СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНКСИОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ
METHOD FOR PRODUCING OF PREPARATION POSSESSING ANXIOLYTIC ACTIVITY

Изобретение относится к фармации и касается способа получения средства, обладающего анксиолитической активностью.
В связи с большой распространенностью нервно-психических заболеваний актуальным является разработка лекарственных средств, направленных на коррекцию функциональных нарушений нервной системы. При этом широко применяемые в настоящее время анксиолитики, оказывают негативное воздействие на организм: гиперседация, миорелаксация и другие (Машковский, 2002).
Перспективными для фармакологической коррекции нарушений, возникающих при функциональных расстройствах нервной системы, являются средства растительного происхождения. Использование фитопрепаратов считается более безопасной терапией, поскольку комплекс биологически активных веществ, обусловливающих терапевтическое действие, обладает малой токсичностью и лучшей переносимостью. Растительные препараты, имеющие существенно меньше побочных эффектов, могут рассматриваться в качестве альтернативной терапии тревожно-депрессивных расстройств или использоваться для усиления эффективности базисных препаратов (Воробьева, Акарачкова, 2007; Ушкалова, Илларионова, 2008).
Большой интерес в этом направлении представляют шишки хмеля обыкновенного как источник получения нового лекарственного средства с анксиолитической активностью.
Известно использование шишек хмеля обыкновенного в составе: «Сбор успокоительный»: листьев мяты перечной - 33,3%, листьев вахты трехлистной - 33,3%, корневищ с корнями валерианы - 16,7%, шишек хмеля - 16,7% (ФС 42-1026-91). «Успокоительный сбор №2. Порошок - фильтр-пакеты»: пустырника травы - 40%, хмеля соплодий - 20%, мяты перечной листьев - 15%, валерианы корневищ с корнями - 15%, солодки корней - 10% (ФСП 42-8796-07). Известен способ получения «Хмеля экстракт жидкий» 1:1 на спирте 95%, применяемый для производства лекарственных средств (ФСП 42-8271-06). Известен способ получения «Хмеля экстракт сухой». Субстанция (15:1, экстрагент - вода), применяемый для производства нестерильных лекарственных средств (ФСП-42-8459-07).
Недостатками известных источников являются низкий выход экстрактивных веществ, длительность производства и менее выраженное фармакологическое действие данных средств по сравнению со средством, получаемым по заявленному способу.
Задачей данного изобретения является получение средства на растительной основе с повышенной фармакологической активностью за счет увеличения выхода экстрактивных и действующих веществ путем последовательной экстракции сырья различными экстрагентами.
Для достижения поставленной задачи измельченный растительный материал (сырье) шишки хмеля обыкновенного - Humulus lupulus L. семейство коноплевые - Cannabaceae экстрагируют спиртом 60-70% в соотношении сырье-экстрагент 1:(20-25) с учетом коэффициента водопоглощения 1:5 при температуре (60-70)°C при постоянном перемешивании в течение 2,5 часов. Извлечение фильтруют в сборник. Далее, шрот последовательно экстрагируют спиртом 40-50% и водой очищенной, подавая каждый раз в экстрактор экстрагент в количестве, равном объему слитого извлечения. Водно-спиртовые извлечения концентрируют под вакуумом, а кубовые остатки объединяют.
Экстракцию спиртом 60-70% и водой очищенной проводят однократно, а спиртом 40-50% - двукратно. Водное извлечение объединяют с кубовым остатком (от спиртовых извлечений) и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, затем доупаривают до 1/3 полученного объема, сушат в вакуумной сушилке и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Выход готового продукта составляет 21-24% от массы исходного сырья.
Выявленные признаки, отличающие предложенное техническое решение от прототипа, являются существенными и позволяют сделать вывод о соответствии предлагаемого способа критерию «новизна».
Предложенный способ позволяет получить готовый продукт, представляющий собой аморфный гигроскопичный порошок от зеленовато-коричневого до коричневого цвета со специфическим запахом горьковатого вкуса. Потеря массы при высушивании составляет 3,1-3,7%.
Заявленный способ получения средства позволяет получить сухой полиэкстракт хмеля обыкновенного, содержащий комплекс биологически активных веществ, обладающий выраженной анксиолитической активностью.
