СПОСОБЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АДЕНОАССОЦИИРОВАННЫХ ВИРУСНЫХ ПРЕПАРАТОВ

1. Способ количественного определения дозы препарата AAV, предусматривающий количественное определение общего количества капсидов AAV в препарате AAV посредством AAV-специфического анализа ELISA.
2. Способ количественного определения дозы препарата AAV, предусматривающий количественное определение общего количества капсидов AAV в препарате AAV с помощью AAV-специфического анализа ELISA и оценку процента или соотношения полных и пустых (полные:пустые) капсидов AAV в пробе AAV с помощью криогенной просвечивающей электронной микроскопии (CryoTEM).
3. Способ измерения концентрации полных капсидов AAV в препарате AAV, предусматривающий количественное определение общего количества капсидов AAV в препарате AAV с помощью AAV-специфического анализа ELISA и оценку процентного содержания полных и пустых капсидов AAV в препарате AAV с помощью криогенной просвечивающей электронной микроскопии (CryoTEM).
4. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором анализ ELISA представляет собой сэндвич-анализ ELISA, прямой ELISA, непрямой ELISA или конкурентный анализ ELISA, специфический для антигена AAV.
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором анализ ELISA представляет собой сэндвич-анализ ELISA, специфический для антигена AAV.
6. Способ по п. 1, дополнительно предусматривающий оценку процента или соотношения полных и пустых (полные:пустые) капсидов AAV в препарате AAV.
7. Способ по п. 1, при котором стадию оценки проводят до или после анализа ELISA.
8. Способ по п. 6 или 7, при котором стадия оценки предусматривает определение процентного содержания или соотношения полных:пустых капсидов AAV с помощью криогенной просвечивающей электронной микроскопии (CryoTEM), TEM с отрицательным окрашиванием, капиллярного электрофореза, аналитического ультрацентрифугирования, нативного агарозного геля, щелочного агарозного геля, саузерн-блота, дот-блот гибридизации, УФ-спектрофотометрии, слабой анионообменной хроматографии или масс-спектрометрии.
9. Способ по любому из пп. 6-8, при котором стадия оценки предусматривает использование CryoTEM.
10. Способ по п. 8 или 9, при котором стадия CryoTEM предусматривает:
(i) погружение препарата AAV в субстрат в инертную подложку;
(ii) мгновенную заморозку погруженного препарата AAV;
(iii) визуализацию погруженного препарата AAV с использованием криогенной просвечивающей электронной микроскопии; а также
(iv) количественную оценку процентного содержания полных капсидов AAV по сравнению с пустыми капсидами AAV в препарате AAV.
11. Способ по п. 10, при котором субстрат представляет собой аморфный некристаллический лед.
12. Способ по п. 10, при котором препарат AAV не содержит клеточных остатков.
13. Способ по любому из предыдущих пунктов, причем способ не предусматривает количественную ПЦР.
14. Способ введения препарата AAV нуждающемуся в этом субъекту, предусматривающий:
(i) получение очищенного препарата AAV;
(ii) измерение концентрации капсидов AAV в очищенном препарате AAV с использованием AAV-специфического анализа ELISA; а также
(iii) введение субъекту терапевтически эффективного количества очищенного препарата AAV.
15. Способ по п. 14, при котором анализ ELISA представляет собой сэндвич-анализ ELISA, прямой ELISA, непрямой ELISA или конкурентный анализ ELISA, специфические для антигена AAV.
16. Способ по п. 14 или 15, при котором анализ ELISA представляет собой сэндвич-анализ ELISA, специфический для антигена AAV.
17. Способ по любому из пп. 14-16, дополнительно предусматривающий оценку процента или отношения полных и пустых (полные:пустые) капсидов AAV в препарате AAV.
18. Способ по п. 17, при котором стадию оценки проводят до или после анализа ELISA.
19. Способ по п. 17 или 18, при котором стадия оценки предусматривает определение процентного содержания или соотношения полных:пустых капсидов AAV с помощью CryoTEM, аналитического ультрацентрифугирования, нативного агарозного геля, щелочного агарозного геля, саузерн-блота, дот-блот гибридизации, УФ спектрофотометрии, слабой анионообменной хроматографии или масс-спектрометрии.
20. Способ по любому из пп. 17-19, при котором стадия оценки предусматривает использование CryoTEM.
10
20
21. Способ по любому из пп. 14-20, при котором концентрация очищенного препарата AAV составляет от приблизительно 1×10 к.п./мл до приблизительно 1×10 к.п./мл.
10
16
22. Способ по любому из пп. 14-21, при котором терапевтически эффективное количество препарата AAV представляет собой дозу от приблизительно 1×10 к.ч./кг до приблизительно 1×10 к.ч./кг.
23. Способ по любому из пп. 14-22, при котором способ не предусматривает количественную ПЦР.
24. Способ по любому из пп. 14-23, при котором субъект представляет собой человека.
25. Способ введения препарата AAV в определенной дозе нуждающемуся в этом субъекту, предусматривающий
(i) получение очищенного препарата AAV;
(ii) измерение концентрации капсидов AAV в очищенном препарате AAV с использованием AAV-специфического анализа ELISA; а также
(iii) введение определенной дозы очищенного препарата AAV субъекту.
