Эффективность биологически активных добавок из голотурий и совершенствование технологии их получения

2012

Известия ТИНРО

Том 170

УДК 664.959:593.96 В.Н. Акулин, К.Г. Павель, Т.Н. Слуцкая, Г.Н. Тимчишина, Е.В. Якуш*

Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр, 690091, г. Владивосток, пер. Шевченко, 4

эффективность биологически активных добавок из голотурий и совершенствование технологии их получения

Показана эффективность биологически активных добавок из голотурий, которая заключается в улучшении физического состояния человека. Обосновано безопасное количество экстрактов и гидролизатов из мышечной ткани и внутренностей голотурий, представлена их сравнительная характеристика по общему содержанию гликозидов. Обоснована технология получения порошкообразных БАД из голотурий. Основными этапами технологии являются поглощение жидкой части микрокристаллической целлюлозой, высушивание в вакууме и последующее досушивание в инфракрасной сушилке до содержания воды не более 10 %. После проведения реэкстракции и определения количества гликозидов установлено, что потерь этих компонентов при получении порошкообразных форм не происходит. Установлено, что полученные порошкообразные формы БАД, а также гидролизата из внутренностей безопасны по содержанию токсичных элементов.

Ключевые слова: биологически активные добавки из голотурий, микрокристаллическая целлюлоза, порошкообразные формы биологически активных добавок к пище из голотурий, тритерпеновые гликозиды, улучшение физического состояния.

Akulin V.N., Pavel K.G., Slutskaya T.N., Timchishina G.N., Yakush E.V. Effectiveness of biologically active food supplements from holothurians and improvement of technology for the production // Izv. TINRO. — 2012. — Vol. 170. — P. 291-298.

Effectiveness of dietary supplements from sea cucumbers is shown: they actually improve physical condition of human. Safe level of the extracts and hydrolyzates from muscles and viscera of sea cucumbers is determined, total content of glycosides in these supplements is analyzed comparatively. Technology for the powdered supplements production from the sea cucumbers is substantiated with the following main stages: absorption of the liquid substance by microcrystalline cellulose; drying in vacuum; and finish drying in infrared dryer to the level of water content < 10 %. Conservation of glycosides in these processes is proved; the powdered supplements, as well as the hydrolyzate of viscera, are safe by toxic elements content.

* Акулин Валерий Николаевич, кандидат биологических наук, заместитель генерального директора, e-mail: tinro@tinro.ru; Павель Константин Геннадьевич, кандидат химических наук, старший научный сотрудник, e-mail: pavel@tinro.ru; Слуцкая Татьяна Ноевна, доктор технических наук, заведующая отделом, e-mail: slutskaya@tinro.ru; Тимчишина Галина Николаевна, кандидат технических наук, старший научный сотрудник, e-mail: timchishina@tinro.ru; Якуш Евгений Валентинович, кандидат химических наук, заместитель генерального директора, e-mail: evyakush@tinro.ru.

Akulin Valery N., Ph.D., Deputy Director, e-mail: tinro@tinro.ru; Pavel Konstantin G., Ph.D., senior researcher, e-mail: pavel@tinro.ru; Slutskaya Tatiana N., D.Sc., Head of Department, e-mail: slutskaya@tinro.ru; Timchishina Galina N., Ph.D., senior researcher, e-mail:timchishina@tinro.ru; Yakush Eugeny V., Ph.D., Deputy Director, e-mail: evyakush@tinro.ru.

Key words: dietary supplement, microcrystalline cellulose, powdered BAFS, triterpene glycoside, human physical condition improvement.

Введение

Считается, что биологическая активность голотурий (кукумарии и трепанга) обусловлена в основном наличием тритерпеновых гликозидов. Известно, что эти компоненты типичны для высших наземных растений (семейства розоцветных, гвоздичных и др.) и состоят из агликона (гемина) тритерпеновой природы и присоединенных к нему с помощью гликозидной связи углеводных остатков, образующих углеводную цепь (Еляков, Оводов, 1972). Первые сведения о наличии в тканях голотурий тритерпеновых гликозидов, подобных растительным, появились в 1950-1960-е гг. сначала за рубежом (Nigrelli, Zahl, 1952; Yamanouchi, 1955; Nigrelli, 1960; Seeman, 1967) и позже у нас в стране (Левин, 1982, 1989).

