Ферментативная активность нейтрофилов и моноцитов крови у детей, больных бронхиальной астмой

© Коллектив авторов, 2007

О.А. Мурзова, В.И. Григанов

ФЕРМЕНТАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ И МОНОЦИТОВ КРОВИ У ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ

Кафедра педиатрии лечебного факультета (зав. проф. В.И. Григанов) Астраханской государственной

медицинской академии, г. Астрахань, РФ

У детей, больных бронхиальной астмой, в возрасте от 10 мес до 5 лет исследовали ферментативную активность нейтрофилов и моноцитов крови. Выявлены конкордантные изменения дегидрогеназной, диафоразной и эстеразной активности, которые выразились в угнетении всего исследуемого ферментативного спектра.

Authors studies enzyme activity of blood neutrophyles and monocytes in children aged 10 months—5 years old with bronchial asthma. Examination showed concordant changes of dehydrogenase, diaphorase and esterase activity, which were presented as depression of all studied enzyme spectrum.

В последнее десятилетие непрерывно нарастает частота и тяжесть бронхиальной астмы (БА) у детей. Проблема БА приобрела не только значительное медицинское, но и социальное значение, привлекая к себе внимание врачей и других специалистов. Очень многие вопросы, традиционно считавшиеся решенными, вновь и вновь пересматриваются в свете новых теоретических исследований и данных современных клинических наблюдений.

Дисфункция иммунной системы - непременный спутник воспалительных процессов. Говоря о противомикробной защите организма, обычно выделяют систему неспецифической защиты и собственно иммунную систему, обеспечивающую защиту в наиболее экономичном, рациональном и эффективном решении. По мнению многих авторов [1, 2], первой линией защиты от гнойной инфекции являются нейтрофилы и макрофаги. Мо-нонуклеарные фагоциты обеспечивают в значительной степени неспецифическую защиту организма за счет своей фагоцитарной функции. Сек-ретируемые макрофагами молекулы выполняют эффекторные и регуляторные функции.

Участие макрофагов в эффекторной фазе специфического иммунного ответа проявляется, в частности, их мобилизацией в очаг иммунного воспаления под влиянием лимфоцитарных продуктов. Макрофаги принимают самое активное участие в неспецифической защите от патогенных микроорганизмов: в раннем воспалительном ответе на инфекцию, в «запуске» специфического иммунного ответа в клеточно-опосредованном иммунном ответе. В очаге острого воспаления в первые часы моноциты/макрофаги составляют менее 5% инфильтрирующих клеток, значительно уступая по численности гранулоцитам, однако через 24-48 ч от начала воспаления макрофаги становятся доми-

нирующими клетками инфильтрата, приходя на смену быстро погибающим нейтрофилам [3].

Полиморфноядерные нейтрофилы принимают самое активное участие в эффекторной фазе специфического иммунного ответа. Эти клетки составляют первую линию неспецифической проти-вомикробной защиты. Они первыми мобилизуются в очаг воспаления или инфекции, и от их фагоцитарной активности зависит элиминация возбудителей. Нейтрофилы обладают всеми функциями фагоцитирующих клеток: адгезивностью, подвижностью, способностью к хемотаксису, способностью захватывать бактерии и другие частицы, убивать захваченные организмы с помощью кис-лородозависимых или кислородонезависимых механизмов и переваривать захваченные объекты фагоцитоза. В составе специфических гранул и лизосом нейтрофилы содержат богатый набор ферментов и факторов бактерицидности.

Материалы и методы исследования

В условиях отделения аллергологии областной детской клинической больницы, обслуживающей территории Астрахани и Астраханской области, проведено обследование 86 детей в возрасте от 10 мес до 5 лет с диагнозом БА, отобранных методом простой рандомизации. Больные обследовались при поступлении в стационар и в динамике заболевания после курса проведенного лечения. В качестве контроля были обследованы 36 здоровых детей в возрасте от 10 мес до 5 лет.

У всех детей проводили цитохимическое исследование ферментативной активности нейтрофилов и моноцитов. Нейтрофилы определяли в мазке из цельной крови. Выделение моноцитов проводили по методике И.С. Фрейдлин [4]. В нейтрофилах и моноцитах исследовали следующие группы ферментов:

Таблица 1

Активность СДГ, ЛДГ и Г-6-ФДГ в нейтрофилах детей, больных БА

Ферменты Группы обследованных детей % реагирующих клеток Степень реакции, усл. ед. СЦП, усл. ед.

