Влияние экстракта аврана лекарственного (Gratiola officinalis L. ) на экспрессию маркера пролиферации ki67 и маркера апоптоза p53 в перевиваемом раке почки (pa) лабораторных крыс

XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС

ТЕЗИСЫ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

Раково-тестикулярные антигены (РТА) являются одной из групп опухоль-ассоциированных антигенов. В зрелых соматических клетках экспрессия РТА практически отсутствует, и ее появление может служить молекулярным маркером малигнизации ткани. Иммунный ответ на РТА может быть активизирован с помощью генно-клеточных противоопухолевых вакцин. Однако иммунотерапия наиболее часто применяется в качестве дополнения к основным методам лечения опухолей — хирургическому лечению, радио-и химиотерапии. Доксорубицин (DXR) в настоящее время продолжает использоваться в составе химиотерапии при раке шейки матки, при этом его эффекты на экспрессию генов РТА и результаты последующей иммунотерапии остаются не изученными. Поэтому целью нашего исследования стала оценка влияния разных концентраций доксорубицина и времени экспозиции (культивирования клеток) на транскрипционный профиль РТА клеток HeLa С^-2.

Материалы и методы. В работе использована культура клеток человека — рак шейки матки линии HeLa CCL-2. Культивирование клеток HeLa CCL-2 проводилось в 9 стерильных плоскодонных культуральных флаконах площадью 25 см2 с адгезионной поверхностью и вентилируемыми крышками (Sarstedt, Германия). Инкубирование шло в условиях контролируемого 5% CO2 и 95% влажности при 37 градусах по Цельсию в мультигазовом инкубаторе CB 150 (Binder, Германия). Культивирование клеток проводилось в среде RPMI-1640 (Биолот, Россия) c 10% фетальной телячьей сывороткой (Thermo Scientific hyclone, США) при концентрации гентамицина 50 мкг/мл и различными концентрациями доксорубицина: 0 мкг/мл (контроль), 2 мкг/мл и 4 мкг/мл (по 3 флакона). Через 1, 5 и 24 часа культивирования клеточные линии снимались с подложки флакона и анализировались: подсчет количества живых и мертвых клеток, определение относительной экспрессии генетических локусов. Суммарную РНК из образцов выделяли по методу P. Chomczynski и N. Sacchi (2006). Для синтеза библиотеки кДНК использовали набор реагентов «РЕВЕРТА-L» (Россия, «Интерлабсервис»). Праймеры разработали с использованием базы данных NCBI GenBank. Определение относительной экспрессии 17 генетических локусов (MAGE-A1, MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-B1, MAGE-B2, GAGE1, GAGE3, GAGE4, MAGE-C1, BAGE, CTAG-1B, XAGE3, NY-ESO1, SSX2, SYCP1, PRAME1) проводили методом Real-Time qPCR (референсный ген — GAPDH) на термоциклере Bio-Rad CFX96 (Bio-Rad, USA). Статистический анализ проводили с использованием двухфакторного дисперсионного анализа с повторениями (оценивалось влияние факторов А-время культивирования и Б — концентрация доксорубицина), а также Post Hoc теста (тест Newman-Keuls) в программе Statistica 8.0 (StatSoft Inc).

Результаты. В ходе исследования установлено, что факторы времени инкубации клеток и концентрации DXR вместе взятые статистически достоверно (p<0,005) влияют на экспрессию 13 из 17 (77%) исследованных генов: MAGEA1, MAGEA3, MAGEA4, MAGEB1, MAGEB2, GAGE1, GAGE3, BAGE, CTAG1B, XAGE3, NY-ESO1, PRAME1 и SYCP1. При этом факторы времени инкубации клеток и концентрация DXR статистически достоверно не влияли на экспрессию генов SSX2, MAGEA2, GAGE4 и MAGEC1, концентрация DXR отдельно взятая статистически достоверно не влияет на экспрессию генетических локусов MAGEB1 и MAGEB2 (влияет фактор времени инкубации, p<0,05), а фактор времени инкубации не влияет на экспрессию гена PRAME1 (влияет фактор концентрации DXR, p<0,05).

