СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИНДРОМА ПОЛИКИСТОЗНЫХ ЯИЧНИКОВ У ПОДРОСТКОВ С ПОМОЩЬЮ ИЗМЕРЕНИЯ СООТНОШЕНИЯ 2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1 В МОЧЕ
DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR POLYCYSTIC OVARIAN SYNDROME IN ADOLESCENTS BY MEASURING URINE 2-OHE1/16α-OHE1 RATIO

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству и гинекологии, и может найти применение для диагностики синдрома поликистозных яичников (СПКЯ) у девочек.
Способ позволяет провести количественную оценку уровня метаболитов эстрогенов 2-гидроксиэстрона (2-ОНЭ1) и 16α-гидроксиэстрона (16α-ОНЭ1) и расчет их соотношения (2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1) в моче при обследовании девочек с олиго/аменореей, гиперандрогенными проявлениями и 2D-эхографическими признаками поликистозных яичников (ПКЯ) в возрасте от 14 до 17 лет включительно с помощью тест-системы ESTRAMET 2/16α ELISA для уточнения диагноза СПКЯ.
Описанные результаты были получены в рамках диссертации на соискание степени кандидата медицинских наук по теме: «Усовершенствование алгоритма диагностики и лечения формирующегося синдрома поликистозных яичников у подростков».
СПКЯ является одной из наиболее частых причин нарушения ритма менструации у подростков и бесплодия эндокринного генеза в репродуктивном возрасте [3, 4]. К сожалению, имеющиеся диагностические критерии в этом возрасте позволяют лишь заподозрить формирование синдрома, тогда как интервал между первым симптомом и диагностикой СПКЯ можно считать «выигранным» временем. Вот почему в научном мире гинекологов и эндокринологов перспективным и первоочередным по важности является изыскание более четких, специфических критериев СПКЯ, дающих возможность выявить заболевание на ранних стадиях его развития, начиная с подросткового периода.
Количественное определение уровней метаболитов эстрогенов в моче раннее было рекомендовано женщинам с гормональными нарушениями, оказывающими влияние на риск и прогноз зависимых от эстрогенов состояний здоровья, для дополнительной диагностики расстройств репродуктивной системы, эстрогенсекретирующих тестикулярных и овариальных опухолей и преждевременного полового созревания. Принцип работы тест-системы ESTRAMET 2/16α ELISA (Immuna Care Corporation, США) основан на конкурентном методе твердофазного иммуноферментного анализа. Описанный способ заключается в определении уровня метаболитов эстрогенов 2-гидроксиэстрона (2-ОНЭ1) и 16α-гидроксиэстрона (16α-ОНЭ1) и расчет их соотношения (2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1) в моче.
В настоящее время считается доказанным, что для поддержания нормального гормонального баланса у женщин необходимо, чтобы концентрация 2-ОНЭ1 превышала концентрацию 16α-ОНЭ1 как минимум в два раза. По данным ряда авторов при понижении данного соотношения статистически значимо возрастает риск возникновения выше указанных состояний [1, 2, 5, 6].
Задачей изобретения является разработка критерия диагностики СПКЯ у девочек в возрасте 14-17 лет включительно при использовании тест-системы ESTRAMET 2/16α ELISA для количественного определения уровня метаболитов эстрогенов 2-гидроксиэстрона (2-ОНЭ1) и 16α-гидроксиэстрона (16α-ОНЭ1) в моче и расчета их соотношения (2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1).
Методика исследования
Исследование было произведено у 40 девочек-подростков. Критериями отбора в группу обследуемых явились: возраст 14-17 лет включительно, соматическое здоровье, подтвержденное клинически и лабораторно, соответствие физического, полового и психического развития возрастным нормативам.
Основную группу составили 20 девочек с олиго/аменореей, гиперандрогенными проявлениями и 2D-эхографическими признаками ПКЯ.
Контрольную группу составили 20 девочек с регулярным ритмом менструаций и без гиперандрогенных проявлений.
На 1-м этапе проводили детальный анализ анамнестических данных девочек, включая изучение наследственной предрасположенности к заболеваниям, острых и хронических соматических и эндокринных заболеваний, перенесенных и имеющихся у девочек к моменту осмотра, времени возникновения и характера менструаций.
На 2-м этапе после получения информированного согласия девочки или ее законного представителя (при возрасте менее 15 лет), проводилась оценка данных 2D эхографии органов малого таза, физического (рост, масса тела, индекс массы тела) и полового развития (половая формула, данные наружного гинекологического осмотра), выявление гиперандрогенных проявлений.
На 3-м этапе оценивались уровни метаболитов эстрогенов 2-гидроксиэстрона (2-ОНЭ1) и 16α-гидроксиэстрона (16α-ОНЭ1) в моче и рассчитывались их соотношения (2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1) на основании данных, полученных при проведении теста ESTRAMET.
