СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕТОКЛОПРАМИДА
METHOD FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF METOCLOPRAMIDE

Целью данного изобретения явилась разработка фотометрической методики определения метоклопрамида в лекарственных формах, воде и биологических жидкостях.
Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения медицинского препарата метоклопрамида при контроле его в процессе производства и реализации, а также при проведении медико-биологических исследований.
Метоклопрамид (4-Амино-5-хлор-N-[2-(диэтиламино)этил]-2-меток-сибензамида гидрохлорид)
2
3
Является специфическим блокатором дофаминовых (Д) рецепторов, а также серотониновых (5-НТ) рецепторов [Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. Т. 1. 14-ое издание, переработанное, исправленное и дополненное // М: ООО «Издательство Новая Волна»: Издатель С.Б. Дивов. 2002. 540 с.].
Число методов определения метоклопрамида незначительно. Для идентификации метоклопрамида предложено использовать методы ИК-спектроскопии, тонкослойной хроматографии с использованием для выявления пятен метоклопрамида раствора 4-диметиламинобензальдегида, реакцию на хлориды, реакцию на первичную ароматическую аминогруппу (взаимодействие продукта диазотирования препарата с щелочным раствором 2-нафтола) [British Pharmacopea, the Pharmaceutical Press, London // 1993. P. 429, 1010-1011].
макс
Известен способ идентификации и количественного определения метоклопрамида, основанный на образовании метоклопрамидом соединения, окрашенного в лимонно-желтый цвет (λ=380 нм), при его диазотировании [Болотов В.В., Мороз В.П., Петухова I.Ю. Iдентифiкацiя i визначення метоклопрамiду за допомогою реакцii дiaзoтyвaння та електронноi спектроскопii // Харкiв: Вicник фармацii. 2002. №1(29). С. 21-23].
-5
-4
-3
-2
Разработан способ количественного определения церукала (метоклопрамида), который наиболее близко подходит к нашему решению и взятый в качестве прототипа. Определение проводят путем обработки анализируемой пробы раствором органического реагента в кислой среде с последующим фотометрированием полученного раствора. Кислую среду создают путем добавления цитратного буферного раствора до pH 1,2-4,0, затем добавляют последовательно п-диметиламинокоричный альдегид до концентрации 4,56·10-4,56·10 М и додецилсульфат натрия до концентрации 4·10-4·10 М и фотометрируют при 540 нм [RU №2070720. Кл. G01N 21/78, G01N 33/15. Опубл. 20.12.1996]. Метод обладает высокой чувствительностью, позволяет проводить определение метоклопрамида не только в фармпрепаратах и воде, но и в различных биологических жидкостях. Вместе с тем, использование сложных аналитических форм, образующихся при использовании различных поверхностно-активных веществ в качестве модификаторов окрашенных систем, делает окраску новых аналитических форм малоустойчивыми и любое незначительное отклонение в методике проведения анализа, несомненно, приводит к ошибкам определения.
Предлагается способ определения метоклопрамида, основанный на образовании им азосоединения при взаимодействии диазотированного метоклопрамида с хромотроповой кислотой.
Реакция проходит по схеме:
Получение раствора азосоединения (азокрасителя)
3
1) Приготовление раствора метоклопрамида. 1 таблетку, содержащую 10 мг определяемого вещества, измельчают, взмучивают в 20 см воды, перемешивают 5 минут.
3
2) Получение диазотированного метоклопрамида. В полученный раствор последовательно вносят 20 г льда, 1,0 см 0,1% водного раствора нитрита натрия и 1 каплю 36% раствора соляной кислоты.
3
3
3) Приготовление раствора хромотроповой кислоты. В стакане емкостью 100 см в 20 см воды растворяют 0,04 г хромотроповой кислоты. Добавляют 1-2 кристаллика карбоната натрия и 20 г льда.
3
3
3
3
4) Получение азосоединения. В стакан емкостью 200 см переносят полученные растворы диазотированного метоклопрамида и хромотроповой кислоты и добавляют туда же 2 см 0,5% водного раствора гидроксида натрия, и доводят объем раствора азосоединения до 100 см. Раствор окрашен в красный цвет, окраска устойчива длительное время (часы, дни), 1 см полученного раствора красителя соответствует содержанию 0,1 мг метоклопрамида.
Спектры поглощения раствора азосоединения
3
3
Отбирают 1 см раствора полученного азосоединения и доводят объем до 10 см водой. Измеряют спектры поглощения в кювете толщиной 1 см относительно воды в пределах от 400 до 600 нм при pH 3; 7,2 и 11 (рис. 1).
Рис. 1. Спектры поглощения красителя: 1 - раствор при pH 3; 2 - pH 7,2; 3 - pH 11. Кювета 1 см, измерения относительно воды при 298 К.
