МУТАНТЫ ГЕМАГГЛЮТИНИНА ВИРУСА ГРИППА

1. Нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа Н31, причем белок НА содержит аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере одну замену по сравнению с соответствующей аминокислотной последовательностью дикого типа, причем указанная по меньшей мере одна замена представляет собой замену одной или более аминокислот, соответствующих аминокислотам в положениях 382, 384, 392, 431, 524, 525, 526 или 528 A/Hong Kong/4801/14 НА.
2. Нуклеиновая кислота по п. 1, содержащая
первую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 382 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не аспарагин, например, на аланин или консервативную замену аланина,
вторую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 524 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не цистеин, например, на серии или консервативную замену серина, и
третью замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 528 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не цистеин, например, на лейцин или консервативную замену лейцина.
3. Нуклеиновая кислота по п. 1, содержащая
первую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 384 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не лейцин, например, на валин или консервативную замену валина,
вторую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 524 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не цистеин, например, на серии или консервативную замену серина, и
третью замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 528 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не цистеин, например, на лейцин или консервативную замену лейцина.
4. Нуклеиновая кислота по п. 1, содержащая
первую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 392 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не фенилаланин, например, на аспарагиновую кислоту или консервативную замену аспарагиновой кислоты,
вторую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 524 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не цистеин, например, на серии или консервативную замену серина, и
третью замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 528 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не цистеин, например, на лейцин или консервативную замену лейцина.
5. Нуклеиновая кислота по п. 1, содержащая
первую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 431 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не лейцин, например, на метионин или консервативную замену метионина,
вторую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 524 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не цистеин, например, на серии или консервативную замену серина, и
третью замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 528 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не цистеин, например, на лейцин или консервативную замену лейцина.
6. Нуклеиновая кислота по п. 1, содержащая
первую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 382 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не аспарагин, например, на аланин или консервативную замену аланина,
вторую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 384 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не лейцин, например, на валин или консервативную замену валина,
третью замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 524 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не цистеин, например, на серии или консервативную замену серина, и
четвертую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 528 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не цистеин, например, на лейцин или консервативную замену лейцина.
7. Нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-6, причем белок НА дополнительно содержит замену по аминокислотам, соответствующих аминокислотам в положениях 525, 526 или 525 и 526 A/Hong Kong/4801/14 НА, причем замена аминокислоты в положении 525 представляет собой замену на не фенилаланин, например, на лейцин или консервативную замену лейцина, а замена аминокислоты в положении 526 представляет собой замену на не лейцин, например, на валин или консервативную замену валина.
8. Нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-7, причем консервативная замена аланина представляет собой серии, глицин, треонин, цистеин или валин;
консервативная замена валина представляет собой изолейцин, метионин, аланин или треонин;
консервативная замена аспарагиновой кислоты представляет собой глутаминовую кислоту, глутамин или серии;
консервативная замена метионина представляет собой изолейцин, глутамин, валин или фенилаланин;
консервативная замена серина представляет собой треонин, аланин, аспарагин, аспарагиновую кислоту, глутамин, глицин, глутаминовую кислоту или лизин; и/или
консервативная замена лейцина представляет собой изолейцин, валин, метионин, фенилаланин или валин.
9. Модифицированный белок гемагглютинин (НА) гриппа Н3, кодируемый нуклеиновой кислотой по любому из пп. 1-8.
10. Вирусоподобная частица (VLP), содержащая белок НА, кодируемый нуклеиновой кислотой по любому из пп. 1-8.
11. Способ получения вирусоподобной частицы (VLP) в растении, части растения или растительной клетке, предусматривающий:
a) i) введение нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-8 в растение, часть растения или растительную клетку; и, необязательно, введение второй нуклеиновой кислоты, кодирующей белок протонного канала, такой как белок М2 подтипа А гриппа; или
ii) предоставление растения, части растения или растительной клетки, содержащих нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-8, и необязательно, причем растение, часть растения или растительная клетка дополнительно содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую белок протонного канала, такой как белок М2 подтипа А гриппа; а также
b) инкубацию растения, части растения или растительной клетки в условиях, которые допускают экспрессию белка НА, кодируемого нуклеиновой кислотой, и, необязательно, белка протонного канала, кодируемого второй нуклеиновой кислотой, тем самым производя VLP; и
c) необязательно, сбор растения, части растения или растительной клетки и очистку VLP.
12. VLP, полученная способом по п. 11, необязательно дополнительно содержащая один или более липидов, полученных из растения, части растения или растительной клетки, специфические для растений N-гликаны, модифицированные N-гликаны или их комбинацию.
13. Растение, часть растения или растительная клетка, содержащие рекомбинантную нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-8, белок НА по п. 9 или VLP по п. 10 или 12.
14. Композиция для индукции иммунного ответа, содержащая эффективную дозу VLP по любому из пп. 10 или 12 и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант, наполнитель или вспомогательное вещество.
15. VLP по любому из пп. 10 или 12 для применения для индукции иммунитета к инфекции гриппа у субъекта, причем VLP, необязательно, вводят субъекту перорально, интраназально, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно или подкожно.
16. Способ увеличения выхода продукции вирусоподобных частиц (VLP) в растении, части растения или растительной клетке, предусматривающий:
a) введение нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-8 в растение, часть растения или растительную клетку или предоставление растения, части растения или растительной клетки, содержащих нуклеиновую кислоту, по любому из пп. 1-10; а также
b) инкубацию растения, части растения или растительной клетки в условиях, которые допускают экспрессию модифицированного белка НА гриппа, кодируемого нуклеиновой кислотой, тем самым производя VLP с более высоким выходом по сравнению с растением, частью растения или растительной клеткой, экспрессирующей немодифицированный белок НА гриппа, и
c) необязательно, сбор растения, части растения или растительной клетки и очистку VLP.
17. Модифицированный белок гемагглютинин (НА) гриппа Н3, содержащий аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере одну замену по сравнению с соответствующей аминокислотной последовательностью дикого типа, причем указанная по меньшей мере одна замена представляет собой одну или более аминокислот, соответствующих аминокислотам в положениях 382, 384, 392, 431, 524, 525, 626 или 528 из A/Hong Kong/4801/14 НА.