К вопросу о процессах адаптации и стресса у животных и их коррекции с применением транскраниальной электростимуляции

К ВОПРОСУ О ПРОЦЕССАХ АДАПТАЦИИ И СТРЕССА У ЖИВОТНЫХ И ИХ КОРРЕКЦИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ТРАНСКРАНИАЛЬНОЙ ЭЛЕКТРОСТИМУЛЯЦИИ

О.Б. Сеин, Д.О. Сеин, К.А. Лещуков, М.А. Соловьева

Аннотация. В статье рассматриваются теоретические и практические аспекты адаптации и стресса у домашних животных. Показана роль антиноцицептивной системы мозга и эндогенных опиоидных пептидов в этих процессах. Приводятся результаты использования разработанного авторами способа профилактики транспортного стресса у крупного рогатого скота с применением транскраниальной электростимуляции.

Ключевые слова: адаптация, антиноцицептивная система, коррекция, кролики, крупный рогатый скот, опиоидные пептиды, стресс.

Адаптация или приспособление организма к изменяющимся условиям существования в окружающей среде сопровождается возникновением приспособительных форм поведения и изменения обмена веществ, участвующих в данных приспособительных реакциях. Однако термин «адаптация» чаще всего используется в более узком понимании. Обычно им обозначают снижение чувствительности рецепторного аппарата к постоянно действующему раздражителю.

Адаптация является важным свойством биологических систем на всех этапах и уровнях их развития, осуществляемым регуляторными факторами обмена веществ, энергии и информации. На низших стадиях филогенеза эту функцию выполняют нативные или модифицированные метаболиты, а на более высших - специализированные нейроэндокринные факторы (гормоны, медиаторы). Именно согласованное образование, действие и превращение гормонов и медиаторов, а также нейросекретов осуществляют интеграцию функций и адаптивные перестройки, которые необходимы для сохранения жизненно важных констант и параметров на уровне, обеспечивающем жизнеспособность и жизнедеятельность организма.

Вопросы адаптации всегда интересовали исследователей. Вначале ее понимание базировалось на рефлекторной теории Р.Декарта, принципы которой были сформулированы еще в 17 веке. Затем на учении И.П.Павлова о рефлексах, которое объясняло приспособительные реакции животных и человека к условиям окружающей среды по принципу «стимул-реакция». В последующем осмысление системных механизмов адаптации к условиям окружающей среды показало, что они обеспечиваются не отдельными органами, а определенным образом организованными и соподчиненными между собой системами. Этому послужило учение о функциональных системах выдающегося отечественного физиолога П.К. Анохина, которое позволило внести существенные коррективы в представление об адаптации.

В отличие от «рефлекторной теории» рассмотрение адаптации со стороны системной физиологии показало, что ее нельзя ограничивать узкими рамками афферент-но-эфферентных отношений и условный рефлекс, объясняющий поведенческие акты по формуле «стимул-реакция», не может полностью объяснить приспособительный характер поведения животного.

Функциональная система является динамической структурой, в которой акцент ставится на законах формирования какого-либо функционального объединения, обязательно заканчивающегося полезным приспособительным эффектом и включающего в себя аппараты оценки этого эффекта. При этом понятие функциональной системы охватывает все стороны приспособительной деятельности организма.

Оценка адаптации с позиции системной физиологии позволяет понимать ее не как процесс или свершившийся факт приспособления к чему-либо, а рассматривать ее как обратную связь, обеспечивающую целесообразное реагирование сложной иерархической самоуправляющейся системы на изменяющиеся условия окружающей среды.

Процессы адаптации тесно связаны со стрессом, концепция которого впервые была представлена канадским ученым Г.Селье в 1936 г. в статье «Синдром, вызванный различными повреждающими агентами» (И.А.8е1уе,1936).

