Изменения функциональных характеристик тромбоцитов при проведении инактивации патогенов в концентратах тромбоцитов (предварительное сообщение)

Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 5

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 615.38.014.41

ИЗМЕНЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК ТРОМБОЦИТОВ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ИНАКТИВАЦИИ ПАТОГЕНОВ В КОНЦЕНТРАТАХ ТРОМБОЦИТОВ

И. М. Накастоев, А. Е. Грачев, Э. Г. Гемджян, М. А. Пантелеев, Н. В. Захарова, Е. А. Ватагина, И.С. Кастрикина, В. М. Погорелов, В. В. Рыжко

ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Резюме. Целью исследования было изучение влияния фотодинамической инактивации патогенов с применением амотосалена на функцию тромбоцитов в концентратах тромбоцитов (КТ). Проанализированы три группы образцов КТ: 1-я — нативные КТ в день получения; 2-я — нативные КТ после 20—24 ч хранения; 3-я — КТ, подвергнутые инактивации патогенов (ИП) с использованием системы Intercept через 20—24 ч после получения. Во всех образцах исследовали количество тромбоцитов, фракции крупных и незрелых тромбоцитов, экспозицию фосфатидилсерина (ФС) и Р-селектина на мембранах неактивированных тромбоцитов и после их направленной активации. Выявлено, что ИП сопровождается статистически значимым снижением концентрации тромбоцитов в КТ. Исследование экспрессии ФС и Р-селектина показало, что ИП способствует подавлению спонтанной активации тромбоцитов при их хранении. Однако при направленной активации тромбоцитов наблюдали существенное снижение уровня экспозиции ФС в группе КТ, подвергнутых ИП. Метод ИП ведет к снижению концентрации клеток в КТ и влияет на их функциональный статус.

Ключевые слова: концентрат тромбоцитов, инактивация патогенов, амотосален, Р-селектин, фосфатидилсерин, статистический анализ, непараметрическая статистика, проспективное исследование

CHANGES IN THE PLATELET FUNCTIONAL CHARACTERISTICS IN PLATELET CONCENTRATES AFTER INACTIVATION OF PATHOGENS

I.M.Nakastoev, A.E.Grachev, E.G.Gemdzhyan, M.A.Panteleev, N.V.Zakharova, E.A.Vatagina, I.S.Kastrikina, V.M.Pogorelov,

V.V.Ryzhko

Hematology Research Center, Moscow

Summa ry.Theaim of the study was evaluation of the effects of amotosalen photodynamic inactivation of pathogens in platelet concentrates (PC) on the platelet function. Three groups of PC were analyzed: 1) native PC on the day of donation; 2) native PC after 20—24 h storage; and 3) PC after pathogen inactivation (PI) by the Intercept system 20—24 h after donation. Platelet counts, large and immature platelet fractions, phosphatidylserine (PS) and P-selection expression on inactivated platelet membranes and after their target stimulation were studied in all samples. Pathogen inactivation was associated with a significant reduction of platelet concentrations in PC. Studies of PS and P-selectin expression showed that PI suppressed spontaneous stimulation of platelets during storage. However, direct stimulation of platelets was associated with a significant reduction of PS expression in PC subjected to PI. The PI method used in our study led to reduction of cell concentrations in PC and modulated platelet function.

Key words: platelet concentrate, pathogen inactivation. amotosalen, P-selectin, phosphatidylserine

Инфекционная безопасность реципиента при трансфузиях компонентов крови является актуальной проблемой. Частота трансмиссии вирусных заболеваний при трансфузии компонентов крови возрастает для реципиента с 3,6 до 36 случаев на 1000 пациентов при увеличении количества доноров от 1 до 8 [1]. Инициальный риск бактериальной контаминации (также имеющий важное значение) существенно ниже и составляет 0,9 случая на 1000 трансфузий [2]. A. Eder и соавт. [3] выявили, что при переливании 1 004 000 протестированных концентратов тромбоцитов (КТ) наблюдалось 20 септических реакций от 17 донаций (при этом в 3 случаях со смертельным исходом). Схожие данные по частоте бактериальной кон-

Для корреспонденции:

Накастоев Ислам Мухарбекович, младший научный сотрудник отделения химиотерапии гематологических заболеваний, полиорганной патологии и гемодиализа, ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва.

