СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ ВИРУСА ПАРАГРИППА-3 КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
METHOD FOR PREPARING CATTLE PARAINFLUENZA-3 HYPERIMMUNE SERUM

Изобретение относится к области биологии и сельского хозяйства, в частности лечения и профилактики инфекционных заболеваний.
Гипериммунные сыворотки против вируса парагриппа-3 получают на разных видах лабораторных и домашних животных.
Известен способ по получению и исследованию гипериммунных сывороток от лабораторных животных против вирусов инфекционного ринотрахеита, герпеса и парагриппа-3 крупного рогатого скота, где в качестве тест-объектов использовали кроликов, а исследования проводили в реакциях нейтрализации, торможения гемадсорбции и гемагглютинации (Зудилина, 1970).
Основным недостатком является трудоемкость работы и применение для инъекции живого вируса штаммов ТК - А и ТА, который при определенных условиях может вызвать распространение инфекции.
Известен способ получения гипериммунных сывороток к вирусам инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 крупного рогатого скота (Хитрова, 2003, НПО НАРВАК).
Недостаток данного способа получения гипериммунных сывороток связан с иммунизацией дорогостоящих животных - быков (лошадей), что, несомненно, сказывается на стоимости сывороток.
Целью настоящего изобретения является получение гипериммунных сывороток от ослов для лечения телят, больных парагриппом-3, и профилактики здорового молодняка крупного рогатого скота. Преимуществами данного способа получения являются:
- получение гипериммунных сывороток на наиболее дешевых донорах - ослах, что удешевляет гипериммунную сыворотку;
- возможность получения гипериммунных сывороток не на живой вирус, а на инактивированный антиген, находящийся в вакцине.
Для проведения опыта были подобраны по принципу аналогов 15 ослов 3-4-х лет весом 150-200 кг. За 30 дней до начала цикла гипериммунизации ослов клинически осматривали: все опытные животные средней упитанности, нормальной конституции, температура тела в пределах 37,5-38,5°C, пульс 30-40, дыхание 8-14, ран и других повреждений кожного покрова не обнаружили.
Перед началом опыта у всех ослов отобрали кровь, получили сыворотку и исследовали в РТГА на наличие противопарагриппозных антител. Антитела к вирусу парагриппа-3 в сыворотках крови не обнаружили. Ослов разделили на 3 группы по 5 голов. Всем подопытным животным внутримышечно в область крупа ввели по 1 мл эмульсионной инактивированной вакцины против парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота производства Юрьевецкого биокомбината г.Владимира, серии №4, госконтроля №4, изготовленной  09.05 г.
Через каждые 14 дней проводили иммунизацию этой же вакциной с увеличением дозы вакцины на 1 мл. Схема иммунизации ослов представлена в таблице 1.
Ослам первой группы в качестве адъюванта в равных объемах в вакцину добавили аэросил, второй группе - монтанид, а третью группу животных иммунизировали без адъювантов.
Начиная с третьей иммунизации, общий объем вакцины и адъюванта вводили в две точки.
Проведенные эксперименты показывают, что ослы являются хорошими тест-объектами для получения гипериммунной сыворотки против вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота. Так, из 15 взятых в работу ослов ни в одном случае не было осложнений на месте внутримышечного введения вакцины. У отдельных животных отмечали легкое угнетенное состояние, повышение температуры тела на 0,5-1°C в течении 1-2 дней, кратковременный отказ от корма.
В дальнейшем кровь для исследования сывороток отбирали у ослов через 14 дней после последнего введения биопрепарата и в это же время проводили очередную иммунизацию животных по той же схеме.
Результаты исследования сывороток представлены в таблице 1.
Таблица 1.
Схема иммунизации ослов
№ групп
К-во жив-х
Доза вакцины и адъюванта (в см<sup>3</sup>)
Иммунизация
1-я
2-я
3-я
4-я
5-я
1.
5
<img file="00000001.tif" he="12" wi="4" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000002.tif" he="12" wi="4" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000003.tif" he="12" wi="4" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000004.tif" he="12" wi="4" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000005.tif" he="12" wi="4" img-content="undefined" img-format="tif" />
2.
5
<img file="00000006.tif" he="12" wi="4" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000002.tif" he="12" wi="4" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000007.tif" he="12" wi="4" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000008.tif" he="12" wi="4" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000005.tif" he="12" wi="4" img-content="undefined" img-format="tif" />
3.
5
1
2
3
4
5
Примечание: в числителе - доза вакцины, в знаменателе - доза адъюванта.
Таблица 2.
Динамика накопления антител в процессе гипериммунизации ослов
№ групп
Титры антител в РТГА
До вакц.
Через 14 дней после иммунизации
1-я
2-я
3-я
4-я
5-я
1.
0
1:8-1:16
1:64-1:128
1:128-1:256
1:256-1:512
1:512-1:1024
2.
0
1:8-1:16
1:64-1:128
1:128-1:256
1:256-1:512
1:512-1:1024
3.
0
1:4-1:8
1:128-1:256
1:32-1:128
1:64-1:256
1:256-1:512
Примечание: отбор крови проводили через 14 дней после каждой иммунизации.
Из данных таблицы 2 видно, что иммунизация ослов инактивированной вакциной вызывает у них через 14 дней образование антител в таких титрах, которые способны защитить животных от заражения вирусом парагриппа-3 крупного рогатого скота. Так, у животных, которым вакцину ввели совместно с аэросилом или монтанидом, титры антител в РНГА после второго введения вакцины достигли до 1:128. Несколько ниже титры антител у ослов третьей группы, иммунизированных без добавления адъюванта, хотя после четвертой и пятой иммунизации в сыворотке крови этих животных титры антител достигали до 1:512. У животных первой и второй групп антитела были в пределах 1:128-1:256 через 14 дней после третьей иммунизации, а после четвертой и пятой иммунизации уровень антител достигал разведений 1:256-1:1024. Эти данные говорят о высокой иммуногенной активности ослов как продуцентов гипериммунной сыворотки. Результаты иммунизации ослов эмульсионной инактивированной вакциной свидетельствуют о возможности получения высокоактивных гипериммунных сывороток, применяя в качестве антигена инактивированную вакцину.
Таким образом, наши исследования показали, что ослы являются хорошими тест-объектами для производства гипериммунных сывороток против парагриппа-3 крупного рогатого скота.
Кроме непосредственного воздействия на лечение и профилактику вируса парагриппа-3 гипериммунная сыворотка от ослов способствует сокращению времени лечения на 2-3 дня и позволяет снизить затраты в два раза.
Источники информации
Конопаткин А.А., Артемов Б.Т., Бакулов И.А. и др. Эпизоотология и инфекционные заболевания. Учебник для вузов. М.: Колос, 1993, 369 с.
Зудилина З.Ф. Получение и исследование гипериммунных сывороток от лабораторных животных против вирусов инфекционного ринотрахеита, герпеса и парагриппа-3 крупного рогатого скота в реакциях нейтрализации, торможения гемадсорбции и гемагглютинации. Труды ВИЭВ. Материалы 2-й научной конференции ВИЭВ, 1970, 16 с.
Хитрова А.Е., Верховский О.А., Непоклонова И.В. Получение гипериммунных сывороток к вирусам инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 крупного рогатого скота. (НПО НАРВАК). Международная научная конференция посвящ. 45-летию ФГУ ВНИИЗЖ, «Актуальные проблемы инфекционной патологии животных», Владимир, 2003, 222 с.
Конопаткин А.А., Бакулов И.А. и др. Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных. Учебник для вузов. М.: Колос, 1984, 296 с.