ЗАМЕЩЕННЫЕ 6-(1-ПИПЕРАЗИНИЛ)-ПИРИДАЗИНЫ В КАЧЕСТВЕ АНТАГОНИСТОВ 5-НТ6 РЕЦЕПТОРА
SUBSTITUTED 6-(1-PIPERAZINYL)-PYRIDAZINES AS 5-HT6 RECEPTOR ANTAGONISTS

Область техники, к которой относится изобретение
6
Настоящее изобретение относится к новым замещенным 6-(1-пиперазинил)-пиридазинам, обладающим антагонистическими свойствами в отношении 5-HT рецептора. Изобретение дополнительно связано со способами получения таких новых соединений, с фармацевтическими композициями, содержащими вышеупомянутое новое соединение в качестве активного ингредиента, а также с применением вышеупомянутых соединений в качестве лекарственного средства.
Уровень техники
WO-2003/066604 относится, среди прочего, к 3-арил-6-пиперазин-1-илпиридазинами, обладающими активностью в отношении гистаминового Н3 рецептора, которые можно использовать для лечения нарколепсии.
Описание изобретения
6
4
7
6
6
6
6
6
6
5-гидрокситриптаминовый рецептор 6 (5-HT рецептор) принадлежит к семейству рецепторов, сопряженных с G-белками, входят в состав Gs-семейства G белков, включая 5-HT и 5-HT рецептор, которые стимулируют аденилатциклазную активность. Полагают, также, что 5-HT рецептор регулирует глутаминергическую и холинергическую неврональную активность. 5-HT рецепторы селективным образом обнаружены в участках мозга, вовлеченных в когнитивные процессы. Блокирование серотонина 5-HT может оказаться существенным в высших когнитивных процессах, таких как память и тогда, когда рассматриваются негативные симптомы, связанные с шизофренией. Действительно, многочисленные предклинические данные показали, что антагонизм в отношении 5-HT рецептора оказывает положительные эффекты на когнитивные процессы у грызунов (Mitchell and Neumaier (2005) 5-HT receptors: a novel target for cognitive enhancement. Pharmacology & Therapeutics 108:320-333). 5-HT рецептор мало или вообще не экспрессируется периферическими тканями, что может проводить к селективности воздействия лекарственного средства с меньшим числом побочных эффектов.
6
В самых общих чертах, соединения с аффинностью к 5-HT рецептору могут быть дополнительно полезны для лечения множества нарушений центральной нервной системы, тревожности, депрессии, синдрома гиперактивности с дефицитом внимания, болезни Альцгеймера, эпилепсиии и шизофрении.
6
6
Кроме того, 5-HT антагонизм был связан с подавлением аппетита и приема пищи. Преобладание нарушений приема пищи, таких, например, как ожирение, делает это основной проблемой общественного здоровья во всех возрастных группах. Нарушения приема пищи провоцируют различные серьезные заболевания, такие как диабеты, нарушения желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистые заболевания, приступы апноэ во сне и остеоартрит. 5-HT рецептор вызывает огромный интерес в качестве молекулярной мишени для разработки нового поколения безопасных и более эффективных лекарственных средств против ожирения.
6
Целью настоящего изобретения является обеспечение новых соединений, которые являются эффективными антагонистами 5-HT рецептора, которые практически не взаимодействуют с другими рецепторами, приводя к меньшему числу побочных эффектов. Изобретение дополнительно связано со способами их получения и с содержащими их фармацевтическими композициями. Изобретение также относится к применению этих производных для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики нарушений когнитивных функций и нарушений, связанных с питанием.
Данное изобретение касается новых соединений, в соответствии с формулой (I):
и его стереоизомерных форм, в которых
1
R является хлором, трифторметилом или циано;
2
R является фенилом или фенилом, замещенным галогеном;
3
1-4
R является водородом, С-алкилом или пиридинилметилом;
2
2
2
2
X представляет собой -O-, -NH-, -CH-, -CH(OH)-, -SO-, -CO-, -NH-CH-, -O-CH-, 1,2-этендиил или этиндиил;
и их фармацевтически приемлемых аддитивных солей и сольватов.
Далее будет описано настоящее изобретение. В следующих параграфах более подробно определены различные аспекты изобретения. Каждый аспект, определенный таким образом, можно объединить с другим аспектом или аспектами, если ясно не указано наоборот. В частности, любой признак, отмеченный как предпочтительный или преимущественный, можно объединить с любым другим признаком или признаками, отмеченными как предпочтительные или преимущественные.
Например, изобретение связано с соединениями формулы (I) и его стереоизомерными формами, в которых
1
R представляет собой трифторметил;
2
2
R является фенилом или фенилом, замещенным галогеном; предпочтительно R является фенилом, замещенным галогеном;
3
3
1-4
R является водородом С алкилом или пиридинилметилом; предпочтительно R является водородом, метилом или пиридинилметилом;
2
2
2
2
X представляет собой -O-, -NH-, -CH-, -CH(OH)-, -SO-, -CO-, -NH-CH-, -О-CH-, 1,2-этендиил или этиндиил;
и с их фармацевтически приемлемыми аддитивными солями и сольватами.
Изобретение связано, в частности, с соединениями формулы (I) и их стереоизомерными формами, в которых
1
R представляет собой трифторметил;
2
R является фенилом или фенилом, замещенным фтором;
3
R является водородом, метилом или пиридинилметилом;
2
2
2
2
X представляет собой -O-, -NH-, -CH-, -CH(OH)-, -SO-, -CO-, -NH-CH-, -О-CH-, 1,2-этендиил или этиндиил;
и с их фармацевтически приемлемыми аддитивными солями и сольватами.
2
В дополнительном варианте осуществления изобретение связано с соединениями, согласно любому из других вариантов осуществления, в которых R является фенилом или фенилом, замещенным одним или несколькими заместителями, выбираемыми из группы, состоящей из галогенов.
2
В дополнительном варианте осуществления изобретение связано с соединениями, согласно любому из других вариантов осуществления, в которых R является фенилом или фенилом, замещенным одним, двумя или тремя заместителями, выбираемыми из группы, состоящей из галогенов.
2
В дополнительном варианте осуществления изобретение связано с соединениями, согласно любому из других вариантов осуществления, в которых R является фенилом или фенилом, замещенным одним галогеном.
В дополнительном варианте осуществления изобретение связано с соединениями согласно любому из других вариантов осуществления, в которых галогеном является фтор.
Среди соединений формулы (I) и их стереоизомерных форм наиболее интересными являются, например,
2
4-(4-фторфенокси)-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-пиридазин, N-(4-фторфенил)-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-4-пиридазинамин, 4-(фенилметил)-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-пиридазин, фенил[6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-4-пиридазинил]-метанон, альфа-фенил-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-4-пиридазинметанол, 4-(фенилсульфонил)-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-пиридазин, 4-[(Z)-2-(4-фторфенил)этенил]-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-пиридазин, 4-[(E)-2-(4-фторфенил)этенил]-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-пиридазин, 4-[(4-фторфенил)этенил]-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-пиридазин, 6-(4-метил-1-пиперазинил)-4-[(E)-2-фенилэтенил]-3-(трифторметил)-пиридазин, [6-(4-метил-1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-4-пиридазинил]фенил-метанон, N-[(4-фторфенил)метил]-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-4-пиридазинамин, 4-[(4-фторфенил)метокси]-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-пиридазин, 4-[(E)-2-фенилэтенил]-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-пиридазин, N-(4-фторфенил)-6-(1-пиперазинил)-3-(трифторметил)-4-пиридазинамин *2,5 HCl*0,5 HO, 4-[(E)-2-фенилэтенил]-6-[4-(4-пиридинилметил)-1-пиперазинил]-3-(трифторметил)-пиридазин, 4-[(E)-2-фенилэтенил]-6-[4-(2-пиридинилметил)-1-пиперазинил]-3-(трифторметил)-пиридазин и их фармацевтически приемлемые аддитивные соли и сольваты.
Химические названия соединений по настоящему изобретению образуются согласно правилам номенклатуры принятым Химической реферативной службой (Chemical Abstracts Service, CAS). В случае таутомерных форм, образуют название показанной таутомерной формы структуры. Однако должно быть ясно, что другая, не показанная таутомерная форма также включена в объем настоящего изобретения.
Когда бы в настоящем изобретении не использовали термин «замещенный», он предназначен для обозначения того, что один или несколько водородов, предпочтительно от 1 до 3 водородов, более предпочтительно 1 водород у атома, отмеченного в выражении при помощи слова «замещенный», замещен на выбор из обозначенной группы, при условии, что нормальная валентность указанного атома не превышена и что замещение приводит к химически стабильному соединению, то есть к соединению, которое является достаточно устойчивым для того, чтобы выдержать выделение до полезной степени чистоты из реакционной смеси и составление рецептуры терапевтического средства. Например, когда фенил замещают галогеном, это означает, что вышеупомянутый фенил замещен одним или несколькими заместителями, выбираемыми из галогенов.
1-4
На всем протяжении этой заявки термин «С алкил» определяет прямоцепочечную или разветвленную цепь насыщенных углеводородных радикалов, содержащую от 1 до 4 атомов углерода, такую как метил, этил, пропил, 1-метилэтил, бутил, 1,1-диметилэтил. Термин галоген как группа или часть группы, характерен для фтора, хлора, брома и йода, если не указано или не ясно по-иному из контекста.
