Способность мононуклеаров периферической крови человека продуцировать цитокины при воздействии на них ксиломананном in vitro

2017, Т. 19, Специальный выпуск Иммуномодуляторы эндогенной и экзогенной природы

2017, Vol. 19, Special Issue Immunomodulators of endogenous and exogenous nature

ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ ЭНДОГЕННОЙ И ЭКЗОГЕННОЙ ПРИРОДЫ

«БИОБРАН» В КОРРЕКЦИИ ЭЛЕМЕНТОВ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ ДИССЕМИНИРОВАННЫМИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ В СОЧЕТАНИИ С ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ КЛЕТОЧНОЙ ИММУНОТЕРАПИЕЙ

Балдуева И.А., Пипиа Н.П. Данилова А.Б., Новик А.В., Нехаева Т.Л., Емельянова Н.В., Галлиулина О.А., Авдонкина Н.А.

ФГБУ«Научно-исследовательский институт онкологии им. Н.Н.Петрова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Препарат «Биобран», иммуномодулятор растительного происхождения, представляющий собой комплекс полисахаридов, основным из которых является арабиноксилан, был разработан в Японии в 1992 году. К основным фармакологическим эффектам «Биобрана» относят стимуляцию активности естественных киллеров (NK), Т- и В-клеток, макрофагов, подавление проникновения нейтрофилов в очаг воспаления. Экспериментальные исследования, проведенные на животных моделях различных опухолей, показали, что под воздействием этого препарата увеличивается противоопухолевая активность дендритных клеток (ДК), возрастает чувствительность клеток опухоли к химиотерапевтическим агентам. Первые пилотные клинические исследования, проведенные в группе больных раком печени, продемонстрировали увеличение продолжительности жизни пациентов, получавших «Биобран». Тем не менее, в настоящее время еще нет убедительных доказательств противоопухолевой активности данного препарата, нет четких данных о механизмах его действия, что ограничивает точки его приложения и требует проведения стандартных рандомизированных клинических исследований.

Цель. Оценить эффективность препарата «Биобран» как иммуностимулятора, дополняющего активную специфическую иммунотерапию больных диссеминирован-ными злокачественными новообразованиями.

Материалы и методы. В исследование было включено 14 больных диссеминированными злокачественными новообразованиями (меланома кожи — 5, саркомы мягких тканей — 3, рак яичника — 2, рак поджелудочной железы — 2, рак почки — 1, рак предстательной железы — 1), получавших активную специфическую иммунотерапию на основе РТА+ активированных ДК, которые имели низкие показатели абсолютного количества NK-клеток в периферической крови. Этой группе больных был назначен «Биобран». В качестве контрольной группы рассматривали пациентов со сходными показателями врожденного иммунитета, которые не принимали данный препарат.

Всем пациентам были выполнены иммунологические исследования на проточном цитофлуориметре FACS Canto II (BD, США): оценивали количественное содержание основных популяций и субпопуляций лимфоцитов в периферической крови.

Результаты. Абсолютное содержание NK клеток в периферической крови больных злокачественными новообразованиями, получивших «Биобран», достоверно увеличивалось в процессе терапии в отличие от пациентов, не получивших этот препарат (0,06±0,010 и 0,1±0,015 х 109 клеток, до приема «Биобрана», соответственно, 0,11±0,005 и 0,05±0,012 х 109 клеток, через 4 мес. от начала лечения, р = 0,008). Аналогичные закономерности были выявлены при определении абсолютного содержания NKT-клеток: 0,07±0,015 и 0,015±0,077 х 109 клеток до применения препарата, 0,15±0,010 и 0,05±0,012 х 109 клеток р = 0,013, через 4 мес. от начала лечения соответственно.

Выводы. Препарат «Биобран» способствует увеличению абсолютного содержания NK- и NKT-клеток в периферической крови больных с диссеминированным опухолевым процессом на фоне активной специфической иммунотерапии во 2-й и последующих линиях лекарственного лечения. Дальнейшие исследования позволят изучить влияние «Биобрана» на функциональную активность различных субпопуляций клеток иммунной системы у этой категории больных.

СПОСОБНОСТЬ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ПРОДУЦИРОВАТЬ ЦИТОКИНЫ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ НА НИХ КСИЛОМАНАННОМ IN VITRO

Бляхер М.С., Алешкин А.В., Федорова И.М., Рамазанова З.К., Краснопольская Л.М., Тульская Е.А., Кукушкина Е.А.

ФБУН «Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Т.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, Москва, Россия

Введение. Ксиломаннан — это полисахарид, выделенный из щелочерастворимой фракции мицелия Ganoderma lucidum. Противоопухолевая активность ксиломаннана была показана в опытах in vivo сотрудниками лаборатории фармакологии и химиотерапии ФГБНУ НИИНА им. Г.Ф. Гаузе. Так как относительно немного исследований содержат информацию о влиянии этого вещества на способность к продукции цитокинов лейкоцитами периферической крови, представлялось актуальным изучить цитокиновый профиль при стимуляции ксиломананном in vitro.

