Влияние стресса, предшествующего смерти, на биологическую активность цитомединов почек

ЛИТЕРАТУРА

1. Авцын А.П., Жаворонков A.A., Марачев А.Г. Патология человека на Севере. — М.: Медицина, 1985.

2 Есъков В.М. Компартментно-кластерный подход в исследованиях биологических динамических систем (БДС). Монография. — 4.1. Межклеточные взаимодействия в нейрогенераторных и биомеханических кластерах. — Самара, 2003. — 198 с.

3. Есъков В.М., Живогляд Р.Н. Фазатон мозга в норме и при патологии. // Вестник новых медицинских технологий. - Тула, 2004. - № 4. - С.5-9.

4. Живогляд Р.Н. Гирудотерапия — влияние ее на гемомик-роциркуляцию. // Сб. научн. трудов. Гирудотерапия и гирудофармакотерапия. — М., 1997. — Т.1. — С.7-16.

5. Живогляд Р.Н. Об одном из альтернативных методов лечения гинекологических заболеваний. // Вестник новых медицинских технологий. - Тула, 2002. - № 3. -С.10-18.

6. Хадарцев A.A., Есъков В.М. и др. Системный анализ, управление и обработка информации в биологии и медицине. 4асть IV. Обработка информации, системный анализ и управление (общие вопросы в клинике, в эксперименте). Монография. — Тула: Изд-во ТулГУ, 2003. - 203 с.

© АВХОДИЕВ Г.И., КУЗЬМИНА О.В., КОТ М.Л. -

ВЛИЯНИЕ СТРЕССА, ПРЕДШЕСТВУЮЩЕГО СМЕРТИ, НА БИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ЦИТОМЕДИНОВ ПОЧЕК

Г.И. Авходиев, О.В. Кузьмина, М.Л. Кот

(4итинская государственная медицинская академия, ректор — д.м.н., проф. A.B. Говорин; кафедра судебной

медицины, зав. — д.м.н., проф. Г.И. Авходиев)

Резюме. В статье представлены результаты сравнительного исследования количественных и качественных показателей цитомединов почек. Установлено что стресс, предшествующий смерти оказывает существенное влияние на исследуемые показатели пептидов.

Ключевые слова. Стресс, смерть, человек, животное, цитомидины почек, судебная медицина.

Установление стресса, предшествующего смерти, является наиболее актуальной и исследуется с всевозрастающей интенсивностью в самых разных аспектах. Это связано, прежде всего, с широкой распространенностью стрессовых состояний. Значительная группа современных профессий характеризуется возможностью возникновения внезапных острых аварийных ситуаций, несвоевременное устранение которых может привести к материальным потерям, а часто и к человеческим жертвам [4,7,12].

Диагностика стрессовых состояний, предшествующих смерти, является актуальной в судебно-медицинской практике, очень важной для судебно-следствен-ных органов при расследовании различных преступлений и происшествий [2]. В экспертной практике накоплен определенный опыт диагностики состояния стресса. Правила судебно-медицинской экспертизы трупа рекомендуют экспертам при внезапной смерти лиц молодого возраста в условиях чрезмерной физической нагрузки, психической травмы или иных стрессовых воздействий, а также когда причина смерти не ясна, наряду с другими органами брать гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковую систему, органы иммуногенеза, мазки-отпечатки слизистой оболочки дыхательных путей [1].

В настоящее время достаточно подробно изучены изменения функций органов и систем в экстремальных условиях. В большей степени это относится к сердечно-сосудистой, дыхательной, нейро-эндокринной системам [3,5,6]. Среди экстремальных ситуаций, обуславливающих стресс, — реакции со стороны почек, — выраженные психоэмоциональные реакции, которые в результате адаптационной перестройки центральной и регионарной гемодинамики приводят к увеличению в

