Иммуногенетический профиль (HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DQB1) популяции русских Челябинской области

23. Giachelia M., Voso M.T., Tisi M.C., Martini M., Bozzoli V., Massini G., et al. Interleukin-6 plasma levels are modulated by a polymorphism in the NF-kB1 gene and are associated with outcome following rituximab-combined chemotherapy in diffuse large B-cell non-Hodgkin lymphoma. Leuk. Lymphoma. 2012; 53(3): 411-6.

24. Bidwell J., Keen L., Gallagher G., Kimberly R., Huizinga T., Mc-Dermott M.F., et al. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases, supplement 1. Genes Immun. 2001; 2(2): 61-70.

25. Alas S., Emmanouilides C., Bonavida B. Inhibition of interleukin 10 by rituximab results in down-regulation of bcl-2 and sensi-tization of B-cell non-Hodgkin's lymphoma to apoptosis. Clin. Cancer Res. 2001; 7(3): 709-23.

26. Alas S., Bonavida B. Rituximab inactivates signal transducer and activation of transcription 3 (STAT3) activity in B-non-Hodgkin's lymphoma through inhibition of the interleukin 10 autocrine/paracrine loop and results in down-regulation of Bcl-2 and sensitization to cytotoxic drugs. Cancer Res. 2001; 61(13): 5137-44.

27. Ying B., Shi Y., Pan X., Song X., Huang Z., Niu Q., et al. Association of polymorphisms in the human IL-10 and IL-18 genes with rheumatoid arthritis. Mol. Biol. Rep. 2011; 38(1): 379-85.

28. Kube D., Hua T.D., von Bonin F.,Schoof N., Zeynalova S., Kloss M., et al. Effect of interleukin-10 gene polymorphisms on clinical outcome of patients with aggressive non-Hodgkin's lymphoma: an exploratory study. Clin. Cancer Res. 2008; 14: 3777-84.

29. Tarabar O., Cikota-Aleksic B., Tukic L., Milanovic N., Aleksic A., Magic Z. Association of interleukin-10, tumor necrosis factor-a and transforming growth factor-P gene polymorphisms with the outcome of diffuse large B-cell lymphomas. Int. J. Clin. Oncol. 2014; 19(1): 186-92.

О КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015

УДК 616.15:614.2]:612.6.05.017.1.08

30. Wang S., Fang Z., Huang Y., Lin Z., Su R. Clinical implications of tumor necrosis factor-a in lymphomas. Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi. 2014; 35(12): 1107-10.

31. Yri O.E., Ekstram P.O., Hilden V., Gaudernack G., Liest0l K., Smeland E.B., et al. Influence of polymorphisms in genes encoding immunoregulatory proteins and metabolizing enzymes on susceptibility and outcome in patients with diffuse large B-cell lymphoma treated with rituximab. Leuk. Lymphoma. 2013; 54(10): 2205-14.

32. Relander T., Johnson N.A., Farinha P., Connors J.M., Sehn L.H., Gascoyne R.D. Prognostic factors in follicular lymphoma. J. Clin. Oncol. 2010; 28(17): 2902-13.

33. Giachelia M., Voso M.T., Tisi M.C., Martini M., Bozzoli V, Massini G. et al. Interleukin-6 plasma levels are modulated by a polymorphism in the NF-kB1 gene and are associated with outcome following rituximab-combined chemotherapy in diffuse large B-cell non-Hodgkin lymphoma. Leuk. Lymphoma. 2012; 53(3): 411-6.

34. Aschebrook-Kilfoy B., Zheng T., Foss F., Ma S., Han X., Lan Q., et al. Polymorphisms in immune function genes and non-Hodg-kin lymphoma survival. J. Cancer Surviv. 2012; 6(1): 102-14. doi: 10.1007/s11764-010-0164-4.

35. Sagne C., Marcel V., Amadou A., Hainaut P., Olivier M., Hall J. A meta-analysis of cancer risk associated with the TP53 intron 3 duplication polymorphism (rs17878362): geographic and tumor-specific effects. Cell Death Dis. 2013; 4: e492. doi: 10.1038/cd-dis.2013.24

Поступила 05.03.15 Received 05.03.15

ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПРОФИЛЬ (HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DQB1) ПОПУЛЯЦИИ РУССКИХ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ

Суслова Т.А.12, Вавилов М.Н.2, Сташкевич Д.С.1, Беляева С.В.12, Хромова Е.Б.12, Евдокимов А.В.1 ,

Горелова А.К.1, Бурмистрова А.Л.1

1ФГБОУ ВПО Челябинский государственный университет, 454021, г. Челябинск; 2ГБУЗ Челябинская областная

станция переливания крови, 454076, г. Челябинск

Резюме. Проведено иммуногенетическое типирование 591 донора ГБУЗ Челябинская областная станция переливания крови, идентифицирующих себя русскими, по 5 генам HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DQB1 на базовом разрешении. Был использован метод полимеразной цепной реакции с сиквенс-специфическими праймерами (SSP-PCR) со стандартными наборами ("Protrans", Германия). С помощью стандартной иммуногенетической программы Арлекин рассчитаны частоты генов (GF), частоты двух- и пятилокусных гаплотипов HLA (HF), величины неравновесного сцепления (D') двух-локусных гаплотипов. Показаны наиболее характерные для русских Челябинской области аллельные семейства генов (А*01,*02,*03; В*07, В*44, В*35; С*03,*04,*07,*12; DRB1*01, DRB1*15, DRB1*13, DRB1*07; DQB1*02,*03,*05,*06) и гаплотипов A*01-B*08-C*07-DRB1*03-DQB1*02 (HF 4,06), A*03-B*07-C*07-DRB1*15-DQB1*06 (HF 3,3), A*03-B*35-C*04-DRB1 *01 -DQB1 *05 (HF 2,88), A*02-B*13-C*06-DRB1*07-DQB1*02 (HF 1,61). Показаны наиболее сцепленные двухлокусные гаплотипы аллельных семейств генов В*-С* и DRB1*-DRQ1*. На основе расчета генетических расстояний (по Нею) по локусам HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1, с использованием многомерного шкалирования, представлено расположение 56 популяций, включая данные по популяциям Челябинской области. Полученные закономерности могут быть использованы в практической работе для создания регистра доноров стволовых клеток России. Данные могут быть использованы как контрольная группа для проведения работ «ассоциация HLA с заболеваниями», использованы специалистами по этногенезу народов.

