ЖИДКАЯ ИНГАЛЯЦИОННАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ RPL 554
LIQUID INHALATION COMPOSITION CONTAINING RPL554

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к жидкой фармацевтической композиции, содержащей лекарственное средство, действующее на органы дыхания.
Уровень техники
Токсикокинетические свойства жидкой фармацевтической композиции не поддаются прогнозированию. Важно, чтобы была правило составлена композиция, содержащая активный фармацевтический ингредиент (API), чтобы обеспечить безопасную, эффективную и контролируемую дозировку при доставке композиции пациенту. Это особенно касается композиций для ингаляции. Кроме того, жидкие фармацевтические композиции должны иметь надежную долгосрочную стабильность, чтобы обеспечить поддержание профиля дозирования композиции после хранения. Это позволяет избежать введения некорректных дозировок. Фармацевтические композиции также должны быть составлены таким образом, чтобы введение не было неприятным для пациента, например, в отношении вкуса и кислотности.
RPL554 (9,10-Диметокси-2-(2,4,6-триметилфенилимино)-3-(N-карбамоил-2-аминоэтил)-3,4,6,7-тетрагидро-2Н-пиримидо[6,1-а]изохинолин-4-он) представляет собой двойной PDE3/PDE4 ингибитор и описывается в WO 00/58308 (и также иногда упоминается как RPL554). В качестве комбинированного PDE3/PDE4 ингибитора, RPL554 обладает как противовоспалительной, так и бронхорасширяющей активностью и полезен для лечения респираторных расстройств, таких как астма и хроническое обструктивное заболевание легких (COPD). Структура RPL554 показана далее.
Часто предпочтительнее вводить RPL554 путем ингаляции из-за его эффективности при лечении респираторных расстройств. Эффективным методом введения является распыление. Franciosi et al. описывают раствор RPL554 в цитратно-фосфатном буфере (Efficacy and safety of RPL554, a dual PDE3 and PDE4 inhibitor, in healthy volunteers and in patients with asthma or chronic obstructive pulmonary disease: findings from four clinical trials, The Lancet: Respiratory Medicine 11/2013; 1 (9): 714-27. DOI: 10.1016/S2213-2600 (13)70187-5).
Сущность изобретения
В настоящем изобретении неожиданно было обнаружено, что оптимальная композиция для ингаляции, содержащая RPL554, представляет собой жидкую фармацевтическую композицию, содержащую суспензию частиц RPL554. Было обнаружено, что суспензии RPL554 обладают весьма желательными свойствами для клинического применения. Было обнаружено, что ряд преимуществ связан с жидкой фармацевтической композицией, которая содержит разбавитель и суспензию частиц RPL554 или его фармацевтически приемлемой соли.
max
Жидкая фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению обладает значительно улучшенными свойствами по сравнению с предшествующими композициями, например, по сравнению с композицией RPL554 в виде раствора. Что касается токсикокинетических свойств, было обнаружено, что композиция в виде суспензии обладает характеристиками замедленного высвобождения по сравнению с таковыми для раствора. Это может уменьшить число лечений, которые должны быть назначены пациенту. Также было обнаружено, что суспензия позволяет вводить гораздо большую дозу RPL554, что можно увидеть из значений С и AUC в плазме. Это также может сократить частоту требуемых введений.
Жидкая фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению также демонстрирует отличную стабильность, при этом композиции не проявляют разложение ни через 12 месяцев при условиях окружающей среды (25°C), ни через 6 месяцев при ускоренных условиях (40°C). Разложение наблюдается в сопоставимой композиции в виде раствора при таких же условиях. Композиции могут не проявлять разложение ни через 12 месяцев при условиях окружающей среды (25°C/60%RH), ни через 6 месяцев при ускоренных условиях (40°C/75%RH).
Соответственно, настоящее изобретение обеспечивает жидкую фармацевтическую композицию, содержащую разбавитель и суспензию частиц 9,10-диметокси-2-(2,4,6-триметилфенилимино)-3-(N-карбамоил-2-аминоэтил)-3,4,6,7-тетрагидро-2Н-пиримидо[6,1-а]изохинолин-4-она (RPL554) или его фармацевтически приемлемой соли.
Настоящее изобретение также обеспечивает жидкую фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению для применения для лечения человека или животного. Жидкая фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может применяться для лечения или профилактики заболевания или состояния, выбранного из астмы, аллергической астмы, сенной лихорадки, аллергического ринита, бронхита, эмфиземы, бронхоэктаза, хронического обструктивного заболевания легких (COPD), синдрома расстройства дыхания у взрослых (ARDS), стероид-устойчивой астмы, тяжелой астмы, детской астмы, кистозного фиброза, фиброза легких, легочного фиброза, интерстициальной легочной болезни, кожных заболеваний, атопического дерматита, псориаза, воспаления глаз, церебральной ишемии, воспалительных заболеваний и аутоиммунных заболеваний. Как правило, указанным заболеванием или состоянием является астма или COPD, более часто COPD.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения или профилактики заболевания или состояния, как определено в настоящей заявке, у субъекта, причем способ включает введение указанному субъекту эффективного количества жидкой фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 - Концентрация провокации (PC) ацетилхолина, которая суммарно вызывала 50-ти % увеличение общей резистентности дыхательных путей (RL РС50 ацетилхолина) у животных, получавших физиологический раствор или композицию RPL554 в виде раствора: моменты времени 2 и 5 ч: RL РС50 ацетилхолина была логарифмически преобразована в целях статистического анализа. По полученным результатам t-критерий нетрансформированных данных показал различия между группами по сравнению с физиологическим раствором. *Непараметрический анализ показал значительную разницу между 2 ч (1 мг/мл раствор RPL554, P=0.0190 без корректировки) и 5 ч (2.5 мг/мл раствор, P=0.0095 без корректировки) по сравнению с группой с физиологическим раствором. N значения = 6, 4, 4; 4, 4 слева направо. (Примечание: 5 ч не нанесено на график).
Фиг. 2 - RL РС50 ацетилхолина у животных, обработанных средой или композицией RPL554 в виде суспензии: моменты времени 2 и 5 ч: RL РС50 ацетилхолина была логарифмически преобразована в целях статистического анализа (верхняя панель). Непараметрический анализ показал значительную разницу между 2 ч (10 мг/мл суспензия RPL554, P=0.0268 без корректировки) по сравнению с контрольной группой со средой. Повторный анализ данных путем объединения данных для среды (2+5 ч), показал общую значительную бронхопротекцию (P=0.0016), которая характеризуется значительной степенью бронхопротекции с 2.5 мг/мл суспензией RPL554 (2.52 раз (1-5.72), P<0.05 и 10 мг/мл суспензия RPL554 (4.67 раз (2-11), *P<0.05) по сравнению со средой. В момент времени 5 ч, 10 мг/мл суспензия RPL554 вызвала значительную степень бронхопротекции (2.77 раз (1.3-6.0), *P<0.05). (N=8,4,4,3, 6, слева направо) (нижняя панель).
