N-9-ЗАМЕЩЕННЫЕ ПУРИНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ
N-9-SUBSTITUTED PURINE COMPOUNDS, COMPOSITIONS AND METHODS OF USE

Мишень рапамицина млекопитающих (mTOR) представляет собой серин/треонинкиназу весом 289 кДа, которая считается членом семейства фосфоинозитид-3-киназа-подобной киназы (PIKK), поскольку она содержит карбоксильный терминальный домен киназы, который имеет значительную гомологию последовательности с каталитическим доменом фосфоинозитид-3-киназой (PI3K) липидных киназ. В дополнение к каталитическому домену на С-конце, киназа mTOR также содержит FКВР12-рапамицинсвязывающий (FRB) домен, предполагаемый репрессор домена около С-конца и до 20 попарно повторяющихся фрагментов HEAT на N-конце, а также FRAP-ATM-TRRAP (FAT) и FAT С-конечного домена. (См. статью Huang и Houghton, Current Opinion in Pharmacology, 2003, 3, с.371-377). В литературе киназы mTOR также называют FRAP (FKBP12 и рапамицин-связанный белок), RAFT1 (рапамицин и FKBP12 мишень 1), RAPT1 (мишень рапамицина 1).
Киназы mTOR могут активироваться факторами роста через путь PI3K-Akt или клеточные стрессы, такие как недостаток питательных веществ или гипоксия. Активация киназы mTOR, как полагают, играет ключевую роль в регуляции клеточного роста и выживаемости клеток в широком спектре клеточных функций, включая трансляцию, транскрипцию, оборот мРНК, стабильность белков, реорганизацию цитоскелета актина и аутофагию. Для более подробного обзора биологии клеточной сигнализации mTOR и потенциального терапевтического эффекта модуляции сигнальных взаимодействий mTOR см. статьи Sabatini D.M. и Guertin D.A., An Expanding Role for mTOR in Cancer, TRENDS in Molecular Medicine, 2005, 11, с.353-361; Chiang G.C. и Abraham R.T., Targeting the mTOR signaling network in cancer, 2007, TRENDS 13, c.433-442; Jacinto и Hall, Tor signaling in bugs, brain and brawn. Nature Reviews Molecular and Cell Biology, 2005, 4, c. 117-126; и Sabatini D.M. и Guertin D.A., Defining the Role of mTOR, Cancer Cancer Cell, 2007, 12, c.9-22.
Исследователи, изучающие биологию киназы mTOR, обнаружили патологическую связь между нарушением регуляции клеточной сигнализации mTOR и рядом заболеваний, включая иммунологические нарушения, рак, метаболические заболевания, сердечно-сосудистые заболевания и неврологические расстройства.
Например, существуют доказательства того, что сигнальный путь PI3K-AKT, который расположен перед киназой mTOR, часто сверхактивирован в раковых клетках, что впоследствии приводит к гиперактивации последующих мишеней, таких как киназы mTOR. В частности, компоненты пути PI3K-AKT, которые мутировали в различных опухолях человека, включают активацию мутаций рецепторов факторов роста и усиление и гиперэкспрессию PI3K и АКТ. Кроме того, есть доказательства, которые показывают, что многие виды опухолей, включая глиобластому, гепатоцеллюлярную карциному, карциному легких, меланому, рак эндометрия и рак предстательной железы, содержат мутации с потерей функции негативных регуляторов путей PI3K-AKT, такие как делеция фосфатазы и гомолога ангиотензина в хромосоме 10 (PTEN) и комплекс туберозного склероза (TSC1/TSC2), что также приводит к гиперактивной сигнализации киназы mTOR. Описанное выше позволяет предположить, что ингибиторы киназы mTOR могут быть эффективными терапевтическими средствами для лечения заболеваний, вызванных, по крайней мере частично, гиперактивностью сигнализации киназы mTOR.
Киназа mTOR существует в виде двух физически и функционально различных комплексов сигнализации (а именно, mTORCl и mTORC2). mTORCl, также известный как "комплекс mTOR-Raptor" или "рапамицин-чувствительный комплекс", потому что он связывается и ингибируется низкомолекулярным ингибитором рапамицина. mTORC 1 определяется наличием белков mTOR, Raptor и mLST8. Рапамицин сам по себе представляет собой макролид, и обнаружен впервые как низкомолекулярный ингибитор киназы mTOR. Для того чтобы быть биологически активным, рапамицин образует тройной комплекс с mTOR и FKBP12, который является цитозольным связывающим белком под общим названием иммунофилин. Рапамицин действует как индуктор димеризации mTOR и FKBP12. Образование комплекса рапамицин-FКВР12 приводит к повышению функции, так как комплекс связывается непосредственно с mTOR и ингибирует функцию mTOR.
Во-вторых, совсем недавно обнаружен комплекс mTORC, mTORC2, характеризующийся наличием белков mTOR, Rictor, Protor-1, mLST8 и mSINl. mTORC2 также обозначается как "комплекс mTOR-Rictor" или "рапамицин-нечувствительный" комплекс, поскольку он не зависит от рапамицина.
Оба комплекса mTOR играют важную роль в отношении внутриклеточных сигнальных путей, что влияет на рост клеток, пролиферацию и выживание. Например, нижние белки-мишени mTORC1 включают рибосомные киназы S6 (например, S6K1, S6K2) и связывающий белок эукариотического фактора инициации 4Е (4Е-ВР1), которые являются ключевыми регуляторами трансляции белка в клетках. Кроме того, mTORC2 отвечает за фосфорилирование АКТ (S473), и исследования показали, что бесконтрольная клеточная пролиферация вследствие гиперактивации АКТ является признаком нескольких типов рака.
В настоящее время несколько аналогов рапамицина проходят клинические испытания в отношении рака (например, Wyeth’s CCI-779, Novartis’ RAD001 и Ariad Pharmaceuticals’ AP23573). Интересно, что клинические данные показывают, что аналоги рапамицина являются эффективными в отношении некоторых видов рака, таких как лимфома мантиевых клеток, рак эндометрия и почечно-клеточная карцинома.
Обнаружение второго комплекса белков mTOR (mTORC2), который не ингибируется рапамицином или его аналогами, предполагает, что ингибирование mTOR рапамицином является неполным, и что прямой ингибитор киназы mTOR, который может ингибировать mTORCl и mTORC2 в сайте связывания каталитического АТФ, может быть более эффективным и обладать более широкой противоопухолевой активностью по сравнению с рапамицином и его аналогами.
В последнее время описаны низкомолекулярные ингибиторы mTOR, включая заявки на патент US 11/599663 и US 11/657156 от OSI Pharmaceuticals Inc.; в международных заявках на патент WO 2008/023161 и WO 2006/090169 от Kudos Pharmacuticals; и в международных заявках на патент WO 2008/032060, WO 2008/032086, WO 2008032033, WO 2008/032028, WO 2008/032036, WO 2008/032089, WO 2008/032072, WO 2008/031091, WO 2008/116129 от AstraZeneca; в международной заявке на патент WO 2008/116129 и заявке на патент US 12/276459 от Wyeth.
В заявке на патент US 61/085309 описан класс N-гетероциклических конденсированных пиримидиновых соединений с активностью в отношении mTOR.
В связи с повышением знаний о роли сигнализации mTOR в заболеваниях (например, рак), желательно получить низкомолекулярные ингибиторы mTOR (включая mTORCl mTORC2), которые могут использоваться для лечения заболеваний, при которых наблюдается нарушенная активность mTOR, таких как, например, рак. Кроме того, может быть желательно получить низкомолекулярные ингибиторы соответствующих ферментов (например, PI3K, АКТ), которые действуют до или после сигнального пути mTOR.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы I:
1
1
R1
a
b
a
a
a
a
b
a
a
b
c
a
a
b
a
b
a
a
b
a
a
b
c
c1
1
a
b
1
a
1
a
l
a
l
a
b
l
a
l
a
b
1
a
l
a
a
b
1
a
b
l
a
a
b
l
a
1
a
b
1
1
1
1
c1
a
b
a
b
c
1
c1
0
a
b
a
a
a
a
b
2
2
R2
d
e
d
d
d
d
e
d
d
e
f
d
d
e
d
e
d
d
e
d
d
e
f
2
d
e
2
d
2
d
2
d
2
d
e
2
d
2
d
e
2
d
2
d
d
e
2
d
e
2
d
d
e
2
d
2
d
e
2
2
2
d
e
d
e
f
2
3
3
R3
g
g
h
g
h
g
g
i
i
i
g
h
g
h
i
3
R3
3
1
2
3
4
A
1
2
3
4
A
A
A
4
5
6
5
6
5
6
5
5
6
4
5
6
4
5
6
4
5
5
6
4
5
4
5
4
5
6
4
5
4
5
6
5
6
D
4
5
6
D
D
j
k
j
j
j
j
k
j
k
j
m
3
j
k
3
j
3
j
3
j
3
j
k
3
j
k
3
j
k
3
3
m
m
m
j
k
m
3
A
D
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
1-6
1-6
1-6
2-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-6
1-6
2-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-4
2-4
2-4
2
2
2
3
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
2-6
2-6
1-6
6-10
1-9
6-10
2-12
1-6
2-6
2-6
1-6
2
2
2
2
3
2
2
2
3
1-6
1-6
1-6
1-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-6
1-6
2-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-4
2-4
2-4
2
2
3
1-6
1-6
1-6
2-6
3-6
1-6
1-6
2-6
3-6
2
1-4
2-4
2-4
2-6
3-7
1-5
2
2
1-6
1-6
2-6
1-6
1-6
2-6
2-6
3-10
2-10
6-10
1-9
2
2
2
1-6
1-6
2-6
2-6
1-6
3-7
3-7
6-10
1-6
1-6
1-6
3-7
3-7
6-10
1-9
1-4
2-4
2-4
где R выбран из группы, состоящей из 6-10-членного арила, 5-9-членного гетероарила, 3-12-членного гетероциклоалкила, 3-12-членного циклоалкила, где R замещен от 0 до 5 заместителями R, выбранными из группы, состоящей из галогена, F, Cl, Br, I, -NRR, -SR, -OR, -C(O)OR, -C(O)NRR, -C(O)R, -NRC(O)R, -OC(O)R, -NRC(O)NRR, -OC(O)NRR, -NRS(O)NRR, -S(O)R, -S(O)NRR, -R, -NO, -N, =O, -CN, R, -X-NRR, -X-SR, -X-OR, -X-C(O)OR, -X-C(O)NRR, -X-C(O)R, -X-NRC(O)R, -X-OC(O)R, -X-NRC(O)NRR, -X-OC(O)NRR, -X-NRS(O)NRR, -X-S(O)R, -X-S(O)NRR, -X-NO, -X-N, -X-CN и X-R; где R и R каждый независимо выбран из водорода, C алкила, C галогеналкила, C гетероалкила, С алкенила, С алкинила, C циклоалкила, C гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила, необязательно R и R, когда присоединены к одному атому азота, объединены с образованием 3-6-членного гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О и S; R выбран из С алкила, C галогеналкила, С алкенила, С алкинила, С циклоалкила, С гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила; Х выбран из группы, состоящей из С алкилена, C алкенилена и C алкинилена; и R выбран из группы, состоящей из фенила, 2-пиридила, 3-пиридила, 4-пиридила, 2-имидазолила, 2-индолила, 1-нафтила, 2-нафтила, 2-тиенила, 3-тиенила, 2-пирролила, 2-фуранила и 3-фуранила, и где R замещен от 0 до 3 заместителями, выбранными из F, Cl, Br, I, -NRR, -SR, -OR, -S(O)R, -S(O)NRR, -NO, -N, =O, -CN, пиридила, C алкила, С алкенила, Салкинила и С гетероалкила. R выбран из группы, состоящей из следующих групп: водород, C алкил, С алкенил, С алкинил, C гетероалкил, 6-10-членный арил, 5-10-членный гетероарил, 3-12-членный гетероциклоалкил, 3-12-членный циклоалкил, -L-С арил, -L-C гетероарил, -L-C циклоалкил, -L-С гетероциклоалкил, где L выбран из C алкилена, С алкенилена, Салкинилена и C гетероалкилена, и где R замещен от 0 до 5 заместителями R, выбранными из группы, состоящей из галогена, F, Cl, Br, I, -NRR, -SR, -OR, -С(O)OR, -C(O)NRR, -С(O)R, -NRC(O)R, -OC(O)R, -NRC(O)NRR, -OC(O)NRR, -NRS(O)NRR, -S(O)R, -S(O)NRR, -R, -NO, -N, =О, -CN, -X-NRR, -X-SR, -X-OR, -X-C(O)OR, -X-C(O)NRR, -X-C(O)R, -X-NRC(O)R, -X-OC(O)R, -X-NRC(O)NRR, -X-OC(O)NRR, -Х-NRS(О)NRR, -X-S(O)2R, -X-S(O)NRR, -X-NO, -X-N и -X-CN; где R и R каждый независимо выбран из водорода, C алкила, С галогеналкила, C гетероалкила, C алкенила, С алкинила, С циклоалкила, C гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила, необязательно R и R, когда присоединены к одному атому азота, объединены с образованием 3-6-членного гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О и S; R выбран из C алкила, C галогеналкила, С алкенила, С алкинила, С циклоалкила, C гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила; и Х выбран из группы, состоящей из С алкилена, Cалкенилена и C алкинилена. R представляет собой 5-12-членное моноциклическое или мостиковое гетероциклоалкильное кольцо, где группа R замещена от 0 до 3 заместителями R, выбранными из группы, состоящей из -C(O)OR, -C(O)NRR, -NRR, -OR, -SR, -S(O)R, -S(O)R, -R, галогена, F, Cl, Br, I, -NO, -CN и -N, где R и R каждый независимо выбран из водорода, C алкила, C галогеналкила, C гетероалкила, С алкенила и С циклоалкила, где необязательно R и R, вместе с атомом азота, к которому каждый присоединен, объединены с образованием 3-6-членного гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О и S, и R выбран из C алкила, C галогеналкила, С алкенила, С циклоалкила; и если R представляет собой моноциклическое гетероциклоалкильное кольцо, тогда любые две группы R, присоединенные к одному атому R, необязательно объединены с образованием 3-7-членного карбоциклического или 3-7-членного гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 атома, выбранных из N, О и S в качестве вершин кольца. А, А, А и А каждый независимо выбран из N, C(R) или С(Н), где по крайней мере три А, А, А и А каждый независимо представляет собой С(Н) или C(R), где R в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br, I, -NO, -CN, С алкила, С алкенила, C алкинила, или любые две группы R, присоединенные к соседним атомам, необязательно объединены с образованием С гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О и S в качестве вершин кольца, С циклоалкильного кольца, Сгетероарильного кольца, содержащего от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, О и S в качестве вершин кольца, или фенильного кольца. Наконец, D выбран из группы, состоящей из -NRC(O)NRR, -NRR, -C(O)NRR, -OC(O)OR, -OC(O)NRR, -NRC(=N-CN)NRR, -NRC(=N-OR)NRR, -NRC(=N-NR)NRR, -NRC(O)R, -NRC(O)OR, -NRS(O)NRR и -NRS(O)R, где R выбран из группы, состоящей из водорода, C алкила, C галогеналкила и С алкенила; R и R каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, C алкила, C галогеналкила, С алкенила, С алкинила, С циклоалкила, С гетероциклоалкила, С арила и C гетероарила, и Rи R, когда присоединены к одному атому азота, необязательно объединены с образованием 5-7-членного гетероциклического или 5-9-членного гетероарильного кольца, содержащего 1-3 гетероатома, выбранных из N, О и S в качестве вершин кольца, и замещенные 0-3 заместителями R; и где R, R и Rдалее замещены от 0 до 3 заместителями R, где R независимо выбран из группы, состоящей из галогена, F, Cl, Br, I, -NO, -CN, -NRR, -OR, -SR, -С(O)OR, -C(O)NRR, -NRC(O)R, -NRC(O)OR, -X-NRR, -X-OR, -X-SR, -X-C(O)OOR, -X-C(O)NRR, -X-NRC(O)R, -X-NRC(O)OR, -X-CN, -X-NO, -S(O)R, -S(O)R,=O и -R; где R и R выбран из водорода, C алкила, C галогеналкила, С алкенила, С алкинила, C гетероалкила, С циклоалкила, С гетероциклоалкила, С арила, C гетероарила; и R, в каждом случае, независимо выбран из C алкила, C галогеналкила, С циклоалкила, С гетероциклоалкила, С арила и C гетероарила, и Х выбран из группы, состоящей из С алкилена, С алкенилена и C алкинилена, и где D и заместитель R, присоединенный к атому, который является соседним с атомом, к которому присоединен D, необязательно объединены с образованием необязательно замещенного 5-6-членного гетероциклического или гетероарильного кольца, замещенного от 0 до 4 заместителями R.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим по крайней мере один фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или эксципиент и соединение формулы I.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам применения соединений формулы I для лечения заболеваний или нарушений, которые могут излечиваться ингибированием киназы mTOR.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к изготовлению лекарственного средства для лечения рака.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) для применения для лечения рака.
Определения
1-8
3-6
5-12
Как здесь используется, термин "алкил", отдельно или как часть другого заместителя, обозначает, если не указано иное, линейный или разветвленный углеводородный радикал, содержащий обозначенное количество атомов углерода (например, C обозначает от одного до восьми атомов углерода). Примеры алкильных групп включают метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, трет-бутил, изо-бутил, втор-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил и им подобные. Термин "алкенил" обозначает ненасыщенный алкильный радикал, содержащий одну или несколько двойных связей. Аналогично, термин "алкинил" обозначает ненасыщенный алкильный радикал, содержащий одну или несколько тройных связей. Примеры таких ненасыщенных алкильных групп включают винил, 2-пропенил, кротил, 2-изопентенил, 2-(бутадиенил), 2,4-пентадиенил, 3-(1,4-пентадиенил), этинил, 1- и 3-пропинил, 3-бутинил и более высокие гомологи и изомеры. Термин "циклоалкил", "карбоциклический" или "карбоцикл" обозначает углеводородные кольца, содержащие указанное количество кольцевых атомов (например, С циклоалкил), и являющиеся полностью насыщенными или содержащие не более одной двойной связи между вершинами кольца. Как здесь используется "циклоалкил", "карбоциклический" или "карбоцикл" также относится к бициклическим, полициклическим и спироциклическим углеводородным кольцам, таким как, например, бицикло[2.2.1]гептан, пинан, бицикло[2.2.2]октан, адамантан, норборнен, спироциклический C алкан и т.д. Как здесь используется, термины "алкенил", "алкинил", "циклоалкил", "карбоцикл" и "карбоциклический" включают их моно- и полигалогенированные варианты.
2
2
3
2
2
3
2
2
3
2
2
3
3
2
2
3
3
2
2
2
3
3
3
3
2
3
3
3
2
3
2
3
3
Термин "гетероалкил" отдельно или в комбинации с другим термином обозначает, если не указано иное, стабильный линейный или разветвленный углеводородный радикал, состоящей из указанного количества атомов углерода и из 1-3 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из О, N, Si и S, и где атомы азота и серы необязательно могут быть окислены, и гетероатом азота необязательно может быть кватернизирован. Гетероатом(ы) О, N и S могут быть замещены в любом внутреннем положении гетероалкильной группы. Гетероатом Si может быть замещен в любом положении гетероалкильной группы, включая положение, в котором алкильная группа присоединена к остатку молекулы. "Гетероалкил" может содержать вплоть до трех единиц незамещенных атомов, а также включать моно- и полигалогенированные варианты или их комбинации. Примеры включают -СН-СН-O-СН, -СН-СН-O-CF, -СН-СН-NH-СН, -СН-СН-N(CH)-CH, -СН-S-СН-СН, -S(O)-СН, -СН-СН-S(O)-СН, -СН=СН-O-СН, -Si(СН), -СН-СН=N-ОСН и -СН=СН=N(СН)-СН. Вплоть до двух гетероатомов могут идти последовательно, как, например, -СН-NH-ОСН и -СН-O-Si(СН).
Термин "гетероциклоалкил", "гетероциклический" или "гетероцикл" обозначают циклоалкановую группу, которая содержит от одного до пяти гетероатомов, выбранных из N, О и S, где атомы азота и серы необязательно окислены, и атом (атомы) азота необязательно кватернизированы. Если не указано иное, "гетероциклоалкильное", "гетероциклическое" или "гетероциклильное" кольцо может быть моноциклической, бициклической, спироциклической или полициклической кольцевой системой. Неограничивающие примеры "гетероциклоалкильных", "гетероциклических" или "гетероциклильных" колец включают пирролидин, пиперидин, имидазолидин, пиразолидин, бутиролактам, валеролактам, имидазолидинон, гидантоин, диоксолан, фталимид, пиперидин, пиримидин-2,4(1Н,3Н)-дион, 1,4-диоксан, морфолин, тиоморфолин, тиоморфолин-S-оксид, тиоморфолин-S,S-оксид, пиперазин, пиран, пиридон, 3-пирролин, тиопиран, пирон, тетрагидрофуран, тетрагидротиофен, хинуклидин, тропан и им подобные. "Гетероциклоалкильная", "гетероциклическая" или "гетероциклильная" группа может быть присоединена к остатку молекулы через один или несколько кольцевых атомов углерода или гетероатомов. "Гетероциклоалкил", "гетероциклический" или "гетероцикл" могут включать их моно- и полигалогенированные варианты.
