ВАКЦИНА АНТИРАБИЧЕСКАЯ СУХАЯ ДЛЯ КРУПНОГО И МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА
DRY RABIES VACCINE FOR CATTLE AND SMALL CATTLE

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при производстве высокоиммуногенных, стабильных при хранении вакцин для профилактики бешенства крупного и мелкого рогатого скота.
Вакцина антирабическая сухая для крупного и мелкого рогатого скота, включающая антирабический антиген, среду культивирования, защитную среду высушивания на основе пептона, сахарозы и желатина, а также стимулятор иммунитета сапонин, отличающаяся тем, что в качестве антирабического антигена и депонирующего компонента сухая вакцина содержит гидрат окиси алюминия (ГОА) с адсорбированным на нем инактивированным вирусом бешенства при следующем соотношении компонентов (мас.%):
Гидрат окиси алюминия с адсорбированным
на нем инактивированным вирусом бешенства
6,0-9,0
Сапонин
0,75-1,5
Пептон
30,0-33,0
Сахароза
35,0-37,0
Желатин
9,0-10,0
Среда культивирования
Остальное,
причем масса сухой вакцины составляет в среднем 10% от массы жидкой вакцины, получаемой при восстановлении сухой вакцины до первоначального объема стерильной дистиллированной водой.
Гидрат окиси алюминия в составе заявляемой сухой вакцины создает депо антирабического антигена и этим пролонгирует его специфическое возбуждающее воздействие на иммунную систему организма крупного рогатого скота, что приводит к более длительной циркуляции в крови животных антител с активностью, близкой признанному ВОЗ лимиту надежности - 0,5 МЕ/мл (табл.2).
Заявляемая вакцина проявляет себя высокоиммуногенным препаратом также и в опытах на овцах и козах. Она способна защищать животных от вируса бешенства, введенного непосредственно в мишень поражения (мозг), в дозе, многократно превышающей летальную (табл.3).
Включенный в состав заявляемой вакцины адсорбированный на ГОА вирус бешенства при сублимационном высушивании практически полностью сохраняет первоначальную иммуногенную потенцию (93,7-96,4%), тогда как вакцина, высушенная без ГОА (аналог), теряет 16,7-31,3% иммуногенности (табл.1).
Предлагаемая вакцина обладает большей иммуногенностью и, следовательно, будет с большей эффективностью защищать целевых животных от бешенства (3 табл.).
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при производстве высокоиммуногенных стабильных при хранении вакцин для профилактики бешенства крупного и мелкого рогатого скота.
Известен способ получения антирабической вакцины, согласно которому готовый сухой препарат содержит в своем составе инактивированный В-пропиолактоном вирус бешенства штамм Щелково-51, репродуцированный в культуре перевиваемых клеток ВНК-21, компоненты среды культивирования и защитной среды высушивания на основе пептона, сахарозы, желатина (патент РФ 965049, C12N 7/08 // C12R 1/91, заявлено 11.04.80).
Эта вакцина производится в промышленных объемах и применяется в России и странах СНГ для профилактической иммунизации собак, кошек, лошадей, свиней и других животных против бешенства. Ее состав остается неизменным уже в течение 15 лет, хотя технологические приемы получения посевного вирусного пула, размножения клеток ВНК-21 и репродукции в них вируса бешенства штамма Щелково-51 изменяются и совершенствуются (патенты РФ 2191600, 2002 г.; 2287343, 2006 г.).
Недостатком ее является то, что из-за недостаточной иммуногенности для крупного и мелкого рогатого скота ее применение для этих животных возможно только при наличии специального адъювантного растворителя.
Наиболее близким аналогом заявляемой вакцины является вакцина для профилактики бешенства крупного рогатого скота, включающая антирабический антиген в виде инактивированного вируса бешенства в среде культивирования, защитную среду высушивания на основе пептона, сахарозы, желатина, а также стимулятор иммунитета сапонин (RU 955577, А61К 39/205, зарегистрирован 22 апреля 1993 г.). Для изготовления вакцины используют инактивированный β-пропиолактоном вирус бешенства штамм Щелково-51, репродуцированный в культуре клеток ВНК-21. Перед применением сухую вакцину восстанавливают до первоначального объема дистиллированной водой. Животных вакцинируют подкожно в дозе 5,0 мл дважды.
