Значение гистологического метода исследования в определении давности повреждения мягких тканей

водился с учетом предположительной этнической принадлежности лиц, которым принадлежали биологические образцы, а именно - славянской группы и лиц предположительно среднеазиатского происхождения. Полученные результаты анализировали при помощи базы данных YHRD (Y-Chromosome STR Haplotype Reference Database).

ВЫВОДЫ

Для повышения информативности молекулярно-ге-нетического исследования и обеспечения существенного увеличения доказательного значения получаемых результатов, а также для получения статистически более достоверных результатов, необходимо дальнейшего расширения и пополнение базы данных YHRD (Y-Chromosome STR Haplotype Reference Database).

ЗНАЧЕНИЕ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ РЕФЛЕКТОРНОЙ СМЕРТИ В СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЙ ПРАКТИКЕ

Е. Л. Грязнова

• Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области

• Аннотация: Статья посвящена значению гистологического метода исследования при диагностике рефлекторной смерти. Анализ изученного практического и теоретического материала позволяет делать выводы о характерной морфологии миокарда при данном виде смерти.

• Ключевые слова: рефлекторная смерть, субсегментарные контрактуры, «полосы пересокращения», фуксиноррагия, окраска ГОФП

ВВЕДЕНИЕ

«Рефлекторная остановка сердца», «рефлекторная смерть» (по М. И. Авдееву, 1977) - это случаи внезапной смерти, возникающей в результате травматического воздействия на рефлексогенные зоны тела человека, с характерной клиникой умирания, без специфических морфологических признаков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Рефлекторный механизм остановки сердца специфичен, не всегда сопровождается видимыми повреждениями тканей в месте травматического воздействия. Отсутствие повреждений не исключает «рефлекторной смерти», но затрудняет судебно-медицинскую диагностику. Иногда удается документировать вовлечение нервных образований в зону травмы. В основе механизма остановки сердца при резком раздражении нервных образований, иннерви-рующих сердце, лежат фатальные аритмии. Во всех случаях «чистой» рефлекторной смерти наблюдается различной продолжительности период умирания, который по своей клинике укладывается в состояние коллапса. Морфологические изменения в организме пострадавшего характеризуют острое расстройство гемодинамики, отражающее стереотипную реакцию организма на внешний раздражитель, являются компенсаторной реакцией на повреждающий фактор и гипоксию, не являются специфичными. Их выраженность зависит от пре- и агонального периода умирания, но не достигает изменений, наблюдаемых при шоке. Гистологическим исследованием обычно обнаруживаются признаки перераспределения крови, острые дис-циркуляторные нарушения. Прицельно, с использованием дополнительных окрасок, исследуется сердце. Кусочки

заключаются в парафин, срезы окрашиваются гематоксилином и эозином, ГОФП (гематоксилином, основным фуксином и пикриновой кислотой). Гистологические препараты исследуются с помощью световой обычной микроскопии. Выявляются сердечные мышечные волокна, находящиеся в различной степени сокращения, а также пучки резко расслабленных извитых мышечных волокон. Характерным для всех случаев рефлекторной смерти является наличие фуксиноррагии мышечных волокон (окрашивание саркоплазмы кардиомиоцитов ГОФП в красно-коричневый цвет) необычно большого числа субсегментарных полос сокращения, выявлявшихся в большинстве кар-диомиоцитов. Характерно плотное расположение полос пересокращения в различных отделах миокарда. Таким образом, распространенность (плотность) и выраженность контрактурных повреждений кардиомиоцитов, формирование «полос пересокращения» во многих п/з исследуемого миокарда может явиться базовой поддержкой морфологии рефлекторной остановки сердца. То есть количественная характеристика начинает приобретать качественный характер: распространенность, плотность, относительная равномерность выраженной фуксиноррагии, контрактурных повреждений кардиомиоцитов характерны для рефлекторной остановки сердца.

ВЫВОДЫ

• СМЭ-диагностика внезапной смерти, обусловленной травмой рефлексогенных зон тела, по одной морфологической картине затруднительна. Решение вопросов, интересующих следствие, возможно лишь на основе комплексного подхода с учетом обстоятельств причинения травмы рефлексогенных зон тела, клинического проявления травмы, обнаруженной морфологии.

• В случаях внезапной смерти, возникающей в результате травматического воздействия на рефлексогенные зоны тела человека, необходимо прицельно исследовать миокард с использованием дополнительных окрасок для выявления фуксиноррагии, контрактурных повреждений кардиомиоцитов.

• Относительно равномерная распространенность, выраженность фуксиноррагии, субсегментарных контрактур в различных отделах миокарда желудочков и межжелудочковой перегородки, наличие «полос пересокращения» в большей части полей зрения исследованного миокарда являются характерными для рефлекторной остановки сердца.

ЗНАЧЕНИЕ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ В ОПРЕДЕЛЕНИИ ДАВНОСТИ ПОВРЕЖДЕНИЯ МЯГКИХ ТКАНЕЙ

И. А. Фролова

• Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области (нач. - д.м.н., проф. В. А. Клевно), кафедра судебной медицины ФУВ ГБУЗ МО МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского

• Аннотация: Доклад посвящен проблеме определения давности повреждений.

• Ключевые слова: давность повреждения, кровоизлияние, воспаление, лейкоцитарная реакция, гемосидерофаги, пролиферация, резорбция

ВВЕДЕНИЕ

Вопрос об определении давности возникновения повреждений в мягких тканях и внутренних органах является одним из наиболее важных в судебной медицине.

