Исследование низкопроцентного мозаицизма гоносом у двух детей с задержкой полового и физического развития: необходимость применения молекулярно-цитогенетических методов

Исследование низкопроцентного мозаицизма гоносом

О О 1

у двух детей с задержкой полового и физического развития: необходимость применения молекулярно-цитогенетических методов

И.А. Демидова, С.Г. Ворсанова, И.Ю. Юров, А.Д. Колотый, О.С. Куринная, М.И. Яблонская, Е.В. Тозлиян, Ю.Б. Юров

Study of low-percentage gonosomal mosaicism in two children with sexual and physical retardation: a need for molecular cytogenetic methods

I.A. Demidova, S.G. Vorsanova, I.Yu. Iourov, A.D. Kolotyi, O.S. Kurinnaya, M.I. Yablonskaya, E.V. Tozliyan, Yu.B. Yurov

Московский НИИ педиатрии и детской хирургии; Научный центр психического здоровья РАМН, Москва

В работе показаны возможности молекулярно-цитогенетических методов диагностики, а именно флюоресцентной гибридизации in situ (FISH), на примере обследования двух детей с различными аномалиями развития и со «скрытыми» низкопроцентными формами мозаицизма гоносом. Выявление «скрытого» низкопроцентного хромосомного мозаицизма и определение доли клеток аномального клона с помощью современных молекулярно-цитогенетических методов может объяснить причину заболевания, определить прогноз и тактику лечения, особенно при мозаичных формах численных аномалий половых хромосом, а также провести корректную медико-генетическую консультацию семьи.

Ключевые слова: дети, аномалии развития, половые хромосомы, молекулярно-цитогенетические исследования, низкопроцентные мозаичные формы аномалий гоносом.

The paper shows the capacities of molecular cytogenetic diagnostic techniques, namely: fluorescence in situ hybridization as exemplified by the examination of 2 children with various malformations and with latent low-percentage gonosomal mosaicism. Detection of latent low-percentage chromosomal mosaicism and estimation of the share of abnormal clone cells by the currently available molecular cytogenetic techniques may explain the cause of the disease, define its prognosis and treatment policy particularly in the mosaic forms of numerical sex chromosomal abnormalities and give a ground for appropriate medical genetic family counseling.

Key words: children, malformations, sex chromosomes, molecular cytogenetic studies, mosaic forms of gonosomal abnormalities.

© Коллектив авторов, 2010

Ros Vestn Perinatol Pediat 2010; 6:36-40

Адрес для корреспонденции: Ворсанова Светлана Григорьевна —д.б.н., проф., зав. лабораторией молекулярной цитогенетики нервно психических заболеваний МНИИ педиатрии и детской хирургии 125412 Москва, ул. Талдомская, д. 2

Демидова Ирина Александровна — к.б.н., в.н.с. той же лаборатории Колотий Алексей Дмитриевич — к.б.н., с.н.с. той же лаборатории Куринная Оксана Сергеевна — н.с. той же лаборатории Юров Юрий Борисович —д.б.н., проф., гл.н.с. той же лаборатории; зав. лабораторией цитогенетики Научного центра психического здоровья РАМН 113152 Москва, Загородное ш., д. 2

Юров Иван Юрьевич — к.б.н., в.н.с. лаборатории молекулярной цитогенетики нервно психических заболеваний МНИИ педиатрии и детской хирургии; в.н.с. лаборатории молекулярной генетики мозга Научного центра психического здоровья РАМН

Яблонская Мария Игоревна — к.м.н., с.н.с. отделения психоневрологии и наследственных заболеваний с нарушением психики МНИИ педиатрии и детской хирургии

Тозлиян Елена Васильевна — к.м.н., врач-эндокринолог того же института

Анеуплоидии половых хромосом или гоносом являются наиболее распространенными хромосомными синдромами после трисомии хромосомы 21. Частота их составляет не менее 0,3% в общей популяции [1, 2]. При этих синдромах довольно часто выявляются мозаичные формы, когда в клетках одной или различных тканей присутствуют две или более клеточные линии с разным хромосомным набором.

