К проблеме современного применения лекарственной аффинной хроматографии (drug-affinite chromatography) в медицине и фармации

ПРОБЛЕМНАЯ СТАТЬЯ

18. Смирнова, С.А. Оценка качества фармацевтического обслуживания /Смирнова С.А., Косова И.В. //Вестн. РУДН. - 2004. - № 4. - С. 157-161.

19. Федина, Е.А. О необходимости подготовки провизора-консультанта /Е.А. Федина //Новая аптека. - 2001. - № 9. - С. 36-42.

Кузнецов П.В., Теслов Л.С., Кульпин П.В., Федорова Ю.С., Дудин А.А.

Кемеровская государственная медицинская академия,

г. Кемерово

Санкт-Петербургская химико-фармацевтическая академия,

г. Санкт-Петербург

К ПРОБЛЕМЕ СОВРЕМЕННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (DRUG-AFFJNJTE CHROMATOGRAPHY) В МЕДИЦИНЕ И ФАРМАЦИИ

В данной проблемной статье рассмотрены современное состояние и перспективы применения лекарственной аффинной хроматографии в медицине и фармации.

Целью работы являлось обобщение мировых литературных данных по исследуемой проблеме.

Впервые проанализировано тандемное сочетание метода лекарственной аффинной хроматографии и аффинной масс-спектрометрии, трансформируемое сегодня в новое фундаментальное направление - химическая протеомика. Показана перспектива применения этого направления в изучении различных природных первичных и вторичных метаболитов (алкалоиды, флавоноиды и др.), лекарств.

Ключевые слова: лекарственная аффинная хроматография: химическая протеомика; природные первичные и вторичные метаболиты: лекарства.

Kuznetsov P.V., Teslov L.S., Kulpin P.V., Fedorova J.S., Dudin A.A.

Kemerovo State Medical Akademy, Kemerovo Sanct-Peterburg Chemical Pharmacial Akademy, Sanct-Peterburg

PROBLEM OF CONTEMPORARY USE OF DRUG-AFFJNJTE CHROMATOGRAPHY JN MEDJCJNE AND FARMACJY

This article describes the problem of current state and prospects of drug affinity chromatography in medicine and pharmacy.

The aim is to summarize scientific literature data on research topic.

For the first time tandem combination of drug affinity chromatography and affinity mass spectrometry that is transformed today in a new fundamental scientific branch is analyzed. The prospects for application of this branch in the study of various natural primary and secondary metabolites (alkaloids, flavonoids, etc.) medicines are studied.

Key words: drug affinity chromatography: chemical proteomics; natural primary and secondary metabolites; drugs.

Настоящая проблемная статья основана на наших многолетних исследованиях (П.В. Кузнецов и сотрудники, 1990-2014 г.г.) в области аффинной хроматографии (АФХ) и посвящена современному состоянию и перспективам применения лекарственной аффинной хроматографии (ЛАФХ) в медицине и фармации.

Хорошо известно, что исторически развитие классической аффинной хроматографии (КАФХ) связано с пионерскими работами П. Куатреказаса, К. Ан-финсена, Е. Пората и других, которые в 60-70 годы ХХ века начали активно изучать методы выделения и очистки различных биополимеров, в том числе сте-роидсвязывающих белков (ССБ) [2, 24, 31]. В качестве лигандов в систему: матрица-вставка-лиганд (с МВЛ) по знаменитой реакции азосочетания [12]

Корреспонденцию адресовать:

ФЕДОРОВА Юлия Сергеевна,

650029, г. Кемерово, ул. Ворошилова, 22А, Тел.: 8 (3842) 35-89-16.

E-mail: fedorova_yuliya_sergeevna@mail.ru

вводились разнообразные эстрогены (в том числе и лекарства) по схеме (рис.).

Для выделения фиксированных на адсорбентах аффинного типа (ААФТ) разнообразных ССБ (в виде лигандбелкового комплекса) элюирование проводили восстановителями, например Na2S2O4, количественно разрушающих азосвязи на ААФТ. Данный принцип выделения таких лигандбелковых комплексов был назван позже вариантом ковалентной АФХ [14, 31, 37]. В дальнейшем в зонах разрыва появились и другие функциональные группы и фрагменты молекул, например дисульфидная связь, дигид-роксифрагмент [6, 14].

