Активность пектина в отношении биоплёнок холерных вибрионов

Активность пектина в отношении биоплёнок холерных вибрионов

Н. А. СЕЛЯНСКАЯ', Л. А. ЕГИАЗАРЯН', С. Н. ГОЛОВИН', Э. Г. ПОТИЕВСКИЙ2, Л. М. ВЕРКИНА', Н. Г. ЖЕЛЕЗНЯК'

' Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора, Ростов-на-Дону 2 Омская Государственная медицинская академия, Омск

Pectin Activity in Respect of Choleric Vibrion Biofilms

N. A. SELYANSKAYA', L. A. YEGIAZARYAN', S. N. GOLOVIN', E. G. POTIYEVSKIY2, L. M. VERKINA', N. G. ZHELEZNYAK'

' Rostov on Don Antiplague Scientific Research Institute, Rostov-on-Don 2 Omsk State Medical Academy, Omsk

Рост антибиотикорезистентности холерных вибрионов обуславливает интерес к группе веществ растительной природы, обладающих антимикробной активностью. Целью настоящей работы стало изучение антибактериальных свойств пектина в отношении Vibrio cholerae и образованных им биоплёнок. 1,0—5,0% раствор пектина вызывал гибель холерных вибрионов различных серогрупп, как антибиотикочувствительных, так и обладающих множественной антибиотикорезистентностью, при воздействии всего в течение 1 ч. Биоплёнки оказались несколько более устойчивыми к действию 1,0% пектина и проявили высокую чувствительность к 2,0—5,0% раствору пектина, который также препятствовал формированию биопленок. С помощью трансмиссионной электронной микроскопии показано, что в результате действия 5,0% раствора пектина в течение 1 ч наблюдается выраженная деструкция матрикса с полным разрушением клеток холерных вибрионов. Проведённое исследование свидетельствует о перспективности использования пектинов в лечении и профилактике заболеваний, вызванных V.cholerae.

Ключевые слова: пектин, холерные вибрионы, биоплёнка.

The growth of antibiotic resistance of cholera vibrios causes interest in a group of substances of plant origin possessing antimicrobial activity. The purpose of this work was to study the antibacterial properties of pectin in relation to Vibrio cholerae and biofilms formed by it. A 1.0—5.0% solution of pectin caused death of cholera vibrios of various serogroups, both antibiotic-sensitive and possessing multiple antibiotic resistance, when exposed for a total of 1 hour. Biofilms were slightly more resistant to 1.0% pectin and showed high sensitivity to 2.0—5.0% solution of pectin, which also prevented the formation of biofilms. With the help of transmission electron microscopy it was shown that as a result of the action of 5.0% pectin solution within 1 hour a pronounced destruction of the matrix with complete destruction of cholera vibrio cells was observed. The study shows the promise ofusing pectins in the treatment and prevention of diseases caused by V.cholerae.

Keywords: pectin, Vibrio cholerae, biofilm.

В настоящее время наблюдается рост антибиотикорезистентности возбудителей инфекционных заболеваний, в том числе холерных вибрионов. Анализ антибиотикограмм клинических штаммов Vibrio cholerae, выделенных в последние годы в различных регионах мира, свидетельствует о наличии у этих бактерий устойчивости к по-лимиксину, триметоприму/сульфаметоксазолу, фуразолидону, стрептомицину, гентамицину, спектиномицину, тетрациклинам, хлорамфени-колу, ампициллину, цефтриаксону, налидиксо-вой кислоте и фторхинолонам [1—6]. Кроме того, холерные вибрионы способны формировать

© Коллектив авторов, 2016

Адрес для корреспонденции: 344002 Ростов-на-Дону, ул. М.Горького, Ростовский-на-Дону противочумный институт. E mail: ppdn@inbox.ru

микробные сообщества — биопленки, в составе которых устойчивость бактерий к используемым антибиотикам в 10—100 раз выше, чем у планктонных клеток [7]. Поэтому антибактериальная терапия становится неэффективной, что обуславливает растущий интерес отечественных и зарубежных учёных к группе веществ растительной природы, обладающих антимикробной активностью в отношении холерных вибрионов и образованных ими биоплёнок, с целью изучения возможности применения их для профилактики и лечения холеры [8, 9].

