РЕГУЛЯТОРНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ ЭКСПРЕССИИ ИЗ СЕМЕЙСТВА LEMNACEAE

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, представленную в SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 13 или 14;
b) нуклеотидной последовательности, содержащей по меньшей мере 50 смежных нуклеотидов последовательности, представленной в SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 13 или 14, где указанная нуклеотидная последовательность инициирует транскрипцию в клетке растения;
c) нуклеотидной последовательности, содержащей функциональный фрагмент последовательности, представленной в SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 13 или 14, где указанный фрагмент инициирует транскрипцию в клетке растения;
d) нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 13 или 14, где указанная нуклеотидная последовательность инициирует транскрипцию в клетке растения, и
e) нуклеотидной последовательности, которая гибридизуется при строгих условиях с комплементом нуклеотидной последовательности а), где указанная нуклеотидная последовательность инициирует транскрипцию в клетке растения.
2. Экспрессионная конструкция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.
3. Экспрессионная конструкция по п.2, дополнительно содержащая функционально связанную представляющую интерес гетерологичную нуклеотидную последовательность.
4. Экспрессионная конструкция по п.3, дополнительно содержащая функционально связанную кодирующую последовательность сигнального пептида, который направляет секрецию полипептида, кодируемого указанной представляющей интерес гетерологичной нуклеотидной последовательностью, в культуральную среду.
5. Экспрессионная конструкция по п.4, в которой указанный сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) последовательности, представленной в SEQ ID NO:16;
b) последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:16, где указанная последовательность направляет секрецию указанного полипептида в культуральную среду; и
с) функционального фрагмента последовательности, представленной в SEQ ID NO:16, где указанная последовательность направляет секрецию указанного полипептида в культуральную среду.
6. Экспрессионная конструкция по п.5, в которой указанная кодирующая последовательность указанного сигнального пептида содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) последовательности, представленной в SEQ ID NO:15;
b) последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:15; и
c) фрагмента последовательности, представленной в SEQ ID NO:15.
7. Экспрессионная конструкция по любому из пп.3-6, в которой указанная представляющая интерес гетерологичная нуклеотидная последовательность кодирует полипептид млекопитающего.
8. Экспрессионная конструкция по п.7, в которой указанный полипептид млекопитающего выбран из группы, состоящей из инсулина, гормона роста, α-интерферона, β-интерферона, β-глюкоцереброзидазы, β-глюкуронидазы, белка ретинобластомы, белка р53, ангиостатина, лептина, эритропоэтина, гранулоцитарного макрофагального колониестимулирующего фактора, плазминогена, моноклональных антител, Fab-фрагментов, одноцепочечных антител, цитокинов, рецепторов, вакцин человека, вакцин животных, пептидов, сывороточного альбумина и их комбинаций.
9. Трансформированное растение или клетка или клубенек растения, содержащие экспрессионную конструкцию по п.2.
10. Трансформированное растение или клетка или клубенек растения по п.9, в котором указанное растение или клетка или клубенек растения принадлежат к однодольным растениям.
11. Трансформированное растение или клетка или клубенек растения по п.10, в котором указанное однодольное растение принадлежит к роду, выбранному из группы, состоящей из рода Spirodela, рода Wolffia, рода Wolfiella, рода Landoltia и рода Lemna.
12. Трансформированное растение или клетка или клубенек растения по п.10, в котором указанное однодольное растение выбирается из группы, состоящей из видов Lemna minor, Lemna miniscula, Lemna aequinoctialis и Lemna gibba.
13. Трансформированное растение или клетка или клубенек растения по п.9, в котором указанные растение или клетка или клубенек растения принадлежат к двудольным растениям.
14. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, представленную в SEQ ID NO:7, 8 или 9; и
b) нуклеотидной последовательности, содержащей функциональный фрагмент последовательности, представленной в SEQ ID NO:7, 8 или 9, где указанный фрагмент усиливает транскрипцию в клетке растения.
