Лабораторная диагностика иммунных реакций при различных состояниях

лабораторная диагностика иммунных реакции при различных состояниях

Н.А. Бутина, Е.А. Дуванова. Особенности выявления маркеров аллергии. ООО «Центр лабораторной диагностики», Вологда

Аллергия - широко распространенная патология и занимает лидирующие позиции по росту заболеваемости во всем мире. Количество веществ, которые могут выступать в качестве аллергенов, с каждым годом стремительно растет, поэтому для успешного лечения ее и профилактики необходимо знать региональные факторы, способствующие развитию аллергии.

Цель исследования - изучить спектр веществ, вызывающих аллергические реакции у взрослых и детей.

Методом ИФА исследовали сыворотку венозной крови с определением IgE общего и специфических IgE к 82 аллергенам и 12 вариантам смесей аллергенов (пищевые, пыльцевые, растительные, насекомых, животных и др.). Применяли наборы с жидкофазными аллергенами для количественного определения общего и аллергенспецифических IgE производства ООО «Компания Алкор Био» РФ.

Обобщены материалы обследования 658 пациентов на маркеры аллергии, в том числе 248 детей и 416 взрослых. IgE общий в превышающем норму количестве (более 100 ед/мл) выявлен у 175 (42%) взрослых и 100 (40%) детей, для которых за норму принят уровень до 60 ед/мл. IgE к специфическим аллергенам обнаружены у 40% детей и 40% взрослых. Самыми распространенными факторами аллергизации являются пыльца деревьев раннего цветения (26%), среди которых преобладает береза бородавчатая, широко распространенная в регионе, а также пыльца луговых (16,2%) и сорных трав (14,3%). Установлено, что маркеры аллергии на сорные травы у взрослых выявляются в 6,6 раза чаше, чем у детей, на луговые травы - в 3 раза чаще и деревья раннего цветения - в 2 раза чаще.

Формирование ингаляционной аллергии на клещей (D. pteronyssinus и D. Farina) относится ко второй по частоте встречаемости группе (8,6 и 8,3%) в общей структуре. Аллергические реакции на домашнюю пыль (5,7%) и на эпителий собак и кошек (4%) также относятся к наиболее распространенным, особенно у детей. В структуре пищевых аллергенов выделяется коровье молоко (4,8% у взрослых и 13,1% у детей) и яичный белок у 6% детей. Установлено, что в осенние месяцы обнаружение специфических IgE к растительным аллергенам в обеих возрастных группах возрастает в более чем в 10 раз, в то время как IgE к пищевым продуктам и бытовым аллергенам такой динамики не имеют.

Установлен достаточно высокий уровень выявления общего IgE с одинаковой частотой у взрослых и детей. В структуре факторов, вызывающих аллергию, преобладают растительные аллергены. Выявлены сезонные колебания влияния аллергенов на организм. Раннее и достоверное выявление специфических IgE способствует своевременной диагностике и целенаправленному лечению аллергии.

Е.А. Васильева, И.В. Маянская, Н.И. Толкачева, И.Д. Успенская, В.И. Ашкинази, В.С. Кропотов. Индуцированный синтез цитокинов клетками крови in vitro в норме и при патологии. ФГБУ «Нижегородский НИИ детской гастроэнтерологии» Минздрава России, Нижний Новгород.

Цель исследования - выявить продукцию цитокинов клетками крови здоровых детей и пациентов с муковисцидо-зом в ответ на стимуляцию микст-митогеном в сравнительном аспекте с их системным синтезом.

Было изучено 120 образцов крови 60 пациентов с муковис-цидозом (МВ) тяжелого, среднетяжелого и легкого течения заболевания в возрасте 3-14 лет. Группу сравнения составляли 27 условно-здоровых детей того же возраста. Содержание цитокинов (ФНОа, ИФНу, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10) в сыворотке и супернатантах (СН) клеточных культур крови после 24-часовой инкубации с микст-митогеном (фитогемагглютинин,

конконавалин, липополисахарид) определяли твердофазным иммуноферментным анализом (ИФА). Статистическую обработку результатов проводили параметрическими и непараметрическими методами вариационной статистики.