В ряде работ [10—12] доказано антибактериальное действие на микроорганизмы, вызывающие кишечные инфекции, включая холерные вибрионы, пектина, представляющего собой естественный полимер — Б-галактуроновой кис-

лоты и являющегося естественным компонентом всех зелёных растений планеты.

Целью настоящей работы стало изучение антибактериальных свойств пектина в отношении холерных вибрионов и образованных ими биоплёнок.

Материал и методы

В работе использовали штаммы, полученные из Музея живых культур ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора: V.cholerae El Tor 5879, 18826, 18904, 19613; V.cholerae 0139 16077; V.cholerae non 01/ non 0 139 19190. Все штаммы, за исключением контрольного анти-биотикочувствительного штамма V.cholerae El Tor 5879, обладали множественной антибиотикорезистентностью.

В исследованиях использовались 0,25—0,5—1,0—2,0—5,0% водные растворы пектина.

Для определения действия пектина на V.cholerae готовили взвесь 16—18-часовых агаровых культур (104—109 микр. кл./мл) по отраслевому стандарту мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича (0С0-42-25-59-86 П) в соответствующем растворе пектина. Взвесь инкубировали в термостате при 37°С в течение 1, 2, 3 и 24 ч с последующим высевом на агар Мартена для выявления жизнеспособности вибрионов.

Для определения действия пектина на образовавшиеся сообщества биопленки холерных вибрионов получали способом, описанным в предыдущих работах [13], во флаконах с 30 мл стерильной водопроводной воды, при комнатной температуре, используя в качестве твердого субстрата пластинки из пищевого пластика (0,5x1,5 см). Суспензию холерных вибрионов добавляли в конечной концентрации nx104 микр. кл./мл по отраслевому стандарту мутности ГИСК им. Л. А. Тарасеви-ча (0С0-42-25-59-86 П). На третьи сутки культивирования пластинки с образовавшимися биоплёнками после трёхкратного промывания в физиологическом растворе переносили в пенициллиновые флаконы, содержащие пектин в концентрациях 0,25—0,5—1,0—2,0—5,0% на 1—3—24 ч. Затем делали отпечатки биоплёнок и высевали 0,1 мл планктонной культуры на пластинки с агаром Мартена (рН 7,7), учитывая результат по наличию или отсутствию роста холерных вибрионов.

Для определения влияния пектина на формирование биоплёнок, пластиковые пластинки помещали в пенициллино-вые флаконы, содержащие 0,25—5,0% раствор пектина и взвесь 104 микр. кл/мл холерных вибрионов каждого штамма. Через 1—3 суток выращивания в термостате (37°С) делали отпечатки биоплёнок и высевали по 0,1 мл планктонной культуры на пластинки с агаром Мартена (рН 7,7). Результат учитывали через 24 часа по наличию или отсутствию роста холерных вибрионов.

Визуализацию действия пектина на биопленки V.cholerae El Tor осуществляли просвечивающим электронным микроскопом Jeol JEM-1011, получая изображения при помощи CCD-rfvths Olympus-SIS Veleta.

Для обработки образцов на электронном микроскопе был разработан комбинированный метод культивирования биопленок и дальнейшей их пробоподготовки, при котором минимально нарушается структура самой биопленки и максимально возможно визуализируются основные её компоненты: внеклеточный матрикс и микробные клетки со свойственными им особенностями.

Биоплёнки выращивали непосредственно на медных сеточках для трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ) с формаровой пленкой-подложкой, смонтированных на предметных стеклах.

Приготовление пленок-подложек, монтаж опорных сеток и фиксацию их на предметные стекла проводили при условиях работы с ПБА I-II группы патогенности в стерильных условиях в боксе микробиологической безопасности 2-го

класса. Стекло после специальной стерилизации с плёнкой под углом 30° погружали в кристаллизатор с налитой до образования выпуклого мениска дистиллированной водой. При этом плёнка отделяется от стекла и остается на поверхности воды. На плавающую плёнку помещали опорные сеточки в количестве 4—5 штук. Таким образом, мы получали субстрат для формирования биоплёнок.

