УЛУЧШЕННЫЕ НАНОТЕЛА ПРОТИВ СЫВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА ЧЕЛОВЕКА

1. Способ лечения болезни, связанной с фактором некроза опухоли α (TNF-α), включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества полипептида, содержащего вариабельную область иммуноглобулина, которая связывается с эпитопом TNF-α:
(a) который содержит следующие аминокислотные остатки TNF-α: Gln в позиции 88, Lys в позиции 90 и/или Glu в позиции 146; или
(b) который является тем же эпитопом TNF-α, который связывает полипептид, содержащий любой из следующих наборов последовательностей CDR:
- CDR1 является DYWMY (SEQ ID NO:15); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGFN (SEQ ID NO:34);
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35); или
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYVDSVKG (SEQ ID NO:25); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35).
2. Способ по п. 1, где полипептид способен проникать через внутрижелудочную среду без инактивации.
3. Способ по п. 1 или 2, где полипептид ингибирует взаимодействие TNFα/TNFα-рецептор.
4. Способ по любому из пп. 1-2, где вариабельная область иммуноглобулина конкурирует за связывание с или замещает связывание с эпитопом TNF-α полипептида, содержащего любой из следующих наборов последовательностей CDR:
- CDR1 является DYWMY (SEQ ID NO:15); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGFN (SEQ ID NO:34);
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35); или
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYVDSVKG (SEQ ID NO:25); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35).
5. Способ по п. 3, где вариабельная область иммуноглобулина конкурирует за связывание с или замещает связывание с эпитопом TNF-α полипептида, содержащего любой из следующих наборов последовательностей CDR:
- CDR1 является DYWMY (SEQ ID NO:15); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGFN (SEQ ID NO:34);
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35); или
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYVDSVKG (SEQ ID NO:25); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35).
6. Способ по любому из пп. 1-2 или 5, где вариабельная область иммуноглобулина конкурирует за связывание с или замещает связывание с эпитопом TNF-α полипептида, содержащего аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 76, 77, 95 или 96.
7. Способ по любому из пп. 1-2 или 5, где вариабельная область иммуноглобулина является однодоменным антителом, вариабельной областью тяжелой цепи или VHH.
8. Способ по любому из пп. 1-2 или 5, где полипептид вводят как фармацевтическую композицию.
9. Способ по любому из пп. 1-2 или 5, где полипептид вводят перорально.
10. Способ по п.8, где фармацевтическая композиция содержит кишечнорастворимое покрытие, которое устойчиво к действию внутрижелудочной среды и проходит в кишечник.
11. Способ по п.8, где фармацевтическая композиция является таблеткой для глотания, таблеткой для медленного растворения в щёчном кармане, лепешкой, капсулой, эликсиром, суспензией, сиропом или вафлей.
12. Способ по любому из пп. 1-2 или 5, где болезнь является болезнью Крона, язвенным колитом или воспалительным синдромом кишечника.
13. Способ по п.8, где фармацевтическая композиция является суппозиторием.
14. Способ по любому из пп. 1-2 или 5, где полипептид содержит по меньшей мере две вариабельные области иммуноглобулина, которые связывают эпитоп TNF-α.
15. Полипептид, содержащий вариабельную область иммуноглобулина, который связывает эпитоп TNF-α:
(a) который содержит следующие аминокислотные остатки TNF-α: Gln в позиции 88, Lys в позиции 90 и/или Glu в позиции 146; или
(b) который является тем же эпитопом TNF-α, который связывает полипептид, содержащий любой из следующих наборов последовательностей CDR:
- CDR1 является DYWMY (SEQ ID NO:15); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGFN (SEQ ID NO:34);
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35); или
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYVDSVKG (SEQ ID NO:25); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35),
где указанный полипептид получают путем контактирования полипептида, связывающего TNF-α, содержащего любой из следующих наборов последовательностей CDR:
- CDR1 является DYWMY (SEQ ID NO:15); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGFN (SEQ ID NO:34);
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35); или
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYVDSVKG (SEQ ID NO:25); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35),
с TNF-α в присутствии или отсутствии полипептида из большой библиотеки синтетических или природных полипептидов в условиях, позволяющих связывание между указанным связывающим TNF-α полипептидом с указанным TNF-α; и
измерение связывания между указанным связывающим TNF-α полипептидом с указанным TNF-α, где уменьшение в связывании в присутствии указанного полипептида относительно связывания в отсутствии указанного полипептида указывает на то, что указанный полипептид связывает указанный эпитоп TNF-α.
16. Полипептид по п. 15, где связывающий TNF-α полипептид содержит SEQ ID NO: 96 или 52.
17. Полипептид по п. 15 или 16, где полипептид способен проникать через внутрижелудочную среду без инактивации.
18. Полипептид по п. 15 или 16, где полипептид ингибирует взаимодействие TNFα/TNFα-рецептор.
19. Полипептид по любому из пп. 15-16, где вариабельная область иммуноглобулина конкурирует за связывание с или замещает связывание с эпитопом TNF-α полипептида, содержащего аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 76, 77, 95 или 96.
