СТАБИЛЬНЫЕ И РАСТВОРИМЫЕ АНТИТЕЛА, ИНГИБИРУЮЩИЕ TNFα

L
H
L
H
1. Стабильное и растворимое антитело или производное антитела, которые специфически связывают TNFα, причем указанное антитело или производное антитело содержат вариабельный домен легкой цепи (V), имеющий последовательность SEQ ID NO:1 или производный из последовательности SEQ ID NO:1, который объединен с вариабельным доменом тяжелой цепи (V), имеющим последовательность SEQ ID NO:2 или производным из последовательности SEQ ID NO:2, причем в случае производной последовательности указанная последовательность имеет максимально до 5 изменений в каркасе указанного V-домена и/или максимально до 9 изменений в каркасе указанного V-домена.
L
H
2. Антитело или производное антитела по п.1, где изменения V находятся в одном или нескольких из положений 4, 46, 65, 67, 70 и/или 83, а изменения V находятся в одном из положений 11, 16, 28, 43, 68, 70, 71, 72, 73, 76, 77, 93 и/или 112.
L
H
3. Антитело или производное антитела по п.1, где изменения V находятся в одном или нескольких из положений 4, 46, 65, 67, 70 и/или 83, а изменения V находятся в одном или нескольких из положений 11, 16, 28, 43, 48, 68, 70, 71, 72, 73, 76, 77, 79, 93 и/или 112.
L
H
4. Антитело или производное антитела по любому из предыдущих пунктов, в котором, по меньшей мере, одно из этих превращений приводит к аминокислоте, присутствующей в SEQ ID NO:3 для V и/или SEQ ID NO:4 для V.
L
5. Антитело или производное антитела по п.1, где V-домен содержит последовательность SEQ ID:NO 1.
H
6. Антитело или производное антитела по п.5, содержащее V-домен последовательности SEQ ID NO:2.
H
7. Антитело или производное антитела по п.5, содержащее V-домен, производный из последовательности SEQ ID NO:2, в которой F68 изменен на A, L, I или V.
L
H
8. Антитело или производное антитела по п.1, содержащее V-домен последовательности SEQ ID NO:11 и V-домен последовательности SEQ ID NO:4.
L
H
9. Антитело или производное антитела по п.1, где, по меньшей мере, один аминокислотный остаток превращен, по меньшей мере, в одном из CDR в остаток, присутствующий в соответствующем CDR V-последовательности SEQ ID NO:5 и/или V-последовательности SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:25.
L
L
H
H
L
H
10. Антитело или производное антитела по п.9, где, по меньшей мере, один из CDR группы CDR2 V, CDR3 V, CDR2 V или CDR3 V превращен в соответствующий CDR V-последовательности SEQ ID NO:5 и/или V-последовательности 25 или SEQ ID NO:6.
L
H
11. Антитело или производное антитела по п.10 с V-последовательностью SEQ ID NO:7 или SEQ ID NO:8 и V-последовательностью SEQ ID NO:2.
H
H
12. Антитело или производное антитела по п.10 с V-последовательностью SEQ ID NO:1 и V-последовательностью SEQ ID NO:4, или SEQ ID NO:9, или SEQ ID NO:28, или SEQ ID NO:29.
H
H
13. Антитело или производное антитела по п.10 с V-последовательностью SEQ ID NO:26 или SEQ ID NO:27 и V-последовательностью SEQ ID NO:30.
14. Антитело или производное антитела по п.9, имеющее специфичность в отношении TNFα человека.
L
H
15. Производное антитела по п.1, которое является scFv-антителом, в котором V- и V-домены соединены линкером.
L
H
16. scFv-антитело по п.15, содержащее расположение последовательностей V-линкер-V.
17. scFv-антитело по п.15, где этот линкер имеет последовательность SEQ ID NO:10 или произведен из указанной последовательности.
18. scFv-антитело по п.17, где, по меньшей мере, один G указанного линкера изменен на более полярную или заряженную аминокислоту.
19. scFv-антитело по п.18, где линкер имеет последовательность SEQ ID NO:39.
L
H
20. Производное антитела по п.1, которое является Fab-фрагментом, в котором V-домен слит с константной областью каппа-цепи Ig человека, V-домен слит с СН1-доменом IgG человека и эти два слитых полипептида соединены межцепочечным дисульфидным мостиком.
21. scFv-антитело или Fab-фрагмент по п.1, которые являются мечеными или химически модифицированными.
22. ДНК-последовательность, кодирующая антитело или производное антитела по любому из пунктов 1-20.
23. Клонирующий или экспрессирующий вектор, содержащий ДНК-последовательность по п.22.
24. Подходящая клетка-хозяин, трансформированная экспрессирующим вектором по п.23.
