Контролируемое исследование ранозаживляющей активности бальзама Гамабиол в эксперименте

УДК 619.615.3

Ключевые слова: Гамабиол, ранозаживление, противовоспалительная активность

Key words: Gamabiol, wound-healing, anti-inflammatory activity

Бакулин И. Н., Деева А. В., Виденина А. А., Кожевникова Т. Н., Санина В. Ю., Тимофеева Т. Ю., Смирнова Е. Г., Наровлянский А. Н., Пронин А. В., Санин А. В.

КОНТРОЛИРУЕМОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ РАНОЗАЖИВЛЯЮщЕЙ АКТИВНОСТИ БАЛЬЗАМА ГАМАБИОЛ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

CONTROLLED EXPERIMENTAL STUDY OF THE GAMABIOL BALSAM WOUND-HEALING ACTIVITY

ФГБУ НИИЭМ им. Гамалеи Минздравсоцразвития РФ

Адрес: 123098, Москва, ул. Гамалеи, 18 The Gamaleya Institute of Epidemiology and Microbiology Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation Address: 123098, Russia, Moscow, Gamaleya street, 18

Бакулин Игорь Николаевич, к. б. н., ст. науч. сотрудник лаборатории естественного иммунитета

Bakulin Igor N., Ph.D., Senior Research Scientist of the Laboratory of Natural Immunity Деева Анна Валентиновна, к. м. н., ст. науч. сотрудник лаборатории естественного иммунитета Deyeva Anna V., Ph.D., Senior Research Scientist of the Laboratory of Natural Immunity Виденина Анна Александровна, мл. науч. сотрудник лаборатории клеточного иммунитета Videnina Anna A., Junior Research Scientist of the Laboratory of Cell-Mediated Immunity Кожевникова Татьяна Николаевна, к. м. н., науч. сотрудник лаборатории клеточного иммунитета Kozhevnikova Tatiana N., Ph.D., Research Scientist of the Laboratory of Cell-Mediated Immunity Санина Валентина Юрьевна, к. х. н., ст. науч. сотрудник лаборатории клеточного иммунитета Sanina Valentina Yu., Ph.D., Senior Research Scientist of the Laboratory of Cell-Mediated Immunity Тимофеева Татьяна Юрьевна, науч. сотрудник лаборатории клеточного иммунитета Timofeyeva Tatiana Yu., Research Scientist of the Laboratory of Cell-Mediated Immunity Смирнова Елена Георгиевна, науч. сотрудник лаборатории клеточного иммунитета Smirnova Elena G., Research Scientist of the Laboratory of Cell-Mediated Immunity Наровлянский Александр Наумович, д. б. н., проф., руководитель лаборатории цитокинов Narovlyansky Alexander N., Doctor of Biology Science, Prof., Head of the Laboratory of Cytokines Пронин Александр Васильевич, д. б. н., проф., руководитель лаборатории естественного иммунитета

Pronin Alexander V., Doctor of Biology Science, Prof., Head of the Laboratory of Natural Immunity Санин Александр Владимирович, д. б. н., проф., руководитель лаборатории клеточного иммунитета Sanin Alexander V., Doctor of Biology Science, Prof., Head of the Laboratory of Cell-Mediated Immunity

Аннотация. Бальзам Гамабиол применяется в ветеринарной медицине не только для ухода за проблемной кожей, но и при лечении различных кожных патологий: аллергического дерматита, хронического дерматоза, демодекоза и саркоптоза. Он также эффективен при лечении укушенных ран у собак. Активные действующие компоненты бальзама включают полипренолы, терпеноиды, денатурированный экстракт плаценты, окись цинка и гиалуроно-вую кислоту. В настоящей работе показано, что Гамабиол ускоряет заживление индуцированных ран у кроликов, активизирует процессы репаративной кожной регенерации и ангиогенеза, а также оказывает противовоспалительное воздействие.

Summary. Gamabiol balsam is used in veterinary medicine not only for problem skin care, but for treatment of different skin pathological conditions as well: allergic dermatitis, chronic dermatosis, demodecosis and sarcoptosis. Also it is shown to heal bitten wounds in dogs. Active ingredients of the balsam include polyprenols, terpenoids, denaturated placenta extract, zink oxide and hyaluronic acid. In this study we have shown that the balsam usage for treatment of induced wounds in rabbits accelerated reparative skin cell regeneration and angiogenesis, and exerted anti-inflammatory activity.

