Влияние G-CSF на проангиогенные свойства мобилизированных клеток периферической крови у больных с хронической сердечной недостаточностью

Влияние G-CSF на проангиогенные свойства мобилизированных клеток периферической крови у больных с хронической сердечной недостаточностью

В.И. Коненков 1, О.В. Повещенко 1, И.И. Ким 1, Е.А. Покушалов 2, А.Б. Романов 2,

Н.А. Гульева 1, В.В. Бернвальд1, А.В. Шевченко 1, О.В. Голованова 1,

Е.В. Янкайте 1, А.Ф. Повещенко 1, А.М. Караськов 2

1 НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, Новосибирск

2 НИИ патологии кровообращения им. акад. Е.Н. Мешалкина Росмедтехнологий, Новосибирск

Effect of G-CSF on proangiogenic properties mobilized peripheral blood cells in patients with chronic heart failure

V.I. Konenkov1, O.V. Poveshchenko 1,I.I. Kim 1, E.A. Pokushalov2, A.B. Romanov2, N.A. Guleva 1, V.V. Bernvald 1,

A.V. Shevchenko 1, O.V. Golovanova 1, E.V. Yankyate 1, A.F. Poveshchenko 1, A.M. Karaskov2

1 Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology SB RAMS, Novosibirsk

2 State Research Institute of Circulation Pathology them. Acad. EN Meshalkina, Novosibirsk

В связи с эффективностью интрамиокардиальной клеточной терапии при ишемической болезни сердца (ИБС), целью работы является оценка фенотипических характеристик и цитокин-продуцирующих свойств мононуклеарных клеток, мобилизованных введением препарата О-СБЕ из костного мозга пациентов с сердечной недостаточностью, развившейся после перенесенного острого инфаркта миокарда. В исследование включено 67 пациентов с ИБС, III—IV функциональным классом хронической сердечной недостаточности (по классификации ЫУИА), получающих современную стандартную терапию. Показано, что введение препарата О-СБЕ приводит к мобилизации эндотелиальных прогениторных клеток (ЭПК) из костного мозга в периферическую кровь (СВ34+/Сй133+ и С034+/КйП+ популяций). Интрамиокардиальное введение клеток приводит к улучшению перфузии в зонах введения у 76% пациентов. У пациентов с выявленным улучшением перфузии миокарда количество Сй34+СП133+ ЭПК в 3,2 раза выше, чем у пациентов без эффекта или с ухудшением. Мононуклеарные клетки после введения О-СБЕ в 48-часовой культуре се-кретируют цитокины Еро, ОМ-СБЕ, ТЫЕ-а, способствующие улучшению кровоснабжения миокарда. Периферическая кровь является доступным источником ЭПК, а мононуклеа-ры после мобилизации способны оказывать репаративное действие на ишемизированный миокард.

Ключевые слова: ишемическая болезнь сердца, эндотелиальные прогениторные клетки, цитокины, перфузия миокарда.

The aim is to study the phenotypic characteristics and cytokine-producing properties mobilized drug administration G-CSF from bone marrow mononuclear cells of peripheral blood of patients with heart failure, which developed after acute myocardial infarction, in connection with the efficiency of intramyocardial stem cell therapy. The study included 67 patients with CHD and III—IV functional class congestive heart failure (NYHA), receiving current standard therapy. Shown that the introduction of the drug G-CSF results in mobilization of endothelial progenitor cells (EPC) from bone marrow into peripheral blood (CD34+/CD133+and CD34+/ KDR+populations). Intramyocardial cell injection resulted in improved perfusion at the injection site in 76% of patients. Patients who responded to improved perfusion, the number of CD34+CD133+PC in 3,2 times higher than in patients without effect or impairment. Mononuclear cells after administration of G-CSF in a 48 hour culture secrete cytokines, Epo, GM-CSF, TNF-a, contribute to the improvement of myocardial perfusion. Peripheral blood is a readily available source of EPC, and mononuclear cells after mobilization are able to exert reparative effects on the ischemic myocardium.

