ПРОИЗВОДНЫЕ 4-ФЕНИЛПИРИМИДИН-2-КАРБОНИТРИЛА
4-PHENYLPYRIMIDINE-2-CARBONITRILE DERIVATIVES

Изобретение относится к производным 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила, к содержащим их фармацевтическим композициям, а также к применению этих производных для получения лекарственного средства для лечения катепсин K- и катепсин S-связанных заболеваний, таких как атеросклероз, заболеваний костей, таких как остеопороз, воспалительных и иммунных нарушений, таких как ревматоидный артрит и рассеянный склероз, и хронической боли, такой как невропатическая боль.
Цистеинпротеазы представляют собой класс пептидаз, характеризующихся наличием остатка цистеина в каталитическом сайте фермента, и эти протеазы связаны с нормальным разложением и процессингом белков. Многие патологические нарушения или заболевания являются результатом аномальной активности цистеинпротеаз, такой как суперэкспрессия или усиленная активация. Цистеиновые катепсины, например катепсин B, K, L, S, V, F, представляют собой класс лизосомальных ферментов, которые участвуют в различных нарушениях, включая воспаление, ревматоидный артрит, остеоартрит, остеопороз, опухоли, коронарные заболевания, атеросклероз, аутоиммунные заболевания и инфекционные заболевания.
Катепсин K обладает сильной коллагенолитической, эластазной и желатиназной активностью (Bromme et al., J. Biol, Chem, 271, 2126-2132, 1996) и преимущественно экспрессируется в остеокластах (Bromme et Okamoto, Biol. Chem. Hopp-Seyler, 376, 379-384, 1995). Он расщепляет ключевые белки костного матрикса, включая коллаген типа I и II (Kaffienah et al., Biochem. J. 331, 727-732, 1998), желатин, остеопонтин и остеонектин, и также участвует в метаболизме внеклеточного матрикса, необходимом для нормального роста и восстановления костей (Bossard et al., J. Biol. Chem. 271, 12517-12524, 1996). Ингибирование катепсина K должно привести к снижению опосредуемой остеокластом резорбции кости.
Ингибиторы катепсина K могут поэтому представлять собой новые терапевтические средства для лечения болезненных состояний у человека, таких как остеопороз.
Sukhova et al (J. Clin. Invest. 102, 576-583, 1998) продемонстрировали, что клетки (макрофаги), которые мигрируют и накапливаются в развивающихся атеросклеротических бляшках у человека, также синтезируют мощные эластазы катепсин K и S.
Деградация матрикса, особенно в волокнистой крышке таких бляшек, является критическим процессом в дестабилизации атеросклеротического поражения. Таким образом, метаболизм компонентов внеклеточного матрикса, коллагена и эластина, которые придают герметичность волокнистому колпачку поражения, может критически влиять на клинические проявления атеросклероза, такие как тромбоз коронарной артерии в результате разрушения атеросклеротической бляшки. Ингибирование катепсинов K и/или S на участках бляшек, склонных к разрыву, может таким образом представлять собой эффективный способ предотвращения таких событий.
Как катепсин K, катепсин S также обладает сильной эластолитической (Arch. Biochem. Biophys., 299, 334-339, 1992; J. Biol. Chem., 267, 7258-7262, 1992) и коллагенолитической активностью (Biochem. J., 256, 433-440, 1998). Патологически измененные человеческие артерии суперэкспрессируют катепсин K и S и показывают взаимный дефицит цистатина C, наиболее распространенного эндогенного ингибитора цистеинпротеаз (J. Clin. Invest. 102, 576-583, 1998; J. Clin. Invest. 104, 1191-1197, 1999). Sukhova et al (J. Clin. Invest. 111, 897-906, 2003) продемонстрировали, что дефицит катепсина S уменьшает атеросклероз у мышей с дефицитом ЛПНП-рецепторов. Bromme et al (Biochem. Biophys. Research Comm. 312, 1019-1024, 2003) также продемонстрировали, что и катепсин К и S способны к разложению HDL3 и свободного от липидов apoA-I in vitro. Это дополнительно указывает на катепсин К и S как терапевтическую цель для атеросклероза.
Показано, что катепсин S является ключевым ферментом, участвующим в инвариантном процессинге цепи в антигенпредставляющих клетках человека и мыши (J. Clin. Invest. 110, 361-369, 2002). Этот инвариантный процессинг цепи регулирует функцию класса II MHC и связан с воспалительными и аутоиммунными нарушениями. Saegusa et al (J. Clin. Invest. 110, 361-369, 2002) продемонстрировали, что ингибирование катепсина S in vivo изменяет представление аутоантигена и развитие органоспецифического аутоиммунитета.
В Международной Заявке на патент WO 03/020287 также раскрыто, что мРНК для катепсина S активируется в животных моделях хронической боли и что введение ингибиторов катепсина S вызывает реверсирование механической гиперальгезии у этих животных.
Производные 4-аминопиримидин-2-карбонитрила были описаны в качестве ингибиторов катепсинов К и/или S в Международной заявке на патент WO 03/020278 (Novartis Pharma GMBH), тогда как структурно-родственные производные 4-аминопиримидин-2-карбонитрила были недавно раскрыты в WO 04/000819 (ASTRAZENECA AB) как ингибиторы катепсина S. Пирролопиримидины были аналогично раскрыты как ингибиторы катепсина K и/или S в WO 03/020721 (Novartis Pharma GMBH) и WO 04/000843 (ASTRAZENECA AB).
В настоящее время обнаружено, что производные 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила, имеющие общую формулу I
1-6
1-6
3-6
1-6
1-6
1-6
2
1-6
2
1-6
2
2
1-8
2
2
2
2
2
2
в которой R обозначает 1-3 возможных заместителя, независимо выбранных из (С)алкила (в случае необходимости замещенного одним или более галогенами), (С)алкилокси (в случае необходимости замещенного одним или более галогенами), циано, галогена, гидрокси, нитро, (С)циклоалкила, CO(С)алкила, S(С)алкила, SO(С)алкила, SO(С)алкила, SONH(С)алкила, SONH, NHCO(С)алкила и COH; или 2 заместителя R в смежных положениях вместе обозначают OCHO, OCHCHO или CHCHO;
1
1-6
R обозначает Н или (С)алкил;
2
2-6
1-4
6-10
6-10
1-4
3
4
2
6
7
R обозначает (С)алкил, в случае необходимости замещенный ОН, (С)алкилокси, (С)арилокси, (С)арил(С)алкилокси, одним или более атомов галогена, NRR, COH или CONRR;
3
4
1-8
1-4
6-10
3-8
1-4
5
5
6-10
2-9
3
1-4
1-4
6-10
1-4
2-9
1-4
R и R независимо обозначают Н, (С)алкил [в случае необходимости замещенный одним или более атомов галогена, (С)алкилокси или (С)арилокси], (С)циклоалкил [в случае необходимости замещенный одним или более атомов галогена], (С)алкил, замещенный 4-8-членным насыщенным гетероциклом, включающим гетероатом, выбранный из О, S и NR, 4-8-членный насыщенный гетероцикл, включающий гетероатом, выбранный из О, S и NR, (С)арил, (С)гетероарил [в случае необходимости замещенный 1-3 заместителями, выбранными из галогена, CF, (С)алкила и (С)алкилокси], (С)арил(С)алкил или (С)гетероарил(С)алкил; или
3
4
8
9
5
R и R вместе с азотом, с которым они связаны, образуют 4-8-членный насыщенный гетероцикл, в случае необходимости замещенный одним или более галогенами или CONRR, и который может дополнительно включать 1 или более гетероатомов, выбранных из О, S и NR; или
3
1-4
4
1-4
8
9
10
8
9
8
9
8
9
10
R обозначает Н или (С)алкил; и R обозначает (С)алкил, замещенный CONRR, COOR, NR, R, NRCOR или NRCONRR;
5
1-4
3-8
6-10
2-5
3-8
6-10
2-5
R обозначает Н, (С)алкил [в случае необходимости замещенный (С)циклоалкилом, (С)арилом или (С)- гетероарилом], (С)циклоалкил, (С)арил или (С)гетероарил;
6
7
1-4
5
R и R независимо обозначают Н, (С)алкил или 4-8-членный насыщенный гетероцикл, включающий гетероатом, выбранный из О, S и NR; или
6
7
5
R и R вместе с азотом, с которым они связаны, образуют 4-8-членный насыщенный гетероцикл, в случае необходимости замещенный одним или более галогенами, и который может дополнительно включать 1 или более гетероатомов, выбранных из О, S и NR;
8
9
1-4
R и R независимо обозначают Н или (С)алкил; или
8
9
5
R и R вместе с атомами, с которыми они связаны, образуют 4-8-членный насыщенный гетероцикл, который может дополнительно включать 1 или более гетероатомов, выбранных из О, S и NR;
10
1-4
R обозначает Н или (С)алкил;
или их фармацевтически приемлемая соль являются ингибиторами катепсина K и катепсина S и могут поэтому использоваться для получения лекарственного средства для лечения катепсин K- и катепсин S-связанных нарушений, таких как, например, атеросклероз, заболевания костей, такие как остеопороз, воспалительные и иммунные нарушения, такие как ревматоидный артрит и рассеянный склероз, и хроническая боль, такая как невропатическая боль.
Следующий аспект изобретения относится к производным 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила, имеющим общую формулу I
формула I
в которой
1-6
1-6
R обозначает 1-3 возможных заместителя, независимо выбранных из (С)алкила [в случае необходимости замещенного одним или более галогенами], (С)алкилокси [в случае необходимости замещенного одним или более галогенами], циано и галогена;
1
1-6
R обозначает Н или (С)алкил;
2
2-6
1-4
3
4
R обозначает (С)алкил, в случае необходимости замещенный ОН, (С)алкилокси, одним или более атомами галогена или NRR;
3
4
1-8
3-8
5
6-10
2-9
6-10
1-4
2-9
1-4
R и R независимо обозначают Н, (С)алкил [в случае необходимости замещенный одним или более галогенами], (С) циклоалкил [в случае необходимости замещенный одним или более галогенами], 4-8-членный насыщенный гетероцикл, включающий гетероатом, выбранный из О, S и NR, (С)арил, (С)гетероарил, (С)арил(С)алкил или (С)гетероарил-(С)алкил; или
3
4
5
R и R вместе с азотом, с которым они связаны, образуют 4-8-членный насыщенный гетероцикл, в случае необходимости замещенный одним или более галогенами, и который может дополнительно включать 1 или более гетероатомов, выбранных из О, S и NR;
5
1-4
3-8
6-10
2-5
3-8
6-10
2-5
R обозначает Н, (С)алкил [в случае необходимости замещенный (С) циклоалкилом, (С)арилом или (С) гетероарилом], (С)циклоалкил, (С)арил или (С)гетероарил; или к их фармацевтически приемлемой соли.
1-6
Термин (С)алкил, как используется в определениях формулы I, означает разветвленный или неразветвленный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, такой как гексил, пентил, 3-метилбутил, бутил, изобутил, третичный бутил, пропил, изопропил, этил и метил.
2-6
2-6
2
Термин (С)алкил аналогично означает разветвленный или неразветвленный алкил, содержащий 2-6 атомов углерода, такой как гексил, пентил, 3-метилбутил, бутил, изобутил, третичный бутил, пропил, изопропил и этил. Предпочтительным (С)алкилом, как используется в определении R в формуле I, является н-пропил.
1-4
Термин (С)алкил означает разветвленный или неразветвленный алкил, содержащий 1-4 атома углерода, такой как бутил, изобутил, третичный бутил, пропил, изопропил, этил и метил.
1-8
Термин (С)алкил означает разветвленный или неразветвленный алкил, содержащий 1-8 атомов углерода, такой как октил, гептил, гексил, пентил, 3-метилбутил, бутил, изобутил, третичный бутил, пропил, изопропил, этил и метил.
3-6
Термин (С) циклоалкил означает циклоалкил, содержащий 3-6 атомов углерода, такой как циклогексил, циклопентил, циклобутил и циклопропил.
3-8
Термин (С) циклоалкил аналогично означает циклоалкил, содержащий 3-8 атомов углерода, такой как циклооктил, циклогептил, циклогексил, циклопентил, циклобутил и циклопропил.
6-10
Термин (С)арил означает радикал, полученный из ароматической группы, содержащей 6-10 атомов углерода, такой как, например, фенил и нафтил.
6-10
1-4
1-4
6-10
Термин (С)арил(С)алкил означает (С)алкил, который замещен (С)арилом, таким как, например, бензил.
2-9
Термин (С)гетероарил означает 5- или 6-членный циклический ароматический радикал, содержащий 1-3 гетероатома, выбранных из азота, кислорода или серы, и к которому может быть присоединено другое 5- или 6-членное (гетеро)ароматическое кольцо. Примерами таких гетероарильных групп являются пиридил, имидазолил, пиразолил, пиримидинил, тиазолил, изотиазолил, оксазолил, изоксазолил, тиенил, оксадиазолил, хинолил, изохинолил, бензотиазолил, бензимидазолил и т.п. Предпочтительными гетероарилами являются 2-пиридил и 3-пиридил.
2-5
Термин (С)гетероарил означает 5- или 6-членный циклический ароматический радикал, содержащий 1-3 гетероатома, выбранных из азота, кислорода или серы. Примерами таких гетероарильных групп являются пиридил, имидазолил, пиразолил, пиримидинил, тиазолил, изотиазолил, оксазолил, изоксазолил, тиенил, оксадиазолил и т.п. Предпочтительными гетероарилами являются 2-пиридил и 3-пиридил.
2-9
1-4
1-4
2-9
Термин (С)гетероарил(С)алкил означает (С)алкил, замещенный (С)гетероарилом, такой как, например, пиридин-4-илметил.
3
4
6
7
8
9
5
В определениях в формуле I R и R, и/или R и R, и/или R и R могут, вместе с азотом, с которым они связаны, образовывать 4-8-членный насыщенный гетероцикл, такой как аназетидин, пирролидин, пиперидин или 1Н-азепин. Такие кольца могут содержать 1 или более дополнительных гетероатомов, выбранных из О, S или NR, с образованием таких колец, как морфолин, тиоморфолин, гексагидро-1,4-оксазепин, пиперазин, гомопиперазин, имидазолидин или тетрагидротиазол.
Термин «галоген» означает F, Cl, Br или I. Когда галоген является заместителем в алкильной группе, предпочтительным является F. Предпочтительным галоген-замещенным алкилом является трифторметил.
2
2-6
1-4
3
4
Предпочтительными согласно изобретению производными 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила согласно формуле I являются такие, в которых R обозначает (С)алкил, замещенный ОН, (С)алкилокси, одним или более галогенов или NRR.
2
3
4
Другими предпочтительными соединениями являются соединения, в которых R обозначает пропил, замещенный в положении 3 группой NRR.
Более предпочтительными являются производные формулы I, в которых 4-фенил включает трифторметиловый заместитель в метаположении.
Особенно предпочтительными производными 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила по изобретению являются:
- 4-(3-гидрокси-1-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-(3-(пиперидин-1-ил)-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(1-этилпропиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2карбонитрил;
- 4-[3-(4-метил-[1,4]диазепин-1-ил)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-(3-циклогексиламинопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-{3-[метил-(1-метилпиперидин-4-ил)-амино]-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(4-метилпиперазин-1-ил)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-(3-изопропиламинопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(4-пиридин-2-ил-пиперазин-1-ил)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(карбамоилметиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(карбоксиметиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(2-диметиламиноэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(2-ацетиламиноэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-{3-[2-(2-оксоимидазолидин-1-ил)-этиламино]-пропил}-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-(3,4-диметилфенил)-6-[3-(метилкарбамоилметиламино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(2-ацетиламиноэтиламино)-пропил]-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-(3,4-диметилфенил)-6-{3-[2-(2-оксоимидазолидин-1-ил)-этиламино]-пропил}-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(3-диметиламинопропиламино)-пропил]-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-(3,4-диметилфенил)-6-{3-[2-(1-метилпирролидин-2-ил)-этиламино]-пропил}-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-(3-циклопропиламино-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(1-(S)-метил-2-метоксиэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(1-(S)-карбамоилэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(1-(R)-карбамоилэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(1-этил-1-метилпропиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(1-метилциклопропиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(2-гидроксиэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(1-карбамоил-1-метилэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил;
- 4-[3-(2-оксопирролидин-3-(S)-иламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил; или их фармацевтически приемлемая соль.
Изобретение относится в следующем аспекте к фармацевтическим композициям, включающим производное 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила, имеющее общую формулу I, или его фармацевтически приемлемую соль, в смеси с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами.
2
1-6
2
1
3
Производные 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила общей Формулы I могу быть получены, как изображено в Схеме 1, конденсацией производного ацетофенона, имеющего формулу (II), в которой R имеет значение, как определено выше, со сложным эфиром формулы R'-ОС(O)R, в котором R' представляет собой (С)алкил, и R имеет значение, определенное выше, с получением производного 1,3-диона формулы (III). В случае необходимости, группа R может быть введена алкилированием производного 1,3-диона в присутствии основания, например карбоната калия, и подходящего растворителя, например ТГФ или ацетона, при нагревании, с получением производного 2-алкил-1,3-диона, имеющего формулу (IV). Циклизацией 1,3-диона (IV) с мочевиной в присутствии кислоты, например, концентрированного водного гидрохлорида в подходящем растворителе, например этаноле, с нагреванием получают производное 2-гидрокси-4-фенилпиримидина формулы (V). Обработка соединения формулы (V) POCl при высокой температуре приводит к производному 2-хлор-4-фенилпиримидина формулы (VI), которое в результате цианирования цианидом меди в растворителе, например диметилформамиде или N-метилпирролидиноне, и с помощью микроволнового нагревания приводит к производному 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила общей Формулы I.
Стадия цианирования может также быть осуществлена с использованием цианида цинка в качестве реагента с катализатором на основе переходного металла, например тетракистрифенилфосфинпалладием, в подходящем растворителе, например диметилформамиде, диметоксиэтане или N-метилпирролидиноне.
Схема 1
В альтернативном способе, как изображено на Схеме 2, производное 1,3-диона формулы (IV) обрабатывают S-метил изотиоуриниййодидом в подходящем растворителе, например изопропаноле, и подходящем основании, например, триэтиламине, получая производное 2-метилсульфанил-4-фенилпиримидина формулы (VII). Окисление производного формулы VII моноперсульфатом калия (Oxone) или м-хлорпербензойной кислотой (MCPBA) в подходящем растворителе, например метаноле, воде, хлороформе или их смеси, приводит к производному 2-метансульфонил-4-фенилпиримидина формулы (VIII), которое в результате обработки цианидом натрия в подходящем растворителе, например диметилсульфоксиде, приводит к производным 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила общей Формулы I.
