КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ ИММУНООНКОЛОГИИ

1. Молекула гРНК, содержащая tracr и cr-РНК, где cr-РНК включает нацеливающий домен, который комплементарен последовательности-мишени, выбранной из интрона TET2 или точки соединения интрон-экзон TET2.
2. Молекула гРНК по п. 1, где нацеливающий домен комплементарен последовательности в геномной области, выбранной из: chr4:105146980-105190359; chr4:105190506-105233896; chr4:105237352-105241338; chr4:105241430-105242833; chr4:105242928-105243569; chr4:105243779-105259618; chr4:105259770-105261758; chr4:105261849-105269609; chr4:105269748-105272563 и chr4:105272919-105275047, необязательно в геномной области, выбранной из: chr4:105270624-105270643; chr4:105270630-105270649; chr4:105271863-105271883; chr4:105271340-105271360; chr4:105271204-105271223; chr4:105271526-105271546; chr4:105270350-105270370; chr4:105270268-105270288; chr4:105272182-105272202; chr4:105272465-105272485; chr4:105271387-105271407; chr4:105272436-105272456; chr4:105271924-105271944; chr4:105272323-105272343; chr4:105272057-105272077; chr4:105272309-105272329; chr4:105272324-105272344; chr4:105271184-105271204; chr4:105271190-105271210; chr4:105271295-105271315; chr4:105271292-105271312; chr4:105271458-105271478; chr4:105270635-105270655; chr4:105271173-105271192; chr4:105271232-105271252; chr4:105271845-105271865; chr4:105271849-105271869 и chr4:105271056-105271076, или
где нацеливающий домен содержит или состоит из любой из SEQ ID NO: 1000-SEQ ID NO: 10514 или SEQ ID NO: 10515, или их фрагмента.
3. Молекула гРНК по любому из пп. 1, 2, где нацеливающий домен содержит 17, 18, 19 или 20 последовательно расположенных нуклеиновых кислот любой из приведенных последовательностей нацеливающего домена, необязательно где указанные 17, 18, 19 или 20 последовательно расположенных нуклеиновых кислот находятся на 3'-конце или 5'-конце приведенной последовательности нацеливающего домена.
4. Молекула гРНК по любому из предшествующих пунктов, где часть cr-РНК и часть tracr гибридизуются с образованием флагштока, содержащего SEQ ID NO: 50 или SEQ ID NO: 51, где флагшток необязательно дополнительно содержит первое и/или второе удлинение флагштока, расположенное с 3'-стороны от части флагштока, представляющей собой cr-РНК, где указанное первое удлинение флагштока содержит SEQ ID NO: 55, и/или где указанное второе удлинение флагштока содержит SEQ ID NO: 57.
5. Молекула гРНК по любому из пп. 1-4, где tracr содержит:
(a) SEQ ID NO: 87, необязательно дополнительно содержащую на 3'-конце дополнительные 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 нуклеотидов урацила (U);
(b) SEQ ID NO: 65 или
(c) SEQ ID NO: 84, и/или
где, если молекула гРНК содержит флагшток, часть флагштока, представляющая собой cr-РНК, содержит SEQ ID NO: 79 или SEQ ID NO: 80; и
где tracr необязательно дополнительно содержит SEQ ID NO: 53 или SEQ ID NO: 54, и необязательно, если присутствует первое удлинение флагштока, первое удлинение tracr, расположенное с 5'-стороны от SEQ ID NO: 53 или SEQ ID NO: 54, причем указанное первое удлинение tracr содержит SEQ ID NO: 56.
6. Молекула гРНК по любому из пп. 1-3, где cr-РНК содержит, от 5' к 3', [нацеливающий домен]-:
(a) SEQ ID NO: 50;
(b) SEQ ID NO: 51;
(c) SEQ ID NO: 77;
(d) SEQ ID NO: 78;
(e) SEQ ID NO: 79;
(f) SEQ ID NO: 80 или
(g) SEQ ID NO: 81, и/или
где tracr содержит, от 5' к 3':
(h) SEQ ID NO: 53;
(i) SEQ ID NO: 54;
(j) SEQ ID NO: 82;
(k) SEQ ID NO: 83;
(l) SEQ ID NO: 65;
(m) SEQ ID NO: 84;
(n) SEQ ID NO: 87;
(o) SEQ ID NO: 76;
(p) SEQ ID NO: 85;
(q) SEQ ID NO: 86;
(r) любую из h)-q), выше, дополнительно содержащую на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 нуклеотидов урацила (U), например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, или 7 нуклеотидов урацила (U);
(s) любую из h)-r), выше, дополнительно содержащую на 3'-конце по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 нуклеотидов аденина (A), например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, или 7 нуклеотидов аденина (A); или
(t) любую из h)-s), выше, дополнительно содержащую на 5'-конце (например, на 5'-конце), по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 нуклеотидов аденина (A), например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, или 7 нуклеотидов аденина (A).