Key words: ischemic heart disease, endothelial progenitor cells, cytokines, myocardial perfusion.

Хроническая сердечная недостаточность (ХСН), возникающая чаще всего при ишемическом поражении миокарда, является одной из главных причин заболеваемости и смертности, а также снижения качества жизни пациентов. В настоящее время у значительного число больных не отмечается значимого клинического улучшения после выполнения традиционных методов повторной васкуляризации, таких как ангиопластика или коронарное шунтирование, что определяет необходимость разработки терапевтических методов, направленных не только на улучшение функционального состояния миокарда, но и репаративную регенерацию сердечной мышцы. Учитывая роль стволовых/прогениторных (СПК] клеток в развитии, поддержании и восстановлении стареющих или пораженных тканей взрослого ор-

е-таП: poveschenkoov@yandex.ru

ганизма, они представляют собой альтернативную стратегию лечения сердечно-сосудистой патологии. Доступным источником аутогенных СПК является периферическая кровь после фармакологической мобилизации клеток костного мозга человеческим рекомбинантным гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (Э-СЭР). В экспериментальных работах на модели инфаркта миокарда (ИМ) показано, что введение Э-СБР в течение 4—5 сут. приводит к уменьшению размера зоны ишемического повреждения, улучшению функциональных показателей работы сердца [1]. Но моделирование ИМ не в полной мере отражает все процессы динамического развития ИБС у человека. Несмотря на показанную возможность мобилизации СПК, в том числе эндотелиальных прогениторных клеток (ЭПК), в кровоток, клиническая

эффективность применения G-CSF путем последовательных инъекций у пациентов с сердечнососудистой патологией низкая, что может быть связано с недостаточной миграцией СПК в пораженный миокард [2]. Поэтому сочетание мобилизации СПК с локальным или системным введением аутогенных СПК пациенту является на сегодняшний день основным подходом в клеточной терапии ИБС. Наряду с гемопоэтическими предшественниками, периферическая кровь после мобилизации СПК является источником и ЭПК, которые способствуют поддержанию эндотелиальной целостности и постнатальной неова-скуляризации тканей организма [3, 4]. Образование новых сосудов может осуществляться как за счет ангиогенеза, так и путем васкулогенеза из ЭПК, когда в ответ на ангиогенные ростовые факторы ЭПК мигрируют, пролиферируют и дифференцируются в зрелые эндотелиоциты [4—9].

С учетом спорных результатов начальных клинических исследований, необходимо более полное понимание биологических свойств используемых клеток у пациентов с ХСН. Ключевой аспект в области научных исследований в рамках клеточной терапии представляет фенотипическая и функциональная характеристика СПК.

Цель нашего исследования состояла в оценке фенотипических характеристик и цитокин-продуцирующих свойств мобилизованных в кровоток мононуклеарных клеток костного мозга пациентов с сердечной недостаточностью, развившейся после перенесенного острого инфаркта миокарда.

Материал и методы

В исследование приняли участие 67 пациентов с ИБС, III—IV функциональным классом ХСН (по классификации NYHA), получающих современную стандартную терапию. Средний возраст больных составлял 57,0±7,7 (M±m) лет, 91% из них мужчины. Длительность анамнеза болезни в части ИБС составляла 7,2±5,4 лет, количество перенесенных ИМ — 1—2, фракция выброса левого желудочка < 35%, длительность периода от последнего ИМ — не менее 12 мес. Пациенты находились на лечении в ФГУ «НИИ патологии кровообращения им. ак. Е.Н Ме-шалкина Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи», Новосибирск. Письменное информированное согласие было получено от всех пациентов. Протокол исследования одобрен локальными Этическими комитетами, утвержден Учеными Советами обоих учреждений соисполнителей.

