Средство для дезинвазии объектов внешней среды против ооцист эймерий индеек
MEANS FOR DISINFECTION OF ENVIRONMENTAL OBJECTS AGAINST OOCYSTS OF EIMERIA TURKEYS

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно ветеринарной паразитологии и может быть использовано в индейководческих хозяйствах промышленного типа при заболеваниях молодняка индеек эймериозом.
Индейководство - важный источник увеличения производства высококачественного птичьего мяса. Опыт работы успешных хозяйств показывает, что разведение индеек в хозяйствах промышленного типа позволяет резко поднять эффективность производства. Индейка - одна из самых крупных сельскохозяйственных птиц. Масса взрослых самцов достигает 20-30 кг, самок - 8-10 кг. Мясо индейки содержит все необходимые ингредиенты и практически может полностью удовлетворить потребность человека в животном белке, является отличным сырьем для глубокой переработки и приготовления разнообразных диетических продуктов, рекомендованных при гипертонической болезни, атеросклерозе, заболеваниях желудочно-кишечного тракта и других.
В настоящее время в условиях промышленного птицеводства, когда на ограниченной территории содержится большое поголовье птицы, существует большой риск возникновения паразитарных заболеваний - эймериоза, криптоспоридиоза, гистомоноза и других [1, 4].
Лечебно-профилактические мероприятия, которые проводятся на данный момент в индейководческих хозяйствах промышленного типа, не всегда обеспечивают должный результат, поэтому паразитарные болезни продолжают беспокоить их и приносят им весомый экономический ущерб. Об этом свидетельствуют работы отечественных и зарубежных ветеринарных паразитологов [2, 3, 5].
Проведенными исследованиями установлено, что любое птицеводческое хозяйство, практикующее напольное содержание птиц, неблагополучно по паразитарным болезням и наиболее часто кокцидиозом. Работами ученых установлено, что в кишечнике молодняка индеек паразитируют семь видов эймерий (Eimeria spp.), а в числе наиболее патогенных и распространенных следует отметить: Eimeria meleagridis, Е. dispersa, Е. meleagrimitis, Е. adenoides, Е. gallopavonis. В условиях птицеводческих хозяйств у молодняка индеек весьма часто имеет место смешанная инвазия, обусловленная паразитированием нескольких видов эймерий одновременно, при этом они поражают как тонкий, так и толстый отделы кишечника оказывая наибольшее патогенное действие организму птицы.
Эймериоз индеек (кокцидиоз) - острая, подострая, или хроническая болезнь молодняка птиц в возрасте от 7 до 90 суток и более, проявляющаяся истощением, вялостью молодняка, энтеритом, колитом, диарея, потерей массы и снижением продуктивности. При смешанной инвазии с высокой интенсивностью наиболее часто отмечают массовую гибель молодняка. Источником данной инвазии является больная эймериозом птица, а также переболевшие в течение определенного времени. Передача инвазии в неблагополучных хозяйствах происходит через загрязненные спорулированными ооцистами подстилку, кормушки, корма, воду и инвентарь. Механическими разносчиками ооцист эймерий часто являются синантропные птицы, грызуны, насекомые: мухи, тараканы, сверчки, а также обслуживающий персонал - на обуви, одежде и предметах ухода за птицей. Различные нарушения технологии выращивания молодняка такие как повышенная влажность воздуха и подстилки, скученность птицы в помещениях, неполноценное кормление, контакт между индюшатами и птицей старших возрастных групп и нарушения ветеринарно-санитарных правил способствуют широкому распространению эймериоза среди молодняка.
Кроме того, ооцисты кокцидий птиц весьма устойчивы во внешней среде и способны сохранять свою жизнеспособность в условиях средней полосы России больше года.
При организации противопаразитарных мероприятий необходимо исходить из того, что эпизоотический процесс при паразитозах птиц, как и при многих заразных болезнях, состоит из трех звеньев: источник инвазии, факторы передачи и восприимчивые животные. Воздействуя на факторы передачи инвазии можно прервать эту цепочку, уничтожая экзогенную стадию развития эймерий.