25. Клетка-хозяин по п.24, являющаяся прокариотической или эукариотической клеткой, в частности, клеткой Е.coli, дрожжей, растения, насекомого или млекопитающего.
26. Способ получения молекулы антитела или производного антитела по любому из пунктов 1-20, предусматривающий культивирование клетки-хозяина по п.24 или 25 в условиях, которые делают возможным синтез указанной молекулы антитела, и извлечение ее из указанной культуры.
27. Антитело или производное антитела по п.1 в качестве фармацевтического средства.
28. Применение антитела или производного антитела по любому из пп.1-21 для получения лекарственного средства для лечения TNFα-ассоциированных заболеваний, в частности, остеоартрита, увеита, воспалительного заболевания кишечника, или в качестве диагностического средства in vitro для детектирования TNFα-ассоциированных заболеваний, в частности, остеоартрита, увеита, воспалительного заболевания кишечника.
29. Диагностическая или терапевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп.1-21 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.
30. Комбинированный препарат, содержащий антитело по любому из пп.1-21 вместе, по меньшей мере, со вторым соединением.
31. Комбинированный препарат по п.30, в котором второе соединение не является антителом, специфическим в отношении TNFα.
32. Комбинированный препарат по п.30 или 31 для применения в качестве лекарственного средства.
33. Вектор по п.23 в качестве фармацевтического средства для генотерапевтических применений на людях и/или животных.
34. Способ лечения TNFα-связанного заболевания, где антитело или производное антитела по любому из пп.1-21 вводят локально или местно.
L
H
35. Применение любой из V- и/или V-последовательностей, указанных в любом из пп.1-20, в экспрессирующем векторе.
36. Стабильная водная фармацевтическая готовая форма, содержащая терапевтически эффективное количество антитела или производного антитела по любому из пп.1-21, не подвергнутого предварительной лиофилизации, ацетатный буфер с pH приблизительно от 4,8 до 5,5, поверхностно-активное вещество и полиол, где эта готовая форма не содержит регулирующего тоничность количества хлорида натрия.
37. Готовая форма по п.36, которая является изотонической.
38. Готовая форма по п.36 или 37, которая является стабильной при температуре приблизительно 2-8°С в течение, по меньшей мере, одного года.
39. Готовая форма по п.36, которая является стабильной после замораживания и оттаивания этой формы.
40. Готовая форма по п.36, которая является стабильной при приблизительно 30°С в течение, по меньшей мере, одного месяца.
41. Готовая форма по п.36, где полиол является невосстанавливающим сахаром.
42. Готовая форма по п.36, где невосстанавливающим сахаром является трегалоза.
43. Готовая форма по п.36, где невосстанавливающим сахаром является сахароза.
44. Готовая форма по п.36, где антителом является фрагмент антитела.
45. Готовая форма по п.44, где фрагментом антитела является scFv.
46. Готовая форма по п.36, где антитело связывает TNFα.
47. Готовая форма по п.36, которая является стабильной при температуре приблизительно 2-8°С в течение, по меньшей мере, двух лет.
48. Готовая форма по п.36, где концентрация антитела в готовой форме равна приблизительно от 0,1 до 50 мг/мл.
49. Готовая форма по п.36, где поверхностно-активным веществом является полисорбат.
50. Готовая форма по п.45, где scFv связывает TNFα.
51. Готовая форма по п.36, где ацетат присутствует в количестве приблизительно 5-30 мМ.
52. Готовая форма по п.51, где ацетат присутствует в количестве 10-30 мМ.
53. Готовая форма по п.50, дополнительно содержащая консервант.
54. Готовая форма по п.53, где консервантом является бензиловый спирт.
55. Готовая форма по п.50, где антитело присутствует в количестве приблизительно 30-50 мг/мл.
56. Готовая форма по п.55, где буфером является 10-30 мМ ацетат натрия при pH 5, полиолом является трегалоза в количестве приблизительно 2-10% масса/объем, поверхностно-активным веществом является полисорбат в количестве приблизительно 0,01-0,1% об./об., где готовая форма дополнительно содержит бензиловый спирт в качестве консерванта и где готовая форма является стабильной при температуре приблизительно 2-8°С в течение, по меньшей мере, двух лет.
57. Изделие, содержащее контейнер, вмещающий стабильную водную фармацевтическую готовую форму, содержащую терапевтически эффективное количество антитела, не подвергнутого предварительной лиофилизации, ацетатный буфер с pH приблизительно от 4,8 до 5,5, поверхностно-активное вещество и полиол, где эта готовая форма не содержит регулирующего тоничность количества хлорида натрия.
58. Изделие по п.57, где антителом является антитело или производное антитела по пп.1-21.