Маркер-опосредованный скрининг устойчивых к мучнистой росе (ген pl-1) генотипов яблони

УДК 634.11/12:631.524.86 DOI: 10.30914/2411 -9687-2020-6-2-180-186

Маркер-опосредованный скрининг устойчивых к мучнистой росе

генотипов яблони А. С. Лыжин, Н. Н. Савельева

Федеральный научный центр им. И.В. Мичурина, Мичуринск, Россия

Введение. Мучнистая роса, возбудителем которой является фитопатогенный сумчатый гриб Podosphaera leucotricha (Ell. et Ev.) Salm, одно из наиболее распространенных заболеваний яблони в мире. Большинство существующих сортов яблони восприимчивы к мучнистой росе. В этой связи идентификация исходных форм, несущих гены устойчивости, является необходимым этапом успешной селекционной работы по созданию устойчивых к мучнистой росе сортов. Использование молекулярных маркеров повысит надежность идентификации ценных форм и эффективность селекционного процесса по созданию устойчивых генотипов яблони. Цель исследования: анализ сортов и форм яблони по гену устойчивости к мучнистой росе (Pl-1) и идентификация перспективных генотипов. Материалы и методы. Биологическими объектами исследования являлись сорта и дикорастущие виды яблони различного эколого-географического происхождения. Экстракция геномной ДНК яблони проводилась из молодых листьев согласно протоколу Diversity Arrays Technology P/L. Для оценки аллельного состояния гена Pl-1 устойчивости к мучнистой росе использовали маркер AT20-SCAR. Результаты исследования, обсуждения. Маркер AT20-SCAR, сцепленный с доминантным аллелем Pl-1, идентифицирован у дикорастущего вида яблони. M. niedzwetzkyana K29422 (предполагаемый генотип по гену устойчивости Pl-1 - Pl-1Pl-1 или Pl-1pl-1). У проанализированных сортов яблони и дикорастущего вида M. orientalis K29476 маркер AT20-SCAR не выявлен (предполагаемый генотип pl-1pl-1). Заключение. Устойчивостью к мучнистой росе по оценке аллельного состояния гена Pl-1 характеризуется дикорастущий вид M. niedzwetzkyana K29422, что позволяет рекомендовать его в качестве источника устойчивости к Podosphaera leucotricha для селекции.

Ключевые слова: яблоня, генотип, мучнистая роса, устойчивость, молекулярные маркеры, ген Pl-1.

Благодарности: исследование выполнено при финансовой поддержке Тамбовской области в рамках научного проекта № 23-МУ-19 (02).

Для цитирования: Лыжин А.С., Савельева Н.Н. Маркер-опосредованный скрининг устойчивых к мучнистой росе (ген PL-1) генотипов яблони // Вестник Марийского государственного университета. Серия «Сельскохозяйственные науки. Экономические науки». 2020. Т. 6. № 2. С. 180-186. DOI: 10.30914/24119687-2020-6-2-180-186

Marker-mediated screening of powdery mildew resistant

apple genotypes A. S. Lyzhin, N. N. Saveleva

I. V. Michurin Federal Scientific Center, Michurinsk, Russia

Introduction. Powdery mildew caused by phytopathogenic ascomycete fungus Podosphaera leucotricha (Ell. et Ev.) Salm. is one of the most common apple diseases in the world. Most existing apple varieties are susceptible to powdery mildew. Therefore, the identification of the initial forms carrying the resistance genes is a necessary step in the successful breeding of powdery mildew resistant varieties. The use of molecular markers will increase the reliability of identification of valuable forms and the efficiency of the breeding process for creating sustainable apple genotypes. The purpose of the study: analysis of apple varieties and forms by the powdery mildew resistance gene (Pl-1) and identification of promising genotypes. Materials and methods. The biological objects of the study were apple varieties and wild species of varuois ecological and geographical origin. Apple genomic DNA was extracted from young leaves according to the Diversity Arrays Technology P/L protocol. To assess the allelic state of Pl-1 powdery mildew resistance gene the marker AT20-SCAR was used. Results, discussions. Marker AT20-SCAR linked to the dominant Pl-1 allele was identified in the wild species M. niedzwetzkyana K29422 (putative Pl-1 genotype is Pl-1Pl-1 or Pl-1pl-1). In the analyzed apple varieties and wild species M. orientalis K29476, the marker AT20-SCAR was not detected (the putative genotype is pl-1pl-1). Conclusion. The wild species M. niedzwetzkyana K29422 is characterized by powdery mildew resistance

according to the allelic state of the Pl-1 gene, which allows it to be recommend as a source in breeding for resistance to Podosphaera leucotricha.