Адрес: 125167, Москва, Новый Зыковский проезд, д.4а.

Телефон: 8(926)383-26-88.

E-mail: slep06@gmail.com

таминации и развитию тяжелых септических реакций приводят и другие авторы [4—8]. Микробное обсеменение КТ происходит, как правило, в момент донации и при хранении в течение 5 дней при температурном режиме 20—24оС, при котором количество микроорганизмов может многократно увеличиваться [1, 9].

Действенным методом, предупреждающим подобные трансфузионные осложнения, является инактивация патогенов (ИП), все шире применяемая в последние годы в практической работе службы крови как у нас в стране, так и за рубежом [10, 11].

Основные требования к ИП в КТ — это обеспечить деконтаминацию всех инфекционных агентов: бактерий, грибов, вирусов и прионов, не оказывая при этом отрицательного влияния на количество и функциональную активность тромбоцитов. Универсального метода ИП, полностью удовлетворяющего этому условию, еще не существует. Наиболее часто сегодня для этих целей применяются фотодинамические методы. Принципиальный механизм, используемый во всех фотодинамических методах ИП, заключается в том, что компоненты крови обрабатываются

32

Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 5

веществом, которое при последующем облучении ультрафиолетовым светом (с определенной длиной волны) способно вызывать повреждение нуклеиновых кислот или клеточных мембран патогенов.

В Гематологическом научном центре (ГНЦ) Минздрава России для ИП в КТ используют фотодинамический метод с применением амотосалена в качестве фотосенсибилизатора. Амотосален является синтетическим псораленом, способным (подобно алкилирующим соединениям) связываться с нуклеиновыми кислотами и под влиянием ультрафиолетового излучения эффективно ингибировать основные функции ДНК и РНК: репликацию, транскрипцию, трансляцию и репарацию [12].

Исследования показали, что этим методом эффективно нейтрализуется большинство известных болезнетворных микроорганизмов, включая оболочечные и безоболочечные вирусы, бактерии, простейшие (Trypanosoma cruzi и Plasmodium falciparum), теоретически он может оказывать влияние и на грибы [12—14]. В отношении прионов, которые не содержат нуклеиновых кислот, псоралены не эффективны.

В то же время существует определенный риск того, что псоралены, влияя на все виды нуклеиновых кислот, в том числе цитоплазматические РНК, могут опосредованно ухудшать функциональную активность тромбоцитов [15].

В рандомизированных исследованиях по оценке клинической эффективности перелитых патогени-нактивированных (ПИ) КТ в первую очередь оценивался прирост тромбоцитов в крови реципиентов [16], однако известно, что гемостатический эффект перелитых КТ обусловлен не только их количеством, но и функциональными особенностями [17]. В процессе ИП существует риск повреждения билипидной мембраны тромбоцитов, нарушения тканевого дыхания (повреждение митохондриальной ДНК) тромбоцитов и анаболических процессов в их цитоплазме (повреждение транспортных и матричных РНК). Эти факторы могут потенциально влиять на адге-зивно-агрегационную и ангиотрофическую функции кровяных пластинок и приводить к ухудшению их способности обеспечивать первичный гемостаз, поэтому изучение функциональных характеристик тромбоцитов после проведения инактивации патогенов представляется актуальной задачей.

Цель исследования — изучить влияние фотодинамического метода инактивации патогенов с применением амотосалена на количество тромбоцитов в КТ и экспозицию фосфатидилсерина и Р-селектина на мембранах тромбоцитов.

Материалы и методы

В исследование включены 29 больных ГНЦ, которым по медицинским показаниям с мая 2012 г. по август 2012 г. была осуществлена трансфузия КТ. В исследование не вошли больные с резистентностью к трансфузиям КТ, фебрильной лихорадкой, спленомегалией и спленэктомией.

КТ в нашем исследовании получали из крови здоровых доноров на сепараторе клеток крови MCS+ ("Hemonetics", США) в соответствие с инструкциями изготовителя. Через

1—2 ч после получения КТ проводили ИП с использованием системы Intercept ("СemsCoIporation", США) с соблюдением инструкций производителя. Контейнер с КТ соединяли с одноразовым набором для ИП, в котором последовательно происходило добавление фотосенсибилизатора амотосалена (концентрация амотосалена в КТ до облучения 150 мкМ), облучение (обеспечивается иллюминатором Intercept в дозе 3,6 Дж/см2) и адсорбция остаточного амотосалена с помощью адсорбирующего элемента.