Ключевые слова: популяционная иммуногенетика; HLA; русская популяция; региональный регистр доноров костного мозга.

Для цитирования: Суслова Т.А., Вавилов М.Н., Сташкевич Д.С., Беляева С.В., Хромова Е.Б., Евдокимов А.В., Горелова А.К., Бурмистрова А.Л. Иммуногенетический профиль (HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DQB1) популяции русских Челябинской области. Гематология и трансфузиология. 2015; 60(3): 28-35.

IMMUNOGENETIC PROFILE (HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DQB1) OF THE RUSSIAN POPULATION

IN CHELYABINSK REGION

Suslova TA.12, VavilovM.N.2, Stashkevich D.S.1, Belyaeva S.V.12, Khromova E.B12, EvdokimovA.V.1, Gorelova A.K1,

Burmistrova A.L.'

Chelyabinsk State University, 454021 Chelyabinsk, Russia;2Chelyabinsk Regional Blood Transfusion Center, 454076

Chelyabinsk, Russia

Summary. Immunogenetic typing of 591 donors by 5 genes (HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DQB1) was carried out at the basic resolution. The donors identified themselves as Russians, blood specimens were collected at Chelyabinsk Blood Transfusion Center. The study was carried out by SSP-PCR with standard Protrans kits (Germany). The gene frequencies (GF), haplotypes frequencies (HF) for two- and five-lucus hap-lotypes, and linkage disequilibrium values (D') for two-locus haplotypes were estimated using the Harlequin standard immunogenetic software. The study detected the gene allele families (A*01, *02, *03; B*07, B*44, B*35; C*03, *04, *07, *12; DRB1*01, DRB1*15, DRB1*13, DRB1*07; DQB1*02, *03, *05, *06) and haplotypes A*01-B*08-C*07-DRB1*04-DQB1*02 (HF 4.06), A*03-B*07-C*07-DRB1*15-DQB1*06 (HF 3.3), A*03-B*35-C*04DRB1*01-DQB1*05 (HF 2.88), A*02-B*13-C*06-DRB1*07-DQB1*02 (HF 1.61), most characteristic of the Russians in the Chelyabinsk region. The most strong-linked two-locus haplotypes of gene allele families B*-C* and DRB1*-DRQ1* were presented. The location of 56 populations, including the data for the Chelyabinsk region populations, was presented on the base of estimation of the genetic distances (after Nei) by locuses HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1 using multidimensional scaling. The resultant regularities can be used for creating a register of stem cell donors of Russia. The data can serve as the reference group for evaluation of HLA associations with diseases and be useful for specialists in ethnogenesis.

Key words: population immunogenetics; HLA; Russian population; regional register of bone marrow donors.

The study was supported by RFBR under the research project № 15-04-05176. Citation: Gematologiya i transfuziologiya. 2015; 60

Русские - основной этнос Российской Федерации, численность которого 115,89 млн человек, что составляет около 80% населения страны [1]. Челябинская область, согласно историческим данным, заселялась русскими с конца XVII века. До этого времени край был заселен в основном степными кочевниками, башкирами, казахами и назывался Зауральская Башкирия, в состав Российской империи не входил. Заселение русскими продолжилось в XVIII веке с царской экспедиции И.К. Кириллова. Челябинская крепость была построена в 1736 г. и заселена крестьянами и казаками Зауралья, преимущественно выходцами из Зауралья, Поморья, Прикамья и со Средней Волги [2]. С конца XIX века, после окончания строительства Самаро-Златоустовской железной дороги, именно через Челябинск проходила миграция населения из европейской части России в Сибирь для освоения новых земель. Всего за этот период через Челябинск мигрировало около 4 млн человек, а население города увеличилось к 1917 г. до 60 тыс. человек. Увеличение миграции населения русских городов в Челябинск в XX веке усилилось в связи с индустриализацией и войнами [3]. Сейчас в Челябинске насчитывается 936 тыс русских, что составляет 86% населения [1]. Таким образом, формирование русской этнической группы Челябинской области происходило из потомков переселенцев из европейской части России в течение последних 300 лет (10-12 поколений).

Русские - восточно-славянский этнос, самый многочисленный народ Европы, антропологически относятся к европеоидному типу [4]. Изучение профиля HLA приобрело значительный интерес и

Для корреспонденции:

Суслова Татьяна Александровна, кандидат мед. наук, доцент кафедры микробиологии, иммунологии и общей биологии биологического факультета ФГБОУ ВПО Челябинский государственный университет, заведующая отделом молекулярно-биологической диагностики ГБУЗ Челябинская областная станция переливания крови. Адрес: 454021, Челябинск, ул. Братьев Кашириных, д. 129, биологический факультет. Телефон: +7(351)799-71-76. E-mail: tatiana.suslova.hla@gmail.com.

Corresponding author:

Suslova Tatiana, MD, PhD, docent (tatiana.suslova.hla@gmail.com).

существенно продвинулось за последнее десятилетие, в том числе в России [5-10]. Данные о генных частотах русских, проживающих в различных регионах страны, представлены в международной базе данных The Allele Frequency Net Database (AF) [11, 12]. Популяционные отличия в распределении генов HLA в различных регионах России необходимо учитывать при создании Российского регистра доноров стволовых клеток для оптимизации поиска донора для трансплантации аллогенных стволовых клеток.

Задачи исследования:

• Охарактеризовать распределение генных частот локусов HLA-A, HLA-В, HLA-С, HLA-DRB1, HLA-DQB1, а также их гаплотипических сочетаний в этнической группе русских, проживающих в Челябинской области.

• Исходя из полученных частот локусов HLA-A, HLA-B, HLA-С, HLA-DRB1, HLA-DQB1, рассчитать генетические дистанции между популяциями (русские, татары, башкиры) Челябинской области и другими мировыми популяциями, представленными в международной базе данных AF [11, 12].

• На основе генетических дистанций провести кластерный анализ для установления места популяций (русские, татары, башкиры) Челябинской области в структуре мировых популяций.

