Влияние растительного экстракта «Фитоуросепт» на пролиферативную активность т- и В-лимфоцитов

что может косвенно указывать на противовоспалительное действие изучаемых образцов. При гистологическом исследовании легочных тканей морских свинок выявлен положительный эффект фитосбора на течение воспалительного процесса в бронхолегочной системе.

Анализ результатов исследования муколитических свойств фитосбора и спиртового экстракта фиалки одно-

цветковой показал меньшее количество приступов кашля при применении растительного сбора.

При исследовании острой токсичности травяного сбора выявлено, что данный настой в соотношении 1:1,5 с водой не обладает острой токсичностью при внутрижелудочном введении белым крысам.

ЛИТЕРАТУРА

1. Государственная фармакопея СССР. - Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. - XI изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.

2. Коржевский Д.Э. Краткое изложение основ гистологической техники для врачей и лаборантов-гистологов. - СПб.: Кроф, 2005. - 48 с.

3. Мартынов А.М., Чупарина Е.В. Содержание и состав полисахаридных комплексов, макро- и микроэлементов Viola uniflora (Violaceae) // Растительные ресурсы. - 2009. - Т.

45. Вып. 4. - С.67-73.

4. Мартынов А.М., Собенин А.М. Полифенольные соединения и аминокислоты надземной части Viola uniflora // Растительные ресурсы. - 2011. - Т. 47. Вып. 2. - С.118-122.

5. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA.

- М.: Медиа Сфера, 2002. - 312 с.

6. Руководство по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р. У Хабриева. -2-изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - 832 с.

Информация об авторах: Соседова Лариса Михайловна - д.м.н., профессор, заведующий лабораторией, e-mail: tox_lab@mail.ru; Мартынов Альберт Михайлович - к.ф.н., доцент кафедры, 664049, г. Иркутск, м-н Юбилейный, 100, ГБОУ ДПО ИГМАПО, кафедра фармации, тел. (3952) 46-53-26, e-mail: martinov_irk@mail.ru;

Капустина Елена Александровна - к.м.н., научный сотрудник лаборатории;

Титов Евгений Алексеевич - к.б.н., научный сотрудник

© ХОБРАКОВА В.Б., НИКОЛАЕВ С.М. - 2013 УДК: 615.322

ВЛИЯНИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО ЭКСТРАКТА «ФИТОУРОСЕПТ» НА ПРОЛИФЕРАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ Т- И В-ЛИМФОЦИТОВ

Валентина Бимбаевна Хобракова1, Сергей Матвеевич Николаев1-2

Резюме. Установлена иммуномодулирующая активность комплексного растительного средства - сухого экстракта «Фитоуросепт» в реакции пролиферации Т- и В-лимфоцитов селезенки мышей в экспериментах in vitro. Показано, что испытуемое средство в концентрации 4,0 мкг/мл стимулирует пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов.

Ключевые слова: сухой экстракт «Фитоуросепт», иммуномодулятор, пролиферация, Т-лимфоцит, В-лимфоцит, митоген.

THE INFLUENCE OF THE PLANT EXTRACT “PHYTOUROSEPT" ON THE Т- AND В-LYMPHOCYTE PROLIFERATIVE ACTIVITY

V.B. Khobrakova1, S.M. Nikolaev1,2 ('Institute of General and Experimental Biology of SD RAS, Ulan-Ude;

2Irkutsk State Medical Academy of Continuing Education, Irkutsk, Russia)

Summary. The immunomodulating activity of the complex plant extract “Phytourosept” in the reaction of proliferation of T- and В-lymphocytes obtained from mouse spleen has been established in experiments in vitro. It has been shown that the dry extract “Phytourosept” in the concentration of 4,0 mkg/ml stimulates proliferative activity of T- and В-lymphocytes.

Key words: the dry extract “Phytourosept”, immunomodulator, proliferation, Т-lymphocyte, В-lymphocyte, mitogen.