Когда любая переменная встречается более чем один раз в любом заместителе, каждое определение является независимым.
Фармацевтически приемлемые соли определены как содержащие терапевтически активные нетоксичные кислотно-аддитивные солевые формы, которые соединения формулы (I) способны образовать. Вышеупомянутые соли можно получить путем обработки основных форм соединений формулы (I) соответствующими кислотами, например, неорганическими кислотами, например, галогенводородной кислотой, в частности, соляной кислотой, бромистоводородной кислотой, серной кислотой, азотной кислотой и фосфорной кислотой; органическими кислотами, например, уксусной кислотой, гидроксиуксусной кислотой, пропионовой кислотой, молочной кислотой, пировиноградной кислотой, щавелевой кислотой, малоновой кислотой, янтарной кислотой, малеиновой кислотой, миндальной кислотой, фумаровой кислотой, яблочной кислотой, винной кислотой, лимонной кислотой, метансульфоновой кислотой, этансульфоновой кислотой, бензолсульфоновой кислотой, п-толуолсульфоновой кислотой, цикламиновой кислотой, салициловой кислотой, п-аминосалициловой кислотой, памовой кислотой и миндальной кислотой. В противоположность этому, вышеупомянутые солевые формы можно превратить в свободные формы путем обработки соответствующим основанием. Соединения формулы (I), содержащие кислый протон, также можно превратить в их нетоксичные метал или амин аддитивные солевые формы путем обработки соответствующими органическими и неорганическими основаниями. Соответствующие основные солевые формы включают, например, аммониевые соли, соли щелочных и щелочноземельных металлов, например, литиевые, натриевые, калиевые, магниевые, кальциевые соли и т.п., соли органических оснований, например, первичные, вторичные и третичные алифатические и ароматические амины, такие как метиламин, этиламин, пропиламин, изопропиламин, четыре изомера бутиламина, диметиламин, диэтиламин, диэтаноламин, дипропиламин, диизопропиламин, ди-н-бутиламин, пирролидин, пиперидин, морфолин, триметиламин, триэтиламин, трипропиламин, хинуклидин, пиридин, хинолин и изозинолин; бензатин, N-метил-D-глюкамин, гидрабамин и соли с аминокислотами, такими как, например, аргинин, лизин и т.п. В противоположность этому, солевую форму можно превратить в свободную кислотную форму путем обработки кислотой.
Термин сольват включает гидраты и формы присоединения растворителя, которые способны образовывать соединения формулы (I) также как и их солевые формы. Примерами таких форм являются, например, гидраты, алкоголяты и т.п.
Будет понятно, что некоторые из соединений формулы (I) и их фармацевтически приемлемые аддитивные соли и стереоизомерные формы могут содержать один или несколько центров хиральности и обладать стереоизомерными формами.
Термин «стереоизомерные формы», используемый здесь ранее определяет все возможные изомерные формы, которыми могут обладать соединения формулы (I). Если не отмечено или указано иным образом, химическое обозначение соединений означает смесь всех возможных стереоизомерных форм, причем вышеупомянутые смеси содержат все диастереомеры и энантиомеры основной молекулярной структуры. Более подробно, стереогенные центры могут обладать R- или S-конфигурацией; заместители при двухвалентных циклических (частично) насыщенных радикалах могут обладать либо цис- либо транс- конфигурацией. Соединения, включающие двойные связи, могут обладать E или Z-стереохимией при вышеупомянутой двойной связи. Стереоизомерные формы соединений формулы (I) включены в объем этого изобретения.
Когда говорят о специфической стереоизомерной форме, это означает, что вышеупомянутая форма практически свободна, то есть относится к форме, содержащей менее чем 50%, предпочтительно менее чем 20%, более предпочтительно менее чем 10%, даже более предпочтительно менее чем 5%, дополнительно предпочтительно менее чем 2% и наиболее предпочтительно менее чем 1% другого(их) изомера(ов).
Для терапевтического применения солями соединений формулы (I) являются те соли, в которых противоион является фармацевтически приемлемым. Однако, соли кислот и оснований, которые являются фармацевтически неприемлемыми, могут также найти применение, например, для получения или очистки фармацевтически приемлемого соединения. Все соли, являются ли они фармацевтически приемлемыми или нет, включены в объем настоящего изобретения.
Соединения формулы (I), в том виде, в котором их получают по способу, описанному ниже, можно синтезировать в форме рацемических смесей энантиомеров, которые можно отделить один от другого, следуя общеизвестным методикам разделения оптических изомеров. Рацемические соединения формулы (I) можно превратить в соответствующие диастереомерные солевые формы по реакции с подходящей хиральной кислотой. Вышеупомянутые диастереомерные солевые формы затем разделяют, например, путем селективной или фракционной кристаллизации, и из них под действием щелочи высвобождают энантиомеры. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений формулы (I) включает жидкостную хроматографию с применением хиральной стационарной фазы. Вышеупомянутые чистые стереоизомерные формы могут также возникнуть из чистых стереоизомерных форм соответствующих исходных веществ, при условии, что реакция протекает стереоспецифично. Предпочтительно, вышеупомянутое соединение могло бы быть синтезировано стереоспецифическими способами получения, если требуется отдельный стереоизомер. Эти способы будут преимущественно использовать энантиомерно чистые исходные вещества.
1
2
3
В рамках этой заявки соединение по изобретению, по существу, намерено включить в себя все изотопные комбинации его химических элементов. В рамках этой заявки химический элемент, в частности, когда его упоминают в связи с соединением согласно формуле (I), включает все изотопы и изотопные смеси этого элемента. В частности, когда упоминают водород, под этим подразумевают H, H, H и их смеси.
3
125
11
18
15
13
18
99m
201
123
Соединение по изобретению, таким образом, по существу, включает соединение с одним или несколькими изотопами одного или нескольких элементов, их смеси, включая радиоактивное соединение, также называемое радиоактивно меченным соединением, в котором один или несколько нерадиоактивных атомов были замещены одним из его радиоактивных изотопов. Термином «радиоактивно меченное соединение» обозначают любое соединение согласно формуле (I) или его фармацевтически приемлемую соль, которая содержит, по меньшей мере, один радиоактивный атом. Например, соединение можно пометить позитроном или гамма-излучающими радиоактивными изотопами. Для методик радиолигандного связывания, H-атом или I-атом является предпочтительным замещаемым атомом. Для получения изображения, наиболее часто используемыми излучающими позитрон (PET) радиоактивными изотопами являются C, F, O и N, которые генерируются в ускорителе и обладают временами полураспада 20, 100, 2 и 10 минут (мин), соответственно. Поскольку время полураспада этих соединений такое короткое, то их применение практически осуществимо только в институтах, которые имеют на своей территории ускоритель для их получения, таким образом, их применение ограничено. Наиболее часто используемыми из них являются F, Tc, Tl и I. Обращение с этими радиоактивными изотопами, их получение, выделение и введение в молекулу хорошо известно специалисту в данной области.
3
11
18
122
123
125
131
75
76
77
82
В частности, радиоактивный атом выбирают из группы водорода, углерода, азота, серы, кислорода или галогена. В частности, радиоактивный изотоп выбирают из группы H, C, F, I, I, I, I, Br, Br, Br и Br.
Как использовано в подробном описании и прилагаемой формуле изобретения, неопределенные и определенные артикли единственного числа «a», «an» и «the» также включают ссылки на множественное число, если из контекста явным образом не следует противоположное. Например, «соединение» означает 1 соединение или более чем 1 соединение.
Термины, описанные выше, и другие термины, используемые в подробном описании, являются широко распространенными среди специалистов в данной области.
Фармакология
6
6
Для того чтобы обнаружить соединения эффективные для лечения расстройств когнитивной деятельности и расстройств, связанных с приемом пищи, мы провели отбор соединений, селективно взаимодействующих с серотониновым 5-HT рецептором. Соединения, включенные в объем этого изобретения, как было обнаружено, обладали чистым профилем, из-за того, что обладали низкой аффинностью в отношении тестируемых рецепторов, за исключением серотонинового 5-HT рецептора.
Соединения по настоящему изобретению могут дополнительно, как ожидается, быть активными в «тесте оценки адаптации структуры поведения к смене режима подкрепления» (J.S. Rodefer et al., Neurospychopharmacology (2007), 1-10).
Принимая во внимание вышеупомянутую фармакологию соединений формулы (I), из этого следует, что они пригодны в качестве лекарственных средств.
