ВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ НА ОСНОВЕ AAV И ПУТИ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

13
14
1. Способ лечения спинальной мышечной атрофии (SMA) у пациента-человека, нуждающегося в этом, включающий интратекальное введение вирусного вектора на основе AAV9, содержащего полинуклеотид, кодирующий белок фактора выживания мотонейронов (SMN), где вирусный вектор на основе AAV9 вводят в дозе, составляющей от приблизительно 5×10 vg до 5×10 vg.
2. Способ по п. 1, где вирусный вектор на основе AAV9 дополнительно содержит модифицированный ITR AAV2, промотор гена бета-актина курицы (CB), энхансер немедленно-раннего гена цитомегаловируса (CMV), модифицированный поздний интрон 16S SV40, сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста (BGH) и немодифицированный ITR AAV2.
3. Способ по п. 1, где белок SMN содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 2 и/или вирусный вектор на основе AAV9 содержит последовательность нуклеиновой кислоты с SEQ ID NO: 1.
4. Способ по п. 1, где вирусный вектор на основе AAV9 содержит капсид, содержащий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 3.
5. Способ по п. 1, дополнительно включающий фармацевтически приемлемый носитель, подходящий для интратекального введения.
6. Способ по п. 1, где вирусный вектор на основе AAV9 вводят вместе с контрастной средой.
7. Способ по п. 6, где контрастная среда содержит йогексол.
14
8. Способ по п. 1, где вирусный вектор на основе AAV9 вводят в дозе, составляющей приблизительно 1,2×10 vg.
14
9. Способ по п. 1, где вирусный вектор на основе AAV9 вводят в дозе, составляющей приблизительно 2,4×10 vg.
10. Способ по п. 1, где SMA представляет собой SMA II типа или SMA III типа.
11. Способ по п. 1, где на момент введения вирусного вектора на основе AAV9 возраст пациента составляет:
шесть месяцев или больше;
от шести месяцев до двадцати четырех месяцев;
от двадцати четырех месяцев до шестидесяти месяцев;
двадцать четыре месяца или меньше или
шесть месяцев или меньше.
12. Способ по п. 1, где до введения или на момент введения вирусного вектора на основе AAV9 у пациента:
имеются биаллельные нуль-мутации или инактивирующие делеции в SMN1;
имеется делеция седьмого экзона в SMN1;
имеются три или более копии SMN2;
отсутствует замена c.859G>C в седьмом экзоне по меньшей мере одной копии гена SMN2;
начало заболевания проявляется до возраста приблизительно 12 месяцев;
на момент введения вирусного вектора на основе AAV9 имеется способность сидеть без посторонней помощи, как определено согласно критериям Многоцентрового исследования по разработке справочных показателей роста Всемирной организации здравоохранения (WHO-MGRS), в течение приблизительно 10 секунд или больше, но он не может стоять или ходить;
3
наблюдается одно или несколько из следующего: уровни гамма-глутамилтрансферазы в менее чем приблизительно 3 раза превышают верхний предел нормы, уровни билирубина составляют менее приблизительно 3,0 мг/дл, уровни креатинина составляют менее приблизительно 1,0 мг/дл, уровни Hgb составляют приблизительно 8-18 г/дл и/или количество лейкоцитов составляет менее приблизительно 20000 на мм;
количество тромбоцитов составляет более приблизительно 67000 клеток/мл, или более приблизительно 100000 клеток/мл, или более приблизительно 150000 клеток/мл;
имеется нормальная функция печени;
уровни печеночной трансаминазы составляют менее приблизительно 8-40 Ед/л; и/или
титры антител к AAV9 составляют 1:25, 1:50, 1:75 или 1:100 или меньше, как определено с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA);
отсутствует тяжелый сколиоз (определяемый как искривление позвоночника на ≥ 50°), видимый при рентгенологическом исследовании;
отсутствует противопоказание для проведения спинномозговой пункции или интратекального введения средства терапии;
ранее не проводилась операция или процедура по исправлению сколиоза;
отсутствует необходимость в применении инвазивной вспомогательной вентиляции легких;
в анамнезе отсутствует самостоятельное стояние или ходьба;
не применяется желудочный зонд для кормления;
отсутствует активная вирусная инфекция;
отсутствовала тяжелая инфекция, не являющаяся легочной инфекцией и/или инфекцией дыхательных путей, в пределах четырех недель;
отсутствует сопутствующее заболевание, тяжелая почечная или печеночная недостаточность, известный эпизод судорожного расстройства, сахарный диабет, идиопатическая гипокальциурия или симптоматическая кардиомиопатия;
в анамнезе отсутствует бактериальный менингит или заболевание головного или спинного мозга;
отсутствует известная аллергия или гиперчувствительность к преднизолону или другим глюкокортикостероидам или вспомогательным веществам;
отсутствует известная аллергия или гиперчувствительность к йоду или йодсодержащим продуктам;
не происходит прием лекарственных средств для лечения миопатии или невропатии;
не происходит получение иммуносупрессорной терапии, плазмафереза, иммуномодуляторов или адалимумаба в пределах трех месяцев; и/или
не происходило получение исследуемого или одобренного составного продукта или средства терапии с целью лечения SMA.
