Иммунологические аспекты поражения костного мозга при фолликулярной лимфоме

иммунологические аспекты поражения костного мозга при фолликулярной лимфоме

О.П. Колбацкая, н.А. фалалеева, А.м. моженкова, н.А. Купрышина, А.и. Павловская

ФГБУ«Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава России; Россия, 115478 Москва,

Каширское шоссе, 24

Контакты: Наталья Александровна Фалалеева falaleeva — n@mail.ru

Введение. Костный мозг (КМ) является одной из «излюбленных» зон поражения при фолликулярной лимфоме (ФЛ) — до 70 % случаев. Вместе с тем сопоставление субпопуляционного состава лимфоцитов КМ больных ФЛ с иммунофенотипом первичной опухоли и характеристиками неопухолевого микроокружения до настоящего времени не проводилось. Цель исследования — сопоставление субпопуляционного состава лимфоцитов КМ больных ФЛ с иммунофенотипом первичной опухоли и характеристиками неопухолевого микроокружения.

Материалы и методы. В исследование включены 78 больных ФЛ. Во всех случаях диагноз был верифицирован иммуногисто-химически в соответствии с критериями классификации Всемирной организации здравоохранения (2008). Результаты. При отсутствии специфического поражения КМ по данным гистологического исследования у больных отмечено достоверное повышение содержания цитотоксических CD8+ лимфоцитов в КМ — 21,9 ± 4,5 и 10,1 ± 1,7 %;р = 0,005. Наличие специфического поражения по данным гистологического исследования трепанобиоптатов КМ сопровождалось достоверным повышением уровня В-клеток (CD19+, CD20+), а также CD10+ лимфоцитов в аспиратах КМ. Содержание Т-лимфоцитов КМ(CD5+CD19-) было достоверно более высоким в CDW-негативных случаях ФЛ (32,2 ± 7,6 и 13,5 ± 3,4 %; р = 0,021). Количество В-клеток в КМ (CD19+CD5-, CD10+) было достоверно более высоким в CDW-позитивных случаях (p < 0,05). В случаях выраженной Т-клеточной инфильтрации первичной опухоли уровни костномозговых В-клеток со специфическим для ФЛ иммунофенотипом (CD10+, CD19+CD23+) были достоверно более низкими, р = 0,001 и 0,048 соответственно. Повышенное содержание лимфоцитов в КМ достоверно ассоциируется с повышенным содержанием Т-клеток: CD3, CD5, CD7, CD4, CD8. Вместе с тем содержание зрелых В-клеток (CD20+, CD22+) было одинаковым в 2 сравниваемых группах, а содержание В-лимфоцитов (CD19+, CD19+CD5-), а также В-клеток, экспрессирующих HLA-DR, CD23, CD10, CD38, — более высоким при отсутствии лимфоцитоза в КМ. По этим причинам верификация поражения КМ у больных ФЛ должна быть только иммунологической. Уровни зрелых В-лимфоцитов КМ (CD19, CD20, CD22) были достоверно более высокими у больных с нормальным содержанием оксифильных нормобластов в миелограмме.

Заключение. Наши данные указывают на то, что верификация поражения КМ у больных ФЛ должна быть только иммунологической. Т-клеточное микроокружение первичной опухоли препятствует диссеминации ФЛ в КМ. Субпопуляционный состав лимфоцитов КМ взаимосвязан с иммунофенотипом ФЛ (CD10). Костномозговое микроокружение (CD8+ лимфоциты) ассоциируется с отсутствием специфического поражения КМ по данным гистологического исследования трепанобиоптатов КМ.

Ключевые слова: фолликулярная лимфома, костный мозг, субпопуляция лимфоцитов

DOI: 10.17650/1726-9784-2016-15-4-110-116

immunological aspects of bone marrow involvement in follicular lymphoma

O.P. Kolbatskaya, N.A. Falaleeva, A.M. Mozhenkova, N.A. Kupryshina, A.I. Pavlovskaya

N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center at the Ministry of Health of Russia; 24 Kashyrskoe Sh., Moscow, 115478, Russia

Introduction. _Bone marrow is one of the most common sites of involvement in follicular lymphoma (70 % of cases). Comparison of bone marrow lymphocyte subpopulations with the immunophenotype of primari tumor ant its microinvirement has not been done. Matherials and methods. Study has been done in 78 patients with follicular lymphoma. Diagnosis in each case was verified according to criteria of WHO classification (2008).

