Динамика адениловых нуклеотидов в раннем периоде инфаркта миокарда и при его коррекции клеточной трансплантацией

У больных ГБ пожилого возраста лечение различными физическими факторами существенно изменяло МЦ, о чем свидетельствует динамика конъюнктивальных индексов. Если принять величину КИ в группе больных, получающих физиотерапию до лечения за 100,0%, то после его снижение соответствовало 64,9% (р<0,02). Динамика КИ1, соответственно, 100,0% и 36,4% (р>0,05); КИ2 - 100,0% и 73,6% (р<0,05); КИ3 -100,0% и 53,9% (р<0,05). Улучшение МЦ у пожилых больных ГБ происходило за счет нормализации таких нарушений МЦ, как периваскулярный отек, микрогеморрагии, неравномерность калибра венул, снижение артериоло-венулярных соотношений, обнаружение зон запустевания капилляров. Уменьшились в процессе физиотерапии и внутрисосудистые нарушения МЦ. Анализ изменений продолжительности спастической реакции кожных сосудов на адреналин при лечении физическими факторами показал, что магнитотерапия оказывала положительное влияние на АРС. Случаев

ухудшения АРС в виде нарастания сосудистой гиперреактивности обнаружено не было. Во 2-ой группе изменения показателей конечного кровотока и АРС оказались в ходе лечения статистически незначимы.

У больных ГБ к концу курсового лечения магнито-терапией зафиксирована положительная корреляционная связь между динамикой показателя ЭЗВД и изменениями КЧ (г=+0,633; р<0,01), а также обратная зависимость с КИ (-0,532; р<0,05) и Р (-0,478; р<0,05).

Таким образом, результаты исследования свидетельствуют о морфо-функциональной структурной перестройке микрососудов у больных ГБ в пожилом возрасте, сопровождающейся нарушением эндотелий зависимой вазодилатации. Комплексная магнитотерапия оказывает позитивное влияние на микроциркуляцию и адренергическую сосудистую реактивность, способствует нормализации чувствительности эндотелиальных клеток артерий к напряжению сдвига, т.е. способности к вазодилатации.

ЛИТЕРАТУРА

1. Абрамович С.Г., Федотченко А.А. Способ определения адренергической реактивности сосудов // Патент РФ на изобретение № 2164689 от 27.03.2001 г.

2. Баталова А.А. Ремоделирование звеньев микроцирку-ляторного русла у больных гипертонической болезнью в сочетании с атеросклерозом: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. — Пермь, 2007. — 20 с.

3. Иванова О.В., Балахонова Т.В., Соболева Т.Н. и др. Состояние эндотелий-зависимой вазодилатации у больных гипертонической болезнью, оцениваемое с помощью ультразвука высокогоразрешения у больных гипертонической болезнью // Кардиология. — 1997. — № 7. — С.41-46.

4. Иванова О.В., Рогоза А.Н., Балахонова Т.В. и др. Определение чувствительности плечевой артерии к напряжению сдвига на эндотелий, как метод оценки состояния эндотелий зависимой вазодилатации с помощью ультразвука высокого разрешения у больных с артериальной гипертонией // Кардиология. — 1998. — № 3. — С.37-41.

5. Маколкин В.И., Подзолков В.И., Павлов В.И. и др. Состояние микроциркуляции при гипертонической болезни // Кардиология. — 2002. — № 7. — С.36-40.

6. Маколкин В.И. Микроциркуляция и поражение органов—мишеней при артериальной гипертонии // Кардиология. — 2006. — № 2. — С.83-85.

7. Остроумова О.Д., Дубинская Р.Э. Дисфункция эндотелия при сердечно-сосудистых заболеваниях (по материалам 13 Европейской конференции по артериальной гипертонии) // Кардиология — 2005. — № 2. — С.59-62.

8. Протасов К.В. Клинико-патогенетические взаимосвя-

зи пульсового давления и прогрессирования артериальной гипертонии: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. — Иркутск, 2008. - 40 с.