крови и моче содержания медиаторов и продуктов усиленного распада белков — олигопептидов. Экстремальная ситуация вызывает ответную реакцию, выражающуюся в перераспределении кровообращения, снижении почечной фракции сердечного выброса, ишемиза-ции коркового вещества почек, усилении обмена веществ, увеличении содержания продуктов метаболизма. Все эти процессы приводят к ухудшению функционального состояния почек [5]. Морфологически в почках отмечается малокровие сосудов коркового вещества, сокращение артерий мелкого и среднего калибров. При длительном воздействии стрессорного фактора появляются признаки шунта: малокровие клубочков поверхностной зоны коры, полнокровие капилляров юкста-медулярных клубочков и прямых сосудов мозгового вещества, венозное полнокровие и мелкие свежие кровоизлияния. Нервная травма приводит к изменению в почках обмена белков, свободных радикалов, адреналина и норадреналина, ацетилхолина, электролитов, активности альдолаз. Также происходит повышение активности секреторной функции юкстагломерулярно-го аппарата (ЮГА) — усиливается выброс ренина в кровь без его накопления. Скорость освобождения ренина из клеток превышает его синтез [7].

Последние годы характеризуются бурным исследованием информационных молекул — биологических регуляторов. Последние представлены пептидными соединениями небольшой молекулярной массы, которые вырабатываются в организме и отличаются разнообразием происхождения и характером биологических эффектов. Они контролируют многие системы организма, выполняющие жизненно важные функции [2,9,11]. Известны пептиды, регулирующие кровообращение

[11], кроветворение [10], деятельность желудочно-кишечного тракта, центральной нервной системы, систем иммунитета, гемостаза и других систем организма. Эти пептиды представлены гормонами, нейрогормонами, нейромодуляторами, иммуномодуляторами, рилизинг-факторами, монокинами, факторами роста и др. [8].

Другие пептиды, названные цитомединами, получены из различных органов и тканей, играют важную роль в межклеточной регуляции. Доказана их роль в регуляции иммунного ответа при стрессе [9]. Показана их иммуномодулирующая способность в реакции клеточного и гуморального иммунитета и возможность устранять нарушения, возникающие при остром и хроническом эмоционально-болевом стрессе [10].

В большинстве случаев судебно-медицинская практика сталкивается с нарушениями межклеточных взаимодействий. Это положение касается травматических воздействий на органы и ткани различного происхождения, в том числе и при стрессе [2]. Информационные молекулы — цитомедины — обеспечивают регуляцию межклеточных взаимодействий, и поэтому их исследование с целью установления стресса, предшествующего смерти, представляет несомненный интерес.

Материалы и методы

Наши исследования проведены на 45 белых беспородных крысах весом 180-200г. Лабораторных животных содержали в условиях вивария на стационарном рационе питания в соответствии с «Санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)», утвержденных МЗ СССР 06.07.73 г., приказом МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г., приказом МЗ СССР № 163 от 10.03.66 г. «О суточных нормах кормления лабораторных животных и продуцентов». Животных забивали под кратковременным эфирным наркозом путем нанесения черепно-мозговой травмы. Трупы крыс сохраняли при температуре 18-20оС.

Для установления влияния значительного физического и эмоционального напряжения экспериментальные животные были разбиты на группы: 1 — контроль (интактные животные); 2 — животные, подвергнутые 20-минутному плавательному стрессу. Органы (почки) забирались через 4 часа после наступления смерти.

Лабораторные животные, подвергались плавательному стрессу, путем помещения в емкость с проточной водой с температурой 17-18оС. Практические исследования проведены на 81 трупе людей, умерших от различных причин, с давностью наступления смерти 2436 часов. Из них 49 трупов незадолго до смерти испытывали значительное эмоциональное и физическое напряжение.

Выделение пептидов из почек проводили путем последовательных этапов уксуснокислой экстракции по методу В.Г. Морозова, В.Х. Хавинсона (1981).

Содержание цитомединов определяли с помощью спектрофотометра по формуле:

А х

В

где: С — содержание цитомединов в мг/г ткани, В — вес кусочка органа в граммах, Е 280 — экстинция при длине волны 280 нм,

Е 260 — экстинция при длине волны 260 нм, А — вес порошка, полученного после осаждения ацетоном в миллиграммах.

