СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ КОМБИНИРОВАННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ОБЕДНЕННЫМ УРАНОМ
METHOD FOR SIMULATING COMBINED EXPOSURE TO DEPLETED URANIUM

Предмет настоящего изобретения относится к области медицины, в частности к экспериментальной токсикологии. Способ моделирования может быть использован при исследовании механизмов токсического действия урана на функциональное состояние выделительной, иммунной систем и других органов.
238
235
234
Уран (U) является естественным альфа- и бета-излучающим радиоактивным элементом из второго «интерпериодического узла» актиноидов таблицы химических элементов Д.И. Менделеева. Обедненный уран (U, ОУ) получают промышленным путем, максимально удаляя из урановой руды изотопы U и U [Diarmid M.A. Depleted uranium and public health // BMJ. - 2001. - Vol. 322. - P. 123-124]. В тоже время ОУ является не только радионуклидом, но и политропным токсическим веществом. При этом для ОУ в виде растворимых солей эффекты химической токсичности превалируют над радиологическими [Галибин Г.П., Новиков Ю.В. Токсикология промышленных соединений урана. Под ред. проф. Ю.И. Москалева. М.: Атомиздат, 1976. - 184 с.]. Как поллютант, ОУ явился предметом экологических исследований (контаминация почв и грунтовых вод в зоне военных действий) и ряда медицинских проблем, особенно в связи с последствиями войны в Персидском заливе 1991 года, инкорпорированием в зонах повышенного естественного содержания элемента (урановорудные регионы), производства по переработке руды и при захоронениях в «хвостохранилищах». Впервые токсичность ОУ как политропного яда комбинированного токсического типа действия была системно описана в рамках «Синдрома Войны в Заливе» по результатам первого официального массового применения ОУ в боевых действиях в войне в Ираке в 1990/1991 году в составе боекомплекта танковых войск, штурмовой авиации и крылатых ракет сил НАТО. Попадая в организм человека, уран накапливается в печени, почках, способствуя возникновению онкологических заболеваний, а также вызывает различные поражения внутренних органов. Доказанная химическая токсичность урана при остром отравлении прежде всего проявляется нарушениями функций почек (ведущая патология). Механизмы и угрозы хронической интоксикации ОУ пока недостаточно изучены.
Анализ литературных данных по экспериментальному изучению токсичности соединений ОУ показал, что при моделировании острого и хронического отравления использовались различные суточные дозы исходных веществ, содержащих уран, или дозы по радиоактивности (в основном уранила нитрат, уранила ацетат, гексафторид урана, вживленные под кожу фрагменты оружия) [Toxicological profile for uranium, U.S. Department of health and human services - Public Health Service Agency for Toxic Substances and Disease Registry, ATSDR. - 1999. - 462 p. Toxicological profile for uranium, U.S. Department of health and human services - Public Health Service Agency for Toxic Substances and Disease Registry, ATSDR. - 2013. - P. 526]. Различались и пути введения - от подкожного введения и ингаляции до введения с питьевой водой и имплантации частиц снарядов в подкожную жировую клетчатку. Работ, в которых была бы четко приведена суточная доза поступающего урана по элементу, мало, что затрудняет как интерпретацию результатов, сравнение различных исследований между собой, так и оценку суточного поступления элемента. При добавлении в питьевую воду соединения урана меняют органолептические характеристики воды и могут изменять пищевое поведение и потребление воды животными, и, как следствие, приводить к различным формам и степеням проявления интоксикации. Все перечисленные выше аспекты свидетельствуют о разрозненности данных о токсичности ОУ.
В рекомендациях ВОЗ указано, что необходимы: «уточнение тяжести ренальных нарушений, выражающихся в изменениях функционирования мочевыделительной системы у населения, подвергшегося воздействию обедненного урана в различных дозах; проверка имеющихся научных представлений об изучении патологических состояний при воздействии урана с экстраполяцией результатов на ОУ, что требует дополнительных дальнейших исследований; скоординированности усилий разных стран в отношении проведения токсикологических исследований для получения беспристрастной информации, объективно характеризующей опасность ОУ для здоровья» [Фактологический бюллетень ВОЗ №257 январь 2001, Резолюция, принятая Генеральной Ассамблеей 65/55. Последствия применения оружия и боеприпасов, содержащих обедненный уран. Пункт 97d повестки дня. Генеральная Ассамблея ООН. 13 января 2011. - 2 с.].
