Антиагрегантная и антитромботическая активности нового P2Y1-антагониста — соединения Sbt-119 ex и in vivo

ОРИГИНАЛЬНЫЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ

УДК 615.015

АНТИАГРЕГАНТНАЯ И АНТИТРОМБОТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТИ НОВОГО P2Y1 -АНТАГОНИСТА — СОЕДИНЕНИЯ Sbt-119 EX И IN VIVO

Т. М. Митина, Д. С. Яковлев, А. А. Спасов, К. Ф. Суздалев

Кафедра фармакологии ВолгГМУ

На экспериментальных моделях исследовались антиагрегантная и антитромботическая активности вещества класса производных индола — Sbt-119 с P2Y1-антагонистическими свойствами. Было установлено, что соединение по степени блокирования агрегации тромбоцитов и времени тромбообразования превосходит препарат сравнения «Тик-лопидин» (р < 0,05).

Ключевые слова: P2Y1-антагонист, индол, антиагрегантная активность, антитромботическая активность, тиклопидин, клопидогрель.

ANTIAGGREGANT AND ANTITHROMBOTIC ACTIVITY OF NEW SUBSTANCE P2Y1-ANTOGANISTS - SBT-119 EXAND IN VIVO

T. M. Mitina, D. S. Yakovlev, A. A. Spasov, K. Ph. Suzdalev

We investigated antiaggregant and antithrombotic activities of indole derivatives Sbt-119 with P2Y1-antagonistic properties on experimental models. It has been established that this substance surpasses the drug of comparison, Ticlopidin (p < 0, 05) as to the extent of antiaggregant effect and thrombogenesis time.

Key words: P2Y1-antagonist, indole, antiaggregant activity, antithrombotic activity, ticlopidin, dopidogrel.

Применение антиагрегантных средств при поражении сердечно-сосудистой системы, нарушении мозгового кровообращения, осложнениях при атеросклеротическом поражении периферических сосудов обусловлено возможностью возникновения повышения функциональной активности тромбоцитов, что, в свою очередь, увеличивает риск развития тромбогенных осложнений, требующих постоянного контроля и профилактической коррекции [1,9].

В клинической практике наиболее широкое применение нашли антиагрегантные препараты, такие как ацетилсалициловая кислота, подавляющая циклооксигеназный путь агрегации тромбоцитов, и блокаторы P2Y12-рецепторов—тиклопидин, клопидогрель, прасугрель, тикангрелор, кангрелор, элиногрель [4, 7]. Несмотря на различные механизмы реализации своего основного действия, точкой приложения для данных лекарственных средств является стадия необратимой агрегации. Кроме того, эти препараты обладают рядом недостатков — развитием резистентности при длительных курсах лечения, поздним наступлением основного терапевтического эффекта, повышением риска кровотечений различного ге-неза, нейтропенией, тромбоцитопенией, аллергическими

реакциями и другими [7]. В то же время имеется множество научных публикаций о новой перспективной мишени для создания антиагрегантных и антитромбоцитарных средств—P2Y1-рецепторов. Именно блокирование данного подтипа пуриновых рецепторов на мембране тромбоцитов предотвращает активацию и последующую агрегацию тромбоцитов на начальной стадии, когда процесс обратим [4, 6, 7]. Это объясняет актуальность выявления и изучения свойств новых соединений с пу-ринергической антагонистической активностью как потенциальных корректоров функциональной активности тромбоцитов при нарушениях гемостаза. В ранее проведенных экспериментальных работах по исследованию активностей веществ было установлено, что соединение класса индолов Sbt-119 подавляет Р2^-опос-редованные процессы АДФ-индуцированной активации и агрегации тромбоцитов in vitro.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Изучение антиагрегантной активности Sbt-119 на моделях АДФ-, адреналин- и коллаген-индуцированной агрегации ex vivo и эффекта при экспериментальном

