СПОСОБ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ КЛЕТОК С СОДЕРЖАЩИМИСЯ В НИХ МЕЛКИМИ НЕПРОДУКТИВНЫМИ ЖИВОТНЫМИ В УСЛОВИЯХ ВЕТЕРИНАРНОГО ГОСПИТАЛЯ
METHOD OF PROBIOTIC CELL TREATMENT WITH CONTAINED SMALL NON-PRODUCTIVE ANIMALS IN VETERINARY HOSPITAL ENVIRONMENT

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, а именно к способам санитарной обработки клеток для содержания животных.
В стационаре ветеринарного госпиталя животные, получающие лечение (переломы конечностей, полостные операции и др.), содержатся в индивидуальных клетках, в которых микробная загрязненность различна по своему составу в зависимости от времени пребывания животного в ней. При этом микробные штаммы каждой клетки постоянно циркулируют в помещении стационара ветеринарного госпиталя. Для предупреждения внутригоспитальной инфекции, согласно санитарным нормам, обработка клеток должна проводиться не менее одного раза в сутки.
Известен способ обработки клеток при помощи широко применяемых дезинфицирующих средств, в состав которых входят химические вещества, например, хлорсодержащие. Также известен способ обработки клеток при помощи УФ-излучения (Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга I. Под редакцией Лабинской А.С., Волиной Е.Г. - М.: Издательство БИНОМ, 2008, стр.66-68).
Недостатком этих способов является то, что на время обработки клетки больного животного необходимо извлекать из клетки. Процесс извлечения травмирует как самого животного, так и опасен для обслуживающего персонала. Психологическое и физическое травмирование животных приводит к увеличению сроков лечения и нахождения в стационаре. Длительное нахождение животного в стационаре часто приводит к заражению внутригоспитальной инфекцией. Кроме того, в состав дезинфицирующих средств входят химические вредные вещества, раздражающе действующие на слизистые глаз и дыхательных путей, поэтому после такой обработки определенное время животному нельзя находится не только в клетке, но и в помещении, в котором находится клетка. При долговременном применении одного и того же дезинфицирующего средства вырабатывается устойчивость к нему микробов, и оно перестает на них губительно действовать.
Известны способы биологической дезинфекции клеток для содержания животных при помощи пробиотиков, изготавливаемых в промышленности. Пробиотики - микроорганизмы, губительно действующие на патогенные микроорганизмы, подавляющие их факторы агрессии и не дающие им размножаться. Например, «Концентрат ORGANICS Zoo Professional.)) (), предназначенный для применения в ветеринарных клиниках, содержит 5 семейств положительных (непатогенных) микроорганизмов, стабилизатор спор, моющую органическую основу, очищенную воду. Несмотря на то, что обработку клеток при помощи данного пробиотика можно проводить, не извлекая животного из клетки, существенным недостатком такой обработки является то, что микроорганизмы, входящие в состав этого пробиотика, не убивают патогенные бактерии, как антибиотики и дезинфектанты, они лишь уничтожают запах, разлагая продукты выделения животных.
Кроме того, известен способ биологической дезинфекции клеток для содержания животных при помощи препарата торговой марки «Экофренд» «Аква БАД (БАКФЕР Ст) универсальный очиститель стойла», предназначенный для обработки помещений, где содержатся любые виды животных или птицы. Препарат содержит очищенную воду, ферменты, 5 видов непатогенной микрофлоры, поверхностно-активные вещества (ПАВ) (состав описан на этикетке тары производителя). Недостатком является необходимость извлекать животного из клетки на время обработки, так как в препарате содержатся поверхностно-активные вещества, действующие раздражающе на слизистые. Кроме того, пробиотики обладают избирательным действием, т.е. воздействуют не на все имеющиеся в клетке микроорганизмы и не приводят к нормативному очищению клеток. Так, исследования показали, что бактерицидной активностью обладают не более половины присутствующей в препаратах торговой марки «Экофренд» микрофлоры (Материалы VII Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития», Саратов 2007, стр.142).
