СТАБИЛИЗИРОВАННЫЕ ПРЕПАРАТЫ, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ NGF
STABILIZED PREPARATIONS CONTAINING ANTIBODIES AGAINST NGF

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к области препаратов терапевтических антител. Конкретнее, настоящее изобретение относится к области фармацевтических препаратов, включающих антитело человека, которое специфически связывается с фактором роста нервов (NGF) человека.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Терапевтические макромолекулы (например, антитела) должны приготовляться в виде лекарственного препарата способом, который не только делает молекулы подходящими для введения пациентам, но также сохраняет их стабильность во время хранения. Например, терапевтические антитела в жидком растворе подвержены деградации, агрегации и/или нежелательным химическим модификациям кроме случаев, когда раствор приготовлен надлежащим образом. Стабильность антитела в жидком препарате зависит не только от типов наполнителей, используемых в препарате, но также от количеств и пропорций наполнителей относительно друг друга. Кроме того, при приготовлении жидкого препарата антитела должны учитываться другие факторы помимо стабильности. Примеры таких дополнительных учитываемых факторов включают вязкость раствора и концентрацию антитела, которую может вмещать конкретный препарат. Таким образом, при приготовлении терапевтического антитела в виде лекарственного препарата необходимо очень позаботиться о получении препарата, который остается стабильным, содержит соответствующую концентрацию антитела и обладает подходящей вязкостью, а также другими свойствами, которые делают возможным удобное введение препарата пациентам.
Антитела против фактора роста нервов человека (hNGF) являются одним примером терапевтически релевантных макромолекул, для которых требуется надлежащее приготовление. Антитела против NGF клинически применимы для лечения и/или предупреждения таких заболеваний, как остеоартрит, ишиалгии и других состояний, таких как боль воспалительного происхождения, невропатическая боль и раковая боль.
Хотя антитела против NGF известны, в данной области техники сохраняется потребность в новых фармацевтических препаратах, включающих антитела против hNGF, которые являются в достаточной мере стабильными, а также подходят для введения пациентам.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение удовлетворяет вышеупомянутую потребность в результате обеспечения фармацевтических препаратов, включающих антитело человека, которое специфически связывается с фактором роста нервов человека (hNGF). Препараты настоящего изобретения могут включать наполнители помимо антитела против hNGF. Например, в некоторых вариантах осуществления препарат может включать (i) антитело человека, которое специфически связывается с hNGF; (ii) неионное поверхностно-активное вещество и (iii) по крайней мере один углевод. Неионное поверхностно-активное вещество может выбираться из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата и полиэтиленгликоля. В одном варианте осуществления неионным поверхностно-активным веществом является полисорбат 20. Углеводом может быть сахар, такой как, например, сахароза, глюкоза, маннит, сорбит, лактоза или трегалоза. В одном варианте осуществления сахаром является сахароза.
В одном варианте осуществления фармацевтический препарат включает (i) приблизительно 0,1-100 мг/мл антитела человека, которое специфически связывается с hNGF; (ii) приблизительно 0,01-1,0% полисорбата 20 и (iii) приблизительно 1-20% сахарозы.
В одном варианте осуществления фармацевтический препарат включает (i) приблизительно 0,2-75 мг/мл антитела человека, которое специфически связывается с hNGF; (ii) приблизительно 0,02-0,5% полисорбата 20 и (iii) приблизительно 5-10% сахарозы.
В одном варианте осуществления фармацевтический препарат включает (i) приблизительно 0,6-60 мг/мл антитела человека, которое специфически связывается с hNGF; (ii) приблизительно 0,05% полисорбата 20 и (iii) приблизительно 8% сахарозы.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтический препарат, кроме того, включает от приблизительно 1,0 мМ до приблизительно 50 мМ ацетата.
В одном варианте осуществления фармацевтический препарат включает (i) приблизительно 1-100 мг/мл антитела человека, которое специфически связывается с hNGF; (ii) приблизительно 0,01-1,0% полисорбата 20 и (iii) приблизительно 1-20% сахарозы. В некоторых вариантах осуществления фармацевтический препарат, кроме того, включает от приблизительно 1,0 мМ до приблизительно 50 мМ ацетата.
В одном варианте осуществления фармацевтический препарат включает (i) приблизительно 5-75 мг/мл антитела человека, которое специфически связывается с hNGF; (ii) приблизительно 0,02-0,5% полисорбата 20; (iii) приблизительно 5-10% сахарозы и (iv) приблизительно 5-20 мМ ацетата.
В одном варианте осуществления фармацевтический препарат включает (i) приблизительно 6-60 мг/мл антитела человека, которое специфически связывается с hNGF; (ii) приблизительно 0,05% полисорбата 20; (iii) приблизительно 8% сахарозы и (iv) приблизительно 10 мМ ацетата.
В некоторых вариантах осуществления препарат может также содержать по крайней мере одну аминокислоту, например гистидин или аргинин. В некоторых осуществлениях концентрация гистидина или аргинина может колебаться от приблизительно 25 мМ до приблизительно 100 мМ.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения препарат готовят в буфере, который способен к сохранению pH в диапазоне от приблизительно 4,5 до приблизительно 5,6, например, в ацетатном буфере.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтический препарат демонстрирует вязкость, составляющую менее чем приблизительно 15 сантипуаз, или менее чем приблизительно 12 сантипуаз, или менее чем приблизительно 9 сантипуаз.
Антителом, содержащимся в фармацевтических препаратах настоящего изобретения, может быть любое антитело или гибридный белок или ловушка, которое(ый, ая) специфически связывается с hNGF. Приводимыми в качестве примера антителами, которые могут содержаться в препаратах настоящего изобретения, являются антитела, включающие вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) и вариабельную область легкой цепи (LCVR), причем HCVR включает определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, HCDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, и HCDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; а LCVR включает определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, LCDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, и LCDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.
В некоторых вариантах осуществления антителом, содержащимся в препаратах настоящего изобретения, является антитело, включающее HCVR, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, и LCVR, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
В некоторых вариантах осуществления антителом, содержащимся в препаратах настоящего изобретения, является антитело, включающее HCVR, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, и LCVR, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтические препараты могут вводиться внутривенно или подкожно нуждающемуся в этом пациенту. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления описываемый здесь фармацевтический препарат может использоваться для приготовления лекарственного средства для лечения, предупреждения и/или уменьшения интенсивности любого заболевания или расстройства, связанного с активностью NGF или активацией NGF. Приводимые в качестве примера, не ограничивающие заболевания и расстройства, лечение и/или предупреждение которых может осуществляться посредством введения фармацевтических препаратов настоящего изобретения, включают боль вследствие любого состояния, сопровождающегося нейрогенной, невропатической или ноцицептивной болью. В некоторых вариантах осуществления, имеющих отношение к невропатической боли, упомянутую невралгию тройничного нерва, постгерпетическую невралгию, фантомную боль в ампутированной конечности, фибромиалгию, симпатическую рефлекторную дистрофию и нейрогенные болевые состояния подвергают лечению. В других вариантах осуществления раковую боль, в частности, связанную с раком кости боль, связанную с остеоартритом или ревматоидным артритом боль, поясничную боль, послеоперационную боль в месте разреза, боль в месте перелома или разрыва, боль при остеопоротическом переломе, остеопороз, суставную боль при подагре, диабетическую нефропатию, ишиалгию, боли, связанные с кризисами серповидных клеток, мигрень и другие невропатические и/или ноцицептивные боли подвергают лечению описываемыми здесь препаратами.
Препараты антител настоящего изобретения могут содержаться в любом подходящем контейнере, применимом для хранения фармацевтических препаратов. Примеры таких подходящих контейнеров включают, например, стеклянные или пластмассовые флаконы, шприцы и картриджи. Контейнер может быть прозрачным или непрозрачным (например, янтарно-желтого цвета). В некоторых вариантах осуществления флаконы или шприцы покрывают силиконом, например, диоксидом кремния. В некоторых вариантах осуществления свободное пространство во флаконах заполняют инертным газом с вытеснением любого присутствующего кислорода, который может оказывать вредное влияние на стабильность антитела. Такой инертный газ может выбираться из азота или аргона.
В соответствии с некоторыми аспектами настоящего изобретения фармацевтические препараты остаются относительно стабильными после хранения в течение нескольких дней, месяцев или лет при конкретной температуре. Например, в некоторых, приводимых в качестве примера вариантах осуществления настоящего изобретения высокий процент антитела (например, 90%, 95%, 96% или более) остается в нативной форме после хранения в течение по крайней мере 3, 6, 9 или более месяцев. Процентное содержание нативной формы антитела можно определить, например, с помощью эксклюзионной HPLC, или с помощью любого другого способа, известного в данной области техники. Температура хранения, при которой сохраняется стабильность антитела, может составлять, например, -80°C, -40°C, -30°C, -20°C, 0°C, 5°C, 25°C, 37°C, 45°C или выше.
Другие варианты осуществления настоящего изобретения станут очевидными благодаря анализу следующего подробного описания.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Прежде чем настоящее изобретение будет описано, следует понять, что это изобретение не ограничивается описанными конкретными способами и экспериментальными условиям, поскольку такие способы и условия могут варьироваться. Также должно быть понятно, что используемая здесь терминология предназначена лишь для описания конкретных вариантов осуществления и, как предполагается, не является ограничивающей, поскольку объем настоящего изобретения будет ограничиваться лишь прилагаемой формулой изобретения.
Кроме случаев, оговоренных особо, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют значение, одинаковое с тем, в котором их обычно понимает специалист со средним уровнем компетентности в области техники, к которой относится это изобретение. Используемый здесь термин «приблизительно», при использовании применительно к конкретному изложенному численному значению, означает, что значение может отличаться от изложенного значения на не более чем 1%. Например, как здесь используется, выражение «приблизительно 100» включает 99 и 101 и все значениями между ними (например, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 и т.д.).
Хотя при осуществлении на практике или проверке настоящего изобретения могут использоваться любые способы и материалы, схожие с теми, которые здесь описаны, или эквивалентные им, теперь будут описаны предпочтительные способы и материалы.
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ
Как здесь используется, выражение «фармацевтический препарат» означает комбинацию по крайней мере одного активного ингредиента (например, небольшой молекулы, макромолекулы, соединения и т.д., которая способна вызывать биологический эффект у человека или не являющего человеком животного) и по крайней мере одного неактивного ингредиента, который, после объединения с активным ингредиентом и/или одним или более дополнительных неактивных ингредиентов, подходит для терапевтического введения человеку или не являющему человеком животному. Используемый здесь термин «препарат» означает «фармацевтический препарат» кроме случаев, оговоренных особо. Настоящим изобретением обеспечиваются фармацевтические препараты, включающие по крайней мере один терапевтический полипептид. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения терапевтическим полипептидом является антитело, которое специфически связывается c фактором роста нервов человека (hNGF), или его антигенсвязывающий фрагмент. Конкретнее, настоящее изобретение включает фармацевтические препараты, которые включают (i) антитело человека, которое специфически связывается с hNGF; (ii) неионное поверхностно-активное вещество и (iii) по крайней мере один углевод. Конкретные, приводимые в качестве примера компоненты и препараты, включенные в настоящее изобретение, описываются подробнее ниже.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения «поверхностно-активным веществом» может быть неионное поверхностно-активное вещество, выбираемое из группы, состоящей из полисорбата 20, полисорбата 80, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеата и полиэтиленгликоля.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтические препараты настоящего изобретения могут быть текучими препаратами. Как здесь используется, выражение «текучий препарат» означает смесь из по крайней мере двух компонентов, которая находится преимущество в текучем состоянии при температуре от приблизительно 5°C до приблизительно 45°C. Текучие препараты включают, среди прочего, жидкие препараты. Текучие препараты могут быть с низкой, средней или высокой вязкостью в зависимости от их конкретных составных частей.
АНТИТЕЛА, КОТОРЫЕ СПЕЦИФИЧЕСКИ СВЯЗЫВАЮТСЯ С hNGF
Фармацевтические препараты настоящего изобретения могут включать антитело человека, или его антигенсвязывающий фрагмент, которое(ый) специфически связывается с hNGF. Используемый здесь термин «hNGF» означает фактор роста нервов человека, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, которая кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 1.