Особенно лекарственных средств для лечения или предотвращения состояний, в которых поражена когнитивная деятельность; болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, шизофрении, болезни Хантингтона, болезни диффузных телец Леви, слабоумия, вызванного вирусом иммунодефицита человека, слабоумия, вызванного болезнью Крейцфельда-Якоба; амнестических нарушений; умеренных когнитивных нарушений; и возрастного когнитивного отклонения; для лечения и/или предотвращения пищевых нарушений или заболеваний, для регуляции аппетита; для поддержания, увеличения или снижения массы тела; анорексии, булимии, ожирения, кахексии, диабета II типа (инсулин-независимого сахарного диабета), диабета II типа, вызванного ожирением; для лечения и/или предотвращения припадка; мигрени; травмы головы; эпилепсии; синдрома повышенной раздражимости толстой кишки; синдрома раздраженной кишки; для лечения нарушений центральной нервной системы; шизофреноморфного расстройства, шизоаффективного расстройства, бредового расстройства, непродолжительного психотического расстройства, коллективного психотического расстройства, психотического расстройства из-за общего медицинского состояния, психотического расстройства, вызванного воздействием психоактивного вещества, психотического расстройства без дополнительных уточнений; психоза, связанного со слабоумием; большого депрессивного расстройства, дистимического расстройства, предменструального дисфорического расстройства, депрессивного расстройства без дополнительных уточнений, биполярного расстройства I типа, биполярного расстройства II типа, циклотимического расстройства, биполярного расстройства без дополнительных уточнений, расстройства настроения из-за общего медицинского состояния, расстройства настроения под воздействием психоактивного вещества, расстройства настроения без дополнительных уточнений; генерализованного тревожного расстройства, обсессивно-компульсивного расстройства, панического расстройства, расстройства, вызванного острым стрессом, пост-травматического стрессового расстройства; умственной отсталости; общих расстройств психологического развития; синдромов дефицита внимания, синдрома гиперактивности с дефицитом внимания, расстройства социального поведения; расстройства личности параноидального типа, расстройства личности шизоидного типа, расстройства личности шизотипического типа; тикового расстройства, синдрома Туретта; трихотилломании; конвульсивного расстройства; эпилептического припадка; зависимости от психоактивных веществ; злоупотребления психоактивными веществами; отказа от употребления психоактивных веществ; для лечения и/или предотвращения наркозависимости и/или отказа от наркотических средств; для лечения и/или предотвращения зависимости от никотина и/или отказа от нее; для лечения и/или предотвращения алкогольной зависимости и/или отказа от нее.
Для оптимизации лечения пациентов, страдающих от нарушений, упомянутых в предыдущем параграфе, соединения формулы (I) можно применять совместно с другими психотропными соединениями.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения теплокровных животных, страдающих от таких нарушений, причем вышеупомянутый способ включает систематическое применение терапевтических количеств соединения формулы (I), эффективных для лечения вышеупомянутых нарушений.
Настоящее изобретение также связано с применением соединений формулы (I), как определено здесь выше, для изготовления лекарственного средства, особенно лекарственного средства для лечения и/или предотвращения состояний, в которых поражена когнитивная деятельность; болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, шизофрении, болезни Хантингтона, болезни диффузных телец Леви, слабоумия, вызванного вирусом иммунодефицита человека, слабоумия, вызванного болезнью Крейцфельда-Якоба; амнестических нарушений; умеренных когнитивных нарушений; и возрастного когнитивного отклонения; для лечения и/или предотвращения пищевых нарушений или заболеваний, для регуляции аппетита; для поддержания, увеличения или снижения массы тела; анорексии, булимии, ожирения, кахексии, диабета II типа (инсулиннезависимого сахарного диабета), диабета II типа, вызванного ожирением; для лечения и/или предотвращения припадка; мигрени; травмы головы; эпилепсии; синдрома повышенной раздражимости толстой кишки; синдрома раздраженной кишки; для лечения нарушений центральной нервной системы; шизофреноморфного расстройства, шизоаффективного расстройства, бредового расстройства, непродолжительного психотического расстройства, коллективного психотического расстройства, психотического расстройства из-за общего медицинского состояния, психотического расстройства, вызванного воздействием психоактивного вещества, психотического расстройства без дополнительных уточнений; психоза, связанного со слабоумием; большого депрессивного расстройства, дистимического расстройства, предменструального дисфорического расстройства, депрессивного расстройства без дополнительных уточнений, биполярного расстройства I типа, биполярного расстройства II типа, циклотимического расстройства, биполярного расстройства без дополнительных уточнений, расстройства настроения из-за общего медицинского состояния, расстройства настроения под воздействием психоактивного вещества, расстройства настроения без дополнительных уточнений; генерализованного тревожного расстройства, обсессивно-компульсивного расстройства, панического расстройства, расстройства, вызванного острым стрессом, посттравматического стрессового расстройства; умственной отсталости; общих расстройств психологического развития; синдромов дефицита внимания, синдрома гиперактивности с дефицитом внимания, расстройства социального поведения; расстройства личности параноидального типа, расстройства личности шизоидного типа, расстройства личности шизотипического типа; тикового расстройства, синдрома Туретта; трихотилломании; конвульсивного расстройства; эпилептического припадка; зависимости от психоактивных веществ; злоупотребления психоактивными веществами; отказа от употребления психоактивных веществ; для лечения и/или предотвращения наркозависимости и/или отказа от наркотических средств; для лечения и/или предотвращения зависимости от никотина и/или отказа от нее; для лечения и/или предотвращения алкогольной зависимости и/или отказа от нее.
В варианте осуществления вышеупомянутые состояния выбирают из лечения и/или предотвращения наркозависимости и/или отказа от наркотических средств; для лечения и/или предотвращения зависимости от никотина и/или отказа от нее; для лечения и/или предотвращения алкогольной зависимости и/или отказа от нее.
В варианте осуществления вышеупомянутые заболевания или состояния выбирают из состояний, в которых в которых поражена когнитивная деятельность, нарушений центральной нервной системы, тревожности, депрессии, синдрома гиперактивности с дефицитом внимания, болезни Альцгеймера, эпилепсии, шизофрении, пищевых нарушений и заболеваний.
В варианте осуществления вышеупомянутые заболевания или состояния выбирают из состояний, в которых поражена когнитивная деятельность, нарушений центральной нервной системы, тревожности, депрессии, синдрома гиперактивности с дефицитом внимания, болезни Альцгеймера, эпилепсии и шизофрении.
В варианте осуществления вышеупомянутые заболевания или состояния выбирают состояний, в которых поражена когнитивная деятельность, тревожности, болезни Альцгеймера и шизофрении.
В варианте осуществления вышеупомянутые заболевания или состояния выбирают из тревожности, болезни Альцгеймера и шизофрении.
В варианте осуществления, вышеупомянутым заболеванием является шизофрения.
В варианте осуществления, вышеупомянутым заболеванием является болезнь Альцгеймера.
В варианте осуществления вышеупомянутым состоянием является состояние, в котором поражена когнитивная деятельность.
Настоящее изобретение также относится к применению соединений формулы (I), как определено здесь выше, для изготовления лекарственных средств, в особенности лекарственных средств для лечения вышеупомянутых заболеваний или состояний.
Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения в лечении или предотвращении заболеваний или состояний, упомянутых здесь ранее.
Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения в лечения заболеваний или состояний, упомянутых здесь ранее.
Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для лечения или предотвращения заболеваний или состояний, упомянутых здесь ранее.
Настоящее изобретение относится также к соединениям формулы (I) для лечения заболеваний или состояний, упомянутых в данном описании выше.
По результатам тестов, представленных ниже, специалисты в лечении таких заболеваний могут определить эффективное терапевтическое ежедневное количество. Эффективное терапевтическое ежедневное количество может составлять от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг массы тела, более предпочтительно от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 1 мг/кг массы тела.
Изобретение также связано с фармацевтической композицией, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и, в качестве активного ингредиента, терапевтически эффективное количество соединения согласно формуле (I).
Для легкости введения испытуемые соединения можно включить в состав рецептур различных фармацевтических форм для целей применения. Соединения по изобретению, в частности, соединения согласно формуле (I), их фармацевтически приемлемые кислотные или основные аддитивные соли, их стереоизомерные формы или их любую подгруппу или комбинацию можно составить в рецептуры различных фармацевтических форм для целей применения. В качестве подходящей композиции можно упомянуть все композиции, обычно используемые для системного применения лекарственных средств. Для получения фармацевтических композиций по этому изобретению эффективное количество отдельного соединения, необязательно в форме аддитивной соли, в качестве активного ингредиента соединяют в тщательно перемешанную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, в которой носитель может принимать большое разнообразие форм в зависимости от вида препарата, требуемого для введения. Эти фармацевтические композиции требуются в единой лекарственной форме, пригодной, в частности, для применения орально, ректально, чрезкожно, путем парентеральной инъекции или ингаляции. Например, при изготовлении композиций в оральной лекарственной форме можно использовать любую фармацевтическую среду, такую как, например, воду, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае оральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры, эмульсии и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, разбавители, смазочные средства, связующие, дезинтеграторы и т.п. в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Из-за легкости их применения таблетки и капсулы представляют собой наиболее преимущественные оральные единые лекарственные формы, в случае которых очевидно применяются твердые фармацевтические носители. Для парентеральных композиций носитель будет обычно содержать стерильную воду, по меньшей мере, в значительной степени, хотя можно включить другие ингредиенты, например, для целей растворимости. Можно, например, получить, растворы для инъекций, в которых носитель содержит солевой раствор, раствор глюкозы или смесь солевого раствора и раствора глюкозы. Растворы для инъекций, содержащие соединения формулы (I), можно составить в рецептуру в масле для пролонгированного действия. Соответствующими маслами для этой цели являются, например, арахисовое масло, кунжутное масло, масло семян хлопчатника, кукурузное масло, масло соевых бобов, синтетические сложные эфиры глицерина с длинноцепочечными жирными кислотами и смеси этих и других масел. Можно также получить растворы для инъекций, в случае которых можно использовать соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и т.п. Также включены твердые формы препаратов, которые предназначены для того, чтобы превратить их, незадолго до применения, в жидкие формы препаратов. В композициях, пригодных для чрезкожного применения, носитель необязательно содержит средство, повышающее проницаемость, и/или подходящее смачивающее средство, необязательно объединенное с подходящими добавками любой природы в небольших количествах, в которых добавки не привносят вредное влияние на кожу. Вышеупомянутые добавки могут содействовать введению через кожу и/или могут быть полезны для изготовления требуемых композиций. Эти композиции можно вводить различными способами, например, в качестве трансдермальных пластырей, в качестве средства, действующего в месте нанесения, в качестве мази. Кислотные или основные аддитивные соли соединений формулы (I) из-за их повышенной растворимости в воде по отношению к соответствующей кислой или основной форме, являются более пригодными для изготовления водных композиций.
