Штамм "A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2" вируса гриппа птиц рода Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа Н9 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н9
STRAIN "A/CHICKEN/CHELYABINSK/314-1/2020 H9N2" OF AVIAN INFLUENZA VIRUS OF GENUS ALPHAINFLUENZAVIRUS OF SPECIES INFLUENZA A VIRUS SUBTYPE H9 FOR CONTROL OF ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY OF VACCINES AGAINST AVIAN INFLUENZA AND FOR PRODUCTION OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF AVIAN INFLUENZA TYPE A SUBTYPE H9

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а именно к получению нового штамма вируса гриппа птиц подтипа Н9, и может быть использовано для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц подтипа Н9, а также при разработке и изготовлении средств диагностики и специфической профилактики гриппа птиц подтипа Н9.
Грипп птиц - остро протекающая, высококонтагиозная вирусная болезнь домашних, синантропных и диких птиц, характеризуется септицемией, проявляется угнетением, отеками, поражением органов дыхания и пищеварения [3].
Возбудитель - РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Orthomyxoviridae (по классификации International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) - 00.046), роду Alphainfluenzavirus (ID: 197911 no классификации The National Center for Biotechnology Information (NCBI), к виду Influenza A virus (ID 00.046.0.01.001).
На сегодняшний день грипп птиц вызывается только вирусом гриппа А, который подразделяется на подтипы на основе антигенных различий двух поверхностных гликопротеинов: гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA). На данный момент известно 18 гемагглютинирующих (Н1-Н18) и 11 нейраминидазных подтипов (N1-N11) вирусов гриппа А [11].
Вирусы низкопатогенного гриппа птиц подтипа H9N2 показывают практически одинаково низкую патогенность в экспериментальных условиях при тестировании с помощью IVPI, однако в полевых условиях они часто демонстрируют заболеваемость и смертность от средней до высокой степени [13].
Способность данных вирусов обмениваться генетическим материалом, повышает вероятность эволюции и появления вирусов с неизвестными свойствами, возможно, с высоким пандемическим потенциалом [2].
В связи с возможностью инфицирования людей вирусом гриппа птиц подтипа H9N2, Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) уделяет ему пристальное внимание наряду с вирусом гриппа птиц подтипов Н5, Н7, проводит работу по антигенной и генетической характеристике вируса для разработки средств специфической профилактики в целях готовности к возможной пандемии [9, 16].
Известны штаммы вируса гриппа птиц, выделенные на территории РФ, используемые для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.
Известен штамм "НОВОСИБИРСКИЙ" вируса гриппа птиц Influenzae virus avicum для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц [5]. Это производственный штамм вируса гриппа птиц типа А, подтипа H5N1.
Известен штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса гриппа птиц Influenza virus avicum типа А подтипа Н5 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н5 [6].
Известен штамм A/chiken/Kostroma/3175/17 H5N2 вируса гриппа птиц подтипа H5N2 Infuenza A virus рода Alphainfluenzavirus для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления антигенсодержащих диагностикумов [7].
Известен штамм «A/chicken/Primorsk/419/2018 H9N2» вируса гриппа птиц (аналог), выделенный на территории Приморского края. Штамм предназначен для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н9 [8]. Однако указанный штамм имеет следующие недостатки: штамм относится к генетической линии Y280, представители которой широко распространены на территории Китая и Юго-Восточной Азии, но исходя из литературных данных, вирусы H9N2 генетической линии G1 не менее широко распространены [11]. Изоляты этой генетической линии выделяли во многих странах Ближнего Востока, включая Египет, Иран, Израиль, Саудовскую Аравию и Объединенные Арабские Эмираты [12, 17]. Вирус также регулярно изолировали в Ираке, Иордании, Кувейте, Ливане и Омане [14,15]. В РФ за период 2012-2020 гг.вирусы генетической линии G1 выявляли в Амурской области (A/chicken/Amursky/03/12, A/chicken/Amur_Russia/17/2018), Челябинской области (A/chicken/Chelyabinsk/30/2019), Новосибирской области (A/chicken/Siberia/03/2018) и Забайкальском крае (A/chicken/Zabaikal/2137/2019) [1, 4].