Тритерпеновые гликозиды голотурий имеют широкий спектр биологического действия: обладают антигрибковой, противоопухолевой, гемолитической, цитоста-тической, иммуномодулирующей активностями (Stonik, Elyakov, 1988). В восточной медицине традиционно применяют всевозможные продукты из голотурий, приписывая им целебное действие, связанное с наличием тритерпеновых гликозидов (Левин, 1982; Калинин и др., 1994). Данные по активности и биологической роли гликозидов голотурий приводятся в ряде работ (Анисимов, Чирва, 1980; Burnell, Apsimon, 1983; Еляков, Стоник, 1986; Анисимов, 1987; Kitagawa, 1988; Stonik, Elyakov, 1988; Левин, 1989).

Общее свойство тритерпеновых гликозидов заключается в том, что большинство из этих соединений проявляет гемолитическую активность за счет способности взаимодействовать с эритроцитами, в результате чего клеточная мембрана становится проницаемой для гемоглобина. С помощью электронной микроскопии показано, что на мембранах гемолизованных эритроцитов образуются углубления, причем эффект зависит от концентрации гликозидов (Seeman, 1967). Установлено, что тритерпеновые гликозиды образуют продукты различной стабильности с холестерином, белками и фосфолипидами мембран (Assa et al., 1973). С холестерином тритерпеновые гликозиды образуют малорастворимые комплексы, что используется для их осаждения и выделения. В опытах с исусственными мембранами обнаружено, что гликозиды реагируют с холестерином мембран, повышая проницаемость липосом, которые в свою очередь снижают гемолитическую активность гликозидов. Сделано предположение, что для проявления гемолитической активности необходимо выполнение следующих условий:

— адсорбция гликозидов на мембране эритроцита;

— ферментативный гидролиз гликозидной связи в молекуле гликозида, интенсивность которого зависит от присутствия ингибиторов гликозидаз (альдонолактонов) (Segal, Milo-Goldstein, 1978).

Анализ данных литературы свидетельствует о том, что тритерпеновые гликозиды являются высокотоксичными лишь при непосредственном воздействии на красные кровяные клетки (эритроциты), например, при внутривенном введении. Так, голотурин А из Holothuria mexicana применяется в медицинской практике в тех случаях, когда необходимо провести быстрый и полный гемолиз (Еляков, Стоник, 1986). Способность тритерпеновых гликозидов вызывать гемолиз используется для вычисления «гемолитических индексов» индивидуальных гликозидов, а также в ряде случаев для их количественного определения (Кинта и др., 1990; Kalinin et al., 1992; Чумак и др.,

1995). При пероральном введении токсичность тритерпеновых гликозидов значительно снижается, а небольшое количество не может в этом случае нанести какой-либо вред. Так, например, летальная доза LD50 для мышей, определенная для голотурина из Holothuria leucospilota (= H. vagabunda) в течение 24 ч, оказалась равной 0,75, 70,0 и 400,0 мг/кг соответственно при внутривенном, подкожном и пероральном введении (Yamanouchi, 1955).

Поедание голотурий некоторыми брюхоногими моллюсками можно объяснить тем, что гастроподы обладают высокоактивными ферментами карбогидразами (гли-

козидазами), нейтрализующими возможное токсическое действие гликозидов путем расщепления углеводных цепей (Sova et al., 1970; Elyakova, 1972). Известны случаи потребления голотурий птицами и млекопитающими — каланами, моржами, китами (Mottet, 1976). То, что продукты из голотурий (в частности из трепанга Stichopus ja-ponicus) не приводят к отравлению человека, объясняется небольшими дозами поступающих в организм гликозидов и их частичным гидролизом в кислой среде желудка (Yamanouchi, 1955).

Кроме того, тритерпеновые гликозиды, попадая в организм животных, оказывают существенное влияние на метаболизм и в значительной степени на обмен холестерина (гипохолестеринемическое действие). В обзоре Чике (Cheeke, 1971) на многочисленных примерах показано, что при скармливании тритерпеновых гликозидов у домашней птицы в сыворотке крови и тканях уменьшался уровень холестерина. Считается (Cheeke, 1971; Morgan et al., 1972; Nakaue et al., 1980; Sidhu, OakenfUll, 1986), что в желудочнокишечном тракте животных гликозиды связывают холестерин, как экзогенный (входящий в состав пищевого рациона), так и эндогенный (выделяемый в кишечник вместе с желчью), в результате чего его уровень в крови снижается.