2
2
2
2
Термин "алкилен" отдельно или как часть другого заместителя обозначает двухвалентный радикал, полученный из алкана, представленного -СНСНСНСН-. Обычно, алкильная (или алкиленовая) группа может содержать от 1 до 24 атомов углерода, предпочтительными для настоящего изобретения являются группы, содержащие 10 или менее атомов углерода. "Галогеналкилен" обозначает моно- и полигалогенированный вариант алкилена. "Алкенилен" и "алкинилен" обозначают ненасыщенные формы "алкилена", содержащие двойные или тройные связи соответственно, а также включают моно- и полигалогенированные варианты.
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
Термин "гетероалкилен" отдельно или как часть другого заместителя обозначает двухвалентный радикал, насыщенный или ненасыщенный или полиненасыщенный, полученный из гетероалкила, как представлено -CH-CH-S-CHCH- и -CH-S-CH-CH-NH-CH-, -O-СН-СН=СН-, -СН-СН=С(Н)СН-O-СН- и -S-CH-C≡C-. Для гетероалкиленовых групп гетероатомы также могут занимать любой или оба конца цепи (например, алкиленокси, алкилендиокси, алкиленамино, алкилендиамино и им подобные).
a
b
Термины "алкоксигруппа", "алкиламиногруппа" и "алкилтиогруппа" (или тиоалкоксигруппа) используются в их обычном значении, и относятся к этим алкильным группам, присоединенным к остатку молекулы через атом кислорода, аминогруппу или атом серы, соответственно. Дополнительно, для диалкиламиногрупп, алкильные части могут быть одинаковыми или различными, и также могут быть объединены с образованием 3-7-членного кольца с атомом азота, к которому каждый присоединен. Соответственно, группа, представленная как -NRR, включает пиперидинил, пирролидинил, морфолинил, азетидйнил и им подобные.
1-4
Термины "гало" или "галоген", отдельно или как часть другого заместителя, обозначают, если не указано иное, атом фтора, хлора, брома или йода. Дополнительно, термины, такие как "галогеналкил", включают моногалогеналкил и полигалогеналкил. Например, термин "С галогеналкил" включает трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, 4-хлорбутил, 3-бромпропил, дифторметил и им подобные.
Термин "арил" обозначает, если не указано иное, полиненасыщенную, обычно ароматическую углеводородную группу, которая может содержать отдельное кольцо или несколько колец (вплоть до трех), которые конденсированы вместе. Термин "гетероарил" обозначает арильные группы (или кольца), которые содержат от одного до пяти гетероатомов, выбранных из N, О и S, где атомы азота и серы необязательно окислены, и атом (атомы) азота необязательно кватернизированы. Гетероарильная группа может быть присоединена к остатку молекулы через гетероатом. Неограничивающие примеры арильных групп включают фенил, нафтил и бифенил, тогда как неограничивающие примеры гетероарильных групп включают пиридил, пиридазинил, пиразинил, пиримидинил, триазинил, хинолинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, фталазинил, бензотриазинил, пуринил, бензимидазолил, бензопиразолил, бензотриазолил, бензизоксазолил, изобензофурил, изоиндолил, индолизинил, бензотриазинил, тиенопиридинил, тиенопиримидинил, пиразолопиримидинил, имидазопиридины, бензотиаксолил, бензофуранил, бензотиенил, индолил, хинолил, изохинолил, изотиазолил, пиразолил, индазолил, птеридинил, имидазолил, триазолил, тетразолил, оксазолил, изоксазолил, тиадиазолил, пирролил, тиазолил, фурил, тиенил и им подобные. Необязательные заместители для каждой из описанных арильных и гетероарильных кольцевых систем могут быть выбраны из группы подходящих заместителей, описанных ниже.
Приведенные выше термины (например "алкил", "арил" и "гетероарил"), в некоторых вариантах осуществления, могут включать замещенные и незамещенные формы указанного радикала. Предпочтительные заместители для каждого типа радикалов описаны ниже.
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
1-4
2
1-4
2
1-4
2
1-4
2
1-4
2
1-4
2
1-4
2
2
1-4
1-6
1-6
1-6
1-6
1-4
2
1-4
2
1-4
Заместителями для алкильных радикалов (включая группы, часто обозначенные алкилен, алкенил, алкинил, гетероалкил и циклоалкил) могут быть различные группы, включая, но не ограничиваясь ими, -галоген, -OR’, -NR’R”, -SR’, -SiR’R”R’’’, -OC(O)R’, -C(O)R’, -COR’, -CONR’R”, -OC(O)NR’R", -NR"C(O)R’, -NR’’’C(O)NR’R”, -NR"C(O)R’, -NHC(NH)=NH, -NR’C(NH)=NH, -NHC(NH)=NR’, -NR’’’C(NR’R")=N-CN, -NR’’’C(NR’R”)=NOR’, -NHC(NH)=NR’,-S(O)R’, -S(O)R’, -S(O)NR’R”, -NR’S(O)R”, -NR’’’S(O)NR’R”, -CN, -NO, -(CH)-OR’, -(CH)-NR’R”, -(CH)-SR’, -(CH)-SiR’R”R’’’, -(CH)-OC(O)R’, -(CH)-C(O)R’, -(CH)-COR’, -(CH)CONR’R”, в диапазоне значений от 0 до (2m’+1), где m’ представляет собой общее значение атомов углерода в таком радикале. R’, R” и R’’’ каждый независимо обозначает группы, включая, например, водород, незамещенный C алкил, незамещенный гетероалкил, незамещенный арил, арил, замещенный 1-3 атомами галогена, незамещенный C алкил, C алкоксигруппу или C тиоалкоксигруппу, или незамещенные арил-С алкильные группы, незамещенный гетероарил, замещенный гетероарил, среди прочих. Когда R’ и R" присоединены к одному атому азота, они могут объединяться с атомом азота с образованием 3-, 4-, 5-, 6-или 7-членного кольца. Например, -NR’R" включает 1-пирролидинил и 4-морфолинил. Другие заместители для алкильных радикалов, включая гетероалкил, алкилен, включают, например =O, =NR”, =N-OR’,=N-CN, =NH, где R’ включает заместители, описанные выше. Когда заместитель для алкильных радикалов (включая группы, обозначенные как алкилен, алкенил, алкинил, гетероалкил и циклоалкил) содержит алкиленовый линкер (например -(CH)-NR’R"), алкиленовый линкер включает также его галогензамещенные варианты. Например, линкер "-(CH)-" когда используется как часть заместителя, включают дифторметилен, 1,2-дифторэтилен и т.д.
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3
1-4
1-4
2
1-4
2
1-4
2
1-4
2
1-4
2
1-4
2
1-4
2
1-4
2
2
1-4
1-6
3-6
2-6
2-6
1-4
1-4
2
1-4
2
1-4
Аналогично, заместители для арильных и гетероарильных групп являются различными, и обычно выбраны из группы, включающей, но не ограничиваясь ими, -галоген, -OR’, -OC(O)R’, -NR’R", -SR’, -R’, -CN, -NO, -COR’, -CONR’R”, -C(O)R’, -OC(O)NR’R”, -NR”C(O)R’, -NR”C(O)R’, -NR’C(O)NR”R’’’, -NHC(NH)=NH, -NR’C(NH)=NH, -NHC(NH)=NR’, -S(O)R’, -S(O)R’, -S(O)NR’R”, -NR’S(O)R”, -N, перфтор-С алкоксигруппу и перфтор-С алкил, -(CH)-OR’, -(CH)-NR’R”, -(CH)-SR’, -(CH)-SiR’R”R’’’, -(CH)-OC(O)R’, -(CH)-C(O)R’, -(CH)-COR’, -(CH)CONR’R”, в диапазоне значений от 0 до общего количества открытых валентностей в ароматической кольцевой системе; и где R’, R” и R’’’ независимо выбраны из водорода, С алкила, С циклоалкила, С алкенила, С алкинила, незамещенного арила и гетероарила, (незамещенный арил)-С алкила и незамещенного арилокси-С алкила. Другие подходящие заместители включают каждый из описанных арильных заместителей, присоединенный к кольцевому атому через алкиленовую цепь из 1 -4 атомов углерода. Когда заместитель для арильной или гетероарильной группы содержит алкиленовый линкер (например -(CH)-NR’R”), алкиленовый линкер включает также его галогензамещенные варианты. Например, линкер "-(CH)-" при использовании как часть заместителя включает дифторметилен, 1,2-дифторэтилен и т.д.
Как здесь используется, термин "гетероатом" включает кислород (О), азот (N), серу (S) и кремний (Si).
Используемый здесь термин "хиральный" относится к молекулам, которые обладают свойством неналоженности зеркальных отображений, а термин "ахиральный" относится к молекулам, которые являются наложенными зеркальными отображениями своего партнера.
Используемый здесь термин "стереоизомеры" означает соединения, которые имеют одинаковый химический состав, но различаются по расположению атомов или групп в пространстве.
Используемая здесь волнистая линия "", пересекающая связь в химической структуре, указывает на точку присоединения атома, к которому связь присоединена в химической структуре, к остальной части молекулы, или к остатку фрагмента молекулы.
"Диастереомер" относится к стереоизомеру с двумя или более хиральными центрами, и молекулы которых не являются зеркальными отражениями друг друга. Диастереоизомеры имеют различные физические свойства, например, температуру плавления, кипения, спектральные свойства и реакционоспособность. Смеси диастереомеров могут разделяться аналитическими методиками высокого разрешения, такими как электрофорез и хроматография.
"Энантиомеры" относятся к двум стереоизомерам соединения, которые не являются наложенными зеркальным отражениями друг друга.
Используемые здесь стереохимические определения и обозначения, как правило, взяты из источников: под ред. S.P.Parker, McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms, 1984, McGraw-Hill Book Company, New York; и Eliel, E. и Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Соединения по изобретению могут содержать асимметричные или хиральные центры, и поэтому существуют в разных стереоизомерных формах. Предполагается, что все стереоизомерные формы соединений по изобретению, включая, но не ограничиваясь ими, диастереомеры, энантиомеры и атропизомеры, а также их смеси, такие как рацемические смеси, составляют часть настоящего изобретения. Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, т.е. они обладают способностью вращать плоскость линейно поляризованного света. При описании оптически активного соединения префиксы D- и L- или R- и S- используются для обозначения абсолютной конфигурации молекулы относительно его хирального центра (центров). Префиксы d- и l- или (+) и (-) используются для обозначения знака вращения плоскости поляризованного света соединением, причем (-) или l означает, что соединение является левовращающим. Соединение с префиксом (+) или d является правовращающим. Для данной химической структуры эти стереоизомеры идентичны, за исключением того, что они являются зеркальным отображением друг друга. Конкретный стереоизомер также может обозначаться как энантиомер, и смесь таких изомеров часто называют энантиомерной смесью. Смесь энантиомеров 50:50 называется рацемической смесью или рацематом, которые могут образовываться там, где не было стереоселективности или стереоспецифичности в ходе химической реакции или процесса. Термины "рацемическая смесь" и "рацемат" относятся к эквимолярной смеси двух энантиомерных видов, лишенных оптической активности.
Используемый здесь термин "таутомер" или "таутомерная форма" относится к структурным изомерам с различными энергиями, которые превращаются друг в друга через низкий энергетический барьер. Например, протонные таутомеры (также известные как прототропные таутомеры) включают взаимные превращения через миграцию протона, такие как кето-енольные и имин-енаминовые изомеризации. Валентные таутомеры включают взаимные превращения путем реорганизации некоторых связывающих электронов.
Используемый здесь термин "сольват" относится к ассоциации или комплексу одной или нескольких молекул растворителя и соединения по изобретению. Примеры растворителей, которые образуют сольваты, включают, но не ограничиваются ими, воду, изопропанол, этанол, метанол, ДМСО, этилацетат, уксусную кислоту и этаноламин. Термин "гидрат" относится к комплексу, где молекулами растворителя являются молекулы воды.
Используемый здесь термин "защитная группа" обозначает заместитель, который обычно используется для блокирования или защиты определенной функциональной группы соединения. Например, "защитной группой для аминогруппы" является заместитель, присоединенный к аминогруппе, который блокирует или защищает аминогруппу соединения. Подходящие защитные группы для аминогруппы включают ацетил, трифторацетил, трет-бутоксикарбонил (ВОС), бензилоксикарбонил (CBZ) и 9-флуоренилметиленоксикарбонил (Fmoc). Аналогично, "защитная группа для гидроксигруппы" относится к заместителю гидроксильной группы, которая блокирует или защищает гидроксигруппу. Подходящие защитные группы включают ацетил и силил. "Защитная группа для карбоксигруппы" относится к заместителю карбоксильной группы, которая блокирует или защищают карбоксильную группу. Общие защитные группы для карбоксигруппы включают фенилсульфонилэтил, цианоэтил, 2-(триметилсилил)этил, 2-(триметилсилил)этоксиметил, 2-(п-толуолсульфонил)этил, 2-(п-нитрофенилсульфенил)этил, 2-(дифенилфосфино)этил, нитроэтил и им подобные. Для общего описание защитных групп и их использования см. книгу P.G.M.Wuts и T.W.Greene, Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis, 4-oeиздание, Wiley-Interscience, New York, 2006.
Используемый здесь термин "млекопитающее" включают, но не ограничивается ими, людей, мышей, крыс, морских свинок, обезьян, собак, кошек, лошадей, коров, свиней и овец.
Используемый здесь термин "фармацевтически приемлемые соли" включает соли активного соединения, которые получают с относительно нетоксичными кислотами или основаниями, в зависимости от конкретных заместителей в описанных здесь соединениях. Когда соединения настоящего изобретения содержат относительно кислые функциональные группы, основные аддитивные соли могут быть получены объединением нейтральной формы такого соединения с достаточным количеством желаемого основания, без растворителя или в подходящем инертном растворителе. Примеры солей, полученных с фармацевтически приемлемыми неорганическими основаниями, включают соли алюминия, аммония, кальция, меди, железа (III), железа (II), лития, магния, марганца (III), марганца (II), калия, натрия, цинка и тому подобных. Соли, полученные с фармацевтически приемлемыми органическими основаниями, включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, в том числе замещенных аминов, циклических аминов, природных аминов и им подобных, таких как, например, аргинин, бетаин, кофеин, холин, N, N-дибензилэтилендиамин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, N-этилморфолин, N-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лизин, метилглюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминовые смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин, трометамин и им подобные. Когда соединения настоящего изобретения содержат относительно основные группы, кислотные аддитивные соли могут быть получены объединением нейтральной формы такого соединения с достаточным количеством желаемой кислоты, без растворителя или в подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемых кислотных аддитивных солей включают соли, полученные с неорганическими кислотами, такими как соляная, бромистоводородная, азотная, угольная, моногидрокарбоновая, фосфорная, моногидрофосфорная, дигидрофосфорная, серная, моногидросерная, йодистоводородная или фосфористая кислота и им подобные, а также соли, полученные с относительно нетоксичными органическими кислотами, такими как уксусная, пропионовая, изомасляная, малоновая, бензойная, янтарная, субериновая, фумаровая, миндальная, фталевая, бензолсульфоновая, п-толилсульфоновая, лимонная, винная, метансульфоновая и им подобные. Также включены соли с аминокислотами, такие как аргинат и ему подобные, и соли с органическими кислотами, такими как глюкуроновая или галактуроновая кислота и им подобные (см., например, статью Berge S.М. и др., "Pharmaceutical Salts", Journal Pharmaceutical Science, 1977, 66, сс.1-19). Некоторые конкретные соединения настоящего изобретения содержат как основные, так и кислотные функциональные группы, которые позволяют соединениям превращаться в основные или кислотные аддитивные соли.
Нейтральные формы соединений могут быть восстановлены контактированием соли с основанием или кислотой и выделением исходного соединения обычным образом. Исходная форма соединения отличается от различных форм солей некоторыми физическими свойствами, такими как растворимость в полярных растворителях, но в любом случае соли эквивалентны исходной форме соединения в целях настоящего изобретения.
В дополнение к формам солей, настоящее изобретение относится к соединениям, которые находятся в пролекарственной форме. Используемый здесь термин "пролекарство" относится к тем соединениям, которые легко подвергаются химическим изменениям в физиологических условиях с получением соединений настоящего изобретения. Дополнительно, пролекарства могут быть превращены в соединения настоящего изобретения химическими или биохимическими методами в условиях ex vivo. Например, пролекарства могут медленно превращаться в соединения настоящего изобретения, если их поместить в резервуар трансдермального пластыря с соответствующим ферментом или химическим реагентом.
Пролекарства по изобретению включают соединения, в которых аминокислотный остаток или полипептидная цепь из двух или более (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков ковалентно связана амидной или сложноэфирной связью со свободной аминогруппой, гидроксигруппой или группой карбоновой кислоты соединения настоящего изобретения. Аминокислотные остатки включают, но не ограничиваются ими, 20 природных аминокислот, обычно обозначаемых тремя буквенными символами, а также включают фосфосерин, фосфотреонин, фосфотирозин, 4-гидроксипролин, гидроксилизин, демозин, изодемозин, гамма-карбоксиглутамат, гиппуровую кислоту, октагидроиндол-2-карбоновую кислоту, статин, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновую кислоту, пеницилламин, орнитин, 3-метилгистидин, норвалин, бета-аланин, гамма-аминобутановую кислоту, цитруллин, гомоцистеин, гомосерин, метилаланин, пара-бензоилфенилаланин, фенилглицин, пропаргилглицин, саркозин, метионинсульфон и трет-бутилглицин.
1-6
1-6)
1-6
1-6)
1-6
1-6
2
1-6
2
Также включены дополнительные виды пролекарств. Например, свободные карбоксильные группы соединения по изобретению могут быть превращены в амид или алкиловый эфир. В качестве другого примера соединения настоящего изобретения, включающие свободные гидроксильные группы, могут быть превращены в пролекарства путем превращения гидроксильных групп в группы, такие как, но не ограничиваясь ими, эфир фосфорной кислоты, гемисукцинат, диметиламиноацетат или фосфорилоксиметилоксикарбонил, как описано в статье Fleisher, D. и др.. Improved oral drug delivery: solubility limitations overcome by the use of prodrugs Advanced Drug Delivery Reviews, 1996, 19, с.115. Также включены карбаматные пролекарства гидроксигрупп и аминогрупп, а также карбонатные пролекарства, сульфонатные эфиры и сульфатные эфиры гидроксигрупп. Также описано получение производных гидроксильных групп, таких как (ацилокси)метил и (ацилокси)этиловый эфир, где ацильная группа может быть алкиловым эфиром, необязательно замещенным группами, включая, но не ограничиваясь ими, эфирные группы, аминогруппы и группы карбоновых кислот, или где ацильная группа является сложным эфиром аминокислоты, как описано выше. Пролекарства этого типа описаны в статье J. Med. Chem., 1996, 39, с.10. Более конкретные примеры включают замещение атома водорода спиртовой группы группой, такой как (С)алканоилоксиметил, l-((Cалканоилокси)этил, 1-метил-1-((С)алканоилокси)этил, (Cалкоксикарбонилоксиметил, N-(C)алкоксикарбониламинометил, сукциноил, (С)алканоил, альфа-аминов.д)алканоил, арилацил и альфа-аминоацил, или альфа-аминоацил-альфа-аминоацил, где каждая альфа-аминоацильная группа независимо выбрана из природных L-аминокислот, Р(O)(ОН), -Р(O)(O(С)алкил) или гликозила (радикал приводит к удалению гидроксильной группы гемиацетальной формы углевода).
Дополнительные примеры пролекарственных производных см., например, источники a) Design of Prodrugs, под ред. Н. Bundgaard, (Elsevier, 1985) и Methods in Enzymology, Т. 42, с.309-396, под ред. K.Widder и др. (Academic Press, 1985); b) A Textbook of Drug Design and Development, под ред. Krogsgaard-Larsen и H.Bundgaard, Глава 5 "Design and Application ofProdrugs," H. Bundgaard, 1991, cc.113-191; с) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 1992, 8, cc.1-38; d) H.Bundgaard и др., Journal Pharmaceutical Sciences, 1988, 77, с.285; и е) N.Kakeya и др., Chem. Pharm. Bull., 1984, 32, с.692, каждый из которых включен в качестве ссылки.
Дополнительно, настоящее изобретение относится к метаболитам соединений по изобретению. Как здесь используется, "метаболит" относится к продукту, полученному с помощью метаболизма в организме указанного соединения или его соли. Такие продукты могут быть получены, например, окислением, восстановлением, гидролизом, амидированием, дезамидированием, этерификацией, дезэтерификацией, ферментативным расщеплением введенного соединения и им подобными методами.
14
3
Продукты метаболизма обычно идентифицируют путем получения радиоактивно меченного (например, С или H) изотопа соединения по изобретению, введения его парентерально в определимой дозе (например, более 0,5 мг/кг) животным, таким как крысы, мыши, морские свинки, обезьяны или человек, оставляя на время, достаточное для протекания метаболизма (обычно около 30 секунд до 30 часов), и выделения продуктов превращения из мочи, крови или других биологических образцов. Эти продукты легко выделить, поскольку они мечены (другие выделяют с помощью антител, способных связывать эпитопы, сохраненные в метаболите). Структуры метаболитов определяют обычным способом, например, MS, LC/MS или ЯМР-анализом. Обычно анализ метаболитов осуществляют таким же способом, как и обычные исследования метаболизма лекарственного препарата, хорошо известным специалистам в данной области техники. Продукты метаболизма, поскольку они не обнаруживаются in vivo, могут использоваться в диагностических анализах для определения терапевтической дозировки соединений по изобретению.
