Способ и композиция для лечения рака, уничтожения метастатических раковых клеток и профилактики метастазов рака, используя антитела к конечным продуктам повышенного гликирования ( AGE)
METHOD AND COMPOSITION FOR TREATING CANCER, DESTROYING METASTATIC CANCER CELLS AND PREVENTING METASTASES OF CANCER, USING ANTIBODIES TO END PRODUCTS OF INCREASED GLYCATION (AGE)

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Ink4a
[01] Стареющие клетки представляют собой клетки, которые частично функциональны или нефункциональны и которые находятся в состоянии остановки пролиферации. Старение является четко различимым состоянием клетки и связано с биомаркерами, такими как активация биомаркера p16 («p16»), и экспрессией β-галактозидазы. Старение начинается с повреждения или стресса (такого как избыточная стимуляция факторами роста) клеток. Повреждение или стресс отрицательно влияют на митохондриальную ДНК в клетках, вызывая выработку в них свободных радикалов, которые вступают в реакцию с сахарами в клетке с образованием метилглиоксаля (МГ). В свою очередь МГ реагирует с белками или липидами с образованием конечных продуктов повышенного гликирования (AGE). МГ реагирует с компонентом белков лизином с образованием карбоксиметиллизина, который представляет собой AGE. AGE также образуются в результате неферментативного взаимодействия сахаров в крови с внешними клеточными белками.
[02] Повреждение или стресс митохондриальной ДНК также вызывает развитие ответа на повреждение ДНК, который индуцирует в клетке выработку белков, блокирующих клеточный цикл. Такие блокирующие белки препятствуют делению клетки. Длительное повреждение или стресс вызывает выработку mTOR, который, в свою очередь, активирует синтез белка и инактивирует распад белка. Дальнейшая стимуляция клеток приводит к запрограммированной гибели клеток (апоптозу).
et al.
Oncogene
Ink4a
[03] p16 представляет собой белок, который участвует в регуляции клеточного цикла путем ингибирования S-фазы. Он может быть активирован во время старения или в ответ на различные виды стресса, такие как повреждение ДНК, окислительный стресс или воздействие лекарственных препаратов. p16 обычно рассматривается как белок-супрессор роста опухолей, который вызывает старение клетки в ответ на повреждение ДНК и необратимо препятствует переходу клетки в гиперпролиферативное состояние. Однако в отношении упомянутых выше данных существует некоторая неясность, поскольку некоторые опухоли демонстрируют избыточную экспрессию p16, в то время как другие демонстрируют пониженную экспрессию. Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что избыточная экспрессия р16 в некоторых опухолях обусловлена дефектным белком ретинобластомы («Rb»). p16 действует на Rb, ингибируя тем самым S-фазу, и Rb подавляет p16, создавая отрицательную обратную связь. Дефектный Rb не способен ингибировать S-фазу и подавлять p16, что приводит к избыточной экспрессии p16 в клетках с чрезмерной пролиферацией. Romagosa, C. , p16 overexpression in cancer: a tumor suppressor gene associated with senescence and high-grade tumors, , Vol. 30, 2087-2097 (2011).
et al
PLOS One
et al.
Cancer Res
[04] Известно, что стареющие клетки стимулируют размножение раковых клеток. Стареющие клетки связаны с секрецией многих факторов, участвующих в межклеточной передаче сигналов, включая провоспалительные факторы; секреция таких факторов была названа секреторным фенотипом, связанным со старением, или SASP. Результаты одного из исследований показали, что стареющие мезенхимальные стволовые клетки стимулируют пролиферацию и миграцию клеток рака молочной железы путем секреции IL-6 (Di, G-h. . IL-6 Secreted from Senescent Mesenchymal Stem Cells Promotes Proliferation and migration of Breast Cancer Cells, , Vol. 9, 11, e113572 (2014)). Результаты другого исследования показали, что стареющие фибробласты человека увеличивают рост опухолей за счет секреции матриксной металлопротеиназы (Liu, D.  Senescent Human Fibroblasts Increase the Early Growth of Xenograft Tumors via Matrix Metalloproteinase Secretion, , Vol. 67, 3117-3126 (2007)).
Aging Cell
et al.
Int J Cancer
[05] Стареющие клетки секретируют активные формы кислорода («ROS») как часть SASP. Полагают, что ROS играют важную роль в поддержании старения клеток. Секреция ROS создает эффект «свидетеля», когда стареющие клетки индуцируют старение в соседних клетках: ROS создают именно то клеточное повреждение, которое, как известно, активирует экспрессию p16, что приводит к старению (Nelson, G., A senescent cell bystander effect: senescence-induced senescence, , Vo. 11, 345-349 (2012)). Путь p16/Rb ведет к индукции ROS, которая, в свою очередь, активирует дельта-изоформу протеинкиназы C, создавая контур положительной обратной связи, который дополнительно усиливает выработку ROS, что содействует поддержанию необратимой остановки клеточного цикла; более того, было высказано предположение, что воздействие ROS на раковые клетки может быть эффективным для лечения рака путем индукции остановки перехода между фазами клеточного цикла в клетках с чрезмерной пролиферацией (Rayess, H. , Cellular senescence and tumor suppressor gene p16, , Vol. 130, 1715-1725 (2012)).
et al
Biochem Biophys Res Commun.
et al.
Diabetes Vascular Disease Research
[06] Конечные продукты повышенного гликирования (AGE, также называемые AGE-модифицированными белками или конечными продуктами гликирования) вырабатываются в результате неферментативной реакции сахаров с боковыми цепями белков (Ando, K. ., Membrane Proteins of Human Erythrocytes Are Modified by Advanced Glycation End Products during Aging in the Circulation, , Vol. 258, 123, 125 (1999)). Этот процесс начинается с обратимой реакции между восстанавливающим сахаром и аминогруппой с образованием основания Шиффа, из которого впоследствии в результате перегруппировки Амадори образуется ковалентно связанный продукт. После образования продукт перегруппировки Амадори подвергается дальнейшей перегруппировке с образованием AGE. Гипергликемия, вызванная сахарным диабетом (СД), и окислительный стресс стимулируют указанную посттрансляционную модификацию мембранных белков (Lindsey JB, , ʺReceptor For Advanced Glycation End-Products (RAGE) and soluble RAGE (sRAGE): Cardiovascular Implications,ʺ , Vol. 6(1), 7-14, (2009)). AGE связывают с несколькими патологическими состояниями, включая осложнения диабета, воспаление, ретинопатию, нефропатию, атеросклероз, инсульт, дисфункцию эндотелиальных клеток и нейродегенеративные расстройства (Bierhaus A, ʺAGEs and their interaction with AGE-receptors in vascular disease and diabetes mellitus. I. The AGE concept,ʺ Cardiovasc Res, Vol. 37(3), 586-600 (1998)).
et al
et al
et al.
N
J. Biol. Chem.
Ε
[07] AGE-модифицированные белки также являются маркером стареющих клеток. Такая связь между конечным продуктом гликирования и старением хорошо известна в данной области техники. См., например, Gruber, L. (WO 2009/143411, 26 Nov. 2009), Ando, K. et al. (Membrane Proteins of Human Erythrocytes Are Modified by Advanced Glycation End Products during Aging in the Circulation, Biochem Biophys Res Commun., Vol. 258, 123, 125 (1999)), Ahmed, E.K. et al. (ʺProtein Modification and Replicative Senescence of WI-38 Human Embryonic Fibroblastsʺ Aging Cells, vol. 9, 252, 260 (2010)), Vlassara, H. et al. (Advanced Glycosylation Endproducts on Erythrocyte Cell Surface Induce Receptor-Mediated Phagocytosis by Macrophages, J. Exp. Med., Vol. 166, 539, 545 (1987)) и Vlassara et al. (ʺHigh-affinity-receptor-mediated Uptake and Degradation of Glucose-modified Proteins: A Potential Mechanism for the Removal of Senescent Macromoleculesʺ Proc. Natl. Acad. Sci. USAI, Vol. 82, 5588, 5591 (1985)). Помимо этого, в работе Ahmed, E.K. . указано, что конечные продукты гликирования являются «одной из основных причин спонтанного повреждения клеточных и внеклеточных белков» (Ahmed, E.K. ., см. выше, стр. 353). Соответственно, накопление конечных продуктов повышенного гликирования связано со старением. Поскольку образование конечных продуктов повышенного гликирования связывают с окислением, накопление конечных продуктов повышенного гликирования может быть результатом образования ROS в стареющих клетках (Fu, M.-X., , The Advanced Glycation End Product, -(Carboxymehtyl)lysine, Is a Product of both Lipid Peroxidation and Glycoxidation Reactions, , Vol. 271, 9982-9986 (1996)).
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[08] Согласно первому аспекту настоящее изобретение относится к способу лечения рака, уничтожения метастатических раковых клеток, уничтожения потенциально злокачественных неопластических клеток и/или профилактики метастазов рака, включающему введение субъекту композиции, содержащей антитело к AGE.
[09] Согласно второму аспекту настоящее изобретение относится к способу лечения рака, уничтожения метастатических раковых клеток, уничтожения потенциально злокачественных неопластических клеток и/или профилактики метастазов рака, включающему введение композиции, содержащей первое антитело к AGE и второе антитело к AGE. Второе антитело к AGE и первое антитело к AGE являются различными.
[010] Согласно третьему аспекту настоящее изобретение относится к способу лечения субъекта, имеющего рак, уничтожения метастатических раковых клеток, уничтожения потенциально злокачественных неопластических клеток и/или профилактики метастазов рака, включающему первое введение антитела к AGE; затем исследование эффективности первого введения при лечении рака у субъекта, уничтожении метастатических раковых клеток, уничтожении потенциально злокачественных неопластических клеток и/или предотвращении метастазов рака; затем второе введение антитела к AGE.
[011] Согласно четвертому аспекту настоящее изобретение относится к применению антитела к AGE для изготовления лекарственного средства для лечения рака, уничтожения метастатических раковых клеток, уничтожения потенциально злокачественных неопластических клеток и/или профилактики метастазов рака.
[012] Согласно пятому аспекту настоящее изобретение относится к композиции, содержащей антитело к AGE для применения для лечения рака, уничтожения метастатических раковых клеток, уничтожения потенциально злокачественных неопластических клеток и/или профилактики метастазов рака.
[013] Согласно шестому аспекту настоящее изобретение относится к композиции для лечения рака, уничтожения метастатических раковых клеток, уничтожения потенциально злокачественных неопластических клеток и/или профилактики метастазов рака, содержащей первое антитело к AGE, второе антитело к AGE и фармацевтически приемлемый носитель. Первое антитело к AGE и второе антитело к AGE являются различными.
[014] Согласно седьмому аспекту настоящее изобретение относится к способу диагностики метастатического рака, включающему детектирование иммунного комплекса, содержащего антитело к AGE, связанное с клеткой, экспрессирующей модификацию AGE.
[015] Согласно восьмому аспекту настоящее изобретение относится к иммунному комплексу, содержащему антитело к AGE, связанное с метастатической раковой клеткой. Метастатическая раковая клетка экспрессирует модификацию AGE.
[016] Согласно девятому аспекту настоящее изобретение относится к набору для диагностики метастатического рака, содержащему антитело к AGE, контрольный образец и необязательно реагент, который связывается с антителом к AGE.
[017] ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[018] Термин «пептид» означает молекулу, состоящую из 2-50 аминокислот.
[019] Термин «белок» означает молекулу, состоящую более чем из 50 аминокислот.
et al
[020] Термины «конечный продукт повышенного гликирования», «AGE», «AGE-модифицированный белок или пептид», «конечный продукт гликирования» и «антиген AGE» относятся к модифицированным белкам или пептидам, которые образуются в результате реакции сахаров с боковыми цепями белков, которые дополнительно перегруппировываются и образуют необратимые поперечные сшивки. Этот процесс начинается с обратимой реакции между восстанавливающим сахаром и аминогруппой с образованием основания Шиффа, которое затем в результате перегруппировки Амадори образует ковалентно связанный продукт. После образования продукт перегруппировки Амадори подвергается дальнейшей перегруппировке с получением AGE. AGE-модифицированные белки и антитела к AGE-модифицированным белкам описаны в патенте США №5702704 автором Bucala («Bucala») и US 6380165 коллективом авторов Al-Abed . («Al-Abed»). Гликированные белки или пептиды, которые не претерпели необходимой перегруппировки для образования AGE, такие как N-дезоксифруктозиллизин, обнаруженный на гликированном альбумине, не являются AGE. AGE могут быть выявлены на основании присутствия модификаций AGE (также называемых эпитопами AGE или фрагментами AGE), таких как 2-(2-фуроил)-4(5)-(2-фуранил)-1Н-имидазол («FFI»); 5-гидроксиметил-1-алкилпиррол-2-карбальдегид («пирралин»); 1-алкил-2-формил-3,4-дигликозилпиррол («AFGP»), не флуоресцентная модель AGE; карбоксиметиллизин; и пентозидин. ALI, еще один AGE, описан в работе Al-Abed.
[021] «Антитело, которое связывается с AGE-модифицированным белком на клетке», «анти-AGE антитело» или «антитело к AGE» означает антитело или другой белок, который связывается с AGE-модифицированным белком или пептидом, и содержит константную область антитела, причем указанный белок или пептид, который был модифицирован AGE, представляет собой белок или пептид, который обычно обнаруживается на поверхности клетки, предпочтительно клетки млекопитающего, более предпочтительно клетки человека, кошки, собаки, лошади, верблюда (например, верблюда или альпаки), крупного рогатого скота, овцы или козы. «Антитело, которое связывается с AGE-модифицированным белком на клетке», «анти-AGE антитело» или «антитело к AGE» не включает антитело или другой белок, который связывается с аналогичной специфичностью и селективностью с AGE-модифицированным белком или пептидом, и тем же самым белком или пептидом, не модифицированным AGE (то есть присутствие модификации AGE не увеличивает связывание). AGE-модифицированный альбумин не является AGE-модифицированным белком на клетке, поскольку альбумин не является белком, обычно встречающимся на поверхности клеток. «Антитело, которое связывается с AGE-модифицированным белком на клетке», «анти-AGE антитело», или «антитело к AGE» включает только те антитела, которые приводят к удалению, разрушению или гибели клетки. В область настоящего изобретения также включены антитела, которые конъюгированы, например, с токсином, лекарственным препаратом или другим химическим веществом или частицей. Предпочтительно антитела являются моноклональными антителами, однако также допустимы поликлональные антитела.
Ink4a
[022] Термин «стареющая клетка» означает клетку, которая находится в состоянии остановки пролиферации и экспрессирует один или более биомаркеров старения, таких как активация p16 или экспрессия связанной со старением β-галактозидазы.
[023] Термин «вариант» означает нуклеотидную, белковую или аминокислотную последовательность, отличную от конкретно идентифицированных последовательностей, в которой один или более нуклеотидов, белков или аминокислотных остатков удалены, заменены или добавлены. Варианты могут представлять собой природные аллельные варианты или неприродные варианты. Варианты идентифицированных последовательностей могут сохранять некоторые или все функциональные характеристики идентифицированных последовательностей.
[024] Термин «процент (%) идентичности последовательностей» определяют как процент аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны аминокислотным остаткам в эталонной полипептидной последовательности, после выравнивания последовательностей и введения пробелов, если это необходимо, для достижения максимального процента идентичности последовательностей, и без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательностей. Сопоставление для определения процента идентичности аминокислотных последовательностей может быть достигнуто различными способами, используя общедоступное компьютерное программное обеспечение, такое как BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Предпочтительно значения процента идентичности последовательностей (%) рассчитывают с использованием компьютерной программы для сравнения последовательностей ALIGN-2. Компьютерная программа для сравнения последовательностей ALIGN-2 общедоступна от Genentech, Inc. (Южный Сан-Франциско, Калифорния, США) или может быть скомпилирована из исходного кода, который был подан с документацией пользователя в Бюро по защите авторских прав США и зарегистрирован под номером регистрации прав на объект авторского права США TXU510087. Программа ALIGN-2 должна быть скомпилирована для использования в операционной системе UNIX, включая цифровой UNIX V4.0D. Все параметры сравнения последовательностей задаются программой ALIGN-2 и не меняются.
[025] В тех случаях, когда ALIGN-2 используется для сравнения аминокислотных последовательностей, идентичность последовательностей (%) конкретной аминокислотной последовательности A в отношении или с конкретной аминокислотной последовательностью B (что можно перефразировать как конкретная аминокислотная последовательность A, которая имеет или обладает определенным процентом идентичности аминокислотной последовательности в отношении, с или в сравнении с конкретной аминокислотной последовательностью B), рассчитывается следующим образом: 100 умножить на долю X/Y, где X это количество аминокислотных остатков, оцененных как идентичные совпадения программой выравнивания последовательностей ALIGN-2 при сопоставлении этой программой A и B, и где Y это общее количество аминокислотных остатков в B. Если длина аминокислотной последовательности A не равна длине аминокислотной последовательности B, то процент идентичности аминокислотной последовательности А с B не будет равен проценту идентичности аминокислотной последовательности B с A. Если не указано иное, в настоящей заявке все значения процента идентичности аминокислотных последовательностей получают с использованием компьютерной программы ALIGN-2.
[026] Термин «иммунный комплекс» означает комбинацию антитела, связанного с антигеном. Иммунный комплекс также может называться «комплекс антитело-антиген».
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[027] На ФИГ. 1 представлен график зависимости ответа от времени в эксперименте со связыванием антитела.
[028] На ФИГ. 2 представлен набор для диагностики метастазов злокачественного новообразования.
in vivo
[029] На ФИГ. 3 представлен график изменения нормированного объема опухоли в ходе исследования в условиях  для изучения действия антитела к AGE на рост опухоли, метастатический потенциал и кахексию.
in vivo
[030] На ФИГ. 4 представлен график изменения нормированной массы тела мышей в ходе исследования в условиях  для изучения действия антитела к AGE на рост опухоли, метастатический потенциал и кахексию.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
C. elegans
et al.
Developmental Cell
et al.
Cell Reports
[031] Результаты недавних исследований на  указывают на то, что активно пролиферирующие клетки не являются инвазивными и что инвазивные клетки, такие как метастазирующие раковые клетки, не способны к пролиферации и должны находиться в состоянии подавленного клеточного цикла (Matus , Invasive Cell Fate Requires G1 Cell-Cycle arrest and Histone Deacetylase-Mediated Changes in Gene Expression, , Vol. 35, 162-174 (2015)). Другие исследователи обнаружили, что образование ROS может индуцировать метастазирование раковых клеток (Porporato, P. E.,  A Mitochondrial Switch Promotes Tumor Metastasis, , Vol. 8, 754-766 (2014)).
[032] Остановка смены фаз клеточного цикла и выработка ROS придают метастазирующим раковым клеткам многие характеристики стареющих клеток, которые, как ожидается, могут включать присутствие AGE-модифицированных белков на поверхности клетки. Следовательно, AGE-модифицированные белки обеспечивают антиген, который может быть мишенью при применении антител, для поиска и уничтожения метастазирующих раковых клеток. Введение антител к AGE может уничтожить метастазирующие раковые клетки, обеспечивая тем самым лечение злокачественного новообразования. Введение антител к AGE может предотвратить образование метастазов у пациента, имеющего рак, и может применяться профилактически для предотвращения распространения рака.
in situ
[033] Потенциально злокачественные неопластические образования, такие как себорейный кератоз, актинический кератоз и карцинома , имеют много характеристик стареющих клеток, таких как экспрессия p16, которые, как ожидается, могут включать присутствие AGE-модифицированных белков на поверхности клеток. Следовательно, AGE-модифицированные белки обеспечивают антиген, который может быть мишенью при применении антител, для поиска и уничтожения потенциально злокачественных неопластических клеток. Введение антител к AGE может уничтожить потенциально злокачественные неопластические клетки, предотвращая тем самым рак. Введение антител к AGE можно применять профилактически для предотвращения развития рака у пациента.
