СПОСОБЫ СОЗДАНИЯ БАНКОВ КЛЕТОК СО СВЕРХВЫСОКОЙ ПЛОТНОСТЬЮ

1. Способ получения банка замороженных клеток со сверхвысокой плотностью непосредственно из популяции культивируемых клеток, при этом способ включает:
8
a) культивирование клеток в перфузионном биореакторе с получением популяции клеток со сверхвысокой плотностью с концентрацией по меньшей мере приблизительно 1,0 x 10клеток/мл, где указанный перфузионный биореактор соединен с системой удерживания клеток; и
8
б) добавление криопротектора к популяции клеток со сверхвысокой плотностью с получением банка замороженных клеток со сверхвысокой плотностью, где банк замороженных клеток со сверхвысокой плотностью характеризуется концентрацией по меньшей мере приблизительно 1,0 x 10клеток/мл, и
при этом отсутствует дополнительная стадия концентрирования между культивированием клеток и добавлением криопротектора к популяции клеток со сверхвысокой плотностью.
2. Способ по п. 1, где система удерживания клеток предусматривает систему фильтрации в переменном тангенциальном потоке, содержащую фильтр.
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3. Способ по п. 2, где фильтр характеризуется площадью поверхности, составляющей по меньшей мере приблизительно 0,08 м, от приблизительно 0,3 м до приблизительно 0,5 м, от приблизительно 0,5 м до приблизительно 1,0 м, от приблизительно 0,7 м до приблизительно 0,8 м, от приблизительно 1,0 м до приблизительно 2,0 м, от приблизительно 2,0 м до приблизительно 3,0 м, от приблизительно 3,0 м до приблизительно 4,0 м или от приблизительно 4,0 м до приблизительно 5,5 м.
4. Способ по любому из предыдущих пунктов, где фильтр характеризуется размером пор, выбранным из группы, состоящей из 0,7 мкм, 1,2 мкм и 7 мкм.
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, где популяция клеток со сверхвысокой плотностью характеризуется плотностью клеток, выбранной из группы, состоящей из приблизительно 1,0x10клеток/мл, приблизительно 1,1x10клеток/мл, приблизительно 1,2x10клеток/мл, приблизительно 1,3x10клеток/мл, приблизительно 1,4x10клеток/мл, приблизительно 1,5x10клеток/мл, приблизительно 1,6x10клеток/мл, приблизительно 1,7x10клеток/мл, приблизительно 1,8x10клеток/мл, приблизительно 1,9x10клеток/мл и приблизительно 2,0x10клеток/мл.
6. Способ по любому из предыдущих пунктов, где криоконсервация включает добавление диметилсульфоксида (DMSO) к популяции клеток со сверхвысокой плотностью при конечной концентрации от приблизительно 5% до приблизительно 10% объем/объем.
7. Способ по любому из предыдущих пунктов, где криоконсервация включает замораживание по меньшей мере части популяции клеток со сверхвысокой плотностью в контейнере, подходящем для хранения в условиях криоконсервации.
8. Способ по п. 8, где контейнер представляет собой флакон или криопакет.
8
8
9. Способ по п. 9, где банк замороженных клеток со сверхвысокой плотностью содержит приблизительно 4,5x10клеток/флакон или приблизительно 100x10клеток/криопакет.
8
10. Способ по любому из предыдущих пунктов, где банк замороженных клеток со сверхвысокой плотностью характеризуется плотностью клеток по меньшей мере приблизительно 1,1x10клеток/мл.
11. Способ по любому из предыдущих пунктов, где скорость перфузии в перфузионном биореакторе составляет от приблизительно 0,02 нл/клетку/сутки до приблизительно 0,5 нл/клетку/сутки или от 0 до 15 объемов реактора в сутки.
12. Способ по любому из предыдущих пунктов, где рН культуры клеток перфузионного биореактора составляет от приблизительно 6,8 до приблизительно 7,2, и/или концентрация растворенного кислорода (DO) составляет по меньшей мере приблизительно 30%.
13. Способ по любому из предыдущих пунктов, где биореактор представляет собой биореактор в виде эластичного мешка.
14. Способ по любому из предыдущих пунктов, где банк замороженных клеток со сверхвысокой плотностью характеризуется жизнеспособностью клеток после размораживания по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90% или по меньшей мере приблизительно 95%.
15. Способ по любому из предыдущих пунктов, где клетки представляют собой клетки млекопитающих, при этом необязательно клетки млекопитающих выбраны из группы, состоящей из CHO, CHO-DBX11, CHO-DG44, CHO-S, CHO-K1, Vero, BHK, HeLa, COS, MDCK, HEK-293, NIH-3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT20, T47D, NS0, CRL7030, клеток HsS78Bst, PER.C6, SP2/0-Agl4 и гибридомных клеток.
16. Способ по любому из предыдущих пунктов, где клетки представляют собой трансфицированные клетки.
17. Способ по любому из предыдущих пунктов, где клетки экспрессируют терапевтический белок.
18. Способ по п. 1, где
a) перфузионный биореактор предусматривает биореактор в виде эластичного мешка;
2,
b) фильтр характеризуется площадью поверхности, составляющей по меньшей мере 0,08 м и величина номинально отсекаемой молекулярной массы (MWCO) составляет по меньшей мере 50 кДа;
c) криопротектор, добавляемый к популяции клеток со сверхвысокой плотностью, представляет собой DMSO; и
d) банк замороженных клеток со сверхвысокой плотностью содержит от приблизительно 5 до приблизительно 10% объем/объем DMSO.
19. Способ по любому из предыдущих пунктов, где pH и DO культуры контролируют с помощью автоматизированных способов.
20. Способ по п. 19, где pH и DO контролируют с помощью любого одного или нескольких из следующих действий: регулирование смеси газов, которые вводят в культуру, регулирование скорости качания биореактора или регулирование угла качания биореактора.
21. Способ по п. 20, где биореактор качают при 25 об./мин. с углом качания 12  или при 22 об./мин. с углом качания 10.
22. Способ по любому из предыдущих пунктов, где популяцию клеток со сверхвысокой плотностью охлаждают и поддерживают при температуре приблизительно 4С до и во время добавления криопротектора и распределения.
23. Способ по любому из предыдущих пунктов, где популяцию клеток со сверхвысокой плотностью поддерживают при температуре от приблизительно 20 C до приблизительно 26 C до и во время добавления криопротектора и распределения.
24. Способ по любому из предыдущих пунктов, где популяцию клеток со сверхвысокой плотностью поддерживают при неконтролируемой низкой температуре с применением ледяной водяной бани до и во время добавления криопротектора и распределения.
25. Способ по любому из предыдущих пунктов, где биореактор содержит встроенный фильтр.