Основной задачей при исследовании мозаичных форм численных хромосомных аномалий является эффективное определение доли клеток аномального клона для прогнозирования течения болезни и корректного медико-генетического консультирования семьи. Особые сложности возникают при выявлении низкопроцентного мозаицизма, при котором одна из клеточных линий присутствует в 10% клеток и менее. В этом случае традиционный цитогенетический метод для по-стнатальных исследований кариотипа малоэффективен. Более того, при повторных цитогенетических

Демидова И.А. и соает. Исследование низкопроцентного мозаицизма гоносом у двух детей с задержкой полового и физического развития.

исследованиях в процессе культивирования может наблюдаться селективный отбор клеток с численными аномалиями хромосом или без них вплоть до полной элиминации одного из клонов [1, 3—5]. Однако отсутствие анеуплоидных клеток в последующих исследованиях не говорит об отсутствии анеуплоидии. Выявление «скрытого» хромосомного мозаицизма с помощью современных молекулярно-цитогенетических методов может объяснить причину заболевания, определить прогноз и провести лечебную коррекцию, особенно при мозаичных формах численных аномалий половых хромосом (гоносом). Наиболее эффективным методом для выявления низкопроцентного мозаицизма является метод флюоресцентной гибридизации in situ — FISH, который основан на применении специально подготовленных хромосомоспецифичных ДНК зондов и проведении процедуры диагностики с использованием современной флюоресцентной микроскопии [6—10]. Этот метод дает возможность провести процедуру диагностики на неделящихся интерфазных клетках различных тканей и избежать проблем, связанных с получением хромосомных препаратов.

Цель работы — показать возможности молекуляр-но-цитогенетических методов диагностики на примере обследования двух детей с различными аномалиями развития и со «скрытыми» низкопроцентными формами мозаицизма.

характеристика детей и методы исследования

Объектом исследования стали два ребенка, проходивших обследование в различных отделениях института.

Один из них — мальчик 14 лет, который был направлен в лабораторию молекулярной цитогенетики нервно-психических заболеваний с предположительным диагнозом синдрома Клайнфельтера. У мальчика наблюдались следующие признаки: задержка полового развития, гинекомастия и гипогонадизм.

Другой ребенок, мальчик в возрасте 2 нед был направлен на цитогенетическое исследование со следующими клиническими проявлениями: врожденная микроцефалия, задержка физического развития, дис-пластичные ушные раковины, гипоплазия и гиперте-лоризм сосков, проксимальное расположение I пальцев стоп. В возрасте 6 мес при повторном осмотре ребенка выявлена задержка темпов психомоторного развития.

Для обследования детей были использованы ци-тогенетические и молекулярно-цитогенетические методы исследования. Препараты метафазных хромосом получали из лимфоцитов периферической крови, культивируемых in vitro стандартным методом [11]. Цитогенетический анализ проводили на хромосомных препаратах с использованием светового микроскопа

при увеличении 1125. Хромосомы идентифицировали при помощи дифференциального окрашивания хромосом по длине — G- и C-методы, которые осуществлялись по общепринятым протоколам [12, 13]. В каждом случае анализировали по 30 метафазных пластинок. Помимо хромосомных аномалий в карио-типе учитывали хромосомные варианты и инверсии околоцентромерного гетерохроматина. Хромосомным вариантом считали наличие в одной из хромосом увеличения или уменьшения околоцентромерного гете-рохроматина (С-блока) по сравнению с гомологом, оцениваемого в 1 или 5 баллов. Оценку величины блока С-гетерохроматина проводили полуколичественным методом [14]. Молекулярно-цитогенетическую диагностику проводили с применением FISH и оригинальных хромосомоспецифичных ДНК проб на хромосомы Х и Y [10]. Детекцию флюоресцентных сигналов осуществляли с использованием флюоресцентного микроскопа, оборудованного соответствующим набором фильтров и системой компьютерного анализа изображений (ССD-камерой).