Кроме того, опубликованы материалы, позволяющие судить об антиопухолевой активности гликозидов из кукумарии (Rodriguez et al., 1991; Collin, 2004; Попов, 2006), однако данных о клинических испытаниях нами не найдено.

Разработанная в ТИНРО-центре технология получения БАД из голотурий (трепанга и кукумарии) по большей части основывается на использовании отходов при производстве из них пищевой продукции:

— «Акмар» — сублимированный порошок из варочных вод при кулинарной обработке кукумарии или трепанга;

— «ТИНГОЛ-2» — экстракт из внутренностей кукумарии и трепанга;

— «Эрогол» — порошок из внутренностей кукумарии.

Известны также лечебно-профилактические продукты из кукумарии, полученные путем ферментного гидролиза мышечной ткани («ТИНГОЛ-1») или внутренностей (Акулин и др., 2005). Эти биологически активные добавки различаются по массовому содержанию гликозидов, а также по агрегатному состоянию: «Акмар» и «Эрогол»

— твердые порошкообразные, все остальные — жидкие. Поэтому очень важно совершенствование технологии их получения с целью удобства использования. Кроме того, представляются целесообразными обобщение и систематизация эффективности их действия, установленного ранее при проведении совместных работ с сотрудниками кафедры фармакологии Владивостокского государственного медицинского университета (ВГМУ).

Целью настоящего исследования является расчет дозировок БАД из кукумарии, а также совершенствование их технологии, основанной на получении порошкообразных форм.

Материалы и методы

Расчет безопасного суточного количества препарата для человека проводился согласно рекомендациям (Гуськова, 2001) на основании ранее установленного показателя LD50 = 7,2 мл ТИНГОЛа, полученного при проведении биологических испытаний совместно с ВГМУ (Божко и др., 1999; Каредина и др., 2002; Зенкина и др., 2007).

В качестве исходного биологического материала использовались варочные воды после термической обработки кукумарии, соответствующей требованиям ТУ 9265-19700472012-2001 на кукумарию мороженую, а также мороженые внутренности кукумарии (ТУ 92899 164-72012-2001 «Внутренности кукумарии мороженые-полуфабрикат»).

В качестве пищевого сорбента (наполнителя) была использована микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ) по ТУ 1026-034-07508003-02, разрешенная по показателям безопасности в пищевой промышленности на территории Российской Федерации (Булдаков, 1996).

Гидролиз внутренностей кукумарии проводили согласно ранее полученным данным (Чумак и др., 1996) с использованием протеолитического фермента мегатерина при температуре гидролиза 40 оС и продолжительности 10 ч.

Количество действующих биологически активных веществ определяли с использованием разработанного нами ранее спектрофотометрического метода, в основу которого положено известное спектрофотометрическое определение стихопозида А из трепанга Stichopus japonicus (Аминин и др., 1981). После проведения экстракции 80 %-ным этиловым спиртом, удаления липидов (экстракция хлороформом) и очистки с применением твердофазной экстракции (картриджи SUPELCO SPE-C18) измеряли оптическую плотность полученных продуктов при 258 нм (Чумак и др.,

1995). Содержание гликозидов вычисляли относительно градуировочного графика, построенного после проведения аналогичной реакции со щелочью образцов стандартов гликозидов с известными концентрациями (ТУ 9388-018-2698170-94 «Препарат КД (кукумариозид»).

Определение токсичных элементов проводили с использованием стандартных методов.

Результаты и их обсуждение

На основании проведенных испытаний по определению токсичности ТИНГОЛа-2 и установленной величины LD50, равной 7,2 мл/кг массы животного (самцы мышей, средняя масса 24 г), нами выведена зависимость количества погибших животных от дозы ТИНГОЛа-2 (см. рисунок): количество животных, погибших при употреблении 7,2 мл/кг, составляет 46 %; на основании этого установлена величина LD50 (летальная доза для 50 % подопытных животных). Кроме того, полученные данные позволили установить максимально недействующую дозу (МНД), которая составляет 4 мл/кг, что в расчете на количество гликозидов составляет 2,05 мг гликозидов на 1 кг массы потребителя (с учетом среднего содержания гликозидов 550 мкг/мл).

