СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПИДОВ

1. Трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть, или трансгенное семя растения, содержащее один или несколько экзогенных полинуклеотидов, где трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть или семя имеет повышенный уровень одного или нескольких неполярных липидов по сравнению с соответствующим организмом или его частью или семенем, где отсутствует один или несколько экзогенных полинуклеотидов.
2. Трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть, или семя по п.1, где один или несколько экзогенных полинуклеотидов кодируют MGAT, предпочтительно MGAT2 и/или DGAT2.
3. Трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть, или семя по п.1 или п.2, где уровень одного или нескольких неполярных липидов трансгенного, не являющегося человеком организма или его части или семени по меньшей мере на 0,5% (вес./вес.) больше на основе веса и/или по меньшей мере на 1% (вес./вес.) больше на относительной основе, чем у соответствующего не являющегося человеком организма или его части, или семени.
4. Трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть, или семя по п.1, который характеризуется одним или несколькими из:
(i) где один или несколько экзогенных полинуклеотидов кодируют MGAT и GPAT, MGAT и DGAT, или все три из MGAT, GPAT и DGAT, предпочтительно, где GPAT также имеет фосфатазную активность для образования MAG, и предпочтительно, где DGAT представляет собой DGAT2;
(ii) где общее содержание неполярных липидов трансгенного, не являющегося человеком организма или его части или семени увеличивается по сравнению с соответствующим организмом или его частью;
(iii) где общее содержание неполярных липидов трансгенного, не являющегося человеком организма или его части или семени по меньшей мере на 0,5% (вес./вес.) больше на основе веса и/или по меньшей мере на 1% больше на относительной основе, чем у соответствующего не являющегося человеком организма или его части, или семени;
(iv) где содержание полиненасыщенной жирной кислоты в липиде грансгенного, не являющегося человеком организма или его части или семени увеличивается по сравнению с липидом соответствующего организма или его части, или семени;
(v) где содержание полиненасыщенной жирной кислоты в липиде трансгенного, не являющегося человеком организма или его части, или семени увеличивается по сравнению с липидом соответствующего организма или его части, или семени, где полиненасыщенная жирная кислота включает эйкозадиеновую кислоту (EDA), арахидоновую кислоту (ARA), альфа-линоленовую кислоту (ALA), стеаридоновую кислоту (SDA), эйкозатриеновую кислоту (ETE), эйкозатетраеновую кислоту (ETA), эйкозапентаеновую кислоту (EPA), докозапентаеновую кислоту (DPA), докозагексаеновую кислоту (DHA) или комбинацию двух или более из них;
(vi) где трансгенный, не являющийся человеком организм представляет собой растение, водоросль или организм, подходящий для ферментации, такой как дрожжи или гриб;
(vii) где часть представляет собой семя, плод или вегетативную часть растения;
(viii) где трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть, или семя происходит от Brassica sp., Gossypium hirsutum, Linum usitatissimum, Helianthus sp., Carthamus tinctorius, Glycine max, Zea mays, Arabidopsis thaliana, Sorghum bicolor, Sorghum vulgare, Avena sativa, Trifolium sp., Camelina sativa, Miscanthus x giganteus или Miscanthus sinensis, или от люпина, арахиса или подсолнечника;
(ix) где общее содержание масла или общее содержание жирной кислоты, семени составляет на 0,5% (вес./вес.) - 25% (вес./вес.) больше на основе веса, чем у соответствующего семени, где отсутствует один или несколько экзогенных полинуклеотидов;
(x) где трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть или семя представляет собой вегетативную часть растения, надземную часть растения, зеленую часть растения, лист растения или стебель растения;
(xi) где содержание TAG, DAG, TAG и DAG или MAG вегетативной части растения составляет по меньшей мере на 10% (вес./вес.) больше на относительной основе, чем содержание TAG, DAG, TAG и DAG или MAG соответствующей вегетативной части растения, где отсутствует один или несколько экзогенных полинуклеотидов;
(xii) где по меньшей мере 60% (моль%) содержания жирной кислоты липида трансгенного, не являющегося человеком организма или его части, или семени представляет собой олеиновую кислоту; и
(xiii) где уровень одного или нескольких неполярных липидов и/или общее содержание неполярных липидов трансгенного организма или его части, или семени по меньшей мере на 0,5% (вес./вес.) больше на основе веса и/или по меньшей мере на 1% (вес./вес.) больше на относительной основе, чем у соответствующего организма или его части, где отсутствует один или несколько экзогенных полинуклеотидов, но который содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий DGAT1 Arabidopsis thaliana.
5. Трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть, или семя по п.1, где неполярный липид представляет собой TAG, DAG, TAG и DAG, MAG, общую PUFA или специфическую PUFA, которая представляет собой эйкозадиеновую кислоту (EDA), арахидоновую кислоту (ARA), альфа-линоленовую кислоту (ALA), стеаридоновую кислоту (SDA), эйкозатриеновую кислоту (ЕТЕ), эйкозатетраеновую кислоту (ETA), эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА), докозапентаеновую кислоту (DPA), докозагексаеновую кислоту (DHA) или комбинацию двух или более из них.
6. Способ получения экстрагированного липида, причем способ включает этапы:
i) получения трансгенного, не являющегося человеком организма или его части, или семени по любому из пп.1-5, и
ii) экстрагирования липида из трансгенного, не являющегося человеком организма или его части или семени, таким образом получая экстрагированный липид.
