СПОСОБ ДЛЯ ПОВТОРНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Способ очистки хроматографического материала для повторного использования, содержащий стадии:
a) пропускания двух или более материальных объемов элюирующего буфера через материал, причем элюирующий буфер содержит приблизительно 0,15М уксусную кислоту и имеет значение pH приблизительно 2,9;
b) статической выдержки материала в элюирующем буфере в течение от приблизительно 10 мин до приблизительно 30 мин;
c) пропускания приблизительно двух или более материальных объемов элюирующего буфера через материал; и
d) пропускания приблизительно двух или более материальных объемов буфера регенерации через материал, причем буфер регенерации содержит приблизительно 0,1N NaOH и имеет значение pH приблизительно 13.
2. Способ очистки хроматографического материала для повторного использования, содержащий стадии:
a) пропускания приблизительно двух материальных объемов элюирующего буфера через материал, причем элюирующий буфер содержит приблизительно 0,15М уксусную кислоту и имеет значение pH приблизительно 2,9;
b) статической выдержки материала в элюирующем буфере в течение приблизительно 30 мин;
c) пропускания приблизительно двух материальных объемов элюирующего буфера через материал; и
d) пропускания приблизительно четырех материальных объемов буфера регенерации через материал, причем буфер регенерации содержит приблизительно 0,1N NaOH и имеет значение pH приблизительно 13.
3. Способ очистки хроматографического материала для повторного использования, содержащий стадии:
a) пропускания приблизительно двух материальных объемов элюирующего буфера через материал, причем элюирующий буфер содержит приблизительно 0,15М уксусную кислоту и имеет значение pH приблизительно 2,9,
b) статической выдержки материала в элюирующем буфере в течение приблизительно 30 мин,
c) пропускания приблизительно двух материальных объемов элюирующего буфера через материал, и
d) пропускания приблизительно двух с половиной материальных объемов буфера регенерации через материал, причем буфер регенерации содержит приблизительно 0,1N NaOH и имеет значение pH приблизительно 13,
e) статической выдержки материала в буфере регенерации в течение приблизительно 30 мин,
f) пропускания приблизительно двух с половиной материальных объемов буфера регенерации через материал.
4. Способ очистки хроматографического материала для повторного использования, содержащий стадии:
a) пропускания приблизительно двух материальных объемов равновесного буфера через материал, причем равновесный буфер содержит приблизительно 25 мМ трис (гидроксиметиламинометан) и приблизительно 25 мМ NaCl, и имеет значение pH приблизительно 7,1;
b) статической выдержки материала в равновесном буфере в течение приблизительно 30 мин;
c) пропускания приблизительно двух материальных объемов равновесного буфера через материал;
d) пропускания приблизительно двух материальных объемов элюирующего буфера через материал, причем элюирующий буфер содержит приблизительно 0,15М уксусную кислоту и имеет значение pH приблизительно 2,8;
e) статической выдержки материала в элюирующем буфере в течение приблизительно 30 мин;
f) пропускания приблизительно двух материальных объемов элюирующего буфера через материал;
g) пропускания приблизительно двух материальных объемов буфера регенерации через материал, причем буфер регенерации содержит 0,1N NaOH при значении pH 13;
h) статической выдержки материала в буфере регенерации в течение приблизительно 30 мин;
i) пропускания приблизительно двух материальных объемов буфера регенерации через материал.
5. Способ очистки хроматографического материала для повторного использования, содержащий стадии:
a) пропускания приблизительно четырех материальных объемов равновесного буфера через материал, причем равновесный буфер содержит приблизительно 25 мМ трис (гидроксиметиламинометан) и приблизительно 25 мМ NaCl, и имеет значение pH 7,1;
b) выполнение шести циклов стадий, содержащих:
i) пропускание приблизительно трех материальных объемов элюирующего буфера через материал, причем элюирующий буфер содержит приблизительно 0,15М уксусную кислоту и имеет значение pH приблизительно 2,8;
ii) статическую выдержку материала в элюирующем буфере в течение приблизительно 10 мин;
iii) пропускание приблизительно одного материального объема элюирующего буфера через материал;
iv) пропускание приблизительно трех материальных объемов буфера регенерации через материал, причем буфер регенерации содержит приблизительно 0,1N NaOH и имеет значение pH приблизительно 13;
v) статическую выдержку материала в буфере регенерации в течение приблизительно 10 мин;
vi) пропускание приблизительно одного материального объема буфера регенерации через материал.
6. Способ очистки хроматографического материала для повторного использования, содержащий шесть циклов следующих стадий:
a) пропускания приблизительно трех материальных объемов элюирующего буфера через материал, причем
элюирующий буфер содержит приблизительно 0,15М уксусную кислоту и имеет значение pH приблизительно 2,8;
b) статической выдержки материала в элюирующем буфере в течение приблизительно 15 мин;
c) пропускания приблизительно одного материального объема элюирующего буфера через материал;
d) пропускания приблизительно трех материальных объемов буфера регенерации через материал, причем буфер регенерации содержит приблизительно 0,1N NaOH и имеет значение pH приблизительно 13;
e) статической выдержки материала в буфере регенерации в течение приблизительно 15 мин;
f) пропускания приблизительно одного материального объема буфера регенерации через материал;
g) пропускания приблизительно трех материальных объемов буфера хранения через материал, причем буфер хранения содержит приблизительно 100 мМ ацетат натрия, приблизительно 2%-ый бензиловый спирт, и имеет значение pH приблизительно 5,0;
e) статической выдержки материала в буфере хранения в течение приблизительно 15 мин;
f) пропускания приблизительно одного материального объема буфера хранения через материал.
