БИОАКТИВНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ЗАЩИТЫ, РОСТА И ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЯ
BIOACTIVE POLYPEPTIDES FOR IMPROVING PROTECTION, GROWTH AND PRODUCTIVITY OF PLANT

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке на патент США №62/534,710, поданной 20 июля 2017 г., содержание которой включено в настоящий документ полностью посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0002] Предложены биоактивные примирующие полипептиды, которые могут быть доставлены в сельскохозяйственных составах. Указанные полипептиды можно применять для достижения агрономически желательных результатов растительными культурами, таких как улучшенные фенотипы у растений (например, демонстрирующие защиту от вредителей, болезнетворных агентов и абиотического стресса), улучшенные рост, продуктивность и урожайность растений.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] В стандартных способах достижения требуемых агрономических фенотипов, таких как повышенная урожайность, предотвращение заболеваний, устойчивость к заболеваниям и улучшенная переносимость абиотического стресса, ранее были в основном задействованы селекционное разведение, прививание, трансгенные подходы и подходы с использованием агрохимикатов.
Биоактивные примирующие полипептиды, вовлеченные в защитные ответы у растений
[0004] Растения обладают иммунной системой, которая детектирует микробы, способные вызывать заболевание, и защищает от них. Противомикробные пептиды (ПМП) у растений обычно представляют собой первую линию обороны от внедрения патогенов и вовлечены в инициацию защитных ответов, которые могут обеспечивать врожденный иммунитет растения. Многие ПМП характеризуются общей активностью против различных типов инфекционных агентов. Обычно их классифицируют как антибактериальные, фунгицидные, противовирусные и/или противопаразитарные.
[0005] Устойчивость определенных видов растений к определенным патогенным организмам, которые могут контактировать с поверхностью растения и колонизировать его, основана на высокоспециализированных системах распознавания молекул, продуцируемых только определенными микробами (например, специфическими штаммами бактерий или грибов). Растения ощущают наличие потенциальных инвазивных микробов, используя рецепторы распознавания паттернов (РРП) для распознавания ассоциированных с ними патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (ПАМП).
Флагеллин/Флагеллин-ассоциированные полипептиды
[0006] Флагеллины и флагеллин-ассоциированные полипептиды, происходящие из указанных флагеллинов, как сообщалось, главным образом играют функциональные роли во врожденных иммунных ответах у растений. Указанные полипептиды происходят из высококонсервативных доменов флагеллина эубактерий. Флагеллин представляет собой основной строительный блок бактериального жгутика. Субъединица белка флагеллина, образующая филамент бактериального жгутика, может выступать в качестве мощного элиситора в клетках, вызывая защитные ответы у различных видов растений.
[0007] «Флагеллин» представляет собой глобулярный белок, самоорганизующийся в полый цилиндр с формированием филамента в бактериальном жгутике. Флагеллин представляет собой главный компонент бактериального жгутика, присутствующий у жгутиковых бактерий. Растения могут ощущать присутствие, бороться с инфекцией, а также обеспечивать защиту от бактериальных микробов путем распознавания консервативных эпитопов, таких как протяженный участок из 22 аминокислот (Flg22), расположенный на N-конце кодирующей полноразмерный флагеллин последовательности. Элиситорную активность полипептида Flg22 приписывают указанному консервативному домену в составе N-конца флагеллинового белка (Felix et al., 1999). Растения могут воспринимать бактериальный флагеллин через рецептор распознавания паттернов (РРП) на поверхности растительной клетки, известной как флагеллин-чувствительный рецептор, который представляет собой рецепторную киназу с богатыми лейцином повторами, локализованный в плазматической мембране и доступный на поверхности растительных клеток. У растений наиболее исследованный РРП представлен рецептором FLAGELLIN SENSING 2 (FLS2), высококонсервативным как у однодольных, так и у двудольных растений.
[0008] У Arabidopsis врожденный иммунный ответ на Flg22 включает белковый комплекс распознавания хозяина, который содержит рецепторную киназу FLS2 с богатыми лейцином повторами(LRR) рецепторную киназу (. and Boller T., "FLS2: An LRR receptor-like kinase involved in the perception of the bacterial elicitor flagellin in Arabidopsis," Molecular Cell 5: 1003-1011, 2000). У Arabidopsis thaliana FLS2 представляет собой РРП, определяющий восприятие флагеллина, и является специфическим для связывания флагеллин-ассоциированного полипептида или полипептидов. Например, связывание Flg22 с внешним мембраносвязанным рецептором FLS2 растения запускает сигнальный каскад, вовлеченный во врожденный иммунный ответ, который индуцирует развитие у растения высокоспецифического ассоциированного с сигнализацией каскада, вовлеченного в активацию запускаемого паттернами иммунитета (Chinchilla et al., “The Arabidopsis receptor kinase FLS2 binds Flg22 and determines the specificity of flagellin perception,” Plant Cell 18: 465-476, 2006). Соответственно, связывание Flg22 с мембраносвязанным рецептором FLS2 Arabidopsis способствует первому этапу активации, на котором связывание вызывает каскад активации защитных ответов у растения. Взаимодействие Flg22-FLS2 может также приводить к продуцированию активных форм кислорода (АФК), которые вносят вклад в индукцию окислительного взрыва, ощелачиванию клеточной среды, последующей индукции патоген-реактивных генов и связанных с защитой ответов, которые в дальнейшем могут обеспечивать устойчивость к заболеванию у растения (Felix G. et al., “Plants have a sensitive perception system for the most conserved domain of bacterial flagellin,” The Plant Journal 18: 265-276, 1999, . and Boller T., "FLS2: An LRR receptor-like kinase involved in the perception of the bacterial elicitor flagellin in Arabidopsis," Molecular Cell 5: 1003-1011, 2000, Meindi et al., “The bacterial elicitor flagellin activates its receptor in tomato cells according to the address-message concept,” The Plant Cell 12: 1783-1794, 2000). У томата высокоаффинное связывание Flg22 с FLS-рецептором наблюдали при использовании как интактных клеток, так и препаратов микросомальных мембран. В указанном исследовании связывание Flg22 с рецептором (рецепторами) FLS2 на поверхности плазматической мембраны было необратимым в физиологических условиях, что отражает процесс поглощения элиситора Flg22 с импортом в клетки томата (Meindi et al., “The bacterial elicitor flagellin activates its receptor in tomato cells according to the address-message concept,” The Plant Cell 12: 1783-1794, 2000). Распознавание Flg22 рецептором FLS2 запускает как местный, так и системный иммунные ответы у растений. Flg22-связанный, активированный комплекс рецептора FLS2 интернализуется в растительные клетки путем эндоцитоза и системно перемещается по растению (Jelenska et al., “Flagellin peptide flg22 gains access to long-distance trafficking in Arabidopsis via its receptor, FLS2,” Journal of Experimental Botany 68: 1769-1783, 2017), что может вносить вклад в системные иммунные ответы на Flg22.
[0009] Механизмы, опосредующие восприятие через флагеллиновые рецепторы, задействующие Flg22, высококонсервативны в разнообразных таксонах растений (Taki et al., “Analysis of flagellin perception mediated by flg22 receptor OsFLS2 in rice,” Molecular Plant Microbe Interactions 21: 1635-1642, 2008). Синтетические полипептиды, содержащие 15-22 или 28 аминокислот из консервативных доменов флагеллинового белка, в субмикромолярных концентрациях действуют как элиситоры, инициируя защитные ответы у растений различных видов.
[0010] Получение трансгенных растений использовали для подтверждения флагеллин-специфических ПАМП, которые связываются с флагеллин-специфическими РРП. Эктопическая экспрессия FLS2 в растениях Arabidopsis продемонстрировала прямую корреляцию между ответами на флагеллин и уровнями экспрессии FLS2, что показывает, что FLS2 вовлечен в распознавание флагеллина (сигнал присутствия бактерий) и обеспечивает активацию защитных ответов у растений (. and Boller T., "FLS2: An LRR receptor-like kinase involved in the perception of the bacterial elicitor flagellin in Arabidopsis," Molecular Cell 5: 1003-1011, 2000). Трансгенные растения, экспрессирующие флагеллин-связывающий рецептор, продемонстрировали эффективный ответ против определенных патогенов. Связывание флагеллина с FLS2 было вовлечено в инициацию экспрессии специфических MAP-киназных транскрипционных факторов, функционирующих на следующих после рецептора флагеллина FLS2 этапах. Мутантные растения (fls2), в которых отсутствует рецептор FLS2, нечувствительны к Flg22 (. and Boller T., "FLS2: An LRR receptor-like kinase involved in the perception of the bacterial elicitor flagellin in Arabidopsis," Molecular Cell 5: 1003-1011, 2000) и характеризуются нарушенным связыванием Flg22 с рецептором FLS2. Мутантные растения (fls2) также демонстрировали повышенную восприимчивость к инфекции и заболеванию при обработке патогенными бактериями (Zipfel et al., “Bacterial disease resistance in Arabidopsis through flagellin perception,” Nature 428: 764-767, 2004).
[0011] Традиционно способы повышения устойчивости к заболеваниям были основаны на этих и других подобных открытиях и задействовали трансгенный подход. Трансгенные растения и семена, трансформированные флагеллин-чувствительным (FLS) рецепторным белком (источник: WO2016007606A2, включенный в настоящий документ полностью посредством ссылки) или транскрипционными факторами, вовлеченными в следующие за FLS этапы сигналинга (источник: WO2002072782A2, включенный в настоящий документ полностью посредством ссылки), обеспечивали получение растений, приобретавших устойчивость к заболеванию, вызываемому определенными патогенными микроорганизмами. Согласно другому примеру трансгенные растения, экспрессирующие флагеллин-чувствительный (FLS3) рецептор, также демонстрировали повышенную устойчивость к заболеванию по сравнению с нетрансгенными растениями, не экспрессирующими рецептор FLS3 (источник: WO2016007606A2, включенный в настоящий документ полностью посредством ссылки).
Растительные дефензины/тионины
[0012] Растительные дефензины также были охарактеризованы как противомикробные пептиды (ПМП). Растительные дефензины содержат несколько консервативных остатков цистеинила, образующих дисульфидные мостики и способствуют их структурной стабильности. Дефензины являются одними из наиболее полно охарактеризованных богатых цистеином ПМП у растений. Представители семейства дефензинов содержат четыре дисульфидных мостика, укладывающихся в глобулярную структуру. Указанная высококонсервативная структура выполняет высокоспециализированные роли в защите растений от микробных патогенных организмов. (Nawrot et al., “Plant antimicrobial peptides,” Folia Microbiology 59: 181-196, 2014).
[0013] Тионины представляют собой богатые цистеином растительные ПМП, классифицируемые как принадлежащие к семейству дефензинов, и, как правило, содержат 45-48 остатков аминокислот, из которых 6-8 представлены цистеином, образующим 3-4 дисульфидные связи, у высших растений. Тионины, как было обнаружено, имеются как у однодольных, так и у двудольных растений, и их экспрессия может быть индуцирована инфекцией различными микробами (Tam et. al., “Antimicrobial peptides from plants,” Pharmaceuticals 8: 711-757, 2015). Было обнаружено, что определенные аминокислоты тионинов, такие как Lys1 и Tyr13, которые являются высоко консервативными, критически важны для функциональной токсичности указанных ПМП.
Гарпин и гарпиноподобные (HpaG-подобные) полипептиды
[0014] Аналогично флагеллинам или флагеллин-ассоциированным полипептидам, гарпины включают группу происходящих из бактерий элиситоров, которые происходят из белков-предшественников большего размера. Гарпины критически важны для стимуляции гиперчувствительного ответа (HR) при инфильтрации в межклеточное пространство или апопласт в растительных клетках (Kim et al., “Mutational analysis of Xanthomonas harpin HpaG identifies a key functional region that elicits the hypersensitive response in nonhost plants,” Journal of Bacteriology 186: 6239-6247, 2004). Применение отдаленного гарпиноподобного (HpaG-подобного) биоактивного примирующего полипептида или полипептидов у растения обеспечивает альтернативный способ защиты растения от воздействия заболеваний и насекомых. Гарпины используют систему секреции III типа, которая позволяет транспортировать белки через липидные бислои, составляющие плазматическую мембрану растительной клетки. Связывание гарпинов с поверхностью плазматической мембраны клетки может запускать врожденный иммунный ответ, напоминающий запускаемый патоген-ассоциированными молекулярными паттернами (ПАМП), и известно, что они активируют запускаемый ПАМП иммунитет (Engelhardt et al., “Separable roles of the Pseudomonas syringae pv. phaseolicola accessory protein HrpZ1 in ion-conducting pore formation and activation of plant immunity,” The Plant Journal 57: 706-717, 2009). Мутационный анализ гарпиноподобного происходящего из HpaG полипептида показал, что 12 остатков аминокислот между Leu-39 и Leu50 исходного белка-предшественника элиситора гарпина размером 133 аминокислоты критически важны для стимуляции гиперчувствительного ответа (HR) и последующих врожденных иммунных ответов у табака (Kim et al., “Mutational analysis of Xanthomonas harpin HpaG identifies a key functional region that elicits the hypersensitive response in nonhost plants,” Journal of Bacteriology 186: 6239-6247, 2004). Это показывает, что специфическая область последовательности аминокислот гарпинов (аналогично другим ПМП) отвечает за элиситорные ответы. Гарпины, такие как HpaG-подобные полипептиды, могут применяться для повышения устойчивости не только к патогенам растений, но и к насекомым (Choi et al., “Harpins, multifunctional proteins secreted by gram-negative plant pathogenic bacteria,” Molecular Plant Microbe Interactions 26: 1115-1122, 2013). Гарпин применяли для индукции устойчивости растений к заболеваниям и защиты от колонизации и поедания насекомыми, питающимися флоэмой, такими как тли (Zhang et al., “Harpin-induced expression and transgenic overexpression of phloem protein gene At.PP2A1 in Arabidopsis repress phloem feeding of the green peach aphid Myzus persicae,” BMC Plant Biology 11: 1-11, 2011).
Фактор элонгации Tu (EF-Tu)
[0015] Фактор элонгации Tu представляет собой белок, часто встречающийся у бактерий, который действует как патоген-ассоциированный молекулярный паттерн (ПАМП), и инициирет сигнальные каскады, вовлеченные в обеспечение устойчивости растений к заболеваниям и врожденный иммунитет к микробным патогенным организмам. Интересно, что некоторые полипептиды EF-Tu также обнаруживаются у растений. Известно, что первые 18 остатков аминокислот N-конца EF-Tu из Escherichia coli, называемые elf18, являются мощным индуктором запускаемых ПАМП иммунных ответов у растений (Zipfel et al., “Perception of the bacterial PAMP EF-Tu by the Receptor EFR restricts Agrobacterium-mediated transformation,” Cell 125: 749-760, 2006). Полипептиды, происходящие из EF-Tu E.coli, распознает локализованный на поверхности растительных клеток рецептор EF-Tu (EFR) (Zipfel et al., 2006). Механизм связывания EF-Tu и активации EFR сходен с таковым в случае комплекса пептида Flg с рецептором FLS2 (Mbengue et al., “Clathrin-dependent endocytosis is required for immunity mediated by pattern recognition receptor kinases,” Proc Natl Acad Sci U.S.A. 113: 11034-9, 2016).
Изменяющие рост биоактивные примирующие полипептиды
Фитосульфокины (ФСКα)
[0016] Фитосульфокины (ФСК) принадлежат к группе сульфатированных полипептидов растений, кодируемых предковыми генами, общераспространенными и высококонсервативными у высших растений (Sauter M., “Phytosulfokine peptide signaling,” Journal of Experimental Biology 66: 1-9, 2015). Гены ФСК кодируют небольшие семейства генов, присутствующие как у однодольных, так и у двудольных растений, и кодирующие полипептид или полипептиды ФСК, которые могут быть активны либо в виде пентапептида, либо в виде усеченного по C-концу тетрапептида (Lorbiecke R, Sauter M, “Comparative analysis of PSK peptide growth factor precursor homologs,” Plant Science 163: 348-357, 2002).
[0017] Белок фитосульфокин нацелен на секреторный путь у растений благодаря консервативному сигнальному полипептиду (Lorbiecke R, Sauter M, “Comparative analysis of PSK peptide growth factor precursor homologs,” Plant Science 163: 348-357, 2002). Процессинг белка-предшественника фитосульфокина включает сульфонилирование тирозилпротеинсульфотрансферазой в секреторном пути растения, в частности, в транс-Гольджи, с последующей секрецией и протеолитическим расщеплением в апопласте с продуцированием ФСК (Sauter M., “Phytosulfokine peptide signaling,” Journal of Experimental Biology 66: 1-9, 2015). После процессинга полипептида-предшественника большего размера с образованием ФСК указанный полипептид подвергается сульфатированию тирозина (Ryan et al., “Polypeptide hormones,” The Plant Cell Supplement, S251-S264, 2002). Затем мембраносвязанная рецепторная киназа из семейства киназ с богатыми лейцином повторами распознает секретированный полипептид на поверхности клетки (Sauter M., “Phytosulfokine peptide signaling,” Journal of Experimental Biology 66: 1-9, 2015, где ФСК может связываться со специализированным рецептором ФСК (например, PSK1 из Arabidopsis), который содержит область с богатыми лейцином повторами, расположенный на поверхности плазматической мембраны растения. Специфическое связывание ФСК было детектировано во фракциях плазматической мембраны из суспензионных культур клеток, происходящих из риса и кукурузы; было показано, что связывание с указанным рецептором инициирует и стимулирует пролиферацию клеток (Matsubayashi et al., “Phytosulfokine-α, a sulfated pentapeptide, stimulates the proliferation of rice cells by means of specific high- and low-affinity binding sites,” Proceedings National Academy of Science USA 94:13357-13362, 1997).
[0018] Фитосульфокины (ФСК) выступают в качестве сульфатированных факторов роста с биостимуляторной активностью, и они вовлечены в контроль развития апикальных меристем корней и побегов, регуляцию роста и репродуктивные процессы. Сообщалось также, что ФСК инициируют пролиферацию клеток, дифференцировку покоящихся тканей, и вовлечены в формирование, стимуляцию и дифференцировку трахеальных элементов (Matsubayashi et al., “The endogenous sulfated pentapeptide phytosulfokine-α stimulates tracheary element differentiation of isolated mesophyll cells of zinnia, Plant Physiology 120: 1043-1048, 1999). Сообщалось также, что ФСК-сигнализация вовлечена в регуляцию удлинения корня и гипокотиля во всходах Arabidopsis (Kutschmar et al., “PSK-α promotes root growth in Arabidopsis,” New Phytologist 181: 820-831, 2009).
Полипептид-стимулятор корневых колосков (RHPP)
12
[0019] Полипептид-стимулятор корневых колосков (RHPP) представляет собой фрагмент длиной 12 аминокислот, происходящий из белка-ингибитора трипсина Кунитца (KTI) сои, который был обнаружен в соевом шроте, подвергнутом разложению с применением щелочной протеазы Bacillus circulans HA (Matsumiya Y. and Kubo M. “Soybean and Nutrition, Chapter 11: Soybean Peptide: Novel plant growth promoting peptide from soybean,” Agricultural and Biological Sciences, Sheny H.E. (editor), pgs. 215-230, 2011). Было показано, что RHPP при применении на корнях сои накапливается в корнях и способствует росту корней за счет стимуляции клеточного деления и дифференцировки корневых волосков у Brassica.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0020] Предложен полипептид для биоактивного примирования растения или части растения для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растений. Указанный полипептид содержит что-либо из следующего:
(a) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 1-225, 227-375, 526, 528, 530, 532, 534, 536, 538, 540, 541, 751 и 752; или
(b) мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного мутантного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 571-579 и 753; или
(c) мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного мутантного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 580-586; или
(d) ретро-инверсный полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 376-450, 527, 531, 533, 535, 537 и 539; или
(e) ретро-инверсный полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 451-525; или
(f) ретро-инверсный полипептид Flg15, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg15 содержит SEQ ID NO: 529; или
(g) гарпин или гарпиноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 587, 589, 591, 593, 594 и 595; или
(h) ретро-инверсный гарпин или гарпиноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 588, 590, 592, 596 и 597; или
(i) полипептид-стимулятор корневых волосков (RHPP), при этом последовательность аминокислот указанного RHPP содержит любую из SEQ ID NO: 600, 603 и 604; или
(j) полипептид ингибитора трипсина Кунитца (KTI), при этом последовательность аминокислот указанного полипептида KTI содержит SEQ ID No: 602; или
(k) ретро-инверсный полипептид-стимулятор корневых волосков (RI RHPP), при этом последовательность аминокислот указанного RI RHPP содержит любую из SEQ ID NO: 601, 605 и 606; или
(l) полипептид фактора элонгации Tu (EF-Tu), при этом последовательность аминокислот указанного полипептида EF-Tu содержит любую из SEQ ID NO: 607-623; или
(m) ретро-инверсный полипептид фактора элонгации Tu (RI EF-Tu), при этом последовательность аминокислот указанного RI-полипептида EF-Tu содержит любую из SEQ ID NO: 624-640; или
(n) слитый полипептид, содержащий SEQ ID NO: 750; или
(o) полипептид фитосульфокин (ФСК), при этом последовательность аминокислот указанного полипептида ФСК содержит SEQ ID NO: 598; или
(p) ретро-инверсный полипептид фитосульфокин (RI ФСК), при этом последовательность аминокислот указанного RI-полипептида ФСК содержит SEQ ID NO: 599; или
(q) тионин или тиониноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного тионина или тиониноподобного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 650-749, и
при этом, необязательно, указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (a), мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (c), гарпин или гарпиноподобный полипептид по (g), полипептид ФСК по (o) и тионин или тиониноподобный полипептид по (q) либо содержит химическую модификацию; либо представляет собой вариант, характеризующийся вставкой, делецией, инверсией, повтором, дупликацией, добавлением или заменой аминокислоты в последовательности аминокислот; либо является частью слитого белка; либо содержит последовательность распознавания протеазы.
[0021] Предложена композиция для биоактивного примирования растения или части растения для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растений. Указанная композиция содержит или полипептид согласно описанию выше или любой комбинации указанных полипептидов, и агрохимикат или носитель; или любую комбинацию указанных полипептидов.
[0022] Также предложено семя, покрытое полипептидом или композицией согласно описанию в настоящем документе.
[0023] Также предложен рекомбинантный микроорганизм, который экспрессирует или сверхэкспрессирует полипептид. Указанный полипептид содержит полипептиды согласно описанию выше для композиции.
[0024] Предложены способы повышения роста, урожайности, улучшения состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растения. Указанный способ может включать применение указанного полипептида или указанной композиции согласно описанию в настоящем документе на растении, на части растения или в ростовой среде для растений, или в ризосфере в области, окружающей растение или часть растения, для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растения.
[0025] В качестве альтернативы, указанный способ может включать применение указанного полипептида или указанной композиции согласно описанию в настоящем документе в ростовой среде для растений для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений, и/или защиты растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений, от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа, и/или изменения архитектуры растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений.
[0026] Другой способ включает применение рекомбинантного микроорганизма согласно описанию в настоящем документе на растении, на части растения или в ростовой среде для растений, или в ризосфере в области, окружающей растение или часть растения, для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растения. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует указанный полипептид, и экспрессия указанного полипептида увеличивается по сравнению с уровнем экспрессии указанного полипептида в микроорганизме дикого типа того же вида в таких же условиях.
[0027] Способ получения полипептида, включающий получение слитого белка, содержащего любой полипептид согласно описанию в настоящем документе и сайт расщепления энтерокиназой (EK) путем ферментации, причем указанный сайт расщепления энтерокиназой усиливает активность и стабильность указанного полипептида.
[0028] Признаки настоящего изобретения дополнительно определены в прилагаемой формуле изобретения и перечне вариантов реализации, представленном ниже в разделе, названном «Варианты реализации». Другие объекты и признаки будут частично понятны и частично показаны здесь и далее в настоящем документе.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0029] На фиг. 1 показан биоактивный примирующий полипептид Bt.4Q7Flg22 в природной L-конфигурации (SEQ ID NO: 226) и соответствующая форма в ретро-инверсной или D-конфигурации (SEQ ID NO: 375).
[0030] Фиг. 2 иллюстрирует общую доступную урожайность кукурузы, обработанной путем внекорневого внесения биоактивных примирующих полипептидов Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO:226) в 12 местоположениях (панель A) и ретро-инверсного (RI) варианта Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 375) в 10 местоположениях (панель B), зарегистрированную в бушелях на акр, в сравнении с урожайностью в необработанном контроле.
[0031] Фиг. 3 иллюстрирует общую доступную урожайность кукурузы, обработанной путем внекорневого внесения биоактивного примирующего полипептида Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) в 6 местоположениях, зарегистрированную в бушелях на акр, в сравнении с урожайностью в необработанном контроле.
[0032] Фиг. 4 иллюстрирует общую доступную урожайность сои, обработанной путем внекорневого внесения биоактивных примирующих полипептидов Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (панель A) и ретро-инверсного (RI) Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 375) (панель B) в 11 местоположениях, зарегистрированную в бушелях на акр, в сравнении с урожайностью в необработанном контроле.
[0033] Фиг. 5 иллюстрирует общую доступную урожайность кукурузы, обработанной путем внекорневого внесения биоактивных примирующих полипептидов Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) (панель A) и ретро-инверсного Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 527) (панель B) в 12 местоположениях, зарегистрированную в бушелях на акр, в сравнении с урожайностью в необработанном контроле.
[0034] Фиг. 6 относится к анализу активности активных форм кислорода (АФК) при применении у кукурузы Bt.4Q7Flg22 в комбинации с целлобиозой в разных концентрациях в качестве добавки (панель A) или у сои (панель B).
[0035] Фиг. 7 относится к анализу активности активных форм кислорода (АФК) при применении Bt.4Q7Flg22 в разных концентрациях для идентификации пиковой активности и временного режима проведения анализа.
[0036] Фиг. 8 относится к доставке средства с применением тионинов для воздействия на рост (ослабления роста) штамма Agrobacterium GV3101 зависимым от расхода образом.
[0037] Фиг. 9 относится к доставке средства с полипептидами Bt4Q7 Flg22, мечеными или не мечеными тионинами, для ослабления роста Candidatus Liberibacter spp в инфицированных HLB цитрусовых деревьях. Данные представляют собой результаты количественной ПЦР (значения порогового цикла) для C. Liberibacter в образцах листьев, взятых с обработанных инфицированных деревьев.
[0038] Фиг. 10 относится к доставке средства у цитрусовых деревьев, которые обрабатывали путем впрыскивания 1X или 10X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) для ослабления роста Candidatus Liberibacter spp в инфицированных HLB цитрусовых деревьях. Данные представляют собой результаты количественной ПЦР (значения порогового цикла) для C. Liberibacter в образцах листьев, взятых с обработанных инфицированных деревьев.
[0039] Фиг. 11 относится к деревьям апельсина «Валенсия», обработанным путем впрыскивания 1X или 10X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) для увеличения совокупности плодов на ветви.
[0040] Фиг. 12 относится к деревьям апельсина «Валенсия», обработанным путем впрыскивания 1X или 10X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) для улучшения роста плодов, измеряемого в сантиметрах.
[0041] Фиг. 13 относится к деревьям апельсина «Валенсия», обработанным путем впрыскивания 1X или 10X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) для увеличения совокупности плодов, определяемого исходя из расчетного объема плодов на ветвь.
[0042] Фиг. 14 относится к деревьям грейпфрута «Руби Ред», обработанным путем впрыскивания 1X или 10X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) для увеличения совокупности плодов на ветви.
[0043] Фиг. 15 относится к деревьям грейпфрута «Руби Ред», обработанным путем впрыскивания 1X или 10X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) для улучшения роста плодов, измеряемого в сантиметрах.
[0044] Фиг. 16 относится к деревьям грейпфрута «Руби Ред», обработанным путем впрыскивания 1X или 10X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) для увеличения совокупности плодов, определяемого исходя из расчетного объема плодов на ветвь.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[0045] При использовании в настоящем документе терминов в единственном числе, в том числе предваряемых определением «указанный», они подразумевают «по меньшей мере один» или «один или более», если не указано иное.
[0046] Термины «содержащий» «включающий» и «имеющий» являются инклюзивными и подразумевают возможность присутствия дополнительных элементов помимо перечисленных.
[0047] «Абиотический стресс» в настоящем документе определен как условия окружающей среды, которые могут оказывать негативное воздействие на растение. Абиотический стресс может включать: температурный стресс (вызванный высокими или низкими температурами), вызванный излучением (видимым или УФ) стресс, вызванный засухой стресс, холодовой стресс, вызванный засолением стресс, осмотический стресс, вызванный недостаточностью питательных веществ или высоким содержанием металлов стресс, или водный стресс, который приводит к дефициту воды, затопление или аноксию. Другие факторы абиотического стресса включают обезвоживание, ранение, озон, а также высокую или низкую влажность.
[0048] «Биоактивное примирование» относится к эффекту полипептидов согласно описанию в настоящем документе, обеспечивающему усовершенствование растения или части растения. Биоактивное примирование может улучшать рост, урожайность, состояние здоровья, увеличивать продолжительность жизни, продуктивность и/или жизненную силу растения или части растения, и/или уменьшать абиотический стресс у растения или части растения; и/или защищать растение или часть растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или повышать врожденный иммунный ответ растения или части растения, и/или изменять архитектуру растения.
[0049] Термин «биоактивный примирующий полипептид» в настоящем документе может использоваться взаимозаменяемо с термином «примирующий агент (примирующие агенты)» и соответствовать описанию для классов полипептидов из: флагеллинов и флагеллин-ассоциированных полипептидов, гарпинов и гарпиноподобных полипептидов (HpaG-подобных), тионинов, фактора элонгации Tu (EF-Tu) и его полипептидов, фитосульфокина α (ФСК-α), ингибитора трипсина Кунитца (KTI) и полипептида-стимулятора корневых волосков (RHPP), а также любых соответствующих перечисленным ретро-инверсных полипептидов.
[0050] «Окрашивающее средство» в настоящем документе действует в качестве визуального идентификатора продукта для обозначения и применения продукта. Окрашивающие средства могут включать, не ограничиваясь перечисленными, красители и пигменты, неорганические пигменты, органические пигменты, полимерные окрашивающие средства, и пигментные дисперсные составы для нанесения покрытий, доступные в различных высококонцентрированных оттенках.
[0051] «Эндогенно» в настоящем документе относится к применению с внутренне стороны относительно поверхности растения. Биоактивные примирующие полипептиды небольшого размера подходят, в частности, для сигнализации и коммуникации внутри растения. «Под поверхностью растения» относится к поверхности с внутренней стороны любой растительной мембраны или растительной клетки. «Внутренний» может означать внеклеточный или внутриклеточный в отношении растительной клетки, и включает ксилему, флоэму, трахеиды и т.п. «Эндогенный» может относиться к системному движению или движению через растение, например, относиться к движению от клетки к клетке в растении. Эндогенное применение может включать доставку биоактивных примирующих полипептидов с использованием рекомбинантных эндофитных бактерий или грибов, при этом эндофитный микроорганизм доставляют к растению извне, и за счет естественных механизмов он перемещается внутрь растения.
[0052] «Экзогенно» в настоящем документе относится к применению с внешней стороны поверхности растения. Поверхность растения может представлять собой любую внешнюю поверхность растения, например, плазматическую мембрану, кутикулу, трихому, лист, корневой волосок, оболочку семени и т.п.
[0053] «Ассоциированные» или «подобные» полипептиды в настоящем документе относится к полипептидам, происходящим из указанного полипептида или структурно аналогичным указанному полипептиду, однако отличающиеся от указанного полипептида другой последовательностью аминокислот и/или другим источником. Например, тиониноподобный белок из Brassica rapa (SEQ ID NO: 694) имеет последовательность, отличающуюся от тионина Brassica napus (SEQ ID NO: 693), но структурно и функционально аналогичен ему.
[0054] «Средство для обработки листвы» в настоящем документе относится к композиции, которую применяют на надземных частях или листве растения или части растения, которая может включать листья, стебли, цветки, ветви или любую расположенную на воздухе часть растения, например, привой.
[0055] «Впрыскивание» в настоящем документе может использоваться взаимозаменяемо с вакцинацией или иммунизацией и обеспечивает процесс, в ходе которого биоактивные примирующие полипептиды доставляют эндогенно в растение или часть растения.
[0056] «Инокуляция» означает доставку бактерий или живых микроорганизмов, которые продуцируют примирующий полипептид, в растение или часть растения. Инокуляция может также относиться к доставке примирующего полипептида для пассивного входа через устьице или любое отверстие или на растении или части растения. «Растение» относится, не ограничиваясь перечисленным, к однодольное растение, двудольное растение или голосеменное растение. Термин «растение» в настоящем документе включает целые растения, органы растений, потомство целых растений или органов растений, зародыши, соматические зародыши, зародышевые структуры, протокормы, протокорм-подобные тела и суспензии растительных клеток. Органы растений включают вегетативные органы/структуры побега (например, листья, стебли и клубни), корни, цветки и цветковые органы/структуры (например, прицветники, чашелистики, лепестки, тычинки, плодолистики, пыльники и семяпочки), семена, в том числе зародыш, эндосперм и оболочку семени, и плод (зрелую завязь), ткань растения (например, ткань флоэмы, сосудистую ткань, покровную ткань и т.п.) и клетки (например, сторожевые клетки, яйцеклетки, трихомы и т.п.). Класс растений, которые могут применяться в способах, описанных в настоящем документе, в целом, включает весь класс высших растений, в частности, покрытосеменные односемядольные (однодольные) и двусемядольные (двудольные) растения и голосеменные растения. Он включает растения различных уровней плоидности, в том числе анеуплоидные, полиплоидные, диплоидные, гаплоидные, гомозиготные и гемизиготные. Растения, описанные в настоящем документе, быть представлены сельскохозяйственными однодольными растениями, такими как сорго, кукуруза, пшеница, рис, ячмень, овес, рожь, просо и тритикале. Растения, описанные в настоящем документе, могут также быть представлены сельскохозяйственными двудольными растениями, такими как яблоня, груша, персик, слива, апельсин, лимон, лайм, грейпфрут, киви, гранат, олива, арахис, табак, томат и т.п. Также указанные растения могут быть представлены садовыми и плодоовощными растениями, такими как роза, календула, примула, кизил, фиалка, герань и т.п.
[0057] Растительный «биостимулятор» представляет собой любое вещество или микроорганизм, применяемый для растения или части растения, который используют для повышения эффективности питания, переносимости абиотического стресса и/или любого другого признака или признаков качества растения.
[0058] «Растительная клетка» в настоящем документе относится к любой растительной клетке и может включать клетку на поверхности растения или с внутренней стороны плазматической мембраны растения, например, клетку эпидермиса, клетку трихомы, клетку ксилемы, клетку флоэмы, элемент ситовой трубки или клетку-компаньон.
[0059] «Часть растения» согласно описанию в настоящем документе относится к растительной клетке, листу, стеблю, цветку, цветковому органу, плоду, пыльце, овощу, клубню, клубнелуковице, луковице, ложнолуковице, стручку, корню, корневищу, корневому кому, подвою, привою или семени.
[0060] «Полипептид» согласно описанию в настоящем документе относится к любому белку, пептиду или полипептиду.
[0061] «Примирование» или «пептидное примирование» в настоящем документе относится к технике, используемой для усовершенствования производительности растений. В частности, примирование представляет собой процесс, в ходе которого биоактивные примирующие полипептиды применяют экзогенно или эндогенно для растения, части растения, растительной клетке или в межклеточном пространстве растения, что приводит к исходам, обеспечивающим преимущества для растения, такие как улучшенный рост, продуктивность, переносимость абиотического стресса, переносимость или предотвращение поражения вредителями и заболеваниями.
[0062] «Ретро-инверсный» («ретро-инвертированный») полипептид в настоящем документе относится к полипептидной цепи полипептида природного происхождения из нормальной полностью L-цепи, переконфигурированной и построенной с использованием не встречающихся в природе D-аминокислот, расположенных в обратном порядке относительно встречающихся в природе L-аминокислот.Полностью правовращающая D-аминокислотная форма и исходная цепь, содержащая полностью левовращающую L-форму, представляют собой топологически зеркально-симметричные структуры белка.
[0063] «Средство для обработки семян» в настоящем документе относится к веществу или композиции, которое применяют для обработки или нанесения покрытия на семя. Примеры средств для обработки семян включают применение биологических организмов, химических ингредиентов, инокулянтов, антидотов для гербицидов, питательных микроэлементов, регуляторов роста растений, покрытий для семян и т.п., применяемых на семенах для подавления, контроля или отпугивания патогенов растений, насекомых или других вредителей, которые атакуют семена, всходы или растения, или любого подходящего агента, способствующего росту и улучшению состояния здоровья растения.
[0064] «Синергический» эффект относится к эффекту, возникающему при взаимодействии или кооперации двух или более биоактивных примирующих полипептидов, веществ, соединений или других агентов с получением комбинированного эффекта, превышающего сумму их отдельных эффектов.
[0065] «Синергическая эффективная концентрация» относится к концентрации или концентрациям двух или более биоактивных примирующих полипептидов, веществ, соединений или других агентов, которая дает эффект, превышающий сумму индивидуальных эффектов.
ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ РЕАЛИЗАЦИИ
[0066] Имеется растущая потребность в биоактивных полипептидах, действующих как «примирующие агенты» для обеспечения преимуществ при сельскохозяйственном использовании. Применение биоактивных «примирующих» полипептидов в сельскохозяйственной практике представляет собой сдвиг парадигмы комплексных практик возделывания культур, например, менеджмента заболеваний, абиотического стресса и программ сбора урожая. Биоактивные (встречающиеся в природе, рекомбинантные или синтетические) примирующие полипептиды поставляются в сельскохозяйственных составах. Описаны композиции с биоактивными примирующими полипептидами и способы их применения для многоэтапного режима обработки растительных культур с достижением агрономически желательных исходов. Такие желательные исходы включают улучшенные фенотипы у растений, например, демонстрирующие защиту от вредителей, болезнетворных агентов и абиотического стресса, а также улучшение роста, увеличение продуктивности и урожайности растения. Более конкретно, биоактивные примирующие полипептиды или составы с биоактивными примирующими полипептидами могут применяться в различных режимах обработки, экзогенно и/или эндогенно, для растения или части растения, и, как было обнаружено, улучшают рост, урожайность, состояние здоровья, увеличивают продолжительность жизни, продуктивность и/или жизненную силу растения или части растения, и/или уменьшают абиотический стресс у растения или части растения, и/или защищают растение или часть растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или повышают врожденный иммунный ответ у растения или части растения, и/или изменяют архитектуру растений.
[0067] Специфические классы полученных синтетическим путем или встречающихся в природе биоактивных примирующих полипептидов, в том числе флагеллины и флагеллин-ассоциированные полипептиды (в том числе консервативные у родов Bacillus), тионины, гарпиноподобный (HpaG-подобный) полипептид, фактор элонгации Tu (EF-Tu), фитосульфокин (ФСК-α) и полипептид-стимулятор корневых волосков (RHPP), были выбраны ввиду различающихся механизмов их действия, и они могут применяться индивидуально или в комбинации с другими полипептидами для удовлетворения специфических потребностей сельского хозяйства, описанных выше. Они могут применяться в качестве замены или вместе с коммерчески доступными агрохимическими веществами, биостимуляторами, биоактивными добавками и/или пестицидными соединениями.
[0068] Также предложены комбинации биоактивных примирующих полипептидов, применяемые в синергистически эффективных количествах для обеспечения контроля вредителей, патогенов; и, кроме того, для получения преимуществ в виде улучшения роста и состояния здоровья растений.
I. Полипептиды
[0069] Предложены биоактивные примирующие полипептиды во встречающихся в природе, рекомбинантных или химически синтезированных формах, происходящие из бактерий или растений. Предложены биоактивные примирующие полипептиды как в обычной L-аминокислотной, так и в не встречающейся в природе ретро-инверсной D-аминокислотной формах. Кроме того, предложены биоактивные примирующие полипептиды, которые включают не встречающиеся в природе модификации, в том числе N-концевые и C-концевые модификации, циклизацию, β содержащие -аминокислоты и D-аминокислоты, и другие химические модификации, повышающие стабильность или эффективность указанных полипептидов. Например, флагеллины и Flg-ассоциированные полипептиды длиной 22 аминокислот, происходящие из полной кодирующей области флагеллина, были исходно выделены и идентифицированы из собранного собственного генома бактериального штамма Bacillus thuringiensis 4Q7. Указанные происходящие из Flg22 полипептиды были предложены в стандартной (L) и ретро-инверсной (D) формах. Они описаны как Bt.4Q7Flg22 и ретро-инверсный (RI) Bt.4Q7Flg22. Другие происходящие из бактерий биоактивные примирующие полипептиды представлены Ec.Flg22 (Escherichia coli), HpaG-подобный полипептид (Xanthomonas spp.), а происходящие из растений полипептиды включают тионины (Citrus spp.и другие виды растений), ФСК-α (Arabidopsis thaliana и другие растения), EF-Tu (происходящие как из бактерий, так и из растений) и RHPP (Glycine max).
[0070] Биоактивные примирующие полипептиды могут включать полноразмерные белки, представленные встречающимися в природе, синтетическими или рекомбинантными формами, происходящими из бактерий или растений. Например, и флагеллин, и EF-Tu, и KTI, и HpaG могут быть доставлены в растения.
[0071] Указанные биоактивные примирующие полипептиды могут также быть доставлены в виде партнеров для слияния, слитых с другими белковыми последовательностями, в том числе сайтами расщепления протеазами, связывающими белками и нацеливающими белками для специфической доставки в растения или части растений.
[0072] Также предложены сигнатурные последовательности, сигнальные якорные сортирующие последовательности и последовательности секреции, которые могут быть природными или химически синтезированными, и нацеливающие последовательности, такие как нацеливающие на флоэму последовательности, которые получают вместе с биоактивным примирующим полипептидом или полипептидами с использованием рекомбинантных микроорганизмов, и используют либо в виде слитых полипептидов, либо как вспомогательные полипептиды с биоактивными примирующими полипептидами согласно описанию в настоящем документе.
[0073] Не встречающиеся в природе полипептиды также описаны в настоящем документе. Более конкретно, предложен полипептид для биоактивного примирования растения или части растения для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растений. Указанный полипептид содержит что-либо из следующего:
(a) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 1-225, 227-375, 526, 528, 530, 532, 534, 536, 538, 540 и 541; или
(b) мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного мутантного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 571-579; или
(c) мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного мутантного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 580-586; или
(d) ретро-инверсный полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 376-450, 527, 531, 533, 535, 537 и 539; или
(e) ретро-инверсный полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 451-525; или
(f) ретро-инверсный полипептид Flg15, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg15 содержит SEQ ID NO: 529; или
(g) гарпин или гарпиноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 587, 589, 591, 593, 594 и 595; или
(h) ретро-инверсный гарпин или гарпиноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 588, 590, 592, 596 и 597; или
(i) полипептид-стимулятор корневых волосков (RHPP), при этом последовательность аминокислот указанного RHPP содержит любую из SEQ ID NO: 600, 603 и 604; или
(j) полипептид ингибитора трипсина Кунитца (KTI), при этом последовательность аминокислот указанного полипептида KTI содержит SEQ ID No: 602; или
(k) ретро-инверсный полипептид-стимулятор корневых волосков (RI RHPP), при этом последовательность аминокислот указанного RI RHPP содержит любую из SEQ ID NO: 601, 605 и 606; или
(l) полипептид фактора элонгации Tu (EF-Tu), при этом последовательность аминокислот указанного полипептида EF-Tu содержит любую из SEQ ID NO: 607-623; или
(m) ретро-инверсный полипептид фактора элонгации Tu (RI EF-Tu), при этом последовательность аминокислот указанного RI-полипептида EF-Tu содержит любую из SEQ ID NO: 624-640; или
(n) слитый полипептид, содержащий SEQ ID NO: 750; или
(o) полипептид фитосульфокин (ФСК), при этом последовательность аминокислот указанного полипептида ФСК содержит SEQ ID NO: 598; или
(p) ретро-инверсный полипептид фитосульфокин (RI ФСК), при этом последовательность аминокислот указанного RI-полипептида ФСК содержит SEQ ID NO: 599; или
(q) тионин или тиониноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного тионина или тиониноподобного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 650-749, и
при этом необязательно указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (a), мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (c), гарпин или гарпиноподобный полипептид по (g), полипептид ФСК по (o) и тионин или тиониноподобный полипептид по (q) либо содержит химическую модификацию; либо представляет собой вариант, характеризующийся вставкой, делецией, инверсией, повтором, дупликацией, добавлением или заменой аминокислоты в последовательности аминокислот; либо является частью слитого белка; либо содержит последовательность распознавания протеазы.
Флагеллины и флагеллин-ассоциированные полипептиды
[0074] Указанный полипептид может включать флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид.
[0075] Указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид может происходить из бактерии рода Bacillus, Lysinibacillus, Paenibacillus, Aneurinibacillus или любой их комбинации.
[0076] Один из основных классов биоактивных примирующих полипептидов согласно описанию в настоящем документе представлен флагеллином (флагеллинами) и флагеллин-ассоциированным примирующим полипептидом или полипептидами. Консервативные полные и частичные последовательности, кодирующие аминокислоты флагеллина, из различных видов бактерий, относящихся или не относящихся к Bacillus, идентифицировали с применением способов согласно описанию в настоящем документе.
[0077] Флагеллин представляет собой структурный белок, образующий основную часть филаментов жгутика жгутиковых бактериальных видов, который может демонстрировать консервативность в N-концевой и C-концевой областях белка, но при этом может быть вариабельным в центральной или средней части (Felix G. et al., “Plants have a sensitive perception system for the most conserved domain of bacterial flagellin,” The Plant Journal 18: 265-276, 1999). N- и C-концевые консервативные области флагеллинов, образующие внутренний кор флагеллинового белка, могут играть роли в полимеризации белка в филамент, в подвижности и транспорте указанного белка и в поверхностном прикреплении пептидного фрагмента к мембране растительных клеток /рецепторам клеточной поверхности растения.
[0078] Предложены полные или частичные флагеллины (таблица 1-2) и флагеллин-ассоциированные полипептиды, происходящие из флагеллинов Bacillus и флагеллинов не из Bacillus (таблицы 3 и 5).
[0079] Последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида может содержать любую из SEQ ID NO: 1-768, или любую их комбинацию.
[0080] Флагеллин-ассоциированные биоактивные примирующие полипептиды получают из кодирующих последовательностей флагеллиновых полипептидов (таких как белки-предшественники Flg22). Более конкретно, предложен полипептид или отщепленный фрагмент, происходящий из указанного полипептида, для получения биоактивного примирующего полипептида Flg, который может применяться для примирования или лечения (обработки) растения. Отщепление фрагмента Flg22 от предшественников большего размера может осуществляться путем введения сайтов протеолитического расщепления возле Flg22 для облегчения процессинга с получением активного биопептида из полипептида большего размера.
[0081] Флагеллин-ассоциированные биоактивные примирующие полипептиды могут происходить из полноразмерных флагеллиновых белков (или белков-предшественников из Flg-ассоциированных полипептидов Bacillus, Lysinibacillus, Paenibacillus или Aneurinibacillus, или других неродственных родов бактерий). Например, очищенную с помощью ПЦР ДНК из флагеллин-ассоциированных полипептидов, таких как Flg22 и FlgII-28 (род Bacillus), и Flg15 и Flg22 (E.coli) клонируют в рекомбинантный вектор, амплифицируют для получения адекватных количеств очищенной ДНК, которую затем секвенируют с применением стандартных способов, известных специалисту в данной области техники и используемых им. Те же способы могут применяться для кодирующих флагеллин последовательностей или частичных последовательностей флагеллина (таблица 1), N- или C-концевых полипептидов флагеллина (таблица 2) и любых Flg-ассоциированных полипептидов (таблицы 3-5).
[0082] Указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид может происходить из любого представителя эубактерий, который содержит консервативную область из 22 аминокислот, распознаваемую растениями. Предпочтительные флагеллиновые или флагеллин-ассоциированные полипептиды могут происходить из бактерии рода Bacillus, Lysinibacillus, Paenibacillus, Aneurinibacillus или любой их комбинации. Дополнительные предпочтительные последовательности флагеллина и Flg22 могут быть получены из гамма-протеобактерий, которые содержат консервативные последовательности из 22 аминокислот с>68% идентичностью.
Консервативные последовательности флагеллина из Bacillus
[0083] Флагеллин-ассоциированные биоактивные примирующие полипептиды соответствуют N-концевым консервативным доменам Bacillus spp.и других эубактериальных флагеллинов, и предложены в синтетических, рекомбинантных или встречающихся в природе формах. Флагеллиновые биоактивные примирующие полипептиды Flg22, Flg15 и FlgII-28 (таблица 3) были идентифицированы и действовали как мощные элиситоры на широкий диапазон растительных и овощных культур для предотвращения и лечения распространения определенного заболевания (заболеваний), в то же время синергистически стимулируя и способствуя ростовым реакциям у растений.
[0084] Предложены флагеллиновые и флагеллин-ассоциированные биоактивные примирующие полипептиды согласно описанию в настоящем документе для применения индивидуально или в комбинации с другими биоактивными примирующими полипептидами согласно описанию в настоящем документе, и включают консервативные полные и частичные флагеллины из Bacillus (таблица 1), консервативные N- и C-концевые области из флагеллиновых полипептидов (таблица 2), происходящие из Bacillus Flg22 и происходящие из FlgII-28 биоактивные примирующие полипептиды (таблица 3) и ретро-инверсные последовательности, представляющие собой зеркальные отображения, происходящие из Bacillus Flg22 и FlgII-28 (таблица 4). Подчеркнутая часть последовательностей в таблицах 1 и 3 соответствует идентифицированным сигнальным якорным сортирующим последовательностям или последовательностям секреции, и сигнальным заякоривающим последовательностям, соответственно. Также описаны другие происходящие не из Bacillus полипептиды и белки, представляющие собой функциональные эквиваленты, которые могут быть использованы аналогичным образом (таблица 5).
Таблица 1. Консервативные последовательности флагеллина из Bacillus
SEQ ID NO:
Полная или частичная кодирующая последовательность флагеллина - аминокислоты
ФлагеллинSEQ ID NO:1Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINSASDDAAGLAIATRMKAREGGLNVAGRNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQASLQKEFAQLTEQIDYIAKNTQFNDQQLLGTADKKIKIQTLDTGSTNPAQIEITLNSVKSADLGLDVQIGDEGDAESTAAADPTSAKQAIDAIDAAITTVAGQRATLGATLNRFEFNANNLKSQETSMADAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO:2Bacillus thuringiensis, штаммHD1002
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINSASDDAAGLAIATRMKAREGGLNVAGRNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQASLQKEFAQLTEQIDYIAKNTQFNDQQLLGTADKKIKIQTLDTGSTNPAQIEITLNSVKSADLGLDVQIGDEGDAESTAAADPTSAKQAIDAIDAAITTVAGQRATLGATLNRFEFNANNLKSQETSMADAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO:3Bacillus thuringiensis, штамм HD-789
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINSASDDAAGLAIATRMKAREGGLNVAGRNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQASLQKEFAQLTEQIDYIAKNTQFNDQQLLGTADKKIKIQTLDTGSTNPAQIEITLNSVKSADLGLDVQIGDEGDAESTAAADPTSAKQAIDAIDAAITTVAGQRATLGATLNRFEFNANNLKSQETSMADAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO:4Bacillus cereus, штамм G9842
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINSASDDAAGLAIATRMKAREGGLNVAGRNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQASLQKEFAQLTEQIDYIAKNTQFNDQQLLGTADKKIKIQTLDTGSTNPAQIEITLNSVKSADLGLDVQIGDEGDAESTAAADPTSAKQAIDAIDAAITTVAGQRATLGATLNRFEFNANNLKSQETSMADAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO:5Bacillus thuringiensis, серовар indiana, штамм HD521
MRIGTNVLSMNARQSLYENEKHMNVAMEHLATGKKLNNASDNPANIAIVTRMHARASGMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVTNILQRMRDLAVQSANGTNSNKNRHSLNKEFQSLTEKIGYIGETTEFNDLSVFEGQNRPITLDDIGHTINMMKHIPPSPTQHDIKISTEQEARAAILKIEDALQSVSLHRADLGAMINRLQFNIENLNSQSMALTDAASLIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVSKLLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 6Bacillus thuringiensis, штамм CTC
mrintninsmrtqeymrqnqakmsnsmdrlssgkrinnasddaaglaiatrmraresglgvaadntqngmslirtadsamnsvsnillrmrdianqsangtntnenksalqkefaqlqkqityiaentqfndknllnedsevkiqtldsskgeqqitidlkavtleklnikdiaigkadaadkpvtpgatvdqkdldsvtdkiaaltetsskadidaiqssldnfkasmtpedvktledalkgfktgqanpadagvdaiqdalskvklptataaapaadadksdalaaiaaidaaltkvadnratlgatlnrldfnvnnlksqsssmasaasqiedadmakemsemtkfkilneagismlsqanqtpqmvskllq
ФлагеллинSEQ ID NO: 7BacillusThuringiensis,серовар yunnanensis, штамм IEBC-T20001
MTGITINLEIDFFAYYRFSICRKVNIKKWGFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGENKTIAIQTLDNADTTKQININLADSSTSALQIDKLTISGKTTDTTKTETITVTDDEIKAAKTDIDEFNDAKKALADLKAETSAGKADGSTDDEIKTAVSNFTKSFEKIQKFMNDSDIKTVQTEIEKFDAAAPALDKAKGMGIAFTSAMDPKAGTITKAATRQNASDAIKSIDAALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMAAAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANV
ФлагеллинSEQ ID NO: 8Bacillus thuringiensis, серовар tolworthi
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALQSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDENKAAMEKEFGQLKDQIKYITDNTQFNDKNLLDAASGTTKSIAIQTLDSDQASTQIEIKIAGSSLAALGLDKVQIGQETVAQKDLDVLTKAMGRLAAPDADATTRDLDVQVAKDAFDKVKGFIADPAQAKAVERAFEDYTAAEAGKEEDAAKAIDAAYKKVTGLTAGTTGTVDAHNAVNKIDAALKTVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 9Bacillus cereus, штамм FM1
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQVALQKEFGELQKQIDYIAKNTQFNDKNLLSGKAGAPDQALEINIQTLDSSDPNQQIKISLDSVSTAQLGVKDLQIGSSSITQQQLDTLDNAMKRLETASTTAAVRDQDVADAKAAFENVKGFFSEGNVDSINRAFTDFANETTNKDDKAEAIYALYNNATLITKPTPDASNPASVDPANAIKKIDQAIEKIASSRATLGATLNRLDFNVNNLKSQQSSMASAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 10Bacillus cereus, штамм FM1
MRIGTNVLSMNARQSFYENEKRMNVAIEHLATGKKLNHASDNPANVAIVTRMHARTSGIHVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVTNILQRMRDVAVQSANGTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQIGYIDETTEFNDLSVFDRQNCPVTLDDIGHTVNVTKHIPPSPTQHDINISTEQEARAAIRKIEETLQNVSLHRADLGAMINQLQFNIENLNSQSTALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVYKLLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 11Bacillus thuringiensis, штамм MC28
MDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTADNQQALQKEFGQLKEQISYIADNTEFNDKTLLKADNSVKIQTLDSADTNKQISIDLKGVTLNQLGLDTVNIGSEKLSAESLNVAKATMARLVKADQNADPSTFALDVNTAKESFDKIKGFIANKTNVQNVENAFNDYAVADPADKADKADAIQAAFNTAITGLTAGTPNTSNPSSAVDSIDAALKTVASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 12Bacillus bombysepticus, штамм Wang
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRSREGGLNVAARNTEDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAAMQKEFDQLKEQIQYIADNTEFNDKKLLDGSNSTINIQTLDSHDKNKQITISLDSASLKNLDIKDLAIGSATINQTDLDTATNSMKRLATPATDGKVLAQDIADAKAAFNKVQSAYTPAEVDKIQDAFKAYDKLAADPASKATDIADAAKNVNTVFGTLATPTATKFDPSSAVEKIDKAIETIASSRATLGATLNRLDFNVTNLKSQENSMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 13Bacillus thuringiensis, серовар kenyae
MTGITINLEIDFFAYYRFSICRKVNIKKWGFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRSREGGLNVAARNTEDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAAMQKEFDQLKEQIQYIADNTEFNDKKLLDGSNSTINIQTLDSHDKNKQITISLDSASLKNLDIKDLAIGSATINQTDLDTATNSMKRLATPATDGKVLAQDIADAKAAFNKVQSAYTPAEVDKIQDAFKAYDKLAADPASKDTDIADAAKNVNTVFGTLATPTATKFDPSSAVEKIDKAIETIASSRATLGATLNRLDFNVTNLKSQENSMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 14Bacillus thuringiensis, серовар kenyae
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRSREGGLNVAARNTEDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAAMQKEFDQLKEQIQYIADNTEFNDKKLLDGSNSTINIQALDSHDKNKQITISLDSASLKNLDIKDLAIGSATINQTDLDTATNSMKRLATPATDGKVLAQDIADAKAAFNKVQSAYTPAEVDKIQDAFKAYDKLAADPASKDTDIADAAKNVNTVFGTLATPTATKFDPSSAVEKIDKAIETIASSRATLGATLNRLDFNVTNLKSQENSMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллин (A-тип)SEQ ID NO: 15Bacillus cereus
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGDNKTIAIQTLDNADTSKQININLADSSTSALKIEKLTISGSTAIAGKTEKVTITAEDIKAAEEDIKAFTQAQEGLANLVKEVKDTDGSVKTPGSTPDDIKKAVTAFTESFEKMKKFMNDEDITKVEEKIKAFDAASPDLDAAKEMGTAFTAAMKPAAGEITKAAMKPNASDAIKSIDEALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллин (A-тип)SEQ ID NO: 16Bacillus cereus
MRIGTNVLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNNASDNPANIAIVTRMHARASGMRLAIRNNEDTISMLRTAEAALQTLTNILQRMRDLAVQSANGTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQIGYIGETTEFNDLSVFDGQNRPVTLDDIDHTINMTKHIPPSPTQHDIKISTEQEARAAILKIEEALQSVSIHRADLGSMINRLQFNIENLNSQSMALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVSKLLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 17Bacillus thuringiensis, серовар finitimus, штамм YBT-020
MRIGTNVLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNHASDNPANVAIVTRMHARASGMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVTNVLQRMRDVAVQSANGTNLNKNRDSLNNEFQSLTEQIGYIDETTAFNDLSVFDGQNRPVTLDDIGHTVNVTKHISPSPTQHDINISTEQEARAAIRKIEEALQNVSLYRADLGAMINRLQFNIENLNSQSTALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVYKLLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 18Bacillus thuringiensis, серовар finitimus, штамм YBT-020
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLNVAADNTQNGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTDSNKSALQKEFAELQKQITYIADNTQFNDKNLLKEDSEVKIQTLDSSKGEQQIGIDLKAVTLEKLGINNISIGKADGTTEGTKADLTALQAAAKKLEKPDTGTMEKDVKDAKEEFDKVKASLSDEDVKKIEAAFGEFDKDKTNTTKASDIFNAIKDVKLADKAAAAPAPADLTKFKAALDKLQTPNAGTMVDDVKDAKDEFEKIKGSLSDADAQKIQAAFEEFEKANTDDSKASAIYNLAKDVKVNATDTTTGTDKDTTTSTDKDAALAAIAAIDAALTKVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 19Bacillus cereus,штамм B4264
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTAENKAAMQKEFGELKDQIKYISENTQFNDQHLLNAAKGSTNEIAIQTLDSDSSSKQIKITLQGASLDSLDIKDLQIGSGSTVSQTDLDVLDATMTRVKTATGATRDVDVQAAKSAFDKVKGLMTKPAEVKAIERAFEDYNAGKTDALATAIEAAYTANKTGLPAPAAAAGTVDALGAITKIDAALKTVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 20Bacillus thuringiensis, серовар nigeriensis
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTSDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGDNKSIAIQTLDNADTTKQININLADSSTTALNIDKLSIEGTGNKTITLTAADIAKDKANIDAVGTAKTALAGLTGTPAAAAINSAVADFKTAFAKADKNLMSDAQIKAVTDAITAFEADATPDLTKAKAIGTAYTAPAAGDITKASPNASEAIKSIDAALDTIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 21Bacillus thuringiensis
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTADNQQALQKEFGQLKEQISYIADNTEFNDKTLLKADNSVKIQTLDSADTNKQISIDLKGVTLNQLGLDTVNIGSETLSAESLNVAKATMARLVKADQNADPSTFALDVNTAKESFDKIKGFITNKTNVQNVENAFNDYTVADPADKADKADAIQAAFNTAITGLTAGTPNTSNPSSAVDAIDAALKTVASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 22Bacillus thuringiensis, серовар konkukian, штамм 97-27
MRIGTNVLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHFATGKKLNHASDNPANVAIVTRMHARASGMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVMNILQRMRDLAVQSANGTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQIGYIGETTEFNDLSVFDGQNRPVTLDDIGHTVNVTKHTSPSPTKHDIKISTEQEARAAIRKIEEALQNVSLHRADFGAMINRLQFNIENLNSQSMALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVSKLLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 23Bacillus thuringiensis, серовар konkukian, штамм 97-27
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTADNQQALQKEFGQLKEQISYIADNTEFNDKTLLKADNSVKIQTLDSADTNKQISIDLKGVTLNQLGLDTVNIGSETLSAESLNVAKATMARLVKADQNADPSTFALDVNTAKESFDKIKGFITNKTNVQNVENAFNDYTVADPADKADKADAIQAAFNTAITGLTAGTPNTSNPSSAVDAIDAALKTVASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллиновый белок FlaASEQ ID NO: 24Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056
MRIGTNVLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNHASDNPANIVIVTRMYARASGMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVTNILQHMRDFAIQSANGTNSNTNRDSLNKEFQSLTEPIGYIGETTEFNDLSVFDGQNRPITLDDIGHTINMTKHIPPSPTQHDIKISTEQEARAAIRKIEEALQNVSLHRADLGSMINRLQFNIENLNSQSMALIDTASQVEDADMAQEISDFLKFKLLTAVALSVVSQANQIPQIVSKLLQS
Флагеллиновый белок FlaASEQ ID NO: 25Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSALDKEFAALKDQIDYISKNTEFNDQKLLDGSKKSIAIQTLDNADTNKQIDIQLSNVSTKELKLDTLSIEGSSSKTFTITADDMLAVGTANATAKAKAGTLKGLNVTTGDLTAAKTDVQDFRAAFDKVKGFMGSTEVTNIEKALTKFDGDQSLANAKAIGDALTSDLATTIAKDQTYSKNVSNASSAIASIDAALESIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллин BSEQ ID NO: 26Bacillus thuringiensis, штамм Bt407
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSALDKEFAALKDQIDYISKNTEFNDQKLLDGSKKSIAIQTLDNADTNKQIDIQLSNVSTKELKLDTLSIEGSSSKTFTITADDMLAVGTANATAKAKAGTLKGLNVTTGDLTAAKTDVQDFRAAFDKVKGFMGSTEVTNIEKALTKFDGDQSLANAKAIGDALTSDLATTIAKDQTYSKNVSNASSAIASIDAALESIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 27Bacillus thuringiensis, серовар chinensis CT-43
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSALDKEFAALKDQIDYISKNTEFNDQKLLDGSKKSIAIQTLDNADTNKQIDIQLSNVSTKELKLDTLSIEGSSSKTFTITADDMLAVGTANATAKAKAGTLKGLNVTTGDLTAAKTDVQDFRAAFDKVKGFMGSTEVTNIEKALTKFDGDQSLANAKAIGDALTSDLATTIAKDQTYSKNVSNASSAIASIDAALESIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 28Bacillus thuringiensis, серовар canadensis
MTGITINLEIDFFAYYRFSICRKVNIKKWGFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAALNKEFDALKEQIDYISTNTEFNDKKLLDGSNKTIAVQTLDNADTSKQININLSNVSTKELGLDTLSIGTDKVEKTVYDATTKAFADLGAKTGADKAAFDADVTAAMKEFDKVKPFMSADDVKKIETKLEDYNKANDAGAQTAAQALGKEFATLTKLETTDLKANASGAIASIDTALKNIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 29Bacillus thuringiensis, серовар galleriae
MTGITINLEIDFFAYYRFSICRKVNIKKWGFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAALNKEFDALKEQIDYISTNTEFNDKKLLDGSNKTIAVQTLDNADTSKQININLSNVSTKELGLSTLSIGTDKVEKTVYDATTKAFADLGAKTGTDKAAFAADVTAAMKEFDKVKPFMSADDVKKIETKLEDYNKANDAGAEAAAQALGKEFATLTKLETTDLKANASGAIASIDTALKNIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
N-концевая спиральная область флагеллинаSEQ ID NO: 30Bacillus weihenstephanensis
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLSVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLSNQSANGTNTDENQQALNKEFAALKDQIDYISKNTEFNDKKLLDGSNKSIAIQTLDNADTTKQINIDLSNVSTDTLNISGLTINGKKDITVTISDKDIANAATDIGKATSAQQGLADLTDTTPAVPDTPAVIGTGTAGNPQFPAVKGTPEIPGSSPAEIAKAVDDFKQAFNKVKGLMSDSAVSAMEQKFATFEKDKSLANAKDIGTAFSAPIAGNITKGEQNASGAIKSIDAALEKIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 31Bacillus thuringiensis, серовар ostriniae
MTGITINLEIDFFAYYRFSICRKVNIKKWGFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGDNKSIAIQTLDNADTAKQININLADSSTKALNIDTLSIAGTTDKTITITAKDLTDNKTTLDALKTAKDDLAKLDDKSDQATIDKAVDAFKTAFNNVDKNLLSDKAIEGITEKMTAFDGTHTAAAAIGAAYTEPTAADIKKSAPNASGAIKSIDAALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 32Bacillus thuringiensis
MRIGTNVLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNHASDNPANVAIVTRMHARASGMRVAIRNNEDALSMLRTAEATLQTVANILQRMRDLAVQSSNDTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQISYIGETTEFNDLSVFDGQNRPVTLDDIGHTVNVTKHISPSPTQHDIKISTEQEARAAIRKIEEALQNVLLHRADLGAMINRLQFNIENLNSQSMALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLSEVALSMVSQANQIPQMVSELLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 33Bacillus thuringiensis
MRINTNINSMRTQEYMRQNQTKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGENKTIAIQTLDNADTTKQININLADSSTSALQIDKLTISGKTTDTTKTQTITVTDDEIKAAKTDIDEFNDAKKALADLKAESAPSKGDGSSDDEIKEAVSNFKKSFEKIQKFMNDSDIKTVQTEIEKFDAAAPALDKAKGMGIAFTSAMDPKAGTITKAATRQNASDAIKSIDAALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMAAAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 34Bacillus thuringiensis, серовар pondicheriensis
MTGITINLEIDFFAYYRFSICRKVNIKKWGFLIMRINTNINSMRTQEYMRQNQTKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGENKTIAIQTLDNADTTKQININLADSSTSALQIDKLTISGKTTDTTKTQTITVTDDEIKAAKTDIDEFNDAKKALADLKAESAPSKGDGSSDDEIKEAVSNFKKSFEKIQKFMNDSDIKTVQTEIEKFDAAAPALDKAKGMGIAFTSAMDPKAGTITKAATRQNASDAIKSIDAALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMAAAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллин BSEQ ID NO: 35Bacillus thuringiensis, серовар Berliner
MSIMRIGTNVLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNHASDNPANIVIVTRMYARASGMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVTNILQHMRDFAIQSANGTNSNTNRDSLNKEFQSLTEPIGYIGETTEFNDLSVFDGQNRPITLDDIGHTINMTKHIPPSPTQHDIKISTEQEARAAIRKIEEALQNVSLHRADLGSMINRLQFNIENLNSQSMALIDTASQVEDADMAQEISDFLKFKLLTAVALSVVSQANQIPQIVSKLLQS
Флагеллин ASEQ ID NO: 36Bacillus thuringiensis, серовар Berliner
MARITINLEIDFFAYYRFSICRKVNIKKWGFLNMRINTNINSMRTQDYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSALDKEFAALKDQIDYISKNTEFNDQKLLDGSKKSIAIQTLDNADTNKQIDIQLSNVSTKELKLDTLSIEGSSSKTFTITADDMLAVGTANATAKAKAGTLKGLNVTTGDLTAAKTDVQDFRAAFDKVKGFMGSTEVTNIEKALTKFDGDQSLANAKAIGDALTSDLATTIAKDQTYSKNVSNASSAIASIDAALESIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 37Bacillus cereus, штамм Q1
MRIGTNVLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNHASNNPANVAIVTRMHARASGMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVTNVLQRMRDVAVQSANGTNSSKNRDSLNKEFQSLTEQIGYIDETTEFNDLSVFDGQNRTVTLDDIGHTVNVTKHIPPSPTQHDINISTEQEARAAIRKIEEALQNVSLHRADLGAMINRLQFNIENLNSQSTALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVSKLLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 38Bacillus cereus, штамм Q1
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLSVAADNTQNGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQVALQKEFAALKEQITYIADNTQFNDKNLLNGNQTINIQTLDSHDSTKQIGIDLKSATLEALGIKDLTVGAVGSTEAKNYVDAKEALAKNVAANEFIDAKKALDGNAIAKGYVEAKTAFDDAKPEVKALVSNYTDALAALAKDDTNDDLKKDVADTKALMDANTVAKTYFEAKTAHDGADQAIKDIVTTYDSKLGALDDAANKAISDFDKAKAAFDESPAAKELVKTMDDAKQAATQNNTANAYLVAKAAAELAPNDADKKAELENATKALEKDDTAKGLVKTYENAKEALNPANAMPLDAVKQIDAALKTVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSAMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 39Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
MRIGTNFLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNHASDNPANIAIVTRMHARANGMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVMNILQRMRDLAIQSANSTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQISYIGETTEFNDLSVFDGQNRPVTLDDIGHTVHISKSIPPPSPTQHDIKISTEQEARAAILKIEEALQSVSLHRADLGAMINRLHFNIENLNSQSMALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVSKLLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 40Bacillus thuringiensis, серовар neoleonensis
MRINTNINSMRTQEYMRQNQTKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTSDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGDNKSIAIQTLDNADTTKQININLADSSTSALNIDKLSIEGTGNKTITLTAADIAKDKTNIDAVGTAKTALAGLTGTPAAAAINSAVADFKTAFAKADKNLMSDAQIKSVTDAITAFEADATPDLTKAKAIGTAYTAPAAGDITKASPNASEAIKSIDAALDTIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 41Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
MTGITINLEIDFFAYYRFSICRKVNIKKWGFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGDNKSIAIQTLDNADTAKQININLADSSTKALNIDTLSIAGTTDKTITITAKDLTDNKATLDALKTAKADLAKLDDKSDQATIDKAVDAFKTAFNNVDKNLLSDKAIEGITDKMTAFDGTHTAAAAIGTAYTEPTAGDITKSAPNASGAIKSIDAALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 42Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGDNKSIAIQTLDNADTAKQININLADSSTKALNIDTLSIAGTTDKTITITAKDLTDNKATLDALKTAKADLAKLDDKSDQATIDKAVDAFKTAFNNVDKNLLSDKAIEGITDKMTAFDGTHTAAAAIGTAYTEPTAGDITKSAPNASGAIKSIDAALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 43Bacillus thuringiensis, серовар jegathesan
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTNGNQAALNKEFDALKQQINYISTNTEFNDKKLLDGSNKTIAIQTLDNADTSKKIDIQLADVSTKSLNIDKLKIGGVSKETTDAVGDTFTKLSTTATTDMGALKIEVEAAMKEFDKVKGAMSAEDAKAVTDKLDAFNTAAAATNDAATIAAAKALGAAFDKTKVEMADPNASVAAIDSALENIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQQSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 44Bacillus cereus, штамм ATCC 10987
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMALIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQAALQKEFGELQKQIDYIAGNTQFNDKNLLDGSNPSISIQTLDSADQSKQISIDLKSATLEALGIKDLTVGATENTLAKATITAKDAFDAAKDASDAAKKEIDAAAKDTPSKNDAQLAKEYIEAKATLATLKPTDATYAAKAAELDAATTALNDNAKVLVDGYEKKLTTTKTKEAEYTAAKEQSTKSTAAADLVTKYETAKSNALGNDIAKEYLEAKTAYEANKNDISSKSRFEAAETELNKDITANKAAKVLVETYEKAKTAGTTEKSLVAVDKIDEALKTIADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 45Bacillus thuringiensis, серовар monterrey
MTGITINLEIDFFAYYRFSICRKVNIKKWGFLIMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAALNKEFDALKEQINYISTNTEFNDKKLLDGSNKTIAIQTLDNADTSKKIDIKLADVSTESLKIDKLKIGGVSKETTDAVSETFTKLSTTKTTDKDALKAEVEAAMKEFDKVKGAMSTEDAKAVTDKLGLFNTAAAGTDDTAIATAAKNLGAAFDKTKVNMADPNASVAAIDSALENIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQQSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 46Bacillus cereus, штамм NC7401
MRIGTNVLSLNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNNASDNPANIAIVTRMHARASSMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVTNVLQRMRDLAVQSANDTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQIGYIDETTDFNDLSVFDGQNRTVTLDDIGHTVNVTKHIPPSPTQHDINISTEQEARAAIRKIEEALQNVSLHRADLGAMINRLQFNIENLNSQSTALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVSKLLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 47Bacillus cereus, штамм NC7401
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVASNNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAAMQKEFGELKEQIKYIAENTQFNDQHLLNADKGITKEIAIQTLDSDSDSKQIKIKLQGSSLEALDIKDLQIGNTELAQKDLDLLNATMDRLDATVPGTRDVDVQAAKDAFDKVKGFYTNSDSVKAIERAFEDYATASTAGTAKADAATAIKAAFDLAANKVGKPATGGAQGSANSLGAITKIDAALKTVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQASSMAAAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллин (A-тип)SEQ ID NO: 48Bacillus cereus, штамм AH820
MRINTNINSLRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLNVAANNTQDGMSLIRTADSALGSVSNILLRMRDLANQSANGTNTSDNQAAMQKEFAELQKQITYIADNTQFNDKNLLQSNSSINIQTLDSSDGNQQIGIELKSASLKSLGIEDLAIGASVNPLAKATVEASEAYDKAKADTAAFAKSIADTAATGTGAAKADAAAVDAYIKEADPTAKGNLYTGLTADQKKLADEHNTLKAAEDGKKAELTMATTKSTADGTAKGLVDAYDNAKSDAMNDPKAKAYLEAKMAYEKDTSNVANKQKLDSTKEAMEKDPASKDLVVKLDAAKAAATNGTPLDAVSKIDAALKTVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 49Bacillus cereus AH187
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVASNNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAAMQKEFGELKEQIKYIAENTQFNDQHLLNADKGITKEIAIQTLDSDSDSKQIKIKLQGSSLEALDIKDLQIGNTELAQKDLDLLNATMDRLDATVPGTRDVDVQAAKDAFDKVKGFYTNSDSVKAIERAFEDYATASTAGTAKADAATAIKAAFDLAANKVGKPATGGAQGSANSLGAITKIDAALKTVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQASSMAAAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 50Bacillus cereus
MDFFAYYRFSICRKVNIKKWGFFYMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVASNNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAAMQKEFGELKEQIKYIAENTQFNDQHLLNADKGITKEIAIQTLDSDSDSKQIKIKLQGSSLEALDIKDLQIGNTELAQKDLDLLNATMDRLDATVPGTRDVDVQAAKDAFDKVKGFYTNSDSVKAIERAFEDYATASTAGTAKADAATAIKAAFDLAANKVGKPATGGAQGSANSLGAITKIDAALKTVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQASSMAAAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллиновый белок FlaSEQ ID NO: 51Bacillus cereus
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGENTSIAIQTLDSADTAKQININLADSSTSALLIDKLSISGAGAGTALAGVATADINAAGTKQAALSGLTGSKTTDELDDAVKEFKTEFDKVKSGLSAENADKITAAMDKYTNNKTLDNAKAIGDLYKTMAPADSTVVGTAGTKGQALIDLNATATGDTAQKRQVAVDAFKDDFDKIKGGLNAQDAAKVTAALDKFNKADGSGNTLENAQEIGKVFAEVAAGSTKSNASDAIKSIDKALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 52Bacillus thuringiensis, штамм HD-771[51]
MRINTNINSMRTQEYMRQNQTKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRSREGGLNVAARNTEDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSASETNTSKNQAAMQKEFDQLKEQIQYIADNTEFNDKKLLDGSNSTINIQTLDSHDKNKQITISLDSASLKNLDITDLAIGSNTVNKNDLDTLNNSMKRLETAAADAAVQAQDVTDAKNAFNKVKSGYTPAEVEKMEDAFKAYDKVVADPAKTDALLKAAAEKINTEFKTLTAPTATAFDPSSSVEKIDKAIETIASSRATLGATLNRLDFNVTNLKSQENSMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 53Bacillus thuringiensis, серовар sotto[52]
MRINTNINSMRTQEYMRQNQTKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRSREGGLNVAARNTEDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSASETNTSKNQAAMQKEFDQLKEQIQYIADNTEFNDKKLLDGSNSTINIQTLDSHDKNKQITISLDSASLKNLDITDLAIGSNTVNKNDLDTLNNSMKRLETAAADAAVQAQDVTDAKNAFNKVKSGYTPAEVEKMEDAFKAYDKVVADPAKTDALLKAAAEKINTEFKTLTAPTATAFDPSSSVEKIDKAIETIASSRATLGATLNRLDFNVTNLKSQENSMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 54Bacillus thuringiensis, серовар Novosibirsk
MGVLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGDNKSIAIQTLDNADTSKQINIDLANTSTSSLKIDKLSIEGKGNQTIAITAADIAKDTNIAALTSAQGKLAALTGTPAPAALTTAVDEFKAAFEKVDKNLMSDTQITGIENAIKAYDGATTKTLALAQAVGTAYTAPTPGDITKELPNASSSIKSIDAALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQASSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 55Bacillus thuringiensis, серовар londrina
MGVLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTSENQAALDKEFGALKEQINYISTNTEFNDKKLLDGSNETIAIQTLDNADEGKKIDIKLANVSTDSLKIDKLTIGGAAQKTVDAVADKFNALKTTTTTDKAAIQTEVDAVMKEFDKVKGSMSAEDAKVITDKLKDYNDAADTDTAKATAAKDLGAAFDKTKVNIANPNAAVAAIDSALENIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 56Bacillus cereus, штамм E33L
MRIGTNVLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNHASNNPANIAIVTRMHARASGMRVAIRNNEDALSMLRTAEAALQTVTNILQRMRDLAVQSANVTNSNKNRNSLNKEFQSLTEQISYIGETTEFNDLSVFDGQNRPVTLDDIGYTVNVTKHTPPSPTQHDIKISTEQEARAAIRKIEEALQNVSLHRADLGSMMNRLQFNIENLNSQSMALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVSKLLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 57Bacillus cereus, штамм E33L
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSTAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDKNQGALDKEFAALKEQIDYISKNTEFNDKKLLDGSNKAIAIQTLDSDDKGKQIDISLSDTSTTALKINNLSIAANGLGIGSGKELVGVADNTIANASAEALKKLDGTTGDTDVKRSNAVKAFTDQYKDLKVAMNAKDVETIDAAIKKFEGANTLENAQAIGAAFEGAAKATLTTDINNATLTSKALSDLDTDSTTETRKAAMKDFVAAFDKVKGSMNSSDVTKISDAIDRFSKTDDSGNTLEAARAIGDAFKAATTNGKTSTATDANSAIKAIDEALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKNQASSMASAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 58Bacillus cereus, штамм FRI-35
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSTAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDKNQAALDKEFNALKEQIDYISKNTEFNDKKLLDGSNKSIAVQTLDNADTSKQININLSNTSTKALEINSLTISGTTPIAGKNETSKITAEQMTAASDALEKFKTAQEGLANLTEPTKGSDGKPEAGTGSSNEDIVKAVKAFKEAFKNIQPLMSDTDITTVQNKIDLFDEDAPDLSAAKLIGTTFEESMKPVADKEITKAAVKPNASDAIAAIDAALTKVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQASSMASAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 59Bacillus cereus, штамм FRI-35
MRIGTNVLSLNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNNASDNPANIAIVTRMHARASGMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVTNVLQRMRDLAVQSANGTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQIGYIDETTEFNNLSVFDGQNRPVTLDDIGHTVNVTKHIPPFPTQHDINISTEQEARAAIRKIEEALQNVSLHRADLGAMINRLQFNIENLNSQSTALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQVPQMVSKLLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 60Bacillus thuringiensis
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRAHESGLSVAARNTSDGISLIRTADSALQSVSNILLRMRDIANQTANGTNKDTDIEALGKEFAALKEQITYVSDNTKFNGRELLKGGDDINIQTYDGSDESQQIKIKISELDLSSLDTGEVTDSDTARGTVSTLDDAITNIASKRAELGATLNRLDYNTQNVNSEAASMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILSEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 61Bacillus cereus, штамм ATCC 4342
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRAHESGLSVAARNTSDGISLIRTADSALQSVSNILLRMRDIANQTANGTNKDTDIEALGKEFAALKEQITYVSDNTKFNGRELLKGGDDINIQTYDGSDESQQIKIKISELDLSSLDTGEVTDSDTARGTVSTLDDAITNIASKRAELGATLNRLDYNTQNVNSEAASMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILSEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 62Bacillus thuringiensis
MRIGTNFLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNHASDNPANIAIVTRMHARANGMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVMNILQRMRDLAIQSANSTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQISYIGETTEFNDLSVFDGQNRPVTLDDIGHTVHISKSIPPPSPTQHDIKISTEQEARAAILKIEEALQSVSLHRADLGAMINRLHFNIENLNSQSMALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVSKLLQS
ФлагеллинSEQ ID NO: 63Bacillus thuringiensis
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGDNKSIAIQTLDNADTAKQININLADSSTKALNIDTLSIAGTTDKTITITAKDLTDNKATLDALKTAKADLAKLDDKSDQATIDKAVDAFKTAFNNVDKNLLSDKAIEGITDKMTAFDGTHTAAAAIGTAYTEPTAGDITKSAPNASGAIKSIDAALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 64Bacillus aryabhattai
MRINHNITALNTYRQFNNANNAQAKSMEKLSSGQRINSASDDAAGLAISEKMRGQIRGLDQASRNAQDGVSLIQTAEGALNETHDILQRMRELVVQAGNGTNKTEDLDAIQDEIGSLIEEIGGETDSKGISDRAQFNGRNLLDGSLDITLQVGANAGQQVNLKIGDMSAGALGADTDSDGAADAFVNSINVKDFATTSFDDQLAIIDGAINQVSEQRSGLGATQNRLDHTINNLSTSSENLTASESRIRDVDYALAA
ФлагеллинSEQ ID NO: 65Bacillus manliponensis
MRINTNINSMRTQEYMRQNQDKMNTSMNRLSSGKQINSASDDAAGLAIATRMRAKEGGLNVGAKNTQDGMSALRTMDSALNSVSNILLRMRDLATQSATGTNQGNDRESLDLEFQQLTEEITHIAEKTNFNGNALLSGSGSAINVQLSDAAEDKLTIAAIDATASTLLKGAVDVKTEDKADAAITKIDQAIQDIADNRATYGSQLNRLDHNLNNVNSQATNMAAAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILSEAGVSMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 66Lysinibacillus sp.штамм BF-4
MRIGSWTATGMSIVNHMNRNWNAASKSMLRLSSGYRINSAADDAAGLAISEKMRGQIRGLTMASKNIMDGVSLIQTAEGALNETHAIVQRMRELAVQAATDTNTDDDRAKLDLEFQELKKEIDRISTDTEFNTRTLLNGDYKDNGLKIQVGANSGQAIEVKIGDAGLAGIGLSTESIATREGANAALGKLDEATKNVSMERSRLGAYQNRLEHAYNVAENTAINLQDAESRIRDVDIAKEMMNMVKSQILAQVGQQVLAMHMQQAQGILRLLG
ФлагеллинSEQ ID NO: 67Lysinibacillus sp.штамм 13S34_air
MKIGSWTATGMSIVNHMNRNWNAASKSMLRLSSGYRINSAADDAAGLAISEKMRGQIRGLTMASKNIMDGVSLIQTAEGALNETHAIVQRMRELAVQAATDTNTDDDRAKLDLEFQELKKEIDRISTDTAFNTRTLLNGDYKDNGLKIQVGANSGQAIEVKIGDAGLAGIGLSTESIATREGANAALGKLDEATKNVSMERSRLGAYQNRLEHAYNVAENTAINLQDAESRIRDVDIAKEMMHMVKSQILAQVGQQVLAMHIQQAQGILRLLG
ФлагеллинSEQ ID NO: 68Paenibacillus sp.штамм HW567
MIISHNLTALNTMNKLKQKDLAVSKSLGKLSSGLRINGASDDAAGLAISEKMRGQIRGLNQASRNIQDGISLIQVADGAMQEIHSMLQRMNELAVQASNGTYSGSDRLNIQSEVEQLIEEIDEIAGNTGFNGIKLLNGNNEKTEKTEKTGSVVSVNNPPNNKLITISSPVGTSVSEILNNLLTVFNEAKNGQVGDSDSKRVSSKFTLSINNDELSIVCDTGDGFLLSGGSPNLFYQGYIGGSYKYKFTEFINENDFINIMDIGGANGGDTLKFNFSSISKEPEEQKEQKGLTLQIGANSGETLNIKLPNVTTSAIGISSIDVSTIPNAESSLSSISAAIDKVSAERARMGAYQNRLEHSRNNVVTYAENLTAAESRIRDVDMAKEMMELMKNQIFTQAGQAMLLQTNTQPQAILQLLK
ФлагеллинSEQ ID NO: 69Bacillus anthracis
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTKENQDALDKEFGALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGDNKSIAIQTLDNADTAKQININLADSSTKALNIDSLTISGSKDATITITAEDITAASAEITAAKGARTALANLKDTPADPTKDPAASTPAEIKAAVDDFKGKFEKIKGLMNDTDVKAVEEKIKEFETTSTLAKAQAIGTAFTTGMEPKAGNITKNVPAASSSIKAIDSALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSAMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 70Bacillus anthracis
MQKSQYKKMGVLKMRINTNINSMRTQEYMRQNQDKMNVSMNRLSSGKRINSAADDAAGLAIATRMRARQSGLEKASQNTQDGMSLIRTAESAMNSVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSALQKEFAELQEQIDYIAKNTEFNDKNLLAGTGAVTIGSTSISGAEISIETLDSSATNQQITIKLANTTAEKLGIDATTSNISISGAASALAAISALNTALNTVAGNRATLGATLNRLDRNVENLNNQATNMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 71Bacillus anthracis
MRINTNINSMRTQEYMRQNQDKMNVSMNRLSSGKRINSAADDAAGLAIATRMRARQSGLEKASQNTQDGMSLIRTAESAMNSVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSALQKEFAELQEQIDYIAKNTEFNDKNLLAGTGAVTIGSTSISGAEISIETLDSSATNQQITIKLANTTAEKLGIDATTSNISISGAASALAAISALNTALNTVAGNRATLGATLNRLDRNVENLNNQATNMASAASQIKDADKAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 72Bacillus anthracis
MRINTNINSMRTQEYMRQNQDKMNVSMNRLSSGKRINSAADDAAGLAIATRMRARQSGLEKASQNTQDGMSLIRTAESAMNSVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSALQKEFAELQEQIDYIAKNTEFNDKNLLAGTGAVTIGSTSISGAEISIETLDSSATNQQITIKLANTTAEKLGIDATTSNISISGAASALAAISALNTALNTVAGNRATLGATLNRLDRNVENLNNQATNMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMV
ФлагеллинSEQ ID NO: 73Bacillus anthracis штамм H9401
MNVSMNRLSSGKRINSAADDAAGLAIATRMRARQSGLEKASQNTQDGMSLIRTAESAMNSVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSALQKEFAELQEQIDYIAKNTEFNDKNLLAGTGAVTIGSTSISGAEISIETLDSSATNQQITIKLANTTAEKLGIDATTSNISISGAASALAAISALNTALNTVAGNRATLGATLNRLDRNVENLNNQATNMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинSEQ ID NO: 74Bacillus megaterium штамм WSH-002
MRINHNITALNTYRQFNNANNAQAKSMEKLSSGQRINSASDDAAGLAISEKMRGQIRGLDQASRNAQDGVSLIQTAEGALNETHDILQRMRELVVQAGNGTNKTEDLDAIQDEIGSLIEEIGGEADSKGISDRAQFNGRNLLDGSLDITLQVGANAGQQVNLKIGDMSAGALGADTNSDGAADAFVNSINVKDFTATSFDDQLAIIDGAINQVSEQRSGLGATQNRLDHTINNLSTSSENLTASESRIRDVDYALAA
ФлагеллинSEQ ID NO: 75Aneurinibacillus sp.XH2
MRINHNLPALNAYRNLAQNQIGTSKILERLSSGYRINRASDDAAGLAISEKMRGQIRGLEQGQRNTMDGVSLIQTAEGALQEIHEMLQRMRELAVQAANGTYSDKDKKAIEDEINQLTAQIDQIAKTTEFNGIQLIGDSDSTSLQDVKIQYGPKKEDSLTLELTTQPEADPPFAAGCKADKASLKIDNVDVISDPEGAIETFKAAIDQVSRIRSYFGAIQNRLEHVVNNLSNYTENLTGAESRIRDADMAKEMTEFTRFNIINQSATAMLAQANQLPQGVLQLLKG
N- и C-концевые консервативные области флагеллина
[0085] Флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид может содержать усеченный N-концевой полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного усеченный N-концевого полипептида может содержать SEQ ID NO: 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106,108, 109, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154,156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182,184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 752 или любую их комбинацию.
[0086] Флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид могут содержать усеченный C-концевой полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного усеченный C-концевой полипептид может содержать SEQ ID NO: 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 201, 203, 205, 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225 или любую их комбинацию.
[0087] Идентифицировали N-концевые и C-концевые консервативные области из полноразмерных последовательностей флагеллина разных штаммов Bacillus spp.и других эубактерий (таблица 2). Консервативные N- и C-концевые домены идентифицировали с применением программного обеспечения для множественного выравнивания BLAST и присваивали функциональные аннотации на основании индивидуальных совпадений при поиске базах данных по Bacillus и других базах данных эубактерий. Стартовый сайт N-концевой области кодирующих последовательностей представлен метионином, выделенным жирным шрифтом (M). Консервативные домены приведены в виде последовательностей аминокислот N-конец (левый столбец) и C-конец (правый столбец).
Таблица 2. N- и C-концевые консервативные области флагеллинов
SEQ ID NO:
Консервативный N-конец
Консервативный C-конец
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 76C-SEQ ID NO: 77Bacillus thuringensis, штамм 4Q7[CDS из SEQ ID NO:1]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINSASDDAAGLAIATRMKAREGGLNVAGRNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQASLQKEFAQLTEQIDYIAKNTQFNDQQLLGTADKKIKIQTL
IDAAITTVAGQRATLGATLNRFEFNANNLKSQETSMADAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 78C-SEQ ID NO: 79Bacillus thuringiensis, штаммHD1002[CDS из SEQ ID NO:2]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINSASDDAAGLAIATRMKAREGGLNVAGRNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQASLQKEFAQLTEQIDYIAKNTQFNDQQLLGTADKKIKIQTL
IDAAITTVAGQRATLGATLNRFEFNANNLKSQETSMADAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 80C-SEQ ID NO: 81Bacillus thuringiensis,штамм HD-789[CDS из SEQ ID NO:3]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINSASDDAAGLAIATRMKAREGGLNVAGRNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQASLQKEFAQLTEQIDYIAKNTQFNDQQLLGTADKKIKIQTL
IDAAITTVAGQRATLGATLNRFEFNANNLKSQETSMADAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 82C-SEQ ID NO: 83Bacillus cereus,штамм G9842[CDS из SEQ ID NO:4]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINSASDDAAGLAIATRMKAREGGLNVAGRNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQASLQKEFAQLTEQIDYIAKNTQFNDQQLLGTADKKIKIQTL
IDAAITTVAGQRATLGATLNRFEFNANNLKSQETSMADAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 84C-SEQ ID NO: 85Bacillus thuringiensis, серовар indiana, штамм HD521[CDS из SEQ ID NO:5]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINSAADDAAGLAIATRMKAREGGLNVAARNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSATGTNTTKNQVALNKEFAALKEQITYIADNTQFNDKNLLKSTQEIKIQTL
QLDAALTKVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQENSMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 86C-SEQ ID NO: 87Bacillus thuringiensis, штамм CTC[CDS из SEQ ID NO:6]
WGFLIMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAADNTQNGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTNENKSALQKEFAQLQKQITYIAENTQFNDKNLLNEDSEVKIQTLDS
AIAAIDAALTKVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 88C-SEQ ID NO: 89BacillusThuringiensis,серовар yunnanensis, штамм IEBC-T20001[CDS из SEQ ID NO:7]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
RATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMAAAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQAN
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 90C-SEQ ID NO: 91Bacillus thuringiensis, серовар tolworthi[CDS из SEQ ID NO:8]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALQSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDENKAAMEKEFGQLKDQIKYITDNTQFNDKNLLDA
IDAALKTVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 92C-SEQ ID NO: 93Bacillus cereus, штамм FM1[CDS из SEQ ID NO: 9]
MGVLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQVALQKEFGELQKQIDYIAKNTQFND
RATLGATLNRLDFNVNNLKSQQSSMASAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 94C-SEQ ID NO: 95Bacillus cereus, штамм FM1[CDS из SEQ ID NO: 10]
MGVLNMRIGTNVLSMNARQSFYENEKRMNVAIEHLATGKKLNHASDNPANVAIVTRMHARTSGIHVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVTNILQRMRDVAVQSANGTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQIGYIDETTEFND
RADLGAMINQLQFNIENLNSQSTALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVYKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 96C-SEQ ID NO: 97Bacillus thuringiensis, штамм MC28[CDS из SEQ ID NO: 11]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTADNQQALQKEFGQLKEQISYIADNTEFNDKTLL
AVDSIDAALKTVASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 98C-SEQ ID NO: 99Bacillus bombysepticus,штамм Wang[CDS из SEQ ID NO: 12]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRSREGGLNVAARNTEDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAAMQKEFDQLKEQIQYI
LGATLNRLDFNVTNLKSQENSMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 100C-SEQ ID NO: 101Bacillus thuringiensis, серовар kenyae[CDS из SEQ ID NO: 13]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRSREGGLNVAARNTEDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAAMQKEFDQLKEQIQYI
RATLGATLNRLDFNVTNLKSQENSMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 102C-SEQ ID NO: 103Bacillus thuringiensis, серовар kenyae[CDS из SEQ ID NO: 14]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRSREGGLNVAARNTEDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAAMQKEFDQLKEQIQYI
RATLGATLNRLDFNVTNLKSQENSMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллин (A-тип)N-SEQ ID NO: 104C-SEQ ID NO: 105Bacillus cereus[CDS из SEQ ID NO: 15]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
RATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллин (A-тип)N-SEQ ID NO: 106C-SEQ ID NO: 107Bacillus cereus[CDS из SEQ ID NO: 16]
GFLNMRIGTNVLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNNASDNPANIAIVTRMHARASGMRLAIRNNEDTISMLRTAEAALQTLTNILQRMRDLAVQSANGTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQIGYIGETTEFND
RADLGSMINRLQFNIENLNSQSMALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 108C-SEQ ID NO: 109Bacillus thuringiensis, серовар finitimus,штамм YBT-020[CDS из SEQ ID NO: 17]
GVLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLNVAADNTQNGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTDSNKSALQKEFAELQKQITYIADNTQFNDKNLLKEDSEVKIQTLDS
AIDAALTKVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 110C-SEQ ID NO: 111Bacillus thuringiensis, серовар finitimus,штамм YBT-020[CDS из SEQ ID NO: 18]
GVLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLNVAADNTQNGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTDSNKSALQKEFAELQKQITYIADNTQFNDKNLLKEDSEVKIQTLDS
AAIDAALTKVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 112C-SEQ ID NO: 113Bacillus cereus,штамм B4264[CDS из SEQ ID NO: 19]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTAENKAAMQKEFGELKDQIKYISENTQFNDQHLL
TVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 114C-SEQ ID NO: 115Bacillus thuringiensis, серовар nigeriensis[CDS из SEQ ID NO: 20]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTSDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
AIKSIDAALDTIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 116C-SEQ ID NO: 117Bacillus thuringiensis[CDS из SEQ ID NO: 21]
WGFLIMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTADNQQALQKEFGQLKEQISYIADNTEFND
AVDAIDAALKTVASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 118C-SEQ ID NO: 119Bacillus thuringiensis, серовар konkukian,штамм 97-27[CDS из SEQ ID NO: 22]
WGFLIMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMetRDIANQSANGTNTADNQQALQKEFGQLKEQISYIADNTEFNDKTLL
AVDAIDAALKTVASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 120C-SEQ ID NO: 121Bacillus thuringiensis, серовар konkukian,штамм 97-27[CDS из SEQ ID NO: 23]
WGFLIMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSALDKEFAALKDQIDYISKNTEFNDQKLL
AIASIDAALESIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллиновый белок FlaAN-SEQ ID NO: 122C-SEQ ID NO: 123Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056[CDS из SEQ ID NO: 24]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSALDKEFAALKDQIDYISKNTEFNDQKLL
AIASIDAALESIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллиновый белок FlaAN-SEQ ID NO: 124C-SEQ ID NO: 125Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056[CDS из SEQ ID NO: 25]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSALDKEFAALKDQIDYISKNTEFNDQKLL
AIASIDAALESIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллин BN-SEQ ID NO: 126C-SEQ ID NO: 127Bacillus thuringiensis,штамм Bt407[CDS из SEQ ID NO: 26]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSALDKEFAALKDQIDYISKNTEFNDQKLL
AIASIDAALESIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 128C-SEQ ID NO: 129Bacillus thuringiensis, серовар chinensis CT-43[CDS из SEQ ID NO: 27]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSALDKEFAALKDQIDYISKNTEFNDQKLL
AIASIDAALESIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 130C-SEQ ID NO: 131Bacillus thuringiensis, серовар Canadensis[CDS из SEQ ID NO: 28]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAALNKEFDALKEQIDYISTNTEFNDKKLL
RATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 132C-SEQ ID NO: 133Bacillus thuringiensis, серовар galleriae[CDS из SEQ ID NO: 29]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAALNKEFDALKEQIDYISTNTEFNDKKLL
RATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
N-концевая спиральная область флагеллинаN-SEQ ID NO: 134C-SEQ ID NO: 135Bacillus weihenstephanensis[CDS из SEQ ID NO: 30]
GVLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLSVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLSNQSANGTNTDENQQALNKEFAALKDQIDYISKNTEFNDKKLL
RATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 136C-SEQ ID NO: 137Bacillus thuringiensis, серовар ostriniae[CDS из SEQ ID NO: 31]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
IDAALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQS
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 138C-SEQ ID NO: 139Bacillus thuringiensis[CDS из SEQ ID NO: 32]
WGFLIMRINTNINSMRTQEYMRQNQTKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
LGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMAAAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 140C-SEQ ID NO: 141Bacillus thuringiensis[CDS из SEQ ID NO: 33]
WGFLIMRINTNINSMRTQEYMRQNQTKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
LGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMAAAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 142C-SEQ ID NO: 143Bacillus thuringiensis, серовар pondicheriensis[CDS из SEQ ID NO: 34]
WGFLIMRINTNINSMRTQEYMRQNQTKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
RATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMAAAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллин BN-SEQ ID NO: 144C-SEQ ID NO: 145Bacillus thuringiensis, серовар Berliner[CDS из SEQ ID NO: 35]
GFLNMRINTNINSMRTQDYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSALDKEFAALKDQIDYISKNTEFNDQKLL
AIASIDAALESIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллин AN-SEQ ID NO: 146C-SEQ ID NO: 147Bacillus thuringiensis, серовар Berliner[CDS из SEQ ID NO: 36]
GFLNMARITINLEIDFFAYYRFSICRKVNIKKWGFLNMRINTNINSMRTQDYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSALDKEFAALKDQIDYISKNTEFNDQKLL
AIASIDAALESIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 148C-SEQ ID NO: 149Bacillus cereus, штамм Q1[CDS из SEQ ID NO: 37]
GVLYMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLSVAADNTQNGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQVALQKEFAALKEQITYIADNTQFNDKNLLNGNQTINIQTLDSHDST
TVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSAMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 150C-SEQ ID NO: 151Bacillus cereus, штамм Q1[CDS из SEQ ID NO: 38]
GVLYMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLSVAADNTQNGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQVALQKEFAALKEQITYIADNTQFNDKNLLNGNQTINIQTLDSHDST
TVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSAMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 152C-SEQ ID NO: 153Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni[CDS из SEQ ID NO: 39]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
LGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 154C-SEQ ID NO: 155Bacillus thuringiensis, серовар neoleonensis[CDS из SEQ ID NO: 40]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQTKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARENGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTSDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
AIKSIDAALDTIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 156C-SEQ ID NO: 157Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni[CDS из SEQ ID NO: 41]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
RATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 158C-SEQ ID NO: 159Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni[CDS из SEQ ID NO: 42]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
RATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 160C-SEQ ID NO: 161Bacillus thuringiensis, серовар jegathesan[CDS из SEQ ID NO: 43]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTNGNQAALNKEFDALKQQINYISTNTEFNDKKLLDGSNKTIAIQTLD
LGATLNRLDFNVNNLKSQQSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 162C-SEQ ID NO: 163Bacillus cereus, штамм ATCC 10987[CDS из SEQ ID NO: 44]
GVLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMALIRTADSAMNSVSNILLRRDIANQSANGTNTDKNQAALQKEFGELQKQIDYIAGNTQFNDK
DKIDEALKTIADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSASMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 164C-SEQ ID NO: 165Bacillus thuringiensis, серовар monterrey[CDS из SEQ ID NO: 45]
WGFLIMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAALNKEFDALKEQINYISTNTEFNDKKLL
RATLGATLNRLDFNVNNLKSQQSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 166C-SEQ ID NO: 167Bacillus cereus, штамм NC7401[CDS из SEQ ID NO: 46]
WGFFYMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVASNNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAAMQKEFGELKEQIKYIAENTQFNDQHLL
TVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQASSMAAAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 168C-SEQ ID NO: 169Bacillus cereus, штамм NC7401[CDS из SEQ ID NO: 47]
WGFFYMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVASNNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAAMQKEFGELKEQIKYIAENTQFNDQHLL
TVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQASSMAAAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллин (A-тип)N-SEQ ID NO: 170C-SEQ ID NO: 171Bacillus cereus, штамм AH820[CDS из SEQ ID NO: 48]
GVLNMRINTNINSLRTQEYMRQNQAKMSNSMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLNVAANNTQDGMSLIRTADSALGSVSNILLRMRDLANQSANGTNTSDNQAAMQKEFAELQKQITYIADNTQFNDKNLL
IDAALKTVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 172C-SEQ ID NO: 173Bacillus cereus AH187[CDS из SEQ ID NO: 49]
WGFFYMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVASNNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAAMQKEFGELKEQIKYIAENTQFNDQHLL
TVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQASSMAAAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 174C-SEQ ID NO: 175Bacillus cereus[CDS из SEQ ID NO: 50]
WGFFYMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVASNNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAAMQKEFGELKEQIKYIAENTQFNDQHLL
TVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQASSAAAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
Флагеллиновый белок FlaN-SEQ ID NO: 176C-SEQ ID NO: 177Bacillus cereus[CDS из SEQ ID NO: 51]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
LGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 178C-SEQ ID NO: 179Bacillus thuringiensis,штамм HD-771[CDS из SEQ ID NO: 52]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQTKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRSREGGLNVAARNTEDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSASETNTSKNQAAMQKEFDQLKEQIQYI
RATLGATLNRLDFNVTNLKSQENSMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 180C-SEQ ID NO: 181Bacillus thuringiensis, серовар sotto[CDS из SEQ ID NO: 53]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQTKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRSREGGLNVAARNTEDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDLANQSASETNTSKNQAAMQKEFDQLKEQIQYI
RATLGATLNRLDFNVTNLKSQENSMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 182C-SEQ ID NO: 183Bacillus thuringiensis, серовар Novosibirsk[CSD из SEQ ID NO: 54]
MGVLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSTAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDKNQGALDKEFAALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
AIKAIDEALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKNQASSMASAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 184C-SEQ ID NO: 185Bacillus thuringiensis, серовар Londrina[CDS из SEQ ID NO: 55]
MGVLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTSENQAALDKEFGALKEQINYISTNTEFNDKKLL
AIDSALENIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 186C-SEQ ID NO: 187Bacillus cereus, штамм E33L[CDS из SEQ ID NO: 56]
MGVLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSTAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDKNQGALDKEFAALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
LGATLNRLDFNVNNLKNQASSMASAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 188C-SEQ ID NO: 189Bacillus cereus, штамм E33L[CDS из SEQ ID NO: 57]
MGVLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSTAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDKNQGALDKEFAALKEQIDYISKNTEFNDKKLL
ATLNRLDFNVNNLKNQASSMASAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 190C-SEQ ID NO: 191Bacillus cereus,штамм FRI-35[CDS из SEQ ID NO: 58]
WGFFYMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSTAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGISLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTDKNQAALDKEFNALKEQIDYISKNTEFNDKKL
AIAAIDAALTKVADNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQASSMASAASQVEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 192C-SEQ ID NO: 193Bacillus cereus,штамм FRI-35[CDS из SEQ ID NO: 59]
WGFFYMRIGTNVLSLNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNNASDNPANIAIVTRMHARASGMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVTNVLQRMRDLAVQSANGTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQIGYIDETTEFNN
AIRKIEEALQNVSLHRADLGAMINRLQFNIENLNSQSTALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQVPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 194C-SEQ ID NO: 195Bacillus thuringiensis[CDS из SEQ ID NO: 60]
LVPFAVWLAMSRIRRRILDTDCKAESAVRIKEIPSDVLRAATERPLSCARIRVAIARPAASSEALLIRLPLDKRSIALLILAWFWRMYSCVRMLLMFVLILMLRTP
MAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILSEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 196C-SEQ ID NO: 197Bacillus cereus, штамм ATCC 4342[CDS из SEQ ID NO: 61]
AVWLAMSRIRRRILDTDCKAESAVRIKEIPSDVLRAATERPLSCARIRVAIARPAASSEALLIRLPLDKRSIALLILAWFWRMYSCVRMLLMFVLILMLRTP
SMAASASQIEDADMAKEMSEMTKFKILSEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 198C-SEQ ID NO: 199Bacillus thuringiensis[CDS из SEQ ID NO: 62]
GFLNMRIGTNFLSMNARQSLYENEKRMNVAMEHLATGKKLNHASDNPANIAIVTRMHARANGMRVAIRNNEDAISMLRTAEAALQTVMNILQRMRDLAIQSANSTNSNKNRDSLNKEFQSLTEQISYI
LGAMINRLHFNIENLNSQSMALTDAASRIEDADMAQEMSDFLKFKLLTEVALSMVSQANQIPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 200C-SEQ ID NO: 201Bacillus thuringiensis[CDS из SEQ ID NO: 63]
GFLNMRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSALNSVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKALDKEFSALKEQIDYI
LGATLNRLDFNVNNLKSQSSSMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 202C-SEQ ID NO: 203Bacillus aryabhattai[CDS из SEQ ID NO: 64]
MRINHNITALNTYRQFNNANNAQAKSMEKLSSGQRINSASDDAAGLAISEKMRGQIRGLDQASRNAQDGVSLIQTAEGALNETHDILQRMRELVVQAGNGTNKTEDLDAIQDEIGSLIEEIGGETDSKGISDRAQFNGRNLLDGSLDITLQVGA
IDGAINQVSEQRSGLGATQNRLDHTINNLSTSSENLTASESRIRDVDYALAA
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 204C-SEQ ID NO: 205Bacillus manliponensis[CDS из SEQ ID NO: 65]
MRINTNINSMRTQEYMRQNQDKMNTSMNRLSSGKQINSASDDAAGLAIATRMRAKEGGLNVGAKNTQDGMSALRTMDSALNSVSNILLRMRDLATQSATGTNQGNDRESLDLEFQQLTEEITHIAEKTNFNGNALLSGSGSAINVQLS
IDQAIQDIADNRATYGSQLNRLDHNLNNVNSQATNMAAAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILSEAGVSMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 206C-SEQ ID NO: 207Lysinibacillus sp., штамм BF-4[CDS из SEQ ID NO: 66]
MRIGSWTATGMSIVNHMNRNWNAASKSMLRLSSGYRINSAADDAAGLAISEKMRGQIRGLTMASKNIMDGVSLIQTAEGALNETHAIVQRMRELAVQAATDTNTDDDRAKLDLEFQELKKEIDRISTDTEFNTRTLLNGDYKDNGLKIQVG
LDEATKNVSMERSRLGAYQNRLEHAYNVAENTAINLQDAESRIRDVDIAKEMMNMVKSQILAQVGQQVLAMHMQQAQGILRLLG
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 208C-SEQ ID NO: 209Lysinibacillus sp., штамм 13S34_air[CDS из SEQ ID NO: 67]
MKIGSWTATGMSIVNHMNRNWNAASKSMLRLSSGYRINSAADDAAGLAISEKMRGQIRGLTMASKNIMDGVSLIQTAEGALNETHAIVQRMRELAVQAATDTNTDDDRAKLDLEFQELKKEIDRISTDTAFNTRTLLNGDYKDNGLKIQVG
LDEATKNVSMERSRLGAYQNRLEHAYNVAENTAINLQDAESRIRDVDIAKEMMHMVKSQILAQVGQQVLAMHIQQAQGILRLLG
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 210C-SEQ ID NO: 211Paenibacillus sp., штамм HW567[CDS из SEQ ID NO: 68]
MIISHNLTALNTMNKLKQKDLAVSKSLGKLSSGLRINGASDDAAGLAISEKMRGQIRGLNQASRNIQDGISLIQVADGAMQEIHSMLQRMNELAVQASNGTYSGSDRLNIQSEVEQLIEEIDEIAGNTGFNGIKLLNGNNEKTEKTEK
ISAAIDKVSAERARMGAYQNRLEHSRNNVVTYAENLTAAESRIRDVDMAKEMMELMKNQIFTQAGQAMLLQTNTQPQAILQLLK
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 212C-SEQ ID NO: 213Bacillus anthracis[CDS из SEQ ID NO: 69]
MRINTNINSMRTQEYMRQNQAKMSNAMDRLSSGKRINNASDDAAGLAIATRMRARESGLGVAANNTQDGMSLIRTADSAMNSVSNILLRMRDLANQSANGTNTKENQDALDKEFGALKEQIDYISKNTEFNDKKLLNGDNKSIAIQTL
IDSALETIASNRATLGATLNRLDFNVNNLKSQSSAMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 214C-SEQ ID NO: 215Bacillus anthracis[CDS из SEQ ID NO: 70]
MQKSQYKKMGVLKMRINTNINSMRTQEYMRQNQDKMNVSMNRLSSGKRINSAADDAAGLAIATRMRARQSGLEKASQNTQDGMSLIRTAESAMNSVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSALQKEFAELQEQIDYIAKNTEFNDKNLLAGTGAVTIGSTSISGAEISIETL
ALNTVAGNRATLGATLNRLDRNVENLNNQATNMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 216C-SEQ ID NO: 217Bacillus anthracis[CDS из SEQ ID NO: 71]
MRINTNINSMRTQEYMRQNQDKMNVSMNRLSSGKRINSAADDAAGLAIATRMRARQSGLEKASQNTQDGMSLIRTAESAMNSVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSALQKEFAELQEQIDYIAKNTEFNDKNLLAGTGAVTIGSTSISGAEISIETL
ALNTVAGNRATLGATLNRLDRNVENLNNQATNMASAASQIKDADKAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 218C-SEQ ID NO: 219Bacillus anthracis[CDS из SEQ ID NO: 72]
MRINTNINSMRTQEYMRQNQDKMNVSMNRLSSGKRINSAADDAAGLAIATRMRARQSGLEKASQNTQDGMSLIRTAESAMNSVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSALQKEFAELQEQIDYIAKNTEFNDKNLLAGTGAVTIGSTSISGAEISIETL
ALNTVAGNRATLGATLNRLDRNVENLNNQATNMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMV
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 220C-SEQ ID NO: 221Bacillus anthracis штамм H9401[CDS из SEQ ID NO: 73]
MNVSMNRLSSGKRINSAADDAAGLAIATRMRARQSGLEKASQNTQDGMSLIRTAESAMNSVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSALQKEFAELQEQIDYIAKNTEFNDKNLLAGTGAVTIGSTSISGAEISIETL
LNTALNTVAGNRATLGATLNRLDRNVENLNNQATNMASAASQIEDADMAKEMSEMTKFKILNEAGISMLSQANQTPQMVSKLLQ
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 222C-SEQ ID NO: 223Bacillus megaterium, штамм WSH-002[CDS из SEQ ID NO: 74]
MRINHNITALNTYRQFNNANNAQAKSMEKLSSGQRINSASDDAAGLAISEKMRGQIRGLDQASRNAQDGVSLIQTAEGALNETHDILQRMRELVVQAGNGTNKTEDLDAIQDEIGSLIEEIGGEADSKGISDRAQFNGRNLLDGSLDITLQVGA
IIDGAINQVSEQRSGLGATQNRLDHTINNLSTSSENLTASESRIRDVDYALAA
ФлагеллинN-SEQ ID NO: 224C-SEQ ID NO: 225Aneurinibacillus sp.XH2[CDS из SEQ ID NO: 75]
MRINHNLPALNAYRNLAQNQIGTSKILERLSSGYRINRASDDAAGLAISEKMRGQIRGLEQGQRNTMDGVSLIQTAEGALQEIHEMLQRMRELAVQAANGTYSDKDKKAIEDEINQLTAQIDQIAKTTEFNGIQLIGDSDSTSLQDVK
FKAAIDQVSRIRSYFGAIQNRLEHVVNNLSNYTENLTGAESRIRDADMAKEMTEFTRFNIINQSATAMLAQANQLPQGVLQLLKG
[0088] Последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида может содержать любую из SEQ ID NO: 226-300 или любую их комбинацию.
[0089] Последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида может содержать SEQ ID NO: 226.
[0090] Последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида может содержать любую из SEQ ID NO: 301-375 или любую их комбинацию.
[0091] Последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида может содержать SEQ ID NO: 301.
[0092] Происходящую из флагеллина последовательность полипептида Bt4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) идентифицировали в собственной библиотеке «для внутреннего использования» для Bacillus thuringiensis (Bt.), штамм 4Q7. Консервативные праймеры к полноразмерному флагеллину из E.coli использовали для скрининга библиотеки для штамма Bt.4Q7 и идентифицировали функциональный флагеллин-ассоциированный биоактивный примирующий полипептид Flg22.
Таблица 3. Идентифицированные флагеллиновые полипептиды Flg22 и FlgII-28 из Bacillus spp.
SEQ ID NO:
Пептид Flg22
Flg22-Bt.4Q7SEQ ID NO: 226Bacillus thuringiensis,штамм 4Q7
DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 227Bacillus thuringiensis, штаммHD1002
DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 228Bacillus thuringiensis, штаммHD-789
DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 229Bacillus cereus,штамм G9842
DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 230Bacillus thuringiensis, серовар indiana,штамм HD521
EHLATGKKLNNASDNPANIAIV
Flg22SEQ ID NO: 231Bacillus thuringiensis, штамм CTC
drlssgkrinnasddaaglaiat
Flg22SEQ ID NO: 232Bacillusthuringiensisсеровар yunnanensis, штамм IEBC-T20001
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 233Bacillus thuringiensis, серовар tolworthi
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 234Bacillus cereus, штамм FM1
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 235Bacillus cereus, штамм FM1
EHLATGKKLNHASDNPANVAIV
Flg22SEQ ID NO: 236Bacillus thuringiensis, штамм MC28
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 237Bacillus bombysepticusштамм Wang
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 238Bacillus thuringiensis, серовар kenyae
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 239Bacillus thuringiensis, серовар kenyae
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 240Bacillus cereus
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 241Bacillus cereus
EHLATGKKLNNASDNPANIAIV
Flg22SEQ ID NO: 242Bacillus thuringiensis, серовар finitimusштамм YBT-020
EHLATGKKLNHASDNPANVAIV
Flg22SEQ ID NO: 243Bacillus thuringiensis, серовар finitimusштамм YBT-020
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 244Bacillus cereus, штамм B4264
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 245Bacillus thuringiensis, серовар nigeriensis
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 246Bacillus thuringiensis
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 247Bacillus thuringiensis, серовар konkukianштамм 97-27
EHFATGKKLNHASDNPANVAIV
Flg22SEQ ID NO: 248Bacillus thuringiensis, серовар konkukianштамм 97-27
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 249Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056
EHLATGKKLNHASDNPANIVIV
Flg22SEQ ID NO: 250Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 251Bacillus thuringiensis,штамм Bt407
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 252Bacillus thuringiensis, серовар chinensis CT-43
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 253Bacillus thuringiensis, серовар canadensis
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 254Bacillus thuringiensis, серовар galleriae
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 255Bacillus weihenstephanensis
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 256Bacillus thuringiensis, серовар ostriniae
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 257Bacillus thuringiensis
EHLATGKKLNHASDNPANVAIV
Flg22SEQ ID NO: 258Bacillus thuringiensis
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 259Bacillus thuringiensis, серовар pondicheriensis
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 260Bacillus thuringiensis, серовар Berliner
EHLATGKKLNHASDNPANIVIV
Flg22SEQ ID NO: 261Bacillus thuringiensis, серовар Berliner
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 262Bacillus cereus, штамм Q1
EHLATGKKLNHASNNPANVAIV
Flg22SEQ ID NO: 263Bacillus cereus, штамм Q1
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 264Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
EHLATGKKLNHASDNPANIAIV
Flg22SEQ ID NO: 265Bacillus thuringiensis, серовар neoleonensis
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 266Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 267Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 268Bacillus thuringiensis, серовар jegathesan
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 269Bacillus cereus, штамм ATCC 10987
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22 из флагеллина ASEQ ID NO: 270Bacillus thuringiensis, серовар monterrey
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 271Bacillus cereus, штамм NC7401
EHLATGKKLNNASDNPANIAIV
Flg22SEQ ID NO: 272Bacillus cereus, штамм NC7401
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 273Bacillus cereus, штамм AH820
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 274Bacillus cereus AH187
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 275Bacillus cereus
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 276Bacillus cereus
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 277Bacillus thuringiensisШтамм HD-771 [51]
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 278Bacillus thuringiensis, серовар sotto [52]
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 279Bacillus thuringiensis, серовар Novosibirsk
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 280Bacillus thuringiensis, серовар londrina
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 281Bacillus cereus, штамм E33L
EHLATGKKLNHASNNPANIAIV
Flg22SEQ ID NO: 282Bacillus cereus, штамм E33L
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 283Bacillus cereus,штамм FRI-35
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 284Bacillus cereus, штамм FRI-35
EHLATGKKLNNASDNPANIAIV
Flg22SEQ ID NO: 285Bacillus thuringiensis
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 286Bacillus cereus, штамм ATCC 4342
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 287Bacillus thuringiensis
EHLATGKKLNHASDNPANIAIV
Flg22SEQ ID NO: 288Bacillus thuringiensis
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 289Bacillus aryabhattai
EKLSSGQRINSASDDAAGLAIS
Flg22SEQ ID NO: 290Bacillus manliponensis
NRLSSGKQINSASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 291Lysinibacillus sp.штамм BF-4
LRLSSGYRINSAADDAAGLAIS
Flg22SEQ ID NO: 292Lysinibacillus sp.штамм 13S34_air
LRLSSGYRINSAADDAAGLAIS
Flg22SEQ ID NO: 293Paenibacillus sp., штамм HW567
GKLSSGLRINGASDDAAGLAIS
Flg22SEQ ID NO: 294Bacillus anthracis
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 295Bacillus anthracis
NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 296Bacillus anthracis
NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 297Bacillus anthracis
NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 298Bacillus anthracis, штамм H9401
NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA
Flg22SEQ ID NO: 299Bacillus megaterium, штамм WSH-002
EKLSSGQRINSASDDAAGLAIS
Flg22SEQ ID NO: 300Aneurinibacillus sp.XH2
ERLSSGYRINRASDDAAGLAIS
SEQ ID NO:
Пептид Flg15
Flg15-Bt4Q7SEQ ID NO: 752Модифицированный FLG15-Bt4Q7; Syn01Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7
RINSAKDDAAGLAIA
SEQ ID NO:
Пептид FglI-28
FlgII-28-Bt.4Q7SEQ ID NO: 301Bacillus thuringiensis,штамм 4Q7
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQAS
FlgII-28SEQ ID NO: 302Bacillus thuringiensis, штаммHD1002
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQAS
FlgII-28SEQ ID NO: 303Bacillus thuringiensis, штаммHD-789
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQAS
FlgII-28SEQ ID NO: 304Bacillus cereus,штамм G9842
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTKGNQAS
FlgII-28SEQ ID NO: 305Bacillus thuringiensis, серовар indiana,штамм HD521
TVTNILQRMRDLAVQSANGTNSNKNRHS
FlgII-28SEQ ID NO: 306Bacillus thuringiensis, штамм CTC
svsnillrmrdianqsanItntnenksa
FlgII-28SEQ ID NO: 307BacillusThuringiensis,серовар yunnanensis, штамм IEBC-T20001
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 308Bacillus thuringiensis, серовар tolworthi
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDENKAA
FlgII-28SEQ ID NO: 309Bacillus cereus, штамм FM1
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQVA
FlgII-28SEQ ID NO: 310Bacillus cereus, штамм FM1
TVTNILQRMRDVAVQSANGTNSNKNRDS
FlgII-28SEQ ID NO: 311Bacillus thuringiensis, штамм MC28
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTADNQQA
FlgII-28SEQ ID NO: 312Bacillus bombysepticus, штамм Wang
SVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 313Bacillus thuringiensis, серовар kenyae
SVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 314Bacillus thuringiensis, серовар kenyae
SVSNILLRMRDLANQSASGTNTDKNQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 315Bacillus cereus
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTGDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 316Bacillus cereus
TNILQRMRDLAVQSANGTNSNKNRDSLN
FlgII-28SEQ ID NO: 317Bacillus thuringiensis, серовар finitimus,штамм YBT-020
TNVLQRMRDVAVQSANGTNLNKNRDSLN
FlgII-28SEQ ID NO: 318Bacillus thuringiensis, серовар finitimus,штамм YBT-020
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTDSNKSA
FlgII-28SEQ ID NO: 319Bacillus cereus, штамм B4264
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTAENKAA
FlgII-28SEQ ID NO: 320Bacillus thuringiensis, серовар nigeriensis
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTSDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 321Bacillus thuringiensis
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTADNQQA
FlgII-28SEQ ID NO: 322Bacillus thuringiensis, серовар konkukian,штамм 97-27
TVMNILQRMRDLAVQSANGTNSNKNRDS
FlgII-28SEQ ID NO: 323Bacillus thuringiensis, серовар konkukian,штамм 97-27
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTADNQQA
FlgII-28SEQ ID NO: 324Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056
TVTNILQHMRDFAIQSANGTNSNTNRDS
FlgII-28SEQ ID NO: 325Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056
SVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSA
FlgII-28SEQ ID NO: 326Bacillus thuringiensis,штамм Bt407
SVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSA
FlgII-28SEQ ID NO: 327Bacillus thuringiensis, серовар chinensis CT-43
SVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSA
FlgII-28SEQ ID NO: 328Bacillus thuringiensis, серовар canadensis
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 329Bacillus thuringiensis, серовар galleriae
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 330Bacillus weihenstephanensis
SVSNILLRMRDLSNQSANGTNTDENQQA
FlgII-28SEQ ID NO: 331Bacillus thuringiensis, серовар ostriniae
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 332Bacillus thuringiensis
TVANILQRMRDLAVQSSNDTNSNKNRDS
FlgII-28SEQ ID NO: 333Bacillus thuringiensis
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 334Bacillus thuringiensis, серовар pondicheriensis
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 335Bacillus thuringiensis, серовар Berliner
TVTNILQHMRDFAIQSANGTNSNTNRDS
FlgII-28SEQ ID NO: 336Bacillus thuringiensis, серовар Berliner
SVSNILLRMRDISNQSANGTNTDKNQSA
FlgII-28SEQ ID NO: 337Bacillus cereus, штамм Q1
TVTNVLQRMRDVAVQSANGTNSSKNRDS
FlgII-28SEQ ID NO: 338Bacillus cereus, штамм Q1
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQVA
FlgII-28SEQ ID NO: 339Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
TVMNILQRMRDLAIQSANSTNSNKNRDS
FlgII-28SEQ ID NO: 340Bacillus thuringiensis, серовар neoleonensis
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTSDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 341Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 342Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 343Bacillus thuringiensis, серовар jegathesan
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTNGNQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 344Bacillus cereus, штамм ATCC 10987
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTDKNQAA
FlgII-28 из флагеллина ASEQ ID NO: 345Bacillus thuringiensis, серовар monterrey
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 346Bacillus cereus, штамм NC7401
TVTNVLQRMRDLAVQSANDTNSNKNRDS
FlgII-28SEQ ID NO: 347Bacillus cereus, штамм NC7401
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAA
FlgII-28SEQ ID NO: 348Bacillus cereus, штамм AH820
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTSDNQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 349Bacillus cereus AH187
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAA
FlgII-28SEQ ID NO: 350Bacillus cereus
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTNENKAA
FlgII-28SEQ ID NO: 351Bacillus cereus
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 352Bacillus thuringiensis,штамм HD-771 [51]
SVSNILLRMRDLANQSASETNTSKNQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 353Bacillus thuringiensis, серовар sotto [52]
SVSNILLRMRDLANQSASETNTSKNQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 354Bacillus thuringiensis, серовар Novosibirsk
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 355Bacillus thuringiensis, серовар londrina
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTSENQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 356Bacillus cereus, штамм E33L
TVTNILQRMRDLAVQSANVTNSNKNRNS
FlgII-28SEQ ID NO: 357Bacillus cereus, штамм E33L
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDKNQGA
FlgII-28SEQ ID NO: 358Bacillus cereus,штамм FRI-35
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTDKNQAA
FlgII-28SEQ ID NO: 359Bacillus cereus, штамм FRI-35
TVTNVLQRMRDLAVQSANGTNSNKNRDS
FlgII-28SEQ ID NO: 360Bacillus thuringiensis
SVSNILLRMRDIANQTANGTNKDTDIEA
FlgII-28SEQ ID NO: 361Bacillus cereus, штамм ATCC 4342
SVSNILLRMRDIANQTANGTNKDTDIEA
FlgII-28SEQ ID NO: 362Bacillus thuringiensis
TVMNILQRMRDLAIQSANSTNSNKNRDS
FlgII-28SEQ ID NO: 363Bacillus thuringiensis
SVSNILLRMRDIANQSANGTNTGDNQKA
FlgII-28SEQ ID NO: 364Bacillus aryabhattai
ETHDILQRMRELVVQAGNGTNKTEDLDA
FlgII-28SEQ ID NO: 365Bacillus manliponensis
SVSNILLRMRDLATQSATGTNQGNDRES
FlgII-28SEQ ID NO: 366Lysinibacillus sp., штамм BF-4
ETHAIVQRMRELAVQAATDTNTDDDRAK
FlgII-28SEQ ID NO: 367Lysinibacillus sp., штамм 13S34_air
ETHAIVQRMRELAVQAATDTNTDDDRAK
FlgII-28SEQ ID NO: 368Paenibacillus sp., штамм HW567
EIHSMLQRMNELAVQASNGTYSGSDRLN
FlgII-28SEQ ID NO: 369Bacillus anthracis
SVSNILLRMRDLANQSANGTNTKENQDA
FlgII-28SEQ ID NO: 370Bacillus anthracis
SVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSA
FlgII-28SEQ ID NO: 371Bacillus anthracis
SVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSA
FlgII-28SEQ ID NO: 372Bacillus anthracis
SVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSA
FlgII-28SEQ ID NO: 373Bacillus anthracis, штамм H9401
SVSNILTRMRDIAVQSSNGTNTAENQSA
FlgII-28SEQ ID NO: 374Bacillus megaterium, штамм WSH-002
ETHDILQRMRELVVQAGNGTNKTEDLDA
FlgII-28SEQ ID NO: 375Aneurinibacillus sp.XH2
EIHEMLQRMRELAVQAANGTYSDKDKKA
Ретро-инверсные флагеллин-ассоциированные полипептиды
[0093] Биоактивный полипептид или полипептиды Flg, подходящие для примирования, могут быть получены в не встречающейся в природе изомерной или ретро-инверсной (RI) форме.