Введение рекомбинантного человеческого G-CSF (TEVA Pharmaceutical Industries Ltd, Israel) осуществлялось инъекционно подкожно в дозе 3,3-5,0 мкг/кг веса в течение 5 сут. На 6-е сут. проводилась процедура аппаратного цитафереза на сепараторе клеток крови «Haemonetics MCS + ». Выделение фракции мононуклеаров крови осуществлялось на градиенте плотности фиколла-верографина (р = 1,078) (Био-лоТ, СПб).

Фенотипирование иммунокомпететных клеток проводили с помощью проточного цитометра FACSCantoII (Becton Dickinson, США) в программе FACSDiva (Becton Dickinson, США), в соответствии с инструкциями к прибору. Для поверхностного маркирования использовали моноклональные антитела к CD34, CD45, CD133, KDR, меченные флюоресцеином изотиоцианатом (FITC), фикоэрит-

рином (PE), аллофикоцианином (APC) в количестве, рекомендуемом производителями (Becton Dickinson, AbCam, Novus Biologicals,d±IA). Интра-миокардиальные инъекции осуществлялись через катетер, проведенный через бедренную артерию под навигационным контролем системы NOGA XP (Biosense-Webster) в зоны гибернированного (жизнеспособного, но ишемизированного) миокарда в количестве 300x10е мононуклеаров крови в 10 точек по 0,2 мл.

Для определения содержания цитокинов монону-клеары культивировали в течение 48 ч при 37°С в Ш2-инкубаторе в круглодонных 96-луночных планшетах в среде RPMI-1640 с 10% FCS, дополненной 0,3 мг/мл L-глютамина (БиолоТ, СПб). Культивирование проводили в присутствии липополисахарида (Escherichia coli 0111:B4, Sigma) в конечной концентрации 10 мкг/мл или конканавалина А (КонA, Sigma) в конечной концентрации 15 мкг/мл, а также в отсутствие митогенной стимуляции. Отобранные супернатанты (аликвотами по 0,2 мл) хранили при -70°С до тестирования.

Содержание в супернатантах мононуклеаров цитокинов (TNF-a, IL-10, GM-CSF) оценивали методом проточной флюориметрии на двулучевом лазерном автоматизированном анализаторе (BioPlex Protein Assay System, BioRad, США) с использованием коммерческих тест-систем в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Методом им-муноферментного анализа (ИФА) оценивали содержание эритропоэтина (Epo) (Вектор-Бест). Интенсивность иммуноферментной реакции измеряли на автоматическом спектрофотометре (STAT FAX-2100) при длине волны 492 нм.

ЭКГ-синхронизированная томосцинтиграфия (SPECT) миокарда проводилась с использованием технеция (Tc-99m tetrofosmin) в покое и при фармакологическом «стрессе» с внутривенным введением аде-нозина (0,14 мг/кг/ мин в течение 6 мин). Оценка результатов проводилась в 10 сегментах: каждому сегменту определяли балл от 0 до 4 (0 — нормальная деятельность, 4 — нет активности).

Статистическая обработка полученных результатов проводилась методами описательной и непараметрической статистики на персональном компьютере с использованием программы «STATISTICA for Windows 6.0». Для описательной статистики использовались средние арифметические величины и стандартные отклонения (M±m). Для оценки достоверности различий использовался непараметрический критерий Манна — Уитни, Вилкоксона.

Результаты и обсуждение

Для оценки эффекта мобилизации СПК в периферическое русло использовался маркер гемопоэ-тических стволовых клеток СD34. Показано, что у пациентов с ХСН в нестимулированных условиях количество циркулирующих CD34+ клеток составляет 0,057±0,04%. После введения G-CSF на 6 сут. число CD34+ возрастает в 10,7±6,8 раз и достигает 0,57±0,37 % (рис. 1А). Введение G-CSF приводит к мобилизации из костного мозга не только гемо-поэтических стволовых клеток, но и сопровождается повышением в кровотоке пула ЭПК, которые идентифицируются по экспрессии трех маркеров: CD34, CD133 и рецептора сосудистого эндотелиального фактора роста — VEGFR2 [10].