[034] Антитело, которое связывается с AGE-модифицированным белком на клетке («анти-AGE антитело» или «антитело к AGE»), известно в данной области техники. Примеры включают антитела, которые описаны в патентах США №5702704 (Bucala) и №6380165 (Al-Abed et al.). Примеры включают антитело, которое связывается с одним или более AGE-модифицированными белками, содержащими модификацию AGE, такую как FFI, пирралин, AFGP, ALI, карбоксиметиллизин, карбоксиэтиллизин и пентозидин, а также смеси указанных антител. Предпочтительно антитело связывается с белками, модифицированными карбоксиметиллизином. Предпочтительно антитело является неиммуногенным у животного, у которого оно будет использовано, например, неиммуногенным у человека; животных-компаньонов, включая кошек, собак и лошадей; и коммерчески важных животных, таких как верблюды (или альпака), рогатый скот (крупный рогатый скот), овцы и козы. Более предпочтительно антитело содержит константную область антител из того же вида, как и антитела животного, для снижения иммунного ответа на антитело, т.е. антитело гуманизировано (для человека), содержит фрагменты антител кошачьих (для кошек), содержит фрагменты антител собачьих (для собак), содержит фрагменты антител лошадиных (для лошадей), содержит фрагменты антител верблюдовых (для верблюда или альпаки), содержит фрагменты антител крупного рогатого скота (для крупного рогатого скота), содержит фрагменты антител овец (для овец) или коз (для коз). Наиболее предпочтительно антитело идентично антителу животного, у которого оно будет использовано (за исключением вариабельной области), такому как антитело человека, кошачье антитело, собачье антитело, конское антитело, верблюжье антитело, бычье антитело, овечье антитело или козье антитело. Более подробная информация о константных областях и других частях антител для указанных животных представлена ниже. Предпочтительно антитело представляет собой моноклональное антитело (мАт), однако также допустимы поликлональные антитела.
[035] Особенно предпочтительные антитела к AGE представляют собой антитела, которые связываются с белками или пептидами, которые содержат модификацию AGE, представляющую собой карбоксиметиллизин или карбоксиэтиллизин. Карбоксиметиллизин (также известный как N(эпсилон)-(карбоксиметил)лизин, N(6)-карбоксиметиллизин или 2-амино-6-(карбоксиметиламино)гексановая кислота) и карбоксиэтиллизин (также известный как N(эпсилон)-(карбоксиэтил)лизин) обнаружены на белках или пептидах и липидах как результат окислительного стресса и химического гликирования. CML- и CEL-модифицированные белки или пептиды распознаются рецептором RAGE, который экспрессируется на различных клетках. CML и CEL были хорошо изучены, и продукты, связанные с CML и CEL, являются коммерчески доступными. Например, Cell Biolabs, Inc. продает антигены CML-BSA, поликлональные антитела к CML, наборы для иммуноблоттинга CML и наборы для конкурентного ИФА CML (www.cellbiolabs.com/cml-assays), а также антигены CEL-BSA и наборы для конкурентного ИФА CEL (www.cellbiolabs.com/cel-n-epsilon-carboxyethyl-lysine-assays-and-reagents). Особенно предпочтительное антитело содержит вариабельную область коммерчески доступного мышиного антитела к конечному продукту гликирования, которое вырабатывается к карбоксиметиллизину, конъюгированного с гемоцианином фиссуреллы, мАт к карбоксиметиллизину (клон 318003), доступного от R&D Systems, Inc. (Миннеаполис, Миннесота, США; каталожный номер MAB3247), которое модифицировано для включения константной области человека (или константной области животного, которому оно будет введено). Коммерчески доступные антитела, такие как антитело к карбоксиметиллизину, соответствующее каталожному номеру MAB3247 от R&D Systems, Inc., могут быть предназначены для диагностических целей и могут содержать материал, который не подходит для использования у животных или человека. Предпочтительно коммерчески доступные антитела очищают и/или выделяют перед использованием у животных или человека для удаления токсинов или другого потенциально опасного материала.
k
k
d
back
D
-3
-3
-3
-3
-1
-6
-6
-6
-6
-6
-6
-6
[036] Антитело к AGE имеет низкую скорость диссоциации из комплекса антитело-антиген или  (также называемую  или скорость обратной реакции), предпочтительно не более 9×10, 8×10, 7×10 или 6×10 (с). Антитело к AGE обладает высокой аффинностью в отношении AGE-модифицированного белка клетки, которая может быть выражена как низкая константа диссоциации K не более 9×10, 8×10, 7×10, 6×10, 5×10, 4×10 или 3×10 (М). Предпочтительно связывающие свойства антитела к AGE сходны, аналогичны или лучше таковых для мАт к карбоксиметиллизину (клон 318003), доступного от R&D Systems, Inc. (Миннеаполис, Миннесота, США, каталожный номер MAB3247), как показано на ФИГ. 1.
[037] Антитело к AGE может разрушать AGE-модифицированные клетки посредством антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ). АЗКЦ представляет собой механизм опосредованной клетками иммунной защиты, при котором эффекторная клетка иммунной системы активно лизирует клетку-мишень, поверхностные мембранные антигены которой были связаны со специфичными антителами. АЗКЦ может быть опосредована природными клетками-киллерами (NK-клетками), макрофагами, нейтрофилами или эозинофилами. Эффекторные клетки связываются с частью Fc связанного антитела. Введение NK-клеток, таких как клетки NK92 (линия клеток, доступная от NantKwest, Калвер-Сити, Калифорния, США) совместно или после введения антител к AGE может усилить активность комплимента и, следовательно, эффективность уничтожения метастазирующих раковых клеток антителами к AGE. Антитело к AGE также может разрушать AGE-модифицированные клетки посредством комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ). При КЗЦ каскад комплемента иммунной системы инициируется в результате связывания антитела с антигеном-мишенью.
[038] Антитело к AGE может быть конъюгировано с агентом, который вызывает разрушение AGE-модифицированных клеток. Подходящие агенты могут представлять собой токсин, цитотоксический агент, магнитные наночастицы и магнитные спин-вихревые диски.
et al.
Current Opinion in Microbiology
[039] Токсин, например, порообразующие токсины (PFT) (Aroian R. , ʺPore-Forming Toxins and Cellular Non-Immune Defenses (CNIDs),ʺ , 10:57-61 (2007)), конъюгированный с антителом к AGE, может быть введен пациенту путем инъекции, чтобы селективно нацелено воздействовать и удалить AGE-модифицированные клетки. Антитело к AGE распознает и связывается с AGE-модифицированными клетками. Затем токсин вызывает образование пор на поверхности клетки и последующее удаление клетки посредством осмотического лизиса.
[040] Магнитные наночастицы, конъюгированные с антителом к AGE, могут быть введены пациенту путем инъекции для нацеленного воздействия и удаления AGE-модифицированных клеток. Магнитные наночастицы могут быть нагреты путем применения магнитного поля для селективного удаления AGE-модифицированных клеток.
[041] В качестве альтернативы магнитные спин-вихревые диски, которые намагничиваются только при применении магнитного поля для того чтобы избежать самоагрегации, которая может блокировать кровеносные сосуды, начинают вращаться при применении магнитного поля, вызывая нарушение целостности мембраны клеток-мишеней. Магнитные спин-вихревые диски, конъюгированные с антителами к AGE, специфично нацелено воздействуют на AGE-модифицированные типы клеток, не удаляя другие клетки.
[042] Антитела, как правило, содержат две тяжелые цепи и две легкие цепи полипептидов, соединенные с образованием молекулы «Y»-формы. Константная область определяет механизм, используемый для нацеливания на антиген. Аминокислотная последовательность на конце «Y» (вариабельная область) варьируется среди различных антител. Такая изменчивость обеспечивает специфичность антитела в отношении связываемого антигена. Вариабельная область, которая включает концы легкой и тяжелой цепей, далее подразделяется на гипервариабельные области (HV, иногда также называемые участками, определяющими комплементарность, или CDR) и каркасные (FR) участки. Если антитела получают рекомбинантными способами, то можно получить одно антитело с вариабельными областями (или участками, определяющими комплементарность), которые связываются с двумя разными антигенами, причем каждый конец «Y» является специфичным в отношении одного из антигенов; такие антитела называют биспецифичными антителами.
[043] Гуманизированное антитело к AGE по настоящему изобретению может содержать аминокислотную последовательность константной области человека, представленную в SEQ ID NO:22. Участки, определяющие комплементарность, тяжелой цепи гуманизированного антитела к AGE могут содержать одну или более из последовательностей белка, представленных в SEQ ID NO:23 (CDR1H), SEQ ID NO:24 (CDR2H) и SEQ ID NO:25 (CDR3H). Участки, определяющие комплементарность, легкой цепи гуманизированного антитела к AGE могут содержать одну или более последовательностей белка, представленных в SEQ ID NO:26 (CDR1L), SEQ ID NO:27 (CDR2L) и SEQ ID NO:28 (CDR3L),
[044] Тяжелая цепь иммуноглобулина G1 человека (Homo sapiens) может иметь или может включать белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:1. Вариабельная область тяжелой цепи может содержать или может включать белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:2. Участки, определяющие комплементарность, вариабельной области тяжелой цепи (SEQ ID NO:2), представлены в последовательностях SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42 и SEQ ID NO:43. Легкая каппа-цепь человека (Homo sapiens) иммуноглобулина G1 может содержать или может включать белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:3. Вариабельная область легкой каппа-цепи может содержать или может включать белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:4. Необязательно остаток аргинина (Arg или R) в положении 128 последовательности, представленной в SEQ ID NO:4, может отсутствовать. Участки, определяющие комплементарность, вариабельной области легкой цепи (SEQ ID NO:4), представлены в последовательностях SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45 и SEQ ID NO:46. Вариабельные области могут быть оптимизированы по кодонам, синтезированы и клонированы в векторы экспрессии, содержащие константные области иммуноглобулина G1 человека. Помимо этого вариабельные области могут применяться для гуманизации антител, отличных от антител человека.
[045] Тяжелая цепь антитела может кодироваться последовательностью ДНК, приведенной в SEQ ID NO:12, которая представляет собой тяжелую цепь мышиного иммуноглобулина G2b к AGE. Белковая последовательность тяжелой цепи мышиного иммуноглобулина G2b к AGE, кодируемой последовательностью, представленной в SEQ ID NO:12, приведена в последовательности SEQ ID NO:16. Вариабельная область мышиного антитела представлена в SEQ ID NO:20, что соответствует положениям 25-142 из последовательности, приведенной в SEQ ID NO:16. Тяжелая цепь антитела альтернативно может кодироваться последовательностью ДНК, приведенной в SEQ ID NO:13, которая представляет собой тяжелую цепь химерного иммуноглобулина G1 человека к AGE. Белковая последовательность тяжелой цепи химерного иммуноглобулина G1 человека к AGE, кодируемой последовательностью, представленной в SEQ ID NO:13, приведена в SEQ ID NO:17. Химерный иммуноглобулин человека к AGE содержит мышиную вариабельную область, представленную в последовательности SEQ ID NO:20 в положениях 25-142. Легкая цепь антитела может кодироваться последовательностью ДНК, приведенной в SEQ ID NO:14, которая представляет собой легкую каппа-цепь мышиного антитела к AGE. Белковая последовательность легкой каппа-цепи мышиного антитела к AGE, кодируемой последовательностью, представленной в SEQ ID NO:14, приведена в SEQ ID NO:18. Вариабельная область мышиного антитела представлена в SEQ ID NO:21, что соответствует положениям 21-132 из последовательности SEQ ID NO:18. Легкая цепь антитела может альтернативно кодироваться последовательностью ДНК, приведенной в SEQ ID NO:15, которая представляет собой химерную легкую каппа-цепь антитела человека к AGE. Белковая последовательность химерной легкой каппа-цепи антитела человека к AGE, кодируемой последовательностью, представленной в SEQ ID NO:15, приведена в SEQ ID NO:19. Химерный иммуноглобулин человека к AGE содержит вариабельную область мыши, представленную в последовательности SEQ ID NO:21 в положениях 21-132.
[046] Гуманизированное антитело к AGE по настоящему изобретению может содержать или может включать одну или более гуманизированных тяжелых цепей или гуманизированных легких цепей. Гуманизированная тяжелая цепь может кодироваться последовательностью ДНК, представленной в SEQ ID NO:30, 32 или 34. Белковые последовательности гуманизированных тяжелых цепей, кодируемых последовательностями, представленными в SEQ ID NO:30, 32 и 34, приведены в SEQ ID NO:29, 31 и 33, соответственно. Гуманизированная легкая цепь может кодироваться последовательностью ДНК, представленной в SEQ ID NO:36, 38 или 40. Белковые последовательности гуманизированных легких цепей, кодируемые последовательностями, представленными в SEQ ID NO:36, 38 и 40, приведены в SEQ ID NO:35, 37 и 39, соответственно. Предпочтительно в гуманизированном антителе к AGE максимизировано количество последовательности человека при сохранении исходной специфичности антитела. Может быть сконструировано полное гуманизированное антитело, которое содержит тяжелую цепь, содержащую белковую последовательность, выбранную из последовательностей, приведенных в SEQ ID NO:29, 31 и 33, и легкую цепь, содержащую белковую последовательность, выбранную из последовательностей, приведенных в SEQ ID NO:35, 37 и 39.
[047] Особенно предпочтительные антитела к AGE могут быть получены путем гуманизации мышиных моноклональных антител к AGE. Мышиные моноклональные антитела к AGE имеют белковую последовательность тяжелой цепи, представленную в SEQ ID NO:47 (белковая последовательность вариабельной области представлена в SEQ ID NO:52), белковую последовательность легкой цепи, представленную в SEQ ID NO:57 (белковая последовательность вариабельной области представлена в SEQ ID NO:62). Предпочтительная гуманизированная тяжелая цепь может иметь белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50 или SEQ ID NO:51 (белковые последовательности вариабельных областей гуманизированных тяжелых цепей представлены в SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:55 и SEQ ID NO:56, соответственно). Предпочтительная гуманизированная легкая цепь может иметь белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60 или SEQ ID NO:61 (белковые последовательности вариабельных областей гуманизированных легких цепей представлены в SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65 и SEQ ID NO:66, соответственно). Предпочтительно гуманизированное моноклональное антитело к AGE состоит из тяжелой цепи, имеющей белковую последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50 и SEQ ID NO:51, и легкой цепи, имеющей белковую последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60 и SEQ ID NO:61. Гуманизированные моноклональные антитела к AGE, состоящие из указанных белковых последовательностей, могут иметь улучшенное связывание и/или улучшенную активацию иммунной системы, что приводит к большей эффективности.
Equus caballus
Canis familiaris
Canis familiaris
Felis catus
[048] Белковая последовательность антитела из вида, отличного от человека, может быть модифицирована с целью включения вариабельной области тяжелой цепи, содержащей последовательность, приведенную в SEQ ID NO:2, или легкой каппа-цепи, содержащей последовательность, приведенную в SEQ ID NO:4. Вид, отличный от человека, может представлять собой животного-компаньона, такого как домашняя кошка или домашняя собака, или домашний скот, такой как крупный рогатый скот, лошадь или верблюд. Предпочтительно вид, отличный от человека, не является мышью. Тяжелая цепь иммуноглобулина гамма-4 лошади (Equus caballus) может содержать или может включать белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:5 (номер доступа в EMBL/GenBank AY445518). Тяжелая цепь иммуноглобулина-дельта лошади () может содержать или может включать белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:6 (номер доступа в EMBL/GenBank AY631942). Тяжелая цепь иммуноглобулина A собаки () может содержать или может включать белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:7 (номер доступа в GenBank L36871). Тяжелая цепь иммуноглобулина E собаки () может содержать или может включать белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:8 (номер доступа в GenBank L36872). Тяжелая цепь иммуноглобулина G2 кошки () может содержать или может включать белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:9 (номер доступа в DDBJ/EMBL/GenBank KF811175).
Camelus dromedarius
Camelus bactrianus
Lama glama
Lama pacos
Lama vicugna
Vicugna pacos
Lama guanicoe
Camelus dromedarius
Camelus dromedarius
[049] Животные из семейства верблюдовых, такие как верблюды (и ), ламы (,  и ), альпаки () и гуанако (), имеют уникальное антитело, которое не встречается у других млекопитающих. В дополнение к обычным иммуноглобулинам G, состоящим из тетрамеров тяжелых и легких цепей, верблюдовые также имеют иммуноглобулины G, содержащие тяжелую цепь, но лишенные легких цепей, которые существуют как димеры тяжелой цепи. Эти антитела известны как антитела, состоящие только из тяжелой цепи, HCAbs, однодоменные антитела или sdAbs, и вариабельная область антитела верблюдовых, состоящего только из тяжелой цепи, известна как VHH. В антителах верблюдовых, состоящих только из тяжелой цепи, отсутствует домен CH1 тяжелой цепи и присутствует шарнирная область, которая не встречается у других видов. Вариабельная область однодоменного антитела арабского верблюда () может содержать или может включать белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:10 (номер доступа в GenBank AJ245148). Вариабельная область тяжелой цепи тетрамерного иммуноглобулина арабского верблюда () может содержать или может включать белковую последовательность, представленную в SEQ ID NO:11 (номер доступа в GenBank AJ245184).
[050] Помимо верблюдовых, антитела, состоящие только из тяжелой цепи, также встречаются у хрящевых рыб, таких как акулы, скаты и ромбовые скаты. Этот тип антитела известен как новый иммуноглобулиновый антигенный рецептор или IgNAR, и вариабельный домен IgNAR известен как VNAR. IgNAR существует в виде димеров двух идентичных тяжелых цепей, каждая из которых состоит из одного вариабельного домена и пяти константных доменов. Как и у верблюдовых, данный тип антител лишен легкой цепи.
[051] Белковые последовательности дополнительных видов, отличных от человека, могут быть легко найдены в онлайн базах данных, таких как международная база данных по иммуногенетике (www.imgt.org), Европейский институт биоинформатики (www.ebi.ac.uk), Банк ДНК Японии (ddbj.nig.ac.jp/arsa) или Национальный информационный центр по биотехнологии (www.ncbi.nlm.nih.gov).
[052] Антитело к AGE или его вариант может содержать вариабельную область тяжелой цепи, которая имеет по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:20, включая их посттрансляционные модификации. Вариабельная область, которая имеет по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность последовательности, может содержать замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, однако антитело к AGE, содержащее указанную последовательность, сохраняет способность связываться с AGE. Замены, вставки или делеции могут возникать в областях, расположенных за пределами вариабельной области.
[053] Антитело к AGE или его вариант могут содержать вариабельную область легкой цепи, которая имеет по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:21, включая их посттрансляционные модификации. Вариабельная область, которая имеет по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность последовательности, может содержать замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, однако антитело к AGE, содержащее указанную последовательность, сохраняет способность связываться с AGE. Замены, вставки или делеции могут возникать в областях, расположенных за пределами вариабельной области.
[054] В другом варианте антитело может содержать участки, определяющие комплементарность, из коммерчески доступного мышиного антитела к конечному продукту гликирования, которое вырабатывается к карбоксиметиллизину, конъюгированного с гемоцианином (CML-KLH), мАт к карбоксиметиллизину (клон 318003), доступного от R&D Systems, Inc (Миннеаполис, Миннесота, США, каталожный номер MAB3247).
[055] Антитело может содержать или может включать константные области, которые позволяют разрушать клетки-мишени с помощью иммунной системы субъекта.
[056] Также могут быть использованы смеси антител, которые связываются более чем с одним типом AGE из AGE-модифицированных белков.
[057] Также могут быть использованы биспецифичные антитела, которые представляют собой антитела к AGE, направленные к двум разным эпитопам. Подходящие антитела будут содержать вариабельную область (или участок, определяющий комплементарность) из одного антитела к AGE и вариабельную область (или участок, определяющий комплементарность) из другого антитела.