Фиг. 3 показывает средние концентрации RPL554 в плазме здоровых людей-добровольцев после введения либо (i) композиции в виде суспензии, либо (ii) композиции в виде раствора посредством распылителя при нормальном уровне дозы около 1.5 мг.
Подробное описание изобретения
Частицы RPL554 могут быть любого подходящего размера для использования в жидкой фармацевтической композиции, пригодной для ингаляции. Как правило, частицами RPL554 являются микронизированными частицами. Например, частицы RPL554 могут иметь значение Dv50 (средний размер частиц по объему), меньше или равную 10 мкм, или от около 0,1 мкм до около 8 мкм.
Как правило, частицы имеют распределение частиц по размеру со значением Dv50 от около 0,2 мкм до около 5 мкм. Более конкретно, частицы RPL554 имеют распределение частиц по размеру со значением Dv50 от около 0,7 до около 3,0 мкм. Например, частицы RPL554 могут иметь распределение частиц по размеру со значением Dv50 от 0,9 мкм до 1,7 мкм или, альтернативно, от 1,7 мкм до 2,7 мкм. Часто частицы RPL554 имеют распределение частиц по размеру со значением Dv50 от около 1,1 мкм до около 2,6 мкм.
Значением Dv50 является средним размером частиц для распределения по объему. Таким образом, половина объема частиц находится в виде частиц, имеющих диаметры, меньшие, чем значение Dv50, и половина объема частиц находится в виде частиц, имеющих диаметры, превышающие значение Dv50. Это хорошо известный путь, которым описываются распределения частиц по размерам.
Частицы, как правило, имеют распределение частиц по размеру со значением Dv10 от около 0,4 мкм до около 1,0 мкм. Частицы, как правило, имеют распределение частиц по размеру со значением Dv90 от около 2,0 до около 4,0 мкм. Значение Dv10 отражает диаметр частиц, где 10% объема образца находится в виде частиц, имеющих диаметр меньше, чем значение Dv10. Значение Dv90 отражает диаметр частиц, где 90% объема образца находится в виде частиц, имеющих диаметр меньше, чем значение Dv90.
Методика, используемая для измерения значения Dv50, обычно представляет собой лазерную дифракцию. Например, частицы RPL554 обычно имеют распределение частиц по размеру со значением Dv50 от около 0,2 мкм до около 5 мкм, как измерено методом лазерной дифракции. Анализ распределения частиц по размерам может быть выполнен путем лазерной дифракции с использованием Malvern Spraytec в сочетании с влажной дисперсионной ячейкой. Как правило, параметры прибора для Malvern Spraytec следующие:
• частица - стандартная непрозрачная частица;
• показатель преломления частицы - 1.50;
• показатель преломления (воображаемый) - 0.50;
• плотность частицы - 1.00;
• показатель преломления диспергирующего средства - 1.33;
• блок командоаппарата - 1000RPM;
• тип измерения - синхронный; начальное время выборки - 30 с;
• матирование - 20% - 30%;
• диспергирующее средство - 1% Полисорбат 20 в деионизированной воде.
Частицы RPL554 могут быть получены любым фармацевтически приемлемым способом уменьшения размера или способом получения контролируемого размера частиц. Например, частицы могут быть получены путем распылительной сушки раствора RPL554 или путем контролируемой кристаллизации или путем уменьшения размера твердой формы RPL554, например, путем воздушно-струйного помола, механической микронизации или измельчения в среде.
Концентрация частиц RPL554 в жидкой фармацевтической композиции обычно составляет от около 0,01 мг/мл до около 40 мг/мл. Более конкретно, концентрация частиц RPL554 в жидкой фармацевтической композиции составляет от около 0,1 мг/мл до около 20 мг/мл. Например, концентрация частиц RPL554 в жидкой фармацевтической композиции может составлять от около 0,01 мг/мл до около 5 мг/мл или от 0,1 мг/мл до 5 мг/мл. Концентрация частиц RPL554 в жидкой фармацевтической композиции может составлять, например, от 0,1 мг/мл до 6 мг/мл.
Предпочтительно, значение pH суспензии составляет от около 6 до около 8, более предпочтительно от около 6.5 до около 7.
Жидкая фармацевтическая композиция может дополнительно содержать одно или более поверхностно-активных веществ. Поверхностно-активные вещества представляют собой фармацевтически приемлемые поверхностно-активные вещества. Поверхностно-активными веществами могут быть неионные поверхностно-активные вещества, анионные поверхностно-активные вещества, катионные поверхностно-активные вещества или цвиттерионные поверхностно-активные вещества. Предпочтительно одно или более поверхностно-активных веществ выбраны из одного или более неионных поверхностно-активных веществ.
Одно или более поверхностно-активных веществ, как правило, выбирают из простых алкиловых эфиров полиоксиэтиленгликоля, простых алкиловых эфиров полиоксипропиленгликоля, простых алкиловых эфиров глюкозида, простых октилфенольных эфиров полиоксиэтиленгликоля, простых алкилфенольных эфиров полиоксиэтиленгликоля, сложных алкиловых эфиров глицерина, сложных алкиловых эфиров полиоксиэтиленгликоля и сорбитана (полисорбаты), сложных алкиловых эфиров сорбитана, кокамида МЕА, кокамида DEA, додецилдиметиламиноксида, блок-сополимеров полиэтиленгликоля и полипропиленгликоля (полоксамеры) и полиэтоксилированного таллового амина (РОЕА).
Предпочтительно одно или более поверхностно-активных веществ выбраны из алкиловых сложных эфиров полиоксиэтиленгликоля и сорбитана, например полисорбат 20 (полиоксиэтилен (20) сорбитан монолаурат), полисорбат 40 (полиоксиэтилен (20) сорбитан монопальмитат), полисорбат 60 (полиоксиэтилен (20) сорбитан моностеарат) и полисорбат 80 (полиоксиэтилен (20) сорбитан моноолеат), и алкиловых сложных эфиров сорбитана, например, сорбитан монолаурат, сорбитан монопальмитат, сорбитан моностеарат, сорбитан тристеарат и сорбитан моноолеат.
Общая концентрация одного или более поверхностно-активных веществ, как правило, составляет от около 0,01 мг/мл до около 2 мг/мл. Композиция часто содержит два или более поверхностно-активных вещества, например полисорбат и поверхностно-активное вещество Span.
Как правило, жидкая фармацевтическая композиция дополнительно содержит один или более буферов. Буферы представляют собой фармацевтически приемлемые буферы. Буферы могут представлять собой любые буферы, пригодные для использования в жидкой фармацевтической композиции, пригодной для ингаляции. Один или более буферов, как правило, выбирают из цитратных или фосфатных буферов. Цитратные буферы включают лимонную кислоту, цитрат натрия и их смеси. Фосфатные буферы включают фосфорную кислоту, мононатрия фосфат, двухосновный фосфат натрия и их смеси.
