ВЫСОКОЧУВСТВИТЕЛЬНЫЕ ИММУНОАНАЛИЗЫ И НАБОРЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРЕДСТАВЛЯЮЩИХ ИНТЕРЕС ПЕПТИДОВ И БЕЛКОВ

1. Набор для определения целевого полипептида, выбранного из группы Aβ42, Aβ40 и их смеси, включающий
(i) первое антитело или сочетание антител, которые узнают указанный целевой полипептид
(ii) второе антитело или сочетание антител, которые узнают иную область целевого полипептида, чем область, узнаваемая первым антителом или сочетанием антител
(iii) реагент, обладающий аффинностью в отношении второго антитела, где указанный реагент связан с первым компонентом связывающейся пары, и
(iv) второй компонент связывающейся пары, присоединенный к детектируемому маркеру.
2. Набор по п.1, где первое антитело или сочетание антител узнает область в Aβ40 и/или Aβ42, отличную от C-концевой области.
3. Набор по п.1, где первое антитело узнает N-концевую область пептидов Aβ42 и Aβ40.
4. Набор по п.3, где первое антитело направлено против эпитопа, находящегося в составе аминокислот 1-16 Aβ40 и Aβ42.
5. Набор по п.1, где первое антитело представляет собой моноклональное антитело.
6. Набор по п.5, где моноклональное антитело представляет собой мАb 6E10.
7. Набор по п.1, где второе антитело представляет собой антитело, выбранное из группы
(i) поликлонального антитела, полученного против пептида, соответствующего C-концевой области пептида Aβ42, которое связывается специфически с Aβ42 без существенного перекрестного реагирования с Aβ40
(ii) поликлонального антитела, полученного против пептида, соответствующего C-концевой области пептида Aβ40, которое связывается специфически с Aβ40 без существенного перекрестного реагирования с Aβ42, и
(iii) антитела, которое узнает одновременно C-концевую область как Aβ40, так и Aβ42, и
(iv) сочетания антител из пунктов (i) и (ii).
8. Набор по п.7, где C-концевая область пептида Aβ42, используемого для получения второго антитела, представляет собой пептид с SEQ ID №:1 или SEQ ID №:2.
9. Набор по п.7, где C-концевая область пептида Aβ40, используемого для получения второго антитела, представляет собой пептид с SEQ ID №:3.
10. Набор по п.1, где первое и/или второе антитела или сочетание антител аффинно очищены с использованием полипептида, который обладает последовательностью полипептида, используемого для их получения.
11. Набор по п.1, где реагент, обладающий аффинностью в отношении второго антитела, выбирают из группы анти-IgG антитела, белка A или белка G, или их функционально эквивалентных вариантов.
12. Набор по любому из пп.1-11, где указанный первый компонент связывающей пары представляет собой биотин.
13. Набор по п.12, где второй компонент связывающей пары представляет собой авидин, стрептавидин или их функционально эквивалентный вариант.
14. Набор по п.1, где указанный детектируемый маркер выбирают из группы
(i) ферментов
(ii) флуоресцентных молекул.
15. Набор по п.1, дополнительно включающий твердую подложку.
16. Набор по п.15, где одно из антител или сочетание антител предварительно связано с твердой подложкой.
17. Набор по п.16, где первое антитело предварительно связано с твердой подложкой.
18. Набор по п.17, предварительно обработанный концентрированным раствором трегалозы и высушенный.
19. Набор по п.1, дополнительно включающий образец, содержащий пептиды Aβ40 и/или Aβ42.
20. Набор по п.14, где, если детектируемый маркер представляет собой фермент, то набор дополнительно включает субстрат, который может быть превращен указанным ферментом в детектируемый продукт.
21. Применение набора по любому из пп.1-20 для определения или обнаружения полипептида в образце, где целевой полипептид, подлежащий определению или обнаружению, выбирают из группы Aβ40, Aβ42 или их смеси.
22. Применение по п.21, где образец выбирают из группы, включающей кровь, плазму, сыворотку или СМЖ.
23. Применение набора по пп.1-20 для диагностики дегенеративного заболевания у субъекта.
24. Применение по п.23, где дегенеративное заболевание представляет собой нейродегенеративное заболевание.
25. Применение по п.24, где нейродегенеративное заболевание представляет собой болезнь Альцгеймера.
