Панкреатические лектины: «Двуликий Янус» поджелудочной железы

этот штамм микроорганизма был выделен (на пораженных участках кожи интенсивнее, на интактных - слабее) [6].

Следующим этапом работы являлось изучение степени влияния различных углеводов на процесс адгезии золотистого стафилококка. В работе использован следующий ряд углеводов: мальтоза, лактоза, сахароза, глюкоза. Контролем служили результаты адгезии штаммов без участия углеводов. Полученные результаты представлены на рис. 1.

0 0,5 1 1,5 2 2,5

значение среднего показателя адгезии

Рис.1. Изменение среднего показателя адгезии золотистого стафилококка при действии углеводов

Из рис. 1 видно, что все используемые в работе углеводы ингибировали адгезию штаммов золотистого стафилококка. Однако выраженность этого явления для указанных углеводов оказалась различной. Так лактоза, специфически связываясь с лектиновыми рецепторами стафилококков, в большей степени, чем остальные сахара, ингибировала адгезию к эритроцитам, в результате чего СПА составил 1,69±0,2 по сравнению с контролем (р<0,05). Мальтоза и глюкоза ингибировали адгезию в равной степени (1,89±0,2 и 1,88±0,3 соответственно) и наименее выраженным данное явление было отмечено для сахарозы (1,97±0,3, р<0,05). Таким образом, установлено, что используемые в работе моносахариды подавляют гемагглютинирующую активность штаммов золотистого стафилококка, блокируя специфические активные центры лектина, участвующие в гемагглютинации частиц, а, следовательно, ингибируя процесс адгезии к эритроцитам крови.

Таким образом, проведенные исследования позволяют в некоторой степени определить спектр углеводов, способных специфически связываться с лектиновыми рецепторами золотистого стафилококка, а изучение углеводной специфичности лектино-вых рецепторов этих микроорганизмов является чрезвычайно важным для разработки дальнейших подходов к диагностике и изучению основ их персистенции.

Литература

1. Брилис В.И. и др. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов // Лабораторное дело. 1986. № 4. С. 210-212.

2. Горельникова Е.А. Влияние лектина бацилл на цитокино-вую активность фагоцитов: Автореф. дисс. ...канд. биол. наук. Саратов. 2006. 17 с.

3. Колякина А.В. Лектиновые рецепторы холерных вибрионов: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Ставрополь. 2009. 16 с.

4. Лахтин В.М. и др. Лектины, адгезины и лектиноподоб-ные вещества лактобацилл и бифидобактерий / Вестник Российской АМН. 2006. № 1. С. 28-34.

5. Поздеев О.К. Медицинская микробиология: учеб. пос. / под ред. В.И. Покровского. 4-е изд., испра. М.: ГЭОТАР-Медиа,

2008. 768 с.

6. Фалова О.Е. Адгезивный потенциал staphylococcus aureus при хронических дерматозах // Вестник Тамбовского госунивер-ситета им. Державина. 2009. Том 14, Вып. 2. С. 446-448.

7. Фалова О.Е., Гумаюнова Н.Г. Стафилококковое носитель -ство при хронических дерматозах // Сборник трудов конференции молодых ученых с международным участием «Актуальные вопросы инфекционной патологии 2009». С-Пб. МГУ. 2009. С. 66.

INFLUENCE OF CARBOHYDRATES ON STAPHYLOCOCCUS ADHESION INTENSITY

O.E. FALOVA Ulyanovsk State Technical University

Adhesive activity of Staphylococcus aureus allocated from chronic dermatosis skin has been studied. It is noted, that an average index of adhesion has large variation in extensive limits. A process of staphylococcus aureus adhesion inhibition has been simulated by various carbohydrates. It is shown that lactose reduces microorganism’s adhesion to erythrocytes more considerably than the other kinds of sugar.

Key words: adhesive activity, adhesion inhibition, staphylococcus aureus.

УДК 577.1 : 612.015.347

ПАНКРЕАТИЧЕСКИЕ ЛЕКТИНЫ: «ДВУЛИКИЙ ЯНУС» ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

А. К. МАРТУСЕВИЧ, Ж. Г. СИМОНОВА, Н. Ф. КАМАКИН*

Данная статья посвящена рассмотрению структуры, свойств и биологических функций одного из наиболее известных представителей семейства С-лективноых белков - литостатина. Обсуждается его потенциальная роль в патогенезе хронического панкреатита. Установлено, что литостатин может обладать разнонаправленным действием в отношении кристаллизации солей кальция, что непосредственно влияет на внутрипанкератический кристаллостаз. Предполагается, что литостатин является одним из многочисленных физиологических модуляторов кристаллогенных свойств биологических жидкостей человека и животных.

Ключевые слова: литостатин, лектиновые белки С-типа, кристаллизация, кристаллостаз, хронический панкреатит.

