ВАРИАНТ СРЕДСТВА ДЛЯ RNAi ПРОТИВ АЛЬФА-СИНУКЛЕИНА

1. Средство для RNAi, содержащее первую нить и вторую нить, где
первая нить и вторая нить образуют дуплекс;
первая нить содержит направляющую область, где направляющая область содержит нуклеиновую кислоту, характеризующуюся по меньшей мере приблизительно 90% идентичностью с последовательностью 5'-UGCUCUUUGGUCUUCUCAGCC-3' (SEQ ID NO:24) или по меньшей мере приблизительно 90% идентичностью с последовательностью 5'-UGGGCACAUUGGAACUGAGCA-3' (SEQ ID NO:8); и
вторая нить содержит область, не являющуюся направляющей; где необязательно
направляющая область содержит последовательность нуклеиновой кислоты 5'-UGCUCUUUGGUCUUCUCAGCC-3' (SEQ ID NO:24), и область, не являющаяся направляющей, содержит последовательность нуклеиновой кислоты 5'- GGCUGAGAACCAAAGAGUA-3' (SEQ ID NO:53).
первая нить содержит последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся приблизительно 90% идентичностью с SEQ ID NO: 24 или приблизительно 90% идентичностью с SEQ ID NO: 8;
направляющая область содержит последовательность нуклеиновой кислоты 5'-UGGGCACAUUGGAACUGAGCA-3' (SEQ ID NO: 8), и область, не являющаяся направляющей, содержит последовательность нуклеиновой кислоты 5'-UGCUCAGUCAAUGUGCCUA -3' (SEQ ID NO: 37); или
вторая нить содержит последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся приблизительно 90% идентичностью с SEQ ID NO: 53 или приблизительно 90% идентичностью с SEQ ID NO: 37.
2. Средство для RNAi по п. 1, где первая нить и вторая нить соединены посредством РНК-линкера, где необязательно РНК-линкер содержит 4-50 нуклеотидов; где РНК-линкер способен к образованию петлевой структуры, где необязательно петлевая структура содержит 4-20 нуклеотидов.
3. Средство для RNAi по п. 2, где
средство для RNAi содержит в направлении от 5'-конца к 3'-концу вторую нить, РНК-линкер и первую нить; или
средство для RNAi содержит в направлении от 5'-конца к 3'-концу первую нить, РНК-линкер и вторую нить;
где необязательно средство для RNAi содержит последовательность нуклеиновой кислоты под SEQ ID NO:61 или под SEQ ID NO:63 или нуклеотидную последовательность, на приблизительно 90% идентичную нуклеотидной последовательности под SEQ ID NO: 61 или под SEQ ID NO:63.
4. Средство для RNAi по любому из пп. 1-3, где
средство для RNAi представляет собой малую ингибирующую РНК (siRNA), микроРНК (miRNA) или малую шпилечную РНК (shRNA);
средство для RNAi нацеливается на РНК, кодирующую полипептид, ассоциированный с нейродегенеративной синуклеинопатией, где необязательно нейродегенеративная синуклеинопатия представляет собой болезнь Паркинсона (PD), множественную системную атрофию атрофию (MSA) или деменцию с тельцами Леви (DLB); и
где необязательно полипептид представляет собой альфа-синуклеин (SNCA) или человеческий альфа-синуклеин; или
выполняются оба условия из (a) и (b).
5. Экспрессионная конструкция, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую средство для RNAi по любому из пп. 1-4; где необязательно
нуклеиновая кислота, кодирующая средство для RNAi, содержит каркас miRNA;
нуклеиновая кислота, кодирующая средство для RNAi, функционально связана с промотором, где необязательно промотор выбран из немедленно-раннего промотора цитомегаловируса (CMV), LTR RSV, LTR MoMLV, промотора гена фосфоглицераткиназы-1 (PGK), промотора вируса обезьян 40 (SV40), промотора CK6, промотора гена транстиретина (TTR), промотора TK, тетрациклин-чувствительного промотора (TRE), промотора HBV, промотора hAAT, LSP-промотора, химерного промотора, специфического в отношении печени (LSP), промотора E2F, промотора гена теломеразы (hTERT); промотора, состоящего из энхансера цитомегаловируса/промотора гена бета-актина курицы/промотора гена β-глобина кролика (CAG), промотора гена фактора элонгации 1-альфа (EF1-альфа), промотора человеческого гена β-глюкуронидазы, промотора гена β-актина курицы (CBA), ретровирусного LTR-промотора вируса саркомы Рауса (RSV), промотора гена дигидрофолатредуктазы и промотора гена 13-актина; или
выполняются оба условия из (a) и (b).