По достижении необходимой степени зрелости биопленки субстрат переносили в пенициллиновые флаконы с 5,0% раствором пектина на 1 ч.

Для окраски полученного образца применяли схему, позволяющую проводить одновременную фиксацию образца с его обеззараживанием (глутаровый альдегид, тетраоксид осмия), контрастирование (тетраоксид осмия) и визуализацию матрикса биоплёнки (рутениевый красный, тетраоксид осмия). При использовании этого метода на первом этапе образуется связь между катионом рутениевого красного и анионными группами кислых полисахаридов, а при последующей обработке тетраоксидом осмия в окислительно-восстановительной реакции, катализируемой рутениевым красным, низшие окислы осмия осаждаются на окисленном субстрате. После высыхания опорные сетки с образцами отделяли пинцетом от предметного стекла, помещали в держатель и исследовали методом ТЭМ.

Результаты исследования

Воздействие 0,25% раствора пектина на вибрионы в концентрациях их 104—105 микр. кл./мл в течение 1—2 ч не приводило к их гибели, за исключением штамма V.cholerae 0139 16077 (nx104 микр. кл./мл). Через 3 ч экспозиции данный раствор пектина оказался эффективен в отношении V.cholerae El Tor 5879, 18826 и V.cholerae non O1/ non O139 19190 в концентрации их104 микр. кл. / мл, V.cholerae 0139 16077 в концентрациях nx105—108 микр. кл./мл. Клетки V.cholerae non O1/ non O139 19190 в концентрациях nx105—106 микр. кл./мл погибали лишь через 24-часовой экспозиции с 0,25% раствором пектина (табл. 1).

При воздействии 0,5% раствора пектина в течение 1 ч на агаре Мартена отсутствовал рост V.cholerae non O1/ non O139 19190 во всех концентрациях, V.cholerae El Tor 5879 и 18826 в концентрациях nx104—105 микр. кл./мл, а V.cholerae 0139 16077 — nx104—108 микр. кл./мл. Через 2—24 ч действия 0,5% раствора пектина наблюдалось угнетение роста штаммов V.cholerae El Tor 5879, 18826 в концентрациях nx104—107 микр. кл. / мл. Указанный раствор пектина оказался не эффективным в отношении данных штаммов в концентрации nx108—109 микр. кл./мл, а V.cholerae 0139 16077 в концентрации nx109 микр. кл./мл даже при 24-часовой экспозиции (табл. 1).

В присутствии 1,0—5,0% раствора пектина холерные вибрионы исследованных штаммов во всех концентрациях утрачивали жизнеспособность уже через 1 ч воздействия (см. табл. 1).

Таким образом, 1,0—5,0% раствор пектина вызывает гибель холерных вибрионов различных серогрупп, как антибиотикочувствительных, так и обладающих множественной антибиотикоре-зистентностью, при воздействии всего в течение

Таблица 1. Чувствительность холерных вибрионов к пектину

Штаммы V.cholerae Концентрация Концентрация раствора пектина, %

V.cholerae, 0,25 0,5 1,0-5,0

микр. кл./мл_Экспозиция, ч

24 1 2 3 24 1 2 3 24

1

2

3

El Tor 5879

El Tor 18826

O139 16077

nx104 R R S S S S S S S S S S

nx105 R R R R S S S S S S S S

nx106 R R R R R S S S S S S S

nx107 R R R R R S S S S S S S

nx108 R R R R R R R R S S S S

nx109 R R R R R R R R S S S S

nx104 R R S S S S S S S S S S

nx105 R R R R S S S S S S S S

nx106 R R R R R S S S S S S S

nx107 R R R R R S S S S S S S

nx108 R R R R R R R R S S S S

nx109 R R R R R R R R S S S S

nx104 S S S S S S S S S S S S

nx105 R R S S S S S S S S S S

nx106 R R S S S S S S S S S S

nx107 R R S S S S S S S S S S

nx108 R R S S S S S S S S S S

nx109 R R R R R R R R S S S S

O139 19190 nx104 R R S S S S S S S S S S

nx105 R R R S S S S S S S S S

nx106 R R R S S S S S S S S S

nx107 R R R R S S S S S S S S

nx108 R R R R S S S S S S S S

nx109 R R R R S S S S S S S S

Примечание. Здесь и в табл. 2, 3. R - устойчивость; S - чувствительность.

