Возможная корреляция полиморфизмов генов, ассоциированных с метаболизмом варфарина и фолатов у больных с хроническим лимфоцитарным лейкозом

Колюбаева С. Н., Иванов А. М., Сухина И. А., Никитин В. Ю., Исакова Т. В.,

Дмитриева О. В., Поляков А. С., Бондарчук С. В.

Федеральное государственное казенное военно-образовательное учреждение высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации, Санкт-Петербург.

ВОЗМОЖНАЯ КОРРЕЛЯЦИЯ ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНОВ, АССОЦИИРОВАННЫХ С МЕТАБОЛИЗМОМ ВАРФАРИНА И ФОЛАТОВ У БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОЦИТАРНЫМ ЛЕЙКОЗОМ

В последние годы получены данные в пользу того, что одним из важных факторов развития и прогрессирования злокачественных опухолей, в том числе и хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), является функционально значимый полиморфизм генов, кодирующих ферменты системы биотрансформации ксенобиотиков. К ним относится около 90 % всех лекарственных препаратов. 1-ая фаза биотрансформации (окислительная) обеспечивается, в основном, семейством генов цитохрома Р450. Основной функцией 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков является детоксикация за счет действия гидролаз и трансфераз. И, наконец, 3-я фаза биотрансформации связана с выведением из организма лекарственных форм. Кроме генов, отвечающих за экспрессию энзимов с широкой субстратной специфичностью, в организме имеются гены, обеспечивающие функции

энзимов с узкой направленностью действия. К ним относится ген MTHFR, который кодирует энзим метилентетрагидрофолат редуктазу, участвующий в метаболизме фолатов и препаратов, близких по структуре к фолиевой кислоте. В настоящей работе были исследованы цитогенетические повреждения методом флуоресцентной in situ гибридизации. Для этого метода применяли ДНК-зонды фирмы ABBOT, направленные на детекцию характерных для ХЛЛ повреждений: делеция генов ATM и P53, делеция в q плече хромосомы 13, трисомия по хромосоме 12. Исследование полиморфизма генов производили только в группе больных ХЛЛ с цитогенетическими повреждениями, предсказывающих хороший прогноз течения заболевания: del (13) (q14.3), del (13)(q34), del (13)(q14.3-34).

Таким образом, у одних и тех же больных исследовали полиморфизмы генов, ассоцииро-

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОБЛАСТОЗОВ

ванные с метаболизмом варфарина и фолатного цикла (фирма ДНК-технология), амплификацию проводили на приборе ДТ-прайм (ДНК-технология). В варфариновый цикл входит определение вариантов генов CYP2C9: С > Т; CYP2C9 А > С; VKORC1: 1639 G >А; CYP4F2 С > Т, CYP2C9. В фолатный цикл входит определение вариантов генов MTR:2756 А > G, MTHFR:1298 А > С, МТ№^ 677 С > Т, МТКЯ:66 А> G. При исследовании больных ХЛЛ с более сложными

хромосомными перестройками в кариотипе чаще выявляются аллельные различия по сравнению с контрольным генотипом. Так, например, у больного с клональной транслокацией между 11 и 13 хромосомами, делецией в локусе (13)^14-34) выявлены аллельные различия от контроля в трех генах, в отличие от тех случаев, когда при одном хромосомном повреждении (например, ёе1(13)(^14.3) аллельные различия выявляются реже и в меньшем количестве генов.

Кузник Б. И.3, Хавинсон В. Х.1,2, Тарновская С. И.2, Линькова Н. С.2

1 Институт физиологии им. И. П. Павлова РАН, Санкт-Петербург.

2 Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.

3 ГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия», г. Чита.

ЭПИГЕНЕТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ РЕГУЛЯТОРНЫХ ПЕПТИДОВ НА ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ И СИСТЕМУ ГЕМОСТАЗА

Многочисленные исследования, проведенные нами и нашими сотрудниками (Хавинсон В. Х. и др., 1982-2012; Кузник Б. И. и др., 1982-2012; Патеюк А. В. и др., 1990-2012), показали, что регуляторные пептиды (РП) — тималин, вилон, эпиталамин, эпиталон, кортексин и др. — при введении больным с различной патологией способствовали ликвидации вторичных иммунодефицитов, восстанавливали баланс в содержании про- и противовоспалительных цитокинов, а также нормализовали состояние системы гемостаза. Приведенные факты свидетельствовали о том, что существуют общие механизмы действия РП на гуморальные защитные системы организма. Одним из таких механизмов могло быть эпигенетическое влияние РП на систему иммунитета и гемостаза.

Для проверки высказанной гипотезы из базы данных GenBank [Benson D.A., Karsch-Mizrachi] нами были взяты нуклеиновые последовательности генов провоспалительных (IL-1 a, IL-6, IL-17A, TNFa), противовоспалительных (IL-4, IL-10) и иммунных (IL-2, IL-5) цитокинов, а также генов тканевого фактора (TF), антитромбина III (AT-III) и протеина С (PC). Изучалось наличие сайтов связывания в промоторных зонах указанных генов с РП, обладающими геропротектор-ными и иммуномодулирующими свойствами: Lys-Glu (вилон) и Ala-Glu-Asp-Gly (эпиталон).

Оказалось, что Lys-Glu способен взаимодействовать с генами про- (IL-6, Ш-17Аи TNFa) и противовоспалительных цитокинов (IL-4 и IL-10), а также иммунного цитокина IL-5. Ala-Glu-Asp-

G1y, кроме того, может вступать во взаимосвязь с геном ^-1а и Ш-2. Последовательности нуклеотидов, вступающих во взаимодействие с Lys-G1u, представлены GCAG и в меньшей мере — СGTC, а для А1а^1и^р^1у — АТТТС, ТА-ААС, АТТГО, CTTTG и TAAAG. Число сайтов связывания для Lys-G1u и A1a-G1u-Asp-G1y в гене ^-6 одинаково; в гене TNFa для Lys-G1u в 2,5 раза, а Ш-17А — в 2 раза больше, чем для А1а-G1u-Asp-G1y. Число последовательностей, связывающихся с A1a-G1u-Asp-G1y, в генах Ш-4 и Ш-10 в 2-3 раза превышает число таковых для Lys-G1u. Наконец, число последовательностей в гене Ш-5, способных реагировать с A1a-G1u-Asp-G1y, в 10 раз превышает содержание таковых для Lys-G1u. В промоторной зоне гена ^-2 не содержатся сайты связывания к Lys-G1u, тогда как к A1a-G1u-Asp-G1y их число достигает 16.

Исследуемые нами РП способны взаимодействовать с последовательностями нуклеотидов генов ТБ, АТ-111 и РС. Сайтами связывания в гене ТБ для Lys-G1u являются последовательности ОСАО и комплементарная ей CGTC, а для A1a-G1u-Asp-G1y — САААО, СТТТА, САААТ, GTTTC и СТТТА. Сайты связывания в гене АТ-111 для A1a-G1u-Asp-G1y представлены последовательностями АТТТС, GTTTC, TAAAG, СТТТА и CTTTG, а для Lys-G1u — лишь GCAG, встречаемый всего один раз. В промоторном участке гена РС сайтами связывания для A1a-G1u-Asp-G1y служат последовательности: ATTTG, САААТ, ATTTG, а для Lys-G1u — GCAG.