7. Способ по любому из пп.1-6, в котором хроматографический материал находится в хроматографической колонке.
8. Способ по любому из пп.1-7, в котором хроматографический материал является аффинным материалом.
9. Способ по п.8, в котором аффинный материал является аффинным материалом Протеина А.
10. Способ по п.9, в котором аффинный материал Протеина А является материалом MAbSelect, материалом MAbSelect SuRe или материалом MAbSelect SuRe LX.
11. Способ по любому из пп.1-10, в котором хроматографический материал используется для крупномасштабного производства полипептида.
12. Способ очистки хроматографического материала для повторного использования, содержащий стадии:
a) пропускания приблизительно трех материальных объемов равновесного буфера через материал, причем равновесный буфер содержит приблизительно 40 мМ ацетат натрия и имеет значение pH приблизительно 5,5;
b) пропускания приблизительно двух материальных объемов приблизительно 0,5N NaOH через материал;
c) статической выдержки материала в приблизительно 0,5N NaOH в течение приблизительно 10 мин;
d) пропускания приблизительно одного материального объема приблизительно 0,5N NaOH через материал; и
e) статической выдержки материала в приблизительно 0,5N NaOH в течение приблизительно 10 мин;
f) пропускания приблизительно одного материального объема приблизительно 0,5N NaOH через материал.
13. Способ по п.12, в котором хроматографический материал находится в хроматографической колонке.
14. Способ по п.12 или 13, в котором хроматографический материал является ионообменным материалом.
15. Способ по п.14, в котором ионообменный материал является катионообменным материалом.
16. Способ по п.15, в котором катионообменный материал является материалом POROS HS50.
17. Способ по любому из пп.12-16, в котором хроматографический материал используется для крупномасштабного производства антитела.
18. Способ очистки хроматографического материала для повторного использования, содержащий стадии:
a) пропускания приблизительно трех материальных объемов равновесного буфера через материал, причем равновесный буфер содержит приблизительно 50 мМ трис (гидроксиметиламинометан), 85 мМ ацетат натрия и имеет значение pH приблизительно 8,8 и проводимость приблизительно 8,6 мСм/см;
b) пропускания приблизительно двух материальных объемов приблизительно 0,5N NaOH через материал;
c) статической выдержки материала в приблизительно 0,5N NaOH в течение приблизительно 10 мин;
d) пропускания приблизительно одного материального объема приблизительно 0,5N NaOH через материал; и
e) статической выдержки материала в приблизительно 0,5N NaOH в течение приблизительно 10 мин;
f) пропускания приблизительно одного материального объема приблизительно 0,5N NaOH через материал.
19. Способ по п.18, в котором хроматографический материал находится в хроматографической колонке.
20. Способ по п.18 или 19, в котором хроматографический материал является ионообменным материалом.
21. Способ по п.20, в котором ионообменный материал является анионообменным материалом.
22. Способ по п.21, в котором анионообменный материал является материалом QSFF.
23. Способ по любому из пп.18-22, в котором хроматографический материал используется для крупномасштабного производства антитела.
24. Способ по любому из пп.1-23, в котором буферные растворы пропускаются через материал со скоростью приблизительно 30 материальных объемов в час, приблизительно 20 материальных объемов в час или приблизительно 15 материальных объемов в час.
25. Способ по любому из пп.1-24, в котором буфер пропускается через материал в направлении нисходящего потока или в направлении восходящего потока.
26. Способ по любому из пп.1-25, в котором очистка хроматографического материала измеряется путем прогона имитационного элюирования после очистки хроматографического материала.
27. Способ по п.26, в котором элюент имитационного элюирования, удовлетворяющий одному или более из следующих условий: <0,25 мг/мл общего содержания протеина, <1 части на миллион фрагментов IgG, <1 части на миллион выщелоченного протеина A, <1 мкг/мл CZE LIF, <1 части на миллион CHOP и <1 пг/мл ДНК CHO; указывает на эффективную очистку материала для многопродуктового использования.
28. Способ по любому из пп.1-27, в котором хроматографический материал является устойчивым в щелочи.
29. Способ по любому из пп.1-28, в котором хроматографический материал используется для очистки полипептида.
30. Способ по любому из пп.1-29, в котором хроматографический материал чистится после очистки первого полипептида, причем хроматографический материал используется для очистки второго полипептида после этой очистки.
31. Способ по п.30, в котором полипептид является антителом или иммуноадгезином.
32. Способ по п.31, в котором полипептид является иммуноадгезином.
33. Способ по п.31, в котором полипептид является антителом.
34. Способ по п.33, в котором антитело является моноклональным антителом.
35. Способ по п.34, в котором моноклональное антитело является химерным антителом, гуманизированным антителом или человеческим антителом.
36. Способ по п.35, в котором моноклональное антитело является моноклональным антителом IgG.
37. Способ по п.36, в котором антитело является антиген-связывающим фрагментом.
2
38. Способ по п.37, в котором антиген-связывающий фрагмент является фрагментом Fab, фрагментом Fab’, фрагментом F(ab’), scFv, ди-scFv, би-scFv, тандемом (ди, три)-scFv, Fv, sdAb, трехфункциональным антителом, BiTE, диателом или триотелом.
39. Способ по п.38, в котором полипептид представляет собой фермент, гормон, протеин слияния, Fc-содержащий протеин, иммуноконъюгат, цитокин или интерлeйкин.
40. Способ по п.30, в котором первый полипептид представляет собой первое антитело или первый иммуноадгезин, а второй полипептид представляет собой второе антитело или второй иммуноадгезин.