[0094] Ретро-инверсные полипептиды Flg могут демонстрировать улучшенную аффинность связывания белка или белков FLS-рецептора. Растительные флагеллиновые рецепторы, такие как FLS2, способны распознавать фрагмент ретро-инверсного полипептида Flg, такого как Flg22 или FlgII-28, локализованный в N-концевом консервативном домене флагеллина. Ретро-инверсные формы указанных полипептидов Flg предложены в виде биологически активных форм, способных распознавать и взаимодействовать с Flg-ассоциированным или FLS- рецепторным белком на поверхности мембраны растительных клеток.
[0095] Ретро-инверсные полипептиды Flg могут обладать повышенной активностью и стабильностью к протеолитическому разложению на поверхности мембраны растения. Например, ретро-инверсные формы полипептидов Bacillus Flg22 или FlgII-28 могут повышать активность и стабильность полипептида или полипептидов Flg и повышать защиту от протеолитического разложения на поверхности растения или на поверхности корней. Указанные ретро-инверсные формы также демонстрируют улучшенную стабильность при применении в полевых условиях, или на почве, или в почве.
[0096] Ретро-инверсные полипептиды представляют собой топологические зеркально-симметричные формы природной структуры исходного полипептида. Ретро-инверсные синтетические формы последовательностей полипептидов образуются при изменении направления вращения последовательностей полипептидов и при использовании полностью D-ретропептидов или ретро-энантио-пептидов. Полипептид или полипептиды Flg, содержащие полностью D-аминокислотную цепь, принимают форму, представляющую собой «зеркальное отображение» трехмерной структуры соответствующего L-пептида или цепи L-аминокислот.
[0097] Это дополнительно осуществляют путем ретро-инверсного изменения любого из исходных полипептидов Flg, происходящих из Bacillus или других эубактерий в таблице 3. Сконструированные ретро-инверсные полипептиды для Flg22 (RI Flg22: SEQ ID NO: 376-450) и FlgII-28 (RI-FlgII-28: SEQ ID NO: 451-525) представлены в таблице 4. Ретро-инверсные формы Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) и EcFlg15 (SEQ ID NO: 529), представленные в таблице 5, были также созданы из происходящих из E.coli последовательностей.
[0098] Указанный полипептид может включать ретро-инверсный полипептид Flg22.
[0099] Указанный полипептид может включать ретро-инверсный полипептид FlgII-28.
[0100] Любой из флагеллин-ассоциированных биоактивных примирующих полипептидов, содержащихся в Bacillus, или другие полипептиды Flg22 или FlgII-28 эубактерий из таблицы 3 могут применяться в ретро-инверсных формах (указанных в таблице 4).
[0101] Ретро-инверсные формы биоактивных примирующих полипептидов Flg согласно настоящему документу могут быть представлены любой из трех форм, где инверсия хиральности аминокислот включает нормальную полностью D-форму (инверсная), полностью L-форму (ретро) и/или полностью D-ретроформу (ретро-инверсную), или комбинацией указанных форм для достижения требуемых фенотипов у растения.
[0102] Происходящие из Bacillus полипептиды L-Flg22 и L-FlgII-28 в таблице 3 и природные полипептиды E.c. L-Flg22 и L-Flg15 в таблице 5 были получены синтетически путем ретро-инверсного конструирования с образованием ретро-инверсного полипептида D-Flg22 (SEQ ID NO: 376-450), D-FlgII-28 (SEQ ID NO: 451-525) и полипептида E.c. D-Flg22 (SEQ ID NO: 527, 529).
[0103] Инверсию хиральности аминокислот (из полностью L в полностью D) для Bt.4Q7 Flg22 (SEQ ID NO: 376), предложенного в виде небольшого линейного полипептидного фрагмента, которая называется ретро-инверсной модификацией, обеспечивали путем обращения направления полипептидного остова, описанного ниже.
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
D
(AIALGAADDSASNIRKGSSLRD)
[0104] Ретро-инверсный полипептид Flg22 с полностью D-аминокислотной цепью принимает структуру, «зеркальную» относительно трехмерной структуры родственного природного полипептида L-Bt.4Q7 Flg 22, и указанная полностью L-цепь представляет собой эквивалентное зеркальное отображение полностью D-полипептида Bt.4Q7 Flg22. Все остатки L-аминокислот заменяют на их D-энантиомеры, что приводит к получению полностью D-пептидов или ретроизомеров полностью D-пептидов, содержащих амидные связи. Природную L-аминокислотную форму цепи полипептида Bt.4Q7 Flg22 обращают с получением синтетической ретро-инверсной полностью D-конформации путем замены всех остатков L-аминокислот соответствующими D-энантиомерами.
[0105] На фиг. 1 приведена диаграмма, изображающая природный (полностью L) Bt.4Q7 Flg22 и его ретро-инверсный вариант или зеркальное отображение, образующий полностью D-энантиомерный полипептид Bt.4Q7 Flg22. Ретро-инверсный полипептид Flg, соответствующий Bt.4Q7 Flg22 (SEQ ID NO: 226), указан как SEQ ID NO: 376.
[0106] В случае коротких полипептидов, таких как Flg22, Flg15 и FlgII-28, зеркальное отображение положений боковых цепей при конформационном изменении с конверсией из состояния L в D приводит к зеркально-симметричным трансформациям также и боковых цепей.
[0107] Полностью D-ретро-аналоги, как было обнаружено, обладают биологической активностью (Guptasarma, “Reversal of peptide backbone direction may result in mirroring of protein structure, FEBS Letters 310: 205-210, 1992). Ретро-инверсный D-Flg-полипептид или полипептиды могут допускать топологию боковых цепей в растянутой конформации, аналогичную соответствующей последовательности природного L-Flg-полипептида, имитируя, таким образом, биологическую активность исходной природной L-молекулы, но будучи при этом полностью устойчивыми к протеолитическому разложению, с увеличением таким образом стабильности при контакте полипептида с растением или окружающей средой.
[0108] Ретро-инверсные биоактивные примирующие полипептиды Flg описаны в таблице 4 или таблице 5. Ретро-инверсные Flg-ассоциированные биоактивные примирующие полипептиды, представленные в таблице 4, были выбраны за усиленную активность и стабильность, а также способность переносить варьирующие условия и окружающую среду. Благодаря их D-энантиомерной природе они более устойчивы к протеолитическому разложению и могут переносить более жесткие условия окружающей среды и существовать в таких условиях.
Таблица 4. Ретро-инверсные флагеллиновые полипептиды Flg22 и FlgII-28 из Bacillus
SEQ ID NO:
Пептид Flg22
RI Bt.4Q7Flg22SEQ ID NO: 376Bacillus thuringiensis,штамм 4Q7
AIALGAADDSASNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 377Bacillus thuringiensis, штаммHD1002
AIALGAADDSASNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 378Bacillus thuringiensis, штаммHD-789
AIALGAADDASNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 379Bacillus cereus,штамм G9842
AIALGAADDSASNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 380Bacillus thuringiensis, серовар indiana,штамм HD521
VIANAPNDSANNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 381Bacillus thuringiensis, штамм CTC
TAIAGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 382Bacillus thuringiensis,серовар yunnanensis, штамм IEBC-T20001
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 383Bacillus thuringiensis, серовар tolworthi
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 384Bacillus cereus, штамм FM1
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 385Bacillus cereus, штамм FM1
VIAVNAPNDSAHNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 386Bacillus thuringiensis, штамм MC28
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 387Bacillus bombysepticus,штамм Wang
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 388Bacillus thuringiensis, серовар kenyae
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 389Bacillus thuringiensis, серовар kenyae
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 390Bacillus cereus
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 391Bacillus cereus
VIAINAPNDASNNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 392Bacillus thuringiensis, серовар finitimus,штамм YBT-020
VIANAPNDSAHNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 393Bacillus thuringiensis, серовар finitimus,штамм YBT-020
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 394Bacillus cereus, штамм B4264
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 395Bacillus thuringiensis, серовар nigeriensis
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 396Bacillus thuringiensis
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 397Bacillus thuringiensis, серовар konkukian,штамм 97-27
VIANAPNDSAHNLKKGTAFHE
RI Flg22SEQ ID NO: 398Bacillus thuringiensis, серовар konkukian,штамм 97-27
AIALGAADDSANNRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 399Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056
VIVINAPNDSAHNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 400Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 401Bacillus thuringiensisштамм Bt407
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 402Bacillus thuringiensis, серовар chinensis CT-43
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 403Bacillus thuringiensis, серовар canadensis
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 404Bacillus thuringiensis, серовар galleriae
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 405Bacillus weihenstephanensis
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 406Bacillus thuringiensis, серовар ostriniae
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 407Bacillus thuringiensis
VIANAPNDSAHNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 408Bacillus thuringiensis
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 409Bacillus thuringiensis, серовар pondicheriensis
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 410Bacillus thuringiensis, серовар Berliner
VIVINAPNDASHNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 411Bacillus thuringiensis, серовар Berliner
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 412Bacillus cereus, штамм Q1
VIAVANPNNSAHNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 413Bacillus cereus, штамм Q1
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 414Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
VIANAPNDSAHNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 415Bacillus thuringiensis, серовар neoleonensis
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 416Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 417Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 418Bacillus thuringiensis, серовар jegathesan
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 419Bacillus cereus, штамм ATCC 10987
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22 из флагеллина ASEQ ID NO: 420Bacillus thuringiensis, серовар monterrey
AIALGAADDASNNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 421Bacillus cereus, штамм NC7401
VIANAPNDSANNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 422Bacillus cereus, штамм NC7401
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 423Bacillus cereus, штамм AH820
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 424Bacillus cereus AH187
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 425Bacillus cereus
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 426Bacillus cereus
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 427Bacillus thuringiensis, штамм HD-771 [51]
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 428Bacillus thuringiensis, серовар sotto [52]
AIALGAADDANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 429Bacillus thuringiensis, серовар Novosibirsk
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 430Bacillus thuringiensis, серовар londrina
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 431Bacillus cereus, штамм E33L
VIAINAPNNSAHNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 432Bacillus cereus, штамм E33L
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 433Bacillus cereus, штамм FRI-35
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 434Bacillus cereus, штамм FRI-35
VIAINAPNDSANNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 435Bacillus thuringiensis
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 436Bacillus cereus, штамм ATCC 4342
AIALGAADDANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 437Bacillus thuringiensis
VIANAPNDSAHNLKKGTALHE
RI Flg22SEQ ID NO: 438Bacillus thuringiensis
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 439Bacillus aryabhattai
SIALGAADDSASNIRQGSSLKE
RI Flg22SEQ ID NO: 440Bacillus manliponensis
AIALGAADDSASNIQKGSSLRN
RI Flg22SEQ ID NO: 441Lysinibacillus sp., штамм BF-4
SIALGAADDAASNIRYGSSLRL
RI Flg22SEQ ID NO: 442Lysinibacillus sp., штамм 13S34_air
SIALGAADDAASNIRYGSSLRL
RI Flg22SEQ ID NO: 443Paenibacillus sp., штамм HW567
SIAGLAADDSAGNIRLGSSLKG
RI Flg22SEQ ID NO: 444Bacillus anthracis
AIALGAADDSANNIRKGSSLRD
RI Flg22SEQ ID NO: 445Bacillus anthracis
AIALGAADDAASNIRKGSSLRN
RI Flg22SEQ ID NO: 446Bacillus anthracis
AIALGAADDAASNIRKGSSLRN
RI Flg22SEQ ID NO: 447Bacillus anthracis
AIALGAADDAASNIRKGSSLRN
RI Flg22SEQ ID NO: 448Bacillus anthracis, штамм H9401
AIALGAADDAASNIRKGSSLRN
RI Flg22SEQ ID NO: 449Bacillus megaterium, штамм WSH-002
SIALGAADDSASNIRQGSSLKE
RI Flg22SEQ ID NO: 450Aneurinibacillus sp.XH2
SIALGAADDSARNIRYGSSLRE
SEQ ID NO:
Пептид Flg15
RI Flg15-Bt4Q7SEQ ID NO: 767Модифицированный FLG15-Bt4Q7; Syn01Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7
AIALGAADDKASNIR
SEQ ID NO:
Пептид FlgII-28
RI FlgII-28-Bt.4Q7SEQ ID NO: 451Bacillus thuringiensisштамм 4Q7
SAQNGKTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 452Bacillus thuringiensis, штаммHD1002
SAQNGKTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 453Bacillus thuringiensis, штаммHD-789
SAQNGKTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 454Bacillus cereus, штамм G9842
SAQNGKTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 455Bacillus thuringiensis, серовар indiana, штамм HD521
SHRNKNSNTGNASQVALDRMRQLINTVT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 456Bacillus thuringiensis, штамм CTC
ASKNENTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 457Bacillus thuringiensis, серовар yunnanensis, штамм IEBC-T20001
AKQNDDTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 458Bacillus thuringiensis, серовар tolworthi
AAKNEDTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 459Bacillus cereus, штамм FM1
LAVQNKDTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 460Bacillus cereus, штамм FM1
SDRNKNSNTGNASQVAVDRMRQLINTVT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 461Bacillus thuringiensis, штамм MC28
AQQNDATNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 462Bacillus bombysepticus, штамм Wang
AAQNKDTNTGSASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 463Bacillus thuringiensis, серовар kenyae
AAQNKDTNTGSASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 464Bacillus thuringiensis, серовар kenyae
AAQNKDTNTGSASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 465Bacillus cereus
AKQNDGTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 466Bacillus cereus
NLSDRNKNSNTGNASQVALDRMRQLINT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 467Bacillus thuringiensis, серовар finitimus,штамм YBT-020
NLSDRNKNLNTGNASQVAVDRMRQLVNT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 468Bacillus thuringiensis, серовар finitimus,штамм YBT-020
ASKNSDTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 469Bacillus cereus, штамм B4264
AAKNEATNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 470Bacillus thuringiensis, серовар nigeriensis
AKQNDSTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 471Bacillus thuringiensis
AQQNDATNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 472Bacillus thuringiensis, серовар konkukian,штамм 97-27
SDRNKNSNTGNASQVALDRMRQLINMVT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 473Bacillus thuringiensis, серовар konkukian,штамм 97-27
AQQNDATNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 474Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056
SDRNTNSNTGNASQIAFDRMHQLINTVT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 475Bacillus thuringiensis, серовар thuringiensis, штамм IS5056
ASQNKDTNTGNASQNSIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 476Bacillus thuringiensis, штамм Bt407
ASQNKDTNTGNASQNSIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 477Bacillus thuringiensis, серовар chinensis CT-43
ASQNKDTNTGNASQNSISRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 478Bacillus thuringiensis, серовар canadensis
AAQNENTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 479Bacillus thuringiensis, серовар galleriae
AQQNEDTNTGNASQNSLDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 480Bacillus weihenstephanensis
AQQNEDTNTGNASQNSLDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 481Bacillus thuringiensis, серовар ostriniae
AKQNDGTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 482Bacillus thuringiensis
SDRNKNSNTDNSSQVALDRMRQLINAVT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 483Bacillus thuringiensis
AKQNDDTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 484Bacillus thuringiensis, серовар pondicheriensis
AKQNDDTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 485Bacillus thuringiensis, серовар Berliner
SDRNTNSNTGNASQIAFDRMHQLINTVT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 486Bacillus thuringiensis, серовар Berliner
ASQNKDTNTGNASQNSIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 487Bacillus cereus, штамм Q1
SDRNKSSNTGNASQVAVDRMRQLVNTVT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 488Bacillus cereus, штамм Q1
AVQKDTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 489Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
SDRNKNSNTSNASQIALDRMRQLINMVT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 490Bacillus thuringiensis, серовар neoleonensis
AKQNDSTNIGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 491Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
AKQNDGTNTFNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 492Bacillus thuringiensis, серовар morrisoni
AKQNDGTNTFNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 493Bacillus thuringiensis, серовар jegathesan
AAQNGNTNTFNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 494Bacillus cereus, штамм ATCC 10987
AAQNKDTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28 из флагеллина ASEQ ID NO: 495Bacillus thuringiensis, серовар monterrey
AAQNENTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 496Bacillus cereus, штамм NC7401
SDRNKNSNTDNASQVALDRMRQLVNTVT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 497Bacillus cereus, штамм NC7401
AAKNENTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 498Bacillus cereus, штамм AH820
AAQNDSTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 499Bacillus cereus AH187
AAKNENTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 500Bacillus cereus
AAKNENTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 501Bacillus cereus
AKQNDGTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 502Bacillus thuringiensis, штамм HD-771 [51]
AAQNKSTNTESASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 503Bacillus thuringiensis, серовар sotto [52]
AAQNKSTNTESASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 504Bacillus thuringiensis, серовар Novosibirsk
AKQNDGTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 505Bacillus thuringiensis, серовар londrina
AAQNESTNTGNAQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 506Bacillus cereus, штамм E33L
SNRNKNSNTVNASQVALDRMRQLINTVT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 507Bacillus cereus, штамм E33L
AGQNKDTNTNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 508Bacillus cereus, штамм FRI-35
AAQNKDTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 509Bacillus cereus, штамм FRI-35
SDRNKNSNTGNASQVALDRMRQLVNTVT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 510Bacillus thuringiensis
AEIDTDKNTGNATQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 511Bacillus cereus, штамм ATCC 4342
AEIDTDKNTGNATQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 512Bacillus thuringiensis
SDRNKNSNTSNASQIALDRMRQLINMT
RI FlgII-28SEQ ID NO: 513Bacillus thuringiensis
AKQNDGTNTGNASQNAIDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 514Bacillus aryabhattai
ADLDETKNTGNGAQVVLERMRQLIDHTE
RI FlgII-28SEQ ID NO: 515Bacillus manliponensis
SERDNGQNTGTAQTALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 516Lysinibacillus sp., штамм BF-4
KARDDDTNTDTAAQVALERMRQVIAHTE
RI FlgII-28SEQ ID NO: 517Lysinibacillus sp., штамм 13S34_air
KARDDDTNTDTAAQVALERMRQVIAHTE
RI FlgII-28SEQ ID NO: 518Paenibacillus sp., штамм HW567
NLRDSGSYTGNSAQVALENMRQLMSHIE
RI FlgII-28SEQ ID NO: 519Bacillus anthracis
ADQNEKTNTGNASQNALDRMRLLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 520Bacillus anthracis
ASQNEATNTGNSSQVAIDRMRTLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 521Bacillus anthracis
ASQNEATNTGNSSQVAIDRMRTLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 522Bacillus anthracis
ASQNEATNTGNSSQVAIDRMRTLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 523Bacillus anthracis, штамм H9401
ASQNEATNTGNSSQVIADRMRTLINSVS
RI FlgII-28SEQ ID NO: 524Bacillus megaterium, штамм WSH-002
ADLDETKNTGNGAQVVLERMRQLIDHTE
RI FlgII-28SEQ ID NO: 525Aneurinibacillus sp.XH2
AKKDKSYTGNAAQVALERMRQLMEHIE
Последовательности Flg из различных организмов
Таблица 5. Флагеллин-ассоциированные полипептиды Flg22 и Flg15 из других организмов
SEQ ID NO:
Пептид - аминокислоты
Флагеллин (Flg22)SEQ ID NO: 526Escherichia coli
ERLSSGLRINSAKDDAAGQAIA
Флагеллин (Ретро-инверсный Flg22)SEQ ID NO: 527Escherichia coli
AIAQGAADDKASNIRLGSSLRE
Флагеллин (Flg15)SEQ ID NO: 528Escherichia coli
RINSAKDDAAGQAIA
Флагеллин (Ретро-инверсный Flg15)SEQ ID NO: 529Escherichia coli
AIAQGAADDKASNIR
Флагеллин (Flg22)SEQ ID NO: 530Pseudomonas aeruginosa
QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA
Флагеллин (Ретро-инверсный Flg22)SEQ ID NO: 531Pseudomonas aeruginosa
AIQLGAADDKASNIRSGTSLRQ
Флагеллин (Flg22)SEQ ID NO: 532Xanthomonas spp.X. campestris и X. citri
QRLSSGLRINSAKDDAAGLAIS
Флагеллин (Ретро-инверсный Flg22)SEQ ID NO: 533Xanthomonas spp.X. campestris и X. citri
SIALGAADDKASNIRLGSSLRQ
Флагеллин (Flg22)SEQ ID NO: 534Erwinia amylovora
QRLSSGLRINSAKDDAAGQAIS
Флагеллин (Ретро-инверсный Flg22)SEQ ID NO: 535Erwinia amylovora
SIAQGAADDKASNIRLGSSLRQ
Флагеллин (Flg22)SEQ ID NO: 536Burkholderia phytofirmans
TRLSSGKRINSAADDAAGLAIS
Флагеллин (Ретро-инверсный Flg22)SEQ ID NO: 537Burkholderia phytofirmans
SIALGAADDAASNIRKGSSLRT
Флагеллин (Flg22)SEQ ID NO: 538Burkholderia ubonensis
NRLSSGKRINTAADDAAGLAIS
Флагеллин (Ретро-инверсный Flg22)SEQ ID NO: 539Burkholderia ubonensis
SIALGAADDAATNIRKGSSLRN
Флагеллин (Flg22)SEQ ID NO: 540Pseudomonas syringae
TRLSSGLKINSAKDDAAGLQIA
Флагеллин (Ретро-инверсный Flg22)SEQ ID NO: 541Pseudomonas syringae
AIQLGAADDKASNIKLGSSLRT
Флагеллин (FlgII-28)(SEQ ID NO: 751)Pseudomonas syringae
ESTNILQRMRELAVQSRNDSNSATDREA
Флагеллин (Ретро-инверсный FlgII-28)(SEQ ID NO: 768)Pseudomonas syringae
AERDTASNSDNRSQVALERMRQLINTSE
Последовательности, содействующие направлению флагеллинов или флагеллин-ассоциированных полипептидов в растение
[0109] Сигнатурные последовательности, сигнальные якорные сортирующие последовательности и последовательности секреции могут применяться по отдельности или вместе в комбинации с любыми флагеллиновыми или флагеллин-ассоциированными полипептидами согласно описанию в настоящем документе. Указанные вспомогательные последовательности подходят для эффективной доставки флагеллиновых полипептидов на поверхность мембраны растительных клеток. Другие вспомогательные последовательности могут также содействовать транслокации фрагмента полипептида Flg через плазматическую мембрану. Доставка флагеллинов и флагеллин-ассоциированных полипептидов на поверхность плазматической мембраны растения (или части растения) может вносить вклад в последующие сигнальные процессы и приводить к благоприятным исходам для растения или части растения, такие как улучшенное состояние здоровья и повышенная продуктивность растения.
[0110] Указанный полипептид может дополнительно содержать вспомогательный полипептид.
[0111] Указанный вспомогательный полипептид может содержать сигнатурный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного сигнатурного полипептида могут содержать любую из SEQ ID NO: 542-548, приведенных в таблице 6, или любую их комбинацию. Например, последовательность аминокислот указанного сигнатурного полипептида может содержать SEQ ID NO: 542.
[0112] Указанный вспомогательный полипептид может содержать сигнальный якорный сортирующий полипептид, и последовательность аминокислот указанного сигнального якорного сортирующего полипептида может содержать любую из SEQ ID NO: 549-562, приведенных в таблице 7, или любую их комбинацию. Например, последовательность аминокислот указанного сигнального якорного сортирующего полипептида может содержать SEQ ID NO: 549.
[0113] Указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид может быть получен рекомбинантным способом с применением микроорганизма. Например, указанный микроорганизм может включать Bacillus, Pseudomonas, Paenibacillus, Aneurinibacillus или Lysinibacillus.
[0114] Указанный вспомогательный полипептид может содержать полипептид секреции, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида секреции может содержать любую из SEQ ID NO: 563-570, или любую их комбинацию. Например, последовательность аминокислот указанного полипептида секреции может содержать SEQ ID NO: 563.
[0115] Указанные три типа вспомогательных последовательностей дополнительно описаны в таблице 6 (N-концевые сигнатурные последовательности), таблице 7 (сигнальные якорные сортирующие последовательности) и таблице 8 (последовательности секреции).
[0116] Также предложены «вспомогательные» последовательности, содержащие консервативные сигнатурные (таблица 6; SEQ ID NO: 542-548), сигнальные якорные сортирующие последовательности (таблица 7; SEQ ID NO: 549-562) и последовательности секреции (таблица 8; SEQ ID NO: 563-570) в комбинации с любыми из флагеллин-ассоциированных полипептидов согласно описанию в настоящем документе. В частности, подходящими являются комбинации вспомогательных сигнатурных, сигнальных якорных сортирующих последовательностей и последовательностей секреции с природными L-полипептидами Flg (таблица 3. SEQ ID NO: 226-375) или любыми из ретро-инверсных полипептидов Flg22 (таблица 4. SEQ ID NO: 376-525) для обеспечения эффективной доставки полипептидов Flg на внеклеточную поверхность растительной мембраны, например, на поверхность растения или части растения.
N-концевые сигнатурные последовательности
[0117] «Сигнатурные» последовательности аминокислот, консервативные у бактерий (родов) Bacillus, Lysinibacillus, Paenibacillus или Aneurinibacillus, и других эубактериальных родов может участвовать в нацеливании флагеллиновых полипептидов на подходящий белок или белки Flg-ассоциированных рецепторов, таких как FLS-рецепторы, содержащие экспонированный на поверхности мембраны растительных клеток сайт связывания, и могут применяться для улучшения связывания полипептида Flg и рецептора, обеспечивая повышенный потенциал активации Flg-ассоциированного рецептора или рецепторов. Флагеллиновые сигнатурные последовательности, идентифицированные в таблице 6, подходят для нацеливания и стабильной доставки полипептидов Flg для связывания с FLS или FLS-подобным(и) рецептором (рецепторами), увеличивая таким образом контакт и связывание между мембранным рецептором и полипептидом Flg.
[0118] Консервативные N-концевые сигнатурные последовательности (SEQ ID NO: 542-548) могут применяться в комбинации с любыми из флагеллин-ассоциированных полипептидов согласно описанию в настоящем документе. В частности, для применения подходят сигнатурные последовательности в комбинации с природными L-полипептидами Flg (L-Flg22 SEQ ID NO: 226-300; L-FlgII-28 SEQ ID NO: 301-375) или любыми из ретро-инверсных D-полипептидов Flg (D-Flg22 SEQ ID NO: 376-450; FlgII-28 SEQ ID NO: 451-525) или любыми другими Flg-ассоциированными последовательностями, приведенными в таблице 5 (SEQ ID NO: 526-541) для обеспечения эффективной доставки Flg-ассоциированных полипептидов на поверхность растительной мембраны.
[0119] Сигнатурные последовательности способствуют связыванию биоактивных примирующих последовательностей полипептидов Flg22 и FlgII-28 с подходящим Flg-ассоциированным рецептором или рецепторами для активации рецептора или рецепторов, делая его (их) функционально активным(и).
Таблица 6. Флагеллин-ассоциированные N-концевые сигнатурные последовательности
SEQ ID NO:
Флагеллиновые сигнатурные последовательности
SEQ ID NO: 542
GFLN
SEQ ID NO: 543
WGFLI
SEQ ID NO: 544
MGVLN
SEQ ID NO: 545
GVLN
SEQ ID NO: 546
WGFFY
SEQ ID NO: 547
LVPFAVWLA
SEQ ID NO: 548
AVWLA
N-концевые сигнальные якорные сортирующие последовательности
[0120] «Сигнальные якорные сортирующие» последовательности аминокислот, консервативные у родов Bacillus, Lysinibacillus, Aneurinibacillus и Paenibacillus и других эубактериальных родов бактерий, могут участвовать в заякоривании и локализации флагеллин-ассоциированных полипептидов на поверхности мембраны растительных клеток и способствовать высокоаффинному связыванию с подходящим(и) Flg-ассоциированным(и) рецептором(ами), повышая таким образом потенциал активации связанного рецептора или рецепторов.
[0121] Консервативные сигнальные якорные последовательности (SEQ ID NO: 549-562; таблица 7) локализованы в 3'-направлении относительно предварительно расщепленных или полноразмерных кодирующих или частичных кодирующих последовательностей флагеллина, например, согласно описанию в настоящем документе (SEQ ID NO: 1-75; таблица 1).
[0122] Сигнальные якорные сортирующие домены согласно описанию в настоящем документе подходят для прикрепления к мембране. Они могут применяться для содействия локализации и связыванию Flg-ассоциированных полипептидов с рецептором на поверхности мембраны и имеют некоторое функциональное сходство на уровне аминокислот с эндосомальными (везикулярными), мигрирующими или предназначенными для нацеливания в секреторный путь белками. Такие сигнальные якорные сортирующие последовательности согласно описанию в настоящем документе, подходящие для заякоривания биоактивных примирующих полипептидов Flg на мембране растительных клеток, также применяют для улучшения мембранной интеграции биоактивных примирующих полипептидов Flg в растительной клетке.
[0123] Такие последовательности согласно описанию в таблице 7 могут дополнительно быть функционально аннотированы как сигнальные якорные последовательностей рецептора импорта, которые могут применяться для усовершенствования нацеливания или доставки, эффективного мембранного заякоривания Flg-ассоциированных полипептидов в растении и способствовать мембранной интеграции в цитозоль растительной клетки.
[0124] Комбинирование сигнальных якорных последовательностей (SEQ ID NO: 549-562; таблица 7) с любым из флагеллинов или флагеллин-ассоциированных биоактивных примирующих полипептидов согласно описанию в настоящем документе подходит для облегчения прикрепления и импорта указанного флагеллин-ассоциированного полипептида или полипептидов в растение.
[0125] Такие сигнальные якорные сортирующие последовательности могут применяться в комбинации с Flg-ассоциированными полипептидами, и подходят для нацеливания, эффективного мембранного заякоривания, мембранной интеграции и миграции из Гольджи в лизосомы/вакуолярной миграции. Указанные сигнальные якорные сортирующие последовательности используют для стабильной доставки полипептидов Flg на поверхность растительной мембраны и их интегрального включения в растение.
[0126] Такие последовательности согласно описанию в настоящем документе содержат дилейциновые аминокислоты, которые, как сообщается, придают способность к эндоцитозу в растительных системах (Pond et al. 1995, “A role for acidic residues in di-leucine motif-based targeting to the endocytic pathway”, Journal of Biological Chemistry 270: 19989-19997, 1995).
[0127] Такие описанные сигнальные якорные сортирующие последовательности могут также применяться для эффективной доставки системных сигналов в сайты инфекции и стимуляции врожденного иммунитета растения в растительных клетках.
Таблица 7. Флагеллин-ассоциированные сигнальные якорные сортирующие последовательности
SEQ ID NO:
Сигнальная якорная Последовательность
SEQ ID NO: 549
LLGTADKKIKIQ
SEQ ID NO: 550
LLKSTQEIKIQ
SEQ ID NO: 551
LLNEDSEVKIQ
SEQ ID NO: 552
LGVAANNTQ
SEQ ID NO: 553
LLRMRDLANQ
SEQ ID NO: 554
LQRMRDVAVQ
SEQ ID NO: 555
LLRMRDISNQ
SEQ ID NO: 556
LLRMRDIANQ
SEQ ID NO: 557
LQKQIDYIAGNTQ
SEQ ID NO: 558
LLIRLPLD
SEQ ID NO: 559
QRMRELAVQ
SEQ ID NO: 560
TRMRDIAVQ
SEQ ID NO: 561
TRMRDIAVQ
SEQ ID NO: 562
QRMRELVVQ
C-концевые последовательности секреции
[0128] Консервативные последовательности, локализованные на C-конце флагеллина (флагеллинов), дополнительно описаны как последовательности секреции (SEQ ID NO: 563-570; таблица 8).
[0129] Консервативные последовательности были идентифицированы на C-конце белков, происходящих из флагеллина бактерий Bacillus, Lysinibacillus и Paenibacillus (роды) и других родов эубактерий; они содержат 6 аминокислот, например LGATLN, LGSMIN или LGAMIN. Указанные последовательности были функционально аннотированы с помощью BLAST по бактериальным базам данных как мотивы, максимально гомологичные полипептидам секреции. Было обнаружено, что указанные идентифицированные консервативные полипептиды длиной 6 аминокислот наиболее сходны с обнаруживаемыми в системах секреции III типа у E.coli. Сообщалось, что системы экспорта III типа вовлечены в транслокацию полипептидов через мембрану растительных клеток. Сборка филаментов из флагеллина зависит от доступности подлежащих секреции флагеллинов и может требовать наличия шаперонов для содействия секреторному процессу.
[0130] Указанные полипептиды секреции согласно описанию в настоящем документе могут применяться в комбинации с любыми флагеллин-ассоциированными полипептидами согласно описанию в настоящем документе для доставки указанных полипептидов/пептидов в цитозоль растения-хозяина, обеспечивая таким образом благоприятные для растения исходы.
Таблица 8. C-концевые последовательности секреции флагеллин-ассоциированных полипептидов
SEQ ID NO:
Полипептиды секреции флагеллина
SEQ ID NO: 563
LGATLN
SEQ ID NO: 564
LGATQN
SEQ ID NO: 565
LAQANQ
SEQ ID NO: 566
LGAMIN
SEQ ID NO: 567
LGSMIN
SEQ ID NO: 568
MGAYQN
SEQ ID NO: 569
LGAYQN
SEQ ID NO: 570
YGSQLN
[0131] Сигнатурные последовательности (SEQ ID NO: 542-548; таблица 6), сигнальные якорные сортирующие последовательности (SEQ ID NO: 549-562; таблица 7) и последовательности секреции (SEQ ID NO: 563-570; таблица 8) согласно настоящему изобретению могут применяться с любыми из флагеллиновых полипептидов или флагеллин-ассоциированных полипептидов, чтобы способствовать росту и обеспечивать преимущества для здоровья и защиты растения или части растения.
Модификация функции последовательностей полипептидов Flg
[0132] Любая из Flg-ассоциированных L- или D-последовательностей, приведенных в таблицах 3, 4 или 5, может быть аналогичным образом модифицирована путем слияния с любой из вспомогательных последовательностей согласно описанию в таблице 6-8. В одном примере слияние с любыми из указанных вспомогательных последовательностей обеспечивает модификацию последовательности биоактивного примирующего полипептида Bt.4Q7Flg22, идентифицированной как SEQ ID NO: 226.
Мутации Flg-ассоциированных полипептидов для увеличения отвечаемости на активные формы кислорода или стабильности полипептидов
[0133] Указанный полипептид может содержать мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид.
[0134] Указанный мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид может происходить из бактерии рода Bacillus, Lysinibacillus, Paenibacillus или Aneurinibacillus. Таким же образом могут также применяться другие полипептиды из других классов эубактерий, в том числе Enterobacteraciae. Другие представляющие интерес роды включают Pseudomonas, Escherichia, Xanthomonas, Burkholderia, Erwinia и др.
[0135] Последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида может содержать любую из SEQ ID NO: 226, 289, 290, 291, 293, 294, 295, 300, 437, 532, 534, 536, 538, 540, 571-586 и 751-768. Например, последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида может содержать любую из SEQ ID NO: 226, 293, 295, 300, 540, 571, 574 и 752, или любую их комбинацию.
[0136] Любой биоактивный примирующий полипептид, встречающийся в природе или не встречающийся в природе, может быть дополнительно модифицирован путем химической модификации для увеличения производительности, а также стабильности указанных полипептидов. Такие биоактивные примирующие полипептиды включают флагеллиновые полипептиды, ретро-инверсные полипептиды, происходящие из гарпинов полипептиды, происходящие из гарпиноподобных полипептиды, полипептиды EF-Tu, тиониновые полипептиды, полипептиды RHPP и полипептиды ФСК. Специфические последовательности, которые могут быть химически модифицированы, включают SEQ ID NO: 226-592, 594-601, 603-749 и 751-766.
[0137] Указанные биоактивные примирующие полипептиды могут также быть конъюгированы с другими фрагментами, в том числе связывающимся с растением доменом и полипептидом, связывающимся с частью растения доменом и полипептидом, и другими носителями, такие как масла, пластики, гранулы, керамика, почва, удобрения, пеллеты и большинство конструкционных материалов.
[0138] Указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид может быть химически модифицирован на N- или C-конце. Общие модификации N- и C-концов включают: ацетилирование, добавление липидов, добавление мочевины, добавление пироглутамила, добавление карбамата, добавление сульфонамида, добавление алкиламида, биотинилирование, фосфорилирование, гликозилирование, пегилирование, метилирование, биотинилирование, добавление кислоты, добавление амида, добавление сложного эфира, добавление альдегида, добавление гидразида, добавление гидроксамовой кислоты, добавление хлорметилкетонов или добавление меток очистки. Указанные метки могут повышать активность указанных полипептидов, увеличивать стабильность, придавать указанным полипептидами свойства ингибиторов протеаз, прямо блокировать протеазы, позволяют выполнять отслеживание и помогают связыванию с растительными тканями.
[0139] Указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид может быть модифицирован путем перекрестного связывания или циклизации. При перекрестном связывании полипептиды могут связываться либо между собой, либо с вторичной поверхностью или фрагментом, что способствует доставке или стабильности указанных полипептидов. Может быть выполнена циклизация, например, чтобы одновременно повысить активность указанного полипептида и предотвратить взаимодействие протеаз с указанным полипептидом.
[0140] Модификации или мутации последовательностей могут быть внесены в любую последовательность или последовательности аминокислот согласно описанию в таблицах 4 и 5, с заменой на последовательность любых из 20 стандартных аминокислот, известных в природе, или на последовательность нестандартных или неканонических аминокислот, таких как селеноцистеин, пирролизин, N-формилметионин и т.п.Например, могут быть внесены модификации или мутации во внутренние последовательности, как показано в SEQ ID NO: 571, в C-конец, как показано в SEQ ID NO: 572 или SEQ ID NO: 753, или в N-конец, как показано в SEQ ID NO: 573, с получением полипептидов Flg с усиленной активацией АФК и повышенной функциональностью в растении или части растения. Модифицированные полипептиды также могут быть усеченными по N- или C-концу, как показано в SEQ ID NO: 752 (N-концевое усечение) для дополнительного повышения функциональности в растении или части растения. В таблице 9A приведена обобщенная информация об идентифицированных флагеллиновых полипептидах, которые обеспечивают модифицированную активность АФК.
Таблица 9A. Идентифицированные флагеллиновые полипептиды Flg22 из Bacillus или других бактерий с мутациями, которые обеспечивают модифицированную активность АФК
SEQ ID NO:
Пептид Flg22
Flg22-Bt4Q7SEQ ID NO: 571Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7Модифицированный FLG22-Bt4Q7 (S13K); Syn01
DRLSSGKRINSAKDDAAGLAIA
Flg22-Bt4Q7SEQ ID NO: 572Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7Модифицированный FLG22-Bt4Q7 (A20Q); Syn02
DRLSSGKRINSASDDAAGLQIA
Flg22-Bt4Q7SEQ ID NO: 573Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7Модифицированный FLG22-Bt4Q7 (D1Q); Syn03
QRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Flg22-Bt4Q7SEQ ID NO: 574Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7Модифицированный FLG22-Bt4Q7 (D1N); Syn06
NRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Caballeronia megalochromosomataSEQ ID NO: 575
TRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Flg22-Bt4Q7SEQ ID NO: 576Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7Модифицированный FLG22-Bt4Q7 (K7Y); Syn07
DRLSSGYRINSASDDAAGLAIA
Flg22-Bt4Q7SEQ ID NO: 577Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7Модифицированный FLG22-Bt4Q7 (K7F); Syn08
DRLSSGFRINSASDDAAGLAIA
Flg22-Bt4Q7SEQ ID NO: 578Bacillus thuringiensisМодифицированный FLG22-Bt4Q7 (A16P); Syn05
DRLSSGKRINSASDDPAGLAIA
Flg22-Bt4Q7SEQ ID NO: 579Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7Модифицированный FLG22-Bt4Q7 (K7Q); Syn09
DRLSSGQRINSASDDAAGLAIA
Flg22-Bt4Q7SEQ ID NO: 753Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7Модифицированный FLG22-Bt4Q7 (D15P); Syn04
DRLSSGKRINSASDPAAGLAIA
Flg15-Bt4Q7SEQ ID NO: 752Bacillus thuringiensisУсеченный по N-концу Syn01
RINSAKDDAAGLAIA
Bm.Flg22-B1Bacillus manliponensisSEQ ID NO: 290
NRLSSGKQINSASDDAAGLAIA
Ba.Flg22-B2Bacillus anthracisSEQ ID NO: 295
NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA
Bc.Flg22-B3Bacillus cereusSEQ ID NO:294
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
A. spp.Flg22-B4Aneurinibacillus spp.XH2SEQ ID NO: 300
ERLSSGYRINRASDDAAGLAIS
Ba.Flg22-B5Bacillus aryabhattaiSEQ ID NO: 289
EKLSSGQRINSASDDAAGLAIS
P spp.Flg22-B6Paenibacillus spp., штамм HW567SEQ ID NO: 293
GKLSSGLRINGASDDAAGLAIS
L spp.Flg22-L1Lysinibacillus spp.SEQ ID NO: 291
LRLSSGYRINSAADDAAGLAIS
L spp.Flg22-L2Lysinibacillus spp.SEQ ID NO: 580
EKLSSGLRINRAGDDAAGLAIS
L spp.Flg22-L3Lysinibacillus spp.SEQ ID NO: - 581
EKLSSGYKINRASDDAAGLAIS
L spp.Flg22-L4Lysinibacillus spp.SG9SEQ ID NO: 582
LRISSGYRINSAADDPAGLAIS
Lf.Flg22-L5Lysinibacillus fusiformisSEQ ID NO: 583
LRISTGYRINSAADDPAGLAIS
Lm.Flg22-L6Lysinibacillus macroidesSEQ ID NO: 584
EKLSSGFRINRAGDDAAGLAIS
Lx.Flg22-L6LysinibacillusxylanilyticusSEQ ID NO: 585
EKLSSGYKINRAGDDAAGLAIS
Pa.Flg22Pseudomonas aeruginosaSEQ ID NO: 530
QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA
Ec.Flg22Escherichia coliSEQ ID NO: 586
ERLSSGLRINSAKDDAAGQAIA
Xcc.Flg22Xanthomonas campestris, патовар campestris, штамм 305 или(Xanthomonas citri, патовар citri)SEQ ID NO: 532
QRLSSGLRINSAKDDAAGLAIS
Ea.Flg22Erwinia amylovoraSEQ ID NO: 534
QRLSSGLRINSAKDDAAGQAIS
Bp.Flg22Burkholderia phytofirmans, штамм PsJNSEQ ID NO: 536
TRLSSGKRINSAADDAAGLAIS
Bu.Flg22Burkholderia ubonensisSEQ ID NO: 538
NRLSSGKRINTAADDAAGLAIS
Ps.Flg22Pseudomonas syringae, патовар actinidiae ICMP 19096SEQ ID NO: 540
TRLSSGLKINSAKDDAAGLQIA
Коровый активный домен Flg22
[0141] Подчеркнутые части последовательностей в таблице 9A соответствуют коровому активному домену Flg22. Указанный коровый домен содержит, например, SEQ ID NO: 754 с заменами аминокислот в количестве до одной, двух или трех (представлены SEQ ID NO: 755-765), которые могут способствовать росту, сокращению и/или предотвращению заболеваний в растительных культурах и декоративных растениях. Для упрощения ссылок указанный коровый домен представлен как консенсусная последовательность, содержащая SEQ ID NO: 766. Различные природные и мутантные полипептиды Flg22, содержащие SEQ ID NO: 754-765, описаны наряду с указанной консенсусной последовательностью в таблице 9B ниже. Соответственно, указанные полипептиды могут дополнительно содержать коровую последовательность. Указанная коровая последовательность может содержать любую из SEQ ID NO: 754-766.
[0142] Указанный полипептид может также содержать любой полипептид, содержащий любую из SEQ ID NO: 1-753 или 767-768, отличающийся тем, что он дополнительно содержит коровую последовательность, содержащую любую из SEQ ID NO: 754-766. Включение указанной коровой последовательности в указанный полипептид или полноразмерный белок с другой функцией может увеличивать примирующую биоактивность указанного полипептида.
Таблица 9B Коровая последовательность Flg22 с вариантами.
SEQ ID NO:
Коровая последовательность FLG22
Полипептиды, содержащие коровую последовательность
SEQ ID NO: 754
RINSASDD
SEQ ID NO: 226-229SEQ ID NO: 289SEQ ID NO: 299SEQ ID NO: 536SEQ ID NO: 572-579
SEQ ID NO: 755
RINNASDD
SEQ ID NO: 231-234SEQ ID NO: 236-240SEQ ID NO: 243-246SEQ ID NO: 248SEQ ID NO: 250-256SEQ ID NO: 258-259SEQ ID NO: 261SEQ ID NO: 263SEQ ID NO: 265-270SEQ ID NO: 272-280SEQ ID NO: 282-283SEQ ID NO: 285-286SEQ ID NO: 288SEQ ID NO: 294
SEQ ID NO: 756
QINSASDD
SEQ ID NO: 290
SEQ ID NO: 757
RINSAADD
SEQ ID NO: 291-292SEQ ID NO: 295-298SEQ ID NO: 582-583SEQ ID NO: 536SEQ ID NO: 582-583
SEQ ID NO: 758
RINGASDD
SEQ ID NO: 293
SEQ ID NO: 759
RINRASDD
SEQ ID NO: 300
SEQ ID NO: 760
RINSAKDD
SEQ ID NO: 526SEQ ID NO: 528SEQ ID NO: 530SEQ ID NO: 532SEQ ID NO: 534SEQ ID NO: 571SEQ ID NO: 586
SEQ ID NO: 761
RINTAADD
SEQ ID NO: 538
SEQ ID NO: 762
KINSAKDD
SEQ ID NO: 540
SEQ ID NO: 763
RINRAGDD
SEQ ID NO: 580SEQ ID NO: 584
SEQ ID NO: 764
KINRASDD
SEQ ID NO: 581
SEQ ID NO: 765
KINRAGDD
SEQ ID NO: 585
SEQ ID NO: 766
(R/Q/K)IN(S/N/G/R/T)A(S/A/K/G)DD
Консенсусная последовательность для SEQ ID NO: 755-765 (последовательности, идентифицированные в указанной таблице)
Гарпин или Гарпиноподобный полипептиды
[0143] Указанный полипептид может включать гарпин или гарпиноподобный полипептид.
[0144] Последовательность аминокислот указанного гарпина или гарпиноподобного полипептида может содержать SEQ ID NO: 587-592 и 594-597 (таблицы 10 и 11),
[0145] Указанные гарпины или гарпиноподобные полипептиды могут происходить из вида Xanthomonas или разнообразных родов бактерий, в том числе Pantoea sesami, Erwinia gerudensis, Pantoea sesami или Erwinia gerudensis
[0146] Дополнительные гарпиноподобные биоактивные примирующие полипептиды могут происходить из полноразмерного HpaG-подобного белка из Xanthamonas citri, содержащего SEQ ID NO: 593.
[0147] Применение HpaG-подобных полипептидов с использованием природной формы последовательности L-гарпиноподобной (SEQ ID NO: 587) или ретро-инверсной формы D-гарпиноподобной последовательности (SEQ ID NO: 588) биоактивных примирующих полипептидов, приведенных в таблицах 10 или 11, подходит для улучшения роста и иммунных ответов у растений при экзогенном или эндогенном применении для растения или части растения. Ретро-инверсный HpaG-подобный (например SEQ ID NO: 588) биоактивный примирующий полипептид, в частности, подходит для усиления активности и стабильности HpaG-подобного полипептида при применении для растений, растущих в условиях абиотического стресса или подвергнутых воздействию условий абиотического стресса. Ретро-инверсная форма HpaG-подобного полипептида может применяться для улучшения роста и защитных ответов у растений, растущих в такой среде.
Таблица 10. Гарпиноподобные (HpaG-подобные) полипептиды
SEQ ID NO:
Последовательность аминокислот пептида
Гарпиноподобный (HpaG-подобный)SEQ ID NO: 587Вид XanthomonasMW 2626,35 Да
NQGISEKQLDQLLTQLIMALLQQ
Гарпиноподобный (Ретро-инверсный HpaG-подобный)SEQ ID NO: 588Вид XanthomonasMW 2626,35 Да
QQLLAMILQTLLQDLQKESIGQN
Гарпиноподобный (HpaG-подобный)SEQ ID NO: 589Вид XanthomonasMW 2626,35 Да
LDQLLTQLIMAL
Гарпиноподобный (Ретро-инверсный HpaG-подобный)SEQ ID NO: 590Вид XanthomonasMW 2626,35 Да
LAMILQTLLQDL
Гарпиноподобный (HpaG-подобный)SEQ ID NO: 591Вид XanthomonasMW 2626,35 Да
SEKQLDQLLTQLIMALLQQ
Гарпиноподобный (Ретро-инверсный HpaG-подобный)SEQ ID NO: 592Вид XanthomonasMW 2626,35 Да
QQLLAMILQTLLQDLQKES
HpaG-подобный белокSEQ ID NO: 593Xanthamonas citri
MMNSLNTQLGANSSFFQVDPSQNTQSGSNQGNQGISEKQLDQLLTQLIMALLQQSNNAEQGQGQGQGGDSGGQGGNRQQAGQSNGSPSQYTQMLMNIVGDILQAQNGGGFGGGFGGGFGGGLGTSLGTSLGTSLASDTGSMQ
Таблица 11. HpaG-подобные гомологи из разнообразных родов бактерий
SEQ ID NO:
Последовательность аминокислот пептида
Активная фракция гомолога HpaGSEQ ID NO: 594Pantoea sesami
QLEQLMTQLRARLCRLMAM
Активная фракция гомолога HpaGSEQ ID NO: 595Erwinia gerudensis
QLEQLMTQLRARLKRLMAM
Активная фракция ретро-инверсного гомолога HpaGSEQ ID NO: 596Pantoea sesami
MAMLRCLRARLQTMLQELQ
Активная фракция ретро-инверсного гомолога HpaGSEQ ID NO: 597Erwinia gerudensis
MAMLRKLRARLQTMLQELQ
Фитосульфокиновые (ФСК-α) полипептиды
[0148] Указанный полипептид может содержать полипептид ФСК.
[0149] Последовательность аминокислот указанного полипептида ФСК может содержать SEQ ID NO: 598-599.
[0150] Фитосульфокин-альфа (ФСК-α) был впервые получен из Arabidopsis thaliana и представляет собой сульфонированный биоактивный примирующий полипептид. Биоактивный примирующий полипептид или полипептиды ФСК-α приведены в таблице 11.
[0151] ФСК-α представлен либо в виде синтетического полипептида, либо в виде природного полипептида, экспрессируемого в рекомбинантном микроорганизме, очищенного и используемого в сельскохозяйственных составах для применения для растений или частей растений.
Таблица 12. Фитосульфокин-альфа (ФСК-α), сульфонированные биоактивные примирующие полипептиды, представленные в виде природной и ретро-инверсной последовательности аминокислот
SEQ ID NO:
Аминокислоты последовательности пептида
Фитосульфокин (ФСК-α)SEQ ID NO: 598Arabidopsis thalianaMW 845 Да
Tyr(SO<sub>3</sub>H)-I-Tyr(SO<sub>3</sub>H)-TQ
Фитосульфокин (Ретро-инверсный ФСК-α)SEQ ID NO: 599Arabidopsis thalianaMW 845 Да
QT-Tyr(SO<sub>3</sub>H)-I-Tyr(SO<sub>3</sub>H)
Полипептид-стимулятор корневых колосков (RHPP)
[0152] Указанный полипептид может содержать RHPP
[0153] Последовательность аминокислот указанного RHPP может содержать SEQ ID NO: 600-601 и 603-606. Например, последовательность аминокислот указанного RHPP может содержать SEQ ID NO: 600.
[0154] Также предложена комбинация указанного полипептида, содержащего RHPP, и полипептида, содержащего флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид. Указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид может содержать любую из SEQ ID NO: 226, 752 и 571. В некоторых случаях указанный полипептид содержит RHPP, содержащий SEQ ID NO: 600, и флагеллин, содержащий SEQ ID NO: 226.
[0155] Указанный полипептид может содержать полипептид ФСК, RHPP, гарпин или гарпиноподобный полипептид, или их комбинацию.
[0156] Дополнительные биоактивные примирующие полипептиды RHPP могут происходить из полноразмерного белка-ингибитора трипсина Кунитца из Glycine max, содержащего SEQ ID NO: 602. Указанный полипептид RHPP может быть модифицирован посредством C-концевого амидирования, N-концевого ацетилирования или другой модификации. Указанный биоактивный примирующий полипептид RHPP может быть получен путем добавления неочищенного протеазного гидролизата ингибитора трипсина Кунитца и/или соевого шрота.
[0157] Исходно полученный RHPP для сои (Glycine max) может быть представлен, например, в виде средства для внекорневого внесения для получения благоприятных фенотипов у кукурузы, сои и других растительных культур.
Таблица 13. Последовательность аминокислот прямых и ретро-инверсных последовательностей RHPP
SEQ ID NO:
Аминокислоты последовательности пептида
Пептид-стимулятор корневых колосков (RHPP)SEQ ID NO: 600Glycine maxMW 1198,20 Да
GGIRAAPTGNER
Пептид-стимулятор корневых колосков (Ретро-инверсный RHPP)SEQ ID NO: 601Glycine maxMW 1198,20 Да
RENGTPAARIGG
Ингибитор трипсина КунитцаSEQ ID NO: 602Glycine max
MKSTIFFALFLFCAFTTSYLPSAIADFVLDNEGNPLENGGTYYILSDITAFGGIRAAPTGNERCPLTVVQSRNELDKGIETIISSPYRIRFIAEGHPLSLKFDSFAVIMLCVGIPTEWSVVEDLPEGPAVKIGENKDAMDGWFRLERVSDDEFNNYKLVFCPQQAEDDKCGDIGISIDHDDGTRRLVVSKNKPLVVQFQKLDKESLAKKNHGLSRSE
Таблица 14. Гомологи RHPP из Glycine spp.
SEQ ID NO:
Аминокислоты последовательности пептида
Гомолог RHPPSEQ ID NO: 603Glycine max
GGIRATPTENER
Гомолог RHPPSEQ ID NO: 604Glycine max/Glycine soja
GGIRVAATGKER
[0158] Указанный полипептид может включать ретро-инверсный (RI) RHPP.
[0159] Указанный ретро-инверсный RHPP может содержать SEQ ID NO: 601, 605 или 606.
[0160] Указанный ретро-инверсный (RI) RHPP может быть модифицирован посредством C-концевого амидирования или N-концевого ацетилирования.
Таблица 15. Ретро-инверсные последовательности аминокислот гомологов RHPP из Glycine spp.
SEQ ID NO:
Аминокислоты последовательности пептида
Гомолог RHPPSEQ ID NO: 605Glycine max
RENETPTARIGG
Гомолог RHPPSEQ ID NO: 606Glycine max/Glycine soja
REKGTAAVRIGG
Полипептиды-факторы элонгации Tu (EF-Tu)
[0161] Указанный полипептид может содержать полипептид EF-Tu.
[0162] Пептиды, происходящие из фактора элонгации Tu (EF-Tu), могут применяться по отдельности или в комбинации с другими биоактивными примирующими полипептидами согласно описанию в настоящем документе, например, в комбинации с полипептидами Flg22 для обеспечения нескольких режимов защиты от патогенных организмов, как правило, бактериальных и относящихся к грибам микроорганизмов, но также и других инфекционных агентов, таких как вирусы.
[0163] В таблице 16 приведены предпочтительные N-концевые полипептиды происходящие из различных биоактивных примирующих полипептидов EF-Tu, выбранных из полипептидов EF-Tu как растений, так и бактерий. Указанные происходящие из EF-Tu полипептиды могут иметь любую длину от 18 до 26 аминокислот, или менее 26 аминокислот.В таблице 17 также приведены ретро-инверсные (полностью D-) варианты полипептидов EF-Tu, происходящих из бактерий и водорослей.
[0164] Последовательность аминокислот указанного полипептида EF-Tu может содержать любую из SEQ ID NO: 607-640.
[0165] Последовательность аминокислот указанного полипептида EF-Tu может содержать SEQ ID NO: 616 или 617.
[0166] Полипептид EF-Tu может быть модифицирован посредством N-концевого ацетилирования. Например, указанный полипептид EF-Tu может быть модифицирован путем N-концевого ацетилирования и содержать любые из SEQ ID NO: 607, 608, 610, 611, 613, 614, 616, 617, 619 или 622.
Таблица 16. N-концевые ацетилированные и центральные полипептиды, происходящие из факторов элонгации (EF-Tu), существующих у видов растений, бактерий и водорослей
SEQ ID NO:
Длина последовательности аминокислот
Последовательность аминокислот пептида
EF-Tu хлоропластовSEQ ID NO: 607 (ацетилированный)Arabidopsis lyrata
18
Ac-ARGKFERKKPHVNIGTIG
EF-Tu хлоропластовSEQ ID NO: 608 (ацетилированный)Arabidopsis lyrata
26
Ac-ARGKFERKKPHVNIGTIGHVDHGKTT
EF-Tu хлоропластовSEQ ID NO: 609Arabidopsis lyrata
50
EKPNVKRGENKWVDKIYELMDSVDSYIPIPTRQTELPFLLAVEDVFSITG
N-конец EF-TuSEQ ID NO: 610 (ацетилированный)Euglena gracilis
18
Ac-ARQKFERTKPHINIGTIG
N-конец EF-TuSEQ ID NO: 611 (ацетилированный)Euglena gracilis
26
Ac-ARQKFERTKPHINIGTIGHVDHGKTT
EF-Tu фрагментSEQ ID NO: 612Euglena gracilis
50
KNPKITKGENKWVDKILNLMDQVDSYIPTPTRDTEKDFLMAIEDVLSITG
N-конец EF-TuSEQ ID NO: 613 (ацетилированный)Acidovorax avenae
18
Ac-AKGKFERTKPHVNVGTIG
N-конец EF-TuSEQ ID NO: 614 (ацетилированный)Acidovorax avenae
26
Ac-AKGKFERTKPHVNVGTIGHVDHGKTT
EF-Tu фрагментSEQ ID NO: 615Acidovorax spp.
50
KLALEGDKGPLGEQAIDKLAEALDTYIPTPERAVDGAFLMPVEDVFSISG
N-конец EF-TuSEQ ID NO: 616 (ацетилированный)Bacillus cereus
18
Ac-AKAKFERSKPHVNIGTIG
N-конец EF-TuSEQ ID NO: 617 (ацетилированный)Bacillus cereus
26
Ac-AKAKFERSKPHVNIGTIGHVDHGKTT
Фрагмент EF-TuSEQ ID NO:618Bacillus cereus
50
SALKALQGEAEWEEKIIELMAEVDAYIPTPERETDKPFLMPIEDVFSITG
N-конец EF-TuSEQ ID NO: 619 (ацетилированный)Burkholderia spp.
26
Ac-AKGKFERTKPHVNVGTIGHVDHGKTT
Фрагмент EF-TuSEQ ID NO: 620Burkholderia spp.
50
KLALEGDTGELGEVAIMNLADALDTYIPTPERAVDGAFLMPVEDVFSISG
Фрагмент EF-TuSEQ ID NO: 621Xanthomonas campestris
50
RLALDGDQSEIGVPAILKLVDALDTFIPEPTRDVDRPFLMPVEDVFSISG
N-конец EF-TuSEQ ID NO: 622 (ацетилированный)Pseudomonas spp.
26
Ac-AKEKFERSKPHVNVGTIGHVDHGKTT
EF-TuSEQ ID NO: 623Pseudomonas spp.
50
MALEGKDDNEMGTTAVKKLVETLDSYIPEPERAIDKPFLMPIEDVFSISG
Таблица 17. Ретро-инверсные полипептиды, происходящие из факторов элонгации (EF-Tu), существующих у видов бактерий и водорослей
SEQ ID NO:
Длина последовательности аминокислот
Последовательность аминокислот пептида
RI EF-Tu хлоропластовSEQ ID NO: 624Arabidopsis lyrata
18
GITGINVHPKKREFKGRA
RI EF-Tu хлоропластовSEQ ID NO: 625Arabidopsis lyrata
26
TTKGHDVHGITGINVHPKKREFKGRA
RI EF-Tu хлоропластовSEQ ID NO: 626Arabidopsis lyrata
50
GTISFVDEVALLFPLETQRTPIPIYSDVSDMLEYIKDVWKNEGRKVNPKE
RI N-конец EF-TuSEQ ID NO: 627Euglena gracilis
18
GITGINIHPKTREFKQRA
RI N-конец EF-TuSEQ ID NO: 628Euglena gracilis
26
TTKGHDVHGITGINIHPKTREFKQRA
Фрагмент RI EF-TuSEQ ID NO: 629Euglena gracilis
50
GTISLVDEIAMLFDKETDRTPTPIYSDVQDMLNLIKDVWKNEGKTIKPNK
RI N-конец EF-TuSEQ ID NO: 630Acidovorax avenae
18
GITGVNVHPKTREFKGKA
RI N-конец EF-TuSEQ ID NO: 631Acidovorax avenae
26
TTKGHDVHGITGVNVHPKTREFKGKA
Фрагмент RI EF-TuSEQ ID NO: 632Acidovorax spp.
50
GSISFVDEVPMLFAGDVAREPTPIYTDLAEALKDIAQEGLPGKDGELALK
RI N-конец EF-TuSEQ ID NO: 633Bacillus cereus
18
GITGINVHPKSREFKAKA
RI N-конец EF-TuSEQ ID NO: 634Bacillus cereus
26
TTKGHDVHGITGINVHPKSREFKAKA
Фрагмент RI EF-TuSEQ ID NO:635Bacillus cereus
50
GITSFVDEIPMLFPKDTEREPTPIYADVEAMLEIIKEEWEAEGQLAKLAS
RI N-конец EF-TuSEQ ID NO: 636Burkholderia spp.
26
TTKGHDVHGITGVNVHPKTREFKGKA
Фрагмент RI EF-TuSEQ ID NO: 637Burkholderia spp.
50
GSISFVDEVPMLFAGDVAREPTPIYTDLADALNMIAVEGLEGTDGELALK
Фрагмент RI EF-TuSEQ ID NO: 638Xanthomonas campestris
50
GSISFVDEVPMLFPRDVDRTPEPIFTDLADVLKLIAPVGIESQDGDLALR
RI N-конец EF-TuSEQ ID NO: 639Pseudomonas spp.
26
TTKGHDVHGITGVNVHPKSREFKEKA
RI EF-TuSEQ ID NO: 640Pseudomonas spp.
50
GSISFVDEIPMLFPKDIAREPEPIYSDLTEVLKKVATTGMENDDKGELAM
Тионины и нацеливающие тионины полипептиды
[0167] Указанный полипептид может содержать тионин или тиониноподобный полипептид.
[0168] Указанный тионин или тиониноподобный полипептид может быть слит с нацеливающей на флоэму последовательностью с образованием слитого полипептида, при этом последовательность аминокислот указанной нацеливающей на флоэму последовательности содержит любую из SEQ ID NO: 641-649 или любую их комбинацию, для доставки указанного слитого полипептида в сосудистую ткань или сосудистые клетки, и/или во флоэму, или в ассоциированную с флоэмой ткань или ассоциированные с флоэмой клетки в растении или в части растения.
[0169] Последовательность аминокислот указанной нацеливающей на флоэму последовательности может содержать SEQ ID NO: 641.
[0170] Более конкретно, нацеливающие последовательности, подходящие для нацеливания ПМП-полипептидов, таких как тионины или полипептиды Flg, в сосудистые ткани (ксилему и флоэму), могут быть чрезвычайно подходящими для лечения заболеваний, захватывающих ограниченные ткани, вовлеченные в транспорт жидкостей и питательных веществ (например, водорастворимых питательных веществ, сахаров, аминокислот, гормонов и т.п.). Сосудистые ткани, такие как ксилема, транспортируют и сохраняют воду и водорастворимые питательные вещества, а клетки флоэмы транспортируют сахара, белки, аминокислоты, гормоны и другие органические молекулы у растений.
[0171] Предпочтительные нацеливающие на сосудистые ткани/флоэму полипептиды, подходящие для нацеливания тионинов и флагеллин-ассоциированных полипептидов согласно описанию в настоящем документе, приведены в таблице 18.
Таблица 18. Нацеливающие на флоэму полипептиды
SEQ ID NO:
Нацеливающие на сосудистые ткани/флоэму полипептиды
Нацеливающий на флоэму пептид,синтетическийSEQ ID NO: 641
MSTATFVDIIIAILLPPLGVFLRFGCGVEFWICLVLTLLGYIPGIIYAIYVLTK
Индуцируемый вызванным засолением стрессом нацеливающий пептидCitrus clementinaSEQ ID NO: 642
MGSETFLEVILAILLPPVGVFLRYGCGVEFWICLLLTVLGYIPGIIYAIYVLVG
Гипотетический белок CICLECitrus trifoliataSEQ ID NO: 643
MGTATCVDIILAVILPPLGVFLKFGCKAEFWICLLLTILGYIPGIIYAVYVITK
Гипотетический белок CICLECitrus sinensisSEQ ID NO: 644
MADEGTATCIDIILAIILPPLGVFLKFGCKVEFWICLLLTIFGYIPGIIYAVYAITKN
Отвечающий на низкую температуру и засоление белокCitrus sinensisSEQ ID NO: 645
MADGSTATCVDILLAVILPPLGVFLKFGCKAEFWICLLLTILGYIPGIIYAVYAITKK
Гипотетический белок CICLECitrusclementinaSEQ ID NO: 646
FYKQKYQVQITKAVTQNPKHFFNQSSCFLTLNFILFHFTLFKNQSKMADGSTATCVDILLAVILPPLGVFLKFGCKAEFWICLLLTILGYIPGIIYAVYAITKK
Отвечающий на низкую температуру и засоление белокArabidopsis thalianaSEQ ID NO: 647
MSTATFVDIIIAILLPPLGVFLRFGCGVEFWICLVLTLLGYIPGIIYAIYVLTK
Индуцируемый холодом белокCamelina sativaSEQ ID NO: 648
MSTATFVDIIIAVLLPPLGVFLRFGCGVEFWICLVLTLLGYIPGIIYAIYVLTK
Отвечающий на низкую температуру и засоление белокArabidopsis lyrataSEQ ID NO: 649
MGTATCVDIIIAILLPPLGVFLRFGCGVEFWICLVLTLLGYIPGILYALYVLTK
[0172] Синтетический вариант нацеливающего на флоэму полипептида (SEQ ID NO: 641), в частности, подходит для применения при нацеливании противомикробных полипептидов на ситовидные трубки флоэмы и клетки-компаньоны.
[0173] Также предложены противомикробные тиониновые полипептиды (таблица 19), которые используют с нацеливающими на флоэму последовательностями, приведенными в таблице 18 для нацеливания последовательностей тионина в ткани флоэму цитрусовых, а также других растений.
[0174] Последовательность аминокислот указанного тионина или тиониноподобного полипептида может содержать любую из SEQ ID NO: 650-749, например, SEQ ID NO: 651.
Таблица 19. Тионин и тиониноподобные последовательности
SEQ ID NO:
Тионин или тиониноподобные последовательности - аминокислоты
Тиониноподобный белокСинтетическийSEQ ID NO: 650
RTCESQSHRFKGPCSRDSNCATVCLTEGFSGGDCRGFRRRCRCTRPCVFDEK
Тиониноподобный белокCitrus sinensisSEQ ID NO: 651
RVCQSQSHHFHGACFSHHNCAFVCRNEGFSGGKCRGVRRRCFCSKLC
Тиониноподобный белокAvena sativaSEQ ID NO: 652
KSCCKDIMARNCYNVCRIPGTPRPVCATTCRCKIISGNKCPKDYPK
Тиониноподобный белокСинтетическийSEQ ID NO: 653
RTCESQSHRFKGPCSRDSNCATVCLTEGFSGGDCRGFRRRCRCTRPCVFDEK
Тиониноподобный белокCitrus sinensisSEQ ID NO: 654
MDSRSFGLLPLLLLILLTSQMTVLQTEARLCESQSHRFHGTCVRSHNCDLVCRTEGFTGGRCRGFRRRCFCTRIC
Подобный ингибитору протеиназы se60 белокCitrus paradiseSEQ ID NO: 655
MKSFFGIFLLLLILFASQEIMVPAEGRVCQSQSHHFHGACFSHHNCAFVCRNEGFSGGKCRGVRRRCFCSKLC
Предшественник дефензинаCitrus clementinaSEQ ID NO: 656
MKSFFGIFLLLLILFASQMMVPAEGRVCQSQSHHFHGACFSHHNCAFVCRNEGFSGGKCRGARRRCFCSKLC
Предшественник дефензинаCitrus clementinaSEQ ID NO: 657
MKSFFGIFLLLLILFASQEMMVPAEGRVCQSQSHHFHGACFSHHNCAFVCRNEGFSGGKCRGARRRCFCSKLC
Тиониноподобный белокCitrus clementinaSEQ ID NO: 658
MKSFFGIFLLLLILFASQMMVPAEGRVCQSQSHHFHGACFSHHNCAFVCRNEGFSGGKCRGARRRCFCSKLC
Тиониноподобный пептидNicotiana benthamianaSEQ ID NO: 659
MANSMRFFATVLLLALLVMATEMGPMTIAEARTCESQSHRFKGPCSRDSNCATVCLTEGFSGGDCRGFRRRCFCTRPC
Тиониноподобный белокNicotiana sylvestrisSEQ ID NO: 660
MAKSMRFFATVLLLALLVMATEMGPTTIAEARTCESQSHRFKGPCSRDSNCATVCLTEGFSGGDCRGFRRRCFCTRPC
Тиониноподобный белокNicotiana tabaccumSEQ ID NO: 661
MANSMRFFATVLLLTLLVMATEMGPMTIAEARTCESQSHRFKGPCSRDSNCATVCLTEGFSGGDCRGFRRRCFCTRPC
Тиониноподобный белокNicotiana tomentosiformisSEQ ID NO: 662
MANSMRFFATVLLIALLVMATEMGPMTIAEARTCESQSHRFKGPCSRDSNCATVCLTEGFSGGDCRGFRRRCFCTRPC
Тиониноподобный белокNicotiana tabaccumSEQ ID NO: 663
MANSMRFFATVLLIALLVTATEMGPMTIAEARTCESQSHRFKGPCSRDSNCATVCLTEGFSGGDCRGFRRRCFCTRPC
Дефензин класса INicotiana alataSEQ ID NO: 664
MANSMRFFATVLLLTLLFMATEMGPMTIAEARTCESQSHRFKGPCARDSNCATVCLTEGFSGGDCRGFRRRCFCTRPC
Тионин листьевAvena sativaSEQ ID NO: 665
MGSIKGLKSVVICVLVLGIVLEQVQVEGKSCCKDIMARNCYNVCRIPGTPRPVCATTCRCKIISGNKCPKDYPKLHGDPD
Тионин листьевAvena sativaSEQ ID NO: 666
MGSIKGLKSVVICVLVLGIVLEHVQVEGKSCCKDTTARNCYNVCRIPGTPRPVCATTCRCKIISGNKCPKDYPKLHGDLD
Тионин класса ITulipa gesnerianaSEQ ID NO: 667
LGLVVAQTQVDAKSCCPSTAARNCYNVCRFPGTPRPVCAATCGCKIITGTKCPPDYPKLGWSTFQNSDVADKALDVVDEALHVAKEVMKEAVERCNNACSEVCTKGSYAVTA
Тиониноподобный белок класса IVitis viniferaSEQ ID NO: 668
MERKSLGFFFFLLLILLASQEMVVPSEARVCESQSHKFEGACMGDHNCALVCRNEGFSGGKCKGLRRRCFCTKLC
Тиониноподобный белок класса IVitis viniferaSEQ ID NO: 669
MERKSLGFFFFLLLILLASQMVVPSEARVCESQSHKFEGACMGDHNCALVCRNEGFSGGKCKGLRRRCFCTKLC
Дефензин Ec-AMP-D1Citrus sinensisSEQ ID NO: 670
MERSVRLFSTVLLVLLLLASEMGLRAAEARICESQSHRFKGPCVSKSNCAAVCQTEGFHGGHCRGFRRRCFCTKRC
Противомикробный белок 1 (Ah- Amp1)Aesculus hippocastanumSEQ ID NO: 671
LCNERPSQTWSGNCGNTAHCDKQCQDWEKASHGACHKRENHWKCFCYFNC
Гипотетический белок DCARDacus carotaSEQ ID NO: 672
MAKNSTSPVSLFAISLIFFLLANSGSITEVDGKVCEKPSLTWSGKCGNTQHCDKQCQDWEGAKHGACHSRGGWKCFCYFEC
Богатый цистеином противомикробный белокClitoria ternateaSEQ ID NO: 673
NLCERASLTWTGNCGNTGHCDTQCRNWESAKHGACHKRGNWKCFCYFNC
Гипотетический белок DCARDacus carotaSEQ ID NO: 674
MAKKSSSFCLSAIFLVLLLVANTGMVREVDGALCEKPSLTWSGNCRNTQHCDKQCQSWEGAKHGACHKRGNWKCFCYHAC
ТиониноподобныйBupleurum kaoiSEQ ID NO: 675
MAKKLNAVTVSAIFLVVFLIASYSVGAAKEAGAEGEVVFPEQLCERASQTWSGDCKNTKNCDNQCIQWEKARHGACHKRGGKWMCFCYFDKC
Дефензин Dm-AMP1=богатый цистеином противомикробный белокDahlia merckiiSEQ ID NO: 676
ELCEKASKTWSGNCGNTGHCDNQCKSWEGAAHGACHVRNGKHMCFCYFNC
ТиониноподобныйHelianthus annuusSEQ ID NO: 677
MAKISVAFNAFLLLLFVLAISEIGSVKGELCEKASQTWSGTCGKTKHCDDQCKSWEGAAHGACHVRDGKHMCFCYFNCSKAQKLAQDKLRAEELAKEKIEPEKATAKP
ТионинCynara cardunculus, вар. scolymusSEQ ID NO: 678
MAKNSVAFFALLLLICILTISEFAVVKGELCEKASKTWSGNCGNTRHCDDQCKAWEGAAHGACHTRNKKHMCFCYFNCPKAEKLAQDKLKAEELARDKVEAKEVPHFKHPIEPIHHP
ТионинCynara cardunculus, вар. scolymusSEQ ID NO: 679
MAKQWVSFFALAFIVFVLAISETQTVKGELCEKASKTWSGNCGNTKHCDDQCKSWEGAAHGACHVRNGKHMCFCYFNSCAEADKLSEDQIEAGKLAFEKAEKLDRDVKKAVPNVDHP
Дефензиноподобный белок 1 - DCAR-подобныйDaucus carota, подвид SativusSEQ ID NO: 680
MAQKVNSALIFSAIFVLFLVASYSVTVAEGARAGAEGEVVYPEALCERASQTWTGKCQHTDHCDNQCIQWENARHGACHKRGGNWKCFCYFDHC
Богатый цистеином дефензин с малой молекулярной массойArabidopsis lyrataSEQ ID NO: 681
MASSYTLMLFLCLSIFLIASTEMMAVEARICERRSKTWTGFCGNTRGCDSQCKSWERASHGACHAQFPGFACFCYFNC
Тиониноподобный белокParthenium hysterophorusSEQ ID NO: 682
MAKSSTSYLVFLLLVLVVAISEIASVNGKVCEKPSKTWFGNCKDTEKCDKRCMEWEGAKHGACHQRESKYMCFCYFDCDP
предполагаемый белок дефензин AMP1Arabidopsis thalianaSEQ ID NO: 683
MASSYTLMLFLCLSIFLIASTEMMAVEGRICERRSKTWTGFCGNTRGCDSQCKRWERASHGACHAQFPGFACFCYFNC
ТиониноподобныйEutrema salsugineumSEQ ID NO: 684
MASSYTLLLFVCLSIFFIASTEMMMVEGRVCERRSKTWTGFCGNTRGCDSQCKRWERASHGACHAQFPGFACFCYFNC
ДефензиноподобныйVitis viniferaSEQ ID NO: 685
MAKLLGYLLSYALSFLTLFALLVSTEMVMLEAKVCQRPSKTWSGFCGSSKNCDRQCKNWEGAKHGACHAKFPGVACFCYFNC
НоттинCorchorus olitoriusSEQ ID NO: 686
MAKSLSSFATFLALLCLFFLLSTPNEMKMAEAKICEKRSQTWSGWCGNSSHCDRQCKNWENARHGSCHADGLGWACFCYFNC
НоттинCorchorus olitoriusSEQ ID NO: 687
MEMKMAEGKICEKRSQTWSGWCGNSSHCDRQCKNWENARHGSCHADGLGWACFCYFNC
Тиониноподобный белок Camelina sativaSEQ ID NO: 688
MASSLKLMLFLCLSIFLIASTEMMTVEGRTCERRSKTWTGFCGNTRGCDSQCRSWEGASHGACHAQFPGFACFCYFNC
Тиониноподобный белок Cucumis sativusSEQ ID NO: 689
MAKVVGNSAKMIVALLFLLALMLSMNEKQGVVEAKVCERRSKTWSGWCGNTKHCDRQCKNWEGATHGACHAQFPGRACFCYFNC
Тиониноподобный белокCynara cardunculus, вар. scolymusSEQ ID NO: 690
MIDAFNYKQFSTVKGKICEKPSKTWFGKCQDTTKCDKQCIEWEDAKHGACHERESKLMCFCYYNCGPPKNTPPGTPPSPP
ТиониноподобныйCapsella rubellaSEQ ID NO: 691
MASSYKLILFLCLSIFLIASFEMMAVEGRICQRRSKTWTGFCGNTRGCDSQCKRWERASHGACHAQFPGFACFCYFNC
ТионинArabidopsis thalianaSEQ ID NO: 692
MMAVEGRICERRSKTWTGFCGNTRGCDSQCKRWERASHGACHAQFPGFACFCYFNC
ТионинBrassica napusSEQ ID NO: 693
MASSYTRLLLLCLSIFLIASTEVMMVEGRVCQRRSKTWTGFCGNTRGCDSQCKRWERASHGACHAQFPGFACFCYFNC
Тиониноподобный белок Brassica rapaSEQ ID NO: 694
MASSYARLLLLCLSIFLIASTEVMMVEGRVCQRRSKTWTGFCGNTRGCDSQCKRWERASHGACHAQFPGFACFCYFNC
Тиониноподобный белок Camelina sativaSEQ ID NO: 695
MASSLKLMLFLCLSIFLIASTEMMTVEGRTCERRSKTWTGFCGNTRGCDSQCRRWEHASHGACHAQFPGFACFCYFNC
Дефензиноподобный белок Brassica napusSEQ ID NO:696
MASYTRLLLLCLSIFLIASTEVMMVEGRVCQRRSKTWTGFCGNTRGCDSQCKRWERASHGACHAQFPGFACFCYFNC
Тиониноподобный белок Vitis viniferaSEQ ID NO: 697
MVMLEAKVCQRPSKTWSGFCGSSKNCDRQCKNWEGAKHGACHAKFPGVACFCYFNC
Тиониноподобный белокBrassica napusSEQ ID NO: 698
MTKSFILVALLCICFILLSPTEMRLTLNACLKLAEAKICEKYSQTWSGRCTKTSHCDRQCINWEDARHGACHQDKHGRACFCYFNCKK
Тиониноподобный белокRaphanus sativusSEQ ID NO: 699
MASSYTVFLLLCLSIFLIASTEVMMVEGRVCQRRSKTWTGFCGNTRGCDSQCKRWEHASHGACHAQFPGFACFCYFNC
ТиониноподобныйArabis alpineSEQ ID NO: 700
MASSYTLLLFLCLSIFLIVSTEMMMVEGRICERRSKTWTGFCANTRGCDSQCKRWERASHGACHAQFPGVACFCYFNC
Тиониноподобный белокCucumis meloSEQ ID NO: 701
MAKVVGNSAKMIVAFLFLLALTLSMNEKQGVVEAKVCERRSKTWSGWCGDTKHCDRQCKNWEGAKHGACHAQFPGRACFCYFNC
Тиониноподобный белокErythranthe guttateSEQ ID NO: 702
MAASLVYRLSSVILIVLLLFIMLNNEVMVVESRLCERRSKTWTGFCGSSNNCNNQCRNWERASHGACHAQFPGFACFCYFNC
Тиониноподобный белок Sesamum indicumSEQ ID NO: 703
MAKFQVSSTIFFALFFCFLLLASNEAKICQRMSKTWSGVCLNSGNCDRQCRNWERAQHGACHRRGLGFACLCYFKC
Тиониноподобный белокEclipta prostrataSEQ ID NO: 704
MAKNSVAFFAFLLILFVLAISEIGSVKGELCEKASQTWSGTCRITSHCDNQCKSWEGAAHGACHVRGGKHMCFCYFSHCAKAEKLTQDKLKAGHLVNEKSEADQKVPVTP
Гамма-тионин Cynara cardunculus, вар. scolymusSEQ ID NO: 705
MAKNTKVSAFLFVFLFVFFLVVHSVTAFAIRFKCFDTDMLLKVIADMVVGMKGIEKVCRRRSKTWSGYCGDSKHCDQQCREWEGAEHGACHHEGLGRACFCYFNC
Предшественник Art v 1 Ambrosia artemisiifoliaSEQ ID NO: 706
MAAGLLVFVLAISEIASVKGKLCEKPSVTWSGKCKVKQTDKCDKRCIEWEGAKHGACHKRDSKASCFCYFDCDPTKNPGPPPGAPKGKAPAPSPPSGGGGEGGGEGGGER
Предшественник Art v 1 Ambrosia artemisiifoliaSEQ ID NO: 707
MAAGLLVFVLAISEIASVKGKLCEKPSLTWSGKCKVKQTDKCDKRCIEWEGAKHGACHKRDSKATCFCYFDCDPTKNPGPPPGAPKGKAPAPSPPSGGGAPPPSGGEGGER
Тиониноподобный белок Jatropha curcasSEQ ID NO: 708
MAKLHSSALCFLIIFLFLLVSKEMAVTEAKLCQRRSKTWSGFCGDPGKCNRQCRNWEGASHGACHAQFPGFACFCYFKC
Тиониноподобный белок Nelumbo nuciferaSEQ ID NO: 709
MAKAPKSVSYFAFFFILFLLASSEIQKTKKLCERRSKTWSGRCTKTQNCDKQCKDWEYAKHGACHGSWFNKKCYCYFDC
Тиониноподобный белок Pyrus×bretschneideriSEQ ID NO: 710
MAKLLSRLSIPLIVFVFLLILLASTEVAMVEARICQRRSKTWSGFCANTGNCNRQCTNWEGALHGACHAQFPGVACFCYFRC
Предшественник богатого цистеином белка с малой молекулярной массой LCR78Ricinus communiSEQ ID NO: 711
MAKLHFPTLLCLFIFLFLLVSTEMQVTQAKVCQRRSKTWSGFCGSTKNCDRQCKNWEGALHGACHAQFPGVACFCYFKCGGER
Гомолог предшественника Art v 1 Ambrosia artemisiifoliaSEQ ID NO: 712
KLCEKPSVTWSGKCKVKQTDKCDKRCIEWEGAKHGACHKRDSKASCFCYFDCDPTKNPGPPPGAPKGKAPAPSPPSGGGAPPPSGGEGGGD
Гомолог предшественника Art v 1 Ambrosia artemisiifoliaSEQ ID NO: 713
KLCEKPSVTWSGNKVKQTDKCDKRCIEWEGAKHGACHKRDSKASCFCYFDCDPTKNPGPPPGAPKGKAPAPSPPSGGGAPPPSGGEGGGDGGGGRR
Тиониноподобный белокPrunus mumeSEQ ID NO: 714
MAKLLSHLLFYPILFLFLFIFLASTEVAILEARICQRRSKTWSGFCGNTRNCNRQCRNWEGALRGACHAQFPGFACFCYFRC
НоттинCorchorus olitoriusSEQ ID NO: 715
MAKTLQLFALFFIVILLANQEIPVAEAKLCQKRSKTWTGICIKTKNCDNQCKKWEKAEHGACHRQGIGFACFCYFNQKKC
НоттинCorchorus olitoriusSEQ ID NO: 716
MAKFVSTVALLFALFILLASFDEGMMPMAEAKVCSKRSKTWSGFCNSSANCNKQCREWEDAKHGACHFEFPGFACFCYFNC
Тиониноподобный белок Solanum pennelliiSEQ ID NO: 717
MNSKVILALLVCFLLIASNEMQGGEAKVCGRRSSTWSGLCLNTGNCNTQCIKWEHASSGACHRDGFGFACFCYFNC
Тиониноподобный белокFragaria vesca, подвид VescaSEQ ID NO: 718
MAKLLGYHLVYPILFLFIFLLLASTEMGMLEARICQRRSKTWTGLCANTGNCHRQCRNWEGAQRGACHAQFPGFACFCYFNC
НоттинCorchorus capsularisSEQ ID NO: 719
MAKFVSVALLLALFILVASFDEGMVPMAEAKLCSKRSKTWSGFCNSSANCNRQCREWEDAKHGACHFEFPGFACFCYFDC
Тиониноподобный белок Solanum tuberosumSEQ ID NO: 720
MQGGEARVCERRSSTWSGPCFDTGNCNRQCINWEHASSGACHREGIGSACFCYFNC
Дефензин 1,2-подобный белок PDF1.2-1Dimocarpus longanSEQ ID NO: 721
MAKTLKSVQFFALFFLVILLAGSEMTAVEALCSKRSKTWSGPCFITSRCDRQCKRWENAKHGACHRSGWGFACFCYFNKC
Тиониноподобный белок Camelina sativaSEQ ID NO: 722
MAKAATIVTLLFAALVFFAALETPTMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNSNACKNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйArabis alpineSEQ ID NO: 723
MAKFASIIAFLFAALVLFASFEAPTMVEAQKYCEKPSGTWSGVCGNSNACNNQCINLEGARHGSCNYVFPYYRCICYFQC
ТиониноподобныйTheobroma cacaoSEQ ID NO: 724
MAMSLKSVHFFALFFIVVLLANQEMPVAEAKLCQKRSKTWTGPCIKTKNCDHQCRKWEKAQHGACHWQWPGFACFCYVNC
ТиониноподобныйAmborella trichopodaSEQ ID NO: 725
MAKLVSPKAFFVFLFVFLLISASEFSGSEAKLCQKRSRTWSGFCANSNNCSRQCKNLEGARFGACHRQRIGLACFCYFNC
Богатый цистеином с малой молекулярной массой 67 Arabidopsis thalianaSEQ ID NO: 726
MAKSATIVTLFFAALVFFAALEAPMVVEAQKLCERPSGTWSGVCGNSNACKNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйArabis alpineSEQ ID NO: 727
MAKFASIITLLFAALVLFASLEAPTMVEAQKLCQRPSGTWSGVCGNNGACKNQCINLEKARHGSCNYVFPYHRCICYFPC
ТиониноподобныйBrassica junceaSEQ ID NO: 728
MAKVASIIALLFAALVLFAAFEAPTMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACKNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйBrassica oleracea, вар. oleraceaSEQ ID NO: 729
MAKFASIIALLFAALVLFAALEAPTMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACKNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйCamelina sativaSEQ ID NO: 730
MAKPATIVTLLFAALVFFAALETPTMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACKNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйCamelina sativaSEQ ID NO: 731
MAKSATIVTLLFAALVFFAALETPTMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACKNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйBrassica napusSEQ ID NO:732
MAKFASIIAPLFAVLVLFAAFEAPTMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACKNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйEutrema salsugineumSEQ ID NO: 733
MAKFASIITLLFAALVLFAVFEGPTMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACKNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
Богатый цистеином фунгицидный белокRaphanus sativusSEQ ID NO: 734
MAKFASIIALLFAALVLFAAFEAPTMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACKNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
Тиониноподобный белок 1 Raphanus sativusSEQ ID NO: 735
MAKFASIVSLLFAALVLFTAFEAPAMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACKNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
Тиониноподобный белок 1 Raphanus sativusSEQ ID NO: 736
MNTKVILALLFCFLLVASNEMQVGEAKVCQRRSKTWSGPCINTGNCSRQCKQQEDARFGACHRSGFGFACFCYFKC
ТиониноподобныйBrassica rapaSEQ ID NO: 737
MAKFASIIAPLFAALVLFAAFEAPTMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACKNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйSolanum pennelliiSEQ ID NO: 738
MNTKLILALMFCFLLIASNEMQVGEAKVCQRRSKTWSGPCINTGNCSRQCKQQEDARFGACHRSGFGFACFCYFKC
ТиониноподобныйCitrus clementinaSEQ ID NO: 739
MAKFTTTFALLFAFFILFAAFDVPMAEAKVCQRRSKTWSGLCLNTGNCSRQCKQQEDARFGACHRQGIGFACFCYFKC
ТиониноподобныйBrassica rapaSEQ ID NO: 740
MAKFTSIIVLLFAALVLFAGFEAPTMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACKNQCIRLEKARHGSCNYVFPARKCICYFPC
ТиониноподобныйEutrema salsugineumSEQ ID NO: 741
MAKFASIITLLFAALVLFATFAPTMVEAKLCERPSGTWSGVCGNNNACKSQCQRLEGARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйEutrema salsugineumSEQ ID NO: 742
MAKFASIITLLFAALVLFATFEAPTMVEAKLCERPSGTWSGVCGNNNACKSQCQRLEGARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйHeliophila coronopifoliaSEQ ID NO: 743
MAKFASIIAFFFAALVLFAAFEAPTIVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACRNQCINLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйBrassica oleraceaSEQ ID NO: 744
MAKVASIVALLFPALVIFAAFEAPTMVEAQKLCERPSGTWSGVCGNNNACKNQCIRLEKARHGSCNYVFPAHKCICYFPC
ТиониноподобныйCicer arietinumSEQ ID NO: 745
MSKFYTVFMFLCLALLLISSWEVEAKLCQRRSKTWSGPCIITGNCKNQCKNVEHATFGACHRQGFGFACFCYFNCH
ТиониноподобныйCitrus clementinaSEQ ID NO: 746
MAKSVASITTAFALIFAFFILFASFGVPMAEAKVCQRRSKTWSGPCLNTGKCSRQCKQQEYARYGACYRQGAGYACYCYFNC
ТиониноподобныйCitrus sinensisSEQ ID NO: 747
MAKSVASITTAFALIFAFFILFASFEVPMAEAKVCQRRSKTWSGPCLNTGKCSRHCKQQEDARYGACYRQGTGYACFCYFEC
ТиониноподобныйCitrus sinensisSEQ ID NO: 748
MAKFTTTFALLFAFFILFAAFDVPMAEAKVCQLRSKTWSGLCLNTGNCSRQCKQQEDARFGACHRQGIGFACFCYFKC
Ec-AMP-D1Citrus sinensisSEQ ID NO: 749
MERSVRLFSTVLLVLLLLASEMGLRAAEARICESQSHRFKGPCVSKSNCAAVCQTEGFHGGHCRGFRRRCFCTKRC
[0175] Указанный полипептид может содержать слитый белок.
[0176] В таблице 20 (SEQ ID NO: 750) описаны последовательности, используемые для трансляционного слияния с применением последовательности нуклеотидов, которая кодирует синтетический нацеливающий на флоэму полипептид (SEQ ID NO: 641) и синтетического тионинового полипептида (SEQ ID NO: 650). Заглавными буквами (без жирного начертания) обозначена нацеливающая на флоэму последовательность, заглавными буквами с жирным начертанием обозначено слияние указанных двух пептидных последовательностей (таблица 20), кодирующих нацеленный на флоэму биоактивный примирующий полипептид.
Таблица 20. Трансляционное слияние нацеливающей на флоэму последовательности с происходящим из тионина полипептидом
Трансляционное слияние нацеливающей на флоэму последовательности с тиониновым полипептидом (синтетическим) SEQ ID NO: 750
MSTATFVDIIIAILLPPLGVFLRFGCGVEFWICLVLTLLGYIPGIIYAIYVLTKRTCESQSHRFKGPCSRDSNCATVCLTEGFSGGDCRGFRRRCRCTRPCVFDEK
Дополнительные модификации
[0177] Кроме того, могут быть химически синтезированы полипептиды с D-аминокислотами, β2-аминокислотами, β3-аминокислотами, гомоаминокислотами, гамма- аминокислотами, пептидоидами, N-метиламинокислотами и другими не встречающимися в природе миметиками и производными аминокислот.
[0178] Указанные полипептиды могут быть модифицированы либо путем естественных процессов, таких как посттрансляционный процессинг, или с применением методик химической модификации, хорошо известных в данной области техники. Модификации могут происходить в любом месте полипептида, в том числе в полипептидном остове, в боковых цепях аминокислот, и на аминоконце или карбоксильном конце. Один и тот же тип модификации может быть осуществлен в равной или в варьирующей степени в нескольких сайтах полипептида. Также полипептид может содержать множество типов модификаций.
[0179] Пептиды могут быть разветвленными, например, в результате убиквитинирования, и могут быть циклическими, с ветвлением или без ветвления. Циклические, разветвленные и разветвленные циклические полипептиды могут возникать в результате естественных посттрансляционных процессов или могут быть получены синтетическими способами.
[0180] Модификации включают ацетилирование, добавление кислоты, ацилирование, АДФ-рибозилирование, добавление альдегида, добавление алкиламида, амидирование, аминирование, биотинилирование, добавление карбамата, добавление хлорметилкетонов, ковалентное присоединение нуклеотида или производного нуклеотида, перекрестное связывание, циклизация, образование дисульфидных связей, деметилирование, добавление сложного эфира, образование ковалентных перекрестных связей, образование цистеин-цистеиновых дисульфидных связей, образование пироглутамата, формилирование, гамма-карбоксилирование, гликозилирование, образование ГФИ-якоря, добавление гидразида, добавление гидроксамовой кислоты, гидроксилирование, иодирование, добавление липида, метилирование, миристиолирование, окисление, пегилирование, протеолитический процессинг, фосфорилирование, пренилирование, пальмитоилирование, добавление метки очистки, добавление пироглутамила, рацемизацию, селеноилирование, добавление сульфонамида, сульфатирование, опосредованное транспортной РНК добавление аминокислот к белкам, такое как аргинилирование, убиквитинирование, и добавление мочевины. (см., например, Creighton et al. (1993) Proteins - Structure and Molecular Properties, 2nd Ed., T. E. Creighton, W. H. Freeman and Company, New York; Johnson, ed. (1983) Posttranslational Covalent Modification Of Proteins, Academic Press, New York; Seifter et al. (1990) Meth. Enzymol., 182: 626-646; Rattan et al.(1992) Ann. N.Y. Acad. Sci., 663: 48-62; и т.п.).
[0181] С применением известных способов конструирования белков и рекомбинантной ДНК-технологии могут быть получены варианты для усовершенствования или изменения характеристик полипептидов, описанных в настоящем документе. Такие варианты включают делеции, вставки, инверсии, повторы, дупликации, достройки и замены (например, консервативные замены), выбранные в соответствии с общими правилами, хорошо известными в данной области техники, таким образом, чтобы оказывать незначительный эффект на активность.
[01892] Указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 70% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0183] Указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 75% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0184] Указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 80% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0185] Указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 85% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0186] Указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 90% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0187] Указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 95% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0188] Указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 98% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0189] Указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 99% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
II. Получение биоактивных примирующих полипептидов
[0190] Предложены способы и подходы для клонирования, генетической модификации и экспрессии биоактивных примирующих полипептидов (например, флагеллинов), и указанные биоактивные примирующие полипептиды (например, Bt.4Q7Flg22), задействующие способы, хорошо известные и широко используемые специалистом в данной области техники. Описанные в настоящем документе способы могут применяться с любым из биоактивных примирующих полипептидов согласно описанию в настоящем документе, включающим, соответственно, любой из флагеллинов, флагеллин-ассоциированных полипептидов, тионинов, гарпиноподобных (HpaG-подобных) полипептидов, EF-Tu, ФСК-α или RHPP, и/или любые их комбинации.
[0191] Биоактивные примирующие полипептиды могут быть представлены в виде свободного полипептида, иммобилизованного на поверхности частицы, или импрегнированы на матрице или в матрицу. Для получения свободного полипептида может быть использован ряд экспрессионных систем.
[0192] Происходящие из флагеллина полные кодирующие, частичные кодирующие последовательности (флагеллиновые полипептиды) и флагеллин-ассоциированные полипептиды могут сверхэкспрессироваться у штамма Bacillus, например, у штамма BT013A Bacillus thuringiensis, у Bacillus cereus или у Bacillus subtilis. Флагеллины и происходящие из флагеллинов полипептиды клонируют с применением подходящего экспрессионного вектора, позволяющего получить значительные количества указанного полипептида.
[0193] Например, для облегчения клонирования целевых нуклеотидов, которые кодируют биоактивный примирующий полипептид или полипептиды согласно описанию в настоящем документе, конструировали совместимый с E.coli челночный вектор pSUPER путем слияния остова плазмиды pBC, описанной выше, с клонирующим вектором pUC57 E.coli в совместимых сайтах рестрикции эндонуклеазы BamHI. Полученный вектор pSUPER несет двойные селективные маркеры (для отбора на ампициллине у E.coli и отбора на тетрациклине у Bacillus spp). Клонирование выполняли путем ПЦР-амплификации целевых нуклеотидов со специфическими праймерами, синтезированными с 15 п. о., перекрывающими сайт встраивания pSUPER. Кодирующие специфический ген полипептиды сливали с вектором pSUPER с помощью набора для клонирования In-Fusion HD Cloning Kit (Clontech). Конструкции pSUPER с верифицированной последовательностью амплифицировали с применением подходящих для остова pBC обратных и прямых праймеров. Итоговые ПЦР-продукты самолигировались с получением плазмиды pBC, которую использовали для трансформации донорного штамма B30 Bacillus spp.Итоговую конструкцию верифицировали для подтверждения того, что она является полностью внутриродовой, в применением секвенирования по Сэнгеру.
[0194] Биоактивные примирующие полипептиды/пептиды согласно описанию в настоящем документе получают в больших количествах для применения на полях и в садах, с использованием свободной экспрессионной системы, в которой может быть использован штамм Bacillus subtilis и/или Bacillus thuringiensis в качестве штамма для предполагаемой гетерологичной экспрессии. Базовая экспрессионная плазмида, называемая pFEe4B, состоит из участка E.coli (=e) и участка Bacillus (=pFE). Участок e происходит из pUC19 и позволяет проводить отбор и амплификацию вектора у E.coli для целей клонирования. Он содержит бета-лактамазный ген (bla), придающий устойчивость к бета-лактамным антибиотикам, таким как ампициллин и другие производные пенициллина, а также точку начала репликации E.coli, обеспечивающую размножение вектора. Участок pFE обеспечивает отбор и амплификацию плазмиды у Bacillus spp.и управляет экспрессией представляющего интерес гетерологичного полипептида/пептида. Соответственно, он содержит ген, придающий устойчивость к тетрациклину (tetL), а также ген белка репликации (repU), отвечающего за амплификацию плазмиды у Bacillus spp., оба из которых происходят из природной плазмиды pBC16 Bacillus cereus. Экспрессионная кассета pFEe4B содержит сигнал секреции (amyQ), сайт клонирования и терминатор (rspD), где первый обеспечивает секрецию экспрессированного белка/пептида из клеток штамма-хозяина в среду вокруг клеток, а последний - предотвращение транскрипции за пределами представляющей интерес открытой рамки считывания. Экспрессией в pFEe4B управляет модифицированный автоиндуцируемый промотор, который инициирует экспрессию после достижения культурой достаточной оптической плотности. В экспрессионной системе pFEe4b экспрессию контролирует последовательность IPTG-индуцируемого промотора из Bacillus subtilis. Указанный промотор состоит из модифицированного конститутивного промотора в комбинации с lac-репрессором E.coli (lacI) и сайтом связывания рибосомы. Соответственно, экспрессия с кодируемых pFEe4B полипептидов/пептидов зависит от присутствия подходящих индуцирующих агентов, таких как изопропил-бета-D-1-тиогалактопиранозид (IPTG). Однако другие pFe-системы, подходящие для экспрессии полипептидов согласно описанию в настоящем документе, не требуют для экспрессии таких систем индукции. Плазмида pFEe4 дополнительно несет ген E.coli lacI под контролем промотора пенициллазы Bacillus licheniformis для предотвращения экспрессии полипептида/пептида согласно описанию в настоящем документе в отсутствие какого-либо индуцирующего агента.
[0195] Другие коммерчески доступные экспрессионные векторы, например, любые происходящие из Bacillus subtilis, могут также подходить для применения. Другие экспрессионные векторы выбирали для получения рекомбинантных биоактивных примирующих полипептидов на основании следующих необходимых критериев: рекомбинантный микроорганизм является непатогенным и считается «в общем рассматриваемым как безопасный» (GRAS) организмом, не характеризуется значимым смещением частоты использования кодонов и способен секретировать внеклеточные белки непосредственно в культуральную среду, обеспечивая получение бесклеточного варианта или вариантов биоактивных примирующих полипептидов.
[0196] Другие экспрессионные системы, распространенные в данной области техники, могут быть использованы для экспрессии биоактивных примирующих полипептидов аналогичным образом.
[0197] Биоактивные примирующие полипептиды согласно описанию в настоящем документе могут быть получены и очищены либо с применением белковой метки (или меток) с помощью аффинной очистки, или с применением колоночных способов расщепления протеазами, с высвобождением немеченого полипептида или полипептида. Способы применения указанного подхода для получения несвязанных вариантов биоактивных примирующих полипептидов хорошо известны и понятны специалисту в данной области техники.
[0198] Белковые метки обычно содержат относительно небольшую последовательность аминокислот, встроенную в транслированный полипептид, по сути обеспечивающие молекулярную «привязь» для представляющего интерес биоактивного примирующего полипептида. Они широко используются для содействия экспрессии и очищения рекомбинантных полипептидов. Полигистидиновую (His) метку выбирали для аффинной очистки биоактивных примирующих полипептидов согласно описанию. His-метка может быть слита либо с N-концом, либо с C-концом полипептида. His-метки часто комбинируют с другими метками для двойного мечения. Метки для биоактивных примирующих полипептидов могут подходить для аффинной очистки. Указанные метки могут также отщепляться от биоактивных примирующих полипептидов с помощью специфических протеаз и специфическими колоночными способами расщепления протеазами с высвобождением очищенного немеченого биоактивного примирующего полипептида или полноразмерного белка-предшественника, представляющего интерес.Указанные способы также распространены и хорошо известны специалисту в данной области техники. Другие метки, которые могут быть использованы, известны в данной области техники и включают FLAG-метки, эпитопы антител, стрептавидин/биотин, а также другие инструменты для очищения. Другая подходящая метка представлена глутатион-S-трансферазной (GST) меткой.
[0199] Белковые метки могут быть включены в состав плазмиды для получения полипептида. В идеале, указанная плазмида содержит, помимо последовательности, кодирующей представляющий интерес полипептид, сигнал секреции (например, сигнал секреции amyE или amyQ), чтобы способствовать секреции, и белковую метку (например, глутатион-S-трансферазу) для повышения стабильности указанного полипептида, с улучшением таким образом продуцирования и стабильности. В предпочтительных случаях белковую метку (например, GST) соединяют с полипептидом с применением линкерной последовательности, содержащей консенсусную последовательность расщепления. Это может обеспечивать добавление нацеленной киназы, способной расщеплять указанную метку и высвобождать очищенный выделенный полипептид. Подходящая консенсусная последовательность расщепления может включать последовательность расщепления энтерокиназой (SEQ ID NO: 772), которая может быть расщеплена, например, просто с применением бычьей энтерокиназы.
[0200] Соответственно, предложен способ получения полипептида, включающий продуцирование слитого белка, содержащего любой полипептид согласно описанию в настоящем документе и сайт расщепления энтерокиназой (EK) путем ферментации, который служит для повышения активности и стабильности указанного полипептида. Слитый белок, кодируемый указанной плазмидой, может дополнительно содержать белковую метку (например, полигистидиновую (His) метку, FLAG-метку, эпитоп антитела, стрептавидин/биотин, глутатион-S-трансферазу (GST) или любую комбинацию перечисленного), причем сайт расщепления энтерокиназой содержит соединительную область, соединяющую полипептид и белковую метку. Указанный слитый белок может также содержать сигнал секреции. Указанный сигнал секреции может содержать сигнал секреции amyE или amyQ (например, SEQ ID NO: 769), или может содержать любую из SEQ ID NO: 563-570 согласно описанию выше. Указанный полипептид, содержащий сайт расщепления энтерокиназой (EK), может быть более стабильным и может быть продуцирован с большим выходом при ферментации по сравнению с полипептидом, где отсутствует сайт расщепления энтерокиназой (EK). Если требуется, для активации (например, выделения) представляющего интерес полипептида из указанного слитого белка может применяться энтерокиназа (например, бычья энтерокиназа). Указанная энтерокиназа может применяться «на месте», для обеспечения максимальной стабильности биоактивного примирующего полипептида перед введением.
[0201] Биоактивные примирующие полипептиды могут быть получены в синтетической форме с применением коммерчески доступных технологий пептидного синтеза, обеспечивающих получение полипептидов высокой чистоты. Синтетическое получение биоактивных примирующих полипептидов задействует общие методы твердофазного пептидного синтеза, хорошо известные специалисту в данной области техники. Методы химического синтеза включают: поэтапную сборку пептидов из аминокислотных предшественников, в ходе которой удлинение пептида продолжается за счет реакции сопряжения аминокислот, с последующим удалением обратимой защитной группы. Твердофазный пептидный синтез используют для добавления этапа ковалентного связывания, на котором происходит присоединение синтезируемой пептидной цепи к нерастворимой полимерной подложке, за счет чего заякоренный пептид может быть достроен в ходе нескольких циклов. Указанные реакции достройки доводят до завершения и затем синтезированный полипептид извлекают из твердой подложки с помощью этапов фильтрации и промывания. Анализы МС и ВЭЖХ осуществляют после завершения синтеза и очищения.
[0202] Любой из биоактивных примирующих полипептидов согласно описанию в настоящем документе для флагеллин-ассоциированных полипептидов (таблицы 1-5), гарпиноподобных (HpaG-подобных) полипептидов (таблица 10 и 11), фитосульфокиновых (ФСК-α) полипептидов (таблица 12), RHPP (таблица 13-15), фактора элонгации Tu (полипептидов EF-Tu) (таблицы 16 и 17), тиониновых и тиониноподобных полипептидов (таблица 19) может быть представлен в синтетических формах.
[0203] Кроме того, такие способы могут применяться для получения и применения консервативных вспомогательных последовательностей, предпочтительно называемых сигнатурными (SEQ ID NO: 542-548), сигнальными якорными сортирующими (SEQ ID NO: 549-562) последовательностями и последовательностями секреции (SEQ ID NO: 563-570).
[0204] Ретро-инверсные варианты могут также быть получены синтетическим путем или произведены химически. Синтетические полипептиды, полученные в полностью D-конформации, получают путем замены всех остатков L-аминокислот их D-энантиомерами, что приводит к получению обращенного или полностью D-ретроизомера полипептида Flg. Твердофазный синтез применяют для получения ретро-инверсных вариантов полипептида или полипептидов Flg. После синтеза и очищения ретро-инверсного полипептида или полипептидов аминокислотный состав подтверждают с применением масс-спектрометрии полипептида или полипептидов Flg. Затем подтверждают чистоту ретро-инверсного полипептида или полипептидов на уровне, превышающем или равном 95%, с применением ВЭЖХ-анализа. Ретро-инверсные варианты полипептида или полипептидов Flg дополнительно характеризуют с использованием значений времени удерживания при ВЭЖХ, относительной молекулярной массы и аминокислотного состава (IC50, мкМ). Получение ретро-инверсных вариантов с применением технологии рекомбинантной ДНК обычно включает использование механизмов нерибосомного синтеза белка.
[0205] Ретро-инверсные синтетические биоактивные примирующие полипептиды Flg, полученные с применением твердофазного синтеза, тестируют на способность к связыванию FLS2 или альтернативных FLS-рецепторов, например, FLS3, также обнаруживаемых у растений. Эксперименты с конкурентным ИФА ELISA используют для подтверждения аффинности связывания ретро-инверсных Flg-ассоциированных полипептидов с растительными FLS-рецепторами.
Рекомбинантные бактерии, экспрессирующие биоактивные примирующие полипептиды
[0206] Также предложен рекомбинантный микроорганизм, который экспрессирует или сверхэкспрессирует полипептид. Указанный полипептид содержит полипептиды согласно описанию выше для указанной композиции. Например, указанный полипептид может содержать: указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (a); или мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (b); или мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (c); или гарпин или гарпиноподобный полипептид по (g); или RHPP по (i); или полипептид KTI по (j); или полипептид EF-Tu по (l); или слитый полипептид по (n); или полипептид ФСК по (o); или тионин или тиониноподобный полипептид по (q).
[0207] Указанный полипептид может сверхэкспрессироваться указанным микроорганизмом. Указанный рекомбинантный микроорганизм может включать микроорганизм, способный эффективным образом продуцировать рекомбинантные биоактивные примирующие полипептиды или их предшественники. Предпочтительный микроорганизм относится к роду Bacillus, представляет собой бактерию из рода Paenibacillus, гриб из рода Penicillium, бактерию из рода Glomus, бактерию из рода Pseudomonas, бактерию из рода Arthrobacter, бактерию из рода Paracoccus, бактерию из рода Rhizobium, бактерию из рода Bradyrhizobium, бактерию из рода Azosprillium, бактерию из рода Enterobacter, бактерию из рода Escherichia или любую их комбинацию.
[0208] Указанный рекомбинантный микроорганизм может включать бактерию из рода Bacillus, бактерию из рода Paenibacillus или любую их комбинацию.
[0209] Например, указанный микроорганизм может включать бактерию рода Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides, Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, Bacillus megaterium, Bacillus subtilis, Bacillus firmus, Bacillus aryabhattai, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis, Bacillus circulans, Bacillus flexus, Bacillus nealsonii, Bacillus pumulis, Paenibacillus или их комбинацию.
[0210] Специалист в данной области техники часто использует способы и подходы для определения и верификации рода и вида бактерий. Общий способ включает получение хромосомной ДНК, выделенной из бактерий, и ПЦР-амплификацию области 16s рРНК с применением универсальных праймеров (ACTCCTACGGGAGGCAGCAGT) и (GGGTTGCGCTCGTTG/AC). Затем ПЦР-ампликоны очищают и секвенируют для корректной идентификации подходящего бактериального штамма, например, специфический штамм рода Bacillus.
[0211] Специалисту в данной области техники в целом известны протоколы обработки образцов для получения хромосомной ДНК, трансформации ДНК генов, кодирующих полипептиды, с применением плазмиды, продуцирующей указанные полипептиды в бактерии-хозяине, например, штамме Bacillus.
[0212] Предложенные штаммы Bacillus могут продуцировать любой биоактивный примирующий полипептид согласно описанию в настоящем документе, или их комбинацию. Например, указанный штамм может включать:
(a) Bacillus aryabhattai CAP53 (NRRL No. B-50819),
(b) Bacillus aryabhattai CAP56 (NRRL No. B-50817),
(c) Bacillus flexus BT054 (NRRL No. B-50816),
(d) Paracoccus kondratievae NC35 (NRRL No. B-50820),
(e) Bacillus mycoides BT155 (NRRL No. B-50921),
(f) Enterobacter cloacae CAP12 (NRRL No. B-50822),
(g) Bacillus nealsonii BOBA57 (NRRL No. NRRL B-50821),
(h) Bacillus mycoides EE118 (NRRL No. B-50918),
(i) Bacillus subtilis EE148 (NRRL No. B-50927),
(j) Alcaligenes faecalis EE107 (NRRL No. B-50920),
(k) Bacillus mycoides EE141 (NRRL NO. B-50916),
(l) Bacillus mycoides BT46-3 (NRRL No. B-50922),
(m) представитель семейства Bacillus cereus EE128 (NRRL No. B-50917),
(n) Paenibacillus massiliensis BT23 (NRRL No. B-50923),
(o) представитель семейства Bacillus cereus EE349 (NRRL No. B-50928),
(p) Bacillus subtilis EE218 (NRRL No. B-50926),
(q) Bacillus megaterium EE281 (NRRL No. B-50925),
(r) представитель семейства Bacillus cereus EE-B00377 (NRRL B-67119);
(s) Bacillus pseudomycoides EE-B00366 (NRRL B-67120),
(t) Bacillus mycoides EE-B00363 (NRRL B-67121),
(u) Bacillus pumilus EE-B00143 (NRRL B-67123),
(v) Bacillus thuringiensis EE-B00184 (NRRL B-67122),
(w) Bacillus mycoides EE116 (NRRL No. B-50919),
(x) представитель семейства Bacillus cereus EE417 (NRRL No. B-50974),
(y) Bacillus subtilis EE442 (NRRL No. B-50975),
(z) Bacillus subtilis EE443 (NRRL No. B-50976),
(aa) представитель семейства Bacillus cereus EE444 (NRRL No. B-50977),
(bb) Bacillus subtilis EE405 (NRRL No. B-50978),
(cc) представитель семейства Bacillus cereus EE439 (NRRL No. B-50979),
(dd) Bacillus megaterium EE385 (NRRL No. B-50980),
(ee) представитель семейства Bacillus cereus EE387 (NRRL No. B-50981),
(ff) Bacillus circulans EE388 (NRRL No. B-50982),
(gg) Bacillus thuringiensis EE319 (NRRL No. B-50983),
(hh) представитель семейства Bacillus cereus EE377 (NRRL No. B-67119),
(ii) Bacillus mycoides EE363 (NRRL No. B-67121),
(jj) Bacillus pseudomycoides EE366 (NRRL No. B-67120);
(kk) Bacillus thuringiensis BT013A (NRRL No. B-50924);
[0213] или любую их комбинацию. Каждый из указанных штаммов был передан для депонирования в Службу сельскохозяйственных исследований (ARS) министерства сельского хозяйства США (USDA), расположенную по адресу: 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A., и им были присвоены для идентификации депозитные номера NRRL, приведенные в круглых скобках. Штаммы (a)-(d), (f) и (g) были депонированы 11 марта 2013 г. Штаммы (e), (h)-(q), (w) и (kk) были депонированы 10 марта 2014 г. Штаммы (x)-(ff) были депонированы 10 сентября 2014 г. Штамм (gg) был депонирован 17 сентября 2014 г. Штаммы (r)-(v), (hh), (ii) и (jj) были депонированы 19 августа 2015 г. Bacillus thuringiensis BT013A также известен как Bacillus thuringiensis 4Q7.
[0214] Выделение и характеризация указанных штаммов описаны в примерах, приведенных в международной публикации WO/2017/161091, включенной в настоящий документ полностью посредством ссылки. Для простоты идентификации организма в международной публикации WO/2017/161091 A1 также приведены частичные последовательности 16S рибосомальной РНК для каждого из указанных штаммов в перечне последовательностей и в таблице 17.
[0215] Любые из рекомбинантных микроорганизмов могут применяться для сверхэкспрессии биоактивного примирующего полипептида согласно описанию в настоящем документе для флагеллин-ассоциированного полипептида (таблицы 1-5), гарпина или гарпиноподобного (HpaG-подобный) полипептида (таблица 10 или 11), фитосульфокинового (ФСК-α) полипептида (таблица 12), RHPP (таблица 13-15), полипептида EF-Tu (таблица 16-17) и тионина или тиониноподобного полипептида (таблица 19).
[0216] Указанный рекомбинантный микроорганизм может включать смесь двух или более любых рекомбинантных микроорганизмов, описанных в настоящем документе.
[0217] Указанный рекомбинантный микроорганизм может быть инактивирован. Инактивация приводит к получению микроорганизмов, неспособных к воспроизведению. Инактивация микроорганизмов может быть благоприятной, например, поскольку она позволяет доставлять микроорганизм в растение или в ростовую среду для растений при снижении или элиминации каких-либо пагубных эффектов, которые живой микроорганизм может оказывать на растение или на окружающую среду. Указанный рекомбинантный микроорганизм может быть инактивирован любым физическим или химическим способом, например, путем термообработки, применения гамма-облучения, рентгеновского облучения, УФ-А-облучения, УФ-B-облучения или обработки растворителем, таким как глутаральдегид, формальдегид, пероксид водорода, уксусная кислота, отбеливатель, хлороформ или фенол, или применения любой комбинации перечисленного.
III. Композиции
[0218] Предложена композиция для биоактивного примирования растения или части растения для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растений. Указанная композиция содержит что-либо из следующего: полипептид согласно описанию в настоящем документе или любую комбинацию указанных полипептидов, и агрохимикат или носитель; или любую комбинацию указанных полипептидов согласно описанию в настоящем документе.
[0219] Указанная композиция может состоять по существу из биоактивных примирующих полипептидов или полипептидов согласно описанию в настоящем документе.
[0220] Указанная композиция может состоять в основном из биоактивных примирующих полипептидов, при этом оставшаяся часть композиции представлена агрохимическими веществами или носителями. Более конкретно, указанная композиция может содержать от приблизительно 0,00001% до приблизительно 95% указанных полипептидов, от приблизительно 0,1 до приблизительно 80 масс. % агрохимических веществ, и от приблизительно 5 до приблизительно 50 масс. % носителя от общей массы композиции. В качестве альтернативы, указанная композиция может содержать от приблизительно 0,01 до приблизительно 5 масс. % указанных полипептидов, от приблизительно 0,2 до приблизительно 70 масс. % агрохимических веществ, и от приблизительно 10 до приблизительно 30 масс. % носителя от общей массы композиции, или указанная композиция может содержать от приблизительно 0,05 масс. % до приблизительно 1 масс. % указанных полипептидов, от приблизительно 30 до приблизительно 60 масс. % агрохимических веществ, и от приблизительно 40 до приблизительно 69 масс. % носителя от общей массы композиции. В качестве альтернативы, указанная композиция может содержать любое детектируемое количество указанных полипептидов, и от приблизительно 0,1 до приблизительно 80 масс. % агрохимических веществ, и от приблизительно 5 до приблизительно 50 масс. % носителя от общей массы композиции.
[0221] Указанная композиция может включать либо агрохимикат, либо носитель, который ассоциирован с указанным полипептидом в природе.
[0222] Указанный агрохимикат может не встречаться в природе в комбинации с указанным полипептидом.
[0223] Указанный агрохимикат может включать, не ограничиваясь перечисленным, консервант, буферный агент, смачивающий агент, поверхностно-активное вещество, агент для покрытия, моносахарид, полисахарид, абразивный агент, пестицид, инсектицид, гербицид, нематоцид, бактериоцид, фунгицид, майтицид, удобрение, биостимулятор, окрашивающее средство, увлажнитель, осмопротектор, антибиотик, аминокислоту, агент для биологического контроля или комбинацию перечисленного.
[0224] Если указанная композиция включает аминокислоту, указанная аминокислота может быть предоставлена отдельно от аминокислот, которые содержит указанный полипептид. Например, может быть использована выделенная аминокислота. Подходящие аминокислоты включают любые природные или не встречающиеся в природе аминокислоты. Например, указанная композиция может содержать цистеин.
[0225] Указанный агрохимикат может содержать кислоту, такую как кислота, присутствующая при химическом синтезе любого полипептида, описанного в настоящем документе. Например, соляная кислота, уксусная кислота или трифторуксусная кислота могут присутствовать в тех случаях, когда полипептид синтезируют, например, путем ферментации.
[0226] В тех случаях, когда указанный агрохимикат представляет собой кислоту, он может составлять от приблизительно 0,001 до приблизительно 30 масс. %, от приблизительно 0,01 до приблизительно 20 масс. %, или от приблизительно 0,1 до приблизительно 5 масс. % от общей массы композиции.
[0227] Если не указано иное, каждый агрохимикат может составлять от приблизительно 0,1 до приблизительно 60 масс. %, от приблизительно 0,5 до приблизительно 50 масс. %, или от приблизительно 10 до приблизительно 30 масс. % от общей массы композиции.
[0228] В тех случаях, когда указанная композиция включает консервант, указанный консервант может включать консерванты на основе дихлорофена и полуформаля бензилового спирта (PROXEL от ICI или ACTICIDE RS от Thor Chemie, и KATHON MK от Dow Chemical), и производные изотиазолинона, такие как алкилизотиазолиноны и бензизотиазолиноны (ACTICIDE MBS от Thor Chemie). Дополнительные примеры подходящих консервантов включают MIT (2-метил-4-изотиазолин-3-он), BIT (1,2-бензизотиазолин-3-он, который может быть приобретен у Avecia, Inc. как PROXEL GXL в виде раствора в гидроксиде натрия и дипропиленгликоле), 5-хлор-2-(4-хлорбензил)-3(2H)-изотиазолон, 5-хлор-2-метил-2H-изотиазол-3-он, 5-хлор-2-метил-2H-изотиазол-3-он, 5-хлор-2-метил-2H-изотиазол-3-он-гидрохлорид, 4,5-дихлор-2-циклогексил-4-изотиазолин-3-он, 4,5-дихлор-2-октил-2H-изотиазол-3-он, 2-метил-2H-изотиазол-3-он, комплекс 2-метил-2H-изотиазол-3-он-хлорида кальция, 2-октил-2H-изотиазол-3-он, полуформаль бензилового спирта или любую комбинацию перечисленного.
[0229] В тех случаях, когда указанная композиция включает буферный агент, указанный буферный агент может содержать калий, фосфорную кислоту, фосфатную соль, лимонную кислоту, цитратную соль, сульфатную соль, MOPS или HEPES. Указанный буферный агент может стабилизировать полипептид в композиции.
[0230] В тех случаях, когда указанная композиция включает смачивающий агент, указанный смачивающий агент может содержать кремнийорганические вещества, полиоксиэтоксилаты, полисорбаты, полиэтиленгликоль и их производные, этоксилаты, масла для обработки растений и полисахариды.
[0231] В тех случаях, когда указанная композиция включает поверхностно-активное вещество, указанное поверхностно-активное вещество может содержать темное нефтяное масло, темный нефтяной дистиллят, сложный эфир жирной кислоты и многоатомного спирта, полиэтоксилированный сложный эфир жирной кислоты, арилалкилполиоксиэтиленгликоль, монобутиловый простой полиоксиэтиленполиоксипропиленовый эфир, алкиламинацетат, алкиларилсульфонат, многоатомный спирт, алкилфосфат, этоксилат спирта, алкилфенолэтоксилат, алкилфенолэтоксилат, алкоксилированный многоатомный спирт, аолкилполиэтоксиэфир, алкилполиоксиэтилен-глицерин, производные этоксилированного соевого масла, поверхностно-активное вещество на основе кремнийорганических веществ; или любую комбинацию перечисленного. Поверхностно-активные вещества могут быть включены в различные композиции, в том числе композиции для обработки листвы.
[0232] В тех случаях, когда указанная композиция включает агент для покрытия, указанный агент для покрытия может содержать придающий липкость агент, полимеры, наполнители или объемообразующие агенты.
[0233] Указанный придающий липкость агент может включать, не ограничиваясь перечисленным, карбоксиметилцеллюлозу, природные и синтетические полимеры в форме порошков, гранул, или латексы, такие как гуммиарабик, хитин, поливиниловый спирт и поливинилацетат, а также природные фосфолипиды, такие как кефалины и лецитины, и синтетические фосфолипиды. Придающие липкость агенты включают агенты, предпочтительно состоящие из адгезивного полимера, который может быть природным или синтетическим, не оказывающего фитотоксического эффекта на семя, на которое требуется нанести покрытие. Дополнительные придающие липкость агенты, которые могут быть включены, по отдельности или в комбинации, включают, например, сложные полиэфиры, полиэфир-эфиры, полиангидриды, полиэфируретаны, полиэфирамиды; поливинилацетаты; сополимеры поливинилацетата; поливиниловые спирты и тилозу; сополимеры поливинилового спирта; поливинилпирролидоны; полисахариды, в том числе крахмалы, модифицированные крахмалы и производные крахмалов, декстрины, мальтодекстрины, альгинаты, хитозаны и целлюлозы, сложные эфиры целлюлозы, простые эфиры целлюлозы и сложные эфиры простых эфиров целлюлозы, включая этилцеллюлозу, метилцеллюлозы, гидроксиметилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы и карбоксиметилцеллюлозу; жиры; масла; белки, в том числе казеин, желатин и зеины; гуммиарабики; шеллаки; винилиденхлорид и сополимеры винилиденхлорида; лигносульфонаты, в частности, лигносульфонаты кальция; полиакрилаты, полиметакрилаты и акриловые сополимеры; поливинилакрилаты; полиэтиленоксид; полибутены, полиизобутены, полистирол, полибутадиен, полиэтиленамины, полиэтиленамиды; полимеры и сополимеры акриламида; полигидроксиэтилакрилат, мономеры метилакриламида; и полихлоропрен, или любую их комбинацию. Придающие липкость агенты могут применяться в ряде композиций, включая используемые в средстве для обработки семян.
