СПОСОБ БИОЛОГИЧЕСКОЙ СТЕРИЛИЗАЦИИ ЖИВОТНЫХ

Полезная модель относится к экспериментальной морфологии и физиологии, в частности, к способам стерилизации самок и самцов для моделирования бесплодия экспериментальных животных с целью тестирования различных препаратов репродуктивно-стимулирующего действия, а также может быть использована для стерилизации животных в животноводстве и ветеринарии.
Аналогом является способ биологической кастрации (Кузнецов А.К. Ветеринарная хирургия, офтальмология и ортопедия. - Л.: Колос, 1980. - С. 152), применяемый у самцов путем введения гомогената тканей гомологического семенника, а у самок - введением больших доз гормонов яичников - фолестрол 2 мл на 100 кг массы, 0,5% масляный раствор дистильбестрола пропионата 1000000 ед., 2% масляный раствор синестрола -10000000 ед.
Признаками аналога, совпадающими с существенными признаками заявляемой полезной модели, являются: обеспечение возможности прекращения функции семенников и яичников у млекопитающих.
Признаками, препятствующими достижению ожидаемого технического результата в случае хирургического вмешательства, являются такие существенные недостатки как отличие в методике для самцов и самок, ненадежность метода, значительные материальные затраты при приготовления биопрепаратов.
В качестве прототипа выбран способ биологической стериализации животных (Патент №. 30458 А. Украша. МПК 6 АО1К21/00, А61К35/26. Cnoci6 бюлопчно"1 кастраци тварин / Кримський державний медичний ушверситет нm. C.I. Георпевського. - Заявка № 98052419. - Заявл. 12.05.1998. - Опубл. 15.11. 2000, Бюл. № 6), осуществляемый путем введения лекарственного препарата цереброспинальной жидкости крупного рогатого скота с помощью внутримышечных инъекций самцам двукратно с интервалом в неделю, а самкам - однократно, причем введение
спинномозговой жидкости коров вызывает прекращение сперматогенеза у самцов и прекращение половой циклики вследствие ановуляции у самок, а причинами таких изменений являются расстройства нейроэндокринной системы в регуляции репродуктивной функции.
Признаками, совпадающими с существенными признаками полезной модели, являются введение препарата спинномозговой жидкости крупного рогатого скота с помощью внутримышечных инъекций.
Техническим результатом заявляемой полезной модели является повышение эффективности стерилизации и умелынение частоты возникновения осложнений при проведении стерилизации.
Причинами, препятствующими достижению ожидаемого технического результата, являются: большие различия биохимического состава, и, соответственно, биологических свойств спинномозговой жидкости, вследствие отсутствия стандартизации доноров; материальные и временне затраты на проведение фильтрирования, уменьшение биологической активности ликвора вследствие фильтрования, поскольку такие большие молекулы биологически активных веществ, например, как тропные гормоны аденогипофиза, остаются на фильтре; необходимость получения у доноров большого количества спинномозговой жидкости вследствие большой массы двухмесячных свинок и поросят, которая составляет свыше 15-18 кг, и, соответственно, большой разовой дозы ликвора (свыше 30-36 мл), введение которой может привести к местным осложнениям - образование внутримышечных инфильтратов; доказанный эффект использования только в сельском хозяйстве при стерилизации свиней и при стерилизации самцов белых крыс.
В основу полезной модели поставлена задача усовершенствования способа-прототипа путем получения спинномозговой жидкости только у лактирующих коров на протяжении нескольких недель после первого отела с последующей криоконсервацией и однократным введением полученного
биопрепарата спинномозговой жидкости в новорожденном возрасте самкам и самцам, что позволяет получить спинномозговую жидкость с максимальными биологическими свойствами, максимально сохранить биологически активные вещества в ее составе, а также обеспечить ее максимальный эффект в организме животного-реципиента, поскольку в новорожденном возрасте проницаемость гематоэнцефалического барьера и пластичность структур гипоталамо-гипофизарной системы максимальная, как следствие, повысить качество и эффективность стерилизации, уменьшить материальные затраты, то есть достичь ожидаемый технический результат.
Поставленная задача решается тем, что в способе биологической стериализации животных, включающем введение препарата спинномозговой жидкости крупного рогатого скота с помощью инъекций, согласно полезной модели, используют прижизненно взятую криоконсервированную ксеногенную спинномозговую жидкость лактирующих коров, которую получают методом субокципитальной пункции в первые 2-3 недели после отела, вводят ее полиэстричным млекопитающим в раннем постнатальном периоде внутримышечно или внутрибрюшинно однократно из расчета дозы 2 мл на кг массы.