Со временем, в методе КАФХ в качестве лигандов оказались задействованы и другие типы лекарственных средств: катехоламины, кортикостероиды, алкалоиды (тубокурарин) и др. [4, 5]. Например, в работах Б.А. Клящицкого и сотрудников (1980-90 г.г. ХХ в.) в качестве аффинных лигандов активно использовали антибиотики [14].

В числе пионерских работ в области исследования лекарство-связы-вающих белков (ЛСБ) следу-

16

T. 13 № 3 2014

Medicine

in Kuzbass

в Кузбассе

К ПРОБЛЕМЕ СОВРЕМЕННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (DRUG-AFFINITE CHROMATOGRAPHY) В МЕДИЦИНЕ И ФАРМАЦИИ

Рисунок

Реакция получения азоадсорбента с иммобилизованными эстрогенами, где: n = 2, 4, 6 и др.

ет упомянуть работы Солдатова [25, 26], который изучал аспекты выделения и очистки нифедипин-связывающих белков на адсорбенте: гексаметилен-диамино-сукцинил-о-этил-нифедипин-сефарозе.

Автором было показано, что рецептор дигидро-пиридинов селективно элюируется в виде олигомерного комплекса двух субъединиц с массой 160 и 53 кДа. Предложен метод препаративного обогащения выделенного рецептора.

Как показано в наших работах [4, 14, 15], в качестве лекарственных лигандов на эпоксиносителях были иммобилизованы витамины и их аналоги (фолиевая кислота, витамин В6 и др.), нуклеотиды, различные стероиды (кортизол (и др.), диэтилстильбэс-трол, некоторые анестетики, сульфаниламиды, производные фенантренизохинолина и др. Для иммобилизации на эпоксиносителях кортикостероидов нами был разработан новый способ их иммобилизации по реакции окисления а-кетольной группы (метод Люэбарта-Мэттокса) [2, 14]. Другие способы синтеза стероидсвязывающих ААФТ рассмотрены в работе П.В. Кузнецов и соавт. [2, 24].

Проблемы выделения и очистки тироксинсвязы-вающих белков, в том числе с применением ЛАФХ обсуждены ранее в наших работах [3, 19, 22]. Ин-

тересно отметить, что производные салициловой и антраниловой кислот активно использовалось нами также и в качестве концевых фрагментов вставок [3, 14]. Новый тип лигандов на их основе рассмотрен в работах [3, 14, 19, 23]. Аналогичные исследования известны для изучения траниласт-связывающих белков, сывороточных альбуминов [14].

Таким образом, к началу 90 г. ХХ в. в методе КАФХ оформляется вариант ЛАФХ (drug-affinite chromatography, DAC). Понятно, что основной режим его применения связан с выделением и исследованием ЛСБ. Еще одним важным вектором применения ЛАФХ является вариант использования его в обращенной АФХ (ОАФХ) [13, 14]. В нем изучали связывание различных белковых лигандов (в системе: матрица-вставка-лиганд) с разнообразными лекарствами [5, 14, 22]. Эти исследования, позволили углубить знания о специфике важнейших доменных фрагментов белков, связывающих лекарства, например альбумина, ряда иммуноглобулинов и др.

Сегодня, по нашему мнению, основой ЛАФХ в режиме метода АФХ «все-таки следует считать изучение drug-зависимых белков» [14]. С другой стороны, <тАС вариантом АФХ (в широком смысле) можно считать аффинную хроматографию в режимах ОАФХ, неклассической АФХ (НАФХ) и даже фантомной хроматографии ... применительно к изучению выделения и анализа лекарственных веществ.» [14, 33, 34].

В дальнейшем, на рубеже 70-80 гг. ХХ в. метод ЛАФХ (в различных режимах АФХ) начинает сопрягаться с разнообразными масс-спектрометрическими методами изучения белков, образуя новый фундаментальный подход к их исследованию, называемый сегодня химической протеомикой (ХП) [36]. Особо подчеркнем, что исследование в области ХП заметно активизируется в мире после 2003-2005 г.г. ХХ1 в. [39]. Так, в методе ХП, применяются самые различ-

Сведения об авторах:

КУЗНЕЦОВ Петр Васильевич, доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармацевтической химии ГБОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Кемерово, Россия.

ТЕСЛОВ Леонид Степанович, кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармакогнозии и ботаники ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия.