Keywords: apple, genotype, powdery mildew, resistance, molecular markers, Pl-1 gene.

Acknowledgements: the study was carried out with financial support from the Tambov Region as part of the scientific project № 23-My-19 (02).

For citation: Lyzhin A.S., Saveleva N.N. Marker-mediated screening of powdery mildew resistant (PL-1 gene) apple genotypes. Vestnik of the Mari State University. Chapter "Agriculture. Economics". 2020, vol. 6, no. 2, pp. 180-186. DOI: 10.30914/2411-9687-2020-6-2-180-186 (In Russ.).

Введение

Мучнистая роса, возбудителем которой является фитопатогенный сумчатый гриб Podosphaera leucotricha (Ell. et Ev.) Salm., одно из наиболее распространенных заболеваний яблони в мире [8; 9]. Патоген поражает соцветия, листья, молодые побеги. Пораженные листья скручиваются, буреют и опадают, побеги замедляют рост, искривляются, соцветия и цветки деформируются и отмирают. Особенно сильно мучнистой росой поражаются активно растущие сеянцы и саженцы в питомниках [5; 16]. Потери товарного урожая яблок при эпифи-тотийном развитии на растениях P. leucotricha могут достигать 50-80 % [1; 4]. Большинство культивируемых в настоящее время сортов яблони восприимчивы к мучнистой росе [5; 12].

Контроль распространения мучнистой росы в насаждениях яблони обеспечивается в первую очередь своевременным применением фунгицидов и соблюдением других агротехнических мероприятий [7]. Однако широкое применение химических средств защиты негативно сказывается на экологической обстановке, а также требует затрат значительного количества финансовых и трудовых ресурсов [3; 6]. В связи с этим актуальным направлением борьбы с мучнистой росой в насаждениях яблони является создание и использование в производстве сортов с генетически детерминированной устойчивостью к P. leucotricha.

К настоящему времени у яблони идентифицировано несколько неаллельных генов, детерминирующих устойчивость к мучнистой росе -Pl-1 (Malus robusta), Pl-2 (M. zumi), Pl-d (D12), Pl-w (White Angel), Pl-mis (Mildew immune selection) [10; 11], интрогрессия которых в геном культивируемых сортов позволит получить устойчивые к P. leucotricha формы. При этом наличие сцепленных с указанными локусами диагностических ДНК-маркеров позволяет с высокой надежностью

вне зависимости от фенотипического проявления признака вести эффективный скрининг по отдельным детерминантам устойчивости и выявлять перспективные генотипы [5; 10].

Цель исследования: анализ сортов и форм яблони по гену устойчивости к мучнистой росе (Pl-1) и идентификация перспективных генотипов.

Материалы и методы

Исследования были проведены в 2019-2020 гг. В качестве биологических объектов использованы сорта яблони различного эколого-географического происхождения генетической коллекции ФГБНУ «ФНЦ им. И.В. Мичурина». Контролем присутствия в геноме аллеля Pl-1 устойчивости к мучнистой росе являлась дикорастущая форма M. robusta K43199.

Экстракция геномной ДНК была проведена из молодых листьев согласно протоколу Diversity Arrays Technology P/L с модификациями, позволяющими согласно проведенным ранее исследованиям [2; 15] получать экстракт геномной ДНК дикорастущих видов и сортов яблони необходимой для постановки ПЦР концентрации и чистоты. Для идентификации гена Pl-1 использовали маркер AT20-SCAR [10]. Праймеры были синтезированы в ЗАО Синтол, Москва и имели следующую нуклеотидную последовательность:

- AT20-for:

5-ATCAGCCCCACATGAATCTCATACC-3'

- AT20-rev:

5'-ACATCAGCCCTCAAAGATGAGAAGT-3'.