Выполненное с использованием теста Newman-Keuls попарное сравнение 9 групп по 2 факторам для каждого гена РТА, выявило следующие статистически значимые отличия для p<0,002: 1. Относительно контроля (среда без доксорубицина) через 1 час культивирования обнаружено повышенние экспрессии MAGEA1, MAGEA4, MAGEA3 и SYCP1 (2 мкг/мл), NY-ESO1 (2 и 4 мкг/мл доксорубицина), а также подавление экспрессии генов GAGE1 и BAGE (2 мкг/мл доксорубицина). 2. Относительно контроля через 5 часов культивирования обнаружена пониженная экспрессия BAGE (2 и 4 мкг/мл доксорубицина), относительно контроля через 24 часа культивирования обнаружена сниженная экспрессия GAGE1 (2 и 4 мкг/мл), BAGE (2 мкг/мл) и повышенная экспрессия гена XAGE3 (2 и 4 мкг/мл). 3. Относительно точки 1 час культивирования с доксорубицином разной концентрации обнаружено снижение экспрессии MAGEA1, MAGEA4, MAGEA3, MAGEB1 (2 мкг/мл), MAGEB2 (4 мкг/мл), BAGE и SYCP1 (2 мкг/мл) через 5 часов культивирования, MAGEA1, MAGEA4, MAGEA3, MAGEB1 (2 мкг/мл), MAGEB2 (4 мкг/мл), BAGE и SYCP1 (2 мкг/мл) через 24 часа культивирования. 4. Относительно точки 1 час культивирования с доксорубицином разной концентрации обнаружено повышение экспрессии GAGE1 (2 мкг/мл) через 24 часа, GAGE3 (2 мкг/мл) через 5 и 24 часа, XAGE3 (2 и 4 мкг/мл) через 24 часа культивирования. Заключение. Существенное влияние на экспрессию генов клеточной линии HeLa Са-2 MAGEA1, MAGEA3, MAGEA4, MAGEB1, MAGEB2, GAGE1, GAGE3, BAGE, CTAG1B, XAGE3, NY-ESO1, PRAME1 и SYCP1 оказывает время культивирования и концентрация доксорубицина. На экспрессию РТА генов SSX2, MAGEA2, GAGE4 и MAGEC1 клеточной линии HeLa С^-2 эти факторы существенного влияния не оказывали, что может позволить рекомендовать данные РТА в качестве мишени для иммунотерапии. Полученные данные также позволили сформировать следующие группы РТА:

1) повышающие экспрессию под воздействием доксоруби-цина (MAGEA1, MAGEA4, NY-ESO1, MAGEA3, SYCP1, XAGE3);

2) снижающие экспрессию под воздействием доксорубицина (GAGE1 и BAGE). Эти результаты имеют важное значение для проведения иммунотерапии, в частности, для создания и применения дендритно-клеточных вакцин.

Влияние экстракта аврана лекарственного (Gratiola officinalis L.) на экспрессию маркера пролиферации ki67 и маркера апоптоза p53 в перевиваемом раке почки (PA) лабораторных крыс

Н. А. Наволокин', Д. А. Мудрак', Н. В. Полуконова', А. Б. Бучар-ская', Г. Н. Маслякова'

Место работы: 'ФГБОУ ВО Саратовский ГМУ им. В. И. Разумовского Минздрава России e-mail: nik-navolokin@yandex.ru

Введение. На сегодняшний день не создано ни одного противоопухолевого препарата, который был бы безопасен в рекомендуемых дозах и не имел бы ограничений для использования. Особое внимание уделяется созданию лекарственных средств растительного происхождения с минимальными побочными эффектами [Е. Д. Гольдберг, 2008]. Цель. В экспериментах in vivo исследовать на примере перевитого рак почки влияние флавоноидсодержащего экстракта аврана на маркер пролиферации ki67 и маркер апоптоза p53. Материалы и методы. Использованы водные раствор экстракта аврана лекарственного, полученного нами авторским способом [Патент РФ 2482863].