Схема 2
2
3
В другом способе, как изображено на Схеме 3, производное β-сложного кето-эфира формулы (IX), в которой R имеет значение, определенное выше, конденсируют с тиомочевиной в присутствии метилата натрия, получая производное 2-меркапто-4-гидроксипиримидина формулы (X), которое, в результате S-метилирования йодометаном в присутствии основания, например гидроксида калия, приводит к производному 2-метилсульфанил-4-гидроксипиримидина формулы (XI). Обработка соединения формулы XI POCl дает производное 2-метилсульфанил-4-хлорпиримидина формулы (XII), окисление которого с использованием MCPBA приводит к производному 2-метансульфонил-4-хлорпиримидина формулы (XIII).
Схема 3
Реакция сочетания соединения XIII с фенилбороновыми кислотами с использованием катализатора на основе переходного металла дает производные 2-метансульфонил-4-фенилпиримидина формулы (VII), которые могут впоследствии быть преобразованы в производные 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила общей Формулы I обработкой цианидом натрия в подходящем растворителе, например диметилсульфоксиде.
В альтернативном способе, изображенном на схеме 4, для введения группы фенила в положение 4 пиримидина, соединение, имеющее формулу XIII (см. схему 3), может быть введено в реакцию с гексаметилбисстаннаном, с получением производного 2-метансульфонил-4-триметилстаннилпиримидина формулы (XIV), которое в результате реакции с цианидом натрия в диметилсульфоксиде приводит к производному 2-циано-4-триметилстаннилпиримидина формулы (XV). В результате реакции сочетания по Stille соединения формулы XV с арилгалидом с использованием катализатора на основе переходного металла, как описано в общей литературе, получают производное 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила общей Формулы I.
Схема 4
2
2-6
3
4
2
Производные 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила общей Формулы I, в которой R обозначает (С)алкил, замещенный группой NRR, могут быть получены исходя из соответствующего спиртового производного, как изображено на схеме 5 для соединений по изобретению, в которых R обозначают заместитель, представляющий собой 3-OH-пропил.
3
4
Окислением подходящего спиртового производного формулы (I) перйодинатом Десса-Мартина, или с использованием альтернативной процедуры окисления, получают соответствующее производное альдегида согласно формуле (XVI), которое затем конденсируют с амином формулы HNRR в условиях восстановительного аминирования, получая указанные производные 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила по изобретению.
Схема 5
2
2-6
2
Производные 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила общей Формулы I, в которой R обозначает (С)алкилкарбоновую кислоту или карбоксамиды, могут быть получены исходя из соответствующего спиртового производного, как изображено на схеме 6 для соединений по изобретению, в которых R обозначает заместитель, представляющий собой 3-OH-пропил.
Окислением подходящего спиртового производного формулы (I) с использованием хлорита натрия и гипохлорида натрия в присутствии ТЕМРО в качестве катализатора получают соответствующую кислоту (XVIII). Реакцией сочетания этой кислоты с первичными или вторичными аминами с различными реагентами сочетания, например EDCI, PyBOP, HBTU и др., получают соответствующий карбоксамид (XIX) в качестве продукта реакции.
Схема 6
В другом способе, как изображено на схеме 7, для введения фенила в положение 4 пиримидина, соединение, имеющее формулу XV (см. схему 4), обрабатывают йодом, получая производное 2-циано-4-йодпиримидина формулы (XX). Затем, с использованием сочетания типа Stille, или Suzuki, или Negishi соединения формулы XX с арилбороновыми кислотами или другими целевыми ариловыми соединениями металлов с использованием катализатора на основе переходного металла, как описано в общей литературе, получают производные 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила общей Формулы I.
Схема 7
2
2
2
В другом способе, как изображено на схеме 8, для введения R и фенила в положения 6 и 4 соответственно пиримидина, реакцией сочетания соединения XXI с арилгалидами с переходным металлом в качестве катализатора, с последующим удалением защитной группы бензила получают соединение общей формулы I, где R обозначает 3-гидроксипропил, который может быть далее дериватизирован согласно схеме 5 с получением соединения с различными R и фенилом в положениях 6 и 4 пиримидина.
Схема 8
2
Соединение XXI может синтезироваться согласно схеме 3 и схеме 4 с β-кетоэфиром с R как 4-бензоксипропил (XXIV), который может синтезироваться, как изображено на схеме 9. Реакцией 4-бензоксимасляной кислоты с кислотой Мелдрама в присутствии изопропенилхлорформиата с DMAP в качестве основания получают ацилированное производное кислоты Мелдрама, которое затем преобразуют в XXIV этанолизом с помощью кислоты. Альтернативно, соединение XXIV может также синтезироваться из этил- или метилацетоацетата (XXV) через широко задокументированную химию двойного аниона с 3-бензоксиэтилбромидом (XXVI) в качестве алкилирующего агента.
2
3
4
5
В получении производных 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила общей Формулы I, в которой группа R содержит атом азота основного амина (в форме NRR или NR), такой азот должен быть временно защищен, например, с помощью защитной группы для лабильного к кислоте трет.-бутилоксикарбонила (Вос). Другие подходящие защитные группы для функциональных групп, которые должны быть временно защищены в ходе синтеза, известны в уровне техники, например, из Wuts, P. G.M. and Greene, T. W.: Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New York, 1999.
Схема 9
Соединения по изобретению, которые могут быть в форме свободного основания, могут быть выделены из реакционной смеси в форме фармацевтически приемлемой соли.
Фармацевтически приемлемые соли могут также быть получены путем обработки свободного основания формулы I органической или неорганической кислотой, такой как, но не ограничиваясь ими, хлорид водорода, бромид водорода, йодид водорода, серная кислота, фосфорная кислота, уксусная кислота, трифторуксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, метансульфоновая кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота и аскорбиновая кислота.
Соединения по изобретению могут существовать в сольватированной, а также в несольватированной формах, включая гидратированные формы. В общем, сольватированные формы эквивалентны несольватированным формам и входят в рамки настоящего изобретения.
Соединения согласно настоящему изобретению могут существовать как аморфные формы, но также возможны и многочисленные кристаллические формы. В общем, все физические формы эквивалентны для применений, рассмотренных в соответствии с настоящим изобретением, и входят в рамки этого изобретения.
1
10
Производные 4-фенилпиримидин-2-карбонитрила по изобретению и их соли могут содержать центр хиральности в одной или более боковых цепях R, R-R и могут поэтому быть получены в виде чистого энантиомера, или как смесь энантиомеров, или как смесь, содержащая диастереомеры. Способы асимметричного синтеза, посредством которого получают чистые стереоизомеры, известны в уровне техники, например синтез с хиральной индукцией или проводимый исходя из хиральных промежуточных соединений, энантиоселективные ферментативные преобразования, разделение стереоизомеров или энантиомеров с использованием хроматографии на хиральных средах. Такие способы, например, описаны в Chirality in Industry (edited by A. N. Collins, G. N. Sheldrake and J. Crosby, 1992; John Wiley).
Было обнаружено, что соединения по изобретению являются ингибиторами человеческого катепсина K и катепсина S и могут поэтому, в следующем аспекте изобретения, использоваться в терапии и, в частности, для получения лекарственного средства для лечения остеопороза, атеросклероза и родственных катепсин K- и катепсин S-зависимых нарушений, например воспалительных и иммунных нарушений, таких как ревматоидный артрит, хроническая боль, такая как невропатическая боль, и других нарушений, связанных с аномальной резорбцией костей, таких как болезнь Педжета, остеоартрит, остеолитический рак кости и метастатическое заболевание кости.
Соединения по изобретению могут вводиться энтерально или парентерально и для человека предпочтительно в суточной дозе 0,001-100 мг на кг массы тела, предпочтительно 0,01-10 мг на кг массы тела. В смеси с фармацевтически подходящими вспомогательными средствами, например, как описано в стандартной ссылке Gennaro et al., Remington's Pharmaceutical Sciences, (20th ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2000, см., в частности, Part 5: Pharmaceutical Manufacturing), соединения могут быть прессованы в твердые лекарственные формы, такие как пилюли, таблетки, или обработаны с получением капсул или суппозиториев. Посредством фармацевтически подходящих жидкостей соединения могут также быть использованы в форме раствора, суспензии, эмульсии, например, для использования в качестве препарата для инъекции или в виде спрея, например для использования в качестве спрея для носа.
Для получения лекарственных форм, например таблеток, можно использовать обычные добавки, такие как наполнители, красители, полимерные связующие и т.п. В общем, может использоваться любая фармацевтически приемлемая добавка, которая не нарушает функцию активных соединений.
Подходящие носители, с которыми композиции могут вводиться, включают лактозу, крахмал, производные целлюлозы и т.п. или их смеси, в подходящих количествах.
Изобретение далее иллюстрируется следующими примерами.
Методы
1
Общие химические процедуры. Все реактивы были либо приобретены из общих коммерческих источников, либо синтезированы согласно описанным в литературе процедурам с использованием коммерческих источников. Данные протонного ЯМР (Н ЯМР) были получены на спектрометре Bruker DPX 400 и отнесены к внутреннему TMS. Масс-спектры регистрировали на Shimadzu LC-8A (ВЭЖХ) PE Sciex API 150EX LCMS. Аналитический анализ ЖХМС с обратной фазой был выполнен на колонке LUNA C18 (5µ; 30×4,6 мм) в условиях градиента (от 90% воды/0,1% муравьиной кислоты до 90% ацетонитрил/0,1% муравьиной кислоты) при скорости потока 4 мл/мин.
Аббревиатуры
Диметилформамид (ДМФ), N-метилпирролидинон (NMP), дихлорметан (DCM), диметилсульфоксид (ДМСО), тетрагидрофуран (ТГФ), 1,2-диметоксиэтан (DME), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), диизопропилэтиламин (DIPEA), триэтиламин (ТЕА), уширенный (br), синглет (s), дуплет (d), триплет (t), трифторуксусная кислота (ТФК), трет.-бутилоксикарбонил (Вос), 1-(3-диметиламинопропил)-3-этил карбодиимид HCl (EDCl), 1-гидроксибензотриазол (HOBt), 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси (ТЕМРО).
ПРИМЕР 1
4-Пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
A: 3-гидрокси-1-(3-трифторметилфенил)-гекс-2-ен-1-он
К перемешиваемой суспензии амида натрия (0,78 г) в эфире (40 мл), в атмосфере азота, добавляли 3-трифторацетофенон (1,52 мл). Смесь перемешивали в течение 5 минут, затем медленно добавляли этилбутират (1,32 мл). Полученную смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи, охлаждали до комнатной температуры и гасили водой (20 мл). Эфирный слой удаляли и водный слой подкисляли HCl (5M), затем экстрагировали простым эфиром (3 x 20 мл). Органические слои объединяли, промывали водой (20 мл), высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении, получая сырой продукт в форме масла. Флэш-хроматографией на силикагеле получали 3-гидрокси-1-(3-трифторметилфенил)-гекс-2-ен-1-он в форме масла (0,74 г).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,12 (с, 1Н), 8,06 (д, 1Н), 7,77 (д, 1Н), 7,59 (т, 1Н), 6,19 (с, 1Н), 3,88 (уш. с, 1Н), 2,44 (т, 2H), 1,69-1,79 (м, 2H), 1,01 (т, 3H).
B: 6-пропил-4-(3-трифторметилфенил)-1 H-пиримидин-2-он
Перемешиваемую смесь 3-гидрокси-1-(3-трифторметилфенил)-гекс-2-ен-1-она (259 мг), мочевины (90 мг), HCl (0,15 мл, 5M) и этанола (5 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 16 часов. Добавляли дополнительное количество мочевины (60 мг) и HCl (0,15 мл, 5M) и нагревание с обратным холодильником продолжали в течение 24 часов. Смеси позволяли охладиться и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в смеси этилацетата (20 мл) и воды (20 мл), органический слой отделяли и затем промывали раствором насыщенного карбоната натрия (20 мл), затем водой (20 мл). Экстракт этилацетата высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении, получая 6-пропил-4-(3-трифторметилфенил)-1H-пиримидин-2-он в виде твердого вещества коричневого цвета (204 мг). МС m/z 283,0 (M+1), 100%.
C: 2-хлор-4-пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин
Смесь 6-пропил-4-(3-трифторметилфенил)-1H-пиримидин-2-она (204 мг) и хлорангидрида фосфорной кислоты (3 мл) перемешивали и нагревали с обратным холодильником в течение 72 часов, затем оставляли для охлаждения, после чего выливали на смесь лед/простой эфир (20 мл). Эфирный слой отделяли, промывали насыщенным раствором карбоната натрия (20 мл), высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении, получая 2-хлор-4-пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин в форме темно-коричневого масла (239 мг).
МС m/z 301,3 (M+1), 100%.
D: 4-пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
К раствору 2-хлор-4-пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидина (50 мг) в 1-метил-2-пирролидиноне (2 мл) добавляли цианид меди (I) (60 мг). Суспензию нагревали в микроволновой печи при 200°C в течение 20 минут, затем вливали в смесь этилацетата (10 мл) и водного раствора аммиака (5 мл). Органический слой отделяли, промывали водой (10 мл), высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении. Препаративной ВЭЖХ получали целевое соединение 4-пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил в виде смолы коричневого цвета (4,1 мг).
1
3
Н ЯМР (CDC1) δ: 8,27-8,37 (м, 2H), 7,82 (д, 1Н), 7,34 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,88 (т, 2H), 1,78-1,91 (м, 2H), 1,03 (т, 3H). МС m/z 292,0 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 2
5-Метил-4-пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
A: 2-метил-1-(3-трифторметилфенил)-гексан-1,3-дион
К перемешиваемой суспензии карбоната калия (596 мг) в ацетоне (7 мл) добавляли 3-гидрокси-1-(3-трифторметилфенил)-гекс-2-ен-1-он (190 мг), затем йодометан (0,45 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 6 часов, охлаждали до комнатной температуры и растворитель упаривали при пониженном давлении. Полученное масло растворяли в этилацетате (20 мл), промывали водой (3×20 мл), высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении, получая сырой продукт в форме масла.
Флэш-хроматографией на силикагеле получали 2-метил-1-(3-трифторметилфенил)-гексан-1,3-дион в форме масла (102 мг).
1
3
Н ЯМР (CDC1) δ: 8,14 (с, 1Н), 8,06 (д, 1Н), 7,77 (д, 1Н), 7,56 (т, 1Н), 4,41 (кв, 1Н), 2,29-2,48 (м, 2H), 1,46-1,55 (м, 2H), 1,40 (д, 3H), 0,78 (т, 3H).
B: 5-метил-6-пропил-4-(3-трифторметилфенил)-1 H-пиримидин-2-он
Перемешиваемую смесь 2-метил-1-(3-трифторметилфенил)-гексан-1,3-диона (102 мг), мочевины (45 мг), HCl (0,10 мл, 5M) и этанола (4 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 16 часов. Добавляли дополнительное количество мочевины (30 мг) и HCl (0,10 мл, 5M) и нагревание с обратным холодильником продолжали в течение 24 часов. Смеси позволяли охладиться и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в смеси этилацетата (10 мл) и воды (10 мл), органический слой отделяли и затем промывали раствором насыщенного карбоната натрия (10 мл), затем водой (10 мл). Экстракт этилацетата высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении, получая 5-метил-6-пропил-4-(3-трифторметилфенил)-1Н-пиримидин-2-он в форме желтого масла (64 мг).
МС m/z 297,4 (M+1), 100%.
C: 2-хлор-5-метил-4-пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин
Смесь 5-метил-6-пропил-4-(3-трифторметилфенил)-1H-пиримидин-2-она (64 мг) и хлорангидрида фосфорной кислоты (3 мл) перемешивали и нагревали с обратным холодильником в течение 24 часов, затем оставляли для охлаждения и выливали на смесь лед/простой эфир (20 мл). Эфирный слой отделяли, промывали насыщенным раствором карбоната натрия (10 мл) и воды (10 мл), высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении, получая 2-хлор-5-метил-4-пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин в форме масла (64 мг).
МС m/z 315,0 (M+1), 100%.
D: 5-метил-4-пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
К раствору 2-хлор-5-метил-4-пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидина (50 мг) в диметилформамиде (1 мл) добавляли цианид цинка (II) (16 мг) и тетракис(трифенилфосфин)-палладий (0) (16 мг). Суспензию нагревали в микроволновой печи при 150°C в течение 5 минут, затем вливали в этилацетат (50 мл) и промывали водой (2×10 мл). Органический слой отделяли, высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении. Препаративной ВЭЖХ получали 5-метил-4-пропил-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил в виде смолы желтого цвета (11 мг). Н ЯМР (CDC1) δ: 7,63-7,81 (м, 4H), 2,87 (т, 2H), 2,39 (с, 3H), 1,80-1,90 (м, 2H), 1,07 (т, 3H). МС m/z 306,4 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 3
4-(3-гидрокси-1-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
A: 1,3-диоксо-6-гидрокси-1-(3'-трифторфенил)-гексан
1
3
К перемешиваемой суспензии гидрида натрия (60% в парафиновом масле, 20 г) в диэтиловом эфире (1 л) при 0°C добавляли этанол (1 мл). К указанной смеси добавляли гамма-бутиролактон (18 г), затем за 30 минут по каплям добавляли раствор простого диэтилового эфира (100 мл) 3'-трифторметилацетофенона (38 г). Смесь оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 72 часов. Добавляли этанол (20 мл), чтобы разрушить лишний гидрид натрия, затем водный раствор хлорида аммония (20 г в 300 мл воды). Органический слой отделяли и промывали разбавленной соляной кислотой (0,1 н., 500 мл), затем водой (2×200 мл). Эфирный слой высушивали над сульфатом натрия, растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток пропускали через колонку с силикагелем, используя петролейный эфир и этилацетат (1:1) как элюент, получая 1,3-диоксо-6-гидрокси-1-(3'-трифторфенил)-гексан (32 г). Н ЯМР (CDC1) δ: 8,1 (с, 1Н), 8,04 (д, 1Н), 7,76 (д, 1Н), 7,55 (дд, 1Н), 6,2 (с, 1Н), 3,74 (т, 2H), 2,61 (т, 2H), 1,97 (м, 2H). МС m/z 275 (M+1), 100%.
B: 2-метилсульфанил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)пиримидин
1
3
К раствору 1,3-диоксо-6-гидрокси-1-(3'-трифторфенил)-гексана (32 г) в изопропаноле (30 мл) добавляли S-метилизотиоуранйодид (34 г). Смесь нагревали при 110°C в течение 4 часов. После охлаждения до комнатной температуры добавляли триэтиламин (45 мл) и метанол (50 мл) и смесь нагревали с обратным холодильником с масляной баней при 85°C в течение 6 часов. После удаления растворителя и триэтиламина при пониженном давлении, остаток помещали в этилацетат (500 мл) и воду (500 мл). Органический слой отделяли, затем промывали разбавленной соляной кислотой (0,1 н., 500 мл), затем водой (2×300 мл). Органический слой высушивали, растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток пропускали через колонку с силикагелем, используя петролейный эфир и этилацетат (1:1) как элюент, получая 2-метилсульфанил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)пиримидин (18 г). Н ЯМР (CDCl) δ: 8,3 (с, 1Н), 8,25 (д, 1Н), 7,76 (д, 1Н), 7,58 (дд, 1Н), 7,28 (с, 1Н), 3,74 (т, 2H), 2,92 (т, 2H), 2,65 (с, 3H), 2,03 (м, 2H). МС m/z 329 (M+1), 100%.