Определение подлинности и количественного содержания экстрактивных и действующих веществ сухого полиэкстракта хмеля обыкновенного установлено современными физико-химическими методами.
На основании фитохимического анализа в сухом полиэкстракте хмеля установлено наличие:
1). Фенольных соединений.
0,5 г сухого полиэкстракта растворяют в 50 мл воды при нагревании «на магнитной мешалке», охлаждают, фильтруют через бумажный фильтр.
К 1 мл фильтрата прибавляют 1 мл 3% раствора железа окисного хлорида; появляется черно-зеленое окрашивание (полифенольные соединения).
К 2 мл фильтрата прибавляют 2-3 капли 2% раствора едкого натра; раствор окрашивается в желто-оранжевый цвет (флавоноиды).
К 3 мл фильтрата прибавляют 1 мл 2% раствора алюминия хлорида, при слабом нагревании в течение 10-15 мин; раствор окрашивается в зеленовато-желтый цвет (флавоноиды).
К 1 мл фильтрата прибавляют 5 мл 5% раствора хлористоводородной кислоты в бутаноле и нагревают на «водяной бане» 15 мин; раствор окрашивается в розовый цвет (лейкоантоцианы).
254
f
f
f
f
f
f
Из этилацетатных извлечений методом хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ) на пластинках «Kieselgel G60 F» в системе растворителей этилацетат-ледяная уксусная кислота-вода (5:1:1), просматривая в УФ-свете до и после обработки хроматограмм 3% спиртовым раствором алюминия хлорида; идентифицированы, по ярко-желтой и зеленовато-желтой флюоресценции, со стандартами: рутин - R~0,24; гесперидин - R~0,31; гиперозид - R~0,38; мирицитин - R~0,86; кверцетин - R~0,90; кемпферол - R~0,94.
254
f
f
f
f
Хроматографией в тонком слое сорбента на пластинках «Sorbfil» ПТСХ П-А-УФ-254» или пластинках «Kieselgel G60 F» в системе растворителей бензол-этилацетат-муравьиная кислота (4:4:2), после проявления 10% спиртовым раствором гидроксида натрия, обнаружены фенолкарбоновые кислоты: хлорогеновая - R~0,22; галловая - R~0,63; кофейная - R~0,74; коричная - R~0,85.
2). Углеводов.
К 1 мл фильтрата прибавляют 3 мл 96% спирта; образуется белый осадок (полисахариды).
254
f
f
3). Методом ТСХ гексановое извлечение из сухого полиэкстракта хроматографируют на пластинках «Sorbfil» ПТСХ П-А-УФ-254» или пластинках «Kieselgel G60 F» в системе растворителей гексан-диэтиловый эфир (80:20). При проявлении хроматограмм 10% спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты обнаружены: пятно желтовато-зеленого цвета с R~0,85 (β-каротин), пятно синего цвета с R~0,50 (токоферол) на уровне свидетелей.
4). Аминокислот. К 2 мл фильтрата прибавляют 3 мл 0,1% водного раствора нингидрина; при нагревании образуется сине-фиолетовое окрашивание раствора (аминокислоты).
254
f
f
f
f
f
f
f
f
f
f
f
f
f
f
f
Методом ТСХ в водном извлечении сухого полиэкстракта, на пластинках «Kieselgel G60 F» в системе растворителей пропанол-вода (7:3), после обработки хроматограмм 0,2% спиртовым раствором нингидрина, при нагревании до визуализации пятен розовато-фиолетового цвета, обнаружены 10 аминокислот: гистидин - R~0,04; глицин - R~0,41; глутаминовая кислота - R~0,51; γ-аминомаслянная кислота R~0,36; аспарагин - R~0,29; аланин - R~0,50; серин - R~0,28; пролин - R~0,42; треонин R~0,48; тирозин - R~0,73. В двойной системе: БУВ (4:1:5) и (8:3:1) еще обнаружены 5 аминокислот: лизин - R~0,08; аргинин - R~0,10; аспарагиновая кислота - R~0,21; цистеин - R~0,43; триптофан - R~0,66.