Техническая проблема заключается в расширении арсенала актуальных штаммов вируса гриппа птиц типа А подтипа Н9, циркулирующих на территории РФ, и обладающих инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью, сохраняющих иммуногенные свойства после инактивации, обеспечивая тем самым получение чувствительных и высокоспецифичных диагностикумов и вакцинных препаратов, создающих эффективную защиту домашней птицы против гомологичного вируса.
Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцинный штамм A/chicken/Israel/215/2007 H9N2 (Ck/215), относящийся к генетической линии G1 и используемый в Израиле при изготовлении вакцины против низкопатогенного вируса гриппа птиц подтипа Н9 [10]. Однако этот штамм имеет ряд недостатков. Штамм был выделен более десяти лет назад и антигенно отличается от ныне существующих вариантов, а одним из важнейших факторов выбора эффективного штамма для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики, а так же для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против вирусов гриппа птиц является антигенное соответствие между гемагглютининовым белком вакцины и штаммом, циркулирующим в полевых условиях. Штамм A/chicken/Israel/215/2007 H9N2 антигенно отличается от изолятов, циркулирующих на территории РФ.
Указанная проблема решена путем получения штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц, который может использоваться для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц подтипа Н9.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2», был выделен в ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2020 г. из проб, поступивших с птицефабрики Челябинской области Российской Федерации.
В результате вирусовыделения из гомогената внутренних органов кур был получен штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц.
Штамм прошел 3 пассажа на 11-суточных СПФ-куриных эмбрионах. Способен вызывать гибель эмбрионов кур в течение 48-72 ч инкубации.
Подтип H9N2 идентифицирован методами полимеразной цепной реакции (ПЦР), нуклеотидного секвенирования, в РТГА (реакция торможения гемагглютинации) и РИНА (реакция ингибиции нейраминидазной активности).
При проведении филогенетического анализа нуклеотидной последовательности фрагмента гена НА участка 1414-1573 п. н. было установлено, что исследуемый изолят «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц принадлежит к генетической линии G1, широко распространенной на территории Ближнего Востока.
По фрагменту гена НА наиболее генетически близкими оказались последовательности вирусов гриппа птиц подтипа H9N2, выделенные в Израиле (98,2-99,0% совпадений), а также последовательности вирусов гриппа птиц подтипа H9N2, выделенные на территории стран Ближнего Востока (98-99% совпадений).
Сайт расщепления гемагглютинина содержит основные аминокислоты и имеет структуру RSSR/GLF, что позволяет охарактеризовать вирус как потенциально низковирулентный.
Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц типа А, подтипа H9N2, депонирован 11 декабря 2020 г. в Государственную коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» под регистрационным номером №333 - деп/20-121-ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».
Экспериментально подтверждена возможность использования штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и для приготовления биопрепаратов для специфической профилактики и диагностики гриппа птиц.
Сущность изобретения пояснена на графическом изображении (фиг. 1). На фиг. 1 представлена дендрограмма, отражающая филогенетические взаимоотношения штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса гриппа птиц подтипа Н9. Дендрограмма основана на сравнении нуклеотидных последовательностей участка гена гемагглютинина.
Показано, что исследуемый штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» принадлежит к обширной линии штаммов G1, выявленных на территории стран Ближнего Востока.
Сущность изобретения пояснена следующим перечнем последовательностей:
SEQ ID №1: представляет последовательность нуклеотидов фрагмента гена гемагглютинина штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2»;
SEQ ID №2: представляет последовательность аминокислот фрагмента гемагглютинина штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2».