C: 2-метансульфонил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)пиримидин
1
3
К раствору 2-метилсульфанил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)пиримидина (7,8 г) в смешанном растворителе из метанола и воды (200 мл, 10:1) добавляли OXONE (34 г). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов, затем разбавляли этилацетатом (500 мл). Смесь промывали водой (3×500 мл). Органический слой высушивали над сульфатом натрия, растворитель удаляли при пониженном давлении, получая 2-метансульфонил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трифторметилфенил) пиримидин (8,9 г) в качестве сырого продукта, который использовали для следующей стадии без дальнейшей очистки. Н ЯМР (CDCl) δ: 8,3-8,4 (м, 2H), 7,8-7,87 (м, 2H), 7,68 (дд, 1Н), 3,77 (т, 2H), 3,43 (с, 3H), 3,10 (т, 2H), 2,10 (м, 2H).
D: 4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
К перемешиваемому раствору 2-метилсульфонил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)пиримидина (200 мг) в диметилсульфоксиде (5 мл) добавляли цианид натрия (27 мг). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 минут, затем вливали в этилацетат (50 мл) и промывали водой (2×50 мл). Органический слой высушивали над сульфатом натрия, упаривали при пониженном давлении и очищали препаративной ВЭЖХ. Выделяли 4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил в форме смолы (78 мг).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,35 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 7,80 (с, 1Н), 7,69 (т, 1Н), 3,77 (т, 2H), 3,05 (т, 2H), 2,07-2,13 (м, 2H). МС m/z 308,3 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 4a
4-(3-пиперидин-1-ил-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
A: 4-(3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
Перйодинат Десса-Мартина (104 мг) добавляли к раствору 4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (50 мг) в дихлорметане (5 мл) и полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин. Смесь промывали водой (3×10 мл), высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении, получая 4-(3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил в виде твердого вещества коричневого цвета (70 мг). МС m/z 306,1 (M+1), 100%.
B: 4-(3-пиперидин-1-ил-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
К суспензии макропористого цианоборгидрида (102 мг, 2,35 ммоль/г) в ацетонитриле (0,5 мл) добавляли пиперидин (19 л), уксусную кислоту (0,1 мл) и раствор 4-(3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (49 мг) в ацетонитриле (0,5 мл). Смесь нагревали в микроволновой печи при 150°C в течение 10 минут, фильтровали через стеклянный фильтр, используя прибор для мультифильтрации Vacmaster, и очищали препаративной ВЭЖХ. Выделяли 4-(3-пиперидин-1-ил-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил в виде прозрачной смолы (12 мг).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,34 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,79 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,93 (т, 2H), 2,32-2,44 (м, 5H), 1,97-2,05 (м, 2H), 1,49-1,60 (м, 4H), 1,37-1,45 (м, 2H), 1,23-1,38 (м, 1Н). МС m/z 375,3 (M+1), 85%.
Процедура, описанная выше, была далее применена, с использованием соответствующих производных амина, для получения следующих соединений:
4b: 4-(3-Морфолин-4-ил-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,28-8,34 (м, 2H), 7,82 (д, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,69 (т, 1Н), 3,68 (т, 4H), 2,96 (т, 2H), 2,38-2,48 (м, 6H), 1,98-2,07 (м, 2H). МС m/z 377,4 (M+1), 100%.
4c: 4-[3-(1,4-Дифторпиперидин-1-ил)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,31-8,33 (м, 2H), 7,83 (д, 1Н), 7,76 (с, 1Н), 7,69 (т, 1Н), 2,95 (т, 2H), 2,55 (уш. т, 4H), 2,48 (т, 2H), 1,92-2,05 (м, 6H). МС m/z 411,3 (M+1), 100%.
4d: 4-(3-(4-Метилпиперазин-1-ил)-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,31-8,33 (м, 2H), 7,82 (д, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,69 (т, 1Н), 2,94 (т, 2H), 2,30-2,60 (уш. м, 10Н), 2,26 (с, 3H), 1,98-2,05 (м, 2H). МС m/z 390,1 (M+1), 100%.
4e: 4-(3-Циклогексиламинопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,31-8,34 (м, 2H), 7,82 (д, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,97 (т, 2H), 2,71 (т, 2H), 2,35-2,45 (м, 1Н), 1,92-2,03 (м, 2H), 1,79-1,91 (м, 2H), 1,65-1,77 (м, 2H), 1,54-1,65 (м, 1Н), 0,96-1,32 (м, 5H). МС m/z 389,3 (M+1), 100%.
4f: 4-(3-изопропиламинопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,31-8,35 (м, 2H), 7,82 (д, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,98 (т, 2H), 2,80 (кв, 1Н), 2,69 (т, 2H), 1,95-2,02 (м, 2H), 1,05 (д, 6H). МС m/z 349,5 (M+1), 83%.
4g: 4-[3-(бензилметиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,33 (с, 1Н), 8,28 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,69 (с, 1Н), 7,67 (т, 1Н), 7,20-7,29 (м, 5H), 3,49 (с, 2H), 2,94 (т, 2H), 2,40-2,50 (уш. т, 2H), 2,23 (с, 3H), 1,97-2,08 (м, 2H). МС m/z 411,3 (M+1), 100%.
4h: 4-(3-изобутиламинопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,34 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,98 (т, 2H), 2,69 (т, 2H), 2,42 (д, 2H), 1,95-2,05 (м, 2H), 1,66-1,78 (м, 1Н), 0,91 (д, 6H). МС m/z 363,3 (M+1), 98%.
4i: 4-{3[(Пиридин-4-илметил)-амино]-пропил}-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,54 (д, 2H), 8,34 (с, 1Н), 8,30 (д, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 7,75 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 7,24-7,27 (м, 2H), 3,82 (с, 2H), 3,00 (т, 2H), 2,73 (т, 2H), 2,00-2,09 (м, 2H). МС m/z 398,0 (M+1), 100%.
4j: 4-(3-Пирролидин-1-ил-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,35 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,79 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,97 (т, 2H), 2,44-2,56 (м, 6H), 2,00-2,07 (м, 2H), 1,74-1,79 (м, 4H). МС m/z 361,1 (M+1), 100%.
4k: 4-(3-азепан-1-ил-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,34 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,94 (т, 2H), 2,58-2,61 (м, 4H), 2,53 (т, 2H), 1,94-2,01 (м, 2H), 1,54-1,67 (м, 8H). МС m/z 389,3 (M+1), 100%.
4l: 4-[3-(азациклоокт-1-ил)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,35 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,77 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,98 (т, 2H), 2,48-2,58 (м, 6H), 1,91-2,00 (м, 2H), 1,51-1,72 (м, 10Н). MCm/z 403,5 (M+1), 100%.
4m: 4-(3-Циклопентиламинопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,36 (с, 1Н), 8,30 (д, 1Н), 7,81-7,84 (м, 2H), 7,67 (т, 1Н), 3,48 (уш. т, 1Н), 3,08-3,20 (уш. м, 2H), 3,04 (т, 2H), 2,26-2,33 (м, 2H), 2,00-2,13 (м, 2H), 1,71-1,84 (м, 4H), 1,57-1,68 (м, 2H). МС m/z 375,3 (M+1), 100%.
4n: 4-(3-Циклогептиламинопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,35 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,79 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,97 (т, 2H), 2,67 (т, 2H), 2,58-2,64 (м, 1Н), 1,95-2,02 (м, 2H), 1,24-1,84 (м, 12Н). МС m/z 403,5 (M+1), 100%.
4о: 4-[3-(циклогексилметиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,35 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,97 (т, 2H), 2,68 (т, 2H), 2,43 (д, 2H), 1,96-2,04 (м, 2H), 0,85-1,77 (м, 11Н). МС m/z 403,5 (M+1), 100%.
4p: 4-(3-трет.-Бутиламинопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,35 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,79 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,99 (т, 2H), 2,66 (т, 2H), 1,94-2,01 (м, 2H), 1,11 (с, 9H). МС m/z 363,3 (M+1), 100%.
4q: 4-[3-(2,2-диметилпропиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: (8,34 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,99 (т, 2H), 2,69 (т, 2H), 2,34 (с, 2H), 1,97-2,04 (м, 2H), 0,90 (с, 9H). МС m/z 377,5 (M+1), 100%.
4r: 4-[3-(1-Этилпропиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,35 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,79 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,99 (т, 2H), 2,66 (т, 2H), 2,33-2,39 (кв, 1Н), 1,95-2,02 (м, 2H), 1,35-1,47 (м, 4H), 0,88 (т, 6H). МС m/z 377,5 (M+1), 100%.
4s: 4-{3-[Метил-(1-метилпиперидин-4-ил)-амино]-пропил}-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,34 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,77 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 2,87-2,95 (м, 4H), 2,51 (т, 2H), 2,29-2,37 (м, 1Н), 2,25 (с, 6H), 1,88-2,01 (м, 4H), 1,53-1,70 (м, 4H). МС m/z 418,3 (M+1), 58%.
4t: 4-[3-(2,2,2-Трифторэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,51 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,24 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 3,92 (кв, 2H), 3,21 (т, 2H), 3,08 (т, 2H), 2,21-2,29 (м, 2H). МС m/z 389,1 (M+1), 58%.
4u: 4-[3-(4-метил-[1,4]диазепан-1-ил)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,32-8,34 (м, 2H), 7,82 (д, 1Н), 7,79 (с, 1Н), 7,69 (т, 1Н), 2,94 (т, 2H), 2,68-2,71 (м, 4H), 2,53-2,62 (м, 6H), 2,34 (с, 3H), 1,94-2,02 (м, 2H), 1,76-1,82 (м, 2H). МС m/z 404,5 (M+1), 100%.
4v: 4-(3-[1,4]оксазепан-4-ил-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,39 (с, 1Н), 8,31 (д, 1Н), 7,86 (с, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 3,97 (т, 2H), 3,87 (т, 2H), 2,07-3,77 (м, 12Н). МС m/z 391,1 (M+1), 100%.
4w: 4-(3-Фениламинопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,31 (с, 1Н), 8,26 (д, 1Н), 7,81 (д, 1Н), 7,72 (с, 1Н), 7,66 (т, 1Н), 7,16 (т, 2H), 6,70 (т, 1Н), 6,60 (д, 2H), 3,72 (уш. с, 1Н), 3,27 (т, 2H), 3,03 (т, 2H), 2,15-2,19 (м, 2H). МС m/z 383,1 (M+1), 58%.
4x: 4-[3-(4-Пиридин-2-ил-бензиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,68 (д, 1Н), 8,34 (с, 1Н), 8,27 (д, 1Н), 7,94 (д, 2H), 7,63-7,81 (м, 5H), 7,41 (д, 2H), 7,21-7,23 (м, 1Н), 3,86 (с, 2H), 2,99 (т, 2H), 2,74 (т, 2H), 2,00-2,07 (м, 2H). МС m/z 474,1 (M+1), 42%.
4y: 4-[3-(4-фенилпиперазин-1-ил)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,51 (с, 1Н), 8,47 (д, 1Н), 8,24 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,77 (т, 1Н), 7,21 (т, 2H), 6,93 (д, 2H), 6,83 (т, 1Н), 3,11-3,15 (м, 4H), 2,99 (т, 2H), 2,63-2,68 (м, 4H), 2,53 (т, 2H), 2,05-2,13 (м, 2H). МС m/z 452,1 (M+1), 100%.
4z: 4-[3-(4-бензилпиперазин-1-ил)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,31-8,34 (м, 2H), 7,82 (д, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,67 (т, 1Н), 7,25-7,32 (м, 5H), 3,48 (с, 2H), 2,93 (т, 2H), 2,38-2,55 (м, 10Н), 1,97-2,05 (м, 2H). МС m/z 466,0 (M+1), 100%.
4a': 4-[3-(4-Пиридин-2-ил-пиперазин-1-ил)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,35 (с, 1Н), 8,32 (д, 1Н), 8,18 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,80 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 7,47 (т, 1Н), 6,60-6,65 (м, 2H), 3,51-3,53 (м, 4H), 2,98 (т, 2H), 2,54-2,57 (м, 4H), 2,48 (т, 2H), 2,03-2,11 (м, 2H). МС m/z 453,0 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 5a
4-(3-изопропилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
A:2-меркапто-6-пропилпиримидин-4-ол
Натрий (4,6 г) добавляли частями при 0°C к метанолу (150 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре до растворения. После охлаждения до 0°C, добавляли частями тиомочевину (11,0 г) и смесь перемешивали до растворения. Этил бутирилацетат (15,8 г) в метаноле (200 мл) добавляли по каплям при 0°C за 30 минут. Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 9 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде. После окисления с уксусной кислотой до pH 6 и перемешивания в течение 1 часа, смесь фильтровали. Осадок последовательно промывали водой и изопропанолом, затем высушивали при пониженном давлении, получая 2-меркапто-6-пропилпиримидин-4-ол (14,1) в виде белых кристаллов (Т. пл.=220°C).
1
6
Н ЯМР (ДМСО-d) δ: 12,2 (уш. с, 2H); 5,68 (с, 1Н); 2,32 (т, J=7 Гц, 2H); 1,60-1,50 (м, 2H); 0,88 (т, J=7 Гц, 3H).
B: 2-метилсульфанил-6-пропилпиримидин-4-ол
1н. раствор гидроксида калия в метаноле (110 мл) добавляли по каплям при 0°C к суспензии 2-меркапто-6-пропилпиримидин-4-ола (17,0 г) в метаноле (220 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. После охлаждения до 0°C за 15 минут добавляли по каплям йодометан (6,8 мл).
Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов, затем фильтровали. Первый осадок последовательно промывали метанолом, водой, изопропанолом, затем высушивали при пониженном давлении. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, растирали с водой, фильтровали. Второй осадок последовательно промывали метанолом, водой, изопропанолом, затем высушивали при пониженном давлении. Оба осадка объединяли, получая 2-метилсульфанил-6-пропилпиримидин-4-ол (15,5 г) в виде белых кристаллов (Т. пл.=158°C).
1
6
Н ЯМР (ДМСО-d) δ: 5,93 (с, 1Н); 2,47 (с, 3H); 2,45-2,35 (м, 2H); 1,65-1,55 (м, 2H); 0,89 (т, J=7 Гц, 3H).
C: 4-хлор-2-метилсульфанил-6-пропилпиримидин
Суспензию 2-метилсульфанил-6-пропилпиримидин-4-ола (15,5 г) в хлорангидриде фосфорной кислоты (160 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 6 часов. Растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток разбавляли дихлорметаном и выливали на лед. Слои разделяли, водный слой экстрагировали дважды этилацетатом. Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая 4-хлор-2-метилсульфанил-6-пропилпиримидин (17,5 г, 100%) в виде оранжевого масла.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 6,85 (с, 1H); 2,7-2,6 (м, 2H); 2,57 (с, 3H); 1,8-1,7 (м, 2H); 0,97 (т, J=7 Гц, 3H).
D:4-хлор-2-метансульфонил-6-пропилпиримидин
М-хлорпербензойную кислоту (65,0 г, 378 ммоль) добавляли частями за 15 минут к раствору 4-хлор-2-метилсульфанил-6-пропилпиримидина (17,5 г, 84 ммоль) в DCM (350 мл) при 0°C. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов, затем фильтровали. Осадок последовательно промывали малым количеством DCM, водным раствором метабисульфита натрия, водой и растирали с насыщенным раствором бикарбоната натрия, фильтровали, затем промывали водой, высушивали при пониженном давлении, получая 4-хлор-2-метансульфонил-6-пропилпиримидин (18,3 г, 93%) в виде твердого вещества грязно-белого цвета (Т. пл.=73°C).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,43 (с, 1H); 3,37 (с, 3H); 2,87 (т, J=7 Гц, 2H); 1,9-1,7 (м, 2H); 1,02 (т, J=7 Гц, 3H).
E: 4-(3-изопропилфенил)-2-метансульфонил-6-пропилпиримидин
Карбонат калия (0,850 г, 6 ммоль), воду (1 мл) и тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,695 г, 0,6 ммоль) последовательно добавляли в атмосфере азота к смеси 4-хлор-2-метансульфонил-6-пропилпиримидина (1,17 г, 5 ммоль) и 3-изопропилфенилбороновой кислоты (0,984 г, 6 ммоль) в диметоксиэтане (40 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 18 часов, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли между этилацетатом и водой. Водный слой экстрагировали дважды этилацетатом. Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 7/3), получая желтое масло, которое кристаллизовали в пентане. После фильтрации получали 4-(3-изопропилфенил)-2-метансульфонил-6-пропилпиримидин (0,380 г) в виде твердого вещества грязно-белого цвета (Т. пл.=82°C).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,0-7,9 (м, 2H); 7,71 (с, 1H); 7,5-7,4 (м, 2H); 3,43 (с, 3H); 3,1-3,0 (м, 1Н); 2,95-2,85 (м, 2H); 1,95-1,85 (м, 2H); 1,32 (д, J=7 Гц, 6H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 319,1 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 99,3%.
F: 4-(3-изопропилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
Цианид натрия (65 мг, 1,32 ммоль) добавляли при комнатной температуре к 4-(3-изопропилфенил)-2-метансульфонил-6-пропилпиримидину (211 мг) в диметилсульфоксиде (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, затем разделяли между этилацетатом и водой. Водный слой экстрагировали дважды этилацетатом. Объединенные органические слои промывали рассолом, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 7/3), получая розовое масло, которое кристаллизовали в пентане. После фильтрации получали 4-(3-изопропилфенил)-2-циано-6-пропилпиримидин (164 мг) в виде твердого вещества грязно-белого цвета (Т. пл.=64°C).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,98 (с, 1Н); 7,90-7,85 (м, 1Н); 7,71 (с, 1Н); 7,5-7,4 (м, 2H); 3,10-2,95 (м, 1Н); 2,85-2,75 (м, 2H); 1,90-1,80 (м, 2H); 1,32 (д, J=7 Гц, 6H); 1,02 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 266,1 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 98,5%.
Указанную описанную процедуру далее применяли, используя соответствующие производные бороновой кислоты, для получения следующих соединений:
5b: 4-Фенил-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,15-8,05 (м, 2H); 7,71 (с, 1H); 7,60-7,45 (м, 3H); 2,90-2,80 (м, 2H); 1,90-1,80 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 224,1 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 97,1%.
5c: 4-(3-изопропил-6-метоксифенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,01 (с, 1Н); 7,91 (с, 1Н); 7,35 (д, J=8 Гц, 1Н); 6,97 (д, J=8 Гц, 1Н); 3,90 (с, 3H); 3,1-2,9 (м, 1Н); 2,85-2,75 (м, 2H); 1,85-1,75 (м, 2H); 1,28 (д, J=7 Гц, 6H); 1,01 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 296,2 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 98,3%.
