СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВОВИРУСНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА
METHOD OF PRODUCING ANTIVIRAL DRUG

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и медицины и касается противовирусного средства, на основе комплекса дезоксирибонуклеата натрия с железом (III).
Актуальным направлением современной медицины является борьба с вирусными заболеваниями, прочно удерживающими первое место среди всей инфекционной патологии человека. Также значительный интерес представляет проблема иммунотерапии, поскольку в настоящее время особенностью состояния здоровья населения в мире (по данным ВОЗ) является снижение иммунореактивности. Наличие нарушений в иммунной системе снижает эффективность проводимой базовой терапии, создает предпосылки для затяжного течения, хронизации патологического процесса. Таким образом, поиск и клиническая оценка новых препаратов с противовирусным и иммуномодулирующим действием, являются перспективными и актуальными.
В настоящее время в медицинской практике при различной инфекционной патологии нашел применение эффективный препарат на основе природной ДНК - Ферровир. Действующим веществом препарата является субстанция, представляющая собой Дезоксирибонуклеат натрия с железом комплекс (Desoxyribonucleate sodium with ferrum complex) (https://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_5276.htm).
Препарат оказывает противовирусное и иммуномодулирующее действия, активизирует противовирусный, противогрибковый и противомикробный иммунитеты. Проявляет противовирусное действие в отношение различных РНК- и ДНК-содержащих вирусов. Клинический опыт применения препарата показал его высокую активность, хорошую переносимость, отсутствие токсичности (IС50>4000мкг/мл), и нежелательных побочных эффектов. При терапии СПИД/ВИЧ-инфекции 14-дневное курсовое применение Ферровира повышает уровень CD4+лимфоцитов в крови. Это повышение продолжается в течение 1-1,5 месяца после окончания курса лечения. Одновременно снижается вирусная нагрузка в организме, выражающаяся в снижении концентрации РНК ВИЧ в сравнении с исходным уровнем. При рецидивирующей герпетической инфекции сокращается тяжесть и продолжительность рецидива, наступает быстрая и длительная ремиссия после 10-дневного курсового лечения. Применение Ферровира в комплексном лечении больных хроническим гепатитом С способствует улучшению переносимости лечения (уменьшение головокружения, тошноты и т.д.), снижению репликативной активности всех генотипов вируса HCV, переведению процесса в латентную фазу с восстановлением клеток печени и отсутствием вирусной репликации. Препарат характеризуется высокой степенью активности при совместном присутствии вирусов основного и оппортунистического заболеваний. Химиотерапевтический индекс препарата - более 20, что характерно для высокоактивных лекарственных средств. Однако существующие методы получения данного препарата и других препаратов на основе природных дезоксирибонуклеиновых кислот не обеспечивают достаточно эффективных мер по преодолению основных недостатков, таких как происходящая деградация и денатурация ДНК, приводящая к снижению биологической активности и фармакологической нестабильности конечного продукта.
Известен патент РФ 2158592, опубл. 10.11.2000, раскрывающий противовирусный иммунотропный препарат, который содержит комплекс натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты молекулярной массы не более 500 кД и гиперхромным эффектом не менее 10% с оксидом железа. Для получения препарата иммуномодулятор дезоксирибонуклеат натрия модифицируют 3-валентным оксидом железа. При этом расчетное количество дезоксирибонуклеата растворяют в водном растворе расчетного количества оксида железа с последующей очисткой, фильтрацией и
стерилизацией полученного препарата. В патенте не раскрывается возможность использования солей трехвалентного железа. Данный способ не обеспечивает достаточную стабильность при хранении.
Известен способ получения иммунотропного противовирусного препарата на основе натриевой соли нативной дезоксирибонуклеиновой кислоты ДНК-Na, заключающийся в том, что из животного сырья получают биологически-активную — субстанцию натриевой соли нативной дезоксирибонуклеиновой кислоты (Na-ДНК) с молекулярной массой 270-500 кД, гиперхромным эффектом - не ниже 37%, содержанием белка - менее 1%. Далее, расчетное количество ДНК-Na для приготовления 1,5% раствора иммунотропного препарата отвешивается и растворяется в водном растворе определенной концентрации соли одного из переходных металлов из ряда: цинк, марганец, железо, кобальт, сурьма, процесс растворения проводят при нормальной температуре и выдерживают в течение 6 ч. Проводят процесс стерилизации полученного препарата через мембраны с размером пор 0,22 мкм и стерильный розлив в терапевтических дозах (патент RU 2172632 C1, опубл. 27.08.2001). Данный источник может быть указан в качестве ближайшего аналога- прототипа. В патенте не раскрывается, какие соединения железа и какой валентности могут быть использованы.
