СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ, В ЧАСТНОСТИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА, МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ, ПОГЛОЩЕННЫХ ИЗ ТКАНИ МАКРОФАГАМИ КРОВИ, КОТОРЫЕ ПОВТОРНО ПОСТУПАЮТ ИЗ ТКАНЕЙ В КРОВЕНОСНУЮ СИСТЕМУ

1. Способ исследования, в частности количественного анализа, молекулярного маркера/маркеров, поглощенного из ткани макрофагами крови, которые повторно поступают из ткани в кровеносную систему, характеризующийся следующими этапами:
- обработка цельной крови агентом, который подавляет коагуляцию и/или агломерацию цельной крови;
- осуществление отбора и/или обогащения и/или отделения макрофагов крови или популяций лейкоцитов, содержащих макрофаги крови, из цельной крови;
- осуществление перфорирования или лизирования отобранных макрофагов крови или популяций лейкоцитов, содержащих макрофаги крови, возможно после предшествующей необязательной пермеабилизации отобранных макрофагов крови или популяций лейкоцитов, содержащих макрофаги крови;
- осуществление качественного и количественного определения фагоцитированных маркеров макрофагов, происходящих не из крови, а именно молекулярных маркеров, происходящих из ткани, после предшествующего перфорирования и/или лизирования макрофагов крови или популяций лейкоцитов, содержащих макрофаги крови.
2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что отбор и/или обогащение и/или выделение макрофагов крови осуществляют посредством положительного отбора с использованием антител, направленных против поверхностного маркера CD16.
3. Способ по п.2, характеризующийся тем, что предпочтительно после или, возможно, до положительного отбора с использованием антител, направленных против поверхностного маркера CD16, осуществляют положительный отбор с использованием антител, направленных против поверхностного маркера CD14.
4. Способ по любому из пп.1-3, характеризующийся тем, что осуществляют отрицательный отбор для исключения клеток с поверхностными маркерами CD56, и/или CD57, и/или CD161 с использованием антител, направленных против маркеров поверхности CD56, и/или CD57, и/или CD161.
5. Способ по любому из пп.1-3, характеризующийся тем, что положительный или отрицательный отбор осуществляют с использованием магнитных гранул, которые могут быть, предпочтительно обратимо, связаны.
6. Способ по любому из пп.1-3, характеризующийся тем, что положительный или отрицательный отбор осуществляют с использованием антител, связанных с планшетом для твердофазного ИФА.
7. Способ по любому из пп.1-3, характеризующийся тем, что количественный анализ популяции мононуклеарных лейкоцитов осуществляют в планшете для твердофазного ИФА, предпочтительно путем изменения активности лактатдегидрогеназы с использованием планшетного анализатора для твердофазного ИФА, в частности предпочтительно в том же планшете для твердофазного ИФА, в котором осуществляли количественное и качественное определение молекулярных маркеров, в частности антигенов макрофагов, происходящих не из крови.
8. Способ по любому из пп.1-3, характеризующийся тем, что осуществление количественного определения присутствующего количества фагоцитрированных молекулярных маркеров, происходящих не из крови, а из ткани, осуществляют при помощи планшетного анализатора для твердофазного ИФА и/или устройства для измерения хемилюминесценции.
9. Способ по любому из пп.1-3, характеризующийся тем, что в качестве молекулярных маркеров, в частности тканевых маркеров и/или серологических маркеров используют
- анормальное метилирование ДНК;
- AFP (α-1-фетопротеин);
- AHCY (S-аденозил-гомоцистеин-гидролаза);
- AMY2 (панкреатическая амилаза);
- СА 15-3 (синонимы: MUC1, EMA, CD227);
- СА 19-9;
- СА 50;
- СА 72-4 (синоним: TAG72);
- СА 125 (синоним: MUC16);
- кальцитонин;
- кальпротектин;
- CCSA-2 (специфический антиген колоректального рака-2);
- CCSP-2 (секретируемый белок колоректального рака-2);
- СЕА (раковый эмабриональный антиген);
- CYP24A1;
- цитокератин (СК) 8 и его фрагменты;
- СК18 и его фрагменты;
- СК19 и его фрагменты;
- CRP (С-реактивный белок);
- цистатин В;
- DDH (дигидродиолдегидрогеназа);
- DKK-1 (Dikkopf-1);
- GP73 (белок Гольджи - 73) (синоним: GOLPH2);
- НЕ4 (белок эпидермиса человека 4);
- HER2/neu;
- HSP (белок теплового шока) - 27;
- Mac-2 BP (Мас-2 - связывающий белок);
- маммаглобин А;
- маммаглобин В;
- MIA (белок, обладающий способностью подавлять меланому);
- MnSOD (маргенец-супероксиддисмутаза);
- PARK7 (синоним: DJ-1);
- ProGRP (прогестин-релизинг пептид);
- NSE (нейрон-специфическая енолаза);
- пан-цитокератин;
- Рго-ММР (про-металлопротеаза матрикса) - 7;
- PSA (простата-специфический антиген);
- S100A8;
- S100A9;
- S-100бета;
- SCCA1 (антиген плоскоклеточной карциномы 1);
- SCCA2 (антиген плоскоклеточной карциномы 2);
- тироглобулин;
- UHRF1 (убихитин-подобный с/содержащий PHD и кольцо-палец домены 1);
- URG4 (активируемый ген 4); и
- YKL-40 (синоним: CHI3-L1),
а также их комбинация/комбинации.
