СПОСОБ И СИСТЕМА ДЛЯ СВОРАЧИВАНИЯ БЕЛКА ИН ВИТРО

1. Способ сворачивания белка, содержащий:
введение концентрированного раствора денатурированного белка; и
статическое перемешивание денатурированного белка со сворачивающим растворителем для получения смеси, содержащей сворачиваемый белок.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что белок является рекомбинантным белком, полученным микробным способом.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что раствор денатурированного белка получается отделением белка от микробного носителя и его обработкой денатурирующим реагентом.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что сворачивающий растворитель является буфером, в котором растворим белок.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что статическое перемешивание производится в статическом смесителе, содержащем серию перемешивающих элементов в трубопроводе.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что раствор белка вводится в поток сворачивающего растворителя в трубопроводе непосредственно перед тем, как поток достигает перемешивающих элементов статического смесителя.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что смесь после статического перемешивания поступает в камеру динамического перемешивания.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что смесь динамически перемешивается в камере динамического перемешивания.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что свернутый белок получается с выходом готового продукта больше, чем 75% мономера, менее чем за 1 ч.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что свернутый белок получается с выходом готового продукта больше, чем 95%.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что свернутый белок получается за время, меньшее 30 мин.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что свернутый белок получается за время меньше, чем 5 мин.
13. Способ по п.4, отличающийся тем, что концентрация денатурирующего реагента в растворе белка составляет по меньшей мере 3М.
14. Способ по п.1, отличающийся тем, что растворение является по меньшей мере десятикратным.
15. Способ по п.14, отличающийся тем, что растворение является приблизительно шестидесятикратным.
16. Способ по п.1, отличающийся тем, что температура во время перемешивания находится приблизительно между 2 и 30°С.
17. Способ по п.1, отличающийся тем, что температура во время перемешивания составляет около 4°С.
18. Способ по п.1, отличающийся тем, что концентрация белка во время перемешивания составляет менее чем 0,2 мг/мл.
19. Способ по п.18, отличающийся тем, что концентрация белка во время перемешивания составляет около 0,1 мг/мл.
20. Способ по п.1, отличающийся тем, что скорость потока смеси выбирается такой, чтобы статический смеситель имел число Рейнольдса приблизительно от 200 до 7000.
21. Способ по п.1, отличающийся тем, что объем смеси больше, чем 10 л.
22. Способ по п.1, отличающийся тем, что объем смеси больше, чем 100 л.
23. Способ по п.1, отличающийся тем, что объем смеси больше, чем 1000 л.
24. Способ по п.1, отличающийся тем, что белок имеет одну или более внутримолекулярных дисульфидных связей в его нативной форме.
25. Способ по п.24, отличающийся тем, что белок имеет одну внутримолекулярную дисульфидную связь в его нативной форме.
26. Способ по п.25, отличающийся тем, что белком является Интерферон β.
27. Способ по п.26, отличающийся тем, что белком является Интерферон β-1b.
28. Способ по п.27, отличающийся тем, что раствор белка содержит НА-свободный Интерферон β.
29. Способ по п.1, отличающийся тем, что свернутый белок является биологически активным.
30. Способ по п.1, отличающийся тем, что смесь содержит также наполнители, воспринимаемые обычно как безопасные ингредиенты терапевтического состава активного белка.
31. Способ по п.30, отличающийся тем, что наполнители содержат трегалозу.
32. Способ по п.31, отличающийся тем, что раствор белка содержит 0,1 мг/мл НА-свободного Интерферона β-1b в 2 мМ аспарагиновой кислоты при рН около 4, а наполнители содержат 9% трегалозы.
33. Система для восстановления свернутого белка из раствора, содержащая:
статический смеситель;
трубопровод, соосный с входящим потоком статического смесителя; и
подводящий канал к входящему потоку трубопровода статического смесителя.
34. Система по п.33, содержащая также:
источник сворачивающего растворителя, сконфигурированный для подвода к входящему потоку статического смесителя; и
источник концентрированного денатурированного белка, сконфигурированный для подвода к трубопроводу через входящий поток подводящего канала статического смесителя.
35. Система по п.34, отличающаяся тем, что статический смеситель содержит в трубопроводе несколько неподвижных перемешивающих элементов, подвижных перемешивающих элементов или их комбинацию.
36. Система по п.35, отличающаяся тем, что трубопровод статического смесителя имеет диаметр не более чем 2 дюйма.
3
4
37. Система по п.36, отличающаяся тем, что трубопровод статического смесителя имеет диаметр около / дюйма.
38. Система по п.35, отличающаяся тем, что статический смеситель имеет неподвижные элементы.
39. Система по п.33, содержащая также камеру динамического перемешивания в нисходящем потоке статического смесителя.