ПРОДУКТ ДЛЯ ЗДОРОВЬЯ СОБАК, СОДЕРЖАЩИЙ АНТИТЕЛА ПРОТИВ СОБАЧЬЕГО ПАРВОВИРУСА ТИПА 2
CANINE HEALTH PRODUCT CONTAINING ANTIBODIES AGAINST CANINE PARVOVIRUS TYPE 2

Настоящее изобретение относится к композиции, которая включает антитела против одного или нескольких определенных вирусов, бактерий и/или патогенов для применения для улучшения здоровья собаки, где композицию вводят в течение первых 24 часов жизни или в период от 24 часов до 90 дней, соответствующий возрасту собаки.
Процент смертности щенков в собаководстве с момента рождения до отлучения от матери (в возрасте 2 месяцев) драматически высокий и оценивается на уровне около 25%. Инфекционные заболевания, конкретно, септицемия и диарея являются самыми распространенными причинами смерти щенка. Кроме того, это оказывает негативное влияние на характеристики роста собаки.
Настоящее изобретение направлено на решение данной проблемы.
В первом аспекте изобретения предлагается композиция, содержащая антитела против одного или нескольких из следующих;
Вирус:
- Собачий парвовирус типа 2,
- Собачий герпесвирус,
- Собачий вирус парагриппа
- Собачий вирус чумы
- Собачий коронавирус
- Аденовирус типа 1
Бактерия:
- Bordetella bronchiseptica
- E.coli
- Streptococci
- Staphylococci
Паразит:
- Isospora
- Giardia
для применения с целью улучшения здоровья собаки, причем композицию вводят в первые 24 часа жизни или в период от последующих 24 часов и, предпочтительно, до 70 дней, соответствующих возрасту собаки, или до 90 дней, соответствующих возрасту собаки.
В настоящем изобретении предлагается гипериммунная композиция, содержащая гомологичные или гетерологичные антитела, которые специфично направлены против патогенов собаки и вводятся по точному временному графику либо рано (в первые 24 часа жизни) или поздно (в возрасте 24 часа или позднее), или и рано, и поздно.
Композиция для применения согласно первому аспекту изобретения также может содержать гидролизованный углевод и/или масло (или жир). Гидролизованный углевод может обеспечивать основу для композиции. Он также может быть полезен в качестве гипогликемического агента для предотвращения гипогликемии у щенка. Такой агент может способствовать избежанию гипогликемии (также известной как синдром потери окраса щенка) у любой породы, особенно у любой комнатной собаки. Гидролизованный углевод может представлять собой один или несколько из любого простого сахара, мальтозы, декстрозы, мальтодекстрина или фруктозы. Гидролизованный углевод может присутствовать в композиции в количестве от 10 до 50% по массе, например, 15-50%, 20-40%, 25-35% или 5-35%.
Композиция также может включать масло (которое также может относиться к жиру). Масло обеспечивает подходящий инертный носитель для антител и подходит для введения щенку согласно изобретению. Масло может быть полезным источником энергии для щенка. Подходящие масла включают подсолнечное масло, соевое масло, сурепное масло, оливковое масло, пальмовое масло/кокосовое и/или свиной жир. Предпочтительно, масло является растительным.
Композиция также может включать любой один или несколько из следующих ингредиентов: яичный порошок (предпочтительно, куриный), другой яичный продукт (предпочтительно, куриный), витамины, минералы, воду, колострум или сыворотку. Предпочтительно, композиция не включает молочную сыворотку или продукты, подобные ей. Кроме того, или альтернативно, композиция может включать один или несколько следующих компонентов:
рисовые, кукурузные, пшеничные, животные, молочные и растительные белки, животный и растительный жир, взбитую мякоть, кукурузное масло, соевое масло, рыбий жир, псиллиум, молочную сыворотку, фрукто-олигосахарид, лецитин из сои, аминокислоты (L-аргинин, DL-метионин, таурин), минералы (Ca, P, Zn, Fe, Mn, Си, I, Se), витамины (A, холин, D3, E, ниацин, C, пнатотенат кальция, B2, B1, B6, биотин, фолиевую кислоту, B12, K1), антиоксиданты.
Количество антитела, включаемое в продукт, может варьироваться от 10 до 200 мг гипериммунизированного ингредиента (яичный порошок в качестве примера)/на 1г продукта.
