Способ получения растительного моллюскоцида как профилактического средства против пастбищных гельминтозов животных
METHOD OF PRODUCING VEGETABLE MOLLUSCICIDE AS PREVENTIVE AGENT AGAINST PASTORAL HELMINTHIASES OF ANIMALS

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к ветеринарной гельминтологии, и может быть использовано в качестве моллюскоцидного средства в борьбе и профилактике пастбищных гельминтозов животных и птиц.
В качестве борьбы и профилактики пастбищных гельминтозов животных и птиц фармакопейным способом используются препараты Смолевки белой {Silene latifolia). Способ позволяет реализовать указанное назначение. Изобретение касается экологичного растительного средства для борьбы с моллюсками (родов Planorbis и Lymnaed) - промежуточными хозяевами возбудителей пастбищных гельминтозных заболеваний животных и птиц, дезинвазии пастбищ, и может быть использовано в системе сезонных профилактических мероприятий. При проведении дезинвазии по сокращению и/или уничтожению популяции брюхоногих на выпасных площадях происходит разрыв биологических циклов многих геогельминтозов, тем самым достигается эффект сокращения инвазии на определенной территории.
Гельминты распространены у большинства домашних, диких животных, птиц и человека, они наносят значительный экономический ущерб сельскому хозяйству. У гельминтозных заболеваний, особенно пастбищных, в биологическом цикле развития имеются промежуточные хозяева - личинки насекомых, ракообразные, рыбы, пресмыкающиеся, в том числе моллюски. Моллюски - источники большинства трематодозных и нематодозных инвазий биологических объектов. В организме мягкотелых происходит ряд стадий развития (преобразований) личиночных форм этих гельминтов (партеногенез, линька и др.).
Моллюски устойчивы к воздействиям факторов окружающей среды благодаря толщине мерцательного слоя покровного эпителия и плотности коллагеновых волокон, образующих кожно-мускульный мешок беспозвоночного.
Обработку против моллюсков выгульных лугов проводят в период активного состояния моллюсков (икрометания, их развития и роста) при температуре окружающей среды не ниже 13°С и рН не выше 7,6 единиц. Препараты Смолевки белой на пастбищных лугах в местах обитания моллюсков (лужи, заболоченные и прибрежные участки водоемов, противопожарные каналы, канавы, мочажины, лужи, ямы) вносят в форме рабочих водных растворов с помощью опрыскивателя (пульверизатора), а в форме порошка - вручную с наветренной стороны. Перед дезинвазией заливных лугов (пойм) прекращают внесение удобрений для оценки эффективности проводимых мероприятий.
Способов уничтожения пастбищных моллюсков множество. Их применение зависит от особенностей биологического цикла моллюсков (экологии, условий применения, биотопов). В производстве часто применяемо: опрыскивание, опыливание, рассев или разбрасывание отравленных приманок, введение моллюскоцидов в струю воды, пополняющей водоем, использование аэрозолей, капельное внесение, фумигация, покрытие поверхностей (пропитывание, вкрапление).
Моллюскоциды химического происхождения (соединения меди, мышьяка, цинка, бария, ртути и полихлортерпены, спирты, фенолы) являются перспективными, но применение их на больших площадях относительно дорого. Такие препараты ограниченно доступны и являются токсичными для объектов окружающей среды. Например, салициланилиды вызывают 100% гибель низших ракообразных и рыб, 65-84% гибель бентоса в первые часы после внесения в пруды [1]. Большинство химических соединений обладают высокой моллюскоцидной активностью, однако, для применения их в практических условиях необходима надежная безопасность для человека, животных, птиц, растений и других микроорганизмов. Важно, чтобы через определенное время после обработки моллюскоцидами остаточное количество химических веществ, содержащихся в сельскохозяйственной продукции, полученной с обработанного участка, было минимальным и их концентрация безопасна для животных и человека.
Препараты растительного происхождения являются экологичными и поэтому малотоксичны относительно млекопитающих, пресмыкающихся, земноводных, гидробионтов и растительности. Данная группа моллюскоцидов недорога, относительно доступна и безопасна в применении.
Разработка безопасного, дешевого и высокоэффективного способа сокращения и/или уничтожения численности моллюсков является актуальной задачей на сегодняшний день в качестве борьбы и профилактики пастбищных гельминтозных заболеваний животных и птиц при выгульном содержании. Экспериментально, в лабораторных условиях показано, но подробно не исследовано, губительное воздействие фитонцидов, гликозидов, дубильных веществ листьев дрожащего тополя (осины) (Populus tremula), дуба (род Quercus), различных видов полыни (род Artemisid), репейника (Arctium lappa), багульника (Ledum palustris), акации (род Acacia) и препаратов чеснока на яйцекладки моллюсков Planorbarius corneus [1].