Вначале Г. Селье рассматривал стресс исключительно как разрушительное, негативное явление. Однако впоследствии он пишет: «Стресс есть неспецифический ответ организма на любое представление ему требований... С точки зрения стрессовой реакции не имеет значения. Приятна или не приятна ситуация, с которой мы столкнулись. Имеет значение лишь интенсивность потребности в перестройке или в адаптации». Позже Г.Селье (1977) разграничивал стресс на «дистресс» -отрицательный стресс и эустресс - «положительный стресс», а также ввел понятие «адаптационной энергии».

В развитии стрессового состояния в организме различают три последовательные стадии: тревоги, резистентности, истощения. Все эти стадии сопровождаются характерными перестройками в гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системе. В настоящее время роль этой системы хорошо изучена. Установлена взаимосвязь и очередность включения ее составных частей после воздействия стресс-фактора. Показано, что стресс-факторы стимулируют секрецию четырех гормонов адренокортикотропного, гидрокортизона, корти-костерона и адреналина. Выделяясь в кровеносную систему, эти гормоны разносятся по всему организму и участвуют в процессе адаптации.

Разумеется, что с развитием биологической науки «учение о стрессе», разработанное Г.Селье, постоянно дополняется. Пересматриваются определенные позиции, вносятся коррективы. Так, с открытием в 1972 году опиатных рецепторов, а затем опиоидных нейропеп-тидов позволило несколько иначе взглянуть на механизм стресса.

Опиоидные пептиды представляют собой большую группу физиологически активных нейропептидов, обладающих чрезвычайно широким спектром регулятор-ной активности. Они обнаружены в различных тканях и органах - в мозге, желудочно-кишечном тракте, надпочечниках, иммунокомпетентных клетках. Опиоидные пептиды участвуют в регуляции гомеокинетического баланса многих функциональных систем, они обладают выраженным свойством снижать болевую чувствительность, усиливать кровообращение головного мозга и миокарда, повышают устойчивость к гипоксии.

Многочисленные публикации, имеющиеся на сегодняшний день, указывают на участие опиоидных пептидов в механизмах развития стресса и формирования адаптации. В ряде работ отмечается, что опиоиды, в частности энкефалины и эндорфины, способны модулировать синтез и секрецию «гормонов стресса».

Учитывая вышеизложенное, нами были проведены эксперименты по изучению влияния эндогенных опио-идных нейропептидов на процессы адаптации у животных и использованию их с целью профилактики транспортного стресса.

В опытах мы применяли транскраниальную электростимуляцию (ТЭС), представляющую собой неинва-зивный метод воздействия на организм. Данный метод и сопровождающая его аппаратура были разработаны в «Центре ТЭС», функционирующем при институте физиологии имени И.П. Павлова, коллективом ученых под руководством профессора В.П. Лебедева. Принцип метода ТЭС заключается в сочетанном применении постоянного тока и импульсного тока в определенных режимах, что оказывает стимулирующий эффект на антиноцицептивную систему мозга. Для этого на электроды зафиксированные в области головы животного подается ток с применением аппарата «Трансаир-2».

В скрининговых исследованиях, проведенных М.А. Джой и др. (2005), было установлено, что после ТЭС в крови кроликов повышалось содержание бета-эндорфина в 10-15 раз. Это позволяет сделать заключение, что транскраниальная электростимуляция является «источником» эндогенных опиоидных пептидов. Учитывая это, нами была проведена серия опытов.

Первый опыт проводился на кроликах. Было отобрано три группы кроликов - аналогов. Кроликов 1 группы подвергали ТЭС. Для этого вначале на электроды - зажимы (рисунок 1) подавался постоянный ток, плавно нарастающий в течение 2 мин от 0 до 6,5 мА. Затем в той же полярности подавались прямоугольные импульсы с частотой 77 Гц и длительностью 3,5 мс, амплитуду которых медленно увеличивали в течение 2 мин до 3,0 мА. ТЭС проводили 2 раза в сутки утром и вечером в течение двух дней подряд. Продолжительность одного сеанса составляла 30 мин. Кролики 2 группы являлись контрольными. Им накладывали на голову электроды, но ТЭС не проводили.

