СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ДЕСТРУКТИВНОГО КОМПОНЕНТА ПРИ ВОСПАЛЕНИИ, АССОЦИИРОВАННОМ С ГИПЕРПЛАЗИЕЙ ЭНДОМЕТРИЯ

Полезная модель относится к медицине, а именно к способам выявления деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия и может быть использована в лабораторной диагностике для определения наличия воспалительного процесса, ассоциированного с гиперпластическими заболеваниями эндометрия, и оценки степени выраженности деструктивного компонента при воспалительной реакции.
Проблема изучения гиперпластических процессов женской репродуктивной системы остается актуальной, что связано, с одной стороны, с широкой распространенностью, а с другой - с нерешенными вопросами этиопатогенеза данной патологии. Существует гормонозависимый патогенетический вариант гиперплазии эндометрия, характеризующийся хронической гиперэстрогенемией, и автономный вариант, при котором эндокринные нарушения не выражены или отсутствуют, однако, в анамнезе обнаруживается связь с травматическими повреждениями при многократных абортах и диагностическом выскабливании, а также воспалительными процессами у больных гиперплазией эндометрия.
В качестве ближайшего аналога (прототип) выбран способ выявления деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия (Хмельницкий ОК Патоморфологическая диагностика гинекологический заболеваний. - СПб: Сотис, 1994. - С. 136-144; Кузнецова А.В. Хронический эндометрит. Архив патологи. - 2000. - № 3. - С. 48 - 52), заключающийся в получении биологического материала и проведении стандартного гистологического исследования, с помощью которого оценивают комплекс общих морфологических признаков хронического воспаления и наличие деструктивных изменений, то есть нарушений микроциркуляции, лимфо-лейкоцитарной инфильтрации, клеточной деструкции, некротических и склеротических изменений.
Признаками, совпадающими с существенными признаками заявляемого способа, являются: получение биологического материала и использование неспецифических лабораторных критериев воспалительного процесса.
Техническим результатом полезной модели являются: возможность использования малоинвазивного метода получения биологического материала (вместо диагностического выскабливания проводится забор маточного смыва), возможность количественной оценки интенсивности деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия, высокая информативность независимо от фазы менструального цикла.
Причинами, препятствующими достижению ожидаемого технического результата, являются: инвазивность и высокий риск возникновения осложнений (перфорация матки, кровотечение, инфекционные осложнения) при получении биологического материала для гистологического исследования, низкая точность оценки морфологических изменений и сложность их анализа при гиперплазии эндометрия, ассоциированной с воспалительным процессом, отсутствие параметричности результатов, позволяющей оценивать интенсивность воспалительного компонента, необходимость предварительного планирования исследования с учетом фазы менструального цикла. Гистологическая диагностика хронического воспалительного процесса, ассоциированного с гиперплазией, является сложной и не всегда достоверной, и требует проведения инвазивной процедуры диагностического выскабливания, что в значительной степени ограничивает возможности наблюдения за течением воспалительного процесса в динамике.
В основу полезной модели поставлена задача усовершенствования способа-прототипа путем использования вместо гистологического исследования биоптата эндометрия спектрофотометрического определения
в маточном смыве активности протеолитических ферментов и их ингибиторов, которые являются универсальными эффекторами биохимической альтерации и отражают интенсивность воспалительно-деструктивных процессов. Следует отметить, что эластаза и трипсиноподобные ферменты являются наиболее важными протеиназами с деструктивным потенциалом, которые способны разрушать практически все протеиновые структуры тканей и органов, а кислотостабильные ингибиторы относятся к классу основных серпинов, которые на тканевом уровне нейтрализуют активность протеиназ.
Поставленная задача решается тем, что в способе выявления деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия, включающем получение биологического материала и использование неспецифических лабораторных критериев, согласно полезной модели, проводят забор маточного смыва для биохимического исследования, определяют эластазоподобную активность (ЭПА), трипсиноподобную активность (ТПА), уровень кислотостабильних ингибиторов (КСИ), и при повышении ЭПА до 13,10 нМоль/мг-мин., ТПА -до 28,25 нМоль/мг-мин., при значении КСИ от 30,0 мИЕ/мг и выше устанавливают умеренную интенсивность деструкции при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия, а при увеличении ЭПА более 13,10 нМоль/мг-мин., ТПА - более 28,25 нМоль/мг-мин. и снижении КСИ менее 30,0 мИЕ/мг устанавливают высокую интенсивность деструкции при воспалении, ассоциированным с гиперплазией эндометрия.
