АНАЛИТИЧЕСКОЕ УСТРОЙСТВО, ВКЛЮЧАЮЩЕЕ В СЕБЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНЫЕ ЗОНЫ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ РЕАКЦИЙ
ANALYTIC DEVICE, INCLUDING SUCCESSIVE ZONES FOR CARRYING OUT REACTIONS

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к усовершенствованному устройству с латеральным потоком и способу, относящемуся к этому устройству.
Уровень техники по изобретению
Неточность результата является важной мерой качества результата. Термины «неточность результата» и «неточность измерения» включают в себя оценку точности способа, приведшего к результату или измерению. Все части способа или измерения, которые возможно влияют на качество, должны быть рассмотрены. В случае, касающемся клинического анализа или теста, информация об неуверенности в результатах предпочтительно должна быть доступна.
Европейское Сообщество по Аккредитации, EA, назвала GUM (Guide to Expression of Uncertainty in Measurement, International Organisation of Standardisation, ISO, Geneva, 1995) [Руководство по выражению неуверенности при измерениях, Международная организация по стандартизации, Женева, 1995 год] «главным документом» для оценки неточности измерения. Этот документ введен сюда во всей полноте посредством ссылки.
Документ PCT/SE03/00919 относится к микрожидкостной системе, включающей в себя подложку и обеспеченную на указанной подложке по меньшей мере одну дорожку для протекания потока, включающую в себя большое число микростолбиков, выступающих вертикально из указанной подложки, при этом промежуток между микростолбиками является достаточно малым для того, чтобы индуцировать капиллярное действие в нанесенной жидкой пробе и принудить указанную жидкость двигаться. В нем раскрыто, что это устройство может включать в себя более плотную зону, которая может действовать как сито, препятствующее, например, прохождению клеток. Также в нем раскрыто воплощение с микроструктурами, где форма, размер и/или расстояние между центрами образует градиент, так что движение фракции пробы, типа клеток и т.п. может быть задержано или выборочно разделено.
В документе PCT/SE2005/000429 показано устройство и способ для отделения компонента в жидкой пробе перед обнаружением аналита в указанной пробе, где проба добавляется в приемную зону на подложке, причем указанная подложка также возможно включает в себя зону проведения реакции, транспортную или инкубационную зону, соединяющую приемную зону и зону проведения реакции, соответственно, образующие дорожку для протекания потока на подложке, причем указанная подложка является непористой подложкой, и по меньшей мере часть указанной дорожки для протекания потока состоит из выступающих областей, по существу вертикальных по отношению к поверхности указанной подложки и имеющих высоту, диаметр и промежутки между соседними выступами такие, чтобы достигался латеральный капиллярный поток указанной жидкой пробы в указанной зоне, и где обеспечивалось средство для разделения рядом с зоной для приема пробы. В нем раскрывается воплощение, где удаляются красные кровяные клетки.
Документ WO/2005/118139 касается устройства для обращения с жидкими пробами, включающего в себя дорожку для протекания потока, имеющую по меньшей мере одну зону для приема пробы и транспортную или инкубационную зону, причем указанные зоны, соединенные зоной или включающие в себя зону, имеющую выступы, по существу вертикальные по отношению к ее поверхности; указанное устройство снабжено стоком с емкостью для приема указанной жидкой пробы, указанный сток включает в себя зону, имеющую выступы, по существу вертикальные к ее поверхности, и указанный сток приспособлен для реагирования на внешнее влияние, регулирующее его емкость, для приема указанной жидкой пробы. В документе раскрыто, что устройство может быть использовано, когда следует удалить такое дисперсное вещество, как клетки, из объема пробы. Утверждается, что красные кровяные клетки могут быть отделены без значительного разрушения клеток.
В аналитических устройствах с латеральным потоком, в которых результат считывается в зоне реакции, может при некоторых обстоятельствах возникать разброс в результатах, например, из-за изменений в осаждении реагентов на аналитическое устройство, связывания реагентов с аналитическим устройством, высыхания реагентов на аналитическом устройстве и считывания сигналов от аналитического устройства.
