Изотипический состав и эпитопная специфичность аутоантител против тиреоглобулина

Различия в содержании сывороточной формы СР38 антигена при иммунных нарушениях разной этиологии

Пткцьша Ю.С., Лебедев М.Ю., Королева В.Б.,

Пупша С. А., Борпякова И.А., Крыжанова М.А., Варшавская Л.В., Мартынова Т.Г., Кораблев С.Б., Барышников А.Ю., Новиков В.В.

Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии Минздрава РФ, Россия, Нижегородский НИИ травматологии и ортопедии Митдрава РФ. России, Нижегородская государственная медицинская академия, Россия Онкологический научный центр РАМН Москва, Россия

С038 антиген является мембранным активационным маркером клеток иммунной системы. Он обладает внеклеточной ферментативной активностью, связанной с образованием циклической АДФ-рибозы, служащей мощным мобилизируюишм агентом внутриклеточного кальция. Показано, что С038 антиген, как и ряд других дифференцировочных антигенов, может находиться в растворимой форме. Предполагается, что растворимый С038 антиген обладает функциональной активностью, имеющей иммунорегуляторное значение. В представленной работе приводятся данные о содержании растворимого С038 антигена при заболеваниях аутоиммунной природы, некоторых вирусных инфекциях, гематологических заболеваниях и при термических ожогах.

С помощью моноклональных и поликлональных антител иммуноферментным методом оценивали содержание растворимого С1338 антигена в сыворотке крови здоровых доноров, больных ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, аутоиммунным гепатитом, вирусными гепатитами В и С, миеломнои болезнью, хроническим лимфолейкозом, а также больных ожоговой болезнью. Уровень растворимого СИЗ8 антигена выражали в условных единицах. Обнаружено, что при ревматоидном артрите, системной красной волчанке и при аутоиммунном гепатите содержание растворимого С038 антигена повышено в сравнении с нормой в 2-3 раза. В группах больных миеломной болезнью и хроническим лимфолейкозом уровень растворимого С038 антигена не имел статистически достоверных отличий от нормы. Увеличение количественного содержания растворимого СЭ38 антигена было обнаружено также в сыворотке крови больных острым и хроническим вирусным гепатитом В. У больных острым и хроническим вирусным гепатитом С количество растворимого С038 антигена находилось в пределах нормы, при этом имело тенденцию к снижению при хронической форме вирусного гепатита С. Больные ожоговой болезнью, которые характеризуются развитием иммуносупрессорных механизмов, в основной своей массе (15 человек из 17) имели нормальный уровень растворимого СЭ38 антигена. Исключение составили двое больных, у которых

уровень растворимого С038 был резко понижен. У этих больных был зарегистрирован летальный исход.

Полученные результаты свидетельствуют, что содержание растворимой формы СЭ38 антигена может выступать в качестве показателя активации иммунной системы - в частности, может выступать как один из маркеров аутоиммунных процессов, протекающих в организме. Вероятно, раство-римый СЭ38 антиген принимает участие в реализации механизмов супрессии иммунной системы в ответ на ее чрезмерную активацию. Можно предполагать также, что пониженное содержание растворимого С[338 антигена указывает на истощение защитного потенциала иммунной системы.

Изотипический состав и эпитопная специфичность аутоантител против тиреоглобулина

Руденко И.Я., Львова О.А., Василевский Д.И.1, Романчпшен А.Ф.1, Климович В.Б.

Центральный научно-исследовательский рентгенорадиологический институт М3 РФ, Санкт-Петербург, 'С.-Петербургская Педиатрическая медицинская академия

В сыворотке большинства здоровых людей встречаются аутоангитела против т иреоглобулина (аД'Гг). При аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы (ЩЖ) их содержание увеличивается в 10-100 раз. Функции аАТг в здоровом организме и их роль в развитии патологических процессов изучены недостаточно. Созданные в лаборатории гибридомной технологии ЦНИРРИ панели моноклональных антител (МКАТ) против тиреоглобулина (ТГ) и против иммуноглобулинов (1”) человека дают возможность исследовать разнообразие аАТг.

Цель работы состояла в изучении с помощью ряда вариантов иммуноферментного анализа (ИФА) изогипичес-кой принадлежности и эпитопной специфичности аАТг, синтезируемых при аутоиммунных заболеваниях ЩЖ.

Объектом исследования служили сыворотки 83 пациентов, страдающих диффузно-токсическим зобом (ДТЗ) или аутоиммунным тиреоидитом (АИТ). В качестве антигена использовали ТГ, выделенный из ткани ЩЖ человека и очищенный методом гель-фильтрационной хроматографии. Антиген адсорбировали в лунках планшетов для иммуноанализа из раствора с рН=9,5. Суммарный титр аАТг в сыворотках пациентов определяли методом иммуносорбснтного твердофазного ИФА при помощи смеси меченых пероксидазой МКАТ против легких цепей ^ каппа- и лямбда-типа. Для определения изотипи-ческого состава аАТг использовали конъюгаты МКАТ против классов и подклассов 1ц человека. Эпитопную специфичность аАТг изучали методом конкурентного ИФА с мечеными пероксидазой МКАТ против ТГ. Было использовано пятнадцать МКАТ, распознающих на молекуле ТГ 12 изолированных антигенных участков.