Материалы и методы

Иммуногенетическое типирование проведено среди 591 потенциально здорового донора стволовых клеток русской национальности в ГБУЗ Челябинская областная станция переливания крови. В исследование вошли случайно выбранные неродственные люди, постоянно проживающие на территории Челябинской области. Принадлежность к определенной этнической группе определяли по официальным документам и данным генеалогического анамнеза в трех поколениях.

В качестве материала для исследования использовали венозную кровь, взятую в пробирки с этилендиаминтетра-уксусной кислотой (ЭДТА). Выделение ДНК из представленных образцов проводили с использованием реагентов Protrans DNA Box 500 (Германия) согласно инструкции производителя. Генотипирование осуществляли методом полимеразной цепной реакции с сиквенс-специфически-

Многомерное шкалирование в двух измерениях для 56 мировых популяций, построенное на основании генетических дистанций по частотам генов трех локусов HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1. Каждая точка представляет собой популяцию, линиями выделен географический регион проживания этих популяций. Stress = 0,074.

ми праймерами (Single Specific Primer-Polymerase Chain Reaction, PCR-SSP) с использованием наборов Protrans.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью определения абсолютного количества аллель-ных семейств локусов HLA классов I и II путем прямого подсчета полученных результатов. Для оценки использовали следующие критерии: генную частоту (gf) - долю определенного аллельного семейства среди всех аллель-ных семейств в исследуемой популяции и стандартную ошибку для генной частоты (se). Соответствие наблюдаемого распределения аллельных семейств равновесию Харди-Вайнберга определяли с помощью компьютерной программы Arlequin 3.5 [13]. Кроме того, в программе Arlequin 3.5 проводили оценку гаплотипов HLA (двух-локусные и пятилокусные) и определение гаметной фазы методом максимизации ожидания (Expectation-Maximization algorithm). Для двухлокусных гаплотипов оценивали неравновесное сцепление (неслучайная ассоциация двух аллелей в прилегающих локусах). На основе классического коэффициента, измеряющего отклонение частоты наблюдаемого гаплотипа от случайного сочетания аллелей разных локусов (D), было рассчитано стандартизованное значение (D'). Данная величина, в отличие от D, не зависит от относительной частоты аллеля, вследствие чего высокие значения неравновесного сцепления наблюдаются не только для частых, но и для редких аллелей.

Расчет генетических расстояний проводили по методу Нея [14] c помощью компьютерной программы Phylip 3.68. Материалом для исследования послужили генетические частоты HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1 в трех популяциях Челябинской области (русские, башкиры, татары) и в 53 мировых популяциях (AF) [11, 12].

На основе полученной матрицы генетических расстояний по частотам генов A, B, DRB1 в программе PAST (версия 2.17) проводили кластерный анализ, результаты которого представлены в виде графика многомерного шкалирования по двум осям [15, 16]. На рисунке отображено расположение 56 исследованных популяций Северной Европы, Центральной и Восточной Европы, Южной Европы, Юго-Восточной Азии, Центральной и Восточной Азии, Урала, Северной Азии и Сибири, Южной Азии, Передней Азии и Африки. В качестве критерия оценки точности полученного графического изображения MDS использован Stress Value (от 0,4 - низкий до 0,0 - идеальный).

Результаты и обсуждение

В табл. 1 представлены аллельные частоты для локусов HLA-A*, HLA-B*, HLA-С*, HLA-DRB1*, HLA-DQA1*, HLA-DQB1* в популяции русских, проживающих на территории Челябинской области. Все изученные локусы находятся в равновесии по Хар-ди-Вайнбергу [13]. В локусе HLA-А* обнаружено

Таблица 1

Частота генов HLA: A*, B*, C*, DRB1*, DQB1* у русских Челябинской области

Аллельное семейство'* Количество ** Частота аллеля (fg) Частота гена (Г SE для (gf)*** Гом4* Аллельное семейство* Количество ** Частота аллеля (fg) Частота гена (Г SE для (gf)*** Гом4*

