СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИЗОБРАЖЕНИЙ СРЕЗА ТКАНИ

1. Способ различения зон в серии из N первичных цифровых изображений, где N является целым числом >1, тем самым создавая новое изображение, причем указанный способ включает этапы:
n+1
n
a) получения серии из N первичных цифровых изображений (221), содержащих неопределенные маркерные зоны, причем изображение I содержит, по меньшей мере, такое же количество неопределенных маркерных зон, как и первичное цифровое изображение I при 2≤n≤N, где n - целое число;
n
b) оценивания (211, 222, 310) каждого первичного цифрового изображения I для 1≤n≤N согласно заданным критериям выбора и определения маркерных зон изображения как неопределенных маркерных зон, удовлетворяющих заданным критериям выбора, и сохранения информации (311) о любой такой маркерной зоне изображения в полученном в результате соответствующем вторичном цифровом изображении или в связи с/в соответствии с ним, тем самым получая серию из N вторичных цифровых изображений;
new
c) получения (223) нового изображения I;
new
n
n-1
new
d) для каждого n при 2≤n≤N серии вторичных цифровых изображений, полученных при выполнения этапа b), введения маркерных зон нового изображения в новое изображение I, причем указанные маркерные зоны нового изображения имеют такую же форму и местоположение, как и маркерные зоны изображения, присутствующие в изображении I, но не в изображении I, и указанные маркерные зоны нового изображения могут быть идентифицированы в I по характерному признаку;
new
1
new
e) введения (212, 224) маркерных зон нового изображения в новое изображение I, причем указанные маркерные зоны нового изображения имеют такую же форму и местоположение, как и маркерные зоны изображения, присутствующие в изображении I, и указанные маркерные зоны изображения могут быть идентифицированы в I по характерному признаку.
new
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что этап получения нового изображения I включает получение изображения образца ткани.
new
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что новое изображение I является копией одного из изображений в указанной серии изображений.
4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанный характерный признак на этапах d) и е) представляет собой признак, который имеет характерное значение для каждого n при 1<n<N.
5. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанный характерный признак представляет собой преобладающий цвет, и указанное характерное значение представляет собой конкретный цвет, ассоциированный с определенным клеточным маркером.
6. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что заданные критерии выбора включают порог для визуального свойства неопределенной маркерной области.
7. Способ визуализации популяций клеток в гистологическом срезе ткани, причем указанный способ включает этапы:
a) получения (811) среза ткани, который подготовлен для молекулярного окрашивания ранее известным способом;
b) получения (812) серии из K определенных молекулярных средств обнаружения для обеспечения специфического связывания с элементами заданных серий из K клеточных маркеров, которые могут присутствовать в срезе ткани по этапу а), и их обнаружения, причем указанные определенные молекулярные средства обнаружения способны вызывать формирование инициируемой и выявляемой ответной реакции, причем K - целое число >2;
c) для каждого определенного молекулярного средства обнаружения k=1, 2, …, K по этапу b) выполнения следующей последовательности операций:
1) приведение указанного среза ткани по этапу а) в соприкосновение (813) с указанным определенным молекулярным средством обнаружения с обеспечением в результате специфического связывания с определенным элементом указанной заданной серии клеточных маркеров;
2) промывание (814) указанного среза ткани для того, чтобы удалить молекулярные средства обнаружения, которые не связаны ни с каким клеточным маркером;
3) инициирование ответной реакции (815) от молекулярных средств обнаружения, которые могут быть связаны с клеточными маркерами среза ткани, тем самым позволяя выявить указанные молекулярные средства обнаружения; и
k
4) когда могут быть выявлены указанные молекулярные средства обнаружения, осуществление сканирования/визуализации (817) среза ткани для того, чтобы создать первичное цифровое изображение I, которое может содержать одну или несколько неопределенных маркерных зон, ассоциированных с образованием выявляемого полимера;
k
при этом получение серии из K первичных цифровых изображений I при к=1, …, K, содержащих возрастающее количество неопределенных маркерных зон;
k
new
d) осуществления способа по п.1 на серии из K первичных цифровых изображений I при k=1, …, K, полученных при выполнении этапа с), тем самым создавая изображение I, визуализирующее указанные клеточные структуры.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанные молекулярные средства обнаружения представляют собой группу антител, предпочтительно моноклональных антител или фрагментов антител, при этом каждое антитело связывается с конкретным клеточным маркером, и при этом с каждым антителом конъюгирован фермент, причем указанный фермент обладает способностью вызывать образование выявляемого полимера в присутствии одного или нескольких подходящих субстратов,
при этом операции 1) и 2) этапа с) выполняют таким образом, что:
i) срез ткани по этапу а) вводят в соприкосновение с антителом, которое специфически связывается с определенным элементом указанной заданной серии клеточных маркеров; причем указанное антитело конъюгировано с ферментом, указанный фермент обладает способностью вызывать образование выявляемого полимера в присутствии одного или нескольких подходящих субстратов;
ii) после выполнения этапа i), описанного выше, промывают срез ткани для того, чтобы удалить несвязанные антитела; и
при этом операцию 3) этапа с) выполняют таким образом, что:
iii) после выполнения операции 2) воздействуют на срез ткани одним или несколькими подходящими для указанного фермента субстратами с образованием в результате выявляемых полимеров в случае присутствия в указанном срезе ткани указанного определенного элемента указанной заданной серии клеточных маркеров.
9. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанные молекулярные средства обнаружения представляют собой группу молекулярных комплексов, в которой каждый комплекс содержит первое антитело, предпочтительно моноклональное антитело, связывающееся с конкретным клеточным маркером, второе антитело или фрагмент антитела, предпочтительно моноклональное антитело, специфически связанное с указанным первым антителом, и фермент, конъюгированный с указанным вторым антителом, причем указанный фермент обладает способностью вызывать образование выявляемого полимера в присутствии одного или нескольких подходящих субстратов,
при этом операции 1) и 2) этапа с) выполняют таким образом, что:
i) срез ткани по этапу а) вводят в соприкосновение с первым антителом, специфически связывающимся с определенным элементом указанной определенной серии клеточных маркеров;
ii) после выполнения этапа i), описанного выше, промывают срез ткани для того, чтобы удалить несвязанные антитела;
iii) после выполнения этапа ii), описанного выше, вводят срез ткани в соприкосновение со вторым антителом, специфически связывающимся с указанным первым антителом, причем указанное второе антитело конъюгировано с ферментом, указанный фермент обладает способностью вызывать образование выявляемого полимера в присутствии одного или нескольких подходящих субстратов; и
iv) после выполнения этапа iii), описанного выше, промывают срез ткани для того, чтобы удалить несвязанные антитела; и
при этом операцию 3) этапа с) выполняют таким образом, что:
v) после выполнения операции 2) воздействуют на срез ткани одним или несколькими подходящими для указанного фермента субстратами с образованием в результате выявляемых полимеров в случае присутствия в указанном срезе ткани указанного определенного элемента указанной заданной серии клеточных маркеров.
10. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что указанный фермент выбирают из группы, состоящей из щелочной фосфатазы и пероксидазы, такой как пероксидаза хрена.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанный субстрат выбирают из группы, состоящей из 3,3′-диаминобензидина, Ferangi Blue, Vulcan Fast Red, аминоэтилкарбазола (АЕС) и Vina green.
12. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанные молекулярные средства обнаружения представляют собой группу молекулярных конъюгатов, содержащих распознающую часть, связанную с индикаторной частью, причем указанная распознающая часть обладает способностью специфически связываться с определенным элементом указанной заданной серии клеточных маркеров, указанную распознающую часть выбирают из группы, состоящей из антитела, такого как поликлональное антитело, моноклональное антитело и их фрагменты, и молекулы нуклеиновой кислоты, такой как молекула РНК и молекула ДНК, при этом указанная индикаторная часть представляет собой флуорохром, указанный флуорохром обладает способностью испускать излучение с определенной длиной волны после воздействия на него инициирующим излучением, отличающимся от указанного испускаемого излучения,
при этом операцию 3) этапа с) выполняют таким образом, что срез ткани и любое молекулярное средство обнаружения, которое с ним связано, подвергают действию инициирующего излучения, что вызывает испускание излучения с определенной длиной волны при наличии в указанном срезе ткани указанного определенного элемента указанной заданной серии клеточных маркеров; и
при этом выполняют операцию 4) этапа с) тогда, когда испускается указанное излучение с определенной длиной волны.
13. Способ по любому из пп.8, 9 или 12, отличающийся тем, что субстрат, из которого образуются по меньшей мере частично растворимые полимеры, такие как Vina green или аминоэтилкарбазол (АЕС), применяют в качестве субстрата для получения выявляемого полимера, причем способ дополнительно включает этапы:
e) промывания указанного среза ткани для того, чтобы удалить указанный выявляемый полимер; и
f) повторения этапов b-d с новой серией молекулярных средств обнаружения.
14. Способ визуализации трехмерного распределения нескольких популяций клеток и клеточных структур в пределах одного и того же трехмерного пространства в образце для гистологического исследования, включающий этапы:
iv) получения образца ткани и разрезание указанного образца на ряд первоначально наложенных друг на друга срезов ткани ранее известным способом;
v) осуществления способа по любому из пп.7-13 для всех срезов ткани, полученных при выполнении этапа i); и
vi) наложения друг на друга изображений, полученных при выполнении этапа ii), согласно известным принципам, тем самым получая трехмерное визуальное отображение трехмерного распределения нескольких клеточных популяций и клеточных структур в пределах одного и того же трехмерного пространства в образце для гистологического исследования.