О влиянии растительного средства «Нефрофит» на активность каспазы-3 в ишемизированных клетках почек белых крыс

встречается патология шейки матки. Физические параметры у сельских девочек более развиты, чем у городских: преобладают окружность груди, масса, размеры большого анатомического таза. Дефицит массы как фактор риска созревания репродуктивной системы у городских девочек-подростков встречается почти в 2

раза чаще. Балл полового развития не различается у сельских и городских девочек. Созревание репродуктивной системы к 17 годам наблюдается у 58 % подростков в городе и у 62 % — в селе, что в дельнейшем приводит к снижению реализации репродуктивной функции.

REPRODUCTIVE HEALTH OF ADOLESCENT GIRLS IN URBAN AND RURAL AREAS

V.A. Guryeva, I.M. Danilova, A.N.Danilov

The peculiarities of reproductive and somatic health of adolescent girls, living in an industrial centre and rural areas of the Altai region have been tested. In order to estimate girls’ reproductive potential deep examining of 489 urban and 529 urban rural girls between the ages 15-17 has been held. Clinical and paraclinical methods of testing have been used. The statistic analysis showed that somatic pathology among urban girls compared to rural ones was higher. Gynecological disease of adolescent girls reaches 70-80 per cent. The lack ofweight is considered to be a risk-factor of reproductive system maturity among urban girls and is twice more often spread than among rural girls. The maturity of reproductive system by the age ofl7 is observed among 58% of teenagers living in towns and among 62% of those who live in the rural areas. The received information proved decrease of adolscent girls’ reproductive potential in the Altai Region.

ЛИТЕРАТУРА

1. Богданова Е.А., Кан Н.И. Репродуктивное здоровье у девочек-подростков с ожирениему/ Руководство по гинекологии детей и подростков. — М., 2005. — С.305-318.

2. Вейн А.М. Вегетативные расстройства: клиника, лечение, диагностика. — М.: МИА, 2000. — 752 с.

3. Веселова Н.М. Влияние хронического тонзиллита на становление менструальной функции // Руководство по гинекологии детей и подростков. — М., 2005. — С.253-257.

4. Коколина В. Ф. Гинекологическая эндокринология детей и подростков: рук-во для врачей. — М.: МИА, 2001.

— 251 с.

5. Кулаков В.И. Роль охраны репродуктивного здоровья населения России в решении демографических проблем // Врач. - 2006. - № 9. - С.3-4.

6. Назаренко М.Ю. Репродуктивное здоровье девочек-подростков высокоурбанизированного района, методологические основы и организованные формы его сохранения: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. — Томск,

7. Савельева Г.М., Катушева Л.М., Краснова И.А. Миома матки и репродуктивная функция // Практическая ги-

некология: от новых возможностей к новой стратегии: тез. междунар. конгр. — М., 2006. — С.157-158.

8. Сметник В.П., Тумилович Л.Г. Неоперативная гинекология: рук-во для врачей. — СПб.,1995. — Кн. 1. — 223 с.

9. Тумилович Л.Г, Сальникова Т.П., Дзюба Г.И. Оценка степени полового развития девочек // Акушерство и гинекология. — 1975. — № 3. — С.54-56.

10. Уварова Е.В. Репродуктивное здоровье девочек России в начале 21 века // Акушерство и гинекология. — 2006.

- Прил. - С.27-30.

11. Хабаров С.В. Репродуктивное здоровье сельских жительниц: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. — М., 2002. — 45 с.

12. Шарапова О.В., Баклаенко Н.Г. Актуальные вопросы сохранения репродуктивного здоровья девочек в возрасте до 18 лет в современных условиях // Справочник фельдшера и акушерки. — 2005. — № 3. — С.7-13.

13. Юрьев В.В., Симоходский А. С., Воронович Н.Н, Хомич ММ. Рост и развитие ребенка. — М., 2007. — 260 с.

14. Adolescent Health Care: A Practical Guide: 4th ed. / ed. L. Neinstein. — Philadelphia: Lippincott Williams& Wilkins, 2002. — P.328-329.

15. Groft J.N., Hagen B, Miller N.K., et al. Adolescent health: a rural community’s approach // Rursl Remote Heslth. — 2005. — Vol. 5, № 2. — P.366.

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ

© ЛЕМЗА С.В., МОНДОДОЕВ А.Г., НИКОЛАЕВ С.М., КУШКОЕВА Е.Ф., БИДАГАЕВ Ю.А. - 2008

О ВЛИЯНИИ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «НЕФРОФИТ» НА АКТИВНОСТЬ КАСПАЗЫ-3 в ишемизированных клетках ПОЧЕК БЕЛЫХ КРЫС

С.В. Лемза, А.Г. Мондодоев, С.М. Николаев, Е.Ф. Кушкоева, Ю.А. Бидагаев

Резюме. Исследовали влияние растительного средства «Нефрофит» на интенсивность апоптотического процесса при ишемии/реперфузии почек у белых крыс. Установлено ингибирующее действие «Нефрофита» на активность кас-пазы-3 в дозе 150 мг/кг массы животного.

