ЭКСТРАКТ ИЗ РАСТЕНИЯ Аlhagi pseudalhagi, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ И КОСМЕТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ, СПОСОБЫ СНИЖЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ХОЛЕСТЕРИНА И ТРИГЛИЦЕРИДОВ В КРОВИ, СНИЖЕНИЯ УРОВНЯ ПРОДУКТОВ ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ, УЛУЧШЕНИЯ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ, АНТИОКСИДАНТНЫХ СВОЙСТВ, УЛУЧШЕНИЯ СОСТОЯНИЯ КОЖНЫХ ПОКРОВОВ, СТИМУЛИРОВАНИЯ ОБРАЗОВАНИЯ КОЛЛАГЕНА, РАНОЗАЖИВЛЕНИЯ И СНИЖЕНИЯ ВОСПАЛЕНИЯ
Alhagi pseudalhagi EXTRACT, BASED PHARMACEUTICAL AND COSMETIC COMPOSITION, METHODS OF BLOOD CHOLESTEROL AND TRIGLYCERIDES REDUCTION, LIPID OXIDATE LEVEL CONTROL, MICROCIRCULATION IMPROVEMENT AND ANTIOXIDANT PROPERTIES, SKIN IMPROVEMENT, STIMULATION OF COLLAGEN FORMATION, WOUND HEALING AND INFLAMMATION REDUCTION

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к биохимической и медицинской промышленности, а также может быть использовано в области косметологии, а именно к биологически активному экстракту из растения Alhagi pseudalhagi, сем.Fabасеае или бобовые (Leguminosae), фармацевтической и косметической композиции на его основе, а также способам снижения содержания общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и органах животных, снижения уровня продуктов перекисного окисления липидов, улучшения антиоксидантных свойств, процессов микроциркуляции, энергоснабжения и, как следствие, процессов метаболизма в органах и тканях, улучшения состояния кожных покровов и увеличения синтеза коллагена, а также способу стимулирования ранозаживления и способу снижения воспаления кожных покровов.
Уровень техники
Известен экстракт, полученный из растения пустыни, такого как Ajuga turkestanica (живучка туркестанская, ceм.Labiae), содержащий экдистероиды и иридоиды, путем экстракции растворителями или смесью растворителей, включающей воду, этиловый или метиловый спирты, бутилен гликоль или пропиленгликоль для использования в косметологии в качестве средства увлажнения эпидермиса (FR 2801504).
Раскрытие изобретения
Впервые авторами настоящего изобретения получен биологически активный экстракт из растения Alhagi pseudalhagi, обладающий гиполипидемическим, антиоксидантным, антигипоксическим действием, способствующим увеличению содержания АТФ, гликогена и окислительно-восстановительного потенциала клетки и, таким образом, улучшающим метаболические процессы в органах и тканях, таких как миокард, кожа, мышечная ткань, а также ранозаживляющим, противоспалительным, гидратирующим, стимулирующим синтез коллагена и улучшающим состояние кожных покровов свойствами.
Способ получения вещества заключается в экстракции измельченного целого растения, включая надземную часть и корни, различными растворителями, применяемыми в химико-фармацевтической промышленности, включающими воду, спирты (этанол, метанол, н-бутанол, изопропанол, глицерин, пропиленгликоль, бутиленгликоль) и их водные растворы, ацетон, этилацетат, и очистке путем последовательного фильтрования через ультрамембраны.
Таким образом, полученный в соответствии с изобретением экстракт растения Alhagi pseudalhagi представляет собой комплекс биологически активных веществ, обладающих широким спектром терапевтического и косметологического действия, что позволяет применять экстракт и продукты на его основе для:
- снижения содержания общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и органах животных;
- снижения уровня продуктов перекисного окисления липидов;
- улучшения процессов микроциркуляции, энергоснабжения и, как следствие, процессов метаболизма в органах и тканях;
- улучшения гидратации и увеличения синтеза коллагена;
- заживления ран и купирования воспалительных явлений на коже.
Краткое описание чертежей.