результаты и обсуждение

В результате проведенного цитогенетическо-го исследования у первого ребенка был обнаружен кариотип 45,X,9qh-[2]/46,XY,9qh-[28] (рис. 1, а, б).

а б

И ¡1 « и К I I ]\ U Ii \)

к It }| Ii и •PI N N ч К Л Ц 11 11 П iL 1- 1 4 г +  а

II ИТ! h и *} II Н II |LJ| к

11  1 М ы< Н г- г 1 1 О 4 и Ц Г Н  I- V

в г

Рис. 1. Результаты цитогенетического (а, б) и молекулярно-цитогенетического (в, г) исследования лимфоцитов периферической крови ребенка в возрасте 14 лет.

а—нормальный кариотип (46,XY); б— кариотип без хромосомы Y (45,X); в, г—интерфазныеядра после применения FISH с двумя хромосомоспецифичными ДНК зондами на хромосомы Х и Y (nuc ish(DXZ1x1,DYZ3x0)[24]/(DXZ1x2,DYZ3x1) [15]/(DXZ1x1,DYZ3x2)[3]/(DXZ1x1,DYZ3x1)[958]): хромосомы Х маркированы красными сигналами, хромосомы Y — зелеными сигналами.

Из данных литературы известно, что потеря хромосомы Y из нормального мужского кариотипа в лимфоцитах крови у мужчин происходит значительно реже, чем, например, потеря хромосомы Х у женщин, и у мальчиков в возрасте до 15 лет встречается в 0,05% случаев [15]. Поэтому для уточнения доли аномального клона с потерей хромосомы Y (45, Х), учитывая клиническую картину пробан-да (синдром Клайнфельтера), было осуществлено повторное культивирование клеток крови для получения хромосомных препаратов и проведения молекулярно-цитогенетического исследования, а именно FISH с двумя оригинальными хромосо-моспецифичными ДНК зондами на хромосомы Х и Y. Соотношение клонов клеток после проведения молекулярно-цитогенетической диагностики на ме-тафазных пластинках: 45,X.ish(DXZ1x1,DYZ3x0) [5]/47,XXY.ish(DXZ1x2,DYZ3x1)[1]/46,XY. ish(DXZ1x1,DYZ3x1) 94]. Таким образом, при повторном исследовании метафазных клеток аномальный клон 45,Х был выявлен в 5% клеток, клон 47,XXY, характерный для синдрома Клайнфельтера, — в 1% клеток и нормальный клон — 46,XY — в 94% клеток.

При анализе неделящихся клеток на стадии интерфазы было обнаружено следующее соотношение различных клонов клеток: nuc ish(DXZ1x1,DYZ3x0) [24]/(DXZ1x2,DYZ3x1)[15]/(DXZ1x1,DYZ3x2)[3]/ (DXZ1x1,DYZ3x1)[958]. То есть аномальный клон 45,Х был выявлен в 2,4% клеток, 47,XXY — в 1,5% клеток, 47,XYY — в 0,3% клеток и нормальный клон — 46,XY — в 95,8% клеток (рис. 1, в, г).

