СПОСОБЫ ФОРМИРОВАНИЯ БАНКА КЛЕТОК ВЫСОКОЙ ПЛОТНОСТИ

1. Способ формирования без центрифугирования банка замороженных клеток с высокой плотностью, данный способ включает
a) культивирование клеток в перфузионном биореакторе, где указанный биореактор перемешивают для эффективного смешивания и газообмена, при этом указанный биореактор связан с системой удерживания клеток;
b) концентрирование указанных клеток без центрифугирования чтобы получить концентрированную клеточную популяцию;
c) криоконсервирование концентрированной клеточной популяции, чтобы получить банк замороженных клеток с высокой плотностью.
2. Способ по п. 1, в котором система удерживания клеток содержит систему чередующейся тангенциальной проточной фильтрации, содержащую фильтр.
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3. Способ по п. 2, в котором фильтр имеет площадь поверхности по меньшей мере 0,3 м, предпочтительно от примерно 0,3 м до примерно 0,5 м, от примерно 0,5 м до примерно 1,0 м, от примерно 0,7 м до примерно 0,8 м, от примерно 1,0 м до примерно 2,0 м, от примерно 2,0 м до примерно 3,0 м, от примерно 3,0 м до примерно 4,0 м или от примерно 4,0 м до примерно 5,0 м.
4. Способ по п. 1, в котором фильтр имеет размер пор, выбранный из группы, состоящей из 0,2 мкм, 0,4 мкм и 0,65 мкм.
8
8
8
8
8
8
8
5. Способ по п. 1, в котором концентрированная клеточная популяция имеет плотность клеток, выбранную из группы, состоящей из 1,0×10, 1,1×10 клеток/мл, 1,2×10 клеток/мл, 1,3×10 клеток/мл, 1,5×10 клеток/мл, 1,7×10 клеток/мл и 2,0×10 клеток/мл.
6. Способ по п. 1, в котором указанное криоконсервирование включает добавление диметилсульфоксида (DMSO) к концентрированной клеточной популяции при конечной концентрации от примерно 5% до примерно 10% по объему.
7. Способ по п. 1, в котором указанное криоконсервирование включает замораживание по меньшей мере части концентрированной клеточной популяции в контейнере, подходящем для хранения при условиях криоконсервирования.
8. Способ по п. 7, в котором контейнер является флаконом.
9. Способ по п. 7, в котором контейнер является криомешком.
8
10. Способ по п. 1, в котором банк замороженных клеток с высокой плотностью имеет плотность клеток примерно 1×10 клеток/мл.
11. Способ по п. 1, в котором скорость перфузии в перфузионном биореакторе находится в интервале от примерно 0,02 нл/клетку/день до примерно 0,5 нл/клетку/день.
12. Способ по п. 1, в котором культура клеток в перфузионном биореакторе имеет pH между примерно 6,8 и примерно 7,2.
13. Способ по п. 1, в котором культура клеток в перфузионном биореакторе имеет концентрацию растворенного кислорода по меньшей мере примерно 30%.
14. Способ по п. 1, в котором биореактор является биореактором в виде эластичного мешка.
15. Способ по п. 1, в котором банк замороженных клеток с высокой плотностью имеет жизнеспособность после размораживания, выбранную из по меньшей мере 60%, по меньшей мере примерно 90% и по меньшей мере примерно 95%.
16. Способ по п. 1, в котором клетки являются клетками млекопитающих.
17. Способ по п. 1, в котором клетки являются трансфицированными клетками.
18. Способ формирования без центрифугирования банка замороженных клеток с высокой плотностью, данный способ включает
2
a) культивирование клеток в перфузионном биореакторе, связанном с системой чередующейся тангенциальной проточной фильтрации, где биореактор содержит биореактор в виде эластичного мешка, и где фильтр имеет площадь фильтрующей поверхности по меньшей мере 0,3 м и размер пор, соответствующий номинальному отсечению по молекулярной массе (MWCO) по меньшей мере 50 кДа;
8
b) концентрирование без центрифугирования клеток с применением системы чередующейся тангенциальной проточной фильтрации, чтобы получить концентрированную клеточную популяцию, имеющую плотность более чем примерно 1,0×10 клеток/мл;
8
c) криоконсервирование концентрированной клеточной популяции, чтобы получить банк замороженных клеток с высокой плотностью, где криоконсервирование содержит добавление диметилсульфоксида (DMSO) к концентрированной клеточной популяции до конечной концентрации от примерно 5% до примерно 10% по объему; и где банк замороженных клеток с высокой плотностью имеет плотность клеток примерно 10 клеток.
19. Способ по п. 1 или 18, в котором pH и концентрацию растворенного кислорода (DO) культуры регулируют автоматическими методами.
20. Способ по п. 1 или 18, в котором pH и концентрацию растворенного кислорода (DO) культуры регулируют неавтоматическими методами.