3
3
Имеются различные способы моделирования воздействия ураном. Наиболее близкими к заявляемому изобретению являются следующие. В монографии «Токсикология промышленных соединений урана» [Галибин Г.П., Новиков Ю.В. Токсикология промышленных соединений урана. Под ред. проф. Ю.И. Москалева. М.: Атомиздат, 1976. - 184 с.] проведено обобщение экспериментальных данных по токсичности большинства соединений урана при различных путях введения. Авторами было проведено исследование на 90 крысах самцах с исходной массой 150 г. С помощью металлического зонда животным натощак однократно вводили в желудок диуранат аммония в дозе 120 мг/кг [там же, стр. 24-26]. Было показано, что при однократном введении в желудок диуранат аммония всасывается в небольших количествах. При внутривенном введении диураната аммония в дозах 10-20 мг/кг патоморфологические изменения были наиболее выраженными. В клинической картине поражения преобладали признаки, характерные для урановых отравлений - снижение массы тела, олигоанурия, жажда, отказ от пищи, заторможенность, гибель при явлениях общего паралича. Для ингаляционной затравки крысам с массой 200 г проводили экспозицию в течение 4 часов с средней концентрацией аэрозоля 10,1 мг/м по урану. Было установлено, что в легкие крыс поступает 280 мкг урана, таким образом, через 10-15 минут в организме крыс задерживается 14% урана, поступившего при вдыхании. Однако после однократного ингаляционного поступления количество не отражает общего содержания урана в организме. Также изучено влияние смешанного оксида урана при остром воздействии. Эксперименты проводили на половозрелых крысах самцах с массой 160-180 г. Для перорального введения использовали дозу 200 мг/кг, для ингаляции с экспозицией 60 минут концентрация аэрозоля в затравочной камере составляла 30 мг/м [там же, стр. 52-59]. Показано, что после введения в желудок через 3-6 часов в организме крыс обнаруживается около 0,21% от введенной дозы. При ингаляции в организме крыс сразу же после воздействия обнаружено 25% оксида урана, при этом 60% задержанной дозы выводится с эффективным периодом не более 2 суток, а 30% - 30-40 дней, оставшиеся 10% с периодом 250-300 дней. Максимальное количество урана, откладываемое в почках и печени, отмечается через 24-48 часов и равно 0,7% от проингалированного. При подкожном введении собакам нитрата уранила в дозе 4 мг/кг LeBrie S.J. обнаружил урановую нефропатию, которая сопровождалась трехкратным увеличением тока лимфы в почках с уменьшением уровня белка в лимфе. Гистологически у животных с урановой нефропатией отмечено поражение дистального сегмента проксимальных канальцев почек. Лебедева Н.К. в условиях острого отравления крыс нитратом уранила использовала дозу 10 мг/кг при подкожном введении и установила в моче животных все фракции белков сыворотки крови, а также некоторые фракции белков почек [там же, стр. 76-77]. Степанова С.А. и Белова Р.С. показали, что дистрофические и некробиотические изменения эпителия мочевых канальцев появляются в основном при введении любым путем больших доз урана в первые 2-5 дней [там же, стр. 77]. Также авторы отмечают неравномерность глубины поражения почек животных, получивших одинаковое количество урана, что, по их мнению, объясняется различной индивидуальной чувствительностью.