13. Способ по п. 1, где пациента помещают в положение Тренделенбурга во время и/или после введения вирусного вектора на основе AAV9.
14. Способ по п. 1, где пациенту вводят пероральный стероид за, по меньшей мере, приблизительно 1-48 часов до введения вирусного вектора на основе AAV9 и пациенту:
пероральный стероид вводят в дозе, составляющей приблизительно 1 мг/кг;
пероральный стероид вводят в дозе, составляющей приблизительно 1 мг/кг, и снижают дозу до 0,5 мг/кг/день в течение 2 недель после введения вирусного вектора на основе AAV9, а затем до 0,25 мг/кг/день в течение еще 2 недель;
пероральный стероид вводят в течение по меньшей мере приблизительно 10-60 дней после введения вирусного вектора на основе AAV9;
продолжают введение перорального стероида в течение более 30 дней после введения вирусного вектора на основе AAV9 и до тех пор, пока уровни аспартаттрансаминазы (AST) и/или аланинаминотрансферазы (ALT) не станут ниже значения, в два раза превышающего верхний предел нормы, или ниже приблизительно 120 МЕ/л;
6
продолжают введение перорального стероида в течение более 30 дней после введения вирусного вектора на основе AAV9 и до тех пор, пока T-клеточный ответ в образце крови от пациента не упадет ниже 100 пятнообразующих клеток (SFC) на 10 мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC); и/или
пероральный стероид вводят до тех пор, пока титры антител к AAV9 у пациента не уменьшатся до менее 1:25, 1:50, 1:75 или 1:100 при определении с помощью ELISA,
где необязательно пероральный стероид вводят пациенту один или два раза в день.
15. Способ по п. 14, где пероральный стероид представляет собой преднизолон или эквивалент.
16. Способ по п. 1, дополнительно включающий введение пациенту второго терапевтического средства одновременно или последовательно с введением вирусного вектора на основе AAV9.
17. Способ по п. 16, где второе терапевтическое средство содержит антисмысловой нуклеотид, нацеливающийся на SMN1 и/или SMN2, средство для усиления мышц и/или нейропротектор.
18. Способ по п. 1, где после введения вирусного вектора на основе AAV9 у пациента:
отсутствует тяжелый сколиоз (определяемый как искривление позвоночника на ≥ 50°), видимый при рентгенологическом исследовании;
отсутствует операция или процедура по исправлению сколиоза в пределах от 6 месяцев до 3 лет;
отсутствует необходимость в применении инвазивной вспомогательной вентиляции легких;
не применяется желудочный зонд для кормления;
титры антител к AAV9 составляют 1:25, 1:50, 1:75 или 1:100 или выше, как определено с помощью ELISA, и их отслеживают в течение приблизительно 1-8 недель или до тех пор, пока титры не уменьшатся до менее 1:25, 1:50, 1:75 или 1:100;
количество тромбоцитов составляет менее приблизительно 67000 клеток/мл, или менее приблизительно 100000 клеток/мл, или менее приблизительно 150000 клеток/мл и его отслеживают в течение приблизительно 1-8 недель или до тех пор, пока количество тромбоцитов не увеличится до приблизительно 67000 клеток/мл, или более приблизительно 100000 клеток/мл, или более приблизительно 150000 клеток/мл; и/или
количество тромбоцитов составляет менее приблизительно 67000 клеток/мл и его подвергают лечению с помощью переливания тромбоцитов.
19. Способ по п. 1, где через 1-24 месяца после введения вирусного вектора на основе AAV9 у пациента достигается:
способность стоять без опоры в течение по меньшей мере приблизительно трех секунд, как определено согласно Шкалам оценки развития младенцев и детей малого возраста Бейли;
способность ходить без посторонней помощи, как определено согласно Шкалам оценки развития младенцев и детей малого возраста Бейли;
способность сделать по меньшей мере пять шагов самостоятельно, как определено согласно Шкалам оценки развития младенцев и детей малого возраста Бейли;
изменение после лечения по сравнению с измерением на исходном уровне на момент проведения лечения, как определено согласно Шкалам оценки развития младенцев и детей малого возраста Бейли; и/или
улучшение, составляющее по меньшей мере три пункта по компоненту Крупной моторики Шкал оценки развития младенцев и детей малого возраста Бейли, по сравнению с баллом до введения.
