БИОЛОГИЧЕСКОЕ КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПЕПТИДОГЛИКАНОВ

1. Способ количественного определения пептидогликанов (PGN) в образце полимера глюкозы, включающий
a) обработку образца полимера глюкозы посредством обработки ультразвуком, нагревания и/или ощелачивания;
b) приведение обработанного образца или его разведения в контакт с рекомбинантной клеткой, экспрессирующей экзогенный рецептор TLR2 (Toll-подобный рецептор 2) и репортерный ген при прямой зависимости от сигнального пути, связанного с рецептором TLR2, причем указанный репортерный ген кодирует окрашенный или флуоресцирующий белок или белок, активность которого может быть измерена с субстратом или без него;
c) измерение сигнала репортерного гена и
d) определение количества PGN в образце с применением калибровочной кривой на основе зависимости количества PGN от интенсивности сигнала репортерного гена.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что обработка образца посредством обработки ультразвуком, нагревания и/или ощелачивания позволяет фрагментировать и дезинтегрировать PGN, содержащиеся в образце, в частности, для того, чтобы сделать их способными активировать рецептор TLR2.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что обработка образца делает возможным образование PGN преимущественно с размером приблизительно 120 кДа.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что репортерный ген представляет собой ген секретируемой щелочной фосфатазы.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что клетка представляет собой клетку линии HEK-Blue™ hTLR2.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что калибровочная кривая на основе зависимости количества PGN от интенсивности сигнала репортерного гена была построена с применением PGN, полученных из бактерии, выбранной из Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis и Alicyclobacillus acidocaldarius, предпочтительно из Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus и Alicyclobacillus acidocaldarius.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что способ включает предварительную стадию построения калибровочной кривой с применением PGN, полученных из бактерии, выбранной из Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis и Alicyclobacillus acidocaldarius.
3
8. Способ по п. 6, отличающийся тем, что калибровочную кривую на основе зависимости количества PGN от интенсивности сигнала репортерного гена стандартизируют или калибруют с применением внутреннего стандарта, который представляет собой агонист TLR2, предпочтительно липопептид, в частности, трихлоргидрат PAMCys-Ser-(Lys)4.
9. Способ по любому из п.п. 1-5, отличающийся тем, что калибровочная кривая на основе
3
зависимости количества PGN от интенсивности сигнала репортерного гена была получена с применением внутреннего стандарта, который представляет собой агонист TLR2, предпочтительно липопептид, в частности, трихлоргидрат PAMCys-Ser-(Lys)4.
3
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что способ включает предварительную стадию построения калибровочной кривой с применением внутреннего стандарта, который представляет собой агонист TLR2, предпочтительно липопептид, в частности, трихлоргидрат PAMCys-Ser-(Lys)4.
11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что образец разводят, при необходимости, таким образом, чтобы получать сигнал репортерного гена, соответствующий линейной части калибровочной кривой.
12. Способ по п. 1, отличающийся тем, что образец представляет собой образец раствора икодекстрина.
13. Набор для количественного определения пептидогликанов (PGN) в образце полимеров глюкозы, содержащий
- рекомбинантную клетку, экспрессирующую экзогенный рецептор TLR2 (Toll-подобный рецептор 2) и репортерный ген при прямой зависимости от сигнального пути, связанного с рецептором TLR2, причем указанный репортерный ген кодирует окрашенный или флуоресцирующий белок или белок, активность которого может быть измерена с субстратом или без него; и
- либо калибровочную кривую на основе зависимости количества PGN от интенсивности сигнала репортерного гена, либо стандарт PGN, предпочтительно полученный из бактерии, выбранной из Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis и Alicyclobacillus acidocaldarius, предпочтительно из Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus и Alicyclobacillus acidocaldarius, либо внутренний стандарт, который представляет собой агонист TLR2, предпочтительно липопептид, в частности, трихлоргидрат PAM3Cys-Ser-(Lys)4;
- необязательно инструкции по применению и раствор для предварительной обработки образца.
3
14. Набор по п. 13, дополнительно содержащий внутренний стандарт, который представляет собой агонист TLR2, предпочтительно липопептид, в частности, трихлоргидрат PAMCys-Ser-(Lys)4.