СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СМЕСИ ТРИТЕРПЕНОВЫХ КИСЛОТ И СМЕСИ НЕЙТРАЛЬНЫХ ИЗОПРЕНОИДОВ ИЛИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ СОДЕРЖАЩИХ ИХ
METHOD OF PREPARING MIXTURE OF TRITERPENE ACIDS AND MIXTURE OF NEUTRAL ISOPRENOIDS OR BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES CONTAINING SAID COMPOUNDS

Изобретение относится к области получения биологически активных веществ из растительного сырья, которые могут использоваться в медицине, косметике, парфюмерии и сельском хозяйстве.
Известен «Способ получения биологически активной суммы солей тритерпеновых кислот» (п. РФ №2108107, A61K 35/78).
Известен также «Способ получения биологически активной суммы нейтральных изопреноидов» (п. РФ №2199861, A01N 65/00).
Недостатком известных способов является неполное извлечение биологически активных веществ из-за наличия воздушных пузырьков в полостях (клетках, смолоходах) в используемом сырье.
Ближайшим к заявленному способу (прототип) является «Способ получения биологически активной суммы тритерпеновых кислот» (п. РФ №2151139, A61K 35/78), недостатком которого является отделение нейтральных изопреноидов, которые, в свою очередь, также являются биологически активными веществами, а также неполное извлечение экстрактивных веществ из сырья.
Техническим результатом является упрощение процесса получения смеси биологически активных веществ и их более полное извлечение из сырья.
Технический результат достигается тем, что высушенную, измельченную или предварительно обработанную паром древесную зелень или кору пихты экстрагируют органическим растворителем при последовательном воздействии вакуума от 70 до 380 мм рт.ст. и атмосферного давления не менее двух раз, затем экстракт сливают, высушивают безводным сульфатом магния и упариванием извлекают смесь биологически активных веществ или в экстракт добавляют 2%-ный раствор едкого натра и после тщательного перемешивания оставляют расслаиваться, после расслоения водно-щелочной слой сливают, подкисляют 10%-ной соляной кислотой до рН=2 и экстрагируют смесь тритерпеновых кислот органическим растворителем, из оставшегося органического слоя экстракта упариванием выделяют смесь нейтральных изопреноидов.
Наличие воздуха в клетках и смолоходах высушенной, измельченной или предварительно обработанной паром древесной зелени или коры пихты при экстрагировании закупоривает межклеточные проходы, за счет чего затрудняется проникновение растворителя к другим клеткам или полостям и уменьшает площадь контакта растворителя с биологически активными веществами, что приводит к неполному извлечению их.
Однократное воздействие вакуума от 70 до 380 мм рт.ст. позволяет увеличить в 2-3 раза объем воздуха, находящегося в порах экстрагируемого сырья, что приводит к обязательному его выходу вначале из пор, затем из растворителя после всплывания пузырьков.
Последующее восстановление атмосферного давления в экстракторе уменьшает в 2-3 раза объем воздуха в порах сырья, при этом растворитель заполняет высвободившиеся от воздуха пустоты, что увеличивает площадь его контакта с биологически активными веществами в сырье.
Повторное воздействие вакуума от 70 до 380 мм рт.ст. с последующим восстановлением атмосферного давления позволяет удалить оставшуюся часть воздуха и увеличить площадь контакта растворителя с биологически активными веществами, что в конечном счете обеспечивает их более полное экстрагирование.
Опытным путем было установлено, что последовательное воздействие вакуума в пределах от 70 до 380 мм рт.ст. и атмосферного давления позволяет эффективно удалять воздух из пор сырья за два раза.
Последовательная обработка экстрагируемого сырья вакуумом в пределах 70-380 мм рт.ст. и атмосферным давлением более двух раз дальнейшего увеличения выхода не даст.
Эффективность удаления воздуха последовательным воздействием вакуума и атмосферного давления можно наблюдать визуально в экстракторе, наполненным сырьем и растворителем. Так, при окончании загрузки экстрактора сырьем и растворителем видно, что сырье плавает в верхних слоях растворителя. После двукратной последовательной обработки вакуумом и атмосферным давлением сырья в растворителе оно погружается и находится на дне экстрактора, что однозначно доказывает эффективное удаление воздуха из пор сырья.