Согласно рекомендациям ФАО/ВОЗ для препаратов с МНД от 1 до 5 мг/кг коэффициент запаса при расчете допустимой суточной дозы (ДСД) составляет 50 (Булдаков,

1996). Таким образом, ДСД составляет 2,05 мг/кг : 50 = 0,041 мг/кг, а ДСП (допустимая суточная потребность, определяемая как ДСД, умноженное на значение средней массы человека (70 кг)) составляет 2,9 мг/кг, что обеспечивается ежедневным потреблением почти 200 мл препарата «ТИНГОЛ-2» (дозировка рассчитана с учетом среднего содержания гликозидов в 1 мл препарата).

Это позволило заключить, что доза, составляющая 0,1-0,2 мл препарата «ТИН-ГОЛ-2» в сутки на 1 кг, или 15 мл (в пересчете на гликозиды составляющая 3500-7000 мкг на человека), ниже, чем ДСД, почти на порядок.

Таким же образом рассчитаны и рекомендованы суточные дозировки и других БАД из голотурий (табл. 1), положительно влияющих на организм человека.

Доза ТИНГОЛа-2. мл/кг Зависимость количества погибших экспериментальных животных от дозы препарата Number of dead animals dependence on experimental dose

Таблица i

Содержание, рекомендуемые дозировки гликозидов и установленные эффекты

Table i

Glycosides content, their recommended dosage, and effects in experiments

Наименование БАД Количество гликозидов Рекомендованное суточное потребление Установленный эффект

«ТИНГОЛ-1» — гидролизат из мышечной ткани голотурий 0,2-0,3 мг/мл 15-20 мл Повышение общего тонуса, работоспособности, половой активности у здоровых. Нормализация соотношения Т- и В-лимфоцитов крови, устранение диспротеини-зации у больных

«ТИНГОЛ-2» — экстракт из внутренностей голотурий 0,6-0,7 мг/мл 5-15 мл Повышение физической активности, половой активности; стимулирующее действие при стрессах и при воздействии радиации

«Акмар» — сублимированные варочные воды при тепловой обработке голотурий 0,1-0,2 мг/г 15-30г Повышение физической и половой активности, нормализация сна

«Эрогол» — сублимированный продукт из внутренностей голотурий 0,4-0,6 мг/г 10-12г Улучшение физического состояния, повышение сексуального влечения (либидо) и половой активности

Необходимо пояснить, что общее суточное количество гликозидов при использовании БАД, указанных в табл. 1, находится в пределах 1500-7200 мкг на человека со средней массой 70-75 кг; так, для ТИНГОЛа-1 это 3000-6000 мкг, для ТИНГОЛа-2 — 3000-7000 мкг, для Акмара и Эрогола — соответственно 1500-6000 и 4000-7200 мкг.

Представление о необходимом регулировании количества потребляемых БАД из голотурий, так же как гликозидов из женьшеня, обсуждается в работах А.М. Попова (Попов и др., 1994; Попов, 2002, 2006).

Сравнение дозировок, указанных в табл. 2, с известными, рекомендуемыми в литературе показало следующее: количество гликозидов, обеспечивающее выживаемость облученных мышей, составляет 2 мкг/кг (инъекционно), при лечении алеутской болезни норок — 1 мкг/кг (Калинин и др., 1994; Пат. № 97113260/14 (РФ), Пат. № 4891144/15 (РФ)). Соответственный пересчет этих данных на суточную дозу для человека составляет от 700 до 69209 мкг. Это означает, что рекомендуемые дозировки существенно ниже верхнего уровня, известного в литературе, что служит дополнительным аргументом в пользу экспериментальных данных о малой токсичности исследованных БАД — источников гликозидов.

Основным процессом при получении гликозидсодержащих добавок из кукумарии являются спиртовая экстракция или ферментативный гидролиз, в результате чего готовые БАД имеют жидкую форму, что не всегда удобно при организации производства, транспортировки, а также для потребителя. Исследования, обосновывающие возможность получения порошкообразных форм, базировались на сорбции биологически активных гликозидов пищевым сорбентом, в качестве которого выбрана микрокристаллическая целлюлоза, которая, как известно, является типичным наполнителем в фармакологии, применяется в пищевой промышленности для производства мороженого, кондитерских изделий, соусов и других продуктов. Кроме того, микрокристаллическая целлюлоза находит широкое применение как основа при производстве новых биологически активных добавок (Прокопьева и др., 1997; Жуйкова и др., 2010; Задин