6. Экспрессионная конструкция по п. 5, где экспрессионная конструкция дополнительно содержит интрон, сигнал полиаденилирования или их оба; и где необязательно
интрон представляет собой интрон CBA, интрон hEF1-альфа или химерный интрон, и где необязательно экспрессионная конструкция представляет собой самокомплементарный вектор, и интрон представляет собой химерный интрон дельта; и/или
сигнал полиаденилирования представляет собой сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста, сигнал полиаденилирования SV40 или сигнал полиаденилирования TK HSV.
7. Вектор, содержащий экспрессионную конструкцию по п. 5 или 6; где необязательно вектор
представляет собой вектор на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), и где необязательно экспрессионная конструкция фланкирована одной или несколькими последовательностями инвертированного концевого повтора (ITR) AAV или двумя ITR AAV, где необязательно ITR AAV представляют собой ITR серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAVrh8R, AAV9, AAV10, AAVrh10, AAV11, AAV12, AAV2R471A, AAV DJ, AAV козы, AAV крупного рогатого скота или AAV мыши;
дополнительно содержит спейсерную последовательность нуклеиновой кислоты, расположенную выше или ниже нуклеиновой кислоты, кодирующей средство для RNAi;
представляет собой самокомплементарный вектор на основе rAAV, где необязательно вектор содержит первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую средство для RNAi, и вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую последовательность, комплементарную последовательности средства для RNAi, где первая последовательность нуклеиновой кислоты может образовывать внутринитевые пары оснований со второй последовательностью нуклеиновой кислоты на протяжении большей части или всей ее длины, и где необязательно первая последовательность нуклеиновой кислоты и вторая последовательность нуклеиновой кислоты соединены мутантным ITR AAV, где мутантный ITR AAV характеризуется делецией D-области и содержит мутацию последовательности концевого разрешения; или
предусматривает любую комбинацию из (a)-(c).
8. Клетка, содержащая вектор по п. 7.
9. Частица рекомбинантного AAV, содержащая вектор по п. 7; где необязательно вирусная частица AAV содержит капсид серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAVrh8R, AAV9, AAV10, AAVrh10, AAV11, AAV12, AAV2R471A, AAV2/2-7m8, AAV DJ, AAV2 N587A, AAV2 E548A, AAV2 N708A, AAV V708K, AAV2-HBKO, AAVDJ8, AAVPHP.B, AAVPHP.eB, AAVBR1, AAVHSC15, AAVHSC17, AAV козы, химерного AAV1/AAV2, AAV крупного рогатого скота, AAV мыши или rAAV2/HBoV1; и
где необязательно
ITR и капсид вирусной частицы rAAV получены из одного и того же серотипа AAV; или
ITR и капсид вирусной частицы rAAV получены из разных серотипов AAV, где необязательно ITR получен из AAV2, и капсид частицы rAAV получен из AAV1.
10. Композиция, содержащая частицу rAAV по п. 9, где необязательно композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.
11. Набор, содержащий средство для RNAi по любому из пп. 1-4, частицу AAV по п. 9 или композицию по п. 10, где необязательно набор дополнительно содержит инструкции по применению.
12. Способ лечения нейродегенеративной синуклеинопатии у млекопитающего, включающий введение млекопитающему средства для RNAi по любому из пп. 1-4, экспрессионной конструкции по п. 5 или 6, вектора по п. 7, клетки по п. 8, частицы rAAV по п. 9 или композиции по п. 10.
13. Способ подавления экспрессии альфа-синуклеина у млекопитающего с нейродегенеративным заболеванием, включающий введение млекопитающему средства для RNAi по любому из пп. 1-4, экспрессионной конструкции по п. 5 или 6, вектора по п. 7, клетки по п. 8, частицы rAAV по п. 9 или композиции по п. 10.