Нами показано, что на 6 сут. после мобилизации Э-СБР у пациентов с ХСН происходит не только увеличение количества Сй34+ клеток, но и увеличивается число Сй34+ клеток, которые ко-экспрессируют Сй133 (рис. 1Б). Содержание Сй34+Сй133+ клеток возрас-

тает в 12,8 раз и составляет к 6-м сут. 0,1±0,07%. Количество CD34+VEGFR2+-эндотелиальных предшественников при введении G-CSF увеличивается и составляет 0,13±0,07% (рис. 1В), что согласуется с литературными данными [4, 11].

0,8

0,6

0,4

0,2

CD34+

±

О сут. 6-е сут.

А

В

Рис.1. Содержание С034+ [п = 38), 0034+00133+ (п = 26), СО34+'^Е0ЕЯ2+[КОЙ+) (п=12) клеток в кровотоке относительно общего числа мононуклеаров в процессе мобилизации Б-СБР,

*- показатели статистически значимо отличающиеся от показателей до мобилизации [и- критерий Манна - Уитни)

ЭПК периферической крови после мобилизации Э-СБР представляют собой гетерогенную популяцию: включают как Сй34+, так Сй34- клетки. Показано, что популяция Сй133 + Сй34--кпеток, так же, как и популяция Сй133+Сй34+ клеток, способствует регенерации сосудов [10, 11]. Нами показано, что до стимуляции Э-СБР определяется популяция Сй133 + Сй34--клеток, численность которой после введения Э-СБР возрастает в 5 раз и составляет в среднем 0,1% от общего числа мононуклеаров крови (данные не представлены). Также возрастает популяция Сй34--клеток, экспрессирующих VEGFR2 — с 0,25% до 2%. Высокий уровень экспрессии VEGFR2 может свидетельствовать о присутствии в мононуклеарной фракции после мобилизации как одной из популяций ЭПК (Сй14+Сй34-), так и зрелых эндотелиоцитов [9].

ЭПК способны оказывать репаративное действие на ишемический миокард как прямым включением в стенку сосуда (васкулогенез) и/или дифференциров-кой в кардиомиогенном направлении, так и опосредованным действием — синтезом факторов роста, усиливающих локальный ангиогенез и улучшающих перфузию миокарда, и цитокинов, стимулирующих мобилизацию СПК костного мозга [9, 12].

Через 6 месяцев после интрамиокардиального введения мононуклеаров крови после мобилизации Э-СБР у 76% пациентов улучшились показатели перфузии в сегментах, в которые вводили клетки, у 24% больных перфузия миокарда осталась без изменения или ухудшилась.

Визуализация отсроченных сцинтиграмм с оценкой перераспределения изотопа в миокарде как суммы баллов исследуемых сегментов показала, что суммарная оценка области сниженного накопления препарата (дефекты перфузии или гипоперфузия) в миокарде левого желудочка в покое составила 24±11 балла до лечения, 19±13 через 6 мес. и 21±12 к 12 мес. наблюдения (рис. 2).

балл

40

35

30

25

20

15

10

5

0

##

І

До

лечения

6 мес. 12 мес.

П о к о й

До 6 мес. 12 мес.

лечения

А д е н о з и н

Рис.2. Результаты оценки перфузии миокарда [двухэтапная оценка: в покое и после фармакологической нагрузки с аденозином]. ЭКГ-синхронизированная томосцинтиграфия через 6 и 12 мес. после интрамиокардиального введения мононуклеаров крови [n = 32].

Баллы обозначают средние значения участков гипоперфузии - чем выше общее количество баллов, тем более выражена гипоперфузия.

*, **- показатели статистически значимо отличающиеся от показателей до лечения [U- критерий Манна-Уитни];

#, ##- статистической значимости различий не выявлено

Также уменьшилось количество участков гипоперфузии на нагрузочном этапе (в ответ на инфузию аде-нозина) до 22±12 и 23±10 к 6 и 12 мес. соответственно по сравнению с показателем 27±11баллов до лечения. Снижение дефектов перфузии на нагрузке и в покое свидетельствует об увеличении кровоснабжения и, таким образом, доли жизнеспособного миокарда. Отсутствие изменений в миокардиальной перфузии в областях, отдалённых от зоны клеточного воздействия, и выявленное значительное улучшение миокардиального резерва в сегментах, подвергшихся воздействию, косвенно доказывает положительный эффект от введения в миокард аутогенных СПК.

