5-АРОМАТИЧЕСКОЕ АЛКИНИЛЗАМЕЩЕННОЕ БЕНЗАМИДНОЕ СОЕДИНЕНИЕ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
5-AROMATIC ALKYNYL-SUBSTITUTED BENZAMIDE COMPOUND AND METHOD FOR PRODUCTION THEREOF, PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND USE THEREOF

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к области фармацевтической химии и фармацевтической терапии и, в частности, к классу 5-ароматических алкинилзамещенных бензамидных соединений, способу их получения, фармацевтической композиции, содержащей такое соединение, и используется в качестве отрицательного аллостерического модулятора метаботропного глутамата рецепторный подтип 5 (MGluR5), в частности, при приготовлении лекарственного средства для лечения центральной нервной системы и психических заболеваний, таких как синдром ломкой X-хромосомы, леводопа-индуцированные дискинезии при болезни Паркинсона (PD-LID), гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ), аутизм, боль, беспокойство, депрессия, наркомания и тому подобное.
СВЕДЕНИЯ О ПРЕДШЕСТВУЮЩЕМ УРОВНЕ ТЕХНИКИ
Глутамат, который является самым важным возбуждающим нейромедиатором в центральной нервной системе млекопитающих, играет важную роль в поддержании нормальной функции нервной системы и также играет важную роль во многих патофизиологических процессах, таких как боль, нейродегенеративные повреждения и эпилепсия. В то же самое время массивный выброс и накопление глутамата в нервной системе - основа патологии множества повреждений нервной клетки и нейродегенеративного заболевания, то есть, нейротоксический эффект глутамата, в конечном счете, приводит к смерти нейронов. Эксайтотоксичность, возникающая в результате активации глутаматных рецепторов и оксидативная токсичность, возникающая в результате торможения глутаматных / цистин транспортеров на клеточной мембране, являются источниками многих болезней нервной системы, таких как ишемия головного мозга, болезнь Паркинсона, эпилепсия, таким образом заставляя глутаматные рецепторы стать одной из терапевтических мишеней этих болезней.
Глутаматные рецепторы (GluR), главным образом, разделяют на ионотропные глутаматные рецепторы (iGluRs) и метаботропные глутаматные рецепторы (mGluRs). Антагонист ионотропного глутаматного рецептора достиг некоторого терапевтического эффекта по результатам исследований на животных, непосредственно блокируя постсинаптический эффект глутамата, но он также блокирует нормальную возбуждающую передачу и производит серьезные побочные эффекты, такие как психиатрические симптомы, головокружение, усталость, и т.д., таким образом ограничивая клиническое применение таких составов; и метаботропные глутаматные рецепторы подавляют выброс глутамата через предсинаптический механизм, таким образом уменьшая токсичное вещество и побочный эффект антагониста ионотропного глутаматного рецептора, и, как ожидают, станут новой мишенью для лечения определенных неврологических болезней.
mGluRs (метаботропные глутаматные рецепторы) является одним из членов С-класса надсемейства рецепторов, сопряженных с G-белком (GPCRs). Согласно его гомологии последовательности белка, механизма передачи сигнала системы внутриклеточных вторичных посредников сопряженных рецепторов и специфичностью для разных агонистов, он может быть разделен на три категории. Первая категория mGluRI (mGluR1, mGluR5) в основном распределена в постсинаптической области, рецепторы mGluR1 также распределены в глиальных клетках, а рецепторы mGluR5 распределены в маргинальной зоне коры головного мозга и базальных ганглиях, которые тесно связаны с морфологией дендритных шипов и играют важную роль в синаптической передаче и пластичности. Вторая категория mGluR II (mGluR2, mGluR3) в основном располагается в пресинаптической области, где mGluR2-рецепторы расположены в мозжечке, коре головного мозга, синаптических аксонах таламуса, рецепторы mGluR3 также широко распространены в головном мозге, включая глии. Третья категория mGluRIII (mGluR4, mGluR6, mGluR7, mGluR8) также распределена в пресинаптической области, mGluR 4/7/8 локализуется в цикле движения базальных ганглиев, а рецепторы mGluR6 находятся в нейронах сетчатки. Гомология mGluR внутри группы составляет около 70% и только около 45% между разными группами. mGluR5 главным образом располагается в нейронном постсинаптическом возбуждающем окончании и глии, связывается с белком Gα/q, активирует фосфолипазу С и усиливает внутриклеточное выделение Са2+. Исследования показали, что mGluR5 экспрессируется на высоком уровне в центральной нервной системе (ЦНС), главным образом в областях, связанных с нервной системой и психическими заболеваниями, таких как кора головного мозга, гиппокампе и базальных ганглиях и т.д. Таким образом, mGluR5 является одной из важных мишеней для лечения центральной нервной системы и психических заболеваний.
Что касается разработки лекарства для определенной мишени, ранние исследования в основном были направлены на разработку низкомолекулярных конкурентных антагонистов для эндогенных лигандов, но из-за высокой степени сохранения участков связывания рецепторов mGlu трудно получить соединение с хорошей селективностью к подтипам рецепторов. Кроме того, многие эндогенные лиганды часто являются производными глутаминовой кислоты, не обладают подходящими фармакокинетическими свойствами и проницаемостью ЦНС, что затрудняет их использование в клинических исследованиях. В последние годы всеобщее внимание привлекают аллостерические модуляторы mGlu-рецепторов. Составляющие, связанные с неэндогенными участками лигандов, не активируют либо не антагонистируют рецепторную функцию напрямую, а косвенно усиливают или снижают активность, индуцированную глутаматом, известную как позитивные аллостерические модуляторы (РАМ) и отрицательные аллостерические модуляторы (NAM). Аллостерические модуляторы mGlu-рецептора действуют на аллостерические участки трансмембранной области GPCR, тем самым обеспечивая большие возможности для преодоления дефектов селективности и низкой проницаемости конкурентных антагонистов эндогенных участков рецептора mGlu.
В последние годы отрицательный аллостерический модулятор mGluR5 вызвал большую обеспокоенность у большинства научных работников и крупных фармацевтических компаний в качестве потенциального лекарственного средства для лечения таких заболеваний синдрома ломкой Х-хромосомы, как леводопа-индуцированные дискинезии при болезни Паркинсона (PD-LID), гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ), аутизм, боль, беспокойство, депрессия, наркомания и тому подобное. С 2000 года было подано более 190 заявок на отрицательный аллостерический модулятор mGluR5, из которых 66 заявок на впатент были поданы с 2009 по июнь 2013 года. До настоящего момента были начаты клинические испытания по меньшей мере 9 низкомолекулярных составляющих, из которых в настоящее время 4 соединения проходят II или III этапы клинических испытаний, такие как Mavoglurant, Diproglurant, RG7090 и Fenobam. Следовательно, отрицательный аллостерический регуляторный участок mGluR5 считается идеальной мишенью лекарственных препаратов, в то время как разработка нового отрицательного аллостерического модулятора mGluR5 для лечения центральной нервной системы и заболеваний, связанных с психической системой, на основании изложенного, имеет очень важное значение и хорошие перспективы применения.
Таким образом, в данной области существует острая необходимость в разработке нового аллостерического модулятора mGluR5.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задачей данного изобретения является разработка нового отрицательного аллостерического модулятора mGluR5, в частности, mGluR5 отрицательных аллостерических модуляторов с улучшенной селективностью.
Первый аспект данного изобретения представляет 5-ароматическое алкинилзамещенное бензамидное соединение, имеющее структуру, представленную общей формулой I, и рацемат, R-изомер, S-изомер, фармацевтически приемлемую соль, или их смесь:
X представляет собой СН или N;
R1 выбран из следующей группы: водород, галоген, С1-С6-алкил, галогензамещенный С1-С6-алкил, циано;
2
3
2
3
2
3
R и R каждый независимо выбран из группы, включающей водород, замещенный или незамещенный фенил, замещенный или незамещенный 3-7-членный гетероарил, замещенный или незамещенный 5-7-членный арилметилен, 3-7-членный гетероциклилметилен, каждый гетероциклил независимо содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота; и R и R не являются одновременно водородом; либо R и R вместе с присоединенным атомом азота образуют группу, выбранную из группы, состоящей из замещенного либо незамещенного 5-20-членного гетеро-спироциклического кольца или замещенного либо незамещенного 4-20-членного конденсированного гетероциклического кольца; где замещенное означает один или несколько атомов водорода в группе, замещенные заместителями, выбранными из группы, включающей галоген, С1-С6-алкил, галогензамещенный С1-С6-алкил, С1-С6-алкокси, С1-С6-алкоксикарбонил, галогензамещенный С1-С6-алкокси, С2-С6-алкенил, С2-С6-алкинил, С3-С8-циклоалкил, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметил, карбокси, меркапто, сульфонил, С6-С10-арил и 3-12-членный гетероциклил; где гетероспироциклическое кольцо, конденсированное гетероциклическое кольцо или гетероциклил, каждый независимо, содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота;
кольцо выбирают из группы, состоящей из замещенного или незамещенного 5-6-членного ароматического гетероцикла, замещенного или незамещенного 6-20-членного гетероароматического конденсированного кольца, где заместитель представляет собой 1, 2, 3 или 4 заместителя, выбранных из группы, состоящей из галогена, С1-С6-алкил, галогензамещенный С1-С6-алкил, С1-С6-алкокси, галогензамещенный С1-С6-алкокси, С3-С8-циклоалкил, С3-С8-галогенированный циклоалкил, циано, нитро, амино (-NH2), амино (предпочтительно С1-С6-амино), гидрокси, гидроксиметил, карбокси, меркапто, сульфонил, С6-С10-арил и 3-12-членный гетероциклил, где ароматический гетероцикл, гетероароматическое конденсированное кольцо или гетероциклил, каждый независимо, содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота;
И в случаях, когда R1 является Н,  кольцо представляет собой замещенное или незамещенное 5-членное ароматическое гетероциклическое кольцо;
галогеном является F, Cl, Br или I.
2
3
2
3
В другом предпочтительном варианте осуществления указанные R и R каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, замещенного или незамещенного фенила, замещенного или незамещенного 3-7-членного гетероарила, замещенного или незамещенного 5-7-членного арилметилена, 3-7-членного гетероциклил-метилена, тогда как каждый гетероциклил независимо содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота; R и R не являются одновременно водородом;
2
3
либо R и R вместе с присоединенным атомом азота образуют группу, выбранную из группы, состоящей из замещенного или незамещенного гетеро-спироциклического кольца, замещенного или незамещенного конденсированного гетероциклического кольца; где замещенное означает один или несколько атомов водорода в группе, замещенные заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, С1-С6 алкокси, галогензамещенного С1-С6 алкокси, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметил, карбокси, меркапто, сульфонила или трифторметила.
4
5
6
7
8
В другом предпочтительном варианте осуществления,  кольцо выбирают из группы, состоящей из , , , ,  где R, R, R, R и R каждый представляет 1-4 заместитель в гетерогруппе, и каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогена, С1-С6-алкила, галогензамещенного С1-С6-алкила, С1-С6-алкокси, циано, нитро, амино, гидрокси.
2
В другом предпочтительном варианте осуществления R выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного фенила, замещенного или незамещенного пиридила, замещенного или незамещенного пиразинила; где указанное замещенное означает, что атом(ы) водорода замещен(ы) заместителем (заместителями), выбранным(ы) из группы, состоящей из галогена, С1-С6-алкила, галогензамещенного С1-С6-алкила, С1-С6-алкокси, циано, нитро, амино, гидрокси;
3
R является Н;
2
3
либо R и R вместе с присоединенным N-атомом образуют замещенную или незамещенную группу, выбранную из группы, состоящей из
, , , ,
9
10
11
12
13
где R, R, R, R и R каждый представляет собой 1-4 заместителя при любом прообразе кольца, и каждый заместитель независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, С1-С6-алкила, галогензамещенного С1-С6-алкила, С1-С6 алкокси, циано, нитро, амино, гидрокси.
В другом предпочтительном варианте осуществления  выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного пиридила, замещенного или незамещенного тиазолила, замещенного или незамещенного изоксазолила, замещенного или незамещенного пиримидинила или замещенного или незамещенного индазолила; где заместитель выбирают из группы, состоящей из галогена, С1-С6-алкила, галогензамещенного С1-С6-алкила, С1-С6-алкокси, циано, нитро, амино, гидрокси.
1
В другом предпочтительном варианте осуществления R выбран из Н, F, Cl, СН3, CN.
2
В другом предпочтительном варианте осуществления R выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного фенила, замещенного или незамещенного пиридила или замещенных или незамещенных следующих групп: ,, ,, где указанным замещенным является(-ются) атом(ы) водорода группы замещенные заместителем (заместителями), выбранным(и) из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, С1-С6 алкокси, циано.
В другом предпочтительном варианте осуществления  выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного пиридила, замещенного или незамещенного тиазолила; где заместитель определяется, как указано выше.
В другом предпочтительном варианте осуществления соединение формулы I представляет собой соединение, выбранное из таблицы А.
Во втором аспекте настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция. Фармацевтическая композиция включает: (а) терапевтически эффективное количество 5-ароматического алкинилзамещенного бензамидного соединения формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, рацемат, R-изомер, S-изомер или их комбинацию; и (ii) фармацевтически приемлемый носитель.
В другом предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция используется для лечения заболеваний, связанных с центральной нервной системой и психической системой, предпочтительно для лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из синдрома ломкой Х-хромосомы, леводопа-индуцированной дискинезии при болезни Паркинсона (PD-LID), гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (ГЭРБ), аутизма, болей, беспокойства, депрессии, наркомании, тревожности.
В другом предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция представляет собой препарат для инъекций.
В другом предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция представляет собой лекарственную форму для перорального применения.