Между совокупностью существенных признаков заявляемого способа и ожидаемым техническим результатом, проявляется следующая причинно-следственная связь: использование в качестве основы для получения лекарственного биопрепарата спинномозговой жидкости крупного рогатого скота, а именно - лактирующих коров, полученную на протяжении 2-3 недель после отела, позволяет достичь увеличения количества биологически активных веществ стерилизирующего действия в составе сырья, криоконсервация позволяет максимально сохранить биологические свойства ликвора, введение препарата животным в новорожденном возрасте позволяет уменьшить объем вводимой спинномозговой жидкости, уменьшить количество местных осложнений, уменьшить материальные затраты на ее
получение, так как масса животных в новорожденном возрасте и, соответственно, разовая доза спинномозговой жидкости, которая вводится, минимальные; а использование спинномозговой жидкости для стерилизации самцов и самок лабораторных грызунов позволяет увеличить область применения данного способа стерилизации, использовать его не только в сельском хозяйстве, но и в экспериментальной морфологи, физиологии и других, для моделирования бесплодия и угнетения функции яичников экспериментальных животных с целью тестирования различных препаратов репродуктивно-стимулирующего действия.
Заявляемый способ заключается в следующем.
Спинномозговую жидкость получают от лактирующих коров методом субокципитальной пункции в период физиологической ановуляции, то есть в течение 2-3 недель после отела в стерильную полузакрытую систему, немедленно погружают в сосуд Дьюара с жидким азотом для замораживания при температуре -196 С°. Замороженный ликвор транспортируют на станцию переливания крови, лабораторию и т.д., где его сохраняют необходимое время в морозильной камере низкотемпературных холодильников.
Целесообразно проводить криоконсервацию спинномозговой жидкости в емкостях того объема, который будет нужен в будущем при проведении стерилизации, чтобы избежать многократного размораживания и оттаивания, а размораживать спинномозговую жидкость перед введением только однократно. Спинномозговую жидкость оттаивают при комнатной температуре и вводят однократно путем инъекции самцам и самкам белых крыс, свиней в период новорожденности из расчета разовой дозы 2 мл на один кг массы тела.
Крысам спинномозговую жидкость вводят внутрибрюшинно в первые сутки жизни, свиньям - внутримышечно в 1-10-е сутки жизни. Введенная спинномозговая жидкость вызывает прекращение функционирования половых желез животных - ановуляцию у самок и торможение
сперматогенеза у самцов вследствие нарушения регуляторной функции гипоталамо-гипофизарно-эпифизарной системы.
Способ подтверждается следующими примерами его использования.
Пример 1.
Самка белой крысы в первые сутки жизни, масса 7,5 г; проведена однократная внутрибрюшинная инъекция спинномозговой жидкости из рассчета дозы 2 мл на кг массы (0,015 мл); наблюдается снижение темпов прироста массы тела, в возрасте 90 суток не наступает открытие влагалища, отсутствуют эстральные циклы, на вскрытии - уменьшена масса гонад, морфологический статус коркового слоя яичников соответствует яичникам незрелых крыс, все полостные фолликулы имеют выраженные признаки атрезии.
По данной методике биологической стерилизации подлежали 10 самок, у которых выявлены аналогичные изменения показателей фертильности и морфологические изменения яичников.
Пример 2.
Свинка, возраст 14 суток, масса 2,5 кг; проведена однократная внутримышечная инъекция спинномозговой жидкости из рассчета дозы 2 мл на кг массы (5 мл); наблюдается продолжительное необратимое бесплодие, вследствие отсутствия циклических изменений репродуктивной системы, что связано с блокировкой фолликулогенеза на этапе селекции доминантных фолликулов, что подтверждается проведенным гистологическим исследованием (рис. 2).
По данной методике биологической стерилизации подлежали 20 самок, у которых выявлены аналогичные изменения показателей фертильности и морфологические изменения яичников.
Заявляемый способ позволяет проводить биологическую стерилизацию с высокой эффективностю при однократном введении препарата у свиней и лабораторных грызунов в новорожденном возрасте, также позволяет снизить
материальные затраты при проведении стерилизации за счет уменьшения объема спинномозговой жидкости, упростить обработку спинномозговой жидкости, уменьшить частоту возникновения осложнений при проведении стерилизации; распространить область использования данного способа стерилизации от сельского хозяйства и животноводства до экспериментально-морфологических исследований.
Данный способ может быть использован для стерилизации животных в животноводстве и ветеринарии, а также для моделирования бесплодия экспериментальных животных с целью тестирования различных препаратов репродуктивно-стимулирующего действия.