Objective — to compare subpopulation composition of lymphocytes in bone marrow of patients with follicular lymphoma with immunophenotype of the primary tumor and the characteristics of the non-tumor microenvironment.

Results. Histological detection of bone marrow involvement was associated with significant elevation of mature B-cells (CD19+, CD20+) as well as CD10+ lymphovytes in bone marrow aspiration biopsy specimens. In CD10-negative follicular lymphoma T-cell content (CD5+CD19-) was higher than in CD10+ cases (32.2 ± 7.6 % u 13.5 ± 3.4 %; p = 0.021). Oppositively, number of B-cells in bone marrow (CD19+CD5-, CD10+) was higher in CD10+ cases (p < 0.05). Intensive infiltration of primary tumor with T-cells was associated with lower number of bone marrow B-cells with specific follicular lymphoma phenotype — CD10+, CD19+CD23+ — (p = 0.001 and 0.048, correspondingly). Elevation of bone marrow lymphocytes was associated with higher number of mature T-cells in bone

marrow - CD3, CD5, CD7, CD4, CD8. Number of B-cells (CD20+, CD22+) and (CD19+, CD19+CD5-), as well as B-cells expressing HLA-DR, CD23, CD10, CD38 was either equal or even higher in group of patients without lymphocytosis in bone marrow. In the gruop of normal level of oxyphilic normoblasts in bone marrow higher level of mature bone marrow B-cells (CD19, CD20, CD22) was noted. Conclusion. Our data confirm that verification of bone marrow involvement in follicular lymphoma should be immunological. T-cell microinvirement in primary tumor prevents of follicular lymphoma dissemination to bone marrow. Subpopulations of bone marrow lymphocytes are related to the immunophenotype of primary tumor (CD10). Bone marrow microenvironment (CD8+ lymphocytes) correlates with the absense of specific bone marrow involvement according to histology of bone marrow trephine biopsy.

Key words: follicular lymphoma, bone marrow, subpopulation of lymphocytes

Введение

Фолликулярная лимфома (ФЛ) относится к категории периферических мелкоклеточных лимфом. Костный мозг (КМ) является одним из наиболее частых участков метастатического поражения при ФЛ (до 70 % случаев по данным Всемирной организации здравоохранения [1]).

ФЛ возникает из клеток светлых центров фолликулов лимфатических узлов — центробластов и цен-троцитов. Важную роль в патогенезе заболевания играет транслокация 14;18 с перемещением гена Ьс1-2 с хромосомы 18 на хромосому 14 под контроль им-муноглобулиновых генов [2], наблюдаемая в более чем 90 % случаев ФЛ.

Иммунофенотипические характеристики ФЛ хорошо изучены. Это периферическая В-клеточная опухоль, характеризующаяся экспрессией общих В-кле-точных маркеров (CD19), маркеров более зрелых этапов В-клеточной дифференцировки (CD20, CD37, мембранные иммуноглобулины). В числе дополнительных маркеров — CD10, CD23, CD38, наличие фолликулярных дендритных клеток CD23+, CD21+.

Иммунофенотип ФЛ достаточно характерен, однако ее диагностика не всегда проста, что может быть связано со слабой экспрессией CD19 в ряде случаев [3], делецией иммуноглобулиновых генов в ходе соматических гипермутаций, характерных для этого типа клеток. Для наиболее полной диагностики ФЛ предложены восьмицветные проточно-ци-тометрические панели антител Еврофлоу [4].

Важную роль в диагностике и прогнозе ФЛ играет так называемое микроокружение опухолевых клеток. Инфильтрация опухоли Т-лимфоцитами является признаком благоприятного прогноза, а инфильтрация макрофагами — неблагоприятного [5].

Несмотря на высокую частоту поражения КМ при ФЛ, патогенетические механизмы этого процесса до конца не изучены. Доказана неблагоприятная роль данного фактора в прогнозе ФЛ [6]. В литературе отсутствуют сведения о взаимосвязи поражения КМ при ФЛ с иммунофенотипом первичной опухоли и опухолевым микроокружением. Практически не разработан вопрос о костномозговом микроокружении опухолевых клеток. Целью нашего исследования было сопоставление субпопуляционного состава

лимфоцитов КМ больных ФЛ с иммунофенотипом первичной опухоли и характеристиками неопухолевого микроокружения.