В WO 2008/137008 фирмы Claros Diagnostics Inc. раскрывается устройство, имеющее реагент, расположенный в микрожидкостном канале микрожидкостной системы в подложке. Жидкостный коннектор включает в себя дорожку для жидкости со входом для жидкости и выходом для жидкости, соединенными с выходом и входом микрожидкостных каналов, чтобы обеспечивалась жидкостная связь соответственно между дорожкой и каналами. Дорожка содержит пробу или реагент, размещаемый до соединения коннектора с подложкой. В этом документе раскрываются воплощения, где область проведения реакции включает в себя по меньшей мере две изогнутые канальные области, соединенные последовательно. Раскрывается, что детектирующие зоны могут быть соединены последовательно. Раскрывается, что детектируемый сигнал может быть разным в разных частях области. Проблема в WO 2008/137008 состоит в том, что это устройство все еще чувствительно к изменениям в таких факторах, как осаждение реагентов на аналитическое устройство, связывание реагентов с аналитическим устройством, высыхание реагентов на аналитическом устройстве и считывание сигнала от аналитического устройства.
В документе США 2008273918 раскрываются жидкостные коннекторы, способы и устройства для проведения анализов (например, иммуноанализов) в микрожидкостных системах.
В WO 01/02093 раскрывается изделие для детектирования, включающее в себя пленочный слой для управления жидкостью, имеющий по меньшей мере одну микроструктурированную основную поверхность с большим числом микроканалов в ней.
Хотя аналитические устройства с латеральным потоком по известному уровню этой техники могут применяться удовлетворительно, всегда есть потребность в улучшенных устройствах и способах, где точность увеличена и разброс результатов уменьшен. Также имеется потребность в устройствах и способах, где может быть обеспечена оценка неточности.
Проблемы в такой технике известного уровня включают разброс при осаждении реагентов в зоне проведения реакции на аналитическом устройстве, при связывании реагентов, высыхании реагентов и считывании сигнала от аналитического устройства. Такие разбросы, а возможно и другие, могут вносить изменения в сигнал отклика, который считывается с аналитического устройства.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Целью настоящего изобретения является устранение по меньшей мере некоторых недостатков известного уровня техники и обеспечение улучшенного устройства, улучшенной системы и улучшенного способа.
В первом аспекте предлагается аналитическое устройство, включающее в себя подложку, имеющую по меньшей мере одну зону для добавления пробы, по меньшей мере один сток и по меньшей мере одну дорожку для протекания потока, соединяющую эту по меньшей мере одну зону для добавления пробы и этот по меньшей мере один сток, причем эта по меньшей мере одна дорожка для протекания потока включает в себя выступы, по существу вертикальные по отношению к поверхности указанной подложки и имеющие высоту (Н), диаметр (D) и промежуток между соседними выступами (f1, f2), так чтобы достигался латеральный капиллярный поток жидкой пробы, при этом устройство включает в себя по меньшей мере две последовательные зоны для проведения реакций, причем каждая зона для проведения реакции приспособлена для облегчения измерения реагирования, возникающего от одного и того же аналита, и по меньшей мере две зоны для проведения реакции расположены так, чтобы обеспечивался расчет концентрации по меньшей мере одного аналита.
Во втором аспекте предлагается система, включающая в себя аналитическое устройство, описанное выше, и считывающее устройство, предназначенное для считывания сигнала отклика от каждой из по меньшей мере двух последовательно соединенных зон для проведения реакции, причем считывающее устройство включает в себя микропроцессор, предназначенный для расчета концентрации на основании измеренных сигналов отклика.