5d: 4-(3-Трифторметоксифенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,05 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,98 (с, 1Н); 7,71 (с, 1Н); 7,58 (т, J=8 Гц, 1Н); 7,42 (д, J=8 Гц, 1Н); 2,9-2,8 (м, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 308,1 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 97,1%.
5e: 4-(4-фтор-3-метилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,99 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,95-7,90 (м, 1Н); 7,65 (с, 1Н); 7,15 (т, J=8 Гц, 1Н); 2,9-2,8 (м, 2H); 2,37 (с, 3H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,02 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 256,1 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 97,1%.
5f: 4-(2,3-диметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,40-7,35 (м, 1H); 7,3-7,1 (м, 3H); 2,85-2,75 (м, 2H); 2,35 (с, 3H); 2,25 (с, 3H); 1,85-1,75 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 252,3 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 99,6%.
5g: 4-(3-хлор-4-фторфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,21 (д, J=8 Гц, 1H); 8,1-8,0 (м, 1Н); 7,66 (с, 1H); 7,35-7,20 (м, 1Н); 2,9-2,8 (м, 2H); 1,90-1,75 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 276/278 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 93,3%.
5h: 4-(3,5-дихлорфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,00 (с, 2H); 7,68 (с, 1Н); 7,55 (с, 1Н); 2,9-2,8 (м, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 292/294 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 93,7%.
5i: 4-(3-метилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,94 (с, 1Н); 7,88 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,71 (с, 1Н); 7,45-7,35 (м, 2H); 2,9-2,8 (м, 2H); 2,47 (с, 3H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 238,2 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 99,1%.
ПРИМЕР 6a:
4-(3,5-бис-трифторметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
A: 2-метансульфонил-4-пропил-6-триметилстаннилпиримидин
Тетракис(трифенилфосфин)палладий (2,48 г, 2,1 ммоль) и гексаметилдистаннан (20 г, 61,4 ммоль) последовательно добавляли в атмосфере азота к смеси 4-хлор-2-метансульфонил-6-пропилпиримидина (12,8 г, 54,5 ммоль), хлорида лития (2,8 г, 66 ммоль) и 2,6-ди-трет.-бутил-4-метилфенола (0,18 г, 0,82 ммоль) в диоксане (240 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 3 часов, затем охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 8/2), получая 2-метансульфонил-4-пропил-6-триметилстаннанилпиримидин (9,5 г, 48%) в виде желтого масла.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,51 (с, 1H); 3,39 (с, 3H); 2,81 (т, J=7 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,02 (т, J=7 Гц, 3H); 0,44 (с, 9H).
B: 4-пропил-6-триметилстаннанилпиримидин-2-карбонитрил
Цианид натрия (0,63 г, 12,9 ммоль) добавляли при комнатной температуре к 2-метансульфонил-4-пропил-6-триметилстаннанилпиримидину (2,34 г, 6,5 ммоль) в диметилсульфоксиде (23 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, затем разделяли между этилацетатом и водой. Водный слой экстрагировали дважды этилацетатом. Объединенные органические слои промывали рассолом, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 9/1), получая 4-пропил-6-триметилстаннанилпиримидин-2-карбонитрил (1,53 г, 76%) в виде твердого вещества грязно-белого цвета (Т. пл.=62°C).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,47 (с, 1Н); 2,80-2,65 (т, J=7 Гц, 2H); 1,8-1,7 (м, 2H); 0,99 (т, J=7 Гц, 3H); 0,41 (с, 9H).
C: 4-(3,5-бис-трифторметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
Бис(трифенилфосфин)палладий дихлорид (34 мг, 0,05 ммоль) добавляли в атмосфере азота к смеси 4-пропил-6-триметилстаннанилпиримидин-2-карбонитрила (155 мг, 0,50 ммоль) и 3,5-бис-трифторметилмонобромбензола (0,10 мл, 0,58 ммоль) в диметилформамиде (3 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 часов, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли между этилацетатом и водой. Водный слой экстрагировали дважды этилацетатом. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали на силикагеле (элюент: DCм), получая твердое вещество, которое растирали в пентане. После фильтрации получали 4-(3,5-бис-трифторметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил (63 мг, 35%) в виде твердого вещества грязно-белого цвета (Т. пл.=112°C).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,56 (с, 2H); 8,07 (с, 1Н); 7,80 (с, 1Н); 2,92 (т, J=8 Гц, 2H); 1,95-1,85 (м, 2H); 1,05 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 360,3 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 99,4%.
Описанную выше процедуру затем применяли, используя соответствующие производные бром- или йодофенила, для получения следующих соединений:
6b: 4-(3-хлорфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,10 (с, 1Н); 7,99 (д, J=8 Гц, 1H); 7,69 (с, 1Н); 7,6-7,4 (м, 2H); 2,86 (т, J=7 Гц, 2H); 1,90-1,75 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 258/260 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 94,9%.
6c: 4-(3,4-дихлорфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,23 (с, 1H); 7,96 (д, J=8 Гц, 1H); 7,67 (с, 1Н); 7,62 (д, J=8 Гц, 1Н); 2,86 (т, J=8 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 292/294 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 99,3%.
6d: 4-(4-Хлор-3-трифторметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,42 (с, 1H); 8,26 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,75-7,65 (м, 2H); 2,87 (т, J=8 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,04 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 326/328 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 98,9%.
6e: 4-(4-циано-3-метилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,10 (с, 1H); 7,99 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,77 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,73 (с, 1Н); 2,88 (т, J=8 Гц, 2H); 2,68 (с, 3H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 263,2 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 99,5%.
6f: 4-(3-хлор-4-метилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,11 (с, 1H); 7,91 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,66 (с, 1Н); 7,39 (д, J=8 Гц, 1Н); 2,84 (т, J=8 Гц, 2H); 2,47 (с, 3H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 272/274 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 99,3%.
6g: 4-(4-метил-3-трифторметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,33 (с, 1H); 8,20 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,71 (с, 1Н); 7,47 (д, J=8 Гц, 1Н); 2,86 (т, J=7 Гц, 2H); 2,59 (с, 3H); 1,90-1,75 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 306,1 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 97,8%.
6h: 4-(4-фтор-3-трифторметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,4-8,3 (м, 2H); 7,71 (с, 1Н); 7,39 (т, J=9 Гц, 1Н); 2,88 (т, J=7 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 310,1 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 94,0%.
6l: 4-(3,4-диметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,90 (с, 1Н), 7,82 (д, J=7,6 Гц, 1Н), 7,66 (с, 1Н), 7,27 (д, J=7,6 Гц, 1Н), 2,82 (т, J=7,8 Гц, 2H), 2,37 (с, 3H), 2,35 (с, 3H,), 1,84 (квинта, 2H), 1,01 (т, J=7,4 Гц, 3H). МС m/z: 252 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 99,7%.
6m: 4-(3-фтор-4-метилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,79 (д, 2H), 7,65 (с, 1Н), 7,34 (т, J=7,8 Гц, 1Н), 2,84 (т, J=7,6 Гц, 2H), 2,37 (с, 3H), 1,83 (м, 2H), 1,02 (т, J=7,2 Гц, 3H). МС m/z: 256 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 98,9%.
Указанная описанная процедура была изменена для получения следующих соединений, с использованием соответствующих производных бром- или йодофенила при нагревании с обратным холодильником с 1,2-дихлорэтаном вместо DMF в качестве растворителя.
6n: 4-(4-хлор-3-фторфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,0-7,9 (м, 1H); 7,86 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,67 (с, 1Н); 7,6-7,5 (м, 1Н); 2,86 (т, J=8 Гц, 2H); 1,95-1,80 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 276/278 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 97,6%.
6о: 4-(3-хлор-4-цианофенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,28 (с, 1H); 8,11 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,85 (д, J=8 Гц, 1H); 7,73 (с, 1Н); 2,89 (т, J=7 Гц, 2H); 1,95-1,80 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 283/285 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 98,1%.
6r: 4-Пропил-6-(3,4,5-трифторфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,81 (м, 2H), 7,63 (с, 1H), 2,87 (т, J=7,6 Гц, 2H), 1,85 (м, 2H), 1,03 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 278 (M+1). ВЭЖХ (200-400 нм): 98,6%.
ПРИМЕР 7a
4-[3-(Пиридин-2-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
К раствору 4-(3-оксопропил)-6-(трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (91 мг) в дихлорметане (6 мл) добавляли уксусную кислоту (36 мкл, 2 экв.), затем 2-аминопиридин (1,3 экв.). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (2 экв.) и смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре. Добавляли холодный разбавленный раствор карбоната натрия, смесь перемешивали в течение 10 минут и отделяли органический слой. Сырой продукт хроматографировали на колонке, содержащей 2 г силикагеля, элюируя смесью дихлорметан:этанол 99:1, получая 4-[3-(пиридин-2-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил в форме свободного основания. Свободное основание растворяли в DCM и добавляли HCl (1 М в простом эфире). Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток был повторно растворен в DCM, и продукт осаждали, добавляя простой диэтиловый эфир, чтобы получить 4-[3-(пиридин-2-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил в форме соли соляной кислоты.
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,51 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,28 (с, 1Н), 7,90 (с, 1Н), 7,89 (т, 1Н), 7,81 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 7,08 (д, 1Н), 6,89 (т, 1Н), 3,51 (т, 2H), 3,12 (т, 2H), 2,31-2,20 (м, 2H). МС m/z 384,0 (M+1).
Процедуру, описанную выше, затем применяли, используя соответствующий амин, для получения следующих соединений в форме свободного основания или соответствующей соли соляной кислоты:
7b: 4-[3-(5-Хлорпиридин-2-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,33 (с, 1Н), 8,28 (д, 1Н), 7,99 (с, 1Н), 7,84 (д, 1Н), 7,76 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 7,33 (д, 1Н), 6,33 (д, 1Н), 4,47 (уш. с, 1Н), 3,48-3,40 (м, 2H), 3,01 (т, 2H), 2,22-2,13 (м, 2H). МС m/z 418,1 (M+1).
7c: 4-[3-(4-Метилпиридин-2-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,31 (с, 1Н), 8,27 (д, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,75 (с, 1Н), 7,66 (т, 1Н), 6,38 (д, 1Н), 6,15 (с, 1Н), 4,42 (уш. с, 1Н), 3,47-3,40 (м, 2H), 3,03 (т, 2H), 2,20-2,13 (м, 2H), 2,19 (с, 3H). МС m/z 398,1 (M+1).
7d: 4-[3-(1-Метилбензимидазол-2-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,31 (с, 1Н), 8,16 (д, 1Н), 7,79 (д, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,60 (т, 1Н), 7,41 (д, 1Н), 7,09-7,02 (м, 1Н), 7,02-6,96 (м, 2H), 4,38 (уш. с, 1Н), 3,74-3,68 (м, 2H), 3,43 (с, 3H), 3,07 (т, 2H), 2,34-2,26 (м, 2H). МС m/z 437,1 (M+1).
7e: 4-[3-(4-Трифторметилпиридин-2-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
Н ЯМР (ДМСО-d6) δ: 8,50 (д, 1Н), 8,49 (с, 1Н), 8,46 (с, 1Н), 8,14 (д, 1Н), 7,99 (д, 1Н), 7,84 (т, 1Н), 7,11 (т, 1Н), 6,64 (д, 1Н), 6,63 (с, 1Н), 3,43-3,36 (м, 2H), 2,97 (т, 2H), 2,12-2,04 (м, 2H). МС m/z 452,1 (M+1).
7f: 4-[3-(изохинолин-3-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметил фенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,80 (с, 1Н), 8,30 (с, 1Н), 8,20 (д, 1Н), 7,79 (д, 1Н), 7,72 (с, 1Н), 7,71 (д, 1Н), 7,60 (т, 1Н), 7,51 (д, 1Н), 7,46 (т, 1Н), 7,19 (т, 1Н), 6,49 (с, 1Н), 4,66 (уш. с, 1Н), 3,48-3,42 (м, 2H), 3,07 (т, 2H), 2,29-2,22 (м, 2H). МС m/z 434,3 (M+1).
7g: 4-[3-(3,5-Дифторпиридин-2-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,32 (с, 1Н), 8,30 (д, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 7,79 (д, 1Н), 7,77 (с, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 7,05-6,97 (м, 1Н), 4,60 (уш. с, 1Н), 3,58 (кв, 2H), 3,02 (т, 2H), 2,24-2,16 (м, 2H). МС m/z 420,0 (M+1).
7h: 4-[3-(1-метилтрифторэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,52 (с, 1Н), 8,50 (д, 1Н), 8,29 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,80 (т, 1Н), 4,35-4,24 (м, 1Н), 3,42-3,26 (м, 2H), 3,12 (т, 2H), 2,40-2,22 (м, 2H), 1,59 (д, 3H). МС m/z 403,1 (M+1).
7i: 4-[3-(2-амино-2-оксоэтилметиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,53 (с, 1Н), 8,50 (д, 1Н), 8,27 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 4,01 (с, 2H), 3,37-3,31 (м, 2H), 3,08 (т, 2H), 2,98 (с, 3H), 2,37-2,27 (м, 2H). МС m/z 378,3 (M+1).
7j: 4-[3-(2-метокси-2-оксоэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид (выделенный как побочный продукт синтеза 4s' ниже)
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,52 (с, 1Н), 8,49 (д, 1Н), 8,27 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 4,03 (с, 2H), 3,85 (с, 3H), 3,21 (т, 2H), 3,09 (т, 2H), 2,32-2,22 (м, 2H). МС m/z 379,1 (M+1).
7k: 4-[3-(пиримидин-2-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,50 (с, 1Н), 8,47 (м, 2H), 8,24 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,78 (т, 1Н), 6,85 (т, 1Н), 3,59 (т, 2H), 3,06 (т, 2H), 2,21 (p, 2H). МС m/z 385,0 (M+1).
7l: 4-[3-(6-метоксипиримидин-4-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,52 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,37 (с, 1Н), 8,27 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 6,10 (уш. с, 1Н), 4,06 (с, 3H), 3,63 (уш. с, 2H), 3,07 (уш. с, 2H), 2,22 (уш. с, 2H). МС m/z 415,0 (M+1).
ПРИМЕР 8a:
4-[3-(Метилкарбамоилметиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
К перемешиваемому раствору 4-(3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (50 мг) в метаноле (1 мл) добавляли гидрохлорид амида метилглицина (41 мг) и уксусную кислоту (12 мкл). Смесь перемешивали в течение 5 минут, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (42 мг) и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение ночи. Метанол удаляли в вакууме, полученный остаток растворяли в DCM (20 мл) и промывали насыщенным бикарбонатом натрия и водой (1:1, 2 x 20 мл). Органический слой отделяли, высушивали над сульфатом натрия и упаривали, получая сырой продукт в форме масла. Очисткой препаративной ВЭЖХ получали соль ТФК 4-[3-(метилкарбамоилметиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила в виде твердого вещества белого цвета (13 мг).
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,55 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,24 (с, 1Н), 7,88 (д, 1Н), 7,80 (т, 1Н), 3,80 (с, 2H), 3,15 (т, 2H), 3,08 (т, 2H), 2,75 (с, 3H), 2,22 (м, 2H). МС m/z 378,4 (M+1), 100%.
Процедуру, описанную выше, затем применяли, используя соответствующее производное амина, для получения следующих соединений:
8b: 4-[3-(2-Диметилкарбамоилпирролидин-1-ил)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,55 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,28 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,80 (м, 1Н), 4,65 (т, 1Н), 3,88 (м, 1Н), 3,31 (м, 2H), 3,22 (м, 1Н), 3,08 (м, 5H), 3,01 (с, 3H), 2,68 (м. 1Н), 2,22 (м, 3H), 2,24 (м, 2H). МС m/z 432,4 (M+1), 100%.
8c: 4-[3-(Карбамоилметиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,55 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,28 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,80 (т, 1Н), 3,85 (с, 2H), 3,18 (т, 2H), 3,08 (т, 2H), 2,26 (м, 2H). МС m/z 364,3 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 9a
4-(3-Пиперазин-1-ил-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
К перемешиваемому раствору 4-(3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (50 мг) в дихлорметане (1 мл) добавляли трет.-бутил-1-пиперазин карбоксилат (61 мг) и уксусную кислоту (12 л). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение пяти минут, затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (42 мг) и перемешивание продолжали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (20 мл) и промывали насыщенным бикарбонатом натрия и водой (1:1, 2×20 мл). Органические фракции отделяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в диэтиловом эфире (1 мл), добавляли HCl в простом эфире (2M, 72 мкл) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Смесь разбавляли простым эфиром (10 мл), промывали насыщенным бикарбонатом натрия и водой (1:1, 2×10 мл), высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении, получая сырой продукт. Очисткой препаративной ВЭЖХ получали соль ТФК 4-(3-пиперазин-1-ил-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила.
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,51 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,78 (д, 1H), 3,56 (м, 4H), 3,30 (м, 6H), 3,08 (т, 2H), 2,32 (м, 2H). МС m/z 376,4 (M+1), 100%.
Следующее соединение также было получено в соответствии с той же самой процедурой:
9b: 4-(3-[1,4]диазепан-1-ил-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
К перемешиваемому раствору 4-(3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (50 мг) в дихлорметане (1 мл) добавляли трет.-бутил-1-гомопиперазин карбоксилат (75 мкл) и уксусную кислоту (12 мкл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение пяти минут, затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (42 мг) и перемешивание продолжали в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (20 мл) и промывали насыщенным бикарбонатом натрия и водой (1:1, 2×20 мл). Органические фракции отделяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в ТГФ (500 мкл) и добавляли трифторуксусную кислоту (100 л). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, затем растворитель удаляли при пониженном давлении, получая сырой продукт. Очисткой препаративной ВЭЖХ получали соль ТФК 4-(3-[1,4]диазепан-1-ил-пропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила.
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,52 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 3,78 (м, 2H), 3,70 (м, 2H), 3,59 (м, 2H), 3,45 (т, 2H), 3,38 (т, 2H), 3,31 (т, 2H), 2,32 (м, 4H). МС m/z 390,3 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 10a
4-[3-(Карбоксиметиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
К перемешиваемому раствору 4-(3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил) пиримидин-2-карбонитрила (50 мг) в метаноле (1 мл) добавляли глицин (25 мг), затем воду (100 мкл) и уксусную кислоту (12 мкл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение пяти минут, затем добавляли цианоборгидрид на твердом носителе (77 мг, 2,57 ммоль/г) и перемешивание продолжали в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая сырой продукт. Очисткой препаративной ВЭЖХ получали соль ТФК 4-[3-(карбоксиметиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила.
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,55 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,80 (т, 1Н), 3,91 (с, 2H), 3,17 (т, 2H), 3,08 (т, 2H), 2,28 (м, 2H). МС m/z 365,0 (M+1), 100%.
