СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЯВЛЕНИЯ КРОВОТЕЧЕНИЯ У БОЛЬНОГО ГЕМОФИЛИЕЙ

1. Способ лечения кровотечения у больного гемофилией без ингибиторов, включающий
введение больному фиксированной дозы от приблизительно 30 мг до приблизительно 90 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (РНКи), которая ингибирует экспрессию Serpinc1,
причем средство двухцепочечной РНКи содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности к иРНК, кодирующей Serpinc1, которая содержит по меньшей мере 15 соседних нуклеотидов, отличающихся не более чем на 3 нуклеотида от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), причем по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити представляют собой модифицированные нуклеотиды, и при этом смысловая нить конъюгирована с лигандом, присоединенным на 3'-конце; и
введение больному терапевтически эффективного количества замещающего фактора, причем эффективное количество замещающего фактора уменьшено по сравнению с рекомендованным эффективным количеством замещающего фактора,
за счет этого происходит лечение кровотечения у больного гемофилией без ингибиторов.
2. Способ лечения кровотечения у больного гемофилией с ингибиторами, включающий
введение больному фиксированной дозы от приблизительно 30 мг до приблизительно 90 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (РНКи), которая ингибирует экспрессию Serpinc1,
причем средство двухцепочечной РНКи содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности к иРНК, кодирующей Serpinc1, которая содержит по меньшей мере 15 соседних нуклеотидов, отличающихся не более чем на 3 нуклеотида от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), причем по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити представляют собой модифицированные нуклеотиды, и при этом смысловая нить конъюгирована с лигандом, присоединенным на 3'-конце; и
введение больному терапевтически эффективного количества шунтирующего средства, причем эффективное количество шунтирующего средства уменьшено по сравнению с рекомендованным эффективным количеством шунтирующего средства,
за счет этого происходит лечение кровотечения у больного гемофилией с ингибиторами.
3. Способ лечения кровотечения у больного гемофилией без ингибиторов, включающий
введение больному фиксированной дозы от приблизительно 40 мг до приблизительно 90 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (РНКи), которая ингибирует экспрессию Serpinc1,
причем средство двухцепочечной РНКи содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности к иРНК, кодирующей Serpinc1, которая содержит по меньшей мере 15 соседних нуклеотидов, отличающихся не более чем на 3 нуклеотида от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), причем по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити представляют собой модифицированные нуклеотиды, и при этом смысловая нить конъюгирована с лигандом, присоединенным на 3'-конце; и
введение больному терапевтически эффективного количества замещающего фактора, причем эффективное количество замещающего фактора уменьшено по сравнению с рекомендованным эффективным количеством замещающего фактора,
за счет этого происходит лечение кровотечения у больного гемофилией без ингибиторов.
4. Способ лечения кровотечения у больного гемофилией с ингибиторами, включающий
введение больному фиксированной дозы от приблизительно 40 мг до приблизительно 90 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (РНКи), которая ингибирует экспрессию Serpinc1,
причем средство двухцепочечной РНКи содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем антисмысловая нить содержит область комплементарности к иРНК, кодирующей Serpinc1, которая содержит по меньшей мере 15 соседних нуклеотидов, отличающихся не более чем на 3 нуклеотида от нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15), причем по существу все нуклеотиды смысловой нити и по существу все нуклеотиды антисмысловой нити представляют собой модифицированные нуклеотиды, и при этом смысловая нить конъюгирована с лигандом, присоединенным на 3'-конце; и
введение больному терапевтически эффективного количества шунтирующего средства, причем эффективное количество шунтирующего средства уменьшено по сравнению с рекомендованным эффективным количеством шунтирующего средства,
за счет этого происходит лечение кровотечения у больного гемофилией с ингибиторами.
5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором фиксированную дозу средства двухцепочечной РНКи вводят больному один раз в месяц, один раз каждые шесть недель, один раз каждые 2 месяца или ежеквартально.
6. Способ по любому из пп. 1-4, в котором средство двухцепочечной РНКи вводят больному в фиксированной дозе приблизительно 50 мг.
7. Способ по любому из пп. 1-4, в котором средство двухцепочечной РНКи вводят больному в фиксированной дозе приблизительно 80 мг.
8. Способ по любому из пп. 1-7, в котором средство двухцепочечной РНКи вводят больному подкожно.
9. Способ по любому из пп. 1-6, в котором больным является человек.
10. Способ по п. 9, в котором гемофилией является гемофилия A, гемофилия B или гемофилия C.
11. Способ по любому из пп. 1-10, в котором все нуклеотиды смысловой нити и все нуклеотиды антисмысловой нити представляют собой модифицированные нуклеотиды.
12. Способ по любому из пп. 1-11, в котором модифицированные нуклеотиды независимо выбирают из группы, состоящей из 2'-деокси-2'-фтор-модифицированного нуклеотида, 2'-деокси-модифицированного нуклеотида, заблокированного нуклеотида, лишенного азотистого основания нуклеотида, 2'-амино-модифицированного нуклеотида, 2'-алкил-модифицированного нуклеотида, морфолинонуклеотида, фосфорамидата и нуклеотида, содержащего неприродное основание.