Третий аспект настоящего изобретения представляет отрицательный аллостерический модулятор mGluR5, содержащий компонент, выбранный из 5-ароматического алкинилзамещенного бензамидного соединения вышеуказанной общей формулы I, его фармацевтически приемлемой соли, рацемата, R-изомера, S-изомера или их комбинации.
В другом предпочтительном варианте осуществления mGluR5 отрицательный аллостерический модулятор избирательно ингибирует mGluR5.
В другом предпочтительном варианте осуществления отрицательный аллостерический модулятор mGluR5 не оказывает ингибирующего действия на mGluR1 (предпочтительно, отношение между значением IC50 для mGluR5 и значением IC50 для mGluR1 составляет ≥1000, предпочтительно ≥2000, более предпочтительно ≥5000, наиболее предпочтительно ≥10000).
В четвертом аспекте настоящего изобретения используют соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, рацемат, R-изомер, его S-изомер или их смесь, как описано в первом аспекте изобретения, для приготовления лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с mGluR5 (метаботропный глутаматный рецептор, подтип 5).
В другом предпочтительном варианте осуществления заболевание представляет собой заболевание, связанное с центральной нервной системой и психической системой, предпочтительно для лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из синдрома ломкой Х-хромосомы, леводопа-индуцированной дискинезии при болезни Паркинсона (PD-LID), гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (ГЭРБ), аутизма, болей, беспокойства, депрессии, наркомании, тревожности.
Подразумевается, что в данном изобретении каждая из технических функций, определенно описанных выше и ниже (таких как в Примерах), может сочетаться друг с другом, таким образом составляя новые или предпочтительные технические решения, которые не обязательно описывать один за другим из-за громоздкости.
ПЕРЕЧЕНЬ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фигуре 1 показан результат теста подвешивания мыши за хвост Примера 7.
На Фигуре 2 показан результат теста на подергивание мышью головой.
СВЕДЕНИЯ, ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ ВОЗМОЖНОСТЬ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ.
Через длительное и интенсивное изучение заявитель разработал mGluR5 отрицательный аллостерический модулятор как показано в Формуле I. Модулятор может ингибировать mGluR5 с высокой селективностью, не показывая ингибирующее действие на другие глутаматные рецепторы гомологических метаболитов, или показывая слабое ингибирующее действие, который может использоваться для подготовки медицины для лечения mGluR5-связанных заболеваний, таких как заболевания центральной нервной системы и связанные с системой психиатрические заболевания. Данное изобретение выполняется на этой основе.
Термины
Используемый здесь галоген представляет собой F, Cl, Br или I.
Используемый здесь термин «С1-С6-алкил» относится к линейному или разветвленному алкилу с 1-6 атомами углерода, включая, но не ограничиваясь ими, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил и гексил или тому подобное.
Используемый здесь термин «С1-С6 алкокси» относится к линейному или разветвленному алкокси, содержащему от 1 до 6 атомов углерода, включая, но не ограничиваясь ими, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси или тому подобное.
Используемый здесь термин «С2-С6 алкенил» относится к линейному или разветвленному алкенилу, содержащему одну двойную связь, имеющую 2-6 атомов углерода, включая, но не ограничиваясь ими, винил, пропенил, бутенил, изобутенил, пентенил и гексенил.
Используемый здесь термин «С2-С6 алкинил» относится к линейному или разветвленному алкинилу, содержащему одну тройную связь, имеющую от 2 до 6 атомов углерода, включая, но не ограничиваясь ими, этинил, пропинил, бутинил, изобутинил, пентинил, гексинил и тому подобное.
Используемый здесь термин «С3-С10 циклоалкил» относится к циклическому алкилу, содержащему от 3 до 10 атомов углерода в кольце, включая, но не ограничиваясь ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил и циклодецил. Термины «С3-С8 циклоалкил», «С3-С7 циклоалкил» и «С3-С6 циклоалкил» имеют сходные значения.
Используемый здесь термин «С6-С12 арил» относится к арильной группе, имеющей от 6 до 12 атомов углерода, которая не содержит гетероатомов на кольце, таких как фенил, нафтил и тому подобное. Термин «С6-С10 арил» имеет аналогичное значение.
Используемый здесь термин «3-12-членный гетероциклил» относится к насыщенной или ненасыщенной 3-12-членной кольцевой группе, содержащей от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота на кольце, таких как диоксоланил. Термин «3-7-членный гетероциклил» имеет аналогичное значение.
Термин «5-20-членное гетеро-спироциклическое кольцо» относится к насыщенному или ненасыщенному спиро-кольцу, имеющему от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, О или S.
Термин «4-20-членное конденсированное гетероциклическое кольцо» относится к насыщенному, ненасыщенному или ароматическому конденсированному кольцу, имеющему 1-4 гетероатома, выбранных из N, О или S.
В настоящем изобретении, если не указано иное, используемые термины имеют общий смысл, известный специалистам в данной области техники.
Заболевания, связанные с отрицательным аллостерическим модулятором mGluR5
Синдром ломкой Х-хромосомы (FXS), также известный как синдром Мартина-Белла, является распространенным наследственным заболеванием, связанным с задержкой умственного развития. Заболеваемость составляет около 1/1250 у мужчин и 1/2500 у женщин. Неспецифическая задержка умственного развития составляет 2%-6%, а задержка умственного развития, связанная с синдромом ломкой Х-хромосомы составляет 40%. Клиническими симптомами являются различные степени психической отсталости, отсутствие концентрации внимания, гиперактивность, тревожность с перепадами настроения, обсессивно-компульсивное расстройство, аутизм, а также может проявляться в форме плохой координации движений и повышенной вероятности развития эпилепсии, а также других не-неврологических симптомов, таких, как необычное лицо, большие уши, чрезмерное удлинение сустава и гиперфункция яичек, возникающая после полового созревания. Ген вирулентности-FMR1 был успешно клонирован Verkerk с соавторами (1991). Аномальная амплификация (CGG)n тринуклеотидной повторной последовательности на 5' конце гена и аномальное метилирование соседнего участка островка CpG приводят к завершению транскрипции и трансляции гена FMR1, что приводит к сокращению или удалению кодированного продукта FMRP, т.е. ломкого X-белка задержки умственного развития. Появление нокаутных по FMR1 мышей в 1994 году стало важной вехой в изучении синдрома ломкой Х-хромосомы. Bakker с соавторами поместили неомициновый фрагмент в область гена FMR1, тем самым предотвращая экспрессию геном FMRP, чтобы получить мышиную модель синдрома ломкой X-хромосомы. Многие особенности поведения нокаутных по FMR1 мышей очень сходны с таковыми у пациентов с синдромом ломкой Х-хромосомы, в особенности, что касается повышения спонтанной активности, снижения способности привыкания при тесте «открытое поле», повышения степени подверженности аудиогенным припадкам и небольшим дефицитом способности к обучению.
Что касается синдрома ломкой Х-хромосомы, в настоящее время нет одобренных препаратов для его лечения, в то время как применяемое лечение, такое, как специализированное обучение, поведенческая терапия, социальная подготовка и лечение медикаментами может положительно повлиять на прогнозы пациентов и облегчить вторичные симптомы, но не может эффективно исправить основные проблемы синдрома ломкой Х-хромосомы. В настоящее время широко употребляемыми лекарственными средствами являются в основном большие дозы фолиевой кислоты (которая может способствовать улучшению поведения и двигательной активности пациента, качества речи, но не может улучшить умственное развитие и не оказывает действия на взрослых пациентов), антидепрессанты, стимуляторы центральной нервной системы (метилфенидат, декстроамфетамин и т.д., которые эффективны для улучшения дефицита внимания и чрезмерной активности, но имеют много побочных эффектов) и противоманиакальных препаратов (тиоридазин для лечения поведенческих и эмоциональных расстройств).
Синдром ломкой Х-хромосомы вызывается мутацией одного гена FMR1. Мутация гена FMR1 препятствует экспрессии белка FMRP, что приводит к делеции FMRP головного мозга. В нормальных условиях белок FMRP может контролировать либо блокировать активированный сигнальный путь mGluR5 в клетках мозга. Когда FMRP отсутствует, сигнал mGluR5 активируется сверх нормы, что вызывает отклонения в связях и поведении нейронов мозга и когнитивные расстройства, связанные с синдромом ломкой Х-хромосомы. Аномалии дендритного шипика, вызванные синдромом ломкой X-хромосомы, могут быть вызваны чрезмерной активацией пути mGluR-I, индуцированной делецией FMRP, которая влияет на внутриклеточную мобилизацию Са2+ и синтез белка. При эксперименте было обнаружено, что, когда нокаутные по гену FMR1 мыши, культивировавшие гиппокампальные нейроны, получали mGluRI-ингибитор РНССС, содержание связанного с микротрубочками белка 1B (MAP1B) было значительно ниже, чем у необработанных KO (нокаутных) мышей, что подтвердило, что ингибитор может препятствовать синтезу белка, индуцированного активацией mGluR-I. Было также отмечено, что дендритный шипик у ингибированной группы KO (нокаутных) мышей был короче, чем в необработанной группе, что указывает на то, что ингибитор может частично изменять морфологическую аномалию дендритного шипика синдрома ломкой X-хромосомы. Это указывает на то, что ингибитор mGluR-I смог частично заменить функцию отрицательной регуляции FMRP, воздействуя таким образом на функцию этих белков. В ряде исследований также продемонстрировано, что специфически ингибируя mGluR5, можно значительно облегчить симптомы пациентов с FXS, обеспечивая полную безопасность и малое количество побочных эффектов. Следовательно, отрицательный аллостерический регуляторный участок mGluR5 считается идеальной лекарственной мишенью для ломкой Х-хромосомы, а разработка нового отрицательного аллостерического модулятора mGluR5 на данной основе для лечения таких заболеваний имеет очень важное значение и хорошие перспективы применения.
Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ) относится к заболеванию, при котором дискомфорт и/или осложнения вызваны рефлюксом содержимого желудка. В дополнение к эрозивному эзофагиту, пищеводу Барретта и аденокарциноме пищевода, он также вызывает хронический кашель, хронический ларингит, бронхиальную астму, эрозию зубов и другие экстрасофагиальные проявления. Пекинское и Шанхайское эпидемиологическое обследование показало, что распространенность ГЭРБ достигает 5,77%, что серьезно влияет на ежедневную деятельность и качество жизни пациентов. С изменением стиля жизни и питания заболеваемость ГЭРБ в нашей стране растет с каждым годом.
В настоящее время основным лекарственным средством для клинического лечения ГЭРБ является ингибитор протонной помпы (ИПП), но есть ИПП-устойчивые пациенты, симптомы которых не обязательно связаны с кислотой. Кроме того, он часто вызывает рецидив у пациентов после прекращения приема лекарств, а долговременное использование также вызывает у пациентов нежелательные реакции. И большинство других лекарств, таких как ингибиторы рецепторов Н2, прокинетики, регуляторы висцеральной боли, антациды и т.д., эффективны только для пациентов с легкой формой заболевания, что ограничивает их применение в медицинской практике. Традиционные лекарственные средства могут лишь облегчить симптомы в определенной степени и не могут достичь терапевтического эффекта для патогенеза.
Преходящие расслабления нижнего пищеводного сфинктера (ПРНПС) являются одним из основных патогенезов ГЭРБ. Исследования показали, что около 90% рефлюкса у пациентов с ГЭРБ связано с ПРНПС. Глутамат может передавать сенсорную информацию из кишечника в центральную нервную систему, включая блуждающий сигнал, который вызывает ПРНПС. Исследования показали, что селективные отрицательные аллостерические модуляторы mGluR5 могут эффективно ингибировать ПРНПС, уменьшать количество рефлюкса у пациентов и продлевать интервал рефлюкса. Другие исследования показали, что отрицательные аллостерические модуляторы mGluR5 могут снижать чувствительность к колоректальной боли. И висцеральная гипералгезия играет роль в функциональной изжоге и ИПП-устойчивой ГЭРБ, что указывает на то, что она оказывает определенное влияние на ГЭРБ, особенно на ИПП-устойчивую форму ГЭРБ.
Хотя отрицательный аллостерический модулятор mGluR5 является многообещающим препаратом против рефлюкса для лечения ГЭРБ, используемые в медицинской практике препараты имеют ограниченную эффективность и некоторые побочные реакции. Поэтому необходимо разработать безопасные, эффективные и высокоселективные аллостерические модуляторы mGluR5.
Болезнь Паркинсона (PD), также известная как дрожательный паралич, является вторым основным дегенеративным заболеванием центральной нервной системы после болезни Альцгеймера. Основными клиническими симптомами являются снижение двигательной активности, тремор в состоянии покоя, ригидность мышц, нарушение походки и поз. Широкое использование леводопы привело к более эффективному контролю симптомов болезни Паркинсона, но у большинства пациентов после длительного ее применения (более пяти лет) появляется леводопа-индуцированная дискинезия (LID). Леводопа-индуцированная дискинезия (LID) часто выражается в виде танцевальных движений, дистонии, атетоза или простых повторяющихся непроизвольных движениях. Тяжесть проявления часто связана со степенью дегенеративных поражений дофаминергических нейронов.
При болезни Паркинсона (PD), ввиду того, что ингибирующее действие D2-рецептора на бледный шар нейронов стриатума ослабляется и активность передачи глутамата непрямым путем значительно повышается, основной целью лечения болезни Паркинсона (PD) является снижение активности непрямого пути, что может быть достигнуто посредством ингибирования нейротрансмиссии глутамата. Блокирование активности рецептора глутамата лекарственным средством может уменьшить внедрение глутаматергических нейронов, блокировать вызванную леводопой аномальную экспрессию интрастриатного гена и ослабить леводопа-индуцированную дискинезию (LID). mGluR5 в большой мере экспрессируется в проекционных нейронах стриатума, а не в целевом органе вегетативной нервной системы, что является преимуществом по сравнению с неблагоприятным действием традиционных препаратов, действующих непосредственно на систему допамина. Исследования также показали, что отрицательные аллостерические модуляторы mGluR5 могут снизить вероятность леводопа-индуцированной дискинезии (LID) у крыс с болезнью Паркинсона PD; и клинические испытанные лекарственные препараты также подтвердили, что отрицательные аллостерические модуляторы mGluR5 обладают хорошей безопасностью, толерантностью и эффективностью против двигательных расстройств.