20. Полипептид по любому из пп. 15-16, где вариабельная область иммуноглобулина конкурирует за связывание с или замещает связывание с эпитопом TNF-α полипептида, содержащего любой из следующих наборов последовательностей CDR:
- CDR1 является DYWMY (SEQ ID NO:15); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGFN (SEQ ID NO:34);
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35); или
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYVDSVKG (SEQ ID NO:25); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35).
21. Полипептид по п. 15 или 16, где вариабельная область иммуноглобулина является однодоменным антителом, вариабельной областью тяжелой цепи или VHH.
22. Полипептид по п. 15 или 16, где полипептид содержит по меньшей мере две вариабельные области иммуноглобулина, которые связывают эпитоп TNF-α.
23. Полипептид по п. 15 или 16, где полипептид является гуманизированным.
24. Применение эпитопа TNF-α, который
(a) который содержит следующие аминокислотные остатки TNF-α: Gln в позиции 88, Lys в позиции 90 и/или Glu в позиции 146; или
(b) который является тем же эпитопом TNF-α, который связывает полипептид, содержащий любой из следующих наборов последовательностей CDR:
- CDR1 является DYWMY (SEQ ID NO:15); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGFN (SEQ ID NO:34);
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35); или
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYVDSVKG (SEQ ID NO:25); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35),
для отбора или получения полипептида, который может быть использован в способе лечения болезни, связанной с фактором некроза опухоли α (TNF-α).
25. Применение по п. 24, где указанный полипептид содержит SEQ ID NO: 96 или 52.
26. Применение по п. 24 или 25, где полипептид способен проникать через внутрижелудочную среду без инактивации.
27. Применение по п. 24 или 25, где полипептид ингибирует взаимодействие TNFα/TNFα-рецептор.
28. Применение по п. 24 или 25, где полипептид конкурирует за связывание с или замещает связывание с эпитопом TNF-α полипептида, содержащего аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 76, 77, 95 или 96.
29. Применение по п. 24 или 25, где полипептид конкурирует за связывание с или замещает связывание с эпитопом TNF-α полипептида, содержащего любой из следующих наборов последовательностей CDR:
- CDR1 является DYWMY (SEQ ID NO:15); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGFN (SEQ ID NO:34);
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35); или
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYVDSVKG (SEQ ID NO:25); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35).
30. Применение по п. 24 или 25, где полипептид является однодоменным антителом, вариабельной областью тяжелой цепи или VHH.
31. Применение по п. 24 или 25, где полипептид содержит по меньшей мере две вариабельные области иммуноглобулина, которые связывают эпитоп TNF-α.
32. Применение по п. 24 или 25, где полипептид является гуманизированным.
33. Способ лечения болезни, связанной с TNF-α, путем ингибирования или уменьшения перекрестного сшивания рецептора TNF, опосредованное эпитопом TNF-α:
(a) который содержит следующие аминокислотные остатки TNF-α: Gln в позиции 88, Lys в позиции 90 и/или Glu в позиции 146; или
(b) который является тем же эпитопом TNF-α, который связывает полипептид, содержащий любой из следующих наборов последовательностей CDR:
- CDR1 является DYWMY (SEQ ID NO:15); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGFN (SEQ ID NO:34);
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35); или
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYVDSVKG (SEQ ID NO:25); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35),
путем использования полипептида, содержащего вариабельную область иммуноглобулина, которая связывается с эпитопом TNF-α, по п. 15.
34. Способ по п. 33, где полипептид способен проникать через внутрижелудочную среду без инактивации.
35. Способ по п. 33 или 34, где полипептид ингибирует взаимодействие TNFα/TNFα-рецептор.
36. Способ по п. 33 или 34, где вариабельная область иммуноглобулина конкурирует за связывание с или замещает связывание с эпитопом TNF-α полипептида, содержащего аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NOs: 52, 53, 54, 76, 77, 95 или 96.
37. Способ по п. 33 или 34, где вариабельная область иммуноглобулина конкурирует за связывание с или замещает связывание с эпитопом TNF-α полипептида, содержащего любой из следующих наборов последовательностей CDR:
- CDR1 является DYWMY (SEQ ID NO:15); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGFN (SEQ ID NO:34);
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO:22); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35); или
- CDR1 является VSWMY (SEQ ID NO:18); CDR2 является EINTNGLITKYVDSVKG (SEQ ID NO:25); и CDR3 является SPSGSF (SEQ ID NO:35).
38. Способ по п. 33 или 34, где вариабельная область иммуноглобулина является однодоменным антителом, вариабельной областью тяжелой цепи или VHH.
39. Способ по п. 33 или 34, где полипептид содержит по меньшей мере две вариабельные области иммуноглобулина, которые связывают эпитоп TNF-α.
40. Способ по п. 33 или 34, где полипептид является гуманизированным.
41. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по любому одному из пп. 15-23.
42. Фармацевтическая композиция по п. 41, которая дополнительно содержит одно или более вспомогательных веществ.
43. Фармацевтическая композиция по п. 41 или 42, где композиция является таблеткой для глотания, таблеткой для медленного растворения в щёчном кармане, лепешкой, капсулой, эликсиром, суспензией, сиропом или вафлей.
44. Фармацевтическая композиция по п. 41, где композиция содержит кишечнорастворимое покрытие, которое устойчиво к действию внутрижелудочной среды, и проходит в кишечник.
45. Фармацевтическая композиция по п. 41, где композиция является суппозиторием.