Для борьбы с эймериозом птиц предложено большое количество средств, как против эндогенных стадий, так и экзогенных. Актуальность проблемы ставит задачи перед исследователями - разработать средства и способы дезинвазии объектов внешней среды против ооцист кокцидий птиц.
Среди рекомендованных средств, которые применяют против экзогенных стадий кокцидий следует отметить: 4,0%-й раствор едкого натра, который должен иметь температуру не ниже 80°С; 7,0%-й раствор аммиака; 2,0%-я эмульсия ортохлорфенола; 10%-й раствор однохлористого йода [3]. Отмеченные выше средства дезинвазии применяют во многих животноводческих хозяйствах, но их эффективность не устраивает запросы птицеводства на промышленной основе. В современных условиях нужны комбинированные средства, состоящие из нескольких действующих веществ (ДВ) и вспомогательных компонентов.
В числе таковых уместно рассматривать комплексное средство, имеющее в своем составе в качестве действующих веществ: парахлорметаксиленол, сульфоновую кислоту, изопропанол, молочную кислоту и вспомогательные компоненты, при их совместном применении в оптимальных концентрациях.
Из ранее отмеченных веществ первые три: парахлорметаксиленол, сульфоновая кислота и изопропанол, известны как высокоэффективные дезинфицирующие средства для наружного применения. Входящее в состав рассматриваемого средства следующее вещество - молочная кислота, является антисептиком и оказывает действие на оболочку ооцист эймерий, облегчая доступ действующим веществам.
При совместном применении отмеченных составляющих против ооцист эймерий индеек они оказывают синергетическое действие на паразитарный объект, а используемые вспомогательные компоненты - поверхностно-активные вещества, способствуют очищению пола птичников, стен и технологического оборудования от биозагрязнений и равномерно распределяют ДВ по поверхности.
В задачу наших исследований входило разработать эффективное средство дезинвазии против ооцист эймерий индеек доступными средствами, пригодными для применения как ручным, так и механическим способом, не оказывая коррозионное воздействие на имеющееся в птицеводческих помещениях технологическое оборудование.
Решение поставленной задачи достигается тем, что в качестве средства дезинвазии против ооцист эймерий индеек было использовано составленное нами комплексное средство «Токицид», имеющее следующий состав: действующие вещества - парахлорметаксиленол 27,0%, сульфоновая кислота 12,0%, изопропанол 14,0%, молочная кислота 4,0% и вспомогательные компоненты - поверхностно-активные вещества - 17,0%, вода до 100%.
Из доступных заявителю источников информации не известна указанная совокупность существующих признаков, позволяющих получать указанный технический результат, поэтому заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности «новизна».
Заявителю также не известны средства аналогичного назначения, в которых были раскрыты отличительные признаки заявляемого изобретения с получением от использования его в какой-либо совокупности признаков указанного технического результата. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень».
Доказательства промышленной применимости заявляемого приводятся в следующих примерах.
Пример 1. Приготовление рабочих растворов, разведение культуры ооцист кокцидий индеек и проведение лизис-теста с разными концентрациями средства дезинвазии
Исследования по рассматриваемой проблеме проводили в условиях лаборатории Всероссийского научно-исследовательского института фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений -филиал ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (г. Москва).
Рабочий раствор с разными концентрациями комбинированного средства «Токицид» готовили следующим образом. В приготовленные четыре стеклянные колбы на 1 л наливали по 700 мл дистиллированной воды и в первые три из них добавляли по 10; 20 и 30 мл средства, тщательно размешивали в течение пяти минут, объем доводили до 1 литра, снова размешивали в течение 5 минут и раствор был готов к использованию. В четвертую колбу к 700 мл воды добавляли 40 г кристаллического фенола, размешивали, объем доводили до 1 литра, снова размешивали, дали отстояться и раствор был готов к использованию.
Приготовление культуры ооцист Eimeria spp.индеек.