7. Способ по п.6, где трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть, или семя представляет собой семя канолы, которое включает одно или несколько из следующего:
i) по меньшей мере 45% масла семян на основе веса,
ii) относительное содержание масла семян по меньшей мере на 5% (вес./вес.) больше, чем у соответствующего семени,
iii) относительное содержание DAG по меньшей мере на 10% (вес./вес.) больше, чем у соответствующего семени, и
iv) относительное содержание TAG по меньшей мере на 5% (вес./вес.) больше, чем у соответствующего семени.
8. Способ по п.6, где трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть, или семя представляет собой семя кукурузы, которое включает одно или несколько из следующего:
i) по меньшей мере 5% масла семян на основе веса,
ii) относительное содержание масла семян по меньшей мере на 5% (вес./вес.) больше, чем у соответствующего семени,
iii) относительное содержание DAG по меньшей мере на 10% (вес./вес.) больше, чем у соответствующего семени, и
iv) относительное содержание TAG по меньшей мере на 5% (вес./вес.) больше, чем у соответствующего семени.
9. Способ по п.6, где трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть, или семя представляет собой семя сои, которое включает одно или несколько из следующего:
i) по меньшей мере 20% масла семян на основе веса,
ii) относительное содержание масла семян по меньшей мере на 5% (вес./вес.) больше, чем у соответствующего семени,
iii) относительное содержание DAG по меньшей мере на 10% (вес./вес.) больше, чем у соответствующего семени, и
iv) относительное содержание TAG по меньшей мере на 5% (вес./вес.) больше, чем у соответствующего семени.
10. Способ по любому из пп.6-9, где способ дополнительно включает одно или несколько из сбора семян из трансгенного растения, отжима масла семян из семени и/или очищения масла семян, и получения промышленного продукта из экстрагированного липида, где промышленный продукт представляет собой предпочтительно алкиловые сложные эфиры, такие как метиловые сложные эфиры жирных кислот.
11. Способ получения клетки с усиленной способностью к образованию одного или нескольких неполярных липидов, где способ включает следующее:
i) введение в клетку одного или нескольких экзогенных полинуклеотидов, кодирующих
a) MGAT,
b) DGAT2,
c) MGAT и GPAT,
d) MGAT и DGAT или
e) MGAT, GPAT и DGAT,
где один или несколько экзогенных полинуклеотидов функционально связаны с одним или несколькими промоторами, которые способны управлять экспрессией одного или нескольких экзогенных полинуклеотидов в клетке,
ii) экспрессирование одного или нескольких экзогенных полинуклеотидов в клетке или клетке-потомке,
iii) анализ содержания липидов клетки, и
iv) выбор клетки, имеющей повышенный уровень одного или нескольких неполярных липидов по сравнению с соответствующей клеткой, где отсутствуют экзогенные полинуклеотиды.
12. Способ по п.11, где выбранная клетка имеет один или несколько из признаков организма или его части, или семени, определенных в любом из пп.1-5.
13. Способ по п.11 или 12, где один или несколько экзогенных полинуклеотидов являются стабильно интегрированными в геном клетки.
14. Способ по п.11, дополнительно включающий этап регенерации трансгенного растения из клетки этапа i).
15. Применение одного или нескольких эндогенных полинуклеотидов, кодирующих:
i) MGAT,
ii) DGAT2,
iii) MGAT и GPAT,
iv) MGAT и DGAT или
v) MGAT, GPAT и DGAT,
для получения трансгенного, не являющегося человеком организма или его части, или семени с улучшенной способностью к образованию одного или нескольких неполярных липидов по сравнению с соответствующим организмом или его частью, или семенем, где отсутствует один или несколько экзогенных полинуклеотидов.
16. Применение по п.15, где трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть, или семя имеет один или несколько признаков организма или его части, или семени, определенных в любом из пп.1-5.
17. Способ получения семени, причем способ включает:
i) выращивание трансгенного, не являющегося человеком организма по любому из пп.1-5, который представляет собой трансгенное растение, и
ii) сбор семени от трансгенного растения.
18. Применение трансгенного, не являющегося человеком организма или его части, или семени по любому из пп.1-5, для производства промышленного продукта, предпочтительно алкиловых сложных эфиров, таких как метиловые сложные эфиры жирных кислот.
19. Применение по п.18, где промышленный продукт представляет собой топливо.
20. Экстрагированный липид, который можно получить из трансгенного, не являющегося человеком организма или его части, или семени по любому из пп.1-5, или полученный способом по любому из пп.6-10.
21. Экстрагированный липид по п.20, включающий содержание DAG, которое составляет по меньшей мере 1% (вес./вес.) на основе веса экстрагированного липида.
22. Способ получения топлива, причем способ включает:
i) реакцию липида по п.20 или 21 со спиртом, необязательно, в присутствии катализатора, для образования алкиловых сложных эфиров, и
ii) необязательно, смешивание алкиловых сложных эфиров с топливом на нефтяной основе.
23. Способ получения пищевого продукта, причем способ включает примешивание трансгенного, не являющегося человеком организма или его части, или семени по любому из пп.1-5, экстрагированного липида, полученного способом по любому из пп.6-10, или экстрагированного липида по п.20 или 21, к по меньшей мере одному другому пищевому ингредиенту.
24. Пищевые продукты, косметические средства или химические средства, содержащие трансгенный, не являющийся человеком организм или его часть, или семя по любому из пп.1-5, экстрагированный липид, полученный способом по любому из пп.6-10, или экстрагированный липид по п.20 или 21.
25. Процесс ферментации, включающий этапы:
i) обеспечения сосуда, содержащего жидкую композицию, содержащую трансгенный, не являющийся человеком организм по любому из пп.1-5, который является подходящим для ферментации, и составляющих, необходимых для ферментации и биосинтеза жирной кислоты, и
ii) обеспечения условий, способствующих ферментации жидкой композиции, содержащейся в указанном сосуде.