В каждом случае мы анализировали 2 образца КТ. Первый образец отбирали сразу после получения КТ (до проведения ИП) в объеме 10 мл с соблюдением асептических условий. Часть этого образца анализировали сразу после получения, другую часть — через 20—24 ч хранения при температуре 22 ± 2оС в смесителе с инкубатором (AP48L, "Presvac", Аргентина), работающем на скорости 50—60 мин-1. Второй образец отбирали из КТ уже после окончания ИП и адсорбции остаточного амотосалена также с соблюдением асептических условий.

Подсчет количества клеток, распределение тромбоцитов по объему и определение содержания молодых тромбоцитов проводили на проточном анализаторе Sysmex XE-2100 ("Kobe", Япония). Прибор выполняет (в течение 60 с) анализ образцов по 32 параметрам, включая три следующих: PLT (в • 109/л) — количество тромбоцитов, P-LCR (в %) — доля тромбоцитов, превышающих по объему 12 фл (1 фемтолитр — 10-15/л) и IPF (в %) — доля незрелых тромбоцитов (аналоги ретикулоцитов в красном ростке кроветворения по уровню дифференцировки, но не по функции) [18, 19]. Незрелые тромбоциты автоматически идентифицировали по интенсивности флюоресценции при использовании специализированного программного обеспечения Xeipfmaster. Незрелыми считали крупные тромбоциты содержащие РНК.

Определение экспрессии фосфатидилсерина и P-селектина

Мы исследовали экспрессию фосфатидилсерина (ФС) как маркера активации тромбоцитов и формирования про-коагулянтной мембраны.

В нормальном состоянии мембрана тромбоцитов не поддерживает реакций свертывания: отрицательно заряженные фосфолипиды, в том числе ФС, сосредоточены на внутреннем слое мембраны [20]. Активация тромбоцитов приводит к перемещению ФС на внешний слой мембраны и формированию прокоагулянтной поверхности. Активация тромбоцитов имеет несколько степеней, и экспозиция прокоагулянтной поверхности является одной из высших [21, 22]. Только сильные активаторы (тромбин и коллаген) способны вызывать такой ответ. Более слабые активаторы не способны самостоятельно вызывать появление ФС [23].

Мы выбрали экспозицию Р-селектина в качестве маркера высвобождения а-гранул тромбоцитов.

P-селектин содержится в составе внутреннего слоя мембран а-гранул неактивированных тромбоцитов. Во время активации тромбоцитов мембраны а-гранул сливаются с цитоплазматической мембраной, происходит секреция их содержимого и экспозиция P-cелектина на поверхности тромбоцитов. Известно, что в процессе активации тромбоцитов секретируется несколько типов гранул, однако главными являются а-гранулы, содержащие высо-

33

Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 5

Таблица 1

Концентрация тромбоцитов в различных образцах КТ

Группа образцов Количество образцов Средняя концентрация, •109/л Стан- дартная ошибка 95% доверительный интервал

1-я 18 1138* 63 1264,2—1011,8

2-я 21 1008,3* 58,4 1125,2—891,4

3-я 21 946,7* 58,4 1063,5—829,8

Примечание:* p = 0,05 между любыми двумя измерениями.

комолекулярные белки, такие как фактор V, фибриноген, фактор Виллебранда, фибронектин и др.

КТ с концентрацией тромбоцитов около 1 • 109 кле-ток/мл разводили в 10 раз базовым тромбоцитарным буфером (БТБ): 20 мМ HEPES pH 7,4, содержащий 150 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 1 мМ MgCl2, 0,4 мМ NaH2PO4, 5 мМ глюкоза и 0,5% БСА (бычий сывороточный альбумин).

Для окрашивания по ФС и Р-селектину и активации использовали аликвоты тромбоцитов по 5 мкл. К этим аликвотам добавляли равный объем (по 5 мкл) БТБ с добавленными 5 мМ CaCl2 и 4% фикоэретрин (РЕ) аннек-сином V (для прокрашивания ФС), либо 4% PE-CD62P (для окрашивания Р-селектина). Таким образом, конечная концентрация тромбоцитов в смеси составляла около 0,5 • 108 кл/мл, CaCl2 — 2,5 мМ, красителя — 2%.