[0234] В тех случаях, когда указанная композиция включает абразивный агент, указанный абразивный агент могут содержать тальк, графит или комбинацию первого и второго.
[0235] Увлажнитель представляет собой гигроскопическое вещество, которое помогает удерживать влагу. В тех случаях, когда указанная композиция включает увлажнитель, указанный увлажнитель может содержать: глицерол, глицерин, производное глицерина (например, моностеарат глицерина, триацетат глицерина, триацетин, пропиленгликоль, гексиленгликоль или бутиленгликоль), триэтиленгликоль, триполипропиленгликоль, глицерилтриацетат, сахарозу, тагатозу, сахарный спирт или многоатомный сахарный спирт (например, глицерин, сорбит, ксилит, маннит или мантитол), полимерный многоатомный спирт (например, полидекстрозу, коллаген, алоэ или гель алоэ вера) или альфагидроксикислоту (например, молочную кислоту, мед, мелассу, квиллайю, гексаметафосфат натрия, хлорид лития или мочевину). Синтетические увлажнители могут также включать бутиленгликоль и экстракт тремеллы.
[0236] В тех случаях, когда указанная композиция включает пестицид, указанный пестицид может содержать инсектицид, гербицид, фунгицид, бактериоцид, нематоцид, майтицид или любую их комбинацию.
[0237] В тех случаях, когда указанная композиция включает инсектицид, указанный инсектицид может содержать клотианидин, имидаклоприд, фосфорорганическое соединение, карбамат, пиретроид, акарицид, алкилфталат, борную кислоту, борат, фторид, серу, мочевину с галоароматическими заместителями, сложный эфир углеводорода, биологический инсектицид или любую комбинацию перечисленного. Например, указанный инсектицид может содержать клотианидин или имидаклоприд.
[0238] Указанный агрохимикат может содержать гербицид. Указанный гербицид может содержать 2,4-D, 2,4-DB, ацетохлор, ацифлуорфен, алахлор, аметрин, атразин, аминопиралид, бенефин, бенсульфурон, бенсульфурон-метил, бенсулид, бентазон, биспирибак натрия, бромацил, бромоксинил, бутилат, карфентразон, хлоримурон, 2-хлорфеноксиуксусную кислоту, хлорсульфурон, хлоримурон-этил, клетодим, кломазон, клопиралид, клорансулам, диметиламиновую соль хлор-2-метилфеноксипропановой кислоты (CMPP-P_DMA), циклоат, ДХФК, десмедифам, дикамбу, дихлобенил, диклофоп, 2,4-дихлорфенол, дихлорфеноксиуксусную кислоту, дихлорпроп, дихлорпроп-П, диклосулам, дифлуфензопир, диметенамид, диметиламиновая соль 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты, дикват, диурон, DSMA, эндоталь, EPTC, эталфлуралин, этофумесат, феноксапроп, флуазифоп-П, флукарбазон, флуфенацет, флуметсулам, флумиклорак, флумиоксазин, флуометурон, флуроксипир, 1-метилгептиловый эфир фтороксипира, фомесафен, натриевую соль фомесафена, форамсульфурон, глюфосинат, глюфосинат аммония, глифосат, галосульфурон, галосульфурон-метил, гексазинон, 2-гидроксифеноксиуксусную кислоту, 4-гидроксифеноксиуксусную кислоту, имазаметабенз, имазамокс, имазапик, имазаквин, имазетапир, изоксабен, изоксафлутол, лактофен, линурон, мазапир, МЦПА, МЦПБ, мекопроп, мекопроп-P, мезотрион, С-метолахлор, метрибузин, метсульфурон, метсульфурон-метил, молинат, MSMA, напропамид, напталам, никосульфурон, норфлуразон, оризалин, оксадиазон, оксифторфен, паракват, пеларгоновую кислоту, пендиметалин, фенмедифам, пиклорам, примисульфурон, продиамин, прометрин, пронамид, пропанил, просульфурон, пиразон, пиритиобак, пироксасульфон, квинклорак, квизалофоп, римсульфурон, сетоксидим, сидурон, симазин, сульфентразон, сульфометурон, сульфосульфурон, тебутиурон, тербацил, тиазопир, тифенсульфурон, тифенсульфурон-метил, тиобенкарб, триалкоксидим, триаллат, триасульфурон, трибенурон, трибернурон-метил, триклопир, трифлуралин, трифлусульфурон или любую их комбинацию.
[0239] В тех случаях, когда указанная композиция включает нематоцид, указанный нематоцид может содержать Bacillus firmus, флуопирам, антибиотики-нематоциды, такие как абамектин; карбаматные нематоциды, такие как ацетопрол, Bacillus chitonosporus, хлорпикрин, бенклотиаз, беномил, Burholderia cepacia, карбофуран, карбосульфан и клеотокард; дазомет, дибромхлорпропан (DBCP), DCIP, аланикарб, алдикарб, альдоксикарб, оксамил, диамидафос, фенамифос, фостиетан, фосфамидон, кадусафос, хлорпирифос, диклофентион, диметоат, этопрофос, фенсульфотион, фостиазат, гарпины, гетерофос, имициафос, изамидофос, изазофос, метомил, мекарфон, Myrothecium verrucaria, Paecilomyces lilacinus, Pasteuria nishizawae (в том числе их споры), форат, фосфокарб, тербуфос, тионазин, триазофос, тиоксазафен, дазомет, 1,2-дихлорпропан, 1,3-дихлорпропен, фурфурал, йодметан, метам, метилбромид, метилизотиоцианат, ксиленол или любую их комбинацию. Например, указанный нематоцид может включать штамм Bacillus firmus i-2580, Pasteuria nishizawae (в том числе их споры) или флуопирам.
[0240] В тех случаях, когда указанная композиция включает бактериоцид, указанный бактериоцид может содержать стрептомицин, пенициллины, тетрациклины, окситетрациклин, касугамицин, ампициллин, оксолиновую кислоту, хлортетрациклин, оксид меди или любую их комбинацию. Например, указанный бактериоцид может содержать окситетрациклин.
[0241] Агенты для биологического контроля в широком смысле определены как микроорганизмы, которые могут применяться вместо синтетических пестицидов или удобрений. В тех случаях, когда указанная композиция включает агент для биологического контроля, указанный агент для биологического контроля могут содержать Bacillus thuringiensis, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides, изолят J, Bacillus methylotrophicus, Bacillus vallismortis, Chromobacterium subtsugae, Delftia acidovorans, Streptomyces lydicus, Streptomyces colombiensis, Streptomyces galbus K61, Penicillium bilaii, продуцирующий липопептид Bacillus subtilis штамм, продуцирующий липопептид Bacillus amyloliquefaciens штамм, штамм Bacillus firmus или штамм Bacillus pumilus.
[0242] Указанный агрохимикат может включать фунгицид. Указанный фунгицид может содержать альдиморф, ампропилфос, ампропилфос калия, андоприм, анилазин, азаконазол, азоксистробин, беналаксил, беноданил, беномил, бензамакрил, бензамакрил-изобутил, бензовиндифлупир, биалафос, бинапакрил, бифенил, битерталон, бластицидин-S, боскалид, бромуконазол, бупиримат, бутиобат, полисульфид кальция, капсимицин, каптафол, каптан, карбендазим, карвон, хинометионат, хлобентиазон, хлорфеназол, хлоронеб, хлорпикрин, хлороталонил, хлозолинат, клозилакон, куфранеб, цимоксанил, ципроконазол, ципродинил, ципрофурам, дебакарб, дихлорфен, диклобутразол, диклофлуанид, дикломезин, диклоран, диэтофенкарб, диметиримол, диметоморф, димоксистробин, диниконазол, диниконазол-М, динокап, дифениламин, дипиритион, диталимфос, дитианон, додеморф, додин, дразоксолон, эдифенфос, эпоксиконазол, этаконазол, этиримол, этридиазол, фамоксадон, фенапанил, фенаримол, фенбуконазол, фенфурам, фенитропан, фенпиклонил, фенпропидин, фенпропиморф, фентин ацетат, фентин гидроксид, фербам, феримзон, флуазинам, флудиоксонил, флуметовер, флуоромид, флуоксастробин, флуквинконазол, флурпримидол, флусилазол, флусульфамид, флутоланил, флутриафол, фолпет, фосетил-алюминий, фосетил-натрий, фталид, фуберидазол, фуралаксил, фураметпир, фуркарбонил, фурконазол, фурконазол-цис, фурмециклокс, гуазатин, гексахлорбензен, гексаконазол, гимексазол, имазалил, имибенконазол, иминоктадин, иминоктадина альбесилат, иминоктадина триацетат, йодокарб, ипробенфос (IBP), ипродион, ирумамицин, изопротиолан, изоваледион, касугамицин, крезоксим-метил, составы с медью, такие как: гидроксид меди, нафтенат меди, оксихлорид меди, сульфат меди, оксид меди, оксинат меди и бордоская жидкость, манкоппер, манкоцеб, манеб, меферимзон, мепанипирим, мепронил, метконазол, метазил, метасульфокарб, метфуроксам, метирам, метомеклам, метсульфовакс, милдиомицин, миклобутанил, миклозолин, никеля диметилдитиокарбамат, нитротал-изопропил, нуаримол, офурац, оксадиксил, оксамокарб, оксолиновую кислоту, оксикарбоксим, оксифентиин, паклобутразол, пефуразоат, пенконазол, пенцикурон, фосдифен, пикоксистробин, пимарицин, пипералин, полиоксин, полиоксорим, пробеназол, прохлораз, процимидон, пропамокарб, пропанозин-натрий, пропиконазол, пропинеб, протиоциназол, пиразофос, пирифенокс, пириметанил, пирохилон, пироксифур, хинконазол, хинтозин (PCNB), стробилурин, сера и составы с серой, тебуконазол, теклофталам, техназин, тетциклацис, тетраконазол, тиабендазол, тиоциофен, тифлузамид, тиофанат-метил, тиоксимид, толклофос-метил, толилфлуанид, триадимефон, триадименол, триазбутил, триазол, триазоксид, трихламид, трициклазол, триклопир, тридеморф, трифлоксистробин, трифлумизол, трифорин, униконазол, валидамицин A, винклозолин, виниконазол, зариламид, цинеб, цирам, а также Dagger G, OK-8705, OK-8801, a-(1,1-диметилэтил)-(3-(2-феноксиэтил)-1H-1,2,4-триазол-1-этанол, a-(2,4-дихлорфенил)-[3-фтор-3-пропил-1 H--1,2,4-триазол-1-этанол, a-(2,4-дихлорфенил)-[3-метокси-a-метил-1H-1,2,4-триазол-1-этанол, a-(5-метил-1,3-диоксан-5-ил)-[3-[[4-(трифторметил)-фенил]-метилен]-1 H-1,2,4-триазол-1-этанол, (5RS,6RS)-6-гидрокси-2,2,7,7-тетраметил-5-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-3-октанон, (E)-a-(метоксиимино)-N-метил-2-фенокси-фенилацетамид, 1-изопропил{2-метил-1-[[[1-(4-метилфенил)-этил]-амино]-карбонил]-пропил}карбамат, 1-(2,4-дихлорфенил)-2-(1 H-1,2,4-триазол-1-ил)-этанон-O-(фенил метил)-оксим, 1-(2-метил-1-нафталенил)-1H-пиррол-2,5-дион, 1-(3,5-дихлорфенил)-3-(2-пропенил)-2,5-пирролидиндион, 1-[(дийодометил)-сульфонил]-4-метилбензен, 1-[[2-(2,4-дихлорфенил)-1, 3-диоксолан-2-ил]-метил]-1H-имидазол, 1-[[2-(4-хлорфенил)-3-фенилоксиранил]-метил]-1 H-1,2,4-триазол, 1-[1-[2-[(2,4-дихлорфенил)-метокси]-фенил]-этенил]-1H-имидазол, 1-метил-5-нонил-2-(фенилметил)-3-пирролидинол, 2',6'-дибромо-2-метил-4'-трифторметокси-4'-трифторметил-1, 3-тиазолкарбоксанилид, 2,2-дихлор-N-[1-(4-хлорфенил)-этил]-1-этил-3-метилциклопропанкарбоксамид, 2,6-дихлор-5-(метилтио)-4-пиримидинилтиоцианат, 2,6-дихлор-N-(4-трифторметилбензил)-бензамид, 2,6-дихлор-N-[[4-(трифторметил)-фенил]-метил]-бензамид, 2-(2,3,3-трийодо-2-пропенил)-2H-тетразол, 2-[(1-метилэтил)-сульфонил]-5-(трихлорметил)-1,3,4-тиадиазол, 2-[[6-дезокси-4-O-(4-0-метил-(3-D-гликопиранозил)-a-D-глюкопиранозил]-амино]-4-метокси-1H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил, 2-аминобутан, 2-бром-2-(бромметил)-пентандинитрил, 2-хлор-N-(2,3-дигидро-1,1,3-триметил-1 H-инден-4-ил)-3-пиридинкарбоксамид, 2-хлор-N-(2,6-диметилфенил)-N-(изотиоцианатометил)-ацетамид, 2-фенилфенол (OPP), 3,4-дихлор-1-[4-(дифторметокси)-фенил]-пиррол-2,5-дион, 3,5-дихлор-N-[циано[(1-метил-2-пропинил)-окси]-метил]-бензамид, 3-(1,1-диметилпропил-1-оксо-1H-инден-2-карбонитрил, 3-[2-(4-хлорфенил)-5-этокси-3-изоксазолидинил]-пиридин, 4-хлор-2-циано-N,N-диметил-5-(4-метилфенил)-1 H-имидазол-l-сульфонамид, 4-метил-тетразоло[1,5-a]хиназолин-5(4H)-он, 8-(1,1-диметилэтил)-N-этил-N-пропил-1,4-диоксаспиро[4,5]декан-2-метанамин, 8-гидроксихинолинсульфат, 9H-ксантен-2-[(фениламино)-карбонил]-9-карбоксильный гидразид, бис-(1-метилэтил)-3-метил-4-[(3-метилбензоил)-окси]-2,5-тиофендикарбоксилат, цис-1-(4-хлорфенил)-2-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-циклогептанол, цис-4-[3-[4-(1,1-диметилпропил)-фенил-2-метилпропил]-2,6-диметил-морфолина гидрохлорид, этил[(4-хлорфенил)-азо]-цианоацетат, калия бикарбонат, натриевую соль метантетратиола, метил-1-(2,3-дигидро-2,2-диметил-инден-1-ил)-1H-имидазол-5-карбоксилат, метил-N-(2,6-диметилфенил)-N-(5-изоксазолилкарбонил)-DL-аланинат, метил N-(хлорацетил)-N-(2,6-диметилфенил)-DL-аланинат, N-(2,3-дихлор-4-гидроксифенил)-1-метилциклогексанкарбоксамид, N-(2,6-диметилфенил)-2-метокси-N-(тетрагидро-2-оксо-3-фуранил)-ацетамид, N-(2,6-диметилфенил)-2-метокси-N-(тетрагидро-2-оксо-3-тиенил)-ацетамид, N-(2-хлор-4-нитрофенил)-4-метил-3-нитробензенсульфонамид, N-(4-циклогексилфенил)-1,4,5,6-тетрагидро-2-пиримидинамин, N-(4-гексилфенил)-1,4,5,6-тетрагидро-2-пиримидинамин, N-(5-хлор-2-метилфенил)-2-метокси-N-(2-оксо-3-оксазолидинил)-ацетамид, N-(6-метокси)-3-пиридинил)-циклопропанкарбоксамид, N-[2,2,2-трихлор-1-[(хлорацетил)-амино]-этил]-бензамид, N-[3-хлор-4,5-бис(2-пропинилокси)-фенил]-N'-метоксиметанимидамид, натриевую соль N-формил-N-гидрокси-DL-аланина, 0,0-диэтил[2-(дипропиламино)-2-оксоэтил]-этилфосфорамидотиоат, 0-метил-S-фенил-фенилпропилфосфорамидотиоат, S-метил-1,2,3-бензотиадиазол-7-карботиоат и спиро[2H]-1-бензопиран-2,1'(3'H)-изобензофуран]-3'-он, N-трихлорметил)тио-4-циклогексан-1,2-дикарбоксимид, диамид тетраметилтиопероксидикарбоновой кислоты, метил-N-(2,6-диметилфенил)-N-(метоксиацетил)-DL-аланинат, 4-(2,2-дифтор-1,3-бензодиоксол-4-ил)-1-Н-пиррол-3-карбонитрил, или любую комбинацию перечисленного.
[0243] В тех случаях, когда указанные полипептиды входят в состав или применяются в комбинации с коммерчески доступными фунгицидами, указанные композиции могут дополнительно повышать уровень защиты для улучшения предотвращения или распространения заболевания у растения. Комбинация указанных полипептидов с фунгицидом может защищать растение от первичной или вторичной грибной инфекции, которая может возникать, если растение было повреждено или ослаблено в результате воздействия абиотического стресса или заболевания.
[0244] Стробилуриновый фунгицид может содержать стробилурин A, стробилурин B, стробилурин C, стробилурин D, стробилурин E, стробилурин F, стробилурин G, стробилурин H, азоксистробин, трифлоксистробин, крезоксим метил, флуоксастробин, пикоксистробин или любую комбинацию перечисленного.
[0245] Стробилуриновый фунгицид может содержать не встречающийся в природе стробилуриновый фунгицид, такой как азоксистробин, трифлоксистробин, крезоксим-метил, флуоксастробин или любую их комбинацию. Например, стробилуриновый фунгицид может содержать трифлоксистробин, флуоксастробин или пикоксистробин. Стробилуриновые фунгициды используют для контроля ряда грибных заболеваний, в том числе водной плесени, ложномучнистой росы, настоящей мучнистой росы, вызывающие пятнистость и гниль листьев грибы, вызывающие гниение плодов и ржавчинные грибы. Они подходят для обработки различных растительных культур, в том числе злаков, полевых культур, фруктов, древесных орехов, овощей, газонных и декоративных растений.
[0246] Триазольный фунгицид может содержать протиоконазол, имидазол, имидазил, прохлораз, пропиконазол, трифлумизол, диниконазол, флусилазол, пенконазол, гексаконазол, ципроконазол, миклобутанил, тебуконазол, дифеноконазол, тетраконазол, фенбуконазол, эпоксиконазол, метконазол, флуквинконазол, тритиконазол или любую их комбинацию.
[0247] Биоактивные примирующие полипептиды могут быть доставлены в комбинации с стробилуринами и триазольными фунгицидами, в частности, флуоксастробином или трифлоксистробином в комбинации с протиоконазолом.
[0248] Кроме того, указанный фунгицид может содержать азоксистробин, карбоксин, дифеноконазол, флудиоксонил, флуксапироксад, ипконазол, мефеноксам, пираклостробин, силтиофам, седаксан, тирам, тритиконазол или любую их комбинацию.
[0249] Наряду с фунгицидами для внекорневого внесения согласно описанию в настоящем документе биоактивные примирующие полипептиды могут быть предложены в комбинации с фунгицидом, инсектицидом, нематоцидом, бактериоцидом и майтицидом, или любым агрохимикатом, который представляет собой биологический агент.
2
2
4
[0250] Указанный агрохимикат может включать удобрение. Указанное удобрение может включать сульфат аммония, нитрат аммония, нитрат сульфата аммония, хлорид аммония, бисульфат аммония, полисульфид аммония, тиосульфат аммония, водный аммиак, безводный аммиак, полифосфат аммония, сульфат алюминия, нитрат кальция, нитрат кальция-аммония, сульфат кальция, обожженный магнезит, кальцитовый известняк, оксид кальция, нитрат кальция, доломитовый известняк, гидратную известь, карбонат кальция, диаммонийфосфат, моноаммонийфосфат, нитрат магния, сульфат магния, нитрат калия, хлорид калия, сульфат магния-калия, сульфат калия, нитраты натрия, магнезиальный известняк, магнезию, мочевину, формальдегидмочевины, мочевино-аммониевый нитрат, покрытую серой мочевину, покрытую полимером мочевину, изобутилиден-димочевину, KSO4-MgSO, каинит, сильвинит, кизерит, соли Эпсома, элементарную серу, мергель, молотые раковины устриц, рыбную муку, жмыхи, рыбный тук, кровяную муку, фосфатную руду, суперфосфаты, шлак, костную муку, древесную золу, навоз, помет летучих мышей, торфяной мох, компост, сырой песок, муку из жмыха семян хлопчатника, перьевую муку, крабовую кормовую муку, рыбную эмульсию, гуминовую кислоту или любую их комбинацию.
[0251] Указанное удобрение может включать жидкое удобрение или сухое удобрение.
[0252] Указанный агрохимикат может содержать микроудобрение, содержащее борную кислоту, борат, борную фритту, сульфат меди, медную фритту, хелат меди, натрия тетраборат декагидрат, сульфат железа, оксид железа, сульфат железа-аммония, железную фритту, хелат железа, сульфат марганца, оксид марганца, хелат марганца, хлорид марганца, марганцевую фритту, молибдат натрия, молибденовую кислоту, сульфат цинка, оксид цинка, карбонат цинка, цинковую фритту, фосфат цинка, хелат цинка или любую их комбинацию.
[0253] Указанный агрохимикат может содержать инсектицид, при этом указанный инсектицид содержит фосфорорганическое соединение, карбамат, пиретроид, акарицид, алкилфталат, борную кислоту, борат, фторид, серу, мочевину с галоароматическими заместителями, сложный эфир углеводорода, биологический инсектицид или любую их комбинацию.
[0254] В тех случаях, когда указанная композиция включает биостимулятор, указанный биостимулятор может содержать экстракт морских водорослей, элиситор, полисахарид, моносахарид, экстракт белка, соевый экстракт, гуминовую кислоту, гормон растений, регулятор роста растений или любую их комбинацию.
[0255] Могут применяться различные окрашивающие средства, в том числе органические хромофоры, классифицируемые как нитрозо-, нитро-, азо-, в том числе моноазо-, бисазо- и полиазо-, дифенилметан, триарилметан, ксантен, метан, акридин, тиазол, тиазин, индамин, индофенол, азин, оксазин, антрахинон, фталоцианин, или любая их комбинация.
[0256] Указанная композиция может дополнительно содержать носитель.
[0257] Носитель указанной композиции может включать, но не ограничиваясь перечисленным, воду, торф, пшеницу, отруби, вермикулит, глину, пастеризованную почву, карбонат кальция, бикарбонат кальция, доломит, гипс, бентонит, глину, фосфорит, соединение фосфора, диоксид титана, гумус, тальк, альгинат, активированный уголь или их комбинацию.
[0258] Указанная композиция может находиться в форме водного раствора, взвеси или дисперсии, эмульсии, твердого вещества, например, порошка или гранул, или любой другой требуемой форме для применения указанной композиции для растения или части растения.
[0259] Биоактивные примирующие полипептиды, такие как флагеллин и флагеллин-ассоциированные полипептиды, тионин (семейство дефензинов), гарпиноподобный HpaG, EF-Tu или другие способствующие росту или изменяющие рост биоактивные примирующие полипептиды, такие как ФСК-α и RHPP, могут быть представлены в виде композиций, которые могу применяться экзогенно и/или эндогенно у растения или части растения, и обеспечивать усиленный рост растения, продуктивность растения и улучшенное состояние здоровья у указанного растения или части растения, согласно более подробному описанию ниже.
[0260] Указанные биоактивные примирующие полипептиды могут быть добавлены по отдельности или в комбинации в виде композиции, подходящей для применения в качестве средств для обеспечения преимущества для растений и/или частей растений.
[0261] Для получения комбинации указанные полипептиды могут быть подготовлены и доставлены в форме очищенного полипептида, либо в виде генетически слитой последовательности на одном рекомбинантном векторе, либо по отдельности с применением разных рекомбинантных векторов.
[0262] Биоактивные примирующие полипептиды могут также получены и доставлены в растение или часть растения в виде полипептидов из нескольких активных конструкций в слитом белке. Примеры включают доставку нескольких флагеллин-ассоциированных полипептидов, получаемых последовательно, с сайтами расщепления протеазой, разделяющими все полипептидами, как известно специалисту в данной области техники. Такие слитые белки могут включать любую комбинацию биоактивных примирующих полипептидов согласно описанию в настоящем документе, в том числе биоактивных примирующих полипептидов из разных классов, такие как комбинации флагеллин-ассоциированных полипептидов с RHPP. Биоактивные примирующие полипептиды могут также быть использованы в виде слитых белков со связывающимися с растением доменами, которые могут направлять указанные полипептиды в определенные местоположения в растении, где они наиболее востребованы или необходимы для того, чтобы их активность была благоприятной.
[0263] Кроме того, указанные полипептиды могут быть добавлены в предложенные составы в форме синтетических соединений.
[0264] Флагеллиновые и флагеллин-ассоциированные биоактивные примирующие полипептиды согласно описанию в настоящем документе могут быть представлены в индивидуальном виде или в комбинации, содержащей по меньшей мере два и до нескольких биоактивных примирующих полипептидов для получения композиции, отвечающей специфическим потребностям растения в широком диапазоне требуемых ответов у хозяина и сельскохозяйственных систем.
[0265] Если композиция включает ретро-инверсную форму биоактивного примирующего полипептида Flg (например, RI Bt.4Q7 Flg 22 (SEQ ID NO: 376), указанный полипептид демонстрирует улучшенную стабильность и меньшее разложение с течением времени, обеспечивающие бóльшую активность на поверхности мембраны растительных клеток, что усиливает способность указанного полипептида к связыванию с рецептором и поглощению растением. Ретро-инверсные формы таких Flg-ассоциированных биоактивных примирующих полипептидов используют для обеспечения улучшенной стабильности применяемого в агрокультуре состава, при условии, что указанный полипептид или полипептиды Flg демонстрируют улучшенную защиту от протеолитического расщепления, которая вносит вклад в общую более высокую активность и более длительный срок хранения композиции.
[0266] В тех случаях, когда указанный полипептид содержит полипептид RHPP, указанная композиция может дополнительно содержать флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид. Указанный полипептид RHPP может содержать SEQ ID NO: 600. Последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида может содержать любую из SEQ ID NO: 1-525, 532, 534, 536, 538, 540, 571-586 и 751-752, или любую их комбинацию. Например, указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид может содержать любую из SEQ ID NO: 226, 571 и 752. В некоторых случаях указанный полипептид RHPP может содержать SEQ ID NO: 600 и указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид может содержать SEQ ID NO: 226.
[0267] Указанные полипептиды могут быть введены в состав в комбинации со вспомогательным полипептидом. Сигнатурные полипептиды (SEQ ID NO: 542-548), сигнальные якорные сортирующие полипептиды (SEQ ID NO: 549-562) и полипептиды секреции (SEQ ID NO: 563-570) могут быть скомбинированы с биоактивными примирующими полипептидами согласно описанию для нацеливания на указанные полипептиды/пептиды (таблицы 1-5) на поверхность мембраны растительных клеток для улучшенного связывания и активации Flg-ассоциированных рецепторов. Указанный способ эффективной доставки и связывания указанного полипептида с растением обеспечивает преимущества стимуляции роста, а также усиленную защиту растения или части растения.
[0268] Например, гарпиновые или HpaG-подобные биоактивные примирующие полипептиды согласно описанию в настоящем документе могут применяться в комбинации со вспомогательными полипептидами согласно описанию в таблицах 6-8), сигнатурными полипептидами (SEQ ID NO: 542-548), сигнальными якорными сортирующими полипептидами (SEQ ID NO: 549-562) и/или полипептидами секреции (SEQ ID NO: 563-570). Указанные вспомогательные полипептиды, применяемые в комбинации с HpaG-подобными биоактивными примирующими полипептидами подходят для нацеливания и доставки гарпиноподобных биоактивных примирующих полипептидов на поверхность мембраны растительных клеток, улучшая контакт с мембраной растительных клеток, и обеспечивают средство передачи, облегчающее эффективный контакт и проникновение гарпиноподобного (HpaG-подобного) полипептида в растение или в окружение растительной клетки (апопласт).
[0269] Один или более из указанных полипептидов EF-Tu может быть скомбинирован, необязательно, с указанным флагеллином или флагеллин-ассоциированным полипептидом. Последовательность аминокислот указанного полипептида или полипептидов EF-Tu может содержать SEQ ID NO: 616 и/или 617. Последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида может содержать любую из SEQ ID NO: 1-525, 532, 534, 536, 538, 540, 571-586 и 751-753, или любую их комбинацию. Например, последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида может содержать SEQ ID NO: 571. В другом примере указанная композиция может содержать полипептиды EF-Tu, содержащие SEQ ID NO: 616 и 617, и флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, содержащий SEQ ID NO: 226, 571, 572, или их комбинации. В другом примере полипептид или полипептиды EF-Tu, содержащие SEQ ID NO: 616 и/или 617, могут быть скомбинированы с флагеллином или флагеллин-ассоциированным полипептидом, содержащим SEQ ID NO: 226. В качестве альтернативы, указанная композиция может содержать один или более полипептидов EF-Tu по отдельности (например, содержащие SEQ ID NO: 616 и/или 617). Указанные полипептиды EF-Tu (например, SEQ ID NO: 616 и 617) могут быть дополнительно модифицированы путем N-концевого ацетилирования.
[0270] Кроме того, полипептид EF-Tu или полипептид EF-Tu, и флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид могут быть скомбинированы с гарпином или гарпиноподобным полипептидом. Например, последовательность аминокислот указанного гарпина или гарпиноподобного полипептида может содержать SEQ ID NO: 587.
[0271] Указанная композиция может содержать любую из следующих комбинаций: (a) флагеллиновые или флагеллин-ассоциированные полипептиды, при этом последовательности аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированных полипептидов содержат SEQ ID NO: 571, 295, 300, 293 и 580; или 295, 300, 293 и 580; или 571, 295, 293 и 580; или 571, 300, 293 и 580; или 571, 293 и 580; или 571, 295, 293; или (b) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226, и целлобиоза, целлюлоза, хитин, хитозан или любая комбинация перечисленного; или (c) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226, и гарпин или гарпиноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит SEQ ID NO: 591; или (d) гарпин или гарпиноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит SEQ ID NO: 587, и полипептид ФСК, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида ФСК содержит SEQ ID NO: 598; или (e) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226, 752 или 571 или любую их комбинацию, и полипептиды EF-Tu, при этом последовательности аминокислот указанных полипептидов EF-Tu содержат SEQ ID NO: 616 и 617; или (f) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226, 540, 752 или 571 или любую их комбинацию; или (g) полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида RHPP содержит SEQ ID NO: 600; или (h) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательности аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержат SEQ ID NO: 226, 540, 226, 752 или 571 или любую их комбинацию, и полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида RHPP содержит SEQ ID NO: 600; или (i) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226, и полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида RHPP содержит SEQ ID NO: 600.
IV. Применение
[0272] Композиция и способы для сельскохозяйственного применения, описанные в настоящем документе, могут применяться в любыми видами растений и/или их семенами. Указанные композиции и способы, как правило, применяют с агрономически важными семенами.
[0273] Указанное семя может представлять собой трансгенное семя, из которого может быть выращено трансгенное растение, в котором происходит трансгенное событие, которое обеспечивает, например, переносимость конкретного гербицида или комбинации гербицидов, повышенную устойчивость к заболеванию, улучшенную переносимость воздействия насекомых, засухи, стресса и/или повышенную урожайность.
[0274] Указанное семя может включать селекционный признак, в том числе например, селекционный признак толерантности к заболеванию.
[0275] В некоторых случаях семя включает по меньшей мере один трансгенный признак и по меньшей мере один селекционный признак.
[0276] Композиции биоактивных примирующих полипептидов и способы применения указанных полипептидов могут применяться для обработки любого подходящего типа семени, в том числе, но не ограничиваясь перечисленными, пропашных и овощных культур. Например, одно или более растений или одна или более частей растений, или семена одного или более растений могут включать текстильный банан (манильскую пеньку) (Musa textilis), кормовую люцерну (Medicago sativa), люцерну в семенах (Medicago sativa), миндаль (Prunus dulcis), анисовое семя (Pimpinella anisum), яблоню (Malus sylvestris), абрикос (Prunus armeniaca), арековую пальму (бетельную пальму) (Areca catechu), арракачу (Arracacia xanthorrhiza), аррорут (Maranta arundinacea), артишок (Cynara scolymus), спаржу (Asparagus officinalis), авокадо (Persea americana), просо посевное (просо американское) (Pennisetum americanum), бамбарский земляной орех (Vigna subterranea), банан (Musa paradisiaca), ячмень (Hordeum vulgare), фасоль сухую, съедобную, зерновую (Phaseolus vulgaris), фасоль зеленую (виды Phaseolus и Vigna), кормовую свеклу (Beta vulgaris), красную свеклу (Beta vulgaris), сахарную свеклу (Beta vulgaris), кормовую сахарную свеклу (Beta vulgaris), сахарную свеклу в семенах (Beta vulgaris), бергамот (Citrus bergamia), плод бетельной пальмы (Areca catechu), черный перец (Piper nigrum), акацию черноствольную (Acacia mearnsii), ежевику различных видов (Rubus spp.), чернику (Vaccinium spp.), бразильский орех (Bertholletia excelsa), хлебное дерево (Artocarpus altilis), садовые бобы, сухие (Vicia faba), садовые бобы, зеленые (Vicia faba), брокколи (Brassica oleracea, вар. botrytis), сорго двуцветное (Sorghum bicolor), сорго веничное (Sorghum bicolor), брюссельскую капусту (Brassica oleracea, вар. gemmifera), гречиху (Fagopyrum esculentum), красную капусту, белую капусту, савойскую капусту (Brassica oleracea, вар. capitata), пекинскую капусту (Brassica chinensis), кормовую капусту (Brassica spp.), какао (Theobroma cacao), мускусную дыню (Cucumis melo), семена тмина (Carum carvi), кардамон (Elettaria cardamomum), испанский артишок (Cynara cardunculus), кэроб (Ceratonia siliqua), пищевую морковь (Daucus carota spp.sativa), кормовую морковь (Daucus carota sativa), орех кешью (Anacardium occidentale), кассаву (маниок) (Manihot esculenta), клещевину (Ricinus communis), цветную капусту (Brassica oleracea, вар. botrytis), корневой сельдерей (Apium graveolens, вар. rapaceum), сельдерей (Apium graveolens), чайот (Sechium edule), любые сорта вишни (Prunus spp.), каштан съедобный (Castanea sativa), нут (бараний горох) (Cicer arietinum), цикорий (Cichorium intybus), зелень цикория (Cichorium intybus), сухой перец чили (все сорта) (Capsicum spp.(annuum)), свежий перец чили (все сорта) (Capsicum spp.(annuum)), корицу (Cinnamomum verum), цитрон (Citrus medica), цитронеллу (Cymbopogon citrates; Cymbopogon nardus), клементин (Citrus reticulata), гвоздику (Eugenia aromatica; Syzygium aromaticum), кормовой клевер (все сорта) (Trifolium spp.), клевер в семенах (все сорта) (Trifolium spp.), какао (Theobroma cacao), кокос (Cocos nucifera), таро (Colocasia esculenta), кофе (Coffea spp.), орех кола, все сорта (Cola acuminata), кользу (рапс) (Brassica napus), зерновую кукурузу (маис) (Zea mays), кукурузу (маис) для силоса (Zea mays), кукурузу (маис) как овощную культуру (Zea mays), маш-салат (Valerianella locusta), хлопок, все сорта (Gossypium spp.), семя хлопчатника, все сорта (Gossypium spp.), зерновую вигну (Vigna unguiculata), зеленую вигну (Vigna unguiculata), клюкву (Vaccinium spp.), кресс-салат (Lepidium sativum), огурец (Cucumis sativus), смородину, все сорта (Ribes spp.), кремовое яблоко (Annona reticulate), таро (Colocasia esculenta), финики (Phoenix dactylifera), морингу масличную (Moringa oleifera), дурру (сорго) (Sorghum bicolour), пшеницу дурум (Triticum durum), бамбарский земляной орех (Vigna subterranea), эдо (эддо) (Xanthosoma spp.; Colocasia spp.), баклажан (Solanum melongena), эндивий (Cichorium endivia), фенхель (Foeniculum vulgare), пажитник (Trigonella foenum-graecum), инжир (Ficus carica), лещину (фундук) (Corylus avellana), фуркрею (Furcraea macrophylla), лен для волокна (Linum usitatissimum), масличный лен (льняное семя) (Linum usitatissimum), формиум (новозеландский лен) (Phormium tenax), чеснок, сухой (Allium sativum), чеснок, зеленый (Allium sativum), герань (Pelargonium spp.; Geranium spp.), имбирь (Zingiber officinale), крыжовник, все сорта (Ribes spp.), горлянка (Lagenaria spp; Cucurbita spp.), бараний горох (нут) (Cicer arietinum), виноград (Vitis vinifera), грейпфрут (Citrus paradisi), виноград для производства изюма (Vitis vinifera), столовый виноград (Vitis vinifera), виноград для производства вина (Vitis vinifera), трава эспарто (Lygeum spartum), ежа сборная (Dactylis glomerata), сорго двуцветное (Sorghum bicolor, вар. sudanense), земляной орех (арахис) (Arachis hypogaea), гуаву (Psidium guajava), гвинейскую кукурузу (гвинейское сорго) (Sorghum bicolor), фундук (лещину) (Corylus avellana), пеньковое волокно (Cannabis sativa spp.indica), манильскую пеньку (абаку)(Musa textilis), бомбейскую пеньку (Crotalaria juncea), конопляное семя (марихуану) (Cannabis sativa), генекен (Agave fourcroydes), хну (Lawsonia inermis), хмель (Humulus lupulus), конский боб (Vicia faba), хрен (Armoracia rusticana), гибридную кукурузу (Zea mays), индиго (Indigofera tinctoria), жасмин (Jasminum spp.), иерусалимский артишок (Helianthus tuberosus), джовар (сорго) (Sorghum bicolor), джут (Corchorus spp.), капуста кале (Brassica oleracea, вар. acephala), капок (Ceiba pentandra), кенаф (Hibiscus cannabinus), кольраби (Brassica oleracea, вар. gongylodes), лаванду (Lavandula spp.), порей (Allium ampeloprasum; Allium porrum), лимон (Citrus limon), лимонную траву (Cymbopogon citratus), чечевицу (Lens culinaris), леспедезу, все сорта (Lespedeza spp.), латук (Lactuca sativa, вар. capitata), лайм, кислый (Citrus aurantifolia), лайм, сладкий (Citrus limetta), льняное семя (масличную культуру льна) (Linum usitatissimum), лакрицу (Glycyrrhiza glabra), личи (Litchi chinensis), локват (Eriobotrya japonica), люпин, все сорта (Lupinus spp.), макадамию (австралийский орех) (Macadamia spp.ternifolia), мускатный цвет (Myristica fragrans), магвей (Agave atrovirens), маис (кукурузу) (Zea mays), маис (кукурузу) для силоса (Zea mays), кукурузу (гибрид) (Zea mays), обычную кукурузу (Zea mays), мандарин (Citrus reticulata), обыкновенную свеклу (кормовую свеклу) (Beta vulgaris), манго (Mangifera indica), маниок (кассаву) (Manihot esculenta), суржу (смесь злаков) (смесь Triticum spp.и Secale cereale), шишковник (Mespilus germanica), бахчевые культуры (дыню, Cucumis melo), не включая арбуз, сорго веничное (Sorghum bicolor), просо американское, просо посевное (Pennisetum americanum), просо тростниковое (Pennisetum americanum), просо пальчатое (Eleusine coracana), просо итальянское (Setaria italica), ежовник японский (Echinochloa esculenta), просо африканское (бажра, просо тростниковое) (Pennisetum americanum), просо обыкновенное (Panicum miliaceum), мяту, все сорта (Mentha spp.), шелковицу для получения ягод, все сорта (Morus spp.), шелковицу для разведения шелковичных червей (Morus alba), высшие грибы (Agaricus spp.; Pleurotus spp.; Volvariella), горчицу (Brassica nigra; Sinapis alba), нектарин (Prunus persica, вар. nectarina), новозеландский лен (формиум) (Phormium tenax), гвизоцию абиссинскую (Guizotia abyssinica), мускатный орех (Myristica fragrans), овес кормовой (Avena spp.), масличную пальму (Elaeis guineensis), окру (Abelmoschus esculentus), оливу (Olea europaea), лук в семенах (Allium cepa), сухой лук (Allium cepa), зеленый лук (Allium cepa), опиумный мак (Papaver somniferum), апельсин (Citrus sinensis), горький апельсин (Citrus aurantium), декоративные растения (различные), пальмировую пальму (Borassus flabellifer), масличную пальму для получения пальмоядрового масла (Elaeis guineensis), масличную пальму (Elaeis guineensis), саговую пальму (Metroxylon sagu), папайю (дынное дерево) (Carica papaya), пастернак (Pastinaca sativa), горох, пищевой сухой, для получения крупы (Pisum sativum), зеленый горох (Pisum sativum), персик (Prunus persica), арахис (земляной орех) (Arachis hypogaea), грушу (Pyrus communis), орех пекан (Carya illinoensis), черный перец (Piper nigrum), сухой перец (Capsicum spp.), хурму (Diospyros kaki; Diospyros virginiana), голубиный горох (Cajanus cajan), ананас (Ananas comosus), фисташковое дерево (Pistacia vera), плантан (Musa sapientum), сливу (Prunus domestica), гранат (Punica granatum), помело (Citrus grandis), маковое семя (Papaver somniferum), картофель (Solamum tuberosum), масличную пальму для получения пальмоядрового масла (Elaeis guineensis), сладкий картофель (Ipomoea batatas), сливу домашнюю (Prunus domestica), пищевую тыкву (Cucurbita spp.), кормовую тыкву (Cucurbita spp.), пиретрум (Chrysanthemum cinerariaefolium), квебрахо (Aspidosperma spp.), австралийский орех (Macadamia spp.ternifolia), айву (Cydonia oblonga), хинное дерево (Cinchona spp.), киноа (Chenopodium quinoa), рами (Boehmeria nivea), рапс (кользу) (Brassica napus), малину, все сорта (Rubus spp.), красную свеклу (Beta vulgaris), полевицу (Agrostis spp.), китайскую крапиву (Boehmeria nivea), ревень (Rheum spp.), рис (Oryza sativa; Oryza glaberrima), розу (Rose spp.), каучуковое дерево (Hevea brasiliensis), шведскую репу (брюкву) (Brassica napus, вар. napobrassica), рожь (Secale cereale), семена плевела (Lolium spp.), сафлор (Carthamus tinctorius), эспарцет (Onobrychis viciifolia), овсяный корень (Tragopogon porrifolius), саподиллу (Achras sapota), сатсума (мандарин/танжерин) (Citrus reticulata), скорцонеру (черный корень) (Scorzonera hispanica), кунжут (Sesamum indicum), масло ши (орех) (Vitellaria paradoxa), сизаль (Agave sisalana), сорго (Sorghum bicolor), сорго, веничное (Sorghum bicolor), сорго, дурра (Sorghum bicolor), сорго, гвинейское (Sorghum bicolor), сорго, джовар (Sorghum bicolor), сорго, сладкое (Sorghum bicolor), сою (Glycine max), соевое сено (Glycine max), спельту (Triticum spelta), шпинат (Spinacia oleracea), тыкву (Cucurbita spp.), землянику (Fragaria spp.), сахарную свеклу (Beta vulgaris), кормовую сахарную свеклу (Beta vulgaris), сахарную свеклу в семенах (Beta vulgaris), кормовой сахарный тростник (Saccharum officinarum), сахарный тростник для производства сахара или алкоголя (Saccharum officinarum), сахарный тростник для кровельной соломы (Saccharum officinarum), подсолнечник кормовой (Helianthus annuus), подсолнечник для производства масла (Helianthus annuus), бомбейскую пеньку (Crotalaria juncea), брюкву (Brassica napus, вар. napobrassica), кормовую брюкву (Brassica napus, вар. napobrassica), сладкую кукурузу (Zea mays), сладкий лайм (Citrus limetta), сладкий перец (Capsicum annuum), сладкий картофель (Iopmoea batatas), сладкое сорго (Sorghum bicolor), танжерин (Citrus reticulata), малангу (Xanthosoma sagittifolium), тапиок (кассаву) (Manihot esculenta), таро (Colocasia esculenta), чай (Camelia sinensis), абиссинскую траву (Eragrostis abyssinica), тимофеевку луговую (Phleum pratense), табак (Nicotiana tabacum), томат (Lycopersicon esculentum), лядвенец (Lotus spp.), пшеницу тритикале, кормовую (гибрид Triticum aestivum и Secale cereale), тунговое дерево (Aleurites spp.; Fordii), пищевую репу (Brassica rapa), кормовую репу (Brassica rapa), урену (конголезский джут) (Urena lobata), ваниль (Vanilla planifolia), вику посевную в зерне (Vicia sativa), грецкий орех (Juglans spp., в частности, Juglans regia), арбуз (Citrullus lanatus), пшеницу (Triticum aestivum), ямс (Dioscorea spp.) или мате (Ilex paraguariensis).
[0277] Композиции и способы согласно описанию в настоящем документе могут также применяться для газонной травы, декоративной травы, цветов, декоративных растений, деревьев и кустарников.
[0278] Композиции, содержащие указанные биоактивные примирующие полипептиды, также подходят для применения в питомниках, на газонах и в садах, для цветоводства или промышленного выращивания цветов на срезку, и обеспечивают преимущества для повышения продуктивности, улучшения защиты здоровья, увеличения жизненной силы и продолжительности жизни растений. Например, они могут применяться для многолетних растений, однолетних растений, при выгонке для луковиц или ложнолуковиц, трав, почвопокровников, деревьев, кустарников, декоративных растений (например, орхидей и т.п.), тропических растений и сеянцев.
[0279] Композиции, содержащие указанные биоактивные примирующие полипептиды, подходят для обработки растений, частей растений и материала(ов) для размножения растений, например, любого растения или части растения, такой как семена, корни, стебли, цветковые органы, подвоев, привой, луковицы, ложнолуковицы, корневища, клубни и т.п.
[0280] Биоактивные примирующие полипептиды могут применяться в качестве средств для обработки семян для лечения от ряда вредителей, заболеваний, дефицита питательных веществ, наряду с улучшением роста и продуктивности растений.
[0281] Композиции для покрытия или обработки семян может представлять собой, например, композицию в жидком носителе, композицию в виде взвеси или порошковую композицию, которую наносят вместе со стандартными добавками, которые используют, чтобы обеспечить липкость средства для обработки семян для прилипания к семенам и их покрытия. Подходящие добавки для композиции для семян включают: тальки, графиты, камеди, стабилизирующие полимеры, полимеры для покрытия, полимеры для заключительной обработки, агенты для скольжения, чтобы обеспечить текучесть семян и пригодность к посадке, косметические агенты и целлюлозные материалы, такие как карбоксиметилцеллюлоза, и т.п. Биоактивный примирующий полипептид для обработки семян может дополнительно содержать окрашивающие агенты и другие такие добавки.
[0282] Указанные биоактивные примирующие полипептиды могут применяться индивидуально в виде средств для обработки семян или в комбинации с другими добавками, такими как фунгициды, инсектициды, инокулянты, регуляторы роста растений, стимулирующие рост растений микробы, удобрения и усилители удобрений, питательные вещества для семян, средства биологического контроля, антидоты для гербицидов и средства от заболеваний всходов, и другие стандартные средства для обработки семян.
[0283] Композиция для обработки семян согласно описанию в настоящем документе может быть нанесена на семена в подходящем носителе, таком как вода или порошок, не вредный для семян или окружающей среды. Затем семена высаживают стандартным образом.
[0284] Предпочтительные средства для обработки семян, такие как Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226 или SEQ ID NO: 571), Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) и Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600), подходят для улучшения развития всходов, ускорения прорастания, увеличения числа прорастающих семян и улучшения выживаемости всходов. Кроме того, указанные композиции для обработки семян улучшают защиту семян от связанных с микробами заболеваний, которые, как известно, контактируют с семенами или с почвой вокруг семян, и распространяются на ранних стадиях формирования всходов.
[0285] Указанная композиция для обработки семян может содержать полипептид согласно описанию в настоящем документе и фунгицид, инсектицид, нематоцид, агент для биологического контроля, биостимулятор, микроб или любую комбинацию перечисленного.
[0286] Указанная композиция для обработки семян может содержать полипептид согласно описанию в настоящем документе и клотианидин, Bacillus firmus, металаксил или любую комбинацию перечисленного.
[0287] Указанная композиция для обработки семян может содержать полипептид согласно описанию в настоящем документе, клотианидин и флуопирам.
[0288] Указанное средство для обработки семян может содержать полипептид согласно описанию в настоящем документе, металаксил и флуопирам.
[0289] Биоактивные примирующие полипептиды могут наноситься непосредственно на семена в виде раствора или в комбинации с другими коммерчески доступными добавками. Растворы, содержащие водорастворимый полипептид, могут быть нанесены путем опрыскивания или иным способом на семена в виде протравливателя семян или средства для замачивания семян. Твердые вещества или сухие материалы, содержащие растворимые биоактивные примирующие полипептиды, также подходят для стимуляции эффективного прорастания, роста и защиты на ранних стадиях формирования всходов.
[0290] Биоактивные примирующие полипептиды могут быть введены в состав с солюбилизирующим носителем, таким как вода, буфер (например, цитратный или фосфатный буфер) и другие вспомогательные агенты (т.е. спирт, другие растворители) или любым солюбилизирующим агентом. Кроме того, незначительные количества усилителей высушивания, таких как низшие спирты и т.п., могут быть использованы в композиции. Поверхностно-активные вещества, эмульгаторы и консерванты могут также быть добавлены в незначительных (0,5% по объему или менее) количествах для повышения стабильности продукта для нанесения покрытия на семена.
[0291] Средств для обработки семян, содержащие биоактивные примирующие полипептиды, могут применяться с использованием любой коммерчески доступной аппаратуры для обработки семян, или также могут применяться с использованием любого приемлемого некоммерческого способа или способов, например, с применением шприцев или любого другого устройства для обработки семян. Общие процедуры обработки семян с покрытием с применением биоактивных примирующих полипептидов могут быть выполнены с помощью Wintersteiger HEGE 11 (Wintersteiger AG, Австрия, Германия) на семенах основных растительных культур, а именно, кукурузы, сои, пшеницы, риса и различных овощей. Производительность указанной аппаратуры для обработки семян может обеспечивать обработку значительного количества различных типов, размеров и объемов семян (20-3000 граммов). Семена загружают в резервуары аппарата для обработки семян. Выбор резервуара зависит от необходимого количества семян для обработки и размера выбранного резервуара: большой резервуар 14,5 л (покрытие 500-3000 г семян за один раз); средний резервуар 7 л (покрытие 80-800 г семян за один раз); и маленький резервуар 1 л (покрытие 20-100 г семян за один раз). Также доступны другие, большего размера системы для обработки семян.
[0292] Семена направляются к радиальной периферии вращающихся резервуаров за счет центробежной силы, создаваемой центрифужным устройством для нанесения покрытия. Вращающийся диск, расположенный на дне резервуара, распределяет средство для обработки семян равномерно по поверхности семени. В этот момент начинается цикл центрифугирования, что заставляет семена передвигаться по кругу вокруг центра резервуара с равномерным нанесением покрытия на семена. Процесс нанесения покрытия со средством для обработки семян начинается тогда, когда семена равномерно рассредоточены вокруг распределителя. Материал образца средства для обработки семян (например, порошковый, полужидкий, жидкий; или взвесь) может быть нанесен на вращающийся диск внутри вращающихся сосудов, используемых для равномерного распределения средства для обработки семян для обеспечения равномерного покрытия и протравки поверхности семени.
[0293] Постоянный воздушный поток, создаваемый с применением сжатого воздуха (2-6 Бар), может быть использован при нанесении покрытия на семена, чтобы способствовать равномерному покрытию семян в резервуаре. Время, необходимое для нанесения покрытия на семена, зависит от количества семян, вязкости средства для обработки семян и типа обрабатываемых семян. Калькулятор обработки семян используют для корректировки всех объемов для большинства основных и культивируемых коммерческих сельскохозяйственных культур и типа применяемой обработки семян.
[0294] Покрытие может быть нанесено на семена с применением различных способов, в том числе, но не ограничиваясь перечисленным, обливание или прокачивание, сбрызгивание или опрыскивание для нанесения водного раствора, содержащего биоактивные примирующие полипептиды, на семя или поверх семени, опрыскивание или нанесение на слой семян с использованием или без использования конвейерной системы. Подходящие устройства для смешивания включают барабанные смесители, смесительные бассейны или барабаны, или другие устройства для нанесения текучих материалов, в том числе бассейны или барабаны, куда помещают семена в процессе покрытия.
[0295] После обработки и высушивания семян их перемещают в контейнер(ы) для хранения большего размера. Семена высушивают либо на воздухе, либо в непрерывном потоке воздуха, пропускаемом над семенами. Затем семена переносят в отдельный контейнер или мешок для транспортировки, перемещения или хранения.
[0296] Могут также быть предложены биоактивные примирующие полипептиды для доставки на поверхность растения или плазматической мембраны растения в виде средств для опрыскивания листвы или обработки семян в области вокруг растения или части растения.
[0297] Состав(ы) с биоактивным примирующим полипептидом (полипептидами) могут также быть представлены в виде средства для обработки семян или на подложке, например, иммобилизованы или импрегнированы на частице, или в виде гранул, таких как используемые для разбросного внесения.
[0298] Биоактивные примирующие полипептиды согласно описанию в настоящем документе могут применяться для растений и частей растений как экзогенное средство, путем опрыскивания, обработки почвы, внесения в борозду при посадке, обработки семян, обмакивания или промывания, или как эндогенное средство, путем впрыскивания, инокуляции, орошения, инфильтрации и т.п.
[0299] Указанные полипептиды могут применяться непосредственно на растении или в области вокруг растения или части растения.
[0300] Они могут также быть нанесены на материал подложки, который затем применяют для растения или части растения.
[0301] Композиции, содержащие флагеллин-ассоциированные биоактивные примирующие полипептиды, могут также применяться для непосредственной доставки в растение, ткани растения или растительную клетку с помощью различных способов доставки, например, впрыскивания, инокуляции или инфильтрации (например, инфильтрации в устьице на листе). Указанные полипептиды могут также применяться таким образом, чтобы они могли системно перемещаться по растению и влиять на сигнальные каскады в растении, таким образом обеспечивая благоприятные и продуктивные исходы для растения или части растения.
[0302] Ретро-инверсные биоактивные примирующие полипептиды Flg согласно описанию в таблице 4 или таблице 5 могут применяться индивидуально или в комбинации с любыми другими флагеллиновыми, флагеллин-ассоциированными или другими биоактивными примирующими последовательностями полипептидов согласно описанию в настоящем документе. Комбинации таких флагеллиновых и флагеллин-ассоциированных биоактивных примирующих RI-полипептидов подходят для применения в качестве средств защиты растений и стимуляторов роста растений.
[0303] Вспомогательные сигнатурные полипептиды (SEQ ID NO: 542-548; таблица 6), сигнальные якорные сортирующие полипептиды (SEQ ID NO: 549-562, таблица 7) и полипептиды секреции (SEQ ID NO: 563-570; таблица 8) могут применяться в комбинации с любой из кодирующих флагеллин (таблица 1) N- и/или C-концевых консервативных последовательностей из происходящих из Bacillus флагеллинов (таблица 2), флагеллин-ассоциированных полипептидов: Flg22 и FlgII-28 (таблица 3), ретро-инверсных форм Flg22 и FlgII-28 (таблица 4) или любых других Flg (таблица 5) согласно описанию в настоящем документе.
[0304] Например, любой из Flg-ассоциированных биоактивных примирующих полипептидов или любая их комбинация может быть представлен(а) в индивидуальных составах и применяться либо одновременно, либо последовательно в отдельных составах, или может быть представлен(а) в виде слитого белка (белков) со вспомогательными последовательностями согласно описанию в таблицах 6-8, и прямо или по отдельности применяться для растения или части растения.
[0305] Гарпиноподобные полипептиды или полипептиды RHPP могут обеспечивать функциональные преимущества при применении как экзогенно, например, на поверхности растения в виде средства для опрыскивания листвы, так и апопластически (в пространстве с внешней стороны мембраны растительных клеток) и эндогенно (внутри растительной клетки/с внутренней стороны мембраны растительных клеток). Полипептиды RHPP могут также обеспечивать функциональные преимущества при применении в виде средства для обработки семян.
[0306] Внекорневое внесение или внесение в борозду при посадке гарпиноподобных, HpaG-подобных полипептидов подходит для усиления роста, увеличения биомассы, выраженности зеленого цвета или продуцирование хлорофилла у растения.
[0307] Может быть предложен биоактивный примирующий полипептид или полипептиды ФСК-α для доставки на поверхность растения/плазматической мембраны растения в виде средства для опрыскивания листвы или обработки семян в области вокруг растения, части растения или растительной клетки.
[0308] Также могут быть предложены композиции, содержащие биоактивные примирующие полипептиды ФСК-α, для доставки в растение, ткани растения или растительную клетку различными способами, например, путем впрыскивания, инокуляции или инфильтрации (например, добавления непосредственно или предварительно в клеточную культуру).
V. Способы применения
[0309] Предложены способы повышения роста, урожайности, улучшения состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растения. Указанный способ может включать применение указанного полипептида или указанной композиции согласно описанию в настоящем документе на растении, на части растения или в ростовой среде для растений, или в ризосфере в области, окружающей растение или часть растения, для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растения.
[0310] В качестве альтернативы, указанный способ может включать применение указанного полипептида или указанной композиции согласно описанию в настоящем документе в ростовой среде для растений для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений, и/или защиты растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений, от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа, и/или изменения архитектуры растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений.
[0311] Другой способ включает применение рекомбинантного микроорганизма согласно описанию в настоящем документе на растении, на части растения или в ростовой среде для растений, или в ризосфере в области, окружающей растение или часть растения, для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растения. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует полипептид, и экспрессия указанного полипептида увеличивается по сравнению с уровнем экспрессии указанного полипептида в микроорганизме дикого типа того же вида в таких же условиях.
[0312] Также предложены задействующие указанные биоактивные примирующие полипептиды способы увеличения общей продуктивности растения на полях, во фруктовых садах, на клумбах, в питомниках, на лесных участках, фермах, газонах, в садах, садовых центрах или на посевных участках. Варианты и способы применения, задействующие указанные биоактивные примирующие полипептиды, также подходят для улучшения роста, состояния здоровья и продуктивности растений у разнообразных растительных культур (однодольных и двудольных), например, кукурузы, пшеницы, риса, сахарного тростника, сои, сорго, картофеля и различных овощей.
[0313] Также предложен способ «примирования биоактивным полипептидом» путем непосредственного применения указанных полипептидов, которые могут применяться либо экзогенно на поверхности растительных клеток, либо эндогенно внутри растения и/или растительной клетки. Предложены полипептиды для доставки на поверхность растения или плазматическую мембрану растения, или внутрь растения, ткани или клетки растения, и они подходят для регуляции процессов развития, которые приводят к фенотипам улучшенного роста, например, увеличению общей биомассы, вегетативного роста, налива семян, размера семян и количества семян, которые вносят вклад в увеличение общей урожайности сельскохозяйственных растений.
[0314] Применение ретро-инверсных полипептидов Flg в виде сельскохозяйственных составов может обеспечивать улучшенную защиту растений от заболеваний и абиотических стрессов, при этом синергистически улучшая рост, продуктивность и урожайность наряду с поддержанием улучшенного состояния здоровья и производительности растений на протяжении более длительных периодов времени.
[0315] Выбор природной L-формы (таблица 3) или ретро-инверсной D-формы (таблица 4) Flg-ассоциированных полипептидов может зависеть от окружающей среды, растения/культуры или комбинации растения/культуры и окружающей среды. Кроме того, важен выбор времени обработки (например, применения средства для опрыскивания листьев) в вегетационном периоде. Ретро-инверсные биоактивные примирующие полипептиды Flg отличаются усиленной аффинностью связывания с поверхностью мембран клеток. Благодаря указанным признакам RI-формы биоактивных примирующих полипептидов Flg могут применяться для усовершенствования переносимости абиотического стресса у растения или части растения.
[0316] Кроме того, ретро-инверсные формы RI Ec.Flg22 и RI Bt.4Q7Flg22 могут подходить для стимуляции закрытия устьиц в условиях засухи и теплового (вызванного высокими температурами) стресса, и улучшения урожайности в указанных условиях. Контроль закрытия устьиц с применением Flg-ассоциированного биоактивного примирующего полипептида у растения в периоды средового стресса может помогать регуляции потери воды и стабилизации тургорного давления в растении при неблагоприятных условиях окружающей среды.
[0317] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать: полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 226-300 и 571-573; ретро-инверсный полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 376-450; или любую комбинацию перечисленного, для защиты растения или части растения от заболевания и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0318] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать: полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 301-375; ретро-инверсный полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 451-525; или любую комбинацию перечисленного, для защиты растения или части растения от заболевания и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0319] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида Flg22 могут содержать любую из SEQ ID NO: 226, 571 или 752, и/или полипептиды EF-Tu, при этом последовательность аминокислот указанных полипептидов EF-Tu содержит SEQ ID NO: 616 и 617, для защиты растения или части растения от заболевания и/или усиления врожденного иммунитета растения или части растения. Согласно указанным способам последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида могут содержать любую из SEQ ID NO: 226, 289, 290, 291, 293, 294, 295, 300, 437, 532, 534, 536, 538, 540, 571-586 и 751-766 или любую их комбинацию, для защиты растения или части растения от заболевания, насекомых или нематод. Они представляют собой полипептиды с мутантными последовательностями, демонстрирующие повышенную активность в отношении активных форм кислорода. Например, последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида может содержать любую из SEQ ID NO: 226, 293, 295, 300, 540, 571 574, 751 и 752, или любую их комбинацию.
[0320] Указанное заболевание может включать азиатское позеленение цитрусовых, болезнь Хуанлун (HLB), азиатскую ржавчину сои, вызываемую Sclerotinia стеблевую гниль (или белую плесень), вызываемую Pseudomonas пятнистость листьев или церкоспориоз листьев.
[0321] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 226-300 и 571-573, или любую их комбинацию.
[0322] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 301-375 или 751, или любую их комбинацию.
[0323] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать полипептид Flg22 и полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 226-300 и 571-573 или любую их комбинацию, а последовательность аминокислот указанного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 301-375 или 751, или любую их комбинацию. Указанный полипептид или указанная композиция может дополнительно содержать ретро-инверсный полипептид Flg22, ретро-инверсный полипептид FlgII-28 или их комбинацию, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 376-450 или любую их комбинацию, а последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 451-525 или любую их комбинацию.
[0324] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать полипептид RHPP и/или RI-полипептид RHPP для увеличения урожайности, улучшения роста и/или продуктивности растения или части растения, и/или изменения архитектуры растения.
[0325] В тех случаях, когда указанный способ включает полипептид или композицию, содержащие полипептид RHPP и/или RI-полипептид RHPP, рост может включать рост корней, длину корней, биомассу корней, образование клубеньков, общую биомассу, биомассу над поверхностью земли или любую комбинацию перечисленного. В тех случаях, когда указанный полипептид или указанная композиция содержит полипептид RHPP, последовательность аминокислот указанного полипептида RHPP может содержать SEQ ID NO: 600.
[0326] В тех случаях, когда указанный способ включает полипептид или композицию, содержащие полипептид RHPP и/или RI-полипептид RHPP, растение может включать сою, рост может включать общую длину корней, биомассу корней, образование клубеньков, количество клубеньков на растение, общую биомассу, биомассу над поверхностью земли или любую комбинацию перечисленного, и продуктивность может включать общее число стручков или число стручков на узел.
[0327] Архитектура растения может включать благоприятные исходы для растения или части растения. Например, благоприятные исходы могут включать возможность повышенной плотности посадки на поле с растениями.
[0328] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать гарпиноподобный полипептид или полипептид RHPP для защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0329] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать полипептид ФСК для увеличения урожайности растения или части растения в условиях среды с предрасположенностью к жаре и засухе.
[0330] Указанный полипептид, указанная композиция или указанный рекомбинантный микроорганизм могут применяться непосредственно перед формированием цветков или на предшествующей цветению фазе.
[0331] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать полипептид ФСК, RHPP, гарпин или гарпиноподобный полипептид, или их комбинацию для улучшения роста растения или части растения.
[0332] Рост может включать апикальные меристемы корня и цветка, образование цветковых органов, развитие плодов, образование плодов, количество цветковых органов, размер цветковых органов или комбинацию перечисленного.
[0333] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать полипептид ФСК и гарпин или гарпиноподобный полипептид, для улучшения роста и продуктивности растения или части растения в среде с предрасположенностью как к стрессовым, так и к не являющимися стрессовыми для роста растений условиям.
[0334] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать тионин или тиониноподобный полипептид.
[0335] Указанный тионин или тиониноподобный полипептид может быть слит с нацеливающей на флоэму последовательностью с образованием слитого полипептида, причем последовательность аминокислот указанной нацеливающей на флоэму последовательности содержит любую из SEQ ID NO: 641-649 или любую их комбинацию, для доставки указанного слитого полипептида в сосудистую ткань или сосудистые клетки, и/или во флоэму, или в ассоциированную с флоэмой ткань или ассоциированные с флоэмой клетки в растении или в части растения.
[0336] Согласно указанным способам защита растения или части растения от заболевания может включать профилактическое лечение (обработку), лечение (обработку), предотвращение и уменьшение прогрессирования заболевания на растении или в растении, или части растения.
[0337] Указанное заболевание может включать азиатское позеленение цитрусовых (HLB), рак цитрусовых, церкоспориоз листьев или вызывающие заболевание бактерии.
[0338] Указанные вызывающие заболевание бактерии могут включать бактериальное повреждение листьев, бактериальную полосатость листьев, бактериальную стеблевую гниль, бактериальную пятнистость листьев, бактериальный запал листьев, бактериальную вершинную гниль, бактериальную полосатость, шоколадную пятнистость, бактериальное увядание и гниль Госса, красная пятнистость (холкус), фиолетовую пятнистость листового влагалища, гниль семян, белую гниль всходов, болезнь Стюарта (бактериальное увядание), низкорослость кукурузы, бактериальный ожог, болезнь Пирса, пестрый хлороз цитрусовых, рак цитрусовых, серовары Pseudomonas syringae; или комбинацию перечисленного.
[0339] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция дополнительно могут содержать флагеллин или флагеллин-подобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-подобного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226-525 и 571-573, или любую их комбинацию.
[0340] Согласно указанным способам указанный полипептид, указанная композиция или указанный рекомбинантный микроорганизм могут применяться экзогенно на растении, на части растения или в ростовой среде для растений.
[0341] Согласно указанным способам указанный полипептид, указанная композиция или указанный рекомбинантный микроорганизм могут применяться эндогенно в растении или части растения.
[0342] Указанная часть растения может включать растительную клетку, лист, ветвь, стебель, цветок, листву, цветковый орган, плод, пыльцу, овощ, клубень, корневище, клубнелуковицу, луковицу, ложнолуковицу, стручок, корень, корневой ком, подвой, привой или семя.
[0343] Согласно указанным способам указанный полипептид, указанная композиция или указанный рекомбинантный микроорганизм могут применяться на поверхности растения, листвы растения или поверхности семени растения.
[0344] Согласно указанным способам указанный полипептид, указанная композиция или указанный рекомбинантный микроорганизм могут применяться на поверхности семени, и указанное растение или указанную часть растения выращивают из указанного семени.
[0345] Согласно указанным способам указанный полипептид, указанная композиция или указанный рекомбинантный микроорганизм могут применяться в качестве средства для внекорневого внесения.
[0346] Растение может представлять собой плодовое растение или овощное растение, и указанный способ обеспечивает повышенную урожайность плодов или овощей.
[0347] В способах, предусматривающих применение биоактивных примирующих полипептидов два или более раз в течение вегетационного периода, первое применение может происходить на стадии или до стадии развития V2, а последующие - до цветения растения. Например, при первом применении могут быть использованы средства для обработки семян, на стадии/или до стадии развития VE, на стадии или до стадии развития V1, на стадии или до стадии развития V2, на стадии или до стадии развития V3, на стадии или до стадии развития V4, на стадии или до стадии развития V5, на стадии или до стадии развития V6, на стадии или до стадии развития V7, на стадии или до стадии развития V8, на стадии или до стадии развития V9, на стадии или до стадии развития V10, на стадии или до стадии развития V11, на стадии или до стадии развития V12, на стадии или до стадии развития V13, на стадии или до стадии развития V14, на стадии или до стадии развития V15, на стадии или до стадии развития VT, на стадии или до стадии развития R1, на стадии или до стадии развития R2, на стадии или до стадии развития R3, на стадии или до стадии развития R4, на стадии или до стадии развития R5, на стадии или до стадии развития R6, на стадии или до стадии развития R7, или на стадии или до стадии развития R8. Например, первое применение может происходить на стадии или до стадии прорастания, на стадии или до стадии всходов, на стадии или до стадии кущения, на стадии или до стадии выхода в трубку, на стадии или до стадии стеблевания; или на стадии или до стадии колошения. Например, если для идентификации стадии роста зерновой культуры используют шкалу Фикеса, первое применение может происходить на стадии или до стадии 1, на стадии или до стадии 2, на стадии или до стадии 3, на стадии или до стадии 4, на стадии или до стадии 5, на стадии или до стадии 6, на стадии или до стадии 7, на стадии или до стадии 8, на стадии или до стадии 9, на стадии или до стадии 10, на стадии или до стадии 10.1, на стадии или до стадии 10.2, на стадии или до стадии 10.3, на стадии или до стадии 10.4; или на стадии или до стадии 10.5.
Абиотический стресс
[0348] Абиотический стресс вызывает значимые потери урожая и может приводить к значительному снижению урожаев и потенциальной урожайности. Биоактивные примирующие полипептиды и композиции согласно описанию в настоящем документе могут применяться в качестве химических примирующих агентов для увеличения переносимости растением одного или более абиотических стрессов. Соответственно, флагеллиновые полипептиды, флагеллин-ассоциированные полипептиды Flg22 или FlgII-28, происходящие из вида Bacillus, Flg15 и Flg22, происходящие из E.coli и других организмов (таблица 5), и полипептиды RHPP, происходящие из Glycine max (таблицы 13-15), подходят для увеличения переносимости абиотического стресса растением, группой растений, полем растений и/или частями растений. Полипептиды и композиции согласно описанию в настоящем документе обеспечивают переносимость абиотического стресса растением или частью растения. Переносимость абиотического стресса, придаваемая растению или части растения, относится к абиотическим стрессам, которые включают, не ограничиваясь перечисленным: температурный стресс, радиационный стресс, вызванный засухой стресс, холодовой стресс, вызванный засолением стресс, осмотический стресс, вызванный дефицитом питательных веществ или высоким содержанием металлов стресс, и водный стресс, который является результатом дефицита воды, затопление или аноксия. Химическое примирование с применением биоактивных примирующих полипептидов и композиций согласно описанию в настоящем документе применяют у растения или части растения, обеспечивая универсальный подход к защите растения или части растения от индивидуальных абиотических стрессов, нескольких абиотических стрессов или комбинированных абиотических стрессов.
[0349] Полипептиды и композиции согласно описанию в настоящем документе эффективны для защиты растения от факторов абиотического стресса при применении в качестве средства для надземного внекорневого внесения у растения, части растения, корней растения, семян растения, в ростовой среде для растений или области, окружающей растение, или области, окружающей семя растения. Например, в случае деревьев одно или более применений могут быть использованы в разные моменты роста деревьев, в том числе моменты до, во время или после образования побегов; до, во время или после завязывания плодов; или до или после сбора плодов.
[0350] Описанные в настоящем документе способы обеспечивают химическое примирование растения для защиты от абиотического стресса или стрессов таким образом, чтобы у указанного растения уже были подготовлены и инициированы защитные механизмы, которые могут быть активированы быстрее и повышать переносимость абиотического стресса или нескольких факторов стресса, возникающих одновременно или в разные моменты времени в течение вегетационного периода.
[0351] Ретро-инверсные формы полипептидов Flg22 согласно описанию в настоящем документе могут применяться наружно в виде средства для опрыскивания листвы (а также с использованием других способов применения, например, в виде средства для пропитки корневой зоны) в периоды вызванного избыточными температурами, водой и засухой стресса, и использоваться для защиты растения от засухи, теплового стресса и/или других абиотических стрессов, которые могут оказывать влияние на отверстия устьиц и осцилляцию, которые обычно возникают при потере на транспирацию через растение.
[0352] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать: полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 226-300 и 571-573 или любую их комбинацию; ретро-инверсный полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 376-450 или любую их комбинацию; или любую комбинацию перечисленного, для уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания; и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0353] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать: полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 301-375 или любую их комбинацию; ретро-инверсный полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 451-525 или любую их комбинацию; или любую комбинацию перечисленного, для уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания; и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0354] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать: ретро-инверсный полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 376-450 или любую их комбинацию; ретро-инверсный полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 451-525 или любую их комбинацию; или любую комбинацию перечисленного, для уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания; и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0355] Согласно указанным способам указанный полипептид или указанная композиция может содержать полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида RHPP содержит SEQ ID NO: 600, 603, 604 или любую их комбинацию; полипептид ингибитора трипсина Кунитца (KTI), при этом последовательность аминокислот указанного полипептида KTI содержит SEQ ID NO: 602; ретро-инверсный полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного RI RHPP содержит SEQ ID NO: 601, 605, 606 или любую их комбинацию; или любую комбинацию перечисленного, для уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания; и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0356] Абиотический стресс может включать тепловой стресс, температурный стресс, радиационный стресс, вызванный засухой стресс, холодовой стресс, вызванный засолением стресс, вызванный дефицитом питательных веществ стресс, вызванный высоким содержанием металлов стресс, водный стресс, осмотический стресс или любую комбинацию перечисленного.
Балансирование иммунного ответа с ростом и развитием растений
[0357] Хотя иммунные ответы могут обеспечивать защиту растений от атаки патогенов, избыточные иммунные ответы могут оказывать негативное влияние на рост растений. Соответственно, для оптимизации состояния здоровья растения требуется сбалансированная комбинация усиленного иммунитета или предотвращения заболеваний и защиты у растения со способствующим улучшению роста ответом.
[0358] Биоактивные примирующие полипептиды, подходящие для усиления иммунного ответа согласно описанию в настоящем документе, могут быть скомбинированы с полипептидами, которые обеспечивают положительное влияние на рост и продуктивность растений. Указанные комбинации полипептидов специально отбирают на основании разных механизмов их действия/регуляции при применении для растения или части растения. Однако некоторые биоактивные примирующие полипептиды (Flg, HpGa-подобные, ФСКα, тионины) распознаются рецептороподобными белками, после чего начинается процесс, инициирующий их вход в растение и транспорт по растению, что приводит к функциональным исходам, тогда как другие поглощаются растением путем активной абсорбции (например, RHPP). Например, ФСК-α и Flg-ассоциированные полипептиды, такие как Flg22, Flg25 и FlgII-28 распознает богатая лейцином рецепторная киназа, локализованная на поверхности плазматической мембраны, и задействованная в комплексном сигнальном пути, вовлеченном в запускаемые патогенами ответы, приводящие к развитию иммунитета, устойчивости к заболеванию или предотвращению заболевания (Kutschmar et al. “PSKα promotes root growth in Arabidopsis,” New Phytologist 181: 820-831, 2009).
[0359] Биоактивные примирующие полипептиды согласно описанию в настоящем документе, такие как Flg22, HpaG-подобные полипептиды и тионины, могут работать как элиситоры и проявлять противомикробную активность (например, антипестицидную; антибактериальную, фунгицидную или противовирусную активность). Предложены специфические комбинации полипептидов, например, комбинация флагеллин-ассоциированного и гарпин-ассоциированного биоактивных примирующих полипептидов подходит для предотвращения и защиты от вызываемых патогенами заболеваний растений, и служит двойной цели при совместном применении с указанными другими полипептидами, например, ФСК-α и RHPP, которые улучшают рост и продуктивность растения, части растения и/или растений на полях.
[0360] Комбинации биоактивных примирующих полипептидов согласно описанию в настоящем документе могут применяться на растении экзогенно в виде средства для опрыскивания листвы, внесения в борозду при посадке, обработки семян, пропитки или промывания, или эндогенно для стимуляции как иммунной отвечаемости, так и характеристик роста растения, что в совокупности приводят к повышению урожайности. Они могут также обеспечивать защиту и преимущества в росте для разных частей растения (например, листьев, корней, клубней, клубнелуковиц, корневищ, луковиц, ложнолуковиц, цветков, стручков, плодов и растущих меристем).
[0361] Комбинированное средство для внекорневого внесения или последовательное применение ФСК(с HpaG-подобными биоактивными примирующими полипептидами может подходить для улучшения роста растений в стандартных условиях окружающей среды (нестрессовый, или оптимальный рост) или растений, подвергающихся абиотическому стрессу (например, тепловому стрессу и вызванному дефицитом воды стрессу).
[0362] Обработка средством для внекорневого внесениявнекорневого внесения с биоактивными примирующими полипептидами, HpaG-подобным полипептидом X.spp и At.PSKα, по-разному действует при применении на растениях в оптимальных (нестрессовых) и в стрессовых условиях среды. Указанные два класса биоактивных примирующих полипептидов подходят либо для последовательного применения, либо для применения в комбинации в средстве для внекорневого внесениявнекорневого внесения, и могут улучшать рост растений в среде, характеризующейся или не характеризующейся абиотическим стрессом или стрессами.
[0363] HpGa-подобный полипептид X.spp.обеспечивал преимущество для роста растений кукурузы в нестрессовой среде, когда температура, вода, питательные вещества и другие показатели окружающей среды были благоприятны для оптимального роста растений. С другой стороны, At.PSKα при применении в качестве средства для опрыскивания листвы обеспечивает преимущество для роста растений в условиях среды, характеризующихся стрессом, вызванным высокими температурами и засухой, или дефицитом воды. Соответственно, при совместном применении в комбинации в составе в качестве средств для внекорневого внесениявнекорневого внесения они могут охватывать как нестрессовые, так и стрессовые условия среды, и обеспечивать дополнительные преимущества для роста растений кукурузы, культивируемых в различных условиях окружающей среды.
[0364] Увеличение продуктивности и улучшение роста растений при применении At.PSKα, также наблюдается у растений сои, культивируемых в условиях среды, характеризующихся или не характеризующейся абиотическим стрессом. Растения сои, обработанные путем внекорневого внесениявнекорневого внесения состава, содержащего биоактивный примирующий полипептид At.PSKα, и культивируемые в условиях вызванного высокими температурами и засухой стресса, отличались увеличенной урожайностью относительно контрольных растений сои, обработанных водой и поверхностно-активным веществом без биоактивного примирующего полипептида.
[0365] При совместном применении HpaG-подобных полипептидов и At.PSKα из X. spp.В качестве средства для опрыскивания листвы, они подходят для обеспечения синергических эффектов в растениеводстве в нормальных и стрессовых условиях среды. При применении At.PSKα в качестве средства для опрыскивания наблюдается улучшенный общий рост у кукурузы, тогда как HpaG-подобный полипептид из X. spp.приводит к противоположному тренду. Соответственно, совместное применение указанных двух биоактивных примирующих полипептидов может обеспечивать рост растений в условиях «теплового стресса», сбалансированный таким образом, что изменения роста растений по сравнению с контрольными растениями значительнее суммы эффектов применяемых по отдельности биоактивных примирующих полипептидов.
[0366] Синергическое взаимодействие указанных двух классов биоактивных примирующих полипептидов усиливает рост растений в условиях теплового стресса (например, увеличивает скорость роста наряду с увеличением биомассы растений).
[0367] Любой из биоактивных примирующих полипептидов согласно описанию в настоящем документе может применяться для растения один или более раз, в комбинации или индивидуально, для улучшения роста и продуктивности указанного растения. Может быть реализовано многократное применение, чтобы способствовать преимуществам в урожайности на протяжении вегетационного периода, при этом применение адаптируют к условиям среды, например, если во время сезона роста ожидается период жаркой и сухой погоды, дополнительные опрыскивания биоактивными примирующими полипептидами, способствующими росту при абиотическом стрессе, могут смягчать негативное влияние на растение.
Внекорневое внесение фитосульфокина-альфа (ФСК-α) для увеличения урожайности
[0368] Предложен способ применения At.PSKα в качестве средства для внекорневого внесения для активно растущих растений сои, для обеспечения преимущества в урожайности в условиях вызванного высокими температурами и засухой стресса. Например, предложены способы применения композиции, содержащей биоактивный примирующий полипептид At.PSKα в качестве средства для опрыскивания листвы, для сои на стадиях V1-V4, с использованием способов внесения согласно описанию в настоящем документе. Растения сои, обработанные средствами для внекорневого внесениявнекорневого внесения с At.PSKα, могут культивироваться на полях в условиях, обусловленных нестрессовой и стрессовой (высокие температуры и дефицит воды) средой. Обработка At.PSKα может обеспечивать преимущества в росте и урожайности у растений, культивированных в различных условиях окружающей среды, в том числе в присутствии факторов абиотического стресса.
[0369] Любой из биоактивных примирующих полипептидов RHPP, приведенных в таблицах 12-14, может применяться на поверхности растения в качестве средства для внекорневого внесениявнекорневого внесения, внесения в борозду при посадке, обработки семян или пропитки корневой зоны.
[0370] Внекорневое внесение RHPP приводит к изменению архитектуры растения.
[0371] Предложен способ, согласно которому полипептид RHPP применяют в качестве средства для внекорневого внесениявнекорневого внесения у растений, что приводит к получению отличающейся архитектуры листвы (кукуруза) и усиленной корневой системы (соя). Увеличение угла между стеблем и листом, а также биомассы корней при применении средства для обработки листвы с RHPP обеспечивает значимые преимущества для применения в сельском хозяйстве у двух важных сельскохозяйственных культур (кукуруза и соя).
Применение RHPP для изменения архитектуры растения
[0372] Применение биоактивного примирующего полипептида, RHPP, в качестве средства для внекорневого внесениявнекорневого внесения у кукурузы на стадии V5-V8 приводит к получению отличающегося фенотипа архитектуры листвы с вертикальной ориентацией листвы и направленными выше листьями. В частности, это актуально при более высокой плотности посадки, используемой для максимизации урожайности в полевых условиях. Средства для внекорневого внесениявнекорневого внесения с полипептидом RHPP у маиса (кукурузы) подходят для изменения угла между стеблем и листом, способствуя таким образом уменьшению угла между стеблем и листом, что приводит к вертикальной ориентации листа. Указанный фенотип может быть благоприятным для увеличения индекса площади листьев, уменьшения синдрома избегания затенения у кукурузы и улучшения фотосинтетической эффективности. Кроме того, применение RHPP в виде состава для внекорневого внесениявнекорневого внесения для максимизации развития листового полога и общей проницаемости для света играет ключевую роль в улучшении вегетативного роста растений перед инициацией стадии налива семян.
[0373] У растений кукурузы наблюдается скручивание листьев или изменение архитектуры листьев в сторону более вертикальной ориентации для сохранения воды и повышения устойчивости растений к засухе и жаре. Вертикализация фенотипа листьев кукурузы после применения композиций с биоактивным примирующим полипептидом (полипептидами) RHPP полезны и обеспечивают альтернативный неселекционный способ формирования архитектуры листьев и повышения устойчивости к засухе и жаре.
[0374] Фенотип с вертикальной ориентацией листьев у растений кукурузы участвует в снижении температуры листьев, транспирации через все растение и повышении эффективности использования воды, а также обеспечивает архитектурные изменения листвы растения, которые могут позволить более высокую плотность посадки, что приводит к существенному увеличению урожая.
[0375] Применение биоактивного примирующего полипептида, RHPP, у сои могут также обеспечивать преимущества. Например, внекорневое внесение RHPP у цветущей сои может улучшать завязывание стручков. Завязывание стручков представляет собой стадию развития сои с середины R4 до середины R5, которая вносит непосредственный вклад в урожайность. Начало завязывания стручков отмечено появлением стручка размером  дюйма на одном из четырех верхних узлом на главном стебле. Затем она прогрессирует в стадию полного формирования стручка, когда происходит быстрый рост стручков и начинается развитие семян. Улучшение завязывания стручков количественно определяют по увеличению урожайности (т.е. числу стручков на узел на растении, или общему числу стручков на растение).
RHPP для увеличения биомассы корней и урожайности
[0376] Растения сои, обработанные путем внекорневого внесениявнекорневого внесения биоактивного примирующего полипептида или полипептидов RHPP (SEQ ID NO: 600), могут демонстрировать улучшенный и более полный налив стручков по сравнению с необработанными растениями, что может быть результатом повышения фиксации азота.
[0377] Корневая архитектура, в частности, корневая система, быстро осваивающая глубокую почву, может оптимизировать захват азота и поглощение воды, что, в частности, важно при росте на высыхающих и обедненных по азоту почвах. Полипептид(ы) RHPP согласно описанию в настоящем документе при применении в виде средства для обработки листвы у растений сои обеспечивают корневой фенотип, подходящий для усвоения воды и минеральных веществ (азота), в частности, в бедных азотом почвах. Повышение эффективности усвоения питательных веществ за счет улучшения корневой архитектуры представляет собой ключевой фактор улучшения продуктивности растений при культивировании сои в широком диапазоне типов почв.
[0378] Увеличенная биомасса корней в результате внекорневого внесениявнекорневого внесения RHPP на ранних вегетативных стадиях развития сои VE-V5 или V2-V3 приводит к получению корневой системы, быстро осваивающей глубокую почву (глубокие корни) и большему общему увеличению биомассы корней. Например, биоактивный примирующий полипептид-стимулятор корневых волосков, такой как RHPP (SEQ ID NO: 600) может применяться в виде средства для обработки листвы у растений сои на стадии развития V2-V3, чтобы обеспечить общее увеличение биомассы корней. Другими заметными улучшениями наряду с биомассой корней являются получение более длинных боковых корней, увеличение ветвления корня, корневых волосков и увеличение площади впитывающей поверхности корня.
[0379] RHPP может применяться в виде средства для обработки листвы на ключевых стадиях развития (VE-V8 или V2-V8) или в условиях среды, когда необходим быстрый прирост корней, например, на сухих или недостаточно питательных типах почвы. Типы почвы, в частности, могут влиять на развитие и распространение корней. Например, если всходам растений трудно пробиться через глинистую почву, это может влиять на образование корней и пролиферацию корней. Увеличение корневой массы может не только благоприятным образом влиять на всхожесть растений, но и вносить вклад в акклиматизацию растений. Кроме того, образование клубеньков и их количество важны, поскольку бактерии, населяющие клубеньки, вытягивают азот из воздуха, позволяя растениям сои превращать его в азот, необходимый им для роста и продуцирования семян.
[0380] Полипептиды RHPP (таблицы 13-15) могут применяться для улучшения образования клубеньков и продуцирования клубеньков на корнях сои при применении любого из указанных способов обработки, подходящих для внесения непосредственно в почву, в качестве пропитки, для внесения в борозду при посадке или в качестве средства для внекорневого внесениявнекорневого внесения для применения на надземных частях растений.
[0381] Увеличение числа клубеньков может приводить к повышенной фиксации азота азотфиксирующими бактериями, населяющими корневые клубеньки, такие как Rhizobium leguminosarum или japonicum. Образование клубеньков может наблюдать вскоре после VE, и оно может повышать фиксацию азота. Эффективное образование клубеньков на корнях сои приводит к более высоким урожаям и получению семян более высокого качества, большего количества белка и масла в пересчете на семя или акр. Первые тройчатые листья полностью сформированы на растениях сои на стадии развития V1-V2, которая, по имеющимся оценкам, является пиковым периодом для фиксации азота.
[0382] Комбинированное применение биоактивного примирующего полипептида Gm.RHPP с различными удобрениями может обеспечивать стимуляцию урожайности и рекомендовано, в частности, для использования в менеджменте возделывания культур на обедненных по азоту почвах.
Бактериальное заболевание
[0383] Способы применения биоактивных примирующих полипептидов, таких как флагеллин-ассоциированные полипептиды или тиониноподобные полипептиды согласно описанию в настоящем документе, подходят для предотвращения, обработки и контроля бактериальных заболеваний у кукурузы и, в частности, подходят для лечения бактериальной полосатости листьев у кукурузы, вызываемой Xanthomonas vasicola, патоваром vasculorum, также известным как Xanthomnas campestris, патовар vasculorum.
[0384] Исследования показывают, что бактериальная полосатость листьев распространена и может встречаться на обширных территориях по всему «кукурузному поясу» США (Западная Индиана, Иллинойс, Айова, Миссури, Восточная Небраска и Восточный Канзас). Болезнь наиболее распространена там, где практика севооборота предполагает посадку кукурузы после кукурузы. Бактериальная полосатость листьев может вызывать инфекцию зубовидной кукурузы (полевой) семенной кукурузы, лопающейся кукурузы и сладкой кукурузы. Симптомы у кукурузы включают узкие коричнево-желтые штрихи и коричнево-желтые полосы между жилками листьев. Очаги повреждений обычно развиваются на расположенных ниже или более старых листьях растения, и в первое время распространяются на расположенные выше или более молодые листья на растении. Вокруг очагов поражений также может присутствовать желтое обесцвечивание.
[0385] Бактериальная полосатость листьев кукурузы предположительно сохраняет жизнеспособность в остатках ранее инфицированных растений-хозяев. Бактериальные экссудаты, обнаруживаемые на поверхностях инфицированных тканей листа, могут служить вторичным инокулятом. Бактерия разносится ветром, сильным дождем и, возможно, водой при орошении. Патоген проникает в листья кукурузы через естественные отверстия, такие как устьица, что может приводить к возникновению очагов поражения в виде паттернов с полосами, пересекающими листья. Колонизация тканей листа, по-видимому, ограничена основными жилками.
[0386] Поскольку заболевание вызвано бактериальным патогеном, его трудно контролировать с помощью текущих способов применения бактерицидов. Так, большинство бактерицидов работают как контактные продукты и не являются системными; таким образом, они не будут абсорбироваться или всасываться в растение посредством других механизмов. Обработка бактерицидами может требовать многократного повторения, так как бактерицид может быть смыт дождем или унесен ветром, что делает такую обработку неэкономичной или нецелесообразной для применения на некоторых культурах кукурузы.
[0387] Согласно существующим на сегодняшний день практикам менеджмента заболеваний рекомендовано использование практик севооборота (например, культивирование кукурузы, сои, а затем снова кукурузы) и внедрение практик санации, таких как очистка оборудования между применениям.
[0388] Внекорневое внесение полипептидов Flg (таблицы 4-5) и тиониновых полипептидов (таблица 19), или комбинаций указанных двух классов обеспечивает альтернативный подход к лечению заболевания. Средства для внекорневого внесения с указанными биоактивными примирующими полипептидами, которыми опрыскивают на поверхность листьев бессимптомных растений или растений с проявляющимися симптомами, представляют собой способ предотвращения, лечения и контроля бактериальной полосатости листьев у кукурузы.
[0389] В качестве альтернативы, флагеллиновые и тиониновые биоактивные примирующие полипептиды или их комбинации могут подходить для предотвращения, обработки и контроля других бактериальных заболеваний, инфицирующих кукурузу (таблица 21).
Таблица 21. Вызывающие заболевание бактерии у кукурузы
Заболевание кукурузы
Вызывающие заболевание бактерии
Бактериальное повреждение листьев и стеблевая гниль
Pseudomonas avenae, подвид avenae
Бактериальная пятнистость листьев
Xanthomonas campestris, патовар holcicola
Бактериальная полосатость листьев
Xanthomonas vasicola
Бактериальная стеблевая гниль
Enterobacter dissolvens; Erwinia dissolvens
Бактериальная стеблевая и вершинная гниль
Erwinia carotovora, подвид carotovoraErwinia chrysanthemi, патовар zeae
Бактериальная полосатость
Pseudomonas andropogonis
Шоколадная пятнистость
Pseudomonas syringae, патовар coronafaciens
Бактериальное увядание и гниль Госса (крапчатость листьев и увядание)
Clavibacter michiganensis, подвид nebraskensis; Corynebacterium michiganense, патовар nebraskense
Красная пятнистость (холкус)
Pseudomonas syringae, патовар syringae van Hall
Фиолетовая пятнистость листового влагалища
Полупаразитические бактерии
Гниль семян - белая гниль всходов
Bacillus subtilis
Болезнь Стюарта (бактериальное увядание)
Erwinia stewartii
Низкорослость кукурузы («achapparramiento», низкорослость маиса, низкорослость маиса Центрального плато или долины Рио Гранде)
Spiroplasma kunkelii
Церкоспориоз листьев у сои
[0390] Cercospora представляет собой грибной патоген, вызывающий церкоспориоз листьев сои. Церкоспориоз листьев, также называемый фиолетовой пятнистостью семян, инфицирует как листья, так и семена сои. Инфекция Cercospora у семян сои снижает внешний вид и качество семян. Организм-возбудитель церкоспориоза листьев - Cercospora kikuchii, зимующий на остатках сои и в оболочках семян. Распространение заболевания происходит при попадании спор гриба на растения сои с инфицированных остатков, сорняков или других инфицированных растений сои. Распространение заболевания и развитие симптомов усиливаются в периоды теплой и влажной погоды. Развитие симптомов обычно начинается после цветения и проявляется в виде округлых очагов поражения на листьях сои, имеющих вид пятен от красновато-коричневого до фиолетового цвета, которые могут сливаться с формированием очагов. Симптомы явным образом проявляются в верхнем ярусе листьев, обычно на трех или четырех верхних тройчатых листьях По мере созревания урожая у инфицированных растений сои наблюдается усугубление симптомов, и при наполнении стручка может произойти преждевременное опадение пораженных листьев. Развитие симптомов, вызванных Cercospora, может также проявляться в виде очагов поражения на стеблях, черешках листьях и стручках. Инфицирование семян происходит через место прикрепления к стручку. На инфицированных Cercospora семенах видно обесцвечивание с фиолетовым оттенком, которое может выглядеть как крапинки или пятна, полностью покрывающие оболочку семени.
[0391] Внекорневое внесение флагеллина или флагеллин-ассоциированных полипептидов (таблицы 4-5) представляет собой альтернативный подход к лечению указанного заболевания. Средства для внекорневого внесения с указанными биоактивными примирующими полипептидами, которыми опрыскивают поверхность листьев бессимптомных растений или растений с проявляющимися симптомами, представляют собой способ предотвращения, лечения и контроля церкоспориоза листьев у сои. Внекорневое внесение Flg22, происходящего из Bacillus thuringiensis, в частности, при высоком рабочем расходе (например, 4,0 жидких унции на акр), может обеспечивать способ менеджмента раннего развития симптомов и получение более здоровых и более жизнеспособных растений сои, культивируемых в полевых местоположениях, пораженных Cercospora.
[0392] Специфические комбинации биоактивных примирующих полипептидов, которые могут подходить для лечения или уменьшения симптомов, вызванных Cercospora, включают: флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид с последовательностью аминокислот, содержащей SEQ ID NO: 226, 751 или 752; полипептид RHPP с последовательностью, содержащей SEQ ID NO: 600; или комбинацию флагеллин-ассоциированного полипептида с последовательностью аминокислот, содержащей любую из SEQ ID NO: 226, 751 и 572, и полипептида RHPP, имеющего последовательность аминокислот, содержащей SEQ ID NO: 600.
[0393] Например, подходящая комбинация биоактивных примирующих полипептидов для лечения или уменьшения симптомов, вызванных Cercospora, на растении или части растения представлена флагеллиновым полипептидом, имеющим последовательность аминокислот, содержащую SEQ ID NO: 226, по отдельности или в комбинации с полипептидом RHPP, имеющий последовательность аминокислот, содержащую SEQ ID NO: 600. Дополнительные средства для обработки могут дополнительно содержать фунгицид в комбинации с указанными биоактивными примирующими полипептидами.
Азиатская ржавчина сои
[0394] Азиатская ржавчина сои представляет собой грибное заболевание, вызываемое Phakopsora pachyrhizi. Его этиология и симптомы аналогичны вызываемому Cercospora заболеванию, и комбинации биоактивных примирующих полипептидов, подходящие для его лечения, также сходны. В частности, комбинации биоактивных примирующих полипептидов, которые могут подходить для лечения или уменьшения симптомов азиатской ржавчины сои, включают: флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, имеющий последовательность аминокислот, содержащую SEQ ID NO: 226, 751 или 752; полипептид RHPP, имеющий последовательность, содержащую SEQ ID NO: 600; или комбинацию флагеллин-ассоциированного полипептида, имеющего последовательность аминокислот, содержащую любую из SEQ ID NO: 226, 751 и 572, и полипептида RHPP, имеющего последовательность аминокислот, содержащую SEQ ID NO: 600.
[0395] Например, подходящая комбинация биоактивных примирующих полипептидов для лечения или уменьшения симптомов азиатской ржавчины сои на растении или части растения, представляет собой флагеллиновый полипептид, имеющий последовательность аминокислот, содержащую SEQ ID NO: 226, по отдельности или в комбинации с полипептидом RHPP, имеющим последовательность аминокислот, содержащую SEQ ID NO: 600. Дополнительные средства для обработки могут дополнительно содержать фунгицид в комбинации с указанными биоактивными примирующими полипептидами.
Красная пятнистость (холкус)
[0396] Красная пятнистость представляет собой бактериальное заболевание, вызываемое Pseudomanas syringae, патовар actinidae. В настоящем документе описаны способы применения флагеллиновых или флагеллин-ассоциированных полипептидов для ограничения роста P. syringae и, соответственно, предотвращения или лечения красной пятнистости у растения или части растения. Флагеллиновые или флагеллин-ассоциированные полипептиды, подходящие для лечения P. syringae, включают любые полипептиды, имеющие последовательности аминокислот, содержащие любые из SEQ ID NO: 226, 540, 751 и 572 или любую их комбинацию.
Вызываемая Sclerotinia стеблевая гниль (белая плесень)
[0397] Sclerotinia sclerotiorum представляет собой фитопатогенный гриб, вызывающий заболевание, называемое белой плесенью. Оно также известно как мягкая гниль, мокрая гниль, стеблевая гниль, падалица, гниль корневой шейки и склеротиниоз. Диагностические симптомы белой гнили включают покоящиеся структуры черного цвета, известные как склероции, и белый пушистый налет мицелия на инфицированном растении. Склероции, в свою очередь, продуцируют плодовое тело, продуцирующее споры в сумке. Sclerotinia может поражать сочные травянистые растения, в частности, фрукты и овощи, или молодую ткань древесных декоративных растений. Она может также поражать бобовые или клубнеплодные растения, такие как картофель. Белая плесень может поражать хозяина на любой стадии роста, в том числе всходы, зрелые растения и собираемые продукты. Обычно она обнаруживается в тканях с высоким содержанием воды и в непосредственной близости от почвы. При отсутствии лечения очаги поражения на линии почвы, имеющие цвет от бледно- до темно-коричневого, покрываются белым пышным мицелиальным налетом. Он поражает ксилему, что приводит к хлорозу, увяданию, опадению листьев и гибели. Белая плесень может также возникать на плодах в полевых условиях или при хранении, и характеризуется белым грибным мицелием, который покрывает плод, с последующим гниением плода. Флагеллиновые или флагеллин-ассоциированные полипептиды, подходящий для лечения инфекции S. sclerotiorum, включают любые полипептиды, имеющие последовательности аминокислот, содержащую любую из SEQ ID NO: 226, 540, 571, 751 и 752.
Вызываемая Pseudomonas пятнистость листьев
[0398] Pseudomonas syringae, патовар actinidiae (PSA) представляет собой губительный патоген растений, вызывающий бактериальный рак как зеленых (Actinidiae deliciosa), так и желтых (Actinidiae chinesis) киви во всех зонах производства киви, приводя к серьезным потерям урожаев в Новой Зеландии, Китае и Италии. Только в Новой Зеландии совокупные потери дохода от самого разрушительного биовара PSA-V, по прогнозам, приблизятся к $740 млн новозеландских долларов (NZD) к 2025 году (Исследовательский институт аграрного бизнеса и экономики Университета Линкольна, «Стоимость Psa-V для новозеландской индустрии киви и более широкого сообщества»; май 2012 г. ). PSA-V колонизирует внешние и внутренние поверхности у киви и может распространяться через ткани ксилемы и флоэмы. Симптомы заболевания PSA-V у киви включают бактериальную пятнистость листьев, бактериальный рак ствола, красные экссудаты, гниль цветков, обесцвечивание веток и, в конечном итоге, отмирание лоз киви. Стандартный способ борьбы с PSA-V в настоящее время предусматривает частую обработку листвы на лозах киви средствами с металлической медью, что, по прогнозам, приведет к отбору устойчивой к меди формы патогена и потере контроля над заболеванием. Имеется срочная потребность в новых способах контроля.
[0399] Флагеллиновые или флагеллин-ассоциированные пептиды, подходящие для лечения инфекции Pseudomanas syringase, в частности, у киви, включают любые полипептиды, имеющие последовательности аминокислот, содержащую SEQ ID NO: 226, 540, 752 и/или 571.
Азиатское позеленение цитрусовых (болезнь Хуанлун)
[0400] Описанные в настоящем документе способы включают другой подход к борьбе с заболеванием и наряду с этим обеспечивает преимущества, заключающиеся в увеличении общей продуктивности растения. Указанный подход направлен конкретным образом на обеспечение экзогенного или эндогенного применения биоактивных примирующих полипептидов, которые включают тионины для противодействия заболеванию у растений.
[0401] Тиониновые и тиониноподобные полипептиды (таблица 19) и их композиции подходят для предотвращения, лечения и контроля азиатского позеленения цитрусовых, также называемого болезнью Хуанлун (HLB), разрушительного заболевания цитрусовых. Заболевание HLB широко распространено и обнаруживалось в большинстве коммерческих и жилых участках, во всех округах, где есть коммерческие цитрусовые сады.
[0402] В настоящем документе описаны способы применения тиониновых полипептидов (SEQ ID NO: 650-749) для предотвращения распространения и лечения заболевания HLB.
[0403] Азиатское позеленение цитрусовых переносит азиатская цитрусовая листоблошка, Diaphorina citri, или африканская цитрусовая листоблошка, Trioza erytreae Del Guercio, оба вида охарактеризованы как сосущие сок полужесткокрылые насекомые семейства Psyllidae, которые, как было определено, участвуют в распространении позеленения цитрусовых, заболевания, вызываемого высокоспециализированными населяющими флоэму бактериями Candidatus Liberibacter asiaticus (Halbert, S.E. and Manjunath, K.L, “Asian citrus psyllids Sternorrhyncha: Psyllidae and greening disease of citrus: A literature review and assessment of risk in Florida,” Florida Entomologist 87: 330-353, 2004). Азиатское позеленение цитрусовых или болезнь Хуанлун считают смертельным для цитрусового дерева после того, как оно было инфицировано.
[0404] Ранние симптомы заболевания на листьях представлены пожелтением жилок и асимметричным хлорозом, называемым мраморной пятнистостью, представляющей собой главный диагностический симптом заболевания. Инфицированные деревья отстают в росте, имеют скудную листву с видимой мраморной пятнистостью. Ранние симптомы пожелтения могут появляться на одном побеге или ветви и по мере прогрессирования заболевания пожелтение может распространиться по всему дереву. У пораженных деревьев может наблюдаться отмирание ветвей и опадение плодов. Плоды часто бывают немногочисленными, мелкими, деформированными или несимметричными, и не окрашены должным образом, оставаясь зелеными на конце, с желтым пятном непосредственно под плодоножкой (стеблем) на срезанном фрукте.
[0405] Азиатское позеленение цитрусовых может также передаваться при прививке, когда выбирают цитрусовые подвои и прививают к сортовому привою.
[0406] Менеджмент позеленения цитрусовых оказался сложным и, соответственно, в имеющихся способах контроля HLB используется многоуровневый комплексный подход к менеджменту заболеваний и вредителей, задействующий 1) внедрение свободных от заболеваний питомников и подвоев для использования при прививании, 2) применение пестицидов и системных инсектицидов для контроля переносчиков-листоблошек, 3) применение агентов для биологического контроля, таких как антибиотики, 4) применение благоприятных насекомых, таких как паразитические осы, атакующие листоблошек, и 5) селекция с получением нового генетического материала цитрусовых с повышенной устойчивостью к вызывающим позеленение цитрусовых бактериям (Candidatus Liberibacter spp.). Принятие культуральных и регуляторных мер для предотвращения распространения заболевания также входит в комплексный подход к менеджменту. Многие аспекты менеджмента позеленения цитрусовых являются дорогостоящими как в денежном выражении, так и в отношении потерь в производстве цитрусовых.
[0407] При междужилковом применении тиониновый полипептид или смесь тиониновых полипептидов может быть доставлена непосредственно во флоэму (например, клетки флоэмы, включая сок флоэмы, клетки-компаньоны флоэмы и элементы ситовидных трубок флоэмы), где может обитать Candidatus Liberibacter.
[0408] Указанные тионины могут быть получены с применением экспрессионной системы, в которой они могут быть слиты с нацеливающей на флоэму последовательностью (последовательностями) (таблица 18) и затем однозначным образом доставлены именно в ту область, где могут обитать бактерии в цитрусовом растении.
[0409] Указанные нацеленные на флоэму тиониновые биоактивные примирующие полипептиды подходят для лечения цитрусовых растений, для предотвращения, снижения или элиминации распространения азиатского позеленения цитрусовых или болезни Хуанлун (HLB) путем непосредственного нацеливания на бактерию Candidatus Liberibacter asiaticus
[0410] Указанные нацеленные на флоэму тионины могут быть доставлены путем инъекции во флоэму кустарника или дерева. Кроме того, они могут быть доставлены путем опрыскивания, промывания, или добавления в виде средства для замачивания или пропитки в почву или в область вокруг растения.
[0411] Любые из нацеливающих на флоэму последовательностей (таблица 18; SEQ ID NO: 641-649) могут применяться в комбинациях с тиониновыми и тиониноподобными полипептидами (таблица 19; SEQ ID NO: 650-749).
[0412] Бактерию, вызывающую HLB, Candidatus Liberibacter asiaticus, трудно выделить и культивировать. Для тестирования индивидуальных тионинов и тионинов с нацеливающими на флоэму последовательностями, чтобы определить, подходят ли они для обработки заболевания HLB, может быть использован Agrobacterium tumefaciens в качестве модельного организма для тестирования эффективности для уменьшения титров клеток или роста Agrobacterium до применения тионина или комбинаций с тионином в условиях фруктового сада.
[0415] Способы «пептидного примирования» тионинами и/или тиониноподобными полипептидами согласно настоящему изобретению (таблица 19) могут также применяться в комбинации с флагеллиновыми и флагеллин-ассоциированными полипептидами (таблицы 1-5). Комбинации тиониновых и флагеллин-ассоциированных биоактивных примирующих полипептидов могут применяться для профилактической предварительной обработки цитрусового растения путем применения указанного биоактивного примирующего полипептида или композиции, содержащей указанный полипептид, до возникновения или проявления каких-либо связанных с инфекцией симптомов у цитрусовых кустарников или деревьев. Указанная предварительная обработка увеличивает устойчивость к болезнетворному патогену, вызывающему позеленение цитрусовых (Candidatus Liberibacter spp.).
[0414] Тионины, представленные в комбинации с флагеллин-ассоциированными биоактивными примирующими полипептидами, обеспечивают более комплексный подход к предотвращению и менеджменту заболевания. Тиониновые и флагеллин-ассоциированные биоактивные примирующие полипептиды задействуют два отличающихся механизма действия для предотвращения заболевания и распространения заболевания.
[0415] Тионин-флагеллиновые комбинации биоактивных примирующих полипептидов могут также применяться вместе с любым другим комплексным подходом к менеджменту для контроля заболевания, предусмотренным при HLB, включая, но не ограничиваясь перечисленными, (1) использование свободных от заболевания сеянцев и/или корневых побегов для прививания, (2) применение пестицидов и/или системных инсектицидов для контроля болезнетворных листоблошек, (3) применение агентов для биологического контроля, например, инъекций антибиотиков, или паразитических насекомых, контролирующих листоблошек, (4) выведение новых вариантов генетического материала цитрусовых с повышенной устойчивостью к бактериям, вызывающим азиатское позеленение цитрусовых, (5) контроль паразитических растений (например, повилики), которые могут распространять заболевание; или (6) любую комбинацию перечисленного.
[0416] Синтетический вариант нацеливающего на флоэму полипептида (SEQ ID NO: 641), в частности, подходит для применения при нацеливании противомикробных полипептидов на ситовидные трубки флоэмы и клетки-компаньоны, и может подходить для лечения различных бактериальных заболеваний растений, таких как бактериальная полосатость листьев, азиатское позеленение цитрусовых или болезнь Хуанлун, и рак цитрусовых.
[0417] Кроме того, флагеллиновые или флагеллин-ассоциированные полипептиды подходят для лечения азиатского позеленения цитрусовых, в частности, при применении в комбинации с бактериоцидом. Например, могут быть использованы флагеллиновые или флагеллин-ассоциированные полипептиды с последовательностями аминокислот, содержащими любую из SEQ ID NO: 226, 571 и 752. Предпочтительно, указанный бактериоцид содержит окситетрациклин.
Рак цитрусовых
[0418] Способы «пептидного примирования» были разработаны для применения с биоактивными примирующими тиониновыми и флагеллин-ассоциированными полипептидами согласно описанию в таблице 19 (тионины) и таблицах 1-5 (флагеллиновые и флагеллин-ассоциированные полипептиды) для профилактической обработки цитрусовых растений до возникновения каких-либо видимых симптомов рака цитрусовых, или в качестве средства для обработки после появления видимых симптомов заболевания.
[0419] Рак цитрусовых встречается в основном в тропическом и субтропическом климате; было описано его возникновение более чем в 30 странах, в том числе сообщалось о распространении инфекции в Азии, Африке, на островах Тихого и Индийского океанов, в Южной Америке, Австралии, Аргентине, Уругвае, Парагвае, Бразилии и США. Рак цитрусовых представляет собой заболевание, вызываемое бактерией Xanthomonas axonopodis, патовар citri или, патовар aurantifolii (также называемой Xanthomonas citri, подвид citri), инфицирующей листву, плоды и молодые стебли. Симптомы инфекции рака цитрусовых на листьях и плодах кустарников/деревьев цитрусовых могут приводить к пятнистости листьев, повреждениям листьев, сбрасыванию листьев, отмиранию верхушек, деформации плодов, появлению пятен на кожуре плодов, преждевременному опадению плодов и формированию язвенных повреждений на листьях и плодах. Диагностические симптомы рака цитрусовых включают характерный желтый ореол, окружающий очаги повреждения на листьях, и водянистая полоса, развивающаяся вокруг некротической ткани на листьях цитрусового растения. Патоген рака цитрусовых может распространяться в результате транспортировки инфицированных плодов, растений и оборудования. Распространению могут также способствовать ветер и дождь. Системы верхового орошения могут также способствовать перемещению вызывающего рак цитрусовых патогена. Зараженные стебли могут нести бактерии рака цитрусовых (Xanthomonas axonopodis, патовар citri) в очагах поражения на стеблях для передачи другим цитрусовым растениям. Насекомые, такие как азиатская минирующая мушка (Phyllocnistis citrella) также распространяют заболевание.
[0420] В целом, цитрусовые растения, подверженные заболеванию рака цитрусовых, включают апельсин, сладкий апельсин, грейпфрут, пуммело, мандарин разновидности танжерин, лимон, лайм, кислый лайм «Свингл», палестинский сладкий лайм, танжерин, танжело, кислый апельсин, дикий лимон, цитрон, каламондин, понцирус трехлисточковый и кумкват.Миллионы долларов по всему миру ежегодно затрачиваются на программы предотвращения, санитарной обработки, недопущения, карантина и эрадикации для контроля рака цитрусовых (Gottwald T.R. “Citrus Canker,” The American Phytopathological Society, The Plant Health Instructor 2000/ обновлено в 2005). Лечение указанного заболевания включало применение антибиотиков или дезинфицирующих средств, применение бактерицидных спреев на основе меди и применение пестицидов для контроля азиатской минирующей мушки.
[0421] Комбинация с биоактивными примирующими полипептидами, содержащая тионин и флагеллин-ассоциированные полипептиды, может быть использована у цитрусового растения или части цитрусового растения (например, подвоя, привоя, листьев, корней, стеблей, плодов и листвы) с применением способов, которые могут включать: опрыскивание, инокуляцию, впрыскивание, замачивание, пропитка, промывание, протравку и/или внесение в окружающую почву, например, в виде средства для внесения в борозду при посадке.
[0422] Предложены способы применения биоактивных примирующих полипептидов, содержащих тионин и/или флагеллин-ассоциированные полипептиды, для предварительной обработки цитрусовых растений или частей цитрусовых растений (например, подвоя, привоя, листьев, корней, стеблей, плодов и листвы) до возникновения каких-либо видимых симптомов. Они также подходят для обеспечения повышения устойчивости к патогену рака цитрусовых, что приводит к уменьшению симптомов заболевания.
[0423] Кроме того, способы применения биоактивных примирующих полипептидов, таких как флагеллиновые и флагеллин-ассоциированные полипептиды, подходят для лечения цитрусовых растений или частей цитрусовых растений (например, подвоя, привоя, листьев, корней, стеблей, плодов и листвы) при ранних симптомах рака цитрусовых или после того как симптомы заболевания становятся явными.
[0424] Применение полипептидов Flg для обработки цитрусовых растений для предотвращения, снижения или элиминации распространения рака цитрусовых может быть реализовано путем впрыскивания во флоэму кустарника или дерева, опрыскивания, промывания, добавления в виде средства для замачивания или пропитки в почву или область почвы вокруг растения, или путем внесения в борозду при посадке.
[0425] Тиониновые биоактивные примирующие полипептиды согласно описанию в настоящем документе (таблица 17) могут применяться индивидуально или в комбинации с любым из флагеллин-ассоциированных полипептидов Flg (таблицы 1-5) в виде средства для обработки листвы, или опрыскивания, или впрыскивания и подходят для предотвращения заражения цитрусовых растений насекомыми, такими как азиатская минирующая мушка (Phyllocnistis citrella), которые были идентифицированы как распространители бактерий (Xanthomonas axonopodis, патовар citri), вызывающих рак цитрусовых.
Цитрусовые растения
[0426] Любой из описанных в настоящем документе способов обеспечения улучшенного состояния здоровья растений, переносимости заболеваний, или применения для лечения заболеваний, для лечения или предотвращения азиатского позеленения цитрусовых (HLB) или рака цитрусовых, подходят для применения у любых цитрусовых растений и кустарников/деревьев.
[0427] Тиониновые или флагеллин-ассоциированные полипептиды или композиции, содержащие тиониновые или флагеллин-ассоциированные полипептиды согласно описанию в настоящем документе, могут применяться для любого цитрусового кустарника и/или дерева, и для любого агрономически важного цитрусового гибрида или негибридного цитрусового растения, и подходят для профилактической обработки указанного цитрусового растения для предотвращения начала инфекции или обеспечения лечения после возникновения инфекции.
[0428] Виды цитрусовых растений, подходящие для применения способов, описанных в настоящем документе, включают, не ограничиваясь перечисленными: сладкий апельсин (Citrus sinensis, Citrus maxima × Citrus reticulata), апельсин-бергамот (Citrus bergamia, Citrus limetta × Citrus aurantium), горький апельсин, померанец или севильский апельсин (Citrus aurantium, Citrus maxima × Citrus reticulata), апельсин-королек (Citrus sinensis), оранжело или хиронья (Citrus paradisi × Citrus sinensis), мандарин (Citrus reticulate), лимон трехлисточковый (Citrus trifoliata), апельсин татибана (Citrus tachibana), клементин (Citrus clementina), кишу микан (Citrus kinokuni), лимон (Citrus limon, Citrus maxima × Citrus medica), индийский дикий апельсин (Citrus indica), лимон «Империал» (Citrus limon, Citrus medica × Citrus paradisi), лайм (Citrus latifoli, Citrus aurantifolia), лимон Мейера (Citrus meyeri); гибриды Citrus ×meyeri с Citrus maxima, Citrus medica, Citrus paradisi и/или Citrus sinensis), лимон дикий (Citrus jambhiri), лимон волкамериана (Citrus volkameriana), лимон «Пондероза» (Citrus limon×Citrus medica), каффир-лайм (Citrus hystrix или Mauritius papeda), сладкий лимон, сладкий лайм или мусамби (Citrus limetta), персидский лайм или лайм таити (Citrus latifolia), палестинский сладкий лайм(Citrus limettioides), таламисан (Citrus longispina), австралийский пальчиковый лайм (Citrus australasica), австралийский круглый лайм (Citrus australis), австралийский пустынный или дикий лайм (Citrus glauca), лайм Маунт Уайт (Citrus garrawayae), лайм «какаду» или «Хампти-Ду» (Citrus gracilis), инодору (Citrus inodora), новогвинейский дикий лимон (Citrus warburgiana), папуану (Citrus wintersii), лимандарин (Citrus limonia; (гибриды с Citrus reticulata × Citrus maxima × Citrus medica), гайниму (Citrus pennivesiculata), австралийский кровавый лайм (Citrus australasica×Citrus limonia) китайский лайм (Triphasia brassii, Triphasia grandifolia, Triphasia trifolia), грейпфрут (Citrus paradisi; Citrus maxima × Citrus ×sinensis), танжерин (Citrus tangerina), танжело (Citrus tangelo; Citrus reticulata × Citrus maxima или Citrus paradisi), танжело разновидности миннеола (Citrus reticulata × Citrus paradisi), оранжело (Citrus paradisi × Citrus sinensis), тангор (Citrus nobilis; Citrus reticulata × Citrus sinensis), помелло или помело (Citrus maxima), цитрон (Citrus medica), горный цитрон (Citrus halimii), кумкват (Citrus japonica или виды Fortunella), гибриды кумквата (каламондин, Fortunella japonica; цитранжкват, Citrus ichangensis; лаймкват, Citrofortunella floridana; оранжекват, гибрид между Satsuma mandarin×Citrus japonica или видами Fortunella; просаймкват, Fortunella hirdsiie; санкват, гибрид между Citrus meyeri и Citrus japonica или видами Fortunella; юзукват, гибрид между Citrus ichangensis и Fortunella margarita), папеды (Citrus halimii, Citrus indica, Citrus macroptera, Citrus micrantha), ичанскую папеду (Citrus ichangensis), сулавесскую папеду (Citrus celebica), папеду Хази (Citrus latipes), меланезийскую папеду (Citrus macroptera), ичанский лимон (Citrus ichangensis × Citrus maxima), юзу (Citrus ichangensis × Citrus reticulata), зеленый апельсин (Citrus reticulata×Citrus maxima), кабосу (Citrus sphaerocarpa), судачи (Citrus sudachi), алемо (Citrus macrophylla), микранту (Citrus micrantha), мелкоплодную микранту (Citrus micrantha), калпи (Citrus webberi), микан (Citrus unshiu), хьюганацу (Citrus tamurana), мангшаньеган (Citrus mangshanensis), каулу (Citrus crenatifolia), аманацу или нацумикам (Citrus natsudaidai), кинноу (Citrus nobilis × Citrus deliciosa), кийоми (Citrus sinensis × Citrus unshiu), оробланко (Citrus maxima × Citrus paradisi), агли (Citrus reticulata × Citrus maxima и/или Citrus × paradisi), каламондин (Citrus reticulata × Citrus japonica), чинотто (Citrus myrtifolia, Citrus aurantium или Citrus pumila), мандарин «клеопатра» (Citrus reshni), дайдай (Citrus aurantium или Citrus daidai), лараха (Citrus aurantium), мандарин сатсума (Citrus unshiu), мандарин «наартье» (Citrus reticulata × Citrus nobilis), рангпур (Citrus limonia; или гибрид с Citrus sinensis×Citrus maxima × Citrus reticulata), наснаран (Citrus amblycarpa), йекан, анадомикан (Citrus iyo), дикий лайм (Citrus odichukuthi), золотой апельсин (Citrus flaviculpus), помпию (Citrus monstruosa), тайваньский танжерин (Citrus depressa), «Шонан Голд» (Citrus flaviculpus или Citrus unshiu), сунки (Citrus sunki), мангшанский мандарин (Citrus mangshanensis, Citrus nobilis), климению (Clymenia platypoda, Clymenia polyandra), Jabara (Citrus jabara), мандору (Mandora cyprus), мелоголд (Citrus grandis×Citrus paradisii/Citrus maxima/Citrus grandis), ичанский лимон (Citrus ichangensis×Citrus maxima), медовый мандарин (Citrus reticulata) и мандарин шикваса (Citrus depressa).
[0429] Тиониновые и/или флагеллин-ассоциированные примирующие полипептиды могут применяться у любого цитрусового растения, кустарника/дерева, используемого в медицинских или косметических/ оздоровительно-косметических целях, такого как апельсин-бергамот (Citrus bergamia), кислый или горький апельсин (Citrus aurantium), сладкий апельсин (Citrus macrophylla), ки-лайм (Citrus aurantiifolia), грейпфрут (Citrus paradisi), цитрон (Citrus medica), мандарин (Citrus reticulate), лимон (Citrus limon, или гибриды с Citrus medica × Citrus maxima, Citrus limonia, Citrus medica × Citrus maxima × Citrus medica), сладкий лайм (Citrus limetta), каффир-лайм (Citrus hystrix или Mauritius papeda), гибрид лимона или лумию (Citrus medica×Citrus limon), (Citrus medica × Citrus maxima × Citrus medica), оманский лайм (Citrus aurantiifolia, Citrus medica × Citrus micrantha), шеддок (Citrus grandis), лайм «какаду» или «Хампти-Ду» (Citrus gracilis), помело (Citrus retkulata), тангор (Citrus nobilis); и кислый лайм или нимбука (Citrus acida).
[0430] Примеры важных цитрусовых гибридов для получения плодов: сладкий апельсин (Citrus sinensis), горький апельсин (Citrus aurantium), Грейпфрут (Citrus paradisi), лимон (Citrus limon), персидский лайм (Citrus latifolia), ки-лайм (Citrus aurantiifolia), танжерин (Citrus tangerine) и рангпур (Citrus limonia).
[0431] Кроме того, любой из биоактивных примирующих полипептидов, любая из композиций и любой из способов согласно описанию в настоящем документе может применяться у любого цитрусового растения, кустарника/дерева, используемого в качестве генетического материала подвоя и/или привоя. Указанные способы, в частности, подходят для подвоев, часто используемых для прививания цитрусовых, для усиления достоинств сортового привоя, которые могут включать переносимость засухи, мороза, болезнетворных или почвенных организмов (например, нематод). Такие цитрусовые растения, которые обеспечивают подходящие подвоев, включают: кислый или горький апельсин (Citrus aurantium), сладкий апельсин (Citrus macrophylla), лимон трехлисточковый (Poncirus trifoliata), лимон дикий (Citrus jambhiri), лимон волкамериана (Citrus volkameriana), алемо (Citrus macrophylla), мандарин «клеопатра» (Citrus reshini), цитрумело (гибриды с × видами Citroncirus), грейпфрут (Citrus paradisi), лайм рангпур (Citrus limonia), палестинский сладкий лайм (Citrus limettioides) и цитранж Тройер (Citrus sinensis × Poncirus trifoliata, или Citrus sinensis × Citrus trifoliata) и цитранж (Citrus sinensis × Poncirus trifoliata или C. sinensis × C. trifoliata).
Применение ретро-инверсных биоактивных примирующих полипептидов Flg для лечения и уменьшения позеленения цитрусовых
[0432] Комбинации флагеллин-ассоциированных полипептидов в паре с их ретро-инверсными эквивалентами могут применяться для лечения и уменьшения эффекта позеленения у цитрусовых, к которому приводит азиатское позеленение цитрусовых или болезнь Хуанлун.
[0433] Ранним симптомом HLB у цитрусовых является пожелтение листьев на отдельной ветви или в одном секторе листового полога дерева. На листьях, желтеющих в результате HLB, наблюдается асимметричный паттерн с неравномерным пожелтением или мраморностью листа, с зелеными пятнами на одной стороне листа и желтыми на другой. По мере прогрессирования заболевания HLB размер плодов уменьшается, а сок становится горьким. Плод может оставаться частично зеленым и имеет тенденцию к преждевременному опадению.
[0434] Комбинации для обработки с полипептидами Flg и их ретро-инверсными (RI) формами может применяться для минимизации эффекта позеленения плодов цитрусовых. Такие комбинации для обработки могут применяться на инфицированных HLB деревьях. Ретро-инверсные формы будут конкурировать с природными формами полипептидов Flg за связывание с FLS-ассоциированным рецептором (рецепторами) на поверхности растения и, соответственно, ингибировать/задерживать формирование симптомов позеленения, ассоциированных с заболеванием HLB. Комбинации природных Flg22 и RI Flg22 способствуют точной настройке иммунного ответа для уменьшения количества и даже элиминации вызывающих заболевание бактерий, Candidatus Liberibacter asiaticus, наряду с предотвращением развития острых симптомов, таких как пожелтение листьев и позеленение плодов цитрусовых.
ПРИМЕРЫ
[0435] Приведенные ниже неограничивающие примеры предназначены для дополнительного иллюстрирования настоящего изобретения.
Пример 1: Применение Bt.4Q7Flg22 и ретро-инверсного Bt.4Q7Flg22, Ec.Flg22 и Ec.RI Flg22 у кукурузы
[0436] Эффект биоактивных примирующих полипептидов Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и ретро-инверсного Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 376), а также Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) и Ec.RI Flg22 (SEQ ID 527) на урожайность кукурузы (BECK'S 5828 YH, 6175YE) определяли в 10 отдельных местоположениях на Среднем Западе США (фиг.2 и фиг. 3).
[0437] Посевные грядки на поле в каждом местоположении формировали с применением стандартных или противоэрозийных способов посадки кукурузы. Удобрение вносили согласно стандартным агротехническим рекомендациям, одинаковым образом для всех местоположений на Среднем Западе США. Для контроля сорняков использовали гербициды с дополнительным рыхлением почвы при необходимости. Во всех местоположениях засаживали четырехрядные площадки длиной 17,5 футов (5,3 метров). Семена кукурузы высаживали на глубину 1,5-2 дюймов (3,8-5,1 см), чтобы обеспечить нормальное развитие корней, с плотностью 28 000-36 000 растений на акр при ширине рядов 30 дюймов (76,2 см) и расстоянием между семенами, позволяющим разместить приблизительно 1,6-1,8 семян на фут.Каждый гибрид культивировали по меньшей мере на трех отдельных площадках (репликаты) в каждом местоположении, чтобы компенсировать вариабельность условий на поле.
