ИОНЫ МАГНИЯ В КАЧЕСТВЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО АГЕНТА
MAGNESIUM IONS AS ANTIBACTERIAL AGENT

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[001] Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США №62/339977, поданной 23 мая 2016 года, и предварительной заявки на патент США №62/360496, поданной 11 июля 2016 года, озаглавленной «ИОНЫ МАГНИЯ В КАЧЕСТВЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО АГЕНТА» («MAGNESIUM ION AS ANTIBACTERIAL AGENT»), содержание которых включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылок.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[002] Настоящее изобретение относится, помимо прочего, к продуктам, обогащенным магнием, и их применению, например, для предотвращения образования биопленок и в производстве сыра.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[003] Несмотря на развитие способов консервации продуктов питания, бактериальное загрязнение остается ведущей причиной продовольственных потерь по всему миру. По оценкам, примерно треть всех продуктов питания, производимых в мире, утрачиваются после уборки урожая, и большая часть этих потерь может быть связана с загрязнением микроорганизмами. Молочная продукция является одной из отраслей с наиболее высокими продовольственными потерями, так как ежегодно примерно 20% жидкого молока, пастеризованного стандартными способами, выбрасывается перед употреблением. Бактериальное загрязнение может отрицательно влиять на качество, функциональные характеристики и безопасность молока и его производных. Считается, что основным источником загрязнения молочных продуктов является образование биопленок на поверхности оборудования для переработки молока. Биопленки представляют собой высокоструктурированные многоклеточные сообщества, которые обеспечивают выживание бактерий в агрессивной внешней среде.
[004] Коровье молоко является высокопитательным, что делает его идеальной средой для роста микроорганизмов. Оно содержит большое количество воды и питательных веществ (таких как лактоза, белки и липиды) и имеет практически нейтральный pH. Так как наличие микроорганизмов в молоке может являться причиной его порчи и/или появления рисков для здоровья, производство молока контролируется исключительно жесткими регламентирующими нормами. Указанные нормы включают пастеризацию при высоких температурах, в результате которой уничтожается основная часть бактерий, и хранение молока при низких температурах, которое ограничивает рост многих бактерий. Кроме того, трубопроводы на молочных фермах регулярно чистят щелочными и кислотными жидкостями при высоких температурах в рамках процедуры чистки на месте (англ. cleaning-in-place (CIP)). Несмотря на указанные жесткие условия, некоторые бактерии могут преодолевать эти ограничения. Например, термофильные и спорообразующие бактерии могут переживать процедуры пастеризации, и психротрофные бактерии успешно развиваются при низких температурах хранения молока. Кроме того, споры бактерий могут выживать при обработке реагентами, традиционно используемыми в процедурах CIP. Некоторые из указанных бактерий вырабатывают ферменты (протеазы и липазы), которые приводят к появлению привкуса и створаживанию конечного продукта.
[005] Члены рода Bacillus являются одними из наиболее распространенных бактерий на молочных фермах и перерабатывающих заводах. Кроме того, они являются основным типом грамположительных бактерий, выделяемых из сырого молока и пастеризованного молока. Термофильные, мезофильные и психротрофные штаммы Bacillus были выявлены на молочных фермах и/или в молоке. В. cereus в большом количестве образует биопленки на нержавеющей стали, которую традиционно используют на заводах по производству продуктов питания, и является одним из источников биологического загрязнения продуктов питания после технологической обработки. Важно отметить, что на промышленных молокозаводах В. cereus составляет более 12% микрофлоры, образующей биопленки. Так как виды Bacillus повсеместно встречаются в природе, они легко распространяются по системам пищевого производства, и загрязнение этими видами практически неизбежно. Кроме того, споры В. cereus имеют высокую устойчивость к различным воздействиям и являются крайне гидрофобными, эти отличительные признаки позволяют им с легкостью налипать на оборудование пищевой промышленности. Биопленки, образуемые термоустойчивыми видами Bacillus на молочных линиях, могут быстро разрастаться до такого уровня, что проходящее молоко загрязняется клетками, высвобождаемыми из биопленки. Таким образом, биопленки, образуемые видами Bacillus, являются одной из основных санитарных проблем в молочной промышленности.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[006] Согласно другому аспекту в изобретении предложен способ уменьшения или подавления образования биопленок в жидкости и/или увеличения эффективности пастеризации жидкости, включающий стадию добавления источника ионов магния в жидкость до достижения конечной концентрации указанных ионов магния в указанной жидкости от 8 мМ до 150 мМ, с образованием тем самым жидкости, обогащенной магнием. В некоторых вариантах реализации способ дополнительно включает стадию пастеризации жидкости, обогащенной магнием.
[007] Согласно другому аспекту в изобретении предложен способ обработки, предотвращения, подавления и/или уменьшения образования биопленок и/или уменьшения или разрушения существующих биопленок на поверхности, включающий стадии: обеспечения композиции, содержащей эффективную концентрацию ионов магния; и приведение указанной поверхности в контакт с указанной композицией. В некоторых вариантах реализации эффективная концентрация ионов магния составляет по меньшей мере 20 мМ.
[008] Согласно другому аспекту в изобретении предложена композиция, содержащая молоко, обогащенное магнием, где концентрация ионов магния в указанном молоке, обогащенном магнием, составляет от 8 миллимоль на литр (мМ) до 25 мМ. В некоторых вариантах реализации концентрация указанных ионов магния в указанном молоке, обогащенном магнием, составляет от 10 мМ до 15 мМ.
[009] В некоторых вариантах реализации в композиции уменьшено образование биопленок.
[010] В некоторых вариантах реализации молоко, обогащенное магнием, представляет собой пастеризованное молоко, обогащенное магнием. В некоторых вариантах реализации пастеризованное молоко, обогащенное магнием, характеризуется наличием менее чем 1 колониеобразующей единицы (КОЕ)/миллилитр.
[011] В некоторых вариантах реализации молоко, обогащенное магнием, имеет пониженную продолжительность сычужного свертывания (RCT) по сравнению с молоком, не обогащенным магнием (таким как то, что получают у того же млекопитающего или перерабатывают схожими способами, но без добавления Mg). В некоторых вариантах реализации молоко, обогащенное магнием, имеет увеличенную плотность сырного сгустка (CF, мин) по сравнению с молоком, не обогащенным магнием, полученным от того же млекопитающего.
[012] В некоторых вариантах реализации предложено изделие, содержащее композицию согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации изделие выбрано из группы, состоящей из пищевой упаковки, устройства для получения и/или переработки молока.
[013] Согласно другому аспекту в изобретении предложен способ, включающий стадию добавления источника ионов магния в молоко до достижения конечной концентрации указанных ионов магния в указанном молоке от 8 мМ до 25 мМ, с образованием тем самым молока, обогащенного магнием. В некоторых вариантах реализации способ дополнительно включает стадию пастеризации молока, обогащенного магнием.
[014] В некоторых вариантах реализации способ предназначен для уменьшения или подавления образования биопленок в указанном молоке. В некоторых вариантах реализации способ предназначен для увеличения эффективности пастеризации. В некоторых вариантах реализации способ предназначен для увеличения уровня включения белка в молочный продукт.
[015] В некоторых вариантах реализации источник ионов магния представляет собой соль магния. В некоторых вариантах реализации соль магния выбрана из: хлорида магния, фторида магния, сульфата магния, нитрата магния, ацетата магния, карбоната магния, цитрата магния, фосфата магния и их гидратов.
[016] В некоторых вариантах реализации биопленка образована бактериями, выбранными из грамположительных бактерий и грамотрицательных бактерий. В некоторых вариантах реализации биопленка образована спорообразующими бактериями. В некоторых вариантах реализации бактерии выбраны из родов, включая: Bacillus, Geobacillus, Anoxybasillus и Pseudomona. В некоторых вариантах реализации бактерии выбраны из штаммов бактерий: Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Geobacillus stearothermophilus, Anoxybacillus flavithermus и Pseudomonas aeruginosa.
[017] Если отсутствуют иные определения, все технические и/или научные термины, используемые в настоящем описании, имеют значение, общепринятое специалистами в области техники, к которой относится изобретение. Несмотря на то, что при реализации или исследовании вариантов реализации изобретения можно применять способы и материалы, схожие или эквивалентные тем, что описаны в настоящем документе, типовые способы и/или материалы описаны ниже. В случае противоречий следует учитывать описание патента, включая определения. Кроме того, материалы, способы и примеры являются исключительно иллюстративными и не обязательно накладывают какие-либо ограничения.