Таблица 2. Влияние пектина на образование биоплёнок холерными вибрионами

Штаммы V. сМегае Концентрация раствора пектина, %

0,25

0,5

1,0

2,0

П

П

П

П

5,0

П

Б

Б

Б

El Tor 5879 R R S R S R

El Tor 19613 R R S R S R

O139 16077 R R S R S R

non O1/ non O139 19190 R R S R S R

Примечание. П - планктон; Б - биоплёнка.

S S S S

S S S S

S S S S

S S S S

1 часа. По данным литературы, механизм антимикробного действия пектинов связан с их способностью закислять реакционную среду, вызывая кислотное повреждение структур и белков бактериальной клетки. Дополнительно к этому могут протекать и другие процессы, например омыление этерифицированных карбоксильных групп с образованием соли (натриевой, калиевой, кальциевой и др.) и микроколичеств метилового спирта, безвредных для макроорганизма, но губительных для микроорганизмов [11]. В макроорганизме пектины способны избирательно стимулировать рост доминантной антагонистической кишечной микрофлоры (пребиотический эффект), активировать врожденный иммунитет хозяина, а также обладают детоксикационными свойствами [11, 12, 14].

Интересные данные получены при изучении влияния пектина на образование биоплёнок холерными вибрионами. В отпечатках биоплёнок

штаммов V.cholerae El Tor 5879, 19613, V.cholerae 0139 16077, V.cholerae non O1/ non O139 19190 при воздействии 2,0—5,0% раствора пектина на третьи сутки, отсутствовал рост холерных вибрионов на агаре Мартена. Однако 0,25—1,0% раствор пектина не препятствовал образованию биоплёнок этими штаммами (табл. 2).

Пектины, обладая высокими гелеобразующи-ми свойствами, обусловленными гидрофильнос-тью галактуроновых кислот, обволакивают бактерии, нарушая тем самым их адгезию — начальный этап процесса образования биоплёнок [11]. Проведённое S. Wang с соавт. [15] исследование показало, что показатель адгезии для V.cholerae достоверно снижался в присутствии пектинового олигосахарида до 16,1%. По мнению некоторых исследователей, использование веществ, способных препятствовать адгезии возбудителей, является перспективным направлением борьбы с биоплёнками [16].

Таблица 3. Действие пектина на биоплёнки холерных вибрионов

Штаммы V.cholerae

Концентрация раствора пектина, %

0,25 0,5 1,0 2,0-5,0

Экспозиция, ч

1 3 24 13 24 1 3 24 1 3 24

П Б П Б П Б П Б П Б ПБ ПБПБПБ ПБПБПБ

El Tor 5879 El Tor 18826 El Tor 19613 El Tor 18904 O139 16077

non 01/ non O139 19190

R R R R R R

R R R R R R

R R R R R R

R R R R S R

R R R R S R

R R S R S R

R R R R R R

R R R R R R

R R S R S R

S R S S S S

R R S S S S

S R S R S S

S S S S S S S S S S S S

S S S S S S S S S S S S

S R S R S S S S S S S S

S S S S S S S S S S S S

S S S S S S S S S S S S

S S S S S S S S S S S S

При изучении влияния пектина на зрелые биоплёнки 6 штаммов V.cholerae были получены следующие результаты (табл. 3).

К 0,25% раствору пектина проявляли чувствительность лишь планктонные культуры V.cholerae El Tor 18904, V.cholerae 0139 16077 (экспозиция 24 ч) и V.cholerae non 01/ non 0139 19190 (экспозиция 3 ч).