Соединение формулы I
Настоящее изобретение представляет собой 5-ароматическое алкинилзамещенное бензамидное соединение, имеющее структуру, представленную следующей общей формулой I, и рацемат, R-изомер, S-изомер, фармацевтически приемлемую соль или их смесь:
в которой:
X представляет собой СН или N;
1
R выбран из следующей группы: водород, галоген, С1-С6-алкил, галогензамещенный С1-С6-алкил, циано;
2
3
2
3
2
3
R и R каждый независимо выбран из группы, включающей водород, замещенный или незамещенный фенил, замещенный или незамещенный 3-7-членный гетероарил, замещенный или незамещенный 5-7-членный арилметилен, 3-7-членный гетероциклилметилен, каждый гетероциклил независимо содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота; и R и R не являются одновременно водородом; или R и R вместе с присоединенным атомом азота образуют группу, выбранную из группы, состоящей из замещенного или незамещенного 5-20-членного гетеро-спироциклического кольца либо замещенного или незамещенного 4-20-членного конденсированного гетероциклического кольца; где замещенное означает один или несколько атомов водорода в группе, замещенных заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, галогензамещенного С1-С6 алкила, С1-С6 алкокси, С1-С6 алкоксикарбонила, галогензамещенного С1-С6 алкокси, С2-С6 алкенила, С2-С6 алкинила, С3-С8 циклоалкила, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, карбокси, меркапто, сульфонила, С6-С10 арила и 3-12-членного гетероциклила; где гетероспироциклическое кольцо, конденсированное гетероциклическое кольцо или гетероциклил, каждый независимо, содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота;
кольцо выбирают из группы, состоящей из замещенного или незамещенного 5-6-членного ароматического гетероцикла, замещенного или незамещенного 6-20-членного гетероароматического конденсированного кольца, где заместитель представляет собой 1, 2, 3 или 4 заместителя, выбранных из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, галогензамещенного С1-С6 алкила, С1-С6 алкокси, галогензамещенного С1-С6 алкокси, С3-С8 циклоалкила, С3-С8 галогенированного циклоалкила, циано, нитро, амино, амино (предпочтительно С1-С6 амино), гидрокси, гидроксиметила, карбокси, меркапто, сульфонила, С6-С10-арила и 3-12-членного гетероциклила, где ароматический гетероцикл, гетероароматическое конденсированное кольцо или гетероциклил, каждый независимо, содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота;
1
и когда R представляет собой Н,  кольцо представляет собой замещенный или незамещенный 5-членный ароматический гетероцикл;
галогеном является F, Cl, Br или I.
2
3
2
3
В другом предпочтительном варианте осуществления указанные R и R каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, замещенного или незамещенного фенила, замещенного или незамещенного 3-7-членного гетероарила, замещенного или незамещенного 5-7-членного арилметилена, 3-7-членного гетероциклил-метилена, тогда как каждый гетероциклил независимо содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из кислорода, серы и азота; R и R не являются одновременно водородом;
2
3
или R и R вместе с присоединенным атомом азота образуют группу, выбранную из группы, состоящей из замещенного или незамещенного гетеро-спироциклического кольца, замещенного или незамещенного конденсированного гетероциклического кольца; где замещенное означает один или несколько атомов водорода в группе, замещенные заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, С1-С6 алкокси, галогензамещенного С1-С6 алкокси, циано, нитро, амино, гидрокси, гидроксиметила, карбокси, меркапто, сульфонила или трифторметила.
4
5
6
7
8
В другом предпочтительном варианте осуществления  кольцо выбирают из группы, состоящей из , , , , , , где R, R, R, R и R каждый представляет 1-4 заместитель в гетерокольце, и каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогена, С1-С6-алкила, галогензамещенного С1-С6-алкила, С1-С6-алкокси, циано, нитро, амино, гидрокси.
2
В другом предпочтительном варианте осуществления R выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного фенила, замещенного или незамещенного пиридила, замещенного или незамещенного пиразинила; где указанное замещенное означает, что атом(ы) водорода замещен(ы) заместителем (заместителями), выбранным(и) из группы, состоящей из галогена, С1-С6-алкила, галогензамещенного С1-С6-алкила, С1-С6-алкокси, циано, нитро, амино, гидрокси;
3
R обозначает Н;
2
3
или R и R вместе с присоединенным N-атомом образуют замещенную или незамещенную группу, выбранную из группы, состоящей из
, , , ,
9
10
11
12
13
где R, R, R, R и R каждый представляет собой 1-4 заместитель при любом прообразе кольца, и каждый заместитель независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, С1-С6-алкила, галогензамещенного С1-С6-алкила, С1-С6 алкокси, циано, нитро, амино, гидрокси.
В другом предпочтительном варианте осуществления  выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного пиридила, замещенного или незамещенного тиазолила, замещенного или незамещенного изоксазолила, замещенного или незамещенного пиримидинила либо замещенного или незамещенного индазолила; где заместитель выбирают из группы, состоящей из галогена, С1-С6-алкила, галогензамещенного С1-С6-алкила, С1-С6-алкокси, циано, нитро, амино, гидрокси.
1
3
В другом предпочтительном варианте R выбран из Н, F, Cl, СН, CN.
2
В другом предпочтительном варианте осуществления R выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного фенила, замещенного или незамещенного пиридила либо замещенных или незамещенных следующих групп: , , , , где указанный замещенный означает атом(ы) водорода группы, замещенный(-ые) заместителем (заместителями), выбранным(и) из группы, состоящей из галогена, С1-С6 алкила, С1-С6 алкокси, циано.
В другом предпочтительном варианте осуществления  выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного пиридила, замещенного или незамещенного тиазолила, где заместитель определяется, как указано выше.
В более предпочтительном варианте осуществления данного изобретения составы основной формулы I данного изобретения являются предпочтительно специфическими следующими составами:
Фармацевтически приемлемые соли
Настоящее изобретение представляет собой фармацевтически приемлемую соль соединения формулы I, в частности, обычную фармацевтически приемлемую соль, образующуюся при взаимодействии соединения формулы I с неорганической или органической кислотой. Например, обычная фармацевтически приемлемая соль может быть получена путем взаимодействия соединения формулы I с неорганической кислотой, включая хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, аминосульфоновую кислоту, фосфорную кислоту и тому подобное, либо с органической кислотой, включая лимонную кислоту, винную кислоту, молочную кислоту, пировиноградную кислоту, уксусную кислоту, бензолсульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, метансульфоновую кислоту, нафталинсульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, нафталиндисульфоновую кислоту, малеиновую кислоту, яблочную кислоту, малоновую кислоту, фумаровую кислоту, янтарную кислоту, пропионовую кислоту, щавелевую кислоту, трифторуксусную кислоту, стеариновую кислоту, памовую кислоту, гидроксималевую кислоту, фенилуксусную кислоту, бензойную кислоту, салициловую кислоту, глутаминовую кислоту, аскорбиновую кислоту, п-анилинсульфоновую кислоту, 2-ацетоксибензойную кислоту, изэтионовую кислоту и т.д.; либо может быть натрием, калиевой солью, солью кальция, солью алюминия или солью аммония, образованной соединением формулы I с неорганическим основанием; либо может представлять собой соль метанамина, соль этиламина или соль этаноламина, образованную соединением формулы I с органическим основанием.
Способ получения соединения формулы I
Другим аспектом настоящего изобретения является способ получения соединения формулы I, который осуществляют в соответствии со следующей схемой (примером):
Стадия а: Трихлорид алюминия растворяют в органическом растворителе, а затем бис(триметилсилил)ацетилен и добавляют на ледяной бане соединение 1 и подвергают взаимодействию для получения соединения 2; органический растворитель представляет собой тетрагидрофуран, диэтиловый эфир, диметилформамид, диметиловый эфир гликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, диоксан, этанол, метанол, этилацетат, дихлорметан или их смесь;
Стадия b: Соединение 2 растворяют в органическом растворителе и добавляют тиоацетамид и перемешивают до завершения реакции для получения соединения 3; органический растворитель представляет собой тетрагидрофуран, диэтиловый эфир, диметилформамид, диметиловый эфир гликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, диоксан, этанол, метанол, этилацетат, дихлорметан или их смесь;
Стадия с: Соединение 3 растворяют в органическом растворителе и добавляют сильное основание до завершения реакции для получения соединения 4; органический растворитель представляет собой тетрагидрофуран, диэтиловый эфир, диметилформамид, диметиловый эфир гликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, диоксан, этанол, метанол, этилацетат, дихлорметан или их смесь; сильным основанием является NaOH, КОН, этоксид натрия или метоксид натрия;
Стадия d: Тионилхлорид добавляют к соединению 5 и нагревают до появления конденсата, получая промежуточное соединение 6; температура нагрева колеблется от 60 до 80°С;
Стадия е: Амин растворяют в органическом растворителе и добавляют определенное количество основания. После того, как соединение 6 растворяют в органическом растворителе, его на ледяной бане добавляют по каплям к раствору амина с получением промежуточного соединения 7; амин выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного анилина, замещенного или незамещенного пиридинамина, тетрагидроизохинолина, 2-метилтетрагидроизохинолина, 7-окса-2-азаспиро[3,5]нонана, 8-окса-2-азаспиро[4,5]декана, 3-трифторметил-5,6,7,8-тетрагидро-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразина гидрохлорид; органический растворитель представляет собой тетрагидрофуран, диэтиловый эфир, диметилформамид, диметиловый эфир гликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, диоксан, этанол, метанол, этилацетат, дихлорметан или их смесь; основание представляет собой ацетат натрия, NaOH, КОН, этоксид натрия, метоксид натрия, карбонат натрия, карбонат калия, триэтиламин или диизопропил амин;
Стадия f: Промежуточное соединение 7 растворяют в органическом растворителе, добавляют некоторое количество основания и алкинильного субстрата, а затем добавляют йодид меди и дихлорид бис-трифенилфосфин палладия и нагревают до появления конденсата для получения соединения 8; органический растворитель представляет собой тетрагидрофуран, толуол, диэтиловый эфир, диметилформамид, диметиловый эфир гликоля, диэтиловый эфир этиленгликоля, диоксан, этанол, метанол, этилацетат, дихлорметан или их смесь; и основание представляет собой ацетат натрия, NaOH, КОН, этоксид натрия, метоксид натрия, карбонат натрия, карбонат калия, триэтиламин или диизопропиламин; и температура нагрева колеблется от 80 до 120°С.
Другие соединения могут быть получены аналогичными методами путем выбора различных исходных материалов.
Фармацевтическая композиция и способы применения
Соединения по настоящему изобретению обладают высочайшей активностью отрицательной аллостерической регуляции mGluR5. Следовательно, соединения по настоящему изобретению и различные кристаллические формы, фармацевтически приемлемые неорганические или органические соли, гидраты или сольваты и фармацевтическая композиция, содержащая соединение по настоящему изобретению в качестве основного активного ингредиента, могут быть использованы для лечения, профилактики и облегчение болезней, связанных с отрицательной аллостерической регуляцией mGluR5, таких как заболевания центральной нервной системы и психической системы и т.д.
Фармацевтическая композиция по изобретению включает соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль в безопасном и эффективном диапазоне доз и фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель. В этих случаях «безопасная и эффективная доза» означает, что количество соединения является достаточным для значительного улучшения состояния, не вызывая значительных побочных эффектов. Как правило, фармацевтическая композиция содержит 1-3000 (активная доза 3-30 мг/кг) мг соединения по изобретению на дозу, предпочтительно 10-2000 мг соединения по изобретению на дозу. Предпочтительно, «доза» представляет собой капсулу или таблетку.
«Фармацевтически приемлемый носитель» означает один или несколько совместимых твердых или жидких наполнителей или желатиновых материалов, которые пригодны для использования человеком, и должны иметь достаточную чистоту и достаточно низкую токсичность. «Совместимость» означает, что каждый компонент композиции может смешиваться с соединениями по настоящему изобретению и друг с другом без значительного снижения эффективности соединений. Некоторые примеры фармацевтически приемлемых носителей включают целлюлозу и ее производные (такие как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза натрия, ацетат целлюлозы и т.д.), желатин, тальк, твердые лубриканты (такие, как стеариновая кислота, стеарат магния), сульфат кальция, растительные масла (такие как соевое масло, кунжутное масло, арахисовое масло, оливковое масло и т.д.), полиолы (такие как пропиленгликоль, глицерин, маннит, сорбит и т.д.), эмульгаторы (такие как Tween), смачивающие агенты (такие, как додецилсульфат натрия), красители, ароматизаторы, стабилизаторы, антиоксиданты, консерванты, вода без пирогена и т.д.
Специального ограничения способа применения соединений или фармацевтических композиций по настоящему изобретению не существует, а типичные способы применения включают (но не ограничивается ими): пероральное, внутриопухолевое, ректальное, парентеральное (внутривенное, внутримышечное или подкожное) и местное применение (введение).