3
3
3
3
3
Другим подробным документом является отчет «Toxicological profile for uranium» комиссии ATSDR, Центр контроля заболеваемости и профилактики США, изданный в 1999 с пересмотром в 2013 г. [Toxicological profile for uranium, U.S. Department of health and human services - Public Health Service Agency for Toxic Substances and Disease Registry, ATSDR. - 2013. - P. 526]. Материалы отчета содержат подробнейшие сведения о действии урана на организм человека и животных, токсикокинетике урана, методах аналитического определения элемента в биосредах и объектах окружающей среды, биомаркерах воздействия и эффектов из научных статей за период с 1946 по 2010 гг. Накожное воздействие соединений урана также не выявило иммунотоксических проявлений в тестах на животных. В исследованиях на животных, подвергавшихся воздействию пыли из диураната аммония, содержащих 6,8 мг U/м в течение 6 часов/день, 5 дней/неделю в течение 30 дней обнаружен рост нейтрофилов, уменьшение лимфоцитов, умеренное падение лейкоцитов и увеличение числа эозинофилов. Крысы, подвергавшиеся воздействию с воздухом уранила нитрат гексагидрата, содержащего 9,5 мг U/м 8 часов/день, 5 дней/неделю в течение 30 дней, показали начальное увеличение с последующим уменьшением абсолютного числа лимфоцитов и нейтрофилов. Фокальный некроз селезенки и лимфатических узлов слепой кишки был выявлен у крыс после воздействия в течение 30 дней по 6 часов/день до 0,4 и 4 мг U/м тетрафторида урана. Тем не менее, эти эффекты не наблюдались при воздействии 18 мг U/м, поэтому значение этого вывода остается неясным [там же, стр. 99]. Существует лишь ряд доказательств из исследований на животных, что воздействие ураном может повлиять на иммунную систему. Повышение активности макрофагов связано с локализованными альфа-треками во всех пяти долях легких у F344 крыс, подвергавшихся воздействию 6,825.5 нКи/м при вдыхании диоксида обогащенного урана в течение 100 минут. Радиоактивная концентрация смеси оценивалась как 1,91 кБк /мг (51,6 нКи /мг). Число и размер макрофагов в легких увеличивалось во времени после воздействия. При оральном введении урана до 40 мг/кг крысам не было зарегистрировано иммунологических нарушений, а при накожном нанесении вообще не было отмечено поражения системы иммунитета. Никакие другие специфические иммунологические тесты не проводились. Данные исследования были проведены в период 1949-1998 г. [там же, стр. 98-100, стр. 151-152, стр. 174].
В протеомных исследованиях на крысах при введении уранил нитрата было показано изменение в содержании около 14 белков под воздействием урана. Эти изменения включали увеличение уровня в моче альбумина, альфа-1-антитрипсина, транстиретина, церулоплазмина и трансферрина; снижение в моче уровня эпидермального фактора роста, контраспиноподобного протеазного ингибитора и панкреатической альфа-амилазы [Malard V., Gaillard J.C., Berenguer F., et al. 2009. Urine proteomic profiling of uranium nephrotoxicity // Biochim. Biophys. Acta. - 2009. - Vol. 1794 (6). - P. 882-891]
Известен метод моделирования токсического поражения почек при внутримышечном введении смеси глицерина и уранил ацетата, при котором формируется смешанный миоглобинурический нефрит и острый токсический нефрит, которые обратимы и непродолжительны во времени [Хушбактова З.А., Сыров В.Н. Фармакотерапевтический эффект фитоэкдистероидов и неробола при токсическом поражении почек в эксперименте // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2001. - №4. - С. 56-58]. Недостатками указанного способа является узкая специфичность, невозможность экстраполяции указанных данных в отношении воздействия на организм ОУ, так как в результате моделирования у животных формируются краш-синдром, отягощенный нефротоксическим действием урана на канальцы почек.
Описанные способы моделирования имеют важное значение для токсикологии урана, однако они не в полной мере отражают все аспекты действия ОУ на организм, особенно комбинированного по путям введения, что максимально бы приближало условия экспериментов к реальным клиническим ситуациям.