Реакционная смесь для ПЦР объемом 15 мкл содержала: 20 нг геномной ДНК, 2,0 мМ dNTPs, 2,5 мМ MgCI2, 10 пМ каждого праймера, 1 ед. Taq-полимеразы и 1,5 мМ 10х стандартного ПЦР-буфера (+(NH4)2SÜ4, -KCL). Все компоненты произведены фирмой Thermo Fisher Scientific.

Амплификацию проводили в термоциклере T100 («BIO-RAD», США) по следующей программе: 94 °C - 5 мин., 35 циклов: 94 °C - 1 мин., 60 °C - 2 мин., 72 °C - 2 мин.; финальная элонгация: 94 °C - 1 мин., 60 °C - 2 мин.,72 °C - 10 мин.

Разделение ампликонов осуществляли методом электрофореза в агарозном геле (концентрация агарозы - 2 %, буферная система - 1х ТВЕ (трис-боратный буфер), напряженность электрического поля при электрофорезе - 3,9-4,5 В/см). Для определения длины амплифицированных фрагментов использовали маркер молекулярного веса Gene Ruler 100bp DNA ladder (Thermo scientific) (0,1 мкг/мкл).

Результаты исследования, обсуждения

Ген Pl-1 картирован в дистальной части группы сцепления 12 [10]. Для детекции в геноме яблони гена Pl-1 разработан маркер AT20-SCAR,

локализованный на расстоянии 4,5 cM от гена. На электрофореграмме маркер AT20-SCAR представлен фрагментами размером 450 и 500 п.н. Аллелю резистентности Pl-1 соответствует целевой фрагмент маркера размером 450 п.н. Продукт размером 500 п.н. может амплифици-роваться как у устойчивых, так и у восприимчивых к мучнистой росе по гену Р1-1 генотипов яблони [13].

В анализируемой коллекции генотипов яблони целевой фрагмент маркера AT20-SCAR размером 450 п.н. выявлен у дикорастущего вида M. niedzwetzkyana ^9422. У изучаемых сортов яблони и дикорастущего вида M. orientalis ^9476 маркер AT20-SCAR представлен продуктом размером 500 п.н. (фрагмент 450 п.н. отсутствует), что составляет 97,4 % от общего количества форм. Пример идентификации приведен на рисунке, результаты - в таблице.

Электрофоретический спектр маркера AT20-SCAR генотипов яблони: К - контроль (M. robusta K43199), 1 - Honey Crisp, 2 - Galarina, 3 - Стрела, 4 - Свежесть, 5 - Ligol, 6 - Кандиль орловский, 7 - Gala, 8 - Диамант, 9 - Telemon, 10 - Prima, 11 - Благовест, 12 - Fuji, 13 - Зелёный шум, М - маркер молекулярного веса / Electrophoresis profile of marker AT20-SCAR of apple tree genotypes: К - control (M. robusta K43199), 1 - Honey Crisp, 2 - Galarina, 3 - Strela, 4 - Svezhest', 5 - Ligol, 6 - Kandil' orlovskiy, 7 - Gala, 8 - Dyyamant, 9 - Telemon, 10 - Prima, 11 - Blagovest, 12 - Fuji, 13 - Zelyonyi shum, М - DNA ladder

Результаты ПЦР-анализа сортов и форм яблони по маркеру AT20-SCAR / The results of PCR analysis of apple varieties and forms for the marker AT20-SCAR

Сорт/форма / AT20-SCAR, 450 п.н. / Генотип/

Variety/form AT20-SCAR, 450 b.p. Genotype

1 2 3

M. robusta K43199 (контроль) /M. robusta K43199 (control) 1 Pl-1pl-1

Антоновка обыкновенная / Antonovka obyknovennaya 0 pl-1pl-1

Стела / Stela 0 pl-1pl-1

Былина / Bylina 0 pl-1pl-1

Чародейка / Charodejka 0 pl-1pl-1

Окончание табл.