10. Способ по любому из пп.1-3, характеризующийся тем, что в качестве агента против коагуляции и/или агломерации используют гепарин или другой подходящий анткоагулянт.
11. Способ по любому из пп.1-3, характеризующийся тем, что перфорирование или лизирование макрофагов или содержащей их популяции лейкоцитов осуществляют посредством обработки сапонином или обработки раствором тритона.
2
12. Способ по любому из пп.1-3, характеризующийся тем, что для определения антигенов макрофагов, происходящих не из крови, используют антитела, возможно конъюгированные с биотином, HRP (пероксидаза хрена), АР (щелочная фосфатаза) или люминесцентными красителями, в частности иимуноглобулины класса (IgG) и фрагменты Fab или F(ab) и/или аптамеры, в частности выбранные из следующих:
- анти-IgG мыши (поликлональное);
- анти-IgG кролика (поликлональное);
- анти-IgG козы (поликлональное);
- анти-IgG крысы (поликлональное);
- анти-IgG осла (поликлональное);
- анти-AFP (клон AFP-01);
- анти-AFP (клон AFP-11);
- анти-AFP (клон 4А3);
- анти-AFP (клон 5Н7);
- анти-AFP (клон М803209);
- анти-AFP (клон М0151611);
- анти-AFP (клон М0151608);
- анти-AFP (поликлональное);
- анти-AHCY (клон 1Е11-1А7);
- анти-AHCY (клон 2F11-1D10);
- анти-AHCY (клон 4Н2);
- анти-AHCY (клон M1);
- анти-AHCY (клон М2);
- анти-AHCY (поликлональное);
- анти-АМY2 (клон 6А9/1);
- анти-АМY2 (клон 501);
- анти-АМY2 (клон 503);
- анти-АМY2 (клон 10-102.5);
- анти-АМY2 (поликлональное);
- анти-СА 15-3/MUC1 (клон М2С5);
- анти-СА 15-3/MUC1 (клон М9Е7);
- анти-СА 15-3/MUC1 (клон М4Н2);
- анти-СА 15-3/MUC1 (клон М8С9);
- анти-СА 15-3/MUC1 (клон M10G4);
- анти-СА 15-3/MUC1 (клон М10Н6);
- анти-СА 15-3/MUC1 (клон М3А106);
- анти-СА 15-3/MUC1 (клон C595(NCRC48));
- анти-СА 15-3/MUC1 (клон Е29);
- анти-СА 15-3/MUC1 (поликлональное);
- анти-СА 19-9 (клон 121SLE);
- анти-СА 19-9 (поликлональное);
- анти-СА 50 (клон М991149);
- анти-СА 50 (клон 93);
- анти-СА 50 (поликлональное);
- анти-СА 72-4/TAG72 (клон SPM148);
- анти-СА 72-4/TAG72 (поликлональное);
- анти-СА 125/MUC16 (клон 2F1);
- анти-СА 125/MUC16 (клон 10G12);
- анти-СА 125/MUC16 (клон Х75);
- анти-СА 125/MUC16 (клон Х325);
- анти-СА 125/MUC16 (поликлональное);
- анти-кальцитонин (клон SP17);
- анти-кальцитонин (клон 13В9);
- анти-кальцитонин (клон 13f2);
- анти-кальцитонин (клон 24В2);
- анти-кальцитонин (поликлональное);
- анти-кальпротектин (клон 27Е10);
- анти-кальпротектин (поликлональное);
- анти-ССSА-2 (поликлональное);
- анти-ССSР-2 (поликлональное);
- анти-СЕА (клон Соl-1);
- анти-СЕА (клон 1С7);
- анти-СЕА (клон 1C10);
- анти-СЕА (клон 1C11);
- анти-СЕА (поликлональное);
- анти-СYР24А1 (клон 1Е1);
- анти-СYР24А1 (клон 1F8);
- анти-СYР24А1 (поликлональное);
- анти-СК8 (клон 24);
- анти-СК8 (клон LP3K);
- анти-СК8 (поликлональное);
- анти-СК18 (клон DC-10);
- анти-СК18 (клон DA-7);
- анти-СК18 (клон LDK18);
- анти-СК18 (поликлональное);
- анти-СК19 (клон А53-В/А2);
- анти-СК19 (клон ВА17);
- анти-СК19 (клон 236-11221);
- анти-СК19 (поликлональное);