[018] Дополнительные варианты реализации и полный объем применимости настоящего изобретения станут понятными после изучения последующего подробного описания. Тем не менее, следует понимать, что подробное описание и конкретные примеры, хотя в них и указаны предпочтительные варианты реализации изобретения, приведены исключительно для иллюстрации, так как различные изменения и модификации, не выходящие за рамки сущности и объема изобретения, будут очевидны специалистам в данной области техники после ознакомления с указанным подробным описанием.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
2
2
[019] На фиг. 1А показаны фотографии образования бактериальных пленок и образования колоний В. subtilis (NCIB3610) в присутствии 5 мМ, 10 мМ, 25 мМ, 50 мМ, 100 мМ MgCl или контроля (без добавления MgCl);
2
[020] На фиг. 1В приведен график, на котором продемонстрированы кривые роста В. subtilis NCIB3610, выращиваемых в среде LBGM (контроль) или среде LBGM, дополненной 5 мМ, 10 мМ, 25 мМ, 50 мМ или 100 мМ MgCl;
2
[021] На фиг. 1С показаны изображения КЛСМ клеток В. subtilis с флуоресцентными метками (YC161 с Pspank-gfp) после инкубации в течение 24 часов в среде, способствующей образованию биопленок, в присутствии 5 мМ, 10 мМ, 25 мМ, 50 мМ или 100 мМ MgCl;
2
2
2
2
[022] На фиг. 1D показаны фотографии образования колоний В. subtilis (NCIB3610) в твердых средах LBGM, отвержденных 1,5% агаром, которые предварительно обрабатывали путем нанесения раствора 5 мМ MgCl, 20 мМ MgCl, 50 мМ MgCl или контроля (без добавления MgCl);
2
2
2
2
[023] На фиг. 1Е показаны фотографии образования биопленок В. subtilis (NCIB3610) в среде, обогащенной апельсиновым соком, без добавок (LB + апельсиновый сок), с добавкой 50 мМ MgCl (LB + апельсиновый сок + 50 мМ MgCl) или 80 мМ MgCl (LB + апельсиновый сок + 80 мМ MgCl);
2+
2+
+
[024] На фиг. 2А-С приведены столбчатые диаграммы, на которых показано действие ионов Mg (А), ионов Са (В) и ионов Na (С) на транскрипцию оперонов, ответственных за образование матрикса (опероны epsA-O и tapA);
2
[025] На фиг. 3А показаны изображения КЛСМ клеток В. subtilis с флуоресцентными метками после инкубации в течение 5 часов совместно с молоком в присутствии добавленного MgCl в указанных концентрациях;
2
[026] На фиг. 3В приведен график, на котором продемонстрированы кривые роста В. subtilis в молоке с добавлением различных концентраций MgCl;
2
[027] На фиг. 4 показаны изображения КЛСМ, на которых продемонстрирована экспрессия оперона tapA в клетках В. subtilis, выращиваемых в молоке или в молоке с добавками 1 мМ, 3 мМ или 5 мМ MgCl;
[028] На фиг. 5 приведена столбчатая диаграмма, на которой продемонстрировано действие повышенных концентраций ионов магния или ионов кальция на выживаемость В. subtilis, выращиваемых в молоке, после пастеризации;
2
[029] На фиг. 6 приведен график, на котором показаны результаты анализа, который проводили на оборудовании Optigraph (Ysebaert, Frepillon, France), для образцов с добавками 5 мМ MgCl2 (кюветы 7 и 8), 3 мМ MgCl (кюветы 5 и 6) или 3 мМ CaCl2 (кюветы 3 и 4) по сравнению с контрольным образцом молока без добавок (кюветы 1 и 2);
2
2
[030] На фиг. 7 показаны образцы мягкого сыра, полученного из молока с добавками CaCl или MgCl и для сравнения из молока без добавок, где указанные концентрации соответствуют увеличению концентрации в молоке;
2
[031] На фиг. 8А-В приведены столбчатые диаграммы, на которых показаны измеренные значения времени начала свертывания сыра (8А) и образования плотного сырного сгустка (8В) молока без добавок и образцов молока с добавками 1 мМ, 3 мМ, 5 мМ, 7 мМ, 10 мМ, 15 мМ или 20 мМ MgCl;
2
[032] На фиг. 9 приведена столбчатая диаграмма, на которой показано содержание белка в процентах в сыре, полученном из молока (контроль), и сыре, полученном из молока, обогащенного магнием, имеющего повышенную на 5 мМ концентрацию ионов магния (5 мМ MgCl); и
2
[033] На фиг. 10 показаны фотографии сосудов с молоком или молоком с добавками 3 мМ, 5 мМ, 10 мМ, 50 мМ или 100 мМ MgCl, содержащих культуры В. subtilis.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[034] Настоящее изобретение относится к продуктам, обогащенным магнием. Согласно некоторым вариантам реализации в продуктах, обогащенные магнием, понижено образование биопленок и повышено разрушение существующих на поверхности биопленок. Согласно некоторым аспектам жидкости, обогащенные магнием, в меньшей степени подвержены образованию биопленок. В некоторых вариантах реализации жидкости предназначены для употребления млекопитающими (например, человеком).
[035] Настоящее изобретение дополнительно относится к молочным составам, обогащенным магнием, и молочным продуктам, обогащенным магнием. Значительное уменьшение образования биопленок в молочных продуктах неожиданно обеспечивается посредством их обогащения магнием. В некоторых вариантах реализации образование биопленок в композиции согласно настоящему изобретению понижено по сравнению с молоком или молочным продуктом без добавок ионов магния. В некоторых вариантах реализации подавление образования бактерий в композиции согласно настоящему изобретению при тепловой обработке (например, пастеризации) является более эффективным по сравнению с молоком или молочными продуктами без добавок ионов магния.
[036] В изобретении дополнительно предложен способ обогащения молочного продукта магнием, включающий стадию добавления ионов магния в молочный продукт, с получением тем самым молочного продукта, обогащенного магнием. В изобретении дополнительно предложен способ подавления и/или уменьшения образования биопленок в молочном продукте путем добавления ионов магния в молочный продукт для получения молочного продукта, обогащенного магнием, с уменьшением тем самым образования биопленок в указанном молоке или указанном молочном продукте.
2+
[037] Изобретение основано отчасти на неожиданном открытии того, что ионы магния подавляют образование биопленок видов Bacillus. Изобретение также основано отчасти на том факте, что, как было показано, бактериальные клетки в присутствии Mg имеют повышенную восприимчивость к тепловой пастеризации, проводимой во время переработки молока. Изобретение дополнительно основано отчасти на том факте, что включение молочных белков в сырный сгусток при изготовлении сыра улучшается в присутствии ионов магния.
[038] Как продемонстрировано ниже в настоящем описании, молоко, дополненное ионами магния до конечной концентрации 3 мМ, 5 мМ и 10 мМ, характеризуется пониженным образованием биопленок (см. пример 3), увеличенной эффективностью пастеризации (см. пример 5), пониженной продолжительностью сычужного свертывания (RCT) (см. пример 6) при изготовлении сыра, увеличением плотности сырного сгустка (см. пример 6) и увеличением количества вводимых в сыр белков (см. пример 7) по сравнению с молоком без добавок.
[039] Не ограничивая изобретение какой-либо теорией или механизмом действия, было дополнительно продемонстрировано, что подавление образования биопленок может быть отчасти связано с действием ионов магния в отношении подавления образования внеклеточного матрикса (см. примеры 2 и 4).
Композиции
[040] Согласно некоторым аспектам в настоящем изобретении предложены композиции, содержащие жидкость, обогащенную магнием, где концентрация ионов магния в жидкости, обогащенной магнием, составляет от 8 миллимоль на литр (мМ) до 150 мМ.
[041] В некоторых вариантах реализации жидкости представляют собой напитки и/или питьевые продукты. В некоторых вариантах реализации жидкости представляют собой немолочные напитки и/или немолочные питьевые продукты. При использовании в настоящем описании термин «немолочный» включает все типы продуктов, которые не содержат молоко или молочные продукты, полученные от млекопитающих. При использовании в настоящем описании термин «напиток» относится к по существу водной питьевой композиции, подходящей для употребления человеком. Неограничивающие примеры напитков включают воду, безалкогольные напитки, соки на основе фруктовых экстрактов, соки на основе овощных экстрактов, растительное молоко (например, соевое молоко, миндальное молоко, рисовое молоко, кокосовое молоко и т.д.), кофе, чай и любую их комбинацию.
[042] Неограничивающие примеры фруктовых экстрактов включают экстракты манго, граната, пассифлоры, ягод, арбуза, клубники, сливы, груши, винограда, гуавы, грейпфрута, лимона, мандарина, папайи, ананаса, яблока, клюквы, банана, апельсина или любые их комбинации.
[043] Неограничивающие примеры овощных экстрактов включают экстракты моркови, помидоров, свеклы или любые их комбинации. Экстракты могут иметь форму соков, мякоти или любых их комбинаций, которые подходят для изготовления напитков.
[044] При использовании в настоящем описании термин «обогащенный магнием» относится к жидкости или полученному из нее продукту (например, напитку, немолочному напитку), в которую(-ый) добавлены ионы магния, что обеспечивает повышенную концентрацию ионов магния по сравнению с обычной концентрацией магния в жидкости.
[045] Согласно некоторым аспектам в настоящем изобретении предложены композиции, содержащие жидкость, где жидкость, обогащенная магнием, дополнена магнием с концентрацией от 5 миллимоль на литр (мМ) до 150 мМ.