1 2 3

Красуля / Krasulia 0 p -1pl-1

Памяти Нестерова / Pamyati Nesterova 0 p -1pl-1

Академик Казаков [Akademik Kazakov 0 p -1pl-1

Каскад / Kaskad 0 p -1pl-1

Готика / Gotika 0 p -1pl-1

Успенское / Uspenskoye 0 p -1pl-1

Флагман / Flagman 0 p -1pl-1

Вымпел / Vympel 0 p -1pl-1

Имант / Imant 0 p -1pl-1

Кандиль орловский / Kandil' orlovskiy 0 p -1pl-1

Дыямант / Dyyamant 0 p -1pl-1

Благовест / Blagovest 0 p -1pl-1

Скала / Skala 0 p -1pl-1

Фрегат / Fregat 0 p -1pl-1

Стрела / Strela 0 p -1pl-1

Белорусское сладкое / Belorusskoye sladkoye 0 p -1pl-1

Свежесть / Svezhest' 0 p -1pl-1

Зелёный шум / Zelonyy shum 0 p -1pl-1

Приокское / Priokskoye 0 p -1pl-1

Braeburn 0 p -1pl-1

Golden Delicious 0 p -1pl-1

Freedom 0 p -1pl-1

Prima 0 p -1pl-1

Galarina 0 p -1pl-1

Lobo 0 p -1pl-1

Gala 0 p -1pl-1

Fuji 0 p -1pl-1

Honey Crisp 0 p -1pl-1

Ligol 0 p -1pl-1

Telemon 0 p -1pl-1

Redfree 0 p -1pl-1

Gold rush 0 p -1pl-1

M. niedzwetzkyana K29422 1 Pl-1Pl- or Pl-1pl-1

M. orientalis K29476 0 p -1pl-1

Маркер ЛТ20-8СЛЯ является доминантным [13], то есть целевой продукт амплифицируется только при наличии у генотипа доминантного аллеля Pl-1. В связи с этим ген Pl-1 в генотипе

дикорастущего вида M. niedzwetzkyana К29422 может находиться в двух состояниях - доминантном гомозиготном (Pl-1Pl-1) или гетерозиготном (Pl-1pl-1).

Отсутствие целевого фрагмента маркера AT20-SCAR размером 450 п.н. свидетельствует о рецессивном гомозиготном состоянии гена Pl-1 (pl-1pl-1) у изучаемых сортов яблони и дикорастущего вида M. orientalis K29476. Редкая встречаемость аллеля Pl-1 в геноме культивируемых форм яблони подтверждается также другими исследователями. Так, в работе Patzak et al. (2011) из 83 проанализированных сортов и форм яблони аллель Pl-1 идентифицирован у 2 генотипов -Borovinka и Hagloe Crab, что составляет 2,4 % от общего количества изучаемых форм [14]. В исследовании, проведенном О. Ю. Урбанович с соавторами на 130 сортах и дикорастущих видах яблони, ген Pl-1 идентифицирован у 3 сортов -Аламата, Долго, Чулановка и 4 дикорастущих видов - M. х cerasifera, M. sargentii, M. х robusta,

M. baccata, что составляет 5,4 % от общего количества проанализированных форм [5].

Заключение

Таким образом, в результате проведенного молекулярно-генетического анализа маркер AT20-SCAR, сцепленный с доминантным аллелем Pl-1, идентифицирован у дикорастущего вида яблони. M. niedzwetzkyana Х29422 (предполагаемый генотип по гену устойчивости Pl-1 - Pl-1Pl-1 или Pl-1pl-1), что позволяет рекомендовать его в качестве источника устойчивости к P. leucotricha для селекции. У проанализированных сортов яблони и дикорастущего вида M. orientalis ^9476 маркер AT20-SCAR не выявлен (предполагаемый генотип pl-1pl-1).

Литература

1. Инденко И.Ф., Смагин Н.Е. Экологически безопасное возделывание яблони в горных регионах юга России // Субтропическое и декоративное садоводство. 2007. № .40. С. 323-335. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=17638251 (дата обращения 07.02.2020).

2. Лыжин А.С., Савельева Н.Н. Идентификация генов устойчивости к парше у сортов и гибридных форм яблони с использованием молекулярных маркеров // Плодоводство и виноградарство Юга России. 2018. № 53(5). С. 1-14. DOI: 10.30679/2219-5335-2018-5-53-1-14

3. Супрун И.И., Насонов А.И., Якуба Г.В., Лободина Е.В., Барсукова О.Н. Эффективность отбора сеянцев яблони в школке на устойчивость к парше и мучнистой росе // Плодоводство и виноградарство Юга России. 2016. № 38. С. 117-129. URL: https://elibrary.ru/item.asp?id=25647153& (дата обращения 07.02.2020).