15. Экспрессионная конструкция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.14.
16. Экспрессионная конструкция по п.15, дополнительно содержащая функционально связанный представляющий интерес промотор.
17. Экспрессионная конструкция по п.16, в котором указанный представляющий интерес промотор выбран из группы, состоящей из нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, представленную в SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:13 и SEQ ID NO:14.
18. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, представленную в SEQ ID NO:15;
b) нуклеотидной последовательности, содержащей по меньшей мере 25 смежных нуклеотидов последовательности, представленной в SEQ ID NO:15, где указанная нуклеотидная последовательность кодирует сигнальный пептид;
c) нуклеотидной последовательности, содержащей функциональный фрагмент последовательности, представленной в SEQ ID NO:15, где указанная нуклеотидная последовательность кодирует сигнальный пептид; и
d) нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:15, где указанная нуклеотидная последовательность кодирует сигнальный пептид.
19. Экспрессионная конструкция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.18, функционально связанную с представляющей интерес гетерологичной нуклеотидной последовательностью.
20. Экспрессионная конструкция по п.19, дополнительно содержащая функционально связанный представляющий интерес промотор.
21. Экспрессионная конструкция по п.20, в которой указанный представляющий интерес промотор выбран из группы, состоящей из нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, представленную в SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:13 и SEQ ID NO:14.
22. Экспрессионная конструкция по любому из пп.19-21, в которой указанная представляющая интерес гетерологичная нуклеотидная последовательность кодирует полипептид млекопитающего.
23. Экспрессионная конструкция по п.22, в которой указанный полипептид млекопитающего выбран из группы, состоящей из инсулина, гормона роста, α-интерферона, β-интерферона, β-глюкоцереброзидазы, β-глюкуронидазы, белка ретинобластомы, белка р53, ангиостатина, лептина, эритропоэтина, гранулоцитарного макрофагального колониестимулирующего фактора, плазминогена, моноклональных антител, Fab-фрагментов, одноцепочечных антител, цитокинов, рецепторов, вакцин человека, вакцин животных, пептидов, сывороточного альбумина и их комбинаций.
24. Способ экспрессии нуклеотидной последовательности в растении или клетке или клубеньке растения, предусматривающий введение в это растение или клетку или клубенек растения экспрессионной конструкции, причем указанная экспрессионная конструкция содержит регуляторный элемент экспрессии, функционально связанный с представляющей интерес гетерологичной нуклеотидной последовательностью, где указанный регуляторный элемент экспрессии содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
a) нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, представленную в SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 13 или 14;
b) нуклеотидной последовательности, содержащей по меньшей мере 50 смежных нуклеотидов последовательности, представленной в SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 13 или 14, где указанная нуклеотидная последовательность инициирует транскрипцию в клетке растения;
c) нуклеотидной последовательности, содержащей функциональный фрагмент последовательности, представленной в SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 13 или 14, где указанный фрагмент инициирует транскрипцию в клетке растения;
d) нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 13 или 14, где указанная нуклеотидная последовательность инициирует транскрипцию в клетке растения, и
е) нуклеотидной последовательности, которая гибридизуется при строгих условиях с комплементом нуклеотидной последовательности а), где указанная нуклеотидная последовательность инициирует транскрипцию в клетке растения.
25. Способ по п.24, в котором указанное растение или клетка или клубенек растения принадлежат к однодольным растениям.
26. Способ по п.25, в котором указанное однодольное растение принадлежит к роду, выбранному из группы, состоящей из рода Spirodela, рода Wolffia, рода Wolfiella, рода Landoltia и рода Lemna.
27. Способ по п.25, в котором указанное однодольное растение выбирается из группы, состоящей из видов Lemna minor, Lemna miniscula, Lemna aequinoctialis и Lemna gibba.
28. Способ по п.24, в котором указанное растение или клетка или клубенек растения относится к двудольному растению.