При проведении цитогенетического исследования у второго мальчика был обнаружен аналогичный ка-риотип: 45,X,1phqh[1]/46,XY,1phqh[29] (рис. 2, а, б). Как и в первом случае, для уточнения доли аномального клона ребенку было рекомендовано, а затем и осуществлено повторное культивирование лимфоцитов периферической крови для получения хромосомных препаратов и проведения молекулярно-цито-генетического исследования, а именно FISH с двумя оригинальными хромосомоспецифичными ДНК зондами на хромосомы X и Y. Результаты молекулярно-цитогенетической диагностики следующие: 47,XYY. ish(DXZ1x1,DYZ3x2)[4]/46,XY.ish(DXZ1x1,DYZ3x1) [46] (рис. 2, в). При повторном культивировании аномального клона клеток 45, Х выявлено не было, но в то же время был обнаружен аномальный клон клеток 47,XYY (синдром дисомии Y) в 8% клеток. При анализе неделящихся интерфазных клеток было получено следующее соотношение клеточных линий: nuc ish (DXZ1x1,DYZ3x0)[3]/ (DXZ1x1,DYZ3x2)[18]/ (DXZ1x1,DYZ3x1)[979], а именно, аномальный клон 45,Х был выявлен в 0,3% клеток, 47,XYY — в 1,8% клеток и нормальный клон — 46,XY — в 97,9% клеток (рис. 2, г).

Следует отметить, что при интерпретации полу-

и

Ш X»

H X К M .[[ } 11 Ii и П и it я

HT HF T

if ri н л 7 J

lin il MiUliiJLîi JLJLÂ JtJtJL

it H

t

Рис. 2. Результаты цитогенетического (а, б) и молекулярно-цитогенетического (в, г) исследования лимфоцитов периферической крови ребенка в возрасте 2 нед.

а — нормальный кариотип (46,XY); б — кариотип без хромосомы Y (45,X); в — метафазная пластинка после применения FISH с двумя хромосомоспецифичными ДНК зондами на хромосомы Х и Y (47,XYYish(DXZ1x1,DYZ3x2)[4]/46,XY ish(DXZ1x1,DYZ3x1)[46]): одна хромосома Х маркирована красным сигналом и две хромосомы Y — зелеными сигналами; г — интерфазные ядра после применения FISH с двумя хромосомоспецифичными ДНК зондами на хромосомы Х и Y (nuc ish (DXZ1x1,DYZ3x0)[3]/(DXZ1x1,DYZ3x2)[18]/ (DXZ1x1,DYZ3x1)[979]): маркирование то же.

ченных в результате молекулярно-цитогенетического исследования данных у наших пациентов возникли определенные трудности. Международная цитогенети-ческая номенклатура (ISCN, 2009) не отмечает необходимое минимальное количество метафазных или интерфазных клеток с отличным хромосомным набором для постановки диагноза мозаичной формы заболевания. Многие авторы считают, что мозаичные формы численных хромосомных аномалий следует учитывать только в том случае, если в результате исследования обнаружено 6—10% клеток с одинаковым набором хромосом, отличающихся по кариотипу от преобладающей клеточной линии [16, 17]. Известно также, что процент клеток с анеуплоидиями по половым хромосомам в лимфоцитах периферической крови увеличивается с возрастом у лиц обоих полов, но в большей степени это явление выражено у женщин старшего возраста [18, 19]. Для определения возможных клинических последствий низкопроцентного хромосомного мозаицизма возникает необходимость идентификации среднестатистического уровня хромосомных мутаций в норме. Отсутствие таких данных приводит к невозможности постановки диагноза «низкопроцентного хромосомного мозаицизма», который может быть причиной фено-типических проявлений соответствующего заболевания

Демидова И.А. и соавт. Исследование низкопроцентного мозаицизма гоносом у двух детей с задержкой полового и физического развития.

или вызвать сложности интерпретации анализа мозаицизма при пренатальной диагностике [5, 20, 21].

Лабораторией молекулярной цитогенетики нервно-психических заболеваний Московского НИИ педиатрии и детской хирургии совместно с лабораторией цитогенетики Научного центра психического здоровья РАМН было проведено исследование среднестатистического уровня спонтанных хромосомных мутаций, который наблюдается в норме [22, 23]. При анализе более миллиона клеток крови постнатальных образцов было показано, что аутосомная анеуплоидия в норме определяется в 0,73% клеток, а анеуплоидия гоносом — в 1,11%. Учитывая стандартное отклонение от этих величин, подобный уровень хромосомных мутаций следует считать межклеточными геномными вариациями в норме, но не хромосомной аномалией, приводящей к соответствующим фенотипическим проявлениям. В наших случаях у детей была обнаружена анеуплоидия по половым хромосомам от 0,3 до 8%. Следовательно, принимая во внимание результаты проведенных нами исследований, аномальные клеточные линии с процентным содержанием ниже 1,1 можно не учитывать как мозаичный клон.