Близкими методами сокращения численности и уничтожения брюхоногих является фармакопейный способ получения моллюскоцидных препаратов (порошка, водного, спиртового, аммиачного экстрактов) на основе ели европейской (Picea abies L.) [3], бадана толстолистного (Bergenia crassifolia L.) [21], дуба обыкновенного (Quercus robur L.) [4], амброзии (род Ambrosia L.) [5], гравилата речного (Geum rivale L.) и городского (Geum urbanum L.) [6], аира обыкновенного (Acorus calamus L.) [9], лапчатки прямостоячей или калгана (Potentilla erecta L.) [9], горца змеиного (Polygonum bistorta L.) [10], дербенника иволистного (Lythrum salicaria L.) [9], кровохлебки лекарственной (Sanguisorba officinalis L.) [12], сабельника болотного (Comarum palustre L.) [13], мыльнянки лекарственной (Saponaria officinalis) [14], толокнянки обыкновенной (Arctostaphylos uva-ursi L.) [21]. Представленные растительные препараты эффективны против моллюсков видов - Lymnaea goupili, L. subangulata, L. truncatula, L. ovata, L. auricularia, L. peregra, L. stagnalis, L. palustris, Planorbis planorbis, Planorbarius corneus и, малотоксичны в отношении биологических объектов и растительности, не обладают кумулятивными свойствами.
Растение бадан толстолистный доступен только в Забайкалье, Якутии, Алтае, Туве. Короткий и быстрый вегетационный срок выращивания Смолевки по сравнению с деревьями (ель, дуб, ива) показывает перспективность использования моллюскоцидных свойств растения. Лекарственные растения, содержащие ядовитые, токсические и сильнодействующие вещества, такие как амброзия, кровохлебка, горец, толокнянка, официально используются в медицинских целях. Аир болотный, гравилат речной, калган, дербенник, сабельник, мыльнянка произрастают и набирают вегетационную массу для производства препаратов в водных и околоводных биотопах. Смолевка белая неприхотлива, холодоустойчива, выращивается и произрастает на любых типах почв (естественных и культурных пастбищах, пашнях) и в различной природно-климатической зоне (кроме субарктической и арктической). Растение, частично, используется в декоративных целях (цветоводстве) и является частью кормового рациона для жвачных животных.
С целью расширения ареала биологических моллюскоцидов и расширения сырьевой базы предлагается использовать препараты из корневищ, корней, стеблей, листьев, цветов и плодов «мыльной травы» Смолевки белой (S. latifolia). Согласно известным изобретениям [1-12, 14] по сокращению численности и/или уничтожению брюхоногих беспозвоночных действующими веществами, обладающими моллюскоцидными свойствами, являются растительные фитонциды и дубильные вещества. Одним из сильнодействующих веществ для мягкотелых брюхоногих считаются поверхностно-активные вещества (ПАВы), в состав которых входит особая группа гликозидов - сапонины [1]. Ими богаты корни и корневища этого растения [15, 17, 18, 23].
Наиболее близким аналогом изобретения являются препараты Мыльнянки лекарственной [1, 14], произрастающей в низинных и заболоченных местах. Смолевка белая (S. latifolia) также обладает моллюскоцидным свойством благодаря наличию тритерпеновых гликозидов. Предлагаемое растение, как и многие другие семейства гвоздичных и первоцветных (горицвет, фиалка альпийская), содержит естественные мыла. Растение выращивают на выпасных лугах, естественных и искусственных пастбищах. Дрему белую можно использовать не только как сырье для производства медицинских, гигиенических, моллюскоцидных средств, но и как биологический репеллент для мягкотелых беспозвоночных на определенных территориях.
Целью настоящего изобретения явилось изучение моллюскоцидной эффективности средств растительного происхождения на основе Смолевки белой (S. latifolia) и расширения естественной сырьевой базы для производства препаратов, снижающих численность брюхоногих.
Дрема белая или Смолевка белая (лат. S. latifolia) - травянистое двудомное растение рода Смолевок семейства Гвоздичные, произрастающее в большинстве стран Европы, западной Азии и Северной Африки, одно- или двулетнее (иногда многолетнее) растение высотой 40 - 80 см. Оно содержит большое количество сапонинов, которые используют в производстве медицинских и гигиенических средств [18, 19].