н
Для сбора ооцист использовали фекалии спонтанно зараженных эймериями молодняка индеек 26-35-суточного возраста при напольной технологии их содержания на птицефабрике. Доставленный из хозяйства материал от зараженных индюшек исследовали флотационным методом Фюллеборна. Поверхностную пленку из стаканов снимали с помощью паразитологической петли и собирали в чашку Петри с дихлорированной водой, трижды отмывали ооцист от соли, подсчитывали их количество в 1 мл, перемешивали со слоем консерванта - 2%-ный раствор бихромата калия и использовали в дальнейшей работе - при культивировании их в термостате в условиях лаборатории при температуре +26°С. В процессе культивирования, который проходил в течение шести дней, ежедневно проводили аэрацию культуры (40 минут), а с четвертого дня проводили осмотр и оценку культуры ооцист под микроскопом. Заключительную оценку культуры проводили через шесть дней культивирования, определяли процент споруляции, который составил 97%. Для разведения готовой культуры использовали буфер SWH. При приготовлении, которого к 3300 мл дистиллированной воды добавили 17,5 мл 10%-ного раствора хлорида кальция и 5 мл 10%-ного раствора сульфата магния, автоклавировали в течение 20 минут при 120°С, р раствора определяли с помощью прибора «Авилон-410».
Лизис-тест культуры ооцист Eimeria spp.с приготовленными концентрациями средства (1; 2 и 3%-ные растворы средства и 4%-й фенол) проводили в условиях лаборатории. При этом в 250 мл колбы Эрленмейера поместили по 50 мл приготовленного средства, фенола и буфера SWH по отдельности и добавили по 50 мл раствора с ооцистами кокцидий в концентрации 2000 ооцист/мл. После чего колбы с содержимым ставили на вибростолик со скоростью 100 об/минуту на 2 часа.
По истечении времени содержимое из колбы выливали в пластиковую бутылку с завинчивающийся крышкой объемом 1500 мл, колбу с остатком раствора ополаскивали несколько раз и сливали в пластиковую бутылку и объем доводили буфером до 1500 мл. Перемешивали содержимое бутылки путем переворачивания (три раза) и оставляли при комнатной температуре (22±2°С) на 24 часа. Затем раствор сливали до отметки 30 мл, а осадок переливали в новую емкость объемом 100 мл, пластиковую бутылку ополаскивали несколько раз с использованием буфера, доводя объем до 50 мл и использовали в дальнейшей работе.
Пример 2. Биопроба по экспериментальному заражению индюшат для определения эффективности средства для дезинвазии птичников
Определение эффективности разных концентраций средства для дезинвазии проводили в условиях экспериментального хозяйства ранее отмеченного института на 60 индюшатах 21-дневного возраста, свободных от кокцидий и их корма не содержали антикокцидийные препараты. Опытных индюшат взвешивали индивидуально, пронумеровали, по принципу аналогов разделили на 6 групп по 10 голов в каждой, содержали их в клетках изолировано и подвергали клиническому обследованию. Для контроля концентрации ооцист (2000 экз./мл) кокцидий использовали камеру Мак Мастера и микроскопа МБС. Для разведения культуры применяли буфер SWH с таким расчетом, чтобы было возможно задавать 2 мл суспензии каждой птице с общим количеством ооцист 4000 экз./гол.
Индюшатам 1, 2 и 3 групп задавали внутрь при помощи микропипетки, постепенно по 2 мл суспензии ооцист эймерий, обработанной 1 -, 2 и 3%-ной растворами комплексного средства. Индюшатам 4 группы - по 2 мл суспензии ооцист эймерий, обработанной 4%-м раствором фенола. Индюшатам 5-й группы назначали внутрь 2 мл суспензию ооцист в дозе 2000 экз/мл в разведении с буфером, они служили зараженным контролем. Индюшата 6-й группы - по 2 мл буферного раствора, они служили незараженным контролем.
В ходе опыта индюшата всех шести групп находились в аналогичных условиях содержания и имели одинаковый рацион. За ними проводили ежедневные клинические наблюдения: за общим состоянием, их поведением, приемом корма и воды, видимыми физиологическими изменениями.