7. Молекула гРНК по любому из пп. 1-3, где нацеливающий домен и tracr находятся на отдельных молекулах нуклеиновой кислоты, и где молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нацеливающий домен, содержит SEQ ID NO: 79, и молекула нуклеиновой кислоты, содержащая tracr, содержит SEQ ID NO: 65, или где нацеливающий домен и tracr находятся на одной молекуле нуклеиновой кислоты, где молекула гРНК содержит петлю, находящуюся с 3'-стороны от нацеливающего домена и с 5'-стороны от tracr, где петля необязательно содержит SEQ ID NO: 52.
8. Молекула гРНК по любому из пп. 1-7, содержащая, от 5' к 3', [нацеливающий домен]-:
(a) SEQ ID NO: 71;
(b) SEQ ID NO: 72;
(c) SEQ ID NO: 73;
(d) SEQ ID NO: 74;
(e) SEQ ID NO: 75 или
(f) любую из (a)-(e), выше, дополнительно содержащую на 3'-конце 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 нуклеотидов урацила (U).
9. Молекула гРНК по любому из пп. 1-8, где одна или необязательно более одной из молекул нуклеиновой кислоты, содержащих молекулу гРНК, содержат:
a) фосфоротиоатную модификацию, например, три фосфоротиоатных модификации на 3'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;
b) фосфоротиоатную модификацию, например, три фосфоротиоатных модификации на 5'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;
c) модификацию, например, три модификации посредством 2'-O-метила на 3'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;
d) модификацию, например, три модификации посредством 2'-O-метила на 5'-конце указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты;
e) модификацию посредством 2'-O-метила на каждом от 4-го до концевого, от 3-го до концевого и от 2-го до концевого 3'-остатков указанной молекулы или молекул нуклеиновой кислоты; или
f) любую их комбинацию.
10. Молекула гРНК по любому из пп. 1-9, где, когда систему CRISPR, включающую молекулу гРНК, вводят в клетку, в или вблизи последовательности-мишени, комплементарной нацеливающему домену молекулы гРНК, образуется инсерция-делеция по меньшей мере приблизительно в 40%, например, по меньшей мере приблизительно в 50%, например, по меньшей мере приблизительно в 60%, например, по меньшей мере приблизительно в 70%, например, по меньшей мере приблизительно в 80%, например, по меньшей мере приблизительно в 90%, например, по меньшей мере приблизительно в 95%, например, по меньшей мере приблизительно в 96%, например, по меньшей мере приблизительно в 97%, например, по меньшей мере приблизительно в 98%, например, по меньшей мере приблизительно в 99% клеток популяции, или где указанная инсерция-делеция включает делецию более 10 нуклеотидов, например, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,32, 33, 34 или 35 нуклеотидов по меньшей мере приблизительно в 5%, например, по меньшей мере приблизительно 10%, 15%, 20%, 25%, 30% или более клеток популяции.
11. Молекула гРНК по п. 10, где инсерция-делеция выбрана из инсерций-делеций, приведенных в таблице 22, или где инсерция-делеция образуется с частотой инсерции-делеции, выбранной из частот, приведенных в таблице 23, где инсерцию-делецию необязательно определяют посредством секвенирвоания последнего поколения (NGS).
12. Молекула гРНК по любому из пп. 1-11, где, когда систему CRISPR, включающую молекулу гРНК, вводят в клетку, экспрессия по меньшей мере одной изоформы TET2, функция TET2 или каталитическая функция TET2 уменьшается или устраняется в указанной клетке.