КУЛЬПИН Павел Валерьевич, аспирант кафедры фармацевтической химии, ГБОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Кемерово, Россия.

ФЕДОРОВА Юлия Сергеевна, кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармацевтической химии, ГБОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Кемерово, Россия.

ДУДИН Андрей Александрович, ассистент кафедры фармакогнозии и ботаники, ГБОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Кемерово, Россия.

Information about authors:

KUZNETSOV Peter Vasilevich, doctor of pharmacy, professor, head of pharmaceutical chemistry department, Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia.

TESLOV Leonid Stepanovich, candidate of pharmaceutical sciences, associate professor, department of botany and pharmacognosy, Saint-Petersburg state chemical-pharmaceutical academy, Saint-Petersburg, Russia.

KULPIN Pavel Valerievich, postgraduate of the department of pharmaceutical chemistry, Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia. FEDOROVAYuliya Sergeevna, candidate of pharmaceutical sciences, associate professor, pharmaceutical chemistry department, Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia.

DUDIN Andrey Aleksandrovich, junior lecturer, department of botany and pharmacognosy, Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia.

О'Йййя#та

в Кузбассе

Medicine

in Kuzbass

T. 13 № 3 2014

17

К ПРОБЛЕМЕ СОВРЕМЕННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (DRUG-AFFINITE CHROMATOGRAPHY) В МЕДИЦИНЕ И ФАРМАЦИИ

ные режимы аффинной хроматографии — борлиган-дная, имуноаффинная, металлхелатная, краситель-лигандная хроматографии и др. [38-41]. При этом продолжаются исследования новых адсорбентов для металлхелатной аффинной хроматографии. Так, в работе [41], для селективного выделения фосфопепти-дов предложены аффинные адсорбенты с трехвалентными лантаноидами (гольмий, эрбий и др.).

Однако, к сожалению, вынуждены подчеркнуть, что в солидной монографии по методу АФХ [37] вариант ЛАФХ вообще отсутствует и, естественно, связь метода АФХ с ХП нигде не обсуждается и не анализируется, хотя литературные данные в этом направлении рассмотрены в разделе аффинная масс-спектрометрия. На сегодня современная ХП — это метод, опирающийся как на различные режимы ЛАФХ, так и на масс-спектрометрию, в том числе аффинного типа [42-45]. Среди целей и задач не только выделение и очистка разнообразных ЛСБ, в том числе и генно-инженерного типа (терапевтические, фармацевтические белки), но и изучение механизмов взаимодействия лиганда (лекарства) и выделяющихся белков. Важная роль в этом процессе отводится и скринингу новых лекарственных средств, в режиме связывания с первичными метаболитами, которую могут играть новые патентованные лекарственные средства [17, 18]. Несомненно, что синтез на их основе полимерных аналогов, в том числе и различных ААФТ, представляется крайне интересным и перспективными по аналогии с нашими работами [3, 19-22].

Ключевые аспекты по исследованию первичных метаболитов в режиме ХП изложены недавно в монографии [36]. Поэтому, только после выхода данной монографии этот раздел фундаментальной науки становится общепринятым, а вариант ЛАФХ наконец-то получает право на самостоятельное существование в методе аффинной хроматографии, будучи включенным в центр «треугольника Кузнецова» [14]1.

Вынуждены, однако, еще раз подчеркнуть, что в данной монографии [36] в ее ключевых разделах (например, часть II, раздел 3 «immobilization compounds and drug-affinite chromatography») тем не менее, отсутствует научное определение понятия метода drug-affinite chromatography, что делает данную работу своевременной и актуальной.

Таким образом, если режимы фундаментальных исследований в области первичных метаболитов организма, четко сфокусированы в новейшем методе ХП, то аналогичное изучение вторичных метаболитов (прежде всего природных) в этом же ключе, но в варианте НАФХ развиваются пока недостаточно [4, 6]. Тем не менее, в работе П.В. Кузнецова и со-ав. [30], на эпоксиазоадсорбентах с новокаинамидным и мориновым лигандами впервые разделены модельные смеси фенолкарбоновых кислот и их эфиров, ксантоны (магниферин), изофлавоноиды. Интерес-

ные данные по изучению методом НАФХ биологически активных веществ экстракта колокольчика ра-пунцелевидного (Cаmpanula rapunculus) представлены в работе Л.С. Теслова и соав. [29], где в качестве азо-ААФТ использовали адсорбент на основе суль-фанилэтил-оксиэтил-сферона с морином в качестве лиганда. Новые азо-ААФТ на основе триазинактиви-рованного гидразиноносителя получены и изучены в работе [5]. Адсорбенты этого типа характеризуются хорошим сорбционным эффектом, как для производных 4-оксикумарина, так и для фенолкарбоновых кислот (салициловая, галловая кислоты) [1, 5, 8]. Хроматографическое разделение методом НАФХ гликозидов, флавоноидов производных кверцетина и лютеолина описаны в работе [7].

