СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВЫШЕНИЯ АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ УСЛОВНО-ПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРЫ IN VITRO МОЛОЧНОКИСЛОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКОЙ, СОДЕРЖАЩЕЙ КУЛЬТУРУ МИКРООРГАНИЗМОВ STREPTOCOCCUS TERMOPHILUS TH-4
METHOD FOR RESEARCHING INCREASE OF ANTIBIOTIC SENSITIVITY OF CONDITIONALLY-PATHOGENIC MICROFLORA IN VITRO WITH MILK-FOUNDATION FODDER ADDITIVE CONTAINING STREPTOCOCCUS TERMOPHILUS TH-4 MICROORGANISM CULTURE

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано в лабораторной практике при изучении антибиотикочувствительности микроорганизмов.
Известен «Препарат для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта "ТоксиБиоВит"» (патент РФ №2475254, кл. A61K 35/74 от 13.12.2011) и способ его применения, включающий введение в организм веществ, тормозящих развитие патогенной микрофлоры, стимулирующих ферментную активность и антиоксидантную защиту, а также обладающих широким спектром микроэлементов и стимулирующих развитие полезных микроорганизмов, а именно метаболитов микроорганизмов Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Halobacterium halobium, иммобилизованных на активном носителе, представляющем собой смесь глауконита с клеточными оболочками пивных дрожжей Saccharomyces cerevisiae.
К недостаткам известного способа является отсутствие данных по росту антибиотикочувствительности к конкретному виду антибактериального вещества, а так же отсутствие данных по росту показателей зон задержки роста тест-культуры до и после контакта с испытуемым супернатантом (надосадочная жидкость) культуры пробиотика.
Оценку антибиотикочувствительности микроорганизмов проводили в соответствии с методическими указаниями «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» (МУК №4.2.1890-04, 2004 г.).
Сущность изобретения состоит в том, что в предлагаемом способе используют супернатант Streptococcus termophilus ТН-4, полученный в разные сроки культивирования и введенный в состав молочно-кислой кормовой добавки.
Задача изобретения - расширение арсенала способов повышения антибиотикочувствительности микроорганизмов in vitro.
Указанная задача достигается тем, что в способе повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro молочно-кислой кормовой добавкой содержащей культуру микроорганизмов Streptococcus termophilus ТН-4, включающем использование супернатанта молочно-кислой кормовой добавкой содержащей культуру микроорганизмов Streptococcus termophilus ТН-4 полученного в разные сроки культивирования.
Согласно предлагаемому способу, к 0,5 мл среды МПБ (мясо-пептонный бульон) добавляют 0,5 мл супернатанта молочно-кислой кормовой добавки, после чего вносят 0,5 мл МПБ суточной культуры условно-патогенной микрофлоры, полученный раствор инкубируют 18-24 ч при Т=37,0±0,5°С, после чего проводят определение антибиотикочувствительности микроорганизмов на МПА (мясо-пептонный агар) с 24 видами антибактериальных препаратов дискодиффузионным методом.
8
Молочнокислая кормовая добавка включает: молоко, штамм Streptococcus termophilus ТН-4 содержащий 11*10 КОЕ / на 1 мл при рН=3,41, изготавливаемая по ТУ 9224-001-014185347608.
Пример 1. Анализ изменения зоны задержки роста микроорганизмов, при определении антибиотикочувствительности после контакта с молочнокислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов разных сроков культивирования, показал разную чувствительность у исследуемых представителей условно-патогенной микрофлоры. Так, наибольший рост антибиотикочувствительности микроорганизмов отмечается после культивирования с десяти и тридцати дневными культурами (табл. 1).
Р<0,05
Наибольшее увеличение антибиотикочувствительности (на 92%) отмечено у E. fecalis 200 после контакта с десятидневной культурой молочнокислой кормовой добавки Streptococcus termophilus ТН-4.
Таким образом, рост антибиотикочувствительности Е. fecalis 200, St. albus АТСС 25923, Е. coli АТСС 25222, Pr vulgaris 192, Kl. pneumonia 71 после контакта с супернатантом молочно-кислой кормовой добавки Streptococcus termophilus ТН-4 первого дня культивирования составил от 16,1 до 50%, десятого дня - от 25,7 до 92%, двадцатого дня от 22,2 до 33% и тридцатого дня от 50 до 74,2% соответственно.
Пример 2. Установлено, что на протяжении всего эксперимента, супернатант молочно-кислой кормовой добавки Streptococcus termophilus ТН-4 разного срока культивирования, вызывает устойчивый рост количества антибактериальных препаратов, к которым чувствительны изучаемые штаммы условно-патогенной микрофлоры. Кроме того, увеличение срока инкубирования пробиотика совпадает со снижением количества малочувствительных препаратов у штаммов условно-патогенной микрофлоры (табл.2).
Примечание: число антибактериальных препаратов, к которым микрофлора устойчива - У (зона задержки роста менее 10 мм), малочувствительна - М (зона задержки роста менее 15 мм), чувствительна - Ч (зона задержки роста более 15 мм).