В настоящее время лечение заболеваний, в патогенез которых вовлекается иммунная система, остается сложной задачей. Применяемые методы терапии либо недостаточно эффективны, либо сопровождаются развитием тяжелых побочных реакций. Использование препаратов природного происхождения представляется перспективным направлением дальнейшего развития и совершенствования методов иммунокоррекции и иммунореабилитации. В последние годы значительно возрос интерес к средствам из лекарственных растений, для большинства из которых характерно отсутствие выраженных побочных эффектов и низкая токсичность благодаря содержанию в них комплекса биологически активных веществ [1,2,3]. Многокомпонентные растительные сборы привлекают внимание гармоничным сочетанием биологически активных веществ, широким спектром их фармакологического действия. Объектом настоящего исследования явился сухой полиэкстракт «Фитоуросепт» (условное название) (зарегистрирован как БАД к пище «Арура-Тан №4»), пред-

ставляющий собой сухой экстракт из травы горца птичьего (Polygonum aviculare L.), листьев толокнянки обыкновенной (Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng.), брусники обыкновенной (Vaccinium vitis-idaea L.), крапивы двудомной (Urtica dioica L.) и цветков календулы лекарственной (Calendula officinalis L.) в соотношении 3,0:2,0:2,0:1,5:1,5 масс. частей. В состав полиэкстракта входит сумма экстрактивных веществ, представленных комплексом веществ полифенольной природы (флаво-ноиды: апигенин, лютеолин, кверцитин, рутин, гиперозид, мирицетин; фенолкарбоновые кислоты: хлорогеновая, галловая; фенологликозид арбутин). Содержание флавоноидов в пересчете на гиперозид - не менее 2%, фенологликозидов в пересчете на арбутин - не менее 12%.

Целью настоящего исследования явилось определение влияния сухого полиэкстракта «Иммунополифит» на пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов селезенки мышей in vitro.

Материалы и методы

Влияние исследуемого средства на пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов селезенки мышей линии СВА оценивали in vitro в реакции бластной трансформации в присутствии митогенов: конканавалина А (Кон А) и липо-полисахарида (ЛПС) по включению 3Н-тимидина с использованием сцинтилляционного счетчика. Клетки селезенки мышей в концентрации 1х106 клеток/мл вносили по 100 мкл в лунки плоскодонных культуральных микропланшет. Митогены КонА и ЛПС вносили в лунки в концентрации 10 мкг/мл. Дополнительно вносили исследуемое средство в концентрациях 0,4, 4,0 и 40 мкг/мл. Клетки инкубировали в среде RPMI-1640 в течение 48 час. при 370С в атмосфере воздуха с 5% СО2. Синтез ДНК в культуре клеток оценивали по включению 3Н-тимидина, вносимого на последующие 18 час. инкубации из расчета 37 Кбк на лунку. Клетки переносили на бумажные фильтры и отмывали. Счет радиоактивности проводили в бета-счетчике. Уровень синтеза ДНК оценивали в импульсах в 1 минуту [4].

После проверки распределения на нормальность полученные результаты обработаны статистическим методом с помощью t-критерия Стьюдента [5]. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез p=0,05.

Результаты и обсуждение

Ранее нами сообщалось об иммуномодулирующем действии сухого экстракта «Фитоуросепт» при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии [7]. В данной работе показано, что исследуемый экстракт в экспериментальнотерапевтической дозе 40 мг/кг способен ослаблять супрессивное действие цитостатика азатиоприна на клеточноопосредованную иммунную реакцию (гиперчувствительность замедленного типа), антителогенез и фагоцитоз перитонеальных макрофагов в отношении Staphylococcus aureus, что выражается в восстановлении иммунологических показателей (индекса реакции гиперчувствительности замедленного типа, абсолютного и относительного количества антителообразующих клеток, фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа) до уровня таковых у интактных животных. В настоящей работе представляло интерес исследовать влияние сухого экстракта «Фитоуросепт» на пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов селезенки мышей in vitro в реакции бластной трансформации в присутствии митогенов Кон А и ЛПС по включению 3Н-тимидина.

При оценке влияния «Фитоуросепт» на пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов селезенки мышей in vitro использовали его в концентрациях 0,4; 4,0 и 40,0 мкг/мл. Результаты исследований представлены в таблицах 1 и 2.

