АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩАЯ МОЛЕКУЛА, СПОСОБНАЯ К МНОГОКРАТНОМУ СВЯЗЫВАНИЮ ДВУХ ИЛИ БОЛЕЕ МОЛЕКУЛ АНТИГЕНА

1. Антигенсвязывающая молекула, имеющая значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4), определяемое как отношение KD для антигена при рН 5,8 и KD для антигена при рН 7,4, составляющее 2 или выше.
2. Антигенсвязывающая молекула по п. 1, в которой значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4) составляет 10 или выше.
3. Антигенсвязывающая молекула по п. 1, в которой значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4) составляет 40 или выше.
4. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1-3, в которой по меньшей мере одна аминокислота антигенсвязывающей молекулы заменена гистидином или по меньшей мере один гистидин вставлен в антигенсвязывающую молекулу.
5. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1-4, в которой антигенсвязывающая молекула обладает антагонистической активностью.
6. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1-5, в которой антигенсвязывающая молекула связывается с мембранным антигеном или растворимым антигеном.
7. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1-6, в которой антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.
8. Фармацевтическая композиция, содержащая антигенсвязывающую молекулу по одному из пп. 1-7.
9. Способ улучшения фармакокинетики антигенсвязывающей молекулы путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.
10. Способ увеличения количества связываний антигена антигенсвязывающей молекулой путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.
11. Способ увеличения количества антигенов, которые могут связываться антигенсвязывающей молекулой, путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.
12. Способ диссоциации внутри клетки антигена от внеклеточно связанной антигенсвязывающей молекулы путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.
13. Способ высвобождения антигенсвязывающей молекулы, которая была связана с антигеном и интернализована в клетку, в форму свободную от антигена за пределами клетки путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.
14. Способ увеличения способности антигенсвязывающей молекулы элиминировать антиген из плазмы путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.
15. Способ по одному из пп. 9-14, в котором значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4), определяемое как отношение KD для антигена при рН 5,8 и KD для антигена при рН 7,4, составляет 2 или выше.
16. Способ по одному из пп. 9-14, в котором значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4) составляет 10 или выше.
17. Способ по одному из пп. 9-14, в котором значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4) составляет 40 или выше.
18. Способ улучшения фармакокинетики антигенсвязывающей молекулы путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.
19. Способ увеличения количества связываний антигена антигенсвязывающей молекулой путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.
20. Способ увеличения количества антигенов, которые могут быть связаны антигенсвязывающей молекулой, путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.
21. Способ диссоциации внутри клетки антигена от внеклеточно связанной антигенсвязывающей молекулы путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.
22. Способ высвобождения антигенсвязывающей молекулы, которая была связана с антигеном и интернализована в клетку, в форму свободную от антигена за пределами клетки, путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином, или вставка по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.
23. Способ увеличения способности антигенсвязывающей молекулы элиминировать антиген из плазмы путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.
24. Способ по одному из пп. 18-23, в котором замена или вставка гистидина увеличивает значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4), определяемое как соотношение антигенсвязывающей активности при рН 5,8 и антигенсвязывающая активность при рН 7,4, по сравнению со значением KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4) до замены или вставки гистидина.
25. Способ по одному из пп. 9-24, в котором антигенсвязывающая молекула обладает антагонистической активностью.
26. Способ по одному из пп. 9-25, в котором антигенсвязывающая молекула связывается с мембранным антигеном или растворимым антигеном.
27. Способ по одному из пп. 9-26, в котором антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.
28. Способ скрининга антигенсвязывающей молекулы, который включает следующие стадии:
(a) определения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН от 6,7 до рН 10,0;
(b) определения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН от 4,0 до рН 6,5; и
(c) отбора антигенсвязывающей молекулы, антигенсвязывающая активность которой при рН от 6,7 до рН 10,0 превышает антигенсвязывающую активность при рН от 4,0 до рН 6,5.
29. Способ скрининга по п. 28, который включает стадию отбора антитела, антигенсвязывающая активность которого при рН от 6,7 до рН 10,0 вдвое или выше, чем антигенсвязывающая активность при рН от 4,0 до рН 6,5.
30. Способ скрининга антигенсвязывающей молекулы, который включает следующие стадии:
(a) связывания антигенсвязывающей молекулы с антигеном в условиях от рН 6,7 до рН 10,0;
(b) помещения антигенсвязывающей молекулы, которая связана с антигеном из (а), в условия от рН 4,0 до рН 5,5; и
(c) получения антигенсвязывающей молекулы, которая диссоциирует в условиях от рН 4,0 до рН 6,5.
