Способ и набор для идентификации Vaccinium myrtillus

1. Способ идентификации Vaccinium myrtillus в ботанической композиции посредством ПЦР-амплификации, включающий определение в образце этой композиции фрагмента нуклеиновой кислоты V. myrtillus, находящегося в пределах внутреннего транскрибируемого спейсера 1, области гена 5,8S рибосомной РНК и внутреннего транскрибируемого спейсера 2, где указанный способ включает следующие стадии:
(а) выделение нуклеиновых кислот из указанного образца;
(б) выполнение ПЦР в режиме реального времени на выделенной нуклеиновой кислоте с использованием:
- набора праймеров, выбранных из группы, состоящей из:
(1) SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6;
(2) SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8;
(3) SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10;
(4) SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12;
и
- отжиг зонда в области нуклеиновой кислоты, амплифицированной с помощью праймеров, где указанный зонд состоит из последовательности SEQ ID NO: 13;
(в) определение наличия продукта амплификации,
при этом обнаружение продукта амплификации указывает на наличие Vaccinium myrtillus в ботанической композиции.
2. Способ по п. 1, где набор прамеров (1) используют на стадии (б).
3. Способ по пп. 1, 2, где указанную ПЦР в режиме реального времени (rt-ПЦР) выполняют в следующих условиях:
- начальная стадия денатурации при 95°С в течение 180 с;
- 2-стадийные циклы из 15 с при 95°С (1-ая стадия) и 15 с при 62-68,5°С (2-ая стадия) повторяют от 40 до 50 раз.
4. Способ по пп. 1-3, где ботаническая композиция представляет собой растительный экстракт.
5. Набор для идентификации Vaccinium myrtillus в ботанической композиции, содержащий набор праймеров и зонд, как определено в п. 1.
6. Набор по п. 5, дополнительно содержащий ДНК-полимеразу, смесь дезоксинуклеотидов (dNTP), буферные растворы.
7. Набор по пп. 5, 6, дополнительно содержащий в отдельных контейнерах образец нуклеиновой кислоты Vaccinium myrtillus для использования в качестве положительного контроля и воду или буферный раствор, не содержащие нуклеазу, в качестве отрицательного контроля.