[0438] Природный биоактивный примирующий полипептид Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и соответствующий ретро-инверсный полипептид (SEQ ID NO: 376) химически синтезировали с применением твердофазного пептидного синтеза и готовили состав для рабочего расхода 0,33 жидких унции на акр (24,1 мл/гектар, га). Конечная концентрация в резервуаре опрыскивателя составляла 25 нМ после разведения в носителе в объеме 10 галлонов воды на акр (37,85 л/га). Природные биоактивные примирующие полипептиды Bt.4Q7Flg22 применяли в течение первого и второго года испытаний в полевых условиях для измерения эффектов на протяжении многолетнего вегетационного периода. Ретро-инверсные полипептиды применяли в течение первого года испытания в полевых условиях для сравнения с природным Bt.4Q7Flg22. Биоактивные примирующие полипептиды применяли в качестве средств для опрыскивания листвы с рабочим расходом 0,33 жидких унции на акр (24,1 мл/га) на стадиях развития V5-V8. Каждый полипептид наносили вместе с неионогенным поверхностно-активным веществом в количестве 0,5%. Измеряли эффект биоактивных примирующих полипептидов как абсолютные изменения урожайности в бушелях на акр. Кроме того, рассчитывали вероятность успеха: процент протестированных местоположений, обработка в которых давала преимущество в урожайности по сравнению с другими обработками (в указанном случае - по сравнению с необработанными контрольными растениями).
[0439] На панели A фиг. 2 видно, что в испытаниях первого года в полевых условиях при применении средства для опрыскивания листвы с Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) наблюдалось среднее увеличение урожайности 11,60 бушелей на акр (728,1 кг/га) с вероятностью успеха 90% во всех 10 местоположениях по сравнению с необработанными контрольными растениями кукурузы. На панели B фиг. 2 видно, что применение средства для опрыскивания листвы с ретро-инверсным биоактивным примирующим полипептид Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 376) приводило к среднему увеличению урожайности +11,90 бушелях на акр (746,9 кг/га) с вероятностью успеха 70% во всех 10 местоположениях на Среднем Западе США по сравнению с необработанными контрольными растениями кукурузы. На обеих фигурах местоположения (1-12) отмечены на оси X, а абсолютное изменение урожайности в бушелях на акр отмечено на оси Y и указано над или под столбцами на графике для каждого местоположения. Полипептид Ec.Flg22 при применении у кукурузы обеспечивал преимущество 8,2 бушелей/акр (514,7 кг/га) с 80% вероятностью успеха на всех 10 участках. Ретро-инверсный вариант Ec.RI Flg22 не обеспечивал таких результатов, давая 1,9 бушелей/акр на всех 10 участках с 50% вероятностью успеха.
[0440] Полевые испытания второго года проводили на больших площадях в полевых условиях в 10-11 местоположениях на Среднем Западе США (Иллинойс, Индиана, Айова) и применяли средство для опрыскивания листвы с биоактивным примирующим полипептидом Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) у растений кукурузы на стадии V8 (Dekalb 5064). Средство для опрыскивания листвы с Bt.4Q7Flg22 применяли с рабочим расходом 0,33 жидких унций на акр. Как показано на фиг. 3, внекорневое внесение с применением биоактивного примирующего полипептида Bt.4Q7Flg22 приводило к среднему увеличению урожайности +4,8 бушелей на акр относительно контроля во всех 11 местоположениях с вероятностью успеха 83%. Местоположения 1-6 отмечены на оси X, а абсолютное изменение урожайности в бушелях на акр отмечено на оси Y и указано над или под столбцами на графике для каждого местоположения.
[0441] Полевые испытания первого года с применением средств для обработки листвы с применением биоактивного примирующего полипептида Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) у гибрида кукурузы (Beck's 5828 YH), представленные на фиг. 2 (панель A), привели к увеличению урожайности более чем на +11 бушелей на акр (690,4 кг/га) относительно необработанных контрольных растений. Полевые испытания второго года на растениях кукурузы на стадии V8 (Dekalb 5064), представленные на фиг. 3, привели к увеличению почти на +5 бушелей на акр (313,8 кг/га) по сравнению с урожайностью необработанных контрольных растений. Комбинированное среднее значение для двух гибридов кукурузы давало 2-летнее среднее увеличение урожайности +8,0 бушелей на акр (50,2 кг/га) в разных местоположениях с вероятностью успеха 86%, отражающее многолетний вегетационный период.
[0442] Третье исследование выполняли с тестированием биоактивного примирующего полипептида Bt.4Q7 Flg22 в качестве средства для применения у кукурузы на стадии V5-V8 с 3 уровнями расхода, наносимого вместе с неионогенным поверхностно-активным веществом. Итоговые рабочие расходы составляли 0,33 жидких унции на акр, 4 жидких унции на акр, 8 жидких унций на акр (24,1 мл/га, 292,3 мл/га, 584,6 мл/га), что давало приблизительные конечные концентрации 25 нМ, 300 нМ, 600 нМ, соответственно. Каждое исследование проводили на 10-11 участках. Конечные результаты исследования на стадиях V5-V8 при расходе 0,33 жидких унции на акр (24,1 мл/га) составили преимущество в 5,75 бушелей на акр, или 360,9 кг/га, при расходе 4 жидких унции на акр - 3,77 бушелей/акр, или 236,6 кг/га, и при расходе 8 жидких унций на акр - 5,05 бушелей на акр, или 317 кг/га.
Пример 2: Применение Bt.4Q7Flg22 на кукурузе стадии V8 с фунгицидом
[0443] Обработку листвы Bt.4Q7Flg22, с добавлением или без добавления коммерчески доступного фунгицида, STRATEGO YLD, проводили для определения наличия синергических эффектов при комбинировании биоактивного примирующего полипептида Bt.4Q7Flg22 с фунгицидом. Применение средства для опрыскивания листвы с Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) по отдельности или в комбинации с STRATEGO YLD оценивали у растений кукурузы (гибрид Dekalb 5064) на стадии развития V8.
[0444] Испытания в повторностях проводили в 6-8 местоположениях на Среднем Западе США (Айова, Иллинойс, Индиана). Растения кукурузы культивировали согласно описанию в примере 1. Площадки содержали в соответствии с практиками культивирования индивидуальных производителей; каждая площадка была представлена в 3-4 репликатах. При применении фунгицида STRATEGO YLD (комбинации протиоконазола и трифлоксистробина) использовали рекомендованный в сопроводительной инструкции расход (4,0 жидких унций/акр, или 292,3 мл/га)) в каждом местоположении. Применение средств для обработки листвы включало следующие варианты обработки: (a) необработанный контроль, (b) фунгицид STRATEGO YLD по отдельности и Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) в форме свободного пептида с добавлением (c) и без добавления (d) фунгицида. Bt.4Q7Flg22 применяли с рабочим расходов 0,33 или 4,0 жидких унции на акр или (24,1 или 292,3 мл/га).
[0445] Урожайность кукурузы в бушелях на акр регистрировали во всех местоположениях как среднюю урожайность для испытаний в повторностях в каждом местоположении. Изменение урожайности в бушелях на акр для растений кукурузы, обработанных средствами для внекорневого внесения с фунгицидом STRATEGOYLD нормировали по средней урожайности для контрольных растений кукурузы в 6 местоположениях (таблица 22).
[0446] Средства для обработки листвы с Bt.4Q7Flg22 с расходом 0,33 жидких унции на акр (24,1 мл/га) обеспечивали преимущества в урожайности относительно необработанных контрольных растений кукурузы с увеличением +4,84 бушелей на акр (303,8 кг/га), которое наблюдалось во всех 6 местоположениях. Обработка листвы с применением только фунгицида STRATEGO YLD также обеспечивала преимущество в урожайности у кукурузы с увеличением +4,88 бушелей на акр (306,3 кг/га) относительно контрольных растений. Применение свободного пептида, Bt.4Q7Flg22, с расходом 0,33 жидких унции на акр (24,1 мл/га) в комбинации с фунгицидом STRATEGO YLD с расходом 4,0 жидких унции на акр показало синергический эффект, приводя к среднему увеличению +10,72 бушеля на акр (672,9 кг/га) относительно необработанных контрольных растений. Соответственно, комбинация обработки полипептидом Bt.4Q7 Flg22 и фунгицидом приводило к синергическому эффекту при рабочем расходе 0,33 жидких унции на акр (24,1 мл/га) для полипептидов и рабочем расходе 4,0 жидких унции на акр (292,3 мл/га) фунгицида.
Таблица 22: Обработка листвы кукурузы биоактивным примирующим полипептидом Bt.4Q7Flg22 с фунгицидом для увеличения урожайности кукурузы
Обработка - кукуруза
Рабочий расход при нанесении в жидких унциях на акр
Средняя общая урожайность в бушелях на акр(6 местоположений)
Среднее увеличение в бушелях на акр по сравнению с контролем
Контроль
-
187,37
-
Bt.4Q7Flg22
0,33
192,21
+4,84
STRATEGO YLD
4,0
193,80
+4,88
Bt.4Q7Flg22 +STRATEGO YLD
0,334,0
207,86
+10,72
[0447] Второе исследование для рассмотрения комбинации Ec.Flg22 со STRATEGO также проводили на 8 участках в виде испытаний в повторностях, таким же образом, как и в описании выше. Ec.Flg22 при расходе 4 жидких унции на акр (292,3 мл/га) добавлял 1,3 (бушеля на акр) (81,6 кг/га) к результату для STRATEGO YLD с 63% вероятностью успеха на 8 участках. Указанный результат демонстрирует, что оба полипептида Flg22 были способны увеличивать преимущество, обеспечиваемое коммерческим фунгицидом STRATEGO YLD.
Пример 3: Применение Bt.4Q7 Flg22, ретро-инверсного Bt.4Q7Flg22, Ec.Flg22, ретро-инверсного Ec.Flg22 или RHPP у сои на стадии R2 - увеличенная урожайность.
[0448] Средства для внекорневого внесения с биоактивным примирующим полипептидом Bt.4Q7 Flg22 (SEQ ID NO: 226; фиг. 4, панель A), ретро-инверсным (RI) Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 376; фиг. 4, панель B) из Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7, и полипептидом-стимулятором корневых волосков (RHPP, SEQ ID NO: 600), происходящим из Glycine max, применяли индивидуально для растений сои (коммерческий гибрид Beck's 294 NR) на стадии развития R2 с рабочим расходом 0,33 жидких унции на акр, или 24,1 мл/га (полипептиды Flg22); или 4,0 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га (RHPP). Способы культивирования, задействованные в примере 1, использовали для семян сои. Семена сои (коммерческий гибрид Beck's 294 NR) высаживали на глубину 1,5-2 дюймов (3,8-5,1 см), чтобы обеспечить нормальное развитие корней. Семена сои высаживали с приблизительной плотностью, составлявшей в среднем 150 000 растений на акр, при ширине рядов 30 дюймов (76,2 см) и расстоянием между семенами, позволяющим разместить приблизительно 7-8 семян на фут (0,3 м).
[0449] Итоговую урожайность в бушелях на акр регистрируют для сои, культивированной в 11 отдельных местоположениях на Среднем Западе США, собранной в октябре (фиг.4). Урожайность сои (в бушелях на акр) также регистрируют как среднее для всех местоположений изменение урожайности (в бушелях на акр), нормированное по контрольным растениям сои. Урожайность сои после внекорневого внесения Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и RI Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 376) сравнивали с урожайностью необработанных растений сои и наносили результаты на график на фиг. 4. Местоположения 1-11 отмечены на оси X. Абсолютное изменение урожайности (в бушелях на акр) по сравнению с необработанными контрольными растениями сои отмечено на оси Y и указано над или под столбцами на графике для каждого местоположения. Регистрируют среднюю урожайность во всех 11 местоположениях, она обозначена черным столбцом. Урожайность обработанных внекорневым внесением Bt4Q7Flg22 и RI Bt.4Q7Flg22 растений сои демонстрировала аналогичные тренды в 11 разных местоположениях. Опрыскивание с применением RI Bt.4Q7Flg22 у сои приводило к среднему увеличению урожайности 0,90 бушелей на акр (60,5 кг/га) для 2 гибридов сои во всех 11 местоположениях по сравнению с необработанными контрольными растениями сои. Результаты для урожайности при применении природного (полностью L) Bt.4Q7Flg22 у сои были нулевыми (-0,1 бушелей на акр, или -6,7 кг/га)) при сравнении во всех местоположениях. Данные об урожайности, представленные для всех 11 индивидуальных местоположений на Среднем Западе США, дают вероятность успеха 64%, для обработки обоими средствами для опрыскивания, с RI Bt.4Q7Flg22 и с Bt.4Q7Flg22, по сравнению с контрольными или необработанными растениями сои. Добавление 4 жидких унций на акр (292,3 мл/га) полипептида RHPP в том же исследовании увеличивало урожайность на 1,2 бушеля на акр (80,7 кг/га) по сравнению с контролем.
[0450] Второе исследование выполняли для тестирования полипептидов Ec.Flg22 и Ec.RI Flg22 в виде средств для обработки листвы на стадии R2 у сои при расходе носителя, воды с неионогенным поверхностно-активным веществом (NIS), 10 галлонов на акр (93,5 л/га). Для каждой обработки в резервуаре получали концентрацию 100 нМ. Применение Ec.Flg22 приводит к увеличению 0,9 бушелей на акр (60,5 кг/га) с 82% вероятностью успеха на 11 участках, а Ec.RI Flg22 приводит к увеличению 0,6 бушелях на акр (40,3 кг/га) с 80% вероятностью успеха на 10 участках. Также включали полипептид RHPP в виде средства для обработки семян, обеспечивающий 1,2 бушелей/акр (80,7 кг/га) на 11 участках с 73% вероятностью успеха.
[0451] Третье исследование на тех же 11 участках выполняли при добавлении удобрения для внекорневой подкормки по отдельности или с RHPP при расходе 8 жидких унций/акр (584,6 мл/га). Добавление RHPP к удобрению для внекорневой подкормки обеспечивало преимущество в 1 бушель/акр (67,2 кг/га) на всех 11 участках.
Пример 4: Применение полипептидов Flg22 для опрыскивания листвы у сои.
[0452] Средства для обработки листвы с Bt.4Q7Flg22, Ec.Flg22 и RHPP в количестве 4,0 и 8,0 жидких унций на акр (292,3 и 584,6 мл/га) тестировали в периоде R2 на сортах сои в 11 участках в 10 галлонах воды на акр (93,5 л/га) с 0,5% неионогенного поверхностно-активного вещества (NIS). При применении большей дозы, 8 жидких унций на акр (584,6 мл/га), полипептид Ec.Flg22 давал преимущество в 0,74 бушелей на акр (49,8 кг/га), а Bt.4Q7 Flg22 давал преимущество в 0,88 бушелей на акр (59,2 кг/га). Более низкий расход, 4 жидких унции на акр (292,3 мл/га), для RHPP давал преимущество в урожайности в 0,31 бушелей на акр (20,9 кг/га).
Пример 5: Применение флагеллиновых полипептидов Escherichia coli для увеличения урожайности - Кукуруза
[0453] Затем тестировали эффект происходящих из Escherichia coli флагеллиновых полипептидов на урожайность кукурузы. Сначала растения кукурузы (Beck's 5828 YH) на стадиях развития V5-V8 опрыскивали составами, содержащими биоактивный примирующий полипептид Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) и ретро-инверсный RI Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 527) из Escherichia coli, при рабочем расходе 0,33 жидких унции на акр (24,1 мл/га). Итоговую урожайность в бушелях на акр определяли для кукурузы, выращенной в 12 отдельных местоположениях и собранной в октябре.
[0454] На фиг. 5 показана урожайность в указанных 12 местоположениях, нормированная по необработанным контрольным растениям и представленная как увеличение или уменьшение в бушелях на акр по сравнению с контролем. Представленные данные об урожайности для 12 индивидуальных местоположений в Иллинойсе соответствовали вероятности успеха 50%. У растений кукурузы, обработанных средством для опрыскивания листвы с биоактивный примирующим полипептидом Ec.Flg22 (фиг.5, панель A), наблюдалось среднее увеличение урожайности +8,2 бушеля на акр (514,7 кг/га) относительно необработанных растений во всех 12 местоположениях. У растений кукурузы, обработанных средством для опрыскивания листвы с ретро-инверсным биоактивным примирующим полипептидом RI Ec.Flg22 (фиг.5, панель B), наблюдалось среднее увеличение урожайности +1,9 бушелей на акр (119,3 кг/га) во всех 12 местоположениях по сравнению с необработанными контрольными растениями кукурузы. Соответственно, применение средств для опрыскивания листвы, содержащих биоактивные примирующие полипептиды Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526), обеспечивало благоприятный ростовой ответ и преимущество в урожайности у растений кукурузы при применении на стадии развития V5-V8.
Пример 6: Внекорневое внесение флагеллиновых полипептидов Escherichia coli у кукурузы на стадии V2-V3 для увеличения высоты растений
3
-2
-1
[0455] Внекорневое внесение Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) и ретро-инверсного RI Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 527) осуществляли у кукурузы (Beck's 297NR). Растения культивировали в вегетационном помещении с контролируемыми условиями среды. Семена высаживали непосредственно в контейнеры объемом 39,7 см, содержащие растительный грунт Timberline, на глубину 2,54 см, в количестве 2 семян на контейнер. После высаживания в каждый контейнер добавляли по 50 мл воды комнатной температуры, чтобы обеспечить прорастание. Контейнеры размещали в вегетационном помещении с искусственным освещением, при поступлении приблизительно 300 мкмоль м с (световых фотонов) при суточном свето-темновом цикле 13/11 и с температурами в диапазоне от 21°C днем до 15°C ночью. Для растений использовали одинаковые режимы полива и удобрения.
[0456] Средства для обработки листвы, содержащие как природные, так и ретро-инверсные формы Ec.Flg22, наносили на 3-недельные растения сои на стадии развития от V2 до V3 с рабочим расходом 0,33 жидких унции на акр (24,1 мл/га). Высоту растений (см) измеряли непосредственно перед доставкой средства для внекорневого внесения через 3 недели, а затем повторно 2 недели спустя, когда возраст растений составлял 5 недель. Испытания в 2 повторностях проводили с использованием 18 растений на испытание.
[0457] Согласно описанию в таблице 23, при внекорневом внесении полипептида Ec.Flg22 у сои на стадии развития V2-V3 увеличивалась высота растений по сравнению с контрольными растениями (обработка только водой) (таблица 23). Внекорневое внесение с применением биоактивных примирующих полипептидов Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) и ретро-инверсного Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 527) приводило к +13% и +16% увеличению высоты растений при нормировании по контрольным необработанным растениям сои (нормирование по 100%).
Таблица 23. Внекорневое внесение флагеллинового полипептида увеличивает высоту растений у сои
Средство для обработки листвы
Высота (см) через 3 недели
Высота (см) через 5 недель
Высота в процентах относительно контроля
Соя
Ec.Flg22 (1 мкМ)
40,17 (5,83)
64,79 (8,40)
113,2%
Ретро-инверсный Ec.Flg22 (1 мкМ)
36,57 (6,00)
66,46 (5,77)
116,1%
Пример 7: Применение Flg22 и ретро-инверсного Flg22 у кукурузы - высота растений
[0458] Растения кукурузы (гибрид Beck's 5828 YH) культивировали в вегетационном помещении с контролируемыми условиями среды согласно описанию в примере 6. Растения измеряли через три недели после появления всходов и затем обрабатывали средствами для внекорневого внесения с природной (L) и ретро-инверсной (D) формами полипептидов Flg22 из Bacillus thuringiensis (Bt.4Q7Flg22, SEQ ID NO: 226 и 376) и Escherichia coli (Ec.Flg22, SEQ ID NO: 526-527). Биоактивные примирующие полипептиды применяли в виде свободных полипептидов в концентрации 1 мкМ. Контрольные растения обрабатывали отдельно водой. Через дополнительные 2 недели роста измеряли высоту растений (через 5 недель).
[0459] Изменение высоты растений (Δ высоты, см) между точками времени после 2-недельного и 5-недельного интервалов измеряли и нормировали по росту обработанных водой контрольных растений. Проводили испытания в 3 повторностях с 9 растениями на испытание, в общей сложности по 27 измерений на каждую обработку (таблица 24). При измерении в точке времени через 3 недели различия измеренной высоты растений между обработанными EcFlg22, Bt.4Q7Flg22 или обработанными водой контрольными растениями отсутствовали. Максимальное изменение высоты растений после 3-5 недель регистрировали у растений кукурузы, которые обрабатывали средством для внекорневого внесения с Ec.Flg22 ((=17,60 см). У указанных растений также достигалось увеличение высоты +8,3% по сравнению с контрольными растениями при измерении в точке через 5 недель. Два ретро-инверсных полипептида (RI Ec.Flg22 и RI Bt.4Q7Flg2) и природный Bt.4Q7Flg22 аналогичным образом увеличивали высоту растений по сравнению с контрольной обработкой, с зарегистрированным увеличением от приблизительно +2% до +4%.
Таблица 24. Внекорневое внесение полипептидов Ec.Flg22 и Bt. Flg22 у кукурузы обеспечивало увеличение высоты растений
Средство для обработки листвы кукурузы
Высота (см) через 3 недели (среднеквадратическое отклонение, STDEV)
Высота (см) через 5 недель (STDEV)
(Высота (см)
ΔВысота в процентах от контрольной высоты
Ec.Flg22, 1 мкМ
47,00 (8,30)
64,60 (6,93)
17,60
+8,3%
Ec.Flg22, Ретро-инверсный, 1 мкМ
48,62 (6,62)
62,00 (4,07)
13,38
+3,9%
Bt 4Q7Flg, 221 мкМ
50,10 (6,79)
61,89 (7,03)
5,40
+3,7%
Bt 4Q7Flg22, Ретро-инверсный, 1 мкМ
49,05 (4,28)
61,03 (7,13)
11,98
+2,3%
Пример 8: Применение ретро-инверсных биоактивных примирующих полипептидов Flg22 для содействия росту при стрессе - кукуруза
[0460] Абиотический стресс вызывает значимые потери урожая и может приводить к значительному снижению урожаев и потенциальной урожайности. Композиции с флагеллином и флагеллин-ассоциированные биоактивные примирующие полипептиды могут применяться в качестве химических примирующих агентов для увеличения переносимости растением одного или более абиотических стрессов. Проводили обработку листвы с применением Ec.Flg22 и Bt.4Q7Flg22 и ретро-инверсных форм (RI) обоих указанных биоактивных примирующих полипептидов для определения того, способны ли указанные полипептиды при внекорневом внесении обеспечивать защитное преимущество против теплового и вызванного засухой стресса.
-2
-1
[0461] Семена кукурузы (гибрид Beck's 5828 YH) высаживали и культивировали согласно описанию в примере 6, за исключением того, что использовали световой цикл с 16-часовым днем и 8-часовой ночью. Температуру циклически меняли от 21°C днем до 15°C ночью, при влажности 75%. Световой цикл был достаточным для обеспечения равномерного, приблизительно 300 мкмоль м с, адекватного освещения для роста растений. Растения измеряли через 3 недели после появления всходов и затем обрабатывали средствами для внекорневого внесения с природными или ретро-инверсными (RI) формами Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526-527) или Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226 и 376) в концентрации 1 мкМ. Контрольные растения обрабатывали только водой. Через неделю после обработки опрыскиванием растения подразделяли на 2 группы, причем одну группу оставляли в тех же стандартных условиях среды для роста согласно описанию, а другую группу переносили в условия среды, обеспечивающие тепловой и вызванный дефицитом воды стресс.В условиях среды, характеризующихся тепловым стрессом, температуру повышали с применением тепловых матов с 21°C до 27°C на 18 часов в день на протяжении периода 5 дней. Растения оставляли без полива на протяжении теплового стресса, чтобы дополнительно имитировать вызванный дефицитом воды стресс.Измеряли изменение высоты растений (см) еще через 2 недели в точке 5 недель и регистрировали как процент от высоты контрольных (обработанных водой) растений. Измерения регистрировали как комбинированное среднее значение для двух испытаний с 9 репликатами растений на испытание (таблица 25).
[0462] Как показано в таблице 25, обе природные формы биоактивных примирующих полипептидов (Ec.Flg22 и Bt.4Q7Flg22) увеличивали рост растений относительно высоты контрольных растений при применении в нестрессовых условиях. Указанные две обработки обеспечивали достижение растениями высоты 103% и 108% от соответствующего контроля. Однако только растения кукурузы, обработанные ретро-инверсными полипептидами Flg22 (оба ретро-инверсных полипептида, Ec.Flg22 и Bt.4Q7Flg22), демонстрировали усиленный рост растений по сравнению с контрольными растениями при культивировании и в нормальных условиях среды, и в условиях теплового/водного стресса. Растения, обработанные ретро-инверсным Ec.Flg22, достигали 103% от высоты соответствующего контроля в обоих вариантах условий. Растения, обработанные Bt.4Q7Flg22, достигали 102% и почти 108% от высоты соответствующего контроля в нестрессовых и стрессовых условиях, соответственно.
[0463] Соответственно, растения кукурузы, которые обрабатывали ретро-инверсными полипептидами Flg22 (RI-Ec.Flg22 и RI-Bt.4Q7Flg22), демонстрировали улучшенный рост, на что указывает увеличение высоты растений в процентах относительно контрольных растений. Указанный результат предполагает, что ретро-инверсные формы более стабильны и способны сохраняться без протеолитического разложения в более жестких условиях среды или ситуациях, создающих условия для абиотического стресса. Соответственно, они могут обеспечивать защитное преимущество у растений, подвергающихся воздействию абиотического стресса.
Таблица 25. Внекорневое внесение Ec.Flg22 и Bt.Flg22 у кукурузы, культивируемой в нестрессовых и стрессовых условиях окружающей среды
Средство для обработки листвы у кукурузы (без теплового стресса)
Без стресса(Высоты (см) в %, нормированная по высоте контроля
При стрессе(Высоты в процентах от высоты контроля
Ec.Flg22, 1 мкМ
108,3%
95,8%
Ретро-инверсный Ec.Flg22, 1 мкМ
103,9%
103,5%
Bt. 4Q7Flg 22, 1 мкМ
103,7%
100,1%
Ретро-инверсный Bt.4Q7Flg22, 1 мкМ
102,3%
107,8%
Пример 9: Тепловой и вызванный дефицитом воды стресс после применения средства для обработки листвы с полипептидом Flg22 у кукурузы на стадии V2-V3
[0464] В отдельном эксперименте растения кукурузы, культивированных согласно описанию в примере 8, обрабатывали Bt.4Q7Flg22 наряду с поверхностно-активным веществом до воздействия теплового и вызванного дефицитом воды стресса. Испытания в 3 повторностях с 18 репликатами растений кукурузы на каждое испытание культивировали в вегетационном помещении с контролируемыми условиями среды до стадии развития V2-V3. Каждое растение обрабатывали средствами для опрыскивания листвы, содержащими 0,1% поверхностно-активного вещества, с Bt.4Q7Flg22 или без Bt.4Q7Flg22 (конечная концентрация 1 мкМ). Через неделю после опрыскивания растения переносили в среду, обеспечивающую тепловой и вызванный дефицитом воды стресс.Тепловой стресс создавали с использованием тепловых матов для повышения температуры окружающей среды с 21°C до 27°C. В период теплового стресса растения оставляли без полива. Растения кукурузы оставались в условиях имитации абиотического стресса в течение одной недели, а затем высоту растений (см) измеряли повторно (таблица 26).
[0465] Как показано в таблице 26, в двух испытаниях из трех применение полипептида Bt.4Q7Flg22 в виде средства для опрыскивания листвы (испытания 1 и 3) приводило к значимому улучшению роста (высоты, измеренной в сантиметрах) у растений кукурузы по сравнению с контрольными растениями, обработанными отдельно поверхностно-активным веществом. Обработка листвы биоактивным примирующим полипептидом Bt.4Q7Flg22 приводила почти к 13% увеличению высоты растений в испытании 1 и более чем к 33% увеличению в испытании 3 по сравнению с контрольными (обработанными отдельно поверхностно-активным веществом) растениями.
Таблица 26. Изменение высоты растений кукурузы при применении Bt.4Q7Flg22
Обработка кукурузы
Высота (см) до стресса,2 недели (STDEV)
Высота (см)после стресса,4 недели (STDEV)
(Высота (см)
(Высота в процентах от контрольной высоты
Испытание 1
Поверхностно-активное вещество (0,1%)
17,62 (2,32)
27,96 (3,02)
+10,34
100,0%
Bt.4Q7Flg22 (1 мкМ)
17,72 (2,08)
29,39 (3,04)
+11,68
112,9%
Испытание 2
Поверхностно-активное вещество (0,1%)
15,93 (1,22)
25,26 (1,99)
+9,32
100,0%
Bt.4Q7Flg22 (1 мкМ)
16,03 (1,97)
25,31 (6,29)
+9,28
99,5%
Испытание 3
Поверхностно-активное вещество (0,1%)
13,16 (2,28)
21,43 (2,89)
+8,28
100,0%
Bt.4Q7Flg22 (1 мкМ)
14,99 (1,97)
26,02 (3,21)
+11,03
133,2%
Пример 10: Средство для обработки семян с полипептидами Flg22 - кукуруза и соя
[0466] Семена кукурузы двух отдельных гибридов (гибриды Beck's 5828 AM и 4606 P2) обрабатывали биоактивными примирующими полипептидами Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), наносимыми на поверхность каждого семени, в конечных концентрациях во взвеси 0,25 мкМ или 1,0 мкМ (таблица 27). Средства для семян получали с использованием стокового раствора полипептида с концентрацией 40 мкМ, разведенного до подходящей концентрации во взвеси, содержащей фунгицид, инсектицид, благоприятные бактерии, окрашивающее средство и средство для финишного покрытия семян (EverGol Energy (0,031 мг активного ингредиента/семя), PONCHO/VOTiVO (0,6 мг активного ингредиента/семя), Peridium 1006 (5 жидких унций на центнер, или 147,9 мл/центнер) и Pro-Ized Red Colorant (обычный) (0,5 жидких унций на центнер). Средство для обработки семян наносили с использованием Wintersteiger HEGE II (Wintersteiger AG, Австрия, Германия).
[0467] Семена высаживали в 12 местоположениях на Среднем Западе США (Айова, Иллинойс, Индиана). Урожай собирали на 16 рандомизированных блоках репликатов для каждой из обработок полипептидом Flg22, включающих внесение Bt.4Q7Flg22 в концентрации во взвеси 0,25 мкМ и 1,0 мкМ.
[0468] Из таблицы 27 видно, что средство для обработки семян с биоактивным примирующим полипептидом Bt.4Q7Flg22, применяемое в количестве, эквивалентном 40 мкМ раствору полипептида, при расходе 0,035 или 0,14 жидких унций (2,6 или 10,2 мл/га) раствора полипептида на единицу семян кукурузы, приводило к повышению урожайности со средним увеличением на +2,1 бушелей на акр (131,8 кг/га) при обработке с низким расходом, и средним увеличением +5,3 бушелей на акр при обработке с высоким расходом по сравнению с необработанными контрольными семенами (без обработки семян).
Таблица 27. Обработка семян кукурузы с применением полипептидов Flg22
Обработкакукурузы
Концентрация пептидов во взвеси для покрытия семян
Эквивалентный расход при нанесении на семена кукурузы, в жидких унциях на единицу
Средняя общая урожайность в бушелях на акр,Гибрид 1
Средняя общая урожайность в бушелях на акр,Гибрид 2
Средняя общая урожайность в бушелях на акр,Гибрид 1 и 2
Изменение урожайности в бушелях на акр по сравнению с контрольными семенами
Контроль
-
-
206,65
184,27
197,32
-
Bt.4Q7Flg22
0,25 мкМ
0,035 жидких унций 40 мкМ раствора пептида /единицу
218,36
182,88
200,62
+2,1
Bt.4Q7Flg22
1,0 мкМ
0,14 жидких унций 40 мкМ раствора пептида /единицу
213,44
187,48
202,62
+5,3
[0469] Второе исследование организовали для тестирования способности Ec.Flg22, Ec.RI Flg22, Bt.4Q7Flg22 и Bt.4Q7RI Flg22 содействовать урожайности кукурузы. Испытания в повторностях на 12 местоположениях организовали согласно описанию выше. Bt.4Q7 Flg22 обеспечивал 2,8 бушелей или 71,1 кг с 50% вероятностью успеха, полипептид Bt.4Q7 RI Flg22 обеспечивал 0,5 бушелей на акр. Полипептид Ec. Flg22 обеспечивал преимущество в 2,8 бушелей на акр (175,8 кг/га) с 70% вероятностью успеха, а Ec.RI Flg22 не давал преимуществ.
[0470] Третье исследование организовали для рассмотрения преимуществ обработки семян сои полипептидами Bt.4Q7 Flg22, RI Bt.4Q7Flg22, Ec.RI Flg22 и RHPP в виде средств для обработки семян у сои. В исследовании с 12 местоположениями полипептид RHPP обеспечивал 0,4 бушелей/акр (26,9 кг/га) с 64% вероятностью успеха, полипептид Bt.4Q7 Flg22 обеспечивал 1,3 бушелей на акр (87,4 кг/га) с 64% вероятностью успеха, RI-полипептид Bt.4Q7 Bt.4Q7Flg22 обеспечивал 0,3 бушелей на акр (20,2 кг/га) с 55% вероятностью успеха, а Ec.RI Flg22 обеспечивал 1,8 бушелей на акр (121,1 кг/га) с 73% вероятностью успеха.
Пример 11: Применение флагеллиновых биоактивных примирующих полипептидов у томатов - увеличенная урожайность
[0471] Средство для внекорневого внесения с Bt.4Q7 Flg22 (SEQ ID NO: 226) и Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) применяли в виде средства для экзогенного опрыскивания на стадии перед цветением и использовали для увеличения урожайности у томата.
[0472] Площадки малой площади устраивали так, чтобы имитировать условия коммерческого выращивания томата. Культивирование двух гибридов томата, «Jetsetter» (Испытание 1) и «Better Big Boy» (Испытание 2) начинали с рассады в теплице в течение 42-56 дней до высаживания на приподнятые грядки. Растения томата высаживали, когда температура почвы на глубине три дюйма под поверхностью (7,6 см) достигала 60°F (15.5°C). Растения томата культивировали на приподнятых грядках, покрытых черной пластиковой мульчей. Растения культивировали с использованием капельного орошения и удобрений, которые вносили в соответствии с рекомендациями для производителей на протяжении вегетационного периода для обеспечения оптимального роста и урожайности растений. Небольшие приподнятые площадки устраивали так, чтобы имитировать плотность посадки, используемую коммерческими производителями, которые обычно высаживают по 2600-5800 растений на акр в один ряд с расстоянием 18-30 дюймов (46-76 см) между растениями в ряду, на грядках с расстоянием между центрами 5-6,5 футов (1,5-2 м).
[0473] Средства для обработки листвы с Bt.4Q7 Flg22 и Ec.Flg22 с низким и высоким рабочим расходом, 1 жидкая унция на акр (73,1 мл/га) и 20 жидких унций на акр (1461,5 мл/га), соответственно, применяли на двух гибридах на ранней стадии цветения (первые цветы). Испытания в повторностях проводили в Университете Миссури (Колумбия, Миссури) в июле. Контрольные растения обрабатывали равными (рабочему расходу) объемами воды. Определяли эффекты средств для обработки листвы на увеличение урожайности у томата и регистрировали значения, нормированные по контрольной обработке водой. Среднее изменение урожайности в процентах относительно средней контрольной урожайности регистрируют в таблице 28.
[0474] Внекорневое внесение биоактивных примирующих полипептидов, как Bt.4Q7Flg22, так и Ec.Flg22, увеличивало урожайность плодов томата для каждого гибрида как при низком, так и при высоком рабочем расходе. После усреднения результатов для двух гибридов установлено, что при низком и высоком рабочем расходе средства Bt.4Q7 Flg22 увеличивал урожайность томата на +25% и +17%, соответственно, относительно контрольных растений. Аналогичным образом, обработка с низким и высоким рабочим расходе средства Ec.Flg22 приводила к среднему увеличению урожайности томата на +43% и +46% относительно контрольных растений для двух гибридов.
Таблица 28: Обработка листвы для увеличения урожайности у разных гибридов томатов
Средство для обработки листвы
Испытание 1:Изменение урожайности в процентах относительносреднего значения для контроля;Гибрид: «Jetsetter»
Испытание 2:Изменение урожайности в процентах относительно среднего значения для контроля; Гибрид: «Better Big Boy»
Среднее значение для испытаний1 и 2 изменение урожайности в процентах относительно среднего значения для контроля
Bt.4Q7 Flg22(1 жидкая унция на акр)
+49%
+1%
+25%
Bt.4Q7 Flg22(20 жидких унций на акр)
+22%
+12%
+17%
Ec.Flg22(1 жидкая унция на акр)
+61%
+25%
+43%
Ec.Flg22(20 жидких унций на акр)
+72%
+21%
+46%
Пример 12: Обработка листвы растений томата составом с Bt.4Q7 Flg22
[0475] В другом эксперименте растения томата (гибрид: «Better Boy»), культивированные согласно описанию в предыдущем примере, обрабатывали составом с Bt.4Q7 Flg22 на первой стадии цветения. Использованный состав состоял из ретро-инверсного D-RI-полипептида Bt.4Q7 Flg22, который применяли вместе с 0,01% (по объему) неионогенного поверхностно-активного вещества. Указанный состав наносили на листву растений томата с рабочим расходом средства 1 жидкая унция на акр (73,1 мл/га) в зимних испытаниях на томате с двумя повторностями во Флориде. При сборе урожая измеряли урожайность как число плодов на растение, массу (в граммах) на плод и общую урожайность (в фунтах на акр). В таблице 29 приведена урожайность в виде процентного сравнения или изменения относительно необработанных контрольных (обработанных только водой) растений.
[0476] Обработка листвы с применением состава Bt.4Q7 Flg22, наносимого с расходом 1 жидкая унция на акр (73,1 мл/га) увеличивала урожайность томата «Better Boy» в среднем на 21% по сравнению с необработанными (обработанными только водой) контрольными растениями. Указанное увеличение для растений томата «Better Boy» соответствовало как увеличению числа плодов на растение, так и увеличению массы плодов (таблица 29).
Таблица 29: Обработка листвы биоактивным примирующим полипептидом Flg22 для увеличения урожайности у томата
Обработка
Изменение в процентах числа плодов на растение по сравнению с контролем
Изменение в процентах массы на плодпо сравнению с контролем
Изменение урожайности в процентах (в фунтах на акр) по сравнению с контролем
Bt.4Q7 Flg221 жидкая унция на акр
+12%
+9%
+21%
Пример 13: Применение флагеллиновых биоактивных примирующих полипептидов у перца-увеличенная урожайность
[0477] Средства для обработки листвы с Bt.4Q7 Flg22 (SEQ ID NO: 226) и Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) наносили в виде средства для экзогенного опрыскивания на стадии первого цветка и использовали для увеличения урожайности у двух сортов перца.
[0478] Средства для обработки листвы с биоактивными примирующими полипептидами Bt.4Q7 Flg22 и Ec.Flg22 применяли на площадках малой площади, устроенных так, чтобы имитировать условия коммерческого выращивания перца (Capsicum). Два сорта перца: «Red Knight» (RK) и «Hungarian Hot Wax» (HHW) культивировали из 6-недельной рассады на приподнятых грядках, покрытых черной пластиковой мульчей с высокими влагоудерживающими характеристиками, с pH 5,8-6,6. Растения культивировали с использованием капельного орошения и удобрения, вносимого в соответствии с рекомендациями для производителей на протяжении вегетационного периода c целью обеспечения оптимального роста и урожайности растений. Небольшие приподнятые площадки устраивали так, чтобы имитировать плотность посадки, используемую коммерческими производителями, которые обычно высаживают приблизительно по 10 000-14 000 растений на акр в двойных рядах на расстоянии 14-18 дюймов (35,6-46 см) на грядках с пластиковой мульчей, с расстоянием 16-24 дюймов (40,6-61 см) между растениями в ряду и расстоянием между центрами грядок 5,0-6,5 футов (40,6-70 см). Также растения перца могут быть высажены в один ряд на каждой грядке (5000-6500 растений на акр, или 12 355-16 062 растений на гектар).
[0479] Средства для внекорневого внесения с композициями, содержащими Bt.4Q7 Flg22 и Ec.Flg22, применяли у растений перца обоих сортов на стадии первого цветка с рабочим расходом средства 1 жидкая унция на акр (низкий уровень), или 73,1 мл/га, и 20 жидких унций на акр (высокий уровень), или 1461,5 мл/га, и сравнивали с контролем (обработкой водой с таким же рабочим расходом). Эффекты указанных средств для внекорневого внесения на урожайность перца определяли для двух отдельно собранных с использованием метода одноразовой уборки урожаев и нормировали по урожайности контрольных растений. Среднее изменение урожайности в процентах для каждой обработки относительно урожайности у контрольных растений приведено в фунтах на акр в таблице 29.
[0480] Обработка листвы растений перца с применением биоактивных примирующих полипептидов, либо Bt.4Q7 Flg22, либо Ec.Flg22, приводила к общему среднему увеличению урожайности перца (в фунтах на акр) как при низком, так и при высоком рабочем расходе средств у обоих сортов перца, RK и HHW. Комбинированная средняя урожайность для сортов RK и HHW была выше на +53% (низкий уровень: 1 жидкая унция на акр, или 73,1 мл/га) и +25% (высокий уровень: 20 жидких унций на акр) у обработанных средством для внекорневого внесения с Bt.4Q7 Flg22 растений перца по сравнению с контрольными растениями перца. В качестве альтернативы, увеличение комбинированной средней урожайности для сортов RK и HHW было выше на +30% (низкий уровень: 1 жидкая унция на акр) и +47% (высокий уровень: 20 жидких унций на акр, или 1461,5 мл/га) у обработанных средством для внекорневого внесения с Ec.Flg22 растений перца по сравнению с контрольными растениями перца.
[0481] У двух сортов перца наблюдались разные ответы на обработку листвы и разные итоговые преимущества в урожайности у обоих сортов перца (таблица 30). Существенное увеличение урожайности наблюдалось у сорта HHW по сравнению с сортом перца RK и контрольными или необработанными растениями, с увеличением урожайности на +77% (низкий расход:1 жидкая унция на акр, или 73,1 мл/га) и +42% (высокий расход: 20 жидких унций на акр, или 1461,5 мл/га) относительно контрольных или необработанных растений перца для Bt.4Q7Flg22. Кроме того, полипептиды Bt.4Q7Flg22 при низком рабочем расходе (1 жидкая унция на акр) и Ec.Flg22 при высоком рабочем расходе (20 жидких унций/акр) наиболее эффективно увеличивали урожайность у сорта HHW (оба варианта обеспечивали +72% увеличение относительно контрольных растений).
Таблица 30: Обработка листвы Flg22 для увеличения урожайности у разных сортов перца
Средство для обработки листвы
Среднее изменение в процентах общей массы урожая (фунтов на акр)«Red Knight»,испытания в 2 повторностях
Среднее изменение в процентах общей массы урожая (фунтов на акр)(«Hungarian Hot Wax»),испытания в 2 повторностях
Совокупное среднее изменение урожайности в процентахОбщее значение(фунтов на акр) для RK и HHW
Bt.4Q7Flg22:1 жидкая унция на акр
+29%
+77%
+53%
Ec.Flg22:1 жидкая унция на акр
+30%
+29%
+30%
Bt.4Q7Flg22:20 жидких унций на акр
+8%
+42%
+25%
Ec.Flg22:20 жидких унций на акр
+22%
+72%
+47%
Пример 14: Применение флагеллиновых биоактивных примирующих полипептидов у тыквы - увеличенная урожайность
[0482] Средства для обработки листвы с Bt.4Q7Flg22 наносили экзогенно на тыкву «Ambassador» на первой стадии цветения, используя два отдельных состава (состав 1=F1 и состав 2=F2). Состав 1 (F1) состоит из природного биоактивного примирующего L-полипептида Bt.4Q7 Flg22, наносимого вместе с 0,01% (по объему) неионогенного поверхностно-активного вещества. Состав 2 (F2) состоит из RI D-полипептида Bt.4Q7 Flg22, наносимого вместе с 0,01% (масса/объем) неионогенного поверхностно-активного вещества. Оба состава, F1 и F2, наносили на листья тыквы с рабочим расходом 1 жидкая унция на акр (73,1 мл/га). Сравнивали урожайность растений, обработанных средствами для опрыскивания листьев с Bt.4Q7Flg22 F1 и F2, с контрольными (вода) или необработанными растениями тыквы. Растения тыквы культивировали в супесчаном грунте следующим образом. В накрытых пластиком грядках шириной 2,5 фута (0,76 м) делали отверстия размером 2,5 см, располагая их в двух рядах на каждой грядке на расстоянии 1,5 фута (0,46 м) в каждом ряду. Ряды на грядке располагали в шахматном порядке. Грядки располагались на расстоянии 4 фута (1,2 м) одна от другой. В каждое отверстие высевали по 3 семени тыквы и через 14 дней после посадки прореживали, чтобы оставить по 1 растению на отверстие. В центре каждой грядки были проложены трубки для капельного орошения, и растения поливали по мере необходимости..
[0483] Растения тыквы культивировали из семян на приподнятых грядках до цветения, и обрабатывали листья в том же местоположении во Флориде (FL), при этом проводили испытания в 2 повторностях или два раза отдельно собирали урожай. Урожайность растений, обработанных средством для листьев с Bt.4Q7Flg22 F1 и F2 представлена как количество плодов тыквы на растение, масса (в граммах) одной тыквы и общая урожайность тыквы (фунтов на акр), и выражена в виде процентного изменения относительно необработанных контрольных растений (таблица 31).
[0484] Средства для обработки листвы с Bt.4Q7Flg22, содержащие два состава, F1 и F2, обеспечивали повышенное преимущество в урожайности при нанесении на листья тыквы («Ambassador») на стадии перед цветением по сравнению с необработанными контрольными растениями. И количество плодов тыквы на растение, и масса одной тыквы, и общее средне изменение урожайности в процентах (фунтов на акр) увеличивались у обработанных Bt.4Q7Flg22 F1 и F2 растений по сравнению с контрольными или необработанными растениями. Растения тыквы, обработанные обоими составами с Bt.4Q7Flg22, F1 и F2, показали аналогичный тренд к увеличению количества плодов тыквы на растение, массы одной тыквы и общего среднего изменения урожайности в процентах (фунтов на акр), однако растения тыквы, обработанные средством для внекорневого внесения F1, демонстрировали увеличение количества плодов тыквы на растение и общей урожайности тыквы относительно растений, обработанных составом F2.
Таблица 31: Средство для обработки листвы с композицией полипептидов Flg22 для увеличения урожайности у тыквы
Обработка
Изменение в процентах количества плодов тыквы на растение по сравнению с контролем
Изменение в процентах массы одной тыквы по сравнению с контролем
Изменение урожайности в процентах (фунтов на акр) по сравнению с контролем
Bt.4Q7Flg221 жидкая унция на акрСостав 1
+7%
+2%
+9%
Bt.4Q7Flg221 жидкая унция на акрСостав 2
+4%
+2%
+6%
Пример 15. Скрининг полипептидов Flg на продуцирование активных форм кислорода (АФК) у кукурузы и сои
[0485] С учетом частоты использования кодонов получали мутации в Bt.4Q7Flg22 для лучшего совпадения с организмом хозяина и связывания полипептида Flg22 с FLS-рецептором на поверхности растительных клеток. Вероятностный подход использовали для получения трех вариантов природного Bt.4Q7Flg22, разработанных таким образом, чтобы они содержали предпочтительные аминокислотные сигнатуры для кукурузы и сои и функционировали с такой же или более высокой эффективностью относительно природного Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226) в анализах активности АФК. Указанные варианты содержали мутации во внутреннем сегменте (SEQ ID NO: 571), или на C-конце (SEQ ID NO: 572), или на N-конце (SEQ ID NO: 573), и были названы: Bt.4Q7Flg22-Syn01, Bt.4Q7Flg22-Syn02 и Bt.4Q7Flg22-Syn03, соответственно. Затем проводили измерения для Bt.4Q7Flg22-Syn01 и Bt.4Q7Flg22-Syn03, сравнивая их с природными формами в различных концентрациях.
[0486] Свежие ткани листьев растений кукурузы (гибрид 5828 YX) и сои (гибрид 297 R4) разрезали на одинаковые образцы и помещали на поверхность 150 мкл стерильной воды в лунки 96-луночного белого низколюминесцентного планшета. Планшет помещали помещали под лампы для культивирования со свето-темновыми циклами 16/8 при постоянной температуре 22°C.
[0487] Для получения образцов кукурузы надземную ткань растений кукурузы на стадии V1-V4 отрезали от растения над линией почвы с применением чистого бритвенного лезвия. Семядоли и первые листы удаляли. Стебли разрезали на кусочки размером 1 мм, от основания растения до уровня приблизительно 1,3 см ниже первого листового узла. Каждый срез кукурузы помещали в индивидуальную лунку 96-луночного планшета.
2
[0488] Для получения образцов сои полностью развернутые тройчатые листья срезали с растений на стадии V1-V3. Вырезали листовые диски (12,6 мм) из листовых пластинок с применением чистого острого пробкового бура диаметром 4 мм. Диски разрезали пополам с применением чистого бритвенного лезвия, и каждую половину диска помещали в индивидуальную лунку 96-луночного планшета.
2
2
[0489] Стоковые растворы природного полипептида Flg22 (SEQ ID NO: 226) или полипептидов Flg22, содержащих описанные мутации (SEQ ID NO: 571 или 573) получали либо в стерильной деионизированной воде, либо в100 мМ натрий-фосфатном буфере (pH 7,8-8,0) с 0,1% Tween-20. Через 18-24 часов воду из всех лунок 96-луночного планшета удаляли. Образцы растительной ткани обрабатывали 100 мкл элиситорным раствором, содержащим 1:100 разведение стокового раствора полипептида Flg22 (диапазон концентраций от пикомолярной (250 пМ) до микромолярной (10 мкМ)), 34 мкг/мл люминола и 20 мкг/мл пероксидазы хрена. Распознавание полипептида Flg22 тканью растений приводило к активации иммунной сигнализации и продуцированию апопластических активных форм кислорода (АФК). В присутствии АФК (HO) пероксидаза хрена катализировала окисление люминола и генерацию видимого света. Относительные световые единицы (RLU) регистрировали с помощью люминометра для микропланшетов GLOMAX 96 (Promega Corporation) с интеграцией 0,5 с; интервалами 2,6 мин на протяжении периода времени 40 минут.
[0490] Для анализа данных вычисляли общее количество генерированных RLU для каждого образца на протяжении всего периода времени продолжительностью 40 минут.Значимо выпадающие значения за пределами межквартильного диапазона исключали из анализ. Общее количество RLU во всех вариантах условий (n=6-16) нормировали по среднему значению RLU для Bt.4Q7Flg22 в концентрации 25 нМ и регистрировали как процент (%) от контроля Bt.4Q7Flg22 (таблица 32).
[0491] Синтетический подвергнутый мутагенезу вариант Bt.4Q7Flg22-Syn01 увеличивал активность АФК в диапазоне концентраций (0,25-100 нМ), тогда как Bt.4Q7Flg22-Syn03 характеризовался большим разнообразием и демонстрировал повышенную активность АФК в концентрациях 0,25 нМ, 1 нМ, 10 нМ, 25 нМ и 100 нМ по сравнению с природным вариантом Flg22 или Bt.4Q7Flg22. Синтетический вариант средства с Bt.4Q7Flg22-Syn01 при использовании 5 нМ обеспечивал максимальное изменение активности АФК относительно природного варианта или Bt.4Q7Flg22. Активность АФК в ответ на применение Bt.4Q7Flg22-Syn03 в диапазоне добавленных концентраций была более разнообразной.
Таблица 32. Полученные синтетические мутанты Flg (Syn-01 и Syn-03) обладают большей активностью в анализе АФК по сравнению с природным Bt.4Q7Flg22 в широком диапазоне концентраций.
Концентрация (нМ)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO:226)
Bt.4Q7Flg22-Syn01(SEQ ID NO: 571)
Bt.4Q7Flg22-Syn03(SEQ ID NO: 573)
0,25
8,12
23,56
14,86
0,5
14,86
55,00
14,86
1
23,85
57,04
41,47
5
57,00
113,00
57,00
10
76,85
116,34
85,70
25
100,00
118,05
111,40
100
113,74
120,83
162,29
1000
127,76
121,20
97,67
Пример 16: Скрининговые анализы АФК для идентификации функционально активных полипептидов Flg для кукурузы и сои
[0492] На основании результатов предварительных исследований в примере 15 были выбраны следующие концентрации для скрининга широкого диапазона полипептидов Flg22 на активность АФК у кукурузы и сои: 5 нМ для кукурузы (гибрид 5828 YX) и 100 нМ для сои (гибрид 297 R4). После этого использовали анализы активности АФК для идентификации наилучших кандидатных биоактивных примирующих полипептидов Flg22 для индивидуального применения средств у кукурузы и сои, и для идентификации кандидатов, активных как у кукурузы, так и у сои.
[0493] Собирали ткани листьев растений кукурузы и сои и проводили анализы АФК согласно приведенному ранее описанию в примере 15 для мутантных полипептидов, представленных в таблице 33. Общее количество продуцированных RLU вычисляли для каждого образца на протяжении всего периода времени продолжительностью 40 минут.Значимо выпадающие значения за пределами межквартильного диапазона исключали из анализа. Проводили сравнения активности АФК у кукурузы (гибрид 5828 YX) и сои (гибрид 297 R4) и регистрировали в виде процента (%) относительных световых единиц (RLU) по сравнению со средними значениями RLU при обработке Bt.4Q7Flg22 в концентрации 25 нМ (таблица 33).
[0494] В таблице 33 обобщена относительная активность для различных мутантных полипептидов Flg22 по сравнению с природным Bt.4Q7Flg22, плюс стандартное отклонение для каждого условия (STDEV).
Таблица 33. Сравнение активности АФК для различных полипептидов Flg22 в кукурузе и сое
SEQ ID NO:
Последовательность аминокислот
Кукуруза (5828 YX),5 нМ полипептид
Соя (297 R4),100 нМ полипептид
Средняя активность (%)
STDEV
Средняя активность (%)
STDEV
Bt.4Q7Flg22Bacillus thuringiensisSEQ ID NO: 226
DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
100
_
100
_
Bt.Flg22-Syn01Мутант S13KBacillus thuringiensisSEQ ID NO: 571
DRLSSGKRINSAKDDAAGLAIA
142,9
39,3
112
3,0
Bt.Flg22-Syn02Мутант A20QBacillus thuringiensisSEQ ID NO: 572
DRLSSGKRINSASDDAAGLQIA
78,3
26
68,7
14,0
Bt.Flg22-Syn03Мутант D1QBacillus thuringiensisSEQ ID NO: 573
QRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
122,1
29,5
113,5
42,6
Bm.Flg22-B1Bacillus manliponensisSEQ ID NO: 290
NRLSSGKQINSASDDAAGLAIA
106,0
25,2
74,6
4,9
Ba.Flg22-B2Bacillus anthracisSEQ ID NO: 295
NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA
134,7
56,8
83,0
26,6
Bc.Flg22-B3Bacillus cereusSEQ ID NO: 294
DRLSSGKRINNASDDAAGLAIA
80,3
18,4
90,0
35,5
A spp.Flg22-B4Aneurini-bacillus spp.XH2SEQ ID NO: 300
ERLSSGYRINRASDDAAGLAIS
78,1
20,1
133,1
23,9
Ba.Flg22-B5Bacillus aryabhattaiSEQ ID NO: 289
EKLSSGQRINSASDDAAGLAIS
27,1
2,3
42,2
7,4
P spp.Flg22-B6Paenibacillus spp., штамм HW567SEQ ID NO: 293
GKLSSGLRINGASDDAAGLAIS
135,3
31,6
112,5
22,8
L spp.Flg22-L1Lysinibacillus spp.SEQ ID NO: 291
LRLSSGYRINSAADDAAGLAIS
26,6
3,6
64,1
14,1
L spp.Flg22-L2Lysinibacillus spp.SEQ ID NO: 580
EKLSSGLRINRAGDDAAGLAIS
104,5
1,2
128,6
29,5
L spp.Flg22-L3Lysinibacillus spp.SEQ ID NO: 581
EKLSSGYKINRASDDAAGLAIS
36,4
7,9
96,9
20,6
L spp.Flg22-L4Lysinibacillus spp.SG9SEQ ID NO: 582
LRISSGYRINSAADDPAGLAIS
60,1
5,9
117,9
25,7
Lf.Flg22-L5Lysinibacillus fusiformisSEQ ID NO: 583
LRISTGYRINSAADDPAGLAIS
59,3
5,8
111,6
27,5
Lm.Flg22-L6Lysinibacillus macroidesSEQ ID NO: 584
EKLSSGFRINRAGDDAAGLAIS
58,7
19,4
112,3
42,3
Lm.Flg22-L6LysinibacillusxylanilyticusSEQ ID NO: 585
EKLSSGYKINRAGDDAAGLAIS
33,7
1,4
77,0
19,2
Pa.Flg22Pseudomonas aeruginosaSEQ ID NO: 530
QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA
116,0
32,5
88,6
22,2
Ec.Flg22Escherichia coliSEQ ID NO: 586
ERLSSGLRINSAKDDAAGQAIA
95,0
46,7
116,8
13,3
Xcc.Flg22Xanthomonas campestris, патовар campestris, штамм 305 или(Xanthomonas citri, патовар citri)SEQ ID NO: 532
QRLSSGLRINSAKDDAAGLAIS
143,3
5,2
96,4
17,6
Ea.Flg22Erwinia amylovoraSEQ ID NO: 534
QRLSSGLRINSAKDDAAGQAIS
125,2
9,2
91,9
10,1
Bp.Flg22Burkholderia phytofirmans, штамм PsJNSEQ ID NO: 536
TRLSSGKRINSAADDAAGLAIS
111,2
14,0
67,2
3,0
Bu.Flg22Burkholderia ubonensisSEQ ID NO: 538
NRLSSGKRINTAADDAAGLAIS
92,9
12,7
91,1
12,9
Ps.Flg22Pseudomonas syringae, патовар actinidiae ICMP 19096SEQ ID NO: 540
TRLSSGLKINSAKDDAAGLQIA
154,4
20,7
113,1
19,6
[0495] На основании результатов из таблицы 33 может быть сделан ряд прогнозов на основании эффекта различных мутаций полипептидов Flg22 на активность АФК в кукурузе и сое. В таблице 34 описана активность АФК, наблюдаемая или прогнозируемая для различных нацеленных мутаций. Вкратце, замены первой аминокислоты (D1N, D1Q или D1T) приводят или предположительно будут приводить к выраженному распознаванию рецептором Flg22 и/или его активации у кукурузы. Мутации во внутреннем сегменте, K7Y, K7F и A16P, предположительно, будут приводить к аналогичным положительным результатам у сои. Из всех протестированных полипептидов Bt.4Q7Flg22-Syn01 (S13K) и Bt.4Q7Flg22-Syn03 (D1Q) обладали наиболее выраженной АФК-индуцирующей активностью у кукурузы и у сои.
Таблица 34. Обобщенные результаты для мутантных вариантов природного Bt.4Q7Flg22
SEQ ID NO
Последовательность аминокислот
Описание результатов действия на активность АФК
SEQ ID NO: 226
DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Bt.4Q7Flg22Bacillus thuringiensis(природный вариант, используемый в качестве стандарта для сравнения)
SEQ ID NO: 571
DRLSSGKRINSAKDDAAGLAIA
Мутация S13K: выраженная активация АФК и у кукурузы, и у сои
SEQ ID NO: 572
DRLSSGKRINSASDDAAGLQIA
Мутация A20Q: негативное действие на активацию АФК и у кукурузы, и у сои
SEQ ID NO: 573
QRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Мутация D1Q: Выраженная активация АФК и у кукурузы, и у сои
SEQ ID NO: 574
NRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Мутация D1N: Выраженная активация АФК и у кукурузы, и у сои (прогнозируемая)
SEQ ID NO: 575
TRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Мутация D1T: Выраженная активация АФК и у кукурузы, и у сои (прогнозируемая)
SEQ ID NO: 576
DRLSSGYRINSASDDAAGLAIA
Мутация K7Y: Выраженная активация АФК только у сои (прогнозируемая)
SEQ ID NO: 577
DRLSSGFRINSASDDAAGLAIA
Мутация K7F: Выраженная активация АФК только у сои (прогнозируемая)
SEQ ID NO: 578
DRLSSGKRINSASDDPAGLAIA
Мутация A16P: Выраженная активация АФК только у сои  (прогнозируемая)
SEQ ID NO: 579
DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Мутация K7Q: выраженное снижение активации АФК и у кукурузы, и у сои (прогнозируемое)
Пример 17: Анализы активности АФК для идентификации комбинаций полипептидов Flg для кукурузы и сои
[0496] Ткани листьев растений кукурузы и сои собирали и анализы АФК выполняли согласно приведенному ранее описанию в примере 15. Относительную активность АФК при применении разных вариантов Flg22, по отдельности или в комбинации, оценивали для идентификации предпочтительных комбинаций полипептидов Flg22, обеспечивающих максимальный ответ со стороны активности АФК при совместном применении как у кукурузы, так и у сои. Результаты обобщены в таблице 35.
Таблица 35. Комбинации Flg22, обеспечивающие повышенную активность АФК у кукурузы и сои
Композиция флагеллина
Последовательность аминокислот
Кукуруза (5828 YX),5 нМ полипептид
Соя (297 R4),100 нМ полипептид
Средняя активность (%)
STDEV
Средняя активность (%)
STDEV
Bt.4Q7Flg22Bacillus thuringiensisSEQ ID NO: 226
DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
100
_
100
_
Bt.Flg22-Syn01Bacillus thuringiensisSEQ ID NO: 571
DRLSSGKRINSAKDDAAGLAIA
122,48
31,69
83,54
36,21
Ba.Flg22-B2Bacillus antrhacisSEQ ID NO: 295
NRLSSGKRINSAADDAAGLAIA
142,53
7,45
97,59
68,59
A spp.Flg22-B4Aneurinbacillus spp.XH2SEQ ID NO: 300
ERLSSGYRINRASDDAAGLAIS
53,64
1,45
106,37
16,48
P spp.Flg22-B6Paenibacillus spp., штамм HW567SEQ ID NO: 293
GKLSSGLRINGASDDAAGLAIS
103,61
37,59
132,95
54,72
L spp.Flg22-L2Lysinibacillus spp.SEQ ID NO: 574
EKLSSGLRINRAGDDAAGLAIS
113,04
28,89
138,86
53,66
FLG22-Syn01+B2+B4+B6+L2
Комбинации полипептидов согласно описанию выше
148,52
6,30
132,35
53,99
FLG22B2+B4+B6+L2
Комбинации полипептидов согласно описанию выше
128,31
0,65
139,74
55,00
FLG22-Syn01+B2+B6+L2
Комбинации полипептидов согласно описанию выше
122,81
29,81
124,51
67,31
FLG22-Syn01+B4+B6+L2
Комбинации полипептидов согласно описанию выше
119,17
8,02
100,97
25,95
FLG22-Syn01+B6+L2
Комбинации полипептидов согласно описанию выше
124,67
8,69
103,45
34,03
FLG22-Syn01+B2+B4
Комбинации полипептидов согласно описанию выше
143,02
7,08
120,67
24,76
Пример 18: Анализ активности АФК с целлобиозной добавкой -- кукуруза и соя
[0497] Целлобиоза представляет собой состоящий из глюкозы дисахарид и является строительным блоком для полимера целлюлозы. Химически она представляет собой глюкоза-бета-1-4-глюкозу, редуцирующий сахар, который состоит из двух молекул β-глюкозы, соединенных β(1-4)-связью. Целлобиозу получают путем разложения целлюлозы или лихенина, и при гидролизе она дает глюкозу. Сравнивали обработку Bt.4Q7Flg22 с целлобиозой и без целлобиозы в анализах активности АФК для определения того, может ли целлобиоза действовать как элиситор для увеличения продуцирования АФК в реакциях, включающих полипептид Flg22. Проводили следующую специфическую обработку с применением анализов АФК на листьях кукурузы (фиг.6, панель A) и сои (фиг.6, панель B): Bt.4Q7Flg22 в концентрации 25 нМ; Bt.4Q7Flg22 в концентрации 25 нМ + целлобиоза в концентрации 100 мкМ; Bt.4Q7Flg22 в концентрации 25 нМ + целлобиоза в концентрации 1 мМ; 100 мМ натрий-фосфатный буфер - контроль; и целлобиоза отдельно (100 мкМ).
2
2
[0498] Ткани листьев растений кукурузы и сои собирали согласно приведенному ранее описанию в примере 15. Стоковые растворы биоактивного примирующего полипептида Flg22 получали либо в стерильной деионизированной воде, либо в 100 мМ натрий-фосфатном (pH 7,8-8,0) буфере с 0,1% Tween-20. Через 18-24 часов воду удаляли из каждой лунки 96-луночного планшета. Образцы обрабатывали 100 мкл раствора, содержащего Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226, 25 нМ), целлобиозу (100 мкМ или 1 мМ), 34 мкг/мл люминола и 20 мкг/мл пероксидазы хрена. Распознавание полипептида Flg22 растительной тканью приводило к активации иммунной сигнализации и получению апопластических активных форм кислорода (АФК). В присутствии АФК (HO) пероксидаза хрена катализировала окисление люминола и генерацию видимого света. Относительные световые единицы (RLU) регистрировали с помощью люминометра GLOMAX 96 для микропланшетов (Promega Corporation) с интеграцией 0,5 с; с интервалами 2,6 мин на протяжении периода времени, составляющего 40 минут.
[0499] Для анализа данных строили графики зависимости среднего значения RLU на обработку (n=6-16 образцов, +/- стандартная ошибка среднего) от времени (фиг.6). Значимо выпадающие значения за пределами межквартильного диапазона исключали из анализа.
[0500] Среднее значение RLU в эксперименте для каждой обработки нанесено на график на фиг. 6, панель A (кукуруза) и панель B (соя). Хотя продуцирование АФК наблюдалась в тканях обоих растений при применении средств, содержащих только полипептид Flg22 (кружки белого цвета), добавление целлобиозы в концентрации 1 мМ приводило к значимой активности АФК в тканях обоих растений (черные кружки). Добавление целлобиозы в более низких концентрациях (100 мкМ) не изменяло активность АФК по сравнению с Bt.4Q7Flg22 по отдельности (ср. кружки белого и серого цвета на фиг. 6, панель A) и не приводило к какому-либо продуцированию АФК у сои (кружки серого цвета на фиг. 6, панель B). Отметим, что комбинация Bt.4Q7Flg22 в концентрации 25 нМ и целлобиозы в концентрации 1 мМ приводила к большему продуцированию АФК у сои (пик АФК на уровне приблизительно 25 000 RLU) по сравнению с листьями кукурузы (пик АФК на уровне приблизительно 75 000 RLU).
Пример 20: Применение фитосульфокина (ФСК-α) для увеличения урожайности - кукуруза и соя
[0501] Тестировали эффект фитосульфокина-альфа (ФСК-α), сульфонированного биоактивного примирующего полипептида, происходящего из Arabidopsis thaliana, на урожайность кукурузы и сои. Кукурузу и сою культивировали на поле согласно описанию в примере 1 и 3. ФСК(Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 598) применяли в конечной концентрации 1 мкМ в виде средства для опрыскивания листвы с поверхностно-активным веществом, и равномерно наносили на надземные часть растений кукурузы (гибрид 5140RR) и сои (гибрид 375 NR). Составы с At.PSKα применяли на стадии развития V5-V8 у кукурузы и стадии развития V1-V4 у сои. Растения кукурузы и сои, обработанные At.PSKα, сравнивали с необработанными контрольными растениями (вода). Обработанные растения были рандомизированы в одном местоположении в четыре блока репликатов для сравнений с контрольными растениями. Урожайность регистрировали в бушелях на акр.
[0502] В таблице 36 показано, как внекорневое внесение At.PSKα приводило к увеличению урожайности в испытаниях и у кукурузы, и у сои. И у кукурузы, и у сои наблюдалось положительное увеличение урожайности в полевых условиях при применении составов для внекорневого внесения, содержащих At.PSKα, на стадии развития V5-V8 у кукурузы и стадии развития V1-V4 у сои. В среднем у кукурузы наблюдалось увеличение общей урожайности +3 бушеля на акр (188,3 кг/га) в полевых условиях, а у сои наблюдалось увеличение урожайности +0,8 бушелей на акр (53,8 кг/га).
Таблица 36. Внекорневое внесение At.PSKα у кукурузы и сои приводит к увеличению урожайности (в бушелях на акр)
Бушелей на акр листовой кукурузы
Бушелей на акр листовой сои
3,0
0,8
Пример 21: Внекорневое внесение фитосульфокина-альфа (ФСК-α) для увеличения урожайности - Соя
[0503] Предложен способ, согласно которому применение At.PSKα в качестве средства для внекорневого внесения у активно растущих растений сои обеспечивает преимущество в урожайности в условиях среды, характеризующихся тепловым и вызванным засухой стрессом.
[0504] Растения сои культивировали согласно описанию в примере 6. Полипептид At.PSKα (SEQ ID NO: 598) применяли в виде средства для опрыскивания листвы у растений на стадии V1-V4. Затем растения сои, обработанные средствами для внекорневого внесения с At.PSKα, и контрольные растения, обработанные отдельно водой и поверхностно-активным веществом, культивировали в условиях, описанных в примерах 7-9, обеспечивающих нестрессовую и стрессовую (высокая температура и дефицит воды) окружающую среду. В таблице 37 описано изменение в процентах или увеличение высоты, зарегистрированные у растений сои, обработанных At.PSKα в виде средства для опрыскивания листвы на стадии роста V1-V4. Применение At.PSKα приводило к увеличению высоты на +3,5% в нестрессовой окружающей среде и увеличению высоты на +4,3% в стрессовой окружающей среде, регистрируемому в бушелях на акр, по сравнению с необработанными контрольными растениями сои.
Таблица 37. Увеличение урожайности у сои, обработанной средством для внекорневого внесения с At.PSKα и культивированной в нестрессовой и стрессовой окружающей среде
Изменение высоты сои в процентах (%) относительно контроля в нестрессовой окружающей среде при применении At.PSKα
Изменение высоты сои в процентах (%) относительно контроля в стрессовой окружающей среде при применении At.PSKα
3,5%
4,3%
Пример 22: Применение RHPP для изменения архитектуры растения - кукуруза
[0505] Полипептид-стимулятор корневых колосков (RHPP, SEQ ID NO: 600) первоначально полученный для сои (Glycine max), предложен в качестве средства для внекорневого внесения для обеспечения благоприятных фенотипов у кукурузы.
[0506] Природный и ретро-инверсный RHPP (SEQ ID NO: 600-601) применяют у растений кукурузы на стадиях V5-V8. Ретро-инверсный RHPP может быть модифицирован путем C-концевого амидирования перед применением. Обработка RHPP указанным образом, предположительно, приводит к получению отличающегося фенотипа архитектуры листвы с вертикальной ориентацией листвы и направленными выше листьями. Увеличение угла между стеблем и листом обеспечивает значительные преимущества для применения в сельском хозяйстве в указанной области. В частности, это актуально при более высокой плотности посадки, используемой для максимизации урожайности в полевых условиях. Средства для внекорневого внесения с полипептидом RHPP у маиса (кукурузы) подходят для изменения угла между стеблем и листом, способствуя таким образом уменьшению угла между стеблем и листом, что приводит к вертикальной ориентации листа. Указанный фенотип может быть благоприятным для увеличения индекса площади листьев, уменьшения синдрома избегания затенения у кукурузы и улучшения фотосинтетической эффективности. Кроме того, применение RHPP в виде состава для внекорневого внесения для максимизации развития листового полога и общей проницаемости для света играет ключевую роль в улучшении вегетативного роста растений перед инициацией стадии налива семян.
Пример 23: Применение RHPP для увеличения биомассы корней и показателей урожайности - соя
[0507] Эффективное образование клубеньков на корнях сои приводит к более высоким урожаям и получению семян более высокого качества, большего количества белка и масла в пересчете на семя или акр. Это может быть обусловлено повышенной фиксацией азота, поскольку образование клубеньков повышает фиксацию азота. Для определения того, способен ли биоактивный примирующий полипептид-стимулятор корневых волосков RHPP (SEQ ID NO: 600) модулировать биомассу корней и образование клубеньков и таким образом улучшать фиксацию азота, растения сои (гибрид Morsoy 38X52 и гибрид Beck's 297R4) обрабатывали средством для внекорневого внесения с RHPP (300 нМ) на стадии развития R1-R2.
Увеличенные биомасса растений и образование клубеньков
-2
-1
[0508] Биоактивный примирующий полипептид RHPP (SEQ ID NO: 600, изначально происходящий из Glycine max) применяли в виде средства для обработки листвы у гибридной сои возрастом 4 недели (сорт Morsoy) с 0,1% (по объему) неионогенного поверхностно-активного вещества (ALLIGARE SURFACE™) с помощью пульверизатора, нанося приблизительно по 1,25 мл/растение. Указанный эксперимент проводили в общей сложности на 8 растениях на испытание на каждую группу обработки. Контейнеры держали в вегетационном помещении с искусственным освещением, при уровне поступления света приблизительно 300 мкмоль м с с обеспечением светового суточного цикла 16/8 и с температурами в диапазоне от 21°C днем до 15°C ночью. Показатели роста: число клубеньков, биомассу корней и общую биомассу на растение измеряли через 15 дней после внекорневого внесения и сравнивали результаты для средств для обработки листвы, включающих поверхностно-активное вещество ALLIGARE SURFACE (0,1% по объему) в качестве контроля и полипептид RHPP (300 нМ), содержащий поверхностно-активное вещество ALLIGARE SURFACE (0,1% по объему). Средние показатели роста согласно описанию нормировали по контрольным растениям, которые обрабатывали поверхностно-активным веществом по отдельности (таблица 38).
[0509] Подсчитанное число образовавшихся клубеньков на корнях каждого растения, обработанного средством для внекорневого внесения с RHPP, сравнивали с числом клубеньков на контрольных растениях, обработанных 0,1% (по объему) поверхностно-активным веществом по отдельности. Обработка RHPP приводила к примерному удвоению числа клубеньков на корнях каждого растения сои по сравнению с контрольной обработкой (поверхностно-активным веществом). Растения сои, обработанные средством для внекорневого внесения с полипептидом RHPP, также демонстрировали увеличение биомассы корней и общей совокупной биомассы растений, при нормировании по контролю дававших увеличение биомассы корней более чем на 20% и увеличение общей биомассы на 8%.
Таблица 38. Увеличение биомассы растений и образования клубеньков у сои (сорт Morsoy) после применения средства для внекорневого внесения с биоактивным примирующим полипептидом RHPP (n=8 репликатов растений)
Показатели роста
Контроль (0,1% по объему поверхностно-активного вещества ALLIGARE SURFACE)
RHPP (300 нМ +0,1% по объемуALLIGARE SURFACE)
Результат обработки RHPP в процентах, нормированный по по обработанному поверхностно-активным веществом контролю
Среднее число клубеньков на растение
8,88
15,13
170,42%
Биомассу корней (g)
1,76
2,13
120,57%
Общую биомассу (g)
42,64
46,24
108,44%
Улучшенный рост растений
-2
-1
[0510] Биоактивный примирующий полипептид RHPP (SEQ ID NO: 600) также применяли в виде средства для обработки листвы у гибрида сои на стадии R1 (Beck's 297R4) с 0,1% (по объему) неионогенного поверхностно-активного вещества (ALLIGARE SURFACE) с помощью пульверизатора, нанося приблизительно по 1,2 мл/растение. Указанный эксперимент выполняли для рассмотрения эффектов RHPP на рост растений и проводили с использованием в общей сложности 18 растений на группу обработки. Контейнеры держали в вегетационном помещении с искусственным освещением, с уровнем поступления света приблизительно 300 мкмоль м с при световом суточном цикле 18/6, и с температурами в диапазоне от 21°C днем до 15°C ночью. Растения сои на стадии R1 ничем не обрабатывали (необработанный контроль), обрабатывали поверхностно-активным веществом ALLIGARE SURFACE в концентрации 0,1% (по объему) или полипептидом RHPP (300 нМ) в комбинации с поверхностно-активным веществом ALLIGARE SURFACE (0,1% по объему). Высоту каждого растения регистрировали во время опрыскивания и повторно через 16 дней после обработки средством для внекорневого внесения; сравнивали средние показатели роста для разных средств для обработки листвы (таблица 39).
[0511] Растения сои, которые обрабатывали путем внекорневого внесения полипептида RHPP (300 нМ + 0,1% ALLIGARE SURFACE) характеризовались улучшением роста растений (увеличением высоты растений) и увеличенным изменением высоты растений по сравнению с растениями, которые обрабатывали отдельно поверхностно-активным веществом, и по сравнению с необработанным контролем (таблица 39).
Таблица 39. Улучшение роста растений сои (Beck's 297R4) при внекорневом внесении биоактивного примирующего полипептида RHPP (n=18 репликатов растений)
Показатели роста
Необработанный контроль
Контроль (поверхностно-активное вещество 0,1% ALLIGARE SURFACE)
RHPP(300 нМ + 0,1%ALLIGARE SURFACE)
Высота (см)
19,3
19,4
19,9
Измерение высоты (см)
4,0
3,7
4,6
Пример 24: Применение RHPP в комбинации с удобрением - Соя
2
5
2
[0512] Биоактивный примирующий полипептид Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) применяли в виде средства для внекорневого внесения с жидким удобрением для внекорневой подкормки, N-RAGE MAX (21-1-3 N-P-K), у двух сортов сои (AG3536 и AG3832). Средство для внекорневого внесения с RHPP применяли с расходом 1 жидкая унция на акр, или 73,1 мл/га (концентрация 300 нМ) и удобрением для сои с рекомендованным рабочим расходом (1-2 галлона/акр (9,4-18,8 л/га) или равным 2,16 фунтов/галлон (0,29 кг/л) азота; 0,10 фунтов/галлон фосфата PO и растворимого поташа (KO, 0,31 фунтов/галлон, или 0,4 кг/л). Внекорневое внесение комбинации RHPP и удобрения проводили у двух сортов сои (AG3536 и AG3832) на стадии развития R2 (рекомендованные стадии R1-R6) в 5 местоположениях на Среднем Западе США (Айова, Иллинойс, Индиана). Средство для внекорневого внесения с Gm.RHPP с N-RAGE MAX обеспечивало преимущество в урожайности, составляющее 1,9 бушелей на акр (127,8 кг/га) по сравнению с контрольной обработкой, и увеличение в среднем на 1,4 бушелей на акр (94,2 кг/га) по сравнению с растениями, которые обрабатывали удобрением по отдельности, для сорта 1 (AG3536) (таблица 40).
Таблица 40. Применение RHPP плюс удобрение
Обработка сои
Рабочий расход средства в жидких унциях на акр
Средняя общая урожайность в бушелях на акрСорт 1
Средняя общая урожайность в бушелях на акрСорт 2
Средняя общая урожайность в бушелях на акрСорт 1 и 2
Среднее изменение в бушелях на акр по сравнению с контролемСорт 1 и 2
Контроль
-
62,50
62,16
62,33
-
N-rage Max
128
63,04
60,29
61,66
-0,67
RHPP
4,0
65,42
61,04
63,23
+0,9
RHPP +N-RAGE MAX
4,0128
64,40
60,96
62,68
+0,35
Пример 25: Применение биоактивных примирующих полипептидов RHPP у томатов-увеличенная урожайность
[0513] Обработку средством для внекорневого внесения с Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) проводили путем экзогенного опрыскивания на стадии перед цветением и использовали для увеличения урожайности у томата. Два гибрида томата («Jetsetter» и «Better Big Boy») высаживали на небольших площадках согласно описанию в примере 12. Средство для обработки листвы с Gm.RHPP применяли с рабочим расходом средства 1 жидкая унция на акр (73,1 мл/га) и 20 жидких унций на акр (1461,5 мл/га) у двух гибридов, «Jetsetter» (Испытание 1) и «Better Big Boy» (Испытание 2), на ранней стадии цветения (первые цветы). Испытания в повторностях проводили на Среднем Западе США (Миссури) в июле. Обработку листвы Gm.RHPP у растений томата сравнивали с контролем (обработкой водой с таким же рабочим расходом). Определяли эффекты средств для обработки листвы на увеличение урожайности у томата, нормировали по контрольной обработке водой и регистрировали как среднее изменение урожайности в процентах относительно средней урожайности контроля в таблице 41.
[0514] Среднюю урожайность, представленную как изменение в процентах относительно контрольных растений, регистрировали по отдельности для двух испытаний и в виде среднего значения для двух гибридов томата. Обработка листьев с применением Gm.RHPP приводила к увеличению урожая плодов томата в каждом из двух испытаний при применении с рабочим расходом 1 жидкая унция на акр (73,1 мл/га). Применение Gm.RHPP приводило к среднему увеличению урожайности томата +52% относительно контрольных растений у двух гибридов, с индивидуальным средним увеличением +93% для гибрида «Jetsetter» и +10% для «Better Big Boy» по сравнению с контрольными растениями.
Таблица 41: Обработка листвы RHPP для увеличения урожайности у разных гибридов томатов
Средство для обработки листвы
Испытание 1:Изменение урожайности в процентах относительносреднего значения для контроля;Гибрид: «Jetsetter»
Испытание 2:Изменение урожайности в процентах относительно среднего значения для контроля; Гибрид: «Better Big Boy»
Среднее значение для испытаний1 и 2 изменение урожайности в процентах относительно среднего значения для контроля
Gm.RHPP(1 жидкая унция на акр)
+93%
+10%
+52%
Пример 26: Применение RHPP у перца - увеличенная урожайность
[0515] Средство для обработки листвы с Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) наносили путем экзогенного опрыскивания на первой стадии цветения для увеличения урожайности у двух сортов перца. Средство для обработки листвы с Gm.RHPP применяли на площадках малой площади, устроенных так, чтобы имитировать условия коммерческого выращивания перца (Capsicum) согласно описанию в примере 13. Средства для внекорневого внесения с биоактивным примирующим полипептидом Gm.RHPP применяли на стадии первого цветка, у двух сортов перца, «Red Knight» (RK) и «Hungarian Hot Wax» (HHW). Проводили обработку листвы Gm.RHPP с рабочим расходом средства 1 жидкая унция на акр (73,1 мл/га) на растениях перца RK и HHW, и сравнивали с контролем (обработкой водой с таким же рабочим расходом). Эффекты средств для внекорневого внесения на урожайность перца определяли для двух отдельно собранных с использованием метода одноразовой уборки урожаев и нормировали по урожайности контрольных растений. Среднее изменение урожайности в процентах относительно урожайности у контрольных растений регистрируют в таблице 42 как изменение в процентах на общую массу (в фунтах на акр) собранного перца. Среднее изменение урожайности в процентах регистрируют для 2 репликатов урожаев (испытаний) для сортов перца RK и HHW, а затем в виде комбинированного среднего значения для обоих сортов.
Таблица 42: Обработка листвы RHPP для увеличения урожайности у разных сортов перца
Средство для обработки листвы
Среднее изменение в процентах общей массы урожая (фунтов на акр) для «Red Knight»
Среднее изменение в процентах общей массы урожая (в фунтах на акр) для«Hungarian Hot Wax»
Совокупное среднее изменение общей урожайности в процентах(в фунтах на акр) для RK и HHW
Gm.RHPP1 жидкая унция на акр
+87%
+46%
+67%
[0516] Средняя урожайность в процентах у растений перца RK и HHW, которые обрабатывали Gm.RHPP с рабочим расходом 1 жидкая унция на акр (73,1 мл/га), увеличивалась на 87% для перца RK и на 46% для перца HHW по сравнению с контрольными растениями. Комбинированное среднее значение для обоих сортов перца регистрировали как среднее 67% увеличение для изменения урожайности в процентах у обработанных внекорневым внесением Gm.RHPP растений перца относительно необработанных (вода) контрольных растений перца (таблица 42).
Пример 27: Применение гарпиноподобных полипептидов и At.PSK(у кукурузы
[0517] Гарпины могут обеспечивать функциональные преимущества при применении как экзогенно, например, на поверхности растения в виде средства для опрыскивания листвы, так и апопластически (в пространстве с внешней стороны мембраны растительных клеток) или эндогенно (внутри растительной клетки/с внутренней стороны мембраны растительных клеток). Синтетический гарпиновый биоактивный примирующий HpaG-подобный полипептид (Xanthomonas spp., SEQ ID NO: 587) применяли экзогенно на поверхности растений кукурузы на стадии развития V2 -V3. Кроме того, тестировали эффект экзогенного применения фитосульфокина-альфа (ФСК-α), сульфонированного биоактивного примирующего полипептида, происходящего из Arabidopsis thaliana, на рост кукурузы.
3
-2
-1
[0518] Растения кукурузы (гибрид Beck's 5828 YH) культивировали в вегетационном помещении с контролируемыми условиями среды. Семена кукурузы высаживали непосредственно в контейнеры объемом 39,7 cm, содержащие растительный грунт Timberline, на глубину 2,54 см, по 2 семени на контейнер. После высаживания в каждый контейнер добавляли по 50 мл воды комнатной температуры, чтобы обеспечить прорастание. Контейнеры размещали в вегетационном помещении с искусственным освещением, с поступлением приблизительно 300 мкмоль м с (световых фотонов) при световом суточном цикле 16/8, с температурами в диапазоне от 21°C днем до 15°C ночью. Для растений использовали одинаковые режимы полива и удобрения.
[0519] Высоту растений (см) измеряли через 3 недели после появления всходов. Затем на растения кукурузы биоактивные примирующие HpaG-подобные полипептиды (SEQ ID NO: 587), представленные в виде синтетического полипептида размером 23 аминокислоты, и At.PSKα (SEQ ID NO: 598) наносили в виде средства для опрыскивания листвы в конечных концентрациях 1 мкМ для биоактивных примирующих HpaG-подобных полипептидов и 100 мМ для биоактивных примирующих полипептидов ФСКα. Контрольные растения обрабатывали поверхностно-активным веществом (0,01% по объему) по отдельности. Через неделю после обработки опрыскиванием растения подразделяли на 2 группы, при этом одна группа оставалась в той же стандартной описанной выше ростовой окружающей среде, а другую группу переносили в окружающую среду, обеспечивающую тепловой и вызванный дефицитом воды стресс.При воздействии высокой температурой и дефицитом воды среда в вегетационном помещении (за исключением температуры и циклов полива/удобрения) оставалась аналогичной стандартной ростовой окружающей среде). Тепловой стресс обеспечивали с применением тепловых матов, повышая температуру окружающей среды с 21°C до 27°C. В период теплового стресса растения оставляли без полива, чтобы имитировать вызванный дефицитом воды стресс.Изменение высоты растений (см) измеряли через 5 недель и регистрировали как нормированное по высоте контрольных растений или как процент от высоты контрольных растений (обработанных водой). Измерения регистрировали как комбинированное среднее значение для двух испытаний с 9 репликатами растений на каждое испытание (таблица 43) и представляли как рост в процентах относительно контрольных растений кукурузы, которые обрабатывали водой с поверхностно-активным веществом (0,01% по объему), значения для которых принимали за стандарт 100% (таблица 43).
Таблица 43. Изменения высоты растений кукурузы, обработанных X. spp.HpaG-подобным полипептидом и At. ФСК-α
Обработка кукурузы
Высота (см) и (STDEV) через 3 недели
Высота (см)после нестрессовых условий через 5 недель
Высота (см)после стрессачерез 5 недель
Высота растений нормированная как процент от контрольной высоты в нестрессовых условиях
Высота растений нормированная как процент от контрольной высоты в стрессовых условиях
X. spp.HpaG-подобный(1 мкМ)
47,23 (6,11)
64,10 (5,53)
45,50 (4,37)
107,4%
89,4%
At.PSKα (100 нМ)
49,36 (8,00)
58,62 (4,84)
54,88 (2,79)
98,2%
107,8%
[0520] При внекорневом внесении HpaG-подобного полипептида наблюдался улучшенный ростовой фенотип в обычных, но не в стрессовых условиях окружающей среды по сравнению с контрольными растениями, тогда как при внекорневом внесении ФСК(наблюдался улучшенный ростовой фенотип при росте в условиях теплового и вызванного дефицитом воды стресса, но не в нестрессовой окружающей среды.
[0521] В отдельной группе испытаний в повторностях аналогичные изменения показателей роста были обусловлены средствами для внекорневого внесения с HpaG-подобным полипептидом (SEQ ID NO: 587) и ФСК((SEQ ID NO: 598). В таблице 44 показано изменение в процентах роста растений кукурузы, обработанных X. spp.HpaG-подобным полипептидом (конечная концентрация 1 мкМ) и At.PSKα (конечная концентрация 100 нМ) в виде средств для обработки листвы, измеряемое по изменениям высоты растений по сравнению с контрольными (вода плюс 0,01% по объему поверхностно-активного вещества) растениями, культивированными в оптимальных (нестрессовых) и в стрессовых условиях среды. Указанный результат предполагает, что комбинированное средство для внекорневого внесения или последовательное внесение ФСК(с HpaG-подобными биоактивными примирующими полипептидами могут подходить для улучшения роста растений в стандартных (нестрессовых или оптимальных для роста) условиях окружающей среды или роста растений, подвергающихся воздействую абиотического стресса (например, теплового и вызванного дефицитом воды стресса).
Таблица 44. Обработка средствами для внекорневого внесения с применением Xspp HpaG-подобного полипептида и At.PSKα у кукурузы, культивированной в нестрессовых и стрессовых условиях
Обработка
Высота растений (см)Изменение в процентах по сравнению с контролем (0,01% поверхностно-активного вещества)Нестрессовые условия
Высота растений (см)Изменение в процентах по сравнению с контролем (0,01% поверхностно-активного вещества)Стрессовые условия
Xspp.HpaG-подобный (1 мкМ)
+5,0%
-6,1%
At.PSK-α (100 нМ)
-11,8%
+6,1%
Пример: 28 Комбинация Bt.4Q7Flg22 или Ec.Flg22 с RHPP
[0522] Биоактивные примирующие полипептиды, Bt.4Q7Flg22 и Ec.Flg22, комбинировали с RHPP и оценивали обеспечиваемые преимущества в урожайности у сои. Комбинацию либо Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), либо Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526) и RHPP (SEQ ID NO: 600) применяли для внекорневого внесения у двух сортов сои (AG2836, Сорт 1; AG3536, Сорт 2) в 7 местоположениях на Среднем Западе США (Айова, Иллинойс и Айова).
[0523] Внекорневое внесение с применением биоактивный примирующий полипептид Bt.4Q7 Flg22 (SEQ ID NO: 226; фиг. 4, панель A), Ec.Flg22 (SEQ ID NO: 526; фиг. 4, панель B) и RHPP (SEQ ID NO: 600) проводили индивидуально у растений сои (коммерческий гибрид Beck's 294 NR) на стадии развития R2 с применением варьирующих рабочих расходов 0,33, 4,0, 8,0 и 16,0 жидких унций на акр, или (24,1 мл/га, 292,3 мл/га, 584,6 мл/га, 1169,2 мл/га). Среднюю урожайность (сбор урожая в сентябре) в бушелях на акр регистрируют для сои, культивированной в 7 отдельных местоположениях, и индивидуально для обоих сортов сои и в виде комбинированной средней урожайности (таблица 45). Урожайность сои (бушелях на акр) также регистрируют как изменение урожайности (в бушелях на акр), нормированное по контрольным растениям сои для обоих сортов.
Таблица 45. Полипептиды Flg и полипептиды RHPP увеличивают урожайность у сои
Обработка сои
Рабочий расход средства вжидких унциях на акр
Средняя общая урожайность в бушелях на акр,сорт 1
Средняя общая урожайность в бушелях на акр, сорт 2
Средняя общая урожайность в бушелях на акр,сорт 1 и 2
Среднее увеличение в бушелях на акр по сравнению с контролем, сорт 1 и 2
Контроль
-
59,53
61,61
60,57
-
Bt.4Q7Flg22
0,33
60,33
61,61
61,02
+0,45
Bt.4Q7Flg22
4,0
57,61
64,19
60,90
+0,33
Bt.4Q7Flg22
8,0
59,05
63,86
61,45
+0,88
Ec.Flg22
0,33
58,62
63,58
61,10
+0,53
Ec.Flg22
4,0
58,02
63,91
60,74
+0,17
Ec.Flg22
8,0
58,27
64,35
61,31
+0,74
Gm.RHPP
0,33
59,15
62,44
60,92
+0,35
Gm RHPP
4,0
58,61
66,35
61,83
+1,26
Gm RHPP
8,0
59,47
62,46
61,08
+0,51
Bt.4Q7Flg22 + Gm.RHPP
4,04,0
61,14
64,88
63,18
+2,61
Ec.Flg22 +Gm.RHPP
4,016
59,56
62,46
61,08
+0,51
[0524] Сорт сои AG3536 (Сорт 2) стабильно превосходил AG3536 (Сорт 1) по урожайности в бушелях на акр во всех 7 местоположениях на Среднем Западе США. Все средства для внекорневого внесения с Bt.4Q7Flg22, Ec.Flg22 и RHPP, применяемые индивидуально в 3 разными рабочими расходами (0,33, 4,0 и 8,0 жидких унций /акр) или (24,1 мл/га, 292,3 мл/га, 584,6 мл/га) приводили к преимуществу в урожайности относительно необработанных контрольных растений. RHPP, который наносили на листья с рабочим расходом 4,0 жидких унции на акр (292,3 мл/га), приводил к максимальному увеличению урожайности +1,26 бушелей на акр (84,7 кг/га) относительно контрольных растений, по сравнению с другими биоактивными примирующими полипептидами при их отдельном применении. Однако комбинация Bt.4Q7Flg22 с RHPP обеспечивала дополнительное преимущество в урожайности, приводя к увеличению +2,61 бушелей на акр (175,5 кг/га) относительно необработанных контрольных растений соя. Указанное увеличение урожайности, наблюдаемое у растений сои, обработанных средствами для внекорневого внесения с Bt.4Q7Flg22 в комбинации с RHPP, иллюстрирует синергический эффект, достигаемый при комбинировании биоактивных примирующих полипептидов, когда увеличение урожайности комбинации выше суммы для двух полипептидом при их отдельном применении.
Пример 29: Применение Agrobacterium tumefaciens для тестирования эффективности тионинов при лечении заболевания HLB
[0525] Штаммом Agrobacterium tumefaciens GV3101 инокулировали среду Лурия (LB) и культивировали в течение 20 часов. Изначально оптическую плотность (OD) культуры измеряли при длине волны 600 нм с применением спектрофотометра и нормировали по низкой стартовой плотности. Затем культуры разделяли на равные части и обрабатывали тионинами в аналогичных пропорциях, репрезентативных для смесей, используемых для лечения цитрусовых деревьев. Использованные отношения тионина Cs. (SEQ ID NO: 651), тионина As. (SEQ ID NO: 652) и тионина Mt. (SEQ ID NO: 653) составляли 10,0%, 2,0%, 0,40%, 0,08% и 0,02%, и их готовили таким образом, чтобы получить по 20 мл общего объема фильтрата каждой из смесей тионинов, который используют в качестве средства для обработки на одно дерево. Каждую смесь тионинов также сравнивали с контрольными смесями, содержащими только: фильтрат, минимальную среду (LB) или антибиотик тетрациклин (Tet) (10 мкг/мл на культуру). Каждый столбец соответствует комбинированному измерению OD для 3 репликатов. После инкубации со смесями тионинов и антибиотика оптическую плотность (OD 600) повторно измеряли для определения того, происходило ли снижение или ингибирование роста культур Agrobacterium.
[0526] Как показано на фиг. 8, при всех обработках, тионином Cs., тионином As. и тионином Mt., наблюдался дозозависимый ответ и сниженный рост культур Agrobacterium по сравнению с контрольными фильтратом, минимальной средой (LB) или антибиотиком (Tet).
Пример 30: Лечение инфекции Candidatus Liberibacter asiaticus тионинами
[0527] Применение тионинов для лечения инфекции Candidatus Liberibacter asiaticus будет протестировано на цитрусовых деревьях из фруктовых садов, расположенных в центральной Флориде (округ Окичоби). Для обработки в общей сложности 26 деревьев будут использованы составы со смесями тионина (SEQ ID NO: 620; 621 и 622), содержащими или не содержащими последовательность для локализации во флоэму (SEQ ID NO: 611) для нацеливания указанных тионинов специфическим образом во флоэму, где обитает Candidatus Liberibacter asiaticus. Инокуляция деревьев апельсина «Валенсия» (Citrus sinensis) указанными составами тионинов и их смесей будет проведена с применением устройства для впрыскивания низкого давления BRANDT ENTREE. В общей сложности четыре обработки тионинами, в том числе водой в качестве отрицательного контроля и окситетрациклин в качестве положительного контроля будут проведены у 5-летних деревьев. Цитрусовые деревья будут рандомизированы в блоки обработки для площадок с контрольными (необработанными), обработанными тионинами и положительными контрольными обработанными антибиотиком (окситетрациклином) деревьями. Тионины, слитые с нацеливающей на флоэму последовательностью, будут экспрессированы в векторе pBC, и тионинсодержащий фильтрат будет собран из экспрессирующих клеток. Общий объем 20 мл, содержащий смесь тионинов: тионин Cs. (SEQ ID NO: 651), тионин As. (SEQ ID NO: 652) и тионин Ms. (SEQ ID NO: 653) будет представлен в виде 20 мл общего объема фильтрата. Обработанные тионином цитрусовые деревья будут сравнены с необработанными (контрольными) деревьями и деревьями которые обрабатывали отдельно положительным контролем, антибиотиком окситетрациклином, в концентрации 2 грамма/дерево. Уровни инфекции у деревьев Candidatus Liberibacter asiaticus будут подтверждены путем кПЦР-детекции или амплификации с применением специфических для гена 16S рРНК праймеров и вложенных праймеров для детекции заболевания HLB [Последовательность 5'»3': (прямой) HLB в виде TCGAGCGCGTATGCAATACG; (обратный) HLBr GCGTTATCCCGTAGAAAAAGGTAG; HLBpc (зонд) AGACGGFTGAGTAACGCG, меченый репортерным красителем флуоресцеином].
[0528] Растения будут обрабатывать в марте, а образцы листьев будут собраны спустя один месяц в апреле. Среднее количество бактерий Candidatus Liberibacter asiaticus будет оцениваться наряду с присвоением оценок видимым симптомам мраморной пятнистости или признаков пожелтения листьев и стеблей.
[0529] Размер плодов, форма и уровень развития или зрелости плодов будут оцениваться для 20 репрезентативных плодов на дерево. Продольная длина (главный диаметр, см) и ширина (меньший диаметр, см, среднее значение между максимальной и минимальной шириной плода, если он несимметричен). Форма плода будет измерена с использованием отношения ширины к длине. Общая масса плода будет измерена и разделена на общее число плодов (20) с получением средней массы плода (в граммах). Общая масса плодов будет измерена и представлены в килограммах на дерево.
o
o
o
o
o
c
c
[0530] Будет рассчитана плотность по Бриксу, в градусах Брикса (Brix) с поправкой на кислотность в соке, полученном из выжатых плодов грейпфрута и апельсина для каждого дерева, в соответствии с минимальными стандартами министерства сельского хозяйства США (USDA) для лабораторных аналитических методов определения Brix. Также будет измерен процент кислоты (%, масса/объем). Показатель Brix на рефрактометре для восстанавливаемого сока равно значению требуемого Brix с поправкой на кислотность за вычетом вклада кислоты и эффекта температуры. Общая титруемая кислотность (% кислоты) восстановленного сока также будет вычислена на основании Brix восстановленного сока и отношения плотности по Бриксу к кислотности, и скорректирована с учетом факторов поправки на кислотность и температурной коррекции (источник: JBT FoodTech Laboratory Manual, “Procedures for Analysis of Citrus Products, Sixth Edition).
[0531] Число бактериальных клеток будет вычислено с применением методик флуоресцентной ПЦР в реальном времени, количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР) для детекции только живых бактерий и вычитания фона ДНК, включая депротеинизированную ДНК или ДНК из мертвых клеток (Davis and Brlansky, “Quantification of live Candidatus Liberibacter asiasticus” populations using real-time PCR and propidium monoazide”, Plant Disease 97: 1158-1167, 2013). Число специфических колоний с клетками Candidatus Liberibacter asiasticus (CLas) будет измерено в листьях, собранных с обработанных тионинами, необработанных (контрольных) и обработанных положительным контролем (антибиотиком) деревьев. Расчеты для титров живых бактерий проводят на основании выхода ДНК в кПЦР, аппроксимируют уравнением регрессии для корреляции целевого числа копий с общим количеством бактерий и представляют как количество живых клеток на грамм ткани в логарифмическом масштабе. Сравнительные показатели титров из обработанных и необработанных деревьев будут сопоставлены с степенью тяжести заболевания или симптомов заболевания, таких как классическая мраморная пятнистость на листьях, деформированные или асимметричные плоды и позеленение плодов, и т.п., для деревьев как красного грейпфрута, так и апельсина «Валенсия».
Пример 31: Применение ретро-инверсных биоактивных примирующих полипептидов Flg для лечения и уменьшения позеленения цитрусовых
[0532] Комбинации флагеллин-ассоциированных полипептидов в паре с их ретро-инверсными эквивалентами могут применяться для лечения и уменьшения эффекта позеленения у цитрусовых, к которому приводит азиатское позеленение цитрусовых или болезнь Хуанлун (HLB).
[0533] Ранним симптомом HLB у цитрусовых является пожелтение листьев на отдельной ветви или в одном секторе листового полога дерева. На листьях, желтеющих в результате HLB, наблюдается асимметричный паттерн с неравномерным пожелтением или мраморностью листа, с зелеными пятнами на одной стороне листа и желтыми на другой. По мере прогрессирования заболевания HLB размер плодов уменьшается, а сок становится горьким. Плод может оставаться частично зеленым и имеет тенденцию к преждевременному опадению.
[0534] Ретро-инверсные формы Flg22 могут конкурировать с природными формами Flg22 за связывание с FLS-ассоциированным рецептором (рецепторами) на поверхности растения и, соответственно, ингибировать/задерживать формирование симптомов позеленения, ассоциированных с заболеванием HLB. Применение комбинаций природного Flg22 и RI Flg22 будет способствовать точной настройке иммунного ответа для снижения и даже элиминации вызывающих заболевание бактерий, Candidatus Liberibacter asiaticus, и, соответственно, предотвращать развитие острых симптомов, таких как пожелтение листьев и позеленение плодов цитрусовых.
[0535] Обработка комбинациями полипептидов Flg с их ретро-инверсными (RI) формами будет использована для минимизации эффекта инфекции HLB на позеленение плодов цитрусовых. 34 коммерческих дерева грейпфрута, Citrus paradise Macfad., и шесть деревьев сладкого апельсина, Citrus sinensis (L.), с симптомами или без симптомов заболевания HLB, будут обрабатывать с применением комбинаций флагеллиновых биоактивных примирующих полипептидов, описанных в таблице 46, ниже, с помощью устройства для впрыскивания низкого давления, называемого BRANDT enTREE, для распределения полипептидов Flg внутри дерева.
Таблица 46. Комбинации природных Flg22 и ретро-инверсных биоактивных примирующих полипептидов Flg22
Обработка
SEQ ID NO:
Концентрация нМ
Bt.4Q7Flg22
226
50 нМ
Bt.4Q7Flg22
226
100 мМ
RI Bt.4Q7Flg22
376
50 нМ
RI Bt.4Q7Flg22
376
100 мМ
Bt.4Q7Flg22 + RI Bt.4Q7Flg22
226 и 376
50 нМ
Bt.4Q7Flg22 + RI Bt.4Q7Flg22
226 и 376
100 мМ
Ec.Flg22
526
50 нМ
Ec.Flg22
526
100 мМ
RI Ec.Flg22
527
50 нМ
RI Ec.Flg22
527
100 мМ
Ec.Flg22 + RI Ec.Flg22
526 и 527
50 нМ
Ec.Flg22 + RI Ec.Flg22
526 и 527
100 мМ
[0536] Образцы ткани листьев с указанных обработанных деревьев грейпфрута и сладкого апельсина будут проанализированы с применением анализа на АФК согласно описанию в примере 15. Образцы будут получены во фруктовых рощах с марта по август в центральной Флориде. Выборка из цитрусового сада считается репрезентативной для штата. Сады для взятия образцов должны иметь минимальную площадь 2 гектара (в диапазоне от 2 до 24 га, в среднем 5,2 га). Цитрусовые деревья из выбранного сада будут выбраны случайным образом и будут включать необработанные контрольные деревья на каждой рандомизированной площадке. Ткани листьев с деревьев грейпфрута и апельсина будут собирать с деревьев приблизительно одного возраста. Образцы листьев берут из аналогичных мест на деревьях и только с деревьев с новым приростом на момент взятия образцов. В садах, выбранных для взятия образцов, используют аналогичные практики культивирования, включая орошение затоплением и контроль сорняков с применением гербицидов. Однако в выбранных садах не будут использоваться какие-либо пестицидные средства как минимум в течение 30 дней до взятия образцов листьев для анализов АФК. В каждом саду будут случайным образом выбраны для взятия образцов испытания в 2 повторностях на 10 деревьях грейпфрута с симптоматикой заболевания HLB и проведено сравнение с образцами с 14 деревьев грейпфрута (неинфицированный контроль) без каких-либо симптомов. Аналогичное взятие образцов листьев будет проведено у сладкого апельсина (четыре инфицированных образца сравнивают с 2 неинфицированными контролями). Будут выбраны деревья, репрезентативные для всего сада. Будет проведен иерархический дисперсионный анализ (ANOVA) для определения статистической значимости каких-либо наблюдаемых различий активности АФК при обработке контрольных и инфицированных HLB образцах листьев цитрусовых.
Пример 32: Внекорневое внесение полипептида Flg22 уменьшает церкоспориоз листьев у сои
[0537] Внекорневое внесение биоактивного примирующего полипептида Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), происходящего из Bacillus thuringiensis, и Bacillus pseudomycoides, экспрессирующей Bt.4Q7Flg22 (H1), применяли у растений сои (коммерческий гибрид Beck's 294 NR) на стадии развития V3, которые культивировали в 3 отдельных местоположениях на Среднем Западе США, где ранее, по имеющимся данным, наблюдалась инфекция Cercospora в полевых условиях.
[0538] Оценочные показатели церкоспориоза листьев (процент пораженной площади листьев) использовали для оценки тяжести заболевания во всех полевых экспериментах. Процент пораженной площади листьев рассчитывали с использованием визуального ключа на основе анализа изображений ASSESS для количественной оценки заболевания у растения (источник: Chagas Ferreira da Silva, LSU Master's Theses, 2014). Оценочные показатели симптомов в виде процентов получали для самых верхних тройчатых листьев
[0539] Результаты приведены в таблице 47. Внешне растения сои, которые обрабатывали средствами для обработки листвы с биоактивным примирующим полипептидом Bt.4Q7Flg22 и Bacillus pseudomycoides, экспрессирующим Bt.4Q7Flg22 (H1), отличались увеличенной жизненной силой по сравнению с необработанными контрольными растениями. Контрольные растения демонстрировали усиление развития ранних симптомов при наблюдении в точке времени через 4 недели, 30% по сравнению с 20% при обработке Bt.4Q7Flg22 (0,33 жидких унции на акр, или 24,1 мл/га) и приблизительно 5% при обработке Bt.4Q7Flg22 (4,0 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га). Растения сои, обработанные Bacillus pseudomycoides, экспрессирующей Bt.4Q7Flg22 (H1), также демонстрировали меньшее развитие ранних симптомов в результате инфекции Cercospora относительно необработанных контрольных растений, 20% через 4 недели (0,33 жидких унции на акр, или 24,1 мл/га) и 10% (4,0 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га). Через 8 недель после применения необработанные контрольные растения демонстрировали визуальные симптомы 50% повреждения верхнего яруса листвы растения (верхние 3-4 тройчатых листа). Оценочный показатель симптомов для растений, которые получали средства для обработки листвы с полипептидом Bt.4Q7Flg22 (0,33 жидких унции на акр, или 24,1 мл/га) был сопоставим с показателем для необработанных контрольных растений через 8 недель после применения средства для обработки листвы. Однако растения сои, которые получали средства для обработки листвы с полипептидов Bt.4Q7Flg22 (4,0 жидких унции на акр) и Bacillus pseudomycoides, экспрессирующим Bt.4Q7Flg22 (H1) (0,33 жидких унции на акр, или 24,1 мл/га; и 4,0 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га) демонстрировали значительное снижение выраженных симптомов и повреждений. В целом, обработка полипептидом Bt.4Q7Flg22 (4,0 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га) была эффективной для предотвращения развития ранних симптомов инфекции Cercospora относительно необработанных растений, у которых наблюдались симптомы повреждения и фиолетовости листьев, а также сбрасывание листьев. Соответственно, внекорневое внесение полипептида Bt.4Q7Flg22 с более высоким рабочим расходом средства (например, 4,0 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га)) может обеспечивать способ контроля развития ранних симптомов и получения более здоровых и более жизнеспособных растений сои, культивируемых в полевых местоположениях, которые были поражены Cercospora.
Таблица 47: Обработка листвы растений сои Bt.4Q7Flg22 и экспрессирующим Bt.4Q7Flg22 Bp.приводила к облегчению заболевания и развития симптомов Cercospora у сои
Обработка - Соя
Рабочий расход средства вжидких унциях на акр
Процент площади поражения заболеванием у растений через 4 недели после применения
Площадь поражения заболеванием через 8 недель после применения
Контроль
-
30%
50%
Bt.4Q7Flg22
0,33 жидких унции на акр
20%
50%
Bt.4Q7Flg22
4,0 жидких унции на акр
5%
35%
H1 Bt.4Q7Flg22
0,33 жидких унции на акр
20%
40%
H1 Bt.4Q7Flg22
4,0 жидких унции на акр
10%
30%
Пример 33: Применение у кукурузы - анализ усиленного нормализованного разностного индекса растительности (ENDVI)
[0540] Усиленный нормализованный разностный индекс растительности (ENDVI) представляет собой индикатор живой, фотосинтетически-активной зеленой растительности, и его использовали для сравнения эффективности обработок в испытаниях в полевых условиях с применением технологии дистанционной регистрации. Значения индекса ENDVI в диапазоне от -1,0 до 0,1 указывают на растения с ухудшенным состоянием здоровья, у который понижен фотосинтез, тогда как значения, близкие к 1, указывают на богатую растительность, высокую фотосинтетическую способность и увеличенную биомассу. Здоровые растения активно поглощают видимый свет в спектральном диапазоне длин волн 400-700 нм и отражают свет с длинами волн в ближнем инфракрасном диапазоне от 700 до 1100 нм. Измерения ENDVI могут соответствовать определенным вегетационным свойствам, например, биомассе растений или зеленому цвету, поглощению света лиственным покровом растений, фотосинтетической емкости (например, индексу площади листьев, биомассе и концентрации хлорофилла). Изображения для ENDVI получали с помощью BGNIR-камеры (Zenmuse X3), присоединенной к дрону (DJI MATRICE 100), созданной специально для захвата изображений и фильтрации при захвате разных длин световых волн. Камера использует сенсоры для захвата излучения электромагнитного спектра в видимом и ближнем инфракрасном диапазонах. Здоровые растения с большим количеством вегетативной массы или биомассы отражают свет в зеленом (G) и ближнем инфракрасном диапазонах (NIR), при этом поглощая свет как в голубом (B), так и в красном диапазонах. Менее здоровые или имеющие меньшую надземную биомассу растения отражают больше видимого света и меньше света в NIR-диапазоне. ENDVI учитывает два канала, NIR и G, как каналы отражения, а B - как канал поглощения. В приведенной ниже формуле ENDVI значения для NIR и зеленого каналов суммируют с получением значения для канала отражения. Значение для голубого канала умножают на два для компенсации суммирования каналов NIR и G. В уравнении ENDVI используют следующие вычисления для значений каналов NIR, G и B для получения значения коэффициента в виде одного выходного значения:
[0541] Семена кукурузы (гибрид DEKALB DKC 58-89), обработанные средством для обработки семян, содержащим фунгицид EVERGOL (7,18% пропиконазол, 3,59% пенфлуфена в комбинации с 5,74% металаксила) и PONCHO/VOTiVO 500 (смесь 40,3% инсектицида клотианидина и 51,6% Bacillus firmus I-1582, микробного агента) высаживали на Среднем Западе США (Иллинойс). Различные средства для обработки листвы, содержащие Bt.4Q7Flg22 и синтетический вариант Bt.4Q7Flg22 (Syn01Flg22, согласно описанию в таблице 48) применяли у растений кукурузы на стадии развития V5-V7. Изображения BGNIR получали с дронов, передвигающихся на высоте 50 м над испытательной площадкой, через три недели после применения каждого средства для обработки листвы и после полного смыкания листового полога кукурузы. Индивидуальные BGNIR-изображения обрабатывали с помощью программного обеспечения для анализа производимых дроном изображений, с получением единого ортомозаичного изображения испытательной площадки, которое дополнительно анализировали с помощью программного обеспечения для визуализации Fiji. На ортомозаичном изображении области площадок для идентификации индивидуальных средств для обработки листвы на поле и репликатов для каждой из обработок были однозначным образом установлены с использованием GPS-координат в каждом полевом испытании. Репликаты для обработок, идентифицируемые для визуализации, имели одинаковый размер. Для каждого варианта средства для обработки листвы собирали по три репликата, на каждой площадке-репликате визуализировали по два ряда. В пределах каждого репликата измеряли среднюю интенсивность света для каждого из каналов изображения [голубой, зеленый и ближний ИК (визуализируемый как красный)] по шкале от 0 до 255, где интенсивность 0=0% отражение (черный пиксель), а интенсивность 255=100% отражение (белый пиксель). Указанные средние интенсивности света B, G и NIR использовали для вычисления значения ENDVI с применением алгоритма ENDVI для оценки состояния здоровья растений (зеленый цвет) для каждой площадки-репликата. Затем значения ENDVI усредняли по трем площадкам-репликатам согласно описанию в таблицах 49 и 50. Значения ENDVI для средств для обработки сравнивали с контрольной обработкой на каждой площадке. Контрольная обработка включала обработку растений кукурузы, культивированных из семян, только основным средством для обработки семян, и не включала средств для обработки листвы. Композиции средств для обработки листвы соответствовали описанию и применялись с рабочим расходом средств согласно таблице 48.
Таблица 48. Композиции средств для обработки листвы с Flg22 для тестирования у кукурузы и сои
Композиция
Состав для внекорневого внесения
Рабочий расход средства в жидких унциях на акр, или миллилитров на гектар (мл/га)
Композиция 1
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)
4 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га
Композиция 2
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,11,6 мМ двухосновный фосфат натрия в комбинации с 4,2 мМ моногидратом лимонной кислоты pH 5,6консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
4 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га
Композиция 3
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
4 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га
Композиция 4
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ + Целлобиоза: 320 мМ1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
4 жидких унции на акр (Flg22)292,3 мл/га,8 жидких унций на акр (Целлобиоза)584,6 мл/га
Композиция 5
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
48 жидких унций на акр, или 3507,6 мл/га
Композиция 6
Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
4 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га
Композиция 7
Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
0,4 жидких унции на акр, или 29,23 мл/га
Композиция 8
Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) 16,7 мкМ + Целлобиоза: 320 мМ1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
0,4 жидких унции на акр (Flg22)29,23 мл/га8 жидких унций на акр (Целлобиоза)584,6 мл/га
Композиция 9
At.Flg22-B4 (SEQ ID NO: 300)1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
4 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га
[0542] Композиции для обработки листьев содержали 0,1% (по объему) консерванта PROXEL BC, водную дисперсию смеси 330,7 мМ 1,2-бензизотиазолина (BIT), 53,5 мМ 5-хлор-2-метил-4-изотиазолин-3-она (CMIT) и 26,1 мМ 2-метил-4-изотиазолин-3-она (MIT). Композиции для обработки листьев применяли с заданным расходом (жидких унций на акр, или мл/га) в объеме носителя (воды) 20 галлонов на акр с 0,1% (по объему) неионогенного поверхностно-активного вещества Alligare Surface™
[0543] Как показано в таблице 49, средства для внекорневого внесения с композициями содержащие Bt.4Q7Flg22 и Syn01Flg 22 при применении у кукурузы на стадии развития V5-V7 приводили к увеличению значений коэффициента измерения ENDVI при сравнении или нормировании по растениям, которые не получали средства для обработки листвы (контроль с обработкой семян). Композиции Bt.4Q7Flg22 в виде средства для обработки листвы в забуференных составах (композиции 2, 3, 4 и 5; фосфат натрия, pH 5,6-5,7) приводили к получению растений с более высокими значениями коэффициента ENDVI по сравнению с растениями, которые обрабатывали Bt.4Q7Flg22 в виде незабуференной композиции (композиция 1) с расходом 4 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га. Однако все значения коэффициента ENDVI у обработанных Bt.4Q7Flg22 растений (композиции 1-5) были увеличены по сравнению с необработанными контрольными растениями. У растений кукурузы применение композиции 4 в виде средства для обработки листвы, состоящей из полипептида Bt4Q7Flg22 в комбинации с целлобиозой в забуференном фосфатом составе, при нанесении с рабочим расходом 8 жидких унций на акр, или 584,6 мл/га, приводило к +9% увеличению среднего значения коэффициента ENDVI относительно контрольных (только обработка семян) растений. У растений, обработанных средствами для внекорневого внесения с композициями 1 и 5, которые различались только соответствующим рабочим расходом средства (4 и 48 жидких унций на акр, или 292,3 мл/га и 3,507,6 мл/га), наблюдались аналогичные значения коэффициента ENDVI (+3% и +4%) по сравнению с контрольными растениями. Важно отметить, что более высокий расход, 48 жидких унций на акр, или 3 507,6 мл/га не приводил к детектируемой фитотоксичности, которую можно было заметить по снижению значения ENDVI по сравнению с контролем (только средство для обработки семян). Композиции 6, 7 и 8 с полученным синтетическим путем вариантом Bt.4Q7Flg22 (Syn01Flg22) также применяли в виде средства для опрыскивания листвы у растений кукурузы на стадии развития V5-V7. Полипептид Syn01Flg22 в забуференном фосфатом составе (композицию 6 и композицию 7) сравнивали в соответствии с рабочим расходом средств. Полипептид Syn01Flg22 (композиция 6) при применении у растений кукурузы с более высоким рабочим расходом средства (4 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га) приводил к снижению значения коэффициента ENDVI или характеризовался меньшим процентным увеличением ENDVI по сравнению с полипептидом Syn01Flg22 (композиция 7) при применении у растений с рабочим расходом средства 0,4 жидких унции на акр, или 29,23 мл/га; разница между обработками композициями 6 и 7 составляла 8%. В Syn01Flg22 (композиция 8) добавляли целлобиозу и, аналогично композиции 7, применяли с рабочим расходом средства 0,4 жидких унции на акр, или 29,23 мл/га. Внекорневое внесение Syn01Flg22 (композиции 7) сравнивали с Syn01Flg22 в комбинации с целлобиозой (320 мМ) (композицией 8). Композиция 7 и композиция 8 с Syn01Flg22 характеризовались аналогичным увеличением коэффициента измерений ENDVI, приводя к +10% увеличению по сравнению с контрольными растениями или +8% увеличению по сравнению с растениями, которые обрабатывали Syn01Flg22 (композиция 6) с более высоким рабочим расходом 4 Жидких унции/акр, или 292,3 мл на гектар (га).
Таблица 49. Полученные показатели ENDVI при обработке средствами для внекорневого внесения с Flg22 у гибрида кукурузы DKC 52-61
Обработка
ENDVI (STDEV)
Среднее изменение ENDVI в процентах, нормированное по контрольным растениям
Контрольная обработка семян
0,253 (0,027)
_
Bt.4Q7Flg22, композиция 1
0,259 (0,019)
+3%
Bt.4Q7Flg22, композиция 2
0,269 (0,021)
+6%
Bt.4Q7Flg22, композиция 3
0,272 (0,003)
+7%
Bt.4Q7Flg22 + Целлобиоза, композиция 4
0,276 (0,009)
+9%
Bt.4Q7Flg22, композиция 5
0,263 (0,010)
+4%
Syn01Flg22, композиция 6
0,258 (0,016)
+2%
Syn01Flg22, композиция 7
0,277 (0,018)
+10%
Syn01Flg22 + Целлобиоза, композиция 8
0,279 (0,015)
+10%
Нормирование по контрольной обработке семян: EVERGOL и PONCHO/VOTiVO 500
[0544] Семена кукурузы (гибрид DEKALB DKC 52-61) также обрабатывали Roundup POWERMAX (активный ингредиент глифосат, 48,7% в форме калиевой соли) в комбинации с композицией 3 с Bt.4Q7Flg22. Roundup POWERMAX применяли с рекомендованным в инструкции по применению препарата рабочим расходом 24 жидких унции/акр. Bt.4Q7Flg22 (композицию 3) применяли с расходом 4,0 жидких унции на акр, или 292,3 мл/га. Результаты приведены в таблице 50.
Таблица 50. ENDVI при внекорневом внесении полипептидов Flg22 в комбинации с гербицидом у кукурузы (гибрид DKC 52-61)
Код состава для обработкиРабочий расход средства
ENDVI (STDEV)
Среднее изменение ENDVI в процентах, нормированное по обработке Roundup POWERMAX
Roundup POWERMAX
0,271 (0,006)
_
Roundup POWERMAX + Bt.4Q7Flg22(композиция 3)
0,293 (0,005)
+8%
Нормирование по средству для обработки листвы RoundUp POWERMAX
[0545] Как показано в таблице 50, Roundup POWERMAX при применении у кукурузы на стадии развития V5-V7 в виде гербицида для внекорневого внесения в комбинации с Bt.4Q7Flg22 (композиция 3) приводил к увеличению коэффициента измерений ENDVI на +8% по сравнению с обработкой Roundup POWERMAX без полипептида Bt.4Q7Flg22.
Пример 34: Применение биоактивных примирующих полипептидов у кукурузы на стадии V4-V7 - увеличенная урожайность
[0546] Кукурузу для испытаний на больших площадях высаживали из семян (гибриды DEKALB: DKC 52-61, DKC 58-89 и DKC 65-81), покрытых средством для обработки семян, содержащим фунгицид EVERGOL (7,18% пропиконазола, 3,59% пенфлуфена и 5,74% металаксила) с PONCHO/VOTiVO 500 (смесь инсектицида клотианидина и микробного агента, Bacillus firmus I-1582). Кукурузу для испытаний в полевых условиях высаживали в 8 местоположениях на Среднем Западе США (Индиана, Иллинойс и Айова). Посевные грядки на поле в каждом местоположении формировали с применением стандартных или противоэрозийных методов для посадки кукурузы. Удобрение вносили согласно стандартным агротехническим рекомендациям, одинаковым образом для всех местоположений на Среднем Западе США. Для контроля сорняков использовали гербициды с дополнительным рыхлением почвы при необходимости. Во всех местоположениях засаживали четырехрядные площадки по 5,3 метра. Семена кукурузы высаживали на глубину 3,8-5,1 см для обеспечения нормального развития корней. Кукурузу высаживали с приблизительной плотностью в среднем 42 000 растений на акр, или 103 782 растения на гектар, при средней ширине ряда 0,8 метров и расстоянием между семенами, позволяющим разместить 1,6-1,8 семян на каждые 30 см.
[0547] Растения кукурузы приблизительно на стадии развития V5 обрабатывали средствами для внекорневого внесения с применением композиции для обработки листвы, содержащей полипептид Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и синтетический вариант Bt.4Q7Flg22, который описан как полипептид Syn01Fflg22 (SEQ ID NO: 571). Композиции для обработки листьев, содержащие указанный полипептид Bt.4Q7Flg22 и синтетический вариант полипептида Bt.4Q7Flg22, применяли у 3 гибридов кукурузы (гибриды DEKALB: гибрид 1: DKC 52-61; гибрид 2: DKC 58-89; гибрид 3: DKC 65-81), высаженных в 8 местоположениях на Среднем Западе США (Индиана, Иллинойс и Айова). Растения кукурузы получали средства для обработки листвы в концентрациях и с рабочим расходом средств согласно описанию в таблице 51. Собирали урожай кукурузы (в бушелях на акр) и регистрировали в таблице 51 как среднюю урожайность (в бушелях на акр) во всех местоположениях (8 местоположениях для гибрида 1, 7 местоположениях для гибрида 2 и 6 местоположениях для гибрида 3) и как среднее изменение в бушелях на акр по сравнению с обработанным основным средством для обработки семян (ST) контролем после обработки поверхностно-активным веществом по отдельности.
Таблица 51. Обработка листвы с применением Bt.4Q7Flg22 и синтетического мутанта Syn01Flg22 - увеличение урожайности кукурузы
Средство для обработки листвы(Концентрация)
Рабочий расход средстважидких унций на акр (мл/гектар)
Средняя урожайность бушелях на акр
Среднее изменение урожайности в бушелях на акр по сравнению с обработанным поверхностно-активным веществом контролем
Bt.4Q7Flg22(16,7 мкМ)(композиция 1)
4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/гектар)
201,43
+1,14
Bt.4Q7Flg22(16,7 мкМ) + Целлобиоза(320 мМ)(композиция 4)
4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/гектар)8,0 жидких унций на акр(584,6 мл/гектар)
205,43
+2,55
Syn01Flg22(16,7 мкМ)(композиция 6)
4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/гектар)
203,79
+0,90
Syn01Flg22(16,7 мкМ)(композиция 7)
0,4 жидких унции на акр(29,2 мл/гектар)
204,36
+1,48
(16,7 мкМ) + Целлобиоза(320 мМ)(композиция 8)
0,4 жидких унции на акр(29,2 мл/гектар)8,0 жидких унций на акр(584,6 мл/гектар)
204,47
+1,59
[0548] Растений кукурузы приблизительно на стадии развития V5 обрабатывали средствами для внекорневого внесения с применением композиции для обработки листвы, содержащей полипептид Bt.4Q7Flg22 и синтетический вариант, Syn01Flg22, полипептида Bt.4Q7Flg22. Полипептиды Bt.4Q7Flg22 и синтетический вариант Bt.4Q7 Flg22 также комбинировали с целлобиозой (320 мМ), редуцирующим сахаром, состоящим из двух молекул β-глюкозы, соединенных β(1→4)-связью, и используемым в качестве элиситорного средства для усиления эффекта полипептида Flg22. И Bt.4Q7Flg22, и Syn01Flg22 при применении в комбинации с целлобиозой у растений кукурузы приводили к усилению стимуляции урожайности относительно внекорневого внесения полипептидов Bt.4Q7Flg22 и Syn01Flg22. Положительное увеличение урожайности, +2,55 бушелей на акр, или 160 кг/га наблюдалось у растений кукурузы, которые обрабатывали средством для обработки листвы с Bt.4Q7Flg22 и целлобиозой, по сравнению с увеличением урожайности +1,14 бушелей на акр, или 71,6 кг/га для средства для обработки листвы с Bt. 4Q7Flg22 при его применении отдельно. Наблюдалось также положительное увеличение урожайности +1,59 бушелей на акр, или 99,8 кг/га, у растений кукурузы, которые обрабатывали средством для обработки листвы с Syn01Flg22 (0,2 жидких унции на акр, или 14,6 мл/га) в комбинации с целлобиозой, по сравнению с увеличением +1,48 бушелей на акр или 92,9 кг/га урожайности для средства для обработки листвы Syn01Flg22 с тем же рабочим расходом средства. Таким образом, Bt.4Q7Flg22 и Syn01Flg22 в виде средств для обработки листвы у растений кукурузы на стадии развития V5 с рабочим расходом 4,0 жидких унции, или 292,3 мл/га обеспечивали немного меньшее увеличение урожайности, +1,14 бушелей на акр (71,6 кг/га) и +0,90 бушелей на акр (56,5 кг/га) по сравнению с комбинациями указанных двух полипептидов Flg22 с целлобиозой.