Введение

Бальзам Гамабиол предназначен для ухода за проблемной кожей животных. В его состав входят полипренолы и терпеноиды хвойных пород деревьев, плацента денатурированная

эмульгированная (ПДЭ), сульфат цинка и ги-алуроновая кислота. Полипренолы способны усиливать метаболические процессы в клетках кожи, ускорять процессы регенерации, заживления ран и ожогов различной приро-

ды, оказывают противовоспалительное действие. Терпеноиды используют в качестве антисептического и тонизирующего средства, они также улучшают микроциркуляцию и биодоступность других компонентов. ПДЭ наряду с полипренолами и терпено-идами позволяет активизировать местный иммунитет, цинк обладает антисептическим, вяжущим и подсушивающим действием, а гиалуроновая кислота обладает антиокси-дантными свойствами, активизирует процессы регенерации, снижает синтез проста-гландинов и улучшает кровоснабжение кожи и тканей пораженных суставов.

Ранее было показано, что Гамабиол эффективен при лечении аллергического дерматита, хронического дерматоза, межпальцевого дерматита, демодекоза и саркоптоза у мелких домашних животных [3]. Также показано [1], что применение Гамабиола при лечении укушенных ран у собак позволяет не только существенно ускорить процесс заживления, но и профилактировать развитие абсцессов, некрозов и других осложнений.

В настоящей работе определяли влияние Гамабиола на процессы заживления индуцированной кожной раны в эксперименте.

Материалы и методы

Эксперименты проводили на взрослых половозрелых кроликах-самцах породы шиншилла, массой 3,5-4 кг.

Использовали бальзам Гамабиол производства ООО «ГамаВетФарм» (РФ, Москва), а в качестве препарата сравнения - мазь Ле-вомиколь производства ОАО «НИЖФАРМ» (РФ, Нижний Новгород).

Под общей анестезией у кроликов выбривали участок кожи на спине в межлопаточной области для формирования стандартной кожной раны.

После обработки кожи спиртом в стерильных условиях наносили стандартизированную кожную рану: на кожу накладывали стерильный шаблон веретенообразной формы размером 1 х 2 см, по краю шаблона скальпелем разрезали кожу до подкожной клетчатки, после чего шаблон удаляли, а участок кожи, соответствующий шаблону, иссекали с обнажением подкожной клетчатки. Умеренное

кровотечение, возникающее при этом, останавливали прижатием марлевого тампона. Электрокоагуляцию сосудов не использовали, чтобы избежать дополнительного термического повреждения ткани, которое могло повлиять на выраженность морфологических признаков воспалительного процесса в ране и динамику процесса регенерации.

На поверхность раны наносили исследуемый препарат (в опытной группе - Гама-биол, в контрольной - Левомеколь) 2 раза в сутки. Рану оставляли открытой, повязку не накладывали, поскольку ее смещение и трение о рану при движениях животного могли вызвать дополнительные микротравмы и исказить морфологическую картину процесса заживления.

За динамикой заживления раны наблюдали ежедневно, вычисляя площадь раны, покрытую коркой, а также площади грануляции и эпителизации. С этой целью использовали прозрачную пленку с миллиметровой сеткой. Выраженность воспалительного процесса определяли по степени гиперемии, отека краев раны, наличию и характеру экссудата.

Через 7, 14 и 21 день по 1 кролику из каждой серии выводили из эксперимента для проведения морфологических исследований. Для этого под наркозом у кролика иссекали область раны, включая окружающую кожу и прилегающую подкожную клетчатку. Удаленную ткань фиксировали в 10%-м нейтральном формалине, а затем заливали в парафин по стандартной методике. Приготовленные срезы тканей окрашивали гематоксилином-эозином и пикрофуксином по Ван Гизону с докраской арсеином (для диф-ференцировки коллагеновых и эластиновых волокон).

Результаты и обсуждение

Динамическое наблюдение за процессом заживления кожной раны показало, что активность воспалительного процесса в обеих сериях опытов была существенно выражена в первые 1-2 дня после нанесения травмы, что проявлялось в яркой гиперемии и отеке окружающих тканей на расстоянии до 0,5-0,7 см от краев раны. У 1 кролика из контрольной группы с использованием мази Ле-

вомеколь отмечали выраженную экссудацию из раны, причем на 2-е сутки экссудат принял гнойный характер. В последующие 2-3 дня активность воспаления стихала в обеих сериях опытов, однако у кроликов опытной группы динамика снижения воспалительных проявлений была заметно более выраженной, чем в группе сравнения.

При изучении динамики заживления раны также выявились четкие различия по скорости развития грануляционной ткани в ране и скорости ее эпителизации. В серии опытов, где использовали Гамабиол, эти процессы протекали достоверно более интенсивно. Суммированные результаты представлены в таблице 1.

Средняя площадь кожной раны составляла 132±2 мм2. Начиная с 7-х суток отмечалось более быстрое очищение раны от корки и замещение ее грануляционной тканью в серии опытов с Гамабиолом по сравнению с опытами, где использовали Левомеколь, а к 10-м и 14-м суткам отмечена более выраженная эпителизация краев раны под влиянием Гамабиола. К 21-м суткам разница между группами сглаживается.