Таблица 2

Содержание тритерпеновых гликозидов в исследуемых сухих формах БАД, мкг/г,

средние значения

Table 2

Content of triterpene glycosides in examined forms of dry dietary supplements, mg/g, mean values

Образец Время экст ракции, мин Исходное содержание гликозидов в жидких образцах

30 6G

Гидролизат из мыш. ткани кукумарии (ТИНГОЛ-i) 595,6 580,4 249,3

Гидролизат из внутренностей кукумарии 1334,0 1342,6 559,8

Варочные воды после 2 ч варки кукумарии 438,5 426,2 184,8

Экстракт из внутренностей кукумарии (ТИнГоЛ-2) 1910,5 1892,7 640,3

и др., 2010). Оценка возможного взаимодействия микрокристаллической целлюлозы с наносимыми компонентами показала отсутствие химических связей и позволила говорить только о физической сорбции (Бурханова и др., 2002), что представляется чрезвычайно важным при решении данной проблемы.

Первым этапом работы явилось определение максимальной поглощаемости жидких компонентов одной весовой частью микрокристаллической целлюлозы. Установлено, что полное насыщение (вес/объем) достигается для ТИНГОЛа-1 и варочных вод после термической обработки через 15-20 мин взаимодействия и составляет 1,0 : 2,4, а для ТИНГОЛа-2 при тех же условиях эта величина равна 1,0 : 3,0. После окончания сорбции проводилось двустадийное высушивание сначала на вакуумной сушке в течение 40-50 мин, затем досушивание до содержания воды 10 % при 20 ± 2 °С с принудительной вентиляцией в течение 1 ч.

Конечный продукт после окончательного высушивания представляет собой порошок бежевого или светло-бежевого цвета с запахом и вкусом, свойственным продукции из кукумарии.

Повторная экстракция (реэкстракция) гликозидсодержащих компонентов из сухих порошков проводилась в следующих условиях: время — 30-60 мин, соотношение экстрагируемого материала и спирта — 1 : 3, температура — 20 ± 2 °С. Для обеспечения процесса экстракции применялось механическое перемешивание (встряхивание).

Полученные данные свидетельствуют о том, что, во-первых, существенной зависимости между количеством гликозидов и временем реэкстракции нет, во-вторых, массовая доля гликозидов в целом совпадает с содержанием в исходных образцах. При анализе данных табл. 2 стоит учесть увеличение количества гликозидов против исходного в соответствии с объемом, поглощенным микрокристаллической целлюлозой.

Установлено, что использование микрокристаллической целлюлозы и высушивание образцов (существенное концентрирование) не влекут за собой накопления токсичных элементов (табл. 3).

Таблица 3

Содержание токсичных элементов в сухих порошках из варочных вод кукумарии и гидролизата внутренностей, мг/кг

Table 3

Content of toxic elements in dry powders on the basis of the sea cucumber cooking water,

and its viscera hydrolyzate, mg/kg

Образец Свинец Кадмий Мышьяк Ртуть

На основе варочных вод 0,15 0,0025 0,5 0,002

На основе гидролизата из внутренностей 0,10 0,0025 0,4 0,00i

Норма, не более* 10,0 2,0 12,0 0,5

* Согласно СанПиНу 2.3.2.1078-01.

Полученные результаты свидетельствуют о безопасности исследованных образцов (варочные воды и гидролизат внутренностей на МКЦ) по содержанию токсичных элементов.

Выводы

Сорбция микрокристаллической целлюлозой гликозидсодержащих компонентов, а затем высушивание не сопровождаются потерей целевого продукта (гликозидов) и характеризуются простым процессом физического поглощения. Собственно технологический процесс получения порошкообразных продуктов, который заключается в использовании МКЦ как сорбента и последующей сушке, не нуждается в существенной доработке за исключением обоснования необходимого технологического оборудования.

Список литературы

Акулин В.Н., Калиниченко Т.П., Карлина А.Е. и др. Рациональное использование кукумарий дальневосточных морей // Вопр. рыб-ва. — 2005. — № 2(22). — С. 389-404.

Аминин Д.Л., Шенцова Е.Б., Анисимов М.М., Кузнецова Т.А. Спектрофотометрическое определение стихопозида А из голотурии Stichopus japonicus S. // Антибиотики. — 1981. — Т. 26, № 8. — С. 585-588.

Анисимов М.М. Тритерпеновые гликозиды и структурно-функциональные свойства мембран // Биол. науки. — 1987. — № 10. — С. 49-63.

