Липидный спектр лимфоцитов крови больных ревматоидным артритом

Литература

1. Абрамович С.Г. Хлоридные натриевые минеральные ванны в лечении гипертонической болезни // Сибирский медицинский журнал. - 2000. - №3. -С.9-13.

2. Заславский А.Ю., Маркаров Г.С. Импульсный низкочастотный физиотерапевтический аппарат “ИНФИТА” // Медицинская техника. - 1994. -№5. - С.23-25.

3. Иванов С.Г., Смирнов В.В., Соловьева Ф.В. и др. Магнитотерапия у больных гипертонической болезнью // Тер. архив. - 1990. - Т.62, №9. - С.71-73.

4. Карлов В.А., Куликов Ю.А., Ильина Н.Л. и др. Дисциркуляторная энцефалопатия у больных артериальной гипертензией // Журнал неврологии и психиатрии. - 1997. - №5. - С.15-17.

5. Мусаев А.В., Рахмани С.А., Нуриева Л.Р. Влияние кислородных ванн на состояние больных дисцир-куляторной энцефалопатией // Журнал неврологии и психиатрии. - 1998. - №8. - С.44-46.

6. Рождественская Е.Д. Современные аспекты проблемы гипертонической болезни // Вестник 1 Об

ластной клинической больницы г. Екатеринбурга -2000. - Вып.2, №1. - С.11-17.

7. Сафонова Е.А., Тодосичук Р.Н. Состояние общей и центральной гемодинамики больных гипертонической энцефалопатией в процессе бальнеотерапии // Сульфидная бальнеотерапия в комплексном лечении хронических заболеваний. - Сочи, 1987. -С.85-88.

8. Стрелкова Н.И. Начальные формы сосудистых поражений головного мозга: предотвращение их прогрессирования с помощью методов физической терапии // Вопросы курортол., физиотер. и ЛФК. -1999.-№6.-С.41-42.

9. Чащин Н.Ф. Применение ХНВ и физических тренировок в реабилитации больных ишемической болезнью сердца с экстрасистолией: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - Томск, 1992. - 29 с.

10. Split W., Jagodzinski Z., Lukomski M. Balneologic-zne leczenie zawrotow gtowy i zaburzen rawnowagi // Neurol, i neurochir. Pol. - 1997. - Vol.31, №4. -P.715-725.

© БУЛЫГИН Г.В., КИШИНЕВСКИЙ М.В., БОЛЬШАКОВА Т.Ю., ШКИЛЬ Л.М. -УДК 612.112.94:616.72-002.77

ЛИПИДНЫЙ СПЕКТР ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ

Г.В. Булыгин, М. В. Кишиневский, Т.Ю. Большакова, Л.М. Шкилъ.

Резюме. Проведено изучение липидного спектра Т- и В-лимфоцитов больных ревматоидным артритом в динамике их лечения нестероидными противовоспалительными препаратами. Установлено, что для обострения заболевания характерны изменения липидного состава клеток, отражающие механизмы защиты мембранных структур лимфоцитов от продуктов деградации липидов, образующихся при активации липолиза и перекисного окисления. Регистрируемые изменения липидного спектра лимфоцитов могут являться фактором, ограничивающим их функциональные возможности. После лечения отмечена положительная динамика изученных показателей, однако они не достигают уровня здоровых доноров.

Оптимальное функционирование клеток организма во много зависит от состояния структурных субъединиц клеточных мембран, их взаимодействия и взаимного расположения. В результате перестроек, происходящих в мембранах, могут изменяться практически все их функции, регулирующие жизнедеятельность отдельных органелл и клетки в целом: от активности мембраносвязанных ферментов, проницаемости и транспорта ионов и субстратов до активности генома, способности к размножению. Разнообразие компонентов и образование комплексов между ними обусловливает наличие сложной гетерогенной структурной организации биомембран. Основным структурообразующим компонентом клеточных мембран являются липиды, содержание и соотношение различных фракций которых определяет биофизические свойства мембранных структур, функциональные возможности рецепторного аппарата клеток [5]. По мнению ряда авторов, нарушения

свойств липидного бислоя не только могут возникать при заболевании, но и во многих случаях являются первопричиной развития патологического процесса в клетках, тканях и организме в целом [2,П,15].