H
H
H
H
L
H
L
H
L
Используемый здесь термин «антитело», как обычно подразумевается, относится к молекулам иммуноглобулинам, включающим четыре полипептидные цепи, две тяжелые (H) цепи и две легкие (L) цепи, соединенные с помощью дисульфидных связей, а также их мультимерам (например, IgM); однако в определение термина «антитело» также включены молекулы иммуноглобулинов, состоящие только из тяжелых цепей (т.е. в которых отсутствуют легкие цепи). Каждая тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи (здесь сокращенно HCVR или V) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи включает три домена: C1, C2 и C3. Каждая легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи (здесь сокращенно LCVR или V) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи включает один домен (CL1). V- и V-области можно далее подразделить на участки гипервариабельности, называемые определяющими комплементарность участками (CDR), распределенные среди областей, которые являются более консервативными, называемых каркасными областями (FR). Каждая V и V состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от амино-конца к карбоксильному концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Кроме случаев, оговоренных особо, используемый здесь термин «антитело», как будет подразумеваться, охватывает полные молекулы антител, а также их антигенсвязывающие фрагменты. Используемые здесь термины «антигенсвязывающая часть» антитела, «антигенсвязывающий фрагмент» антитела и т.п. включают любой встречающийся в природе, ферментативно получаемый, синтетический или созданный с помощью методов генетической инженерии полипептид или гликопротеин, который специфически связывается с антигеном с образованием комплекса. Используемые здесь термины «антигенсвязывающая часть» антитела или «фрагмент антитела» относятся к одному или более фрагментов антитела, которые сохраняют способность к специфическому связыванию с hNGF.
Используемый здесь термин «выделенное антитело, как подразумевается, относится к антителу по существу без других антител, характеризующихся отличными специфичностями в отношении антигенов (например, выделенное антитело, которое специфически связывается с hNGF, является антителом по существу без антител, которые специфически связываются с антигенами, отличными от hNGF).
-6
Термин «специфически связывается» или т.п. означает, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образует комплекс с антигеном, который является относительно стабильным в физиологических условиях. Специфическое связывание может характеризоваться константной диссоциации, составляющей по крайней мере приблизительно 1×10 M или меньше. Способы определения того, связываются ли две молекулы специфически, хорошо известны в данной области техники и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и т.п. Однако выделенное антитело, которое специфически связывается с hNGF, может обладать перекрестной реактивностью с другими антигенами, такими как молекулы NGF других видов. В контексте настоящего изобретения полиспецифические (например, биспецифические) антитела, которые связываются с hNGF, а также с одним или более дополнительных антигенов, как считается, «специфически связываются» с hNGF. Кроме того, выделенное антитело может по существу не содержать другой клеточный материал и/или другие химические вещества.
Приводимые в качестве примера антитела, которые могут быть включены в фармацевтические препараты настоящего изобретения, изложены в заявке US 20090041717.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения антитело против hNGF, или его антигенсвязывающий фрагмент, включает определяющий комплементарность участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, HCDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, и HCDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения антитело против hNGF, или его антигенсвязывающий фрагмент, включает определяющий комплементарность участок 1 легкой цепи (LCDR1), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, LCDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, и LCDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.
В некоторых вариантах осуществления антитело против hNGF, или его антигенсвязывающий фрагмент, включает домены HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3, выбираемые, соответственно, из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6-8-10/SEQ ID NO: 14-16-18.
В некоторых вариантах осуществления антитело против hNGF, или его антигенсвязывающий фрагмент, включает вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), имеющую аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4 и 20. В некоторых вариантах осуществления антитело против hNGF, или его антигенсвязывающий фрагмент, включает вариабельную область легкой цепи (LCVR), имеющую аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12 и 22. В некоторых вариантах осуществления антитело против hNGF, или его антигенсвязывающий фрагмент, включает пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4/12 и 20/22.
Не ограничивающее, приводимое в качестве примера антитело, используемое здесь в примерах, называют «мАт1». Это антитело также упоминается в US 20090041717 и включает, как описывается здесь, пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, имеющую SEQ ID NO: 20/22, и домены HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3, представленные SEQ ID NO: 6-8-10/SEQ ID NO: 14-16-18.
Количество антитела, или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащееся в фармацевтических препаратах настоящего изобретения, может варьировать в зависимости от конкретных желаемых свойств препаратов, а также от конкретных обстоятельств и целей, с которыми препараты намереваются использовать. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические препараты могут содержать от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 500 мг/мл антитела; от приблизительно 1 мг/мл до приблизительно 500 мг/мл антитела; от приблизительно 5 мг/мл до приблизительно 400 мг/мл антитела; от приблизительно 5 мг/мл до приблизительно 200 мг/мл антитела; от приблизительно 25 мг/мл до приблизительно 180 мг/мл антитела; от приблизительно 25 мг/мл до приблизительно 150 мг/мл антитела или от приблизительно 50 мг/мл до приблизительно 180 мг/мл антитела. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические препараты могут содержать от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 100 мг/мл антитела, от приблизительно 0,2 мг/мл до приблизительно 75 мг/мл антитела, от приблизительно 0,6 мг/мл до приблизительно 60 мг/мл антитела. Например, препараты настоящего изобретения могут содержать приблизительно 0,1 мг/мл, приблизительно 0,2 мг/мл, приблизительно 0,6 мг/мл, приблизительно 1 мг/мл, приблизительно 2 мг/мл, приблизительно 5 мг/мл, приблизительно 10 мг/мл, приблизительно 15 мг/мл, приблизительно 20 мг/мл, приблизительно 25 мг/мл, приблизительно 30 мг/мл, приблизительно 35 мг/мл, приблизительно 40 мг/мл, приблизительно 45 мг/мл, приблизительно 50 мг/мл, приблизительно 55 мг/мл, приблизительно 60 мг/мл, приблизительно 65 мг/мл, приблизительно 70 мг/мл, приблизительно 75 мг/мл, приблизительно 80 мг/мл, приблизительно 85 мг/мл, приблизительно 86 мг/мл, приблизительно 87 мг/мл, приблизительно 88 мг/мл, приблизительно 89 мг/мл, приблизительно 90 мг/мл, приблизительно 95 мг/мл, приблизительно 100 мг/мл, приблизительно 105 мг/мл, приблизительно 110 мг/мл, приблизительно 115 мг/мл, приблизительно 120 мг/мл, приблизительно 125 мг/мл, приблизительно 130 мг/мл, приблизительно 131 мг/мл, приблизительно 132 мг/мл, приблизительно 133 мг/мл, приблизительно 134 мг/мл, приблизительно 135 мг/мл, приблизительно 140 мг/мл, приблизительно 145 мг/мл, приблизительно 150 мг/мл, приблизительно 155 мг/мл, приблизительно 160 мг/мл, приблизительно 165 мг/мл; приблизительно 170 мг/мл, приблизительно 175 мг/мл; приблизительно 180 мг/мл, приблизительно 185 мг/мл; приблизительно 190 мг/мл, приблизительно 195 мг/мл или приблизительно 200 мг/мл антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которое(ый) специфически связывается с hNGF.
НАПОЛНИТЕЛИ и pH
Фармацевтические препараты настоящего изобретения включают один или более наполнителей. Используемый здесь термин «наполнитель» означает любой нетерапевтический агент, добавляемый к препарату для обеспечения желаемой консистенции, вязкости или эффекта стабилизации.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтический препарат настоящего изобретения включает буфер, подходящий для сохранения pH в диапазоне от приблизительно 4,5 до приблизительно 5,6. Приводимый в качестве примера буфер, подходящий для применения в препаратах настоящего изобретения, включает, например, ацетатный буфер. В одном варианте осуществления ацетатный буфер готовят в концентрации, составляющей 10 мМ.
Количество ацетата, содержащегося в фармацевтических препаратах настоящего изобретения, может варьироваться от приблизительно 1 мМ до приблизительно 50 мМ, от приблизительно 2 мМ до приблизительно 20 мМ, от приблизительно 3 мМ до приблизительно 12 мМ или составлять приблизительно 10 мМ.
Фармацевтические препараты настоящего изобретения могут также включать один или более углеводов, например, один или более сахаров. Сахаром может быть редуцирующий сахар или нередуцирующий сахар. «Редуцирующие сахара» включают, например, сахара с кетонной или альдегидной группой и содержат реакционноспособную полуацетальную группу, которая позволяет сахару функционировать в качестве восстанавливающего агента. Конкретные примеры редуцирующих сахаров включают фруктозу, глюкозу, глицеральдегид, лактозу, арабинозу, маннозу, ксилозу, рибозу, рамнозу, галактозу и мальтозу. Нередуцирующие сахара могут включать аномерный углерод, который является ацетальным и по существу не реагирует с аминокислотами или полипептидами с инициацией реакции Майяра. Конкретные примеры нередуцирующих сахаров включают сахарозу, трегалозу, сорбозу, сукралозу, сорбит, мелецитозу и раффинозу. Сахарные кислоты включают, например, сахарные кислоты, глюконат и другие сахара с множеством оксигрупп и их соли.
Количество сахара, содержащегося в фармацевтических препаратах настоящего изобретения, может варьироваться в зависимости от конкретных обстоятельств и намеченных целей, с которыми препараты используются. В некоторых вариантах осуществления препараты могут содержать от приблизительно 0,1% до приблизительно 20% сахара, от приблизительно 0,5% до приблизительно 20% сахара, от приблизительно 1% до приблизительно 20% сахара, от приблизительно 2% до приблизительно 15% сахара, от приблизительно 3% до приблизительно 10% сахара, от приблизительно 4% до приблизительно 10% сахара или от приблизительно 5% до приблизительно 10% сахара. Например, фармацевтические препараты настоящего изобретения могут содержать приблизительно 0,5%, приблизительно 1,0%, приблизительно 1,5%, приблизительно 2,0%, приблизительно 2,5%, приблизительно 3,0%, приблизительно 3,5%, приблизительно 4,0%, приблизительно 4,5%, приблизительно 5,0%, приблизительно 5,5%, приблизительно 6,0%, приблизительно 6,5%, приблизительно 7,0%, приблизительно 7,5%, приблизительно 8,0%, приблизительно 8,5%, приблизительно 9,0%, приблизительно 9,5%, приблизительно 10,0%, приблизительно 10,5%, приблизительно 11,0%, приблизительно 11,5%, приблизительно 12,0%, приблизительно 12,5%, приблизительно 13,0%, приблизительно 13,5%, приблизительно 14,0%, приблизительно 14,5%, приблизительно 15,0%, приблизительно 15,5%, приблизительно 16,0%, 16,5%, приблизительно 17,0%, приблизительно 17,5%, приблизительно 18,0%, приблизительно 18,5%, приблизительно 19,0%, приблизительно 19,5% или приблизительно 20,0% сахара (например, сахарозы).
Фармацевтические препараты настоящего изобретения могут также включать одно или более поверхностно-активных веществ. Используемый здесь термин «поверхностно-активное вещество» означает вещество, которое уменьшает поверхностное натяжение жидкости, в которой его растворяют, и/или уменьшает межфазное натяжение между маслом и водой. Поверхностно-активные вещества могут быть ионными или неионными. Приводимые в качестве примера неионные поверхностно-активные вещества, которые могут быть включены в препараты настоящего изобретения, включают, например, алкилполиэтиленоксид, алкилполиглюкозиды (например, октилглюкозид и децилмальтозид), жирные спирты, такие как цетиловый спирт и олеиловый спирт, кокамид МЭА, кокамид ДЭА и кокамид ТЭА. Конкретные неионные поверхностно-активные вещества, которые могут быть включены в препараты настоящего изобретения, включают, например, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат 28, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 65, полисорбат 80, полисорбат 81 и полисорбат 85; полоксамеры, такие как полоксамер 188, полоксамер 407; полиэтилен-полипропиленгликоль или полиэтиленгликоль (ПЭГ). Полисобат 20 также известен как TWEEN 20, сорбитмонолаурат и полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат.