B присутствии 0,5% раствора пектина наступала гибель биоплёнок штаммов V.cholerae El Tor 18904 и V.cholerae 0139 16077 через 3 ч, а V.cholerae non 01/ non 0139 19190 — через 24 ч. Планктонные культуры этих штаммов утрачивали жизнеспособность через 1—3 ч.

На агаре Мартена отсутствовал рост вибрионов и планктонной и биоплёночной форм всех штаммов V.cholerae через 1 ч экспозиции с 1,0—5,0% раствором пектина, за исключением биоплёнок штамма V.cholerae El Tor 19613, которые оказались устойчивы к действию 1,0% раствора пектина в течение 1—3 ч (см. табл. 3).

Известно, что биоплёночные культуры более устойчивы к повреждающим факторам внешней среды, чем планктонные [17]. B нашем исследовании биоплёнки V.cholerae также оказались несколько более устойчивы к действию пектина в сравнении планктонными клетками. Однако пектин в концентрациях 2,0—5,0% продемонстрировал высокую антибактериальную активность в отношении биоплёночных форм холерных вибрионов.

С помощью трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ) нам удалось визуализировать результат воздействия 5,0 % раствора пектина (1 ч) на биоплёнки V.cholerae El Tor 5879 (рисунок).

B контроле без воздействия пектина видна биопленка, состоящая из групп бактерий, адге-зированных к поверхности и окруженных густым аморфным веществом с многочисленными тяжами — внеклеточным экзополисахаридным матриксом (см. рисунок, a). B результате воздействия 5,0% раствора пектина (1 ч) выявлена выраженная деструкция матрикса с полным разрушением клеток холерных вибрионов (см. рисунок, б).

Биопленки V.cholerae El Tor 5879.

Третьи сутки, трансмиссионная электронная микроскопия, контрастирование рутениевым красным и тетраокси-дом осмия, ув. х30 000. а - без воздействия пектина (контроль); б - воздействие 5,0% раствора пектина в течение 1 ч.

Заключение

В настоящее время активно ведется разработка препаратов, активных в отношении биоплёнок холерных вибрионов. Так, исследования учёных позволили открыть вещества, ингибиру-ющие кворум-сенсинг этих бактерий, разруша-

ющие биоплёнки V.cholerae и нарушающие их образование [18]. В нашем исследовании показано, что пектин в 2,0—5,0% концентрациях обладает высокой антибактериальной активностью как в отношении планктонных, так и биоплёночных форм холерных вибрионов, в том

ЛИТЕРАТУРА

1. Рыжко И.В., Дудина Н.А., Ломов Ю.М., Шутъко А.Г., Цураева Р.И., Анисимов Б.И. Антибактериальная активность 22 препаратов в отношении штаммов холерного вибриона 01 и 0139 серогрупп, выделенных от людей в период с 1927 по 2005 гг. Антибиотики и хи-миотер 2005; 8—9: 38—42. / Ryzhko I.V., Dudina N.A., Lomov Ju.M, Shut'ko A.G., Curaeva R.I., Anisimov B.I. Antibakterial'naja aktivnost' 22 preparatov v otnoshenii shtammov holernogo vibriona O1 i O139 sero-grupp, vydelennyh ot ljudej v period s 1927 po 2005 gg. Antibiotiki i khimioter 2005; 8—9: 38—42. [in Russian]

2. Селянская H.A., Веркина Л.М., Березняк H.A., Титова С.В., Железняк Н.Г., Архангелъская ИВ. Сравнительная оценка антибиотикорези-стентности штаммов V. cholerae non 01 / non 0139, выделенных от людей в Ростовской области в разные годы. Эпидемиол инфекц бол 2015; 3: 32—35. / SeljanskajaN.A., VerkinaL.M., BereznjakN.A., Titova S.V., Zheleznjak N.G., Arhangel'skaja I.V. Sravnitel'naja ocenka antibi-otikorezistentnosti shtammov V. cholerae non O1 / non O139, vydelennyh ot ljudej v Rostovskoj oblasti v raznye gody. Jepidemiol infekc bol 2015; 3: 32—35. [in Russian]

3. Balaji K, Okonjo P.A., Thenmozhi R, Karutha Pandian S. Virulence and Multidrug Resistance Patterns of Vibrio cholerae O1 Isolates from Diarrheal Outbreaks of South India During 2006—2009. Microb Drug Resist 2013; 19 (3): 198—203.

