Способ определения снижения радиационно-индуцированной миграции клеток рака молочной железы

2
2
1. Способ определения снижения радиационно-индуцированной миграции клеток рака молочной железы, включающий 72-часовое воздействие на опухолевые клетки ДНК-связывающих лигандов - водонерастворимых димерных бисбензимидазолов, и облучение, отличающийся тем, что после радиационного воздействия  миграционную активность опухолевых клеток in vitro определяют с помощью теста заживления раны: клетки инкубируют до достижения ими 100% монослоя, добавляют DB(5) или DB(7), через 24 часа удаляют узкую полосу монослоя и облучают оставшиеся  клетки в дозе 4 Гр, инкубируют клетки в течение 48 часов при температуре +37°С в CO-инкубаторе с 5% содержанием CO, определяют ширину свободной от клеток полосы через 24 и 48 часов после облучения в сравнении с исходным значением, принятым за 100%, и регистрируют снижение радиационно-индуцированной миграции на 26,8% через 24 часа, на 19,9% через 48 часов - под влиянием DB(5) и на 17,9% через 24 часа - под влиянием DB(7).
2
2
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что миграционную активность опухолевых клеток определяют с помощью с помощью трансвелл анализа: клетки инкубируют при температуре +37°С с водонерастворимым димерным бисбензимидазолом с 5 метиленовыми группами в составе линкера (DB (5) или водонерастворимым димерным бисбензимидазолом с 7 метиленовыми группами DB(7) в течение 24 часов, далее клетки облучают в дозе 4 Гр, через 48 часов клетки отмывают от DB(5) или DB(7) и высевают в транслуночные вставки, инкубируют в течение трех суток при температуре +37°С в CO-инкубаторе с 5% содержанием CO, после чего подсчитывают количество мигрировавших клеток с помощью светового микроскопа и регистрируют снижение радиационно-индуцированной миграции в 2,3 раза по влиянием DB(5) и в 3,5 раза под влиянием DB(7).
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что определяют уровень экспрессии гена OCLN: инкубируют клетки при температуре +37°С с водонерастворимым димерным бисбензимидазолом с 5 метиленовыми группами в составе линкера DB(5) или водонерастворимым димерным бисбензимидазолом с 7 метиленовыми группами DB(7) в течение 24 часов, далее клетки облучают в дозе 4 Гр, через 48 часов выделяют мРНК, которую путём реакции обратной транскрипции переводят в комплементарную ДНК (кДНК), далее проводят  полимеразную цепную реакцию в реальном времени, определяют пороговые циклы амплификации (Ct) и при помощи расчетного метода ΔΔCt регистрируют увеличение радиационно-индуцированного уровня экспрессии OCLN в 2,4 раза под влиянием DB(5) и в 1,9 раз под влиянием DB(7).