а б в

СДГ больные БА 16,02±0,14 2,00±0,001 3,00±0,06 13,53±0,21 42,65±0,35*

здоровые 30,03±0,12 0 30,03±0,12 0 60,06±0,24

ЛДГ больные БА 6,73±0,06 1,87±0,75 0 6,31±0,06 19,35±0,16*

здоровые 36,01±0,02 0 36,01±0,02 0 72,02±0,04

Г-6-ФДГ больные БА 70,02±0,01 70,02±0,01 0 0 70,02±0,01*

здоровые 41,01±0,03 0 41,01±0,03 0 82,02±0,06

Здесь и в табл. 2-6: * р<0,05 при сравнении со здоровыми.

1) метаболические: сукцинатдегидрогеназа (СДГ), отражающая цикл Кребса; лактатдегидрогеназа (ЛДГ), отражающая анаэробный гликолиз; глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназа (Г-6-ФДГ), отражающая активность пен-тозофосфатного шунта;

2) ферменты транспорта электронов кислорода: НАД и НАДФ-диафоразы по методике Р.П. Нарциссова;

3) лизосомальные: а-нафтилацетатэстеразы (АЭ) и а-нафтилбутиратэстеразы (БЭ) по методике Вачштей-на-Вольфа [5].

Оценку результатов цитохимических реакций проводили полуколичественным методом Кар1ош. В основе этого метода лежит распределение всех клеточных элементов по группам в зависимости от интенсивности окраски и количества выявляемого в клетке цитохимичес-ки активного вещества. К нулевой группе относили клетки без гранул. В 1-ю группу включали клетки низкой степени активности, содержащие единичные гранулы, или клетки, в которых площадь окраски занимала до 25% цитоплазмы (степень «а»). Ко 2-й группе относили клетки средней степени активности, то есть те, цитоплазма которых была заполнена гранулами на 30-70% (степень «б»). К 3-й группе относили клетки высокой степени активности, то есть заполненные гранулами на 70-100% независимо от того, контролировалось ядро или нет (степень «в»). Кроме того, к степени «в» относили клетки, из которых наблюдался выход гранул.

Для определения среднего цитохимического показателя (СЦП) в мазке подсчитывали 100 клеток (нейтро-филов или моноцитов, в зависимости от вида мазка). При этом число клеток каждой из степеней умножали на номер степени, то есть СЦП определяли по формуле: СЦП=а+2б+3в.

Результаты и их обсуждение

У больных БА младшей группы СЦП активности СДГ (табл. 1) был значительно снижен (42,65±0,35 усл. ед.) по сравнению с таковым у контрольной группы. У больных происходит качественное перераспределение клеточной активности. Основная масса реагирующих клеток классифицировалась как степень «в» (высшая степень активности) (13,53±0,21 усл. ед.). Клетки степеней «а» и «б» встречались в единичных количествах.

Активность ЛДГ в нейтрофилах больных данной группы была угнетена более чем в 3 раза (19,35±0,16 усл. ед.). Процент реагирующих клеток был в 6 раз меньше такового в контрольной группе (6,73±0,06%). Большинство реагирующих клеток классифицировалось как степень «в». Клетки степени «а» встречались в единичных количествах, клетки степени «б» не встречались.

Определение активности Г-6-ФДГ у детей младшей группы, больных БА, показало, что количество реагирующих клеток превышало таковое в контрольной, при этом СЦП реакции был несколько ниже такого у здоровых детей (90,02±0,01 усл. ед.). Данный факт объясняется тем, что произошло качественное перераспределение клеточной активности. Все реагирующие клетки классифицировались как степень «а». Клетки степеней «б» и «в» не встречались.

Диафоразная активность нейтрофилов крови у детей младшей группы, больных БА, была значительно снижена по сравнению с таковой контрольной группы (табл. 2). Так, СЦП активности НАД-диафоразы был снижен в 2,6 раза (44,55±0,35 усл.

