СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АДГЕЗИОННЫХ КЛЕТОК

1. Способ получения адгезионных клеток, в соответствии с которым:
а. адгезионные клетки вносят в культуральный сосуд, который содержит микроносители в культуральной среде;
b. клетки амплифицируют, проводя несколько последовательных пассажей клеток в том же самом культуральном сосуде, причем каждый пассаж клеток, следующий за первым пассажем клеток, проводят:
i. используя всю или часть клеточной популяции, которая была получена в течение предшествующего пассажа клеток, после проведения ферментативной обработки клеточной популяции для открепления клеток от микроносителей; и
ii. внося культуральную среду и увеличивая количество микроносителей; и
с. клеточную популяцию, полученную в течение последнего пассажа клеток, собирают после необязательного проведения ферментативной обработки указанной клеточной популяции для открепления клеток от микроносителей.
2. Способ получения биологического агента, продуцируемого адгезионными клетками, в соответствии с которым:
а. адгезионные клетки вносят в культуральный сосуд, который содержит микроносители в культуральной среде;
b. клетки амплифицируют, проводя несколько последовательных пассажей клеток в этом одном культуральном сосуде, причем каждый пассаж клеток, следующий за первым пассажем клеток, проводят:
i. используя всю или часть клеточной популяции, которая получена в течение предшествующего пассажа клеток, после проведения ферментативной обработки указанной клеточной популяции для открепления клеток от микроносителей; и
ii. внося культуральную среду и увеличивая количество микроносителей;
с. клеточную популяцию, получаемую в течение последнего клеточного пассажа, обрабатывают таким образом, чтобы она продуцировала биологический агент, причем указанную обработку проводят в том же культуральном сосуде, который использовали для амплификации клеток; и
d. собирают биологический агент.
3. Способ по п.2, в соответствии с которым биологический агент является инфекционным агентом, и обработку клеточной популяции на стадии (с) проводят, заражая популяцию клеток указанным инфекционным агентом в инфекционной среде.
4. Способ по п.3, в котором инфекционным агентом является вирус бешенства, а инфекционной средой является вирусная инфекционная среда, свободная от любого продукта животного происхождения.
5. Способ по п.1 или 2, в соответствии с которым число пассажей клеток, проводимых в одном культуральном сосуде, составляет 2, 3 или 4.
6. Способ по п.1 или 2, в соответствии с которым концентрация микроносителей в культуральной среде в течение первого пассажа клеток составляет обычно <1 г/л, и, предпочтительно, ≤0,5 г/л.
7. Способ по п.1 или 2, в соответствии с которым при проведении ферментативной обработки используют раствор, содержащий протеолитический фермент.
8. Способ по п.1 или 2, в соответствии с которым каждый последующий пассаж клеток проводят, увеличивая объем культуральной среды.
9. Способ по п.1 или 2, в соответствии с которым первый пассаж клеток проводят в объеме культуральной среды, который составляет от 1/5 до половины рабочего объема культурального сосуда.
10. Способ по п.1 или 1, в соответствии с которым культуральная среда свободна от сыворотки животного происхождения.
11. Способ по п.1 или 2, в соответствии с которым культуральная среда свободна от любого продукта животного происхождения.
12. Способ по п.1 или 2, в соответствии с которым концентрация белка в культуральной среде составляет ≤15 мг/л.
13. Способ по п.1 или 2, в соответствии с которым культуральная среда также содержит клеточный протекторный агент.
14. Способ по п.13, в соответствии с которым клеточным протекторным агентом является поливинилпирролидон или полоксамер.
15. Способ по п.1 или 2, в соответствии с которым культуральный сосуд представляет собой биореактор, который имеет рабочий объем между 3 и 3000 литрами, предпочтительно между 20 и 1000 литрами, и, особенно предпочтительно, между 20 и 500 литрами.
16. Способ по п.15, в соответствии с которым культуральным сосудом является биореактор для однократного применения.
17. Способ по п.1 или 2, в соответствии с которым адгезионные клетки представляют собой клетки Vero.
18. Способ по п.1, в соответствии с которым клеточная популяция, которую собирают на стадии (с), содержит, по меньшей мере, 60-кратное количество клеток, исходно внесенных на стадии (а) способа.
19. Способ получения адгезионных клеток, в соответствии с которым:
а. размораживают запас адгезионных клеток, затем
b. с размороженными адгезионными клетками проводят способ по п.1.
20. Способ получения адгезионных клеток, в соответствии с которым после получения адгезионных клеток в первом культуральном сосуде по любому из пп.1 или 19:
а. клеточную популяцию, собранную после ферментативной обработки указанной клеточной популяции для открепления клеток от микроносителей, переносят во второй культуральный сосуд, который имеет больший рабочий объем, и который содержит культуральную среду, содержащую большее количество микропор относительно количества микропор, присутствующего в течение последнего пассажа клеток, проведенного в первом культуральном сосуде, и
b. стадии (b) и (с) способа по п.1 выполняют во втором сосуде.
21. Способ по п.20, в соответствии с которым стадии (а) и (b) по п.20 повторяют снова в третьем культуральном сосуде, который имеет больший рабочий объем, чем рабочий объем второго культурального сосуда.
22. Применение клеток, которые были получены в соответствии со способом по п.1, для получения биологических агентов.
23. Способ получения адгезионных клеток в культуральном сосуде, который содержит микроносители в культуральной среде, в соответствии с которым количество получаемых клеток увеличивается с кратностью ≥60 в результате проведения последовательных пассажей клеток в единственном культуральном сосуде.