ГЕТЕРОЦИКЛИЛАМИДОЗАМЕЩЕННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ИМИДАЗОЛА
HETEROCYCLYLAMIDOSUBSTITUTED IMIDAZOLE DERIVATIVES

Настоящее изобретение относится к гетероциклиламидозамещенным производным имидазола и способам их получения, их применению для лечения и/или профилактики заболеваний, равно как и их применению для изготовления лекарственных средств для лечения и/или профилактики заболеваний, в частности для применения в качестве противовирусных средств, в особенности против цитомегаловирусов.
В международной заявке на изобретение WO 99/23091 описаны ароматические гетероциклические соединения в качестве противовоспалительных средств, которые, среди прочего, могут также быть пригодны для лечения вирусных инфекций.
Обладающие противовирусной активностью средства, отличные по своей структуре, присутствуют на рынке. Однако доступные в настоящее время способы терапии с помощью ганцикловира, валганцикловира, фоскарнета и цидофовира связаны с острыми побочными эффектами, например с нейротоксичностью, нейтропенией и тромбоцитопенией. Кроме того, всегда присутствует возможность развития резистентности. Вследствие этого желательны новые средства для эффективной терапии.
Поэтому одной из целей настоящего изобретения является выдвижение новых соединений, обладающих такой же или улучшенной противовирусной активностью, для лечения вирусных инфекционных заболеваний у людей и животных.
Как было неожиданно обнаружено, замещенные производные имидазола, описываемые в настоящем изобретении, обладают высокой противовирусной активностью.
Объектом настоящего изобретения являются соединения формулы
,
в которых
1
R обозначает группу формулы
или ,
где
* обозначает положение, по которому осуществляется связывание с карбонильной группой,
4
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
R обозначает фенил или 5- или 6-членный гетероарил, причем фенил и гетероарил могут быть замещены заместителями в количестве от 1 до 3, каковые заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей галоид, гидроксигруппу, оксогруппу, нитрогруппу, цианогруппу, трифторметил, дифторметил, трифторметоксигруппу, дифторметоксигруппу, монофторметоксигруппу, трифторметилтиогруппу, (С-С)алкил, (С-С)алкоксигруппу, гидроксикарбонильную группу, (С-С)алкоксикарбонильную группу, аминогруппу, (С-С)алкиламиногруппу, аминокарбонильную группу и (С-С)алкиламинокарбонильную группу,
5
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
R обозначает фенил или 5- или 6-членный гетероарил, причем фенил и гетероарил могут быть замещены заместителями в количестве от 1 до 3, каковые заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей галоид, гидроксигруппу, оксогруппу, нитрогруппу, цианогруппу, трифторметил, дифторметил, трифторметоксигруппу, дифторметоксигруппу, монофторметоксигруппу, трифторметилтиогруппу, (С-С)алкил, (С-С)алкоксигруппу, гидроксикарбонильную группу, (С-С)алкоксикарбонильную группу, аминогруппу, (С-С)алкиламиногруппу, аминокарбонильную группу и (С-С)алкиламинокарбонильную группу,
6
7
а R и R независимо друг от друга обозначают водород, метил или этил,
2
1
6
3
6
6
10
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
R обозначает (С-С)алкил, причем алкил может быть замещен заместителем, каковой заместитель выбран из группы, включающей (С-С)циклоалкил, (С-С)арил и 5- или 6-членный гетероарил, где циклоалкил, арил и гетероарил могут быть замещены заместителями в количестве от 1 до 3, каковые заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей галоид, гидроксигруппу, оксогруппу, нитрогруппу, цианогруппу, трифторметил, дифторметил, трифторметоксигруппу, дифторметоксигруппу, монофторметоксигруппу, трифторметилтиогруппу, (С-С)алкил, (С-С)алкоксигруппу, гидроксикарбонильную группу, (С-С)алкоксикарбонильную группу, аминогруппу, (C-С)алкиламиногруппу, аминокарбонильную группу и (C-С)алкиламинокарбонильную группу,
3
1
6
1
6
R обозначает фенил, причем фенил может быть замещен заместителями в количестве от 1 до 3, каковые заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей галоид, гидроксигруппу, трифторметил, дифторметил, трифторметоксигруппу, дифторметоксигруппу, монофторметоксигруппу, трифторметилтиогруппу, (С-С)алкил и (С-С)алкоксигруппу, а также их соли, их сольваты и сольваты их солей.
Соединениями по настоящему изобретению являются соединения формулы (I), а также их соли, сольваты и сольваты их солей, соединения, входящие в объем формулы (I) и отвечающие нижеприведенным формулам, а также их соли, сольваты и сольваты их солей, равно как и соединения, входящие в объем формулы (I) и упоминаемые ниже в качестве примеров осуществления настоящего изобретения, а также их соли, сольваты и сольваты их солей, если только упоминаемые ниже и входящие в объем формулы (I) соединения уже не являются солями, сольватами и сольватами солей.
Соединения по настоящему изобретению могут, в зависимости от их строения, существовать в форме стереоизомеров (энантиомеров, диастереомеров). В связи с этим объектом настоящего изобретения являются энантиомеры или диастереомеры и соответствующие их смеси. Стереоизомерно чистые составляющие могут быть выделены из подобных смесей энантиомеров и/или диастереомеров известным образом.
В тех случаях, когда соединения по настоящему изобретению могут существовать в форме таутомеров, настоящее изобретение охватывает все таутомерные формы.
Соли, предпочтительные для целей настоящего изобретения, являются физиологически приемлемыми солями соединений по настоящему изобретению. Однако следует также включить и те соли, которые сами по себе непригодны для фармацевтического применения, но которые могут быть применены, например, для выделения или очистки соединений по настоящему изобретению.
Физиологически приемлемые соли соединений по настоящему изобретению включают кислотно-аддитивные соли неорганических кислот, карбоновых кислот и сульфокислот, например, соли соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфокислоты, этансульфокислоты, толуолсульфокислоты, бензолсульфокислоты, нафталиндисульфокислоты, уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, пропионовой кислоты, молочной кислоты, винной кислоты, яблочной кислоты, лимонной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты и бензойной кислоты.
Физиологически приемлемые соли соединений по настоящему изобретению также включают соли распространенных оснований, такие как, в качестве примера и предпочтительно, соли щелочных металлов (например, соли натрия и калия), соли щелочноземельных металлов (например, соли кальция и магния) и аммонийные соли, являющиеся производными аммиака или органических аминов, содержащих от 1 до 16 атомов углерода, таких как, в качестве примера и предпочтительно, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, этилдиизопропиламин, моноэтаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, дициклогексиламин, диметиламиноэтанол, прокаин, дибензиламин, N-метилморфолин, аргинин, лизин, этилендиамин и N-метилпиперидин.
Термин «сольваты» в соответствии с целями настоящего изобретения относится к тем формам соединений по настоящему изобретению, которые в твердом или жидком состоянии образуют комплекс посредством координации с молекулами растворителя. Гидраты являются особой формой сольватов, в которой имеет место координация с молекулами воды.
Объектом настоящего изобретения также являются пролекарства соединений по настоящему изобретению. Термин «пролекарства» охватывает соединения, которые могут быть биологически активны или неактивны сами по себе, но которые преобразуются в соединения по настоящему изобретению во время своего нахождения в организме (например, в результате метаболизма или гидролиза).
В соответствии с целями настоящего изобретения заместители отвечают нижеприведенным значениям, если иное не оговорено специально.
1
6
Термин «алкил» сам по себе, а также «алк» и «алкил» в алкоксигруппе, алкиламиногруппе, алкоксикарбонильной группе и алкиламинокарбонильной группе обозначает неразветвленный или разветвленный алкильный радикал, включающий в общем случае от 1 до 6 («(С-С)алкил»), предпочтительно, от 1 до 4, особенно предпочтительно, от 1 до 3 атомов углерода в качестве примера и предпочтительно метил, этил, н-пропил, изопропил, трет-бутил, н-пентил и н-гексил.
Термин «алкоксигруппа», в качестве примера и предпочтительно, обозначает метоксигруппу, этоксигруппу, н-пропоксигруппу, изопропоксигруппу, трет-бутоксигруппу, н-пентоксигруппу и н-гексилоксигруппу.
1
3
Термин «алкиламиногруппа» обозначает алкиламинный радикал, включающий один или два алкильных заместителя (выбранных независимо друг от друга), в качестве примера и предпочтительно, метиламиногруппу, этиламиногруппу, н-пропиламиногруппу, изопропиламиногруппу, трет-бутиламиногруппу, н-пентиламиногруппу, н-гексиламиногруппу, N,N-диметиламиногруппу, N,N-диэтиламиногруппу, N-этил-N-метиламиногруппу, N-метил-N-н-пропиламиногруппу, N-изопропил-N-н-пропиламиногруппу, N-трет-бутил-N-метиламиногруппу, N-этил-N-н-пентиламиногруппу и N-н-гексил-N-метиламигогруппу. Термин «(С-С)алкиламиногруппа» обозначает, например, моноалкиламинный радикал, включающий от 1 до 3 атомов углерода или диалкиламинный радикал, включающий от 1 до 3 атомов углерода на каждый алкильный заместитель.
Термин «алкоксикарбонильная группа», в качестве примера и предпочтительно, обозначает метоксикарбонильную группу, этоксикарбонильную группу, н-пропоксикарбонильную группу, изопропоксикарбонильную группу, трет-бутоксикарбонильную группу, н-пентоксикарбонильную группу и н-гексилоксикарбонильную группу.
1
3
Термин «алкиламинокарбонильная группа» обозначает алкиламинокарбонильный радикал, включающий один или два алкильных заместителя (выбранных независимо друг от друга), в качестве примера и предпочтительно, метиламинокарбонильную группу, этиламинокарбонильную группу, н-пропиламинокарбонильную группу, изопропиламинокарбонильную группу, трет-бутиламинокарбонильную группу, н-пентиламинокарбонильную группу, н-гексиламинокарбонильную группу, N,N-диметиламинокарбонильную группу, N,N-диэтиламинокарбонильную группу, N-этил-N-метиламинокарбонильную группу, N-метил-N-н-пропиламинокарбонильную группу, N-изопропил-N-н-пропиламинокарбонильную группу, N-трет-бутил-N-метиламинокарбонильную группу, N-этил-N-н-пентиламинокарбонильную группу и N-н-гексил-N-метиламинокарбонильную группу. Термин «(C-С)алкиламинокарбонильная группа» обозначает, например, моноалкиламинокарбонильный радикал, включающий от 1 до 3 атомов углерода или диалкиламинокарбонильный радикал, включающий от 1 до 3 атомов углерода на каждый алкильный заместитель.