Таким образом, по данным визуального контроля использование мази Гамабиол ведет к более быстрому очищению раны, ускоренному замещению некротических тканей грануляционной тканью и более быстрой эпителизацией раны.

Более детально о характере влияния мази Гамабиол на процесс заживления раны можно судить по данным морфологического исследования процессов, непосредствен-

Параметры, характеризующие д

но характеризующих процесс репарации. Исследованные параметры включали:

- количество активированных фибробла-стов - клеточных элементов, создающих морфологическую основу для репаративной регенерации эпителия (в нашем случае эпидермиса);

- процесс синтеза коллагеновых и эласти-новых волокон;

- сосудистую систему, обеспечивающую транспортные потребности участка репара-тивной регенерации;

- интенсивность процесса эпителизации кожной раны.

Известно [2], что процесс репаративной регенерации проходит ряд стадий, каждая из которых отличается не только своеобразием тканевой реакции, но и вполне определенной продолжительностью. На первой стадии (до 7 суток) доминируют процессы экссудации, затем начинается мезенхималь-ная реакция (до 14 суток), наконец к 21 суткам формируется молодая соединительная ткань. Именно поэтому при проведении экспериментального исследования были выбраны данные сроки (табл. 2).

Из данных таблицы 2 следует, что у животных, которым применяли бальзам Га-мабиол (опытная группа), концентрация активированных фибробластов на единицу раневой поверхности через 7 суток значительно выше, нежели в контроле. Через 14 суток от начала эксперимента градиент падения концентрации активированных фи-бробластов, как в собственно дерме, так и в подкожной клетчатке при применении Гама-

Таблица 1. шику заживления кожной раны

Срок

опыт контроль опыт контроль опыт контроль

1 133±2 130±1 0 0 0 0

3 131±2 134±2 0 0 0 0

7 74±4 92±3*** 61±3 39±2*** 0 0

10 12±2 39±4*** 78±6 81±4 43±3 12±3***

14 0 8±2** 33±2 54±3** 97±4 65±5*

21 0 0 0 17±2* 132±5 117±6

Примечание: достоверность разницы результатов между опытной (Гамабиол) и контрольной (Левомеколь) группами: * - Р < 0,05, ** - Р < 0,01, *** - Р < 0,001.

Примечание: достоверность разницы результатов между опытной и контрольной группами при каждом сроке наблюдения - Р < 0,05.

Таблица 2.

Влияние Гамабиола (опыт) на морфологические показатели процесса заживления кожной раны в эксперименте

Показатель Локализация Сроки

7 суток 14 суток 21 сутки

опыт контроль опыт контроль опыт контроль

Концентрация активированных фибро-бластов дерма 93,23±7,12 72,91±2,52 71,12±5,30 70,39±5,39 42,27±6,32 67,28±1,73

клетчатка 73,35±6,14 71,52±4,96 62,18±8,35 66,37±4,25 31,23±7,52 58,81±7,54

Концентрация коллагеновых волокон дерма 23,12±5,34 17.53±6,72 32,17±4,78 35,52±8,31 39,53±3,52 63,49±8,17

клетчатка 12,53±5,37 19,54±8,26 21,78±5,82 38,63±4,72 28,30±1,63 57,84±9,51

Концентрация эластиновых волокон дерма 8,41±5,72 4,56±0,13 13,43±2,19 5,52±3,36 12,61±3,98 15,92±0,62

клетчатка 5,59±2,00 3,68±2,04 7,35±1,13 5,43±0,18 7,28±1,53 13,04±2,11

Концентрация кровеносных сосудов дерма 26,52±6,52 13,24±3,12 36,17±5,31 15,24±4,18 48,25±7,52 42,81±7,39

клетчатка 11,83±3,12 7,91±0,25 15,64±2,36 8,15±4,21 21,94±3,28 9,21±5,34

Концентрация эпителиоцитов на единице длины базаль-ной мембраны дерма 12,75±8,12 13,65±2,4 28,54±3,54 16,76±2,19 49,82±4,17 28,53±4,16

биола значительно выше. Указанная закономерность сохранялась и через 21 сутки.

Естественным следствием этого процесса является снижение концентрации коллагено-вых и эластиновых волокон. Соотношение концентрации коллагеновых и эластиновых волокон в норме поддерживается на уровне 3 : 1. Нарушение фибриллогенеза в ту либо другую сторону является свидетельством нарушения процесса репаративной регенерации. При использовании Гамабиола указанное выше соотношение коллагеновых и эластиновых волокон сохранялось, тогда как в контроле наблюдали значительное повышение синтеза коллагеновых волокон, которое происходит за счет недостаточности синтеза эластиновых волокон.

