Мутация гена TP53 - предиктор противоопухолевого ответа у пациентов с высокоагрессивной В-клеточной лимфомой

54

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

приводило к увеличению уровня экспрессии гена PRAME. Путь индукции экспрессии PRAME при помощи ЛПС остался неизвестным, но можно предположить, что одним из важных компонентов этого пути является MYD88, ответственный за TLR-сигналинг С учетом гомологии белка PRAME и Toll-подобных рецепторов ЛПС и моноклональные антитела (МКА), возможно, передают активирующий сигнал к гену PRAME по TLR-зависимому сигнальному пути.

Цель исследования — установить роль TLR-зависимо-го сигналинга в индукции экспрессии гена PRAME.

Материалы и методы. Линия клеток K562, характеризующаяся высоким уровнем экспрессии гена PRAME, была подвергнута воздействию ЛПС (концентрация в культу-ральной среде 20 мкг/мл) и МКА 6H8 (1, 5 и 50 мкг/мл), распознающих поверхностный белок PRAME. Через 1 и 4 ч инкубирования проводилась экстракция тотальной клеточной РНК для определения уровня экспрессии генов PRAME и MYD88. Для статистического анализа использовались коэффициент корреляции Пирсона и критерий Уилкоксона.

Результаты. При воздействии ЛПС и МКА против белка PRAME увеличился уровень экспрессии генов PRAME и MYD88. Корреляция между уровнем экспрессии этих 2 генов была прямой и высокозначимой (коэффициент корреляции Пирсона 0,87, p = 0,04). Увеличилось число клеток, находящихся в состоянии апоптоза (p = 0,0024) и доля погибших клеток (p = 0,0021).

Заключение. Показана роль TLR-зависимого сигнального пути в индукции экспрессии гена PRAME и выявлен MYD88 в качестве посредника. Гиперэкспрессия PRAME приводила к снижению жизнеспособности клеток K562.

В.А. Мисюрин, А.А. Рудакова, А.В. Пономарёв, О.С. Бурова, Л.Ф. Морозова, М.А. Барышникова ИССЛЕДОВАНИЕ ПУТЕЙ ИНИЦИАЦИИ АПОПТОЗА ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ФОРМОЙ АРАНОЗЫ

ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия

Введение. Ранее обнаружено, что липосомальная лекарственная форма оказывает на клеточные линии мела-номы более выраженное цитотоксическое действие, чем субстанция аранозы или лекарственная форма «лио-филизат для приготовления раствора для инъекций». Однако механизм уничтожения опухолевых клеток липосо-мальной формой аранозы малоизучен.

Цель исследования — сравнить влияние липосомаль-ной аранозы и субстанции аранозы на компоненты системы апоптоза MDM2 и TP53.

Материалы и методы. Исследования проводили на 11 клеточных линиях меланомы пациента: mel Ibr EEMC, mel Ibr, mel Is, mel Gus, mel Me, mel Mtp, mel Bgf, mel Kor, mel Hn, mel Cher, mel Il и mel H. Клеточные линии культивировали в стандартных условиях в RPMI-1640 с добавлением 10 % сыворотки. По достижении монослоя в культу-ральные флаконы добавляли субстанцию аранозы и липосомальную аранозу в концентрации IC50, ранее найденной в МТТ-тесте. Через 24 ч инкубации клетки удаляли с культуральных флаконов для последующего выделения РНК и определения уровня экспрессии генов MDM2

и TP53. Статистически данные анализировали при помощи критерия Уилкоксона (программа STATISTICA 10).

Результаты. Через 24 ч после добавления липосомаль-ной аранозы уровень экспрессии гена MDM2 в линиях mel Ibr EEMC, mel Ibr, mel Is, mel Gus, mel Me, mel Mtp, mel Bgf и mel Kor был ниже в среднем на 500 % по сравнению с теми же линиями, инкубированными с субстанцией аранозы (p = 0,0179). В линиях mel Hn, mel Cher, mel Il и mel H, напротив, уровень экспрессии гена MDM2 был в среднем на 10 % выше после инкубации с липосомальной ара-нозой, чем при условии их инкубирования с субстанцией аранозы, однако эти различия были недостоверны (p = 0,4652). Уровень экспрессии гена TP53 в линиях mel H, mel Il, mel Hn, mel Bgf и mel Kor после инкубации с липосо-мальной аранозой был в среднем на 75 % выше, чем после инкубации с субстанцией аранозы. После применения ли-посомальной аранозы уровень экспрессии TP53 в линиях mel Me, mel Mtp, mel Ibr EEMC, mel Cher, mel Is, mel Gus был в среднем на 30 % более низким по сравнению с теми же линиями, инкубированными с субстанцией аранозы. Наибольшим изменениям подвергся уровень экспрессии гена MDM2, который либо существенно повысился в условиях применения липосомальной аранозы, либо значимо не изменился.