Особенно преимущественным является составление рецептуры вышеупомянутых фармацевтических композиций в единой лекарственной форме для легкости применения и однородности дозированных единиц. Единая лекарственная форма, как использовано здесь, относится к физически дискретным единицам, используемым в качестве единицы дозирования, причем каждая единица содержит заранее определенное количество активного ингредиента, вычисленное для обеспечения требуемого терапевтического эффекта в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких дозированных лекарственных форм являются таблетки (включая шероховатые таблетки или таблетки с покрытием), капсулы, пилюли, пакетики с порошком, пластины, суппозитории, растворы или суспензии для инъекций и т.п., их изолированные кратные единицы.
Поскольку соединения по изобретению являются соединениями для потенциального орального применения, фармацевтические композиции, содержащие вышеупомянутые соединения, предназначенные для орального применения, являются особенно предпочтительными.
Для того чтобы увеличить растворимость и/или стабильность соединений формулы (I) в фармацевтических композициях, можно преимущественно использовать α-, β- или γ-циклодекстрины или их производные, в частности, гидроксиалкил замещенные циклодекстрины, например, 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин. Также растворимость и/или стабильность соединений по изобретению в фармацевтических композициях могут улучшать со-растворители, такие как спирты.
В зависимости от способа применения фармацевтическая композиция будет предпочтительно содержать от 0,05 до 99 вес.%, более предпочтительно от 0,1 до 70 вес.%, даже более предпочтительно от 0,1 до 50 вес.% соединения формулы (I), и от 1 до 99,95 вес.%, более предпочтительно от 30 до 99,9 вес.%, даже более предпочтительно от 50 до 99,9 вес.% фармацевтически приемлемого носителя, причем все проценты основаны на общей массе композиции.
Получение
Соединения формулы (I-a),
1
3a
2
1-4
в которой R является хлором, трифторметилом или циано, R является С алкилом или пиридинилметилом, и где R и X являются такими как определено ранее, можно получить по реакции соединения формулы (I-b)
1
2
1a
1a
1-4
3
3
в которой R, X и R являются такими, как определено ранее, с C-альдегидом (таким как, например, формальдегид или ацетальдегид) или пиридинкарбоксальдегидом в присутствии основания, такого как EtN, восстановителя, такого как NaBH(OAc), Pt/C (не пригодно для R=Cl) или никеля Ренея (не пригодно для R=CN) и подходящего растворителя для проведения реакции, такого как дихлорметан (DCM), метанол или этанол.
Соединения формулы (I-b)
в которой заместители определены ранее, можно получить путем снятия защитной группы в промежуточном соединении формулы (II),
1
2
в которой L представляет собой подходящую защитную группу, такую как трет-бутилоксикарбонил, и R, R и X определены ранее, в соответствующих условиях, таких как в присутствии трифторуксусной кислоты (TFA) в DCM, или кислой катионообменной смолы, относящейся к типу сульфированного полистирола (например, AMBERLITE™ кислоты) в метаноле (MeOH), или в HCl, в растворителе, таком как диоксан.
Промежуточные соединения формулы (II'')
2
2
в которой L представляет собой подходящую защитную группу, такую как трет-бутоксикарбонил, и R и X определены ранее, можно получить по реакции хлорпроизводного (II'') с Zn(CN) в присутствии палладиевого катализатора, такого как тетракис (трифенилфосфин)палладий в подходящем растворителе, таком как, например, ДМФ.
Промежуточные соединения формулы (II-a)
1a
в которой R является хлором или трифторметилом и другие заместители определены ранее, обычно получают в промотируемой N,N-диметилглицином реакции присоединения Ульмана между промежуточным соединением формулы (III)
1a
x
x
2
2
2
3
3
4
2
3
в которой R и L определены ранее, с коммерчески доступным R-фенолом, в котором R является водородом или галогеном. Реакцию этого типа обычно проводят в условиях катализа медью или никелем (например, используя соли меди или никеля, такие как, например, CuO, CuI или Ni(OAc)) и основания, подобного CsCO, KPO или KCO при повышенной температуре (70-100°C) в соответствующем инертном растворителе, таком как диоксан или толуол.
Промежуточные соединения формулы (II-b)
1a
2
x
x
2
3
3
4
2
3
в которой R, R и L определены ранее, обычно получают по реакции промежуточного соединения формулы (III) с коммерчески доступным R-бензоламином, в котором R является водородом или галогеном, обычно в присутствии лиганда, такого как (1S)-[1,1'-бинафталин]-2,2'-диилбис[дифенилфосфина] ((S)-BINAP), и основания, такого как CsCO, KPO, KCO или натрий трет-бутоксида (трет-BuONa) при повышенной температуре (70-100°C) в соответствующем инертном растворителе, таком как диоксан или толуол.
Промежуточные соединения формулы (II-c)
1a
2
x
x
2
3
3
4
2
3
в которой R, R и L определены ранее, обычно получают по катализируемой CuI/L-пролином реакции присоединения промежуточного соединения формулы (III) к R-бензолсульфоновой кислоте, натриевой соли, в которой R является водородом или галогеном, в присутствии основания, такого как CsCO, KPO или KCO при повышенной температуре (70-100°C) в соответствующем растворителе, таком как диметилсульфоксид (DMCO).
Промежуточные соединения формулы (II-d)
1a
2
x
x
x
3
4
2
3
3
4
2
3
2
2
в которой R, R и L определены ранее и где X' представляет собой 1,2-этендиил или этиндиил, обычно получают присоединением промежуточного соединения формулы (III) к [(R-фенил)этендиил)]-бороновой кислоте или (R-фенил)этинилу), в которых R является водородом или галогеном, в присутствии катализатора, такого как тетракис(трифенилфосфин)палладий (Pd(PPh)), основания, такого как CsCO, KPO или KCO и необязательно солей меди или никеля, таких как, например, CuO, CuI или Ni(OAc), необязательно в присутствии подходящего растворителя, такого как диоксан или N,N-диметилформамид (ДМФ), в подходящих реакционных условиях, таких как подходящая температура, либо при обычно применяемом нагревании, либо под действием микроволнового излучения в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.
Промежуточные соединения формулы (II-e)
1a
2
x
x
x
2
2
в которой R, R и L определены ранее и в которой X'' представляет собой -NH-CH- или -О-CH-, обычно получают присоединением промежуточного соединения формулы (III) к R-бензолметанамину или R-бензолметанолу, в которых R является водородом или галогеном, в присутствии основания, такого как NaH в подходящем растворителе, таком как ТГФ или ДМФ, в подходящих реакционных условиях, таких как подходящая температура, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.
Промежуточные соединения формулы (II-f)
1a
в которой R и L определены ранее, можно получить по реакции промежуточного соединения формулы (II-g)
1a
2
в которой R и L определены ранее, с Pd/C катализатором в атмосфере H в соответствующих растворителях, таких как EtOH или MeOH при комнатной температуре.
Промежуточные соединения формулы (II-h)
1a
2
в которой R и L определены ранее, можно получить путем окисления промежуточного соединения формулы (II-g) окислителем, таким как MnO или 1,1,1-трис(ацетилокси)-3H-1,2-бензиодоксол-3-оном (реагентом Десс-Мартина) в подходящем растворителе, таком как DCM или этил ацетат (EtOAc) при низких температурах, обычно при 0°C.
Промежуточные соединения формулы (II-g) можно получить по реакции соединения формулы (IV)
1a
в которой R и L определены ранее, с бензальдегидом в присутствии подходящего основания, такого как смесь бутиллития и 2,2,6,6-тетраметилпиперидина, в подходящем инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран (ТГФ), при низких температурах, обычно в интервале от -78°С до 0°C.
Промежуточные соединения формулы (III) можно получить по реакции промежуточного соединения формулы (IV) с йодом в присутствии подходящего основания, такого как смесь бутиллития и 2,2,6,6-тетраметилпиперидина в подходящем инертном растворителе, таком как ТГФ при низких температурах, обычно в интервале от -78°С до 0°C.