Методом ВЭЖХ. 0,6 г сухого полиэкстракта растворяют в 25 мл спирта 70%. 20 мкл полученного раствора вводили в высокоэффективный жидкостной хроматограф «Gilston» (модель 305, Франция) (колонка 4,6×250 мм, Кромасил С 18, размер частиц 5 микрон); подвижная фаза: метанол-вода-фосфорная кислота концентрированная (400:600:5). При детектировании с помощью УФ-детектора «Gilston» UV/VIS модель 151, при длине волны 254 нм идентифицированы таннин, галловая, хлорогеновая, феруловая кислоты, рутин, гиперозид, кверцетин, лютеолин-7-глюкозид, лютеолин, кемпферол, кумарин (рис.1).
Идентификация аминокислот.
Свободные аминокислоты. 1 г (точная навеска) полиэкстракта растворяли в 50 мл воды очищенной и нагревали на «водяной бане» в течение 10-15 мин. Извлечение охлаждали и фильтровали. Далее, пробоподготовка образца для исследования включала обработку хлороформом, с целью извлечения липидов и гидрофобных пигментов, осаждение полисахаридов двойным количеством спирта 96%, удаление осадка центрифугированием и концентрирование водного извлечения в вакууме. Сухие остатки (точные навески) растворяли в цитрат-литиевом буфере (pH 2,2) в объеме, определяемом в зависимости от концентрации аминокислот и наносили на колонку аминокислотного анализатора марки ААА-339 (Чехия).
Связанные аминокислоты. Определяли после кислотного гидролиза пробы 6 Н раствором кислоты хлористоводородной при температуре 110°C в течение 24 часов в ампуле. После ампулу вскрывали, кислоту упаривали на роторном испарителе, остаток растворяли в натрий-цитратном буферном растворе (pH 2,2) в объеме, определяемом в зависимости от концентрации аминокислот.Идентифицировано около 20 аминокислот, из которых 10 незаменимых (табл.1, 2).
5). Эфирных масел. Эфирные масла исследовали методом капиллярной ГЖХ-МС. 30 мкл эфирного масла растворяли в 1,5 мл н-гексана. Объем пробы 1 мкл раствора, с разделением потока 20:1, вводили в инжектор газового хроматографа.
Идентификацию веществ на хроматограмме осуществляли с учетом трех факторов: времени удерживания вещества, спектра электронного удара и ионной масс-хроматограммы в базе данных Хромато-Масс-Спектрометра NBS 54 (рис.2).
Количественное определение. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин-стандарт с применением метода дифференциальной спектрофотометрии.
Методика. Около 0,4 г (точная навеска) полиэкстракта хмеля сухого помещают в стаканчик, приливают 30 мл спирта 70%, растворяют при слабом нагревании, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора спиртом 70% до метки. Содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр в сухую колбу, отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).
3 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 3 мл 2% спиртового раствора алюминия хлорида, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор Б).
Через 30 минут измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 412 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 3 мл раствора А, 1-2 капель 1% уксусной кислоты помещенного в мерную колбу вместимостью 25 мл и доведенного спиртом 70% до метки.
Параллельно, в тех же условиях, измеряют оптическую плотность раствора Б ГСО рутина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое вещество (X) в процентах вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора,
O
D - оптическая плотность раствора ГСО рутина,
m - масса полиэкстракта в граммах,
O
m - масса ГСО рутина в граммах,
W - потеря в массе при высушивании полиэкстракта в процентах.
Содержание суммы флавоноидов должно быть не менее 0,8% в полиэкстракте в пересчете на рутин.
Предложенный способ получения достаточно прост, не требует сложной схемы очистки, позволяет получить продукт постоянного состава с максимальным количеством действующих веществ, благодаря применению трех экстрагентов.
Технология может быть внедрена на предприятиях, выпускающих лекарственные препараты и профилактические средства.
Для доказательства существенности предложенных признаков способа, для выявления оптимальных технологических режимов нами изучены основные факторы, влияющие на процесс экстрагирования растительного сырья: состав и природа экстрагента, его соотношения с сырьем, степень измельчения сырья, температурный режим, продолжительность и кратность числа экстракций.
Количественная оценка велась по выходу экстрактивных веществ (ГФ XI, вып.1. С.295) и по сумме флавоноидов в пересчете на рутин-стандарт.
Метрологические характеристики методики представлены в таблице 3. Как видно из данных таблицы, относительная ошибка единичного определения с 95% вероятностью составляет ±2,77%.