Некоторые соединения настоящего изобретения могут существовать в несольватированных формах, а также в сольватированных формах, включая гидратированные формы. Обычно сольватированные формы эквивалентны несольватированным формам, и охватываются настоящим изобретением. Некоторые соединения настоящего изобретения могут существовать в нескольких кристаллических или аморфных формах. Обычно все физические формы эквивалентны по применению, предусмотренному настоящим изобретением, и входят в объем настоящего изобретения.
Некоторые соединения настоящего изобретения имеют асимметричные атомы углерода (оптические центры) или двойные связи; рацематы, диастереомеры, геометрические изомеры, региоизомеры и индивидуальные изомеры (например, отдельные энантиомеры) все охватываются настоящим изобретением.
2
3
11
13
14
13
15
15
17
18
32
33
35
18
36
123
125
3
14
3
14
2
15
13
11
18
Соединения настоящего изобретения также могут содержать неприродные пропорции атомных изотопов в одном или нескольких атомах, которые составляют такие соединения. Например, настоящее изобретение также охватывает изотопно меченные варианты настоящего изобретения, которые идентичны описанным здесь, но отличаются тем, что один или несколько атомов замещены атомом с атомной массой или массовым числом, отличным от преобладающей массы атома или массового числа, обычно встречающегося для атома в природе. Все изотопы любого конкретного атома или элемента охватываются рамками изобретения, а также их применение. Примерные изотопы, которые могут быть включены в соединения по изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, серы, фтора, хлора и иода, например Н, Н, С, С, С, N, N, О, О, О, Р, Р, S, F, Cl, I и I. Некоторые изотопно меченные соединения настоящего изобретения (например, меченные Н или С) используются в анализах распределения соединения и/или субстрата в тканях. Тритиевые (Н) и углерод (С) изотопы отличаются простотой получения и обнаружения. Дальнейшее замещение тяжелыми изотопами, такими как дейтерий (то есть Н), может производить определенные терапевтические преимущества, приводящие к большей метаболической стабильности (например, повышению периода полураспада in vivo или снижению потребляемой дозы) и, следовательно, может быть предпочтительным при некоторых обстоятельствах. Позитронизлучающие изотопы, такие как О, N, С и F, полезны для исследований позитронно-эмиссионной томографией (ПЭТ) для изучения замещения рецептора субстратом. Изотопно меченные соединения настоящего изобретения могут быть получены методиками, аналогичными описанным на схемах и/или в примерах ниже, заменяя изотопно меченный реагент на немеченый реагент.
Термины "лечить" и "лечение" относятся к терапевтическому лечению и профилактическим или превентивным мерам, где целью является предотвращение или замедление (снижение) нежелательных физиологических изменений или нарушений, таких, как развитие или распространение рака. В целях настоящего изобретения полезные или желаемые клинические результаты включают, но не ограничиваются ими, облегчение симптомов, снижение степени тяжести заболевания, стабилизированное (т.е. неухудшенное) состояние заболевания, задержка или замедление прогрессирования заболевания, улучшение или облегчение болезненного состояния и ремиссия (частичная или полная), обнаруживаемая или необнаруживаемая. "Лечение" также может обозначать продление жизни по сравнению с ожидаемым временем жизни без лечения. Нуждающиеся в лечении включают тех, кто уже имеет состояние или нарушение, а также тех, которые склонны к состоянию или нарушению, или тех, у которых состояние или нарушение должно быть предотвращено.
Фраза "терапевтически эффективное количество" означает количество соединения настоящего изобретения, которое (i) излечивает или предотвращает конкретное заболевание, состояние или нарушение, (ii) облегчает, улучшает или устраняет один или несколько симптомов конкретного заболевания, состояния или нарушения, или (iii) предотвращает или замедляет начало одного или нескольких симптомов конкретного заболевания, состояния или нарушения, описанного здесь. В случае рака терапевтически эффективное количество лекарственного препарата может уменьшать количество раковых клеток, снижать размер опухоли, ингибировать (например, замедлять в некоторой степени и предпочтительно останавливать) инфильтрацию раковых клеток в периферические органы; подавлять (например, замедлять в некоторой степени и желательно останавливать) метастаз опухоли, ингибировать в некоторой степени рост опухоли и/или облегчать некоторой степени один или несколько симптомов, связанных с раком. В этой степени препарат может предотвращать рост и/или убивать существующие раковые клетки, он может быть цитостатическим и/или цитотоксическим. Для лечения рака эффективность можно измерить, например, путем оценки времени прогрессирования заболевания (ТТР) и/или определением скорости откликов (RR).
Термины "рак" и "раковый" относятся или описывают физиологическое состояние млекопитающих, которые обычно характеризуются нерегулируемым ростом клеток. "Опухоль" включает одну или более раковых клеток. Примеры рака включают, но не ограничиваются ими, карциному, лимфому, бластому, саркому, лейкемию и злокачественные новообразования лимфоидной ткани. Более конкретные примеры такого вида рака включают плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак легких, включая мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких ("NSCLC"), аденокарциному легких и плоскоклеточную карциному легких, рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, рак желудка или кишечника, включая рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичников, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, колоректальный рак, карциному эндометрия или матки, карциному слюнной железы, рак почки или почечный рак, рак простаты, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному печени, анальную карциному, карциному полового органа, а также рак головы и шеи.
Используемый здесь термин "дополнение" относится к применению активного соединения в сочетании с известными терапевтическими средствами. Такие средства включают цитотоксические режимы лекарственных препаратов и/или ионизирующего излучения, используемые при лечении различных видов рака. Примеры химиотерапевтических агентов, которые могут быть объединены с соединениями по изобретению, включает эрлотиниб (TARCEVA, Genentech/OSI Pharm.), бортезомиб (VELCADE, Millennium Рпагт.),фулвестрант (Faslodex, AstraZeneca), сутент (SU11248, Pfizer), летрозол (FEMARA, Novartis), иматиниб мезилат (GLEEVEC, Novartis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), оксалиплатин (Eloxatin, Sanofi), 5-FU (5-фторурацил), лейковорин, рапамицин (Sirolimus, RAPAMUNE, Wyeth), лапатиниб (TYKERB, GSK572016, Glaxo Smith Kline), лонафарниб (SCH 66336), сорафениб (BAY43-9006, Bayer Labs) и гефитиниб (IRESSA, AstraZeneca), AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), алкилирующие агенты, такие как тиотепа и CYTOXAN циклофосфамид; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквуон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметиломеламин; ацетогенины (особенно буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его синтетические аналоги адозелесин, карзелесин и бизелесин); криптофицины (особенно криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая его синтетические аналоги, KW-2189 и СВ1-ТМ1); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктиин; спонгистатин; горчичный азот, такие как хлорамбуцил, хломафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид мехлорэтаминоксида, мелфалан, новембичин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, горчичный урацил; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимнустин, антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, особенно калихеамицин гамма1I и калихеамицин омега1I (Angew Chem. Intl. Ed. Engl., 1994, 33, c.183-186); динемицин, включая динемицин А; бисфосфонаты, такие как клодронат; эсперамицин; а также неокарциностатиновый хромофор и связанные хромопротеиновые энедииновые хромофоры антибиотиков), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, каминомицин, карцинофиллин, хромомицин, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, адриамицин (доксорубицин), морфолинодоксорубицин, цианоморфолинодоксорубицин, 2-пирролинодоксорубицин и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, куеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU), аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин, андрогены, такие как калустерон, дромостанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадренергические агенты, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; агенты для корректировки уровня фолиевой кислоты, такие как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамида гликозид; аминолевулиновая кислота; енилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквуон; эльформитин; эллиптиния ацетат; эпотилон; этоглуцид; галлия нитрат; гидроксимочевина; лентинан; лонидайнин; майтансиноиды, такие как майтансин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраерин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; PSK полисахаридный комплекс (JHS Natural Products, Eugene, Oreg.); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквуон; 2,2’,2”-трихлортриэтиламин; трихотецены (особенно Т-2 токсин, верракурин А, родинин А и ангуидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид ("Ara-C"); циклофосфамид; тиотепа; таксоиды, например TAXOL (паклитаксель; Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE™ (не содержащий кремофора), альбумин-конструированные наночастицы составов паклитакселя (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Ill.) и TAXOTERE (доксетаксель; Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); хлоранмбуцил; GEMZAR (гемцитабин); 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; платиновые аналоги, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; NAVELBINE (винорельбин); новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; капецитабин (XELODA); ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; и их фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные.
Кроме того, в определение "химиотерапевтического агента" включены: (i) антигормональные агенты, которые действуют как регуляторы или ингибиторы действия гормона на опухоль, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы рецептора эстрогена (SERM), включая, например, тамоксифен (включая NOLVADEX, тамоксифена цитрат), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и FARESTON (торемефина цитрат); (ii) ингибиторы ароматазы, которые ингибируют фермент ароматазу, который регулирует выработку эстрогена в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, MEGASE (мегестрола ацетат), AROMASIN (экземестан, Pfizer), форместан, фадрозол, RIVISOR (ворозол), FEMARA (летрозол, Novartis) и ARIMIDEX (анастрозол, AstraZeneca); (iii), антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин, а также троксацитабин (1,3-диоксолановый нуклеозидный аналог цитозина); (iv) ингибиторы протеинкиназы, например, ингибитор PI3K, ингибитор МЕК и т.д.; (v) ингибиторы липидной киназы, (vi) антисмысловые олигонуклеотиды, особенно те, которые ингибируют экспрессию генов в сигнальных путях, участвующих в нарушенной пролиферации клеток, такие как, например, PKC-альфа, и H-Ras, (vii) рибозимы, такие как ингибиторы экспрессии VEGF (например, ANGIOZYME) и ингибиторы экспрессии HER2; (viii) вакцины, такие как вакцины генной терапии, например, ALLOVECTIN, LEUVECTIN и VAXID; PROLEUKIN rIL-2; ингибиторы топоизомеразы 1, такие как LURTOTECAN; ABARELIX rmRH; (ix), антиангиогенные агенты, такие как бевацизумаб (AVASTIN, Genentech) и (x) фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любых вышеперечисленных агентов. Активные соединения также могут использоваться в качестве добавок культуры клеток для ингибирования mTOR, например, для повышения чувствительности клеток к известным химиотерапевтическим агентам или ионизирующему излучению in vitro.
Соединения
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы I:
1
1
R1
a
b
a
a
a
a
b
a
a
b
c
a
a
b
a
b
a
a
b
a
a
b
c
c1
1
a
b
1
a
1
a
l
a
l
a
b
l
a
l
a
b
1
a
l
a
a
b
1
a
b
l
a
a
b
l
a
1
a
b
1
1
1
1
c1
a
b
a
b
c
1
c1
c1
a
b
a
a
a
a
b
2
2
R2
d
e
d
d
d
d
e
d
d
e
f
d
d
e
d
e
d
d
e
d
d
e
f
2
d
e
2
d
2
d
2
d
2
d
e
2
d
2
d
e
2
d
2
d
d
e
2
d
e
2
d
d
e
2
d
2
d
e
2
2
2
d
e
d
e
f
1
3
3
R3
g
g
h
g
h
g
g
i
i
i
g
h
g
h
i
3
R3
3
1
2
3
4
A
1
2
3
4
A
A
A
4
5
6
5
6
5
6
5
5
6
4
5
6
4
5
5
6
4
5
5
6
4
5
4
5
4
5
6
4
5
4
5
6
5
6
D
4
5
6
j
k
j
j
j
j
k
j
k
j
m
3
j
k
3
j
2
j
3
j
3
j
k
3
j
k
3
j
k
3
3
m
m
m
j
k
m
3
A
D
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
1-6
1-6
1-6
2-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-6
1-6
2-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-4
2-4
2-4
2
2
2
3
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
2-6
2-6
1-6
6-10
1-9
3-12
2-12
1-6
2-6
2-6
1-6
2
2
2
2
3
2
2
2
3
1-6
1-6
1-6
2-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-6
1-6
2-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-4
2-4
2-4
2
2
3
1-6
1-6
1-6
2-6
3-6
1-6
1-6
2-6
3-6
2
1-4
2-4
2-4
2-6
3-7
1-5
2
2
1-6
1-6
2-6
1-6
1-6
2-6
2-6
3-10
2-10
6-10
1-9
2
2
2
1-6
1-6
2-6
2-6
1-6
3-7
3-7
6-10
1-9
1-6
1-6
3-7
3-7
6-10
1-9
1-4
2-4
2-4
где R выбран из группы, состоящей из 6-10-членного арила, 5-9-членного гетероарила, 3-12-членного гетероциклоалкила, 3-12-членного циклоалкила, где R замещен 0-5 заместителями R, выбранными из группы, состоящей из галогена, F, Cl, Br, I, -NRR, -SR, -OR, -C(O)OR, -C(O)NRR, -C(O)R, -NRC(O)R, -OC(O)R, -NRC(O)NRR, -OC(O)NRR, -NRS(O)NRR, -S(O)R, -S(O)NRR, -R, -NO, -N, =O, -CN, R, -X-NRR, -X-SR, -X-OR, -X-C(O)OR, -X-C(O)NRR, -X-C(O)R, -X-NRC(O)R, -X-OC(O)R, -X-NRC(O)NRR, -X-OC(O)NRR, -X-NRS(O)NRR, -X-S(O)R, -X-S(O)NRR, -X-NO, -X-N, -X-CN и X-R; где R и R каждый независимо выбран из водорода, C алкила, C галогеналкила, C гетероалкила, С алкенила, С алкинила, С циклоалкила, C гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила, необязательно R и R, когда присоединены к одному атому азота, объединены с образованием 3-6-членного гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О и S; R выбран из C алкила, C галогеналкила, С алкенила, С алкинила, С циклоалкила, С гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила; Х выбран из группы, состоящей из С алкилена, C алкенилена и C алкинилена; и R выбран из группы, состоящей из фенила, 2-пиридила, 3-пиридила, 4-пиридила, 2-имидазолила, 2-индолила, 1-нафтила, 2-нафтила, 2-тиенила, 3-тиенила, 2-пирролила, 2-фуранила и 3-фуранила, и где R замещен от 0 до 3 заместителями, выбранными из F, Cl, Br, I, -NRR, -SR, -OR, -S(O)R, -S(O)NRR, -NO, -N, =O, -CN, пиридила, С алкила, С алкенила, С алкинила и C гетероалкила. R выбран из группы, состоящей из следующих групп: водород, C алкил, С алкенил, С алкинил, C гетероалкил, 6-10-членный арил, 5-10-членный гетероарил, 3-12-членный гетероциклоалкил, 3-12-членный циклоалкил, -L-С арил, -L-C гетероарил, -L-С циклоалкил, -L-С гетероциклоалкил, где L выбран из C алкилена, С алкенилена, С алкинилена и C гетероалкилена, и где R замещен от 0 до 5 заместителями R, выбранными из группы, состоящей из галогена, F, Cl, Br, I, -NRR, -SR, -OR, -С(O)OR, -C(O)NRR, -С(O)R, -NRC(O)R, -OC(O)R, -NRC(O)NRR, -OC(O)NRR, -NRS(O)NRR, -S(O)R, -S(O)NRR, -R, -NO, -N, =О, -CN, -X-NRR, -X-SR, -X-OR, -X-C(O)OR, -X-C(O)NRR, -X-C(O)R, -X-NRC(O)R, -X-OC(O)R, -X-NRC(O)NRR, -X-OC(O)NRR, -Х-NRS(О)NRR, -X-S(O)2R, -X-S(O)NRR, -X-NO, -X-N и -X-CN; где R и R каждый независимо выбран из водорода, C алкила, C галогеналкила, C гетероалкила, С алкенила, С алкинила, С циклоалкила, С гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила, необязательно R и R, когда присоединены к одному атому азота, объединены с образованием 3-6-членного гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О и S; R выбран из C алкила, C галогеналкила, С алкенила, С алкинила, С циклоалкила, С гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила; и Х выбран из группы, состоящей из С алкилена, C алкенилена и C алкинилена. R представляет собой 5-12-членное моноциклическое или мостиковое гетероциклоалкильное кольцо, где группа R замещена от 0 до 3 заместителями R, выбранными из группы, состоящей из -C(O)OR, -C(O)NRR, -NRR, -OR, -SR, -S(O)R, -S(O)R, -R, галогена, F, Cl, Br, I, -NO, -CN и -N, где R и R каждый независимо выбран из водорода, C алкила, C галогеналкила, C гетероалкила, С алкенила и С циклоалкила, где необязательно R и R, вместе с атомом азота, к которому каждый присоединен, объединены с образованием 3-6-членного гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О и S, и R выбран из C алкила, C галогеналкила, С алкенила, С циклоалкила; и если R представляет собой моноциклическое гетероциклоалкильное кольцо, тогда любые две группы R, присоединенные к одному атому R, необязательно объединены с образованием 3-7-членного карбоциклического или 3-7-членного гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 атома, выбранных из N, О и S в качестве вершин кольца. А, А, А и А каждый независимо выбран из N, C(R) или С(Н), где по крайней мере три А, А, А и А каждый независимо представляет собой С(Н) или C(R), где R в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br, I, -NO, -CN, С алкила, C алкенила, C алкинила, или любые две группы R, присоединенные к соседним атомам, необязательно объединены с образованием С гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О и S в качестве вершин кольца, С циклоалкильного кольца, С гетероарильного кольца, содержащего от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, О и S в качестве вершин кольца, или фенильного кольца. Наконец, D выбран из группы, состоящей из -NRC(O)NRR, -NRR, -C()NRR, -OC(O)OR, -OC(O)NRR, -NRC(=N-CN)NRR, -NRC(=N-OR)NRR, -NRC(=N-NR)NRR, -NRC(O)R, -NRC(O)OR, -NRS(O)NRR и -NRS(O)R, где Rвыбран из группы, состоящей из водорода, C алкила, C галогеналкила и С алкенила; R и R каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, C алкила, C галогеналкила, C алкенила, С алкинила, С циклоалкила, С гетероциклоалкила, С арила и C гетероарила, и Rи R, когда присоединены к одному атому азота, необязательно объединены с образованием 5-7-членного гетероциклического или 5-9-членного гетероарильного кольца, содержащего 1-3 гетероатома, выбранных из N, О и S в качестве вершин кольца, и замещенные 0-3 заместителями R; и где R, R и R далее замещены от 0 до 3 заместителями R, где R независимо выбран из группы, состоящей из галогена, F, Cl, Br, I, -NO, -CN, -NRR, -OR, -SR, -C(O)OR, -C(O)NRR, -NRC(O)R, -NRC(O)OR, -X-NRR, -X-OR, -X-SR, -X-C(O)OR, -X-C(O)NRR, -X-NRC(O)R, -X-NRC(O)OR, -X-CN, -X-NO, -S(O)R, -S(O)R, -О и -R; где R и R выбран из водорода, C алкила, C галогеналкила, С алкенила, С алкинила, C гетероалкила, С циклоалкила, C гетероциклоалкила, С арила, C гетероарила; и R, в каждом случае, независимо выбран из С алкила, C галогеналкила, С циклоалкила, С гетероциклоалкила, С арила и C гетероарила, и Х выбран из группы, состоящей из С алкилена, C алкенилена и С алкинилена, и где D и заместитель R, присоединенный к атому, который является соседним с атомом, к которому присоединен D, необязательно объединены с образованием необязательно замещенного 5-6-членного гетероциклического или гетероарильного кольца, замещенного от 0 до 4 заместителями R.
В одном варианте осуществления соединениями формулы I являются соединения формулы I-A:
3
3
R3
g
g
h
g
h
g
g
i
i
i
g
h
g
h
i
3
R3
3
3
R3
g
h
g
i
3
R3
3
3
3
2
2
2
3
1-6
1-6
1-6
2-6
3-6
1-6
1-6
2-6
3-6
В другом варианте осуществления в соединении формулы I или I-A радикал R выбран из группы, включающей морфолин-4-ил, 3,4-дигидро-2Н-пиран-4-ил, 3,6-дигидро-2Н-пиран-4-ил, тетрагидро-2Н-пиран-4-ил, 1,4-оксазепан-4-ил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ил, 3-окса-8-азабицикло[3.2.1]октан-8-ил, пиперидин-1-ил и 8-окса-3-азабицикло[3.2.1]октан-3-ил, где R группа замещена 0-3 R заместителями, выбранными из группы, состоящей из -C(O)OR, -C(O)NRR, -NRR, -OR, -SR, -S(O)R, -S(O)R, -R, галогена, F, Cl, Br, I, -NO, -CN и -N, где R и R каждый независимо выбран из водорода, C алкила, С галогеналкила, C гетероалкила, С алкенила и С циклоалкила, где необязательно R и R вместе с атомом азота, к которому каждый присоединен, объединены с образованием 3-6-членного гетероциклического кольца, включающего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О и S, и R выбран из C алкила, C галогеналкила, С алкенила, С циклоалкила; и если R представляет собой моноциклическое гетероциклоалкильное кольцо, тогда любые две R группы, присоединенные к одному атому R, необязательно объединены с образованием 3-7-членного карбоциклического или 3-7-членного гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 атома, выбранных из N, О и S в качестве вершин кольца. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления R замещен 0-2 заместителями R, выбранными из -NRR, -OR и R, и когда R представляет собой моноциклическое гетероциклоалкильное кольцо, тогда любые две группы R, присоединенные к одному атому R, необязательно объединены с образованием 3-7-членного карбоциклического или 3-7-членного гетероциклического кольца, включающего 1 или 2 атома, выбранных из N, О и S в качестве вершин кольца. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления R выбран из группы, включающей морфолин-4-ил, 3(R)-метилморфолин-4-ил, 3(S)-метилморфолин-4-ил, 3(R)-этилморфолин-4-ил, 3(S)-этилморфолин-4-ил, 3(R)-изопропилморфолин-4-ил, 3(S)-изопропилморфолин-4-ил, 3,3-диметилморфолин-4-ил, 3,4-дигидро-2Н-пиран-4-ил, 3,6-дигидро-2Н-пиран-4-ил, тетрагидро-2Н-пиран-4-ил, 1,4-оксазепан-4-ил, пиперидин-1-ил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ил, 3-окса-8-азабицикло[3.2.1]октан-8-ил, 4-метоксипиперидин-1-ил и 8-окса-3-азабицикло[3.2.1]октан-3-ил. В частности, R представляет собой 3-метилморфолин-4-ил.