Патология функционирования поджелудочной железы (ПЖЖ) в настоящее время выявляется более чем у 10% взрослого населения [3,38,49]. В круг основных проблем, связанных с дисфункцией данного органа, прежде всего, входят сахарный диабет, острый и хронический панкреатит. Несмотря на это, многие механизмы физиологии и развития патологических состояний в ПЖЖ остаются нераскрытыми. Так, одним из наиболее частых вариантов хронического панкреатита является алкогольный, значимым звеном патогенеза которого служит формирование кальций-содержащих конкрементов (кальцификация) [4,38].

В начале 90 гг. прошлого столетия был обнаружен особый гликопротеин, предположительно способствующий поддержанию жидкого агрегатного состояния панкреатического сока и, следовательно, препятствующий протеканию в нем процессов кальцификации [13,22,50,60]. В связи с этим он получил логичное название «литостатин». Оказалось, что содержание литостатина в соке ПЖЖ достаточно высокое и составляет около 15% от всех его белковых компонентов [32,33]. Однако, даже учитывая углубленные физико-химические исследования [14,23,31] и выполненное рядом зарубежных авторов физическое и математическое моделирование молекулярных механизмов потенциального ингибирующего действия литостатина на различные этапы образования кальцификатов [22,27,36], дискуссия относительно роли данного соединения в патогенезе хронического панкреатита остается не до конца уточненной [4,12,53]. Кроме того, в отечественной литературе крайне мало сведений по данной проблеме [4,7].

Важно подчеркнуть, что большинство исследователей рассматривают кальцифицирующий панкреатит как изолированную патологию ПЖЖ, тогда как системный подход к рассмотрению обнаруженных нарушений коллоидной стабильности биосред, в частности, панкреатического сока, в доступной литературе не представлен. С другой стороны, многими авторами указывается на плейотропность Reg-гена, кодирующего синтез литостатина [10,18,29,64], его участие в процессах регенерации [20,42,47,66], апоптоза [55] и канцерогенеза [58,64]. В биологических жидкостях человека найдены различные пептидные и гликопептидные соединения, поддерживающие их кристаллогенную активность на постоянном (гомеостатическом) уровне [1,6,9,11], а функциональные и структурные гомологи литостатина широко представлены в животном мире: это гликопептидные антифриз-белки рыб [65], овоклеидин (главный белок кальцифицированного слоя яичной скорлупы [4]), перлюцин (белок, выделенный из ракови-

* ГОУ ВПО «Кировская государственная медицинская академия Росздрава»

ны моллюска Haliotis laevigata [62]), человеческий тетранектин, панкреатит-ассоцированный белок [24] и др. Важно, что все эти белки принято относить к семейству лектинов [37]. Наконец, сам литостатин обладает способностью препятствовать кристаллизации мочи даже при высокой степени ее пересыщения литогенными солями [51].

С учетом того, насколько сложна рассматриваемая с начала 90 проблема [35], а также общебиологического значения исследований биологического контроля кристаллизации и самоорганизации [1,8,9,39] принципиально важен критический анализ физиологической и патологической роли лектиновых белков, их участия в процессах поддержания и сдвига кристаллогенной стабильности панкреатического сока.

Общая характеристика семейства лектиновых белков. К настоящему времени установлено, что семейство лектиновых белков достаточно обширно и включает ряд секреторных протеинов, содержащих лектиновый домен С-типа, интегрированный с относительно коротким N-терминальным пептидом [37]. Основными представителями семейства являются литостатин (белок Х, белок панкреатических камней, Reg-протеин, белок Р19 и др.), панкреатит-ассоциированный белок (протеин Р29, HIP), белки Reg-1L, Reg-4, Reg-3 и т.д. Всего известно 9 белков-лектинов С-типа, из которых 7 имеют Ca2+-зависимую активность [4], в т.ч. эпидермальный фактор роста, человеческий сурфактант, человеческий тетранектин и др. Предполагается, что представители данного семейства способны обладать митогенным, антиапопто-генным и противовоспалительным действием, могут участвовать в регуляции адгезии клеток и агрегации бактерий. В то же время, одним из ключевых и клинически значимых эффектов служит активно оспариваемая ингибиторная активность литостатина по отношению к кристаллизации солей кальция [27,36,37,46].

Особую ценность с практических позиций имеет способность некоторых представителей семейства лектинов к повышению устойчивости против онкогенных агентов [37,57,58]. Раскрытие роли этих белков в канцерогенезе способно открыть новые горизонты в лечении больных с новообразованиями различной локализации (печень [64], кишечник [57], головной мозг [31] и др.).

Кроме того, интересные данные о состоянии поджелудочной железы могут быть получены при современном лабораторном исследовании - протеомном анализе панкреатического сока. Так, обнаружение в нем PAP-1L белка в достаточной концентрации, может служить основанием для разработки биомаркерной диагностики рака поджелудочной железы [34].

Следует отметить, что некоторые лектины могут играть роль ростовых факторов, причем этом эффект может быть достаточно специфичным. Так, у млекопитающих Reg-1 и INGAP белки обнаруживают специфическое модулирующее действие на островки Лангерганса [48], обеспечивая либо их выживание в неблагоприятных условиях, либо гибель.