26. Способ по п. 25, при котором анализ ELISA представляет собой сэндвич-анализ ELISA, прямой ELISA, непрямой ELISA или конкурентный анализ ELISA, специфический для антигена AAV.
27. Способ по п. 25 или 26, при котором анализ ELISA представляет собой сэндвич-анализ ELISA, специфический для антигена AAV.
28. Способ по п. 25 или 27, дополнительно предусматривающий оценку процента или соотношения полных и пустых (полные:пустые) капсидов AAV в препарате AAV.
29. Способ по п. 28, при котором стадию оценки проводят до или после анализа ELISA.
30. Способ по п. 28 или 29, при котором стадия оценки предусматривает определение процентного содержания или соотношения полных:пустых капсидов AAV с помощью CryoTEM, аналитического ультрацентрифугирования, нативного агарозного геля, щелочного агарозного геля, саузерн-блота, дот-блот гибридизации, УФ-спектрофотометрии, слабой анионообменной хроматографии или масс-спектрометрии.
31. Способ по любому из пп. 28-30, при котором стадия оценки предусматривает использование CryoTEM.
32. Способ по любому из пп. 25-31, при котором способ не предусматривает количественную ПЦР.
10
20
33. Способ по любому из пп. 25-32, при котором концентрация очищенного препарата AAV составляет от приблизительно 1×10 к.ч./мл до приблизительно 1×10 к.ч./мл.
10
16
34. Способ по любому из пп. 25-33, при котором терапевтически эффективное количество препарата AAV представляет собой дозу от приблизительно 1×10 к.ч./кг до приблизительно 1×10 к.ч./кг.
35. Способ по любому из пп. 25-34, при котором субъект представляет собой человека.
36. Способ получения препарата AAV, предусматривающий:
(i) трансфекцию клеток-хозяев по меньшей мере одной плазмидой, содержащей представляющий интерес ген;
(ii) сбор супернатанта или клеточной суспензии клеточной культуры, содержащей капсиды AAV, для создания фракции AAV;
(iii) количественное определение общего количества капсидов AAV во фракции AAV с использованием AAV-специфического анализа ELISA; а также
(iv) получение препарата AAV с желаемой концентрацией на основе общего количества капсидов AAV.
37. Способ по п. 36, дополнительно предусматривающий концентрирование фракции AAV.
38. Способ по п. 36 или 37, дополнительно предусматривающий удаление по меньшей мере части пустых капсидов из фракции AAV.
39. Способ по любому из пп. 36-38, при котором анализ ELISA представляет собой сэндвич-анализ ELISA, прямой ELISA, непрямой ELISA или конкурентный анализ ELISA, специфический для антигена AAV.
40. Способ по любому из пп. 36-39, при котором анализ ELISA представляет собой сэндвич-анализ ELISA, специфический для антигена AAV.
41. Способ по любому из пп. 36-40, дополнительно предусматривающий оценку процента или соотношения полных и пустых (полные:пустые) капсидов AAV в препарате AAV.
42. Способ по п. 41, при котором стадию оценки проводят до или после анализа ELISA.
43. Способ по п. 41 или 42, при котором стадия оценки предусматривает определение процентного содержания или соотношения полных:пустых капсидов AAV с помощью CryoTEM, аналитического ультрацентрифугирования, нативного агарозного геля, щелочного агарозного геля, саузерн-блота, дот-блот гибридизации, УФ спектрофотометрии, слабой анионообменной хроматографии или масс-спектрометрии.
44. Способ по любому из пп. 41-43, при котором стадия оценки предусматривает использование CryoTEM.
45. Способ по любому из пп. 36-44, причем способ не предусматривает количественную ПЦР.
46. Способ по любому из пп. 36-45, при котором процентное содержание полных капсидов AAV составляет от приблизительно 40% до приблизительно 100%.
47. Способ по любому из пп. 36-46, при котором по меньшей мере 60% капсидов AAV представляют собой полные капсиды AAV.
10
20
48. Способ по любому из пп. 36-47, при котором концентрация составляет от приблизительно 1×10к.ч./мл до приблизительно 1×10 к.ч./мл.
49. Способ по любому из пп. 36-48, причем способ дополнительно предусматривает лиофилизацию препарата AAV.
50. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором AAV представляет собой AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10 или химерный вектор AAV.
51. Способ по п. 50, при котором AAV представляет собой AAV8.
52. Способ по п. 50, при котором AAV представляет собой AAV9.
53. Способ по любому из предыдущих пунктов, при котором AAV представляет собой генетически сконструированный AAV, химически модифицированный AAV или и то и другое.
54. Способ по любому из пп. 4-13, 15-24, 26-35 и 39-53, при котором антиген AAV представляет собой AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, химерный AAV, генетически сконструированный AAV или химически модифицированный AAV.
55. Препарат AAV, полученный способом по любому из пп. 36-54.
in vitro
in vivo
56. Препарат AAV по п. 55, причем препарат AAV обладает специфической активностью и причем активность проверяют с использованием системы , системы  или их комбинации.