4
Твердые лекарственные формы для перорального применения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В этих твердых лекарственных формах активные соединения смешиваются с по меньшей мере одним обычным инертным эксципиентом (или носителем), таким как цитрат натрия или CaHPO, или смешиваются с любым из следующих компонентов: (а) наполнители или совместители, например крахмал, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота; (b) связующие вещества, например гидроксиметилцеллюлоза, альгинат, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и аравийская камедь; (с) увлажнители, такие как глицерин; (d) разрыхлители, такие как агар, карбонат кальция, картофельный крахмал или крахмал тапиоки, альгиновая кислота, некоторые составные силикаты и карбонат натрия; (д) вещества, замедляющие растворение, такие как парафин; (f) ускорители абсорбции, например соединения четвертичного аммония; (g) смачивающие агенты, такие как цетиловый спирт и глицерилмоностеарат; (h) адсорбенты, например каолин; и (i) смазывающие вещества, такие как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердый полиэтиленгликоль, лаурилсульфат натрия или их смесь. В капсулах, таблетках и пилюлях лекарственные формы могут также содержать буферные агенты.
Твердые лекарственные формы, такие как таблетки, драже, капсулы, пилюли и гранулы, могут быть получены с использованием материалов покрытия и оболочки, таких как кишечнорастворимые покрытия и любые другие материалы, известные в данной области. Они могут содержать контрастные агенты. Высвобождение активных соединений или соединений в композициях может происходить замедленным образом заданными дозами в определенном участке желудочно-кишечного тракта. Примеры компонентов покрытия включают полимеры и воски. При необходимости активные соединения и один или несколько вышеуказанных эксципиентов могут образовывать микрокапсулы.
Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, растворы, суспензии, сиропы или настойки. В дополнение к активному соединению жидкая лекарственная форма может содержать любой обычный инертный разбавитель, известный в данной области, такой как вода или другие растворители, солюбилизаторы и эмульгаторы, например, этанол, изопропанол, этилкарбонат, этилацетат, пропиленгликоль, 1,3-бутандиол, диметилформамид, а также масло, в частности, хлопковое масло, арахисовое масло, масло зародышей кукурузы, оливковое масло, касторовое масло и кунжутное масло или их комбинацию.
Помимо этих инертных разбавителей композиция может также содержать добавки, такие как смачивающие агенты, эмульгаторы и суспендирующие агенты, подсластители, ароматизаторы и отдушки.
В дополнение к активному соединению суспензия может содержать суспендирующий агент, например этоксилированный изооктадеканол, полиоксиэтиленсорбит и сложный эфир сорбитана, микрокристаллическую целлюлозу, метоксид алюминия и агар или их комбинацию.
Композиции для парентеральной инъекции могут содержать физиологически приемлемые стерильные водные или безводные растворы, дисперсии, суспензии или эмульсии и стерильные порошки, которые могут быть повторно растворены в стерильных растворах или дисперсиях для инъекций. Подходящие водные и неводные носители, разбавители, растворители или эксципиенты включают воду, этанол, полиолы и любые подходящие их смеси.
Дозированные формы для местного применения соединений по изобретению включают мази, порошки, пластыри, аэрозоли и средства для ингаляций. Активный ингредиент при необходимости смешивают с физиологически приемлемым носителем и любым консервантом, буфером или пропеллентом в стерильных условиях.
Соединение по настоящему изобретению можно вводить отдельно или в комбинации с любым другим фармацевтически приемлемым соединением.
При использовании фармацевтической композиции безопасное и эффективное количество соединения по настоящему изобретению применяется к млекопитающему (например, человеку), нуждающемуся в лечении, где применяемая доза представляет собой фармацевтически эффективную дозу. Для человека весом 60 кг суточная доза обычно составляет 1-2000 мг, предпочтительно 6-600 мг. Конечно, конкретная доза также должна зависеть от различных факторов, таких как способ приема, состояние здоровья пациента, которые хорошо известны в рамках квалификации опытного врача.
Далее настоящее изобретение будет проиллюстрировано со ссылкой на конкретные примеры. Следует понимать, что эти примеры предназначены только для иллюстрации изобретения, но не для ограничения объема изобретения. Экспериментальные методы без каких-либо конкретных условий, описанных в следующих примерах, как правило, выполняются в соответствии с обычными условиями или в соответствии с инструкциями производителя. Если не указано иное, части и процентное содержание рассчитываются исходя из веса. Исходные материалы, используемые в настоящем изобретении, являются коммерчески доступными без специального описания.
Пример 1. Получение 2-фтор-5-Спиридин-2-этинил)-N-(4-фторфенил) бензамида (ZD001)
1.1. Синтез 2-фтор-5-йодбензоилхлорида
500 мл 2-фтор-5-йодбензойной кислоты помещали в колбу грушевидной формы на 50 мл, затем добавляли 3 мл тионилхлорида и нагревали при 77°С в течение 2 часов. Реакцию контролировали тонкослойной хроматографией (ТСХ). По завершении реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и сушили с помощью ротационного выпаривания для удаления тионилхлорида с получением 524 мг 2-фтор-5-йодбензоилхлорида в виде бесцветной жидкости.
1.2 Синтез 2-фтор-N-(4-фторфенил)-5-йодбензамида
200 мг 4-фторанилина растворяли в 5 мл этилацетата и добавляли 260 μl триэтиламина. Затем добавляли по каплям 2-фтор-5-йодбензоилхлорид в этилацетате при охлаждении льдом, реакция завершалась через 1,5 часа. Для разбавления добавляли 10 мл этилацетата, а для экстрагирования добавляли 20 мл воды. Смесь экстрагировали этилацетатом трижды, один раз промывали насыщенным рассолом, сушили над безводным сульфатом натрия и сушили с помощью ротационного выпаривания с получением 620 мг 2-фтор-N-(4-фторфенил)-5-йодбензамида в виде светло-желтого твердого вещества.
1.3 Синтез конечного продукта ZD001
1
3
625 мг 2-фтор-N-(4-фторфенил)-5-йодбензамида растворяли в толуоле, добавляли 1,5 экв. 2-этинилпиридина и 2,2 экв. триэтиламина, а затем 0,2 экв. йодистой меди, 0,2 экв. бис(трифенилфосфин)палладий дихлорида. Смесь нагревали и перемешивали при 100°С в течение 6 часов в инертной атмосфере. Реакционную жидкость сушили путем ротационного выпаривания и очищали с получением 460 мг ZD001 в виде желтовато-коричневого твердого вещества, выход 79%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 10.61 (s, 1Н), 8.62 (d, J=4.1 Гц, 1Н), 7.95-7.80 (m, 3Н), 7.78-7.71 (m, 2Н), 7.68 (d, J=7.8 Гц, 2Н), 7.51-7.41 (m, 2Н), 7.22 (t, J=8.9 Гц, 2Н). LRMS (EI) m/z 335(М+).
Пример 2. Получение (2-хлор-5-(пиридин-2-этинил) фенил) (7-окса-2-аза-спиро [3,5] нонан-2-ил) метанона (ZD002)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 2-хлор-5-йодбензойной кислотой, а 4-фторанилин заменяли 7-окса-2-азаспиро [3,5] нонаном, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD002, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.62 (m, J=4.9, 1.8, 0.9 Гц, 1Н), 7.70 (m, J=7.7, 1.8 Гц, 1H), 7.56-7.55 (m, 1Н), 7.54-7.50 (m, 2Н), 7.40 (dd, J=8.1, 0.7 Гц, 1H), 7.30-7.26 (m, 1H), 3.94 (s, 4H), 3.65-3.49 (m, 4H), 1.89-1.70 (m, 4H). LRMS (EI) m/z367(M+).
Пример 3. Получение (2-хлор-5-(пиридин-2-этинил) фенил) (8-окса-2-аза-спиро [4,5] дек-2-ил) метанона (ZD003)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 2-хлор-5-йодбензойной кислотой, а 4-фторанилин заменяли 8-окса-2-азаспиро [4,5] деканом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD003, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.63 (d, J=4.1 Гц, 1Н), 7.70 (t, J=7.8 Гц, 1H), 7.57-7.49 (m, 3H), 7.43-7.38 (m, 1H), 7.28 (d, J=7.5 Гц, 1H), 3.83-3.65 (m, 4H), 3.44 (dd, J=104.9, 12.7 Гц, 2H), 1.87 (dt, J=27.5, 7.2 Гц, 3H), 1.64 (t, J=5.3 Гц, 2H), 1.60-1.48 (m, 3H).LRMS (EI) m/z 381 (М+).
Пример 4. Получение 2-фтор-Н-(4-фторфенил)-5-((2-метилтиазол-4-ил) этинил) бензамида (ZD004)
1
3
2-этинилпиридина заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD004, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.34 (dd, J=7.5, 2.1 Гц, 1H), 7.68 (dd, J=5.4, 3.1 Гц, 1H), 7.65-7.58 (m, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.18 (dd, J=11.7, 8.6 Гц, 1H), 7.08 (t, J=8.6 Гц, 2H), 2.75 (s, 3H).LRMS (EI) m/z 355(M+).
Пример 5. Получение 2-хлор-N-(4-фторфенил)-5-(пиридин-2-этинил) бензамида (ZD036)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 2-хлор-5-йодбензойной кислотой, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD036, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.65 (s, 1Н), 7.99 (s, 2H), 7.80 (s, 1H), 7.63 (d, J=8.3 Гц, 4H), 7.45 (d, J=8.1 Гц, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.08 (t, J=8.3 Гц, 2H).LRMS (EI) m/z 351(M+)
Пример 6. Получение 2-хлор-Н-(4-фторфенил)-5-((2-метилтиазол-4-ил) этинил) бензамида (ZD037)
1
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 2-хлор-5-йодбензойную кислоту и 2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD037, выход 80%. Н NMR (400 МГц, DMSO) δ 10.63 (s, 1Н), 7.96 (s, 1Н), 7.79 (d, J=1.7 Гц, 1Н), 7.76-7.70 (m, 2Н), 7.67 (dt, J=15.5, 5.2 Гц, 2Н), 7.21 (t, J=8.9 Гц, 2Н), 2.68 (s, 3H).LRMS (EI) m/z 371(М+)
Пример 7. Получение 2-фтор-N-(4-фторфенил)-5-(пиридин-3-этинил) бензамида (ZD038)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 3-этинилпиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD038, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 9.28-8.51 (s, 1Н), 8.47-8.30 (m, 2H), 7.85 (d, J=7.8 Гц, 1H), 7.73-7.55 (m, 3H), 7.53-7.32 (m, 1H), 7.21 (dd, J=11.7, 8.6 Гц, 1H), 7.08 (t, J=8.6 Гц, 2H).LRMS (EI) m/z 335(M+)
Пример 8. Получение 2-фтор-N-(4-фторфенил)-5-(пиридин-4-этинил) бензамида (ZD039)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинилпиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD039, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.44-8.34 (m, 3H), 7.93-7.79 (m, 1H), 7.70 (s, 1Н), 7.63 (dd, J=8.6, 4.6 Гц, 3H), 7.24-7.18 (m, 1H), 7.09 (t, J=8.5 Гц, 3H).LRMS (EI) m/z 335(M+)
Пример 9. Получение N-(4-фторфенил)-2-метил-5-(пиридин-2-этинил) бензамида (ZD040)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 2-метил-5-йодбензойной кислотой, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD040, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.57 (d, J=4.3 Гц, 1Н), 8.23 (s, 1H), 7.73-7.57 (m, 4H), 7.49 (td, J=6.7, 3.2 Гц, 2H), 7.25-7.20 (m, 2H), 7.02 (t, J=8.6 Гц, 2H), 2.47 (s, 3H).LRMS (EI) m/z 331(M+)
Пример 10. Получение N-(4-фторфенил)-2-метил-5-((2-метилтиазол-4-ил) этинил) бензамида (ZD041)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 2-метил-5-йодбензойной кислотой и 2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD041, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.79 (s, 1Н), 7.66 (s, 1H), 7.60 (dd, J=8.5, 4.7 Гц, 2H), 7.49 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.24 (d, J=7.8 Гц, 1H), 7.05 (t, J=8.5 Гц, 2H), 2.74 (s, 3H), 2.50 (s, 3H).LRMS (EI) m/z 351 (M+)
Пример 11. Синтез 2-фтор-5-(пиридин-2-этинил)-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD042)
1
3
4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD042, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.72 (d, J=13.1 Гц, 2Н), 8.65-8.59 (m, 1H), 8.41 (d, J=3.5 Гц, 1Н), 8.31 (dd, J=7.4, 2.2 Гц, 2H), 7.74-7.68 (m, 2H), 7.53 (dt, J=7.8, 1.0 Гц, 1H), 7.35 (dd, J=8.3, 4.7 Гц, 1H), 7.30-7.26 (m, 1H), 7.19 (dd, J=11.5, 8.6 Hz, 1H).LRMS (EI) m/z 318(M+)
Пример 12. Синтез 2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-илэтинил)-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD043)
l
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD043, выход 80%. H NMR (400 МГц z, CDCl) δ 8.74 (s, 1Н), 8.67 (d, J=13.8 Гц, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.33 (d, J=8.1 Гц, 1H), 8.27 (dd, J=7.4, 2.2 Гц, 1H), 7.67 (ddd, J=8.4, 4.9, 2.3 Гц, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.17 (dd, J=11.6, 8.6 Гц, 1H), 2.73 (s, 3H).LRMS (EI) m/z 338(M+)
Пример 13. Получение N-(4-цианофенил)-2-фтор-5-(пиридин-2-этинил) бензамида (ZD044)
1
3
4-фторанилин заменяли на 4-цианоанилин, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD044, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.70 (d, J=14.4 Гц, 1H), 8.35 (d, J=7.2 Гц, 1H), 7.82 (d, J=8.7 Гц, 2H), 7.75 (s, 2H), 7.67 (d, J=8.6 Гц, 2H), 7.62-7.50 (m, 1H), 7.39-7.27 (m, 1H), 7.21 (dd, J=11.6, 8.5 Гц, 1H).LRMS (EI) m/z 342(M+)
Пример 14. Получение N-(4-цианофенил)-2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-ил) этинил) бензамида (ZD045)
1
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли на 4-цианоанилин, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD045, выход 80%. Н NMR (400 МГц, DMSO) δ 10.95 (s, 1Н), 7.94 (s, 1H), 7.92 (s, 1Н), 7.91-7.88 (m, 2Н), 7.85 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.82-7.77 (m, 1Н), 7.47 (s, 1Н), 2.68 (s, 3H).LRMS (EI) m/z 362(M+)
Пример 15. Получение (3,4-дигидроизохинолин-2(1H-ил)(2-фтор-5-(пиридин-2-илэтинил)фенил) метанона (ZD046)
1
3
4-фторанилин заменяли 3,4-дигидроизохинолином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD046, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.62 (s, 1Н), 7.73-7.61 (m, 3Н), 7.54-7.49 (m, 1H), 7.30-7.26 (m, 1H), 7.25-7.17 (m, 3H), 7.14 (dd, J=11.5, 6.5 Гц, 2H), 4.72 (d, J=170.6 Гц, 2H), 3.58 (t, J=5.8 Гц, 2H), 2.93 (dt, J=42.1, 5.6 Гц, 2H).LRMS (EI) m/z 357(M+)
Пример 16. Получение (3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил)(2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)фенил) метанона (ZD047)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 3,4-дигидроизохинолином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD047, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.62-7.56 (m, 2Н), 7.36 (d, J=7.0 Гц, 1Н), 7.25-7.16 (m, 3Н), 7.12 (t, J=9.0 Гц, 2H), 4.71 (d, J=171.9 Гц, 2H), 3.57 (t, J=5.8 Гц, 2H), 2.92 (d, J=43.6 Гц, 2H), 2.73 (d, J=3.6 Гц, 3H).LRMS (EI) m/z 377(M+)
Пример 17. Получение (2-фтор-5-(пиридин-2-илэтинил)фенил)(1-метил-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил) метанона (ZD048)
1
3
4-фторанилин заменяли 1-метил-3,4-дигидроизохинолином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD048, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.62 (d, J=4.7 Гц, 1H), 7.74-7.59 (m, 3Н), 7.51 (d, J=7.8 Гц, 1H), 7.25-7.23 (m, 1H), 7.23-7.09 (m,5H), 5.81 (d, J=6.7 Гц, 1H), 3.72-3.42 (m, 2H), 2.73 (d, J=16.0 Гц, 2H), 1.60 (d, J=6.8 Гц, 3H).LRMS (EI) m/z 371(M+)
Пример 18. Получение (2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)фенил)(1-метил-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил) метанона (ZD049)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 1-метил-3,4-дигидроизохинолином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD049, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.62-7.55 (m, 2Н), 7.37 (s, 1Н), 7.18 (ddd, J=11.5, 9.2, 5.7 Гц, 3Н), 7.11 (dd, J=11.8, 5.7 Гц, 2H), 5.80 (d, J=6.7 Гц, 1H), 3.54 (dd, J=50.6, 6.1 Гц, 2H), 3.34-2.81 (m, 2H), 2.73 (s, 3H), 1.59 (d, J=6.8 Гц, 3H).LRMS (EI) m/z 391(M+).