Антитела могут быть получены согласно любому известному методу и так, как обсуждалось в статье Sa Van Nguyen et al., 2006: 70:62-64, The Canadian journal of Veterinary Research. Количество гипериммунизированного яичного порошка может использоваться для определения количества антитела в дозировке композиции (на основе концентрации 25% IgY). Интервал от 0,24 до 0,36г гипериммунизированного цельного яичного порошка является подходящим. Принимая 25% IgY, это соответствует 0,06-0,09г IgY/100г массы собаки. IgY в данном методе получения не является специфичным.
Альтернативно, антитела могут быть получены путем вакцинации животного против целевого заболевания и с получением антител из сыворотки с образованием части композиции по изобретению. Гипериммунизированный ингредиент в данном случае получают с помощью животного (предпочтительно, сельскохозяйственного животного), получающего программу по вакцинации собаки с получением антител против патогенов собаки в каждой ткани его тела (мясо, сыворотка) или в каждом биологическом продукте (молоко, яйцо).
Гипериммунизированный раствор, содержащий гетерологичные антитела, специфично направленные против патогенов собаки, может представлять собой яйца после программы вакцинации собаки, применяемой к курицам или к другим птицам, он может представлять собой молоко или колострум коровы, овцы, козы или другого вида млекопитающего после программы вакцинации собак, применяемой к соответствующему животному (корова, овца, коза или другой вид сельскохозяйственных млекопитающих). Он может представлять собой сыворотку или мясо животных, которые следовали такой же программе вакцинации, как описано выше.
Это собственный ответ животного на вакцинацию с продуцированием гипериммунизированного раствора, который и позволяет создавать специфичные антитела.
Композиция для применения согласно первому аспекту изобретения предпочтительна в формате, который дает возможность легкого введения щенку, включая щенков в их первый день жизни. Таким образом, предпочтительные формы композиции включают спрей, жидкость, мусс или гель. Также сюда включены пищевые добавки для домашних животных, включающих порошок для рассыпания на жидкость и/или гель и/или пищу. Кроме того, включен типичный влажный или сухой корм, который может вводиться животному после отлучения щенка от матери. Предпочтительно, продукт представляет собой жидкость или гель, который представлен в форме, которая дает возможность разбрызгивания в рот щенка или позволяет легкое введение.
E. coli.
Конкретно, композиция может включать антитела против одного или нескольких перечисленных вирусов и против Композиция может содержать антитела против собачьего коронавируса и/или аденовируса типа 1.
Несколько различных продуктов благодаря различной геолокализации заболеваний и различному сайту действия (местное или системное) включены согласно настоящему изобретению.
Изобретение включает продукт согласно первому аспекту, который может включать:
Антитела против каждого из следующих: собачьего парвовируса типа 2, собачьего герпесвируса, собачьего вируса парагриппа, собачьего вируса чумы, собачьего коронавируса и аденовируса типа 1 в любой комбинации. Продукт может альтернативно включать любую их комбинацию из двух или более, как например, антитела против следующих вирусов:
- Собачий парвовирус типа 2 и собачий герпесвирус
- Собачий парвовирус типа 2 и собачий вирус парагриппа
- Собачий парвовирус типа 2 и собачий вирус чумы
- Собачий парвовирус типа 2 и аденовирус типа 1
- Собачий герпес вирус и собачий вирус парагриппа
- Собачий герпес вирус и собачий вирус чумы
- Собачий герпес вирус и собачий коронавирус
- Собачий герпес вирус и собачий аденовирус типа 1
- Собачий вирус парагриппа и собачий вирус чумы
- Собачий вирус парагриппа и собачий коронавирус
- Собачий вирус парагриппа и аденовирус типа 1
- Собачий вирус чумы и собачий коронавирус
- Собачий вирус чумы и аденовирус типа 1
- Собачий коронавирус и аденовирус типа 1
- Собачий парвовирус типа 2, собачий герпесвирус и собачий вирус парагриппа
- Собачий парвовирус типа 2, собачий герпесвирус чумы
- Собачий парвовирус типа 2, собачий вирус парагриппа и собачий вирус чумы
- Собачий герпесвирус, собачий вирус парагриппа и собачий вирус чумы
- Собачий парвовирус типа 2, собачий герпесвирус и собачий коронавирус
- Собачий парвовирус типа 2, собачий герпесвирус и аденовирус типа 1
- Собачий парвовирус типа 2, собачий вирус парагриппа и собачий коронавирус