13. Способ по любому из пп. 1-12, в котором область комплементарности составляет по меньшей мере 17 нуклеотидов в длину.
14. Способ по любому из пп. 1-13, в котором область комплементарности составляет от 19 до 21 нуклеотида в длину.
15. Способ по п. 14, в котором область комплементарности составляет 19 нуклеотидов в длину.
16. Способ по любому из пп. 1-15, в котором каждая нить имеет не более чем 30 нуклеотидов в длину.
17. Способ по любому из пп. 1-16, в котором каждая смысловая нить и антисмысловая нить независимо имеет 19-25 нуклеотидов в длину.
18. Способ по любому из пп. 1-17, в котором каждая смысловая нить и антисмысловая нить независимо имеет 21-23 нуклеотида в длину.
19. Способ по любому из пп. 1-18, в котором смысловая нить составляет 21 нуклеотид в длину и антисмысловая нить составляет 23 нуклеотида в длину.
20. Способ по любому из пп. 1-19, в котором по меньшей мере одна нить содержит 3' выступ по меньшей мере из 1 нуклеотида.
21. Способ по любому из пп. 1-19, в котором по меньшей мере одна нить содержит 3' выступ по меньшей мере из 2 нуклеотидов.
22. Способ по любому из пп. 1-21, в котором лиганд представляет собой производное N-ацетилгалактозамина (GalNAc).
23. Способ по п. 22, в котором лиганд представляет собой
.
24. Способ по п. 23, в котором средство двухцепочечной РНКи конъюгирован с лигандом, как показано на следующей схеме
и при этом X представляет O или S.
25. Способ по п. 24, где X представляет O.
26. Способ по любому из пп. 1-25, в котором область комплементарности состоит из нуклеотидной последовательности 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15).
27. Способ по любому из пп. 1-26, в котором средство двухцепочечной РНКи содержит смысловую нить, содержащую нуклеотидную последовательность 5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA-3' (SEQ ID NO: 16), и при этом антисмысловая нить содержит нуклеотидную последовательность 5'-UUGAAGUAAAUGGUGUUAACCAG-3' (SEQ ID NO: 15).
28. Способ по п. 27, в котором смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), а антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14),
где a, c, g и u представляют 2′-O-метил (2′-OMe) A, C, G или U; Af, Cf, Gf или Uf представляют 2′-фтор A, C, G или U; а s представляет фосфоротиоатную связь.
29. Способ по любому из пп. 1-28, в котором смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), а антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14),
где a, c, g и u представляют 2′-O-метил (2′-OMe) A, C, G или U; Af, Cf, Gf или Uf представляют 2′-фтор A, C, G или U; а s представляет фосфоротиоатную связь; и
при этом смысловая нить конъюгирована с лигандом, как показано на следующей схеме
где X представляет O или S.
30. Способ по любому из пп. 1-29, в котором средство двухцепочечной РНКи вводят больному в виде фармацевтической композиции.
31. Способ по любому из пп. 1-30, в котором введение больному средства дцРНК снижает активность Serpinc1 приблизительно на 75% или более.
32. Способ по любому из пп. 1, 3 и 5-31, в котором замещающим фактором является фактор VIII.
33. Способ по п. 32, в котором терапевтически эффективное количество фактора VIII, вводимое больному, меньше, чем приблизительно 200 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 190 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 180 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 170 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 160 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 150 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 140 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 130 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 120 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 110 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 100 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 90 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 80 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 70 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 60 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 50 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 40 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 30 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 20 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 10 МЕ/кг.
34. Способ по п. 32, в котором терапевтически эффективное количество фактора VIII, вводимое больному, от приблизительно в полтора раза до приблизительно в пять раз меньше, чем рекомендованное эффективное количество фактора VIII.
35. Способ по п. 34, в котором терапевтически эффективное количество фактора VIII, вводимое больному, составляет дозу от приблизительно 10 до приблизительно 20 МЕ/кг.
36. Способ по любому из пп. 1, 3, и 5-28, в котором замещающим фактором является фактор IX.
37. Способ по п. 36, в котором терапевтически эффективное количество фактора IX, вводимое больному, меньше, чем приблизительно 200 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 190 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 180 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 170 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 160 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 150 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 140 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 130 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 120 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 110 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 100 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 90 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 80 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 70 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 60 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 50 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 40 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 30 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 20 МЕ/кг, или меньше, чем приблизительно 10 МЕ/кг.
38. Способ по п. 36, в котором терапевтически эффективное количество фактора IX, вводимое больному, от приблизительно двух раз до приблизительно шести раз меньше, чем рекомендованное эффективное количество фактора IX.
39. Способ по п. 38, в котором терапевтически эффективное количество фактора IX, вводимое больному, составляет дозу от приблизительно 20 до приблизительно 30 МЕ/кг.
40. Способ по любому из пп. 2 и 4-31, в котором шунтирующим средством является активированный концентрат протромбинового комплекса (aPCC).