4. Ульяновская Е.В., Супрун И.И., Седов Е.Н., Седышева Г.А., Серова З.М. Создание иммунных к парше генотипов яблони с комплексом ценных агробиологических признаков // Плодоводство и виноградарство Юга России. 2011. № 10. С. 14-30. URL: https://kubansad.ru/media/uploads/files/nauchnye_trudy_skzniisiv/tom_5/22.pdf (дата обращения 07.02.2020).

5. Урбанович О.Ю., Козловская З.А., Картель Н.А. Распространение генов устойчивости к мучнистой росе в коллекции сортов и видов яблони, выращиваемых в Беларуси // Молекулярная и прикладная генетика. 2010. № . 11. С. 20-25. URL: https://www.elibrary.ru/item.asp?id=38539641 (дата обращения 07.02.2020).

6. Якуба Г.В. Экологизация защиты яблони от мучнистой росы в Краснодарском крае // Субтропическое и декоративное садоводство. 2007. № 40. С. 405-409. URL: https://www.elibrary.ru/item.asp?id=17638262 (дата обращения 07.02.2020).

7. Якуба Г.В. Технология защиты яблони от болезней с применением отечественных фунгицидов // Садоводство и виноградарство. 2016. № 4. С. 33-39. DOI: 10.18454/VSTISP.2016.4.2841

8. Bus V.G.M., Ranatunga C., Alspach P.A., Oraguzie N.C., Whitworth C. A partial diallel study of powdery mildew resistance in six apple cultivars under three growing conditions with different disease pressures // Euphytica. 2006. Vol. 148 (3). Pp. 235-242. DOI: 10.1007/s10681-005-9014-2

9. Calenge F., Durel C.E. Both stable and unstable QTLs for resistance to powdery mildew are detected in apple after four years of field assessments // Molecular Breeding. 2006. vol. 17(4). pp. 329-339. DOI: 10.1007/s11032-006-9004-7

10. Dunemann F., Peil A., Urbanietz A., Garcia-Libreros T. Mapping of the apple powdery mildew resistance gene Pl1 and its genetic association with an NBS-LRR candidate resistance gene // Plant Breeding. 2007. Vol. 126 (5). Pp. 476-481. DOI: 10.1111/j.1439-0523.2007.01415.x

11. Evans K., James C. Identification of SCAR markers linked to Pl-w mildew resistance in apple // Theoretical and Applied Genetics. 2003. Vol. 106 (7). P. 1178-1183. DOI: 10.1007/s00122-002-1147-2

12. Lespinasse Y., Durel C.E., Laurens F., Parisi L., Chevalier M., Pinet C. A European project: DARE-durable apple resistance in Europe (FAIR5 CT97-3898) durable resistance of apple to scab and powdery-mildew: one step more towards an environmental friendly orchard // Acta horticulturae. 2000. Vol. 538 (1). P. 197-200. URL: https://www.cabdirect.org/cabdirect/abstract/20003032218 (дата обращения 07.02.2020).

13. Markussen T., Kruger J., Schmidt H., Dunemann F. Identification of PCR-based markers linked to the powdery-mildew-resistance gene Pl1 fromMalus robusta in cultivated apple // Plant Breeding. 1995. Vol. 114 (6). Pp. 530-534. DOI: 10.1111/j.1439-0523.1995.tb00850.x

14. Patzak J., Paprstein F., Henychova A. Identification of Apple Scab and Powdery Mildew Resistance Genes in Czech Apple (Malus x domestica) Genetic Resources by PCR Molecular Markers // Czech J. Genet. Plant Breed. 2011. Vol. 47 (4). Pp. 156-165. URL: https://www.agriculturejournals.cz/publicFiles/140_2011-CJGPB.pdf (дата обращения 07.02.2020).

