Разработка методики количественного определения зовиракса

УДК 543.42.062 © Е.А. Илларионова, П.О. Иноземцев, И.П. Сыроватский

РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗОВИРАКСА

Разработана унифицированная методика спектрофотометрического определения зовиракса (ацикловира) в субстанции, отличающаяся использованием в качестве образца сравнения калия феррицианида. Обоснованы оптимальные условия определения: растворитель - 0,1 М раствор натрия гидроксида, аналитическая длина волны - 261 нм. Определены коэффициенты пересчета. Относительное стандартное отклонение разработанной методики для субстанции составило 0,005.

Ключевые слова: спектрофотометрия, внешний образец сравнения, коэффициент пересчета, зовиракс, ацикловир, калия феррицианид.

E.A. Illarionova, P.O. Inozemtsev, I.P. Syrovatsky THE DEVELOPMENT OF THE METODOLOGY OF QUANTITATION DETERMINATION OF ZOVIRAX

A unified procedure has been developed for the spectrophotometric determination of zovirax (aciclovir) in the substance using potassium ferrocyanide as reference sample. The best conditions for substance determination have been substantiated as follows: 0,1M NaOH as a solvent and an analytical wavelength of 261 nm. The coefficients of recalculation have been determined. The relative standard deviation of the developed methodology is 0,005 for the substance.

Keywords: spectrophotometry, external sample of comparison, coefficient of recalculation, zovirax, aciclovir, potassium ferrocyanide.

Одними из широко применяемых в медицине лекарственных средств являются производные пурина, обладающие противовирусным действием [2]. Одним из таких препаратов является зовиракс, или ацикловир (2-амино-1,9-дигидро-9-[(2-гидроксиэтокси)-метил]-6Н-пурин-6-ОН) .

О

H2N N

OH

O

ацикловир

Частое применение этого препарата требует особого внимания к его качеству. Анализ НД показал, что для количественного определения ацикловира применяется ацидиметрия в среде ледяной уксусной кислоты и уксусного ангидрида, являющаяся высокотоксичным методом [1]. Цель настоящего исследования разработать новую методику количественного определения зовиракса спектрофотометрическим методом с использованием внешнего образца сравнения.

Материалы и методы

В работе использовали: субстанцию ацикловира, отвечающую требованиям нормативного документа, калия феррицианид (чда), 0,1 М раствор натрия гидроксида, приготовленный из фиксанала,

0,1 М раствор кислоты хлористоводородной, приготовленный из фиксанала, спирт этиловый 95%.

Электронные спектры регистрировали на спектрофотометре Specord UV VIS. Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометрах СФ-26 и СФ-46 в кюветах 1 см на фоне растворителя. Величину рН контролировали с помощью универсального ионометра ЭВ-74.

Результаты исследований обработаны статистически с использованием пакета программ Microsoft Excel для Windows XP. Проверка распределения, которому подчиняются результаты исследования, дала возможность использовать для анализа критерий Стьюдента. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез Р = 0,05.

Результаты и обсуждение

С целью оптимизации условий спектрофотометрического определения ацикловира нами были изучены спектры поглощения растворов ацикловира в интервале рН 1,1-13,0 (рис. 1).

номер кривой соответствует значению рН

Рис. 1. УФ-спектр поглощения 0,0015% раствора ацикловира

Из приведенных экспериментальных данных видно, что при рН 1,1-3,0 спектр поглощения ацикловира характеризуется одной полосой поглощения с максимумом при длине волны 256±1нм. При увеличении рН от 5,5 до 7,0 происходит гипсохромный сдвиг максимума поглощения до 251 нм, а затем при рН 8,0-13,0 наблюдается постепенный батохромный сдвиг максимума и уширение полосы поглощения. Следует отметить, что при рН 1,1-3,0 спектр поглощения ацикловира характеризуется наличием «плеча» в области 274-277 нм, а при рН 5,5-7,0 - в области 265-275 нм.

Изучение стабильности растворов ацикловира (рис. 2) показало, что наиболее устойчив раствор ацикловира с рН 13,0. Поэтому в качестве оптимального растворителя для спектрофотометрического определения ацикловира нами выбран 0,1М раствор гидроксида натрия (рН 13,0).

Методом наименьших квадратов было рассчитано уравнение градуировочного графика ацикловира при оптимальных условиях (растворитель - 0,1М раствор гидроксида натрия, ^тах=261 нм): А=(0,038±0,001)С, 8д=0,014 (А - оптическая плотность, С - концентрация, мкг/мл).

Аналитическая длина волны ацикловира (261 нм) входит в интервал, оптимальный для феррициа-нида калия (255-267 нм) [4]. Следует отметить, что у феррицианида калия и ацикловира совпадают максимумы поглощения, и они имеют общий оптимальный растворитель - 0,1М раствор гидроксида натрия. Следовательно, можно предположить, что погрешность анализа ацикловира при отмеченных выше оптимальных условиях не будет превышать допустимую.