Выпуск 4 (40). 2011

19

артериальном тромбозе, индуцированном хлоридом железа (III) in vivo.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Антиагрегантную активность веществ исследовали по методу G. Born (1962) [8] в модификации В. А. Габбасова (1989) [2] на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов «Биола» 220 LA (Россия) [5]. Забор образцов крови крыс из брюшной аорты проводили через два часа после перорального введения веществ. Соединение Sbt-119 и препараты сравнения «Клопидогрель» («Sanofi-syntelabo», Франция) и «Тиклопидин» («Sanofi-syntelabo», Франция) изучались в эквимолярных дозах, соответствующих средней терапевтической дозе тиклопидина,—6 мг/кг Обогащенную тромбоцитами плазму получали по методу В. А. Люсова и Ю. Б. Белоусова [3]. В качестве индукторов агрегации использовались АДФ («Sigma», Венгрия) в конечной концентрации 5 мкМ, адреналин («Ренам», Венгрия) — 10 мй№, коллаген («Ренам», Венгрия) — 50 мкг/мл. Уровень агрегации оценивался по значению степени агрегации, определяемой как максимальное приращение светопропускания после добавления индуктора.

Исследование антитромботической активности соединений проводили на модели артериального тромбоза у крыс, вызванного поверхностной аппликацией наружной сонной артерии 50%-го раствора хлорида железа (III) [10]. Дозы веществ соответствовали дозам изучения антиагрегантной активности. Моделирование артериального тромбоза осуществляли спустя 2 часа после перорального введения соединений.

Данные регистрировались с помощью ультразвукового компьютеризованного допплерографа для исследования кровотока ММ-Д-К («Минимакс-допплер-К», г. Санкт-Петербург, ООО «СП Минимакс»). Об антитромботической активности судили по длительности развития 50, 90 и 95 % снижения кровотока.

Статистическая обработка проводилась с использованием критерия Краскела-Уолиса с постобработкой тестом Данна для множественных сравнений, а также нелинейного регрессионного анализа, реализованных в программе «Graph.Pad.Prism.5.0».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В ходе проведенного исследования по изучению антиагрегантной активности в условиях ex vivo было установлено, что соединение Sbt-119 на (-72,8 ± 8,27), (-84,6 ± 8,75) и (-99,7 ± 0,16) Д % подавляло агрегацию тромбоцитов по отношению к контролю при воздействии индукторов АДФ, адреналина и коллагена соответственно (р < 0,05). При АДФ-опосредованной агрегации опытное вещество по степени антиагрегантного действия статистически значимо в 18,2 раза превосходило препарат сравнения «Тиклопидин». На моделях адреналин- и коллаген-индуцированной агрегации Sbt-119 по антиагрегантной активности незначительно превосходило тиклопидин. Ана-

лиз данных о влиянии на агрегацию тромбоцитов исследуемого соединения и клопидогреля показал, что при действии всех трех индукторов Sbt-119 по способности подавлять агрегацию не уступает последнему (табл. 1).

Следующий этап исследования заключался в изучении антитромботической активности Sbt-119 и препаратов сравнения. Результаты экспериментов показали, что опытное вещество по способности подавления тромбообразования превосходит тиклопидин и соответствует клопидогрелю (рис.).

Таблица 1

Антиагрегантная активность соединения Sbt-119, тиклопидина и клопидогреля на моделях АДФ-, адреналин- и коллаген-индуцированной агрегации тромбоцитов крыс

Вещество Индуктор агрегации

АДФ | адреналин | коллаген

изменения агрегации тромбоцитов, Д %*

Sbt-119 -72,80 ± 8 27** о -84,60 ± 8,75** -99,70 ± 0,16**

Тиклопидин 4,00 ± 18,86 -81,90 ± 11,45** -99,10 ± 1,05**

Клопидогрель -84,10 ± 7,06** -99,00 ± 1,07** -97,10 ± 2,92**

* Изменения по отношению к группе контроля; ** данные достоверны к контролю (р < 0,05);

и препаратов сравнения на скорость кровотока в наружной сонной артерии крыс в условиях экспериментального тромбоза, индуцированного хлоридом железа

В контрольной группе животных снижение кровотока на 50 % было отмечено через (13,9 ± 1,1) минут с момента начала воздействия на сосуд хлорида железа (III). На (21,3 ± 1,6) минуте после повреждения эндотелиальной стенки наружной сонной артерии кровоток снизился на 90 %. Время наступления 95 % окклюзии в контрольной группе составило (23,8 ± 2,2) минут.