Ключевые слова: апоптоз, каспаза-3, «Нефрофит».

В последние годы ряд исследований показали зна- нии апоптоза, который может быть индуцирован теми

чимость активации процессов апоптоза при нефропа- же повреждающими факторами, которые приводят к

тиях ишемической, токсической и септической этио- некрозу клеток [5]. Кроме того, при длительных инток-

логии [7,8,11]. Также известно, что развитие функцио- сикациях любыми нефротропными ядами в субтокси-

нальных нарушений почек, их выраженность во мно- ческих дозах гибель клеток нефрона происходит по пути

гом зависит от клеток нефрона находящихся в состоя- индукции апоптоза [10]. Это очень важные наблюдения,

поскольку в отличие от некроза апоптотический процесс на определенных стадиях поддается регулированию в определенных стадиях. Таким образом, выяснение роли апоптоза в патогенезе нефропатий и поиск новых средств, способных оказывать регулирующее влияние на процессы индуцированного апоптоза является весьма актуальной проблемой биологии и медицины.

Цель настоящей работы — изучить динамику апоп-тотического процесса при ишемических повреждениях почек, используя в качестве маркера этого процесса активность каспазы-3, одного из ключевых ферментов наилучшим образом коррелирующего с апоптотическим фенотипом, а также оценить влияние комплексного растительного средства «Нефрофит» представляющего собой комплекс из сухих экстрактов

Orthosiphon stamineus Benth., Polygonum

aviculare L., Arctostaphylos uva ursi L. и в соотношении 4,0:3,5:2,5 на его активность.

Материалы и методы

Опыты проводили на крысах обоего пола массой 180200 г. линии Wistar. Апоптоз индуцировали ишемией/реперфузией почек по методу [9]. После 40-минутной окклюзии почечной артерии восстанавливали кровоток для реперфузии почек. Продолжительность реперфузии составляла 1, 4, 8 и 16 часов. Активность каспазы-3 определяли в клетках канальцев из коркового слоя почек колориметрическим методом согласно рекомендациям к набору реактивов (Caspase-3 Assay Kit, Sigma) в трех группах животных: интактной (ложнооперированные животные), группе с индуцированным апоптозом (контрольная), где также определяли влияние специфического ингибитора и в группе животных с индуцированным апоптозом на фоне введения «Нефрофита» (опытная). В каждой группе было по 8 крыс. Водный раствор «Нефрофита» вводили животным внутрижелудочно в дозе 150 мг/кг в объеме 10 мл/кг накануне вечером и за один час до воспроизведения ишемии. Это средство было выбрано в качестве возможного ингибитора активности каспазы-3 на основании предварительных исследований, которые установили его выраженные нефропротекторные свойства благодаря наличию мембраностабилизирующей и антиоксидантной активности [3,4]. Значимость различий между сравниваемыми группами оценивали по t- критерию Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Как видно из таблицы 1, активность каспазы-3 в группе животных с индуцированным апоптозом значительно превышала ее активность в группе ложноопери-

рованных животных: в 3 раза после часовой реперфузии, в 7,3 раза после 4-часовой и более чем в 15 раз после 8 и 16-часовой реперфузии. Сходная динамика активности фермента наблюдалась и в опытной группе животных, причем под влиянием «Нефрофита» происходило снижение активности каспазы-3, сравнимое с действием специфического ингибитора Ас-БЕУБ-СНО, что, на наш взгляд, является хорошим показателем для средств природного происхождения. К 1 часу реперфузии почек у животных опытной группы активность фермента снижалась на 53%, к 4 — на 42%, к 8 —

Таблица 1

на 41% и к 16 часам почти на 20%. Отсюда следует, что с течением времени ингибирующее влияние «Нефрофита» заметно снижается, вероятно, в результате его биотрансформации в организме.

Таким образом, установлено ингибирующее влияние комплексного растительного средства «Нефрофит» на активность каспазы-3, фермента, который является биохимическим маркером интенсивности апоптотичес-кого процесса. Ранее Пап и Ри [12] показали, что кофейная кислота защищает нейроны мозжечка от угасания при их повреждении нейротоксином и подавляет активацию каспазы-3. Эта работа и приведенные выше [6,10] указывают на то, что входящие в состав растительных экстрактов химические вещества могут оказывать как ингибирующее, так и индуцирующее действие на апоптотический процесс. Что касается механизмов ингибирующего действия «Нефрофита», то здесь можно высказать два предположения. Первое, имея в своем составе достаточное количество свободных аминокислот [2], он может, отчасти, способствовать восполнению дефицита АТФ (ведущего к апоптозу) в результате включения их в цикл Кребса. Второе, содержащиеся в «Нефрофите» флавоноиды и тритерпеноиды [1] могут регулировать транскрипционную активность генов, кодирующих супероксиддисмутазу, глутатионпе-роксидазу, глутатионсинтазу и другие белки, повышающие антиоксидантный статус клетки и снижающие количество повреждений в ДНК, что ведет к повышению жизнестойкости клеток [6].