Фигура 1. На фигуре представлен микроскопический снимок биопсии кожи при 40-кратном увеличении, демонстрирующий влияние накожного применения экстракта верблюжьей колючки в течение 14 дней на биосинтез коллагена. Окраска по модифицированному методу Маллори. Коллагеновые волокна (показаны стрелками) окрашены в фиолетовый цвет.
Фигура 2. На фигуре представлен контрольный микроскопический снимок биопсии кожи при 40-кратном увеличении без применения экстракта верблюжьей колючки. Окраска по модифицированному методу Маллори.
Фигура 3. На фигуре представлен микроскопический снимок биопсии кожи при 200-кратном увеличении, демонстрирующий влияние накожного применения экстракта верблюжьей колючки в течение 14 дней на биосинтез коллагена. Окраска по модифицированному методу Маллори. Коллагеновые волокна (показаны стрелками) окрашены в фиолетовый цвет.
Фигура 4. На фигуре представлен контрольный микроскопический снимок биопсии кожи при 200-кратном увеличении без применения экстракта верблюжьей колючки.
Осуществление изобретения
Изобретение касается экстракта из цельного растения Alhagi pseudalhagi, содержащего комплекс биологически активных веществ, включающих полимерные проантоцианидины, изопреноиды, флавоноиды, и фармацевтической и косметической композиции на его основе.
Другим аспектом изобретения является использование экстракта из растения Alhagi pseudalhagi в способах снижения содержания общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови у животных и человека, снижения уровня продуктов перекисного окисления липидов, улучшения процессов микроциркуляции, антиоксидантных свойств, энергоснабжения и, как следствие, улучшения метаболизма в органах и тканях человека и животных.
Еще одним аспектом изобретения является использование экстракта из растения Alhagi pseudalhagi в способах улучшения состояния кожных покровов и увеличения синтеза коллагена, а также способу стимулирования ранозаживления и способу снижения воспаления кожных покровов.
При получении экстракта возможно использование как цельного, так и частей растения, но предпочтительно использование для получения целевого продукта всех частей растения.
Экстракты согласно изобретению, содержащие комплекс биологически активных веществ, получают при использовании растворителей, включающих спирты, в частности метанол, этанол, н-бутанол, изопропанол, глицерин, пропиленгликоль, бутиленгликоль и их водные растворы, ацетон, этилацетат или их смеси.
При использовании водных растворов спиртов или ацетона предлагается интервал концентрации воды от 0 до 50 об.%.
При экстракции смесью вода-метанол или этанол преимущественно использовали смесь, состоящую из 50-90 об.% спирта и 50-10 об.% воды. Предпочитали смесь, состоящую из 50 об.% этанола или метанола и 50 об.% воды.
При экстракции смесью вода-глицерин или пропиленгликоль или бутиленгликоль преимущественно использовали смесь, состоящую из 40-60 об.% глицерина или пропиленгликоля или бутиленгликоля и 60-40 об.% воды. Предпочитали смесь, состоящую из 50 об.% глицерина или пропиленгликоля или бутиленгликоля и 50 об.% воды.
При экстракции этилацетатом предпочтение отдавалось экстракции чистым растворителем.
Получаемый экстракт был проанализирован с применением классических аналитических методов, а именно:
- специфических химических реакций;
- высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ);
- тонкослойной хроматографией.
Согласно полученным результатам в экстракте содержались следующие соединения: полимерные проантоцианиды (16,03 мас.%), изопреноиды (36,71 мас.%), флавоноиды (8,0 мас.%), углеводы и остальное (39,26 мас.%).
Полученный экстракт применяется в качестве гиполиподемического средства для снижения содержания общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и органах животных и человека, антиоксидантного средства для снижения уровня продуктов перекисного окисления липидов, средства, улучшающего метаболические процессы в органах и тканях животных и человека, таких как миокард, кожа, мышечная ткань, способствуя увеличению содержания АТФ, гликогена и окислительно-восстановительного потенциала клетки, а также ранозаживляющего, противоспалительного, гидратирующего и стимулирующего синтез коллагена средства.
