ПИРИМИДИЛЦИКЛОПЕНТАНЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ AKT-ПРОТЕИНКИНАЗЫ
PYRIMIDYL CYCLOPENTANES AS AKT-PROTEIN KINASE INHIBITORS

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к новым ингибиторам серин/треонин-протеинкиназ (например, AKT и родственных киназ), фармацевтическим композициям, содержащим такие ингибиторы, и способам получения указанных ингибиторов. Эти ингибиторы применимы, например, для лечения гиперпролиферативных заболеваний, таких как рак и воспаление у млекопитающих.
Уровень техники
Протеинкиназы (РК) представляют собой ферменты, которые катализируют фосфорилирование гидроксигрупп тирозиновых, сериновых и треониновых остатков белков путем переноса терминального (гамма) фосфата из АТФ. Через пути сигнальной трансдукции эти ферменты модулируют рост, дифференцировку и пролиферацию клеток, т.е. практически все аспекты жизни клеток тем или иным образом зависят от активности PK (Hardie, G. и Hanks, S. (1995) The Protein Kinase Facts Book. I u II, Academic Press, San Diego, CA). Кроме того, аномальная активность РК связана с семейством заболеваний, начиная от относительно безопасных, не угрожающих жизни, таких как псориаз, до чрезвычайно вирулентных, таких как глиобластома (рак мозга). Протеинкиназы представляют собой важный класс мишеней для терапевтической модуляции (Cohen, P. (2002) Nature Rev. Drug Discovery 1:309).
Атипичные фосфорилирование белков и/или экспрессия, как часто сообщают, в значительной степени представляют собой один из эффектов, являющихся причиной аномальной пролиферации клеток, метастаза и выживания клеток при раке. Аномальные регуляция и/или экспрессия различных киназ, включающих Akt, VEGF, ILK, ROCK, p70S6K, Bcl, PKA, PKC, Raf, Src, PDK1, ErbB2, MEK, IKK, Cdk, EGFR, BAD, CHK1, CHK2 и GSK3 среди многих других, определенно органически связаны именно с раком.
3
Протеинкиназы включают два класса: протеин-тирозин-киназы (РТК) и серин-треонин-киназы (STK). B/Akt-протеинкиназные ферменты представляют собой группу серин/треонин-киназ, которые сверхпродуцированы во многих опухолях человека. Одной из лучше всего охарактеризованных мишеней PI3K-липидных продуктов является 57-KD-серин/треонин-протеинкиназа Akt, ниже участка PI3K в пути сигнальной трансдукции (Hemmings, B.A. (1997) Science 275:628; Hay N. (2005) Cancer Cell 8:179-183). Akt представляет собой человеческий гомолог v-akt-протоонкогена в резко трансформирующем ретровирусе АКТ8. Из-за высокой степени родства последовательностей Akt и протеинкиназ А и С, Akt также называют протеинкиназой В (РКВ) и родственной А и С (RAC). Известно, что существуют три изоформы Akt, a именно Akt1, Akt2 и Akt3, которые обладают 80%-ной общей гомологией [(Staal, S.P. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. 84:5034; Nakatani, K. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 257:906; Li et al. (2002) Current Topics in Med. Chem. 2:939-971; WO 2005/113762)]. Изоформы Akt участвуют в общей доменной организации, которая состоит из РН-домена (pleckstrin homology domen) у N-конца, каталитического домена киназ, и короткой регуляторной области у С-конца. Кроме того, как Akt2, так и Akt3 имеют варианты сплайсинга. При рекрутинге к клеточной мембране под действием PtdInd(3,4,5)P, Akt фосфорилируется (активируется) PDK1 при Т308, Т309 и Т305 для изоформ Akt1 (PKBα), Akt2 (PKBβ) и Akt3 (PKBγ) соответственно и при S473, S474 и S472 для изоформ Akt1, Akt2 и Akt3 соответственно. Такое фосфорилирование происходит под действием еще неизвестной киназы (предположительно названной PDK2), хотя PDK1 [(Balendran, A., (1999) Curr. Biol. 9:393)], аутофосфорилирование [(Toker, A. (2000) J. Biol. Chem. 275:8271)] и интегрин-связанная киназа (ILK) (Delcommenne, M. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:11211) вовлечены в данный процесс. Активация Akt требует ее фосфорилирования на остатке Ser 473 в С-концевом гидрофобном мотиве. (Brodbeck et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:9133-9136; Coffer et al. (1991) Eur. J. Biochem. 201:475-481; Alessi et al. (1997) Curr. Biol. 7:261-269). Хотя монофосфорилирование Akt активирует киназу, для максимальной активности киназы требуется бис(фосфорилирование).
Полагают, что Akt воздействует на рак, подавляя апоптоз и усиливая как ангиогенез, так и пролиферацию [(Toker et al. (2006) Cancer Res. 66(8):3963-3966)]. Akt сверхпродуцирована во многих формах человеческого рака, включающих (но не ограниченных перечисленными ниже) рак толстой кишки [(Zinda et al. (2001) Clin. Cancer Res. 7:2475)], яичников [(Cheng et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:9267)], мозга [(Haas Kogan et al. (1998) Curr. Biol. 8:1195)], легких [(Brognard et al. (2001) Cancer Res. 61:3986)], поджелудочной железы [(Bellacosa et al. (1995) Int. J. Cancer 64:280-285; Cheng et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. 93:3636-3641)], предстательной железы [(Graff et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:24500)] и рак желудка [(Staal et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:5034-5037)].
Для таргетной терапии небольшими молекулами ингибитора исследован транспорт рапамицина (mTOR) к мишени PI3K/Akt/млекопитающее [(Georgakis, G. и Younes, A. (2006) Expert Rev. Anticancer Ther. 6(1): 131-140; Granville et al. (2006) Clin. Cancer Res. 12(3):б79-689)]. Ингибирование PI3K/Akt передачи сигнала индуцирует апоптоз и ингибирует рост опухолевых клеток, которые повышают уровни Akt [(Kim et al. (2005) Current Opinion in Investig. Drugs 6(12): 1250-1258; Luo et al. (2005) Molecular Cancer Ther. 4(6):977-986)].
Разработка ингибиторов киназ, которые нацелены на пути с аномальной регуляцией, приводящие в конечном счете к заболеванию, представляют собой огромный этический и коммерческий интерес для медицинского и фармацевтического сообщества. Соединение, которое ингибирует (1) рекрутинг Akt, к клеточной мембране, (2) активацию действием PDK1 или PDK2, (3) фосфорилирование субстрата или (4) одну из нижних мишеней Akt могло бы быть ценным противораковым средством, действующим или в виде отдельной терапевтической методики, или в сочетании с другими принятыми методиками.
Публикация заявки на патент США No. 2005/0130954 описывает в числе других целый ряд соединений, которые действуют как ингибиторы АКТ. Полагают, что эти соединения применимы в лечении гиперпролиферативных заболеваний, таких как рак.
В публикации заявки на патент США No. 2008/0058327 и публикации заявки на патент США No. 2008/0051399 описываются в числе других целый ряд соединений, которые действуют как ингибиторы AKT.
Раскрытие изобретения
Настоящее изобретение относится к новым соединениям, которые ингибируют AKT-протеинкиназы. Соединения по настоящему изобретению полезны в качестве терапевтических средств для лечения заболеваний и состояний, которые можно лечить путем ингибирования AKT-протеинкиназ.
Настоящее изобретение включает соединения общей формулы I
1
1a
2
2a
3
и их энантиомеры и соли, в которых A, R, R, R, R и R такие, как определено ниже.
Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы I, или его энантиомер, или его фармацевтически приемлемую соль.
Дополнительным объектом настоящего изобретения является способ лечения у млекопитающих заболеваний или медицинских состояний опосредованных AKT-протеинкиназами, включающий введение указанным млекопитающим одного или нескольких соединений формулы I, или их энантиомеров, или их фармацевтически приемлемых солей в количестве, эффективном для лечения или профилактики указанного заболевания. Состояния, опосредованные AKT-протеинкиназой, которые можно лечить способами по настоящему изобретению, включают (но не ограничиваются ими) воспалительные, гиперпролиферативные, сердечно-сосудистые, нейродегенеративные, гинекологические и дерматологические заболевания и нарушения.
Дополнительный объект настоящего изобретения относится к способу ингибирования продуцирования AKT-протеинкиназ у млекопитающих, который включает введение указанным млекопитающим соединения формулы I, или его энантиомера, или его фармацевтически приемлемой соли в количестве, эффективном для ингибирования продуцирования AKT-протеинкиназы.
Дополнительный объект настоящего изобретения относится к способам ингибирования активности AKT-протеинкиназ, включающим контактирование указанных киназ с соединением формулы I.
Соединения по изобретению можно успешно использовать в сочетании с другими известными терапевтическими средствами. Соответственно, настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы I, или его энантиомер, или его фармацевтически приемлемую соль в сочетании со вторым терапевтическим средством.
Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы I и их энантиомерам и фармацевтически приемлемым солям для применения в качестве лекарственных средств в лечении состояний, опосредованных AKT-протеинкиназами.
Дополнительным объектом изобретения является применение соединения формулы I, или его энантиомера, или фармацевтически приемлемой соли в терапии. В одном варианте осуществления изобретения терапия включает лечение состояния, опосредованного AKT-протеинкиназой.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к набору для лечения заболеваний или нарушений, опосредованных AKT-протеинкиназой, который содержит соединение формулы I или его энантиомер, или фармацевтически приемлемую соль, контейнер и необязательно листок-вкладыш или этикетку с показаниями для лечения. Наборы могут дополнительно содержать второе соединение или состав, включающий второе фармацевтическое средство, применимое для лечения указанного заболевания или нарушения.
Настоящее изобретение дополнительно включает способы получения, способы разделения и способы очистки соединений по настоящему изобретению.
Дополнительные преимущества и новые признаки настоящего изобретения будут изложены в следующей ниже части описания и в части, которая будет очевидна специалистам в данной области при экспертизе следующего описания или которую можно будет узнать из практики изобретения. Преимущества изобретения могут быть реализованы и достигнуты с помощью комбинаций, композиций и способов, конкретно указанных в прилагаемой формуле изобретения.
Осуществление изобретения
Теперь будут сделаны подробные ссылки на определенные варианты осуществления изобретения, примеры которых иллюстрируются сопровождающими структурами и формулами. Хотя изобретение будет описано в сочетании с пронумерованными вариантами его осуществления, должно быть понятно, что не подразумевается ограничение изобретения этими вариантами осуществления. Наоборот, подразумевается, что изобретение охватывает все альтернативы, модификации и эквиваленты, которые могут быть включены в объем настоящего изобретения согласно пунктам формулы изобретения. Специалист в данной области техники должен знать множество способов и веществ, аналогичных или эквивалентных описанным здесь, которые можно было бы использовать в практике настоящего изобретения. Настоящее изобретение никоим образом не ограничено описанными способами и веществами. В случае если одна или несколько включенных ссылок на литературу и аналогичные материалы отличаются от настоящей заявки или противоречат ей, включая определенные термины, использование терминов, описанные методики или что-либо подобное (но не ограничиваясь этим), настоящая заявка имеет преимущественную силу.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
3
2
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
3
3
3
2
3
3
2
2
2
2
3
3
2
2
3
2
3
2
3
2
2
3
3
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
3
2
3
2
2
3
3
2
2
2
3
3
3
2
3
3
2
3
2
3
2
3
2
2
3
3
2
3
2
3
2
3
3
3
Термин "алкил", используемый здесь, относится к насыщенному линейному или разветвленному одновалентному углеводородному радикалу, содержащему один-двенадцать атомов углерода, причем алкильный радикал может быть необязательно независимо замещен одним или несколькими заместителями, описанными ниже. Примеры алкильных групп включают (но не ограничиваются ими) метил ("Me", -СН), этил ("Et", -СНСН), 1-пропил ("n-Pr", н-пропил, -СНСНСН), 2-пропил ("i-Pr", изопропил, -СН(СН)), 1-бутил ("n-Bu", н-бутил, -CHCHCHCH), 2-метил-1-пропил ("i-Bu", изобутил, -СНСН(СН)), 2-бутил ("s-Bu", втор-бутил, -СН(СН)СНСН), 2-метил-2-пропил ("t-Bu", трет-бутил, -С(СН)), 2,2-диметилпропил (СНС(СН)), 1-пентил (н-пентил, -СНСНСНСНСН), 2-пентил (-СН(СН)СНСНСН), 3-пентил (-СН(СНСН)), 2-метил-2-бутил (-С(СН)СНСН), 3-метил-2-бутил (-СН(СН)СН(СН)), 3-метил-1-бутил (-СНСНСН(СН)), 2-метил-1-бутил (-СНСН(СН)СНСН), 1-гексил (-СНСНСНСНСНСН), 2-гексил (-СН(СН)СНСНСНСН), 3-гексил (-СН(СНСН)(СНСНСН)), 2-метил-2-пентил (-С(СН)СНСНСН), 3-метил-2-пентил (-СН(СН)СН(СН)СНСН), 4-метил-2-пентил (-СН(СН)СНСН(СН)), 3-метил-3-пентил (-С(СН)(СНСН)), 2-метил-3-пентил (-СН(СНСН)СН(СН)), 2,3-диметил-2-бутил (-С(СН)СН(СН)), 3,3-диметил-2-бутил (-СН(СН)С(СН)), 1-гептил, 1-октил и им подобные.
Применяемые здесь термины "циклоалкил", "карбоцикл", "карбоциклил" и "карбоциклическое кольцо" используют как взаимозаменяемые, и они относятся к насыщенным или частично ненасыщенным циклическим углеводородным радикалам, содержащим от трех до двенадцати атомов углерода. Термин "циклоалкил" включает моноциклические и полициклические (например, бициклические и трициклические) структуры, где полициклические структуры необязательно включают насыщенное или частично ненасыщенное циклоалкильное кольцо, конденсированное с насыщенным, частично ненасыщенным или ароматическим циклоалкильным или гетероциклическим кольцом. Циклоалкил может быть необязательно независимо замещен одним или несколькими заместителями, описанными здесь.
Примеры циклоалкильных групп включают (но не ограничиваются ими) циклопропил, циклобутил, циклопентил, 1-циклопент-1-енил, 1-циклопент-2-енил, 1-циклопент-3-енил, циклогексил, 1-циклогекс-1-енил, 1-циклогекс-2-енил, 1-циклогекс-3-енил, циклогексадиенил, циклогептил, циклооктил, циклононил, циклодецил, циклоундецил, циклододецил, бицикло[2.2.1]гептан, бицикло[2.2.2]октан и бицикло[3.2.2]нонан.