Между совокупностью существующих признаков предлагаемого способа и ожидаемым техническим результатом проявляется следующая причинно-следственная связь: получение в качестве биологического материала маточного смыва, забор которого является менее инвазивным методом по сравнению с диагностическим выскабливанием, с последующим определением уровней эластазоподибной активности, трипсиноподобной
активности и кислотостабильных ингибиторов позволяет выявить наличие и степень интенсивности деструктивного компонента при воспалении, ассоциированным с гиперплазией эндометрия, возможность осуществлять количественную оценку интенсивности деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия, повысить точность диагностики, а также повисит информативность оценки независимо от фазы менструального цикла. Способ заключается в следующем.
Маточный смыв получают путем введения в полость матки 3-4 мл подогретого физиологического раствора через педиатрический одноразовый катетер Фолея без предварительного расширения цервикального канала. К противоположному концу катетера присоединяют 10-ти мл шприц. Введенную жидкость аспирируют через 20-30 секунд. Получают 2-3 мл маточного смыва, который замораживают и хранят при температуре -15 0 С - -18 ° С до проведения биохимического исследования. Для определения ЭПА в маточных смывах применяют спектрофотометрический метод, основанный на регистрации скорости ферментативного гидролиза синтетического субстрата Nt-вос-аланил-п-нитрофенилового эфира (Банф). Прирост оптической плотности измеряют при длине волны 347,5 нм, а результаты выражают в нМ гидролизованного субстрата на 1 мг содержания общего белка за 1 мин.
Для определения ТПА в маточных смывах применяют спектрофотометрический метод, основанный на регистрации скорости отщепления К-бензоил-Ь-аргинина (БА) от синтетического субстрата N-бензоил-Ь-аргинина этилового эфира (БАЕЕ) (Reanal). Расчет активности проводится по приросту оптической плотности в пробе за 1 минуту и отображается в нмоль БА, заявленного на 1 мг содержания общего белка за 1 мин.
Для измерения уровня КСИ проводят предварительную подготовку биологического материала. Для этого маточный смыв разбавляют в два раза 0,05 M ацетатным буфером и прогревают в течение 20 минут при температуре 60° С на водяной бане. Полученный экстракт нейтрализует 0,05 M NaOH до нейтральных значений, центрифугируют и получают супернатант, который используют для дальнейшего биохимического исследования. КСИ определяют методом, который основан на регистрации торможения прироста оптической плотности пробы за счет БАЕЕ-естеразнои активности трипсина кислотостабильнимы ингибиторами протеиназ при длине волны 253 нм.
Активность КСИ сыворотки крови выражают в ингибиторных единицах, приводятся на 1 мг содержания общего белка пробы.
Полученные данные сравнивают с контрольными значениями здоровых людей, диагностируют наличие и степень интенсивности воспалительного компонента при гиперплазии эндометрия.
При повышении ЭПА в 13,10 нМоль/мг-мин., ТПА - до 28,25 нМоль/мг-мин. и при значении КСИ от 30,0 мИЕ/мг и выше устанавливают умеренную интенсивность деструкции при воспалении, ассоциированным с гиперплазией эндометрия, а при увеличении ЭПА более 13,10 нМоль/мг-мин., ТПА - более 28,25 нМоль/мг-мин. и снижении КСИ менее 30,0 мИЕ/мг устанавливают высокую интенсивность деструкции при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия.
Для подтверждения результатов, полученных при определении активности протеиназ и их ингибиторов в качестве диагностических критериев деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия, проведена серия клинических исследований по определению активности состояния протеиназ-ингибиторной системы в маточных смывах 89 больных женщин с различными гистологическими формами гиперплазии эндометрия. В качестве контроля использовали
измерения аналогичных показателей у 18 клинически здоровых женщин.
В таблице 1 приведены активность неспецифических протеиназ и кислотостабильних ингибиторов в маточных смывах у женщин с различными формами гиперплазии эндометрия, то есть уровни эластазоподобной, трипсиноподобной активности и кислотостабильных ингибиторов в маточных смывах, и показана возможность использования этих показателей для выявления деструктивного компонента при воспалении, ассоциированным с гиперплазией эндометрия.
Выраженное повышение ЭПА в маточных смывах более чем в 5 раз, ТПА - в 2,5 раза и снижение КСИ в 3 раза ниже контроля зафиксировано при клиническом обследовании женщин, больных различными формами гиперплазии эндометрия, подтверждает возможность использования параметров протеиназ-ингибиторной системы в качестве диагностического критерия деструктивного компонента при воспалении, ассоциированным с гиперплазией эндометрия.
В результате проведенных исследований было установлено, что при повышении ЭПА до 5 раз по отношению к норме, то есть до 13,10 нМоль/мг-мин., ТПА - до 2,5 раз, то есть до 28,25 нМоль/мг-мин., а уровня КСИ выше 30,0 мИЕ/мг устанавливают умеренную интенсивность деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия. При увеличении ЭПА более 13,10 нМоль/мг-мин., ТПА - выше 28,25 нМоль/мг-мин. и снижении КСИ до уровня, менше чем 30,0 мИЕ/мг, устанавливают высокую интенсивность деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия.