13. Молекула гРНК по п. 12, функция, например каталитическая функция, TET2 уменьшается, например, по меньшей мере приблизительно на 10%, 20%, 30%, 40% или 50%, однако не уменьшается более чем приблизительно на 80%, в указанной клетке.
14. Молекула гРНК по любому из пп. 10-13, где, когда систему CRISPR, включающую молекулу гРНК, вводят в клетку, в указанной клетке не образуются инсерции-делеции вне мишени.
15. Композиция, содержащая первую молекулу гРНК по любому из пп. 1-14 и молекулу Cas9, где молекула Cas9 необязательно содержит любую из SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 111-SEQ ID NO: 121 или SEQ ID NO: 123, или где молекула Cas9 представляет собой активную или неактивную Cas9 S. pyogenes.
16. Композиция по п. 15, где первая молекула гРНК и указанная молекула Cas9 находятся в рибонуклеопротеиновом комплексе (RNP).
17. Композиция по п. 15 или 16, дополнительно содержащая матричную нуклеиновую кислоту, где матричная нуклеиновая кислота является двухцепочечной или одноцепочечной.
18. Композиция по п. 17, где матричная нуклеиновая кислота присутствует в векторе, и где вектор представляет собой лентивирусный вектор, вектор AAV, вектор AAV6, аденовирусный вектор, плазмиду, миникольцо или наноплазмиду.
19. Композиция по любому из пп. 17, 18, где матричная нуклеиновая кислота содержит по меньшей мере одно 5' и/или по меньшей мере одно 3' плечо гомологии и где указанное плечо гомологии содержит последовательность, гомологичную последовательности интрона TET2, и где матричная нуклеиновая кислота необязательно дополнительно содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую химерный рецептор антигена (CAR).
20. Композиция по п. 19, где CAR представляет собой:
(a) CD19 CAR, содержащий любую из SEQ ID NO: 160-SEQ ID NO: 172 или SEQ ID NO: 175, или содержащий любую из SEQ ID NO: 185-SEQ ID NO: 197; или
(b) BCMA CAR, содержащий антигенсвязывающий домен, содержащий любую из SEQ ID NO: 239-SEQ ID NO: 412 или содержащий любую из SEQ ID NO: 849-SEQ ID NO: 863 или SEQ ID NO: 879-SEQ ID NO: 899, например, содержащий SEQ ID NO: 859.
21. Композиция по любому из пп. 19, 20, где матричная нуклеиновая кислота содержит промотор, необязательно промотор EF1-альфа, функционально связанный с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR, и/или где последовательность матричной нуклеиновой кислоты дополнительно содержит первое плечо гомологии, содержащее SEQ ID NO: 124, и второе плечо гомологии, содержащее SEQ ID NO: 125; и где молекула гРНК необязательно представляет собой гРНК, содержащую нацеливающий домен, комплементарный последовательности в геномной области (в соответствии с hg38) chr4:105269748-105272563, chr4:105270624-105270643, chr4:105270630-105270649 или chr4:105271863-105271883.
22. Композиция по любому из пп. 17-21, где последовательность матричной нуклеиновой кислоты находится в векторе AAV6; последовательность матричной нуклеиновой кислоты, кодирующая CAR, выбрана из CD19 CAR, BCMA CAR и CD22 CAR; последовательность матричной нуклеиновой кислоты содержит первое плечо гомологии, содержащее SEQ ID NO: 124, и второе плечо гомологии, содержащее SEQ ID NO: 125; и молекула гРНК представляет собой гРНК, содержащую нацеливающий домен, комплементарный последовательности в геномной области (в соответствии с hg38) chr4:105269748-105272563, chr4:105270624-105270643, chr4:105270630-105270649 или chr4:105271863-105271883, или молекула гРНК содержит нацеливающий домен, содержащий SEQ ID NO: 10148, SEQ ID NO: 10149 или SEQ ID NO: 10206.
23. Композиция по любому из пп. 15-22, дополнительно содержащая по меньшей мере одну дополнительную молекулу гРНК, где каждая молекула гРНК композиции комплементарна отличающейся последовательности-мишени.