Используемые здесь термины "гетероцикл", "гетероциклил" и "гетероциклическое кольцо" взаимозаменяемы и относятся к насыщенному или частично ненасыщенному карбоциклическому радикалу, содержащему в кольце 3-8 атомов, где, по меньшей мере, один атом кольца представляет собой гетероатом, независимо выбранный из азота, кислорода и серы, остальные атомы кольца представляют собой атомы углерода, причем один или несколько атомов в кольце могут быть необязательно независимо замещены одним или несколькими заместителями, описанными ниже. Радикал может быть углерод-центрированным или гетероатом-центрированным. Термин "гетероцикл" включает гетероциклоалкокси. Термин "гетероциклил" также включает радикалы, в которых гетероциклические радикалы конденсированы с насыщенным, частично ненасыщенным или ароматическим карбоциклическим или гетероциклическим кольцом. Гетероцикл может быть С-замещенным или N-замещенным, в тех случаях, где это возможно. Например, группа, производная от пиррола, может представлять собой пиррол-1-ил (N-замещение) или пиррол-3-ил (С-замещение). Далее, группа, производная от имидазола может представлять собой имидазол-1-ил (N-замещение) или имидазол-3-ил (С-замещение). Примеры гетероциклических групп, в которых 2 атома углерода кольца замещены оксо (=O) группами, представляют собой изоиндолин-1,3-дионил и 1,1-диоксотиоморфолинил. Гетероциклические группы здесь необязательно замещены независимо одним или несколькими заместителями, описанными в настоящей заявке.
Типичные гетероциклильные группы включают (но не ограничиваются ими) оксиранил, азиридинил, тииранил, азетидинил, оксетанил, тиетанил, 1,2-дитиетанил, 1,3-дидиетанил, пирролидинил, пиперидинил, морфолинил, тиоморфолинил, тиоксанил, пиперазинил, гомопиперазинил, гомопиперидинил, оксепанил, тиепанил, оксазепинил, диазепинил, тиазепинил, дигидротиенил, дигидропиранил, дигидрофуранил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиенил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, 1-пирролинил, 2-пирролинил, 3-пирролинил, индолинил, 2Н-пиранил, 4Н-пиранил, диоксанил, 1,3-диоксоланил, пиразолинил, пиразолидинил, дитианил, дитиоланил, пиразолидинил, имидазолинил, имидазолидинил, 3-азабицикло[3.1.0]гексанил, 3-азабицикло[4.1.0]гептанил и азабицикло[2.2.2]гексанил.
Используемый здесь термин "гетероарил" относится к одновалентному ароматическому радикалу с 5-, 6- или 7-членным кольцом и включает конденсированные циклические (кольцевые) системы (по меньшей мере, одна из которых является ароматической) из 5-10 атомов, содержащие, по меньшей мере, один гетероатом, независимо выбранный из азота, кислорода и серы. Гетероарил может быть С-замещенным или N-замещенным в случаях, где это возможно. Гетероарильные группы могут быть необязательно независимо замещены одним или несколькими заместителями, описанными здесь.
Примеры гетероарильных групп включают (но не ограничиваются ими) пиридинил, имидазолил, имидазопиридинил, пиримидинил, пиразолил, триазолил, пиразинил, тетразолил, фурил, тиенил, изоксазолил, тиазолил, оксазолил, изотиазолил, пирролил, хинолинил, изохинолинил, индолил, бензимидазолил, бензофуранил, циннолинил, индазолил, индолизинил, фталазинил, пиридазинил, триазинил, изоиндолил, птеридинил, пуринил, оксадиазолил, тиадиазолил, фуразанил, бензофуразанил, бензотиофенил, бензотиазолил, бензоксазолил, хиназолинил, хиноксалинил, нафтиридинил и фуропиридинил.
Используемый здесь термин "галоген" обозначает фтор, хлор, бром или йод.
Термин "энантиомер" относится к двум стереомерам соединения, которые представляют собой неналагающиеся зеркальные изображения друг друга.
Термин "диастереомер" относится к паре оптических изомеров, которые не являются зеркальными изображениями друг друга.
Термин "таутомер" или "таутомерная форма" относится к структурным изомерам с различными энергиями, которые взаимопревращаются через низкий энергетический барьер.
Фраза "фармацевтически приемлемый" показывает, что вещество или композиция химически или токсикологически совместима с другими ингредиентами, содержащимися в рецептуре, и/или с млекопитающим, которое подвергают лечению этим веществом или композицией.
Фраза "эффективное количество» обозначает количество соединения, которое при введении млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, является достаточным для (i) лечения или предотвращения конкретного заболевания, состояния или нарушения, опосредованного активностью одной или нескольких AKT-протеинкиназ, тирозинкиназ, дополнительных серин/треонинкиназ и/или киназ с «двойной» специфичностью, (ii) улучшения состояния, ослабления или устранения одного или нескольких симптомов конкретного заболевания, состояния или нарушения или (iii) предотвращения или задержки появления одного или нескольких симптомов конкретного заболевания, состояния или нарушения, описанных здесь.
Подразумевается, что термин "проведение лечения" означает, по меньшей мере, облегчение состояния заболевания у млекопитающего, такого как человек, на которого влияют, по меньшей мере, частично, одна или несколько AKT-протеинкиназ, тирозинкиназ, дополнительных серин/треонинкиназ и/или киназ с «двойной» специфичностью. Термины «лечить» и «лечение» относятся как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мерам, цель которых состоит в том, чтобы предотвратить или замедлить (уменьшить) нежелательные физиологические изменения или нарушения. Для целей настоящего изобретения благоприятные или желательные клинические результаты включают (но не ограничиваются ими) ослабление симптомов, уменьшение степени поражения, стабилизированное (т.е. не ухудшающееся) состояние заболевания, задержку или замедление развития заболевания, улучшение или облегчение состояния заболевания и ремиссию (частичную или полную), определяемую или неопределяемую. Термин «лечение» может также означать продление времени выживания по сравнению с ожидаемым временем выживания без получения лечения. Нуждающиеся в лечении включают тех, которые уже страдают заболеванием или болезненным состоянием, а также тех, которые, как было обнаружено, предрасположены к состоянию заболевания, но которым еще не поставлен диагноз. Термины «проведение лечения», «лечить» или «лечение» включают в себя как превентивное, т.е. профилактическое, так и паллиативное лечение.
Используемый здесь термин «млекопитающее» относится к теплокровному животному, которое страдает заболеванием, описанным здесь, или у которого существует риск развития такого заболевания, и включает морских свинок, собак, кошек, крыс, мышей, хомяков и приматов, в том числе человека, но не ограничен перечисленными животными.
Термин "листок-вкладыш" используют для того, чтобы сослаться на инструкции, обычно включенные в наборы терапевтических продуктов, предназначенные для продажи, в которых содержится информация о показаниях, применении, дозировке, введении, противопоказаниях и/или предупреждениях, касающихся применения таких терапевтических продуктов.
Используемые здесь термины "соединение по этому изобретению", "соединения по настоящему изобретению" и "соединения формулы I" включают соединения формулы I и их таутомеры, разделенные энантиомеры, разделенные диастереомеры, рацемические смеси, сольваты, метаболиты, соли (включая фармацевтически приемлемые соли) и фармацевтически приемлемые пролекарства.
Следует понимать, что примеры, где два или несколько радикалов используют последовательно для определения заместителя, присоединенного к структуре, радикал, называемый первым, считается терминальным, а радикал называемый последним, считается присоединенным к рассматриваемой структуре. Так, например, арилалкильный радикал присоединен к рассматриваемой структуре алкильной группой.
ИНГИБИТОРЫ АКТ
Соединения по изобретению формулы I применимы для ингибирования AKT-протеинкиназ. Кроме АКТ, соединения формулы I могут также быть применимы в качестве ингибиторов тирозинкиназ, а также серин- и треонинкиназ. Такие соединения находят применение в качестве терапевтических средств против заболеваний, которые можно лечить ингибированием сигнального пути AKT-протеинкиназ и путей рецепторов тирозин- и серин/треонинкиназ.
В общем случае изобретение включает соединения формулы I
и их разделенные энантиомеры, разделенные диастереомеры и фармацевтически приемлемые соли, где:
1
1a
3
2
2
R и R независимо выбраны из Н, Me, Et, винила, CF, CHF или CHF;
2
R представляет собой Н, ОН, ОМе или F;
2a
R представляет собой Н, Me или F;
3
3
R представляет собой Н, Me, Et или CF;
А представляет собой ;
e
G представляет собой фенил, необязательно замещенный одной-четырьмя группами R, или 5-6-членный гетероарил, необязательно замещенный галогеном;
5
6
3
3
6
1
3
1
3
1
3
1
3
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
R и R независимо представляют собой Н, ОСН, С-С-циклоалкил, необязательно замещенный F, ОН, C-С алкилом или O(С-С алкилом), 4-6-членный гетероцикл, необязательно замещенный F, ОН, C-С алкилом, циклопропилметилом или С(=O)(C-С алкилом), или C-С-алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, независимо выбранными из ОН, оксо, О(С-С-алкила), CN, F, NH, NH(С-С-алкила), N(С-С-алкила), циклопропила, фенила, имидазолила, пиперидинила, пирролидинила, морфолинила, тетрагидрофуранила, оксетанила или тетрагидропиранила,
5
6
c
d
6
3
2
3
2
2
1
3
3
2
2
2
3
1
3
или R и R вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-7-членное гетероциклическое кольцо, необязательно замещенное одной или несколькими группами, независимо выбранными из ОН, галогена, оксо, CF, CHCF, CHCHOH, O(C-С алкил), С(=O)СН, NH, NHMe, N(Me), S(O)СН, циклопропилметила и C-С алкила, или R представляет собой водород, a R и R вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют 4-6-членное гетероциклическое кольцо, содержащее один атом азота;
a
b
R и R представляют собой Н
a
b
6
или R представляет собой Н, а R и R вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют 5-6-членное гетероциклическое кольцо, содержащее один или два атома азота;
c
d
R и R представляют собой Н или Me
c
d
или R и R вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют циклопропильное кольцо;
e
1
6
3
6
1
6
3
3
1
6
2
2
2
1
6
1
6
2
2
2
2
3
2
1
6
2
1
6
1
6
2
каждый R представляет собой независимо галоген, C-С-алкил, С-С-циклоалкил, О-(С-С-алкил), CF, OCF, S(С-С-алкил), CN, ОСН-фенил, NH, NO, NH-(C-C-алкил), N-(С-С-алкил), пиперидин, пирролидин, CHF, CHF, OCHF, OCHF, ОН, SO(С-С-алкил), C(O)NH, C(O)NH(C-C-алкил) и С(O)N(С-С-алкил);
m и n независимо равны 0, 1, 2 или 3 при условии, что (m+n) должны быть равны 2, 3 или 4; и
р равно 0 или 1.
В общем случае изобретение включает соединения формулы I
и их разделенные энантиомеры, разделенные диастереомеры и фармацевтически приемлемые соли, где:
1
1a
3
2
2
R и R независимо выбраны из Н, Me, Et, винила, CF, CHF или CHF;
2
R представляет собой Н, ОН, ОМе или F;
2a
R представляет собой Н, Me или F;
3
3
R представляет собой Н, Me, Et или CF;
А представляет собой ;
e
G представляет собой фенил, необязательно замещенный одной-четырьмя группами R, или 5-6-членный гетероарил, необязательно замещенный галогеном;
5
6
3
3
6
1
3
1
3
1
3
1
3
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
R и R независимо представляют собой Н, ОСН, С-С-циклоалкил, необязательно замещенный F, ОН, C-С алкилом или О-(C-Салкилом), 4-6-членный гетероцикл, необязательно замещенный F, ОН, C-С алкилом, циклопропилметилом или С(=O)(C-С алкилом), или C-С-алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, независимо выбранными из ОН, оксо, О-(С-Салкила), CN, F, NH, NH(C-С-алкила), N(С-С-алкила), циклопропила, фенила, имидазолила, пиперидинила, пирролидинила, морфолинила, тетрагидрофуранила, оксетанила или тетрагидропиранила,
5
6
3
2
3
2
2
1
3
3
2
2
2
3
1
3
или R и R вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 4-7-членное гетероциклическое кольцо, необязательно замещенное одной или несколькими группами, независимо выбранными из ОН, галогена, оксо, CF, CHCF, CHCHOH, O(C-С алкила), С(=O)СН, NH, NHMe, N(Me), S(O)СН, циклопропилметила и C-С алкила;
a
b
R и R представляют собой Н
a
b
6
или R представляет собой Н, a R и R вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют 5-6-членное гетероциклическое кольцо, содержащее один или два атома азота в кольце;
c
d
R и R представляют собой Н или Me
c
d
или R и R вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют циклопропильное кольцо;
e
1
6
3
6
1
6
3
3
1
6
2
2
2
1
6
1
6
2
2
2
2
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
каждый R независимо представляет собой галоген, C-С-алкил, С-С-циклоалкил, O-(С-С-алкил), CF, OCF, S(С-С-алкил), CN, ОСН-фенил, NH, NO, NH-(C-С-алкил), N-(C-C-алкил), пиперидин, пирролидин, CHF, CHF, OCHF, OCHF, ОН, SO(С-С-алкил), C(O)NH, C(O)NH(C-C-алкил) и С(O)N(С-С-алкил);
m и n независимо равны 0, 1 или 2 при условии, что (m+n) должны быть равны 2, 3 или 4; и
р равно 0 или 1.
e
3
3
2
2
2
Примеры, относящиеся к группе G формулы I, включают фенил ("Ph"), необязательно замещенный одной или несколькими группами R, независимо выбранными из F, Cl, Br, I, метила, этила, изопропила, трет-бутила, циклопропила, CN, CF, ОМе, OEt, OCF, NO, SMe и OCHPh. Типичные варианты осуществления G включают фенил, 2-хлорфенил, 3-хлорфенил, 4-хлорфенил, 4-фторфенил, 4-бромфенил, 4-метилфенил, 4-этилфенил, 4-изопропилфенил, 4-трифторметилфенил, 4-цианофенил, 4-метоксифенил, 4-этоксифенил, 4-тиометилфенил, 4-трифторметоксифенил, 4-циклопропилфенил, 4-хлор-3-фторфенил, 3,4-дифторфенил, 4-бром-3-фторфенил, 3-фтор-4-метилфенил, 3-фтор-4-метоксифенил, 3-фтор-4-трифторметилфенил, 4-циано-3-фторфенил, 3,4-дихлорфенил, 2,4-дихлорфенил, 2,4-дифторфенил, 2-хлор-4-фторфенил, 2-фтор-4-хлорфенил, 3,5-дихлорфенил, 3,5-дифторфенил, 3-хлор-5-фторфенил, 3-хлор-4-фторфенил, 3-бром-4-фторфенил, 3,5-дифтор-4-хлорфенил, 2,3-дифтор-4-хлорфенил, 2,5-дифтор-4-хлорфенил, 3,5-дифтор-4-бромфенил, 2,3-дифтор-4-бромфенил, 2,5-дифтор-4-бромфенил, 4-(OCHPh)-фенил, 4-хлорфенил, 2,4-дихлорфенил, 3,4-дихлорфенил, 4-хлор-3-фторфенил, 3-хлор-4-фторфенил, 3-фтор-4-бромфенил, 4-фторфенил, 3,4-дифторфенил, 2,4-дифторфенил 4-бромфенил, 4-хлор-2-фторфенил, 4-метоксифенил, 4-метилфенил, 4-цианофенил, 4-трифторметилфенил, 4-йодфенил, 4-нитрофенил, 4-трет-бутилфенил, 2-фторфенил, 3-трифторметилфенил, 2-фтор-4-трифторметилфенил, 3-фтор-4-трифторметоксифенил, 3-фтор-4-трифторметилфенил и 4-трифторметоксифенил.