Лимфоциты, являясь морфологическим субстратом иммунной системы, участвуют в выполнении многочисленных ее функций. Полифункциональность системы предъявляет к лимфоцитам соответствующие требования, способность к выполнению которых обеспечивается сложными внутриклеточными процессами, отражающими практически весь спектр метаболических реакций, характерных для организма человека. Значительная часть реакций метаболизма в лимфоцитах связана с липидным обменом, а образующиеся при этом различные липиды, используются как в процессах внутриклеточного обмена, так и для поддержания оптимального состояния и обновления клеточных структур. Результаты проведенных к

настоящему времени исследований свидетельствуют о выраженной зависимости между липидным составом мембран лимфоцитов и способностью клеток реагировать на внешние раздражения, участии этих клеток в обеспечении иммунореактивности [1,9,14]. Однако в доступной литературе имеются немногочисленные сведения о роли структурно-функциональных нарушений в мембранах лимфоцитов при развитии патологических состояний [3], практически отсутствует информация об исследованиях, проведенных при аутоиммунных процессах/

Материалы и методы

Нами обследованы 20 женщин, больных ревматоидным артритом (РА) в возрасте 35-50 лет (суставная форма, активность 2-3 степени), длительность заболевания - 5-9 лет. В качестве контрольной группы обследованы 20 практически здоровых женщин того же возраста (не являющихся штатными донорами и, обращавшихся для разовых заборов на станцию переливания крови). Лечение больных РА в стационаре включало в себя применение нестероидных противовоспалительных препаратов; гормональная терапия в этой группе не применялась Обследование проводили при поступлении их в специализированное отделение стационара и через 3 недели после специфического и симптоматического лечения.

Исследовались лимфоциты периферической крови, выделение которых производилось по ме-

тоду A. Boyum [12] на градиенте плотности фи-колл-верографина (1,077 г/см3) Выделенные лимфоциты разделяли на Т- и В-клетки методикой с нейлоновой ватой [4]; чистота взвеси Т-лимфоци-тов при этом составляла до 94% (88,72±4,22%), В-лимфоцитов - до 72% (60,36+3,81 %). Для изучения липидного спектра лимфоцитов использовалась методика тонкослойной хроматографии липидов. Липидные экстракты из лимфоцитов готовили по методу J Folch с соавт. [13], разгонку фракций осуществляли на силуфолевых пластинах UV-254 с последующим проявлением липидов 5%-м раствором фосфорномолибденовой кислоты в 96% этаноле. Для определения размеров пятен фракций липидов пластины сканировали на “Chromoscan-200”. Идентификацию липидных фракций проводили при помощи стандартов фирмы “Sigma” и по относительной подвижности фракций.

Определялись фракции нейтральных липидов и фосфолипидов: суммарные фосфолипиды (ФЛ), холестерин (ХОЛ), свободные жирные кислоты (СЖК), триацилглицериды (ТАГ), эфиры холестерина (ЭХ), лизофосфолипиды (ЛФЛ), фосфати-дилхолин (ФХ), суммарная фракция фосфатиди-линозитола и фосфатидилсерина (ФИ+ФС), фос-фатидилэтаноламин (ФЭА), суммарная фракция кардиолипина и цереброзидов (КЛ+цер.); вычислялись и соотношения некоторых фракций -ХОЛ/ФЛ, СЖК/ТАГ.

Таблица 1.

Содержание липидов различных фракций (%>%>) и их соотношения в Т- и В-лимфоцитах здоровых доноров и больных ревматоидным артритом в динамике заболевания (М±т).

