СПОСОБЫ И ПРОДУКТЫ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ И ДОСТАВКИ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ

1. In vivo cпособ лечения буллезного эпидермолиза, включающий:
доставку пациенту синтетической РНК, кодирующей редактирующий ген белок, который нацелен на ген COL7, пациенту и
индукцию одноцепочечного или двухцепочечного разрыва в гене COL7 клеток кожи пациента,
тем самым устраняя мутацию, которая по крайней мере частично ответственна за фенотип заболевания, где:
синтетическую РНК доставляют в клетки кожи пациента путем инъекции в кожу, и
редактирующий ген белок содержит ДНК-связывающий домен и нуклеазный домен.
2. Способ по п.1, в котором редактирующий ген белок способен нацеливаться на последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78.
3. Способ по п.1, в котором редактирующий ген белок выбран из группы, состоящей из нуклеазы, подобной активатору транскрипции эффекторной нуклеазы (TALEN), цинк-пальцевой нуклеазы, мегануклеазы, никазы и белка, ассоциированного с короткими палиндромными повторами, регулярно расположенными группами (CRISPR).
4. Способ по п.1, в котором синтетическая РНК дополнительно содержит одну или обе структуры: 5'-кэп и 3'-поли(A) хвост.
5. Способ по п.1, в котором синтетическая РНК дополнительно содержит одну или обе структуры: 5'-кэп и 3'-поли(A) хвост.
6. Способ по п.1, в котором ДНК-связывающий домен и нуклеазный домен разделены линкером.
7. Ex vivo cпособ лечения дистрофического буллезного эпидермолиза, включающий:
(а) получение выделенной клетки кожи;
(b) доставку в выделенную клетку кожи синтетической РНК, кодирующей редактирующий ген белок, который нацелен на ген COL7 и которая индуцирует одноцепочечный или двухцепочечный разрыв в гене COL7 выделенной клетки кожи, тем самым устраняя мутацию, которая по крайней мере частично ответственна за фенотип дистрофического буллезного эпидермолиза и производство генно-модифицированной клетки,
где редактирующий ген белок содержит ДНК-связывающий домен и нуклеазный домен; и
(с) введение генетически модифицированной клетки больному с дистрофическим буллезным эпидермолизом для улучшения одного или нескольких симптомов заболевания, связанных с дистрофическим буллезным эпидермолизом.
8. Способ по п.7, в котором редактирующий ген белок выбран из группы, состоящей из нуклеазы, подобной активатору транскрипции эффекторной нуклеазы (TALEN), цинк-пальцевой нуклеазы, мегануклеазы, никазы и белка, ассоциированного с короткими палиндромными повторами, регулярно расположенными группами (CRISPR).
9. Способ по п.7, в котором редактирующий ген белок способен нацеливаться на последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78.
10. Способ по п.7, в котором синтетическая РНК дополнительно содержит одну или обе структуры: 5'-кэп и 3'-поли(A) хвост.
11. Способ по п.7, в котором синтетическая РНК дополнительно содержит одну или обе структуры: 5'-кэп и 3'-поли(A) хвост.
12. Способ по п.7, где ДНК-связывающий домен и нуклеазный домен разделены линкером.
13. Способ по п.7, в котором выделенная клетка кожи представляет собой кератиноцит.
14. Ex vivo cпособ лечения дистрофического буллезного эпидермолиза, включающий:
получение выделенной клетки кожи;
доставку синтетической РНК, кодирующей редактирующий ген белок, который нацелен на ген COL7 в выделенную клетку кожи, и доставку матрицы восстановления COL7 в выделенную клетку кожи, тем самым редактируя ген COL7 и производя клетку с отредактированным геномом,
где редактирующий ген белок содержит ДНК-связывающий домен и нуклеазный домен и вызывает одноцепочечный или двухцепочечный разрыв в гене COL7 выделенной клетки кожи; и
введение генетически модифицированной клетки больному с дистрофическим буллезным эпидермолизом для улучшения одного или нескольких симптомов заболевания, связанных с дистрофическим буллезным эпидермолизом.
15. Способ по п.14, в котором матрица восстановления COL7 представляет собой одноцепочечную молекулу ДНК или двухцепочечную молекулу ДНК.
16.Способ по п.14, в котором матрица восстановления COL7 не содержит сайта связывания редактирующего ген белка.
17. Способ по п.14, в котором редактирующий ген белок выбран из группы, состоящей из нуклеазы, подобной активатору транскрипции эффекторной нуклеазы (TALEN), цинк-пальцевой нуклеазы, мегануклеазы, никазы и белка, ассоциированного с короткими палиндромными повторами, регулярно расположенными группами (CRISPR).
18. Способ по п.14, в котором редактирующий ген белок нацеливается на последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78.