Общая концентрация одного или более буферов обычно составляет от около 5 мг/мл до около 40 мг/мл. Композиция часто содержит два или более буферных компонента, например две фосфатные соли, например соли фосфата натрия.
Жидкая фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может включать: (а) частицы RLP554 при концентрации от около 0,01 мг/мл до около 40 мг/мл; (b) одно или более поверхностно-активных веществ при концентрации от около 0,01 мг/мл до около 5 мг/мл; и (с) буфер при концентрации от около 5 мг/мл до около 25 мг/мл.
Жидкая фармацевтическая композиция, как правило, дополнительно содержит регулятор тоничности. Регулятором тоничности может быть любой фармацевтически приемлемый регулятор тоничности. Примеры регуляторов тоничности включают простые нетоксичные соли, такие как галогениды щелочных металлов, например хлорид натрия и йодид калия. Как правило, регулятором тоничности является хлорид натрия. Концентрация регулятора тоничности будет зависеть от количества, необходимого для достижения желаемого тоничности, например, изотоничности с организмом или легкими. Концентрация регулятора тоничности, как правило, составляет от около 2 мг/мл до около 8 мг/мл, и более конкретно от около 3,5 мг/мл до 6 мг/мл.
2
2
Жидкая фармацевтическая композиция может содержать другие компоненты. Альтернативно, другие компоненты могут быть исключены. В некоторых случаях жидкая фармацевтическая композиция не содержит агониста β-адренергических рецепторов или антагониста мускариновых рецепторов (или не содержит более 0.1 мас. % в общем агониста β-адренергических рецепторов и антагониста мускариновых рецепторов).
Разбавителем может быть любой фармацевтически приемлемый разбавитель. Разбавитель подходит для введения путем ингаляции. Примеры подходящих разбавитель включают воду, этанол и глицерин. Разбавителем предпочтительно является вода. Разбавитель предпочтительно является стерильным.
Жидкая фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению, как правило, содержит:
(а) частицы RLP554 при концентрации от 0.01 мг/мл до 40 мг/мл;
(b) алкиловый сложный эфир полиоксиэтиленгликоля и сорбитана при концентрации от 0.1 мг/мл до 2 мг/мл;
(c) алкиловый сложный эфир сорбитана при концентрации от 0.01 мг/мл до 0.1 мг/мл;
(d) первый фосфатный буферный компонент при концентрации от 5 мг/мл до 10 мг/мл;
(e) второй фосфатный буферный компонент при концентрации от 5 мг/мл до 10 мг/мл; и
(f) регулятор тоничности при концентрации от 2 мг/мл до 8 мг/мл.
Например, жидкая фармацевтическая композиция может содержать:
(a) частицы RLP554 при концентрации 0.05 мг/мл-25 мг/мл;
(b) полиоксиэтилен (20) сорбитан монолаурат (Полисорбат 20, Tween 20) при концентрации от 0.1 мг/мл до 2 мг/мл;
(c) сорбитан монолаурат (Span 20) при концентрации от 0.01 мг/мл до 0.1 мг/мл;
(d) моногидрат мононатрий фосфата при концентрации от 5 мг/мл до 10 мг/мл;
(e) двухосновный безводный фосфат натрия при концентрации от 5 мг/мл до 10 мг/мл; и
(f) хлорид натрия при концентрации от 2 мг/мл до 8 мг/мл.
Как правило, жидкая фармацевтическая композиция подходит для введения посредством распылителя.
Настоящее изобретение также обеспечивает распылитель, содержащий жидкую фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению. Распылитель, как правило, загружен жидкой фармацевтической композицией. Распылитель, как правило, содержит от около 1 мл до около 200 мл, более конкретно от 1 мл до 20 мл жидкой фармацевтической композиции.
R
В распылителях применяется сжатый воздух для аэрозолизации жидкой фармацевтической композиции в аэрозоль, который вдыхается в дыхательные пути субъекта. Примеры распылителей включают мягкий аэрозольный распылитель, вибрирующий сетчатый распылитель, инжекционный распылитель и распылитель ультразвуковой водой. Подходящие распылительные устройства включают Philips I-neb™ (Philips), Pari LC Sprint (Pari GmbH), AERx™ Pulmonary Delivery System (Aradigm Corp.) и Pari LC Plus Reusable Nebulizer (Pari GmbH).
Настоящее изобретение также обеспечивает жидкую фармацевтическую композицию для применения для лечения человека или животного. Композиция является такой, как определено в настоящей заявке. Жидкая фармацевтическая композиция, как правило, предназначена для применения для лечения человека или животного, где лечение включает введение путем ингаляции.
Композиции согласно настоящему мнению позволяют отсрочить высвобождение RPL554 в кровоток. Таким образом, концентрация RPL554 в плазме через определенное время увеличивается по сравнению с использованием известных композиций RPL554. Как правило, концентрация RPL554 в плазме крови больше или равна 1 нг/мл за время, большее или равное четырем часам после введения распыленной дозы композиции. Распыляемая доза, как правило, составляет от 0.02 мг/кг до 0.6 мг/кг. Например, распыленная доза может составлять от 0.2 мг/кг до 0.6 мг/кг. Например, настоящее изобретение обеспечивает жидкую фармацевтическую композицию, как определено в настоящей заявке, для применения для лечения человека или животного, где концентрация RPL554 в плазме крови больше или равна 1 нг/мл за время, большее или равное четырем часам после введения распыленной дозы от 0.2 мг/кг до 0.6 мг/кг посредством ингаляции распыленной композиции согласно настоящему изобретению. Концентрация RPL554 в плазме крови, как правило, больше или равна 1 нг/мл за время, большее или равное трем, четырем или пяти часам после введения распыленной дозы композиции.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения или профилактики заболевания или состояния, как определено в настоящей заявке, у субъекта, причем способ включает введение указанному субъекту эффективного количества жидкой фармацевтической композиции, как определено в настоящей заявке. Как правило, способ предназначен для лечения заболевания или состояния. Заболевание или состояние, как правило, выбирается из астмы, аллергической астмы, сенной лихорадки, аллергического ринита, бронхита, эмфиземы, бронхоэктаза, хронического обструктивного заболевания легких (COPD), синдрома расстройства дыхания у взрослых (ARDS), стероид-устойчивой астмы, тяжелой астмы, детской астмы, кистозного фиброза, фиброза легких, легочного фиброза, интерстициальной легочной болезни, кожных заболеваний, атопического дерматита, псориаза, воспаления глаз, церебральной ишемии, воспалительных заболеваний и аутоиммунных заболеваний. Предпочтительно способ включает лечение астмы или хронического обструктивного заболевания легких (COPD), более предпочтительно COPD.