А

Рис. 2. Зависимость оптической плотности растворов ацикловира от времени хранения

В связи с тем, что удельные показатели поглощения ацикловира и феррицианида калия не совпадают, необходимо рассчитать коэффициент пересчета [3]. Результаты экспериментальных исследований по определению коэффициента пересчета ацикловира по феррицианиду калия представлены в табл. 1.

Таблица 1

Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа ацикловира

по внешнему образцу сравнения феррицианиду калия

аос Аос Е1»% 1см ос авос А -^вос Е1»% ^\см вос Кпер Метрологические характеристики

0,0932 0,4535 486,59 0,1447 0,5735 39,63 0,0815 К =0,0813

0,1025 0,4921 480,10 0,1447 0,5638 38,96 0,0812 82=0,0000001

0,0992 0,4763 480,14 0,1403 0,5452 38,86 0,0809 8=0,0003

0,1021 0,5017 491,38 0,1381 0,5528 40,03 0,0815 8 х =0,0001

0,1019 0,4935 484,30 0,1340 0,5302 39,57 0,0817 ДХ =0,0002

0,1011 0,4881 482,79 0,1395 0,5452 39,08 0,0810 Е%=0,24

0,1003 0,4841 482,65 0,1365 0,5361 39,27 0,0814 8Г=0,003

0,1020 0,4962 486,47 0,1451 0,5751 39,63 0,0815

0,0981 0,4711 480,22 0,1407 0,5467 38,86 0,0809

0,0926 0,4559 492,33 0,1385 0,5544 40,03 0,0813

Разработанные условия спектрофотометрического определения ацикловира позволили предложить методику количественного определения ацикловира в субстации.

Методика количественного определения ацикловира в субстанции по феррицианиду калия либо по рабочему стандартному образцу (РСО) ацикловира: точную массу препарата (0,1000 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 20 мл воды, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки 0,1М раствором гидроксида натрия и перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 261 нм в кювете с длиной рабочего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения применяют 0,1М раствор гидроксида

натрия. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора внешнего образца сравнения ферри-цианида калия либо РСО ацикловира.

Методика приготовления раствора внешнего образца сравнения феррицианида калия: точную массу феррицианида калия (0,1400 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 20 мл 0,1М раствора гидроксида натрия, доводят объем раствора этим же растворителем до метки и перемешивают. 5 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 0,1М раствором гидроксида натрия до метки и перемешивают.

Методика приготовления РСО ацикловира аналогична методике приготовления анализируемого образца ацикловира. Результаты количественного определения ацикловира в субстанции представлены в таблице 2.

Таблица 2

Результаты спектрофотометрического определения ацикловира по внешнему образцу сравнения феррицианиду калия и по РСО ацикловира

№ серии Образцы сравнения Метрологические характеристики

X S2 S S х ДХ Е% Sr

031002 феррицианид калия 99,81 0,2525 0,5025 0,1899 0,47 0,47 0,005

ацикловир 99,73 0,2486 0,4986 0,1884 0,46 0,46 0,005

051202 феррицианид калия 99,76 0,1697 0,4120 0,1557 0,38 0,38 0,004

ацикловир 99,83 0,2678 0,5175 0,1956 0,48 0,48 0,005

010103 феррицианид калия 99,87 0,2714 0,5210 0,1969 0,48 0,48 0,005

ацикловир 99,89 0,2174 0,4662 0,1762 0,43 0,43 0,005

Анализ приведенных результатов показывает, что при спектрофотометрическом определении ацикловира по внешнему образцу сравнения феррицианиду калия и по РСО ацикловира получены сопоставимые результаты. Относительная погрешность определения не превышает 0,48%. Методика спектрофотометрического определения с использованием внешнего образца сравнения характеризуется хорошей воспроизводимостью (Sr не превышает 0,005) [5]. Проведена сравнительная оценка разработанной методики с методикой нормативного документа, которая показала преимущества методики спектрофотометрического определения по внешнему образцу сравнения: доступность, экс-прессность, высокая воспроизводимость, отсутствие высокотоксичных реактивов.

Литература

1. Ацикловир. НД 42-5172-01. 2001. 15 с.

2. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Плетенева Т.В. Модифицированный метод сравнения в спектрофотометрическом анализе лекарственных средств // Вестник РУДН. Сер. Медицина. 2003. № 5 (24). С. 66-70.

3. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Артасюк Е.М. Оптические характеристики внешних образцов сравнения для спектрофотометрии // Люминесценция и лазерная физика: труды VII между-нар. школы-семинара. Иркутск, 2003. С. 87-93.

4. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Иноземцев П.О. Спектрофотометрическое определение бендазола // Сибирский медицинский журнал. Иркутск, 2009. №8. С. 42-44.

5. Энциклопедия лекарств / под ред. Г.Л. Вышковского. Изд. 16. М.: РЛС-2008, 2007. С. 146.