Термин «арил» обозначает моно- или бициклический ароматический карбоциклический радикал, в общем случае включающий от 6 до 10 атомов углерода, в качестве примера и предпочтительно, фенил и нафтил.
В соответствии с целями настоящего изобретения термин «5- или 6-членный гетероарил» в общем случае обозначает ароматический моноциклический радикал, включающий 5 или 6 кольцевых атомов и до 4 гетероатомов из группы, включающей серу, кислород и/или азот. Гетероарильный радикал может быть присоединен по атому углерода или по гетероатому. В качестве примера и предпочтительно, могут быть упомянуты нижеследующие радикалы: тиенил, фурил, пирролил, тиазолил, оксазолил, пиразолил, имидазолил, пиридил, пиримидил и пиридазинил.
Термин «циклоалкил» обозначает циклоалкильную группу, обычно включающую от 3 до 8, предпочтительно, от 3 до 6, атомов углерода, в качестве примера и предпочтительно, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.
Термин «галоид» обозначает фтор, хлор, бром и иод.
В соответствии с целями настоящего изобретения, предпочтение отдается таким соединениям формулы (I), в которых
1
R обозначает группу формулы
,
где
* обозначает положение, по которому осуществляется связывание с карбонильной группой,
4
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
R обозначает фенил или 5- или 6-членный гетероарил, причем фенил и гетероарил могут быть замещены заместителями в количестве от 1 до 3, каковые заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей галоид, гидроксигруппу, оксогруппу, нитрогруппу, цианогруппу, трифторметил, дифторметил, трифторметоксигруппу, дифторметоксигруппу, монофторметоксигруппу, трифторметилтиогруппу, (С-С)алкил, (С-С)алкоксигруппу, гидроксикарбонильную группу, (С-С)алкоксикарбонильную группу, аминогруппу, (С-С)алкиламиногруппу, аминокарбонильную группу и (С-С)алкиламинокарбонильную группу,
2
1
6
3
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
R обозначает (С-С)алкил, причем алкил может быть замещен заместителем, каковой заместитель выбран из группы, включающей (С-С)пиклоалкил и фенил, где циклоалкил и фенил может быть замещен заместителями в количестве от 1 до 3, каковые заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей галоид, гидроксигруппу, оксогруппу, нитрогруппу, цианогруппу, трифторметил, дифторметил, трифторметоксигруппу, дифторметоксигруппу, монофторметоксигруппу, трифторметилтиогруппу, (С-С)алкил, (С-С)алкоксигруппу, гидроксикарбонильную группу (С-С)алкоксикарбонильную группу, аминогруппу, (С-С)алкиламиногруппу, аминокарбонильную группу и (С-С)алкиламинокарбонильную группу,
3
1
6
1
6
R обозначает фенил, причем фенил может быть замещен заместителями в количестве от 1 до 3, каковые заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей галоид, гидроксигруппу, трифторметил, дифторметил, трифторметоксигруппу, дифторметоксигруппу, монофторметоксигруппу, трифторметилтиогруппу, (С-С)алкил и (С-С)алкоксигруппу,
а также их соли, их сольваты и сольваты их солей.
В соответствии с целями настоящего изобретения предпочтение также отдается тем соединениям формулы (I), в которых
1
R обозначает группу формулы
,
где
* обозначает положение, по которому осуществляется связывание с карбонильной группой,
4
1
4
1
4
R обозначает фенил или пиридил, причем фенил и пиридил могут быть замещены заместителями в количестве от 1 до 3, каковые заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей галоид, нитрогруппу, цианогруппу, трифторметил, дифторметил, трифторметоксигруппу, дифторметоксигруппу, монофторметоксигруппу, (С-С)алкил и (С-С)алкоксигруппу,
2
R обозначает метил, этил или н-бутил, причем метил, этил и н-бутил могут быть замещены заместителем, каковой заместитель выбран из группы, включающей циклопропил и фенил, где фенил может быть замещен трифторметильным заместителем,
3
R обозначает фенил, причем фенил может быть замещен заместителями в количестве от 1 до 3, каковые заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей фтор, хлор, трифторметоксигруппу, дифторметоксигруппу, трифторметилтиогруппу и метил,
а также их соли, их сольваты и сольваты их солей.
В соответствии с целями настоящего изобретения предпочтение также отдается тем соединениям формулы (I), в которых
1
R обозначает группу формулы
,
где
* обозначает положение, по которому осуществляется связывание с карбонильной группой, а
4
1
4
1
4
R обозначает фенил или пиридил, причем фенил и пиридил могут быть замещены заместителями в количестве от 1 до 3, каковые заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей галоид, нитрогруппу, цианогруппу, трифторметил, дифторметил, трифторметоксигруппу, дифторметоксигруппу, монофторметоксигруппу, (С-С)алкил и (С-С)алкоксигруппу.
3
В соответствии с целями настоящего изобретения предпочтение также отдается тем соединениям формулы (I), в которых R обозначает фенил, причем фенил может быть замещен заместителями в количестве от 1 до 3, каковые заместители независимо друг от друга выбраны из группы, включающей фтор, хлор, трифторметоксигруппу, дифторметоксигруппу, трифторметилтиогруппу и метил.
Помимо этого, объектом настоящего изобретения является способ получения соединений формулы (I), в соответствии с которым, согласно способу [А], соединения формулы
,
1
2
в которых R и R принимают указанные выше значения, взаимодействуют на первой стадии с агентом-восстановителем, а на второй стадии, в присутствии производного карбоновой кислоты, с соединениями формулы
,
3
в которых R принимает указанные выше значения, или,
согласно способу [Б], соединения формулы (II) взаимодействуют на первой стадии с агентом-восстановителем, а на второй стадии с соединениями формулы
,
3
в которых R принимает указанные выше значения, или,
согласно способу [В], соединения формулы
,
в которых
2
3
R и R принимают указанные выше значения, а
8
R обозначает метил или этил,
взаимодействуют на первой стадии с основанием, а на второй стадии с соединениями формулы
,
1
в которых R принимает указанные выше значения, в присутствии дегидратирующих агентов.
Соединения формул (III), (IV) и (VI) являются известными или могут быть синтезированы известными способами исходя из соответствующих исходных веществ.
Нижеследующее относится к стадии 1 способов [А] и [Б].
Реакцию, как правило, осуществляют в инертных растворителях, предпочтительно, в диапазоне температур от 0°С до температуры кипения растворителя с обратным холодильником при давлении от атмосферного до 3 бар.
Агентами-восстановителями являются, например, палладий на угле и водород, муравьиная кислота/триэтиламин/палладий на угле, цинк, цинк/соляная кислота, железо, железо/соляная кислота, сульфат железа(II)/соляная кислота, сульфид натрия, дисульфид натрия, гидросульфит натрия, полисульфид аммония, боргидрид натрия/хлорид никеля, дихлорид олова, трихлорид титана или никель Ренея и водный раствор гидразина. Предпочтение отдается никелю Ренея и водному раствору гидразина, палладию на угле и водороду или муравьиной кислоте/триэтиламину/палладию на угле.
Инертными растворителями являются, например, простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, метил-трет-бутиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, диоксан, тетрагидрофуран (ТГФ), диметиловый эфир гликоля или диметиловый эфир диэтиленгликоля, спирты, такие как метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол, н-бутанол или трет-бутанол, углеводороды, такие как бензол, ксилол, толуол, гексан, циклогексан или фракции нефти, или другие растворители, такие как диметилформамид, диметилацетамид, ацетонитрил или пиридин, а в тех случаях, когда растворитель смешивается с водой, также и смеси перечисленного с водой. Предпочтительными растворителями являются метанол, этанол, изопропанол или, в случае никеля Ренея и водного раствора гидразина, тетрагидрофуран.
Нижеследующее относится к стадии 2 способа [А].
Реакцию, как правило, осуществляют в инертных растворителях, предпочтительно, в диапазоне температур от комнатной температуры до 40°С при атмосферном давлении.
Производными карбоновых кислот являются, например, N,N-карбонилдиимидазол, фосген, дифосген, трифосген, фениловый эфир хлормуравьиной кислоты или 4-нитрофениловый эфир хлормуравьиной кислоты. Предпочтение отдают N,N-карбонилдиимидазолу.
Инертными растворителями являются, например, галоидированные углеводороды, такие как хлористый метилен, трихлорметан, четыреххлористый углерод, трихлорэтан, тетрахлорэтан, 1,2-дихлорэтан или трихлорэтилен, простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, метил-трет-бутиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, диоксан, тетрагидрофуран, диметиловый эфир гликоля или диметиловый эфир диэтиленгликоля, углеводороды, такие как бензол, ксилол, толуол, гексан, циклогексан или фракции нефти, или другие растворители, такие как этилацетат, ацетон, диметилформамид, диметилацетамид, 2-бутанон, диметилсульфоксид, ацетонитрил или пиридин, а в тех случаях, когда растворитель смешивается с водой, также и смеси перечисленного с водой. Предпочтение отдают диметилсульфоксиду.
Нижеследующее относится к стадии 2 способа [Б].
Реакцию, как правило, осуществляют в инертных растворителях, предпочтительно, в присутствии основания, предпочтительно, в диапазоне температур от комнатной температуры до температуры кипения растворителя с обратным холодильником при атмосферном давлении.