Количество поверхностно-активного вещества, содержащегося в фармацевтических препаратах настоящего изобретения, может варьироваться в зависимости от конкретных желаемых свойств препаратов, а также от конкретных обстоятельств и целей, с которыми препараты намереваются использовать. В некоторых вариантах осуществления препараты могут содержать от приблизительно 0,01% до приблизительно 10% поверхностно-активного вещества, от приблизительно 0,05% до приблизительно 5% поверхностно-активного вещества или от приблизительно 0,1% до приблизительно 1% поверхностно-активного вещества. Например, препараты настоящего изобретения могут содержать приблизительно 0,01%, приблизительно 0,02%, приблизительно 0,03%, приблизительно 0,04%, приблизительно 0,05%, приблизительно 0,06%, приблизительно 0,07%, приблизительно 0,08%, приблизительно 0,09%, приблизительно 0,10%, приблизительно 0,11%, приблизительно 0,12%, приблизительно 0,13%, приблизительно 0,14%, приблизительно 0,15%, приблизительно 0,16%, приблизительно 0,17%, приблизительно 0,18%, приблизительно 0,19%; приблизительно 0,20%, приблизительно 0,21%, приблизительно 0,22%, приблизительно 0,23%, приблизительно 0,24%, приблизительно 0,25%, приблизительно 0,26%, приблизительно 0,27%, приблизительно 0,28%, приблизительно 0,29% или приблизительно 0,30% поверхностно-активного вещества (например, полисорбата 20).
Фармацевтические препараты настоящего изобретения могут иметь pH в диапазоне от приблизительно 4,0 до приблизительно 6,0. Например, препараты настоящего изобретения могут иметь pH, равный приблизительно 4,2, приблизительно 4,4, приблизительно 4,6, приблизительно 4,8, приблизительно 5,0, приблизительно 5,2, приблизительно 5,4, приблизительно 5,6, приблизительно 5,8 или приблизительно 6,0.
ПРИВОДИМЫЕ В КАЧЕСТВЕ ПРИМЕРА ПРЕПАРАТЫ
В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения фармацевтический препарат включает (i) антитело человека, которое специфически связывается с hNGF (например, мАт1); (ii) ацетат и (iii) сахар (например, сахарозу). Конкретные, не ограничивающие, приводимые в качестве примера варианты осуществления, охватываемые этим аспектом настоящего изобретения, изложены в таблице 1.
Таблица 1
Приводимые в качестве примера фармацевтические препараты, включающие мАт1, ацетат и сахарозу
мАт1 (мг/мл)
5
5
10
15
5
5
10
15
5
5
10
15
5
5
10
15
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
ацетат (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
сахароза (%)
2
2
2
2
4
4
4
4
6
6
6
6
8
8
8
8
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения фармацевтический препарат включает (i) антитело человека, которое специфически связывается с hNGF (например, мАт1), (ii) ацетат, (iii) сахар (например, сахарозу) и (iv) поверхностно-активное вещество (например, полисорбат 20). Конкретные, не ограничивающие, приводимые в качестве примера варианты осуществления, охватываемые этим аспектом настоящего изобретения, изложены в таблицах 2A и 2B.
Таблица 2A
Приводимые в качестве примера фармацевтические препараты, включающие мАт1, ацетат, сахарозу и полисорбат 20
мАт1 (мг/мл)
5
50
100
150
5
50
100
150
5
50
100
150
ацетат (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
сахароза (%)
2
2
2
2
4
4
4
4
8
8
8
8
полисорбат 20 (%)
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
Таблица 2B
Приводимые в качестве примера фармацевтические препараты, включающие мАт1, ацетат, сахарозу и полисорбат 20
мАт1 (мг/мл)
5
50
100
150
5
50
100
150
5
50
100
150
ацетат (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
сахароза (%)
2
2
2
2
4
4
4
4
8
8
8
8
полисорбат 20 (%)
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения фармацевтический препарат включает (i) антитело человека, которое специфически связывается с hNGF (например, мАт1), (ii) ацетат, (iii) сахар (например, сахарозу); (iv) поверхностно-активное вещество (например, полисорбат 20), (v) первую аминокислоту (например, гистидин) и (v) вторую аминокислоту (например, аргинин). Конкретные, не ограничивающие, приводимые в качестве примера варианты осуществления, охватываемые этим аспектом настоящего изобретения, изложены в таблицах 3A, 3B, 3C, 3D, 3E и 3F.
Таблица 3A
Приводимые в качестве примера фармацевтические препараты, включающие мАт1, ацетат, гистидин, сахарозу, полисорбат 20 и аргинин
мАт1 (мг/мл)
5
50
100
150
5
50
100
150
5
50
100
150
ацетат (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
гистидин (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
сахароза (%)
2
2
2
2
4
4
4
4
8
8
8
8
полисорбат 20 (%)
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
аргинин (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Таблица 3B
Приводимые в качестве примера фармацевтические препараты, включающие мАт1, ацетат, гистидин, сахарозу, полисорбат 20 и аргинин
мАт1 (мг/мл)
5
50
100
150
5
50
100
150
5
50
100
150
ацетат (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
гистидин (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
сахароза (%)
2
2
2
2
4
4
4
4
8
8
8
8
полисорбат 20 (%)
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
аргинин (мМ)
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
Таблица 3C
Приводимые в качестве примера фармацевтические препараты, включающие мАт1, ацетат, гистидин, сахарозу, полисорбат 20 и аргинин
мАт1 (мг/мл)
5
50
100
150
5
50
100
150
5
50
100
150
ацетат (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
гистидин (мМ)
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
сахароза (%)
2
2
2
2
4
4
4
4
8
8
8
8
полисорбат 20 (%)
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
аргинин (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Таблица 3D
Приводимые в качестве примера фармацевтические препараты, включающие мАт1, ацетат, гистидин, сахарозу, полисорбат 20 и аргинин
мАт1 (мг/мл)
5
50
100
150
5
50
100
150
5
50
100
150
ацетат (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
гистидин (мМ)
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
сахароза (%)
2
2
2
2
4
4
4
4
8
8
8
8
полисорбат 20 (%)
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
аргинин (мМ)
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
Таблица 3Е
Приводимые в качестве примера фармацевтические препараты, включающие мАт1, ацетат, гистидин, сахарозу, полисорбат 20 и аргинин
мАт1 (мг/мл)
5
50
100
150
5
50
100
150
5
50
100
150
Ацетат (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Гистидин (мМ)
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
Сахароза (%)
2
2
2
2
5
5
5
5
10
10
10
10
полисорбат 20 (%)
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
аргинин (мМ)
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
Таблица 3F
Приводимые в качестве примера фармацевтические препараты, включающие мАт1, ацетат, гистидин, сахарозу, полисорбат 20 и аргинин
мАт1 (мг/мл)
5
50
100
150
5
50
100
150
5
50
100
150
Ацетат (мМ)
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Гистидин (мМ)
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
Сахароза (%)
2
2
2
2
5
5
5
5
10
10
10
10
полисорбат 20 (%)
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
аргинин (мМ)
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
В соответствии с некоторыми аспектами настоящего изобретения препарат антитела может включать антитело против hNGF в концентрации, составляющей приблизительно 20 мг/мл, в приблизительно 10 мМ ацетатном буфере, плюс приблизительно 1,0% полиэтиленгликоля 3350 (ПЭГ 3350) и приблизительно 20% сахарозы при pH, равном приблизительно 5,0. В одном варианте осуществления препарат антитела вводят внутривенно. В одном варианте осуществления препарат антитела вводят подкожно.
Дополнительные, не ограничивающие примеры фармацевтических препаратов, охватываемых настоящим изобретением, изложены здесь в другом месте, в том числе демонстрационных примерах, представленных ниже.
СТАБИЛЬНОСТЬ И ВЯЗКОСТЬ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
Фармацевтические препараты настоящего изобретения типично демонстрируют высокие уровни стабильности. Термин «стабильные», используемый здесь применительно к фармацевтическим препаратам, означает, что в антителах в фармацевтических препаратах остается удовлетворительная степень структуры и/или функции и/или биологической активности после хранения в течение заданного промежутка времени. Препарат может быть стабильным, даже если в антителе, содержащемся в нем, не сохраняются 100% его структуры и/или функции и/или биологической активности после хранения в течение заданного промежутка времени. В некоторых случаях сохранение приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 95%, приблизительно 96%, приблизительно 97%, приблизительно 98% или приблизительно 99% структуры и/или функции и/или биологической активности антитела после хранения в течение заданного промежутка времени может рассматриваться как «стабильный препарат».
Стабильность можно измерить, среди прочего, посредством определения процента нативной формы антитела, остающегося в препарате после хранения в течение заданного промежутка времени при конкретной температуре. Процент нативной формы антитела можно определить с помощью, среди прочего, эксклюзионной хроматографии (например, эксклюзионной жидкостной хроматографии высокого разрешения [эксклюзионной HPLC]). «Удовлетворительная степень стабильности», как это выражение используется здесь, означает, что по крайней мере 90% нативной формы антитела можно выявить в препарате после хранения в течение заданного промежутка времени при конкретной температуре. В некоторых вариантах осуществления по крайней мере приблизительно 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% нативной формы антитела можно выявить в препарате после хранения в течение заданного промежутка времени при конкретной температуре. Заданный промежуток времени, после которого определяют стабильность, может составлять по крайней мере 1 месяц, по крайней мере 2 месяца, по крайней мере 3 месяца, по крайней мере 4 месяца, по крайней мере 5 месяцев, по крайней мере 6 месяцев, по крайней мере 7 месяцев, по крайней мере 8 месяцев, по крайней мере 9 месяцев, по крайней мере 10 месяцев, по крайней мере 11 месяцев, по крайней мере 12 месяцев, по крайней мере 18 месяцев, по крайней мере 24 месяца или более. Температура, при которой фармацевтический препарат можно хранить при оценке стабильности, может быть любой температурой в диапазоне от приблизительно -80°C до приблизительно 45°C, например, хранение при приблизительно -30°C, приблизительно -20°C, приблизительно 0°C, приблизительно 5°C, приблизительно 25°C, приблизительно 37°C или приблизительно 45°C. Например, фармацевтический препарат может считаться стабильным, если после хранения в течение 3 месяцев при 5°C более чем приблизительно 90%, 95%, 96% или 97% нативной формы антитела выявляется с помощью эксклюзионной HPLC. Фармацевтический препарат может также считаться стабильным, если после хранения в течение 6 месяцев при 5°C более чем приблизительно 90%, 95%, 96% или 97% нативной формы антитела выявляется с помощью эксклюзионной HPLC. Фармацевтический препарат может также считаться стабильным, если после хранения в течение 9 месяцев при 5°C более чем приблизительно 90%, 95%, 96% или 97% нативной формы антитела выявляется с помощью эксклюзионной HPLC. Фармацевтический препарат может также считаться стабильным, если после хранения в течение 3 месяцев при 25°C более чем приблизительно 90%, 95%, 96% или 97% нативной формы антитела выявляется с помощью эксклюзионной HPLC. Фармацевтический препарат может также считаться стабильным, если после хранения в течение 6 месяцев при 25°C более чем приблизительно 90%, 95%, 96% или 97% нативной формы антитела выявляется с помощью эксклюзионной HPLC. Фармацевтический препарат может также считаться стабильным, если после хранения в течение 9 месяцев при 25°C более чем приблизительно 90%, 95%, 96% или 97% нативной формы антитела выявляется с помощью эксклюзионной HPLC.
405
405
Для оценки стабильности препаратов настоящего изобретения могут использоваться другие способы, такие как дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC) для определения термоустойчивости, регулируемое перемешивание для определения механической устойчивости и определение оптической плотности при приблизительно 350 нм или приблизительно 405 нм для определения мутностей растворов. Например, препарат настоящего изобретения может считаться стабильным, если после хранения в течение 6 или более месяцев при приблизительно 5°C - приблизительно 25°C изменение ОП препарата составляет менее чем приблизительно 0,05 (например, 0,04, 0,03, 0,02, 0,01 или менее) по сравнению с ОП препарата в t=0.
Стабильность можно также оценить посредством измерения биологической активности и/или аффинности связывания антитела со своей мишенью. Например, препарат настоящего изобретения может рассматриваться как стабильный, если после хранения при, например, 5°C, 25°C, 37°C, 45°C и т.д. в течение заданного промежутка времени (например, 1-12 или 18 месяцев) антитело против hNGF, содержащееся в препарате, связывается с hNGF с аффинностью, которая составляет по крайней мере 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или более от аффинности связывания антитела до указанного хранения. Дополнительные способы оценки стабильности антитела в препарате демонстрируются в разделе «Примеры», представленном ниже.