2
2
H
[058] Фрагменты антител можно использовать вместо целых антител. Например, иммуноглобулин G может быть разделен на более мелкие фрагменты с помощью ферментативного расщепления. Расщепление папаином отделяет N-концевую часть дисульфидных мостиков между тяжелыми цепями с получением фрагментов Fab. Фрагменты Fab содержат легкую цепь и один из двух N-концевых доменов тяжелой цепи (также известный как фрагмент Fd). Расщепление пепсином отделяет С-концевую часть дисульфидных мостиков между тяжелыми цепями с получением фрагментов F(ab'). Фрагменты F(ab') содержат легкие цепи и два N-концевых домена, соединенных дисульфидными мостиками. Расщепление пепсином также приводит к образованию фрагмента Fv (вариабельный фрагмент) и фрагмента Fc (кристаллизующийся фрагмент). Фрагмент Fv содержит два N-концевых вариабельных домена. Фрагмент Fc содержит домены, которые взаимодействуют с рецепторами иммуноглобулинов на клетках и с начальными элементами каскада комплемента. Пепсин также может расщеплять иммуноглобулин G до третьей константной области тяжелой цепи (C3) с образованием большого фрагмента F(abc) и небольшого фрагмента pFc'. В другом варианте фрагменты антител могут быть получены рекомбинантными способами.
+
+
2
1
[059] Если необходимы дополнительные антитела, они могут быть получены с использованием известных способов. Например, выработка поликлональных антител (ПАТ) может быть индуцирована у млекопитающего-хозяина путем введения одной или более инъекций иммуногена и, если необходимо, адъюванта. Как правило, иммуноген (и адъювант) вводят млекопитающему с помощью подкожной или внутрибрюшинной инъекции. Иммуноген может представлять собой AGE-модифицированный белок клетки, такой как AGE-антитромбин III, AGE-кальмодулин, AGE-инсулин, AGE-церулоплазмин, AGE-коллаген, AGE-катепсин B, AGE-альбумин, такой как AGE-бычий сывороточный альбумин (AGE-BSA), AGE-сывороточный альбумин человека или овальбумин, AGE-кристаллин, AGE-активатор плазминогена, AGE-белок плазматической мембраны клеток эндотелия, AGE-альдегидредуктаза, AGE-трансферрин, AGE-фибрин, AGE-медь/цинк-содержащая СОД, AGE-апоB, AGE-фибронектин, AGE-панкреатическая рибоза, AGE-апоA-I и II, AGE-гемоглобин, AGE-Na/K-АТФаза, AGE-плазминоген, AGE-миелин, AGE-лизоцим, AGE-иммуноглобулин, AGE-транспортирующий глюкозу белок эритроцитов, AGE-β-N-ацетилгексокиназа, AGE-апоE, AGE-белок клеточной мембраны эритроцитов, AGE-альдозоредуктаза, AGE-ферритин, AGE-спектрин эритроцитов, AGE-алкогольдегидрогеназа, AGE-гаптоглобин, AGE-тубулин, AGE-гормон щитовидной железы, AGE-фибриноген, AGE-β-микроглобулин, AGE-сорбитолдегидрогеназа, AGE-α-антитрипсин, AGE-карбонатдегидратаза, AGE-РНКаза, AGE-липопротеин низкой плотности, AGE-гексокиназа, AGE-апоC-I, AGE-гемоглобин, такой как AGE-гемоглобин человека, AGE-альбумин, такой как AGE-бычий сывороточный альбумин (AGE-БСА) и AGE-сывороточный альбумин человека, AGE-липопротеин низкой плотности (AGE-LDL) и AGE-коллаген IV. В качестве AGE-антигенов также могут быть использованы AGE-модифицированные клетки, такие как AGE-модифицированные эритроциты, целые, лизированные или частично расщепленные. Примеры адъювантов включают полный адъювант Фрейнда, монофосфориллипид A, синтетический дикориномиколат трегалозы, гидроксид алюминия (квасцы), белки теплового шока HSP 70 или HSP96, эмульсию сквалена, содержащую монофосфориллипид A, α2-макроглобулин и поверхностно-активные вещества, включая масляные эмульсии, плюроновые полиолы, полианионы и динитрофенол. Для улучшения иммунного ответа иммуноген может быть конъюгирован с полипептидом, который является иммуногенным у хозяина, таким как гемоцианин фиссуреллы (KLH), сывороточный альбумин, бычий тиреоглобулин, холерный токсин, нестойкий энтеротоксин, частицы диоксида кремния или ингибитор трипсина сои. Предпочтительный конъюгат иммуногена представляет собой AGE-KLH. В другом варианте ПАТ могут быть получены у кур, вырабатывающих молекулы IgY.
[060] Моноклональные антитела (мАт) также могут быть получены путем иммунизации хозяина или лимфоцитов хозяина, сбора секретирующих мАт (или потенциально секретирующих) лимфоцитов, слияния полученных лимфоцитов с иммортализованными клетками (например, клетками миеломы) и отбора тех клеток, которые секретируют желаемое мАт. Могут быть использованы другие методики, такие как методика EBV-гибридомы. Методики получения химерных антител с помощью сплайсинга генов, кодирующих вариабельные области антител, с генами константных областей иммуноглобулина человека (или другого животного), позволяют получать «химерные антитела», которые по существу являются антителами человека (гуманизированными) или по существу «превращенными» в антитела других животных (например, кошки, собаки, лошади, верблюда или альпаки, крупного рогатого скота, овцы или козы) на уровне аминокислот. Если необходимо, мАт могут быть очищены от культуральной среды или асцитной жидкости с помощью стандартных методик, таких как хроматография на носителе белок A-сефароза или гидроксилапатит, гель-электрофорез, диализ, осаждение сульфатом аммония или аффинная хроматография. Помимо этого, моноклональные антитела человека могут быть получены путем иммунизации трансгенных мышей, содержащих третью копию транс-локусов IgG человека и подавленные эндогенные локусы Ig мыши, или с использованием трансгенных мышей, несущих гены человека. Гуманизированные моноклональные антитела и их фрагменты также могут быть получены с помощью технологий фагового дисплея.
[061] «Фармацевтически приемлемый носитель» включает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и замедляющие всасывание агенты и тому подобное, совместимые с фармацевтическим введением. Предпочтительные примеры подходящих носителей или разбавителей включают воду, физиологический раствор, растворы Рингера и раствор декстрозы. В композиции также могут быть включены дополнительные активные соединения. Растворы и суспензии, используемые для парентерального введения, могут включать стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, физиологический раствор, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт или метилпарабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; буферы, такие как буферы на основе ацетатов, цитратов или фосфатов, и агенты для корректировки тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. pH можно корректировать с помощью кислот или оснований, таких как хлористоводородная кислота или гидроксид натрия. Парентеральный препарат может быть заключен в ампулы, одноразовые шприцы или многодозные флаконы из стекла или пластика.
[062] Фармацевтические композиции, подходящие для инъекций, включают стерильные водные растворы или дисперсии для немедленного приготовления стерильных растворов или дисперсии для инъекций. Фармацевтические композиции антител, подходящие для инъекций, могут содержать различные вспомогательные вещества. Носители, подходящие для внутривенного введения, включают физиологический раствор, бактериостатическую воду, CREMOPHOR EL  (BASF, Парсиппани, Нью-Джерси, США) или забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS). Во всех случаях композиция должна быть стерильной и должна быть жидкой так, чтобы ее можно было ввести с использованием шприца. Подходящие композиции должны быть стабильными во время производства и хранения и должны быть защищены от загрязнения микроорганизмами, такими как бактерии и грибы. Различные антибактериальные и противогрибковые агенты, например, парабены, хлорбутанол, фенол, аскорбиновая кислота и тимеросал, могут быть загрязнены микроорганизмами. Композиция может содержать изотонические агенты, такие как сахара, полиспирты, такие как манит, сорбит, и хлорид натрия. Композиции, которые могут замедлять всасывание, содержат такие агенты как моностеарат алюминия и желатин. Стерильные растворы для инъекций могут быть получены путем включения антител и, необязательно, других терапевтических компонентов, в необходимом количестве в подходящий растворитель с одним или комбинацией ингредиентов, если требуется, с последующей стерилизацией. Способы получения стерильных твердых веществ для приготовления стерильных растворов для инъекций включают вакуумную сушку и сушку вымораживанием с получением твердого вещества.
[063] Для введения путем ингаляции антитела могут быть доставлены в виде аэрозольного спрея из распылителя или контейнера под давлением, который содержит подходящий пропеллент, например, газ, такой как диоксид углерода. Антитела также могут быть доставлены путем ингаляции в виде сухого порошка, например, с использованием платформы для доставки ингаляционных лекарственных препаратов iSPERSE™ (PULMATRIX, Лексингтон, Массачусетс, США). Использование антител к AGE, которые представляют собой куриные антитела (IgY), может быть неиммуногенным у различных животных, включая человека, при введении путем ингаляции.
[064] Местное применение может быть эффективным при различных видах рака и потенциально злокачественных неопластических образований, присутствующих на коже, например, меланомах, себорейном кератозе и актиническом кератозе. Композиции для местного применения могут быть в виде кремов или лосьонов.
in vivo
[065] Соответствующий уровень дозировки каждого типа антитела обычно составит от приблизительно 0,01 до 500 мг на кг массы тела пациента. Предпочтительно уровень дозировки составит от приблизительно 0,1 до приблизительно 250 мг/кг; более предпочтительно от приблизительно 0,5 до приблизительно 100 мг/кг. Подходящий уровень дозировки может составлять от приблизительно 0,01 до 250 мг/кг, от приблизительно 0,05 до 100 мг/кг или от приблизительно 0,1 до 50 мг/кг. В пределах указанного диапазона дозировка может составлять от 0,05 до 0,5, от 0,5 до 5 или от 5 до 50 мг/кг. Несмотря на то, что каждый тип антитела можно вводить по схеме от 1 до 4 раз в сутки, например, один или два раза в сутки, антитела обычно имеют длительный период полувыведения в условиях . Соответственно, каждый тип антитела можно вводить один раз в сутки, один раз в неделю, один раз каждые две или три недели, один раз в месяц или один раз каждые 60-90 дней.
[066] Субъект, которому вводят антитело к AGE, может пройти обследование, чтобы определить, было ли лечение рака эффективным путем исследования распространения рака в различные части тела пациента, в частности, в лимфатические узлы. Может быть использован любой подходящий диагностический тест, такой как биопсия, эндоскопия, анализ крови или диагностическая визуализация, такая как рентгенография или КТ. Диагностический тест также может включать детектирование антител к AGE. Введение антитела и последующее обследование можно повторять до достижения желаемого терапевтического результата. Аналогичным образом, субъект может пройти обследование, чтобы определить, было ли лечение потенциально злокачественного неопластического образования эффективным на основании уменьшения размера или исчезновения неопластического образования.
[067] Стандартные лекарственные формы могут быть получены, чтобы облегчить введение и улучшить единообразие доз. Стандартная дозированная форма относится к физически дискретным единицам, подходящим для введения в виде однократных доз для субъекта, подлежащего лечению, содержащим терапевтически эффективное количество одного или более типов антител в комбинации с необходимым фармацевтическим носителем. Предпочтительно стандартная лекарственная форма находится в герметичном контейнере и является стерильной.
[068] Любое млекопитающее, у которого может развиваться метастатический рак, можно лечить с применением способов, описанных в настоящем документе. Человек является предпочтительным млекопитающим для лечения. Другие млекопитающие, которые могут получить лечение, включают мышей, крыс, коз, овец, коров, лошадей и животных-компаньонов, таких как собаки или кошки. Субъект, нуждающийся в лечении, может быть выявлен с помощью диагностики рака. Виды рака, которые особенно подвержены метастазированию, включают рак легкого, меланому, рак толстой кишки, рак почек, рак предстательной железы, рак шейки матки, рак мочевого пузыря, ректальный рак, рак пищевода, рак печени, рак полости рта и горла, множественную миелому, рак яичников и рак желудка. Лечение могут получить пациенты с метастатическим раком. Лечение также может быть назначено пациентам, страдающим раком, но до момента выявления каких-либо метастазов, чтобы предотвратить образование метастазов. Аналогичным образом, любое млекопитающее, у которого может развиться потенциально злокачественное неопластическое образование, может получить лечение с применением способов, описанных в настоящем документе. Человек является предпочтительным млекопитающим для лечения. Другие млекопитающие, которые могут получить лечение, включают мышей, крыс, коз, овец, коров, лошадей и животных-компаньонов, таких как собаки или кошки. Субъект, нуждающийся в лечении, может быть выявлен с помощью диагностики потенциально злокачественного неопластического образования.
[069] Особенно предпочтительная группа для лечения включает субъектов, у которых не могут быть использованы стандартные способы лечения рака, такие как хирургическое вмешательство, лучевая терапия или химиотерапия. Пациент с метастатическим раком или подверженный риску развития метастазов рака может быть не способен перенести определенные способы лечения рака из-за других диагнозов, физических состояний или осложнений. Например, беременные женщины не могут получать лучевую терапию из-за риска причинить вред плоду. Пожилые или ослабленные пациенты, такие как те, которые страдают раковой кахексией, могут не быть подходящими кандидатами для хирургического вмешательства вследствие риска не пережить инвазивную процедуру. Пациенты с уже подавленной иммунной системой или хронической инфекцией могут быть не способы получить химиотерапию, поскольку многие химиотерапевтические препараты наносят вред иммунной системе.
[070] Антитела к AGE можно применять в процессах клеточной очистки, таких как иммунопэннинг и иммуноадсорбция. Процессы очистки можно применять для выделения желательных или нежелательных клеток из культур тканей, клеточных культур или крови. Клеточная очистка может быть использована при трансплантациях, таких как трансплантация костного мозга, или переливаниях, таких как переливание крови. Клеточная очистка особенно полезна при трансплантации аутологичных стволовых клеток во время химиотерапии для удаления метастазирующих злокачественных клеток и концентрирования полезных стволовых клеток. Иммунопэннинг или иммуноадсорбция с применением антитела к AGE могут обеспечить выделение метастазирующего рака из культуры ткани, культуры клеток или образца крови.
[071] Антитела к AGE можно использовать для диагностики метастазов рака. Иммунный комплекс (также известный как комплекс антитело-антиген), содержащий антитело к AGE, связанное с метастатической раковой клеткой, экспрессирующей AGE-модифицированные белки, представляет собой уникальный аналит, который может прогнозировать или указывать на метастатический рак. Специфичное связывание антител к AGE с метастазирующими раковыми клетками может обеспечить детектирование метастазов рака на субклинических уровнях. Диагностические антитела к AGE можно применять для детектирования циркулирующих метастатических раковых клеток, которые вызывают риск образования метастазов в новом месте. В другом варианте диагностические антитела к AGE можно применять для исследования клеток, полученных из определенного места, чтобы определить присутствие метастатических раковых клеток. Биопсия может включать сбор клеток из определенной части тела, которая подвержена известному риску накопления метастатических раковых клеток, такой как лимфатические узлы, легкие, печень, мозг или кости, или из части тела, в которой подозревают присутствие метастазов вследствие других симптомов, таких как подозрительный комок. Антитела к AGE можно применять в любом диагностическом способе, в котором применяют антитела для детектирования аналита, представляющего интерес. Например, иммунный комплекс можно детектировать с использованием подходящей методики визуализации после прикрепления метки к антителам, такой как флуоресцентная метка или радиоактивная метка; с использованием цитологических методик, таких как иммунофлуоресценция, проточная цитометрия или сортировка клеток с активированной флуоресценцией (FACS); с использованием биохимических методик, таких как иммунологические количественные исследования, особенно твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), Вестерн-блоттинг или иммунопреципитация; или с использованием методик клеточной очистки, таких как иммунопэннинг.
200
210
220
230
240
250
[072] На ФИГ. 2 представлен набор  для диагностики метастазов рака. Набор может содержать антитело к AGE , контроль  и необязательно реагент  для детектирования антитела к AGE. Антитело к AGE, контроль и необязательный реагент могут поставляться в любом подходящем контейнере, таком как бутылки, ампулы, конверты, пробирки, флаконы, колбы или шприцы. Антитело к AGE и/или реагент необязательно могут быть помечены, например, флуоресцентной меткой, радиоактивной меткой или золотой частицей. Контроль может представлять собой нормальную сыворотку от животного, у которого было получено вторичное антитело, раствор, содержащий известное количество белка или пептида, модифицированного AGE, или фиксированные или консервированные клетки, которые проявляют модификацию AGE. Примеры реагентов для детектирования антитела к AGE включают вторичные антитела, такие как поликлональное антитело к белку человека, полученное у осла и помеченное родамином. Набор может быть необязательно размещен в контейнере . Набор может необязательно включать печатные инструкции . Предпочтительно содержимое набора является стерильным и готово к использованию.
[073] Набор может необязательно включать контейнер для размещения ингредиентов набора. Контейнер может быть выполнен из жесткого, прочного материала, такого как пластик, или может быть гибким, например, в виде мешка или мягкой коробки.
[074] Набор может необязательно включать инструкции по использованию. Инструкции могут быть предоставлены в виде печатных инструкций или в электронном формате, например, на USB-накопителе (Universal Serial Bus - универсальная последовательная проводная шина), на защищенной цифровой (SD) карте или размещены через Интернет и доступны через код быстрого ответа (QR).
[075] Наборы необязательно могут содержать дополнительные диагностические материалы или оборудование, например, буферы, фиксаторы, блокирующие растворы, ингибиторы протеаз, субстраты для анализа, такие как предметные стекла и/или покровные стекла для микроскопа, планшеты для микротитрования и реагенты для экстракции клеток, такие как детергенты и растворы детергентов.
[076] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности SEQ ID NO:1, представлена ниже:
[077] Положения 16-133 вышеуказанной аминокислотной последовательности соответствуют последовательности, представленной в SEQ ID NO:2. Положения 46-50 вышеуказанной аминокислотной последовательности соответствуют последовательности, представленной в SEQ ID NO:41. Положения 65-81 вышеуказанной аминокислотной последовательности соответствуют последовательности, представленной в SEQ ID NO 42. Положения 114-122 вышеуказанной аминокислотной последовательности соответствуют последовательности, представленной в SEQ ID NO:43.
[078] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности SEQ ID NO:3, представлена ниже:
[079] Положения 16-128 вышеуказанной аминокислотной последовательности соответствуют последовательности, представленной в SEQ ID NO:4. Необязательно остаток аргинина (Arg или R) в положении 128 из последовательности, представленной в SEQ ID NO:4, может отсутствовать. Положения 39-54 вышеуказанной аминокислотной последовательности соответствуют последовательности, представленной в SEQ ID NO:44. Положения 70-76 вышеуказанной аминокислотной последовательности соответствуют последовательности, представленной в SEQ ID NO:45. Положения 109-117 вышеуказанной аминокислотной последовательности соответствуют последовательности, представленной в SEQ ID NO:46.