29. Способ по п.24, в котором указанная экспрессионная конструкция дополнительно содержит функционально связанную кодирующую последовательность сигнального пептида, которая направляет секрецию полипептида, кодируемого указанной представляющей интерес гетерологичной нуклеотидной последовательностью, в культуральную среду.
30. Способ по п.29, в котором указанный сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) последовательности, представленной в SEQ ID NO:16;
b) последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:16, где указанная последовательность направляет секрецию указанного полипептида в культуральную среду; и
c) функционального фрагмента последовательности, представленной в SEQ ID NO:16, где указанная последовательность направляет секрецию указанного полипептида в культуральную среду.
31. Способ по п.30, в котором указанная кодирующая последовательность указанного сигнального пептида содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) последовательности, представленной в SEQ ID NO:15;
b) последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:15; и
c) фрагмента последовательности, представленной в SEQ ID NO:15.
32. Способ по любому из пп.24-31, в котором указанная представляющая интерес гетерологичная нуклеотидная последовательность кодирует полипептид млекопитающего.
33. Способ по п.32, в котором указанный полипептид млекопитающего выбран из группы, состоящей из инсулина, гормона роста, α-интерферона, β-интерферона, β-глюкоцереброзидазы, β-глюкуронидазы, белка ретинобластомы, белка р53, ангиостатина, лептина, эритропоэтина, гранулоцитарного макрофагального колониестимулирующего фактора, плазминогена, моноклональных антител, Fab-фрагментов, одноцепочечных антител, цитокинов, рецепторов, вакцин человека, вакцин животных, пептидов, сывороточного альбумина и их комбинаций.
34. Способ по п.27, в котором указанная представляющая интерес гетерологичная нуклеотидная последовательность содержит предпочтительные кодоны ряски в кодирующей последовательности указанной представляющей интерес гетерологичной нуклеотидной последовательности.
35. Способ по п.34, в котором указанная представляющая интерес гетерологичная нуклеотидная последовательность содержит 70-100% предпочтительных для ряски кодонов.
36. Способ экспрессии нуклеотидной последовательности в растении или клетке или клубеньке растения, предусматривающий введение в это растение или клетку или клубенек растения экспрессионной конструкции, причем указанная экспрессионная конструкция содержит регуляторный элемент экспрессии, функционально связанный с представляющей интерес гетерологичной нуклеотидной последовательностью, в котором указанный регуляторный элемент экспрессии содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, представленную в SEQ ID NO:10, 11 или 12;
b) нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:10, 11 или 12, где указанная нуклеотидная последовательность усиливает экспрессию генов в клетке растения; и
c) нуклеотидной последовательности, которая гибридизуется при строгих условиях с комплементом нуклеотидной последовательности а), где указанная нуклеотидная последовательность усиливает экспрессию генов в клетке растения.
37. Способ по п.36, в котором указанное растение или клетка или клубенек растения принадлежат к однодольным растениям.
38. Способ по п.37, в котором указанное однодольное растение принадлежит к роду, выбранному из группы, состоящей из рода Spirodela, рода Wolffia, рода Wolfiella, рода Landoltia и рода Lemna.
39. Способ по п.37, в котором указанное однодольное растение выбирается из группы, состоящей из видов Lemna minor, Lemna miniscula, Lemna aequinoctialis и Lemna gibba.
40. Способ по п.36, в котором указанное растение или клетка или клубенек растения принадлежат к двудольным растениям.
41. Способ по п.36, в котором указанная экспрессионная конструкция дополнительно содержит функционально связанную кодирующую последовательность сигнального пептида, которая направляет секрецию полипептида, кодируемого указанной представляющей интерес гетерологичной нуклеотидной последовательностью, в культуральную среду.
42. Способ по п.41, в котором указанный сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) последовательности, представленной в SEQ ID NO:16;
b) последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:16, где указанная последовательность направляет секрецию указанного полипептида в культуральную среду; и
c) функционального фрагмента последовательности, представленной в SEQ ID NO:16, где указанная последовательность направляет секрецию указанного полипептида в культуральную среду.