2
2
В некоторых вариантах осуществления фармацевтические препараты настоящего изобретения в текучей форме демонстрируют низкие-средние уровни вязкости. «Вязкость», как здесь используется, может быть «кинематической вязкостью» или «абсолютной вязкостью». «Кинематическая вязкость» является показателем сопротивления жидкости течению под действием гравитации. Когда две жидкости равного объема помещают в идентичные капиллярные вискозиметры, и допускают их протекание под действием гравитации, протекание через капилляр вязкой жидкости дольше, чем таковое менее вязкой жидкости. Например, если полное протекание одной жидкости занимает 200 секунд, а таковое другой жидкости - 400 секунд, вторая жидкость является в два раза более вязкой, чем первая жидкость по шкале кинематической вязкости. «Абсолютная вязкость», иногда называемая динамической вязкостью или просто вязкостью, является произведением кинематической вязкости на плотность жидкости (Абсолютная вязкость = кинематическая вязкость × плотность). Кинематическую вязкость измеряют в L/T, где L представляет собой длину, а T - время. Обычно кинематическую вязкость представляют в сантистоксах (сСт). Единицей кинематической вязкости в системе СИ является мм/сек, что равно 1 сСт. Абсолютную вязкость представляют в единицах - сантипуазах (сП). Единицей абсолютной вязкости в системе СИ является миллиПаскаль-секунда (мПа-сек), где 1 сП = 1 мПа-сек.
Как здесь используется применительно к текучему препарату настоящего изобретения, при низком уровне вязкости будет демонстрироваться абсолютная вязкость, составляющая менее чем приблизительно 20 сантипуаз (сП). Например, считается, что текучий препарат настоящего изобретения имеет «низкую вязкость», если после измерения с использованием стандартных методов измерения вязкости препарат демонстрирует абсолютную вязкость, составляющую приблизительно 19 сП, приблизительно 18 сП, приблизительно 17 сП, приблизительно 16 сП, приблизительно 15 сП, приблизительно 14 сП, приблизительно 13 сП, приблизительно 12 сП, приблизительно 11 сП, приблизительно 10 сП, приблизительно 9 сП, приблизительно 8 сП, приблизительно 7 сП, приблизительно 6 сП, приблизительно 5 сП, приблизительно 4 сП или менее. Как здесь используется применительно к текучему препарату настоящего изобретения, при среднем уровне вязкости будет демонстрироваться абсолютная вязкость между приблизительно 30 сП и приблизительно 20 сП. Например, считается, что текучий препарат настоящего изобретения имеет «среднюю вязкость», если после измерения с использованием стандартных методов измерения вязкости препарат демонстрирует абсолютную вязкость, составляющую приблизительно 30 сП, приблизительно 29 сП, приблизительно 28 сП, приблизительно 27 сП, приблизительно 26 сП, приблизительно 25 сП, приблизительно 24 сП, приблизительно 23 сП, приблизительно 22 сП, приблизительно 21 сП или приблизительно 20 сП.
Как продемонстрировано в примере 5 ниже, авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что текучие препараты с низким-средним уровнем вязкости, содержащие высокие концентрации антитела против hNGF (например, вплоть до по крайней мере 125-150 мг/мл), можно получить путем приготовления антитела с использованием 25 мМ гистидина и 25 мМ-100 мМ аргинина. Кроме того, в дальнейшем обнаружили, что вязкость препарата можно уменьшить в даже большей степени с помощью снижения содержания сахарозы.
КОНТЕЙНЕРЫ ДЛЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ И СПОСОБЫ ВВЕДЕНИЯ
Фармацевтические препараты настоящего изобретения могут содержаться в любом контейнере, подходящем для хранения лекарственных средств и других терапевтических композиций. Например, фармацевтические препараты могут содержаться в герметизированном и стерилизованном пластмассовом или стеклянном контейнере заданного объема, таком как флакон, ампула, шприц, картридж или бутылочка. Для удерживания препаратов настоящего изобретения могут использоваться различные типы флаконов, в том числе, например, прозрачные и непрозрачные (например, янтарно-желтого цвета) стеклянные или пластмассовые флаконы. Так же любой тип шприца может использоваться для удерживания и/или введения фармацевтических препаратов настоящего изобретения. Фармацевтические препараты в контейнере можно обрабатывать, используя любой известный в данной области техники способ удаления кислорода для увеличения стабильности антитела, в случае необходимости. Кислород в свободном пространстве (газовом пространстве над жидкостью в закрытом контейнере) можно заменить инертным газом, таким как азот или аргон.
Фармацевтические препараты настоящего изобретения могут содержаться в шприцах с обычным содержанием вольфрама или в шприцах с низким содержанием вольфрама. Как будет понятно специалистам со средним уровнем компетентности в данной области техники, процесс изготовления стеклянных шприцов обычно включает использование горячего вольфрамового стержня, функцией которого является продавливание отверстия в стекле, для создания тем самым отверстия, из которого жидкости можно извлечь и вытеснить из шприца. Этот процесс приводит к отложению малых количеств вольфрама на внутренней поверхности шприца. Для уменьшения количества вольфрама в шприце могут использоваться последующие стадии промывок и других обработок. Используемый здесь термин «с обычным содержанием вольфрама» означает, что шприц содержит более чем 500 частей на миллиард (част/млрд) вольфрама. Термин «с низким содержанием вольфрама» означает, что шприц содержит менее чем 500 част/млрд вольфрама. Например, шприц с низким содержанием вольфрама, в соответствии с настоящим изобретением, может содержать менее чем приблизительно 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 390, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 или менее част/млрд вольфрама.
Используемые в шприцах резиновые уплотнительные манжетки на поршне и резиновые пробки, используемые для закрытия отверстий флаконов, могут быть покрыты слоем для предотвращения загрязнения лекарственного содержимого шприца или флакона и/или для сохранения его стабильности. Таким образом, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтические препараты настоящего изобретения могут содержаться в шприце, который включает покрытую слоем манжетку на поршне, или во флаконе, который герметизирован с помощью покрытой слоем резиновой пробки. Например, манжетка или пробка могут быть покрыты тонким слоем фтороуглеводорода. Примеры покрытых слоем пробок и/или манжеток, подходящих для использования вместе с флаконами и шприцами, содержащими фармацевтические препараты настоящего изобретения, упоминаются, например, в патентах США с № 4997423, 5908686, 6286699, 6645635 и 7226554. Конкретные, приводимые в качестве примера покрытые слоем резиновые пробки и манжетки, которые могут использоваться применительно к настоящему изобретению, имеются в продаже под товарным знаком «FluroTec» от West Pharmaceutical Services, Inc. (Lionville, PA).
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения фармацевтические препараты могут содержаться в шприце с низким содержанием вольфрама, который содержит покрытую слоем фтороуглеводорода манжетку. Однако, как продемонстрировано в разделе «Примеры» ниже, антитело против NGF настоящего изобретения, по-видимому, является стабильным в любой из проверенных комбинаций шприца и манжетки.
Фармацевтические препараты могут вводиться пациенту парентеральным путем, например, с помощью инъекции (например, подкожной, внутривенной, внутримышечной, внутрибрюшинной и т.д.), или с использованием чрескожного введения, введения через слизистые оболочки, интраназального, легочного и/или орального введения. Многочисленные устройства для доставки в виде ручек и/или автоинжекторов многократного использования могут использоваться для подкожной доставки фармацевтических препаратов настоящего изобретения. Примеры включают, но без ограничения, AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, Соединенное Королевство), ручку DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Швейцария), ручку HUMALOG MIX 75/25™, ручку HUMALOG™, ручку HUMALIN 70/30™(Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II и III (Novo Nordisk, Copenhagen, Дания), NOVOPEN JUNIOR™(Novo Nordisk, Copenhagen, Дания), ручку BD™ (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ и OPTICLIK™ (Sanofi-Aventis, Frankfurt, Германия), не говоря уже о других. Примеры устройств для доставки в виде одноразовых ручек и/или автоинжекторов, применяемых для подкожной доставки фармацевтической композиции настоящего изобретения, включают, но без ограничения, ручку SOLOSTAR™ (Sanofi-Aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk) и KWIKPEN™(Eli Lilly), автоинжектор SURECLICK™ (Amgen, Thousand Oaks, CA), PUSHCLICK™ (Scandinavian Health, Ltd. (SHL) Group), PENLET™(Haselmeier, Stuttgart, Германия), EPIPEN (Dey, L.P.) и ручку HUMIRA™ (Abbott Labs, Abbott Park, IL), не говоря уже о других.
Также здесь предусматривается использование микроинфузионного устройства для доставки фармацевтических препаратов настоящего изобретения. Используемый здесь термин «микроинфузионное устройство» означает устройство для подкожной доставки, предназначенное для медленного введения больших объемов (например, вплоть до приблизительно 2,5 мл или более) терапевтического препарата в течение длительного периода времени (например, приблизительно 10, 15, 20, 25, 30 или более минут). См., например, патенты США с № 6629949 и 6659982 и Meehan et al., J. Controlled Release 46: 107-116 (1996). Микроинфузионные устройства, в частности, применимы для доставки больших доз терапевтических белков, содержащихся в высокой концентрации (например, приблизительно 100, 125, 150, 175, 200 или более мг/мл) и/или вязких растворов.
ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
Фармацевтические препараты настоящего изобретения применимы, среди прочего, для лечения, предупреждения и/или уменьшения интенсивности любого заболевания или расстройства, связанного с активностью NGF. Приводимые в качестве примера, не ограничивающие заболевания и расстройства, лечение и/или предупреждение которых может осуществляться посредством введения фармацевтических препаратов настоящего изобретения, включают боль вследствие любого состояния, сопровождающегося нейрогенной, невропатической или ноцицептивной болью. В некоторых вариантах осуществления, имеющих отношение к невропатической боли, упомянутую невралгию тройничного нерва, постгерпетическую невралгию, фантомную боль в ампутированной конечности, фибромиалгию, симпатическую рефлекторную дистрофию и нейрогенные болевые состояния подвергают лечению. В других вариантах осуществления раковую боль, в частности, связанную с раком кости боль, связанную с остеоартритом или ревматоидным артритом боль, поясничную боль, послеоперационную боль в месте разреза, боль в месте перелома или разрыва, боль при остеопоротическом переломе, остеопороз, суставную боль при подагре, диабетическую нефропатию, ишиалгию, боли, связанные с кризисами серповидных клеток, мигрень и другие невропатические и/или ноцицептивные боли предпочтительно подвергают лечению. Таким образом, настоящее изобретение включает способы лечения, предупреждения и/или уменьшения интенсивности любого заболевания или расстройства, связанного с активностью NGF или активацией NGF (в том числе любого из вышеупомянутых, приводимых в качестве примера заболеваний, расстройств и состояний) посредством использования фармацевтических препаратов настоящего изобретения. Терапевтические способы настоящего изобретения включают введение субъекту любого препарата, включающего антитело против hNGF, раскрытого здесь. Субъектом, которому вводят фармацевтический препарат, может быть, например, любой человек или не являющееся человеком животное, который нуждается в таком лечении, предупреждении и/или уменьшении интенсивности, или тот, кому бы принесло пользу иным образом ингибирование или ослабление активности NGF и/или NGF-опосредованной активности. Например, субъектом может быть индивидуум, у которого диагностировано любое из вышеупомянутых заболеваний или расстройств, или который, как полагают, подвержен риску поражения им. Настоящее изобретение включает, кроме того, применение любого из фармацевтических препаратов, раскрытых здесь, для производства лекарственного средства для лечения, предупреждения и/или уменьшения интенсивности любого заболевания или расстройства, связанного с активностью NGF или активацией NGF (в том числе любого из вышеупомянутых, приводимых в качестве примера заболеваний, расстройств и состояний).