9. Ротарь О.П. Ремоделирование сердца и функция эндотелия у больных с ожирением, артериальной гипертензией и синдромом обструктивного апноэ/гипопное во сне: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. — СПб., 2007.

— 19 с.

10. Соболева Т.Н. Функциональное состояние эндотелия коронарных и периферических артерий у больных ишемической болезнью сердца и гипертонической болезнью; медикаментозная коррекция выявленных нарушений: Автореф. дис. д-ра мед. наук. — М., 2008. — 40 с.

11. Celermajer D.S., Sorensen K.E., Cooh V.M., et al. Non-in-vasive detection of endothelial dysfunction in children and adults at risk of atherosclerosis // Lancet. — 1992. — Vol. 340. — P.1111-1115.

12. Erbs S., Gielen S., Linke A., et al. Improvement of peripheral endothelial function by acute vitamin C application: different effects in patients with coronary artery disease, and dilated cardiomyopathy // Am. Heart J. — 2003. — Vol. 146, № 2. — P.280-285.

13. Julius S. Effect of sympathetic over activity on cardiovascular prognosis in hypertension // Eur. Heart J. — 1998. — Vol.19 (Suppl.F). — P.14-18.

14. Tousoulis D., Antoniades C., Bosinakou E., et al. Effects of atorvastatin on reactive hyperemia and inflammatory process in patients with congestive heart failure // Atherosclerosis. — 2005. — Vol. 178, № 2. — P.359-363.

15. Watts K, Beye P., Siataricas A., et al. Exercise training normalizes vascular dysfunction and improves central adiposity in obese adolescents // J. Am. Coll. Cardiol. — 2004. — Vol. 43, № 10. — P.1823-1827.

Адрес для переписки:

Россия, 664005, г. Иркутск, ул. 2-ая Железнодорожная, 4, курорт «Ангара», корпус №1. тел. служ. - (3952) 39-87-92, Абрамович Станислав Григорьевич — зав. кафедрой физиотерапии и курортологии ИгИуВ, доктор медицинских наук, профессор.

© КЛИНОВА С.Н., БОГОРОДСКАЯ С.Л., КУРИЛЬСКАЯ Т.Е., ПИВОВАРОВ Ю.И., БАДУЕВ Б.К., ГУТНИК И.Н., РОХИН А.В., КУШНАРЕВ Д.Ф. - 2009

ДИНАМИКА АДЕНИЛОВЫХ НУКЛЕОТИДОВ В РАННЕМ ПЕРИОДЕ ИНФАРКТА МИОКАРДА И ПРИ ЕГО КОРРЕКЦИИ КЛЕТОЧНОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИЕЙ

С.Н. Клинова1, С.Л. Богородская1, Т.Е. Курильская1, Ю.И. Пивоваров1, Б.К. Бадуев1, И.Н. Гутник2,

А.В. Рохин2, Д. Ф. Кушнарев2

^Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии Сибирского отделения РАМН, Иркутск; директор

— д.м.н., проф., член-корр. РАМН Е.Г. Григорьев; 2Иркутский государственный университет, ректор — д.х.н., проф. А.И. Смирнов, кафедра аналитической химии, зав. — д.х.н., проф. Д.Ф. Кушнарев)

Резюме. Целью работы являлась оценка воздействия ксеногенного клеточного трансплантата на энергетический метаболизм в поврежденном сердце. Проведенное ЯМР-спектроскопическое исследование сердечной ткани позволило

установить, что у животных с трансплантацией восстановление процессов энергообеспечения кардиомиоцитов наступало в более ранние сроки, чем у животных без трансплантации. Это явление не было связано с активацией иммунных реакций. Понижение процентного содержания макроэргов у животных с трансплантацией к концу первых суток, возможно, связано с более ранним включением механизмов внутриклеточной адаптации, в том числе с синтезом БТШ.

Ключевые слова: клеточная трансплантация, повреждение сердца, энергетический обмен.