26. Способ определения или обнаружения количества целевого полипептида, выбранного из группы Aβ42, Aβ40 или их смеси, в образце, включающий стадии
(i) иммобилизации целевого полипептида, присутствующего в образце, первым антителом или сочетанием антител, которые специфически связывают указанный целевой полипептид,
(ii) создания контакта между иммунными комплексами, образованными на стадии (a), и вторым антителом или сочетанием антител, которые узнают область целевого полипептида, отличную от области, которую узнает первое антитело или сочетание антител,
(iii) создания контакта между комплексами, образованными на стадии (ii), и реагентом, обладающим аффинностью в отношении второго антитела и связанным с первым компонентом связывающей пары,
(iv) создания контакта между комплексами, образованными на стадии (iii), и вторым компонентом связывающей пары, который присоединен к детектируемому маркеру, и
(v) определения или обнаружения активности или количества детектируемого маркера, присоединенного ко второму компоненту связывающей пары.
27. Способ по п.26, где первое антитело узнает область, общую для Aβ40 и Aβ42, которая отлична от C-концевой области.
28. Способ по п. 27, где первое антитело узнает N-концевую область пептидов Aβ42 и Aβ40.
29. Способ по п.26, где первое антитело направлено против эпитопа, находящегося в составе аминокислот 1-16 Aβ40 и Aβ42.
30. Способ по п.26, где первое антитело представляет собой моноклональное антитело.
31. Способ по п.30, где моноклональное иммобилизующее антитело представляет собой mAb 6E10.
32. Способ по п.26, где второе антитело представляет собой антитело, выбранное из группы
(i) поликлонального антитела, полученного против пептида, соответствующего C-концевой области пептида Aβ42, которое связывается специфически с Aβ42 без существенного перекрестного реагирования с Aβ40
(ii) поликлонального антитела, полученного против пептида, соответствующего C-концевой области пептида Aβ40, которое связывается специфически с Aβ40 без существенного перекрестного реагирования с Aβ42, и
(iii) антитела, которое узнает одновременно C-концевую область как Aβ40, так и Aβ42, и
(iv) сочетания антител из пунктов (i) и (ii).
33. Способ по п.32, где C-концевая область пептида Aβ42, используемого для получения второго антитела, представляет собой пептид, выбранный из группы SEQ ID №:1, SEQ ID №:2.
34. Способ по п.32, где C-концевая область пептида Aβ40, используемого для получения второго антитела, представляет собой пептид, выбранный из группы SEQ ID №:3.
35. Способ по п.26, где первое и/или второе антитела аффинно очищены с использованием полипептида, который обладает последовательностью полипептида, используемого для их получения.
36. Способ по п.26, где реагент, обладающий аффинностью в отношении второго антитела, выбирают из группы анти-IgG антитела, белка A или белка G, или их функционально эквивалентных вариантов.
37. Способ по п.26, где указанный первый компонент связывающей пары представляет собой биотин.
38. Способ по п.37, где второй компонент связывающей пары представляет собой авидин, стрептавидин или их функционально эквивалентный вариант.
39. Способ по п.26, где указанный детектируемый маркер выбирают из группы
(i) ферментов
(ii) флуоресцентных молекул.
40. Способ по п.26, где биологический образец выбирают из группы, включающей кровь, плазму, сыворотку и СМЖ.
41. Способ по п.26, где первое антитело предварительно иммобилизовано на твердой подложке.
42. Способ диагностики дегенеративного заболевания у субъекта, включающий определение количества Aβ40 или Aβ42 в образце от пациента при помощи способа по любому из пп.26-41 и проведение корреляции между концентрацией одного или обоих пептидов в образце от указанного субъекта относительно концентрации указанного пептида или пептидов в образце от здорового индивидуума и развитием дегенеративного заболевания.
43. Способ по п.42, где дегенеративное заболевание представляет собой нейродегенеративное заболевание.
44. Способ по п.43, где нейродегенеративное заболевание представляет собой болезнь Альцгеймера, и где, если количество пептидов Aβ40 и/или Aβ42 в указанных образцах является меньшим, чем количество указанного пептида или пептидов в биологическом образце того же происхождения, полученном от здорового индивидуума, то это является указанием на то, что субъект страдает болезнью Альцгеймера.
45. Способ по любому из пп.42-44, где образец, в котором определяют Aβ40 и/или Aβ42, представляет собой образец плазмы или сыворотки.