В третьем аспекте предлагается способ проведения анализа, включающий в себя этапы:
а) обеспечение аналитического устройства, включающего в себя по меньшей мере одну зону для добавления пробы, по меньшей мере один сток и по меньшей мере одну дорожку для протекания потока, соединяющую эту по меньшей мере одну зону для добавления пробы и этот по меньшей мере один сток, причем эта по меньшей мере одна дорожка для протекания потока включает в себя выступы, по существу вертикальные по отношению к поверхности указанной подложки и имеющие высоту (Н), диаметр (D) и промежуток между соседними выступами (f1, f2), так чтобы достигался латеральный капиллярный поток жидкой пробы, при этом устройство включает в себя по меньшей мере две последовательно расположенные зоны для проведения реакции (зоны реакции), причем каждая зона для проведения реакции предназначена для облегчения измерения сигнала отклика, возникающего от одного и того же аналита,
b) измерения сигнала отклика в каждой зоне для проведения реакции, причем сигналы отклика возникают от одного и того же аналита, и
с) расчета концентрации по меньшей мере одного аналита на основании измеренных по меньшей мере двух сигналов отклика.
Другие аспекты и воплощения определены в приложенной формуле изобретения.
Описывается аналитическое устройство с латеральным потоком и несколькими последовательно расположенными зонами для проведений реакций, где считываются сигналы отклика. Аналогичные, но не обязательно одинаковые сигналы отклика, считываются в нескольких зонах для проведения реакций, и таким образом, например, могут быть рассчитаны концентрация аналита и оценка неточности на основании измеренных сигналов отклика. Наиболее часто измеренные величины в последовательно расположенных зонах для реакций не являются идентичными в зависимости от факторов, включающих в себя, но без ограничения ими, концентрацию пробы, типы анализа, количества пробы, расстояние между последовательно расположенными зонами для реакций. Отличительные особенности включают в себя то, что несколько сигналов отклика считываются по меньшей мере в двух последовательно соединенных зонах для реакций. Эти по меньшей мере две величины используются в расчете конечного результата, включая оценку неточности.
Преимущества заключаются в том, что обеспечиваются дальнейшие возможности контролировать сигналы, которые могут быть считаны с различных зон для реакций. К тому же может быть рассчитана более точная величина. Разбросы могут возникать из-за таких переменных, без ограничения перечисленными, как осаждение, связывание, сушка и считывание. Эффекты таких разбросов уменьшаются благодаря этому изобретению. Изобретение позволяет оценивать неточность результата.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Перед тем как изобретение будет раскрыто и подробно описано следует учитывать, что оно не ограничивается конкретными соединениями, конфигурациями, этапами способа, подложками и материалами, раскрытыми здесь, так как такие соединения, конфигурации, этапы способа, подложки и материалы могут несколько изменяться. Также следует учитывать, что применяемая здесь терминология используется в целях описания только конкретных воплощений и не предназначена для ограничения, так как объем настоящего изобретения ограничивается только пунктами приведенной формулы изобретения и их эквивалентами.
Следует отметить, что используемые в этой спецификации и в приложенной формуле изобретения формы единственного числа включают в себя значения множественного числа, если контекст не будет четко диктовать противоположное значение.
Если ничего другого не определено, то подразумевается, что любые термины и научная терминология, используемые здесь, имеют значения, общепонятные для специалистов в области техники, к которой относится это изобретение.
Термин «около», используемый в связи с численной величиной везде в описании и формуле изобретения, означает диапазон точности, знакомый и приемлемый для специалиста в этой области. Указанный диапазон составляет ±10%.
Используемый везде в формуле изобретения и описании термин «анализ» означает процесс, в котором определяется по меньшей мере один аналит.
Используемый везде в формуле изобретения и в описании термин «аналитическое устройство» означает устройство, которое используется для анализа пробы. Диагностическое устройство является не ограничивающим примером аналитического устройства.
Используемый везде в формуле изобретения и описании термин «аналит» означает вещество или химический, или биологический компонент, одно или больше свойств которого определяются в аналитической процедуре. Аналит или сам компонент часто не может быть измерен, но его измеряемое свойство может быть измерено. Например, можно измерить концентрацию аналита.