Эффективное количество RPL554, как правило, составляет от около 0.01 мг/кг до 50 мг/кг для однократной дозы. Эффективное количество RPL554 часто составляет от около 0.01 мг/кг до 1 мг/кг для однократной дозы. Например, эффективным количеством может быть доза от около 0.1 мг до около 500 мг, или от около 0.1 мг до 100 мг, предпочтительно от около 0.1 мг до около 6 мг. Эффективное количество может составлять от 0.1 мг до 12 мг. Однократная доза RPL554 может составлять от 0.5 мг до 3 мг, например около 1.5 мг. Доза может вводиться ежедневно. Например, доза RPL554 может составлять от 0.01 мг/кг/день до 50 мг/кг/день, как правило, от 0.01 мг/кг/день до 10 мг/кг/день или от 0.01 мг/кг/день до 1 мг/кг/день. Эти дозы, как правило, представляют собой номинальную дозу, выделяемую ингалятором. Жидкая фармацевтическая композиция может вводиться один, два или три раза в день или может вводиться дважды, три раза, четыре или пять раз в неделю. Композицию можно вводить так часто, как этого требуется пациенту.
Эффективным количеством может быть доза от около 0.1 мг до около 500 мг, или от около 0.1 мг до 100 мг, предпочтительно от около 0.5 мг до около 6 мг. Эффективное количество может составлять от 0.1 мг до 12 мг. Однократная доза RPL554 может составлять от 0.5 мг до 24 мг, что может вводиться путем распыления. Однократная доза RPL554 может составлять от 0.5 мг до 6 мг, например около 1.5 мг. Дозы можно вводить один, два или три раза в день. Например, доза RPL554 может составлять от 0.1 мг/день до 50 мг/день, как правило, от 1.5 мг/день до 18 мг/день. Эти дозы обычно представляют собой номинальную дозу, испускаемую ингалятором. Жидкая фармацевтическая композиция может вводиться один, два или три раза в день или может вводиться дважды, три раза, четыре или пять раз в неделю. Композицию можно вводить так часто, как этого требуется пациенту.
В настоящем изобретении неожиданно было обнаружено, что композиция в виде RPL554 суспензии позволяет вводить пациенту более высокие дозы RPL554 без сопутствующего увеличения сердечно-сосудистой патологии. Таким образом, жидкая фармацевтическая композиция подходит для применения для лечения пациентов, страдающих сердечно-сосудистыми заболеваниями или подверженных риску сердечно-сосудистых заболеваний.
Например, композиция может применяться для лечения заболевания или состояния, как определено выше, у пациента, страдающего сердечно-сосудистой уязвимостью. Пациенты, страдающие сердечно-сосудистой уязвимостью, как правило, подвержены повышенному риску неблагоприятных событий, связанных с тахикардией или гипертонией. Более конкретно, пациентами, страдающими сердечно-сосудистой уязвимостью, являются страдающие от ранее существующего состояния сердца или состояния, которое усугубляется тахикардией или гипертонией. К таким пациентам относятся страдающие ишемической болезнью сердца, кардиомиопатией, гипертонией, гипертонической болезнью сердца, сердечной недостаточностью, аритмией, сердечной дисритмией, эндокардитом, миокардитом, клапанной болезнью сердца и инсультом. Также включены пациенты, перенесшие сердечный приступ.
Настоящее изобретение далее описывается более подробно с помощью следующих примеров.
Примеры
Пример 1 - состав и стабильность композиции RPL554 в виде суспензии
Жидкие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению получили с составами, приведенными в Таблицах 1 и 2 далее.
Анализ основного вещества провели дважды. Ключевые параметры способа были следующими:
• подвижная фаза : ацетонитрил : вода : ТFА (45:55:0.1);
• колонка: Waters X-Bridge phenyl, 3.5 мкм, 150×4.6 мм;
• скорость потока: 1.5 мл/мин;
• объем инъекции: 10 мкл;
• обнаружение: УФ при 254 нм;
• время выполнения: 6 минут; и
• образец и стандартная концентрация: 0.1 мг/мл.
Вариант 1а хранили при условиях либо (i) температура 25°C и относительная влажность (RH) 60%, либо (ii) температура 40°C и RH 75%. Внешний вид, pH, основное вещество, примеси и распределение частиц по размеру (PSD) измерили первоначально, в момент времени 1 месяц, 2 месяца и 6 месяцев (6 месяцев только для условий 25°C и RH 60%). Количество примесей измерили посредством ВЭЖХ при относительном времени удерживания (RRT) указанных примесей.
Результаты показаны в Таблицах 3 и 4 далее.
Вариант 1b хранили при условиях либо (i) температура 25°C и относительная влажность (RH) 60%, либо (ii) температура 40°C и RH 75%. Внешний вид, pH, примеси и распределение частиц по размеру (PSD) измерили первоначально, в момент времени 1 месяц и 2 месяца. Количество примесей измерили посредством ВЭЖХ при относительном времени удерживания (RRT) указанных примесей.
Результаты показаны в Таблицах 5 и 6 далее.
Как можно видеть из Таблиц 3-6, жидкая фармацевтическая композиция согласно настоящему состоянию демонстрирует отличную долгосрочную стабильность без существенных изменений pH или количества присутствующих примесей. Эта стабильность наблюдается даже через 2 месяца при 40°C.
Сравнительный пример 1 - состав и стабильность композиции RPL554 в виде раствора
Аналогичный тест на стабильность был проведен для композиции RPL554 в виде раствора. Раствор 1,0 мкл/мл RPL554 в водном растворе цитрат-фосфатного буфера при значении pH около 3,2 выдерживали в условиях температуры 25°C и относительной влажности (RH) 60% в течение шести месяцев. Внешний вид, pH, основное вещество и присутствующие примеси измерены первоначально и через 6 месяцев. Результаты показаны в Таблице 7 далее.
Хотя во внешнем виде раствора нет изменений, наблюдается значительное увеличение количества примеси при значении RRT 0,87. Эта примесь была идентифицирована как продукт гидролиза RPL554. Раствор RPL554 менее стабилен, чем композиция в виде суспензии согласно настоящему изобретению.
Пример 2 - распределение частиц по размеру
Распределение частиц по размеру образца микронизированного RPL554, подходящего для использования в распыляемых составах, оценивали с использованием лазерной дифракции. Распределение частиц по размеру проводили методом лазерной дифракции с использованием Malvern Spraytec в сочетании с влажной дисперсионной ячейкой.
Результаты являются следующими: Dv10=0.69 мкм; Dv50=1.35 мкм; Dv90=2.5 мкм.
Пример 3 - композиции
Композиции RPL554 в виде суспензии и раствора получили следующим образом. Эти композиции применялись в Примерах 4-6.
Способ получения (Суспензия)
Буферный раствор RPL554: Требуемое количество эксципиентов среды взвешивали в подходящем контейнере и доводили до необходимого объема водой для инъекции. Эксципиенты магнитно перемешивали в течение 10 минут до полного растворения буферных солей. РН измеряли, регистрировали и при необходимости доводили до pH 7,0±0,3 с помощью HCl/NaOH и фильтровали через фильтр 0,22 мкм.