Таким образом, у первого мальчика при исследовании лимфоцитов периферической крови была выявлена низкопроцентная мозаичная форма численных аномалий гоносом со следующими линиями клеток: 45,Х; 47,KKY и 46,ХY А у второго ребенка обнаружена низкопроцентная мозаичная форма численных аномалий гоносом с линиями клеток 47,ХYY и 46,ХУ

Тем не менее отсутствие аномального клона 45,Х при повторном исследовании лимфоцитов периферической крови с помощью FISH у второго мальчика не может служить основанием для полного исключения у него анеуплоидии по этому клону. Такое явление известно в науке под названием «исчезающий мозаи-цизм». Оно впервые было описано в 1967 г. P. La Marche и соавт. [3]. В этом случае при повторном культивировании может наблюдаться селективный отбор клеток с хромосомными аномалиями или без них. Поэтому в будущем данному ребенку для окончательного решения вопроса о диагнозе рекомендуется проведение FISH диагностики на некультивированных клетках различных тканей (клетки буккального эпителия, фи-бробласты кожи, биоптаты мышечной ткани и др.), в которых процентное соотношение нормальных и аномальных клонов клеток может быть совсем другим.

Помимо мозаичных форм численных аномалий го-носом у обследуемых детей были обнаружены хромосомные варианты: у первого ребенка в виде уменьшения околоцентромерного гетерохроматина хромосомы 9 (9qh-), а у второго — в виде инверсии околоцентро-мерного гетерохроматина хромосомы 1 (1phqh). До сих пор единого взгляда на роль вариантов околоцентро-мерного гетерохроматина в развитии той или иной патологии нет. Считается, что данные участки хромосом

не содержат активных генов. Тем не менее определенные типы экстремальных вариантов хромосом и инверсии околоцентромерного гетерохроматина, по-видимому, при соответствующих обстоятельствах могут оказывать влияние на нарушение функциональной активности генов, находящихся от них в непосредственной близости, — так называемый эффект положения генов [24, 25]. Кроме того, инверсии околоцентро-мерного гетерохроматина, вероятно, могут нарушать и сами последовательности ДНК отдельных генов, расположенных на границе с инвертированным участком. Носители вариантов хромосом 1 и 9 чаще встречаются среди пациентов с различными врожденными пороками развития [26]. Среди детей с задержкой психомоторного и физического развития, врожденными пороками и/или микроаномалиями развития носители экстремальных вариантов гетерохроматиновых районов встречаются с частотой до 24,4% [6, 7, 27], тогда как в нормальной популяции подобные изменения хромосом наблюдаются с частотой 4—6% [28, 29]. По-видимому, вариации в гетерохроматиновых районах хромосом являются характерными для таких форм патологии; эти дети, в том числе и представленные в настоящей работе, составляют группы риска по различным врожденным порокам развития в сочетании с умственной отсталостью и без нее.

заключение

В последние годы появляется все больше работ, указывающих на связь «скрытого» низкопроцентного хромосомного мозаицизма с клиническими проявлениями. Обнаружение даже незначительной доли клеток с хромосомной аномалией может объяснить причину заболевания. В то же время присутствие у больного преобладающей доли нормальных клеток предполагает более благоприятный прогноз течения болезни, а своевременная эффективная диагностика мозаичных форм хромосомных аномалий способствует лечебной коррекции, особенно при таких аномалиях половых хромосом, как синдромы Шерешевского — Тернера, Клайнфельтера, трисомии по хромосмоме Х и дисомии по хромосоме Y. Еще раз следует подчеркнуть, что в настоящее время методический арсенал для определения мозаичных форм численных хромосомных аномалий ограничен, и наиболее адекватным методом молекулярно-цитогенетической диагностики для их выявления является метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH), основанный на использовании хромосомоспецифичных ДНК проб. Этот метод, используемый на неделящихся интерфазных клетках различных тканей, позволяет избежать проблем, связанных с культивированием, и за счет анализа большого числа клеток дает возможность за короткое время получить высокодостоверные результаты [1, 6—8, 10, 20, 21].

