СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛЛАГЕНА В ТКАНИ

1. Способ оценки протекания процесса заживления раны, включающий:
(а) получение образца ткани из раневого участка субъекта;
(б) обработку этого образца ткани;
(в) разделение глицина, пролина и гидроксипролина в обработанном образце ткани методом жидкостной хроматографии высокого давления с получением площадей пиков аналитов;
(г) определение концентраций глицина, пролина и гидроксипролина в ткани;
(д) корреляцию концентраций глицина, пролина и гидроксипролина в ткани с количеством общего коллагена в ткани и
(е) сравнение количества общего коллагена в ткани в раневом участке с количеством коллагена в нераневой ткани для оценки протекания процесса заживления раны.
2. Способ по п.1, где ткань представляет собой кожу.
3. Способ по п.1, где ткань гранулирована.
4. Способ по п.1, где стадии (а)-(е) повторяют по меньшей мере один раз, и при каждом повторе образец ткани получают из одного и того же раневого участка одного и того же субъекта.
5. Способ по п.4, где стадии (а)-(е) повторяют по меньшей мере один раз в течение периода времени от примерно 3 сут до примерно 2 лет.
6. Способ по п.4, дополнительно включающий сравнение количества общего коллагена в ткани при первом повторе с количеством общего коллагена в ткани при одном или более последующих повторах.
7. Способ по п.1, где субъектом является млекопитающее.
8. Способ по п.7, где млекопитающим является человек.
9. Способ по п.1, где обработка включает следующие стадии:
(а) удаление жира из образца ткани;
(б) дегидратация образца ткани;
(в) гидролиз образца до аминокислот и
(г) дериватизация образца.
10. Способ по п.1, где жидкостную хроматографию высокого давления осуществляют на колонке С18.
11. Способ по п.10, где колонка С18 имеет диапазон рН от примерно 1 до примерно 12.
12. Способ по п.1, где элюирование глицина, пролина и гидроксипролина во время жидкостной хроматографии высокого давления измеряют при 436 нм с использованием детектора на фотодиодной матрице.
13. Способ по п.1, где жидкостная хроматография высокого давления представляет собой жидкостную хроматографию высокого давления с обращенными фазами.
14. Способ по п.1, где жидкостную хроматографию высокого давления проводят с использованием подвижной фазы, содержащей 70% 25 мМ буферного раствора фосфата калия, рН 11,0 и 30% ацетонитрила.
15. Способ по п.1, где определение концентраций глицина, пролина и гидроксипролина в ткани включает:
(а) получение образцов с известными концентрациями глицина, пролина и гидроксипролина;
(б) разделение глицина, пролина и гидроксипролина в этих образцах методом жидкостной хроматографии высокого давления;
(в) нанесение на график известных концентраций глицина, пролина и гидроксипролина по оси х и площадей пиков аналитов по оси у и построение линейной калибровочной кривой; и
(г) вычисление концентраций каждого из глицина, пролина и гидроксипролина в обработанном образце ткани по формуле:
где b означает отрезок, отсекаемый по оси у, и m означает тангенс угла наклона линейной калибровочной кривой; и
(д) вычисление концентраций каждого из глицина, пролина и гидроксипролина в ткани по формуле:
16. Способ по п.1, где корреляция концентраций глицина, пролина и гидроксипролина в ткани с количеством общего коллагена в ткани включает использование формулы:
где С означает сумму значений процентного содержания глицина, пролина и гидроксипролина в коллагене, деленную на 100.
17. Способ по п.16, где С равно 0,55.