Недостатком аналога является то, что при первичной однократной вакцинации крупного рогатого скота поствакцинальные антирабические антитела практически полностью исчезают из кровеносного русла животных через 11-12 месяцев после введения вакцины (табл.2). Кроме того, при сублимационном высушивании аналог теряет значительную часть (16,7-31,3%) иммуногенной потенции (табл.1). Не предусмотрено его применение для иммунизации мелкого рогатого скота.
Задачей изобретения является совершенствование сухой вакцины для профилактики бешенства крупного и мелкого рогатого скота путем устранения указанных недостатков.
Технический результат изобретения заключается в сохранении иммуногенной потенции антирабической вакцины в процессе сублимационного высушивания (табл.1), в удлинении срока циркуляции поствакцинальных антител в организме крупного рогатого скота на уровне, близком лимиту надежности (табл.2), а также в получении данных, свидетельствующих о высокой антителоиндуцирующей активности заявляемой вакцины и ее способности эффективно защищать мелкий рогатый скот (овец и коз) от вируса бешенства на уровне центральной нервной системы (табл.3). Названные результаты получены благодаря включению в состав предлагаемой сухой вакцины, перед ее высушиванием, гидрата окиси алюминия (ГОА) с адсорбированным на нем вирусом бешенства.
Сущность изобретения. Вакцина антирабическая сухая для крупного и мелкого рогатого скота, включающая антирабический антиген, среду культивирования, защитную среду высушивания на основе пептона, сахарозы и желатина, а также стимулятор иммунитета сапонин, отличающаяся тем, что в качестве антирабического антигена и депонирующего компонента сухая вакцина содержит гидрат окиси алюминия (ГОА) с адсорбированным на нем инактивированным вирусом бешенства при следующем соотношении компонентов (мас.%):
Гидрат окиси алюминия с адсорбированным
на нем инактивированным вирусом бешенства
6,0-9,0
Сапонин
0,75-1,5
Пептон
30,0-33,0
Сахароза
35,0-37,0
Желатин
9,0-10,0
Среда культивирования
Остальное,
причем масса сухой вакцины составляет в среднем 10% от массы жидкой вакцины, получаемой при восстановлении сухой вакцины до первоначального объема стерильной дистиллированной водой.
Гидрат окиси алюминия, включенный в состав заявляемой сухой антирабической вакцины, в комплексе с адсорбированным на нем инактивированным вирусом бешенства повышает иммуногенную потенцию препарата и удлиняет срок циркуляции в кровеносном русле крупного рогатого скота поствакцинальных антител (табл.1, 2) с активностью 0,5 МЕ/мл, которая считается достаточной для защиты животных и человека от бешенства (8-й доклад экспертов ВОЗ по бешенству, Женева, 1994). Заявляемая вакцина предохраняет овец и коз от гибели даже при непосредственном их заражении вирусом бешенства в мозг, в дозах, многократно превосходящих летальную дозу (табл.3). Следовательно, ее применение позволит с большей эффективностью защищать крупный и мелкий рогатый скот от бешенства.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами. Культивирование инфицированных вирусом бешенства штамма Щелково-51 клеток ВНК-21 осуществляют роллерным и псевдосуспензионным (на микроносителях Цитодекс 2) способами. Сбор вируссодержащей культуральной жидкости проводят через 96 и 120 часов культивирования. В результате получают три серии вируссодержащего материала, часть которого используют для изготовления вакцин заявляемого (3 серии) и известного (3 серии) состава.