Спонтанная секреция цитокинов клетками крови и их уровень в сыворотке у группы здоровых детей не имела значимых отличий для ИФНу и ИЛ-4, в то время как спонтанная продукция ИЛ-6, ФНОа и ИЛ-10 была значимо выше (p = 0,017, p = 0,02, p = 0,015 соответственно), чем в сыворотке крови. Для ИФНу, ИЛ-4, ИЛ-10 выявлена прямая взаимосвязь между сывороточным уровнем и их спонтанным синтезом, что свидетельствует о том, что спонтанный синтез клетками крови ex vivo отражает их содержание в сыворотке здорового ребенка.

МВ характеризуется системной гиперпродукцией (ИЛ-6, ИЛ-4, ФНОа, ИФН-у), а также повышенной спонтанной и индуцированной комплексом митогенов продукции цитокинов клетками крови. У детей с легким течением заболевания взаимосвязь между сывороточным уровнем и спонтанным синтезом установлена только для ФНОа и ИЛ-4 (R = 0,63, p = 0,02; R = 0,68, p = 0,02). Это свидетельствовало о том, что только данные цитокины отражают их системный синтез. Снижение секреции противовоспалительных цитокинов и повышенный синтез провоспалительных цитокинов как в сыворотке, так и в СН отражают сдвиги в состоянии иммунной защиты и дисбаланс в цитокиновой системе, который связан с №2-типом иммунного ответа.

Дети с тяжелым и среднетяжелым течением заболевания также проявляли одинаковую значимую гиперцитокине-мию всех тестируемых цитокинов по сравнению с группой условно-здоровых. Установлен интересный факт: у некоторых детей (12% случаев) низкий системный уровень ФНОа и ИЛ-4 в сыворотке сопровождался минимальным индексом стимуляции на комплексный митоген и спонтанной продукцией на уровне здоровых (p = 0,46). Такое снижение уровня цитокинов выявлено при наличии хронической бактериальной инфекции в мокроте данных детей.

Большинство детей (57 из 60) имели высокую отвечае-мость культивируемых клеток на стимуляцию митогенами. Это является свидетельством сохранения эффекторного потенциала культур клеток пациентов, несмотря на тяжелое заболевание. Однако клетки в организме, праймированные комплексом бактериальных и вирусных антигенов, могут исчерпать свой защитный потенциал, что создает угрозу срыва иммунитета. Метод индивидуальной оценки секреции цито-кинов клетками цельной крови под влиянием митогенов оценивает их функциональный резерв и может быть использован в медицине для оптимизации лечения.

Ж.П. Васнева, Л.В. Беляева. Иммунный статус пациентов с лекарственной непереносимостью (ЛН). Открытое акционерное общество «Самарский диагностический центр»

Обследовали 56 взрослых (20% мужчин, 80% женщин) Поволжского региона с ЛН и повышенными коэффициентами сенсибилизации (КС) к местным анестетикам (МА). В периферической крови определяли CD4+, CD8+, CD16+, HLADR+, CD3-16+, CD3+16+, CD3+HLADR+, CD3-HLADR+ -клетки с использованием меченных ФИТЦ и фикоэритрином МКАТ серии LT (Москва) и цитометра («Calibur», США), IgE общий (Москва), IgA, IgM, IgG, С,- и C4- компоненты комплемента («Olimpus», Япония), ЦИК разных размеров с использованием 2,5% (max), 3,5% (med) и 7,0% (min) раствора ПЭГ6000. Статистическую обработку проводили с использованием Statistica. В качестве контрольных использовались результаты обследования 60 доноров без проявлений ЛН, КС к МА у которых не превышали 0,3.