[046] Согласно некоторым аспектам в настоящем изобретении предложены композиции, содержащие немолочный напиток и/или немолочный питьевой продукт, где обогащенный магнием немолочный напиток и/или немолочный питьевой продукт дополнен ионами магния с концентрацией от 20 мМ до 150 мМ, от 25 мМ до 150 мМ, от 30 мМ до 150 мМ, от 35 мМ до 150 мМ, от 40 мМ до 150 мМ, от 45 мМ до 150 мМ, от 50 мМ до 150 мМ, от 60 мМ до 150 мМ, от 70 мМ до 150 мМ, от 20 мМ до 100 мМ, от 20 мМ до 100 мМ, от 25 мМ до 100 мМ, от 30 мМ до 100 мМ, от 35 мМ до 100 мМ, от 40 мМ до 100 мМ, от 45 мМ до 100 мМ, от 50 мМ до 100 мМ, от 60 мМ до 100 мМ, от 70 мМ до 100 мМ, от 20 мМ до 90 мМ, от 25 мМ до 90 мМ, от 30 мМ до 90 мМ, от 35 мМ до 90 мМ, от 40 мМ до 90 мМ, от 45 мМ до 90 мМ, от 50 мМ до 90 мМ, от 60 мМ до 90 мМ, от 70 мМ до 90 мМ, от 20 мМ до 80 мМ, от 25 мМ до 80 мМ, от 30 мМ до 80 мМ, от 35 мМ до 80 мМ, от 40 мМ до 80 мМ, от 45 мМ до 80 мМ, от 50 мМ до 80 мМ, от 60 мМ до 80 мМ, от 70 мМ до 80 мМ.
Обогащенные молочные композиции
[047] Согласно некоторым аспектам в настоящем изобретении предложены композиции, содержащие обогащенный магнием молочный продукт, где концентрация ионов магния в обогащенном магнием молочном продукте составляет от 8 мМ до 30 мМ.
[048] При использовании в настоящем описании термин «молоко» относится к любому нормальному секрету, получаемому из молочных желез млекопитающих, такому как женское, коровье, козье, лошадиное, верблюжье, свиное, буйволиное или овечье молоко, и включает молоко, сыворотку, комбинации молока и сыворотки, как таковые, или их концентраты и различные молочные продукты, получаемые из них. Молоко, как правило, содержит сывороточные белки и казенны. Отношение сывороточных белков к казеинам может быть различным у различных видов. Например, белки в коровьем молоке включают 20% сывороточных белков и 80% казеинов, тогда как белки в женском молоке включают 60% сывороточных белков и 40% казеинов.
S1
S1
[049] При использовании в настоящем описании термин «сывороточные белки» относится к смеси глобулярных белков. В молоке содержится множество сывороточных белков, и конкретный набор сывороточных белков в секретах молочной железы может быть различным в зависимости от вида, а также других факторов. Основными сывороточными белками коровьего молока являются  и а-лактальбумин. При использовании в настоящем описании термин «казеин» относится к α -казеину, α -казеину, β-казеину, κ-казеину или их комбинации, которые содержатся в молоке млекопитающих, различные казенны представляют собой разные молекулы, но имеют схожую структуру. Различные казенны присутствуют в молоке в виде суспензии частиц, т.е. мицелл казеина. Термин «казеин» при использовании в настоящем описании дополнительно включает кислотный казеин, сычужный казеин, гидролизованный казеин, натрия казеинат, калия казеинат, магния казеинат, кальция казеинат и их комбинации.
[050] В некоторых вариантах реализации млекопитающее выбрано из группы, состоящей из: овцы, коровы, козы, верблюда, буйвола, свиньи и лошади. В некоторых вариантах реализации млекопитающее представляет собой корову. В некоторых вариантах реализации молоко представляет собой коровье молоко. В некоторых вариантах реализации молоко представляет собой женское молоко.
[051] Молоко может содержать добавки ингредиентов, обычно используемых для получения молочных продуктов, таких как жир, белок или сахарные фракции и т.д. Молоко, таким образом, включает необезжиренное молоко, молоко пониженной жирности, обезжиренное молоко, делактированное молоко, сливки, ультрафильтрованное молоко, диафильтрованное молоко, микрофильтрованное молоко, молоко, разведенное из порошкового молока, конденсированное молоко, порошковое молоко, органическое молоко или их комбинацию или любую их разбавленную форму.
[052] При использовании в настоящем описании термин «молочный продукт» относится к продукту, полученному в результате какой-либо переработки молока. Термин «молочный продукт» дополнительно включает ферментированные молочные продукты. Неограничивающие примеры ферментированных молочных продуктов включают: йогурт, кефир, творожный сыр, творог, пахту, масло, молодой сыр и полутвердый сыр. В некоторых вариантах реализации молочный продукт представляет собой сыр.
[053] Термин «сыр» при использовании в настоящем описании относится в общем смысле ко всем типам сыра, включая, например, сыры, такие как определено согласно общему стандарту CODEX для сыров и различными государственными и национальными регулирующими органами. Типовые классы сыров включают, но не ограничиваются ими, твердые/полутвердые сыры, мягкие сыры, аналоги сыров, смешанные сыры и сыры паста филата, помимо прочих типов сыров. Термин «твердый/полутвердый сыр» включает сыры, имеющие содержание влаги в процентах на безжировой основе (MFFB) от 54% до 69%. Примеры твердых/полутвердых сыров включают Колби, Хаварти, Монтерей Джек, горгонзолу, гауду, Чешир и Мюнстер, моцареллу с низким содержанием влаги и частично обезжиренную моцареллу, помимо прочих. Термин «мягкий сыр» включает сыры, имеющие MFFB более 67%. Примеры мягких сыров включают стандартную моцареллу, помимо прочих.
[054] При использовании в настоящем описании термины «молоко, обогащенное магнием» и «молочный продукт, обогащенный магнием» относятся к молоку и/или молочному продукту с добавками ионов магния, что обеспечивает повышенную концентрацию ионов магния по сравнению с обычной концентрацией магния в молоке и/или молочных продуктах, полученных у одного млекопитающего (например, коровы). В некоторых вариантах реализации концентрация магния в обогащенном магнием молоке и/или молочном продукте не более чем на 1 мМ, 2 мМ, 3 мМ, 4 мМ, 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ, 16 мМ, 17 мМ, 18 мМ, 19 мМ или 20 мМ превышает его концентрацию в молоке и/или молочном продукте, полученном из того же источника, но не содержащем добавки ионов магния. В некоторых вариантах реализации концентрация магния в обогащенном магнием молоке и/или молочном продукте по меньшей мере на 1 мМ, 2 мМ, 3 мМ, 4 мМ, 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ, 16 мМ, 17 мМ, 18 мМ, 19 мМ или 20 мМ превышает его концентрацию в молоке и/или молочном продукте, полученном из того же источника, но не содержащем добавки ионов магния. В некоторых вариантах реализации концентрация магния в обогащенном магнием молоке и/или молочном продукте по меньшей мере на 1 мМ, 2 мМ, 3 мМ, 4 мМ, 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ или 15 мМ превышает его концентрацию в молоке и/или молочном продукте, полученном из того же источника, но не содержащем добавки ионов магния. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения. В некоторых вариантах реализации концентрация магния в обогащенном магнием молоке и/или молочном продукте по меньшей мере на 1 мМ превышает его концентрацию в молоке и/или молочном продукте, полученном из того же источника, но не содержащем добавки ионов магния. В некоторых вариантах реализации концентрация магния в обогащенном магнием молоке и/или молочном продукте на от 1 мМ до 10 мМ, от 1 мМ до 15 мМ, от 1 мМ до 16 мМ, от 1 мМ до 17 мМ, от 1 мМ до 18 мМ, от 1 мМ до 19 мМ или от 1 мМ до 20 мМ выше по сравнению с его концентрацией в молоке и/или молочном продукте, полученном из того же источника, но не содержащем добавки ионов магния. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
[055] В некоторых вариантах реализации концентрация ионов магния в обогащенном молоке или молочном продукте составляет от 7 мМ до 30 мМ, от 7 мМ до 25 мМ, от 7 мМ до 20 мМ, от 7 мМ до 19 мМ, от 7 мМ до 18 мМ, от 7 мМ до 16 мМ, от 7 мМ до 15 мМ, от 7 мМ до 14 мМ, от 7 мМ до 13 мМ, от 7 мМ до 12 мМ, от 7 мМ до 11 мМ, от 7 мМ до 10 мМ, от 8 мМ до 30 мМ, от 8 мМ до 25 мМ, от 8 мМ до 20 мМ, от 8 мМ до 19 мМ, от 8 мМ до 18 мМ, от 8 мМ до 16 мМ, от 8 мМ до 15 мМ, от 8 мМ до 14 мМ, от 8 мМ до 13 мМ, от 8 мМ до 12 мМ, от 8 мМ до 11 мМ, от 8 мМ до 10 мМ, от 10 мМ до 30 мМ, от 10 мМ до 25 мМ, от 10 мМ до 20 мМ, от 10 мМ до 19 мМ или от 10 мМ до 18 мМ, от 10 мМ до 17 мМ или от 10 мМ до 16 мМ, от 10 мМ до 15 мМ, от 10 мМ до 14 мМ, от 10 мМ до 13 мМ, от 10 мМ до 12 мМ или от 10 мМ до 11 мМ. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
[056] В некоторых вариантах реализации образование биопленок в обогащенном магнием молоке и/или молочном продукте подавлено. В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению характеризуется пониженным образованием биопленок по сравнению с молоком или молочными продуктами, не содержащими добавок ионов магния. В некоторых вариантах реализации образование биопленок в композиции согласно настоящему изобретению понижено по сравнению с молоком и молочными продуктами того же происхождения, не содержащими добавок ионов магния. В некоторых вариантах реализации образование биопленок в обогащенном молоке и/или молочном продукте уменьшено по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 90% или 100% по сравнению с молоком и/или молочным продуктом того же происхождения, не содержащим добавки ионов магния.