В работе мы оценили субпопуляционный состав лимфоцитов КМ у больных ФЛ, изучили состав лимфоцитов КМ в случаях поражения (на основании гистологического исследования трепанобиопта-тов КМ) и без такового. Особое внимание уделили сопоставлению субпопуляционного состава лимфоцитов КМ с иммунофенотипом первичной опухоли. Также проанализированы взаимосвязи с некоторыми показателями гемопоэза у больных — наличием или отсутствием лимфоцитоза в КМ, изменением эритроидной дифференцировки с увеличением процентного содержания оксифильных форм.

Материалы и методы

Работа выполнена в НИИ клинической онкологии ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. Все больные проходили обследование и лечение в отделении химиотерапии.

У 78 больных ФЛ проведены анализ субпопуляций костномозговых лимфоцитов и оценка взаимосвязи с поражением КМ по данным гистологического исследования, иммунофенотипом первичной опухоли и характеристиками гемопоэза.

Диагноз ФЛ во всех случаях был верифицирован с помощью иммуногистохимического исследования биопсийного материала первичной опухоли. Морфологическую и иммуногистохимическую диагностику ФЛ, а также гистологическое исследование трепанобиопта-тов КМ проводили в отделе патологической анатомии опухолей человека по результатам исследования опухолевой ткани в соответствии с критериями классификации опухолей кроветворной и лимфоидной тканей Всемирной организации здравоохранения (2008) [1].

Исследование показателей гемопоэза, иммуно-фенотипирование опухоли по криостатным срезам, а также исследование субпопуляций лимфоцитов КМ методом проточной цитометрии проводились в лаборатории иммунологии гемопоэза.

Статистическую обработку результатов исследования выполняли с использованием программы SPSS 16.0 for Windows.

Результаты и обсуждение

Исследование КМ проведено у 78 больных ФЛ. Общая характеристика иммунофенотипа опухолевых клеток представлена в табл. 1.

Таблица 1. Иммунофенотипическая характеристика лимфоцитов костного мозга в случаях поражения при фолликулярной лимфоме

Маркеры N Минимум Максимум Среднее Стандартная ошибка среднего

Т-лимфоциты

2,30 67,70 22,8756 1,86942

2,20 64,70 22,4603 1,87915

1,30 62,10 18,8448 2,06258

1,00 50,00 11,7290 1,21106

0,70 51,40 12,8824 1,38382

В-лимфоциты

CD20 73 0,10 99,70 55,0219 3,16459

CD19 75 1,20 96,70 58,4040 3,03544

CD19+CD23 - 43 0,20 95,10 30,6442 3,55357

CD19+CDD23+ 62 0,20 99,80 40,2903 4,19729

CD19+CD5 - 43 1,70 99,40 64,5930 4,06902

CD19+CD5+ 65 0,10 92,40 5,9785 1,48672

CD22 14 1,00 98,60 65,8643 9,79761

Мембранные Ig-каппа 22 0,00 90,00 30,5409 7,86474

Мембранные ^-лямбда 19 0,10 95,60 39,3684 9,63585

Дополнительные маркеры

HLA-DR 65 9,20 97,60 65,1554 2,82077

CD38 73 0,50 96,90 25,3877 2,92508

CD10 61 0,00 92,40 27,2426 3,67968

CD21 30 0,10 96,90 25,7967 4,99242

CD23 60 0,30 99,80 40,2933 4,30600

Как видно из табл. 1, диапазон Т-лимфоцитов достаточно широк. Уровень В-клеток был низким в случаях отсутствия поражения КМ и высоким при наличии специфического поражения КМ при ФЛ (максимум по CD20+ 99,7 %). В отдельных случаях изучены маркеры и их комбинации, используемые для дифференциальной диагностики мелкоклеточных лимфом: CD79, CD43, CD81, CD200, CD31, CD305, CD11c, CD103, CD95, CD185, CD49d, CD62L, CD39, CD27. Ни в одном из этих случаев не был подтвержден диагноз хронического лимфолейкоза

(В-ХЛЛ), мантийноклеточной лимфомы, лимфомы из клеток маргинальной зоны, лимфоплазмоцитар-ной лимфомы, волосатоклеточного лейкоза. Во всех случаях иммунофенотипическая характеристика лимфоидных клеток соответствовала ФЛ.

