Влияние ионола на процессы перекисного окисления липидов в печени собак с острым панкреатитом

© Коллектив авторов, 2007 УДК 636.7:616.36:616.37-002

ВЛИЯНИЕ ИОНОЛА НА ПРОЦЕССЫ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В ПЕЧЕНИ СОБАК С ОСТРЫМ ПАНКРЕАТИТОМ

П.С. Филипенко, И.С. Салий, Г.В. Потапов Ставропольская государственная медицинская академия

При остром панкреатите (ОП) на фоне усиленного свободнорадикального окисления липидов происходит истощение системы антиоксидан-тной защиты, что вызывает неконтролируемое генерирование активных форм кислорода (АФК) и активацию перекисного окисления липидов (ПОЛ). Степень недостаточности антиоксидантной системы (АОС) коррелирует с тяжестью деструктивных процессов в поджелудочной железе [1, 3, 11].

В настоящее время для стабилизации системы антиоксидантной защиты при ОП применяется два основных вида терапии - заместительная и коррегирующая. Заместительная терапия предполагает применение препаратов, обладающих антиоксидантной активностью (ферменты антиоксидантной защиты, неферментные антиоксиданты). В группу неферментных антиоксидантов входят синтетические имитаторы ферментов и вещества, не имеющие ферментоподобного действия (природные и синтетические антиоксиданты). Таким образом, по-видимому, патогенетическая терапия ОП должна включать коррекцию антиоксидантной системы [2,12].

Целью настоящего исследования явилось изучение влияния 2,6-ди-трет-бутил-4-метил-фенола (пространственно-затруднённый фенол), используемого в качестве стандарта при изучении антиоксидантной активности различных химических соединений, на процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в печени собак с острым экспериментальным панкреатитом (ОЭП).

Материал и методы. В эксперименте ОП воспроизводили у 56 беспородных взрослых собак интраопе-

рационным введением в ткань поджелудочной железы, а затем внутривенно панкреоцитотоксической сыворотки (ПЦТС) [10]. Животные были разделены на две группы по 28 собак в каждой. В печени собак первой группы исследовали продукты ПОЛ в динамике развития ОП, во второй группе продукты ПОЛ определяли на фоне внутримышечного введения 5% раствора ио-нола из расчёта 5 мг на 1 кг массы животного в сутки. Для исключения влияния наркоза, операционной травмы и манипуляций с ПЖ на изменение активности процессов ПОЛ 8 собакам по вышеописанной методике в ткань железы вводили 0,9% раствор хлорида натрия (ложнооперированные животные). Показатели продуктов ПОЛ у этих животных были приняты за исходные и послужили отправной точкой при анализе результатов активации процессов ПОЛ у животных с ОЭП (табл.1). Животных умерщвляли через 1, 8, 24 часа и на 3, 6, 10 и 20 сутки с момента введения ПЦТС. С учётом рекомендаций [5] проводили перфузию печени через сосуды 100 мл охлаждённого до 0°С 0,25 М сахарозы с 1мМ ЭДТА, рН 7,4 со скоростью 60-80 мл в минуту. Содержание диеновых конъюгатов (ДК) малонового диальдегида (МДА) определяли в гомогенатах печени и расчитывали на 1 мг общих липидов [6-8]. Общие липиды исследовали по методу Н.П. Тарановой и Л.В. Говоровой [9]. Морфологические изменения в поджелудочной железе при развитии ОЭП у контрольных животных и под влиянием введения антиоксидантов определяли с окраской парафиновых срезов гематоксилином-эозином, пикрофуксином [4]. Во всех случаях был выявлен геморрагический панкреатит.

Результаты исследования обработаны методом кор-

Таблица 1

Концентрация продуктов ПОЛ в печени ложнооперированных собак

Исследуемый показатель Количество

Диеновые конъюгаты (ммоль/мг общих липидов) 0,828±0,019

Малоновый диальдегид (нмоль/мг общих липидов) 323,154±8,815

и ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА

Таблица 2

Концентрации ДК

Исследуемые показатели Сроки исследования

1 час 8 часов 24 часа 3 суток 6 суток 10 суток 20 суток

Контрольные собаки 29,720 ±0,802* 34,980 ±1,116* 0,888 ±0,041 21,561 ±0,505* 12,720 ±0,386* 9,750 ±0,352* 11,667 ±0,375*

Собаки, леченные ионолом 0,768 ±0,054 1,395 ±0,060*/** 2,046 ±0,168*/** 1,704 ±0,098*/** 0,333 ±0,034* 0,513 ±0,064* 1,025 ±0,068*/**

* р< 0,05 в сравнении с ложнооперированными животными; ** р< 0,05 в сравнении с контрольной группой.