Фраза "5-6-членный гетероарил, необязательно замещенный галогеном", относящаяся к группе G формулы I, включает тиофены и пиридины, необязательно замещенные атомами галогена. Конкретные примеры включают структуры:
,
но не ограничены ими.
3
В одном варианте осуществления формулы I R представляет собой Н.
3
В еще одном варианте осуществления формулы I R представляет собой метил, причем указанный метил необязательно находится в (S) конфигурации.
3
1
1a
1
1a
В еще одном варианте осуществления формулы I R представляет собой этил. В одном варианте осуществления формулы I R представляет собой метил, причем указанный метил необязательно находится в (R) конфигурации. В некоторых вариантах осуществления формулы I R представляет собой Н. В некоторых вариантах осуществления формулы I R и R оба представляют собой метил.
1
1a
В еще одном варианте осуществления формулы I R представляет собой Н. В некоторых вариантах осуществления формулы I R представляет собой Н.
1
1a
В еще одном варианте осуществления формулы I R представляет собой этил. В некоторых вариантах осуществления формулы I R представляет собой Н.
1
1a
2
В еще одном варианте осуществления формулы I R представляет собой СН=СН(винил). В некоторых вариантах осуществления формулы I R представляет собой Н.
1
1a
2
В еще одном варианте осуществления формулы I R представляет собой СНОН. В некоторых вариантах осуществления формулы I R представляет собой Н.
1a
В одном варианте осуществления формулы I R представляет собой Н.
2
2a
В одном варианте осуществления формулы I R и R представляют собой Н.
2
2a
В еще одном варианте осуществления формулы I R и R представляют собой F.
2
2a
В еще одном варианте осуществления формулы I R представляет собой F и Rпредставляет собой Н.
2
2a
В еще одном варианте осуществления формулы I R представляет собой ОН. В некоторых вариантах осуществления формулы I R представляет собой Н.
2
В еще одном варианте осуществления формулы I R представляет собой ОМе.
e
В одном варианте осуществления формулы I G представляет собой фенил, необязательно замещенный одной-четырьмя группами R.
3
3
2
2
2
В одном варианте осуществления формулы I G представляет собой фенил, необязательно замещенный одной-четырьмя группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, I, метила, этила, изопропила, трет-бутила, циклопропила, CN, CF, ОМе, OEt, OCF, NO, SMe и OCHPh. Типичные варианты осуществления G включают фенил, 2-хлорфенил, 3-хлорфенил, 4-хлорфенил, 4-фторфенил, 4-бромфенил, 4-метилфенил, 4-этилфенил, 4-изопропилфенил, 4-трифторметилфенил, 4-цианофенил, 4-метоксифенил, 4-этоксифенил, 4-тиометилфенил, 4-трифторметоксифенил, 4-циклопропилфенил, 4-хлор-3-фторфенил, 3,4-дифторфенил, 4-бром-3-фторфенил, 3-фтор-4-метилфенил, 3-фтор-4-метоксифенил, 3-фтор-4-трифторметилфенил, 4-циано-3-фторфенил, 3,4-дихлорфенил, 2,4-дихлорфенил, 2,4-дифторфенил, 2-хлор-4-фторфенил, 2-фтор-4-хлорфенил, 3,5-дихлорфенил, 3,5-дифторфенил, 3-хлор-5-фторфенил, 3-хлор-4-фторфенил, 3-бром-4-фторфенил, 3,5-дифтор-4-хлорфенил, 2,3-дифтор-4-хлорфенил, 2,5-дифтор-4-хлорфенил, 3,5-дифтор-4-бромфенил, 2,3-дифтор-4-бромфенил, 2,5-дифтор-4-бромфенил, 4-(OCHPh)-фенил, 4-хлорфенил, 2,4-дихлорфенил, 3,4-дихлорфенил, 4-хлор-3-фторфенил, 3-хлор-4-фторфенил, 3-фтор-4-бромфенил, 4-фторфенил, 3,4-дифторфенил, 2,4-дифторфенил 4-бромфенил, 4-хлор-2-фторфенил, 4-метоксифенил, 4-метилфенил, 4-цианофенил, 4-трифторметилфенил, 4-йодфенил, 4-нитрофенил, 4-трет-бутилфенил, 2-фторфенил, 3-трифторметилфенил, 2-фтор-4-трифторметилфенил, 3-фтор-4-трифторметоксифенил, 3-фтор-4-трифторметилфенил и 4-трифторметоксифенил.
В одном варианте осуществления формулы I G представляет собой 4-хлорфенил, 4-фторфенил, 4-бромфенил, 4-йодфенил, 4-трифторметилфенил, 4-трифторметоксифенил, 4-тиометилфенил, 3-фтор-4-хлорфенил, 2,4-дихлорфенил или 3,4-дихлорфенил.
В одном варианте осуществления формулы I G может представлять собой 5-6-членный моноциклический гетероарил, необязательно замещенный одним или несколькими атомами галогена. В некоторых вариантах осуществления G может представлять собой тиофен или пиридин, необязательно замещенный одним или несколькими атомами галогена. В некоторых вариантах осуществления G замещен одним атомом галогена. Конкретные варианты осуществления включают:
.
5
В одном варианте осуществления формулы I R представляет собой Н или этил.
6
В одном варианте осуществления формулы I R представляет собой Н или этил.
6
В одном варианте осуществления формулы I R представляет собой водород, этил или изопропил.
a
b
В одном варианте осуществления формулы I R и R представляют собой Н.
c
d
В одном варианте осуществления формулы I R и R представляют собой Н.
c
d
6
c
d
6
В одном варианте осуществления R представляет собой водород, а R и R вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют 4-6-членное гетероциклическое кольцо, содержащее один атом азота. В некоторых вариантах осуществления m равно 0, R представляет собой водород, а R и R вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют 4-6-членное гетероциклическое кольцо, содержащее один атом азота, так что А имеет формулу:
,
где q равно 1 или 2 и n равно 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления n равно 1 и q равно 1, n равно 1 и q равно 2 или n равно 2 и q равно 2.
В одном варианте осуществления формулы I m и n независимо равны 0, 1 или 2 при условии, что (m+n) должны быть равны 2, 3 или 4. В конкретных вариантах осуществления m равно 0 и n равно 2, m равно 1 и n равно 2, m равно 2 и n равно 2, m равно 1 и n равно 1, m равно 2 и n равно 1 или m равно 2 и n равно 0.
В одном варианте осуществления формулы I m и n оба равны 1.
В еще одном варианте осуществления формулы I m равно 2 и n равно 0. В еще одном варианте осуществления формулы I n равно 2 и m равно 0.
В одном варианте осуществления формулы I m равно 1, n равно 1, р равно 0, так что А представлен формулой 1
,
5
6
c
d
где G, R, R, R и R такие, как определено здесь.
c
d
В некоторых вариантах осуществления формулы 1 R и R представляют собой Н.
5
В некоторых вариантах осуществления формулы 1 R представляет собой Н или этил.
6
В некоторых вариантах осуществления формулы 1 R представляет собой Н или этил.
В некоторых вариантах осуществления формулы I m равно 1, n равно 1 и р равно 1, так что А представлен формулой 2
6
7
8
где G, R, R и R такие, как здесь определено.
a
b
В некоторых вариантах осуществления формулы 2 R и R представляют собой Н.
c
d
В некоторых вариантах осуществления формулы 2 R и R представляют собой Н.
5
В некоторых вариантах осуществления формулы 2 R представляет собой Н или этил.
6
В некоторых вариантах осуществления формулы 2 R представляет собой Н или этил.
В конкретных вариантах осуществления А представляет собой
.
В дополнительных вариантах осуществления А выбран из структур:
В дополнительных вариантах осуществления А представляет собой
.
В конкретных вариантах осуществления А выбран из:
.
В конкретных вариантах осуществления А представляет собой
.
В некоторых вариантах осуществления соль представляет собой "фармацевтически приемлемую соль", которая, если не указано иное, включает соли, которые сохраняют биологическую эффективность соответствующей свободной кислоты или свободного основания конкретного соединения и не имеют нежелательных биологических или иных эффектов.
Соединения формулы I также включают другие соли таких соединений, которые не обязательно являются фармацевтически приемлемыми солями и которые могут быть применимы в качестве промежуточных соединений для получения и/или очистки соединений формулы I и/или для разделения энантиомеров соединений формулы I.
СИНТЕЗ СОЕДИНЕНИЙ ФОРМУЛЫ I
Соединения по настоящему изобретению можно синтезировать такими путями, которые включают способы, аналогичные хорошо известным в химии, особенно в свете приведенного здесь описания. Исходные вещества обычно доступны из коммерческих источников, таких как Sigma-Aldrich (Сент-Луис, шт. Миссури), Alfa Aesar (Уорд Хилл, шт.Миннесота), или TCI (Портлэнд, шт. Орегон), или их легко получить способами, хорошо известными специалистам в данной области (например, их получают способами, как правило, описанными в [Louis F. Fieser и Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v.1-19, Wiley, N.Y. (1967-1999 ed.) или в Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, включая приложения (которые также доступны из online базы данных Beilstein)].
Для иллюстративных целей на схемах 1-8 показаны общие способы получения соединений по настоящему изобретению, а также ключевых промежуточных соединений. Для более подробного описания отдельных стадий реакций см. раздел примеров, который приводится ниже. Специалисты в данной области понимают, что для синтеза соединений по изобретению можно использовать другие синтетические пути. Хотя конкретные исходные вещества и реагенты показаны на схемах и рассматриваются ниже, их можно легко заменить другими исходными веществами и реагентами, чтобы обеспечить получение разнообразных производных и/или условий реакции. Кроме того, многие соединения, полученные способами, описанными ниже, могут быть дополнительно модифицированы в свете настоящего описания с помощью способов традиционной химии, хорошо известных специалистам в данной области.
Схема 1
где: Reducing agent - восстановитель,
Deprotection - снятие защиты,
Deprotection and optional functionalization - снятие защиты и необязательная функционализация.
a
b
2
2a
1
1a
3
5
6
c
d
3
На схеме 1 показан способ получения соединения 9 формулы I, где p равно 1; R и R представляют собой Н; R, R, R, R, R, R, R, R, R, m и n определены здесь; a Pg и Pg' представляют собой аминозащитные группы с взаимоисключающими условиями удаления (например, Pg=Boc и Pg'=Cbz - см., например, "Protective Groups in Organic Synthesis" by Greene and Wuts, Wiley-Interscience, third edition, Chapter 7). Восстановительное аминирование с участием амина 2 и альдегида 1 в стандартных условиях, таких как NaBH(ОАс)/АсОН при температуре от 0 до 50°С дает замещенный амин 3. Ацилирование полученного замещенного амина 3 замещенным ацилпиперазином 4 в присутствии основания (такого, как основание Хюнига) при температуре от -20 до 100°С дает защищенный пиперазин 5. Удаление этой защитной группы (для Cbz группы, например, гидрогенолизом и т.п.) дает пиперазин 6. Обработка пиперазина 6 галогенированным пиримидином 7 при температуре от 25 до 250°С, и/или при высоком давлении, и/или при действии микроволнового излучения дает промежуточное соединение 8. Снятие защиты с аминогруппы (для Воc группы, например, действием HCl в диоксане при температуре от 0°С до 50°С) и конечная необязательная функционализация амина (например, алкилирование, восстановительное аминирование или ацилирование в стандартных условиях для введения новых заместителей) дают конечные соединения 9. Если требуется, их соответствующие аналоги можно затем подвергнуть разделению и получить индивидуальные энантиомеры.
Схема 2
где: Deprotection - снятие защиты,
Optional functionalization - необязательная функционализация,
Base - основание,
Oxidative - окислительное расщепление,
Reduction - восстановление,
Activation - активация.
1
2
2a
1a
3
5
6
a
b
c
d
4
4
3
2
На схеме 2 показан способ получения соединения 20 формулы I, где R, R и Rпредставляют собой водород; R представляет собой Me, a R, R, R, R, R, R, R, m, n и p такие, как определено здесь. Согласно схеме 2, бромирование (+)-пулегона 10 бромом дает дибромид 11. Обработка дибромида 11 основанием, таким как этоксид натрия, дает пулегенат 12. Окислительное расщепление пулегената 12, например, с помощью озонолиза при низкой температуре с последующей обработкой восстановителем (например, Zn) или с помощью NaIO/OsO при температуре от 5°С до 50°С), дает кетоэфир 13. Обработка кетоэфира 13 тиомочевиной в присутствии основания, такого как КОН в этаноле, с последующим восстановлением меркаптогруппы в стандартных условиях (например, никель Ренея как катализатор в аммиаке) дает гидроксипиримидин 16. Активация соединения 16 (например, галогенирование) действием, например, POCl или SOCl при температуре от -20 до 100°С с получением хлорпиримидина дает готовую к функционализации пиримидин-циклопентановую единицу 17. Замещение уходящей группы действием подходящего защищенного/замещенного пиперидина 18 при температуре от 0 до 150°С дает пиперидин 19. Снятие защиты с аминогруппы (для Воc группы, например, действием HCl в диоксане при температуре от 0 до 50°С) и конечная необязательная функционализация амина (например, алкилирование, восстановительное аминирование или ацилирование для введения новых заместителей) дают конечные соединения 20. Если требуется, их соответствующие аналоги можно затем подвергнуть разделению и получить индивидуальные энантиомеры.