Смачивающий раствор RPL554: Требуемое количество полисорбата 20 взвешивали в подходящем контейнере, и требуемое количество сорбитан монолаурата добавили. Смачивающий раствор магнитно перемешивали в течение 10 минут, затем перенесли в более большой контейнер с буферным раствором и довели до конечного объема с помощью буферного раствора. Раствор магнитно перемешивали в течение 10 минут и фильтровали через фильтр 0,22 мкм.
Среда: Требуемый объем смачивающего раствора RPL554 измерили в подходящем контейнере и довели до конечного объема с помощью буферного раствора RPL554, перемешали с помощью магнитной мешалки в течение 10 минут. Значение pH измеряли, регистрировали и при необходимости доводили до pH 7,0±0,3 с помощью HCl/NaOH.
Суспензия 20 мг/мл RPL554: Необходимое количество RPL554 взвешивают в небольшом стакане и добавляют необходимое количество смачивающего раствора. Суспензию смешивали, используя смеситель Silverson, снабженный 5/8''-дюймовым экраном с высокой прозрачностью, в течение около 1 минуты при 8000 об/мин. Смесь переносили в новый чистый сухой химический стакан, промытый буферным раствором. Необходимую массу получили с помощью буферного раствора и смешали с применением смесителя Silverson, оборудованного 1-дюймовым экраном с высокой прозрачностью в течение около 1 минуты при 8000 об/мин. Значение pH измеряли, регистрировали и при необходимости доводили до pH 7,0±0,3 с использованием HCl/NaOH. Раствор переносили в конечный контейнер.
Для более низких концентраций суспензий RPL554, требуемое количество 20 мг/мл композиции взвесили и разбавили до необходимого объема средой, применяя шприц, оборудованный фильтром 0.22 мкм. Композицию осторожно перемешивали на магнитной мешалке в течение 5 минут.
Композиция Раствор RPL554 1 мг/мл (pH 3.5)
Способ получения (Раствор)
0.1М Раствор лимонной кислоты RPL554: Необходимое количество получения лимонной кислоты взвесили в подходящем контейнере, довели до требуемого объема с помощью 0.9% физиологического раствора и магнитно перемешали до полного растворения.
0.2М Раствор двухосновного фосфата натрия RPL554: Необходимое количество двухосновного безводного фосфата натрия взвесили в подходящем контейнере, довели до требуемого объема с помощью 0.9% физиологического раствора и магнитно перемешали до полного растворения.
Среда: Требуемый объем раствора лимонной кислоты, раствора двухосновного фосфата натрия и 0.9% физиологического раствора измерили в подходящем контейнере и тщательно смешали. Значение pH измерили и при необходимости урегулировали (pH 3.5 (±0.3) или pH 2.5 (±0.2)) посредством добавления по каплям еще лимонной кислоты или раствора фосфата натрия, как требуется.
Раствор RPL554: Требуемое количество тестируемого вещества взвесили в подходящем контейнере, довели до конечного объема с помощью среды и магнитно перемешивали до полного растворения. Значение pH измерили и при необходимости урегулировали.
Пример 4 - Токсикокинетический профиль у крыс
Сущность
Крысам Han Wistar (5/пол/группа) вводили дозы посредством только назальной ингаляции один раз ежедневно при целевых дозах 2.4, 8.4 или 21.6 мг/кг/день суспензии RPL554 согласно настоящему изобретению в течение 7 последовательных дней (группы 2, 3 и 4). Еще 5 крыс/пол/группа получали суспензию среды и действовали в качестве контролей (группа 1). Продолжительность введения дозы составляла 240 минут на каждый день. В конце периода лечения все выжившие животные подвергались эвтаназии и вскрытию. Сопутствующим животным (3/пол/группа) подобным образом вводили дозы, и кровь на день 7 подвергли токсикокинетическому анализу. Дополнительной группе сопутствующих животных (3/пол) вводили дозы путем только назальной ингаляции один раз ежедневно при целевой дозе 2.4 мг/кг/день раствора RPL554 для сравнения со суспензией RPL554, и кровь на день 7 подвергли токсикокинетическому анализу (группа 5). Среднее значение аэрозольных концентраций и достигнутые дозы представлены в Таблице 8 далее.
Токсикокинетические результаты
Токсикокинетический профиль суспензии RPL554 измерялся при разных дозах (группы 2, 3 и 4). Это сравнивали с токсикокинетическим профилем известного раствор RPL554 (группа 5). Дозы, вводимые в группу 2 и группу 5, одинаковы. Группа 1 является контрольной группой.
max
max
max
8ч
Токсикокинетические параметры RPL554 в форме суспензии (согласно изобретению) или раствора (сравнительной) оценивали на 7-й день 1-й недели ежедневного ингаляционного воздействия композиций RPL554 на крыс. Результаты показаны в таблицах 10 и 11 ниже. Измеряемые параметры - максимальная концентрация RPL554 в плазме крови крыс (С), время, необходимое для достижения С (Т), и площадь под кривой дозы через 8 часов (AUC).
max
max
max
Эти результаты показывают, что можно достичь значительно более высоких значений С, используя жидкую фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению (например, группы 3 и 4) по сравнению с композицией в виде раствора (группа 5). Ограниченная доза растворимости из раствора RPL554 предотвращает достижение таких значений С с композицией в виде раствора. Композиции в виде суспензии, как также показано, имеют замедленное высвобождение, с более высокими значениями Т, наблюдаемыми для групп 2-4.
Пример 5 - Токсикокинетический профиль у собак
Токсикокинетический профиль суспензий RPL554 согласно настоящему изобретению оценили для собак породы бигля. Модель исследования представлена в Таблице 12 далее.
* Аэрозольная концентрация, вычисленная исходя из предполагаемой продолжительности воздействия 120 минут и массы тела 12 кг
Животным вводили тестируемое вещество, RPL554, посредством ингаляции в течение 3 дней при каждой дозе в фазе с изменяющейся дозой (Фаза 1) с периодом вымывания не менее 2 дней между дозами. В фазе постоянной дозы (фаза 2) животные получали тестируемое вещество в течение 7 последовательных дней. В перекрестной фазе (фаза 3), животные получали тестируемое вещество в виде однократного воздействия композицией в виде суспензии, за чем следует два дня без введения дозы, за чем следует однократное воздействие сравнительной концентрацией в виде раствора.