Представляемые нами данные могли быть получены исключительно благодаря современным молекулярно-цитогенетическим технологиям, а именно методу FISH. В представленных случаях мы использовали наиболее традиционный материал для постнатальных исследований — лимфоциты периферической крови. При необходимости для более эффективной оценки доли низкопроцентного мозаицизма у больных с помощью

ЛИТЕРАТУРА

1. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б, Чернышев В.Н. Медицинская цитогенетика. М: Медпрактика-М, 2006. 300 с.

2. Hassold T., Hant P. To err (meiotically) is human: the genesis of human aneuploidy // Nat. Rev. Genet. 2001. № 2. P. 280—291.

3. La Marche P.H., Heisler A.B., Kronemer N.S. Dissapearing mosaicism. Suggested mechanism is growth advantage of normal over abnormal cell population // Rhode Island Med. J. 1967.Vol. 50, № 3. P. 184—189.

4. Howard P.J., Cramp C.E., Fryer A.E. Trisomy 1 mosaicism only detected on a direct chromosome preparation in a neonate // Clin. Genet. 1995. Vol. 48, № 6. P. 313—316.

5. Wheeler M, Peakman D, Robinson A., Henry G. 45,X/46,XY mosaicism: contrast of prenatal and postnatal diagnosis // Am. J. Med. Genet. 1988. Vol. 29. P. 565—571.

6. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б, Соловьев И.В. и др. Современные достижения молекулярной цитогенетики в диагностике хромосомной патологии. // Рос. вестн. перинатол. и педиат. 1998. № 1. С. 31—36.

7. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б. Молекулярно-цитогенети-ческая пре- и постнатальная диагностика хромосомной патологии // Вестник РАМН. 1999. № 11. С. 12—15.

8. Соловьев И.В., Ворсанова С.Г., Демидова И.А. и др. Роль мо-лекулярно-цитогенетической диагностики в пост- и пре-натальном выявлении хромосомной патологии // Ультраз-вукова перинатальна дiагностика. 1995. № 6-7. С. 65—70.

9. Vorsanova S.G., Kolotii A.D., Iourov I.Y. et al. Evidence of high frequency of chromosomal mosaicism in spontaneous abortions revealed by interphase FISH analysis // J. Histochem. Cytochem. 2005. Vol. 53. P. 375—380.

10. Yurov Y.B., Soloviev I.V, Vorsanova S.G. et al. High resolution fluorescence in situ hybridization using сyanine and fluorescеin dyes ultra-rapid chromosome detection by directly fluorescently ladeled alphoid DNA probes // Hum. Genet. 1996. Vol. 97. P. 390—398.

11. Hungerford D.A. Leukocytes cultured from small inocula of the blood and the preparation of methaphase chromosomes by treatment of the hypotonic KCl // Stain Techn. 1965. Vol. 40. P. 333—338.

12. Seabright M. A rapid banding technique for human chromosome //Lancet. 1972. № 11. P. 971—972.

13. Sumner A.T. A simple technique for demonstrating centromeric heterochromatin // Exp. Cell Res. 1972. Vol. 75. P. 304—306.

14. Система учета размеров гетерохроматиновых участков 1, 9, 16 и Y / Полиморфизм хромосом у человека. Под ред. А.А. Прокофьевой-Бельговской. М., 1981. C. 245—246.