4
5
6
5
6
5
6
4
5
6
4
5
4
5
4
5
6
4
5
4
5
6
5
6
4
5
6
5
6
D
2
2
1-6
1-6
1-6
3-7
2-7
6-10
1-9
В другом варианте осуществления в соединении формулы I или I-A D выбран из группы, состоящей из -NRC(O)NRR, -NRR, -C(O)NRR, -NRC(=N-CN)NRR, -NRC(O)R, -NRC(O)OR, -NRS(O)NRR и -NRS(O)R. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления D представляет собой -NRC(O)NRR или -NRR, где R представляет собой водород, R и R каждый независимо представляет собой необязательно замещенную группу, выбранную из группы, состоящей из водорода, С алкила, C гетероалкила, C галогеналкила, С циклоалкила, С гетероциклоалкила, С арила и С гетероарила, и R и R, когда присоединены к одному атому азота, необязательно объединены с образованием 5-7-членного гетероциклического кольца или 5-9-членного гетероарильного кольца, включающего 1-3 гетероатома, выбранных из N, О и S, в качестве вершин кольца и замещенного 0-3 заместителями R.
5
6
5
6
5
6
5
6
1-3
6-10
1-9
3-7
1-3
3-7
В другом варианте осуществления в соединении формулы I или I-A D представляет собой -NRR, где R представляет собой водород или С алкил, и R представляет собой необязательно замещенный С арил, С гетероарил или С гетероциклоалкил. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления D представляет собой -NRR, где R представляет собой водород или С алкил, и R представляет собой необязательно замещенный С гетероциклоалкил, выбранный из группы, состоящей из:
, , , , , , , , , , и ;
3-7
D
j
k
j
s
где атом водорода, присоединенный к одному или нескольким атомам азота или углерода вершин кольца в С гетероциклоалкильном кольце, необязательно заменен заместителем R, выбранным из группы, состоящей из F, Cl, Br, I, -NRR, -OR и R. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления D выбран из группы, состоящей из:
, , , , , , , , , ,  и .
5
6
5
6
В другом варианте осуществления в соединениях формулы I или I-A D представляет собой -NRR, где R и R объединены с образованием необязательно замещенного 5-членного гетероарильного кольца, выбранного из группы, состоящей из пирролила, пиразолила, имидазолила и триазолила.
4
5
6
4
5
6
5
6
4
5
6
6
1-6
1-6
1-6
3-7
3-7
1-6
1-6
В другом варианте осуществления в соединениях формулы I или I-A D представляет собой -NRC(O)NRR, где R представляет собой водород; R и R каждый независимо представляет собой необязательно замещенную группу, выбранную из группы, включающей водород, С алкил, C галогеналкил, C гетероалкил, С циклоалкил, С гетероциклоалкил, 5-6-членный гетероарил и необязательно замещенный фенил. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления один из R и R представляет собой водород. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления R и R каждый представляет собой водород и R представляет собой необязательно замещенную группу, выбранную из C алкила и С галогеналкила. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления R выбран из группы, состоящей из:
, , , , , , , , , , ,  и .
6
В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления R выбран из группы, состоящей из:
,  и
4
5
6
4
5
6
В другом варианте осуществления в соединении формулы I или I-A D представляет собой -NRC(O)NRR, где R и R каждый представляет собой водород и R представляет собой этил.
4
6
4
5
6
6
m
j
k
j
6
5
1-3
В другом варианте осуществления в соединении формулы I или I-A D представляет собой -NRC(O)NRR, где R представляет собой водород и R представляет собой водород или С алкил, и R представляет собой необязательно замещенную группу, выбранную из группы, включающей необязательно замещенный изоксазол-3-ил, изоксазол-4-ил изоксазол-5-ил, оксазол-2-ил, оксазол-4-ил, оксазол-5-ил, пиразол-3-ил, пиразол-4-ил, пиразол-5-ил, 1,2,3-оксадиазол-4-ил, 1,2,3-оксадиазол-5-ил, 1,3,4-оксадиазол-2-ил, 1,3,4-оксадиазол-5-ил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 5-пиридил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, 2-оксепанил, 3-оксепанил, 2-тетрагидрофуранил, 3-тетрагидрофуранил и фенил. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления R независимо замещен 0-3 заместителями, выбранными из F, Cl, Br, I, -CN, -R, -NRR и -OR. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления R выбран из группы, состоящей из:
, , , , ,
, , , , ,
, , , , ,
и .
A
A
A
A
В другом варианте осуществления в соединениях формулы I D и заместитель R, присоединенный к атому, соседнему с атомом, к которому присоединен D, необязательно объединены с образованием необязательно замещенного 5-6-членного гетероциклического или гетероарильного кольца, замещенного 0-4 заместителями R. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления 5-6-членное гетероциклическое или гетероарильное кольцо, полученное объединением D и заместителем R, соединенным с атомом, соседним с атомом, к которому присоединен D, выбрано из группы, состоящей из необязательно замещенного имидазолидинона, пиразола, имидазола, пирролидинона и пиримидина. В другом варианте осуществления данного варианта осуществления D и заместитель R, присоединенный к атому, соседнему с атомом, к которому присоединен D, необязательно объединены с образованием необязательно замещенного 5-6-членного гетероциклического или гетероарильного кольца, выбранного из группы, состоящей из:
, ,
,  и
1
1
R1
a
b
a
a
a
a
b
a
a
b
c
a
a
b
a
b
a
a
b
a
a
b
c
c1
1
a
b
1
a
1
a
l
a
l
a
b
l
a
l
a
b
1
a
l
a
a
b
1
a
b
l
a
a
b
l
a
1
a
b
1
1
1
1
c1
a
b
a
b
c
1
c1
c1
a
b
a
a
a
a
b
2
2
R2
d
e
d
d
d
d
e
d
d
e
f
d
d
e
d
e
d
d
e
d
d
e
f
2
d
e
2
d
2
d
2
d
2
d
e
2
d
2
d
e
2
d
2
d
d
e
2
d
e
2
d
d
e
2
d
2
d
e
2
2
2
d
e
d
e
f
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
1-6
1-6
1-6
2-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-6
1-6
2-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-4
2-4
2-4
2
2
2
3
1-6
2-6
2-6
1-6
1-6
2-6
2-6
1-6
2
2
2
2
3
2
2
2
3
1-6
1-6
1-6
2-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-6
1-6
2-6
2-6
3-7
2-7
2
1-4
1-4
2-4
2-4
В другом варианте осуществления в соединении формулы I или I-A R выбран из группы, состоящей из фенила, 5-6- членного гетероарила, 3-7-членного гетероциклоалкила, 3-7-членного циклоалкила, где R замещен 0-5 заместителями R, выбранными из группы, состоящей из галогена, F, Cl, Br, I, -NRR, -SR, -OR, -C(O)OR, -C(O)NRR, -C(O)R, -NRC(O)R, -OC(O)R, -NRC(O)NRR, -OC(O)NRR, -NRS(O)NRR, -S(O)R, -S(O)NRR, -R, -NO, -N, =O, -CN, R, -X-NRR, -X-SR, -X-OR, -X-C(O)OR, -X-C(O)NRR, -X-C(O)R, -X-NRC(O)R, -X-OC(O)R, -X-NRC(O)NRR, -X-OC(O)NRR, -X-NRS(O)NRR, -X-S(O)R, -X-S(O)NRR, -X-NO, -X-N, -X-CN и X-R; где R и R каждый независимо выбран из водорода, С алкила, C галогеналкила, C гетероалкила, С алкенила, С алкинила, С циклоалкила, C гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила, необязательно R и R, когда присоединены к одному атому азота, объединены с образованием 3-6-членного гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О и S; R выбран из C алкила, C галогеналкила, С алкенила, С алкинила, С циклоалкила, C гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила; Х выбран из группы, состоящей из С алкилена, C алкенилена и C алкинилена; и R выбран из группы, состоящей из фенила, 2-пиридила, 3-пиридила, 4-пиридила, 2-имидазолила, 2-индолила, 1-нафтила, 2-нафтила, 2-тиенила, 3-тиенила, 2-пирролила, 2-фуранила и 3-фуранила, и где R замещен 0-3 заместителями, выбранными из F, Cl, Br, I, -NRR, -SR, -OR, -S(O)R, -S(O)NRR, -NO, -N, =O, -CN С алкила, С алкенила, С алкинила и C гетероалкила; и R выбран из группы, состоящей из водорода, C алкила, С алкенила, С алкинила, C гетероалкила, 3-6-членного гетероциклоалкила, 3-6-членного циклоалкила, и где R замещен 0-3 заместителями R, выбранными из группы, состоящей из галогена, F, Cl, Br, I, -NRR, -SR, -OR, -С(O)OR, -C(O)NRR, -С(O)R, -NRC(O)R, -OC(O)R, -NRC(O)NRR, -OC(O)NRR, -NRS(O)NRR, -S(O)R, -S(O)NRR, -R, -NO, -N, =О, -CN, -X-NRR, -X-SR, -X-OR, -X-C(O)OR, -X-C(O)NRR, -X-C(O)R, -X-NRC(O)R, -X-OC(O)R, -X-NRC(O)NRR, -X-OC(O)NRR, -Х-NRS(О)NRR, -X-S(O)2R, -X-S(O)NRR, -X-NO, -X-N и -X-CN; где R и R каждый независимо выбран из водорода, C алкила, C галогеналкила, C гетероалкила, С алкенила, С алкинила, С циклоалкила, C гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила, необязательно R и R, когда присоединены к одному атому азота, объединены с образованием 3-6-членного гетероциклического кольца, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, О и S; R выбран из C алкила, C галогеналкила, С алкенила, С алкинила, С циклоалкила, C гетероциклоалкила, фенила и -(СН)-фенила; и Х выбран из группы, состоящей из С алкилена, C алкенилена и C алкинилена.
1
1
R1
2
R2
1
1-6
2-6
2-6
1-6
В другом варианте осуществления в соединениях формулы I или I-A R выбран из группы, включающей циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, азетидин-1-ил, азетидин-2-ил, азетидин-3-ил, пирролидин-1-ил, пирролидин-2-ил, пирролидин-3-ил, пиперидин-1-ил, пиперидин-2-ил, пиперидин-3-ил, пиперидин-4-ил, оксетан-2-ил, оксетан-3-ил, тетрагидрофуран-2-ил, тетрагидрофуран-3-ил, тетрагидропиран-2-ил, тетрагидропиран-3-ил и тетрагидропиран-4-ил, оксепан-2-ил, оксепан-3-ил, оксепан-4-ил, фенил, пиррол-2-ил, пиррол-3-ил, пиразол-3-ил, пиразол-4-ил, пиразол-5-ил, фуран-2-ил, фуран-3-ил, тиен-2-ил, тиен-3-ил, тиазол-2-ил, тиазол-3-ил, тиазол-4-ил, имидазол-1-ил, имидазол-4-ил, пирид-2-ил, пирид-3-ил, пирид-4-ил, пиримидин-1-ил, пиримидин-2-ил, пиримидин-3-ил, пиразин-2-ил, пиридазин-2-ил, пиридазин-3-ил и триазин-2-ил, где R замещен 0-3 заместителями R; и R выбран из группы, состоящей из водорода, C алкила, С алкенила, С алкинила, C гетероалкила, и замещен 0-3 заместителями R. В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления R выбран из группы, состоящей из:
, , , , ,
, , , , ,
, , ,  и .
1
В другом варианте осуществления в соединениях формулы I или I-A R выбран из группы, состоящей из:
1
В другом варианте осуществления в соединениях формулы I или I-A R выбран из группы, состоящей из водорода,
, , , , , , , , , , , , , ,
, , ,  и
2
2
В некоторых вариантах осуществления данного варианта осуществления R выбран из группы, состоящей из водорода, метила, этила, пропила, изопропила, 5 циклопропилметила и метоксиэтила, в частности, R представляет собой метил или этил.
В другом варианте осуществления соединения формулы I выбраны из соединений, приведенных в таблице 1.
Таблица 1
№
Структура
Наименование
101
<img file="00000145.TIF" he="54" wi="92" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-Этил-3-(4-(8-(3-гидроксиоксетан-3-ил)-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)мочевина
102
<img file="00000146.TIF" he="54" wi="88" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-(4-(8-Циклопропил-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)-3-этилмочевина
№
Структура
Наименование
103
<img file="00000147.TIF" he="54" wi="96" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-Этил-3-(4-(8-(4-гидрокситетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)мочевина
104
<img file="00000148.TIF" he="54" wi="96" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-Этил-3-(4-(9-этил-8-(4-гидрокситетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)мочевина
105
<img file="00000149.TIF" he="54" wi="94" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-Этил-3-(4-(8-(3-гидроксиазетидин-3-ил)-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)мочевина
106
<img file="00000150.TIF" he="54" wi="88" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-(4-(8-Циклопропил-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)-3-этилмочевина
107
<img file="00000151.TIF" he="54" wi="96" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-Этил-3-(4-(9-этил-6-(3-метилморфолино)-8-(пиримидин-5-ил)-9Н-пурин-2-ил)фенил)мочевина
№
Структура
Наименование
108
<img file="00000152.TIF" he="54" wi="92" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-Этил-3-(4-(8-(3-фтороксетан-3-ил)-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)мочевина
109
<img file="00000153.TIF" he="54" wi="92" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-Этил-3-(4-(8-(3-фтороксетан-3-ил)-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)мочевина
110
<img file="00000154.TIF" he="54" wi="94" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-Этил-3-(4-(9-этил-8-(4-фтортетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)мочевина
111
<img file="00000155.TIF" he="54" wi="89" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-Этил-3-(4-(9-этил-8-(3-гидроксиоксетан-3 -ил)-6-(3 -метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)мочевина
112
<img file="00000156.TIF" he="54" wi="88" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-6-(4-(8-Циклопропил-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фениламино)пиридин-2(1Н)-он
№
Структура
Наименование
113
<img file="00000157.TIF" he="54" wi="91" img-content="undefined" img-format="TIF" />
(S)-1-(4-(8-Циклопропил-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)-3-(оксетан-3-ил)мочевина
Синтез соединений
3
Как показано в примерах ниже, существуют синтетические методики, с помощью которых специалист в данной области техники может получить соединения настоящего изобретения и связанные с ними промежуточные соединения, используемые для получения таких соединений. На следующих схемах показаны некоторые общие методики получения соединений по изобретению и ключевых промежуточных соединений. Если не указано иное, сокращения, используемые на схемах ниже, имеют следующие значения: R=алкил или другая не участвующая в реакции группа, LG=уходящая группа (например галогенид, тозилат), Сус=карбоцикл или гетероцикл, H(Ar)=арильное или гетероарильное кольцо, LDA=литийдиизопропиламид, ТГФ=тетрагидрофуран, Х=О, NP, CH, CHR, CRR, Р=защитная группа (например BOC) и n=1-6.
На схеме 1 показана общая синтетическая методика получения 2-хлорпуриновых промежуточных соединений, используемых для получения соединений формулы I. Замещение N-9 атома азота в дихлорпурине (i), например, алкилированием с помощью R-LG, с последующим замещением С-6 группы хлора морфолиногруппой или другой аминогруппой, приводит к получению С-6 аминозамещенного соединения iii. Замещение в С-8 положении соединения iii сначала галогенированием соединения iii приводит к получению промежуточного соединения iv. Последующая перекрестная конденсация, опосредованная палладием (например конденсация Сузуки) соединения iv с арил-, гетероарил-, циклоалкил- или гетероциклоалкилборонатами приводит к С-8 замещенному продукту промежуточных соединений (то есть соединение v-a или v-b). Альтернативно, депротонирование соединения iii с помощью сильного основания с последующим погашением полученного аниона электрофилом, таким как циклический кетон, приводит к получению другого С-8 замещенного продукта промежуточных соединений, например соединения vi. Превращение гидроксигруппы соединения vi в группу фтора (как в соединении vii) может осуществляться фторирующим агентом, таким как трифторид диэтиламиносеры (DAST).
Схема 1
На схеме 2 показана общая методика получения промежуточных соединений по изобретению, в которой замещение N-9 группы и С-8 положения пурина является обратимым. Сначала N-9 атом азота дихлорпурина (i) защищают с помощью ТНР защитной группы в кислых условиях с получением соединения viii. Замещение С-6 группы хлора на морфолиногруппу или другую аминогруппу приводит к получению С-6 аминозамещенного (например, морфолинозамещенного) продукта ix. Алкилирование С-8 группы депротонированием соединения ix с последующим погашением электрофилом приводит к получению соединения х. Перекрестная конденсация, опосредованная палладием (например, конденсация Сузуки) соединения x с арилборонатным реагентом приводит к получению арилированного продукта xi. Удаление N-9 защитной группы в кислых условиях с последующим замещением (например, алкилирование с помощью R-LG) полученного N-9 разблокированного продукта xii приводит к получению соединения xiii. Гидрирование нитрогруппы в соединении xiii приводит к получению аминопромежуточного соединения xiv, которое далее может превращаться в соединения формулы I методами, далее описанными в примерах.
Схема 2
На схеме 3 показана общая методика отщепления С-2 положения пуриновых промежуточных соединений с получением соединений по изобретению. Как показано на схеме 3-А, реакция перекрестной конденсации, опосредованная палладием, используя соединение хлора xv и фенилмочевина-боронатное соединение, приводит к получению соединения мочевины xvi. Как показано на схеме 3-В, гидрирование соединения xvii с последующим ацилированием аминосоединения xviii трифосгеном, и реакция полученного карбамоильного соединения с амином приводит к получению альтернативного способа получения соединений формулы I с группой фенилмочевины. На схеме 3-С показано применение арилхлоридного реагента для перекрестной конденсации в реакции перекрестной конденсации, опосредованной палладием (конденсация Бушвальда-Хартвига), с получением соединений формулы I.
Схема 3
Фармацевтические композиции
В дополнение к одному или нескольким приведенным выше соединениям (или их стереоизомерам, геометрическим изомерам, таутомерам, сольватам, метаболитам или фармацевтически приемлемым солям или пролекарствам), композиции для модулирования активности mTOR у людей и животных обычно содержат фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.
Термин "композиция", используемый здесь, включает продукт, содержащий указанные ингредиенты в указанных количествах, а также любой продукт, который получают, прямо или опосредованно, комбинацией указанных ингредиентов в указанных количествах. Под "фармацевтически приемлемым" подразумевают носитель, разбавитель или эксципиент, совместимый с другими ингредиентами состава и не вредный для реципиента.
Для использования соединения настоящего изобретения для терапевтического лечения (включая профилактическое лечение) млекопитающих, включая человека, его обычно комбинируют в соответствии со стандартной фармацевтической практикой для фармацевтического состава. В соответствии с этим вариантом осуществления по изобретению описана фармацевтическая композиция, включающая соединение по изобретению в смеси с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем или эксципиентом.
Типичный состав получают путем смешения соединения настоящего изобретения и носителя, разбавителя или эксципиента. Подходящие носители, разбавители и эксципиенты хорошо известны специалисту в данной области, и включают материалы, такие как углеводы, воск, растворимые и/или набухающие полимеры, гидрофильные или гидрофобные материалы, желатин, масла, растворители, вода и им подобное. Конкретный используемый носитель, разбавитель или эксципиент зависит от средств и целей, для которых применяется соединение настоящего изобретения. Растворители обычно выбирают из растворителей, признанных специалистами в данной области безопасными (GRAS) для введения млекопитающим. Обычно безопасными растворителями являются нетоксичные водные растворители, такие как вода и другие нетоксичные растворители, которые растворяются или смешиваются с водой. Подходящие водные растворители включают воду, этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль (например, PEG 400, PEG 300) и т.д. и их смеси. Составы также могут включать один или несколько буферов, стабилизирующих агентов, поверхностно-активных веществ, увлажняющих веществ, смазочных веществ, эмульгаторов, суспендирующих агентов, консервантов, антиоксидантов, вещества, придающие цвет, глиданты, технологические добавки, красители, подсластители, ароматизирующие агенты, отдушки и другие известные добавки, обеспечивающие хорошее представление препарата (то есть соединения настоящего изобретения или его фармацевтической композиции) или облегчение изготовления фармацевтического продукта (например, лекарственного средства).
Составы могут быть получены с помощью обычных методик растворения и смешивания. Например, большую часть лекарственного вещества (то есть соединение настоящего изобретения) или стабилизированной формы соединения (например, комплекс с производным циклодекстрина или другим известным комплексообразующим агентом) растворяют в подходящем растворителе в присутствии одного или нескольких эксципиентов, описанных выше. Соединение настоящего изобретения обычно составляют в фармацевтические дозированные формы для обеспечения легко контролируемой дозировки препарата и для установления пациенту предписанного режима.
