ПРИМЕНЕНИЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ СОЛИ ЧЕТВЕРТИЧНОГО ФОСФОНИЯ И ЗАМЕЩЕННОГО ДИНИТРОБЕНЗОФУРОКСАНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПИРОПЛАЗМОЗА У СОБАК И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ
APPLICATION OF PHARMACEUTICAL COMPOSITION, BASED ON SALT OF QURTERNARY PHOSPHONIUM AND SUBSTITUTED DINITROBENZOFUROXANE FOR TREATMENT OF PIROPLASMOSIS IN DOGS AND TREATMENT METHOD

Изобретение относится преимущественно к ветеринарии и медицине, а именно к способам лечения кровепаразитарных болезней преимущественно собак с использованием (пероральное применение) фармацевтической композиции на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана.
Пироплазмоз - инвазионное заболевание, вызываемое одноклеточным паразитом Piroplasma canis, который переносится иксодовыми клещами Ixodes ricinus, Dermacentor pictis, Dermacentor marginatus, Rhipicephalus sanguineus, Rhipicephalus turanicus. Сезонность заболевания совпадает с пиками активности клещей и приходится на весну и осень. После укуса клеща пироплазмы попадают в кровь, где локализуются в эритроцитах, а также в нейтрофильных лейкоцитах и моноцитах. Под их воздействием эритроциты начинают разрушаться, а их обломки оседают в почечных канальцах, закупоривая их и вызывая почечную недостаточность. Токсичные продукты распада гемоглобина вызывают нарушение работы почек, печени, сердца и центральной нервной системы. Более того, из-за нехватки кислорода, переносимого эритроцитами, у животного наступает удушье и, если не оказать первую помощь, оно может погибнуть в течение суток. Заболевание возникает через 4-7 дней после укуса клеща и протекает с высокой температурой (40-41,6°С), желтушностью слизистых оболочек, шатающейся походкой, потерей аппетита и веса, моча приобретает темно-красный цвет.
Тактика лечения пироплазмоза включает уничтожение возбудителя, снятие интоксикации и поддержание общего состояния организма.
Анализ уровня техники, проведенный заявителем, показал, что в выявленных способах лечения пироплазмоза для уничтожения возбудителя применяются препараты группы органических красителей (беренил, азидин, метиленовая синь), имидокарб дипропионат, диамидин и др. лекарственные вещества в форме инъекционных растворов [Кленова И.Ф. Ветеринарные препараты в России. - Справочник. - М.: Сельхозиздат, 2000. - С.248-249].
Так, например, известен запатентованный способ применения этидия бромистого для лечения пироплазмоза лошадей, заключающийся в том, что вводят этидий бромистый внутримышечно, однократно в дозе 0,5-1,0 мг/кг живой массы [Патент RU 2258501 «Способ применения этидия бромистого для лечения пироплазмоза лошадей»].
Известно лекарственное запатентованное средство для лечения пироплазмоза собак, содержащее беренил в качестве активного вещества и растворитель - воду, а в качестве дополнительного растворителя димефосфон, при следующем соотношении компонентов: беренил - 17,0-18,0 г; димефосфон - 0,5-1,0 г; вода для инъекции - до 100 мл. Лекарственное средство быстро всасывается и обладает пролонгированным действием. Данное лекарственное средство накапливается в достаточной терапевтической концентрации в месте преимущественной локализации пироплазм [Патент RU 2347558 «Лекарственное средство для лечения пироплазмоза собак»].
Недостатками выявленных способов лечения пироплазмоза и лекарственных препаратов для лечения пироплазмоза являются токсичность лекарственных препаратов, требующая последующего дополнительного лечения от побочных эффектов, и инъекционный путь их введения, требующий высоких затрат (шприцев-инъекторов, антисептических средств для обработки кожи в месте инъекции, участия специалиста в проведении инъекции), и опасный в отношении возможного инфицирования на месте инъекции другими патогенами.
Известна запатентованная фармацевтическая композиция на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана «Депрот-14» для лечения (пероральное применение) эймериозов у животных и птиц, выбранная заявителем в качестве прототипа [Патент RU 2473334 «Антиэймериозная фармацевтическая композиция на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана»].
Из исследованного уровня техники не известен способ перорального применения лекарственных препаратов для лечения кровепаразитарных болезней (пироплазмоза).
Задачей заявленного технического решения является разработка удобного и безопасного в применении (пероральное применение) способа лечения пироплазмоза у собак с помощью известной фармацевтической композиции на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана «Депрот-14», обладающей высокой противопаразитарной эффективностью и низкой токсичностью (ЛД50 2500 мг/кг).