В заключение общего обзора лектиновых белков следует подчеркнуть, что многими исследователями постулируется наличие специфических рецепторов для этих белков [37,44]. Данный тезис подтвержден результатами, полученными как in vitro (на культурах клеток [47]), так и in vivo (на лабораторных животных [37,44]).

Краткая структурно-функциональная характеристика литостатина. Литостатин (ЛС) представляет собой водорастворимый гликопротеин, содержащий 144 аминокислоты, образующих 3 дисульфидных мостика [23]. Выделено 11 изоформ ЛС с молекулярной массой в диапазоне 17-22 кД.

Панкреатический ЛС человека является продуктом экспрессии reg-гена (регенеративный ген) [10], который локализован в коротком плече 2 хромосомы (локус 2р12), состоит из примерно 3000 пар нуклеотидов и включает 6 экзонов.

Рассматриваемый лектин, секретируемый в поджелудоч-носй железе составляет 5-10% общего протеома панкреатического сока [4]. Впервые литостатин был обнаружен и описан J. Gross et. al. (1985) в соке поджелудочной железы человека. В следствии способностей изоформы S1 литостатина образовывать фибриллы при нейтральных значениях рН, данный белок первоначально был назван фибриллообразующим протеином (pancreatic thread protein) [32,33]. Четыре других изоформы (S2-5) при изучении свойств продемонстрировали ингибиторную активность в отношении роста кристаллов кальцита [14], в связи с чем изучаемый белок был расценен как фактор предотвращения формирования камней, за что и получил современное название [56]. Следует подчеркнуть, что исторически первое выделение литостатина из

панкреатических камней больных алкогольным кальцифицирующим панкреатитом произвели A. De Caro et al. (1979) [21], назвав его «белком панкреатических камней», но эти исследования тогда не получили широкой известности [53]. Оказалось, что этот протеин соответствует изоформе S1.

Представляет интерес тот факт, что изоформы S2-5 литоста-тина могут эффективно гидролизоваться трипсином панкреатического сока. Так, в условиях in vitro при воздействии трипсина литостатин гидролизуется с образованием изоформ H1 (пептид, содержащий 133 аминокислоты) и Н2 (N-терминальный ундека-пептид) (рис. 1).

Терминологический казус заключается в том, что приводимые в литературе изоформы S1 и С являются аналогичными по отношению к Н1, служа разными названиями одного пептида.

Литостатин (Reg-протеин) является, как уже указывалось, продуктом экспрессии reg-гена и образуется в регенерирующей печени или регенераторных островках поджелудочной железы, оставаясь на низком уровне в нормальных тканях [12,18,28,40,43].

Рис.1. Изоформы человеческого литостатина и их гидролиз трипсином [53]

Кристаллографическая структура литостатина представлена на рис. 2.

Рис. 2. Кристаллографическая структура литостатина (разрешение - 1,55 ангстрем) [53]

Функция литостатина в настоящее время остается дискута-бельной. В частности, для него показано стимулирующее действие в отношении регенерации р-клеток поджелудочной железы [44]. Однако, наиболее значимым и обсуждаемым его эффектом остается способность модифицировать кристаллизацию кальциевых солей в панкреатическом соке, чему и будет уделено максимальное внимание в данном обзоре, т.к. расшифровка этого феномена позволит более полно описать патогенез кальцифицирующего панкреатита, а, следовательно, оптимизировать его патогенетическое лечение. Для решения указанной задачи важно критически оценить имеющиеся представления о физикохимических механизмах модификации кристаллообразования кальциевых солей в присутствии литостатина.

Механизмы модуляции кристаллогенеза в панкреатическом соке литостатина. К настоящему времени имеют место 2 основных гипотезы, трактующие механизм ингибирующего действия литостатина в отношении панкреатического сока как пересыщенного кальциевыми солями раствора: связывания Са2+ и адсорбции. Экспериментальные данные, лежащие в основе первой гипотезы, базируются на демонстрации индуцированного роста кристаллов кальцита в присутствии нарастающих концентраций литостатина [14]. Результаты этих исследований частично иллюстрирует рис. 3.

О О- • &

О цМ 0,1 цМ 1 цМ 2 . М 3 цМ

Я о % & О ¿2)0  © © V * в- ! & • * ' V* О §£¡2 &

Рис. 3. Эффект действия различных концентраций литостатина на морфологию кристаллов кальцита

Эта гипотеза дополнительно подтверждена обнаружением в изучаемом соединении четырех Са2+-связывающих участков [4]. В то же время отсутствие кальция в центре панкреатических камней заставляет усомниться в участии иона в инициации кристаллообразования в поджелудочной железе [50]. Кроме того, несмотря на многочисленные изыскания, до сих пор не установлена эффективная ингибирующая концентрация литостатина в панкреатическом соке. Эти значения колеблются в интервале от

1,2 до 500 мкмоль/л [4,5,14].

Предположение об К-терминальном пептиде как медиаторе ингибиторного эффекта также не находит подтверерждения, т. к. для достижения сопоставимого с литостатином действия его концентрация должна быть в 100 раз выше (рис. 4).