Пример 35: Комбинация полученного синтетическим путем Flg22 (Syn01Flg22) и фунгицида
[0549] В дополнительном исследовании проводили испытания для исследования урожайности на больших площадях с применением средства для внекорневого внесения, содержащего композиции с полипептидом Bt.4Q7Flg22 и полученным синтетическим путем полипептидом из Bt.4Q7Flg22 (Syn01Flg22) с добавлением фунгицида широкого спектра, STRATEGO YLD (10,8% протиоконазола и 32,3% трифлоксистробина). STRATEGO YLD, который представляет собой коммерчески доступный фунгицид, подходящий для применения в качестве средства для внекорневого внесения в начале сезона у кукурузы, применяли в виде средства для опрыскивания листвы, следуя рекомендациям в инструкции по применению препарата, с рабочим расходом 4,0 жидких унции на акр (292,3 мл/гектар). Растения кукурузы приблизительно на стадии развития V5 обрабатывали средствами для внекорневого внесения с применением композиция для обработки листвы, содержащей полипептид Bt.4Q7Flg22 и Syn0Flg22, синтетический вариант полипептида Syn01Flg22, в комбинации с фунгицидом STRATEGO YLD. Средства для обработки листвы применяли у 2 гибридов кукурузы (гибриды DEKALB: гибрид 1: DKC 52-61; гибрид 2: DKC 58-89), высаженных в 2 местоположениях в Айове. Собирали урожай кукурузы (в бушелях на акр) и регистрировали как среднюю урожайность (в бушелях на акр) в обоих местоположениях для обоих гибридов, а также как среднее изменение в бушелях на акр по сравнению с растениями кукурузы, культивированными из семян, которые обрабатывали основным средством для обработки семян (ST) и только внекорневым внесением фунгицида STRATEGOYLD (таблица 52).
Таблица 52. Урожайность кукурузы при внекорневом внесении синтетического мутанта Bt.4Q7Flg22 в комбинации с фунгицидом
Средство для обработки листвы(Концентрация)
Рабочий расход средства в жидких унциях на акр(мл/гектар)
Средняя урожайность в бушелях на акр
Среднее изменение урожайности в бушелях на акр по сравнению с контрольным фунгицидом
Фунгицид STRATEGO YLD
4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/гектар)
223,13
_
Фунгицид STRATEGO YLD + Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226) (16,7 мкМ)(композиция 3)
4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/гектар)4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/гектар)
228,62
+5,49
Фунгицид STRATEGO YLD + Syn01Flg22(SEQ ID NO: 571) (16,7 мкМ)(композиция 6)
4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/гектар)4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/гектар)
228,96
+5,83
Основное средство для обработки семян (ST) состояло из фунгицида EVERGOL + PONCHO/VOTIVO 500. Фунгицид STRATEGO YLD применяли в концентрации и с рабочим расходом средства согласно рекомендациям в инструкции по применению препарата.
[0550] Внекорневое внесение у растений кукурузы на стадии V5 полипептидов Bt.4Q7Flg22 и Syn01Flg22 в комбинации с фунгицидом, STRATEGO YLD, в концентрациях и с рабочим расходом средств в соответствии с указанным в таблице 5, выше, приводило к приросту более чем +5 бушелей на акр. Обработка листвы полипептидом Syn01Flg22 приводила к несколько большему увеличению урожайности кукурузы, +5,84 бушелей на акр (366,6 кг/га), по сравнению с обработкой растений кукурузы полипептидом Bt.4Q7Flg22, которая приводила к средней урожайности +5,50 бушелей на акр (345,2 кг/га) по сравнению с растениями, получавшими средство для обработки листвы только с фунгицидом STRATEGO YLD.
Пример 36: Средство для обработки семян полипептидами Flg22 для увеличения урожайности кукурузы
[0551] В других исследованиях испытания для изучения урожайности на больших площадях проводили с применением основного средства для обработки семян, состоящего из фунгицида EVERGOL (7,18% пропиконазола, 3,59% пенфлуфена в комбинации с 5,74% металаксила) и PONCHO/VOTiVO 500 (смесь 40,3% инсектицида клотианидина и 51,6% Bacillus firmus I-1582, микробного агента) в комбинации с различными полипептидами Flg22. Средства для обработки семян применяли у 3 гибридов кукурузы (Beck's 4919V2, 5140HR и 5828YX), высаженных в 8 местоположениях на Среднем Западе США (Индиана, Иллинойс и Айова). Композиции для обработки семян с полипептидами Flg22 применяли с расходом согласно описанию в таблице 53 в жидких унциях на единицу семян кукурузы или сои в общем объеме взвеси, содержащей основное средство для обработки семян Bt.4Q7Flg22 из Bacillus thuringinesis (композиция 10) и Pa.Flg22 из Paenibacillus alvei (композиция 11). Конечная концентрация полипептида во взвеси для композиций 10 и 11 составляла 1 мкМ.
Таблица 53. Композиции со средствами для обработки семян с Flg22 для тестирования у кукурузы и сои
Композиция
Состав средства для обработки семян
Рабочий расход средства в жидких унций/единицу кукурузы или сои, или в миллилитрах на единицу (мл/единицу)
Композиция 10
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 40,0 мкМ, 11,6 мМ двухосновный фосфат натрия в комбинации с 4,2 мМ моногидратом лимонной кислоты pH 5,6
0,14 жидких унций/единицу или4,14 мл/единицу
Композиция 11
Pa.Flg22 (SEQ ID NO: 293) 40,0 мкМ,11,6 мМ двухосновный фосфат натрия в комбинации с 4,2 мМ моногидратом лимонной кислоты pH 5,6
0,14 жидких унций/единицу или4,14 мл/единицу
[0552] Собирали урожай кукурузы (в бушелях на акр) и регистрировали как урожайность (в бушелях на акр) во всех 8 местоположениях, усредняя по всем 3 гибридам. Среднее изменение в бушелях на акр сравнивали с растениями кукурузы, культивированным из семян, которые обрабатывали только основным средством для обработки семян (ST), и регистрировали в таблице 54.
Таблица 54. Обработка семян кукурузы полипептидом Flg22 увеличивает урожайность
Средство для обработки листвы
Рабочий расход средства
Средняя урожайность (бушелях на акр)
Среднее изменение урожайности (в бушелях на акр) по сравнению с контрольным ST
Bt.4Q7Flg22Bacillus thuringinesis(SEQ ID NO: 226)(композиция 10)
0,14 жидких унций/единицу или4,14 мл/единицу
179,72
+4,73
Pa.Flg22Paenibacillus alvei(SEQ ID NO: 293)(композиция 11)
0,14 жидких унций/единицу или4,14 мл/единицу
182,24
+3,57
[0553] Обработка семян кукурузы полипептидами Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и Pa.Flg22 (SEQ ID NO: 293) увеличивала урожайность, представленную как среднее значение для 3 гибридов кукурузы в 8 местоположениях на Среднем Западе США. Полипептид Bt.4Q7Flg22, представленный в виде средства для обработки семян, обеспечивал даже большее преимущество в урожайности, или +4,73 бушелей на акр (296,9 кг/га) по сравнению с контрольными растениями. Pa.Flg22 при применении в виде средства для обработки семян также обеспечивал прирост урожая +3,57 бушелей на акр (224 кг/га) относительно растений кукурузы, культивированных из семян, которые обрабатывали только основным средством для обработки семян. Соответственно, оба полипептида Flg22, полученных из бактерий разных видов (Bacillus и Paenibacillus), обеспечивали существенное увеличение урожайности при применении в виде средств для обработки семян у кукурузы.
Пример 37: Применение полипептидов Flg22 с целлобиозой для увеличения урожайности кукурузы
[0554] Кукурузу для испытаний на больших площадях высаживали семенами (гибриды DEKALB: DKC 52-61, DKC 58-89 и DKC 65-81), содержащими средство для обработки семян с фунгицидом EVERGOL (7,18% пропиконазола, 3,59% пенфлуфена в комбинации с 5,74% металаксила) в комбинации с PONCHO/VOTiVO 500 (смесь инсектицида клотианидина и микробного агента, Bacillus firmus 1582). Растения кукурузы приблизительно на стадии развития V5 обрабатывали средствами для внекорневого внесения с сельскохозяйственной композицией, содержащей Bt.4Q7Flg22 и синтетические полипептиды Syn01Flg22, с добавлением или без добавления целлобиозы (320 мМ). Указанные средства для обработки листвы применяли на 2 гибридах кукурузы (гибриды DEKALB: гибрид 1: DKC 58-89; гибрид 2: DKC 65-81), высаженных в 2 местоположениях на Среднем Западе США (Иллинойс), подвергавшихся засухо-подобным условиям после внекорневого внесения, на стадии опыления при развитии кукурузы. Растений кукурузы обрабатывали средствами для обработки листвы с Bt.4Q7Flg22 и Syn01Flg22 в концентрациях и с рабочим расходом средств согласно описанию в таблице 48, с неионогенным поверхностно-активным веществом (Alligare Surface™ в конечной концентрации 0,1% по объему от объема резервуара опрыскивателя). Урожай кукурузы (в бушелях на акр) собирали и регистрировали как среднюю урожайность (в бушелях на акр) в обоих местоположениях для 2 гибридов, а также как среднее изменение в бушелях на акр по сравнению с урожайностью растений кукурузы, которые обрабатывали только основным средством для обработки семян (ST) и неионогенным поверхностно-активным веществом (Alligare Surface™ в конечной концентрации 0,1% по объему от объема резервуара опрыскивателя) (таблица 55).
Таблица 55. Комбинации полипептидов Flg22 с целлобиозой - кукуруза
Средство для обработки листвы(Концентрация)
Рабочий расход средства в жидких унциях на акр(мл/гектар (га)
Средняя урожайность (в бушелях на акр)
Среднее изменение урожайности (в бушелях на акр) по сравнению с обработанным поверхностно-активным веществом контролем
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO:226)(16,7 мкМ)
4,0(292,3 мл/га)
96,46
+3,70
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO:226)(16,7 мкМ) +Целлобиоза(320 мМ)
4,0(292,3 мл/га)8,0(584,6 мл/га)
100,98
+8,22
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO:226)(16,7 мкМ)
48,0(3507,6 мл/га)
119,37
+26,61
Syn01Flg22(SEQ ID NO: 571)(16,7 мкМ)
4,0(292,3 мл/га)
98,48
+5,72
Syn01Flg22(SEQ ID NO: 571)(16,7 мкМ)
0,4(29,2 мл/га)
102,36
+9,60
Syn01Flg22(SEQ ID NO: 571)(16,7 мкМ) +Целлобиоза(320 мМ)
0,4(29,2 мл/га)8,0(584,6 мл/га)
108,24
+15,48
[0555] Применение средств для обработки листвы с Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и синтетическим вариантом Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) приводило к существенному приросту урожая у растений кукурузы при комбинировании в средствах для обработки листвы с целлобиозой, дисахаридом, который применяют в качестве вторичного стабилизирующего агента для полипептида Flg и основы для доставки на поверхность растительной мембраны. Полипептид Bt.4Q7Flg22 (16,7 мкМ) с целлобиозой (320 мМ) в виде комбинированного средства для опрыскивания листвы, применяемый с рабочим расходом средства 4,0 жидких унции на акр (Flg22), обеспечивал более чем двойной прирост урожая, увеличение +8,22 бушеля на акр или приблизительно 516 кг/га относительно контрольных растений, по сравнению с 4,0 жидких унциями на акр полипептида Bt.4Q7Flg22 по отдельности. Применение полипептида Bt.4Q7Flg22 без целлобиозы приводило к увеличению +3,70 бушелей на акр, или 232 кг/га относительно контрольных растений, культивированных из обработанного поверхностно-активным веществом контроля. Аналогичное увеличение урожайности происходило в растениях кукурузы, обработанных Syn01Flg22 и комбинацией Syn01Flg22 (16,7 мкМ) с целлобиозой (320 нМ) при рабочем расходе средства 0,2 жидких унции на акр, на +9,60 (602,6 кг/га) и +15,48 (971,6 кг/га), соответственно, по сравнению с урожайностью у обработанных поверхностно-активным веществом контрольных растений. Кроме того, полипептид Bt.4Q7Flg22 (16,7 мкМ) наносили в виде средства для опрыскивания листвы на растения кукурузы на стадии развития V5-V7 с тремя разными рабочими расходами средства, 0,2, 2,0 и 24,0 жидких унции на акр (14,6 мл/га, 146,2 мл/га и 1753,8 мл/га). Полипептид Bt.4Q7Flg22 при нанесении с самым высоким рабочим расходом, обеспечивал по существу большее преимущество в урожайности, увеличение урожайности почти +27 бушелей на акр (1694,6 кг/га) относительно урожайности у контрольных растений. В целом, Bt.4Q7Flg22 и синтетический вариант Syn01Flg22 обеспечивали защиту от засухо-подобных условий роста на критически важной стадии развития растений (т.е. опыления), что приводило к увеличенной урожайности для всех комбинаций Bt.4Q7Flg22, Syn01Flg22 и целлобиозы, используемых в качестве средств для внекорневого внесения.
[0556] В другом исследовании обработка семян с использованием полипептидов Flg22 и комбинаций полипептидов Flg22 с целлобиозой обеспечивала общее увеличение урожайности в испытаниях в полевых условиях, регистрируемое как среднее значение для четырех повторных испытаний (таблица 56). Обработку семян проводили у гибрида кукурузы (Beck's 5828YX), высаженного в 1 местоположении на Среднем Западе США (Колумбия). Композиции для обработки семян с Flg22 применяли согласно описанию в таблице 56, по 0,14 жидких унций на единицу семян кукурузы в общем объеме взвеси, содержащей основное средство для обработки семян. Конечную концентрацию полипептидов Flg22 во взвеси стандартизировали, доводя до 1 мкМ на семя. Использовали ту же конечную концентрацию целлобиозы, что и в комбинированных средствах с полипептидами Flg22, составляющую 1,0 мМ на семя. Регистрируют среднюю урожайность в бушелях на акр и среднее увеличение урожайности в бушелях на акр по сравнению с необработанным контролем (столбец 1) и с Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO:226) (столбец 2) для кукурузы, культивированной из семян, которые обрабатывали комбинированными средствами с полипептидом Flg22 согласно приведенному ниже описанию в таблице 56.
Таблица 56. Комбинации для обработки семян полипептидами Flg22 и вариантами полипептидов Flg22 с целлобиозой - кукуруза
Средство для обработки листвы (Концентрация)
Средняя урожайность бушелях на акр (Среднее изменение в бушелях на акр по сравнению с необработанным контролем)
Среднее изменение в бушелях на акр по сравнению с необработанным контролем
Среднее изменение в бушелях на акр по сравнению с Bt.4Q7Flg22; SEQ ID NO:226
Основная контрольная обработка семян
28,00
-
-1,60
Bt.4Q7Flg22 в концентрации1,0 мкМ(SEQ ID NO:226)
29,60
+1,60
-
Syn01Flg22 в концентрации1,0 мкМ(SEQ ID NO: 571)
39,58
+ 11,58
+9,98
Syn03Flg22 в концентрации1,0 мкМ(SEQ ID NO: 300)
35,17
+7,17
+5,57
Pa.Flg22Paenibacillus alveiв концентрации 1,0 мкМ(SEQ ID NO: 293)
39,04
+11,04
+9,44
La.Flg22Lysinibacillus в концентрации1,0 мкМ(SEQ ID NO: 574)
37,13
+9,13
+7,53
Flg22-B2Bacillus в концентрации 1,0 мкМ(SEQ ID NO: 295)
36,79
+8,79
+7,19
Комбинация Flg22 Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) + Flg22-B2 (SEQ ID NO: 295) + At.Flg22-B4 (SEQ ID NO: 300), каждыйв концентрации 0,33 мкМ
45,39
+17,39
+15,79
Целлобиоза 1 мМ
39,66
+11,67
+10,07
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO:226) в концентрации 1,0 мкМ +Целлобиоза 1 мМ
36,22
+8,22
+6,62
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO:226) в концентрации 0,25 мкМ
47,06
+19,07
+17,47
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO:226) в концентрации 0,25 мкМ +Целлобиоза 1 мМ
40,62
+12,63
+11,02
Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) в концентрации0,25 мкМ
32,65
+4,66
+3,06
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 571) в концентрации 0,25 мкМ +Целлобиоза1 мМ
31,03
+3,03
+1,43
Пример 38: Применение Flg22 с целлобиозной добавкой у сои на стадии V4-V6
Увеличенная урожайность - Испытания для исследования урожайности на больших площадях
[0557] Сою для испытаний на больших площадях высаживали семенами сои без покрытия. Семена сои высаживали на глубину 1,5-2 дюймов (приблизительно 5 см) для обеспечения нормального развития корней. Сою высаживали на площадках размером 12,5' (3,8 м), в среднем по 150 500 растений на акр, при ширине рядов 30 дюймов (0,8 м) и расстоянием между семенами, позволяющим разместить 7-8 семян на фут (30 см).
[0558] Сою обрабатывали сельскохозяйственными композициями, содержащими агрокультурно эффективные количества композиций Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) и Flg22 из Aneurinbacillus thermoaerophilus, At.Flg22-B4 (SEQ ID NO: 300). Указанную обработку полипептидами Flg22 проводили путем опрыскивания листвы с рабочим расходом средств (в жидких унциях на акр, или мл/га), указанным в таблице 57, на сое, культивированной в пяти местоположениях на Среднем Западе США (участвующие участки: Айова и Иллинойс). Растения сои обрабатывали средствами для обработки листвы, содержащими Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226); Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) и At.Flg22-B4 (SEQ ID NO: 300) приблизительно на стадии развития V4-V6 с неионогенным поверхностно-активным веществом для облегчения растекания и поглощения средств (Alligare Surface™ в конечной концентрации 0,1% по объему от объема резервуара опрыскивателя). Собирали урожай 3 сортов сои (Asgrow: AG2733, AG3536 и AG4034) у растений, обработанных композициями с Flg22. Урожайность сои также регистрировали как изменение урожайности в бушелях на акр по сравнению с контрольными растениями сои, которые обрабатывали неионогенным поверхностно-активным веществом (обработка только Alligare Surface™ в конечной концентрации 0,1% (по объему) (таблица 57).
[0559] Внекорневое внесение полипептидов Bt.4Q7Flg22 и Syn01Flg22 также проводили в комбинации с целлобиозой в качестве добавки и исследовали эффект полипептидов Flg22 в комбинации с целлобиозной добавкой на увеличение урожайности. Целлобиоза представляет собой дисахарид глюкозы и строительный блок для полимера целлюлозы. Химически она представляет собой глюкоза-бета-1-4-глюкозу, редуцирующий сахар, который состоит из двух молекул β-глюкозы, соединенных β(1-4)-связью. Целлобиозу получают путем разложения целлюлозы или лихенина, и при гидролизе она дает глюкозу. Целлобиозная добавка в комбинации с Bt.4Q7Flg22 обеспечивала увеличение активности активных форм кислорода (АФК) у сои. Собирали урожай 3 сортов сои (Asgrow: AG2733, AG3536 и AG4034) у растений, обработанных композициями с Flg22, с добавлением или без добавления целлобиозной добавки, и регистрировали как среднюю урожайность (в бушелях на акр) для всех 3 сортов в разных местоположениях. Урожайность сои также регистрировали как изменение урожайности в бушелях на акр по сравнению с контрольными растениями сои, которые обрабатывали неионогенным поверхностно-активным веществом (обработка только Alligare Surface™ в конечной концентрации 0,1% по объему) (таблица 57).
Таблица 57. Урожайность сои при обработке листвы с применением разнообразных полипептидов Flg22
Концентрация средства
Рабочий расход средства в жидких унциях на акр (мл/гектар (га))
Среднее количество в бушелях на акр(5 местоположениях)
Изменение в бушелях на акр относительно обработанного поверхностно-активным веществом контроля
Отдельно неионогенное поверхностно-активное вещество
0,1% от объема спрея
61,36
-
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226)16,7 мкМ,Композиция 1
4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/га)
62,85
+1,49
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226)16,7 мкМ,Композиция 2
4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/га)
64,72
+1,56
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226)16,7 мкМ,Композиция 3
4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/га)
63,87
+2,51
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226): 16,7 мкМ,+ Целлобиоза: 320 мМКомпозиция 4
4,0 жидких унции на акр (292,3 мл/га), 8,0 жидких унций на акр(584,6 мл/га)
63,15
+1,79
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226)16,7 мкМ,Композиция 5
48,0 жидких унций на акр(3507,6 мл/га)
62,64
+1,28
Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571)16,7 мкМ,Композиция 6
4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/га)
63,12
+1,76
Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571)16,7 мкМ,Композиция 7
0,4 жидких унции на акр(29,2 мл/га)
62,88
+1,52
Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571)16,7 мкМ,+ Целлобиоза (320 мМ)Композиция 8
0,4 жидких унции на акр(29,2 мл/га),8,0 (584,6 мл/га)
63,92
+2,56
At.Flg22-B4 (SEQ ID NO: 300)16,7 мкМ,Композиция 9
4,0 жидких унции на акр(292,3 мл/га)
63,66
+2,30
[0560] Обработка листвы различными полипептидами Flg22, Bt.4Q7Flg22; Syn01Flg22 и At.Flg22-B4 (композиции 1-9) во всех случаях приводила к преимуществам в урожайности при применении у сои на стадии развития V4-V6 по сравнению с контрольными растениями сои, которые обрабатывали путем внекорневого внесения поверхностно-активного вещества по отдельности. Средство для обработки листвы с Bt.4Q7Flg22 (композиция 3) при расходе 4,0 жидких унции на акр приводило к увеличению на +2,51 бушеля на акр (168,8 кг/га) относительно контрольных растений (только поверхностно-активное вещество). Полипептид Syn01Flg22 (композиция 6), который наносили на растения сои в виде средства для обработки листвы с расходом 4,0 жидких унции на акр, приводил к приросту урожайности +1,76 бушелей на акр (118,4 кг/га) по сравнению с обработанными только поверхностно-активным веществом контрольными растениями. Syn01Flg22 (композиция 7) и Syn01Flg22 с целлобиозой (320 нМ) (композиция 8), которые наносили на растения сои с более низким рабочим расходом средства, 0,2 жидких унции на акр, приводили к увеличению +1 бушель на акр при добавлении целлобиозной добавки или к общему увеличению урожайности +2,56 бушелей на акр (172,2 кг/га) относительно контрольных растений. Полипептид At.Flg22-B4 (композиция 9) при применении у сои (V4-V6) также приводил к преимуществу в урожайности +2,3 бушелей на акр (154,7 кг/га) по сравнению с контрольными растениями или к преимуществу более 3,5 бушелей на акр (235,4 кг/га) по сравнению с растениями, которые обрабатывали только неионогенным поверхностно-активным веществом.
[0561] В еще одном исследовании средства для обработки семян с полипептидами Flg22 и комбинациями полипептидов Flg22 с целлобиозой использовали в качестве средств для обработки семян у сои, что приводило к общему увеличению урожайности в полевых испытаниях, регистрируемому как среднее значение для четырех повторных испытаний (таблица 58). Средства для обработки семян применяли у 1 гибрида сои (сорта), высаживаемого в 1 местоположении на Среднем Западе США (Колумбия, MO). Композиции для обработки семян с Flg22 применяли согласно описанию в таблице 58, с расходом 0,14 жидких унций на единицу семян сои в общей взвеси, и наносили на семена сои, покрытые основным средством для обработки семян, состоящим из Poncho VOTiVO 600 FS и Evergol Energy. Рабочий расход всех средств для обработки семян был одинаковым и составлял 0,14 жидких унций на акр, или 4,14 мл/единицу. Конечная концентрация полипептидов Flg22 во взвеси была стандартизирована, составляя 1 мкМ на семя. Такую же конечную концентрацию 1,0 мМ на семя использовали для целлобиозы, применяемой в комбинированных средствах с полипептидами Flg22. Четыре площадки-репликата для каждого варианта обработки семян располагали в местоположении случайным образом. Средняя урожайность в бушелях на акр и среднее изменение в бушелях на акр по сравнению с контрольными растениями, которые обрабатывали только основным средством для обработки семян, приведены в таблице 58. Наиболее существенное увеличение урожайности наблюдалось для Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) при применении в виде средств для обработки семян у сои в конечной концентрации 1,0 мкМ полипептидов Flg22, что приводило к соответствующим увеличениям средней урожайности на +5,11 (343,7 кг/га) и +9,92 (667,1 кг/га) относительно урожайности сои, которую обрабатывали основным средством для обработки семян.
Таблица 58. Комбинации для обработки семян с полипептидами Flg22 и вариантами полипептидов Flg22 с целлобиозой - соя
Средство для обработки листвы(Концентрация)
Средняя урожайность в бушелях на акр (Среднее изменение в бушелях на акр по сравнению с необработанным контролем)
Среднее изменение в бушелях на акр по сравнению с необработанным контролем
Контрольное основное средство для обработки семян
41,11
-
Bt.4Q7Flg22 в концентрации 1,0 мкМ(SEQ ID NO:226)
46,22
+5,11
Syn01Flg22 в концентрации 1,0 мкМ(SEQ ID NO: 571)
51,09
+ 9,92
Syn03Flg22 в концентрации 1,0 мкМ(SEQ ID NO: 573)
43,61
+2,50
Pa.Flg22Paenibacillus alveiв концентрации 1,0 мкМ(SEQ ID NO: 293)
41,39
+0,28
An,.Flg22Aneurillusbacillus в концентрации 1,0 мкМ(SEQ ID NO: 300)
46,01
+4,90
Flg22 вида Bacillus (Комбинация последовательностей Flg22)Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571, Flg22- B2 (SEQ ID NO:295) и Flg22-B4 (SEQ ID NO: 300), каждый в концентрации 0,33 мкМ
44,43
+3,32
Целлобиоза1 мМ
43,98
+2,87
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO:226) в концентрации 1,0 мкМ +Целлобиоза1 мМ
43,40
+2,29
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO:226) в концентрации 0,25 мкМ
43,80
+2,69
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO:226) в концентрации 0,25 мкМ +Целлобиоза1 мМ
43,52
+2,41
Пример 39: Применение RHPP у сои на стадии V5 увеличивало урожайность
[0562] Кукурузу для испытаний на больших площадях высаживали семенами (гибриды DEKALB: DKC 52-61, DKC 58-89 и DKC 65-81), содержащими средство для обработки семян с фунгицидом EVERGOL (7,18% пропиконазола, 3,59% пенфлуфена в комбинации с 5,74% металаксила) в комбинации с PONCHO/VOTiVO 500 (смесь инсектицида клотианидина и микробного агента, Bacillus firmus 1582). Растения кукурузы, приблизительно на стадии развития V5, обрабатывали путем внекорневого внесения сельскохозяйственной композиции, содержащей полипептид Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600). Состав с полипептидом Gm.RHPP (таблица 59) применяли у гибридов кукурузы с рабочим расходом средства 8,0 жидких унций на акр (584,6 мл/га) с 0,1% по объему (от объема резервуара опрыскивателя) неионогенного поверхностно-активного вещества (Alligare Surface™). В общей сложности испытание проводили в 6 местоположениях на Среднем Западе США (Иллинойс, Индиана, Айова), с 1-2 гибридами на местоположение и 3 площадками-репликатами на каждый гибрид. Собирали урожай кукурузы (в бушелях на акр) и регистрировали как среднюю урожайность (в бушелях на акр). Среднее изменение в бушелях на акр сравнивали с урожайностью растений, культивированных из обработанного поверхностно-активным веществом контроля, и регистрировали как комбинированную среднюю урожайность (в бушелях на акр) для 6 местоположений (в общей сложности 11 площадок-репликатов) и как общее изменение в бушелях на акр по сравнению с контрольными растениями. Результаты показаны в таблице 59.
Таблица 59. Обработка листвы с применением RHPP - увеличение урожайности кукурузы
Средство для обработки листвы, концентрация
Расход при нанесении
Средняя урожайность в бушелях на акр (Среднее изменение в бушелях на акр по сравнению с контролем, обработанным только поверхностно-активным веществом)
Обработанный поверхностно-активным веществом контроль (контроль)
-
206,15
Gm.RHPP (SEQ ID: 600)100 мкМ, консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
8,0 жидких унций на акр(584,6 мл/га)
209,67(+3,52; 64% вероятность успеха)
[0563] Обработка листвы растений полипептидом Gm.RHPP приводило к увеличенной урожайности у кукурузы по сравнению с растениями, которые обрабатывали поверхностно-активным веществом по отдельности. Средняя объединенная урожайность на 6 местоположениях для растений кукурузы, которые обрабатывали средством для обработки листвы с полипептидом Gm.RHPP была немного выше 209 бушелей на акр, тогда как у контрольных растений она составляла 206 бушелей на акр. Урожайность обработанных Gm.RHPP растений увеличивалась на 3,52 бушеля на акр, или на 220,9 кг/га по сравнению с урожайностью контрольных растений кукурузы (таблица 59).
Пример 40: Полипептид RHPP увеличивает число стручков у сои
-2
-1
[0564] Растения сои (сорт MorSoy) культивировали из семян, высаживая по 2 семени на контейнер в вегетационном помещении с контролируемыми условиями среды, в условиях поступления приблизительно 300 мкмоль с (фотонов света) при суточном свето-темновом цикле 13/11 и диапазоне температур 21°C днем/15°C ночью, до стадии развития V4. Затем растения помещали в условия длительного дня, включающие световой суточный цикл 16/8 и температуру 21-26°C, чтобы стимулировать ранее цветение и ускорить прогрессирование с переходом на репродуктивную (R) стадию роста. Когда растения сои достигали стадии развития R1, их обрабатывали средством для внекорневого внесения, содержащим полипептид Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) в конечной концентрации 300 нМ с 0,10% неионогенного поверхностно-активного вещества (NIS90:10; Precision Laboratories, LLC). Растения сои обрабатывали контрольным составом с Gm.RHPP и контрольным неионогенным поверхностно-активным веществом по отдельности. Контрольную обработку как Gm.RHPP, так и неионогенным поверхностно-активным веществом проводили у 18 растений для каждого варианта обработки. Каждое растение опрыскивали шестью равноудаленными струями сверху с расстояния приблизительно 15 см для полного покрытия листвы. После нанесения средств растения сои на стадии R1 возвращали в вегетационное помещение с контролируемой средой. Через 17 дней растения обрабатывали другим средством для обработки листвы с составом, включающим полипептид Gm.RHPP и неионогенное поверхностно-активное вещество, а также только неионогенным поверхностно-активным веществом. Стручки сои длиной более 1 мм подсчитывали на растениях через 31 день после первой обработки средством для опрыскивания листвы. Регистрируют среднее число стручков на растение и стандартное отклонение от общего среднего (таблица 60). P-значение (p<0,05 для значимости) рассчитывали на основании сравнения с применением парного t-критерия числа стручков у растений, которые обрабатывали средствами с Gm.RHPP или контрольным неионогенным поверхностно-активным веществом.
Таблица 60. Число стручков у культивированной в теплице сои через 31 день после обработки листвы RHPP
Концентрация средства
Подсчитанное число стручков(STDEV)
p-значение
Неионогенноеповерхностно-активное вещество (NIS90:10 контроль)0,01% (по объему)
1,07(+0,44)
0,0116
Gm.RHPP (SEQ ID: 591) + Поверхностно-активное вещество300 нМ
2,00(+1,22)
p-значение<0,05 соответствует статистической значимости
[0565] Внекорневое внесение полипептида Gm.RHPP на ранней репродуктивной стадии (R1) у растений сои приводило примерно к удвоению подсчитанного числа стручков по сравнению с растениями, которые обрабатывали контрольным неионогенным поверхностно-активным веществом.
Пример 41: Полипептиды Flg22 и RHPP увеличивают урожайность у томата и перца
[0566] Обработку средствами для внекорневого внесения с Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) проводили в виде экзогенного опрыскивания на стадии перед цветением и использовали для увеличения урожайности у томата и перца халапеньо.
[0567] Площадки малой площади устраивали так, чтобы имитировать условия коммерческого выращивания томатов. Культивирование растений томата сорта Roma начинали с рассады в теплице в течение 45 дней до высаживания в поле на 2 приподнятые грядки с расстоянием 2 фута (0,6 метров) между растениями, в среднем по 30 растений на грядку. Рассаду томата высаживали в почву на глубину три дюйма, когда температура почвы достигала 15,6°C. Растения томата культивировали на приподнятых грядках, закрытых черной пластиковой мульчей. Растения культивировали с использованием капельного орошения и удобрений (80 фунтов, или 36,3 кг азота; 100 фунтов (45,4 кг) фосфата и 100 фунтов (45,4 кг) поташа или калия), которые вносили в соответствии с рекомендациями для производителей на протяжении вегетационного периода для обеспечения оптимальных роста и урожайности растений. Небольшие приподнятые площадки были устроены так, чтобы имитировать плотность посадки, используемую коммерческими производителями, которые обычно высаживают 2600-5800 растений на акр в один ряд с расстоянием 45,7-76,2 см между растениями в ряду и центрами на расстоянии 1,5-2 м. [Orzolek et al., “Agricultural Alternatives: Tomato Production.” University Park: Penn State Extension, 2016].
[0568] Средства для обработки листвы с Bt.4Q7Flg22 и Gm.RHPP применяли на растениях томата непосредственно на ранней стадии цветения (первые цветы). Композицию для обработки листвы с полипептидом Bt.4Q7Flg22 наносили с рабочим расходом средства 4,0 жидких унции на акр (292,3 мл/гектар), а композицию для обработки листвы с полипептидом Gm.RHPP наносили с рабочим расходом средства 3,2 жидких унции на акр (234 мл/гектар) на растения томата в 10 галлонах воды на акр с 0,1% по объему неионогенного поверхностно-активного вещества (Alligare™ Surface). Обработанные Bt.4Q7Flg22 и Gm.RHPP растения сравнивали с контрольными растениями, которые не обрабатывали средством для обработки листвы. Растения обрабатывали в повторностях (с репликатами) по 6 растений, по три репликата на обработку. Определяли эффект средств для обработки листвы на урожайность томата и регистрировали результаты, нормированные по контролю, не обработанному опрыскиванием. Среднюю массу плода на растение томата регистрировали в таблице 61 как комбинированное среднее значение для 2 отдельных урожаев и среднее изменение в процентах массы плода по сравнению с контролем без обработки опрыскиванием.
Таблица 61. Обработка листвы высаженных весной томатов
Концентрация средства для обработки листвы
Средняя масса плода (граммов) на растение
Изменение в процентах массы плода по сравнению с контролем без обработки опрыскиванием
Контроль без обработки опрыскиванием
1369,9
_
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 3)
1487,8
+8,61%
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 591) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
1397,1
+1,99%
[0569] Применение средства для обработки листвы с полипептидом Bt.4Q7 Flg22 в концентрации 16,7 мкМ и при рабочем расходе средства 4,0 жидких унции на акр (292,3 мл/гектар) приводило к общему увеличению средней массы плода на растение, регистрируемой как суммарная масса в граммах, и изменению массы плода на +8,61% по сравнению с контролем без опрыскивания. Полипептид Gm.RHPP при применении в концентрации 100 мкМ и с рабочим расходом средства 3,2 жидких унции на акр (234 мл/гектар) также приводил к общему увеличению урожайности как средней массы плода (в граммах) на растение и изменению массы плода почти на +2% по сравнению с контролем без опрыскивания.
[0570] В другом исследовании средства для обработки листвы с полипептидами Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) применяли у растений перца халапеньо (Capsicum) на ранней стадии цветения (первые цветы). Небольшие площадки устраивали так, чтобы имитировать условия коммерческого выращивания перца халапеньо. Растения перца культивировали в течение 12 недель в контролируемым вегетационном помещении, а затем высаживали на открытый воздух на 2 приподнятые грядки, закрытые черной пластиковой мульчей с высокими водоудерживающими характеристиками, в почву с pH 5,8-6,6. Растения перца халапеньо высаживали на расстоянии 14-16 дюймов (38 см), с 16-24 дюймами (50 см) между растениями, приблизительно по 25 растений на грядку. Растения культивировали с использованием капельного орошения и удобрения, вносимого в соответствии с рекомендациями для производителей на протяжении вегетационного периода для обеспечения оптимальных условий для роста растений. Приподнятые площадки устраивали так, чтобы имитировать плотность посадки, используемую коммерческими производителями, которые обычно высаживают приблизительно по растений на акр (5 000-6 500 растений на акр, или 12 355-16 062 растений на гектар) в двойных рядах на расстоянии 35,6-45,7 см на грядках с центрами на расстоянии 5,0-6,5 футов (1,52-1,98 метров) (Orzolek et al., “Agricultural Alternatives: Pepper Production.” University Park: Penn State Extension, 2010).
[0571] Средства для обработки листвы с полипептидами Bt.4Q7Flg22 и Gm. RHPP наносили на перец халапеньо с рабочим расходом средств 2,0 жидких унции на акр (146,2 мл/гектар) и 4,0 жидких унции на акр (292,3 мл/гектар) для Bt.Flg22, и 3,2 жидких унции на акр (234 мл/гектар) для полипептид Gm.RHPP, в объеме для опрыскивания 10 галлонов воды на акр с 0,1% по объему неионогенного поверхностно-активного вещества (Alligare™ Surface). Обрабатывали по 6 репликатов растений, с тремя репликатами на каждую обработку. Репликаты со средней урожайностью на растение, на 50% выше или на 50% ниже медианной урожайности для указанного испытания исключали, как выпадающие значения. Средства для обработки листвы с полипептидом Bt.4Q7Flg22 и Gm.RHPP, применяемые у растений перца халапеньо, сравнивали с растениями, которые опрыскивали 10 галлонами на акр воды с 0,1% по объему неионогенного поверхностно-активного вещества (Alligare™ Surface) по отдельности.
[0572] Эффекты полипептидов Bt.4Q7Flg22 и Gm. RHPP, применяемых в качестве средств для опрыскивания листвы, на урожайность перца определяли для двух отдельно собранных с использованием метода одноразовой уборки урожаев. Число перцев и биомассу над поверхностью земли на растение нормировали по урожайности и биомассе контрольных растений перца, которые обрабатывали поверхностно-активным веществом по отдельности (таблица 62).
Таблица 62. Обработка листвы высаженных весной растений перца халапеньо
Средство для обработки листвы и расход
Средняя масса плода (граммов) на растение
Изменение в процентах массы плода по сравнению с обработанным поверхностно-активным веществом контролем
Обработанный поверхностно-активным веществом контроль (Alligare™ Surface; 0,1% по объему от объема спрея)
123,7
_
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7, консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 3)2 жидких унции/акр
184,1
+49%
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7, консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 3)4 жидких унции/акр
173,7
+40%
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 591) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)3,2 жидких унции/акр.
156,6
+27%
[0573] Полипептид Bt.4Q7Flg22 при применении в виде средства для опрыскивания листвы у растений перца халапеньо на стадии перед цветением обеспечивал существенное увеличение средней массы плода на растение, +49% для расхода 2 жидких унции на акр (146,2 мл/гектар) и +40% для расхода 4 жидких унции на акр (292,3 мл/га), по сравнению с обработанными только поверхностно-активным веществом контрольными растениями. Обработка полипептидом Gm.RHPP, также в виде средства для опрыскивания листвы на стадии перед цветением, также приводила к увеличению средней массы плода на растение перца халапеньо, с увеличением массы перца +27% в пересчете на растение по сравнению с плодами перца, собранными с обработанных только поверхностно-активным веществом контрольных растений.
Пример 42: Применение у тыквы - увеличенная урожайность
[0574] Средства для обработки листвы, содержащие полипептид Bt.4Q7Flg22 или Gm.RHPP, применяли экзогенно в виде средства для обработки листвы у тыквы-горлянки на первой стадии цветения. Средства для обработки листвы с полипептидами Bt.4Q7Flg22 и Gm.RHPP применяли у растений тыквы с рабочим расходом средства 2,0 жидких унции на акр (146,2 мл/гектар) или 3,2 жидких унции на акр (234 мл/гектар), соответственно, в объеме для опрыскивания 10 галлонов воды на акр с 0,1% по объему неионогенного поверхностно-активного вещества (AlligareTM 90). Сравнивали урожайность растений, обработанных полипептидами, по сравнению с обработанными только поверхностно-активным веществом контрольными растениями, используя по три репликата на обработку. Урожайность для получавших внекорневое внесение растений, которые обрабатывали полипептидом Bt.4Q7Flg22 или Gm.RHPP, регистрируют в таблице 63 как среднюю массу (в граммах) плодов тыквы на растение для двух урожаев на репликат и выражают в виде процентного изменения по сравнению с контрольными растениями. Репликаты со средней урожайностью на растение на 50% выше или на 50% ниже медианной урожайности для испытания исключали как выпадающие значения.
[0575] Растения тыквы культивировали в супесчаном грунте следующим образом. В накрытых пластиком грядках шириной 0,76 м делали отверстия размером 2,5 см, располагая их в двух рядах на каждой грядке на расстоянии 0,46 м в каждом ряду. Ряды на грядке располагали в шахматном порядке. Грядки располагались на расстоянии 1,2 м одна от другой. В каждое отверстие высевали по 3 семени тыквы и через 14 дней после посадки прореживали, чтобы оставить по 1 растению на отверстие. В центре каждой грядки были проложены трубки для капельного орошения, и растения поливали по мере необходимости.
Таблица 63. Обработка листвы композицией, содержащей полипептид Gm.RHPP, для увеличения урожайности у тыквы
Средство для обработки листвы и расход
Средняя масса плодов тыквы (в граммах) на растение
Изменение массы плода в процентах по сравнению обработанным только поверхностно-активным веществом контролем
Обработанный поверхностно-активным веществом контроль (Alligare™ 90; 0,1% по объему от объема спрея)
716,7
_
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7, консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 3)2 жидких унции/акр
748,4
+4,4%
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 591) 100 мкМконсервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)3,2 жидких унции/акр.
748,4
+4,4%
[0576] Обработка листвы как полипептидом Bt.4Q7Flg22, так и Gm.RHPP у растений тыквы на стадии перед цветением приводила к увеличению массы собранных плодов тыквы в среднем на 31,7 граммов на растение, или +4,4% изменению массы плода по сравнению с обработанными только поверхностно-активным веществом контрольными растениями (таблица 63).
Пример 43. Полипептид Flg22 уменьшает тяжесть белой пятнистости листьев у капусты кале
[0577] В испытании с повторностями в осеннем сезоне на капусте кале на Среднем Западе (Колумбия, Миссури), очень влажные и теплые условия роста приводили к развитию белой пятнистости листьев кале, как правило, вызываемой Cercospora brassicicola. Инфицированные растения кале ранее не получали средств для обработки листвы для предотвращения вызванного грибами заболевания. Для оценки тяжести заболевания устанавливали критерии оценки (по шкале от 1 до 5), где показатель 1=здоровое растение с тремя или менее белыми пятнами, вызванными грибом, 2=растение с 4 или более пятнами, часть листьев которого поражена заболеванием, 3=на большей части листьев наблюдаются симптомы и до 1 листа опало из-за заболевания, 4=на большей части листьев наблюдаются симптомы и 2-3 листа опали из-за заболевания; и 5=на большей части листьев наблюдаются симптомы и четыре или более листьев опали из-за заболевания. Один человек проводил оценку всех растений на одном участке испытаний, после чего растения, получавшие разную обработку, равномерно распределяли по показателю заболевания в таблице 64 для 6 блоков повторностей по 6 растений на обработку (в общей сложности=36 растений на обработку). Для тестирования Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) на улучшение симптомов заболевания у капусты кале проводили обработку в виде средства для опрыскивания листвы с указанным в таблице 64 расходом в объеме носителя (воды) 10 галлонов на акр, с 0,1% по объему неионогенного поверхностно-активного вещества (Alligare™ Surface). Через три недели после обработки листвы оценивали тяжесть заболевания у растений, используя те же критерии. Изменение показателя заболевания рассчитывали для каждого растения и определяли среднее изменение показателя заболевания для каждой обработки. Растения собирали через четыре дня после оценки тяжести заболевания и измеряли урожайность как массу растений (в граммах). Выпадающие значения для массы, либо на 50% ниже, либо на 50% выше медианной массы на испытание, исключали из набора данных.
Таблица 64. Обработка кале средствами для внекорневого внесения для смягчения белой пятнистости листьев.
Средство для обработки листвы (концентрация)
Рабочий расход средства в жидких унциях на акр(мл/гектар)
Изменение урожайности (Средняя масса растения в граммах) относительно контроля (%)
Среднее изменение показателя заболевания
Контроль, поверхностно-активное вещество по отдельности
н/п
14,6(100%)
Улучшение на 0,6 пункта
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (100 мкМ), 1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7, консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
12,0 жидких унций на акр (876,9 мл/гектар)
15,1(103%)
Улучшение на 1,1 пункта
Жидкий фунгицид с медью
Рекомендованный в инструкции расход (54,45 жидких унций/акр)
11,5(79%)
Улучшение на 1,1 пункта
Жидкий фунгицид с медью+Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)(100 мкМ), 1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7, консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
Рекомендованный в инструкции расход (54,45 жидких унций/акр)+12,0 жидких унций на акр (876,9 мл/гектар)
12,4(85%)
Улучшение на 0,8 пункта
[0578] Обработка листьев инфицированных растений кале готовым составом с Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) приводила к улучшению урожайности и симптомов заболевания относительно контроля (таблица 64). При средней массе растения у необработанного контроля 14,6 г, растения, обработанные путем внекорневого внесения Bt.4Q7Flg22, имели среднюю массу 15,1 г и характеризовались средним улучшением показателей заболевания на 0,5 пункта относительно контроля. Применение фунгицида с медью улучшало показатели заболевания у растений в той же степени, что и Bt.4Q7Flg22, однако снижало урожайность на 21% (11,5 г) по сравнению с контролем. Комбинированная обработка фунгицидом с медью и Bt.4Q7Flg22 увеличивало урожайность до 12,4 г на растение, однако в целом Bt.4Q7Flg22 по отдельности обеспечивал максимальное преимущество для урожайности и состояния здоровья растений в указанном испытании. Таким образом, полипептиды Flg22 могут применяться для замедления прогрессирования грибной инфекции у овощных культур и увеличения урожайности в стрессовых условиях культивирования.
Пример 44: Скрининговые анализы АФК для определения совместимости полипептида Flg22 со средствами для обработки семян
8
8
[0579] Средства для обработки семян исследовали на совместимость с получением апопластических активных форм кислорода (АФК) в тканях черешка кукурузы. Различные коммерчески доступные средства для обработки семян исследовали на совместимость с полипептидом Flg22 (Bt.4Q7Flg22; SEQ ID NO: 226), который, как было показано, увеличивает урожайность при применении по отдельности в виде средства для обработки семян кукурузы. Анализы активности АФК проводили на образцах черешков кукурузы гибрида 5828 YX согласно описанию в примере 15, за исключением того, что относительные световые единицы (RLU) регистрировали с помощью люминометра SpectraMax L (интеграция 0,5 с; интервалы 2,0 мин) на протяжении периода времени 40 минут.Bt.4Q7Flg22 в варьирующих концентрациях (0 и 1000 мкМ) комбинировали с тремя коммерческими средствами для обработки семян, состоящими из PPST 2030 (комбинация бактерий, 5×10 КОЕ/мл Bacillus subtilis и 5×10 КОЕ/мл Bacillus pumilis), ILEVO (48,4% флуопирам) и PONCHO/VOTiVO (смесь 40,3% клотианидина и микробного агента, Bacillus firmus I-1582) и тестировали на наличие АФК-ответа в черешках кукурузы. Все три средств для обработки семян согласно описанию применяли с рабочим расходом средства на семя в соответствии с рекомендациями из индивидуальной инструкции по применению каждого средства для обработки семян. Строили стандартную кривую для варьирующих концентраций полипептида Bt.4Q7Flg22 для получения логарифмической корреляции между RLU и концентрацией Flg22 с R2=0,90. Значения RLU представлены средним для 4 отдельных измерений (4 обработанных лунки на каждом планшете); общее увеличение АФК (RLU) (кратность увеличения относительно фона) приведено в круглых скобках (таблица 65).
Таблица 65. Исследование совместимости средств для обработки семян с полипептидом Flg22 с применением анализа на АФК
Средство для обработки семян
Фон
1 мкМ Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226) (концентрированное ST)(Кратность увеличения (X) относительно фона)
1 мкМ Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)(ST в 1:10 разведении)(Кратность увеличения (X) относительно фона)
PPST 2030
15952,2
109313,7(6,9X)
96129,9(6,0X)
ILeVO
84716,9
548686,2(6,5X)
382365,1(4,5X)
PONCHO/VOTiVO
17379,7
120788,9(6,9X)
267720,2(15,4X)
[0580] Продуцирование АФК по оценке на основании значений RLU увеличивалось при добавлении 1 мкМ Bt.4Q7Flg22 в комбинации с каждым из средств для обработки семян согласно описанию в таблице 65. Продуцирование АФК (значения RLU) при 1:10 разведении средств для обработки семян (ST) с добавлением 1 мкМ Bt.4Q7Flg22 также увеличивалось по сравнению с фоновым уровнем RLU для средства для обработки семян по отдельности или при отсутствии полипептида Bt.4Q7Flg22. Разведенное средство для обработки семян PONCHO/VOTiVO в комбинации с 1 мкМ Bt.4Q7Flg22 обеспечивало более чем 15X увеличение по сравнению с фоном, или 2,2X увеличение по сравнению с обработкой неразбавленным средством PONCHO/VOTiVO в расчете на семя в соответствии с рекомендациями в инструкции по применению препарата. Соответственно, полипептид Flg22 может быть детектирован с помощью анализа на АФК в комбинации с стандартным основным средством для обработки семян при заявленном для указанного средства расходе. При комбинировании таких полипептидов Flg22 с определенными средствами для обработки семян может быть рассмотрена коррекция либо концентрации полипептида, либо концентрации средства для обработки семян для обеспечения оптимального АФК-ответа у растения. Указанные результаты демонстрируют активность полипептидов Flg22 у растений в присутствии других комплексных средств для обработки семян на сегодняшнем рынке.
Пример 45: Комбинации пептидов Flg22 и FlgII-28 для увеличения активности АФК у томата
[0581] В отдельном исследовании полипептиды Flg22 и FlgII-28, происходящие из разных областей флагеллинового белка, тестировали по отдельности и в комбинации на совместимость ответа в листьях томата. Хотя и Flg22, и FlgII-28 оба представляют собой ассоциированные с микробами молекулярные паттерны (МПМП), их могут отдельно распознавать флагеллин-чувствительные рецепторы 2 (FLS2) и флагеллин-чувствительные рецепторы 3 (FLS3), соответственно (Hind et al., 2016; Nature Plants 2:16128), и взаимодействия могут отличаться у разных видов растений. Ряд полипептидов Flg22 (Bt.4Q7Flg22, SEQ ID NO: 226; Bt.4Q7Flg22-Syn01, SEQ ID NO: 571; и Ec.Flg22, SEQ ID NO: 526) сравнивали с применением анализов активности АФК у томата с несколькими полипептидами FlgII-28 (Ps.tomatoFlgII-28, SEQ ID NO: 751; A.sp.FlgII-28, SEQ ID NO: 375).
[0582] С растений томата возрастом 4 недели срезают листья, и с использованием пробкового бура из листьев вырезали диски размером 4 мм. Каждый диск разрезали пополам бритвенным лезвием, после чего каждую половину диска помещают на поверхность 150 мкл воды в лунке 96-луночного планшета и оставляют на ночь. На следующий день непосредственно перед обработка полипептидами воду из всех лунок удаляли. Полипептиды Flg согласно описанию в таблице 66 добавляли в воду до получения конечных концентраций 5 нМ (таблица 67) и 100 нМ (таблица 68) в растворе с люминолом и HRP перед добавлением в каждую лунку для обработки. Для сохранения активности полипептиды хранили в небольших аликвотах, чтобы избежать многократного замораживания и размораживания. Все разведения для получения рабочих концентраций проводили в ультрачистой воде. Растворы полипептидов хранили при -20°C в случае краткосрочного хранения или -80°C в случае долгосрочного хранения. Значения RLU и относительную активность АФК (таблицы 67, 68) регистрировали как среднее для 4 измерений. Анализы активности АФК проводили с применением способов, ранее описанных в примере 15, за исключением того, что относительные световые единицы (RLU) регистрировали с помощью люминометра SpectraMax L (интеграция 0,5 с; интервалы 2,0 мин) на протяжении периода времени 40 минут.
Таблица 66. Полипептиды Flg22 и FlgII-28 из различных источников
Описание полипептида Flg
Длина последовательности аминокислот
Последовательность
Bt.4Q7Flg22Bacillus thuringiensis(SEQ ID NO: 226)
22
DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
Syn01Flg22,Синтетический(SEQ ID NO: 571)
22
DRLSSGKRINSAKDDAAGLAIA
Ps.tomato FlgII-28Pseudomonas syringae, патовар tomato DC3000(SEQ ID NO: 751)
28
ESTNILQRMRELAVQSRNDSNSATDREA
Ec.Flg22Escherichia coli(J26)(SEQ ID NO: 526)
22
ERLSSGLRINSAKDDAAGQAIA
A.sp.FlgII-28Aneurinibacillus sp.XH2(SEQ ID NO: 300)
28
EIHEMLQRMRELAVQAANGTYSDKDKKA
Таблица 67. Сравнение активности АФК для полипептидов Flg22 и FlgII-28 в ткани листа томата
Средство с полипептидом
Среднее значение RLU (5 нМ полипептид Flg)(Кратность увеличения (X) относительно обработки Bt.4Q7Flg22)
Отрицательный контроль (вода)
24423(0,7 X)
Bt.4Q7Flg22Bacillus thuringiensis(SEQ ID NO: 226)
33118(-)
Bt.4Q7Flg22-Syn01,Синтетический(SEQ ID NO: 571)
116751(3,5 X)
Ps.tomatoFlgII-28Pseudomonas syringae, патовар tomato(SEQ ID NO: 751)
1019995(30,8 X)
Ec.Flg22Escherichia coli(SEQ ID NO: 526)
426307(12,9 X)
Aneurinibacillus.sp.FlgII-28(SEQ ID NO: 375)
32980(1,0 X)
Таблица 68. Полипептиды FlgII-28 из грамотрицательной бактерии Pseudomonas syringae, патовар Tomato DC3000, и грамположительной бактерии Aneurinibacillus sp.XH2 запускают продуцирование АФК в ткани листьев томата
Концентрация средства с полипептидом
Среднее значение RLU для 100 нМ полипептида Flg (Кратность увеличения (X) относительно обработки Bt.4Q7Flg22)
Отрицательный контроль (вода)
15 824 (0,007X)
Bt.4Q7Flg22Bacillus thuringiensis(SEQ ID NO: 226)100 нМ
2 118 932 (-)
Ps.tomatoFlgII-28Pseudomonas syringae, патовар Tomato DC3000(SEQ ID NO: 751)100 нМ
3 657 810 (1,7X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226; 100 нМ) +Ps.tomatoFlgII-28(SEQ ID NO:751; 100 нМ)
4 222 426 (2,0X)
Aneurinibacillus.sp.FlgII-28(SEQ ID NO: 375)100 нМ
2 844 947 (1,3X)
[0583] По результатам в таблице 67 и таблице 68 было определено, что второй эпитоп флагеллина, называемый FlgII-28 и происходящий из либо грамотрицательной Pseudomonas syringae, патовар tomato DC3000, либо грамположительной Aneurinibacillus sp.XH2 (SEQ ID NO: 375), является достаточным для запуска иммунного ответа (например, продуцирования АФК) у томата (SEQ ID NO: 751) в концентрациях и 5 нМ, и 100 нМ. В концентрации 5 нМ Ps.tomato FlgII-28 характеризовался самой высокой активностью по сравнению с другими полипептидами Flg22 и FlgII-28, и приводил почти к 31-кратному увеличению RLU по сравнению с Bt.4Q7Flg22 в той же концентрации, тогда как 5 нМ A.spp.FlgII28 обеспечивал равный низкий АФК-ответ на 5 нМ Bt.4Q7Flg22. Полипептид Flg22 (Ec.Flg22; SEQ ID NO: 526) из грамотрицательной Escherichia coli также приводил к увеличенной активности АФК при применении на листьях томата, со значениями RLU в 12,9 X выше, чем для обработки Bt.4Q7Flg22 по отдельности. Полипептид Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) запускал очень слабый АФК-ответ в листьях томата в концентрации 5 нМ, однако обеспечивал выраженный ответ в концентрации 100 нМ. Ps.tomato FlgII-28, с другой стороны, обеспечивал сильный АФК-ответ по сравнению с отрицательным контролем (водой) в обеих протестированных концентрациях. Таким образом, листья томата демонстрировали увеличенную чувствительность к полипептидам Flg, происходящим из флагеллина грамотрицательных бактерий, таких как Ps.tomato FlgII-28 и Ec.Flg22. Кроме того, синтетический вариант Bt.4Q7Flg22, называемый Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571), обладал по существу увеличенной активностью (3,5 X) по сравнению с обработкой Bt.4Q7Flg22 при тестировании с концентрацией 5 нМ.
[0584] Как указано в таблице 68, комбинации полипептидов из грамположительной (Bt.4Q7Flg22; SEQ ID NO: 226) и грамотрицательной бактерии Ps.tomato FlgII-28 (Pseudomonas syringae, патовар tomato DC3000; SEQ ID NO: 751) могут применяться в качестве комбинированного средства для внекорневого внесения для увеличения продуцирования АФК относительно любой из обработок по отдельности, и усиления иммунитета растений к определенным патогенным организмам.
Пример 46: Синтетические полипептиды Flg22Syn01 и Flg-15Syn01 для увеличения активности АФК у кукурузы и сои
[0585] Получали усеченный вариант Syn01Flg22, происходящий из Bt.4Q и Flg22, в котором отсутствовали семь N-концевых аминокислот, что давало полипептид длиной 15 аминокислот с последовательностью nh2-RINSAKDDAAGLAIA-cooh. Указанный полипептид, называемый Bt.4Q7Syn01Flg15 (SEQ ID NO: 752), представляет собой полипептид, встречающийся в природе у грамотрицательных протеобактерий, но отсутствующий в последовательностях белков грамположительных бактерий. Коровая последовательность, необходимая для взаимодействия с рецептором, RINSAKDD, в укороченном полипептиде сохраняется, и, соответственно, вариант длиной 15 аминокислот, предположительно, будет активным в отношении запуска продуцирования АФК у растений. Для тестирования указанного предположения Syn01Flg15 сравнивали с Bt.4Q7Flg22 и Syn01Flg22 в анализах АФК как на кукурузе (таблица 69), так и на сое (таблица 70). Анализы активности АФК проводили с применением способов, ранее описанных в примере 15, за исключением того, что относительные световые единицы (RLU) регистрировали с помощью люминометра SpectraMax L (интеграция 0,5 с; интервалы 2,0 мин) на протяжении периода времени 40 минут.
Таблица 69. Варианты Flg22Syn01 и Flg15Syn01 обладают более высокой активностью, чем Bt.4Q7Flg22, в анализе активности АФК в ткани стебля кукурузы.
Концентрация полипептида Flg (нМ)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO:226)
Syn01Flg22(SEQ ID NO: 571)
Syn01Flg15(SEQ ID NO: 752)
100
33037(1X)
54888(1,6X)
Н.О.
10
6032(0,2X)
17660(0,5X)
14079(0,4X)
Относительную активность АФК нормировали по средним значениям RLU для Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226). Н.О.: значение не тестировали и, соответственно, относительное значение не определено.
[0586] В анализе активности АФК на кукурузе (таблица 69) Flg22 Syn01 (SEQ ID NO: 571) характеризовался максимальным АФК-ответом в ткани стебля кукурузы в концентрации как 100 нМ, так и 10 нМ, на что указывает относительная соответствующая активность 1,6X (100 нМ) и 0,5X (10 нМ) по сравнению с обработкой с применением Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), характеризующейся ослабленным АФК-ответом, 0,2X при концентрации 10 нМ. Укороченные варианты Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) или Syn01Flg15 (SEQ ID NO: 752) также демонстрировали больший АФК-ответ, 0,4X при концентрации 10 нМ, что в два раза больше относительной активности АФК для Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) при той же концентрации.
Таблица 70. Варианты Flg22Syn01 и Flg15Syn01 обладают более высокой активностью, чем Bt.4Q7Flg22 в анализе на АФК на ткани листьев сои
Концентрация полипептида Flg (нМ)
Относительная активность АФК Bt,4Q7Flg22(SEQ ID NO:226)
Относительная активность АФКFlg22Syn01(SEQ ID NO: 571)
Относительная активность АФКSyn01Flg15(SEQ ID NO: 752)
100
250 432(1X)
315 961(1,25X)
Н.о.
10
10,754(0,04X)
62,020(0,25X)
42,983(0,17X)
Относительную активность АФК нормировали по средним значениям RLU для Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226). Н.О.: показывает, что значение не тестировали и, соответственно, относительное значение не определено.
[0587] Сходным образом, в анализе активности АФК на сое (таблица 70) полученный синтетическим путем мутант Bt.4Q7Flg22, описанный как Bt.4Q7Flg22 Syn01 (SEQ ID NO: 571), также характеризовался максимальным АФК-ответом в ткани листьев сои в концентрации как 100 нМ, так и 10 нМ, на что указывает относительная соответствующая активность 1,25X (100 нМ) и 0,25X (10 нМ) по сравнению с обработкой с применением Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), характеризующейся очень ослабленным АФК-ответом, 0,04X, при концентрации 10 нМ. Укороченные варианты Syn01Flg22 или Syn01Flg15 также демонстрировали больший АФК-ответ, 0,17X при концентрации 10 нМ, что в 4 раза выше относительной активности АФК для Bt.4Q7Flg22 при той же концентрации.
[0588] В целом, Syn01Flg22 характеризовался более высокой активностью АФК в обеих протестированных концентрациях в тканях как кукурузы, так и сои по сравнению с Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226). Укороченный полипептид размером 15 аминокислот Syn01Flg15 был в 2-4 раза активнее Bt.4Q7Flg22 и только незначительно менее активен, чем Syn01Flg22 размером 22 аминокислоты при концентрации 10 нМ, указывая на то, что в указанной последовательности сохраняют ключевые аминокислоты для стимуляции иммунного ответа растений.
Пример 47: Химическая модификация полипептидов Flg22 для увеличения активности АФК
[0589] Химические модификации могут быть внесены в полипептиды Flg22 для увеличения стабильности белка с защитой от протеолиза и/или содействия более продолжительной активности, что может приводить к большей доступности для рецептора FLS2. В целом, модификации полипептидов могут быть использованы для 1) стабилизации полипептида в неблагоприятных условиях или в присутствии протеаз, или 2) обеспечения дополнительных функциональных или молекулярных характеристик пептида. Модификации для улучшения стабильности включают циклизацию полипептидов и внесение изменений на N- и C-концах. Циклизация по типу «голова к хвосту» (т.е. образование амидной связи между N-концевым аминоконцом и C-концевым карбоксильным концом) приводит к получению жесткого полипептидного остова, противостоящего конформационным изменениям, часто стабилизирует связывание пептида с рецептором и защищает концы полипептида от экзопротеаз. В качестве альтернативы, модификация концов полипептида может стабилизировать полипептиды за счет нейтрализации (C-концевого амидирования) и предотвращения разложения N-конца (N-концевое ацетилирование). Увеличенную растворимость и стабильность полипептиду может также придавать конъюгация гидрофильной молекулы, такой как полиэтиленгликоль (ПЭГ).
[0590] Такие модификации, используемые для стабилизации полипептидов Flg22 включают пегилирование, циклизацию и амидирование/ацетилирование, все которых описан в таблице 71. Стабилизацию полипептидов с применением пегилирования проводят путем связывания полипептида с полиэтиленгликолем (ПЭГ). После связывания с полипептидом каждая субъединица ПЭГ находится в тесной связи с 2-3 молекул воды, что, соответственно, повышает растворимость указанного полипептида, а также увеличивает общую структуру, делая его менее подверженным протеолитическому разложению и более доступным для мембранного рецептора FLS2 на поверхности растения. Может также применяться циклизация для повышения стабильности полипептида Flg. Стабилизация полипептида может быть также достигнута путем N-концевого ацетилирования и C-концевого амидирования, причем указанные модификации обеспечивают большее сходство с природным белком и, соответственно, могут увеличивать биологическую активность указанного полипептида.
Таблица 71. Модифицированные полипептиды Flg22
Описание пептида(Код идентификации)
Модификация
MW
Последовательность
Bt.4Q7Flg22(модифицированная SEQ ID NO: 226)
Происходящая из природной последовательность из Bacillus thuringiensis
2229,42
nh2 DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA conh2
Bt.4Q7Flg22 Mod-1(модифицированная SEQ ID NO: 226)
N-концевое ацетилированиеC-концевое амидирование
229,3
Ac DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA nh2
Syn05Flg22(модифицированная SEQ ID NO: 578)
Замена аминокислоты (A16P)N-концевое ацетилированиеC-концевое амидирование
2255,46
Ac DRLSSGKRINSASDDPAGLAIA nh2
Syn05Flg22-PEG4(модифицированная SEQ ID NO: 578)
Пегилированиеконъюгация с Flg22 перед амидной связью
2461
peg4 (где х=4) DRLSSGKRINSASDDPAGLAIA conh2
Syn05Flg22-Cyc(модифицированная SEQ ID NO: 578)
Циклизация по типу «голова к хвосту»
2196
Cyc(DRLSSGKRINSASDDPAGLAIA)
[0591] Специализированные модифицированные полипептиды согласно описанию в таблице 71, в том числе Syn05Flg22-Syn05 (J36), Syn05Flg22-PEG (J37) и Syn05Flg22-Cyc, синтезировали в центре молекулярных взаимодействий университета Миссури (Колумбия, Миссури, США), лиофилизировали с получением сухого порошка и подтверждали надлежащую MW и требуемую чистоту (>70%) с применением жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (ЖХ/МС) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), соответственно. Стандартные синтезированные полипептиды, в том числе Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и Bt.4Q7Flg22 Mod-1 (SEQ ID NO: 226; J41), получали от Genscript (Пискатауэй, Нью-Джерси, США). Все лиофилизированные полипептиды ресуспендировали в ультрачистой воде до концентрации 10 мМ и получали серийные разведения в ультрачистой воде с требуемой концентрацией для тестирования в анализах АФК у сои и кукурузы согласно описанию выше в примере 15.
[0592] Для получения образцов сои с растений на стадии V1-V3 (сорт Morsoy) срезали полностью раскрытые тройчатые листья. Вырезали листовые диски (4 мм) с применением пробкового бура и затем помещали на поверхность 150 мкл воды абаксиальной стороной вниз, на ночь перед проведением анализа на АФК, описанного выше.
[0593] Для получения образцов кукурузы получали надземную ткань из растений кукурузы на стадии V1-V4 (гибрид Beck's 5828 YX) согласно приведенному ранее описанию. Затем вырезанные кусочки листьев размером 1 мм помещали на поверхность 150 мкл воды на ночь.
[0594] Анализы активности АФК проводили с применением способов, ранее описанных в примере 15, за исключением того, что относительные световые единицы (RLU) регистрировали с помощью люминометра SpectraMax L (интеграция 0,5 с; интервалы 2,0 мин) на протяжении периода времени 40 минут.Сначала строили график зависимости относительных световых единиц (RLU) от времени, используя временную кинетику для каждой протестированной концентрации с последующим интегрированием для вычисления площади под кривой для вычисления общего продуцированного количества RLU. Затем для каждого полипептида, использованного у сои (таблицы 72-73) и кукурузы (таблица 74), строили график зависимости среднего общего количества RLU (n=4 образца на обработку) от концентрации полипептида.
[0595] Данные для каждой обработки аппроксимировали с использованием логарифмической регрессии или линейной регрессии с наилучшим приближением (R>0,80). С использованием регрессии с наилучшим приближением для каждого полипептида рассчитывали концентрацию, которая требуется, чтобы обеспечить продуцирование общего количества RLU 15 000 (кукуруза) или 50 000 (соя), и сравнивали % активности в каждом наборе данных с контрольной обработкой (таблицы 72-74).
Таблица 72. Модифицированные на N- и C-концах полипептиды Flg22-Bt запускают продуцирование активных форм кислорода у сои
Обработка(код)
Концентрация полипептида (нМ) для продуцирования в общей сложности 5×104 RLU
% активности (по сравнению с немодифицированным Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)
31,4
100,0%
Bt.4Q7Flg22 Mod-1(SEQ ID NO: 226)
29,6
106,14%
[0596] Концентрация полипептида Flg22, требуемая для обеспечения выходных значений RLU, составляющих 50 000 RLU для Bt.4Q7Flg22S Mod-1 (SEQ ID NO: 226) была ниже, чем для существующего Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), который, как было показано, обеспечивает прирост урожайности и придает защитные свойства растениям сои. Это показывает, что модификация Flg22 путем N-концевого ацетилирования и/или C-концевого амидирования не мешает связыванию полипептида с рецептором FLS2, и модификации могут быть использованы для получения более активного и/или стабильного варианта Flg22, на что указывает +6% увеличение активности Bt.4Q7Flg22S Mod-1 относительно Bt.4Q7Flg22 (таблица 72).
[0597] В Центре молекулярных взаимодействий Университета штата Миссури (Колумбия, Миссури) получали новые полипептиды с единственной заменой аминокислоты (A16P) по сравнению с немодифицированным полипептидом Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), которая приводила к получению полипептида Syn05Flg22 (SEQ ID NO: 578), который подвергали дополнительной модификации путем N-концевого пегилирования с получением Syn05Flg22-PEG (SEQ ID NO: 578) и циклизации по типу «голова к хвосту» с получением Syn05Flg22-Cyc (SEQ ID NO: 578). Проводили анализ на АФК у сои для оценки эффекта указанных двух дополнительных модификаций, а именно, N-концевого пегилирования и циклизации по типу «голова к хвосту», полипептида Flg22; результаты приведены в таблице 73.
Таблица 73. Модифицированные синтетические полипептиды Flg22-Bt запускают продуцирование активных форм кислорода у сои
Обработка
Концентрация полипептида (нМ) для продуцирования в общей сложности 5×104 RLU
% активности (по сравнению с Syn0Flg22; SEQ ID NO: 578)
Syn05Flg22(SEQ ID NO: 578)
89,8
100,0%
Syn05Flg22-PEG(SEQ ID NO: 578)
64,8
138,6%
Syn05Flg22-Cyc(SEQ ID NO: 578)
146,9
61,1%
[0598] В анализе на АФК у сои при сравнении относительной активности Syn05Flg22 (SEQ ID NO: 578) и двух модифицированных вариантов указанного полипептида пегилированный полипептид Syn05Flg22-PEG (SEQ ID NO: 578) требовал по существу меньшего количества указанного полипептида для достижения в общей сложности 50 000 RLU, что приводило к увеличенной на +38% активности по сравнению с непегилированным вариантом или Syn05Flg22 (SEQ ID NO: 578). Пегилирование N-конца пептида увеличивает гидрофильность указанного полипептида и может повышать аффинность в отношении пептид-связывающего кармана рецептора FLS2. Циклизованный вариант Syn05Flg22-Cyc (SEQ ID NO: 578), напротив, требовал большего количества полипептида в анализе активности АФК (+57,1 нМ) по сравнению с нециклизованным вариантом Syn05Flg22 для продуцирования в общей сложности 50 000 RLU в анализе на АФК у сои. Указанный результат предполагает, что циклизация полипептида Flg22 (Syn05Bt.4Q7Flg22-Cyc) может приводить к образованию более жесткого полипептидного остова, характеризующегося измененным связыванием с рецептором FLS2, таким образом для достижения эквивалентного АФК-ответа необходимо большее количество циклизованного пептида. Однако повышенная стабильность циклизованного полипептида в окружающей среде может компенсировать незначительное снижение активности.
Таблица 74. Модифицированные синтетические полипептиды Flg22-Bt запускают продуцирование активных форм кислорода у кукурузы
Обработка
Концентрация полипептида (нМ) для продуцирования в общей сложности 5×104 RLU
% активности (по сравнению с немодифицированным Syn05Flg22(SEQ ID NO: 578)
Syn05Flg22(SEQ ID NO: 578)
19,5
100,0%
Syn05Flg22-PEG(SEQ ID NO: 578)
15,0
130,3%
[0599] В анализе на АФК у кукурузы пегилированный вариант Syn05Flg22-PEG требовал по существу меньшего количества (почти на 5 нМ) указанного полипептида для достижения в общей сложности 15000 RLU, что обеспечивало увеличенную на +30% активности по сравнению с непегилированным вариантом или Syn05Flg22 (таблица 74).
[0600] Модификация полипептидов Flg22 (Bt) или Syn05Flg22 (Bt) путем N-концевого ацетилирования, N-концевого пегилирования, C-концевого амидирования и/или циклизации по типу «голова к хвосту» дает пептид, сохраняющий активность, по оценке на основании результатов анализов на АФК в тканях кукурузы и сои. Указанные полипептиды могут быть использованы для доставки дополнительно стабилизированного происходящего из Syn05Flg22 (SEQ ID NO: 578) варианта полипептида для сельскохозяйственного применения (путем внекорневого внесения, обработки семян, внесения в борозду при посадке, нанесения на рассаду или впрыскивания в ствол). Циклизация Syn05Flg22-Cyc может быть использована для повышения стабильности указанного полипептида, но она мешала активности АФК, предположительно, за счет влияния на аффинность указанного синтетического полипептида в отношении мембранного рецептора FLS2.
Пример 48. Совместимость адъюванта с полипептидами Flg22
[0601] Составы продуктов с полипептидами Flg22, как правило, могут включать противомикробные биостатические консерванты, такие как Proxel, и поверхностно-активные вещества. Соответственно, тестировали совместимость указанных типов адъювантов с применением анализов активности АФК для определения эффекта на отвечаемость на Flg22 в растворе при применении в комбинации с такими адъювантами. Консерванты Proxel в целом представляют собой биоциды широкого спектра действия для сохранения многих сельскохозяйственных продуктов, защищающие их от порчи бактериями, дрожжами и грибами. Поверхностно-активные вещества в целом также широко используют в сельскохозяйственных составах для улучшения проникновения многих агрохимических продуктов в растение для повышения эффективности. В указанном исследовании пять разных консервантов Proxel и два разных неионогенных поверхностно-активные вещества тестировали в составах в комбинации с Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) на эффективность генерации АФК-ответа с применением анализа активности АФК в листьях сои. Разные составы Proxel (Lonza) описаны ниже в таблице 75. Указанные составы Proxel смешивали с 40 мкМ полипептидом Flg22 в рекомендованном производителем в сопроводительной инструкции диапазоне расхода (Lonza), а затем разводили в анализе АФК до конечной концентрации полипептида 100 нМ и концентраций Proxel, указанных в таблице 75. Протестированные неионогенные поверхностно-активные вещества использовали в анализе АФК с расходом в диапазоне, рекомендованном индивидуальным поставщиком или производителем в сопроводительной инструкции. Средние для четырех образцов значения измерений RLU, полученных после проведения анализа АФК, снимали с использованием дисков из листьев сои согласно приведенному ранее описанию в примере 15, за исключением того, что относительные световые единицы (RLU) регистрировали с помощью люминометра SpectraMax L (интеграция 0,5 с; интервалы 2,0 мин) на протяжении периода времени 40 минут.Среднее для указанных 4 значений RLU приведено в таблице 76.
Таблица 75. Разные добавки PROXEL, используемые в качестве адъювантов в составах с полипептидами
Составы PROXEL
Химическое описание
PROXEL BD20
20% водная дисперсия 1,2-бензизотиазолин-3-она
PROXELBC
Водная дисперсия смеси 1,2-бензизотиазолин-3-она (BIT), 5-хлор-2-метил-4-изотиазолин-3-она (CIMT) и 2-метил-4-изотиазолин-3-она (MIT)
PROXELGXL
20% водный раствор дипропиленгликоля 1,2-бензизотиазолин-3-она
PROXELBN
Водная дисперсия 1,2-бензизотиазолин-3-она и 2-бром-2-нитропропен-1,3-диола
PROXEL AQ
Раствор 1,2-бензизотиазолин-3-она в воде
Таблица 76. Выходные значения RLU в анализах активности АФК в листьях сои с применением полипептида Flg22, введенного в состав с разными консервантами Proxel
Сравнение обработки с добавлением или без добавления консерванта PROXELКонцентрация
Средние значения RLU(Кратность увеличения относительно отрицательного контроля)
Ложнообработанный (водой) отрицательный контроль
4823
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226 в концентрации 100 нМ)(Без добавления консерванта PROXEL)
81887(17,0X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226 в концентрации 100 нМ) +PROXEL BD20 (0,0005988%)
89188(18,5X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226 в концентрации 100 нМ) +PROXELBD20 (0,00011976%)
105527(21,9X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226 в концентрации 100 нМ) +PROXELBC (0,0005988%)
136575(28,3X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226 в концентрации 100 нМ) +PROXELBC (0,00011976%)
92808(19,2X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226 в концентрации 100 нМ) +PROXELGXL (0,0002994%)
128410(26,6X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226 в концентрации 100 нМ) +PROXELGXL (0,0008982%)
101847(21,1X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226 в концентрации 100 нМ) +PROXELBN (0,0002994%)
91554(19,0X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226 в концентрации 100 нМ) +PROXELBN (0,00017964%)
105164(21,8X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226 в концентрации 100 нМ) +PROXELAQ (0,0005988%)
116634(24,2X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226 в концентрации 100 нМ) +PROXELAQ (0,0035928%)
98394(20,4X)
[0602] Все средства с консервантом Proxel согласно описанию в таблице 76 были совместимы при использовании в составах с полипептидом Flg22 (Bt.4Q7Flg22; SEQ ID NO: 226), на что указывают высокие значения RLU (кратность увеличения 19,0-28,3X относительно ложной обработки), по сравнению с контрольным полипептидом Bt.4Q7Flg2 без консерванта Proxel (кратность увеличения 17,0X относительно ложной обработки).
Таблица 77. Выходные значения RLU в анализах активности АФК в тканях листьев сои с применением полипептида Flg22 в составе с разными неионогенными поверхностно-активными веществами
Сравнение обработки с добавлением или без добавления поверхностно-активного веществаКонцентрация
Средние значения RLU(Кратность увеличения относительно отрицательного контроля)
Ложнообработанный (водой) отрицательный контроль
51288
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)52,2 нМЭквивалент: 4,0 жидких унции на акр в 10 галлонах воды/акр
350503(6,8X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)52,2 нМ +Silwet-L77 (0,025%)
142478(2,8X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)52,2 нМ +Silwet-L77 (0,10%)
163517(3,2X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)52,2 нМ +NIS90:10 (0,25%)
329295(6,4X)
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)52,2 нМ +NIS90:10 (0,5%)
295726(5,8X)
[0603] Все средства с (неионогенными) поверхностно-активного веществами согласно описанию в таблице 77 были совместимыми при смешивании в указанных концентрациях с полипептидом Flg22 (Bt.4Q7Flg22; SEQ ID NO: 226) в концентрации 52,2 нМ, эквивалентной рабочему расходу 4,0 жидких унции/акр композиции 1 (Bt.4Q7Flg22; SEQ ID NO: 226; 16,7 мкМ) в воде с расходом при опрыскивании 10 галлонов на акр. Кратность увеличения продуцирования АФК относительно ложнообработанного контроля была сопоставима для контрольного полипептида Bt.4Q7Flg2 без поверхностно-активного вещества (6,8X относительно контроля) и для полипептида Bt.4Q7Flg2 с неионогенным поверхностно-активным веществом NIS90:10 при использовании в количестве 0,25% по объему или 0,5% по объему от раствора для обработки (5,8-6,4X), или была немного ниже для полипептида Bt.4Q7Flg2 с Silwet-L77 при использовании в количестве 0,025% по объему или 0,1% по объему от раствора для обработки (2,8-3,2X). Silwet-L77 (Helena), неионогенное кремнийорганическое поверхностно-активное вещество, представлен в виде сополимера, обладающего улучшенными характеристиками смачивания и растекаемости при использовании в водных спреях. NIS90:10 (Precision Laboratories) представляет собой малопенящееся неионогенное поверхностно-активное вещество, усиливающее защиту и производительность сельскохозяйственных культур за счет увеличения площади покрытия раствором для опрыскивания и улучшения проникновения в целевую поверхность листьев. Оба неионогенные поверхностно-активные вещества в комбинации с Bt.4Q7Flg22 позволяли продуцирование АФК в ответ на полипептид Flg22 в целевых тканях листа (таблица 77), и, соответственно, они совместимы с полипептидом Flg22 для внекорневого внесения в полевых условиях.
Пример 49: Получение Bt.4Q7Flg22 с использованием способов ферментации и активации путем расщепления энтерокиназой для испытаний по предотвращению заболеваний у картофеля, чечевицы и цитрусовых деревьев
[0604] Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) был представлен в конформации, обеспечивающей стабилизацию указанного полипептида и усиление активности для альтернативного способа получения, а именно, бактериальной ферментации. Полипептид Bt.4Q7Flg22 был скомбинирован с сигналом секреции amyQ из альфа-амилазы Bacillus amyloliquefaciens), слитым с глутатион-S-трансферазой (GST) и последовательностью метки для расщепления энтерокиназой согласно описанию ниже: Сигнал секреции amyQ (альфа-амилаза Bacillus amyloliquefaciens) GST (Schistosoma japonicum)_Линкер_Сайт расщепления энтерокиназой_Bt.4Q7Flg22_Стоп-кодон (таблица 78).
Таблица 78. Клонирование Bt.4Q7Flg22 с последовательностями для увеличения стабильности и активности полипептида
Описание
Последовательности аминокислот
Сигнал секреции amyQ(Bacillus amyloliquefaciens)SEQ ID NO:769
MIQKRKRTVSFRLVLMCTLLFVSLPITKTSA
GST(Schistosoma japonicum)SEQ ID NO:770
MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPK
ЛинкерSEQ ID NO:771
GGGGGGS
Метка для расщепления энтерокиназой(Консенсусная мишень для расщепления бычьей энтерокиназой, протеазой легкой цепи)SEQ ID NO: 772
DDDDK
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)(Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7)
DRLSSGKRINSASDDAAGLAIA
ДНК, используемая для клонирования, из последовательностей сигнала секреции amy E, GST и Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), происходила из собственных внутренних библиотек; код штамма-продуцента=H101 (устойчивый к Хлорамфениколу)
Таблица 79. Клонирование Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) с последовательностями для увеличения стабильности и активности полипептида
Описание
Последовательность аминокислот
Сигнал секреции amyQ(Bacillus amyloliquefaciens)SEQ ID NO: 769
MIQKRKRTVSFRLVLMCTLLFVSLPITKTSA
GST(Schistosoma japonicum)SEQ ID NO: 770
MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPK
ЛинкерSEQ ID NO: 771
GGGGGGS
Метка для расщепления энтерокиназой(Консенсусная мишень для расщепления бычьей энтерокиназой, протеазой легкой цепи)SEQ ID NO: 772
DDDDK
Bt.4Q7Flg22-Syn01(SEQ ID NO: 226)(Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7)
DRLSSGKRINSAKDDAAGLAIA
ДНК, которую использовали для клонирования с последовательностей сигнала секреции amy E, GST и SynFlg22 (SEQ ID NO: 571), происходила из собственных внутренних библиотек. Код штамма-продуцента=H114 (устойчивый к тетрациклину)
Таблица 80. Клонирование тиониноподобного белка с последовательностью для секреции в ростовые среды для ферментации
Описание
Последовательность аминокислот
сигнал секреции amyQSEQ ID NO: 769(Bacillus amyloliquefaciens)
MIQKRKRTVSFRLVLMCTLLFVSLPITKTSA
Тиониноподобный белок(SEQ ID NO: 650)(Синтетический)
RTCESQSHRFKGPCSRDSNCATVCLTEGFSGGDCRGFRRRCRCTRPCVFDEK
[0605] Последовательности из таблиц 78, 79 и 80 клонировали в стандартный клонирующий вектор, содержащий ампициллиновый селективный маркер и либо хлорамфениколовый (Cm), либо тетрациклиновый (Tet) селективный маркер, который может быть реплицирован у E.coli и затем перенесен в штамм Bacillus subtilis K08 для продуцирования (коды штамма-продуцента: H101=amyQ-GST-EK-BtFlg22, H114=amyQ-GST-EK-BtFlg22-Syn01 и H117=H117=amyQ-Thionin-like). Продуцирование путем ферментации осуществляли начиная с ночной культуры в стерильной среде 2XYT (16 г бактотриптона, 10 г дрожжевого экстракта и 5 г NaCl на литр; pH доводили до 7,0) с 10 мкг/мл Cm или Tet, которую затем разводили свежей средой 2XYT с 10 мкг/мл Cm или Tet на следующий день. Продуцирование осуществляли в объеме среды 50 мл (качалочная колба) или 3 л (стеклянный биореактор) при постоянной температуре 30°C. Бóльшие объемы при масштабировании могут включать 5-1000 л+, в том числе до 30000 л). Бактериальный рост отслеживали до достижения культурой оптической плотности 0,6-1,0, после чего добавляли изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид (IPTG) до конечной концентрации 0,1-1,0 мМ для индукции продуцирования слитого белка GST-Bt.4Q7Flg22. Индуцированное продуцирование продолжали в условиях культивирования на протяжении еще 12-24 часов для получения слитого белка, секретируемого в ростовые среды. При секреции метка секреции amyQ отщепляется от слитого белка. Затем культуры центрифугировали при 5000×g в течение 20 мин и фильтровали через бутылочный вакуумный фильтр с размером пор 0,22 мкм для удаления бактериальных клеток. После этого собирали стерильный фильтрат и использовали в качестве средства для обработки листвы на растениях чечевицы и картофеля в испытаниях по предотвращению заболевания Sclerotinia (пример 50) или для впрыскивания в ствол цитрусовых деревьев для эрадикации и предотвращения симптомов заболевания HLB (пример 51).
[0606] После ферментации два варианта полипептидного продукта Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) использовали в испытаниях по предотвращению заболевания у картофеля и чечевицы, один без обработки энтерокиназы (фильтрат H101, неактивированный), а другой после активации с применением энтерокиназы для отщепления GST-метки, слитой с полипептидом Flg22 (активированный EK фильтрат H101). Для активации Bt.4Q7Flg22 добавляли 32 Ед (единицы) энтерокиназы (EK: энтерокиназа легкой цепи; New England BioLabs, Inc, продукт №P8070) на 1 мл фильтрата H101 с периодом инкубации в течение 2-3 часов при 30°C для ферментативного высвобождения Bt.4Q7Flg22 при отсоединении от сайта расщепления GST-EK с получением активированного освобожденного продукта, содержащего полипептиды Bt.4Q7Flg22 размером 22 аминокислоты. Для испытаний с впрыскиванием в цитрусовые деревья фильтрат H101 и фильтрат H114 были EK-активированы путем добавления 0,8 Ед легкой цепи энтерокиназы (New England Biolabs, Inc, продукт №P8070) на мл фильтрата с инкубацией в течение 3 часов при 30°C для ферментативного высвобождения полипептида Flg22. Для высвобождения тиониноподобного пептида, который был продуцирован без GST-метки, не требовалась активирующая обработка.
Пример 50: Предварительная обработка листвы полипептидами Bt.4Q7Flg22 защищает растения чечевицы и картофеля от вызываемой Sclerotinia стеблевой гнили (белой плесени)
[0607] Средства для обработки Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) исследовали на способность обеспечивать защиту растений чечевицы и картофеля против инфицирования и прогрессирования заболевания, вызванного штаммом Sclerotinia sclerotorium MT07 (белая плесень). Изучали три разных варианта полипептидов Bt.4Q7Flg22 в исследованиях для оценки заболевания, состав с Bt.4Q7Flg22 (100 мкМ) в натрий-фосфатном буфере, pH 5,7, и два разных варианта Bt.4Q7Flg22, продуцированных с применением способов ферментации согласно описанию (пример 49), используемых с активацией и без активации Flg22 энтерокиназой (EK) и называемых фильтратом H101.
[0608] До применения указанных трех вариантов указанных полипептидов в анализах защиты от заболевания у растений чечевицы и картофеля выполняли анализ активности АФК в тканях черешков кукурузы с применением способов, описанных ранее в примере 15, для подтверждения того, что фильтрат H101 Bt.4Q7Flg22, в частности, обработанный EK, был активен. Активацию фильтратами H101 Bt.4Q7Flg22 без энтерокиназы и с энтерокиназой (EK=8 Ед/мл фильтрат) сравнивали с активацией синтетическим Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), который использовали для получения ряда сравнений концентраций для прогнозирования концентраций Flg22 в фильтратах H101, полученных с применением процедур ферментации.
Таблица 81. Анализ активности АФК с применением Flg22, продуцированного путем ферментации, с активацией и без активации энтерокиназой у кукурузы
Концентрация полипептида Flg22
Среднее значение RLU при обработке полипептидами Flg22
Изменение (X) количества RLU для полипептида Flg22 По сравнению с отрицательным контролем
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)(1,0 нМ)
6851
0,8X
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)(5 нМ)
9389
1,1X
Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)(25 нМ)
12157
1,4X
Bt.4Q7Flg22(ферментативный фильтрат H101) с (+) энтерокиназой, 8 Ед/мл (0,1% по объему)
25212
3,0X
Bt.4Q7Flg22 (ферментативный фильтрат H101) без (-) энтерокиназы (0,1% по объему)
16891
2,0X
Значения RLU регистрируют как среднее для 4 отдельных измерений после вычитания фоновых уровней RLU.
[0609] Оба продуцированных путем ферментации фильтрата H101 Bt.4Q7Flg22, активированный и неактивированный EK, обеспечивали более высокую активность АФК (значения RLU), чем контроль (0 нМ Bt.4Q7Flg22). Фильтраты H101 Bt.4Q7Flg22 (0,1% по объему) после обработки EK, нанесенные на стебли кукурузы в анализе на АФК, обеспечивали 3,0X увеличение значений RLU по сравнению с контрольной обработкой без какого-либо полипептида Flg22, и АФК-ответ был выше, чем для Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) в концентрации 25 нМ; соответственно, расчетная активность Bt.4Q7Flg22 в неразведенном EK-активированном фильтрате составляла ≥ 25 мкМ. Обработка продуцированными путем ферментации фильтратами H101 Bt.4Q7Flg22 без EK все же обеспечивали более высокую активность АФК (2,0X RLU) относительно обработки для отрицательного контроля, но увеличение значений RLU было меньше, чем для фильтратов H101 Bt.4Q7Flg22 с EK. После подтверждения активности фильтратов H101 в анализах АФК (таблица 81) их оценивали в исследованиях по защите от заболеваний на картофеле и чечевице.
[0610] Различные составы с Bt.4Q7 полипептиды Flg22 применяли у растений чечевицы и картофеля, проводя предварительную обработку листвы растений за 48 часов до инокуляции грибом Sclerotinia sclerotorium, в комбинации с фунгицидом и без фунгицида (Endura, активный ингредиент 70% боскалид), эффективным для лечения и защиты растений от инфекции гриба Sclerotinia (белая плесень). Составы с Bt.4Q7Flg22 тестировали с использованием модели заболевания сельскохозяйственных культур (Университет штата Монтана, консультационная служба по защите сельскохозяйственных культур) для изучения эффектов каждого из вариантов предварительной обработки листвы на предотвращение и защиту от заболевания и симптомов его развития. Все обработки, включая контроль (воду) проводили на растениях чечевицы и картофеля с использованием распылителя, подсоединенного к регулируемому воздушному компрессору с установленным выходным давлением на распылитель 50 фунтов/кв. дюйм. После предварительной обработки растения инокулировали Sclerotinia sclerotorium с использованием мицелиальной пробки (агаровая пробка, покрытая мицелием), которую прикладывали стороной с мицелием к стеблю растений, и помещали во влажные камеры (100%) на заданное время.
Чечевица
-2
-1
[0611] Растения чечевицы (сорт Pennel) культивировали на беспочвенной среде, состоящей из смеси 1:1 торфяного мха и перлита в контейнерах 4'4', по одному растению на контейнер, в течение 24 дней в контролируемой ростовой камере в следующих ростовых условиях: 300-400 мкмоль м с (световых фотонов) при суточном свето-темновом цикле 13/11 и диапазоне температур 21°C днем/15°C ночью. Исследования заболевания включали пять растений чечевицы на каждое из шести разных средств для обработки листвы, с 6 репликатами растений на обработку, в общей сложности по 30 растений на каждое средство для обработки листвы согласно описанию в таблице 35. Все средства для обработки листвы, применяемые для предварительной обработки, наносили с добавлением неионогенного поверхностно-активного вещества (ALLIGARE SURFACE; Alligare, LLC) до конечной концентрации 0,1% (по объему), или концентрации алкилполиоксиэтилена, гликолевых производных. Каждую обработку Bt.4Q7Flg22, и в виде готового состава, и полученного путем ферментации Bt.4Q7Flg22, проводили с рабочим расходом средства 0,1% (по объему) или 300 мкл продукта на 300 мл воды; на каждое растение подавали эквивалентное число струй для полного покрытия листвы, используя по 8 мл каждого средства для обработки у всех 30 растений на обработку. Предварительную обработку фунгицидом Endura проводили в объеме, эквивалентном рабочему расходу средства 11 жидких унций на акр (803,8 мл/га), следуя инструкциям по применению в инструкции по применению препарата. Обработки рандомизировали с использованием блочной рандомизации с полностью случайным распределением. Приблизительно через 48 часов после предварительной обработки растения инокулировали штаммом Sclerotinia sclerotorium, выделенным локально в Монтане, с использованием мицелиальной пробки (агаровая пробка, покрытая мицелием), которую прикладывали стороной с мицелием к стеблю растений. Затем растения чечевицы помещали во влажную камеру (100%) на период 72 часа. Через 11 дней после инокуляции оценивали и присваивали показатель симптомам заболевания, и определяли среднюю сырую массу (общая масса каждого репликата - граммы) (таблица 82). Растения оставляли для высушивания приблизительно на 3 недели, а затем определяли сухую массу (общая масса на репликат - граммы) (таблица 82)
[0612] Определение показателей заболевания (показатели заболевания по балльной шкале 0-7), сырую массу и сухую массу (в граммах) собирали для каждого репликата из пяти растений, а затем усредняли по общему числу растений (n=30). Показатели заболевания выставляли в баллах по шкале от 0-7, где показатель, равный 0, эквивалентен отсутствию заболевания, а показатель, равный 10, означает, что ни одно растение не выжило (таблица 82).
Таблица 82. Оценка заболевания у чечевицы через 10 дней после инфекции Sclerotinia sclerotiorum
Обработка
Показатели заболевания по балльной шкале 0-7 (STDEV)
Средняя общая сырая масса на растение (граммы)(STDEV)
Средняя общая сухая масса на растение (граммы)(STDEV)
Контроль (вода)
2,83(±1,84)
4,52(±1,18)
0,95(±0,21)
Фунгицид Endura
0,50(±0,84)
2,89(±0,30)
0,68(±0,05)
Готовый состав с Bt.4Q7Flg22
1,33(±0,82)
5,44(±0,48)
0,99(±0,07)
Фунгицид Endura +Готовый состав с Bt.4Q7Flg22
1,0(±0,89)
4,95(±0,59)
0,96(±0,05)
Неактивированный фильтрат H101
2,17(±1,47)
4,51(±0,93)
0,85(±0,06)
Активированный EK фильтрат H101
2,17(±1,33)
6,11(±0,69)
1,09(±0,11)
p-значение<0,1 означает наличие статистически значимого различия между обработками и контролем (водой).
[0613] Внекорневое внесение готового состава с Bt.4Q7Flg22 сравнивали с фунгицидом Endura, с фунгицидом Endura в комбинации с готовым составом с Bt.4Q7Flg22 и двумя средствами с Bt.4Q7Flg22, содержащими полипептиды Flg22, полученные путем реакций ферментации с активацией и без активации EK согласно приведенному ранее описанию в таблице 82. Все средства для обработки листвы в модели заболевания сельскохозяйственных культур сравнивали друг с другом и с обработанными контролем (водой) растениями, и оценивали появление симптомов заболевания через 11 дней после инокуляции. Каждому растению присваивали показатель заболевания от 0 до 7. Также определяли общую свежую и сухую массу (в граммах) на растение. Фунгицид Endura, коммерчески доступное средство для лечения от Sclerotinia sclerotium, обеспечивал наименьшее развитие симптомов заболевания у чечевицы при сравнении всех средств для обработки листвы, с показателем заболевания 0,50, при этом обработка водой (контроль) приводила к показателю заболевания 2,83. Внекорневое внесение готового состава с Bt.4Q7Flg22 у растений чечевицы приводило к увеличению устойчивости к Sclerotinia при показателе заболевания 1,33 (p-значение=0,0972), по сравнению с растениями, которые получали контрольную обработку водой. В отличие от обработки фунгицидов Endura, которая приводила к замедленному росту по сравнению с растениями, обработанными контролем (водой), обработка готовым составом с Bt.4Q7Flg22 приводила к продолжительному интенсивному росту в период раннего развития симптомов. У растений чечевицы, которые предварительно обрабатывали готовым составом с Bt.4Q7Flg22, средняя сырая масса составляла 5,44 граммов на растение, в отличие от растений, обработанных фунгицидом Endura по отдельности (2,89 г) или контролем (водой) (4,52 г). Комбинированная обработка фунгицидом Endura и готовым составом с полипептидом Bt.4Q7Flg22 дополнительно повышала защиту растений чечевицы от развития симптомов при показателе заболевания 1,0 (p-значение=0,0524), по сравнению с растениями, обработанными контролем (водой). Масса (свежая и сухая) растений, которые предварительно обрабатывали готовым составом с полипептидом Bt.4Q7Flg22, была выше, чем свежая или сухая масса растений, которые обрабатывали контролем (водой) или фунгицидом Endura по отдельности. Полипептиды Bt.4Q7 Flg22, полученные из продуктов ферментации (не активированные EK и активированные EK) характеризовались эквивалентными оценочными показателями симптомов заболевания 2,17, что ниже показателя заболевания у растений, получавших только контрольную обработку водой. Однако сырая масса на растение, обработанное активированным EK вариантом полипептида Bt.4Q7Flg22, было значимо выше, составляя 6,11 граммов (p-значение=0,0266), по сравнению с обработанными водой растениями. Активированный EK вариант полипептида Bt.4Q7Flg22 также характеризовался самой высокой общей свежей и сухой массой по сравнению со всеми другими обработками из таблицы 82. Другие важные результаты указанного исследования заключались в обнаружении того, что предварительная обработка растений чечевицы готовым составом с полипептидом Bt.4Q7Flg22 защищала чечевицу от повреждения, индуцированного фунгицидом. Средняя сырая масса растений, которые обрабатывали фунгицидом Endura, составляла 2,89 г, тогда как обработке готовым составом с Bt.4Q7Flg22 обеспечивала 5,44 г (p-значение=2,645×10-05). Продуцированный путем ферментации Bt.4Q7Flg22 содержал фермент энтерокиназу (EK), используемую для отщепления полипептида Bt.4Q7Flg22 от GST-EK-Bt.4Q7Flg22 согласно приведенному ранее описанию. Обработка чечевицы указанным фильтратом Bt.4Q7Flg22 обеспечивала увеличенную активность полипептида Flg22, приводя таким образом к значимому улучшению роста растений в периоде инфекции по сравнению с обработанными водой контрольными растениями (p-значение=1,180×10-05). Неактивированный EK, или GST-EK-Bt.4Q7Flg22, или неращепленный фильтрат Bt.4Q7Flg22 не усиливал рост растений по сравнению с растениями, которые обрабатывали только контролем (водой) (p-значение=0,9852).
Картофель
-2
-1
[0614] Семенной картофель (сорт: Russet Burbank) высаживали из фрагментов картофеля размером 2 см с выступающими «глазками» (по 1 фрагменту на контейнер) срезом вниз, на глубину приблизительно 7-8 см в беспочвенную среду, состоящую из смеси 1:1 торфяного мха и перлита в контейнеры 10×10 см. Культивировали по одному растению картофеля на на контейнер в течение 19 дней в контролируемой ростовой камере в стандартных условиях приблизительно с 300-400 мкмоль м с (световых фотонов) при суточном свето-темновом цикле 13/11 и диапазоне температур 21°C днем/15°C ночью. Через 19 дней после высаживания растения картофеля предварительно обрабатывали средствами для внекорневого внесения согласно описанию в таблице 36. Исследования заболевания включали по пять растений картофеля на каждое из шести разных средств для обработки листвы с 6 растениями-репликатами на каждую обработку, в общей сложности по 30 растений на каждое средство для обработки листвы согласно описанию в таблице 83. Все средства для обработки листвы, использованные для предварительной обработки, наносили на листья с добавлением неионогенного поверхностно-активного вещества (ALLIGARE SURFACE; Alligare LLC) до конечной концентрации, составляющей 0,1% (по объему), или концентрации алкилполиоксиэтилена, гликолевых производных. Каждую обработку Bt.4Q7Flg22 с применением готового состава и полученного путем ферментации продукта проводили с рабочим расходом средства 0,1% (по объему), или 300 мкл продукта в 300 мл воды, и на каждое растение подавали эквивалентное число струй для полного покрытия листвы, по 15 мл каждого средства для обработки для всех 30 растений на обработку. Применяли предварительную обработку фунгицидом Endura с рабочим расходом средства, эквивалентным 11 жидким унциям на акр (803,8 мл/га), следуя инструкции по применению препарата. Обработки рандомизировали с использованием блочной рандомизации с полностью случайным распределением. Приблизительно через 48 часов после предварительной обработки растения инокулировали Sclerotinia sclerotorium с применением мицелиальной пробки (агаровая пробка, покрытая мицелием), которую прикладывали стороной с мицелием к стеблю растений, и помещали во влажную камеру (100%) на 192 часа. Через 16 дней после инокуляции оценивали симптомы заболевания и присваивали им показатель, а также регистрировали среднюю сырую массу (общая масса стеблей - граммы) (таблица 83). Растения оставляли для высушивания на 12 дней, после чего регистрировали сухую массу (общая масса стеблей - граммы) (таблица 83).
[0615] Через 48 часов в растения картофеля инокулировали с применением мицелиальных пробок, помещенных на почву возле каждого растения, и помещали во влажную орошаемую камеру. Обработки рандомизировали с использованием блочной рандомизации. Показатели заболевания (по оценочной шкале с баллами от 0 до 6). Также определяли свежую и сухую массу стеблей (в граммах) для каждого растения, а затем усредняли по общему числу растений (n=30). Сухую массу стеблей определяли после полного высыхания растений приблизительно через 12 дней после сбора. Показатели заболевания оценивали через 16 дней после начальной инокуляции. Показатели заболевания выставляли в баллах по шкале от 0 до 6, где показатель, равный 0, эквивалентен отсутствию заболевания, а показатель, равный 6, означает, что ни одно растение не выжило.
Таблица 83. Оценка заболевания у растений картофеля через 15 дней после инфицирования Sclerotinia sclerotiorum
Обработка
Показатели заболевания по балльной шкале 0-6(STDEV)
Средняя свежая масса стеблей на растение (граммов; «г»)(STDEV)
Средняя сухая масса стеблей на растение (в граммах; «г»)(STDEV)
Контроль (вода)
2,83(+1,33)
96,01(+17,05)
12,08(+2,75)
Фунгицид Endura
0,50(+0,84)
110,98(+18,32)
16,86(+8,69)
Готовый состав с Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226)
1,83(+0,98)
113,37(+14,58)
15,01(+3,72)
Неактивированный фильтрат H101
2,33(+1,03)
98,08(+15,34)
12,96(+2,77)
Активированный EK фильтрат H101
1,83(+0,75)
117,76(+15,83)
17,66(+8,70)
p-значение<0,1 означает наличие статистически значимого различия между обработками и контролем (водой).
[0616] Сравнивали влияние предварительной обработки листьев с применением готового состава с Bt.4Q7Flg22 и полипептидов Bt.4Q7Flg22, происходящих из продуктов ферментации (фильтраты H101), на развитие симптомов заболевания у растений картофеля, обработанных фунгицидом Endura, и растений, получавших контрольную обработку водой. Внекорневое внесение готового состава с Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) в виде предварительной обработки растений картофеля приводило к показателю заболевания 1,83, в отличие от растений, которые обрабатывали контролем (водой) (показатель заболевания=2,83). Растения, которые предварительно обрабатывали фунгицидом Endura, характеризовались наименее выраженными симптомами заболевания с показателем заболевания 0,50 (p-значение=0,0045), в отличие от растений, обработанных контролем (водой). Предварительная обработка готовым составом с полипептидом Bt.4Q7Flg22 приводила к среднему показателю заболевания у растений, аналогичному показателю для активированного энтерокиназой Bt.4Q7Flg22 (активированный EK H101) в виде фильтрата (продукта ферментации); обе обработки характеризовались показателями заболевания 1,83. Неактивированный EK, или GST-EK-Bt.4Q7Flg22, или фильтрат Flg22 без обработки с расщеплением (неактивированный H101), которым обрабатывали растения, характеризовался показателем 2,33, который значимо не отличался от показателя заболевания у растений, обработанных контролем (водой) (p-значение=0,4835). При этом предварительная обработка растений картофеля активированным EK фильтратом Bt.4Q7Flg22 приводила к увеличенной средней свежей и сухой массе стеблей на растение относительно всех обработок, при увеличении сырой массы стеблей приблизительно на 20 г и увеличении сухой массы стеблей почти на 6 г на растение по сравнению с растениями, которые предварительно обрабатывали контролем (водой). Все растения, которые обрабатывали готовым составом с полипептидом Bt.4Q7Flg22, характеризовались увеличенной свежей и сухой массой стеблей в пересчете на одно растение по сравнению с растениями, которые получали контрольную обработку только водой.
Пример 51: Лечение инфекции Candidatus Liberibacter asiaticus Flg22 и противомикробными полипептидами
[0617] Составы с Bt.4Q7Flg22 применяли путем впрыскивания в ствол деревьев как апельсина «Валенсия» (Citrus sinensis), так и грейпфрута «Руби Ред» (Citrus×paradisi). Исследование проводили в коммерческой фруктовой роще, расположенной в центральной Флориде (округ Окичоби). Обработку путем впрыскивания с применением полипептида Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) в низкой концентрации 1X (0,55 мкмоль пептида; расчетная концентрация во флоэме 0,138 мкМ) и в высокой концентрации 10X (5,5 мкмоль пептида; расчетная концентрация во флоэме 1,38 мкМ) сравнивали с необработанными контрольными деревьями. Обработку путем впрыскивания осуществляли с использованием блочной рандомизации с полностью случайным распределением, на 10 деревьях грейпфрута (возрастом 4 года) на каждую обработку. Впрыскивание проводили в апреле (2017 г. ) на стадии первого прироста, от появления листьев до достижения ими полного размера. Впрыскивание в деревья грейпфрута проводили с применением устройства для впрыскивания низкого давления, BRANDTENTREE (BRANDT). Образцы листьев с каждого из деревьев грейпфрута собирали во время впрыскивания (0 день), на 21 и 56 дни после впрыскивания. В общей сложности выбирали по шесть образцов листьев на дерево для представления популяции листьев на дереве, в том числе возраста листьев, местоположения и наличия видимых симптомов. Каждую центральную жилку отделяли от листовой пластинки и сразу разрезали на кусочки очень маленького размера новым стерильным лезвием бритвы. Затем образцы листьев с каждого дерева помещали в индивидуальную пробирку, которую затем хранили в морозильной камере при -80°C до последующей обработки. Экстракцию ДНК и полимеразную цепную реакцию в реальном времени, или количественный ПЦР-анализ (кПЦР) на указанных листьях проводили в компании Southern Gardens Citrus (Кливистон, Флорида).
[0618] Наличие титров бактерий CLas у инфицированных HLB цитрусовых деревьев может быть определено с применением методов количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (кПЦР) со специфическими праймерами для подтверждения наличия заболевания (Li, W.B., Hartung, J.S. and Levy, L. 2008 “Optimized quantification of unculturable 'Candidatus Liberibacter spp.' In host plants using real-time PCR”, Plant Disease 92: 854-861). Экстракцию ДНК и количественный ПЦР-анализ (кПЦР) на указанных листьях выполняли в компании Southern Gardens Citrus (Кливистон, Флорида) с применением набора праймеров для HLB, нацеленного на 16S ДНК бактерий C. Liberibacter, 5'→3' (прямой): HLB TCGAGCGCGTATGCAATACG (SEQ ID NO: 773); (обратный) HLBr: GCGTTATCCCGTAGAAAAAGGTAG (SEQ ID NO: 774); HLBpc (зонд): AGACGGFTGAGTAACGCG (SEQ ID NO: 775), меченый интеркалирующим флуоресцентным репортерным красителем]. Проводили 40 циклов кПЦР и измеряли флуоресцентный сигнал, пропорциональный количеству дцДНК в растворе. Анализ кПЦР позволяет детектировать бактерии CLas в тканях цитрусовых растений. Для каждой обработки из анализа кПЦР получали значения порогового цикла (Ct). Показатель Ct представляет собой эквивалент числа циклов ПЦР, необходимого для получения относительного порогового значения. Согласно обычной для области молекулярной биологии практике изменение значения Ct регистрируют для определения относительного количества ДНК CLas в обработанных или необработанных образцах, или в обработанных образцах в одной точке времени или в другой точке времени. Чем выше значение Ct, тем более выражен эффект обработки или больше ее эффективность, на что указывает снижение/элиминация бактерий CLas на дереве. Снижение бактериальной нагрузки в процентах может быть вычислено следующим образом:
% снижения в образце со временем
или
% снижения в обработанном образце относительно контрольного=
[0619] Результаты испытания на грейпфруте показаны на фиг. 9. Средние значения для сравнений Ct (n=10 деревьев на обработку), полученных в анализе кПЦР для точки времени T0 (день впрыскивания), точек времени T21 и T56 (21 день и 56 дней после впрыскивания) приведены со стандартной ошибкой для средних значений порогового цикла на фиг. 9 (T0=столбцы темно-серого цвета; T21=столбцы белого цвета; T56=столбцы светло-серого цвета; средние значения порогового цикла отмечены символом «x»). Все выпадающие значения отмечены маленькими кружками за пределами планок стандартных погрешностей для каждой обработки. Контрольные деревья, или деревья грейпфрута, не обработанные вспрыскиванием, отличались самыми низкими значениями порогового цикла в диапазоне Ct около 25 для всех точках времени обработки. Для образцов листьев с деревьев грейпфрута, которые обрабатывали впрыскиванием составов с 1X и 10X полипептидом Bt.4Q7Flg22, были получены немного более высокие подсчитанные значения Ct по сравнению с листьями с контрольных деревьев (фиг.9). Чем выше значение Ct., тем больше эффект обработки для контроля или уменьшения распространения инфекции бактерий CLas. Среднее значение Ct в листьях, взятых в T21, было выше, чем значение Ct в образцах с T56, но оба значения были значимо выше значений в листьях с контрольных не обработанных впрыскиванием деревьев, или в листьях с деревьев, которые обрабатывали впрыскиванием составов с полипептидом Bt.4Q7Flg22 (фиг.9, средние значения порогового цикла отмечены символом «x»).
[0620] Другое исследование на апельсине «Валенсия» (Citrus sinensis) также проводили в коммерческой фруктовой роще, расположенной в центральной Флориде (округ Окичоби). Обработку путем впрыскивания с применением составов с Bt.4QFlg22 (SEQ ID NO: 226) сравнивали с противомикробными полипептидами, известными как тионины. Тионин впрыскивали в виде смеси тиониновых полипептидов (SEQ ID NO: 651, 652 и 653), которые характеризуются как «немеченые», или не содержащие последовательность для локализации во флоэму. Наряду со смесью немеченых тионинов применяли «меченый» тиониновый полипептид, содержащий последовательность для локализации во флоэму (SEQ ID NO: 650), в качестве сравнительной обработки средством для впрыскивания. Нацеленный на флоэму или «меченый» вариант применяли для специфического нацеливания тионина во флоэму, где обитают и размножаются бактерии CLas. Обработку деревьев апельсина путем впрыскивания проводили с использованием блочной рандомизации с полностью случайным распределением, в общей сложности на 8 деревьях апельсина (возрастом 8 лет) на каждую обработку, для необработанного контроля и средств с Bt.4QFlg22, и в общей сложности на 5 деревьях апельсина на каждую обработку для средств с тионином. Впрыскивание осуществляли в апреле (2017 г.) на стадии первого прироста, от появления листьев до достижения ими полного размера. Впрыскивание в деревья апельсина проводили с использованием устройства для впрыскивания низкого давления, BRANDTENTREE (BRANDT). Все полипептиды: Bt.4Q7Flg22 в концентрациях 1X (0,138 мкМ) и 10X (1,37 мкМ), «немеченые» и «меченые» тиониновые полипептиды сравнивали с деревьями, которые не обрабатывали путем впрыскивания (контроль). Образцы листьев с деревьев апельсина собирали для каждой обработки во время впрыскивания (0 день) и в точке времени T56, или через 56 дней после впрыскивания.
[0621] В общей сложности по шесть образцов листьев на дерево выбирали для представления популяции листьев на дереве, в том числе возраста листьев, местоположения и наличия видимых симптомов. Каждую центральную жилку отделяли от листовой пластинки и сразу разрезали на кусочки очень маленького размера новым стерильным лезвием бритвы. Затем образцы листьев с каждого дерева помещали в индивидуальную пробирку, которую затем хранили в морозильной камере при -80°C до последующей обработки. Экстракцию ДНК и полимеразную цепную реакцию в реальном времени, или количественный ПЦР-анализ (кПЦР) на указанных листьях проводили в компании Southern Gardens Citrus (Кливистон, Флорида) с применением способов согласно описанию выше для проведения анализа Ct.
[0622] Результаты испытания на апельсине «Валенсия» представлены на фиг. 10 (T0=столбцы темно-серого цвета; T56=столбцы белого цвета). Ткани листьев с контрольных деревьев апельсина характеризовались минимальными значениями порогового цикла Ct в диапазоне приблизительно 25-30 в точках времени лечения T0 и T56, что указывает на то, что уровни титров бактерий CLas у указанных деревьев не изменялись. Обработка как «немеченым», так и «меченым» тионином характеризовались более высокими средними значениями порогового цикла для листьев, взятых в точке времени T56, по сравнению со средними значениями порогового цикла для листьев T56, взятых с контролей, в которые впрыскивали воду (фиг.10; средние значения порогового цикла отмечены символом «x»). Все выпадающие значения отмечены небольшими кружками за пределами планок стандартных погрешностей для каждой обработки. Образцы листьев с деревьев, которые обрабатывали нацеленным на флоэму тиониновым «меченым» средством характеризовались более высоким средним значением Ct в точке времени T56 по сравнению с листьями с деревьев, которые обрабатывали ненацеленным или «немеченым» тионином. Образцы листьев с деревьев апельсина, которые обрабатывали путем впрыскивания составов с 1X и 10X полипептидом Bt.4Q7Flg22, характеризовались значимо более высоким значением Ct в точках времени от T0 от T56, на что указывает среднее увеличение Ct в T56 по сравнению с T0 (фиг.10; средние значения порогового цикла отмечены символом «x»). Листья с деревьев, обработанным путем впрыскивания обоих составов с полипептидами Bt.4Q7Flg22 (1X и 10X) также характеризовались значимо более высокими значениями порогового цикла по сравнению с образцами листьев с контрольных деревьев. Указанные Bt.4Q7Flg22 представляют собой эффективные средства для контроля или уменьшения уровней титров бактерий CLas в инфицированных деревьях апельсина (фиг.9).
[0623] Оба полипептида Bt.4Q7 Flg22 при применении в виде средств для впрыскивания в конечных концентрациях 1X (0,138 мкМ) и 10X (1,38 мкМ) были эффективны для уменьшения уровней титров CLas в образцах тканей листьев, взятых через 8 недель после впрыскивания. При этом более высокая концентрация полипептида Bt.4Q7Flg22 10X (1,38 мкМ) была даже более эффективной, обеспечивая 37% снижение (Испытание 1) и 43% снижение (Испытание 2) уровней титров CLas.
Таблица 84. Эффективность обработки Bt.4Q7Flg22 для уменьшения уровней титров бактерий CLas через 8 недель после обработки цитрусовых растений средством для вспрыскивания (апельсин «Валенсия» и грейпфрут «Руби Ред»)
Концентрация средства для впрыскивания
Снижение в процентах титра CLas, нормированное по контролю
Испытание 1
Испытание 2
1X Bt.4Q7Flg22(SEQ ID NO: 226),расчетная концентрация в сосудистой сети дерева 0,138 мкМ
33%
21%
10X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226),расчетная концентрация в сосудистой сети дерева 1,38 мкМ
37%
43%
[0624] Полученные ранее результаты показывают, что Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) способствует росту растений во всех периодах заболевания (пример 50). Для оценки потенциального преимущества для роста растений при впрыскивании Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) инфицированным HLB деревьям апельсина «Валенсия» и грейпфрута «Руби Ред», измеряли рост в текущем году в мае 2018 г. у тех же деревьев, которые были обработаны путем впрыскивания Bt.4Q7Flg22 в апреле 2017 г., и оценивали титр бактерий CLas в коммерческой фруктовой роще, расположенной в центральной Флориде (округ Окичоби). Проводили визуальную оценку каждого дерева для выявления областей роста в текущем сезоне с ветвями зеленого цвета, в отличие от старых ветвей с бóльшим видимым одревеснением, с оттенком от темного зеленовато-коричневого до коричневого. На каждом дереве выбирали три репрезентативных ветви с приростом, и измеряли расстояние в дюймах от начала прироста зеленого цвета (самый старый узел) до верхушки самого молодого узла гибкой мерной лентой. Данные собирали для деревьев, обработанным путем впрыскивания 1X и 10X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) а также для необработанного контроля, по 8 деревьев на обработку в испытании на апельсине «Валенсия» и по 9-10 деревьев на обработку в испытании на грейпфруте «Руби Ред» (n=24-30 измерений на обработку). В испытании на грейпфруте «Руби Ред» погибло только одно дерево из исходного испытания (группа обработки 1X Bt.4Q7Flg22), предположительно из-за повреждений ураганным ветром в сентябре 2017 г. Для каждого испытания рассчитывали среднюю длину новых побегов (дюймов) и нормировали по необработанному контролю (таблица 85).
Таблица 85. Впрыскивание в ствол Bt.4Q7Flg22 улучшает рост новых ветвей у апельсина «Валенсия» и грейпфрута «Руби Ред»
Испытание
Обработка
Средняя длина новых побегов (в дюймах)
Длина новых побегов (% от контроля)
Апельсин «Валенсия» - впрыскивание в апреле 2017 г., измерения в мае 2018 г.
Контроль
7,23
100%
1X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), расчетная концентрация в сосудистой сети дерева 0,138 мкМ
13,33
184%
10X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), расчетная концентрация в сосудистой сети дерева 1,38 мкМ
12,29
170%
Красный грейпфрут -впрыскивание в апреле 2017 г., измерения в мае 2018
Контроль
8,05
100%
1X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), расчетная концентрация в сосудистой сети дерева 0,138 мкМ
10,83
135%
10X Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), расчетная концентрация в сосудистой сети дерева 1,38 мкМ
9,13
113%
[0625] Указанные результаты демонстрируют дополнительную способность композиций Flg22, которые обеспечивали пониженный титр бактерий CLas по сравнению с необработанными растениями (фиг.9 и фиг. 10), улучшать рост деревьев сладкого апельсина и грейпфрута (таблица 85). Усиленный рост ветвей служит индикатором повышенного урожая плодов, поскольку образуется больше листьев, поддерживающих рост плодов на протяжении сезона. По сравнению с необработанным контролем, деревья апельсина и грейпфрута, обработанные путем впрыскивания 1X Bt.4Q7Flg22 в апреле 2017 г., характеризовались большей в среднем на 6,1 дюймов (+85%) или 2,8 дюймов (+35%) длиной прироста новых ветвей, соответственно. Доза 10X при впрыскивании Bt.4Q7Flg22 также была эффективной для улучшения роста, обеспечивая на 5,1 дюймов (70%) и на +1,1 дюйма (+13%) больший прирост новых ветвей у деревьев апельсина и грейпфрута, соответственно. Так как впрыскивание 10X Bt.4Q7Flg22 не было более эффективным, чем впрыскивание 1X, для усиления роста в 2018 году, и снижение титра бактерий было аналогичным в 2017 г., впрыскивание 1X Bt.4Q7Flg22 обеспечивает достаточный ответ у растений. Важно отметить, что измерение роста показало отсутствие возникновения фитотоксичности после впрыскивание в ствол Flg22 в дозе как 1X, так и 10X.
[0626] Поскольку указанные растения не были на 100% свободны от вызывающих заболевание бактерий, указанные результаты также демонстрируют способность к продолжению роста у растений, обработанным путем впрыскивания Bt.4Q7Flg22, несмотря на присутствие вызывающих HLB бактерий. Учитывая прогнозируемое появление штаммов CLas с устойчивостью к антибиотикам, которые станут дополнительным препятствием для контроля HLB, впрыскивание Flg22 представляет собой актуальную альтернативу обработкам антибиотиками для улучшения роста растений и уменьшения титра бактерий. Деревья, обработанные путем впрыскиваний Flg22 в указанном примере, культивировали с использованием стандартной коммерческой программы обработки цитрусовых, что дополнительно демонстрирует возможность дополнения стандартных практик для выращивания впрыскиваниями Flg22 цитрусовым растениям.
Пример 52: Обработка листвы и впрыскивание в ствол Flg22 отдельно или в комбинации с противомикробными или способствующими улучшению здоровья растений соединениями улучшает рост новых побегов на деревьях апельсина
[0627] В последующих испытаниях в апреле (2018 года) применяли составы с Flg22 путем впрыскивания в ствол или опрыскивания листвы на двух независимых участках испытаний. Был разработан дизайн испытаний для 1) тестирования вариантов полипептида Flg22, полученных синтетическим путем и путем ферментации, 2) сравнения эффективности варианта Flg22, ранее применявшегося для впрыскивания в цитрусовые в испытаниях в 2017 году, Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), и Syn01Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 571), который был эффективен в виде средства как для внекорневого внесения, так и для обработки семян, увеличивая урожайность у пропашных культур, 3) сравнения способов применения Flg22, а именно, впрыскивания в ствол и опрыскивания листового полога, и 4) тестирования комбинаторных обработок пептидами Flg22, впрыскиванием окситетрациклина, L-цистеином и S-метиловым сложным эфиром бензо(1,2,3)тиадиазол-7-тиокарбоновой кислоты (также известным как BTH) в виде коммерчески доступного состава ACTIGARD WG. L-цистеин представляет собой незаменимую протеиногенную аминокислоту; BTH представляет собой аналог салициловой кислоты с повышенной стабильностью, который применяют в сельском хозяйстве в качестве активатора иммунных ответов в растений, и одобренный для применения у цитрусовых деревьев в виде средства для пропитки корневой зоны или орошения для предотвращения рака цитрусовых, вызываемого Xanthomonas axonopodis, патовар citri.
[0628] В марте 2018 г. деревья обрабатывали на двух отдельных участках. Трехлетние деревья апельсина «Гамлин» (Citrus sinensis) обрабатывали в коммерческой фруктовой роще, локализованной в центральной Флориде (округ Окичоби). Аналогичное испытание проводили в коммерческой роще 6-летних деревьев апельсина «Верния» на корневых побегах «Свингл» в Лейк Уэльс, Флорида (округ Полк). Средства для обработки применяли согласно описанию в таблице 85 ниже с использованием устройства для впрыскивания низкого давления, BRANDT ENTREE (BRANDT), для впрыскивание в стволы, или ранцевого опрыскивателя с CO2 под давлением, превращающего средство для опрыскивания листвы в мелкодисперсный туман. Впрыскивание в стволы проводили согласно описанию в примере 51. Композиции для обработки листьев с Bt.4Q7Flg22 разводили в воде с неионогенным поверхностно-активным веществом (NIS от Precision Labs 90:10; 0,1% по объему от объема резервуара опрыскивателя) и равномерно наносили на листовой полог дерева с расходом средства для опрыскивания 3 литра на дерево. Блоки деревьев, обработанных средством для листвы, на территории испытаний разделяли «зазором» (пропущенным деревом) между блоками обработки, чтобы избежать переноса средств для обработки в соседние блоки обработки. Обработку проводили ранним утром или поздним вечером в период слабого ветра (<5 миль в час); условия были такими, что все средства для опрыскивания высыхали на листьях в пределах периода 4 часов. Комбинированные средства для обработки, описанные в таблице 86, либо впрыскивали из одной бутыли BRANDT ENTREE (композиция для цитрусовых 7, композиция для цитрусовых 8), либо применяли по отдельности в виде впрыскивания окситетрациклина с последующей обработкой листвы Bt.4Q7Flg22-Syn01 в тот же день (композиция для цитрусовых 11, композиция для цитрусовых 12). Для всех обработок использовали по 10 деревьев, разделенных на два блока репликатов по пять деревьев в каждом. Композиции для цитрусовых 1-8 применяли в рощах и в Окичоби, и в округе Полк, а композиции для цитрусовых 9-12 применяли только в роще в Окичоби.