Влияние «Нефрофита» на активность каспазы-3 при ишемических повреждениях почек у

белых крыс

Группы животных Активность каспазы-3 пмоль/мин/мг белка

1 час 4 часа 8 часов 16 часов

Ложнооперированная 2,40+0,13

Контрольная 7,19+1,04 14,77+1,18 36,60+3,05 36,20+2,46

Контрольная + ингибитор 4,36+0,34 5,03+1,31 14,00+1,56 19,60+2,83

Опытная 3,36+0,23* 8,56+1,75* 21,50+1,10* 29,10+2,21

Примечание: различия в группах контроль — опыт значимы при р < 0,05.

ABOUT INFLUENCE OF VEGETATIVE REMEDY “NEPHROPHYTE” ON ACTIVITY OF CASPASE -3 IN ISCHEMIC CELLS OF WHITE RATS

S.V Lemza, A.G. Mondodoev, S.M. Nikolaev, E.K. Kushkoeva, Yu.A. Bidagaev

The effect ofplant preparation on caspase-3 activity in ischemic renal cells was examined. It has been found that the administration ofNephropnyte at a dose of 150 mg/kg body weight to Wistar albino rats before ischemia/reperfusion injury of kidneys markedly decreased the activity of caspase-3.

ЛИТЕРАТУРА

Маркарян А.А., Абрамов А.А., Даргаева Т.Д. и др. Разработка методов контроля качества и фармакологическое изучение комплексного средства растительного происхождения — гранулы «Нефрофит» // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. - 2003. - Т 44, № 6. - С.356-360. Маркарян А.А., Аляутдин Р.Н., Мондодоев А.Г. Аминокислотный состав нового комплексного растительного препарата «Нефрофит» и его возможная роль в коррекции сулемовой острой почечной недостаточности у

крыс // Бюл. экспер. биол. и мед. — 2004. — Т 137, № 2.

- С.190-194.

3. Маркарян А.А., Даргаева Т.Д., Мондодоев А.Г. Антиоксидантная активность нового растительного сухого экстракта «Нефрофит» // Бюл. экспер. биол. и мед. - 2004.

- Т 137, № 1. - С.39-41.

4. Николаев С.М., Шантанова Л.Н., Мондодоев А.Г. и др. Экспериментальная фитотерапия повреждений почек.

- Улан-Удэ: БГУ, 2003. - С.

5. Перевезенцева Ю.Б. Апоптоз и его роль в патогенезе почек // Нефрология. - 2001. - Т. 5, № 4. - С.17-23.

6. De Feudis F. V., Papadopoulos V., Drieu K Ginkgo biloba extracts and cancer: a research area in its infancy //Fundamental and Clin. Pharmacol. - 2003. - Vol. 17. - P405-417.

7. Dharnidharka V.R., Nadeau K, Cannon C.L., et al. Ciprof-loxicin overdose: acute renal failure with prominent apop-totic changes // Am. J. Kidney Dis. — 1998. — Vol. 31. — P710-712

8. Jaffe R, Ariel I., Beeri R, et al. Frequent apoptosis in human kidneys after renal hypoperfusion // Exp. Nephrol. — 1997. - Vol. 5. - P39-43.

9. Kaushal G.P, Singh A.R., Shah S.V. Identification of gene family of caspases in rat kidney and altered expression in ischemia-reperfusion injury // Am. J. Physiol. - 1998. -

Vol. 274. - P. F581-F595.

10. Ortiz A., Justo P., Sanz A., et al. Targeting apoptosis in acute tubular injury // Biochem. Pharmacol. — 2003. — Vol. 66. — P1589-1594.

11. Schumer M., Colombel M.C., Sawchuk T.S, et al. Morphologic, biochemical, and molecular evidence of apoptosis during the reperfusion phase after brief periods of renal ischemia //Am. J. Pathol. — 1992. — Vol. 140. — P831-838.

12. Tian X.F., Pu X.P. 2004. Caffeic acid (CA) protects cerebellar granule neurons (CGN) from apoptosis induced by neurotoxin 1-methyl-4-phenylpyridnium (MPP) // J. Peking Univ. Health Sci. — 2000. — Vol. 36. — P27-30.