О

О цМ

о

10 (хМ

О

100 цМ

Рис. 4. Эффект К-ундекапептида литостатина на кристаллизацию кальцита

Вторая предполагаемая гипотеза - адсорбционная - длительное время считалась основным механизмом ингибирования кристаллизации. На основании теоретических и экспериментальных сведений о том, что литостатин имеет большее сродство к кристаллу по сравнению со свободнными ионами кальция [21,50], а также подтверждение способности литостатина 82^ адсорбироваться на поверхности предсформированного кристалла [14] Н. 8аг1еБ е! а1. (1991) предложили механизм, связанный с адсорбцией К-терминального ундекапептида к кристаллической поверхности [56]. Это положение в дальнейшем доказано имму-нофлуоресцентными методами 8. Geider е! а1. (1996), которые показали возможность адсобрции литостатина на грани кристалла относительно оси роста последнего.

Позднее появились серьезные обратные наблюдения, в соответствии с которыми сродство литостатина к кристаллам, формирующимся солями кальция, даже ниже, чем у альбумина, второго основного компонента панкреатического сока, а уровень адсорбированных литостатина и альбумина примерно одинаков [22,23]. Более того, адсобрция литостатина на кристаллах кальцита не намного выше, чем на аморфном веществе (в частности, на стекле [53]).

Кроме всего вышеперечисленного, в общую закономерность не укладываются некоторые факты, обнаруженные побочно исследованиями в отношении литостатина. Во-первых, при-

меняемый в данных экспериментах ТРИС-буфер самостоятельно способен угнетать кристаллизацию солей кальция [23]. Во-вторых, в отдельных случаях литостатин (изоформы 82^) потенцировал нуклеацию кристаллов, кальций-содержащих солей [53], что приводило к формированию микрокристаллического «слад-жа», в дальнейшем вымываемого из протоковой системы поджелудочной железы.

Таким образом, проанализированные модели способны трактовать потенциальные эффекты литостатина в отношении его ингибирования кристаллизации солей кальция, но убедительные доказательства реальности данных схем на сегодняшний день отсутствуют, в связи с чем проблема требует своего окончательного решения. Выдвигаемый Ь. Ра1а^ е! а1. (2003) тезис о том, что адсорбция литостатина на кристаллах солей кальция -только неспецифический феномен [53], не объясняет очевидной связи динамики содержания литостатина и развития кальцифицирующего панкреатита. Следовательно, основные механизмы действия изучаемого соединения пока остаются нераскрытыми.

Участие литостатина в патогенезе панкреатита и другой патологии человека. Общая базисная концепция потенциального участия литостатина в патогенезе хронического панкреатита на первый взгляд достаточно логична и удачно изложена в обзоре И.В. Маева и Ю.А. Кучерявого [4,5]. Она основана на принятии литостатина как превалирующего фактора регуляции интенсивности внутрипанкреатической протоковой кальцификации и литогенеза. С учетом того, что при хроническом панкреатите алкогольной этиологии обнаружено выраженное снижение уровня данного белка в соке поджелудочной железы [50] в условиях физиологического и панкреатит-ассоциированного повышения концентрации бикарбонатов в этой жидкой биосреде предположение о лимитирующей роли литостатина в образовании панкреатических конкрементов путем ингибирования нуклеации, агрегации и роста кристаллов солей кальция [27,46,56]. Таким образом, этот протеин рассматривается как стабилизатор кристаллогенных свойств панкреатического сока [4]. По мнению указанных авторов, патогенез преципитации протеиново-кальциевых агрегатов есть результат гипосекреции литостатина при его повышенной потребности, возникающей, в частности, при ускоренном гидролизе белков панкреатического сока, индукции полимеризации пептидных компонентов, появлении в биосреде большого количества плохо растворимых протеинов, гиперсекреции минеральных кальцийсодержащих соединений и т.д. [2].

Подобный описанному выше ракурс восприятия кальцифицирующего панкреатита позволяет расценивать возникающие нарушения как внутриорганную секреторную дисфункцию, однако следует обратить внимание на имеющую место системность в анализируемых процессах и явлениях. Так, процессы камнеобра-зования и формирования частично или полностью кальцифицированных агрегатов - общебиологическое явление, находящее проявления практически во всех органах и тканях человека и животных [1,4,9]. В абсолютном большинстве жидких биосубстратов выявлены факторы стабилизации кристаллогенных свойств (обеспечения кристаллостаза [9]) преимущественно белковой природы [9,14]. В частности, такие сведения имеются для слюны [43] и мочи [51].

С другой стороны, обнаружено проявление биологической функции литостатина и вне поджелудочной железы. Например, в зарубежной литературе представлена серия исследований, посвященных роли данного белка в патогенезе нейродегенератив-ных (болезнь Альцгеймера [24,31]) и прионных (болезнь Кляйц-фельдтера-Якоба [45]) заболеваний. Показано, что участие лито-статина в их патогенезе прежде всего обусловлено способностью протеина к формированию фибрилл и преципитации с дальней-щим присоединением к этому «ядру» прионных белков, амилоида или других агрегирующих частиц. Источники появления литоста-тина в центральной нервной системе до сих пор точно не установлены, за исключением данных об обнаружении И^-протеина в цереброспинальной жидкости [24].

