СПОСОБ НОРМАЛИЗАЦИИ УРОВНЯ АЛЬФА2-АНТИПЛАЗМИНА У СВИНОМАТОК С БРОНХИТОМ
METHOD FOR NORMALISING ALPHA2-ANTIPLASMIN LEVEL IN SOWS WITH BRONCHITIS

Изобретение относится к биологии и ветеринарии, а именно к гематологии.
2
Аналогов предлагаемого способа нормализации уровня α-антиплазмина у свиноматок с бронхитом не существует.
В литературе имеются сведения о высокой биологической активности крезацина - производного ароксиалкилкарбоновых кислот, способного стимулировать различные системы живых организмов, повышая их выживаемость в неблагоприятных условиях (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы // Ветеринария. - 2006. - №11. - С.49-51), и гамавита - комплексного сбалансированного средства на основе плаценты, содержащего нуклеинат натрия, набор аминокислот, витаминов и солей, обладающего высоким органопротективным и анаболическим эффектом (Белоусова Р.В. Применение гамавита для повышения эффективности воспроизводства свиней // Ветеринария - 2006. - №10. - С.11-12). Однако в литературе нет указаний о влиянии этих препаратов на САЭ у свиноматок с артритом и тем более на возможность ее нормализации с помощью их сочетания.
2
Целью изобретения является нормализация уровня α-антиплазмина у свиноматок с бронхитом.
2
Сущность заявляемого способа заключается в том, что для нормализации уровня α-антиплазмина у свиноматок с бронхитом им назначаются крезацин 4 мг/кг в сутки, включенный в схему выпаивания утром на пять суток, и одновременно с ним гамавит 0,03 мг/кг внутримышечно один раз в день, утром, в течение пяти суток.
2
Применение заявленного комплекса нормализует уровень α-антиплазмина у свиноматок с бронхитом через 5 суток после окончания лечения, устраняя явления бронхита. Это является основой оздоровления стада свиноматок, снижения падежа и высокого качества получаемых от них поросят и мясной продукции.
Заявляемый способ осуществляется следующим образом.
2
2
2
2
2
Известно, что α-антиплазмин (α-АП) является наиболее важным ингибитором фибрииолиза, в присутствии которого происходит быстрое формирование необратимого, лишенного активности комплекса “плазмин-α-АП”. Метод оценки уровня α-АП основан на определении способности α-АП исследуемого образца плазмы инактивировать добавляемый в плазму очищенный плазмин. Содержание остаточного плазмина определяется по степени гидролиза хромогенного субстрата, специфичного по отношению к этому ферменту.
2
4
Используются реактивы: 1. Плазмин свиньи, лиофилизированный. Разводится в буфере до концентрации 0,1 СТА Е/мл. 2. Хромогенный субстрат D-Norvalylcyclohexylalanil-lysil-p-nitroanilide. Разводится в дистиллированной воде до концентрации 3 ммоль/л. 3. Раствор буфера: KHPO (100 ммоль/л), NaCl 9 г/л, глицерин (250 г/л), pH 7,5.
2
2
Для выполнения исследования необходима также стандартная или контрольная нормальная плазма с известным содержанием α-АП или пулированная (взятая не менее, чем от 10 здоровых свиноматок), активность α-АП в которой принимается за 100%.
Применяется следующее оборудование: спектрофотометр с термостатируемой кюветой (температура реакции +37°С). Используемая длина волны 405 нм. Ширина оптического пути кюветы - 1 см.
Материалом для исследования служит нитратная бедная тромбоцитами плазма.
Предварительно все смешиваемые реагенты подогреваются до +37°С. Ход определения приводится в таблице ниже.
Таблица
Схема определения уровня α<sub>2</sub>-антиплазмина
Последовательность операций
Исследуемый образец
Контроль (плазмин)
1. Внести в кювету или пробирку:
исследуемую плазму
20 мкл (0,02 мл)
-
физиологический (0,15 М) раствор хлорида натрия
-
20 мкл (0,02 мл)
раствор плазмина
1,0 мл
1,0 мл
2. Перемешать и инкубировать при +37°С в течение 1 мин
3. Добавить хромогенный субстрат и включить секундомер
0,1 мл
0,1 мл
В течение 30 сек учитывают показатели поглощения и одновременно включают секундомер. Спустя 60 и 120 сек повторно определяют показатели поглощения.
2
Вычисляют скорость изменения поглощения за 1 мин (Δ А/мин), которая пропорциональна активности α-АП. Для этого рассчитывают разницу поглощения при 405 нм между 0 и 60 секундами инкубации, а также между 60 и 120 секундами. Определяют среднюю величину из двух показателей Δ А/мин.
плазмин
контроль
2
п
Каждая серия анализов требует не менее одного значения для раствора плазмина (Δ А/мин ) и одного референтного значения, определяемого с использованием контрольной нормальной плазмы (Δ А/мин ) с известным значением α-АП. Эти значения используют для вычисления внутрилабораторного коэффициента пересчета (К):
2
Содержание α-АП в исследуемом образце плазмы в виде % от нормы в дальнейшем вычисляется по формуле:
2
образец
плазмин
образец
α-АП (% от нормы)=Кп × (Δ А/мин  - Δ А/мин )
2
В норме, уровень α-АП в плазме крови составляет 80-120%.
2
Снижение активности α-АП может быть определено при активации фибринолиза, его повышение сопряжено с риском тромбоза.
2
При диагностике у свиноматок с бронхитом повышения α-АП необходимо назначение лечения согласно заявленному способу.
Пример 1. У свиноматки с бронхитом №19 была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме.
2
При обследовании свиноматки была выявлена повышенная активность α-АП (147%). Животному был назначен крезацин 4 мг/кг в сутки, включенный в схему выпаивания утром на пять суток, и одновременно с ним гамавит 0,03 мг/кг внутримышечно один раз в день, утром, в течение пяти суток.
2
Через 5 суток после окончания лечения у свиноматки нормализовалась активности α-АП (128%) при устранении явлений бронхита.
2
2
Наблюдение за свиноматкой в последующем зарегистрировало стойкое сохранение нормального уровня α-АП в течение как минимум 3 месяцев (срок наблюдения) после окончания лечения - α-АП не выше 92%.
2
Пример 2. У свиноматки с бронхитом №24 была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме. У нее выявлено повышение активности α-АП (136%). Животному был назначен крезацин 4 мг/кг в сутки, включенный в схему выпаивания утром на пять суток, и одновременно с ним гамавит 0,03 мг/кг внутримышечно один раз в день, утром, в течение пяти суток.
2
Через 5 суток после окончания лечения у свиноматки нормализовалась активность α-АП (86%) при устранении явлений бронхита.
2
Наблюдение за свиноматкой в последующем не зарегистрировало отрицательной динамики α-АП (в течение 3 мес наблюдения).
2
Использование предлагаемого способа оптимизации активности α-АП в ветеринарии способно помочь избежать развития сосудистых тромбозов у свиноматок с бронхитом, что позволяет оздоровить стадо, снизить падеж и получать от этих животных мясную продукцию высокого качества.
2
Применение заявленного способа успешно апробировано на 126 свиноматках с бронхитом с достижением полной нормализации уровня α-антиплазмина во всех случаях.