Задачей настоящего изобретения является разработка более эффективного способа получения противовирусного препарата на основе комплекса дезоксирибонуклеата натрия с железом.
Задача решается следующим способом получения:
В качестве исходных компонентов для создания комплекса используется натриевая соль дезоксирибонуклеиновой кислоты, выделяемая из животного сырья, тимуса, селезенки сельскохозяйственных животных, печени, молоки лососевых, осетровых и прочих промысловых рыб и водорастворимые соли железа (III).
В качестве натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты может быть использована субстанция, полученная известными из уровня техники
способами. Например, такие субстанции раскрыты в патентах RU 2309759 C1, RU 2236853 C1, RU 2673802 C2 и т.п. Предпочтительно использование субстанции с гиперхромным эффектом не менее 40%.
В качестве водорастворимых солей железа используют фармацевтически приемлемые соли железа, например хлорид железа (III), сульфат железа (III), цитрат железа (III), аспартат железа (III) и т.п. Предпочтительно использование хлорида трехвалентного железа.
В качестве вспомогательного вещества служащего стабилизатором ионной среды и консерватором биологических молекул используются фармацевтически приемлемые водорастворимые соли натрия. Примерами таких солей могут быть сульфат, гидрокарбонат, хлорид, фосфат, сукцинат, цитрат, глюконат и др. Предпочтительно согласно изобретению используют хлорид натрия.
При приготовлении лекарственного средства используется следующая последовательность:
3+
a) растворение соль железа (III) в воде для инъекций до концентрации в интервале 0,01- 0,08 г/л с целью получения раствора с ионами железа (Fe);
b) растворение дезоксирибонуклеат натрия до концентрации в интервале 0,1 - 25,0 г/л с целью образования устойчивого комплекса дезоксирибонуклеата натрия с железом (III);
c) экспозиция раствора в течении времени в интервале от 0,5 до 5,0 часов с целью полноты проведения реакции образования комплекса;
d) растворение вспомогательного вещества до концентрации в интервале от 1,0 до 10,0 г/л с целью создания в растворе достаточной ионной силы для стабилизации биологических молекул и консервации раствора;
e) контроль и корректировка pH раствора 0,1н NaOH в интервале 5,0 — 8,0;
f) нагрев раствора до 25-35 °C;
g) осветляющая и стерилизующая фильтрация раствора с использованием фильтров с диаметром пор от 1,0 до 0,2 мкм.
Способ позволяет получить препарат, в котором в качестве активного вещества используется комплекс дезоксирибонуклеата натрия с железом (III) обладающий противовирусным действием в отношении РНК и ДНК-содержащих вирусов в частности гепатита С, клещевого энцефалита, герпеса и прочее.
Противовирусный эффект препарата определяется стимуляцией Toll-like receptor 9 (TLR9) плазмоцитоидных дендритных клеток. Они дифференцируются в дендритные клетки 2 типа — это интерферон- продуцирующие клетки, которые в свою очередь секретируют большое количество IFN — 1 типа (α и β) и способствуют дифференцировке наивных T-лимфоцитов в T-хелперы 2 типа. Под влиянием последних, происходит дифференцировка B-лимфоцитов в плазматические клетки, секретирующие Ig G2, IgG4, IgM. Интерфероны активируют гены, ответственные за эффект прямой противовирусной активности. Кроме прямого действия на вирусную репликацию, IFN α\β, IFN γ активируют макрофаги и NK – клетки усиливая их противовирусную активность.
Технический результат заключается в предотвращении самораспада и деструкции означенного комплекса во времени.
Высокая стабильность препарата достигается с помощью выбора комплексообразующей соли, а именно водорастворимой соли железа, а также определенной последовательности операций, позволяющей с высокой степенью вероятности воспроизводить требуемые физико-химические свойства лекарственного средства и, следовательно, гарантировать высокий терапевтических эффект от применения лекарственного препарата.
Данное техническое решение можно сопроводить следующими примерами:
Пример 1.