© АЖУНОВА Т.А., БИКМУЛИНА Г.А., РАЗУВАЕВА Я.Г., МОНДОДОЕВ А.Г., ХОБРАКОВА В.Б., ФЕРУБКОЕ.В. - 2008

ВЛИЯНИЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА САБЕЛЬНИКА БОЛОТНОГО НА ТЕЧЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА

Т.А. Ажунова, Г.А. Бикмулина, Я.Г. Разуваева, А.Г. Мондодоев, В.Б. Хобракова, Е.В. Ферубко

Резюме. Курсовое введение экстракта сабельника болотного на фоне экспериментального гломерулонефрита оказывает выраженное нефропротекторное влияние, характеризующееся уменьшением выраженности деструктивных изменении в нефронах, нормализацией показателей функционального состояния почек, липидного спектра крови, ингибированием свободнорадикальных процессов и повышением антиоксидантной защиты организма.

Ключевые слова: экспериментальный гломерулонефрит, экстракт сабельника болотного.

Хронический гломерулонефрит — неуклонно прогрессирующее иммуноопосредованное воспалительное заболевание почек, приводящее к формированию хронической почечной недостаточности. Замедление прогрессирования хронического гломерулонефрита является одной из важнейших проблем практической нефрологии [3,5]. Особый интерес в лечении заболевании почек представляют лекарственные средства растительного происхождения, обладающие выраженной фарма-котерапевтической эффективностью и низкой токсичностью. Так, в народной и традиционной медицине для лечения заболеваний почек издавна применяются га-леновые препараты из сабельника болотного (Comarum palustre L.) в качестве мочегонного и противовоспалительного средства [8,10].

Целью настоящего исследования явилась оценка влияния сухого экстракта из корней и корневищ сабельника болотного на течение экспериментального гломе-рулонефрита.

Материалы и методы

Исследования проведены на крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 180-210 г. Гломерулонефрит вызывали по методике J. Reynolds в модификации И.В. Мухина [6]. Лабораторным животным в 2 точки у хвоста однократно вводили смесь, состоящую из полного адъюванта Фрейнда и 50% тканевого антигена коркового слоя почки интактной крысы; через 3 недели после первого введения инъекцию указанной смеси повторяли в том же объеме. Животные опытной группы получали внутрижелудоч-но раствор сухого экстракта сабельника болотного (ЭСБ) в экспериментально-терапевтической дозе 100 мг/ кг массы 1 раз в сутки в течение 3 недель с момента последнего введения взвеси полного адъюванта Фрейнда с корковым веществом почки. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество воды очищенной по аналогичной схеме. С целью оценки функционального состояния почек измеряли диурез и скорость клубочковой фильтрации, исследовали общий анализ мочи. В сыворотке крови определяли концентрацию креатинина, мочевины и липидный спектр на биохимическом анализаторе «DIANA» с использова-

нием готовых наборов фирмы «Cormay» (Польша). Реакцию перекисного окисления липидов определяли по содержанию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови [1] и в гомогенате ткани [11]. Состояние антиокси-дантной системы организма оценивали по активности ка-талазы в сыворотке крови [2] и содержанию восстановленного глутатиона в крови [12].

Для патоморфологических исследований почки фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в целлоидин-парафин. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином, а также по Массону, ван Гизону и ШИК-реакцией [4]. Морфометрические исследования проводили с использованием компьютерной программы «Motic Image 2000». Определяли количество клеток в клубочке, площадь почечного клубочка, капилляров клубочка и мочевого пространства клубочка [7].

Значимость различий между указанными параметрами среди экспериментальных групп оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия считались существенными при р<0,05 [9].

Результаты и обсуждение Результаты исследований свидетельствовали, что через 3 недели от момента последнего введения антигенного комплекса у животных контрольной группы развивается олигурический синдром с нарушением экскреторной функции почек и выраженной протеину-рией (табл. 1). Так, диурез снижался на 33%, скорость клубочковой фильтрации (СКФ) — в 6 раз, содержание белка в моче увеличивалось в 5 раз по сравнению с таковыми у животных интактной группы. У животных

Таблица 1

Влияние экстракта сабельника болотного на функциональное состояние почек и показатели азотистого обмена у белых крыс при экспериментальном гломерулонефрите

Показатели Группы животных

интактная контрольная опытная

Объем мочи за 3 ч, мл/100 г 1,54+0,11 1,03+0,05 2,91+0,21*

СКФ, мл/час^100г 2,7+0,08 0,44+0,02 1,16+0,09*

Белок в моче, г/л 1,02+0,32 5,10+0,38 3,30+0,04*

Креатинин, мкмоль/мл 72,1+3,91 94,2+5,04 84,6+4,32*

Мочевина, ммоль/мл 5,5+0,42 11,1+0,63 6,9+0,37*

Примечание здесь и далее: * - означает, что значения значимы по сравнению с данными у животных контрольной группы при р<0,05.