СПОСОБЫ ПОВЫШЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ КЛЕТОК В ПРОМЫШЛЕННОМ БИОРЕАКТОРЕ

1. Способ прогнозирования влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе, при этом способ включает:
(a) определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания в испытательном сосуде для культивирования, причем совокупность условий испытания определена набором параметров; и
(b) прогнозирование влияния концентрации сенсибилизирующего средства на жизнеспособность клеток в промышленном биореакторе на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий.
2. Способ по п. 1, где набор параметров предусматривает сдвиговое напряжение, концентрацию сенсибилизирующего средства и концентрацию вещества-протектора.
3. Способ по п. 1 или 2, где совокупность условий проведения испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где сенсибилизирующее средство представляет собой противовспенивающее средство.
5. Способ по п. 4, где противовспениватель представляет собой противовспениватель на основе полидиметилсилоксана.
6. Способ по п. 4, где противовспениватель представляет собой симетикон.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где испытательный сосуд для культивирования имеет объем от приблизительно 5 мл до приблизительно 5 л.
8. Способ по п. 7, где испытательный сосуд для культивирования имеет объем от приблизительно 10 мл до приблизительно 500 мл.
9. Способ по любому из пп. 1-8, где испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами.
10. Способ по любому из пп. 1-9, где промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л.
11. Способ по п. 10, где промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 50 л до приблизительно 10000 л.
12. Способ по любому из пп. 1-11, где промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор.
13. Способ по любому из пп. 1-11, где промышленный биореактор представляет собой биореактор периодического действия с подпиткой.
14. Способ по любому из пп. 1-13, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно обеспечивает удельный коэффициент гибели клеток, составляющий менее 40% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
15. Способ по любому из пп. 1-13, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно обеспечивает удельный коэффициент гибели клеток, составляющий менее 20% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
16. Способ по любому из пп. 1-13, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
17. Способ по любому из пп. 1-13, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 100 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
18. Способ по любому из пп. 1-13, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
19. Способ по любому из пп. 1-13, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением сенсибилизирующего средства в концентрации, которая предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 5% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
20. Способ по любому из пп. 14-19, где клетка содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок.
21. Способ по п. 20, дополнительно включающий сбор рекомбинантного терапевтического белка.
22. Способ по п. 21, дополнительно включающий очистку рекомбинантного терапевтического белка.
23. Способ по п. 22, дополнительно включающий составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком.
24. Способ по любому из пп. 1-23, где клетка представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку или клетку млекопитающего.
25. Способ по любому из пп. 1-24, где жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования.
26. Способ по любому из пп. 1-8 и пп. 10-25, где испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами, и совокупность условий испытания включает одно или несколько из:
(a) перемешивания вращением со скоростью от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 400 об/мин;
(b) концентрации сенсибилизирующего средства, составляющей от приблизительно 0 ppm до приблизительно 120 ppm; и
(c) концентрации вещества-протектора, составляющей от приблизительно 1 г/л до приблизительно 10 г/л.
27. Способ по п. 2 или 26, где вещество-протектор представляет собой полоксамер, полоксамин или полиол Pluronic.
28. Способ по п. 27, где полоксамер представляет собой полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407.
29. Способ по п. 27, где полоксамин представляет собой полоксамин-904 или полоксамин-908.
30. Способ повышения жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе, при этом способ включает:
(a) определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания в испытательном сосуде для культивирования, где совокупность условий определена набором параметров;
(b) выбор условия, которое является оптимальным для жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе, на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий; и
(d) культивирование клетки в промышленном биореакторе при выбранном условии.
31. Способ по п. 30, где набор параметров предусматривает сдвиговое напряжение, концентрацию сенсибилизирующего средства и концентрацию вещества-протектора.
32. Способ по п. 30 или 31, где совокупность условий проведения испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана.
33. Способ по п. 31 или 32, где сенсибилизирующее средство представляет собой противовспенивающее средство.
34. Способ по п. 33, где противовспениватель представляет собой противовспениватель на основе полидиметилсилоксана.
35. Способ по п. 33, где противовспениватель представляет собой симетикон.
36. Способ по любому из пп. 30-35, где испытательный сосуд для культивирования имеет объем от приблизительно 5 мл до приблизительно 5 л.
37. Способ по п. 36, где испытательный сосуд для культивирования имеет объем от приблизительно 10 мл до приблизительно 500 мл.
38. Способ по любому из пп. 30-37, где испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами.
39. Способ по любому из пп. 30-38, где промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л.
40. Способ по п. 39, где промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 50 л до приблизительно 10000 л.