В народной медицине Смолевка белая ценится за насыщенный химический состав [15, 16, 18, 23]. В подземных и надземных частях растения присутствуют дубильные вещества, флавоноиды, синаповая кислота, тритерпеновые гликозиды (сапонины), органические кислоты, смолы, кумарин, гомофиентин, феруловая кислота, витамин С, алкалоиды, изовитексин, ориентин. Препараты Смолевки используются для снятия психического напряжения в виде ванн и внутрь [15-19]. Отвары и настои листьев и цветков применяют как успокаивающие средства при эпилепсии, маточных кровотечениях, для лечения пупочной грыжи внутрь и наружно в виде припарок, компрессов. В современной литературе имеются данные о том, что Дрема белая применяется при различных опухолевых заболеваниях кишечника [24, 25]. Настойка семян применяется при новообразованиях прямой и ободочной кишки. В эксперименте, препараты надземной части растения повышают сократительную способность мускулатуры матки, имеют противовоспалительные и желчегонные действия. Корни обладают высоким пенообразовательным свойством и могут использоваться для получения растительного мыла. Смолевка белая является ценным кормом для мелкого и крупного животноводства [16, 26-28].
Технология приготовления моллюскоцидных препаратов на основе Смолевки включает в себя сбор цельного растения во время максимальной вегетации, промывание от загрязнений, сушку до содержания влаги 13-15% для получения первичной сырьевой продукции (порошка). Порошок препарата из корней, листьев, стеблей, цветков и семян растения готовят измельчением высушенного сбора в ступке с пестиком до размера частиц 1-3 мм. Навеску порошка помещают в емкость и добавляют дистиллированной воды в соотношении 1:5-15 и выдерживают до 24 ч, получая при этом водный экстракт. Для получения качественного препарата выполняют следующее. Порошок растения помещается в стеклянный сосуд, в который добавляется н-бутанол из расчета на 1 г навески порошка Смолевки 100 мл растворителя. Данный спирт используется для увеличения объема экстрагируемых веществ, в том числе высокополярных сапонинов [23]. Перемешивание взвеси осуществляется мешалкой с верхним приводом с частотой 100 об/мин. Экстрагирование производится н-бутанолом в течение 24 часов при температуре смеси 30±2°С. Получение жидкой фракции препарата осуществляется с помощью центрифугирования, что сокращает время очищения сырьевого продукта. Надосадочная жидкость подвергается концентрированию в роторном испарителе при температуре 60±2°С при 280±5 об/мин, а также давлении воздуха 4 кПа. Досушивание концентрата производится в вакуум-эксикаторе при комнатной температуре и давлении в 10 кПа в течение 24 часов.
Эффективность предлагаемого способа борьбы и профилактики с пастбищными моллюсками отражена в следующих примерах.
Пример 1. Предварительную работу в условиях лаборатории проводили в ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН, на искусственных биотопах для беспозвоночных [29]. Исследования проводились на «чистых» и инвазированных популяциях мягкотелых - Lymnaea truncatula (малый прудовик) и L. palustris (болотный прудовик) культурами мирацидий возбудителя Fasciola hepatica. Жизнеспособность моллюсков выявляли микроскопированием под бинокулярным микроскопом Levenhuk 3ST во время нагревания беспозвоночных на столике Морозова в течение 5-10 минут по двигательной активности. Учитывали наличие нарушения нормальных процессов жизнедеятельности у моллюсков (отеков, обезвоживания - выделение слизи, геморрагии и др.).
Сбор растения производится в сезонный период года с июля по октябрь месяцы по достижению максимального выхода вегетационной массы. В это время в физиологии растения происходит цветение, созревание семян и, в том числе, накопление ПАВов и дубильных веществ. Растения выкапывают с корнями, промывают в водопроводной воде от грунта и сушат в тени без доступа солнечных лучей до влажности 13-15%. Порошок препарата из корней, листьев, стеблей, цветков и семян растения готовят измельчением высушенного сбора в ступке с пестиком до размера 1-3 мм частиц. Навеску растительного сырья (порошок) из Смолевки белой массой 2,5 г помещают в химический стакан объемом 50 мл, добавляют 25 мл дистиллированной воды. Стакан устанавливают на магнитную мешалку с якорем на 15 сек при 150 оборотах в минуту. Стойкая образовавшаяся пена на поверхности взвеси указывает на наличие ПАВов в приготовленном водном растворе [23]. В качестве контроля №1 использовали порошок Мыльнянки лекарственной, а контролем №2 служили 2 фотокювета с наличием «чистых» популяций прудовиков.