- Собачий парвовирус типа 2, собачий вирус парагриппа и аденовирус типа 1
- Собачий герпесвирус, собачий вирус парагриппа и собачий коронавирус
- Собачий герпесвирус, собачий вирус парагриппа и аденовирус типа 1
- Собачий парвовирус типа 2, собачий вирус чумы и собачий коронавирус
- Собачий парвовирус типа 2, собачий вирус чумы и аденовирус типа 1
- Собачий герпесвирус, собачий вирус чумы и собачий коронавирус
- Собачий герпесвирус, собачий вирус чумы и аденовирус типа 1
- Собачий вирус парагриппа, собачий вирус чумы и собачий коронавирус
- Собачий вирус парагриппа, собачий вирус чумы и аденовирус типа 1
- Собачий парвовирус типа 2, собачий коронавирус и аденовирус типа 1
- Собачий герпесвирус, собачий коронавирус и аденовирус типа 1
- Собачий вирус парагриппа, собачий коронавирус и аденовирус типа 1
- Собачий вирус чумы, собачий коронавирус и аденовирус типа 1
Любая из комбинаций также может включать антитела против одного, двух или трех из следующих в любой комбинации:
- Bordetella bronchiseptica
- E. coli
- Streptococci
- Staphylococci
Любая вышеописанная комбинация также может включать антитела против одного или обоих из следующих:
- Isospora
- Giardia
E. coli
Пример продукта (a): антитела против собачьего парвовируса типа 2 и против для раннего введения (в первые 24 часа жизни, системно)
Пример продукта (b): антитела против собачьего коронавируса и против собачьего парвовируса типа 2 (местно)
Пример продукта (c): антитела против вируса чумы и против аденовируса типа 1.
Пример продукта (d): антитела против герпесвируса (раннее введение) (в первые 24 часа жизни).
Пример, касающийся раннего введения (первый день жизни):
Половина специфичных IgY (представляющая неизвестную часть суммарного содержания IgY) может содержать специфичные антитела против собачьего парвовируса типа 2), и другая их половина может содержать специфичные антитела против E.coli).
Пример, касающийся позднего введения (после или отдельно от раннего введения): Половина специфичных IgY (представляющая неизвестную часть суммарного содержания IgY) может содержать антитела против собачьего парвовируса типа 2) и другая их половина может содержать специфичные антитела против собачьего коронавируса).
Композиция согласно первому аспекту изобретения может быть такой, где здоровье собаки относится к кишечному иммунитету и/или к росту и/или к стрессу.
Эффект соответственно вводимой композиции заключается в улучшении здоровья собаки и зоотехнических характеристик путем улучшения общего и кишечного иммунитета.
Эффект раннего введения (в первые 24 часа жизни) специфичных антител состоит в повышении системного иммунитета. Специфичные антитела будут поглощаться кровотоком, обеспечивая немедленную продолжительную защиту после однократной (и затем, возможно, двойной) дозы. Таким образом, изобретение имеет два пути положительного действия согласно времени введения. Раннее введение (в первые 24 часа) позволяет специфичным антителам пройти сквозь кишечный барьер для достижения кровеносной системы. Это приводит в результате к системному защитному действию, которое может быть против, по меньшей мере, патогенов-мишеней программы вакцинации, применяемой к животному, продуцирующему гипериммунизированный раствор с помощью собственного ответа на вакцинацию). Композиция первого аспекта изобретения способна действовать перед тем, как кишечный барьер закроется, если она будет даваться в первые 24 часа жизни в виде антител гипериммунизированного раствора, попадая непосредственно в кровоток. Когда композицию дают в возрасте 24 часов или после этого, то она модулирует и положительно регулирует последствия стресса у животного (такого как отлучение от матери, интенсивные упражнения и т.д.) в пищеварительном тракте, включая паразитную нагрузку, воспаление, нарушение равновесия микрофлоры и т.д.. Когда композицию дают в возрасте 24 часов или после этого, эффект будет представлять собой местный эффект в пищеварительном тракте/ротовой полости.
Композиция по изобретению может вводиться один раз или дважды в течение первых 24 часов жизни. Композиция может вводиться в первые 8 часов жизни, по меньшей мере, с интервалом 4 часа. Введение может максимизировать антитела, попадающие в общую систему циркуляции крови животного. Введение в возрасте 24 часов или после этого может осуществляться, по меньшей мере, раз в день или более часто. Такая же или другая композиция согласно изобретению может вводиться в течение первых 24 часа жизни и в возрасте 24 часов и после этого.