В табл. 2 сопоставлены уровни различных субпопуляций лимфоцитов у больных с наличием поражения по данным гистологического исследования трепанобиоптатов КМ и при отсутствии такового.

Таблица 2. Количественное сопоставление уровней различных субпопуляций лимфоцитов костного мозга у больных с наличием поражения костного мозга (по данным гистологического исследования) и при отсутствии такового

Маркер, СО Поражение костного мозга N Среднее Стандартная ошибка среднего P

CD3 нет 10 30,3100 5,36637 нд

есть 32 21,6219 3,09294

CD7 нет 11 29,8818 5,41952 нд

есть 28 20,7607 3,03363

CD5+ нет 6 27,4333 6,29050 нд

CD19 - есть 19 16,7789 3,88377

CD4 нет 10 11,1700 2,05091 нд

есть 29 12,3690 2,13165

CD8 нет 10 21,8800 4,47933 0,005

есть 28 10,0643 1,74853

CD20 нет 8 30,4500 13,07627 0,011

есть 30 58,0100 4,09746

CD19 нет 11 36,0273 10,75636 0,013

есть 27 60,4593 4,12279

CD19+ нет 6 29,6167 13,95993 нд

CD23 - есть 16 32,7000 5,09521

HLA-DR нет 9 48,8000 11,33653 нд

есть 24 63,0292 4,24436

CD38 нет 10 27,5300 7,97329 нд

есть 30 20,6100 4,00341

CD10 нет 8 13,1875 4,68331 0,047

есть 25 29,2240 6,13737

CD21 нет 3 2,0000 0,50332 0,056

есть 12 15,4250 6,28543

Примечание. нд — различия недостоверны.

Как видно из табл. 2, лишь в случаях ФЛ без поражения КМ достоверно повышено содержание

CD3 78

CD7 73

CD5+19 - 58

CD4 69

CD8 68

цитотоксических клеток CD8+ в КМ. При наличии поражения по данным гистологического исследования трепанобиоптатов КМ, как и следовало ожидать, был повышен уровень всех В-клеток (CD19+, CD20+), а также CD10-позитивных лимфоцитов.

Мы сравнили субпопуляционный состав лимфоцитов КМ у больных ФЛ в зависимости от первичного иммунофенотипа опухоли. Статистически достоверные данные получены в зависимости от экспрессии антигена CD10 (табл. 3).

таблица 3. Особенности субпопуляционного состава лимфоцитов костного мозга у больных фолликулярной лимфомой в зависимости от экспрессии CD10 на клетках первичной опухоли

маркер, CD CD10 N Среднее Стандартная ошибка среднего p

CD5+ нет 8 32,2125 7,57926 0,021

CD19 - есть 12 13,4667 3,39564

CD20 нет есть 10 18 38,0300 59,0444 7,91658 6,62203 0,055

CD19+ нет 7 32,8714 9,46094 0,033

CD5 - есть 9 63,1444 8,60029

CD10 нет 5 3,2800 0,73308 0,000

есть 19 35,2158 7,10091

Примечание. Сопоставление проведено по всем субпопуляциям, представленным в табл. 2. В табл. 3 представлены только достоверные различия.

Уровень Т-клеток (в данном случае CD5+CD19-лимфоциты) был достоверно более высоким в CD10-негативных случаях ФЛ. Следует отметить, что общее содержание Т-клеток, выявляемых по маркерам CD3 и CD7, также было более высоким в CDlO-негатив-ных случаях, однако по этим маркерам различия не были достоверными: для CD3 средние значения 28,4 ± 5,95 (n = 11) и 20,4 ± 3,52 (n = 22), для CD7-27,2 ± 6,0 (n = 11) и 18,7 ± 3,5 (n = 19).