[057] В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению является пастеризованной. В некоторых вариантах реализации в результате пастеризации добиваются уничтожения бактерий. В некоторых вариантах реализации пастеризованное молоко, обогащенное магнием, характеризуется наличием менее чем 1 колониеобразующей единицы (КОЕ)/миллилитр. В некоторых вариантах реализации пастеризованное молоко, обогащенное магнием, характеризуется наличием менее чем 10 колониеобразующих единиц (КОЕ)/миллилитр. В некоторых вариантах реализации пастеризованное молоко, обогащенное магнием, характеризуется наличием менее чем 100 колониеобразующих единиц (КОЕ)/миллилитр. В некоторых вариантах реализации пастеризованное молоко, обогащенное магнием, характеризуется наличием менее чем 1000 колониеобразующих единиц (КОЕ)/миллилитр. В некоторых вариантах реализации при пастеризации в композиции согласно настоящему изобретению происходит уменьшение жизнеспособности бактериальных клеток по сравнению жизнеспособностью, достижимой при пастеризации молока и/или молочного продукта того же происхождения, не содержащего добавки ионов магния. В указанных вариантах реализации уменьшение жизнеспособности бактериальных клеток в композиции согласно настоящему изобретению по меньшей мере на 10%, 20%. 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% выше по сравнению с молоком и/или молочным продуктом того же происхождения, не содержащем добавки ионов магния.
[058] В некоторых вариантах реализации композиция обеспечивает более эффективную пастеризацию бактерий по сравнению с молоком и/или молочным продуктом того же происхождения, не содержащим добавки ионов магния. Термин «пастеризация» согласно этому контексту относится к нагреванию вещества, подвергающегося обработке (такого как молоко), как правило при температуре от 72 до 95°C в течение периода от 20 до 60 секунд, например, по меньшей мере при температуре 72°C в течение 15 секунд.
Способы коагуляции молока для изготовления сыра
[059] В некоторых вариантах реализации обогащенное магнием молоко согласно настоящему изобретению перерабатывают для получения обогащенного магнием сыра. Сыр, как правило, состоит из белков и жиров молока, такого как коровье, буйволиное, козье или овечье молоко. Специалистам будет понятно, что обогащенный магнием сыр согласно настоящему изобретению может быть получен любым подходящим способом, известным в данной области техники, таким как, например, ферментная коагуляция молока для сыроделия сычужным ферментом или кислотная коагуляция молока для сыроделия пищевыми кислотами или кислотами, получаемыми в результате роста молочнокислых бактерий. В частности, сыр получают путем коагуляции казеина. В процессе свертывания коагулирующие ферменты (например, протеазы, свертывающие молоко) воздействуют на растворимую часть казеинов, κ-казеин, что приводит к возникновению нестабильного мицеллярного состояния, в результате чего происходит образование сгустков.
[060] В одном из вариантов реализации обогащенное молоко согласно настоящему изобретению применяют для изготовления сыра путем сычужной коагуляции. В одном из вариантов реализации обогащенный молочный продукт согласно настоящему изобретению представляет собой сычужный творожный сыр. Сычужный фермент коммерчески доступен, например, как Naturen (сычужный фермент животного происхождения), Chymax (химозин, полученный путем ферментации), Microlant (микробный коагулянт, полученный путем ферментации), все производства Chr-Hansen A/S, Denmark). При использовании в настоящем описании «химозин» относится к аспарагиновой протеазе, которая осуществляет специфический гидролиз пептидной связи Phe105-Met106 в κ-казеине.
[061] В общем случае свойства коагуляции молока могут быть определены как отличительная способность молока взаимодействовать с коагулирующим ферментом с образованием сырного сгустка с подходящей плотностью в течение приемлемого времени.
[062] В тех вариантах реализации, где проводят обработку обогащенного молока, продолжительность сычужного свертывания (RCT) составляет от 5 минут до 18 минут, от 5 минут до 15 минут, от 5 минут до 14 минут, от 7 минут до 18 минут или от 7 минут до 15 минут. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения. В некоторых вариантах реализации обогащенное молоко согласно настоящему изобретению характеризуется уменьшенной RCT по сравнению с молоком, не содержащим добавки магния. В некоторых вариантах реализации RCT молока, обогащенного магнием, по меньшей мере на 2 минуты, 3 минуты, 5 минут, 6 минут, 7 минут, 8 минут, 9 минут или 10 минут меньше по сравнению с молоком, не содержащим добавки магния. В некоторых вариантах реализации RCT молока, обогащенного магнием, уменьшена по меньшей мере на 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% по сравнению с RCT молока, не содержащего добавки магния.
[063] При использовании в настоящем описании «продолжительность сычужного свертывания (RCT)» относится к периоду времени между добавлением коагулирующего фермента и началом процесса коагуляции/свертывания.
2
2
[064] В тех вариантах реализации, где обогащенный магнием молочный продукт представляет собой сыр, обогащенный сыр характеризуется повышенной плотностью сырного сгустка по сравнению с сыром, не содержащим добавки ионов магния, и/или полученным при переработке молока, не содержащего добавки ионов магния. В некоторых вариантах реализации обогащенный сыр представляет собой продукт, полученный из молока, обогащенного в концентрации от 1 мМ MgCl до 15 мМ MgCl.
[065] В некоторых вариантах реализации увеличение представляет собой по меньшей мере увеличение плотности сырного сгустка на 10%, увеличение на 15%, увеличение на 20%, увеличение на 25%, увеличение на 30%, увеличение на 35%, увеличение на 40%, увеличение на 45%, увеличение на 50%, увеличение на 55%, увеличение на 60%, увеличение на 70% или увеличение на 75%. В некоторых вариантах реализации увеличение плотности сырного сгустка соответствует увеличению по меньшей мере на 1 вольт, увеличению на 2 вольт, увеличению на 3 вольт, увеличению на 4 вольт, увеличению на 5 вольт, увеличению на 6 вольт, увеличению на 7 вольт, увеличению на 8 вольт, увеличению на 9 вольт или увеличению на 10 вольт. В некоторых вариантах реализации сыр, обогащенный магнием, характеризуется плотностью сырного сгустка, соответствующей значению от 9 вольт до 25 вольт, от 9 вольт до 20 вольт, от 9 вольт до 18 вольт, от 9 вольт до 15 вольт, от 10 вольт до 25 вольт, от 10 вольт до 20 вольт, от 10 вольт до 18 вольт, от 10 вольт до 15 вольт, от 11 вольт до 25 вольт, от 11 вольт до 20 вольт, от 11 вольт до 18 вольт или от 11 вольт до 15 вольт. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
2
[066] При использовании в настоящем описании плотность сырного сгустка относится к плотности сырного сгустка, измеренной в конкретный момент времени (например, через 30 минут) после добавления коагулирующего фермента. В некоторых вариантах реализации плотность сырного сгустка измеряют через 30 минут после добавления сычужного фермента в молоко. В некоторых вариантах реализации плотность сырного сгустка измеряют через 90 минут после добавления сычужного фермента в молоко. В качестве альтернативы, для сравнения измеренной плотности сырного сгустка молока и молока с добавками MgCl можно выбирать другие моменты времени после добавления сычужного фермента в молоко.
[067] В некоторых вариантах реализации сыр, обогащенный магнием, характеризуется улучшенными органолептическими свойствами. Термин «органолептический» при использовании в настоящем описании относится к любому воспринимаемому свойству продукта, включая вкус, цвет, запах, текстуру и ощущение во рту. В некоторых вариантах реализации сыр, обогащенный магнием, характеризуется улучшенной текстурой.
Способы
[068] Согласно некоторым аспектам в изобретении предложен способ, включающий стадии добавления эффективного количества ионов магния в жидкость (например, в напиток), с получением тем самым жидкости, обогащенной магнием. Специалистам в данной области техники будет понятно, что эффективное количество может быть различным для различных типов жидкостей и выбранных способов применения.
[069] В некоторых вариантах реализации способ дополнительно включает стадию пастеризации указанной жидкости, обогащенной магнием.
[070] Согласно некоторым аспектам в изобретении предложен способ, включающий стадии добавления эффективного количества ионов магния в немолочный напиток или немолочный питьевой продукт, с получением тем самым обогащенного магнием немолочного напитка и/или обогащенного магнием немолочного питьевого продукта.
[071] Согласно некоторым аспектам в изобретении предложен способ, включающий стадии добавления эффективного количества ионов магния в молоко или молочный продукт, с получением тем самым обогащенного магнием молока и/или обогащенного магнием молочного продукта.
[072] В некоторых вариантах реализации способ дополнительно включает стадию пастеризации указанного молока, обогащенного магнием.