41. Способ по п. 40, в котором терапевтически эффективное количество aPCC, вводимое больному, меньше, чем приблизительно 100 Е/кг, или меньше, чем приблизительно 90 Е/кг, или меньше, чем приблизительно 80 Е/кг, или меньше, чем приблизительно 70 Е/кг, или меньше, чем приблизительно 60 Е/кг, или меньше, чем приблизительно 50 Е/кг, или меньше, чем приблизительно 40 Е/кг, или меньше, чем приблизительно 30 Е/кг, или меньше, чем приблизительно 20 Е/кг, или меньше, чем приблизительно 10 Е/кг.
42. Способ по п. 40, в котором терапевтически эффективное количество aPCC, вводимое больному, от приблизительно двух раз до приблизительно трех раз меньше, чем рекомендованное эффективное количество aPCC.
43. Способ по п. 42, в котором терапевтически эффективное количество aPCC, вводимое больному, составляет дозу от приблизительно 30 до приблизительно 50 Е/кг.
44. Способ по любому из пп. 2 и 4-31, в котором шунтирующим средством является рекомбинантный фактор VIIa (rFVIIa).
45. Способ по п. 44, в котором терапевтически эффективное количество therFVIIa, вводимое больному, меньше, чем приблизительно 120 мкг/кг, или меньше, чем приблизительно 110 мкг/кг, или меньше, чем приблизительно 100 мкг/кг, или меньше, чем приблизительно 90 мкг/кг, или меньше, чем приблизительно 80 мкг/кг, или меньше, чем приблизительно 70 мкг/кг, или меньше, чем приблизительно 60 мкг/кг, или меньше, чем приблизительно 50 мкг/кг, или меньше, чем приблизительно 40 мкг/кг, или меньше, чем приблизительно 30 мкг/кг, или меньше, чем приблизительно 20 мкг/кг.
46. Способ по п. 45, в котором терапевтически эффективное количество rFVIIa, вводимое больному, приблизительно в два раза меньше, чем рекомендованное эффективное количество rFVIIa.
47. Способ по п. 46, в котором терапевтически эффективное количество rFVIIa, вводимое больному, составляет дозу приблизительно 45 мкг/кг.
48. Способ по любому из пп. 1-47, дополнительно включающий измерение уровней тромбина у больного.
49. Способ по любому из пп. 1-48, дополнительно включающий измерение уровней замещающего фактора у больного.
50. Способ лечения кровотечения у больного гемофилией без ингибиторов, включающий
введение больному фиксированной дозы, равной приблизительно 80 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (РНКи), которое ингибирует экспрессию Serpinc1,
причем средство двухцепочечной РНКи содержит смысловую нить и антисмысловую нить,
причем смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), а антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14),
где a, c, g и u представляют 2′-O-метил (2′-OMe) A, C, G или U; Af, Cf, Gf или Uf представляют 2′-фтор A, C, G или U; а s представляет фосфоротиоатную связь; и
при этом 3'-конец смысловой нити конъюгирован с лигандом, как показано на следующей схеме
причем X представляет O или S; и
введение больному терапевтически эффективного количества замещающего фактора, причем эффективное количество замещающего фактора уменьшено по сравнению с рекомендованным эффективным количеством замещающего фактора,
за счет этого происходит лечение кровотечения у больного гемофилией без ингибиторов.
51. Способ лечения кровотечения у больного гемофилией с ингибиторами, включающий
введение больному фиксированной дозы, равной приблизительно 80 мг средства двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (РНКи), которое ингибирует экспрессию Serpinc1,
причем средство двухцепочечной РНКи содержит смысловую нить и антисмысловую нить, причем смысловая нить содержит 5'-GfsgsUfuAfaCfaCfCfAfuUfuAfcUfuCfaAf-3' (SEQ ID NO:13), а антисмысловая нить содержит 5'-usUfsgAfaGfuAfaAfuggUfgUfuAfaCfcsasg-3' (SEQ ID NO:14),
где a, c, g и u представляют 2′-O-метил (2′-OMe) A, C, G или U; Af, Cf, Gf или Uf представляют 2′-фтор A, C, G или U; а s представляет фосфоротиоатную связь; и
при этом 3'-конец смысловой нити конъюгирован с лигандом, как показано на следующей схеме
где X представляет O или S; и
введение больному терапевтически эффективного количества шунтирующего средства, причем эффективное количество шунтирующего средства уменьшено по сравнению с рекомендованным эффективным количеством шунтирующего средства,
за счет этого происходит лечение кровотечения у больного гемофилией с ингибиторами.
52. Способ по п. 51 или 52, в котором фиксированную дозу средства РНКи вводят больному подкожно.
53. Способ по п. 51 или 52, в котором фиксированную дозу средства РНКи вводят больному один раз в месяц.
54. Способ по п. 51 или 52, в котором гемофилией является гемофилия A.
55. Способ по п. 51 или 52, в котором гемофилией является гемофилия B.
56. Способ по п. 51 или 52, в котором гемофилией является гемофилия C.