Заключение. Полученные данные свидетельствуют о влиянии липосомальной аранозы на чувствительность клеток меланомы к апоптозу посредством снижения уровня экспрессии гена MDM2, кодирующего ингибитор про-апоптотического белка TP53.

A.E. Мисюрина12, В.А. Мисюрин23, А.В. Мисюрин23, А.М. Ковригина1, С.К. Кравченко1, Е.А. Барях4, А.У. Магомедова1, Е.Н. Пушкова2, Ю.П. Финашутина23 МУТАЦИЯ ГЕНА TP53 - ПРЕДИКТОР ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ОТВЕТА У ПАЦИЕНТОВ С ВЫСОКОАГРЕССИВНОЙ В-КЛЕТОЧНОЙ ЛИМФОМОЙ

1ФГБУ ГНЦМинздрава России, Москва, Россия;

2ООО «ГеноТехнология», Москва, Россия;

ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России,

Москва, Россия;

4ГКБ № 52, Москва, Россия

Введение. Мутации в гене TP53 (MUT-TP53) приводят к блокированию апоптоза в клетках и возникновению в них дополнительных онкогенных событий, способствующих опухолевой прогрессии. Неясна корреляция MUT-TP53 с противоопухолевым ответом у пациентов с высокоагрессивной B-клеточной лимфомой (high grade В-cell lymphoma, HGBCL).

Цель исследования — оценить влияние мутаций в гене TP53 у пациентов с HGBCL на результативность терапии и сопоставить с другими известными прогностическими критериями.

Материалы и методы. За период наблюдения [медиана наблюдения 10,8 мес (0,6-160,9)] в ФГБУ ГНЦ Минздрава России получали лечение 32 пациента с установленным диагнозом HGBCL (11 — double-hit (DH), 21 — неспеци-фицированная, NOS). MYC-R выявлена у 7 пациентов HGBCL, NOS. Все пациенты получали интенсивную им-

Спецвыпуск / том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

55

мунополихимиотерапию. Мутации в экзонах 5—8 TP53 определялись секвенированием по Сэнгеру ДНК опухолевых клеток. Для оценки влияния на общую выживаемость (ОВ) и время до прогрессирования заболевания (TTP) факторов MUT-TP53, MYC-R и DH проведен однофактор-ный событийный анализ (критерий Каплана Мейера, ло-гранговый тест) и многофакторный дисперсионный и Кокс-регрессионный анализ (STATISTICA 10).

Результаты. Значимые MUT-TP53 выявлены у 9 пациентов. Группы с WT-TP53 и MUT-TP53 сопоставимы по основным клиническим характеристикам. По результатам однофакторного анализа пациенты с MUT-TP53 имели худшие показатели ОВ и более высокую вероятность прогрессирования заболевания. Так, медиана ОВ пациентов c MUT-TP53 составила 7,0 (3,5-40,9) против 30,5 (0,6160,9) мес у пациентов с WT-TP53 (p = 0,03). Медиана времени до прогрессирования заболевания у пациентов c MUT-TP53 составила 3,5 (0,3-16,1) vs 30,5 (0,6-160,9) мес у пациентов с WT-TP53 (p = 0,00016). При многофакторном анализе MUT-TP53 — независимый фактор раннего прогрессирования HGBCL как в группе DH, так и HGBCL NOS.

Заключение. Мутации в гене TP53 — значимый пре-диктивный фактор раннего прогрессирования заболевания. Данная группа пациентов нуждается в новых подходах к терапии.

Н.А. Михеева1, Г.С. Терентюк1, В.А. Михеев2,

Е.П. Дрождина1, Н.А. Курносова1

ОЦЕНКА ПРОНИЦАЕМОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИХ

ТКАНЕВЫХ БАРЬЕРОВ ДЛЯ ЗОЛОТЫХ

НАНОЧАСТИЦ IN VIVO

ФГБОУ ВО «УлГУ», Ульяновск, Россия;

2ФГБОУВО «УлГПУ им. И.Н. Ульянова», Ульяновск, Россия

Введение. Биологические тканевые барьеры (БТБ), такие как кожа и гистогематические барьеры (ГГБ), представляют собой структурно-функциональные механизмы, выполняющие регуляторную и защитную функции. Одним из перспективных наноматериалов являются золотые наночастицы (ЗНЧ), применяемые в диагностике, направленном транспорте лекарств, оптической визуализации клеточных структур, фототермической и фотодинамической терапии и т. д. Однако несмотря на это вопрос о возможном проникновении НЧ через БТБ остается мало изученным, что ограничивает возможности для их биомедицинского применения.