24. Композиция по п. 23, где первая молекула гРНК представляет собой молекулу гРНК по любому из пп. 1-14, и указанная по меньшей мере одна дополнительная молекула(ы) гРНК содержит нацеливающий домен, комплементарный последовательности-мишени в ингибиторной молекуле PDCD1, компоненте T-клеточного рецептора TRAC или TRBC, B2M, HLA-DM, HLA-DO, HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP, CIITA, RFXANK, RFXAP, RFX1, RFX5, NF-YA, NF-YB, NF-YC, X2BP, OCAB, HLA-A, HLA-B, HLA-C, NLRC5, CD247, CD3, CD3D, CD3E, CD3G, DCK, CD52, FKBP1A или NR3C1.
25. Композиция по любому из пп. 15-24, составленная в среде, пригодной для электропорации, где каждая из указанных молекул гРНК необязательно находится в RNP-комплексе с молекулой Cas9, и где каждый из указанных комплексов RNP присутствует в концентрации менее чем приблизительно 10 мкМ.
26. Последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует молекулу гРНК по любому из пп. 1-14 или один или более компонентов композиции по любому из пп. 15-25, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты необязательно представляет собой вектор, выбранный из группы, состоящей из лентивирусного вектора, аденовирусного вектора, вектора на основе аденоассоциированного вируса (AAV), вектора на основе вируса простого герпеса (HSV), плазмиды, миникольца, наноплазмиды и РНК-вектора.
27. Способ изменения последовательности-мишени в клетке, включающий приведение указанной клетки в контакт с:
(a) молекулой гРНК по любому из пп. 1-14 и молекулой Cas9;
(b) молекулой гРНК по любому из пп. 1-14 и нуклеиновой кислотой, кодирующей молекулу Cas9;
(c) нуклеиновой кислотой, кодирующей молекулу гРНК по любому из пп. 1-14 и молекулу Cas9;
(d) нуклеиновой кислотой, кодирующей молекулу гРНК по любому из пп. 1-14 и нуклеиновую кислоту, кодирующую молекулу Cas9;
(e) любой из a)-d), выше, и матричной нуклеиновой кислотой по любому из пп. 17-22;
(f) композицией по любому из пп. 15-25; или
(g) вектором по п. 26,
где молекула гРНК по любому из пп. 1-14 или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу гРНК по любому из пп. 1-14, и молекула Cas9 или нуклеиновая кислота, кодирующая молекулу Cas9, необязательно составлены в одну композицию.
28. Способ по п. 27, где способ приводит к вставке по меньшей мере части матричной нуклеиновой кислоты в или вблизи последовательности-мишени молекулы гРНК по любому из пп. 1-14, где указанная вставка происходит только в одной или обеих аллелях.
29. Способ модификации способами инженерии клетки для экспрессии химерного рецептора антигена (CAR), включающий:
(a) введение в указанную клетку системы CRISPR, содержащей молекулу гРНК по любому из пп. 1-14 или композиции по п. 15; и
(b) введение в указанную клетку матричной нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR;
где указанный способ необязательно дополнительно включает введение в указанную клетку одной или более систем CRISPR, содержащих одну или более молекул гРНК, комплементарных молекуле-мишени в ингибиторной молекуле, компоненте T-клеточного рецептора, B2M и/или CIITA.
30. Способ по любому из пп. 27-29, где клетка представляет собой иммунную эффекторную клетку или популяцию иммунных эффекторных клеток, T-клетку, например, CD4+ T-клетку, CD8+ T-клетку или их комбинацию, где указанная клетка необязательно является аутологичной или аллогенной по отношению к пациенту, которому вводят указанную клетку.
31. Способ по п. 29, где CAR представляет собой:
(a) CD19 CAR, содержащий антигенсвязывающий домен, содержащий любую из SEQ ID NO: 160-SEQ ID NO: 172 или SEQ ID NO: 175 или содержащий любую из SEQ ID NO: 185-SEQ ID NO: 197; или
(b) BCMA CAR, содержащий антигенсвязывающий домен, содержащий любую из SEQ ID NO: 239-SEQ ID NO: 412 или любую из SEQ ID NO: 849-SEQ ID NO: 863 или любую из SEQ ID NO: 879-SEQ ID NO: 899.
32. Клетка, измененная способом по любому из пп. 27-31 или содержащая первую молекулу гРНК по любому из пп. 1-14, или композицию по любому из пп. 15-25, нуклеиновую кислоту по п. 26, или вектор по п. 26.