[080] Последовательность ДНК, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:12, представлена ниже:
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGCTGCAGCCAGGTGCCGAGCTCGTGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGCTGGCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGCTGAAGCAGAGGCCAGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCGAGATCTCCCCCACCAACGGCAGAGCCTACTACAACGCCCGGTTCAAGTCCGAGGCCACCCTGACCGTGGACAAGTCCTCCAACACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCCCTGACCTCTGAGGCCTCCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGCTTACGGCAACTACGAGTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCTGTGGCTAAGACCACCCCTCCCTCCGTGTACCCTCTGGCTCCTGGCTGTGGCGACACCACCGGATCCTCTGTGACCCTGGGCTGCCTCGTGAAGGGCTACTTCCCTGAGTCCGTGACCGTGACCTGGAACTCCGGCTCCCTGTCCTCCTCCGTGCACACCTTTCCAGCCCTGCTGCAGTCCGGCCTGTACACCATGTCCTCCAGCGTGACAGTGCCCTCCTCCACCTGGCCTTCCCAGACCGTGACATGCTCTGTGGCCCACCCTGCCTCTTCCACCACCGTGGACAAGAAGCTGGAACCCTCCGGCCCCATCTCCACCATCAACCCTTGCCCTCCCTGCAAAGAATGCCACAAGTGCCCTGCCCCCAACCTGGAAGGCGGCCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCCAACATCAAGGACGTGCTGATGATCTCCCTGACCCCCAAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCGAGGACGACCCTGACGTGCAGATCAGTTGGTTCGTGAACAACGTGGAAGTGCACACCGCCCAGACCCAGACACACAGAGAGGACTACAACAGCACCATCAGAGTGGTGTCTACCCTGCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGTCCGGCAAAGAATTCAAGTGCAAAGTGAACAACAAGGACCTGCCCAGCCCCATCGAGCGGACCATCTCCAAGATCAAGGGCCTCGTGCGGGCTCCCCAGGTGTACATTCTGCCTCCACCAGCCGAGCAGCTGTCCCGGAAGGATGTGTCTCTGACATGTCTGGTCGTGGGCTTCAACCCCGGCGACATCTCCGTGGAATGGACCTCCAACGGCCACACCGAGGAAAACTACAAGGACACCGCCCCTGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTACTTCATCTACTCCAAGCTGAACATGAAGACCTCCAAGTGGGAAAAGACCGACTCCTTCTCCTGCAACGTGCGGCACGAGGGCCTGAAGAACTACTACCTGAAGAAAACCATCTCCCGGTCCCCCGGCTAG
[081] Последовательность ДНК, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:13, представлена ниже:
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGCTGCAGCCAGGTGCCGAGCTCGTGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGCTGGCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGCTGAAGCAGAGGCCAGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCGAGATCTCCCCCACCAACGGCAGAGCCTACTACAACGCCCGGTTCAAGTCCGAGGCCACCCTGACCGTGGACAAGTCCTCCAACACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCCCTGACCTCTGAGGCCTCCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGCTTACGGCAACTACGAGTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCTGTGGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGATAG
[082] Последовательность ДНК, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:14, представлена ниже:
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGACCCCTCTGTCCCTGCCTGTGTCTCTGGGCGACCAGGCCTCCATCTCCTGCCGGTCTAGACAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCCCCCAAGCTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACAGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACCTGGGCCTGTACTTCTGCAGCCAGTCCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGGCAGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTGA
[083] Последовательность ДНК, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:15, представлена ниже:
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGACCCCTCTGTCCCTGCCTGTGTCTCTGGGCGACCAGGCCTCCATCTCCTGCCGGTCTAGACAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCCCCCAAGCTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACAGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACCTGGGCCTGTACTTCTGCAGCCAGTCCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA
[084] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:16, представлена ниже:
MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVQLLQPGAELVKPGASVKLACKASGYLFTTYWMHWLKQRPGQGLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSEATLTVDKSSNTAYMQLSSLTSEASAVYYCARAYGNYEFAYWGQGTLVTVSVAKTTPPSVYPLAPGCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPESVTVTWNSGSLSSSVHTFPALLQSGLYTMSSSVTVPSSTWPSQTVTCSVAHPASSTTVDKKLEPSGPISTINPCPPCKECHKCPAPNLEGGPSVFIFPPNIKDVLMISLTPKVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTIRVVSTLPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPSPIERTISKIKGLVRAPQVYILPPPAEQLSRKDVSLTCLVVGFNPGDISVEWTSNGHTEENYKDTAPVLDSDGSYFIYSKLNMKTSKWEKTDSFSCNVRHEGLKNYYLKKTISRSPG*
[085] Остаток аланина в положении 123 вышеуказанной аминокислотной последовательности необязательно может быть заменен остатком серина. Остаток тирозина в положении 124 вышеуказанной аминокислотной последовательности необязательно может быть заменен остатком фенилаланина. Положения 25-142 вышеуказанной аминокислотной последовательности соответствуют последовательности, приведенной в SEQ ID NO:20. SEQ ID NO:20 может необязательно содержать замены в положениях 123 и 124. SEQ ID NO:20 может необязательно содержать один дополнительный остаток лизина после концевого остатка валина.
[086] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:17, представлена ниже:
MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVQLLQPGAELVKPGASVKLACKASGYLFTTYWMHWLKQRPGQGLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSEATLTVDKSSNTAYMQLSSLTSEASAVYYCARAYGNYEFAYWGQGTLVTVSVASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG*
[087] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:18, представлена ниже:
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPKLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPPTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC*
[088] Положения 21-132 вышеуказанной аминокислотной последовательности соответствуют последовательности, приведенной в SEQ ID NO:21.
[089] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:19, представлена ниже:
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPKLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
[090] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:22, представлена ниже:
[091] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:23, представляет собой SYTMGVS.
[092] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:24, представляет собой TISSGGGSTYYPDSVKG.
[093] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:25, представляет собой QGGWLPPFAX, где X может представлять собой любую природную аминокислоту.
[094] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:26, представляет собой RASKSVSTSSRGYSYMH.
[095] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:27, представляет собой LVSNLES.
[096] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:28, представляет собой QHIRELTRS.
[097] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:29, представляет собой MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNQKFQGRVTMTVDKSTNTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAYGNYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG.
[098] Последовательность ДНК, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:30, представляет собой:
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAGGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCGAGATCTCCCCTACCAACGGCAGAGCCTACTACAACAGAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGACAAGTCCACCAACACCGTGTACATGGAACTGTCCTCCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGCCTACGGCAACTACGATTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCCTCTGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCGGATAGTAA.
[099] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:31, представляет собой: MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNAKFQGRVTMTVDKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAYGNYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG.
[0100] Последовательность ДНК, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:32, представляет собой:
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAGGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCGAGATCTCCCCTACCAACGGCAGAGCCTACTACAACCAAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGACAAGTCCACCAACACCGCTTACATGGAACTGTCCTCCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGCCTACGGCAACTACGATTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCCTCTGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCGGATAGTAA.
[0101] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:33, представляет собой:
MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNAKFQGRVTMTVDKSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARAYGNYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG.
[0102] Последовательность ДНК, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:34, представляет собой:
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAGGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCGAGATCTCCCCTACCAACGGCAGAGCCTACTACAACCAAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGACAAGTCCATCAACACCGCTTACATGGAACTGTCCAGACTGCGGAGCGATGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGCCTACGGCAACTACGATTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCCTCTGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCGGATAGTAA
[0103] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:35, представляет собой:
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVNSNGNTFLQWYQQRPGQSPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGGGTVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.
[0104] Последовательность ДНК, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:36, представляет собой:
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGTCCCCTCTGTCCCTGCCTGTGACCCTGGGACAGCCTGCCTCCATCTCCTCAGATCCTCCCAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCAGCAGCGGCCTGGCCAGAGCCCCAGACTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCTCCCAGAGCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCGGAGGCACCAAGTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA.
[0105] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:37, представляет собой:
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYQQRPGQSPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGGGTVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.
[0106] Последовательность ДНК, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:38, представляет собой:
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGTCCCCTCTGTCCCTGCCTGTGACCCTGGGACAGCCTGCCTCCATCTCCTCAGATCCAGGCAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCAGCAGCGGCCTGGCCAGAGCCCCAGACTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCTCCCAGAGCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCGGAGGCACCAAGTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA.
[0107] Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:39, представляет собой:
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQSPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVNSNGNTFLQWYHQRPGQPPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGAGKDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGQGTLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.
[0108] Последовательность ДНК, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:40, представляет собой:
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGTCCCCTCTGTCCAGTCCTGTGACCCTGGGACAGCCTGCCTCCATCTCCTCAGATCCTCCCAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCACCAGCGGCCTGGCCAGCCTCCCAGACTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACGATTTTCCGGCTCTGGCGCTGGCAAGGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCTCCCAGAGCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCCAGGGCACCAACTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA.
[0109]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:47, представляет собой:
MGWTLVFLFLLSVTAGVHSQVQLLQPGAELVKPGASVKLACKASGYLFTTYWMHWLKQRPGQGLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSEATLTVDKSSNTAYMQLSSLTSEASAVYYCARSFGNYEFAYWQGTLVTVSVASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK.
[0110]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:48, представляет собой:
MGWTLVFLFLLSVTAGVHSEVQLLESGAEAKKPGASVKLSCKASGYLFTTYWMHWVHQAPGQRLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK.
[0111]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:49, представляет собой:
MGWTLVFLFLLSVTAGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQRLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK.
[0112]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:50, представляет собой:
MGWTLVFLFLLSVTAGVHSQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK.
[0113]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:51, представляет собой:
MGWTLVFLFLLSVTAGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCEASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSFGNYEFAYWQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK.
[0114]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:52, представляет собой:
QVQLLQPGAELVKPGASVKLACKASGYLFTTYWMHWLKQRPGQGLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSEATLTVDKSSNTAYMQLSSLTSEASAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSV.
[0115]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:53, представляет собой:
EVQLLESGAEAKKPGASVKLSCKASGYLFTTYWMHWVHQAPGQRLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSS.
[0116]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:54, представляет собой:
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQRLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSS.
[0117]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:55, представляет собой:
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSS.
[0118]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:56, представляет собой:
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCEASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSS.
[0119]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:57, представляет собой:
MVSSAQFLGLLLLCFQGTRCDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPKLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.
[0120]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:58, представляет собой:
MVSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIVMTQTPLSLPVTLGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWLQQRPGQPPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLTISRVEAEDVGIYFCSQSTHVPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.
[0121]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:59, представляет собой:
MVSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPQLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEPEDVGVYYCSQSTHVPPTFGGGTKVEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.
[0122]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:60, представляет собой:
MVSSAQFLGLLLLCFQGTRCDVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWFQQRPGQSPRRLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSDTDFTLRISRVEAEDVGLYYCSQSTHVPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.
[0123]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:61, представляет собой:
MVSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWLLQKPGQPPQLLIYKVSLRFSGVPNRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCSQSTHVPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.
[0124]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:62, представляет собой:
DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPKLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPPTFGGGTKLEIK.
[0125]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:63, представляет собой:
DIVMTQTPLSLPVTLGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWLQQRPGQPPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLTISRVEAEDVGIYFCSQSTHVPPTFGQGTKVEIK.
[0126]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:64, представляет собой:
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPQLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEPEDVGVYYCSQSTHVPPTFGGGTKVEVK.
[0127]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:65, представляет собой:
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWFQQRPGQSPRRLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSDTDFTLRISRVEAEDVGLYYCSQSTHVPPTFGQGTKLEIK.
[0128]
Однобуквенная аминокислотная последовательность, которая соответствует последовательности, приведенной в SEQ ID NO:66, представляет собой:
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWLLQKPGQPPQLLIYKVSLRFSGVPNRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCSQSTHVPPTFGGGTKVEIK.
[0129] ПРИМЕРЫ
in vivo.
[0130] Пример 1. Исследование введения антитела к конечному продукту гликирования в условиях  В этом примере показано, что антитело к AGE может быть нацелено к клеткам, содержащим AGE-модифицированные белки на клеточной поверхности. Несмотря на то, что клетки, рассмотренные в данном исследовании, представляют собой стареющие клетки, они могут считаться моделью метастазирующих раковых клеток.
[0131] Для того чтобы исследовать влияние антитела к конечному продукту гликирования, антитело вводили старой мыши CD1 (ICR) (Charles River Laboratories) два раза в сутки путем внутривенной инъекции с частотой один раз в неделю в течение трех недель (1, 8 и 15 день), с последующим десятинедельным перерывом в применении препарата. Испытываемое антитело представляло собой коммерчески доступное мышиное антитело к конечному продукту гликирования, которое вырабатывалось к карбоксиметиллизину, конъюгированное с гемоцианином фиссуреллы, мАт к карбоксиметиллизину (клон 318003), доступное от R&D Systems, Inc. (Миннеаполис, Миннесота, США, каталожный номер MAB3247). У контрольных животных в качестве контроля использовали физиологический солевой раствор.
[0132] Возраст мышей, называемых «молодыми», составил 8 недель, в то время как возраст мышей, называемых «старыми», составил 88 недель (±2 дня). При введении антитела нежелательные явления не были обнаружены. Различные группы животных, использованные в исследовании, представлены в таблице 1.
[0133]
Таблица 1: Различные группы животных, использованные в исследовании
<b>№ группы</b>
<b>Исследуемый материал</b>
<b>Мыши</b>
<b>Уровень дозы (мкг/г/2 р./сутки/</b><b>неделю)</b>
<b>Кол-во животных</b>
<b>Основное исследование</b>
<b>Период без введения препарата</b>
<b>Самки</b>
<b>Самки</b>
1
PBS
Молодые
0
20
-
2
PBS
Старые
0
20
20
3
Антитело
Старые
2,5
20
20
4
Без введения
Старые
0
20
Исходные условия
5
Антитело
Старые
5,0
20
20
- =Неприменимо, Исходные условия=Подгруппа животных, умерщвленных до начала лечения для сбора жировой ткани.
INK4a
-ΔΔCt
[0134] мРНК P16, маркер стареющих клеток, количественно определяли в жировой ткани групп с помощью кПЦР в режиме реального времени. Результаты представлены в таблице 2. В таблице ΔΔCt=среднее значение ΔCt контрольной группы (2) -среднее значение ΔCt экспериментальной группы (1 или 3, или 5); Относительная экспрессия=2.
[0135]
Таблица 2: Количество мРНК P16<sup>Ink4a</sup>, определенное в жировой ткани
Расчет (не скорректи-рованный для группы 4: 5,59)
Группа 2 в сравнении с Группой 1
Группа 2 в сравнении с Группой 3
Группа 2 в сравнении с Группой 5
Группа 2
Группа 1
Группа 2
Группа 3
Группа 2
Группа 5
Среднее значение ΔCt
5,79
7,14
5,79
6,09
5,79
7,39
ΔΔCt
-1,35
-0,30
-1,60
Относительная экспрессия
2,55
1,23
3,03
Ink4a
Ink4a
Ink4a
[0136] Результаты в приведенной выше таблице свидетельствуют о том, что, как и ожидалось, старые мыши, не получавшие лечения (контрольная группа 2), экспрессируют в 2,55 раза больше мРНК p16, чем молодые мыши, не получавшие лечения (контрольная группа 1). Данный факт был обнаружен при сравнении результатов старых мышей в группе 2, не получавших лечения, которых умерщвляли в конце периода восстановления на 85 день, с результатами для молодых мышей в группе 1, не получавших лечения, которых умерщвляли по завершении лечения на 22 день. При сравнении результатов старых мышей в группе 2, не получавших лечения, с результатами старых мышей в группе 3, получавших лечение, которых умерщвляли на 85 день, было выявлено, что количество мРНК p16 было в 1,23 раза выше в группе 2, чем в группе 3. Таким образом, уровень экспрессии мРНК p16 был ниже, когда старых мышей лечили с использованием антитела в дозе 2,5 мкг/г/2 раза в сутки/неделю.
Ink4a
Ink4a
Ink4a
[0137] При сравнении результатов старых мышей в группе 2 (контроль), не получавших лечения, с результатами старых мышей в группе 5 (5 мкг/г), получавших лечение, которых умерщвляли на 22 день, было выявлено, что количество мРНК p16 было в 3,03 раза выше в группе 2 (контроль), чем в группе 5 (5 мкг/г). Это сравнение показало, что животные в группе 5 имели более низкие уровни экспрессии мРНК p16 после лечения антителом в дозе 5,0 мкг/г/2 раза в сутки/неделю, в результате чего уровни экспрессии мРНК p16 были сравнимы с уровнями у молодых мышей, не получавших лечения (т.е. в 1 группе). В отличие от мышей в группе 3 (2,5 мкг/г), которых умерщвляли в конце периода восстановления на 85 день, мышей в группе 5 умерщвляли по завершении лечения на 22 день.
[0138] Полученные результаты указывают на то, что введение антитела привело к гибели стареющих клеток.
[0139] Также измеряли массу икроножной мышцы, чтобы определить влияние введения антитела при саркопении. Результаты представлены в таблице 3. Полученные результаты указывают на то, что введение антитела увеличивало мышечную массу по сравнению с контролем, но только при более высокой дозе 5,0 мкг/г/2 раза в сутки/неделю.
[0140]
Таблица 3: Влияние введения антитела на массу икроножной мышцы
Группа
Краткая информация
Абсолютная масса икроножной мышцы
Масса икроножной мышцы в сравнении с массой тела
1
Среднее значение
0,3291
1,1037
Станд. откл.сред.
0,0412
0,1473
N
20
20
2
Среднее значение
0,3304
0,7671
Станд. откл.сред.
0,0371
0,1246
N
20
20
3
Среднее значение
0,3410
0,7706
Станд. откл.сред.
0,0439
0,0971
N
19
19
5
Среднее значение
0,4074
0,9480
Станд. откл.сред.
0,0508
0,2049
N
9
9
Ink4a
[0141] Полученные результаты свидетельствуют о том, что введение антител, которые связываются с AGE клетки, привело к уменьшению количества клеток, экспрессирующих p16, биомаркер старения. Данные указывают на то, что снижение количества стареющих клеток приводит непосредственно к увеличению мышечной массы у старых мышей. Эти результаты указывают на то, что потерю мышечной массы, классический признак саркопении, можно лечить путем введения антител, которые связываются с AGE клетки. Результаты позволяют предположить, что введение антител может быть эффективным при лечении метастазов рака за счет устранения стареющих клеток.
[0142] Пример 2. Аффинность и кинетика исследуемого антитела
[0143] Аффинность и кинетику исследуемого антитела, использованного в примере 1, исследовали с использованием Nα,Nα-бис(карбоксиметил)-L-лизинтрифторацетатной соли (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) в качестве модельного субстрата для AGE-модифицированного белка клетки. Исследование взаимодействия без использования метки проводили на устройстве BIACORE™ T200 (GE Healthcare, Питтсбург, Пенсильвания, США), используя сенсорный чип серии S CM5 (GE Healthcare, Питтсбург, Пенсильвания, США), при этом проточную ячейку FC1 установили как пустую, и проточную ячейку FC2 иммобилизовали с исследуемым антителом (молекулярная масса 150000 Да). Подвижный буфер представлял собой буфер HBS-EP (10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТА и 0,05% Р-20, рН=7,4), при температуре 25 °С. Программное обеспечение представляло собой программное обеспечение для анализа данных BIACORE™ T200, версия 2.0. При анализе использовали двойной контроль (Fc2-1 и впрыскивание только буфера), и данные аппроксимировали с использованием модели связывания Ленгмюра 1:1.
[0144]
Таблица 4: Экспериментальные параметры в исследовании аффинности и кинетики
Ассоциация и диссоциация
Путь потока
Fc1 и Fc2
Скорость потока (мкл/мин)
30
Время ассоциации (с)
300
Время диссоциации (с)
300
Концентрация образца (мкМ)
20-5 - 1,25 (×2) -0,3125-0,078-0
k
k
a
d
D
max
max
3
-3
-6
2
2
[0145] График зависимости ответа от времени представлен на ФИГ.1. В исследовании определяли следующие значения:  (1/Мс)=1,857×10;  (1/с)=6,781×10; K (M)=3,651×10; R (ед. ответа)=19,52; и χ=0,114. Поскольку значение χ при аппроксимации составляет менее 10% от R, подобранная модель является достоверной.
