СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ МНОЖЕСТВА КУЛЬТИВИРОВАННЫХ КЛЕТОК НА НАЛИЧИЕ РЕГУЛЯРНЫХ СТРУКТУР ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДНОГО ЦЕЛЕВОГО КОМПОНЕНТА, СОДЕРЖАЩЕГОСЯ В КУЛЬТИВИРОВАННЫХ КЛЕТКАХ

1. Способ исследования множества культивированных клеток на наличие регулярных структур по меньшей мере одного целевого компонента, содержащегося в культивированных клетках, причем способ содержит этапы, на которых
обеспечивают множество культивированных клеток, подлежащих исследованию,
фиксируют культивированные клетки, подлежащие исследованию, сохраняя любые структуры по меньшей мере одного целевого компонента, содержащегося в культивированных клетках,
окрашивают по меньшей мере один целевой компонент, содержащийся в зафиксированных культивированных клетках, используя первый окрашивающий агент, связанный с по меньшей мере одним целевым компонентом, и способный при возбуждении испускать свет первой длины волны,
возбуждают первый окрашивающий агент, что приводит к тому, что он испускает свет первой длины волны,
получают двухмерное изображение (2) зафиксированных культивированных клеток с первым окрашивающим агентом, испускающим свет первой длины волны,
из упомянутого двухмерного изображения (2) зафиксированных культивированных клеток извлекают двухмерное первое отфильтрованное изображение (5), показывающее яркими только те части, которые содержат по меньшей мере один целевой компонент, с которым связан первый окрашивающий агент,
осуществляют автокорреляцию первого отфильтрованного изображения (5) или взаимную корреляцию первого отфильтрованного изображения со вторым двухмерным отфильтрованным изображением, извлеченным из двухмерного изображения зафиксированных культивированных клеток и показывающего яркими только части, отличных от тех, которые содержат по меньшей мере один целевой
компонент, с которым связан первый окрашивающий агент, для получения двухмерного корреляционного изображения (3), и
определяют наличие или отсутствие регулярных структур по меньшей мере одного целевого компонента, содержащегося в зафиксированных культивированных клетках, путем определения присутствуют ли в корреляционном изображении (3) регулярные структуры в максимумах (30) и минимумах (31) яркости.
2. Способ по п. 1, в котором этап, на котором извлекают двухмерные первое и второе отфильтрованные изображения? содержит выполнение фильтрации гребней и впадин двухмерного изображения зафиксированных культивированных клеток,
для того чтобы сгенерировать двухмерное изображение (5) гребней, в котором полосообразные структуры по меньшей мере одного целевого компонента, с которым связан окрашивающий агент, усилены по яркости, и в котором любые структуры, отличные от полосообразных структур по меньшей мере одного целевого компонента, с которым связан окрашивающий агент, ослаблены по яркости, указанное изображение гребней образует первое отфильтрованное изображение,
и для того чтобы сгенерировать двухмерное изображение впадин, в котором полосообразные структуры, расположенные между полосообразными структурами по меньшей мере одного целевого компонента, с которым связан окрашивающий агент, усилены по яркости, и в котором структуры, отличные от полосообразных структур, расположенных между полосообразными структурами по меньшей мере одного целевого компонента, с которым связан окрашивающий агент, ослаблены по яркости, указанное изображение впадин образует второе отфильтрованное изображение,
и в котором осуществляют взаимную корреляцию изображения (5) гребней и изображения впадин, чтобы сгенерировать корреляционное изображение (3).
3. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором корреляционное изображение (3) генерируют путем
выполнения преобразования Фурье первого отфильтрованного изображения для получения двухмерного Фурье-преобразованного первого отфильтрованного изображения и умножения Фурье-преобразованного первого отфильтрованного изображения само на себя для получения двухмерного Фурье-преобразованного корреляционного изображения, или
выполнения преобразования Фурье первого отфильтрованного изображения и выполнения преобразования Фурье второго отфильтрованного изображения для получения двухмерного Фурье-преобразованного второго отфильтрованного изображения и умножения Фурье-преобразованного первого отфильтрованного изображения на Фурье-преобразованное второе отфильтрованное изображение для получения двухмерного Фурье-преобразованного корреляционного изображения,
выполнения обратного преобразования Фурье Фурье-преобразованного корреляционного изображения для получения двухмерного корреляционного изображения (3).