Задача настоящего изобретения направлена на создание способа моделирования острого комбинированного воздействия обедненным ураном в эксперименте на животных, воспроизводящего острое комбинированное воздействие обедненным ураном у человека в условиях пребывания в зоне военных конфликтов с использованием оружия и брони, содержащих обедненный уран (вдыхание пыли оксидов урана, попадание в желудок, накожное воздействие), а также в условиях проживания в эндемических зонах урановых месторождений, урановых хвостохранилищ.
Решение этой задачи позволяет расширить представления о патогенезе острого комбинированного воздействия ОУ, его токсического действия на анатомо-морфологические и функциональные особенности почек, клеток иммунной системы, эндокринные и метаболические процессы и позволит проводить поиск и разработку способов профилактики и терапии отравлений.
3
8
У заявляемого изобретения имеются следующие преимущества: воздействие осуществляется доступными, встречаемыми в техногенной сфере формами обедненного урана - пылью оксида урана (UO), уранил ацетатом дигидратом, цинк уранил ацетатом, которые легко могут быть получены производственным путем; создаваемое острое воздействие обедненным ураном является воспроизводимым и приводит к формированию патологических изменений, соответствующих почечной недостаточности, тубулопатии, поражению системы иммунитета.
У заявляемого изобретения имеются следующие существенные признаки: однократно животным вводят через трахею суспензию оксида урана; накожную аппликацию осуществляют путем погружения хвоста на 2/3 его длины в раствор уранил ацетата дигидрата; перорально через атравматический желудочный зонд вводят раствор уранил ацетата дигидрата или цинк уранил ацетата в дипазоне доз 1-100 мг/кг, предпочтительно 15-60 мг/кг по элементу с целью создания острого воздействия ОУ. В связи с относительно низкой (не более 1-3%) абсорбцией из желудочно-кишечного тракта и легких урана воздействие можно расценивать как низкодозовое. В результате моделирования у животных развиваются: токсическая нефропатия, тубулоинтерстициальный нефрит (за счет химической токсичности), увеличение числа мононуклеаров в стадиях раннего и позднего апоптоза (за счет химической и радиологической токсичности ОУ).
Данный способ осуществляется следующим образом.
238
235
2
3
2
2
2
3
4
В качестве токсикантов используют доступные водорастворимые соединения шестивалентного урана с изотопной чистотой не менее 99% U и 0.4% U - уранил ацетат дигидрат (УАД) и цинк-уранил ацетат (ЦУА) составов UO(CHCOO)×2HO, М.м. 424,146 г/моль и ZnUO(CHCOO), М.м. 571,59 г/моль, производитель - Fluka (Brand, Германия), Sigma-Aldrich (США), а также смешанный оксид урана (продукты сгорания металлического урана). Чистота и состав веществ описан в паспортах качества (сертификат анализа) на данные реактивы. Радиоактивность 1 мкг соединений находилась в пределах 0.31-0.40 пико-Кюри. Оксид урана получают известным способом из солей уранила [Исмагилов З.Р., Кунцевич С.В., Кузнецов В.В., Шикина Н.В., Керженцев М.А., Рогов В.А., Ушаков В.А. Исследование новых катализаторов на основе оксидов урана // Кинетика и Катализ, 2007. - Т. 48. - №4. - С. 544-553].
238
В деионизированной воде приготовляют раствор соли урана с содержанием 1,00 г/л по элементу (для приготовления раствора, вводимого лабораторным животным). Концентрацию элемента U в растворах для введения и биожидкостях животных определяют методом масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой [Иваненко Н.Б., Наволоцкий Д.В., Иваненко А.А., Соловьев Н.Д., Блаженникова И.В. Определение урана в моче методом масс-спектрометрии высокого разрешения с индуктивно связанной плазмой // www.medline.ru, том 13, токсикология, 12 сентября 2012. - С. 871-880].
Работу с лабораторными животными проводят в соответствии с «Санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)» (РФ, утв. 06.04.1973); «Руководством по содержанию и использованию лабораторных животных» (USA, National Academy Press, Washington, D.C., 1996); «Руководством по содержанию и использованию лабораторных животных» (FELASA, 2010); «Лабораторные животные» (положение и руководство. Российская Академия Медицинских Наук, Москва, 2003).