Токсикокинетические результаты
max
6ч
Через 7 дней дозировок при 9.82 мг/кг/день суспензии RPL554 (группа 2), значения С для самцов и самок составляли 116 нг/мл и 95.9 нг/мл, соответственно, и значения AUС для самцов и самок составляли 389 нг.ч/мл и 289 нг.ч/мл, соответственно.
max
6ч
После однократного воздействия суспензией RPL554 при 0.395 мг/кг, значения С для самцов и самок составляли 13.4 нг/мл и 12.7 нг/мл, соответственно, и значения AUC для самцов и самок составляли 33.9 нг.ч/мл и 31.5 нг.ч/мл, соответственно.
max
6h
После однократного воздействия раствором RPL554 при 0.543 мг/кг, значения С для самцов и самок составляли 40.9 нг/мл и 34.2 нг/мл, соответственно, и значения AUC для самцов и самок составляли 74.6 нг.ч/мл и 62.8 нг.ч/мл, соответственно.
max
Наблюдается, что можно достичь высоких значений С и AUC с использованием суспензии RPL554 согласно настоящему мнению (например, 116 нг/мл и 95.9 нг/мл).
Токсикокинетические результаты также подтверждают, что композиция в виде суспензии дает замедленное высвобождение по сравнению с композицией в виде раствора. Это можно видеть из данных эксперимента фазы 3 (отдельные однократные дозы композиции в виде суспензии). Эти данные представлены в таблице 13 ниже, где композиция в виде раствора (целевая доза 0.5 мг/кг/день, точная 0.543 мг/кг/день) сравнивается с композицией в виде суспензии (целевая доза 0.5 мг/кг/день, точная 0.395 мг/мг/день). Таблица 13 показывает концентрации в плазме (нг/мл) с течением времени после обработки однократной дозой суспензией или однократной дозой раствора. Две обработки проводились с разницей в два дня. Представлены данные для всех трех собак: одна собака мужского пола (61) и две собаки женского пола (62 и 64). BLQ относится к плазменным концентрациям менее 1.00 нг/мл.
Данные таблицы 13 показывают, что композиция в виде суспензии RPL554 приводит к более замедленному профилю высвобождения, чем композиция в виде раствора RPL554. Например, концентрация RPL554 в плазме ниже обнаруживаемого порога через 4 часа после ингаляции композиции в виде раствора для всех собак, тогда как по меньшей мере 1.4 нг/мл RPL554 присутствует через 4 часа в плазме крови для всех собак после ингаляции суспензии.
Пример 6 - легочная функция у морских свинок
Введение
RPL554 вызывает бронхопротекцию против внутривенно введенных спазмогенных агентов при введении в виде сухого порошка или при приготовлении в виде раствора в подкисленном физиологическом растворе (pH 2,5). Этот функциональный антагонизм (1,5 двойных разведение, т.е. в 2,8 раза) против метахолина также был проверен у людей, страдающих астматическими нарушениями (Franciosi et al., 2013). Эта примерная оценка бронхопротекции, обеспечиваемой RPL554, когда он представлен в виде новый композиции в виде суспензии для распыления.
Методология
Воздействие лекарственного средства
Самцов морских свинок Dunkin Hartley (300-400 г) помещали в специально созданную аэрозольную камеру и подвергали воздействию либо среды (0,9% физиологический раствор, pH 2,5), либо RPL554 (раствор 2,5 мг/мл), либо RPL554 (раствор 1 мг/мл) в течение 15 мин. Аэрозоли генерировали с использованием ультразвукового распылителя (Ultraneb 99), а скорость потока 1 л/мин использовали для направления распыленного раствора в аэрозольную камеру, которая содержала 4 рамки, что позволяет удерживать животных с помощью их верхних дыхательных путей (то есть носа), выступающих в аэрозольную камеру.
2
После этого 15-минутного периода воздействия животным позволяли восстанавливаться, а затем до 2 ч и 5 ч после воздействия лекарственного средства анестезировали животных уретаном (1,5 г/кг), и делали срединный разрез, чтобы обнажить трахею. Трахеостомию проводили, и канюлю для трахеи устанавливали на место и прикрепляли к пневмотахографу, который, в свою очередь, соединяли с датчиком давления Validyne (+2 см HO) для обнаружения потока. Изменения дыхания в воздушном потоке измерялись с использованием системы регистрации функции легких (LFR, версия 9, Mumed UK) и отображались в реальном времени на ПК. Сигнал потока был интегрирован, чтобы дать измерение дыхательного объема.
2
2
2
Канюлю вводили в грудную полость между 3-м и 5-м межреберным пространством и соединяли с отрицательной стороной датчика давления Validyne (+20 см НO). Положительная сторона датчика давления была соединена со стороной пневмотахографа, ближайшей к животному, чтобы получить меру транспульмонарного давления (ТРР: разница между давлением во рту и грудным давлением). Параметры легочной функции, полное сопротивление дыхательных путей (RL, см НO.с/л) и динамическая растяжимость легких (мл / см НО) были получены из каждого измерения потока, дыхательного объема и ТРР методом интеграции. Сонную артерию канюлировали для измерения кровяного давления, соответственно. Установлены кумулятивные кривые зависимости эффекта от концентрации провокации (ПК) ацетилхолина, что в совокупности вызывало 50%-ное увеличение RL (РС50).
Воздействие ацетилхолина
Бронхостеноз к ацетилхолину (0.25-16 мг/мл, воздействие в течение 4 с) контролировали через 2 ч и 5 после введения раствора RPL554 (1 и 2.5 мг/мл) или среды (подкисленный физиологический раствор pH 3.5 или pH 2.5). Аэрозоли ацетилхолина были получены с помощью распылителя Aeroneb Lab (Aerogen Inc). Приток направлялся либо с помощью пневмотахографа для измерения дыхательной механики легких, либо отводился через распылитель с целью доставки лекарственного средства непосредственно в легкие (механика дыхания не измерялась в течение 4-х секундного периода воздействия).
В отдельной серии экспериментов легочная функция производилась через 2 и 5 ч после ингаляции новой композиции RPL554 в виде суспензии (2.5 мг/мл и 10 мг/мл) и среды.
Результаты
Основные параметры
Основные параметры: общая легочная резистентность (RL), динамическая растяжимость легких (Cdyn), среднее значение артериального кровяного давления (BP) и выход распылителя измерялись у животных, ранее подвергавшихся контролю среде (физиологический раствор pH 2.5) и композициям RPL554 в виде раствора (1 мг/мл или 2.5 мг/мл, Фиг. 1) и новым композициям RPL554 в виде суспензии (2.5 мг/мл и 10 мг/мл, Фиг. 2). Основные респираторные и сердечно-сосудистые параметры были получены перед воздействием ацетилхолина и контролировались через 2 и 5 ч после воздействия физиологическим раствором или RPL554 у анестезированных морских свинок.
Параметры легочной функции
В общем, RL показывает изменения в диаметре дыхательных путей в центральных дыхательных путях после активации мускариновых рецепторов на гладких мышцах дыхательных путей в этой области легкого. Ацетилхолин был выбран благодаря короткой продолжительности его действия.
1. Композиция RPL554 в виде раствора
Ацетилхолин, вводимый анестезированным морским свинкам ингаляционным путем, вызывал дозозависимый ответ бронхоконстриктора, как определено изменениями RL, измеренными через 2 ч и 5 ч после воздействия физиологического раствора и RPL554 (1 мг/мл, 2,5 мг/мл раствор).