Пример 19. Синтез 2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-илэтинил)-Ы-(пиридин-3-ил) никотинамида (ZD050)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 2-фтор-5-йодпиколиновую кислоту, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD050, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.699 (s, 1H), 2.501 (s, 3H), 8.869 (1H, d), 8.894 (d, 1H), 8.402 (ddd, 1H), 7.476 (ddd, 1H), 7.316 (ddd, 1H,), 8.404 (ddd, 1H). LRMS (EI) m/z 339(M+).
Пример 20. Получение 2-фтор-Н-(4-фторфенил)-5-(пиридин-2-илэтинил) никотинамида (ZD051)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную заменяли 2-фтор-5-йодпиколиновой кислотой, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD051, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.719 (1Н, d), 8.813 (1H, d), 7.743 (1H, ddd), 7.743 (1H, ddd), 7.017 (1H, ddd), 7.017 (1H, ddd), 7.492 (1H, ddd), 8.729 (1H, ddd), 7.848 (1H, ddd), 7.221 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 336(M+).
Пример 21. Получение (3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил)(2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)пиридин-3-ил) метанона (ZD052)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 3,4-дигидроизохинолином, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 2-фтор-5-йодпиколиновую кислоту, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD052, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.264 (1H), 2.455 (s,3H), 8.688 (1Н, d), 8.758 (1Н, d), 4.354 (1Н, d), 4.467 (1Н, d), 3.658 (1Н, ddd), 3.359 (1Н, ddd), 2.926 (1Н, ddd), 3.020 (1Н, ddd), 6.866 (1H, ddd), 7.240 (1Н, ddd), 7.041 (1Н, ddd), 7.168 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 378(M+).
Пример 22. Получение 2-фтор-N-(4-фторфенил)-5-((2-метилтиазол-4-ил) этинил)никотинамида (ZD053)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 2-фтор-5-йодпиколиновую кислоту, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD053, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.265 (s, 1Н), 2.454 (s, 3H), 8.690 (1H, d), 8.766 (1H, d), 7.743 (1H, ddd), 7.743 (1H, ddd), 7.017 (1H, ddd), 7.017 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 356(M+).
Пример 23. Получение 2-хлор-N-(4-фторфенил)-5-((2-метилтиазол-4-ил) этинил)никотинамида (ZD054)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 2-хлор-5-йодпиколиновой кислотой, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1 с получением продукта ZD054, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.690 (1Н, d), 8.703 (1Н, d), 7.744 (1H, ddd), 7.744 (1H, ddd), 7.018 (1Н, ddd), 7.018 (1Н, ddd), 7.284 (s, 1Н), 2.408 (s, 3Н). LRMS (EI) m/z 373(M+).
Пример 24. Синтез 2-фтор-5-(пиридин-2-илэтинил)-N-(пиридин-3-ил) никотинамида (ZD055)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 2-фтор-5-йодпиколиновую кислоту, 4-фторанилин заменяли на 3-аминопиридин, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как и в примере 1 с получением продукта ZD055, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.719 (1H, d), 8.813 (1H, d), 8.402 (1Н, ddd), 7.476 (1Н, ddd), 7.315 (1Н, ddd), 7.492 (1Н, ddd), 8.404 (1Н, ddd), 8.729 (1Н, ddd), 7.848 (1H, ddd), 7.221 (1Н, ddd). LRMS (EI) m/z 319(М+).
Пример 25. Получение (3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил)(2-фтор-5-(пиридин-2-илэтинил)пиридин-3-ил) метанона (ZD056)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 2-фтор-5-йодпиколиновую кислоту, 4-фторанилин заменяли 3,4-дигидроизохинолином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1 с получением продукта ZD056, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.718 (1Н, d), 8.807 (1Н, d), 4.356 (1Н, d), 4.468 (1Н, d), 3.659 (1H, ddd), 3.359 (1H, ddd), 2.926 (1Н, ddd), 3.020 (1Н, ddd), 6.866 (1Н, ddd), 7.492 (1Н, ddd), 7.240 (1H, ddd), 7.041 (1Н, ddd), 8.729 (1H, ddd), 7.848 (1Н, ddd), 7.168 (1H, ddd), 7.221 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 358(M+).
Пример 26. Получение 2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)-N-бензоиланилина (ZD057)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли анилином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как и в примере 1, с получением продукта ZD057, выход 80%, Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.264 (s, 1Н), 2.406 (s, 3Н), 8.503 (1H, dd), 7.857 (1H, dd), 7.401 (1H, dd), 7.481 (1H, dddd), 7.481 (1H, dddd), 7.272 (1H, dddd), 7.272 (1H, dddd), 7.069 (1H, tt). LRMS (EI) m/z 337(M+).
Пример 27. Синтез 2-циано-5-((2-метилтиазол-4-илэтинил)-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD058)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 2-циано-5-йодпиколиновую кислоту, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как и в примере 1, с получением продукта ZD058, выход 80%). Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.411 (s, 1Н), 2.554 (s, 3Н), 8.561 (1Н, dd), 7.793 (1Н, dd), 8.051 (1Н, dd), 8.404 (1Н, ddd), 7.455 (1Н, ddd), 7.317 (1Н, ddd), 8.405 (1Н, ddd). LRMS (EI) m/z 345(M+).
Пример 28. Синтез 5-((2-метилтиазол-4-илэтинил)-N-(пиридин-3-ил)-2-(трифторметил) бензамида (ZD059)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 2-трифторметил-5-йодпиколиновой кислотой, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD059, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.461 (s, 1H), 2.478 (s, 3Н), 8.585 (1H, dd), 7.899 (1Н, dd), 7.781 (1Н, dd), 8.404 (1Н, ddd), 7.455 (1Н, ddd), 7.317 (1Н, ddd,), 8.405 (1Н, ddd). LRMS (EI) m/z 388(M+).
Пример 29. Получение N-(4-фторфенил)-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)-2-(трифторметил) бензамида (ZD060)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 2-трифторметил-5-йодпиколиновой кислотой, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1 с получением продукта ZD060, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.461 (s, 1H), 2.478 (s, 3Н), 8.585 (1H, dd), 7.899 (1H, dd), 7.781 (1H, dd), 7.745 (1H, ddd), 7.746 (1H, ddd), 7.018 (1H, ddd), 7.018 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 405(M+).
Пример 30. Получение 2-циано-N-(4-фторфенил)-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD061)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-циано-5-йодбензойную кислоту заменяли на 2-циано-5-йодпиколиновую кислоту, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD061, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.379 (s, 1Н), 8.556 (1Н, dd), 7.794 (1H, dd), 8.044 (1H, dd), 7.745 (1H, ddd), 7.745 (1H, ddd), 7.018 (1H, ddd), 7.018 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 362(M+).
Пример 31. Получение 4-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)-2-(1,2,3,4-дигидроизохинолин-2-карбонил) бензонитрила (ZD062)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 2-циано-5-йодпиколиновую кислоту, 4-фторанилин заменяли 3,4-дигидроизохинолином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD062, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.410 (s, 1Н), 2.554 (s, 3Н), 8.544 (1Н, dd), 7.790 (1Н, dd), 8.046 (1H, dd), 4.330 (1Н, d), 4.474 (1H, d), 3.665 (1H, ddd), 3.375 (1Н, ddd), 2.928 (1Н, ddd), 3.023 (1H, ddd), 6.867 (1Н, ddd), 7.240 (1Н, ddd), 7.042 (1Н, ddd), 7.168 (1Н, ddd). LRMS (EI) m/z 384(M+).
Пример 32. Получение (3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил)(5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)-2-(трифторметил)фенил) метанона (ZD063)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 2-трифторметил-5-йодпиколиновой кислотой, 4-фторанилин заменяли 3,4-дигидроизохинолином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD063, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.459 (s, 1Н), 2.477 (s, 3Н), 8.567 (1H, dd), 7.896 (1H, dd), 7.779 (1H, dd), 4.325 (1H, d), 4.467 (1H, d), 3.663 (1H, ddd), 3.374 (1H, ddd), 2.928 (1H, ddd), 3.023 (1Н, ddd), 6.867 (1H, ddd), 7.240 (1H, ddd), 7.042 (1H, ddd), 7.168 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 427(M+).
Пример 33. Получение 2-фтор-N-(2-фторфенил)-5-((2-метилтиазол-4-ил) этинил) бензамида (ZD064)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли на 2-фторанилин, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD064, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.264 (s, 1H), 2.406 (s, 3Н), 8.504 (1H, dd), 7.858 (1Н, dd), 7.401 (1H, dd), 8.107 (1H, ddd), 7.025 (1H, ddd), 7.235 (1H, ddd), 7.035 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 355(M+).
Пример 34. Получение 2-фтор-N-(3-фторфенил)-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD065)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли на 3-фторанилин, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD065, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.264 (s, 1H), 2.406 (s, 3Н), 8.503 (1H, dd), 7.858 (1H, dd), 7.401 (1H, dd), 7.722 (1H, ddd), 7.533 (1H, ddd), 7.335 (1H, ddd), 7.013 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 355(M+).
Пример 35. Получение N-(3,4-дифторфенил)-2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD066)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 3,4-дифторанилином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD066, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.264 (s, 1H), 2.406 (s, 3Н), 8.504 (1Н, dd), 7.858 (1Н, dd), 7.401 (1H, dd), 7.725 (1Н, dd), 7.278 (1H, dd), 7.299 (1Н, dd). LRMS (EI) m/z 373(M+).
Пример 36. Получение N-(2,4-дифторфенил)-2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD067)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 2,4-дифторанилином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD067, выход 80%. H NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.566 (s, 1H), 2.523 (s, 3Н), 7.887 (1H, dd), 7.988 (1Н, dd), 7.516 (1Н, dd), 7.538 (1H, dd), 7.397 (1Н, dd), 6.877 (1Н, dd). LRMS (EI) m/z 373(M+).
Пример 37. Получение N-(4-хлорфенил)-2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD068)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 4-хлоранилином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD068, выход 80%. H NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.417 (1H, ddd), 7.417 (1H, ddd), 7.750 (1H, ddd), 7.750 (1H, ddd), 8.503 (1H, dd), 7.392 (1H, dd), 7.903 (1H, dd), 7.264 (s, 1H), 2.406 (s, 3H). LRMS (EI) m/z 372(M+).
Пример 38. Получение 2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-илэтинил)-N-(4-(трифторметил)фенил) бензамида (ZD069)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 4-трифторметиланилом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD069, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDC1) δ 7.264 (s, 1Н), 2.406 (s, 3Н), 8.503 (1H, dd), 7.858 (1H, dd), 7.401 (1H, dd), 7.251 (1H, ddd), 7.251 (1H, ddd), 7.573 (1H, ddd), 7.573 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 405(M+).