Изучение новых хроматографических свойств карбоновых кислот в зависимости от принципов синтеза ААФТ описано в работе [10]. Интересно, что используя вариант НАФХ в работе [8] удалось провести очистку фармакопейного танина, с высоким выходом. В работах по изучению качества настойки каштана конского методом НАФХ нами была впервые зафиксирована в ее составе примесь флавоноидов [9]. Однако, исследования методом НАФХ П.В. Кузнецова и сотрудников, начатые в 90 годы ХХ в. [5, 13, 14] и сегодня показывают новые яркие перспективы в этом направлении. Так, сочетание метода НАФХ (в режиме ЛАФХ) с хромато-масс-спектрометрией, привело к получению новых уникальных результатов. Например, в работах Ю.С. Федоровой и соавторов показано, что растительные биологические вещества фракций фитопрепаратов, выделенных методом НАФХ, существенно зависят от изучаемого вида копеечника (к. чайный, к. забытый, к. альпийский) [11, 32]. Интересно также, что исследование компонентов препарата ФиБС с применением методов НАФХ и масс-спектрометрии, показало наличие летучих кремний-органических соединений [28].

Важные перспективы развития метода НАФХ в химии лекарств, природных соединений могут быть связаны и с изучением композитных лигандов в ААФТ. Так, модификация эпоксиазоадсорбентов различными дубильными веществами (танин и др.) повышало их сорбционный потенциал в 4-5 раз при сорбции азотсодержащих лекарственных средств (амидопирин, тиамин) [14].

Интересные перспективы в методе НАФХ открываются и при модификации полисахаридных сорбентов детонационными наноалмазами [27]. Исследование в режиме метода НАФХ экстрактов гинкго билоба, впервые показали возможность обнаружения в полученных фракциях (методом аффинной хрома-то-масс-спектрометрии) специальных окислительно-восстано-вительных добавок производителей препарата (производное метил-трет.бутил-фенола). Особенности разделения ноотропных препаратов с при-

1 «В свое время был предложен удобный графический образ для определения основной задачи теоретической органической химии...треугольник, стороны которого означают зависимость между составом, строением и свойствами.». «.особая роль белковых веществ. на поздних этапах развития химии белка, привели к постановке проблем требующих расширенного понимания триады «состав, строение, свойство». Мы не случайно в число трех основных проблем химии белка включили проблему функций (но не проблему свойств).» (см. История химии белка. Шамин А.Н. М., «Наука», 1977 г. стр. 332-333).

18

T. 13 № 3 2014 MediciinnLass

ПРОБЛЕМНАЯ СТАТЬЯ

менением эпоксиазоадсорбентов приведены в работе В.В. Халахина и соавт. [34].

Наконец, в исследованиях флавоноидов и их производных методом НАФХ, Л.С. Теслову и соав. удалось впервые получить высокочистые производные глюкуронидов флавоноидов [30]. Аналогично глю-куронидные аналоги (миквелианин, 3-О-глюкуронид кверцетина) разделяются в 2-3 компонентных смесях флавоноидов на эпоксиазоадсорбентах с мори-новым и троксевазиновым лигандами [23].

Тем не менее и сегодня, в работах отечественных ученых, посвященных хроматографическим исследованиям биологически активных веществ природных соединений, растительных материалов, в том числе и на основе с хромато-масс-спектрометрии, информация о применении в этой сфере метода НАФХ,

ЛИТЕРАТУРА:

пока полностью отсутствует. Авторы статьи уверены, что приведенные данные по изучению выше названных объектов методом НАФХ в сочетании с хро-мато-масс-спектрометрией будут стимулировать их активное внедрение в химию лекарств и природных соединений.