Инертными растворителями являются, например, галоидированные углеводороды, такие как хлористый метилен, трихлорметан, четыреххлористый углерод, трихлорэтан, тетрахлорэтан, 1,2-дихлорэтан или трихлорэтилен, простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, метил-трет-бутиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, диоксан, тетрагидрофуран, диметиловый эфир гликоля или диметиловый эфир диэтиленгликоля, углеводороды, такие как бензол, ксилол, толуол, гексан, циклогексан или фракции нефти, или другие растворители, такие как этилацетат, ацетон, диметилформамид, диметилацетамид, 2-бутанон, диметилсульфоксид, ацетонитрил или пиридин. Предпочтение отдают тетрагидрофурану или хлористому метилену.
Основаниями являются, например, карбонаты щелочных металлов, такие как карбонат цезия, карбонат натрия или карбонат калия, или трет-бутилат калия, или другие основания, такие как гидрид натрия, 1,5-диазабицикло[5.4.0]ундец-5-ен (ДБУ), триэтиламин или диизопропилэтиламин, предпочтительно, триэтиламин.
Нижеследующее относится к стадии 1 способа [В].
Реакцию, как правило, осуществляют в инертных растворителях, предпочтительно, в диапазоне температур от 0°С до температуры кипения растворителя с обратным холодильником при атмосферном давлении.
Основаниями являются, например, гидроксиды щелочных металлов, такие как гидроксид натрия, гидроксид лития или гидроксид калия, или карбонаты щелочных металлов, такие как карбонат цезия, карбонат натрия или карбонат калия, предпочтительно, гидроксид натрия.
Инертными растворителями являются, например, галоидированные углеводороды, такие как хлористый метилен, трихлорметан, четыреххлористый углерод, трихлорэтан, тетрахлорэтан, 1,2-дихлорэтан или трихлорэтилен, простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, метил-трет-бутиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, диоксан, тетрагидрофуран, диметиловый эфир гликоля или диметиловый эфир диэтиленгликоля, спирты, такие как метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол, н-бутанол или трет-бутанол, углеводороды, такие как бензол, ксилол, толуол, гексан, циклогексан или фракции нефти, или другие растворители, такие как диметилформамид, диметилацетамид, диметилсульфоксид, ацетонитрил или пиридин, или смеси растворителей с водой. Предпочтительным растворителем является смесь этанола и воды.
Нижеследующее относится к стадии 2 способа [Б].
Реакцию, как правило, осуществляют в инертных растворителях, в необязательном присутствии основания, предпочтительно, в диапазоне температур от -70°С до 40°С при атмосферном давлении.
Подходящие для этого дегидратирующие агенты включают, например, карбодиимиды, такие как, например, N,N'-диэтил-, N,N'-дипропил-, N,N'-диизопропил-, N,N'-дициклогексилкарбодиимид, гидрохлорид N-(3-диметиламиноизопропил)-N'-этилкарбодиимида (ЭДК), N-циклогексилкарбодиимид-N'-пропилоксиметилполистирол (ПС-карбодиимид), или карбонильные соединения, такие как карбонилдиимидазол, или 1,2-оксазолиевые соединения, такое как 2-этил-5-фенил-1,2-оксазолий-3-сульфат или перхлорат 2-трет-бутил-5-метилизоксазолия, или ациламиносоединения, такие как 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин, или ангидрид пропанфосфокислоты, или изобутиловый эфир хлормуравьиной кислоты, или бис(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфорилхлорид, или гексафторфосфат бензотриазолилокситрис(диметиламино)фосфония, или гексафторфосфат 0-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония (ГБТУ), тетрафторборат 2-(2-оксо-1-(2Н)-пиридил)-1,1,3,3-тетраметилурония (ТПТУ), или гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония (ГАТУ), или 1-гидроксибензотриазол (ГБТ), или гексафторфосфат бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония (БОФ), или смеси вышеперечисленного в сочетании с основаниями.
Основания являются, например, карбонатами щелочных металлов, такими как, например, карбонат натрия или карбонат калия, или гидрокарбонат натрия или гидрокарбонат калия, или органические основания, такие как триалкиламины, например, триэтиламин, N-метилморфолин, N-метилпиперидин, 4-диметиламинопиридин (ДМАП) или диизопропилэтиламин, или ДБУ, 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен (ДБН), пиридин. Предпочтение отдают триэтиламину.
Реакцию конденсации предпочтительно осуществляют с помощью карбонилдиимидазола.
Инертными растворителями являются, например, галоидированные углеводороды, такие как хлористый метилен, трихлорметан, четыреххлористый углерод, трихлорэтан, тетрахлорэтан, 1,2-дихлорэтан или трихлорэтилен, простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, метил-трет-бутиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, диоксан, тетрагидрофуран, диметиловый эфир гликоля или диметиловый эфир диэтиленгликоля, углеводороды, такие как бензол, ксилол, толуол, гексан, циклогексан или фракции нефти, или другие растворители, такие как этилацетат, ацетон, диметилформамид, диметилацетамид, 2-бутанон, диметилсульфоксид, ацетонитрил или пиридин, а в тех случаях, когда растворитель смешивается с водой, также и смеси перечисленного с водой. Предпочтение отдают диметилформамиду.
Соединения формулы (II) являются известными или могут быть получены посредством взаимодействия соединений формулы
,
в которых
2
R принимает указанные выше значения, а
8
R обозначает метил или этил,
на первой стадии с основанием, а на второй стадии с соединениями формулы (VI), в присутствии дегидратирующих агентов.
Реакцию осуществляют таким образом, как это описано в способе [В].
Соединения формулы (VII) являются известными или могут быть получены посредством взаимодействия соединений формулы
,
в которых
2
R принимает указанные выше значения, а
8
R обозначает метил или этил,
с дымящей азотной кислотой, концентрированной азотной кислотой, нитрующей смесью или смесью серной и азотной кислот в других соотношениях, необязательно в уксусном ангидриде в качестве растворителя, предпочтительно, в диапазоне температур от комнатной температуры до 60°С при атмосферном давлении.
Соединения формулы (V) являются известными или могут быть получены посредством взаимодействия соединений формулы (VII) на первой стадии с агентом-восстановителем, а на второй стадии с соединениями формулы (III) в присутствии производного карбоновой кислоты или на второй стадии с соединениями формулы (IV).
Реакцию осуществляют таким образом, как это описано в способах [А] и [Б].
Соединения формул (III), (IV), (VI) и (VIII) являются известными или могут быть получены известными способами исходя из соответствующих исходных веществ.
Схема синтеза 1
ТБТУ - тетрафторборат O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония
Схема синтеза 2
Соединения общей формулы (I) по настоящему изобретению демонстрируют непредвиденный, неожиданный спектр активности. Они обладают противовирусной активностью в отношении представителей группы Herpes viridae (вирусов герпеса), в особенности, в отношении цитомегаловирусов (ЦМВ), в частности, в отношении цитомегаловируса человека (ЦМВ человека). Вследствие этого они пригодны для лечения и профилактики заболеваний, в особенности вирусных инфекций, в частности вышеупомянутых вирусов, и вызываемых ими инфекционных заболеваний. Здесь и далее вирусную инфекцию следует понимать и как заражение вирусом, и как заболевание, вызванное заражением вирусом.
Благодаря некоторым своим свойствам соединения общей формулы (I) могут быть применены для изготовления лекарственных средств, пригодных для профилактики и/или лечения заболеваний, в частности вирусных инфекций.
Областями показаний, которые могут быть упомянуты в качестве примера, являются:
1) Лечение и профилактика инфекций ЦМВ человека у пациентов, больных СПИДом (ретинит, пневмонит, инфекции желудочно-кишечного тракта).
2) Лечение и профилактика инфекций цитомегаловируса у пациентов, перенесших пересадку костного мозга и органов, у которых развиваются зачастую являющиеся угрозой жизни ЦМВ-пневмонит или ЦМВ-энцефалит, а также ЦМВ-инфекции желудочно-кишечного тракта и системные ЦМВ-инфекции.
3) Лечение и профилактика инфекций ЦМВ человека у новорожденных и детей.
4) Лечение острых инфекций ЦМВ человека у беременных женщин.
5) Лечение инфекций ЦМВ человека у пациентов с подавлением иммунного ответа, связанным с раком и терапией рака.
6) Лечение ЦМВ-положительных больных раком с целью подавления развития опухоли, опосредованного ЦМВ человека (сравни J. Cinatl, и др., FEMC Microbiology Reviews 2004, 28, 59-77).
Соединения по настоящему изобретению предпочтительно применяют для изготовления лекарственных средств, пригодных для профилактики и/или лечения инфекций представителей группы Herpes viridae, в частности цитомегаловируса, в особенности цитомегаловируса человека.
В соответствии со своими фармакологическими свойствами соединения по настоящему изобретению могут применяться сами по себе и, если это требуется, также в сочетании с другими активными соединениями, в частности противовирусными активными соединениями, такими как, например, ганцикловир или ацикловир, для лечения и/или профилактики вирусных инфекций, в частности инфекций ЦМВ человека.
Объектом настоящего изобретения также является применение соединений по настоящему изобретению для лечения и/или профилактики заболеваний, предпочтительно, вирусных инфекций, в частности инфекций цитомегаловируса человека (ЦМВ человека) или другого представителя группы Herpes viridae.
Объектом настоящего изобретения также является применение соединений по настоящему изобретению для лечения и/или профилактики заболеваний, в частности заболеваний, упомянутых выше.
Объектом настоящего изобретения также является применение соединений по настоящему изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения и/или профилактики заболеваний, в частности заболеваний, упомянутых выше.
Объектом настоящего изобретения также является способ лечения и/или профилактики заболеваний, в частности заболеваний, упомянутых выше, с помощью эффективного в противовирусном отношении количества соединений по настоящему изобретению.
Соединения по настоящему изобретению могут действовать системно и/или локально. С этой целью они могут быть введены подходящим путем, как-то, например, перорально, парентерально, внутрилегочно, интраназально, сублингвально, лингвально, трансбуккально, перректально, накожно, чрескожно, конъюнктивально или посредством ушного введения, или же в виде имплантата или эндопротеза сосуда.
Для данных путей введения возможно введение соединений по настоящему изобретению в соответствующих лекарственных формах.