Анисимов М.М., Чирва В.Я. О биологической роли тритерпеновых гликозидов // Успехи совр. биол. — 1980. — № 6. — С. 573-582.

Божко Г.Г., Каредина В.С., Слуцкая Т.Н., Тимчишина Г.Н. Изучение действия пищевой добавки ТИНГОЛ-1 на репродуктивную систему самцов мышей // Сб. материалов науч. конф. «Состояние здоровья населения Дальнего Востока. Новые медицинские технологии с использованием биоресурсов». — Владивосток : Дальиздат, 1999. — С. 78-80.

Булдаков А.С. Пищевые добавки. Справочник. — СПб. : Ut, 1996. — 240 с.

Бурханова Н.Д., Муратова С.А., Никонович Г.В. и др. Изучение взаимодействия в системах микрокристаллическая целлюлоза — лекарственные вещества // Хим.-фармацевт. журн. — 2002. — Т. 36, № 11. — С. 41-43.

Гуськова Т.А. Концепция развития лекарственной токсикологии // Хим.-фармацевт. журн.

— 2001. — Т. 35, № 10. — С. 48-61.

Еляков Г.Б., Оводов Ю.С. Гликозиды аралиевых // Химия природных соединений. — 1972. — № 6. — С. 697-709.

Еляков Г.Б., Стоник В.А. Терпеноиды морских организмов : монография. — М. : Наука, 1986. — 269 с.

Жуйкова Н.Н., Саблина О.С., Штокарева Е.А., Гаврилов А.С. Комплексный наполнитель для прямого прессования на основе лактозы и микрокристаллической целлюлозы // Хим.-фармацевт. журн. — 2010. — № 4. — С. 53-56.

Задин Р.Р., Вдовина Г.П., Фотеев В.Т., Корюкина И.П. Новый комбинированный энтеросорбент // Фармация. — 2010. — № 2. — С. 34-36.

Зенкина В.Г., Каредина В.С., Солодкова О.А. и др. Морфология яичников андрогени-зированных крыс на фоне приема экстракта из кукумарии // Тихоок. мед. журн. — 2007. — № 4. — С. 70-72.

Калинин В.И., левин В.С., Стоник В.А. Химическая морфология: тритерпеновые гли-козиды голотурий : монография. — Владивосток : Дальнаука, 1994. — 284 с.

Каредина В.С., Зенкина В.Г., Слуцкая Т.Н. Влияние тритерпеновых гликозидов (ТГ) морских гидробионтов на овогенез млекопитающих // 1-я Междунар. конф. «Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки». — М., 2002. — С. 80-81.

Кинта П.К., Фадеев Ю.М., Акимов Ю.А. Терпеноиды растений : монография. — Кишинев : Штиинца, 1990. — 88 с.

левин В.С. Дальневосточный трепанг : монография. — Владивосток : Дальневост. кн. изд-во, 1982. — 192 с.

левин В.С. О биологической роли и происхождении токсичных гликозидов иглокожих // Журн. общ. биол. — 1989. — Т. 50, № 2. — С. 207-212.

Пат. № 4891144/15 (РФ) Средство для профилактики и лечения алеутской болезни норок / Гришин Ю.И., Ковалевская А.М., Стоник В.А. и др. Опубл. 09.06.95.

Пат. № 97113260/14 (РФ) Средство для лечения лучевой болезни / Ковалевская А.М., Стоник В.А. Опубл. 27.11.99.

Попов А.М. Механизмы биологической активности гликозидов женьшеня: сравнение с гликозидами голотурий // Вестн. ДВО РАН. — 2006. — № 6. — С. 92-104.

Попов А.М. Сравнительное изучение цитотоксического и гемолитического действия тритерпеноидов женьшеня и голотурий // Изв. РАН. Сер. Биол. — 2002. — № 2. — С. 155-164.

Попов А.М., Агафонова Л.Н., Самошина Н.Ф., Уварова Н.И. Изучение иммуномодулирующей активности тетроциклических тритерпеновых гликозидов даммаранового и голостанового ряда // Антибиотики и химиотерапия. — 1994. — Т. 39, № 7. — С. 24-29.

Прокопьева Л.А., Силин Ю.В., Мисовец Ю.В. Микрокристаллическая целлюлоза как энтеросорбент и основа новых биологически активных добавок // Terra medica. — 1997. — № 3. — С. 36-37.

