СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛИЧИНОК НЕМАТОД ПОДОТРЯДА ASCARIDATA
METHOD FOR LARVAL NEMATODE ASCARIDATA CULTURE

Изобретение относится к ветеринарии, а также медицине и может быть использовано в области профилактики гельминтозов животных и человека, а также в лабораторной диагностике для создания иммуноферментных тест-систем на основе антигена нематод подотряда ASCARIDATA, получаемого из личинок.
Кишечные гельминтозы являются самыми экономически значимыми (за исключением малярии) паразитозами человека, животных и птиц. Но до настоящего времени совершенствование их диагностики остается актуальной проблемой. Классические копроскопические методы диагностики кишечных гельминтозов обладают рядом неустранимых недостатков: зависимость от профессиональных качеств исследователя, низкая диагностическая эффективность при слабой степени инвазированности.
Очевидно, что наиболее перспективными методом диагностики является серологическая на основе иммуноферментного анализа (ИФА).
Однако для получения антигенов, необходимых для проведения многих серологических реакций возникает ряд методических трудностей. В частности для получения антигена из личинок представителей подотряда Ascaridata необходимо простимулировать выход личинок нематод из яйцевых оболочек с помощью смесей сложного состава, вдобавок обладающих низкой эффективностью.
Ближайшим аналогом для патентуемого метода является метод культивирования личинок Твердохлебова П.Т., при котором для разрушения яйцевых оболочек используется искусственный желудочный сок, состоящий из трипсина и соляной кислоты.
Существенным недостатком данного метода является низкая эффективность выхода личинок.
Целью изобретения является увеличение процента выхода личинок из яйцевых оболочек.
Способ осуществляется следующим образом: оплодотворенные яйца Ascaris suum инкубировали 24 часа при 27 С° в физиологическом растворе с добавлением 0,2% препарата ДП-2Т. Для этого 5 грамм данного препарата разводили в 1 л дистиллированной воды.
Затем яйца отмывали от препарата ДП-2Т, центирфугированием в течение 10 минут при 1000 об. / мин. и инкубировали в пенициллиновых флаконах с физиологическим раствором в объеме 2 мл в течение 30 суток.
Процесс инкубирования через каждые двое суток контролировали микроскопированием.
Через месяц инкубирования из приблизительно 20% оплодотворенных яиц в раствор вышли подвижные личинки (таблица 1).
В контроле выхода личинок из яиц не наблюдалось.
При использовании искусственного желудочного сока процент выходящих из яйцевых оболочек личинок в нашем опыте был гораздо ниже (менее 5%).
Аналогичные результаты были получены на других тестовых организмах из подотряда Ascaridata.
При обработке ДП-2Т в той же концентрации в течение часа аналогичные результаты получены с использованием Arcadia galli (Таблица 2) и Ascaris lumbricoides (Таблица 3) в качестве тестовых объектов для воздействия на них ДП-2Т.
Таблица 1
Результаты изучения выхода личинок Ascaris suum из яйцевых оболочек
№
Процент вышедших личинок Ascaris suum (%)
пробы
Под влиянием ДП-2Т
Под влиянием желудочного сока (контроль)
1.
15
0
2.
18
1
3.
20
4
4.
23
0
5.
20
3
6.
19
2
Таблица 2
Результаты изучения выхода личинок Arcadia galli из яйцевых оболочек
№
Процент вышедших личинок Ascaris suum (%)
пробы
Под влиянием ДП-2Т
Под влиянием желудочного сока (контроль)
1.
20
0
2.
25
1
3.
16
4
4.
18
0
5.
19
3
6.
20
2
Таблица 3
Результаты изучения выхода личинок Ascaris lumbricoides из яйцевых оболочек
№
Процент вышедших личинок Ascaris suum (%)
пробы
Под влиянием ДП-2Т
Под влиянием желудочного сока (контроль)
1.
20
0
2.
25
1
3.
26
4
4.
14
0
5.
13
3
6.
18
2
Таким образом, патентуемый способ культивирования личинок можно использовать для получения личинок нематод различных представителей подотряда аскарид.
Литература
1) Сергиев В.П., Лобзин Ю.В. и др. Паразитарные болезни человека (протозоозы и гельминтозы). - СПб., «Фолиант», 2006. - С.2 - 444.
2) Сорокина Т.С. История Медицины. - М.: «Из. Центр «Академия». - 2006. - С.62-81.
3) Сафиуллин Р.Т. Сравнительная эффективность копроскопических методов диагностики гельминтозов свиней и их усовершенствование на основе стандартизации. / Р.Т. Сафиуллин // Тр. ВИГИСа. - 2001. - Т.37. - С.149-159.
4) Долбин Д.А., Лутфуллин М.X., Латыпов Д.Г. Сравнительная эффективность различных гельминтоовоскопических методов для диагностики неоаскаридоза телят. // Тр. ВИГИС. - Т.41. - М. - 2005. - С.2005. - С.154-160.
5) Долбин Д.А., Агафонова Е.В., Смирнова Л.Р., Хазиева С.М. Пути улучшения качества лабораторной диагностики гельминтозов. // Казмед ж. - 2007. - Т. LXXXVIII. - №4. - С.398-402.