Подходящими для перорального введения являются лекарственные формы, которые действуют в соответствии с известным уровнем техники и высвобождают соединения по настоящему изобретению быстро и/или в измененной форме и которые содержат соединения по настоящему изобретению в кристаллической и/или аморфизированной и/или растворенной форме, такие как, например, таблетки (таблетки без покрытия и с покрытием, например, имеющие кишечно-растворимые покрытия или покрытия, растворяющиеся с задержкой или являющиеся нерастворимыми и контролирующие высвобождение соединения по настоящему изобретению), таблетки или пленки/капсулы, которые быстро распадаются в ротовой полости, пленки/лиофилизаты, капсулы (например, твердые или мягкие желатиновые капсулы), таблетки с сахарным покрытием, гранулы, пеллеты, порошки, эмульсии, суспензии, аэрозоли или растворы.
Парентеральное введение может происходить без промежуточной стадии всасывания (например, внутривенно, внутриартериально, внутрисердечно, интраспинально или интраперитонеально) или с участием всасывания (например, внутримышечно, подкожно, внутрикожно, чрескожно или внутрибрюшинно). Лекарственными формами, подходящими для парентерального введения, являются, среди прочего, препараты для инъекций и вливаний в форме растворов, суспензий, эмульсий, лиофилизатов или стерильных порошков.
Примерами, подходящими для других путей введения, являются фармацевтические формы для ингаляции (среди прочего, порошковые и аэрозольные ингаляторы), капли для носа, растворы, спреи, таблетки, пленки/капсулы или капсулы для лингвального, сублингвального или трансбуккального введения, суппозитории, препараты для ушей или глаз, влагалищные капсулы, водные суспензии (лосьоны, взбалтываемые смеси), липофильные суспензии, мази, кремы, чрескожные терапевтические системы, молоко, пасты, пены, пудры, имплантаты или эндопротезы сосудов.
Соединения по настоящему изобретению могут быть преобразованы в указанные лекарственные формы. Это может быть осуществлено способом, который известен сам по себе, посредством смешения с инертными нетоксичными фармацевтически приемлемыми наполнителями. Данные наполнители включают, среди прочего, носители (например, микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, маннит), растворители (например, жидкие полиэтиленгликоли), эмульгаторы и диспергирующие или увлажняющие агенты (например, додецилсульфат натрия, полиоксисорбитанолеат), связующие вещества (например, поливинилпирролидон), синтетические и природные полимеры (например, альбумин), стабилизаторы (например, антиоксиданты, такие как, например, аскорбиновая кислота), красители (например, неорганические пигменты, такие как, например, оксиды железа) и корригенты вкуса и/или запаха.
Объектом настоящего изобретения также являются лекарственные средства, включающие хотя бы одно соединение по настоящему изобретению, обычно совместно с одним или более инертными нетоксичными фармацевтически приемлемыми наполнителями, равно как и их применение в упомянутых выше целях.
Как правило, при внутривенном введении для достижения эффективных результатов показало себя полезным введение количеств приблизительно от 0,001 до 10 мг/кг, предпочтительно, приблизительно от 0,01 до 5 мг/кг массы тела, при пероральном же введении дозировка составляет приблизительно от 0,01 до 25 мг/кг, предпочтительно, от 0,1 до 10 мг/кг массы тела.
Может, тем не менее, оказаться необходимым отклоняться в соответствующих случаях от упомянутых количеств в непосредственной зависимости от массы тела, пути введения, индивидуальной реакции на активное соединение, типа препарата и времени или периода, в течение которого происходит введение. Так, в некоторых случаях может оказаться достаточным применять количество, меньше упомянутого выше минимального, тогда как в других случаях необходимо превысить упомянутый выше максимальный предел. В случае введения больших количеств может быть рекомендовано разделить последние на большое число отдельных доз в течение суток.
Процентные данные в нижеприведенных испытаниях и примерах являются массовыми процентами, если иное не оговорено специально, а доли являются массовыми долями. Соотношения растворителей, разведение и данные о концентрации растворов жидкостей в жидкостях основываются во всех случаях на объемах.
Примеры
Использованные сокращения
водн.
водный
БИНАФ
2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил
CD<sub>3</sub>CN
пердейтероацетонитрил
конц.
концентрированный
ПХИ
прямая химическая ионизация
(в масс-спектрометрии (МС))
ДХМ
хлористый метилен
ДИЭА
N,N-диизопропилэтиламин (основание Хюнига)
разб.
разбавленный
ДМАП
4-N,N-диметиламинопиридин
ДМФ
N,N-диметилформамид
ДМСО
диметилсульфоксид
ЭА
этилацетат
ЭДКИ×HCl
гидрохлорид
N'-(3-диметиламинопропил)-N-этилкарбодиимида
ЭУ
ионизация электронным ударом (в масс-спектрометрии)
ИРЭП
ионизация распылением в электрическом поле
(в масс-спектрометрии)
прим.
пример
ч.
час
ГАТУ
гексафторфосфат O-
(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония
ГБТУ
гексафторфосфат
O(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония
ВЭЖХ
высокоэффективная жидкостная хроматография
ЖХ-МС
жидкостная хроматография в сочетании
с масс-спектрометрией
ЛДА
диизопропиламид лития
лит.
литературные данные (ссылка)
t<sub>пл.</sub>
температура плавления
МС
масс-спектрометрия
ЯМР
спектроскопия ядерного магнитного резонанса
ОФ-ВЭЖХ
обращенно-фазовая ВЭЖХ
КТ
комнатная температура
R<sub>t</sub>
время удерживания (в ВЭЖХ)
насыщ.
насыщенный
р-р
раствор
ТБТУ
тетрафторборат O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-
тетраметилурония
ТГФ
тетрагидрофуран
ТСХ
тонкослойная хроматография
Методики ВЭЖХ и ЖХ-МС
Методика 1 (ЖХ-МС): Прибор: Micromass Platform LCZ с ВЭЖХ-хроматографом Agilent series 1100, колонка: Thermo HyPURITY Aquastar 3µ 50 мм × 2,1 мм, элюент А: 1 л воды + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, элюент Б: 1 л ацетонитрила +0,5 мл 50% муравьиной кислоты, градиент: 0,0 мин - 100% А → 0,2 мин - 100% А → 2,9 мин - 30% А → 3,1 мин - 10% А → 5,5 мин - 10% А, нагреватель: 50°С, скорость элюирования: 0,8 мл/мин, УФ-детекция: 210 нм.
Методика 2 (ЖХ-МС): Прибор: Micromass Quattro LCZ с ВЭЖХ-хроматографом Agilent series 1100, колонка: Phenomenex Synergi 2µ Hydro-RP Mercury 20 мм × 4 мм, элюент А: 1 л воды + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, элюент Б: 1 л ацетонитрила + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, градиент: 0,0 мин - 90% А → 2,5 мин - 30% А → 3,0 мин - 5% А → 4,5 мин - 5% А, скорость элюирования: 0,0 мин - 1 мл/мин, 2,5 мин/3,0 мин/4,5 мин - 2 мл/мин, нагреватель: 50°С, УФ-детекция: 208-400 нм.
Методика 3 (ЖХ-МС): Прибор: Micromass Platform LCZ с ВЭЖХ-хроматографом Agilent series 1100, колонка: Phenomenex Synergi 2µ Hydro-RP Mercury 20 мм × 4 мм, элюент А: 1 л воды + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, элюент Б: 1 л ацетонитрила + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, градиент: 0,0 мин - 90% А → 2,5 мин - 30% А → 3,0 мин - 5% А → 4,5 мин - 5% А, скорость элюирования: 0,0 мин - 1 мл/мин, 2,5 мин/3,0 мин/4,5 мин - 2 мл/мин, нагреватель: 50°С, УФ-детекция: 210 нм.
Методика 4 (ЖХ-МС): Тип масс-спектрометра: Micromass ZQ, тип хроматографа ВЭЖХ: Waters Alliance 2795, колонка: Phenomenex Synergi 2µ Hydro-RP Mercury 20 мм × 4 мм, элюент А: 1 л воды + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, элюент Б: 1 л ацетонитрила + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, градиент: 0,0 мин - 90% А → 2,5 мин - 30% А → 3,0 мин - 5% А → 4,5 мин - 5% А, скорость элюирования: 0,0 мин - 1 мл/мин, 2,5 мин/3,0 мин/4,5 мин - 2 мл/мин, нагреватель: 50°С, УФ-детекция: 210 нм.
Методика 5 (ЖХ-МС): Тип масс-спектрометра: Micromass ZQ, тип хроматографа ВЭЖХ: HP 1100 series, УФ-детектор с диодной матрицей, колонка: Phenomenex Synergi 2µ Hydro-RP Mercury 20 мм × 4 мм, элюент А: 1 л воды + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, элюент Б: 1 л ацетонитрила + 0,5 мл 50% муравьиной кислоты, градиент: 0,0 мин - 90% А → 2,5 мин - 30% А → 3,0 мин - 5% А → 4,5 мин - 5% А, скорость элюирования: 0,0 мин - 1 мл/мин, 2,5 мин/3,0 мин/4,5 мин - 2 мл/мин, нагреватель: 50°С, УФ-детекция: 210 нм.
Методика 6 (ЖХ-МС): Тип масс-спектрометра: Micromass ZQ, тип хроматографа ВЭЖХ: HP 1100 series, УФ-детектор с диодной матрицей, колонка: Grom-Sil 120 ODS-4 HE 50 мм × 2 мм, 3,0 мкм, элюент А: вода + 500 мкл 50% муравьиной кислоты на литр, элюент Б: ацетонитрил + 500 мкл 50% муравьиной кислоты на литр, градиент: 0,0 мин - 0% Б → 2,9 мин - 70% Б → 3,1 мин - 90% Б → 4,5 мин - 90% Б, нагреватель: 50°С, скорость элюирования: 0,8 мл/мин, УФ-детекция: 210 нм.