33. Клетка по п. 32, где клетка представляет собой иммунную эффекторную клетку или популяцию иммунных эффекторных клеток, T-клетку или NK-клетку, CD4+ T-клетку, CD8+ T-клетку или их комбинацию.
34. Клетка по любому из пп. 32, 33, где экспрессия в клетке ингибиторной молекулы, компонента T-клеточного рецептора, TRAC, TRBC1, TRBC2, CD3E, CD3D, CD3G, B2M, CIITA или их комбинаций снижена или устранена, относительно немодифицированной клетки того же типа, и/или где в клетке снижена или устранена экспрессия TET2, экспрессия по меньшей мере одной изоформы TET2, и/или снижена или устранена функция TET2, относительно уровня экспрессии и/или функции в неизменной клетке того же типа клеток.
35. Клетка по любому из пп. 32-34, где клетка содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный рецептор антигена (CAR), встроенную в геном в интроне или точке соединения интрон-экзон TET2, необязательно в интроне 9-10 или точке соединения интрон-экзон между экзоном 9 и интроном 9-10 или точке соединения интрон-экзон между экзоном 10 и интроном 9-10 TET2.
36. Клетка по любому из пп. 32-35, где клетка представляет собой T-клетку и демонстрирует:
(a) увеличенную способность к пролиферации;
(b) повышенную цитотоксичность;
(c) сниженная экспрессия ингибиторной молекулы, PD1, TIM3, LAG3, PD-L1 или их комбинаций; или
(d) представляет собой CD45RA+CD62L+CD27+CD95+,
относительно неизмененной клетки сходного типа.
37. Клетка по п. 36, где указанная клетка содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую химерный антигенный рецептор, встроенную в участок в интроне TET2, где указанный участок выбран из любого из chr4:105146980-105190359; chr4:105190506-105233896; chr4:105237352-105241338; chr4:105241430-105242833; chr4:105242928-105243569; chr4:105243779-105259618; chr4:105259770-105261758; chr4:105261849-105269609; chr4:105269748-105272563; и chr4:105272919-105275047, необязательно в интроне TET2, выбранный из: chr4:105270624-105270643; chr4:105270630-105270649; chr4:105271863-105271883; chr4:105271340-105271360; chr4:105271204-105271223; chr4:105271526-105271546; chr4:105270350-105270370; chr4:105270268-105270288; chr4:105272182-105272202; chr4:105272465-105272485; chr4:105271387-105271407; chr4:105272436-105272456; chr4:105271924-105271944; chr4:105272323-105272343; chr4:105272057-105272077; chr4:105272309-105272329; chr4:105272324-105272344; chr4:105271184-105271204; chr4:105271190-105271210; chr4:105271295-105271315; chr4:105271292-105271312; chr4:105271458-105271478; chr4:105270635-105270655; chr4:105271173-105271192; chr4:105271232-105271252; chr4:105271845-105271865; chr4:105271849-105271869 и chr4:105271056-105271076.
38. Клетка по любому из пп. 36, 37, где в клетке экспрессия и/или функция компонента T-клеточного рецептора, B2M, CIITA или их комбинации снижена или устранена относительно немодифицированной клетки того же типа.
39. Применение клетки по любому из пп. 36-38 в обеспечении противоопухолевого иммунитета у индивидуума, имеющего пролиферативное заболевание, предзлокачественное состояние, злокачественную опухоль или не связанное со злокачественной опухолью состояние, ассоциированное с экспрессией опухолевого антигена, путем введения индивидууму эффективного количества указанной клетки.