Промежуточные соединения формулы (IV')
3
можно получить по реакции 6-хлор-3-трифторметилпиридазина (полученного, следуя методике, описанной в Goodman, A.J.; Stanforth, S.P; Tarbit B. Tetrahedron 1999, 55, 15067-15070) с трет-бутил-1-пиперазинкарбоксилатом в присутствии подходящего основания, такого как диизопропилметиламин (DIPEA) в подходящем растворителе, таком как CHCN при подходящей температуре либо при обычно применяемом нагревании или при действии микроволнового излучения в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.
Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение.
Экспериментальная часть
2
3
3
4
3
Здесь и далее термин «DCM» означает дихлорметан, «MeOH» означает метанол, «ТГФ» означает тетрагидрофуран, «LCMS» означает жидкостную хроматографию/масс-спектрометрию, «q.s.» означает достаточное количество, «ВЭЖХ» означает высокоэффективную жидкостную хроматографию, «r.t.» означает комнатную температуру, «Pd(OAc)» означает ацетат палладия, «DIPEA» означает диизопропилэтиламин, «min.» означает минуты, «h.» означает часы, «(S)-BINAP» означает (1S)-[1,1'-бинафталин]-2,2'-диилбис[дифенилфосфин], «EtOAc» означает этил ацетат, «EtN» означает триэтиламин, «EtOH» означает этанол, «r.m.» означает реакционную смесь, «DMSO» означает диметилсульфоксид, «TFA» означает трифторуксусную кислоту, «Pd(PPh)» означает тетракис(трифенилфосфин)палладий и «NaBH(OAc)» означает натрий триацетоксиборгидрид.
Реакции при участии микроволн проводили в одномодовом реакторе: Emrys™ Optimizer microwave reactor (Personal Chemistry A. B., в настоящее время Biotage).
1
3
6
Спектры H ЯМР записывали либо на спектрометре Bruker DPX-400 либо на спектрометре Bruker AV-500 с последовательностью стандартных импульсов при 400 МГц и 500 МГц, соответственно, с использованием CDCl и DMSO-d в качестве растворителей. Химические сдвиги (δ) записывали в миллионных долях (ppm) смещенных в слабое поле относительно тетраметилсилана (TMS), который использовали в качестве внутреннего стандарта.
A. Получение промежуточных соединений
Пример Al
a) Получение промежуточного соединения 1
3
14
19
3
4
2
+
Смесь 6-хлор-3-трифторметилпиридазина (0,666 г, 5,09 ммоль) (полученного, следуя методике, описанной в Goodman, A.J.; Stanforth, S.P; Tarbit B. Tetrahedron 1999, 55, 15067-15070), трет-бутил 1-пиперазинкарбоксилата (1,138 г, 6,11 ммоль) и DIPEA (1,95 мл, 1,12 ммоль) в CHCN (10 мл) перемешивали при 180°C в течение 30 мин под действием микроволнового излучения. Растворитель выпаривали под вакуумом, и остаток очищали колоночной хроматографией (силикагель; гексан/EtOAc) получая на выходе промежуточное соединение 1 (1,67 г, 99%) в виде светло-желтого твердого вещества. CHFNO по расчетам 332; обнаружено 333 (MH).
b) Получение промежуточного соединения 2
4
14
18
3
4
2
+
2,2,6,6-Тетраметилпиперидин (3,808 мл, 22,56 ммоль) добавляли к смеси бутиллития (2,5 M в гексане) (6,31 мл, 15,79 ммоль) в ТГФ (125 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь охлаждали до -78°C и затем добавляли раствор промежуточного соединения 1 (2,5 г, 7,52 ммоль) в ТГФ (20 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч при -78°C перед добавлением раствора йода (2,29 г, 9,024 ммоль) в ТГФ (10 мл). Смесь перемешивали при -78°C в течение 1 ч и затем разбавляли 10% раствором уксусной кислоты в ТГФ. Затем смеси позволяли достичь комнатной температуры, и растворитель выпаривали под вакуумом. Остаток разбавляли DCM и экстрагировали водой. Органический слой отделяли, сушили (MgSO), фильтровали, и растворитель выпаривали под вакуумом. Осадок высаживали из диэтилового эфира, получая на выходе промежуточное соединение 2 (2,81 г, 82%) в виде светло-желтого твердого вещества. CHFINO по расчетам 458; Обнаружено 459 (MH).
Промежуточное соединение 5
получали по аналогичному протоколу, что и промежуточное соединение 2, но вместо йода использовали бензальдегид. Выход: 84%.
c-1) Получение промежуточного соединения 3
2
3
2
2
4
Смесь промежуточного соединения 2 (0,490 г, 1,069 ммоль), 4-фторфенола (0,215 г, 1,92 ммоль), N,N-диметилглицина (0,107 ммоль), CuI (0,0061 г, 0,032 ммоль) и CsCO (0,697 г, 2,14 ммоль) в диоксане (5 мл) продували N и нагревали при 100°C в течение 16 часов. Затем смесь охлаждали и добавляли DCM, HO и концентрированный раствор NHOH. Смесь экстрагировали, и отделенные органические слои фильтровали через хлопчатобумажную ткань. Растворитель выпаривали, и остаток очищали колоночной флеш-хроматографией с силикагелем (элюент: DCM/EtOAc 0-1-2-5%). Требуемые фракции собирали, и растворитель выпаривали, получая на выходе 0,435 г (92%) промежуточного соединения 3 в виде белого твердого вещества.
c-2) Получение промежуточного соединения 4
2
2
3
3
Смесь промежуточного соединения 2 (0,15 г, 0,327 ммоль), 4-фторбензоламина (0,034 мл, 0,3 ммоль), (S)-BINAP (0,0061 г, 0,009 ммоль), Pd(OAc) (0,002 г, 0,009 ммоль), CsCO (0,533 г, 1,63 ммоль) и EtN (0,002 мл, 0,02 ммоль) в толуоле (2 мл) перемешивали и нагревали при 100°C в течение 24 ч. Затем смесь охлаждали, фильтровали через диатомитовую землю (CELITE™), и органический слой выпаривали. Осадок очищали колоночной флеш-хроматографией с силикагелем (элюент: DCM/EtOAc 100/0-97/3-95/5). Требуемые фракции собирали, и растворитель выпаривали, получая на выходе 0,117 г (81%) промежуточного соединения 4 в виде желтого твердого вещества.
c-3) Получение промежуточного соединения 7
2
3
4
4
3
Раствор промежуточного соединения 2 (0,200 г, 0,0004 моль) в ДМСО (1,5 мл; сухой) продували N в течение нескольких минут. Затем к раствору добавляли смесь натриевой соли бензолсульфиновой кислоты (0,143 г, 0,0009 моль), L-пролина (0,020 г, 0.0002 моль), CuI (0,08 g) и KPO (0,093 г, 0,0004 моль), и реакционную смесь нагревали при 85°C в течение 18 ч. Затем смесь разбавляли DCM, и получившуюся в результате смесь промывали водным раствором аммиака. Органический слой отделяли, сушили (MgSO), фильтровали, и фильтрат выпаривали. Остаток очищали флеш-хроматографией (элюент: DCM/(NH 7N раствор в MeOH) сначала 100/0, затем 90/10). Требуемые фракции собирали, и растворитель выпаривали. Выход: 0,148 г промежуточного соединения 7 (72%) в виде бледно-желтого твердого вещества.
c-4) Получение промежуточного соединения 8
смесь E/Z
3
4
2
3
3
Смесь промежуточного соединения 2 (0,2 г, 0,00043 моль), [2-(4-фторфенил)винил]бороновой кислоты (0,092 г, 0,00055 моль), Pd(PPh) (0,015 г, 0,0000086 моль), KCO (0,118 г, 0,000129 моль), диоксана (2 мл) и ДМФ (0,5 мл) облучали микроволновым излучением при 160°C в течение 1 ч. Затем растворитель выпаривали и остаток очищали колоночной флеш-хроматографией с силикагелем (элюент: DCM/(NH 7N раствор в MeOH) 97/3). Требуемые фракции собирали, и выпаривали растворитель. Выход: 0,179 г промежуточного соединения 8 (92%; смесь E/Z) в виде желтого масла.
Промежуточное соединение 10
получали по аналогичному протоколу, который использовали для синтеза промежуточного соединения 8, но вместо [2-(4-фторфенил)винил]бороновой кислоты в качестве исходного вещества использовали (E)-(2-фенилвинил)бороновую кислоту.
c-5) Получение промежуточного соединения 9
3
4
3
3
Смесь промежуточного соединения 2 (0,2 г, 0,43 ммоль), 1-этинил-4-фторбензола (0,067 г, 0,55 ммоль), Pd(PPh) (0,010 г, 0,0086 ммоль), CuI (0,002 г, 0,129 ммоль) и EtN (2 мл) перемешивали при 55°C в течение 3 ч. Затем смесь охлаждали, фильтровали через диатомитовую землю (CELITE™), и фильтрат выпаривали. Остаток очищали колоночной флеш-хроматографией с силикагелем (элюент: DCM/(NH 7N раствор в MeOH) 97/3). Требуемые фракции собирали и выпаривали растворитель. Выход: 0,132 г промежуточного соединения 9 (68%).
c-6) Получение промежуточного соединения 12
4
Смесь промежуточного соединения 2 (0,400 г, 0,873 ммоль) и 4-фторбензолметанамина (1,2 мл, 10,5 ммоль) перемешивали в течение 1 ч при 150°C. Затем добавляли воду, насыщенный раствор NHCl и DCM. Органические слои отделяли и фильтровали через хлопчатобумажную ткань. Фильтрат выпаривали, и остаток очищали колоночной флеш-хроматографией с силикагелем (элюент: DCM/EtOAc 100/0-95/5). Требуемые фракции собирали и выпаривали растворитель. Выход: 0,340 г промежуточного соединения 12 (86%).