DYNAMICS OF ADENYLIC NUCLEOTIDES IN THE EARLY PERIOD OF A MYOCARDIAL INFARCTION AND IN ITS CORRECTION BY CELLULAR TRANSPLANTATION

S.N. Klinova1, S.L. Bogorodskya1, T.E. Kurilskaya1, Y.I. Pivovarov1, B.K. Baduev1, I.N. Gootnik2, A.V. Rokhin2,

D.Ph. Kushnarev2

^Scientific Centre of Reconstructive and Restorative Surgery SB RAMS; 2Irkutsk State University)

Summary. The aim of present work was evaluation of influence of xenogenic cellular transplant on energy metabolism in damaged heart. NMR-spectroscopic research of cardiac tissue that was carried out allowed to establish that in animals with transplantation restoration of processes of cardiac hystiocytes energy supply had earlier terms than in animals without transplantation. That wasn’t connected with activation of immune reactions. Reduction of percentage of energy substrates in animals with transplantation by the end of the first day is probably connected with earlier inclusion of mechanisms of intracellular adaptation, including synthesis HSP.

Key words: cellular transplantation, heart damage, energy.

Среди разрабатываемых и используемых методов лечения острого инфаркта миокарда все большее внимание уделяется методам клеточной трансплантации. Показано корректирующее действие клеточных препаратов на липидный обмен [1], ферментативную активность [3]. Известно, что важнейшим этапом механизма альтерации кардиомиоцитов является расстройство энергоснабжения клеток миокарда, причем, нарушения могут развиваться на всех этапах процесса энергообеспечения: синтеза АТФ, транспорта энергии и ее использования [4]. Возможно, меньшее повреждение и более быстрое восстановление структурных и биохимических нарушений клеток и органов при клеточной трансплантации может быть связано с ее благоприятным влиянием на энергетический обмен.

Цель работы: изучить влияние клеточной трансплантации на динамику параметров энергетического обмена в поврежденном сердце.

Материалы и методы

Эксперимент проводили на самцах беспородных крыс, массой 250-300 г. Повреждение сердца моделировали путем однократного подкожного введения 0,1% раствора адреналина в дозе 0,2 мг/100 г массы тела. Первой (контрольной) группе животных сразу после адреналина вводили физиологический раствор (n=59). Второй (опытной) группе животных подкожно инъецировали суспензию кардиомиоцитов новорожденных кроликов в дозе 500 тыс. клеток в 0,5 мл физиологического раствора (n=63). В связи с тем, что трансплантация ксеногенных клеток сопровождается иммунологическими реакциями, которые могут привести к положительному эффекту, дополнительно была введена третья группа животных, в которой сразу после адреналина подкожно вводили сыворотку взрослого кролика из расчета 4 мкл сыворотки в 0,5 мл физиологического раствора (n=58). Забор сердец осуществляли через 1, 4, 8, 12, 16, 24 часов от начала эксперимента. За исходные значения принимали параметры, определяемые у здоровых животных (n=12). В гомогенезированной сердечной ткани определяли уровень АТФ, АДФ, АМФ, креатин-фосфата, неорганического фосфата методом ЯМР-спект-роскопии, с использованием ЯМР-спектрометра «Varian VXR — 500S». Энергетический заряд рассчитывали по формуле: (АТФ + 0,5 АДФ)/ (АТФ + АДФ + АМФ).

Статистическую обработку результатов проводили с применением программы Statistica for Windows 6.0 (StatSoft, USA, 1999). Для установления различий использовали непараметрический критерий Манна-Уитни. Различия считали значимыми при р < 0,05. Данные приведены в медианах.

Результаты и обсуждение

Как показали исследования, к первому часу эксперимента в миокарде крыс опытной и контрольной групп

наблюдалось значимое снижение процентного содержания АТФ по сравнению со здоровыми животными, что обусловлено усилением гидролиза АТФ вследствие действия адреналина на сердце. Более высокое значение креатинфосфата к первому часу эксперимента в опытной группе позволяло предположить, что транспорт энергии у животных с трансплантацией сохранен в большей степени, чем в контроле (табл. 1).

