Моноклональное антитело, антагонист хемокинового рецептора CXCR4, снижает метастазирование опухоли и повышает инфильтрацию в опухоль цитотоксических Т-лимфоцитов in vivo

86

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

не отличался от нормы, в то время как уровень полноразмерной формы был повышен в 1,9 раза (р < 0,05).

Заключение. Уровень обеих форм мРНК гена CD38 в периферической крови больных РТК с метастазами выше, чем в периферической крови больных без метастазов. Таким образом, уровень мРНК гена CD38 может быть использован в качестве дополнительного прогностического маркера при РТК. Кроме того, мРНК гена CD38 может стать индикатором наличия метастатических клеток в организме больного.

А.А. Петкевич, С.А. Кузнецов, И.Ж. Шубина, М.В. Киселевский

НОВЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ АДЪЮВАНТНОЙ АДАПТИВНОЙ ИММУНОТЕРАПИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ

ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Введение. Современные методы адаптивной иммунотерапии рака основаны на использовании лимфоцитов, активированных интерлейкином-2 или другими цитоки-нами, а также вакцин, разработанных, с применением дендритных клеток. Особое внимание в последнее время привлекают иммунные чекпоинты — молекулы, участвующие в качестве триггерных механизмов активации лимфоцитов. В настоящее время проходят клинические испытания препараты ипилимумаб (блокатор гена CTLA4) и ниволумаб (блокатор рецептора PD1). В процессе применения новых средств иммунотерапии необходимо проводить постоянный контроль за показателями гуморального и клеточного иммунитета. На 1-м этапе мы ограничились изучением характеристики субпопуляций лимфоцитов периферической крови и лимфатических узлов (ЛУ) больных раком яичника, меланомой и немелкоклеточным раком легкого.

Цель исследования — определение иммунофенотипа мононуклеарных клеток (МНК) периферической крови и ЛУ больных раком яичника, меланомой и немелкокле-точного рака легкого.

Материалы и методы. Определение иммунофенотипа МНК проводили с помощью моноклональных антител против соответствующих антигенов, конъюгированных с флуоресцентными красителями FITC, PE или PAC: CD3, CD8, CD4, CD56, CD25, CD16. Цитометрические измерения осуществляли на проточном цитофлуориметре.

Результаты. В группе МНК распределение субпопуляций клеток было следующим: CD3+ — 18,8—74,9 % от общего пула исследуемых клеток; CD4+ — 9,4—64,0 %, CD3+/ CD8+ - 4-30 %, OT4+/CD25+ - 0-2 %, CD16+/ CD56+ -0-20 %. В ЛУ субпопуляции распределились следующим образом: CD16+/ CD56+ - 0-0,8 %, CD4+ - 13,4-55,3 %, CD3+/CD8+ - 3,8-14,1 %, CD4+/CD25+ - 0-12,9 %. Из представленных данных видно, что в ЛУ практически отсутствует субпопуляция клеток натуральных киллеров, среди МНК-пула эта субпопуляция также значительно снижена.

Заключение. Данные результаты позволяют предположить, что ЛУ могут служить источником эффекторных клеток, генерируемых для последующего использования в противоопухолевой иммунотерапии. Возможно, именно эти популяции лимфоцитов следует рассматривать как наибо-

лее функционально активные источники для клеточной иммунотерапии.

Р. А. Петров, А. Г. Мажуга, Е.К. Белоглазкина,

С.A. Петров, Е.Э. Ондар, Н.В. Зык

ДИЗАЙН И СИНТЕЗ ЛИГАНДОВ ASGP-РЕЦЕПТОРА

НА ОСНОВЕ ПРОИЗВОДНЫХ N-АЦЕТИЛ-ГАЛАКТОЗЫ

Химический факультет ФГБОУВО «МГУ им. М.В. Ломоносова», Москва

Введение. Гепатоцеллюлярная карцинома — наиболее распространенная опухоль печени, результат злокачественного перерождения гепатоцитов. Ежегодно в мире диагностируют более 600 тыс. случаев заболевания этим недугом. Перспективным направлением увеличения эффективности химиотерапии является адресная доставка лекарств в клетки печени при помощи ASGP-рецептора гепатоцитов, распознающего производные галактозы. Данный рецептор расположен только на поверхности клеток печени и селективно связывается с гидроксильными группами в 3-м и 4-м положениях галактозы. Внемембранная часть белка состоит из 3 субъединиц, каждая их которых связывается с галактозой.