Выход смеси биологически активных веществ при двукратной обработке экстрагируемого сырья вакуумом и атмосферным давлением увеличился на:
- 17,3% при экстрагировании воздушно-сухой, измельченной древесной зелени пихты;
- 12,8% при экстрагировании воздушно-сухой, измельченной древесной зелени пихты, предварительно обработанной паром;
- 7,3% при экстрагировании воздушно-сухой, измельченной коры пихты.
Пример 1. Свежую, измельченную древесную зелень пихты (475,6 г) обрабатывают острым паром (t 110-125°С) в течение 16 часов, высушивают до воздушно-сухого состояния (238,1 г), заливают 0,6 л трет-бутилметиловым эфиром, дважды последовательно воздействуют вакуумом 320 мм рт.ст. и атмосферным давлением и оставляют при атмосферном давлении и комнатной температуре на один час. Экстракт сливают, а сырье заливают новой порцией (0,6 л) трет-бутилметилового эфира, создают дважды последовательно вакуум 320 мм рт.ст. и атмосферное давление и оставляют на 1 ч при комнатной температуре и атмосферном давлении. Экстракт сливают, объединяют с первой порцией, высушивают безводным сульфатом магния и упаривают досуха. Получают 24,2 г смеси биологически активных веществ, в состав которых входят смесь тритерпеновых кислот (52-55%), смесь нейтральных изопреноидов (28-36%) и примеси жиров и красящих веществ (хлорофилл, каратиноиды). При этом получено 6,9 г пихтового масла, а выход смеси биологически активных веществ составил 10,2%.
Пример 2. Осуществляли в условиях примера 1, но без последовательного воздействия на растительное сырье в растворителе вакуума и атмосферного давления. Из сухой измельченной, предварительно обработанной паром древесной зелени пихты (навеска 229,7 г) было получено 20 грамм смеси биологически активных веществ, выход составил 8,7%.
Пример 3. Свежую, измельченную кору пихты (520 г) обрабатывают острым паром, высушивают и полученные 183 г сырья экстрагируют трет-бутилметиловым эфиром под последовательным воздействием вакуума и атмосферного давления в условиях примера 1. В полученный экстракт добавляют 400 г 2%-ного водного раствора едкого натра, смесь энергично встряхивают в делительной воронке и оставляют расслаиваться. Через 15 минут отделяют водно-щелочной (нижний) слой, подкисляют 10%-ной соляной кислотой до рН=2 и экстрагируют смесь тритерпеновых кислот трет-бутилметиловым эфиром (1 л). Получено 10,8 г тритерпеновых кислот, что составило 5,9% от экстрагируемого сырья. Из оставшегося органического слоя экстракта выделяют смесь нейтральных изопреноидов упариванием досуха и отгоняют из нее остатки пихтового масла и растворителя. Получено 3,2 г смеси нейтральных изопреноидов в виде воскообразной, темно-зеленой массы, что составляет 1,75% от экстрагируемого сырья. При этом получено 4,3 г пихтового масла во время обработки свежего сырья острым паром.
Пример 4. Осуществляли в условиях примера 3, но без последовательного воздействия вакуума и атмосферного давления на кору в растворителе. Из 180 г сухой, измельченной коры пихты получено 9,9 г тритерпеновых кислот (выход 5,5%), 2,93 г нейтральных изопреноидов (выход 1,63%) и 4,25 г пихтового масла.
Пример 5. В условиях примера 1 для экстракции сырья в качестве органического растворителя использовали смесь бензина (бензин экстракционный БР-1) и этилацетата в соотношении (1:1 по объему), с временем настаивания обеих порций по 6 часов. Выход смеси биологически активных веществ составил 12,4%.
Пример 6. В условиях примера 1 для экстракции сырья использовали смесь бензина (бензин экстракционный БР-1) и этилацетата в соотношении (1:1 по объему), с временем настаивания обеих порций по 6 часов только при атмосферном давлении. Выход смеси биологически активных веществ составил 10,5%.