Для активации тромбоцитов в пробы с добавленным красителем и кальцием вносили аналог коллагена CRP (collagen-relatedpeptide) до конечной концентрации 25 мкг/мл и перемешивали. Активацию проводили в течение 15 мин, после чего пробы разбавляли в 20 раз БТБ с 2,5 мМ CaCl2 и анализировали на проточном цитометре FACS Calibur ("BD Biosciences", США) по характерному светорассеянию и флюоресценции РЕ.

Анализ полученных результатов проводили с помощью специального программного обеспечения. По характерному светорассеянию определяли границы популяции тромбоцитов. Далее для выделенной зоны тромбоцитов анализировали флюоресценцию добавленных маркеров. Долю ФС-положительных тромбоцитов определяли как отношение выявленного количества клеток, окрашенных аннексином V, к количеству всех событий в популяции тромбоцитов (принимаемому за 100%). Также и долю Р-селектинположительных тромбоцитов определяли как отношение выявленного количества клеток, окрашенных CD62P, к количеству всех событий в популяции тромбоцитов.

Статистическую значимость различий средних значений количества тромбоцитов (подвергнутых и не подвер-

Таблица 2

Доля тромбоцитов, превышающих по объему 12 фл (P-LCR), и доля незрелых тромбоцитов (IPF) в различных образцах КТ

Показатель 1-я группа 2-я группа 3-я группа

P-LCR, %* 16,0 ± 6,6 13,7 ± 5,9 12,9 ± 6,3

IPF, %** 1,5 1,65 1,45

Примечание. * — количество крупных тромбоцитов, превышающих по объему 12 фл, ** — фракция незрелых тромбоцитов.

Таблица 3

Экспрессия ФС и Р-селектина (в %) на тромбоцитах

Показатель экспрессии 1-я группа

ФС 4,1 ± 1,4 9,5 ± 5,6 4,1 ± 2,1

ФС после активации 29,5 ± 10,3 30,1 ± 1,2 15,4 ± 9,6

Р-селектина 10, ± 4,3 22,3 ± 12,3 13,3 ± 6,8

Р-селектина после активации 79,7 ± 8,5 77,4 ± 9,6 78,2 ± 15,2

гнутых патогенинактивации) оценивали (при примененной в данном исследовании двухвыборочной схеме испытания [24]) с помощью парного 1-критерия Стьюдента. Для проверки соответствия эмпирических распределений нормальному закону использовали критерий Смирнова— Крамера. Результаты представлены средними значениями с 95% доверительными интервалами (или со стандартными отклонениями). Результаты считали статистически значимыми при p < 0,05.

Результаты и обсуждение

Учитывая, что образец ПИ КТ мы получали для исследования только через 20—24 ч после забора (в связи с длительностью процедуры инактивации), образец необработанного КТ исследовали повторно с соблюдением аналогичных условий и сроков хранения. Таким образом, все исследованные образцы были разделены на три группы: 1-я группа — нативный КТ в день получения, 2-я группа — нативный КТ после 20—24 ч хранения, 3-я группа — ПИ КТ через 20—24 ч от момента получения.

Средняя концентрация тромбоцитов в образце исходного КТ (1-я группа) составила 1138 • 109/л (табл. 1). Средняя концентрация тромбоцитов в образцах 2-й и 3-й групп составила 1008,3 • 109 и 946,7 • 109/л соответственно. Следовательно, концентрация тромбоцитов в КТ, не подвергнутых ИП, выше, чем в КТ после ИП, и обе эти концентрации ниже исходного среднего значения.

При исследовании объемных характеристик было выявлено, что в результате суточного хранения образцов происходит снижение числа тромбоцитов, превышающих 12 фл. При сравнении образов 2-й и 3-й групп статистически значимого различия не выявлено. Фракция незрелых тромбоцитов во всех исследуемых группах оставалась без статистически значимых изменений (табл. 2).

Таким образом, при исследовании количества тромбоцитов мы выявили достоверно значимое снижение их числа в группе КТ, подвергнутой ИП, по сравнению с КТ, хранившимися с соблюдением аналогичных условий хранения, но не подвергнутых ИП. Подсчет крупных и незрелых тромбоцитов показал отсутствие селективного влияния ИП на какую-то определенную фракцию тромбоцитов.