ПРИМЕРЫ
Следующие примеры предлагаются для обеспечения специалистов со средним уровнем компетентности в данной области техники полным раскрытием и описанием того, как приготовить и применять способы и композиции настоящего изобретения, и, как подразумевается, не ограничивают объем того, что авторы настоящего изобретения рассматривают в качестве изобретения. Были приложены усилия для обеспечения точности в отношении используемых чисел (например, количеств, температуры и т.д.), но следует учитывать некоторые экспериментальные ошибки и девиации. Кроме случаев, оговоренных особо, части являются весовыми частями, молекулярная масса является средней молекулярной массой, температура представлена в градусах Цельсия, а давление около или вблизи атмосферного.
Пример 1. Стабильность полностью человеческого антитела против фактора роста нервов (NGF) человека («мАт1») после хранения при низких температурах
В этом примере были созданы различные препараты, содержащие антитело против NGF человека без наполнителей. Приводимым в качестве примера антителом, используемым в этом и во всех последующих примерах, изложенных ниже, является антитело, включающее вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 20 и вариабельную область легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 22. Это антитело называют здесь «мАт1».
Как и в предварительном эксперименте, стабильность мАт1 в жидком растворе определяли после различных промежутков времени хранения в замороженном состоянии при -30°C и -80°C. Концентрация мАт1, используемая в этом примере, составляла 130 мг/мл. В различные моменты времени стабильность мАт1 определяли с помощью эксклюзионной жидкостной хроматографии высокого разрешения (эксклюзионной HPLC) или с помощью катионообменной жидкостной хроматографии высокого разрешения (катионообменной HPLC). Стабильность оценивали на основе процента нативной формы мАт1, остающегося в образце (с помощью эксклюзионной HPLC; таблица 4) и по проценту кислотного варианта, отмечаемому в образце (с помощью катионообменной HPLC; таблица 5). Увеличение процента кислотного варианта находится в соответствии с дезамидированием антитела и поэтому считается нежелательным явлением по отношению к фармацевтическим препаратам настоящего изобретения.
Таблица 4
Остающийся % нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Температура хранения
Время (месяцы)
-80°C
-30°C
0
96,6
96,6
1
96,6
95,2
3
96,6
94,6
6
96,6
94,2
9
96,5
93,1
12
96,7
93,3
Таблица 5
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
Температура хранения
Время (месяцы)
-80°C
-30°C
0
14,3
14,3
1
14,7
14,6
3
14,9
14,5
6
14,1
12,8
9
14,9
14,5
12
14,6
14,6
Эти результаты показывают, что мАт1 может оставаться стабильным в концентрации, составляющей 130 мг/мл, в течение по крайней мере 12 месяцев при хранении при -80°C.
Пример 2. Стабильность препаратов мАт1, содержащих минимальное количество наполнителей.
Шесть различных препаратов, содержащих мАт1, готовили в концентрации, составляющей 40 мг/мл, с минимальным количеством наполнителей (как продемонстрировано в таблице 6, см. также пример 2) и хранили при - 20°C или -30°C в течение различных периодов времени. Все препараты содержат 10 мМ ацетата, pH 5,0. В таблице 7 (-30°C) и таблице 8 (-20°C) представлен процент нативной формы мАт, остающийся в различных препаратах с минимальным количеством наполнителей, определяемый с помощью эксклюзионной HPLC.
Таблица 6
Препараты мАт1, содержащие минимальное количество наполнителей
Препарат
Наполнитель
мАт1 (мг/мл)
1
0,5% полиэтиленгликоля  3350
40
2
1,0% полиэтиленгликоля 3350
40
3
1% Сахароза
40
4
2% Сахароза
40
5
4% Сахароза
40
6
нет
40
Как отмечено выше, стабильность препаратов проверяли с помощью эксклюзионной HPLC после хранения в течение различных промежутков времени при -30°C и -20°C. Результаты, представленные в виде остающегося процента нативной формы мАт1, приведены в таблице 7 (в случае хранения при -30°C) и 8 (-20°C).
Таблица 7
Остающийся % нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC) после хранения при -30°C
# препарата (см. таблицу 6)
Время (месяцы)
1
2
3
4
5
6
0
98,3
98,1
98,0
97,9
98,1
98,0
1
98,0
98,1
98,0
98,0
98,0
97,0
3
97,8
97,9
98,0
98,0
97,9
96,0
6
98,2
98,4
98,5
98,4
98,4
95,9
9
98,2
98,3
98,5
98,5
98,8
95,1
12
98,2
98,4
98,4
98,4
98,5
95,7
18
97,7
98,2
98,1
98,1
98,4
94,5
24
97,9
98,1
98,3
98,5
98,5
94,5
Таблица 8
Остающийся % нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC) после хранения при -20°C
# препарата (см. таблицу 6)
Время (месяцы)
1
2
3
4
5
6
0
98,3
98,1
98,0
97,9
98,1
98,0
1
97,8
98,1
98,2
98,1
98,2
95,8
3
97,8
97,9
98,1
98,2
98,0
93,0
6
97,7
98,3
98,3
98,4
98,5
92,6
9
97,8
98,1
98,3
98,3
98,3
90,7
12
97,7
98,2
98,3
98,3
98,5
92,9
18
96,4
97,7
97,9
98,1
98,3
86,7
24
96,6
97,9
98,1
98,2
98,3
88,6
Как показано в этом примере, стабильность мАт1 сохраняется в значительной степени в препаратах 1, 2, 3, 4 и 5 после хранения в течение нескольких месяцев при -20°C и -30°C. Эти результаты указывают на то, что стабильность мАт1 при -30°C можно увеличить посредством добавления по крайней мере 1,0% сахарозы или по крайней мере 0,5% полиэтиленгликоля 3350. Эти результаты, кроме того, указывают на то, что стабильность мАт1 при -20°C можно увеличить посредством добавления по крайней мере 1,0% сахарозы или по крайней мере 1,0% полиэтиленгликоля 3350.
Пример 3. Стабилизированный препарат мАт1
Для использования в представленных ниже примерах 4 и 5 был приготовлен стабилизированный препарат, содержащий различные концентрации мАт1. Этот препарат, названный «препаратом A», представлен в таблице 9.
Таблица 9
Стабилизированный препарат «А» мАт1
Компонент
Препарат A
мАт1
6-100 мг/мл
Ацетат
Полисорбат 20
0,05%
Сахароза
8%
pH
5,0
Пример 4. Стабильность препарата A после хранения при 5°C
Стабильность препарата A (см. пример 3), содержащего 6, 20 или 100 мг/мл мАт1, проверяли после хранения в течение нескольких месяцев при 5°C в прозрачных стеклянных флаконах. Стабильность оценивали по следующим параметрам: (a) внешнему виду; (b) мутности (ОП 405 нм); (c) pH; (d) проценту извлекаемого мАт1 в целом, определяемому с помощью HPLC с обращенной фазой; (e) проценту извлекаемой нативной формы мАт1 (определяемому с помощью эксклюзионной HPLC); (f) проценту основного пика извлекаемого мАт1 (определяемому с помощью катионообменной HPLC) и (g) проценту извлекаемого кислотного варианта мАт1 (определяемому с помощью катионообменной HPLC). Результаты оценки стабильности препарата A, содержащего 6, 20 и 100 мг/мл мАт1, суммированы в таблицах 10, 11 и 12, соответственно.
Таблица 10
Стабильность препарата A, содержащего 6 мг/мл мАт1, после хранения при 5°C в стеклянных флаконах (0-12 месяцев)
Длительность хранения при 5°C (месяцы)
Параметр
0
1
2
3
6
9
12
Внешний вид
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Мутность (ОП 405 нм)
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
PH
5,1
5,1
5,1
5,0
5,0
5,1
5,1
% извлекаемого мАт1 в целом
100
96
101
99
102
107
107
% извлекаемой нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
98,8
98,6
98,7
98,9
98,5
98,8
98,7
% основного пика извлекаемого мАт1 (катионообменная HPLC)
44,8
46,3
46,4
454
41,2
46,2
45,0
% извлекаемого кислотного варианта мАт1 (катионообменная HPLC)
16,6
16,5
17,4
17,7
15,2
15,9
16,5
Таблица 11
Стабильность препарата A, содержащего 20 мг/мл мАт1, после хранения при 5°C в стеклянных флаконах (0-18 месяцев)
Длительность хранения при 5°C (месяцы)
Параметр
0
1
2
3
6
9
12
18
Внешний вид
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Мутность (ОП 405 нм)
0,00
0,00
0,01
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
pH
5,1
5,2
5,0
5,1
5,0
5,1
5,2
5,1
% извлекаемого мАт1 в целом
100
96
99
100
100
104
101
102
% извлекаемой нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
99,0
98,4
98,5
98,4
98,6
98,2
98,6
98,2
% основного пика извлекаемого мАт1 (катионообменная HPLC)
44,0
44,0
44,1
43,8
44,3
43,8
44,9
43,6
% извлекаемого кислотного варианта мАт1 (катионообменная HPLC)
15,8
15,5
15,8
15,5
15,5
15,2
15,9
15,3
Таблица 12
Стабильность препарата A, содержащего 100 мг/мл мАт1, после хранения при 5°C в стеклянных флаконах (0-18 месяцев)
Длительность хранения при 5°C (месяцы)
Параметр
0
1
2
3
6
9
12
18
Внешний вид
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Удовл.
Мутность (ОП 405 нм)
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
pH
5,0
5,1
5,0
5,1
5,0
5,1
5,0
5,2
% извлекаемого мАт1 в целом
100
98
106
104
103
103
101
104
% извлекаемой нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
98,2
97,9
97,5
97,8
98,2
97,4
98,1
97,6
% основного пика извлекаемого мАт1 (катионообменная HPLC)
41,3
40,9
39,2
39,0
39,5
39,7
42,0
40,4
% извлекаемого кислотного варианта мАт1 (катионообменная HPLC)
14,8
14,9
13,7
14,0
14,0
13,4
13,8
14,0
Результаты этого примера показывают, что препарат A, содержащий 6 мг/мл мАт1, оставался стабильным в течение по крайней мере 12 месяцев хранения при 5°C в прозрачных стеклянных флаконах, при этом приблизительно 98,7% или более нативной формы мАт1 оставалось в образцах после хранения в течение 12 месяцев в таких условиях. Результаты этого примера, кроме того, показывают, что препарат A, содержащий 20 мг/мл мАт1, оставался стабильным в течение по крайней мере 18 месяцев хранения при 5°C в прозрачных стеклянных флаконах, при этом приблизительно 98,2% нативной формы мАт1 оставалось в образцах после хранения в течение 18 месяцев в таких условиях. Кроме того, препарат A, содержащий 100 мг/мл мАт1, оставался стабильным в течение по крайней мере 18 месяцев хранения при 5°C в прозрачных стеклянных флаконах, при этом приблизительно 97,6% нативной формы мАт1 оставалось в образцах после хранения в течение 18 месяцев в таких условиях. Кроме того, процент кислотного варианта не изменялся значительно с момента времени = 0 после хранения в течение 12 или 18 месяцев в исследуемых условиях, тем самым подтверждая стабильность препаратов.
Пример 5. Эффект концентраций аргинина, гистидина и сахарозы на вязкость и стабильность препаратов, содержащих мАт1.
Было приготовлено несколько препаратов, содержащих 100 мг/мл, 125 мг/мл и 150 мг/мл мАт1 и различные количества гистидина, аргинина и сахарозы. Для каждого препарата определяли вязкость и осмоляльность при 25°C. Результаты суммированы в таблице 13.