Моделирование острого воздействия включает в себя следующие признаки. Для введения животным через дыхательные пути используют интратрахеальное или ингаляционное введение анестезированным крысам пыли оксида урана в дозовом диапазоне от 1 до 100 мг/кг. Внутрижелудочно вводят растворы соединений урана в диапазоне доз 1-100 мг/кг. Накожную аппликацию осуществляют путем погружения хвоста на 2/3 его длины в раствор 0,5 г/л урана в течение 10-60 минут. Создают комбинированное воздействие ураном на лабораторных животных путем последовательного введения соединений урана, что имитирует острое комбинированное воздействие обедненным ураном у человека в условиях пребывания в зоне военных конфликтов с использованием оружия и брони, содержащих обедненный уран (вдыхание пыли оксидов урана, попадание в желудок, накожное воздействие). В контрольных группах животным вводят эквивалентное количество плацебо (растворитель, вода очищенная).
Критериями оценки формирования воздействия ураном являются следующие: клиническая картина, включающая общее состояние животных, состояние кожных покровов и видимых слизистых, потребление корма и воды, температура тела. Биохимические показатели определяют с помощью готовых наборов фирм «Ольвекс Диагностикум» (Россия), «Randox» (Великобритания), «Immundiagnostik» (Германия). Активность аланин-, аспартатаминотрансферазы и лактатдегидрогеназы, уровень мочевины и креатинина определяли оптимизированными кинетическими методами. Показатели эндогенной интоксикации оценивали по общепринятому методу М.Я. Малаховой. Измерения проводят на автоматическом биохимическом анализаторе «KeyLab» фирмы «BPC + BioSed s.r.l» (Италия), мультифункциональном фотометре «Synergy-2» фирмы «BioTek Instruments, Inc.» (США). Апоптоз оценивают следующим образом. Используют суспензию мононуклеарных клеток крови (моноциты + лимфоциты), выделенных путем центрифугирования в градиенте плотности. Оценку уровня апоптотических клеток проводят с помощью процедуры окрашивания с использованием меченого флюоресцеинизотиоцианатом (FITC) аннексии V, специфически связывающимся с остатками фофатидилсерина на мембранах апоптотических клеток (маркер раннего апоптоза), и пропидиум йодида (PI) - флюоресцентого красителя ДНК, позволяющего дифференцировать клетки с интактной и проницаемой мембраной (маркер позднего апоптоза, нитевых разрывов ДНК), долю некротизированных клеток оценивают по наличию обоих маркеров. Клетки выделяют на среде Lympholite-Rat (Cedarlane, Канада), центрифугируя их при 400×g в течение 40 минут. Образовавшееся в интерфазе кольцо снимают пипеткой. Полученную клеточную взвесь отмывают 3 раза PBS. 1-кратным Annexin V Binding Buffer (BD Pharmingen) доводят концентрацию клеток до 106 кл/мл. Затем в цитометрические пробирки добавляют по 100 мкл полученного раствора, 5 мкл FITC Annexin V (BD Pharmingen) и 5 мкл PI (BD Pharmingen). Суспензию клеток инкубируют в темноте при комнатной температуре в течение 15 минут. Добавляют 400 мкл 1-кратного Annexin V Binding Buffer (BD Pharmingen). Цитометрию проводят на проточном цитофлуориметре BD FACSCalibur™ с анализом данных в программе CellQuest.PrO. В каждой пробе просчитывают не менее 10000 клеток.
Все исследования проводят в соответствии с современными правилами клинико-лабораторной диагностики. Функциональную и морфологическую характеристику почек животных оценивают по показателям азотемии, эндогенной интоксикации и гистологической картины срезов ткани или нефробиоптатов.