Исходный (в 1-й группе) уровень экспозиции ФС в фоне (без направленной активации) составил 4,08 ± 1,41%. Средний уровень экспозиции ФС тромбоцитов в фоне составил 8,1 ± 3% во 2-й группе и 4,1 ± 2,1 в 3-й группе. После направленной активации тромбо-

34

Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 5

а

Рис. 1. Частотное распределение изменений (от исходного) значений экспозиции фосфатидилсерина неактивированных тромбоцитов в группах без ИП (а) и с ИП (б).

Здесь и на рис. 2: по оси абсцисс — прирост (в %) тромбоцитов экспрессирующих фосфатидилсерин, по оси ординат — поинтер-вальная частота прироста (в %).

цитов уровень экспозиции ФС повысился в среднем в 1-й группе до 29,5%, во 2-й группе до 30,1%. В группе образов КТ, подвергнутых ИП экспозиция, ФС после активации повысилась в среднем до 15,4% (табл. 3).

Различия значений во 2-й и в 3-й группах от исходных значений экспозиции ФС демонстрируют изменения, обусловленные непосредственно ИП или изменения в результате хранения. Для упрощения анализа полученных данных мы привели частотное распределение этих изменений во 2-й и в 3-й группах, как для неактивированных тромбоцитов (рис. 1, а, б), так и для активированных (рис. 2, а, б). Получены следующие результаты: изменение доли тромбоцитов, экспрессирующих ФС, составило для неактивированных тромбоцитов в среднем около 4% (95% ДИ 4,9; 3,2) в группе КТ, не подвергнутых ИП, и 0,1% (95% ДИ -0,8; 0,9) в группе КТ после ИП, (см. рис. 1, а, б), а для тромбоцитов после их направленной активации (аналогом коллагена) 0,6% (95%ДИ -2,5; 3,8) в группе без ИП и -14,1% (95%дИ -17,1; -11) в группе с ИП (см. рис. 2, а, б). Обнаруживаемый сдвиг средних значений экспозиции ФС в группе тромбоцитов, подвергнутых ИП, в сторону уменьшения является статистически значимым (р = 0,05), что справедливо как для неактивированных, так и для активированных тромбоцитов; в первом случае разница изменений между группой КТ, не подвергнутых обработке, и КТ после ИП составляет примерно 4%, во втором — около 14% (т. е. на порядок больше).

При исследовании экспозиции Р-селектина (см. табл. 3) отмечено ее увеличение в результате хранения (в среднем до 22%), однако после ИП не отмечено статистически значимого его изменения. Во всех исследуемых группах в ответ на активацию получено адекватное повышение экспозиции P-селектина.

Выводы

1. ИП в КТ методом Intercept с применением амо-тосалена сопровождается статистически значимым

а

P

' ШШт Ш m Ш

' ______^ / / / / / /<^/ / / / / / ////// //////. //////, / // // //у//// / Х|

-40 -30 -20 -10 0 10 20 30 40

б

Рис. 2. Частотное распределение изменений (от исходного) значений экспозиции фосфатидилсерина активированных тромбоцитов в группах без ИП (а) и с ИП (б).

снижением количества тромбоцитов при отсутствии избирательного влияния ИП на фракции незрелых или крупных тромбоцитов.

2. Исследование маркеров активации выявило повышение экспозиции ФС при хранении КТ в первые 24 ч. Несмотря на то что КТ, подвергнутый ИП, так же хранился в течение суток, в образцах ПИ КТ экспозиция ФС сохранялась на исходном уровне. Исследование экспозиции P-селектина на тромбоцитах продемонстрировало рост этого маркера в результате хранения в то время как в группе ПИ КТ уровень экспозиции P-селектина сопоставим с исходным.

3. При исследовании экспозиции ФС после активации аналогом коллагена CRP в группе ПИ КТ выявлено снижение активационного ответа тромбоцитов. Исследование экспозиции P-селектина в ответ на активацию коллагеном в этой же группе показало сохранение адекватной активационной способности тромбоцитов.