У пациентов с ЛН отмечается повышение (p < 0,001) HLADR+ в 3,8 раза, CD16+ в 1,9 раза, CD3-16+ на 38,5%, CD8+ - на 15,5%, IgA, IgG и IgE на 38,9, 19,3 и 53,4%,

ЦИКтт, med, max на 40, 72,7 и 18,7%, соответственно. Достоверных изменений остальных параметров не выявлено. Корреляционный анализ по Спирману (R) у пациентов с ЛН выявил связи (p < 0,001) CD4+ с CD16+ (R = -0,44); CD8+ с CD16+, CD3+16+ и ЦИК max (R = 0,46; 0,42; -0,36, соответственно); HLADR+ с IgE и ЦИКтт (R = 0,41, 0,37). В обеих группах выявлены связи CD3-CD16+ с CD3+ (R = -0,55;

i J 4 пациенты 7 7

R = -0,88) и CD16+ (R = 0,8; R =0,68), в кон-

контроль 7 7 4 пациенты 7 7 контроль 7 /7

трольной группе - связь CD16+ с ЦИКmed (R = -0,74).

Таким образом, можно заключить, что у пациентов с ЛН изменения затрагивают показатели активации клеток и их цитотоксической и комплексообразовательной активности. Большее количество корреляционных связей между иммунологическими показателями относительно таковых контрольной группы может свидетельствовать о системном характере данной активности.

Э.А. Имельбаева, Н.М. Абезгильдина, Л.Р. Мухамадиева, С.Н Томарова, Э.Ф. Хантимерова, Т.А. Челпанова, Н.А. Васильева, А.И. Имельбаев, А.Ж. Гильманов. Фагоцитарная активность нейтрофилов в крови у больных поллинозом в период ремиссии. ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, Уфа

Исследование активности фагоцитирующих клеток у больных аллергозами проводится главным образом в период обострения заболевания, в то время как важно знать и базальные, «фоновые», показатели. Ввиду участия грануло-цитов практически во всех звеньях воспалительных процессов прогноз течения аллергических заболеваний во многом определяется функциональным состоянием клеток. В частности, сегментоядерные нейтрофилы содержат гистаминазу

- основной фактор дезактивации гистамина, главного медиатора аллергических реакций немедленного типа.

Целью настоящего исследования явилась оценка состояния фагоцитарных клеток крови у больных поллинозом в период ремиссии заболевания. У 20 практически здоровых лиц и 8 больных поллинозом во время ремиссии (зимой) в крови, взятой утром натощак, определяли абсолютное и относительное содержание фракций лейкоцитов (лейкоцитарную формулу), моделировали фагоцитарную реакцию с частицами латекса и определяли показатели фагоцитоза (фагоцитарное число, фагоцитарный индекс, общую фагоцитарную активность и фагоцитарную емкость крови). В тесте естественной миграции лейкоцитов в ротовую полость in vivo оценивали подвижность клеток при воздействии 0,5% раствора яичного альбумина.

Результаты проведенных исследований показали, что в период ремиссии у больных поллинозом относительное количество сегментоядерных нейтрофилов в крови было снижено почти на 30% (до 43,0 ± 0,8% против 72,6 ± 1,3% у здоровых лиц); абсолютное количество нейтрофилов - ниже на 67%. Фагоцитарная активность нейтрофилов в крови у больных поллинозом была снижена на 31% (40,0 ± 2,5% активность против 58,2 ± 2,8% у здоровых), интенсивность фагоцитоза

- на 59,4% (фагоцитарный индекс 3,0 ± 0,18 ед. против 7,4 ± 0,8 ед.). Общая фагоцитарная активность и фагоцитарная емкость крови у больных поллинозом были в 2 и 5 раз ниже по сравнению с данными здоровых лиц. Оценка естественной эмиграции лейкоцитов в тесте с яичным альбумином также показала ее снижение в сравнении с данными контрольной группы на 40% через 10 мин и на 80% на 20-й минуте после стимуляции белком.