Т-лимфоциты В-лимфоциты

Доноры «=20 До лечения «=20 После лечения «=12 Доноры «=20 До лечения «=20 После лечения «=12

ФЛ 27,82±0,97 19,38+0,40

ХОЛ 21,24±0,74 19,57+0,70 21,83+0,79 20,92±0,56 21,78±0,60 21,09±0,84

СЖК 6,71+0,50 13,00+0,48

ТАГ 12,84+0,71 10,97±1,10 10,35±0,37

ЭХ 31,40+0,86 35,70±1,54 (Р1 <0,05) 31,86±1 15 29,34±1,06 35,38±1,87 (Р4<0,01) 29,88±1,35

ЛФЛ 1,10+0,17 7,30+0,66

СФМ 8,10+0,80 13,74±0,65 (Р1 <0,001) 7,81 +0,61 8,53±1,03 10,06±0,85 8,75±1,20

ФХ 32,50+1,62 28,51+1,21 (Р1 <0,001) 30,59+1,89 25,94+1,02 . 26,28+0,77 24,06+0,80

ФИ+ФС 5,67+0,54 7,96+0,93

ФЭА 30,03+1,27 21,26±1,23 (Р1<0,001) 26,52±1,20 (Р1<0,1) 26,88±1,09 24,53+0,78 ‘ (Р4<0,1) 26,95±1,22

ХОЛ/ФЛ 0,77±0,03 1,09±0,06

СЖК/ТАГ 0,54±0,05 1,43±0,26

Примечание: Р1 и Р4 — достоверность различий с соответствующей графой таблицы

Результаты исследований представлены в таблице 1, в которой для двух фракций фосфолипидов (ФИ и ФС) указано их суммарное содержание в связи с тем, что при тонкослойной хроматографии на силуфоле не всегда происходит их достаточно четкое разделение. Однако, учитывая важную роль указанных фосфолипидов в регуляции жизнедеятельности клетки (большинство авторов относят их к так называемым регуляторным), а также близкие биохимические характеристики и место в метаболизме липидов, мы посчитали возможным привести суммарный показатель этих фракций. В то же время нами не включен в таблицу показатель содержания в лимфоцитах кардио-липина и цереброзидов (КЛ+цер.). Это обусловлено тем, что при одномерной хроматографии на КЛ накладывается фракция цереброзидов и раздельный учет их содержания возможен только при последующем дополнительном разделении. Учитывая различное функциональное предназначение указанных липидов и их биохимические свойства, мы не интерпретировали изменения содержания этой суммарной фракции.

Результаты и обсуждение

Установлено, что липидный спектр Т- и В-лимфоцитов больных ревматоидным артритом 2-3 степени активности характеризуется некоторыми особенностями, отличающими его от показателей здоровых женщин контрольной группы

В Т-клетках определяется менее высоким содержание ФЛ (Р<0,001), ФХ (Р<0,05) и ФЭА (Р<0,001) Это сочетается с повышением в них доли СЖК (Р<0,001), ЭХ (Р<0,05), ЛФЛ (Р<0,001) и ФИ+ФС (Р<0,05).

В В-лимфоцитах соотношение объемов различных фракций липидов было подобным, у больных снижено, по сравнению со здоровыми, количество в клетках ФЛ (Р<0,001) и недостоверно - ФЭА (Р<0,1), повышено же содержание СЖК (Р<0,01), ЭХ (Р<0,01) и ЛФЛ (Р<0,001).

Изменения липидного спектра Т- и В-лимфо-цитов, наблюдаемые в динамике заболевания -после проведения 3-недельного курса лечения, заключались в том, что значительная часть показателей приближалась к уровню, отмечаемому у женщин контрольной группы: как в Т-, так и в В-клетках увеличивался объем ФЛ, ФХ, ФЭА и снижалось содержание СЖК, ЭХ, ЛФЛ (табл.1). Однако следует отметить, что такие из показателей, как ФЛ, СЖК и ЛФЛ, несмотря на тенденцию к их "нормализации", и при достижении улучшения состояния больных после лечения достоверно отличались по своей величине от контрольной группы.