15. Savel'ev N.I., Lyzhin A.S., Savel'eva N.N. Genetic diversity of genus Malus Mill. for scab resistance genes // Russian Agricultural Sciences. 2016. Vol. 42. No .5. Pp. 310-313. DOI: 10.3103/S1068367416050189

16. Susuri L.R., Susuri H.S., Muja I.Z. Podosphaera leucotricha and reaction of some apple cultivars // Agronomski glasnik. 2000. Vol. 63 (1/2). Pp. 29-39. URL: https://www.cabdirect.org/cabdirect/abstract/20013017478 (дата обращения 07.02.2020).

References

1. Indenko I.F., Smagin N.E. Ekologicheski bezopasnoe vozdelyvanie yabloni v gornykh regionakh Yuga Rossii [Ecologically safe cultivation of apple in the mountainous regions of southern Russia]. Subtropicheskoe i dekorativnoe sadovodstvo = Subtropical and ornamental horticulture, 2007, no. 40, pp. 323-335. Available at: https://elibrary.ru/item.asp?id=17638251 (accessed 07.02.2020). (In Russ.).

2. Lyzhin A.S., Savelyeva N.N. Identifikatsiya genov ustoichivosti k parshe u sortov i gibridnykh form yabloni s ispol'zovaniem molekulyarnykh markerov [Identification of scab resistance genes in the apple varieties and hybrid forms with use of molecular markers]. Plodovodstvo i vinogradarstvo Yuga Rossii = Fruit growing and viticulture of South Russia, 2018, no. 53(5), pp. 1-14. DOI: 10.30679/2219-5335-2018-5-53-1-14 (In Russ.).

3. Suprun I.I., Nasonov A.I., Yakuba G.V., Lobodina E.V., Barsukova O.N. Effektivnost' otbora seyantsev yabloni v shkolke na ustoichivost' k parshe i muchnistoi rose [Effective selection of apple seedlings in a seed plot on resistance to scab and powder mildew]. Plodovodstvo i vinogradarstvo Yuga Rossii = Fruit growing and viticulture of South Russia, 2016, no. 38, pp. 117-129. Available at: https://elibrary.ru/item.asp?id=25647153& (accessed 07.02.2020). (In Russ.).

4. Ulyanovskaya E.V., Suprun I.I., Sedov E.N., Sedysheva G.A., Serova Z.M. Sozdanie immunnykh k parshe genotipov yabloni s kompleksom tsennykh agrobiologicheskikh priznakov [Creation of the apple-tree genotypes immune to scab and with complex of valuable agrobiological traits]. Plodovodstvo i vinogradarstvo Yuga Rossii = Fruit growing and viticulture of South Russia, 2011, no. 10, pp. 14-30. Available at: https://kubansad.ru/media/uploads/files/nauchnye_trudy_skzniisiv/tom_5/22.pdf (accessed 07.02.2020). (In Russ.).

5. Urbanovich O.Yu., Kozlovskaya Z.A., Kartel N.A. Rasprostranenie genov ustoichivosti k muchnistoi rose v kollektsii sortov i vidov yabloni, vyrashchivaemykh v Belarusi [Spread of mildew resistance genes in the collection of apple cultivars and species grown in Belarus]. Molekulyarnaya i prikladnaya genetika = Molecular and Applied Genetics, 2010, no. 1, pp. 20-25. Available at: https://www.elibrary.ru/item.asp?id=38539641 (accessed 07.02.2020). (In Russ.).

6. Yakuba G.V. Ekologizatsiya zashchity yabloni ot muchnistoi rosy v Krasnodarskom krae [Greening the protection of apple from powdery mildew in the Krasnodar Region]. Subtropicheskoe i dekorativnoe sadovodstvo = Subtropical and ornamental horticulture, 2007, no. 40, pp. 405-409. Available at: https://www.elibrary.ru/item.asp?id=17638262 (accessed 07.02.2020). (In Russ.).

7. Yakuba G.V. Tekhnologiya zashchity yabloni ot boleznei s primeneniem otechestvennykh fungitsidov [Apple technologies protection from diseases with domestic fungicides application]. Sadovodstvo i vinogradarstvo = Horticulture and viticulture, 2016, no. 4, pp. 33-39. DOI: 10.18454/VSTISP.2016.4.2841 (In Russ.).

8. Bus V.G.M., Ranatunga C., Alspach P.A., Oraguzie N.C., Whitworth C. A partial diallel study of powdery mildew resistance in six apple cultivars under three growing conditions with different disease pressures. Euphytica, 2006, vol. 148(3), pp. 235-242. DOI: 10.1007/s10681-005-9014-2 (In Eng.).