1.1 - Анализ RL РС50 ацетилхолина
Анализ Post hoc арифметического среднего значения продемонстрировал значительную бронхопротекцию в момент времени 2 ч для раствора RPL554 1 мг/мл (среднее значение разности = 3.5 (0.11-8.83) мг/мл, Р=0.0445) и 2.5 мг/мл в момент времени 2 и (4.7 (0.4-9) мг/мл, Р=0.0357) и в момент времени 5 ч (3.4 (0.9-6) мг/мл, Р=0.0133). Степень бронхопротекции менее выражена в момент времени 5 ч для 1 мг/мл раствора RPL554 (2.5 (-0.17-5.2) мг/мл, P=0.0628).
Наблюдалось достоверное различие между 2 ч (1 мг/мл RPL554, P=0.0190 без корректировки) и 5 ч (2.5 мг/мл, P=0.0095 без корректировки) для раствора RPL554 по сравнению с группой физиологического раствора (Фиг. 1).
2. Новая композиция RPL554 в виде суспензии
Ацетилхолин, вводимый анестезированным морским свинкам ингаляционным путем, вызывал дозозависимый бронхостеноз, определяемый изменениями RL, измеренными через 2 ч и 5 ч после введения физиологического раствора и суспензии RPL554 (2,5 мг/мл и 10 мг/мл). Дозозависимое снижение исходной растяжимости легкого (Cdyn) также регистрировалось одновременно с увеличением концентраций ацетилхолина через 2 ч и через 5 ч после воздействия физиологическим раствором или суспензией RPL554 (2,5 мг/мл и 10 мг/мл).
2.1 - Анализ RL РС50 ацетилхолина
Анализ расхождения log2 трансформированных данных для RL РС50 ацетилхолина показал общий эффект лекарственного средства в момент времени 2 ч (P=0.0238). Для 2-часовой группы это отразилось в значительной разнице между 10 мг/мл суспензией RPL554 и группой среды (Среднее значение разницы складки = 2,67 (1,12-6,36), P<0,05). Несмотря на большую разницу среднего значения между RPL554 (10 мг/мл суспензия) по сравнению со средой в момент времени 5 ч при 14-ти кратном сдвиге (0.5-400), большой доверительный интервал является причиной того, почему статистическая разница не была достигнута (Фиг. 2, верхняя панель).
Данные для среды для моментов времени 2 и 5 ч были объединены и проанализированы (Фиг. 2, нижняя панель). Был отмечен общий значительный лечебный эффект (P=0.0016), который был выражен значительной степенью бронхопротекции с 2.5 мг/мл суспензией RPL554 (2.52 раз (1-5.72), P<0.05 и 10 мг/мл RPL554 (4.67 раз (2-11), Р<0.05). В момент времени 5 ч, RPL554 10 мг/мл суспензия вызывала значительную степень бронхопротекции (2.77 раз (1.3-6.0) (Фиг. 2, нижняя панель).
В общем
RPL554 ингибировал бронхостеноз, индуцированный аэрозольно введенным ацетилхолином, при измерении через 2 и 5 ч после воздействия лекарственного средства. Как композиции RPL554 в виде раствора (1 мг/мл, 2.5 мг/мл), так и новые композиции RPL554 в виде суспензии (2.5 мг/мл, 10 мг/мл) вызывали статистически значимую бронхопротекцию.
Пример 7 - Фармакокинетические исследования у людей
Была проведена фаза I рандомизированного двойного слепого плацебо-контролируемого исследования для оценки безопасности, переносимости и фармакокинетики однократных ингаляционных доз композиции RPL554 в виде суспензии согласно настоящему изобретению, вводимой распылителем здоровым мужчинам в возрасте от 18 до 50 включительно.
Номинальная доза композиции в виде суспензии составляла около 1.5 мг, что по существу эквивалентной дозе 0.018 мг/кг, которая ранее была показана хорошо переносимой в клинических исследованиях с композицией в виде раствора.
В качестве композиции в виде суспензии использовали стерильную суспензию для распыления, содержащую 1,5 мг микронизированного лекарственного вещества RPL554 в 5 мл фосфат-буферизованного физиологического раствора при pH 7 с поверхностно-активными веществами (Tween 20 и Span 20) (как описано в Примере 1 выше, но с другой концентрацией RPL554). Дозирование суспензии осуществляли с использованием стандартного струйного распылителя (PARI LC Sprint).
Образцы крови (по 4 мл в каждый момент времени) собирались через соответствующие интервалы времени после введения. Образцы собирали путем венепункции или с помощью канюли в предплечье в литиевые гепариновые трубки и немедленно охлаждали (ледяная ванна). Кровь центрифугировали в течение 15 минут после сбора. Плазму отделяли в охлаждаемой центрифуге (около 4°C) при 1100g в течение 15 минут и переносили в полипропиленовые пробирки. Затем измеряли концентрацию активного вещества.
Результаты в виде средних значений представлены на Фиг. 3, которая показывает кривые средних значений концентрации для субъектов после введения композиции в виде раствора или композиции в виде суспензии. Результаты для композиции в виде раствора были получены из предыдущего клинического исследования (The Lancet Respiratory Medicine Volume 1, No.9, p. 714-727, November 2013), в котором использовали стерильный раствор для распыления, содержащий RPL554, растворенный в цитрат-фосфат буферизованном физиологическом растворе при pH 3.2. Количество, вводимое растворителем, было таким, что номинальная доза RPL554 составляла 0.018 мг/кг (~1.26 мг для 70 кг субъекта).
Среднее значение фармакокинетических параметров, измеренных во время исследования, представлено в таблице 14 ниже.
Значения в таблице 14 показывают, что композиция в виде суспензии согласно настоящему изобретению обладает значительно улучшенным фармакокинетическим профилем по сравнению со сравнительной композицией в виде раствора. В частности, площадь под кривой (AUC) и период полуразложения значительно увеличены. Это демонстрирует, что композиция в виде суспензии обеспечивает неожиданно улучшенный путь, посредством которого RPL554 может вводиться путем ингаляции.
Пример 8 - исследование стабильности за двенадцать месяцев
Три партии композиции в виде суспензии согласно настоящему изобретению получили с составами, представленными в Таблице 15, приведенной далее.
Аналитическое тестирование
Аналитическое тестирование проводили после хранения композиций в течение 1, 3, 6 и 12 месяцев при 25°C и 60% RH. Результаты для 12 месяцев описаны далее.
Внешний вид
Тестирование внешнего вида осуществили визуально на одном образце, проводилось визуально на одном образце. Было обнаружено, что образец плацебо представляет собой прозрачный бесцветный раствор. Образцы с концентрацией 0.5 мг/мл представляли собой суспензию светло-желтого цвета, не содержащую видимых агломератов, тогда как образцы с концентрацией 2.5 мг/мл и 10 мг/мл представляли собой суспензии желтого цвета, не содержащие видимых агломератов.
pH
Значение pH определили на одном образце. Результаты показаны в Таблице 16.