реляционного и вариационного анализа при Р не менее 95%. Антиоксидантные свойства ионола (2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола) были изучены при исследовании процессов ПОЛ в клеточных мембранах гепатоцитов при остром экспериментальном панкреатите. Эффективность ионола как ингибитора свободнорадикальных реакций была оценена по изменению концентрации ДК и МДА как первичных и промежуточных продуктов ПОЛ в гепатоцитах собак с ОЭП.

Результаты и обсуждение. Исследуя процессы ПОЛ клеток печени собак с ОЭП (контрольная группа) мы выявили четыре пика увеличения концентрации ДК в гомогенатах органа: 1-8 час, 3-и, 6-е и 20-е сутки (табл.2). Наивысшая концентрация ДК отмечена в 1-й и 8-й час развития заболевания (соответственно 29,720±0,802 и 34,980±1,116 ммоль/мг общих липидов, р<0,01), причём наибольшая концентрация зафиксирована на 8-й час развития ОП. Через 24 часа концентрация ДК резко снижена в сравнении с предыдущими сроками. Начиная с 6-х суток, количество ДК в гомогенатах печени ниже, чем в предыдущие сроки, однако их концентрация ощутимо выше, чем у ложнооперирован-ных животных (р<0,001).

Концентрация МДА в мембранах печени собак с геморрагическим панкреатитом (табл.3) резко возрастает в 1-й час и через 8 часов развития заболевания с 323,154±8,815 нмоль/мг общих липидов (лож-

нооперированные животные) до 839,972±45,501 и до 775,223±48,341 нмоль/мг общих липидов (р<0,01). К исходу первых суток концентрация МДА в гомогенатах печени достоверно ниже, чем у ложнооперированных животных (р<0,05). На третьи, шестые и десятые сутки развития ОП отмечено резкое увеличение концентрации МДА с пиком на шестые сутки (1576,753±91,112 нмоль/ мг общих липидов, р<0,001). С 10-х суток наблюдалась тенденция к уменьшению концентрации МДА, однако уровень последнего был выше, чем у ложноопериро-ванных животных (соответственно 1133,781±66,101 и 323,154±8,815 нмоль/мг общих липидов, р<0,001).

Таким образом, можно полагать, что обнаруженное нами неконтролируемое развитие процессов ПОЛ в печени собак с геморрагическим панкреатитом к концу первых суток многократно усиливает первичное повреждение печени циркулирующими в крови продуктами распада ПЖ.

При изучении влияния ионола на процессы ПОЛ в печени собак с ОП было обнаружено (табл.2,3), что при введении препарата отмечается нарастание концентрации ДК в клеточных мембранах печени к концу первых суток развития ОЭП с 0,768±0,054 ммоль/мг общих липидов до 2,046±0,168 ммоль/мг общих липидов, что достоверно выше показателей животных контрольной группы (р<0,001). Во все остальные сроки наблюдения концентрация ДК в гепатоцитах значительно меньше,

Таблица 3

Концентрации МДА

Исследуемые показатели Сроки исследования

1 час 8 часов 24 часа 3 суток 6 суток 10 суток 20 суток

Контрольные собаки 839,972 ±45,501 775,223 ±48,341 246,001 ±20,972* 1520,522 ±70,381 1576,753 ±91,112 1133,781 ±66,101 726,820 ±44,682

Собаки, леченные ионолом 682,203 ±62,921/** 65,061 ±2,852 98,341 ±7,860 477,961 ±34,921 253,313 ±34,391 195,190 ±23,462 284,061 ±19,941*

*р< 0,05 в сравнении с ложнооперированными животными; ** р< 0,05 в сравнении с контрольной группой.

чем у животных контрольной группы (р<0,05).

Анализируя влияние ионола на скорость перехода первичных продуктов ПОЛ в промежуточные (МДА), мы обратили внимание на тот факт, что антиоксидант наиболее интенсивно тормозит переход ДК в МДА в первые сутки развития ОЭП. На третьи сутки концентрация МДА достоверно (р<0,01) увеличивается в сравнении с 24-м часом развития ОП. Увеличение концентрации МДА в этот срок совпадает с увеличением концентрации ДК.

Заключение. Таким образом, при введении ионо-ла процесс ПОЛ в печени животных с ОП обрывается на стадии зарождения цепей, в связи с чем уменьшается переход диенкетонов в промежуточные продукты. Способность ионола подавлять свободнорадикальное ПОЛ может быть связана как с прямым химическим взаимодействием его с радикалами, так и с торможением окислительной модификации антиокислительных ферментов. По существующему мнению [10], мембраностабилизирующее действие ионола связано с угнетением фосфолипазной активности и, как следствие, с торможением гидролиза фосфолипидов клеточных мембран.