A*01 117 0,198 0,111 0,009 14 C*01 48 0,081 0,041 0,006 1

A*02 307 0,519 0,310 0,013 59 C*02 69 0,117 0,061 0,007 3

A*03 186 0,315 0,172 0,011 17 C*03 113 0,191 0,105 0,009 10

A*11 64 0,108 0,055 0,007 1 C*04 133 0,225 0,120 0,009 9

A*23 25 0,042 0,022 0,004 1 C*05 54 0,091 0,047 0,006 2

A*24 120 0,203 0,107 0,009 6 C*06 136 0,230 0,120 0,009 6

A*25 46 0,078 0,040 0,006 1 C*07 294 0,497 0,293 0,013 50

A*26 51 0,086 0,043 0,006 0 C*08 29 0,049 0,025 0,005 0

A*29 12 0,020 0,010 0,003 0 C*12 134 0,227 0,119 0,009 7

A*30 21 0,036 0,018 0,004 0 C*14 7 0,012 0,006 0,002 0

A*31 35 0,059 0,030 0,005 0 C*15 26 0,044 0,023 0,004 0

A*32 31 0,052 0,028 0,005 1 C*16 12 0,020 0,010 0,003 0

A*33 24 0,041 0,021 0,004 0 C*17 30 0,051 0,028 0,005 1

A*66 6 0,010 0,005 0,002 0 C*18 2 0,003 0,002 0,001 0

A*68 31 0,052 0,026 0,005 0

A*69 1 0,002 0,001 0,001 0 DRB1*01 138 0,234 0,128 0,010 12

A*74 1 0,002 0,001 0,001 0 DRB1*03 110 0,186 0,099 0,009 7

DRB1*04 121 0,205 0,106 0,009 4

B*07 146 0,247 0,135 0,010 14 DRB1*07 149 0,252 0,135 0,010 10

B*08 81 0,137 0,071 0,007 3 DRB1*08 27 0,046 0,023 0,004 0

B*13 74 0,125 0,063 0,007 0 DRB1*09 18 0,030 0,016 0,004 1

B*14 22 0,037 0,019 0,004 0 DRB1*10 13 0,022 0,011 0,003 0

B*15 57 0,096 0,050 0,006 1 DRB1*11 132 0,223 0,119 0,009 9

B*18 92 0,156 0,080 0,008 2 DRB1*12 28 0,047 0,025 0,005 1

B*27 60 0,102 0,052 0,006 2 DRB1*13 149 0,252 0,145 0,010 18

B*35 115 0,195 0,104 0,009 6 DRB1*14 17 0,029 0,014 0,003 0

B*37 11 0,019 0,009 0,003 0 DRB1*15 149 0,252 0,140 0,010 15

B*38 38 0,064 0,032 0,005 0 DRB1*16 47 0,080 0,040 0,006 0

B*39 34 0,058 0,029 0,005 0

B*40 65 0,110 0,060 0,007 3 DQB1*02 217 0,367 0,201 0,012 20

B*41 34 0,058 0,030 0,005 0 DQB1*03 344 0,582 0,334 0,014 51

B*44 104 0,176 0,096 0,009 7 DQB1*04 26 0,044 0,022 0,004 0

B*45 5 0,008 0,004 0,002 0 DQB1*05 208 0,352 0,196 0,012 22

B*47 3 0,005 0,003 0,001 0 DQB1*06 255 0,431 0,247 0,013 35

B*48 8 0,014 0,007 0,002 0

B*49 26 0,044 0,022 0,004 0

B*50 16 0,027 0,014 0,003 0

B*51 41 0,069 0,036 0,005 0

B*52 25 0,042 0,022 0,004 0

B*53 2 0,003 0,002 0,001 0

B*55 10 0,017 0,008 0,003 0

B*56 14 0,024 0,012 0,003 0

B*57 32 0,054 0,027 0,005 0

B*58 15 0,025 0,013 0,003 0

B*73 1 0,002 0,001 0,001 0

Примечание. * - не обнаруженные аллельные семейства: А*34, А*36, А*43, В*42, В*46, В*54, В*59, В*67, В*78, В*81, В*82, В*83; ** -количество положительных индивидуумов; *** - стандартная ошибка ^Е) для частоты гена ^11); 4* - количество обнаруженных гомозиготных индивидуумов.

Таблица 2 Частоты двухлокусных гаплотипов HLA у русских Челябинской области

Гаплотип +/+ ОТ Б' Гаплотип +/+ HF Б'

А*01 B*08 58 4,91 0,65 А*01 С*07 69 5,84 0,33

А*02 B*27 34 2,88 0,35 А*02 *05 41 3,47 0,61

А*03 B*07 72 6,09 0,34 А*03 *04 51 4,31 0,23

А*03 B*35 54 4,57 0,32 А*03 *07 89 7,53 0,21

А*11 B*35 23 1,95 0,28 А*11 *04 27 2,28 0,34

А*23 B*49 8 0,68 0,29 А*23 С*04 14 1,18 0,48

А*24 B*39 14 1,18 0,34 А*25 *12 37 3,13 0,76

А*25 B*18 36 3,05 0,75 А*26 *12 18 1,52 0,27

А*26 B*38 19 1,61 0,48 А*30 *06 15 1,27 0,68

А*30 B*13 15 1,27 0,7 А*33 *08 11 0,93 0,43

А*33 B*14 13 1,10 0,58 А*66 С*17 6 0,51 1

А*33 B*58 9 0,76 0,59

А*66 B*41 6 0,51 1 B*07 *07 154 13,03 0,95

А*68 B*13 7 0,59 0,17 B*08*07 83 7,02 0,98

B*13 *06 72 6,09 0,97

B*07 DRB1*15 82 6,94 0,43 B*14 *08 20 1,69 0,91

B*08 RB1*03 69 5,84 0,80 B*15 *03 43 3,64 0,7

B*13 RB1*07 52 4,40 0,66 B*18 *12 50 4,23 0,47

B*14 RB1*01 10 0,85 0,38 B*27 *01 23 1,95 0,44

B*18 RB1*11 24 2,03 0,15 B*27 *02 36 3,05 0,55

B*18 RB1*15 28 2,37 0,18 B*35 *04 101 8,54 0,8

B*27 RB1*01 31 2,62 0,43 B*37 *06 10 0,85 0,9

B*27 RB1*16 11 0,93 0,19 B*38 *12 36 3,05 0,94

B*35 RB1*01 55 4,65 0,37 B*39 *12 17 1,44 0,43

B*37 RB1*10 3 0,25 0,27 B*40 *03 49 4,15 0,65

B*38 RB1*13 23 1,95 0,54 B*41 С*17 32 2,71 0,97

B*39 RB1*04 13 1,10 0,31 B*44 *05 50 4,23 0,88

B*41 RB1*13 29 2,45 0,77 B*44 С*16 10 0,85 0,82

B*44 RB1*07 30 2,54 0,15 B*45 С*16 2 0,17 0,39

B*50 RB1*07 10 0,85 0,57 B*48*08 7 0,59 0,87

B*52 RB1*15 16 1,35 0,55 B*49 С*07 24 2,03 0,89

B*57 RB1*07 24 2,03 0,71 B*50 С*06 15 1,27 0,93

B*58 RB1*03 7 0,59 0,41 B*51 *14 4 0,34 0,56

B*73 RB1*04 1 0,08 1 B*51 15 21 1,78 0,77

B*52 *12 23 1,95 0,87

DRB1*01 QB1*05 149 12,61 0,98 B*55 *03 7 0,59 0,66

DRB1*03 QB1*02 114 9,64 0,97 B*56 *01 14 1,18 1

DRB1*04 QB1*03 122 10,32 0,96 B*57 *06 28 2,37 0,86

DRB1*07 QB1*02 120 10,15 0,69 B*57 *18 1 0,08 0,49

DRB1*08 QB1*04 25 2,12 0,96 B*58 *03 10 0,85 0,63

DRB1*09 QB1*03 19 1,61 1

DRB1*10 QB1*05 13 1,10 1

DRB1*11 QB1*03 140 11,84 0,99

DRB1*12 QB1*03 29 2,45 1

DRB1*13 QB1*06 129 10,91 0,67

DRB1*14 QB1*05 17 1,44 1

DRB1*15 QB1*06 160 13,54 0,95

DRB1*16 QB1*05 47 3,98 1

15 аллельных семейств, наиболее частыми из которых являются А*02, А*01 и А*03. Редкими, с частотой менее 0,03, являются аллели А*23, *29, *30, *32, *33, *66, *68, *69, *74. Не обнаружены А*34, А*43, А*80 - (gf = 0).