Таблица 86. Композиции для обработки, протестированные на способность смягчения эффектов HLB у деревьев апельсина
Композиция
Состав
Способ обработки
Рабочий расход средства
Композиция для цитрусовых 1
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 100 мкМ,10 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7
Впрыскивание в ствол
2,75 мл/дерево(расчетная концентрация 0,138 мкМ в сосудах растений)
Композиция для цитрусовых 2
Bt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571) 100 мкМ,10 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7
Впрыскивание в ствол
2,75 мл/дерево(расчетная концентрация 0,138 мкМ в сосудах растений)
Композиция для цитрусовых 3
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) (фильтрат ферментативного бульона) с (+) энтерокиназой, 0,8 Ед/мл
Впрыскивание в ствол
80 мл/дерево
Композиция для цитрусовых 4
Bt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571) (фильтрат ферментативного бульона)с (+) энтерокиназой, 0,8 Ед/мл
Впрыскивание в ствол
80 мл/дерево
Композиция для цитрусовых 5
Bt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571) 100 мкМ,10 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7
Средство для опрыскивания листвы
3,0 мл/дерево в объеме носителя для опрыскивания 3 л, включающего воду + 0,1% по объему NIS от Precision Labs 90:10
Композиция для цитрусовых 6
Bt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571) 100 мкМ,10 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7
Средство для опрыскивания листвы
12,0 мл/дерево в объеме носителя для опрыскивания 3 л, включающего воду + 0,1% по объему NIS от Precision Labs 90:10
Композиция для цитрусовых 7
Часть ABt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571) 100 мкМ,10 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7
Впрыскивание в ствол
2,75 мл/дерево(расчетная концентрация 0,138 мкМ в сосудах растений)
Часть BACTIGARD WG(Активный ингредиент: 50% Ацибензолар-S-метила: S-метилового сложного эфирабензо (1,2,3)тиадиазол-7-карботиокислоты; BTH)(раствор в воде 50 мг/мл)
Впрыскивание в ствол
20 мл/дерево(1 г на дерево)
Композиция для цитрусовых 8
Часть ABt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571) 100 мкМ,10 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7
Впрыскивание в ствол
2,75 мл/дерево(расчетная концентрация 0,138 мкМ в сосудах растений)
Часть BL-Цистеин(раствор в воде 3 мг/мл)
Впрыскивание в ствол
20 мл/дерево(60 мг на дерево)
Композиция для цитрусовых 10
Часть ABt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571) 100 мкМ,10 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7
Средство для опрыскивания листвы
3,0 мл/дерево в объеме носителя для опрыскивания 3 л, включающего воду + 0,1% по объему NIS от Precision Labs 90:10
Часть BОкситетрациклин-HCl(раствор в воде 22,5 мг/мл)
Впрыскивание в ствол
20 мл/дерево(0,45 г на дерево)
Композиция для цитрусовых 11
Часть ABt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571) 100 мкМ,10 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7
Средство для опрыскивания листвы
12,0 мл/дерево в объеме носителя для опрыскивания 3 л, включающего воду + 0,1% по объему NIS от Precision Labs 90:10
Часть BОкситетрациклин-HCl(раствор в воде 22,5 мг/мл)
Впрыскивание в ствол
20 мл/дерево(0,45 г на дерево)
[0629] Для оценки потенциального преимущества для роста растений при обработке инфицированных HLB деревьев апельсина впрыскиванием или опрыскиванием разными составами с полипептидами Flg22 по отдельности или в комбинации с противомикробными или способствующими здоровью растений соединениями, в мае 2018 г. измеряли длину новых побегов у деревьев, обработанных в марте 2018 г. в коммерческих рощах в округах Окичоби и Полк, Флорида. В период обработки растений в обоих местоположениях (март 2018 г.) на деревьях росли темно-зеленые листья и начинали развиваться плоды сезона 2018 г. В период двухмесячного интервала между обработками (март 2018 г.) и в период измерений деревьев (май 2018 г.) деревья вступили в период весеннего роста с видимым приростом в виде очень светлых зеленых гибких ветвей с такими же светло-зелеными листьями. Каждое дерево оценивали на наличие новых побегов, и на каждом дереве выбирали три репрезентативных ветви с приростом. Расстояние в дюймах от начала светло-зеленого прироста (самый старый узел) до верхушки самого молодого узла измеряли гибкой мерной лентой. Данные собирали для 10 деревьев на каждую обработку, в том числе необработанного контроля, в общей сложности по 30 измерений на каждую обработку. В таблице 86 приведена средняя длина новых побегов (дюймов) для каждой обработки на обоих участках в рощах в округах Окичоби и Полк; рост нормирован по необработанному контролю.
Таблица 87. Варианты Flg22 при применении в виде средств для впрыскивания в ствол или опрыскивания листвы улучшают рост новых ветвей у деревьев апельсина «Гамлин» и «Верния»
Обработка
Средняя длина новых побегов (дюймов)
Длина новых побегов (% от контроля)
Необработанный контроль
3,08
100%
Композиция для цитрусовых 1Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226),Впрыскивание по 2,75 мл/дерево
3,84
125%
Композиция для цитрусовых 2Bt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571)Впрыскивание по 2,75 мл/дерево
4,48
146%
Композиция для цитрусовых 3Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226)активированный энтерокиназой (EK) фильтрат, впрыскивание по 80 мл/дерево
5,18
169%
Композиция для цитрусовых 4Bt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571)активированный энтерокиназой (EK) фильтрат, впрыскивание по 80 мл/дерево
3,28
107%
Композиция для цитрусовых 5Средство для опрыскивания листвы с Bt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571) 1X
3,66
119%
Композиция для цитрусовых 6Средство для опрыскивания листвы с Bt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571) 4X
3,76
122%
[0630] Измерения роста новых побегов «Гамлин» и «Верния», проведенные через два месяца либо после впрыскивания в ствол, либо после применения средства для опрыскивания листвы с вариантами Flg22, показали, что и Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), и Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) эффективны для стимуляции усиленного роста по сравнению с необработанным контролем. В среднем, длина побегов на необработанном контроле составляла 3,08 дюймов, тогда как деревья, которым впрыскивали Bt.4Q7Flg22, имели на 25% более длинные побеги (3,84 дюйма), а деревья, которым впрыскивали Syn01Flg22 - более длинные побеги, составляющие 146% (4,48 дюймов). Bt.4Q7Flg22 и Syn01Flg22, полученные с применением способов ферментации, описанных в примере 49, также эффективно увеличивали рост побегов при впрыскивании в ствол с расходом 80 мл/дерево. Композиция для цитрусовых 3, содержащая Bt.4Q7Flg22, полученная путем ферментации штамма H101 и обработки 0,8 Ед/мл энтерокиназы (New England Biolabs; код продукта P8070), была наиболее эффективной, обеспечивая большую длину побегов, в среднем 169% (5,18 дюймов) от необработанного контроля.
[0631] Внекорневое внесение вариантов Flg22, эффективное для стимуляции роста киви, сои, чечевицы и картофеля под бременем заболевания также тестировали на способность содействовать росту инфицированных HLB деревьев апельсина. Из таблицы 88 видно, что композиции для цитрусовых 5 и 6, состоящие из 1X или 4X доз Syn01Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 571), соответственно, также эффективны для стимуляции роста новых побегов на деревьях апельсина. Дозы 1X и 4X были сходным образом эффективны, при этом обработка листьев с расходом 1X обеспечивала при измерении большую длину побегов, составляющую 119% от контроля, а обработка с расходом 4X обеспечивала при измерении большую длину побегов, составляющую 122% от контроля. Указанные результаты показывают, что внекорневое внесение полипептида Flg22 может применяться как часть стандартной программы ухода за деревьями в цитрусовых рощах.
Таблица 88. Впрыскивание Bt.4Q7Flg22-Syn01 в комбинации со способствующими улучшению здоровья растений соединениями улучшает рост новых ветвей у деревьев апельсина «Гамлин» и «Верния»
Обработка
Средняя длина новых побегов (дюймов)
Длина новых побегов(% от контроля)
Необработанный контроль
3,08
100%
Композиция для цитрусовых 2Bt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571)Впрыскивание по 2,75 мл/дерево
4,48
146%
Композиция для цитрусовых 7Bt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571)Впрыскивание по 2,75 мл/дерево+ BTH (ACTIGARD WG; впрыскивание по 1 г/дерево)
3,44
112%
Композиция для цитрусовых 8Bt.4Q7Flg22-Syn01 (SEQ ID NO: 571)Впрыскивание по 2,75 мл/дерево + L-Цистеин (впрыскивание по 60 мг/дерево)
5,87
191%
[0632] Затем исследовали комбинацию Syn01Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 571) с BTH (ACTIGARD WG) или L-цистеином как в Мелвине, так и в роще в Лейк Уэльс.Оба комбинированных средства для обработки из таблицы 88 демонстрировали бóльшую длину новых побегов по сравнению с необработанным контролем, показывая, что полипептиды Flg22 могут применяться в комбинации с аминокислотами, гормонами растений или миметиками гормонов растений для улучшения состояния здоровья цитрусовых деревьев.
Таблица 89. Применение средства для опрыскивания листвы Bt.4Q7Flg22-Syn01 в комбинации с впрыскиванием окситетрациклином увеличивает рост новых ветвей у деревьев апельсина «Гамлин» возрастом 3 года
Обработка (см. таблицу 85)
Средняя длина новых побегов (дюймов)
Длина новых побегов(% от контроля)
Необработанный контроль
1,67
100%
Композиция для цитрусовых 9Окситетрациклин-HCl(0,45 г/дерево)+ средство для опрыскивания листвы Syn01Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 571) 1X
3,80
228%
Композиция для цитрусовых 10Окситетрациклин-HCl(0,45 г/дерево)+ средство для опрыскивания листвы Syn01Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 571) 4X
3,32
199%
[0633] В отдельном испытании комбинация наблюдали за обработкой Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) и окситетрациклином. В тот же день, когда деревья были обработаны путем впрыскивания окситетрациклина, группы из 10 деревьев также опрыскивали средством для внекорневого внесения Syn01Flg22 в дозе 1X или 10X. Указанные результаты показывают, что обработки антибиотиком и полипептидом совместимы, и фитотоксичность в результате двойной обработки не наблюдалась. Может быть разработана стандартная программа, в рамках которой производители чередовали бы впрыскивание в деревья и обработку листвы для улучшенного контроля над симптомами HLB и для снижения титра CLas.
Пример 53: Защита от заболевания с применением средств для внекорневого внесения с Bt.4Q7Flg22 и Gm.RHPP у растений сои для защиты от заболеваний, вызываемых Phakopsora pachyrhizi и Cercospora kikuchii
[0634] В таблице 90 описаны композиции и соответствующий рабочий расход, протестированные в приведенном ниже примере.
Таблица 90. Внекорневое внесение Bt.4Q7Flg22 и Gm.RHPP у сои защищает растения от Phakopsora pachyrhizi и Cercospora kikuchii
Композиция
Состав для внекорневого внесения
Рабочий расход средствав жидких унциях на акр, или миллилитрах на гектар (мл/га)
Композиция 12
Фунгицид FOX
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га
Композиция 13
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)
2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
Композиция 14
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)
4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
Композиция 15
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
Композиция 16
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
Композиция 17
Фунгицид FOX +Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
Композиция 18
Фунгицид FOX +Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
Композиция 19
Фунгицид FOX +Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
Композиция 20
Фунгицид FOX +Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +300 мл/га
 Композиции для обработки листьев содержали 0,1% (по объему) консерванта PROXEL BC, водную дисперсию смеси 330,7 мМ 1,2-бензизотиазолина (BIT), 53,5 мМ 5-хлор-2-метил-4-изотиазолин-3-она (CMIT) и 26,1 мМ 2-метил-4-изотиазолин-3-она (MIT). Композиции для обработки листьев применяли с заданным расходом (в жидких унциях на акр, или мл/га) в объеме носителя 150 л/га, или 16 галлонов на акр воды с 0,5% (по объему) поверхностно-активного вещества AUREO, метилированного соевого масла (композиция 13) или с 0,33% (по объему) минерального масла Agris Parrafinic (стоковая концентрация 795 г/л или 79,5% (м/о) (композиции 13-20).
2
[0635] Испытания с повторностями в полевых условиях проводили в трех местоположениях в Парагвае (Ятитай, Облигадо и Капитан Миранда) с применением средства для внекорневого внесения, содержащего композиции полипептида Bt.4Q7Flg22 и полипептида RHPP с добавлением фунгицида широкого спектра, Fox (16,0% протиоконазола и 13,7% трифлоксистробина). FOX представляет собой коммерчески доступный в Южной Америке фунгицид для внекорневого внесения с ограниченной эффективностью для профилактической и лечебной обработки при азиатской ржавчине сои, вызываемой Phakopsora pachyrhizi, и повреждении листьев сои, вызываемом Cercospora kikuchii, который наносят в виде средства для опрыскивания листвы, следуя рекомендациям в инструкции по применению препарата, с рабочим расходом 5,48 жидких унций на акр (400 мл/гектар). Начиная со стадии развития R1 растения сои два раза обрабатывали средствами для внекорневого внесения с композициями, описанными в таблице 90, с интервалом 13-14 дней между опрыскиваниями. Средства для обработки листвы применяли на одном сорте сои (на каком сорте? один и тои же сорт для всех 3 участков) на трех участках с 4 площадками для повторностей (3×10 метров, 30 м; минимум 6 рядов на обработку). При оценке заболевания в испытаниях с инфицированием естественным путем выставляли показатели тяжести инфекции (0-100% пораженной листвы) у 10 растений на каждой площадке как вызываемой Phakopsora pachyrhizi азиатской ржавчины сои, так и вызываемого Cercospora kikuchii повреждения листьев сои на стадии развития сои R4-R5 (4-15 дней после второго внекорневого внесения), руководствуясь источником: Godoy et al (1997; Journal of plant diseases and protection 104:336-345). Процент фитотоксичности (0-100% пораженной листвы) также регистрировали на стадии развития сои R4-R5. Тяжесть инфекции и фитотоксичность усредняли для всех четырех репликатов на каждом участке (в общей сложности 12 репликатов, 3 участка с 4 репликатами каждый). Рассчитывали стандартное отклонение для каждой обработки на всех трех участках. У необработанных контрольных растений на участке в Ятитае наблюдалось 99% сбрасывание листьев через 11 дней после применения второго средства для обработки листвы; в этот момент регистрировали показатели сбрасывания листьев (обезлиствление 0-100%). Результаты отслеживания тяжести заболевания, фитотоксичности и сбрасывания листьев приведены в таблице 91 в виде процентов с указанным в круглых скобках стандартным отклонением.
Таблица 91. Частота встречаемости симптомов азиатской ржавчины сои после внекорневого внесения композиций фунгицида и полипептидов в Парагвае
Состав для внекорневого внесения
Рабочий расход средствав жидких унциях на акрмиллилитров на гектар (мл/га)
Частота встречаемости симптомов азиатской ржавчины сои после 2 внекорневых внесений (% пораженной листвы); N=12 репликатов на обработку
Изменение симптомов азиатской ржавчины сои относительно контроля (%);N=12 репликатов на обработку
Сбрасывание листьев (% листвы) после 2 внекорневых внесений (только Ятитай; N=4 повторности на обработку)
Необработанный контроль
н/п
35,1% (±13,8%)
--
99%
Фунгицид FOX(композиция 12)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га
19,4% (±10,3%)(-15,7%)
-15,7%
45%
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,Консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 13)
2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
22,7% (±14,4%)
-12,4%
70%
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 14)
4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
22,1% (±14,6%)
-13,0%
60%
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 15)
2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
24,6% (±13,4%)
-10,5%
96%
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 16)
4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
23,8% (±11,5%)
-11,3%
70%
Фунгицид FOX +Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 17)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
9,3% (±3,9%)
-25,8%
25%
Фунгицид FOX +Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 18)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
8,0% (±5,1%)
-27,1%
25%
Фунгицид FOX +Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 19)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
8,3% (±5,8%)
-26,8%
25%
Фунгицид FOX +Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 20)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +300 мл/га
11,0% (±3,3%)
-24,1%
25%
Таблица 92. Частота встречаемости симптомов церкоспориоза листьев после внекорневого внесения композиций фунгицида и полипептидов в Парагвае
Состав для внекорневого внесения
Рабочий расход средствав жидких унциях на акрмиллилитров на гектар (мл/га)
Частота встречаемости вызванных Cercospora симптомов после 2 внекорневых внесений (% пораженной листвы); N=12 репликатов на обработку
Изменение вызванных Cercospora симптомов относительно контроля (%);N=12 репликатов на обработку
Необработанный контроль
н/п
19,3% (±5,1%)
--
Фунгицид FOX(композиция 12)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га
15,0% (±9,6%)
-4,3%
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXELBC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 13)
2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
16,4% (±7,7%)
-2,8%
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226)16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXELBC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 14)
4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
15,8% (±6,3%)
-3,5%
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXELBC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 15)
2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
15,9% (±6,9%)
-3,3%
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXELBC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 16)
4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
14,8% (±5,3%)
-4,5%
Фунгицид FOX +Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXELBC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 17)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
10,6% (±3,9%)
-8,7%
Фунгицид FOX +Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXELBC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 18)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
10,6% (±4,4%)
-9,2%
Фунгицид FOX +Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT) (композиция 19)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
11,3% (±4,2%)
-8,0%
Фунгицид FOX +Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 20)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +300 мл/га
11,3% (±4,2%)
-8,0%
Таблица 93. Фитотоксичность после внекорневого внесения композиций фунгицида и полипептидов в Парагвае
Состав для внекорневого внесения
Рабочий расход средствав жидких унциях на акрмиллилитров на гектар (мл/га)
Фитотоксичность (% пораженной листвы) после 2 внекорневых внесений; N=12 репликатов на обработку
Необработанный контроль
н/п
0,00% (±0,00%)
Фунгицид FOX(композиция 12)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га
2,25% (±32,9%)
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 13)
2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
0,00% (±0,00%)
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 14)
4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
0,00% (±0,00%)
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 15)
2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
0,00% (±0,00%)
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 16)
4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
0,00% (±0,00%)
Фунгицид FOX +Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 17)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
2,33% (±0,14%)
Фунгицид FOX +Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 18)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
2,25% (±0,25%)
Фунгицид FOX +Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 19)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
2,42% (±0,29%)
Фунгицид FOX +Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 20)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +300 мл/га
2,17% (±0,29%)
[0636] Внекорневое внесение Bt.4Q7Flg22 и Gm.RHPP в течение репродуктивных фаз развития сои обеспечивало увеличенную защиту от азиатской ржавчины сои и церкоспориоза листьев по сравнению с необработанным контролем. У обработанных средствами для внекорневого внесения с Bt.4Q7Flg22 при расходе 150 и 300 мл/га растений наблюдалась меньшая на 12,4-13,0% площадь поражения листьев азиатской ржавчиной сои и меньшая на 2,8-3,5% площадь поражения листьев Cercospora по сравнению с необработанным контролем; а у обработанных средств для внекорневого внесения с Gm.RHPP при расходе 150 и 300 мл/га растений наблюдалась меньшая на 10,5-11,3% площадь поражения листьев азиатской ржавчиной сои и меньшая на 3,3-4,5% площадь поражения листьев Cercospora по сравнению с необработанным контролем. Комбинированные средства для обработки, включающие либо Bt.4Q7Flg22, либо RHPP с фунгицидом FOX, увеличивали защиту против азиатской ржавчины сои и Cercospora относительно обработки фунгицидом Fox по отдельности. На участке в Ятитае на стадии развития R7 наблюдалось меньшее сбрасывание листьев, обусловленное тяжелыми симптомами заболевания, при обработке Bt.4Q7Flg22 или Gm.RHPP +/- фунгицид FOX. При том, что на указанной стадии необработанный контроль был на 99% обезлиствен, обработка Bt.4Q7Flg22 при расходе 150 или 300 мл/га уменьшала сбрасывание листьев до 70% или 60%, при наличии все еще видимых зеленых листьев, соответственно. Обработка Gm.RHPP при расходе 150 или 300 мл/га уменьшала сбрасывание листьев до 96% или 70%, соответственно. Комбинированная обработка Bt.4Q7Flg22 или Gm.RHPP с фунгицидом FOX уменьшала сбрасывание листьев до 25% при видимых зеленых листьях, тогда как фунгицид Fox по отдельности уменьшал сбрасывание листьев только до 45% без видимых зеленых листьев. В целом, обработка полипептидами обеспечивала повышенную защиту относительно фунгицида FOX по отдельности для контроля азиатской ржавчины сои и церкоспориоза листьев. Ни одно из средств с полипептидами по отдельности не демонстрировало фитотоксичности; фитотоксичность комбинации любого полипептида с фунгицидом FOX также значимо не увеличивалась и не уменьшалась относительно фунгицида FOX по отдельности (таблица 93).
Пример 54. Внекорневое внесение Flg22-PSA у киви защищает растения от Pseudomonas syringae, патовар actinidiae (PSA-V)
[0637] Pseudomonas syringae, патовар actinidiae (PSA) представляет собой губительный патоген растений, вызывающий бактериальный рак как зеленых (Actinidiae deliciosa), так и желтых (Actinidiae chinesis) киви во всех зонах производства киви, приводя к серьезным потерям урожаев в Новой Зеландии, Китае и Италии. Только в Новой Зеландии совокупные потери дохода от самого разрушительного биовара PSA-V, по прогнозам, приблизятся к $740 млн новозеландских долларов (NZD) к 2025 году (Исследовательский институт аграрного бизнеса и экономики Университета Линкольна «Стоимость Psa-V для новозеландской индустрии киви и более широкого сообщества”; май 2012 г. ). PSA-V колонизирует внешние и внутренние поверхности у киви и может распространяться через ткани ксилемы и флоэмы. Симптомы заболевания PSA-V у киви включают бактериальную пятнистость листьев, бактериальный рак ствола, красные экссудаты, гниль цветков, обесцвечивание веток и, в конечном итоге, отмирание лоз киви. Стандартный способ борьбы с PSA-V в настоящее время предусматривает частую обработку листвы на лозах киви средствами с металлической медью, что, по прогнозам, приведет к отбору устойчивой к меди формы патогена и потере контроля над заболеванием. Имеется срочная потребность в новых способах контроля.
[0638] Для тестирования чувствительности листьев киви к 22-аминокислотным фрагментам флагеллина, кусочки размером 1 мм вырезали из черешков листьев киви Actinidiae deliciosa сорта «Hayward» и размещали на поверхности 150 мкл воды в лунках 96-луночного планшета, по одному кусочку на лунку. Получали полипептиды Flg22 из таблицы 94 для анализа, ресуспендируя лиофилизированный полипептид в деионизированной воде до концентрации 10 мМ; затем готовили серийные разведения пептидов до 10 мкМ в 100 мМ натрий-фосфатном (pH 7,8-8,0) буфере с 0,1% Tween-20. Через 20 часов из образцов черешков листа киви удаляли воду и заменяли на 100 мкл раствора для элиситации, содержащего 100 нМ пептид (разведение из 10 мкМ стокового раствора), 34 мкг/мл люминола и 20 мкг/мл пероксидазы хрена в деионизированной воде. Распознавание полипептида Flg22 тканью растения приводило к активации иммунной сигнализации и продуцированию апопластических активных форм кислорода (АФК). В присутствии АФК (H2O2) пероксидаза хрена катализировала окисление люминола и генерацию видимого света. Относительные световые единицы (RLU) регистрировали с помощью люминометра SpectraMax L (интеграция 0,5 с; интервалы 2,0 мин) на протяжении периода времени 40 минут.В двух независимых экспериментах в общей сложности 6 образцов черешков листа киви обрабатывали каждым полипептидом Flg22 из таблицы 94. Для каждой обработки рассчитывали среднее общее количество RLU и стандартную ошибку среднего (SEM). Для определения значимости различий между обработками использовали двусторонний T-критерий при 90% уровне достоверности (P<0,1). Для каждого полипептида определяли относительное продуцирование АФК по сравнению с общим количеством RLU для контрольного 100 нМ Bt.4Q7Flg22.
Таблица 94. Черешки листьев киви наиболее чувствительны к Flg22-PSA
Обработка
Среднее общее количество относительных световых единиц (RLU); SEM в круглых скобках
P-значение для сравнения со 100 нМ Bt.4Q7Flg22
Продуцирование АФК относительно Bt4Q7Flg22 (%)
100 нМ Bt.4Q7Flg22-(SEQ ID NO: 226)
47,457(±12,900)
н/п
100%
100 нМ Syn01Flg22(SEQ ID: 571)
81,848(±27,631)
p=0,286
172%
100 нМ Flg22-PSA(SEQ ID: 540)
124,550(±33,555)
p=0,058*
262%
*Значимое различие при 90% уровне достоверности
[0639] В двух независимых экспериментах черешки листьев киви «Hayward» были значимо более чувствительны к Flg22, происходящему из Pseudomonas syringae, патовар actinidiae (Flg22-PSA; SEQ ID NO:540) по сравнению с Flg22, происходящие из Bacillus thuringiensis, штамм 4Q7 (Bt.4Q7Flg22; SEQ ID NO: 226). Хотя продуцирование АФК увеличивалось в черешках листьев киви в ответ на синтетический Syn01Flg22 (SEQ ID NO: 571) по сравнению с Bt.4Q7 Flg22 (SEQ ID NO: 226), указанное различие не было значимым. На основании этих результатов получали состав с Flg22-PSA (SEQ ID NO: 540) указанным образом в конечной концентрации 100 нМ (таблица 94) для испытаний по предотвращению заболевания растений киви «Hayward» в Новой Зеландии в контейнерной культуре.
Таблица 95. Варианты обработки в испытаниях на контейнерной культуре киви
Композиция
Состав для внекорневого внесения
Разведение продукта для опрыскивания,в миллилитрах продукта/литр воды (мл/л), или вграммах продукта/литр воды (г/л)
Композиция 21
ChampION++™ (46,1% гидроксид меди; эквивалент 30% металлической меди)
0,9 г ChampION++™ /л воды
Композиция 22
Flg22-PSA (SEQ ID NO: 540) 100 мкМ10 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)
4 мл/л воды
[0640] Композиции для обработки листьев содержали 0,1% (по объему) консерванта PROXEL BC, водной дисперсии смеси 330,7 мМ 1,2-бензизотиазолина (BIT), 53,5 мМ 5-хлор-2-метил-4-изотиазолин-3-она (CMIT) и 26,1 мМ 2-метил-4-изотиазолин-3-она (MIT). Композиции для обработки листьев разводили до заданных концентраций в воде (г/л воды или мл/л воды) с 0,05% (по объему) неионогенного поверхностно-активного вещества Contact XcelTM. Разведенные продукты наносили в виде микрокапель с помощью пневматического ранцевого опрыскивателя на листву каждого растения до ее полного покрытия.
[0641] Для оценки эффективности Flg22-PSA (SEQ ID NO: 540) для контроля Pseudomonas syringae, патовара actinidiae (PSA-V), компания HortEvaluation Ltd совместно с NuFarm Limited проводила испытание на пораженной заболеванием контейнерной культуре киви в регионе Бей-оф-Пленти в Новой Зеландии. Растения киви Actinidiae deliciosa «Hayward» в контейнерах без симптомов PSA-V равномерно распределяли по 6 группам обработки, по 12 растений в контейнерах на группу. За день до инокуляции PSA-V растения в контейнерах обрабатывали ChampION++TM, промышленным стандартом для контроля PSA-V, или готовым составом с Flg22-PSA в соответствии с рабочим расходом из таблицы 96 (группы обработки 3,4) в питомнике в Те Пука, Новая Зеландия. Через 24 часа все растения, за исключением неинфицированных контролей, опрыскивали 1×108 КОЕ/мл инокулюма PSA-V с помощью 5-литрового ручного пневматического опрыскивателя, который направляли на нижнюю сторону листьев, до полного покрытия листвы. Неинфицированный контроль опрыскивали отдельно водой. Затем растения в контейнерах транспортировали в Пекайну и размещали на участке с верховым аэрозольным орошением на 48 часов, имитируя условия окружающей среды для инфицирования PSA-V, при этом неинфицированные контрольные растения отделяли от инфицированных растений. Через 48 часов подгруппу растений уносили с участка с аэрозольным орошением и ненадолго оставляли для просушки. После последней обработки все растения перемещали на последний участок испытания на открытом воздухе, в рандомизированных местоположениях в Пекайне. Средняя ежедневная температура на участке испытаний составляла 20,75°C при общем количестве осадков 277 мм в течение 34 дней. Кроме того, каждое растение поливали с помощью капельного орошения дважды в сутки, каждый раз в течение двух часов. Условия окружающей среды были благоприятными для прогрессирования симптомов заболевания PSA-V. Проводили визуальный мониторинг растений в течение всего периода испытания для оценки заболевания PSA-V, при этом тот же эксперт оценивал % площади листа, покрытый пятнами, через 6 дней после инокуляции (6 ДПИ), 16 ДПИ, 23 ДПИ и 29 ДПИ. Кроме того, оценивали фитотоксичные эффекты обработки у каждого растения через 29 ДПИ по шкале от 0 до 10, где 0=отсутствие фитотоксичности для листьев, а 10=симптомы очень тяжелой фитотоксичности для листьев. Средние показатели заболевания на 6, 16, 23 и 29 ДПИ и показатель фитотоксичности на 29 ДПИ приведены в таблице 96 для каждой обработки (n=12 растений на обработку). Для каждой обработки вычисляли p-значения для сравнения с необработанным контролем.
Таблица 96. Внекорневое внесение Flg22-PSA уменьшает симптомы заболевания PSA-V у киви
№группы обработки /Состав для внекорневого внесения
Расход при нанесении и время обработки
Пораженная листва (% площади поверхности листьев);p-значения для сравнения с необработанным контролем
6 ДПИ
16 ДПИ
23 ДПИ
29 ДПИ
Группа обработки 1Неинфицированные растения
н/п
0,00%
1,66%
7,89%
18,14%
Группа обработки 2Необработанный контроль
н/п
15,12%
40,36%
54,64%
67,82%
Группа обработки 3ChampION++™ (композиция 21)
0,9 г/л;За день до инокуляции
3,23%(p<0,001)
12,48%(p<0,001)
16,57%(p<0,001)
25,20%(p<0,001)
Группа обработки 4Flg22-PSA (композиция 22)
4 мл/л;За день до инокуляции
7,31%(p<0,001)
29,41%(p=0,013)
45,97%(p=0,085)
61,91%(p=0,190)
[0642] Применение Flg22-PSA значимо снижало симптомы пятнистости листьев PSA-V (P<0,1; 90% доверительный интервал) на 6, 16 и 23 ДПИ по сравнению с необработанным контролем. Комбинация предварительной обработки Flg22-PSA дополнительно уменьшала тяжесть пятнистости листьев по сравнению с отдельной обработкой Flg22-PSA во всех оцениваемых точках времени, и удлиняла период значимой защиты до 29 ДПИ (меньшая на 14,3% пятнистость листьев по сравнению с необработанным контролем; P=0,002). Таким образом, Flg22-PSA можно использовать как в качестве самостоятельного средства для лечения, так и в комбинации с другими видами лечения, направленными на ограничение роста патогена. В то время как промышленный стандарт, ChampION++TM, используемое в настоящее время содержащее медь средство для лечения PSA, обуславливает незначительную фитотоксичность для листьев (средний показатель=1,6), для средств 3-4 не наблюдалось значимой фитотоксичности (таблица 97). Flg22-PSA может применяться в качестве альтернативы другим фитотоксичным средствам для обработки.
Таблица 97. Средство для внекорневого внесения FLG22-PSA не приводит к фитотоксичности для листьев киви
№группы обработки /Состав для внекорневого внесения
Расход при нанесении и время обработки
Средний показатель фитотоксичности (0-10); 29 ДПИ
Группа обработки 1Неинфицированные растения
н/п
0,0 (±0,0)
Группа обработки 2Необработанный контроль
н/п
0,0 (±0,0)
Группа обработки 3ChampION++™ (композиция 21)
0,9 г/л;За день до инокуляции
1,6 (±0,9)
Группа обработки 4Flg22-PSA (композиция 22)
4 мл/л;За день до инокуляции
0,1 (±0,3)
Пример 55: Полипептиды происходящие из фактора элонгации Tu
[0643] Полипептиды Elf18 и Elf26, происходящие из консенсусного белка фактора элонгации-TU (EF-Tu) Bacillus cereus, тестировали на способность обеспечивать АФК-ответ у кукурузы (гибрид 5828 YX), сои (сорт Morsoy) и Arabidopsis thaliana. Полипептиды синтезировали в компании Genscript USA (Пискатауэй, Нью-Джерси) с применением стандартных методов твердофазного синтеза и предоставляли в виде лиофилизированного порошка с равной или превышающей 70% чистотой. Сухой порошок ресуспендировали до концентрации 10 мМ в ультрачистой воде, и затем получали серийные разведения в ультрачистой воде с концентрациями, протестированными в анализе на АФК, из таблицы 98.
[0644] Для анализа на АФК с растений Arabidopsis возрастом 4 недели срезают листья, и с использованием пробкового бура из листьев вырезают диски размером 4 мм. Каждый диск разрезают пополам бритвенным лезвием, после чего каждую половину диска помещают на поверхность 150 мкл воды в лунке 96-луночного планшета таким образом, чтобы абаксиальная сторона касалась воды, и оставляют на ночь. На следующий день непосредственно перед обработка полипептидами воду из всех лунок удаляли. Значения RLU и относительную активность АФК регистрировали как средние значения для 4 измерений. Анализы активности АФК проводили с применением способов, ранее описанных в примере 15). Результаты для активности АФК приведены в таблице 97 ниже.
Таблица 98. Полипептиды Elf18 и Elf26 из Bacillus cereus
Описание полипептида EF-Tu
Длина последовательности аминокислот
Последовательность
N-конец EF Tu (модифицированный)Bacillus cereus(SEQ ID NO: 616)
18
Ac-AKAKFERSKPHVNIGTIG-conh2
N-конец EF Tu(модифицированный)Bacillus cereus(SEQ ID NO: 617)
26
Ac-AKAKFERSKPHVNIGTIGHVDHGKTT-conh2
Таблица 99. Сравнение активности АФК для полипептидов elf18 и elf26 в ткани листьев Arabidopsis
Обработка полипептидами
Среднее значение RLU(Кратность увеличения (X) относительно ложной обработки)
Отрицательный контроль (вода)
82896 (1 X)
N-конец EF Tu (100 нМ) (SEQ ID NO: 616)
264194 (3,2 X)
N-конец EF Tu (100 нМ) (SEQ ID NO: 617)
211383 (2,5 X)
Bt.4Q7Flg22 (100 нМ) (SEQ ID NO: 226)
258073 (3,1 X)
N-конец EF Tu (100 нМ) (SEQ ID NO: 616)+ Bt.4Q7Flg22 (100 нМ) (SEQ ID NO: 226)
254344 (3,1 X)
N-конец EF Tu (100 нМ) (SEQ ID NO: 617) +Bt.4Q7Flg22 (100 нМ)(SEQ ID NO:226)
181504 (2,2 X)
[0645] Рецептор полипептидов EF-Tu, EF-Tu-рецептор (EFR), был идентифицирован ранее в Brassica clade, модельным растением для которого является Arabidsopis thaliana. Результаты в таблице 99 показывают, что новые идентифицированные полипептиды из Bacillus cereus EF-Tu (SEQ ID NO: 616 и SEQ ID NO: 617) могут применяться для стимуляции АФК-ответа, аналогичного по величине Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226), при тестировании каждого из них в концентрации 100 нМ. По сравнению с ложнообработанным контролем N-концевые полипептиды EF-Tu давали ответ в 3,2-2,5 раз выше, тогда как Bt.4Q7Flg22 обеспечивал 3,1-кратное увеличение относительно ложнообработанного контроля. Указанные результаты показывают, что фрагменты длиной 18 и 26 аминокислот из N-конца полипептидов Bacillus cereus могут применяться аналогичным Bt.4Q7Flg22 образом в культурах Brassica, в том числе, но не ограничиваясь перечисленными, кале, капусты, листовой капусты, цветной капусты, брюссельской капусты, савойской капусты, кольраби и гайлона, для увеличения биомассы растений, урожайности и предотвращения заболеваний.
[0646] Комбинированные средства для обработки с N-концевыми пептидами EF-Tu (SEQ ID NO: 616 и SEQ ID NO: 617) и Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) обеспечивали аналогичные АФК-ответы на пептиды EF-Tu по отдельности, что указывает на то, что комбинированная обработка указанными пептидами в полевых условиях не мешает активности; однако, поскольку последующие сигнальные события для пептидов EF-Tu и Flg22, распознаваемых рецепторами EFR и FLS2 соответственно, задействуют общие механизмы, разнесенное применение средств с пептидами может обеспечивать максимальное преимущество для роста растения.
Пример 56: Защита от заболевания с применением средств для внекорневого внесения Bt.4Q7Flg22 и Gm.RHPP у растений сои для защиты от заболеваний, вызываемых Phakopsora pachyrhizi и Cercospora kikuchii
[0647] Ранее было обнаружено, что внекорневое внесение Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) в репродуктивных фазах развития сои снижает симптомы заболевания при инфекциях, вызываемых Phakopsora pachyrhizi и Cercospora kikuchii (пример 53). С указанных растений снимали урожай; как было обнаружено, внекорневое внесение Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) и Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) увеличивает урожайность по сравнению с необработанными контрольными растениями в испытаниях с повторностями в Парагвае, на растениях, которые были инфицированы азиатской ржавчиной сои и церкоспориозом листьев. Внекорневое внесение Bt.4Q7Flg22 при расходе 150 и 300 мл/га увеличивало урожайность на +342,2 кг/га и +427,2 кг/га, соответственно, в испытаниях, где средняя урожайность для необработанных растений составляла 1266,3 Кг/га. Увеличение урожайности при внекорневом внесении Bt.4Q7Flg22 с расходом 300 мл/га (36,1%) было сопоставимо с применением отдельно фунгицида FOX (36,6%), что демонстрирует эффективность Bt.4Q7Flg22 в качестве фунгицидного средства для обработки листвы как для уменьшения симптомов заболевания, так и для стимуляции урожайности. Относительная урожайность на всех трех участках испытания у растений, обработанных комбинированным средством с фунгицидом FOX и Bt.4Q7Flg22, была немного выше, чем при обработке фунгицидом FOX или средством для внекорневого внесения с Bt.4Q7Flg22 по отдельности, что демонстрирует совместимость обработок. Средства для внекорневого внесения с Gm.RHPP при расходе 150 и 300 мл/га дополнительно увеличивали урожайность на +294,2 кг/га и 506,8 кг/га, соответственно, по сравнению с необработанным контролем. При применении в комбинации с фунгицидом FOX Gm.RHPP обеспечивал максимальную защиту против заболевания в указанных испытаниях, о чем свидетельствует увеличенная на +517,6 кг/га и +539,9 кг/га урожайность при расходе средства с Gm.RHPP 150 мл/га и 300 мл/га, соответственно. Внекорневое внесение Gm.RHPP стабильно улучшало состояние здоровья растений и увеличивало урожайность, соответственно, Gm.RHPP представляет собой эффективное средство для стимуляции роста и устойчивости к грибному заболеванию.
Таблица 100. Урожайность сои при полевых испытаниях в нескольких повторностях при обработке инфицированных Phakopsora pachyrhizi и Cercospora kikuchii растений Bt.4Q7Flg22 или RHPP
Состав для внекорневого внесения
Рабочий расход средства в жидких унциях на акр/миллилитрах на гектар (мл/га)
Среднее изменение урожайности по сравнению с необработанным контролем [1266,3 килограммов/гектар (Кг/га)]; N=12 репликатов на обработку
Урожайность относительно необработанного контроля (%); N=12 репликатов на обработку
Необработанный контроль
н/п
--
100%
Фунгицид FOX(композиция 12)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га
+445,6 кг/га
136,6%
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 13)
2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
+ 342,2 кг/га
130,7%
Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 14)
4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
+ 427,2 кг/га
136,1%
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 15)
2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
+ 294,2 кг/га
125,5%
Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 16)
4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
+ 506,8 кг/га
143,5%
Фунгицид FOX +Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 17)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
+ 426,5 кг/га
138,4%
Фунгицид FOX +Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) 16,7 мкМ,1,67 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 5,7,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ (BIT); 53,5 мкМ (CMIT); 26,1 мкМ (MIT)(композиция 18)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +4,11 жидких унций на акр, или 300 мл/га
+ 418,5 кг/га
137,2%
Фунгицид FOX +Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 19)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +2,05 жидких унций на акр, или 150 мл/га
+ 517,6 кг/га
145,5%
Фунгицид FOX +Gm.RHPP (SEQ ID NO: 600) 100 мкМ,консервант PROXEL BC: 330,7 мкМ; 50,1 мкМ (CMIT); 21,71 мкМ (MIT)(композиция 20)
5,48 жидких унций на акр, или 400 мл/га +300 мл/га
+ 539,9 кг/га
146,9%
Пример 57. Обработка Flg22 цитрусовых деревьев, инфицированных Candidatus Liberibacter asiaticus, увеличивает совокупность плодов
[0648] Предыдущие результаты, обобщенные в примере 51, показывают, что впрыскивание в ствол Bt.4Q7Flg22 (SEQ ID NO: 226) уменьшает титры патогенов и способствует новому росту на цитрусовых деревьях, инфицированных Candidatus Liberibacter asiaticus, причинным агентом болезни Хуанлун (HLB). Для оценки потенциального увеличения плодоношения и получения предварительных расчетных значений урожайности измеряли совокупность плодов в июне 2018 г. у тех же инфицированных HLB деревьев апельсина «Валенсия» (сбор урожая весной 2019 г. ) и грейпфрута «Руби Ред» (сбор урожая осенью 2018 г. ), в ствол которых впрыскивали Bt.4Q7Flg22 в апреле 2017 г., в коммерческой фруктовой роще, расположенной в центральной Флориде (округ Окичоби). Согласно описанию в примере 51, деревья обрабатывали впрыскиванием в апреле 2017 г. либо 1X Bt.4Q7Flg22 - низкий расход (0,55 мкмоль пептида; расчетная концентрация во флоэме 0,138 мкМ), либо 10X Bt.4Q7Flg22 - высокий расход (5,5 мкмоль пептида; расчетная концентрация во флоэме 1,38 мкМ). В июне 2018 г. обработанные впрыскиванием Bt.4Q7Flg22 деревья сравнивали с необработанными контрольными деревьями в той же области рощи с использованием установленных способов планирования урожайности цитрусовых деревьев (“Forecasting Florida Citrus Production: Methodology & Development; 1971; автор: S. R. Williams, для Florida Crop and Livestock Reporting Service). Для количественного определения совокупности плодов на каждом дереве случайным образом выбирали три четвертичных ветви на уровне глаз (n=8 деревьев на обработку для апельсина «Валенсия», n=10 деревьев на обработку для грейпфрута «Руби Ред»). Измеряли периметр каждой четвертичной ветви в сочленении, где начиналась указанная ветвь, и использовали для вычисления площади поперечного сечения (CSA) ветви с использованием следующих уравнений (где C=периметр, CSA=площадь поперечного сечения и r=радиус):
[0649] Затем подсчитывали общее число плодов на четвертичной ветви, дистальной относительно этого сочленения. Для нормирования размера ветвей совокупность плодов на каждой четвертичной ветви количественно определяли как число плодов на ветви, разделенное на CSA указанной четвертичной ветви:
[0650] Подсчитанное количество плодов на четвертичную ветвь CSA указано на фиг. 11 (апельсин «Валенсия») и фиг. 12 (красный грейпфрут) на диаграммах типа «ящик с усами», где медианное значение для каждой обработки отмечено вертикальной линией в «ящике», среднее или усредненное значение отмечено символом «x», верхний и нижний квартили отмечены краями «ящика», а «усы» доходят до максимальных и минимальных наблюдаемых значений подсчитанного количества плодов на CSA ветви. Все выпадающие значения отмечены небольшими кружками за пределами стандартных планок погрешностей для каждой обработки.
[0651] Для дополнительной оценки характеристик размера и объема плодов на дереве измеряли диаметр (мм) по меньшей мере 10 случайным образом выбранных плодов на дереве с использованием кронциркуля, размещенного на самом широком месте каждого плода. Средний диаметр плодов (мм) на дереве для каждой обработки указан на фиг. 13 (апельсин «Валенсия») и фиг. 14 (красный грейпфрут) на диаграммах типа «ящик с усами». Средний диаметр плодов использовали для расчетной оценки общего объема плодов на ветвь для каждой обработки. Для получения указанных расчетных значений рассчитывали объем в миллилитрах (мл) теоретически сферического апельсина с использованием следующего уравнения, где радиус (r) плода представляет собой средний диаметр (измеренный в миллиметрах) на ветвь, разделенный на 2:
[0652] Расчетный объем плодов, нормированный по CSA ветвей для каждой обработки, указан на фиг. 15 (апельсин «Валенсия») и фиг. 16 (красный грейпфрут) на диаграммах типа «ящик с усами».
[0653] Измерения, выполненные в июне 2018 г. для оценки совокупности плодов на деревьях апельсина «Валенсия» и грейпфрута «Руби Ред» в Окичоби, Флорида, показывают увеличение количества плодов на ветвь и увеличение размера плодов на деревьях обоих сортов, обработанных путем впрыскивания в стволы Bt.4Q7Flg22 в высокой 1X и низкой 10X концентрации (SEQ ID NO: 226) в апреле 2017 г., при сравнении средних и медианных значений всех измеренных показателей с необработанным контролем. Увеличенные совокупность и размер плодов являются прогностическими факторами увеличенной урожайности. Указанные результаты обеспечивают дополнительные доказательства того, что впрыскивание в ствол цитрусовых деревьев Bt.4Q7Flg22 может применяться для снижения бактериальных титров C. liberibacter у апельсина (фиг.9) и грейпфрута (фиг.10; таблица 84) и стимуляции роста новых отростков и плодов (таблица 85, фиг. 11-16) на цитрусовых деревьях.
[0654] Как можно увидеть из вышеизложенного, был достигнут ряд целей настоящего изобретения и получены другие благоприятные результаты.
[0655] Поскольку в вышеперечисленные полипептиды, рекомбинантные организмы, способы и семена могут быть внесены различные изменения без отступления от объема настоящего изобретения, предполагается, что весь материал, содержащийся в приведенном выше описании, должен быть интерпретирован как иллюстративный, а не ограничивающий.
ВАРИАНТЫ РЕАЛИЗАЦИИ
[0656] В качестве дополнительного иллюстративного материала ниже описаны дополнительные неограничивающие варианты реализации настоящего изобретения.
[0657] Вариант реализации 1 представляет собой полипептид для биоактивного примирования растения или части растения для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растений, отличающийся тем, что указанный полипептид включает:
(a) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 1-225, 227-375, 526, 528, 530, 532, 534, 536, 538, 540, 541, 751, 752 и 754-766; или
(b) мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного мутантного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 571-579 и 753; или
(c) мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного мутантного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 580-586; или
(d) ретро-инверсный полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 376-450, 527, 531, 533, 535, 537 и 539; или
(e) ретро-инверсный полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 451-525 или 768; или
(f) ретро-инверсный полипептид Flg15, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg15 содержит SEQ ID NO: 529 или 767; или
(g) гарпин или гарпиноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 587, 589, 591, 593, 594 и 595; или
(h) ретро-инверсный гарпин или гарпиноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 588, 590, 592, 596 и 597; или
(i) полипептид-стимулятор корневых волосков (RHPP), при этом последовательность аминокислот указанного RHPP содержит любую из SEQ ID NO: 600, 603 и 604; или
(j) полипептид ингибитора трипсина Кунитца (KTI), при этом последовательность аминокислот указанного полипептида KTI содержит SEQ ID No: 602; или
(k) ретро-инверсный полипептид-стимулятор корневых волосков (RI RHPP), при этом последовательность аминокислот указанного RI RHPP содержит любую из SEQ ID NO: 601, 605 и 606; или
(l) полипептид фактора элонгации Tu (EF-Tu), при этом последовательность аминокислот указанного полипептида EF-Tu содержит любую из SEQ ID NO: 607-623; или
(m) ретро-инверсный полипептид фактора элонгации Tu (RI EF-Tu), при этом последовательность аминокислот указанного RI-полипептида EF-Tu содержит любую из SEQ ID NO: 624-640; или
(n) слитый полипептид, содержащий SEQ ID NO: 750; или
(o) полипептид фитосульфокин (ФСК), при этом последовательность аминокислот указанного полипептида ФСК содержит SEQ ID NO: 598; или
(p) ретро-инверсный полипептид фитосульфокин (RI ФСК), при этом последовательность аминокислот указанного RI-полипептида ФСК содержит SEQ ID NO: 599; или
(q) тионин или тиониноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного тионина или тиониноподобного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 650-749, и
необязательно, отличающийся тем, что указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (a), мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (c), гарпин или гарпиноподобный полипептид по (g), полипептид KTI по (j), полипептид ФСК по (o) и тионин или тиониноподобный полипептид по (q) либо содержит химическую модификацию; либо представляет собой вариант, характеризующийся вставкой, делецией, инверсией, повтором, дупликацией, добавлением или заменой аминокислоты в последовательности аминокислот; либо является частью слитого белка; либо содержит последовательность распознавания протеазы.
[0658] Вариант реализации 2 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 1, отличающийся тем, что указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (a), мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (c), гарпин или гарпиноподобный полипептид по (g), полипептид KTI по (j), полипептид ФСК по (o) и тионин или тиониноподобный полипептид по (q) либо содержит химическую модификацию; либо представляет собой вариант, характеризующийся вставкой, делецией, инверсией, повтором, дупликацией, добавлением или заменой аминокислоты в последовательности аминокислот; либо является частью слитого белка; либо содержит последовательность распознавания протеазы.
[0659] Вариант реализации 3 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 2, отличающийся тем, что указанная химическая модификация включает ацетилирование, добавление кислоты, ацилирование, АДФ-рибозилирование, добавление альдегида, добавление алкиламида, амидирование, аминирование, биотинилирование, добавление карбамата, добавление хлорметилкетонов, ковалентное присоединение нуклеотида или производного нуклеотида, перекрестное связывание, циклизацию, образование дисульфидных связей, деметилирование, добавление сложного эфира, образование ковалентных перекрестных связей, образование цистеин-цистеиновых дисульфидных связей, образование пироглутамата, формилирование, гамма-карбоксилирование, гликозилирование, образование ГФИ-якоря, добавление гидразида, добавление гидроксамовой кислоты, гидроксилирование, иодирование, добавление липида, метилирование, миристиолирование, окисление, пегилирование, протеолитический процессинг, фосфорилирование, пренилирование, пальмитоилирование, добавление метки очистки, добавление пироглутамила, рацемизацию, селеноилирование, добавление сульфонамида, сульфатирование, опосредованное транспортной РНК добавление аминокислот к белкам, убиквитинирование или добавление мочевины.
[0660] Вариант реализации 4 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 2, отличающийся тем, что указанная химическая модификация включает N-концевую модификацию или C-концевую модификацию.
[0661] Вариант реализации 5 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 3, отличающийся тем, что указанная химическая модификация включает ацетилирование, амидирование, перекрестное связывание или циклизацию.
[0662] Вариант реализации 6 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 2, отличающийся тем, что указанная замена аминокислоты в последовательности аминокислот варианта включает замену на β-аминокислоту, D-аминокислоту или не встречающуюся в природе аминокислоту.
[0663] Вариант реализации 7 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 1, отличающийся тем, что указанный полипептид включает: мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (b); или ретро-инверсный полипептид Flg22 по (d); или ретро-инверсный полипептид FlgII-28 по (e); или ретро-инверсный полипептид Flg15 по (f); или ретро-инверсный гарпин или гарпиноподобный полипептид по (h); или RHPP по (i); или RI RHPP по (k); или полипептид EF-Tu по (l); или RI-полипептид EF-Tu по (m); или слитый полипептид по (n); или RI-полипептид ФСК по (p).
[0664] Вариант реализации 8 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 7, отличающийся тем, что последовательность аминокислот указанного мутантного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида по (b) содержит любую из SEQ ID NO: 571-573.
[0665] Вариант реализации 9 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-6, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид.
[0666] Вариант реализации 10 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 9, отличающийся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 754-766.
[0667] Вариант реализации 11 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-6, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид.
[0668] Вариант реализации 12 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 11, отличающийся тем, что указанный мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид происходит из бактерии рода Bacillus, Lysinibacillus, Paenibacillus, или Aneurinibacillus.
[0669] Вариант реализации 13 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 1, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит ретро-инверсный полипептид Flg22.
[0670] Вариант реализации 14 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 1, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит ретро-инверсный полипептид FlgII-28.
[0671] Вариант реализации 15 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 1, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит ретро-инверсный полипептид Flg15.
[0672] Вариант реализации 16 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-6, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит гарпин или гарпиноподобный полипептид.
[0673] Вариант реализации 17 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 1, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит ретро-инверсный гарпин или гарпиноподобный полипептид.
[0674] Вариант реализации 18 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 1, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит RHPP.
[0675] Вариант реализации 19 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 1, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит RI RHPP.
[0676] Вариант реализации 20 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 1, причем указанный полипептид включает полипептид EF-Tu.
[0677] Вариант реализации 21 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 1, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит ретро-инверсный полипептид EF-Tu.
[0678] Вариант реализации 22 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-21, отличающийся тем, что указанный полипептид дополнительно содержит коровую последовательность.
[0679] Вариант реализации 23 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 22 отличающийся тем, что указанный коровую последовательность содержит любую из SEQ ID 754-766.
[0680] Вариант реализации 24 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 1, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит слитый полипептид.
[0681] Вариант реализации 25 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 24, отличающийся тем, что указанный слитый полипептид содержит вспомогательный полипептид.
[0682] Вариант реализации 26 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 25, отличающийся тем, что указанный вспомогательный полипептид включает сигнатурный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного сигнатурного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 542-548 или любую их комбинацию.
[0683] Вариант реализации 27 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 25, отличающийся тем, что указанный вспомогательный полипептид включает сигнатурный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного сигнатурного полипептида содержит SEQ ID NO: 542.
[0684] Вариант реализации 28 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 25, отличающийся тем, что указанный вспомогательный полипептид включает сигнальный якорный сортирующий полипептид, и последовательность аминокислот указанного сигнального якорного сортирующего полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 549-562 или любую их комбинацию.
[0685] Вариант реализации 29 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 25, отличающийся тем, что указанный вспомогательный полипептид включает сигнальный якорный сортирующий полипептид, и последовательность аминокислот указанного сигнального якорного сортирующего полипептида содержит SEQ ID NO: 549.
[0686] Вариант реализации 30 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-6, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит фитосульфокиновый полипептид.
[0687] Вариант реализации 31 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-6, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит ретро-инверсный фитосульфокиновый полипептид.
[0688] Вариант реализации 32 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-6, отличающийся тем, что указанный полипептид содержит тионин или тиониноподобный полипептид.
[0689] Вариант реализации 33 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-32, отличающийся тем, что указанный полипептид дополнительно содержит коровую последовательность, содержащую любую из SEQ ID NO: 754-768, и тем, что включение указанной коровой последовательности увеличивает примирующую биоактивность указанного полипептида.
[0690] Вариант реализации 34 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-33, отличающийся тем, что указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 70% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0691] Вариант реализации 35 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-34, отличающийся тем, что указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 75% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0692] Вариант реализации 36 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-35, отличающийся тем, что указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 80% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0693] Вариант реализации 37 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-36, отличающийся тем, что указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 85% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0694] Вариант реализации 38 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-37, отличающийся тем, что указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 90% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0695] Вариант реализации 39 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-38, отличающийся тем, что указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 95% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0696] Вариант реализации 40 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-39, отличающийся тем, что указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 98% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-768, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0697] Вариант реализации 41 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-40, отличающийся тем, что указанный полипептид может содержать последовательность аминокислот, по меньшей мере на 99% идентичную любой из SEQ ID NO: 1-766, при этом указанный полипептид обладает примирующей биоактивностью.
[0698] Вариант реализации 42 представляет собой полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-41, отличающийся тем, что указанный полипептид выделен, концентрирован из продукта ферментации и/или частично очищен.
[0699] Вариант реализации 43 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 42, отличающийся тем, что указанный полипептид выделен, концентрирован из продукта ферментации и/или частично очищен с помощью фильтрации или хроматографии.
[0700] Вариант реализации 44 представляет собой полипептид согласно варианту реализации 42 или 43, отличающийся тем, что указанный полипептид выделен, концентрирован из продукта ферментации или частично очищен из рекомбинантного микроорганизма.
[0701] Вариант реализации 45 представляет собой композицию для биоактивного примирования растения или части растения для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растений, причем указанная композиция содержит что-либо из следующего:
полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-44 или любой их комбинации, и агрохимикат или носитель; или
любую комбинацию указанных полипептидов согласно любому из вариантов реализации 1-44.
[0702] Вариант реализации 46 представляет собой композицию согласно варианту реализации 45, отличающуюся тем, что указанная композиция содержит флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (a), мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (c), гарпин или гарпиноподобный полипептид по (g), полипептид KTI по (j), полипептид ФСК по (o), тионин или тиониноподобный полипептид по (q), или любую комбинацию перечисленного, и агрохимикат или носитель, причем указанный агрохимикат или носитель не ассоциирован с указанным полипептидом в природе.
[0703] Вариант реализации 47 представляет собой композицию согласно варианту реализации 45, отличающуюся тем, что указанная композиция содержит:
мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (b); или ретро-инверсный полипептид Flg22 по (d); или ретро-инверсный полипептид FlgII-28 по (e); или ретро-инверсный полипептид Flg15 по (f); или ретро-инверсный гарпин или гарпиноподобный полипептид по (h); или RHPP по (i); или RI RHPP по (k); или полипептид EF-Tu по (l); или RI-полипептид EF-Tu по (m); или слитый полипептид по (n); RI-полипептид ФСК по (p), или любую комбинацию перечисленного; и
флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (a), мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (c), гарпин или гарпиноподобный полипептид по (g), полипептид KTI по (j), полипептид ФСК по (o), тионин или тиониноподобный полипептид по (q), или любую комбинацию перечисленного.
[0704] Вариант реализации 48 представляет собой композицию согласно варианту реализации 46 или 47, отличающуюся тем, что указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (a), мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (c), гарпин или гарпиноподобный полипептид по (g), полипептид KTI по (j), полипептид ФСК по (o), тионин или тиониноподобный полипептид по (q) или любая комбинация перечисленного не содержит химической модификации; не является вариантом; не является частью слитого белка; и не содержит последовательности распознавания протеазы.
[0705] Вариант реализации 49 представляет собой композицию согласно варианту реализации 45, отличающуюся тем, что указанная композиция содержит: два или более мутантных флагеллинов или флагеллин-ассоциированных полипептидов по (b); или ретро-инверсных полипептидов Flg22 по (d); или ретро-инверсных полипептидов FlgII-28 по (e); или ретро-инверсных полипептидов Flg15 по (f); или ретро-инверсных гарпинов или гарпиноподобных полипептидов по (h); или RHPP по (i); или RI RHPP по (k); или полипептидов EF-Tu по (l); или RI-полипептидов EF-Tu по (m); или слитых полипептидов по (n); или RI-полипептидов ФСК по (p).
[0706] Вариант реализации 50 представляет собой композицию согласно варианту реализации 45, отличающуюся тем, что указанная композиция содержит: два или более флагеллинов или флагеллин-ассоциированных полипептидов по (a), мутантных флагеллинов или флагеллин-ассоциированных полипептидов по (c), гарпинов или гарпиноподобных полипептидов по (g), полипептидов KTI по (j), полипептидов ФСК по (o) или тионинов или тиониноподобных полипептидов по (q), отличающихся чем-либо из следующего:
по меньшей мере что-либо одно из флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида по (a), мутантного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида по (c), гарпина или гарпиноподобного полипептида по (g), полипептида ФСК по (o), или тионина или тиониноподобного полипептида по (q) содержит химическую модификацию; является вариантом; является частью слитого белка; или содержит последовательность распознавания протеазы; или
по меньшей мере два флагеллина или флагеллин-ассоциированных полипептида по (a), мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (c), гарпин или гарпиноподобный полипептид по (g), полипептид KTI по (j), полипептид ФСК по (o), или тионин или тиониноподобный полипептид по (q) не ассоциированы в природе.
[0707] Вариант реализации 51 представляет собой композицию согласно варианту реализации 45, отличающуюся тем, что указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид получают рекомбинантным способом с использованием микроорганизма.
[0708] Вариант реализации 52 представляет собой композицию согласно варианту реализации 51, отличающуюся тем, что указанный микроорганизм включает бактерию из рода Bacillus, бактерию из рода Pseudomonas, бактерию из рода Paenibacillus, гриб из рода Penicillium, бактерию из рода Glomus, бактерию из рода Arthrobacter, бактерию из рода Paracoccus, бактерию из рода Rhizobium, бактерию из рода Bradyrhizobium, бактерию из рода Azosprillium, бактерию из рода Enterobacter, бактерию из рода Escherichia или любую их комбинацию.
[0709] Вариант реализации 53 представляет собой рекомбинантный микроорганизм, который экспрессирует или сверхэкспрессирует полипептид, причем указанный полипептид включает полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-44 или любую их комбинацию.
[0710] Вариант реализации 54 представляет собой рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 53, отличающийся тем, что указанный полипептид включает: флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (a); или мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (b); или мутантный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид по (c); или гарпин или гарпиноподобный полипептид по (g); или RHPP по (i); или полипептид KTI по (j); или полипептид EF-Tu по (l); или слитый полипептид по (n); или полипептид ФСК по (o); или тионин или тиониноподобный полипептид по (q).
[0711] Вариант реализации 55 представляет собой рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 53 или 54, отличающийся тем, что он сверхэкспрессирует указанный полипептид.
[0712] Вариант реализации 56 представляет собой рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 55, отличающийся тем, что указанный полипептид получают с сигналом секреции.
[0713] Вариант реализации 57 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, отличающиеся тем, что указанный полипептид содержит флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид.
[0714] Вариант реализации 58 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 57, отличающиеся тем, что указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид химически модифицирован на N- или C-конце.
[0715] Вариант реализации 59 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 57, отличающиеся тем, что указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид модифицирован путем перекрестного связывания или циклизации.
[0716] Вариант реализации 60 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 57, отличающиеся тем, что указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид происходит из бактерии рода Bacillus, Lysinibacillus, Paenibacillus, Aneurinibacillus или любой их комбинации.
[0717] Вариант реализации 61 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 57, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 1-75 или любую их комбинацию.
[0718] Вариант реализации 62 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 57, отличающиеся тем, что указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид содержит усеченный N-концевой полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного усеченный N-концевого полипептида содержит SEQ ID NO: 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106,108, 109, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154,156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182,184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 752 или любую их комбинацию.
[0719] Вариант реализации 63 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 57, отличающиеся тем, что указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид содержит усеченный C-концевой полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного усеченного C-концевого полипептида содержит SEQ ID NO: 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 201, 203, 205, 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225 или любую их комбинацию.
[0720] Вариант реализации 64 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 57, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 289, 290, 291, 293, 294, 295, 300, 437, 532, 534, 536, 538, 540, 571-586 и 751-768 или любую их комбинацию.
[0721] Вариант реализации 65 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 64, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 293, 295, 300, 540, 571, 574 и 752 или любую их комбинацию.
[0722] Вариант реализации 66 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 64, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 754-766.
[0723] Вариант реализации 67 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 66, отличающиеся тем, что указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид включен в не являющийся флагеллином или не ассоциированный с флагеллином полипептид или полноразмерный белок, при этом включение указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида приводит к повышенной биоактивной примирующей активности указанного не являющийся флагеллином или не ассоциированного с флагеллином полипептида или полноразмерного белка.
[0724] Вариант реализации 68 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 57, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226-300 или любую их комбинацию.
[0725] Вариант реализации 69 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 57, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 301-375 и 751 или любую их комбинацию.
[0726] Вариант реализации 70 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 69, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 301.
[0727] Вариант реализации 71 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, отличающиеся тем, что указанный полипептид содержит ретро-инверсный полипептид Flg22.
[0728] Вариант реализации 72 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, отличающиеся тем, что указанный полипептид содержит ретро-инверсный полипептид FlgII-28.
[0729] Вариант реализации 73 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, отличающиеся тем, что указанный полипептид содержит тионин или тиониноподобный полипептид.
[0730] Вариант реализации 74 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 73, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного тионина или тиониноподобного полипептида содержит SEQ ID NO: 651.
[0731] Вариант реализации 75 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 74, отличающиеся тем, что указанный тионин или тиониноподобный полипептид слит с нацеливающей на флоэму последовательностью с образованием слитого полипептида, при этом последовательность аминокислот указанной нацеливающей на флоэму последовательности содержит любую из SEQ ID NO: 641-649 или любую их комбинацию, для доставки указанного слитого полипептида в сосудистую ткань или сосудистые клетки, и/или во флоэму, или в ассоциированную с флоэмой ткань или ассоциированные с флоэмой клетки в растении или в части растения.
[0732] Вариант реализации 76 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 75, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного нацеливающей на флоэму последовательностью содержит SEQ ID NO: 641.
[0733] Вариант реализации 77 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, отличающиеся тем, что указанный полипептид включает полипептид ФСК.
[0734] Вариант реализации 78 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 77, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного полипептида ФСК содержит SEQ ID NO: 598.
[0735] Вариант реализации 79 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, отличающиеся тем, что указанный полипептид содержит RHPP.
[0736] Вариант реализации 80 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 79, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного RHPP содержит SEQ ID NO: 600.
[0737] Вариант реализации 81 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 80, дополнительно содержащие флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид.
[0738] Вариант реализации 82 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 81, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 752 и 571.
[0739] Вариант реализации 83 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 82, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226.
[0740] Вариант реализации 84 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, отличающиеся тем, что указанный полипептид содержит RI RHPP.
[0741] Вариант реализации 85 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 38-47, отличающиеся тем, что указанный полипептид содержит гарпин или гарпиноподобный полипептид.
[0742] Вариант реализации 86 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 85, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит SEQ ID NO: 587.
[0743] Вариант реализации 87 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, содержащие полипептид ФСК, RHPP, гарпин или гарпиноподобный полипептид, или их комбинацию.
[0744] Вариант реализации 88 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, отличающиеся тем, что указанный полипептид включает полипептид EF-Tu.
[0745] Вариант реализации 89 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, отличающиеся тем, что указанный полипептид дополнительно содержит сигнал секреции.
[0746] Вариант реализации 90 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 88 или 89, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного полипептида EF-Tu содержит SEQ ID NO: 616.
[0747] Вариант реализации 91 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 90, дополнительно включающие полипептид EF-Tu, имеющий последовательность аминокислот, содержащую SEQ ID NO: 617.
[0748] Вариант реализации 92 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 88-91, дополнительно содержащие флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, причем последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 1-525, 526, 530, 532, 534, 536, 538, 540, 541, 571- 586 и 751-766, или любую их комбинацию.
[0749] Вариант реализации 93 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 92, дополнительно содержащие флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, причем последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226, 571 или 752, или их комбинацию.
[0750] Вариант реализации 94 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 92, дополнительно содержащие гарпин или гарпиноподобный полипептид.
[0751] Вариант реализации 95 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 94, отличающиеся тем, что последовательность аминокислот указанного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит SEQ ID NO: 587.
[0752] Вариант реализации 96 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, содержащие
(a) флагеллиновые или флагеллин-ассоциированные полипептиды, при этом последовательности аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированных полипептидов содержат SEQ ID NO: 571, 295, 300, 293 и 580; или 295, 300, 293 и 580; или 571, 295, 293 и 580; или 571, 300, 293 и 580; или 571, 293 и 580; или 571, 295, 293; или
(b) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226 и что-либо одно или более из целлобиозы, хитина, хитозана или целлюлозы; или
(c) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226, и гарпин или гарпиноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит SEQ ID NO: 591; или
(d) гарпин или гарпиноподобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного гарпина или гарпиноподобного полипептида содержит SEQ ID NO: 587, и полипептид ФСК, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида ФСК содержит SEQ ID NO: 598; или
(e) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226, 571 или 752, или любую их комбинацию; и полипептиды EF-Tu, при этом последовательности аминокислот указанных полипептидов EF-Tu содержат SEQ ID NO: 616 и 617; или
(f) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226, 540, 571 или 752, или любую их комбинацию; или
(g) полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида RHPP содержит SEQ ID NO: 600; или
(h) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательности аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226, 540, 226, 571 или 752, или любую их комбинацию; и полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида RHPP содержит SEQ ID NO: 600; или
(i) флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226; и полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида RHPP содержит SEQ ID NO: 600.
[0753] Вариант реализации 97 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, отличающиеся тем, что указанный полипептид содержит слитый полипептид.
[0754] Вариант реализации 98 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-56, отличающиеся тем, что указанный флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид представляет собой слитый с полипептидом белок.
[0755] Вариант реализации 99 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 45-98, дополнительно содержащий вспомогательный полипептид.
[0756] Вариант реализации 100 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 99, отличающиеся тем, что указанный вспомогательный полипептид включает сигнатурный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного сигнатурного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 542-548 или любую их комбинацию.
[0757] Вариант реализации 101 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 99, отличающиеся тем, что указанный вспомогательный полипептид включает сигнатурный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного сигнатурного полипептида содержит SEQ ID NO: 542.
[0758] Вариант реализации 102 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 99, отличающиеся тем, что указанный вспомогательный полипептид включает сигнальный якорный сортирующий полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного сигнального якорного сортирующего полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 549-562 или любую их комбинацию.
[0759] Вариант реализации 103 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 102, отличающиеся тем, что указанный вспомогательный полипептид включает сигнальный якорный сортирующий полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного сигнального якорного сортирующего полипептида содержит SEQ ID NO: 549.
[0760] Вариант реализации 104 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 99, отличающиеся тем, что указанный вспомогательный полипептид включает полипептид секреции, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида секреции содержит любую из SEQ ID NO: 563-570 или 769, или любую их комбинацию.
[0761] Вариант реализации 105 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 104, отличающиеся тем, что указанный вспомогательный полипептид включает полипептид секреции, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида секреции содержит SEQ ID NO: 563 или 769.
[0762] Вариант реализации 106 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 99 или 104, отличающиеся тем, что указанный вспомогательный полипептид включает последовательность расщепления энтерокиназой, при этом последовательность аминокислот указанной последовательности расщепления энтерокиназой содержит SEQ ID NO: 772.
[0763] Вариант реализации 107 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 106, отличающиеся тем, что вспомогательный полипептид включает соединительную область между полипептидом и белковой меткой.
[0764] Вариант реализации 108 представляет собой композицию или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 107, отличающиеся тем, что указанная белковая метка включает полигистидиновую (His) метку, метку FLAG, эпитоп антитела, стрептавидин/биотин, глутатион-S-трансферазу (GST) или любую их комбинацию.
[0765] Вариант реализации 109 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 45-52 и 57-108, дополнительно содержащую либо агрохимикат, либо носитель, который ассоциирован с указанным полипептидом в природе.
[0766] Вариант реализации 110 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 45-52 и 57-109, отличающийся тем, что указанный агрохимикат содержит антибиотик, биопестицид, консервант, буферный агент, смачивающий агент, поверхностно-активное вещество, агент для покрытия, моносахарид, полисахарид, абразивный агент, пестицид, инсектицид, гербицид, нематоцид, бактериоцид, фунгицид, майтицид, удобрение, биостимулятор, осмопротектор, окрашивающее средство, увлажнитель, аминокислоту, агент для биологического контроля или комбинацию перечисленного.
[0767] Вариант реализации 111 представляет собой композицию согласно варианту реализации 110, отличающуюся тем, что указанный консервант содержит дихлорофен, полуформаль бензилового спирта, производное изотиазолинона, алкилизотиазолинон, бензизотиазолинон, MIT (2- метил-4-изотиазолин-3-он), BIT (1,2-бензизотиазолин-3-он), 5-хлор-2-(4-хлорбензил)-3(2H)-изотиазолон, 5-хлор-2-метил-2H-изотиазол-3-он, 5-хлор-2-метил-2H-изотиазол-3-он, 5-хлор-2-метил-2H-изотиазол-3-он-гидрохлорид, 4,5-дихлор-2-циклогексил-4- изотиазолин-3-он, 4,5-дихлор-2-октил-2H-изотиазол-3-он, 2-метил-2H- изотиазол-3-он, комплекс 2-метил-2H-изотиазол-3-он-хлорида кальция, 2-октил-2H-изотиазол-3-он; или любую комбинацию перечисленного.
[0768] Вариант реализации 112 представляет собой композицию согласно варианту реализации 110 или 111, отличающуюся тем, что указанный буферный агент содержит калий, фосфорную кислоту, фосфатную соль, лимонную кислоту, цитратную соль, сульфатную соль, MOPS, HEPES или любую их комбинацию.
[0769] Вариант реализации 113 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 110-112, отличающуюся тем, что указанный смачивающий агент содержит кремнийорганическое вещество, полиоксиэтоксилат, полисорбат, полиэтиленгликоль или производное перечисленного, этоксилат, масло для обработки растений, полисахарид или любую комбинацию перечисленного.
[0770] Вариант реализации 114 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 110-113, отличающуюся тем, что указанное поверхностно-активное вещество содержит темное нефтяное масло, темный нефтяной дистиллят, сложный эфир жирной кислоты и многоатомного спирта, полиэтоксилированный сложный эфир жирной кислоты, арилалкилполиоксиэтиленгликоль, алкиламинацетат, алкиларилсульфонат, многоатомный спирт, алкилфосфат, этоксилат спирта, этоксилат алкилфенола, алкоксилированные полиолы, простые алкилполиэтоксиэфиры, производные этоксилированного соевого масла, алкилполиоксиэтиленглицерин, этоксилат спирта, монобутиловый простой эфир полиоксиэтиленполиоксипропилена, производное кремнийорганического вещества или любую комбинацию перечисленного.
[0771] Вариант реализации 115 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 110-114, отличающуюся тем, что указанный агент для покрытия содержит придающий липкость агент, полимеры, наполнитель, объемообразующий агент или любую их комбинацию.
[0772] Вариант реализации 116 представляет собой композицию согласно варианту реализации 115, отличающуюся тем, что указанный придающий липкость агент содержит карбоксиметилцеллюлозу, природный полимер, синтетический полимер, гуммиарабик, хитин, поливиниловый спирт, поливинилацетат, природный фосфолипид, кефалин, лецитин, синтетический фосфолипид, сложный полиэфир, полиэфир-эфирный сополимер, полиангидрид, полиэфируретан, сложный полиэфирамид; поливинилацетат; сополимер поливинилацетата; тилозу; сополимер поливинилового спирта; поливинилпирролидон; полисахарид, крахмал, модифицированный крахмал, производное крахмала, декстрин, мальтодекстрин, альгинат, хитозан, целлюлозу, сложный эфир целлюлозы, простой эфир целлюлозы, сложные эфиры простых эфиров целлюлозы, этилцеллюлозу, метилцеллюлозу, гидроксиметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу; жир; масло; белок, казеин, желатин, зеин; шеллак; винилиденхлорид, сополимер винилиденхлорида; лигносульфонат, кальция лигносульфонат; полиакрилат, полиметакрилат, акриловый сополимер; поливинилакрилат; полиэтиленоксид; полибутен, полиизобутилен, полистирол, полибутадиен, полиэтиленамин, полиэтиленамид; полимер или сополимер акриламида; полигидроксиэтилакрилат, метилакриламид; полихлоропрен или любую комбинацию перечисленного.
[0773] Вариант реализации 117 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 110-116, отличающуюся тем, что указанный абразивный агент содержит тальк, графит или их комбинацию.
[0774] Вариант реализации 118 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 110-117, отличающуюся тем, что указанный пестицид содержит инсектицид, гербицид, фунгицид, бактериоцид, нематоцид, майтицид или любую их комбинацию.
[0775] Вариант реализации 119 представляет собой композицию согласно варианту реализации 118, отличающуюся тем, что указанный инсектицид содержит клотианидин, имидаклоприд, фосфорорганическое соединение, карбамат, пиретроид, акарицид, алкилфталат, борную кислоту, борат, фторид, серу, мочевину с галоароматическими заместителями, сложный эфир углеводорода, биологический инсектицид или любую их комбинацию.
[0776] Вариант реализации 120 представляет собой композицию согласно варианту реализации 118, отличающуюся тем, что указанный гербицид содержит 2,4-D, 2,4-DB, ацетохлор, ацифлуорфен, алахлор, аметрин, атразин, аминопиралид, бенефин, бенсульфурон, бенсульфурон-метил, бенсулид, бентазон, биспирибак натрия, бромацил, бромоксинил, бутилат, карфентразон, хлоримурон, 2-хлорфеноксиуксусную кислоту, хлорсульфурон, хлоримурон-этил, клетодим, кломазон, клопиралид, клорансулам, диметиламиновую соль хлор-2-метилфеноксипропановой кислоты (CMPP-P_DMA), циклоат, ДХФК, десмедифам, дикамбу, дихлобенил, диклофоп, 2,4-дихлорфенол, дихлорфеноксиуксусную кислоту, дихлорпроп, дихлорпроп-П, диклосулам, дифлуфензопир, диметенамид, диметиламиновую соль 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты, дикват, диурон, DSMA, эндоталь, EPTC, эталфлуралин, этофумесат, феноксапроп, флуазифоп-П, флукарбазон, флуфенацет, флуметсулам, флумиклорак, флумиоксазин, флуометурон, флуроксипир, 1-метилгептиловый эфир фтороксипира, фомесафен, натриевую соль фомесафена, форамсульфурон, глюфосинат, глюфосинат аммония, глифосат, галосульфурон, галосульфурон-метил, гексазинон, 2-гидроксифеноксиуксусную кислоту, 4-гидроксифеноксиуксусную кислоту, имазаметабенз, имазамокс, имазапик, имазаквин, имазетапир, изоксабен, изоксафлутол, лактофен, линурон, мазапир, МЦПА, МЦПБ, мекопроп, мекопроп-P, мезотрион, С-метолахлор, метрибузин, метсульфурон, метсульфурон-метил, молинат, MSMA, напропамид, напталам, никосульфурон, норфлуразон, оризалин, оксадиазон, оксифторфен, паракват, пеларгоновую кислоту, пендиметалин, фенмедифам, пиклорам, примисульфурон, продиамин, прометрин, пронамид, пропанил, просульфурон, пиразон, пиритиобак, пироксасульфон, квинклорак, квизалофоп, римсульфурон, сетоксидим, сидурон, симазин, сульфентразон, сульфометурон, сульфосульфурон, тебутиурон, тербацил, тиазопир, тифенсульфурон, тифенсульфурон-метил, тиобенкарб, триалкоксидим, триаллат, триасульфурон, трибенурон, трибернурон-метил, триклопир, трифлуралин, трифлусульфурон или любую их комбинацию.
[0777] Вариант реализации 121 представляет собой композицию согласно варианту реализации 118, отличающуюся тем, что указанный нематоцид содержит Bacillus firmus, флуопирам, антибиотик-нематоцид, абамектин, карбамат-нематоцид, ацетопрол, Bacillus chitonosporus, хлорпикрин, бенклотиаз, беномил, Burholderia cepacia, карбофуран, карбосульфан, клеотокард, дазомет, дибромхлорпропан (DBCP), DCIP, аланикарб, алдикарб, альдоксикарб, оксамил, диамидафос, фенамифос, фостиетан, фосфамидон, кадусафос, хлорпирифос, диклофентион, диметоат, этопрофос, фенсульфотион, фостиазат, гарпины, гетерофос, имициафос, изамидофос, изазофос, метомил, мекарфон, Myrothecium verrucaria, Paecilomyces lilacinus, Pasteuria nishizawae, форат, фосфокарб, тербуфос, тионазин, тиоксазафен, триазофос, дазомет, 1,2-дихлорпропан, 1,3-дихлорпропен, фурфурал, йодметан, метам, метилбромид, метилизотиоцианат, ксиленол; или любую их комбинацию.
[0778] Вариант реализации 122 представляет собой композицию согласно варианту реализации 118, отличающуюся тем, что указанный бактериоцид содержит стрептомицин, пенициллин, тетрациклин, окситетрациклин, ампициллин, оксолиновую кислоту, касугамицин, хлортетрациклин, оксид меди или любую их комбинацию.
[0779] Вариант реализации 123 представляет собой композицию согласно варианту реализации 122, отличающуюся тем, что указанный бактериоцид содержит окситетрациклин.
[0780] Вариант реализации 124 представляет собой композицию согласно варианту реализации 118, отличающийся тем, что указанный агент для биологического контроля содержит Bacillus thuringiensis, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides, изолят J, Bacillus methylotrophicus, Bacillus vallismortis, Chromobacterium subtsugae, Delftia acidovorans, Streptomyces lydicus, Streptomyces colombiensis, Streptomyces galbus K61, Penicillium bilaii, продуцирующий липопептид штамм Bacillus subtilis, продуцирующий липопептид штамм Bacillus amyloliquefaciens, штамм Bacillus firmus или штамм Bacillus pumilus.
2
2
4
[0781] Вариант реализации 125 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 110-124, отличающуюся тем, что указанное удобрение содержит сульфат аммония, нитрат аммония, нитрат сульфата аммония, хлорид аммония, бисульфат аммония, полисульфид аммония, тиосульфат аммония, водный аммиак, безводный аммиак, полифосфат аммония, сульфат алюминия, нитрат кальция, нитрат кальция-аммония, сульфат кальция, обожженный магнезит, кальцитовый известняк, оксид кальция, нитрат кальция, доломитовый известняк, гидратную известь, карбонат кальция, диаммонийфосфат, моноаммонийфосфат, нитрат магния, сульфат магния, нитрат калия, хлорид калия, сульфат магния-калия, сульфат калия, нитраты натрия, магнезиальный известняк, магнезию, мочевину, формальдегидмочевины, мочевино-аммониевый нитрат, покрытую серой мочевину, покрытую полимером мочевину, изобутилидендимочевину, KSO4-MgSO, каинит, сильвинит, кизерит, соли Эпсома, элементарную серу, мергель, молотые раковины устриц, рыбную муку, жмыхи, рыбный тук, кровяную муку, фосфатную руду, суперфосфаты, шлак, костную муку, древесную золу, навоз, помет летучих мышей, торфяной мох, компост, сырой песок, муку из жмыха семян хлопчатника, перьевую муку, крабовую кормовую муку, рыбную эмульсию, гуминовую кислоту или любую их комбинацию.
[0782] Вариант реализации 126 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 110-125, отличающуюся тем, что указанное удобрение содержит борную кислоту, борат, борную фритту, сульфат меди, медную фритту, хелат меди, натрия тетраборат декагидрат, сульфат железа, оксид железа, сульфат железа-аммония, железную фритту, хелат железа, сульфат марганца, оксид марганца, хелат марганца, хлорид марганца, марганцевую фритту, молибдат натрия, молибденовую кислоту, сульфат цинка, оксид цинка, карбонат цинка, цинковую фритту, фосфат цинка, хелат цинка или любую их комбинацию.
[0783] Вариант реализации 127 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 110-126, отличающуюся тем, что указанный биостимулятор содержит экстракт морских водорослей, элиситор, полисахарид, моносахарид, экстракт белка, соевый экстракт, гуминовую кислоту, гормон растений, регулятор роста растений или любую их комбинацию.
[0784] Вариант реализации 128 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 110-126, отличающуюся тем, что указанная аминокислота включает цистеин.
[0785] Вариант реализации 129 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации или 57-128, дополнительно содержащую фунгицид.
[0786] Вариант реализации 130 представляет собой композицию согласно варианту реализации 129, отличающуюся тем, что указанный фунгицид содержит стробилуриновый фунгицид или триазольный фунгицид.
[0787] Вариант реализации 131 представляет собой композицию согласно варианту реализации 130, отличающуюся тем, что указанный стробилуриновый фунгицид включает стробилурин A, стробилурин B, стробилурин C, стробилурин D, стробилурин E, стробилурин F, стробилурин G, стробилурин H, азоксистробин, трифлоксистробин, крезоксимметил, флуоксастробин, пикоксистробин или любую их комбинацию.
[0788] Вариант реализации 132 представляет собой композицию согласно варианту реализации 131, отличающуюся тем, что указанный стробилуриновый фунгицид включает азоксистробин, трифлоксистробин, крезоксимметил, флуоксастробин, пикоксистробин, пираклостробин или любую их комбинацию.
[0789] Вариант реализации 133 представляет собой композицию согласно варианту реализации 131, отличающуюся тем, что указанный стробилуриновый фунгицид включает трифлоксистробин.
[0790] Вариант реализации 134 представляет собой композицию согласно варианту реализации 131, отличающуюся тем, что указанный стробилуриновый фунгицид включает флуоксастробин.
[0791] Вариант реализации 135 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 130-134, отличающуюся тем, что указанный триазольный фунгицид включает протиоконазол, имидазол, имидазил, прохлораз, пропиконазол, трифлумизол, диниконазол, флусилазол, пенконазол, гексаконазол, ципроконазол, миклобутанил, тебуконазол, дифеноконазол, тетраконазол, фенбуконазол, эпоксиконазол, метконазол, флуквинконазол, тритиконазол или любую их комбинацию.
[0792] Вариант реализации 136 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 130-135, отличающуюся тем, что указанный триазольный фунгицид включает протиоконазол.
[0793] Вариант реализации 137 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 45-52 или 57-136, отличающуюся тем, что указанный увлажнитель содержит глицерол, глицерин, производное глицерина, триацетат глицерина, триацетин, пропиленгликоль, гексиленгликоль, бутиленгликоль, триэтиленгликоль, триполипропиленгликоль, глицерилтриацетат, сахарозу, тагатозу, сахарный спирт, многоатомный сахарный спирт, сорбит, ксилит, маннит, мантитол, полимерный многоатомный спирт, полидекстрозу, коллаген, алоэ, гель алоэ вера, альфагидроксикислоту, мед, мелассу, квиллайю, гексаметафосфат натрия, хлорид лития, мочевину, бутиленгликоль или экстракт тремеллы
[0794] Вариант реализации 138 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 45-52 или 57-137, отличающуюся тем, что указанный носитель содержит воду, торф, пшеницу, отруби, вермикулит, глину, пастеризованную почву, карбонат кальция, бикарбонат кальция, доломит, гипс, бентонит, глину, фосфорит, соединение фосфора, диоксид титана, гумус, тальк, альгинат, активированный уголь или их комбинацию.
[0795] Вариант реализации 139 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 45-52 или 57-138, отличающуюся тем, что указанная композиция содержит от приблизительно 0,00001 масс. % до приблизительно 95% указанного полипептида или полипептидов, от приблизительно 0,01% до приблизительно 80 масс. % указанного агрохимиката и от приблизительно 5 до приблизительно 50 масс. % носителя от общей массы композиции.
[0796] Вариант реализации 140 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 45-52 или 57-139, отличающуюся тем, что указанная композиция содержит от приблизительно 0,01% до приблизительно 5% указанного полипептида или полипептидов, от приблизительно 0,2% до приблизительно 70 масс. % указанного агрохимиката, и от приблизительно 10 до приблизительно 30 масс. % носителя от общей массы композиции.
[0797] Вариант реализации 141 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 45-52 или 57-139, отличающуюся тем, что указанная композиция содержит от приблизительно 0,05% до приблизительно 1% указанного полипептида или полипептидов, от приблизительно 30% до приблизительно 60 масс. % указанного агрохимиката, и от приблизительно 40 до приблизительно 69 масс. % носителя от общей массы композиции.
[0798] Вариант реализации 142 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 45-52 или 57-141, отличающуюся тем, что указанный агрохимикат содержит соляную кислоту, уксусную кислоту и/или трифторуксусную кислоту.
[0799] Вариант реализации 143 представляет собой композицию согласно варианту реализации 142, отличающуюся тем, что указанный агрохимикат содержит соляную кислоту, уксусную кислоту и/или трифторуксусную кислоту, и содержит от приблизительно 0,001 масс. % до приблизительно 30% масс. % от общей массы композиции.
[0800] Вариант реализации 144 представляет собой композицию согласно варианту реализации 143, отличающуюся тем, что указанный агрохимикат содержит соляную кислоту, уксусную кислоту и/или трифторуксусную кислоту, и содержит от приблизительно 0,01 масс. % до приблизительно 20% масс. % от общей массы композиции.
[0801] Вариант реализации 145 представляет собой композицию согласно варианту реализации 144, отличающуюся тем, что указанный агрохимикат содержит соляную кислоту, уксусную кислоту и/или трифторуксусную кислоту, и содержит от приблизительно 0,1 масс. % до приблизительно 5 масс. % от общей массы композиции
[0802] Вариант реализации 146 представляет собой семя, покрытое полипептидом согласно любому из вариантов реализации 1-44 или любой их комбинации, или композицией согласно любому из вариантов реализации 45-52 и 57-145, или рекомбинантным микроорганизмом согласно любому из вариантов реализации 53-108.
[0803] Вариант реализации 147 представляет собой способ улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растения, при этом указанный способ включает что-либо из следующего:
(a) применение полипептида согласно любому из вариантов реализации 1-45 или композиции согласно любому из вариантов реализации 45-52 и 57-145 для растения, части растения или в ростовой среде для растений, или в ризосфере в области, окружающей растение или часть растения, для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растения; или
(b) применение полипептида согласно любому из вариантов реализации 1-45 или композиции согласно любому из вариантов реализации 45-52 и 57-145 в ростовой среде для растений, для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений, и/или защиты растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений, от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа, и/или изменения архитектуры растения или части растения, которое предполагают выращивать в указанной ростовой среде для растений; или
(c) применение рекомбинантного микроорганизма согласно любому из вариантов реализации 53-56, 102 и 105 на растении, на части растения или в ростовой среде для растений, или в ризосфере в области, окружающей растение или часть растения, для улучшения роста, урожайности, состояния здоровья, увеличения продолжительности жизни, продуктивности и/или жизненной силы растения или части растения, и/или уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения, и/или изменения архитектуры растения, при этом указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует полипептид, и экспрессия полипептида увеличивается по сравнению с уровнем экспрессии указанного полипептида в микроорганизме дикого типа того же вида в таких же условиях.
[0804] Вариант реализации 148 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит: полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 226-300 и 571-573 или любую их комбинацию; ретро-инверсный полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 376-450 или любую их комбинацию; или любую комбинацию перечисленного, для уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания; и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0805] Вариант реализации 149 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит: полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 301-375 или любую их комбинацию; ретро-инверсный полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 451-525 или любую их комбинацию; или любую комбинацию перечисленного, для уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания; и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0806] Вариант реализации 150 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит: ретро-инверсный полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 376-450 или любую их комбинацию; ретро-инверсный полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 451-525 или любую их комбинацию; или любую комбинацию перечисленного, для уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания; и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0807] Вариант реализации 151 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит: полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида RHPP содержит SEQ ID NO: 600, 603, 604 или любую их комбинацию; полипептид ингибитора трипсина Кунитца (KTI), при этом последовательность аминокислот указанного полипептида KTI содержит SEQ ID NO: 602; ретро-инверсный полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного RI RHPP содержит SEQ ID NO: 601, 605, 606 или любую их комбинацию; или любую комбинацию перечисленного, для уменьшения абиотического стресса у растения или части растения; и/или защиты растения или части растения от заболевания; и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0808] Вариант реализации 152 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 147-151, отличающийся тем, что указанный абиотический стресс включает тепловой стресс, температурный стресс, радиационный стресс, вызванный засухой стресс, холодовой стресс, вызванный засолением стресс, вызванный дефицитом питательных веществ стресс, вызванный высоким содержанием металлов стресс, водный стресс, осмотический стресс или любую комбинацию перечисленного.
[0809] Вариант реализации 153 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит: полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 226-300 и 571-573; ретро-инверсный полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 376-450; или любую комбинацию перечисленного, для защиты растения или части растения от заболевания и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0810] Вариант реализации 154 представляет собой способ согласно варианту реализации 147 или 153, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит: полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 301-375; ретро-инверсный полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 451-525; или любую комбинацию перечисленного, для защиты растения или части растения от заболевания и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0811] Вариант реализации 155 представляет собой способ согласно варианту реализации 147 отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит: полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида Flg22 содержит SEQ ID NO: 226, 752 или 571; и полипептиды EF-Tu, при этом последовательности аминокислот указанных полипептидов EF-Tu содержат SEQ ID NO: 616 и 617, для защиты растения или части растения от заболевания и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0812] Вариант реализации 156 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 289, 290, 291, 293, 294, 295, 300, 437, 532, 534, 536, 538, 540, 571-586 и 751-766, или любую их комбинацию, для защиты растения или части растения от заболевания, насекомых или нематод.
[0813] Вариант реализации 157 представляет собой способ согласно варианту реализации 156, отличающийся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 293, 295, 300, 540, 571 574, 751 и 752, или любую их комбинацию.
[0814] Вариант реализации 158 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 147 и 150-157, отличающийся тем, что указанное заболевание включает азиатское позеленение цитрусовых, болезнь Хуанлун (HLB), азиатскую ржавчину сои, вызываемую Sclerotinia стеблевую гниль (или белую плесень), вызываемую Pseudomonas пятнистость листьев или церкоспориоз листьев.
[0815] Вариант реализации 159 представляет собой способ согласно варианту реализации 158, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит полипептид Flg22, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 226-300 и 571-573 или любую их комбинацию.
[0816] Вариант реализации 160 представляет собой способ согласно варианту реализации 158, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 301-375 или 751, или любую их комбинацию.
[0817] Вариант реализации 161 представляет собой способ согласно варианту реализации 158, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит полипептид Flg22 и полипептид FlgII-28, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 226-300 и 571-573 или любую их комбинацию, а последовательность аминокислот указанного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 301-375 или 751 или любую их комбинацию.
[0818] Вариант реализации 162 представляет собой способ согласно варианту реализации 161, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция дополнительно содержит ретро-инверсный полипептид Flg22, ретро-инверсный полипептид FlgII-28 или их комбинацию, при этом последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида Flg22 содержит любую из SEQ ID NO: 376-450 или любую их комбинацию, а последовательность аминокислот указанного ретро-инверсного полипептида FlgII-28 содержит любую из SEQ ID NO: 451-525 или любую их комбинацию.
[0819] Вариант реализации 163 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит полипептид RHPP и/или RI-полипептид RHPP для увеличения урожайности, улучшения роста и/или продуктивности растения или части растения, и/или изменения архитектуры растения.
[0820] Вариант реализации 164 представляет собой способ согласно варианту реализации 163, отличающийся тем, что указанный полипептид RHPP содержит SEQ ID NO: 600.
[0821] Вариант реализации 165 представляет собой способ согласно варианту реализации 163 или 164, отличающийся тем, что указанный рост включает рост корней, длину корней, биомассу корней, образование клубеньков, общую биомассу, биомассу над поверхностью земли или любую их комбинацию.
[0822] Вариант реализации 166 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 163-165, отличающийся тем, что указанное растение включает сою, рост включает общую длину корней, биомассу корней, образование клубеньков, количество клубеньков на растение, общую биомассу, биомассу над поверхностью земли или любую их комбинацию, а продуктивность включает общее число стручков или число стручков на узел.
[0823] Вариант реализации 167 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 163-166, отличающийся тем, что архитектура растения включает благоприятные исходы для растения или части растения.
[0824] Вариант реализации 168 представляет собой способ согласно варианту реализации 167, отличающийся тем, что указанные благоприятные исходы включают возможность повышенной плотности посадки на поле с растениями.
[0825] Вариант реализации 169 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит гарпиноподобный полипептид или полипептид RHPP, для защиты растения или части растения от заболевания, насекомых и/или нематод, и/или усиления врожденного иммунного ответа растения или части растения.
[0826] Вариант реализации 170 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит полипептид ФСК, для увеличения урожайности растения или части растения в условиях среды с предрасположенностью к жаре и засухе.
[0827] Вариант реализации 171 представляет собой способ согласно варианту реализации 170, отличающийся тем, что указанный полипептид, указанную композицию или указанный рекомбинантный микроорганизм применяют непосредственно перед формированием цветков или на предшествующей цветению фазе.
[0828] Вариант реализации 172 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит полипептид ФСК, RHPP, гарпин или гарпиноподобный полипептид, или их комбинацию, для улучшения роста растения или части растения.
[0829] Вариант реализации 173 представляет собой способ согласно варианту реализации 172, отличающийся тем, что указанный рост включает апикальные меристемы корня и цветка, образование цветковых органов, развитие плодов, образование плодов, количество цветковых органов, размер цветковых органов или комбинацию перечисленного.
[0830] Вариант реализации 174 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит полипептид ФСК и гарпин или гарпиноподобный полипептид, для улучшения роста и продуктивности растения или части растения в среде с предрасположенностью как к стрессовым, так и к не являющимися стрессовыми для роста растений условиям.
[0831] Вариант реализации 175 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит тионин или тиониноподобный полипептид.
[0832] Вариант реализации 176 представляет собой способ согласно варианту реализации 175, отличающийся тем, что указанный тионин или тиониноподобный полипептид слит с нацеливающей на флоэму последовательностью с образованием слитого полипептида, причем последовательность аминокислот указанной нацеливающей на флоэму последовательности содержит любую из SEQ ID NO: 641-649 или любую их комбинацию, для доставки указанного слитого полипептида в сосудистую ткань или сосудистые клетки, и/или во флоэму, или в ассоциированную с флоэмой ткань или ассоциированные с флоэмой клетки в растении или в части растения.
[0833] Вариант реализации 177 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанные полипептиды включают полипептиды Flg22.
[0834] Вариант реализации 178 представляет собой способ согласно варианту реализации 177, отличающийся тем, что указанные полипептиды содержат SEQ ID NO: 526 и 527.
[0835] Вариант реализации 179 представляет собой способ согласно варианту реализации 177, отличающийся тем, что указанные полипептиды содержат SEQ ID NO: 226 и 227.
[0836] Вариант реализации 180 представляет собой способ согласно варианту реализации 175 или 176, отличающийся тем, что указанное заболевание включает азиатскую болезнь цитрусовых (HLB), рак цитрусовых, церкоспориоз листьев или вызывающие заболевание бактерии.
[0837] Вариант реализации 181 представляет собой способ согласно варианту реализации 180, отличающийся тем, что указанные вызывающие заболевание бактерии включают бактериальное повреждение листьев, бактериальную стеблевую гниль, бактериальную пятнистость листьев, бактериальный запал листьев, бактериальную вершинную гниль, бактериальную полосатость, шоколадную пятнистость, бактериальное увядание и гниль Госса, красная пятнистость (холкус), фиолетовую пятнистость листового влагалища, гниль семян, белую гниль всходов, болезнь Стюарта (бактериальное увядание), низкорослость кукурузы, бактериальный ожог, болезнь Пирса, пестрый хлороз цитрусовых, рак цитрусовых, серовары Pseudomonas syringae; или комбинацию перечисленного.
[0838] Вариант реализации 182 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанный полипептид или указанная композиция содержит флагеллин или флагеллин-подобный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-подобного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226-525 и 571-573, или любую их комбинацию.
[0839] Вариант реализации 183 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанное заболевание включает азиатскую ржавчину сои, вызываемую Cercospora или Sclerotinia стеблевую гниль (или белую плесень), и указанный полипептид или композиция содержит:
флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 752 и 571; или
полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида RHPP содержит SEQ ID NO: 600; или
флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 752 и 571; и полипептид RHPP, при этом последовательность аминокислот указанного полипептида RHPP содержит SEQ ID NO: 600.
[0840] Вариант реализации 184 представляет собой способ согласно варианту реализации 183, отличающийся тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит SEQ ID NO: 226.
[0841] Вариант реализации 185 представляет собой способ согласно 183 или 184, отличающийся тем, что указанная композиция дополнительно содержит фунгицид.
[0842] Вариант реализации 186 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанное заболевание включает бактериальное заболевание, и указанный способ включает ограничение роста бактерий и/или предотвращение указанного заболевания, и тем, что последовательность аминокислот указанного флагеллин или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 540, 752 и 571, или любую их комбинацию.
[0843] Вариант реализации 187 представляет собой способ согласно варианту реализации 186, отличающийся тем, что указанные бактерии включают Pseudomonas syringae, патовар actinidiae.
[0844] Вариант реализации 188 представляет собой способ согласно варианту реализации 187, отличающийся тем, что указанное растение включает киви.
[0845] Вариант реализации 189 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанное заболевание включает азиатское позеленение цитрусовых, и указанная композиция содержит бактериоцид и флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 571 и 752 или любую их комбинацию.
[0846] Вариант реализации 190 представляет собой способ согласно 189, отличающийся тем, что указанный бактериоцид содержит окситетрациклин.
[0847] Вариант реализации 191 представляет собой способ согласно варианту реализации 147, отличающийся тем, что указанное заболевание включает вызываемую Sclerotinia стеблевую гниль (или белую плесень), и указанная композиция содержит флагеллин или флагеллин-ассоциированный полипептид, при этом последовательность аминокислот указанного флагеллина или флагеллин-ассоциированного полипептида содержит любую из SEQ ID NO: 226, 540, 571, 751 и 752.
[0848] Вариант реализации 192 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 147-191, отличающийся тем, что защита растения или части растения от заболевания включает профилактическое лечение (обработку), лечение (обработку), предотвращение и уменьшение прогрессирования заболевания на растении или в растении, или в части растения.
[0849] Вариант реализации 193 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 147-192, отличающийся тем, что указанный полипептид, указанную композицию или указанный рекомбинантный микроорганизм применяют экзогенно на растении, на части растения или в ростовой среде для растений.
[0850] Вариант реализации 194 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 147-193, отличающийся тем, что указанный полипептид, указанную композицию или указанный рекомбинантный микроорганизм применяют эндогенно в растении или части растения.
[0851] Вариант реализации 195 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 147-194, отличающийся тем, что указанная часть растения включает клетку, лист, ветвь, стебель, цветок, листву, цветочный орган, плод, пыльцу, овощ, клубень, ветвь, луковицу, ложнолуковицу, стручок, корень, корневой ком, подвой, привой или семя.
[0852] Вариант реализации 196 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 147-195, отличающийся тем, что указанный полипептид, указанную композицию или указанный рекомбинантный микроорганизм применяют на поверхности растения, на листве растения или на поверхности семени растения.
[0853] Вариант реализации 197 представляет собой способ согласно варианту реализации 196, отличающийся тем, что указанный полипептид, указанную композицию или указанный рекомбинантный микроорганизм применяют на поверхности семени, и указанное растение или указанную часть растения выращивают из указанного семени.
[0854] Вариант реализации 198 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 147-197, отличающийся тем, что указанный полипептид, указанную композицию или указанный рекомбинантный микроорганизм применяют в качестве средства для внекорневого внесения.
[0855] Вариант реализации 199 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 147-198, отличающийся тем, что указанное растение представляет собой плодовое растение или овощное растение, и указанный способ обеспечивает повышенную урожайность плодов или овощей.
[0856] Вариант реализации 200 представляет собой способ получения полипептида, включающий получение слитого белка, содержащего полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-44 и сайт расщепления энтерокиназой (EK) путем ферментации, причем указанный сайт расщепления энтерокиназой усиливает активность и стабильность указанного полипептида.
[0857] Вариант реализации 201 представляет собой способ согласно варианту реализации 200, дополнительно включающий воздействие энтерокиназой на подготовленный слитый белок для расщепления сайта расщепления энтерокиназой и выделения указанного полипептида.
[0858] Вариант реализации 202 представляет собой способ согласно варианту реализации 200 или 201, отличающийся тем, что указанный сайт расщепления энтерокиназой содержит SEQ ID NO: 772.
[0859] Вариант реализации 203 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 200-202, отличающийся тем, что указанный слитый белок дополнительно содержит белковую метку.
[0860] Вариант реализации 204 представляет собой способ согласно варианту реализации 203, отличающийся тем, что указанная белковая метка содержит глутатион-S-трансферазу (GST).
[0861] Вариант реализации 205 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 200-204, отличающийся тем, что указанный слитый белок дополнительно содержит сигнал секреции.
[0862] Вариант реализации 206 представляет собой способ согласно варианту реализации 205, отличающийся тем, что указанный сигнал секреции содержит последовательность аминокислот, содержащую любую из SEQ ID NO: 563-570 или 769, или любую их комбинацию.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>Spogen Biotech Inc./Споген Биотех Инк.