[0146] Пример 3. Конструирование и получение мышиного антитела IgG2b к AGE и химерного антитела IgG1 к AGE
[0147] Получали мышиные антитела к AGE и химерные антитела человека к AGE. Последовательность ДНК тяжелой цепи мышиного антитела IgG2b к AGE приведена в SEQ ID NO:12. Последовательность ДНК химерного антитела человека IgG1 к AGE приведена в SEQ ID NO:13. Последовательность ДНК легкой каппа-цепи мышиного антитела к AGE приведена в SEQ ID NO:14. Последовательность ДНК легкой каппа-цепи химерного антитела человека к AGE приведена в SEQ ID NO:15. Последовательности генов синтезировали и клонировали в векторы с высоким уровнем экспрессии у млекопитающих. Последовательности оптимизировали по кодонам. Готовые конструкции подтверждали с помощью секвенирования перед трансфекцией.
[0148] Клетки линии HEK293 высевали во встряхиваемую колбу за один день до трансфекции и выращивали с использованием бессывороточных сред с определенным химическим составом. Конструкции для экспрессии ДНК кратковременно трансфецировали в 0,03 литра суспензии клеток линии HEK293. Через 20 часов клетки отбирали, чтобы получить жизнеспособные клетки и жизнеспособное количество клеток и измеряли титры (Octet QKe, ForteBio). Дополнительные показатели регистрировали во время ряда этапов трансфекции. Культуры собирали на 5 день, и для каждой культуры измеряли дополнительный образец, чтобы определить плотность и жизнеспособность клеток, а также титр антител.
[0149] Кондиционированные среды для мышиных и химерных антител к AGE собирали и очищали после ряда этапов трансфекции путем центрифугирования и фильтрации. Супернатанты пропускали через колонку с белком А и элюировали буфером с низким рН. Фильтрацию с использованием мембранного фильтра с размером пор 0,2 мкм проводили перед разделением на аликвоты. После очистки и фильтрации концентрации белка рассчитывали на основании OD280 и коэффициента экстинкции. Обобщенные данные по величинам выхода и количеству аликвот приведены в таблице 5:
[0150]
Таблица 5: Величины выхода и количество аликвот
Белок
Концентрация (мг/мл)
Объем (мл)
Количество флаконов
Общий выход (мг)
Мышиное антитело к AGE
0,08
1,00
3
0,24
Химерное антитело к AGE
0,23
1,00
3
0,69
[0151] Чистоту антител оценивали с помощью капиллярного электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия (CE-SDS) с использованием LabChip GXII (PerkinElmer).
[0152] Пример 4. Связывание мышиных (исходных) и химерных антител к AGE
[0153] Связывание мышиных (исходных) и химерных антител к AGE, описанных в примере 3, исследовали с помощью ИФА с прямым связыванием. В качестве контроля использовали антитело к карбоксиметиллизину (CML) (R&D Systems, MAB3247). CML конъюгировали с KLH (CML-KLH), и планшеты для ИФА покрывали CML и CML-KLH в течение ночи. Конъюгированное с пероксидазой хрена (ПХ) козье антитело к Fc мыши использовали для детектирования контрольных и мышиных (исходных) антител к AGE. Конъюгированное с пероксидазой хрена козье антитело к Fc человека использовали для детектирования химерного антитела к AGE.
[0154] Антигены разбавляли до концентрации 1 мкг/мл в 1× фосфатном буфере при рН=6,5. 96-луночный планшет для микротитрования для ИФА покрывали 100 мкл/лунку разведенного антигена и выдерживали в течение ночи при 4 °C. Планшет блокировали 1× PBS с добавлением 2,5% БСА и выдерживали в течение 1-2 часов на следующее утро при комнатной температуре. Образцы антитела получали в виде последовательных разведений с использованием 1× PBS с добавлением 1% БСА с начальной концентрацией 50 мкг/мл. Вторичные антитела разбавляли в соотношении 1:5000. По 100 мкл разбавленных антител вносили в каждую лунку. Планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 0,5-1 ч на шейкере для микропланшетов. Планшет промывали 3 раза с использованием 1× PBS. В лунки вносили по 100 мкл/лунку разбавленного конъюгированного с пероксидазой хрена вторичного козьего антитела к Fc человека. Планшет инкубировали в течение 1 часа на шейкере для микропланшетов. Затем планшет промывали 3 раза с использованием 1× PBS. По 100 мкл субстрата ПХ, TMB, добавляли в каждую лунку для развития окрашивания в планшетах. По истечении 3-5 минут реакцию останавливали добавлением 100 мкл 1 н HCl. Второй вариант ИФА с прямым связыванием выполняли только с покрытием CML. Абсорбцию при OD450 считывали с помощью считывателя для микропланшетов.
[0155] Исходные данные по абсорбции OD450 для ИФА с покрытием CML и CML-KLH приведены на карте планшета ниже. Использовали 48 из 96 лунок. Пустые лунки на карте планшета обозначают неиспользованные лунки.
[0156] Карта планшета для ИФА с покрытием CML и CML-KLH:
Концен-трация (мкг/мл)
1
2
3
4
5
6
7
50
0,462
0,092
0,42
1,199
0,142
1,852
16,67
0,312
0,067
0,185
0,31
0,13
0,383
5,56
0,165
0,063
0,123
0,19
0,115
0,425
1,85
0,092
0,063
0,088
0,146
0,099
0,414
0,62
0,083
0,072
0,066
0,108
0,085
0,248
0,21
0,075
0,066
0,09
0,096
0,096
0,12
0,07
0,086
0,086
0,082
0,098
0,096
0,098
0
0,09
0,085
0,12
0,111
0,083
0,582
R&DПоложительный контроль
Исходное антитело к AGE
Химерное антитело к AGE
R&DПоложительный контроль
Исходное антитело к AGE
Химерное антитело к AGE
Покрытие CML-KLH
Покрытие CML
[0157] Исходные данные по абсорбции при OD450 для ИФА с покрытием только CML представлены в таблице ниже. Использовали 24 из 96 лунок в планшете. Пустые лунки на карте планшета обозначают неиспользованные лунки.
[0158] Карта планшета для ИФА с покрытием только CML:
Концентрация (мкг/мл)
1
2
3
4
5
6
7
50
1,913
0,165
0,992
16,66667
1,113
0,226
0,541
5,555556
0,549
0,166
0,356
1,851852
0,199
0,078
0,248
0,617284
0,128
0,103
0,159
0,205761
0,116
0,056
0,097
0,068587
0,073
0,055
0,071
0
0,053
0,057
0,06
R&DПоложительный контроль
Исходное антитело к AGE
Химерное антитело к AGE
[0159] Контрольные и химерные антитела к AGE связывались как с CML, так и с CML-KLH. Мышиное (исходное) антитело к AGE не связывалось или связывалось в незначительной степени как с CML, так и с CML-KLH. Данные повторного ИФА подтверждают связывание контроля и химерного антитела к AGE с CML. Все контрольные пробы с использованием только буфера показали отрицательный сигнал.
[0160] Пример 5: Гуманизированные антитела
[0161] Гуманизированные антитела конструировали путем создания множества гибридных последовательностей, в которых отдельные части последовательности исходного (мышиного) антитела гибридизовали с каркасными последовательностями человека. Акцепторные каркасные участки выявляли на основании общей идентичности последовательностей по всей длине каркаса, совпадающих положений границ раздела, аналогично классифицированных канонических положений CDR и присутствия сайтов N-гликозилирования, которые необходимо было бы удалить. Три гуманизированные легкие цепи и три гуманизированные тяжелые цепи конструировали на основании двух различных акцепторных каркасов тяжелой и легкой цепи человека. Аминокислотные последовательности тяжелых цепей представлены в SEQ ID NO:29, 31 и 33, которые кодируются последовательностями ДНК, представленными в SEQ ID NO:30, 32 и 34, соответственно. Аминокислотные последовательности легких цепей представлены в SEQ ID NO:35, 37 и 39, которые кодируются последовательностями ДНК, представленными в SEQ ID NO:36, 38 и 40, соответственно. Указанные гуманизированные последовательности методично исследовали визуально и с помощью компьютерного моделирования, чтобы выделить последовательности, которые наиболее вероятно сохранят связывание с антигеном. Цель заключалась в том, чтобы максимально увеличить количество последовательности человека в готовых гуманизированных антителах, сохраняя при этом первоначальную специфичность антител. Легкие и тяжелые гуманизированные цепи могут быть объединены, чтобы создать девять вариантов полностью гуманизированных антител.
et al.
[0162] Три тяжелые цепи и три легкие цепи исследовали для определения их гуманизированности. Оценки гуманизированности антитела рассчитывали в соответствии со способом, описанным в Gao, S. H., , ʺMonoclonal antibody humanness score and its applicationsʺ, BMC Biotechnology, 13:55 (July 5, 2013). Оценка гуманизированности описывает степень сходства последовательности вариабельной области антитела с последовательностью антитела человека. Для тяжелых цепей оценка 79 баллов или выше свидетельствует о том, что они сходны с последовательностями человека; для легких цепей оценка 86 или выше свидетельствует о том, что они сходны с последовательностями человека. Оценки гуманизированности трех тяжелых цепей, трех легких цепей, исходной (мышиной) тяжелой цепи и исходной (мышиной) легкой цепи представлены ниже в таблице 6:
[0163] Таблица 6: Оценки гуманизированности антитела человека
Антитело
Гуманизированность (каркас+CDR)
Исходная (мышиная) тяжелая цепь
63,60
Тяжелая цепь 1 (SEQ ID NO:29)
82,20
Тяжелая цепь 2 (SEQ ID NO:31)
80,76
Тяжелая цепь 3 (SEQ ID NO:33)
81,10
Исходная (мышиная) легкая цепь
77,87
Легкая цепь 1 (SEQ ID NO:35)
86,74
Легкая цепь 2 (SEQ ID NO:37)
86,04
Легкая цепь 3 (SEQ IN NO: 39)
83,57
[0164] Гены полноразмерных антител конструировали путем в первую очередь синтеза последовательностей вариабельных областей. Последовательности оптимизировали для экспрессии в клетках млекопитающих. Полученные последовательности вариабельных областей затем клонировали в векторы экспрессии, которые уже содержали домены Fc человека; для тяжелой цепи использовали IgG1.
[0165] Маломасштабное получение гуманизированных антител осуществляли путем трансфекции плазмид для тяжелых и легких цепей в суспензию клеток линии HEK293 с использованием бессывороточных сред с определенным химическим составом. Целые антитела в кондиционированной среде очищали с использованием среды MabSelect SuRe Protein A (GE Healthcare).
[0166] Девять гуманизированных антител получали из каждой комбинации трех тяжелых цепей, имеющих аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:29, 31 и 33, и трех легких цепей, имеющих аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO:35, 37 и 39. Также получали сравнительное химерное исходное антитело. Антитела и их соответствующие титры представлены в таблице 7 ниже:
[0167]
Таблица 7: Титры антител
Антитело
Титр (мг/л)
Химерное исходное антитело
23,00
SEQ ID NO:29+SEQ ID NO:35
24,67
SEQ ID NO:29+SEQ ID NO:37
41,67
SEQ ID NO:29+SEQ ID NO:39
29,67
SEQ ID NO:31+SEQ ID NO:35
26,00
SEQ ID NO:31+SEQ ID NO:37
27,33
SEQ ID NO:31+SEQ ID NO:39
35,33
SEQ ID NO:33+SEQ ID NO:35
44,00
SEQ ID NO:33+SEQ ID NO:37
30,33
SEQ ID NO:33+SEQ ID NO:39
37,33
[0168] Связывание гуманизированных антител можно оценить, например, в исследовании дозозависимого связывания методом ИФА или клеточного анализа связывания.
[0169] Пример 6 (возможное применение): уничтожение метастатических раковых клеток и лечение метастатического рака
[0170] Агрегаты клеток рака яичников человека (Creative BioArray, Ширли, Нью-Йорк, США) инокулировали в/б в двух группах (A и B) мышей prkdcscid (SCID) с дефицитом T- и B-клеток, в частности, мышам линии NSG, доступным от Jackson Laboratories (Фармингтон, Коннектикут, США). Группа A являлась контрольной группой, в которой физиологический раствор вводили путем внутривенной инъекции, и в группе B любое из описанных моноклональных антител к AGE вводили в дозе 5 мкг/г/мышь путем внутривенной инъекции.
[0171] Через 80 дней после инокуляции раковых клеток мышей из групп A и B подвергали макроскопическому и гистологическому обследованию. Мыши в группе B, получившие антитела, имели значительно меньше метастатических очагов, чем контрольные мыши в группе А.
in vivo
[0172] Пример 6: Исследование введения моноклонального антитела к карбоксиметиллизину в условиях
in vivo
[0173] Исследовали влияние антитела к карбоксиметиллизину на рост опухоли, метастатический потенциал и кахексию. Исследования в условиях  проводили у мышей с использованием опухолевой модели рака молочной железы мышей. Возраст самок мышей линии BALB/c (BALB/cAnNCrl, Charles River) составлял одиннадцать недель в 1 день исследования.
2
2
[0174] Клетки рака молочной железы мышей 4T1 (ATCC CRL-2539) культивировали в среде RPMI 1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, 2 мМ глутамина, 25 мкг/мл гентамицина, 100 единиц/мл натриевой соли пенициллина G и 100 мкг/мл сульфата стрептомицина. Опухолевые клетки поддерживали в колбах для тканевых культур в инкубаторе при 37°C в увлажненной атмосфере 5% СО/95% O.
6
5
3
2
3
3
3
[0175] Культивируемые клетки рака молочной железы затем имплантировали мышам. Клетки 4T1 собирали во время логарифмической фазы размножения и повторно суспендировали в фосфатно-солевом буфере (PBS) в концентрации 1×10 клеток/мл в день имплантации. Опухоли инициировали путем подкожной имплантации 1×10 клеток 4T1 (0,1 мл суспензии) в правый бок каждого испытуемого животного. Опухоли контролировали до достижения целевого диапазона объемов опухолей 80-120 мм. Объем опухоли определяли по формуле: объем опухоли=(ширина опухоли)(длина опухоли)/2. Массу опухоли аппроксимировали, исходя из предположения, что 1 мм объема опухоли имеет массу 1 мг. Через тринадцать дней после имплантации, обозначенной как 1-й день исследования, мышей распределяли на четыре группы (n=15/группу), при этом индивидуальные объемы опухолей колебались от 108 до 126 мм и средний объем опухоли составлял 112 мм. Четыре группы лечения представлены в таблице 8 ниже:
[0176]
[0177] В качестве терапевтического агента использовали моноклональное антитело к карбоксиметиллизину. 250 мг моноклонального антитела к карбоксиметиллизину получили от R&D Systems (Миннеаполис, Миннесота, США). Растворы моноклонального антитела к карбоксиметиллизину для дозирования готовили в концентрации 1 и 0,5 мг/мл в носителе (PBS) для получения активных дозировок 10 и 5 мкг/г, соответственно, в объеме дозирования 10 мл/кг. Растворы для дозирования хранили при 4°C в защищенном от света месте.
[0178] Все лекарственные препараты вводили внутривенно (в/в) два раза в сутки в течение 21 дня, за исключением 1 дня исследования, когда мышам вводили одну дозу. На 19 день исследования в/в дозу заменяли внутрибрюшинной (в/б) дозой для тех животных, которым из-за разрушения хвостовой вены не могли вводить внутривенные инъекции. Объем дозирования составил 0,200 мл на 20 г массы тела (10 мл/кг) и был скорректирован в соответствии с массой тела каждого отдельного животного.
[0179] Исследование продолжали в течение 23 дней. Опухоли измеряли с помощью штангенциркулей два раза в неделю. Животных взвешивали ежедневно на 1-5 день, затем два раза в неделю до завершения исследования. Мыши также находились под контролем для обнаружения любых побочных эффектов. Приемлемую токсичность определяли как среднюю потерю массы тела менее 20% во время исследования и не более 10% смертей, связанных с лечением. Эффективность лечения определяли с использованием данных, полученных в последний день исследования (23 день).
лечение
контроль
in vivo
[0180] Способность антитела к карбоксиметиллизину ингибировать рост опухоли определяли путем сравнения медианы объема опухоли (MTV) для групп 1-3. Объем опухоли измеряли, как описано выше. Процент ингибирования роста опухоли (TGI, %) определяли как разницу между MTV контрольной группы (группа 1) и MTV группы, получавшей лекарственный препарат, выраженную в процентах от MTV контрольной группы. TGI (%) можно рассчитать по формуле: TGI (%)=(1-MTV/MTV)×100. На ФИГ. 3 представлен график изменения нормированного объема опухоли в ходе исследования в условиях  для изучения влияния антитела к AGE на рост опухоли, метастатический потенциал и кахексию.
лечение
контроль
[0181] Способность антитела к карбоксиметиллизину ингибировать метастазы рака определяли путем сравнения очагов рака легких для групп 1-3. Процент ингибирования (ингибирование, %) определяли как разность между средним количеством метастатических очагов контрольной группы и средним количеством метастатических очагов группы, получавшей лекарственный препарат, выраженную в процентах от среднего количества метастатических очагов контрольной группы. Ингибирование (%) может быть рассчитано по следующей формуле: Ингибирование (%)=(1-Среднее кол-во очагов/Среднее кол-во очагов)×100.
in vivo
[0182] Способность антитела к карбоксиметиллизину ингибировать кахексию определяли путем сравнения массы ткани легких и массы икроножных мышц для групп 1-3. Значения массы тканей также нормировали к 100 г массы тела. На ФИГ. 4 представлен график изменения нормированной массы тела мышей в ходе исследования в условиях  для изучения влияния антитела к AGE на рост опухоли, метастатический потенциал и кахексию.
3
3
[0183] Эффективность лечения также оценивали по частоте и величине регрессионных ответов, наблюдавшихся во время исследования. Лечение может вызвать частичную регрессию (PR) или полную регрессию (CR) опухоли у животного. При PR-ответе объем опухоли составлял 50% или менее от объема опухоли в 1 день для трех последовательных измерений в ходе исследования и был равен или превышал 13,5 мм для одного или более из этих трех измерений. При CR-ответе объем опухоли составлял менее 13,5 мм для трех последовательных измерений в ходе исследования.
P
[0184] Статистический анализ проводили с использованием Prism (GraphPad) для Windows 6.07. Статистические анализы различий между средними объемами опухолей (MTV) двух групп на 23 день осуществляли с использованием U-теста Манна-Уитни. Сравнения метастатических очагов оценивали с использованием дисперсионного анализа и критерия Даннетта. Нормированные значения массы ткани сравнивали с использованием дисперсионного анализа. Двусторонние статистические анализы проводили при уровне значимости =0,05. Результаты классифицировали как статистически значимые или статистически незначимые.
[0185] Результаты исследования приведены ниже в таблице 9.
[0186] Таблица 9: Результаты
Груп-па
MTV (мм<sup>3</sup>)
TGI (%)
Очаги в легких
Ингибирование (%)
PR
CR
Нормированная масса икроножных мышц (мг)
Нормированная масса легких(мг)
1
1800
Нет данных
70,4
Нет данных
0
0
353,4/19,68
2799,4/292,98
2
1568
13%
60,3
14%
0
0
330,4/21,62
2388,9/179,75
3
1688
6%
49,0
30%
0
0
398,6/24,91
2191,6/214,90
[0187] Все схемы лечения приемлемо переносились без смертей, связанных с лечением. Единственным случаем смерти животного была вызванная метастазами смерть, которая не была связана с лечением. Анализ тенденции для значений TGI (%) указывал на достоверность (P>0,05, критерий Манна-Уитни) для группы 5 мкг/г (группа 2) и 10 мкг/г (группа 3). Анализ тенденции для ингибирования (%) указывал на достоверность (P>0,05, дисперсионный анализ и критерий Даннетта) для группы лечения 5 мкг/г. Ингибирование (%) было статистически достоверным (P≤0,01, дисперсионный анализ и критерий Даннетта) для группы лечения 10 мкг/г. Анализ тенденции для способности антитела к карбоксиметиллизину лечить кахексию указывал на достоверные отличия (P>0,05, дисперсионный анализ) на основании сравнения массы легких и икроножных мышц между группами лечения и контрольной группой. Результаты указывают на то, что введение моноклонального антитела к карбоксиметиллизину способно уменьшить метастазы рака.