Экстракт согласно изобретению вводится в организм человека или животного в терапевтически активной дозе, которая зависит от состояния пациента, его возраста и веса. Предпочтительно водный раствор экстракта вводится перорально или в виде инъекций подкожно, внутримышечно или внутривенно в дозе приблизительно от 10 до 250 мг/кг веса человека или животного.
При применении в косметологии в качестве улучшающего состояние кожи и стимулирующего синтез коллагена средства в косметических гелях, лосьонах или кремах, в состав которых могут быть включены любые приемлемые в косметологии наполнители, содержание экстракта предпочтительно составляет от 0,2 до 5 вес.%.
Способ получения экстракта верблюжьей колючки и исследование его биологической активности подтверждается следующим и примерами, которые представлены для иллюстрации, но не для ограничения изобретения конкретными воплощениями.
Примеры
Пример 1. Получение экстракта
В экстрактор объемом 60 л погружают 17 кг измельченного (0,5-0,8 мм) воздушно-сухого сырья верблюжьей колючки и экстрагируют методом настаивания вышеперечисленными растворителями или их смесью. Причем соотношение растворителя и воды составляет 1:10 при использовании этанола, в случае использования этилацетата это соотношение составляет 1:4 и для метанола и глицерина - 1:2.
Экстракцию проводят в интервале температуры 25-35°С. Экстракцию проводят четырехкратно, далее полученные извлечения объединяют и фильтруют через слой бязи. Затем экстракт сгущают в вакуум-выпарном аппарате для удаления растворителя. Смесь охлаждается до окружающей температуры. Охлажденная смесь фильтруется через слой бязи и фильтровальной бумаги для удаления осадка. Полученный концентрат растворяют в воде и передают в ультрафильтрационную установку для очистки полимерных проантоцианидинов и изопреноидов. Полученный концентрат дополнительно обрабатывают активированным углем.
Согласно полученным результатам ВЭЖХ в экстракте содержались следующие соединения: полимерные проантоцианиды (16,03 мас.%), изопреноиды (36,71 мас.%), флавоноиды (8,0 мас.%), углеводы и остальное (39,26 мас.%). Конечный продукт был использован для исследования его биологической активности.
Пример 2. Гиполипидемическое действие.
Гиполипидемическая активность оценивалась по гипохолестеринемического и гипотриглицеридемического действию экстракта у кроликов породы шиншилла. У кроликов массой 2,5-3,0 кг экспериментальный атеросклероз вызывали введением в желудок раствора холестерина в хлопковом масле (0,3 г холестерина и 1 мл масла на 1 кг массы тела). Холестерин вводили в течение 3 месяцев.
Экстракт верблюжьей колючки (ЭВК) вводили внутрь в виде водного раствора в дозе 50 мг/кг на протяжении последних 4 недель. По окончании эксперимента животных декапитировали под легким эфирным наркозом. Содержание общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови определяли на автоанализаторе АА-П фирмы " Techicon"(США), в тканях - унифицированными методами. В качестве контрольного препарата был использован клофибрат в оптимально-терапевической дозе (250 мг/кг).
Таблица 1.Влияние экстракта верблюжьей колючки на содержание липидов у кроликов с экспериментальным атеросклерозом (М±m; п=6-8)
Показатель относительного содержания, в %
Группа
Сыворотка крови
Аорта
Сердце
Печень
Общего холестерина
Контроль
100.0±0,3
100.0±0,2
100.0±0,1
100.0±0,1
ЭВК
23,6±0,2
52.6±0,2
76,9±0,1
66.7±0,1
Клофибрат
23,6±0,2
57.9±0,2
92,3±0,1
73.3±0,1
Показатель относительного содержания, в %
Группа
Сыворотка крови
Аорта
Сердце
Печень
Триглицеридов
Контроль
100.0±0,4
100.0±0,1
100,0±0,1
100.0±0,1
ЭВК
41.0±0,3
71.4±0,1
66,7±0,1
62.5±0,1
Клофибрат
50.0±0,4
78.6±0,1
73,3±0,1
75.0±0,1
Примечание: достоверность к контролю (Р<0,05)
Как видно из табл.1, экстракт верблюжьей колючки выраженно снижал содержание общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и органах животных. Причем действовал в этом плане более выраженно, чем известное гиполипидемическое средство - клофибрат в дозе 250 мг/кг.