с-7) Получение промежуточного соединения 13
4
4-Фторбензолметанол (0,19 мл, 1,74 ммоль) добавляли к смеси NaH (0,062 г, 1,55 ммоль; 60% в масле) и ДМФ (4 мл; безводный). Эту смесь перемешивали в течение 10 мин, и затем добавляли промежуточное соединение 2 (0,400 г, 0,873 ммоль) в ДМФ (2 мл; безводный). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем добавляли насыщенный раствор NHCl, воду и DCM. Органический слой отделяли и фильтровали через хлопчатобумажную ткань. Фильтрат выпаривали, и остаток очищали колоночной флеш-хроматографией (элюент: DCM/EtOAc 100/0-98/2-96/4). Требуемые фракции собирали, и выпаривали растворитель. Выход: 0,295 г промежуточного соединения 13 (74%).
Пример A2
Получение промежуточного соединения 6
2
Промежуточное соединение 5 (0,06 г, 0,0001 моль) растворяли в EtOH (5 мл) и к этому раствору добавляли Pd/C (0,005 g). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре и атмосферном давлении в атмосфере H в течение 2 дней. Затем смесь фильтровали через подушку диатомитовой земли (CELITE™), и фильтрат выпаривали. Остаток очищали колоночной хроматографией (элюент: DCM). Требуемые фракции собирали, и выпаривали растворитель. Выход: 0,050 г промежуточного соединения 6 (86%).
Пример A3
a) Получение промежуточного соединения 11
2
4
Промежуточное соединение 5 (0,08 г, 0,00018 моль) растворяли в DCM (2 мл) и раствор охлаждали до 0°C. К этому раствору добавляли 1,1,1-Трис(ацетокси)-3H-1,2-бензиодоксол-3-он (реагент Десс-Мартина) (0,12 г, 0,00027 моль), и реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч. Затем добавляли воду и слои разделяли. Органический слой сушили (NaSO), фильтровали, и выпаривали растворитель. Выход: промежуточное соединение 11 (не очищенное, использовали, как есть, на следующей стадии реакции).
b) Получение промежуточного соединения 11 (альтернативная методика)
2
MnO (5 г, 0,058 моль) добавляли к смеси промежуточного соединения 5 (3 г, 0,007 моль) в EtOAc (60 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Затем смесь фильтровали и выпаривали растворитель, получая на выходе 2,5 г промежуточного соединения 11 (83%; не очищенное, использовали, как есть, на следующей стадии реакции).
B. Получение соединений
Пример B1
Получение соединения 1
2
3
2
3
Смесь промежуточного соединения 3 (0,435 г, 0,983 ммоль) в TFA (2 мл) и DCM (18 мл) перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Затем добавляли DCM, насыщенный раствор NaCO и HO, и смесь экстрагировали. Отделенные органические слои фильтровали через хлопчатобумажную ткань, растворитель выпаривали, и остаток очищали колоночной флеш-хроматографией с силикагелем (DCM/(NH 7 N раствор в MeOH) 100/0-98/2). Требуемые фракции собирали, и выпаривали растворитель, получая на выходе 0,316 г (94%) соединения 1.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м.д.: 2,86-3,06 (м, 4H) 3,57-3,64 (м, 4H) 5,96 (с, 1H) 7,08-7,25 (м, 4H).
Пример B2
a-1) Получение соединения 2
Смесь промежуточного соединения 4 (0,117 г, 0,33 ммоль) и кислой катион-обменной смолы, относящейся к типу сульфонированного полистирола (AMBERLITE™ кислота) (достаточное количество) в MeOH (8 мл) взбалтывали в течение 24 ч. Смолу отфильтровывали и органический слой отбрасывали.
3
6
1
Затем смолу промывали MeOH и перемешивали в течение 30 мин в NH 7N растворе в MeOH. Смолу отфильтровывали, и полученный органический слой концентрировали под вакуумом. Остаток очищали колоночной флеш-хроматографией с силикагелем (DCM/MeOH 70/30). Требуемые фракции собирали, и выпаривали растворитель, получая на выходе желтое твердое вещество. Это твердое вещество повторно очищали ВЭЖХ, получая на выходе 0,048 г (53%) белого твердого вещества. Аморфное твердое вещество перекристаллизовывали из этилового эфира, получая на выходе 0,015 г соединения 2 (свободного основания) в виде кристаллического белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м.д. 2,81-2,93 (м, 4H) 3,47-3,53 (м, 4H) 6,15 (с, 1H) 7,26 (т, J=8,81 Гц, 2H) 7,30-7,39 (м, 2H) 8,13 (с, 1H).
a-2) Получение соединения 16
2
*2,5 HCl*0,5 HO
2
3
2
3
2
6
1
Смесь промежуточного соединения 4 (0,425 г, 0,963 ммоль), DCM (18 мл) и TFA (2 мл) перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Затем добавляли DCM, насыщенный раствор NaCO и HO, и смесь экстрагировали. Отделенные органические слои фильтровали через хлопчатобумажную ткань, и выпаривали растворитель. Остаток очищали флеш-хроматографией с силикагелем (элюент: DCM/(NH 7N раствор в MeOH) от 100/0 до 97/3). Требуемые фракции собирали, и выпаривали растворитель. Остаток растворяли в EtOAc/DIPE, и добавляли раствор HCl в 2-пропаноле (5-6 N). Затем выпаривали большую часть растворителя. К концентрату добавляли дополнительное количество EtOAc и смесь озвучивали в ультразвуковой ванне. Осадок отфильтровывали и высушивали. Выход: 0,388 г соединения 16 (97%; 2,5HC1 *0,5HO). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м.д. 3,14 (ушир.с, 4H) 3,71-3,79 (м, 4H) 6,28 (с, 1H) 7,28 (т, J=8,79 Гц, 2H) 7,32-7,42 (м, 2H) 8,47 (с, 1H) 9,43 (ушир.с, 2H).
b) Получение соединений 7 и 8
Соединение 7 (Z-изомер) и соединение 8 (E-изомер) получали по протоколу, аналогичному тому, который использовали для синтеза соединения 2, но вместо промежуточного соединения 4 в качестве исходного соединения использовали промежуточное соединение 8 (смесь E/Z). После ВЭЖХ очистки получали два чистых изомера.
1
6
Соединение 7: H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м.д.: 2,59-2,82 (м, 4H) 3,45-3,57 (м, 4H) 6,59 (ушир.д, J=12,4 Гц, 1H) 6,91 (с, 1H) 6,96 (д, J=12,4 Гц, 1H) 7,04-7,25 (м, 4H).
1
6
Соединение 8: H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м.д. 2,75-2,88 (м, 4H) 3,65-3,77 (м, 4H) 7,05 (дд, J=16,17, 1,87 Гц, 1H) 7,24-7,34 (м, 2H) 7,53 (с, 0H) 7,64-7,76 (м, 3H).
c) Получение соединения 9
Соединение 9 получали по протоколу, аналогичному тому, который использовали для синтеза соединения 2, но вместо промежуточного соединения 4 в качестве исходного соединения использовали промежуточное соединение 9. Выход: соединение 9 в виде желтого твердого вещества (80%).
1
6
H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м.д.: 2,72-2,86 (м, 4H) 3,63-3,75 (м, 4H) 7,31-7,41 (м, 2H) 7,60 (с, 1H) 7,62-7,69 (м, 2H).
Пример B3
a) Получение соединения 3
3
2
4
3
Промежуточное соединение 6 (0,05 г, 0,0001 моль) растворяли в 4 М HCl в диоксане (1 мл). Раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривали, и остаток растворяли в DCM. Этот раствор промывали насыщенным раствором NaHCO, сушили (NaSO) и фильтровали. Соединение очищали колоночной хроматографией с нормальной фазой (элюент: DCMZ(NH 7N раствор в MeOH)). Требуемые фракции собирали, и выпаривали растворитель, получая на выходе 0,035 г соединения 3 (90%).
1
3
H ЯМР (500 МГц, CDCl) δ м.д. 2,82-2,89 (м, 4H) 3,42-3,61 (м, 4H) 3,98 (с, 2H) 6,32 (с, 1H) 7,09 (д, J=7,51 Гц, 2H) 7,20-7,26 (м, 1H) 7,29 (т, J=7,37 Гц, 2H).
b) Получение соединения 5
HCl соль
Раствор промежуточного соединения 5 (0,054 г, 0,109 ммоль) и a 4 M раствора HCl в диоксане перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Выпаривали растворитель, и остаток обрабатывали этиловым эфиром, получая на выходе светло-желтый осадок, который отфильтровывали. Выход: 0,0426 г соединения 5 (92%; HCl-соль).