Цель исследования — получение конъюгатов противоопухолевого лекарственного препарата доксорубицина с тканеспецифическими лигандами для направленной доставки препарата непосредственно в опухоль печени и их биологическое тестирование.

Материалы и методы. Все исходные реактивы являются коммерчески доступными. Полученные соединения охарактеризованы с помощью методов 'H и 13С ядерной магнитно-резонансной спектроскопии и высокоэффективной жидкостной хроматографии масс-спектрометрии.

Результаты. На данный момент нами были получены 8 новых высокоселективных лигандов, которые были исследованы на предмет связывания с рецептором. Выявлены наиболее активно связывающиеся соединения. Лиганды, показавшие наибольшую активность, планируется конъ-югировать с противоопухолевым препаратом доксоруби-цином, а также ввести флуоресцентные метки для дальнейших исследований in vitro.

Заключение. Таким образом, нами был предложен перспективный метод оптимизации противоопухолевого соединения за счет его конъюгирования с высокоселективным лигандом. В результате работы были оптимизированы синтетические подходы к созданию лигандов ASGP-рецепто-ра на основе производных N-ацетил-галактозы. На основе полученных данных об активности исследуемых соединений была установлена зависимость структура — активность; разработана процедура, позволяющая в экспериментах in vitro исследовать новые лиганды асиалогликопротеино-вого рецептора и конъюгаты на их основе.

Работа выполнена при поддержке РНФ (грант № 14-34-00017).

А.А. Пискунов, М.С. Аксенова, М.В. Лыков, Д.А. Потеряев МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО, АНТАГОНИСТ ХЕМОКИНОВОГО РЕЦЕПТОРА CXCR4, СНИЖАЕТ МЕТАСТАЗИРОВАНИЕ ОПУХОЛИ И ПОВЫШАЕТ ИНФИЛЬТРАЦИЮ В ОПУХОЛЬ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ Т-ЛИМФОЦИТОВ IN VIVO

№1 I том 15 I 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

87

ООО «МБЦ «Генериум», Москва

Введение. Хемокиновый рецептор CXCR4 и его лиганд SDF-1 экспрессируются во многих типах рака. CXCR4 на опухолевых клетках направляет метастазирование к местам высокой экспрессии SDF-1. CXCR4/SDF-1 также действуют локально, паракринно и аутокринно, усиливая рост опухоли и воспалительную нагрузку. SDF-1, секрети-руемый опухолью и ее микроокружением, увеличивает выживаемость опухоли и модулирует трафик иммунных клеток в ее окружение. Поэтому CXCR4 является привлекательной мишенью для иммунотерапии рака с помощью антител. Основываясь на результатах партнерской компании Affitech AS, МБЦ «Генериум» ведет дальнейшую разработку и доклинические исследования антитела 9N10, антагониста CXCR4.

Цель исследования — доклиническая разработка полностью человеческого рекомбинантного антитела, инги-бирующего CXCR4, и оценка его терапевтического потенциала по онкологическим показаниям.

Материалы и методы. Для создания изотипов IgG1 и IgG4 антитела 9N10 использовали стандартные методы молекулярного клонирования. Рекомбинантные антитела экспрессировались в клетках линии CHO. Антитела были выделены и очищены с помощью 2-стадийной хроматографии и диализа. Связывание антител с нативным CXCR4 определяли проточной цитометрией. Ингиби-рование внутриклеточного сигнального каскада CXCR4 оценивали измерением выброса внутриклеточного кальция в ответ на лиганд. Хемотаксис CXCR4+ раковых клеток in vitro определялся в камерах Бойдена. Для определения терапевтического потенциала 9N10 in vivo использовались 2 модели: 1) экспериментальная сингенная модель метастазирования мышиной меланомы В16 при инъекции раковых клеток в хвостовую вену; б) мышиная сингенная ортотопическая опухоль молочной железы 4Т1. Количество и тип клеток иммунной системы, инфильтрировавших в опухоль, оценивали методом многоканальной проточной цитометрии гомогенизированной опухоли при некропсии.

