ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО

ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ УСТРОЙСТВО
Полезная модель относится к области медицинской техники, а именно к диагностическим устройствам для определения сифилиса методом иммуноферментного анализа (ИФА).
В настоящее время для диагностики сифилиса используются стандартные пластиковые планшеты для ИФА, представляющие собой плоскость с отогнутыми вниз краями, на поверхности которой выполнены лунки (обычно 48 или 96).
На внутреннюю поверхность лунок нанесен слой, содержащий вещество, способное реагировать с антителами к возбудителю сифилиса, содержащимися в сыворотке крови больного.
В качестве таких веществ планшет содержит, например, антигены Treponema pallidum, например, TmpA или флагеллин.
(Рассказов Н.И. и др. Вестник ., 1990 N1, с.12-16; G.Antoni, J. Immunol. Methods 1996, v.89,Nl, p. 137-140)
Недостатком устройства является его невысокая селективность, особенно в случае рецедивного, скрытых раннего и позднего сифилиса.
Прототипом заявляемого решения является планшет для ИФА вышеописанного типа на внутреннюю поверхность лунок которого нанесен липопротеиновый антиген Treponema pallidum массой 15 кДа (Bunghn R. et all. Infect. Immun. 1996, v.64, N7, p.24572466).
Однакоданное диагностическое устройство также обладает недостаточной селективностью, а кроме того в ряде случаев оказывается неэффективным, что связано , повидимому , со стерическими затруднениями, в результате чего ряд антител (AT) с данным липопротеином не реагируют.
Задачей, решаемой в рамках заявляемого решения, являлось создание более эффективного диагностического устройства.
Было найдено, что данная задача может быть решена за счет включения в состав слоя, расположенного на внутренней поверхности лунок, одновременно нескольких различных пептидных фрагментов белковых антигенов Тг. pall., каждый из которых мог бы связываться с AT к отдельному эпитопу.
В качестве указанных фрагментов могут быть использованы, в частности, фрагменты 23-40,23-51,42-60,61-81,255-275 Ттр А антигена, 34-54 flab 1 белка, 58-77 tp-15 антигена, а также участки других белковых молекул Treponema pallidum .
Лучшие результаты были достигнуты при наличии в составе иммобилизованной на поверхности лунок смеси , состоящей из пептидов, соответствующих последовательностям 123-141  44-61 TpD, 23-51 TmpA и 67-87 TpD.
Общий вид диагностического устройства приведен на фиг. 1. Устройство состоит из планшета 1 представляющего собой горизонтальную поверхность с отогнутыми вниз бортами 2. На горизонтальной поверхности выполнены лунки 3, на внутренней поверхности которых нанесен слой 4 вещества, содержащего смесь пептидов.
Для приготовления устройства поверхность лунок стандартного планшета для ИФА обрабатывают буферным раствором, содержащим пептиды, после чего планшет инкубируют при температуре 4-6 °С, в течении 24-48 часов, промывают буферным раствором, содержащим поверхностно-активное вещество, высушивают и упаковывают.
Для проведения анализа лунки 3 промывают буферным раствором, после чего планшет 1 устанавливают на борта 2, в лунки 3 вводят анализируемую сыворотку и инкубируют при 37 °С в течении 30 мин. При наличии в сыворотке антител к сифилису последние связываются с пептидами слоя 4.
Далее не связавшиеся вещество удаляют. В лунки 3 вносят конъюгат пероксидазы хрена с моноклональными AT к иммуноглобулинам человека, фиксируют и проявляют продукты реакции смесью перекиси водорода и о-фенилендиамина и считывают результаты с помощью вертикального фотометра.
Результаты анализа сывороток 165 больных и 50 доноров с помощью заявляемого устройства приведены в табл. 1
Таблица 1 .Результаты анализа сывороток крови с использованием заявляемого диагностического устройства.
Выпуск заявляемого диагностического производственное предприятие «Аквапаст.
устройства налажен в ТОО «НаучноФОРМУЛА