После первого дня жизни рекомендация будет такой же, как для молочных продуктов для собак, как описано ниже:
Размер собаки, соответствующий взрослой/Количество
Возраст (недели)
Дозировка/на 24 часа
Мини 1-10 кг
средняя 11-25 кг
Макси 26-44 кг
Огромная >45 кг
0-20 фунтов
56-100 фунтов
>100 фунтов
1
x8
3-10мл
5-20мл
10-25мл
15-35 мл
2
x5
10-30мл
15-50мл
37-70мл
40-80 мл
3
x4
20-50мл
35-90мл
60-120мл
85-125 мл
4
x4
25-60мл
45-125мл
90-170мл
120-190 мл
Возраст в неделях
Дозировка/на 24 часа
Количество
1
x7
2-4 мл
2
x6
5-10 мл
3
x5
10-15 мл
4
x5
10-15 мл
Продукт может быть составлен следующим образом:
Пропорция яичного порошка согласно 4 вариантам для продукта, походящего для распыления:
Вариант 1: использование цельного яичного порошка, разведенного в масле и/или в жире без декстрозы:
Пропорция гипериммунизированного цельного яичного порошка от 5 до 30% продукта (на основе введения в виде спрея).
Вариант 2: использование цельного яичного порошка, разведенного в масле и/или в жире с декстрозой:
Пропорция гипериммунизированного цельного яичного порошка от 5 до 30% продукта с декстрозой от 10% до 30% (на основе введения в виде спрея).
Вариант 3: использование порошка яичного желтка, разведенного в масле и/или в жире без декстрозы:
Пропорция гипериммунизированного цельного яичного порошка от 1 до 20% продукта (на основе введения в виде спрея).
Вариант 4: использование порошка яичного желтка, разведенного в масле и/или в жире с декстрозой:
Пропорция гипериммунизированного цельного яичного порошка от 1 до 20% продукта с декстрозой от 10% до 30% (на основе введения в виде спрея).
Во втором аспекте изобретения предлагается композиция согласно первому аспекту изобретения без ограничения по применению или по графику введения.
Соответственно, во втором аспекте изобретения предлагается композиция, содержащая антитела против одного или нескольких из следующих:
Вирус:
- Собачий парвовирус типа 2,
- Собачий герпесвирус,
- Собачий вирус парагриппа
- Собачий вирус чумы
- Собачий коронавирус
- Аденовирус типа 1
Бактерия:
- Bordetella bronchiseptica
- E.coli
- Streptococci
- Staphylococci
Паразит:
- Isospora
- Giardia
Все предпочтительные признаки первого аспекта также применимы ко второму аспекту. Это включает, что композиция может содержать гидролизованный углевод и/или масло (или жир), как представлено согласно первому аспекту изобретения, включая принимаемые количества.
Масла могут быть такими, как описано выше для первого аспекта изобретения. Другие дополнительные ингредиенты также могут быть такими, как описано выше согласно первому аспекту изобретения. Антитела могут быть получены согласно вышеописанным методам. Формат второго аспекта изобретения такой, как описано выше относительно первого аспекта.
Для улучшения здоровья собаки, предпочтительно, в случае, где собака нуждается в улучшении здоровья, введение композиции, содержащей антитела против одного или нескольких из следующих:
Вирус:
- Собачий парвовирус типа 2,
- Собачий герпесвирус,
- Собачий вирус парагриппа
- Собачий вирус чумы
- Собачий коронавирус
- Аденовирус типа 1
Бактерия:
- Bordetella bronchiseptica
- E.coli
- Streptococci
- Staphylococci
Паразит:
- Isospora
- Giardia
Предпочтительно, введение композиции осуществляют в течение первых 24 жизни или непосредственно в возрасте 24 часов.
Более предпочтительные признаки первого и второго аспекта изобретения также применяются к третьему аспекту.
Конкретно, третий аспект изобретения относится к композиции согласно первому и/или второму аспекту изобретения. Введение может осуществляться в возрасте от 24 часов до 70 дней или до 90 дней.
Изобретение конкретно относится к улучшению здоровья собаки, конкретно, к улучшению здоровья щенков от рождения до момента отлучения от матери (в возрасте около 2 месяцев). Здоровье собаки, которое следует улучшить, конкретно относится к улучшению кишечного иммунитета, к росту и/или к стрессу.