[0188] Пример 7: Диагностика метастатического рака (возможное применение)
[0189] Пациентка с раком молочной железы имеет увеличенные лимфатические узлы. Онколог подозревает, что рак молочной железы образовал метастазы в ее лимфатических узлах. Онколог получает образец крови, а также биопсию из одного ее увеличенного лимфатического узла. Клетки из образца крови и биопсии исследуют для определения присутствия AGE-модифицированных раковых клеток с применением набора, содержащего флуоресцентномеченое антитело к AGE и контроль. Результаты диагностического теста указывают на присутствие циркулирующих AGE-модифицированных раковых клеток в крови пациентки, а также присутствие метастатических клеток рака молочной железы в лимфатических узлах. Второе окрашивание клеток для выявления поверхностного клеточного нуклеолина, известного маркера рака, как описано в патенте США №7541150 Miller et al., подтверждает присутствие раковых клеток.
[0190] СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
[0191] 1. Публикация международной заявки на патент WO 2009/143411, Gruber (26.11.2009).
[0192] 2. Патент США № 5,702,704, Bucala (дата выдачи 30.12.1997).
et al.
[0193] 3. Патент США № 6,380,165, Al-Abed  (дата выдачи 30.04.2002).
et al.
[0194] 4. Патент США № 6,387,373, Wright  (дата выдачи 14.05.2002).
et al.
[0195] 5. Патент США № 4,217,344, Vanlerberghe  (дата выдачи 12.08.1980).
[0196] 6. Патент США № 4,917,951, Wallach (дата выдачи 17.04.1990).
[0197] 7. Патент США № 4,911,928, Wallach (дата выдачи 27.05.1990).
et al.
[0198] 8. Заявка на патент США № US 2010/226932, Smith  (09.09.2010).
et al.
Biochemical and Biophysical Research Communications
[0199] 9. Ando K, , ʺMembrane Proteins of Human Erythrocytes Are Modified by Advanced Glycation End Products During Aging in the Circulation,ʺ , Vol. 258, 123-27 (1999).
et al.
Diabetes Vascular Disease Research
[0200] 10. Lindsey JB, , ʺReceptor For Advanced Glycation End-Products (RAGE) and soluble RAGE (sRAGE): Cardiovascular Implications,ʺ , Vol. 6(1), 7-14, (2009).
[0201] 11. Bierhaus A, ʺAGEs and their interaction with AGE-receptors in vascular disease and diabetes mellitus. I. The AGE concept,ʺ Cardiovasc Res, Vol. 37(3), 586-600 (1998).
et al.
in vitro
[0202] 12. Meuter A.,  ʺMarkers of cellular senescence are elevated in murine blastocysts cultured : molecular consequences of culture in atmospheric oxygenʺ J Assist Reprod Genet. 2014 Aug 10. [предпечатная электронная публикация].
[0203] 13. Baker, D.J. et al., ʺClearance of p16Ink4a-positive senescent cells delays ageing-associated disordersʺ, Nature, vol. 479, pp. 232-236, (2011).
et al
[0204] 14. Jana Hadrabová, . ʺChicken immunoglobulins for prophylaxis: Effect of inhaled antibodies on inflammatory parameters in rat airwaysʺ Journal of Applied Biomedicine (в печати; доступно онлайн 05.05.2014).
et al
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
[0205] 15. Vlassara, H. ., ʺHigh-affinity-receptor-mediated Uptake and Degradation of Glucose-modified Proteins: A Potential Mechanism for the Removal of Senescent Macromoleculesʺ, , Vol. 82, 5588, 5591 (1985).
et al
Arthritis & Rheumatism
[0206] 16. Roll, P. ., ʺAnti-CD20 Therapy in Patients with Rheumatoid Arthritisʺ, , Vol. 58, No. 6, 1566-1575 (2008).
et al
Circ. Res.
[0207] 17. Kajstura, J. ., ʺMyocite Turnover in the Aging Human Heartʺ, , Vol. 107(11), 1374-86, (2010).
et al
Arthritis and Rheumatism
[0208] 18. de Groot, K. ., ʺVascular Endothelial Damage and Repair in Antineutrophil Cytoplasmic Antibody-Associated Vasculitisʺ, , Vol. 56(11), 3847, 3847 (2007).
et al
Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab.
[0209] 19. Manesso, E. ., ʺDynamics of β-Cell Turnover: Evidence for β-Cell Turnover and Regeneration from Sources of β-Cells other than β-cell Replication in the HIP Ratʺ, ,Vol. 297, E323, E324 (2009).
et al
J. Clin. Invest.
[0210] 20. Kirstein, M. ., ʺReceptor-specific Induction of Insulin-like Growth Factor I in Human Monocytes by Advanced Glycosylation End Product-modified Proteinsʺ, , Vol. 90, 439, 439-440 (1992).
Clinical Medical Insights: Oncology,
[0211] 21. Murphy, J. F., ʺTrends in cancer immunotherapyʺ,  Vol. 14(4), 67-80 (2010).
et al.
Journal of Lipid Research
[0212] 22. Virella, G. , ʺAutoimmune Response to Advanced Glycosylation End-Products of Human LDLʺ, , Vol. 44, 487-493 (2003).
et al.
Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology
[0213] 23. Ameli, S. , ʺEffect of Immunization With Homologous LDL and Oxidized LDL on Early Atherosclerosis in Hypercholesterolemic Rabbitsʺ, , Vol. 16, 1074 (1996).
[0214] 24. ʺSarcopeniaʺ, доступно онлайн на en.wikipedia.org/wiki/Sarcopenia (14.11.2014).
[0215] 25. ʺWhat is sarcopenia?ʺ, доступно онлайн на www.iofbonehealth.org/what-sarcopenia (2014).
[0216] 26. Blahd, W., ʺSarcopenia with agingʺ, доступно онлайн на www.webmd.com/healthy-aging/sarcopenia-with-aging (03.08.2014).
[0217] 27. ʺKeyhole limpet hemocyaninʺ, доступно онлайн на en.wikipedia.org/wiki/Keyhole_limpet_hemocyanin (18.04.2014).
[0218] 28. ʺCML-BSA Product Data Sheetʺ, доступно онлайн на www.cellbiolabs.com/sites/default/files/STA-314-cml-bsa.pdf (2010).
[0219] 29. ʺCML (N-epsilon-(Carboxymethyl)Lysine) Assays and Reagentsʺ, доступно онлайн на www.cellbiolabs.com/cml-assays (доступ был получен 15.12.2014).
et al
Age and Ageing
[0220] 30. Cruz-Jentoft, A. J. ., ʺSarcopenia: European consensus on definition and diagnosisʺ, , Vol. 39, pp. 412-423 (13.04.2010).
et al
J. Nutr. Health Aging
[0221] 31. Rolland, Y. ., ʺSarcopenia: its assessment, etiology, pathogenesis, consequences and future perspectivesʺ, , Vol. 12(7), pp. 433-450 (2008).
et al
Biochemical and Biophysical Research Communications
ε
[0222] 32. Mera, K. ., ʺAn autoantibody against N-(carboxyethyl)lysine (CEL): Possible involvement in the removal of CEL-modified proteins by macrophagesʺ, , Vol. 407, pp. 420-425 (12.03.2011).
et al
Biochemistry
ε
[0223] 33. Reddy, S. ., ʺN-(carboxymethyl)lysine is a dominant advanced glycation end product (AGE) antigen in tissue proteinsʺ, , Vol. 34, pp. 10872-10878 (01.08.1995).
et al
Clinical Pharmacology & Therapeutics
[0224] 34. Naylor, R. M. ., ʺSenescent cells: a novel therapeutic target for aging and age-related diseasesʺ, , Vol. 93(1), pp.105-116 (05.12.2012).
Biochemistry (Moscow)
[0225] 35. Katcher, H. L., ʺStudies that shed new light on agingʺ, , Vol. 78(9), pp. 1061-1070 (2013).
et al
Aging Cells
[0226] 36. Ahmed, E. K. ., ʺProtein Modification and Replicative Senescence of WI-38 Human Embryonic Fibroblastsʺ, , Vol. 9, 252, 260 (2010).
et al
J. Exp. Med.
[0227] 37. Vlassara, H. ., ʺAdvanced Glycosylation Endproducts on Erythrocyte Cell Surface Induce Receptor-Mediated Phagocytosis by Macrophagesʺ, , Vol. 166, 539, 545 (1987).
et al
Journal of the American Medical Directors Association
[0228] 38. Fielding, R. A., ., ʺSarcopenia: an undiagnosed condition in older adults. Current consensus definition: prevalence, etiology, and consequencesʺ, , Vol. 12(4), pp. 249-256 (Май 2011).
et al
Lama pacos
[0229] 39. Maass, D. R. ., ʺAlpaca () as a convenient source of recombinant camelid heavy chain antibodies (VHHs)ʺ, Journal of Immunological Methods, Vol. 324, No. 1-2, pp. 13-25 (31.07.2007).
et al
in vitro
[0230] 40. Strietzel, C.J. ., ʺ functional characterization of feline IgGsʺ, Veterinary Immunology and Immunopathology, Vol. 158, pp. 214-223 (2014).
et al
[0231] 41. Patel, M. ., ʺSequence of the dog immunoglobulin alpha and epsilon constant region genesʺ, Immunogenetics, Vol. 41, pp. 282-286 (1995).
et al
[0232] 42. Wagner, B. ., ʺThe complete map of the Ig heavy chain constant gene region reveals evidence for seven IgG isotypes and for IgD in the horseʺ, The Journal of Immunology, Vol. 173, pp. 3230-3242 (2004).
et al
[0233] 43. Hamers-Casterman, C. ., ʺNaturally occurring antibodies devoid of light chainsʺ, Nature, Vol. 363, pp. 446-448 (03.06.1993).
et al
[0234] 44. De Genst, E. ., ʺAntibody repertoire development in camelidsʺ, Developmental & Comparative Immunology, Vol. 30, pp. 187-198 (досутпно онлайн 11.07.2005).
et al
Camelus dromedarius
Camelus bactrianus
[0235] 45. Griffin, L.M. ., ʺAnalysis of heavy and light chain sequences of conventional camelid antibodies from  and  speciesʺ, Journal of Immunological Methods, Vol. 405, pp. 35-46 (доступно онлайн 18.01.2014).
et al
H
[0236] 46. Nguyen, V.K. ., ʺCamel heavy-chain antibodies: diverse germline VH and specific mechanisms enlarge the antigen-binding repertoireʺ, The European Molecular Biology Organization Journal, Vol. 19, No, 5, pp. 921-930 (2000).
et al
H
47. Muyldermans, S. ., ʺSequence and structure of V domain from naturally occurring camel heavy chain immunoglobulins lacking light chainsʺ, Protein Engineering, Vol. 7, No. 9, pp. 1129-1135 (1994).
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ГРУБЕР, Льюис, С.
<120> СПОСОБ И КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА, УНИЧТОЖЕНИЯ МЕТАСТАТИЧЕСКИХ РАКОВЫХ КЛЕТОК И ПРОФИЛАКТИКИ МЕТАСТАЗОВ РАКА, ИСПОЛЬЗУЯ АНТИТЕЛА К КОНЕЧНЫМ ПРОДУКТАМ ПОВЫШЕННОГО ГЛИКИРОВАНИЯ (AGE)
<130> SIW01-013-WO
<160> 66
<210> 1
<211> 463
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная тяжелая цепь иммуноглобулина G1 Homo sapiens
<400> 1
Met Asn Leu Leu Leu Ile Leu Thr Phe Val Ala Ala Ala Val Ala Gln
1               5                   10                  15
Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
20                  25                  30
Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr Trp
35                  40                  45
Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
50                  55                  60
Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe Lys
65                  70                  75                  80
Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met
85                  90                  95
Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
100                 105                 110
Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
115                 120                 125
Val Thr Val Ser Val Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
130                 135                 140
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
145                 150                 155                 160
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
165                 170                 175
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
180                 185                 190
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
195                 200                 205
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
210                 215                 220
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
225                 230                 235                 240
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
245                 250                 255
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
260                 265                 270
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
275                 280                 285
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
290                 295                 300
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
305                 310                 315                 320
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
325                 330                 335
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
340                 345                 350
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
355                 360                 365
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
370                 375                 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
385                 390                 395                 400
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
405                 410                 415
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
420                 425                 430
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
435                 440                 445
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450                 455                 460
<210> 2
<211> 118
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 2
Gln Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr
20                  25                  30
Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe
50                  55                  60
Lys Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Val
115
<210> 3
<211> 234
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицированная легкая каппа-цепь иммуноглобулина G1 Homo sapiens
<400> 3
Met Asn Leu Leu Leu Ile Leu Thr Phe Val Ala Ala Ala Val Ala Asp
1               5                   10                  15
Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp
20                  25                  30
Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser Asn
35                  40                  45
Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
50                  55                  60
Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp
65                  70                  75                  80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
85                  90                  95
Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Thr
100                 105                 110
His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
115                 120                 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130                 135                 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145                 150                 155                 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165                 170                 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180                 185                 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195                 200                 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210                 215                 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230
<210> 4
<211> 113
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 4
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85                  90                  95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg
<210> 5
<211> 327
<212> Белок
<213> Equus caballus
<400> 5
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Lys Val Phe Pro Leu Ala Ser His Ser Ala
1               5                   10                  15
Ala Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Gly Cys Leu Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50                  55                  60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ala Ser Ser Leu Lys Ser Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys
85                  90                  95
Lys Ile Val Ile Lys Glu Cys Asn Gly Gly Cys Pro Ala Glu Cys Leu
100                 105                 110
Gln Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val
115                 120                 125
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
130                 135                 140
Gly His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
145                 150                 155                 160
Glu Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Phe Asn Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Lys Asp Trp Leu
180                 185                 190
Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala
195                 200                 205
Pro Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro
210                 215                 220
Gln Val Tyr Val Leu Ala Pro His Arg Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys
225                 230                 235                 240
Val Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Thr Asp Ile Asp
245                 250                 255
Ile Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser
260                 265                 270
Thr Thr Pro Ala Gln Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser
275                 280                 285
Lys Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr
290                 295                 300
Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser
305                 310                 315                 320
Val Ser Lys Ser Pro Gly Lys
325
<210> 6
<211> 415
<212> Белок
<213> Equus caballus
<400> 6
Ser Leu Glu Asp Thr Ala Val Ile Pro Leu Phe Ser Glu Cys Lys Ala
1               5                   10                  15
Pro Lys Glu Asp Asp Val Val Ser Leu Ala Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Gln Val Thr Trp Glu Pro Glu Met Gln Asn Gln
35                  40                  45
Lys Pro Trp Thr Phe Pro Ala Met Lys Lys Gly Gln Glu Tyr Ile His
50                  55                  60
Val Phe Ser Leu Thr Thr Trp Trp Lys Pro Gly Ser His Ser Cys Thr
65                  70                  75                  80
Val His His Lys Ala Ser Ser Phe Arg Lys Lys Met Thr Phe Gln Glu
85                  90                  95
Pro Ala Ser Trp Ala Pro Gln Arg Thr Ser Ala Leu Pro Val Thr Ser
100                 105                 110
Lys Glu Pro Thr Pro Ala Pro Thr Thr Leu Arg Lys Ser Glu Pro Ser
115                 120                 125
Thr Arg His Thr Gln Pro Glu Thr Gln Lys Pro Arg Ile Pro Val Asp
130                 135                 140
Thr Pro Leu Lys Glu Cys Gln Ser His Thr His Pro Pro Ser Ile Tyr
145                 150                 155                 160
Leu Leu His Pro Pro Leu Gln Gly Leu Trp Leu Lys Gly Glu Ala Thr
165                 170                 175
Phe Thr Cys Leu Val Val Gly Asp Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Ser
180                 185                 190
Trp Glu Leu Ser Glu Arg Ser Asn Gly Met Phe Val Glu Ser Gly Pro
195                 200                 205
Leu Glu Lys His Thr Asn Gly Ser Gln Ser Arg Ser Ser Arg Leu Ala
210                 215                 220
Leu Pro Arg Ser Ser Trp Ala Met Gly Thr Ser Val Thr Cys Lys Leu
225                 230                 235                 240
Ser Tyr Pro Asn Leu Leu Ser Ser Met Glu Val Val Gly Leu Lys Glu
245                 250                 255
His Ala Ala Ser Ala Pro Arg Ser Leu Thr Val His Ala Leu Thr Thr
260                 265                 270
Pro Gly Leu Asn Ala Ser Pro Gly Ala Thr Ser Trp Leu Gln Cys Lys
275                 280                 285
Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Glu Ile Val Leu Thr Trp Leu Glu Gly
290                 295                 300
Gln Arg Glu Val Asp Pro Ser Trp Phe Ala Thr Ala Arg Pro Thr Ala
305                 310                 315                 320
Gln Pro Gly Asn Thr Thr Phe Gln Thr Trp Ser Ile Leu Leu Val Pro
325                 330                 335
Thr Ile Pro Gly Pro Pro Thr Ala Thr Tyr Thr Cys Val Val Gly His
340                 345                 350
Glu Ala Ser Arg Gln Leu Leu Asn Thr Ser Trp Ser Leu Asp Thr Gly
355                 360                 365
Gly Leu Ala Met Thr Pro Glu Ser Lys Asp Glu Asn Ser Asp Asp Tyr
370                 375                 380
Ala Asp Leu Asp Asp Ala Gly Ser Leu Trp Leu Thr Phe Met Ala Leu
385                 390                 395                 400
Phe Leu Ile Thr Leu Leu Tyr Ser Gly Phe Val Thr Phe Ile Lys
405                 410                 415
<210> 7
<211> 334
<212> Белок
<213> Canis familiaris
<400> 7
Ser Lys Thr Ser Pro Ser Val Phe Pro Leu Ser Leu Cys His Gln Glu
1               5                   10                  15
Ser Glu Gly Tyr Val Val Ile Gly Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe Pro
20                  25                  30
Pro Glu Pro Val Asn Val Thr Trp Asn Ala Gly Lys Asp Ser Thr Ser
35                  40                  45
Val Lys Asn Phe Pro Pro Met Lys Ala Ala Thr Gly Ser Leu Tyr Thr
50                  55                  60
Met Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Ala Gln Cys Pro Asp Asp Ser
65                  70                  75                  80
Ser Val Lys Cys Gln Val Gln His Ala Ser Ser Pro Ser Lys Ala Val
85                  90                  95
Ser Val Pro Cys Lys Asp Asn Ser His Pro Cys His Pro Cys Pro Ser
100                 105                 110
Cys Asn Glu Pro Arg Leu Ser Leu Gln Lys Pro Ala Leu Glu Asp Leu
115                 120                 125
Leu Leu Gly Ser Asn Ala Ser Leu Thr Cys Thr Leu Ser Gly Leu Lys
130                 135                 140
Asp Pro Lys Gly Ala Thr Phe Thr Trp Asn Pro Ser Lys Gly Lys Glu
145                 150                 155                 160
Pro Ile Gln Lys Asn Pro Glu Arg Asp Ser Cys Gly Cys Tyr Ser Val
165                 170                 175
Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys Ala Asp Pro Trp Asn His Gly Asp Thr
180                 185                 190
Phe Ser Cys Thr Ala Thr His Pro Glu Ser Lys Ser Pro Ile Thr Val
195                 200                 205
Ser Ile Thr Lys Thr Thr Glu His Ile Pro Pro Gln Val His Leu Leu
210                 215                 220
Pro Pro Pro Ser Glu Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr
225                 230                 235                 240
Cys Leu Val Arg Gly Phe Lys Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu
245                 250                 255
Gln Gly Thr Gln Glu Leu Pro Gln Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Glu Pro
260                 265                 270
Leu Lys Glu Pro Asp Gln Thr Asn Met Phe Ala Val Thr Ser Met Leu
275                 280                 285
Arg Val Thr Ala Glu Asp Trp Lys Gln Gly Glu Lys Phe Ser Cys Met
290                 295                 300
Val Gly His Glu Ala Leu Pro Met Ser Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp
305                 310                 315                 320
Arg Leu Ala Gly Lys Pro Thr His Val Asn Val Ser Val Val
325                 330
<210> 8
<211> 426
<212> Белок
<213> Canis familiaris
<400> 8
Thr Ser Gln Asp Leu Ser Val Phe Pro Leu Ala Ser Cys Cys Lys Asp
1               5                   10                  15
Asn Ile Ala Ser Thr Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Leu Pro Met Ser Thr Thr Val Thr Trp Asp Thr Gly Ser Leu Asn Lys
35                  40                  45
Asn Val Thr Thr Phe Pro Thr Thr Phe His Glu Thr Tyr Gly Leu His
50                  55                  60
Ser Ile Val Ser Gln Val Thr Ala Ser Gly Lys Trp Ala Lys Gln Arg
65                  70                  75                  80
Phe Thr Cys Ser Val Ala His Ala Glu Ser Thr Ala Ile Asn Lys Thr
85                  90                  95
Phe Ser Ala Cys Ala Leu Asn Phe Ile Pro Pro Thr Val Lys Leu Phe
100                 105                 110
His Ser Ser Cys Asn Pro Val Gly Asp Thr His Thr Thr Ile Gln Leu
115                 120                 125
Leu Cys Leu Ile Ser Gly Tyr Val Pro Gly Asp Met Glu Val Ile Trp
130                 135                 140
Leu Val Asp Gly Gln Lys Ala Thr Asn Ile Phe Pro Tyr Thr Ala Pro
145                 150                 155                 160
Gly Thr Lys Glu Gly Asn Val Thr Ser Thr His Ser Glu Leu Asn Ile
165                 170                 175
Thr Gln Gly Glu Trp Val Ser Gln Lys Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr
180                 185                 190
Tyr Gln Gly Phe Thr Phe Lys Asp Glu Ala Arg Lys Cys Ser Glu Ser
195                 200                 205
Asp Pro Arg Gly Val Thr Ser Tyr Leu Ser Pro Pro Ser Pro Leu Asp
210                 215                 220
Leu Tyr Val His Lys Ala Pro Lys Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu
225                 230                 235                 240
Ala Thr Met Glu Gly Met Asn Leu Thr Trp Tyr Arg Glu Ser Lys Glu
245                 250                 255
Pro Val Asn Pro Gly Pro Leu Asn Lys Lys Asp His Phe Asn Gly Thr
260                 265                 270
Ile Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Asn Thr Asn Asp Trp Ile Glu
275                 280                 285
Gly Glu Thr Tyr Tyr Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Lys Asp
290                 295                 300
Ile Val Arg Ser Ile Ala Lys Ala Pro Gly Lys Arg Ala Pro Pro Asp
305                 310                 315                 320
Val Tyr Leu Phe Leu Pro Pro Glu Glu Glu Gln Gly Thr Lys Asp Arg
325                 330                 335
Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Gln Asn Phe Phe Pro Ala Asp Ile Ser
340                 345                 350
Val Gln Trp Leu Arg Asn Asp Ser Pro Ile Gln Thr Asp Gln Tyr Thr
355                 360                 365
Thr Thr Gly Pro His Lys Val Ser Gly Ser Arg Pro Ala Phe Phe Ile
370                 375                 380
Phe Ser Arg Leu Glu Val Ser Arg Val Asp Trp Glu Gln Lys Asn Lys
385                 390                 395                 400
Phe Thr Cys Gln Val Val His Glu Ala Leu Ser Gly Ser Arg Ile Leu
405                 410                 415
Gln Lys Trp Val Ser Lys Thr Pro Gly Lys
420                 425
<210> 9
<211> 335
<212> Белок
<213> Felis catus
<400> 9
Ala Ser Thr Thr Ala Ser Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1               5                   10                  15
Thr Thr Ser Gly Ala Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Leu Gly Tyr
20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ala Ser Gly Leu Tyr Ser
50                  55                  60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Leu Ser Asp Thr
65                  70                  75                  80
Phe Thr Cys Asn Val Ala His Arg Pro Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys
85                  90                  95
Thr Val Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly
100                 105                 110
Pro Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile
115                 120                 125
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu
130                 135                 140
Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln
145                 150                 155                 160
Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg
165                 170                 175
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
180                 185                 190
Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys
195                 200                 205
Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys
210                 215                 220
Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr
225                 230                 235                 240
Gln Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys
245                 250                 255
Gly Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln
260                 265                 270
Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser
275                 280                 285
Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His
290                 295                 300
Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu
305                 310                 315                 320
His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
325                 330                 335
<210> 10
<211> 96
<212> Белок
<213> Camelus dromedarius
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Glu Arg Glu Gly Val
35                  40                  45
Ala Ala Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
<210> 11
<211> 96
<212> Белок
<213> Camelus dromedarius
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
<210> 12
<211> 1434
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь IgG2b мыши к AGE
<400> 12
atggacccca agggcagcct gagctggaga atcctgctgt tcctgagcct ggccttcgag     60
ctgagctacg gccaggtgca gctgctgcag ccaggtgccg agctcgtgaa acctggcgcc    120
tctgtgaagc tggcctgcaa ggcttccggc tacctgttca ccacctactg gatgcactgg    180
ctgaagcaga ggccaggcca gggcctggaa tggatcggcg agatctcccc caccaacggc    240
agagcctact acaacgcccg gttcaagtcc gaggccaccc tgaccgtgga caagtcctcc    300
aacaccgcct acatgcagct gtcctccctg acctctgagg cctccgccgt gtactactgc    360
gccagagctt acggcaacta cgagttcgcc tactggggcc agggcaccct cgtgacagtg    420
tctgtggcta agaccacccc tccctccgtg taccctctgg ctcctggctg tggcgacacc    480
accggatcct ctgtgaccct gggctgcctc gtgaagggct acttccctga gtccgtgacc    540
gtgacctgga actccggctc cctgtcctcc tccgtgcaca cctttccagc cctgctgcag    600
tccggcctgt acaccatgtc ctccagcgtg acagtgccct cctccacctg gccttcccag    660
accgtgacat gctctgtggc ccaccctgcc tcttccacca ccgtggacaa gaagctggaa    720
ccctccggcc ccatctccac catcaaccct tgccctccct gcaaagaatg ccacaagtgc    780
cctgccccca acctggaagg cggcccttcc gtgttcatct tcccacccaa catcaaggac    840
gtgctgatga tctccctgac ccccaaagtg acctgcgtgg tggtggacgt gtccgaggac    900
gaccctgacg tgcagatcag ttggttcgtg aacaacgtgg aagtgcacac cgcccagacc    960
cagacacaca gagaggacta caacagcacc atcagagtgg tgtctaccct gcccatccag   1020
caccaggact ggatgtccgg caaagaattc aagtgcaaag tgaacaacaa ggacctgccc   1080
agccccatcg agcggaccat ctccaagatc aagggcctcg tgcgggctcc ccaggtgtac   1140
attctgcctc caccagccga gcagctgtcc cggaaggatg tgtctctgac atgtctggtc   1200
gtgggcttca accccggcga catctccgtg gaatggacct ccaacggcca caccgaggaa   1260
aactacaagg acaccgcccc tgtgctggac tccgacggct cctacttcat ctactccaag   1320
ctgaacatga agacctccaa gtgggaaaag accgactcct tctcctgcaa cgtgcggcac   1380
gagggcctga agaactacta cctgaagaaa accatctccc ggtcccccgg ctag         1434
<210> 13
<211> 1416
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Химерная тяжелая цепь антитела IgG1 человека к AGE
<400> 13
atggacccca agggcagcct gagctggaga atcctgctgt tcctgagcct ggccttcgag     60
ctgagctacg gccaggtgca gctgctgcag ccaggtgccg agctcgtgaa acctggcgcc    120
tctgtgaagc tggcctgcaa ggcttccggc tacctgttca ccacctactg gatgcactgg    180
ctgaagcaga ggccaggcca gggcctggaa tggatcggcg agatctcccc caccaacggc    240
agagcctact acaacgcccg gttcaagtcc gaggccaccc tgaccgtgga caagtcctcc    300
aacaccgcct acatgcagct gtcctccctg acctctgagg cctccgccgt gtactactgc    360
gccagagctt acggcaacta cgagttcgcc tactggggcc agggcaccct cgtgacagtg    420
tctgtggcta gcaccaaggg ccccagcgtg ttccctctgg cccccagcag caagagcacc    480
agcggcggaa ccgccgccct gggctgcctg gtgaaggact acttccccga gcccgtgacc    540
gtgtcctgga acagcggcgc tctgaccagc ggagtgcaca ccttccctgc cgtgctgcag    600
agcagcggcc tgtactccct gagcagcgtg gtgaccgtgc ccagcagcag cctgggcacc    660
cagacctaca tctgcaacgt gaaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagaaggtg    720
gagcctaaga gctgcgacaa gacccacacc tgccctccct gccccgcccc cgagctgctg    780
ggcggaccca gcgtgttcct gttccctccc aagcccaagg acaccctgat gatcagccgc    840
acccccgagg tgacctgcgt ggtggtggac gtgagccacg aggaccccga ggtgaagttc    900
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagcctcg ggaggagcag    960
tacaactcca cctaccgcgt ggtgagcgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac   1020
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtgagcaac aaggccctgc ccgctcccat cgagaagacc   1080
atcagcaagg ccaagggcca gccccgggag cctcaggtgt acaccctgcc ccccagccgc   1140
gacgagctga ccaagaacca ggtgagcctg acctgcctgg tgaagggctt ctacccctcc   1200
gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcctgaga acaactacaa gaccacccct   1260
cccgtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtacagca agctgaccgt ggacaagtcc   1320
cggtggcagc agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac   1380
tacacccaga agagcctgag cctgagcccc ggatag                             1416
<210> 14
<211> 720
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Легкая каппа-цепь мышиного антитела к AGE
<400> 14
atggagaccg acaccctgct gctctgggtg ctgctgctct gggtgcccgg ctccaccgga     60
gacgtcgtga tgacccagac ccctctgtcc ctgcctgtgt ctctgggcga ccaggcctcc    120
atctcctgcc ggtctagaca gtccctcgtg aactccaacg gcaacacctt cctgcagtgg    180
tatctgcaga agcccggcca gtcccccaag ctgctgatct acaaggtgtc cctgcggttc    240