Используемый в формуле изобретения и описании термин «капиллярный поток» означает поток, индуцируемый главным образом капиллярной силой.
Используемый в формуле изобретения и описании термин «дорожка для протекания потока» означает область на устройстве, где может возникать поток жидкости между различными зонами.
Используемый в формуле изобретения и описании термин «открытый», применяемый в связи с капиллярным потоком, означает, что система открыта, т.е. система полностью без крышки, или если имеется крышка или частичная крышка, то она не находится в капиллярном контакте с жидкостью пробы, т.е. крышка не участвует в создании капиллярной силы.
Используемый в формуле изобретения и описании термин «промежуток между соседними выступами» означает расстояние между соседними выступами.
Используемый в формуле изобретения и описании термин «зона реакции» означает область на аналитическом устройстве, где молекулы в пробе могут быть обнаружены.
Используемый в формуле изобретения и описании термин «сигнал отклика» означает измеримое явление, возникающее в зоне реакции на аналитическом устройстве. Сигнал отклика включает в себя, но не только, свет излучаемый флуоресцирующими молекулами.
Используемый в формуле изобретения и описании термин «зона для добавления пробы» означает зону, где добавляется проба.
Используемый в формуле изобретения и описании термин «сток» означает область с емкостью для приема жидкой пробы.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Изобретение более подробно описывается со ссылками на чертежи, в которых:
Фиг.1 является схематичным изображением жидкостного чипа с зоной А для добавления пробы, одной дорожкой для протекания потока с тремя последовательно соединенными зонами В для реакций и стоком С.
Фиг.2 является схематичным изображением жидкостного чипа с зоной А для добавления пробы, двумя дорожками для протекания потока, причем каждая дорожка для протекания потока имеет две последовательно соединенные зоны В для реакций и сток С.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
В первом аспекте предлагается аналитическое устройство, включающее в себя подложку, имеющую по меньшей мере одну зону для добавления пробы, по меньшей мере один сток и по меньшей мере одну дорожку для протекания потока, соединяющую эту по меньшей мере одну зону для добавления пробы и этот по меньшей мере один сток, причем эта по меньшей мере одна дорожка для протекания потока включает в себя выступы, по существу вертикальные по отношению к поверхности указанной подложки и имеющие высоту (Н), диаметр (D) и промежуток между соседними выступами (f1, f2), так чтобы достигался латеральный капиллярный поток жидкой пробы, при этом устройство включает в себя по меньшей мере две последовательно расположенные зоны для реакций, где каждая зона для реакции предназначена для облегчения измерения реагирования, исходящего от одного и того же аналита, и где эти по меньшей мере две зоны для реакций расположены так, чтобы можно было обеспечить расчет концентрации по меньшей мере одного аналита.
Точное положение этих по меньшей мере двух зон для реакций может изменяться, могут быть предложены различные позиции, если только есть возможность рассчитать концентрацию по меньшей мере одного аналита. Тот факт, что эти по меньшей мере две зоны для реакций расположены для обеспечения расчета концентрации по меньшей мере одного аналита, означает, что эти по меньшей мере две зоны для реакций или расположены в местах, где измеренные реагирования одного и того же аналита приблизительно одинаковы в пределах неточности измерения, или они расположены так, что измеренные сигналы отклика от одного и того же аналита различаются, но предсказуемым образом и поэтому концентрация может быть рассчитана. Одним примером последнего случая являются две зоны для реакций, расположенные последовательно с малым расстоянием между ними. Первая зона может создавать один измеряемый сигнал отклика, а вторая может создавать меньший измеряемы0й сигнал отклика в зависимости от таких факторов, как расстояние между этими по меньшей мере двумя зонами для реакций и используемое аналитическое устройство. Эксперименты могут, например, привести к заключению, что измеренный сигнал отклика во второй зоне всегда составляет некоторую долю от измеренного сигнала отклика в первой зоне. В одном воплощении эти по меньшей мере две зоны для реакций расположены так, что измеренные сигналы отклика от одного и того же аналита являются одинаковыми в пределах неточности измерения.
