ОПТИМИЗАЦИЯ ВЕКТОРА PET15B СИНТЕЗА ФЕРМЕНТА UVRD-ГЕЛИКАЗЫ

Способ получения экспрессионной векторной конструкции на основе вектора pET15b, предназначенного для трансформации штамма Escherichia coli BL21(DE3) и последующего микробиологического синтеза рекомбинантного 6-his-меченого фермента uvrD-геликазы, включающий в себя выращивание организма Thermus thermophilus, выделение тотальной ДНК, амплификацию целевого гена uvrD с помощью системы праймеров, несущих адаптеры с сайтами рестрикции фермента NdeI, представленных последовательностями SEQ ID NO: 1-2, выделение и очистка продуктов амплификации из агарозного геля, рестрикцию вектора pET15b рестриктазой NdeI, лигирование продуктов амплификации в вектор по сайту рестрикции NdeI с "липкими концами", при этом целевой ген ориентирован под T7 промотор, а получаемый фермент 6-his-меченый, что позволяет использовать хроматографические колонки с Ni для высокоэффективной очистки целевого фермента.