Генотипирование первотёлок по локусу гена жирномолочности (DGAT) и их молочная продуктивность

параметров при нагрузках адреналином служат объективными критериями оценки функциональных возможностей механизма срочной адаптации, АЕС, систем кровообращения, дыхания, обмена веществ, поддержания температуры тела у лошадей разного возраста.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М: Высшая школа, 1990. - 212 с. 2. Лысов, В.Ф. Принцип функциональной взаимосвязи и взаимозависимости серотонин-, гистамин- и адренергической систем у животных в онтогенезе/ В.Ф. Лысов, В.А. Гудин, С.В. Гудин // Сельскохозяйственная биология. - 2006. -№ 6. - С. 3-14. 3. Уша, Б.В. Клиническая диагностика внутренних незаразных болезней./ Б.В.Уша, И.М.Беляков, Р.П. Пушкарев. - М: Колос С, 2004. - 362 с.

РЕАКЦИЯ МЕХАНИЗМА СРОЧНОЙ АДАПТАЦИИ У ЛОШАДЕЙ РАЗНОГО ВОЗРАСТА НА НАГРУЗКУ АДРЕНАЛИНОМ

Гудин В. А., Папаев Р.М.

Резюме

У лошадей в постнатальном периоде в ответ на направленные сдвиги содержания адреналина наблюдаются закономерные, разные по характеру, степени и длительности реакции механизма срочной адаптации, характеризующиеся активацией АЕС, систем кровообращения, дыхания, обмена веществ, поддержания температуры тела.

REACTION MECHANISM URGENT ADAPTATION HORSES OF ALL AGES LOAD

ADRENALIN

Goodin, V.A., Papaev R.M.

Summary

Horses in the postnatal period in response to shifts towards the content of adrenaline observed patterns, different in nature, extent and duration of the reaction mechanism of urgent adaptation, characterized by activation of the AEC, circulatory, respiratory, metabolic, to maintain body temperature.

УДК 636. 082. 12 ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ПЕРВОТЁЛОК ПО ЛОКУСУ ГЕНА ЖИРНОМОЛОЧНОСТИ (DGAT) И ИХ МОЛОЧНАЯ ПРОДУКТИВНОСТЬ

Зиннатова Ф.Ф.**, Шакиров Ш.К.*, Алимов А.М.

ГНУ «Татарский Научно-исследовательский институт сельского хозяйства» Российской академии сельскохозяйственных наук , г.Казань* Казанская государственная академия ветеринарной медицины

Ключевые слова: генотипирование, молочная продуктивность,

жир молока, холмогорская «Татарстанская» порода.

Key words: genotyping, milk yield, milk fat, Kholmogors'ka "Tatarstan" breed.

В селекционной работе с молочными породами скота, а в данном случае холмогорской татарстанского типа, всё большее внимание стали уделять не только гену каппа-казеин, но и такому как диацетил-глицерин О-ацетил трансфераза (DGAT). Данный маркер обуславливает кодирование ключевого фермента для синтеза молочного жира. Содержание жира в молоке, также как и содержание в нём белка является важной технологической характеристикой этого продукта.

Ген DGAT был картирован на хромосоме 14 в геноме Bos taurus, как маркер влияющий на качество молока. Анализ последовательности нуклеотидов, позволили идентифицировать последовательность, как структурную область гена Диацил- глицерал-ацетил-трансферазы. Данный фермент вовлечён в биосинтез липидов [4].

Известно, что неконсервативная замена К232А (лизина на аланин) в последовательности этого гена, снижает содержание жира в молоке коров. При этом аллель содержащий лизин в 232 положениях является наиболее желательным, поскольку коровы, несущие этот аллель гена DGAT (КК и КА), производят более жирное молоко, чем гомозиготные коровы с генотипом АА, содержащий аллель, где в 232 положении располагается аланин [5 ].

Таким образом, генетический полиморфизм молочного жира хорошо изучен учёными селекционерами. И благодаря современным методам генетических исследований можно идентифицировать аллельные варианты гена жирномолочности.