В группе с введением сыворотки процентное содержание в миокарде креатинфосфата, АДФ и энергетический заряд значимо выше, чем в контроле, что свидетельствует о менее выраженном расстройстве энергообеспечения кардиомиоцитов в результате ишемии. По сравнению с опытной группой, в группе с сывороткой доля АМФ меньше, энергетический заряд выше, что может быть обусловлено более высокой скоростью работы дыхательной цепи кардиомиоцитов, либо менее выраженным гидролизом АТФ.

К 4 часу эксперимента наблюдались значительные отличия исследуемых параметров миокарда крыс с трансплантацией клеток от параметров миокарда крыс двух контрольных групп: значимо возросла величина креатинфосфата, а также энергетический заряд в контрольных группах. Это может быть связано либо с активацией гликолитического синтеза АТФ и дополнительным образованием креатинфосфата как переносчика энергии к местам ее использования, либо с нарушением процессов утилизации энергии.

В период с четырех до шестнадцати часов в контрольной группе снижались процентное содержание АТФ, креатинфосфата, энергетический заряд, и соответственно, нарастали АМФ и неорганический фосфат. Возможно, в это время либо ингибировались процессы синтеза АТФ в условиях нарастающей гипоксии, либо восстанавливались процессы утилизации энергии, и возникал дисбаланс между потреблением и синтезом энергии. Минимальные значения АТФ и креатинфос-фата в контрольной группе были отмечены к 16 часам. Очевидно, в этот период в кардиомиоцитах происходит истощение энергетических резервов. К 24 часам в контрольной группе возрастали процентное содержание АТФ, креатинфосфата, энергетический заряд по сравнению с предыдущими значениями в этой группе, что может быть обусловлено активацией процессов син-

Показатели 31Р ЯМР-спектра сердечной ткани

Таблица 1

Группы животных Сроки забора материала

Исходно 1 час. 4 час. 8 час. 12 час. 16 час. 24 час.

Аденозинтрифосф юрная кислота

1.(А+физ. р-р) 8,30 11,20 4,40* 6,55 2,90* 7,50*

2.(А+клетки) 8,00* 6,10* 3,90 11,55 й е 5,35 й 4,80 е

3.(А+сыв) 8,90 11,30 3,80 5,60 1,60 16,75* е

Здоровые 11,50

Аденозиндифосфорная кислота

1.(А+физ. р-р) 12,65* 19,75* 10,20* 8,30 16,80 19,00

2.(А+клетки) 19,30* 8,90* й 16,10 й 28,00* й 15,80 й 18,70

3.(А+сыв) 19,30* 18,00 8,30 9,80 9,60 24,30*

Здоровые 18,45

Аденозинмонофосфорная кислота

1.(А+физ. р-р) 33,90 21,35* 39,40* 30,35* 26,50 24,00

2.(А+клетки) 26,80 е 22,20 й 31,00* й 21,85 й е 27,45 й 31,00*е

3.(А+сыв) 19,50* е 18,40 36,70 е 33,80 20,10 16,35

Здоровые 28,70

Креатинфосфат

1.(А+физ. р-р) 11,60 18,15* 6,20* 13,15* 4,96* 9,70*

2.(А+клетки) 16,10* 6,80 22,80* 18,50* 3,90 й 14,80* й

3.(А+сыв) 18,00* е 10,20* е 12,00* 12,10 4,80 5,25*

Здоровые 11,35

Неорганический фосфат

1.(А+физ. р-р) 30,45 29,95 32,80 36,15 46,70* 38,35

2.(А+клетки) 27,70 59,10 й 24,30* й 19,80* й 44,75 й 30,10*й

3.(А+сыв) 29,55 38,70* е 31,40 е 39,50 50,80 35,60

Здоровые 26,70

Энергетический заряд

1.(А+физ. р-р) 0,70* 0,50* 0,49* 0,73 0,15 0,39*

2.(А+клетки) 0,40 0,75 0,21 й 0,40* й 0,30 й 0,25* е

3.(А+сыв) 0,48* 0,52 0,17 е 0,47 0,27 0,64*е

Здоровые 0,50

Примечание: * -р < 0,05 по сравнению со здоровыми животными; V- р < 0,05 по сравнению с контрольной группой; д - р < 0,05 по сравнению с опытной группой; е - р < 0,05 по сравнению с группой с введением сыворотки.