Пример 3. Антиоксидантное действие
-4
Оценку антиоксидантного действия экстракта верблюжьей колючки проводили в опытах in vitro и in vivo. В системе in vitro было установлено, что экстракт верблюжьей колючки в концентрации 10 г/мл уменьшал образование МДА в гомогенате печени на 32,9% по сравнению с контролем (чистое перекисное окисление), при этом наблюдалось увеличение активности ферментов антиоксидантной защиты - каталазы и супероксиддисмутазы. При этом экстракт не уступал в опытах in vitro по активности известному антиоксидантному средству (витамин Е), эффект которого в данном случае составлял 36,8%. Увеличение ферментов составило - 19,7 и 19,0% соответственно. О выраженности антиоксидантного эффекта ЭВК в опытах in vivo судили по результатам экспериментов, полученных на кроликах самцах массой 2,5-3,0 кг в условиях экспериментального инфаркта миокарда, воспроизведенного путем перевязки левой нисходящей коронарной артерии. Продукты перекисного окисления липидов - диеновые конъюгаты (ДК) и малоновый диальдегид (МДА) определяли по описанным унифицированным методам. ЭВК вводили 3 дня до операции и 3 дня после в дозе 50 мг/кг орально. При этом в качестве препарата сравнения был использован известный антиоксидант - ионол (вводили также орально в дозе 120 мг/кг). Проведенные эксперименты показали, что экстракт верблюжьей колючки вызывал статистически достоверное снижение содержания ДК и МДА в ишемической зоне миокарда на 50,4 и 54,0% соответственно. В зоне, отдаленной от ишемического повреждения, концентрация МДА уменьшалась на 38,2%, содержание ДК нормализовалась (табл.2).
Таблица 2.Влияние экстракта верблюжьей колючки на содержание ДК и МДА в сердечной ткани (в мкМ/г) и сыворотке крови (в мкМ/мл) животных в условиях экспериментального инфаркта миокарда (M±m; n-6)
Условия эксперимента
ДК
МДА
Зона Инфаркт миокарда
Отдаленная зона
Сыворотка крови
Зона Инфаркт миокарда
Отдаленная зона
Сыворотка крови
Интактные животные
-
0,77±0.04
0,23±0,02
-
2,46±0,24
2,88±0,28
Инфаркт миокарда (контроль) Р<sub>1</sub>
1,59±0,08
0,91±0,06<0,1
0,36±0,04<0,02
7,95±0,93
5,6±0,45<0,001
5,63±0,60<0,001
Инфаркт миокарда + ЭВК Р<sub>2</sub>
0,79±0,003<0,001
0,72±0,03<0,02
0,18±0,01<0,001
5,16±0,54<0,02
3,99±0,43<0,02
3,93±0,32<0,02
Инфаркт миокарда + ионол Р<sub>2</sub>
0,95±0,05<0,001
0,81±<±0,2
0,20±0,01<0,001
5,52±0,48<0,02
4,120,39<0,02
4,06±0,36<0,02
Примечание: Р<sub>1</sub> - достоверность различия показателей по сравнению с таковыми у интактных животных, Р<sub>2</sub> - между контрольной и опытной группами.
Введение ионола в аналогичных условиях снижало уровень ДК и МДА в зоне ишемии на 40,2-30,5%, а в зоне, отдаленной от ишемического повреждения, на 10,9-24,4%. Аналогичные изменения наблюдались и в сыворотке крови. Таким образом, экстракт верблюжьей колючки обладает выраженным антиоксидантным действием, превосходящим соответствующий эффект ионола.
Пример 4. Энергосберегающий эффект экстракта верблюжьей колючки.