Цель исследования - изучить проницаемость БТБ in vivo для ЗНЧ разного размера.

Материалы и методы. Самкам белых крыс в хвостовую вену на 15-е сутки беременности вводили 0,7 мл суспензии 5, 10, 30, 50 и 150 нм ПЭГелированных ЗНЧ. Для изучения проницаемости эпидермиса для ЗНЧ на эпилированную кожу спины белых крыс наносили гель, содержащий на-нооболочки (диаметр 160 нм). Для усиления проникновения ЗНЧ в кожу использованы физические (частичная лазерная абляция и ультразвуковое (УЗ) воздействие), химические методы [диметилсульфоксид (ДМСО) и тиофан-сульфоксид (ТСО)], а также сочетанное применение физико-химических методов. В качестве контроля взяты интактные животные. Для визуализации зон накопления

ЗНЧ в коже и органах использовали метод автометаллографии нитратом серебра, ОКТ, а содержание золота в тканях оценивали методом ААС.

Результаты. Установлена проницаемость ЗНЧ диаметром 5, 10, 30 и 50 нм через плаценту хориального типа белых крыс: общее содержание ЗНЧ указанных диаметров в плодах достоверно превышает таковое плодов контрольной группы примерно в 8 раз. ЗНЧ присутствуют в печени и селезенке плодов. Гематоэнцефалический барьер оказывается проницаемым для ЗНЧ диаметром 5 нм. Простое нанесение геля с ЗНЧ неэффективно для их доставки в кожу за счет пассивной диффузии. Показано, что лазерная абляция кожи перед нанесением геля и последующая УЗ обработка позволяет преодолеть роговой слой и доставить золотые нанооболочки в дерму. Применение ДМСО обусловливает преодоление ЗНЧ рогового слоя эпидермиса, которые достигают сосочкового слоя дермы. Использование ТСО не способствует трансдермальному транспорту ЗНЧ через здоровую кожу. Оптимальным методом усиления тран-сдермального транспорта ЗНЧ через роговой слой эпидермиса следует признать мультимодальное физико-химическое воздействие (комбинация ДМСО и УЗ воздействие).

Заключение. Продемонстрирована размерная зависимость проницаемости ГГБ для ЗНЧ при парентеральном введении. Сочетанное физико-химическое воздействие является оптимальным методом усиления трансдермаль-ного транспорта ЗНЧ. Полученные данные свидетельствуют о возможном применении ЗНЧ в диагностических и терапевтических целях in vivo.

В.А. Мумятова, А.А. Балакина, М.А. Лапшина, В.Д. Сень, А.Б. Корнев, А.А. Терентьев ВЛИЯНИЕ ИНГИБИРОВАНИЯ БЕЛКА Р53 НА ИЗМЕНЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ДЕЙСТВИИ ГЕНОТОКСИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область, Россия

Введение. Побочные эффекты действия современных противоопухолевых препаратов, применяемых в химиотерапии, часто связывают с нарушением про- и антиоксидантно-го баланса клеток. Недавно обнаружена взаимосвязь активных форм кислорода, антиоксидантной системы (АОС) и белка р53 в процессах регуляции сигнальных систем клеток. Таким образом, в противоопухолевой терапии белок р53 может играть важную роль в механизмах клеточного ответа на уровне окислительно-восстановительного баланса.

Цель исследования — анализ экспрессии генов АОС опухолевых клеток MCF-7 при действии генотоксичеких соединений в норме и при ингибировании функции белка р53.

Материалы и методы. Исследование проводили на линии опухолевых клеток MCF-7 (аденокарцинома молочной железы пациента). В работе использовали цисплатин и аминонитроксильный комплекс платины (ГУ) — ВС-131, в дозе IC50. Накопление белка р53 исследовали методами иммуноблотинга и иммунофлуоресценции. Выделение суммарной РНК проводили с использованием реагента ExtractRNA («Евроген») согласно методике производителя. Синтез первичной цепи к-ДНК проводили с помощью

Спецвыпуск/ том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