6. Перевощикова Н.К./ Здоровье детей и реабилитация в условиях дошкольных учреждений: Инф.-метод. письмо. Кемерово, 1996.

УДК 591.436.2: 599.3234

ФИЗИЧЕСКИЕ СВОЙСІВА ПИЩИ КАК ФАКТОР ПОСTHATAЛЬHОГО МОРФОГЕНЕЗА ПЕЧЕНИ

В.Ф. СЫЧ, T.H КУЗНЕЦОВА, А.В. МЯСНИКОВА*

Изучали морфогенез гепатоцитов печени белых крыс в условиях длительного питания диспергированной пищей, вызывающего ги-потрофические изменения гепатоцитов, которые выражаются в уменьшении объема их ядра и цитоплазмы, отмечаемых со 180 по 270 день постнатального онтогенеза.

Ключевые слова: диспергированная пища, гепатоцит, печень.

Исследования последних лет [4,5,7-12] обращают внимание на то, что изменение физических свойств пищи путем ее предварительного измельчения (диспергации) оказывает влияние на морфогенез стенки пищеварительного канала. Структурным преобразованиям подвергаются, в частности, мышечная и слизистая оболочки пищевода [8], тощей [9], и ободочной кишок [11], а также желудка [4,12]. Упомянутые структуры непосредственно воспринимают механические и химические воздействия химуса, поэтому их морфологическая реакция на изменение физических свойств диспергированной пищи исходно представляется более ожидаемой, чем реакция других органов пищеварительной системы, например, застенных пищеварительных желез [10]. ^^графические особенности печени, поджелудочной и слюнных желез исключают какие-либо непосредственные влияния на них химуса, и их вовлечение в ответную реакцию организма на питание диспергированной пищей едва ли возможно предположить. Среди застенных пищеварительных желез наибольший интерес представляет печень, т.к. она является самой крупной и многофункциональной железой пищеварительной системы, неотъемлемым звеном многих процессов жизнедеятельности. Участвуя в белковом, углеводном, жировом и других обменах веществ [1,3], печень отличается низким порогом чувствительности к изменениям химических свойств пищи [13-15].

Цель работы - изучение морфологических особенностей постнатального морфогенеза печени белых крыс в условиях длительного питания исключительно диспергированной пищей.

Материалы и методы. Исследование проводилось на 80 самцах белых неинбредных крыс. На 21 сутки постнатального онтогенеза животные были произвольно разделены на опытную и контрольную группы. Животные контрольной группы питались естественной для грызунов пищей, основу которой составляли цельные зерна злаков, крупно нарезанные овощи. Животным опытной группы давали пищу того же состава, но после тщательного механического измельчения с помощью мельницы (зерно), мясорубки и терки (овощи). Рацион питания составляли с учетом пищевой ценности и сбалансированности всех компонентов. Животным обеспечивался свободный доступ к воде и пище в любое время суток. Другие условия содержания крыс были идентичными.

Непосредственным объектом проведенного исследования послужила печень, участки которой брали у контрольных и опытных животных на 21, 120, 180 и 270 сутки. Все болезненные манипуляции с животными проводились согласно приказу №755 от 12 августа 1977г. по МЗ СССР «О гуманном обращении с экспериментальными животными». Кусочки печени, размером 57 мм, фиксировали в 10% нейтральном формалине, после чего заливали в парафин. Изготовленные с помощью санного микротома МПС-2 срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином. Морфометрию структур печени проводили с помощью компьютерной видеотестсистемы, включающей световой микроскоп «Carl Zeiss», цифровую фотокамеру «Canon» и компьютерную программу денситофотометрии «Mecos-C1». При изучении гистопрепаратов измерялась площадь сечения ядер и цитоплазмы гепатоцитов, а также определялось их ядерно-цитоплазматическое отношение. Полученные морфометрические данные подвергались статистической обработке с использованием критерия Стьюдента, а также с применением компьютерных программ обработки статистических данных «SPSS 13.0 for Windows», «Statistica 6».

Результаты. В период с 21 по 120 сутки постнатального онтогенеза у животных контрольной и опытной групп происходит увеличение среднего значения площади сечения, а следовательно, и объема ядер гепатоцитов. !ак, если на 21 сутки этот показатель составляет 26,50±0,27 мкм2, то к 120 суткам он возрастает до 29,72±1,18 мкм2 (р<0,05) у животных контрольной группы и до

* 432063 г. Ульяновск, ул. Архитектора Ливчака, 2 Ульяновский государственный университет, ИМЭиФК, кафедра общей биологии

28,29±1,3 мкм (р<0,05) у животных опытной группы (рис. 1). При этом различия между показателями 120-суточных животных опытной и контрольной групп несущественны (р>0,05).