Проявление экстрактом верблюжьей колючки энергосберегающего, антигипоксического действия, а также улучшающего процессы микроциркуляции и гидратацию тканей отчетливо выявлено у интактных животных (крысы - самцы) массой 230-270 г и крыс, подвергавшихся через день плаванию в течение 30 минут при температуре воды 26-27°С массой 230-270 г (Островская П.У. и соавт.1981 г). В качестве контроля была использована вода, а образца для контроля - экстракт верблюжьей колючки (ЭВК).
По истечении 2 месяцев животных декапитировали (под легким эфирным наркозом), извлекали сердце и сердечную мышцу, отдельные их участки фиксировали в 1% растворе окиси осмия по Коулфилду для электроно-микроскопического исследования, а остальную часть органов замораживали в жидком азоте для определения содержания гликогена, лактата, пирувата и адениннуклеотидов по известным методам. Избыточный лактат рассчитывали по Huckbee W.C., энергетический заряд системы по Atkinson D.E. В сыворотке крови определяли глюкозу и лактат по унифицированным методам. Электронные микрофотографии получили на микроскопе ЭМ-200.
Установлено, что по происшествии 2 месяцев у интактных крыс опытной группы крыс, получавших экстракт верблюжьей колючки в дозе 10 мг/кг, на протяжении всего опыта увеличивалось содержание гликогена и пирувата в скелетной мышце, миокарде и даже в коже (табл.3). Под действием экстракта верблюжьей колючки несколько более выражено уменьшение содержания молочной кислоты. Снижение содержания молочной кислоты и увеличение уровня пировиноградной кислоты способствует увеличению окислительно-восстановительного потенциала в исследуемых органах и тканях на 3-5 MB. Значения величин избыточного лактата при этом приобретали отрицательные величины. Наблюдаемые изменения свидетельствуют о том, что изучаемый нами экстракт способствует выраженному преобладанию аэробной фазы окисления углеводов в органах и тканях, увеличению утилизации при этом молочной кислоты.
Более того, по происшествии 2 месяцев у крыс с физической нагрузкой, получавших экстракт верблюжьей колючки в дозе 10 мг/кг, на протяжении всего опыта заметно возросла продолжительность плавания до предела (животные плавали с грузом 6% от массы тела). Это увеличение составило более чем в 1,5 раза. Такое повышение работоспособности, как видно из табл.3 и 4, связано со способностью препарата повышать резистентность организма к кислородному голоданию и увеличивать функциональные ресурсы органов и тканей.
Так, у плавающих животных эффект экстракта верблюжьей колючки проявляется более выражено, чем у интактных, сдвиги в содержании изучаемых компонентов адениннуклеотидного и углеводного обменов оказались более существенными. В сыворотке крови величина отношения глюкозы / лактат была выше, а лактат / ПВК значительно ниже, чем в контроле. Экстракт верблюжьей колючки способствовал увеличению содержания гликогена, по-видимому, за счет более выраженного глюконеогенеза в органах и тканях. На это указывало не только заметное увеличение содержания гликогена, но и повышенная утилизация в них молочной кислоты (табл.3 и 4).
При морфологическом изучении сердца и скелетной мышцы регистрировалось значительно большее число функционирующих капилляров, окружающих каждый миоцит (в среднем в опыте 8-12 против 4-6 в норме). Цитоплазма эндотелиоцитов в абсолютном большинстве таких капилляров производила впечатление "кипящей" от обилия пиноцитотических везикул, что свидетельствовало о резко усиленном обмене в капиллярном русле.
Таким образом, под действием экстракта верблюжьей колючки происходит ряд позитивных биохимических сдвигов в организме за счет более выгодного протекания метаболических процессов, направленных на поддержание гомеостаза энергопродукции в условиях дефицита кислорода.