При подборе экстрагента были использованы вода очищенная и спирт этиловый различной концентрации. Из данных таблицы 4 следует, что при экстракции в концентрации выше 70% спирта, выход флавоноидов не увеличивается, оптимальным является 50%, 60%, 70% спирт и горячая вода, при котором достигается максимальный выход суммы экстрактивных веществ и флавоноидных соединений.
Как известно, размер частиц сырья обусловливает полноту и скорость перехода в извлечение экстрагируемых веществ. Для изучения влияния степени измельчения на выход экстрактивных веществ и флавоноидов, сырье подвергалось измельчению до диаметра частиц 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 мм. В таблице 5 представлены результаты исследований. Установлено, что оптимальной степенью измельчения для сырья является размер частиц, не более 1 мм.
Определено оптимальное соотношение фаз сырье-экстрагент, соответствующее 1:(20-25) для однократного залива сырья (табл.6). Дальнейшее увеличение объема экстрагента нецелесообразно, поскольку содержание действующих веществ уменьшается. Для интенсификации процесса экстракции сырья нужно учитывать температурный фактор. Учитывая полученные данные (табл.7), экстракцию сырья необходимо проводить при температуре (60-70)°C.
Для определения продолжительности и кратности числа экстракций установлено время достижения равновесной концентрации в системе «сырье-экстрагент» для спиртовых и водной экстракций по следующей методике. К навескам по 1 г измельченного сырья (1 мм) прибавляют (70% спирт, 50% спирт) в соотношении 1:25 с учетом К/в 1:5 и экстрагируют при комнатной температуре «на вибрационном встряхивателе». Через определенный промежуток времени извлечение сливают и анализируют на содержание экстрактивных веществ (1 контакт фаз). Экстракцию повторяют трижды, заливая сырье новой порцией экстрагента в количестве, равном слитому извлечению (2 и 3 контакты фаз). Сливы проводят через каждые 30 мин, 1 час, 1,5 часа, 2 часа, 2,5 часа, 3 часа. Аналогичным образом, в тех же условиях экстракцию горячей водой проводят на «водяной бане».
Экспериментальные данные приведены в таблице 8. Полученные результаты свидетельствуют о том, что равновесное состояние при первом, втором, третьем контакте фаз достигается через 2,5 часа. При этом при первом контакте экстракции спиртом 70% и горячей водой в извлечение переходит 65-75% экстрактивных веществ. При экстракции спиртом 50% извлекается в течение первых двух контактов фаз до 90% экстрактивных веществ. Поэтому в целях экономии экстрагентов и времени экстракции исключаются применение 2 и 3 контактов фаз при экстракции спиртом 70% и водой очищенной и 3 контакта фаз при экстракции спиртом 50%.
Способ иллюстрируется ниже следующими примерами.
Пример 1
1 кг шишек хмеля обыкновенного измельчают до размера частиц диаметром не более 1 мм (сито №10 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстрактор с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 25 л спирта этилового 60% в соотношении сырье-экстрагент, равном 1:20 с учетом К/в 1:5. Экстрагируют при температуре 60°C при постоянном перемешивании в течение 2,5 часов. Далее шрот экстрагируют спиртом 40% - два раза и водой очищенной - один раз, подавая каждый раз в экстрактор экстрагент в количестве, равном объему слитого извлечения. 1-й слив - 19,8 л; 2-й слив - 19,5 л; 3-й слив - 19,3 л; 4-й слив - 18,8 л. Водно-спиртовые извлечения концентрируют под вакуумом. Кубовые остатки объединяют с водным извлечением, фильтруют и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, доупаривают до 1/3 полученного объема, сушат в вакуумной сушилке в течение 5 часов и измельчают на мельнице. Получают 237 г готового продукта, что составляет 23,7% от массы исходного сырья.
Полиэкстракт хмеля сухой представляет собой аморфный порошок коричневого цвета со специфическим запахом. Гигроскопичен. Содержание влаги 3,1%.