41. Способ по любому из пп. 30-40, где промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор.
42. Способ по любому из пп. 30-40, где промышленный биореактор представляет собой биореактор периодического действия с подпиткой.
43. Способ по любому из пп. 30-42, где стадия (c) приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 40% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
44. Способ по любому из пп. 30-42, где стадия (c) приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 20% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
45. Способ по любому из пп. 30-42, где стадия (c) приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
46. Способ по любому из пп. 30-42, где стадия (c) приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 100 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
47. Способ по любому из пп. 30-42, где стадия (c) приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
48. Способ по любому из пп. 30-42, где стадия (c) приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 5% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
49. Способ по любому из пп. 30-48, где клетка содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок.
50. Способ по п. 49, дополнительно включающий сбор рекомбинантного терапевтического белка.
51. Способ по п. 50, дополнительно включающий очистку рекомбинантного терапевтического белка.
52. Способ по п. 51, дополнительно включающий составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком.
53. Способ по любому из пп. 30-52, где клетка представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку или клетку млекопитающего.
54. Способ по любому из пп. 30-53, где жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования.
55. Способ по любому из пп. 30-37 и пп. 39-54, где испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами, и совокупность условий испытания включает одно или несколько из:
(a) перемешивания вращением со скоростью от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 400 об/мин;
(b) концентрации сенсибилизирующего средства, составляющей от приблизительно 0 ppm до приблизительно 120 ppm; и
(c) концентрации вещества-протектора, составляющей от приблизительно 1 г/л до приблизительно 10 г/л.
56. Способ по п. 31 или 55, где вещество-протектор представляет собой полоксамер, полоксамин или полиол Pluronic.
57. Способ по п. 56, где полоксамер представляет собой полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407.
58. Способ по п. 56, где полоксамин представляет собой полоксамин-904 или полоксамин-908.
59. Способ прогнозирования жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе, при этом способ включает:
(a) выбор набора параметров, включающего по меньшей мере два параметра;
(b) определение жизнеспособности клеток при совокупности условий испытания, определенных набором параметров в испытательном сосуде для культивирования; и
(c) прогнозирование жизнеспособности клеток в промышленном биореакторе на основании жизнеспособности клеток в испытательном сосуде для культивирования при совокупности условий.
60. Способ по п. 59, где набор параметров предусматривает сдвиговое напряжение, концентрацию сенсибилизирующего средства и концентрацию вещества-протектора.
61. Способ по п. 59 или 60, где совокупность условий испытания выбирают на основании полнофакторного скрининга и/или прописанного центрального композиционного плана.
62. Способ по п. 60 или 61, где сенсибилизирующее средство представляет собой противовспенивающее средство.
63. Способ по п. 62, где противовспениватель представляет собой противовспениватель на основе полидиметилсилоксана.
64. Способ по п. 62, где противовспениватель представляет собой симетикон.
65. Способ по любому из пп. 59-64, где испытательный сосуд для культивирования имеет объем от приблизительно 5 мл до приблизительно 5 л.
66. Способ по п. 65, где испытательный сосуд для культивирования имеет объем от приблизительно 10 мл до приблизительно 500 мл.
67. Способ по любому из пп. 59-66, где испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами.
68. Способ по любому из пп. 59-67, где промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л.
69. Способ по п. 68, где промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 50 л до приблизительно 10000 л.
70. Способ по любому из пп. 59-69, где промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор.
71. Способ по любому из пп. 59-69, где промышленный биореактор представляет собой биореактор периодического действия с подпиткой.
72. Способ по любому из пп. 59-71, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 40% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
73. Способ по любому из пп. 59-71, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 20% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
74. Способ по любому из пп. 59-71, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
75. Способ по любому из пп. 59-71, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 100 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
76. Способ по любому из пп. 59-71, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
77. Способ по любому из пп. 59-71, дополнительно включающий культивирование клетки в промышленном биореакторе с применением условия, которое предположительно приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 5% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
78. Способ по любому из пп. 72-77, где клетка содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок.
79. Способ по п. 78, дополнительно включающий сбор рекомбинантного терапевтического белка.
80. Способ по п. 79, дополнительно включающий очистку рекомбинантного терапевтического белка.
81. Способ по п. 80, дополнительно включающий составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком.
82. Способ по любому из пп. 59-81, где клетка представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку или клетку млекопитающего.
83. Способ по любому из пп. 59-82, где жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования.