Исследования основывались на определении первичной структуры фрагмента гена гемагглютинина (НА) испытуемого образца штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» с последующим анализом филогенетического родства с другими штаммами и изолятами вируса гриппа птиц подтипа H9N2. В результате секвенирования была определена нуклеотидная (360 н.о.) и аминокислотная (119 а.о.) последовательности фрагмента гена НА штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2».
Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологическая характеристика
Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц относится к семейству Orthomyxoviridae, роду Alphainfluenzavirus, виду Influenza A virus, подтипу H9N2 и обладает морфологическими признаками, характерными для вируса гриппа типа А.
Вирионы вируса гриппа - оболочечные, плеоморфные. Диаметр сфероподобных частиц около 100 нм; нитевидные частицы около 17 нм в диаметре, длиной 250 нм и более. На поверхности вириона находятся шипообразные выступы (до 14 нм), образованные гомотримерами НА. В промежутках между кластерами НА у вирусов типа А размещаются молекулы NA.
Липидная мембрана окружает петлеобразные филаменты нуклеокапсидов с восемью фрагментами вирусного генома, каждый из которых представлен линейной одноцепочечной антисмысловой РНК.
Общая длина генома составляет около 13600 нуклеотидов (нт). Наиболее крупный фрагмент (№1) содержит около 2350 и.о.; №2 - чуть менее 2350 и.о.; №3, как правило, - 2250 и.о.; №4 - 1780 и.о.; №5 - 1575 и.о.; №6 -1420 и.о.; №7 - 1050 и.о.; №8 - 900 н.о.
На обоих концах каждой геномной цепи РНК содержатся повторяющиеся отрезки, причем повторы 5'-концевого участка (у вирусов типа А они имеют вид 5'-AGUAGAAACAAGG) комплементарны инвертированным повторам, расположенным на 3'-конце. Кроме того, 3'-концевые участки некоторых фрагментов генома содержат консервативные отрезки, типичные для вирусных штаммов, поражающих субъектов определенного биологического вида [ICTV-International Committee on Taxonomy of Viruses].
Антигенные свойства
По своим антигенным свойствам штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц относится к семейству Orthomyxoviridae, роду Alphainfluenzavirus, виду Influenza A virus, типу А, подтипу H9N2.
2
Гемагглютинирующая активность штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» подавляется специфической сывороткой к вирусу гриппа птиц подтипа H9N2 («IZSVe», Италия), что подтверждает принадлежность штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц к подтипу Н9. Титр специфической сыворотки составил 6 log. Нейраминидазная активность штамма подавляется специфической сывороткой к вирусу гриппа птиц (ВГП) подтипа H5N2 («IZSVe», Италия).
Биотехнологические свойства
3
2
Инактивированный вирус индуцирует антитела, выявляемые методами реакции торможения гемагглютинирующей активности (РТГА). Так, через 14 суток после однократной иммунизации цыплят инактивированной вакциной из штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц в прививном объеме 0,5 см/гол средний титр антител по группе к НА, обеспечивающим реакцию торможения гемагглютинации, составил 3,8 log (таблица 5).
Гено- и хемотаксономическая характеристики
6
Штамм «A/chicken/Chelyabinsky314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц типа А подтипа Н9 является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 250×10 Д.
Геном вируса гриппа представлен однонитевой РНК негативной полярности в виде 8 нитей (сегментов) в комплексе с белком нуклеопротеина (NP).
Вирионы вируса гриппа имеют наружную липопротеиновую оболочку, чаще сферической формы. Диаметр сферических форм около 100 нм. Вирусные частицы содержат РНК - 1%, белки - 70%, жиры - 20%, углеводы - до 8%.
Антигенная вариабельность и таксономическая классификация вируса основана на идентификации двух основных поверхностных белков -гемагглютинина и нейраминидазы.
Устойчивость к внешним факторам
Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса ГП чувствителен к детергентам, формальдегиду, бета-пропиолактону, производным азиридина, быстро инактивируется при прогревании (56°С), ультрафиолетовом облучении и при рН ниже 5,0.