В локусе HLA-В* самыми часто встречающимися аллельными семействами являются: В*07, В*44 и В*35. 7 из 26 аллельных семейств данного локуса встречаются с частотой gf <0,01 (В*37, *45, *47, *48, *53, *55, *73). Не определены ^ = 0) следующие аллельные семейства HLA: В*42, *46, *54, *59, *67, *78, *81, *82, *83.

Локус HLA-C - максимальные частоты С*03, *04, *06*, 07, *12, низкая частота (gf < 0,03) - С*08, *15, *16, *17, *18.

В локусе ^А-ОЯШ* наиболее распространенными аллельными вариантами оказались DRB1*01, DRB1*15, DRB1*13, DRB1*07, DRB1*11 и DRB1*04, частота каждого из них превысила 0,09. Редко встречающимися были аллельные семейства DRB1*09, *10, *12, *14, *16. Аллельные семейства DQB1*02, *03, *05, *06 представлены с наибольшей частотой, в то время как частота DQB1*04 составляет всего gf= 0,022.

В табл. 2 представлены частоты и величины неравновесного сцепления некоторых гаплотипов ^А: А*-С*, А*-В*, В*-С*, C*-DRB1*, B*-DRB1*, DRB1*-DQB1*, встречающихся с частотой более 0,01. Показатель D' характеризует степень связи между генами разных локусов. Данные двухло-кусные гаплотипы являются распространенными в основном за счет низкого числа рекомбинаций в этом генном пространстве и сохраняются при различных событиях - миграция, смешение различных популяций, факторы внешней среды, оказывающие влияние на естественный отбор. У русских Челябинской области наиболее сцепленными являются гены HLA: В*-С* (23 пары имеют D' >0,5), что говорит о высокой сцепленности этих локусов и пары DRB1*-DQВ1*, где практически каждое аллельное семейство DRB1* имеет свое типичное сцепление с определенной аллелью DQB1*, что может отражать небольшое расстояние на хромосоме между этими генами: В*-С* и DRB1*-DQBl*. В остальных анализируемых локусах можно отметить следующие сцепленные пары: А*01-В*08, А*25-В*18, А*30-В*13, А*33-В*14, А*33-В*58, А*66-В*41; А*02-С*05, А*25-С*12, А*30-С*06. Именно за счет двухлокус-ных сцеплений в наибольшей степени сформированы устойчивые, так называемые анцестральные, га-плотипы (см. табл. 2), сохраняющиеся в популяции в течение многих поколений.

В табл. 3 представлены 20 наиболее распространенных 5-локусных гаплотипов, характерных для русского населения Челябинской области.

Данные многомерного шкалирования (MDS) генных частот HLA-популяций, включенных в сравнительное исследование, представлены на рисунке. Каждая точка на графике отражает популяцию, степень генетических отличий в профиле HLA между популяциями соответствует расстоянию между точками. Географический регион проживания исследу-

емых популяций условно отмечен линиями (ареал). Данные многомерного шкалирования иллюстрируют, что популяция русских Челябинской области максимально удалена по расположению от популяций Центральной и Юго-Восточной Азии. Исследуемая популяция русских Челябинской области расположена в непосредственной близости к центрально-европейским популяциям (чехи, немцы, поляки, австрийцы) и жителям Северной Европы (шведы, финны, ирландцы, валлийцы) и несколько удалена от популяций Балкан и Южной Европы. Тесное расположение всех европейских популяций в одной области графика позволяет предположить общее происхождение всех европейских народов.

Иммуногенетический профиль популяции русских Челябинской области по частоте генов, гапло-типов и силе неравновесного сцепления между некоторыми аллелями локусов HLA подтверждает, что русские Челябинской области практически идентичны русским, проживающим в других регионах России, а также популяциям, проживающим на территории Европы [11, 12]. Максимальное распространение у русских Челябинской области имеет типичный европейский гаплотип АН8.1, с высоким сцеплением в каждой паре генов. Аллельные семейства, входящие в этот гаплотип, также являются наиболее распространенными в популяции. Второй по частоте встречаемости гаплотип АН7.1 имеет частоту 3,9% у русских Челябинской области. Пары генов в этом гаплотипе имеют меньшую силу сцепления, особенно в парах А*03-В*07 ф' = 34) и В*07-DRБ1*15 ф' = 43). Возможно, именно поэтому в популяции с частотой, близкой к 1%, появляются гаплотипы А*02-В*07-С*07-DRB1*15-DQB1*06, А*24-В*07-С*07-DRB1*15-DQB1*06, в которых вместо слабо сцепленного А*03 появляется иной аллельный вариант в локусе А* и гаплотипы А*03-В*07-С*07-DRБ1*01-DQB1*05 или А*03-В*07-С*07-DRB1*13-DQB1*06 (НБ = 0,5%) с иными, чем в анцестральном гаплотипе АН7.1, генами HLA класса II.

Меньшая стабильность гаплотипа АН7.1 может быть объяснена его более ранним происхождением в ходе эволюции, чем АН8.1. Этот гаплотип более распространен в Северной Европе [17-20].

По распространенности у русских Челябинской области 3-е место занимает гаплотип АН35.1. (НБ = 2,96%). Этот гаплотип является распространенным в финно-угорских популяциях (финны, саамы России, Швеции, татары, чуваши России) [7, 8, 20-22]. Несмотря на высокий показатель D' в парах генов этого гаплотипа по сравнению с АН7.1, в популяции встречаются производные из АН.35.1 гаплотипы, включающие DRB1*04 или значительно реже иные гены II класса, например А*03-В*35-DRB1*13 (НБ = 0,5%). Аналогично, гаплотипы с иным геном в локусе А характеризуются более низкой частотой: А*02-В*35-С*04-DRB1*01-DQB1*05 (НБ = 0,3) или А*11-В*35-DRB1*01-DQB1*01 (НБ = 0,6%). Другой гаплотип с аллельным вариантом В*35, а именно А*11-В*35-DRB1*11-DQB1*03, распространенный в большинстве случаев в азиатской части Евразийского континента, тоже выявлен в исследуемой ко-

горте, но он не входит в 20 наиболее распространенных 5-локусных галотипов у русских Челябинской области гаплотипов и его частота составляет 0,68%.