Рисунок 1 - Проведение транскраниальной электростимуляции у кролика

У кроликов обеих групп до ТЭС, через 60 мин, 3 и 6 часов после ТЭС брали кровь, в которой определяли содержание бета-эндорфина иммуноферментным методом.

Результаты иммуноферментного анализа показали, что у кроликов 1 группы содержание бета-эндорфина через 60 мин после ТЭС увеличилось в 3,8 раза и относительно животных контрольной группы (7,0±0,10 -7,8±0,15 ммоль/л) находилось на высоком уровне в течение трех часов.

Полученные данные свидетельствуют, что ТЭС оказывает выраженное действие на антиноцицептив-ную систему мозга животных, которое сопровождается «выбросом» в кровь большого количества эндогенного опиоидного пептида бета-эндорфина, обладающего антистрессорным действием.

Учитывая результаты первого опыта, нами был проведен второй опыт с целью профилактики транспортного стресса у кроликов. Было сформировано две группы.

Кролики 1 группы перед транспортировкой подвергались ТЭС, кролики 2 группы являлись контролем.

Кроликов обеих групп перевозили автотранспортом в специальных клетках по 5 голов в каждой. У всех животных определяли массу тела, а также брали кровь перед перевозкой (до проведения ТЭС) и после перевозки. В крови определяли скорость оседания эритроцитов (СОЭ), гематокрит, содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина с использованием общепринятых методов. Отдельное количество эозинофилов подсчитывали методом И.С. Пиралишвили (1962). Концентрацию глюкозы в крови определяли с использованием наборов «Био-ЛА-Тест» фирмы Лахема. Содержание кортизола устанавливали с применением имму-ноферментного анализа. Адреналин определяли флюо-рометрическим методом.

В период эксперимента за подопытными кроликами осуществляли контроль, наблюдали за приемом корма, учитывали их реакцию на различные внешние раздражители.

Результаты проведенного эксперимента показали, что во время и после перевозки кролики 1 группы вели себя спокойно, на внешние раздражители реагировали адекватно. При даче корма через 2 часа после перевозки все кролики опытной группы его активно поедали. У кроликов контрольной группы аппетит отсутствовал, они принимали только воду. Общее состояние у большинства животных этой группы было угнетенным, они неподвижно сидели в клетке, опустив голову, и перемещались только к поилке. В то же время у двух кроликов контрольной группы отмечалось возбуждение, они постоянно перемещались по клетке, беспокоили других животных, при этом корм не принимали.

Исследование крови показало, что общие гематологические показатели у кроликов всех групп находились в пределах физиологических норм. Однако у кроликов контрольной группы отмечалась более высокая СОЭ (2,0±0,08 мм/час), уменьшение содержания эритроцитов (5,0±0,10-1012 г/л) и гемоглобина (100,5±8,4г/л), а также наблюдалась выраженная эозинопения (605,0±15,0 в 1 мм3). У кроликов опытной группы эти показатели соответственно составили - 1,8±0,10 мм/ час, 5,2± 0,10 -1012 г/л, 108,5±10,4 г/л,825,0 ± 14,4в мм3.

Определение «гормона стресса»- адреналина показало, что до ТЭС и транспортировки его содержание у подопытных кроликов не имело существенных различий, а после транспортировки оно повысилось. При этом если у кроликов 1 группы повышение адреналина в крови было относительно небольшим (на 2,4 и 4,5 нг/ мл соответственно), то у кроликов контрольной группы оно было значительным (на 13,4 нг/мл).

Содержание кортизола в крови кроликов обеих групп после транспортировки также увеличилось. В этом случае у кроликов 1 группы увеличение было меньше (14,6±0,29 нг/ мл), чем у кроликов 2 группы (16,8±0,34 нг/мл).