Процедуру, описанную выше, затем применяли, используя соответствующие производные амина, для получения следующих соединений:
10b: 4-[3-(2-Карбамоилэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,51 (с, 1Н), 8,47 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,78 (т, 1Н), 3,32 (т, 2H), 3,19 (т, 2H), 3,09 (т, 2H), 2,70 (т, 2H), 2,27 (м, 2H). МС m/z 378,3 (M+1), 100%.
10c: 4-[3-Карбоксиметилметиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,55 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,80 (т, 1Н), 4,14 (с, 2H), 3,38 (т, 2H), 3,08 (т, 2H), 3,02 (с, 3H), 2,35 (м, 2H). МС m/z 378,8 (M+1).
ПРИМЕР 11a
4-{3-[2-(1-Метилпирролидин-2-ил)-этиламино]-пропил}-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
К перемешиваемому раствору 4-(3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (50 мг) в метаноле (1 мл) добавляли 2-(2-аминоэтил)-1-метилпирролидин (48 мкл) и уксусную кислоту (12 мкл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение пяти минут, затем добавляли цианоборгидрид на твердом носителе (77 мг, 2,57 ммоль/г) и перемешивание продолжали в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая сырой продукт. Очисткой препаративной ВЭЖХ получали соль ТФК 4-{3-[2-(1-метилпирролидин-2-ил)-этиламино]-пропил}-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила.
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,52 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 3,75 (м, 1Н), 3,38 (м, 1Н), 3,19 (м, 5H), 3,12 (т, 2H), 2,96 (с, 3H), 2,40 (м, 2H), 2,27 (т, 2H), 2,15 (м, 2H), 2,05 (м, 1Н), 1,82 (м, 1Н). МС m/z 418,3 (M+1), 100%.
Процедуру, описанную выше, затем применяли, используя соответствующие производные амина, для получения следующих соединений:
11b: 4-[3-(2-Пирролидин-1-ил-этиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,51 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,78 (т, 1Н), 3,61 (т, 2H), 3,50 (м, 6H), 3,24 (т, 2H), 3,10 (т, 2H), 3,29 (м, 2H), 2,13 (м, 4H). МС m/z 404,5 (M+1), 100%.
11c: 4-{3-[(1-этилпирролидин-2-ил-метил)-амино]-пропил}-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD)δ: 8,51 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,78 (т, 1Н), 3,82 (м, 1Н), 3,78 (м, 1Н), 3,68 (м, 1Н), 3,55 (м, 1Н), 3,45 (м, 1Н), 3,31 (м, 1Н), 3,27 (т, 2H), 3,20 (м, 1H), 3,11 (т, 2H), 2,50 (м, 1Н), 2,31 (м, 2H), 2,19 (м, 2H), 2,05 (м, 1Н), 1,38 (т, 3H). МС m/z 418,1 (M+1), 100%.
11d: 4-(3-(1-азабицикло[2.2.2]окт-3-ил-амино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,51 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,78 (т, 1Н), 3,95 (м, 1Н), 3,86 (м, 1Н), 3,42 (м, 5H), 3,25 (т, 2H), 3,11 (т, 2H), 2,57 (м, 1Н), 2,32 (м, 2H), 2,20 (м, 2H), 2,05 (м, 2H). МС m/z 416,1 (M+1), 100%.
11e: 4-[3-(2-Морфолин-4-ил-этиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенилпиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,52 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,80 (т, 1Н), 3,87 (т, 4H), 3,45 (т, 2H), 3,23 (м, 4H), 3,10 (т, 6H), 2,28 (м, 2H). МС m/z 420,1 (M+1), 100%.
11f: 4-[3-(2-метоксиэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,52 (с, 1H), 8,48 (д, 1H), 8,24 (с, 1H), 7,90 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 3,66 (т, 2H), 3,42 (с, 3H), 3,25 (т, 2H), 3,16 (т, 2H), 3,08 (т, 2H), 2,24 (м, 2H). МС m/z 365,0 (M+1), 100%.
11g: 4-{3-[2-(2-Оксоимидазолидин-1-ил)-этиламино]-пропил}-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,52 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 3,53 (м, 2H), 3,46 (м, 4H), 3,24 (м, 2H), 3,19 (т, 2H), 3,08 (т, 2H), 2,25 (м, 2H). МС m/z 419,0 (M+1), 100%.
11h: 4-[3-(2-Диметиламиноэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,52 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,28 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,80 (т, 1Н), 3,54 (с, 4H), 3,28 (т, 2H), 3,12 (т, 2H), 2,98 (с, 6H), 2,30 (м, 2H). МС m/z 378,4 (M+1), 100%.
11i: 4-[3-(2-Ацетиламиноэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,52 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 3,51 (т, 2H), 3,18 (м, 4H), 3,08 (т, 2H), 2,25 (м, 2H), 1,99 (с, 3H). МС m/z 392,1 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 12
4-(3-Гидрокси-1-пропил)-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
A: 2-метилсульфанил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3,4-диметилфенил) пиримидин
К перемешиваемой суспензии гидрида натрия (60% в парафиновом масле, 20 г) в диэтиловом эфире (1 л) при 0°C добавляли этанол (1 мл). К указанной смеси добавляли гамма-бутиролактон (18 г), с последующим капельным добавлением раствора 3',4'-диметилацетофенона (29,6 г) в простом диэтиловом эфире (100 мл) за 30 минут. Смесь оставляли для перемешивания при комнатной температуре в течение 72 часов. Затем добавляли этанол (20 мл), чтобы разрушить лишний гидрид натрия, после чего добавляли водный раствор хлорида аммония (20 г в 300 мл воды). Органический слой отделяли и промывали разбавленной соляной кислотой (0,1 н., 500 мл), затем водой (2×200 мл). Эфирный слой высушивали над сульфатом натрия, растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток смешивали с S-метилизотиоуранйодидом (37 г). Смесь нагревали при 130°C в течение 4 часов. После охлаждения до комнатной температуры добавляли триэтиламин (45 мл) и метанол (50 мл) и смесь нагревали с обратным холодильником с использованием масляной при 85°C в течение 6 часов. После удаления растворителя и триэтиламина при пониженном давлении, остаток забирали этилацетатом (500 мл) и водой (500 мл). Органический слой отделяли, промывали разбавленной соляной кислотой (0,1 н., 500 мл), затем водой (2×300 мл). Органический слой высушивали, растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток пропускали через колонку с силикагелем, используя петролейный эфир и этилацетат (1:1) как элюент, получая 2-метилсульфанил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3,4-диметилфенил)пиримидин (17,5 г).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,84 (с, 1Н), 7,80 (д, 1Н), 7,15-7,25 (м, 2H), 3,72 (т, 2H), 2,87 (т, 2H), 2,63 (с, 3H), 2,34 (с, 3H), 2,32 (с, 3H), 2,03 (м, 2H).
B: 4-(3-гидроксипропил)-6-(3,4-диметилфенил)пиримидин-2-карбонитрил
К раствору 2-метилсульфанил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3,4-диметилфенил)пиримидина (5,8 г) в смешанном растворителе, состоящем из метанола и воды (110 мл, 10:1), добавляли OXONE (35 г). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов, затем разбавляли этилацетатом (500 мл). Смесь промывали водой (3 x 500 мл). Органический слой высушивали над сульфатом натрия, растворитель удаляли при пониженном давлении, получая 2-метансульфонил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3,4-диметилфенил)пиримидин в качестве сырого продукта. К перемешиваемому раствору указанного 2-метилсульфонил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3,4-диметилфенил)пиримидина в диметилсульфоксиде (50 мл) добавляли цианид натрия (2,9 г). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов, затем вливали в этилацетат (300 мл) и промывали водой (2 x 200 мл). Органический слой высушивали над сульфатом натрия, растворитель упаривали при пониженном давлении, указанный остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле, используя смесь петролейный эфир/EtOAc (1:1) в качестве элюента, получая в качестве продукта 4-(3-гидроксипропил)-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил (4,8 г).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,01 (с, 1Н), 7,96 (с, 1Н), 7,89 (д, 1Н), 7,25 (д, 1Н), 3,64 (т, 2H), 2,93 (т, 2H), 2,36 (с, 3H), 2,34 (с, 3H), 2,0 (м, 2H). МС m/z 268 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 13a
4-(3,4-Диметилфенил)-6-[3-(пиридин-2-ил-амино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
A: 4-(3-оксо-1-пропил)-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
Перйодинат Десса-Мартина (4,2 г) добавляли к раствору 4-(3-гидроксипропил)-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (2,0 г) в дихлорметане (100 мл) и полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин. Смесь промывали водой (3×100 мл), высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле при использовании смеси петролейный эфир/EtOAc (2:1), получая 4-(3-оксопропил)-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил в виде твердого вещества белого цвета (1,9 г).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,87 (с, 1Н), 7,8 (д, 1Н), 7,75 (с, 1Н), 7,25 (д, 1Н), 3,16 (т, 2H), 3,09 (т, 2H), 2,36 (с, 3H), 2,34 (с, 3H). МС m/z 266 (M+1), 100%.
B: 4-(3,4-диметилфенил)-6-[3-(пиридин-2-ил-амино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
К раствору 4-(3-оксопропил)-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (91 мг) в дихлорметане (6 мл) добавляли уксусную кислоту (2 экв.), затем 2-аминопиридин (1,3 экв.). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, затем добавляли триацетоксиборогидрид натрия (2 экв.) и смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре. Добавляли холодный разбавленный раствор карбоната натрия, смесь перемешивали в течение 10 минут и отделяли органический слой, растворитель удаляли при пониженном давлении. Сырой продукт хроматографировали на колонке с 2 г силикагеля, элюируя смесью дихлорметан:этанол (99:1), получая продукт в форме свободного основания. Свободное основание растворяли в DCM и добавляли HCl (1 М в простом эфире). Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток повторно растворяли в DCM и продукт осаждали, добавляя простой диэтиловый эфир, чтобы получить 4-(3,4-диметилфенил)-6-[3-(пиридин-2-ил-амино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид (60 мг).
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,09 (с, 1Н), 8,00 (с, 1Н), 7,95-7,86 (м, 2H), 7,83 (д, 1Н), 7,32 (д, 1Н), 7,07 (д, 1Н), 6,88 (т, 1H), 3,48 (т, 2H), 3,05 (т, 2H), 2,29-2,19 (м, 2H). МС m/z 344,1 (M+1).
Используя соответствующие амины, получали следующие соединения в форме либо свободного основания, либо соответствующей соли соляной кислоты.
13b: 4-(3,4-Диметилфенил)-6-(3-(4-метилпиридин-2-ил-амино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,08 (с, 1Н), 7,98 (с, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,69 (д, 1Н), 7,31 (д, 1Н), 6,82 (с, 1Н), 6,74 (д, 1Н), 3,37 (т, 2H), 3,04 (т, 2H), 2,37 (с, 6H), 2,35 (с, 3H), 2,28-2,18 (м, 2H). МС m/z 358,0 (M+1).
13c: 4-[3-(2-Диметиламино-l-метилэтиламино)-пропил]-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрилди гидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,13 (с, 1Н), 8,02 (с, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,31 (д, 1Н), 3,95-3,80 (м, 1Н), 3,65-3,48 (м, 1Н), 3,25-3,15 (м, 2H), 3,11-3,04 (м, 2H), 2,98 (с, 6H), 2,37 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,32-2,26 (м, 2H), 1,50 (д, 3H). МС m/z 352,5 (M+1).
13d: 4-(3,4-Диметилфенил)-6-[3-(1-этилпирролидин-2-метиламино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил дигидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,13 (с, 1Н), 8,02 (с, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,32 (д, 1Н), 3,87-3,69 (м, 2H), 3,68-3,50 (м, 2H), 3,50-3,38 (м, 1Н), 3,27-3,21 (м, 2H), 3,21-3,11 (м, 1Н), 3,13 (т, 2H), 2,52-2,41 (м, 1Н), 2,38 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,35-2,26 (м, 2H), 2,24-2,10 (м, 2H), 2,09-1,97 (м, 1H), 1,41 (т, 3H). МС m/z 378,5 (M+1).
13e: (S)-4-(3,4-Диметилфенил)-6-[3-(хинуклидинил-3-амино)-пропил]пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,13 (с, 1Н), 8,02 (с, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,31 (д, 1Н), 3,94-3,85 (м, 1Н), 3,85 (т, 1Н), 3,67-3,53 (м, 3H), 3,46-3,31 (м, 2H), 3,22 (т, 2H), 3,07 (т, 2H), 2,57 (уш. с, 1Н), 2,38 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,36-2,26 (м, 3H), 2,22-2,10 (м, 1Н), 2,10-1,99 (м, 2H). МС m/z 376,4 (M+1).
13f: 4-(3,4-Диметилфенил)-6-[3-(проп-2-ил-амино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,90 (с, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,69 (с, 1Н), 7,28 (д, 1Н), 2,91 (т, 2H), 2,84-2,77 (м, 1Н), 2,68 (т, 2H), 2,37 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,02-1,93 (м, 2H), 1,06 (д, 3H). МС m/z 309,4 (M+1).
13g: 4-(3,4-Диметилфенил)-6-[3-(1-метилтрифторэтиламино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,10 (с, 1Н), 8,01 (с, 1Н), 7,94 (д, 1Н), 7,32 (д, 1Н), 4,32-4,21 (м, 1Н), 3,39-3,33 (м, 2H), 3,05 (т, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,36 (с, 3H), 2,35-2,17 (м, 2H), 1,57 (д, 6H). МС m/z 363,1 (M+1).
13h: 4-(3,4-Диметилфенил)-6-{3-[2-(морфолин-4-ил)-этиламино]-пропил}-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,06 (с, 1Н), 8,00 (с, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,32 (д, 1Н), 3,69 (т, 4H), 2,93 (т, 2H), 2,75 (т, 2H), 2,70 (т, 2H), 2,52 (т, 2H), 2,50-2,45 (м, 4H), 2,38 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,06-1,98 (м, 2H). МС m/z 380,4 (M+1).
13i: 4-{[3-(3-диэтилкарбамоил)-пиперидин-1-ил]-пропил}-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрилгидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,11 (с, 1Н), 8,01 (с, 1Н), 7,94 (д, 1Н), 7,31 (д, 1Н), 3,9-2,9 (м, 13Н), 2,38 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,33 (м, 2H), 2,1-1,6 (м, 4H), 1,27-1,05 (м, 6H). МС m/z 434,4 (M+1).
13j: 4-(3,4-Диметилфенил)-6-[3-(4-пиридин-2-ил-пиперазин-1-ил)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрилдигидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,14 (д, д, 1Н), 8,12 (с, 1Н), 8,10 (д, 1Н), 8,02 (с, 1Н), 7,95 (д, 1Н), 7,46 (д, 1Н), 7,32 (д, 1Н), 7,14 (т, 1Н), 4,42 (уш. с, 2H), 3,80 (уш. с, 4H), 3,38 (д, д 2H), 3,35 (уш. с, 2H), 3,07 (т, 2H), 2,40 (м, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,36 (с, 3H). МС m/z 413,3 (M+1)
ПРИМЕР 14a
4-(3,4-диметилфенил)-6-[3-(2-гидрокси-1,1-диметилэтиламино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
К раствору 4-(3-оксопропил)-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (50 мг) в ацетонитриле (1,5 мл) при перемешивании добавляли 2-амино-2-метил-1-пропанол (36 мкл), макропористый цианоборгидрид (110 мг, 2,57 ммоль/г) и уксусную кислоту (16 мкл) и полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь фильтровали и очищали препаративной ВЭЖХ, получая 4-(3,4-диметилфенил)-6-[3-(2-гидрокси-1,1-диметилэтиламино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты в виде твердого вещества белого цвета (10 мг).
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,08 (с, 1Н), 8,00 (с, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,33 (д, 1Н), 3,55 (с, 1Н), 3,11 (т, 2H), 3,02 (т, 2H), 2,38 (с, 1Н), 2,36 (с, 1Н), 2,16-2,25 (м, 2H), 1,34 (с, 6H). МС m/z 339,1 (M+1), 100%.
14b: 4-(3,4-диметилфенил)-6-[3, (2-метоксиэтиламино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
К раствору 4-(3-оксопропил)-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (50 мг) в MeOH (1,5 мл) при перемешивании добавляли 2-метоксиэтиламин (26 мкл). Добавляли макропористый цианоборгидрид (110 мг, 2,57 ммоль/г) и уксусную кислоту (16 мкл) и полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь фильтровали и очищали препаративной LCMS, получая 4-(3,4-диметилфенил)-6-[3, (2-метоксиэтиламино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты в виде твердого вещества белого цвета (8 мг).
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,07 (с, 1Н), 8,00 (с, 1H), 7,94 (д, 1Н), 7,33 (д, 1H), 3,64 (т, 2H), 3,42 (с, 3H), 3,24 (т, 2H), 3,13 (т, 3H), 3,01 (т, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,36 (с, 3H), 2,16-2,26 (м, 2H). МС m/z 325,5 (M+1), 100%.
Процедуру, описанную выше, затем применяли, используя соответствующие производные амина, для получения следующих соединений:
14c: 4-(3,4-диметилфенил)-6-{3-[(пиридин-2-илметил)-амино]-пропил}-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,62 (д, 1Н), 7,98 (т, 1Н), 7,90 (с, 1Н), 7,84 (д, 1Н), 7,75 (с, 1Н), 7,60 (д, 1Н), 7,52 (м, 1Н), 7,27 (д, 1Н), 4,48 (с, 2H), 3,33 (т, 2H), 3,07 (т, 2H), 2,36 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,23-2,35 (м, 2H). МС m/z 358,0 (M+1), 100%.
14d: 4-(3,4-Диметилфенил)-6-{3-[3-(1H-имидазол-4-ил)-пропиламино]-пропил}-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,81 (с, 1Н), 8,08 (с, 1Н), 8,00 (с, 1Н), 7,93 (д, 1Н), 7,45 (с, 1Н), 7,30 (д, 1Н), 3,39 (т, 2H), 3,18-3,22 (м, 4H), 3,04 (т, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,36 (с, 3H), 2,20-2,28 (м, 2H). МС m/z 361,0 (M+1), 100%.
14e: 4-[3-(бицикло[2,2,1]гепт-2-иламино)-пропил]-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,87 (с, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,70 (с, 1Н), 7,52 (м, 1Н), 3,37-3,42 (м, 1Н), 3,01-3,09 (м, 2H), 2,96 (т, 2H), 2,54 (с, 1Н), 2,35 (с, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,22-2,30 (м, 3H), 1,93-2,04 (м, 1Н), 1,68-1,78 (м, 1Н), 1,53-1,60 (м, 2H), 1,38-1,45 (м, 3H), 1,26 (д, 1Н). МС m/z 361,0 (M+1), 100%.