Thompson, Brian /Томпсон, Брайан
Leslie, Michelle /Лесли, Мишель
<120>BIOACTIVE POLYPEPTIDES FOR IMPROVEMENTS IN PLANT PROTECTION,
GROWTH AND PRODUCTIVITY / БИОАКТИВНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ ДЛЯ
ОБЕСПЕЧЕНИЯ УЛУЧШЕНИЯ ЗАЩИТЫ, РОСТА И ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЯ
<130>ELEN 3016.WO
<150>US 62/534710
<151>2017-07-20
<160>775
<170>PatentIn, версия 3.5
<210>1
<211>283
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>1
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Lys Ala Arg Glu Gly Gly Leu Asn Val Ala Gly Arg
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala Ser Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Gln Leu Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Gln Gln Leu Leu Gly Thr Ala Asp Lys Lys Ile Lys
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Thr Gly Ser Thr Asn Pro Ala Gln Ile Glu Ile
145 150 155 160
Thr Leu Asn Ser Val Lys Ser Ala Asp Leu Gly Leu Asp Val Gln Ile
165 170 175
Gly Asp Glu Gly Asp Ala Glu Ser Thr Ala Ala Ala Asp Pro Thr Ser
180 185 190
Ala Lys Gln Ala Ile Asp Ala Ile Asp Ala Ala Ile Thr Thr Val Ala
195 200 205
Gly Gln Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Phe Glu Phe Asn
210 215 220
Ala Asn Asn Leu Lys Ser Gln Glu Thr Ser Met Ala Asp Ala Ala Ser
225 230 235 240
Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys
245 250 255
Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn
260 265 270
Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
275 280
<210>2
<211>283
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>2
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Lys Ala Arg Glu Gly Gly Leu Asn Val Ala Gly Arg
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala Ser Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Gln Leu Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Gln Gln Leu Leu Gly Thr Ala Asp Lys Lys Ile Lys
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Thr Gly Ser Thr Asn Pro Ala Gln Ile Glu Ile
145 150 155 160
Thr Leu Asn Ser Val Lys Ser Ala Asp Leu Gly Leu Asp Val Gln Ile
165 170 175
Gly Asp Glu Gly Asp Ala Glu Ser Thr Ala Ala Ala Asp Pro Thr Ser
180 185 190
Ala Lys Gln Ala Ile Asp Ala Ile Asp Ala Ala Ile Thr Thr Val Ala
195 200 205
Gly Gln Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Phe Glu Phe Asn
210 215 220
Ala Asn Asn Leu Lys Ser Gln Glu Thr Ser Met Ala Asp Ala Ala Ser
225 230 235 240
Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys
245 250 255
Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn
260 265 270
Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
275 280
<210>3
<211>283
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>3
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Lys Ala Arg Glu Gly Gly Leu Asn Val Ala Gly Arg
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala Ser Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Gln Leu Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Gln Gln Leu Leu Gly Thr Ala Asp Lys Lys Ile Lys
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Thr Gly Ser Thr Asn Pro Ala Gln Ile Glu Ile
145 150 155 160
Thr Leu Asn Ser Val Lys Ser Ala Asp Leu Gly Leu Asp Val Gln Ile
165 170 175
Gly Asp Glu Gly Asp Ala Glu Ser Thr Ala Ala Ala Asp Pro Thr Ser
180 185 190
Ala Lys Gln Ala Ile Asp Ala Ile Asp Ala Ala Ile Thr Thr Val Ala
195 200 205
Gly Gln Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Phe Glu Phe Asn
210 215 220
Ala Asn Asn Leu Lys Ser Gln Glu Thr Ser Met Ala Asp Ala Ala Ser
225 230 235 240
Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys
245 250 255
Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn
260 265 270
Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
275 280
<210>4
<211>283
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>4
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Lys Ala Arg Glu Gly Gly Leu Asn Val Ala Gly Arg
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala Ser Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Gln Leu Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Gln Gln Leu Leu Gly Thr Ala Asp Lys Lys Ile Lys
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Thr Gly Ser Thr Asn Pro Ala Gln Ile Glu Ile
145 150 155 160
Thr Leu Asn Ser Val Lys Ser Ala Asp Leu Gly Leu Asp Val Gln Ile
165 170 175
Gly Asp Glu Gly Asp Ala Glu Ser Thr Ala Ala Ala Asp Pro Thr Ser
180 185 190
Ala Lys Gln Ala Ile Asp Ala Ile Asp Ala Ala Ile Thr Thr Val Ala
195 200 205
Gly Gln Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Phe Glu Phe Asn
210 215 220
Ala Asn Asn Leu Lys Ser Gln Glu Thr Ser Met Ala Asp Ala Ala Ser
225 230 235 240
Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys
245 250 255
Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn
260 265 270
Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
275 280
<210>5
<211>266
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>5
Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys His Met Asn Val Ala Met Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn Asn Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn Ile Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Ser Gly Met Arg Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Thr Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg His Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Lys Ile Gly Tyr Ile Gly Glu Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Glu Gly Gln Asn Arg Pro Ile Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Ile Asn Met Met Lys His Ile Pro Pro
145 150 155 160
Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Lys Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala Arg
165 170 175
Ala Ala Ile Leu Lys Ile Glu Asp Ala Leu Gln Ser Val Ser Leu His
180 185 190
Arg Ala Asp Leu Gly Ala Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Leu Ile
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
245 250 255
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>6
<211>375
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>6
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asp
50 55 60
Asn Thr Gln Asn Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys Ser Ala Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Gln Leu Gln Lys Gln Ile Thr Tyr Ile Ala Glu Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Asn Glu Asp Ser Glu Val Lys Ile
130 135 140
Gln Thr Leu Asp Ser Ser Lys Gly Glu Gln Gln Ile Thr Ile Asp Leu
145 150 155 160
Lys Ala Val Thr Leu Glu Lys Leu Asn Ile Lys Asp Ile Ala Ile Gly
165 170 175
Lys Ala Asp Ala Ala Asp Lys Pro Val Thr Pro Gly Ala Thr Val Asp
180 185 190
Gln Lys Asp Leu Asp Ser Val Thr Asp Lys Ile Ala Ala Leu Thr Glu
195 200 205
Thr Ser Ser Lys Ala Asp Ile Asp Ala Ile Gln Ser Ser Leu Asp Asn
210 215 220
Phe Lys Ala Ser Met Thr Pro Glu Asp Val Lys Thr Leu Glu Asp Ala
225 230 235 240
Leu Lys Gly Phe Lys Thr Gly Gln Ala Asn Pro Ala Asp Ala Gly Val
245 250 255
Asp Ala Ile Gln Asp Ala Leu Ser Lys Val Lys Leu Pro Thr Ala Thr
260 265 270
Ala Ala Ala Pro Ala Ala Asp Ala Asp Lys Ser Asp Ala Leu Ala Ala
275 280 285
Ile Ala Ala Ile Asp Ala Ala Leu Thr Lys Val Ala Asp Asn Arg Ala
290 295 300
Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu
305 310 315 320
Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp
325 330 335
Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu
340 345 350
Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln
355 360 365
Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
370 375
<210>7
<211>416
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>7
Met Thr Gly Ile Thr Ile Asn Leu Glu Ile Asp Phe Phe Ala Tyr Tyr
1 5 10 15
Arg Phe Ser Ile Cys Arg Lys Val Asn Ile Lys Lys Trp Gly Phe Leu
20 25 30
Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr
35 40 45
Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser
50 55 60
Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
65 70 75 80
Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu Gly Val Ala Ala
85 90 95
Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala
100 105 110
Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn
115 120 125
Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Asp Asn Gln Lys Ala Leu Asp
130 135 140
Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn
145 150 155 160
Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Glu Asn Lys Thr Ile
165 170 175
Ala Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Thr Lys Gln Ile Asn Ile
180 185 190
Asn Leu Ala Asp Ser Ser Thr Ser Ala Leu Gln Ile Asp Lys Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Gly Lys Thr Thr Asp Thr Thr Lys Thr Glu Thr Ile Thr Val
210 215 220
Thr Asp Asp Glu Ile Lys Ala Ala Lys Thr Asp Ile Asp Glu Phe Asn
225 230 235 240
Asp Ala Lys Lys Ala Leu Ala Asp Leu Lys Ala Glu Thr Ser Ala Gly
245 250 255
Lys Ala Asp Gly Ser Thr Asp Asp Glu Ile Lys Thr Ala Val Ser Asn
260 265 270
Phe Thr Lys Ser Phe Glu Lys Ile Gln Lys Phe Met Asn Asp Ser Asp
275 280 285
Ile Lys Thr Val Gln Thr Glu Ile Glu Lys Phe Asp Ala Ala Ala Pro
290 295 300
Ala Leu Asp Lys Ala Lys Gly Met Gly Ile Ala Phe Thr Ser Ala Met
305 310 315 320
Asp Pro Lys Ala Gly Thr Ile Thr Lys Ala Ala Thr Arg Gln Asn Ala
325 330 335
Ser Asp Ala Ile Lys Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser
340 345 350
Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val
355 360 365
Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ala Ala Ala Ser Gln
370 375 380
Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe
385 390 395 400
Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Val
405 410 415
<210>8
<211>368
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>8
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Gln Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Glu Asn Lys Ala Ala Met Glu Lys
100 105 110
Glu Phe Gly Gln Leu Lys Asp Gln Ile Lys Tyr Ile Thr Asp Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Asp Ala Ala Ser Gly Thr Thr Lys
130 135 140
Ser Ile Ala Ile Gln Thr Leu Asp Ser Asp Gln Ala Ser Thr Gln Ile
145 150 155 160
Glu Ile Lys Ile Ala Gly Ser Ser Leu Ala Ala Leu Gly Leu Asp Lys
165 170 175
Val Gln Ile Gly Gln Glu Thr Val Ala Gln Lys Asp Leu Asp Val Leu
180 185 190
Thr Lys Ala Met Gly Arg Leu Ala Ala Pro Asp Ala Asp Ala Thr Thr
195 200 205
Arg Asp Leu Asp Val Gln Val Ala Lys Asp Ala Phe Asp Lys Val Lys
210 215 220
Gly Phe Ile Ala Asp Pro Ala Gln Ala Lys Ala Val Glu Arg Ala Phe
225 230 235 240
Glu Asp Tyr Thr Ala Ala Glu Ala Gly Lys Glu Glu Asp Ala Ala Lys
245 250 255
Ala Ile Asp Ala Ala Tyr Lys Lys Val Thr Gly Leu Thr Ala Gly Thr
260 265 270
Thr Gly Thr Val Asp Ala His Asn Ala Val Asn Lys Ile Asp Ala Ala
275 280 285
Leu Lys Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn
290 295 300
Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ala Ser Met
305 310 315 320
Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met
325 330 335
Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met
340 345 350
Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
355 360 365
<210>9
<211>374
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>9
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Val Ala Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Gly Glu Leu Gln Lys Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Ser Gly Lys Ala Gly Ala Pro Asp
130 135 140
Gln Ala Leu Glu Ile Asn Ile Gln Thr Leu Asp Ser Ser Asp Pro Asn
145 150 155 160
Gln Gln Ile Lys Ile Ser Leu Asp Ser Val Ser Thr Ala Gln Leu Gly
165 170 175
Val Lys Asp Leu Gln Ile Gly Ser Ser Ser Ile Thr Gln Gln Gln Leu
180 185 190
Asp Thr Leu Asp Asn Ala Met Lys Arg Leu Glu Thr Ala Ser Thr Thr
195 200 205
Ala Ala Val Arg Asp Gln Asp Val Ala Asp Ala Lys Ala Ala Phe Glu
210 215 220
Asn Val Lys Gly Phe Phe Ser Glu Gly Asn Val Asp Ser Ile Asn Arg
225 230 235 240
Ala Phe Thr Asp Phe Ala Asn Glu Thr Thr Asn Lys Asp Asp Lys Ala
245 250 255
Glu Ala Ile Tyr Ala Leu Tyr Asn Asn Ala Thr Leu Ile Thr Lys Pro
260 265 270
Thr Pro Asp Ala Ser Asn Pro Ala Ser Val Asp Pro Ala Asn Ala Ile
275 280 285
Lys Lys Ile Asp Gln Ala Ile Glu Lys Ile Ala Ser Ser Arg Ala Thr
290 295 300
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
305 310 315 320
Ser Gln Gln Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Val Glu Asp Ala
325 330 335
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
340 345 350
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
355 360 365
Val Ser Lys Leu Leu Gln
370
<210>10
<211>266
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>10
Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn Ala Arg Gln Ser Phe
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Ile Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn Val Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Thr Ser Gly Ile His Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Thr Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Val Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Gly Tyr Ile Asp Glu Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Arg Gln Asn Cys Pro Val Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Val Asn Val Thr Lys His Ile Pro Pro
145 150 155 160
Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Asn Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala Arg
165 170 175
Ala Ala Ile Arg Lys Ile Glu Glu Thr Leu Gln Asn Val Ser Leu His
180 185 190
Arg Ala Asp Leu Gly Ala Met Ile Asn Gln Leu Gln Phe Asn Ile Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Thr Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
245 250 255
Pro Gln Met Val Tyr Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>11
<211>341
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>11
Met Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp
1 5 10 15
Ala Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly
20 25 30
Leu Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg
35 40 45
Thr Ala Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met
50 55 60
Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Asp Asn
65 70 75 80
Gln Gln Ala Leu Gln Lys Glu Phe Gly Gln Leu Lys Glu Gln Ile Ser
85 90 95
Tyr Ile Ala Asp Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Thr Leu Leu Lys Ala
100 105 110
Asp Asn Ser Val Lys Ile Gln Thr Leu Asp Ser Ala Asp Thr Asn Lys
115 120 125
Gln Ile Ser Ile Asp Leu Lys Gly Val Thr Leu Asn Gln Leu Gly Leu
130 135 140
Asp Thr Val Asn Ile Gly Ser Glu Lys Leu Ser Ala Glu Ser Leu Asn
145 150 155 160
Val Ala Lys Ala Thr Met Ala Arg Leu Val Lys Ala Asp Gln Asn Ala
165 170 175
Asp Pro Ser Thr Phe Ala Leu Asp Val Asn Thr Ala Lys Glu Ser Phe
180 185 190
Asp Lys Ile Lys Gly Phe Ile Ala Asn Lys Thr Asn Val Gln Asn Val
195 200 205
Glu Asn Ala Phe Asn Asp Tyr Ala Val Ala Asp Pro Ala Asp Lys Ala
210 215 220
Asp Lys Ala Asp Ala Ile Gln Ala Ala Phe Asn Thr Ala Ile Thr Gly
225 230 235 240
Leu Thr Ala Gly Thr Pro Asn Thr Ser Asn Pro Ser Ser Ala Val Asp
245 250 255
Ser Ile Asp Ala Ala Leu Lys Thr Val Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu
260 265 270
Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser
275 280 285
Gln Ser Ala Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp
290 295 300
Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu
305 310 315 320
Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val
325 330 335
Ser Lys Leu Leu Gln
340
<210>12
<211>367
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus bombysepticus
<400>12
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ser Arg Glu Gly Gly Leu Asn Val Ala Ala Arg
50 55 60
Asn Thr Glu Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Ser Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala Ala Met Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Asp Gln Leu Lys Glu Gln Ile Gln Tyr Ile Ala Asp Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Ser Thr Ile Asn
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Ser His Asp Lys Asn Lys Gln Ile Thr Ile Ser
145 150 155 160
Leu Asp Ser Ala Ser Leu Lys Asn Leu Asp Ile Lys Asp Leu Ala Ile
165 170 175
Gly Ser Ala Thr Ile Asn Gln Thr Asp Leu Asp Thr Ala Thr Asn Ser
180 185 190
Met Lys Arg Leu Ala Thr Pro Ala Thr Asp Gly Lys Val Leu Ala Gln
195 200 205
Asp Ile Ala Asp Ala Lys Ala Ala Phe Asn Lys Val Gln Ser Ala Tyr
210 215 220
Thr Pro Ala Glu Val Asp Lys Ile Gln Asp Ala Phe Lys Ala Tyr Asp
225 230 235 240
Lys Leu Ala Ala Asp Pro Ala Ser Lys Ala Thr Asp Ile Ala Asp Ala
245 250 255
Ala Lys Asn Val Asn Thr Val Phe Gly Thr Leu Ala Thr Pro Thr Ala
260 265 270
Thr Lys Phe Asp Pro Ser Ser Ala Val Glu Lys Ile Asp Lys Ala Ile
275 280 285
Glu Thr Ile Ala Ser Ser Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg
290 295 300
Leu Asp Phe Asn Val Thr Asn Leu Lys Ser Gln Glu Asn Ser Met Ala
305 310 315 320
Ala Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser
325 330 335
Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu
340 345 350
Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
355 360 365
<210>13
<211>400
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>13
Met Thr Gly Ile Thr Ile Asn Leu Glu Ile Asp Phe Phe Ala Tyr Tyr
1 5 10 15
Arg Phe Ser Ile Cys Arg Lys Val Asn Ile Lys Lys Trp Gly Phe Leu
20 25 30
Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr
35 40 45
Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met Asp Arg Leu Ser
50 55 60
Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
65 70 75 80
Ile Ala Thr Arg Met Arg Ser Arg Glu Gly Gly Leu Asn Val Ala Ala
85 90 95
Arg Asn Thr Glu Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala
100 105 110
Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn
115 120 125
Gln Ser Ala Ser Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala Ala Met Gln
130 135 140
Lys Glu Phe Asp Gln Leu Lys Glu Gln Ile Gln Tyr Ile Ala Asp Asn
145 150 155 160
Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Ser Thr Ile
165 170 175
Asn Ile Gln Thr Leu Asp Ser His Asp Lys Asn Lys Gln Ile Thr Ile
180 185 190
Ser Leu Asp Ser Ala Ser Leu Lys Asn Leu Asp Ile Lys Asp Leu Ala
195 200 205
Ile Gly Ser Ala Thr Ile Asn Gln Thr Asp Leu Asp Thr Ala Thr Asn
210 215 220
Ser Met Lys Arg Leu Ala Thr Pro Ala Thr Asp Gly Lys Val Leu Ala
225 230 235 240
Gln Asp Ile Ala Asp Ala Lys Ala Ala Phe Asn Lys Val Gln Ser Ala
245 250 255
Tyr Thr Pro Ala Glu Val Asp Lys Ile Gln Asp Ala Phe Lys Ala Tyr
260 265 270
Asp Lys Leu Ala Ala Asp Pro Ala Ser Lys Asp Thr Asp Ile Ala Asp
275 280 285
Ala Ala Lys Asn Val Asn Thr Val Phe Gly Thr Leu Ala Thr Pro Thr
290 295 300
Ala Thr Lys Phe Asp Pro Ser Ser Ala Val Glu Lys Ile Asp Lys Ala
305 310 315 320
Ile Glu Thr Ile Ala Ser Ser Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn
325 330 335
Arg Leu Asp Phe Asn Val Thr Asn Leu Lys Ser Gln Glu Asn Ser Met
340 345 350
Ala Ala Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met
355 360 365
Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met
370 375 380
Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
385 390 395 400
<210>14
<211>367
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>14
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ser Arg Glu Gly Gly Leu Asn Val Ala Ala Arg
50 55 60
Asn Thr Glu Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Ser Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala Ala Met Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Asp Gln Leu Lys Glu Gln Ile Gln Tyr Ile Ala Asp Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Ser Thr Ile Asn
130 135 140
Ile Gln Ala Leu Asp Ser His Asp Lys Asn Lys Gln Ile Thr Ile Ser
145 150 155 160
Leu Asp Ser Ala Ser Leu Lys Asn Leu Asp Ile Lys Asp Leu Ala Ile
165 170 175
Gly Ser Ala Thr Ile Asn Gln Thr Asp Leu Asp Thr Ala Thr Asn Ser
180 185 190
Met Lys Arg Leu Ala Thr Pro Ala Thr Asp Gly Lys Val Leu Ala Gln
195 200 205
Asp Ile Ala Asp Ala Lys Ala Ala Phe Asn Lys Val Gln Ser Ala Tyr
210 215 220
Thr Pro Ala Glu Val Asp Lys Ile Gln Asp Ala Phe Lys Ala Tyr Asp
225 230 235 240
Lys Leu Ala Ala Asp Pro Ala Ser Lys Asp Thr Asp Ile Ala Asp Ala
245 250 255
Ala Lys Asn Val Asn Thr Val Phe Gly Thr Leu Ala Thr Pro Thr Ala
260 265 270
Thr Lys Phe Asp Pro Ser Ser Ala Val Glu Lys Ile Asp Lys Ala Ile
275 280 285
Glu Thr Ile Ala Ser Ser Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg
290 295 300
Leu Asp Phe Asn Val Thr Asn Leu Lys Ser Gln Glu Asn Ser Met Ala
305 310 315 320
Ala Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser
325 330 335
Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu
340 345 350
Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
355 360 365
<210>15
<211>397
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>15
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Asp Asn Lys Thr Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ser Lys Gln Ile Asn Ile Asn
145 150 155 160
Leu Ala Asp Ser Ser Thr Ser Ala Leu Lys Ile Glu Lys Leu Thr Ile
165 170 175
Ser Gly Ser Thr Ala Ile Ala Gly Lys Thr Glu Lys Val Thr Ile Thr
180 185 190
Ala Glu Asp Ile Lys Ala Ala Glu Glu Asp Ile Lys Ala Phe Thr Gln
195 200 205
Ala Gln Glu Gly Leu Ala Asn Leu Val Lys Glu Val Lys Asp Thr Asp
210 215 220
Gly Ser Val Lys Thr Pro Gly Ser Thr Pro Asp Asp Ile Lys Lys Ala
225 230 235 240
Val Thr Ala Phe Thr Glu Ser Phe Glu Lys Met Lys Lys Phe Met Asn
245 250 255
Asp Glu Asp Ile Thr Lys Val Glu Glu Lys Ile Lys Ala Phe Asp Ala
260 265 270
Ala Ser Pro Asp Leu Asp Ala Ala Lys Glu Met Gly Thr Ala Phe Thr
275 280 285
Ala Ala Met Lys Pro Ala Ala Gly Glu Ile Thr Lys Ala Ala Met Lys
290 295 300
Pro Asn Ala Ser Asp Ala Ile Lys Ser Ile Asp Glu Ala Leu Glu Thr
305 310 315 320
Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp
325 330 335
Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala
340 345 350
Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met
355 360 365
Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln
370 375 380
Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
385 390 395
<210>16
<211>266
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>16
Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn Asn Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn Ile Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Ser Gly Met Arg Leu Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Thr Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Leu Thr Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Gly Tyr Ile Gly Glu Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg Pro Val Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Asp His Thr Ile Asn Met Thr Lys His Ile Pro Pro
145 150 155 160
Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Lys Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala Arg
165 170 175
Ala Ala Ile Leu Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Ser Val Ser Ile His
180 185 190
Arg Ala Asp Leu Gly Ser Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
245 250 255
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>17
<211>266
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>17
Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn Val Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Ser Gly Met Arg Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Thr Asn Val Leu Gln Arg Met Arg Asp Val Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Leu Asn Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn Asn
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Gly Tyr Ile Asp Glu Thr Thr
115 120 125
Ala Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg Pro Val Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Val Asn Val Thr Lys His Ile Ser Pro
145 150 155 160
Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Asn Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala Arg
165 170 175
Ala Ala Ile Arg Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Asn Val Ser Leu Tyr
180 185 190
Arg Ala Asp Leu Gly Ala Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Thr Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
245 250 255
Pro Gln Met Val Tyr Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>18
<211>460
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>18
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Asn Val Ala Ala Asp
50 55 60
Asn Thr Gln Asn Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Ser Asn Lys Ser Ala Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Glu Leu Gln Lys Gln Ile Thr Tyr Ile Ala Asp Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Lys Glu Asp Ser Glu Val Lys Ile
130 135 140
Gln Thr Leu Asp Ser Ser Lys Gly Glu Gln Gln Ile Gly Ile Asp Leu
145 150 155 160
Lys Ala Val Thr Leu Glu Lys Leu Gly Ile Asn Asn Ile Ser Ile Gly
165 170 175
Lys Ala Asp Gly Thr Thr Glu Gly Thr Lys Ala Asp Leu Thr Ala Leu
180 185 190
Gln Ala Ala Ala Lys Lys Leu Glu Lys Pro Asp Thr Gly Thr Met Glu
195 200 205
Lys Asp Val Lys Asp Ala Lys Glu Glu Phe Asp Lys Val Lys Ala Ser
210 215 220
Leu Ser Asp Glu Asp Val Lys Lys Ile Glu Ala Ala Phe Gly Glu Phe
225 230 235 240
Asp Lys Asp Lys Thr Asn Thr Thr Lys Ala Ser Asp Ile Phe Asn Ala
245 250 255
Ile Lys Asp Val Lys Leu Ala Asp Lys Ala Ala Ala Ala Pro Ala Pro
260 265 270
Ala Asp Leu Thr Lys Phe Lys Ala Ala Leu Asp Lys Leu Gln Thr Pro
275 280 285
Asn Ala Gly Thr Met Val Asp Asp Val Lys Asp Ala Lys Asp Glu Phe
290 295 300
Glu Lys Ile Lys Gly Ser Leu Ser Asp Ala Asp Ala Gln Lys Ile Gln
305 310 315 320
Ala Ala Phe Glu Glu Phe Glu Lys Ala Asn Thr Asp Asp Ser Lys Ala
325 330 335
Ser Ala Ile Tyr Asn Leu Ala Lys Asp Val Lys Val Asn Ala Thr Asp
340 345 350
Thr Thr Thr Gly Thr Asp Lys Asp Thr Thr Thr Ser Thr Asp Lys Asp
355 360 365
Ala Ala Leu Ala Ala Ile Ala Ala Ile Asp Ala Ala Leu Thr Lys Val
370 375 380
Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe
385 390 395 400
Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala
405 410 415
Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr
420 425 430
Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala
435 440 445
Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
450 455 460
<210>19
<211>367
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>19
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Lys Ala Ala Met Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Gly Glu Leu Lys Asp Gln Ile Lys Tyr Ile Ser Glu Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Gln His Leu Leu Asn Ala Ala Lys Gly Ser Thr Asn
130 135 140
Glu Ile Ala Ile Gln Thr Leu Asp Ser Asp Ser Ser Ser Lys Gln Ile
145 150 155 160
Lys Ile Thr Leu Gln Gly Ala Ser Leu Asp Ser Leu Asp Ile Lys Asp
165 170 175
Leu Gln Ile Gly Ser Gly Ser Thr Val Ser Gln Thr Asp Leu Asp Val
180 185 190
Leu Asp Ala Thr Met Thr Arg Val Lys Thr Ala Thr Gly Ala Thr Arg
195 200 205
Asp Val Asp Val Gln Ala Ala Lys Ser Ala Phe Asp Lys Val Lys Gly
210 215 220
Leu Met Thr Lys Pro Ala Glu Val Lys Ala Ile Glu Arg Ala Phe Glu
225 230 235 240
Asp Tyr Asn Ala Gly Lys Thr Asp Ala Leu Ala Thr Ala Ile Glu Ala
245 250 255
Ala Tyr Thr Ala Asn Lys Thr Gly Leu Pro Ala Pro Ala Ala Ala Ala
260 265 270
Gly Thr Val Asp Ala Leu Gly Ala Ile Thr Lys Ile Asp Ala Ala Leu
275 280 285
Lys Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg
290 295 300
Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ala Ser Met Ala
305 310 315 320
Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser
325 330 335
Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu
340 345 350
Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
355 360 365
<210>20
<211>377
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>20
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Asp Asn Gln Lys Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Asp Asn Lys Ser Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Thr Lys Gln Ile Asn Ile Asn
145 150 155 160
Leu Ala Asp Ser Ser Thr Thr Ala Leu Asn Ile Asp Lys Leu Ser Ile
165 170 175
Glu Gly Thr Gly Asn Lys Thr Ile Thr Leu Thr Ala Ala Asp Ile Ala
180 185 190
Lys Asp Lys Ala Asn Ile Asp Ala Val Gly Thr Ala Lys Thr Ala Leu
195 200 205
Ala Gly Leu Thr Gly Thr Pro Ala Ala Ala Ala Ile Asn Ser Ala Val
210 215 220
Ala Asp Phe Lys Thr Ala Phe Ala Lys Ala Asp Lys Asn Leu Met Ser
225 230 235 240
Asp Ala Gln Ile Lys Ala Val Thr Asp Ala Ile Thr Ala Phe Glu Ala
245 250 255
Asp Ala Thr Pro Asp Leu Thr Lys Ala Lys Ala Ile Gly Thr Ala Tyr
260 265 270
Thr Ala Pro Ala Ala Gly Asp Ile Thr Lys Ala Ser Pro Asn Ala Ser
275 280 285
Glu Ala Ile Lys Ser Ile Asp Ala Ala Leu Asp Thr Ile Ala Ser Asn
290 295 300
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
305 310 315 320
Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile
325 330 335
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
340 345 350
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
355 360 365
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
370 375
<210>21
<211>367
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>21
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Asp Asn Gln Gln Ala Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Gly Gln Leu Lys Glu Gln Ile Ser Tyr Ile Ala Asp Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Thr Leu Leu Lys Ala Asp Asn Ser Val Lys Ile
130 135 140
Gln Thr Leu Asp Ser Ala Asp Thr Asn Lys Gln Ile Ser Ile Asp Leu
145 150 155 160
Lys Gly Val Thr Leu Asn Gln Leu Gly Leu Asp Thr Val Asn Ile Gly
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Ser Ala Glu Ser Leu Asn Val Ala Lys Ala Thr Met
180 185 190
Ala Arg Leu Val Lys Ala Asp Gln Asn Ala Asp Pro Ser Thr Phe Ala
195 200 205
Leu Asp Val Asn Thr Ala Lys Glu Ser Phe Asp Lys Ile Lys Gly Phe
210 215 220
Ile Thr Asn Lys Thr Asn Val Gln Asn Val Glu Asn Ala Phe Asn Asp
225 230 235 240
Tyr Thr Val Ala Asp Pro Ala Asp Lys Ala Asp Lys Ala Asp Ala Ile
245 250 255
Gln Ala Ala Phe Asn Thr Ala Ile Thr Gly Leu Thr Ala Gly Thr Pro
260 265 270
Asn Thr Ser Asn Pro Ser Ser Ala Val Asp Ala Ile Asp Ala Ala Leu
275 280 285
Lys Thr Val Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg
290 295 300
Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ala Ser Met Ala
305 310 315 320
Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser
325 330 335
Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu
340 345 350
Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
355 360 365
<210>22
<211>266
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>22
Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His Phe Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn Val Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Ser Gly Met Arg Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Met Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Gly Tyr Ile Gly Glu Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg Pro Val Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Val Asn Val Thr Lys His Thr Ser Pro
145 150 155 160
Ser Pro Thr Lys His Asp Ile Lys Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala Arg
165 170 175
Ala Ala Ile Arg Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Asn Val Ser Leu His
180 185 190
Arg Ala Asp Phe Gly Ala Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
245 250 255
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>23
<211>367
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>23
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Asp Asn Gln Gln Ala Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Gly Gln Leu Lys Glu Gln Ile Ser Tyr Ile Ala Asp Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Thr Leu Leu Lys Ala Asp Asn Ser Val Lys Ile
130 135 140
Gln Thr Leu Asp Ser Ala Asp Thr Asn Lys Gln Ile Ser Ile Asp Leu
145 150 155 160
Lys Gly Val Thr Leu Asn Gln Leu Gly Leu Asp Thr Val Asn Ile Gly
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Ser Ala Glu Ser Leu Asn Val Ala Lys Ala Thr Met
180 185 190
Ala Arg Leu Val Lys Ala Asp Gln Asn Ala Asp Pro Ser Thr Phe Ala
195 200 205
Leu Asp Val Asn Thr Ala Lys Glu Ser Phe Asp Lys Ile Lys Gly Phe
210 215 220
Ile Thr Asn Lys Thr Asn Val Gln Asn Val Glu Asn Ala Phe Asn Asp
225 230 235 240
Tyr Thr Val Ala Asp Pro Ala Asp Lys Ala Asp Lys Ala Asp Ala Ile
245 250 255
Gln Ala Ala Phe Asn Thr Ala Ile Thr Gly Leu Thr Ala Gly Thr Pro
260 265 270
Asn Thr Ser Asn Pro Ser Ser Ala Val Asp Ala Ile Asp Ala Ala Leu
275 280 285
Lys Thr Val Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg
290 295 300
Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ala Ser Met Ala
305 310 315 320
Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser
325 330 335
Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu
340 345 350
Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
355 360 365
<210>24
<211>266
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>24
Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn Ile Val Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Met Arg Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Thr Asn Ile Leu Gln His Met Arg Asp Phe Ala Ile Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Thr Asn Arg Asp Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Pro Ile Gly Tyr Ile Gly Glu Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg Pro Ile Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Ile Asn Met Thr Lys His Ile Pro Pro
145 150 155 160
Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Lys Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala Arg
165 170 175
Ala Ala Ile Arg Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Asn Val Ser Leu His
180 185 190
Arg Ala Asp Leu Gly Ser Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Met Ala Leu Ile Asp Thr Ala Ser Gln Val
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Ile Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Leu Leu Thr Ala Val Ala Leu Ser Val Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
245 250 255
Pro Gln Ile Val Ser Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>25
<211>381
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>25
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ser Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Gln Lys Leu Leu Asp Gly Ser Lys Lys Ser Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Asn Lys Gln Ile Asp Ile Gln
145 150 155 160
Leu Ser Asn Val Ser Thr Lys Glu Leu Lys Leu Asp Thr Leu Ser Ile
165 170 175
Glu Gly Ser Ser Ser Lys Thr Phe Thr Ile Thr Ala Asp Asp Met Leu
180 185 190
Ala Val Gly Thr Ala Asn Ala Thr Ala Lys Ala Lys Ala Gly Thr Leu
195 200 205
Lys Gly Leu Asn Val Thr Thr Gly Asp Leu Thr Ala Ala Lys Thr Asp
210 215 220
Val Gln Asp Phe Arg Ala Ala Phe Asp Lys Val Lys Gly Phe Met Gly
225 230 235 240
Ser Thr Glu Val Thr Asn Ile Glu Lys Ala Leu Thr Lys Phe Asp Gly
245 250 255
Asp Gln Ser Leu Ala Asn Ala Lys Ala Ile Gly Asp Ala Leu Thr Ser
260 265 270
Asp Leu Ala Thr Thr Ile Ala Lys Asp Gln Thr Tyr Ser Lys Asn Val
275 280 285
Ser Asn Ala Ser Ser Ala Ile Ala Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Ser
290 295 300
Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp
305 310 315 320
Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala
325 330 335
Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met
340 345 350
Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln
355 360 365
Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
370 375 380
<210>26
<211>381
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>26
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ser Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Gln Lys Leu Leu Asp Gly Ser Lys Lys Ser Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Asn Lys Gln Ile Asp Ile Gln
145 150 155 160
Leu Ser Asn Val Ser Thr Lys Glu Leu Lys Leu Asp Thr Leu Ser Ile
165 170 175
Glu Gly Ser Ser Ser Lys Thr Phe Thr Ile Thr Ala Asp Asp Met Leu
180 185 190
Ala Val Gly Thr Ala Asn Ala Thr Ala Lys Ala Lys Ala Gly Thr Leu
195 200 205
Lys Gly Leu Asn Val Thr Thr Gly Asp Leu Thr Ala Ala Lys Thr Asp
210 215 220
Val Gln Asp Phe Arg Ala Ala Phe Asp Lys Val Lys Gly Phe Met Gly
225 230 235 240
Ser Thr Glu Val Thr Asn Ile Glu Lys Ala Leu Thr Lys Phe Asp Gly
245 250 255
Asp Gln Ser Leu Ala Asn Ala Lys Ala Ile Gly Asp Ala Leu Thr Ser
260 265 270
Asp Leu Ala Thr Thr Ile Ala Lys Asp Gln Thr Tyr Ser Lys Asn Val
275 280 285
Ser Asn Ala Ser Ser Ala Ile Ala Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Ser
290 295 300
Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp
305 310 315 320
Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala
325 330 335
Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met
340 345 350
Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln
355 360 365
Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
370 375 380
<210>27
<211>381
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>27
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ser Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Gln Lys Leu Leu Asp Gly Ser Lys Lys Ser Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Asn Lys Gln Ile Asp Ile Gln
145 150 155 160
Leu Ser Asn Val Ser Thr Lys Glu Leu Lys Leu Asp Thr Leu Ser Ile
165 170 175
Glu Gly Ser Ser Ser Lys Thr Phe Thr Ile Thr Ala Asp Asp Met Leu
180 185 190
Ala Val Gly Thr Ala Asn Ala Thr Ala Lys Ala Lys Ala Gly Thr Leu
195 200 205
Lys Gly Leu Asn Val Thr Thr Gly Asp Leu Thr Ala Ala Lys Thr Asp
210 215 220
Val Gln Asp Phe Arg Ala Ala Phe Asp Lys Val Lys Gly Phe Met Gly
225 230 235 240
Ser Thr Glu Val Thr Asn Ile Glu Lys Ala Leu Thr Lys Phe Asp Gly
245 250 255
Asp Gln Ser Leu Ala Asn Ala Lys Ala Ile Gly Asp Ala Leu Thr Ser
260 265 270
Asp Leu Ala Thr Thr Ile Ala Lys Asp Gln Thr Tyr Ser Lys Asn Val
275 280 285
Ser Asn Ala Ser Ser Ala Ile Ala Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Ser
290 295 300
Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp
305 310 315 320
Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala
325 330 335
Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met
340 345 350
Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln
355 360 365
Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
370 375 380
<210>28
<211>397
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>28
Met Thr Gly Ile Thr Ile Asn Leu Glu Ile Asp Phe Phe Ala Tyr Tyr
1 5 10 15
Arg Phe Ser Ile Cys Arg Lys Val Asn Ile Lys Lys Trp Gly Phe Leu
20 25 30
Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr
35 40 45
Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser
50 55 60
Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
65 70 75 80
Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala
85 90 95
Asn Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala
100 105 110
Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn
115 120 125
Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Gln Ala Ala Leu Asn
130 135 140
Lys Glu Phe Asp Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Thr Asn
145 150 155 160
Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Lys Thr Ile
165 170 175
Ala Val Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ser Lys Gln Ile Asn Ile
180 185 190
Asn Leu Ser Asn Val Ser Thr Lys Glu Leu Gly Leu Asp Thr Leu Ser
195 200 205
Ile Gly Thr Asp Lys Val Glu Lys Thr Val Tyr Asp Ala Thr Thr Lys
210 215 220
Ala Phe Ala Asp Leu Gly Ala Lys Thr Gly Ala Asp Lys Ala Ala Phe
225 230 235 240
Asp Ala Asp Val Thr Ala Ala Met Lys Glu Phe Asp Lys Val Lys Pro
245 250 255
Phe Met Ser Ala Asp Asp Val Lys Lys Ile Glu Thr Lys Leu Glu Asp
260 265 270
Tyr Asn Lys Ala Asn Asp Ala Gly Ala Gln Thr Ala Ala Gln Ala Leu
275 280 285
Gly Lys Glu Phe Ala Thr Leu Thr Lys Leu Glu Thr Thr Asp Leu Lys
290 295 300
Ala Asn Ala Ser Gly Ala Ile Ala Ser Ile Asp Thr Ala Leu Lys Asn
305 310 315 320
Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp
325 330 335
Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala
340 345 350
Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met
355 360 365
Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln
370 375 380
Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
385 390 395
<210>29
<211>397
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>29
Met Thr Gly Ile Thr Ile Asn Leu Glu Ile Asp Phe Phe Ala Tyr Tyr
1 5 10 15
Arg Phe Ser Ile Cys Arg Lys Val Asn Ile Lys Lys Trp Gly Phe Leu
20 25 30
Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr
35 40 45
Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser
50 55 60
Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
65 70 75 80
Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala
85 90 95
Asn Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala
100 105 110
Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn
115 120 125
Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Gln Ala Ala Leu Asn
130 135 140
Lys Glu Phe Asp Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Thr Asn
145 150 155 160
Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Lys Thr Ile
165 170 175
Ala Val Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ser Lys Gln Ile Asn Ile
180 185 190
Asn Leu Ser Asn Val Ser Thr Lys Glu Leu Gly Leu Ser Thr Leu Ser
195 200 205
Ile Gly Thr Asp Lys Val Glu Lys Thr Val Tyr Asp Ala Thr Thr Lys
210 215 220
Ala Phe Ala Asp Leu Gly Ala Lys Thr Gly Thr Asp Lys Ala Ala Phe
225 230 235 240
Ala Ala Asp Val Thr Ala Ala Met Lys Glu Phe Asp Lys Val Lys Pro
245 250 255
Phe Met Ser Ala Asp Asp Val Lys Lys Ile Glu Thr Lys Leu Glu Asp
260 265 270
Tyr Asn Lys Ala Asn Asp Ala Gly Ala Glu Ala Ala Ala Gln Ala Leu
275 280 285
Gly Lys Glu Phe Ala Thr Leu Thr Lys Leu Glu Thr Thr Asp Leu Lys
290 295 300
Ala Asn Ala Ser Gly Ala Ile Ala Ser Ile Asp Thr Ala Leu Lys Asn
305 310 315 320
Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp
325 330 335
Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala
340 345 350
Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met
355 360 365
Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln
370 375 380
Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
385 390 395
<210>30
<211>406
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus weihenstephanensis
<400>30
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Ser Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ser Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Glu Asn Gln Gln Ala Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Lys Ser Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Thr Lys Gln Ile Asn Ile Asp
145 150 155 160
Leu Ser Asn Val Ser Thr Asp Thr Leu Asn Ile Ser Gly Leu Thr Ile
165 170 175
Asn Gly Lys Lys Asp Ile Thr Val Thr Ile Ser Asp Lys Asp Ile Ala
180 185 190
Asn Ala Ala Thr Asp Ile Gly Lys Ala Thr Ser Ala Gln Gln Gly Leu
195 200 205
Ala Asp Leu Thr Asp Thr Thr Pro Ala Val Pro Asp Thr Pro Ala Val
210 215 220
Ile Gly Thr Gly Thr Ala Gly Asn Pro Gln Phe Pro Ala Val Lys Gly
225 230 235 240
Thr Pro Glu Ile Pro Gly Ser Ser Pro Ala Glu Ile Ala Lys Ala Val
245 250 255
Asp Asp Phe Lys Gln Ala Phe Asn Lys Val Lys Gly Leu Met Ser Asp
260 265 270
Ser Ala Val Ser Ala Met Glu Gln Lys Phe Ala Thr Phe Glu Lys Asp
275 280 285
Lys Ser Leu Ala Asn Ala Lys Asp Ile Gly Thr Ala Phe Ser Ala Pro
290 295 300
Ile Ala Gly Asn Ile Thr Lys Gly Glu Gln Asn Ala Ser Gly Ala Ile
305 310 315 320
Lys Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Lys Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr
325 330 335
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
340 345 350
Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
355 360 365
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
370 375 380
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
385 390 395 400
Val Ser Lys Leu Leu Gln
405
<210>31
<211>406
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>31
Met Thr Gly Ile Thr Ile Asn Leu Glu Ile Asp Phe Phe Ala Tyr Tyr
1 5 10 15
Arg Phe Ser Ile Cys Arg Lys Val Asn Ile Lys Lys Trp Gly Phe Leu
20 25 30
Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr
35 40 45
Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser
50 55 60
Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
65 70 75 80
Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala
85 90 95
Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala
100 105 110
Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn
115 120 125
Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala Leu Asp
130 135 140
Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn
145 150 155 160
Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Asp Asn Lys Ser Ile
165 170 175
Ala Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ala Lys Gln Ile Asn Ile
180 185 190
Asn Leu Ala Asp Ser Ser Thr Lys Ala Leu Asn Ile Asp Thr Leu Ser
195 200 205
Ile Ala Gly Thr Thr Asp Lys Thr Ile Thr Ile Thr Ala Lys Asp Leu
210 215 220
Thr Asp Asn Lys Thr Thr Leu Asp Ala Leu Lys Thr Ala Lys Asp Asp
225 230 235 240
Leu Ala Lys Leu Asp Asp Lys Ser Asp Gln Ala Thr Ile Asp Lys Ala
245 250 255
Val Asp Ala Phe Lys Thr Ala Phe Asn Asn Val Asp Lys Asn Leu Leu
260 265 270
Ser Asp Lys Ala Ile Glu Gly Ile Thr Glu Lys Met Thr Ala Phe Asp
275 280 285
Gly Thr His Thr Ala Ala Ala Ala Ile Gly Ala Ala Tyr Thr Glu Pro
290 295 300
Thr Ala Ala Asp Ile Lys Lys Ser Ala Pro Asn Ala Ser Gly Ala Ile
305 310 315 320
Lys Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr
325 330 335
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
340 345 350
Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
355 360 365
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
370 375 380
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
385 390 395 400
Val Ser Lys Leu Leu Gln
405
<210>32
<211>266
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>32
Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn Val Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Ser Gly Met Arg Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Leu Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Thr Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Ala Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ser Asn Asp Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Ser Tyr Ile Gly Glu Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg Pro Val Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Val Asn Val Thr Lys His Ile Ser Pro
145 150 155 160
Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Lys Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala Arg
165 170 175
Ala Ala Ile Arg Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Asn Val Leu Leu His
180 185 190
Arg Ala Asp Leu Gly Ala Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Leu Leu Ser Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
245 250 255
Pro Gln Met Val Ser Glu Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>33
<211>393
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>33
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Thr Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Asp Asn Gln Lys Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Glu Asn Lys Thr Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Thr Lys Gln Ile Asn Ile Asn
145 150 155 160
Leu Ala Asp Ser Ser Thr Ser Ala Leu Gln Ile Asp Lys Leu Thr Ile
165 170 175
Ser Gly Lys Thr Thr Asp Thr Thr Lys Thr Gln Thr Ile Thr Val Thr
180 185 190
Asp Asp Glu Ile Lys Ala Ala Lys Thr Asp Ile Asp Glu Phe Asn Asp
195 200 205
Ala Lys Lys Ala Leu Ala Asp Leu Lys Ala Glu Ser Ala Pro Ser Lys
210 215 220
Gly Asp Gly Ser Ser Asp Asp Glu Ile Lys Glu Ala Val Ser Asn Phe
225 230 235 240
Lys Lys Ser Phe Glu Lys Ile Gln Lys Phe Met Asn Asp Ser Asp Ile
245 250 255
Lys Thr Val Gln Thr Glu Ile Glu Lys Phe Asp Ala Ala Ala Pro Ala
260 265 270
Leu Asp Lys Ala Lys Gly Met Gly Ile Ala Phe Thr Ser Ala Met Asp
275 280 285
Pro Lys Ala Gly Thr Ile Thr Lys Ala Ala Thr Arg Gln Asn Ala Ser
290 295 300
Asp Ala Ile Lys Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser Asn
305 310 315 320
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
325 330 335
Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ala Ala Ala Ser Gln Ile
340 345 350
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
355 360 365
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
370 375 380
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
385 390
<210>34
<211>426
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>34
Met Thr Gly Ile Thr Ile Asn Leu Glu Ile Asp Phe Phe Ala Tyr Tyr
1 5 10 15
Arg Phe Ser Ile Cys Arg Lys Val Asn Ile Lys Lys Trp Gly Phe Leu
20 25 30
Ile Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr
35 40 45
Met Arg Gln Asn Gln Thr Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser
50 55 60
Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
65 70 75 80
Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu Gly Val Ala Ala
85 90 95
Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala
100 105 110
Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn
115 120 125
Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Asp Asn Gln Lys Ala Leu Asp
130 135 140
Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn
145 150 155 160
Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Glu Asn Lys Thr Ile
165 170 175
Ala Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Thr Lys Gln Ile Asn Ile
180 185 190
Asn Leu Ala Asp Ser Ser Thr Ser Ala Leu Gln Ile Asp Lys Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Gly Lys Thr Thr Asp Thr Thr Lys Thr Gln Thr Ile Thr Val
210 215 220
Thr Asp Asp Glu Ile Lys Ala Ala Lys Thr Asp Ile Asp Glu Phe Asn
225 230 235 240
Asp Ala Lys Lys Ala Leu Ala Asp Leu Lys Ala Glu Ser Ala Pro Ser
245 250 255
Lys Gly Asp Gly Ser Ser Asp Asp Glu Ile Lys Glu Ala Val Ser Asn
260 265 270
Phe Lys Lys Ser Phe Glu Lys Ile Gln Lys Phe Met Asn Asp Ser Asp
275 280 285
Ile Lys Thr Val Gln Thr Glu Ile Glu Lys Phe Asp Ala Ala Ala Pro
290 295 300
Ala Leu Asp Lys Ala Lys Gly Met Gly Ile Ala Phe Thr Ser Ala Met
305 310 315 320
Asp Pro Lys Ala Gly Thr Ile Thr Lys Ala Ala Thr Arg Gln Asn Ala
325 330 335
Ser Asp Ala Ile Lys Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser
340 345 350
Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val
355 360 365
Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ala Ala Ala Ser Gln
370 375 380
Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe
385 390 395 400
Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln
405 410 415
Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
420 425
<210>35
<211>269
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>35
Met Ser Ile Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn Ala Arg
1 5 10 15
Gln Ser Leu Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His
20 25 30
Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn
35 40 45
Ile Val Ile Val Thr Arg Met Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Met Arg Val
50 55 60
Ala Ile Arg Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu
65 70 75 80
Ala Ala Leu Gln Thr Val Thr Asn Ile Leu Gln His Met Arg Asp Phe
85 90 95
Ala Ile Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Thr Asn Arg Asp Ser
100 105 110
Leu Asn Lys Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Pro Ile Gly Tyr Ile Gly
115 120 125
Glu Thr Thr Glu Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg
130 135 140
Pro Ile Thr Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Ile Asn Met Thr Lys His
145 150 155 160
Ile Pro Pro Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Lys Ile Ser Thr Glu Gln
165 170 175
Glu Ala Arg Ala Ala Ile Arg Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Asn Val
180 185 190
Ser Leu His Arg Ala Asp Leu Gly Ser Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe
195 200 205
Asn Ile Glu Asn Leu Asn Ser Gln Ser Met Ala Leu Ile Asp Thr Ala
210 215 220
Ser Gln Val Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Ile Ser Asp Phe Leu
225 230 235 240
Lys Phe Lys Leu Leu Thr Ala Val Ala Leu Ser Val Val Ser Gln Ala
245 250 255
Asn Gln Ile Pro Gln Ile Val Ser Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>36
<211>414
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>36
Met Ala Arg Ile Thr Ile Asn Leu Glu Ile Asp Phe Phe Ala Tyr Tyr
1 5 10 15
Arg Phe Ser Ile Cys Arg Lys Val Asn Ile Lys Lys Trp Gly Phe Leu
20 25 30
Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Asp Tyr
35 40 45
Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser
50 55 60
Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
65 70 75 80
Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala
85 90 95
Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala
100 105 110
Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ser Asn
115 120 125
Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser Ala Leu Asp
130 135 140
Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn
145 150 155 160
Thr Glu Phe Asn Asp Gln Lys Leu Leu Asp Gly Ser Lys Lys Ser Ile
165 170 175
Ala Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Asn Lys Gln Ile Asp Ile
180 185 190
Gln Leu Ser Asn Val Ser Thr Lys Glu Leu Lys Leu Asp Thr Leu Ser
195 200 205
Ile Glu Gly Ser Ser Ser Lys Thr Phe Thr Ile Thr Ala Asp Asp Met
210 215 220
Leu Ala Val Gly Thr Ala Asn Ala Thr Ala Lys Ala Lys Ala Gly Thr
225 230 235 240
Leu Lys Gly Leu Asn Val Thr Thr Gly Asp Leu Thr Ala Ala Lys Thr
245 250 255
Asp Val Gln Asp Phe Arg Ala Ala Phe Asp Lys Val Lys Gly Phe Met
260 265 270
Gly Ser Thr Glu Val Thr Asn Ile Glu Lys Ala Leu Thr Lys Phe Asp
275 280 285
Gly Asp Gln Ser Leu Ala Asn Ala Lys Ala Ile Gly Asp Ala Leu Thr
290 295 300
Ser Asp Leu Ala Thr Thr Ile Ala Lys Asp Gln Thr Tyr Ser Lys Asn
305 310 315 320
Val Ser Asn Ala Ser Ser Ala Ile Ala Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu
325 330 335
Ser Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu
340 345 350
Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser
355 360 365
Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu
370 375 380
Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser
385 390 395 400
Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
405 410
<210>37
<211>266
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>37
Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asn Asn Pro Ala Asn Val Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Ser Gly Met Arg Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Thr Asn Val Leu Gln Arg Met Arg Asp Val Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Ser Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Gly Tyr Ile Asp Glu Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg Thr Val Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Val Asn Val Thr Lys His Ile Pro Pro
145 150 155 160
Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Asn Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala Arg
165 170 175
Ala Ala Ile Arg Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Asn Val Ser Leu His
180 185 190
Arg Ala Asp Leu Gly Ala Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Thr Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
245 250 255
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>38
<211>494
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>38
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Ser Val Ala Ala Asp
50 55 60
Asn Thr Gln Asn Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Val Ala Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Ala Leu Lys Glu Gln Ile Thr Tyr Ile Ala Asp Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Asn Gly Asn Gln Thr Ile Asn Ile
130 135 140
Gln Thr Leu Asp Ser His Asp Ser Thr Lys Gln Ile Gly Ile Asp Leu
145 150 155 160
Lys Ser Ala Thr Leu Glu Ala Leu Gly Ile Lys Asp Leu Thr Val Gly
165 170 175
Ala Val Gly Ser Thr Glu Ala Lys Asn Tyr Val Asp Ala Lys Glu Ala
180 185 190
Leu Ala Lys Asn Val Ala Ala Asn Glu Phe Ile Asp Ala Lys Lys Ala
195 200 205
Leu Asp Gly Asn Ala Ile Ala Lys Gly Tyr Val Glu Ala Lys Thr Ala
210 215 220
Phe Asp Asp Ala Lys Pro Glu Val Lys Ala Leu Val Ser Asn Tyr Thr
225 230 235 240
Asp Ala Leu Ala Ala Leu Ala Lys Asp Asp Thr Asn Asp Asp Leu Lys
245 250 255
Lys Asp Val Ala Asp Thr Lys Ala Leu Met Asp Ala Asn Thr Val Ala
260 265 270
Lys Thr Tyr Phe Glu Ala Lys Thr Ala His Asp Gly Ala Asp Gln Ala
275 280 285
Ile Lys Asp Ile Val Thr Thr Tyr Asp Ser Lys Leu Gly Ala Leu Asp
290 295 300
Asp Ala Ala Asn Lys Ala Ile Ser Asp Phe Asp Lys Ala Lys Ala Ala
305 310 315 320
Phe Asp Glu Ser Pro Ala Ala Lys Glu Leu Val Lys Thr Met Asp Asp
325 330 335
Ala Lys Gln Ala Ala Thr Gln Asn Asn Thr Ala Asn Ala Tyr Leu Val
340 345 350
Ala Lys Ala Ala Ala Glu Leu Ala Pro Asn Asp Ala Asp Lys Lys Ala
355 360 365
Glu Leu Glu Asn Ala Thr Lys Ala Leu Glu Lys Asp Asp Thr Ala Lys
370 375 380
Gly Leu Val Lys Thr Tyr Glu Asn Ala Lys Glu Ala Leu Asn Pro Ala
385 390 395 400
Asn Ala Met Pro Leu Asp Ala Val Lys Gln Ile Asp Ala Ala Leu Lys
405 410 415
Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu
420 425 430
Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ala Met Ala Ala
435 440 445
Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu
450 455 460
Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser
465 470 475 480
Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
485 490
<210>39
<211>267
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>39
Met Arg Ile Gly Thr Asn Phe Leu Ser Met Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn Ile Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Asn Gly Met Arg Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Met Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Ile Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Ser Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Ser Tyr Ile Gly Glu Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg Pro Val Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Val His Ile Ser Lys Ser Ile Pro Pro
145 150 155 160
Pro Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Lys Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala
165 170 175
Arg Ala Ala Ile Leu Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Ser Val Ser Leu
180 185 190
His Arg Ala Asp Leu Gly Ala Met Ile Asn Arg Leu His Phe Asn Ile
195 200 205
Glu Asn Leu Asn Ser Gln Ser Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg
210 215 220
Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe
225 230 235 240
Lys Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln
245 250 255
Ile Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>40
<211>377
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>40
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Thr Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Asp Asn Gln Lys Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Asp Asn Lys Ser Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Thr Lys Gln Ile Asn Ile Asn
145 150 155 160
Leu Ala Asp Ser Ser Thr Ser Ala Leu Asn Ile Asp Lys Leu Ser Ile
165 170 175
Glu Gly Thr Gly Asn Lys Thr Ile Thr Leu Thr Ala Ala Asp Ile Ala
180 185 190
Lys Asp Lys Thr Asn Ile Asp Ala Val Gly Thr Ala Lys Thr Ala Leu
195 200 205
Ala Gly Leu Thr Gly Thr Pro Ala Ala Ala Ala Ile Asn Ser Ala Val
210 215 220
Ala Asp Phe Lys Thr Ala Phe Ala Lys Ala Asp Lys Asn Leu Met Ser
225 230 235 240
Asp Ala Gln Ile Lys Ser Val Thr Asp Ala Ile Thr Ala Phe Glu Ala
245 250 255
Asp Ala Thr Pro Asp Leu Thr Lys Ala Lys Ala Ile Gly Thr Ala Tyr
260 265 270
Thr Ala Pro Ala Ala Gly Asp Ile Thr Lys Ala Ser Pro Asn Ala Ser
275 280 285
Glu Ala Ile Lys Ser Ile Asp Ala Ala Leu Asp Thr Ile Ala Ser Asn
290 295 300
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
305 310 315 320
Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile
325 330 335
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
340 345 350
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
355 360 365
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
370 375
<210>41
<211>406
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>41
Met Thr Gly Ile Thr Ile Asn Leu Glu Ile Asp Phe Phe Ala Tyr Tyr
1 5 10 15
Arg Phe Ser Ile Cys Arg Lys Val Asn Ile Lys Lys Trp Gly Phe Leu
20 25 30
Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr
35 40 45
Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser
50 55 60
Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
65 70 75 80
Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala
85 90 95
Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala
100 105 110
Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn
115 120 125
Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala Leu Asp
130 135 140
Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn
145 150 155 160
Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Asp Asn Lys Ser Ile
165 170 175
Ala Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ala Lys Gln Ile Asn Ile
180 185 190
Asn Leu Ala Asp Ser Ser Thr Lys Ala Leu Asn Ile Asp Thr Leu Ser
195 200 205
Ile Ala Gly Thr Thr Asp Lys Thr Ile Thr Ile Thr Ala Lys Asp Leu
210 215 220
Thr Asp Asn Lys Ala Thr Leu Asp Ala Leu Lys Thr Ala Lys Ala Asp
225 230 235 240
Leu Ala Lys Leu Asp Asp Lys Ser Asp Gln Ala Thr Ile Asp Lys Ala
245 250 255
Val Asp Ala Phe Lys Thr Ala Phe Asn Asn Val Asp Lys Asn Leu Leu
260 265 270
Ser Asp Lys Ala Ile Glu Gly Ile Thr Asp Lys Met Thr Ala Phe Asp
275 280 285
Gly Thr His Thr Ala Ala Ala Ala Ile Gly Thr Ala Tyr Thr Glu Pro
290 295 300
Thr Ala Gly Asp Ile Thr Lys Ser Ala Pro Asn Ala Ser Gly Ala Ile
305 310 315 320
Lys Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr
325 330 335
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
340 345 350
Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
355 360 365
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
370 375 380
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
385 390 395 400
Val Ser Lys Leu Leu Gln
405
<210>42
<211>373
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>42
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Asp Asn Lys Ser Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ala Lys Gln Ile Asn Ile Asn
145 150 155 160
Leu Ala Asp Ser Ser Thr Lys Ala Leu Asn Ile Asp Thr Leu Ser Ile
165 170 175
Ala Gly Thr Thr Asp Lys Thr Ile Thr Ile Thr Ala Lys Asp Leu Thr
180 185 190
Asp Asn Lys Ala Thr Leu Asp Ala Leu Lys Thr Ala Lys Ala Asp Leu
195 200 205
Ala Lys Leu Asp Asp Lys Ser Asp Gln Ala Thr Ile Asp Lys Ala Val
210 215 220
Asp Ala Phe Lys Thr Ala Phe Asn Asn Val Asp Lys Asn Leu Leu Ser
225 230 235 240
Asp Lys Ala Ile Glu Gly Ile Thr Asp Lys Met Thr Ala Phe Asp Gly
245 250 255
Thr His Thr Ala Ala Ala Ala Ile Gly Thr Ala Tyr Thr Glu Pro Thr
260 265 270
Ala Gly Asp Ile Thr Lys Ser Ala Pro Asn Ala Ser Gly Ala Ile Lys
275 280 285
Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu
290 295 300
Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser
305 310 315 320
Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp
325 330 335
Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu
340 345 350
Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val
355 360 365
Ser Lys Leu Leu Gln
370
<210>43
<211>361
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>43
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Gly Asn Gln Ala Ala Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Asp Ala Leu Lys Gln Gln Ile Asn Tyr Ile Ser Thr Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Lys Thr Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ser Lys Lys Ile Asp Ile Gln
145 150 155 160
Leu Ala Asp Val Ser Thr Lys Ser Leu Asn Ile Asp Lys Leu Lys Ile
165 170 175
Gly Gly Val Ser Lys Glu Thr Thr Asp Ala Val Gly Asp Thr Phe Thr
180 185 190
Lys Leu Ser Thr Thr Ala Thr Thr Asp Met Gly Ala Leu Lys Ile Glu
195 200 205
Val Glu Ala Ala Met Lys Glu Phe Asp Lys Val Lys Gly Ala Met Ser
210 215 220
Ala Glu Asp Ala Lys Ala Val Thr Asp Lys Leu Asp Ala Phe Asn Thr
225 230 235 240
Ala Ala Ala Ala Thr Asn Asp Ala Ala Thr Ile Ala Ala Ala Lys Ala
245 250 255
Leu Gly Ala Ala Phe Asp Lys Thr Lys Val Glu Met Ala Asp Pro Asn
260 265 270
Ala Ser Val Ala Ala Ile Asp Ser Ala Leu Glu Asn Ile Ala Ser Asn
275 280 285
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
290 295 300
Asn Leu Lys Ser Gln Gln Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile
305 310 315 320
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
325 330 335
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
340 345 350
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
355 360
<210>44
<211>465
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>44
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ala Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala Ala Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Gly Glu Leu Gln Lys Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Gly Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Asp Gly Ser Asn Pro Ser Ile Ser
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Ser Ala Asp Gln Ser Lys Gln Ile Ser Ile Asp
145 150 155 160
Leu Lys Ser Ala Thr Leu Glu Ala Leu Gly Ile Lys Asp Leu Thr Val
165 170 175
Gly Ala Thr Glu Asn Thr Leu Ala Lys Ala Thr Ile Thr Ala Lys Asp
180 185 190
Ala Phe Asp Ala Ala Lys Asp Ala Ser Asp Ala Ala Lys Lys Glu Ile
195 200 205
Asp Ala Ala Ala Lys Asp Thr Pro Ser Lys Asn Asp Ala Gln Leu Ala
210 215 220
Lys Glu Tyr Ile Glu Ala Lys Ala Thr Leu Ala Thr Leu Lys Pro Thr
225 230 235 240
Asp Ala Thr Tyr Ala Ala Lys Ala Ala Glu Leu Asp Ala Ala Thr Thr
245 250 255
Ala Leu Asn Asp Asn Ala Lys Val Leu Val Asp Gly Tyr Glu Lys Lys
260 265 270
Leu Thr Thr Thr Lys Thr Lys Glu Ala Glu Tyr Thr Ala Ala Lys Glu
275 280 285
Gln Ser Thr Lys Ser Thr Ala Ala Ala Asp Leu Val Thr Lys Tyr Glu
290 295 300
Thr Ala Lys Ser Asn Ala Leu Gly Asn Asp Ile Ala Lys Glu Tyr Leu
305 310 315 320
Glu Ala Lys Thr Ala Tyr Glu Ala Asn Lys Asn Asp Ile Ser Ser Lys
325 330 335
Ser Arg Phe Glu Ala Ala Glu Thr Glu Leu Asn Lys Asp Ile Thr Ala
340 345 350
Asn Lys Ala Ala Lys Val Leu Val Glu Thr Tyr Glu Lys Ala Lys Thr
355 360 365
Ala Gly Thr Thr Glu Lys Ser Leu Val Ala Val Asp Lys Ile Asp Glu
370 375 380
Ala Leu Lys Thr Ile Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu
385 390 395 400
Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ala Ser
405 410 415
Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu
420 425 430
Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser
435 440 445
Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu
450 455 460
Gln
465
<210>45
<211>394
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>45
Met Thr Gly Ile Thr Ile Asn Leu Glu Ile Asp Phe Phe Ala Tyr Tyr
1 5 10 15
Arg Phe Ser Ile Cys Arg Lys Val Asn Ile Lys Lys Trp Gly Phe Leu
20 25 30
Ile Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr
35 40 45
Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser
50 55 60
Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
65 70 75 80
Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala
85 90 95
Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala
100 105 110
Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn
115 120 125
Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Gln Ala Ala Leu Asn
130 135 140
Lys Glu Phe Asp Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asn Tyr Ile Ser Thr Asn
145 150 155 160
Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Lys Thr Ile
165 170 175
Ala Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ser Lys Lys Ile Asp Ile
180 185 190
Lys Leu Ala Asp Val Ser Thr Glu Ser Leu Lys Ile Asp Lys Leu Lys
195 200 205
Ile Gly Gly Val Ser Lys Glu Thr Thr Asp Ala Val Ser Glu Thr Phe
210 215 220
Thr Lys Leu Ser Thr Thr Lys Thr Thr Asp Lys Asp Ala Leu Lys Ala
225 230 235 240
Glu Val Glu Ala Ala Met Lys Glu Phe Asp Lys Val Lys Gly Ala Met
245 250 255
Ser Thr Glu Asp Ala Lys Ala Val Thr Asp Lys Leu Gly Leu Phe Asn
260 265 270
Thr Ala Ala Ala Gly Thr Asp Asp Thr Ala Ile Ala Thr Ala Ala Lys
275 280 285
Asn Leu Gly Ala Ala Phe Asp Lys Thr Lys Val Asn Met Ala Asp Pro
290 295 300
Asn Ala Ser Val Ala Ala Ile Asp Ser Ala Leu Glu Asn Ile Ala Ser
305 310 315 320
Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val
325 330 335
Asn Asn Leu Lys Ser Gln Gln Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln
340 345 350
Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe
355 360 365
Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln
370 375 380
Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
385 390
<210>46
<211>266
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>46
Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Leu Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn Asn Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn Ile Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Ser Ser Met Arg Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Thr Asn Val Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Asp Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Gly Tyr Ile Asp Glu Thr Thr
115 120 125
Asp Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg Thr Val Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Val Asn Val Thr Lys His Ile Pro Pro
145 150 155 160
Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Asn Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala Arg
165 170 175
Ala Ala Ile Arg Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Asn Val Ser Leu His
180 185 190
Arg Ala Asp Leu Gly Ala Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Thr Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
245 250 255
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>47
<211>373
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>47
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ser Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys Ala Ala Met Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Gly Glu Leu Lys Glu Gln Ile Lys Tyr Ile Ala Glu Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Gln His Leu Leu Asn Ala Asp Lys Gly Ile Thr Lys
130 135 140
Glu Ile Ala Ile Gln Thr Leu Asp Ser Asp Ser Asp Ser Lys Gln Ile
145 150 155 160
Lys Ile Lys Leu Gln Gly Ser Ser Leu Glu Ala Leu Asp Ile Lys Asp
165 170 175
Leu Gln Ile Gly Asn Thr Glu Leu Ala Gln Lys Asp Leu Asp Leu Leu
180 185 190
Asn Ala Thr Met Asp Arg Leu Asp Ala Thr Val Pro Gly Thr Arg Asp
195 200 205
Val Asp Val Gln Ala Ala Lys Asp Ala Phe Asp Lys Val Lys Gly Phe
210 215 220
Tyr Thr Asn Ser Asp Ser Val Lys Ala Ile Glu Arg Ala Phe Glu Asp
225 230 235 240
Tyr Ala Thr Ala Ser Thr Ala Gly Thr Ala Lys Ala Asp Ala Ala Thr
245 250 255
Ala Ile Lys Ala Ala Phe Asp Leu Ala Ala Asn Lys Val Gly Lys Pro
260 265 270
Ala Thr Gly Gly Ala Gln Gly Ser Ala Asn Ser Leu Gly Ala Ile Thr
275 280 285
Lys Ile Asp Ala Ala Leu Lys Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu
290 295 300
Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser
305 310 315 320
Gln Ala Ser Ser Met Ala Ala Ala Ala Ser Gln Val Glu Asp Ala Asp
325 330 335
Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu
340 345 350
Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val
355 360 365
Ser Lys Leu Leu Gln
370
<210>48
<211>447
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>48
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Leu Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Asn Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Gly Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Asp Asn Gln Ala Ala Met Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Glu Leu Gln Lys Gln Ile Thr Tyr Ile Ala Asp Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Gln Ser Asn Ser Ser Ile Asn Ile
130 135 140
Gln Thr Leu Asp Ser Ser Asp Gly Asn Gln Gln Ile Gly Ile Glu Leu
145 150 155 160
Lys Ser Ala Ser Leu Lys Ser Leu Gly Ile Glu Asp Leu Ala Ile Gly
165 170 175
Ala Ser Val Asn Pro Leu Ala Lys Ala Thr Val Glu Ala Ser Glu Ala
180 185 190
Tyr Asp Lys Ala Lys Ala Asp Thr Ala Ala Phe Ala Lys Ser Ile Ala
195 200 205
Asp Thr Ala Ala Thr Gly Thr Gly Ala Ala Lys Ala Asp Ala Ala Ala
210 215 220
Val Asp Ala Tyr Ile Lys Glu Ala Asp Pro Thr Ala Lys Gly Asn Leu
225 230 235 240
Tyr Thr Gly Leu Thr Ala Asp Gln Lys Lys Leu Ala Asp Glu His Asn
245 250 255
Thr Leu Lys Ala Ala Glu Asp Gly Lys Lys Ala Glu Leu Thr Met Ala
260 265 270
Thr Thr Lys Ser Thr Ala Asp Gly Thr Ala Lys Gly Leu Val Asp Ala
275 280 285
Tyr Asp Asn Ala Lys Ser Asp Ala Met Asn Asp Pro Lys Ala Lys Ala
290 295 300
Tyr Leu Glu Ala Lys Met Ala Tyr Glu Lys Asp Thr Ser Asn Val Ala
305 310 315 320
Asn Lys Gln Lys Leu Asp Ser Thr Lys Glu Ala Met Glu Lys Asp Pro
325 330 335
Ala Ser Lys Asp Leu Val Val Lys Leu Asp Ala Ala Lys Ala Ala Ala
340 345 350
Thr Asn Gly Thr Pro Leu Asp Ala Val Ser Lys Ile Asp Ala Ala Leu
355 360 365
Lys Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg
370 375 380
Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala
385 390 395 400
Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser
405 410 415
Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu
420 425 430
Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
435 440 445
<210>49
<211>373
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>49
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ser Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys Ala Ala Met Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Gly Glu Leu Lys Glu Gln Ile Lys Tyr Ile Ala Glu Asn Thr
115 120 125
Gln Phe Asn Asp Gln His Leu Leu Asn Ala Asp Lys Gly Ile Thr Lys
130 135 140
Glu Ile Ala Ile Gln Thr Leu Asp Ser Asp Ser Asp Ser Lys Gln Ile
145 150 155 160
Lys Ile Lys Leu Gln Gly Ser Ser Leu Glu Ala Leu Asp Ile Lys Asp
165 170 175
Leu Gln Ile Gly Asn Thr Glu Leu Ala Gln Lys Asp Leu Asp Leu Leu
180 185 190
Asn Ala Thr Met Asp Arg Leu Asp Ala Thr Val Pro Gly Thr Arg Asp
195 200 205
Val Asp Val Gln Ala Ala Lys Asp Ala Phe Asp Lys Val Lys Gly Phe
210 215 220
Tyr Thr Asn Ser Asp Ser Val Lys Ala Ile Glu Arg Ala Phe Glu Asp
225 230 235 240
Tyr Ala Thr Ala Ser Thr Ala Gly Thr Ala Lys Ala Asp Ala Ala Thr
245 250 255
Ala Ile Lys Ala Ala Phe Asp Leu Ala Ala Asn Lys Val Gly Lys Pro
260 265 270
Ala Thr Gly Gly Ala Gln Gly Ser Ala Asn Ser Leu Gly Ala Ile Thr
275 280 285
Lys Ile Asp Ala Ala Leu Lys Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu
290 295 300
Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser
305 310 315 320
Gln Ala Ser Ser Met Ala Ala Ala Ala Ser Gln Val Glu Asp Ala Asp
325 330 335
Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu
340 345 350
Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val
355 360 365
Ser Lys Leu Leu Gln
370
<210>50
<211>397
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>50
Met Asp Phe Phe Ala Tyr Tyr Arg Phe Ser Ile Cys Arg Lys Val Asn
1 5 10 15
Ile Lys Lys Trp Gly Phe Phe Tyr Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn
20 25 30
Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser
35 40 45
Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser
50 55 60
Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu
65 70 75 80
Ser Gly Leu Gly Val Ala Ser Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu
85 90 95
Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu
100 105 110
Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn
115 120 125
Glu Asn Lys Ala Ala Met Gln Lys Glu Phe Gly Glu Leu Lys Glu Gln
130 135 140
Ile Lys Tyr Ile Ala Glu Asn Thr Gln Phe Asn Asp Gln His Leu Leu
145 150 155 160
Asn Ala Asp Lys Gly Ile Thr Lys Glu Ile Ala Ile Gln Thr Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Ser Asp Ser Lys Gln Ile Lys Ile Lys Leu Gln Gly Ser Ser
180 185 190
Leu Glu Ala Leu Asp Ile Lys Asp Leu Gln Ile Gly Asn Thr Glu Leu
195 200 205
Ala Gln Lys Asp Leu Asp Leu Leu Asn Ala Thr Met Asp Arg Leu Asp
210 215 220
Ala Thr Val Pro Gly Thr Arg Asp Val Asp Val Gln Ala Ala Lys Asp
225 230 235 240
Ala Phe Asp Lys Val Lys Gly Phe Tyr Thr Asn Ser Asp Ser Val Lys
245 250 255
Ala Ile Glu Arg Ala Phe Glu Asp Tyr Ala Thr Ala Ser Thr Ala Gly
260 265 270
Thr Ala Lys Ala Asp Ala Ala Thr Ala Ile Lys Ala Ala Phe Asp Leu
275 280 285
Ala Ala Asn Lys Val Gly Lys Pro Ala Thr Gly Gly Ala Gln Gly Ser
290 295 300
Ala Asn Ser Leu Gly Ala Ile Thr Lys Ile Asp Ala Ala Leu Lys Thr
305 310 315 320
Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp
325 330 335
Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ala Ser Ser Met Ala Ala Ala
340 345 350
Ala Ser Gln Val Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met
355 360 365
Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln
370 375 380
Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
385 390 395
<210>51
<211>455
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>51
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Glu Asn Thr Ser Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Ser Ala Asp Thr Ala Lys Gln Ile Asn Ile Asn
145 150 155 160
Leu Ala Asp Ser Ser Thr Ser Ala Leu Leu Ile Asp Lys Leu Ser Ile
165 170 175
Ser Gly Ala Gly Ala Gly Thr Ala Leu Ala Gly Val Ala Thr Ala Asp
180 185 190
Ile Asn Ala Ala Gly Thr Lys Gln Ala Ala Leu Ser Gly Leu Thr Gly
195 200 205
Ser Lys Thr Thr Asp Glu Leu Asp Asp Ala Val Lys Glu Phe Lys Thr
210 215 220
Glu Phe Asp Lys Val Lys Ser Gly Leu Ser Ala Glu Asn Ala Asp Lys
225 230 235 240
Ile Thr Ala Ala Met Asp Lys Tyr Thr Asn Asn Lys Thr Leu Asp Asn
245 250 255
Ala Lys Ala Ile Gly Asp Leu Tyr Lys Thr Met Ala Pro Ala Asp Ser
260 265 270
Thr Val Val Gly Thr Ala Gly Thr Lys Gly Gln Ala Leu Ile Asp Leu
275 280 285
Asn Ala Thr Ala Thr Gly Asp Thr Ala Gln Lys Arg Gln Val Ala Val
290 295 300
Asp Ala Phe Lys Asp Asp Phe Asp Lys Ile Lys Gly Gly Leu Asn Ala
305 310 315 320
Gln Asp Ala Ala Lys Val Thr Ala Ala Leu Asp Lys Phe Asn Lys Ala
325 330 335
Asp Gly Ser Gly Asn Thr Leu Glu Asn Ala Gln Glu Ile Gly Lys Val
340 345 350
Phe Ala Glu Val Ala Ala Gly Ser Thr Lys Ser Asn Ala Ser Asp Ala
355 360 365
Ile Lys Ser Ile Asp Lys Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser Asn Arg Ala
370 375 380
Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu
385 390 395 400
Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp
405 410 415
Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu
420 425 430
Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln
435 440 445
Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
450 455
<210>52
<211>367
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>52
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Thr Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ser Arg Glu Gly Gly Leu Asn Val Ala Ala Arg
50 55 60
Asn Thr Glu Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Ser Glu Thr Asn Thr Ser Lys Asn Gln Ala Ala Met Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Asp Gln Leu Lys Glu Gln Ile Gln Tyr Ile Ala Asp Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Ser Thr Ile Asn
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Ser His Asp Lys Asn Lys Gln Ile Thr Ile Ser
145 150 155 160
Leu Asp Ser Ala Ser Leu Lys Asn Leu Asp Ile Thr Asp Leu Ala Ile
165 170 175
Gly Ser Asn Thr Val Asn Lys Asn Asp Leu Asp Thr Leu Asn Asn Ser
180 185 190
Met Lys Arg Leu Glu Thr Ala Ala Ala Asp Ala Ala Val Gln Ala Gln
195 200 205
Asp Val Thr Asp Ala Lys Asn Ala Phe Asn Lys Val Lys Ser Gly Tyr
210 215 220
Thr Pro Ala Glu Val Glu Lys Met Glu Asp Ala Phe Lys Ala Tyr Asp
225 230 235 240
Lys Val Val Ala Asp Pro Ala Lys Thr Asp Ala Leu Leu Lys Ala Ala
245 250 255
Ala Glu Lys Ile Asn Thr Glu Phe Lys Thr Leu Thr Ala Pro Thr Ala
260 265 270
Thr Ala Phe Asp Pro Ser Ser Ser Val Glu Lys Ile Asp Lys Ala Ile
275 280 285
Glu Thr Ile Ala Ser Ser Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg
290 295 300
Leu Asp Phe Asn Val Thr Asn Leu Lys Ser Gln Glu Asn Ser Met Ala
305 310 315 320
Ala Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser
325 330 335
Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu
340 345 350
Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
355 360 365
<210>53
<211>367
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>53
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Thr Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ser Arg Glu Gly Gly Leu Asn Val Ala Ala Arg
50 55 60
Asn Thr Glu Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Ser Glu Thr Asn Thr Ser Lys Asn Gln Ala Ala Met Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Asp Gln Leu Lys Glu Gln Ile Gln Tyr Ile Ala Asp Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Ser Thr Ile Asn
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Ser His Asp Lys Asn Lys Gln Ile Thr Ile Ser
145 150 155 160
Leu Asp Ser Ala Ser Leu Lys Asn Leu Asp Ile Thr Asp Leu Ala Ile
165 170 175
Gly Ser Asn Thr Val Asn Lys Asn Asp Leu Asp Thr Leu Asn Asn Ser
180 185 190
Met Lys Arg Leu Glu Thr Ala Ala Ala Asp Ala Ala Val Gln Ala Gln
195 200 205
Asp Val Thr Asp Ala Lys Asn Ala Phe Asn Lys Val Lys Ser Gly Tyr
210 215 220
Thr Pro Ala Glu Val Glu Lys Met Glu Asp Ala Phe Lys Ala Tyr Asp
225 230 235 240
Lys Val Val Ala Asp Pro Ala Lys Thr Asp Ala Leu Leu Lys Ala Ala
245 250 255
Ala Glu Lys Ile Asn Thr Glu Phe Lys Thr Leu Thr Ala Pro Thr Ala
260 265 270
Thr Ala Phe Asp Pro Ser Ser Ser Val Glu Lys Ile Asp Lys Ala Ile
275 280 285
Glu Thr Ile Ala Ser Ser Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg
290 295 300
Leu Asp Phe Asn Val Thr Asn Leu Lys Ser Gln Glu Asn Ser Met Ala
305 310 315 320
Ala Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser
325 330 335
Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu
340 345 350
Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
355 360 365
<210>54
<211>381
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>54
Met Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln
100 105 110
Lys Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr
115 120 125
Ile Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Asp
130 135 140
Asn Lys Ser Ile Ala Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ser Lys
145 150 155 160
Gln Ile Asn Ile Asp Leu Ala Asn Thr Ser Thr Ser Ser Leu Lys Ile
165 170 175
Asp Lys Leu Ser Ile Glu Gly Lys Gly Asn Gln Thr Ile Ala Ile Thr
180 185 190
Ala Ala Asp Ile Ala Lys Asp Thr Asn Ile Ala Ala Leu Thr Ser Ala
195 200 205
Gln Gly Lys Leu Ala Ala Leu Thr Gly Thr Pro Ala Pro Ala Ala Leu
210 215 220
Thr Thr Ala Val Asp Glu Phe Lys Ala Ala Phe Glu Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Asn Leu Met Ser Asp Thr Gln Ile Thr Gly Ile Glu Asn Ala Ile Lys
245 250 255
Ala Tyr Asp Gly Ala Thr Thr Lys Thr Leu Ala Leu Ala Gln Ala Val
260 265 270
Gly Thr Ala Tyr Thr Ala Pro Thr Pro Gly Asp Ile Thr Lys Glu Leu
275 280 285
Pro Asn Ala Ser Ser Ser Ile Lys Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Thr
290 295 300
Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp
305 310 315 320
Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ala Ser Ser Met Ala Ser Ala
325 330 335
Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met
340 345 350
Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln
355 360 365
Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
370 375 380
<210>55
<211>364
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>55
Met Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Glu Asn Gln
100 105 110
Ala Ala Leu Asp Lys Glu Phe Gly Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asn Tyr
115 120 125
Ile Ser Thr Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser
130 135 140
Asn Glu Thr Ile Ala Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Glu Gly Lys
145 150 155 160
Lys Ile Asp Ile Lys Leu Ala Asn Val Ser Thr Asp Ser Leu Lys Ile
165 170 175
Asp Lys Leu Thr Ile Gly Gly Ala Ala Gln Lys Thr Val Asp Ala Val
180 185 190
Ala Asp Lys Phe Asn Ala Leu Lys Thr Thr Thr Thr Thr Asp Lys Ala
195 200 205
Ala Ile Gln Thr Glu Val Asp Ala Val Met Lys Glu Phe Asp Lys Val
210 215 220
Lys Gly Ser Met Ser Ala Glu Asp Ala Lys Val Ile Thr Asp Lys Leu
225 230 235 240
Lys Asp Tyr Asn Asp Ala Ala Asp Thr Asp Thr Ala Lys Ala Thr Ala
245 250 255
Ala Lys Asp Leu Gly Ala Ala Phe Asp Lys Thr Lys Val Asn Ile Ala
260 265 270
Asn Pro Asn Ala Ala Val Ala Ala Ile Asp Ser Ala Leu Glu Asn Ile
275 280 285
Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe
290 295 300
Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala
305 310 315 320
Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr
325 330 335
Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala
340 345 350
Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
355 360
<210>56
<211>266
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>56
Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asn Asn Pro Ala Asn Ile Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Ser Gly Met Arg Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Leu Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Thr Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Val Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asn Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Ser Tyr Ile Gly Glu Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg Pro Val Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly Tyr Thr Val Asn Val Thr Lys His Thr Pro Pro
145 150 155 160
Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Lys Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala Arg
165 170 175
Ala Ala Ile Arg Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Asn Val Ser Leu His
180 185 190
Arg Ala Asp Leu Gly Ser Met Met Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
245 250 255
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>57
<211>460
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>57
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Thr Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Gly Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Lys Ala Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Ser Asp Asp Lys Gly Lys Gln Ile Asp Ile Ser
145 150 155 160
Leu Ser Asp Thr Ser Thr Thr Ala Leu Lys Ile Asn Asn Leu Ser Ile
165 170 175
Ala Ala Asn Gly Leu Gly Ile Gly Ser Gly Lys Glu Leu Val Gly Val
180 185 190
Ala Asp Asn Thr Ile Ala Asn Ala Ser Ala Glu Ala Leu Lys Lys Leu
195 200 205
Asp Gly Thr Thr Gly Asp Thr Asp Val Lys Arg Ser Asn Ala Val Lys
210 215 220
Ala Phe Thr Asp Gln Tyr Lys Asp Leu Lys Val Ala Met Asn Ala Lys
225 230 235 240
Asp Val Glu Thr Ile Asp Ala Ala Ile Lys Lys Phe Glu Gly Ala Asn
245 250 255
Thr Leu Glu Asn Ala Gln Ala Ile Gly Ala Ala Phe Glu Gly Ala Ala
260 265 270
Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Ile Asn Asn Ala Thr Leu Thr Ser Lys
275 280 285
Ala Leu Ser Asp Leu Asp Thr Asp Ser Thr Thr Glu Thr Arg Lys Ala
290 295 300
Ala Met Lys Asp Phe Val Ala Ala Phe Asp Lys Val Lys Gly Ser Met
305 310 315 320
Asn Ser Ser Asp Val Thr Lys Ile Ser Asp Ala Ile Asp Arg Phe Ser
325 330 335
Lys Thr Asp Asp Ser Gly Asn Thr Leu Glu Ala Ala Arg Ala Ile Gly
340 345 350
Asp Ala Phe Lys Ala Ala Thr Thr Asn Gly Lys Thr Ser Thr Ala Thr
355 360 365
Asp Ala Asn Ser Ala Ile Lys Ala Ile Asp Glu Ala Leu Glu Thr Ile
370 375 380
Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe
385 390 395 400
Asn Val Asn Asn Leu Lys Asn Gln Ala Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala
405 410 415
Ser Gln Val Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr
420 425 430
Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala
435 440 445
Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
450 455 460
<210>58
<211>399
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>58
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Thr Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Asn Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn Lys Ser Ile Ala
130 135 140
Val Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ser Lys Gln Ile Asn Ile Asn
145 150 155 160
Leu Ser Asn Thr Ser Thr Lys Ala Leu Glu Ile Asn Ser Leu Thr Ile
165 170 175
Ser Gly Thr Thr Pro Ile Ala Gly Lys Asn Glu Thr Ser Lys Ile Thr
180 185 190
Ala Glu Gln Met Thr Ala Ala Ser Asp Ala Leu Glu Lys Phe Lys Thr
195 200 205
Ala Gln Glu Gly Leu Ala Asn Leu Thr Glu Pro Thr Lys Gly Ser Asp
210 215 220
Gly Lys Pro Glu Ala Gly Thr Gly Ser Ser Asn Glu Asp Ile Val Lys
225 230 235 240
Ala Val Lys Ala Phe Lys Glu Ala Phe Lys Asn Ile Gln Pro Leu Met
245 250 255
Ser Asp Thr Asp Ile Thr Thr Val Gln Asn Lys Ile Asp Leu Phe Asp
260 265 270
Glu Asp Ala Pro Asp Leu Ser Ala Ala Lys Leu Ile Gly Thr Thr Phe
275 280 285
Glu Glu Ser Met Lys Pro Val Ala Asp Lys Glu Ile Thr Lys Ala Ala
290 295 300
Val Lys Pro Asn Ala Ser Asp Ala Ile Ala Ala Ile Asp Ala Ala Leu
305 310 315 320
Thr Lys Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg
325 330 335
Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ala Ser Ser Met Ala
340 345 350
Ser Ala Ala Ser Gln Val Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser
355 360 365
Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu
370 375 380
Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
385 390 395
<210>59
<211>266
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>59
Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Leu Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn Asn Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn Ile Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Ser Gly Met Arg Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Thr Asn Val Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Gly Tyr Ile Asp Glu Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asn Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg Pro Val Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Val Asn Val Thr Lys His Ile Pro Pro
145 150 155 160
Phe Pro Thr Gln His Asp Ile Asn Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala Arg
165 170 175
Ala Ala Ile Arg Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Asn Val Ser Leu His
180 185 190
Arg Ala Asp Leu Gly Ala Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Thr Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Val
245 250 255
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>60
<211>269
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>60
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala His Glu Ser Gly Leu Ser Val Ala Ala Arg
50 55 60
Asn Thr Ser Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Gln Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Thr Ala Asn Gly Thr Asn Lys Asp Thr Asp Ile Glu Ala Leu Gly Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Ala Leu Lys Glu Gln Ile Thr Tyr Val Ser Asp Asn Thr
115 120 125
Lys Phe Asn Gly Arg Glu Leu Leu Lys Gly Gly Asp Asp Ile Asn Ile
130 135 140
Gln Thr Tyr Asp Gly Ser Asp Glu Ser Gln Gln Ile Lys Ile Lys Ile
145 150 155 160
Ser Glu Leu Asp Leu Ser Ser Leu Asp Thr Gly Glu Val Thr Asp Ser
165 170 175
Asp Thr Ala Arg Gly Thr Val Ser Thr Leu Asp Asp Ala Ile Thr Asn
180 185 190
Ile Ala Ser Lys Arg Ala Glu Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp
195 200 205
Tyr Asn Thr Gln Asn Val Asn Ser Glu Ala Ala Ser Met Ala Ala Ser
210 215 220
Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Phe Lys Ile Leu Ser Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln
245 250 255
Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
260 265
<210>61
<211>269
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>61
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala His Glu Ser Gly Leu Ser Val Ala Ala Arg
50 55 60
Asn Thr Ser Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Gln Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Thr Ala Asn Gly Thr Asn Lys Asp Thr Asp Ile Glu Ala Leu Gly Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Ala Leu Lys Glu Gln Ile Thr Tyr Val Ser Asp Asn Thr
115 120 125
Lys Phe Asn Gly Arg Glu Leu Leu Lys Gly Gly Asp Asp Ile Asn Ile
130 135 140
Gln Thr Tyr Asp Gly Ser Asp Glu Ser Gln Gln Ile Lys Ile Lys Ile
145 150 155 160
Ser Glu Leu Asp Leu Ser Ser Leu Asp Thr Gly Glu Val Thr Asp Ser
165 170 175
Asp Thr Ala Arg Gly Thr Val Ser Thr Leu Asp Asp Ala Ile Thr Asn
180 185 190
Ile Ala Ser Lys Arg Ala Glu Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp
195 200 205
Tyr Asn Thr Gln Asn Val Asn Ser Glu Ala Ala Ser Met Ala Ala Ser
210 215 220
Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Phe Lys Ile Leu Ser Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln
245 250 255
Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
260 265
<210>62
<211>267
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>62
Met Arg Ile Gly Thr Asn Phe Leu Ser Met Asn Ala Arg Gln Ser Leu
1 5 10 15
Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu His Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro Ala Asn Ile Ala Ile
35 40 45
Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Asn Gly Met Arg Val Ala Ile Arg
50 55 60
Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala Glu Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Thr Val Met Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Ile Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Ser Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn Lys
100 105 110
Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Ser Tyr Ile Gly Glu Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Leu Ser Val Phe Asp Gly Gln Asn Arg Pro Val Thr
130 135 140
Leu Asp Asp Ile Gly His Thr Val His Ile Ser Lys Ser Ile Pro Pro
145 150 155 160
Pro Ser Pro Thr Gln His Asp Ile Lys Ile Ser Thr Glu Gln Glu Ala
165 170 175
Arg Ala Ala Ile Leu Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Ser Val Ser Leu
180 185 190
His Arg Ala Asp Leu Gly Ala Met Ile Asn Arg Leu His Phe Asn Ile
195 200 205
Glu Asn Leu Asn Ser Gln Ser Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg
210 215 220
Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe
225 230 235 240
Lys Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln
245 250 255
Ile Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln Ser
260 265
<210>63
<211>373
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>63
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Asp Asn Lys Ser Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ala Lys Gln Ile Asn Ile Asn
145 150 155 160
Leu Ala Asp Ser Ser Thr Lys Ala Leu Asn Ile Asp Thr Leu Ser Ile
165 170 175
Ala Gly Thr Thr Asp Lys Thr Ile Thr Ile Thr Ala Lys Asp Leu Thr
180 185 190
Asp Asn Lys Ala Thr Leu Asp Ala Leu Lys Thr Ala Lys Ala Asp Leu
195 200 205
Ala Lys Leu Asp Asp Lys Ser Asp Gln Ala Thr Ile Asp Lys Ala Val
210 215 220
Asp Ala Phe Lys Thr Ala Phe Asn Asn Val Asp Lys Asn Leu Leu Ser
225 230 235 240
Asp Lys Ala Ile Glu Gly Ile Thr Asp Lys Met Thr Ala Phe Asp Gly
245 250 255
Thr His Thr Ala Ala Ala Ala Ile Gly Thr Ala Tyr Thr Glu Pro Thr
260 265 270
Ala Gly Asp Ile Thr Lys Ser Ala Pro Asn Ala Ser Gly Ala Ile Lys
275 280 285
Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu
290 295 300
Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser
305 310 315 320
Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp
325 330 335
Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu
340 345 350
Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val
355 360 365
Ser Lys Leu Leu Gln
370
<210>64
<211>257
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus aryabhattai
<400>64
Met Arg Ile Asn His Asn Ile Thr Ala Leu Asn Thr Tyr Arg Gln Phe
1 5 10 15
Asn Asn Ala Asn Asn Ala Gln Ala Lys Ser Met Glu Lys Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Gln Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Asp Gln Ala Ser Arg
50 55 60
Asn Ala Gln Asp Gly Val Ser Leu Ile Gln Thr Ala Glu Gly Ala Leu
65 70 75 80
Asn Glu Thr His Asp Ile Leu Gln Arg Met Arg Glu Leu Val Val Gln
85 90 95
Ala Gly Asn Gly Thr Asn Lys Thr Glu Asp Leu Asp Ala Ile Gln Asp
100 105 110
Glu Ile Gly Ser Leu Ile Glu Glu Ile Gly Gly Glu Thr Asp Ser Lys
115 120 125
Gly Ile Ser Asp Arg Ala Gln Phe Asn Gly Arg Asn Leu Leu Asp Gly
130 135 140
Ser Leu Asp Ile Thr Leu Gln Val Gly Ala Asn Ala Gly Gln Gln Val
145 150 155 160
Asn Leu Lys Ile Gly Asp Met Ser Ala Gly Ala Leu Gly Ala Asp Thr
165 170 175
Asp Ser Asp Gly Ala Ala Asp Ala Phe Val Asn Ser Ile Asn Val Lys
180 185 190
Asp Phe Ala Thr Thr Ser Phe Asp Asp Gln Leu Ala Ile Ile Asp Gly
195 200 205
Ala Ile Asn Gln Val Ser Glu Gln Arg Ser Gly Leu Gly Ala Thr Gln
210 215 220
Asn Arg Leu Asp His Thr Ile Asn Asn Leu Ser Thr Ser Ser Glu Asn
225 230 235 240
Leu Thr Ala Ser Glu Ser Arg Ile Arg Asp Val Asp Tyr Ala Leu Ala
245 250 255
Ala
<210>65
<211>270
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus manliponensis
<400>65
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Asp Lys Met Asn Thr Ser Met Asn Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Gln Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Lys Glu Gly Gly Leu Asn Val Gly Ala Lys
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Ala Leu Arg Thr Met Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Thr Gln
85 90 95
Ser Ala Thr Gly Thr Asn Gln Gly Asn Asp Arg Glu Ser Leu Asp Leu
100 105 110
Glu Phe Gln Gln Leu Thr Glu Glu Ile Thr His Ile Ala Glu Lys Thr
115 120 125
Asn Phe Asn Gly Asn Ala Leu Leu Ser Gly Ser Gly Ser Ala Ile Asn
130 135 140
Val Gln Leu Ser Asp Ala Ala Glu Asp Lys Leu Thr Ile Ala Ala Ile
145 150 155 160
Asp Ala Thr Ala Ser Thr Leu Leu Lys Gly Ala Val Asp Val Lys Thr
165 170 175
Glu Asp Lys Ala Asp Ala Ala Ile Thr Lys Ile Asp Gln Ala Ile Gln
180 185 190
Asp Ile Ala Asp Asn Arg Ala Thr Tyr Gly Ser Gln Leu Asn Arg Leu
195 200 205
Asp His Asn Leu Asn Asn Val Asn Ser Gln Ala Thr Asn Met Ala Ala
210 215 220
Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Ser Glu Ala Gly Val Ser Met Leu Ser
245 250 255
Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
260 265 270
<210>66
<211>273
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>66
Met Arg Ile Gly Ser Trp Thr Ala Thr Gly Met Ser Ile Val Asn His
1 5 10 15
Met Asn Arg Asn Trp Asn Ala Ala Ser Lys Ser Met Leu Arg Leu Ser
20 25 30
Ser Gly Tyr Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
35 40 45
Ile Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Thr Met Ala Ser
50 55 60
Lys Asn Ile Met Asp Gly Val Ser Leu Ile Gln Thr Ala Glu Gly Ala
65 70 75 80
Leu Asn Glu Thr His Ala Ile Val Gln Arg Met Arg Glu Leu Ala Val
85 90 95
Gln Ala Ala Thr Asp Thr Asn Thr Asp Asp Asp Arg Ala Lys Leu Asp
100 105 110
Leu Glu Phe Gln Glu Leu Lys Lys Glu Ile Asp Arg Ile Ser Thr Asp
115 120 125
Thr Glu Phe Asn Thr Arg Thr Leu Leu Asn Gly Asp Tyr Lys Asp Asn
130 135 140
Gly Leu Lys Ile Gln Val Gly Ala Asn Ser Gly Gln Ala Ile Glu Val
145 150 155 160
Lys Ile Gly Asp Ala Gly Leu Ala Gly Ile Gly Leu Ser Thr Glu Ser
165 170 175
Ile Ala Thr Arg Glu Gly Ala Asn Ala Ala Leu Gly Lys Leu Asp Glu
180 185 190
Ala Thr Lys Asn Val Ser Met Glu Arg Ser Arg Leu Gly Ala Tyr Gln
195 200 205
Asn Arg Leu Glu His Ala Tyr Asn Val Ala Glu Asn Thr Ala Ile Asn
210 215 220
Leu Gln Asp Ala Glu Ser Arg Ile Arg Asp Val Asp Ile Ala Lys Glu
225 230 235 240
Met Met Asn Met Val Lys Ser Gln Ile Leu Ala Gln Val Gly Gln Gln
245 250 255
Val Leu Ala Met His Met Gln Gln Ala Gln Gly Ile Leu Arg Leu Leu
260 265 270
Gly
<210>67
<211>273
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>67
Met Lys Ile Gly Ser Trp Thr Ala Thr Gly Met Ser Ile Val Asn His
1 5 10 15
Met Asn Arg Asn Trp Asn Ala Ala Ser Lys Ser Met Leu Arg Leu Ser
20 25 30
Ser Gly Tyr Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
35 40 45
Ile Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Thr Met Ala Ser
50 55 60
Lys Asn Ile Met Asp Gly Val Ser Leu Ile Gln Thr Ala Glu Gly Ala
65 70 75 80
Leu Asn Glu Thr His Ala Ile Val Gln Arg Met Arg Glu Leu Ala Val
85 90 95
Gln Ala Ala Thr Asp Thr Asn Thr Asp Asp Asp Arg Ala Lys Leu Asp
100 105 110
Leu Glu Phe Gln Glu Leu Lys Lys Glu Ile Asp Arg Ile Ser Thr Asp
115 120 125
Thr Ala Phe Asn Thr Arg Thr Leu Leu Asn Gly Asp Tyr Lys Asp Asn
130 135 140
Gly Leu Lys Ile Gln Val Gly Ala Asn Ser Gly Gln Ala Ile Glu Val
145 150 155 160
Lys Ile Gly Asp Ala Gly Leu Ala Gly Ile Gly Leu Ser Thr Glu Ser
165 170 175
Ile Ala Thr Arg Glu Gly Ala Asn Ala Ala Leu Gly Lys Leu Asp Glu
180 185 190
Ala Thr Lys Asn Val Ser Met Glu Arg Ser Arg Leu Gly Ala Tyr Gln
195 200 205
Asn Arg Leu Glu His Ala Tyr Asn Val Ala Glu Asn Thr Ala Ile Asn
210 215 220
Leu Gln Asp Ala Glu Ser Arg Ile Arg Asp Val Asp Ile Ala Lys Glu
225 230 235 240
Met Met His Met Val Lys Ser Gln Ile Leu Ala Gln Val Gly Gln Gln
245 250 255
Val Leu Ala Met His Ile Gln Gln Ala Gln Gly Ile Leu Arg Leu Leu
260 265 270
Gly
<210>68
<211>418
<212>PRT/Белок
<213>Paenibacillus sp.
<400>68
Met Ile Ile Ser His Asn Leu Thr Ala Leu Asn Thr Met Asn Lys Leu
1 5 10 15
Lys Gln Lys Asp Leu Ala Val Ser Lys Ser Leu Gly Lys Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Leu Arg Ile Asn Gly Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Asn Gln Ala Ser Arg
50 55 60
Asn Ile Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Gln Val Ala Asp Gly Ala Met
65 70 75 80
Gln Glu Ile His Ser Met Leu Gln Arg Met Asn Glu Leu Ala Val Gln
85 90 95
Ala Ser Asn Gly Thr Tyr Ser Gly Ser Asp Arg Leu Asn Ile Gln Ser
100 105 110
Glu Val Glu Gln Leu Ile Glu Glu Ile Asp Glu Ile Ala Gly Asn Thr
115 120 125
Gly Phe Asn Gly Ile Lys Leu Leu Asn Gly Asn Asn Glu Lys Thr Glu
130 135 140
Lys Thr Glu Lys Thr Gly Ser Val Val Ser Val Asn Asn Pro Pro Asn
145 150 155 160
Asn Lys Leu Ile Thr Ile Ser Ser Pro Val Gly Thr Ser Val Ser Glu
165 170 175
Ile Leu Asn Asn Leu Leu Thr Val Phe Asn Glu Ala Lys Asn Gly Gln
180 185 190
Val Gly Asp Ser Asp Ser Lys Arg Val Ser Ser Lys Phe Thr Leu Ser
195 200 205
Ile Asn Asn Asp Glu Leu Ser Ile Val Cys Asp Thr Gly Asp Gly Phe
210 215 220
Leu Leu Ser Gly Gly Ser Pro Asn Leu Phe Tyr Gln Gly Tyr Ile Gly
225 230 235 240
Gly Ser Tyr Lys Tyr Lys Phe Thr Glu Phe Ile Asn Glu Asn Asp Phe
245 250 255
Ile Asn Ile Met Asp Ile Gly Gly Ala Asn Gly Gly Asp Thr Leu Lys
260 265 270
Phe Asn Phe Ser Ser Ile Ser Lys Glu Pro Glu Glu Gln Lys Glu Gln
275 280 285
Lys Gly Leu Thr Leu Gln Ile Gly Ala Asn Ser Gly Glu Thr Leu Asn
290 295 300
Ile Lys Leu Pro Asn Val Thr Thr Ser Ala Ile Gly Ile Ser Ser Ile
305 310 315 320
Asp Val Ser Thr Ile Pro Asn Ala Glu Ser Ser Leu Ser Ser Ile Ser
325 330 335
Ala Ala Ile Asp Lys Val Ser Ala Glu Arg Ala Arg Met Gly Ala Tyr
340 345 350
Gln Asn Arg Leu Glu His Ser Arg Asn Asn Val Val Thr Tyr Ala Glu
355 360 365
Asn Leu Thr Ala Ala Glu Ser Arg Ile Arg Asp Val Asp Met Ala Lys
370 375 380
Glu Met Met Glu Leu Met Lys Asn Gln Ile Phe Thr Gln Ala Gly Gln
385 390 395 400
Ala Met Leu Leu Gln Thr Asn Thr Gln Pro Gln Ala Ile Leu Gln Leu
405 410 415
Leu Lys
<210>69
<211>387
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>69
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Glu Asn Gln Asp Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Gly Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Asp Asn Lys Ser Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu Asp Asn Ala Asp Thr Ala Lys Gln Ile Asn Ile Asn
145 150 155 160
Leu Ala Asp Ser Ser Thr Lys Ala Leu Asn Ile Asp Ser Leu Thr Ile
165 170 175
Ser Gly Ser Lys Asp Ala Thr Ile Thr Ile Thr Ala Glu Asp Ile Thr
180 185 190
Ala Ala Ser Ala Glu Ile Thr Ala Ala Lys Gly Ala Arg Thr Ala Leu
195 200 205
Ala Asn Leu Lys Asp Thr Pro Ala Asp Pro Thr Lys Asp Pro Ala Ala
210 215 220
Ser Thr Pro Ala Glu Ile Lys Ala Ala Val Asp Asp Phe Lys Gly Lys
225 230 235 240
Phe Glu Lys Ile Lys Gly Leu Met Asn Asp Thr Asp Val Lys Ala Val
245 250 255
Glu Glu Lys Ile Lys Glu Phe Glu Thr Thr Ser Thr Leu Ala Lys Ala
260 265 270
Gln Ala Ile Gly Thr Ala Phe Thr Thr Gly Met Glu Pro Lys Ala Gly
275 280 285
Asn Ile Thr Lys Asn Val Pro Ala Ala Ser Ser Ser Ile Lys Ala Ile
290 295 300
Asp Ser Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala
305 310 315 320
Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser
325 330 335
Ser Ala Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala
340 345 350
Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly
355 360 365
Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys
370 375 380
Leu Leu Gln
385
<210>70
<211>300
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>70
Met Gln Lys Ser Gln Tyr Lys Lys Met Gly Val Leu Lys Met Arg Ile
1 5 10 15
Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn
20 25 30
Gln Asp Lys Met Asn Val Ser Met Asn Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg
35 40 45
Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg
50 55 60
Met Arg Ala Arg Gln Ser Gly Leu Glu Lys Ala Ser Gln Asn Thr Gln
65 70 75 80
Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Glu Ser Ala Met Asn Ser Val
85 90 95
Ser Asn Ile Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln Ser Ser Asn
100 105 110
Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala Leu Gln Lys Glu Phe Ala
115 120 125
Glu Leu Gln Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr Glu Phe Asn
130 135 140
Asp Lys Asn Leu Leu Ala Gly Thr Gly Ala Val Thr Ile Gly Ser Thr
145 150 155 160
Ser Ile Ser Gly Ala Glu Ile Ser Ile Glu Thr Leu Asp Ser Ser Ala
165 170 175
Thr Asn Gln Gln Ile Thr Ile Lys Leu Ala Asn Thr Thr Ala Glu Lys
180 185 190
Leu Gly Ile Asp Ala Thr Thr Ser Asn Ile Ser Ile Ser Gly Ala Ala
195 200 205
Ser Ala Leu Ala Ala Ile Ser Ala Leu Asn Thr Ala Leu Asn Thr Val
210 215 220
Ala Gly Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Arg
225 230 235 240
Asn Val Glu Asn Leu Asn Asn Gln Ala Thr Asn Met Ala Ser Ala Ala
245 250 255
Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr
260 265 270
Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala
275 280 285
Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
290 295 300
<210>71
<211>287
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>71
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Asp Lys Met Asn Val Ser Met Asn Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Gln Ser Gly Leu Glu Lys Ala Ser Gln
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Glu Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ser Asn Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Glu Leu Gln Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Ala Gly Thr Gly Ala Val Thr Ile
130 135 140
Gly Ser Thr Ser Ile Ser Gly Ala Glu Ile Ser Ile Glu Thr Leu Asp
145 150 155 160
Ser Ser Ala Thr Asn Gln Gln Ile Thr Ile Lys Leu Ala Asn Thr Thr
165 170 175
Ala Glu Lys Leu Gly Ile Asp Ala Thr Thr Ser Asn Ile Ser Ile Ser
180 185 190
Gly Ala Ala Ser Ala Leu Ala Ala Ile Ser Ala Leu Asn Thr Ala Leu
195 200 205
Asn Thr Val Ala Gly Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg
210 215 220
Leu Asp Arg Asn Val Glu Asn Leu Asn Asn Gln Ala Thr Asn Met Ala
225 230 235 240
Ser Ala Ala Ser Gln Ile Lys Asp Ala Asp Lys Ala Lys Glu Met Ser
245 250 255
Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu
260 265 270
Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
275 280 285
<210>72
<211>282
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>72
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Asp Lys Met Asn Val Ser Met Asn Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Gln Ser Gly Leu Glu Lys Ala Ser Gln
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Glu Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ser Asn Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Glu Leu Gln Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Ala Gly Thr Gly Ala Val Thr Ile
130 135 140
Gly Ser Thr Ser Ile Ser Gly Ala Glu Ile Ser Ile Glu Thr Leu Asp
145 150 155 160
Ser Ser Ala Thr Asn Gln Gln Ile Thr Ile Lys Leu Ala Asn Thr Thr
165 170 175
Ala Glu Lys Leu Gly Ile Asp Ala Thr Thr Ser Asn Ile Ser Ile Ser
180 185 190
Gly Ala Ala Ser Ala Leu Ala Ala Ile Ser Ala Leu Asn Thr Ala Leu
195 200 205
Asn Thr Val Ala Gly Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg
210 215 220
Leu Asp Arg Asn Val Glu Asn Leu Asn Asn Gln Ala Thr Asn Met Ala
225 230 235 240
Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser
245 250 255
Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu
260 265 270
Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val
275 280
<210>73
<211>265
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>73
Met Asn Val Ser Met Asn Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser
1 5 10 15
Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala
20 25 30
Arg Gln Ser Gly Leu Glu Lys Ala Ser Gln Asn Thr Gln Asp Gly Met
35 40 45
Ser Leu Ile Arg Thr Ala Glu Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile
50 55 60
Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln Ser Ser Asn Gly Thr Asn
65 70 75 80
Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala Leu Gln Lys Glu Phe Ala Glu Leu Gln
85 90 95
Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Asn
100 105 110
Leu Leu Ala Gly Thr Gly Ala Val Thr Ile Gly Ser Thr Ser Ile Ser
115 120 125
Gly Ala Glu Ile Ser Ile Glu Thr Leu Asp Ser Ser Ala Thr Asn Gln
130 135 140
Gln Ile Thr Ile Lys Leu Ala Asn Thr Thr Ala Glu Lys Leu Gly Ile
145 150 155 160
Asp Ala Thr Thr Ser Asn Ile Ser Ile Ser Gly Ala Ala Ser Ala Leu
165 170 175
Ala Ala Ile Ser Ala Leu Asn Thr Ala Leu Asn Thr Val Ala Gly Asn
180 185 190
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Arg Asn Val Glu
195 200 205
Asn Leu Asn Asn Gln Ala Thr Asn Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile
210 215 220
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
225 230 235 240
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
245 250 255
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
260 265
<210>74
<211>257
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus megaterium
<400>74
Met Arg Ile Asn His Asn Ile Thr Ala Leu Asn Thr Tyr Arg Gln Phe
1 5 10 15
Asn Asn Ala Asn Asn Ala Gln Ala Lys Ser Met Glu Lys Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Gln Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Asp Gln Ala Ser Arg
50 55 60
Asn Ala Gln Asp Gly Val Ser Leu Ile Gln Thr Ala Glu Gly Ala Leu
65 70 75 80
Asn Glu Thr His Asp Ile Leu Gln Arg Met Arg Glu Leu Val Val Gln
85 90 95
Ala Gly Asn Gly Thr Asn Lys Thr Glu Asp Leu Asp Ala Ile Gln Asp
100 105 110
Glu Ile Gly Ser Leu Ile Glu Glu Ile Gly Gly Glu Ala Asp Ser Lys
115 120 125
Gly Ile Ser Asp Arg Ala Gln Phe Asn Gly Arg Asn Leu Leu Asp Gly
130 135 140
Ser Leu Asp Ile Thr Leu Gln Val Gly Ala Asn Ala Gly Gln Gln Val
145 150 155 160
Asn Leu Lys Ile Gly Asp Met Ser Ala Gly Ala Leu Gly Ala Asp Thr
165 170 175
Asn Ser Asp Gly Ala Ala Asp Ala Phe Val Asn Ser Ile Asn Val Lys
180 185 190
Asp Phe Thr Ala Thr Ser Phe Asp Asp Gln Leu Ala Ile Ile Asp Gly
195 200 205
Ala Ile Asn Gln Val Ser Glu Gln Arg Ser Gly Leu Gly Ala Thr Gln
210 215 220
Asn Arg Leu Asp His Thr Ile Asn Asn Leu Ser Thr Ser Ser Glu Asn
225 230 235 240
Leu Thr Ala Ser Glu Ser Arg Ile Arg Asp Val Asp Tyr Ala Leu Ala
245 250 255
Ala
<210>75
<211>286
<212>PRT/Белок
<213>Aneurinibacillus sp.
<400>75
Met Arg Ile Asn His Asn Leu Pro Ala Leu Asn Ala Tyr Arg Asn Leu
1 5 10 15
Ala Gln Asn Gln Ile Gly Thr Ser Lys Ile Leu Glu Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Arg Ile Asn Arg Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Glu Gln Gly Gln Arg
50 55 60
Asn Thr Met Asp Gly Val Ser Leu Ile Gln Thr Ala Glu Gly Ala Leu
65 70 75 80
Gln Glu Ile His Glu Met Leu Gln Arg Met Arg Glu Leu Ala Val Gln
85 90 95
Ala Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Asp Lys Asp Lys Lys Ala Ile Glu Asp
100 105 110
Glu Ile Asn Gln Leu Thr Ala Gln Ile Asp Gln Ile Ala Lys Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Gly Ile Gln Leu Ile Gly Asp Ser Asp Ser Thr Ser Leu
130 135 140
Gln Asp Val Lys Ile Gln Tyr Gly Pro Lys Lys Glu Asp Ser Leu Thr
145 150 155 160
Leu Glu Leu Thr Thr Gln Pro Glu Ala Asp Pro Pro Phe Ala Ala Gly
165 170 175
Cys Lys Ala Asp Lys Ala Ser Leu Lys Ile Asp Asn Val Asp Val Ile
180 185 190
Ser Asp Pro Glu Gly Ala Ile Glu Thr Phe Lys Ala Ala Ile Asp Gln
195 200 205
Val Ser Arg Ile Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Ile Gln Asn Arg Leu Glu
210 215 220
His Val Val Asn Asn Leu Ser Asn Tyr Thr Glu Asn Leu Thr Gly Ala
225 230 235 240
Glu Ser Arg Ile Arg Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Thr Glu Phe
245 250 255
Thr Arg Phe Asn Ile Ile Asn Gln Ser Ala Thr Ala Met Leu Ala Gln
260 265 270
Ala Asn Gln Leu Pro Gln Gly Val Leu Gln Leu Leu Lys Gly
275 280 285
<210>76
<211>152
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>76
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Lys Ala Arg Glu Gly Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Gly Arg Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala
100 105 110
Ser Leu Gln Lys Glu Phe Ala Gln Leu Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ala Lys Asn Thr Gln Phe Asn Asp Gln Gln Leu Leu Gly Thr Ala Asp
130 135 140
Lys Lys Ile Lys Ile Gln Thr Leu
145 150
<210>77
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>77
Ile Asp Ala Ala Ile Thr Thr Val Ala Gly Gln Arg Ala Thr Leu Gly
1 5 10 15
Ala Thr Leu Asn Arg Phe Glu Phe Asn Ala Asn Asn Leu Lys Ser Gln
20 25 30
Glu Thr Ser Met Ala Asp Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala
50 55 60
Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser
65 70 75 80
Lys Leu Leu Gln
<210>78
<211>151
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>78
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Lys Ala Arg Glu Gly Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Gly Arg Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala
100 105 110
Ser Leu Gln Lys Glu Phe Ala Gln Leu Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ala Lys Asn Thr Gln Phe Asn Asp Gln Gln Leu Leu Gly Thr Ala Asp
130 135 140
Lys Lys Ile Lys Ile Gln Thr
145 150
<210>79
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>79
Ile Asp Ala Ala Ile Thr Thr Val Ala Gly Gln Arg Ala Thr Leu Gly
1 5 10 15
Ala Thr Leu Asn Arg Phe Glu Phe Asn Ala Asn Asn Leu Lys Ser Gln
20 25 30
Glu Thr Ser Met Ala Asp Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala
50 55 60
Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser
65 70 75 80
Lys Leu Leu Gln
<210>80
<211>152
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>80
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Lys Ala Arg Glu Gly Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Gly Arg Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala
100 105 110
Ser Leu Gln Lys Glu Phe Ala Gln Leu Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ala Lys Asn Thr Gln Phe Asn Asp Gln Gln Leu Leu Gly Thr Ala Asp
130 135 140
Lys Lys Ile Lys Ile Gln Thr Leu
145 150
<210>81
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>81
Ile Asp Ala Ala Ile Thr Thr Val Ala Gly Gln Arg Ala Thr Leu Gly
1 5 10 15
Ala Thr Leu Asn Arg Phe Glu Phe Asn Ala Asn Asn Leu Lys Ser Gln
20 25 30
Glu Thr Ser Met Ala Asp Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala
50 55 60
Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser
65 70 75 80
Lys Leu Leu Gln
<210>82
<211>152
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>82
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Lys Ala Arg Glu Gly Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Gly Arg Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala
100 105 110
Ser Leu Gln Lys Glu Phe Ala Gln Leu Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ala Lys Asn Thr Gln Phe Asn Asp Gln Gln Leu Leu Gly Thr Ala Asp
130 135 140
Lys Lys Ile Lys Ile Gln Thr Leu
145 150
<210>83
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>83
Ile Asp Ala Ala Ile Thr Thr Val Ala Gly Gln Arg Ala Thr Leu Gly
1 5 10 15
Ala Thr Leu Asn Arg Phe Glu Phe Asn Ala Asn Asn Leu Lys Ser Gln
20 25 30
Glu Thr Ser Met Ala Asp Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala
50 55 60
Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser
65 70 75 80
Lys Leu Leu Gln
<210>84
<211>151
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>84
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Lys Ala Arg Glu Gly Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Ala Arg Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Thr Gly Thr Asn Thr Thr Lys Asn Gln Val
100 105 110
Ala Leu Asn Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Glu Gln Ile Thr Tyr Ile
115 120 125
Ala Asp Asn Thr Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Lys Ser Thr Gln
130 135 140
Glu Ile Lys Ile Gln Thr Leu
145 150
<210>85
<211>85
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>85
Gln Leu Asp Ala Ala Leu Thr Lys Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu
1 5 10 15
Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser
20 25 30
Gln Glu Asn Ser Met Ala Ala Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp
35 40 45
Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu
50 55 60
Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val
65 70 75 80
Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>86
<211>154
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>86
Trp Gly Phe Leu Ile Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asp Asn Thr Gln Asn Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys
100 105 110
Ser Ala Leu Gln Lys Glu Phe Ala Gln Leu Gln Lys Gln Ile Thr Tyr
115 120 125
Ile Ala Glu Asn Thr Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Asn Glu Asp
130 135 140
Ser Glu Val Lys Ile Gln Thr Leu Asp Ser
145 150
<210>87
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>87
Ala Ile Ala Ala Ile Asp Ala Ala Leu Thr Lys Val Ala Asp Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>88
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>88
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Asp Asn Gln Lys
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>89
<211>62
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>89
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ala Ala Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn
50 55 60
<210>90
<211>142
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>90
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Gln Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Glu Asn Lys Ala
100 105 110
Ala Met Glu Lys Glu Phe Gly Gln Leu Lys Asp Gln Ile Lys Tyr Ile
115 120 125
Thr Asp Asn Thr Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Asp Ala
130 135 140
<210>91
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>91
Ile Asp Ala Ala Leu Lys Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly
1 5 10 15
Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln
20 25 30
Ser Ala Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala
50 55 60
Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser
65 70 75 80
Lys Leu Leu Gln
<210>92
<211>137
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>92
Met Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln
100 105 110
Val Ala Leu Gln Lys Glu Phe Gly Glu Leu Gln Lys Gln Ile Asp Tyr
115 120 125
Ile Ala Lys Asn Thr Gln Phe Asn Asp
130 135
<210>93
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>93
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Gln Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Val
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>94
<211>137
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>94
Met Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn
1 5 10 15
Ala Arg Gln Ser Phe Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Ile
20 25 30
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro
35 40 45
Ala Asn Val Ala Ile Val Thr Arg Met His Ala Arg Thr Ser Gly Ile
50 55 60
His Val Ala Ile Arg Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr
65 70 75 80
Ala Glu Ala Ala Leu Gln Thr Val Thr Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg
85 90 95
Asp Val Ala Val Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg
100 105 110
Asp Ser Leu Asn Lys Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Gly Tyr
115 120 125
Ile Asp Glu Thr Thr Glu Phe Asn Asp
130 135
<210>95
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>95
Arg Ala Asp Leu Gly Ala Met Ile Asn Gln Leu Gln Phe Asn Ile Glu
1 5 10 15
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Thr Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
35 40 45
Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
50 55 60
Pro Gln Met Val Tyr Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>96
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>96
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Asp Asn Gln Gln
100 105 110
Ala Leu Gln Lys Glu Phe Gly Gln Leu Lys Glu Gln Ile Ser Tyr Ile
115 120 125
Ala Asp Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Thr Leu Leu
130 135 140
<210>97
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>97
Ala Val Asp Ser Ile Asp Ala Ala Leu Lys Thr Val Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ala Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>98
<211>128
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus bombysepticus
<400>98
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ser Arg Glu Gly Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Ala Arg Asn Thr Glu Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Ser Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala
100 105 110
Ala Met Gln Lys Glu Phe Asp Gln Leu Lys Glu Gln Ile Gln Tyr Ile
115 120 125
<210>99
<211>70
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus bombysepticus
<400>99
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Thr Asn Leu Lys
1 5 10 15
Ser Gln Glu Asn Ser Met Ala Ala Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
20 25 30
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
35 40 45
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
50 55 60
Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>100
<211>128
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>100
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ser Arg Glu Gly Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Ala Arg Asn Thr Glu Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Ser Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala
100 105 110
Ala Met Gln Lys Glu Phe Asp Gln Leu Lys Glu Gln Ile Gln Tyr Ile
115 120 125
<210>101
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>101
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Thr
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Glu Asn Ser Met Ala Ala Ser Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>102
<211>128
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>102
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ser Arg Glu Gly Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Ala Arg Asn Thr Glu Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Ser Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala
100 105 110
Ala Met Gln Lys Glu Phe Asp Gln Leu Lys Glu Gln Ile Gln Tyr Ile
115 120 125
<210>103
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>103
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Thr
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Glu Asn Ser Met Ala Ala Ser Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>104
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>104
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>105
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>105
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>106
<211>136
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>106
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Met Asn Ala
1 5 10 15
Arg Gln Ser Leu Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu
20 25 30
His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn Asn Ala Ser Asp Asn Pro Ala
35 40 45
Asn Ile Ala Ile Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Ser Gly Met Arg
50 55 60
Leu Ala Ile Arg Asn Asn Glu Asp Thr Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala
65 70 75 80
Glu Ala Ala Leu Gln Thr Leu Thr Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Val Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp
100 105 110
Ser Leu Asn Lys Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Gly Tyr Ile
115 120 125
Gly Glu Thr Thr Glu Phe Asn Asp
130 135
<210>107
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>107
Arg Ala Asp Leu Gly Ser Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu
1 5 10 15
Asn Leu Asn Ser Gln Ser Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys
35 40 45
Leu Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>108
<211>153
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>108
Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Ala Asp Asn Thr Gln Asn Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Ser Asn Lys Ser
100 105 110
Ala Leu Gln Lys Glu Phe Ala Glu Leu Gln Lys Gln Ile Thr Tyr Ile
115 120 125
Ala Asp Asn Thr Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Lys Glu Asp Ser
130 135 140
Glu Val Lys Ile Gln Thr Leu Asp Ser
145 150
<210>109
<211>85
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>109
Ala Ile Asp Ala Ala Leu Thr Lys Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu
1 5 10 15
Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser
20 25 30
Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp
35 40 45
Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu
50 55 60
Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val
65 70 75 80
Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>110
<211>153
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>110
Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Ala Asp Asn Thr Gln Asn Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Ser Asn Lys Ser
100 105 110
Ala Leu Gln Lys Glu Phe Ala Glu Leu Gln Lys Gln Ile Thr Tyr Ile
115 120 125
Ala Asp Asn Thr Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Lys Glu Asp Ser
130 135 140
Glu Val Lys Ile Gln Thr Leu Asp Ser
145 150
<210>111
<211>86
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>111
Ala Ala Ile Asp Ala Ala Leu Thr Lys Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr
1 5 10 15
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
20 25 30
Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
35 40 45
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
50 55 60
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
65 70 75 80
Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>112
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>112
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Lys Ala
100 105 110
Ala Met Gln Lys Glu Phe Gly Glu Leu Lys Asp Gln Ile Lys Tyr Ile
115 120 125
Ser Glu Asn Thr Gln Phe Asn Asp Gln His Leu Leu
130 135 140
<210>113
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>113
Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu
1 5 10 15
Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ala Ser Met Ala Ser
20 25 30
Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu
35 40 45
Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser
50 55 60
Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70 75
<210>114
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>114
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Asp Asn Gln Lys
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>115
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>115
Ala Ile Lys Ser Ile Asp Ala Ala Leu Asp Thr Ile Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>116
<211>137
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>116
Trp Gly Phe Leu Ile Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Asp Asn Gln
100 105 110
Gln Ala Leu Gln Lys Glu Phe Gly Gln Leu Lys Glu Gln Ile Ser Tyr
115 120 125
Ile Ala Asp Asn Thr Glu Phe Asn Asp
130 135
<210>117
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>117
Ala Val Asp Ala Ile Asp Ala Ala Leu Lys Thr Val Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ala Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>118
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>118
Trp Gly Phe Leu Ile Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Asp Asn Gln
100 105 110
Gln Ala Leu Gln Lys Glu Phe Gly Gln Leu Lys Glu Gln Ile Ser Tyr
115 120 125
Ile Ala Asp Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Thr Leu Leu
130 135 140
<210>119
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>119
Ala Val Asp Ala Ile Asp Ala Ala Leu Lys Thr Val Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ala Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>120
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>120
Trp Gly Phe Leu Ile Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Ile Ser Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln
100 105 110
Ser Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr
115 120 125
Ile Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Gln Lys Leu Leu
130 135 140
<210>121
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>121
Ala Ile Ala Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Ser Ile Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>122
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>122
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ser Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Gln Lys Leu Leu
130 135 140
<210>123
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>123
Ala Ile Ala Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Ser Ile Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>124
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>124
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ser Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Gln Lys Leu Leu
130 135 140
<210>125
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>125
Ala Ile Ala Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Ser Ile Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>126
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>126
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ser Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Gln Lys Leu Leu
130 135 140
<210>127
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>127
Ala Ile Ala Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Ser Ile Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>128
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>128
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ser Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Gln Lys Leu Leu
130 135 140
<210>129
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>129
Ala Ile Ala Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Ser Ile Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>130
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>130
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Gln Ala
100 105 110
Ala Leu Asn Lys Glu Phe Asp Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Thr Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>131
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>131
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>132
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>132
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Gln Ala
100 105 110
Ala Leu Asn Lys Glu Phe Asp Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Thr Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>133
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>133
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>134
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus weihenstephanensis
<400>134
Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Ser
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ser Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Glu Asn Gln Gln
100 105 110
Ala Leu Asn Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>135
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus weihenstephanensis
<400>135
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>136
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>136
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>137
<211>85
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>137
Ile Asp Ala Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly
1 5 10 15
Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln
20 25 30
Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala
50 55 60
Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser
65 70 75 80
Lys Leu Leu Gln Ser
85
<210>138
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>138
Trp Gly Phe Leu Ile Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Thr Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Asp Asn Gln
100 105 110
Lys Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr
115 120 125
Ile Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>139
<211>70
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>139
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
1 5 10 15
Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ala Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
20 25 30
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
35 40 45
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
50 55 60
Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>140
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>140
Trp Gly Phe Leu Ile Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Thr Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Asp Asn Gln
100 105 110
Lys Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr
115 120 125
Ile Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>141
<211>70
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>141
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
1 5 10 15
Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ala Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
20 25 30
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
35 40 45
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
50 55 60
Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>142
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>142
Trp Gly Phe Leu Ile Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Thr Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Asp Asn Gln
100 105 110
Lys Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr
115 120 125
Ile Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>143
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>143
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ala Ala Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>144
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>144
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Asp Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ser Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Gln Lys Leu Leu
130 135 140
<210>145
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>145
Ala Ile Ala Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Ser Ile Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>146
<211>173
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>146
Gly Phe Leu Asn Met Ala Arg Ile Thr Ile Asn Leu Glu Ile Asp Phe
1 5 10 15
Phe Ala Tyr Tyr Arg Phe Ser Ile Cys Arg Lys Val Asn Ile Lys Lys
20 25 30
Trp Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
35 40 45
Thr Gln Asp Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
50 55 60
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
65 70 75 80
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
85 90 95
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
100 105 110
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
115 120 125
Asp Ile Ser Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln
130 135 140
Ser Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ile Asp Tyr
145 150 155 160
Ile Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Gln Lys Leu Leu
165 170
<210>147
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>147
Ala Ile Ala Ser Ile Asp Ala Ala Leu Glu Ser Ile Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>148
<211>157
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>148
Gly Val Leu Tyr Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Ser
50 55 60
Val Ala Ala Asp Asn Thr Gln Asn Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Val
100 105 110
Ala Leu Gln Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Glu Gln Ile Thr Tyr Ile
115 120 125
Ala Asp Asn Thr Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Asn Gly Asn Gln
130 135 140
Thr Ile Asn Ile Gln Thr Leu Asp Ser His Asp Ser Thr
145 150 155
<210>149
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>149
Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu
1 5 10 15
Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ala Met Ala Ala
20 25 30
Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu
35 40 45
Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser
50 55 60
Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70 75
<210>150
<211>157
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>150
Gly Val Leu Tyr Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Ser
50 55 60
Val Ala Ala Asp Asn Thr Gln Asn Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Val
100 105 110
Ala Leu Gln Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Glu Gln Ile Thr Tyr Ile
115 120 125
Ala Asp Asn Thr Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Asn Gly Asn Gln
130 135 140
Thr Ile Asn Ile Gln Thr Leu Asp Ser His Asp Ser Thr
145 150 155
<210>151
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>151
Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu
1 5 10 15
Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ala Met Ala Ala
20 25 30
Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu
35 40 45
Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser
50 55 60
Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70 75
<210>152
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>152
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>153
<211>70
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>153
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
1 5 10 15
Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
20 25 30
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
35 40 45
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
50 55 60
Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>154
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>154
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Thr Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Asn Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Asp Asn Gln Lys
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>155
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>155
Ala Ile Lys Ser Ile Asp Ala Ala Leu Asp Thr Ile Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>156
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>156
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>157
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>157
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>158
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>158
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>159
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>159
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>160
<211>153
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>160
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Gly Asn Gln Ala
100 105 110
Ala Leu Asn Lys Glu Phe Asp Ala Leu Lys Gln Gln Ile Asn Tyr Ile
115 120 125
Ser Thr Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asp Gly Ser Asn
130 135 140
Lys Thr Ile Ala Ile Gln Thr Leu Asp
145 150
<210>161
<211>70
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>161
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
1 5 10 15
Ser Gln Gln Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
20 25 30
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
35 40 45
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
50 55 60
Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>162
<211>136
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>162
Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ala Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Arg Asp Ile
85 90 95
Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala Ala
100 105 110
Leu Gln Lys Glu Phe Gly Glu Leu Gln Lys Gln Ile Asp Tyr Ile Ala
115 120 125
Gly Asn Thr Gln Phe Asn Asp Lys
130 135
<210>163
<211>86
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>163
Asp Lys Ile Asp Glu Ala Leu Lys Thr Ile Ala Asp Asn Arg Ala Thr
1 5 10 15
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
20 25 30
Ser Gln Ser Ala Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
35 40 45
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
50 55 60
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
65 70 75 80
Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>164
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>164
Trp Gly Phe Leu Ile Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Gln
100 105 110
Ala Ala Leu Asn Lys Glu Phe Asp Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asn Tyr
115 120 125
Ile Ser Thr Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>165
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>165
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Gln Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>166
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>166
Trp Gly Phe Phe Tyr Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ser Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys
100 105 110
Ala Ala Met Gln Lys Glu Phe Gly Glu Leu Lys Glu Gln Ile Lys Tyr
115 120 125
Ile Ala Glu Asn Thr Gln Phe Asn Asp Gln His Leu Leu
130 135 140
<210>167
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>167
Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu
1 5 10 15
Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ala Ser Ser Met Ala Ala
20 25 30
Ala Ala Ser Gln Val Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu
35 40 45
Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser
50 55 60
Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70 75
<210>168
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>168
Trp Gly Phe Phe Tyr Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ser Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys
100 105 110
Ala Ala Met Gln Lys Glu Phe Gly Glu Leu Lys Glu Gln Ile Lys Tyr
115 120 125
Ile Ala Glu Asn Thr Gln Phe Asn Asp Gln His Leu Leu
130 135 140
<210>169
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>169
Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu
1 5 10 15
Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ala Ser Ser Met Ala Ala
20 25 30
Ala Ala Ser Gln Val Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu
35 40 45
Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser
50 55 60
Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70 75
<210>170
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>170
Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Leu Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ser Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Gly Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Asp Asn Gln Ala
100 105 110
Ala Met Gln Lys Glu Phe Ala Glu Leu Gln Lys Gln Ile Thr Tyr Ile
115 120 125
Ala Asp Asn Thr Gln Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu
130 135 140
<210>171
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>171
Ile Asp Ala Ala Leu Lys Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly
1 5 10 15
Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln
20 25 30
Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala
50 55 60
Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser
65 70 75 80
Lys Leu Leu Gln
<210>172
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>172
Trp Gly Phe Phe Tyr Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ser Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys
100 105 110
Ala Ala Met Gln Lys Glu Phe Gly Glu Leu Lys Glu Gln Ile Lys Tyr
115 120 125
Ile Ala Glu Asn Thr Gln Phe Asn Asp Gln His Leu Leu
130 135 140
<210>173
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>173
Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu
1 5 10 15
Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ala Ser Ser Met Ala Ala
20 25 30
Ala Ala Ser Gln Val Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu
35 40 45
Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser
50 55 60
Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70 75
<210>174
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>174
Trp Gly Phe Phe Tyr Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ser Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys
100 105 110
Ala Ala Met Gln Lys Glu Phe Gly Glu Leu Lys Glu Gln Ile Lys Tyr
115 120 125
Ile Ala Glu Asn Thr Gln Phe Asn Asp Gln His Leu Leu
130 135 140
<210>175
<211>77
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>175
Thr Val Ala Asp Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu
1 5 10 15
Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln Ala Ser Ser Ala Ala Ala
20 25 30
Ala Ser Gln Val Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met
35 40 45
Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln
50 55 60
Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70 75
<210>176
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>176
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>177
<211>70
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>177
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
1 5 10 15
Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
20 25 30
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
35 40 45
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
50 55 60
Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>178
<211>128
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>178
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Thr Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ser Arg Glu Gly Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Ala Arg Asn Thr Glu Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Ser Glu Thr Asn Thr Ser Lys Asn Gln Ala
100 105 110
Ala Met Gln Lys Glu Phe Asp Gln Leu Lys Glu Gln Ile Gln Tyr Ile
115 120 125
<210>179
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>179
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Thr
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Glu Asn Ser Met Ala Ala Ser Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>180
<211>128
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>180
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Thr Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ser Arg Glu Gly Gly Leu Asn
50 55 60
Val Ala Ala Arg Asn Thr Glu Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Asn Gln Ser Ala Ser Glu Thr Asn Thr Ser Lys Asn Gln Ala
100 105 110
Ala Met Gln Lys Glu Phe Asp Gln Leu Lys Glu Gln Ile Gln Tyr Ile
115 120 125
<210>181
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>181
Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Thr
1 5 10 15
Asn Leu Lys Ser Gln Glu Asn Ser Met Ala Ala Ser Ala Ser Gln Ile
20 25 30
Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr
50 55 60
Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>182
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>182
Met Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Thr Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln
100 105 110
Gly Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr
115 120 125
Ile Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>183
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>183
Ala Ile Lys Ala Ile Asp Glu Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Asn Gln Ala Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Val Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>184
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>184
Met Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Glu Asn Gln
100 105 110
Ala Ala Leu Asp Lys Glu Phe Gly Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asn Tyr
115 120 125
Ile Ser Thr Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>185
<211>85
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>185
Ala Ile Asp Ser Ala Leu Glu Asn Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu
1 5 10 15
Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser
20 25 30
Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp
35 40 45
Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu
50 55 60
Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val
65 70 75 80
Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>186
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>186
Met Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Thr Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln
100 105 110
Gly Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr
115 120 125
Ile Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>187
<211>70
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>187
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
1 5 10 15
Asn Gln Ala Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Val Glu Asp Ala
20 25 30
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
35 40 45
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
50 55 60
Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>188
<211>141
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>188
Met Gly Val Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Thr Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln
100 105 110
Gly Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ala Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr
115 120 125
Ile Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu
130 135 140
<210>189
<211>68
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>189
Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Asn Gln
1 5 10 15
Ala Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Val Glu Asp Ala Asp Met
20 25 30
Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala
35 40 45
Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser
50 55 60
Lys Leu Leu Gln
65
<210>190
<211>140
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>190
Trp Gly Phe Phe Tyr Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg
1 5 10 15
Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Thr Ala Met
20 25 30
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu
50 55 60
Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Arg Thr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln
100 105 110
Ala Ala Leu Asp Lys Glu Phe Asn Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr
115 120 125
Ile Ser Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu
130 135 140
<210>191
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>191
Ala Ile Ala Ala Ile Asp Ala Ala Leu Thr Lys Val Ala Asp Asn Arg
1 5 10 15
Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn
20 25 30
Leu Lys Ser Gln Ala Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Val Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile
50 55 60
Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>192
<211>137
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>192
Trp Gly Phe Phe Tyr Met Arg Ile Gly Thr Asn Val Leu Ser Leu Asn
1 5 10 15
Ala Arg Gln Ser Leu Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met
20 25 30
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn Asn Ala Ser Asp Asn Pro
35 40 45
Ala Asn Ile Ala Ile Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Ser Gly Met
50 55 60
Arg Val Ala Ile Arg Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr
65 70 75 80
Ala Glu Ala Ala Leu Gln Thr Val Thr Asn Val Leu Gln Arg Met Arg
85 90 95
Asp Leu Ala Val Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg
100 105 110
Asp Ser Leu Asn Lys Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Gly Tyr
115 120 125
Ile Asp Glu Thr Thr Glu Phe Asn Asn
130 135
<210>193
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>193
Ala Ile Arg Lys Ile Glu Glu Ala Leu Gln Asn Val Ser Leu His Arg
1 5 10 15
Ala Asp Leu Gly Ala Met Ile Asn Arg Leu Gln Phe Asn Ile Glu Asn
20 25 30
Leu Asn Ser Gln Ser Thr Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile Glu
35 40 45
Asp Ala Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys Leu
50 55 60
Leu Thr Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Val Pro
65 70 75 80
Gln Met Val Ser Lys Leu Leu Gln
85
<210>194
<211>106
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>194
Leu Val Pro Phe Ala Val Trp Leu Ala Met Ser Arg Ile Arg Arg Arg
1 5 10 15
Ile Leu Asp Thr Asp Cys Lys Ala Glu Ser Ala Val Arg Ile Lys Glu
20 25 30
Ile Pro Ser Asp Val Leu Arg Ala Ala Thr Glu Arg Pro Leu Ser Cys
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Val Ala Ile Ala Arg Pro Ala Ala Ser Ser Glu Ala
50 55 60
Leu Leu Ile Arg Leu Pro Leu Asp Lys Arg Ser Ile Ala Leu Leu Ile
65 70 75 80
Leu Ala Trp Phe Trp Arg Met Tyr Ser Cys Val Arg Met Leu Leu Met
85 90 95
Phe Val Leu Ile Leu Met Leu Arg Thr Pro
100 105
<210>195
<211>49
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>195
Met Ala Ala Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu
1 5 10 15
Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Ser Glu Ala Gly Ile Ser
20 25 30
Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu
35 40 45
Gln
<210>196
<211>102
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>196
Ala Val Trp Leu Ala Met Ser Arg Ile Arg Arg Arg Ile Leu Asp Thr
1 5 10 15
Asp Cys Lys Ala Glu Ser Ala Val Arg Ile Lys Glu Ile Pro Ser Asp
20 25 30
Val Leu Arg Ala Ala Thr Glu Arg Pro Leu Ser Cys Ala Arg Ile Arg
35 40 45
Val Ala Ile Ala Arg Pro Ala Ala Ser Ser Glu Ala Leu Leu Ile Arg
50 55 60
Leu Pro Leu Asp Lys Arg Ser Ile Ala Leu Leu Ile Leu Ala Trp Phe
65 70 75 80
Trp Arg Met Tyr Ser Cys Val Arg Met Leu Leu Met Phe Val Leu Ile
85 90 95
Leu Met Leu Arg Thr Pro
100
<210>197
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>197
Ser Met Ala Ala Ser Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys
1 5 10 15
Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Ser Glu Ala Gly Ile
20 25 30
Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu
35 40 45
Leu Gln
50
<210>198
<211>128
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>198
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Gly Thr Asn Phe Leu Ser Met Asn Ala
1 5 10 15
Arg Gln Ser Leu Tyr Glu Asn Glu Lys Arg Met Asn Val Ala Met Glu
20 25 30
His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro Ala
35 40 45
Asn Ile Ala Ile Val Thr Arg Met His Ala Arg Ala Asn Gly Met Arg
50 55 60
Val Ala Ile Arg Asn Asn Glu Asp Ala Ile Ser Met Leu Arg Thr Ala
65 70 75 80
Glu Ala Ala Leu Gln Thr Val Met Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp
85 90 95
Leu Ala Ile Gln Ser Ala Asn Ser Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp
100 105 110
Ser Leu Asn Lys Glu Phe Gln Ser Leu Thr Glu Gln Ile Ser Tyr Ile
115 120 125
<210>199
<211>70
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>199
Leu Gly Ala Met Ile Asn Arg Leu His Phe Asn Ile Glu Asn Leu Asn
1 5 10 15
Ser Gln Ser Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala Ser Arg Ile Glu Asp Ala
20 25 30
Asp Met Ala Gln Glu Met Ser Asp Phe Leu Lys Phe Lys Leu Leu Thr
35 40 45
Glu Val Ala Leu Ser Met Val Ser Gln Ala Asn Gln Ile Pro Gln Met
50 55 60
Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>200
<211>128
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>200
Gly Phe Leu Asn Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr
1 5 10 15
Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp
20 25 30
Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala
35 40 45
Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly
50 55 60
Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Ala Leu Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp
85 90 95
Ile Ala Asn Gln Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys
100 105 110
Ala Leu Asp Lys Glu Phe Ser Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile
115 120 125
<210>201
<211>70
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>201
Leu Gly Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys
1 5 10 15
Ser Gln Ser Ser Ser Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala
20 25 30
Asp Met Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn
35 40 45
Glu Ala Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met
50 55 60
Val Ser Lys Leu Leu Gln
65 70
<210>202
<211>154
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus aryabhattai
<400>202
Met Arg Ile Asn His Asn Ile Thr Ala Leu Asn Thr Tyr Arg Gln Phe
1 5 10 15
Asn Asn Ala Asn Asn Ala Gln Ala Lys Ser Met Glu Lys Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Gln Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Asp Gln Ala Ser Arg
50 55 60
Asn Ala Gln Asp Gly Val Ser Leu Ile Gln Thr Ala Glu Gly Ala Leu
65 70 75 80
Asn Glu Thr His Asp Ile Leu Gln Arg Met Arg Glu Leu Val Val Gln
85 90 95
Ala Gly Asn Gly Thr Asn Lys Thr Glu Asp Leu Asp Ala Ile Gln Asp
100 105 110
Glu Ile Gly Ser Leu Ile Glu Glu Ile Gly Gly Glu Thr Asp Ser Lys
115 120 125
Gly Ile Ser Asp Arg Ala Gln Phe Asn Gly Arg Asn Leu Leu Asp Gly
130 135 140
Ser Leu Asp Ile Thr Leu Gln Val Gly Ala
145 150
<210>203
<211>52
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus aryabhattai
<400>203
Ile Asp Gly Ala Ile Asn Gln Val Ser Glu Gln Arg Ser Gly Leu Gly
1 5 10 15
Ala Thr Gln Asn Arg Leu Asp His Thr Ile Asn Asn Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Glu Asn Leu Thr Ala Ser Glu Ser Arg Ile Arg Asp Val Asp Tyr
35 40 45
Ala Leu Ala Ala
50
<210>204
<211>148
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus manliponensis
<400>204
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Asp Lys Met Asn Thr Ser Met Asn Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Gln Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Lys Glu Gly Gly Leu Asn Val Gly Ala Lys
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Ala Leu Arg Thr Met Asp Ser Ala Leu
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Thr Gln
85 90 95
Ser Ala Thr Gly Thr Asn Gln Gly Asn Asp Arg Glu Ser Leu Asp Leu
100 105 110
Glu Phe Gln Gln Leu Thr Glu Glu Ile Thr His Ile Ala Glu Lys Thr
115 120 125
Asn Phe Asn Gly Asn Ala Leu Leu Ser Gly Ser Gly Ser Ala Ile Asn
130 135 140
Val Gln Leu Ser
145
<210>205
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus manliponensis
<400>205
Ile Asp Gln Ala Ile Gln Asp Ile Ala Asp Asn Arg Ala Thr Tyr Gly
1 5 10 15
Ser Gln Leu Asn Arg Leu Asp His Asn Leu Asn Asn Val Asn Ser Gln
20 25 30
Ala Thr Asn Met Ala Ala Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Ser Glu Ala
50 55 60
Gly Val Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser
65 70 75 80
Lys Leu Leu Gln
<210>206
<211>151
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>206
Met Arg Ile Gly Ser Trp Thr Ala Thr Gly Met Ser Ile Val Asn His
1 5 10 15
Met Asn Arg Asn Trp Asn Ala Ala Ser Lys Ser Met Leu Arg Leu Ser
20 25 30
Ser Gly Tyr Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
35 40 45
Ile Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Thr Met Ala Ser
50 55 60
Lys Asn Ile Met Asp Gly Val Ser Leu Ile Gln Thr Ala Glu Gly Ala
65 70 75 80
Leu Asn Glu Thr His Ala Ile Val Gln Arg Met Arg Glu Leu Ala Val
85 90 95
Gln Ala Ala Thr Asp Thr Asn Thr Asp Asp Asp Arg Ala Lys Leu Asp
100 105 110
Leu Glu Phe Gln Glu Leu Lys Lys Glu Ile Asp Arg Ile Ser Thr Asp
115 120 125
Thr Glu Phe Asn Thr Arg Thr Leu Leu Asn Gly Asp Tyr Lys Asp Asn
130 135 140
Gly Leu Lys Ile Gln Val Gly
145 150
<210>207
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>207
Leu Asp Glu Ala Thr Lys Asn Val Ser Met Glu Arg Ser Arg Leu Gly
1 5 10 15
Ala Tyr Gln Asn Arg Leu Glu His Ala Tyr Asn Val Ala Glu Asn Thr
20 25 30
Ala Ile Asn Leu Gln Asp Ala Glu Ser Arg Ile Arg Asp Val Asp Ile
35 40 45
Ala Lys Glu Met Met Asn Met Val Lys Ser Gln Ile Leu Ala Gln Val
50 55 60
Gly Gln Gln Val Leu Ala Met His Met Gln Gln Ala Gln Gly Ile Leu
65 70 75 80
Arg Leu Leu Gly
<210>208
<211>151
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>208
Met Lys Ile Gly Ser Trp Thr Ala Thr Gly Met Ser Ile Val Asn His
1 5 10 15
Met Asn Arg Asn Trp Asn Ala Ala Ser Lys Ser Met Leu Arg Leu Ser
20 25 30
Ser Gly Tyr Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala
35 40 45
Ile Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Thr Met Ala Ser
50 55 60
Lys Asn Ile Met Asp Gly Val Ser Leu Ile Gln Thr Ala Glu Gly Ala
65 70 75 80
Leu Asn Glu Thr His Ala Ile Val Gln Arg Met Arg Glu Leu Ala Val
85 90 95
Gln Ala Ala Thr Asp Thr Asn Thr Asp Asp Asp Arg Ala Lys Leu Asp
100 105 110
Leu Glu Phe Gln Glu Leu Lys Lys Glu Ile Asp Arg Ile Ser Thr Asp
115 120 125
Thr Ala Phe Asn Thr Arg Thr Leu Leu Asn Gly Asp Tyr Lys Asp Asn
130 135 140
Gly Leu Lys Ile Gln Val Gly
145 150
<210>209
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>209
Leu Asp Glu Ala Thr Lys Asn Val Ser Met Glu Arg Ser Arg Leu Gly
1 5 10 15
Ala Tyr Gln Asn Arg Leu Glu His Ala Tyr Asn Val Ala Glu Asn Thr
20 25 30
Ala Ile Asn Leu Gln Asp Ala Glu Ser Arg Ile Arg Asp Val Asp Ile
35 40 45
Ala Lys Glu Met Met His Met Val Lys Ser Gln Ile Leu Ala Gln Val
50 55 60
Gly Gln Gln Val Leu Ala Met His Ile Gln Gln Ala Gln Gly Ile Leu
65 70 75 80
Arg Leu Leu Gly
<210>210
<211>148
<212>PRT/Белок
<213>Paenibacillus sp.
<400>210
Met Ile Ile Ser His Asn Leu Thr Ala Leu Asn Thr Met Asn Lys Leu
1 5 10 15
Lys Gln Lys Asp Leu Ala Val Ser Lys Ser Leu Gly Lys Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Leu Arg Ile Asn Gly Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Asn Gln Ala Ser Arg
50 55 60
Asn Ile Gln Asp Gly Ile Ser Leu Ile Gln Val Ala Asp Gly Ala Met
65 70 75 80
Gln Glu Ile His Ser Met Leu Gln Arg Met Asn Glu Leu Ala Val Gln
85 90 95
Ala Ser Asn Gly Thr Tyr Ser Gly Ser Asp Arg Leu Asn Ile Gln Ser
100 105 110
Glu Val Glu Gln Leu Ile Glu Glu Ile Asp Glu Ile Ala Gly Asn Thr
115 120 125
Gly Phe Asn Gly Ile Lys Leu Leu Asn Gly Asn Asn Glu Lys Thr Glu
130 135 140
Lys Thr Glu Lys
145
<210>211
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Paenibacillus sp.