На 4-м месте по распространенности у русских Челябинской области находится гаплотип А*02-В*13-С*06-DRB1*07-DQB1*02. В этом гаплотипе невысока сцепленность пары А*02-В*13 ф' = 1,8%). По-видимому, когда-то он произошел от азиатского А*30-В*13-С*06-DRB1*07-DQB1*02,

Таблица 3

Частоты гаплотипов HLA-A*/B*/C*/DRB1*/DQB1* у русских Челябинской области

ГаПЛОТИПЫ ^Л-Л* / B* / С* / DRB1* / DQB1* НБ Стандартная ошибка **

абс. %

Л*01/Б*08/С*07^Б1*03^Б1*02 51 0,043 4,31 0,006

Л*03/Б*07/С*07^Б1*15^Б1*06 46 0,039 3,89 0,006

A*03/B*35/C*04/DRB1*01/DQB1*05 35 0,030 2,96 0,005

Л*02/Б*13/С*06^Б1*07^Б1*02 21 0,018 1,78 0,004

Л*02/Б*07/С*07^Б1*15^Б1*06 18 0,015 1,52 0,004

Л*25/Б*18/С*12^Б1*15^Б1*06 18 0,015 1,52 0,004

Л*03/Б*07/С*07^Б1*01^Б1*05 17 0,014 1,44 0,003

Л*02/Б*27/С*01^Б1*01^Б1*05 16 0,014 1,35 0,003

Л*02/Б*41/С*17^Б1*13^Б1*03 15 0,013 1,27 0,003

Л*02/Б*44/С*05^Б1*04^Б1*03 13 0,011 1,10 0,002

Л*24/Б*07/С*07^Б1*15^Б1*06 11 0,009 0,93 0,003

Л*30/Б*13/С*06^Б1*07^Б1*02 11 0,009 0,93 0,003

Л*02/Б*15/С*03^Б1*04^Б1*03 11 0,009 0,93 0,003

Л*02/Б*07/С*07^Б1*11^Б1*03 10 0,008 0,85 0,003

Л*25/Б*18/С*12^Б1*04^Б1*03 10 0,008 0,85 0,003

Л*26/Б*38/С*12^Б1*13^Б1*06 10 0,008 0,85 0,003

Л*02/Б*44/С*05^Б1*13^Б1*06 9 0,008 0,76 0,003

Л*23/Б*44/С*04^Б1*07^Б1*02 9 0,008 0,76 0,003

Л*24/Б*18/С*07^Б1*11^Б1*03 9 0,008 0,76 0,003

Л*01/Б*52/С*12^Б1*15^Б1*06 8 0,007 0,68 0,002

Л*02/Б*15/С*03^Б1*13^Б1*06 8 0,007 0,68 0,002

Л*02/Б*27/С*02^Б1*16^Б1*05 8 0,007 0,68 0,002

Л*02/Б*38/С*12^Б1*13^Б1*06 8 0,007 0,68 0,002

Л*02/Б*44/С*05^Б1*11^Б1*03 8 0,007 0,68 0,002

Л*11/Б*35/С*04^Б1*11^Б1*03 8 0,007 0,68 0,002

Л*33/Б*14/С*08^Б1*01^Б1*05 8 0,007 0,68 0,002

Л*33/Б*58/C*03/DRБ1*03/DQБ1*02 8 0,007 0,68 0,002

Л*68/Б*13/C*06/DRБ1*07/DQБ1*02 8 0,007 0,68 0,002

Л*02/Б*18/С*07^Б1*11^Б1*03 7 0,006 0,59 0,002

Л*02/Б*27/C*02/DRБ1*01/DQБ1*05 7 0,006 0,59 0,002

Л*11/Б*35/C*04/DRБ1*01/DQБ1*05 7 0,006 0,59 0,002

Л*02/Б*50/C*06/DRБ1*07/DQБ1*02 6 0,005 0,51 0,002

Л*01/Б*57/C*06/DRБ1*07/DQБ1*03 6 0,005 0,51 0,002

Л*02/Б*57/С*06^Б1*07^Б1*03 6 0,005 0,51 0,002

Л*03/Б*07/C*07/DRБ1*13/DQБ1*06 6 0,005 0,51 0,002

Л*03/Б*08/C*07/DRБ1*03/DQБ1*02 6 0,005 0,51 0,002

Л*24/Б*39/C*07/DRБ1*04/DQБ1*03 6 0,005 0,51 0,002

Л*26/Б*38/C*12/DRБ 1*04^Б 1*03 6 0,005 0,51 0,002

Примечание. * - количество субьектов, содержащих данные аллели; ** - стандартная ошибка для частоты гаплотипа.

широко распространенного в азиатских популяциях, Южной Европе (пакистанские парси, китайцы, Южная Корея) [23-25]. Интересно отметить, что связь А*30-В*13 много сильнее, чем А*02-В*13 и составляет (Б' = 70%). Однако у русских Челябинской области данный гаплотип (А*30-В*13-С*06-DRB1*07-DQB1*02) отмечен с частотой НБ = 0,9%, почти в 2 раза реже, чем А*02-В*13-С*06-DRB1*07-DQB1*02. Последний превалирует у башкир (аутох-тонного населения Челябинской области), татар, чувашей, казахов [8, 22, 26].

Гаплотипы А*25-В*18-С*12-DRB1*15-DQB1*06 и А*02-В*41-С*17-DRB1*13-DQB1*03 отличаются высокой сцепленностью в парах генов и встречаются в изучаемой популяции с частотой более 1%. Характерные европейские гаплотипы, включающие В*44, а именно, A*02-B*44-C*05-DRB1*13-DQB1*06 и A*23-B*44-C*04-DRB1*07-DQB1*02, также находятся среди наиболее распространенных у русских, и это подтверждает их генетическую связь с европейцами.

Частота некоторых типичных азиатских и монголоидных гаплотипов у русских Челябинской области не превышает аналогичные показатели в европейских популяциях [27]. Это касается гапло-типов A*33-B*14-C*08-DRB1*01-DQB1*05, А*33-B*58-C*03-DRB1*03-DQB1*02, А*02^*50-С*06-DRB1*07-DQB1*02, встречающихся с частотой (НБ) соответственно 0,68, 0,68, 0,51, а также аллельных семейств, включенных в эти гаплотипы - А*33, В*50,*58. Удаленность исследуемой популяции от популяций Азии подтверждает еще тот факт, что у русских Челябинской области встречаются с низкой частотой и другие аллельные семейства, более характерные для азиатских популяций, такие как В*48,*53, DRB1*09,*12,*14. Интересно отметить минимальное присутствие в популяции русских гена В*73, обнаруженного при секвенировании денисовского человека, и, как считают, появившегося у лиц монголоидной расы интрогрессией от неандертальцев [28]. Наибольшая частота В*73 выявлена в популяциях пакистанских парси, Ливии [23, 29].

