2-(2,4-ДИХЛОРАНИЛИНО)-1,4-БИС(4-МЕТИЛФЕНИЛ)-2-БУТЕН-1,4-ДИОН, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
2-(2,4-DICHLORANILINO)-1,4-BIS(4-METHYLPHENYL)-2-BUTEN-1,4-DION, POSSESSING ANTIMICROBIAL ACTIVITY

Изобретение относится к области органической химии, к производным 1,4-дикетонов, а именно к неизвестному ранее новому биологически активному веществу - 2-(2,4-дихлоранилино)-1,4-бис(4-метилфенил)-2-бутен-1,4-диону формулы 1:
которое может найти применение в медицине в качестве лекарственного противомикробного препарата.
Ближайшими структурными аналогами заявляемого соединения являются аминовинилдикетоны 2, которые имеют с заявляемыми соединениями 1 одинаковый аминовинилдикетоновый фрагмент [Е.И.Титова, Л.Д.Гаврилова, Р.Л.Болынедворская, Л.И.Верещагин. Журнал органической химии, 1969, том 5, вып.12, с.2113-2119].
Структурными аналогами соединений 1 так же можно считать замещенные 2-амино-4-арил-4-оксо-2-бутеновые кислоты и их эфиры 3, проявляющие противомикробную и анальгетическую активность [Е.Н.Козьминых, А.О.Беляев, В.О.Козьминых, P.P.Махмудов, Т.Ф.Одегова. Химико-фармацевтический журнал, 2002, т.36, №11, с.28-30. Н.В.Колотова, В.О.Козьминых, Э.В.Долбилкина, Е.Н.Козьминых, В.Э.Колла, С.А.Шеленкова. Химико-фармацевтический журнал, 1998, т.32, №9, с.32-35].
Все приведенные аналоги 2, 3 содержат общий с заявляемыми соединениями 1 аминовинилкетоновый фрагмент. Отличия состоят в том, что в качестве заместителей R и R' в заявляемых соединениях находится n-толлильный заместитель, R''=Н, в качестве R''' - 2,4-дихлораминофенильный заместитель.
В качестве эталона сравнения нами взяты противомикробные препараты - цефепим [Яковлев С.В., Рус. мед. журнал, 1998, т.6, №22, с.1449-1457] и хлоргексидина биглюконат [Падейская Е.Н., Инф. и антимикроб. терап., 2001, №5, с.105-155], широко применяемые в лечебной практике антибиотик и дезинфектант.
Цель данного изобретения - синтез неописанного ранее 2-(2,4-дихлоранилино)-1,4-бис(4-метилфенил)-2-бутен-1,4-диона, обладающего противомикробным действием.
Поставленная цель достигается получением 2-(2,4-дихлоранилино)-1,4-бис(4-метилфенил)-2-бутен-1,4-диона и изучением его противомикробного действия.
Пример получения заявляемого соединения 1:
-1
1
3
22
15
2
2
Смесь эквимолярных количеств дитолуоилацетилена и 2,4-дихлоранилина кипятили в бензоле в течение 5 мин. Растворитель упаривали. Образовавшийся осадок перекристаллизовывали из четыреххлористого углерода. Выход 75%. Т.пл. 147-148°С. ИК спектр, см: 1668 (С(1)=0), 1605 (С(4)=0, С=С). Спектр ЯМР Н, м.д.: 2.36 (с, 6Н, 2Ме); 6.13 (с, 1Н, СН); 6.97 (м, 7Н, Ar); 7.76 (д, 4Н, Н(2), Н(6), J=8.4); 12.35 (с, 1Н, NH). Найдено, %: С 66.72; Н 3.80; Cl 17.85; N 3.50. CHClNO. Вычислено, %: С 66.68; Н 3.82; Cl 17.89; N 3.53.
Полученное соединение 1 представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в спиртах, хлороформе, толуоле, диметилсульфоксиде и диметилформамиде, нерастворимое в алканах и воде.
Заявленное соединение было исследовано на наличие у него противомикробной активности.