В одном воплощении зона для реакции, расположенная ближе всего к зоне для добавления пробы, имеет площадь, которая отличается от площади любой одной из других зон (зоны) для реакций. В одном воплощении зона для реакции, ближе всего расположенная к зоне для добавления пробы, имеет площадь, которая меньше площади любой одной из другой зоны (зон) для реакции. В одном воплощении зона для реакции, ближе всего расположенная к зоне для добавления пробы, имеет самую малую площадь, и зона для реакции, расположенная дальше всего от зоны для добавления пробы, имеет самую большую площадь. В одном воплощении аналитическое устройство включает в себя три зоны для реакций, где зона для реакции, ближе всего расположенная к зоне для добавления пробы, имеет самую малую площадь, зона для реакции, расположенная дальше всего от зоны для добавления пробы, имеет самую большую площадь, и промежуточная зона для реакции имеет вторую наименьшую площадь. Возможность подгонки площади зоны для реакции дает возможность управлять величиной и долей в пробе, которая связана с реагентом в зоне для реакции. Таким образом можно обеспечить связывание некоторой подходящей доли пробы с зоной для реакции, ближе всего расположенной к зоне для добавления пробы. Если зону для реакции, ближе всего расположенную к зоне для добавления пробы, не делают слишком большой, то в потоке пробы останется полезное количество пробы, и оно будет протекать в оставшиеся зоны для реакций. Таким образом можно изменять площади этих по меньшей мере двух зон для реакций, чтобы получить подходящие сигналы сигналов отклика от всех зон реакций для пробы.
В одном воплощении эти по меньшей мере две зоны для реакций имеют различные геометрии. В одном воплощении зона для реакции, ближе всего расположенная к зоне для добавления пробы, имеет ширину, которая меньше ширины любой одной из другой зоны (зон) для реакции. В одном воплощении зона для реакции, ближе всего расположенная к зоне для добавления пробы, имеет продольную форму по отношению к направлению потока. В одном воплощении зона для реакции, дальше всего расположенная от зоны для добавления пробы, распространяется на всю ширину дорожки для протекания потока. В одном воплощении имеются три зоны для реакции, где зона для реакции, ближе всего расположенная к зоне для добавления пробы, имеет продольную форму при рассмотрении ее в направлении потока с малой шириной, промежуточная зона для реакции имеет поперечное сечение, которое является частью ширины дорожки для протекания потока, и зона для реакции, дальше всего расположенная от зоны для добавления пробы, распространяется на всю ширину дорожки для протекания потока. В одном воплощении зона для реакции, ближе всего расположенная к зоне для добавления пробы, имеет ширину, соответствующую 10-25% ширины дорожки для протекания потока, промежуточная зона для реакции имеет ширину, соответствующую 25-75% дорожки для протекания потока, и зона для реакции, дальше всего расположенная от зоны для добавления пробы, распространяется на всю ширину дорожки для протекания потока. Таким образом обеспечиваются другие возможности изменения геометрии и ширины этих по меньшей мере двух зон реакций, чтобы лучше управлять сигналом от различных зон реакций. Сигнал от различных зон для реакций может быть отрегулирован с использованием этого подхода. Кроме того, имеется преимущество в том, что поток жидкой пробы лучше размещается, и имеется возможность спроектировать эти по меньшей мере две зоны реакций так, чтобы облегчалось протекание потока жидкой пробы.