Фармацевтическая композиция (или состав) для применения могут быть упакованы различными способами в зависимости от способа, используемого для введения препарата. Обычно изделие для распространения включает контейнер, содержащий отделение для фармацевтического состава в надлежащей форме. Подходящие контейнеры хорошо известны специалистам в данной области и включают материалы, такие как бутылки (пластиковые и стеклянные), саше, ампулы, пластиковые упаковки, металлические цилиндры и им подобные. Контейнер также может включать защиту для предотвращения неосторожного доступа к содержимому упаковки. Кроме того, контейнер содержит расположенную в нем инструкцию, которая описывает содержимое контейнера. Инструкция также может включать соответствующие предупреждения.
Фармацевтические составы соединения настоящего изобретения могут быть получены для различных способов и типов введения. Например, соединение по изобретению (например, соединение формулы I) с требуемой степенью чистоты необязательно может быть смешано с фармацевтически приемлемыми разбавителями, носителями, эксципиентами или стабилизаторами (см. книгу Remington: The Science and Practice of Pharmacy: Remington the Science and Practice of Pharmacy, 2005, 21-ое издание, Lippincott Williams & Wilkins, Philidelphia, PA), в форме лиофилизированного состава, измельченного порошка или водного раствора. Состав может быть получен путем смешивания при температуре окружающей среды при соответствующем значении pH, и в нужной степени чистоты, с физиологически приемлемыми носителями, т.е. носителями, которые не являются токсичными для пациентов в используемых дозах и концентрациях. Значение pH состава в основном зависит от конкретного применения и концентрации соединения, но может колебаться от 3 до 8. Состав в ацетатном буфере при pH 5 является подходящим вариантом осуществления.
Соединение настоящего изобретения (например, соединение формулы I) для использования здесь является предпочтительно стерильным. В частности, составы, которые используются для введения in vivo, должны быть стерильными. Такая стерилизация легко осуществляется путем фильтрации через стерильные мембраны для фильтрации.
Соединение по изобретению обычно может храниться в виде твердой композиции, лиофилизированного состава или в виде водного раствора.
Фармацевтическую композицию по изобретению получают, дозируют и вводят способом, т.е. в количестве, концентрации, режиме, курсе, носителе и способе введения, известном в медицинской практике. Факторы для выбора данного условия включают, в частности, излечиваемое нарушение, в частности излечиваемого млекопитающего, клиническое состояние пациента, причины заболевания, участок доставки агента, способ введения, схема введения и другие факторы, известные специалисту. "Терапевтически эффективное количество" соединения для введения выбирают из таких соображений, и составляет минимальное количество, необходимое для предотвращения, улучшения или лечения нарушения, опосредованного фактором свертывания. Такое количество предпочтительно ниже количества, которое является токсичным для пациента или вызывает у пациента значительно большее кровотечение.
В качестве общего предписания, начальное фармацевтически эффективное количество соединения-ингибитора по изобретению, вводимого парентерально на дозу, составляет примерно 0,01-100 мг/кг, а именно от около 0,1 до 20 мг/кг массы тела пациента в день, с обычным начальным диапазоном используемого соединения от 0,3 до 15 мг/кг/сут.
Приемлемыми разбавителями, носителями, эксципиентами и стабилизаторами являются нетоксичные для пациентов в используемых дозах и концентрациях, и включают буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты, антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин, консерванты (например, октадецилдиметилбензиламмоний хлорида, хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония, фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил или пропилпарабен, катехин, резорцин; циклогексанол, 3-пентанол и м-крезол);
низкомолекулярные (менее 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины, гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон, аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин, моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие вещества, такие как ЭДТА, сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие ионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, Zn-белковые комплексы) и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™, PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (PEG). Активный фармацевтический ингредиент по изобретению (например, соединение формулы I) также может вводиться в микрокапсулы, полученные, например, коацервацией или межфазной полимеризацией, например, гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и поли-(метилметацилатные) микрокапсулы, соответственно, в коллоидных системах доставки лекарственных препаратов (например, в липосомах, микросферическом альбумине, микроэмульсиях, наночастицах и нанокапсулах) или в макроэмульсиях. Такие методики описаны в книге Remington: The Science and Practice of Pharmacy: Remington the Science and Practice of Pharmacy, 2005, 21-ое издание, Lippincott Williams & Wilkins, Philidelphia, PA.
Могут быть получены препараты пролонгированного действия соединений по изобретению (например, соединение формулы I). Подходящие примеры препаратов замедленного высвобождения включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие соединение формулы I, которые находятся в форме формованных изделий, например, пленок или микрокапсул. Примеры матриц для пролонгированного высвобождения включают полиэфиры, гидрогели (например, поли(2-гидроксиэтилметакрилат) или поли(виниловый спирт)), полилактиды (патент US 3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и гамма-этил-L-глутамата, не разлагающийся этилен-винилацетат, разлагающиеся сополимеры молочной кислоты и гликолевой кислоты, такие как LUPRON DEPOT™ (микросферы для инъекций, состоящие из сополимера молочной кислоты и гликолевой кислоты и лейпролида ацетата) и поли-D-(-)-3-оксимасляная кислота.
Составы включают составы, подходящие для введения описанными здесь способами. Составы удобно помещают в единичную дозированную форму и могут быть получены любым из способов, хорошо известных в области фармацевтики. Способы и составы обычно можно найти в книге Remington: The Science and Practice of Pharmacy: Remington the Science and Practice of Pharmacy, 2005, 21-ое издание, Lippincott Williams & Wilkins, Philidelphia, PA. Такие способы включают стадию объединения активного ингредиента с носителем, который представляет собой один или несколько вспомогательных ингредиентов. Обычно составы получают равномерным и однородным объединением активного ингредиента с жидкими носителями или тонко измельченными твердыми носителями или обоими, и затем, при необходимости, формированием продукта.
Составы соединения по изобретению (например, соединение формулы I), подходящие для перорального введения, могут быть получены в виде дискретных единиц, таких как пилюли, капсулы, гранулы или таблетки, каждая из которых содержит предварительно определенное количество соединения по изобретению.
Спрессованные таблетки могут быть получены путем прессования в подходящем устройстве активного ингредиента в свободно текущей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно в смеси со связующим, лубрикантом, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно-активным веществом или диспергатором. Формованные таблетки могут быть получены путем формования в соответствующем устройстве смеси порошкообразного активного ингредиента, смоченного инертным жидким разбавителем. Таблетки могут быть необязательно покрыты оболочкой или на них могут быть нанесены бороздки, и необязательно составляются таким образом, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение активного ингредиента.
Таблетки, пастилки, лепешки, водные или масляные суспензии, растворимые порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, например, желатиновые капсулы, сиропы или эликсиры могут быть получены для приема внутрь. Составы соединения по изобретению (например, соединение формулы I), предназначенные для перорального применения, могут быть получены в соответствии с любым известным в уровне техники способом изготовления фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать одно или несколько веществ, в том числе подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты, для того, чтобы обеспечить приятный состав. Таблетки, содержащие активный ингредиент в смеси с нетоксичным фармацевтически приемлемым эксципиентом, который подходит для изготовления таблеток, являются приемлемыми. Этими эксципиентами могут быть, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция или натрия, лактоза, фосфат кальция или натрия; гранулирующие и разрыхляющие агенты, например, кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие агенты, такие как крахмал, желатин или акация; и смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть без покрытия или могут быть покрыты известными способами, включая микрокапсулирование для предотвращения распада и адсорбции в желудочно-кишечный тракт, тем самым обеспечивая устойчивое действие в течение более длительного периода. Например, может использоваться материал для задержки во времени, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат отдельно или с воском.
Для лечения глаз или других внешних тканей, например, рта и кожи, составы предпочтительно применяют в качестве мази или крема, содержащего активный ингредиент (ингредиенты) в количестве, например, от 0,075 до 20 вес.%. Когда получают мазь, активный ингредиент может использоваться с любыми парафиновыми или водорастворимыми мазями. Альтернативно, активные ингредиенты можно получать в креме с масло с кремовой основой масло-в-воде.
При желании водная фаза кремовой основы может включать многоатомные спирты, например, спирт с двумя или более гидроксильными группами, такие как пропиленгликоль, бутан 1,3-диол, маннит, сорбит, глицерин и полиэтиленгликоль (включая PEG 400) и их смеси. Местные составы могут желательно включать соединение, которое повышает абсорбцию или проникновение активного ингредиента через кожу или другие поврежденные области. Примеры таких усилителей кожного проникновения включают диметилсульфоксид и связанные аналоги.
Масляная фаза эмульсии настоящего изобретения может быть получена из известных ингредиентов известным способом. Хотя фаза может состоять только из эмульгатора, желательно она включает смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом или с жиром и маслом вместе. Предпочтительно, гидрофильный эмульгатор включен вместе с липофильным эмульгатором, который выступает в качестве стабилизатора. Также предпочтительно включение масла и жира вместе. Вместе эмульгатор (эмульгаторы) со стабилизатором (стабилизаторами) или без него составляют так называемый эмульсионный воск, и воск вместе с маслом и жиром составляют так называемую эмульгирующую основу мази, которая образует жирную дисперсную фазу состава крема. Эмульгаторы и стабилизаторы эмульсии, пригодные для использования в составе по изобретению, включает Tween 60, SPAN 80, цетостеариловый спирт, бензиловый спирт, миристиловый спирт, моностеарат глицерина и натрийлаурилсульфат.
Водные суспензии соединения по изобретению (например, соединение формулы I) содержат активные вещества в смеси с эксципиентами, подходящими для изготовления водных суспензий. Такие эксципиенты включают суспендирующие агенты, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлозу, кроскармеллозу, повидон, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакант и камедь, и диспергирующие или увлажняющие агенты, такие как природные фосфатиды (например, лецитин), продукт конденсации алкиленоксида с жирными кислотами (например, полиоксиэтиленстеарат), продукт конденсации окиси этилена со алифатическим спиртом с длинной цепью (например, гептадекаэтиленоксицетанол), продукт конденсации окиси этилена с частичным сложным эфиром на основе жирной кислоты и ангидрида гексита (например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат). Водная суспензия также может содержать один или несколько консервантов, таких как этил- или н-пропил-п-гидроксибензоат, один или несколько красителей, один или несколько ароматизаторов и один или несколько подсластителей, таких как сахароза или сахарин.
Фармацевтическая композиция соединения по изобретению (например, соединение формулы I) может находиться в виде стерильного инъекционного препарата, например, стерильной инъекционной водной или маслянистой суспензии. Эта суспензия может быть получена в соответствии с известным уровнем техники, используя подходящие диспергирующие или увлажняющие агенты и суспендирующие агенты, упомянутые выше. Стерильным инъекционным препаратом также может быть стерильный инъекционный раствор или суспензия в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, такой как раствор в 1,3-бутандиоле, или полученный в виде лиофилизированного порошка. Приемлемыми носителями и растворителями, которые могут использоваться, являются вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные жирные масла обычно можно использовать в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этого может использоваться любое мягкое жирное масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, также могут использоваться для получения инъекций.
Количество активного ингредиента, которое может объединяться с материалом носителя для получения единичной дозированной формы, будет меняться в зависимости от пациента и способа введения. Например, состав для высвобождения во времени, предназначенный для перорального введения человеку, может содержать примерно от 1 до 1000 мг активного вещества в смеси с соответствующим и удобным количеством материала носителя, которое может варьироваться от 5 до 95% от общей композиции (вес.:вес.). Фармацевтическая композиция может быть получена с легко измеримыми количествами для введения. Например, водный раствор, предназначенный для внутривенного введения, может содержать от 3 до 500 мкг активного ингредиента на миллилитр раствора, чтобы получить вливание подходящего объема в размере около 30 мл/ч.
Составы для парентерального введения включают водные и неводные стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические агенты и растворенные вещества, которые делают состав изотоническим с кровью реципиента, и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загустители.
Составы для местного применения в глаз также включают глазные капли, где активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, особенно в водном растворителе для активного ингредиента. Активный ингредиент предпочтительно присутствует в таких составах в концентрации примерно от 0,5 до 20 вес.%, например от около 0,5 до 10 вес.%, например около 1,5 вес.%.
Составы для местного применения в полость рта включают лепешки, содержащие активный ингредиент в ароматный основе, как правило, сахарозе и акации или трагаканте; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахароза и акация; и жидкости для полоскания рта, содержащие активный ингредиент в подходящем жидком носителе.
Составы для ректального введения могут быть представлены в виде свечей с соответствующей основой, содержащей, например, масло какао или салицилат.
Составы, подходящие для внутрилегочного или назального введения, имеют размер частиц, например, в диапазоне от 0,1 до 500 мкм (в том числе размеры частиц в диапазоне от 0,1 до 500 мкм с шагом микрон, таким как 0,5, 1, 30 мкм, 35 мкм и т.д.), которые вводят быстрым вдохом через носовой проход или вдыханием через рот так, чтобы достичь легочных альвеол. Подходящие составы включают водные или масляные растворы активного ингредиента. Составы, подходящие для введения аэрозолей или сухого порошка, могут быть получены традиционными методами, и могут быть доставлены с другими терапевтическими агентами, такими как соединения, используемые для лечения или профилактики описанных ниже нарушений.
Составы, подходящие для вагинального введения, могут быть представлены в виде свечей, тампонов, кремов, гелей, паст, пенок или спрея, содержащих в дополнение к активному ингредиенту носителей, которые известны в данной области.
Составы могут быть введены в контейнеры единичной дозы или нескольких доз, например в закрытые ампулы и сосуды, и могут храниться в высушенном заморозкой (лиофилизированном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например, воды, для инъекции непосредственно перед применением. Приготовленные для немедленного приема инъекционные растворы и суспензии готовят из стерильных порошков, гранул и таблеток описано ранее вида. Предпочтительными единичными дозированными составами являются те, которые содержат суточную дозу или единичную суточную субдозу, как описано выше, или соответствующую ее часть, активного ингредиента.
Изобретение также относится ветеринарным композициям, содержащим по меньшей мере один активный ингредиент (например, соединение формулы I) как определено выше, вместе с его ветеринарным носителем. Ветеринарными носителями являются материалы, используемые для введения композиции, и могут быть твердыми, жидкими или газообразными материалами, которые являются инертными или приемлемыми для ветеринарного применения и совместимыми с активным ингредиентом. Эти ветеринарные композиции можно вводить парентерально, перорально или любым другим желаемым способом.
Способы
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению по изобретению (например, соединение формулы I) или его стереоизомеру, геометрическому изомеру, таутомеру, сольвату, метаболиту или фармацевтически приемлемой соли, пролекарству, которое ингибирует активность киназы mTOR. В одном варианте осуществления соединение по изобретению (например, соединение формулы I) или его стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит, фармацевтически приемлемая соль или пролекарство ингибирует активность mTORC1 и mTORC2. В другом варианте осуществления соединение по изобретению (например, соединение формулы I) или его стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит, фармацевтически приемлемая соль или пролекарство ингибирует активность mTORC1. В другом варианте осуществления соединение по изобретению (например, соединение формулы I) или его стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит, фармацевтически приемлемая соль или пролекарство ингибирует активность mTORC2. В некоторых вариантах осуществления соединение формулы I в 1х, 2х, 3х, 4х, 5х, 6х, 7х, 8х, 9х, 10х, 11х, 12х, 13х, 14х, 15х, 16х, 17х, 18х, 19х, 20х, 25х, 30х, 40х, 50х, 60х, 70х, 80х, 90х, 100х, 200х, 300х, 400х, 500х, 600х, 700х, 800х, 900х или 1000 раз более селективно в отношении ингибирования активности mTORC1 по сравнению с mTORC2. В некоторых других вариантах осуществления соединение формулы I в 1х, 2х, 3х, 4х, 5х, 6х, 7х, 8х, 9х, 10х, 11х, 12х, 13х, 14х, 15х, 16х, 17х, 18х, 19х, 20х, 25х, 30х, 40х, 50х, 60х, 70х, 80х, 90х, 100х, 200х, 300х, 400х, 500х, 600х, 700х, 800х, 900х или 1000 раз более селективно в отношении ингибирования активности mTORC2 по сравнению с mTORC1. В некоторых вариантах осуществления соединения по изобретению являются более селективными в отношении ингибирования активности mTORC1 и/или mTORC2 по сравнению с соответствующими липидными киназами PI3. В некоторых вариантах осуществления соединение формулы I в 1х, 2х, 3х, 4х, 5х, 6х, 7х, 8х, 9х, 10х, 11х, 12х, 13х, 14х, 15х, 16х, 17х, 18х, 19х, 20х, 25х, 30х, 40х, 50х, 60х, 70х, 80х, 90х, 100х, 200х, 300х, 400х, 500х, 600х, 700х, 800х, 900х или 1000 раз более селективно в отношении ингибирования активности киназы mTOR (например, mTORC1, mTORC2) по сравнению с липидной киназой PI3K. В каждом из приведенных выше вариантов осуществления, в одном конкретном варианте осуществления соединение по изобретению (например, соединение формулы I) или его стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит, фармацевтически приемлемая соль или пролекарство присутствует в виде фармацевтической композиции.
Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования активности киназы mTOR в клетке, включающему контактирование указанной клетки с активным соединением по изобретению в эффективном количестве (например, соединение формулы I) или его стереоизомером, геометрическим изомером, таутомером, сольватом, метаболитом, фармацевтически приемлемой солью или пролекарством. Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования пролиферации клеток, включающему контактирование клетки с соединением формулы I или его подвидом. Такие способы могут осуществляться in vitro или in vivo.
Соединение настоящего изобретения или его стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит, фармацевтически приемлемая соль или пролекарство полезно для лечения заболеваний, состояний и/или нарушений, включая, но не ограничиваясь, характеризующиеся сверхэкспрессией киназ PIKK, например, киназы mTOR. Соответственно, другой вариант осуществления настоящего изобретения включает способы лечения заболеваний или состояний, которые могут излечиваться путем ингибирования киназ mTOR. В одном варианте осуществления способ включает введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, соединения по изобретению в терапевтически эффективном количестве (например, соединение формулы I) или его стереоизомера, геометрического изомера, таутомера, сольвата, метаболита, фармацевтически приемлемой соли или пролекарства. В приведенном выше варианте осуществления в одном конкретном варианте осуществления соединение по изобретению (например, соединение формулы I) или его стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит, фармацевтически приемлемая соль или пролекарство присутствует в виде фармацевтической композиции.
Соединения по изобретению могут вводиться любым способом, подходящим для условий лечения. Подходящие способы включают пероральный, парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутриартериальный, внутрикожный, интратекальный и эпидуральный), трансдермальный, ректальный, назальный, местный (в том числе ротовой и подъязычный), вагинальный, внутрибрюшинный, внутрилегочный и интраназальный. Для местного иммуносупрессивного лечения соединения могут быть введены в очаг поражения, в том числе перфузией или иным контактированием трансплантата с ингибитором перед трансплантацией. Следует иметь в виду, что предпочтительный способ может меняться в зависимости, например, от состояния пациента. Когда соединение вводят перорально, оно может быть получено в форме пилюль, капсул, таблеток и т.д. с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом. Когда соединение вводят парентерально, оно может быть составлено с фармацевтически приемлемым парентеральным носителем и в единичной дозированной инъекционной форме, как описано ниже.
Доза для лечения млекопитающих (например, человека) может варьироваться от 10 мг до 1000 мг соединения формулы I. Типичная доза может составлять от около 100 мг до 300 мг соединения. Дозу можно вводить один раз в день (QID), два раза в день (BID) или чаще, в зависимости от фармакокинетических и фармакодинамических свойств, включая всасывание, распределение, метаболизм и экскреция конкретного соединения. Кроме того, факторы токсичности могут повлиять на дозировку и режим введения. При приеме перорально, пилюли, капсулы или таблетки могут поступать в организм ежедневно или реже в течение определенного периода времени. Режим может быть повторен в течение нескольких циклов терапии.
Заболевания и состояния, поддающиеся лечению способом настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, рак, инсульт, диабет, гепатомегалию, сердечно-сосудистые заболевания, болезни Альцгеймера, кистозный фиброз, вирусные заболевания, аутоиммунные заболевания, атеросклероз, рестеноз, псориаз, аллергические заболевания, воспаление, неврологические расстройства, связанные с гормонами заболевания, состояния, связанные с трансплантации органов, иммунодефицитные состояния, деструктивные заболевания костей, пролиферативные расстройства, инфекционные заболевания, состояния, связанные с гибелью клеток, тромбин-индуцированную агрегацию тромбоцитов, хронический миелолейкоз (CML), заболевания печени, синдром Пеутца-Джегхера, клубневый склероз, патологические иммунные состояния, сопровождающиеся активацией Т-клеток, нарушения ЦНС у пациента и старение. В одном варианте осуществления больной человек лечится соединением по изобретению (например, соединение формулы I) и фармацевтически приемлемым носителем, адъювантом или связующим, где соединение по изобретению присутствует в количестве, необходимом для детектируемого ингибирования активности киназы mTOR.