19. Способ по п.14, в котором синтетическая РНК дополнительно содержит одну или обе структуры: 5'-кэп и 3'-поли(A) хвост.
20. Способ по п.14, в котором синтетическая РНК дополнительно содержит одну или обе структуры: 5'-кэп и 3'-поли(A) хвост.
21. Способ по п.14, где ДНК-связывающий домен и нуклеазный домен разделены линкером.
22. Способ по п.14, в котором выделенная клетка кожи представляет собой кератиноцит.
23. Способ лечения дистрофического буллезного эпидермолиза, включающий
(а) получение неплюрипотентной клетки;
(b) доставку первой синтетической РНК, кодирующей генетически модифицированный белок, который нацелен на ген COL7, в неплюрипотентную клетку и доставку второй синтетической РНК, кодирующей фактор перепрограммирования в неплюрипотентную клетку, тем самым получая генетически модифицированную и перепрограммированную клетку;
где:
(i) редактирующий ген белок содержит ДНК-связывающий домен и нуклеазный домен и вызывает одноцепочечный или двухцепочечный разрыв в гене COL7 клетки; и
(ii) клетка экспрессирует фактор перепрограммирования, приводящий к перепрограммированию клетки; и
(с) введение генетически модифицированной и перепрограммированной клетки больному с дистрофическим буллезным эпидермолизом для улучшения одного или нескольких симптомов заболевания, связанных с дистрофическим буллезным эпидермолизом.
24. Способ по п. 23, в котором первую синтетическую РНК доставляют в клетку перед доставкой в клетку второй синтетической РНК в клетку.
25. Способ по п.24, где неплюрипотетная клетка является клеткой млекопитающего.
26. In vivo cпособ лечения буллезного эпидермолиза, включающий:
доставку синтетической РНК, кодирующей редактирующий ген белок, который нацелен на ген COL7, пациенту и
доставку матрицу восстановления COL7 пациенту, тем самым редактируя ген COL7, где:
синтетическую РНК и матрицу восстановления доставляют в клетки кожи пациента путем введения в клетки кожи и
редактирующий ген белок содержит ДНК-связывающий домен и нуклеазный домен и вызывает двухцепочечный разрыв в гене COL7 клеток кожи пациента.
27. Способ по п.26, в котором редактирующий ген белок корректирует или устраняет, либо самостоятельно, либо в комбинации с одной или несколькими другими молекулами или редактирующими ген белками, мутацию, которая по меньшей мере частично ответственна за фенотип заболевания.
28. Способ по п.26, в котором матрица восстановления COL7 представляет собой одноцепочечную молекулу ДНК или двухцепочечную молекулу ДНК.
29. Способ по п.26, в котором матрица восстановления COL7 не содержит сайта связывания редактирующего ген белка.
30. Способ по п.26, в котором редактирующий ген белок нацеливается на последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78.
31. Способ по п.26, в котором редактирующий ген белок выбран из группы, состоящей из нуклеазы, подобной активатору транскрипции эффекторной нуклеазы (TALEN), цинк-пальцевой нуклеазы, мегануклеазы, никазы и белка, ассоциированного с короткими палиндромными повторами, регулярно расположенными группами (CRISPR).
32. Фармацевтическая композиция для применения по п.26, в которой синтетическая молекула РНК дополнительно содержит одну или более из: 5'-кэп, 5'-кэп 1 структуры и 3'-поли(А) хвоста.
33. In vivo cпособ лечения буллезного эпидермолиза, включающий:
доставку синтетической РНК, кодирующей редактирующий ген белок, который нацелен на ген COL7, пациенту и
индукцию однонитевого или двухнитевого разрыва в гене COL7 клеток кожи пациента,
тем самым устраняя мутацию, которая по крайней мере частично ответственна за фенотип заболевания, где:
синтетическую РНК доставляют в клетки кожи пациента путем введения в кожу, и
редактирующий ген белок содержит ДНК-связывающий домен и нуклеазный домен.
34. Способ по п.33, в котором редактирующий ген белок способен нацеливаться на последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78.
35. Способ по п.33, в котором редактирующий ген белок выбран из группы, состоящей из нуклеазы, подобной активатору транскрипции эффекторной нуклеазы (TALEN), цинк-пальцевой нуклеазы, мегануклеазы, никазы и белка, ассоциированного с короткими палиндромными повторами, регулярно расположенными группами (CRISPR).
36. Способ по п.33, в котором синтетическая РНК дополнительно содержит одну или обе структуры: 5'-кэп и 3'-поли(A) хвост.
37. Способ по п.33, в котором синтетическая РНК дополнительно содержит одну или обе структуры: 5'-кэп и 3'-поли(A) хвост.
38. Способ по п.33, где ДНК-связывающий домен и нуклеазный домен разделены линкером.