В табл. 2 приведена активность неспецифических протеиназ и кислотостабильних ингибиторов в маточных смывах у женщин с различными формами гиперплазии эндометрия в 1 и 2 фазы менструального цикла.
В способе выявления деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия, в качестве инструментальных методов используют спектрофотометрию, как значимые показатели используют показатели активности компонентов неспецифической протеиназ-ингибиторной системы маточного смыва: еластазоподибну активность (ЭПА), трипсиноподибну активность (ТПА) и уровень кислотостабильних ингибиторов ( КСИ), и при повышении активности протеиназ до 5 раз по отношению к норме, то есть еластазоподибнои активности в 13,10 нМоль/мг-мин., трипсиноподибнои активности - до 2,5 раз, то есть до 28,25 нМоль/мг-мин., а уровня КСИ выше 30,0 мИЕ/мг устанавливают умеренную интенсивность деструктивного компонента при воспалении, ассоциированным с гиперплазией эндометрия. При увеличении ЭПА больше 13,10 нМоль/мг-мин., ТПА - выше 28,25 нМоль/мг-мин. и снижении КСИ до уровня менее чем 30,0 мИЕ/мг устанавливают высокую интенсивность деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия.
Было установлено, что уровень активности неспецифических протеиназ и кислотостабильних ингибиторов в маточных смывах женщин, больных гиперплазией эндометрия, не зависит от фазы менструального цикла, что значительно повышает диагностические возможности заявленного способа.
По сравнению со способом-прототипом заявляемый способ выявления деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия позволяет, используя спектрофотометрические методы исследования эластазоподобной, трипсиноподобной активности и кислотостабильних ингибиторов, определить наличие у больной воспалительного процесса, ассоциированного с гиперплазией эндометрия, оценить интенсивность деструктивного компонента, повысить точность диагностики, обосновать необходимость проведения
противовоспалительной терапии без применения инвазивного и опасного метода диагностического выскабливания и ожидания надлежащей фазы менструального цикла, что может быть использовано при установлении интенсивности деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия.
Способ подтверждается следующими примерами его использования.
Пример 1.
Больная С, возраст 37 лет, обратилась с жалобами на ановуляторные маточные кровотечения умеренной интенсивности и межменструальные кровянистые выделения. Было проведено первичное обследование, в которое входило и стандартное морфологическое исследование биоптата, в результате которого был установлен диагноз простой гиперплазии эндометрия. Также было проведено биохимическое исследование протеиназ-ингибиторной системы маточного смыва, в результате которого было выявлено повышение уровня ЭПА до 12,4 нМоль/мг-мин., ТПА - до 34,5 нМоль/мг-мин. и снижение уровня КСИ до 55,6 мИЕ/мг. Таким образом, была установлена умеренная интенсивность деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия, и было принято решение назначить стандартную комбинированную гормональную терапию.
Пример 2.
Больная Г., возраст 35 лет, обратилась с жалобами на периодические боли внизу живота, ановуляторные маточные кровотечения. Было проведено первичное обследование, в которое входило и стандартное морфологическое исследование биоптата, который был получен с помощью диагностического выскабливания эндометрия. Установлен диагноз комплексной гиперплазии эндометрия, назначено комбинированную гормональную терапию. Назначенная терапия не привела к существенному клиническому результату - сохранялась боль внизу живота. Была назначена диагностика по
заявляемому способу, то есть биохимическое исследование протеиназ-ингибиторной системы маточного смыва, в результате которого было выявлено повышение уровня ЭПА до 17,6 нМоль/мг-мин., ТПА - до 19,5 нМоль/мг-мин., и снижение уровня КСИ до 21,6 мИЕ/мг.
Была установлена высокая интенсивность деструктивного компонента при воспалении, ассоциированном с гиперплазией эндометрия. Согласно использованию заявляемого способа, терапевтическая схема была своевременно дополнена использованием антибактериальных, иммуномодулирующих средств, физиотерапевтическими методами лечения.
Сравнение со способом-прототипом показывает, что использование данного способа позволяет обеспечивать повышение точности диагностики, сокращает время для назначения адекватной противовоспалительной терапии, определяет необходимую продолжительность курса терапии и позволяент осуществить прогноз.
Примечание. Звездочками обозначена достоверность сравнений (р<0,05); относительно контроля
Примечание. Звездочками обозначена достоверность сравнений относительно контроля: * - ρ < 0,05; ** - ρ < 0,01; *** - ρ < 0,001.