14f: 4-(3,4-диметилфенил)-6-{3-[3-(2-оксопирролидин-1-ил)-пропиламино]-пропил}-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,91 (с, 1H), 7,84 (д, 1H), 7,81 (с, 1H), 7,27 (д, 1H), 3,47-3,50 (м, 4H), 3,12 (м, 2H), 3,05 (т, 2H), 2,98 (м, 2H), 2,49 (т, 2H), 2,36 (с, 3H), 2,34 (с, 3H), 2,29 (м, 2H), 2,08-2,16 (м, 4H). МС m/z 392,3 (M+1), 100%.
14g: 4-[3-(1,1-диметил-2-морфолин-4-ил-этиламино)-пропил]-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,91 (с, 1Н), 7,86 (д, 1Н), 7,78 (с, 1H), 7,27 (д, 1H), 3,92 (м, 4H), 3,34 (с, 2H), 3,14-3,18 (м, 6H), 3,01 (т, 2H), 2,37 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,30-2,35 (м, 2H), 1,52 (с, 6H). МС m/z 408,1 (M+1), 100%.
14h: 4-(3,4-диметилфенил)-6-{3-[2-(1H-индол-3-ил)-этиламино]-пропил}-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,03 (с, 1H), 7,99 (с, 1H), 7,93 (д, 1Н), 7,58 (д, 1H), 7,31-7,37 (м, 2H), 7,19 (с, 1Н), 7,12 (т, 1Н), 7,04 (т, 1Н), 3,33-3,38 (м, 2H), 3,14-3,21 (м, 4H), 2,99 (т, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,14-2,21 (м, 2H). МС m/z 411,0 (M+1), 100%.
14i: 4-(3,4-диметилфенил)-6-[3-(метилкарбамоилметиламино)-пропил]-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: (8,07 (с, 1Н), 8,00 (с, 1Н), 7,94 (д, 1Н), 7,31 (д, 1Н), 3,73 (с, 1Н), 3,08 (т, 2H), 3,01 (т, 2H), 2,79 (с, 3H), 2,38 (с, 3H), 2,36 (с, 3H), 2,19 (т, 2H). МС m/z 338,5 (M+1), 100%.
14j: 4-[3-(2-Ацетиламиноэтиламино)-пропил]-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,08 (с, 1Н), 8,00 (с, 1Н), 7,94 (д, 1Н), 7,31 (д, 1Н), 3,50 (т, 2H), 3,15 (м, 4H), 3,01 (т, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,21 (м, 2H), 1,99 (с, 3H). МС m/z 352,4 (M+1), 100%.
14k: 4-(3,4-диметилфенил)-6-{3-[2-(l-метилпирролидин-2-ил)-этиламино]-пропил}-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,08 (с, 1Н), 8,00 (с, 1Н), 7,94 (д, 1Н), 7,33 (д, 1Н), 3,70-3,77 (м, 1Н), 3,33-3,41 (м, 1Н), 3,12-3,21 (м, 5H), 3,04 (т, 2H), 2,94 (с, 3H), 2,38-2,43 (м, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,36 (с, 3H), 2,20-2,28 (м, 2H), 2,04-2,18 (м, 2H), 1,93-2,04 (м, 1Н), 1,75-1,86 (м, 1Н). МС m/z 378,5 (M+1), 100%.
14l: 4-[3-(Карбамоилметилметиламино)-пропил]-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,08 (с, 1Н), 8,00 (с, 1Н), 7,94 (д, 1Н), 7,32 (д, 1Н), 4,00 (уш. с, 2H), 3,24-3,30 (м, 2H), 3,01 (т, 2H), 2,98 (т, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,36 (с, 3H), 2,23-2,30 (м, 2H). МС m/z 338,4 (M+1), 100%.
14m: 4-[3-(Диметилкарбамоилметиламино)-пропил]-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,89 (с, 1H), 7,83 (д, 1Н), 7,76 (с, 1Н), 7,27 (д, 1Н), 4,00 (с, 2H), 3,24 (т, 2H), 3,03 (м, 2H), 3,01 (с, 6H), 2,36 (с, 3H), 2,34 (с, 3H), 2,23-2,35 (м, 2H). МС m/z 352,3 (M+1), 100%.
14n: 4-(3,4-диметилфенил)-6-{3-[2-(2-оксоимидазолидин-1-ил)-этиламино]-пропил}-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,08 (с, 1Н), 8,00 (с, 1Н), 7,94 (д, 1Н), 7,33 (д, 1Н), 3,51-3,55 (м, 2H), 3,43-3,48 (м, 4H), 3,23 (т, 2H), 3,17 (т, 2H), 3,02 (т, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,36 (с, 3H), 2,17-2,27 (м, 2H). МС m/z 379,4 (M+1), 100%.
14о: 4-[3-(3-Диметиламинопропиламино)-пропил]-6-(3,4-диметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил соль трифторуксусной кислоты
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,07 (с, 1Н), 7,99 (с, 1Н), 7,93 (д, 1Н), 7,31 (д, 1Н), 3,24 (т, 2H), 3,13-3,20 (м, 4H), 3,03 (т, 2H), 2,92 (с, 6H), 2,37 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,20-2,28 (м, 2H), 2,12-2,19 (м, 2H). МС m/z 352,4 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 15
4-(3-гидрокси-3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
2
4
2
2
2
К перемешиваемому раствору 4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)пиримидин-2-карбонитрила (1,54 г) в ацетонитриле (15 мл) добавляли 0,2M буфер KHPO рН 6,5 (15 мл), затем ТЕМРО (120 мг). Смесь нагревали до 45°C и добавляли последовательно раствор NaClO (1,26 г в 5 мл HO) и 5% NaOCl (0,25 мл в 5 мл НО) за 1 час (приблизительно 1,5 мл каждого добавляли как начальные аликвоты). Через 5 ч смесь охлаждали и подщелачивали до рН 9,0 добавлением 4 н. NaOH, с последующим добавлением холодного раствора сульфита натрия. Нейтральные фракции удаляли экстракцией этилацетатом. Водную фазу подкисляли до рН 3,5 добавлением 5 н. HCl и экстрагировали дважды DCM (материал, нерастворимый в бифазной смеси, удаляли фильтрацией через целит), органический слой промывали водой, затем рассолом. Удалением растворителя с последующим растиранием с эфиром получали белый осадок, содержащий остатки ТЕМРО и некоторые производные 2-карбоксамидпиримидина как побочный продукт. Полученные маточные растворы содержали желаемую кислоту, 4-(3-гидрокси-3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил, 370 мг.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,35 (с, 1Н), 8,31 (д, 1Н), 7,83 (с, 1Н), 7,83 (д, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 3,22 (т, 2H), 3,00 (т, 2H). МС m/z 322,1 (M+1).
ПРИМЕР 16a
4-[3-(пиперидин-1-ил)-3-оксопропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
2
К раствору 4-(3-гидрокси-3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (64 мг) в DCM (6 мл) добавляли 1-гидроксибензотриазол (30 мг) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид HCl (38 мг). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут и добавляли пиперидин (22 мг). После выдерживания в течение 18 ч реакционную смесь промывали HCl (1 М, 2×5 мл), НО, затем рассолом и высушивали с сульфатом натрия. После удаления растворителя, кристаллизацией из смеси ацетон/эфир получали 4-(3-пиперидин-1-ил-3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил в виде твердого вещества белого цвета, 35 мг.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,37 (с, 1Н), 8,31 (д, 1Н), 7,91 (с, 1Н), 7,80 (д, 1Н), 7,66 (т, 1Н), 3,51 (т, 2H), 3,46 (т, 2H), 3,23 (т, 2H), 2,95 (т, 2H), 1,70-1,58 (м, 4H), 1,56-1,48 (м, 2H). МС m/z 389,1 (M+1).
Следующие соединения получали аналогично путем сочетания кислоты с соответствующим амином в присутствии HOBt и EDCl.
16b: 4-[3-(гомопиперазин-1-ил)-3-оксопропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил гидрохлорид
1
3
Н ЯМР (CDOD) δ: 8,51 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,28 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,78 (т, 1Н), 3,98-3,92 и 3,84-3,78 (м, 2H) (ротамеры), 3,81-3,76 и 3,71-3,66 (м, 2H) (ротамеры), 3,50-3,45 и 3,33-3,27 (м, 2H) (ротамеры), 3,41-3,35 и 3,33-3,27 (м, 2H) (ротамеры), 3,29-3,23 (м, 2H), 3,07 (т, 2H), 2,26-2,16 и 2,10-2,02 (м, 2H) (ротамеры). МС m/z 404,4 (M+1).
16c: 4-(3,4-диметилфенил)-6-[2-(2-пиридин-2-ил-этилкарбамоил)-этил]-пиримидин-2-карбонитрил трифторметансульфонат
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,62 (д, 1Н), 8,27 (т, 1Н), 7,88 (с, 1Н), 7,81 (д, 1Н), 7,62-7,78 (м, 4H), 7,28 (с, 1Н), 3,70-3,80 (м, 2H), 3,33 (т, 2H), 3,04 (т, 2H), 2,70 (т, 2H), 2,34 (д, 6H). МС m/z 386,0 (M+1), 95%.
16d: 4-(3,4-диметилфенил)-6-[2-(2-пиперидин-1-ил-этилкарбамоил)-этил]-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,90 (с, 1Н), 7,85 (д, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 7,28 (с, 1Н), 3,29 (т, 2H), 3,19 (т, 2H), 2,75 (т, 2H), 2,30-2,40 (м, 12Н), 1,52-1,60 (м, 4H), 1,41-1,47 (м, 2H). МС m/z 392,1 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 17
4-(3-трет.-бутилфенил)-6-(3-оксопропил)-пиримидин-2-карбонитрил
A: 1-(3-трет.-бутилфенил)-этанон
4
3
1
К раствору 1-трет.-бутил-3-этилбензола (11,15) в ацетонитриле (350 мл) и воде (150 мл) при перемешивании при комнатной температуре добавляли сульфат церия (III) (6,05 г) и бромат бария (13,5 г). Полученную суспензию нагревали с обратным холодильником в течение 16 ч. После охлаждения до комнатной температуры, реакционную смесь фильтровали. Насыщенный водный раствор серноватистокислого натрия добавляли к фильтрату и продукт экстрагировали в DCM (3×100 мл). Объединенные органические фракции промывали рассолом, высушивали над MgSO и концентрировали в вакууме, получая 1-(3-трет.-бутилфенил)-этанон как сырой продукт в форме желтого масла (13,5 г). Н ЯМР (CDCl) δ: 8,00 (с, 1H), 7,75 (д, 1Н), 7,61 (д, 1Н), 7,39 (т, 1Н), 2,61 (с, 3H), 1,36 (с, 9H).
B: 1,3-Диоксо-6-гидрокси-1-(3'-трет.-бутилфенил)-гексан
4
К суспензии NaH (60% в масле, 7,66 г) в простом эфире (480 мл) при 0°C добавляли при перемешивании этанол (479 мкл), затем γ-бутиролактон (6,18 мл). После этого по каплям добавляли 1-(3-трет.-бутилфенил)-этанон (13,5 г) в простом эфире (80 мл). Полученной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 72 часов. После аккуратного добавления этанола (10,5 мл), добавляли раствор хлорида аммония (10 г в 250 мл воды), эфирный слой отделяли и промывали рассолом (300 мл), высушивали над MgSO и концентрировали в вакууме, получая 1,3-диоксо-6-гидрокси-1(3'-трет.-бутилфенил)-гексан как сырой продукт (18,5 г). Он не требовал никакой очистки и сразу использовался в следующей реакции.
МС m/z 245,4 (M+1), 80%.
C: 2-Метилсульфанил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трет.-бутилметилфенил)-пиримидин
4
1,3-Диоксо-6-гидрокси-1(3'-трет.-бутилфенил)-гексан (сырой продукт, 18,5 г) и соль S-метилизотиоурана (30,7 г) нагревали при 110°C в течение 3 часов. Реакционной смеси давали охладиться до комнатной температуры, добавляли метанол (30 мл) и триэтиламин (26 мл) и полученную смесь нагревали при 85°C в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и продукт забирали в этилацетат (400 мл), промывали водой (2 x 200 мл) и органический слой высушивали над MgSO. После удаления растворителя под вакуумом, остаток пропускали через колонку с силикагелем, используя петролейный эфир и этилацетат (1:1) как элюент, получая 2-метилсульфанил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трет.-бутилметилфенил)-пиримидин (5,2 г) в форме масла.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,12 (с, 1H), 7,86 (д, 1Н), 7,52 (д, 1H), 7,40 (т, 1Н), 7,25 (с, 1Н), 3,75 (т, 2H), 2,88 (т, 2H), 2,64 (с, 3H), 1,99-2,06 (м, 2H), 1,38 (с, 9H). МС m/z 317,1 (M+1), 95%.
D: 2-Метилсульфонил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин
4
К раствору 2-метилсульфанил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трет.-бутилфенил)-пиримидина (5,2 г) в смешанном растворителе из метанола и воды (122 мл, 10:1) добавляли OXONE (23,2 г). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После разбавления водой (200 мл) продукт экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенные органические фракции промывали рассолом (200 мл), высушивали над MgSO и концентрировали в вакууме, получая 2-метилсульфонил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трет.-бутилметилфенил)-пиримидин (4,6 г) в форме твердого вещества светло-коричневого цвета. Его использовали как сырье в следующей стадии без дальнейшей очистки.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,12 (с, 1Н), 7,92 (д, 1Н), 7,73 (с, 1Н), 7,59 (д, 1Н), 7,45 (т, 1Н), 3,75 (т, 2H), 3,43 (с, 3H), 3,08 (т, 2H), 2,08-2,16 (м, 2H), 1,40 (с, 9H). МС m/z 349,4 (M+1), 95%.
E:4-(3-трет.-бутилфенил)-6-(3-гидроксипропил)-пиримидин-2-карбонитрил
4
К раствору 2-метилсульфонил-4-(3-гидроксипропил)-6-(3-трет.-бутилметилфенил)-пиримидина (4,6 г) в диметилсульфоксиде (120 мл) при перемешивании при комнатной температуре добавляли цианид натрия (647 мг). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. После добавления этилацетата (200 мл) смесь промывали водой (100 мл×3). Органический слой высушивали над MgSO и концентрировали в вакууме, остаток пропускали через колонку с силикагелем, используя петролейный эфир и EtOAc как элюент, получая 4-(3-трет.-бутилфенил)-6-(3-гидроксипропил)-пиримидин-2-карбонитрил (4,0 г) в форме масла.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,14 (с, 1Н), 7,89 (д, 1Н), 7,74 (с, 1Н), 7,60 (д, 1Н), 7,46 (т, 1Н), 3,76 (т, 2H), 3,00 (т, 2H), 2,05-2,13 (м, 2H), 1,40 (с, 9H). МС m/z 296,0 (M+1), 95%.
F: 4-(3-трет.-бутилфенил)-6-(3-оксопропил)-пиримидин-2-карбонитрил
4
Перйодинат Десса-Мартина (679 мг) добавляли к раствору 4-(3-трет.-бутилфенил)-6-(3-гидроксипропил)-пиримидин карбонитрила (394 мг) в DCM (5 мл) и полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (100 мл), промывали водой (2×100 мл). Органический слой высушивали над MgSO и концентрировали в вакууме. Остаток пропускали через колонку с силикагелем, используя петролейный эфир и этилацетат (1:1) как элюент, чтобы получить 4-(3-трет.-бутилфенил)-6-(3-оксопропил)-пиримидин-2-карбонитрил в форме твердого вещества светло-желтого цвета (266 мг).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,13 (с, 1Н), 7,88 (д, 1Н), 7,79 (с, 1Н), 7,60 (д, 1Н), 7,46 (т, 1Н), 3,18 (м, 2H), 3,11 (м, 2H), 1,40 (с, 9H). МС m/z 294,0 (M+1), 95%.
ПРИМЕР 18a
4-(3-Бензилоксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
A: этиловый эфир 6-бензилокси-3-оксогексановой кислоты
4-Бензилоксимасляную кислоту (6,38 мл), кислоту Мелдрама (5,76 г) и диметиламинопиридин (9,77 г) растворяли в DCM (200 мл) и охлаждали до 0°C. Раствор изопропенил хлорформиата в дихлорметане (100 мл) добавляли по каплям и перемешивали при 0°C еще 2 часа. Добавляли гидросульфат калия (200 мл 10%-ного водного раствора), органическую фазу отделяли, высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в этаноле (200 мл) и нагревали с обратным холодильником в течение ночи. После охлаждения растворитель выпаривали при пониженном давлении и полученное масло очищали флэш-хроматографией на колонках с силикагелем. Выделяли этиловый эфир 6-бензилокси-3-оксогексановой кислоты в форме оранжевого масла (8,53 г).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,26-7,35 (м, 5H), 4,48 (с, 2H), 4,18 (кв, 2H), 3,49 (т, 2H), 3,44 (с, 2H), 2,67 (т, 2H), 1,90-1,97 (м, 2H), 1,27 (т, 3H). МС m/z 287,0 (M+1), 100%.
B: 6-(3-Бензилоксипропил)-2-меркаптопиримидин-4-ол
К перемешиваемой суспензии метилата натрия (3,48 г) в метаноле (40 мл), охлажденной до 0°C, добавляли тиомочевину (3,56 г). Смесь перемешивали до растворения, затем медленно добавляли этиловый эфир 6-бензилокси-3-оксогексановой кислоты (8,52 г в 20 мл метанола). Раствор нагревали с обратным холодильником в течение ночи, охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в воде (50 мл), подкисляли до рН 6 уксусной кислотой и перемешивали в течение 1 часа. Осадок фильтровали, промывали последовательно водой (2×20 мл) и изопропанолом (2×20 мл), затем высушивали, получая 6-(3-бензилоксипропил)-2-меркаптопиримидин-4-ол в форме белого порошка (7,94 г). МС m/z 277,1 (M+1), 100%.
C: 6-(3-Бензилоксипропил)-2-метилсульфанилпиримидин-4-ол
Смесь 6-(3-бензилоксипропил)-2-меркаптопиримидин-4-ола (7,94 г), гидроксида калия (32 мл 1 н. раствора в метаноле) и метилйодида (1,97 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Осадок фильтровали, промывали последовательно метанолом (2×20 мл), изопропанолом (2×20 мл) и водой (2×20 мл), затем высушивали, получая 6-(3-бензилоксипропил)-2-метилсульфанилпиримидин-4-ол в форме белого порошка (7,0 г). МС m/z 291,0 (M+1), 100%.