Активность фагоцитов у аллергических больных в фазе обострения заболевания зависит от механизмов развивающихся аллергических реакций и индивидуальных особенностей больных [Арефьева Н.А. и др., 1997]; литературные данные на эту тему противоречивы. Установленное в нашем исследовании у больных поллинозом в период ремиссии выраженное снижение количественных и функциональных показателей фагоцитирующих клеток крови способно формировать условия для сенсибилизации и развития аллергических реакций с возможным нейтрофилезом, эозинофилией

и лимфоцитозом в последующем - в острый период заболевания.

М.А. Риттер, Е.Н. Гурашкина, А.Т. Яковлев, Е.С. Рож-кова, О.П. Гумилевская. Оценка связи уровня цитокинов в сыворотке с эффективностью вакцинации против гепатита B. ГБОУ ВПО Волгоградский государственный медицинский университет Минздрава России

Гепатит B остается актуальной проблемой на сегодняшний день. Часто эта инфекция протекает бессимптомно, не нанося заметного вреда здоровью. Но в ряде случаев гепатит B переходит в хроническую форму, приводящую в последующем к циррозу печени или гепатоцеллюлярной карциноме и в итоге к смерти больного. Одним из наиболее эффективных методов борьбы с гепатитом B является своевременная вакцинация.

Принято считать, что протективный иммунитет сохраняется в течение 5-7 лет после вакцинации, но у некоторых лиц уровень защитных антител даже в первые несколько лет не достигает необходимых 10 мМЕ/мл, что может свидетельствовать о индивидуальных различиях иммунной системы при ответе на вакцинацию. Возможно развитие поствакцинального иммунитета зависит от особенностей формирования иммунного ответа (уровней цитокинов, индивидуальных генетических вариаций, функциональности клеточного и гуморального звена).

Цель - оценить возможную связь между напряженностью поствакцинального иммунитета и уровнем цитокинов у лиц, вакцинированных против гепатита B.

Было обследовано 160 человек, вакцинированных против гепатита B не более 7 лет назад. Обследуемым проводилось определение антител к HBsAg методом иммунохемилюми-несцентного анализа с использованием реактивов компании Roche Diagnostic (Швейцария) и уровня ИЛ-2, ИЛ-4, ИФН-а методом твердофазного иммунного анализа с использованием реактивов «Вектор-Бест» (Россия). Все полученные в ходе работы экспериментальные данные подвергали статистической обработке с использованием пакета прикладных программ STATISTICA for Windows 6.0.

Медицинские работники, вошедшие в исследование, были разделены на две группы по уровню защитных антител к HBsAg: первая группа с эффективным иммунитетом (уровень антител более 10 мМЕ/мл) и вторая группа с неэффективным иммунитетом (уровень антител ниже 10 мМЕ/мл). В каждой группе были определены уровни ИЛ-2, ИЛ-4, ИФН-а, как наиболее важных и ведущих цитокинов в иммунном ответе, влияющих на дифференцировку клеток и выработку соответствующих иммуноглобулинов. Сравнение уровней цито-кинов в сыворотке вакцинируемых двух исследуемых групп между собой не выявило значимых отличий (p < 0,05).

Сывороточные уровни цитокинов ИЛ-2, ИЛ-4, ИФН-а не отражают индивидуальные особенности формирования протективного гуморального иммунитета после вакцинации против гепатита B.