1
6
H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м.д.: 3,18-3,32 (м, 4H) 3,82-4,20 (м, 4H) 5,87 (с, 1H) 7,14-7,43 (м, 5H) 7,65 (с, 1H) 9,07 (ушир.с, 2H).
Пример B4
a) Получение соединения 4 и соединения 12
Соединение 4 (свободное основание)
Соединение 12 (HCl-соль)
3
Промежуточное соединение 11 (неочищенное; остаток, который получали по примеру A3.a) растворяли в 4M растворе HCl в диоксане (2 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель выпаривали, и остаток обрабатывали насыщенным раствором NaHCO, экстрагировали DCM и очищали колоночной хроматографией (элюент: DCM/EtOAc 7/3). Требуемые фракции собирали, и выпаривали растворитель. Выход: 0,030 г соединения 4 (50%).
HCl-соль соединения 4, соединение 12, получали путем растворения промежуточного соединения 11 (0,5 г, 0,001145 моль) в 4М растворе HCl в MeOH (15 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Затем растворитель выпаривали, получая на выходе 0,350 г соединения 12 (81,9%; в виде HCl-соли).
b) Получение соединения 13
3
3
3
2
4
Смесь соединения 12 (0,080 г, 0,215 ммоль), формальдегида (0,050 г, 0,47 ммоль), NaBH(OAc) (0,100 г, 0,47 ммоль) и EtN (0,1 г, 1 ммоль) в DCM (5 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Затем смесь промывали насыщенным раствором NaHCO. Объединенный органический слой сушили (NaSO), фильтровали, и выпаривали растворитель под вакуумом. Остаток очищали препаративной ТСХ (элюент: DCM/MeOH 20/1). Выход: соединение 13 (42%).
Пример B5
a) Получение соединения 6
2
3
4
3
TFA (1 мл) добавляли к раствору промежуточного соединения 7 (0,145 г, 0,0003 моль) в DCM (4 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем выпаривали растворитель, и остаток растворяли в DCM. Этот органический раствор промывали насыщенным раствором NaCO. Органический слой отделяли, сушили (MgSO), фильтровали и фильтрат выпаривали. Продукт очищали колоночной флеш-хроматографией (элюент: DCM/(NH 7N раствор в MeOH) сначала 100/0, затем 95/5). Требуемые фракции собирали, и выпаривали растворитель, получая на выходе 0,103 г бледно-желтого твердого вещества. Это твердое вещество дополнительно очищали ВЭЖХ, получая на выходе 0,0513 г соединения 6 (45%) в виде бледно-желтого твердого вещества.
1
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м.д. 2,96-3,08 (м, 4H) 3,80-3,89 (м, 4H) 7,45-7,54 (м, 2H) 7,58-7,64 (м, 1H) 7,66 (с, 1H) 7,79 (д, J=7,88 Гц, 2H).
b) Получение соединения 14
2
*2,5 HCl *0,5 HO
2
3
3
2
Смесь промежуточного соединения 12 (0,340 г, 0,7465 ммоль), TFA (1 мл) и DCM (9 мл) перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Затем добавляли насыщенный раствор NaCO, воду и DCM. Органический слой отделяли и фильтровали через хлопчатобумажную ткань. Выпаривали растворитель, и остаток очищали колоночной флеш-хроматографией с силикагелем (элюент: DCM/(NH 7N раствор в MeOH) сначала 100/0, затем 99/1, затем 98/2). Требуемые фракции собирали, и выпаривали растворитель. Клейкий продукт обрабатывали 5-6 N HCl в 2-пропаноле (0,5 мл). Растворитель выпаривали, и к остатку добавляли EtOAc. Смесь озвучивали в ультразвуковой ванне, и затем соединение отфильтровывали и высушивали. Выход: 0,275 г соединения 14 (86%; *2,5 HC1 *0,5 HO).
1
6
R ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м.д. 3,17 (ушир.с, 4H) 3,80-3,92 (м, 4H) 4,59 (д, J=6,01 Гц, 2H) 6,36 (с, 1H) 7,18 (т, J=8,79 Гц, 2H) 7,44 (дд, J=8,67, 5,66 Гц, 2H) 7,85 (ушир.с, 1H) 9,51 (ушир.с, 2H).
c) Получение соединения 15
Соединение 15 получали по протоколу, аналогичному тому, который использовали для синтеза соединения 6, но вместо промежуточного соединения 7 в качестве исходного соединения использовали промежуточное соединение 13. Выход: соединение 15 (88%).
1
3
Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м.д.: 2,93-3,04 (м, 4H) 3,62-3,76 (м, 4H) 5,15 (с, 2H) 6,23 (с, 1H) 7,10 (т, J=8,67 Гц, 2H) 7,38 (дд, J=8,55, 5,32 Гц, 2H).
Пример B6
a) Получение соединения 10
HCl соль
Смесь промежуточного соединения 10 (5,5 г, 0,0127 моль) и раствора HCl в MeOH (110 мл) перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Затем выпаривали растворитель, получая на выходе 4,5 г соединение 10 (95%; HCl-соль).
b) Получение соединения 11
3
3
Смесь соединения 10 (0,080 г, 0,22 ммоль), формальдегида (0,25 ммоль), NaBH(OAc) (достаточное количество) и EtN (0,101 г, 1 ммоль) в DCM (5 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Затем растворитель выпаривали, и остаток очищали препаративной ТСХ (элюент: DCM/MeOH 20/1) получая на выходе соединение 11.
Следующие соединения формулы (I), как описано в таблице 1, были получены по аналогии с вышеупомянутыми примерами (Пр. №). Некоторые соединения получали в солевой форме. В случае, когда определяли точную стехиометрию, результат показан в колонке «солевая форма», см., например, №№ п/п 14 и 16. В случае, когда точную стехиометрию не определяли, указывали только тип солевой формы, см., например, № п/п 5.
Таблица 1
<img file="00000044.tif" he="27" wi="60" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000045.tif" he="198" wi="156" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000046.tif" he="99" wi="151" img-content="undefined" img-format="tif" />
C. Аналитическая часть
ВЭЖХ
Общая методика A
ВЭЖХ измерение выполняли, используя систему Shimadzu 2010 LCMS-system, включающую насос, детектор с фотодиодной матрицей (PDA) (используемая длина волны 220 нм), термостат для колонок и колонку, как подробно описано в соответствующих методах ниже. Поток из колонки расщеплялся Shimadzu 2010 MSD детектором. MS детектор был оснащен API-ES (ионизацией электрораспылением при атмосферном давлении). Масс-спектры снимали путем сканирования от 100 до 1000. Напряжение на границе раздела фаз составляло 4500 В при положительной ионизации. Поток распыленного газа составлял 1,5 л/мин. Температура CDL (изогнутой линии десольватации при нагретом капилляре) составляла 250°C, и напряжение CDL составляло 30 В. Температура термоблока составляла 200°C. Напряжение на детекторе составляло 1500 В.
Общая методика B
Жидкостную зроматографию проводили, используя систему сверхпроизводительной жидкостной хроматографии Acquity (UPLC) (Waters), включающую бинарный насос, пробозаборник, термостат для колонок (выставленный на 55°C), детектор с диодной матрицей (DAD) и колонку, как подробно описано в соответствующих методах ниже. Поток из колонки расщепляли в MS спектрометре. MS детектор был оснащен источником ионизацией электрораспылением. Масс-спектры снимали путем сканирования от 100 до 1000 за 0,18 секунд, используя время задержки 0,02 секунды. Напряжение на капиллярной игле составляло 3,5 кВ, и температурный источник поддерживали при 140°C. В качества газа-распылителя использовали азот. Регистрацию данных проводили с помощью системы Waters-Micromass MassLynx-Openlynx data system.
ВЭЖХ способ 1
3
В дополнение к общей методике A: ВЭХЖ с обращенной фазой проводили на YMC-Pack ODS-AQ, 50×2,0 мм 5 мкм колонке при скорости протока 1,0 мл/мин. Для пробега градиента от 99% A и 1% B до 90% A и 10% B за 0,01 мин использовали две подвижные фазы (подвижная фаза A: вода с 0,1% трифторуксусной кислотой; подвижная фаза B: CHCN с 0,05% трифторуксусной кислотой). Затем создавали градиент 20% A и 80% B за 2,2 мин, и выдерживали его в течение 0,28 мин. Использовали стандартный объем вкалываемой пробы 1 мкл. Температура термостата составляла 50°C. (MS полярность: положительная).
ВЭЖХ способ 2
2
В дополнение к общей методике B: ВЭХЖ с обращенной фазой проводили на С18 колонке, заполненной гибридом, включающим этоксисилан с мостиковыми структурами/диоксид кремния (BEH) (1,7 мкм, 2,1×50 мм; Waters Acquity) при скорости протока 0,8 мл/мин. Для пробега градиента от 95% A и 5% B до 5% A и 95% B за 1,3 мин использовали две подвижные фазы (мобильная фаза A: 0,1% муравьиной кислоты в HOZMeOH 95/5; мобильная фаза B: MeOH) и выдерживали его в течение 0,2 мин. Использовали объем вкалываемой пробы 0,5 мкл. Температура термостата составляла 50°C. Напряжение на конусе составляло 10 В в режиме положительной ионизации и 20 В в режиме отрицательной ионизации.