- анти-CRP (клон 232007);
- анти-CRP (клон 232024);
- анти-CRP (клон С2);
- анти-CRP (клон С4);
- анти-CRP (клон С5);
- анти-CRP (клон С6);
- анти-CRP (клон С7);
- анти-CRP (поликлональное);
- анти-цистатин В (клон 2F1);
- анти-цистатин В (клон 8k275);
- анти-цистатин В (клон В-02);
- анти-цистатин В (клон RJMW-2E7);
- анти-цистатин В (поликлональное);
- анти-DDH (клон Т101);
- анти-DDH (поликлональное);
- анти-DKK-1 (клон 141135);
- анти-DKK-1 (поликлональное);
- aHTH-GP73/GOLPH2 (клон YA-14);
- aHTH-GP73/GOLPH2 (клон 5В10);
- aHTH-GP73/GOLPH2 (поликлональное);
- анти-НЕ4 (клон С-12);
- анти-НЕ4 (поликлональное);
- анти-НЕК2/neu (клон 10С7);
- анти-НЕЕ2/neu (клон 191924);
- анти-НЕК2/neu (клон N3/D10);
- анти-НЕК2/neu (поликлональное);
- анти-НБР-27 (клон G3.1);
- анти-Н8Р-27 (клон АР5Е5);
- анти-Н8Р-27 (клон F-4);
- анти-Н8Р-27 (клон 2А5);
- анти-Н8Р-27 (поликлональное);
- анти-Мас-2 ВР (клон SP-2);
- анти-Мас-2 ВР (поликлональное);
- анти-маммаглобин А (клон 1G8D6, синоним 2E7G9);
- анти-маммаглобин А (клон 304-1А5);
- анти-маммаглобин А (поликлональное);
- анти-маммаглобин В (клон Е-17);
- анти-маммаглобин В (поликлональное);
- анти-MIA (клон 3А6);
- анти-MIA (поликлональное);
- анти-ММР-7 (клон 6А4);
- анти-ММР-7 (клон 176-5F12);
- анти-ММР-7 (клон 141-7В2);
- анти-ММР-7 (клон 377313);
- анти-ММР-7 (поликлональное);
- анти-MnSOD (клон 1АЕ);
- анти-MnSOD (клон 2А1);
- анти-MnSOD (клон 4F10);
- анти-MnSOD (клон 23G5);
- анти-MnSOD (клон 37СТ127.5.11.6);
- анти-MnSOD (поликлональное);
- анти-РАКК7/DJ-1 (клон 1В11);
- анти-РАКК7/DJ-1 (клон 1D7);
- aHTH-PARK7/DJ-1 (клон 6А65);
- aHTH-PARK7/DJ-1 (клон 3055);
- anra-PARK7/DJ-1 (клон А-9);
- aHTH-PARK7/DJ-1 (клон D-4);
- анти-РАКК7/DJ-1 (клон Е2);
- анти-РАКК7/DJ-1 (поликлональное);
- анти-proGRP (клон pGRP5);
- анти-proGRP (клон Е146);
- анти-proGRP (клон E172);
- анти-GRP (клон 76-Е6);
- анти-proGRP (поликлональное);
- анти-GRP (поликлональное);
- анти-NSE (клон 1С1);
- анти-NSE (клон 5А4);
- анти-NSE (клон 5Е2);
- анти-NSE (клон 5G10);
- анти-NSE (поликлональное);
- анти-пан-цитокератин (клон 7Н8С4);
- анти-пан-цитокератин (клон В311.1);
- анти-пан-цитокератин (клон С11);
- анти-пан-цитокератин (клон D-12);
- анти-пан-цитокератин (поликлональное);
- анти-PSA (клон ER-PR8);
- анти-PSA (клон 181823);
- анти-PSA (поликлональное);
- анти-8100А8 (клон 1В3);
- анти-8100А8 (клон 2С5/4);
- анти-8100А8 (клон 2Н2);
- анти-8100А8 (клон 2Q396A);
- анти-8100А8 (клон 6А614);
- анти-8100А8 (клон 8L627);
- анти-8100А8 (клон 8-5С2);
- анти-5100А8 (клон CF-145);
- анти-8100А8 (клон MRP8 7С12/4);
- анти-8100А8 (клон S13.67);
- анти-8100А8 (поликлональное);
- анти-8100А9 (клон 1С10);
- анти-8100А9 (клон 2Q396B);
- анти-8100А9 (клон 4G9);
- анти-8100А9 (клон NO.19);
- анти-8100А9 (клон NO.134);
- анти-8100А9 (клон S32.2);
- анти-8100А9 (клон S36.48);
- анти-S100А9 (поликлональное);
- анти-S-100бета (клон SB6);
- анти-S-100бета (клон SH-B1);
- анти-S-100бета (клон SH-B4);
- анти-S-100бета (поликлональное);
- анти-SCCA1 (клон 8Н11);