Биологическую активность цитомединов изучали путем влияния на фагоцитарную активность нейтрофи-лов крови здоровыгх доноров. Подсчет поглощенныгх частиц вели в 200 нейтрофилах по фагоцитарному показателю (количество нейтрофилов, принявших участие в фагоцитозе из 100 просмотренных) и фагоцитарному числу (среднее число частиц, поглощенным одним нейтрофилом). Для статистической оценки результатов фагоцитарный показатель и фагоцитарное число быти пересчитаны в процентном отношении к контрольным величинам. Для этого значения, полученные в опыте, умножались на 100% и делились на контрольные величины.

О воздействии цитомединов на коагуляционныш гемостаз судили по времени рекальцификации плазмы (Bergerhof H.D., Roka L., 1954), АЧТВ (Larrien M.J., Weillard C., 1957 в модификации Баркагана З.С., 1975), протромбиновому времени (Quick A.J., 1966), тромби-новому времени (Сирмаи Э., 1962; Балуда В.П. и соавт., 1980).

Все изучаемые величины были пересчитаны и представлены в процентном отношении к контролю, которым служили показатели иммунитета и гемостаза крови здоровых доноров.

Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием персонального компьютера типа IBM PC. Для анализа экспериментальных данных использовалась методика, описанная П.А. Ма-тыщиныш (БГМИ, кафедра патофизиологии 1992 г.). Достоверными считались результаты с р < 0,05.

Результаты и обсуждение

В эксперименте на лабораторный животных быио установлено, что плавательный стресс приводит к изменениям качественных и количественных показателей цитомединов почек. Под действием пептидов, полученных от крыс, подвергнутых 20-минутному стрессовому воздействию, происходило достоверное падение в 1,5 раза их концентрации (p<0,002), при этом также наблюдалось выраженное угнетающее воздействие на фагоцитарную активность нейтрофилов. Фагоцитарный показатель и фагоцитарное число снижались в среднем на 30%.

Воздействие изучаемых соединений на гемостаз выфажалось в достоверном удлинении всех исследованных показателей свертывающей системы крови (время рекальцификации, АЧТВ, протромбиновое и тромби-новое время). Причем цитомедины, выщеленные из почек животных, испытавших стрессовое воздействие, в большей степени оказытали угнетающее действие.

Полученные в ходе экспериментов результаты (табл. 1), позволили перейти к исследованию цитомединов умерших людей. При этом быти получены данные, свидетельствующие о том, что во вторые сутки посмертного периода с предшествующим стрессовым воздействием происходит снижение уровня цитомединов почек более чем в 2 раза (р<0,001). Активность полученных соединений также изменялась. В тестах исследования фагоцитарной активности нейтрофилов цитомедины, выделенные от трупов лиц, испытавших перед смертью значительное эмоциональное и физическое напряжение, снижали фагоцитарный показатель и фагоцитар-

Таблица 1 ния крови оказывали пептиды почек

Влияние плавательного стресса на количество и биологическую активность 1руп°в людей, испытавших перед цитомединов почек экспериментальных животных смертью стресс. Причем наиболее

информативным было изменение

АЧТВ, данный показатель увеличился относительно контроля на 20% (табл. 2).

Таким образом, в результате проведенных исследований отмечены изменения как количества, так и биологической активности цитомединов в зависимости от предшествующего стрессового воздействия. Установлено, что при стрессе количество пептидов снижается и усиливается инги-бирующая активность полипептидов на фагоцитоз нейтрофилов и показатели свертывания крови. Результаты могут быть использованы в судебно-медицинской практике для установления эмоционального и физического перенапряжения, предшествую -щего смерти.