Было установлено, что все три активные концентрации и плацебо имеют значение pH, равное 6.7, в момент времени, равный двенадцати месяцам. С начального момента времени никаких изменений не наблюдалось.
Анализ на содержание основного вещества
Анализ на содержание основного вещества осуществили дважды. Ключевыми параметрами способа являются следующие:
Результаты анализа показаны в Таблице 17.
Результаты анализа для активных суспензий каждой концентрации в момент времени, равный двенадцати месяцем, не показывают никаких изменений с начальной точки времени.
Сопутствующие вещества
Определение сопутствующих веществ осуществляли дважды. Ключевыми параметрами способа являются следующие.
Результаты определения связанных веществ суспензий представлены в Таблице 18.
Таблица 18 - Результаты анализа связанных веществ для суспензий RPL554 (в виде %LC)
Партия BN011/14 - (0.5 мг/мл) - 25°C/60%RH
Партия BN010/14- (2.5 мг/мл) - 25°C/60%RH
Партия BN009/14 - (10 мг/мл) - 25°C/60%RH
Результаты для связанных веществ для активных суспензий каждой концентрации в момент времени, равный двенадцати месяцам, подобны начальной точке времени
Распределение частиц по размеру (PSD)
Способ определения распределения частиц по размеру осуществили, применяя Spraytec, с параметрами, приведенными далее.
Оптические свойства: частица: RI (реальная): 1.50 (стандартная непрозрачная частица); RI (воображаемая): 0.50; плотность: 1.00; диспергирующее средство (вода); RI диспергирующего средства: 1.33
Диспергирующее средство, применяемое для анализа образца: 1% полисорбат 20 в деионизированной воде
Параметры блока командоаппарата: скорость мешалки 1000 оборотов в минуту
Время измерения: время взятия образца: 30 с; перерыв: 10 с
Результаты показаны в Таблице 19.
Профили распределения частиц по размеру были подобны для всех 3 концентраций в момент времени, равный двенадцати месяцам, и не показали значительных изменений по сравнению с начальной точкой времени.
Микроскопическая оценка
Микроскопическую оценку проводили путем визуальной оценки композиций с использованием микроскопа G3. Агрегаты не наблюдались ни в одной из тестируемых партий, хотя иногда наблюдались некоторые крупные рыхлые агломераты для суспензий 2,5 мг/мл и 10 мг/мл. Оценка показала, что не было изменений по сравнению с первоначальной временной точкой.
Скорость доставки и общая доставляемая доза

Скорость доставки и общую доставляемую дозу определили на 3 ампулах на партию. Суспензии дозировались и доставляли с помощью комбинации распылителя PARI LC PLUS / компрессора PARI TurboBOY S. Результаты измерения скорости доставки и общей доставляемой дозы представлены в Таблице 20.
Таблица 20 - Результаты определения скорости доставки и общей доставляемой дозы с применением распылителя PARI LC PLUS
Партия BN011/14 0.5 мг/мл
Партия BNO10/14 2.5 мг/мл
Партия BN009/14 10 мг/мл
*оценка означает общую доставку
эффективность в % означает общую точную доставленную дозу/теоретическую доставленную дозу (вычислено, применяя доставленную массу и концентрацию композиции из анализа)
Общая доставляемая доза и скорость доставки для всех концентраций были подобны начальному моменту времени. Эффективность доставки всех суспензий соответствовала предыдущим моментам времени.
Аэродинамическое распределение частиц по размеру (APSD)

Определение аэродинамического распределения частиц по размеру (APSD) проводилось на трех ампулах на партию в условиях применения Next Generation Impactor (NGI). Суспензии дозировали и доставляли, применяя комбинацию распылителя PARI LC PLUS / компрессора PARI TurboBOY S. Результаты определения APSD приведены в Таблице 21. Результаты были внесены в программу CITDAS (версия 3.10) для вычисления дозы тонкодисперсных частиц с использованием порогового значения 5 мкм, и результаты, полученные на основании вычислений, также представлены в Таблице 21.
Таблица 21 - Результаты определения аэродинамического распределения частиц по размеру посредством NGI (в виде мг RPL554), применяя распылитель PARI LC PLUS
Партия BN011/14 - (0.5 мг/мл) 25°C/60%RH
Партия BN010/14 - (2.5 мг/мл) 25°C/60%RH
Партия BN009/14 - (10 мг/мл) 25°C/60%RH
*
- вычислено, применяя CITDAS для неокругленных данных. Аббревиатуры: FPD: доза мелких частиц; FPF: фракция мелких частиц; GSD: геометрическое распределение по размеру; MMAD: масс-медианный аэродинамический диаметр; МОС: коллектор с микроотверстиями.
Стабильность через 12 месяцев
Таблицы 22 (для 0.5 мг/мл), 23 (для 2.5 мг/мл) и 24 (для 10 мг/мл) далее объединяют данные для 12 месяцев, описанные выше, с соответствующими данными для моментов времени 1, 3 и 6 месяцев для композиций RPL554 в виде суспензии согласно настоящему изобретению.
*
(Необходимо отметить: пики примесей, отмеченные знаком  в Таблицах 22, 23 и 24, наблюдались в виде дублета, но ранее наблюдались как единственный пик в первоначальный момент времени. Вероятно, это связано с использованием новой колонки, которая обеспечивает более хорошее разделение, и это, как полагают, не является признаком разложения.)
Суммарно
Суспензии RPL554 для распыления 0.5 мг/мл (BN011/14), 2.5 мг/мл (BN010/14) и 10 мг/мл (BN009/14) и связанное плацебо (BN008/14) были получены и поставлены в условия проверки на стабильность при 25°C/60%RH и протестированы в момент времени 12 месяцев
Результаты показали, что по существу никаких изменений ни в одной из партий, прошедших проверку в 12-ти месячный момент времени, и подтверждено, что суспензия RPL554 для распыления была стабильна в течение 12 месяцев при 25°C/60%RH.
Пример 9 - анализ в течение шести месяцев при ускоренных условиях (40°C/75% RH)
Ускоренные исследования стабильности при 40°C/75% RH также проводились до шести месяцев. Результаты приведены в Таблице 25 (для 0.5 мг/мл), Таблице 26 (для 2.5 мг/мл) и Таблице 27 (для 10 мг/мл).
*
(Как отмечено в Примере 8, пики примесей, отмеченные знаком , наблюдались в виде дублета, но ранее наблюдались как единственный пик в первоначальный момент времени. Вероятно, это связано с использованием новой колонки, которая обеспечивает более хорошее разделение, и это, как полагают, не является признаком разложения.)
Результаты показали, что по существу никаких изменений ни в одной из партий, прошедших тестирование в момент времени 6 месяцев, и подтвердили, что суспензии RPL554 для распыления имеют отличную стабильность, будучи стабильными в течение 6 месяцев при 40°C/75%RH.