Вместе с тем уровень В-клеток в КМ был более высоким в CD^-позитивных случаях ФЛ, что наиболее отчетливо наблюдается на примере CD19+CD5-субпопуляции. Интересно отметить, что злокачественные клетки КМ сохраняли CD10+ иммунофенотип. Это совсем не очевидно, так как хорошо известно, что при выходе за пределы фолликула клетки ФЛ могут утрачивать антиген CD10 [7].

Экспрессия CD23, CD21 на опухолевых клетках, а также наличие CD21+ фолликулярных дендритных клеток в опухолевой ткани не были взаимосвязаны с субпопуляционным составом, а также особенностями иммунофенотипа лимфоидных клеток КМ. Наличие CD23+ фолликулярных дендритных клеток

ассоциировалось с большей пропорцией CD19+-CD23+ клеток в КМ: 11,7 ± 6,1 % (п = 5) и 36,9 ± 8,96 % (п = 16), р = 0,033. Определенная тенденция (р < 0,05) отмечена для более высоких уровней В-кле-ток ^19+, CD10+, HLA-DR+) в КМ больных CD38-позитивной ФЛ, однако число пациентов с CD38-негативным иммунофенотипом было крайне мало (п = 3).

Интересным, с нашей точки зрения, оказалось влияние Т-клеточного микроокружения ФЛ с метастатическим поражением КМ при данном типе опухоли. В случаях выраженной Т-клеточной инфильтрации опухоли уровни В-клеток со специфическим для ФЛ иммунофенотипом (CD10+, CD19+CD23+) были достоверно более низкими, р = 0,001 и 0,048 соответственно.

У большинства больных ФЛ иммунофенотипи-рование лимфоцитов КМ было проведено на фоне их повышенного содержания. Сравнение субпопуля-ционного состава лимфоцитов у этой группы больных и больных с нормальным или сниженным количеством лимфоцитов в КМ представлено в табл. 4.

Главный вывод, который можно сделать на основании анализа данных табл. 4, заключается в том, что повышенное содержание лимфоцитов достоверно ассоциируется с повышенным содержанием Т-клеток: CD3, CD5, CD7, CD4, CD8. Вместе с тем содержание зрелых В-клеток, измеряемых на основании мембранной экспрессии антигенов CD20 и CD22, является абсолютно идентичным в 2 сравниваемых группах. Количество В-клеток (CD19+, CD19+CD5-) было более высоким у больных, содержание лимфоцитов в КМ у которых не было повышено. Аналогичные данные получены для всех дополнительных маркеров, используемых при дифференциальной диагностике ФЛ CD23, CD10, CD38). Следовательно, повышенное содержание лимфоцитов КМ у больных ФЛ не является указанием на специфическое поражение КМ, так как чаще всего ассоциировано с достоверным увеличением уровня Т-клеток. При этом уровень зрелых В-лимфоцитов в группах с нормальным и сниженным содержанием лимфоцитов также повышен в сравнении с нормой. Напротив, уровни клеток, экспрессирующих маркеры, применяемые в дифференциальной диагностике ФЛ, выше у больных с нормальным или сниженным содержанием лимфоцитов. По этим причинам верификация поражения КМ у больных ФЛ должна быть только иммунологической.

Мы сравнили субпопуляционный состав лимфоцитов КМ с особенностями костномозгового кроветворения у больных ФЛ. Наиболее частым отклонением являлось повышение уровня оксифильных нормобластов, наблюдаемое в анализируемой группе в 69 % случаев. Сравнение субпопуляционного состава

таблица 4. Сопоставление субпопуляционного состава лимфоцитов костного мозга у больных фолликулярной лимфомой в зависимости от наличия лимфоцитоза в костном мозге

