СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УГРОЗЫ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ПЛАЦЕНТЫ ПРИ СНИЖЕНИИ ПИРУВАТА НА ФОНЕ ОБОСТРЕНИЯ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ
METHOD FOR DETERMINING RISK OF PLACENTAL FUNCTIONING AT REDUCED PYRUVATE ACCOMPANYING AGGRAVATED CYTOMEGALOVIRUS INFECTION IN THIRD TRIMESTER OF GESTATION

1. Цель изобретения - разработать способ оценки снижения содержания пирувата в синцитиотрофобласте плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации.
2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке способа, позволяющего выяснить причину снижения в синцитиотрофобласте плаценты содержания пирувата в связи с обострением на третьем триместре гестации цитомегаловирусной инфекции.
3. Раскрытие изобретения
2
2
+
Углеводы, жирные кислоты и аминокислоты окисляются через цикл лимонной кислоты до CO и HO. Прежде чем эти вещества вовлекаются в заключительный этап катаболизма, их углеродная цепь превращается в двухуглеродный фрагмент в форме ацетил-КоА [1,5-7]. В этой форме углеводы, жирные кислоты и аминокислоты включаются в цикл лимонной кислоты [7]. Основным источником в этой цепи превращений в сторону образования ацетил-КоА является пировиноградная кислота (пируват), образующаяся в реакциях катаболизма глюкозы и аминокислот [1, 7]. Превращение пирувата в ацетил-КоА происходит при участии набора ферментов, объединенных под названием пируватдегидрогеназного комплекса. Окислительное декарбоксилирование пирувата происходит в матриксе митохондрий синцитиотрофобласта. Окислительное декарбоксилирование пирувата сопровождается образованием NADH, поставляющим электроны в дыхательную цепь и обеспечивающим синтез 3 молей АТФ на 1 моль пирувата путем окислительного фосфорилирования [4]. Таким образом, пируват в нормальных условиях жизнедеятельности клеток можно рассматривать как основной источник восстановления начального этапа цикла Кребса, поскольку происходит восстановление ацетил-КоА и одновременно формируется основной источник энергии - АТФ. В случае нарушения этого цикла происходит подавление гликолиза и выработка продуктов энергетического обмена, что создает угрозу ферментативной системе в плаценте. Таким образом, оценка характера функционирования пируватной системы приобретает особое значение, поскольку это будет отражаться на функционировании плаценты в целом и создавать угрозу развития плода.
4. Новая техническая задача
Разрабатывается новый способ оценки функционирования плаценты с учетом работы пируватного комплекса в условиях обострения на третьем триместре гестации цитомегаловирусной инфекции, что может отражаться на развитии плода.
5. Оценку работы пируватного комплекса проводили в плаценте при обострении во время гестации герпес-вирусной инфекции (Довжикова И.В.) [2]. В отличие от указанного прототипа в данной работе имеются существенные отличия.
1. Активность пируватного комплекса изучалась при обострении цитомегаловирусной инфекции.
2. Изменения активности пирувата изучались не на 5-6 неделях гестации, а на третьем триметре беременности.
3. Контролем, подтверждающим подавление активности пирувата, послужила оценка его Содержания в гомогенате плаценты.
6. Осуществление изобретения
6.1. Обследовано 22 беременных в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией (ХЦМВИ) в стадии обострения на 25-26 неделях гестации и 15 беременных не болевших ЦМВИ. Диагноз обострения ХЦМВИ устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM к ЦМВ или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а также наличия ДНК ЦМВ. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г. Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекс авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (США) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).
6.2. Статистический анализ и обработку данных проводили с использованием пакета прикладных программ «Statistica v. 6.0» (StatSoft Inc., США). Для определения достоверности различий использовали непарный параметрический критерий Стьюдента. Для определения достоверности различий в случае негауссовых распределений - непараметрические критерии Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни. Критический уровень значимости был принят за 5% (0,05). Данные представлены как среднее арифметическое (M) ± стандартная ошибка среднего арифметического (m).
6.3. Гистохимическая реакция на выявление активности пирувата выполнялась согласно рекомендации Kuwahara, Cogan J. [3].
6.4. Определение содержания пирувата в гомогенате плаценты проводилось по методу Умбрайта [8].
7. Полученные данные
Исследования показали, что при обострении ХЦМВИ на третьем триместре гестации до титра антител к ЦМВ 1:1600 у беременной в гомогенате плаценты содержание пирувата снижалось до 0,015±0,002 ммоль/л (контроль - 0,1 ммоль/л). Одновременно на гистологических срезах после проведение гистохимической реакции, изученной под цифровым микроскопом (Япония), соединенным с компьютером по программе Scion (США) автоматически было отмечено, что содержание пируватдегидрогеназы в плаценте при обострении на третьем триместре гестации цитомегаловирусной инфекции до титра антител к ЦМВ 1:1600 снижалось до 35,0±0,95 усл. ед. (контроль - 85,0±1,2 усл. ед.) (фигура 1, 2). Снижение в синцитиотрофобласте и гомогенате плаценты пирувата при обострении цитомегаловирусной инфекции создается угроза нарушения ферментативной активности в плаценте и развития плода.
На фигуре 1 изображена гистохимическая реакция на пируватдегидрогеназу в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты роженицы. Отмечается снижение активности реакции на пируватдегидрогеназу до 35,0±0,95 усл. ед. Реакция выполнена по методу Kuwahara, Cogan. Увеличение 10×100.
На фигуре 2 изображена гистохимическая реакция на пируватдегидрогеназу в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты роженицы не болевшей на всем протяжении гестации. Реакция выполнена по методу Kuwahara, Cogan. Увеличение 10×100.
Литература
1. Березов Т.Т., Коровин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина. 1998. 704 с.
2. Довжикова И.В. Активность пируватдегидрогеназы в плаценте при беременности, осложненной обострением герпетической инфекции // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2008. Вып. 28. С. 17-20.
3. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М.: Мир. 1969. 624 с.
4. Мари Р. Биохимия человека. М.: Мир. 1993. Т. 1. 384 с.
5. Пустовалова Л.М. Основы биохимии. Ростов-на-Дону: Феникс. 2004. 448 с.
6. Радзинский В.Е., Смалько П.Я. Биохимия плацентарной недостаточности. М.: РУДН. 2001. 273 с.
7. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э. Основы биохимии. М.: Мир. 1981. Т. 1. 534 с.
8. Умбрайт Медицинские лабораторные технологии. Санкт-Петербург: Интермедика. 1999. С. 83.