Дополнительные признаки и свойства
Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает. Иммунизация цыплят дозой, в два раза превышающей прививную, не вызывает видимых клинических изменений в общем состоянии птицы, а также локальных поражений ткани в месте введения.
Патогенные свойства
7,0
50
Вирулентность - низкая (не вызывает гибель зараженной птицы в дозе 10 ЭЛД).
Контагиозность - контагиозен. Неиммунные цыплята заражаются при совместном содержании с зараженными.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.
Пример 1.
2
Определение подтиповой антигенной характеристики штамма проводили с помощью перекрестной реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции ингибиции нейраминидазной активности (РИНА) с референтными гипериммунными сыворотками к антителам 16 Н-типов вируса гриппа птиц и с референтными сыворотками против гриппа птиц подтипов N1-N2 по нейраминидазе. Образцы вирусной суспензии исследовали предварительно в реакции гемагглютинации (РГА) для определения гемагглютинирующей активности вируса. Активность штамма вируса гриппа птиц «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» в РГА составила 8 log. В качестве отрицательного контроля использовали нормальную сыворотку крови кур производства ФГБУ «ВНИИЗЖ». Результаты представлены в таблице 1 и таблице 2.
2
В РТГА гемагглютинирующая активность испытуемого образца подавлялась специфической сывороткой к вирусу гриппа птиц подтипа H9N2 («IZSVe», Италия), что подтверждает принадлежность образца штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц к подтипу Н9. Титр сыворотки составил 6 log.
В РИНА нейраминидазная активность испытуемого образца подавлялась специфической сывороткой к вирусу гриппа птиц подтипа H5N2 («IZSVe», Италия).
Согласно результатам серологических исследований штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» был отнесен к вирусу гриппа птиц подтипа H9N2.
Также для подтиповой принадлежности штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» проводили молекулярно-биологические исследования экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ), полученной от зараженных данным штаммом свободных от специфической патогенной микрофлоры куриных эмбрионов (СПФ-КЭ). Для этого выделяли общую РНК, которую использовали для постановки обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР). Первичную индикацию гена М проводили методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени (ОТ-ПЦР-РВ), используя праймеры M25F, M124R и флуоресцентно-меченный олигонуклеотидный зонд М64. С помощью классической ОТ-ПЦР амплифицировали фрагмент гена НА. Методом секвенирования была определена нуклеотидная последовательность фрагмента (360 н. о.) гена НА штамма вируса гриппа птиц «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» и соответствующая ей аминокислотная последовательность (119 а. о.). Было установлено, что по фрагменту гена НА к штамму вируса гриппа птиц «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» наиболее близкими оказались последовательности вирусов гриппа А птиц подтипа Н9, выделенные ранее на территории стран Ближнего Востока (98-99% совпадений).
Таким образом, на основании серологических и молекулярно-биологических исследований установлена принадлежность штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» к семейству Orthomyxoviridae, роду Alphainfluenzavirus, виду Influenza A virus, типу А, подтипу H9N2.
Пример 2.
-1
-10
3
3
3
50
Для использования штаммов вируса в качестве контрольных штаммов при заражении в целях контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин, а также для использования в качестве диагностического и производственного необходимо получить штамм вируса с высокой инфекционной активностью. Для определения инфекционной активности штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц из вирусного материала готовили ряд десятикратных последовательных разведений (от 10 до 10). Каждое разведение вируса инокулировали в аллантоисную полость четырем 11-суточным СПФ-куриным эмбрионам (КЭ) в объеме 0,2 см. Четырем эмбрионам контрольной группы вводили ФБР тем же способом в объеме 0,2 см. Специфичность гибели подтверждали в реакции гемагглютинирующей активности (РГА) исследованием экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ) от каждого зараженного эмбриона. Титр вируса в образце определяли по методу Кербера и выражали в единицах ЭИД/см (таблица 3).
50
3
Таким образом, инфекционная (in vivo) активность штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц при 10-кратном титровании в СПФ-КЭ составила 8,5 lg ЭИД/см.
