1
N-ЗАМЕЩЕННЫЕ АМИДЫ 2-ГИДРОКСИ-4-ОКСО-4-(4-ХЛОРФЕНИЛ)2-БУТЕНОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ ПРОТИВОМИКРОБНУЮ АКТИВНОСТЬ
1
N-SUBSTITUTED AMIDES OF 2-HYDROXY-4-OXO-4-(4-CHLOROPHENYL) 2-BUTENOIC ACID, EXHIBITING ANTIMICROBIAL ACTIVITY

1
Изобретение относится к области органической химии, к производным ацилпировиноградных кислот, а именно к новым биологически активным веществам - N-замещенным амидам 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)2-бутеновой кислоты формулы (I):
3
2
6
3
3
3
6
2
R=2,6-(СН)СН (Ià); 2,4,6-(СН)СН (Iá);
которые могут найти применение в медицине в качестве лекарственных противомикробных средств.
1
1
Ближайшим структурным аналогом заявляемым соединениям является N-4-метилфениламид 2-гидpoкcи-4-oкco-4-(4-xлopфeнил)2-бутеновой кислоты, обладающий противомикробной активностью. Известный структурный аналог заявляемых соединений получен взаимодействием 5-(4-xлopфeнил)-2,3-дигидpo-2,3-фypaндиoнa с 4-метиланилином [Беляев А.О. Аминопроизводные 4-арил-4-оксо-2-бутеновых кислот: синтез, строение, свойства и биологическая активность. Автореф. дисс. канд. хим. наук. / Курск. 2004. - 20 с.].
В качестве эталона сравнения нами взят противомикробный препарат - диоксидин [Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Новая волна, Т.2], широко применяемый в лечебной практике.
1
Цель данного изобретения - синтез неописанных ранее N-замещенных амидов 2-гидpoкcи-4-oкco-4-(4-xлopфeнил)2-бутеновой кислоты, обладающих противомикробным действием.
1
Поставленная цель достигается получением по известной методике [Андрейчиков Ю.С., Милютин А.В., Крылова И.В., Сараева Р.Ф., Дормидонтова Е.В., Дровосекова Л.П., Назметдинов Ф.Я., Колла В.Э. Синтез и биологическая активность гетериламидов ароилпировиноградных кислот и 5-арилпиразол-3-карбоновых кислот// Хим.-фарм.-журн. - 1990. - Т.24. - №7. - С.33-35] N-замещенных амидов 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)2-бутеновой кислоты реакцией 5-(4-хлорфенил)-2,3-дигидро-2,3-фурандиона [Игидов Н.М., Козьминых Е.Н., Софьина О.А., Широнина Т.М., Козьминых В.О. Синтез 1,6-диарил-3,4-дигидрокси-2,4-гексадиен-1,6-дионов из производных 2,3-фурандионов. // Химия гетероцикл. соедин. 1999. №11. С.1466-1475] с 2,6-диметил - или 2,4,6-триметиланилинами в среде толуола:
3
2
6
3
3
3
6
2
R=2,6-(СН)СН (Ià); 2,4,6-(СН)СН (Iá).
Пример получения заявляемого соединения Iа
1
-1
пл.
18
16
3
6
3
2
6
4
6
3
NH
CO
К раствору 2.09 г (0,01 моль) 5-(4-хлорфенил)-2,3-дигидро-2,3-фурандиона в 10 мл толуола добавляли 1.21 г (0.01 моль) 2,6-диметиланилина и кипятили в течение 5-7 мин. Выпавший после охлаждения осадок отфильтровывали, промывали гексаном, перекристаллизовывали из ацетонитрила. Получают 1,90 г (58%) кристаллического соединения (I) с Т 143-145°С. Найдено: С 65,43; Н 4,76; Сl 10,83; N 4,19. CHClNO. Вычислено: С 65,56; Н 4,89; Cl 10,75; N 4,25. ИК спектр, v, см (кристаллы): 3344(CO), 1696 (NH), 1592 (С=С, СО хел.). Спектр ПМР, δ, м.д., ДМСО-d: 2,14 с (6Н, 2 СН); 4,57 с (2Н, CH); 7,04-8,05 м (8Н, СН СН, СН), 10,12 уш. с (1Н, NH)
Пример получения заявляемого соединения Iб
1
-1
пл.
