СПОСОБ ПЦР-АНАЛИЗА БИОЛОГИЧЕСКОГО ОБЪЕКТА, УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ И КОМПОЗИЦИЯ, ВХОДЯЩАЯ В СОСТАВ УСТРОЙСТВА

1. Способ проведения ПЦР-анализа биологического объекта в микрофлюидном чипе, отличающийся тем, что ПЦР-анализ проводят во вставленном в держатель чипа базового блока микрофлюидном чипе, содержащем реагенты, герметизированные парными непрерывными масляными фазами с не менее одной из парных непрерывных масляных фаз на основе ферромагнитного масла, при этом сначала в лунку микрофлюидного чипа вносят биологический объект, затем его последовательно смешивают с реагентом для выделения нуклеиновых кислот на основе щелочного гидролиза, нейтрализатором и реакционной смесью для ПЦР с рН 7,0÷7,5 при 40÷85°С, проводят циклы амплификации и флуоресцентную детекцию продуктов амплификации, при этом смешивание биологического объекта и реагентов, нагревание и охлаждение смеси и флуоресцентную детекцию продуктов амплификации осуществляют путем перемещения в капиллярах ферромагнитного масла не менее одной непрерывной масляной фазы, герметизирующей реактив, воздействуя на ферромагнитное масло магнитным полем магнитной системы при последовательном включении микроэлектромагнитов и регуляции перемещений с использованием сети фотоэлектрических датчиков.
2. Устройство для осуществления способа по п.1, содержащее микрофлюидный чип, базовый блок, блок питания и систему управления, отличающееся тем, что микрофлюидный чип выполнен с лункой для внесения биологического объекта, соединенной с сетью пересекающихся капилляров с реагентами: для выделения нуклеиновых кислот на основе щелочного гидролиза, нейтрализатором и не менее одной реакционной смесью для ПЦР с рН 7,0÷7,5 при 40÷85°С, при этом каждый из перечисленных реагентов находится в капилляре между двумя герметизирующими реагент парными непрерывными масляными фазами, а не менее одной из парных непрерывных масляных фаз выполнено на основе ферромагнитного масла, и базовый блок содержит основные элементы: держатель чипа, не менее одного источника света, не менее одного детектора флуоресценции, сеть фотоэлектрических датчиков, магнитную систему, состоящую из микроэлектромагнитов, и термоэлемент для доведения температуры реакционной смеси до 62÷95°С или следующие, последовательно расположенные термоэлементы: для доведения температуры реакционной смеси до 92÷95°С, для доведения температуры реакционной смеси до 62÷70°С и для доведения температуры реакционной смеси до 70÷72°С.
3. Устройство по п.2, отличающееся тем, что участки микрофлюидного чипа, используемые для детекции на просвет регистрируемого излучения, выполнены из материала, прозрачного для возбуждающего и регистрируемого излучения.
4. Устройство по п.2, отличающееся тем, что участки микрофлюидного чипа, используемые для детекции на просвет регистрируемого излучения, выполнены из материала, прозрачного для возбуждающего и регистрируемого излучения, а остальные участки микрофлюидного чипа выполнены из материала, непрозрачного для возбуждающего и регистрируемого излучения, или покрыты материалом, непрозрачным для возбуждающего и регистрируемого излучения.
5. Устройство по п.2, или 3, или 4, отличающееся тем, что микрофлюидный чип выполнен из материала, выбранного из ряда: пластик, стекло или кремниевая пластина, покрытая стеклом.
6. Устройство по п.2, отличающееся тем, что микрофлюидный чип содержит сквозные и/или закрытые с одного или двух концов капилляры.
7. Устройство по п.2, отличающееся тем, что лунка для внесения биологического объекта и капилляры содержат полимерное покрытие.
8. Устройство по п.6, отличающееся тем, что капилляры содержат полимерное покрытие.
9. Устройство по п.7 или 8, отличающееся тем, что полимерное покрытие выбрано из ряда: полиорганосилоксан, диметилдихлорсилан, окта-децилдиметилхлорсилан, органохлорполисилоксан, полиадениловая кислота, полиметилметоксисилокеан или бычий сывороточный альбумин.
10. Устройство по п.2, отличающееся тем, что в качестве источника света оно содержит светодиод и/или твердотельный лазер.
11. Композиция в виде реакционной смеси для ПЦР, входящая в состав устройства, отличающаяся тем, что она содержит буфер для постановки реакции, содержащий катионы калия (I) и катионы магния (II), на основе буферной системы с рН 7,0÷7,5 при 40÷85°С, включающей соль глутаминовой кислоты, трис(гидроксиметил)аминометан и ортофосфорную кислоту, систему праймеров, метку, термостабильный фермент Taq-полимеразу, смесь четырех дезоксинуклеозидтрифосфатов.
12. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что реакционная смесь содержит систему праймеров, выбранную из ряда: система прямых и обратных неблокированных праймеров, система прямых и обратных неблокированных праймеров и гомологичных им прямых и обратных блокированных праймеров с некомплементарным участком из 1-8 нуклеотидов на 3'-конце, выбранных из ряда: некомплементарный первый нуклеотид, некомплементарный второй нуклеотид, некомплементарный третий нуклеотид, некомплементарный четвертый нуклеотид, некомплементарный пятый нуклеотид, некомплементарный шестой нуклеотид, некомплементарный седьмой нуклеотид, некомплементарный восьмой нуклеотид или их сочетания, при отсчете номера нуклеотида блокированного праймера с 3'-конца, или система прямых и обратных неблокированных праймеров и гомологичных им прямых и обратных праймеров с дидезоксинуклеотидом на 3'-конце.
13. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что реакционная смесь содержит неконьюгированную флуоресцентную метку.
14. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что реакционная смесь содержит коньюгированную с олигонуклеотидом флуоресцентную метку.
15. Композиция по п.14, отличающаяся тем, что олигонуклеотид не конъюгирован или конъюгирован с гасителем флуоресценции и является праймером и/или зондом.