В одном воплощении каждая зона для реакции включает в себя по меньшей мере один реагент и концентрации реагента в этих по меньшей мере двух зонах для реакций различна. В одном воплощении зона реакции, ближе всего расположенная к зоне для добавления пробы, имеет концентрацию реагента, которая ниже концентрации реагента в любой одной другой зоне (зонах) для реакции. В одном воплощении имеются три зоны для реакций, зона для реакции, расположенная ближе всех к зоне для добавления пробы, имеет самую низкую концентрацию реагента, промежуточная зона для реакции имеет промежуточную концентрацию реагента и зона для реакции, дальше всех расположенная от зоны для добавления пробы, имеет самую высокую концентрацию реагента. Таким образом обеспечивается еще одна возможность управления сигналами от различных зон для реакций.
В одном воплощении последовательные зоны для реакций расположены в одной (единственной) дорожке для протекания потока. В одном воплощении аналитическое устройство включает в себя по меньшей мере две дорожки для протекания потока, соединяющие эту по меньшей мере одну зону для добавления пробы и этот по меньшей мере один сток, и при этом каждая дорожка для протекания потока включает по меньшей мере две зоны для реакций. Это последнее воплощение дает возможность уменьшить влияния изменений в потоке между различными дорожками для потоков. Пример такого воплощения показан на Фиг.2.
В одном воплощении эта по меньшей мере одна дорожка для протекания потока является по меньшей мере частично открытой.
Во втором аспекте предлагается система, включающая в себя аналитическое устройство, описанное выше, и считывающее устройство, предназначенное для считывания сигнала отклика от каждой из этих по меньшей мере двух последовательно соединенных зон для реакций, при этом считывающее устройство включает в себя микропроцессор, предназначенный для расчета концентрации на основании измеренных сигналов отклика.
Квалифицированный специалист в данной области может в свете этого описания позволить микропроцессору рассчитать величины, включающие, без ограничения указанными, концентрации аналита, расчетную величину сигнала отклика, сумму и оценку неточности на основании измеренных сигналов отклика с использованием известных алгоритмов и на основе экспериментов, чтобы определить взвешенные значения измеренных сигналов отклика от этих по меньшей мере двух последовательно соединенных зон для реакций.
В одном воплощении считывающее устройство системы включает в себя флуоресцентный ридер.
В третьем аспекте предлагается способ проведения анализа, включающий в себя этапы:
а) обеспечения наличия аналитического устройства, включающего в себя подложку, имеющую по меньшей мере одну зону для добавления пробы, по меньшей мере один сток и по меньшей мере одну дорожку для протекания потока, соединяющую эту по меньшей мере одну зону для добавления пробы и этот по меньшей мере один сток, причем эта по мере одна дорожка для протекания потока включает в себя выступы, по существу вертикальные по отношению к поверхности указанной подложки и имеющие высоту (Н), диаметр (D) и промежуток между соседними выступами (f1, f2), так чтобы достигался латеральный капиллярный поток жидкой пробы, при этом устройство включает в себя по меньшей мере две последовательно соединенных зоны для реакций, причем каждая зона для реакции предназначена для облегчения измерения сигнала отклика, возникающего от одного и того же аналита,
b) измерения сигнала отклика в каждой зоне для реакций, причем сигналы отклика возникают от одного и того же аналита, и
с) расчета концентрации по меньшей мере одного аналита на основании измеренных по меньшей мере двух сигналов отклика.
В одном воплощении сигналы отклика, измеренные в этих по меньшей мере двух зонах для реакций, являются различными. Эта ситуация является наиболее вероятной. Когда эти по меньшей мере две зоны для реакций расположены последовательно, измеренные сигналы отклика обычно являются различными. Расчет величины на основе сигналов отклика таким образом может в целом не соответствовать установленной схеме расчета средней величины. Возможно следует провести эксперименты, чтобы убедиться в том, что эти измеренные по меньшей мере две величины правильно взвешены по отношению одна к другой.
Сигналы отклика, которые измеряются от аналитического устройства, используются для расчета различных величин, включая, без ограничения указанными, концентрацию аналита и оценку неточности. В одном воплощении расчетная концентрация и оценка соответствующей неточности рассчитываются на основании измеренных сигналов отклика и на основании экспериментов по калибровке. В одном воплощении сумма и оценка соответствующей неточности рассчитываются на основании измеренных сигналов отклика.