Схема 3
где: Deprotection - снятие защиты,
Optional functionalization - необязательная функционализация,
Oxidative - окислительное расщепление,
Reduction - восстановление,
Activation - активация,
Hydrolysis - гидролиз.
2
2a
1
1a
3
5
6
7
a
b
c
d
3
На схеме 3 показан способ получения соединения 29 формулы I, где Rпредставляет собой ОН, R представляет собой Н, а R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, m, n и p определены здесь. Согласно схеме 3 обработка кетоэфира 21 тиомочевиной в присутствии основания, такого как КОН в этаноле, с последующим восстановлением меркаптогруппы в стандартных условиях (например, никель Ренея как катализатор в аммиаке) дает гидроксипиримидин 23. Активация (например, галогенирование) гидроксипиримидина 23 в стандартных условиях (например, действием POCl) дает 4-галогенпиримидин 24. Окисление 4-хлорпиримидина 24 окислителем, таким как m-СРВА или пероксид водорода, дает N-оксид 25. Перегруппировка N-оксида 25 уксусным ангидридом дает промежуточное соединение 26. Соединение 26 затем гидролизуют (например, действием LiOH или NaOH при температуре от 0 до 50°С) и получают спирт 27. Соединение 27 затем подвергают взаимодействию с требуемым замещенным пиперазином 18 в соответствии с методикой, описанной на схеме 1, и получают соединение 28. Если соединение 29 должно подвергаться необязательной функционализации, на этой стадии спирт 28 может быть защищен (например, TBS группой), чтобы не допустить возможных осложнений. Удаление защитной группы (Pg) соединения 28, например, с помощью кислоты (например, ТФУ при температуре от -20 до 50°С) в случае Воc группы, и последующая необязательная функционализация свободного амина (например, алкилирование, ацилирование, восстановительное аминирование и т.п.) в стандартных условиях дают полностью функционализированное соединение 29. Полученное соединение 29 можно также подвергать разделению для получения индивидуальных диастереоизомеров, используя либо хиральное разделение, стандартное нехиральное разделение (например, колоночную хроматографию, ВЭЖХ, СКЖХ и т.п.), перекристаллизацию, либо дериватизацию.
Схема 4
где: Deprotection - снятие защиты,
Optional functionalization - необязательная функционализация,
Activation - активация.
2
2a
1
1a
3
5
6
7
a
b
c
d
3
2
На схеме 4 показан альтернативный способ получения соединения 32 формулы I, где R и R представляют собой H, a R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, m, n и p определены здесь. Согласно схеме 3 аминирование кетоэфира 21 с помощью аммониевого синтона дает 30. Образование пиримидина, например, с помощью формиата аммония в присутствии формамида при температуре от 0°С до 250°С, и/или при высоком давлении, и/или действием микроволнового излучения дает бициклический продукт 23. Активация соединения 23 с помощью, например, POCl или SOCl, дает активированный пиримидин, а замещение уходящей группы действием подходящего защищенного/замещенного пиперидина 18 при температуре от 0 до 150°С дает пиперидин 31. Снятие защиты с аминной группы (для Воc группы, например, действием HCl в диоксане при температуре от 0 до 50°С) и конечная необязательная функционализация амина (например, алкилирование, восстановительное аминирование или ацилирование для введения новых заместителей) дает конечные соединения 32. Если требуется, их соответствующие аналоги можно затем подвергнуть разделению и получить индивидуальные энантиомеры.
Схема 5
где: Deprotection - снятие защиты,
Optional functionalization - необязательная функционализация.
2
2a
1
1a
3
5
6
7
a
b
c
d
Схема 5 демонстрирует способ получения соединения 35 формулы I, где Rпредставляет собой фтор, R представляет собой водород, a R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, m, n и p определены здесь. Согласно схеме 5, обработка спирта 33 фторирующим агентом, таким как DAST, при температуре от -78 до 100°С, дает фторпроизводное 34. Снятие защиты с аминогруппы (для Воc группы, например, действием HCl в диоксане при температуре от 0 до 50°С) и конечная необязательная функционализация амина (например, алкилирование, восстановительное аминирование или ацилирование для введения новых заместителей) дают конечные соединения 35. Если требуется, их соответствующие аналоги можно затем подвергнуть разделению и получить индивидуальные энантиомеры.
Схема 6
где: Deprotection - снятие защиты.
5
6
2
2a
1
1a
3
5
6
7
a
b
c
d
Схема 6 демонстрирует способ получения соединения 39 формулы I, где p равно 0; NRR представляет собой такую группу, что амин не может быть дополнительно ацилирован соединением 4; а R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, m и n определены здесь. Ацилирование замещенного амина 36 замещенным ацилпиперазином 4 в присутствии основания (такого, как основание Хюнига) при температуре от -20 до 100°С дает защищенный пиперазин 37 (Pg = защитная группа). Удаление этой защитной группы (для Воc группы, например, действием HCl в диоксане, для Cbz групп - гидрогенолизом и т.п.) дает пиперазин 38. Обработка полученного пиперазина 38 галогенированным пиримидином 7 при температуре от 50 до 250°С, и/или при высоком давлении, и/или при действии микроволнового излучения дает продукт 39. Если требуется, его соответствующие аналоги можно затем подвергнуть разделению и получить индивидуальные энантиомеры.
Схема 7
где: Deprotection - снятие защиты,
Optional functionalization - необязательная функционализация.
2
2a
1
1a
3
5
6
7
a
b
c
d
1
Схема 7 демонстрирует альтернативный путь образования соединения (44) формулы I, где R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, m, p и n определены здесь, а Pg и Pg представляют собой защитные группы с взаимоисключающими условиями удаления (например, группы Воc и Cbz). Ацилирование замещенного амина 40 замещенным ацилпиперазином 4 в присутствии основания (такого как основание Хюнига) при температуре от -20°С до 100°С дает защищенный пиперазин 41 (Pg = защитная группа). Удаление этой защитной группы (например, Воc группы действием HCl в диоксане или Cbz группы - гидрогенолизом) дает пиперазин 42. Обработка полученного пиперазина 42 галогенированным пиримидином 7 при температуре от 50°С до 250°С и/или при высоком давлении или при действии микроволнового излучения дает промежуточное соединение 43. Удаление аминозащитной группы (например, Воc группы действием HCl в диоксане при температуре от 0 до 50°С) и последующая необязательная функционализация (например, алкилирование, восстановительное аминирование или ацилирование для введения новых заместителей) дает конечные соединения 44. Если требуется, эти соответствующие аналоги можно затем подвергнуть разделению получить индивидуальные энантиомеры.
Схема 8
где: Deprotection - снятие защиты,
Optional functionalization - необязательная функционализация,
Protection - защита,
Triphosgene - трифосген.
2
28
1
1a
3
5
6
7
a
b
c
d
На схеме 8 показан альтернативный путь получения соединения 29 формулы I, где R представляет собой ОН; R представляет собой Н; R, R, R, R, R, R, R, R, R, R, m, p и n определены здесь; a Pg и Pg' представляют собой защитные группы с взаимоисключающими условиями их удаления (например, группы Boc и TBS, см., например, 'Protective Groups in Organic Synthesis' by Greene и Wuts, Wiley-Interscience). Согласно схеме 8 соединение 45 подвергают взаимодействию с требуемым замещенным пиперазином 46 по методике, описанной на схеме 1, для получения соединения 47. Защита полученного спирта 47 (например, группой TBS с использованием TBSOTf в присутствии аминного основания, такого как основание Хюнига) дает соединение 48. Удаление аминозащитной группы [например, с помощью кислоты (например, ТФУ при температуре от -20°С до 50°С) в случае Воc группы] дает свободный амин 49. Обработка соединения 49 эквивалентом фосгена (таким как трифосген) дает активированное промежуточное соединение 50, а последующая обработка амином 51 в присутствии основания (например, основания Хюнига при температуре от -50°С до 100°С) дает мочевину 52. Удаление вновь введенной в соединение 52 аминозащитной группы (Pg) в условиях, которые известны как не влияющие на гидроксизащитную группу (Pg') (например, ТФУ при температуре от -50°С до 30°С для группы Вос), и последующая необязательная функционализация свободного амина (например, алкилирование, ацилирование, восстановительное аминирование и т.п.) в стандартных условиях дают полностью функционализированное соединение 53. Наконец, удаление гидроксизащитной группы (например, в случае группы TBS действием источника фторид-иона, такого как TBAF, при температуре от -50°С до +50°С) дает конечное соединение 54. Полученное соединение 54 можно также подвергнуть разделению, чтобы получить индивидуальные диастереомеры посредством либо хирального разделения, стандартного нехирального разделения (например, колоночной хроматографией, ВЭЖХ, СКЖХ и т.п.), перекристаллизации или методом дериватизации.
2
Аналогичные методики могут также предусматриваться (без стадий защиты спирта/снятия защиты) для соединений, где R представляет собой Н или F вместо ОН.
Соответственно, еще один объект изобретения относится к способу получения соединений формулы I, включающему:
(а) взаимодействие соединения формулы
,
1
1a
2
2a
где R, R, R и R такие, как определено здесь, a Hal представляет собой галоген,
с соединением формулы
,
3
c
d
где G, R, R, R, n, m и p такие, как определено здесь, и Pg представляет собой защитную группу, такую как определено здесь, последующее снятие защиты и необязательную функционализацию с получением соединения формулы I;
(b) активацию соединения формулы
,
1
1a
где R и R такие, как определено здесь,
3
2
действием POCl или SOCl, за которой следует реакция замещения с соединением формулы
,
3
c
d
где G, R, R, R, n и m такие, как определено здесь, и Pg представляет собой защитную группу, такую как определено здесь,
с последующим снятием защиты и необязательной функционализацией, что дает соединение формулы I; или
(с) взаимодействие соединения формулы
,
1
1a
3
где R, R и R такие, как определено здесь, и Pg' представляет собой защитную группу, как определено здесь,
с соединением формулы
,
a
b
c
d
где G, R, R, R, R, n, m и p такие, как определено здесь, и Pg представляет собой защитную группу, как определено здесь, с последующим снятием защиты и необязательной функционализацией, что дает соединение формулы I.
При получении соединений формулы I может быть необходима защита удаленных функциональных групп (например, первичных или вторичных аминов и т.п.) промежуточных соединений. Потребность в такой защите может изменяться в зависимости от природы удаленной функциональной группы и условий способов получения. Подходящие аминозащитные группы (NH-Pg) включают ацетил, трифторацетил, трет-бутоксикарбонил (ВОС), бензилоксикарбонил (CBz) и 9-флуоренилметиленоксикарбонил (Fmoc). Необходимость такой защиты легко определяет специалист в данной области. Общее описание защитных групп и их применения см. Т.W.Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.
МЕТОДЫ РАЗДЕЛЕНИЯ
Соединения по настоящему изобретению могут иметь один или несколько асимметрических центров; поэтому такие соединения можно получать в виде индивидуальных (R)- или (S)-стереоизомеров или в виде их смесей. Если не указано иное, подразумевается, что описание или наименование конкретного соединения в описании и формуле изобретения включает как индивидуальные энантиомеры и диастереомеры, так и их смеси, рацемические или другие. Соответственно, настоящее изобретение также охватывает все такие изомеры, включающие диастереомерные смеси, чистые диастереомеры и чистые энантиомеры соединений по настоящему изобретению. Диастереомеры имеют разные физические свойства, например, температуры плавления, температуры кипения, спектральные свойства и реакционную способность.
Может быть выгодно отделять продукты реакции друг от друга и/или от исходных веществ. Целевые продукты каждой стадии или ряда стадий разделяют и/или очищают (здесь далее разделяют) до требуемой степени однородности методами, обычными в данной области техники. Как правило, такие методы разделения включают многократную экстракцию, кристаллизацию из растворителя или смесей растворителей, перегонку, сублимацию или хроматографию. Хроматография может включать любые ее разновидности, в том числе, например, хроматографию с обращенной фазой и нормальной фазой; эксклюзионную хроматографию; ионообменную хроматографию; методы и аппаратуру для жидкостной хроматографии высокого, среднего и низкого давления; маломасштабную аналитическую хроматографию; хроматографию с псевдодвижущимся слоем (ПДС) и препаративную тонкослойную и толстослойную хроматографию, а также методы маломасштабной тонкослойной и флэш-хроматографии. Специалист в данной области будет применять те методы, которые вероятнее всего позволят добиться требуемого разделения.
Диастереомерные смеси можно разделять на индивидуальные диастереомеры, на основе различий их физико-химических свойств способами, хорошо известными. специалистам в данной области, такими как хроматография и/или фракционная кристаллизация. Энантиомеры можно разделять превращением энантиомерной смеси в диастереомерную смесь взаимодействием с соответствующим оптически активным соединением (например, хиральным вспомогательным реагентом, таким как хиральный спирт или хлорангидрид кислоты Мошера), разделением диастереомеров и превращением (например, гидролизом) индивидуальных диастереоизомеров в соответствующие чистые энантиомеры. Энантиомеры можно также разделять с помощью хиральной ВЭЖХ-колонки.
Индивидуальный стереоизомер, например энантиомер, по существу не содержащий своего стереоизомера, можно получать разделением рацемической смеси с помощью такого метода, как образование диастереомеров с использованием оптически активных расщепляющих агентов [Eliel, Е. и Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds," John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994; Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113(3):283-302]. Рацемические смеси хиральных соединений по изобретению можно разделять и выделять любым подходящим методом, включая: (1) образование ионных диастереомерных солей с хиральными соединениями и разделение фракционной кристаллизацией или другими методами, (2) образование диастереомерных соединений с хиральными дериватизирующими реагентами, разделение диастереомеров и превращение в чистые стереоизомеры и (3) разделение по существу чистых или обогащенных стереоизомеров непосредственно в хиральных условиях. См.: "Drug Stereochemistry, Analytical Methods и Pharmacology," Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1993).