Кроме того, здоровье, которое следует улучшить, относится к инфекционным заболеваниям (включая септицемию и диарею), паразитарным инфекциям, воспалению и к нарушению микрофлоры (что относится к здоровью кишечника). Конкретно, композиция относится к предотвращению и/или к лечению инфекций, относящихся к конкретным вирусам, бактериям или паразитам, наработанные антитела к которым присутствуют в композиции.
Настоящее изобретение описано со ссылкой на следующие неограничивающие примеры:
Примеры
Пример 1
Введение:
Иммуноглобулиновую терапию использовали в течение десятилетий для людей и в ветеринарной медицине для лечения или предотвращения инфекционных заболеваний у преждевременно рожденных новорожденных или у индивидуумов с пассивным повреждением иммунитета. Бесспорно, корректная прибавка веса (WG) отражает состояние хорошего здоровья. Целью данного исследования является оценка эффекта введения иммуноглобулинов в отношении прибавки веса у щенков.
Материалы и методы:
Протокол осуществляли в коммерческом питомнике с различными породами (300 самок).
Протокол:
Оценивали две схемы введения:
- Раннее введение:
в первые четыре и восемь часов после рождения щенки получали пероральное введение иммуноглобулинов
- Позднее введение:
щенки получали пероральное введение каждые 3 дня начиная с Дня 2 до Дня 60.
Щенков кормили материнским колострумом/молоком и затем постепенно отлучали от матери. При рождении их распределяли в одну из четырех следующих групп:
- Нет введения (00)
- Только раннее введение (E0)
- Раннее и Позднее введение (EL)
- Только позднее введение (0L)
Работу осуществляли следующим образом:
Проверка концепции: введение обеспечивалось посредством собачьей иммунной сыворотки.
Влияние введения иммуноглобулинов на общий иммунитет, здоровье кишечника и степень смертности: введение с использованием собачьей сыворотки
Забор собачьей сыворотки
Взрослых собак вакцинировали против Чумы, Аденовируса, Парвовируса, вируса Парагриппа, Бордетеллы (одна инъекция) и против Герпесвируса 1 (две инъекции, с интервалом две недели). Через две недели после второй вакцинации собирали кровь с помощью катетеризации яремной вены после хирургической подготовки области.
Забор крови (для приготовления сыворотки) осуществляли на:
- взрослых собаках с массой тела выше чем 10 кг
- для самцов не требовалось никаких ограничений, кроме массы тела;
- для самок, исключали самок с анэструсом в последнем месяце, беременных или тех, у кого первый месяц лактации.
Каждое животное взвешивали перед забором крови. Количество собранной крови рассчитывали как 7 мл/кг массы тела. Для неповторяющихся заборов крови, Hohenhaus, (2006) и Frey (2009) обнаружили безопасную степень забора 17 мл/кг, Schneider (1995) собирал 22 мл крови/на 1 кг массы тела.
Сыворотку экстрагировали путем гемокоагуляции при комнатной температуре и с помощью центрифугирования. Ее разделяли на аликвоты в 4мл-пробирки в стерильных условиях (ламинарный шкаф). Бактериологический анализ (анаэробные и анаэробные культуры) проводили перед введением.
Уход за щенками (фигура 3)
240 или 320 щенков включали в эксперимент. Распределение внутри групп рандомизировали, принимая во внимание массу при рождении (деление на квартили в пропорции взрослой массы). Щенков идентифицировали благодаря окрашенному шерстяному ошейнику. Было доказано в том же питомнике, что метод безвреден для щенков и их матери (никаких сжатий, никаких ограничений конечностей). Ошейник меняли каждую неделю в момент манипуляций для забора образцов с целью соответствия росту щенков.
