СПОСОБЫ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

1. Способ получения клеток, происходящих из мезенхимальных стволовых клеток (МСК), из МСК, включающий приведение МСК в контакт in vitro или ex vivo с фактором роста фибробластов-2 (FGF-2), трансформирующим фактором роста бета (TGFβ) и гепарином или его производным или аналогом в концентрации по меньшей мере 0,01 МЕ/мл.
2. Способ по п. 1, включающий стадии: (а) культивирования МСК, выделенной из биологического образца субъекта, в среде, содержащей FGF-2, TGFβ и гепарин или его производное или аналог в концентрации по меньшей мере 0,01 МЕ/мл; (b) удаления неадгезивного материала и дальнейшего культивирования адгезивных клеток в среде, содержащей FGF-2, TGFβ и гепарин или его производное или аналог в концентрации по меньшей мере 0,01 МЕ/мл, с получением таким образом клеток, происходящих из МСК.
3. Способ по п. 1 или 2, где TGFβ выбран из группы, состоящей из TGFβ1, TGFβ2, TGFβ3 и их смесей, предпочтительно, где TGFβ представляет собой TGFβ1.
4. Способ получения клеток, происходящих из МСК, с улучшенными трансплантационными свойствами из МСК, включающий стадию уменьшения размера, которая характеризуется приведением МСК или клеток, происходящих из МСК, в контакт in vitro или ex vivo с гепарином или его производным или аналогом в концентрации по меньшей мере 0,01 МЕ/мл.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где концентрация гепарина или его производного или аналога составляет по меньшей мере 0,05 МЕ/мл, предпочтительно приблизительно 0,1 МЕ/мл; и/или гепарин или его производное или аналог выбран из группы, состоящей из нефракционированного гепарина (UFH); низкомолекулярного гепарина (LMWH), такого как эноксапарин, дальтепарин, надропарин, тинзапарин, цертопарин, ревипарин, ардепарин, парнапарин, бемипарин или их смеси; гепариноида, такого как гепарансульфат, дерматансульфат, хондроитинсульфат, ахаран сульфат, кератансульфат или их смеси, такие как данапароид; соли гепарина; соли гепариноида; фрагмента гепарина; фрагмента гепариноида; и их смесей.
60
6. Способ по любому из пп. 1-5, где по меньшей мере 60 % клеток, происходящих из МСК, в суспензии имеют диаметр, равный или менее 25 мкм (D ≤ 25 мкм), и где не более 5 % клеток, происходящих из МСК, в суспензии имеют диаметр более 35 мкм.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где клетки, происходящие из МСК, принадлежат к остеохондробластной, предпочтительно к остеобластной линии.
8. Способ по любому из пп. 1-7, где МСК или клетки, происходящие из МСК, дополнительно приводят в контакт, например, когда среда дополнительно содержит одно или более из плазмы, сыворотки или их заменителя.
60
9. Способ получения клеток, происходящих из МСК, из МСК, включающий приведение МСК в контакт in vitro или ex vivo с FGF-2, TGFβ и гепарином или его производным или аналогом, причем по меньшей мере 60 % клеток, происходящих из МСК, в суспензии имеют диаметр, равный или менее 25 мкм (D ≤ 25 мкм), и где не более 5 % клеток, происходящих из МСК, в суспензии имеют диаметр более 35 мкм.
10. Способ по п. 9, где МСК приводят в контакт с гепарином или его производным или аналогом в концентрации по меньшей мере 0,01 МЕ/мл; и/или TGFβ выбран из группы, состоящей из TGFβ1, TGFβ2, TGFβ3 и их смесей; предпочтительно, где TGFβ представляет собой TGFβ1.
60
11. Популяция клеток, происходящих из МСК, которые представляют собой клетки мезенхимальной линии, полученные путем дифференцировки МСК in vitro или ex vivo, причем по меньшей мере 60 % клеток, происходящих из МСК, в суспензии имеют диаметр, равный или менее 25 мкм (D ≤ 25 мкм), и где не более 5 % клеток, происходящих из МСК, в суспензии имеют диаметр более 35 мкм.
12. Популяция клеток, происходящих из МСК, по п. 11, где клетки, происходящие из МСК, могут быть получены способом, включающим приведение МСК в контакт in vitro или ex vivo с FGF-2, TGFβ и гепарином или его производным или аналогом, предпочтительно, где TGFβ выбран из группы, состоящей из TGFβ1, TGFβ2, TGFβ3 и их смесей, более предпочтительно, где TGFβ представляет собой TGFβ1, предпочтительно, где МСК приводят в контакт с гепарином или его производным или аналогом в концентрации по меньшей мере 0,01 МЕ/мл, и необязательно МСК дополнительно приводят в контакт с одним или более из плазмы, сыворотки или их заменителя; и/или клетки, происходящие из МСК, принадлежат к остеохондробластной или остеобластной линии, предпочтительно, где по существу все клетки, происходящие из МСК, остеохондробластной или остеобластной линии являются положительными в отношении CD73, CD63 и CD166; по существу все клетки, происходящие из МСК, остеохондробластной или остеобластной линии являются отрицательными в отношении CD45; по меньшей мере 70 % клеток, происходящих из МСК, остеохондробластной или остеобластной линии являются положительными в отношении щелочной фосфатазы (ALP); и менее 10% клеток, происходящих из МСК, остеохондробластной или остеобластной линии являются положительными в отношении HLA-DR (человеческий лейкоцитарный антиген изотипа DR).
13. Фармацевтическая композиция, содержащая популяцию клеток, происходящих из МСК, как определено в п. 11 или 12.
14. Популяция клеток, происходящих из МСК, по п. 11 или 12, или фармацевтическая композиция по п. 13 для применения в качестве лекарственного средства, предпочтительно для применения в лечении субъекта, нуждающегося в трансплантации клеток, происходящих из МСК.
7
8
7
15. Популяция клеток, происходящих из МСК, для применения по п. 14, где популяция клеток, происходящих из МСК, присутствует в концентрации от приблизительно 1×10 клеток/мл до приблизительно 1×10клеток/мл, предпочтительно, 7,5×10 клеток/мл; и/или популяция клеток, происходящих из МСК, или указанная фармацевтическая композиция пригодны для чрескожного или внутрисосудистого введения.