Техническим результатом заявленного технического решения является применение низкотоксичной (ЛД50 2500 мг/кг) композиции на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана «Депрот-14», применяющейся перорально два раза с интервалом в 24 часа в дозе 350 мг/кг живого веса; курс лечения составляет 2 дня.
Заявленный технический результат достигается пероральным применением композиции на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана «Депрот-14», содержащей н-тетрадецилтрибутилфосфоний хлорид (А) и 5,7-бис-(м-нитроанилино)-4,6-динитробензофуроксан (В) в качестве активных компонентов и глюкозу при весовом соотношении активных компонентов 1:10, как показано на Фиг.1 и 2.
50
Сущность заявленного технического решения заключается в пероральном двухразовом применении фармацевтической композиции на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана «Депрот-14», содержащей н-тетрадецилтри-н-бутилфосфоний хлорид и 5,7-бис-(м-нитроанилино)-4,6-нитробензофуроксан в качестве активных компонентов при их весовом соотношении 1:10 и глюкозу (вспомогательное вещество), обладающей высокой противопаразитарной эффективностью и низкой токсичностью (ЛД 2500 мг/кг).
Заявленное техническое решение осуществляется следующим образом.
Пример. Изучение эффективности фармацевтической композиции на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана «Депрот-14» при лечении пироплазмоза собак.
Испытание лечебной эффективности соединения «Депрот-14» проводили в опыте, где использовали 15 собак 3-4 месячного возраста. Все животные были заражены экспериментально пироплазмозом путем введения одного мл гепаринизированной крови, взятой от спонтанно зараженных собак. Кровь вводили двукратно с интервалом в 7 дней (для гарантированного заражения подопытных животных).
Животные были разделены на 3 группы. Собакам первой группы перорально задавали порошки препарата «Депрот-14» в дозе 350 мг/кг двукратно с интервалом 24 часа. Во второй группе применили 7% раствор беренила (препарат сравнения), который вводили внутримышечно в дозе 0,5 мл на 10 кг веса двукратно с интервалом 72 часа. В третьей группе лечение животных не проводили (контроль). После заражения через каждые 24 часа из периферических сосудов брали кровь и делали мазки. На 7 и 14 дни после заражения у животных брали кровь из вены и проводили гематологические исследования.
Результаты исследований отражены в Таблице 1.
Исследования показали, что после перорального применения препарата «Депрот-14» количество эритроцитов в крови собак 1-й группы за период опыта увеличились с 5,56±0,78 до 7,08±0,7 млн/мкл. Количество лейкоцитов было в пределах нормы. При подсчете лейкоформулы установлено, что процент лимфоцитов снизился от 21,2±6,72 до 18,2±3,9, эозинофилов - от 3,48±2,28 до 2,8±2,9. Процент палочкоядерных нейтрофилов повысился от 1,2±0,96 до 2,6±0,7, пришел в норму процент моноцитов (от 17±2,48 до 8,8±0,6). Уровень гемоглобина колебался от 16,3±2,0 до 15,9±0,8 грамм на децилитр. Показатель скорости оседания эритроцитов (СОЭ) снизился от 31,8±1,9 до 7,4±3,2, т.е. пришел норму. Уровень гематокрит повысился от 33,1±4,5 до 43±4,4.
У собак 2-й группы, леченных инъекциями беренила (препарат сравнения), отмечали незначительное снижение соответственно количества лейкоцитов от 15,6±2,3 до 14,8±2,3, процента лимфоцитов от 23,8±9,8 до 20,6±7,9, моноцитов от 13,1±2,7 до 9,6±1,3. Количество эритроцитов возросло - от 6,5±1,2 до 7,4±1,5 млн/мкл. Процентное содержание эозинофилов выросло от 6,3±2,4 до 7,4±3,1, палочкоядерных нейтрофилов - от 2,2±2,4 до 3,2±2,1, сегментоядерных нейтрофилов - от 54,8±10,1 до 59,4±11,8. СОЭ снизилась от 24,2±9,8 до 11,2±8,2, процент гематокрита и показатели гемоглобина увеличились незначительно.