Пример 3.
Для использования штамма для контроля антигенной и иммуногенной активности, а так же для приготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц подтипа Н9 необходимо получить штамм, свободный от контаминации чужеродными вирусами, бактериями и грибами. Подтверждение отсутствия контаминации бактериальной и грибной микрофлорой проводили в соответствии с ГОСТ 28085 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности». Отсутствие контаминации микоплазмами проводили в соответствии с требованиями ГФ XIV, том 1, с. 1201-1222.
В результате исследований установлено, что штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц не контаминирован бактериями, грибами и микоплазмами. В результате испытаний с применением методов полимеразной цепной реакции (ПЦР) и полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) было установлено, что штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц не контаминирован вирусами ньюкаслской болезни (НБ), инфекционного бронхита кур (ИБК), инфекционного ларинготрахеита птиц (ИЛТ), инфекционной бурсальной болезни (ИББ), реовирусом птиц и содержит в своем составе только геном вируса гриппа птиц типа А подтипа H9N2.
Пример 4.
3
3
Патогенные свойства штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц изучали на цыплятах 30-суточного возраста. В опыте использовали птицу яичного кросса. Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц вводили цыплятам внутримышечно в объеме 0,5 см с инфекционной активностью 106 ЭИД50/см. В результате у цыплят наблюдали характерные клинические признаки заболевания (угнетенное состояние, взъерошенность оперения, отказ от корма и т.д.), гибели зараженной птицы не было отмечено.
Таким образом, штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц является низковирулентным.
Пример 5.
50
2
3
3
3
Для получения иммунных сывороток крови к штамму «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» приготовили вакцину, содержащую в качестве основного компонента данный штамм (предлагаемое изобретение). Для изготовления вакцины использовали адъювант Montanide ISA 70 (SEPPIC, Франция). Для приготовления антигена использовали экстраэмбриональную жидкость СПФ-КЭ зараженных штаммом «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» с инфекционной активностью 8,5 ЭИД/см, при этом гемагглютинирующая активность составляла значение 6 log. Для инактивации инфекционных свойств вируса гриппа птиц использовали бета-пропиолактон (БПЛ). Для этого из исходного раствора БПЛ готовили 10%-ный рабочий раствор на стерильной деминерализованной воде. В сосуд с вируссодержащей жидкостью вносили рабочий раствор БПЛ до конечной концентрации 0,05%. Сосуд с содержимым инкубировали при температуре (18-26)°С в течение 24 ч при постоянном перемешивании на шейкере. После окончания процесса инактивации вирусный материал помещали в холодильник (4-8)°С, предварительно из сосуда отбирали пробу материала в объеме 5,0 см для проведения исследований по определению полноты инактивации вируса и стерильности материала. После подтверждения полноты инактивации готовили серию лабораторного образца вакцины. Для этого смешивали 30 частей антигена с заданными характеристиками и 70 частей адъюванта. Содержание антигенного материала и масляного адъюванта в прививной дозе вакцины в соотношении 30:70 является оптимальным, так как обеспечивает толерантную презентацию антигена в организме иммунизированной птицы. Эмульсию получали на гомогенизаторе при 3000 об/мин. Иммунизацию 30-суточного возраста цыплят проводили внутримышечно в прививном объеме 0,5 см на голову. На 14 и 42 сутки после вакцинации у иммунизированных птиц отбирали кровь и исследовали на наличие специфических антител к вирусу гриппа птиц типа А подтипа Н9 в ИФА и РТГА (таблица 4, 5).
Результаты исследований свидетельствуют о выраженной антигенной активности лабораторного образца вакцины на основе штамма «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц рода Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа Н9, т.к. установлено наличие специфических антител к вирусу гриппа подтипа H9N2 в ИФА и антигемагглютининов к вирусу гриппа птиц подтипа H9N2 в РТГА.