В заключении отметим, что представленные в данной работе результаты исследований по применению метода ЛАФХ в режимах изучения первичных и вторичных метаболитов человека и растений позволяют найти данному варианту достойное место (в центре «треугольника Кузнецова») в общей методологической концепции метода АФХ [13, 14]. Подчеркнем, что дальнейшее развитие метода НАФХ связано и с углублением работ в сфере конструирования системы: матрица-вставка-лиганд [16, 35].

1. А. с. 1770897 СССР, МПК G01N30/90. Способ разделения и выделения кумаринов / П.В. Кузнецов, В.В. Шкаренда ; заявитель и патентообладатель Кемеровский государственный медицинский институт, Кузнецов П.В., Шкаренда В.В. - № 4840869 ; заявл. 23.04.1990 ; опубл. 23.10.1992, Бюл. № 39.

2. Выделение стероидсвязывающих белков на новых аффинных адсорбентах / П.В. Кузнецов, О.А. Демин, В.Я. Кононенко и др. // Укр. биохим. журн. -1992. - № 3. - С. 20-28.

3. Дудин, А.А. Конструирование новых эпоксиазоадсорбентов и их применение в хроматографии белков, лекарств и растительных биологически активных веществ / А.А. Дудин, Ю.С. Федорова, П.В. Кузнецов // Вестн. КузГТУ. - 2013. - № 1. - С. 119-121.

4. Клящицкий, Б. А. Аффинные адсорбенты на основе носителей активированных эпоксидными соединениями / Б. А. Клящицкий, П.В. Кузнецов // Успехи химии. - 1984. - № 53. - С. 1740-1763.

5. Кузнецов, П.В. Аффинная хроматография в XXI в.: ключевые приоритеты стратегии и тактики / П.В. Кузнецов, Е.В. Энгельман // Вопр. биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2000. - № 4. - С. 3-9.

6. Кузнецов, П.В. Перспективы синтеза гидразоно (гидразидо) содержащих адсорбентов аффинного типа (Обзор) / П.В. Кузнецов // Хим.-фарм. журн. - 1997. - №. 10 - С. 18-26.

7. Кузнецов, П.В. Полимерные адсорбента аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ. VII. Хроматографическое разделение гликозидов флавоноидов, производных кверцетина и лютеолина / П.В. Кузнецов, Л.С. Теслов, И.В. Меркулова // Химия природных соединений. - 1995. - № 6. - С. 805-810.

8. Кузнецов, П.В. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ. IX. Исследование танина на адсорбентах с фенольными и полифенольными лигандами / П.В. Кузнецов, Е.М. Антипенко, В.В. Шкаренда // Хим.-фарм. журн. -1996. - № 7. - С. 51-53.

9. Кузнецов, П.В. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ. I. Определение фурокумаринов в фитопрепаратах / П.В. Кузнецов, В.В. Шкаренда // Хим.-фарм. журн. - 1991. - № 4. - С. 72-76.

10. Кузнецов, П.В. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ. XI. Влияние структурных параметров гидразино (азометино) содержащих азоадсорбентов на разделение ароматических кислот / П.В. Кузнецов, Е.М. Антипенко, Я.Ю. Яшкин // Хим.-фарм. журн. - 1997. - № 11. - С. 50-52.

11. Кузнецов, П.В. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ. XXVII. К феномену хроматографического разделения фитопрепаратов копеечника забытого на сефадексе LH-20 и его химически модифицированном аналоге / П.В. Кузнецов, Ю.С. Федорова // Ползуновский вестн. - 2009. - № 3. - С. 338-340.

12. Кузнецов, П.В. Современное состояние синтеза азоадсорбентов аффинного типа для исследования физиологически активных веществ (Обзор) / П.В. Кузнецов // Хим.-фарм. журн. - 1993. - № 6. - С. 36-45.

13. Кузнецов, П.В. Современные тенденции развития классических и не традиционных вариантов аффинной хроматографии / П.В. Кузнецов // Хим.-фарм. журн. - 1992. - № 2. - С. 78-84.

14. Кузнецов, П.В. Эпоксиактивированные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ / П.В. Кузнецов. - Кемерово: Кузбассвузиздат, 2002. - 104 с.

15. Кузнецов, П.В. Эпоксиактивированные адсорбенты в жидкостной хроматографии физиологически активных веществ (Обзор) / П.В. Кузнецов // Хим.-фарм. журн. - 1993. - № 6. - С. 56-65.