[073] В некоторых вариантах реализации способ предназначен для уменьшения и/или подавления образования биопленок в жидкости (например, в напитке, молоке) или молочном продукте. В некоторых вариантах реализации способ предназначен для улучшения пастеризации молока. В некоторых вариантах реализации способ предназначен для увеличения уровня белка в сыре, которому способствует зависящее от магния включение молочных белков в сырный сгусток при изготовлении сыра.
[074] В некоторых вариантах реализации эффективное количество является таким, что конечная концентрация ионов магния в обогащенной магнием жидкости составляет от 5 мМ до 100 мМ. В некоторых вариантах реализации концентрация магния в полученной обогащенной жидкости составляет от 5 мМ до 10 мМ, от 5 мМ до 50 мМ, от 5 мМ до 25 мМ, от 5 мМ до 100 мМ, от 5 мМ до 200 мМ, от 5 мМ до 500 мМ, от 10 мМ до 50 мМ, от 10 мМ до 100 мМ, от 10 мМ до 200 мМ, от 10 мМ до 500 мМ, от 50 мМ до 100 мМ, от 50 мМ до 200 мМ, от 50 мМ до 500 мМ, от 100 мМ до 200 мМ, от 100 мМ до 300 мМ, от 100 мМ до 500 мМ или от 100 мМ до 1000 мМ. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
[075] В некоторых вариантах реализации эффективное количество является таким, что конечная концентрация ионов магния в обогащенном магнием молоке и/или молочном продукте составляет от 7 мМ до 30 мМ. В некоторых вариантах реализации концентрация магния в полученном обогащенном молоке или молочном продукте составляет от 7 мМ до 30 мМ, от 7 мМ до 25 мМ, от 7 мМ до 20 мМ, от 7 мМ до 15 мМ, от 7 мМ до 10 мМ, от 8 мМ до 30 мМ, от 8 мМ до 25 мМ, от 8 мМ до 20 мМ, от 8 мМ до 15 мМ, от 8 мМ до 10 мМ, от 10 мМ до 30 мМ, от 10 мМ до 25 мМ, от 10 мМ до 20 мМ или от 10 мМ до 15 мМ. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
[076] В некоторых вариантах реализации эффективное количество является таким, что конечная концентрация ионов магния в обогащенном магнием молоке и/или молочном продукте увеличена по меньшей мере на 1 мМ по сравнению с молоком и/или молочным продуктом, полученным из того же источника, не содержащим добавки ионов магния.
[077] В некоторых вариантах реализации способ включает стадию добавления источника ионов магния в молоке для достижения конечной концентрации ионов магния в молоке от 8 мМ до 25 мМ, с получением тем самым молока, обогащенного магнием.
[078] В некоторых вариантах реализации источник ионов магния представляет собой водный раствор гидроксида магния или соли магния. В некоторых вариантах реализации ионы магния добавляют в виде соли магния. Неограничивающие примеры солей магния включают: хлорид магния, фторид магния, сульфат магния, нитрат магния, ацетат магния, карбонат магния, цитрат магния, фосфат магния или их гидраты. В качестве альтернативы, источник ионов магния может представлять собой наночастицу, содержащую ионы магния. В некоторых вариантах реализации источник ионов магния представляет собой капсулы, обладающие свойствами, препятствующими бактериальному загрязнению, которые представляют собой сферические частицы, которые могут захватывать и высвобождать различные молекулы. В качестве неограничивающего примера частицы могут быть получены в результате самосборки пептида, препятствующего бактериальному загрязнению, такого как описано в Maity et al., Chemical communications (2014) 50, 11154-11157. В одном из вариантов реализации источник ионов магния представляет собой капсулы, которые содержат магний и могут высвобождать ионы магния.
[079] В некоторых вариантах реализации предложен способ подавления и/или уменьшения образования биопленок в молоке и/или молочном продукте, включающий стадию: добавления ионов магния в молоко или молочный продукт для получения обогащенного магнием молока и/или молочного продукта, где конечная концентрация ионов магния в обогащенном магнием молоке и/или молочном продукте составляет от 7 мМ до 30 мМ, с уменьшением тем самым образования биопленок в указанном молоке или указанном молочном продукте.
[080] В некоторых вариантах реализации предложен способ увеличения эффективности пастеризации молока, включающий стадию: добавления ионов магния в указанное молоко или молочный продукт для получения обогащенного магнием молока и/или молочного продукта, где конечная концентрация ионов магния в указанном обогащенном магнием молока и/или молочного продукта составляет от 7 мМ до 30 мМ, с увеличением тем самым восприимчивости бактерий к пастеризации. В некоторых вариантах реализации способ дополнительно включает стадию обработки обогащенного магнием молока и/или молочного продукта путем пастеризации.
Биопленка
[081] При использовании в настоящем описании термин «биопленка» относится к любому трехмерному заключенному в матрицу сообществу микроорганизмов, которое имеет многоклеточные характеристики. Соответственно, при использовании в настоящем описании термин «биопленка» включает биопленки, ассоциированные на поверхности, а также биопленки в суспензии, такие как хлопья и гранулы. Биопленки могут содержать отдельные виды микроорганизмов или могут представлять собой комплексы смешанных видов и могут включать бактерии или другие микроорганизмы.
[082] В некоторых вариантах реализации биопленка содержит бактерии. В некоторых вариантах реализации бактерии выбраны из грамположительных бактерий и грамотрицательных бактерий. В некоторых вариантах реализации биопленка содержит бактерии. В некоторых вариантах реализации бактерии представляют собой грамположительные бактерии. В некоторых вариантах реализации бактерии представляют собой грамотрицательные бактерии. В некоторых вариантах реализации бактерии представляют собой спорообразующие бактерии. В некоторых вариантах реализации бактерии представляют собой термофильные бактерии. Термины «бактерии» и «бактерия» относятся ко всем прокариотическим организмам, включая все входящие в подцарство бактерий в царстве Прокариоты. Подразумевается, что термин включает все микроорганизмы, рассматриваемые в качестве бактерий, включая микоплазмы, хламидии, актиномицеты, стрептомицеты и риккетсии. В это определение включены все формы бактерий, включая кокки, бациллы, спирохеты, сферопласты, протопласты и т.д. В этот термин также включены прокариотические организмы, которые являются грамотрицательными или грамположительными.
[083] В некоторых вариантах реализации бактерии выбраны из родов, включая: Bacillus, Geobacillus, Anoxybasillus и Pseudomona.
[084] В некоторых вариантах реализации бактерии выбраны из штаммов бактерий: Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Geobacillus stearothermophilus, Anoxybacillus flavithermus и Pseudomonas aeruginosa.
Дезинфицирующее средство
[085] Настоящее изобретение дополнительно относится к дезинфицирующему средству, содержащему эффективную концентрацию ионов магния. Специалистам будет понятно, что эффективная концентрация может зависеть от конкретного применения дезинфицирующего средства. Настоящее изобретение дополнительно относится к дезинфицирующему средству, содержащему ионы магния в концентрации от 50 мМ до 500 мМ. В некоторых вариантах реализации концентрация ионов магния в дезинфицирующем средстве составляет от 5 мМ до 10 мМ, от 5 мМ до 50 мМ, от 5 мМ до 100 мМ, от 5 мМ до 150 мМ, от 5 мМ до 200 мМ, от 5 мМ до 500 мМ, от 10 мМ до 50 мМ, от 10 мМ до 100 мМ, от 10 мМ до 150 мМ, от 10 мМ до 200 мМ, от 10 мМ до 500 мМ, от 20 мМ до 50 мМ, от 20 мМ до 100 мМ, от 20 мМ до 150 мМ, от 20 мМ до 200 мМ, от 20 мМ до 500 мМ, от 30 мМ до 50 мМ, от 30 мМ до 100 мМ, от 30 мМ до 150 мМ, от 30 мМ до 200 мМ, от 30 мМ до 500 мМ, от 50 мМ до 100 мМ, от 50 мМ до 150 мМ, от 50 мМ до 200 мМ, от 50 мМ до 500 мМ, от 100 мМ до 150 мМ, от 100 мМ до 200 мМ, от 100 мМ до 300 мМ, от 100 мМ до 500 мМ или от 100 мМ до 1000 мМ. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения. Настоящее изобретение дополнительно относится к дезинфицирующему средству, содержащему ионы магния в концентрации по меньшей мере 5 мМ, 10 мМ, 15 мМ, 20 мМ, 25 мМ, 30 мМ, 35 мМ, 40 мМ, 45 мМ, 50 мМ, 55 мМ, 60 мМ, 65 мМ, 70 мМ, 80 мМ или 100 мМ. В некоторых вариантах реализации дезинфицирующее средство представляет собой водный раствор или коллоидный раствор. В одном из вариантов реализации дезинфицирующее средство имеет форму пены или спрея. В одном из вариантов реализации дезинфицирующее средство имеет форму крема.
[086] В некоторых вариантах реализации дезинфицирующее средство предназначено для применения в способе обработки, предотвращения, подавления и/или уменьшения образования биопленок и/или уменьшения или разрушения существующих на поверхности биопленок. В некоторых вариантах реализации дезинфицирующее средство предназначено для применения для уменьшения образования бактериальных биопленок на поверхности. В другом варианте реализации дезинфицирующее средство предназначено для применения в моющих машинах в пищевой промышленности. В некоторых вариантах реализации биопленка образована бактериями. В некоторых вариантах реализации популяции указанных бактерий можно обрабатывать дезинфицирующим средством до, во время и/или после образования биопленок.