D: 6-(3-бензилоксипропил)-2-метилсульфанилпиримидин-4-иловый эфир трифторуксусной кислоты
Раствор 6-(3-бензилоксипропил)-2-метилсульфанилпиримидин-4-ола (200 мг) и триэтиламина (0,2 мл) в дихлорметане (5 мл) охлаждали до 0°C, после чего добавляли ангидрид трифторуксусной кислоты (0,14 мл) и полученную смесь нагревали до комнатной температуры. Через 2 часа реакционную смесь промывали водой (2×20 мл), высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении. Флэш-хроматографией на колонках с силикагелем получали 6-(3-бензилоксипропил)-2-метилсульфанилпиримидин-4-иловый эфир трифторуксусной кислоты (160 мг) в форме желтого масла.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,30-7,40 (м, 5H), 6,58 (м, 1H), 4,49 (с, 2H), 3,51 (т, 2H), 2,88 (т, 2H), 2,54 (с, 3H), 2,04-2,10 (м, 2H).
E: 6-(3-бензилоксипропил)-2-метансульфонилпиримидин-4-иловый эфир трифторуксусной кислоты
Суспензию 6-(3-бензилоксипропил)-2-метилсульфанилпиримидин-4-илового эфира трифторуксусной кислоты (494 мг) и Oxone (419 мг) в смеси метанол/вода (8/2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Метанол выпаривали при пониженном давлении и полученную суспензию экстрагировали этилацетатом (2 x 20 мл). Органическую фракцию высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении, получая 6-(3-бензилоксипропил)-2-метансульфонилпиримидин-4-иловый эфир трифторуксусной кислоты (135 мг).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,28-7,40 (м, 5H), 7,15 (м, 1H), 4,47 (с, 2H), 3,54 (т, 2H), 3,33 (с, 3H), 3,11 (т, 2H), 2,10-2,18 (м, 2H). МС m/z 477,0 (M+1), 100%.
F: 4-(3-Бензилоксипропил)-2-метансульфонил-6-триметилстаннанилпиримидин
2
Смесь 6-(3-бензилоксипропил)-2-метансульфонилпиримидин-4-илового эфира трифторуксусной кислоты (13,5 г), гексаметилдитина (11,8 г), тетракис(трифенилфосфин)-палладия (0) (1,4 г), хлорида лития (1,4 г) и 2-6-ди-трет.-бутилфенола (150 мг) в диоксане (100 мл) нагревали с обратным холодильником под N в течение 3 часов. После охлаждения суспензию фильтровали и фильтрат упаривали досуха при пониженном давлении. Флэш-хроматографией на силикагеле получали 4-(3-бензилоксипропил)-2-метансульфонил-6-триметилстаннанилпиримидин (8,0 г) в форме светло-желтого масла.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,47 (с, 1H), 7,25-7,4 (м, 5H), 4,5 (с, 2H), 3,55 (т, 2H), 3,35 (с, 3H), 2,90 (т, 2H), 2,06 (м, 2H), 0,40 (с, 9H).
G: 4-(3-Бензилоксипропил)-6-триметилстаннанилпиримидин-2-карбонитрил
Раствор 4-(3-бензилоксипропил)-2-метансульфонил-6-триметилстаннанилпиримидина (200 мг) и цианида натрия (42 мг) в диметилсульфоксиде (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (10 мл), промывали водой (2×10 мл), высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении. Флэш-хроматографией на силикагеле получали 4-(3-бензилоксипропил)-6-триметилстаннанилпиримидин-2-карбонитрил в форме желтого масла (111 мг).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,45 (с, 1H), 7,28-7,37 (м, 5H), 4,50 (с, 2H), 3,54 (т, 2H), 2,84 (т, 2H), 2,02-2,10 (м, 2H), 0,39 (с, 9H).
H: 4-(3-Бензилоксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
Раствор 4-(3-бензилоксипропил)-6-триметилстаннанилпиримидин-2-карбонитрила (100 мг), трифторметилбромбензола (36 мл) и 1,1'-(бистрифенилфосфин)ферроцендихлорпалладя (II) (16 мг) в диметилформамиде (5 мл) нагревали в микроволновой печи при 150°C в течение 5 мин. Полученную суспензию разбавляли этилацетатом и водой (20 мл), органический слой отделяли, высушивали над сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении. Флэш-хроматографией на силикагеле получали 4-(3-бензилоксипропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил в форме желтой смолы (47 мг).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,31 (с, 1Н), 8,25 (д, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,72 (с, 1Н), 7,67 (т, 1Н), 7,24-7,32 (м, 5H), 4,49 (с, 2H), 3,57 (т, 2H), 3,02 (т, 2H), 2,10-2,18 (м, 2H). МС m/z 398,1 (M+1), 100%.
Процедуру, описанную выше, затем применяли, используя соответствующие производные арилбромида, для получения следующих соединений:
18b: 4-(3-амино-5-трифторметилфенил)-6-(3-бензилоксипропил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,67 (с, 1Н), 7,59 (с, 1Н), 7,56 (с; 1Н), 7,24-7,35 (м, 5H), 7,05 (с, 1Н), 4,49 (с, 2H), 4,08 (уш. с, 2H), 3,56 (т, 2H), 3,00 (т, 2H), 2,10-2,18 (м, 2H). МС m/z 413,3 (M+1), 100%.
18c: 4-(3-Бензилоксипропил)-6-(3-карбокси-5-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,86 (с, 1Н), 8,55 (с, 1Н), 8,47 (с, 1Н), 7,76 (с, 1Н), 7,24-7,35 (м, 5H), 4,43 (с, 2H), 3,53 (т, 2H), 3,00 (т, 2H), 2,09-2,15 (м, 2H). МС m/z 440,3 (М-H), 100%.
ПРИМЕР 19
4-(3-Бензилоксипропил)-6-(3-метансульфониламино-5-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
A: N-(3-бром-5-трифторметилфенил)-метансульфонамид
К раствору 3-Амино-5-бромбензотрифторида (200 мг) в пиридине (2 мл) добавляли метансульфонилхлорид (115 мг) и один кристалл 4-(этанамино)пиридина. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение четырех часов, затем разбавляли этилацетатом (50 мл) и промывали HCl (2M, 50 мл) и насыщенным раствором (50 мл) хлорида натрия. Органические фракции отделяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении, получая N-(3-бром-5-трифторметилфенил)-метансульфонамид (264 мг).
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 7,59 (с, 1Н), 7,58 (с, 1Н), 7,40 (с, 1Н), 7,00 (с, 1Н), 3,11 (с, 3H). МС m/z 318,9 (M+1).
B: 4-(3-Бензилоксипропил)-6-(3-метансульфониламино-5-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
N-(3-бром-5-трифторметилфенил)-метансульфонамид (37 мг), 4-(3-бензилоксипропил)-6-триметилстаннанилпиримидин-2-карбонитрил (40 мг) и дихлорбис(трифенилфосфин)палладий (II) (7 мг) в DMF (1 мл) нагревали в микроволновой печи при 180°C в течение пяти минут. Смесь разбавляли этилацетатом (10 мл) и фильтровали через целит. Фильтрат промывали водой (10 мл) и насыщенным раствором (10 мл) хлорида натрия. Органические фракции отделяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении, получая сырой продукт. Очисткой ВЭЖХ получали 4-(3-бензилоксипропил)-6-(3-метансульфониламино-5-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил.
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,10 (с, 1Н), 8,09 (с, 1Н), 7,74 (с, 1Н), 7,70 (с, 1Н), 7,29 (м, 5H), 4,49 (с, 2H), 3,58 (т, 2H), 3,12 (с, 3H), 3,06 (т, 2H), 2,17 (м, 2H). МС m/z 491,1 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 20
4-(3-Бензилоксипропил)-6-(3-метилсульфамоил-5-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
A: 3-бром-N-метил-5-трифторметилбензолсульфонамид
1
К раствору 3-бром-5-(трифторметил)-бензолсульфонилхлорида (200 мг) в 1,4-диоксане (1 мл) добавляли метиламин (40%-ный водный раствор, 96 мг). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение трех часов, затем разбавляли этилацетатом (20 мл) и промывали HCl (1 М, 2×20 мл). Органические фракции отделяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении, получая 3-бром-N-метил-5-трифторметилбензолсульфонамид (181 мг) в виде твердого вещества желтого цвета. Н ЯМР (MeOD) δ: 8,19 (с, 1Н), 8,05 (с, 1Н), 7,98 (с, 1Н), 4,58 (м, 1H), 2,74 (д, 3H). МС m/z 319,8 (M+1).
B: 4-(3-Бензилоксипропил)-6-(3-метилсульфамоил-5-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
3-бром-N-метил-5-трифторметилбензолсульфонамид (37 мг), 4-(3-бензилоксипропил)-6-триметилстаннанилпиримидин-2-карбонитрил (40 мг) и дихлорбис(трифенилфосфин)палладий (II) (7 мг) в DMF (1 мл) нагревали в микроволновой печи при 180°C в течение пяти минут. Смесь разбавляли этилацетатом (20 мл) и промывали водой (3×20 мл). Органические фракции отделяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении, получая сырой продукт. Очисткой препаративной ВЭЖХ получали 4-(3-бензилоксипропил)-6-(3-метилсульфамоил-5-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил (16,5 мг).
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,70 (с, 1Н), 8,54 (с, 1Н), 8,27 (с, 1Н), 7,82 (с, 1Н), 7,27 (м, 5H), 4,78 (м, 1Н), 4,48 (с, 2H), 3,59 (т, 2H), 3,6 (т, 2H), 2,75 (д, 3H), 2,16 (м, 2H). МС m/z 491,1 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 21
4-(3-гидроксипропил)-6-(3-метилсульфамоил-5-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
К раствору 4-(3-бензилоксипропил)-6-(3-метилсульфамоил-5-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (14,4 мг) в ацетонитриле (700 мкл) и воде (300 мкл) добавляли сульфат церия (3 мг) и бромат бария (6 мг). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи, затем фильтровали через стеклянный фильтр, остаток промывали DCM (10 мл). Фильтрат промывали насыщенным тиосульфатом натрия (10 мл), органические фракции отделяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении, получая сырой продукт. Очисткой препаративной ВЭЖХ получали 4-(3-гидроксипропил)-6-(3-метилсульфамоил-5-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил (3,2 мг).
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,89 (с, 1Н), 8,78 (с, 1Н), 8,31 (с, 1Н), 8,28 (с, 1Н), 3,66 (т, 2H), 3,05 (т, 2H), 2,61 (с, 3H), 2,08 (м, 2Н). МС m/z 401,1 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 22
4-(3-Диметилсульфамоил-5-трифторметилфенил)-6-(3-пиперидин-1-ил-пропил)-пиримидин-2-карбонитрил
A: 4-(3-Метилсульфамоил-5-трифторметилфенил)-6-(3-оксопропил)-пиримидин-2-карбонитрил
Суспензию 4-(3-гидроксипропил)-6-(3-метилсульфамоил-5-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил (235 мг) и реактив Десса Мартина (299 мг) в дихлорметане (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь очищали флэш-хроматографией на силикагеле, получая 4-(3-метилсульфамоил-5-трифторметилфенил)-6-(3-оксопропил)-пиримидин-2-карбонитрил в форме розового масла (300 мг).
МС m/z 399,0 (M+1), 100%.
Из этого альдегида синтезировали следующее соединение при использовании способа восстановительного аминирования, описанного выше в ПРИМЕРЕ 7a:
B: 4-(3-Диметилсульфамоил-5-трифторметилфенил)-6-(3-пиперидин-1-ил-пропил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,75 (с, 1Н), 8,60 (с, 1Н), 8,28 (с, 1Н), 7,88 (с, 1Н), 2,98 (т, 2H), 2,77 (с, 3H), 2,35-2,50 (уш. м, 6H), 2,02-2,08 (м, 2H), 1,42-1,66 (уш. м, 6H). МС m/z 468,0 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 23
4-(4-метокси-3-трифторметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
Бис(трифенилфосфин)палладий дихлорид (34 мг, 0,05 ммоль) добавляли в атмосфере азота к смеси 4-пропил-6-триметилстаннанилпиримидин-2-карбонитрила (150 мг, 0,48 ммоль) и 4-метокси-3-трифторметилмонобромбензола (148 мг, 0,58 ммоль) в диметилформамиде (3 мл). Смесь нагревали в течение 5 часов при 80°C, затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток разделяли между этилацетатом и водой. Водный слой экстрагировали дважды этилацетатом. Объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали на силикагеле (элюент: циклогексан/DCM 7/3), получая твердое вещество, которое растирали в пентане. После фильтрации получали 4-(4-метокси-3-трифторметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил (18 мг, 11%) в виде твердого вещества грязно-белого цвета.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,34 (д, J=8 Гц, 1H); 8,30 (с, 1H); 7,65 (с, 1H); 7,15 (с, 1Н); 4,01 (с, 3H); 2,92 (т, J=8 Гц, 2H); 1,95-1,85 (м, 2H); 1,05 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 322,1 (M+1).
ПРИМЕР 24
4-(5-трет.-бутил-2-метоксифенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
A: 1-трет.-бутил-4-метокси-3-йодобензол
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,76 (д, J=2 Гц, 1Н); 7,30 (дд, J=8 Гц, J'=2 Гц, 1Н); 6,74 (д, J=8 Гц, 1Н); 3,83 (с, 3H); 1,28 (с, 9H).
13
3
C ЯМР (CDCl) δ: 155,8 145,5, 136,3, 126,3, 110,4, 85,9, 56,3, 34,0, 31,4.
B: 4-(5-трет.-бутил-2-метоксифенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,05 (с, 1Н); 7,99 (с, 1Н); 7,51 (д, J=8 Гц, 1Н); 6,97 (д, J=8 Гц, 1Н); 3,90 (с, 3H); 2,81 (т, J=8 Гц, 2H); 1,85-1,75 (м, 2H); 1,36 (с, 9H); 1,01 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 310 (M+1).
ПРИМЕР 25
4-(3-циклопропилфенил)-6-пропил-пиримидин-2-карбонитрил
A: 3-бром-1-циклопропилбензол
Йод (0,335 г, 1,32 ммоль), дийодометан (4,3 мл, 53,0 ммоль) и 3-бромстирол (5 г, 26,4 ммоль) добавляли последовательно к суспензии меди (7,5 г, 118,8 ммоль) в толуоле (50 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 140 ч, затем фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток отгоняли при пониженном давлении, получая 3-бром-1-циклопропилбензол (0,55 г, 10%) в форме бесцветного масла.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,35-7,25 (м, 1Н); 7,25-7,20 (м, 1Н); 7,15-7,05 (м, 1H); 7,05-6,95 (м, 1Н); 1,95-1,85 (м, 1H); 1,05-0,95 (м, 2H); 0,75-0,65 (м, 2H).
B: 4-(3-Циклопропилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,85-7,80 (м, 2H); 7,68 (с, 1Н); 7,41 (т, J=8 Гц, 1H); 7,30-7,20 (м, 1H); 2,84 (т, J=8 Гц, 2H); 2,05-2,95 (м, 1H); 1,90-1,80 (м, 2H); 1,10-0,95 (м, 5H); 0,80-0,75 (м, 2H). МС m/z: 264 (M+1).
ВЭЖХ (200-400 нм): 92,2%.
ПРИМЕР 26a
4-(3,4-диметоксифенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
A: 4-йод-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
Йод (1,64 г, 6,5 ммоль) добавляли при комнатной температуре к раствору 4-пропил-6-триметилстаннанилпиримидин-2-карбонитрила (2,0 г, 6,5 ммоль) в ТГФ (100 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, затем разбавляли насыщенным раствором тиосульфата натрия и ТГФ удаляли при пониженном давлении. Водный слой экстрагировали этилацетатом (3 x 100 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали на силикагеле (элюент: циклогексан/этилацетат 5/5), получая 4-йод-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил (1,28 г, 72%) в форме бесцветного масла.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,81 (с, 1Н); 2,71 (т, J=8 Гц, 2H); 1,8-1,7 (м, 2H); 0,99 (т, J=8 Гц, 3H).
13
3
C ЯМР (CDCl) δ: 172,0, 143,7, 134,2, 129,2, 114,7, 38,8, 21,8, 13,7. МС m/z: 274 (M+1).
B: 4-(3,4-диметоксифенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
2
3
В атмосфере азота раствор (с=0,18M) 4-йод-6-пропилпиримидин-2-карбонитрила (1 мл, 0,18 ммоль) в дегазированном толуоле, водный раствор (с=2M) карбоната калия (0,225 мл, 0,45 ммоль) и тетракис-(трифенилфосфин)палладий (10 мг, 0,09 ммоль) последовательно добавляли к раствору (с=0,216 M) 3,4-диметоксифенилбороновой кислоты (1 мл, 0,216 ммоль) в дегазированном толуоле. Смесь нагревали при 105°C в течение 4 ч, затем оставляли для охлаждения до комнатной температуры и смешивали с водой (4 мл). Органический слой упаривали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали в препаративной ВЭЖХ (НО+0,05% ТФК / CHCN+0,05% ТФК), получая 4-(3,4-диметоксифенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил (28 мг).
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,75 (с, 1Н); 7,66 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,63 (с, 1Н); 6,97 (д, J=8 Гц, 1Н); 4,02 (с, 3H); 3,97 (с, 3H); 2,82 (т, J=8 Гц, 2H); 1,85-1,75 (м, 2H); 1,02 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 284 (M+1).
Описанную выше процедуру применяли, используя соответствующие производные бороновой кислоты, в синтезе следующих производных:
26b: 4-(2,3-дигидробензофуран-5-ил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,1-8,0 (м, 1Н); 7,9-7,8 (м, 1Н); 7,58 (с, 1Н); 6,9-6,8 (м, 1Н); 4,7-4,6 (м, 2H); 3,35-3,25 (м, 2H); 2,85-2,70 (м, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,00 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 266 (M+1).
26c: 4-(3-цианофенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,4-8,3 (м, 2H); 7,86 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,73 (с, 1Н); 7,69 (т, J=8 Гц, 1Н); 2,89 (т, J=8 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,04 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 249 (M+1).
26d: 4-(3-хлорфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,10 (с, 1Н); 7,99 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,67 (с, 1Н); 7,55-7,45 (м, 2H); 2,86 (т, J=8 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,03 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 258/260 (M+1).
26e: 4-(4-Диметиламинофенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,03 (д, J=8 Гц, 2H); 7,53 (с, 1H); 6,75 (д, J=8 Гц, 2H); 3,08 (с, 6H); 2,76 (т, J=8 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,00 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 267 (M+1).
26f: 4-(2,3-дигидро-бензо[1,4]диоксин-6-ил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,7-7,6 (м, 2H); 7,58 (с, 1Н); 6,98 (д, J=8 Гц, 1Н); 4,35-4,25 (м, 4H); 2,80 (т, J=8 Гц, 2H); 1,85-1,75 (м, 2H); 1,01 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 282 (M+1).
25g: 4-Пропил-6-(4-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,23 (д, J=8 Гц, 2H); 7,80 (д, J=8 Гц, 2H); 7,75 (с, 1H); 2,88 (т, J=8 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,04 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 292 (M+1).
26h: 4-(2-метоксифенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,07 (д, J=8 Гц, 1Н); 8,02 (с, 1Н); 7,50-7,45 (м, 1Н); 7,15-7,10 (м, 1Н); 7,04 (д, J=8 Гц, 1Н); 3,93 (с, 3H); 2,82 (т, J=8 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,02 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 254 (M+1).
