Биядерные координационные соединения меди (II), (i) на основе 2-тиоксо-тетрагидро-4н-имидазол-4-она: модификация для стабилизации Cu (i) в физиологических жидкостях

48

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

препарата для человека, требований ГФ XII и ОФС 42-0062-07. С помощью использования значений пороговой пирогенной дозы для препаратов для парентерального введения (5 ЕЭ/кг/ч) установлено предельное содержание бактериальных эндотоксинов для ПБА — не более 0,38 ЕЭ/мг. Это значение целесообразно рекомендовать для внесения в проект ФСП. По результатам проведенных исследований установлено, что ПБА в разведении 1/200 не ингибирует реакцию. Концентрация БЭ во всех проведенных сериях испытуемого препарата составила менее 0,228 ЕЭ/мг, что ниже рекомендованного для внесения в ФСП значения предельного содержания БЭ — не более 0,38 ЕЭ/мг.

Заключение. Содержание бактериальных эндотоксинов в данном препарате может быть определено с помощью ЛАЛ-теста. Предельное содержание бактериальных эндотоксинов для ПБА — не более 0,38 ЕЭ/мг — целесообразно рекомендовать для внесения в проект ФСП. Препарат может быть проверен в разведении 1/200.

Е.В. Литвинова, Т.М. Ермоленко ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ РУП «БЕЛМЕДПРЕПАРАТЫ»

РУП«Белмедпрепараты», Минск, Республика Беларусь

Введение. Разработка и освоение в производстве противоопухолевых препаратов и средств адъювантной химиотерапии злокачественных новообразований начаты на РУП «Белмедпрепараты» в 1994 г. и являются на протяжении более 20 лет приоритетным направлением инновационного развития предприятия.

Цель исследования — обеспечить фармацевтический рынок Республики Беларусь отечественными противоопухолевыми лекарственными средствами в соответствии с международными стандартами качества.

Материалы и методы. Для разработки противоопухолевых препаратов используются фармацевтические субстанции, качество которых соответствует Eur. Ph., USP, BP, что подтверждено документально (DMF, сертификат); производство осуществляется согласно стандартам GMP (Good Manufacturing Practice - Надлежащая производственная практика). Качество вспомогательных веществ также отвечает международным требованиям. РУП «Белмедпрепараты» оснащено современным аналитическим оборудованием, имеет квалифицированные кадры и производственную базу для проведения полного комплекса работ от разработки препаратов до их внедрения в производство.

Результаты. В настоящее время 19 наименований противоопухолевых препаратов производства РУП «Белмед-препараты» включены в современные протоколы лечения онкологических заболеваний: цитарабин, меркаптопурин, доксорубицин, циклофосфан, фотолон, гидроксикарба-мид, кладрибин, флударабел, метотрексат, паклитаксел, золедроновая кислота, оксалиплатин, темобел, кальция фолинат, анастрозол, доцетаксел, винорелбин, гемцита-бин, темодекс. Эффективность и безопасность противоопухолевых лекарственных средств в сравнении с оригинальными препаратами подтверждена в ходе клинических испытаний. В 2013 г. РУП «Белмедпрепараты» реализован

инвестиционный проект по созданию крупнейшего в СНГ производства противоопухолевых препаратов в форме ли-офилизированных порошков для приготовления растворов для инфузий и инъекций, растворов для инъекций, концентратов для приготовления растворов для инфузий во флаконах. Производство сертифицировано на соответствие требованиям GMP.

Заключение. Высокотехнологическое фармацевтическое производство, а также наличие исследовательских лабораторий, оснащенных современным аналитическим оборудованием и имеющих в штате опытных специалистов (технологов, химиков, биологов, биохимиков, фармакологов), обеспечивают выпуск на РУП «Белмедпрепараты» противоопухолевых лекарственных средств, качество которых соответствует оригинальным препаратам.

