СПОСОБ УСИЛЕНИЯ АНТИАГРЕГАНТНОЙ АКТИВНОСТИ
METHOD OF INTENSIFYING ANTIAGGREGANT ACTIVITY

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к экспериментальной фармакологии.
На сегодняшний день известен способ антиагрегантной активации с помощью препарата ацетилсалициловой кислоты (аспирина), обладающего антиагрегантными и противовоспалительными свойствами [1], но на сегодняшний день этот препарат является устаревшим и обладает рядом побочных эффектов.
Цель изобретения - расширение арсенала средств для увеличения антиагрегантной активности.
Поставленная цель достигается применением нового синтезированного химического соединения, являющегося конъюгатом бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой.
Синтез применяемого соединения
Конъюгат бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой синтезирован в научной лаборатории кафедры органической химии Московского государственного педагогического университета.
К раствору 0.50 г (0.441 ммоль) β-циклодекстрина в 8 мл пиридина при перемешивании прикапывали 0.44 г (2.20 ммоль) хлорангидрида ацетисалициловой кислоты в 2 мл бензола, выдерживали при 20°C 24 ч. Гидрохлорид пиридина отфильтровывали, фильтрат упаривали, остаток затирали в этиловом спирте (10 мл), выпавший осадок отфильтровывали, промывали этиловым спиртом (2×5 мл) и сушили в вакууме.
f
6
3
2
аром.
6
3
аром.
73.5
91
45.5
1
2
5
6
6
1
2
3
13
6
6
5
6
2
3
5
4
1
C
C
C
C
Выход соединения (I) 0.47 г (63%), т.пл. 203-205°C, R 0.78 (на алюминиевых пластинках с закрепленным слоем силикагеля, в системе ацетонитрил-вода 5:2). Спектр ЯМР Н (d-ДМСО), δ, м. д.: 2.05-2.35 м (10.5H, C(O)CH), 3.13-4.08 м (42H; CH-CH, CH), 4.23-4.59 м (3.5H, COH), 4.81 уш. с (7H, CH), 5.60-6.04 м (14H; COH, COH), 7.05-8.11 м (14H, CH). ЯМР C (d-ДМСО), δ, м. д.: 20.8 (C(O)H), 59.4 (COH), 63.9 [OC(O)], 68.9 [COC(O)], 71.5-74.0 (C, C, C), 80.1-83.0 (C), 101.0-103.1 (C), 122.1-135.0 (С), 150.1 [OC(O)], 169.2 [C(O)]. Найдено, %: C 51.11; H 5.45. CHO. Вычислено, %: C 51.85; H 5.39.
Формула полученного соединения
В эксперименте in vitro проводились испытания на антиагрегантную активность в отношении тромбоцитов плазмы крови богатой. Препаратом сравнения служила ацетилсалициловая кислота (аспирин).
11
11
Для исследования функционального состояния тромбоцитов фотометрическим методом использовали богатую тромбоцитами плазму (PRP) и суспензию отмытых тромбоцитов. Утром, до кормления лабораторных животных (белые беспородные крысы), брали кровь из яремной вены в пластиковые шприцы, содержащие антикоагулянт (3.8% (0.11 М) раствор цитрата натрия) в соотношении 9:1. Все манипуляции с кровью, плазмой, обогащенной тромбоцитами, и суспензией отмытых тромбоцитов проводились в полиэтиленовой посуде. Для получения богатой тромбоцитами плазмы кровь центрифугировали в пластиковых пробирках при комнатной температуре в течение 10 минут для осаждения эритроцитов и лейкоцитов. Количество тромбоцитов PRP подсчитывалась в камере Горяева на микроскопе МБИ-15 с фазово-контрастной приставкой и доводилось до 2×10-2.5×10 тромбоцитов/л при помощи плазмы, бедной тромбоцитами (РРР). PRP получали повторным центрифугированием крови в течение 10 минут. PRP хранилась при температуре 4°C.
Оценку агрегации тромбоцитов производили на агрегометре PICA (модель 330, США), а также на двухканальном агрегометре LaborAPACT (США) с графической регистрацией и автоматической калькуляцией амплитуды и максимальной скорости агрегации. Агрегатограммы анализировали по амплитуде (максимальная величина падения оптической плотности, выраженная в %); максимальной скорости агрегации (выраженной в %/мин). Все эксперименты проводились в шести параллельных испытаниях, где опытная проба сравнивалась с контрольным образцом. В качестве индукторов агрегации тромбоцитов использовали тромбин в конечной концентрации 0.5 ед./мл. Кровь инкубировали 5 мин с образцами при 37°C.
В качестве примера в таблице №1 приведены данные антиагрегационной активности конъюгата бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой, полученные в эксперименте in vitro.
Антиагрегантная активность конъюгата бета-циклодестрина с ацетилсалициловой кислотой
Образец
Концентрация противовоспалительного средства в навеске (мМ)
Амплитуда (%)
Скорость (% в мин)
Контроль
-
38±8.7
48±6.5
Ацетилсалициловая кислота
0,05
24.7±4.9
27.9±6.5
Конъюгат бета-циклодекстрина с ацетилсалициловой кислотой
0,02
13.0±3.5*
13.0±6.1*
* р<0,05 по сравнению с контролем
Источники информации
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Изд. «Новая волна», 2005 г., 1206 с.
2. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств. Под общей ред. Р.У.Хабриева. М.: 2005. 829 с.
3. K.Uekama, F.Hirayama, T.Irie, Chem. Rev, 98(5), 2045-2076 (1998).
4. M.E.Davis, M.E.Brewster, Nature Rev. Drug Discovery, 3, 1023-1035 (2004).
5. Cyclodextrins and their complexes. Chemistry, analytical methods, applications. // Ed. H. Dodziuk, Wiley-VCH, Weinheim. 2006. 489 p.
6. K.Uekama, К.Minami, F.Hirayama, J. Med. Chem, 40 (17), 2755-2761 (1997).