40. Применение по п. 39, где заболевание представляет собой злокачественную опухоль, выбранную из рака толстого кишечника, рака прямой кишки, почечно-клеточной карциномы, рака печени, немелкоклеточной карциномы легкого, рака тонкого кишечника, рака пищевода, меланомы, рака кости, рака поджелудочной железы, рака кожи, рака головы и шеи, кожной и внутриглазной злокачественной меланомы, рака тела матки, рака яичника, рака прямой кишки, рака анальной области, рака желудка, рака яичка, карциномы фаллопиевых труб, карциномы эндометрия, карциномы шейки матки, карциномы влагалища, карциномы вульвы, болезни Ходжкина, неходжскинской лимфомы, злокачественной опухоли эндокринной системы, рака щитовидной железы, рака паращитовидной железы, рака надпочечника, саркомы мягких тканей, рака мочеиспускательного канала, рака полового члена, солидных опухолей детского возраста, рака мочевого пузыря, рака почки или мочеточника, карциномы почечной лоханки, новообразования центральной нервной системы (ЦНС), первичной лимфомы ЦНС, опухолевого ангиогенеза, опухоли позвоночника, глиомы ствола головного мозга, аденомы гипофиза, саркомы Капоши, эпидермоидного рака, плоскоклеточного рака, T-клеточной лимфомы, злокачественных опухолей, индуцированных факторами внешней среды, хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), острого лейкоза, острого лимфоидного лейкоза (ALL), B-клеточного острого лимфоидного лейкоза (B-ALL), T-клеточного острого лимфоидного лейкоза (T-ALL), хронического миелогенного лейкоза (CML), острого миелоидного лейкоза (AML), B-клеточного пролимфоцитарного лейкоза, бластного новообразования из плазмацитоидных дендритных клеток, лимфомы Беркитта, диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы, волосатоклеточного лейкоза, мелкоклеточной или крупноклеточной фолликулярной лимфомы, злокачественных лимфопролиферативных состояний, лимфомы MALT, лимфомы из клеток мантийной зоны, лимфомы из клеток маргинальной зоны, множественной миеломы, миелодисплазии и миелодиспластического синдрома, лимфомы Ходжкина, плазмабластной лимфомы, новообразования из плазмацитоидных дендритных клеток, макроглобулинемии Вальденстрема и предлейкоза, комбинаций указанных злокачественных опухолей и метастатических очагов указанных злокачественных опухолей.
41. Применение по любому из пп. 39, 40, где указанное заболевание представляет собой злокачественную опухоль, и применение дополнительно включает введение химиотерапевтического средства, где химиотерапевтическое средство необязательно представляет собой циклофосфамид, флударабин или циклофосфамид и флударабин, и/или где указанное заболевание представляет собой злокачественную опухоль, и применение дополнительно включает введение средства для лимфодеплеции или иммунодепрессанта перед введением индивидууму эффективного количества клеток по любому из пп. 32-38.
42. Популяция клеток, содержащая клетку по любому из пп. 32-38, где по меньшей мере приблизительно 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% клеток представляют собой клетку по любому из пп. 32-38.
43. Система редактирования генов, которая связывает последовательность интрона или точки соединения интрон-экзон TET2 в последовательности в геномной области, выбранной из любой из chr4:105146980-105190359; chr4:105190506-105233896; chr4:105237352-105241338; chr4:105241430-105242833; chr4:105242928-105243569; chr4:105243779-105259618; chr4:105259770-105261758; chr4:105261849-105269609; chr4:105269748-105272563 и chr4:105272919-105275047, необязательно в геномной области, выбранной из: chr4:105270624-105270643; chr4:105270630-105270649; chr4:105271863-105271883; chr4:105271340-105271360; chr4:105271204-105271223; chr4:105271526-105271546; chr4:105270350-105270370; chr4:105270268-105270288; chr4:105272182-105272202; chr4:105272465-105272485; chr4:105271387-105271407; chr4:105272436-105272456; chr4:105271924-105271944; chr4:105272323-105272343; chr4:105272057-105272077; chr4:105272309-105272329; chr4:105272324-105272344; chr4:105272324-105272344; chr4:105271184-105271204; chr4:105271190-105271210; chr4:105271295-105271315; chr4:105271292-105271312; chr4:105271458-105271478; chr4:105270635-105270655; chr4:105271173-105271192; chr4:105271232-105271252; chr4:105271845-105271865; chr4:105271849-105271869 и chr4:105271056-105271076.
44. Система редактирования генов по п. 43, где система редактирования генов представляет собой систему редактирования генов на основе нуклеазы с цинковыми пальцами (ZFN), систему редактирования генов TALEN, систему редактирования генов CRISPR или систему редактирования генов на основе мегануклеазы.
45. Клетка, модифицированная системой редактирования генов по любому из пп. 43, 44 или содержащая ее.