Для установления выделения ооцист эймерий в фекалиях от индюшат каждой группы отдельно с 6 по 12 сутки после дачи инвазионного материала ежедневно собирали весь помет, взвешивали, добавляли воду до массы 2000 г, смешивали смесителем в течение пяти минут. Пробы для дальнейших исследований отбирали из каждой группы в количестве 25 г, консервировали 4%-ным раствором бихромата калия, доводили до однородной массы и хранили при +4°С в холодильнике.
3
Наличие ооцист в фекалиях определяли флотационным методом Фюллеборна с использованием насыщенного раствора хлористого натрия, плотностью 1,18 г/см, а количество ооцист/г фекалий подсчитывали с использованием камеры Мак Мастера.
Эффективность разных концентраций средства и 4%-ной концентрации фенола устанавливали, исходя из процента снижения выделения ооцист эймерий после воздействия на них отмеченными концентрациями средства дезинвазии, по сравнению с индюшатами зараженного контроля.
При исследовании опытных индюшат первой группы, которым задавали суспензию ооцист, обработанную 1%-ной концентрацией средства, ооцист эймерий в фекалиях находили через две, три и пять суток в количестве 9, 15 и 19 экземпляров, средний показатель в одной камере за период исследований 3,71. В 1 г фекалий индюшат первой группы обнаружил 742 экз. ооцист, что в проценте от контроля 9,39 (табл.1). Интенсэффективность «средства» в 1%-й концентрации или процент снижения ооцист после воздействия на них средством составила:
У индюшат второй и третьей групп, которым назначали суспензию ооцист, обработанную 2 и 3%-ной концентрациями средства, при исследовании проб фекалий ни в одном случае ооцист не находили, что свидетельствует о 100%-й эффективности средства в отмеченных концентрациях против ооцист эймерий индюшат.
У индюшат четвертой группы после назначения суспензии ооцист эймерий, обработанной 4%-ной концентрацией фенола (базовый препарат), ооцист эймерий в фекалиях находили во все сроки исследований в количестве от 4 до 28 в камере, средний показатель в камере за период исследований 9,64. В г фекалий обнаружили 1928 экз. ооцист эймерий или 24,40% от контроля. Интенсэффективность фенола в 4%-й концентрации против ооцист эймерий индеек составила 75,6%.
Индюшата пятой группы, получавшие 2000 ооцист/мл, во все сроки исследований с фекалиями выделяли ооцист эймерий в количестве от 22 до 57 в камере, средний показатель за период исследований 39,5. В г фекалий при исследовании обнаружили 7900 экз. ооцист эймерий и данный показатель был использован нами как исходный при расчете интенсэффективности испытанного средства и базового препарата.
По результатам проведенных исследований интенсэффективность средства в 1,0%-й концентрации против ооцист эймерий индюшат составила 90,61%, в концентрациях 2 и 3,0% испытанное средство показало против эймерий 100%-ю эффективность, а базовый препарат фенол 4,0%-й обеспечил 75,6%-ю интенсэффективность.
Исходя из полученных результатов для борьбы с экзогенной стадией развития эймерий индюшек испытанное средство в 2%-й концентрации рекомендуем использовать в индейководческих хозяйствах промышленного типа для дезинвазии птичников при их подготовке к заселению молодняком.
Источники информации
1. Акбаев М.Ш., Василевич Ф.И., Акбаев P.M., Водянов А.А., Косминков Н.Е., Пашкин П.И., Ятусевич А.И. Паразитология и инвазионные болезни животных; под ред. М.Ш. Акбаева. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Колос, 2008. - 776 с.
2. Вершинин, И.И. Кокцидиозы животных и их дифференциальная диагностика / И.И. Вершинин. - Екатеринбург, 1996. - 264 с.
3. Методические рекомендации по борьбе с эймериозами с изоспорозами животных. - М., 1994, РАСХН. - 30 с.
4. Сафиуллин Р.Т. Паразитарные болезни птиц, средства и методы борьбы. - М., 2019. - 260 с.
5. Чалышева Э.И., Сафиуллин Р.Т. Распространение кишечных паразитических простейших у молодняка индеек на птицефабриках Центральной России // Российский паразитологический журнал. - М., 2019. - Т. 13. - Вып. 3. - С. 71-74.
ПРИЛОЖЕНИЕ