М.В. Стамм, В.П. Мудров, О.А. Милов, Д.В. Решетняк, Т.Б. Шакланова, В.Н. Нелюбин1. Противоинфекционный иммунный ответ на H.pylori и его связь с развитием осте-опороза. 9-й ЛДЦ МО России, г. Москва, 'КБ № 123 ФМБА России, г Одинцово

Современные экспериментальные данные свидетельствуют об участии таких инфекционных агентов в развитии хронических дегенеративных заболеваниях, как остеопороз. На сегодняшний день установлено, что инфекция Helicobacter pylori вызывает хронический гастрит, язвенную болезнь и злокачественные новообразования желудка. Но заболевание может не ограничиться желудочно-кишечным трактом (ЖКТ) и может вовлечь экстракишечные ткани и органы. В связи с этим неоднократно высказывались предположения, что инфекция H.pylori может нести ответственность за различные эндокринные расстройства, такие как аутоиммунные заболевания и MALT-лимфому щитовидной железы, сахарный диабет, остеопороз и первичный гиперпаратиреоз. От-

дельного внимания заслуживает участие иммунной системы в этом процессе.

Целью работы стал поиск возможной связи развития остеопороза с хроническими воспалительными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки, обусловленными инфицированием H. pylori. В соответствии с целью работы была поставлена задача обследовать различные возрастные группы женщин с диспептическими жалобами и выработать оптимальное сочетание различных маркеров остеопороза с маркерами инфицирования ЖКТ.

Были обследованы 12 женщин в возрасте 30-40 лет (14 женщин 41-48 лет с сохранной репродуктивной функцией, 11 женщин в возрасте 50-57 лет в постменопаузальном периоде) на следующие показатели: паратгормон, 25-гидроксивитамин В (25-OH D), кальцитонин, остеокальцин, C-терминальный телопептид коллагена 1-го типа (ß-CrossLaps), тиреотропный гормон (ТТГ), антитела к тиреопероксидазе (антитела к ТПО), антитела IgG, IgA к H. pylori, циркулирующие иммуноком-плексы (ЦИК), показатели клеточного иммунитета (CD3+4+, 3+8+, 16+56+, 19+). Статистическая обработка полученных данных велась с использованием критерия Манна-Уитни.

У женщин в постменопаузе уровень 25-OH D составлял от 17,8 до 125,5 нг/мл при норме 20-50 нг/мл, и значимой связи с клинической картиной не выявлено. При анализе биохимических параметров метаболизма костной ткани у паци-

ентов, инфицированных H. pylori, обнаружено повышение уровня ß-CrossLaps у 50%, которое достигало 0,77 ± 15 нг/мл, при норме до 0,57 нг/мл. Другие маркеры костного обмена (кальцитонин, остеокальцин) статистически значимых результатов не выявили.

Более половины обследованных женщин предъявили жалобы на диспептические явления со стороны ЖКТ. У женщин в возрасте 30-40 лет антитела к H. pylori класса IgA и IgG были выявлены у 16,7%. В более старшем возрасте антитела к H. pylori класса IgA и IgG были выявлены у 56%.

Уровень CD3+4+ у женщин в постменопаузе составлял 1152 ± 119 кл/мкл, у женщин репродуктивного возраста 1457 ± 251 кл/мкл. Была выявлена слабоположительная корреляционная связь (r = 0,62) между наличием антител IgA к H. pylori, ЦИК и антителами к тиреопероксидазе.

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что хроническое инфекционное заболевание может приводить к системным сдвигам в иммунной системе, а параллельно в биохимическом и гормональном гомеостазе. Инфицирование H. pylori может утяжелять течение остеопороза, о чем свидетельствуют изменения в уровнях маркеров ремоделирования костной ткани. Степень корреляции уровней биохимических показателей костного обмена и иммунологических сдвигов при инфекции, обусловленной H. pylori, требует дальнейшего изучения.

лабораторные иммуно-гематологические исследования в трансфузиологии

В.В. Базарный, Н.В. Гаренских, Е.А. Карбовничая, Е.В. Малухина. Новый подход к оптимизации лабораторного мониторинга кадровых доноров крови. Уральский государственный медицинский университет, Свердловская областная клиническая больница № 1, Екатеринбург

Стандартное тестирование донорской крови не всегда позволяет выявить нарушения в состоянии здоровья кадровых доноров (латентный дефицит железа и др.). Цель исследования заключалась в оценке показателей эритропоэза и обмена железа при различных видах донорства.