-5
4
Концентрация красителя и, соответственно, метоклопрамида в пробе c=2,97·10 моль/л. Оптическая плотность А=0,843 при pH=7,2, толщина слоя l=1 см, молярный коэффициент светопоглощения ε=2,84·10.
Характеристики разработанных методик определения метоклопрамида в различных объектах показаны на следующих примерах.
Пример 1. Методика определения метоклопрамида в таблетках
3
3
Градуировочный график. В 10 пробирок вносят 0; 0,05; 0,10; 0,15; 0,20; 0,40; 0,50; 0,60; 0,80; 1,00 см полученного раствора красителя и доводят объем проб 1 н раствором уксусной кислоты до 10 см. Через 5 минут измеряют оптические плотности растворов при длине волны 520 нм в кювете толщиной 1 см относительно воды (рис. 2). Опыт повторяют 6 раз.
Рис. 2. Градуировочный график для определения метоклопрамида в воде. 1-6 - экспериментальные данные, 7 - рассчитанный градуировочный график (жирная линия).
3
3
3
3
3
3
3
Выполнение определения. Размалывают 1 таблетку препарата и диспергируют ее в 20 см воды. Далее в полученный раствор последовательно вносят 20 г льда, 1,0 см 0,1% водного раствора нитрита натрия и 1 каплю 36% раствора соляной кислоты. В стакане емкостью 100 см в 20 см воды растворяют 0,04 г хромотроповой кислоты, добавляют 1-2 кристаллика карбоната натрия и 20 г льда. В стакан емкостью 200 см переносят полученные растворы диазотированного метоклопрамида и хромотроповой кислоты и добавляют туда же 2 см 0,5% водного раствора гидроксида натрия. Полученная смесь окрашивается в красный цвет. Доводят объем раствора до 100 см водой.
3
3
3
p
<mrow><mi>σ</mi><mo>=</mo><mfrac><mrow><msub><mi>t</mi><mi>p</mi></msub><mi>S</mi></mrow><mrow><msqrt><mi>n</mi></msqrt></mrow></mfrac></mrow>
Из полученного раствора красителя отбирают 6 проб по 0,2 см и доводят их объемы 1 н уксусной кислотой до 10 см. Измеряют оптические плотности при 520 нм, в кювете толщиной 1 см относительно воды. По результатам измерений находят среднюю величину оптической плотности, рассчитывают среднеквадратичное отклонение S и с использованием критерия Стьюдента t=2,57 рассчитывают доверительный интервал
. Аналогичные расчеты проводятся для объема взятых проб 0,4; 0,6; 0,8 и 1,0 см.
Правильность методики определения препарата в таблетках проверена методом «введено-найдено» (таблица 1).
Пример 2. Методика определения метоклопрамида в моче
3
3
3
Градуировочный график. В 10 стаканчиков, содержащих по 50 см мочи, вносят по 0; 0,05; 0,10; 0,20; 0,40; 0,60; 0,70; 0,80; 0,90; 1,00 см раствора метоклопрамида, полученного растворением 1 таблетки препарата в 100 см воды. Далее все пробы обрабатывают как в условиях определения.
3
3
3
3
Выполнение определения. К 50 см мочи приливают 0,1 см 10% раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ), центрифугируют при 1500 об/мин в течение двух минут, центрифугаты объединяют, добавляют туда 1 см раствора, в котором содержится 0,04 г хромотроповой кислоты. Отдельно приготавливают 0,1% раствор нитрита натрия, для этого 0,1 г нитрита натрия растворяют в 100 см воды.
3
3
3
3
3
Отбирают отдельно в стаканчик объемом 100 см 1 см раствора нитрита натрия, добавляют 20 г льда, вносят туда обработанный биологический материал. В раствор хромотроповой кислоты вносят 20 г льда. Все растворы смешивают в одном стакане, где находится нитрит натрия, добавляют 2 см 0,5% раствор гидроксида натрия и перемешивают. Раствор окрашивается в красный цвет. Через 5 минут отбирают 5 см полученного раствора, вносят 5 см 1 н раствора уксусной кислоты и измеряют оптическую плотность при 520 нм в кювете толщиной 1 см относительно воды.
Правильность методики определения метоклопрамида в моче проверена методом «введено-найдено» (табл. 2).
Пример 3. Методика определения метоклопрамида в слюне
3
3
3
3
Градуировочный график. 10 отобранных проб слюны по 1 см разбавляют водой до 50 см и вносят туда 0; 0,05; 0,10; 0,20; 0,40; 0,60; 0,70; 0,80; 0,90; 1,00 см раствора метоклопрамида, полученный растворением 1 таблетки препарата в 100 см воды. Далее проводят все операции, описанные для анализа мочи.
3
3
Выполнение определения. Около 1 см слюны разбавляют водой до 50 см. Далее проводят все операции, описанные для градуировочного графика.
Правильность методики определения метоклопрамида в слюне проверена методом «введено-найдено» (табл. 3).