- анти-SCCA1 (поликлональное);
- анти-SССА2 (клон 10С12);
- анти-SССА2 (поликлональное);
- анти-SССА1/2 (клон В-9);
- анти-SССА1/2 (поликлональное);
- анти-тироглобулин (клон 5Е6);
- анти-тироглобулин (клон 5F9);
- анти-тироглобулин (клон 5G4);
- анти-тироглобулин (клон 11А16);
- анти-тироглобулин (клон РВ2);
- анти-тироглобулин (клон РВ3);
- анти-тироглобулин (поликлональное);
- анти-UHRF1 (клон 1RC1C-10);
- анти-UHRF1 (клон 3А11);
- анти-UHRF1 (поликлональное);
- анти-ЦТЮ4 (поликлональное);
- aнти-YKL-40/CHI3-L1 (клон 2011);
- aнти-YKL-40/CHI3-L1 (клон 321806);
- aнти-YKL-40/CHI3-L1 (поликлональное).
13. Система для выделения и исследования мононуклеарных лейкоцитов крови, в частности макрофагов крови, включающая:
- устройство для добавления агента, подавляющего коагуляцию и/или агломерацию цельной крови;
- устройство для осуществления предварительного отбора и обогащения мононуклеарных лейкоцитов, в частности макрофагов крови, посредством центрифугирования в градиенте плотности;
+
- устройство для осуществления отбора и обогащения CD14 клеток при помощи антител к CD14, которые, возможно обратимо, связаны с магнитными гранулами или планшетом для твердофазного ИФА;
+
- устройство для осуществления отбора и обогащения CD16 клеток при помощи антител к CD16, которые, возможно обратимо, связаны с магнитными гранулами или планшетом для твердофазного ИФА;
- устройство для перфорирования или лизирования популяций мононуклеарных лейкоцитов, в частности макрофагов крови, при помощи раствора сапонина или раствора тритона;
- устройство для количественного анализа популяций мононуклеарных лейкоцитов, в частности макрофагов крови, с использованием теста для определения ЛДГ (лектатдегидрогеназы) в планшете для твердофазного ИФА, в том же планшете для твердофазного ИФА, в котором осуществляют качественное и количественное определение молекулярных маркеров;
- устройство для качественного и количественного определения внутриклеточных молекулярных маркеров, фагоцитированных макрофагами крови после предшествующего перфорирования или лизирования мононуклеарных лейкоцитов, в частности макрофагов, крови, при помощи планшетного анализатора для твердофазного ИФА и/или устройства для измерения хемилюминесценции.
+
14. Система по п.13, характеризующаяся устройством для исключения NK-клеток (клеток-естественных киллеров) с маркерами клеточной поверхности CD56, или CD57, или CD161 из общих мононуклеарных лейкоцитов, в частности CD16 лейкоцитов, с использованием антител к CD56, или CD57, или CD161, которые связаны с магнитными гранулами.
15. Система по любому из предыдущих п.13 или 14, характеризующаяся устройством для фиксации и пермеабилизации мононуклеарных лейкоцитов перед их лизированием, предпочтительно перед или возможно после отбора и/или обогащения и/или отделения макрофагов крови или популяций лейкоцитов, содержащих макрофаги крови, для внутриклеточного связывания антител, направленных против внутриклеточных фагоцитированных молекулярных маркеров, перед лизированием клеток.