По методу (1) диастереомерные соли можно получать путем взаимодействия энантиомерно чистых хиральных оснований, таких как бруцин, хинин, эфедрин, стрихнин, α-метил-β-фенилэтиламин (амфетамин), и им подобные, с асимметрическими соединениями, содержащими кислотные функциональные группы, такими как карбоновые кислоты и сульфоновые кислоты. Разделение диастереомерных солей может быть индуцировано фракционной кристаллизацией или ионной хроматографией. Для разделения оптических изомеров аминосоединений присоединение хиральных карбоновых или сульфоновых кислот, таких как камфорсульфоновая кислота, винная кислота, миндальная кислота или молочная кислота может привести к образованию диастереомерных солей.
1
Согласно альтернативному методу (2) субстрат, который надо разделить, подвергают взаимодействию с одним энантиомером хирального соединения, чтобы образовать диастереомерную пару (Е. и Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., 1994, p.322). Диастереомерные соединения могут образовываться путем взаимодействия асимметрического соединения с энантиомерно чистыми дериватизирующими реагентами, такими как ментальные производные; последующее разделение диастереомеров и гидролиз дают чистый или обогащенный энантиомер. Способ определения оптической чистоты включает получение хиральных сложных эфиров, таких как ментиловый эфир, например, (-) ментилхлорформиат, в присутствии основания, или сложный эфир Мошера, α-метокси-α-(трифторметил)фенилацетат (Jacob III. J. Org. Chem., (1982) 47:4165), рацемической смеси и анализ Н-ЯМР спектра на наличие двух атропизомерных энантиомеров или диастереомеров. Стабильные диастереомеры атропизомерных соединений можно разделять и выделять хроматографией с нормальной или обращенной фазой, действуя в соответствии с методиками разделения атропизомерных нафтил-изохинолинов (WO 96/15111).
Согласно методу (3) рацемическую смесь двух энантиомеров можно разделять хроматографически, используя хиральную стационарную фазу ("Chiral Liquid Chromatography" (1989) W.J.Lough, Ed., Chapman и Hall, New York; Okamoto, J. of Chromatogr., (1990) 513:375-378). Обогащенные или очищенные энантиомеры можно различать такими методами, как оптическое вращение и круговой дихроизм, которые используются для того, чтобы различать другие хиральные молекулы с асимметрическими атомами углерода.
Соединения по настоящему изобретению могут также существовать в различных таутомерных формах, и все такие формы охватываются объемом настоящего изобретения. Например, протонные таутомеры (также известные под названием прототропные таутомеры) включают взаимопревращения посредством миграции протона, такие как кето-енольная и имин-енаминная изомеризации. Валентные таутомеры включают взаимопревращения путем реорганизации некоторых из связывающих электронов.
В структурах, показанных здесь, в случаях, где не указана стереохимия любого конкретного хирального атома, рассматриваются и включаются в качестве соединений по изобретению все стереоизомеры. Когда стереохимия показана цельным клинышком или пунктирной линией, представляя конкретную конфигурацию, тогда стереоизомер считается таким образом указанным и определенным.
ВВЕДЕНИЕ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ СОСТАВЫ
Соединения по изобретению можно вводить любым удобным путем, соответствующим состоянию, которое подвергается лечению. Подходящие пути введения включают пероральный, парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутриартериальный, интрадермальный, интратекальный и эпидуральный), трансдермальный, ректальный, назальный, местный (включая буквальный и сублингвальный), вагинальный, интраперитонеальный, внутрилегочный и интраназальный.
Соединения можно вводить в любой удобной для введения форме, например в виде таблеток, порошков, капсул, растворов, дисперсий, суспензий, сиропов, спреев, суппозиториев, гелей, эмульсий, пластырей и т.п. Такие композиции могут содержать обычно применяемые для фармацевтических препаратов компоненты, например разбавители, носители, модификаторы рН, подслащивающие вещества, наполнители и дополнительные активные агенты. Если требуется парентеральное введение, композиции должны быть стерильными и их готовят в виде раствора или суспензии, подходящей для инъекции или инфузии.
th
th
th
Типичный состав получают путем смешивания соединения по настоящему изобретению и носителя или эксципиента. Подходящие носители и эксципиенты хорошо известны специалистам в данной области техники и подробно описаны, например, в [Howard С. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms и Drug Delivery Systems (8 Ed. 2004); Alfonso R. Gennaro et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20 Ed. 2000); и Raymond С. Rowe, Handbook of Pharmaceutical Excipients (5 Ed. 2005)]. Составы могут также включать один или несколько буферов, стабилизаторы, поверхностно-активные вещества, увлажнители, смазывающие вещества, эмульгаторы, суспендирующие агенты, консерванты, антиоксиданты, вещества, придающие непрозрачность, вещества, придающие сыпучесть, технологические добавки, красители, подслащивающие вещества, ароматизаторы, вещества, придающие вкус и аромат, разбавители и другие добавки, обеспечивающие привлекательную форму лекарственного средства (т.е. соединения по настоящему изобретению или его фармацевтической композиции) или облегчающие изготовление фармацевтического продукта (т.е. лекарственного препарата).
Один вариант осуществления настоящего изобретения включает фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы I, или его стереоизомер или фармацевтически приемлемую соль. В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы I, или его стереоизомер, или его фармацевтически приемлемую соль вместе с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом.
СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ СОЕДИНЕНИЯМИ ФОРМУЛЫ I
Соединения по настоящему изобретению можно использовать как профилактические или терапевтические средства для лечения заболеваний или нарушений, опосредованных модуляцией или регуляцией AKT-протеинкиназ, тирозин-киназ, дополнительных серин/треонинкиназ и/или киназ с «двойной» специфичностью. Состояния, опосредованные AKT-протеинкиназой, которые можно лечить способами по настоящему изобретению, включают воспалительные, гиперпролиферативные, сердечно-сосудистые, нейродегенеративные, гинекологические и дерматологические заболевания и нарушения, но не ограничиваются ими.
В одном варианте осуществления указанная фармацевтическая композиция предназначена для лечения гиперпролиферативных нарушений, включающих виды рака следующих категорий: (1) сердечные: саркома (ангиосаркома, фибросаркома, рабдомиосаркома, липосаркома), миксома, рабдомиома, фиброма, липома и тератома; (2) относящиеся к легким: рак бронха (плоскоклеточный, недифференцированный мелкоклеточный, недифференцированный крупноклеточный, аденокарцинома), альвеолярная (бронхиолярная) карцинома, аденома бронха, саркома, лимфома, хондроматозная гамартома, мезотелиома, немелкоклеточный рак легких, мелкоклеточный рак легких; (3) относящиеся к желудочно-кишечному тракту: пищеводу (плоскоклеточный рак, аденокарцинома, лейомиосаркома, лимфома), желудку (карцинома, лимфома, лейомиосаркома), поджелудочной железе (протоковая аденокарцинома, инсулома, глюкагонома, ульцерогенная аденома поджелудочной железы, карциноидные опухоли, ВИПома), тонкой кишке (аденокарцинома, лимфома, карциноидные опухоли, саркома Калоши, лейомиома, гемангиома, липома, нейрофиброма, фиброма), толстой кишке (аденокарцинома, тубулярная аденома, ворсинчатая аденома, гамартома, лейомиома); (4) (относящиеся к мочеполовому тракту): почкам (аденокарцинома, опухоль Вильмса [нефробластома], лимфома, лейкемия), мочевому пузырю и уретре (плоскоклеточная карцинома, переходно-клеточная карцинома, аденокарцинома), предстательной железе (аденокарцинома, саркома), яичку (семинома, тератома, эмбриональный рак, тератокарцинома, хориокарцинома, саркома, интерстициальная клеточная карцинома, фиброма, фиброаденома, аденоматоидные опухоли, липома); (5) относящиеся к печени: гепатома (гепато-целлюлярная карцинома), холангиокарцинома, гепатобластома, ангиосаркома, гепато-целлюлярная аденома, гемангиома; (6) относящиеся к костям: остеобластическая саркома (остеосаркома), фибросаркома, злокачественная фиброзная гистиоцитома, хондросаркома, саркома Юинга, злокачественная лимфома (ретикулоклеточная саркома), множественная миелома, злокачественная гигантоклеточная опухолевая хордома, остеохондрома (костно-хрящевой экзостоз), доброкачественная хондрома, хондробластома, хондромиксофиброма, остеоид-остеома и гигантоклеточные опухоли; (7) относящиеся к нервной системе: к черепу (остеома, гемангиома, гранулома, ксантома, деформирующий остит), к мягким оболочкам мозга (менингиома, менингиосаркома, глиоматоз), к мозгу (астроцитома, медуллобластома, глиома, эпендимома, герминома [пинеалома], мультиформная глиобластома, олигодендроглиома, шваннома, ретинобластома, врожденные опухоли), к спинному мозгу (нейрофиброма, менингиома, глиома, саркома); (8) гинекологические, относящиеся к матке: (карцинома эндометрия), шейке матки (рак шейки матки, предопухолевая дисплазия шейки матки), к яичникам (карцинома яичника [серозная цистаденокарцинома, муцинозная цистаденокарцинома, карцинома неуточненной локализации], гранулезотекаклеточные опухоли, опухоли из Сертоли-лейдиговских клеток, семинома яичника, злокачественная тератома), к вульве (плоскоклеточная карцинома, внутриэпителиальная карцинома, аденокарцинома, фибросаркома, меланома), к влагалищу (светлоклеточная карцинома, плоскоклеточная карцинома, гроздевидная саркома (эмбриональная рабдомиосаркома), к фаллопиевым трубам (карцинома); (9) гематологические: относящиеся к крови: (миелоидная лейкемия [острая и хроническая], острая лимфобластная лейкемия, хроническая лимфоцитарная лейкемия, миелопролиферативные заболевания, множественная миелома, миелодиспластический синдром), болезнь Ходжкина, не-ходжкинская лимфома [злокачественная лимфома]; (10) относящиеся к коже: запущенная меланома, злокачественная меланома, базальноклеточный рак, плоскоклеточная карцинома, саркома Капоши, диспластический невус, липома, ангиома, дерматофиброма, келоиды, псориаз; (11) относящиеся к надпочечникам: нейробластома; (12) относящиеся к молочной железе: метастатический рак молочной железы; аденокарцинома молочной железы; (13) относящиеся к толстой кишке; (14) относящиеся к полости рта; (15) лейкоз ворсистых клеток; (16) относящиеся к голове и шее; (17) и другие, включающие рефрактерную метастазирующую опухоль; саркому Капоши; синдром Баннаяна-Зонана; и болезнь Каудена или болезнь Лермитта-Дюкло, среди других видов гиперпролиферативных заболеваний.
Соединения и способы по настоящему изобретению могут также быть использованы для лечения заболеваний и состояний, таких как ревматоидный артрит, остеоартрит, болезнь Крона, ангиофиброма, глазные болезни (например, васкуляризация сетчатки, диабетическая ретинопатия, возрастная дистрофия желтого пятна, дистрофия желтого пятна и т.п.), рассеянный склероз, ожирение, рестеноз, аутоиммунные заболевания, аллергия, астма, эндометриоз, атеросклероз, стеноз венозного трансплантата, пери-анастомозный стеноз протезного трансплантата, гиперплазия предстательной железы, хроническое обструктивное заболевание легких, псориаз, ингибирование неврологического повреждения, обусловленное восстановлением тканей, образование рубцовых тканей (и могут способствовать заживлению ран), рассеянный склероз, воспалительное заболевание кишечника, инфекции, конкретно бактериальные, вирусные, ретровирусные или паразитарные инфекции (путем увеличения апоптоза), заболевания легких, новообразования, болезнь Паркинсона, отторжение трансплантата (как иммуносуппрессор), септический шок и т.п.
Соответственно еще один объект настоящего изобретения относится к способу лечения заболеваний или состояний у млекопитающих, опосредованных AKT-протеинкиназами, включающему введение указанным млекопитающим одного или нескольких соединений формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или его пролекарства в количестве, эффективном для лечения или профилактики указанного заболевания.
В случае рака эффективное количество лекарственного средства может уменьшить число раковых клеток, уменьшить размер опухоли, ингибировать (т.е. в некоторой степени замедлить и предпочтительно остановить) инфильтрацию раковых клеток в периферические органы, ингибировать (т.е. в некоторой степени замедлить и предпочтительно остановить) метастазирование опухолей, ингибировать в некоторой степени рост опухолей и/или облегчить в некоторой степени один или несколько симптомов, связанных с раком. По той степени, в которой лекарственное средство может предотвращать рост и/или убивать существующие раковые клетки, оно может быть цитостатическим и/или цитотоксическим. Эффективность терапии рака можно измерить, оценивая, например, время прогрессирования болезни (ТТР) и/или определяя скорость ответа (RR).
Количество соединения формулы I, которое будет соответствовать такому количеству, будет варьироваться в зависимости от таких факторов, как конкретное соединение, стадия заболевания и его тяжесть, характеристики (например, масса) млекопитающего, которое нуждается в лечении, но тем не менее оно обычно может быть определено специалистом в данной области техники.
Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы I для применения в лечении состояний, опосредованных AKT-протеинкиназой.
Дополнительным объектом изобретения является применение соединения формулы I для получения лекарственного препарата для терапии, такой как лечение или профилактика состояний, опосредованных AKT-протеинкиназой.
КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ
Соединения по настоящему изобретению, их стереоизомеры и фармацевтически приемлемые соли можно использовать по отдельности или в сочетании с другими терапевтическими средствами для лечения. Соединения по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с одним или несколькими дополнительными лекарственными средствами, например с противовоспалительным средством, у которого другой механизм действия. Предпочтительно, когда второе соединение в фармацевтически комбинированном составе или в схеме введения обладает комплементарными видами активности, дополняющими активность соединения по настоящему изобретению, так что соединения не оказывают отрицательного действия друг на друга. Соответственно такие соединения включаются в комбинацию в количествах, которые эффективны для намеченных целей. Соединения можно вводить вместе в единой фармацевтической композиции или по отдельности, причем введение по отдельности может происходить одновременно или последовательно в любом порядке. Такое последовательное введение может происходить через короткие или длинные промежутки времени.