Для литостатина также продемонстрирована способность транспортироваться в мочу и слюну человека. Так, при синдроме Шегрена И^-протеин может играть роль индуктора регенерации в слюнных железах [22,43], при появлении в моче он способен выступать в качестве агента поддержания жидкого агрегатного состояния [51], а в желчи может его дестабилизировать [40,52]. Эти необычные для большинства белков-регуляторов фазового или агрегатного состояния биосред свойства в зависимости от

условий и, по-видимому, функциональной «необходимости», обладать про- либо антикристаллогенной активностью, причем проявлемой как в самом органе, так и вне его, и позволяют назвать литостатин и асоциированные с ним панкреатические лек-тины С-типа «двуликим Янусом поджелудочной железы». Следует подчеркнуть, что, по нашему мнению, литостатин не является единственным биогенным соединением с таковой функцией, а способность к двунаправленной регуляции кристаллостаза может быть открыта у многих веществ пептидной и гликопептидной природы, синтезируемых в организме человека и животных. Поэтому для понимания системной роли литостатина и других белков семейства лектинов С-типа принципиален тот факт, что они рассматриваются целым рядом исследователей как чувствительные секреторные стресс-пептиды, уровень и значимость которых существенно возрастает не только при остром и хроническом панкреатите [15,17,25,26,28,59], но и при других патологических состояниях (гепатоцеллюлярная карцинома [64], сепсис [41], Helicobacter-ассоциированная патология [63], неспецифический язвенный колит [58] и т.д.). Выделение этой особой группы биологически активных соединений может раскрыть новые грани эндокринной регуляции организма.

Выводы. Таким образом, кальцифицирующий панкреатит можно рассматривать не как изолированную патологию поджелудочной железы, а как системный результативный сдвиг кристаллогенных свойств (кристаллостаза) биологических жидкостей организма - его кристаллопатологию [9], проявившуюся на фоне предшествующих минимальных (субклинических) функциональных и/или морфологических нарушений в данном органе. Уточнение роли, отводимой в патогенезе изучаемого заболевания литостатину может существенно трансформировать патогенетическую терапию изучаемого заболевания в пользу разработки средств фармакологической коррекции сдвигов кристаллостаза, возникающих при поражении поджелудочной железы.

Литература

1. Воробьев А.В., Мартусевич А.К., Перетягин С.П.

Кристаллогенез биологических жидкостей и субстратов в оценке состояния организма. Нижний Новгород: ФГУ «ННИИТО

Росмедтехнологий», 2008. 384 с.

2. Кейс РМ., Грюнтер М., Новак И. с соавт. Сопоставление механизмов секреции электролитов в поджелудочной и слюнных железах // Физиология и патология желудочно-кишечного тракта. Пер. с англ. М.: Медицина, 1989. С. 289-301.

3. Коротько Г.Ф. Секреция слюнных желез и элементы саливадиагностики. М.: Академия Естествознания, 2006. 190 с.

4. Маев И.В., Кучерявый Ю.А. Литостатин: современный взгляд на биологическую роль и патогенез хронического панкреатита // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 2006. Т. 16. №2. С. 4-10.

5. Маев И.В., Кучерявый Ю. А. Теории и гипотезы патогенеза хронического панкреатита // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. 2005. №2. С. 18-26.

6. Малов Ю.С. Гомеостатические механизмы

пищеварительного тракта в норме и при патологических состояниях // Международные медицинские обзоры. 1994. Т. 2. №1. С. 25-31.

7. Мараховский ЮХ. Хронический панкреатит. Новые данные об этиологии и патогенезе. Современная классификация. Успехи в диагностике и лечении // Рус. мед. журн. 1996. № 3. С. 156-160.

8. Мартусевич А.К. Процесс структурной самоорганизации биологических жидкостей при дегидратации: системный анализ // Информатика и системы управления. 2010. №2. С. 31-34.

9. Мартусевич А.К., Воробьев А.В., Гришина А.А., Русских А. П. Физиология и патология кристаллостаза: общая парадигма и перспективы изучения // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. 2010. №1. С. 135-139.

10. Abe M., Nata K., Akiyama T. et al. Identification of a novel Reg family gene, Reg IIIdelta, and mapping of all three types of Reg family gene in a 75 kilobase mouse genomic region // Gene. 2000. Vol. 246, N1-2. P. 111-122.

11. Addadi L., Weiner S. Interaction between acidic proteins and crystals: stereochemical requirements in biomineralization // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1985. Vol. 82. P. 4110-4114.

12. Alderman B.M., Ulaganathan M., Judd L.M. et al. Insights into the mechanisms of gastric adaptation to aspirin-induced injury: a

role for regenerating protein but not trefoil peptides // Lab. Invest.