Результаты. Показано, что антитело 9N10 является высокоселективным ингибитором CXCR4, вытесняет его лиганд и блокирует его внутриклеточный сигнальный каскад. In vitro 9N10 блокирует миграцию (хемотаксис) нескольких видов раковых клеток (например, лимфомы CCRF-CEM и карциномы 4Т1), не вызывая при этом апоптоз CXCR4+-клеток. В мышиных сингенных раковых моделях монотерапия 9N10 уменьшает количество легочных метастазов CXCR4+-меланомы B16 и увеличивает количество цито-токсических лимфоцитов, инфильтрирующих в опухоль молочной железы 4T1.

Заключение. Антитело 9N10 является перспективным кандидатом для дальнейших доклинических и возможных клинических испытаний в области иммунотерапии солидных опухолей. Ингибирование сигнального каскада CXCR4 с помощью 9N10 может иметь наибольший терапевтический эффект в комбинации с ингибиторами иммунного чекпойнта, поскольку блокирование CXCR4 усиливает проникновение цитотоксических Т-лимфоцитов в опухоль.

Л.В. Плотникова1, А.М. Поляничко2, М.В. Успенская1,

А.Д. Гарифуллин3, С. В. Волошин3

ОСОБЕННОСТИ ИНФРАКРАСНЫХ СПЕКТРОВ

СЫВОРОТКИ КРОВИ У ПАЦИЕНТОВ

С МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ

ФГАОУВО «Санкт-Петербургский НИУ ИТМО»;

Международный научно-исследовательский институт

«Биоинженерия», Санкт -Петербург;

2ФГБОУ ВО СПбГУ, Санкт-Петербург;

3ФГБУ«Российский НИИ гематологии и трансфузиологии

ФМБА», Санкт-Петербург

Введение. Множественная миелома (ММ) составляет около 1 % всех злокачественных новообразований и чуть более 10 % гемобластозов. Наиболее частым симптомом ММ являются боли в костях, которые отмечаются более чем у 60 % пациентов на момент диагностики. Одним из критериев диагностики и оценки эффективности лечения больных ММ является определение уровня патологического белка в сыворотке крови и/или моче. Примерно у 80 % больных ММ методом электрофоретического анализа белков сыворотки крови можно выявить одиночный узкий пик или локализованную полосу (М-компонент) патологического белка, который вырабатывается кло-нальными плазматическими клетками. При этом в сыворотке крови развивается выраженная диспротеинемия. Гипогаммаглобулинемия присутствует только в 10 % случаев ММ, в то время как у оставшихся 90 % пациентов имеются более сложные нарушения соотношения белков сыворотки крови.

Материалы и методы. В нашем исследовании мы применили комбинацию электрофоретического разделения, спектральных подходов и термального анализа для выявления ключевых различий в белковом составе сыворотки крови, ее термального поведения и вторичной структуры белков для образцов, полученных из сыворотки крови больных ММ и здоровых доноров.

Результаты. На сегодняшний день, молекулярные механизмы возникновения болезни остаются слабо изученными. Среди новых и потенциально перспективных подходов к лечению ММ особый интерес представляют направления, основанные на изменениях структуры белков и нарушении процессов фолдинга белков в клональных плазматических клетках. В данной работе методами электрофореза высокого разрешения, рефрактометрии и инфракрасной спектроскопии мы провели сравнительный анализ вторичной структуры белков в составе плазмы крови у пациентов с ММ и здоровых доноров. Анализ полученных данных показывает, что по сравнению с образцами сыворотки крови здоровых доноров в пробах ММ-IgG в структуре белков сыворотки крови наблюдается уменьшение доли а-спиральных участков в среднем на 15—20 %. Уменьшение степени а-спиральности сопровождается также повышением количества межмолекулярных Р-слоев в среднем на 10—15 %. Иная картина наблюдается для образца MM—IgA. В этом случае среднее содержание основных элементов вторичной структуры в белках сыворотки крови близко к таковому в образцах, полученных от здоровых доноров. Увеличение доли межмолекулярных Р-слоев в структуре белков сыворотки крови больных ММ-IgG свидетельст-

№1 / том 15 / 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