Примеры химиотерапевтических средств включают эрлотиниб, (Тарсева, Genentech, Inc./OSI Pharm.), трастузумаб (Герсептин, Genentech, Inc.); бевацизумаб (Авастин, Genentech, Inc.); ритуксимаб (Ритуксан, Genentech, Inc./Biogen Idee, Inc.), бортезомаб (Велкейд, Millennium Pharm.), фулвестрант (Фаслодекс, AstraZeneca), сутент (SU11248, Pfizer), летрозол (Фемара, Novartis), иматиниба мезилат (Гливек, Novartis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), оксалиплатин (Элоксатин, Sanofi), 5-FU (5-фторурацил), лейковорин, рапамицин (Sirolimus, Рапамун, Wyeth), лапатиниб (GSK572016, Glaxo Smith Kline), лопафарниб (SCH 66336), сорафениб (BAY43-9006, Bayer Labs), и гефитиниб (IRESSA, AstraZeneca), AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), алкилирующие агенты, такие как тиотепа и Цитоксан циклофосфамид, Адриамицин (доксоррубицин), Таксол (паклитаксел; Bristol-Myers Squibb, Принстон, шт. Нью-Джерси), Абраксан (не содержащий кремофора) и Таксотеп (доксетаксел; Rhône-Poulenc Rorer, Antony, Франция).
ГОТОВЫЕ ИЗДЕЛИЯ
Еще один вариант осуществления изобретения относится к готовому изделию или "набору", содержащему вещества, применимые для лечения заболеваний, описанных выше. В одном варианте осуществления набор содержит контейнер, включающий соединение по настоящему изобретению. Подходящие контейнеры включают, например, флаконы, пузырьки, шприцы, блистерные упаковки и т.п. Контейнер может быть изготовлен из множества материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер может содержать соединение по настоящему изобретению или его композицию, которые эффективны для лечения указанного состояния, и может иметь стерильный вход доступа (например, контейнер может представлять собой мешок раствора для внутривенных инъекций или пузырек с пробкой, которую можно проколоть иглой для подкожных инъекций).
Кроме того, набор может содержать этикетку или листок-вкладыш на контейнере или в комплекте с ним. В одном варианте осуществления изобретения на этикетке или вкладыше указано, что композицию, содержащую соединение по данному изобретению, можно использовать для лечения заболеваний опосредованных, например, AKT-киназой. На этикетке или вкладыше также может быть указано, что композицию можно применять и для лечения других заболеваний.
В некоторых вариантах осуществления наборы подходят для доставки твердых пероральных форм соединения по настоящему изобретению, таких как таблетки или капсулы. Такой набор включает предпочтительно ряд стандартных лекарственных форм. Такие наборы могут включать карту, содержащую дозировки в порядке их предполагаемого использования. Примером такого набора является «блистерная упаковка». Блистерные упаковки хорошо известны в тароупаковочной промышленности и широко используются для упаковки фармацевтических стандартных лекарственных форм. Если требуется, набор снабжают «напоминанием», например, в виде чисел, букв или других отметок, или календаря-вкладыша, в котором обозначены дни в схеме лечения, когда можно вводить дозы.
Согласно еще одному варианту изобретения набор может содержать (а) первый контейнер, который содержит соединение по настоящему изобретению; и (b) второй контейнер, содержащий второй фармацевтический состав, который содержит второе соединение, применимое для лечения заболевания, опосредованного AKT-киназой. В качестве альтернативы или дополнения набор может включать третий контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Набор может дополнительно включать другие вещества и материалы, которые необходимы с коммерческой точки зрения и с точки зрения пользователя, в том числе другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.
Кроме того, набор может содержать инструкции по введению соединения по настоящему изобретению и второго фармацевтического состава, если он имеется. Например, если набор содержит первую композицию, содержащую соединение формулы I, и второй фармацевтический состав, набор может дополнительно содержать инструкции для одновременного, последовательного или раздельного введения первой и второй фармацевтических композиций пациенту, который в этом нуждается.
В некоторых других вариантах осуществления изобретения, где набор содержит композицию соединения формулы I и второе терапевтическое средство, набор может содержать контейнер для раздельного хранения композиций, такой как разделенный на части флакон или разделенный на части пакет из фольги, однако отдельные композиции могут также находиться внутри единого, не разделенного на части контейнера. В некоторых вариантах осуществления набор содержит инструкции для введения раздельных компонентов. Особенно предпочтительной является такая форма набора, в которой раздельные компоненты предпочтительно вводят в разных лекарственных формах (например, перорально и парентерально) и с разными интервалами, или такая форма, в которой требуется титрование отдельных компонентов комбинации лечащим врачом.
Таким образом, дополнительным объектом настоящего изобретения является набор для лечения нарушения или заболевания, опосредованного Akt-киназой, причем указанный набор содержит а) первую фармацевтическую композицию, содержащую соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль; и b) инструкции по применению.
В некоторых вариантах осуществления изобретения набор дополнительно содержит (с) вторую фармацевтическую композицию, которая содержит второе соединение, пригодное для лечения нарушения или заболевания, опосредованного AKT-киназой. В определенном варианте осуществления изобретения, содержащем вторую фармацевтическую композицию, набор дополнительно содержит инструкции для одновременного, последовательного и раздельного введения указанных первой и второй фармацевтических композиций пациенту, который в этом нуждается. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанные первая и вторая фармацевтические композиции находятся в отдельных контейнерах. В других вариантах осуществления указанные первая и вторая фармацевтические композиции находятся в одном контейнере.
Хотя соединения формулы I прежде всего ценны в качестве терапевтических средств для применения на млекопитающих, они также применимы во всех случаях, когда требуется регулирование AKT-протеинкиназ, тирозинкиназ, дополнительных серин/треонин-киназ и/или киназ с «двойной специфичностью». Таким образом, они полезны в качестве фармакологических стандартов для применения в разработке новых биологических тестов и поиске новых фармакологических средств.
Активность соединений по настоящему изобретению в отношении АКТ протеинкиназ, тирозинкиназ, дополнительных серин/треонин-киназ и/или киназ с «двойной специфичностью» можно оценивать in vitro, in vivo или на клеточных линиях. Анализы in vitro включают анализы, которые определяют ингибирование активности киназ. Альтернирующие in vitro анализы количественно определяют способность ингибитора связывать киназы/э, которую можно измерить или путем введения радиоактивной метки в ингибитор до связывания, выделением комплекса ингибитор/киназа и определением количества связанной радиоактивной метки, или проведением конкурентного анализа, где новые ингибиторы инкубируют с известными радиолигандами. Эти и другие анализы, применимые in vitro и на культурах клеток хорошо известны специалистам в данной области техники.
Хотя изобретение описано и проиллюстрировано с некоторой степенью конкретности, понятно, что настоящее описание выполнено только посредством примеров, и многочисленные изменения в комбинации и организации частей могут быть сделаны специалистами в данной области, не выходя за рамки сущности и объема изобретения, как заявлено ниже.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИМЕРЫ
Анализ AKT-1 киназы
Активность соединений, описанных в настоящем изобретении, можно определять следующим ниже анализом киназ, который с помощью флуоресцентной поляризации измеряет фосфорилирование пептида (содержащего флуоресцентную метку) первичной человеческой рекомбинантной активной AKT-1 с помощью коммерчески доступного набора IMAP.
2
3
Вещества для анализа получают из набора IMAP АКТ Assay Bulk Kit, продукт #R8059, от компании Molecular Devices (Саннивейл, шт. Калифорния). Вещества из набора включают IMAP буфер для реакции (5×). Разбавленный 1× IMAP буфер для реакции содержит 10 мМ трис-HCl, рН 7,2, 10 мМ MgCl, 0,1% BSA, 0,05% NaN. Обычно непосредственно перед использованием прибавляют DTT до конечной концентрации 1 мМ. Набор также включает IMAP буфер для связывания (5×) и IMAP реагент для связывания. Раствор для связывания готовят 1:400 разведением IMAP реагента для связывания 1× IMAP буфером для связывания.
Меченный флуоресцеином AKT-субстрат (от Crosstide) имеет последовательность (F1)-GRPRTSSFAEG. Рабочий раствор (20 мкМ) готовят в 1× IMAP буфере для реакции.
Используемые планшеты включают планшет Costar 3657 (382-луночный, изготовленный из полипропилена и имеющий белое v-образное дно), который применяют для разведения соединений и получения смеси соединение-АТР. Планшет для анализа представляет собой Packard ProxyPlate™-384 F.
Используемую AKT-1 приготавливают из первичной человеческой рекомбинантной AKT-1, которую активируют PDK1 и MAP киназой 2.
Для проведения анализа готовят рабочие растворы соединений (10 мкМ) в ДМСО. Рабочие растворы и раствор контрольного соединения серийно разводят 1:2 девять раз в ДМСО (10 мкл соединения + 10 мкл ДМСО) и получают 50× серийные разведения в нужном интервале доз. Затем 2,1-мкл аликвоты соединений в ДМСО переносят на планшет Costar 3657, содержащий 50 мкл 10,4 мкМ раствора АТР в 1× IMAP буфере для реакции, содержащем 1 мМ DTT. После тщательного смешивания 2,5-мкл аликвоты переносят на планшет ProxyPlate™-384 F.
Анализ инициируют прибавлением 2,5-мкл аликвот раствора, содержащего 200 нМ пептидного субстрата с флуоресцентной меткой и 4 нМ AKT-1. Планшет центрифугируют в течение 1 минуты при 1000g и инкубируют в течение 60 минут при температуре окружающей среды. Затем реакцию гасят прибавлением 15 мкл раствора для связывания, опять центрифугируют и инкубируют еще в течение 30 минут при температуре окружающей среды до считывания счетчика Victor 1420 Multilabel HTS с конфигурацией для измерения поляризации флуоресценции.
50
Соединения примеров 1-20 испытывали, используя вышеописанный анализ, и было показано, что их IC составляет менее 1 мкМ.
ПРЕПАРАТИВНЫЕ ПРИМЕРЫ
Для иллюстрации настоящего изобретения в заявку включены следующие ниже примеры. Однако необходимо иметь в виду, что эти примеры не ограничивают изобретение, а только иллюстрируют предлагаемый способ осуществления изобретения. Специалисты в данной области техники понимают, что описанные химические реакции могут быть легко приспособлены для получения ряда других соединений по изобретению, и альтернативные способы получения соединений по настоящему изобретению рассматриваются как охватываемые объемом настоящего изобретения. Например, синтез соединений по настоящему изобретению, не приведенных в качестве примеров, может быть с успехом осуществлен с помощью модификаций синтезов, очевидных для специалистов в данной области техники, например, путем соответствующей защиты мешающих групп, использования других подходящих реагентов, известных в данной области техники, отличающихся от описанных здесь, и/или путем обычных изменений условий реакции. Альтернативно, другие реакции, описанные здесь или известные в данной области техники, будут рассматриваться как применимые для получения других соединений по изобретению.
В примерах, описанных ниже, все температуры приводятся в градусах Цельсия, если не указано иное. Реагенты приобретали у коммерческих поставщиков, таких как Sigma-Aldrich, Alfa Aesar, или TCI, и использовали без дополнительной очистки, если не указано иное. Тетрагидрофуран ("ТГФ"), дихлорметан ("DCM"), толуол и диоксан приобретали у компании Aldrich в герметичных бутылях и использовали в состоянии поставки.
Реакции, описанные ниже, обычно проводят при положительном давлении азота или аргона или с осушающей трубкой (если не указано иное) в безводных растворителях, а реакционные колбы обычно снабжены резиновой септой для введения субстратов и реагентов с помощью шприца. Стеклянную посуду сушат в печи и/или при нагревании.
1
1
2
3
2
6
3
3
2
6
Н-ЯМР спектры записывают на приборе «Varian» с рабочей частотой 400 МГц. Н-ЯМР спектры записывают для растворов соединений в CDCl, CDOD, DO или d-DMSO (даны в м.д.), используя в качестве стандарта тетраметилсилан (0,00 м.д.) или остаточный растворитель (CDCl: 7,25 м.д.; CDOD: 3,31 м.д.; DO: 4,79 м.д.; d-DMSO: 2,50 м.д.). При описании мультиплетности пиков используют следующие сокращения: с (синглет), д (дублет), т (триплет), кв (квартет), м (мультиплет), уш. (уширенный), дд (дублет дублетов), дт (дублет триплетов). Константы спин-спинового взаимодействия даны в герцах (Гц), когда они приведены.
Пример 1
(R)-N-(2-Аминоэтил)-N-(4-хлорбензил)-4-(5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-карбоксамид
Стадия 1
+
. Триацетоксиборгидрид натрия (3,3 г, 15,4 ммоль, 1,1 экв.) прибавляют при комнатной температуре к раствору 4-хлорбензальдегида (2 г, 14 ммоль), трет-бутил-2-аминоэтилкарбамата (4,5 мл, 28,5 ммоль, 1,2 экв.) и уксусной кислоты (2,5 мл) в дихлорэтане (20 мл). Реакционную смесь оставляют перемешиваться на ночь и гасят 0,5 М раствором HCl (30 мл). Затем смесь один раз экстрагируют дихлорметаном и прибавляют насыщенный водный раствор хлорида натрия. Осадок отфильтровывают и сушат, получая трет-бутил-2-(4-хлорбензиламино)этилкарбамат (3,58 г, 90%), МС (ESI) m/e (М+H) 285.
Стадия 2
+
. Бензил-4-(хлоркарбонил)пиперазин-1-карбоксилат (233 мг, 0,83 ммоль) прибавляют при комнатной температуре к раствору трет-бутил-2-(4-хлорбензиламино)этилкарбамата (235 мг, 0,83 ммоль) и основания Хюнига (0,2 мл, 1,2 ммоль, 1,5 экв.) в дихлорметане (1,6 мл). Реакционную смесь оставляют перемешиваться на ночь. Затем реакционную смесь концентрируют, получая неочищенный продукт, который очищают колоночной флэш-хроматографией, что дает бензил-4-((2-(трет-бутоксикарбониламино)этил)(4-хлорбензил)карбамоил)пиперазин-1-карбоксилат в виде пены (167 мг, 38%). МС (ESI) m/e (M+H) 531.
Стадия 3
2
2
2
4
+
. Смесь бензил-4-((2-(трет-бутоксикарбониламино)этил)(4-хлорбензил)карбамоил)пиперазин-1-карбоксилата (200 мг, 0,38 ммоль) в растворе КОН/МеОН/НО (10 мл; приготовленном в качестве исходного раствора из 10 г КОН, 50 мл МеОН и 25 мл HO) перемешивают в течение 2 часов при 80°С. Реакционную смесь экстрагируют EtOAc, сушат над NaSO и концентрируют при пониженном давлении, получая трет-бутил-2-(N-(4-хлорбензил)пиперазин-1-карбоксамидо)этилкарбамат (132 мг, 89%). МС (ESI) m/e (M+H) 397.