На 4-м этапе полученные данные клинических и лабораторных исследований обрабатывались статистическими методами.
Способ осуществляется следующим образом.
Исследование проводилось у девочек исследуемых групп во вторую фазу спонтанного или индуцированного приемом гестагенов цикла. Пациенткам предлагалось собрать утреннюю порцию мочи в объеме 50 мл в стерильный контейнер и в течение короткого промежутка времени доставить в лабораторию, где и проводилось количественное определение метаболитов эстрогенов 2-гидроксиэстрона (2-ОНЭ1) и 16α-гидроксиэстрона (16α-ОНЭ1) в моче in vitro методом иммуноферментного анализа с помощью набора реагентов ESTRAMET.
Полученные результаты
Установлено, что у здоровых девочек-подростков в возрасте от 14 до 17 лет включительно уровни метаболитов эстрогенов 2-гадроксиэстрона (2-ОНЕ1) и 16α-гидроксиэстрона (16α-ОНЭ1) в моче, оцениваемые путем использования тест-системы ESTRAMET 2/16α ELISA, имеют значения 24,01±8,2 нг/мл и 11,1±0,23 нг/мл соответственно. Анализ полученных результатов позволяет сделать вывод о том, что у здоровых девочек-подростков, имеющих регулярный ритм менструаций, соотношение метаболитов эстрогенов (2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1) в моче соответствует 2,2±0,34.
У девочек-подростков с СПКЯ без иных метаболических и эндокринных нарушений имеется почти двукратное снижение значений 2-ОНЭ1 (12,14±0,6 нг/мл) по сравнению с таковыми здоровых сверстниц. Уровень 16α-ОНЭ1 соответствует значениям 15,77±0,34 нг/мл, что существенно превышает значения в контрольной группе. Притом установлено, что соотношение метаболитов эстрогенов (2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1) в моче девочек-подростков с СПКЯ соответствует значениям 0,71±0,03.
Способ позволяет путем неинвазивного, доступного и нетрудоемкого сбора необходимого материала без участия медицинских работников и проведения иммуноферментного анализа in vitro без участия пациентки получить объективную количественную характеристику уровня метаболитов эстрогенов у девочек-подростков.
В основу способа положена впервые предлагаемая авторами диагностика СПКЯ у подростков в возрасте от 14 до 17 лет включительно по соотношению уровней метаболитов эстрогенов (2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1) методом иммуноферментного анализа с помощью набора реагентов ESTRAMET 2/16α ELISA.
Клинические примеры
Пример 1. Девочка А., 15 лет, обратилась с целью профилактического осмотра. Менструации с 12 лет регулярные, через 30 дней, по 7 дней, умеренные, безболезненные. На основании результатов клинического осмотра имела нормальный индекс массы тела, данных за гиперандрогенные проявления и воспалительный процесс половых органов не получено. На основании проведенного обследования (данные гормонального профиля: ЛГ - 5 МЕ/л, фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) - 5,3 МЕ/л, тестостерон - 1,5 нмоль/л, эстрадиол - 261 пмоль/л; трансабдоминальное ультразвуковое исследование (УЗИ) органов малого таза: размеры матки 39×28×35 мм, толщина эндометрия - 5 мм, размеры правого яичника 18×25×21 мм, левого яичника 12×26×18 мм) патологии функционирования органов репродуктивной системы не выявлено. Проведена количественная оценка уровней метаболитов эстрогенов в моче, собранной на 20 день менструального цикла, методом иммуноферментного анализа. Получен следующий результат: уровень 2-ОНЭ1 составил 25,3 нг/мл, уровень 16α-ОНЭ1 - 12,4 нг/мл, соотношение 2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1 - 2,4, что соответствует нормативным значениям и подтверждает отсутствие патологии репродуктивной системы.
Пример 2. Девочка Г., 14 лет, обратилась с целью профилактического осмотра. Менструации с 11 лет регулярные, через 28-30 дней, по 4-6 дней, умеренные, безболезненные. На основании результатов клинического осмотра имела нормальный индекс массы тела, данных за гиперандрогенные проявления и воспалительный процесс половых органов не получено. На основании проведенного обследования (данные гормонального профиля: ЛГ - 4,5 МЕ/л, фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) - 4,3 МЕ/л, тестостерон - 1,4 нмоль/л, эстрадиол - 235 пмоль/л; трансабдоминальное ультразвуковое исследование (УЗИ) органов малого таза: размеры матки 45×28×36 мм, толщина эндометрия - 5 мм, размеры правого яичника 17×25×22 мм, левого яичника 22×20×18 мм) патологии функционирования органов репродуктивной системы не выявлено. По данным мочевого теста соотношение метаболитов 2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1 соответствовало 2, что в соответствии с полученными авторами данными наблюдается при нормальном функционировании репродуктивной системы.