Пример 2
1 кг шишек хмеля обыкновенного измельчают до размера частиц диаметром не более 1 мм (сито №10 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстрактор с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 30 л спирта этилового 70% в соотношении сырье-экстрагент, равном 1:25 с учетом К/в 1:5. Экстрагируют при температуре 70°C при постоянном перемешивании в течение 2,5 часов. Далее шрот экстрагируют спиртом 50% - два раза и водой очищенной - один раз, подавая каждый раз в экстрактор экстрагент в количестве, равном объему слитого извлечения. 1-й слив - 25,4 л; 2-ой слив - 24,9 л; 3-й слив - 24,8 л; 4-й слив - 24,2 л. Водно-спиртовые извлечения концентрируют под вакуумом. Кубовые остатки объединяют с водным извлечением, фильтруют и упаривают до 1/15 первоначального объема. Концентрированный экстракт очищают сепарированием, доупаривают до 1/3 полученного объема, сушат в вакуумной сушилке в течение 4,5 часов и измельчают на мельнице. Получают 210 г готового продукта, что составляет 21% от веса исходного сырья.
Полиэкстракт хмеля сухой представляет собой аморфный порошок зеленовато-коричневого цвета со специфическим запахом. Гигроскопичен. Содержание влаги 3,7%.
Таким образом, предлагаемый способ получения по сравнению с известным (табл.9) позволяет получить полиэкстракт хмеля сухой, содержащий биологически активные вещества, которые обусловливают его выраженную анксиолитическую активность за счет использования рациональной технологии получения.
Фармакологическое изучение полиэкстракта хмеля обыкновенного сухого
Экспериментальная работа выполнена на белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 160-180 г. Животные находились в стандартных условиях содержания и кормления в виварии (Приказ МЗ №1179 от 10.10.83 г.).
Эксперименты на животных осуществляли в соответствии с правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей.
Животные были разделены на 5 групп. Животным I-III опытных групп в течение 5 дней до проведения экспериментов вводили внутрижелудочно полиэкстракт хмеля сухой в дозах 100, 200 и 300 мг/кг соответственно, разведенного в воде очищенной. Крысы четвертой опытной группы получали препарат сравнения - таблетки валерианы экстракта в дозе 120 мг/кг, животные контрольной группы - очищенную воду в эквивалентном объеме по аналогичной схеме введения.
Тестирование животных в экспериментальных установках проводили через 1 час после последнего введения исследуемых средств.
Анксиолитическое действие полиэкстракта хмеля сухого исследовали согласно методическим указаниям по изучению транквилизирующего (анксиолитического) действия фармакологических веществ (Воронина, Середенин, 2005).
Значимость различий между указанными параметрами среди опытной и контрольной групп животных оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия считали существенными при Р≤0,05 (Сергиенко, Бондарева, 2006).
Влияние полиэкстракта хмеля обыкновенного сухого на поведение животных в приподнятом крестообразном лабиринте
Метод приподнятого крестообразного лабиринта (ПКЛ) основан на навыке предпочтения грызунами темных нор и естественного страха нахождения на открытых площадках и падения с высоты. Непосредственно перед началом эксперимента животных выдерживали в течение 3 минут в темных клетках.
Затем животных помещали в ПКЛ на центральную площадку, головой к открытому рукаву, и в течение 10 минут регистрировали время пребывания животных в открытых и закрытых рукавах, а также на центральной площадке, количество заходов в открытые и закрытые рукава, число свещиваний и вертикальных стоек, а также количество дефекаций.
Результаты тестирования животных в крестообразном лабиринте показали (табл.10), что контрольные животные предпочитают большую часть времени проводить в закрытых рукавах, чем открытых. Курсовое введение животным полиэкстракта хмеля сухого в дозах 200 и 300 мг/кг и валерьяны экстракта подавляло у животных чувство страха открытого пространства, в результате чего количество заходов в открытый рукав установки у животных данных группа увеличилось в 1,6; 1,4 и 1,9 раза. Время пребывания в открытом рукаве у животных опытных групп было выше такового показателя у животных контрольной группы в среднем в 1,5 раза. При этом наибольшее время пребывания в открытом рукаве было у животных, получавших исследуемый полиэкстракт в дозе 300 мг/кг.
Время нахождения на центральной площадке, позволяющее оценить показатель принятия решения, у животных опытных и контрольной групп значимо не отличалось (p>0,05).