15. Guttenbach M, Koschorz B, Bernthaler U. et al. Sex chromosome loss and aging: in situ hybridization studies on human interphase nuclei // Am. J. Hum. Genet. 1995. Vol. 57. P. 1143—1150.

16. Peschka B, Leygraaf J., van der Ven K. et al. Type and frequency of chromosome aberrations in 781 couples undergoing intracytoplasmic sperm injection // Hum. Reprod. 1999. Vol. 14. P. 2257—2263.

17. Sonntag B, Meschede D, Ullmann V. et al. Low-level sex

данного метода можно исследовать клетки буккального эпителия, фибробласты кожи, биоптаты мышечной ткани, а когда дети подрастут, — и сперматозоиды. Дополнительные молекулярно-цитогенетические исследования у пациентов с низкопроцентным хромосомным мозаицизмом будут способствовать более эффективной диагностике хромосомной патологии и корректному медико-генетическому консультированию.

chromosome mosaicism in female partners of couples undergoing ICSI therapy does not significantly affect treatment outcome // Hum. Reprod. 2001. Vol. 16. P. 1648—1652.

18. Fitzgerald P.H. A mechanism of X chromosome aneuploidy in lymphocytes of aging women // Humangenetik. 1975. Vol. 28. P. 153—158.

19. Nowinski G.P., Van Dyke D.L, Tilley B.C. et al. The frequency of aneuploidy in cultured lymphocytes is correlated with age and gender but not with reproductive history // Am. J. Hum. Genet. 1990. Vol. 46. P. 1101—1111.

20. Iourov I.Y., Soloviev I.V., Vorsanova S.G. et al. An approach for quantitative assessment of fluorescence in situ hybridization (FISH) signal for applied human molecular cytogenetics // J. Histochem. Cytochem. 2005. Vol. 53. P. 401—408.

21. Iourov I.Y., Vorsanova S.G., Yurov Y.B. Intercellular genomic (chromosomal) variations resulting in somatic mosaicism: mechanisms and consequences // Curr. Genomics. 2006. Vol. 7. P. 435—446.

22. Юров Ю.Б, Ворсанова С.Г., Соловьев И.В., Юров И.Ю. Частота спонтанной мозаичной анеуплоидии у детей: выявление непатологического уровня хромосомного мозаицизма / VII Российский кош-рете «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии»: сборник материалов конгресса. М., 2009. С. 97—98.

23. Юров Ю.Б, Ворсанова С.Г., Соловьев И.В., Юров И.Ю. Онтогенетические вариации уровня спонтанных хромосомных мутаций: использование молекулярных технологий для идентификации непатогенного (фонового) соматического хромосомного мозаицизма / VIII Российский конгресc «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии»: сборник материалов конгресса. М., 2009. С. 102—103.

24. Прокофьева-Бельговская А.А. Гетерохроматические районы хромосом. М.: Наука, 1986. 430 c.

25. Подугольникова О.А., Солониченко В.Г. Цитогенетическое исследование функций вариабельных районов С-гете-рохроматина у человека. Влияние С-гетерохроматина на экспрессию генов // Цитология. 1994. № 11. C. 1035— 1040.

26. Gardner R..J, McCreanor H.K., Parslow M.J., Veale A.M.O. The 1qh+chromosomes harmless? // Clin. Genet. 1974. № 6. P. 383—393.

27. Демидова И.А., Ворсанова С.Г., Юров И.Ю. и др. Цитоге-нетические и молекулярно-цитогенетические исследования недифференцированных форм умственной отсталости у детей // Рос. вест. перинатол. и педиат. 2009. № 1. С. 69—76.

28. Hsu L., Benn O., Tannenbaum H. et al. Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16 and Y in major ethnic groups. A large prenatal study // Am. J. Med. Genet. 1987. Vol. 26. P. 95—101.

29. Bhasin M.K. Human population cytogenetics: a review // Int. J. Hum. Genet. 2005. Vol. 5. P. 83—152.

Поступила 27.04.10