Методика 7 (ЖХ-МС): Тип масс-спектрометра: Micromass ZQ, тип хроматографа ВЭЖХ: Waters Alliance 2795, колонка: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e 50 мм × 4,6 мм, элюент А: вода + 500 мкл 50% муравьиной кислоты на литр, элюент Б: ацетонитрил + 500 мкл 50% муравьиной кислоты на литр, градиент: 0,0 мин - 10% Б → 3,0 мин - 95% Б → 4,0 мин - 95% Б, нагреватель: 35°С, скорость элюирования: 0,0 мин - 1,0 мл/мин → 3,0 мин - 3,0 мл/мин → 4,0 мин - 3,0 мл/мин, УФ-детекция: 210 нм.
Методика 8 (ЖХ-МС): Прибор: Micromass Quattro LCZ, с ВЭЖХ-хроматографом Agilent series 1100, колонка: Grom-SIL120 ODS-4 HE, 50 мм × 2,0 мм, 3 мкм, элюент А: 1 л воды + 1 мл 50% муравьиной кислоты, элюент Б: 1 л ацетонитрила + 1 мл 50% муравьиной кислоты, градиент: 0,0 мин - 100% А → 0,2 мин - 100% А → 2,9 мин - 30% А → 3,1 мин - 10% А → 4,5 мин - 10% А, нагреватель: 55°С, скорость элюирования: 0,8 мл/мин, УФ-детекция: 208-400 нм.
Методика 9 (газовая хроматография - масс-спектрометрия (ГХ-МО):
Прибор: Micromass GCT, GC6890, колонка: Restek RTX-35MS, 30 м × 250 мкм × 0,25 мкм, постоянная скорость потока гелия: 0,88 мл/мин., нагреватель: 60°С, температура ввода: 250°С, градиент: 60°С (поддерживается в течение 0,30 мин), 50°С/мин → 120°С, 16°С/мин → 250°С, 30°С/мин → 300°С (поддерживается в течение 1,7 мин).
Методика 10 (аналитическая ВЭЖХ): колонка: Kromasil 100 RP-18, 60 мм × 2,1 мм, 3,5 мкм, элюент А: вода+0,5% хлорной кислоты (70%), элюент Б: ацетонитрил, градиент: 0 мин - 2% Б, 0,5 мин - 2% Б, 4,5 мин - 90% Б, 9 мин - 90% Б, 9,2 мин - 2% Б, 10 мин - 2% Б, скорость элюирования: 0,75 мл/мин, температура колонки: 30°С, детекция: УФ, 210 нм.
Исходные соединения
Пример 1А
Этиловый эфир 1-бензил-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты
148 г (936 ммолей) 1-бензил-1Н-имидазола суспендируют в 480 мл ацетонитрила и добавляют при температуре -20°С 120 мл (87,1 г, 860 ммолей) триэтиламина. Затем в течение 15 минут добавляют по каплям 211,2 мл (239 г, 2208 ммолей) этилового эфира хлормуравьиной кислоты. Реакционную смесь перемешивают при температуре -20°с в течение 10 минут. После нагревания до температуры от 15 до 20°С реакционную смесь перемешивают в течение 18 часов, а затем концентрируют под вакуумом. К остатку добавляют воду, насыщенный раствор хлорида натрия и насыщенный раствор гидрокарбоната натрия и троекратно экстрагируют смесь этилацетатом. Объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором хлорида натрия и после высушивания над сульфатом магния концентрируют под вакуумом. Остаток подвергают фракционной перегонке под высоким вакуумом (температура плавления от 173 до 181°С, давление от 1,7 до 1,2 мбар).
Выход: 122,6 г (46% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 4): R=1,71 мин.
+
+
МС (ИРЭП в режиме положительных ионов (ИРЭП)): m/z=231 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=7,6 (s, 1H), 7,4-7,1 (m, 6H), 5,2 (s, 2H), 4,25 (q, 2H), 1,25 (tr, 3Н) м.д.
Пример 2А
Этиловый эфир имидазол-2-карбоновой кислоты
34,7 г (150,9 ммоля) этилового эфира 1-бензил-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты растворяют в 1005 мл этанола и добавляют 34 г формиата аммония. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником около 6 часов. После этого добавляют малыми порциями 8 г 10% палладия на угле и 18 г формиата аммония. После охлаждения катализатор отфильтровывают и концентрируют фильтрат под вакуумом. Продукт, кристаллизующийся в ходе данной операции, растирают с 80 мл льда с водой и собирают посредством фильтрования на вакуум-фильтре.
Выход: 15,9 г (75% от теоретического).
+
+
МС (ИРЭП): m/z=141 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-d): δ=13,3 (s ушир., 1H), 7,4 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 4,3 (q, 2H), 1,3 (tr, 3Н) м.д.
Пример 3А
Этиловый эфир 4-нитро-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты
16,08 г (114,7 ммоля) охлаждаемого льдом этилового эфира имидазол-2-карбоновой кислоты растворяют в 71,7 мл концентрированной серной кислоты. Затем добавляют по каплям 71,7 мл 100% дымящей азотной кислоты. Реакционный раствор перемешивают при температуре от 50 до 60°С в течение 3 часов, а затем, после перемешивания, выливают в 800 мл смеси льда с водой. Выпавшие в осадок кристаллы собирают посредством фильтрования на вакуум-фильтре и промывают 1500 мл льда с водой.
Выход: 15 г (70% от теоретического).
+
+
МС (ИРЭП): m/z=186 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=14,5 (s ушир., 1H), 8,5 (s, 1H), 4,4 (q, 2H), 1,35 (tr, 3Н), м.д.
Пример 4А
4-({[(4-Хлор-2-метилфенил)амино]карбонил}амино)-1-(циклопропилметил)-1Н-имидазол-2-карбоновая кислота
Стадия 1
Этиловый эфир 1-(циклопропилметил)-4-нитро-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты
15 г (81 ммолей) этилового эфира 4-нитро-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты перемешивают в атмосфере аргона с 13,13 г (97,2 ммоля) циклопропилметилбромида и 22,4 г (162 ммолей) карбоната калия в 165 мл ДМФ при температуре 80°С в течение 1 часа. После охлаждения реакционную смесь разбавляют водой и четырехкратно экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фазы однократно промывают водой и троекратно насыщенным раствором хлорида натрия, высушивают с помощью сульфата магния и концентрируют под вакуумом. Кристаллический остаток непосредственно используют далее для следующей реакции.
Выход: 17,59 г (70% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 2): R=2,02 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=240 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=8,2 (s, 1H), 4,4 (q, 2H), 4,3 (d, 2H), 1,4 (m, 4H), 0,55 (q, 2H), 0,45 (q, 2H) м.д.
Стадия 2
Этиловый эфир 4-амино-1-(циклопропилметил)-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты
3,89 г (16,26 ммоля) этилового эфира 1-(циклопропилметил)-4-нитро-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты растворяют в 50 мл ТГФ и добавляют никель Ренея на кончике шпателя. Реакционную смесь гидрируют водородом в аппарате для гидрирования при комнатной температуре. Затем катализатор отфильтровывают и концентрируют фильтрат под вакуумом. Остаток после концентрирования непосредственно используют далее для следующей реакции.
Выход: 3,46 г (100% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 3): R=1,21 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=210 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=6,55 (s, 1H), 4,55 (s, 2H), 4,2 (q, 2H), 4,1 (d, 2H), 1,25 (tr, 3Н), 1,2 (m, 1H), 0,5 (q, 2H), 0,3 (q, 2H) м.д.
Стадия 3
Этиловый эфир 4-({[(4-хлор-2-метилфенил)амино]карбонил}амино)-1-(циклопропилметил)-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты
6 г (35,8 ммоля) 4-хлор-2-метилфенилизоцианата добавляют в атмосфере аргона к 7,49 г (35,8 ммоля) этилового эфира 4-амино-1-(циклопропилметил)-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты в 18 мл ТГФ и перемешивают смесь при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрируют под вакуумом, растирают кристаллизующийся из смеси продукт с 40 мл этилацетата и собирают его посредством фильтрования на вакуум-фильтре.
Выход: 11,1 г (82% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 2): R=2,66 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=376 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=9,45 (s, 1H), 8,0 (d, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,3 (d, 1H), 7,2 (dd, 1H), 4,3 (q, 2H), 4,25 (d, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,3 (tr, 3H), 1,25 (m, 1H), 0,55 (q, 2H), 0,35 (q, 2H) м.д.
Стадия 4
4-({[(4-Хлор-2-метилфенил)амино]карбонил}амино)-1-(циклопропилметил)-1Н-имидазол-2-карбоновая кислота
10,6 г (28,1 ммоля) этилового эфира 4-({[(4-хлор-2-метилфенил)амино]-карбонил}амино)-1-(циклопропилметил)-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты суспендируют в 158 мл этанола. При охлаждении льдом добавляют 16,4 мл воды и 6 мл (112 ммолей) 50% водного раствора гидроксида натрия. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, а затем концентрируют под вакуумом. Остаток переводят в 100 мл изопропанола и добавляют при охлаждении льдом 100 мл 1н. соляной кислоты. Кристаллы собирают посредством фильтрования на вакуум-фильтре и высушивают при температуре 40°С под вакуумом.
Выход: 9,85 г (100% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 4): R=1,74 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=349 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ=9,4 (s, 1H), 8,0 (d, 1H), 7,3 (s, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,2 (dd, 1H), 4,25 (d, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,25 (m, 1H), 0,55 (q, 2H), 0,35 (q, 2H) м.д.
Пример 5А
1-(Циклопропилметил)-4-[({[4-(трифторметокси)фенил]амино}карбонил)-амино]-1Н-имидазол-2-карбоновая кислота
Получение осуществляют по аналогии с примером 4А.
Выход: 10,2 г (93% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 4): R=1,87 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=385 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ=8,6 (s, 1H), 8,4 (s, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,4 (s, 1H), 7,25 (d, 2H), 4,25 (d, 2H), 1,25 (m, 1H), 0,55 (q, 2H), 0,35 (q, 2H) м.д.
Пример 6А
1-Бутил-4-({[(4-хлор-2-метилфенил)амино]карбонил}амино)-1Н-имидазол-2-карбоновая кислота
Получение осуществляют по аналогии с примером 4А.