Илларионова Елена Анатольевна, доктор химических наук, профессор, заведующая кафедрой фармацевтической и токсикологической химии Иркутского государственного медицинского университета, 664003, Иркутск, ул. Красного восстания, 1, тел. (3952) 24-34-47, e-mail: ips1961@rambler.ru, illelena@rambler.ru

Иноземцев Павел Олегович, аспирант кафедры фармацевтической и токсикологической химии Иркутского государственного медицинского университета

Сыроватский Игорь Петрович, кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармацевтической и токсикологической химии Иркутского государственного медицинского университета.

Illarionova Elena Anatolevna, doctor of chemical sciences, professor, head of the department of pharmaceutical and toxicological chemistry, Irkutsk State Medical University. 664003, Irkutsk, Krasnogo Vosstaniya str.,1, ph.: (3952) 24 -34 -47, e-mail: ips1961@rambler.ru, illelena@rambler.ru

Inozemtsev Pavel Olegovich, postgraduate student, department of pharmaceutical and toxicological chemistry, Irkutsk State Medical University.

Syrovatsky Igor Petrovich, candidate of pharmaceutical sciences, associate professor, department of pharmaceutical and toxicological chemistry, Irkutsk State Medical University.

УДК 615.40:54 © Т.В. Корнопольцева, А.Г. Мондодоев, Т.А. Асеева, В.К. Кашин

СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВОГО СРЕДСТВА РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ И ЕГО АНТИКОАГУЛЯНТНАЯ АКТИВНОСТЬ

Разработана методика стандартизации нового средства растительного происхождения, состоящего из надземной части панцерины (Pаnzerina lanata (L). Sojak, семейства Lamiaceae), побегов курильского чая кустарникового (Pentaphylloides fruticosa (L.) O. Schwarz семейства Rosaceae) и корней сабельника болотного (Comarum palustre L., сем. Rosaceae). Установлено, что полиэкстракт сухой в экспериментально-терапевтической дозе 75 мг/кг массы животного повышает коагуляционный потенциал крови, сохраняя сопряженность реакции между различными системами коагуляционного звена и фибринолизом.

Ключевые слова. Полиэкстракт, флавоноиды, коагуляционное звено, фибринолиз, тромбопластин.

T.V. Kornopoltseva, A.G. Mondodoev, T.A. Aseeva, V.K. Kashin

STANDARTIZATION OF A NEW REMEDY OF PLANT ORIGIN AND ITS ANTICOAGULANT ACTIVITY

The new methodology of standartization of a new remedy of plant origin has been developed. It consists of overground part of (Pаnzerina lanata (L). Sojak, family Lamiaceae), sprouts of Pentaphylloides fruticosa (L.) O.Schwarz family Rosaceae and roots of (Comarum palustre L., sem. Rosaceae). It is determined that dry polyextract in experimental-therapeutic dose 75 mg/kgs of animal’s mass raises the coagulant blood potential, saving the reaction’s conjugation between different systems of coagulation link and fibrinolysis.

Keywords: polyextract, flavonoids, coagulant link, fibrinolysis, thromboplastin.

Во всем мире уделяется большое внимание созданию, изучению и внедрению в клиническую практику препаратов для лечения воспалительных заболеваний женской половой сферы. Несмотря на то, что имеется широкий арсенал противовоспалительных препаратов, проблема изыскания новых высокоэффективных средств, обладающих данным видом действия, остается весьма актуальной.

Применение лекарственных растений и препаратов из них для лечения и профилактики различных заболеваний с каждым годом занимает все большее место в клинической медицине. Сведения об использовании растений в народной и традиционной медицине являются ориентиром для выбора направления поиска новых видов лекарственного сырья. В качестве объекта исследования выбрана композиция из 3 лекарственных растений: надземной части панцерины шерстистой (Panzerina lanata (L). Sojak, семейства Lamiaceae), побегов курильского чая кустарникового (Pentaphylloides fruticosa (L.) O.Schwarz семейства Rosaceae) и корней сабельника болотного (Comarum palustre L., семейства. Rosaceae) под условным названием «Профем». Препараты из этих растений, по данным научной и народной медицины обладают выраженным противовоспалительным и кровоостанавливающим действием [5, 6, 7, 8, 9], что указывает на целесообразность применения данной композиции в качестве средства для фитотерапии гинекологических заболеваний.

Цель работы - стандартизация полиэкстракта «Профем» по действующим веществам, а также оценка его влияния на коагуляционное звено гемостаза.

Материалы и методы

Растительный материал собран в Баргузинском районе Республики Бурятия в 2007 г. Методом мацерации с учетом оптимальных параметров экстракции получена субстанция экстракт сухой. Наличие основных биологически активных веществ определяли по общепринятым методикам [3, 4]. Определение потери в массе при высушивании проводили на дериватографе Netzsch STA 449 C (Германия). Спектры поглощения регистрировали на спектрофотометре Agilent-8453Е (США) в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм. Для исследования влияния «Профема» на коагуляционное звено гемостаза использовали аутокоагуляционный тест (АКТ), дающий представление о