Определение бактериостатической активности проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ - М., 2000., с.264-273]. Для всех исследуемых соединений были определены МПК в отношении фармакопейных штаммов: S. aureus АТСС 6538-Р, E. coli АТСС 25922, С. albicans АТСС 885-653, P. aerugenosa АТСС 9027, В. cereus АТСС 8035, В. subtilis АТСС 6633, S. epidermidis АТСС 14990. Посевы производили в мясопептонный бульон, рН 7,0 с различной концентрацией испытуемых соединений. Культуры выращивали в пробирках на скошенной агаризированной среде (мясопептонный агар). Для определения противомикробной активности использовалась 18-20-часовая культура. Для приготовления рабочей взвеси микробов производили смыв выросшей культуры изотоническим раствором натрия хлорида и устанавливали плотность микробной взвеси по стандарту мутности 5 единиц. Далее из полученной микробной взвеси (500 млн. м. т./мл. готовили рабочий раствор бактерий с концентрацией 5 млн. м. т./мл. Данную взвесь микробов вносили в количестве 0,1 мл в пробирки с серийными разведениями изучаемого препарата. Таким образом, микробная нагрузка при определении ПМА составила 250000 м. т./мл. Изучаемое соединение в количестве 0,05 г растворяли в 5 мл диметилсульфоксида, 1 мл полученного разведения 1:100 соединяли с 4 мл мясопептонного бульона (1:500). Далее готовили ряд серийных разведений соединения с двукратно уменьшающей концентрацией.
Учет результатов производили через 18-20 часов выдержки контрольных и опытных пробирок в термостате при температуре 37°С. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) устанавливали по отсутствию признаков роста на питательной среде: последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон) соответствует МПК препарата в отношении данного штамма. Бактериостатический эффект исследуемых соединений сравнивали с действием цефепима [Яковлев СВ., Рус. мед. журнал, 1998, т.6, №22, с.1449-1457], хлоргексидина биглюконата [Падейская Е.Н., Инф. и антимикроб, терап., 2001, №5, с.105-155].
50
50
Острую токсичность (ЛД) заявленного соединения изучали на белых лабораторных мышах обоего пола массой 19-20 г. Исследуемое соединение вводили однократно в желудок в виде крахмальной слизи в объеме 1480, 2960, 4440, 5920, 7400 мг/кг, соответственно, наблюдение за животными проводили в течение 10 суток. Статистическую обработку результатов проводили по Прозоровскому В.В. сравнением средней смертельной дозы (ЛД) при Р=0,05 [Прозоровский В.В., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Фармакол. и токсикол., 1978, №4, с.497-502]. Результаты исследований представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, соединение 1 по противомикробной активности сопоставимо с активностью хлоргексидина биглюконата по отношению к S.aureus и E.coli. Соединение 1 по отношению к С.albicans, спорообразующим палочкам, S.epidermidis уступает препаратам сравнения. По отношению к P.aerugenosa активностью не обладает. Соединение 1 по классификации Измерова Н.Ф. [Измеров Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном введении, М., Медицина, 1977, с.197] относится к классу практически нетоксичных препаратов.
Таким образом, 2-(2,4-дихлоранилино)-1,4-бис(4-метилфенил)-2-бутен-1,4-дион 1 проявляет выраженную противомикробную активность и является практически нетоксичным. Следовательно, заявляемое соединение 1 может найти применение в медицине в качестве противомикробного лекарственного средства.
Таблица 1
Противомикробная активность (мкг/мл) и острая токсичность соединения 1
Соединение
S.aureus
Е.coli
Р.aerug.
С.albic.
S.epid.
В.cereus
В.subt.
LD<sub>50</sub>, мг/кг
1
2,0-1,0
2,0-1,0
-
31-62
125
31
250
2700-3800
Цефепим
0,125-16
0,015-2,0
0,03-16
-
0,5-62
-
-
-
Хлоргексидина бигл-т
1-2
1-5
10-500
7-15
-
1-2
1-3
-
Источники информации
1. Измеров Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном введении, М., Медицина, 1977, с.197.
2. Козьминых Е.Н., Беляев А.О., Козьминых В.О., Махмудов P.P., Одегова Т.Ф. Химико-фармацевтический журнал, 2002, т.36, №11, с.28-30.
3. Колотова Н.В., Козьминых В.О., Долбилкина Э.В., Козьминых Е.Н., Колла В.Э., Шеленкова С.А. Химико-фармацевтический журнал, 1998, т.32, №9, с.32-35.
4. Падейская Е.Н., Инф. и антимикроб, терап., 2001, №5, с.105-155.
5. Прозоровский В.В., Прозоровская М. П., Демченко В.М. Фармакол. и токсикол., 1978, №4, с.497-502.
6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ - М., 2000, с.264-273.
7. Титова Е.И., Гаврилова Л.Д., Болыдедворская Р.Л., Верещагин Л.И. Журнал органической химии, 1969, том 5, вып.12, с.2113-2119.
8. Яковлев С.В. Русский медицинский журнал - 1998. - т.6, №22. - с.1449-1457.