Выход: 2,2 г (93% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 4): R=1,83 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=351 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=9,35 (s, 1H), 8,0 (d, 1H), 7,3 (s, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,2 (dd, 1H), 4,35 (tr, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,7 (квинтет, 2Н), 1,25 (секстет, 2H), 0,9 (tr, 3H) м.д.
Пример 7А
1-Бутил-4-[({[4-(трифторметокси)фенил]амино}карбонил)амино]-1Н-имидазол-2-карбоновая кислота
Получение осуществляют по аналогии с примером 4А.
Выход: 2,05 г (96% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 4): R=1,96 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=387 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=9,0 (s, 1H), 8,9 (s, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,3 (s, 1H), 7,25 (d, 1H), 4,35 (tr, 2H), 1,7 (квинтет, 2H), 1,25 (секстет, 2H), 0,9 (tr, 3Н) м.д.
Пример 8А
4-[({[4-(Трифторметокси)фенил]амино}карбонил)амино]-1-[4-(трифторметил)бензил]-1Н-имидазол-2-карбоновая кислота
Получение осуществляют по аналогии с примером 4А.
Выход: 15,2 г (100% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 2): R=2,46 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=489 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=9,15 (s, 1H), 9,05 (s, 1H), 7,75 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,45 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,25 (d, 2H), 5,7 (s, 2H) м.д.
Пример 9А
4-({[(4-Хлор-2-метилфенил)амино]карбонил}амино)-1-[4-(трифторметил)бензил]-1Н-имидазол-2-карбоновая кислота
Получение осуществляют по аналогии с примером 4А.
Выход: 15,6 г (100% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 4): R=2,23 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=453 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=9,5 (s, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,75 (d, 2H), 7,4 (d, 2H), 7,35 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,15 (d, 1H), 5,75 (s, 2H), 2,25 (s, 3Н) м.д.
Пример 10А
Этиловый эфир 1-метил-4-нитро-1H-имидазол-2-карбоновой кислоты
6,80 г (36,7 ммоля) этилового эфира 4-нитро-1H-имидазол-2-карбоновой кислоты растворяют в 140 мл ацетона и добавляют 11,2 г (80,8 ммоля) карбоната калия и 4,57 мл (73,5 ммоля) метилиодида. После этого смесь перемешивают при температуре 60°С в течение 4 часов. Согласно данным ТСХ (циклогексан/этилацетат 2:1) происходит полное превращение исходного вещества. После охлаждения смесь фильтруют, остаток промывают хлористым метиленом и высвобождают фильтрат из растворителя. Получаемое таким образом твердое вещество высушивают под вакуумом.
Выход: 7,0 г (95% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 5): R=1,40 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=200 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ=8,64 (s, 1H), 4,35 (q, 2H), 3,99 (s, 3Н), 1,34 (t,3H).
Пример 11А
Этиловый эфир 4-амино-1-метил-1H-имидазол-2-карбоновой кислоты
0,50 г (2,5 ммоля) этилового эфира 1-метил-4-нитро-1H-имидазол-2-карбоновой кислоты растворяют в 7,5 мл этанола, добавляют 0,13 г (0,13 ммоля) палладия на угле (10%) и гидрируют смесь при давлении 3 бар в течение 12 часов. После этого реакционный раствор фильтруют через кизельгур и концентрируют фильтрат. Остаток высушивают под вакуумом и подвергают дальнейшим взаимодействиям без дополнительной очистки.
Выход: 0,42 г (99% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 1): R=1,59 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=170 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ=6,47 (s, 1H), 4,55 (ушир. s, 2H), 4,19 (q, 2Н), 3,80 (s, 3H), 1,28 (t, 3Н).
Пример 12А
Этиловый эфир 1-метил-4-[({[4-(трифторметокси)фенил]амино}карбонил)-амино]-1H-имидазол-2-карбоновой кислоты
1,46 г (7,21 ммоля) 4-(трифторметокси)фенилизоцианата добавляют в атмосфере аргона к 1,22 г (3,61 ммоля) этилового эфира 4-амино-1-метил-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты (получаемого по аналогии со стадией 3 примера 4А или также в соответствии с Tetrahedron Lett. 2003, 44, 1607 и цитируемой там литературой) в 50 мл ТГФ и перемешивают смесь при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь фильтруют, концентрируют фильтрат под вакуумом и подвергают его хроматографической очистке.
Выход: 860 мг (62% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 5): R=2,41 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=373 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=8,98 (ушир. s, 2H), 7,55 (m, 2H), 7,36 (s, 1H), 7,29 (m, 2H), 4,28 (q, 2H), 3,91 (s, 3H), 1,30 (t, 3H).
Пример 13А
1-Метил-4-[({[4-(трифторметокси)фенил]амино}карбонил)амино]-1H-имидазол-2-карбоновая кислота
835 мг (2,13 ммоля) этилового эфира 1-метил-4-[({[4-(трифторметокси)-фенил]амино}карбонил)амино]-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты суспендируют в 5 мл этанола и 12 мл тетрагидрофурана. Добавляют при охлаждении льдом 2 мл (25 ммолей) 50% водного раствора гидроксида натрия. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, а затем подкисляют при охлаждении льдом 1н. соляной кислотой. Раствор экстрагируют хлористым метиленом. Органическую фазу концентрируют под вакуумом. Остаток очищают с помощью препаративной ВЭЖХ.
Выход: 346 мг (44% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 4): R=1,62 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=345 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ=9,33 (ушир. s, 1H), 8,98 (ушир. s, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,28 (m, 2H), 3,90 (s, 3H),
Пример 14А
1-(5-Метилпиридин-2-ил)пиперазин
Стадия 1
1-(трет-Бутоксикарбонил)-4-(5-метилпиридин-2-ил)пиперазин
2,50 г (19,6 ммоля) 2-метил-5-хлорпиридина и 4,38 г (23,5 ммоля) N-(трет-бутоксикарбонил)пиперазина растворяют в атмосфере аргона в 50 мл абсолютированного толуола. Затем добавляют 2,26 г (23,5 ммоля) трет-бутилата натрия, 0,37 г (0,59 ммоля) БИНАФ и 0,36 г (0,39 ммоля) трис(дибензилиденацетон)дипалладия и нагревают смесь при температуре 70°С в течение 12 часов. После охлаждения к реакционной смеси добавляют диэтиловый эфир, смесь троекратно промывают насыщенным раствором хлорида натрия, высушивают над сульфатом натрия и отгоняют растворитель под вакуумом. Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии (циклогексан/этилацетат 9:1).
Выход: 5,27 г (97% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 4): R=1,26 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=278 [М+Н]
1
3
Н-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ=8,02 (d, 1H), 7,34 (dd, 1H), 6,59 (d, 1H), 3,55 (m, 4H), 3,45 (m, 4H), 2,21 (s, 3H), 1,49 (s, 9H).
Стадия 2
1-(5-Метилпиридин-2-ил)пиперазин
3,47 г (12,5 ммоля) 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-(5-метилпиридин-2-ил)пиперазина растворяют в 10 мл диоксана и добавляют 31 мл (125 ммолей) хлористого водорода в диоксане (четырехмолярный раствор). Смесь перемешивают при КТ в течение 2 часов. Затем смесь концентрируют, остаток подщелачивают с помощью 1М водного раствора гидроксида натрия и несколько раз экстрагируют его хлористым метиленом. Объединенные органические фазы высушивают над сульфатом натрия, концентрируют и высушивают под вакуумом.
Выход: 2,18 г (98% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 5): R=0,38 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=177 [M+H]
1
3
H-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ=8,02 (d, 1H), 7,32 (dd, 1H), 6,59 (d, 1H), 3,45 (m, 4H), 3,00 (m, 4H), 2,20 (s, 3H).
Пример 15А
1-Этил-4-[({[4-(трифторметокси)фенил]амино}карбонил)амино]-1H-имидазол-2-карбоновая кислота
Получение осуществляют по аналогии с примером 13А.
Выход: 425 мг (91% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 5): R=1,94 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=359 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=10,3 (ушир. s, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,24 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 4,45 (q, 2H), 1,33 (t, 3Н).
Пример 16А
1-Бутил-4-[({[4-(трифторметил)фенил]амино}карбонил)амино]-1Н-имидазол-2-карбоновая кислота
Получение осуществляют по аналогии с примером 13А.
Выход: 1,71 г (90% от теоретического)
t
ЖХ-МС (методика 2): R=2,13 мин
+
+
МС (ИРЭП): m/z=371 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=9,30 (ушир. s, 1H), 9,03 (ушир. s, 1H), 7,64 (m, 4H), 7,36 (s, 1H), 4,35 (t, 2Н), 1,68 (квинтет, 2Н), 1,26 (секстет, 2Н), 0,89 (t, 3Н).
Пример 17А
1-(5-Фторпиридин-2-ил)пиперазин
500 мг (2,84 ммоля) 2-бром-5-фторпиридина и 1,22 г (14,2 ммоля) пиперазина нагревают при перемешивании при температуре 150°С в течение 24 часов. После охлаждения избыток пиперазина отгоняют под вакуумом (трубка с шаровым расширением (kugelrohr), 1,5 мбар, 120°С). Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии (хлористый метилен/этанол/концентрированный раствор аммиака, 30:1:0,1).
Выход: 267 мг (52% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 9): R=8,07 мин.
+
МС (ПХИ): m/z=182 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ=8,07 (d, 1H), 7,48 (td, 1H), 6,82 (dd, 1H), 3,32 (t, 4H), 2,78 (t, 4H).
Пример 18А
1-(5-Бромпиридин-2-ил)пиперазин
Получение осуществляют по аналогии с примером 17А.
Выход: 827 мг (81% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 1): R=2,02 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=242 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=8,15 (d, 1H), 7,65 (dd, 1H), 6,79 (d, 1H), 3,38 (m, 4H), 2,74 (m, 4H).
Пример 19А
1-(5-Метоксипиридин-2-ил)пиперазин
Получение осуществляют по аналогии с примером 14А.
Выход: 91 мг (90% от теоретического).
1
3
Н-ЯМР (400 МГц, CDCl): δ=7,94 (d, 1Н), 7,15 (dd, 1H), 6,64 (d, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,48 (m, 4H), 3,00 (m, 4H).