ное число на 41% и 43% соответственно. В тестах исследования гемостаза наибольшее угнетение свертыва-

Таблица 2

Влияние стресса на количество и биологическую активность цитомединов почек умерших людей

Показатель Стресс M±m р

Количество пептидов (мг/г) — 13,8+1,30 < 0,002

+ 9,3+0,41

Фагоцитарный показатель (%) — 90,1+2,30 < 0,001

+ 62,8+1,30

Фагоцитарное число (%) — 92,0+2,51 < 0,001

+ 64,0+1,35

Время рекальцификации (%) 93,9+0,65 < 0,001

+ 133,1+2,71

АЧТВ (%) 89,1+2,43 < 0,02

+ 127,3+1,50

Протромбиновое время (%) 86,2+1,52 < 0,001

+ 133,5+1,62

Тромбиновое время (%) 97,9+1,23 < 0,001

+ 130,9+1,09

Показатель Стресс M+m р

Количество пептидов (мг/г) — 15,8+0,36 <0,001

+ 7,7+0,21

Фагоцитарный показатель (%) — 63,9+2,89 <0,001

+ 38,1+1,50

Фагоцитарное число (%) — 67,5+2,44 <0,001

+ 38,8+1,10

Время рекальцификации (%) 111,5+1,8 <0,001

+ 128,7+0,2

АЧТВ (%) 101,2+3,9 <0,001

+ 121,4+2,1

Протромбиновое время (%) 102,1+1,7 <0,001

+ 112,3+3,7

Тромбиновое время (%) 107,9+2,4 <0,001

+ 123,8+2,7

PRECEDING DEATH STRESS AFFECT ON BIOLOGICAL ACTIVITY OF KIDNEYS'

CYTOMEDINES

G.I. Avkhodiyev, O.V. Kuzmina, M.L. Kot

In this article we present the results of comparative investigation of kidneys cytomedines' quantative and qualitative indices. It has been defined that stress, preceding death, essentially affects the indices of the peptids.

ЛИТЕРАТУРА

1. Артемов В.Н., Клюев А.В. К вопросу ретроспективной оценки нервно-эмоционального состояния человека в случаях смерти от механических повреждений. / Второй Всеросс. съезд судебных медиков. // Тез. докл. — Иркутск, 1987. - С.277-278.

2. Авходиев Г.И., Кузьмина О.В., Рафибеков М.Г. Белки и их производные в постмортальном периоде. — Чита: Поиск, 2002. - 79 с.

3. Барабой В.А. Механизмы стресса и ПОЛ. // Успехи современной биологии. — 1991. — Т. 111, Вып. 6. — С.923-931.

4. Новиков В. С., Яковлев Г.М., Смирнов В. С., Хавинсон В. Х Биорегуляция в медицине катастроф. — СПб.: Наука, 1992. - 120 с.

5. Букаев Ю.Н., Румянцев В.Б., Куренков Р.Н. Влияние психоэмоционального стресса на функцию почек. // Урология и нефрология. — 1991. — № 1. — С.3-5.

6. Воронина Н.П. Система макрофагов при стрессе. / Тр. ин-та. // Том. мед. ин-т. — 1988. — Т. 5. — С.15-18.

7. Генералов A.B., Сыкало А.И., Пучков Г.Ф. Возможности посмертной судебно-медицинской оценки роли стресса в посттравматическом танатогенезе. / Первый съезд судебных медиков Латвийской ССР. //Тез. докл. — Рига, 1985. — С.209-210.

8. Климов П.К., Барашкова Г.М. Эндогенные пептиды! как

единая система регуляторных веществ. // Физиол. журнал. — 1993. — Т. 79, №№ 3. — С.80-87.

9. Кузник Б.И. Цитомедины, иммунитет и система гомео-стаза. // Сб. Механизмы патологических реакций. — Новокузнецк, 1991. — С.86-89.

10. Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон ВХ Цитомедины: 25-летний опыт экспериментальных и клинических исследований. — СПб.: Наука, 1998. — 310 с.

11. Кузник Б.И., Хавинсон В.Х., Цыбиков Н.Н. Цитомедины

— отряд полипептидов на все случаи жизни. // Регуля-торные пептиды в норме и патологии (Цитомедины).