Анализ результатов показал, что у животных опытных групп в ПКЛ наблюдалась и более высокая общая двигательная активность по сравнению с животными контрольной группы (табл.10). Так у крыс, получавших полиэкстракт хмеля сухой в дозе 200 и 300 мг/кг и валерианы экстракт, увеличивалось количество заходов в закрытые рукава лабиринта и количество вертикальных стоек, а у животных, получавших исследуемый полиэкстракт в дозе 100 мг/кг, - количество свещиваний.
Увеличение исследовательской активности и понижение чувства страха и тревоги у животных опытных групп можно объяснить снижением у них уровня эмоциональности (табл.10). Так, у животных опытных групп количество болюсов было ниже такового показателя у контрольных животных в среднем в 1,6 раза.
Влияние полиэкстракта хмеля обыкновенного сухого на поведение животных в «открытом поле»
Влияние полиэкстракта хмеля сухого и таблеток экстракта валерианы на спонтанную двигательную активность, на ориентировочно-исследовательское поведение и эмоциональность животных изучали с помощью теста «открытое поле». За поведением крыс в экспериментальной установке наблюдали в течение 3 минут (Воронина, 2005). Регистрировали горизонтальную активность (число пересеченных центральных и периферических квадратов), вертикальную активность (число подъемов на задние лапы), число заглядываний в отверстия (норковый рефлекс), количество животных, посетивших центральные квадраты, и латентный период захода в центральный квадрат. Эмоциональное состояние животных определяли по количеству дефекационных шариков и актов груминга. Об общей двигательной активности судили по сумме вертикального, горизонтального компонентов и норковому рефлексу (Воронина, 2005).
Результаты исследований показали, что помещение белых крыс, получавших полиэкстракт хмеля сухой в дозах 200 и 300 мг/кг и валерианы экстракт в дозе 120 мг/кг, в незнакомые условия приводило к увеличению общей двигательной активности в 1,6; 2,8 и 2,1 раза соответственно (табл.11) по сравнению с данными у животных контрольной группы. При этом введение крысам исследуемого полиэкстракта в данных дозах и валерианы экстракта значительно увеличивало количество посещений животными не только периферических, но и центральных квадратов. Латентный период захода в центральные квадраты у крыс, получавших сухой полиэкстракт хмеля в дозах 200 и 300 мг/кг и валерианы экстракт, был ниже такового показателя у животных контрольной группы на 22, 35 и 26% соответственно. При этом 50% животных, получавших полиэкстракт хмеля сухой в дозе 300 мг/кг и валерианы экстракт, посетили центральные квадраты, тогда как у животных контрольной группы этот показатель составил 30%. Также у животных опытных групп на фоне повышения горизонтальной активности наблюдалось существенное увеличение вертикальной активности и норкового рефлекса (табл.11). Повышение ориентировочно-исследовательской активности у белых крыс опытных групп можно объяснить снижением у них уровня эмоциональности (табл.11). Так, у животных, получавших полиэкстракт в дозах 200 и 300, отмечали уменьшение количества дефекационных шариков в среднем на 38% и количества актов груминга в 1,8 и 3,1 раза соответственно по сравнению с таковыми показателями у контрольных животных. На фоне введения препарата сравнения - валерианы экстракта у крыс наблюдали снижение количество дефекационных шариков в 2,2 раза по сравнению с таковыми показателями у животных контрольной группы.
Следовательно, введение животным исследуемого полиэкстракта хмеля в дозах 200 и 300 мг/кг и валерианы экстракта вызывает у крыс ускорение процессов адаптации и снижение тревожно-оборонительной реакции.
Влияние полиэкстракта хмеля обыкновенного сухого на поведение животных в «светлой/темной камере»
Методика «светлой/темной» камеры основана на естественном стремлении грызунов избегать ярко освещенных мест. В данном эксперименте животных помещали в ярко освещенный отсек двухкамерной "светлой/темной" установки и в течение 5 минут регистрировали число переходов между светлым и темным отсеками, а также длительность пребывания в светлом и темном отсеках.