43. Способ по п.42, в котором указанная кодирующая последовательность указанного сигнального пептида содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) последовательности, представленной в SEQ ID NO:15;
b) последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:15; и
c) фрагмента последовательности, представленной в SEQ ID NO:15.
44. Способ по любому из пп.36-43, в котором указанная представляющая интерес гетерологичная нуклеотидная последовательность кодирует полипептид млекопитающего.
45. Способ по п.44, в котором указанный полипептид млекопитающего выбран из группы, состоящей из инсулина, гормона роста, α-интерферона, β-интерферона, β-глюкоцереброзидазы, β-глюкуронидазы, белка ретинобластомы, белка р53, ангиостатина, лептина, эритропоэтина, гранулоцитарного макрофагального колониестимулирующего фактора, плазминогена, моноклональных антител, Fab-фрагментов, одноцепочечных антител, цитокинов, рецепторов, вакцин человека, вакцин животных, пептидов, сывороточного альбумина и их комбинаций.
46. Способ по п.39, в котором указанная представляющая интерес гетерологичная нуклеотидная последовательность содержит предпочтительные кодоны ряски в кодирующей последовательности указанной представляющей интерес гетерологичной нуклеотидной последовательности.
47. Способ по п.46, в котором указанная представляющая интерес гетерологичная нуклеотидная последовательность содержит 70-100% предпочтительных для ряски кодонов.
48. Способ экспрессии и секреции гетерологичного полипептида в растении или клетке или клубеньке растения, предусматривающий введение в это растение или клетку или клубенек растения экспрессионной конструкции, причем указанная экспрессионная конструкция содержит регуляторный элемент экспрессии, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, содержащей кодирующую последовательность указанного гетерологичного полипептида и функционально связанную кодирующую последовательность сигнального пептида, который управляет внеклеточной секрецией указанного гетерологичного полипептида, где указанный сигнальный полипептид выбран из группы, состоящей из:
a) последовательности, представленной в SEQ ID NO:16;
b) последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:16, где указанная последовательность управляет внеклеточной секрецией указанного полипептида; и
c) функционального фрагмента последовательности, представленной в SEQ ID NO:16, где указанная последовательность управляет внеклеточной секрецией указанного полипептида.
49. Способ по п.48, в котором указанная кодирующая последовательность указанного сигнального пептида содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
a) последовательности, представленной в SEQ ID NO:15;
b) последовательности, имеющей по меньшей мере 90% идентичность последовательности с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:15; и
с) фрагмента последовательности, представленной в SEQ ID NO:15.
50. Способ по п.48 или 49, в котором указанная представляющая интерес гетерологичная нуклеотидная последовательность кодирует полипептид млекопитающего.
51. Способ по п.50, в котором указанный полипептид млекопитающего выбран из группы, состоящей из инсулина, гормона роста, α-интерферона, β-интерферона, β-глюкоцереброзидазы, β-глюкуронидазы, белка ретинобластомы, белка р53, ангиостатина, лептина, эритропоэтина, гранулоцитарного макрофагального колониестимулирующего фактора, плазминогена, моноклональных антител, Fab-фрагментов, одноцепочечных антител, цитокинов, рецепторов, вакцин человека, вакцин животных, пептидов, сывороточного альбумина и их комбинаций.
52. Способ по п.48 или 49, в котором указанный регуляторный элемент экспрессии выбран из группы, состоящей из нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, представленную в SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:13 и SEQ ID NO:14.
53. Способ по п.50, в котором указанный регуляторный элемент экспрессии выбран из группы, состоящей из нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, представленную в SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:13 и SEQ ID NO:14.
54. Способ по п.51, в котором указанный регуляторный элемент экспрессии выбран из группы, состоящей из нуклеотидной последовательности, содержащей последовательность, представленную в SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:13 и SEQ ID NO:14.