БИОТРАНСПЛАНТАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КОСТНОЙ ТКАНИ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ

1. Биотрансплантат для лечения дегенеративных заболеваний костной ткани, характеризующийся тем, что содержит мультипотентные стромальные клетки (МСК), полученные из жировой ткани взрослых доноров, трансфицированные геном ВМР-2, характеризующиеся иммунофенотипом CD13+, CD29+, CD44+, CD73+, CD90+, CD105+, CD31-, CD34-, CD45-, способные к направленной дифференцировке в остеогенном, хондрогенном и адипогенном направлениях, и биосовместимый носитель, который представляет собой высокоочищенный костный матрикс с сохраненным коллагеновым и минеральным компонентом и природной архитектоникой.
2. Биотрансплантат по п.1, характеризующийся тем, что в качестве биосовместимого носителя используют материал «Остеоматрикс».
3. Биотрансплантат по п.1, характеризующийся тем, что мультипотентные стромальные клетки получают из жировой ткани взрослых доноров, в том числе для аутологичного использования, путем липоаспирации.
2
50
4. Способ получения биотрансплантата для лечения дегенеративных заболеваний костной ткани по п.1, характеризующийся тем, что липоаспират, полученный у взрослых доноров, дезагрегируют путем инкубации в растворе Версена с добавлением 0,25% трипсина при 37°С в течение 2 ч, после центрифугирования осадок разводят ростовой средой с 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 100 мг/л амикацина, и культивируют клетки на чашках Петри при стандартных культуральных условиях: 37°С, 5% СО в условиях насыщающей влажности, полученные культуры МСК перед трансфекцией растят до 80% монослоя на полной ростовой среде, далее получают аденовирусную конструкцию, несущую кДНК костного морфогенетического белка BMP-2, при этом проводят синтез полной копии кДНК гена BMP-2 с фланкирующими последовательностями, содержащими сайты рестрикции, которые клонируют в плазмиду pShuttle-CMV под контроль промотора цитомегаловируса человека, в результате чего получают вектор pShuttle-CMV-BMP-2, который используют для трансфекции культуры МСК, при этом клетки культивируют с суспензией вирусных частиц, приготовленных на среде DMEM с 2% ЭТС и 100 мг/л амикацина в течение 16 ч, при вирусной нагрузке на монослой 160 ЦПД (единиц тканевой цитопатической дозы) на 1 мл суспензии, в результате получают мультипотентные стромальные клетки, трансфицированные геном ВМР-2, характеризующиеся иммунофенотипом CD13+, CD29+, CD44+, CD73+, CD90+, CD105+, CD31-, CD34-, CD45-, способные к направленной дифференцировке в остеогенном, хондрогенном и адипогенном направлениях, полученную клеточную культуру иммобилизуют на биосовместимом носителе, который представляет собой высокоочищенный костный матрикс с сохраненными коллагеновым и минеральным компонентами и природной архитектоникой, с помощью обогащенной тромбоцитами плазмы крови, при этом полимеризацию проводят в течение 3-5 мин, добавляя в систему тромбин, растворенный в 10%-ном растворе хлорида кальция, и получают биотрансплантат для лечения дегенеративных заболеваний костной ткани.