2
2
2
Первичный препарат (порошок), приготовленный на основе Смолевки белой, в условиях лаборатории показал моллюскоцидное действие в отношении двух видов лимнеид. Обработку порошком культур моллюсков проводили рассеиванием вручную в дозе 10 г на площадь 1 мискусственного биотопа. Плотность брюхоногих в фотокюветах была 93-391 экз./м (для малого прудовика) и 184-217 экз./м (для болотного). Температура грунта составляла 18±2°С, а рН среды 6,7-7,0 единиц. Популяции мягкотелых были свободными от личиночных форм гельминтов. В период с 19-х суток исследований по 31-е в опытной группе наблюдались отеки ноги, обезвоживания и, как следствие, гибель беспозвоночных. Показатель жизнеспособности моллюсков к 31 дню опыта составил 0,3% - 2,3% (табл. 1). В контрольной группе №1 гибель мягкотелых отмечалась с 16 по 31 сутки исследований. Жизнеспособность лимнеид к концу наблюдений составила 0 - 1,0%. В контроле №2 выявлена единичная гибель на 11 и 13 сутки в опытной группе у малого прудовика.
2
2
Подготовленный порошок растения помещается в химический стакан объемом 5 л, в который добавляется н-бутанол из расчета 1 г на 100 мл жидкости. Перемешивание растительной взвеси осуществляется мешалкой с верхним приводом с частотой 100 об/мин. Экстрагирование производится в течение 24 часов при температуре смеси 30±2°С. Отделение экстракта осуществляется с помощью центрифуги THERMO (США) при 8000 об/мин в течение 180 секунд. Надосадочная жидкость подвергается концентрированию в роторном испарителе HEIDOLPH (Германия) при температуре 60±2°С при 280±5 об/мин, а также давлении воздуха 4 кПа. Досушивание концентрата осуществляется в вакуум-эксикаторе при комнатной температуре и давлении в 10 кПа в течение 24 часов. Экстрагируемое вещество представляет собой аморфную гелеобразную массу темно-зеленого цвета со специфическим тонким запахом, хорошо растворимо в воде и спирте. Готовится рабочее разведение препарата в виде 1%-ного раствора на водопроводной воде и производится опрыскивание искусственных биотопов с наличием популяций экспериментальных лимнеид. В опыте №1 используются «чистые» популяции лимнеид, то есть свободные от культур возбудителей гельминтозов (т.к. более 2 лет культивируются в условиях лаборатории). Возраст моллюсков на момент проведения исследований был 2-5 месяца. Опытная группа №2 состоит из экспериментально инвазированной популяции малого прудовика мирацидиями фасциолы F. hepatica. Возраст мягкотелых составляет 1,5 месяца, период инвазирования личиночной формой трематодоза - 1 месяц. В качестве контроля №1 на «чистых» популяциях прудовиков используется 1,0%-ный водный экстракт Мыльнянки лекарственной [14]. Группы фотокювет контроля №2 мягкотелых оставались не обработанными моллюскоцидными средствами. Плотность популяций брюхоногих составляет от 84 до 317 экз./м. Учет результатов исследований производится после 8-ми часовой экспозиции. Рабочий раствор экстракта Смолевки использовали в 1,0%-ной концентрации (табл. 2). Подготовленный водный препарат рассеивали ручным распылителем Grida (Китай) объемом 1000 мл из расчета 100 мл на 1 м площади искусственного биотопа. Оценку эффективности применения моллюскоцидных средств проводили по формуле Аббота [1].
100%-й моллюскоцидный эффект оказал экстракт Смолевки на малого прудовика в опытных группах №1 и 2. Основная гибель беспозвоночных отмечалась в течение первого часа наблюдений. В первые минуты после обработки препаратами отмечалось возбуждение мягкотелых, а через 10-15 минут беспозвоночные переставали активно двигаться, тело полностью погружалось в раковину. При микроскопировании брюхоногих (увеличение х2 - 20) в 100%) случаях отмечались отеки покровного эпителия ноги и обильное выделение прозрачной слизи (защитная реакция организма беспозвоночного на моллюскоцид контактного действия). 98,9%-й моллюскоцидный эффект экстракт Смолевки оказал на популяцию болотного прудовика. В контрольной группе №1 100%-й моллюскоцидный эффект наблюдался в популяции малого прудовика и 99,7%-й у болотного. В контроле №2 среди популяции лимнеид никаких изменений не наблюдали.