3
3
Пример 3. Девочка Р., 15 лет, обратилась с жалобами на задержки менструации до 40-90 дней. Менструации с 13 лет регулярные, через 31 день, по 5 дней, умеренные, безболезненные. Нарушение ритма менструаций по типу олигоменореи возникли через 1 год после менархе. При проведении осмотра: физическое и половое развитие девочки соответствовало возрасту, отмечен рост стержневых волос по белой линии живота, угревые высыпания на коже лица. При ректоабдоминальном исследовании патологических отклонений размеров, положения, консистенции матки и придатков от нормативных не выявлено. При исследовании гормонального профиля констатировали повышение уровня сывороточного ЛГ до 18 МЕ/л и Т до 3,5 нмоль/л, уровень других гормональных показателей находился в пределах нормативных значений, что позволило исключить наличие сопутствующих обменно-эндокринных заболеваний. Данные эхографии органов малого таза позволили определить асимметрично увеличенные в размерах яичники (20 см и 16 см объем правого и левого яичника соответственно), наличие фолликулов разного диаметра (от 4 до 8 мм), располагающихся по всему объему эхопозитивной стромы. В результате проведенного исследования пациентке был поставлен диагноз: Синдром поликистозных яичников. Анализ содержания метаболитов эстрогенов в моче демонстрировал снижение 2-ОНЭ1 до 11,82 нг/мл и увеличение 16α-ОНЭ1 до 16,10 нг/мл. Притом рассчитанное авторами на основании указанных выше значений соотношение метаболитов 2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1 соответствовало 0,73, то есть оказалось почти в 3 раза меньше нормативного уровня.
3
Пример 4. Пациентка П., 14,5 лет, обратилась с жалобами на нерегулярные менструации. Из перенесенных заболеваний отметила ОРВИ, краснуху. Наследственность была отягощенной по женской линии фиброзно-кистозной мастопатией у мамы, гипотиреозом у бабушки. Менструации с 12,5 лет нерегулярные (с задержками до 3-5 месяцев), по 6 дней, умеренные, безболезненные. При проведении осмотра физическое и половое развитие девочки соответствовало возрасту. При ректоабдоминальном исследовании патологических отклонений размеров, положения, консистенции матки и придатков от нормативных не выявлено. Лабораторно-инструментальное обследование проведено на 3 день спонтанной менструации. Гормональный профиль при исследовании определил наличие гиперандрогении: уровень тестостерона составил 2,8 пмоль/л, при возрастном нормативе 1,4-1,8 пмоль/л. Уровень ЛГ соответствовал 16,6 МЕ/л. Остальные гормоны были в пределах возрастных нормативных значений. Данные эхографии органов малого таза, выполненной параллельно определению гормонального фона, свидетельствовали о симметричном увеличении размеров яичников (в среднем до 17,5±0,3 см), наличии множества разновеликих фолликулов, располагающихся по всему объему изоэхогенной стромы. Матка размерами 48×33×43 мм без видимой органической патологии, эндометрий толщиной 5 мм. Результаты мочевого теста показали снижение 2-ОНЭ1 до 11,58 нг/мл и увеличение 16α-ОНЭ1 до 16,09 нг/мл, соотношение метаболитов 2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1 соответствовало 0,72. На основании проведенного исследования пациентке был поставлен диагноз: Синдром поликистозных яичников.
Список литературы
1. Антонеева И.И., Петров СБ. Маркеры апоптоза и пролиферации опухолевых клеток в динамике прогрессирования рака яичника / И.И. Антонеева, СБ. Петрова // Онкология. - 2008. - Т. 10. N 2. - С. 234-237.
2. Ашрафян Л.А., Киселев В.И., Овчинникова О.А., Антонова И.Б. Метаболиты эстрогенов у больных раком молочной железы и возможные пути их коррекции. Материалы IX Всероссийской школы «Основы клинической маммологии». - Москва, 2008. - С. 54-56.
3. Уварова Е.В. Возможности применения комбинированных оральных контрацептивов в пролонгированном режиме при лечении синдрома поликистозных яичников // Проблемы репродукции. - 2006. - Т. 12. - С. 73-78.
4. Шилин Д.Е. Синдром гиперандрогении: современные подходы к диагностике и новые технологии терапии // Лечащий врач. - 2003. - №10. - С. 36-39
5. Guilemette С, Belanger A., Lepine J. Metabolic inactivation of estrogens in breast tissue by UDP-glucuronosyltransferase enzymes: an overview // Breast Cancer Res. - 2004. - Vol. - 6(6). - P. 246-254.
6. Lord R.S., Bongiovanni В., Bralley J.A., Estrogen metabolism and the diet-cancer connection: rationale for assessing the ratio of urinary hydroxylated estrogen metabolites // Altern. Med. Rev. - 2002. Vol. 7. - P. 12-29.