маркер, CD лимфоцитоз N Среднее Стандартная ошибка среднего р

CD3 есть 44 21,0477 2,02323 0,009

нет 8 7,9625 1,43265

CD7 есть 37 20,2297 2,13617 0,002

нет 9 9,4444 1,88518

CD5+CD19- есть 31 19,6065 2,54463 0,019

нет 7 6,1429 1,59551

CD4 есть 38 10,9211 1,29787 0,037

нет 6 3,7833 0,77003

CD8 есть 38 10,3421 1,13488 0,032

нет 6 3,9167 ,62419

CD20 есть 41 61,8146 3,93600 0,830

нет 9 63,8222 7,48274

CD19+CD23- есть 24 34,2792 4,56180 0,220

нет 2 14,1000 0,10000

CD19+CD23+ есть 39 42,8231 5,43344 0,04

нет 7 69,5429 9,94080

CD19+CD5- есть 21 72,5857 4,71191 0,010

нет 5 89,5800 3,63296

CD19+CD5+ есть 40 5,6825 0,92440 0,180-0,014

нет 8 2,8000 0,63920

CD19 есть 38 65,6868 2,61593 0,003

нет 9 83,6667 4,05822

Каппа цепь sIg есть 15 32,8667 9,55514 0,350

нет 3 56,0333 26,46094

Лямбда цепь sIg есть 12 31,0167 12,20308 0,97

нет 3 32,2000 31,70021

CD22 есть 7 65,8714 16,89738 0,99

нет 6 0,65,6667 13,51213

H1A-DR есть 33 69,9424 2,92221 0,004

нет 8 82,6750 2,71496

CD38 есть 42 20,6452 3,53140 0,040

нет 8 40,9750 12,50781

CD10 есть 34 24,7324 4,67723 0,067

нет 9 45,2444 11,83460

CD21 есть 22 33,6727 5,96952 0,000

нет 2 6,6000 0,00000

CD23 есть 29 46,1138 6,39498 0,000

нет 4 80,2500 2,56694

Примечание. Термином «лимфоцитоз» обозначено содержание лимфоцитов выше верхней границы нормы.

Таблица 5. Сравнение субпопуляционного состава лимфоцитов в группах с повышенным и нормальным содержанием оксифильных нормобластов

Маркер СО Оксифильные нормобласты N Среднее Стандартная ошибка среднего р

CD33 норма 27 21,1852 2,81379 нд

увеличены 21 18,7143 2,48855

CD7 норма 22 19,2409 2,89134 нд

увеличены 20 19,2300 2,62765

CD5+CD19 - норма 23 17,7435 2,90525 нд

увеличены 11 20,6364 4,28030

CD4 норма 21 10,7190 1,86120 нд

увеличены 19 10,4842 1,70229

CD8 норма 21 10,0810 1,71442 нд

увеличены 19 9,8842 1,37158

CD22 норма 26 67,5462 5,17018 0,054

увеличены 20 53,8650 4,57792

CD19+CD23 - норма 16 32,0062 6,43100 нд

увеличены 8 32,6625 4,24062

CD19+CDD23+ норма 24 53,8708 7,10856 нд

увеличены 18 38,8556 7,15996

CD19+CD5 - норма 15 78,7133 5,22328 нд

увеличены 8 67,3250 8,15727

CD19+CD5+ норма 26 5,0885 0,92411 нд

увеличены 18 5,4556 1,66700

HLA-DR норма 20 73,2800 4,05049 нд

увеличены 17 68,3294 3,40149

CD38 норма 26 21,6500 4,88651 нд

увеличены 20 26,0800 5,32446

CD10 норма 24 24,8708 5,71211 нд

увеличены 15 33,7600 8,01405

CD21 норма 15 26,8000 6,85084 нд

увеличены 7 29,5429 9,98818

CD19 норма 25 72,2200 3,35220 0,03

увеличены 18 61,1889 3,41027

CD23 норма 16 50,2125 9,09345 нд

увеличены 13 53,2077 8,47612

каппа норма 9 33,8778 13,03432 нд

увеличены 8 33,8875 13,36714

лямбда норма 9 42,2333 15,70206 нд

увеличены 5 17,6800 15,76913

CD22 норма 8 77,0375 11,08836 0,011

увеличены 2 1,2500 0,25000

Примечание. нд — различия недостоверны.

лимфоцитов в группах с повышенным и нормальным содержанием оксифильных нормобластов приведено в табл. 5.

Интересно отметить, что только уровень зрелых В-лимфоцитов (CD19, CD20, CD22) был достоверно более высоким у больных с нормальным содержанием оксифильных нормобластов. Это еще раз подтверждает выдвинутое нами ранее на основании гистологического анализа поражения КМ предположение о том, что увеличение количества оксифильных форм не обусловлено выраженностью метастатического поражения КМ, так как наибольшее увеличение количества В-клеток наблюдается при нормальном содержании оксифильных нормобластов в миелограмме.