4. Kutar B.M., Rajpara N, Upadhyay H, Ramamurthy T, Bhardwaj A.K. Clinical isolates of Vibrio cholerae 01 El Tor Ogawa of 2009 from Kolkata, India: preponderance of SXT element and presence of Haitian ctxB variant. PLoS One2013; 8 (2): 5647.

5. Pal B.B, Khuntia H.K, Samal S.K., Kerketta A.S., Kar S.K., Karmakar M, Pattnaik B. Large outbreak of cholera caused by El Tor variant Vibrio cholerae 01 in the eastern coast of Odisha, India during 2009. Epidemiol Infect 2014; 141 (12): 2560—2567.

6. Jain M, Kumar P., Goel A.K. Emergence of Tetracycline Resistant Vibrio cholerae 01 Biotype EL tor Serotype Ogawa with Classical ctxB Gene from a Cholera Outbreak in Odisha, Eastern India. J Pathog 2016.

7. Кирилова О.Д., Селянская H.A., Титова С.В., Веркина Л.М. Чувствительность биопленок холерных вибрионов к антибактериальным препаратам. Инфекция и иммунитет. Материалы III Санкт-Петербургского международного экологического форума. С.-Пб.: 2014; 85. / Kirilova O.D., Seljanskaja N.A., Titova S.V., Verkina L.M. Chuvstvitel'nost' bioplenok holernyh vibrionov k antibakterial'nym preparatam. Infekcija i immunitet. Materialy III Sankt-Peterburgskogo mezhdunarodnogo jekologicheskogo foruma. S.-Pb.: 2014; 85. [in Russian]

8. Маркина О.В., Максименко Е.В., Маркин Н.В., Селянская Н.А., Ше-лохович А.И., Мазрухо А.Б., Борисенко Н.И. Изучение состава экстрактов растений, обладающих антимикробным эффектом в отношении Vibrio cholerae El Tor, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Журн микробиол 2016; 1: 63—66. / Markina O.V., Maksimenko E.V., Markin N.V., Seljanskaja N.A., Shelohovich A.I., Mazruho A.B., Borisenko N.I.Izuchenie sostava jek-straktov rastenij, obladajushhih antimikrobnym jeffektom v otnoshenii Vibrio cholerae El Tor, s pomoshh'ju vysokojeffektivnoj zhidkostnoj hro-matografii. Zhurn mikrobiol 2016; 1: 63—66. [in Russian]

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:

Селянская Надежда Александровна — к.м.н., ст.н.с. лаборатории биологической безопасности и лечения 00И ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институт, Ростов-на-Дону

Егиазарян Лиана Алъбертовна — м.н.с. лаборатории биологической безопасности и лечения 00И ФКУЗ Ростов-ский-на-Дону противочумный институт, Ростов-на-Дону Головин Сергей Николаевич — лаборант лаборатории биологической безопасности и лечения 00И ФКУЗ Ростов-ский-на-Дону противочумный институт, Ростов-на-Дону

числе обладающих множественной антибиоти-корезистентностью, а также препятствует образованию биоплёнок. Подобные исследования способны открыть новые возможности снижения числа инфекций, обусловленных холерными вибрионами.

9. Kim H.I., Kim J.A., Choi E.J., Harris J.B., Jeong S.Y., Son S.J., Kim Y, Shin O.S. In vitro and in vivo antimicrobial efficacy of natural plant-derived compounds against Vibrio cholerae of O1 El Tor Inaba serotype. Biosci Biotechnol Biochem 2014; 79 (3): 475—83.