Обследованы 120 доноров. Наряду с общепринятыми показателями крови определяли уровень сывороточного железа, ОЖСС (Olympus AU 640) и концентрацию эритропоэтина (ЭПО) методом твердофазного гетерогенного ИФА («Вектор-Бест»). Все обследованные добровольцы были разделены на группы: активных (кадровых) доноров, доноров резерва и доноров тромбоцитов. Контрольную группу составили «первичные» доноры перед первой кроводачей. Для получения тромбоконцентрата использовали технологию автоматического афереза (Haemonetics, устройство MCS+).

Основные параметры гематологического анализа (содержание лейкоцитов, тромбоцитов, эритроцитов и некоторые расчетные индексы - MCH, MCV) у доноров изученных групп существенно не различались. При этом степень анизо-цитоза (RDW) повышалась у активных доноров крови и доноров тромбоцитов на 10% (p = 0,02). Различий в показателях обмена железа между группами также не обнаружено, но у 13% добровольцев в контрольной группе и у 29% активных доноров крови и тромбоцитов отмечалось снижение коэффициента насыщения трансферрина. Таким образом, несмотря на соблюдение адекватного «донорского режима» у части доноров формируется умеренный латентный дефицит железа.

Концентрация ЭПО в контрольной группе составила 29,3 ± 2,3 мМЕ/мл, у активных доноров она повышена на 90% (p < 0,01), у доноров тромбоцитов - на 80% (p < 0,01). Если «эритропоэзвозмущающий» эффект кроводач в целом понятен, то его причины и патогенетическое значение у доноров тромбоцитов требует дальнейшего анализа.

Таким образом, в проведенном исследовании получены

новые данные о состоянии процессов кроветворения и обмена железа при разных видах донорства. Мы полагаем, что совершенствование лабораторного мониторинга здоровья доноров (прежде всего - тромбоцитов) делает актуальным дальнейший научный поиск в данном направлении с использованием новых лабораторных методических подходов, в частности - определение гемопоэтических факторов роста.

Э.А. Имельбаева, В.Т. Степанова, А.Ж. Гильманов. Оценка риска развития посттрансфузионных осложнений у онкологических больных. ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» МЗ РФ, ГБУЗ «Республиканская станция переливания крови», г, Уфа

При возникновении опухоли в организме происходят изменения антигенного состава как самих трансформированных опухолевых клеток, так и клеток крови. Изменения антигенных свойств эритроцитов при опухолях характеризуются в основном снижением агглютинабельности эритроцитов и экспрессии на их поверхности антигенов системы AB0 и H. При остром лейкозе эти процессы обнаруживаются еще до развития лейкемии, особенно выражены при обострении, а в период ремиссии возможен возврат к исходному уровню. В период обострения у больных лейкемией отмечается также подавление экспрессии D-антигена и антигенный химеризм (появление эритроцитов A-и 0-группы). Для эритроцитов опухолевых больных характерна также полиагглютинабельность - феномен Томсона (нестерильно взятые эритроциты, постояв при комнатной температуре более суток, могут агглютинировать со всеми сыворотками AB0-системы). В целом, опухолевая болезнь значительно искажает перекрестную специфичность, способствует синтезу атипичных гликолизил-трансфераз, способных образовывать причудливые АГ - начиная с необычных AB0 и заканчивая специфическими опухолевыми АГ. Перечисленные особенности антигенов эритроцитов создают определенные трудности при определении групп крови у онкологических больных.

Другая сложность связана с приобретенным B-антигеном у лиц с A-группой крови и формированием новой подгруппы A(B). В рутинных тестах эта кровь определяется как принадлежащая к AB-группе, но при переливании крови AB-группы может наступить летальный исход.