С учетом вышеизложенного, целью нашей работы явилось проведение исследований по изучению полиморфизма и определению частоты встречаемости аллельных вариантов по гену DGAT, и корреляция его генотипов с молочной продуктивностью и качественным составом молока.

Материалы и методы. Исследования проводились на образцах ДНК полученных из крови 103 первотелок холмогорской породы татарстанского типа, с целью внедрения их в племенное ядро СХПК им. Ленина Атнинского района. ДНК выделяли из лейкоцитов крови в количестве 100 мкл с использованием набора реагентов «ДНК-сорб-В» (фирма ООО «ИнтерЛабСервис») согласно методике, представленной изготовителем. В предварительных опытах была разработана программа проведения ПЦР, с некоторыми изменениями температурных и временных режимов реакции, что обеспечило оптимальную амплификацию участков гена DGAT. Фрагменты ДНК амплифицировали на программируемом термоциклере MyCycler (Bio-Rad, США) в

следующем режиме:

1) «горячий старт»- 3 мин при 950С;

2) 35 циклов: денатурация- 30 сек при 950С , отжиг- 1 мин при 49 0С, синтез- 40 сек при 72 0С ;

3) достройка - 5 мин при 720С;

Составленная реакционная смесь для проведения амплификации генов обьемом 20 мкл, содержащая: 10хTag буфер , 10 мМ dNTPs (смесь нуклеотидов), 25 мM MgCl2 , смесь праймеров (50 пМ/мкл каждого), Tag ДНК полимераза (5 ед./мкл), 100 нг геномной ДНК.

Для амплификации фрагмента локуса гена DGAT использовали праймеры: DGAT1 (GCACCATCCTCTTCCTCAAG) и DGAT2

(GGAAGCGCTTTCGGAT G).

После амплификации полученный фрагмент ДНК был подвергнут расщеплению с помощью эндонклеазы рестрикции AcoI, (СибЭнзим (Россия)). Гидролиз проводили на программируемом термоциклере в соответствии с рекомендациями изготовителя, в следующем режиме: инкубация 4 цикла: при 37 0С, 30 мин.; инактивация 1 цикл: при 65 0С , 20 сек.

Визуализация фрагментов, осуществлялась электрофоретическим разделением продуктов рестрикции в 2% геле агарозы, в присутствии 5 мкл 10% бромистого этидия, далее фиксировали и документировали с помощью системы GelDoc (Bio-Rad, США).

Результаты и обсуждения. При амплификации ДНК лейкоцитов крови коров с парой праймеров DGAT1 и DGAT2, были получены специфические фрагменты гена жирномолочности длиной 411 п.н (пар нуклеотидов) (рис.1). После последующего анализа ПДРФ продуктов амплификации распределение животных было следующим: 41,7%

первотёлок имели генотип АА, 51,4%- АК и только 6,7% имели желательный генотип КК. Следовательно, среди исследованных животных были обнаружены три генотипа с преобладанием животных гетерозиготных по данному гену

1. Корреляция генотипов гена БОЛТ с молочной продуктивностью и качественным составом молока

Г енотип Количество животных Удой за 100 дн лактации Выход

молочного белка, кг молочного жира, кг

голов %

АА 43 41,7 2338,3± 40,1 72,4±1,18 89,5±1,53

АК 53 51,4 2273,6± 52,2 70,0±2,08 86,8±2,02

КК 7 6,7 2202,8±98,7 69,1±7,04 90,3±4,91

КК к АА -155,5 -3,3 +0,8

КК к АК -90,8 -0,9

Таким образом для повышения жирномолочности молока следует поддерживать в стаде необходимое количество животных , несущих в своем геноме аллель К гена БОЛТ, путем целенаправленного скрещивания коров с желательными генотипами КК и АК с быками- производителями несущих в своем геноме аллель К.

1. Электрофореграмма результата амплификации геномной ДНК коровы с парой праймеров БОЛТ 1 и БОЛТ2

1 - -маркер для проведения электрофоретического анализа

(400,850, 1000,1500 п.н.) Fast Ruler (Helikon);

2- Ампликон гена DGAT, соответствующий 411 п.н.