Таблица 2

Активность НАД и НАДФ-диафораз в нейтрофилах детей, больных БА

Ферменты Группы обследованных детей % реагирующих клеток Степень реакции, усл. ед. СЦП, усл. ед.

а б в

НАД больные БА 16,02±0,14 2,00±0,001 3,00±0,06 13,53±0,21 44,55±0,35*

здоровые 57,03±0,01 0 57,03±0,01 0 114,06±0,02

НАДФ больные БА 6,73±0,06 1,87±0,75 0 6,31±0,06 19,35±0,16*

здоровые 27,02±0,14 0 27,02±0,14 0 57,04±0,28

Таблица 3

Активность АЭ и БЭ в нейтрофилах детей, больных БА

Ферменты Группы обследованных детей % реагирующих клеток Степень реакции, усл. ед. СЦП, усл. ед.

а б в

АЭ больные БА 63,00±0,01 0 63,00±0,01 0 126,00±0,03*

здоровые 64,03±0,02 0 64,03±0,02 0 128,06±0,04

БЭ больные БА 74,01±0,01 0 74,01±0,01 0 148,02±0,02

здоровые 71,01±0,01 0 71,01±0,01 0 142,03±0,03

Таблица 4

Активность СДГ, ЛДГ и Г-6-ФДГ в моноцитах детей, больных БА

Ферменты Группы обследованных детей % реагирующих клеток Степень реакции, усл. ед. СЦП, усл. ед.

а б в

СДГ больные БА 15,06±0,06 15,06±0,06 0 0 15,06±0,06*

здоровые 21,02±0,02 0 0 0 42,04±0,04

ЛДГ больные БА 11,13±0,03 11,13±0,03 0 0 11,13±0,03*

здоровые 0 33,01±0,02 0 66,021±0,04 33,01±0,02

Г-6-ФДГ больные БА 14,32±0,01 14,32±0,01 0 0 14,32±0,01*

здоровые 31,01±0,01 0 31,01±0,01 0 62,02±0,02

ед.), а активность НАДФ-диафоразы - в 3 раза (19,35±0,16 усл. ед.). Практически все реагирующие клетки, формирующие СЦП реакций, классифицировались как степень «в». Клетки степеней «а» и «б» встречались в единичных количествах.

Эстеразная активность нейтрофилов у детей младшего возраста (табл. 3) практически не отличалась от таковой в контрольной группе. Все реагирующие клетки классифицировались как степень «б». Клетки степеней «а» и «в» не встречались.

В моноцитах детей младшей группы, больных БА, активность СДГ (табл. 4) была намного ниже таковой в контрольной группе (15,06±0,06 усл. ед.). В отличие от качественного состава реагирующих клеток в контрольной группе, где все клетки реагировали по средней степени активности (степень «б»), в данном случае произошло перераспределение качественных показателей. Все реагирующие моноциты данной группы больных классифицировались как степень «а».

Таблица5

Активность НАД и НАДФ-диафораз в моноцитах детей, больных БА

Ферменты Группы обследованных детей % реагирующих клеток Степень реакции, усл. ед. СЦП, усл. ед.

а б в

НАД больные БА 87,20±0,02 0 0 87,20±0,02 261,60±0,06*

здоровые 67,01±0,02 0 67,01±0,02 0 134,02±0,04

НАДФ больные БА 46,23±0,03 0 0 46,23±0,03 138,69±0,06*

здоровые 30,02±0,02 0 30,02±0,02 0 60,04±0,04

Таблица 6

Активность АЭ и БЭ в моноцитах детей, больных БА

Ферменты Группы обследованных детей % реагирующих клеток Степень реакции, усл. ед. СЦП, усл. ед.

а б в

АЭ больные БА 15,02±0,03 15,02±0,03 0 0 15,02±0,03*

здоровые 17,01±0,02 0 17,01±0,02 0 34,02±0,04

БЭ больные БА 28,02±0,02 28,02±0,02 0 0 28,02±0,02*

здоровые 42,01±0,01 0 42,01±0,01 0 84,02±0,02

СЦП активности ЛДГ также был намного ниже такового в контрольной группе (11,13±0,03 усл. ед.). При этом все реагирующие клетки классифицировались как степень «а».