tccggcgtgc ccgacagatt ttccggctct ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc    300
tcccgggtgg aagccgagga cctgggcctg tacttctgca gccagtccac ccacgtgccc    360
cctacatttg gcggaggcac caagctggaa atcaaacggg cagatgctgc accaactgta    420
tccatcttcc caccatccag tgagcagtta acatctggag gtgcctcagt cgtgtgcttc    480
ttgaacaact tctaccccaa agacatcaat gtcaagtgga agattgatgg cagtgaacga    540
caaaatggcg tcctgaacag ttggactgat caggacagca aagacagcac ctacagcatg    600
agcagcaccc tcacgttgac caaggacgag tatgaacgac ataacagcta tacctgtgag    660
gccactcaca agacatcaac ttcacccatt gtcaagagct tcaacaggaa tgagtgttga    720
<210> 15
<211> 720
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Химерная легкая каппа-цепь антитела человека к AGE
<400> 15
atggagaccg acaccctgct gctctgggtg ctgctgctct gggtgcccgg ctccaccgga     60
gacgtcgtga tgacccagac ccctctgtcc ctgcctgtgt ctctgggcga ccaggcctcc    120
atctcctgcc ggtctagaca gtccctcgtg aactccaacg gcaacacctt cctgcagtgg    180
tatctgcaga agcccggcca gtcccccaag ctgctgatct acaaggtgtc cctgcggttc    240
tccggcgtgc ccgacagatt ttccggctct ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc    300
tcccgggtgg aagccgagga cctgggcctg tacttctgca gccagtccac ccacgtgccc    360
cctacatttg gcggaggcac caagctggaa atcaagcgga ccgtggccgc ccccagcgtg    420
ttcatcttcc ctcccagcga cgagcagctg aagtctggca ccgccagcgt ggtgtgcctg    480
ctgaacaact tctacccccg cgaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag    540
agcggcaaca gccaggagag cgtgaccgag caggactcca aggacagcac ctacagcctg    600
agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag    660
gtgacccacc agggactgtc tagccccgtg accaagagct tcaaccgggg cgagtgctaa    720
<210> 16
<211> 477
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь мышиного антитела IgG2b к AGE
<400> 16
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly
20                  25                  30
Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala
35                  40                  45
Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg
50                  55                  60
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly
65                  70                  75                  80
Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe Lys Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val
85                  90                  95
Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser
100                 105                 110
Glu Ala Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Glu
115                 120                 125
Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Val Ala Lys
130                 135                 140
Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr
145                 150                 155                 160
Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro
165                 170                 175
Glu Ser Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Ser Val
180                 185                 190
His Thr Phe Pro Ala Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Met Ser Ser
195                 200                 205
Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys
210                 215                 220
Ser Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Lys Lys Leu Glu
225                 230                 235                 240
Pro Ser Gly Pro Ile Ser Thr Ile Asn Pro Cys Pro Pro Cys Lys Glu
245                 250                 255
Cys His Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe
260                 265                 270
Ile Phe Pro Pro Asn Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro
275                 280                 285
Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val
290                 295                 300
Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr
305                 310                 315                 320
Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr
325                 330                 335
Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys
340                 345                 350
Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser
355                 360                 365
Lys Ile Lys Gly Leu Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Ile Leu Pro Pro
370                 375                 380
Pro Ala Glu Gln Leu Ser Arg Lys Asp Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
385                 390                 395                 400
Val Gly Phe Asn Pro Gly Asp Ile Ser Val Glu Trp Thr Ser Asn Gly
405                 410                 415
His Thr Glu Glu Asn Tyr Lys Asp Thr Ala Pro Val Leu Asp Ser Asp
420                 425                 430
Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn Met Lys Thr Ser Lys Trp
435                 440                 445
Glu Lys Thr Asp Ser Phe Ser Cys Asn Val Arg His Glu Gly Leu Lys
450                 455                 460
Asn Tyr Tyr Leu Lys Lys Thr Ile Ser Arg Ser Pro Gly
465                 470                 475
<210> 17
<211> 471
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Химерная тяжелая цепь IgG1 человека к AGE
<400> 17
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly
20                  25                  30
Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala
35                  40                  45
Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg
50                  55                  60
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly
65                  70                  75                  80
Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe Lys Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val
85                  90                  95
Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser
100                 105                 110
Glu Ala Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Glu
115                 120                 125
Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Val Ala Ser
130                 135                 140
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
145                 150                 155                 160
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
165                 170                 175
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
180                 185                 190
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
195                 200                 205
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
210                 215                 220
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
225                 230                 235                 240
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
245                 250                 255
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260                 265                 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275                 280                 285
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
290                 295                 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305                 310                 315                 320
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325                 330                 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
340                 345                 350
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355                 360                 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
370                 375                 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385                 390                 395                 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405                 410                 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
420                 425                 430
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
435                 440                 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450                 455                 460
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
465                 470
<210> 18
<211> 239
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Легкая каппа-цепь мышиного антитела к AGE
<400> 18
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1               5                   10                  15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro
20                  25                  30
Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser
35                  40                  45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys
50                  55                  60
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65                  70                  75                  80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85                  90                  95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe
100                 105                 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
115                 120                 125
Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro
130                 135                 140
Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe
145                 150                 155                 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp
165                 170                 175
Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp
180                 185                 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys
195                 200                 205
Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys
210                 215                 220
Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225                 230                 235
<210> 19
<211> 239
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Химерная легкая каппа-цепь антитела человека к AGE
<400> 19
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1               5                   10                  15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro
20                  25                  30
Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser
35                  40                  45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys
50                  55                  60
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65                  70                  75                  80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85                  90                  95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe
100                 105                 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
115                 120                 125
Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130                 135                 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165                 170                 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180                 185                 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195                 200                 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210                 215                 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210> 20
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь IgG2b мыши к AGE (вариабельная область)
<400> 20
Gln Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr
20                  25                  30
Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe
50                  55                  60
Lys Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Val
115
<210> 21
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Легкая каппа-цепь мышиного антитела к AGE (вариабельная область)
<400> 21
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85                  90                  95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  22
<211>  326
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Константная область человека
<400>  22
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85                  90                  95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100                 105                 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115                 120                 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130                 135                 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145                 150                 155                 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165                 170                 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180                 185                 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195                 200                 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210                 215                 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245                 250                 255
Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260                 265                 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275                 280                 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290                 295                 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305                 310                 315                 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210>  23
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  CDR1H (тяжелая цепь)
<400>  23
Ser Tyr Thr Met Gly Val Ser
1               5
<210>  24
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  CDR2H (тяжелая цепь)
<400>  24
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  25
<211>  10
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  CDR3H (тяжелая цепь)
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (10)..(10)
<223>  Xaa может быть любой природной аминокислотой
<400>  25
Gln Gly Gly Trp Leu Pro Pro Phe Ala Xaa
1               5                   10
<210>  26
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  CDR1L (легкая цепь)
<400>  26
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Ser Arg Gly Tyr Ser Tyr Met
1               5                   10                  15
His
<210>  27
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  CDR2L (легкая цепь)
<400>  27
Leu Val Ser Asn Leu Glu Ser
1               5
<210>  28
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  CDR3L (легкая цепь)
<400>  28
Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg Ser
1               5
<210>  29
<211>  468
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная тяжелая цепь
<400>  29
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly
20                  25                  30
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala
35                  40                  45
Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala
50                  55                  60
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly
65                  70                  75                  80
Arg Ala Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val
85                  90                  95
Asp Lys Ser Thr Asn Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser
100                 105                 110
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Phe
115                 120                 125
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130                 135                 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145                 150                 155                 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165                 170                 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180                 185                 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195                 200                 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210                 215                 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225                 230                 235                 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro Glu
245                 250                 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260                 265                 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275                 280                 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290                 295                 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305                 310                 315                 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325                 330                 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340                 345                 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355                 360                 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Lys Asn Gln
370                 375                 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385                 390                 395                 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
405                 410                 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
420                 425                 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
435                 440                 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
450                 455                 460
Leu Ser Pro Gly
465
<210>  30
<211>  1408
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  30
atggacccca agggcagcct gagctggaga atcctgctgt tcctgagcct ggccttcgag       60
ctgagctacg gccaggtgca gctggtgcag tctggcgccg aagtgaagaa acctggcgcc      120
tccgtgaggt gtcctgcaag gcttccggct acctgttcac cacctactgg atgcactggg      180
tgcgacaggc ccctggacag ggcctggaat ggatgggcga gatctcccct accaacggca      240
gagcctacta caacagaaat tccagggcag agtgaccatg accgtggaca agtccaccaa      300
caccgtgtac atggaactgt cctccctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc      360
tagagcctac ggcaactacg attcgcctac tggggccagg gcaccctcgt gacagtgtcc      420
tctgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cctctggccc ccagcagcaa gagcaccagc      480
ggcggaaccg ccgccctggg ctgcctggga aggactactt ccccgagccc gtgaccgtgt      540
cctggaacag cggcgctctg accagcggag tgcacacctt ccctgccgtg ctgcagagca      600
gcggcctgta ctccctgagc agcgtggtga ccgtgccagc agcagcctgg gcacccagac      660
ctacatctgc aacgtgaacc acaagccctc caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc      720
taagagctgc gacaagaccc acacctgccc tccctgcccc gccccgagct gctgggcgga      780
cccagcgtgt tcctgttccc tcccaagccc aaggacaccc tgatgatcag ccgcaccccc      840
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgag ttcaactggt      900
acgtggacgg cgtggaggtg cacaacgcca agaccaagcc tcgggaggag cagtacaact      960
ccacctaccg cgtggtgagc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcagga     1020
gtacaagtgc aaggtgagca acaaggccct gcccgctccc atcgagaaga ccatcagcaa     1080
ggccaagggc cagccccggg agcctcaggt gtacaccctg ccccccagcc gcgacgagct     1140
gacaagaacc aggtgagcct gacctgcctg gtgaagggct tctacccctc cgacatcgcc     1200
gtggagtggg agagcaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc tcccgtgctg     1260
gacagcgacg cagcttcttc ctgtacagca agctgaccgt ggacaagtcc cggtggcagc     1320
agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac tacacccaga     1380
agagcctgag cctgagcccg gatagtaa                                        1408
<210>  31
<211>  468
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная тяжелая цепь
<400>  31
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly
20                  25                  30
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala
35                  40                  45
Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala
50                  55                  60
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly
65                  70                  75                  80
Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val
85                  90                  95
Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser
100                 105                 110
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Phe
115                 120                 125
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130                 135                 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145                 150                 155                 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165                 170                 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180                 185                 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195                 200                 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210                 215                 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225                 230                 235                 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro Glu
245                 250                 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260                 265                 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275                 280                 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290                 295                 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305                 310                 315                 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325                 330                 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340                 345                 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355                 360                 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Lys Asn Gln
370                 375                 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385                 390                 395                 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
405                 410                 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
420                 425                 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
435                 440                 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
450                 455                 460
Leu Ser Pro Gly
465
<210>  32
<211>  1408
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  32
atggacccca agggcagcct gagctggaga atcctgctgt tcctgagcct ggccttcgag       60
ctgagctacg gccaggtgca gctggtgcag tctggcgccg aagtgaagaa acctggcgcc      120
tccgtgaggt gtcctgcaag gcttccggct acctgttcac cacctactgg atgcactggg      180
tgcgacaggc ccctggacag ggcctggaat ggatgggcga gatctcccct accaacggca      240
gagcctacta caaccaaaat tccagggcag agtgaccatg accgtggaca agtccaccaa      300
caccgcttac atggaactgt cctccctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc      360
tagagcctac ggcaactacg attcgcctac tggggccagg gcaccctcgt gacagtgtcc      420
tctgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cctctggccc ccagcagcaa gagcaccagc      480
ggcggaaccg ccgccctggg ctgcctggga aggactactt ccccgagccc gtgaccgtgt      540
cctggaacag cggcgctctg accagcggag tgcacacctt ccctgccgtg ctgcagagca      600
gcggcctgta ctccctgagc agcgtggtga ccgtgccagc agcagcctgg gcacccagac      660
ctacatctgc aacgtgaacc acaagccctc caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc      720
taagagctgc gacaagaccc acacctgccc tccctgcccc gccccgagct gctgggcgga      780
cccagcgtgt tcctgttccc tcccaagccc aaggacaccc tgatgatcag ccgcaccccc      840
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgag ttcaactggt      900
acgtggacgg cgtggaggtg cacaacgcca agaccaagcc tcgggaggag cagtacaact      960
ccacctaccg cgtggtgagc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcagga     1020
gtacaagtgc aaggtgagca acaaggccct gcccgctccc atcgagaaga ccatcagcaa     1080
ggccaagggc cagccccggg agcctcaggt gtacaccctg ccccccagcc gcgacgagct     1140
gacaagaacc aggtgagcct gacctgcctg gtgaagggct tctacccctc cgacatcgcc     1200
gtggagtggg agagcaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc tcccgtgctg     1260
gacagcgacg cagcttcttc ctgtacagca agctgaccgt ggacaagtcc cggtggcagc     1320
agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac tacacccaga     1380
agagcctgag cctgagcccg gatagtaa                                        1408
<210>  33
<211>  468
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная тяжелая цепь
<400>  33
Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly
20                  25                  30
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala
35                  40                  45
Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala
50                  55                  60
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly
65                  70                  75                  80
Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val
85                  90                  95
Asp Lys Ser Ile Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser
100                 105                 110
Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Phe
115                 120                 125
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130                 135                 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145                 150                 155                 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165                 170                 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180                 185                 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195                 200                 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210                 215                 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225                 230                 235                 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro Glu
245                 250                 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260                 265                 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275                 280                 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290                 295                 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305                 310                 315                 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325                 330                 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340                 345                 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355                 360                 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Lys Asn Gln
370                 375                 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385                 390                 395                 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
405                 410                 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
420                 425                 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
435                 440                 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
450                 455                 460
Leu Ser Pro Gly
465
<210>  34
<211>  1408
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная тяжелая цепь
<400>  34
atggacccca agggcagcct gagctggaga atcctgctgt tcctgagcct ggccttcgag       60
ctgagctacg gccaggtgca gctggtgcag tctggcgccg aagtgaagaa acctggcgcc      120
tccgtgaggt gtcctgcaag gcttccggct acctgttcac cacctactgg atgcactggg      180
tgcgacaggc ccctggacag ggcctggaat ggatgggcga gatctcccct accaacggca      240
gagcctacta caaccaaaat tccagggcag agtgaccatg accgtggaca agtccatcaa      300
caccgcttac atggaactgt ccagactgcg gagcgatgac accgccgtgt actactgcgc      360
tagagcctac ggcaactacg attcgcctac tggggccagg gcaccctcgt gacagtgtcc      420
tctgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cctctggccc ccagcagcaa gagcaccagc      480
ggcggaaccg ccgccctggg ctgcctggga aggactactt ccccgagccc gtgaccgtgt      540
cctggaacag cggcgctctg accagcggag tgcacacctt ccctgccgtg ctgcagagca      600
gcggcctgta ctccctgagc agcgtggtga ccgtgccagc agcagcctgg gcacccagac      660
ctacatctgc aacgtgaacc acaagccctc caacaccaag gtggacaaga aggtggagcc      720
taagagctgc gacaagaccc acacctgccc tccctgcccc gccccgagct gctgggcgga      780
cccagcgtgt tcctgttccc tcccaagccc aaggacaccc tgatgatcag ccgcaccccc      840
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgag ttcaactggt      900
acgtggacgg cgtggaggtg cacaacgcca agaccaagcc tcgggaggag cagtacaact      960
ccacctaccg cgtggtgagc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcagga     1020
gtacaagtgc aaggtgagca acaaggccct gcccgctccc atcgagaaga ccatcagcaa     1080
ggccaagggc cagccccggg agcctcaggt gtacaccctg ccccccagcc gcgacgagct     1140
gacaagaacc aggtgagcct gacctgcctg gtgaagggct tctacccctc cgacatcgcc     1200
gtggagtggg agagcaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc tcccgtgctg     1260
gacagcgacg cagcttcttc ctgtacagca agctgaccgt ggacaagtcc cggtggcagc     1320
agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac tacacccaga     1380
agagcctgag cctgagcccg gatagtaa                                        1408
<210>  35
<211>  238
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  35
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1               5                   10                  15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro
20                  25                  30
Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser
35                  40                  45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Arg
50                  55                  60
Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65                  70                  75                  80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85                  90                  95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
100                 105                 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Val
115                 120                 125
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
130                 135                 140
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
145                 150                 155                 160
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
165                 170                 175
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
180                 185                 190
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
195                 200                 205
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
210                 215                 220
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>  36
<211>  715
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  36
atggagaccg acaccctgct gctctgggtg ctgctgctct gggtgcccgg ctccaccgga       60
gacgtcgtga tgacccagtc ccctctgtcc ctgcctgtga ccctgggaca gcctgcctcc      120
atctcctcag atcctcccag tccctcgtga actccaacgg caacaccttc ctgcagtggt      180
atcagcagcg gcctggccag agccccagac tgctgatcta caaggtgtcc ctgcggttct      240
ccggcgtgcc cgacgatttt ccggctctgg ctctggcacc gacttcaccc tgaagatctc      300
ccgggtggaa gccgaggacg tgggcgtgta ctactgctcc cagagcaccc acgtgccccc      360
tacatttggc ggaggcacca agtggaaatc aagcggaccg tggccgcccc cagcgtgttc      420
atcttccctc ccagcgacga gcagctgaag tctggcaccg ccagcgtggt gtgcctgctg      480
aacaacttct acccccgcga ggccaagggc agtggaaggt ggacaacgcc ctgcagagcg      540
gcaacagcca ggagagcgtg accgagcagg actccaagga cagcacctac agcctgagca      600
gcaccctgac cctgagcaag gccgactacg agaagacaag gtgtacgcct gcgaggtgac      660
ccaccaggga ctgtctagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gctaa           715
<210>  37
<211>  238
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  37
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1               5                   10                  15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro
20                  25                  30
Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser
35                  40                  45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Arg
50                  55                  60
Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65                  70                  75                  80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85                  90                  95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
100                 105                 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Val
115                 120                 125
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
130                 135                 140
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
145                 150                 155                 160
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
165                 170                 175
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
180                 185                 190
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
195                 200                 205
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
210                 215                 220
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>  38
<211>  715
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  38
atggagaccg acaccctgct gctctgggtg ctgctgctct gggtgcccgg ctccaccgga       60
gacgtcgtga tgacccagtc ccctctgtcc ctgcctgtga ccctgggaca gcctgcctcc      120
atctcctcag atccaggcag tccctcgtga actccaacgg caacaccttc ctgcagtggt      180
atcagcagcg gcctggccag agccccagac tgctgatcta caaggtgtcc ctgcggttct      240
ccggcgtgcc cgacgatttt ccggctctgg ctctggcacc gacttcaccc tgaagatctc      300
ccgggtggaa gccgaggacg tgggcgtgta ctactgctcc cagagcaccc acgtgccccc      360
tacatttggc ggaggcacca agtggaaatc aagcggaccg tggccgcccc cagcgtgttc      420
atcttccctc ccagcgacga gcagctgaag tctggcaccg ccagcgtggt gtgcctgctg      480
aacaacttct acccccgcga ggccaagggc agtggaaggt ggacaacgcc ctgcagagcg      540
gcaacagcca ggagagcgtg accgagcagg actccaagga cagcacctac agcctgagca      600
gcaccctgac cctgagcaag gccgactacg agaagacaag gtgtacgcct gcgaggtgac      660
ccaccaggga ctgtctagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gctaa           715
<210>  39
<211>  238
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  39
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1               5                   10                  15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Ser Pro
20                  25                  30
Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser
35                  40                  45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr His Gln Arg
50                  55                  60
Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65                  70                  75                  80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Lys Asp Phe
85                  90                  95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
100                 105                 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Leu
115                 120                 125
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
130                 135                 140
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
145                 150                 155                 160
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
165                 170                 175
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
180                 185                 190
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
195                 200                 205
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
210                 215                 220
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>  40
<211>  715
<212>  ДНК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  40
atggagaccg acaccctgct gctctgggtg ctgctgctct gggtgcccgg ctccaccgga       60
gacgtcgtga tgacccagtc ccctctgtcc agtcctgtga ccctgggaca gcctgcctcc      120
atctcctcag atcctcccag tccctcgtga actccaacgg caacaccttc ctgcagtggt      180
atcaccagcg gcctggccag cctcccagac tgctgatcta caaggtgtcc ctgcggttct      240
ccggcgtgcc cgacgatttt ccggctctgg cgctggcaag gacttcaccc tgaagatctc      300
ccgggtggaa gccgaggacg tgggcgtgta ctactgctcc cagagcaccc acgtgccccc      360
tacatttggc cagggcacca actggaaatc aagcggaccg tggccgcccc cagcgtgttc      420
atcttccctc ccagcgacga gcagctgaag tctggcaccg ccagcgtggt gtgcctgctg      480
aacaacttct acccccgcga ggccaagggc agtggaaggt ggacaacgcc ctgcagagcg      540
gcaacagcca ggagagcgtg accgagcagg actccaagga cagcacctac agcctgagca      600
gcaccctgac cctgagcaag gccgactacg agaagacaag gtgtacgcct gcgaggtgac      660
ccaccaggga ctgtctagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gctaa           715
<210>  41
<211>  5
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  41
Thr Tyr Trp Met His
1               5
<210>  42
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  42
Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe Lys
1               5                   10                  15
Ser
<210>  43
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  43
Ala Tyr Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr
1               5
<210>  44
<211>  16
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  44
Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln
1               5                   10                  15
<210>  45
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  45
Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser
1               5
<210>  46
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  46
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr
1               5
<210>  47
<211>  467
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  47
Met Gly Trp Thr Leu Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly
1               5                   10                  15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys
20                  25                  30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe
35                  40                  45
Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50                  55                  60
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn
65                  70                  75                  80
Ala Arg Phe Lys Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn
85                  90                  95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Ser Ala Val
100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Phe Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly
115                 120                 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Val Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130                 135                 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
145                 150                 155                 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165                 170                 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180                 185                 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195                 200                 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
210                 215                 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
225                 230                 235                 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245                 250                 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260                 265                 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275                 280                 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290                 295                 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305                 310                 315                 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325                 330                 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340                 345                 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355                 360                 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
370                 375                 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385                 390                 395                 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405                 410                 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420                 425                 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435                 440                 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450                 455                 460
Pro Gly Lys
465
<210>  48
<211>  467
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная тяжелая цепь
<400>  48
Met Gly Trp Thr Leu Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly
1               5                   10                  15
Val His Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Ala Lys Lys
20                  25                  30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe
35                  40                  45
Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Val His Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu
50                  55                  60
Glu Trp Met Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn
65                  70                  75                  80
Ala Arg Phe Lys Ser Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Ala Ser
85                  90                  95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Phe Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly
115                 120                 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130                 135                 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
145                 150                 155                 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165                 170                 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180                 185                 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195                 200                 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
210                 215                 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
225                 230                 235                 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245                 250                 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260                 265                 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275                 280                 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290                 295                 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305                 310                 315                 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325                 330                 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340                 345                 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355                 360                 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
370                 375                 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385                 390                 395                 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405                 410                 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420                 425                 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435                 440                 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450                 455                 460
Pro Gly Lys
465
<210>  49
<211>  467
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная тяжелая цепь
<400>  49
Met Gly Trp Thr Leu Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly
1               5                   10                  15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20                  25                  30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe
35                  40                  45
Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu
50                  55                  60
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn
65                  70                  75                  80
Ala Arg Phe Lys Ser Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser
85                  90                  95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Phe Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly
115                 120                 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130                 135                 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
145                 150                 155                 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165                 170                 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180                 185                 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195                 200                 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
210                 215                 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
225                 230                 235                 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245                 250                 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260                 265                 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275                 280                 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290                 295                 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305                 310                 315                 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325                 330                 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340                 345                 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355                 360                 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
370                 375                 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385                 390                 395                 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405                 410                 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420                 425                 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435                 440                 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450                 455                 460
Pro Gly Lys
465
<210>  50
<211>  467
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная тяжелая цепь
<400>  50
Met Gly Trp Thr Leu Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly
1               5                   10                  15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20                  25                  30
Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe
35                  40                  45
Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50                  55                  60
Glu Trp Met Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn
65                  70                  75                  80
Ala Arg Phe Lys Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser
85                  90                  95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Phe Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly
115                 120                 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130                 135                 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
145                 150                 155                 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165                 170                 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180                 185                 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195                 200                 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
210                 215                 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
225                 230                 235                 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245                 250                 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260                 265                 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275                 280                 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290                 295                 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305                 310                 315                 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325                 330                 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340                 345                 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355                 360                 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
370                 375                 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385                 390                 395                 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405                 410                 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420                 425                 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435                 440                 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450                 455                 460
Pro Gly Lys
465
<210>  51
<211>  467
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная тяжелая цепь
<400>  51
Met Gly Trp Thr Leu Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly
1               5                   10                  15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20                  25                  30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Leu Phe
35                  40                  45
Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50                  55                  60
Glu Trp Met Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn
65                  70                  75                  80
Ala Arg Phe Lys Ser Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn
85                  90                  95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Phe Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly
115                 120                 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130                 135                 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
145                 150                 155                 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165                 170                 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180                 185                 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195                 200                 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
210                 215                 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
225                 230                 235                 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245                 250                 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260                 265                 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275                 280                 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290                 295                 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305                 310                 315                 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325                 330                 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340                 345                 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355                 360                 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
370                 375                 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385                 390                 395                 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405                 410                 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420                 425                 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435                 440                 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450                 455                 460
Pro Gly Lys
465
<210>  52
<211>  118
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  52
Gln Val Gln Leu Leu Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ala Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr
20                  25                  30
Trp Met His Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe
50                  55                  60
Lys Ser Glu Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Ala Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ser Phe Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Val
115
<210>  53
<211>  118
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариабельная область гуманизированной тяжелой цепи
<400>  53
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Ala Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr
20                  25                  30
Trp Met His Trp Val His Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe
50                  55                  60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ser Phe Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  54
<211>  118
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариабельная область гуманизированной тяжелой цепи
<400>  54
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr
20                  25                  30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe
50                  55                  60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ser Phe Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  55
<211>  118
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариабельная область гуманизированной тяжелой цепи
<400>  55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr
20                  25                  30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe
50                  55                  60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ser Phe Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  56
<211>  118
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариабельная область гуманизированной тяжелой цепи
<400>  56
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Leu Phe Thr Thr Tyr
20                  25                  30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Glu Ile Ser Pro Thr Asn Gly Arg Ala Tyr Tyr Asn Ala Arg Phe
50                  55                  60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ser Phe Gly Asn Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  57
<211>  239
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  57
Met Val Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly Thr Arg Cys Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro
20                  25                  30
Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser
35                  40                  45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys
50                  55                  60
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65                  70                  75                  80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85                  90                  95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe
100                 105                 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
115                 120                 125
Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130                 135                 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165                 170                 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180                 185                 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195                 200                 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210                 215                 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>  58
<211>  239
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  58
Met Val Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly Thr Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro
20                  25                  30
Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser
35                  40                  45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Leu Gln Gln Arg
50                  55                  60
Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65                  70                  75                  80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe
85                  90                  95
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Phe
100                 105                 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
115                 120                 125
Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130                 135                 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165                 170                 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180                 185                 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195                 200                 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210                 215                 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>  59
<211>  239
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  59
Met Val Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly Thr Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser
20                  25                  30
Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser
35                  40                  45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys
50                  55                  60
Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65                  70                  75                  80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85                  90                  95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
100                 105                 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
115                 120                 125
Val Glu Val Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130                 135                 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165                 170                 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180                 185                 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195                 200                 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210                 215                 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>  60
<211>  239
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  60
Met Val Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly Thr Arg Cys Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro
20                  25                  30
Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser
35                  40                  45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Phe Gln Gln Arg
50                  55                  60
Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65                  70                  75                  80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Asp Phe
85                  90                  95
Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr
100                 105                 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
115                 120                 125
Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130                 135                 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165                 170                 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180                 185                 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195                 200                 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210                 215                 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>  61
<211>  239
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Гуманизированная легкая цепь
<400>  61
Met Val Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly Thr Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser
20                  25                  30
Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser
35                  40                  45
Leu Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gln Lys
50                  55                  60
Pro Gly Gln Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe
65                  70                  75                  80
Ser Gly Val Pro Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85                  90                  95
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr
100                 105                 110
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
115                 120                 125
Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130                 135                 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165                 170                 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180                 185                 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195                 200                 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210                 215                 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>  62
<211>  112
<212>  Белок
<213>  Mus musculus
<400>  62
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85                  90                  95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  63
<211>  112
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариабельная область гуманизированной легкой цепи
<400>  63
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro
35                  40                  45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85                  90                  95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  64
<211>  112
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариабельная область гуманизированной легкой цепи
<400>  64
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85                  90                  95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Val Lys
100                 105                 110
<210>  65
<211>  112
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариабельная область гуманизированной легкой цепи
<400>  65
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85                  90                  95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  66
<211>  112
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариабельная область гуманизированной легкой цепи
<400>  66
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val Asn Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu Gln Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Leu Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85                  90                  95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<---