2. Электрофореграмма результатов анализа полиморфизма гена DGAT 13 исследуемых образцов

1 -маркер для проведения электрофоретического анализа (100,400,850, 1000,1500 п.н.) Fast Ruler (Helikon);

2-8- генотипы АК фрагменты которых соответствуют 203-208 п.н,

411 п.н

ЛИТЕРАТУРА: 1. Калашникова, Л.А. ДНК-технологии оценки сельскохозяйственных животных/ Л.А. Калашникова, И.М. Дунин, В.И. Глазко [и др]. -М.: ВНИИплем, Лесные поляны.-1999.- 148 с. 2. Моисеева, И.Г. Генофонды сельскохозяйственных животных/ И.Г. Моисеева, С.В. Уханов, Ю.А. Столповский, Г.Е. Сулимова, С.Н. Каштанов. -М.: Наука, 2006. -467с. 3. Gravert H.O. Genomanalyse und Michgualitat // Schriftenr. D. Agrarwiss. Fakultat der Univ. Kiel. - 1990. - B.72. - S. 147-154. 4. Locarte G.A., Machado M.A., Martinez M.L. et. All DGAT1 K 232A polymorphism in Brazilian cattle breeds // Genetics and Molecular Research.- 5(3)- 2006.- P. 475482. 5. Thalle, G., W. Kramer, A. Winter. B. Kaupe, G. Erhardt, and R. Fries. 2003. Effects of DGAT1 variants on milk production traits in German cattle breeds. J. Dairy Sci 81:1911-1918.

ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ПЕРВОЛЁЛОК ПО ЛОКУСУ ГЕНА ЖИРНОМОЛОЧНОСТИ (DGAT) И ИХ МОЛОЧНАЯ ПРОДУКТИВНОСТЬ

Зиннатова Ф.Ф., Шакиров Ш.К., Алимов А.М.

Резюме

Определены частоты аллелей и генотипов по локусу гена DGAT используя ПЦР- ПДРФ анализ у коров холмогорской породы татарстанского типа. Установлена корреляция генатипами гена DGAT с молочной продуктивностью и качественным составом молока.

FRESH COWS'GENOTYPING AT BUTTERFATNESS GENE LOCUS (DGAT) AND

THEIR MILK PRODUCTIVITY

Zinnatova F.F., Shakirov Sh.K., Alimov A.M.

Summary

Allele and genotypes frequency at gene locus DGAT using PCR-PDRF analysis in Tatarstan type cows of Kholmogorskaya breed was defined. Correlation of gene's genotype DGAT with milk productivity and qualitative milk content was established.

УДК:591.1:636.4

ИНТЕНСИВНОСТЬ ВОЗРАСТНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ СИСТЕМЫ АЦЕТИЛХОЛИН-АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗА В ЖЕЛУДКЕ У ПОРОСЯТ В РАННЕМ ПОСТНАТАЛЬНОМ ПЕРИОДЕ

Игнатьев Н.Г, Мишина Д.П.

Чувашская государственная сельскохозяйственная академия

Ключевые слова: ацетилхолин-ацетилхолинэстераза, поросята, кардиальная и фундальная часть желудка.

Key words: acetylcholine-acetylcholinesterase, pigs, cardiac and fundus of the stomach.

Дальнейшее и более углубленное изучение закономерностей становления системы ацетилхолин- ацетилхолинэстераза в органах пищеварения требует внедрение в практику профилактики и лечения болезней органов пищеварения у животных новых лекарственных препаратов, основанных на действие ацетилхолина и фермента, гидролизирующего его. Без определения функционального состояния изучаемой системы в органах пищеварения невозможно правильно назначать новые холиномиметические, холинолитические,

антихолинэстеразные препараты и эффективно, разумно их использовать. В связи с этим проведение новых исследований по определению функциональной активности этой системы, выяснение закономерностей ее формирования в органах пищеварения становится весьма актуальным и необходимым.

В научной литературе имеется обширный материал о благоприятном влиянии межпородного скрещивания по продуктивным качествам молодняка сельскохозяйственных животных первого поколения за счет эффекта гетерозиса. Вместе с тем в опубликованных работах