Приготовление заявляемой вакцины. К 4 литрам охлажденной до 4°С вируссодержащей культуральной жидкости добавляют при постоянном перемешивании 1 мл β-пропиолактона, а через 2 часа после этого - 600 мл 6%-ного гидрата окиси алюминия. После тщательного перемешивания смесь помещают в холодильную камеру при 8-10°С на 24 часа. Затем удаляют из нес 600 мл надосадочной жидкости, а к остатку смеси добавляют 2 литра стерильной среды высушивания, представляющей собой водный раствор пептона (9-10%), сахарозы (11-12%) и желатина (2,7-3,0%). К 6 литрам приготовленной смеси прибавляют 61 мл стерильного 10%-ного водного раствора сапонина, адъювантная активность которого в составе антирабических вакцин на крупном и мелком рогатом скоте проявляется в пределах 1,5-3,0 мг/дозу. В результате получают серию жидкой вакцины, содержащую 1,0 мг/мл сапонина и 10% 6%-ного гидрата окиси алюминия с адсорбированным на нем вирусом бешенства штамм Щелково-51. В двух других сериях концентрацию 6%-ного ГОА доводили до 15%. Для изготовления аналога используют тот же вирус и компоненты, что и для изготовления заявляемой вакцины, только без включения ГОА.
3
Приготовленные серии жидких вакцин (заявляемой и аналога) разливают по 10 мл во флаконы объемом 20 см и подвергают сублимационному высушиванию. Сухие вакцины, а также три серии жидкой вакцины-аналога, взятой до высушивания, исследуют рекомендованным ВОЗ методом национальных институтов здоровья США - NIH с целью оценки их иммуногенной потенции в международных единицах (ME), a также для определения сохраняемости иммуногенности вакцин в процессе высушивания.
Таблица 1
Результат исследования иммуногенности антирабических вакцин рекомендованным ВОЗ методом NIH
№ серии
Иммуногенность вакцин, МЕ/мл
Сохраняемость после высушивания, %
жидкой до высушивания
сухой заявляемой
сухой известной (аналог)
сухой заявляемой
сухой известной (аналог)
1
3,6
3,4
2,6
94,4
72,2
2
4,2
4,05
3,5
96,4
83,3
4,8
4,5
3,3
93,7
68,7
Как видно из табл.1, вакцина предлагаемого состава обладает большей иммуногенной потенцией, поскольку почти не теряет своего потенциала в процессе высушивания в отличие от вакцины аналога, которая лишается при высушивании 16,7-31,3% иммуногенности.
В опытах на крупном рогатом скоте используют заявляемую вакцину с иммуногенной потенцией в 3,4 МЕ/мл, вакцину-аналог с активностью - 3,5 МЕ/мл. Сухие вакцины растворяют перед использованием стерильной дистиллированной водой (10 мл на флакон) и вводят телятам массой 230-260 кг подкожно в область шеи в дозе 2,0 мл. До вакцинации, через 45 и 350 дней после нее от животных получают сыворотку крови и исследуют ее в реакции нейтрализации против стандартного вируса бешенства штамм CVS относительно международного сывороточного стандарта. Вируснейтрализующую активность антирабических антител выражают в международных единицах (МЕ/мл).
Представленные в табл.2 данные свидетельствуют, что заявляемая вакцина обеспечивает более длительную циркуляцию поствакцинальных антирабических антител в организме крупного рогатого скота с активностью, близкой 0,5 МЕ/мл, признанной ВОЗ достаточной для защиты животных и человека от бешенства (8-й доклад экспертов ВОЗ по бешенству, Женева. 1994). Следовательно, она будет с большей надежностью предохранять этих животных от бешенства.
Таблица 2
Антителоиндуцирующая активность антирабических вакцин в опыте на крупном рогатом скоте
Препараты
Доза, кратность, место введения
№ животного
Активность антител в крови животных, МЕ/мл
До вакцинации
через 45 дней после вакцинации
через 350 дней после вакцинации
Заявляемая вакцина
2 мл, однократно, в область шеи
1
0
4,1
0,55
2
0
4,8
0,42
3
0
4,0
0,65
4
0
4,2
0,38
5
0
5,1
0,60
6
0
3,5
0,48
Известная вакцина (аналог)
То же
1
0
4,5
0,12
2
0
5,3
0,08
3
0
3,5
0,17
4
0
3,7
0,05
5
0
4,2
0,1
6
0
4,8
0,05
Заявляемая вакцина проявила себя высокоиммунным препаратом, также и в опытах на овцах и козах. Она оказалась способной защищать этих животных от гибели даже при непосредственном введении вируса бешенства в мозг в дозах, многократно превышающих летальную (табл.3). Ее применение позволит более эффективно защищать от вируса бешенства не только крупный, но и мелкий рогатый скот.