Рак, который можно лечить в соответствии со способами настоящего изобретения, включает, но не ограничивается ими, рак молочной железы, яичников, шейки матки, предстательной железы, яичек, мочеполового тракта, пищевода, гортани, глиобластому, нейробластому, рак желудка, кожи, кератоакантому, рак легких, плоскоклеточную карциному, крупноклеточную карциному, немелкоклеточную карциному легких (NSCLC), мелкоклеточную карциному, аденокарциному легких, рак кости, толстой кишки, аденомы, поджелудочной железы, аденокарциному, рак щитовидной железы, фолликулярную карциному, недифференцированную карциному, папиллярную карциному, семиному, меланому, саркому, карциному мочевого пузыря, карциному печени и желчных проходов, карциному почек, миелоидные расстройства, лимфоидные расстройства, рак волосяных клеток, ротовой полости и глотки (рта), губ, языка, рта, глотки, тонкой кишки, ободочной кишки, прямой кишки, мозга и центральной нервной системы, болезнь Ходжкина и лейкемию. В некоторых вариантах осуществления соединения по изобретению полезны для лечения рака, выбранного из группы, состоящей из рака молочной железы, NSCLC, мелкоклеточной карциномы, карциномы печени, лимфоидных расстройств, саркомы, колоректального рака, рака прямой кишки и лейкемии.
Сердечно-сосудистые заболевания, которые могут излечиваться в соответствии со способами настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, рестеноз, кардиомегалию, атеросклероз, инфаркт миокарда и застойную сердечную недостаточность.
Нейродегенеративные заболевания, которые могут излечиваться в соответствии со способами настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз, болезнь Хантингтона, ишемию головного мозга и нейродегенеративные заболевания, вызванные травмой, глутаматной нейротоксичностью и гипоксией.
Воспалительные заболевания, которые могут излечиваться в соответствии со способами настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, ревматоидный артрит, псориаз, контактный дерматит и реакции задержки гиперчувствительности.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединению по изобретению или его стереоизомеру, геометрическому изомеру, таутомеру, сольвату, метаболиту, фармацевтически приемлемой соли или пролекарству для лечения описанных здесь заболеваний или состояний у млекопитающего, например, человека, страдающего таким заболеванием или состоянием. Также описано применение соединения настоящего изобретения или его стереоизомера, геометрического изомера, таутомера, сольвата, метаболита, фармацевтически приемлемой соли или пролекарства для изготовления лекарственного средства для лечения описанных здесь заболеваний и состояний у млекопитающего, например, человека, страдающего таким заболеванием или состоянием.
В одном варианте осуществления соединение по изобретению (например, соединение формулы I) или его стереоизомер, геометрический изомер, таутомер, сольват, метаболит, фармацевтически приемлемая соль или пролекарство используется в качестве противоракового средства или в качестве дополнительного средства при лечении рака в составе комбинированной терапии. Любой специалист в этой области техники легко определит, способно ли лечить соединение-кандидат раковое состояние каждого конкретного вида клеток, отдельно или в комбинации. В определенных вариантах осуществления данного варианта осуществления соединения по изобретению используются в дополнение к другим способам лечения, включая обычную хирургию, лучевую терапию и химиотерапию для лечения рака. Такая химиотерапия может включать, но не ограничивается ею, один или несколько описанных здесь химиотерапевтических агентов.
Комбинированная терапия может применяться в виде одновременного или последовательного режима. При введении последовательно, комбинация может вводиться двумя или более введениями. Комбинированное введение включает совместное введение, использую отдельные составы или единый фармацевтический состав, и последовательное введение в любом порядке, где предпочтительно существует период времени, в то время как оба (или все) активные агенты одновременно проявляют свои биологические активности.
Подходящими дозами для любого из вышеуказанных совместно вводимых агентов являются дозами, в настоящее время используемыми, и которые могут быть понижены за счет совместного действия (синергии) вновь идентифицированных агентов и других химиотерапевтических агентов или способов лечения.
Комбинированная терапия может обеспечить "синергию" и показывать "синергетический эффект", т.е. достигается эффект, который при использовании активных ингредиентов вместе является большим, чем сумма эффектов, полученных в результате использования соединений в отдельности. Синергетический эффект может достигаться, когда активные ингредиенты: (1) совместно составлены и введены или доставлены одновременно в комбинированном составе единичной дозы; (2) доставлены в раздельных или в параллельных отдельных составах; или (3) введены некоторым другим режимом. При поставке альтернативной терапией синергетический эффект может достигаться, когда соединения вводят или доставляют последовательно, например, с помощью различных инъекций в отдельных шприцах, отдельными таблетками или капсулами, или отдельными инфузиями. Обычно во время альтернативной терапии эффективную дозу каждого активного ингредиента вводят последовательно, то есть серийно, в то время как в комбинированной терапии эффективные дозы двух или более активных ингредиентов вводят вместе.
Примеры
Эти примеры не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения, но скорее для указания специалисту получить и использовать соединения, композиции и способы настоящего изобретения. Хотя в настоящем изобретении описаны конкретные варианты осуществления, специалисту понятно, что различные изменения и модификации могут быть сделаны без выхода за рамки и объем изобретения.
Химические реакции в описанных примерах могут быть легко приспособлены для получения ряда других ингибиторов mTOR по изобретению, и альтернативные способы получения соединений настоящего изобретения рассматриваются в рамках данного изобретения. Например, синтез соединений, не представленных в примерах, в соответствии с изобретением может успешно осуществляться с помощью модификаций, очевидных для специалиста в данной области, например, путем соответствующей защиты пересекающихся групп, используя другие подходящие известные реагенты, помимо описанных, и/или путем рутинных модификаций условий реакции. Альтернативно, другие описанные здесь реакции или известные в данной области техники будут признаны как применимые для получения других соединений по изобретению. Соответственно, следующие примеры приведены для иллюстрации, но не для ограничения изобретения.
1
1
3
6
3
6
В описанных ниже примерах, если не указано иное, все температуры приведены в градусах Цельсия. Коммерчески доступные реагенты приобретались у поставщиков, таких как Aldrich Chemical Company, Lancaster, TCI или Maybridge, и использовались без дополнительной очистки, если не указано иное. Приведенные ниже реакции проводились обычно под избыточным давлением азота или аргона или с сушильной трубкой (если не указано иное) в безводных растворителях, и реакционные колбы, как правило, оснащались резиновыми септами для введения субстратов и реагентов с помощью шприца. Стеклянную посуду сушили в печи и/или сушили в тепле. Колоночную хроматографию проводили в системе Biotage (производитель: Dyax Corporation), имеющей колонку с силикагелем или на картридже с диоксидом кремния SEP РАК (Waters); или альтернативно колоночную хроматографию проводили с использованием хроматографической системы ISCO (Производитель: Teledyne ISCO) на колонке с силикагелем. H ЯМР спектры записывали на оборудовании Varian с частотой 400 МГц. H ЯМР-спектры получали в растворе дейтерированного CDCl, d-ДМСО, CHOD или d-ацетона (указывается в ppm), используя хлороформ в качестве стандарта (7,25 ppm). Когда приведен кратный пик, используются следующие сокращения: s (синглет), d (дублет), т (триплет), m (мультиплет), br (расширенный синглет), dd (дублет дублета), dt (дублет триплета). Константы связывания, когда описаны, приведены в герцах (Гц).
T
4
Когда возможно, полученный в реакционных смесях продукт контролировали с помощью LC/MS. Эксперименты высокоэффективной жидкостной хроматографии - масс-спектрометрии (LC/MS), чтобы определить время удерживания (R) и связанные массы иона, проводили с использованием одного из следующих методов. Метод А: эксперименты проводили на РЕ Sciex API 150 EX квадрупольном масс-спектрометре, связанном с системой Shimadzu LC-10AD LC с диодным детектором и 225-позиционным автосамплером помощью колонки Kromasil С18 50×4,6 мм и скорости потока 3 мл/мин. Системой растворителя являлся градиент от 100% воды с 0,05% ТФУК (растворитель А) и 0% ацетонитрила с 0,0375% ТФУК (растворитель В), повышая до 10% растворителя А и 90% растворителя В течение 4 минут. Конечную систему растворителя поддерживали постоянной в течение 0,50 минуты. Метод В: Эксперименты проводили жидкостной хроматографией с масс-спектрометром Agilent Technologies, связанным с системой Agilent Technologies Series 1200 LC с диодным линейным детектором помощью колонки Zorbax 1,8 микрон SB-C18 30×2,1 мм со скоростью потока 1,5 мл/минута. Метод В1: начальный растворитель включал 95% воды, содержащей 0,05% трифторуксусной кислоты (растворитель А) и 5% ацетонитрила, содержащий 0,05% трифторуксусной кислоты (растворитель В), а затем градиент до 5% растворителя А и 95% растворителя В течение 1,5 минут. Конечную систему растворителя поддерживали постоянной в течение 1 минуты. Метод В2: начальный растворитель включал 95% воды, содержащей 0,05% трифторуксусной кислоты (растворитель А) и 5% ацетонитрила, содержащий 0,05% трифторуксусной кислоты (растворитель В), а затем градиент до 5% растворителя А и 95% растворителя В течение 3,0 минут. Конечную систему растворителя поддерживали постоянной в течение 1 минуты. Метод С: Эксперименты проводили жидкостной хроматографией с масс-спектрометром Agilent Technologies, связанным с системой Agilent Technologies Series 1200 LC с диодным линейным детектором помощью колонки Zorbax 1,8 микрон SB-C18 30×2,1 мм со скоростью потока 0,6 мл/минута. Первоначально система растворителей включала 95% воды, содержащей 0,05% трифторуксусной кислоты (растворитель А) и 5% ацетонитрила, содержащий 0,05% трифторуксусной кислоты (растворитель В), а затем градиент до 5% растворителя А и 95% растворителя B в течение 9,0 минут. Конечную систему растворителя поддерживали постоянной в течение 1 минуты. Продукты, полученные в реакционной смеси, могут быть очищены с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обратной фазой (ОФ-ВЭЖХ) с использованием следующих условий: ВЭЖХ с обратной фазой проводили на колонке Gemini-NX (100×30 мм, 10 мкм); 5-85% ACN в течение 10 мин, градиент 0,1% FA или 0,1% NHOH при 60 мл/мин, 254 нм, или на колонке Zymor Pegasus (150×21, 2 мм, 5 мкм); 5-60% метанола при 70 мл/мин, 254 нм.
Все сокращения, используемые для описанных реагентов, условия реакции или используемое оборудование согласованы с определениями, изложенными в "List of standard abbreviations and acronyms», ежегодно публикуемыми в Journal of Organic Chemistry (American Chemical Society journal). Химические наименования отдельных соединений по изобретение получали с использованием структурных наименований ChemBioDraw версии 11,0 или с помощью программы Accelrys’ Pipeline Pilot IUPAC.
Пример 1
Синтез (S)-4-(2-хлор-8-циклопропил-9-метил-9Н-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (а-1):
Стадия 1: Получение 2,6-дихлор-9-метил-9Н-пурина и 2,6-дихлор-7-метил-7H-пурина (а-2):
2
2
4
6
6
1
1
К раствору 2,6-дихлорпурина (1,10 г, 5,82 ммоля) в безводном ТГФ (5,0 мл) добавляли фторид тетра-н-бутиламмония (0,58 мл, 10,58 ммоля, 1,8 эквив.; 1М в ТГФ). Добавляли метилйодид (0,40 мл, 6,42 ммоля, 1,1 эквив.), и реакционную смесь перемешивали при КТ в атмосфере N в течение 30 минут. Реакционную смесь затем разбавляли этилацетатом (250 мл). Органический слой промывали водным насыщенным раствором тиосульфата натрия, водой и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили (NaSO), отфильтровывали и упаривали в вакууме. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией (Si-PPC, градиент от 5 до 100% этилацетата в гексане) с получением 2,6-дихлор-9-метил-9H-пурина (а-2) в виде белого твердого вещества (780 мг, 66%), затем градиент от 0 до 30% метанола в этилацетате с получением 2,6-дихлор-7-метил-7H-пурина (а-3) в виде белого твердого вещества (346 мг, 29,3%). Н ЯМР 2,6-дихлор-9-метил-9H-пурина (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,75 (s, 1H), 3,83 (s, 3Н). Н ЯМР 2,6-дихлор-7-метил-7H-пурина (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,80 (s, 1H), 4,09 (s, 3Н).
Стадия 2: Получение (S)-4-(2-хлор-9-метил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (а-4):
2
2
4
3
1
К перемешиваемому раствору 2,6-дихлор-9-метил-9H-пурина (1,41 г, 6,96 ммоля) и (S)-3-метилморфолина (817 мг, 8,08 ммоля, 1,16 эквив.) в безводном этаноле (60 мл) и безводном DMF (5,0 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (1,8 мл, 10,43 ммоля, 1,5 эквив.), и реакционную смесь перемешивали при КТ в атмосфере N в течение 3 дней. Реакционную смесь разбавляли 1:1 об. диэтиловый эфир:этилацетат. Органический слой промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили (NaSO), отфильтровывали и упаривали в вакууме. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией (Si-PPC, градиент от 0 до 80% этилацетата в гексане) с получением целевого соединения (а-4) в виде твердого вещества (1,59 г, 85,2%). Н ЯМР (CDCl, 500 МГц) δ, ppm: 7,65 (s, 1H), 5,34 (broad d, 2H), 3,99 (m, 1), 3,76 (m, 5H), 3,61 (ddd, 1H), 3,36 (broad s), 1H), 1,39 (d, 3H).
Стадия 3: Получение (S)-4-(2-хлор-8-йод-9-метил-9Н-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (а-5):
2
4
3
1
+
К (S)-4-(2-хлор-9-метил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолину (750,0 мг, 2,80 ммоля) в безводном ТГФ (16 мл) при -78°С в атмосфере N3 добавляли свежеприготовленный диизопропиламид лития в ТГФ (2,0 эквив.). Полученную темно-красную реакционную смесь перемешивали при -78°С. Через 1 ч добавляли монохлорид йода в дихлорметане (4,2 мл, 4,2 ммоля, 1,0 M, 1,5 эквив.), и перемешивали при КТ в течение 16 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором тиосульфата натрия. Летучий растворитель затем упаривали в вакууме, и сырой продукт разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили (NaSO), отфильтровывали и упаривали в вакууме. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией (Si-PPC, градиент от 0 до 100% этилацетата в гексане) с получением целевого соединения в виде твердого вещества (446,4 мг, 40,5%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ, ppm: 5,28 (broad s, 2H), 3,99 (m, 1H), 3,75 (m, 2H), 3,67 (s, 3H), 3,59 (m, 1H), 3,49 (broad s, 1H), 1,38 (d, 3H); LC-MS m/z (метод A)=394/ 396 [M+H], KT=1,92 мин.
Стадия 4: Получение (S)-4-(2-хлор-8-циклопропил-9-метил-9Н-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (а-1):
2
4
+
В сосуд для высокого давления помещали (S)-4-(2-хлор-8-йод-9-метил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолин (78,2 мг, 0,20 ммоля), циклопропилбороновую кислоту (25,8 мг, 0,30 ммоля, 1,5 эквив.), фосфат калия (127,4 мг, 0,60 ммоля, 3,0 эквив.), [1,1’-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II), комплекс с дихлорметаном (1:1) (4,9 мг, 0,006 ммоля, 0,03 эквив.) и 1,4-диоксан (1,0 мл). Реакционную смесь дегазировали в течение 15 минут. Сосуд плотно закрывали, и реакционную смесь перемешивали при 100°С. Через 18 ч реакционную смесь охлаждали до KT и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили (NaSO), отфильтровывали и упаривали в вакууме. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией (Si-PPC, градиент от 0 до 80% этилацетата в гексане) с получением целевого соединения в виде пены (43,7 мг, 71%). ТСХ (40% этилацетат/гексан), Rf=0,41; LC-MS m/z (метод B2)=308 [М+Н], КТ=1,94 мин.
Пример 2
Синтез (S)-4-(2-хлор-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)тетрагидро-2H-пиран-4-ола (L-1):
2
2
4
3
1
+
К (S)-4-(2-хлор-9-метил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолину (100,0 мг, 0,374 ммоля) в безводном ТГФ (4,0 мл) при -78°С в атмосфере N добавляли свежее приготовленный литийдиизопропиламид в ТГФ (2,0 эквив.), и реакционную смесь перемешивали при -78°С. После перемешивания в течение 2 ч добавляли тетрагидро-4H-пиран-4-он (68,6 мл, 0,75 ммоля, 2,0 эквив.). Реакционную смесь затем перемешивали при КТ в течение 16 ч, и гасили насыщенным водным раствором натрийаммонийхлорида. Летучий растворитель упаривали в вакууме, и сырой продукт разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили (NaSO), отфильтровывали и упаривали в вакууме. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией (Si-PPC, градиент от 5 до 100% этилацетата в гексане). Кристаллизация из смеси диэтиловый эфир - гексан приводила к получению продукта (b-1) в виде твердого вещества (111,3 мг, 81,0%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ, ppm: 5,3 (broad s, 1H), 4,98 (broad s, 1H), 4,00 (dd, J=3,4 Гц, 1Н), от 3,97 до 3,79 (m, 7H), от 3,79 до 3,71 (m. 2H), 3,60 (td, J=11,6, 2,7 Гц, 1H), 3,45 (broad s, 1H), 2,39 (m, 2H), 1,86 (d, J=13,2 Гц, 2H), 1,38 (d, J=6,8 Гц, 3H); LC-MS m/z (метод А)=368/370 [M+H], КТ=1,93 мин.
Пример 3
Синтез (S)-трет-бутил 3-(2-хлор-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилата (с-1):
1
+
3
Это соединение (с-1) получали аналогично (S)-4-(2-хлор-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)тетрагидро-2H-пиран-4-олу, используя трет-бутил 3-оксоазетидин-1-карбоксилат в качестве исходного материала. Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ, ppm: 5,17 (broad d, 2H), 4,56 (dd, J=16,9, 9,48 Гц, 2Н), 4,21 (dd, J=9,48. 2,56 Гц, 1Н), от 4,04 до 3,96 (m, 1H), от 3,82 до 3,71 (m, 5H), 3,59 (td, J=11,6, 2,6 Гц, 1H), 3,47 (broad s, 1H), 2,02 (s, 1H), 1,43 (s, 9H), от 1,40 до 1,36 (m, 4Н); LC-MS (метод А)=439/ 441 [M+H], КТ=2,56 мин.
Пример 4
Синтез (S)-3-(2-хлор-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-8-ил)оксетан-3-ола (d-1):
1
+
3
Это соединение получали аналогично (S)-4-(2-хлор-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)тетрагидро-2H-пиран-4-олу, используя 3-оксетанон в качестве исходного материала. Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ, ppm: 5,35 (broad s, 2H), 5,15 (t, J=6,9 Гц, 2H), 4,96 (d, J=7.2 Гц, 2H), 4,00 (dd, J=11,2, 3 Гц, 1H), 3,84 (s, ЗН), от 3,81 до 3,71 (m, 2H), 3,59 (td, J=11,6, 2,7 Гц, 1Н), 3,47 (broad s, 1H), 1,39 (d, J=6,8 Гц, 3H); LC-MS m/z (метод В2)=340 / 342 [М+Н], КТ=1,59 мин.
Пример 5
Синтез (S)-4-(2-хлор-8-(3-фтороксетан-3-ил)-9-метил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (е-1):
2
2
4
3
1
+
К перемешиваемому раствору (S)-3-(2-хлор-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)оксетан-3-ола (127,6 мг, 0,364 ммоля) в безводном ДХМ (8,0 мл) при -78°С в атмосфере N добавляли трифторид диэтиламиносеры (59,5 мл, 0,436 ммоля, 1,2 эквив.). Реакционную смесь нагревали при 0°С в течение 3 ч, перемешивали при КТ в течение 2 ч и гасили 1N раствором гидроксида натрия. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом. Две фазы разделяли, и органический слой промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили (NaSO), отфильтровывали и упаривали в вакууме. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией (Si-PPC, градиент от 0 до 100% этилацетата в гексане) с получением продукта в виде пены (79,6 мг, 62,0%). Н ЯМР (CDCl, 500 МГц) δ, ppm: от 6,10 до 4,40 (broad s, 2H), от 5,30 до 5,19 (m, 2H), 5,10 (dd, J=20,7, 7,8 Гц, 2H), от 4,04 до 3,98 (m, 1H), от 3,83 до 3,73 (m, 2H), 3,68 (d, J=1,5 Гц, 3H), 3,61 (td, J=11,6, 2,8 Гц, 1H), 3,48 (broad s, 1H), 1,40 (d, J=6,8 Гц, 3H); LC-MS m/z (метод А)=342 [M+H], КТ=2,36 мин.
Пример 6
Синтез (S)-4-(2-хлор-8-циклопропил-9-этил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (f-1):
Стадия 1: Получение 2,6-дихлор-9-этил-9H-пурина и 2,6-дихлор-7-этил-7H-пурина (f-2):
1
1
6
6
Соединения получали аналогично 2,6-дихлор-9-метил-9H-пурину и 2,6-дихлор-7-метил-7H-пурину, соответственно, заменяя йодметан на йодэтан с получением (f-2) и (f-3). H ЯМР 2,6-дихлор-9-этил-9H-пурина (f-2): (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,77 (s, 1H), 4,28 (q, 2H), 1,44 (t, 3H). Н ЯМР 2,6-дихлор-7-этил-7H-пурина: (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,91 (s, 1H), 4,49 (q, 2H), 1,46 (t, ЗН).
Стадия 2: Получение (S)-4-(2-хлор-9-этил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (f-4):
1
+
3
Соединение (f-4) получали аналогично (S)-4-(2-хлор-9-метил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолину, используя 2,6-дихлор-9-этил-9Н-пурин в качестве исходного материала. Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ, ppm: 7,71 (s, 1H), 5,41 (broad s, 1H), 5,00 (broad s, 1H), 4,19 (q, J=7,4 Гц, 2H), 4,00 (dd, J=7,8, 3,6 Гц, 1H), 3,76 (m, 2H), 3,61 (td, J=11,6, 2,6 Гц, 1H), 3,48 (broad s, 1H), 1,48 (t, J=7,2 Гц, 3H), 1,41 (d, J=6,8 Гц, 3H); LCMS m/z (метод А)=284 [М+Н], КТ=2,06 мин.