М.М. Макаров, Д.А. Гук, В.М. Малинников, О.О. Красновская, Е.К. Белоглазкина, Н.В. Зык, А.Г. Мажуга

БИЯДЕРНЫЕ КООРДИНАЦИОННЫЕ СОЕДИНЕНИЯ МЕДИ (II), (I) НА ОСНОВЕ 2-ТИОКСО-ТЕТРАГИДРО-4Н-ИМИДАЗОЛ-4-ОНА: МОДИФИКАЦИЯ ДЛЯ СТАБИЛИЗАЦИИ ОТ (I) В ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

МГУ им. М.В. Ломоносова, химический факультет, Москва, Россия

Введение. Открытие цитотоксической активности пла-тиносодержащих препаратов стало началом разработки нового класса противоопухолевых агентов — координационных соединений переходных металлов, уничтожающих раковые клетки путем разрушения структуры ДНК и утраты их способности к делению. Однако ввиду высокой общей токсичности платиновых препаратов в настоящее время ведется поиск новых координационных соединений на основе биогенных металлов, потенциально проявляющих противоопухолевую активность. Ранее в нашей лаборатории были синтезированы биядерные смешанно-валентные комплексы Си (I, II), содержащие 2-замещенные-5-алкилтиоарилметилен-4-имидазолин-4-оны, которые показали высокую цитотоксичность в отношении многих клеточных линий из-за наличия в их структуре связанных атомов Си (I). Однако в физиологических средах одновалентные комплексы меди быстро окисляются, поэтому в структуру таких соединений должны быть включены фрагменты, стабилизирующие одновалентное состояние меди.

Цель исследования — разработать синтетические подходы к внедрению хиноновых фрагментов в координационные соединения одновалентной меди на основе 2-тиок-со-тетрагидро-4Н-имидазол-4-онов для их стабилизации в физиологических средах.

Материалы и методы. Структуры полученных соединений были потверждены комплексом физико-химических методов (спектроскопия ЯМР 'Н, ИК, масс-спектроскопия высокого разрешения).

Результаты. Итог работы — получение ряда новых комплексных соединений одновалентной меди, стабилизированных за счет включения в их структуру хиноновых фрагментов. Кроме того, разработано несколько путей синтеза,

Спецвыпуск / том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

49

которые обеспечивают оптимальные выходы конечных соединений: синтез из хинонов и диаминов, синтез с Cbz-монозащищенными диаминами, синтез на основе Cu-ка-тализируемой реакции азид-алкинового присоединения (CuAAC) и прямой синтез путем аминирования хинонов 2-тиоксо-тетрагидро-4Н-имидазол-4-онами. Для соединения-лидера проведены первичные in vivo испытания.

Заключение. В результате данной работы был разработан качественно новый класс координационных соединений одновалентной меди, стабилизированных в физиологических средах и проявляющих противоопухолевую активность. Исследована токсичность полученных соединений на клеточных линиях НЕК 293 и выявлено соединение-лидер.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (РНФ № 16—33—60166).

С.Ю. Маклакова1, В.В. Топко1, А.В. Пугач1, О.С. Шубернецкая1, Е.К. Белоглазкина12, Н.В. Зык1, В.Э. Котелянский1, А.Г. Мажуга12 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ЛИГАНДОВ ASGPR ДЛЯ СОЗДАНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ НАПРАВЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯ 1МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия; 2Национальный исследовательский технологический университет «МИСиС», Москва, Россия

Введение. Асиалогликопротеиновый рецептор (ASGPR) широко используется в качестве мишени для направленного транспорта терапевтических агентов в гепа-тоциты. Ранее нами был синтезирован ряд эффективных лигандов данного рецептора. Эта работа посвящена in vitro и in vivo исследованиям способности систем на основе лигандов ASGPR проникать в опухолевые клетки на примере конъюгатов с флуоресцентными красителями.

Цель исследования — синтез и биологическое тестирование конъюгатов лигандов ASGPR с флуоресцентными красителями.

Материалы и методы. Полученные вещества анализировали с помощью спектроскопии ЯМР 'H, масс-спектро-метрии высокого разрешения, ВЭЖХ-МС. В работе использовали клеточные линии HEK-293, Huh7 и HepG2, модель альвеолярного слизистого рака печени РС-1, трансплантированную подкожно крысам Wistar.