[087] В некоторых вариантах реализации предложен способ обработки, предотвращения, подавления и/или уменьшения образования биопленок и/или уменьшения или разрушения существующих на поверхности биопленок, включающий стадию нанесения композиции, содержащей эффективную концентрацию ионов магния, на указанную поверхность, в результате чего происходит обработка, предотвращение, подавление и/или уменьшение образования биопленок и/или уменьшение или разрушение существующих на указанной поверхности биопленок.
[088] В некоторых вариантах реализации предложен способ обработки, предотвращения, подавления и/или уменьшения образования биопленок и/или уменьшения или разрушения существующих на поверхности биопленок, включающий стадии: обеспечения композиции, содержащей эффективную концентрацию ионов магния; и приведение указанной поверхности в контакт с указанной композицией. В некоторых вариантах реализации эффективная концентрация ионов магния составляет от 20 мМ до 500 мМ. В некоторых вариантах реализации эффективная концентрация ионов магния составляет по меньшей мере 20 мМ.
[089] Как показано ниже в разделе примеров (см. фиг. 1D) нанесение дезинфицирующего средства, содержащего ионы магния в концентрации 20 мМ или 50 мМ, на твердую поверхность приводило к уменьшению образования биопленок В. subtilis.
[090] В некоторых вариантах реализации дезинфицирующее средство наносят на поверхность. Дезинфицирующим средством можно обрабатывать любые поверхности. Типовые примеры поверхностей, которые можно обрабатывать дезинфицирующим средством, включают, но не ограничиваются ими, поверхности оборудования пищевой промышленности, такого как резервуары, конвейеры, полы, сливные трубы, холодильники, морозильные камеры, поверхности оборудования, стенки, клапаны, ремни, трубы, места соединений, изломы и т.д. Поверхности могут быть металлическими, например, из алюминия, стали, нержавеющей стали, хрома, титана, железа, их сплавов и т.д. Поверхности также могут быть пластиковыми, например, из полиолефинов (например, полиэтилена, полипропилена, полистирола, поли(мет)акрилата, акрилонитрила, бутадиена, АБС, акрилонитрила, бутадиена и т.д.), сложных полиэфиров (например, полиэтилентерефталата и т.д.) и полиамидов (например, нейлона), их комбинаций и т.д. Поверхности также могут представлять собой поверхности кирпича, плитки, керамики, фарфора, древесины, винила, линолеума или ковра, их комбинации и т.д. Поверхности согласно другим аспектам также могут представлять собой поверхность продуктов питания, например, говядины, птицы, свинины, овощей, фруктов, морепродуктов, их комбинаций и т.д.
[091] Для дезинфекции и стерилизации твердых поверхностей дезинфицирующее средство можно наносить на твердую поверхность непосредственно из контейнера, в котором хранится раствор дезинфицирующего средства. Например, раствор дезинфицирующего средства можно выливать, распылять или иным образом наносить непосредственно на твердую поверхность. Затем раствор дезинфицирующего средства можно распределять по твердой поверхности с применением подходящего субстрата, такого как, например, тряпка, кусок ткани или бумажное полотенце. В качестве альтернативы, дезинфицирующее средство сначала можно наносить на субстрат, такой как тряпка, кусок ткани или бумажное полотенце. Затем смоченный субстрат можно приводить в контакт с твердой поверхностью. В качестве альтернативы раствор дезинфицирующего средства можно наносить на твердые поверхности путем диспергирования раствора в воздухе.
Наборы
[092] Согласно другому аспекту в изобретении предложен набор, содержащий композицию согласно настоящему изобретению совместно с упаковочным материалом.
[093] В некоторых вариантах реализации в изобретении предложено изделие, содержащее любую из композиций согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации изделие выбрано из группы, состоящей из пищевой упаковки, устройства для получения и/или переработки молока.
[094] Следует понимать, что при обсуждении, если не утверждается иное, определения, такие как «по существу» и «примерно», модифицирующие условие или относительные характеристики отличительного признака или отличительных признаков варианта реализации изобретения, означают, что условие или характеристика определены в пределах погрешности, приемлемой для осуществления данного варианта реализации в рамках предполагаемого способа применения. Если не указано иное, слово «или» в описании и формуле изобретения следует рассматривать в качестве включающего «или», но не исключающего, и оно обозначает по меньшей мере один из или любую комбинацию элементов, которые оно объединяет.
[095] Следует понимать, что формы единственного числа (соответствующие англ. «а» и «an»), такие как используют выше и других фрагментах настоящего документа, относятся к «одному или более» описываемых компонентов. Специалистам в данной области техники будет очевидно, что использование единственного числа включает множественное число, если конкретным образом не указано иное. Таким образом, в настоящей заявке формы единственного числа и «по меньшей мере один» используют взаимозаменяемо.
[096] Для лучшего понимания идей настоящего изобретения, но не ограничения объема изобретения каким-либо образом, если не указано иное, все числовые значения, выражающие количества, содержание в процентах или отношения, и другие числовые значения, используемые в описании и формуле изобретения, во всех случаях следует рассматривать как модифицированные термином «примерно». Соответственно, если не указано противоположное, числовые параметры, приведенные в последующем описании и прилагаемой формуле изобретения, являются приблизительными и могут быть различными в зависимости от предполагаемых целевых свойств. Наконец, каждый числовой параметр следует трактовать с учетом количества указанных значащих цифр с использованием стандартных способов округления.
[097] В описании и формуле изобретения настоящей заявки каждый из глаголов «содержит», «включает» и «имеет» и родственные слова используют для указания на то, что объект или объекты, к которому(-ым) относится глагол, необязательно включают полный перечень компонентов, элементов или частей объекта или объектов, к которому(-ым) относится глагол. Другие термины при использовании в настоящем описании определены в соответствии со значениями, хорошо известными в данной области техники.
[098] Дополнительные задачи, преимущества и новые отличительные признаки настоящего изобретения будут понятны специалистам в данной области техники после изучения последующих примеров, которые не следует рассматривать как ограничивающие. Кроме того, каждый из различных вариантов реализации и аспектов настоящего изобретения, отмеченных выше в настоящем документе и заявленных ниже в формуле изобретения, подтвержден экспериментально в последующих примерах.
[099] Следует понимать, что определенные отличительные признаки изобретения, которые для ясности описаны в контексте отдельных вариантов реализации, также могут быть предложены в комбинации в отдельном варианте реализации. И наоборот, различные отличительные признаки изобретения, которые для краткости описаны в контексте одного варианта реализации, также могут быть предложены по отдельности или в любой подходящей подкомбинации или, если это возможно, в любом другом описанном варианте реализации изобретения. Определенные отличительные признаки, описанные в контексте различных вариантов реализации, не следует рассматривать как неотъемлемые отличительные признаки этих вариантов реализации, если вариант реализации не может быть осуществлен в отсутствие указанных элементов.
ПРИМЕРЫ
[0100] В целом, номенклатура, используемая в настоящем описании, и лабораторные процедуры, используемые в настоящем изобретении, включают молекулярные, биохимические, микробиологические способы и способы рекомбинантной ДНК. Указанные способы подробно описаны в литературе. См., например, "Molecular Cloning: А laboratory Manual" Sambrook et al., (1989); "Current Protocols in Molecular Biology" Volumes I-III Ausubel, R.M., ред. (1994); Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989); Perbal, "A Practical Guide to Molecular Cloning", John Wiley & Sons, New York (1988); Watson et al., "Recombinant DNA", Scientific American Books, New York; Birren et al. (ред.) "Genome Analysis: A Laboratory Manual Series", Vols. 1-4, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1998); методики, такие как приведены в патентах США №4666828; 4683202; 4801531; 5192659 и 5272057; "Cell Biology: А Laboratory Handbook", Volumes I-III Cellis, J.E., ред. (1994); "Culture of Animal Cells - A Manual of Basic Technique", Freshney, Wiley-Liss, N.Y. (1994), третье издание; "Current Protocols in Immunology" Volumes I-III Coligan J.E., ред. (1994); Stites et al. (ред.), "Basic and Clinical Immunology" (8-е издание), Appleton & Lange, Norwalk, CT (1994); Mishell and Shiigi (ред.), "Strategies for Protein Purification and Characterization - A Laboratory Course Manual" CSHL Press (1996); "Bacteriophage Methods and Protocols", Volume 1: Isolation, Characterization, and Interactions, содержание всех из которых включено посредством ссылки. В настоящем документе приведены и другие общие ссылки.
[0101] Различные варианты реализации и аспекты настоящего изобретения, отмеченные выше и заявленные ниже в формуле изобретения, подтверждены экспериментально в следующих примерах. Обратимся к последующим примерам, которые совместно с приведенным выше описанием иллюстрируют без ограничений некоторые варианты реализации изобретения.
Материалы и способы
Штаммы бактерий и питательные среды
[0102] В настоящем исследовании использовали дикий штамм NCIB3610Bacillus subtilis и штамм АТСС 10987 Bacillus cereus. Для флуоресцентной микроскопии использовали штамм (YC161 с Pspank-gfp), который устойчиво вырабатывал GFP.