При изучении изотипического состава установлено, что аАТг класса 1§й присутствуют почти во всех иссле-

дованных образцах и представлены всеми четырьмя подклассами с преобладанием IgG4. Практически во всех сыворотках обнаружены аАТг класса lgM. В шести образцах выявлены аА1 г класса IgA.

При исследовании конкуренции МКАТ с аАТг было установлено, что только одно из пятнадцати МКАТ (продукт гибридомного клона 1F10) интерферировало с аАТг сывороток пациентов, страдающих АИТ или ДТЗ.

Конкурирующие с МКАТ 1F10 аАТг были обнаружены в сыворотках 44% обследованных пациентов. Среди аАТг, направленных к эпитопу 1FI0, обнаружены молекулы, относящиеся к IgA и ко всем четырем подклассам IgG, но не к IgM.

Полученные данные указывают на то, что при аутоиммунных заболеваниях ЩЖ популяция синтезируемых аАТг не рестриктирована по изо- и субизотипу. Преобладание аАТг подкласса IgG4, как известно, является следствием длительной антигенной стимуляции и не может рассматриваться как признак о граничения продукции субизотипа. В то же время, при АИТ и ДТЗ аАТг, но крайней мере, частично рестриктироваиы поэпитопной специфичности.

Исследование парапротеионов с помощью моноклональных антител

Самойловпч М.П., Грязева И.В., Крутецкал И.Ю., Климович В.Б., Баратова Д.А.'

Центральный научно-исследовательский рентгенорадиологический институт М3 РФ, г. Санкт-Петербург, 'Национальный госпиталь Киргизской Республики, г. Бишкек

Традиционные методы исследования сыворотки при диагностике парапротеинемнй включают иммунодиффузию, электрофорез и иммунофиксацию. Эти методы требуют высокоактивных, стандартных и специфичных антисывороток, занимают много времени, а получаемая информация носит качественный или полуколиче-ственный характер.

Цель работы состояла в разработке, на основе МКАТ, методов иммупохимической диагностики парапротеи-немий. Панель МКАТ против типов, изотипов и субизо-типов иммуноглобулинов (Ig) человека создана в лаборатории гибридомпой технологии ЦНИРРИ и включает реагенты, которые распознают консервативные детерминанты, присутствующие как на молекулах нормальных Ig, так и на парапротеинах.

Материалом исследования служили образцы сыворотки крови пациентов, у которых предполагали наличие парапротеинемии. Дополнительно исследовали образцы мочи. Контролем служил материал от здоровых доноров.

На первом этапе обследования в сыворотках определяли концентрации IgG, IgM, IgA методом двухцентрового ИФА, а также соотношения Ig каппа- и лямб-да-гипов. Во многих случаях этого было достаточно,

чтобы выявить клональное преобладание в пределах одного из классов I”. При неопределенности результата на втором этапе с помощью двухцентрового ИФА оценивали концентрации ДО 1. ДО2. ДОЗ.ДО4 и соотношение каппа/лямбда 1ц в пределах каждого подкласса. По результатам этого исследования выявляли клональное преобладание 1ц минорных подклассов, которое не сказывалось существенно на обшей концентрации ДО, а также устанавливали дефицит остальных подклассов ДО. Редкие варианты ДО- и ДО-пара-протеинемий могут быть выявлены также с помотыо двухцентрового ИФА.

Концентрации свободных легких цепей в сыворотке крови и в моче определяли методом двухцентрового ИФА на основе МКАТ, который не требует концентрирования образцов мочи или освобождения сыворотки от целостных молекул 1ц. Метод позволял выявить парапротеинемии Бенс-Джонса, получить информацию об уровне дифференцировки клеток доминирующего клона, а также оценить сохранность фильтрующей функции почек.

Описанные выше методы могутбьггь неэффективными, если парапротеин представлен тяжелыми цепями или мутантными молекулами, утратившими эпитоп, распознаваемый одним из МКАТ. В таком случае проводят прямой ИФА. Парапротепны адсорбируют из разбавленных сывороток на твердой фазе и затем выявляют с помощью меченых МКАТ. При этом можно использовать смешанный конъюгат, содержащий МКАТ против разных эпитопов молекулы 1” одного класса.

Разработанные на основе МКАТ приемы иммуно-химического исследования позволяют выявить парапротеин, определить составляющие его легкие и тяжелые цени, а также оценить степень вторичного иммунодефицита.

Иммунологические аспекты развития осложнений реконструктивных вмешательств на абдоминальной аорте и магистральных артериях

Светлнков А. В., Барсуков А.Е., Гайкова и Л.Б., Крапнвка Н.А.

Государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова Санкт-Петербург, Россия

Цель н задачи: Цель работы заключалась в сравнительной оценке состояния иммунологической реакгив-ности оперированных пациентов с возникшими в различные сроки ложными аневризмами анастомозов, а также больных с поздними (после 1 года) реокклюзиями и благополучным течением послеоперационного периода.

Материалы и методы. Обследовано 3 группы пациентов. I фуппу составили 35 больных с реокклюзиями в аор-топодвздошно-бедреином и бедренно-подколенном сег-