2003. Vol. 83. N10. P 1415-1425.

13. Arnaud J.P., Humbert W., Eloy R. et al. Pancreatic lithiasis. Contribution of scanning electron microscopy, crystallography and X-ray spectrography // Med. Chir. Dig. 1981. Vol.

10. N7. P. 613-616.

14. Bernard J.P., Adrich Z., Montalto G. et al. Inhibition of nucleation and crystal growth of calcium carbonate by human lithostathine // Gastroenterology. 1992. Vol. 103. N4. P. 1277-1284.

15. Bimmler D., Schiesser M., Perren A. et al. Coordinate regulation of PSP/reg and PAP isoforms as a family of secretory stress proteins in an animal model of chronic pancreatitis // J. Surg. Res.

2004. Vol. 118. N2. P. 122-135.

16. Bluth M., Mueller CM., Pierre J. et al. Pancreatic regenerating protein I in chronic pancreatitis and aging: implications for new therapeutic approaches to diabetes // Pancreas. 2008. Vol. 37. N4. P. 386-395.

17. Bluth M.H., Patel S.A., Dieckgraefe B.K. et al. Pancreatic regenerating protein (reg I) and reg I receptor mRNA are upregulated in rat pancreas after induction of acute pancreatitis // World J. Gastroenterol. 2006. Vol. 12. N28. P. 4511-4516.

18. Bodeker H., Keim V., Fiedler F. et al. PAP I interacts with itself, PAP II, PAP III, and lithostathine/regIalpha // Mol. Cell. Biol. Res. Commun. 1999. Vol. 2. N3. P. 150-154.

19. Boonyasrisawat W., Pulsawat P., Yenchitsomanus P.T. et al. Analysis of the reg1alpha and reg1beta gene transcripts in patients with fibrocalculous pancreatopathy // Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. 2002. Vol. 33. N2. P. 365-372.

20. Chiba T., Fukui H., Kinoshita Y. Reg protein: a possible mediator of gastrin-induced mucosal cell growth // J. Gastroenterol. 2000. Vol. 35, Suppl. 12. P. 52-56.

21. De Caro A., Multigner L., Dagorn J.C., Sarles H. The human pancreatic stone protein // Biochimie. - 1988. Vol. 70. N9. P. 1209-1214.

22. De Reggi M., Gharib B., Patard L. et al. Lithostathine, the presumed pancreatic stone inhibitor, does not interact specifically with calcium carbonate crystals // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273. N9. P. 4967-4971.

23. De Reggi M., Gharib B. Protein-X, Pancreatic Stone-, Pancreatic thread-, reg-protein, P19, lithostathine, and now what? Characterization, structural analysis and putative function(s) of the major non-enzymatic protein of pancreatic secretions // Curr. Protein. Pept. Sci. 2001. Vol. 2. N1. P. 19^2.

24. Duplan L., Michel B., Boucraut J. et al. Lithostathine and pancreatitis-associated protein are involved in the very early stages of Alzheimer's disease // Neurobiol. Aging. 2001. Vol. 22. N1. P. 79-88.

25. Fétaud V, Frossard J.L., Farina A. et al. Proteomic profiling in an animal model of acute pancreatitis // Proteomics. 2008. Vol.

8. N17. P. 3621-3631.

26. Fortunato F, Deng X., Gates L.K. et al. Pancreatic response to endotoxin after chronic alcohol exposure: switch from apop-tosis to necrosis? // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver. Physiol. 2006. Vol. 290. N2. P G232-G241.

27. Gerbaud V., Pignol D., Loret E. et al. Mechanism of calcite crystal growth inhibition by the N-terminal undecapeptide of lithostathine // J. Biol. Chem. 2000. Vol. 275. N2. P. 1057-1064.

28. Gironella M., Folch-Puy E., LeGoffic A. et al. Experimental acute pancreatitis in PAP/HIP knock-out mice // Gut. 2007. Vol. 56. N8. P. 1091-1097.

29. Graf R., Schiesser M., Lüssi A. et al. Coordinate regulation of secretory stress proteins (PSP/reg, PAP I, PAP II, and PAP III) in the rat exocrine pancreas during experimental acute pancreatitis // J. Surg. Res. 2002. Vol. 105. N2. P. 136-144.

30. Graf R., Schiesser M., Scheele G.A. et al. A family of 16-kDa pancreatic secretory stress proteins form highly organized fibrillar structures upon tryptic activation // J. Biol. Chem. 2001. Vol. 276. N24. P. 21028-21038.

31. Grégoire C., Marco S., Thimonier J. et al. Threedimensional structure of the lithostathine protofibril, a protein involved in Alzheimer's disease // EMBO J. 2001. Vol. 20, N13. P. 3313-3321.

32. Gross J., Brauer A.W., Bringhurst R.F. et al. An unusual bovine pancreatic protein exhibiting pH-dependent globule-fibril transformation and unique amino acid sequence // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1985. Vol. 82. P. 5627-5631.