16. Панченко, Д.А. Использование диглицидилового эфира бисфенола А в качестве нового эпоксиреагента в синтезах азоадсорбентов аффинного типа / Д.А. Панченко, А.С. Сухих, П.В. Кузнецов // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб. науч. тр. - Волгоград, 2013. - Вып. 68. - С. 278-279.

17. Пат. 2317287 Российская Федерация, МПК CO7C235/52, CO7C235/34, A61K31/195, A61P5/16. Производные бензамида или фенилацетамида, полезные в качестве лигандов тиреоидного рецептора / Гарг Нерай (SE), М.Р. Гадим (SE), Т.А.В. Эрикссон (SE) и др. ; патентообладатель Каро Био АБ (SE), Бристоль-Мейерз СКВИББ Компани (US). - № 2005103406/04 ; заявл. 08.07.2003 ; опубл. 27.06.2005, Бюл. № 5.

18. Пат. 2379295 Российская Федерация, МПК ^7D237/14, A61K31/495, A61P5/14. Производные пиридазинона в качестве агонистов рецептора тиреоидного гормона / Н-Э. Хайнес (US), Д.Д. Кэртэш (US), Ш.Л. Петранико-коул (US) и др.; патентообладатель Ф. Хоффманн-Ля Рош АГ (СН). - № 2008106058/04; заявл. 11.07.2006 ; опубл. 27.08.2009, Бюл. № 2.

I

MedicLn<L=ss T. 13 № 3 2014

19

К ПРОБЛЕМЕ СОВРЕМЕННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (DRUG-AFFINITE CHROMATOGRAPHY) В МЕДИЦИНЕ И ФАРМАЦИИ

19. Поленок, Е.Г. Тироксинсвязывающие белки: характеристика и современные методы хроматографического выделения и очистки (обзор) / Е.Г. По-ленок, П.В. Кузнецов, С.Ф. Зинчук // Вопр. биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2010. - № 7. - С. 3-13.

20. Поленок, Е.Г. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ. XIX. Синтез и применение йодпроизводных фенолфталеина и тирозина в аффинной хроматографии белков сыворотки крови человека / Е.Г. Поленок, П.В. Кузнецов // Вопр. биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2004. - № 1. -С. 50-55.

21. Поленок, Е.Г. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ XX. Синтез и применение иодпро-изводных фенолфталеина и тирозина в аффинной хроматографии белков сыворотки крови человека / Е.Г. Поленок, П.В. Кузнецов // Хим.-фарм. журн. - 2003. - № 12. - С. 38-40.

22. Поленок, Е.Г. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ: о перспективах конструирования адсорбентов с йодсодержащими салицилатными и п-аминобензоатными лигандами для аффинной хроматографии белков сыворотки крови человека. / Е.Г. Поленок, П.В. Кузнецов // Вестн. РАЕН ЗСО. -2002.- вып.5. - С.98-104.

23. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ. XV. Синтез азоадсорбентов нового поколения для хроматографического исследования фенольных соединений / П.В. Кузнецов, Е.В. Энгельман, Л.С. Теслов и др. // Хим.-фарм. журн. -2001. - № 10. - С. 36-40.

24. Синтез аффинных адсорбентов с иммобилизованными стероидными гормонами: Препринт № 153 Б. / П.В. Кузнецов, В.Я. Кононенко, С.Ф. Зинчук и др. - Красноярск, 1991.

25. Солдатов, Н.М. Выделение и характеристика рецептора дигидропиридиновых кальциевых антагонистов из скелетной мышцы кролика / Н.М. Солдатов // Биохимия. - 1988. - Т. 53, вып. 10. - С. 1600-1611.

26. Солдатов, Н.М. Молекулярные инструменты изучения кальциевых каналов: синтез и оценка биологической активности новых производных группы 4 -арил-1,4- дигидропиридина / Н.М. Солдатов // Биохимия. - 1988. - Т. 53, вып. 7. - С. 1059-1068.

27. Сухих, А.С. Разделение и очистка фармакологически активных веществ на полисахаридных сорбентах с иммобилизованными детонационными наноалмазами / А.С. Сухих, Е.А. Гуров, П.В. Кузнецов // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2012. - Вып. 67. - С. 282-284.

