РАЗРАБОТКА ИММУНОГЕНА НА ОСНОВЕ В-КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГУМАНИЗИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ

1. Способ скрининга антитела широкого спектра действия против представляющего интерес антигена, включающий:
(a) введение первого иммуногена, полученного из представляющего интерес антигена, мыши из мышиной линии, содержащей в своей зародышевой линии:
H
H
H
(i) ограниченный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащий единичный неперестроенный человеческий генный сегмент V, один или более человеческих генных сегментов D и один или более человеческих генных сегментов J, функционально связанных с нуклеотидной последовательностью константной области тяжелой цепи,
K
K
K
K
(ii) генетически модифицированный локус легкой цепи иммуноглобулина, содержащий один или более человеческих генных сегментов V и один или более человеческих генных сегментов J, при этом генные сегменты V и J функционально связаны с нуклеотидной последовательностью константной области легкой цепи, и при этом первый иммуноген содержит множество эпитопов;
(b) создание возможности развития у мыши иммунного ответа на первый иммуноген, при этом иммунный ответ включает генерацию мышиных B-клеток, которые экспрессируют последовательности VDJ тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина (IgH) и VJ легкой цепи человеческого иммуноглобулина (IgL);
(c) выделение клонально родственных B-клеток из мыши, которая экспрессирует рецептор B-клеток (BCR), который специфически связывает первый эпитоп первого иммуногена;
(d) определение аминокислотных последовательностей IgH VDJ и IgL VJ рецептора B-клеток (BCR) у клонально родственных B-клеток;
(e) получение из последовательностей IgH VDJ и IgL VJ аминокислотных последовательностей VDJ и VJ немутированного рецептора B-клеток (BCR) и одной или более аминокислотных последовательностей VDJ и VJ промежуточного предшественника рецептора B-клеток (BCR) у B-клеток на промежуточном этапе дифференцировки;
(f) обеспечение множества вторых иммуногенов, содержащих вторые эпитопы, отличные от первого эпитопа, которые с повышенной аффинностью связываются с немутированным рецептором B-клеток (BCR) или промежуточным предшественником рецептора B-клеток (BCR) по сравнению с первым иммуногеном;
(g) серийное введение другой мыши из линии вторых иммуногенов, выбранных из множества вторых иммуногенов в (f), при этом серийное введение начинают со второго иммуногена к немутированному BCR, и после него вводят вторые иммуногены к промежуточным BCR, все более филогенетически отдаленным от немутированного BCR; и
(h) определение того, включает ли иммунный ответ от мыши из (g) антитело широкого спектра действия, которое связывает множество вторых эпитопов.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что первый и второй иммуногены на этапах (a) и (g) вводят в виде липосомального комплекса.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что представляющий интерес антиген представляет собой или получен из инфекционного агента или патогена, а антитело широкого спектра действия представляет собой нейтрализующее антитело широкого спектра действия против инфекционного агента или патогена.
H
H
H
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что все или по существу все функциональные эндогенные генные сегменты V, D и J в локусе тяжелой цепи иммуноглобулина были удалены или сделаны нефункциональными.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что ограниченный локус тяжелой цепи иммуноглобулина содержит эндогенный ген Adam6a, ген Adam6b или оба их, а генетическая модификация в локусе тяжелой цепи не влияет на экспрессию или функцию эндогенного гена Adam6a, гена Adam6b или их обоих.
6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что мышь содержит эктопически присутствующий ген Adam6a, ген Adam6b или их оба.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность константной области тяжелой или легкой цепи представляет собой нуклеотидную последовательность человека или грызуна.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность константной области представляет собой нуклеотидную последовательность константной области мыши.
H
H
H
H
H
H
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что все или по существу все функциональные эндогенные генные сегменты V, D и J в локусе тяжелой цепи иммуноглобулина были сделаны нефункциональными, а человеческие генные сегменты V, D и J присутствуют в трансгене.
H
H
H
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что человеческие генные сегменты V, D и J функционально связаны с эндогенной нуклеотидной последовательностью константной области в эндогенном нечеловеческом локусе тяжелой цепи иммуноглобулина.
K
K
K
K
K
K
11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что генетически модифицированный локус легкой цепи иммуноглобулина содержит замещение всех или по существу всех функциональных генных сегментов V и генных сегментов J одним или более человеческими генными сегментами V и одним или более человеческими генными сегментами J, при этом человеческие генные сегменты V и человеческие генные сегменты J функционально связаны с нуклеотидной последовательностью константной области легкой цепи.
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
K
12. Способ по п. 1, отличающийся тем, что мышь содержит замещение в эндогенном нечеловеческом V-локусе иммуноглобулина всех или по существу всех функциональных эндогенных генных сегментов V человеческими генными сегментами V, выбранными из группы, состоящей из V4-1, V5-2, V7-3, V2-4, V1-5, V1-6, V3-7, V1-8, V1-9, V2-10, VK3-11, V1-12, V1-13, V2-14, V3-15, V1-16, V1-17, V2-18, V2-19, V3-20, V6-21, V1-22, VK1-23, V2-24, V3-25, V2-26, V1-27, V2-28, V2-29, V2-30, V3-31, V1-32, V1-33, V3-34, V1-35, V2-36, V1-37, V2-38, V1-39, V2-40 и их комбинации.
K
K
K
K
K
K
K
K
13. Способ по п. 1, отличающийся тем, что мышь содержит замещение в эндогенном нечеловеческом J-локусе иммуноглобулина всех или по существу всех функциональных эндогенных нечеловеческих генных сегментов J иммуноглобулина человеческими генными сегментами J, выбранными из J1, J2, J3, J4, J5 и их комбинации.
K
K
14. Способ по п. 11, отличающийся тем, что один или более человеческих сегментов V и J функционально связаны с эндогенной нуклеотидной последовательностью константной области легкой цепи в эндогенном нечеловеческом локусе.
15. Способ по п. 1, отличающийся тем, что представляющий интерес антиген происходит из патогена.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что патоген представляет собой ВИЧ, вирус гриппа или вирус гепатита C.
H
H
17. Способ по п. 1, отличающийся тем, что единичный неперестроенный человеческий генный сегмент V представляет собой человеческий генный сегмент V1-69 или его полиморфный вариант.
H
H
18. Способ по п. 15, отличающийся тем, что единичный неперестроенный человеческий генный сегмент V представляет собой человеческий генный сегмент V1-69 или его полиморфный вариант.