33. Gross J., Carlson R.I., Brauer A.W. et al. Isolation, characterization, and distribution of an unusual pancreatic human secretory protein // J. Clin. Invest. 1985. Vol. 76. P. 2115-2126.

34. Gronborg M., Bunkenborg J., Kristiansen T.Z. et al. Comprehensive proteomic analysis of human pancreatic juice // J. Prote-ome Res. 2004. Vol. 3. N5. P 1042-1055.

35. Harada H., Takeda M., Tanaka J. et al. The fine structure of pancreatic stones as shown by scanning electron microscopy and X-ray probe microanalyser // Gastroenterol. Jpn. 1983. Vol. 18. N6. P. 530-537.

36. Iovanna J.L., Frigerio J.M., Dusetti N. et al. Lithostathine, an inhibitor of CaCO3 crystal growth in pancreatic juice, induces bacterial aggregation // Pancreas. 1993. Vol. 8. N5. P. 597-601.

37. Iovanna J.L., Dagorn J.C. The multifunctional family of secreted proteins containing a C-type lectin-like domain linked to a short N-terminal peptide // Biochim. Biophys. Acta. 2005. Vol. 1723. N 1-3. P. 8-18.

38. Jin C.X., Naruse S., Kitagawa M. et al. Pancreatic stone protein of pancreatic calculi in chronic calcified pancreatitis in man // J. of pancreas. 2002. Vol. 3. N2. P. 54-61.

39. Juhasz J.A., Best S.M., Auffret A.D., Bonfield W. Biological control of apatite growth in simulated body fluid and human blood serum // J. Mater. Sci. Mater. Med. 2008. Vol. 19. N4. P. 1823-1829.

40. Kaneko K., Ando H., Seo T. et al. Proteomic analysis of protein plugs: causative agent of symptoms in patients with choledo-chal cyst // Dig. Dis. Sci. 2007. Vol. 52. N8. P. 1979-1986.

41. Keel M., Härter L., Reding T. et al. Pancreatic stone protein is highly increased during posttraumatic sepsis and activates neutrophil granulocytes // Crit. Care Med. 2009. Vol. 37, N5. P. 1642-1648.

42. Kiji T., Dohi Y., Takasawa S. et al. Activation of regenerating gene Reg in rat and human hearts in response to acute stress // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2005. Vol. 289. N1. P. H277-H284.

43. Kimura T., Fukui H., Sekikawa A. et al. Involvement of REG Ialpha protein in the regeneration of ductal epithelial cells in the minor salivary glands of patients with Sjögren's syndrome // Clin. Exp. Immunol. 2009. Vol. 155. N1. P. 16-20.

44. Kobayashi S., Akiyama T., Nata K. et al. Identification of a receptor for reg (regenerating gene) protein, a pancreatic beta-cell regeneration factor // J. Biol. Chem. 2000. Vol. 275. N15. P. 1072310726.

45. Laurine E., Grégoire C., Fändrich M. et al. Lithostathine quadruple-helical filaments form proteinase K-resistant deposits in Creutzfeldt-Jakob disease // J. Biol. Chem. 2003. Vol. 278. N51. P. 51770-51778.

46. Lee B.I., Mustafi D., Cho W., Nakagawa Y. Characterization of calcium binding properties of lithostathine // J. Biol. Inorg. Chem. 2003. Vol. 8. N3. P. 341-347.

47. Levine J.L., Patel KJ., Zheng Q. et al. A recombinant rat regenerating protein is mitogenic to pancreatic derived cells // J. Surg. Res. 2000. Vol. 89. N1. P. 60-65.

48. Liu J.L., Cui W., Li B., Lu Y. Possible roles of reg family proteins in pancreatic islet cell growth // Endocr. Metab. Immune Disord. Drug Targets. 2008. Vol. 8. N1. P. 1-10.

49. Mahurkar S., Bhaskar S., Reddy D.N. et al. Comprehensive screening for reg1alpha gene rules out association with tropical calcific pancreatitis. // World J. Gastroenterol. 2007. Vol. 13. N44. P. 5938-5943.

50. Multigner L., Sarles H., Lombardo D., De Caro A. Pancreatic stone protein. II. Implication in stone formation during the course of chronic calcifying pancreatitis // Gastroenterology. 1985. Vol. 89. N2. P. 387-391.

51. Nabi G., N'Dow J, Hasan T.S. et al. Proteomic analysis of urine in patients with intestinal segments transposed into the urinary tract // Proteomics. 2005. Vol. 5. N6. P 1729-1733.

52. Ochiai K., Kaneko K., Kitagawa M. et al. Activated pancreatic enzyme and pancreatic stone protein (PSP/reg) in bile of patients with pancreaticobiliary maljunction/ choledochal cysts // Dig. Dis. Sci. 2004. Vol. 49. N11-12. P. 1953-1956.

53. PatardL., Lallemand J.Y., Stoven V. An insight into the role of human pancreatic lithostathine // JOP. 2003. Vol. 4. N2. P. 92-103.