28. Сухих, А.С. Современные перспективы применения жидкостной колоночной хроматографии в химии гуминовых веществ / А.С. Сухих, П.В. Кузнецов, Е.А. Гуров // Вестн. РАЕН ЗСО. - 2007. - Вып. 9. - С. 95-101.

29. Теслов, Л.С. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ. XVIII. Исследование хроматографического разделения суммы полифенольных соединений Campenula rapunculloides / Л.С. Теслов, И.В. Меркулова, П.В. Кузнецов // Химия природных соединений. - 1995. - № 6. - С. 811-813.

30. Теслов, Л.С. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ. XVII. Разделение флавоноидов и некоторых родственных соединений методом некласической аффинной хроматографии / Л.С. Теслов, П.В. Кузнецов, Е.В. Энгельман // Растительные ресурсы. - 2001. - Вып. 4. - С. 130-140.

31. Туркова, Я. Аффинная хроматография / Я. Туркова. - М. : Мир, 1980. - 472 с.

32. Федорова, Ю.С. Ключевые биологически активные вещества фитопрепаратов на основе рода копеечник / Ю.С. Федорова, А.С. Сухих, П.В. Кузнецов // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2011. - Т. 11, вып. 4. - С. 575-580.

33. Халахин, В.В. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ. XXV. Новые азоэпоксиадсорбенты на основе ванилингидразонов о-(окси,амино) замещенных бензойных кислот в неклассической аффинной хроматографии / В.В. Хала-хин, А.А. Дудин, П.В. Кузнецов // Ползуновский вестн. - 2008. - Вып. 3. - С. 190-193.

34. Халахин, В.В. Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ. XXIV. Особенности разделения ноотропных препаратов методом неклассической аффинной хроматографии / В.В. Халахин, П.В. Кузнецов // Вопр. биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2010. - № 8. - С. 25-29.

35. Эпоксиреагент Хуберта в конструировании адсорбентов аффинного типа, используемых в хроматографии лекарств и природных соединений / А.А. Дудин, П.В. Кузнецов, В.В. Халахин и др. // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2012. - Т. 12, вып. 3. - С. 481-500.

36. Drewes, G. Chemical Proteomics: Methods and Protocols. Series: Methods in Molecular Biology, №803. / G. Drewes, M. Bantscheff. - Humana Press, 2012. - 326 p.

37. Handbook of Affinity Chromatography / edit. D.S. Hage. - 2006. - 944 p.

38. Methods for in ves Figation of targeted Kinase inhibitor terahpe using comical proteomies and phosphrylution protiling / B. Fand, E.B. Haura, K.S. So-nalley et al. // Biochem. Pharmacol. - 2010. - V. 80 (5). - Р. 739-747.

39. Fishman, M.C. Pharmaceticals: a new grammar for drug discovery / M.C. Fishman, J.A. Porter // Nature. - 2005. - Vol. 437, Р. 491-493.

40. Andersson, L. Jsolation of phosphoproteomics by immobilized metal (Fe+3) affinity chromatography / L. Andersson, J. Porath // Anal. Biochem. -1986. - V. 154 (1). - Р. 250-254.

41. Dosewitz, M.C. Emmobilized gallinm (III) affininy chromatography of phosphopeptides / M.C. Dosewitz, P. Tempst // Anal. Chem. - 1999. - V. 71 (14). -

43. Recent developments in protein-ligand affinity mass spectrometry / N. Jonker, J. Kool, H. Irth et al. // Anal. Bional. Chem. - 2011. - V. 399 (8). - P. 2669-2681.

44. High-thraghput affinity mass spectrometry / U.A. Kiernan, D. Nedtlkov, E.E. Niedtrkofier // Methods Mol. Biol. - 2006. - V. 328. - P. 141-150.

Р. 2883-2892.

42. Hall, S.E. Chemoproteomics-driven drug discovery: addressing high attrition rates / S.E. Hall // Drug discov. Today. - 2006. - № 11. - Р. 495-502.

45. Multifactorial analysis of affinity mass spectrometry data from serum protein samples: strategy to distingnish patents with prelclampsia from mat ching control individuals / U. Perk, F. Seidenshinner, C. Rower et al. // J. Am. Soc. Mass spectrum. - 2010. - V. 21 (10). - P. 1699-1791.

20

T. 13 № 3 2014 ме^с1п^