В 10 литрах воды для инъекций растворяют 100 мг хлорида железа (III) до концентрации 0,01 г/л, далее в раствор добавляют навеску натрия дезоксирибонуклеата в количестве 10,0 г до концентрации 0,1 г/л, раствор перемешивают до полного растворения в течение 30 минут. pH
раствора 8,0. В полученный раствор добавляют навеску натрия хлорида в количестве 10 г, перемешивают 10 минут, нагревают до температуры 25°C и фильтруют через фильтр 0,65 мкм и 0,2 мкм. Стерильный раствор разливают в стеклянные стерилизованные флаконы объемом 10, 20, 50 мл и герметично укупоривают. Полученное средство используют в качестве ингаляций ротовой полости с целью профилактики бронхиальных проявлений, а также аденовирусных инфекций.
Пример 2.
В 10 литрах воды для инъекций растворяют 300 мг хлорида железа (III) до концентрации 0,03 г/л, далее в раствор добавляют навеску натрия дезоксирибонуклеата в количестве 25,0 г до концентрации 0,25 г/л, раствор перемешивают до полного растворения в течение 40 минут. рН раствора 7,5. В полученный раствор добавляют навеску натрия хлорида в количестве 30 г, перемешивают 15 минут, нагревают до температуры 27°C и фильтруют через фильтр 0,65 мкм и 0,2 мкм. Стерильный раствор разливают в стеклянные стерилизованные флаконы объемом 10, 20 мл и герметично укупоривают. Полученное средство используют в качестве капель в нос с целью профилактики ОРВИ, гриппа, а также синуситов и ринитов.
Пример 3.
В 10 литрах воды для инъекций растворяют 500 мг хлорида железа (III) до концентрации 0,05 г/л, далее в раствор добавляют навеску натрия дезоксирибонуклеата в количестве 140,0 г до концентрации 14,0 г/л, раствор перемешивают до полного растворения в течение 90 минут рН раствора 6,5. В полученный раствор добавляют навеску натрия хлорида в количестве 10 г, перемешивают 20 минут, нагревают до температуры 30°C и фильтруют через фильтр 0,8 мкм, 0,65 мкм и 0,2 мкм. Стерильный раствор разливают в стеклянные стерилизованные флаконы объемом 5 мл и герметично укупоривают. Полученное средство используют для подкожного введения при лечении герпеса.
Пример 4.
В 10 литрах воды для инъекций растворяют 600 мг хлорида железа (III) до концентрации 0,06 г/л, далее в раствор добавляют навеску натрия дезоксирибонуклеата в количестве 160,0 г до концентрации 16,0 г/л,
раствор перемешивают до полного растворения в течение 100 минут. pH раствора 6,0. В полученный раствор добавляют навеску натрия хлорида в количестве 90 г, перемешивают 30 минут, нагревают до температуры 33°C и фильтруют через фильтр 0,8 мкм, 0,65 мкм и 0,2 мкм. Стерильный раствор разливают в стеклянные стерилизованные флаконы объемом 5 мл и герметично укупоривают. Полученное средство используют в качестве внутримышечных инъекций при лечении гепатита C.
Пример 5.
В 10 литрах воды для инъекций растворяют 800 мг хлорида железа (III) до концентрации 0,08 г/л, далее в раствор добавляют навеску натрия дезоксирибонуклеата в количестве 250,0 г до концентрации 25,0 г/л, раствор перемешивают до полного растворения в течение 150 минут. pH раствора 5,0. В полученный раствор добавляют навеску натрия хлорида в количестве 60 г, перемешивают 30 минут, нагревают до температуры 35°C и фильтруют через фильтр 0,8 мкм, 0,65 мкм и 0,2 мкм. Стерильный раствор расфасовывают в полимерные капсулы объемом 0,1, 0,2 и 0,5 мл. Полученное средство используют как кишечнорастворимые капсулы при лечении цитомегаловируса, ротовирусной инфекции и прочих инфекциях ЖКТ.
Анализы полученных препаратов в процессе хранения показали: сохранение подлинности; бесцветность; прозрачность; стерильность; нетоксичность; апирогенность; сохранение степени нативности; содержание РНК менее 0,1%; содержание белка – до 0,1%. Практически не было отмечено побочных эффектов. Препарат имеет более пролонгированный эффект терапии по сравнении препаратом по прототипу. Используемый для сравнения препарат по прототипу к концу срока годности вызывает повышение условного лихорадочного индекса, что свидетельствует о его меньшей стабильности.