Таблица 13
Эффект аргинина, гистидина и сахарозы на вязкость препаратов, содержащих мАт1 (Все препараты содержат 10 мМ ацетат, рН 5,0 и 0,2% полисорбата 20
мАт1 (мг/мл)
Гистидин (мМ)
Гистидин (мМ)
Сахароза(%)
Вязкость (сантипуаз)
Осмоляльность (миллиосмоль)
100
0
0
10
-13,5
440
100
0
25
10
~9
510
100
25
0
10
~9
510
100
0
25
5
~7
270
100
0
50
10
~7
560
125
0
0
5
-20
-250
125
0
25
5
~11
290
125
25
0
5
-12
280
125
0
50
5
~9
340
125
25
25
5
~9
330
125
0
0
2
-16
150
150
0
0
5
~41
300
150
25
25
5
-19
360
150
25
25
2
-15
310
150
0
75
5
-14
450
150
0
100
5
-11
510
Представленные в таблице 13 результаты указывают на то, что добавление гистидина или аргинина в концентрации, составляющей 25 мМ, к мАт1 (в концентрации, составляющей 100 мг/мл) значительно уменьшало вязкость препарата по сравнению с препаратом антитела, не содержащим ни гистидин, ни аргинин. Кроме того, добавление аргинина в концентрации, составляющей 25 мМ, к мАт1 (в концентрации, составляющей 100 мг/мл), при уменьшении концентрации сахарозы с 10% до 5%, приводило к дальнейшему уменьшению вязкости. Когда концентрацию антитела мАт1 увеличивали до 125 мг/мл, как гистидин, так и аргинин в концентрации, составляющей 25 мМ, приводил к значительному уменьшению вязкости при использовании по отдельности или вместе. Кроме того, уменьшение концентрации сахарозы с 5% до 2% с добавлением гистидина и аргинина уменьшало вязкость препарата в еще большей степени. Когда концентрацию мАт1 увеличивали до 150 мг/мл, комбинация гистидина и аргинина, каждый в концентрации, составляющей 25 мМ, приводила к значительному уменьшению вязкости. Уменьшение количества сахарозы с 5% до 2% приводило к дальнейшему уменьшению вязкости.
Основываясь, по крайней мере, отчасти на вышеизложенном, был приготовлен следующий препарат «В», представленный в таблице 14.
Таблица 14
Компонент
Препарат В
мАт1
20- 100 мг/мл
Ацетат
Полисорбат 20
0,05%
Сахароза
8%
Аргинин
pH
5,0
Пример 6. Стабильность препарата A, содержащего 100 мг/мл мАт1, после производства во флаконе и шприцах
Препарат A (см. таблицу 9), содержащий 100 мг/мл мАт1, был приготовлен в 2-мл стеклянном флаконе и в двух различных шприцах: стандартном и с низким содержанием вольфрама. Препараты хранили при 5, 25 и 37°C в течение различных промежутков времени. Стабильность мАт1 после хранения определяли с помощью эксклюзионной HPLC и катионообменной HPLC. Результаты представлены в таблице 15. (Увеличение процента кислотного варианта находится в соответствии с дезамидированием антитела и поэтому считается нежелательным явлением по отношению к фармацевтическим препаратам настоящего изобретения). Как показано в этой таблице, препарат A, содержащий 100 мг/мл мАт1, хранимый при 5°C в стеклянном флаконе или шприце, оставался относительно стабильным в течение по крайней мере 18 месяцев и был немного менее стабильным при 25°C или 37°C в позже проверенные моменты времени.
Таблица 15
Стабильность препарата A, содержащего 100 мг/мл мАт1, во флаконе и шприцах
2-мл стеклянный флакон
Стандартный шприц
Шприц с низким содержанием вольфрама
Температура
Время
% нативной формы (эксклюзионная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
% нативной формы (эксклюзионная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
% нативной формы (эксклюзионная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
-
Начало
98,2
14,4
98,2
14,1
98,2
14,3
37°C
7дней
97,6
13,9
97,6
14,0
97,8
13,9
37°C
14 дней
97,2
14,7
97,3
14,6
97,3
14,7
37°C
28 дней
96,7
15,7
96,6
15,5
96,5
15,5
25°C
1месяц
97,7
13,1
97,5
13,5
97,9
13,3
25°C
3месяца
97,3
14,9
97,2
14,9
97,1
14,8
25°C
6месяца
96,9
17,4
97,1
16,9
96,7
17,4
5°C
1месяц
97,9
14,8
98,1
13,7
98,0
14,0
5°C
3месяца
97,8
13,7
97,6
13,9
97,7
13,5
5°C
6месяцев
98,2
14,0
98,1
13,5
98,0
13,7
5°C
9месяцев
97,4
13,4
97,6
13,1
97,6
13,2
5°
12 месяцев
98,1
13,8
98,1
13,5
98,2
13,1
5°C
18 месяцев
97,6
14,0
97,6
14,1
97,7
14,0
Пример 7. Стабильность препарата В, содержащего 100 мг/мл мАт1, после производства во флаконе и шприцах
Препарат B (см. таблицу 14), содержащий 100 мг/мл мАт1, был приготовлен в 2-мл стеклянном флаконе и в двух различных шприцах: стандартном и с низким содержанием вольфрама. Препараты хранили при 5, 25 и 37°C в течение различных промежутков времени. Стабильность мАт1 после хранения определяли с помощью эксклюзионной HPLC и катионообменной HPLC. Результаты представлены в таблице 16. (Как отмечалось ранее, увеличение процента кислотного варианта находится в соответствии с дезамидированием антитела и поэтому считается нежелательным явлением по отношению к фармацевтическим препаратам настоящего изобретения). Как показано в этой таблице, препарат В, содержащий 100 мг/мл мАт1, хранимый при 5°C в стеклянном флаконе или шприце, оставался относительно стабильным в течение по крайней мере 12 месяцев и был немного менее стабильным при 25°C или 37°C во все проверенные моменты времени.
Таблица 16
Стабильность препарата В, содержащего 100 мг/мл мАт1, во флаконе и шприцах
2-мл стеклянный флакон
Стандартный шприц
Шприц с низким содержанием вольфрама
Темп.
Время
% нативной формы (эксклюзионная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
% нативной формы (эксклюзионная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
% нативной формы (эксклюзионная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
-
Начало
98,2
14,2
98,1
14,4
98,2
14,3
37°C
7дней
97,4
14,3
97,4
14,3
97,6
14,1
37°C
14 дней
97,0
14,9
96,9
14,8
96,9
14,8
37°C
28 дней
96,4
16,3
96,4
16,2
96,4
15,9
25°C
1месяц
97,7
13,6
97,8
13,7
97,7
13,6
25°C
3месяца
96,7
14,7
96,9
14,7
96,8
14,8
25°C
6месяцев
96,6
15,4
96,6
15,5
96,6
15,6
5°C
1месяц
98,1
13,6
98,0
13,7
98,1
13,5
5°C
2месяца
97,8
14,3
97,9
14,3
97,9
14,2
5°C
3месяца
97,7
14,3
97,3
14,4
97,4
14,2
5°C
6месяцев
97,4
14,4
97,5
14,5
97,6
14,5
5°C
9месяцев
97,8
14,2
97,8
14,1
97,7
14,1
5°C
12 месяцев
98,0
15,1
98,1
14,7
98,2
14,7
5°C
18 месяцев
97,7
14,3
97,7
39,8
97,7
14,1
Пример 8: Стабильность препаратов мАт1 в предварительно наполненных шприцах
Был выполнен ряд экспериментов для оценки стабильности различных препаратов мАт1 в предварительно наполненных шприцах. Для этих экспериментов различные иглы Люэра и несъемные иглы, шприцы с обычным содержанием вольфрама и с низким содержанием вольфрама использовались в комбинации с различными типами манжеток (покрытых слоем и без него) и винтовых колпачков. Стабильность препаратов проверяли после хранения в предварительно наполненных шприцах при 37°C, 25°C и 5°C в течение различных промежутков времени (в диапазоне от 7 дней до 6 месяцев, в зависимости от исследуемых условий).
В этом примере стабильность следующих препаратов мАт1 в предварительно наполненных шприцах была проверена: (1) препарата A (см. таблицу 9), содержащего 100 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #1, описанном в таблице 17; (2) препарата A, содержащего 100 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #2, описанном в таблице 18; (3) препарата A, содержащего 20 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #1, описанном в таблице 19; (4) препарата A, содержащего 20 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #2, описанном в таблице 20; (5) препарата A, содержащего 100 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #3, описанном в таблице 21; и (6) препарата A, содержащего 6 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #3, описанном в таблице 22.
Шприц #1 представляет собой 1-мл шприц BD с низким содержанием вольфрама с иглой размером 29G × ½ дюйма Physiolis; шприц #2 представляет собой 1-мл шприц Schott с иглой SN CF размером 29G × ½ дюйма; и шприц #3 представляет собой 1-мл стандартный шприц Daikyo Seiko CZ (Crystal Zenith) с иглой размером 30G × ½ дюйма.
405 нм
Стабильность оценивали по следующим параметрам: (a) визуальному анализа; (b) мутности (ОП); (c) проценту извлечения с помощью HPLC с обращенной фазой; (d) проценту нативной формы мАт1 с помощью эксклюзионной HPLC; (e) проценту основного пика мАт1 с помощью катионообменной HPLC и (f) проценту кислотного варианта с помощью катионообменной HPLC.
Результаты репрезентативного эксперимента, в котором оценивалась стабильность препарата А, содержащего 100 мг/мл мАт1, в шприце #1, представлены в таблице 17 ниже.
Таблица 17
Стабильность препарата A, содержащего 100 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #1
Описание шприца #1:
Шприц:
1-мл шприц BD с низким содержанием вольфрама с иглой размером 29G × ½ дюйма Physiolis
Манжетка:
Hypak FluroTec 4023/50
Винтовой колпачок:
BD 260
Силиконизация:
Напылением
Темп.
Время
Визуальный анализ
Мутность (ОП<sub>405 нм</sub>)
% извлечения
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
% основного пика (катионообменная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
-
Начало
Удов.
0,00
100
98,2
40,2
14,2
37°C
7 дней
Удов.
0,00
101
97,8
37,6
13,9
37°C
14 дней
Удов.
0,00
100
97,3
37,0
14,7
37°C
28 дней
Удов.
0,00
96
96,5
34,9
15,5
25°C
1 месяц
Удов.
0,00
97
97,9
36,9
13,3
25°C
2 месяца
Удов.
0,00
103
97,0
38,6
14,9
25°C
3 месяца
Удов.
0,00
100
97,1
35,5
14,8
25°C
6 месяцев
Удов.
0,00
104
96,7
36,8
17,4
5°C
1 месяц
Удов.
0,00
96
98,0
39,0
13,8
5°C
2 месяцы
Удов.
0,00
103
97,8
39,3
13,6
5°C
3 месяца
Удов.
0,00
100
97,7
39,2
13,5
5°C
6 месяцев
Удов.
0,00
100
98,0
39,2
13,7
5°C
9 месяцев
Удов.
0,00
100
97,6
39,1
13,2
5°C
12 месяцев
Удов.
0,00
102
98,2
40,9
13,1
5°C
18 месяцев
Удов.
0,00
100
97,7
39,6
14,0
Результаты репрезентативного эксперимента, в котором оценивалась стабильность препарата А, содержащего 100 мг/мл мАт1, в шприце #2, представлены в таблице 18 ниже.
Таблица 18
Стабильность препарата A, содержащего 100 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #2
Описание шприца #2:
Шприц:
1-мл шприц Schott с иглой SN CF размером 29G × ½ дюйма
Манжетка:
West FluroTec 4023/50
Винтовой колпачок:
Stelmi 4800 w/RNS
Силиконизация:
Напылением
Темп.
Время
Визуальный анализ
(ОП<sub>405 нм</sub>)
% извлечения
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
% основного пика (катионообменная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
-
Начало
Удов.
0,00
100
98,3
40,3
14,2
37°C
7 дней
Удов.
0,00
102
97,5
37,8
14,0
37°C
14 дней
Удов.
0,00
102
97,3
37,4
14,7
37°C
28 дней
Удов.
0,00
97
96,6
34,6
15,4
25°C
1 месяц
Удов.
0,00
98
97,8
36,8
13,4
25°C
2 месяца
Удов.
0,00
103
97,1
38,8
14,9
25°C
3 месяца
Удов.
0,00
101
97,1
35,6
14,8
25°C
6 месяцев
Удов.
0,00
103
96,8
37,4
17,5
5°C
1 месяц
Удов.
0,00
97
97,8
39,8
13,8
5°C
2 месяца
Удов.
0,00
103
97,8
39,4
13,9
5°C
3 месяца
Удов.
0,00
101
97,6
39,8
13,8
5°C
6 месяцев
Удов.
0,00
101
98,1
40,0
13,9
5°C
9 месяцев
Удов.
0,00
102
97,6
39,7
13,4
5°C
12 месяцев
Удов.
0,00
100
98,2
41,1
13,0
5°C
18 месяцев
Удов.
0,00
102
97,7
39,4
13,9
Результаты репрезентативного эксперимента, в котором оценивалась стабильность препарата А, содержащего 20 мг/мл мАт1, в шприце #1, представлены в таблице 19 ниже.