Кроме того, у русских Челябинской области отсутствуют и другие типичные азиатские аллели: В*46, аллельное семейство, характерное для китайских и тайваньских популяций; В*54, распространенный в Японии и Монголии, а также В*42, распространенные в Северной Африке и Южной Америке [11, 12].

Таким образом, популяция русских Челябинской области является типичной европейской популяцией с небольшими особенностями, отражающими влияние финно-угорских племен (А*03, В*35, БК£1*01), а также возможное участие в этногенезе кочевых азиатских народов (В*13 и БК£1*07), ранее населявших исследованную территорию.

Данные о распределении генов и гаплотипов HLA у русских Челябинской области позволяют проводить целенаправленный поиск неродственного донора для пациента русской национальности, проживающего в любом регионе России. Это подтверждает успешный опыт работы Челябинского регистра доноров стволовой клетки. Всего в Челябинском реги-

стре состоит более 5000 доноров, с 2007 по 2015 г. проведено 14 донаций стволовых клеток для пациентов трансплантационных центров России (Екатеринбург, Москва, Санкт-Петербург).

Знание закономерностей иммуногенетического профиля HLA русских может быть использовано в дальнейшем для проведения научных исследований связи HLA с заболеваниями, а также будет полезным для специалистов в области изучения этногенеза народов.

Коллектив авторов выражает благодарность главным врачам Челябинской ОСПК (Н.П. Майданюк, С.И. Яниной, Г.А. Рудаковой), а также благотворительному фонду Русфонд, Центру волонтерских объединений (г. Челябинск), Челябинскому городскому общественному движению помощи онкобольным детям Искорка (г. Челябинск), внесшим свой вклад в формирование Челябинского регистра доноров стволовых клеток.

Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 15-0405176.

ЛИТЕРАТУРА [REFERENCES]

1. Всероссийская перепись населения 2010 г. Available at: http:// www.gks.ru/free_doc/new_site/perepis2010/croc/perepis_ itogi1612.htm (дата обращения 16.06.2015).

[National Population Census 2010]. (in Russian) Available at:

http://www.gks.ru/free_doc/new_site/perepis2010/croc/perepis_ito gi1612.htm (accessed 16.06.2015).

2. Самигулов Г.Х. Челябинск XVIII-XIX веков: население, планировка, материальная культура (по данным археологии и письменных источников): Автореф. дис. ... канд. истор. наук. Ижевск; 2005.

[Samigulov G.Kh. Chelyabinsk XVIII-XIX: population, planning, material culture

3. Елисеева В. Я., Григорьев Б.В., Матушкин П.Г., Тяжельников Е.М., Четин В.Е. Краткий очерк истории Челябинской области. Челябинск: Южно-Уральское кн. изд-во; 1965.

[Eliseeva V.Ya., Grigoriev B.V., Matushkin P.G., Tyazhelnikov E.M., Chetin V.E. Short History of the Chelyabinsk Region. Chelyabinsk: Yuzhno-Uralskoe knizhnoe izdatelstvo; 1965].

4. Балановская Е.В., Балановский О.П. Русский генофонд на Русской равнине. М.: Луч; 2007.

[Balanovskaya E.V., Balanovskiy O.P. Russian gene pool of the Russian Plain. Moscow: Luch; 2007].

5. Bubnova L.N., Zaitseva G.A., Erokhina L.V., Berkos A.S., Re-utova N.V., Belyaeva E.V., et al. A comparative study of HLA-A and HLA-В antigens and haplotype distribution among donors of hematopoietic stem cells from Russian and German regions. Cell. Ther. Transplant. 2008; 1(1): 28-34.

6. Хаитов Р.М, Алексеев Л.П., Балановская Е.В., Болдырева М.Н., Балановский О.П., Евсеева И.В. и др. HLA-генетическое разнообразие населения России и СНГ. 1. Русские. Иммунология. 2005; 5: 260-3.

[Khaitov R.M, Alekseev L.P., Balanovskaya E.V., Boldyreva M.N., Balanovskiy O.P., Evseeva I.V., et al. HLA-genetic diversity of the population of Russia and CIS. 1. Russkie. Immunologiya. 2005; 5: 260-3].

7. Евсеева И.В., Уэлс С., Тонкс С. Генетический полиморфизм генов иммунного ответа класса I в коренных популяциях европейского Севера России. Иммунология. 2001; 5: 27-30.

[Evseeva I.V., Uels S., Tonks S. Genetic polymorphism of immune response genes in Class I of indigenous populations of Northern

European Russia. Immunologiya. 2001; 5: 27-30].

8. Suslova T.A., Burmistrova A.L., Chernova M.S., Khromova E.B., Lupar E.I., Timofeeva S.V., et al. HLA gene and haplotype frequencies in Russians, Bashkirs and Tatars, living in the Chelyabinsk Region (Russian South Urals). Int. J. Immunogenet. 2012; 39(5): 394-408. doi: 10.1111/j.1744-313X.2012.01117.x.

9. Суслова Т.А., Бурмистрова А.Л., Чернова М.С., Вавилов М.Н., Хромова Е.Б. Распределение генов, гаплотипов HLA в популяции башкир, проживающих в Челябинской области. Иммунология. 2011; 2: 65-9.

[Suslova T.A., Burmistrova A.L., Chernova M.S., Vavilov M.N., Khromova E.B. The distribution of genes, HLA haplotypes of Bashkir population living in the Chelyabinsk region. Immunologiya. 2011; 2: 65-9].

10. Riccio M.E., Buhler S., Nunes J.M., Vangenot C., Cuenod M., Currat M., et al. 16th IHIW: Analysis of HLA Population Data, with updated results for 1996 to 2012 workshop data (AHPD project report). Int. J. Immunogenet. 2013; 40(1): 21-30.