4. Полученные результаты позволяют заключить, что ИП в КТ оказывает влияние на количество клеток в концентрате и на их функциональный статус. Для оценки клинической значимости выявленных изменений необходимо провести дополнительные клинические исследования, изучив скорректированный прирост тромбоцитов после трансфузии КТ, купирование геморрагического синдрома и частоту трансфузий.

ЛИТЕРАТУРА

1. McCullough J. Transfusion Medicine. New Jersey: Wiley-Blackwell; 2012.

2. Dumont L.J., Kleinman S., Murphy J.R., Lippincott R., Schuyler R., Houghton J., Metzel P. Screening of single-donor apheresis platelets for bacterial contamination: the PASSPORT study results. Transfusion. 2010; 50(3): 589—99.

3. Eder A. F., Kennedy J. M., Dy B. A., Notari E. P., Weiss J. W., Fang C. T., et al. Bacterial screening of apheresis platelets and the residual risk of septic transfusion reactions: the American Red Cross experience (2004—2006). Transfusion. 2007; 47(7): 1134—42.

4. Ramirez-Arcos S., Jenkins C., Dion J.,BernierF., Delage G., Goldman M. Canadian experience with detection of bacterial contamination in apheresis platelets. Transfusion. 2007; 47(3): 421—9.

35

Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 5

5. Ramlrez-Arcos S., Chin-Yee I., Hume H., Fearon M., Goldman M., Eckert K., et al. Afatalsepticshockcaseassociatedwithtransfusion-transmittedSerratiamarcescens. Transfusion. 2006; 46(4): 679—81.

6. Fuller A.K., Uglik K.M., Savage W.J., Ness P.M., King K.E. Bacterial culture reduces but does not eliminate the risk of septic transfusion reactions to single-donor platelets. Transfusion. 2009; 49(12): 2588—93.

7. Jacobs M.R., Good C.E., Lazarus H.M., Yomtovian R.A. Relationship between bacterial load, species virulence, and transfusion reaction with transfusion of bacterially contaminated platelets. Clin. Infect. Dis. 2008; 46(8): 1214—20.

8. Schmidt M., Karakassopoulos A., Burkhart J., Deitenbeck R., Asmus J., Muller T. H., et al. Comparison of three bacterial detection methods under routine conditions. Vox Sang. 2007; 92(1): 15—21.

9. Corash L. Inactivation of viruses, bacteria, protozoa and leukocytes in platelet and redcellconcentrates. Vox Sang. 2000; 78 (Suppl. 2): 205—10.

10. Alter H.J. Pathogen reduction: a precautionary principle paradigm. Transfus. Med. Rev. 2008; 22(2): 97—102.

11. Klein H.G., Anderson D., Bernardi M.J., Cable R., Carey W., Hoch J.S., et al. Pathogen inactivation: making decisions about new technologies. Report of a consensus conference. Transfusion. 2007; 47(12): 2338—47.

12. Corash L. Virus inactivation in cellular components. Vox Sang. 1996; 70 (Suppl. 3): 9—16.

13. Pineda A., McCullough J., Benjamin R.J., Cable R., Strauss R.G., Burgstaler E., et al. Pathogen inactivation of platelets with a photochemical treatment with amotosalenHCl and ultraviolet light: process used in the SPRINT trial. Transfusion. 2006; 46(4): 562—71.

14. Murphy S., Snyder E., Cable R., Slichter S.J., Strauss R.G., McCullough J., et al. Platelet dose consistency and its effect on the number of platelet transfusions for support of thrombocytopenia: an analysis of the SPRINT trial of platelets photochemically treated with amotosalenHCl and ultraviolet A light. Transfusion. 2006; 46(1): 24—33.

15. McCullough J., Vesole D.H., Benjamin R.J., Slichter S.J., Pineda A., Snyder E., et al. Therapeutic efficacy and safety of platelets treated with a photochemical process for pathogen inactivation: the SPRINT Trial. Blood. 2004; 104(5): 1534—41.

16. Vamvakas E.C. Meta-analysis of the studies of bleeding complications of platelets pathogen-reduced with the Intercept system. Vox Sang. 2012; 102(4): 302—16.

17. Погорелое В.М., Бескоровайнова В.Ю., Гемджян Э.Г., Алексанян М.Ж., Козинец Г.И. Адаптация тромбоцитопоэза доноров к процедурам тромбоцитафереза. Гематология и трансфузиология. 2012; 3(прилож.): 71.