От Дня 1 до Дня 4
: масса
от Дня 7 до Дня 63
раз в неделю:
- масса, клиническое обследование, измерение ректальной температуры (подходящий гладкий конец)
- введение 15 мл сыворотки/на 1 кг массы щенка перорально (зонд для искусственного кормления в течение первой недели и после шприц для кормления)
- забор кала
Метод: Кал собирали после спонтанной дефекации и с помощью внутриректального мазка с использованием тампона (один мазок для вирусной нагрузки; один для микробиоты)
для: - анализа кала (начиная с Дня 28) на основе шкалы «Royal Canin», адаптированной для щенков с помощью Grellet
- фекальной микробиоты
- количественной оценки вирусной нагрузки (парвовирус/коронавирус)
(Isospora, Toxocara, Giardia)
- количественной оценки паразитной нагрузки
- анализа маркеров здоровья кишечника (калпротректин)
- маркеров кишечного иммунитета (суммарное количество иммуноглобулинов A; антитела к парвовирусу и антитела к коронавирусу)
- забор крови
Метод: Кровь собирали из яремной вены у щенков латерально или дорсально в лежачем положении. Вена видна при использовании стерильной воды, которую капают локально. Забор осуществляли с помощью иглы 23 G и 2мл-шприца. Пальцевидная компрессия в месте укола затем сохранялась в течение 1 минуты. Щенка освобождали только после контроля отсутствия любого стойкого кровотечения. Собирали максимум 0,7мл крови на 100г массы тела щенка. Забор 10% объема циркуляции возможен без каких-либо проблем, то есть если объем циркуляции крови представляет 8% массы тела: то максимальный объем составляет 0,8 мл на 100 г массы тела щенка. Такой протокол уже использовался успешно у 56 щенков, у которых производили забор образцов в День 0, День 2, День 7 и раз в неделю до Дня 60 с отсутствием смертности, вызванной забором крови (Chastant-Maillard et al, 2010), и у 20 щенков производили забор раз в неделю с Дня 0 до Дня 56 (Casseleux, 2007).
для - анализа суммарных иммуноглобулинов
- анализа специфичных антител (к парвовирусу, герепесвирусу, коронавирусу)
- анализа цитруллина
Сыворотку из гипериммунизированных собак готовили и хранили при -20°C до момента выполнения эксперимента. Размер породы, вес и состояние здоровья каждого новорожденного щенка записывали с момента рождения и до Д56 каждую неделю. В зависимости от типа и времени введения сыворотки щенков включали в 4 различные группы: раннего введения (EO, n=36), раннего и позднего (EL, n=34), позднего (OL, n=41) и контрольного (00, n=38). Щенки из групп EO и EL получали сыворотку перорально (1,5 мл/100г массы тела) 2 раза в первые 8 часов жизни. Щенки из групп EL и OL получали сыворотку перорально (3 мл/на щенка) 2 раза в неделю с дня Д2 до Д52. Данные анализировали с использованием тестов хи-квадрата (смертность) и ANCOVA (прибавка веса).
Результаты
В течение первого 21 дня жизни щенков из групп раннего введения (EO и EL) щенки демонстрировали меньше клинических признаков заболеваний, чем щенки из других групп (OL и 00) (16% (11/70) по сравнению с 30% (24/79), p=0,045). В течение периода Д2-28 имела место тенденция к большей прибавке веса WG у щенков крупных пород при раннем введении (EO, EL в среднем 786,6г по сравнению с OL, 00 717,9г; p=0,078), а также у щенков небольших пород при позднем введении (EL, OL 730,4г по сравнению с EO, 00 731,8г). Результаты представлены на Фигуре 1 и на Фигуре 2. В течение периода Д29-49 WG была значительно выше у щенков крупных пород при позднем введении по сравнению с другими щенками (EL, OL 2445,7г по сравнению с EO, 00 2294,0г; p=0,006).
Заключение:
В данном исследовании у щенков, которым вводили взрослую сыворотку в период до момента закрытия рефлекторной дуги кишечника, любая патология в течение неонатального периода проявлялась реже. Лучшая WG наблюдалась при раннем и позднем введении у животных до момента отлучения от матери. Это демонстрирует, что иммуноглобулиновая терапия представляет собой профилактику против смертности и профилактику здоровья щенков.
Результаты представлены на Фигурах 1 и 2.
На Фигуре 1 представлены первые результаты, касающиеся смертности. Значительные результаты с самого начала - Стадия 1 - Смертность=видимые признаки заболевания у живого щенка в конкретный период. Раннее введение значительно УМЕНЬШАЛО СМЕРТНОСТЬ.
На Фигуре 2 представлены первые результаты, касающиеся роста. Значительные результаты с самого начала - скорость роста КРУПНОЙ СОБАКИ улучшалась. Контрольная группа из собачьего питомника оказалась НЕ безопасной группой (вирусные и паразитные инфекции). До достижения возраста 2 месяца: самый быстрый рост является признаком самой высокой безопасности для щенков.
На Фигуре 3 представлен протокол забора образцов.