Рис.1. Показатели средней площади сечения ядер гепатоцитов (мкм2) 21-,

120-, 180-, 270-суточных животных контрольной и опытной групп

В период с 21 по 120 сутки увеличивается объем цитоплазмы гепатоцитов, о котором судили по увеличению среднего значения площади сечения цитоплазмы: если на 21 сутки площадь сечения цитоплазмы составляет 87,12±0,40 мкм2, то к 120 суткам она увеличивается до 128,27±2,94 мкм2 (р<0,05) у контрольных животных и до 135,60±2,57 мкм2 (р<0,05) у животных опытной группы (рис. 2).

Рис.2. Гепатоциты печени 120-суточных особей контрольной (а) и опытной (б) групп. Окраска гематоксилин-эозином, x1000

Рис.4. Гепатоциты печени 270-суточных животных контрольной (а) и опытной (б) групп. Окраска гематоксилин-эозином, х1000

Уменьшается объем ядер гепатоцитов: значения средней площади сечения составляют у 270-суточных контрольных и опытных животных соответственно 31,61±0,72 мкм2 и 28,33±0,35 мкм2. Уменьшение объема ядер сопряжено с уменьшением объема цитоплазмы гепатоцитов: площадь ее сечения уменьшается до

134,61±0,72 мкм2 у 270-суточных контрольных животных и до 102,08±0,61 мкм2 у 270-суточных опытных животных (табл.).

Наблюдаемая атрофия гепатоцитов 270-суточных особей контрольной группы может быть следствием неизбежных возрастных изменений, связанных со снижением функциональной активности гепатоцитов [2]. У опытных животных, питающихся диспергированной пищей, атрофические изменения гепатоцитов выражены значительнее, чем у контрольных животных, что указывает на более интенсивное протекание возрастной инволюции печени как органа, взаимосвязанной со снижением в ней уровня обменных процессов.

Гепатоциты 21-суточных животных характеризуются наиболее низкой степенью дифференцированности, о чем свидетельствует высокое значение их ядерно-цитоплазматического отношения (30,23±0,2%). Интенсивно протекающая дифференциация гепатоцитов в последующий период (21-120 сутки) приводит к значительному (примерно в 1,5 раза) уменьшению ядерноцитоплазматического отношения (рис. 5) у животных как контрольной (21,96±2,08%), так и опытной (20,17±0,58%), групп.

Таблица

На 120-180 сутки наблюдается наиболее интенсивный рост гепатоцитов, который выражается в значительном увеличении площади сечения (объема) их ядер и цитоплазмы. Однако у животных опытной группы, питающихся диспергированной пищей, рост гепатоцитов в этот период замедляется: у 180-суточных контрольных животных площадь сечения ядер гепатоцитов достигает 40±1,29 мкм2 (р<0,05), у 180-суточных животных опытной группы - 32,44±0,38 мкм2 (р<0,05). Спад интенсивности роста в период со 120 по 180 сутки характерен для цитоплазмы гепатоцитов животных опытной группы (рис.3), у которых она растет до 195,16±6,96 мкм2, тогда как у контрольных 180-суточных животных достигает 231,92±3,27 мкм2 (р<0,05).

Морфологические характеристики гепатоцитов белых крыс в норме

Груп™ Показа- \ Возраст животных

21 сутки 120 сутки 180 сутки 270 сутки

Контроль Опыт Контроль Опыт Контроль Опыт

S'rn. (мкм2 ) ядер гепато-цитов 26,50±0,27 29,72±1,18+ 28,29±1,3 40,96±1,29+ 32,44±0,38*+ 31,64±0,72+ 28,33±0,35*+

S сеч. (мкм2 ) цитоплазмы гепато-цитов 87,12±0,40 128,27±2,94+ 135,60± 2,57 231,92±3,27+ 195,16±6,96*+ 134,61±0,72+ 102,08±0,61*+

ЯЦО гепато- цитов (%) 30,23±0,24 21,96±2,08+ 20,17±0,58 18,1±0,73 17,96±0,45+ 24,16± 0,4+ 27,72±0,23*+

т

1S0

Примечание: * - достоверное отличие по сравнению с контрольным значением (р<0,05), + - достоверное отличие по сравнению с предыдущим значением (р<0,05), 8-сеч. - площадь сечения, ЯЦО - ядерно-цитоплазматическое отношение

Наиболее дифференцированными оказываются гепатоциты 180-суточных животных: показатели их ядерно-

цитоплазматического отношения у животных контрольной и опытной групп составляют соответственно 18,1±0,73 % и 17,96±0,45%.