Таблица 3Влияние экстракта верблюжьей колючки на некоторые показатели углеводного обмена у интактных крыс
Условия эксперимента
Скелетная мышца
Миокард
Кожа
Сыворотка крови
контроль (вода)
опыт(ЭВК)
контроль (вода)
опыт(ЭВК)
контроль (вода)
опыт(ЭВК)
контроль (вода)
опыт(ЭВК)
Гликоген, мг%
348±15
396±20
268±21
305±12
287±7,53
366±20,8<sup>*</sup>
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
Пируват, мкмоль на 1 г ткани
0,238±0,014
0,319±0,0182<sup>*</sup>
0,178±0,012
0,299±0,022
0,33±0,014
0,38±0,020
0,071±0,007
0,102±0,01<sup>*</sup>
Лактат, мкмоль на 1 г ткани
7,5±0,35
8,45±0,43
6,11±0,57
8,37±0,64<sup>*</sup>
6,1±0,27
5,26±0,32
1.39±0,14
1,38±0,13
Избыточный лактат
<img file="00000002.tif" he="3" wi="7" img-content="undefined" img-format="tif" />
-1,6
<img file="00000002.tif" he="3" wi="7" img-content="undefined" img-format="tif" />
-1,89
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
-1,7
<img file="00000002.tif" he="3" wi="7" img-content="undefined" img-format="tif" />
-0,61
Глюкоза, мкмоль/л
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
6,12±0,42
5,72±0,51
* - Достоверность между контролем и опытными группами
Таблица 4Влияние экстракта верблюжьей колючки на некоторые показатели углеводного обмена у крыс с физической нагрузкой (М±m; n=6-8)
Условия эксперимента
Скелетная мышца
Миокард
Сыворотка крови
контроль (вода)
опыт(ЭВК)
контроль (вода)
опыт(ЭВК)
контроль (вода)
опыт(ЭВК)
Гликоген, мг%
376±48
435±18
313±17
376±29
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
Пируват, мкмоль на 1 г ткани
0,257±0,02
0,371±0,01<sup>*</sup>
0,287±0,015<sup>*</sup>
0,322±0,03
0,193±0,013<sup>*</sup>
0,246±0,015<sup>*</sup>
Лактат, мкмоль на 1 г ткани
78,21±0,30
6,09±0,69<sup>*</sup>
7,76±0,40
6,77±0,56
1,86±0,20'
1,66±0,21
Избыточный лактат
+0,11
-5,75
-2,08
-2,20
-1,12
-3,14
Глюкоза, мкмоль/л
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000001.tif" he="3" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
7,37±0,28
9,02±0,48<sup>*</sup>
* - Достоверность между контрольными группами и опытными группами животных.
Пример 5. Противовоспалительное действие экстракта верблюжьей колючки.
Оценку противовоспалительного действия экстракта верблюжьей колючки проводили на крысах самцах массой 150-180 г. Оценку его антифлогистической активности проводили на моделях острого воспаления по способности ингибировать отек лапок (определяли онкометрически), вызванный введением под планторный апоневроз 0,2 мл 1% раствора формалина или 0,1 мл 6% декстрана. Результаты учитывали на максимуме развития соответствующих изменений в контроле. Экстракт верблюжьей колючки вводили животным орально в дозе 10 мг/кг накануне эксперимента, а затем за 2 часа до и через 30 минут после инокуляции флогогенных агентов. Для сравнения части животных вводили гидрокортизон в дозе 10 мг/кг.
Таблица 5Влияние экстракта верблюжьей колючки на формалиновый и декстрановый отеки лапок крыс (М±m; n=6-8)
Условия эксперимента
Прирост отека лапки крыс по отношению к исходному, %
Ингибирование отека, %
Через 3 часа после введения формалина
Контроль
0,44±0,024
-
ЭВК
0,16±0,040<sup>*</sup>
63,6
Гидрокортизон
0,29±0,027<sup>*</sup>
34,1
Через 2 часа после введения формалина
Контроль
0,64±0,040
-
ЭВК
0,22±0,037
65,6
Гидрокортизон
0,46±0,022<sup>*</sup>
28,2
Примечание: достоверность по отношению к контролю (Р<0,05).
Как видно из таблицы 5, экстракт верблюжьей колючки обладает значительным противовоспалительным действием, превосходящим по активности соответствующий эффект гидрокортизона.
Пример 6. Ранозаживляющее действие экстракта верблюжьей колючки.