Температуры плавления
Для ряда соединений определяли температуры плавления в открытых капиллярных трубках на аппарате Mettler FP62. Температуры плавления измеряли с градиентом 3 или 10°C/в минуту. Максимальная температура составляла 300°C. Температуры плавления считывали по цифровому табло.
Таблица 2Время удерживания (R<sub>1</sub>) в мин, MH<sup>+</sup> (также [M+H]<sup>+</sup>) пик (протонированная молекула), используемый ВЭЖХ метод и Т.пл. (температура плавления в °C). «n.d.» означает не определяли
№ п/п
R<sub>t</sub>
MH<sup>+</sup>
ВЭЖХметод
Т.пл.(°C)
1
0,93
343
2
132,5
2
0,75
342
2
n.d.
3
0,94
323
2
133,8
4
0,85
337
2
289,5
5
0,82
339
2
199,7
6
0,83
373
2
180,3
7
0,96
353
2
n.d.
8
1,05
353
2
180,6
9
1,05
351
2
251,6
10
1,73
335
1
n.d.
11
1,03
349
2
135,8
12
0,85
337
2
n.d.
13
0,85
351
2
136,3
14
0,82
356
2
n.d.
15
0,99
357
2
142,1
16
0,75
342
2
>300
17
1,14
426
2
163,9
18
1,20
426
2
121,4
D. Фармакология
6
Связывающая способность с рецептором 5-HT человека in vitro
6
2
3
-5
Замороженные мембраны клеток эмбриональных почек человека (HET клеток), трансфицированных серотониновым 5-HT рецептором человека, оттаивали, недолго гомогенизировали, используя Ultra-Turrax T25 гомогенизатор и разбавляли 50 мМ Трис-HCl буфером для анализа, содержащим 10 мМ MgCl, 1 мМ ЭДТА и 10 мкМ паргилина (доведенного HCl до pH 7,4) до соответствующей концентрации белка, оптимизированной для специфического и неспецифического связывания. Радиолиганд диэтиламин [H]лизергиновой кислоты (Perkin Elmer, со специфической активностью ~80 Ки/ммоль) разбавляли буфером для анализа до концентрации 20 нМ. Радиолиганд (20 мкл), с 40 мкл либо 10% ДМСО (контроль), либо раствор метиотепина (в конечной концентрации 10 M для измерения неспецифического связывания), либо раствор представляющего интерес соединения, затем инкубировали с 70 мкл подготовленного раствора мембран и 70 мкл частиц WGA (агглютинина из проростков пшеницы), покрытого PVT (поливинилтолуидина) (в конечной концентрации 0,25 мг/на лунку). Конечная концентрация радиолиганда на лунку составляла 2 нМ. После шейкирования в течение 24 ч при комнатной температуре, планшеты считали в Topcount™ сцинцилляционном счетчике. Процент специфического связывания и кривые конкурентного связывания обсчитывали, используя программное обеспечение S-Plus (Insightful).
Таблица 3Значения pIC<sub>50</sub> (5-HT<sub>6</sub>)
№ п/п
pIC<sub>50</sub>
1
6,6
2
7,2
3
6,9
4
6,9
5
6,2
6
6,6
7
6,8
8
7,2
9
5,8
10
n.d.
11
6,4
12
n.d.
13
6,8
14
6,2
15
6,4
16
n.d.
17
5,9
18
5,2
3
Связывающая способность с рецептором H человека in vitro
3
3
3
50
i
d
125
125
125
Связывание соединений с клонированным H рецептором человека, стабильно экспрессируемым SK-N-MC клетками, проводили, как описано ранее (Lovenberg TW, Pyati J, Chang H, Wilson SJ, Erlander MG. Cloning rat histamine H receptor reveals distinct species pharmacological profiles. J Pharmacol Expt Ther 2000;293:771-778). Вкратце, клеточные массы SK-N-MC клеток, экспрессирующих H рецептор человека, гомогенизировали в 50 мМ Трис-HCl/5 мМ ЭДТА и повторно центрифугировали при 30000 g в течение 30 мин. Клеточные массы гомогенизировали в 50 мМ Трис/5 мМ ЭДТА (pH 7,4). Мембраны инкубировали в течение 1 ч при 25°C с I-йодпроксифаном, разбавленным йодпроксифаном, не содержащим радиоактивных веществ, в 50 мМ Трис-HCl/5 мМ ЭДТА. Общая конечная концентрация йодпроксифана в реакциях составила 1 нМ. Йодпроксифан, не содержащий радиоактивных веществ, вносили в конечной концентрации 0,975 нМ, и I-йодпроксифан вносили в конечной концентрации 0,025 нМ. Реакции останавливали фильтрованием через GF/B планшет для сбора клеток (предобработанный 0,3% полиэтиленимином). Планшеты промывали 5 раз буфером. Неспецифическое связывание определяли в присутствии 100 мкМ гистамина. Величины ингибирующей концентрации (вызывающей 50% ингибирование от максимального эффекта, IC) определяли, используя программу аппроксимации кривой по точкам в предположении моносайтового связывания (GraphPad, San Diego, CA) и переводили в величины K, основываясь на константе диссоциации (K) I-йодпроксифана, равной 1 нМ.
Таблица 4Значения K<sub>i</sub> (H<sub>3</sub>)
№ п/п
K<sub>i</sub> (нМ)
1
5000
2
>10000
3
>10000
4
>10000
5
>10000
6
>10000
7
>10000
8
>10000
9
>10000
10
n.d.
11
>10000
12
n.d.
13
>10000
14
>10000
15
>10000
16
>10000
17
>10000
18
>10000
E. Примеры композиций
«Активный ингредиент» (A.I.), как использовано во всех этих примерах, относится к соединению формулы (I), его фармацевтически приемлемой кислой или основной аддитивной соли и к его стереоизомерным формам.
Пример E.1: Капли для орального применения
500 граммов A.I. растворяли в 0,5 л 2-гидроксипропановой кислоты и 1,5 л полиэтиленгликоля при 60~80°C. После охлаждения до 30~40°C добавляли 35 л полиэтиленгликоля и смесь хорошо перемешивали. Затем добавляли раствор 1750 граммов натрий сахарина в 2,5 л очищенной воды и при перемешивании добавляли 2,5 л кокосового ароматизатора и достаточное количество полиэтиленгликоля до объема 50 л, получая раствор для орального применения в виде капель, содержащий 10 мг/мл A.I. Получившийся в результате раствор разливали в подходящие контейнеры.
Пример E.2: Растворы для орального применения
9 граммов метил 4-гидроксибензоата и 1 грамм пропил 4-гидроксибензоата растворяли в 4 л кипящей очищенной воды. В 3 л этого раствора растворяли сначала 10 граммов 2,3-дигидроксибутандикарбоновой кислоты и затем 20 граммов A.I. Последний раствор объединяли с оставшейся частью первого раствора и добавляли к нему 12 л 1,2,3-пропантриола и 3 л 70% раствора сорбитола. 40 граммов натрий сахарина растворяли в 0,5 л воды и добавляли 2 мл эссенции малины и 2 мл эссенции крыжовника. Последний раствор объединяли с первым, добавляли достаточное количество воды до объема 20 л, получая композицию раствора для орального применения, содержащую 5 мг активного ингредиента на чайную ложку (5 мл). Получившийся в результате раствор разливали в подходящие контейнеры.
Пример E.3: Таблетки, покрытые пленкой
Изготовление сердцевины таблеток
Смесь 100 граммов A.I., 570 граммов лактозы и 200 граммов крахмала хорошо перемешивали и затем увлажняли раствором 5 граммов натрий додецилсульфата и 10 граммов поливинилпирролидона в примерно 200 мл воды. Влажный порошок просеивали, высушивали и опять просеивали. Затем добавляли 100 граммов микрокристаллической целлюлозы и 15 граммов гидрированного растительного масла. Все вместе перемешивали и прессовали в таблетки, получая 10000 таблеток, каждая из которых содержала 10 мг активного ингредиента.
Покрытие
К раствору 10 граммов метилцеллюлозы в 75 мл денатурированного этилового спирта добавляли раствор 5 граммов этилцеллюлозы в 150 мл дихлорметана. Затем добавляли 75 мл дихлорметана и 2,5 мл 1,2,3-пропантриола. 10 граммов полиэтиленгликоля размалывали и растворяли в 75 мл дихлорметана. Последний раствор добавляли к первому, и затем добавляли 2,5 граммов магния октадеканоата, 5 граммов поливинилпирролидона и 30 мл концентрированной окрашивающей суспензии, и все гомогенизировали. Сердцевину таблеток покрывали полученной таким образом смесью в аппарате для нанесения покрытий.
Пример E.4: Раствор для инъекций
1,8 граммов метил 4-гидроксибензоата и 0,2 грамма пропил 4-гидроксибензоата растворяли примерно в 0,5 л кипящей воды для инъекций. После охлаждения примерно до 50°C добавляли при перемешивании 4 грамма молочной кислоты, 0,05 граммов пропиленгликоля и 4 грамма A.I. Раствор охлаждали до комнатной температуры и дополняли достаточным количеством воды для инъекций до 1 л, получая раствор, содержащий 4 мг/мл A.I. Раствор стерилизовали путем фильтрования и разливали по стерильным контейнерам.