<400>211
Ile Ser Ala Ala Ile Asp Lys Val Ser Ala Glu Arg Ala Arg Met Gly
1 5 10 15
Ala Tyr Gln Asn Arg Leu Glu His Ser Arg Asn Asn Val Val Thr Tyr
20 25 30
Ala Glu Asn Leu Thr Ala Ala Glu Ser Arg Ile Arg Asp Val Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Met Glu Leu Met Lys Asn Gln Ile Phe Thr Gln Ala
50 55 60
Gly Gln Ala Met Leu Leu Gln Thr Asn Thr Gln Pro Gln Ala Ile Leu
65 70 75 80
Gln Leu Leu Lys
<210>212
<211>148
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>212
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Ala Lys Met Ser Asn Ala Met Asp Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Glu Ser Gly Leu Gly Val Ala Ala Asn
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Asp Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
85 90 95
Ser Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Glu Asn Gln Asp Ala Leu Asp Lys
100 105 110
Glu Phe Gly Ala Leu Lys Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ser Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Lys Leu Leu Asn Gly Asp Asn Lys Ser Ile Ala
130 135 140
Ile Gln Thr Leu
145
<210>213
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>213
Ile Asp Ser Ala Leu Glu Thr Ile Ala Ser Asn Arg Ala Thr Leu Gly
1 5 10 15
Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Phe Asn Val Asn Asn Leu Lys Ser Gln
20 25 30
Ser Ser Ala Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala
50 55 60
Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser
65 70 75 80
Lys Leu Leu Gln
<210>214
<211>172
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>214
Met Gln Lys Ser Gln Tyr Lys Lys Met Gly Val Leu Lys Met Arg Ile
1 5 10 15
Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met Arg Gln Asn
20 25 30
Gln Asp Lys Met Asn Val Ser Met Asn Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg
35 40 45
Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg
50 55 60
Met Arg Ala Arg Gln Ser Gly Leu Glu Lys Ala Ser Gln Asn Thr Gln
65 70 75 80
Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Glu Ser Ala Met Asn Ser Val
85 90 95
Ser Asn Ile Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln Ser Ser Asn
100 105 110
Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala Leu Gln Lys Glu Phe Ala
115 120 125
Glu Leu Gln Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr Glu Phe Asn
130 135 140
Asp Lys Asn Leu Leu Ala Gly Thr Gly Ala Val Thr Ile Gly Ser Thr
145 150 155 160
Ser Ile Ser Gly Ala Glu Ile Ser Ile Glu Thr Leu
165 170
<210>215
<211>81
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>215
Ala Leu Asn Thr Val Ala Gly Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu
1 5 10 15
Asn Arg Leu Asp Arg Asn Val Glu Asn Leu Asn Asn Gln Ala Thr Asn
20 25 30
Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu
35 40 45
Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser
50 55 60
Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu
65 70 75 80
Gln
<210>216
<211>159
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>216
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Asp Lys Met Asn Val Ser Met Asn Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Gln Ser Gly Leu Glu Lys Ala Ser Gln
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Glu Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ser Asn Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Glu Leu Gln Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Ala Gly Thr Gly Ala Val Thr Ile
130 135 140
Gly Ser Thr Ser Ile Ser Gly Ala Glu Ile Ser Ile Glu Thr Leu
145 150 155
<210>217
<211>81
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>217
Ala Leu Asn Thr Val Ala Gly Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu
1 5 10 15
Asn Arg Leu Asp Arg Asn Val Glu Asn Leu Asn Asn Gln Ala Thr Asn
20 25 30
Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Lys Asp Ala Asp Lys Ala Lys Glu
35 40 45
Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser
50 55 60
Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser Lys Leu Leu
65 70 75 80
Gln
<210>218
<211>159
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>218
Met Arg Ile Asn Thr Asn Ile Asn Ser Met Arg Thr Gln Glu Tyr Met
1 5 10 15
Arg Gln Asn Gln Asp Lys Met Asn Val Ser Met Asn Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ala Thr Arg Met Arg Ala Arg Gln Ser Gly Leu Glu Lys Ala Ser Gln
50 55 60
Asn Thr Gln Asp Gly Met Ser Leu Ile Arg Thr Ala Glu Ser Ala Met
65 70 75 80
Asn Ser Val Ser Asn Ile Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln
85 90 95
Ser Ser Asn Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala Leu Gln Lys
100 105 110
Glu Phe Ala Glu Leu Gln Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Asp Lys Asn Leu Leu Ala Gly Thr Gly Ala Val Thr Ile
130 135 140
Gly Ser Thr Ser Ile Ser Gly Ala Glu Ile Ser Ile Glu Thr Leu
145 150 155
<210>219
<211>76
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>219
Ala Leu Asn Thr Val Ala Gly Asn Arg Ala Thr Leu Gly Ala Thr Leu
1 5 10 15
Asn Arg Leu Asp Arg Asn Val Glu Asn Leu Asn Asn Gln Ala Thr Asn
20 25 30
Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met Ala Lys Glu
35 40 45
Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala Gly Ile Ser
50 55 60
Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val
65 70 75
<210>220
<211>137
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>220
Met Asn Val Ser Met Asn Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser
1 5 10 15
Ala Ala Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr Arg Met Arg Ala
20 25 30
Arg Gln Ser Gly Leu Glu Lys Ala Ser Gln Asn Thr Gln Asp Gly Met
35 40 45
Ser Leu Ile Arg Thr Ala Glu Ser Ala Met Asn Ser Val Ser Asn Ile
50 55 60
Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln Ser Ser Asn Gly Thr Asn
65 70 75 80
Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala Leu Gln Lys Glu Phe Ala Glu Leu Gln
85 90 95
Glu Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Lys Asn Thr Glu Phe Asn Asp Lys Asn
100 105 110
Leu Leu Ala Gly Thr Gly Ala Val Thr Ile Gly Ser Thr Ser Ile Ser
115 120 125
Gly Ala Glu Ile Ser Ile Glu Thr Leu
130 135
<210>221
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>221
Leu Asn Thr Ala Leu Asn Thr Val Ala Gly Asn Arg Ala Thr Leu Gly
1 5 10 15
Ala Thr Leu Asn Arg Leu Asp Arg Asn Val Glu Asn Leu Asn Asn Gln
20 25 30
Ala Thr Asn Met Ala Ser Ala Ala Ser Gln Ile Glu Asp Ala Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Ser Glu Met Thr Lys Phe Lys Ile Leu Asn Glu Ala
50 55 60
Gly Ile Ser Met Leu Ser Gln Ala Asn Gln Thr Pro Gln Met Val Ser
65 70 75 80
Lys Leu Leu Gln
<210>222
<211>154
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus megaterium
<400>222
Met Arg Ile Asn His Asn Ile Thr Ala Leu Asn Thr Tyr Arg Gln Phe
1 5 10 15
Asn Asn Ala Asn Asn Ala Gln Ala Lys Ser Met Glu Lys Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Gln Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Asp Gln Ala Ser Arg
50 55 60
Asn Ala Gln Asp Gly Val Ser Leu Ile Gln Thr Ala Glu Gly Ala Leu
65 70 75 80
Asn Glu Thr His Asp Ile Leu Gln Arg Met Arg Glu Leu Val Val Gln
85 90 95
Ala Gly Asn Gly Thr Asn Lys Thr Glu Asp Leu Asp Ala Ile Gln Asp
100 105 110
Glu Ile Gly Ser Leu Ile Glu Glu Ile Gly Gly Glu Ala Asp Ser Lys
115 120 125
Gly Ile Ser Asp Arg Ala Gln Phe Asn Gly Arg Asn Leu Leu Asp Gly
130 135 140
Ser Leu Asp Ile Thr Leu Gln Val Gly Ala
145 150
<210>223
<211>53
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus megaterium
<400>223
Ile Ile Asp Gly Ala Ile Asn Gln Val Ser Glu Gln Arg Ser Gly Leu
1 5 10 15
Gly Ala Thr Gln Asn Arg Leu Asp His Thr Ile Asn Asn Leu Ser Thr
20 25 30
Ser Ser Glu Asn Leu Thr Ala Ser Glu Ser Arg Ile Arg Asp Val Asp
35 40 45
Tyr Ala Leu Ala Ala
50
<210>224
<211>148
<212>PRT/Белок
<213>Aneurinibacillus sp.
<400>224
Met Arg Ile Asn His Asn Leu Pro Ala Leu Asn Ala Tyr Arg Asn Leu
1 5 10 15
Ala Gln Asn Gln Ile Gly Thr Ser Lys Ile Leu Glu Arg Leu Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Arg Ile Asn Arg Ala Ser Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile
35 40 45
Ser Glu Lys Met Arg Gly Gln Ile Arg Gly Leu Glu Gln Gly Gln Arg
50 55 60
Asn Thr Met Asp Gly Val Ser Leu Ile Gln Thr Ala Glu Gly Ala Leu
65 70 75 80
Gln Glu Ile His Glu Met Leu Gln Arg Met Arg Glu Leu Ala Val Gln
85 90 95
Ala Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Asp Lys Asp Lys Lys Ala Ile Glu Asp
100 105 110
Glu Ile Asn Gln Leu Thr Ala Gln Ile Asp Gln Ile Ala Lys Thr Thr
115 120 125
Glu Phe Asn Gly Ile Gln Leu Ile Gly Asp Ser Asp Ser Thr Ser Leu
130 135 140
Gln Asp Val Lys
145
<210>225
<211>85
<212>PRT/Белок
<213>Aneurinibacillus sp.
<400>225
Phe Lys Ala Ala Ile Asp Gln Val Ser Arg Ile Arg Ser Tyr Phe Gly
1 5 10 15
Ala Ile Gln Asn Arg Leu Glu His Val Val Asn Asn Leu Ser Asn Tyr
20 25 30
Thr Glu Asn Leu Thr Gly Ala Glu Ser Arg Ile Arg Asp Ala Asp Met
35 40 45
Ala Lys Glu Met Thr Glu Phe Thr Arg Phe Asn Ile Ile Asn Gln Ser
50 55 60
Ala Thr Ala Met Leu Ala Gln Ala Asn Gln Leu Pro Gln Gly Val Leu
65 70 75 80
Gln Leu Leu Lys Gly
85
<210>226
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>226
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>227
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>227
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>228
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>228
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>229
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>229
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>230
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>230
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn Asn Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Ile Ala Ile Val
20
<210>231
<211>23
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>231
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala Thr
20
<210>232
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>232
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>233
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>233
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>234
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>234
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>235
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>235
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Val Ala Ile Val
20
<210>236
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>236
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>237
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus bombysepticus
<400>237
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>238
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>238
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>239
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>239
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>240
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>240
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>241
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>241
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn Asn Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Ile Ala Ile Val
20
<210>242
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>242
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Val Ala Ile Val
20
<210>243
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>243
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>244
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>244
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>245
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>245
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>246
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>246
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>247
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>247
Glu His Phe Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Val Ala Ile Val
20
<210>248
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>248
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>249
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>249
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Ile Val Ile Val
20
<210>250
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>250
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>251
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>251
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>252
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>252
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>253
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>253
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>254
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>254
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>255
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus weihenstephanensis
<400>255
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>256
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>256
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>257
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>257
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Val Ala Ile Val
20
<210>258
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>258
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>259
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>259
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>260
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>260
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Ile Val Ile Val
20
<210>261
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>261
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>262
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>262
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asn Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Val Ala Ile Val
20
<210>263
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>263
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>264
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>264
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Ile Ala Ile Val
20
<210>265
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>265
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>266
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>266
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>267
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>267
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>268
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>268
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>269
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>269
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>270
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>270
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>271
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>271
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn Asn Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Ile Ala Ile Val
20
<210>272
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>272
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>273
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>273
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>274
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>274
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>275
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>275
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>276
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>276
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>277
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>277
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>278
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>278
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>279
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>279
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>280
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>280
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>281
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>281
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asn Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Ile Ala Ile Val
20
<210>282
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>282
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>283
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>283
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>284
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>284
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn Asn Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Ile Ala Ile Val
20
<210>285
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>285
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>286
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>286
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>287
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>287
Glu His Leu Ala Thr Gly Lys Lys Leu Asn His Ala Ser Asp Asn Pro
1 5 10 15
Ala Asn Ile Ala Ile Val
20
<210>288
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>288
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>289
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus aryabhattai
<400>289
Glu Lys Leu Ser Ser Gly Gln Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>290
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus manliponensis
<400>290
Asn Arg Leu Ser Ser Gly Lys Gln Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>291
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>291
Leu Arg Leu Ser Ser Gly Tyr Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>292
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>292
Leu Arg Leu Ser Ser Gly Tyr Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>293
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Paenibacillus sp.
<400>293
Gly Lys Leu Ser Ser Gly Leu Arg Ile Asn Gly Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>294
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>294
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>295
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>295
Asn Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>296
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>296
Asn Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>297
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>297
Asn Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>298
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>298
Asn Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>299
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus megaterium
<400>299
Glu Lys Leu Ser Ser Gly Gln Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>300
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Aneurinibacillus sp.
<400>300
Glu Arg Leu Ser Ser Gly Tyr Arg Ile Asn Arg Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>301
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>301
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala Ser
20 25
<210>302
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>302
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala Ser
20 25
<210>303
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>303
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala Ser
20 25
<210>304
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>304
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Gly Asn Gln Ala Ser
20 25
<210>305
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>305
Thr Val Thr Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg His Ser
20 25
<210>306
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>306
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Ile Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys Ser Ala
20 25
<210>307
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>307
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>308
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>308
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Glu Asn Lys Ala Ala
20 25
<210>309
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>309
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Val Ala
20 25
<210>310
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>310
Thr Val Thr Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Val Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser
20 25
<210>311
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>311
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Asp Asn Gln Gln Ala
20 25
<210>312
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus bombysepticus
<400>312
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Ser Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>313
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>313
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Ser Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>314
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>314
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Ser Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>315
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>315
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>316
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>316
Thr Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln Ser Ala Asn
1 5 10 15
Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn
20 25
<210>317
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>317
Thr Asn Val Leu Gln Arg Met Arg Asp Val Ala Val Gln Ser Ala Asn
1 5 10 15
Gly Thr Asn Leu Asn Lys Asn Arg Asp Ser Leu Asn
20 25
<210>318
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>318
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Ser Asn Lys Ser Ala
20 25
<210>319
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>319
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Lys Ala Ala
20 25
<210>320
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>320
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>321
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>321
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Asp Asn Gln Gln Ala
20 25
<210>322
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>322
Thr Val Met Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser
20 25
<210>323
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>323
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ala Asp Asn Gln Gln Ala
20 25
<210>324
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>324
Thr Val Thr Asn Ile Leu Gln His Met Arg Asp Phe Ala Ile Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Thr Asn Arg Asp Ser
20 25
<210>325
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>325
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ser Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser Ala
20 25
<210>326
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>326
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ser Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser Ala
20 25
<210>327
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>327
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ser Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser Ala
20 25
<210>328
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>328
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>329
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>329
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>330
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus weihenstephanensis
<400>330
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ser Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Glu Asn Gln Gln Ala
20 25
<210>331
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>331
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>332
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>332
Thr Val Ala Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ser Asn Asp Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser
20 25
<210>333
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>333
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>334
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>334
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>335
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>335
Thr Val Thr Asn Ile Leu Gln His Met Arg Asp Phe Ala Ile Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Thr Asn Arg Asp Ser
20 25
<210>336
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>336
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ser Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ser Ala
20 25
<210>337
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>337
Thr Val Thr Asn Val Leu Gln Arg Met Arg Asp Val Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Ser Ser Lys Asn Arg Asp Ser
20 25
<210>338
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>338
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Val Ala
20 25
<210>339
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>339
Thr Val Met Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Ile Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Ser Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser
20 25
<210>340
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>340
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>341
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>341
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>342
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>342
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>343
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>343
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Gly Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>344
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>344
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>345
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>345
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>346
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>346
Thr Val Thr Asn Val Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Asp Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser
20 25
<210>347
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>347
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys Ala Ala
20 25
<210>348
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>348
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Asp Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>349
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>349
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys Ala Ala
20 25
<210>350
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>350
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asn Glu Asn Lys Ala Ala
20 25
<210>351
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>351
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>352
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>352
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Ser Glu Thr Asn Thr Ser Lys Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>353
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>353
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Ser Glu Thr Asn Thr Ser Lys Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>354
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>354
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>355
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>355
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Ser Glu Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>356
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>356
Thr Val Thr Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Val Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asn Ser
20 25
<210>357
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>357
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Gly Ala
20 25
<210>358
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>358
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Asp Lys Asn Gln Ala Ala
20 25
<210>359
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>359
Thr Val Thr Asn Val Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser
20 25
<210>360
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>360
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Thr
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Lys Asp Thr Asp Ile Glu Ala
20 25
<210>361
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>361
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Thr
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Lys Asp Thr Asp Ile Glu Ala
20 25
<210>362
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>362
Thr Val Met Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Asp Leu Ala Ile Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Ser Thr Asn Ser Asn Lys Asn Arg Asp Ser
20 25
<210>363
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>363
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Gly Asp Asn Gln Lys Ala
20 25
<210>364
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus aryabhattai
<400>364
Glu Thr His Asp Ile Leu Gln Arg Met Arg Glu Leu Val Val Gln Ala
1 5 10 15
Gly Asn Gly Thr Asn Lys Thr Glu Asp Leu Asp Ala
20 25
<210>365
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus manliponensis
<400>365
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Thr Gln Ser
1 5 10 15
Ala Thr Gly Thr Asn Gln Gly Asn Asp Arg Glu Ser
20 25
<210>366
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>366
Glu Thr His Ala Ile Val Gln Arg Met Arg Glu Leu Ala Val Gln Ala
1 5 10 15
Ala Thr Asp Thr Asn Thr Asp Asp Asp Arg Ala Lys
20 25
<210>367
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>367
Glu Thr His Ala Ile Val Gln Arg Met Arg Glu Leu Ala Val Gln Ala
1 5 10 15
Ala Thr Asp Thr Asn Thr Asp Asp Asp Arg Ala Lys
20 25
<210>368
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Paenibacillus sp.
<400>368
Glu Ile His Ser Met Leu Gln Arg Met Asn Glu Leu Ala Val Gln Ala
1 5 10 15
Ser Asn Gly Thr Tyr Ser Gly Ser Asp Arg Leu Asn
20 25
<210>369
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>369
Ser Val Ser Asn Ile Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln Ser
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Asn Thr Lys Glu Asn Gln Asp Ala
20 25
<210>370
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>370
Ser Val Ser Asn Ile Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ser Asn Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala
20 25
<210>371
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>371
Ser Val Ser Asn Ile Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ser Asn Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala
20 25
<210>372
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>372
Ser Val Ser Asn Ile Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ser Asn Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala
20 25
<210>373
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>373
Ser Val Ser Asn Ile Leu Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Ser Asn Gly Thr Asn Thr Ala Glu Asn Gln Ser Ala
20 25
<210>374
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus megaterium
<400>374
Glu Thr His Asp Ile Leu Gln Arg Met Arg Glu Leu Val Val Gln Ala
1 5 10 15
Gly Asn Gly Thr Asn Lys Thr Glu Asp Leu Asp Ala
20 25
<210>375
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Aneurinibacillus sp.
<400>375
Glu Ile His Glu Met Leu Gln Arg Met Arg Glu Leu Ala Val Gln Ala
1 5 10 15
Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Asp Lys Asp Lys Lys Ala
20 25
<210>376
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>376
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Ser Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>377
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>377
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Ser Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>378
<211>21
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>378
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ser Asn Ile Arg Lys Gly
1 5 10 15
Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>379
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>379
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Ser Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>380
<211>21
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>380
Val Ile Ala Asn Ala Pro Asn Asp Ser Ala Asn Asn Leu Lys Lys Gly
1 5 10 15
Thr Ala Leu His Glu
20
<210>381
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>381
Thr Ala Ile Ala Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>382
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>382
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>383
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>383
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>384
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>384
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>385
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>385
Val Ile Ala Val Asn Ala Pro Asn Asp Ser Ala His Asn Leu Lys Lys
1 5 10 15
Gly Thr Ala Leu His Glu
20
<210>386
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>386
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>387
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus bombysepticus
<400>387
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>388
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>388
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>389
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>389
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>390
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>390
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>391
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>391
Val Ile Ala Ile Asn Ala Pro Asn Asp Ala Ser Asn Asn Leu Lys Lys
1 5 10 15
Gly Thr Ala Leu His Glu
20
<210>392
<211>21
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>392
Val Ile Ala Asn Ala Pro Asn Asp Ser Ala His Asn Leu Lys Lys Gly
1 5 10 15
Thr Ala Leu His Glu
20
<210>393
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>393
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>394
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>394
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>395
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>395
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>396
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>396
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>397
<211>21
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>397
Val Ile Ala Asn Ala Pro Asn Asp Ser Ala His Asn Leu Lys Lys Gly
1 5 10 15
Thr Ala Phe His Glu
20
<210>398
<211>21
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>398
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Arg Lys Gly
1 5 10 15
Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>399
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>399
Val Ile Val Ile Asn Ala Pro Asn Asp Ser Ala His Asn Leu Lys Lys
1 5 10 15
Gly Thr Ala Leu His Glu
20
<210>400
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>400
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>401
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>401
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>402
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>402
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>403
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>403
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>404
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>404
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>405
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus weihenstephanensis
<400>405
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>406
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>406
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>407
<211>21
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>407
Val Ile Ala Asn Ala Pro Asn Asp Ser Ala His Asn Leu Lys Lys Gly
1 5 10 15
Thr Ala Leu His Glu
20
<210>408
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>408
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>409
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>409
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>410
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>410
Val Ile Val Ile Asn Ala Pro Asn Asp Ala Ser His Asn Leu Lys Lys
1 5 10 15
Gly Thr Ala Leu His Glu
20
<210>411
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>411
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>412
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>412
Val Ile Ala Val Ala Asn Pro Asn Asn Ser Ala His Asn Leu Lys Lys
1 5 10 15
Gly Thr Ala Leu His Glu
20
<210>413
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>413
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>414
<211>21
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>414
Val Ile Ala Asn Ala Pro Asn Asp Ser Ala His Asn Leu Lys Lys Gly
1 5 10 15
Thr Ala Leu His Glu
20
<210>415
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>415
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>416
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>416
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>417
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>417
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>418
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>418
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>419
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>419
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>420
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>420
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ser Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>421
<211>21
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>421
Val Ile Ala Asn Ala Pro Asn Asp Ser Ala Asn Asn Leu Lys Lys Gly
1 5 10 15
Thr Ala Leu His Glu
20
<210>422
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>422
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>423
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>423
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>424
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>424
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>425
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>425
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>426
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>426
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>427
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>427
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>428
<211>21
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>428
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Asn Asn Ile Arg Lys Gly
1 5 10 15
Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>429
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>429
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>430
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>430
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>431
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>431
Val Ile Ala Ile Asn Ala Pro Asn Asn Ser Ala His Asn Leu Lys Lys
1 5 10 15
Gly Thr Ala Leu His Glu
20
<210>432
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>432
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>433
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>433
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>434
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>434
Val Ile Ala Ile Asn Ala Pro Asn Asp Ser Ala Asn Asn Leu Lys Lys
1 5 10 15
Gly Thr Ala Leu His Glu
20
<210>435
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>435
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>436
<211>21
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>436
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Asn Asn Ile Arg Lys Gly
1 5 10 15
Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>437
<211>21
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>437
Val Ile Ala Asn Ala Pro Asn Asp Ser Ala His Asn Leu Lys Lys Gly
1 5 10 15
Thr Ala Leu His Glu
20
<210>438
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>438
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>439
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus aryabhattai
<400>439
Ser Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Ser Asn Ile Arg Gln
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Lys Glu
20
<210>440
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus manliponensis
<400>440
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Ser Asn Ile Gln Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asn
20
<210>441
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>441
Ser Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ala Ser Asn Ile Arg Tyr
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Leu
20
<210>442
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>442
Ser Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ala Ser Asn Ile Arg Tyr
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Leu
20
<210>443
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Paenibacillus sp.
<400>443
Ser Ile Ala Gly Leu Ala Ala Asp Asp Ser Ala Gly Asn Ile Arg Leu
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Lys Gly
20
<210>444
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>444
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Asn Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asp
20
<210>445
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>445
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ala Ser Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asn
20
<210>446
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>446
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ala Ser Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asn
20
<210>447
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>447
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ala Ser Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asn
20
<210>448
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>448
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ala Ser Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asn
20
<210>449
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus megaterium
<400>449
Ser Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Ser Asn Ile Arg Gln
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Lys Glu
20
<210>450
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Aneurinibacillus sp.
<400>450
Ser Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ser Ala Arg Asn Ile Arg Tyr
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Glu
20
<210>451
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>451
Ser Ala Gln Asn Gly Lys Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>452
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>452
Ser Ala Gln Asn Gly Lys Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>453
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>453
Ser Ala Gln Asn Gly Lys Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>454
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>454
Ser Ala Gln Asn Gly Lys Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>455
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>455
Ser His Arg Asn Lys Asn Ser Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Gln Leu Ile Asn Thr Val Thr
20 25
<210>456
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>456
Ala Ser Lys Asn Glu Asn Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>457
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>457
Ala Lys Gln Asn Asp Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>458
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>458
Ala Ala Lys Asn Glu Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>459
<211>29
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>459
Leu Ala Val Gln Asn Lys Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn
1 5 10 15
Ala Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>460
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>460
Ser Asp Arg Asn Lys Asn Ser Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Val Asp Arg Met Arg Gln Leu Ile Asn Thr Val Thr
20 25
<210>461
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>461
Ala Gln Gln Asn Asp Ala Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>462
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus bombysepticus
<400>462
Ala Ala Gln Asn Lys Asp Thr Asn Thr Gly Ser Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>463
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>463
Ala Ala Gln Asn Lys Asp Thr Asn Thr Gly Ser Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>464
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>464
Ala Ala Gln Asn Lys Asp Thr Asn Thr Gly Ser Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>465
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>465
Ala Lys Gln Asn Asp Gly Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>466
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>466
Asn Leu Ser Asp Arg Asn Lys Asn Ser Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln
1 5 10 15
Val Ala Leu Asp Arg Met Arg Gln Leu Ile Asn Thr
20 25
<210>467
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>467
Asn Leu Ser Asp Arg Asn Lys Asn Leu Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln
1 5 10 15
Val Ala Val Asp Arg Met Arg Gln Leu Val Asn Thr
20 25
<210>468
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>468
Ala Ser Lys Asn Ser Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>469
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>469
Ala Ala Lys Asn Glu Ala Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>470
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>470
Ala Lys Gln Asn Asp Ser Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>471
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>471
Ala Gln Gln Asn Asp Ala Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>472
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>472
Ser Asp Arg Asn Lys Asn Ser Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Gln Leu Ile Asn Met Val Thr
20 25
<210>473
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>473
Ala Gln Gln Asn Asp Ala Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>474
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>474
Ser Asp Arg Asn Thr Asn Ser Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Ile Ala
1 5 10 15
Phe Asp Arg Met His Gln Leu Ile Asn Thr Val Thr
20 25
<210>475
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>475
Ala Ser Gln Asn Lys Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ser
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>476
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>476
Ala Ser Gln Asn Lys Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ser
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>477
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>477
Ala Ser Gln Asn Lys Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ser
1 5 10 15
Ile Ser Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>478
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>478
Ala Ala Gln Asn Glu Asn Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>479
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>479
Ala Gln Gln Asn Glu Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ser
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>480
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus weihenstephanensis
<400>480
Ala Gln Gln Asn Glu Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ser
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>481
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>481
Ala Lys Gln Asn Asp Gly Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>482
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>482
Ser Asp Arg Asn Lys Asn Ser Asn Thr Asp Asn Ser Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Gln Leu Ile Asn Ala Val Thr
20 25
<210>483
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>483
Ala Lys Gln Asn Asp Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>484
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>484
Ala Lys Gln Asn Asp Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>485
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>485
Ser Asp Arg Asn Thr Asn Ser Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Ile Ala
1 5 10 15
Phe Asp Arg Met His Gln Leu Ile Asn Thr Val Thr
20 25
<210>486
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>486
Ala Ser Gln Asn Lys Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ser
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>487
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>487
Ser Asp Arg Asn Lys Ser Ser Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Val Asp Arg Met Arg Gln Leu Val Asn Thr Val Thr
20 25
<210>488
<211>27
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>488
Ala Val Gln Lys Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala Ile
1 5 10 15
Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>489
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>489
Ser Asp Arg Asn Lys Asn Ser Asn Thr Ser Asn Ala Ser Gln Ile Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Gln Leu Ile Asn Met Val Thr
20 25
<210>490
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>490
Ala Lys Gln Asn Asp Ser Thr Asn Ile Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>491
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>491
Ala Lys Gln Asn Asp Gly Thr Asn Thr Phe Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>492
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>492
Ala Lys Gln Asn Asp Gly Thr Asn Thr Phe Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>493
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>493
Ala Ala Gln Asn Gly Asn Thr Asn Thr Phe Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>494
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>494
Ala Ala Gln Asn Lys Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>495
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>495
Ala Ala Gln Asn Glu Asn Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>496
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>496
Ser Asp Arg Asn Lys Asn Ser Asn Thr Asp Asn Ala Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Gln Leu Val Asn Thr Val Thr
20 25
<210>497
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>497
Ala Ala Lys Asn Glu Asn Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>498
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>498
Ala Ala Gln Asn Asp Ser Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>499
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>499
Ala Ala Lys Asn Glu Asn Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>500
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>500
Ala Ala Lys Asn Glu Asn Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>501
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>501
Ala Lys Gln Asn Asp Gly Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>502
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>502
Ala Ala Gln Asn Lys Ser Thr Asn Thr Glu Ser Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>503
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>503
Ala Ala Gln Asn Lys Ser Thr Asn Thr Glu Ser Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>504
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>504
Ala Lys Gln Asn Asp Gly Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>505
<211>27
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>505
Ala Ala Gln Asn Glu Ser Thr Asn Thr Gly Asn Ala Gln Asn Ala Leu
1 5 10 15
Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>506
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>506
Ser Asn Arg Asn Lys Asn Ser Asn Thr Val Asn Ala Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Gln Leu Ile Asn Thr Val Thr
20 25
<210>507
<211>27
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>507
Ala Gly Gln Asn Lys Asp Thr Asn Thr Asn Ala Ser Gln Asn Ala Leu
1 5 10 15
Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>508
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>508
Ala Ala Gln Asn Lys Asp Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>509
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>509
Ser Asp Arg Asn Lys Asn Ser Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Gln Leu Val Asn Thr Val Thr
20 25
<210>510
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>510
Ala Glu Ile Asp Thr Asp Lys Asn Thr Gly Asn Ala Thr Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>511
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>511
Ala Glu Ile Asp Thr Asp Lys Asn Thr Gly Asn Ala Thr Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>512
<211>27
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>512
Ser Asp Arg Asn Lys Asn Ser Asn Thr Ser Asn Ala Ser Gln Ile Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Gln Leu Ile Asn Met Thr
20 25
<210>513
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>513
Ala Lys Gln Asn Asp Gly Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>514
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus aryabhattai
<400>514
Ala Asp Leu Asp Glu Thr Lys Asn Thr Gly Asn Gly Ala Gln Val Val
1 5 10 15
Leu Glu Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp His Thr Glu
20 25
<210>515
<211>27
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus manliponensis
<400>515
Ser Glu Arg Asp Asn Gly Gln Asn Thr Gly Thr Ala Gln Thr Ala Leu
1 5 10 15
Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>516
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>516
Lys Ala Arg Asp Asp Asp Thr Asn Thr Asp Thr Ala Ala Gln Val Ala
1 5 10 15
Leu Glu Arg Met Arg Gln Val Ile Ala His Thr Glu
20 25
<210>517
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>517
Lys Ala Arg Asp Asp Asp Thr Asn Thr Asp Thr Ala Ala Gln Val Ala
1 5 10 15
Leu Glu Arg Met Arg Gln Val Ile Ala His Thr Glu
20 25
<210>518
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Paenibacillus sp.
<400>518
Asn Leu Arg Asp Ser Gly Ser Tyr Thr Gly Asn Ser Ala Gln Val Ala
1 5 10 15
Leu Glu Asn Met Arg Gln Leu Met Ser His Ile Glu
20 25
<210>519
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>519
Ala Asp Gln Asn Glu Lys Thr Asn Thr Gly Asn Ala Ser Gln Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Arg Met Arg Leu Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>520
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>520
Ala Ser Gln Asn Glu Ala Thr Asn Thr Gly Asn Ser Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Thr Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>521
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>521
Ala Ser Gln Asn Glu Ala Thr Asn Thr Gly Asn Ser Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Thr Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>522
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>522
Ala Ser Gln Asn Glu Ala Thr Asn Thr Gly Asn Ser Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Ile Asp Arg Met Arg Thr Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>523
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus anthracis
<400>523
Ala Ser Gln Asn Glu Ala Thr Asn Thr Gly Asn Ser Ser Gln Val Ile
1 5 10 15
Ala Asp Arg Met Arg Thr Leu Ile Asn Ser Val Ser
20 25
<210>524
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus megaterium
<400>524
Ala Asp Leu Asp Glu Thr Lys Asn Thr Gly Asn Gly Ala Gln Val Val
1 5 10 15
Leu Glu Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp His Thr Glu
20 25
<210>525
<211>27
<212>PRT/Белок
<213>Aneurinibacillus sp.
<400>525
Ala Lys Lys Asp Lys Ser Tyr Thr Gly Asn Ala Ala Gln Val Ala Leu
1 5 10 15
Glu Arg Met Arg Gln Leu Met Glu His Ile Glu
20 25
<210>526
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Escherichia coli
<400>526
Glu Arg Leu Ser Ser Gly Leu Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Gln Ala Ile Ala
20
<210>527
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Escherichia coli
<400>527
Ala Ile Ala Gln Gly Ala Ala Asp Asp Lys Ala Ser Asn Ile Arg Leu
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Glu
20
<210>528
<211>15
<212>PRT/Белок
<213>Escherichia coli
<400>528
Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala Ala Gly Gln Ala Ile Ala
1 5 10 15
<210>529
<211>15
<212>PRT/Белок
<213>Escherichia coli
<400>529
Ala Ile Ala Gln Gly Ala Ala Asp Asp Lys Ala Ser Asn Ile Arg
1 5 10 15
<210>530
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Pseudomonas aeruginosa
<400>530
Gln Arg Leu Ser Thr Gly Ser Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Gln Ile Ala
20
<210>531
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Pseudomonas aeruginosa
<400>531
Ala Ile Gln Leu Gly Ala Ala Asp Asp Lys Ala Ser Asn Ile Arg Ser
1 5 10 15
Gly Thr Ser Leu Arg Gln
20
<210>532
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Xanthomonas spp.
<400>532
Gln Arg Leu Ser Ser Gly Leu Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>533
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Xanthomonas spp.
<400>533
Ser Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Lys Ala Ser Asn Ile Arg Leu
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Gln
20
<210>534
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Erwinia amylovora
<400>534
Gln Arg Leu Ser Ser Gly Leu Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Gln Ala Ile Ser
20
<210>535
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Erwinia amylovora
<400>535
Ser Ile Ala Gln Gly Ala Ala Asp Asp Lys Ala Ser Asn Ile Arg Leu
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Gln
20
<210>536
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Burkholderia phytofirmans
<400>536
Thr Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>537
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Burkholderia phytofirmans
<400>537
Ser Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ala Ser Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Thr
20
<210>538
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Burkholderia ubonensis
<400>538
Asn Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Thr Ala Ala Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>539
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Burkholderia ubonensis
<400>539
Ser Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ala Thr Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Asn
20
<210>540
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Pseudomonas syringae
<400>540
Thr Arg Leu Ser Ser Gly Leu Lys Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Gln Ile Ala
20
<210>541
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Pseudomonas syringae
<400>541
Ala Ile Gln Leu Gly Ala Ala Asp Asp Lys Ala Ser Asn Ile Lys Leu
1 5 10 15
Gly Ser Ser Leu Arg Thr
20
<210>542
<211>4
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>542
Gly Phe Leu Asn
1
<210>543
<211>5
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>543
Trp Gly Phe Leu Ile
1 5
<210>544
<211>5
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>544
Met Gly Val Leu Asn
1 5
<210>545
<211>4
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>545
Gly Val Leu Asn
1
<210>546
<211>5
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>546
Trp Gly Phe Phe Tyr
1 5
<210>547
<211>9
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>547
Leu Val Pro Phe Ala Val Trp Leu Ala
1 5
<210>548
<211>5
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>548
Ala Val Trp Leu Ala
1 5
<210>549
<211>12
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>549
Leu Leu Gly Thr Ala Asp Lys Lys Ile Lys Ile Gln
1 5 10
<210>550
<211>11
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>550
Leu Leu Lys Ser Thr Gln Glu Ile Lys Ile Gln
1 5 10
<210>551
<211>11
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>551
Leu Leu Asn Glu Asp Ser Glu Val Lys Ile Gln
1 5 10
<210>552
<211>9
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>552
Leu Gly Val Ala Ala Asn Asn Thr Gln
1 5
<210>553
<211>10
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>553
Leu Leu Arg Met Arg Asp Leu Ala Asn Gln
1 5 10
<210>554
<211>10
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>554
Leu Gln Arg Met Arg Asp Val Ala Val Gln
1 5 10
<210>555
<211>10
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>555
Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ser Asn Gln
1 5 10
<210>556
<211>10
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>556
Leu Leu Arg Met Arg Asp Ile Ala Asn Gln
1 5 10
<210>557
<211>13
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>557
Leu Gln Lys Gln Ile Asp Tyr Ile Ala Gly Asn Thr Gln
1 5 10
<210>558
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>558
Leu Leu Ile Arg Leu Pro Leu Asp
1 5
<210>559
<211>9
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>559
Gln Arg Met Arg Glu Leu Ala Val Gln
1 5
<210>560
<211>9
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>560
Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln
1 5
<210>561
<211>9
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>561
Thr Arg Met Arg Asp Ile Ala Val Gln
1 5
<210>562
<211>9
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>562
Gln Arg Met Arg Glu Leu Val Val Gln
1 5
<210>563
<211>6
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>563
Leu Gly Ala Thr Leu Asn
1 5
<210>564
<211>6
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>564
Leu Gly Ala Thr Gln Asn
1 5
<210>565
<211>6
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>565
Leu Ala Gln Ala Asn Gln
1 5
<210>566
<211>6
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>566
Leu Gly Ala Met Ile Asn
1 5
<210>567
<211>6
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>567
Leu Gly Ser Met Ile Asn
1 5
<210>568
<211>6
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>568
Met Gly Ala Tyr Gln Asn
1 5
<210>569
<211>6
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>569
Leu Gly Ala Tyr Gln Asn
1 5
<210>570
<211>6
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>570
Tyr Gly Ser Gln Leu Asn
1 5
<210>571
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>571
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>572
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>572
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Gln Ile Ala
20
<210>573
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>573
Gln Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>574
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>574
Asn Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>575
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Caballeronia megalochromosomata
<400>575
Thr Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>576
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>576
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Tyr Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>577
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>577
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Phe Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>578
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>578
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Pro
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>579
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>579
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Gln Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>580
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus spp.
<400>580
Glu Lys Leu Ser Ser Gly Leu Arg Ile Asn Arg Ala Gly Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>581
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus spp.
<400>581
Glu Lys Leu Ser Ser Gly Tyr Lys Ile Asn Arg Ala Ser Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>582
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus spp.
<400>582
Leu Arg Ile Ser Ser Gly Tyr Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Pro
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>583
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus fusiformis
<400>583
Leu Arg Ile Ser Thr Gly Tyr Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp Pro
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>584
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus macroides
<400>584
Glu Lys Leu Ser Ser Gly Phe Arg Ile Asn Arg Ala Gly Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>585
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus xylanilyticus
<400>585
Glu Lys Leu Ser Ser Gly Tyr Lys Ile Asn Arg Ala Gly Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ser
20
<210>586
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Escherichia coli
<400>586
Glu Arg Leu Ser Ser Gly Leu Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala
1 5 10 15
Ala Gly Gln Ala Ile Ala
20
<210>587
<211>23
<212>PRT/Белок
<213>Вид Xanthomonas
<400>587
Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu
1 5 10 15
Ile Met Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210>588
<211>23
<212>PRT/Белок
<213>Вид Xanthomonas
<400>588
Gln Gln Leu Leu Ala Met Ile Leu Gln Thr Leu Leu Gln Asp Leu Gln
1 5 10 15
Lys Glu Ser Ile Gly Gln Asn
20
<210>589
<211>12
<212>PRT/Белок
<213>Вид Xanthomonas
<400>589
Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu Ile Met Ala Leu
1 5 10
<210>590
<211>12
<212>PRT/Белок
<213>Вид Xanthomonas
<400>590
Leu Ala Met Ile Leu Gln Thr Leu Leu Gln Asp Leu
1 5 10
<210>591
<211>19
<212>PRT/Белок
<213>Вид Xanthomonas
<400>591
Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu Ile Met Ala Leu
1 5 10 15
Leu Gln Gln
<210>592
<211>19
<212>PRT/Белок
<213>Вид Xanthomonas
<400>592
Gln Gln Leu Leu Ala Met Ile Leu Gln Thr Leu Leu Gln Asp Leu Gln
1 5 10 15
Lys Glu Ser
<210>593
<211>143
<212>PRT/Белок
<213>Xanthamonas citri
<400>593
Met Met Asn Ser Leu Asn Thr Gln Leu Gly Ala Asn Ser Ser Phe Phe
1 5 10 15
Gln Val Asp Pro Ser Gln Asn Thr Gln Ser Gly Ser Asn Gln Gly Asn
20 25 30
Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu Ile
35 40 45
Met Ala Leu Leu Gln Gln Ser Asn Asn Ala Glu Gln Gly Gln Gly Gln
50 55 60
Gly Gln Gly Gly Asp Ser Gly Gly Gln Gly Gly Asn Arg Gln Gln Ala
65 70 75 80
Gly Gln Ser Asn Gly Ser Pro Ser Gln Tyr Thr Gln Met Leu Met Asn
85 90 95
Ile Val Gly Asp Ile Leu Gln Ala Gln Asn Gly Gly Gly Phe Gly Gly
100 105 110
Gly Phe Gly Gly Gly Phe Gly Gly Gly Gly Leu Gly Thr Ser Leu Gly
115 120 125
Thr Ser Leu Gly Thr Ser Leu Ala Ser Asp Thr Gly Ser Met Gln
130 135 140
<210>594
<211>19
<212>PRT/Белок
<213>Pantoea sesami
<400>594
Gln Leu Glu Gln Leu Met Thr Gln Leu Arg Ala Arg Leu Cys Arg Leu
1 5 10 15
Met Ala Met
<210>595
<211>19
<212>PRT/Белок
<213>Erwinia gerudensis
<400>595
Gln Leu Glu Gln Leu Met Thr Gln Leu Arg Ala Arg Leu Lys Arg Leu
1 5 10 15
Met Ala Met
<210>596
<211>19
<212>PRT/Белок
<213>Pantoea sesami
<400>596
Met Ala Met Leu Arg Cys Leu Arg Ala Arg Leu Gln Thr Met Leu Gln
1 5 10 15
Glu Leu Gln
<210>597
<211>19
<212>PRT/Белок
<213>Erwinia gerudensis
<400>597
Met Ala Met Leu Arg Lys Leu Arg Ala Arg Leu Gln Thr Met Leu Gln
1 5 10 15
Glu Leu Gln
<210>598
<211>5
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis thaliana
<220>
<221>MISC_FEATURE/Другие признаки
<222>(1)..(1)
<223>Xaa=сульфонированный тирозин
<220>
<221>MISC_FEATURE/Другие признаки
<222>(3)..(3)
<223>Xaa=сульфонированный тирозин
<400>598
Xaa Ile Xaa Thr Gln
1 5
<210>599
<211>5
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis thaliana
<220>
<221>MISC_FEATURE/Другие признаки
<222>(3)..(3)
<223>Xaa=сульфонированный тирозин
<220>
<221>MISC_FEATURE/Другие признаки
<222>(5)..(5)
<223>Xaa=сульфонированный тирозин
<400>599
Gln Thr Xaa Ile Xaa
1 5
<210>600
<211>12
<212>PRT/Белок
<213>Glycine max
<400>600
Gly Gly Ile Arg Ala Ala Pro Thr Gly Asn Glu Arg
1 5 10
<210>601
<211>12
<212>PRT/Белок
<213>Glycine max
<400>601
Arg Glu Asn Gly Thr Pro Ala Ala Arg Ile Gly Gly
1 5 10
<210>602
<211>217
<212>PRT/Белок
<213>Glycine max
<400>602
Met Lys Ser Thr Ile Phe Phe Ala Leu Phe Leu Phe Cys Ala Phe Thr
1 5 10 15
Thr Ser Tyr Leu Pro Ser Ala Ile Ala Asp Phe Val Leu Asp Asn Glu
20 25 30
Gly Asn Pro Leu Glu Asn Gly Gly Thr Tyr Tyr Ile Leu Ser Asp Ile
35 40 45
Thr Ala Phe Gly Gly Ile Arg Ala Ala Pro Thr Gly Asn Glu Arg Cys
50 55 60
Pro Leu Thr Val Val Gln Ser Arg Asn Glu Leu Asp Lys Gly Ile Glu
65 70 75 80
Thr Ile Ile Ser Ser Pro Tyr Arg Ile Arg Phe Ile Ala Glu Gly His
85 90 95
Pro Leu Ser Leu Lys Phe Asp Ser Phe Ala Val Ile Met Leu Cys Val
100 105 110
Gly Ile Pro Thr Glu Trp Ser Val Val Glu Asp Leu Pro Glu Gly Pro
115 120 125
Ala Val Lys Ile Gly Glu Asn Lys Asp Ala Met Asp Gly Trp Phe Arg
130 135 140
Leu Glu Arg Val Ser Asp Asp Glu Phe Asn Asn Tyr Lys Leu Val Phe
145 150 155 160
Cys Pro Gln Gln Ala Glu Asp Asp Lys Cys Gly Asp Ile Gly Ile Ser
165 170 175
Ile Asp His Asp Asp Gly Thr Arg Arg Leu Val Val Ser Lys Asn Lys
180 185 190
Pro Leu Val Val Gln Phe Gln Lys Leu Asp Lys Glu Ser Leu Ala Lys
195 200 205
Lys Asn His Gly Leu Ser Arg Ser Glu
210 215
<210>603
<211>12
<212>PRT/Белок
<213>Glycine max
<400>603
Gly Gly Ile Arg Ala Thr Pro Thr Glu Asn Glu Arg
1 5 10
<210>604
<211>12
<212>PRT/Белок
<213>Glycine max
<400>604
Gly Gly Ile Arg Val Ala Ala Thr Gly Lys Glu Arg
1 5 10
<210>605
<211>12
<212>PRT/Белок
<213>Glycine max
<400>605
Arg Glu Asn Glu Thr Pro Thr Ala Arg Ile Gly Gly
1 5 10
<210>606
<211>12
<212>PRT/Белок
<213>Glycine max
<400>606
Arg Glu Lys Gly Thr Ala Ala Val Arg Ile Gly Gly
1 5 10
<210>607
<211>18
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis lyrata
<400>607
Ala Arg Gly Lys Phe Glu Arg Lys Lys Pro His Val Asn Ile Gly Thr
1 5 10 15
Ile Gly
<210>608
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis lyrata
<400>608
Ala Arg Gly Lys Phe Glu Arg Lys Lys Pro His Val Asn Ile Gly Thr
1 5 10 15
Ile Gly His Val Asp His Gly Lys Thr Thr
20 25
<210>609
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis lyrata
<400>609
Glu Lys Pro Asn Val Lys Arg Gly Glu Asn Lys Trp Val Asp Lys Ile
1 5 10 15
Tyr Glu Leu Met Asp Ser Val Asp Ser Tyr Ile Pro Ile Pro Thr Arg
20 25 30
Gln Thr Glu Leu Pro Phe Leu Leu Ala Val Glu Asp Val Phe Ser Ile
35 40 45
Thr Gly
50
<210>610
<211>18
<212>PRT/Белок
<213>Euglena gracilis
<400>610
Ala Arg Gln Lys Phe Glu Arg Thr Lys Pro His Ile Asn Ile Gly Thr
1 5 10 15
Ile Gly
<210>611
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Euglena gracilis
<400>611
Ala Arg Gln Lys Phe Glu Arg Thr Lys Pro His Ile Asn Ile Gly Thr
1 5 10 15
Ile Gly His Val Asp His Gly Lys Thr Thr
20 25
<210>612
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Euglena gracilis
<400>612
Lys Asn Pro Lys Ile Thr Lys Gly Glu Asn Lys Trp Val Asp Lys Ile
1 5 10 15
Leu Asn Leu Met Asp Gln Val Asp Ser Tyr Ile Pro Thr Pro Thr Arg
20 25 30
Asp Thr Glu Lys Asp Phe Leu Met Ala Ile Glu Asp Val Leu Ser Ile
35 40 45
Thr Gly
50
<210>613
<211>18
<212>PRT/Белок
<213>Acidovorax avenae
<400>613
Ala Lys Gly Lys Phe Glu Arg Thr Lys Pro His Val Asn Val Gly Thr
1 5 10 15
Ile Gly
<210>614
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Acidovorax avenae
<400>614
Ala Lys Gly Lys Phe Glu Arg Thr Lys Pro His Val Asn Val Gly Thr
1 5 10 15
Ile Gly His Val Asp His Gly Lys Thr Thr
20 25
<210>615
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Acidovorax spp.
<400>615
Lys Leu Ala Leu Glu Gly Asp Lys Gly Pro Leu Gly Glu Gln Ala Ile
1 5 10 15
Asp Lys Leu Ala Glu Ala Leu Asp Thr Tyr Ile Pro Thr Pro Glu Arg
20 25 30
Ala Val Asp Gly Ala Phe Leu Met Pro Val Glu Asp Val Phe Ser Ile
35 40 45
Ser Gly
50
<210>616
<211>18
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>616
Ala Lys Ala Lys Phe Glu Arg Ser Lys Pro His Val Asn Ile Gly Thr
1 5 10 15
Ile Gly
<210>617
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>617
Ala Lys Ala Lys Phe Glu Arg Ser Lys Pro His Val Asn Ile Gly Thr
1 5 10 15
Ile Gly His Val Asp His Gly Lys Thr Thr
20 25
<210>618
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>618
Ser Ala Leu Lys Ala Leu Gln Gly Glu Ala Glu Trp Glu Glu Lys Ile
1 5 10 15
Ile Glu Leu Met Ala Glu Val Asp Ala Tyr Ile Pro Thr Pro Glu Arg
20 25 30
Glu Thr Asp Lys Pro Phe Leu Met Pro Ile Glu Asp Val Phe Ser Ile
35 40 45
Thr Gly
50
<210>619
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Burkholderia spp.
<400>619
Ala Lys Gly Lys Phe Glu Arg Thr Lys Pro His Val Asn Val Gly Thr
1 5 10 15
Ile Gly His Val Asp His Gly Lys Thr Thr
20 25
<210>620
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Burkholderia spp.
<400>620
Lys Leu Ala Leu Glu Gly Asp Thr Gly Glu Leu Gly Glu Val Ala Ile
1 5 10 15
Met Asn Leu Ala Asp Ala Leu Asp Thr Tyr Ile Pro Thr Pro Glu Arg
20 25 30
Ala Val Asp Gly Ala Phe Leu Met Pro Val Glu Asp Val Phe Ser Ile
35 40 45
Ser Gly
50
<210>621
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Xanthomonas campestris
<400>621
Arg Leu Ala Leu Asp Gly Asp Gln Ser Glu Ile Gly Val Pro Ala Ile
1 5 10 15
Leu Lys Leu Val Asp Ala Leu Asp Thr Phe Ile Pro Glu Pro Thr Arg
20 25 30
Asp Val Asp Arg Pro Phe Leu Met Pro Val Glu Asp Val Phe Ser Ile
35 40 45
Ser Gly
50
<210>622
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Pseudomonas spp.
<400>622
Ala Lys Glu Lys Phe Glu Arg Ser Lys Pro His Val Asn Val Gly Thr
1 5 10 15
Ile Gly His Val Asp His Gly Lys Thr Thr
20 25
<210>623
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Pseudomonas spp.
<400>623
Met Ala Leu Glu Gly Lys Asp Asp Asn Glu Met Gly Thr Thr Ala Val
1 5 10 15
Lys Lys Leu Val Glu Thr Leu Asp Ser Tyr Ile Pro Glu Pro Glu Arg
20 25 30
Ala Ile Asp Lys Pro Phe Leu Met Pro Ile Glu Asp Val Phe Ser Ile
35 40 45
Ser Gly
50
<210>624
<211>18
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis lyrata
<400>624
Gly Ile Thr Gly Ile Asn Val His Pro Lys Lys Arg Glu Phe Lys Gly
1 5 10 15
Arg Ala
<210>625
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis lyrata
<400>625
Thr Thr Lys Gly His Asp Val His Gly Ile Thr Gly Ile Asn Val His
1 5 10 15
Pro Lys Lys Arg Glu Phe Lys Gly Arg Ala
20 25
<210>626
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis lyrata
<400>626
Gly Thr Ile Ser Phe Val Asp Glu Val Ala Leu Leu Phe Pro Leu Glu
1 5 10 15
Thr Gln Arg Thr Pro Ile Pro Ile Tyr Ser Asp Val Ser Asp Met Leu
20 25 30
Glu Tyr Ile Lys Asp Val Trp Lys Asn Glu Gly Arg Lys Val Asn Pro
35 40 45
Lys Glu
50
<210>627
<211>18
<212>PRT/Белок
<213>Euglena gracilis
<400>627
Gly Ile Thr Gly Ile Asn Ile His Pro Lys Thr Arg Glu Phe Lys Gln
1 5 10 15
Arg Ala
<210>628
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Euglena gracilis
<400>628
Thr Thr Lys Gly His Asp Val His Gly Ile Thr Gly Ile Asn Ile His
1 5 10 15
Pro Lys Thr Arg Glu Phe Lys Gln Arg Ala
20 25
<210>629
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Euglena gracilis
<400>629
Gly Thr Ile Ser Leu Val Asp Glu Ile Ala Met Leu Phe Asp Lys Glu
1 5 10 15
Thr Asp Arg Thr Pro Thr Pro Ile Tyr Ser Asp Val Gln Asp Met Leu
20 25 30
Asn Leu Ile Lys Asp Val Trp Lys Asn Glu Gly Lys Thr Ile Lys Pro
35 40 45
Asn Lys
50
<210>630
<211>18
<212>PRT/Белок
<213>Acidovorax avenae
<400>630
Gly Ile Thr Gly Val Asn Val His Pro Lys Thr Arg Glu Phe Lys Gly
1 5 10 15
Lys Ala
<210>631
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Acidovorax avenae
<400>631
Thr Thr Lys Gly His Asp Val His Gly Ile Thr Gly Val Asn Val His
1 5 10 15
Pro Lys Thr Arg Glu Phe Lys Gly Lys Ala
20 25
<210>632
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Acidovorax spp.
<400>632
Gly Ser Ile Ser Phe Val Asp Glu Val Pro Met Leu Phe Ala Gly Asp
1 5 10 15
Val Ala Arg Glu Pro Thr Pro Ile Tyr Thr Asp Leu Ala Glu Ala Leu
20 25 30
Lys Asp Ile Ala Gln Glu Gly Leu Pro Gly Lys Asp Gly Glu Leu Ala
35 40 45
Leu Lys
50
<210>633
<211>18
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>633
Gly Ile Thr Gly Ile Asn Val His Pro Lys Ser Arg Glu Phe Lys Ala
1 5 10 15
Lys Ala
<210>634
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>634
Thr Thr Lys Gly His Asp Val His Gly Ile Thr Gly Ile Asn Val His
1 5 10 15
Pro Lys Ser Arg Glu Phe Lys Ala Lys Ala
20 25
<210>635
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus cereus
<400>635
Gly Ile Thr Ser Phe Val Asp Glu Ile Pro Met Leu Phe Pro Lys Asp
1 5 10 15
Thr Glu Arg Glu Pro Thr Pro Ile Tyr Ala Asp Val Glu Ala Met Leu
20 25 30
Glu Ile Ile Lys Glu Glu Trp Glu Ala Glu Gly Gln Leu Ala Lys Leu
35 40 45
Ala Ser
50
<210>636
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Burkholderia spp.
<400>636
Thr Thr Lys Gly His Asp Val His Gly Ile Thr Gly Val Asn Val His
1 5 10 15
Pro Lys Thr Arg Glu Phe Lys Gly Lys Ala
20 25
<210>637
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Burkholderia spp.
<400>637
Gly Ser Ile Ser Phe Val Asp Glu Val Pro Met Leu Phe Ala Gly Asp
1 5 10 15
Val Ala Arg Glu Pro Thr Pro Ile Tyr Thr Asp Leu Ala Asp Ala Leu
20 25 30
Asn Met Ile Ala Val Glu Gly Leu Glu Gly Thr Asp Gly Glu Leu Ala
35 40 45
Leu Lys
50
<210>638
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Xanthomonas campestris
<400>638
Gly Ser Ile Ser Phe Val Asp Glu Val Pro Met Leu Phe Pro Arg Asp
1 5 10 15
Val Asp Arg Thr Pro Glu Pro Ile Phe Thr Asp Leu Ala Asp Val Leu
20 25 30
Lys Leu Ile Ala Pro Val Gly Ile Glu Ser Gln Asp Gly Asp Leu Ala
35 40 45
Leu Arg
50
<210>639
<211>26
<212>PRT/Белок
<213>Pseudomonas spp.
<400>639
Thr Thr Lys Gly His Asp Val His Gly Ile Thr Gly Val Asn Val His
1 5 10 15
Pro Lys Ser Arg Glu Phe Lys Glu Lys Ala
20 25
<210>640
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Pseudomonas spp.
<400>640
Gly Ser Ile Ser Phe Val Asp Glu Ile Pro Met Leu Phe Pro Lys Asp
1 5 10 15
Ile Ala Arg Glu Pro Glu Pro Ile Tyr Ser Asp Leu Thr Glu Val Leu
20 25 30
Lys Lys Val Ala Thr Thr Gly Met Glu Asn Asp Asp Lys Gly Glu Leu
35 40 45
Ala Met
50
<210>641
<211>54
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>641
Met Ser Thr Ala Thr Phe Val Asp Ile Ile Ile Ala Ile Leu Leu Pro
1 5 10 15
Pro Leu Gly Val Phe Leu Arg Phe Gly Cys Gly Val Glu Phe Trp Ile
20 25 30
Cys Leu Val Leu Thr Leu Leu Gly Tyr Ile Pro Gly Ile Ile Tyr Ala
35 40 45
Ile Tyr Val Leu Thr Lys
50
<210>642
<211>54
<212>PRT/Белок
<213>Citrus clementina
<400>642
Met Gly Ser Glu Thr Phe Leu Glu Val Ile Leu Ala Ile Leu Leu Pro
1 5 10 15
Pro Val Gly Val Phe Leu Arg Tyr Gly Cys Gly Val Glu Phe Trp Ile
20 25 30
Cys Leu Leu Leu Thr Val Leu Gly Tyr Ile Pro Gly Ile Ile Tyr Ala
35 40 45
Ile Tyr Val Leu Val Gly
50
<210>643
<211>54
<212>PRT/Белок
<213>Citrus trifoliata
<400>643
Met Gly Thr Ala Thr Cys Val Asp Ile Ile Leu Ala Val Ile Leu Pro
1 5 10 15
Pro Leu Gly Val Phe Leu Lys Phe Gly Cys Lys Ala Glu Phe Trp Ile
20 25 30
Cys Leu Leu Leu Thr Ile Leu Gly Tyr Ile Pro Gly Ile Ile Tyr Ala
35 40 45
Val Tyr Val Ile Thr Lys
50
<210>644
<211>58
<212>PRT/Белок
<213>Citrus sinensis
<400>644
Met Ala Asp Glu Gly Thr Ala Thr Cys Ile Asp Ile Ile Leu Ala Ile
1 5 10 15
Ile Leu Pro Pro Leu Gly Val Phe Leu Lys Phe Gly Cys Lys Val Glu
20 25 30
Phe Trp Ile Cys Leu Leu Leu Thr Ile Phe Gly Tyr Ile Pro Gly Ile
35 40 45
Ile Tyr Ala Val Tyr Ala Ile Thr Lys Asn
50 55
<210>645
<211>58
<212>PRT/Белок
<213>Citrus sinensis
<400>645
Met Ala Asp Gly Ser Thr Ala Thr Cys Val Asp Ile Leu Leu Ala Val
1 5 10 15
Ile Leu Pro Pro Leu Gly Val Phe Leu Lys Phe Gly Cys Lys Ala Glu
20 25 30
Phe Trp Ile Cys Leu Leu Leu Thr Ile Leu Gly Tyr Ile Pro Gly Ile
35 40 45
Ile Tyr Ala Val Tyr Ala Ile Thr Lys Lys
50 55
<210>646
<211>104
<212>PRT/Белок
<213>Citrus clementina
<400>646
Phe Tyr Lys Gln Lys Tyr Gln Val Gln Ile Thr Lys Ala Val Thr Gln
1 5 10 15
Asn Pro Lys His Phe Phe Asn Gln Ser Ser Cys Phe Leu Thr Leu Asn
20 25 30
Phe Ile Leu Phe His Phe Thr Leu Phe Lys Asn Gln Ser Lys Met Ala
35 40 45
Asp Gly Ser Thr Ala Thr Cys Val Asp Ile Leu Leu Ala Val Ile Leu
50 55 60
Pro Pro Leu Gly Val Phe Leu Lys Phe Gly Cys Lys Ala Glu Phe Trp
65 70 75 80
Ile Cys Leu Leu Leu Thr Ile Leu Gly Tyr Ile Pro Gly Ile Ile Tyr
85 90 95
Ala Val Tyr Ala Ile Thr Lys Lys
100
<210>647
<211>54
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis thaliana
<400>647
Met Ser Thr Ala Thr Phe Val Asp Ile Ile Ile Ala Ile Leu Leu Pro
1 5 10 15
Pro Leu Gly Val Phe Leu Arg Phe Gly Cys Gly Val Glu Phe Trp Ile
20 25 30
Cys Leu Val Leu Thr Leu Leu Gly Tyr Ile Pro Gly Ile Ile Tyr Ala
35 40 45
Ile Tyr Val Leu Thr Lys
50
<210>648
<211>54
<212>PRT/Белок
<213>Camelina sativa
<400>648
Met Ser Thr Ala Thr Phe Val Asp Ile Ile Ile Ala Val Leu Leu Pro
1 5 10 15
Pro Leu Gly Val Phe Leu Arg Phe Gly Cys Gly Val Glu Phe Trp Ile
20 25 30
Cys Leu Val Leu Thr Leu Leu Gly Tyr Ile Pro Gly Ile Ile Tyr Ala
35 40 45
Ile Tyr Val Leu Thr Lys
50
<210>649
<211>54
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis lyrata
<400>649
Met Gly Thr Ala Thr Cys Val Asp Ile Ile Ile Ala Ile Leu Leu Pro
1 5 10 15
Pro Leu Gly Val Phe Leu Arg Phe Gly Cys Gly Val Glu Phe Trp Ile
20 25 30
Cys Leu Val Leu Thr Leu Leu Gly Tyr Ile Pro Gly Ile Leu Tyr Ala
35 40 45
Leu Tyr Val Leu Thr Lys
50
<210>650
<211>52
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>650
Arg Thr Cys Glu Ser Gln Ser His Arg Phe Lys Gly Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Asp Ser Asn Cys Ala Thr Val Cys Leu Thr Glu Gly Phe Ser Gly Gly
20 25 30
Asp Cys Arg Gly Phe Arg Arg Arg Cys Arg Cys Thr Arg Pro Cys Val
35 40 45
Phe Asp Glu Lys
50
<210>651
<211>47
<212>PRT/Белок
<213>Citrus sinensis
<400>651
Arg Val Cys Gln Ser Gln Ser His His Phe His Gly Ala Cys Phe Ser
1 5 10 15
His His Asn Cys Ala Phe Val Cys Arg Asn Glu Gly Phe Ser Gly Gly
20 25 30
Lys Cys Arg Gly Val Arg Arg Arg Cys Phe Cys Ser Lys Leu Cys
35 40 45
<210>652
<211>46
<212>PRT/Белок
<213>Avena sativa
<400>652
Lys Ser Cys Cys Lys Asp Ile Met Ala Arg Asn Cys Tyr Asn Val Cys
1 5 10 15
Arg Ile Pro Gly Thr Pro Arg Pro Val Cys Ala Thr Thr Cys Arg Cys
20 25 30
Lys Ile Ile Ser Gly Asn Lys Cys Pro Lys Asp Tyr Pro Lys
35 40 45
<210>653
<211>52
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>653
Arg Thr Cys Glu Ser Gln Ser His Arg Phe Lys Gly Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Asp Ser Asn Cys Ala Thr Val Cys Leu Thr Glu Gly Phe Ser Gly Gly
20 25 30
Asp Cys Arg Gly Phe Arg Arg Arg Cys Arg Cys Thr Arg Pro Cys Val
35 40 45
Phe Asp Glu Lys
50
<210>654
<211>75
<212>PRT/Белок
<213>Citrus sinensis
<400>654
Met Asp Ser Arg Ser Phe Gly Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Ile Leu
1 5 10 15
Leu Thr Ser Gln Met Thr Val Leu Gln Thr Glu Ala Arg Leu Cys Glu
20 25 30
Ser Gln Ser His Arg Phe His Gly Thr Cys Val Arg Ser His Asn Cys
35 40 45
Asp Leu Val Cys Arg Thr Glu Gly Phe Thr Gly Gly Arg Cys Arg Gly
50 55 60
Phe Arg Arg Arg Cys Phe Cys Thr Arg Ile Cys
65 70 75
<210>655
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Citrus paradise
<400>655
Met Lys Ser Phe Phe Gly Ile Phe Leu Leu Leu Leu Ile Leu Phe Ala
1 5 10 15
Ser Gln Glu Ile Met Val Pro Ala Glu Gly Arg Val Cys Gln Ser Gln
20 25 30
Ser His His Phe His Gly Ala Cys Phe Ser His His Asn Cys Ala Phe
35 40 45
Val Cys Arg Asn Glu Gly Phe Ser Gly Gly Lys Cys Arg Gly Val Arg
50 55 60
Arg Arg Cys Phe Cys Ser Lys Leu Cys
65 70
<210>656
<211>72
<212>PRT/Белок
<213>Citrus clementina
<400>656
Met Lys Ser Phe Phe Gly Ile Phe Leu Leu Leu Leu Ile Leu Phe Ala
1 5 10 15
Ser Gln Met Met Val Pro Ala Glu Gly Arg Val Cys Gln Ser Gln Ser
20 25 30
His His Phe His Gly Ala Cys Phe Ser His His Asn Cys Ala Phe Val
35 40 45
Cys Arg Asn Glu Gly Phe Ser Gly Gly Lys Cys Arg Gly Ala Arg Arg
50 55 60
Arg Cys Phe Cys Ser Lys Leu Cys
65 70
<210>657
<211>73
<212>PRT/Белок
<213>Citrus clementina
<400>657
Met Lys Ser Phe Phe Gly Ile Phe Leu Leu Leu Leu Ile Leu Phe Ala
1 5 10 15
Ser Gln Glu Met Met Val Pro Ala Glu Gly Arg Val Cys Gln Ser Gln
20 25 30
Ser His His Phe His Gly Ala Cys Phe Ser His His Asn Cys Ala Phe
35 40 45
Val Cys Arg Asn Glu Gly Phe Ser Gly Gly Lys Cys Arg Gly Ala Arg
50 55 60
Arg Arg Cys Phe Cys Ser Lys Leu Cys
65 70
<210>658
<211>72
<212>PRT/Белок
<213>Citrus clementina
<400>658
Met Lys Ser Phe Phe Gly Ile Phe Leu Leu Leu Leu Ile Leu Phe Ala
1 5 10 15
Ser Gln Met Met Val Pro Ala Glu Gly Arg Val Cys Gln Ser Gln Ser
20 25 30
His His Phe His Gly Ala Cys Phe Ser His His Asn Cys Ala Phe Val
35 40 45
Cys Arg Asn Glu Gly Phe Ser Gly Gly Lys Cys Arg Gly Ala Arg Arg
50 55 60
Arg Cys Phe Cys Ser Lys Leu Cys
65 70
<210>659
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Nicotiana benthamiana
<400>659
Met Ala Asn Ser Met Arg Phe Phe Ala Thr Val Leu Leu Leu Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Met Ala Thr Glu Met Gly Pro Met Thr Ile Ala Glu Ala Arg
20 25 30
Thr Cys Glu Ser Gln Ser His Arg Phe Lys Gly Pro Cys Ser Arg Asp
35 40 45
Ser Asn Cys Ala Thr Val Cys Leu Thr Glu Gly Phe Ser Gly Gly Asp
50 55 60
Cys Arg Gly Phe Arg Arg Arg Cys Phe Cys Thr Arg Pro Cys
65 70 75
<210>660
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Nicotiana sylvestris
<400>660
Met Ala Lys Ser Met Arg Phe Phe Ala Thr Val Leu Leu Leu Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Met Ala Thr Glu Met Gly Pro Thr Thr Ile Ala Glu Ala Arg
20 25 30
Thr Cys Glu Ser Gln Ser His Arg Phe Lys Gly Pro Cys Ser Arg Asp
35 40 45
Ser Asn Cys Ala Thr Val Cys Leu Thr Glu Gly Phe Ser Gly Gly Asp
50 55 60
Cys Arg Gly Phe Arg Arg Arg Cys Phe Cys Thr Arg Pro Cys
65 70 75
<210>661
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Nicotiana tabacum
<400>661
Met Ala Asn Ser Met Arg Phe Phe Ala Thr Val Leu Leu Leu Thr Leu
1 5 10 15
Leu Val Met Ala Thr Glu Met Gly Pro Met Thr Ile Ala Glu Ala Arg
20 25 30
Thr Cys Glu Ser Gln Ser His Arg Phe Lys Gly Pro Cys Ser Arg Asp
35 40 45
Ser Asn Cys Ala Thr Val Cys Leu Thr Glu Gly Phe Ser Gly Gly Asp
50 55 60
Cys Arg Gly Phe Arg Arg Arg Cys Phe Cys Thr Arg Pro Cys
65 70 75
<210>662
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Nicotiana tomentosiformis
<400>662
Met Ala Asn Ser Met Arg Phe Phe Ala Thr Val Leu Leu Ile Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Met Ala Thr Glu Met Gly Pro Met Thr Ile Ala Glu Ala Arg
20 25 30
Thr Cys Glu Ser Gln Ser His Arg Phe Lys Gly Pro Cys Ser Arg Asp
35 40 45
Ser Asn Cys Ala Thr Val Cys Leu Thr Glu Gly Phe Ser Gly Gly Asp
50 55 60
Cys Arg Gly Phe Arg Arg Arg Cys Phe Cys Thr Arg Pro Cys
65 70 75
<210>663
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Nicotiana tabacum
<400>663
Met Ala Asn Ser Met Arg Phe Phe Ala Thr Val Leu Leu Ile Ala Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Ala Thr Glu Met Gly Pro Met Thr Ile Ala Glu Ala Arg
20 25 30
Thr Cys Glu Ser Gln Ser His Arg Phe Lys Gly Pro Cys Ser Arg Asp
35 40 45
Ser Asn Cys Ala Thr Val Cys Leu Thr Glu Gly Phe Ser Gly Gly Asp
50 55 60
Cys Arg Gly Phe Arg Arg Arg Cys Phe Cys Thr Arg Pro Cys
65 70 75
<210>664
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Nicotiana alata
<400>664
Met Ala Asn Ser Met Arg Phe Phe Ala Thr Val Leu Leu Leu Thr Leu
1 5 10 15
Leu Phe Met Ala Thr Glu Met Gly Pro Met Thr Ile Ala Glu Ala Arg
20 25 30
Thr Cys Glu Ser Gln Ser His Arg Phe Lys Gly Pro Cys Ala Arg Asp
35 40 45
Ser Asn Cys Ala Thr Val Cys Leu Thr Glu Gly Phe Ser Gly Gly Asp
50 55 60
Cys Arg Gly Phe Arg Arg Arg Cys Phe Cys Thr Arg Pro Cys
65 70 75
<210>665
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Avena sativa
<400>665
Met Gly Ser Ile Lys Gly Leu Lys Ser Val Val Ile Cys Val Leu Val
1 5 10 15
Leu Gly Ile Val Leu Glu Gln Val Gln Val Glu Gly Lys Ser Cys Cys
20 25 30
Lys Asp Ile Met Ala Arg Asn Cys Tyr Asn Val Cys Arg Ile Pro Gly
35 40 45
Thr Pro Arg Pro Val Cys Ala Thr Thr Cys Arg Cys Lys Ile Ile Ser
50 55 60
Gly Asn Lys Cys Pro Lys Asp Tyr Pro Lys Leu His Gly Asp Pro Asp
65 70 75 80
<210>666
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Avena sativa
<400>666
Met Gly Ser Ile Lys Gly Leu Lys Ser Val Val Ile Cys Val Leu Val
1 5 10 15
Leu Gly Ile Val Leu Glu His Val Gln Val Glu Gly Lys Ser Cys Cys
20 25 30
Lys Asp Thr Thr Ala Arg Asn Cys Tyr Asn Val Cys Arg Ile Pro Gly
35 40 45
Thr Pro Arg Pro Val Cys Ala Thr Thr Cys Arg Cys Lys Ile Ile Ser
50 55 60
Gly Asn Lys Cys Pro Lys Asp Tyr Pro Lys Leu His Gly Asp Leu Asp
65 70 75 80
<210>667
<211>112
<212>PRT/Белок
<213>Tulipa gesneriana
<400>667
Leu Gly Leu Val Val Ala Gln Thr Gln Val Asp Ala Lys Ser Cys Cys
1 5 10 15
Pro Ser Thr Ala Ala Arg Asn Cys Tyr Asn Val Cys Arg Phe Pro Gly
20 25 30
Thr Pro Arg Pro Val Cys Ala Ala Thr Cys Gly Cys Lys Ile Ile Thr
35 40 45
Gly Thr Lys Cys Pro Pro Asp Tyr Pro Lys Leu Gly Trp Ser Thr Phe
50 55 60
Gln Asn Ser Asp Val Ala Asp Lys Ala Leu Asp Val Val Asp Glu Ala
65 70 75 80
Leu His Val Ala Lys Glu Val Met Lys Glu Ala Val Glu Arg Cys Asn
85 90 95
Asn Ala Cys Ser Glu Val Cys Thr Lys Gly Ser Tyr Ala Val Thr Ala
100 105 110
<210>668
<211>75
<212>PRT/Белок
<213>Vitis vinifera
<400>668
Met Glu Arg Lys Ser Leu Gly Phe Phe Phe Phe Leu Leu Leu Ile Leu
1 5 10 15
Leu Ala Ser Gln Glu Met Val Val Pro Ser Glu Ala Arg Val Cys Glu
20 25 30
Ser Gln Ser His Lys Phe Glu Gly Ala Cys Met Gly Asp His Asn Cys
35 40 45
Ala Leu Val Cys Arg Asn Glu Gly Phe Ser Gly Gly Lys Cys Lys Gly
50 55 60
Leu Arg Arg Arg Cys Phe Cys Thr Lys Leu Cys
65 70 75
<210>669
<211>74
<212>PRT/Белок
<213>Vitis vinifera
<400>669
Met Glu Arg Lys Ser Leu Gly Phe Phe Phe Phe Leu Leu Leu Ile Leu
1 5 10 15
Leu Ala Ser Gln Met Val Val Pro Ser Glu Ala Arg Val Cys Glu Ser
20 25 30
Gln Ser His Lys Phe Glu Gly Ala Cys Met Gly Asp His Asn Cys Ala
35 40 45
Leu Val Cys Arg Asn Glu Gly Phe Ser Gly Gly Lys Cys Lys Gly Leu
50 55 60
Arg Arg Arg Cys Phe Cys Thr Lys Leu Cys
65 70
<210>670
<211>76
<212>PRT/Белок
<213>Citrus sinensis
<400>670
Met Glu Arg Ser Val Arg Leu Phe Ser Thr Val Leu Leu Val Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Ala Ser Glu Met Gly Leu Arg Ala Ala Glu Ala Arg Ile Cys
20 25 30
Glu Ser Gln Ser His Arg Phe Lys Gly Pro Cys Val Ser Lys Ser Asn
35 40 45
Cys Ala Ala Val Cys Gln Thr Glu Gly Phe His Gly Gly His Cys Arg
50 55 60
Gly Phe Arg Arg Arg Cys Phe Cys Thr Lys Arg Cys
65 70 75
<210>671
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Aesculus hippocastanum
<400>671
Leu Cys Asn Glu Arg Pro Ser Gln Thr Trp Ser Gly Asn Cys Gly Asn
1 5 10 15
Thr Ala His Cys Asp Lys Gln Cys Gln Asp Trp Glu Lys Ala Ser His
20 25 30
Gly Ala Cys His Lys Arg Glu Asn His Trp Lys Cys Phe Cys Tyr Phe
35 40 45
Asn Cys
50
<210>672
<211>81
<212>PRT/Белок
<213>Dacus carota
<400>672
Met Ala Lys Asn Ser Thr Ser Pro Val Ser Leu Phe Ala Ile Ser Leu
1 5 10 15
Ile Phe Phe Leu Leu Ala Asn Ser Gly Ser Ile Thr Glu Val Asp Gly
20 25 30
Lys Val Cys Glu Lys Pro Ser Leu Thr Trp Ser Gly Lys Cys Gly Asn
35 40 45
Thr Gln His Cys Asp Lys Gln Cys Gln Asp Trp Glu Gly Ala Lys His
50 55 60
Gly Ala Cys His Ser Arg Gly Gly Trp Lys Cys Phe Cys Tyr Phe Glu
65 70 75 80
Cys
<210>673
<211>49
<212>PRT/Белок
<213>Clitoria ternatea
<400>673
Asn Leu Cys Glu Arg Ala Ser Leu Thr Trp Thr Gly Asn Cys Gly Asn
1 5 10 15
Thr Gly His Cys Asp Thr Gln Cys Arg Asn Trp Glu Ser Ala Lys His
20 25 30
Gly Ala Cys His Lys Arg Gly Asn Trp Lys Cys Phe Cys Tyr Phe Asn
35 40 45
Cys
<210>674
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Dacus carota
<400>674
Met Ala Lys Lys Ser Ser Ser Phe Cys Leu Ser Ala Ile Phe Leu Val
1 5 10 15
Leu Leu Leu Val Ala Asn Thr Gly Met Val Arg Glu Val Asp Gly Ala
20 25 30
Leu Cys Glu Lys Pro Ser Leu Thr Trp Ser Gly Asn Cys Arg Asn Thr
35 40 45
Gln His Cys Asp Lys Gln Cys Gln Ser Trp Glu Gly Ala Lys His Gly
50 55 60
Ala Cys His Lys Arg Gly Asn Trp Lys Cys Phe Cys Tyr His Ala Cys
65 70 75 80
<210>675
<211>92
<212>PRT/Белок
<213>Bupleurum kaoi
<400>675
Met Ala Lys Lys Leu Asn Ala Val Thr Val Ser Ala Ile Phe Leu Val
1 5 10 15
Val Phe Leu Ile Ala Ser Tyr Ser Val Gly Ala Ala Lys Glu Ala Gly
20 25 30
Ala Glu Gly Glu Val Val Phe Pro Glu Gln Leu Cys Glu Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Thr Trp Ser Gly Asp Cys Lys Asn Thr Lys Asn Cys Asp Asn Gln
50 55 60
Cys Ile Gln Trp Glu Lys Ala Arg His Gly Ala Cys His Lys Arg Gly
65 70 75 80
Gly Lys Trp Met Cys Phe Cys Tyr Phe Asp Lys Cys
85 90
<210>676
<211>50
<212>PRT/Белок
<213>Dahlia merckii
<400>676
Glu Leu Cys Glu Lys Ala Ser Lys Thr Trp Ser Gly Asn Cys Gly Asn
1 5 10 15
Thr Gly His Cys Asp Asn Gln Cys Lys Ser Trp Glu Gly Ala Ala His
20 25 30
Gly Ala Cys His Val Arg Asn Gly Lys His Met Cys Phe Cys Tyr Phe
35 40 45
Asn Cys
50
<210>677
<211>108
<212>PRT/Белок
<213>Helianthus annuus
<400>677
Met Ala Lys Ile Ser Val Ala Phe Asn Ala Phe Leu Leu Leu Leu Phe
1 5 10 15
Val Leu Ala Ile Ser Glu Ile Gly Ser Val Lys Gly Glu Leu Cys Glu
20 25 30
Lys Ala Ser Gln Thr Trp Ser Gly Thr Cys Gly Lys Thr Lys His Cys
35 40 45
Asp Asp Gln Cys Lys Ser Trp Glu Gly Ala Ala His Gly Ala Cys His
50 55 60
Val Arg Asp Gly Lys His Met Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys Ser Lys
65 70 75 80
Ala Gln Lys Leu Ala Gln Asp Lys Leu Arg Ala Glu Glu Leu Ala Lys
85 90 95
Glu Lys Ile Glu Pro Glu Lys Ala Thr Ala Lys Pro
100 105
<210>678
<211>117
<212>PRT/Белок
<213>Cynara cardunculus
<400>678
Met Ala Lys Asn Ser Val Ala Phe Phe Ala Leu Leu Leu Leu Ile Cys
1 5 10 15
Ile Leu Thr Ile Ser Glu Phe Ala Val Val Lys Gly Glu Leu Cys Glu
20 25 30
Lys Ala Ser Lys Thr Trp Ser Gly Asn Cys Gly Asn Thr Arg His Cys
35 40 45
Asp Asp Gln Cys Lys Ala Trp Glu Gly Ala Ala His Gly Ala Cys His
50 55 60
Thr Arg Asn Lys Lys His Met Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys Pro Lys
65 70 75 80
Ala Glu Lys Leu Ala Gln Asp Lys Leu Lys Ala Glu Glu Leu Ala Arg
85 90 95
Asp Lys Val Glu Ala Lys Glu Val Pro His Phe Lys His Pro Ile Glu
100 105 110
Pro Ile His His Pro
115
<210>679
<211>117
<212>PRT/Белок
<213>Cynara cardunculus
<400>679
Met Ala Lys Gln Trp Val Ser Phe Phe Ala Leu Ala Phe Ile Val Phe
1 5 10 15
Val Leu Ala Ile Ser Glu Thr Gln Thr Val Lys Gly Glu Leu Cys Glu
20 25 30
Lys Ala Ser Lys Thr Trp Ser Gly Asn Cys Gly Asn Thr Lys His Cys
35 40 45
Asp Asp Gln Cys Lys Ser Trp Glu Gly Ala Ala His Gly Ala Cys His
50 55 60
Val Arg Asn Gly Lys His Met Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Ser Cys Ala
65 70 75 80
Glu Ala Asp Lys Leu Ser Glu Asp Gln Ile Glu Ala Gly Lys Leu Ala
85 90 95
Phe Glu Lys Ala Glu Lys Leu Asp Arg Asp Val Lys Lys Ala Val Pro
100 105 110
Asn Val Asp His Pro
115
<210>680
<211>94
<212>PRT/Белок
<213>Daucus carota
<400>680
Met Ala Gln Lys Val Asn Ser Ala Leu Ile Phe Ser Ala Ile Phe Val
1 5 10 15
Leu Phe Leu Val Ala Ser Tyr Ser Val Thr Val Ala Glu Gly Ala Arg
20 25 30
Ala Gly Ala Glu Gly Glu Val Val Tyr Pro Glu Ala Leu Cys Glu Arg
35 40 45
Ala Ser Gln Thr Trp Thr Gly Lys Cys Gln His Thr Asp His Cys Asp
50 55 60
Asn Gln Cys Ile Gln Trp Glu Asn Ala Arg His Gly Ala Cys His Lys
65 70 75 80
Arg Gly Gly Asn Trp Lys Cys Phe Cys Tyr Phe Asp His Cys
85 90
<210>681
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis lyrata
<400>681
Met Ala Ser Ser Tyr Thr Leu Met Leu Phe Leu Cys Leu Ser Ile Phe
1 5 10 15
Leu Ile Ala Ser Thr Glu Met Met Ala Val Glu Ala Arg Ile Cys Glu
20 25 30
Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Gly Asn Thr Arg Gly Cys
35 40 45
Asp Ser Gln Cys Lys Ser Trp Glu Arg Ala Ser His Gly Ala Cys His
50 55 60
Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>682
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Parthenium hysterophorus
<400>682
Met Ala Lys Ser Ser Thr Ser Tyr Leu Val Phe Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Val Val Ala Ile Ser Glu Ile Ala Ser Val Asn Gly Lys Val Cys Glu
20 25 30
Lys Pro Ser Lys Thr Trp Phe Gly Asn Cys Lys Asp Thr Glu Lys Cys
35 40 45
Asp Lys Arg Cys Met Glu Trp Glu Gly Ala Lys His Gly Ala Cys His
50 55 60
Gln Arg Glu Ser Lys Tyr Met Cys Phe Cys Tyr Phe Asp Cys Asp Pro
65 70 75 80
<210>683
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis thaliana
<400>683
Met Ala Ser Ser Tyr Thr Leu Met Leu Phe Leu Cys Leu Ser Ile Phe
1 5 10 15
Leu Ile Ala Ser Thr Glu Met Met Ala Val Glu Gly Arg Ile Cys Glu
20 25 30
Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Gly Asn Thr Arg Gly Cys
35 40 45
Asp Ser Gln Cys Lys Arg Trp Glu Arg Ala Ser His Gly Ala Cys His
50 55 60
Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>684
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Eutrema salsugineum
<400>684
Met Ala Ser Ser Tyr Thr Leu Leu Leu Phe Val Cys Leu Ser Ile Phe
1 5 10 15
Phe Ile Ala Ser Thr Glu Met Met Met Val Glu Gly Arg Val Cys Glu
20 25 30
Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Gly Asn Thr Arg Gly Cys
35 40 45
Asp Ser Gln Cys Lys Arg Trp Glu Arg Ala Ser His Gly Ala Cys His
50 55 60
Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>685
<211>82
<212>PRT/Белок
<213>Vitis vinifera
<400>685
Met Ala Lys Leu Leu Gly Tyr Leu Leu Ser Tyr Ala Leu Ser Phe Leu
1 5 10 15
Thr Leu Phe Ala Leu Leu Val Ser Thr Glu Met Val Met Leu Glu Ala
20 25 30
Lys Val Cys Gln Arg Pro Ser Lys Thr Trp Ser Gly Phe Cys Gly Ser
35 40 45
Ser Lys Asn Cys Asp Arg Gln Cys Lys Asn Trp Glu Gly Ala Lys His
50 55 60
Gly Ala Cys His Ala Lys Phe Pro Gly Val Ala Cys Phe Cys Tyr Phe
65 70 75 80
Asn Cys
<210>686
<211>82
<212>PRT/Белок
<213>Corchorus olitorius
<400>686
Met Ala Lys Ser Leu Ser Ser Phe Ala Thr Phe Leu Ala Leu Leu Cys
1 5 10 15
Leu Phe Phe Leu Leu Ser Thr Pro Asn Glu Met Lys Met Ala Glu Ala
20 25 30
Lys Ile Cys Glu Lys Arg Ser Gln Thr Trp Ser Gly Trp Cys Gly Asn
35 40 45
Ser Ser His Cys Asp Arg Gln Cys Lys Asn Trp Glu Asn Ala Arg His
50 55 60
Gly Ser Cys His Ala Asp Gly Leu Gly Trp Ala Cys Phe Cys Tyr Phe
65 70 75 80
Asn Cys
<210>687
<211>58
<212>PRT/Белок
<213>Corchorus olitorius
<400>687
Met Glu Met Lys Met Ala Glu Gly Lys Ile Cys Glu Lys Arg Ser Gln
1 5 10 15
Thr Trp Ser Gly Trp Cys Gly Asn Ser Ser His Cys Asp Arg Gln Cys
20 25 30
Lys Asn Trp Glu Asn Ala Arg His Gly Ser Cys His Ala Asp Gly Leu
35 40 45
Gly Trp Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
50 55
<210>688
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Camelina sativa
<400>688
Met Ala Ser Ser Leu Lys Leu Met Leu Phe Leu Cys Leu Ser Ile Phe
1 5 10 15
Leu Ile Ala Ser Thr Glu Met Met Thr Val Glu Gly Arg Thr Cys Glu
20 25 30
Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Gly Asn Thr Arg Gly Cys
35 40 45
Asp Ser Gln Cys Arg Ser Trp Glu Gly Ala Ser His Gly Ala Cys His
50 55 60
Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>689
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Cucumis sativus
<400>689
Met Ala Lys Val Val Gly Asn Ser Ala Lys Met Ile Val Ala Leu Leu
1 5 10 15
Phe Leu Leu Ala Leu Met Leu Ser Met Asn Glu Lys Gln Gly Val Val
20 25 30
Glu Ala Lys Val Cys Glu Arg Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Trp Cys
35 40 45
Gly Asn Thr Lys His Cys Asp Arg Gln Cys Lys Asn Trp Glu Gly Ala
50 55 60
Thr His Gly Ala Cys His Ala Gln Phe Pro Gly Arg Ala Cys Phe Cys
65 70 75 80
Tyr Phe Asn Cys
<210>690
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Cynara cardunculus
<400>690
Met Ile Asp Ala Phe Asn Tyr Lys Gln Phe Ser Thr Val Lys Gly Lys
1 5 10 15
Ile Cys Glu Lys Pro Ser Lys Thr Trp Phe Gly Lys Cys Gln Asp Thr
20 25 30
Thr Lys Cys Asp Lys Gln Cys Ile Glu Trp Glu Asp Ala Lys His Gly
35 40 45
Ala Cys His Glu Arg Glu Ser Lys Leu Met Cys Phe Cys Tyr Tyr Asn
50 55 60
Cys Gly Pro Pro Lys Asn Thr Pro Pro Gly Thr Pro Pro Ser Pro Pro
65 70 75 80
<210>691
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Capsella rubella
<400>691
Met Ala Ser Ser Tyr Lys Leu Ile Leu Phe Leu Cys Leu Ser Ile Phe
1 5 10 15
Leu Ile Ala Ser Phe Glu Met Met Ala Val Glu Gly Arg Ile Cys Gln
20 25 30
Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Gly Asn Thr Arg Gly Cys
35 40 45
Asp Ser Gln Cys Lys Arg Trp Glu Arg Ala Ser His Gly Ala Cys His
50 55 60
Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>692
<211>56
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis thaliana
<400>692
Met Met Ala Val Glu Gly Arg Ile Cys Glu Arg Arg Ser Lys Thr Trp
1 5 10 15
Thr Gly Phe Cys Gly Asn Thr Arg Gly Cys Asp Ser Gln Cys Lys Arg
20 25 30
Trp Glu Arg Ala Ser His Gly Ala Cys His Ala Gln Phe Pro Gly Phe
35 40 45
Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
50 55
<210>693
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Brassica napus
<400>693
Met Ala Ser Ser Tyr Thr Arg Leu Leu Leu Leu Cys Leu Ser Ile Phe
1 5 10 15
Leu Ile Ala Ser Thr Glu Val Met Met Val Glu Gly Arg Val Cys Gln
20 25 30
Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Gly Asn Thr Arg Gly Cys
35 40 45
Asp Ser Gln Cys Lys Arg Trp Glu Arg Ala Ser His Gly Ala Cys His
50 55 60
Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>694
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Brassica rapa
<400>694
Met Ala Ser Ser Tyr Ala Arg Leu Leu Leu Leu Cys Leu Ser Ile Phe
1 5 10 15
Leu Ile Ala Ser Thr Glu Val Met Met Val Glu Gly Arg Val Cys Gln
20 25 30
Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Gly Asn Thr Arg Gly Cys
35 40 45
Asp Ser Gln Cys Lys Arg Trp Glu Arg Ala Ser His Gly Ala Cys His
50 55 60
Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>695
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Camelina sativa
<400>695
Met Ala Ser Ser Leu Lys Leu Met Leu Phe Leu Cys Leu Ser Ile Phe
1 5 10 15
Leu Ile Ala Ser Thr Glu Met Met Thr Val Glu Gly Arg Thr Cys Glu
20 25 30
Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Gly Asn Thr Arg Gly Cys
35 40 45
Asp Ser Gln Cys Arg Arg Trp Glu His Ala Ser His Gly Ala Cys His
50 55 60
Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>696
<211>77
<212>PRT/Белок
<213>Brassica napus
<400>696
Met Ala Ser Tyr Thr Arg Leu Leu Leu Leu Cys Leu Ser Ile Phe Leu
1 5 10 15
Ile Ala Ser Thr Glu Val Met Met Val Glu Gly Arg Val Cys Gln Arg
20 25 30
Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Gly Asn Thr Arg Gly Cys Asp
35 40 45
Ser Gln Cys Lys Arg Trp Glu Arg Ala Ser His Gly Ala Cys His Ala
50 55 60
Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>697
<211>56
<212>PRT/Белок
<213>Vitis vinifera
<400>697
Met Val Met Leu Glu Ala Lys Val Cys Gln Arg Pro Ser Lys Thr Trp
1 5 10 15
Ser Gly Phe Cys Gly Ser Ser Lys Asn Cys Asp Arg Gln Cys Lys Asn
20 25 30
Trp Glu Gly Ala Lys His Gly Ala Cys His Ala Lys Phe Pro Gly Val
35 40 45
Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
50 55
<210>698
<211>88
<212>PRT/Белок
<213>Brassica napus
<400>698
Met Thr Lys Ser Phe Ile Leu Val Ala Leu Leu Cys Ile Cys Phe Ile
1 5 10 15
Leu Leu Ser Pro Thr Glu Met Arg Leu Thr Leu Asn Ala Cys Leu Lys
20 25 30
Leu Ala Glu Ala Lys Ile Cys Glu Lys Tyr Ser Gln Thr Trp Ser Gly
35 40 45
Arg Cys Thr Lys Thr Ser His Cys Asp Arg Gln Cys Ile Asn Trp Glu
50 55 60
Asp Ala Arg His Gly Ala Cys His Gln Asp Lys His Gly Arg Ala Cys
65 70 75 80
Phe Cys Tyr Phe Asn Cys Lys Lys
85
<210>699
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Raphanus sativus
<400>699
Met Ala Ser Ser Tyr Thr Val Phe Leu Leu Leu Cys Leu Ser Ile Phe
1 5 10 15
Leu Ile Ala Ser Thr Glu Val Met Met Val Glu Gly Arg Val Cys Gln
20 25 30
Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Gly Asn Thr Arg Gly Cys
35 40 45
Asp Ser Gln Cys Lys Arg Trp Glu His Ala Ser His Gly Ala Cys His
50 55 60
Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>700
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Arabis alpine
<400>700
Met Ala Ser Ser Tyr Thr Leu Leu Leu Phe Leu Cys Leu Ser Ile Phe
1 5 10 15
Leu Ile Val Ser Thr Glu Met Met Met Val Glu Gly Arg Ile Cys Glu
20 25 30
Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Ala Asn Thr Arg Gly Cys
35 40 45
Asp Ser Gln Cys Lys Arg Trp Glu Arg Ala Ser His Gly Ala Cys His
50 55 60
Ala Gln Phe Pro Gly Val Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>701
<211>84
<212>PRT/Белок
<213>Cucumis melo
<400>701
Met Ala Lys Val Val Gly Asn Ser Ala Lys Met Ile Val Ala Phe Leu
1 5 10 15
Phe Leu Leu Ala Leu Thr Leu Ser Met Asn Glu Lys Gln Gly Val Val
20 25 30
Glu Ala Lys Val Cys Glu Arg Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Trp Cys
35 40 45
Gly Asp Thr Lys His Cys Asp Arg Gln Cys Lys Asn Trp Glu Gly Ala
50 55 60
Lys His Gly Ala Cys His Ala Gln Phe Pro Gly Arg Ala Cys Phe Cys
65 70 75 80
Tyr Phe Asn Cys
<210>702
<211>82
<212>PRT/Белок
<213>Erythranthe guttate
<400>702
Met Ala Ala Ser Leu Val Tyr Arg Leu Ser Ser Val Ile Leu Ile Val
1 5 10 15
Leu Leu Leu Phe Ile Met Leu Asn Asn Glu Val Met Val Val Glu Ser
20 25 30
Arg Leu Cys Glu Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Phe Cys Gly Ser
35 40 45
Ser Asn Asn Cys Asn Asn Gln Cys Arg Asn Trp Glu Arg Ala Ser His
50 55 60
Gly Ala Cys His Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe
65 70 75 80
Asn Cys
<210>703
<211>76
<212>PRT/Белок
<213>Sesamum indicum
<400>703
Met Ala Lys Phe Gln Val Ser Ser Thr Ile Phe Phe Ala Leu Phe Phe
1 5 10 15
Cys Phe Leu Leu Leu Ala Ser Asn Glu Ala Lys Ile Cys Gln Arg Met
20 25 30
Ser Lys Thr Trp Ser Gly Val Cys Leu Asn Ser Gly Asn Cys Asp Arg
35 40 45
Gln Cys Arg Asn Trp Glu Arg Ala Gln His Gly Ala Cys His Arg Arg
50 55 60
Gly Leu Gly Phe Ala Cys Leu Cys Tyr Phe Lys Cys
65 70 75
<210>704
<211>110
<212>PRT/Белок
<213>Eclipta prostrata
<400>704
Met Ala Lys Asn Ser Val Ala Phe Phe Ala Phe Leu Leu Ile Leu Phe
1 5 10 15
Val Leu Ala Ile Ser Glu Ile Gly Ser Val Lys Gly Glu Leu Cys Glu
20 25 30
Lys Ala Ser Gln Thr Trp Ser Gly Thr Cys Arg Ile Thr Ser His Cys
35 40 45
Asp Asn Gln Cys Lys Ser Trp Glu Gly Ala Ala His Gly Ala Cys His
50 55 60
Val Arg Gly Gly Lys His Met Cys Phe Cys Tyr Phe Ser His Cys Ala
65 70 75 80
Lys Ala Glu Lys Leu Thr Gln Asp Lys Leu Lys Ala Gly His Leu Val
85 90 95
Asn Glu Lys Ser Glu Ala Asp Gln Lys Val Pro Val Thr Pro
100 105 110
<210>705
<211>105
<212>PRT/Белок
<213>Cynara cardunculus
<400>705
Met Ala Lys Asn Thr Lys Val Ser Ala Phe Leu Phe Val Phe Leu Phe
1 5 10 15
Val Phe Phe Leu Val Val His Ser Val Thr Ala Phe Ala Ile Arg Phe
20 25 30
Lys Cys Phe Asp Thr Asp Met Leu Leu Lys Val Ile Ala Asp Met Val
35 40 45
Val Gly Met Lys Gly Ile Glu Lys Val Cys Arg Arg Arg Ser Lys Thr
50 55 60
Trp Ser Gly Tyr Cys Gly Asp Ser Lys His Cys Asp Gln Gln Cys Arg
65 70 75 80
Glu Trp Glu Gly Ala Glu His Gly Ala Cys His His Glu Gly Leu Gly
85 90 95
Arg Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
100 105
<210>706
<211>110
<212>PRT/Белок
<213>Ambrosia artemisiifolia
<400>706
Met Ala Ala Gly Leu Leu Val Phe Val Leu Ala Ile Ser Glu Ile Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Gly Lys Leu Cys Glu Lys Pro Ser Val Thr Trp Ser Gly
20 25 30
Lys Cys Lys Val Lys Gln Thr Asp Lys Cys Asp Lys Arg Cys Ile Glu
35 40 45
Trp Glu Gly Ala Lys His Gly Ala Cys His Lys Arg Asp Ser Lys Ala
50 55 60
Ser Cys Phe Cys Tyr Phe Asp Cys Asp Pro Thr Lys Asn Pro Gly Pro
65 70 75 80
Pro Pro Gly Ala Pro Lys Gly Lys Ala Pro Ala Pro Ser Pro Pro Ser
85 90 95
Gly Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu Gly Gly Gly Glu Arg
100 105 110
<210>707
<211>111
<212>PRT/Белок
<213>Ambrosia artemisiifolia
<400>707
Met Ala Ala Gly Leu Leu Val Phe Val Leu Ala Ile Ser Glu Ile Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Gly Lys Leu Cys Glu Lys Pro Ser Leu Thr Trp Ser Gly
20 25 30
Lys Cys Lys Val Lys Gln Thr Asp Lys Cys Asp Lys Arg Cys Ile Glu
35 40 45
Trp Glu Gly Ala Lys His Gly Ala Cys His Lys Arg Asp Ser Lys Ala
50 55 60
Thr Cys Phe Cys Tyr Phe Asp Cys Asp Pro Thr Lys Asn Pro Gly Pro
65 70 75 80
Pro Pro Gly Ala Pro Lys Gly Lys Ala Pro Ala Pro Ser Pro Pro Ser
85 90 95
Gly Gly Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly Gly Glu Gly Gly Glu Arg
100 105 110
<210>708
<211>79
<212>PRT/Белок
<213>Jatropha curcas
<400>708
Met Ala Lys Leu His Ser Ser Ala Leu Cys Phe Leu Ile Ile Phe Leu
1 5 10 15
Phe Leu Leu Val Ser Lys Glu Met Ala Val Thr Glu Ala Lys Leu Cys
20 25 30
Gln Arg Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Phe Cys Gly Asp Pro Gly Lys
35 40 45
Cys Asn Arg Gln Cys Arg Asn Trp Glu Gly Ala Ser His Gly Ala Cys
50 55 60
His Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Lys Cys
65 70 75
<210>709
<211>79
<212>PRT/Белок
<213>Nelumbo nucifera
<400>709
Met Ala Lys Ala Pro Lys Ser Val Ser Tyr Phe Ala Phe Phe Phe Ile
1 5 10 15
Leu Phe Leu Leu Ala Ser Ser Glu Ile Gln Lys Thr Lys Lys Leu Cys
20 25 30
Glu Arg Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Arg Cys Thr Lys Thr Gln Asn
35 40 45
Cys Asp Lys Gln Cys Lys Asp Trp Glu Tyr Ala Lys His Gly Ala Cys
50 55 60
His Gly Ser Trp Phe Asn Lys Lys Cys Tyr Cys Tyr Phe Asp Cys
65 70 75
<210>710
<211>82
<212>PRT/Белок
<213>Pyrus x bretschneideri
<400>710
Met Ala Lys Leu Leu Ser Arg Leu Ser Ile Pro Leu Ile Val Phe Val
1 5 10 15
Phe Leu Leu Ile Leu Leu Ala Ser Thr Glu Val Ala Met Val Glu Ala
20 25 30
Arg Ile Cys Gln Arg Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Phe Cys Ala Asn
35 40 45
Thr Gly Asn Cys Asn Arg Gln Cys Thr Asn Trp Glu Gly Ala Leu His
50 55 60
Gly Ala Cys His Ala Gln Phe Pro Gly Val Ala Cys Phe Cys Tyr Phe
65 70 75 80
Arg Cys
<210>711
<211>83
<212>PRT/Белок
<213>Ricinus communis
<400>711
Met Ala Lys Leu His Phe Pro Thr Leu Leu Cys Leu Phe Ile Phe Leu
1 5 10 15
Phe Leu Leu Val Ser Thr Glu Met Gln Val Thr Gln Ala Lys Val Cys
20 25 30
Gln Arg Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Phe Cys Gly Ser Thr Lys Asn
35 40 45
Cys Asp Arg Gln Cys Lys Asn Trp Glu Gly Ala Leu His Gly Ala Cys
50 55 60
His Ala Gln Phe Pro Gly Val Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Lys Cys Gly
65 70 75 80
Gly Glu Arg
<210>712
<211>91
<212>PRT/Белок
<213>Ambrosia artemisiifolia
<400>712
Lys Leu Cys Glu Lys Pro Ser Val Thr Trp Ser Gly Lys Cys Lys Val
1 5 10 15
Lys Gln Thr Asp Lys Cys Asp Lys Arg Cys Ile Glu Trp Glu Gly Ala
20 25 30
Lys His Gly Ala Cys His Lys Arg Asp Ser Lys Ala Ser Cys Phe Cys
35 40 45
Tyr Phe Asp Cys Asp Pro Thr Lys Asn Pro Gly Pro Pro Pro Gly Ala
50 55 60
Pro Lys Gly Lys Ala Pro Ala Pro Ser Pro Pro Ser Gly Gly Gly Ala
65 70 75 80
Pro Pro Pro Ser Gly Gly Glu Gly Gly Gly Asp
85 90
<210>713
<211>96
<212>PRT/Белок
<213>Ambrosia artemisiifolia
<400>713
Lys Leu Cys Glu Lys Pro Ser Val Thr Trp Ser Gly Asn Lys Val Lys
1 5 10 15
Gln Thr Asp Lys Cys Asp Lys Arg Cys Ile Glu Trp Glu Gly Ala Lys
20 25 30
His Gly Ala Cys His Lys Arg Asp Ser Lys Ala Ser Cys Phe Cys Tyr
35 40 45
Phe Asp Cys Asp Pro Thr Lys Asn Pro Gly Pro Pro Pro Gly Ala Pro
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Pro Ala Pro Ser Pro Pro Ser Gly Gly Gly Ala Pro
65 70 75 80
Pro Pro Ser Gly Gly Glu Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Arg Arg
85 90 95
<210>714
<211>82
<212>PRT/Белок
<213>Prunus mume
<400>714
Met Ala Lys Leu Leu Ser His Leu Leu Phe Tyr Pro Ile Leu Phe Leu
1 5 10 15
Phe Leu Phe Ile Phe Leu Ala Ser Thr Glu Val Ala Ile Leu Glu Ala
20 25 30
Arg Ile Cys Gln Arg Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Phe Cys Gly Asn
35 40 45
Thr Arg Asn Cys Asn Arg Gln Cys Arg Asn Trp Glu Gly Ala Leu Arg
50 55 60
Gly Ala Cys His Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe
65 70 75 80
Arg Cys
<210>715
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Corchorus olitorius
<400>715
Met Ala Lys Thr Leu Gln Leu Phe Ala Leu Phe Phe Ile Val Ile Leu
1 5 10 15
Leu Ala Asn Gln Glu Ile Pro Val Ala Glu Ala Lys Leu Cys Gln Lys
20 25 30
Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Ile Cys Ile Lys Thr Lys Asn Cys Asp
35 40 45
Asn Gln Cys Lys Lys Trp Glu Lys Ala Glu His Gly Ala Cys His Arg
50 55 60
Gln Gly Ile Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Gln Lys Lys Cys
65 70 75 80
<210>716
<211>81
<212>PRT/Белок
<213>Corchorus olitorius
<400>716
Met Ala Lys Phe Val Ser Thr Val Ala Leu Leu Phe Ala Leu Phe Ile
1 5 10 15
Leu Leu Ala Ser Phe Asp Glu Gly Met Met Pro Met Ala Glu Ala Lys
20 25 30
Val Cys Ser Lys Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Phe Cys Asn Ser Ser
35 40 45
Ala Asn Cys Asn Lys Gln Cys Arg Glu Trp Glu Asp Ala Lys His Gly
50 55 60
Ala Cys His Phe Glu Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn
65 70 75 80
Cys
<210>717
<211>76
<212>PRT/Белок
<213>Solanum pennellii
<400>717
Met Asn Ser Lys Val Ile Leu Ala Leu Leu Val Cys Phe Leu Leu Ile
1 5 10 15
Ala Ser Asn Glu Met Gln Gly Gly Glu Ala Lys Val Cys Gly Arg Arg
20 25 30
Ser Ser Thr Trp Ser Gly Leu Cys Leu Asn Thr Gly Asn Cys Asn Thr
35 40 45
Gln Cys Ile Lys Trp Glu His Ala Ser Ser Gly Ala Cys His Arg Asp
50 55 60
Gly Phe Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75
<210>718
<211>82
<212>PRT/Белок
<213>Fragaria vesca
<400>718
Met Ala Lys Leu Leu Gly Tyr His Leu Val Tyr Pro Ile Leu Phe Leu
1 5 10 15
Phe Ile Phe Leu Leu Leu Ala Ser Thr Glu Met Gly Met Leu Glu Ala
20 25 30
Arg Ile Cys Gln Arg Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Leu Cys Ala Asn
35 40 45
Thr Gly Asn Cys His Arg Gln Cys Arg Asn Trp Glu Gly Ala Gln Arg
50 55 60
Gly Ala Cys His Ala Gln Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe
65 70 75 80
Asn Cys
<210>719
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Corchorus capsularis
<400>719
Met Ala Lys Phe Val Ser Val Ala Leu Leu Leu Ala Leu Phe Ile Leu
1 5 10 15
Val Ala Ser Phe Asp Glu Gly Met Val Pro Met Ala Glu Ala Lys Leu
20 25 30
Cys Ser Lys Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Phe Cys Asn Ser Ser Ala
35 40 45
Asn Cys Asn Arg Gln Cys Arg Glu Trp Glu Asp Ala Lys His Gly Ala
50 55 60
Cys His Phe Glu Phe Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asp Cys
65 70 75 80
<210>720
<211>56
<212>PRT/Белок
<213>Solanum tuberosum
<400>720
Met Gln Gly Gly Glu Ala Arg Val Cys Glu Arg Arg Ser Ser Thr Trp
1 5 10 15
Ser Gly Pro Cys Phe Asp Thr Gly Asn Cys Asn Arg Gln Cys Ile Asn
20 25 30
Trp Glu His Ala Ser Ser Gly Ala Cys His Arg Glu Gly Ile Gly Ser
35 40 45
Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
50 55
<210>721
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Dimocarpus longan
<400>721
Met Ala Lys Thr Leu Lys Ser Val Gln Phe Phe Ala Leu Phe Phe Leu
1 5 10 15
Val Ile Leu Leu Ala Gly Ser Glu Met Thr Ala Val Glu Ala Leu Cys
20 25 30
Ser Lys Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Pro Cys Phe Ile Thr Ser Arg
35 40 45
Cys Asp Arg Gln Cys Lys Arg Trp Glu Asn Ala Lys His Gly Ala Cys
50 55 60
His Arg Ser Gly Trp Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Lys Cys
65 70 75 80
<210>722
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Camelina sativa
<400>722
Met Ala Lys Ala Ala Thr Ile Val Thr Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Phe Phe Ala Ala Leu Glu Thr Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Ser Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>723
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Arabis alpine
<400>723
Met Ala Lys Phe Ala Ser Ile Ile Ala Phe Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Ser Phe Glu Ala Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Tyr
20 25 30
Cys Glu Lys Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Ser Asn
35 40 45
Ala Cys Asn Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Gly Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Tyr Tyr Arg Cys Ile Cys Tyr Phe Gln Cys
65 70 75 80
<210>724
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Theobroma cacao
<400>724
Met Ala Met Ser Leu Lys Ser Val His Phe Phe Ala Leu Phe Phe Ile
1 5 10 15
Val Val Leu Leu Ala Asn Gln Glu Met Pro Val Ala Glu Ala Lys Leu
20 25 30
Cys Gln Lys Arg Ser Lys Thr Trp Thr Gly Pro Cys Ile Lys Thr Lys
35 40 45
Asn Cys Asp His Gln Cys Arg Lys Trp Glu Lys Ala Gln His Gly Ala
50 55 60
Cys His Trp Gln Trp Pro Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Val Asn Cys
65 70 75 80
<210>725
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Amborella trichopoda
<400>725
Met Ala Lys Leu Val Ser Pro Lys Ala Phe Phe Val Phe Leu Phe Val
1 5 10 15
Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser Glu Phe Ser Gly Ser Glu Ala Lys Leu
20 25 30
Cys Gln Lys Arg Ser Arg Thr Trp Ser Gly Phe Cys Ala Asn Ser Asn
35 40 45
Asn Cys Ser Arg Gln Cys Lys Asn Leu Glu Gly Ala Arg Phe Gly Ala
50 55 60
Cys His Arg Gln Arg Ile Gly Leu Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys
65 70 75 80
<210>726
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Arabidopsis thaliana
<400>726
Met Ala Lys Ser Ala Thr Ile Val Thr Leu Phe Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Phe Phe Ala Ala Leu Glu Ala Pro Met Val Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Ser Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>727
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Arabis alpine
<400>727
Met Ala Lys Phe Ala Ser Ile Ile Thr Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Ser Leu Glu Ala Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Gln Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Gly
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Tyr His Arg Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>728
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Brassica juncea
<400>728
Met Ala Lys Val Ala Ser Ile Ile Ala Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Ala Phe Glu Ala Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>729
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Brassica oleracea
<400>729
Met Ala Lys Phe Ala Ser Ile Ile Ala Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Ala Leu Glu Ala Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>730
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Camelina sativa
<400>730
Met Ala Lys Pro Ala Thr Ile Val Thr Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Phe Phe Ala Ala Leu Glu Thr Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>731
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Camelina sativa
<400>731
Met Ala Lys Ser Ala Thr Ile Val Thr Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Phe Phe Ala Ala Leu Glu Thr Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>732
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Brassica napus
<400>732
Met Ala Lys Phe Ala Ser Ile Ile Ala Pro Leu Phe Ala Val Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Ala Phe Glu Ala Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>733
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Eutrema salsugineum
<400>733
Met Ala Lys Phe Ala Ser Ile Ile Thr Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Val Phe Glu Gly Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>734
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Raphanus sativus
<400>734
Met Ala Lys Phe Ala Ser Ile Ile Ala Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Ala Phe Glu Ala Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>735
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Raphanus sativus
<400>735
Met Ala Lys Phe Ala Ser Ile Val Ser Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Thr Ala Phe Glu Ala Pro Ala Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>736
<211>76
<212>PRT/Белок
<213>Raphanus sativus
<400>736
Met Asn Thr Lys Val Ile Leu Ala Leu Leu Phe Cys Phe Leu Leu Val
1 5 10 15
Ala Ser Asn Glu Met Gln Val Gly Glu Ala Lys Val Cys Gln Arg Arg
20 25 30
Ser Lys Thr Trp Ser Gly Pro Cys Ile Asn Thr Gly Asn Cys Ser Arg
35 40 45
Gln Cys Lys Gln Gln Glu Asp Ala Arg Phe Gly Ala Cys His Arg Ser
50 55 60
Gly Phe Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Lys Cys
65 70 75
<210>737
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Brassica rapa
<400>737
Met Ala Lys Phe Ala Ser Ile Ile Ala Pro Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Ala Phe Glu Ala Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>738
<211>76
<212>PRT/Белок
<213>Solanum pennellii
<400>738
Met Asn Thr Lys Leu Ile Leu Ala Leu Met Phe Cys Phe Leu Leu Ile
1 5 10 15
Ala Ser Asn Glu Met Gln Val Gly Glu Ala Lys Val Cys Gln Arg Arg
20 25 30
Ser Lys Thr Trp Ser Gly Pro Cys Ile Asn Thr Gly Asn Cys Ser Arg
35 40 45
Gln Cys Lys Gln Gln Glu Asp Ala Arg Phe Gly Ala Cys His Arg Ser
50 55 60
Gly Phe Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Lys Cys
65 70 75
<210>739
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Citrus clementina
<400>739
Met Ala Lys Phe Thr Thr Thr Phe Ala Leu Leu Phe Ala Phe Phe Ile
1 5 10 15
Leu Phe Ala Ala Phe Asp Val Pro Met Ala Glu Ala Lys Val Cys Gln
20 25 30
Arg Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Leu Cys Leu Asn Thr Gly Asn Cys
35 40 45
Ser Arg Gln Cys Lys Gln Gln Glu Asp Ala Arg Phe Gly Ala Cys His
50 55 60
Arg Gln Gly Ile Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Lys Cys
65 70 75
<210>740
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Brassica rapa
<400>740
Met Ala Lys Phe Thr Ser Ile Ile Val Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Gly Phe Glu Ala Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Arg Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala Arg Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>741
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Eutrema salsugineum
<400>741
Met Ala Lys Phe Ala Ser Ile Ile Thr Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Thr Phe Ala Pro Thr Met Val Glu Ala Lys Leu Cys Glu
20 25 30
Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn Ala Cys
35 40 45
Lys Ser Gln Cys Gln Arg Leu Glu Gly Ala Arg His Gly Ser Cys Asn
50 55 60
Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75
<210>742
<211>79
<212>PRT/Белок
<213>Eutrema salsugineum
<400>742
Met Ala Lys Phe Ala Ser Ile Ile Thr Leu Leu Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Thr Phe Glu Ala Pro Thr Met Val Glu Ala Lys Leu Cys
20 25 30
Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn Ala
35 40 45
Cys Lys Ser Gln Cys Gln Arg Leu Glu Gly Ala Arg His Gly Ser Cys
50 55 60
Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75
<210>743
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Heliophila coronopifolia
<400>743
Met Ala Lys Phe Ala Ser Ile Ile Ala Phe Phe Phe Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Phe Ala Ala Phe Glu Ala Pro Thr Ile Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Arg Asn Gln Cys Ile Asn Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>744
<211>80
<212>PRT/Белок
<213>Brassica oleracea
<400>744
Met Ala Lys Val Ala Ser Ile Val Ala Leu Leu Phe Pro Ala Leu Val
1 5 10 15
Ile Phe Ala Ala Phe Glu Ala Pro Thr Met Val Glu Ala Gln Lys Leu
20 25 30
Cys Glu Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly Asn Asn Asn
35 40 45
Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Arg Leu Glu Lys Ala Arg His Gly Ser
50 55 60
Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Lys Cys Ile Cys Tyr Phe Pro Cys
65 70 75 80
<210>745
<211>76
<212>PRT/Белок
<213>Cicer arietinum
<400>745
Met Ser Lys Phe Tyr Thr Val Phe Met Phe Leu Cys Leu Ala Leu Leu
1 5 10 15
Leu Ile Ser Ser Trp Glu Val Glu Ala Lys Leu Cys Gln Arg Arg Ser
20 25 30
Lys Thr Trp Ser Gly Pro Cys Ile Ile Thr Gly Asn Cys Lys Asn Gln
35 40 45
Cys Lys Asn Val Glu His Ala Thr Phe Gly Ala Cys His Arg Gln Gly
50 55 60
Phe Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Asn Cys His
65 70 75
<210>746
<211>82
<212>PRT/Белок
<213>Citrus clementina
<400>746
Met Ala Lys Ser Val Ala Ser Ile Thr Thr Ala Phe Ala Leu Ile Phe
1 5 10 15
Ala Phe Phe Ile Leu Phe Ala Ser Phe Gly Val Pro Met Ala Glu Ala
20 25 30
Lys Val Cys Gln Arg Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Pro Cys Leu Asn
35 40 45
Thr Gly Lys Cys Ser Arg Gln Cys Lys Gln Gln Glu Tyr Ala Arg Tyr
50 55 60
Gly Ala Cys Tyr Arg Gln Gly Ala Gly Tyr Ala Cys Tyr Cys Tyr Phe
65 70 75 80
Asn Cys
<210>747
<211>82
<212>PRT/Белок
<213>Citrus sinensis
<400>747
Met Ala Lys Ser Val Ala Ser Ile Thr Thr Ala Phe Ala Leu Ile Phe
1 5 10 15
Ala Phe Phe Ile Leu Phe Ala Ser Phe Glu Val Pro Met Ala Glu Ala
20 25 30
Lys Val Cys Gln Arg Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Pro Cys Leu Asn
35 40 45
Thr Gly Lys Cys Ser Arg His Cys Lys Gln Gln Glu Asp Ala Arg Tyr
50 55 60
Gly Ala Cys Tyr Arg Gln Gly Thr Gly Tyr Ala Cys Phe Cys Tyr Phe
65 70 75 80
Glu Cys
<210>748
<211>78
<212>PRT/Белок
<213>Citrus sinensis
<400>748
Met Ala Lys Phe Thr Thr Thr Phe Ala Leu Leu Phe Ala Phe Phe Ile
1 5 10 15
Leu Phe Ala Ala Phe Asp Val Pro Met Ala Glu Ala Lys Val Cys Gln
20 25 30
Leu Arg Ser Lys Thr Trp Ser Gly Leu Cys Leu Asn Thr Gly Asn Cys
35 40 45
Ser Arg Gln Cys Lys Gln Gln Glu Asp Ala Arg Phe Gly Ala Cys His
50 55 60
Arg Gln Gly Ile Gly Phe Ala Cys Phe Cys Tyr Phe Lys Cys
65 70 75
<210>749
<211>76
<212>PRT/Белок
<213>Citrus sinensis
<400>749
Met Glu Arg Ser Val Arg Leu Phe Ser Thr Val Leu Leu Val Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Ala Ser Glu Met Gly Leu Arg Ala Ala Glu Ala Arg Ile Cys
20 25 30
Glu Ser Gln Ser His Arg Phe Lys Gly Pro Cys Val Ser Lys Ser Asn
35 40 45
Cys Ala Ala Val Cys Gln Thr Glu Gly Phe His Gly Gly His Cys Arg
50 55 60
Gly Phe Arg Arg Arg Cys Phe Cys Thr Lys Arg Cys
65 70 75
<210>750
<211>106
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>750
Met Ser Thr Ala Thr Phe Val Asp Ile Ile Ile Ala Ile Leu Leu Pro
1 5 10 15
Pro Leu Gly Val Phe Leu Arg Phe Gly Cys Gly Val Glu Phe Trp Ile
20 25 30
Cys Leu Val Leu Thr Leu Leu Gly Tyr Ile Pro Gly Ile Ile Tyr Ala
35 40 45
Ile Tyr Val Leu Thr Lys Arg Thr Cys Glu Ser Gln Ser His Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Pro Cys Ser Arg Asp Ser Asn Cys Ala Thr Val Cys Leu Thr
65 70 75 80
Glu Gly Phe Ser Gly Gly Asp Cys Arg Gly Phe Arg Arg Arg Cys Arg
85 90 95
Cys Thr Arg Pro Cys Val Phe Asp Glu Lys
100 105
<210>751
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Pseudomonas syringae
<400>751
Glu Ser Thr Asn Ile Leu Gln Arg Met Arg Glu Leu Ala Val Gln Ser
1 5 10 15
Arg Asn Asp Ser Asn Ser Ala Thr Asp Arg Glu Ala
20 25
<210>752
<211>15
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>752
Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp Ala Ala Gly Leu Ala Ile Ala
1 5 10 15
<210>753
<211>22
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>753
Asp Arg Leu Ser Ser Gly Lys Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Pro Ala
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Ile Ala
20
<210>754
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>754
Arg Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp
1 5
<210>755
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>755
Arg Ile Asn Asn Ala Ser Asp Asp
1 5
<210>756
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus manliponensis
<400>756
Gln Ile Asn Ser Ala Ser Asp Asp
1 5
<210>757
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus sp.
<400>757
Arg Ile Asn Ser Ala Ala Asp Asp
1 5
<210>758
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Paenibacillus sp.
<400>758
Arg Ile Asn Gly Ala Ser Asp Asp
1 5
<210>759
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Aneurinibacillus sp.
<400>759
Arg Ile Asn Arg Ala Ser Asp Asp
1 5
<210>760
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Escherichia coli
<400>760
Arg Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp
1 5
<210>761
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Burkholderia ubonensis
<400>761
Arg Ile Asn Thr Ala Ala Asp Asp
1 5
<210>762
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Pseudomonas syringae
<400>762
Lys Ile Asn Ser Ala Lys Asp Asp
1 5
<210>763
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus spp.
<400>763
Arg Ile Asn Arg Ala Gly Asp Asp
1 5
<210>764
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus spp.
<400>764
Lys Ile Asn Arg Ala Ser Asp Asp
1 5
<210>765
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Lysinibacillus xylanilyticus
<400>765
Lys Ile Asn Arg Ala Gly Asp Asp
1 5
<210>766
<211>8
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<220>
<221>MISC_FEATURE/Другие признаки
<222>(1)..(1)
<223>Xaa=Arg или Gln или Lys
<220>
<221>MISC_FEATURE/Другие признаки
<222>(4)..(4)
<223>Xaa=Ser или Asn или Gly или Arg или Thr
<220>
<221>MISC_FEATURE/Другие признаки
<222>(6)..(6)
<223>Xaa=Ser или Ala или Lys или Gly
<400>766
Xaa Ile Asn Xaa Ala Xaa Asp Asp
1 5
<210>767
<211>15
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus thuringiensis
<400>767
Ala Ile Ala Leu Gly Ala Ala Asp Asp Lys Ala Ser Asn Ile Arg
1 5 10 15
<210>768
<211>28
<212>PRT/Белок
<213>Pseudomonas syringae
<400>768
Ala Glu Arg Asp Thr Ala Ser Asn Ser Asp Asn Arg Ser Gln Val Ala
1 5 10 15
Leu Glu Arg Met Arg Gln Leu Ile Asn Thr Ser Glu
20 25
<210>769
<211>31
<212>PRT/Белок
<213>Bacillus amyloliquefaciens
<400>769
Met Ile Gln Lys Arg Lys Arg Thr Val Ser Phe Arg Leu Val Leu Met
1 5 10 15
Cys Thr Leu Leu Phe Val Ser Leu Pro Ile Thr Lys Thr Ser Ala
20 25 30
<210>770
<211>218
<212>PRT/Белок
<213>Schistosoma japonicum
<400>770
Met Ser Pro Ile Leu Gly Tyr Trp Lys Ile Lys Gly Leu Val Gln Pro
1 5 10 15
Thr Arg Leu Leu Leu Glu Tyr Leu Glu Glu Lys Tyr Glu Glu His Leu
20 25 30
Tyr Glu Arg Asp Glu Gly Asp Lys Trp Arg Asn Lys Lys Phe Glu Leu
35 40 45
Gly Leu Glu Phe Pro Asn Leu Pro Tyr Tyr Ile Asp Gly Asp Val Lys
50 55 60
Leu Thr Gln Ser Met Ala Ile Ile Arg Tyr Ile Ala Asp Lys His Asn
65 70 75 80
Met Leu Gly Gly Cys Pro Lys Glu Arg Ala Glu Ile Ser Met Leu Glu
85 90 95
Gly Ala Val Leu Asp Ile Arg Tyr Gly Val Ser Arg Ile Ala Tyr Ser
100 105 110
Lys Asp Phe Glu Thr Leu Lys Val Asp Phe Leu Ser Lys Leu Pro Glu
115 120 125
Met Leu Lys Met Phe Glu Asp Arg Leu Cys His Lys Thr Tyr Leu Asn
130 135 140
Gly Asp His Val Thr His Pro Asp Phe Met Leu Tyr Asp Ala Leu Asp
145 150 155 160
Val Val Leu Tyr Met Asp Pro Met Cys Leu Asp Ala Phe Pro Lys Leu
165 170 175
Val Cys Phe Lys Lys Arg Ile Glu Ala Ile Pro Gln Ile Asp Lys Tyr
180 185 190
Leu Lys Ser Ser Lys Tyr Ile Ala Trp Pro Leu Gln Gly Trp Gln Ala
195 200 205
Thr Phe Gly Gly Gly Asp His Pro Pro Lys
210 215
<210>771
<211>7
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>771
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210>772
<211>5
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция
<400>772
Asp Asp Asp Asp Lys
1 5
<210>773
<211>20
<212>DNA/ДНК
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция (праймер)
<400>773
tcgagcgcgt atgcaatacg 20
<210>774
<211>24
<212>DNA/ДНК
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция (праймер)
<400>774
gcgttatccc gtagaaaaag gtag 24
<210>775
<211>18
<212>PRT/Белок
<213>Искусственная последовательность
<220>
<223>Синтетическая конструкция (праймер)
<400>775
Ala Gly Ala Cys Gly Gly Phe Thr Gly Ala Gly Thr Ala Ala Cys Gly
1 5 10 15
Cys Gly
<---