«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017

Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya

ТАБЛИЦА. ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ ПРИ СТИМУЛЯЦИИ КСИЛОМАННАНОМ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОМ КРОВИ

Виды воздействия TNFa IL-10 IL-1 ß IL-6 IL-8

ксиломаннан + NaHCO3 300*±47 494*±106 1507*±361 17116+1461 40395*±2837

NaHCO3 143±22 311±58 1125±233 14088±1333 31071+3129

Примечание. * — статистически значимое отличие от парной пробы NaHCO.

Цель. Изучить влияние ксиломаннана, выделенного из G. lucidum, на продукцию цитокинов мононуклеарами периферической крови человека.

Материалы и методы. Из крови 22 здоровых доноров были выделены мононуклеары. Взвесь мононуклеаров стимулировали ФГА, ЛПС, ксиломаннаном, растворителем ксиломаннана (NaHCO3) или без индукторов (спонтанная продукция). После инкубации в планшете при 37 °С в атмосфере 5% СО2 в течение 20 часов, были получены супернатанты в которых, методом ИФА была определена концентрация TNFa, IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10. Отработана доза ксиломаннана, не токсичная для клеток и обладающая стимулирующим воздействием. Определение концентрации цитокинов проводилось на ИФА-тест-системах российского производства ЗАО «Вектор-Бест» (Россия) и ООО «Цитокин» (Россия).

Статистическая обработка проведена с использованием программы Statistica 6.0 и MS Excel. Сравнение вариационных рядов осуществляли с помощью непараметрического U-критерия Манна—Уитни.

Результаты. При сравнении уровня продукции TNFa под влиянием разных стимуляторов: ФГА, ЛПС или ксиломаннана, выявлено, что ксиломаннан стимулирует продукцию этого цитокина сопоставимо с ФГА и ЛПС и значимо выше, чем под влиянием среды культивирования (спонтанная продукция) и NaHCO3 (значимо при p = 0,002).

Исследование влияния ксиломаннана на продукцию других цитокинов мононуклеарами периферической крови человека продемонстрировало, что данное вещество способствует повышению продукции мононуклеа-рами периферической крови таких цитокинов как IL-10, IL-1ß, IL-6, IL-8. Поскольку ксиломаннан был растворен в NaHCO3, проведено сравнение величины воздействия этого вещества и NaHCO3, что видно в таблице.

Во всех случаях ксиломаннан в большей степени воздействовал на продукцию цитокинов, чем растворитель, а для большинства цитокинов (TNFa, IL-10, IL-1ß, IL-8) — статистически достоверно (величина р колебалась от 0,03 до 0,005).

Заключение. Противоопухолевые свойства ксиломан-нана связанны с его способностью активировать клеточный и гуморальный иммунитет. Ксиломаннан проявил себя в данном исследовании как индуктор активации мононуклеаров периферической крови. Он индуцировал продукцию TNFa, который играет важную роль в противоопухолевом иммунитете. Увеличение продукции TNFa в культурах, стимулированных ксиломаннаном, у большинства доноров сопровождалось увеличением продукции IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10.

ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ ДЛЯ СЕЛЕКТИВНОГО И ГРУППОВОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ

Буркин М.А.

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова», Москва, Россия

Иммунохимические методы активно используются для выявления разнообразных биологически активных низкомолекулярных агентов, в том числе лекарственных соединений. По своим аналитическим характеристикам практический интерес представляют варианты иммуноанализа с избирательным и групповым распознаванием анализируемых соединений. Первые предназначены для идентификации конкретного аналита, вторые позволяют в одной пробе выявлять максимально возможное число структурных аналогов. Так, для скринниговых целей эффективным решением являются методы, обладающие групповой специфичностью. Необходимость идентифицировать отдельное соединение среди близких структурных аналогов может диктоваться его особой активностью, токсичностью или особенностями использования. Подобные системы анализа конструируются на основе антител с разной эпитопной специфичности (к общим или индивидуальным субмолекулярным структурным элементам, эпитопам), а их создание требует дифференцированного подхода. Аффинная хроматография, гибридомная технология и технологии дисплея позволяют выделять и селекционировать поликлональные, моноклональные или ре-комбинантные антитела определенной эпитопной направленности из целого репертуара специфичностей. Альтернативный подход заключается в селекции in situ — избирательном связывании антител специфичных к отдельным эпитопам, происходящем в ходе анализа. Избирательность такого взаимодействия обеспечивается благодаря презентации и/или экранированию на антигенах групповых или индивидуальных эпитоп-ных структур.

Цель и задачи. Конструирование конъюгированных антигенов и создание на их основе систем для селективной и групповой иммунодетекции лекарственных соединений.

Результаты. На основе 7 тетрациклиновых антибиотиков, конъюгированных с белковыми носителями, создана панель антигенов. В конкурентном ИФА, при иммобилизации полученных конъюгатов на твердой фазе, исследованы профили перекрестного взаимодействия поликлональных антител к БСА-ТЦ с каждым из 7 антибиотиков и найдены условия для наилучшего группового распознавания тетрациклина, хлортетрациклина, ок-ситетрациклина и доксициклина, регламентированных в продуктах питания (Food Agric. Immunol., 2009, 20, 245-252).