Пример 2. Опыт производственного (полевого) испытания моллюскоцидных свойств препарата на основе Смолевки белой (Silene latifolia).
2
2
2
2
2
2
2
2
2
Моллюскоцидную активность экстракта на основе Смолевки белой проводили в естественных биотопах поймы р. Ибредки возле с. Сасыкино (территория животноводческого хозяйства ООО «Желудево») Рязанской области Шиловского района (табл. 3). Производственный опыт проводили в течение 7 суток. Объектами для исследований служили прудовики (L. truncatula, L. palustris), катушки (Planorbis planorbis, Planorbarius corneus), физы (Physa fontinalis), ложноконские пиявки (Haemopis sanguisuga) и озерные лягушки (Pelophylax ridibundus). В весенний период было выбрано 5 биотопов (площадью от 4 до 25 м) с легочнодышащими моллюсками на пастбище общей площадью 18 Га. Плотность естественной посадки беспозвоночных на исследуемых площадях была различной: L. truncatula - от 11 до 89 экз./м, L. palustris - от 3 до 251 экз./м, P. fontinalis - от 4 до 19 экз./м, P. planorbis - от 14 до 73 экз./м, P. corneus - от 1 до 54 экз./м. Температуру воды измеряли спиртовым техническим термометром ТТЖ-М (0+200°С) (Россия), а реакцию почвы карманным рН-метром Checker 1 HANNA (Китай). Обработку моллюскоцидным средством на основе 1%-ного рабочего раствора экстракта Смолевки проводили опрыскиванием из аппарата «ЖУК» ОП-209 (Россия) объемом 9 л из расчета 100 мл на м биотопа. В биотопе №1 использовали экстракт Смолевки, полученный из подземной части растения (корневища, корни), в биотопе №2 из надземной части (стебли, листья, соцветия, плоды). В качестве контроля №1 использовали 1,0%-й водный раствор экстракта Мыльнянки лекарственной (расход составил 100 мл на м). В контроле №2 использовали 0,2%-й рабочий раствор Сульфата меди или Медный купорос (расход препарата составил 2 г на м). В контроле №3 использование моллюскоцидных средств не проводилось. Учет результатов исследования проводили через 10 ч, 24 ч и 7 суток после начала опыта. Оценку эффективности применения моллюскоцидных средств проводили согласно общепринятой методике по формуле Hairston N.G. [цит. по 1].
2
В результате поставленных экспериментов на естественных биотопах регистрировались погибшие моллюски, пустые раковины беспозвоночных в количествах от 2 до 89 экз./м. Моллюскоцидная эффективность экстракта на основе Смолевки в биотопах №1 и 2 оказалась 98,1 - 100% в отношении прудовиков, катушек и физ. К концу дня и через сутки регистрировались неподвижные (погибшие) моллюски, а через неделю пустые раковины. Эффективность экстракта Мыльнянки в биотопе №3 составила 98,3 - 100% в отношении малых прудовиков и физ. В биотопе №4 через 10 часов регистрировали мертвых катушек, физ и 3 пиявки, через сутки обнаружили двух погибших озерных лягушек, через неделю находили только раковины беспозвоночных. В биотопе №5 погибших катушек и прудовиков не регистрировали, изменялась только численность моллюсков во время учетного периода.
Пример 3. Опыт полевого испытания моллюскоцидных свойств препарата на основе Смолевки белой (Silene latifolia).
2
2
2
2
Эффективность моллюскоцида на основе Смолевки белой проводили в естественных биотопах поймы р. Каменки д. Свистухи (территория крестьянско-фермерского хозяйства Московской области Дмитровского района) (табл. 4). Исследования также проводили в течение 7 суток. Объектами для исследований служили прудовики (L. truncatula, L. palustris), катушки (P. corneus) и ложноконские пиявки (Н. sanguisuga). Всего было выбрано 4 биотопа (площадью от 3 до 17 м) с моллюсками на пастбище общей площадью 31 га. Естественная посадка беспозвоночных составила: L. truncatula - от 1 до 27 экз./м, L. palustris - от 2 до 174 экз./м, P. corneus - от 1 до 5 экз./м. В биотопе №1 использовали экстракт Смолевки, полученный из всего растения (корневища, корни, стебли, листья, соцветия, плоды). Контролем №1 служил 1,0%-й раствор экстракта Мыльнянки лекарственной, контролем №2 был 0,2%-й раствор Медного купороса. В контроле №3 моллюскоцидов не использовали. Эффективность экстракта на основе Смолевки в биотопе №1 оказалась 98,0 - 100%) в отношении прудовиков. На площади исследуемого биотопа обнаруживали неподвижных моллюсков и пустые раковины. Экстракт Мыльнянки (биотоп №2) в отношении прудовиков показал эффективность на 99,2 - 100%. В биотопе с использованием Медного купороса во время учета обнаружили погибших прудовиков, катушек и 11 ложноконских пиявок. В контрольном биотопе №4 мертвых катушек и прудовиков не регистрировали.