54. Rodgers A.L., Spector M. Pancreatic calculi containing brushite: ultrastructure and pathogenesis // Calcif. Tissue Int. 1986. Vol. 39. N5. P. 342-347.

55. Sanchez D., Gmyr V, Kerr-Conte J. et al. Implication of Reg I in human pancreatic duct-like cells in vivo in the pathological pancreas and in vitro during exocrine dedifferentiation // Pancreas.

2004. Vol. 29. N1. P. 14-21.

56. Sarles H. Pancreatic lithogenesis // Ann. Gastroenterol. Hepatol. (Paris). 1986. Vol. 22. N1. P. 37-40.

57. Sekikawa A., Fukui H., Fujii S. et al. Possible role of REG Ialpha protein in ulcerative colitis and colitic cancer // Gut. 2005. Vol.

54. N10. P. 1437-1444.

58. Sekikawa A., Fukui H., Suzuki K. et al. Involvement of the IL-22/REG Ialpha axis in ulcerative colitis // Lab. Invest. 2010. Vol. 90. N3. P 496-505.

59. Sennello J.A., Fayad R., Pini M. et al. Interleukin-18, together with interleukin-12, induces severe acute pancreatitis in obese but not in nonobese leptin-deficient mice // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2008. - Vol. 105. N23. P. 8085-8090.

60. Viterbo D., Callender G.E., DiMaio T. et al. Administration of anti-Reg I and anti-PAPII antibodies worsens pancreatitis // JOP.

2009. Vol. 10. N1. P. 15-23.

61. Wang J., Koyota S., Zhou X. et al. Expression and localization of regenerating gene I in a rat liver regeneration model // Bio-chem. Biophys Res Commun. 2009. Vol. 380, N3. P 472-477.

62. Weiss IM. et al. Purification and characterization of perlucin and perlustrin, two new proteins from the shell of the mollusc Haliotis laevigata // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. Vol. 267. №1. P. 17-21.

63. Yoshino N., Ishihara S., Rumi M.A. et al. Interleukin-8 regulates expression of Reg protein in Helicobacter pylori-infected gastric mucosa // Am. J. Gastroenterol. 2005. Vol. 100. N10. P. 2157-2166.

64. Yuan R.H., Jeng Y.M., Chen H.L. et al. Opposite roles of human pancreatitis-associated protein and REG1A expression in hepatocellular carcinoma: association of pancreatitis-associated protein expression with low-stage hepatocellular carcinoma, beta-catenin mutation, and favorable prognosis // Clin. Cancer. Res. 2005. Vol. 11. N7. P. 2568-2575.

65. Zelensky A.N., Gready J.E. C-type lectin-like domains in Fugu rubripes // BMC Genomics. 2004. Vol. 5.P 1-51.

66. Zenilman M.E., Magnuson T.H., Swinson K. et al. Pancreatic thread protein is mitogenic to pancreatic-derived cells in culture // Gastroenterology. 1996. Vol. 110. N4. P. 1208-1214.

PANCREATIC LECTINS: “TWO-FACES JANUS” OF PANCREAS A.K. MARTUSEVICH, ZH. G. SIMONOVA, N.F. KAMAKIN Kirov State Medical Academy

This article considers structure, properties and biological function of one of the most famous C-type lectins - lithostathine. Its potential role in chronic pancreatitis pathogenesis is discussed. It is stated, that lithostathine may have binary function for calcite crystallization, regulating intrapancreatic crystallostasis. It is supposed, that lithosta-thine is one of the numerous physiological modulators of biological fluid crystallogenic properties both in human and animal organisms.

Key words: lithostathine, C-type lectins, crystallization, crystal-lostasis, chronic pancreatitits.

УДК 614.64

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТЕЙ ЗАМЕНЫ АЦЕТОНА СПИРТОМ ИЛИ ИЗОПРОПАНОЛОМ В КАЧЕСТВЕ ДЕГИДРАТАТОРА В ТЕХНОЛОГИИ ПЛАСТИНАЦИИ

И.Э. БОРЗЯК, А.К. УСОВИЧ*

Технологический процесс пластинации включает многомесячную обработку препаратов при минусовой температуре, использование в качестве дегидрататора легковоспламеняющегося г^тона. Проведен эксперимент разных режимов дегидратации для определения качественной импрегнации силиконом. Исследованы 6 серий препаратов (кусочки мышечной ткани с участком сухожилия, размером 10х10х10 мм), помещенных на 7 сут. в дегидрататоры при разных условиях. Ключевые слова: пластинация, силикон, дегидратация, ацетон, этанол, изопропанол.

Пластинация (полимерное бальзамирование) возникла усилиями преподавателя анатомии Гейдельбергского Университета Гунтера фон Хагенса (Gunther von Hügens) в 70 годах ХХ столетия как новое научное направление на стыке анатомии и химии для изготовления эстетичных, гигиеничных анатомических препаратов для учебного процесса, научных исследований, анатоми-

* Бюро судебно-медицинской экспертизы департамента здравоохранения г. Москва, УО «Витебский государственный медицинский университет»