4. Способ по п. 3, в котором этап на котором выполняют преобразование Фурье первого и второго отфильтрованных изображений, так же как и этап выполнения обратного преобразования Фурье Фурье-преобразованного корреляционного изображения, выполняют с использованием алгоритма быстрого преобразования Фурье.
5. Способ по любому из пп. 1, 2 или 4, в котором яркость двухмерного корреляционного изображения (3) усредняют до определенного радиуса в пределах всей окружности, и в котором это усреднение яркости в пределах всей окружности выполняют при различных радиусах для получения одномерной корреляционной функции (6), и в котором из этой одномерной корреляционной функции (6) степень полосатости в двухмерном изображении (2) зафиксированных культивированных клеток получают
путем определения расстояния между двумя смежными максимумами (60) яркости или путем определения расстояния между максимумом (60) и смежным минимумом (61) яркости одномерной корреляционной функции (6) и путем определения соотношения амплитуд яркости двух смежных максимумов (60) или соотношения амплитуд яркости максимума (60) и смежного минимума (61) одномерной корреляционной функции (6).
6. Способ по п. 3, в котором яркость двухмерного корреляционного изображения (3) усредняют до определенного радиуса в пределах всей окружности, и в котором это усреднение яркости в пределах всей окружности выполняют при различных радиусах для получения одномерной корреляционной функции (6), и в котором из этой одномерной корреляционной функции (6) степень полосатости в двухмерном изображении (2) зафиксированных культивированных клеток получают путем определения расстояния между двумя смежными максимумами (60) яркости или путем определения расстояния между максимумом (60) и смежным минимумом (61) яркости одномерной корреляционной функции (6), и путем определения соотношения амплитуд яркости двух смежных максимумов (60) или соотношения амплитуд яркости максимума (60) и смежного минимума (61) одномерной корреляционной функции (6).
7. Способ по любому из пп. 1, 2, 4 или 6, который дополнительно содержит этап, на котором выполняют преобразование Фурье двухмерного корреляционного изображения для получения двухмерного Фурье-преобразованного корреляционного изображения (4), в котором из этого Фурье-преобразованного корреляционного изображения (4) определяют расстояние (k, K) между смежными максимумами (40) яркости измеряя расстояние между полосообразными структурами в двухмерном изображении (2) культивированных клеток, и в котором также угол (ϕ, α), под которым расположены смежные максимумы яркости? определяют как отображающий единую ориентацию (21), в соответствии с которой регулярные полосообразные структуры (20) располагаются в двухмерном изображении (2) культивированных клеток.
8. Способ по п. 3, который дополнительно содержит этап, на котором выполняют преобразование Фурье двухмерного корреляционного изображения для получения двухмерного Фурье-преобразованного корреляционного изображения (4), в котором из этого Фурье-преобразованного корреляционного изображения (4) определяют расстояние (k, K) между смежными максимумами (40) яркости измеряя расстояние между полосообразными структурами в двухмерном изображении (2) культивированных клеток, и в котором также угол (ϕ, α), под которым расположены смежные максимумы яркости? определяют как отображающий единую ориентацию (21), в соответствии с которой регулярные полосообразные структуры (20) располагаются в двухмерном изображении (2) культивированных клеток.
9. Способ по п. 5, который дополнительно содержит этап, на котором выполняют преобразование Фурье двухмерного корреляционного изображения для получения двухмерного Фурье-преобразованного корреляционного изображения (4), в котором из этого Фурье-преобразованного корреляционного изображения (4) определяют расстояние (k, K) между смежными максимумами (40) яркости? измеряя расстояние между полосообразными структурами в двухмерном изображении (2) культивированных клеток, и в котором также угол (ϕ, α), под которым расположены смежные максимумы яркости, определяют как отображающий единую ориентацию (21), в соответствии с которой регулярные полосообразные структуры (20) располагаются в двухмерном изображении (2) культивированных клеток.
10. Способ по п. 7, в котором этап, на котором выполняют преобразование Фурье двухмерного корреляционного изображения (3), выполняют, используя алгоритм быстрого преобразования Фурье.