13
14
20. Способ по любому из пп. 1-19, где вирусный вектор на основе AAV9 вводят в дозе, составляющей от приблизительно 6×10 vg до 2,4×10 vg, и где у пациента достигается улучшенный балл согласно Расширенной шкале оценки моторных функций больницы Хаммерсмит по сравнению с баллом до введения; и/или у пациента достигается улучшенный балл согласно Шкалам оценки развития младенцев и детей малого возраста Бейли по сравнению с баллом до введения.
21. Способ по п. 20, где введение приводит к:
улучшению, составляющему по меньшей мере три пункта согласно Расширенной шкале оценки моторных функций больницы Хаммерсмит, к сроку 9 месяцев после введения по сравнению с баллом до введения;
улучшению, составляющему по меньшей мере четыре пункта согласно Расширенной шкале оценки моторных функций больницы Хаммерсмит, к сроку 9 месяцев после введения по сравнению с баллом до введения;
улучшению, составляющему по меньшей мере пять пунктов согласно Расширенной шкале оценки моторных функций больницы Хаммерсмит, к сроку 9 месяцев после введения по сравнению с баллом до введения;
улучшению, составляющему по меньшей мере три пункта по компоненту Крупной моторики Шкал оценки развития младенцев и детей малого возраста Бейли, после введения по сравнению с баллом до введения;
способности стоять без опоры в течение по меньшей мере трех секунд к сроку 12 месяцев после введения; и/или
способности пройти самостоятельно по меньшей мере пять шагов к сроку 12 месяцев после введения.
14
14
22. Фармацевтическая композиция, составленная для интратекального введения, для лечения спинальной мышечной атрофии (SMA), содержащая вирусный вектор на основе AAV9, содержащий модифицированный ITR AAV2, промотор гена бета-актина курицы (CB), энхансер немедленно-раннего гена цитомегаловируса (CMV), модифицированный поздний интрон 16S SV40, полинуклеотид, кодирующий белок фактора выживания мотонейронов (SMN), сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста (BGH) и немодифицированный ITR AAV2, где вирусный вектор на основе AAV9 присутствует в фармацевтической композиции в дозе, составляющей приблизительно 1,2×10 vg или приблизительно 2,4×10 vg.
23. Фармацевтическая композиция по п. 22, где белок SMN содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 2 и/или вирусный вектор на основе AAV9 содержит последовательность нуклеиновой кислоты с SEQ ID NO: 1.
24. Фармацевтическая композиция по п. 22, где вирусный вектор на основе AAV9 содержит капсид, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3.
25. Фармацевтическая композиция по п. 22, дополнительно содержащая контрастную среду.
26. Фармацевтическая композиция по п. 25, где контрастная среда содержит йогексол.
27. Фармацевтическая композиция по п. 22, где композиция находится в контейнере и содержит по меньшей мере одно из следующего:
pH приблизительно 7,7-8,3,
осмоляльность приблизительно 390-430 мОсм/кг,
менее приблизительно 600 частиц размером ≥25 мкм на контейнер,
менее приблизительно 6000 частиц размером ≥10 мкм на контейнер,
13
13
геномный титр от приблизительно 1,7×10 до 5,3×10 vg/мл,
8
10
13
инфекционный титр от приблизительно 3,9×10 до 8,4×10 МЕ на 1,0×10 vg,
13
общий белок приблизительно 100-300 мкг на 1,0×10 vg,
содержание Pluronic F-68 (полоксамер 188) приблизительно 20-80 ppm,
относительная эффективность приблизительно 70-130% на основе клеточного анализа in vitro, где эффективность измеряют относительно эталонного стандарта и/или подходящего контроля,
13
эффективность, определяемая по медиане выживаемости на мышиной модели с SMNΔ7 при дозе 7,5×10 vg/кг, 24 дня или больше,
менее приблизительно 5% пустых капсидов,
общая чистота приблизительно 95% или больше,
уровень эндотоксина приблизительно 0,13 ЕЭ/мл или меньше,
13
менее приблизительно 0,09 нг бензоназы на 1,0×10 vg,
менее приблизительно 30 мкг/г (ppm) цезия,
13
менее приблизительно 0,22 нг бычьего сывороточного альбумина (BSA) на 1,0×10 vg,
5
13
менее приблизительно 6,8×10 пг остаточной плазмидной ДНК на 1,0×10 vg,
5
13
менее приблизительно 1,1×10 пг остаточной hcDNA на 1,0×10 vg и
13
менее приблизительно 4 нг rHCP на 1,0×10 vg.