Как видно из таблицы 1, внесение фитоэкстракта в мо-

ЛИТЕРАТУРА

1. Бакуридзе А.Д., Курцикидзе М.Ш., Писарев В.М. и др. Иммуномодуляторы растительного происхождения // Химико-фармацевтический журнал. - 1993. - №8. - С.43-47.

2. Лазарева Д.Н., Плечев В.В., Моругова Т.В., Самигуллина Л.И. Растения, стимулирующие иммунитет. - Уфа, 2005. -96 с.

3. Мельникова Т.И., Николаев В.О. Сравнительная им-мунофармакологическая оценка растительных экстрактов с полифенольными и полисахаридными комплексами // Фармация в 21 в.: инновации и традиции: Тез. докл. между-нар. науч. конф. - СПб., 1999. - С.179.

4. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000.

дельную систему в концентрации 4,0 мкг/мл приводило к увеличению пролиферативной активности Т-лимфоцитов в 1,3 раза по сравнению с данными в контрольной группе. Испытуемое средство в концентрациях 0,4 и 40,0 мкг/ мл не оказывало значимого влияния на пролиферацию Т-лимфоцитов.

Таблица 1

Влияние сухого экстракта «Фитоуросепт» на пролиферацию Т-лимфоцитов селезенки мышей in vitro

Группы Доза, мкг/мл Кол-во имп. в мин.

Контрольная (Кон А) 15 17003±1025

Опытная («Фитоуросепт» + Кон А) 0,4 17296±1700

4,0 22068±1803*

40,0 16212±1534

Примечание: здесь и далее * - означает, что разница существенна (р<0,05) по сравнению с контролем.

При оценке влияния экстракта «Фитоуросепт» на пролиферацию В-лимфоцитов установлено, что исследуемое средство в концентрации 4,0 мкг/мл стимулирует пролиферативную активность В-лимфоцитов в 1,5 раза по сравнению с данными в контрольной группе. В концентрациях 0,4 и 40

Таблица 2

Влияние сухого экстракта «Фитоуросепт» на пролиферацию В-лимфоцитов селезенки мышей in vitro

Группы Доза, мкг/мл Кол-во имп. в мин.

Контрольная (ЛПС) 15 1549±106

Опытная («Фитоуросепт» + ЛПС) 0,4 1886±102

4,0 2266±114*

40,0 1745±143

мкг/мл экстракт не оказывает существенного влияния на пролиферацию В-лимфоцитов (табл. 2).

Таким образом, сухой экстракт «Фитоуросепт» в концентрации 4,0 мкг/мл стимулирует пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов.

Эффективность данного средства, по-видимому, обусловлена большим разнообразием входящих в его состав биологически активных веществ, преимущественно, поли-фенольными соединениями (флавоноиды, фенологликози-ды, фенолкарбоновые кислоты), обладающими иммуномодулирующими свойствами [1,2,3,6,8].

Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что сухой полиэкстракт «Фитоуросепт» является эффективным иммуномодулирующим средством, что позволяет рекомендовать его для дальнейшего изучения с целью создания новых растительных иммуномодулирующих препаратов.

- 398 с.

5. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. - М., 2006. - 256 с.

6. Толкачев О.Н., Шипулина Л.Д., Шейченко О.П. Новые растительные полифенолы - активные противовирусные агенты и иммуномодуляторы // Int. J. Immunorehabil. - 1999.

- №14. - С.9.

7. Хобракова В.Б., Николаев С.М. Иммунокорригирующие свойства сухого экстракта «Фитоуросепт» при экспериментальном иммунодефиците // Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т. 2 (11). №2-3. - С.205.

8. Berg P.A., Daniel P.T. Effects of flavonoid compounds on the immune response // Piod. Clin. Biol. Res. - 1988. - Vol. 280.

- P.157-171.

Информация об авторах: Хобракова Валентина Бимбаевна - к.б.н., доцент, с.н.с., тел. (3012) 434743, факс: (3012) 43-30-34, e-mail: val0808@mail.ru; Николаев Сергей Матвеевич - д.м.н., профессор кафедры, г.н.с. лаборатории,

e-mail: smnikolaev@mail.ru