— Чита, 1991. — С.1-4.

12. Судебно-медицинская травматология. / Под ред. А.П. Громова, В.Г. Науменко. — М.: Медицина, 1977. — 368 с.

© БРИЛЬ Е.А. -

НОВЫЕ ПОДХОДЫ В ВЕДЕНИИ БОЛЬНЫХ, НАХОДЯЩИХСЯ НА

ЛЕЧЕНИИ У ВРАЧА-ОРТОДОНТА

Е.А. Брилъ

Резюме. Исследование позволило выявить несбалансированность иммунной системы на протяжении всего периода активного аппаратурного лечения. Это четко прослеживается через один и через пять месяцев после фиксации аппарата, а так же в конечном периоде аппаратурного лечения (т.е. через пятнадцать месяцев после фиксации брекетов). Полученные результаты исследования позволяют рекомендовать выделение этих периодов как «критических», требующих проведения иммунокоррегирующей терапии и назначение средств профилактики кариеса зубов.

Ключевые слова. Зубочелюстные аномалии и деформации, иммунитет.

Известно, что гигиеническое состояние полости рта при наличии зубочелюстных аномалий и деформаций (ЗЧАД) ухудшается, возникают воспалительные явления в тканях пародонта, возрастает поражаемость зубов кариесом [1,3]. В последнее время многие исследователи связывают возникновение и развитие зубочелю-стных аномалий и деформаций (ЗЧАД) у детей с различными соматическими, системными заболеваниями. Кроме того, изучается зависимость эффективности ор-тодонтического лечения от общего состояния организма [2,4,5,6,7].

Мы не встретили данных об особенностях иммунитета на этапах ортодонтического лечения. В связи с чем, исследование параметров клеточного и гуморального звеньев иммунитета у ортодонтических больных является весьма актуальным. Изучение распространенности зубочелюстных аномалий и деформаций у детей и подростков с иммунодефицитными состояниями, выявление периодов иммунологического напряжения на этапах ортодонтического лечения позволит разработать качественно новый подход к профилактике кариеса зубов у этих больных.

Материалы и методы

С целью выявления периодов иммунологического напряжения на этапах ортодонтического лечения были сформированы три группы детей. Первую группу (контрольную) составили дети с ЗЧАД без аппаратного лечения (30 детей). Во вторую группу (группу сравнения 1) вошли дети с ЗЧАД, находящиеся на аппаратурном лечении с использованием съемных ортодонтических

аппаратов (35 детей). Третью группу (группа сравнения 2) составили дети с ЗЧАД, находящиеся на лечении с использованием брекет-системы (37 детей).

Исследование системы клеточного иммунитета включало в себя: а) метод розеткообразования, основанный на взаимодействии мембранных рецепторов Т-лимфоцитов с эритроцитами барана. Визуально это определяется при микроскопии в виде розеток — образований, состоящих из лимфоцитов, к поверхности который присоединены эритроциты. Способность Т-лим-фоцитов крови человека взаимодействовать с эритроцитами крови барана, обусловлена наличием на их поверхности гликопротеиновык Е-рецепторов, которые отражают дифференцированность и функциональную принадлежность Т-клеток; б) метод лазерной проточной цитометрии, позволяющий проводить анализ фенотипа и функциональной активности иммунокомпе-тентных клеток, а также их фракционирование. В работе использован проточный лазерный цитометр FACS Calibur американской компании Becton Dickinson и программа Timbuctu; в) содержание иммуноглобулинов классов A, M, G в сыторотке крови исследовались методом радиальной иммунодиффузии в геле по G. Mancini (1965).

Данные клинико-лабораторных исследований подвергались математико-статистической обработке по методу Стьюдента на ПЭВМ типа IBM PC с использованием пакета статистических программ Excel приложения Microsoft Office для среды Windows. Выиислялись следующие величины: средняя арифметическая простая — М, среднее квадратичное отклонение — s, ошибка