При применении Гамабиола как в дерме, так и в подкожной клетчатке значительно активируется ангиогенез, сопровождающийся усилением пролиферации эпителиоцитов. Последнее связано с тем, что активность ангиогенеза напрямую связана с интенсивностью пролиферации клеток эпидермиса.

Градиент нарастания относительной площади сосудов микроциркуляторного русла при применении Гамабиола значительно выше градиента нарастания тех же показателей в контрольной группе. Соответственно, применение Гамабиола сопровождалось более интенсивной пролиферацией эпителиальных клеток, нежели в контроле.

Заключение

Таким образом, при применении бальзама Гамабиол выявлен ряд преимуществ. Во-первых, Гамабиол обладает более выраженным противовоспалительным действием, а во-вторых, значительно ускоряет динамику развития грануляционной ткани и эпителизации кожной раны. Кроме того, при применении Гамабиола стабилизируется фибриллогенез, что проявляется близким к физиологической норме соотношением коллагеновых и эластиновых волокон. В свою очередь стабилизация этого соотношения позволяет предположить, что Гама-биол способствует развитию более нежно-

го соединительнотканного рубца. Наконец, Гамабиол ускоряет ангиогенез, что положительно сказывается на развитии эпителиза-ции кожной раны.

С большой степенью вероятности можно предположить, что высокая эффективность бальзама связана с взаимоусилива-ющим взаимодействием полипренолов и терпеноидов (ускоряющих процессы регенерации, обладающих антисептическим и противовоспалительным действием и улучшающих микроциркуляцию в коже) с гиалуроновой кислотой, которая снижает

синтез простагландинов и улучшает кровоснабжение тканей.

Список литературы

1. Гордеева Е. В. Лечение укушенных ран с помощью гамабиола / Е. В. Гордеева. - Матер. Моск. межд. ветеринарного конгресса. - М., 2010. - С. 127-128.

2. Саркисов, Д. С. Очерки по структурным основам гомеостаза / Д. С. Саркисов. - М. : Медицина, 1977. - 352 с.

3. Фурман, И. М. О применении бальзамических средств у мелких домашних животных / И. М. Фурман. - Матер. Моск. межд. ветеринарного конгресса. -М., 2009. - С. 66-67.

НОУ ДО «Институт Ветеринарной Биологии» |

а

приглашает принять участие в семинаре 01

«Рентгенодиагностика мелких домашних животных»

1 день. Основы рентгенологии. История открытия рентгеновских лучей. Физические аспекты рентгеновского излучения. Рентгенологическая терминология. Технические аспекты рентгеновского излучения. Принципы устройства рентгеновского аппарата. Фотохимия и изготовление рентгеновских снимков. Рентгенологические артефакты. Основные виды рентге-ноконтрастных веществ. Радиационная безопасность. Практическое занятие по самостоятельному изготовлению рентгеновских снимков.

2 день. Общая характеристика рентгенологического исследования костей и суставов. Основные элементы рентгенологической семиотики при патологических изменениях в костях. Переломы. Рентгенологические симптомы. Виды переломов. Заживление переломов. Вывихи. Костно-суставная патология нетравматического генеза. Укладки для рентгенографического исследования отдельных анатомических областей. Картина в норме и при патологии. Возрастные изменения: череп, зубы; позвоночник; грудина, ребра; конечности. Рентгенодиагностика дисплазии тазобедренных суставов собак.

3 день. Рентгенодиагностика органов грудной полости, верхних дыхательных путей и пищевода. Укладки, режимы съемки, норма, патология: пазухи; гортань, трахея; пищевод, съемка пищевода с рентгеноконтрастным веществом; легкие; сердце и сосуды; диафрагма.

4 день. Рентгенодиагностика органов брюшной полости. Укладки, норма, патология: желудок, рентгеноконтрастное исследование желудка; кишечник, рентгеноконтрастное исследование кишечника; печень; поджелудочная железа; селезенка; мочевой пузырь; предстательная железа; матка; почки; надпочечники. Комплексная оценка рентгенограмм брюшной полости.

5 день. Комплексное чтение рентгеновских снимков. Тестовое занятие.

График проведения семинара: 23-27 января, 19-23 марта, 14-18 мая 2012 г.

Место проведения: Санкт-Петербург, ул. Чапаева, д. 16а.

Стоимость участия: 10 000 рублей (НДС не облагается); наличный и безналичный расчет.

Предварительная запись на семинар обязательна: по тел./факсу (812) 232-55-92, +7 921 095-89-27, по e-mail: invetbio@yandex.ru или через форму on-line заявки на сайте: http://www.invetbio.spb.ru/form_seminar_Rg.htm