Злокачественные опухоли

www.malignanttumours.org

Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017

Malignant Tumours

www.malignanttumours.org

XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС

ТЕЗИСЫ

ОПУХОЛИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА

В эксперименте было использовано 30 самцов белых крыс линии Вистар, массой 150±50 г, которым перевели подкожно в области лопатки по 0,5 мл 25% опухолевой взвеси рака почки РА. Первая и вторая группы — опытные, крысы получали экстракт аврана либо перорально, либо внутримышечно в дозе 110 мг/кг. Третью группу — сравнения, составили животные с перевиваемым раком, но без воздействия. В опытных группах через 72 ч после перевивки вводили ежедневно экстракт в течение двух недель, после чего всех животных выводили из эксперимента и производили забор образцов ткани опухоли. Применяли стандартные морфологические методы, окраску по Браше, иммуногистохимические маркеры Ю67 и р53. Использован статистический критерий Крамера-Уэлча (Т). Результаты. В конце эксперимента объем опухоли в группе с внутримышечным введением аврана на 40% меньше (Т>1,96), чем в группе сравнения. При пероральном ведении экстракта аврана объем опухоли был на 23% меньше (Т>1,96), чем в группе сравнения. Индекс торможения по массе опухоли составил 71% для перорального введения и 73% для внутримышечного пути введения.

При гистологическом исследовании в ткани опухоли под действием аврана наблюдали обширные зоны некроза и апоп-тозные тельца. При окраске по Браше отмечали уменьшение экспрессии ядерной РНК в ткани опухоли при обоих путях введения.

В группе без воздействия положительную экспрессию дал маркер пролиферации Ю67 и при обоих путях введении экстракта аврана экспрессия отсутствовала. Маркер р53 показал высокую экспрессию при обоих путях введения экстракта и отсутствие ее в группе сравнения, что говорит о запуске апоптоза в клетках рака почки.

Заключение. Таким образом, отмечается выраженный пато-морфоз рака почки под влиянием экстракта аврана и наиболее эффективен при внутримышечном введении, за счет снижение пролиферативной активности и активации апоптоза.

Еюногастропластика при раке желудка: функциональная оценка

И.Б. Уваров', И.А. Вербицкий', С.Н. Дербенев' Место работы: 'ГБУЗ «Клинический онкологический диспансер №'», г. Краснодар, Россия e-mail: uvarovivan@yandex.ru

Цель. Сравнительная оценка функциональных результатов гастрэктомии (ГЭ) в зависимости от варианта эзофаго-энте-роанастомоза (ЭЭА) и схемы восстановления непрерывности пищеварительного тракта.

Материалы и методы. В исследование включили 133 пациента, в перенесших ГЭ, в сроки более 12 мес. после операции. Пациентов разделили на группы в зависимости от варианта ЭЭА и схемы восстановления непрерывности ЖКТ. I группа — (n=83) с арефлюксным концево-петлевым ЭЭА (КПЭЭА); группа разделена на 3 подгруппы: Ia — без включения ДПК (n=27), Ib — еюногастропластика (ЕГП) с включением ДПК и частичным шунтированием дуоденального пассажа (n=41), Ic — ЕГП с полным включением ДПК (n=15). II группа — (n=32) — с ЭЭА конец в бок. III группа — (n=18) — с ЭЭА по Ру. Оценивали наличие и степень тяжести демпинг-сидрома (ДС), рефлюкс-эзофагита (РЭ).