Рис.3. Показатели средней площади сечения цитоплазмы гепатоцитов (мкм2) 21-, 120-, 180-, 270-суточных животных контрольной (контроль) и опытной (опыт) групп

Уменьшение объема гепатоцитов животных опытной группы взаимосвязано со спадом их функциональной активности и уровня биосинтетических процессов. Различия в объеме ядер гепатоцитов между 180-суточными животными опытной и контрольной групп, позволяют предположить также замедление развития у опытных животных полиплоидии (дву- и многоядерности) гепатоцитов, обычно свойственной этому возрастному периоду [6].

В период со 180 по 270 сутки проявляется обратная тенденция роста гепатоцитов у животных обеих экспериментальных групп: идет уменьшение объема гепатоцитов, при этом у опытных животных атрофические изменения более выражены (рис. 4).

З5

30

25

20

15

10

5

0

Рис.5. Показатели ядерно-цитоплазматического отношения гепатоцитов (%) 21-, 120-, 180-, 270-суточных животных контрольной (контроль) и опытной (опыт) групп

б

б

Торможение роста и наступление атрофических изменений гепатоцитов в период со 180 по 270 сутки проявляется в уменьшении объема их цитоплазмы, обусловливающем, в свою очередь, уменьшение ядерно-цитоплазматического отношения. При этом степень дифференцированности гепатоцитов, обратно пропорциональная значению их ядерно-цитоплазматического отношения, у 270-суточных опытных животных оказывается ниже (р<0,05) как по отношению к показателю 180-суточных опытных животных (17,96±0,45%), так и к показателю 270-суточных животных контрольной группы (24,16±0,4%).

Заключение. Изложенные результаты исследования свидетельствуют о том, что длительное питание исключительно диспергированной пищей обусловливает отклонения морфогенеза печени белых крыс, проявляющиеся на 180-е сутки постнаталь-ного онтогенеза в гипотрофии ее основных клеток - гепатоцитов. Последняя проявляется в уменьшении (р<0,05) в равной степени объемов ядер и цитоплазмы гепатоцитов 180-суточных опытных животных по отношению к животным контрольной группы, при котором степень дифференцированности гепатоцитов не претерпевает существенных изменений.

В последующий период (180-270 сутки) питание диспергированной пищей вызывает усиление возрастных атрофических изменений гепатоцитов, сопровождающихся не только уменьшением объемов их ядер и цитоплазмы, но и снижением степени дифференцированности гепатоцитов. С учетом того, что опытные животные ежесуточно потребляют пищи в 1,6 раза больше, чем контрольные животные того же возраста, можно предположить, что питание диспергированной пищей вызывает системные изменения в организме, при которых имеют место гипофункцио-нальные изменения печени, подтверждаемые гипотрофией (атрофией) клеток ее паренхимы, и нарушение обмена веществ: возникающее переедание ведет не к увеличению, а к уменьшению массы тела, например, у 120-суточных опытных животных на 40%., а у 270-суточных - на 26%, по отношению к контрольным.

Литература

1. Блюгер А.Ф. Основы гепатологии. Рига: Звайгзне, 1975.

470 с.

2. Жукова Н.М., Лебедева Е.А. // Вопросы питания стареющего организма. 1971. Т.96, №3. С. 126-137.

3. Генес С.Г. // Тер. архив. 1977. Т.49. №7. С. 144-150.

4. Келасьева Н.В., и др. // Ученые записки УлГУ. Сер. Биология. 2006. Вып. 1(10). С. 30-36.

5. Кондратенко Ю.Н. и др. // Ученые записки УлГУ. Сер. Биология. 2006. Вып.1(10). С. 37-41.

6. Рябинина З.А., Бенюш ВА. Полиплоидия и гипертрофия клеток в процессах роста. М.: Медицина. 1973.

7. СанжаповаА.Ф и др. // Ученые записки УлГУ. Сер. Биология. 2006. Вып. 1(10). С. 56-60.

8.Слесарев С.М. и др. // Морфол. вед-ти. 2006. №1-2. С. 65.

9. Сыч В.Ф. и др. // Ученые записки УлГУ. Сер. Биология. 2006. Вып. 1(10). С. 86-89.

10. Сыч В.Ф. и др. // Морфол. вед-ти. 2006. №3. С. 62-65.

11. Сыч В.Ф и др. // Ученые записки УлГУ. Сер. Биология. 2006. Вып. 1(10). С. 80-86.

12. Сыч В.Ф и др. // Морфол. вед-ти. 2008. №1-2. С. 107.

13. Тутельян В.А и др. // Вопр. питания. 1999. №5-6. С.26.