18. ПогореловВ.М., Бескоровайнова В.Ю., ЛазаренкоМ.И., Гемджян Э.Г., Уртаев Б.М., Шишкинова З.Г. и др. Незрелые тромбоциты в периферической крови доноров до и после тромбоцитафереза. Вестник службы крови России. 2011; 2: 29—33.

19. Погорелов В.М., Бескоровайнова В.Ю., Лазаренко М.И., Гемджян Э.Г., Уртаев Б.М., Шишкинова З.Г. и др. Незрелые тромбоциты в периферической крови доноров до и после тромбоцитафереза. Методическое пособие. М.: РИО МГМСУ; 2011.

20. Пантелеев М.А., Васильев С.А., Атауллаханов Ф.И., Воробьев А.И., ред. Практическая коагулология М.: Практическая медицина; 2011: 32—5.

21. Heemskerk J. W., Bevers E. M., Lindhout T. Platelet activation and blood coagulation. Tromb. Haemost. 2002; 88(2): 186—93.

22. Sims P.J., Wiedmer T., Esmon C.T., Weiss H.J., Shattil S.J. Assembly of the platelet prothrombinase complex is linked to vesiculation of the platelet plasma membrane. Studies in Scott syndrome: an isolated defect in platelet procoagulant activity. J. Biol. Chem. 1989; 264(29): 17049—57.

23. Kotova Y. N., Ataullakhanov F. I., Panteleev M. A. Formation of coated platelets is regulated by the dense granule secretion of adenosine 5’diphosphat acting via the P2Y12 receptor. J. Thromb. Haemost. 2008; 6(9): 1603—5.

Поступила 04.09.12

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 617-089.163:615.273.5

ТРОМБОЭЛАСТОГРАФИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА И ЭФФЕКТИВНОСТИ ЕЕ КОРРЕКЦИИ ПЕРЕД ОПЕРАТИВНЫМИ ВМЕШАТЕЛЬСТВАМИ У БОЛЬНЫХ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ СИСТЕМЫ КРОВИ

А.Ю. Буланов, В.М. Городецкий, О.В. Щербакова, И.Б. Рязанова, Н.Н. Судейкина, Е.М. Шулутко,

Е.Б. Орел, С.А. Васильев, К.И. Данишян, А.В. Гржималовский, Е.Е. Карпов, Т.Ю. Полянская

ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России

Резюме. Проанализировано состояние гемостаза у пациентов с заболеваниями системы крови после проведение стандартной предоперационной гемостазиологической подготовки. В качестве метода исследования выбран интегральный метод контроля гемостаза — тромбоэластография. Выявлено отсутствие компенсации состояния системы гемостаза у 23,2% больных (у 15,8% отмечена склонность к кровоточивости, у 7,3%, напротив, — тенденция к повышенному тромбообразованию). Причинами нарушений гемостаза являлись как недостаточная подготовка (у обеих категорий больных), так и избыточная гемостатическая терапия у пациентов "геморрагических нозологий". Наиболее проблемными категориями больных по результатам исследования оказались пациенты, страдающие миелодиспласти-ческим синдромом, болезнью Гоше, апластической анемией и болезнью Виллебранда. Минимальное количество больных с "некомпенсированным гемостазом" выявлено среди больных гемофилией.

Ключевые слова: гематологическая хирургия, заболевания системы крови, гемостаз, тромбоэластография, предоперационная подготовка

THROMBOELASTOGRAPHIC EVALUATION OF THE HEMOSTASIS SYSTEM AND EFFICIENCY OF ITS CORRECTION BEFORE SURGICAL INTERVENTIONS IN HEMATOLOGICAL PATIENTS

A.Yu.Bulanov, V.M.Gorodetsky, O.V.Shcherbakova, I.B.Ryazanova, N.N.Sudeikina, E.M.Shulutko, E.B.Orel, S.A.Vasilyev, K.I.Danishyan, A.V.Grzhimalovsky, E.E.Karpov, T.Yu.Polyanskaya

Hematology Research Center, Moscow

Summary. The hemostasis system was studied in hematological patients after standard preoperative hemostasiological treatment. The study was carried out by thromboelastography - an integral hemostasis

36