Способ биологической дезинфекции клеток для содержания животных при помощи промышленно полученных пробиотиков основан на классическом бактериологическом методе изучения санитарно-гигиенического состояния объектов внешней среды при помощи исследования их по эпидемиологическим показателям на зараженность патогенными видами и выделении чистых культур микроорганизмов, в том числе микроорганизмов-пробиотиков (прототип - Руководство по медицинской микробиологии. Книга I. Общая и санитарная микробиология. Под редакцией А.С.Лабинской, Е.Г.Волиной. М.: БИНОМ, 2008, стр.266-270, 281). Способ включает отбор исследуемого материала, посев исследуемого материала на искусственные питательные среды, выделение чистых культур микробов и их последующую идентификацию. Из идентифицированной чистой культуры пробиотика, содержащей микроорганизмы одного вида и полученной как потомство одной клетки, наращивают биомассу, которую включают в состав препаратов, изготавливаемых на основе микроорганизмов-пробиотиков. Основную часть микроорганизмов, используемых как пробиотики, составляет группа микроорганизмов, относящихся в роду бацилл (Руководство по микробиологии и иммунологии. Под общей ред. д.в.н., профессора Н.М.Колычева, д.в.н., профессора В.Н.Кисленко. Новосибирск: Издательство «АРТА», 2010, стр.155).
Недостатком способа является то, что промышленно полученные пробиотики не действуют как дезинфектанты по отношению к значительной части госпитальных штаммов, имеющихся в стационарах ветеринарных госпиталей, в каждом из которых микробная загрязненность различна по своему составу, и не приводят к полной санитарной микробиологической чистоте клеток, в которых содержатся животные в условиях ветеринарного госпиталя.
Технической задачей является повышение санитарной микробиологической чистоты среды содержания животных в условиях ветеринарного госпиталя.
8
9
Техническая задача достигается тем, что способ пробиотической обработки клеток с содержащимися в них мелкими непродуктивными животными в условиях ветеринарного госпиталя включает отбор исследуемого материала, его посев на искусственные питательные среды, выделение чистых культур бацилл из исследуемого материала, процесс идентификации бацилл, в котором согласно изобретению, отбор исследуемого материала проводят из собственного микробиоценоза каждой клетки, находящейся в помещении стационара, а после процесса идентификации бацилл определяют их на патогенность и проводят отбор всех штаммов непатогенных бацилл, затем осуществляют индивидуальное культивирование каждого штамма непатогенных бацилл, изучают их на предмет способности к пробиотическим свойствам и отбирают выявленные пробиотики, каждый из которых отдельно культивируют и затем из каждой полученной культуры-пробиотика приготавливают бактериальную суспензию в дозе 10-10 микробных клеток на 1 мл физиологического раствора, смешивают суспензии всех культур-пробиотиков в равных количествах, наносят по мере необходимости полученную смесь из бактериальных суспензий путем распыления на конструктивные элементы клеток.
8
9
8
9
Способ осуществляют следующим образом. Отбор исследуемого материала проводят из собственного микробиоценоза каждой клетки, находящейся в помещении стационара. Стерильным тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором, берутся смывы с поверхностей клетки, и исследуемый материал, полученный из каждой клетки, помещают в индивидуальную пробирку. Из каждой пробирки делают посев исследуемого материала на искусственную питательную среду в отдельные чашки Петри, в частности на мясопептонный агар. Затем засеянные чашки инкубируют при температуре 37°C в течение суток, после чего визуально оценивают культуральные признаки (размер колоний, их цвет, характер роста), и по визуальным признакам, характерным для бацилл, выделяют чистые культуры бацилл из исследуемого материала, затем проводят процесс идентификации бацилл. При этом материал из каждой колонии микроорганизмов отсевают в индивидуальную пробирку с питательной средой, кроме того, наносят на предметное стекло и окрашивают по Граму в целях уточнения результата визуальной оценки на предмет идентификации бацилл при помощи дополнительного изучения окрашенного мазка под микроскопом. После процесса идентификации бацилл определяют их на патогенность путем посева каждой культуры бацилл из индивидуальной пробирки на питательную среду - мясопептонную желатину. По наличию разжижения желатина определяют патогенность бацилл. Проводят отбор всех штаммов непатогенных бацилл, а патогенные бациллы удаляют из исследования. Затем осуществляют индивидуальное культивирование каждого штамма непатогенных бацилл и изучают их на предмет способности к пробиотическим свойствам. Для этого применяют метод агаровых блоков (Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзива Г.