Проведенные экспериментальные исследования показали, что препараты из подземной (корневища, корни) и надземной (стебли, соцветия и листья) частей Смолевки белой (S. latifolia) обладают моллюскоцидным действием, которые можно использовать для пастбищной профилактики гельминтозов животных и птиц.
Список использованных источников
1. Горохов В.В., Осетров B.C. Моллюскоциды и их применение в сельском хозяйстве. - М.: Колос.- 1987. - 224 с.
2. RU 2239321 С1, 2004.
3. RU 2148319 С1, 2000.
4. RU 2141204 С1, 1999.
5. RU 2456803 C1, 2012.
6. RU 2273133 C1, 2006.
7. RU 2273134 C1, 2006.
8. RU 2284108 C1, 2006.
9. RU 2 350 080 C1, 2004.
10. RU 2341082 C1, 2008.
11. RU 2341080 C1, 2008.
12. RU 2354116 C1, 2009.
13. RU 2341081 C1, 2008.
14. RU 2637856 C2, 2017.
15. Ломанович А.Ф., Рябинович А.Ю. Сапонины как моющие средства. – М.-Л.: Пищепромиздат.- 1936. - 66 с.
16. Ларин И.В., Агабабян Ш.М., Работиса Т.А. Кормовые растения сенокосов и пастбищ СССР.- Т. I-III - М.-Л.: Государственное издательство сельскохозяйственной литературы, 1950- 1956.
17. Варлих В.К. Полная иллюстрированная энциклопедия лекарственных растений России. - Москва. РИПОЛ классик, 2008. - 669 с..
18. Барабанов Е.И. Ботаника: учебник для студ. высш. учеб. заведений. - М.: Издат. центр «Академия», 2006. - 448 с.
19. Пешкова Г.И., Шретер А.И. Растения в домашней косметике и дерматологии. Справочник. МСП. 2001. 684 с.
20. RU 2365107 С1, 2009.
21. RU 2239321 C1, 2004.
22. RU 2341081 C1, 2008.
23. Ковалев B.H., Попова H.B., Кисличенко B.C. Практикум по фармакогнозии: Учеб. пособие для студ. вузов. Харьков: Изд-во НФаУ; Золотые страницы. - 2003. 512 с.
24. Алефиров А.Н. Рак толстого кишечника (рак ободочной кишки, рак прямой кишки). Особенности траволечения. Часть 1. Лекция №10. (Электронный ресурс). - Режим доступа: http:// https://www.travolekar.ru/articles/lectio/cr_col.php (дата обращения: 17.01.2021).
25. Фитотерапия в онкологии: лечение рака толстой кишки [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http:// wincancer.ru/fitoterapiya/ rak_tolstoy_kishki.html (дата обращения: 13.01.2021).
26. Акманаев Э.Д. Практикум по кормопроизводству: Раздел "Луговое кормопроизводство": учебное пособие. - Пермь: ПГСХА, 2005. - 246 с.
27. Вавилов, П.П., Балышев Л.Н. Полевые сельскохозяйственные культуры СССР. - М.: Колос, 1984. - 160 с.
28. Маевский, П.Ф. Флора средней полосы европейской части России (10 издание исправленное и дополненное). - М.: Товарищество научных изданий КМК, 2006. - 600 с.
29. Постевой А.Н., Горохов В.В., Андреянов О.Н., Пузанова Е.В. Методические рекомендации: Модифицированная методика содержания моллюсков Lymnaea truncatula с целью получения адолескариев возбудителя фасциолеза Fasciola hepatica. Москва. - ВНИИП. - 2017 г. - 25 с., Материалы рассмотрены и ободрены секцией «Инвазионные болезни» в ВНИИП, Протокол №3 от 22.09.2017 г.