теза макроэргов вследствие уменьшения гипоксии. В опытной группе в период с 4 до 8 часов происходило наибольшее снижение процентного содержания АТФ и энергетического заряда, но уже к 8 часу возрастала величина креатинфосфата, а к 12 часу процентное содержание АТФ достигало максимальных значений и превышало таковое по сравнению со здоровыми животными. Последующее снижение макроэргов — АТФ, АДФ, креатинфосфата и энергетического заряда в срок 16 часов, вероятно, отражает энергетические затраты на адаптивные синтетические процессы в клетках [2].

К 24 часам в опытной группе наблюдалось нарастание АДФ, креатинфосфата, что может быть обусловлено тенденцией к восстановлению дыхательной цепи митохондрий и адекватному энергоснабжению кардиоми-оцитов. Процентное содержание креатинфосфата в опытной группе оставалось выше, чем в контроле, следовательно, клеточная трансплантация обеспечивала большую сохранность процессов энергообеспечения. При сравнении исследуемых параметров между опытной группой и группой с введением сыворотки к 4 и 8 часам эксперимента значимых отличий не было. Начиная с 12 часа в опытной группе процентное содержание АТФ, АДФ, энергетический заряд, выше, чем в группе

с введением сыворотки. К 16 часу между опытной группой и группой с сывороткой нет значимых отличий, а к 24 часам в группе с сывороткой наблюдается достоверное увеличение доли АТФ. При сравнении группы с введением сыворотки и контрольной группы отмечено, что с 4 часов эксперимента динамика АТФ в группе с сывороткой повторяла закономерности динамики АТФ контрольной группы; к 24 часам процентное содержание АТФ в группе с введением сыворотки повышалась, как и в контрольной группе, но уровень АТФ был значимо выше, чем в контроле. Уровень креатинфосфата был значимо выше к 8 часу в группе с введением сыворотки и ниже — в срок в 24 по сравнению с контролем.

Таким образом, динамика энергетических показателей в опытной и контрольных группах позволила предположить, что процессы энергообеспечения в опытной группе были нарушены в меньшей степени, чем в контрольных. Это проявлялось уже на ранних этапах (4-8 часов) меньшим нарушением утилизации АТФ, АДФ, креатинфосфата. В последующем (через 12 часов) отмечался период восстановления баланса между активным использованием и достаточным синтезом макроэргов. Понижение процентного содержания АТФ и АДФ к концу первых суток могло быть связано с более

ранним включением механизмов внутриклеточной адаптации. По всей видимости, механизм действия сердечных клеток не связан с их ксеногенностью и активацией иммунной системы, так как влияние трансплантации сердечных клеток новорожденного кролика на

ЛИТЕРАТУРА

1. Атеросклероз и клеточная терапия / Под ред. А.А. Ру-новича, Ю.И. Пивоварова, Т.Е. Курильской. — Иркутск, 2005. - 304 с.

2. Бабушкина И.В., Рунович А.А., Боровский Г.Б. и др. Эндогенная защита миокарда: роль белков теплового шока в механизмах прекондиционирования // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. - 2006. - № 5. - С27-31.

динамику энергетических показателей оказалось более значительным, чем инъекция сыворотки крови взрослого кролика. В группе с введением сыворотки динамика изучаемых параметров приближена к таковой в группе с введением адреналина.

Трансплантация ксеногенных кардиомиоцитов при экспериментальном адреналиновом повреждении миокарда: ферментативная активность и морфологические параметры // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2008. - № 3. - С.132-135.

4. Литвицкий П.Ф. Патогенные и адаптивные изменения в сердце при его регионарной ишемии и последующем возобновлении коронарного кровотока // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. -2002. - № 2. - С.2-12.

3. Богородская С.Л., Клинова С.Н., Микашова М.Б. и др.