Исследование глюкозы у подопытных кроликов показало, что до ТЭС и транспортировки ее концентрация в крови находилась в пределах 4,8±0,28 -5,1±0,35 ммоль/л. После транспортировки содержание глюкозы увеличилось ( 5,6±0,33- 6,0±0,37ммоль/л), однако достоверных различий (р>0,05) между полученными показателями у кроликов разных групп выявлено не было.

Определение массы тела у кроликов до транспортировки и через 24 и48 часов после нее показало, что у кроликов 1 группы ее потеря была меньше по сравнению с кроликами 2 группы. Это было связано с более длительным восстановлением аппетита у контрольных кроликов.

Таким образом, результаты исследований поведенческих реакций, определения массы тела и интерьер-ных показателей указывают на то, что у кроликов, под-

вергавшихся ТЭС, стресс-реакция на транспортировку была менее выраженной.

В третьем опыте использовали ТЭС с целью профилактики транспортного стресса у крупного рогатого скота. Объектом исследования являлись телки чёрно-пёстрой породы, предназначенные для транспортировки.

Было отобрано две группы телок-аналогов по 7 голов в каждой. Перед транспортировкой телкам 1 групп проводили ТЭС с использованием аппарата «Трансаир-2». Электроды с гидрофильными прокладками закрепляли на голове животных с применением металлических зажимов (рисунок 2).

Рисунок 2 - Проведение транскраниальной электростимуляции у телки

Телкам 1 группы на электроды подавался постоянный ток, плавно нарастающий в течение 2 мин от 0 до 6,5 мА, затем в той же полярности подавались прямоугольные импульсы с частотой 77 Гц и длительностью 3,5мс, амплитуду которых медленно увеличивали в течение 2 мин до 10 мА. Электростимуляцию проводили два раза в день утром и вечером в течение двух дней подряд. Продолжительность одного сеанса составляла 30 мин. Телки 2 группы являлись контрольными и ТЭС не подвергались.

До транспортировки и после нее за подопытными животными осуществляли наблюдение, определяли массу тела, а также брали кровь до транспортировки и проведения ТЭС и после транспортировки (разгрузки) через 60 мин и 24 часа. В крови определяли количество эозинофилов, содержание адреналина, кортизола, глюкозы и малонового альдегида (МАД) по реакции с тио-барбитуровой кислотой по методу Э.Н. Коробейнико-вой (1989).

Таблица 1 - Гематологические показатели у телок, подвергавшихся перед транспортировкой ТЭС

Показатели До транспортировки и ТЭС После транспортировки через 60 мин После транспортировки через 24 часа

группа группа группа

1 2 1 2 1 2

Эозинофилы, в мм3 1195,0±50,4 1208,0 ±40,2 981,0 ±17,8* 780,0 ±14,0 1017,0 ± 14,0* 988,0 ± 18,3

Адреналин, нг/мл 8,5 ±0,11 8,3 ±0,10 10,4 ± 0,08* 24,6 ±0,09 8,7 ± 0,09* 9,1 ±0,10

Кортизол, нг/мл 27,4 ±2,05 27,9 ±2,00 34,0 ± 1,88* 44,5 ±1,94 30,0 ±2,05* 38,8 ±1,65

Глюкоза, ммоль/л 4,2 ±0,10 4,2 ±0,12 5,5 ± 0,24* 7,1 ±0,27 4,8 ± 0,11* 4,3 ±0,18

МАД, мкмоль/л 0,40 ±0,05 0,38 ±0,05 0,47 ± 0,5* 0,60 ±0,06 0,38 ±0,05* 0,53 ±0,05

Примечание: *- при Р<0,05 по сравнению с животными контрольной группы; - при Р<0,05 по сравнению с животными 2 группы

Результаты исследований крови показали, что до транспортировки животных и проведения ТЭС изучаемые показатели у телок обеих групп не имели существенных отличий (р>0,05) и находились в пределах физиологических норм. Однако через 60 мин после транспортировки (разгрузки) телок в их крови отмечалось увеличение адреналина (таблица 1), кортизола, глюкозы, МАД и уменьшение количества эозинофилов, что указывает на наличие стрессового состояния у подопытных животных. При этом у телок 1 группы изменение изучаемых показателей было менее выраженным по сравнению с животными 2 группы, что подтверждает профилактическую эффективность ТЭС.