14. DeCarli L.M., Ch. S. Lieber // The J of nutrition. 1996. №9. P. 331-336.

15. Rouach H. et al // Hepatol. 1997. Vol.25, №2. Р. 351-355.

УДК 616-36-004.4

КЛЕТОЧНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ПРИ АЛКОГОЛЬНОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ

Д. В. ИВАНОВ*

Ключевые слова: алкоголь, клеточные технологии

Примерно у 7% всего населения России установлен диагноз алкоголизма, смертность от которого (600-700 тыс. человек в год) связана с самым высоким в мире уровнем потребления крепких алкогольных напитков, в т. ч. - суррогатных. Она покрывает собой большую часть разрыва между рождаемостью и смертностью, обуславливающего депопуляцию России. Алкого-

лизм приобрел масштаб национальной катастрофы. Поражение внутренних органов и нервной системы при алкоголизме связано с токсическим влиянием ацетальдегида, дефицитом витаминов (особенно группы В), изменением функциональных возможностей ферментных и окислительных систем, нарушением синтеза белка, снижением иммунобиологической реактивности организма. Особенно сильное токсическое действие ацетальдегид оказывает на стенки сосудов (стимулирует развитие атеросклероза), ткани печени (алкогольный гепатит), ткани мозга (алкогольная энцефалопатия). Помимо этого, этиловый спирт увеличивает агрегацию эритроцитов, способствует микротромбозированию, нарушению микроциркуляции крови в органах и тканях организма. Хроническое употребление алкоголя ведет к атрофии слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта и развитию авитаминоза [1].

Цель исследования - изучение возможности клеточной терапии алкогольного поражения печени.

Объект и методы. Всего наблюдалось 15 человек, из которых 12 - вошли в основную группу и 3 - в контрольную группу. У всех обследуемых отмечалось хроническое поражение печени после длительного злоупотребления алкоголем (стаж не менее 3 лет). Возраст пациентов 52±4 года. Основное требование по включению в группу - прекращение употребления алкоголя. Противопоказаний для проведения лечения с применением клеточных технологий не выявлено. Пациентам основной группы проводилось однократное внутривенное введение аллогенных (фетальных) клеток в дозе 100 млн. Все пациенты проходили стандартное обследование на контрольных точках: до введения (Р0) через 1 (Р1), 3 (Р2) и 6 (Р3) месяцев после введения клеток. Все пациенты основной группы дали письменное согласие на проведение клеточной терапии. На биопсию печени дали согласие 2 пациента (1 - контрольной и 1 - основной группы). Основные показатели, которые изучались на контрольных точках: АсАТ, АлАТ, ГГТП, ХЭ, билирубин, общий анализ крови, УЗИ печени (Р0 и через 6 мес.), результаты по опросникам (8Б-36, EQ-5).

Всем пациентам проводилось стандартное лечение, включающее элиминацию этиологического фактора, высокоэнергетическую диету с большим содержанием белка, эссенциальные фосфолипиды, витамины группы В. На препаратах, полученных при биопсии, гистологические изменения соответствовали воспалению в отсутствие признаков цирротической трансформации.

Результаты. Наиболее выраженные показатели обследования основной и контрольной группы представлены в табл. 1 и 2.

Таблица 1

Результаты показателей обследования основной группы

Показатели Р0 Р, Р 2 Р3

АсАТ 74 48 46 38

АлАТ 52 32 34 28

ГГТП 160 88 64 46

ХЭ 3600 6200 5600 6000

8Г36(РН/МН) 40,53/47,16 46,34/72,08 56,77/67,51 56,77/67,51

EQ-5 0,761/60 0,810/80 0,827/80 0,827/80

Примечание: здесь и далее: АсАТ - аспартатаминотрансфераза; АлАТ -алнинаминотрансфераза; ГГТП - гаммаглютаминтранспептидаза; ХЭ -холинэстераза; 8Г36 (РН/МН) - общий опросник здоровья; РН — физическое здоровье; МН - психическое здоровье; EQ-5 - общий опросник качества жизни

Таблица 2

Результаты показателей обследования контрольной группы

Показатели Р0 Р1 Р? Р3

АсАТ 83 78 68 48

АлАТ 62 56 44 34

ГГТП 140 134 126 86

ХЭ 3400 4800 5300 5200

8Г36(РН/МН) 40,53/47,16 45,83/49,20 46,35/56,86 46,35/56,86

EQ-5 0,761/60 0,707/60 0,707/70 0,707/70

Установлено, что не все пациенты прекратили употребление алкоголя. Лекарственная терапия, проводимая в обоих группах, принесла свой положительный эффект и, была одним из факторов восстановления основных функций печени при элиминации токсического агента. Достоверно отмечено, что скорость наступления и выраженность положительных эффектов преобладали в основной группе, где вводились аллогенные клетки. Этот эффект связан со стимуляцией процессов восстановления печени цитокинами и ростовыми факторами, которые в большом количестве присутствуют в клеточной суспензии, полученой из фетальной печени. Наибольшую роль при этом играют несколько росто-

* Тульский государственный университет, Медицинский институт