Стадия 4
3
3
1
. (R)-(+)-Пулегон (76,12 г, 0,5 ммоль), безводный NaHCO (12,5 г) и безводный эфир (500 мл) помещают в круглодонную колбу объемом 1 л. Реакционную смесь охлаждают на ледяной бане в атмосфере азота. По каплям в течение 30 минут прибавляют бром (25,62 мл, 0,5 ммоль). Смесь фильтруют и осторожно прибавляют к NaOEt (21%, 412 мл, 1,11 ммоль) при охлаждении в ледяной бане. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем прибавляют 5% HCl (1 л) и эфир (300 мл). Водную фазу экстрагируют эфиром (2×300 мл). Объединенную органическую фазу промывают водой, сушат и концентрируют. Остаток прибавляют к подогретому раствору гидрохлорида семикарбазида (37,5 г) и NaOAc (37,5 г) в воде (300 мл). Затем прибавляют кипящий этанол (300 мл) и получают прозрачный раствор. Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2,5 часов и затем перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь обрабатывают водой (1 л) и эфиром (300 мл). Водную фазу экстрагируют эфиром (2×300 мл). Объединенную органическую фазу промывают водой, сушат и концентрируют. Остаток очищают перегонкой в вакууме (73-76°С при 0,8 мм рт.ст.), получая (2R)-этил-2-метил-5-(пропан-2-илиден)циклопентанкарбоксилат (63 г, 64%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 4,13 (м, 2Н), 3,38 (д, J=16 Гц, 0,5Н), 2,93 (м, 0,5Н), 2,50-2,17 (м, 2Н), 1,98 (м, 1Н), 1,76 (м, 1Н), 1,23 (м, 6Н), 1,05 (м, 6Н).
Стадия 5
3
1
2
3
3
. (2R)-Этил-2-метил-5-(пропан-2-илиден)циклопентанкарбоксилат (24 г, 0,122 моль) в этилацетате (100 мл) охлаждают до -68°С смесью сухой лед/изопропанол. Через раствор пропускают озонированный кислород (5-7 фут/ч O) в течение 3,5 часов. Реакционную смесь продувают азотом при комнатной температуре до исчезновения окрашивания. Этилацетат удаляют в вакууме, остаток растворяют в уксусной кислоте (150 мл) и охлаждают ледяной водой. Затем прибавляют порошок цинка (45 г). Раствор перемешивают в течение 30 минут и затем фильтруют. Фильтрат нейтрализуют 2N раствором NaOH (1,3 л) и NaHCO. Водную фазу экстрагируют эфиром (3×200 мл). Органические фазы объединяют, промывают водой, сушат и концентрируют, получая (2R)-этил-2-метил-5-оксоциклопентанкарбоксилат (20 г, 96%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 4,21 (м, 2Н), 2,77 (д, J=11,2 Гц, 1Н), 2,60 (м, 1Н), 2,50-2,10 (м, 3Н), 1,42 (м, 1Н), 1,33 (м, 3Н), 1,23 (м, 3Н).
Стадия 6
+
. КОН (8,3 г, 147,9 ммоль) в воде (60 мл) прибавляют к раствору смеси (2R)-этил-2-метил-5-оксоциклопентанкарбоксилата (20 г, 117,5 ммоль) и тиомочевины (9,2 г, 120,9 ммоль) в этаноле (100 мл). Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 10 часов. После охлаждения растворитель удаляют, и остаток нейтрализуют концентрированной HCl (12 мл) при 0°С. Затем смесь экстрагируют DCM (3×150 мл). Растворитель удаляют, остаток очищают хроматографией на силикагеле, осуществляя элюирование смесью гексан/этилацетат (2:1) и получают (R)-2-меркапто-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ол (12 г, 56%). МС (APCI+) [М+Н]183.
Стадия 7
4
+
. Никель Ренея (15 г) и NHOH (20 мл) прибавляют к суспензии (R)-2-меркапто-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ола (12 г, 65,8 ммоль) в дистиллированной воде (100 мл). Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов и затем фильтруют. Фильтрат концентрируют и получают (R)-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ол (9,89 г, 99%). МС (APCI+) [М+Н] 151.
Стадия 8
3
3
3
3
1
. Смесь (R)-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ола (5,8 г, 38,62 ммоль) в POCl (20 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 5 минут. Избыток POCl удаляют в вакууме, и остаток растворяют в DCM (50 мл). Затем смесь прибавляют к насыщенному раствору NaHCO (200 мл). Водную фазу экстрагируют DCM (3×100 мл), и объединенные органические фазы сушат и концентрируют. Остаток очищают хроматографией на силикагеле, осуществляя элюирование этилацетатом, и получают (R)-4-хлор-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин (3,18 г, 49%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 8,81 (с, 1Н), 3,47 (м, 1Н), 3,20 (м, 1Н), 3,05 (м, 1Н), 2,41 (м, 1Н), 1,86 (м, 3Н), 1,47 (м, 3Н).
Стадия 9
+
. (R)-4-Хлор-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин (46 мг, 0,27 ммоль, 1,1 экв.) прибавляют к раствору трет-бутил-2-(N-(4-хлорбензил)пиперазин-1-карбоксамидо)этилкарбамата (100 мг, 0,25 ммоль) и основания Хюнига (0,1 мл, 0,75 ммоль, 3 экв.) в ацетонитриле (3 мл). Полученную смесь нагревают при 80°С в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют водой и экстрагируют DCM, сушат и концентрируют, получая (R)-трет-бутил-2-(N-(4-хлорбензил)-4-(5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-карбоксамидо)этилкарбамат (40 мг, 30%). МС (ESI) m/e (М+Н) 529.
Стадия 10
+
1
. Раствор HCl в диоксане при 0°С прибавляют к (R)-треот-бутил-2-(N-(4-хлорбензил)-4-(5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-карбоксамидо)этилкарбамату (40 мг, 0,075 ммоль) в МеОН (1 мл). Реакционную смесь перемешивают при 25°С в течение 1 часа. После удаления растворителя неочищенный продукт очищают препаративной ВЭЖХ и получают (R)-N-(2-аминоэтил)-N-(4-хлорбензил)-4-(5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-карбоксамид (32 мг, 90%). МС (ESI) m/е (М+Н) 429,2. H ЯМР δ=8,56 (с, 1Н), δ=7,23-7,56 (дд, 4Н), δ=4,51 (с, 2Н), δ=3,97-4,19 (м, 4Н), δ=3,70 (м, 1Н), δ=3,61 (м, 4Н), δ=3,40-3,43 (т, 2Н), δ=2,96-3,15 (м, 4Н), δ=2,42 (м, 1Н), δ=1,89 (м, 1Н), δ=1,21-1,22 (д, 3Н).
Пример 2
(R)-N-(4-Хлорфенил)-N-(2-(диэтиламино)этил)-4-(5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-карбоксамид
Стадия 1
3
4
. Этилпулегенат (130 г, 662 ммоль) в EtOAc (900 мл) охлаждают до -78°С на бане сухой лед-изопропанол. Полученную смесь подвергают озонолизу до тех пор, пока реакционная смесь не станет пурпурного цвета. На этой стадии прекращают генерирование озона и реакционную смесь удаляют из бани с сухим льдом. Через реакционную смесь барботируют кислород до тех пор, пока она не приобретет желтую окраску. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, и полученный остаток растворяют в ледяной уксусной кислоте (400 мл). Раствор охлаждают до 0°С и постепенно в течение 30 минут прибавляют Zn-пыль (65 г, 993 ммоль), затем смесь перемешивают в течение 2 часов и фильтруют через слой целита для удаления Zn-пыли. Уксусную кислоту нейтрализуют водным NaOH и NaHCO до рН 7 и экстрагируют эфиром (3×800 мл). Объединенные органические слои промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над MgSO, концентрируют и получают (2R)-этил-2-метил-5-оксоциклопентанкарбоксилат в виде жидкости (107 г, 95%).
Стадия 2
2
2
4
+
. Ацетат аммония (240,03 г, 3113,9 ммоль) прибавляют к раствору (R)-этил-2-метил-5-оксоциклопентанкарбоксилата (106,0 г, 622,78 ммоль) в МеОН (1,2 л). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 20 часов, после чего реакция завершается (по данным ТСХ и ВЭЖХ). Реакционную смесь концентрируют для удаления МеОН. Полученный остаток растворяют в DCM, два раза промывают HO, один раз - насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат (NaSO), фильтруют, концентрируют и получают (R)-этил-2-амино-5-метилциклопент-1-енкарбоксилат (102 г, выход 97%) в виде масла. ЖХ/МС (APCI+) m/z 170 [M+H].
Стадия 3
2
4
. Раствор, содержащий (R)-этил-2-амино-5-метилциклопент-1-енкарбоксилат (161,61 г, 955,024 ммоль) и формиат аммония (90,3298 г, 1432,54 ммоль) в формамиде (303,456 мл, 7640,19 ммоль) нагревают до внутренней температуры 150°С и перемешивают в течение 17 часов. Реакционную смесь охлаждают и переносят в одногорлую колбу объемом 2 л. Затем удаляют избыток формамидина перегонкой в высоком вакууме. Как только формамидин перестает отгоняться, оставшееся в перегонном кубе масло растворяют в DCM и промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия (3×200 мл). Объединенные водные промывные воды экстрагируют DCM. Объединенные органические экстракты сушат (NaSO), фильтруют и концентрируют. Полученное коричневое масло растворяют в минимальном количестве ДСМ и полученный раствор прибавляют с помощью делительной воронки к перемешиваемому раствору эфира (около 5 объемов эфира на 1 объем раствора в DCM), что вызывает образование коричневого осадка. Выпавший осадок отфильтровывают через стеклянный фильтр со средним размером пор, промывают эфиром и удаляют. Фильтрат концентрируют, растирание с эфиром повторяют два и более раз, затем сушат в высоком вакууме и получают (R)-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ол (93,225 г, выход 65,00%) в виде пастообразного вещества. ЖХ/МС (APCI-) m/z 149,2.
Стадия 4
3
3
3
3
2
4
. Чистый POCl (463,9 мл, 5067 ммоль) медленно прибавляют через капельную воронку к охлажденному до 0°С раствору (R)-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ола (152,2 г, 1013 ммоль) в DCE (1,2 л). После завершения прибавления реакционную смесь нагревают до комнатной температуры, затем нагревают до кипения и перемешивают в течение 70 минут. Реакция завершена (по данным ВЭЖХ). Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и избыток POCl гасят 4 порциями следующим образом: реакционную смесь переносят в делительную воронку и сливают по каплям в стакан, содержащий лед и насыщенный раствор NaHCO, охлажденный в ледяной бане. Как только прибавление каждой порции реакционной смеси завершается, гашеную смесь перемешивают в течение 30 минут, чтобы обеспечить полную деструкцию POCl до переноса в делительную воронку. Смесь переносят в делительную воронку и два раза экстрагируют DCM. Объединенные экстракты сушат (NaSO), фильтруют и концентрируют. Неочищенный продукт очищают на силикагеле следующим образом: силикагель (1 кг) суспендируют в смеси гексан:этилацетат (9:1) на стеклянном фильтре объемом 3 л, силикагель осаждают в вакууме, с песком сверху. Неочищенный продукт загружают в смесь DCM/гексан, и осуществляют элюирование соединения, используя колбы с отводом объемом 1 л в вакууме. Побочные продукты с высоким Rf вымываются первыми, затем элюируется (R)-4-хлор-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин (104,4 г, выход 61,09%) в виде масла.
Стадия 5
3
2
2
4
+
. 4-Хлоранилин (0,5 г, 3,9 ммоль) прибавляют к раствору гидробромида 2-бром-N,N-диэтилэтиламина (1,12 г, 4,3 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (2 мл, 11,7 ммоль) в толуоле (7,8 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 часов. Затем смесь разбавляют EtOAc (30 мл) и насыщенным раствором NaHCO (20 мл). Органический слой промывают НО (1×20 мл), сушат (NaSO), фильтруют, концентрируют и получают 4-хлор-N-(2-(диэтиламино)этил)бензоламин в виде масла, которое используют без очистки. МС (APCI+) [М+Н] 227,3.
Стадия 6
4
2
4
3
+
1
. трет-Бутил-4-хлоркарбонилпиперазин-1-карбоксилат (0,97 г, 3,9 ммоль) прибавляют к раствору 4-хлор-N-(2-(диэтиламино)этил)бензоламина (884 мг, 3,9 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1,9 мл, 11,7 ммоль) в DCM (8 мл). Реакционную смесь нагревают и кипятят с обратным холодильником в течение 20 часов. Смесь охлаждают до комнатной температуры, гасят насыщенным раствором NHCl (10 мл) и экстрагируют DCM (2×20 мл). Объединенные органические экстракты сушат (NaSO), фильтруют и концентрируют. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле и получают трет-бутил-4-(N-(4-хлорфенил)-N-(2-(диэтиламино)этил)карбамоил)пиперазин-1-карбоксилат (311 мг, 18%). МС (APCI+) [М+Н] 439,4. Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 7,29 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,09 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 3,70-3, 66 (м, 2Н), 3,45-3,42 (м, 2Н), 3,24-3,21 (м, 4Н), 3,15-3,12 (м, 2Н), 2,61-2,57 (м, 2Н), 2,52 (кв, J=7,2 Гц, 4Н), 1,42 (с, 9Н), 0,99 (т, J=7,2 Гц, 6Н).
Стадия 7
2
2
4
3
+
1
. Трифторуксусную кислоту (1 мл) прибавляют к раствору трет-бутил-4-(N-(4-хлорфенил)-N-(2-(диэтиламино)этил)карбамоил)пиперазин-1-карбоксилата (311 мг, 0,7 ммоль) в DCM (5 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов и затем концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в н-бутаноле (2 мл). Прибавляют N,N-диизопропилэтиламин (0,5 мл, 3,6 ммоль), затем (R)-4-хлор-6,7-дигидро-5-метил-5Н-циклопента[d]пиримидин (113 мг, 0,84 ммоль). Реакционную смесь нагревают при 80°С в течение 16 часов. Затем смесь разбавляют НО и экстрагируют DCM (2×20 мл). Объединенные органические экстракты сушат (NaSO), фильтруют и концентрируют. Неочищенный продукт очищают препаративной ВЭЖХ и получают N-(4-хлорфенил)-N-(2-(диэтиламино)этил)-4-((R)-6,7-дигидро-5-метил-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-карбоксамид (39,9 мг, 12%). МС (APCI+) [М+H] 471,3. Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 8,49 (с, 1Н), 7,40-7,35 (м, 2Н), 7,17-7,13 (м, 2Н), 4,06-3,95 (м, 4Н), 3,77-3,70 (м, 2Н), 3,51-3,44 (м, 1Н), 3,39-3,02 (м, 11Н), 2,42-2,32 (м, 1Н). 1,88-1,82 (м, 1Н), 1,33 (т, J=7,2 Гц, 6Н), 1,15 (д, J=6,8 Гц, 3Н).