11. Способ по п. 8 или 9, в котором этап, на котором выполняют преобразование Фурье двухмерного корреляционного изображения (3), выполняют, используя алгоритм быстрого преобразования Фурье.
12. Способ идентификации вещества - потенциального кандидата в лекарственное средство для лечения мышечных заболеваний или заболеваний миокарда, связанных с повреждением саркомерных структур в миоцитах или кардиомиоцитах, причем способ содержит этапы, на которых
обеспечивают множество живых миоцитов или кардиомиоцитов, содержащих саркомерные структуры,
к множеству живых миоцитов или кардиомиоцитов добавляют вещество, оказывающее стрессовое воздействие, что приводит к разрушению саркомерных структур или по меньшей мере их существенному сокращению,
после добавления вещества, оказывающего стрессовое воздействие, к множеству живых миоцитов или кардиомиоцитов, содержащих разрушенные или по меньшей мере существенно сокращенные саркомерные структуры, добавляют вещество-кандидат,
после того как было добавлено вещество-кандидат, культивируют миоциты или кардиомиоциты,
определяют, привело ли добавление вещества-кандидата к образованию саркомерных структур, вновь сформировавшихся в культивированных миоцитах или кардиомиоцитах,
если добавление вещества-кандидата привело к образованию саркомерных структур, вновь сформировавшихся в культивированных миоцитах или кардиомиоцитах, вещество-кандидат квалифицируют в качестве кандидата в лекарственное средство,
причем этап, на котором определяют, привело ли добавление вещества-кандидата к образованию саркомерных структур, вновь сформировавшихся в миоцитах или кардиомиоцитах, содержит использование способа по любому из пп. 1-11.
13. Способ идентификации способности вещества - потенциального кандидата лекарственного средства обладать защитным действием против мышечных заболеваний или заболеваний миокарда, связанных
с повреждением саркомерных структур в миоцитах или кардиомиоцитах, причем способ содержит этапы, на которых
обеспечивают множество живых миоцитов или кардиомиоцитов, содержащих саркомерные структуры,
к множеству живых миоцитов или кардиомиоцитов добавляют вещество-кандидат,
после добавления вещества-кандидата к множеству живых миоцитов или кардиомиоцитов добавляют вещество, оказывающее стрессовое воздействие, что приводит к разрушению саркомерных структур или по меньшей мере их существенному сокращению,
после того как было добавлено вещество, оказывающее стрессовое воздействие, культивируют миоциты или кардиомиоциты,
определяют, привело ли добавление вещества, оказывающего стрессовое воздействие, к разрушению или по меньшей мере существенному сокращению саркомерных структур,
если добавление вещества, оказывающего стрессовое воздействие, не привело к разрушению или по меньшей мере существенному сокращению саркомерных структур, вещество-кандидат квалифицируют в качестве кандидата в лекарственное средство,
причем этап, на котором определяют, привело ли добавление указанного вещества к разрушению или по меньшей мере существенному сокращению саркомерных структур в миоцитах или кардиомиоцитах, содержит использование способа по любому из пп. 1-11.
14. Способ определения наличия саркомерных структур в живых миоцитах или кардиомиоцитах, полученных из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, причем способ содержит этапы, на которых
обеспечивают множество живых индуцированных плюрипотентных стволовых клеток,
вызывают дифференцировку живых индуцированных плюрипотентных стволовых клеток в живые миоциты или кардиомиоциты,
культивируют живые миоциты или кардиомиоциты,
определяют, содержат ли культивированные миоциты или кардиомиоциты саркомерные структуры,
причем этап, на котором определяют, содержат ли культивированные живые миоциты или кардиомиоциты сакромерные структуры, содержит использование способа по любому из пп. 1-11.
15. Способ по п. 14, дополнительно содержащий этапы, на которых
до культивирования живых миоцитов или кардиомиоцитов к живым миоцитам и кардиомиоцитам добавляют вещество, оказывающее стрессовое воздействие, что приводит к разрушению саркомерных структур или по меньшей мере их существенному сокращению, и
после осуществления способа по любому из пп. 1-11 определяют, привело ли добавление вещества, оказывающего стрессовое воздействие к разрушению или по меньшей мере существенному сокращению саркомерных структур в культивированных миоцитах или кардиомиоцитах.