31. Способ скрининга антигенсвязывающей молекулы, связывающая активность которой при первом рН больше, чем при втором рН, который включает стадии:
(a) связывания антигенсвязывающей молекулы с иммобилизованным антигеном на колонке в условиях первого рН;
(b) элюирования антигенсвязывающей молекулы, которая связалась на колонке, при первом рН с колонки в условиях второго рН; ип
(c) сбора элюированной антигенсвязывающей молекулы.
32. Способ скрининга антигенсвязывающей молекулы, связывающая активность которой при первом рН выше, чем при втором рН, который включает стадии:
(a) связывания библиотеки антигенсвязывающих молекул с иммобилизованным антигеном на колонке в условиях первого рН;
(b) элюирования антигенсвязывающей молекулы с колонки в условиях второго рН;
(c) амплификации гена, кодирующего элюированную антигенсвязывающую молекулу; и
(d) получения элюированной антигенсвязывающей молекулы.
33. Способ скрининга по п. 31 или 32, в котором первый рН составляет от 6,7 до 10,0, а второй рН составляет от 4,0 до 6,5.
34. Способ скрининга по одному из пп. 28-33, в котором по меньшей мере одна или несколько аминокислот антигенсвязывающей молекулы заменены гистидином или по меньшей мере один гистидин встроен в антигенсвязывающую молекулу.
35. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая лучше удерживается в плазме.
36. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая способна связываться с антигеном два или более раз.
37. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая способна связываться с большим количеством антигенов по сравнению с количеством ее антигенсвязывающих сайтов.
38. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая диссоциирует внеклеточно связанный антиген внутри клетки.
39. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая связана с антигеном и интернализована в клетку, а высвобождается за пределами клетки в форме свободного антигена.
40. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая обладает повышенной способностью элиминировать антиген в плазме.
41. Способ скрининга по одному из пп. 28-40, в котором антигенсвязывающая молекула используется в качестве фармацевтической композиции.
42. Способ скрининга по одному из пп. 28-41, в котором антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.
43. Способ получения антигенсвязывающей молекулы, который включает стадии:
(a) определения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН от 6,7 до рН 10,0;
(b) определения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН от 4,0 до рН 6,5;
(c) отбора антигенсвязывающей молекулы, антигенсвязывающая активность которой при рН от 6,7 до рН 10,0 выше, чем при рН от 4,0 до рН 6,5;
(d) получения гена, кодирующего антигенсвязывающую молекулу, отобранную в (с);
(e) получения антигенсвязывающей молекулы с использованием гена, полученного в (d).
44. Способ получения антигенсвязывающей молекулы, который включает стадии:
(a) связывания антигенсвязывающей молекулы с антигеном в условиях от рН 6,7 до рН 10,0;
(b) выдерживания антигенсвязывающей молекулы, связанной с антигеном из (а), в условиях от рН 4,0 до рН 6,5;
(c) сбора антигенсвязывающей молекулы, которая диссоциировала в условиях от рН 4,0 до рН 6,5;
(d) получения гена, кодирующего антигенсвязывающую молекулу, полученную в (с);
а также (e) получения антигенсвязывающей молекулы с использованием гена, полученного в (d).
45. Способ получения антигенсвязывающей молекулы, связывающая активность которой при первом рН больше, чем при втором рН, который включает стадии:
(a) связывания антигенсвязывающей молекулы с иммобилизованным антигеном на колонке при первом условии рН;
(b) элюирования антигенсвязывающей молекулы, которая связана на колонке при первом рН, с колонки при втором условии рН;
(c) сбора элюированной антигенсвязывающей молекулы;
(d) получения гена, кодирующего антигенсвязывающую молекулу, полученную в (с); и
(e) получения антигенсвязывающей молекулы с использованием гена, полученного в (d).
46. Способ получения антигенсвязывающей молекулы, связывающая активность которой при первом рН выше, чем при втором рН, который включает стадии:
(a) связывания библиотеки антигенсвязывающих молекул с иммобилизованным антигеном на колонке при первом условии рН;
(b) элюирования антигенсвязывающей молекулы с колонки при втором условии рН;
(c) амплификации гена, кодирующего элюированную антигенсвязывающую молекулу;
(d) сбора элюированной антигенсвязывающей молекулы;
(e) получения гена, кодирующего антигенсвязывающую молекулу, собранную в (d);
(f) получения антигенсвязывающей молекулы с использованием гена, полученного в (е).
47. Способ получения по п. 45 или 46, в котором первый рН составляет от 6,7 до 10,0, а второй рН составляет от 4,0 до 6,5.
48. Способ получения по одному из пп. 43-47, который дополнительно включает стадию замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.
49. Способ получения по одному из пп. 43-48, в котором антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.
50. Фармацевтическая композиция, содержащая антигенсвязывающую молекулу, полученную способом получения по одному из пп. 43-49.