Пример 3
N-(4-Хлорбензил)-N-(2-(диэтиламино)этил)-4-((5R)-7-гидрокси-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-карбоксамид
Стадия 1
3
3
1
. (R)-(+)-Пулегон (76,12 г, 0,5 ммоль), безводный NaHCO (12,5 г) и безводный эфир (500 мл) помещают в круглодонную колбу объемом 1 л. Реакционную смесь охлаждают на ледяной бане в атмосфере азота. По каплям прибавляют бром (25,62 мл, 0,5 ммоль) в течение более 30 минут. Смесь фильтруют и осторожно прибавляют к NaOEt (21%, 412 мл, 1,11 ммоль) в бане, охлаждаемой льдом. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем прибавляют 5% раствор HCl (1 л) и эфир (300 мл). Водную фазу экстрагируют эфиром (2×300 мл). Объединенные органические фазы промывают водой, сушат и концентрируют. Остаток прибавляют к подогретому раствору гидрохлорида семикарбазида (37,5 г) и NaOAc (37,5 г) в воде (300 мл), затем прибавляют кипящий этанол (300 мл) и получают прозрачный раствор. Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2,5 часов и затем перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь обрабатывают водой (1 л) и эфиром (300 мл). Водную фазу экстрагируют эфиром (2×300 мл). Объединенные органические фазы промывают водой, сушат и концентрируют. Остаток очищают вакуумной перегонкой (73-76°С при 0,8 мм рт.ст.) и получают (2R)-этил-2-метил-5-(пропан-2-илиден)циклопентанкарбоксилат (63 г, 64%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 4,13 (м, 2Н), 3,38 (д, J=16 Гц, 0,5Н), 2,93 (м, 0,5Н), 2,50-2,17 (м, 2Н), 1,98 (м, 1Н), 1,76 (м, 1Н), 1,23 (м, 6Н), 1,05 (м, 6Н).
Стадия 2
3
1
2
3
3
. (2R)-Этил-2-метил-5-(пропан-2-илиден)циклопентанкарбоксилат (24 г, 0,122 моль) в этилацетате (100 мл) охлаждают до -68°С смесью сухой лед/изопропанол. Озонированный кислород (5-7 фут/час O) барботируют через раствор в течение 3,5 часов. Реакционную смесь продувают азотом при комнатной температуре до исчезновения цвета. Этилацетат удаляют в вакууме, остаток растворяют в уксусной кислоте (150 мл) и охлаждают ледяной водой. Затем прибавляют цинковую пыль (45 г). Раствор перемешивают в течение 30 минут и затем фильтруют. Фильтрат нейтрализуют 2N раствором NaOH (1,3 л) и NaHCO. Водную фазу экстрагируют эфиром (3×200 мл). Органические фазы объединяют, промывают водой, сушат, концентрируют и получают (2R)-этил-2-метил-5-оксоциклопентанкарбоксилат (20 г, 96%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 4,21 (м, 2Н), 2,77 (д, J=11,2 Гц, 1Н), 2,60 (м, 1Н), 2,50-2,10 (м, 3Н), 1,42 (м, 1Н), 1,33 (м, 3Н), 1,23 (м, 3Н).
Стадия 3
+
. К раствору смеси (2R)-этил-2-метил-5-оксоциклопентанкарбоксилата (20 г, 117,5 ммоль) и тиомочевины (9,2 г, 120,9 ммоль) в этаноле (100 мл) прибавляют КОН (8,3 г, 147,9 ммоль) в воде (60 мл). Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 10 часов. После охлаждения удаляют растворитель, и остаток нейтрализуют концентрированной HCl (12 мл) при 0°С и затем экстрагируют DCM (3×150 мл). Растворитель удаляют, остаток очищают хроматографией на силикагеле, осуществляя элюирование смесью гексан/этилацетат (2:1) и получают (R)-2-меркапто-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ол (12 г, 56%). МС (APCI+) [М+Н]183.
Стадия 4
4
+
. Никель Ренея (15 г) и NHOH (20 мл) прибавляют к суспензии (R)-2-меркапто-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ола (12 г, 65,8 ммоль) в дистиллированной воде (100 мл). Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов и затем фильтруют. Фильтрат концентрируют и получают (R)-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ол (9,89 г, 99%). МС (APCI+) [М+Н]151.
Стадия 5
3
3
3
3
1
. Смесь (R)-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ола (5,8 г, 38,62 ммоль) в POCl (20 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 5 минут. Избыток POCl удаляют в вакууме, и остаток растворяют в DCM (50 мл). Затем смесь прибавляют к насыщенному раствору NaHCO (200 мл). Водную фазу экстрагируют DCM (3×100 мл), и объединенные органические фазы сушат и концентрируют. Остаток очищают хроматографией на силикагеле, осуществляют элюирование этилацетатом и получают (R)-4-хлор-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидина (3,18 г, 49%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 8,81 (с, 1Н), 3,47 (м, 1Н), 3,20 (м, 1Н), 3,05 (м, 1Н), 2,41 (м, 1Н), 1,86 (м, 3Н), 1,47 (м, 3Н).
Стадия 6
3
2
2
3
2
3
3
3
1
. м-СРВА (8,30 г, 37,0 ммоль) прибавляют тремя порциями к раствору (R)-4-хлор-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидина (2,5 г, 14,8 ммоль) в CHCl (60 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 дней. Смесь охлаждают до 0°С и по каплям прибавляют NaSO (10 г) в воде (60 мл). Затем прибавляют NaCO (6 г) в воде (20 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 20 минут. Водную фазу экстрагируют CHCl (2×200 мл) и объединенные органические фазы концентрируют при низкой температуре (<25°С). Остаток очищают хроматографией на силикагеле, осуществляя элюирование смесью этилацетат-DCM/MeOH (20:1) и получают оксид (R)-4-хлор-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидина (1,45 г, 53%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 8,66 (с, 1Н), 3,50 (м, 1Н), 3,20 (м, 2Н), 2,44 (м, 1Н), 1,90 (м, 1Н), 1,37 (д, 1=7,2 Гц, 3Н).
Стадия 7
1
+
3
. Раствор оксида (R)-4-хлор-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидина (1,45 г, 7,85 ммоль) в уксусном ангидриде (20 мл) нагревают при 110°С в течение 2 часов. После охлаждения удаляют избыток растворителя в вакууме. Остаток очищают хроматографией на силикагеле, осуществляя элюирование смесью гексан/этилацетат (3:1) и получают (5R)-4-хлор-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-7-илацетат (1,25 г, 70%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 8,92 (м, 1Н), 6,30-6,03 (м, 1Н), 3,60-3,30 (м, 1Н), 2,84 (м, 1Н), 2,40-2,20 (м, 1Н), 2,15 (д, J=6 Гц, 2Н), 1,75 (м, 2Н), 1,47 (д, J=6,8, 2Н), 1,38 (д, J=7,2, 1Н). МС (APCI+) [М+Н] 227.
Стадия 8
2
. (5R)-4-Хлор-5-метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[d]пиримидин-7-илацетат превращают в (5R)-4-хлор-6,7-дигидро-5-метил-5Н-циклопента[d]пиримидин-7-ол обработкой LiOH в НО/ТГФ с последующей обработкой кислотой (2N раствором HCl в воде) для удаления ацетатных групп.
Стадия 9
. 4-Хлорбензиламин (1,0 мл, 8,2 ммоль) прибавляют к раствору гидробромида 2-бром-N,N-диэтилэтиламина (2,4 г, 9,0 ммоль) и триэтиламина (3,4 мл, 25 ммоль) в дихлорметане (16 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 часов. Затем смесь концентрируют и получают N1-(4-хлорбензил)-N2,N2-диэтилэтан-1,2-диамин в виде масла, которое используют непосредственно без очистки.
4
2
4
3
1
Стадия 10. трет-Бутил-4-хлоркарбонилпиперазин-1-карбоксилат (245 мг, 0,99 ммоль) прибавляют к раствору N1-(4-хлорбензил)-N2,N2-диэтилэтан-1,2-диамина (235 мг, 0,98 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (0,54 мл, 2,94 ммоль) в DCM (2 мл). Реакционную смесь оставляют перемешиваться при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь гасят насыщенным раствором NHCl (2 мл) и экстрагируют DCM (2×5 мл). Объединенные органические экстракты сушат (NaSO), фильтруют и концентрируют. Неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле и получают трет-бутил-4-(N-(4-хлорбензил)-N-(2-(диэтиламино)этил)карбамоил)пиперазин-1-карбоксилат (200 мг, 45%). Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 7,32 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,19 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 4,42 (с, 2Н), 3,45-3,40 (м, 4Н), 3,25-3,20 (м, 4Н), 3,18 (т, J=6,8 Гц, 2 Гц), 2,56 (т, J=6,8 Гц, 2Н), 2,49 (кв, J=7,2 Гц, 4Н), 1,46 (с, 9Н), 0,99 (т, J=7,2 Гц, 6Н).
Стадия 11
2
2
4
3
+
1
. Трифторуксусную кислоту (1 мл) прибавляют к раствору трет-бутил-4-(N-(4-хлорбензил)-N-(2-(диэтиламино)этил)карбамоил)пиперазин-1-карбоксилата (88 мг, 0,19 ммоль) в DCM (1 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов и затем концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в н-бутаноле (1 мл). К раствору прибавляют N,N-диизопропилэтиламин (0,11 мл, 0,6 ммоль). Затем к раствору прибавляют (5R)-4-хлор-6,7-дигидро-5-метил-5Н-циклопента[d]пиримидин-7-ол (37 мг, 0,20 ммоль). Реакционную смесь нагревают при 80°С в течение 16 часов. Затем смесь разбавляют HO (1 мл) и экстрагируют DCM (2×5 мл). Объединенные органические экстракты сушат (NaSO), фильтруют и концентрируют. Неочищенный продукт очищают препаративной ВЭЖХ и получают N-(4-хлорбензил)-N-(2-(диэтиламино)этил)-4-((5R)-6,7-дигидро-7-гидрокси-5-метил-5Н-циклопента[d]пиримидин-4-ил)пиперазин-1-карбоксамид (19,9 мг, 21%). МС (APCI+) [М+Н] 501,3. Н ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 8,46 (с, 1Н), 7,34 (д, J=8,4 Гц, 4Н), 7,13 (д, J=8,4 Гц, 4Н), 5,50 (т, J=8 Гц, 1Н), 5,28 (дд, J=3,6, 8,4 Гц, 1Н), 4,45 (с, 4Н), 4,14-4,04 (м, 4Н), 3,94-3,81 (м, 4Н), 3,51-3,42 (м, 8Н), 3,20-3,00 (м, 16Н), 2,73-2,64 (м, 2Н), 2,40-2,20 (м, 4Н), 2,05-1,98 (м, 1Н), 1,86-1,78 (м, 1Н), 1,33 (д, J=7,2 Гц, 3 Гц), 1,28 (т, J=7,2 Гц, 12Н), 1,21 (д, J=6,8 Гц, 3 Гц).
Примеры 4-14, показанные в таблице 1, могут также быть получены вышеописанными способами.
Хотя изобретение описано в сочетании с пронумерованными вариантами осуществления, понятно, что изобретение не ограничивается этими вариантами осуществления. Наоборот, подразумевается, что изобретение охватывает все альтернативы, модификации и эквиваленты, которые могут быть включены в объем настоящего изобретения, как определено в формуле изобретения. Таким образом, считается, что предшествующее описание является иллюстрацией только принципов настоящего изобретения.
Используемые в представленном выше описании и в нижеследующей формуле изобретения слова «содержать», «содержащий», «включать», «включающий» и «включает» предназначаются для того, чтобы указывать на наличие установленных признаков; целых чисел, компонентов или стадий, но они не исключают наличие или добавление одного или нескольких признаков, целых чисел, компонентов, стадий или их групп.
Таблица 2
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ
Структура
Пример №
AKT1 Enz IMAP Среднее значение IC50
PKA Enz IMAP Среднее значение IC50
Селективность
<img file="00000054.tif" he="46" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 8
Пример 1
21.08
797.38
37.83
<img file="00000054.tif" he="46" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
Пример 1
Структура 9
Партия 2
13.57
721.7
53.18
<img file="00000055.tif" he="35" wi="24" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 3
Пример 2
2053
1110.6
0.54
<img file="00000056.tif" he="36" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 5
Пример 3
645.25
10000.00001
15.50
<img file="00000057.tif" he="23" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 13
Пример 4
368.1
2973.65
8.08
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ
<img file="00000058.tif" he="27" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 14
Пример 5
64.2
2913.5
45.38
<img file="00000059.tif" he="27" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 15
Пример 6
13.57
517.1
38.11
<img file="00000060.tif" he="22" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 11
Пример 7
458.2
4607.4
10.49
<img file="00000061.tif" he="22" wi="33" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 10
Пример 8
584.2
4316.4
7.39
<img file="00000062.tif" he="27" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 16
Пример 9
26.47
559.3
21.13
<img file="00000063.tif" he="22" wi="39" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 12
Пример 10
33.33
2096.3
62.90
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ
<img file="00000064.tif" he="27" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 17
Пример 11
20.05
171.6
8.56
<img file="00000065.tif" he="27" wi="35" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 18
Пример 12
35.1
515.25
14.68
<img file="00000066.tif" he="34" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 2
Пример 13
103.05
2245.35
21.79
<img file="00000067.tif" he="27" wi="34" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 19
Пример 14
66.4
378.4
5.70
<img file="00000068.tif" he="40" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 23
Пример 15
146.73
10000.00001
68.15
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ
<img file="00000069.tif" he="40" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 24
Пример 16
50.2
9103.3
181.34
<img file="00000070.tif" he="40" wi="25" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 25
Пример 17
420.05
10000.00001
23.81
<img file="00000071.tif" he="17" wi="45" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 26
Пример 18
2008.3
10000.00001
4.98
<img file="00000072.tif" he="35" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 20
Пример 19
60.1
10000.00001
166.39
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ
<img file="00000073.tif" he="40" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
Структура 22
Пример 20
31.15
10000.00001
321.03