Пример 39. Получение 2-фтор-N-(4-метоксифенил)-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD070)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 4-метоксианилом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как и в примере 1, с получением продукта ZD070, выход 80%. H NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.264 (s, 1H), 2.406 (s, 3Н), 8.503 (1H, dd), 7.858 (1H, dd), 7.401 (1H, dd), 7.277 (1H, ddd), 7.277 (1H, ddd), 6.636 (1H, ddd), 6.636 (1H, ddd), 3.760 (s, 3H). LRMS (EI) m/z 367(M+).
Пример 40. Получение 2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-илэтинил)-N-(пиридин-2-ил) бензамида (ZD071)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 2-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как и в примере 1, с получением продукта ZD071, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDC1) δ 7.265 (s, 1Н), 2.406 (s, 3Н), 8.507 (1H, dd), 7.859 (1H, dd), 7.402 (1H, dd), 7.661 (1H, ddd), 8.404 (1H, ddd), 7.755 (1H, ddd), 7.106 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 338(M+).
Пример 41. Получение 2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-илэтинил)-N-(пиридин-4-ил) бензамида (ZD072)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 4-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD072, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.264 (s, 1Н), 2.406 (s, 3Н), 8.505 (1H, dd), 7.858 (1H, dd), 7.401 (1H, dd), 7.971 (1H, ddd), 7.971 (1H, ddd), 8.501 (1H, ddd), 8.500 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 338(M+).
Пример 42. Получение 2-фтор-N-(6-фторпиридин-3-ил)-5-((2-метилтиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD073)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 6-фтор-3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как и в примере 1, с получением продукта ZD073, выход 80%. H NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.264 (s, 1Н), 2.406 (s, 3Н), 8.504 (1H, dd), 7.858 (1H, dd), 7.400 (1H, dd), 7.805 (1H, dd), 7.410 (1H, dd), 7.284 (1H, dd). LRMS (EI) m/z 356(M+).
Пример 43. Получение N-(6-хлорпиридин-3-ил)-2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-ил) этинил) бензамида (ZD074)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 6-хлор-3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD074, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.303 (1Н, dd), 7.929 (1H, dd), 7.423 (1Н, dd), 8.504 (1H, dd), 7.391 (1H, dd), 7.902 (1Н, dd), 7.264 (s, 1Н), 2.406 (s, 3Н). LRMS (EI) m/z 373(M+).
Пример 44. Получение 2-фтор-5-((2-метилтиазол-4-илэтинил)-N-(п-метилфенил) бензамида (ZD075)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 6-метил-3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как и в примере 1, с получением продукта ZD075, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.264 (s, 1Н), 2.406 (s, 3Н), 8.503 (1H, dd), 7.857 (1H, dd), 7.401 (1H, dd), 7.186 (1H, ddd), 7.187 (1H, ddd), 7.079 (1H, ddd), 7.079 (1H, ddd), 2.210 (s, 3H). LRMS (EI) m/z 351(M+).
Пример 45. Получение 2-фтор-N-(пиридин-3-ил)-5-(тиазол-4-илэтинил) бензамида (ZD076)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD076, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.388 (1Н, d), 7.214 (1Н, d), 8.514 (1Н, dd), 7.858 (1Н, dd), 7.411 (1H, dd), 8.402 (1Н, ddd), 7.474 (1H, ddd), 7.315 (1Н, ddd), 8.404 (1Н, ddd). LRMS (EI) m/z 324(M+).
Пример 46. Получение 2-фтор-5-((2-фтортиазол-4-ил)этинил)-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD077)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-фтортиазолом, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD077, выход 80%. H NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.139 (s, 1H), 8.503 (1H, dd), 7.858 (1H, dd), 7.401 (1H, dd), 8.402 (1H, ddd), 7.474 (1H, ddd), 7.315 (1H, ddd), 8.404 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 342(M+).
Пример 47. Получение 5-((2-хлортиазол-4-илэтинил)-2-фтор-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD078)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-хлортиазолом, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD078, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.174 (s, 1Н), 8.505 (1H, dd), 7.858 (1H, dd), 7.403 (1H, dd), 8.402 (1H, ddd), 7.474 (1H, ddd), 7.315 (1H, ddd), 8.404 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 359(M+).
Пример 48. Получение 2-фтор-N-(пиридин-3-ил)-5-((2-(трифторметил)тиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD079)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-трифторметилтиазолом, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD079, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.236 (s, 1H), 8.515 (1Н, dd), 7.858 (1H, dd), 7.412 (1H, dd), 8.402 (1H, ddd), 7.474 (1H, ddd), 7.315 (1H, ddd), 8.404 (1H, ddd). LRMS (EI) m/z 392(M+).
Пример 49. Получение 2-фтор-5-((6-метилпиридин-2-ил)этинил)-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD080)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 2-этинил-6-метилпиридином, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD080, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.567 (1Н, dd), 8.587 (1Н, dd), 7.954 (1Н, dd), 8.402 (1Н, ddd), 7.474 (1H, ddd), 7.315 (1Н, ddd), 8.404 (1Н, ddd), 7.294 (1Н, dd), 7.653 (1Н, dd), 7.008 (1Н, dd), 2.565 (s, 3Н). LRMS (EI) m/z 332(M+).
Пример 50. Получение 2-фтор-5-((6-фторпиридин-2-ил)этинил)-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD081)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 2-этинил-6-фторпиридином, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD081, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.660 (1Н, dd), 7.723 (1Н, dd), 7.396 (1Н, dd), 8.605 (1Н, dd), 7.784 (1H, dd), 7.571 (1Н, dd), 8.402 (1Н, ddd), 7.474 (1Н, ddd), 7.315 (1Н, ddd), 8.404 (1Н, ddd). LRMS (EI) m/z 336(M+).
Пример 51. Получение 5-((6-хлорпиридин-2-ил)этинил)-2-фтор-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD082)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 2-этинил-6-хлорпиридином, 4-фторанилин заменяли на 3-аминопиридин, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD082, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.455 (1Н, dd), 7.718 (1Н, dd), 7.426 (1H, dd), 8.604 (1Н, dd), 7.780 (1H, dd), 7.572 (1H, dd), 8.402 (1H, ddd), 7.474 (1Н, ddd), 7.315 (1Н, ddd), 8.404 (1Н, ddd). LRMS (EI) m/z 353(M+).
Пример 52. Получение 2-фтор-N-(пиридин-3-ил)-5-((6-(трифторметил)пиридин-2-ил)этинил) бензамида (ZD083)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 2-этинил-6-трифторметилпиридином, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD083, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.572 (1Н, dd), 8.615 (1Н, dd), 7.961 (1Н, dd), 8.402 (1Н, ddd), 7.474 (1Н, ddd), 7.315 (1Н, ddd), 8.404 (1Н, ddd), 7.331 (1H, dd), 7.916 (1Н, dd), 7.346 (1H, dd). LRMS (EI) m/z 386(M+).
Пример 53. Получение 5-((6-цианопиридин-2-илэтинил)-2-фтор-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD084)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 2-этинил-6-цианопиридином, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD084, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.575 (1Н, dd), 8.647 (1Н, dd), 7.783 (1Н, dd), 8.402 (1Н, ddd), 7.474 (1H, ddd,), 7.315 (1Н, ddd), 8.404 (1Н, ddd), 7.507 (1Н, dd), 7.892 (1Н, dd), 7.780 (1H, dd). LRMS (EI) m/z 343(M+).
Пример 54. Получение 2-фтор-N-(пиридин-3-ил)-5-(пиримидин-5-илэтинил) бензамида (ZD085)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 5-этинилпиримидином, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD085, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.645 (1Н, dd), 8.552 (1Н, dd), 7.859 (1H, dd), 8.402 (1Н, ddd), 7.474 (1H, ddd), 7.315 (1H, ddd), 8.404 (1H, ddd), 9.058 (1H, dd), 8.767 (1Н, dd), 8.849 (1H, dd). LRMS (EI) m/z 319(M+).
Пример 55. Получение 2-фтор-5-((2-метилпиримидин-5-ил)этинил)-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD086)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 2-метил-5-этинилпиримидином, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как и в примере 1, с получением продукта ZD086, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.640 (1H, dd), 8.552 (1H, dd), 7.859 (1H, dd), 8.402 (1H, ddd), 7.474 (1H, ddd), 7.315 (1H, ddd), 8.404 (1H, ddd), 8.751 (1H, d), 8.726 (1H, d), 2.603 (s, 3H). LRMS (EI) m/z 333(M+).
Пример 56. Получение 2-фтор-N-(4-фторфенил)-5-((2-метилпиримидин-5-ил)этинил) бензамида (ZD087)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 2-метил-5-этинилпиримидином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD087, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.640 (1Н, dd), 8.552 (1H, dd), 7.859 (1H, dd), 7.741 (1Н, ddd), 7.741 (1Н, ddd), 7.017 (1Н, ddd), 7.018 (1H, ddd), 8.751 (1Н, d), 8.726 (1H, d), 2.603 (s, 3Н). LRMS (EI) m/z 350(M+).
Пример 57. Получение (3,4-дигидроизохинолин-2(1H)-ил)(2-фтор-5-((2-метилпиримидин-5-ил)этинил) фенилметанона (ZD088)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 2-метил-5-этинилпиримидином, 4-фторанилин заменяли 3,4-дигидроизохинолином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD088, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.614 (1Н, dd), 8.513 (1Н, dd), 7.856 (1Н, dd), 4.270 (1Н, d), 4.461 (1Н, d), 3.652 (1H, ddd), 3.376 (1H, ddd), 2.927 (1Н, ddd), 3.020 (1Н, ddd), 6.867 (1Н, ddd), 7.240 (1Н, ddd), 7.042 (1Н, ddd), 8.751 (1H, d), 8.727 (1Н, d), 7.168 (1H, ddd), 2.603 (s, 3Н). LRMS (EI) m/z 372(M+).
Пример 58. Получение 2-фтор-5-((2-метилоксазол-4-илэтинил)-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD089)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 2-метил-4-этинилоксазолом, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD086, выход 80%. H NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.392 (1H, dd), 8.492 (1H, dd), 7.892 (1Н, dd), 8.402 (1H, ddd), 7.474 (1Н, ddd), 7.315 (1Н, ddd), 8.404 (1H, ddd), 7.383 (s, 1Н), 2.547 (s, 3Н). LRMS (EI) m/z 322(M+).
Пример 59. Получение 2-фтор-N-(4-фторфенил)-5-((2-метилоксазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD090)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 2-метил-4-этинилоксазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD090, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.393 (1Н, dd), 8.492 (1Н, dd), 7.892 (1Н, dd), 7.741 (1H, ddd), 7.741 (1Н, ddd), 7.017 (1H, ddd), 7.018 (1Н, ddd). 7.383 (s, 1Н), 2.547 (s, 3Н), LRMS (EI) m/z 339(M+).
Пример 60. Получение (3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил)(2-фтор-5-((2-метилоксазол-4-ил)этинил)фенил) метанона (ZD091)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 2-метил-4-этинилоксазолом, 4-фторанилин заменяли 3,4-дигидроизохинолином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD091, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.390 (1Н, dd), 8.481 (1Н, dd), 7.847 (1Н, dd), 4.269 (1Н, d), 4.460 (1H, d), 3.651 (1Н, ddd), 3.353 (1H, ddd,), 2.927 (1Н, ddd), 3.034 (1Н, ddd), 6.867 (1H, ddd), 7.240 (1H, ddd), 7.042 (1Н, ddd), 7.382 (1Н), 7.168 (1Н, ddd), 2.547 (s, 3H). LRMS (EI)m/z361(M+).
Пример 61. Получение (3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил)(5-((3,5-диметилизоксазол-4-ил)этинил)-2-фторфенил) метанона (ZD092)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 3,5-диметил-4-этинилизоксазолом, 4-фторанилин заменяли 3,4-дигидроизохинолином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD092, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.380 (1Н, dd), 8.483 (1Н, dd), 7.895 (1Н, dd), 4.269 (1Н, d), 4.460 (1Н, d), 3.652 (1Н, ddd), 3.375 (1Н, ddd), 2.927 (1H, ddd), 3.020 (1H, ddd), 6.867 (1H, ddd), 7.240 (1Н, ddd), 7.042 (1Н, ddd), 7.168 (1Н, ddd), 2.546 (s, 3H), 2.234 (s, 3H). LRMS (EI) m/z 375(M+).
Пример 62. Получение 5-((3,5-диметилизоксазол-4-илэтинил)-2-фтор-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD093)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 3,5-диметил-4-этинилизоксазолом, 4-фторанилин заменяли 3-аминопиридином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD093, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.382 (1H, dd), 8.495 (1Н, dd), 7.899 (1Н, dd), 8.402 (1Н, ddd), 7.474 (1H, ddd), 7.315 (1Н, ddd), 8.404 (1Н, ddd), 2.546 (s, 3H), 2.234 (s, 3H). LRMS (EI) m/z 336(M+).
Пример 63. Получение 5-((3,5-диметилизоксазол-4-илэтинил)-2-фтор-N-(4-фторфенил) бензамида (ZD094)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 3,5-диметил-4-этинилизоксазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD094, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.383 (1H, dd), 8.494 (1H, dd), 7.899 (1Н, dd, J=8.455), 7.741 (1Н, ddd), 7.741 (1H, ddd), 7.017 (1H, ddd), 7.018 (1H, ddd), 2.546 (s, 3H), 2.234 (s, 3H). LRMS (EI) m/z 353(M+).
Пример 64. Получение N-(4-фторфенил)-3-((2-метилтиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD009)
1
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 3-йодбензойной кислотой, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как и в примере 1, с получением продукта ZD009, выход 80%. Н NMR (400 МГц, DMSO) δ 10.41 (s, 1Н), 8.16 (s, 1H), 8.02-7.95 (m, 2Н), 7.79 (m, J=10.9, 8.1, 6.4 Hz, 3Н), 7.61 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.20 (dd, J=12.3, 5.5 Hz, 2H), 2.69 (s, 3H). LRMS (EI) m/z 336(M+).