Статистический анализ проводят с помощью доступных программ статистической обработки данных, предпочтительно пакета программ Statistica. При анализе данных прежде всего проводят проверку согласия показателей с нормальным распределением (критерии Шапиро-Уилка, Лиллиефорса). При малых выборках предпочтительно используют непараметрические статистики. Уровень значимости везде выбирают 0,05. При оценке ряда параметров в дозовых группах используют дескриптивные статистики, а для сравнения - ранговый дисперсионный анализ Краскела-Уоллиса.
Пример. Моделируют острое воздействие ОУ в опыте на крысах. Формируют следующие группы животных (крысы) по 6 особей в каждой:
1-я группа - интактные животные;
2-я группа - контроль 1 плацебо, интратрахеальное введение дистиллированной воды;
3-я группа - опытная группа, 1 мгU/кг оксид урана интратрахеально;
4-я группа - опытная группа, 10 мгU/кг оксид урана интратрахеально;
5-я группа - опытная группа, 100 мгU/кг оксид урана интратрахеально;
6-я группа - контроль 2 плацебо, внутрижелудочное введение дистиллированной воды;
7-я группа - опытная группа, 1 мгU/кг ЦУА, внутрижелудочно;
8-я группа - опытная группа, 30 мгU/кг ЦУА, внутрижелудочно;
9-я группа - опытная группа, 100 мгU/кг ЦУА, внутрижелудочно;
10-я группа - контроль 3 плацебо, накожное нанесение дистиллированной воды;
11-я группа - опытная группа, 10 минут УАД, 0,5 г/л накожно;
12-я группа - опытная группа, 30 минут УАД, 0,5 г/л накожно;
13-я группа - опытная группа, 60 минут УАД, 0,5 г/л накожно;
14-я группа - опытная группа, комбинированное воздействие (3 пути введения): 1 мгU/кг оксида урана интратрахеально + 1 мгU/кг ЦУА внутрижелудочно + 10 минутные накожные аппликации УАД;
15-я группа - опытная группа, комбинированное воздействие (3 пути введения): 10 мгU/кг оксида урана интратрахеально + 1 мгU/кг ЦУА внутрижелудочно + 10 минутные накожные аппликации УАД;
16-я группа - опытная группа, комбинированное воздействие (3 пути введения): 100 мгU/кг оксида урана интратрахеально + 1 мгU/кг ЦУА внутрижелудочно + 10 минутные накожные аппликации УАД;
17-я группа - опытная группа, комбинированное воздействие (3 пути введения): 1 мгU/кг оксида урана интратрахеально + 30 мгU/кг ЦУА внутрижелудочно + 10 минутные накожные аппликации УАД;
18-я группа - опытная группа, комбинированное воздействие (3 пути введения): 1 мгU/кг оксида урана интратрахеально + 100 мгU/кг ЦУА внутрижелудочно + 10 минутные накожные аппликации УАД;
19-я группа - опытная группа, комбинированное воздействие (3 пути введения): 1 мгU/кг оксида урана интратрахеально + 10 мгU/кг ЦУА внутрижелудочно + 30 минутные накожные аппликации УАД;
20-я группа - опытная группа, комбинированное воздействие (3 пути введения): 1 мгU/кг оксида урана интратрахеально + 1 мгU/кг ЦУА внутрижелудочно + 60 минутные накожные аппликации УАД;
21-я группа - опытная группа, комбинированное воздействие (3 пути введения): 10 мгU/кг оксида урана интратрахеально + 30 мгU/кг ЦУА внутрижелудочно + 30 минутные накожные аппликации УАД;
22-я группа - опытная группа, комбинированное воздействие (3 пути введения): 100 мгU/кг оксида урана интратрахеально + 100 мгU/кг ЦУА внутрижелудочно + 60 минутные накожные аппликации УАД.
Сравнение проводят с 1-й группой животных, а также с 2-й, 6-й и 10-й группами, получавших плацебо. Значимых различий между группами плацебо и контроля не должно быть, что свидетельствует о правильности постановки экспериментальной модели.