Измеренные сигналы отклика используются для расчета концентрации аналита. Часто это выполняется с помощью стандартной кривой. Специалист в этой области может в свете этого описания получить стандартную кривую посредством измерения проб с известными концентрациями аналита. Специалист может затем использовать такую стандартную кривую для расчета концентрации на основании измеренных сигналов отклика. Также тот факт, что эти по меньшей мере две последовательно соединенные зоны для реакций могут дать различные результаты, возможно придется рассматривать посредством проведения экспериментов.
Изобретение позволяет путем расчета оценить неточность. В одном воплощении концентрация по меньшей мере одного аналита и оценка соответствующей неточности концентрации рассчитываются на основании измеренных сигналов отклика.
Можно практиковать принципы изобретения в анализах на основе потоков жидкости, а также в других платформах, отличных от платформ, включающих в себя выступы, по существу вертикальные по отношению к поверхности. Примеры последних включают, без ограничения ими, аналитические устройства, включающие пористые материалы, аналитические устройства, включающие в себя нитроцеллюлозу, капиллярные системы, закрытые крышкой, в капиллярном контакте с жидкой пробой, аналитические устройства, где поток гонится электроосмосом, аналитические устройства, где поток гонится центрифугированием, и аналитические устройства, где поток гонится насосом.
Другие отличительные особенности изобретения и их соответствующие преимущества будут очевидны специалисту в этой области при чтении описания и примеров.
Следует учитывать, что это изобретение не ограничивается конкретными воплощениями, показанными здесь. Предлагаются следующие примеры для иллюстративных целей и они не предназначены для ограничения объема изобретения, так как объем изобретения ограничивается только приложенными пунктами формулы изобретения и их эквивалентами.
ПРИМЕРЫ
Использовались чипы на пластиковой подложке, изготовленной из материала Zeonor (фирма Zeon, Япония) и имеющей на поверхности оксидированный декстран для ковалентной иммобилизации белков посредством связывания через основание Шиффа (Shiffs base). В потоковом канале осаждались три зоны для реакций (Biodot AD3200) c 60 нл 1 мг/мл анти-CRP mAb (Fitzgerald Ind. US, M701289). Использовалось устройство, схематично показанное на Фиг.1. После 15 минут чипы высушивались при 20% влажности и 30°С. Чтобы проверить связь в трех зонах для реакций использовалась система моделирования с флуорофор-маркированным CRP. CRP флуоресцентно маркировался в соответствии с инструкциями поставщика с использованием Комплекта для маркирования протеина Alexa Fluor 647 (Invitrogen, US). Маркированный CRP добавлялся к сыворотке крови, обедненной CRP (Scipack, US), что давало конечную концентрацию 80 нг/мл.
15 мкл пробы добавлялось к зоне для пробы чипа и капиллярное действие микростолбиковой структуры распределяло пробу по зоне для реакции в зону капиллярного затекания. Канал для потока затем промывался три раза 7,5 мкл буфера (50 мМ Tris-buffert pH 7,5). Типовое время анализа составляло около 10 минут. Интенсивность сигналов записывалась в опытном образце флуоресцентного сканирующего устройства с освещением строк. Для каждого анализа использовался новый чип и общее число чипов было 25. Результат эксперимента показан в таблице 1. CV является коэффициентом изменения и нормализованной мерой разброса распределения вероятности. Он определяется как отношение стандартного отклонения к среднему значению.
Таблица 1
Сравнение неточности, рассчитанной от одной или всех зон для реакций
Зона реакции
Средний относительный сигнал
Неточность (% CV)
1
192
8
2
139
7
3
113
9
По всем трем
444
5
Как видно в таблице, использование сигналов от более чем одной зона реакции в расчете уменьшает неточность при определении. Этот эксперимент показал, что комбинированное считывание результата в трех зонах реакций значительно уменьшает неточность или неопределенность результата.