Пример 65. Получение (3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил)(3-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)фенил) метанона (ZD012)
1
3
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 3-йодбензойную кислоту, 4-фторанилин заменяли 3,4-дигидроизохинолином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD012, выход 80%. H NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.61 (m J=4.0, 1.6 Гц, 2Н), 7.42 (d, J=6.8 Гц, 2Н), 7.38 (d, J=3.2 Гц, 1H), 7.24-7.12 (m, 4H), 4.74 (d, J=123.5 Гц, 2H), 3.81 (d, J=140.1 Гц, 2H), 2.93 (d, J=36.6 Гц, 2H), 2.74 (s, 3Н). LRMS (EI) m/z 358(M+).
Пример 66. Получение 3-((2-метилтиазол-4-илэтинил)-N-(пиридин-3-ил) бензамида (ZD013)
1
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 3-йодбензойную кислоту, 4-фторанилин заменяли на 3-аминопиридин, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD013, выход 80%. Н NMR (400 МГц, DMSO) δ 10.56 (s, 1Н), 8.94 (s, 1Н), 8.33 (d, J=4.0 Гц, 1H), 8.21 (d, J=11.1 Гц, 2Н), 8.02 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 7.97 (s, 1H), 7.79 (d, J=7.7 Гц, 1Н), 7.63 (t, J=7.7 Гц, 1Н), 7.41 (dd, J=8.2, 4.7 Гц, 1Н), 2.69 (s, 3Н). LRMS (EI) m/z 319(М+).
Пример 67. Получение 3-((2-метилтиазол-4-илэтинил)-N-фенилбензамида (ZZD014)
1
2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, 2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 3-йодбензойную кислоту, 4-фторанилин заменяли анилином, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такие же, как в примере 1, с получением продукта ZD014, выход 80%. Н NMR (400 МГц, DMSO) δ 10.36 (s, 1Н), 8.17 (s, 1H), 7.99 (dd, J=5.3, 4.2 Гц, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.78 (dd, J=12.4, 4.4 Гц, 3Н), 7.61 (t, J=7.8 Гц, 1H), 7.36 (t, J=7.9 Гц, 2H), 7.12 (t, J=7.4 Гц, 1H), 2.72-2.65 (m, 3H). LRMS (EI) m/z 318(M+).
Пример 68. Получение (3-(2-метилтиазол-4-ил)этинил)фенил)(3-трифторметил-5,6-дигидро-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7(8Н)-ил) метанон (ZD005)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 3-йодбензойной кислотой, 4-фторанилин заменяли 3-трифторметил-5,6,7,8-тетрагидро-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразином, 2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD005, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.68 (s, 1Н), 7.65 (s, 1H), 7.47 (d, J=5.6 Гц, 2Н), 7.41 (s, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.26 (s, 2H), 4.12 (s, 2H), 2.74 (s, 3H).LRMS (EI) m/z 418(M+).
Пример 69. Получение 5-(1H-индазол-5-ил)этинил)-2-фтор-N-(4-фторфенил) бензамида (ZD006)
1
2-этинилпиридин заменяли 5-этинил-1Н-индазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD006, выход 80%. Н NMR (400 МГц, DMSO) δ 13.31 (s, 1H), 10.58 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.86 (dd, J=6.7, 2.2 Гц, 1H), 7.79-7.72 (m, 3H), 7.60 (d, J=8.6 Гц, 1H), 7.53-7.48 (m, 1H), 7.47-7.40 (m, 1H), 7.21 (dd, J=12.2, 5.6 Гц, 2H).LRMS (EI) m/z 374(M+).
Пример 70. Получение (3-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)фенил)(7-окса-2-азаспиро[3,5]нонан-2-ил) метанона (ZD007)
1
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 3-йодбензойной кислотой, 4-фторанилин заменяли 7-окса-2-азаспиро[3,5]нонаном, 2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD007, выход 80%. Н NMR (400 МГц, DMSO) δ 7.95 (s, 1H), 7.77 (s, 2Н), 7.52 (t, J=7.7 Гц, 2Н), 4.08 (s, 4Н), 3.79 (t, 4Н), 2.68 (s, 3Н), 1.71 (s, 4H).LRMS (EI) m/z 353(M+).
Пример 71. Получение (3-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)фенил)(8-окса-2-азаспиро[4,5]дец-2-ил) метанона (ZD008)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 3-йодбензойной кислотой, 4-фторанилин заменяли 8-окса-2-азаспиро[4,5]деканом, 2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD008, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.65 (s, 1Н), 7.60 (t, J=7.2 Гц, 1H), 7.51-7.46 (m, 1H), 7.39 (m, J=7.2, 4.2 Гц, 2H), 3.80-3.61 (m, 4H), 3.60-3.45 (m, 4H), 2.73 (s, 3H), 1.69-1.43 (m, 6H). LRMS (EI) m/z 367(M+).
Пример 72. Получение N-(4-цианофенил)-3-((2-метилтиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD010)
1
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 3-йодбензойной кислотой, 4-фторанилин заменяли 4-цианоанилином, 2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD010, выход 80%. H NMR (400 МГц, DMSO) δ 10.74 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.99 (t, J=9.4 Гц,4Н), 7.82 (dd, J=15.8, 8.2 Гц, 3Н), 7.61 (dd, J=20.0, 12.4 Гц, 1H), 2.69 (s, 3H).LRMS (EI) m/z 344(M+).
Пример 73. Получение (1-метил-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил)(3-((2-метилтиазол-4-ил)этинил)фенил) метанона (ZD011)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 3-йодбензойной кислотой, 4-фторанилин заменяли 1-метил-3,4-дигидроизохинолином, 2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD011, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 7.64-7.53 (m, 2Н), 7.39 (d, J=7.5 Гц, 3Н), 7.24-7.06 (m, 4Н), 5.77 (d, J=6.0 Гц, 1Н), 4.81 (s, 1H), 3.75 (s, 1H), 3.53-2.90 (m, 2Н), 2.74 (s, 3Н), 1.70-1.53 (m, 3H).LRMS (EI) m/z373 (М+).
Пример 74. Синтез 3-((2-метилтиазол-4-илэтинил)-N-(4-(трифторметил) фенил) бензамида (ZD015)
1
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли на 3-йодбензойную кислоту, 4-фторанилин заменяли на 4-трифторметиланилином, 2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD015, выход 80%. Н NMR (400 МГц, DMSO) δ 10.68 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.02 (t, J=6.3 Гц, 3Н), 7.97 (s, 1H), 7.79 (d, J=7.7 Гц, 1H), 7.74 (d, J=8.6 Гц, 2H), 7.63 (t, J=7.8 Гц, 1H), 2.69 (s, 3H).LRMS (EI) m/z387 (M+).
Пример 75. Получение N-[-(3-фторфенил)-3-((2-метилтиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD017)
1
3
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 3-йодбензойной кислотой, 4-фторанилин заменяли на 3-фторанилин, 2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD017, выход 80%. Н NMR (400 МГц, CDCl) δ 8.05 (s, 1Н), 7.87 (dd, J=7.9, 1.3 Гц, 1Н), 7.72-7.65 (m, 2Н), 7.48 (t, J=7.8 Гц, 1H), 7.41 (s, 1Н), 7.32-7.30 (m, 1Н), 6.85 (m, J=9.5 Гц, 2Н), 6.69 (s, 1Н), 2.76 (s, 3Н). LRMS (EI) m/z 337(М+).
Пример 76. Получение N-(3-цианофенил)-3-((2-метилтиазол-4-ил)этинил) бензамида (ZD019)
1
2-фтор-5-йодбензойную кислоту заменяли 3-йодбензойной кислотой, 4-фторанилин заменяли 3-цианоанилином, 2-этинилпиридин заменяли 4-этинил-2-метилтиазолом, в то время как остальные исходные вещества, реагенты и способ получения были такими же, как в примере 1, с получением продукта ZD019, выход 80%. Н NMR (400 МГц, DMSO) δ 10.66 (s, 1Н), 8.26 (d, J=1.1 Гц, 1H), 8.18 (d, J=1.5 Гц, 1H), 8.06 (m, J=6.0, 3.6, 2.2 Гц, 1H), 8.03-7.99 (m, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.82-7.77 (m, 1H), 7.66-7.57 (m, 3H), 2.69 (s, 3H).LRMS (EI) m/z 344(M+).
Пример теста на фармологическую активность
Пример 1. Физические и химические свойства состава
Примечание. Физические и химические свойства соединений (значения LogP, CLogP и tPSA) представляют собой расчеты программного обеспечения Chemdraw пакета программ ChemOffice.
Результаты показывают, что физические и химические свойства этих соединений (LogP, CLogP и tPSA и т.д.) сопоставимы с физическими и химическими свойствами этих препаратов, что приводит к высокой степени эффективности препаратов.
Пример 2. Тест активности mGluR5 in vitro
Материал эксперимента: клеточная линия HEK293/mGluR5, флуоресцентный кальциевый краситель Fluo-8, положительный контроль МРЕР, СТЕР.
Инструмент эксперимента: система анализа флуоресценции в реальном времени FLIPR Tetra.
Метод эксперимента: метод детекции флуоресценции кальция HDB Fluo-8.
Принцип эксперимента: метод детекции флуоресценции ионов кальция HDB Fluo-8 представляет собой быстрый, простой и надежный метод детекции флуоресценции внутриклеточных изменений концентрации кальция. Флуоресцентный краситель Fluo 8-AM представляет собой производное ацетилметилового эфира Fluo 8, который может легко проникать через клеточную мембрану в клетку по культуре. Флуоресцентный краситель в клетке будет гидролизоваться внутриклеточной эстеразой, полученный Fluo 8 не может легко проходить через липидную бимолекулярную мембрану как полярная молекула и будет удерживаться в клетке и объединяться с кальцием (Са2+) для продуцирования флуоресценции.
Сначала клетки, экспрессирующие белок рецептора GPCR (mGluR5), калибровались с помощью чувствительного к ионам кальция флуоресцентного зонда и затем стимулировались вместе с соединением. После стимуляции активация рецептора вызывает мобилизацию ионов кальция, а флуоресцентный зонд захватывает ион кальция для индуцирования сигнала флуоресценции. Сигнал считывается с помощью флуоресцентного планшета-ридера. Флуоресцентный планшет-ридер имеет головку для проб для добавления соединений, что позволяет считывать изменения значения флуоресценции соединения в реальном времени. Если выбранное соединение может активировать mGluR5, реакция кальция в потоке может значительно повыситься; и наоборот, если выбранное соединение способно противодействовать mGluR5, реакция кальция в потоке может значительно снизиться. Результаты эксперимента:
Структуры положительных составов следующие:
50
50
50
В оценке биоактивности мы используем молекулярный инструмент МРЕР в качестве положительного контроля, в котором значение IC составляет 4 нмоль. Из данных, уже полученных в приведенной выше таблице, можно видеть, что значения IC для некоторого недавно синтезированного соединения сравнимы с данными, полученными из соединения положительного контроля, а значения IC для mGluR5 нескольких соединений составляют менее 10 нмоль, что доказывает хорошее ингибирующее действие на mGluR5.
Пример 3. Тест селективности mGluR5/1
Материал эксперимента: клеточная линия HEK293/mGluR5, клеточная линия HEK293/mGluRl, флуоресцентный кальциевый краситель Fluo-8, положительный контроль JNJ16259685.
50
Составы с лучшим mGluR5 IC использовались в тесте селективности, результаты представлены в Таблице 3:
Заключение: большинство этих составов имеет слабое ингибирующее действие на mGluR1, который имеет высокую гомологию к mGluR5 (почти нет ингибирующего действия), указывая, что эти составы обладают хорошей селективностью и высокой специфичностью.
Пример 4. Тест активности на животных in vivo
Принцип эксперимента: синдром хрупкой Х-хромосомы является общим генетическим заболеванием, возникающий по причине мутаций при формировании Х-хромосомы в организме человека, и является наиболее распространенной генетической причиной аутизма и задержки умственного развития. Основные клинические проявления включают умеренную и тяжелую умственную отсталость, и, в частности, отсутствие способности к обучению, когнитивное расстройство и предрасположенность к эпилепсии. Несмотря на то, что было подтверждено, что патогенный ген является геном Fmr1, до сих пор не существует эффективной профилактики и лечения в клинической терапии.
Вставка неомицинового фрагмента в область гена Fmr1 для предотвращения экспрессии гена FMRP может привести к модели мышиного синдрома хрупкой Х-хромосомы. Многие поведенческие проявления нокаутных по Fmr1 мышей очень похожи на те, которые имеют пациенты с синдромом хрупкой Х-хромосомы, особенно, что касается повышенной спонтанной активности, снижением способности привыкания при тесте «открытое поле», повышенной степени подверженности аудиогенным припадкам и небольшим дефицитом способности к обучению.
В данном исследовании в качестве экспериментальной модели животных с индуцированной аутогенной эпилепсией мы использовали нокаутных по Fmr1 мышей и оценили эффективность соединения ZD043 в отношении задержки эпилептических припадков, уровня припадков и эпилептической смертности в качестве показателей оценки.
Лабораторные животные и условия разведения:
+
c-ch
tm/Cgr
Вид, линия: нокаутные по Fmr1 мыши, FVB.129P2-Pde6b Tyr Fmr1/J (номер линии 004624)
Возраст: 19-21 дней
Вес: около 7-10 г
Пол: женский и мужской
Количество животных: 24
Условия кормления: комната животных класса SPF Института биологических наук, Китайской академии наук, температура: 22-24°С, влажность: 50-70%, свет: 150-300 Lx, чередующийся 12 часовой день/ночь (дневное время 7:00-19:00).
Испытуемый реагент и способ получения: перед экспериментом 2,0 мг ZD043 взвешивали в 2 мл центрифужной пробирке, для растворения порошка ZD043 брали 10 мкл DMSO с помощью прецизионной пипетки, затем добавляли 10 мкл Tween80, перемешивали и добавляли 980 мкл физиологического раствора, хорошо перемешивали до образования суспензионной жидкости.