13
14
28. Применение вирусного вектора на основе AAV9 в получении лекарственного средства для лечения спинальной мышечной атрофии (SMA) у пациента-человека, нуждающегося в этом, где вирусный вектор на основе AAV9 содержит полинуклеотид, кодирующий белок фактора выживания мотонейронов (SMN), и где вирусный вектор на основе AAV9 составлен для интратекального введения в дозе, составляющей от приблизительно 5×10 vg до 5×10 vg.
29. Применение по п. 28, где вирусный вектор на основе AAV9 дополнительно содержит модифицированный ITR AAV2, промотор гена бета-актина курицы (CB), энхансер немедленно-раннего гена цитомегаловируса (CMV), модифицированный поздний интрон 16S SV40, сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста (BGH) и немодифицированный ITR AAV2.
30. Применение по п. 28, где белок SMN содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 2 и/или вирусный вектор на основе AAV9 содержит последовательность нуклеиновой кислоты с SEQ ID NO: 1.
31. Применение по п. 28, где вирусный вектор на основе AAV9 содержит капсид, содержащий аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 3.
32. Применение по п. 28, дополнительно включающее фармацевтически приемлемый носитель, подходящий для интратекального введения.
33. Применение по п. 28, где вирусный вектор на основе AAV9 вводится вместе с контрастной средой.
34. Применение по п. 33, где контрастная среда содержит йогексол.
14
35. Применение по п. 28, где вирусный вектор на основе AAV9 составлен для введения в дозе, составляющей приблизительно 1,2×10 vg.
14
36. Применение по п. 28, где вирусный вектор на основе AAV9 составлен для введения в дозе, составляющей приблизительно 2,4×10 vg.
37. Применение по п. 28, где SMA представляет собой SMA II типа или SMA III типа.
38. Применение по п. 28, где лекарственное средство предназначено для одновременного или последовательного введения со вторым лекарственным средством и где необязательно второе лекарственное средство содержит антисмысловой нуклеотид, нацеливающийся на SMN1 и/или SMN2, средство для усиления мышц и/или нейропротектор.
13
14
39. Применение по любому из пп. 28-38, где лекарственное средство является эффективным для улучшения балла пациента согласно Расширенной шкале оценки моторных функций больницы Хаммерсмит по сравнению с баллом до введения и/или у пациента достигается улучшенный балл согласно Шкалам оценки развития младенцев и детей малого возраста Бейли по сравнению с баллом до введения, где необязательно вирусный вектор на основе AAV9 составлен для введения в дозе, составляющей от 6×10 vg до 2,4×10 vg.
40. Применение по п. 39, где через 1-24 месяца после введения, необязательно через приблизительно 12 месяцев после введения, у пациента достигается:
способность стоять без опоры в течение по меньшей мере приблизительно трех секунд;
способность ходить без посторонней помощи;
способность сделать по меньшей мере пять шагов самостоятельно и/или
изменение после лечения по сравнению с измерением на исходном уровне на момент проведения лечения;
где необязательно a), b), c) и/или d) определяются согласно Шкалам оценки развития младенцев и детей малого возраста Бейли.
41. Применение по п. 39, где у пациента достигается:
улучшение, составляющее по меньшей мере три пункта согласно Расширенной шкале оценки моторных функций больницы Хаммерсмит, к сроку 9 месяцев после введения по сравнению с баллом до введения;
улучшение, составляющее по меньшей мере четыре пункта согласно Расширенной шкале оценки моторных функций больницы Хаммерсмит, к сроку 9 месяцев после введения по сравнению с баллом до введения;
улучшение, составляющее по меньшей мере пять пунктов согласно Расширенной шкале оценки моторных функций больницы Хаммерсмит, к сроку 9 месяцев после введения по сравнению с баллом до введения;
улучшение, составляющее по меньшей мере три пункта по компоненту Крупной моторики Шкал оценки развития младенцев и детей малого возраста Бейли, после введения по сравнению с баллом до введения;
способность стоять без опоры в течение по меньшей мере трех секунд к сроку 12 месяцев после введения; и/или
способность пройти самостоятельно по меньшей мере пять шагов к сроку 12 месяцев после введения.