8
5
5
[0103] При стандартном выращивании все штаммы размножали в лизогенном бульоне (LB; 10 г триптона, 5 г экстракта дрожжей и 5 г NaCl на литр) или твердой среде LB, дополненной 1,5% агара. Для получения биопленок выращивали бактерии до стационарной фазы роста в среде LB при 37°C при встряхивании до получения примерно 1×10 КОЕ на мл. Биопленки получали при 30°C в среде, способствующей образованию биопленок LBGM (LB +1% (об./об.) глицерин + 0,1 мМ MnSO4). Для исследования влияния ионов магния, натрия или кальция на образование биопленок в среду LBGM непосредственно добавляли различные концентрации MgCl2 (Merck KGaA), NaCl (BIO LAB LTD) или CaCl2 (Merck KGaA). Для образования биопленок по типу колоний 3 мкл клеток (примерно 3×10 КОЕ) наносили в среду LBGM, отвержденную 1,5% агара, как описано выше. Инкубировали планшеты при 30°C в течение 72 часов перед анализом. Для образования бактериальных пленок 5 мкл клеток (примерно 5×10 КОЕ) смешивали с 4 мл бульона LBGM в 12-луночных планшетах (Costar). Инкубировали планшеты при 30°C в течение 24 часов. Получали изображения при помощи микроскопа Zeiss Stemi 2000-С, оборудованного камерой Axiocam ERc 5s.
7
5
[0104] В экспериментах, которые проводили с В. cereus, выращивали бактерии до стационарной фазы роста в среде LB при 37°C при встряхивании до получения примерно 5×10 КОЕ на мл. Для образования бактериальных пленок 5 мкл клеток (примерно 2,5×10 КОЕ) смешивали с 4 мл бульона LBGM в стеклянных пробирках в присутствии различных концентраций MgCl2 или без него. Инкубировали стеклянные пробирки при 30°C в течение 24 часов.
Активность β-галактозидазы
[0105] Для анализа влияния ионов магния на экспрессию генов в матриксе проводили транскрипционное слияние промоторов eps и tapA с геном, кодирующим β-галактозидазу. Собирали образцы полученных бактериальных пленок, как описано выше, и повторно суспендировали в фосфатном буферном солевом растворе (ФБР). Типичные длинные связанные цепи клеток в колонии биопленки разрушали путем обработки слабым ультразвуком, как описано выше. Оптическую плотность образцов клеток нормировали с использованием OD600. Собирали один миллилитр клеточной суспензии и проводили исследование активности β-галактозидазы, как описано выше.
Анализ кривых роста
9
7
[0106] Сначала выращивали клетки при встряхивании культур в течение ночи при 23°C/150 об./мин в LB до получения примерно 2×10 КОЕ на мл. Следующим утром разбавляли культуры 1:100 (примерно до 2×10 КОЕ) в LBGM, содержащей различные концентрации MgCl2 или не содержащей его, и инкубировали при 37°C и 150 об./мин. Периодически измеряли поглощение в каждой культуре при 600 нм в течение 9 часов. Каждое условие изучали в 3 повторностях, и эксперименты по изучению кривых роста повторяли два раза. Показаны типовые результаты.
Анализ флуоресцентной микроскопии
8
5
[0107] Для флуоресцентной микроскопии использовали штамм YC161, который устойчиво вырабатывал GFP. Сначала выращивали штамм при встряхивании в течение 5 часов при 37°C/150 об./мин в LB до получения примерно 1×10 КОЕ на мл. Затем вводили 5 мкл (примерно 5×10 КОЕ) суспензии полученной культуры в 4 мл среды LBGM и инкубировали при 30°C в течение 24 часов без перемешивания. После этого собирали по одному миллилитру суспензии каждого образца, обрабатывали слабым ультразвуком (10 с/ 20% амп./5) и центрифугировали при 5000 об./мин в течение 2 минут. Затем удаляли надосадочную жидкость и повторно суспендировали клеточный сгусток при помощи пипетки. Для наблюдения под микроскопом 3 мкл образцов переносили на предметное стекло и визуализировали в микроскопе проходящего света с использованием дифференциального интерференционного контраста (DIC) Номарского с увеличением ×40. Для визуализации экспрессии GFP штаммом YC161 использовали конфокальный лазерный сканирующий микроскоп Olympus IX81 (Japan), оборудованный 488 нм аргоновым ионным и 543 нм гелий-неоновым лазерами. В экспериментах, которые проводили с В. cereus, клетки окрашивали CYTO 9 из набора определения жизнеспособности биопленок FilmTracerTM LIVE/DEAD Biofilm Viability Kit (Molecular Probes, OR) согласно инструкциям производителя. Испускание сигнала флуоресценции в окрашенных образцах определяли при помощи конфокального лазерного сканирующего микроскопа Olympus IX81 (Japan), оборудованного 488 нм аргоновым ионным и 543 нм гелий-неоновым лазерами.
Статистический анализ
[0108] Статистический анализ проводили при помощи Т-критерия для сравнения контрольных и исследуемых образцов. Статистическая значимость была определена как Р<0,05.
ПРИМЕР 1
Ионы магния подавляют образование биопленок
2+
2+
2+
2+
2+
2
4
[0109] Влияние различных концентраций ионов Mg на образование биопленок. Результаты демонстрируют, что ионы Mg значительно подавляли образование бактериальных пленок В. subtilis зависящим от концентрации образом (фиг. 1А). Ингибирующее действие ионов Mg не было ограничено только соединением MgCl, так как другие соли магния, такие как MgSO, также подавляли образование бактериальных пленок. Это указывает на то, что ингибирующее действие солей магния связано с наличием ионов Mg. Кроме того, образование биопленок по типу колоний также значительно подавлялось в присутствии ионов Mg в высоких концентрациях (фиг. 1А).
2+
2+
[0110] Также оценивали влияние различных концентраций ионов Mg на рост бактерий. Результаты демонстрируют, что наличие ионов Mg в исследуемых концентрациях не влияло на рост бактерий (фиг. 1В).
2
2+
[0111] Кроме того, действие ионов магния визуализировали средствами микроскопии путем исследования связывающего фенотипа клеток В. subtilis (YC161 с Pspank-gfp), содержащих флуоресцентную метку, которые устойчиво вырабатывали GFP. Как продемонстрировано на фигуре 3, в присутствии 25 мМ и более высоких концентраций MgCl происходило значительное уменьшение связывающей способности клеток В. subtilis. Этот результат дополнительно подтверждает активность ионов Mg в отношении подавления образования биопленок В. subtilis.
2
2
[0112] Также оценивали влияние NaCl и CaCl на образование биопленок В. subtilis. Важно отметить, что ни одно из этих соединений не могло подавлять образование биопленок в той же степени, что MgCl (результаты не показаны).
2
2
[0113] Проводили дополнительные эксперименты для оценки действия ионов магния на образование биопленок Bacillus subtilis по типу колоний на твердой поверхности. Сначала готовили стартовую культуру путем выращивания бактерий штамма Bacillus subtilis NCIB 3610 в среде LB (лизогенный бульон) при 37°C, 150 об./мин в течение 5 часов. Затем растворы с различной концентрацией MgCl, а именно 0 мМ (контроль), 5 мМ, 20 мМ или 50 мМ MgCl, наносили на различные участки поверхности твердой среды, способствующей образованию биопленок (LBGM, отвержденной 1,5% агара). После проведения указанных стадий 3 мкл стартовой культуры наносили на каждый из участков твердой среды, способствующей образованию биопленок. Инкубировали образцы при 30°C в течение 72 часов перед анализом. Получали изображения на микроскопе Zeiss Stemi 2000-С, оборудованном камерой Axiocam ERc 5s.
2
2
[0114] Как показано на фиг. 1D, предварительная обработка поверхности твердой среды, способствующей образованию биопленок (LBGM, отвержденной 1,5% агара), путем нанесения 20 мМ раствора MgCl подавляет образование биопленок В. subtilis на поверхности. Ингибирующее действие является более выраженным при использовании 20 мМ раствора MgCl. Полученные результаты позволяют предположить, что раствор магния можно наносить на твердые поверхности для уменьшения, подавления и/или предотвращения образования биопленок.
2
2
2
2
[0115] Кроме того, оценивали влияние ионов магния на образование биопленок В. subtilis среде, обогащенной апельсиновым соком. Для этого проводили сравнение образования биопленок В. subtilis в среде, обогащенной апельсиновым соком (LB + апельсиновый сок), со средой, обогащенной апельсиновым соком, с добавками 50 мМ MgCl (LB + апельсиновый сок + 50 мМ MgCl) и средой, обогащенной апельсиновым соком, с добавками 80 мМ MgCl (LB + апельсиновый сок + 80 мМ MgCl). Результаты демонстрируют, что MgCl2 подавляет образование биопленок по типу колоний в концентрации 50 мМ и более (фиг. 1Е).
ПРИМЕР 2
2+
2+
+
Влияние ионов Mg, Са и Na на транскрипцию оперонов, ответственных за образование матрикса
[0116] Специалистам в данной области техники будет понятно, что образование биопленок по меньшей мере отчасти зависит от синтеза внеклеточного матрикса. Образование внеклеточного матрикса В. subtilis опосредовано двумя основными оперонами: оперонами epsA-O и tapA. Оперон epsA-O отвечает за выработку экзополисахаридов, тогда как оперон tapA отвечает за выработку амилоидных волокон.