19
18
3
6
3
3
2
6
2
6
4
NH
CO
К раствору 2.09 г.(0,01 моль) 5-(4-xлopфeнил)-2,3-дигидpo-2,3-фурандиона в 10 мл толуола добавляют 1.35 г (0.01 моль) 2,4,6-триметиланилина и кипятят в течение 5-7 мин. Выпавший после охлаждения осадок отфильтровывают, промывают гексаном, перекристаллизовывают из ацетонитрила. Получают 1,89 г (55%) кристаллического соединения (I) с Т 168-171°С. СНСlNО. Найдено: С 66,38; Н 5,28; Cl 10,31; N 4,07. Вычислено: С 66,26; Н 5,19; Cl 10,22; N 4,00. ИК спектр, v, см (кристаллы): 3288 (CO), 1680 (NH), 1596 (С =С, СО хел.). Спектр ПМР, δ, м.д., ДМСО-d: 2,05 с (6Н, 2 СН), 2,22 с (3Н, СН), 4,55 с (2Н, СН), 6,83 с (2Н, СН), 7,08 с (1Н, СН), 7,56, 7,94 два д (4Н, СН,), 10,02 уш. с (1Н, NH).
Полученные соединения (I а, б) представляет собой желтые кристаллические вещества, растворимые в диметисульфоксиде, диметиформамиде, труднорастворимые в ацетонитриле, ацетоне, нерастворимые в гексане и воде.
Исследование биологической активности
50
Острую токсичность при внутрибрюшинном введении определяют на белых нелинейных мышах-самцах массой 18-24 г. Исследуемое вещество и препарат сравнения вводят в брюшную полость в виде раствора в 1%-ной крахмальной слизи из расчета 0,1 мл на 10 г массы животного в возрастающих дозах. Результаты обрабатывают по Прозоровскому с вычислением средней смертельной дозы (ЛД) при Р<0,05 [Прозоровский В.В., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Фармакол. токсикол. Т41, №4, с.497-502 (1978)].
Определение бактериостатической активности проводят методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2000., с.264-273]. Для всех исследуемых соединений определяют МПК в отношении штаммов: S. aureus ATCC 6538-Р, E.coli ATCC 25922, В. subtilis ATCC 6633, Ps. aeroginosa ATCC 9027, С. albicans NCTC 885-653. Посевы производят в мясопептонный бульон, рН 7,0 с различной концентрацией испытуемых соединений. Культуры выращивают в пробирках на скошенной агаризированной среде (мясопептонный агар, плотная среда Сабуро). Для определения противомикробной активности используют 18, 20, 48-часовые чистые культуры микроорганизмов. Для приготовления рабочей взвеси микробов производят смывы выросших чистых культур изотоническим раствором натрия хлорида и устанавливают плотность микробной взвеси по стандарту мутности 5 единиц. Далее из полученной микробной взвеси (500 млн м.т./мл) готовят рабочий раствор бактерий с концентрацией 5 млн м.т./мл. Данную взвесь микробов вносят в количестве 0,1 мл в пробирки с серийными разведениями изучаемых препаратов. Таким образом, микробная нагрузка составяет 250 000 м. т./мл. Изучаемое соединение в количестве 0,05 г растворяют в 5 мл диметилсульфоксида, 1 мл полученного разведения 1:100 соединяют с 4 мл мясопептонного бульона или жидкой среды Сабуро (1:500). Далее готовят ряд серийных разведений с двукратно уменьшающей концентрацией.
Учет результатов производят через 18-20 часов выдержки контрольных и опытных пробирок в термостате при температуре 37°С для бактерий и через 48 часов при 22°С - для грибов. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) устанавливают по отсутствию признаков роста на питательной среде: последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон) соответствует МПК препарата в отношении данного штамма. Противомикробный эффект сравнивают хлоргексидином биглюконатом (ХГБ) [Падейская Е.Н. Инф. и антимикроб. терап., 2001, №5, с.105-155]. Результаты исследований представлены в таблице 1.
Таблица 1
Противомикробная активность (мкг/мл) и острая токсичность соединений
Соединение
В.subtilis
Ps.aerogin.
S.aureus
E.coli
C.albic.
LD<sub>50,</sub> мг/кг
1а
64-128
500-1000
0,25-0,5
1-2
500-1000
2820,0 (2300,0÷3400,0)
1б
128-250
500-1000
3,9-7,8
7,8-15,6
125-500
1410,0 (1100,0÷1700,0)
ХГБ
1-3
10-500
1-2
1-5
7-15
4000
Соединения (Ia, б) обладают противомикробной активностью по отношению к грамположительным и грамотрицательным микроорганизмам (МПК 0,25-1000 мкг/мл).
Согласно классификации токсичности препаратов [Измеров И.Ф., Сапоцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов // М., с.197 (1977)] соединения Iа, б относятся к классу практически нетоксичных препаратов.
1
Таким образом, N-замещенные амиды 2-гидpoкcи-4-oкco-4-(4-xлopфeнил) 2-бутеновой кислоты (Iа, б) проявляют выраженную противомикробную активность и являются практически нетоксичным. Следовательно, заявляемые соединения (Iа, б) могут найти применение в медицине в качестве противомикробных лекарственных средств.