Таблица 19
Стабильность препарата A, содержащего 20 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #1
Описание шприца #1:
Шприц:
1-мл шприц BD с низким содержанием вольфрама с иглой размером 29G × ½ дюйма Physiolis
Манжетка:
Hypak FluroTec 4023/50
Винтовой колпачок:
BD 260
Силиконизация:
Напылением
Темп.
Время
Визуальный анализ
Мутность (ОП<sub>405 нм</sub>)
% извлечения
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
% основного пика (катионообменная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
—
Начало
Удов.
0,00
100
98,9
44,5
15,9
37°C
7 дней
Удов.
0,00
100
98,4
42,1
15,7
37°C
14 дней
Удов.
0,00
99
98,3
41,8
16,2
37°C
28 дней
Удов.
0,00
98
97,6
39,2
17,5
25°C
1 месяц
Удов.
0,00
96
98,4
41,4
15,3
25°C
2 месяца
Удов.
0,00
100
98,1
41,8
16,0
25°C
3 месяца
Удов.
0,00
99
98,0
42,7
17,0
25°C
6 месяцев
Удов.
0,01
99
98,0
42,0
19,4
5°C
1 месяц
Удов.
0,00
97
98,2
44,0
15,7
5°C
2 месяца
Удов.
0,00
99
98,5
44,5
15,8
5°C
3 месяцев
Удов.
0,00
100
98,4
44,4
15,8
5°C
6 месяцев
Удов.
0,00
99
98,6
44,1
15,6
5°C
9 месяцев
Удов.
0,00
101
98,2
44,0
15,1
5°C
12 месяцев
Удов.
0,00
101
98,5
45,4
15,9
5°C
18 месяцев
Удов.
0,00
101
98,2
43,5
15,3
Результаты репрезентативного эксперимента, в котором оценивалась стабильность препарата А, содержащего 20 мг/мл мАт1, в шприце #2, представлены в таблице 20 ниже.
Таблица 20
Стабильность препарата A, содержащего 20 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #2
Описание шприца #2:
Шприц:
1-мл шприц Schott с иглой SN CF размером 29G × ½ дюйма
Манжетка:
West FluroTec 4023/50
Винтовой колпачок:
Stelmi 4800 w/RNS
Силиконизация:
Напылением
Темп.
Время
Визуальный анализ
Мутность (ОП<sub>405 нм</sub>)
% извлечения
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
% основного пика (катионообменная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
—
Начало
Удов.
0,00
100
98,9
44,5
15,9
37°C
7 дней
Удов.
0,00
101
98,4
42,1
15,6
37°C
14 дней
Удов.
0,00
100
98,2
41,8
16,2
37°C
28 дней
Удов.
0,00
98
97,6
39,3
17,4
25°C
1 месяц
Удов.
0,00
97
98,3
41,5
15,2
25°C
2 месяца
Удов.
0,00
99
98,2
41,9
16,0
25°C
3 месяца
Удов.
0,00
100
98,0
42,7
16,9
25°C
6 месяцев
Удов.
0,00
99
97,9
42,1
19,5
5°C
1 месяц
Удов.
0,00
96
98,4
44,7
15,6
5°C
2 месяца
Удов.
0,00
99
98,5
44,3
15,9
5°C
3 месяца
Удов.
0,00
99
98,4
44,7
15,7
5°C
6 месяцев
Удов.
0,00
100
98,7
44,2
15,5
5°C
9 месяцев
Удов.
0,00
102
98,4
43,8
15,1
5°C
12 месяцев
Удов.
0,00
102
98,6
45,2
15,9
5°C
18 месяцев
Удов.
0,00
102
98,3
43,2
15,2
Результаты репрезентативного эксперимента, в котором оценивалась стабильность препарата А, содержащего 100 мг/мл мАт1, в шприце #3, представлены в таблице 21 ниже.
Таблица 21
Стабильность препарата A, содержащего 100 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #3
Описание шприца #3:
Шприц:
стандартный 1-мл шприц Daikyo Seiko CZ с иглой размером 30G × ½ дюйма
Манжетка:
Daikyo D-21-6-1 с покрытием FluroTec
Винтовой колпачок:
7028
Силиконизация:
не применима к данному случаю
Темп.
Время
Визуальный анализ
Мутность (ОП<sub>405 нм</sub>)
% извлечения
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
% основного пика (катионообменная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
—
Начало
Удов.
0,00
100
97,5
38,5
13,6
37°C
7 дней
Удов.
0,00
101
97,5
40,0
14,0
37°C
14 дней
Удов.
0,00
102
97,3
39,5
15,2
37°C
28 дней
Удов.
0,00
101
96,4
38,3
15,7
25°C
1 месяц
Удов.
0,00
105
97,8
38,3
13,6
25°C
2 месяца
Удов.
0,00
102
97,2
37,4
14,9
25°C
3 месяцев
Удов.
0,00
102
97,2
37,2
14,6
5°C
1 месяц
Удов.
0,00
104
98,2
38,1
13,3
5°C
2 месяца
Удов.
0,00
101
97,9
38,1
13,4
5°C
3 месяцев
Удов.
0,00
101
97,8
38,4
13,1
5°C
6 месяцев
Удов.
0,00
106
97,8
39,6
13,4
5°C
9 месяцев
Удов.
0,00
105
97,9
40,8
13,4
5°C
12 месяцев
Удов.
0,00
112
97,6
38,3
13,5
Результаты репрезентативного эксперимента, в котором оценивалась стабильность препарата А, содержащего 6 мг/мл мАт1, в шприце #3, представлены в таблице 22 ниже.
Таблица 22
Стабильность препарата A, содержащего 6 мг/мл мАт1, в предварительно наполненном шприце с несъемной иглой #3
Описание шприца #3:
Шприц:
стандартный 1-мл шприц Daikyo Seiko CZ с иглой размером 30G × ½ дюйма
Манжетка:
Daikyo D-21-6-1 с покрытием FluroTec
Винтовой колпачок:
7028
Силиконизация:
N не применима к данному случаю
Темп.
Время
Визуальный анализ
Мутность (ОП<sub>405 нм</sub>)
% извлечения
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
% основного пика (катионообменная HPLC)
% кислотного варианта (катионообменная HPLC)
—
Начало
Удов.
0,00
100
98,8
45,6
16,8
37°C
7 дней
Удов.
0,00
101
98,7
46,2
17,2
37°C
14 дней
Удов.
0,00
101
98,5
45,8
18,2
37°C
28 дней
Удов.
0,00
101
98,3
44,5
19,8
25°C
1 месяц
Удов.
0,00
106
98,8
45,7
17,3
25°C
2 месяца
Удов.
0,00
103
98,8
44,3
18,1
25°C
3 месяцев
Удов.
0,00
101
98,3
42,9
18,6
5°C
1 месяц
Удов.
0,00
105
99,0
46,0
16,6
5°C
2 месяца
Удов.
0,00
102
98,8
45,6
16,8
5°C
3 месяцев
Удов.
0,00
101
98,8
45,7
16,3
5°C
6 месяцев
Удов.
0,00
105
98,5
46,7
16,5
5°C
9 месяцев
Удов.
0,00
106
98,8
47,8
17,2
5°C
12 месяцев
Удов.
0,00
115
97,8
47,6
17,5
Результаты этого ряда экспериментов показывают, что различные препараты остаются относительно стабильными в предварительно наполненных шприцах, особенно при хранении при температурах, составляющих 25°C и ниже, в течение одного месяца или дольше.
Пример 9: Стабильность препаратов, содержащих низкие концентрации мАт1, в стеклянных флаконах
Оценивается стабильность мАт1 в концентрациях, составляющих 0,2, 0,5, 1 и 2 мг/мл, в стеклянных флаконах во время исследований в режиме реального времени и во время ускоренных исследований, результаты которых на сегодняшний день представлены в таблицах 23-27. В случае этих экспериментов стабильность мАт1 исследуется во флаконах из боросиликатного стекла типа 1, изготовленных Schott. Препарат мАт1, используемый в примерах с 9 по 12, схож с таковым, описанным в таблице 9, за исключением того, что используемые концентрации антитела ниже таковых, исследованных ранее, и варьируют на протяжении периодов исследования. Точные концентрации мАт1, используемые в каждом эксперименте, отмечены в каждой таблице, приведенной ниже. Стабильность препаратов проверяли после хранения в стеклянных флаконах при 45°C, 25°C и 5°C в течение различных промежутков времени (в диапазоне от 7 дней до 6 месяцев, в зависимости от исследуемых условий).
Результаты на сегодняшний день указывают на увеличенную деградацию (преципитацию, агрегацию, расщепление и варианты, отличающиеся зарядами) препаратов мАт1 в концентрации 0,2 и 0,5 мг/мл после инкубации при 45°C в течение 7-14 дней. Кроме того, отмечалось увеличение агрегации в препаратах мАт1 во всех концентрациях ≤2 мг/мл после инкубации при 45°C в течение 28 дней (> 15% против ~2% в случае препаратов мАт1 в концентрации ≥6 мг/мл). Преципитация отмечалась, когда препарат мАт1 в концентрации 0,2 мг/мл хранили при 5°C в течение 6 месяцев. Значительная деградация/преципитация не отмечалась, когда препараты мАт1 в концентрациях, составляющих 0,5, 1 и 2 мг/мл, хранили при 5°C в течение 6 месяцев.
Таблица 23
Стабильность мАт1 в низких концентрациях в стеклянных флаконах (инкубация при 45°C)
Время (дни)
% извлеченного мАт1 (HPLC с обращенной фазой)
Концентрация мАт1 (мг/мл флакон)
0,2
0,5
1,0
2,0
0
100
100
100
100
7
91
97
103
109
14
67
94
101
108
28
40
82
100
106
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0.
Таблица 24
Стабильность мАт1 в низких концентрациях в стеклянных флаконах (инкубация при 25°C)
Время (дни)
% извлеченной нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Концентрация мАт1 (мг/мл флакон)
0,2
0,5
1,0
2,0
0
98,1
98,4
98,6
98,5
7
98,3
98,6
98,6
98,7
14
98,1
98,7
98,6
98,7
28
97,6
98,5
98,6
98,7
56
92,2
96,6
98,1
98,5
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0.
Таблица 25
Стабильность мАт1 в низких концентрациях в стеклянных флаконах (инкубация при 5°C)
Время (месяцы)
% извлеченного мАт1 (HPLC с обращенной фазой)
Концентрация мАт1 (мг/мл флакон)
0,2
0,5
1,0
2,0
0
100
100
100
100
1
101
97
105
109
2
99
100
107
110
3
105
99
105
111
6
80
97
102
106
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0.
Таблица 26
Стабильность мАт1 в низких концентрациях в стеклянных флаконах (инкубация при 5°C)
Время (месяцы)
% извлеченной нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Концентрация мАт1 (мг/мл флакон)
0,2
0,5
1,0
2,0
0
98,1
98,4
98,6
98,5
1
97,7
98,6
98,7
98,8
2
97,8
98,3
98,3
98,7
3
98,2
98,7
98,7
98,3
6
97,6
98,4
98,6
98,5
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0.
Таблица 27Стабильность мАт1 в низких концентрациях в шприцах PFS или стеклянных флаконах (инкубация при 45°C)А. Стеклянные флаконы
Время (дни)
% извлеченной нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Концентрация мАт1 (мг/мл флакон)
0,2
0,5
1,0
2,0
0
98,1
98,4
98,6
98,5
7
90,4
97,2
98,3
98,2
14
76,1
92,0
96,1
97,8
28
42,9
51,0
83,7
81,7
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0
В. Шприц.