10. Потиевский Э.Г., Новиков А.И. Медицинские аспекты применения пектина. М.: Медицинская книга. 2002; 96. / Potievskij Je.G., Novikov A.I. Medicinskie aspekty primenenija pektina. M.: Medicinskaja kniga. 2002; 96. [in Russian]

11. Лазарева Е.Б., Меньшиков ДДОпыт и перспективы использования пектинов в лечебной практике. Антибиотики и химиотер 1999; 44: 2: 37—40. / Lazareva E.B., Men 'shikov D.D. Opyt i perspektivy ispol'-zovanija pektinov v lechebnoj praktike. Antibiotiki i khimioter 1999; 44: 2: 37—40. [in Russian]

12. Потиевский Э.Г., Дроздов В Н., Краснова В.И., Орлов М.Д., Макиен-ко Ю Н., Белан Ю.Б., Торланева Т.В., Лобова Ю.Ф., Талимуллина Н.Н., Бешевец Н.Н. Применение пектина в комплексной терапии острых кишечных инфекций у детей раннего возраста. Детские инфекц 2012; 11: 4: 64—67. / Potievskij Je.G., Drozdov V.N., Krasnova V.l., Orlov M.D., Makienko Ju.N., Belan Ju.B., Gorlacheva T.V., Lobova Ju.F., Galimullina N.N., Beshevec N.N. Primenenie pektina v komplek-snoj terapii ostryh kishechnyh infekcij u detej rannego vozrasta. Detskie infekc 2012; 11: 4: 64—67. [in Russian]

13. Титова С.В., Кушнарева Е.В. Оценка способности холерных вибрионов к образованию биопленок in vitro с помощью нового методического подхода. Фундаментал исслед 2014; 10: 375—379. / Titova S.V., KushnarevaE.V. Ocenka sposobnosti holernyh vibrionov k obrazo-vaniju bioplenok in vitro s pomoshh'ju novogo metodicheskogo podho-da. Fundamental issled 2014; 10: 375—379. [in Russian]

14. Inngjerdingen K.T., Langerud B.K., Rasmussen H., Olsen T.K., Austarheim I., Gmnhaug T.E., Aaberge I.S., Diallo D., Paulsen B.S., Michaelsen T.E. Pectic polysaccharides isolated from Malian medicinal plants protect against Streptococcus pneumoniae in a mouse pneumococcal infection model. Scand J Immunol 2013; 77 (5): 372—388.

15. Wang S., Wang J., Mou H., Luo B., Jiang X. Inhibition of adhesion of intestinal pathogens (Escherichia coli, Vibrio cholerae, Campylobacter jejuni, and Salmonella Typhimurium) by common oligosaccharides. Foodborne Pathog Dis 2015; 12 (4): 360—365.

16. ТолубА.В. Бактериальные биоплёнки — новая цель терапии? Клин микробиол антимикроб химиотер 2012; 14: 1: 23—29. / Golub A.V. Bakterial'nye biopljonki — novaja cel' terapii? Klin mikrobiol antimikrob himioter 2012; 14: 1: 23—29. [in Russian]

17. Романова Ю.М., Тинцбург А.Л. Бактериальные биоплёнки как естественная форма существования бактерий в окружающей среде и организме хозяина. Журн микробиол 2011; 3: 99—109. / Romanova Ju.M., Gincburg A.L. Bakterial'nye biopljonki kak estestvennaja forma sushhestvovanija bakterij v okruzhajushhej srede i organizme hozjaina. Zhurn mikrobiol 2011; 3: 99—109. [in Russian[

18. Augustine N., Goel A.K., Sivakumar K.C., Ajay Kumar R., Thomas S. Resveratrol — a potential inhibitor ofbiofilm formation in Vibrio cholera. Phytomedicine 2014: 21 (3): 286—289.

Потиевский Эмиль Григорьевич — к.м.н., Омская Государственная медицинская академия, Ростов-на-Дону Веркина Людмила Михайловна — к.м.н., зав. лабораторией биологической безопасности и лечения ООИ, ФКУЗ Рос-товский-на-Дону противочумный институт, Ростов-на-Дону

Железняк Наталья Георгиевна — лаборант лаборатории биологической безопасности и лечения ООИ ФКУЗ Ростов-ский-на-Дону противочумный институт, Ростов-на-Дону