Препараты сравнения — «Тиклопидин» и «Клопидогрель» — на модели артериального тромбоза, инду-

20

Выпуск 4 (40). 2011

цированного хлоридом железа (III), в 1,5 и 1,8 раза относительно интактной группы удлиняли время тромбообразования в точке 50%-го снижения кровотока (р < 0,05). По показателям 90 и 95 % окклюзии тиклопи-дин достоверно превосходил контрольный показатель в 1,8 раз, клопидогрель — в 2,0—2,1 раза.

В опытной группе крыс, получавших SBT-119, скорость кровотока достоверно превосходила показатели контроля в 1,9—2,3 раза. При этом по степени антитромбогенного действия в точках 90 и 95 % падения кровотока данное вещество незначительно превосходило клопидогрель. В то же время по отношению ко второму препарату сравнения «Тиклопидину» Sbt-119 по этим же показателям продемонстрировал выраженный антитромботический эффект, удлиняя время наступления окклюзии в 1,2 раза (р < 0,05) (табл. 2).

Таблица 2

Влияние соединения SBT-119 и препаратов сравнения на время тромбообразован ия у крыс на модели артериального тромбоза, индуцированного хлоридом железа

Вещество Время снижения кровотока на 50 % Время снижения кровотока на 90 % Время снижения кровотока на 95 %

Контроль 13,9 ± 1,1 21,3 ± 1,6 23,8 ± 2,2

Sbt-119 26,4 ± 2,8* 46,8 ± 2,7*° 53,7 ± 3,2*°

Тиклопидин 21,9 ± 2,8* 39,08 ± 2,40* 44,9 ± 3,4*

Клопидогрель 26,3 ± 1,9* 44,1 ± 2,2* 50,2 ± 3,1*

* Данные достоверны по отношению к контролю

(Р < 0,05);

° данные достоверны по отношению к тиклопидину (Р < 0,05).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, в результате проведенного исследования установлено, что соединение производное индола Sbt-119 проявляет выраженное антиагре-гантное действие, не только не уступающее, но и пре-

восходящее по некоторым показателям действие препараты сравнения «Тиклопидин» и «Клопидогрель». По степени антитромботического эффекта соединение Sbt-119 соответствует клопидогрелю. При этом в сравнении с тиклопидином опытное вещество достоверно увеличивает время достижения окклюзии в поврежденном сосуде на 7,8—8,8 %. Наличие антиаг-регантной и антитромботической активности у Sbt-119 свидетельствует о целесообразности дальнейшего более углубленного фармакологического изучения данного соединения.

ЛИТЕРАТУРА

1. Баркаган З. С. // Клинич. фармакология и терапия. — 2005. — № 3. — С. 51—53.

2. Габбасов З. А. и др. // Лаб. дело. — 1989. — № 10. — С. 15—18.

3. Люсов В. А. // Лаб. дело. — 1975. — № 8. — С. 463—468.

4. Зиганшин А. У., Зиганшина Л. Е. Р2-рецепторы: перспективная мишень для будущих лекарств. — М.: ГЭОТАР-Медиа. — 2009. — 133 с.

5. Спасов А. А., Кучерявенко А. Ф., Салазни-кова О. А. // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 2009. — № 5. — С. 31—34.

6. Baurand A. // Cardiovascular Drug Reviews. — 2003. — Vol. 21, № 1. — Р 67—76.

7. Besada P., Gao Zhan-Guo, Hechler B., et al. // Biochem

Pharmacol. — 2008. — Vol. 75, № 6. —

P 1341—1347.

8. Born G. R. // Nature. — 1962. — Vol. 194. — P 927—929.

9. Fitzgerald D. J. // Neurology. — 2001. — Vol. 57. — P 1—4.

10. Kurz K. D. // Thromb. Res. — 1990. — Vol. 15. — P 269—280.

Контактная информация

Спасов Александр Алексеевич — академик РАМН, з. д. н. РФ, д. м. н., профессор, зав. кафедрой фармакологии ВолгГМУ, e-mail: aspasov@mail.ru

Выпуск 4 (40). 2011

21