Чумак А.Д., Павель К.Г., Тимчишина Г.Н. Определение тритерпеновых гликозидов в голотуриях // Изв. ТИНРО. — 1995. — Т. 118. — С. 36-40.

Чумак А.Д., Павель К.Г., Тимчишина Г.Н. Способ получения гидролизатов из кукумарии // Тез. докл. науч. конф. «Рыбохозяйственные исследования океана». — Владивосток, 1996. — С. 31-32.

Assa Y., Shany S., Gestetner B. et al. Interaction of alfalfa saponins with components of the erycotyte membrane in hemolysis // Biochem. Biophys. Acta. — 1973. — Vol. 307. — P. 83-91.

Burnell D.J., Apsimon J.W. Echinoderms saponins // Marine natural products: Chemical and biological perspectives / ed. Scheuer PJ. — N.Y. : Academic Press, 1983. — Vol. 5. — P. 287-389.

Cheeke P.R. Nutritional and physiological implications of saponins: a review // Can. J. Anim. Sci. — 1971. — Vol. 51. — P. 621-632.

Collin P.D. Peptides having anticancer and antiinflammatory activity : Пат. США 6.767.890. В. 1. Jul. 27, 2004.

Elyakova L.A. Distribution of cellulases and chitinases in marine invertebrates // Comp. Biochem. Physiol. — 1972. — Vol. 43B. — P. 621-632.

Kalinin V.I., Volkova O.V., Likhatskaya G.N. et al. Hemolytic activity of triterpene glycosides from Cucumariidae family holothurians and evolution of this group of toxins // J. Nat. Toxins. — 1992. — Vol. 108, № 2. — P. 17-30.

Kitagawa I. Research of biologically active marine natural products // Yakugaku Zasshi. — 1988. — Vol. 108, № 5. — P. 398-416.

Morgan B., Heald S.G., Brooks J.L., Tee J. Green. The interactions between dietary saponin, cholesterol and related sterols in the chick // Poultry Science. — 1972. — Vol. 51. — P. 677-682.

Mottet M.G. Technical report of the sea urchin and sea cucumber. — Compl. Rep. Wash. Dep. Fish., 1976. — 247 p.

Nakaue H.S., Lowry R.R., Cheeke P.R., Arscott G.H. The effect of dietary Alfalfa of varying saponins content on yolk cholesterol level and layer performance // Poultry Science. — 1980. — Vol. 59. — P. 2744-2748.

Nigrelli R., Zahl P.A. Some biological characteristics of holothurin // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. — 1952. — Vol. 81(2). — P. 379-380.

Nigrelli R.F. Biochemistry and Pharmacology of compounds delived from marine organisms // Ann. N.Y. Academ Sci. — 1960. — Vol. 90. — P. 884-982.

Rodriguez J., Castro R., Riguera R. Holothurinosides: New antitumor non sulphated triterpenoid glycosides from the sea cucumber Holothuria forskalii // Tetrahedron. — 1991. — Vol. 47, № 26. — P. 4753-4762.

Seeman P. Transient holes in the erythtocyte membrane during hypotonic hemolysis and stable holes in the membrane after lysis by saponin and lysolecithin // J. Cell. Biol. — 1967. — № 32. — P. 55.

Segal R., Milo-Goldstein I. The susceptibility of cholesterol-depleted erythrocytes to saponin and sapogenin hemolysis // Biochem. Biophys. Acta. — 1978. — Vol. 512. — P. 223-226.

Sidhu G.S., Oakenfull D.G. A mechanism for the hypocholesterolaemic activity of saponins // British Journ. of Nutrition. — 1986. — Vol. 55. — P. 643-649.

Sova V.V., Elyakova L.A., Vaskovsky V.E. The distribution of laminarinases in marine invertebrates // Comp. Biochem. Physiol. — 1970. — Vol. 32. — P. 459-464.

Stonik V.A., Elyakov G.B. Structure and biologic activities of sponge and sea cucumber toxins // Handbook of natural toxins and venoms / ed. Tu A. — N.Y. : Marcel Dekker Inc., 1988. — P. 107-120.

Yamanouchi T. On the poisonous substance contained in holothurians // Publ. Seto Mar. Biol. Lab. — 1955. — Vol. 4(213). — P. 183-203.

Поступила в редакцию 20.06.2012 г.