Таким образом, заявляемый штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц рода Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа Н9 необходим для создания диагностических препаратов, используемых при типировании новых вирусных вариантов, оценки активности противовирусных препаратов и эффективности вакцин, а так же для создания биопрепаратов для специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н9.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Штамм «A/chicken/Chelyabinsk/314-1/2020 H9N2» вируса гриппа птиц рода Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа H9 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н9»:
1. Анализ генетических свойств изолята вируса гриппа A/Chicken/Chelyabinsk/30/2019 H9N2, выделенного на территории Челябинской области / Н.Г. Зиняков, О. С.Осипова, П. Б. Акшалова и др. // Ветеринария сегодня. - 2019. - №4 (31). - С.49-53.
2. Низкопатогенный грипп птиц, вызванный вирусом подтипа Н9. Обзор литературы. / Варкентин А.В., Волков М.С., Ирза В.Н. - В.: Труды федерального центра охраны здоровья животных, 2014, Т.12 (1). С. 41-53.
3. Ортомиксовирусы. Руководство по вирусологии. / Каверин Н.В., Львов Д.К., Щелканов М.Ю. - М.: МИА, 2013, С.307 - 313.
4. О распространении вируса низкопатогенного гриппа A/H9N2 в мире и на территории Российской Федерации. Проблемы искоренения болезни / М.С. Волков, А.В. Варкентин, В.Н. Ирза // ВетС.- 2019. - №3. - С.51-55.
5. Патент РФ №2323740, МПК А61К 39/145, C12N 7/00, 2006 г.
6. Патент РФ №2647566, МПК А61К 39/145, C12N 7/00, 2017 г.
7. Патент РФ №2736788, МПК C12N 7/00, 2020 г.
8. Патент РФ №2736786, МПК C12N 7/00, 2020 г.
9. Antigenic and genetic characteristics of zoonotic influenza A viruses and development of candidate vaccine viruses for pandemic preparedness. -URL:https://www.who.int/influenza/vaccines/virus/202103_zoonotic_vaccinevirus update.pdf (дата обращения 11.03.21).
10. Antigenic Cartography of H9 Avian Influenza Virus and Its Application to Vaccine Selection/ Y.Wang, I. Davidson, R. Fouchier, E. Spackman - Avian Diseases, 2015. Vol.60(ls). -P.218-225.
11. A Global Perspective on H9N2 Avian Influenza Virus / T. P. Peacock, J. James, J. E. Sealy and M. Iqbal. - Viruses, 2019. Vol.11.- P. 620-628.
12. Characterization of avian H9N2 influenza viruses from United Arab Emirates 2000 to 2003/ Aamir U.B., Wernery U., Ilyushina, N., Webster R.G.// Virology.- 2007.- Vol.361.- P. 45-55.
13. Epidemiological survey and genetic evolution of H9 subtype influenza viruses in Shanghai, China, from 2006 to 2010 / J.P. Zhou, F.F. Ge, J. Liu [et al.] // Arch. Virology. - 2012. - Vol.157. - P. 1193-1198.
14. Genetic analysis of H9N2 avian influenza viruses circulated in broiler flocks: Acase study in Iraq in 2014-2015/ Kraidi Q.A., Madadgar O., Ghalyanchi Langeroudi A., Karimi V. // Virus Genes. -2017.-Vol.53- P. 205-214.
15. Genetic comparison of H9N2 AI viruses isolated in Jordan in 2003/ Monne I., Cattoli G., Mazzacan E. [et al] //Avian Dis.- 2007.- Vol.51.-P. 451-454.
16. Infection with avian influenza viruses / OIE. Terrestrial Animal Health Code, 2019. Chapter 10.4. - URL: https://www.oie.int/standard-setting/terrestrial-code/access-online (дата обращения 11.03.21).
17. Summary of avian influenza Activity in Europe, Asia, and Africa, 2006-2009/ I.H. Brown // Avian Dis. - 2010. - Vol.54. - P. 187-193.