Пример 20А
4-[({[4-(Дифторметокси)фенил]амино}карбонил)амино]-1-метил-1Н-имидазол-2-карбоновая кислота
Получение осуществляют по аналогии с примером 13А.
Выход: 964 мг (81% от теоретического).
t
ВЭЖХ (методика 10): R=3,57 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=327 [М+H]
1
3
Н-ЯМР (400 МГц, CDCl): δ=8,9 (s, 1H), 8,8 (s, 1H), 7,5 (d, 2Н), 7,3 (s, 2Н), 7,1 (t, 1H), 7,09 (d, 2H), 3,9 (s, 3H).
Пример 21А
1-[(1-Этил-4-нитро-1H-имидазол-2-ил)карбонил]-4-(пиридин-2-ил)пиперазин
Смесь 1,23 г (5,06 ммоля) этилового эфира 1-этил-4-нитро-1Н-имидазол-2-карбоновой кислоты (получаемого по аналогии с примером 10А) и 2,48 г (15,2 ммоля) N-(пиридин-2-ил)пиперазина перемешивают при температуре 100°С в течение ночи. В качестве окончательной обработки получаемую таким образом неочищенную смесь очищают с помощью препаративной ВЭЖХ. Получают 0,724 г (43% от теоретического выхода) продукта.
t
ВЭЖХ (методика 10): R=3,19 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=331 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=8,7 (s, 1Н), 8,1 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 6,9 (d, 1H), 6,65 (dd, 1H), 4,2 (q, 2H), 3,8 (m, 4H), 3,65 (m, 2H), 3,55 (m, 2H), 1,4 (t, 3H).
Пример 22А
4-[({[4-(Дифторметокси)фенил]амино}карбонил)амино]-1-бутил-1Н-имидазол-2-карбоновая кислота
Получение осуществляют по аналогии с примером 13А.
Выход: 1,06 г (71% от теоретического).
t
ВЭЖХ (методика 10): R=4,046 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=369 [М+Н]
1
3
Н-ЯМР (400 МГц, CDC1): δ-11,1 (s, 1H), 7,7 (d, 2H), 7,1 (t, 1H), 7,05 (m, 3H), 4,5 (t, 2H), 1,7 (m, 2H), 1,3 (m, 2H), 0,9 (t, 3H).
Пример 23А
1-[(1-Метил-4-нитро-1H-имидазол-2-ил)карбонил]-4-(пиридин-2-ил)пиперазин
Получение осуществляют по аналогии с примером 21 А.
Выход: 4 г (72% от теоретического).
t
ВЭЖХ (методика 10): R=2,99 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=317 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=8,6 (s, 1H), 8,15 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 6,9 (d, 1H), 6,7 (dd, 1H), 3,9 (m, 5H), 3,8 (m, 2H), 3,7-3,5 (m, 4H).
Пример 24А
1-Метил-4-[({[4-(трифторметил)фенил]амино}карбонил)амино]-1H-имидазол-2-карбоновая кислота
Получение осуществляют по аналогии с примером 13А.
Выход: 168 мг (99% от теоретического).
t
ВЭЖХ (методика 4): R=1,57 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=329 [M+H]
1
3
Н-ЯМР (400 МГц, CDCl): δ=9,80 (ушир. s, 1H), 9,18 (ушир. s, 1H), 7,65 (m, 4H), 7,48 (s, 1H), 3,92 (s, 3Н).
Примеры осуществления изобретения
Пример 1
N-{1-Метил-2-[(4-пиридин-2-илпиперазин-1-ил)карбонил]-1H-имидазол-4-ил}-N'-[4-(трифторметокси)фенил]мочевина
1,50 г (4,36 ммолей) продукта примера 13А растворяют в 30 мл ДМФ и добавляют 1,82 г (5,66 ммоля) тетрафторбората O-(бензотриазол-1-ил)-N',N'N',N'-тетраметилурония (ТБТУ) и 266 мг (2,18 ммоля) 4-диметил-аминопиридина. Затем добавляют 925 мг (5,66 ммоля) 1-(пиридин-2-ил)пиперазина и перемешивают смесь при КТ в течение 4 часов. Реакционную смесь очищают с помощью ОФ-ВЭЖХ.
Выход: 1,79 г (83% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 2): R=1,83 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=490 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ=8,89 (ушир. s, 2H), 8,12 (d, 1H), 7,55 (m, 3H), 7,29 (m, 2H), 7,20 (s, 1H), 6,88 (d, 1H), 6,68 (dd, 1H), 4,02 (ушир. s, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,71 (ушир. s, 2H), 3,58 (ушир. s, 4H).
Пример 2
N-(1-Метил-2-{[4-(5-метилпиридин-2-ил)пиперазин-1-ил]карбонил}-1H-имидазол-4-ил)-N'-[4-(трифторметокси)фенил]мочевина
100 мг (0,29 ммоля) продукта примера 13А растворяют в 2 мл ДМФ и добавляют 139 мг (0,44 ммоля) тетрафторбората O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония (ТБТУ) и 53 мг (0,44 ммоля) 4-диметил-аминопиридина. Затем добавляют 103 мг (0,58 ммоля) продукта примера 14А и перемешивают смесь при КТ в течение 4 часов. Реакционную смесь очищают с помощью ОФ-ВЭЖХ.
Выход: 103 мг (70% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 5): R=2,01 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=504 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=8,92 (ушир. s, 2H), 7,99 (d, 1H), 7,54 (m, 2Н), 7,42 (dd, 1H), 7,28 (m, 2H), 7,20 (s, 1H), 6,80 (d, 1H), 4,00 (ушир. s, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,72 (ушир. s, 2H), 3,51 (ушир. s, 4H), 2,16 (s, 3H).
Пример 3
N-(2-{[4-(5-Хлорпиридин-2-ил)пиперазин-1-ил]карбонил}-1-этил-1Н-имидазол-4-ил)-N'-[4-(трифторметокси)фенил]мочевина
Получение осуществляют по аналогии с примером 2.
Выход: 55 мг (68% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 5): R=2,76 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=538 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=8,97 (ушир. s, 1H), 8,92 (ушир. s, 1H), 8,14 (d, 1H), 7,65 (dd, 1H), 7,54 (m, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,24 (s, 1H), 6,92 (d, 1H), 4,16 (q, 2H), 3,97 (ушир. s, 2H), 3,72 (ушир. s, 2H), 3,59 (ушир. s, 4H), 1,32 (t, 3H).
Пример 4
N-(2-{[4-(4-Метоксифенил)пиперазин-1-ил]карбонил}-1-метил-1Н-имидазол-4-ил)-N'-[4-(трифторметокси)фенил]мочевина
Получение осуществляют по аналогии с примером 2.
Выход: 35 мг (58% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 4): R=2,24 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=519 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ=8,89 (ушир. s, 2H), 7,53 (m, 2H), 7,28 (m, 2Н), 7,19 (s, 1H), 6,92 (m, 2H), 6,84 (m, 2H), 4,05 (ушир. s, 2H), 3,75 (m, 5H), 3,69 (s, 3Н), 3,08 (ушир. s, 4H).
Пример 5
N-[4-(Дифторметокси)фенил]-N'-(1-метил-2-{[4-(5-метилпиридин-2-ил)пиперазин-1-ил]карбонил}-1H-имидазол-4-ил)мочевина
Получение осуществляют по аналогии с примером 2 исходя из продукта примера 20А.
Выход: 17 мг (29% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 5): R=1,70 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=486 [M+H]
1
6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ=8,84 (ушир. s, 1H), 8,77 (ушир. s, 1H), 7,98 (d, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,42 (dd, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,11 (t, 1H), 7,10 (m, 2H), 6,80 (d, 1H), 4,01 (ушир. s, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,71 (ушир. s, 2H), 3,50 (ушир. s, 4H), 2,16 (s, 3H).
Примеры, приведенные в таблице 1, получают по аналогии с примером 2.
Пример 40
N-{1-Циклопропилметил)-2-пиридин[(4-илпиперазин-2-илпиперазин-1-ил)карбонил]1H-имидазол-4-ил}-N'-[4-(трифторметокси)фенил]мочевина
57,6 мг (0,15 ммоля) продукта примера 5А растворяют в 0,5 мл ДМФ и добавляют 59,5 мг (0,15 ммоля) гексафторфосфата О-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония (ГБТУ) и 15 мг (0,15 ммоля) триэтиламина. Затем добавляют 49 мг (0,3 ммоля) N-(2-пиридил)пиперазина и перемешивают смесь при КТ в течение 16 часов. Реакционную смесь очищают с помощью ОФ-ВЭЖХ.
Выход: 46 мг (58% от теоретического).
t
ЖХ-МС (методика 5): R=2,08 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=530 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=8,9 (s, 2H), 8,15 (d, 1H), 7,6-7,5 (m, 3Н), 7,25 (m, 3Н), 6,85 (d, 1H), 6,7 (dd, 1H), 4,05 (d, 2H), 4,00 (ушир. s, 2H), 3,75 (ушир. s, 2H), 3,6-3,5 (m, 4H), 1,75 (m, 1H), 0,5 (q, 2H), 0,35 (q, 2H).
Примеры, приведенные в таблице 2, получают по аналогии с примером 40.
Пример 52
N-(3,5-Дифторфенил)-N'-{1-этил-2-[(4-пиридин-2-илпиперазин-1H-ил)карбонил]-1Н-имидазол-4-ил}мочевина
Вначале к раствору 50 мг (0,15 ммоля) 1-[(1-этил-4-нитро-1Н-имидазол-2-ил)карбонил]-4-(пиридин-2-ил)пиперазина в 6 мл абсолютированного ТГФ добавляют никель Ренея на кончике шпателя, а затем 11 мг (0,23 ммоля) гидразингидрата, после чего смесь перемешивают в течение 1 часа. К неочищенному раствору добавляют сульфат натрия, а затем фильтруют раствор через кизельгур и промывают осадок на фильтре хлористым метиленом. Фильтрат концентрируют под вакуумом и снова переводят в 6 мл ТГФ, добавляют 28 мг (0,18 ммоля) дифторфенилизоцианата и 2 мг 1,4-диазабицикло[2,2,2]октана и перемешивают смесь при комнатной температуре. По прошествии 1 часа отгоняют растворитель на роторном испарителе и подвергают остаток очистке с помощью препаративной ВЭЖХ. Получают 20 мг (29% от теоретического выхода) продукта.
t
ВЭЖХ (методика 10): R=3,94 мин.