11. Gonzalez-Galarza F.F., Takeshita L.Y, Santos E.J., Kempson F., Maia M.H., Silva A.L., et al. Allele frequency net 2015 update: new features for HLA epitopes, KIR and disease and HLA adverse drug reaction associations. Nucl. Acid Res. 2015; 39(28): D784-8.

12. Allele Frequency Net Database. AFND; Available at: http://www. allelefrequencies.net

13. Excoffier L., Lischer H.E.L. Arlequin suite ver 3.5: A new series of programs to perform population genetics analyses under Linux and Windows. Mol. Ecol. Res. 2010; 10(3): 564-7.

14. Чернова М.С. Иммуногенетический профиль популяций Челябинской области (русские, татары, башкиры, нагайбаки) в структуре мировых популяций: Автореф. дис. ... канд. би-ол. наук. Челябинск; 2014.

[Chernova M.S. Immunogenetic profile populations of Chelyabinsk region

15. Kruskal J.B. Multimensional scaling by optimizing goodness of fit to a nonmetric hypothesis. Psycometrika. 1964; 9(1): 1-27.

16. Sanchez-Mazas A., Fernandez-Viña M., Middleton D., Hollenbach J.A., Buhler S., Di D., et al. Immunogenetics as a tool in anthropological studies. Immunology. 2001; 133(2): 143-64.

17. Darke C., Guttridge M.G., Thompson J., McNamara S., Street J., Thomas M. HLA class I (A,B) and II (DR,DQ) gene and haplotype frequencies in blood donors from Wales. Exp. Clin. Immunogenet. 1998; 15(2): 69-83.

18. Dunne C., Crowley J., Hagan R., Rooney G., Lawlor E. HLA-A, B, Cw, DRB1, DQB1 and DPB1 alleles and haplotypes in the genetically homogenous Irish population. Int. J. Immunogenet. 2008; 35 (4-5): 295-302.

19. Schipper R.F., D'Amaro J., Bakker J.T., Bakker J., van Rood J.J., Oudshoom M. HLA gene haplotype frequencies in bone marrow donors worldwide registries. Hum. Immunol. 1997; 52(1): 54-7.

20. Wennerström A., Vlachopoulou E., Lahtela L.E., Paakkanen R., Eronen K.T., Seppänen M., et al. Diversity of extended HLA-DRB1 haplotypes in the Finnish population. PLoS One. 2013; 8(11): e79690.

21. Johansson A., Ingman M., Mack S.J., Erlich H., Gyllensten U. Genetic origin of the Swedish Sami inferred from HLA class I and class II allele frequencies. Eur. J. Hum. Genet. 2008; 16(11): 1341-9.

22. Arnaiz-Villena A., Martinez-Laso J., Moscoso J., Livshits G., Zamora J., Gomez-Casado E., et al. HLA genes in the Chuvashian population from European Russia: admixture of Central European and Mediterranean populations. Hum. Biology. 2003; 75(3): 375-92.

23. Mohyuddin A., Mehdi S.Q. HLA analysis of the Parsi (Zoroastrian) population in Pakistan. Tissue Antigens. 2005; 66(6): 691-5.

24. Park M.H., Kim H.S., Kang S.J. HLA-A, -B, -DRB1 allele and haplotype frequencies in 510 Koreans. Tissue Antigens. 1999; 53 (4, Pt 1): 386-90.

25. Li X.F., Zhang X., Chen Y., Zhang K.L., Liu X.J., Li J.P. An analysis of HLA-A, -B, and -DRB1 allele and haplotype frequencies of 21,918 residents living in Liaoning, China. PloS One. 2014; 9(4): e93082. doi: 10.1371/journal.pone.0093082.

26. Kuranov A.B., Vavilov M.N., Abildinova G.Zh., Akilzhanova A.R., Iskakova A.N., Zholdybayeva E.V., et al. Polymorphisms of HLA-DRB1, -DQA1 and -DQB1 in inhabitants of Astana, the capital city of Kazakhstan. PloS One. 2014; 9(12): e115265. doi: 10.1371/journal.pone.0115265.

27. Schmidt A.H., Solloch U.V., Pingel J., Baier D., Böhme I., Dubicka K., et al. High-resolution human leukocyte antigen allele and haplotype frequencies of the Polish population based on 20,653 stem cell donors. Hum. Immunol. 2011; 72(7): 558-65.

28. Abi-Rached L., Jobin M.J., Kulkarni S., McWhinnie A., Dalva K., Gragert L., et al. The shaping of modern human immune systems by multiregional admixture with archaic humans. Science. 2011; 334(6052): 89-94. doi: 10.1126/science.1209202.

29. Fernandez Vina M.A., Hollenbach J.A., Lyke K.E., Sztein M.B., Maiers M., Klitz W., et al. Tracking human migrations by the analysis of the distribution of HLA alleles, lineages and haplotypes in closed and open populations. Phiosl. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 2012; 367(1590): 820-9. doi: 10.1098/ rstb.2011.0320.

nocTynma 08.07.15 Received 08.07.15

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015 УДК 615.382.014.4.07

СТАБИЛЬНОСТЬ ТЕРМОЛАБИЛЬНЫХ ФАКТОРОВ СВЕРТЫВАНИЯ В СВЕЖЕЗАМОРОЖЕННОЙ ПЛАЗМЕ ПОСЛЕ ЕЕ РАЗМОРАЖИВАНИЯ

Зарубин М.В.1, Саратова О.Е.1, Жибурт Е.Б.2

1ГБУЗ Иркутская областная станция переливания крови, 664046, Иркутск; 2ФГУ Национальный медико-хирургический центр им. Н.И. Пирогова, 105203, Москва

Резюме. Проанализированы данные литературы о сохранности факторов свертывания в размороженной плазме. Представлены результаты динамики уровня термолабильных факторов свертывания крови V и VIII в свежезамороженной плазме, хранившейся при температуре 4оС в течение 5 сут после размораживания, и определено ее соответствие нормативным требованиям.

Ключевые слова: свежезамороженная плазма; V фактор свертывания; VIII фактор свертывания; размораживание.

Для цитирования: Зарубин М.В., Саратова О.Е., Жибурт Е.Б. Стабильность термолабильных факторов свертывания в свежезамороженной плазме после ее размораживания. Гематология и трансфузиология. 2015; 60(3): 35-38.