0

Статистически значимыми являются результаты к 6 мес. наблюдения, к 12 мес. показатели перфузии несколько ухудшаются и становятся недостоверными по сравнению с результатами до начала лечения. Наши результаты согласуются с литературными данными, показывающими, что не только СПК костного мозга, но и селектированные CD133 + -прогениторные клетки, введенные интракоронарно и интрамиокардиально, способны воздействовать на перфузию, увеличивать плотность капилляров и экспрессию VEGF в ишемическом миокарде [13, 14]. Тем не менее, учитывая малое количество наблюдений, а также отсутствие контрольной группы, результаты не могут полностью доказывать, что трансплантация аутогенных СПК улучшает перфузию миокарда.

В проведенных исследованиях показано, что решающим фактором эффективности проводимой терапии является доза вводимых пациенту СПК [15, 16]. Нами проведен анализ количества различных популяций прогениторных клеток (CD34+, CD34+CD133 + , CD34+VEGFR2 + ) после мобилизации в зависимости от результатов лечения, оцениваемых по перфузии (табл.1). Мы показали, что у пациентов с положительным эффектом клеточной терапии в виде улучшения перфузии миокарда в 3,2 раза выше количество CD34+CD133+-СПК (0,08±0,02% среди мононуклеаров), чем у пациентов без эффекта или с ухудшением (0,025±0,005%). Достоверных различий количества CD34+ и CD34+VEGFR2+-клеточных популяций не наблюдалось. В кровотоке после G-CSF-мобилизации содержатся различные популяции прогениторных клеток, которые, очевид-

но, могут воздействовать на различные звенья репарации миокарда. Мы идентифицировали минорную CD34+CD133+ популяцию ЭПК, которая может способствовать стимуляции ангиогенеза в миокарде.

Показано, что привнесенные в миокард клетки, в том числе СПК, выделяют различные биоактивные вещества: факторы роста, цитокины — основные эффекты которых выражаются в мощной индукции репаративных процессов в месте повреждения [17]. Трансплантация клеток влияет на ремоделирование миокарда, улучшает механические свойства рубцово-измененной мышцы сердца, улучшает ва-скуляризацию миокарда, усиливая ангиогенез. Мы исследовали содержание ряда цитокинов в супернатанте при культивировании мононуклеаров крови в течение 48 ч и рассмотрели роль некоторых из них в ангиогенезе.

Было установлено, что мононуклеары после мобилизации продуцируют в 48-часовой культуре Еро, GM-CSF, Т^-а в высоких концентрациях (табл. 2), причем у пациентов с положительными изменениями перфузии, культивированные мононуклеары продуцируют больше указанных цитокинов (17,6±1,7; 46,2±16 и 1343±857 соответственно), чем у пациентов с ухудшением (15,8±1,8; 10,3±2,5 и 560±60 соответственно). Мононуклеары обладают большим функциональным резервом, увеличивая секрецию GM-CSF, Т^-а в 15—30 раз в присутствии Т-клеточного митогена КонА как в группе пациентов с улучшением, так и с ухудшением. Уровень Еро не изменяется под воздействием митогена, но высок в культуре. Известно, что самым мощным ангиогенным фактором является VEGF, содержание которого прямо

Таблица 1. Содержание CD34+, CD34+CD133+, CD34+VEGFR2+-клеток в крови пациентов после мобилизации G-CSF