Адрес для переписки:

664022, г. Иркутск, ул. 25 Октября 25, Клинова Светлана Николаевна, Roman1215@mail.ru

© БАЛАБИНА Н.М. - 2009

СОСТОЯНИЕ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ У БОЛЬНЫХ С ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНОЙ АНЕМИЕЙ

Н.М. Балабина

Резюме. Статья посвящена изменению свободнорадикального перекисного окисления при железодефицитной анемии до начала сочетанного лечения сорбифером и токоферолом и после окончания этого лечения.

Ключевые слова: перекисное окисление липидов, антиоксидантный статус, железодефицитная анемия.

CONDITION OF LIPID PEROXIDATION IN PATIENTS WITH IRON DEFICIENCY ANEMIA

N.M. Balabina

Summary. The work is devoted to change of Lipid peroxidation in iron deficiency anemia prior to the beginning treatment with sorbifer and tocopherol and after the termination of this treatment.

Key words: lipid peroxidation, antioxidant status, iron deficiency anemia.

В работах последних лет содержатся указания на связь железодефицитной анемии (ЖДА) с активацией перекисного окисления липидов (ПОЛ) [1,2,3]. Однако, интенсивность свободнорадикального перекисного окисления и состояние антиоксидантных систем при железодефицитной анемии изучены недостаточно. Очевидно, что патогенез клинических проявлений ЖДА, дистрофические поражения тканей с эпителиальным покровом (кожи и ее придатков, слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, мочевыводящих путей, мускулатуры, миокарда), исход ЖДА во многом зависят от нарушений метаболизма, возникающих в результате сидеропении, нарушения функции ряда железосодержащих ферментов и гипоксии [5,8,12]. Вероятно, ведущая роль в реализации метаболических сдвигов принадлежит ПОЛ и состоянию антиоксидантной защиты (АОЗ) клеток [4,9,13,14].

Антиоксидантная активность (АОА) плазмы крови обусловлена наличием в ней антиокислителей: ферментных систем обезвреживания перекисей и свободных радикалов, SH-соединений, стероидных гормонов, а-токоферола, церулоплазмина, трансферрина и других компонентов [1,10,11]. Механизм действия присутствующих в плазме ингибиторов пероксидации липидов и их вклад в общий антиокислительный потенциал плазмы различны. Однако для клинической практики важно не столько учесть вклад того или иного эндогенного

антиоксиданта, сколько оценить резервы антиоксидантной защиты крови в целом [6,7,15].

Цель работы — изучить особенности ПОЛ и анти-оксидатной активности у больных с ЖДА и оценить влияние на эти процессы препаратов железа как при изолированном, так и при сочетанном применении их с антиоксидантами.

Материалы и методы

Под наблюдением находились 57 больных ЖДА, из них

— 37 женщин и 20 мужчин. Возраст больных колебался от 21 до 67 лет, составляя в среднем 51,4+11,4 лет. Причинами ЖДА являлись мено— и метроррагии на фоне миомы матки (20), гиперплазии эндометрия (6), полипа эндометрия (5), эндометриоза (6). У 20 больных причиной ЖДА был кровоточащий геморрой.

Критериями включения больных в исследование являлось: концентрация гемоглобина в крови менее 110 г/л, снижение среднего содержания гемоглобина в эритроците (МСН <27,0 pg), уровень сывороточного железа менее нижней границы нормы (6,6 — для женщин и 10 мкмоль/л

— для мужчин). При исследовании свободнорадикальных процессов были использованы следующие методы: определение генерации активных форм кислорода лейкоцитами (гранулоцитами, моноцитами) крови хемилюминесцен-тным (ХЛ) методом. Интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по содержанию в полазме крови таких конечных продуктов перекисного окисления липидов, как малоновый диальдегид (MDA) и диеновые конъюгаты (ДК) гидроперекисей. При этом концентрацию MDA определяли в реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК). Определение содержания диеновых конъюгатов в плазме крови проводили спектрофотометрическим методом В.Б. Гаврилова и М.И. Мишкарудной (1983). Об-