Время (дни)
% извлеченной нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Концентрация мАт1 (мг/мл флакон)
0,2
0,5
1,0
2,0
0
98,1
98,6
98,5
98,4
7
97,6
98,1
98,2
98,1
14
97,9
97,9
97,8
97,8
28
96,9
96,8
96,7
96,6
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0
Пример 10: Стабильность препаратов, содержащих низкие концентрации мАт1, в шприцах BD и Ompi
Оценивается стабильность мАт1 в концентрациях, составляющих 0,2, 0,5, 1 и 2 мг/мл, в шприцах BD и Ompi во время исследований в режиме реального времени и во время ускоренных исследований. Оба шприца представляют собой шприцы объемом 1 мл, изготовленные с низким содержанием вольфрама, и имеют тонкостенную, несъемную иглу размером 27G × ½ дюйма. Шприц BD содержит 0,8 мг силикона, нанесенного напылением сверху ободка. Шприц Ompi содержит 0,5 мг силикона, который нанесен с помощью технологии с использованием опускающихся насадок, которая обеспечивает более однородное покрытие по всей длине цилиндра шприца. Стабильность препаратов проверяли после хранения в обоих заранее наполненных шприцах при 45°C, 25°C и 5°C в течение различных промежутков времени (в диапазоне от 7 дней до 6 месяцев, в зависимости от исследуемых условий).
Результаты, которые представлены в таблицах 28-30, указывают на то, что стабильность мАт1 при 45°C в шприце BD является значительно выше, чем во флаконе из боросиликатного стекла типа 1, как определено с помощью анализа с использованием HPLC с обращенной фазой (преципитации) и эксклюзионной HPLC (агрегации и вариантов расщепления).
Стабильность мАт1 при 45°C в шприце Ompi была выше, чем во флаконах из боросиликатного стекла типа 1, но значительно меньше, чем при инкубации в шприце BD. Эти данные наводят на мысль, что силикон может блокировать взаимодействие препарата со стеклянной поверхностью, тем самым увеличивая стабильность. Поскольку шприц BD содержит больше силикона по всему стеклянному цилиндру шприца, чем шприц Ompi, это может объяснять, почему препарат является более стабильным в шприце BD, чем в шприце Ompi.
Значительная деградация не отмечалась, когда мАт1 хранили в шприцах BD и Ompi при 5°C или 25°C в течение 6 месяцев, как определено с помощью анализа с использованием эксклюзионной HPLC и катионообменной HPLC.
Таблица 28Стабильность мАт1 в концентрации 0,6 мг/мл в шприцах BD, шприце Ompi или стеклянных флаконах (инкубация при 45°C)
Время (дни)
% извлеченной нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Флакон из стекла типа 1
Шприц BD
Шприц Ompi
0
98,6
98,6
98,9
7
98,2
98,4
98,5
14
97,7
98,0
98,5
28
66,1
97,1
84,5
54
-
95,6
24,5
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0
Таблица 29
Стабильность мАт1 в низких концентрациях в шприцах BD и Ompi (инкубация при 5°C, эксклюзионная HPLC)
Время (месяцы)
% извлеченной нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Концентрация мАт1 (мг/мл)
Флакон
BD
Ompi
0,2
0,6
0,2
0,6
0,2
0,6
0
98,6
98,6
98,4
98,6
98,7
98,9
1
98,7
99,0
98,5
98,9
98,5
98,9
2
98,3
98,9
98,7
98,9
98,6
98,9
3
98,4
98,6
98,4
98,7
98,3
98,7
6
98,3
98,6
98,3
98,7
98,2
98,7
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0
Таблица 30
Стабильность мАт1 в низких концентрациях во флаконе, шприцах BD и CZ (инкубация при 45°C, HPLC с обращенной фазой)
% извлеченного мАт1 (HPLC с обращенной фазой)
Концентрация мАт1 (мг/мл)
Время (дни)
Флакон
BD
CZ
0,2
0,6
0,2
0,6
0,2
0,6
0
100
100
100
100
100
100
7
92
103
96
107
99
106
14
88
96
96
99
104
100
28
39
94
85
99
104
101
42
-
-
61
-
94
-
56
-
-
55
-
96
-
62
-
-
-
88
-
98
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0
Пример 11: Стабильность препарата, содержащего низкие концентрации мАт1, в альтернативных устройствах для хранения.
2
2
Проводятся исследования стабильности мАт1 в других устройствах для хранения, включающих шприцы West CZ (из циклического полиолефина), стеклянные флаконы plus типа 1 Schott (с 100-200-нм слоем SiО на внутренней поверхности флаконов из боросиликатного стекла типа 1) и стеклянные флаконы из боросиликатного стекла типа 1 Schott с заполненным азотом свободным пространством (воздух удален из свободного пространства флакона и заменен газом N).
Результаты, представленные в таблицах 31-36, указывают на то, что стабильность препаратов мАт1 в концентрациях 0,2 и 0,6 мг/мл при 45°C в шприцах CZ была значительно выше, чем в шприцах BD, как определено с помощью HPLC с обращенной фазой и эксклюзионной HPLC.
Кроме того, стабильность препаратов мАт1 в концентрациях 0,2 и 0,6 мг/мл при 45°C в стеклянных флаконах plus типа 1 Schott была значительно выше, чем во флаконах типа 1, как определено с помощью HPLC с обращенной фазой и эксклюзионной HPLC.
Значительная деградация, определяемая с помощью эксклюзионной HPLC, отмечалась в случае препарата мАт1 в концентрации 0,2 мг/мл во флаконах из стекла типа 1 после инкубации при 25°C или 5°C в течение 3 месяцев. Значительная деградация не отмечалась в случае препарата мАт1 в концентрации 0,2 мг/мл в стеклянных флаконах plus типа 1 Schott после инкубации при 25°C или 5°C в течение 3 месяцев.
Стабильность при 45°C была значительно выше в случае препаратов мАт1 в концентрации 0,2 мг/мл во флаконах из стекла типа 1 с верхним азотным слоем, чем во флаконах из стекла типа 1 с воздушным свободным пространством, как определено с помощью эксклюзионной HPLC.
Удаление кислорода из свободного пространства имело высочайший стабилизирующий эффект на мАт1 в концентрации 0,2 мг/мл, приготовленное с использованием 0,05% полисорбата 20 (как и в препарате A), хотя увеличенная скорость деградация, тем не менее, отмечалась по сравнению с препаратом мАт1 в концентрации 0,2 мг/мл без полисорбата 20.
Таблица 31
Стабильность мАт1 в низких концентрациях во флаконе, шприцах BD и CZ (инкубация при 45°C, эксклюзионная HPLC)
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Концентрация мАт1 (мг/мл)
Время (дни)
Флакон
BD
CZ
0,2
0,6
0,2
0,6
0,2
0,6
0
98,8
98,7
98,5
98,5
98,7
98,6
7
96,5
98,3
97,6
98,3
97,0
98,3
14
82,0
97,2
95,8
97,2
97,1
97,0
28
58,2
64,5
70,6
95,8
96,1
96,2
42
-
-
48,8
-
93,3
-
56
-
-
36,4
-
89,6
-
62
-
-
-
93,4
-
90,3
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0
Таблица 32
Стабильность мАт1 в низких концентрациях во флаконе plus типа 1 (инкубация при 45°C, HPLC с обращенной фазой)
% извлеченного мАт1 (HPLC с обращенной фазой)
Время (дни)
Концентрация мАт1 (мг/мл)
Флакон типа 1
Флакон plus типа 1
0,2
0,6
0,2
0,6
0
100
100
100
100
7
92
103
99
106
14
88
96
100
99
28
39
94
101
100
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0
Таблица 33
Стабильность мАт1 в низких концентрациях во флаконе plus типа 1 (инкубация при 45°C, эксклюзионная HPLC)
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Время (дни)
Концентрация мАт1 (мг/мл)
Флакон типа 1
Флакон plus типа 1
0,2
0,6
0,2
0,6
0
98,8
98,7
98,7
98,6
7
96,5
98,3
97,3
98,3
14
82,0
97,2
97,4
97,2
28
58,2
64,5
70,6
95,2
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0
Таблица 34
Стабильность мАт1 в низких концентрациях во флаконе plus типа 1 (инкубация при 25°C, эксклюзионная HPLC)
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Время (месяцы)
Концентрация мАт1 (мг/мл)
Флакон типа 1
Флакон plus типа 1
0,2
0,6
0,2
0,6
0
98,8
98,7
98,7
98,6
1
98,7
98,7
98,6
98,8
2
98,2
98,6
98,2
98,6
3
92,5
97,2
97,5
97,4
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0
Таблица 35
Стабильность мАт1 в низких концентрациях во флаконе plus типа 1 (инкубация при 5°C, эксклюзионная HPLC)
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Время (месяцы)
Концентрация мАт1 (мг/мл)
Флакон типа 1
Флакон plus типа 1
0,2
0,6
0,2
0,6
0
98,8
98,7
98,7
98,7
1
98,9
98,9
98,5
98,7
2
98,7
98,9
98,6
98,6
3
96,5
97,7
97,9
97,7
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0
Таблица 36
Стабильность мАт1 в концентрации 0,2 мг/мл во флаконе типа 1 с верхним азотным слоем (инкубация при 45°C, эксклюзионная HPLC)
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Время (месяцы)
Воздушное свободное пространство
Азотное свободное пространство
0
97,5
97,1
7
95,2
95,7
14
84,6
96,6
21
60,9
96,7
28
53,9
96,7
56
-
92,4
Препарат: 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетат, рН 5,0
Пример 12: Эффект вольфрама на стабильность мАт1 в низкой концентрации
Проводятся исследования стабильности мАт1 после внесения не подвергнутого фильтрации экстракта вольфрамового стержня. Вольфрамовые стержни используются в процессе производства предварительно наполненных шприцев для формирования отверстия в шприце Люэра. Экстракт вольфрамового стержня, используемого на производственной линии BD, готовили, используя плацебо мАт1 (такое же, как препарат А, но без мАт1). Не подвергнутый фильтрации экстракт стержня содержит все разновидности вольфрама, которые могут остаться в шприце в виде загрязнений (растворимые соли вольфрама и нерастворимые оксиды вольфрама).
Результаты эксклюзионной HPLC, представленные в таблицах 37 и 38, указывают на то, что стабильность при 25°C препаратов мАт1 в концентрации 0,6 мг/мл, содержащих уровни вольфрама ≥500 част/млрд, была меньше, чем в контрольном флаконе без вольфрама. Шприцы с низким содержанием вольфрама типично содержат <500 част/млрд вольфрама, тогда как стандартные шприцы могут содержать вплоть до 2500 част/млрд вольфрама.
Деградация не отмечалась в случае препаратов мАт1 с концентрацией 0,6 мг/мл с вольфрамом вплоть до 2500 част/млрд после инкубации при 5°C в течение 6 месяцев.
Таблица 37
Стабильность мАт1 в концентрации 0,6 мг/мл после хранения при 25°C в не подвергнутых фильтрации экстрактах вольфрамовых стержней (эксклюзионная HPLC)
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Время (недели)
Контрольный флакон
50 част/млрд
100 част/млрд
500 част/млрд
1000 част/млрд
2500 част/млрд
0
98,7
98,8
98,9
98,8
98,8
98,7
1
98,7
98,6
98,7
98,6
98,7
98,7
2
98,6
98,6
98,6
98,4
98,4
98,4
4
98,5
98,5
98,5
98,6
98,2
98,5
8
98,6
98,7
98,6
98,2
98,3
98,6
26
97,4
97,8
97,5
78,6
76,5
74,8
Препарат: 0,6 мг/мл мАт в 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетате, рН 5,0.
Таблица 38
Стабильность мАт1 в концентрации 0,6 мг/мл после хранения при 5°C в не подвергнутых фильтрации экстрактах вольфрамовых стержней (эксклюзионная HPLC)
% нативной формы мАт1 (эксклюзионная HPLC)
Время (недели)
Контрольный флакон
50 част/млрд
100 част/млрд
500 част/млрд
1000 част/млрд
2500 част/млрд
0
98,7
98,8
98,9
98,8
98,8
98,7
1
98,5
98,5
98,6
98,7
98,6
98,4
3
97,7
98,0
98,2
98,2
98,2
98,2
6
98,8
98,6
98,7
98,7
98,8
98,4
Препарат: 0,6 мг/мл мАт в 8% сахарозы; 0,05% полисорбата 20, 10 мМ ацетате, рН 5,0.
Конкретные варианты осуществления, описанные здесь, не ограничивают объем настоящего изобретения. В самом деле, различные модификации настоящего изобретения, помимо тех, которые здесь описаны, станут очевидны квалифицированным в данной области техники специалистам на основании вышеприведенного описания и сопроводительных фигур. Такие модификации, как подразумевается, попадают в объем прилагаемой формулы изобретения.