Стадия 3: Получение (S)-4-(2-хлор-9-этил-8-йод-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (f-5):
2
2
4
3
1
+
К (S)-4-(2-хлор-9-этил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолину (465,0 мг, 1,65 ммоля) в безводном ТГФ (6,7 мл) при -78°С в атмосфере N добавляли свежее приготовленный литийдиизопропиламид в ТГФ (2,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при -78°С в атмосфере N3 в течение 2 часов, и добавляли 1-хлор-2-йодэтан (1,01 г, 5,78 ммоля, 3,5 эквив.). Реакционную смесь затем перемешивали при КТ в течение 3 дней, и затем гасили насыщенным водным раствором натрийаммоний хлорида при 0°С. Летучий растворитель затем упаривали в вакууме, и сырой продукт разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили (NaSO), отфильтровывали и упаривали в вакууме. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией (Si-PPC, градиент от 0 до 100% этилацетата в гексане) с получением целевого соединения в виде пены (610,0 мг, 90,7%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ, ppm: 5,28 (broad s, 2H), 4,17 (q, J=7,4 Гц, 2Н), 4,00 (dd, J=11,3, 3,4 Гц, 1Н), 3,75 (m, 2H), 3,59 (m, 1H), 3,48 (broad s, 1H), 1,37 (m, 6H); LC-MS m/z (метод B2)=408 [M+H], КТ=2,06 мин.
Стадия 3: Получение (S)-4-(2-хлор-8-циклопропил-9-этил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (f-1):
1
+
3
Соединение (f-1) получали аналогично (S)-4-(2-хлор-8-циклопропил-9-метил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолину, используя (S)-4-(2-хлор-9-этил-8-йод-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолин в качестве исходного материала. Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ, ppm: 5,31 (broad s, 1H), 5,00 (broad s, 1H), 4,26 (q, J=7,2 Гц, 2H), 3,97 (dd, J=11,3, 3,4 Гц, 1H), 3,74 (m, 2H), 3,58 (td, J=12,2, 2,7, 1H), 3,43 (broad t, 1H), 1,92 (m, 1H), 1,41 (t, J=7,2 Гц, 3H), 1,34 (d, J=6,2 Гц, 3H), 1,12 (m, 2H), 1,06 (m, 2H); LC-MS m/z (метод A)=322 [M+H], КТ=2,81 мин.
Пример 7
Синтез (S)-4-(2-хлор-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)тетрагидро-2H-пиран-4-ола (g-1):
1
+
3
Это соединение (g-1) получали аналогично (S)-4-(2-хлор-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)тетрагидро-2Н-пиран-4-олу, используя (S)-4-(2-хлор-9-этил-9Я-пурин-6-ил)-3-метилморфолин в качестве исходного материала. Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ, ppm: от 5,65 до 4,75 (broad d, 2H), 4,46 (q, 2H), от 4,05 до 3,85 (m, 5H), от 3,83 до 3,73 (m, 2H), 3,62 (dt, J=11,6 Гц, 2,6 Гц, 1Н), от 3,55 до 3,39 (broad s, 1H), 2,59 (s, 1H), от 2,46 до 2,34 (m, 2H), 1,87 (d, J=12,8 Гц, 2H), 1,45 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 1,40 (d, J=6,8 Гц, 3Н); LC-MS m/z (метод B2)=382/384 [M+H], КТ=1,79 мин.
Пример 8
Синтез (S)-4-(2-хлор-9-этил-8-(4-фтортетрагидро-2H-пиран-4-ил)-9Н-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (h-1):
1
+
3
Это соединение (h-1) получали аналогично (S)-4-(2-хлор-8-(3-фтороксетан-3-ил)-9-метил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолину, используя (S)-4-(2-хлор-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)тетрагидро-2H-пиран-4-ол в качестве исходного материала. Н ЯМР (CDCl, 500 МГц) δ, ppm: от 5,90 до 4,60 (broad s, 2H), 4,37 (q, J=7,1 Гц, 2H), 4,02 (dd, J=11,4 Гц, 3,4 Гц, 1H), от 3,98 до 3,86 (m, 4H), 3,78 (dt, J=11,7 Гц, 7,1 Гц, 2H), 3,62 (td, J=11,9 Гц, 2,8 Гц, 1H), 3,48 (d, J=7,0 Гц, 1H), от 2,55 до 2,35 (m, 2H), от 2,22 до 2,06 (m, 2H), 1,43 (t, J=7,1 Гц, 3H), 1,40 (d, J=6,8 Гц, 3H); LC-MS m/z (метод B2)=384 [M+H], КТ=2,10 мин.
Пример 9
Синтез (S)-3-(2-хлор-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)оксетан-3-ола (i-1):
1
+
3
Это соединение (i-1) получали аналогично (S)-4-(2-хлор-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)тетрагидро-2Н-пиран-4-олу, используя 3-оксетанон в качестве исходного материала. Н ЯМР (CDCl, 500 МГц) δ, ppm: от 5,70 до 4,70 (broad s, 2H), 5,20 (dd, J=12,1 Гц, 7,2 Гц, 2Н), 4,95 (d, J=7,2 Гц, 2H), 4,31 (q, J=7,1 Гц, 2H), 4,02 (dd, J=11,3, 3,2 Гц, 1Н), 3,78 (dt, J=11,7 Гц, 7,2 Гц, 2H), 3,61 (td, J=11,9 Гц, 2,7 Гц, 1Н), 3,47 (s, 2H), 1,46 (t, J=7,2 Гц, 3H), 1,41 (d, J=6,8 Гц, 3H); LC-MS m/z (метод В2)=354/356 [М+Н], КТ=1,71 мин.
Пример 10
Синтез (S)-4-(2-хлор-9-этил-8-(3-фтороксетан-3-ил)-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (j-1):
+
f
Это соединение получали аналогично (S)-4-(2-хлор-8-(3-фтороксетан-3-ил)-9-метил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолину, используя (S)-3-(2-хлор-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)оксетан-3-ол в качестве исходного материала. LC-MS m/z (метод С) - 356/358 [M+H], КТ=2,62 мин; ТСХ (1:1 гептан:этилацетат): R=0,58.
Пример 11
Синтез (S)-4-(2-хлор-9-этил-8-(пиримидин-5-ил)-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (k-1):
2
4
3
1
+
В сосуд для микроволнового излучения объемом 5 мл, оснащенный магнитной мешалкой, помещали (S)-4-(2-хлор-9-этил-8-йод-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолин (30 мг, 0,074 ммоля), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиримидин (22,7 мг, 0,110 ммоля, 1,5 эквив.), фосфат калия (46,9 мг, 0,22 ммоля, 3,0 эквив.), 1,1’-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II), комплекс с дихлорметаном (1:1) (3,0 мг, 0,0037 ммоля, 0,05 эквив.), и дегазировали 1,4-диоксаном (3,0 мл). Колбу для микроволнового излучения закрывали, и реакционную смесь нагревали при микроволновом излучении (300 ватт, 120°С) в течение 15 минут. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (10 мл) и отфильтровывали через слой целита. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили (NaSO), отфильтровывали и упаривали в вакууме. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией (Si-PPC, градиент от 0 до 100% этилацетата в гептане) с получением целевого соединения (k-1) в виде пены (20,6 мг, 77,8%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ, ppm: 9,34 (s, 1H), 9,13 (s, 2H), от 6,00 до 4,60 (broad s, 2H), от 4,42 до 4,28 (m, 2H), от 4,11 до 3,97 (m, 1H), от 3,87 до 3,72 (m, 2H), от 3,71 до 3,59 (m, 1H), от 3,59 до 3,40 (broad s, 1H), от 1,51 до 39 (m, 6H); LC-MS m/z (метод А): КТ=2,21 мин, [М+Н]=360.
Пример 12
Синтез 6-(бензилокси)-N-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)пиридин-2-амина (l-1):
2
4
3
1
К смеси 2-бром-6-бензилоксипиридина (1,10 г, 4,15 ммоля) и 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)анилина (1,00 г, 4,57 ммоля, 1,1 эквив.) в трет-буткловом спирте (20 мл) добавляли трет-бутокскд, натрия (556 мг, 5,78 ммоля, 1,40 эквив.), 2-дициклогексилфосфино-2’-(N,N-диметиламино)бифенил (98 мг, 0,25 ммоля, 0,06 эквив.) и бис(дибензилиденацетон)палладий(0) (96 мг, 0,17 ммоля, 0,04 эквив.). Реакционную смесь насыщали азотом в течение нескольких минут, и темно-оранжевую реакционную смесь нагревали при микроволновом излучении (300 ватт, 120°С) в течение 15 минут. Реакцию гасили 10% водным раствором лимонной кислоты и выливали в этилацетат. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили (NaSO), отфильтровывали и упаривали в вакууме. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией (Si-PPC, градиент от 0 до 100% этилацетата в гептане) с получением целевого продукта (l-1) (1,08 г, 65% выход) в виде слегка коричневатого твердого вещества Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ, ppm: 7,75 (d, J=8,4 Гц, 2H), от 7,49 до 7,41 (m, 3H), от 7,41 до 7,34 (m, 4H), от 7,34 до 7,27 (m, 1H), 6,46 (s, 1H), 6,44 (d, J=7,9 Гц, 1H), 6,30 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 5,37 (s, 2H), 1,34 (s, 12H).
Пример 13
Синтез (S)-1-этил-3-(4-(8-(3-гидроксиоксетан-3-ил)-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)мочевины (m-1):
2
4
6
1
+
В сосуд для микроволнового излучения объемом 5 мл, оснащенный магнитной мешалкой, помещали (S)-3-(2-хлор-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)оксетан-3-ол (100 мг, 0,29 ммоля), [4-этилуреидо)фенил]бороновую кислоту, пинаколятный эфир (104,2 мг, 0,36 ммоля, 1,22 эквив.), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (21,0 мг, 0,018 ммоля, 0,062 эквив.), карбонат натрия (47,7 мг, 0,45 ммоля, 1,53 эквив.) и ацетат калия (47,0 мг, 0,48 ммоля, 1,63 эквив.). Дегазировали ацетонитрилом (3,6 мл) и добавляли воду (1,2 мл). Сосуд для микроволнового излучения закрывали, и реакционную смесь нагревали при микроволновом излучении (300 ватт, 120°С) в течение 15 минут. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (10 мл) и отфильтровывали через слой целита. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили (NaSO), отфильтровывали и упаривали в вакууме. Полученный остаток очищали ВЭЖХ с обратной фазой с получением указанного в заголовке соединения (m-1) в виде белого твердого вещества (76,8 мг, 55,8%). Н ЯМР (ДМСО-d 400 МГц) δ, ppm: 8,62 (s, 1H), 8,27 (d, J=8,7 Гц, 2H), 7,48 (d, J=8,8 Гц, 2H), 6,87 (s, 1H), 6,14 (t, J=5,6 Гц, 1H), 5,46 (broad s, 1H), от 5,23 до 5,06 (m, 3H), 4,78 (d, J=6,6 Гц, 2H), 4,01 (d, J=8,3 Гц, 1H), от 3,84 до 3,77 (m, 1H), 3,73 (dd, J=11,0 Гц, 2,3 Гц, 1H), 3,71 (s, 3H), от 3,62 до 3,52 (m, 1H), от 3,51 до 3,39 (m, 1H), от 3,18 до 3,07 (m, 2H), 1,34 (t, J=7,7 Гц, 3H), 1,07 (t, J=7,2 Гц, 3H); LC-MS m/z (метод С)=468,2 [M+H], КТ=3,77 мин.
Пример 14
Синтез (S)-1-этил-3-(4-(8-(4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фенил)мочевины (n-1):
1
+
6
Указанное в заголовке соединение (n-1) получали в соответствии с методикой, описанной в примере 13. Используя (S)-4-(2-хлор-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)-тетрагидро-2H-пиран-4-ол, получали указанное в заголовке соединение (n-1). H ЯМР (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,65 (s, 1H), 8,26 (d, J=8,7 Гц, 2H), 7,48 (d, J=8,8 Гц, 2H), 6,17 (t, J=5,6 Гц, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,45 (broad s, 1H), 5,07 (broad s, 1H), 4,00 (d, J=8,5 Гц, 1H), 3,95 (s, 3H), от 3,85 до 3,66 (m, 6H), 3,56 (t, J=10,6 Гц, 1H), от 3,48 до 3,35 (m, 1H), от 3,17 до 3,07 (m, 2H), от 2,28 до 2,12 (m, 2H), 1,89 (d, J=13,6 Гц, 2H), 1,32 (d, J=6,7 Гц, 3H), 1,06 (t, J=7,2 Гц, 3H); LC-MS m/z (метод С)=496,3 [М+Н], КТ=3,94 мин.
Пример 15
Синтез (S)-1-(4-(8-циклопропил-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)-3-этилмочевины (o-1):
1
+
6
Указанное в заголовке соединение (о-1) получали в соответствии с методикой, описанной в примере 13. Используя (S)-4-(2-хлор-8-циклопропил-9-метил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолин, получали указанное в заголовке соединение. Н ЯМР (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,62 (s, 1H), 8,25 (d, J=8,7 Гц, 2H), 7,47 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,15 (t, J=5,5 Гц, 1Н), 5,38 (broad s, 1H), 5,03 (broad s, 1H), от 4,04 до 3,92 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,77 (d, J=11,7 Гц, 1H), 3,69 (dd, J=11,5 Гц, 2,9 Гц, 1H), от 3,58 до 3,48 (m, 1H), от 3,43 до 3,33 (m, 1H), от 3,19 до 3,04 (m, 2H), от 2,27 до 2,17 (m, 1H), 1,28 (d, J=6,7 Гц, 3H), 1,06 (t, J=7,2 Гц, 4Н), 0,94 (t, J=7,1 Гц, 3H); LC-MS m/z (метод С)=436,2 [M+H], КТ=4,41 мин.
Пример 16
Синтез (S)-1-этил-3-(4-(8-(3-фтороксетан-3-ил)-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)мочевины (р-1):
1
+
6
Указанное в заголовке соединение (р-1) получали в соответствии с методикой, описанной в примере 13. Используя (S)-4-(2-хлор-8-(3-фтороксетан-3-ил)-9-метил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолин, получали указанное в заголовке соединение. Н ЯМР (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,69 (s, 1H), 8,28 (d, J=8,8 Гц, 2H), 7,49 (d, J=8,8 Гц, 2H), 6,18 (t, J=5,7 Гц, 1H), 5,48 (broad s, 1H), от 5,36 до,22 (m, 2H), от 5,19 до 5,02 (m, 3H), 4,02 (d, J=8,1 Гц, 1H), 3,81 (d, J=11,3 Гц, 1H), от 3,76 до 3,66 (m, 4Н), 3,57 (t, J=10,6 Гц, 1H), 3,46 (broad s, 1H), от 3,17 до 3,06 (m, 2H), 1,35 (d, J - 6,7 Гц, 3H), 1,06 (t, J=7,2 Гц, 3H); LC-MS m/z (метод С)=470,2 [M+H], КТ=4,59 мин.
Пример 17
Синтез (S)-1-(4-(8-циклопропил-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)-3-этилмочевины (q-1):
1
+
6
Указанное в заголовке соединение (q-1) получали в соответствии с методикой, описанной в примере 13. Используя (S)-4-(2-хлор-8-циклопропил-9-этил-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолин, получали указанное в заголовке соединение. Н ЯМР (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,63 (s, 1H), 8,23 (d, J=8,7 Гц, 2H), 7,47 (d, J=8,7 Гц, 2Н), 6,16 (t, J=5,6 Гц, 1H), 5,37 (broad s, 1H), 5,04 (broad s, 1H), 4,35 (q, J=7,1 Гц, 2H), от 4,03 до 3,93 (m, 1H), 3,77 (d, J=11,4 Гц, 1H), 3,68 (dd, J=11,4 Гц, 2,8 Гц, 1H), от 3,60 до 3,48 (m, 1H), от 3,43 до 3,30 (m, 1H), от 3,17 до 3,06 (m, 2H), от 2,30 до 2,20 (m, 1H), 1,39 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 1,29 (d, J=6,7 Гц, 3H), от 1,09 до 0,95 (m, 7H); LC-MS m/z (метод С)=450,2 [М+Н], КТ=4,73 мин.
Пример 18
Синтез (S)-1-этил-3-(4-(9-этил-8-(4-гидрокситетрагидро-2H-пиран-4-ил)-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)мочевины (r-1):
1
+
6
Указанное в заголовке соединение (r-1) получали в соответствии с методикой, описанной в примере 13. Используя (S)-4-(2-хлор-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)тетрагидро-2H-пиран-4-ол, получали указанное в заголовке соединение. Н ЯМР (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,62 (s, 1H), 8,25 (d, J=8,7 Гц, 2H), 7,48 (d, J=8,8 Гц, 2H), 6,14 (t, J=5,6 Гц, 1H), 5,78 (s, 1H), 5,44 (broad s, 1H), 5,10 (broad s, 1H), 4,51 (q, J=6,8 Гц, 2H), 4,00 (d, J=8,3 Гц, 1H), от 3,86 до 3,65 (m, 6H), 3,55 (t, J=10,5 Гц, 1H), от 3,47 до 3,34 (m, 1H), от 3,17 до 3,07 (m, 2H), от 2,28 до 2,13 (m, 2H), 1,88 (d, J=13.5 Гц, 2H), 1,43 (t, J=7,0 Гц, 3Н), 1,33 (d, J=6,7 Гц, 3Н), 1,06 (t, J=7,2 Гц, 3Н); LC-MS m/z (метод С)=510,2 [М+Н], КТ=4,18 мин.
Пример 19
Синтез (S)-1-этил-3-(4-(9-этил-8-(4-фтортетрагидро-2H-пиран-4-ил)-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)мочевины (s-1):
1
+
6
Указанное в заголовке соединение (s-1) получали в соответствии с методикой, описанной в примере 13. Используя (S)-4-(2-хлор-9-этил-8-(4-фтортетрагидро-2H-пиран-4-ил)-9Н-пурин-6-ил)-3-метилморфолин, получали указанное в заголовке соединение. Н ЯМР (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,77 (s, 1H), 8,25 (d, J=8,7 Гц, 2H), 7,49 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,29 (t, J=5,5 Гц, 1Н), 5,40 (broad s, 1H), 5,08 (broad s, 1H), 4,41 (q, J=6,8 Гц, 2H), 4,00 (d, J=8,5 Гц, 1H), от 3,92 до 3,68 (m, 6H), от 3,63 до 3,50 (m, 1H), от 3,49 до 3,36 (m, 1H), от 3,17 до 3,07 (m, 2H), от 2,46 до 2,26 (m, 2H), 2,19 (t, J=12,7 Гц, 2H), 1,41 (t, J=7,0 Гц, 3Н), 1,34 (d, J=6,7 Гц, ЗН), 1,06 (t, J=7,2 Гц, ЗН); LC-MS m/z (метод С)=512,3 [M+H], КТ=5,20 мин.
Пример 20
Синтез (S)-1-этил-3-(4-(9-этил-8-(3-гидроксиоксетан-3-ил)-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)мочевины (t-1):
1
+
6
Указанное в заголовке соединение (t-1) получали в соответствии с методикой, описанной в примере 13. Используя (S)-3-(2-хлор-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)-оксетан-3-ол, получали указанное в заголовке соединение. Н ЯМР (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,65 (s, 1H), 8,25 (d, J=8,8 Гц, 2H), 7,48 (d, J=8,8 Гц, 2H), 6,96 (s, 1H), 6,15 (t, J=5,6 Гц, 1H), 5,45 (broad s, 1H), от 5,29 до 4,99 (m, 3Н), 4,77 (d, J=6,4 Гц, 2H), 4,15 (q, J=7,1 Гц, 2H), 4,01 (d, J=8,4 Гц, 1H), 3,81 (d, J=11,6 Гц, 1Н), 3,72 (d, J=11,4 Гц, 1Н), 3,56 (t, J=10,5 Гц, 1Н), от 3,50 до 3,37 (m, 1Н), от 3,18 до 3,06 (m, 2H), 1,39 (t, J=7,1 Гц, 3Н), 1,35 (d, J=6,8 Гц, 3Н), 1,06 (t, J=7,2 Гц, 3Н); LC-MS m/z (метод С)=482,2 [М+Н], КТ=4,01 мин.
Пример 21
Синтез (S)-1-этил-3-(4-(9-этил-8-(3-фтороксетан-3-ил)-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)мочевины (u-1):
1
+
Указанное в заголовке соединение (u-1) получали в соответствии с методикой, описанной в примере 13. Используя (S)-4-(2-хлор-9-этил-8-(3-фтороксетан-3-ил)-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолин, получали указанное в заголовке соединение. Н ЯМР (MeOD, 500 МГц) δ, ppm: 8,33 (d, J=8,7 Гц, 2H), 7,45 (d, J=8,7 Гц, 2H), 5,57 (broad s, 1Н), от 5,40 до 3,28 (m, 2H), 5,26 (broad s, 1H),5,11 (dd, J=21,1 Гц, 8,1 Гц, 2H), 4,23 (q, J=7,0 Гц, 2H), от 4,11 до 4,01 (m, 1Н), от 3,92 до 3,80 (m, 2H), 3,69 (t, J=10,5 Гц, 1Н), от 3,60 до 3,49 (m, 1Н), 3,25 (q, J=7,2 Гц, 2H), от 1,50 до 1,41 (m, 6H), 1,17 (t, J=7,2 Гц, 3Н); LC-MS m/z (метод С)=484,2 [M+H], КТ=4,93 мин.
