ВАРИАНТ AAV, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ, В КОТОРЫХ ОН ИСПОЛЬЗУЕТСЯ, А ТАКЖЕ СПОСОБЫ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ПЕРЕНОСА ГЕНОВ В КЛЕТКИ, ОРГАНЫ И ТКАНИ

1. Рекомбинантная частица AAV, содержащая последовательность капсида AAV, где частица AAV заключает в себе векторный геном, содержащий гетерологичную полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок фактор IX, и где последовательность капсида AAV, по меньшей мере, на 80% идентична последовательности капсида VP1, описанной в SEQ ID NO:1, и содержит, по меньшей мере, одну аминокислотную замену в аминокислотных положениях 195, 199, 201 или 202 указанной последовательности капсида VP1.
2. Рекомбинантная частица AAV по п. 1, где последовательность капсида AAV содержит аминокислоту A, V, P или N в любом из аминокислотных положений 195, 199, 201 или 202 последовательности капсида VP1, описанной в SEQ ID NO:1.
3. Рекомбинантная частица AAV по п. 1, где последовательность капсида AAV содержит остаток A в аминокислотном положении 195; остаток V в аминокислотном положении 199, остаток P в аминокислотном положении 201, или остаток N в аминокислотном положении 202 последовательности капсида VP1, описанной в SEQ ID NO:1.
4. Рекомбинантная частица AAV по п. 1, где последовательность капсида AAV содержит любые два из остатка A в аминокислотном положении 195; остатка V в аминокислотном положении 199, остатка P в аминокислотном положении 201, или остатка N в аминокислотном положении 202 последовательности капсида VP1, описанной в SEQ ID NO:1.
5. Рекомбинантная частица AAV по п. 1, где последовательность капсида AAV содержит любые три из остатка A в аминокислотном положении 195; остатка V в аминокислотном положении 199, остатка P в аминокислотном положении 201, или остатка N в аминокислотном положении 202 последовательности капсида VP1, описанной в SEQ ID NO:1.
6. Рекомбинантная частица AAV по п. 1, где последовательность капсида AAV содержит остаток A в аминокислотном положении 195; остаток V в аминокислотном положении 199, остаток P в аминокислотном положении 201, и остаток N в аминокислотном положении 202 последовательности капсида VP1, описанной в SEQ ID NO:1.
7. Рекомбинантная частица AAV по п. 1, где последовательность капсида AAV содержит последовательность капсида VP1, описанную в SEQ ID NO:5.
8. Рекомбинантная частица AAV по любому из пп. 1-7, где векторный геном дополнительно содержит элемент, контролирующий экспрессию, который обеспечивает транскрипцию указанной гетерологичной полинуклеотидной последовательности, кодирующей белок фактор IX.
9. Рекомбинантная частица AAV по п. 8, где элемент, контролирующий экспрессию, включает в себя конститутивный или регулируемый контролирующий элемент.
10. Рекомбинантная частица AAV по п. 9, где элемент, контролирующий экспрессию, включает в себя тканеспецифичный элемент, контролирующий экспрессию, или промотор.
11. Рекомбинантная частица AAV по любому из пп. 1-7, где одна или несколько последовательностей инвертированных концевых повторов (ITR) фланкируют 5'- или 3'-конец гетерологичной полинуклеотидной последовательности, кодирующей белок фактор IX.
12. Рекомбинантная частица AAV по любому из пп. 1-7, где векторный геном дополнительно содержит полинуклеотидную последовательность-наполнитель или спейсерную полинуклеотидную последовательность.
13. Рекомбинантная частица AAV по любому из пп. 1-7, где последовательность капсида AAV, описанная в SEQ ID NO:1, содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, добавлений или вставок.
14. Рекомбинантная частица AAV по любому из пп. 1-7, где последовательность капсида AAV, описанная в SEQ ID NO:1, содержит 10-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30-40 или 40-50 аминокислотных замен.
15. Рекомбинантная частица AAV, содержащая капсид AAV, который заключает в себе векторный геном, содержащий гетерологичную полинуклеотидную последовательность, где капсид AAV содержит белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:5, где гетерологичная полинуклеотидная последовательность кодирует человеческий белок фактор IX, и где векторный геном дополнительно содержит печень-специфичный промотор или энхансер, и инвертированные концевые повторы AAV, фланкирующие 5’- и 3’-концы гетерологичной полинуклеотидной последовательности.
16. Рекомбинантная частица AAV по любому из пп. 1-7 или 15, где гетерологичная полинуклеотидная последовательность дополнительно содержит, по меньшей мере, часть интрона I человеческого фактора IX.
17. Рекомбинантная частица AAV по п. 16, где векторный геном дополнительно содержит спейсерную полинуклеотидную последовательность или последовательность-наполнитель.
18. Фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантную частицу AAV по любому из пп. 1-17.
19. Способ доставки или переноса гетерологичной полинуклеотидной последовательности, кодирующей белок фактор IX, в организм или клетку млекопитающего, включающий в себя введение рекомбинантной частицы AAV по любому из пп. 1-18 указанному млекопитающему, или в клетку указанного млекопитающего, обеспечивающее доставку или перенос гетерологичной полинуклеотидной последовательности, кодирующей белок фактор IX, в организм или клетку млекопитающего.
20. Способ лечения млекопитающего с дефицитом экспрессии или функции белка фактора IX, включающий в себя: введение млекопитающему количества рекомбинантной частицы AAV по любому из пп. 1-18, обеспечивающего экспрессию указанного белка фактора IX в организме млекопитающего.
21. Способ по п. 20, где вводимое количество рекомбинантной частицы AAV является достаточным для обеспечения терапевтического эффекта у указанного млекопитающего.
22. Способ по п. 20, где млекопитающее представляет собой человека, а терапевтический эффект связан с лечением гемофилии B.
23.Способ по п. 22, где терапевтический эффект включает в себя изменение степени тяжести болезненного фенотипа гемофилии B на средний или легкий болезненный фенотип гемофилии B.
10
10
11
11
12
12
13
24.Способ по любому из пп. 20-23, где указанную рекомбинантную частицу AAV вводят в дозе, составляющей, по меньшей мере, 1×10 векторных геномов (вг) на килограмм (вг/кг) массы тела млекопитающего, или примерно от 1×10 до 1×10вг/кг массы тела млекопитающего, или примерно от 1×10до 1×10вг/кг массы тела млекопитающего, или примерно от 1×10до 1×10вг/кг массы тела млекопитающего.
25. Способ по любому из пп. 20-23, где указанный белок фактор IX экспрессируется в клетке, ткани или органе указанного млекопитающего.
26. Способ по п. 25, где клетка включает в себя гепатоцит, или тотипотентную, полипотентную или мультипотентную стволовую клетку.
27. Способ по любому из пп. 20-23, 26, где указанную рекомбинантную частицу AAV вводят парентерально, внутривенно, внутриартериально, внутримышечно, подкожно, путем интубации, через катетер или внутрь полости.
28. Способ по любому из пп. 20-23, 26, дополнительно включающий в себя введение пустого капсида AAV.
29. Способ по любому из пп. 20-23, 26, где млекопитающее представляет собой человека.
30. Способ по любому из пп. 20-23, 26, где указанная рекомбинантная частица AAV входит в состав фармацевтической композиции.
31. Способ по п. 30, где фармацевтическая композиция содержит пустой капсид AAV.