26i: 4-Пропил-6-(2-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,83 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,75-7,50 (м, 2H); 7,54 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,49 (с, 1Н); 2,87 (т, J=8 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,01 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 292 (M+1).
26j: 4-(3-ацетилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,67 (с, 1Н); 8,37 (д, J=8 Гц, 1Н); 8,14 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,80 (с, 1Н); 7,67 (т, J=8 Гц, 1Н); 2,88 (т, J=8 Гц, 2H); 2,72 (с, 3H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,03 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 266 (M+1).
26k: 4-(4-изопропилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,04 (д, J=8 Гц, 2H); 7,67 (с, 1Н); 7,39 (д, J=8 Гц, 2H); 3,05-2,95 (м, 1Н); 2,83 (т, J=8 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,30 (с, 3H); 1,29 (с, 3H); 1,02 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 266 (M+1).
26l: 4-(Бензо[1.3]диоксол-5-ил)-6 пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,68 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,62 (с, 1Н); 7,58 (с, 1Н); 6,94 (д, J=8 Гц, 1Н); 6,08 (с, 2H); 2,81 (т, J=8 Гц, 2H); 1,85-1,75 (м, 2H); 1,01 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 268 (M+1).
26m: 4-(3-нитрофенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,92 (с, 1Н); 8,53 (д, J=8 Гц, 1Н); 8,43 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,81 (с, 1Н); 7,77 (т, J=8 Гц, 1Н); 2,91 (т, J=8 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,05 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 269 (M+1).
26n: 4-(3-хлор-4-фторфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,21 (д, J=8 Гц, 1H); 8,1-8,0 (м, 1Н); 7,66 (с, 1H); 7,35-7,20 (м, 1H); 2,9-2,8 (м, 2H); 1,90-1,75 (м, 2H); 1,03 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 266 (M+1).
26о: 4-(2,5-диметоксифенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,07 (с, 1Н); 7,66 (д, J=3 Гц, 1H); 7,05 (дд, J=8 Гц, J'=3 Гц, 1H); 6,97 (д, J=8 Гц, 1H); 3,88 (с, 3H); 3,87 (с, 3H); 2,82 (т, J=8 Гц, 2H); 1,85-1,75 (м, 2H); 1,02 (т, J=7 Гц, 3H). МС m/z: 284 (M+1).
ПРИМЕР 27a
4-(2-хлор-5-трифторметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
2
3
В атмосфере азота раствор (с=0,18M) 4-йод-6-пропилпиримидин-2-карбонитрила (1 мл, 0,18 ммоль) в дегазированном толуоле, водный раствор (с=2 M) карбоната калия (0,225 мл, 0,45 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий (10 мг, 0,09 ммоль) были последовательно добавлены к раствору (с=0,216 M) 2-хлор-5-(трифторметил)фенилбороновой кислоты (1 мл, 0,216 ммоль) в дегазированном толуоле. Смесь нагревали при 105°C в течение 4 ч, затем оставляли для охлаждения до комнатной температуры и смешивали с водой (4 мл). Органический слой упаривали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали препаративной ВЭЖХ (НО+0,05% ТФК / CHCN+0,05% ТФК), получая 4-(2-хлор-5-трифторметилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил (34 мг, 58%) в форме твердого вещества.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,99 (с, 1Н); 7,78 (с, 1Н); 7,7-7,6 (м, 2H); 2,89 (т, J=8 Гц, 2H); 1,90-1,80 (м, 2H); 1,03 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 326/328 (M+1).
Описанную процедуру применяли, используя соответствующие производные арилбороновой кислоты, в синтезе следующих производных:
27b: 4-(3-Метансульфонилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 8,63 (с, 1Н); 8,48 (д, J=8 Гц, 1Н); 8,14 (д, J=8 Гц, 1Н); 7,80-7,75 (м, 2H); 3,15 (с, 3H); 2,89 (т, J=8 Гц, 2H); 1,9-1,8 (м, 2H); 1,04 (т, J=8 Гц, 3H). МС m/z: 308 / 310 (M+1).
ПРИМЕР 28
4-(3-Циклопентилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
A: N,N-дибензил-3-циклопентиланилин
2
2
2
3
4
Раствор бромциклопентана (7,62 г, 51,1 ммоль) в сухом ТГФ (25 мл) добавляли по каплям к суспензии магниевых частиц (1,24 г, 51 ммоль) в простом эфире (3 мл) в атмосфере азота в таком количестве, чтобы поддерживать внутреннюю температуру 45-50°C. (После добавления нескольких капель раствора смесь нагревали приблизительно до 50°C, чтобы инициировать формирование реактива Гриньяра). Через 1,5 ч реактив Гриньяра канюлировали в капельную воронку, разбавляли 25 мл сухого ТГФ и добавляли по каплям за 30 минут к холодному (0°C) раствору высушенного ZnBr (11,5 г, 51 ммоль) в сухом ТГФ (90 мл) в атмосфере азота. Через 15 минут реакционную смесь охлаждали до -60°C и добавляли PdCl (dppf) (249 мг, 0,34 ммоль) (раствор стал красным). Раствор 3-бром-N,N-дибензил-анилина (6 г, 17 ммоль) в сухом ТГФ (50 мл) добавляли к этому раствору за 35 минут. Затем удаляли ванну с сухим льдом и раствору давали нагреться до комнатной температуры в течение ночи. После добавления 3 н. HCl (70 мл), ТГФ удаляли при пониженном давлении. Водный остаток экстрагировали три раза AcOEt (3 x 70 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом (50 мл), затем насыщенным раствором NaHCO (50 мл). Нерастворимый материал отфильтровывали и раствор снова промывали рассолом (50 мл). Органический слой высушивали над MgSO и концентрировали при пониженном давлении, получая указанное соединение (5,8 г), которое использовали в следующей стадии без дальнейшей очистки.
1
3
1
2
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,28-7,32 (4H, м), 7,21-7,25 (6H, м), 7,08 (1Н, т, J=8 Гц), 6,60-6,64 (2H, м), 6,55 (1Н, дд, J=8 Гц, J=2,4 Гц), 4,62 (4H, с), 2,85 (1Н, кв), 1,90-2,00 (2H, м), 1,65-1,75 (2H, м), 1,5-1,65 (2H, м), 1,45-1,5 (2H, м).
B: 3-циклопентиланилингидрохлорид
2
2
2
2
2
4
N,N-дибензил-3-циклопентиланилин (6,07 г, 17,03 ммоль) гидрировали на Pd(OH) (600 мг) под давлением 10 бар в смеси MeOH (80 мл), метоксиэтанола (20 мл), CHCl (20 мл) и концентрированной HCl (1,63 мл) в течение 20 часов. Катализатор удаляли фильтрацией и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток разделяли между CHCl и водой. Устанавливали рН приблизительно 10, добавляя NaOH в гранулах. Органический слой промывали рассолом, высушивали над MgSO и концентрировали при пониженном давлении, получая 2,65 г ожидаемого анилина. Гидрохлорид был получен обработкой летучей HCl: 2,38 г, выход: 71%.
ВЭЖХ: 100%.
1
3
Н ЯМР (CCDOD) δ: 7,44 (1Н, т, J=8 Гц), 7,38 (Н, д, J=8 Гц), 7,29 (1Н, с), 7,21 (1H, м), 3,08 (1H, кв), 2,09-2,13 (2H, м), 1,83-1,86 (2H, м), 1,73-1,76 (2H, м), 1,60-1,63 (2H, м).
C: 1-циклопентил-3-йодобензол
2
2
4
Раствор нитрита натрия (558 мг, 8,1 ммоль) в воде (10 мл) добавляли за 5 минут к охлажденному (5°C) раствору 3-циклопентиланилингидрохлорида (1 г, 5,1 ммоль) в 6 н. HCl (25 мл). Через 50 минут добавляли за 5 минут раствор йодида калия (2,02 г, 12,2 ммоль) в воде (10 мл). Смесь нагревали в течение 1 часа при 70°C. После охлаждения до комнатной температуры устанавливали рН более 11 с помощью 6 н. NaOH и смесь экстрагировали три раза CHCl (3 x 100 мл). Объединенные органические слои промывали тиосульфатом натрия (75 мл), затем рассолом (75 мл) и высушивали над MgSO. Растворитель удаляли при пониженном давлении, получая 1,23 г сырого материала (ВЭЖХ: 67%), который очищали хроматографией на силикагеле (элюент: циклогексан), получая указанное названное соединение в форме масла: 825 мг, выход: 60%.
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,58 (1Н, м), 7,50 (1Н, д, J=8 Гц), 7,19 (1Н, уш. д), 7,00 (1Н, т, J=8 Гц), 2,92 (1Н, квинтет), 2,03-2,07 (2H, м), 1,76-1,82 (2H, м), 1,65-1,70 (2H, м), 1,54-1,57 (2H, м).
D: 4-(3-циклопентилфенил)-6-пропилпиримидин-2-карбонитрил
2
3
2
4
Смесь 1-циклопентил-3-йодобензола (158 мг, 0,58 ммоль), 4-пропил-6-триметилстаннанилпиримидин-2-карбонитрила (150 мг, 0,48 ммоль) и PdCl(PPh) (34 мг, 0,05 ммоль) в сухом DMF (3 мл) нагревали при 80°C в течение 6 часов в атмосфере азота. Добавляли дополнительный катализатор (40 мг, 0,06 ммоль) и смесь нагревали в течение 12 часов при 80°C. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток разделяли между водой (5 мл) и AcOEt (5 мл). Водный слой экстрагировали дважды AcOEt (2 x 5 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом, высушивали над MgSO и концентрировали при пониженном давлении, получая 272 мг сырого продукта, который очищали хроматографией на силикагеле (элюент: циклогексан/AcOEt 95/5), получая указанное соединение: 51 мг, выход: 36%, ВЭЖХ: 98%.
1
3
1
2
Н ЯМР (CDCl) δ: 7,99 (1Н, с), 7,87 (1Н, дт, J=5 Гц, J=2 Гц), 7,69 (1Н, с), 7,44 (2H, д, J=5 Гц), 3,10 (1Н, квинтет), 2,84 (2H, т, J=7,6 Гц), 2,12-2,15 (2H, м), 1,81-1,88 (4H, м), 1,60-1,76 (4H, м), 1,02 (3H, т, J=7,2 Гц). МС m/z: 292 (M+1).
ПРИМЕР 29a
4-(3-Циклопропиламинопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
К раствору 4-(3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (153 мг) в метаноле (2 мл) добавляли циклопропиламин (140 мкл), уксусную кислоту (0,12 мл) и затем триацетоксиборгидрид натрия (210 мг). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов, затем очищали препаративной ВЭЖХ. 4-(3-циклопропиламинопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил, соль ТФК, выделяли в виде твердого вещества белого цвета (70 мг).
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,50 (с, 1Н), 8,47 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,81 (т, 1Н), 3,28 (т, 2H), 3,09 (т, 2H), 2,80 (м, 1Н), 2,25 (м, 2H), 0,85-1,05 (м, 4H). МС m/z 347,4 (M+1), 30%.
29b: 4-[3-(1-(s)-Метил-2-метоксиэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
К раствору 4-(3-оксопропил)-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрила (610 мг) в метаноле (8 мл) добавляли 1-(s)-метил-2-метоксиэтиламин (0,85 мл), уксусную кислоту (0,5 мл) и затем триацетоксиборгидрид натрия (0,82 г). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов, затем разбавляли водным раствором бикарбоната натрия (5%, 50 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл плюс 3×20 мл). Объединенный органический слой высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, растворитель удаляли под вакуумом. Остаток пропускали через колонку с силикагелем, используя DCM-MeOH (20:1) как элюент, получая 4-[3-(1-(s)-метил-2-метоксиэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил (250 мг). Указанный нейтральный продукт растворяли в DCM и затем добавляли HCl (1M в простом эфире, 1 мл), 4-[3-(1-(s)-метил-2-метоксиэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил, соль HCl, отбирали фильтрацией (180 мг).
1Н ЯМР (MeOD) δ: 8,50 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,27 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 3,68 (м, 1Н), 3,48 (м, 2H), 3,43 (с, 3H), 3,17 (м, 2H), 3,10 (т, 2H), 2,25 (м, 2H), 1,36 (д, 3H). МС m/z 379,5 (M+1), 80%.
Процедуру, описанную выше, затем применяли, используя соответствующие производные амина, для получения следующих соединений:
29c: 4-[3-(1-(S)-Карбамоилэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1Н ЯМР (MeOD) δ: 8,51 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,22 (с, 1Н), 7,88 (д, 1Н), 7,77 (т, 1Н), 3,29 (м, 1Н), 3,01 (т, 2H), 2,70 (т, 2H), 2,05 (м, 2H), 1,32 (д, 3H). МС m/z 377,9 (M+1), 100%.
29d: 4-[3-(1-(R)-Карбамоилэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1Н ЯМР (MeOD) δ: 8,51 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,22 (с, 1Н), 7,88 (д, 1Н), 7,77 (т, 1Н), 3,23 (кв, 1Н), 3,00 (т, 2H), 2,65 (т, 2H), 2,05 (м, 2H), 1,28 (д, 3H). МС m/z 378,4 (M+1), 100%.
29e: 4-[3-(1-Этил-1-метилпропиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил, соль трифторуксусной кислоты (1:1)
1Н ЯМР (MeOD) δ: 8,54 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,24 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 3,12 (м, 4H), 2,27 (м, 2H), 1,76 (м, 4H), 1,32 (с, 3H), 0,99 (т, 6H). МС m/z 391,3 (M+1), 100%.
29f: 4-[3-(1-Метилциклопропиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил, соль трифторуксусной кислоты (1:1)
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 9,13 (шир. с, 2H), 8,36 (с, 1Н), 8,31 (д, 1Н), 7,83 (с, 1Н), 7,82 (д, 1Н), 7,68 (т, 1Н), 3,24 (м, 2H), 3,04 (т, 2H), 2,28 (м, 2H), 1,50 (с, 3H), 1,21 (т, 2H), 0,74 (т, 2H). МС m/z: 361,1 (M+1), 27%.
29g: 4-[3-(2-гидроксиэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил, соль трифторуксусной кислоты (1:1)
1
3
Н ЯМР (CDCl) δ: 9,04 (шир. с, 2H), 8,34 (с, 1Н), 8,29 (д, 1Н), 7,84 (с, 1Н), 7,81 (д, 1Н), 7,66 (т, 1Н), 4,00 (м, 2H), 3,22 (м, 4H), 3,05 (т, 2H), 2,34 (м, 2H). МС m/z: 351,3 (M+1), 20%.
29h: 4-[3-(1-Карбамоил-1-метилэтиламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,55 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,22 (с, 1Н), 7,90 (д, 1Н), 7,79 (т, 1Н), 3,03 (т, 2H), 2,74 (т, 2H), 2,02-2,12 (м, 2H), 1,39 (с, 6H). МС m/z 392,0 (M+1), 100%.
29i: 4-[3-(2-оксопирролидин-3-(S)-иламино)-пропил]-6-(3-трифторметилфенил)-пиримидин-2-карбонитрил, соль трифторуксусной кислоты (1:1)
1
Н ЯМР (MeOD) δ: 8,52 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 7,91 (д, 1Н), 7,80 (т, 1Н), 4,12 (т, 1Н), 3,38-3,47 (м, 3H), 3,20-3,27 (м, 1Н), 3,10 (т, 2H), 2,60-2,68 (м, 1Н), 2,11-2,35 (м, 3H). МС m/z 390,3 (M+1), 100%.
ПРИМЕР 30
Процедуры тестов
Активность катепсина К
in vitro
Ингибирующую активность соединений по изобретению демонстрировали , измеряя ингибирование рекомбинантного человеческого катепсина K следующим образом.
На 384-луночный планшет для микротитрования добавляли 5 мкл 100 мкМ раствора тестируемого соединения в тестовом буфере (100 мМ ацетат натрия pH 5,5, 5 мМ EDTA, 5 мМ дитиотреитола) с 10% диметилсульфоксида (ДМСО), плюс 10 мкл 100 мкМ раствора субстрата Z-Phe-Arg-AMC (Bachem; 7-амидокумариновое производное дипептида N-бензилоксикарбонил-Phe-Arg-OH) в тестовом буфере и 25 мкл тестового буфера. Затем в лунки добавляли 10 мкл раствора 1 мг/л активированного рекомбинантного человеческого катепсина K в тестовом буфере, получая конечную концентрацию ингибитора 10 мкМ.
50
50
Ферментативную активность определяли, измеряя флуоресценцию высвобожденного аминометилкумарина при 440 нм с использованием возбуждения при 390 нм, в момент времени 10 минут. Активность фермента в процентах вычисляли в сравнении этой активности по отношению к активности раствора, не содержащего ингибитор. Соединения затем подвергали анализу на основании кривой доза-ответ, чтобы определить значения IC для активных соединений (где IC - концентрация тестируемого соединения, вызывающая 50%-ное ингибирование ферментативной активности).
50
50
50
Соединения по изобретению обычно имеют pIC (отрицательный логарифм концентрации IC) в отношении ингибирования человеческого катепсина K более 6, предпочтительно, более 7, как для соединений из Примеров 1, 2, 4h, и наиболее предпочтительно, pIC более 8, как для соединений из Примеров 3, 4a, 4d, 4e, 4f, 4g, 4i, 4r, 4s, 4u, 4a', 8a, 8c, 14j, 14n.
Активность катепсина S.
in vitro
Ингибирующую активность соединений по изобретению демонстрировали , измеряя ингибирование рекомбинантного человеческого катепсина S следующим образом.
На 384-луночный планшет для микротитрования добавляли 10 мкл 100 мкМ раствора тестируемого соединения в тестовом буфере (100 мМ ацетат натрия pH 5,5, 5 мМ EDTA, 5 мМ дитиотреитола) с 10% диметилсульфоксида (ДМСО), плюс 20 мкл 250 мкМ раствора субстрата Z-Val-Val-Arg-AMC (Bachem; 7-амидокумариновое производное трипептида N-бензилоксикарбонил-Val-Val-Arg-OH) в тестовом буфере и 45 мкл тестового буфера. Затем в лунки добавляли 25 мкл раствора 2 мг/л активированного рекомбинантного человеческого катепсина S в тестовом буфере, получая конечную концентрацию ингибитора 10 мкМ.
50
50
Ферментативную активность определяли, измеряя флуоресценцию высвобожденного аминометилкумарина при 440 нм с использованием возбуждения при 390 нМ, в момент времени 20 минут. Активность фермента в процентах вычисляли в сравнении этой активности по отношению к активности раствора, не содержащего ингибитор. Соединения затем подвергали анализу на основании кривой доза-ответ, чтобы определить значения IC для активных соединений (где IC - концентрация тестируемого соединения, вызывающая 50%-ное ингибирование ферментативной активности).