Проверка растворителя: 0,9% раствор NaCl, содержащий 1% DMSO, 1% Tween80.
Основное оборудование эксперимента: цилиндрическое прозрачное ведро из органического стекла (диаметр 10 см, высота 25 см).
Система видеонаблюдения: Shanghai Panorama Digital Technology Co., Ltd., Модель: IPC-5201-BNS.
Сигнальный динамик высокого уровня громкости (≥120 дБ): компания AIDEXIN, модель: ES626.
Тестер уровня громкости: Tektronix Electronic Instrument Holdings Limited, модель: TM824.
Методы.
Мышей взвешивали в день эксперимента. Нокаутных по Fmrl мышей инъецировали внутрибрюшинно в период с 19 до 22 дней по группам согласно плану эксперимента за 30 минут до проведения судорожного теста. Мышь, подлежащую тестированию, переносили в лабораторию испытаний акустических припадков, помещали в прозрачное ведро из органического стекла, а сигнальный динамик высокого уровня громкости фиксировался на верхней части ведра из органического стекла. Перед подачей стимулирующего звука мыши позволяли свободно перемещаться в течение 1 минуты, затем включался динамик и видеозапись всего процесса системой наблюдения; стимулирование звуком (≥120 дБ) длилось в течение 3 минут либо до момента смерти животного, после этого эксперимент завершался.
Метод испытания: после окончания эксперимента задержка эпилептических припадков (2 степень проявления считалась припадками, а самый длительный зарегистрированный период задержки составил 300 секунд, в течение которых не наблюдалось эпилепсии) и уровень припадков (Уровень 0: отсутствие эпилептического ответа; Уровень 1: быстрый бег и непрерывные прыжки; Уровень 2: пароксизмальная эпилепсия; Уровень 3: тоническая эпилепсия; Уровень 4: смерть) были проанализированы в соответствии с видеозаписью.
Обработка данных: вычисление средней и стандартной погрешности периода задержки эпилепсии и уровня припадков, а также процент смертности от эпилепсии каждой группы.
Чем короче период задержки эпилепсии, тем выше степень заболеваемости, указывающая на большую вероятностью возникновении эпилепсии, в то время как длительный период задержки после введения медикаментов и снижение уровня эпилептических припадков указывают на то, что соединение может препятствовать возникновению эпилепсии либо ослаблять степень эпилептических припадков.
После окончания эксперимента задержка эпилептических припадков (2 степень проявления считалась припадками, а самый длительный зарегистрированный период задержки составил 300 секунд, в течение которых не наблюдалось эпилепсии) и уровень припадков (Уровень 0: отсутствие эпилептического ответа; Уровень 1: быстрый бег и непрерывные прыжки; Уровень 2: пароксизмальная эпилепсия; Уровень 3: тоническая эпилепсия; Уровень 4: смерть) были проанализированы в соответствии с видеозаписью.
Результаты эксперимента:
Примечание: Несущий раствор: 1% DMSO, 1% Tween80, 0,9% NaCl; Возраст: средний 20 дней; уровень припадков (Уровень 0: отсутствие эпилептического ответа; Уровень 1: быстрый бег и непрерывные прыжки; Уровень 2: пароксизмальная эпилепсия; Уровень 3: тоническая эпилепсия; Уровень 4: смерть).
Вывод: по сравнению с контрольной группой раствора однократная инъекция ZD043 (10 и 20 мг/кг) может эффективно продлить задержку эпилептических припадков при аудиогенной эпилепсии у нокаутных по Fmrl мышей, ингибировать уровень судорог и снизить смертность от эпилепсии (Несущий раствор 100%; ZD043-10 мг/кг25%). То есть соединение ZD043 может эффективно влиять на фенотип поведения при аудиогенной эпилепсии у нокаутных по Fmr1 мышей.
Пример 5. Фармакокинетический эксперимент у крыс
Режим дозирования:
Шесть здоровых крыс весом 150-200 г были случайным образом разделены на 3 группы (n=3). Крысам давали 10 мл/кг ZD043 через желудочный зонд и внутривенную инъекцию. Доза введения через желудочный зонд составляла 20 мг/кг, а доза внутривенного введения составляла 10 мг/кг. Препарат был приготовлен в соотношении DMSO/Tween80/физиологический раствор (соотношение объемов 5:5:90). Крысы голодали в течение 12 часов перед испытанием и пили воду по желанию. Через 2 часа после введения все крысы приняли пищу вместе.
Контрольное время отбора проб и подготовка проб:
Введение через желудочный зонд: 0, 0,25, 0,5, 1,0, 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 и 24 ч после введения;
Внутривенное введение: 0, 5 мин, 0,25, 0,5, 1,0, 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 и 24 ч после введения;
0,3 мл крови собирали в вышеуказанные моменты времени из венозного сплетения глазницы крысы, помещали в гепаринизированную пробирку и центрифугировали при 11000 об/мин в течение 5 мин. Плазму отделяли и образец замораживали в холодильнике при температуре -20°С.
Результаты эксперимента:
max
max
0-t
1/2
0-t
После того, как крысам дали 20 мг/кг ZD043 через зонд, время пика концентрации в плазме T составляло 0,25 ч, максимальная концентрация C составляла 7124,8 нг/мл; лощадь под кривой AUC составляла 10491,2 нг*ч/мл; и период полувыведения в конечной фазе t составляет 1,302 часа. После введения крысам 10 мг/кг ZD043 путем внутривенной инъекции AUC составлял 66417,0 нг*ч/мл; после нормализации дозы абсолютная биодоступность составила 31,6% после того, как крысам дали 20 мг/кг ZD043 через зонд.
Заключение по эксперименту:
Из приведенных выше результатов эксперимента видно, что в фармакокинетических экспериментах на крысах соединение ZD043 показало хороший уровень абсолютной биодоступности, до 31,6%.
Пример 6. Определение содержания в мозговой ткани у крыс
Порядок проведения эксперимента:
Шесть здоровых крыс весом 150-200 г были случайным образом разделены на 3 группы (n=3). Крысам давали 10 мл/кг ZD043 через желудочный зонд и внутривенную инъекцию. Доза введения через желудочный зонд составляла 20 мг/кг, а доза внутривенного введения составляла 10 мг/кг. Препарат был приготовлен в соотношении DVSO/Tween80/физиологический раствор (соотношение объемов 5:5:90). Крысы голодали в течение 12 часов перед испытанием и пили воду по желанию. Через 2 часа после введения все крысы приняли пищу вместе.
Через 24 ч после введения крыс умертвляли посредством цервикальной дислокации, а левый и правый гиппокамп, переднюю кору и кору головного мозга удаляли на ледяной бане и замораживали в холодильнике при температуре -20°С.
Затем добавлялся физиологический солевой раствор (соотношение 1:10, масса : объем) и смесь была достаточным образом гомогенизирована до образования гомогената. К 100 мл гомогената добавляли 300 мл дихлорметана: раствор метанола (3:2), перемешивали равномерно по вихревым колебаниям и центрифугировали при 14000 об/мин в течение 10 мин. Затем брался прозрачный ликвор. Образец высушивался азотом и хранился в холодильнике при температуре 4°С.
Результаты эксперимента:
Заключение по эксперименту:
После введения соединение ZD043 быстро абсорбировалось и пересекало гематоэнцефалический барьер в тканях головного мозга, а соотношение концентрации лекарственного средства в мозге и плазме достигало 1/2. Поэтому соединение ZD043 имеет хорошую степень ориентированности воздействия на головной мозг.
Пример 7. Исследование фармакодинамики in vivo - эксперимент подвешивания мыши за хвост
Принцип эксперимента: Тест принудительного подвешивания за хвост (TST) - это классический метод, который позволяет быстро оценить эффективность антидепрессантов, возбуждающих препаратов и седативных препаратов. Принцип состоит в том, чтобы зафиксировать момент, в который мышь перестает бороться и переходит в состояние депрессии (отчаяния) после подвешивания за хвост и осуществления неудачной попытки бегства. Во время процесса эксперимента фиксировалось время неподвижности животных для отражения состояния депрессии, а антидепрессанты и возбуждающие препараты значительно сокращают это время.
Метод эксперимента: отбирали самцов мышей массой 20-24 г, участок 2 см от конца хвоста прикрепляли к горизонтальной палочке, переворачивали животных вниз головой на расстоянии около 5 см от стола, а с обеих сторон животного размещали дощечки для ограничения угла зрения животного. В течение 6 мин было проведено сравнение времени неподвижности группы, которой были введены медикаменты, и контрольной группы.
Результаты эксперимента: Результаты показаны на фигуре 1.
Заключение по эксперименту: флуоксетин с положительным контролем может значительно улучшить «время неподвижности» в тесте подвешивания мыши за хвост. Соединение ZD043 значительно сокращало «время неподвижности» в тесте подвешивания мыши за хвост при дозировке 20 мг/кг.
Пример 8. Исследование фармакодинамики in vivo - тест на подергивание головой
2
Принцип эксперимента: модельный тест на подергивание головой (НТТ) был впервые проведен Corne с соавторами в 1963 году; синдром подергивания головы, вызванный возбуждением рецепторов 5-НТ, может быть опосредован с помощью рецептора 5-НТ. Поведение с подергиваниями головы, индуцированное посредством 5-НТР у мышей, более чувствительно к антидепрессантам с различными механизмами действия, таким как циталопрам, флувоксамин и другие ингибиторы 5-НТ, дезипрамин, мапротилин, номифенсин и другие ингибиторы NA, а также имипрамин, действующие на 5-НТ и NA.
Метод эксперимента: отбирали самцов мышей массой 20-24 г. За 3 ч до испытания вводили 100 мг/кг паргилина внутрибрюшинно, а затем внутрибрюшинно вводили исследуемые медикаменты либо физиологический раствор. Через 30 минут производили введение 5-НТР (5 мг/кг, внутрибрюшинно). Спустя 10 мин начиналось наблюдение и фиксировалось количество подергиваний мышей в течение 6 мин. Было произведено сравнение числа подергиваний головы экспериментальной группы и контрольной группы, которой вводился физиологический раствор.
Результаты эксперимента показаны на фигуре 2.
Заключение по эксперименту: флуоксетин с положительным контролем может значительно улучшить показатель «количества подергиваний головы» в тесте на подергивание головой у мышей. Соединение ZD043 было способно снизить «количество подергиваний головы» в эксперименте подергивание головой у мышей при дозировке 20 мг/кг, что показало хорошую фармакодинамику in vivo.
Пример 9. Исследование фармакодинамики in vivo - эксперимент по принудительному плаванию мышей.
Принцип эксперимента: Принцип теста на принудительное плавание мышей (FST) заключается в том, что мышь помещается для плавания в ограниченное пространство, из которого она не может убежать, что в конце концов приводит к замиранию животного, означающее возникновение состояния отчаяния.
Название эксперимента: тест на депрессию при принудительном плавании.
Цели эксперимента: наблюдать влияние испытуемого соединения на депрессивное состояние мышей.
Экспериментальные животные: мыши ICR, 20-28 г, мужские и женские особи.
Экспериментальное оборудование: ведро из органического стекла: цилиндрическое, 25 см в высоту, внутренний диаметр 15 см.
Обработка образца. Испытуемые соединения смешивали с водным раствором 1% CMC (натрийкарбоксиметилцеллюлозы) для получения гомогенного раствора. Доза in vivo составляла 5 мг/кг, 10 мг/кг и 20 мг/кг, это соединение вводили перорально в соотношении 0,1 мл/10 г объем/масса тела. Препараты с положительным контролем (амитриптилин и флуоксетин) растворяли с физиологическим раствором 0,9%, доза для in vivo составляла 10 мг/кг, вводили внутрибрюшинную инъекцию в соотношении 0,1 мл/10 г объем/масса тела. (Примечание: до введения соединения мыши в течение 8 ч голодали и пили воду по желанию).
Методы эксперимента: мышей группировали случайным образом. В первый день после 15 минут моделирования принудительного плавания были отобраны мыши с аналогичными характеристиками. На второй день теста мышам перорально вводили соединение. Затем спустя 1 ч (через 0,5 часа после внутрибрюшинной инъекции) мышей помещали в воду для отслеживания времени неподвижности в течение последних 4 мин из общих 6 мин. Соединение проверялось на предмет того, может ли оно значительно сократить время неподвижности мышей при вынужденном плавании, таким образом, демонстрируя, оказывает ли испытуемое соединение эффект антидепрессанта.
Результаты: (* Р<0,05; ** Р<0,01, *** Р<0,005 по сравнению с контрольной группой).
Результаты показали, что амитриптилин с положительным контролем может значительно улучшить показатель «время неподвижности» во время принудительного плавания мышей. Соединение ZD043 уменьшило показатель «время неподвижности» во время процесса принудительного плавания мышей в разной степени при дозировках 5 мг/кг, 10 мг/кг и 20 мг/кг, в то время как эффект улучшения увеличивается с увеличением дозы.
Результаты показали, что амитриптилин с положительным контролем может значительно улучшить показатель «время неподвижности» во время принудительного плавания мышей. Соединение ZD043 уменьшило показатель «время неподвижности» во время процесса принудительного плавания мышей в разной степени при дозировках 5 мг/кг, 10 мг/кг и 20 мг/кг, в то время как эффект улучшения увеличивается с увеличением дозы.
Вся литература, упомянутая в настоящей заявке, считается внесенной в нее путем ссылки, как если бы каждая была включена индивидуально посредством ссылки. Дополнительно, нужно подразумевать, что после ознакомления с вышеуказанными идеями, специалисты в данной области техники могут произвести различные изменения и модификации к данному изобретению. Эти эквиваленты также охватываются объемом приведенной формулы изобретения.