Аналогичная картина наблюдалась при исследовании активности Г-6-ФДГ в моноцитах больных БА. СЦП реакции формировался исключительно клетками степени «а» и был в 4,3 раза ниже такового в норме (14,32±0,01 усл. ед.).

При изучении диафоразной активности в моноцитах больных БА наблюдалось ее значительное увеличение (табл. 5). Так, СЦП активности НАД-диафоразы составил 261,60±0,06 усл. ед. Процент реагирующих клеток в данном случае был весьма высок (87,20±0,02%). Качественный состав реагирующих клеток классифицировался как высшая степень реакции (степень «в»).

При изучении активности НАДФ-диафоразы в моноцитах больных БА процент реагирующих клеток составлял 46,23±0,03%. Все реагирующие

клетки расценивались как степень «в». Клетки степеней «а» и «б» не встречались. СЦП активности НАДФ был значительно выше такового в контрольной группе и составлял 138,69±0,06 усл. ед.

Эстеразная активность в моноцитах больных БА была намного ниже таковой в контрольной группе (табл. 6). Так, СЦП активности АЭ был снижен больше чем в 2 раза по сравнению с нормой (15,02±0,03 усл. ед.). Отмечалось качественное перераспределение состава реагирующих клеток. Все реагирующие моноциты классифицировались как степень «а». Клеток степеней «б» и «в» не встречалось.

Заключение

Таким образом, в нейтрофилах и моноцитах детей в возрасте от 10 мес до 5 лет, больных БА, отмечались конкордантные изменения всего исследуемого спектра ферментов, которые выразились в угнетении дегидрогеназной, диафоразной и эстеразной активности.

ЛИТЕРАТУРА

1. Балаболкин И.И. Бронхиальная астма у детей. М.: Медицина, 2003.

2. Гордиенко С.М. Современные методические подходы к изучению фагоцитарной активности лейкоцитов. Лаб. дело. 1984; 5: 285-289.

3. Иммунодефицитные состояния. Под ред. В.С.Смирнова и И.С. Фрейдлин. С-Пб., 2000.

4. Фрейдлин И.С., Тотолян АА. Клетки иммунной системы (Т.3; Т.4; Т.5). С-Пб.: Наука, 2001.

5. Хейхоу Ф.Р.Дж., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия. Пер. с англ. М.: Медицина, 1983.

© Коллектив авторов, 2007

Л.Г. Кузьменко', В.А. Бычков', Т.Б. Оболадзе1, Л.М. Коробко2, О.В. Алексеева'

ФАКТОРЫ РИСКА РАЗВИТИЯ АСТМАТИЧЕСКОГО СТАТУСА У ДЕТЕЙ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ

1 Российский университет дружбы народов, 2 Морозовская детская городская клиническая больница, Москва

На основании анализа 1536 историй болезни детей в возрасте 6 мес — 14 лет с бронхиальной астмой (БА), госпитализированных в 1993—1994 гг. и в период 2003—2004 гг., установлено, что астматический статус (АС), несмотря на успехи контроля за БА, продолжает встречаться у детей с БА. Среди причин, провоцирующих его возникновение, кроме известных ранее — передозировка Р2-адреномиметиков и присоединение инфекционно-воспалительных заболеваний — выявлены другие. Среди них наибольшее значение имеют наличие атопического дерматита у родственников первой линии родства, псориаза у родственников первой линии родства, сахарного диабета у родственников первой и второй линии родства, экземы у детей в первые 3 года жизни, аллергии на рыбу у детей, перинатальных поражений ЦНС и других особенностей нервной системы у детей, ветряной оспы и коклюша в анамнезе, острых пневмоний в анамнезе, часто повторяющихся ОРЗ. Рассчитаны уровни относительного риска возникновения АС.

Analysis of 1536 cards of children with bronchial asthma (BA) hospitalized in period 1993-1994 and 2003-2004 showed that status asthmaticus (SA) took place in children as before in spite of progress in BA control. Analysis showed new risk factors of SA development besides well- known — P2- adrenomimetisc overdose and concurrent infection of respiratory tract. The main of these risk factors are: positive family history of atopic dermatitis or psoriasis in parents or in siblings, positive family history of diabetes mellitus, signs of eczema, history