9. Calenge F., Durel C.E. Both stable and unstable QTLs for resistance to powdery mildew are detected in apple after four years of field assessments. Molecular Breeding, 2006, vol. 17(4), pp. 329-339. DOI: 10.1007/s11032-006-9004-7 (In Eng.).

10. Dunemann F., Peil A., Urbanietz A., Garcia-Libreros T. Mapping of the apple powdery mildew resistance gene Pl1 and its genetic association with an NBS-LRR candidate resistance gene. Plant Breeding, 2007, vol. 126 (5), pp. 476-481. DOI: 10.1111/j.1439-0523.2007.01415.x (In Eng.).

11. Evans K., James C. Identification of SCAR markers linked to Pl-w mildew resistance in apple. Theoretical and Applied Genetics, 2003, vol. 106(7), pp. 1178-1183. DOI 10.1007/s00122-002-1147-2 (In Eng.).

12. Lespinasse Y., Durel C.E., Laurens F., Parisi L., Chevalier M., Pinet C. A European project: DARE-durable apple resistance in Europe (FAIR5 CT97-3898) durable resistance of apple to scab and powdery-mildew: one step more towards an environmental friendly orchard. Acta horticulturae. 2000, vol. 538 (1), pp. 197-200. Available at: https://www.cabdirect.org/ cabdirect/abstract/20003032218 (accessed 07.02.2020). (In Eng.).

13. Markussen T., Kruger J., Schmidt H., Dunemann F. Identification of PCR-based markers linked to the powdery-mildew-resistance gene Pl1 from Malus robusta in cultivated apple. Plant Breeding, 1995, vol. 114(6), pp. 530-534. DOI:10.1111/j. 1439-0523.1995.tb00850.x (In Eng.).

14. Patzak J., Paprstein F., Henychova A. Identification of Apple Scab and Powdery Mildew Resistance Genes in Czech Apple (Malus x domestica) Genetic Resources by PCR Molecular Markers. Czech J. Genet. Plant Breed. 2011, vol. 47(4), pp. 156-165. Available at: https://www.agriculturejournals.cz/publicFiles/140_2011-CJGPB.pdf (accessed 07.02.2020). (In Eng.).

15. Savel'ev N.I., Lyzhin A.S., Savel'eva N.N. Genetic diversity of genus Malus Mill. for scab resistance genes. Russian Agricultural Sciences, 2016, vol. 42, no. 5, pp. 310-313. DOI: 10.3103/S1068367416050189 (In Eng.).

16. Susuri L.R., Susuri H.S., Muja I.Z. Podosphaera leucotricha and reaction of some apple cultivars. Agronomski glasnik, 2000, vol. 63 (1/2), pp. 29-39. Available at: https://www.cabdirect.org/cabdirect/abstract/20013017478 (accessed 07.02.2020). (In Eng.).

Статья поступила в редакцию 23.04.2020 г.; принята к публикации 9.06.2020 г.

Submitted 23.04.2020; revised 9.06.2020.

Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

All authors have read and approved the final manuscript.

Об авторах

Лыжин Александр Сергеевич

кандидат сельскохозяйственных наук, ведущий научный сотрудник, Федеральный научный центр им. И.В. Мичурина, г. Мичуринск, Россия, ORCID ГО: 0000-0001-9770-8731, Ranenburzhetc@yandex.ru

Савельева Наталья Николаевна

доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник Федеральный научный центр им. И. В. Мичурина, г. Мичуринск, Россия, ORCID ГО: 0000-0003-4874-7536,

saveleva_natalya_nic@mail. ги

About the authors Aleksandr S. Lyzhin

Ph. D. (Agriculture), Leading Research Associate, I.V. Michurin Federal Scientific Center, Michurinsk, Russia, ORCID ID: 0000-0001-9770-8731,

Ranenburzhetc@yandex. ru

Natalya N. Saveleva

Dr. Sci. (Biology), Leading Research Associate, I.V. Michurin Federal Scientific Center, Michurinsk, Russia, ORCID ID: 0000-0003-4874-7536,

saveleva_natalya_nic@mail. ru