Определение сроков возникновения повреждений основывается на известных положениях общей и частной патологической анатомии и судебной медицины, а также на большом многолетнем практическом опыте нашей гистологической лаборатории. В гистологическом отделе ежегодно исследуется большое количество случаев насильственной смерти. Только за 2015 год было проведено 8120 таких исследований. Среди них в 4801 случае стоял вопрос об определении давности и прижизненности повреждений. Это составило 59 % от всех случаев насильственной смерти. Анализу и обобщению подлежат случаи с точно установленными сроками получения травмы. Полученные результаты во многом совпадают с морфологическими критериями, предложенными в монографии «Гистологический и цитологический методы исследования в судебной медицине» (В. Г. Науменко, Н. А. Митяева) по оценке микроскопических изменений в мягких тканях при травме.

Любые повреждения сопровождаются кровоизлияниями. При гистологическом исследовании выявляются и оцениваются реактивные изменения, возникающие в различные сроки посттравматического периода в зоне травматических кровоизлияний.

Суть реактивного процесса заключена в том, что при механическом повреждении тканей и органов организм человека способен отвечать генетически заложенными реакциями, адекватными силе воздействия. Такой реакцией является асептическое воспаление (т.е. протекающее без участия микроорганизмов).

Для определения давности повреждения необходимо использовать наиболее информативные морфологические признаки, для развития которых необходимо определенное время. Такими морфологическими признаками являются клеточные реакции. Одна из первых клеточных реакций - лейкоцитарная, на развитие которой необходимо около часа. В этот период в зоне кровоизлияния и вокруг него в просветах сосудов и периваскулярно определяются скопления лейкоцитов. Со временем интенсивность лейкоцитарной реакции возрастает.

Процесс повреждения всегда сопровождается процессами восстановления. Морфологическим признаком начала восстановительных процессов является макрофа-гальная реакция. Первые макрофаги появляются в лейкоцитарном инфильтрате примерно через 12 часов. После ухода лейкоцитов с поля реактивного воспаления количество макрофагов увеличивается. На вторые-третьи сутки в зоне кровоизлияния определяются фибробласты. Эти клетки в дальнейшем участвуют в процессе организации зоны повреждения.

На 3-4-й день в кровоизлиянии при специальной окраске по Перлсу выявляются положительно окрашенные на железо макрофаги - гемосидерофаги. В их цитоплазме происходит образование железосодержащего пигмента - гемосидерина. Появление в зоне повреждения гемосидерофагов свидетельствует о начале процесса резорбции (рассасывания) кровоизлияния. В последующем окраска цитоплазмы гемосидерофагов становится более интенсивной, формируются внутриклеточные зерна гемо-сидерина. На третьей неделе (на 17-19-й день, по данным Н. А. Митяевой) макрофаг, содержащий пигмент, разрушается и гемосидерин в виде зерен оказывается свободно лежащим в мягких тканях.

Параллельно с процессом резорбции кровоизлияния развивается процесс его организации. Первые морфологические признаки организации выявляются на 4-7-е сутки, когда в зоне повреждения отмечается врастание фибробластов в виде клеточных тяжей, с последующим формированием соединительнотканных волокон.

ВЫВОДЫ

При исследовании препаратов - помимо подробного описания выявленной морфологической картины в мягких тканях с кровоизлиянием - большое значение имеет объективная оценка полученных результатов, отраженная в выводах. При неизвестных обстоятельствах травмы в составлении выводов о давности следует ориентироваться на минимальное время, необходимое для развития выявленного морфологического признака, являющегося критерием определения давности. В некоторых случаях ориентировочное время получения травмы может определяться временным интервалом. Его границами являются: минимальное время, необходимое для развития имеющегося морфологического признака, и время развития следующего морфологического признака, с учетом динамики реактивного процесса.

При известных обстоятельствах, в том числе при проведении комиссионных экспертиз, выявленная микроскопическая картина позволяет подтвердить или опровергнуть время получения травмы, указанное в материалах дела.

ОСОБЕННОСТИ ПОЛУЧЕНИЯ И АНАЛИЗА ДНК ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ТКАНЕЙ, ФИКСИРОВАННЫХ ВФОРМАЛИНЕ

к.б.н. А.Г. Смоляницкий1, к.б.н. Н. Н. Хромов-Борисов2, А. И. Смоляницкая1

• 1Бюро судебно-медицинской экспертизы

Ленинградской области (нач. - к.м.н., доц.

В. Н. Лебедев)

• 2Российский научно-исследовательский

институт травматологии и ортопедии

им. Р. Р. Вредена

• Аннотация: Выделение и анализ ДНК

из биоматериалов, хранящихся в формалине или в парафиновых блоках, представляют серьезную методическую проблему. Статья посвящена апробации и внедрению в практику судебно-генетических исследований способов обработки таких материалов для получения из них препаратов геномной ДНК, пригодных для энзиматической амплификации. Приведены примеры успешных экспертиз образцов тканей и фрагментов органов, заключенных в парафин или погруженных в формалин, благодаря применению модифицированных методических приемов. Проведен анализ причин, затрудняющих исследования ДНК в таких образцах, и рассмотрены пути их преодоления. Предложен оптимизированный метод пробоподготовки препаратов ДНК из гистологических образцов, тканей и органов, хранившихся в формалине.

• Ключевые слова: экстракция ДНК, гено-типирование гистологических препаратов, формалин, формальдегид

ВВЕДЕНИЕ

Генотипирование объектов биологической природы, находившихся или доставленных на исследование в формалине, - достаточно обычная практика. Ткани и фрагменты органов от трупов доставляются в судебно-хими-ческое и гистологическое отделения в 10 % нейтральном формалине для максимальной защиты материала от гнилостных изменений. Фиксации в формалине подвергаются также ткани перед заключением их в парафиновые блоки. Многочисленными исследованиями показано не-