Наблюдения показали, что непосредственно после разгрузки и размещения телок в загоне у них отмечалось беспокойство. Через 30-60 мин животные успокаивались, двигательная активность у них уменьшалась. При этом было отмечено, что телки опытной группы были более спокойными по сравнению с контрольными животными, они меньше перемещались по загону, у них значительно раньше восстановился аппетит. Поэтому потеря живой массы была меньше, чем в контроле.

Гп - гипоталамус; АНС- антиноцицептивная система; Гф -гипофиз; CRF - кортикотропин релизинг фактор; АКТГ - ад-ренокортикотропный гормон; Нп - надпочечник.

Рисунок 3 - Схема нейроэндокринных реакций в организме животных при стрессе

Возвращаясь к механизму формирования адаптационного синдрома и анализируя полученные результаты наших исследований, можно сделать заключение, что эндогенные опиоидные пептиды, наряду с «гормонами стресса», выполняют важную роль в процессах адаптации и стресса.

На основании литературных данных и результатов собственных исследований мы рассматриваем основные пути реализации ответа на стрессорный агент в виде схемы представленной на рисунке 3. Из данной схемы видно, что с повышением функциональной активности гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системы, являющейся своего рода пусковым механизмом для сложной перестройки организма при развитии стрессового состояния, дополнительно включается антиноци-цептивная система мозга, которая посредством эндогенных опиоидных пептидов участвует в процессах адаптации.

Что касается практической реализации полученных нами данных, в частности разработанного способа профилактики транспортного стресса у крупного рогатого скота (решение Ростпатента РФ № 2011132705/10 о выдаче патента), то мы полагаем, что он найдет практическое применение. Особенно при современном ведении животноводства, характеризующегося концентрацией животных, промышленными методами производства продукции, транспортировками импортного скота на длительное расстояние и другими технологическими мероприятиями.

Список использованных источников

1 Анохин П.К. Узловые вопросы теории функциональных систем. - М.: Наука, 1980. - 197с.

2 Джой М.Л., Лебедев В.П., Гати Д. Плотность тока и пути его распространения в мозге кролика при транскраниальной электростимуляции: изучение с помощью ядерномаг-нитнорезонансной томографии // Транскраниальная электростимуляция. Экспериментально-клинические исследования: сб. статей. - Т.1. - СПб., 2005. - С.138-148.

3 Павлов И.П. Двадцатилетний опыт объективного изучения высшей нервной деятельности (поведения) животных // Полное собр. соч., Т.3-М.-Л.: Изд-во АН СССР,1949. - 605 с.

4 Selye H.A. A syndrome by diverse nocuous agents / H.A. Selye // Nature, 1936.-138. - С.32.

5 Селье Г. Концепция стресса как мы ее представляем в 1976 г. // Новое о гормонах и механизме их действия.- Киев: Наукова думка, 1977. - С. 27-51.

Информация об авторах

Сеин Олег Борисович, доктор биологических наук, профессор кафедры терапии и акушерства ФГБОУ ВПО «Курская ГСХА», тел.(4712)53-14-04, e-mail: academy@kgsha.ru

Сеин Дмитрий Олегович, кандидат биологических наук.

Лещуков Константин Александрович, кандидат биологических наук, доцент кафедры технологии мяса и мясных продуктов Орловского ГАУ.

Соловьева Марина Александровна, аспирант ФГБОУ ВПО «Курская ГСХА».