Результаты. Исследовано влияние добавления биотина и/или хлорида кальция в культуральную среду на уровень экспрессии ASGPR. Показано, что в обоих случаях количество рецепторов на поверхности клеток Huh7 и HepG2 значительно увеличивается. Использование данных добавок способствует проникновению лигандов ASGPR: после добавления лиганда к клеточным культурам в присутствии биотина и/или хлорида кальция, последующей обработки флуоресцентным красителем и фиксации наблюдалась индукция экспрессии рецептора в клеточных линиях Huh7 и HepG2 (в контрольном эксперименте на клеточной линии HEK-293 сигнал флуоресценции отсутствовал). В in vivo исследованиях использовали конъюгаты флуоресцентного красителя Sulfo-Cy5 c лигандами ASGPR на основе с #-ацетилгалактозамина и #-ацетилглюкозамина (контр-

ольное соединение). Животным внутривенно вводили водный раствор контрольного соединения или исследуемого. Спустя 24 ч после инъекции интенсивность флуоресценции в опухоли была выше в случае конъюгата, содержащего #-ацетилгалактозамин. Синтезированные конъюгаты не проявили токсичности: ни в одной из исследуемых групп не отмечено неспецифической гибели животных.

Заключение. В результате работы показано, что добавление биотина и/или хлорида кальция в среду клеточных линий способствует увеличению количества ASGPR на поверхности и, как следствие, ведет к повышенному проникновению лигандов внутрь клеток. Конъюгаты на основе #-ацетилгалактозамина проникают в клетки рака печени на порядок лучше в сравнении с производными #-ацети-лглюкозамина.

Работа выполнена при поддержке РНФ

И.А. Мамичев, Е.А. Пономаренко, С.А. Калюжный, Д.В. Новиков, Е.А. Дудко, А.Н. Гришанина, И.Г. Воробьева, М.М. Давыдов, Т.А. Богуш

КОЭКСПРЕССИЯ БЕЛКОВ ПРОМЕЖУТОЧНЫХ ФИЛАМЕНТОВ И БЕТА-Ш ТУБУЛИНА В ТКАНИ НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ЛЕГКОГО

ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия

Введение. Молекулярная диагностика прогностических маркеров немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) — одно из интенсивно развивающихся направлений трансляционной медицины. Коэкспрессия белков промежуточных филаментов цитокератина и виментина (Цит/Вим), так называемый эпителиально-мезенхималь-ный переход опухолевых клеток эпителиального происхождения, считается неблагоприятным прогностическим признаком, свидетельствующим о повышенном риске ме-тастазирования. Бета-Ш тубулин (ТиВВЗ), изоформа белка микротрубочек бета-тубулина, также ассоциируют с неблагоприятным прогнозом заболевания, так как в литературе описана ассоциация ТиВВЗ с миграцией опухолевых клеток, инвазией и метастазированием.

Цель исследования — оценить корреляционную связь между коэкспрессией Цит/Вим и ТОВВЗ для того, чтобы ответить на вопрос, являются ли эти белки частью единого фенотипического комплекса, характеризующего метастатический потенциал НМРЛ.

Материалы и методы. Количественное иммунофлуо-ресцентное исследование коэкспрессии опухолевых маркеров в 23 хирургических образцах НМРЛ проведено методом проточной цитофлуориметрии (оценка экспрессии Цит/Вим — с использованием двойного окрашивания). В работе применены первичные и вторичные антитела: для ТиВВ — аЬ7751 и аЬ98729 (DyLight650); для Цит — М0821 ДОАКО) и аЬ98729 (DyLight650); для Вим — SP20 (BЮCARE) и аЬ98510 (DyLight650). Количественную обработку данных проводили с помощью программы FlowJo. Уровень экспрессии (количество специфически окрашенных клеток относительно показателя при инкубации с вторичными антителами) анализировали с помощью статистического критерия Колмогорова-Смирнова.

Спецвыпуск/ том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