Заключение

Полученные нами данные свидетельствуют о наличии достоверных взаимосвязей субпопуляционно-го состава лимфоцитов у больных ФЛ с наличием гистологически документированного поражения КМ, особенностями иммунофенотипа первичной опухоли и опухолевого микроокружения, а также особенностями гемопоэза у больных ФЛ.

В случаях ФЛ без поражения КМ достоверно повышено содержание цитотоксических клеток CD8+ в КМ. При наличии поражения по данным гистологического исследования трепанобиоптатов КМ был повышен уровень всех В-клеток (CD19+, CD20+), а также CDlO-позитивных лимфоцитов.

Уровень Т-клеток (CD5+CD19- лимфоциты) был достоверно более высоким в CDlO-негативных

случаях ФЛ. Вместе с тем количество В-клеток в КМ было выше в CD10-позитивных случаях ФЛ, что наиболее отчетливо наблюдается на примере CD19+CD5-субпопуляции. Злокачественные клетки КМ сохраняли CD10+ иммунофенотип.

Т-клеточное микроокружение ФЛ было взаимосвязано с метастатическим поражением КМ: в случаях выраженной Т-клеточной инфильтрации первичной опухоли уровни В-клеток со специфическим для ФЛ иммунофенотипом ^10+, CD19+CD23+) достоверно более низкие, р = 0,001 и 0,048 соответственно.

Повышенное содержание лимфоцитов в КМ достоверно ассоциируется с повышенным содержанием Т-клеток: CD3, CD5, CD7, CD4, CD8. Вместе с тем содержание зрелых В-клеток (CD20+, CD22+) одинаковое в 2 сравниваемых группах, а содержание В-лимфоцитов (CD19+, CD19+CD5-), а также В-клеток, экспрессирующих HLA-DR, CD23, CD10, CD38, было более высоким при отсутствии лимфо-цитоза в КМ. По этим причинам верификация поражения КМ у больных ФЛ должна быть только иммунологической.

Уровни зрелых В-лимфоцитов (CD19, CD20, CD22) были достоверно более высокими у больных с нормальным содержанием оксифильных нормобластов. Следовательно, увеличение количества ок-сифильных форм не обусловлено выраженностью метастатического поражения КМ, так как наибольшее увеличение количества В-клеток наблюдается при нормальном содержании оксифильных нормо-бластов в миелограмме.

ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES

1. Swerdlow S.H., Campo E., Harris N.L. et al. (Eds.) WHO classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues. WHO Press, 2008. P. 439.

2. Tsujimoto Y., Gorham J., Cossman J. et al. The t (14:18) chromosome translocations involved in B-cell neoplasms result from mistakes in VDJ joining. Science 1985;229(4720):1390-3. PMID: 3929382.

3. Almasri N.M., Duque R.E., Iturraspe J. et al. Reduced expression of CD20 antigen as a characteristic marker for chronic lymphocytic leukemia. Am J Hematol 1992;40:259-63. PMID: 1380203.

4. van Dongen J.J., Lhermitte L., Botcher S. et al. EuroFlow antibody panels

for standardized n-dimentional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leucocytes. Leukemia 2012;26:1908-75. DOI: 10.1038/leu.2012.120. PMID: 22552007. PMCID: PMC3437410.

5. Dave S.S., Wright G., Tan B. et al. Prediction of survival in follicular lymphoma based on molecular features of tumor-infiltrating immune cells. N Engl J Med 2004;351: 2159-69. DOI: 10.1056/NEJMoa041869. PMID: 15548776.

6. Federico M., Bellei M., Marcheselli L. et al. Follicular Lymphoma International Prognostic Index 2: A New Prognostic Index for Follicular Lymphoma Developed by

the International Follicular Lymphoma Prognostic Factor Project. J Clin Oncology 2009;27:4555-62. DOI: 10.1200/jc0. 2008.21.3991. PMID: 19652063.

7. Dogan A., Du M.Q., Aiello A. et al. Follicular lymphoma contain a clonally linked but phenotypically distinct neoplastic B-cell population in the interfollicular zone. Blood 1998;91:4708-14.

PMID: 9616169.