При наблюдении за животными на 7-е сутки после воздействия отмечают развитие острого токсического «ответа» со стороны гематологических показателей, иммунной системы (некроз и апоптоз иммуноцитов), а также основного обмена (снижение уровней общего белка, гипергликемия, гиперазотемия). Гибель животных происходит от острой полиорганной недостаточности в пределах 4-10 суток от момента инкорпорирования при системном введении доз выше 30 мгU/кг массы тела. На 14-е сутки отмечают восстановление основных параметров у части выживших крыс. Комбинированная схема приводит к изменению всех изучаемых параметров как на 7-е, так и на 14-е сутки после воздействия.
Существенные изменения функционирования органов детоксикации (почек и, в меньшей степени, печени) в группах 1, 14, 17 и 21 представлены в таблицах 3 и 4. Накопление в плазме крови и на поверхности эритроцитов олигопептидов (ОП), в том числе нерегуляторных (продукты протеолиза, аутолиза, некроза и гипоксии тканей и органов мишеней), связано с повреждением детоксикационной функции организма. Накопление ОП и веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНиСММ) в плазме крови и на эритроцитах при воздействии ураном связано с нарушением их утилизации почками. Изменения со стороны печени проявлялись в увеличении активности двух трансаминаз - аланиновой и аспарагиновой аминотрансферазы, что характеризовало развитие синдрома цитолиза. Анализ данных показал, что у всех опытных крыс развивалась почечная недостаточность с ретенцией конечных азотистых метаболитов - мочевины и креатинина.
Результаты распределения клеток иммунной системы, в частности лимфоцитов крови и спленоцитов селезенки, по стадиям некроза, раннего и позднего апоптоза после воздействия ураном представлены в таблице 5.
При моделировании комбинированного воздействия ураном отмечают накопление элемента в органах ретикулоэндотелиальной системы и их токсическое поражение. Комбинированное воздействие приводит к существенному увеличению числа клеток в стадиях как некроза, так и раннего и позднего апоптоза. То есть при комбинированном поступлении урана зарегистрировано синхронное поражение клеток иммунной системы (T- и B-лимфоцитов, моноцитов) на различных стадиях клеточной гибели на 14-е сутки. Превалирование процессов некроза свидетельствует о прямом цитотоксическом действии урана на клетки иммунной системы.
Влияние острого воздействия обедненным ураном на развитие патоморфологических изменений в почках.
Исследуют почки животных из групп плацебо и комбинированного острого воздействия ОУ. У крыс из 1-й группы корковый слой почки с сохранением типового гистологического строения, петли капилляров клубочков четко контурируются, равномерно полнокровны, мочевое пространство - капсула клубочка не расширена; эпителий извитых проксимальных и дистальных канальцев эозинофильный с равномерным прокрашиванием цитоплазмы, с наличием четких внутрицитоплазмотических гранул.
Установлено, что при воздействии доз менее 10 мгU/кг массы тела развиваются обратимые изменения в дистальных канальцах почек. Однократное воздействие ураном в дозе 15 мгU/кг приводит к поражению почек у 33% животных. В дозе 30 мгU/кг уран вызывает глубокие морфологические изменения в почках 100% животных.
При гистологическом изучении срезов почек опытных крыс (17 и 21 группа) выявлены следующие признаки. В клубочках петли капилляров коллабированы, с уменьшением в размере, полнокровие сосудов микроциркулятроного русла, неравномерно выраженный отек мезангия с отсутствием клеточной реакции, мочевое пространство неравномерно расширено, подоциты внутреннего листка капсулы Шумлянского-Боумена с неравномерно выраженными дистрофическими изменениями на различных этапах прогрессии, с признаками преимущественно смешанной жировой и белковой дистрофии, очаговым распадом ядер. Соединительная ткань интерстиция почки с выраженным отеком, неравномерно выраженными дистрофическими изменениями. Эпителий проксимальных извитых канальцев с выраженными дистрофическими и некробиотическими изменения на различных этапах прогрессии, распадом ядер, лизисом цитоплазмы, однако с сохранением структур базальной мембраны. Эпителий дистальных канальцев с умеренными дистрофическими изменениями на различных этапах прогрессии.