И. Практикум по микробиологии. 5-е изд., перераб. и доп. М.: Дрофа 2004, стр.92), при помощи которого оценивают бактерицидное действие указанных непатогенных бацилл по отношению к циркулирующим в стационаре госпиталя патогенным и условно-патогенным микроорганизмам. По наличию ширины зон отсутствия роста вокруг указанных непатогенных бацилл делают вывод о наличии их пробиотических свойств. Выявленные пробиотики отбирают, каждый из которых отдельно культивируют и затем из каждой полученной культуры-пробиотика приготавливают бактериальную суспензию в дозе 10-10 микробных клеток на 1 мл физиологического раствора. Суспензия обладает повышенными бактерицидными свойствами за счет наличия оптимального количества микробных клеток-пробиотиков. Дозировка менее 10 не приводит к эффективной санитарной обработке, а дозировка более 10 экономически неоправданна. Указанную дозировку подбирают по стандарту мутности (Руководство по медицинской микробиологии. Книга I. Общая и санитарная микробиология. Под редакцией А.С.Лабинской, Е.Г.Волиной. М.: БИНОМ, 2008, стр.254-256, 279). Затем смешивают бактериальные суспензии всех культур-пробиотиков в равных количествах. Смесь может храниться в течение суток при комнатной температуре. По мере необходимости наносят полученную смесь из бактериальных суспензий путем распыления на конструктивные элементы всех клеток, находящихся в стационаре. При такой обработке нет необходимости удалять животных из клетки, так как бактериальная смесь содержит пробиотики местного происхождения. Это объясняется тем, что в индивидуальных клетках создается свой собственный микробиоценоз, состоящий из патогенных, условно-патогенных и непатогенных микроорганизмов, источником которых являются сами животные (с шерсти, с гнойных ран, на лапах с землей и т.д.). Микрофлора воздуха в стационаре постоянно пополняется новыми штаммами из каждой находящейся там клетки, которые циркулируют в помещении. При этом часть непатогенных микроорганизмов, как показали наши исследования, являются собственными пробиотиками, присутствующими в данном помещении, которые при помощи предложенного метода выделяют, размножают (культивируют) и в увеличенном количестве заселяют в клетки. Собственные пробиотики губительно действуют на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, циркулирующие в помещении стационара.
В таблице 1 приведены сравнительные показатели воздействия бактерицидных свойств пробиотиков, полученных по предлагаемому способу и способу по прототипу с применением препарата торговой марки «Экофренд» «Аква БАД (БАКФЕР Ст) универсальный очиститель стойла».
Таблица 1
Показатели
Способ по прототипу
Предлагаемый способ
Золотистый стафилококк, ширина зоны отсутствия роста, мм
7
12
Синегнойная палочка, ширина зоны отсутствия роста, мм
0
17
Кишечная палочка,ширина зоны отсутствия роста, мм
0
10
Как видно из таблицы, по ширине зоны отсутствия роста патогенных и условно-патогенных микроорганизмов вокруг пробиотиков, можно сделать вывод, что пробиотики, полученные из микробиоценоза клеток, действуют более эффективно на патогенную и условно-патогенную микрофлору, повышая в 1,7-17 раза санитарную микробиологическую чистоту среды содержания животных в условиях ветеринарного госпиталя.
8
9
Пример. В стационаре ветеринарного госпиталя белым мышам нарушили целостность кожных покровов на брюхе с образованием ран и заразили раны смесью микробов, которые обитают в стационаре. Первую клетку обработали смесью из бактериальных суспензий, полученных смешиванием суспензий всех культур-пробиотиков с дозой 10-10 на 1 мл физиологического раствора в равных количествах в соответствии с предлагаемым способом обработки. Вторую клетку не подвергали указанной обработке. Через двое суток в первой клетке у всех мышей раны затянулись, а во второй клетке раны остались открытыми, заживление ран у всех мышей произошло на шестые сутки.