ТКАНЕВОЙ МАКРОЭКСПЛАНТАТ, СПОСОБЫ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

1. In vitro клеточная композиция, включающая:
(i) субстрат, имеющий множество микролунок; и
(ii) тканевой эксплантат, содержащий кишечный эпителий из желудочно-кишечного тракта, крупного, не являющегося человеком млекопитающего, при этом кишечный эпителий содержит эпителиальные клетки, имеющие полярность в тканевом эксплантате,
при этом тканевой эксплантат находится в двухмерном контакте с субстратом, образуя люминальную поверхность и базолатеральную поверхность in vitro клеточной композиции, и при этом полярность эпителиальных клеток сохраняется в in vitro клеточной композиции.
2. In vitro клеточная композиция по п. 1, при этом тканевой эксплантат содержит эпителий тонкого кишечника, круговой мышечный слой и кишечные ворсинки.
3. Композиция по любому из пп. 1, 2, при этом тканевой эксплантат получают из подвздошной кишки, тощей кишки, желудка, двенадцатиперстной кишки, пищевода, щеки, языка или толстой кишки желудочно-кишечного тракта.
4. Композиция по любому из пп. 1-3, при этом тканевой эксплантат содержит полностью интактный внеклеточный матрикс.
5. Композиция по п. 4, при этом полностью интактный внеклеточный матрикс содержит собственную пластинку, мышечную пластинку слизистой оболочки, или собственную пластинку и мышечную пластинку слизистой оболочки.
6. Композиция по любому из пп. 1-5, при этом тканевой эксплантат получают из желудочно-кишечного тракта свиньи.
7. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат содержит кишечные энтероциты, и при этом кишечные энтероциты идентифицируют по наличию виллина, E-кадгерина, кератина 20 и/или связывающего жирные кислоты белка 1 (FABP1).
8. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат содержит плотные контакты.
9. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат содержит секретирующие муцин бокаловидные клетки, и при этом секретирующие муцин бокаловидные клетки идентифицируют по наличию муцина 2 (Muc2) и/или гомеобокса 2 каудального типа (CDX2).
10. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат содержит кишечные стволовые клетки, и при этом кишечные стволовые клетки идентифицируют по наличию содержащего богатые лейцином повторы связанного с G-белками рецептора 5 (LGR5) и/или ольфактомедина 4 (OLFM4).
11. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат содержит кишечные эндокринные клетки, при этом кишечные эндокринные клетки идентифицируют по наличию глюкагон-подобного пептида 1 (GLP-1).
12. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат содержит по меньшей мере один транспортер лекарственных средств, метаболизирующий фермент, или и то, и другое.
13. Композиция по п. 12, при этом транспортер лекарственных средств представляет собой MDR-1, и метаболизирующий фермент представляет собой CYP3A4.
14. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат содержит микроскладчатые клетки, и при этом микроскладчатые клетки идентифицируют по наличию виментина.
15. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат содержит слизистые вещества, и при этом слизистые вещества представляют собой гликопротеины, гликолипиды или муцины.
16. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат содержит нервные клетки, и при этом нервные клетки идентифицируют по наличию нестина.
17. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат имитирует in vivo структуру желудочно-кишечного тракта, из которого он был получен.
18. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат поддерживает постоянный уровень секреции Wnt3a.
19. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат содержит интактные крипты.
20. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат обладает тиоредоксин-редуктазной активностью.
21. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат продуцирует GLP-1 или Muc-2.
22. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом тканевой эксплантат является чувствительным к глюкозе, токсинам, или и тому, и другому.
23. Композиция по п. 22, при этом токсин представляет собой вещество с токсичностью для желудочно-кишечного тракта или вещество с токсичностью для клеток.
24. Композиция по п. 23, при этом токсин представляет собой нестероидное противовоспалительное средство (НПВС) или доксициклин.
25. Композиция по п. 24, при этом НПВС представляет собой напроксен.
26. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом субстрат имеет 6, 12, 24, 48, 96, 384 или 1536 микролунок.
27. Композиция по любому из предшествующих пунктов, при этом каждая микролунка полностью покрыта тканевым эксплантатом.
28. Система культивирования клеток для использования в высокопроизводительном скрининговом анализе на абсорбцию лекарственных средств, при этом система культивирования клеток включает:
(i) субстрат, имеющий множество микролунок; и
(ii) тканевой эксплантат, содержащий кишечный эпителий из желудочно-кишечного тракта крупного не являющегося человеком млекопитающего, при этом кишечный эпителий содержит эпителиальные клетки, имеющие полярность в тканевом эксплантате,
при этом тканевой эксплантат находится в двухмерном контакте с субстратом, образуя люминальную поверхность и базолатеральную поверхность, и при этом полярность эпителиальных клеток сохраняется в системе культивирования клеток,
что позволяет измерять абсорбцию лекарственных средств через тканевой эксплантат.
29. Субстратный модуль, подходящий для использования с тканевым эксплантатом, включающий:
первый планшет, имеющий корпус со множеством сформированных в нем микролунок и со множеством сформированных в нем отверстий для вставки крепежных деталей,
второй планшет, имеющий корпус со множеством сформированных в нем микролунок и со множеством сформированных в нем отверстий для вставки крепежных деталей, и
множество магнитов, при этом один или указанное множество магнитов находится внутри каждого из множества отверстий для крепежных деталей первого и второго планшетов.
30. Субстратный модуль по п. 29, при этом первый планшет имеет верхнюю поверхность и противоположную нижнюю поверхность, при этом нижняя поверхность имеет сформированную на ней ободочную часть, проходящую примерно по наружной кромке нижней поверхности и выступающую из нее, при этом ободочная часть образует камеру.
31. Субстратный модуль по п. 30, дополнительно имеющий гребенчатую часть, сформированную вдоль центральной части нижней поверхности первого планшета и выступающую из нее, при этом гребенчатая часть разделяет камеру на множество подкамер, при этом каждая подкамера приспособлена для размещения тканевого эксплантата.
32. Субстратный модуль по п. 30, при этом ободочная часть имеет сформированные в ней вдоль противоположных сторон корпуса первого планшета один или более вырезов.
33. Субстратный модуль по п. 30, при этом второй планшет имеет верхнюю поверхность и противоположную нижнюю поверхность, при этом верхняя поверхность имеет сформированную на ней ободочную часть, проходящую примерно по наружной кромке верхней поверхности и выступающую из нее, при этом ободочная часть образует камеру.
34. Субстратный модуль по п. 33, дополнительно имеющий гребенчатую часть, сформированную вдоль центральной части верхней поверхности второго планшета и выступающую из нее, при этом гребенчатая часть разделяет камеру на множество подкамер, при этом каждая подкамера приспособлена для размещения тканевого эксплантата.
35. Субстратный модуль по п. 33, при этом ободочная часть, сформированная на верхней поверхности второго планшета, имеет сформированные в ней вдоль противоположных сторон корпуса верхнего планшета один или более вырезов.
36. Субстратный модуль по п. 29, при этом множество микролунок первого планшета и второго планшета включают 6, 12, 24, 28, 96, 384 или 1536 микролунок.
37. Субстратный модуль по п. 29, при этом каждая микролунка из множества микролунок полностью покрыта тканевым эксплантатом.