Результаты тестирования животных в «светлой/темной камере» показали, что контрольные животные предпочитают большую часть времени проводить в темном отсеке установки (табл.12). Все 100% животных контрольной группы заходили в темный отсек и проводили там весь период тестирования. Курсовое введение животным полиэкстракта хмеля сухого в дозах 100, 200 и 300 мг/кг и валерианы экстракта в дозе 120 мг/кг вызывало угнетение чувства страха и тревоги, о чем свидетельствовало увеличение количества переходов между камерами в 2,6; 3,3; 3,5 и 2,5 раза и увеличение пребывания животных в светлом отсеке установки в 2,9; 3,5; 2,5 и 2,7 раза по сравнению с таковыми показателями у животных контрольной группы (табл.12). Исследуемый полиэкстракт в дозах 200 и 300 мг/кг в данном эксперименте оказывал более выраженное анксиолитическое действие по сравнению с валерианы экстрактом.
Влияние полиэкстракта хмеля обыкновенного сухого на поведение белых крыс в конфликтной ситуации в варианте Vogel
Конфликтную ситуацию в варианте Vogel создавали, сталкивая питьевую и оборонительную мотивации, путем подавления болевым электрическим раздражителем питьевого рефлекса при потреблении крысами воды из чашки. Для этого животных в течение 2 суток лишали воды, не ограничивая потребление корма, на 3 сутки вырабатывали навык взятия воды из поилки, помещая крысу в камеру, где она находила поилку с водой и начинала пить. На 4 день крысу помещали в камеру на 3 минуты и через 10 с после начала питья каждое взятие воды наказывали электроболевым раздражением (1 мА). В результате, чтобы удовлетворить питьевую мотивацию, крыса должна была преодолеть чувство страха перед наказанием. Об анксиолитическом влиянии полиэкстракта хмеля сухого и валерианы экстракта судили по числу наказуемых взятий воды животным за 3 минуты нахождения в камере. Результаты исследований показали (табл.13), что курсовое введение исследуемого полиэкстракта в дозах 100, 200 и 300 мг/кг устраняет чувство тревоги и страха, увеличивая число наказуемых взятий воды в 5,3; 5,8 и 7,0 раза соответственно по сравнению с таковым показателем у животных контрольной группы. При этом введение полиэкстракта в дозе 300 мг/кг оказывало более выраженное анксиолитическое действие по сравнению с препаратом сравнения - валерианы экстрактом.
Таким образом, курсовое введение животным полиэкстракта хмеля обыкновенного сухого в дозах 200 и 300 мг/кг оказывает выраженное анксиолитическое действие в условиях ненаказуемого поведения, увеличивая количество заходов и время пребывания в открытых рукавах приподнятого крестообразного лабиринта, горизонтальную, вертикальную активность и норковый рефлекс в «открытом поле», а также количество переходов и время пребывания в светлом отсеке «темной/светлой камеры».
Данный эффект сопоставим с таковым у препарата сравнения -валерианы экстракта.
Курсовое введение животным полиэкстракта хмеля обыкновенного сухого в дозах 100, 200 и 300 мг/кг оказывает выраженное анксиолитическое действие в условиях наказуемого поведения, достоверно увеличивая количество наказуемых взятий воды в методике конфликтной ситуации по Vogel. При этом введение исследуемого полиэкстракта в дозе 300 мг/кг оказывает более выраженное действие по сравнению с препаратом сравнения - валерианы экстрактом.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
1. Воробьева О.В., Акарачкова Е.С. Применение комбинированных растительных препаратов при тревожных расстройствах. // Фарматека. - 2007. - №7. - С.47-50.
2. Воронина Т.А., Середенин С.Б. Методические указания по изучению транквилизирующего (анксиолитического) действия фармакологических веществ. // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2005. - С.253-263.
3. Государственная фармакопея СССР XI, вып.1. - М.: Медицина. - 1987. - 336 с.
4. Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Фармакогнозия: учебное пособие. / Под ред. Г.П.Яковлева. - СПб.: СпецЛит, 2006. - 845 с.
5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: ООО Изд.-во «Новая волна», 2002, т.2. - 608 с.
6. Пономарев В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья. - М.: Медицина, 1976. - 202 с.
7. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. - М., 2006. - 256 с.
8. Ушкалова А.В., Илларионова Т.С. Эффективность и безопасность антидепрессивных и седативных средств растительного происхождения. // Фармация. - 2008. - №20 - С.10-14.
9. Фармакопейная статья предприятия. ФСП 42-8459-07. Хмеля экстракт сухой (субстанция). ООО «Хармс». - Россия, 2007. - 9 с.