У нелеченых животных 3-й группы (контроль) снизились соответственно уровень эритроцитов с 5,2±1,8 до 3,8±0,7 млн/мкл, процент сегментоядерных нейтрофилов от 56,2±9,76 до 40±6,8, гематокрита - от 35,6±4,72 до 24,6±4,3. В данной группе (контроль) у собак незначительно возрос процент эозинофилов (от 4,8±2,6 до 5,2±2,8), возросли количество лейкоцитов от 23,3±5,2 до 34,4±3,7, моноцитов от 16,3±3,2 до 20,4±4,5, СОЭ от 31,4±12,9 до 42,1±16,8 мм/час.
В результате исследования установлено, что по влиянию на нормализацию показателей периферической крови у собак, больных пироплазмозом, пероральное применение препарата «Депрот-14» оказалось столь же эффективным, что и инъекции беренила.
Критерием эффективности лечения кровепаразитарных болезней является отсутствие возбудителей в мазках периферической крови (экстенс-эффективность). В результате исследования мазков периферической крови установлено, что у собак 1-й группы (пероральный прием порошка «Депрот-14») пироплазмы в эритроцитах не выявлены спустя 57 часов, во 2-й группе (лечение инъекциями беренила) - через 88 часов, что свидетельствует о преимуществе «Депрот-14» перед известным средством по критерию скорости освобождения организма от паразитов. У животных 3-й группы (контроль) пироплазмы находились в форменных элементах крови в течение всего опыта. Результаты лечения пироплазмоза собак различными препаратами приведены в Табл.2.
Таким образом, фармацевтическая композиция на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана «Депрот-14» для перорального применения обладает противопаразитарным действием на простейших. У собак, экспериментально зараженных Piroplasma canis, освобождение их организма от возбудителя происходит быстрее, чем у животных, леченных инъекциями беренила.
Композиция на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана «Депрот-14» используется в заявленном техническом решении по новому назначению - в качестве антипироплазмозного препарата, что не является очевидным для специалиста в анализируемой области техники, таким образом, заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям.
Таблица 1
Показатели
Результаты до введения препаратов
Результаты после введения через 7 дней
Результаты после введения через 14 дней
Депрот-14
Беренил
Контроль
Депрот-14
Беренил
Контроль
Депрот-14
Беренил
Контроль
Эритроциты млн./мкл
5,56±0,78
6,54±1,18
5,2±1,8
6,08±0,62
6,98±0,82
4,48±1
7,08±0,7
7,36±1,5
3,8±0,7
Лейкоциты тыс./мкл
12,92±3,49
15±2,28
12,1±4,36
12,8±3,6
15±2,5
14,48±1
12,8±3,2
14,8±2,3
18±0,8
Базофилы %
-
-
-
0,2±0,32
-
-
-
-
-
Эозинофилы %
3,48±2,8
6±2,4
4,8±2,56
5±5,6
5,8±2,32
5,2±2,6
2,8±2,9
7,4±3,1
5,2±2,8
Миелоциты %
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Юные %
-
0,8±0,32
-
-
0,2±0,3
-
-
0,2±0,3
-
Палочкоядерные %
1,2±0,96
2,2±2,2
-
2,2±1,36
3,2±2,1
-
2,6±0.7
3,2±2,1
-
Сегментоядерные %
57±4,8
54,8±10,6
56,2±9,76
61,8±5,84
58,8±7,4
47,6±8,2
67,6±6,9
59±15,8
40±6,8
Лимфоциты %
21,2±6,72
23,8±9,76
23±5,2
17±2
19,2±4,9
28,2±5,8
18,2±3,9
20,6±7,9
34,4±3,7
Моноциты %
17±2,48
13±2,72
16±3,2
13,8±2,6
12,8±3,8
19±3,2
8,8±0,6
9,6±1,3
20,4±4
СОЭ мм/час
31,8±19
24,2±24,6
31,4±12,9
17,6±25,2
18,6±11,6
34,8±15,4
7±3,2
11,2±8,2
42±16,8
Гемоглобин г/дл
16,3±2
15,4±2,06
16,4±6,6
15,5±1,5
15,2±1,2
19,5±2,6
15,9±0,8
15,8±1,1
23,5±4,4
Гематокрит %
33±4,48
42,8±9,44
35,6±4,72
37±4,8
45±7,2
29,4±3,5
43±4,4
48,2±6,2
24,6±4,3
Таблица 2
№ группы (препарат)
Колич-во животных
Экстенс-эффективность через (часы), в %
12
24
36
48
60
72
84
96
1 («Депрот-14»)
5
0
0
0
0
100
100
100
100
2 (7% раствор беренила)
5
0
0
0
0
0
0
100
100
3 /контрольная группа/
5
0
0
0
0
0
0
0
0