Результаты. ДС зарегистрирован у 16 пациентов I группы (19,2%), 17 — II группы (53,1%) и 7 — III группы (38,9%) (PI-II <0,001; PI-III <0,05). В подгруппе Ia ДС отмечен у 11 (40,7%), в подгруппе Ib и !с — у 4 (9,7%) и 1 (6,7%) (P Ib — II;

Ib — III; Ic — II; Ic — III <0,001). ДС тяжелой степени у больных с включением в пассаж ДПК не отмечался, средней степени тяжести — у 4 (14,8%) в Ia, у 1 (2,4%) в Ib подгруппе (P Ia — Ib <0,05) и ни в одном случае — в подгруппе Ic (P Ia — Ic <0,05). В целом в I группе ДС тяжелой степени отмечен у 2 (2,4%), во II группе у 5 (15,6%), в III — у 3 (16,7%) (PI-II; I-III <0,05).

Изжога, как симптом РЭ, выявлена у 4 (4,8%) в I группе, при этом у 3 симптом имел слабую выраженность, а у 1 — умеренную, различий по подгр. не отмечено. В группе II частота выявления изжоги составила 62,0% (PI-II <0,001). В III группе изжога слабой и умеренной ст. наблюдалась у 3 (16,7%) (PII-III<0,001). При эндоскопической оценке слизистой оболочки пищевода в I группе явления РЭ выявлены у 7 (8,4%), у 5 из них (6,0%) носили характер катарального. В группе II эрозивный РЭ имел место в 37,5% случаев, катаральный — в 18,8%, язвенный — в 6,3%. В III группе катаральный РЭ зарегистрирован у 4 (22,2%), эрозивный — у 2 (11,1%). Заключение. Частота и тяжесть клинических и эндоскопических проявлений РЭ в отдаленные сроки после ГЭ зависят от конструкции ЭЭА. Включение в пассаж пищи ДПК при ЕГП способствует уменьшению частоты и тяжести ДС. Выполнение ЕГП с частичным (по типу double tract) или полным включением в пассаж ДПК показано у пациентов с потенциально благоприятным клиническим прогнозом заболевания.

Опыт применения системы «нанонож»

при нерезектабельном неметастатическом раке

поджелудочной железы

Ю.И. Патютко', А.Н. Поляков', Н.Е. Кудашкин', Д.В. Подлужный'

Место работы:' Отделение хирургическое № 7 Федерального Государственного Бюджетного учреждения «Российский онкологический Научный центр имени Н. Н. Блохина» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва e-mail: dr.alexp@gmail.com

Цель. Улучшить результаты лечения больных местнорас-пространенным нерезектабельным раком поджелудочной железы.

Материалы и методы. С февраля 2015 года по июнь 2017 выполнено 6 необратимых электропораций нере-зектабельных опухолей поджелудочной железы, одна из них — в сочетании с паллиативной гастропанкреатодуоде-нальной резекцией. Средний возраст — 58 лет (41—68 лет). Обязательное условие — морфологическое подтверждение диагноза. Всем больным проведена предоперационная химиотерапия. В одном случае в результате индукционной терапии достигнут частичный ответ, в пяти — стабилизация по данным лучевых методов диагностики, но в двух из них отмечено значимое снижение уровня опухолевых маркеров.

Средний размер опухоли, по данным лучевой диагностики, до индукционной терапии составил 48,5 мм, перед элек-тропорацией 41,7 мм. Количество обработанных полей — от 1 до 5 (в среднем 2,3). Подвергнуть электропорации весь опухолевый инфильтрат удалось 5 пациентам (83,3%). Послеоперационная химиотерапия с использованием гем-цитабина — 6 курсов — проведена 2 пациентам. Результаты осложнения отмечены у двух больных (33,3%). Одна пациентка (16,7%) умерла на 21 день от панкреонекроза. Результаты. Осложнения отмечены у двух больных (33,3%). Одна пациентка (16,7%) умерла на 21 день от панкреоне-

Злокачественные опухоли

www.malignanttumours.org

Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017

Malignant Tumours

www.malignanttumours.org