2+
2+
2+
2+
2
[0117] Действие ионов Mg на экспрессию генов в матриксе оценивали с применением транскрипционного слияния промоторов epsA-O и tapA с геном, кодирующим β-галактозидазу. Экспрессия оперонов матрикса значительно уменьшалась в ответ на добавление ионов Mg (фигура 2А). Уменьшение экспрессии eps было относительно небольшим (примерно в 4 раза), но значительным, при этом экспрессия tapA снижалась почти в 14,5 раза при повышенных концентрациях ионов Mg (фигура 2А). Полученный результат позволяет предположить, что добавление ионов Mg обеспечивает понижающую регуляцию экспрессии генов внеклеточного матрикса В. subtilis. Важно отметить, что в присутствии схожих концентраций NaCl (фиг. 2В) или CaCl (фиг. 2С) понижение регуляции экспрессии оперонов eps и tapA не происходило в схожей степени.
ПРИМЕР 3
Ионы магния подавляют образование биопленок в молоке
2
2
2+
2+
2+
[0118] Проводили оценку влияния ионов магния на образование биопленок в коровьем молоке. Специалистам в данной области техники известно, что концентрация магния в коровьем молоке, как правило, составляет 4-6 мМ. Для оценки влияния ионов магния выращивали бактерии в коровьем молоке и коровьем молоке с добавками MgCl для получения коровьего молока, в котором концентрация ионов магния была увеличена на 1 мМ, 3 мМ или 5 мМ. Результаты демонстрируют, что ионы Mg подавляют образование биопленок В. subtilis в молоке. Ингибирующее действие ионов Mg является значительным даже при увеличении концентрации магния на 1 мМ по сравнению с контролем. Кроме того, при увеличении концентрации MgCl на 5 мМ связанные биопленки практически полностью исчезали (фигура 3А). Важно отметить, что аналогично результатам, приведенным на фиг. 1В, увеличение концентрации ионов Mg в молоке значительно не влияло на рост бактерий (фигура 3В).
ПРИМЕР 4
Увеличение концентрации ионов магния понижает регуляцию экспрессии оперона tapA
2+
2+
[0119] Оценивали влияние увеличения концентрации Mg в молоке на экспрессию оперона tapA, который является одним из основным оперонов при образовании матрикса. Для этого выращивали В. subtilis в коровьем молоке и коровьем молоке, в котором концентрация ионов магния была увеличена на 1 мМ, 3 мМ или 5 мМ. Кроме того, проводили транскрипционное слияние промотора tapA с геном, кодирующим голубой флуоресцентный белок (CFP). Результаты демонстрируют, что экспрессия оперона tapA значительно уменьшается в ответ на увеличение концентрации ионов Mg в молоке, в частности, при добавлении MgCl2 в концентрации 5 мМ (фиг. 4).
ПРИМЕР 5
Увеличение концентрации ионов магния увеличивает восприимчивость бактерий к тепловому стрессу
2
2
2+
[0120] Изучали влияние увеличения концентрации ионов магния. В. subtilis выращивали в молоке или молоке с добавками 3 мМ или 5 мМ MgCl или 3 мМ или 5 мМ CaCl. Оценивали уровень выживаемости бактерий после пастеризации. Результаты демонстрируют, что увеличение концентрации ионов Mg приводит к увеличению восприимчивости бактерий к тепловой пастеризации (фиг. 5).
ПРИМЕР 6
Увеличение концентрации ионов магния улучшает параметры свертывания молока
2
2
[0121] Для оценки параметров свертывания молока получали образцы молока на молочной ферме Сельскохозяйственной исследовательской организации (ARO; Bet Dagan, Israel). Проводили сравнение образцов молока с образцами молока, содержащими добавки MgCl или CaCl, обеспечивающими увеличение концентрации ионов магния или кальция, соответственно, на 3 мМ или 5 мМ. Параметры свертывания молока, такие как продолжительность сычужного свертывания (RCT; мин) и плотность сырного сгустка (CF; В) через 90 минут (CF-90), измеряли на оборудовании Optigraph (Ysebaert, Frepillon, France) согласно описанию Ляйтнера с соавторами (Leitner et al. (2011)). Результаты приведены на графике. Точку, в которой кривая разделяется на две кривые, называют временем сычужного свертывания (RCT), то есть периодом времени между добавлением свертывающего фермента и началом процесса коагуляции. Плотность сырного сгустка выводят из расстояния между двумя кривыми на графике через 30 минут после добавления свертывающего фермента или через 90 минут после добавления свертывающего фермента.
2+
[0122] Результаты демонстрируют, что RCT значительно понижается в молоке, обогащенном магнием, в котором концентрация ионов магния увеличена на 5 мМ по сравнению с контрольным молоком без добавок; при этом CF-90 значительно выше в образце с добавками ионов Mg (фиг. 6).
[0123] Как дополнительно показано на фиг. 7, полученные сыры, обогащенные магнием, имеют повышенную плотность сырного сгустка, это позволяет предположить, что процесс створаживания происходит более эффективно при концентрации ионов магния, увеличенной на 3 мМ или 5 мМ.
2
[0124] Результаты измерения RCT и CF контрольных образцов молока без добавок и образцов молока с добавками 3 мМ или 5 мМ MgCl приведены в таблице 1.
2
2
2
2
[0125] В дополнительных экспериментах проводили сравнение образцов молока с образцами молока, содержащими добавки MgCl, обеспечивающими увеличение концентрации ионов магния на 1 мМ, 3 мМ, 5 мМ, 7 мМ, 10 мМ, 15 мМ или 20 мМ. Как продемонстрировано на фиг. 8А, добавление 1 мМ, 3 мМ, 5 мМ, 7 мМ, 10 мМ, 15 мМ и 20 мМ MgCl приводит к уменьшению RCT примерно на 32%, 51%, 62%, 70%, 84%, 73% и 74%, соответственно. Как продемонстрировано на фиг. 8В, добавление 1 мМ, 3 мМ, 5 мМ, 7 мМ, 10 мМ, 15 мМ и 20 мМ MgCl приводит к увеличению плотности сырного сгустка примерно на 37%, 54%, 69%, 82%, 84%, 90% и 72%, соответственно. Результаты указывают на то, что при увеличении концентрации ионов магния происходит уменьшение RCT (см. время начала створаживания на фиг. 8А) и увеличение плотности сырного сгустка (фиг. 8В). Важно отметить, что полученные результаты также указывают на то, что добавление 20 мМ не приводит к увеличению плотности сырного сгустка по сравнению с добавлением 15 мМ MgCl (фиг. 8А и 8В).
ПРИМЕР 7
Увеличение концентрации ионов магния увеличивает уровень включения белков в мягкий сыр
2+
[0126] Оценивали влияние увеличенной концентрации ионов Mg на включение молочных белков в мягкие сыры.
2
2
[0127] Молоко получали на молочной ферме ARO и пастеризовали на водяной бане при 63°C в течение 30 минут. Получали образцы сыров из 50 миллилитров (мл) молока, содержащего MgCl в концентрации, обеспечивающей увеличение концентрации ионов магния на 5 мМ, или не содержащего его. В каждый образец добавляли 2,5 мл фермента «Реннин». Образцы инкубировали на водяной бане при 30°C в течение 1 часа. Затем нарезали образцы сыра и помещали в водяную баню при 40°C на 30 минут для сушки сыворотки. После этого переносили образцы сыров в перфорированные пробирки и выдерживали при 4°C в течение 24 часов для удаления сыворотки. Затем определяли уровень белков методом Кьельдаля. Результаты демонстрируют, что в сыре, полученном из молока, обогащенного магнием (с добавками 5 мМ MgCl) повышено количество включенных белков по сравнению с сыром, полученным из молока без добавок (фиг. 9).
ПРИМЕР 8
2
Бактерии Bacillus subtilis в присутствии высоких концентраций MgCl вызывают осаждение белка в молоке
2
2
[0128] Выдержанную в течение ночи культуру Bacillus subtilis разбавляли (разбавление 1:100) в молоке или в молоке с добавками различных концентраций MgCl. Затем инкубировали культуры в течение 5 часов при 37°C и 50 об./мин. Результаты демонстрируют, что при добавлении MgCl в молоко (которое, как правило, имеет исходную концентрацию ионов магния 4-6 мМ) в концентрации 25 мМ или более бактерии Bacillus subtilis вызывали осаждение белков в молоке (фиг. 10).
ПРИМЕР 9
2
Добавление MgCl не влияет на pH молока
2
2
2
[0129] Выдержанную в течение ночи культуру Bacillus subtilis разбавляли (разбавление 1:100) в молоке или в молоке с добавками 50 мМ или 100 мМ MgCl. Культуры инкубировали в течение 5 часов при 37°C и 50 об./мин и измеряли pH каждый час при помощи тест-полосок pH. Результаты демонстрируют схожие измеренные значения pH в молоке с добавками 50 мМ или 100 мМ MgCl и молоке без добавок. Полученные результаты позволяют предположить, что добавление MgCl не влияет на pH молока.