84. Способ по любому из пп. 59-66 и 68-83, где испытательный сосуд для культивирования представляет собой встряхиваемую колбу с дефлекторами, и совокупность условий испытания включает одно или несколько из:
(a) перемешивания вращением со скоростью от приблизительно 125 об/мин до приблизительно 400 об/мин;
(b) концентрации сенсибилизирующего средства, составляющей от приблизительно 0 ppm до приблизительно 120 ppm; и
(c) концентрации вещества-протектора, составляющей от приблизительно 1 г/л до приблизительно 10 г/л.
85. Способ по п. 60 или 84, где вещество-протектор представляет собой полоксамер, полоксамин или полиол Pluronic.
86. Способ по п. 85, где полоксамер представляет собой полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407.
87. Способ по п. 85, где полоксамин представляет собой полоксамин-904 или полоксамин-908.
88. Способ культивирования клетки в промышленном биореакторе, включающий культивирование клетки в жидкой культуральной среде при одном или нескольких из следующих условий:
3
e) промышленный биореактор характеризуется P/V (кВт/м) от приблизительно 1,0 до приблизительно 110 (например, от приблизительно 3,0 до приблизительно 8,0, от приблизительно 3,0 до приблизительно 7,0, от приблизительно 4,0 до приблизительно 6,0, от приблизительно 5,0 до приблизительно 6,0 или приблизительно 6,0);
-1
f) промышленный биореактор характеризуется показателем объема воздуха на объем жидкости в минуту (VVM) (мин) от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,10 (например, от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,08, от приблизительно 0,04 до приблизительно 0,06 или приблизительно 0,06);
g) среда содержит сенсибилизирующее средство в концентрации от приблизительно 0 ppm до приблизительно 5000 ppm (например, от приблизительно 0 ppm до приблизительно 120 ppm, от приблизительно 50 ppm до приблизительно 110 ppm, от приблизительно 80 ppm до приблизительно 100 ppm или приблизительно 100 ppm); и
h) жидкая культуральная среда содержит вещество-протектор в концентрации, которая составляет от приблизительно 1 г/л до приблизительно 15 г/л (например, от приблизительно 2 г/л до приблизительно 10 г/л, от приблизительно 3 г/л до приблизительно 7 г/л, от приблизительно 4 г/л до приблизительно 6 г/л или приблизительно 5 г/л).
89. Способ по п. 88, где сенсибилизирующее средство представляет собой противовспенивающее средство.
90. Способ по п. 89, где противовспениватель представляет собой противовспениватель на основе полидиметилсилоксана.
91. Способ по п. 89, где противовспениватель представляет собой симетикон.
92. Способ по любому из пп. 88-91, где вещество-протектор представляет собой полоксамер, полоксамин или полиол Pluronic.
93. Способ по п. 92, где полоксамер представляет собой полоксамер-188, полоксамер-401, полоксамер-402 или полоксамер-407.
94. Способ по п. 92, где полоксамин представляет собой полоксамин-904 или полоксамин-908.
95. Способ по любому из пп. 88-94, где промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 5 л до приблизительно 20000 л.
96. Способ по п. 95, где промышленный биореактор имеет объем от приблизительно 50 л до приблизительно 10000 л.
97. Способ по любому из пп. 88-96, где промышленный биореактор представляет собой перфузионный биореактор.
98. Способ по любому из пп. 88-96, где промышленный биореактор представляет собой биореактор периодического действия с подпиткой.
99. Способ по любому из пп. 88-98, где способ приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 40% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
100. Способ по любому из пп. 88-98, где способ приводит к удельному коэффициенту гибели клеток, составляющему менее 20% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
101. Способ по любому из пп. 88-98, где способ приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 150 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
102. Способ по любому из пп. 88-98, где способ приводит к удельному продуцированию LDH клеткой, составляющему менее 100 нЕд./клетка/сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
103. Способ по любому из пп. 88-98, где способ приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 1% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
104. Способ по любому из пп. 88-98, где способ приводит к кажущейся скорости роста, составляющей более 5% в сутки, в ходе культивирования клетки в промышленном биореакторе.
105. Способ по любому из пп. 88-98, где клетка содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую рекомбинантный терапевтический белок.
106. Способ по п. 105, дополнительно включающий сбор рекомбинантного терапевтического белка.
107. Способ по п. 106, дополнительно включающий очистку рекомбинантного терапевтического белка.
108. Способ по п. 107, дополнительно включающий составление рецептуры с очищенным рекомбинантным терапевтическим белком.
109. Способ по любому из пп. 88-108, где клетка представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку или клетку млекопитающего.
110. Способ по любому из пп. 88-109, где жизнеспособность клеток определяют путем измерения концентрации дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) в испытательном сосуде для культивирования