Пример 22
Синтез (S)-1-этил-3-(4-(9-этил-6-(3-метилморфолино)-8-(пиримидин-5-ил)-9H-пурин-2-ил)фенил)мочевины (v-1):
1
+
Указанное в заголовке соединение (v-1) получали в соответствии с методикой, описанной в примере 13. Используя (S)-4-(2-хлор-9-этил-8-(пиримидин-5-ил)-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолин, получали указанное в заголовке соединение. Н ЯМР (MeOD, 500 МГц) δ, ppm: 9,29 (s, 1H), 9,23 (s, 2H), 8,33 (d, J=8,7 Гц, 2H), 7,44 (d, J=8,7 Гц, 2H), 5,59 (broad s, 1H), 5,24 (broad s, 1H), 4,47 (q, J=7,2 Гц, 2H), от 4,11 до 4,01 (m, 1H), от 3,92 до 3,81 (m, 2H), 3,69 (td, J=11,9, 2,6, 1H), от 3,62 до 3,49 (m, 1H), от 3,28 до 3,20 (m, 2H), 1,49 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 1,45 (d, J=6,8 Гц, 3Н), 1,17 (t, J=7,2 Гц, 3Н); LC-MS m/z (метод С)=488,2 [M+H], КТ=4,50 мин.
Пример 23
Синтез (S)-1-этил-3-(4-(8-(3-гидроксиазетидин-3-ил)-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)мочевины (w-1):
Стадия 1: Получение (S)-трет-6утил 3-(2-(4-(3-этилуреидо)фенил)-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилата (w-2):
+
Это соединение (w-2) получали аналогично (S)-1-этил-3-(4-(8-(3-гидроксиоксетан-3-ил)-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)мочевине, используя (S)-трет-бутил 3-(2-хлор-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилат в качестве исходного материала. LC-MS m/z (метод А)=567,4 [М+Н], КТ=2,44 мин.
Стадия 2: Получение указанного в заголовке соединения (w-1):
2
2
2
4
6
1
+
К (S)-трет-бутил 3-(2-(4-(3-этилуреидо)фенил)-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-8-ил)-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилату (45,2 мг, 0,08 ммоля) в безводном дихлорметане (3,0 мл) и безводном метаноле (3,0 мл) при 0°С добавляли 4М хлорид водорода в 1,4-диоксане (0,20 мл, 0,80 ммоля, 10,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при КТ в атмосфере N в течение 16 ч. Добавляли трифторуксусную кислоту (0,20 мл), и реакционную смесь перемешивали при 40°С в атмосфере N в течение 24 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до КТ. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, и остаток разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным раствором хлорида натрия, сушили (NaSO), отфильтровывали и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали ВЭЖХ с обратной фазой с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (7,8 мг, 21%). Н ЯМР (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,70 (s, 1H), 8,27 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 7,95 (s, 1H), 7,48 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,44 (s, 1H), 6,22 (t, J=5,5 Гц, 1H), 5,48 (broad s, 1H), 5,15 (broad s, 1H), 4,14 (d, J=8,2 Гц, 1H), 4,08 (d, J=8,3 Гц, 1H), 4,01 (d, J=8,3 Гц, 1H), от 3,84 до 3,67 (m, 7H), от 3,61 до 3,52 (m, 1H), от 3,50 до 3,39 (m, 1H), от 3,17 до 3,07 (m, 2Н), 1,34 (d, J=6,7 Гц, 3Н), 1,06 (t, J=7,2 Гц, 3Н); LC-MS m/z (метод С)=467,2 [М+Н], КТ=3,21 мин.
Пример 24
Синтез (S)-6-(4-(8-циклопропил-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9Н-пурин-2-ил)фениламино)пиридин-2(1H)-она (x-1):
Стадия 1: Получение (S)-6-(бензилокси)-N-(4-(8-циклопропил-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)пиридин-2-амина (x-2):
1
+
3
Это соединение (х-2) получали аналогично (S)-1-(4-(8-циклопропил-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)-3-этилмочевине, используя 6-(бензилокси)-N-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)пиридин-2-амин в качестве исходного материала. Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ, ppm: 8,40 (d, J=8,7 Гц, 2H), от 7,54 до 7,28 (m, 8Н), 6,58 (broad s, 1H), 6,48 (d, J=7,8 Гц, 1H), 6,29 (d, J=7,9 Гц, 1H), 5,49 (broad s, 1H), 5,39 (s, 2H), 5,20 (broad s, 1H), 4,40 (q, J=7,0 Гц, 2H), 4,04 (dd, J=11,2 Гц, 3,1 Гц, 1H), от 3,91 до 3,78 (m, 2H), 3,69 (td, J=11,9 Гц, 2,7 Гц, 1H), от 3,59 до 3,46 (m, 1H), от 2,05 до 1,93 (m, 1H), 1,50 (t, J=7,2 Гц, ЗН), 1,41 (d, J=6,8 Гц, 3Н), от 1,20 до 1,13 (m, 2H), от 1,11 до 1,04 (m, 2H); LC-MS m/z (метод А)=562,3 [M+H], КТ=3,74 мин.
Стадия 2: Получение указанного в заголовке соединения (x-1):
2
2
2
1
+
К раствору (S)-6-(бензилокси)-N-(4-(8-циклопропил-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)пиридин-2-амина (100 мг, 1,78 ммоля) в безводном МеОН (4 мл) и EtOAc (4 мл) добавляли 20 вес.% Pd(OH) на угле (10,0 мг). Реакционную смесь вакуумировали и насыщали H (3х), затем перемешивали в атмосфере H в течение 2 часов. Реакционную смесь затем отфильтровывали через слой целита. Фильтрат концентрировали в вакууме, и сырой продукт очищали колоночной хроматографией (Si-PPC, градиент от 0 до 30% метанола в дихлорметане). Кристаллизация из смеси диэтиловый эфир-гептан приводила к получению указанного в заголовке соединения (х-1) (8,6 мг, 10,2%) в виде твердого вещества. Н ЯМР (ДМСО-d6, 500 МГц) δ, ppm: 10,16 (broad s, 1H), 9,05 (broad s, 1H), 8,27 (d, J=8,7 Гц, 2H), 7,76 (broad s, 2H), 7,41 (t, J=7,9 Гц, 1H), 6,29 (broad s, 1H), 5,98 (d, J=6,3 Гц, 1H), 5,36 (broad s, 1H), 5,06 (broad s, 1H), 4,36 (q, J=7,2 Гц, 2H), 3,98 (d, J=8,5 Гц, 1H), 3,78 (d, J=11,2 Гц, 1H), 3,69 (d, J=8,7 Гц, 1H), 3,54 (t, J=10,6 Гц, 1H), от 3,44 до 3,33 (m, 1H), от 2,30 до 2,19 (m, 1H), 1,40 (t, J=7.1 Гц, 3Н), 1,29 (d, J=6,7 Гц, 3Н), от 1,12. до 0,93 (m, 4Н); LC-MS m/z (метод С)=472,2 [М+Н], КТ=4,93 мин.
Пример 25
Синтез (S)-1-(4-(8-циклопропил-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)-3-(оксетан-3-ил)мочевины (y-1):
Стадия 1: Получение (S)-4-(8-циклопропил-9-этил-2-(4-нитрофенил)-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (y-2):
+
Это соединение (y-2) получали аналогично (S)-1-(4-(8-циклопропил-9-метил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)фенил)-3-этилмочевине, используя пинаконовый эфир 4-нитрофенилбороновой кислоты в качестве исходного материала. LC-MS m/z (метод В2)=409,3 [М+Н], КТ=2,45 мин.
Стадия 2: Получение (S)-4-(8-циклопропил-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)анилина (y-3):
1
+
3
Раствор (S)-4-(8-циклопропил-9-этил-2-(4-нитрофенил)-9H-пурин-6-ил)-3-метилморфолина (76,0 мг, 0,186 ммоля) растворяли в безводном метаноле (3,0 мл) и безводном ТГФ (4,6 мл), подвергали непрерывному поточному гидрированию в аппарате (H-Cube: 10% Pd/C картридж, 1,0 мл/мин поток). Сырую смесь концентрировали в вакууме и очищали колоночной хроматографией (Si-PPC, градиент от 20 до 100% этилацетата в гептане) с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (52,0 мг, 73,8%). Н ЯМР (CDCl, 500 МГц) δ, ppm: 8,28 (d, J=8,5 Гц, 2Н), 6,73 (d, J=8,6 Гц, 2Н), 5,47 (broad s, 1H), 5,17 (broad s, 1H), 4,40 (broad s, 2Н), 4,03 (dd, J=11,3 Гц, 3,3 Гц, 1H), от 3,89 до 3,77 (m, 2Н), 3,68 (td, J=12,0 Гц, 2,8 Гц, 1H), 3,50 (t, J=11,7 Гц, 1H), от 2,02 до 1,91 (m, 1H), 1,48 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 1,39 (d, J=6,8 Гц, 3Н), от 1,33 до 1,22 (m, 2Н), от 1,20 до 1,10 (m, 2Н), 1,06 (dd, J=8,0 Гц, 3,1 Гц, 2Н); LC-MS m/z (метод А)=379,3 [M+H], КТ=1,96 мин.
Стадия 3: Получение указанного в заголовке соединения (у-1):
2
2
2
4
6
1
+
К перемешиваемому раствору (S)-4-(8-циклопропил-9-этил-6-(3-метилморфолино)-9H-пурин-2-ил)анилина (52,0 мг, 0,14 ммоля) в безводном 1,2-дихлорэтане (3,0 мл) добавляли триэтиламин (0,063 мл, 0,45 ммоля, 3,3 эквив.). Реакционную смесь охлаждали до 0°С, и одной порцией добавляли трифосген (40,8 мг, 0,14 ммоля, 1,0 эквив.). После перемешивания при 0°С в атмосфере N в течение 5 минут реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до КТ, и затем добавляли 3-оксетанамин (50,2 мг, 0,69 ммоля, 5,0 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при КТ в атмосфере N в течение 16 ч, и затем разбавляли этилацетатом (25 мл). Органический слой промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия, сушили (NaSO), отфильтровывали и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали ВЭЖХ с обратной фазой с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (30,5 мг, 46,5%). Н ЯМР (ДМСО-d, 400 МГц) δ, ppm: 8,78 (s, 1H), 8,24 (d, J=8,7 Гц, 2Н), 7,47 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,97 (d, J=6,7 Гц, 1H), 5,37 (broad s, 1H), 5,03 (broad s, 1H), от 4,86 до 4,69 (m, 3Н), 4,44 (t, J=6,0 Гц, 2Н), 4,35 (q. J=7,1 Гц, 2Н), 3,97 (d, J=8,7 Гц, 1H), 3,77 (d, J=11,3 Гц, 1H), 3,68 (dd, J=11,4 Гц, 2,6 Гц, 1H), 3,53 (t, J=10,5 Гц. 1H), от 3,44 до 3,33 (m, 1H), от 2,30 до 2,19 (m, 1H), 1,39 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 1,28 (d, J=6,7 Гц, 3Н), от 1,10 до 0,95 (m, 4Н); LC-MS m/z (метод С)=478,2 [М+Н], КТ=4,44 мин.
Пример 26
Биологическая оценка соединений:
а. Анализ с mTOR киназой in vitro
2
Активность киназы в отношении фермента mTOR оценивали путем инкубирования очищенного рекомбинантного фермента (mTOR (1360-2549)+GBL, полученный в лабораторных условиях) в реакционной смеси, содержащей АТФ, MnCl и флуоресцентно меченный субстрат mTOR, например, GFP-4E-ВР1 (Invitrogen, продукт # PR8808A). Реакцию останавливали добавлением меченного тербием фосфор-специфичного антитела, например, Тb-меченого анти-р4Е-ВР1 Т37/Т46 (Invitrogen, продукт # PR8835A), EDTA и буферного раствора TR-FRET (Invitrogen, продукт # PR3756B). Образование продукта определяли посредством флуоресценции резонансного переноса энергии с временным разрешением (TR-FRET), который возникает, когда фосфорилированный субстрат и меченое антитело находятся в непосредственной близости вследствие фосфор-специфичного связывания. Ферментативную активность измеряли как увеличение сигнала TR-FRET с помощью планшетного ридера Perkin Elmer Envision. Анализ проводили в 384-луночных планшетах Proxiplate Plus (Perkin Elmer, продукт # 6008269), используя следующую методику:
Активность соединения тестировали по кривой зависимости от дозы с 10 точками, начиная с самой высокой конечной концентрации 10 мкМ. Их серийно разбавляли в 100% ДМСО до дальнейшего разведения буфером. Реакционную смесь (8 uls), содержащую 0,25 нМ mTOR+фермент GBL, 400 нМ GFP-4E-BP1, 8 мкМ АТФ, 50 мМ Hepes pH 7,5, 0,01% Tween 20, 10 мМ MnCh, 1 мМ EGTA, 1 мМ DTT, 1% ДМСО (+/- соединение), инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем добавляли 8 мл раствора, содержащего 2 нМ Tb-анти-р4Е-ВР1 антитела и 10 мМ EDTA, разбавляли буфером TR-FRET и инкубировали в течение 30 минут для остановки реакции. Планшету сканировали с помощью планшетного ридера Envision. Значения Ki рассчитывали, используя Assay Explorer, с помощью уравнения АТФ-конкурентного сильного связывания Моррисона для определения значений Ki.
Соединения по изобретению (например, соединения формулы) имеют значения активности (Ki) в отношении киназы mTOR от около 0,0001 нМ до около 5 мкМ, и в некоторых вариантах осуществления от около 0,0001 нМ до около 1 мкМ, и в некоторых других вариантах осуществления менее чем от около 0,0001 нМ до около 0,5 мкМ. Соединения 101-113 по изобретению, приведенные в таблице 1, имеют следующие уровни активности (в мкМ): 0,007, 0,008, 0,005, 0,004, 0,074, 0,008, 0,003, 0,003, 0,003, 0,005, 0,004, 0,006 и 0,008, соответственно.
b. Клеточный анализ фосфо-АКТ серина 473 in vitro
Анализ позволяет измерить ингибирование тестируемого соединения АКТ серин-473 фосфорилирования в PC-3 (ATCC CRL-1435) клетках, вырабатывающих аденокарциному предстательной железы человека, которые были стимулированы эпидермальным фактором роста (EGF).
2
Клеточные линии РС-3 поддерживали в среде RPMI1640 с добавлением 10% FBS, 2 мМ глутамина и 10 мМ HEPES, pH 7,4, при 37°С в увлажненном инкубаторе с 5% CO.
Клетки высевали в 384-луночные планшеты с плотностью 7000 клеток/лунка в 50 мкл питательной среды. Через 24 часа питательную среду удаляли и заменяли RPMI1640, не содержащей FBS. Клетки обрабатывали 10 концентрациями тестируемого соединения или отдельно ДМСО для контроля (конечная концентрация ДМСО 0,5%) и инкубировали при 37°С в течение 30 минут. Клетки затем стимулировали в течение 10 минут с помощью 100 нг/мл EGF (конечная концентрация). Одну колонку контроля не стимулировали EGF для наблюдения соотношения между стимулированными и нестимулированными клетками. Через 10 минут соединения и среду для стимулирования удаляли и заменяли 25 мкл буфера для лизиса, содержащего ингибиторы протеазы и ингибиторы фосфатазы. Этот буфер содержал детергент для обеспечения разрушения клеток. После полного клеточного разрушения 20 мкл лизата переносили в 384-луночную 4-местную планшету MesoScale Discovery и покрывали антителами к АКТ (MesoScale Discovery (MSD) продукт K211CAD-2), которые предварительно блокировали с помощью 3% бычьего сывороточного альбумина в Tris-буферном растворе. После переноса лизата в планшету MSD, АКТ в лизате захватывали на покрытые антитела инкубированием на шейкере при температуре 4°С в течение 16 часов. После стадии захвата планшеты промывали, и затем инкубировали в течение двух часов с антителами к S473 фосфорилированным АКТ, которые конъюгированы с Sulfo-Tag. Эта метка дает сигнал, когда находится в непосредственной близости от электрода на основе планшеты MSD. Связывание меченых антител с захваченным белком позволяет определить ридер MSD.
50
50
Значение ЕС определяли как концентрацию, при которой данное соединение достигает 50% снижения измеренных уровней фосфорилирования S473 АКТ. Значения ЕС вычисляли с помощью установки MDL Assay Explorer 3,0,1,8 сигмоидальной кривой с переменным наклоном.
50
Соединения 101-113, описанные в таблице 1, имеют значения активности ЕС (в мкМ): 0,030, 0,037, 0,029, 0,01, N/A, 0,015, 0,007, 0,009, 0,008, 0,005, 0,004, 0,006 и 0,008, соответственно.
с. Анализ клеточной пролиферации in vitro
Эффективность соединения формулы I измеряли с помощью анализа клеточной пролиферации с использованием следующих методик:
3
1. Аликвоту 20 мл клеточной культуры, содержащей около 10 клеток (РС3 или MDAMB361,1) в среде помещали в каждую лунку 384-луночной непрозрачной планшеты.
2. Получали контрольные клетки, содержащие среду без клеток, клетки оставляли заселяться в течение ночи.
3. Соединение добавляли к экспериментальным лункам и инкубировали в течение 3 дней.
4. Планшеты уравновешивали до комнатной температуры в течение приблизительно 30 минут.
5. Добавляли объем реагента CellTiter-Glo, равный объему клеточной культуральной среды, присутствующему в каждой лунке.
6. Содержимое смешивали в течение 2 минут на орбитальном шейкере для индуцирования лизиса клеток.
7. Пластины инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут для стабилизации сигнала люминесценции.
8. Люминесценцию записывали и наносили на график как RLU=относительные единицы люминесценции.
50
50
Альтернативно, клетки высеивали с оптимальной плотностью в 96-луночную планшету, и инкубировали в течение 4 дней в присутствии тестируемого соединения. Затем добавляли Alamar Blue для анализа среды, и клетки инкубировали в течение 6 часов, затем считывали при длине волны возбуждения 544 нм, длине волны излучения 590 нм. Значения IC рассчитывали с использованием сигмоидального дозозависимой кривой. Первые соединения, описанные в таблице 1, имеют значение IC (в мкМ, с клетками РС3): 282, 0,207, 0,12, 0,115, N/A, 0,441, 0,112, 0,232, 0,218, 0,163, 0,269, 0,853 и 1,7.
d. Анализ на связывание PI3K p110α (альфа)
2
2
50
Анализы на связывание: Начальные опыты поляризации осуществляли на Analyst НТ 96-384 (Molecular Devices Corp, Sunnyvale, CA.). Образцы для измерения сродства флуоресцентной поляризации получали добавлением 1:3 серийных разведении р110 альфа PI3K (Upstate Cell Signaling Solutions, Charlottesville, VA), начиная с конечной концентрации 20 мкг/мл в буфере для поляризации (10 мМ Tris pH 7,5, 50 мМ NaCl, 4 мм MgCl, 0,05% Chaps и 1 мМ DTT) до конечной концентрации 10 мМ PIP (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT). После периода инкубирования в течение 30 минут при комнатной температуре реакции останавливали добавлением GRP-1 и зонда PIP3-TAMRA (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT), 100 нМ и 5 нМ конечная концентрация соответственно. Считывали со стандартными отключенными фильтрами для родаминового фторофора (λвозб=530 нм; λиспуск=590 нм) в 384-луночных черных планшетах Proxiplate малого объема (PerkinElmer, Wellesley, MA). Значения поляризации флуоресценции наносили на график в зависимости от концентрации белка, и значения ЕС получали путем подстановки данных в уравнение с 4-мя параметрами с помощью программного обеспечения KaleidaGraph (Synergy software. Reading, PA). Этот эксперимент позволял также установить подходящие концентрации белка для использования в последующих конкурентных экспериментах с ингибиторами.
50
Ингибирующие значения IC определяли путем добавления 0,04 мг/мл р110 альфа PI3K (конечная концентрация) в сочетании с PIP2 (конечная концентрация 10 мМ) в лунках, содержащих серийные разведения 1:3 антагонистов в конечной концентрации 25 мМ АТФ (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA) в буфере для поляризации. После инкубационного периода 30 минут при комнатной температуре реакции останавливали добавлением GRP-1 и зонда PIP3-TAMRA (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT) в конечной концентрации 100 нМ и 5 нМ, соответственно. Считывали со стандартными отключенными фильтрами для родаминового фторофора (λвозб=530 нм; λиспуск=590 нм) в 384-луночных черных планшетах Proxiplate малого объема (PerkinElmer, Wellesley, MA). Значения поляризации флуоресценции наносили на график в зависимости от концентрации белка, и значения ЕСзо получали путем подстановки данных в уравнение с 4-мя параметрами с помощью программного обеспечения Assay Explorer (MDL, San Ramon, CA).
Приведенное выше описание имеет исключительно иллюстрирующий характер принципов изобретения. Кроме того, поскольку многочисленные модификации и изменения будут очевидны специалистам в данной области, оно не должно ограничивать изобретение точной конструкцией и способом, описанным выше. Соответственно, все подходящие модификации и их эквиваленты можно считать подпадающими под объем изобретения, определенный последующей формулой изобретения.