+
+
МС (ИРЭП): m/z=456 [М+Н]
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ=8,5 (2s, 2Н), 8,1 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,15 (m, 2H), 6,9-6,65 (m, 3H), 4,2 (q, 2H), 3,9 (m, 2H), 3,7 (m, 2H), 3,55 (m, 4H), 1,3 (t, 3H).
Примеры, приведенные в таблице 3, получают по аналогии с примером 52, кроме примера 57, который получают по аналогии с примером 2.
Б. Исследование физиологической активности
Активность соединений по настоящему изобретению in vitro может быть показана с помощью следующих анализов.
Исследования цитопатогенности в отношении ЦМВ человека (цитомегаловируса человека)
4
2
Исследуемые соединения используют в виде 50-миллимольных (мМ) растворов в диметилсульфоксиде (ДМСО). В качестве веществ для сравнения используют ганцикловир, фоскарнет и цидофовир. После добавления в каждом случае по 2 мкл 50, 5, 0,5 и 0,05 мМ исходного раствора в ДМСО к 98 мкл порциям среды для клеточных культур в ячейки А-Н ряда 2 96-ячеечного планшета с целью осуществления параллельных определений, производят разбавления 1:2 с помощью 50 мкл порций среды плоть до ряда 11. Каждая из ячеек в рядах 1 и 12 содержит 50 мкл среды. После этого в каждую ячейку добавляют с помощью пипетки по 150 мкл суспензии 1×10 клеток (фибробласты крайней плоти человека (NHDF)) (ряд 1 - клеточный контроль), а в рядах 2-12 также смесь инфицированных ЦМВ человека и неинфицированных клеток NHDF (отношение число вирусных частиц к числу клеток (M.O.I.) 0,001-0,002), т.е. 1-2 инфицированные клетки на 1000 неинфицированных. Ряд 12 (без вещества) служит в качестве вирусного контроля. Окончательные исследуемые концентрации составляют 250-0,0005 мкМ. Планшеты инкубируют при температуре 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО в течение 6 суток, т.е. до тех пор, пока все клетки в ячейках вирусного контроля не подвергнутся инфицированию (100% цитопатогенный эффект (СРЕ)). После этого клетки фиксируют и окрашивают посредством добавления смеси формалина и красителя Гимза (30 минут), промывают бидистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу при температуре 50°С. После этого осуществляют визуальный анализ планшетов с помощью микроскопа (Plaque Multiplier компании Technomara).
С планшетов для исследования могут быть получены следующие данные.
50
СС (NHDF) - максимальная концентрация вещества в мкМ, при которой отсутствуют заметные цитостатические эффекты в отношении клеток по сравнению с необработанными ячейками клеточного контроля.
50
ЕС (ЦМВ человека) - концентрация вещества в мкМ, которая обеспечивает ингибирование СРЕ (цитопатогенного эффекта) на 50% по сравнению с необработанными ячейками вирусного контроля.
50
50
ПС (показатель селективности) = СС (NHDF) / ЕС (ЦМВ человека).
Характерные данные в отношении активности соединений по настоящему изобретению in vitro приведены в таблице А.
Таблица А
Номер примера
NHDF СС<sub>50</sub> [нМ]
ЦМВ человека ЕС<sub>50</sub> [нМ]
ПС ЦМВ человека
1
43,5
3,0
14500
2
10,9
0,75
14530
25
12,5
4,8
2600
29
34,0
0,95
35790
32
5,3
0,85
6240
Пригодность соединений по настоящему изобретению для лечения инфекций ЦМВ человека может быть показана с помощью следующей экспериментальной модели на животном.
Экспериментальная модель для ЦМВ человека с ксенотрансплантатом Gelfoam
Животные
3-4-недельных самок мышей с иммунной недостаточностью (16-18 г) линий Fox Chase SCID (тяжелый комбинированный иммунодефицитный синдром), или Fox chase SCID-NOD (тяжелый комбинированный иммунодефицитный синдром - страдающие диабетом без ожирения), или SCID beige (бежевые), приобретают у коммерческих производителей (Bomholtgaard, Jackson). Животных содержат в стерильных условиях (включая подстилку и кормление) в изоляторах.
Вирусный рост
Цитомегаловирус человека (ЦМВ человека), штамм Davis, выращивают in vitro на эмбриональных фибробластах крайней плоти человека (клетки NHDF). Через 5-7 дней после инфицирования клеток NHDF плотностью инфицирования (M.O.I.) 0,01, инфицированные вирусом клетки собирают и хранят в присутствии минимально обогащенной среды (MEM), 10% околоплодной сыворотки теленка (FCS) с 10% ДМСО при температуре -40°С. После последовательных десятикратных разведений инфицированных вирусом клеток определяют титр на 24-ячеечных планшетах с конфлюэнтным слоем клеток NHDF после прижизненного окрашивания нейтральным красным или фиксации и окрашивания смесью формалин/Гимза (как описано выше).
Изготовление губок, трансплантация, обработка и оценка
6
Коллагеновые губки размером 1×1×1 см (Gelfoam, Peasel & Lorey, номер заказа 407534, K.Т.Chong и др., тезисы 39-й межнаучной конференции по противомикробным агентам и химиотерапии, 1999, стр.439, P.M.Kraemer и др., Cancer Research 1983, (43): 4822-4827) вначале смачивают забуференным фосфатом физиологическим раствором (PBS), удаляя захваченные пузырьки воздуха посредством обезгаживания, а затем хранят в MEM+10% FCS. 1×10 инфицированных вирусом клеток NHDF (инфицированных ЦМВ человека, штамма Davis, M.O.I.=0,01), отделяют через 3 часа после инфицирования и добавляют по каплям в 20 мкл MEM, 10% FCS на влажную губку. По прошествии 12-13 часов добавляют 5 нг/мкл базового фактора роста фибробластов (bFGF) в 25 мкл PBS /0,1% бычьего сывороточного альбумина (BSA)/1 мм дитиотреитола (DTT) необязательно добавляют к губкам и инкубируют губки в течение 1 часа. Для трансплантации мышей с иммунной недостаточностью анестезируют авертином или смесью ацепромазин-ксилазин и кетамином, удаляют шерсть на спине с помощью электробритвы, раскрывают эпидермис на 1-2 см без натяжения и трансплантируют влажные губки под кожу спины. Хирургическую рану закрывают с помощью тканевого клея. Через 24 часа после трансплантации мышам перорально вводят вещество три раза в сутки (7.00 ч, 14.00 ч и 19.00 ч), два раза в день (8.00 ч и 17.00 ч) или один раз в день (14.00 ч) в течение восьмисуточного периода. Доза составляет 3, или 10, или 30, или 100 мг/кг массы тела, вводимый объем составляет 10 мл/кг массы тела. Вещества приготовляют в форме состава, представляющего собой 0,5% суспензию в Тилозе, необязательно содержащую 2% ДМСО. Через 9 суток после трансплантации и 1 6 часов после последнего введения вещества животных безболезненно умерщвляют и удаляют губку. Инфицированные вирусом клетки высвобождают из губки посредством коллагеназного расщепления (330 ед./1,5 мл) и хранят в присутствии MEM, 10% околоплодной телячьей сыворотки, 10% ДМСО при температуре -140°С. Оценку осуществляют после последовательных десятикратных разведений инфицированных вирусом клеток посредством определения титра на 24-ячеечных планшетах с конфлюэнтным слоем клеток NHDF после прижизненного окрашивания нейтральным красным или фиксации и окрашивания смесью формалин/Гимза (как описано выше). Определяют число инфекционных вирусных частиц после введения вещества по сравнению с контрольной группой, которой вводили плацебо.
В. Примеры осуществления изобретения в отношении фармацевтических композиций
Соединения по настоящему изобретению могут быть преобразованы в фармацевтические препараты следующими способами.
Таблетка
Состав: 100 мг соединения согласно примеру 1, 50 мг лактозы (моногидрат), 50 мг кукурузного крахмала (природного), 10 мг поливинилпирролидона (PVP 25) (BASF, Людвигсхафен, Германия) и 2 мг стеарата магния.
Масса таблетки 212 мг. Диаметр 8 мм, радиус кривизны 12 мм.
Изготовление: смесь активного соединения, лактозы и крахмала гранулируют с 5% раствором (масс./масс.) PVP в воде. После высушивания гранулы смешивают со стеаратом магния в течение 5 минут. Получаемую таким образом смесь спрессовывают с помощью общепринятого пресса для таблеток (форма таблеток указана выше). Рекомендуется использовать для прессования сдавливающее усилие 15 кН.
Суспензия, которая может вводиться перорально
Состав: 1000 мг соединения согласно примеру 1, 1000 мг этанола (96%), 400 мг Rhodigel (ксантановая камедь компании FMC, Пенсильвания, США) и 99 г воды.
10 мл суспензии для перорального применения эквивалентны единичной дозе 100 мг соединения по настоящему изобретению.
Изготовление: Rhodigel суспендируют в этаноле и добавляют к получаемой таким образом суспензии активное соединение. Затем добавляют воду при перемешивании. Смесь перемешивают в течение около 6 часов до завершения набухания Rhodigel.
Раствор, который может вводиться внутривенно:
Состав: 1 мг соединения согласно примеру 1, 15 г полиэтиленгликоля 400 и 250 г воды для инъекций.
Изготовление: соединение по настоящему изобретению растворяют совместно с полиэтиленгликолем 400 в воде при перемешивании. Раствор стерилизуют посредством фильтрования (диаметр пор 0,22 мкм) и разливают в асептических условиях в термически стерилизованные флаконы для вливаний. Последние закупоривают пробками для флаконов для вливаний и обжимными колпачками.