Литература.

1. Колесова, О.Е. Новый подход к лечению острого панкреатита и профилактика его осложнений / О.Е. Колесова, Г.В. Леонтьева, С.М. Чудных. - М., 1996. - 12 с.

2. Костюченко, А.Л. Неотложная панкреатология / А.Л. Кос-тюченко, В.И. Филин. - СПб: «Питер», 2000.- С.15-19.

3. Крючина, Е.А. Антиоксидантная терапия острого панкреатита / Е.А. Крючина // Российский журнал гастроэн-

терологии, гепатологии и колопроктологии.- 1999.- Т.9, №5.-С.78.

4. Меркулов, Г.А. Курс патогистологической техники / ГА. Меркулов. - М., 1969. - С. 338.

5. Покровский, А.А. Лизосомы / А.А. Покровский, В.А. Ту-тельян. - М., 1976. - С. 262.

6. Путилина, Ф.Е. Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен) / Ф.Е. Путилина, С.Д. Зоидзе. - Л., 1982. - С. 168-172.

7. Стальная, И.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича. - М.: «Медицина», 1977. -С. 63.

8. Стальная, И.Д. Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных жирных кислот / И.Д. Стальная // Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича.

- М.: «Медицина», 1977. - С. 64.

9. Таранова, Н.П. Микрометод определения общих липидов в лимфоцитах и другом биологическом материале / Н.П. Таранова, Л.В. Говорова // Вопросы медицинской химии.

- 1987. - №2. - С. 132-136.

10. Филипенко, П.С. Материалы к патогенезу и экспериментальной терапии острых цитотоксических панкреатитов: дис. ... канд. мед. наук. / П.С. Филипенко. - Ставрополь, 1986. - 319 с.

11. Черданцев, Д.В. Диагностика и лечение окислительного стресса при остром панкреатите / Д.В. Черданцев, Ю.С. Винник, Э.В. Каспаров, Р.М. Титова, О.В. Первова. -Красноярск, 2002.- С.148.

12. Яицкий, Н.А. Острый панкреатит / Н.А. Яицкий, В.М. Седов, Р. А. Сопия. - М.: Медпресс-информ, 2003. - С. 204-211.

ВЛИЯНИЕ ИОНОЛА НА ПРОЦЕССЫ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В ПЕЧЕНИ СОБАК С ОСТРЫМ ПАНКРЕАТИТОМ.

П.С.ФИЛИПЕНКО, И.С. САЛИЙ, Г.В. ПОТАПОВ

Целью настоящего исследования явилось изучение влияния 2,6-ди-трет-бутил-4-метил-фенола (ионола) на процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в печени собак с острым экспериментальным панкреатитом (ОЭП). Исследованы 56 взрослых собак с острым экспериментальным панкреатитом: 28 животным вводили 5% масляный раствор ионола, другие 28 собак служили контролем. Содержание первичных (ДК) и промежуточных (МДА) продуктов ПОЛ определяли в гомогенатах печени через 1, 8, 24 часа, на 3, 6, 10 и 20 сутки. Изучали эффективность ионола как ингибитора свободнорадикальных реакций.

В ходе исследования было установлено, что жирорастворимый антиоксидант ионол с умеренной активностью влияет на процессы ПОЛ в гепатоцитах, его введение животным с ОЭП обрывает процессы ПОЛ на стадии зарождения цепей, в связи с чем уменьшается переход диенкетонов в МДА.

Ключевые слова: острый панкреатит, перекисное окисление липидов, ионол

INFLUENCE OF IONOL ON LIPID PEROXIDATION IN THE LIVER OF DOGS WITH AN ACUTE PANCREATITIS

FILIPENKO P.S. SALY I.S., POTAPOV G.V.

The purpose of the present research was studying of ionol influence on lipid peroxidation (POL) in liver of dogs with an experimental acute pancreatitis (EAP).

56 dogs with EAP were examined. 28 animals undergone injection of 5 % ionol oil solution, other 28 dogs served as controls. The level of primary (DK) and intermediate (MDA) POL products were detected in liver homogenates at 1, 8 and 24 hours, and then at 3, 6, 10 and 20 days. Efficiency of ionol as inhibitor of free radical reactions was assessed.

Ionol - fat-soluble antioxidant with the moderate activity -was shown to influence POL processes in hepatocytes. Its injection to animals with EAP evidently broke POL at the stage of chains initiation decreasing dieneketones transformation to MDA.

Key words: an acute pancreatitis, lipid peroxidation, ionol