Оценку ранозаживляющего действия экстракта верблюжьей колючки проводили на крысах самцах массой 180-200 г. Ожоговую рану наносили на предварительно эпиллированную кожу спины нагретой до 200°С медной пластинкой, установленной на кончике электропаяльника. После нанесения травмы рану обрабатывали 5% концентрацией экстракта верблюжьей колючки в подсолнечном масле. Повязки не применяли. Состояние раневой поверхности оценивали в динамике через каждые 7 дней. В качестве препарата-сравнения использовали аптечное облепиховое масло.
Таблица 6Влияние экстракта верблюжьей колючки на сроки заживления ожоговых ран у крыс (М±m; n=6-8)
Условия эксперимента
Площадь ожоговой поверхности, см<sup>2</sup>
Сроки полного заживления в днях
Через 7 дней
Через 14 дней
Через 21 дней
Через 28 дней
Через 35 дней
Контроль(подсол. масло)
15,4±0,34
12,2±0,55
9,0±0,43
5,1±0,37
3,3±0,27
67,2±1,44
ЭВК
14,2±0,39
9,4±0,44<sup>*</sup>
4,4±0,38<sup>*</sup>
2,1±0,36<sup>*</sup>
0,7±0,20<sup>*</sup>
43,7±1,86<sup>*</sup>
Облепиховое масло
15,2±0,42
11,4±0,48
6,8±0,40<sup>*</sup>
3,8±0,24<sup>*</sup>
1,8±0,12
50,6±2,40<sup>*</sup>
Примечание: достоверность к соответствующему контролю (Р<0,05).
Как видно из таблицы 6, экстракт верблюжьей колючки по ранозаживляющему действию на ожоговые дефекты кожи превосходит облепиховое масло.
Пример 7. Биосинтез коллагена в коже.
Влияние экстракта на синтез коллагена оценивали при помощи гистологического анализа. С этой целью исследовали образцы биопсии кожи до и спустя 14 дней после ежедневного нанесения экстракта на участок кожи. Для исследования использовали композицию, включающую от примерно 0,2 до примерно 5,0% экстракта верблюжьей колючки и по меньшей мере один из приемлемых вспомогательных веществ, выбираемых из группы, включающей воду, гидроксиэтилмочевину, масло оливковое, цеарилэтилгексаноат, изопропилмиристат, глицерин, пропиленгликоль, полиакрилат натрия, изопропилизостеарат, парфюмерную отдушку, карбамид, бензиловый спирт, 2-метил-4-изотиозолин-3-он или их смеси. Образцы фиксировали в течение 48 часов в нейтральном 10% формалине.
Затем дегидрировали в спирте, осветляли в ксилоле и инфильтрировали в парафине при 60°С, затем заливали парафином и делали срезы на микротоме толщиной 6-8 мкм. Полученные срезы окрашивали на коллаген по модифицированному методу Маллори. В основе метода лежит свойство толуидинового синего окрашивать коллагеновые волокна и свойство кислого фуксина окрашивать эластические волокна. Для этого срезы в течение 2-3 минут окрашивали в 0,5%-ном растворе кислого фуксина, промывали в дистиллированной воде, затем помещали на 2-5 минут в фосфорно-вольфрамовую кислоту, после чего окрашивали в течение 1-2 минут в комбинированном красящем растворе, содержащем краситель толуидиновый синий, затем дифференцировали в 96% спирте. Окраску коллагена оценивали под микроскопом. В результате окраски коллагеновые волокна приобретали темно-синий цвет, ядра клеток, эритроциты и эластические волокна - красный цвет, а мышечная ткань приобретала оранжевый цвет.
Результаты исследования образцов биопсии до и спустя 14 дней после ежедневного нанесения экстракта на участок кожи, представленные на фиг.1 и 3, демонстрируют увеличение синтеза коллагена по сравнению с контролем (фиг.2 и 4), что свидетельствует о способности экстрактов согласно изобретению стимулировать образование коллагена, способствуя восстановлению упругости и эластичности кожи.
Таким образом, экстракт верблюжьей колючки представляет собой чрезвычайно метаболитически активное средство, которое может использоваться в различных областях медицины и косметологии, в том числе для замедления возрастных изменений в органах и тканях.