По результатам проведенного исследования можно заключить, что для лимфоцитов больных ревматоидным артритом характерен интенсивный липидный обмен, сопровождающийся деградацией фосфолипидов за счет активации реакций пе-рекисного окисления (ПОЛ) и липолиза, способных к взаимной индукции. Об интенсификации указанных процессов в Т- и В-лимфоцитах боль-

ных свидетельствует высокое содержание в них продуктов ПОЛ - лизофосфолипидов, которые являются сильным детергентом и, накапливаясь в мембранах, изменяют их фазовое состояние, снижают стабильность клеток и могут приводить в итоге к их гибели. Наряду с увеличением ЛФЛ происходит также повышение в лимфоцитах СЖК и увеличение, по сравнению с показателями лимфоцитов доноров, соотношения СЖК/ТАГ, подтверждающее наличие смещения реакций липидного метаболизма в сторону липолиза. Эта активация липолитических процессов не только оказывает повреждающее действие на клеточные структуры, но и уменьшает снабжение внутриклеточных процессов субстратами метаболизма, так как известно, что высокое содержание СЖК ограничивает поступление в них глюкозы.

Как защитную реакцию можно расценить увеличение содержания в клетках суммарного холестерина (ХОЛ+ЭХ), который наравне с фосфолипидами играет важнейшую роль в организации мембранных структур клеток. Холестерин определяет электрический потенциал, текучесть, проницаемость и другие биофизические параметры мембран, обеспечивает необходимую стабильность структурам, предохраняя их от продуктов перекисного окисления и от действия ферментов. Однако, как известно, повышение его содержания в мембранах определяет для них высокие возможности защиты от ПОЛ, но в то же время уменьшает их проницаемость, в том числе и за счет уменьшения в структурах доли фосфолипидов [5, 6,8]. Результаты изучения липидного спектра лимфоцитов больных РА подтверждают наличие перераспределения соотношения основных структурных компонентов биомембран - отмечено изменение показателя ХОЛ/ФЛ как в Т-, так и в В-лимфоцитах (Р<0,001).

При повышении активности заболевания параллельно с увеличением холестерина в лимфоцитах больных действуют и другие механизмы защиты - происходит накопление фракции наиболее трудноокисляемого фосфолипида, препятствующего процессам деградации мембран - СФМ, что отмечается одновременно с уменьшением содержания легкоокисляемого фосфолипида - ФЭА. На существование подобных перестроек липидного спектра, определяющих различные функциональные возможности мембранных структур и клеток в целом указывается в сообщениях об изменениях липидного спектра клеток и при других патологических процессах [3,7]. Такого рода изменения липидного спектра клеток способны весьма существенно ограничивать возможности их рецепторного аппарата [10].

У больных с высокой активностью патологического процесса отмечено, что Т- или В-клетки, принадлежащие к популяциям, обеспечивающим функционирование соответственно клеточного или гуморального звеньев иммунной системы, имеют некоторые особенности, обусловленные, вероятно, их различной функциональной нагруз-

кой при этой патологии. В Т-лимфоцитах определяется меньшее, чем в В-клетках, содержание ФЛ и ХОЛ (Р<0,001 и Р<0,05 соответственно), при более высоком соотношении ХОЛ/ФЛ (Р<0,05). Также для Т-лимфоцитов характерны более высокое содержание СЖК и соотношение СЖК/ТАГ (Р<0,001 и Р<0,05 соответственно); в них больше, чем в В-лимфоцитах, ФХ (Р<0,001), но меньше ФЭА (Р<0,001).

После 3-недельного курса лечения отмечены изменения в содержании липидов в лимфоцитах, которые приближали показатели к уровню здоровых лиц. В клетках увеличивалось количество ФЛ и ФЭА, снижались доли СЖК, ЭХ, ЛФЛ, СФМ и соотношение ХОЛ/ФЛ. Указанные изменения липидного спектра в большинстве своем однонаправленны в Т и В-лимфоцитах и близки по своей выраженности.

Таким образом, для лимфоцитов больных ревматоидным артритом в период высокой активности заболевания были характерны изменения липидного спектра, свидетельствующие об активации процессов ПОЛ и гидролиза липидов. Параллельно этому протекали реакции липидного обмена, которые направлены на защиту структурных образований клеток от процессов деградации. Однако “защитные” перестройки липидного спектра одновременно ограничивают функциональные

возможности клеток через изменение вязкости мембран и снижение их реакционной способности и активности клеточных рецепторов. Дополнительное ограничение функции лимфоцитов за счет уменьшения поступления в клетки субстратов для внутриклеточного метаболизма обусловливает и повышение в них СЖК.

Лечение больных ревматоидным артритом указанными выше препаратами позволяет не только получить клинический эффект, но и до определенной степени восстанавливает функциональные возможности Т- и В-лимфоцитов больных. Однако применяемые схемы лечения больных РА не приводят к полному восстановлению функции иммунокомпетентных клеток, так как липидные показатели свидетельствуют, что и при наступлении клинической ремиссии в лимфоцитах сохраняется повышенный, по сравнению со здоровыми, уровень липолитических процессов и ПОЛ, продолжают срабатывать описанные выше механизмы, которые ограничивают функциональные возможности клеток. Полученные данные являются аргументом в пользу того, что лечение больных ревматоидным артритом должно включать в себя иммунокорригирующие препараты, восстанавливающие функцию иммунокомпетентных клеток через нормализацию в них липидного обмена.

LIPID SPECTRUM OF LYMPHOCYTES IN BLOOD OF THE PATIENTS WITH

RHEUMATOID ARTHRITIS

G.V. Buligin, M.V. Kishincvskij, T.U. Bolshakova, L.M. Shilj

(Institute for Medical Problems of the North, Siberian Division,

Russian Academy of Medical Sciences, Krasnoyarsk, Russia, Krasnoyarsk State Medical Academy)

Lipid spectrum of T- and B-lymphocytc were examined in patient with the rheumatoid arthritis during their NAID treatment. Established that changes in lipid structure arc characteristic for manifestation (worsening) of the disease and account for defence mechanisms of lymfocytc membrane constituents against lipid degradation products result from the lypolysis and the lipid peroxidation. Those changes in lymphocyte lipid spectrum may become a factor restricts their functional possibility. Note that the positive dynamics of the examined indices is registered after treatment, but not those as in healthy donors.

Литература

1. Баглаев Т.Н. Исследование мембран лимфоцитов флуоресцентными зондами // Лаб. дело - 1986. -№7. - С.387-392.

2. Владимиров Ю.А. Роль нарушения барьерной и матричной функций липидного слоя биологических мембран в патологии: Актовая речь. - М.: Мед. -1985.- 25 с.

3. Волков B.C., Жухаров JI.C. Особенности липидного состава лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови у больных ишемической болезнью сердца с нормолипидемией // Кардиология. -1983. - №9. - С.97-99.

4. Гаррота Д., Нери Т. Иммунология: Методы исследований / Под ред. А. Лефковитс, Б. Пернис - М.: Мир,- 1983.-С.188-213.

5. Кагава Л. Биомембраны. - М.: Высш. шк. -1983. — 301 с

6. Крылов В.И., Вельтищев Ю.Е., Петрушина А.Д. Липидный обмен у детей - Красноярск, 1985. -128 с.

7. Ландышев Ю.С., Савельева М.В., Бородин Е.А. Фосфолипиды и ферментные системы мембран эритроцитов у больных бронхиальной астмой в Амурской области // Тез докл. межреспубл. симпоз. “Особенности липидного обмена в условиях Сибири и Дальнего Востока с учетом бытовых и пищевых факторов” - Чита, 1987. - С.43.

8. Теппермен Дж., Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринной системы. - М.: Мир. -1989.-656 с.

9. Томилец В.А., Тулуевская Л.М., Подколзин А.А. Экспрессия простагландиновых рецепторов и фос-фолипидный состав мембран лимфоцитов селезенки при первичном иммунном ответе // Тез. докл. Всесоюзн. симпоз по биохимии липидов. - Алма-Ата, 1987-С. 122.

10. Туркина Т.И., Марченко Л.Ф, Извекова В.А. и др. Взаимосвязь экспрессии лимфоцитарных Рс-рецепторов, модифицированных простагландинами и изопротеренолом, с показателями липидного об-