Группа пациентов с ухудшением перфузии Группа пациентов с улучшением перфузии

% изменения гипоперфузионных участков покой аденозин покой аденозин

+

CD34+ 0,61±0,42 0,65±0,43

CD34+CD133+ 0,025±0,005 0,08±0,02* p=0,042

CD34+VEGFR2+ 0,1±0,04 0,1±0,01

* — «р» по сравнению с группой пациентов с ухудшением перфузии

Цитокины Общая группа пациентов Группа пациентов с ухудшением перфузии Группа пациентов с улучшением перфузии

Спонт КонА Спонт КонА Спонт КонА

Epo мМе/мл 16,9±1,6 16,8±2,2 15,8±1,8 15,2±0,6 17,6±1,7* 17,9±2,4

GM-CSF пгк/мл 34,3±13 162±56 10,3±2,5 331±105 46,2±16** 648±193

TNF-a пгк/мл 760±106 15160±978 560±60 10864±926 1343±857* 20270±629

* — р<0,05, по сравнению со спонтанной продукцией группы с ухудшением перфузии (критерий Вилкоксона). ** — р<0,03 по сравнению со спонтанной продукцией группы с ухудшением перфузии (критерий Вилкоксона).

коррелирует с количеством ЭПК [8]. Но также показано, что введение Epo пациентам с сердечной недостаточностью способствует улучшению кровоснабжения. Epo стимулирует неоваскуляризацию, повышая экспрессию VEGF в ишемизированных тканях и воздействуя на эндотелиальные клетки, экспрессирующие его рецептор [18]. TNF-a является не только цитоки-ном с провоспалительными свойствами, но и воздействует на различные звенья ангиогенеза, обладает антиапоптотическим действием [19], стимулирует продукцию матриксных металлопротеиназ в эндотелии. GM-CSF, являющийся фактором стимуляции пролиферации и дифференцировки гемопоэтиче-ских клеток, может также стимулировать различные звенья ангиогенеза [17]. Кроме того, GM-CSF и Epo способны мобилизировать СПК из костного мозга и при введении клеток в миокард возможен дополнительный выход СПК в периферическое сосудистое русло, что усиливает клинический эффект.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Harada M., Qin Y., Takano H. et al. G-CSF prevents cardiac remodeling after myocardial infarction by activating the Jak-Stat pathway in cardiomyocytes. Nat. Med. 2005; 11: 305—11.

2. Wang Y., Tagil K., Ripa R.S. et al. Effect of mobilization of bone marrow stem cells by granulocyte colony stimulating factor on clinical symptoms, left ventricular perfusion and function in patients with severe chronic ischemic heart disease. Int. J. Cardiol. 2005; 100: 477—83.

3. Asahara T., Murohara T., Sullivan A. et al. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science 1997; 275: 964-7.

4. Capobianco S., Chennamaneni V., Mittal M. et al. Endothelial progenitor cells as factors in neovascularization and endothelial repair. World J. Cardiol. 2010. 26; 2(12): 411-20

5. de Boer H.C., Hovens M.M., van Oeveren-Rietdijk A.M. et al. Human CD34+/KDR+ cells are generated from circulating CD34 + cells after immobilization on activated platelets. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2011; 31: 408-15.

6. Dimmeler S., Leri A. Aging and disease as modifiers of efficacy of cell Therapy. Circ. Res. 2008; 102: 1319-30.

7. Honold J., Lehmann R., Heeschen C. et al. Effects of granulocyte colony stimulating factor on functional activities of endothelial progenitor cells in patients with chronic ischemic heart disease. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2006; 26: 2238-43.

8. Leone A., Valgimigli M., Giannico M. B. et al. From bone marrow to the arterial wall: the ongoing tale of endothelial progenitor cells. European. Heart J. 2009; 30: 890-9.

9. Zampetaki A., Kirton J., Xu Q. et.al. Vascular repair by endothelial progenitor cells. Cardiovascular. Research. 2008; 78: 413-21.

10. Friedrich E.B., Walenta K., Scharlau J. et al. CD34-/CD133+/ VEGFR-2 + endothelial progenitor cell subpopulation with potent vasoregenerative capacities. Circ. Res. 2006; 98: e20-e25.

Таким образом, G-CSF эффективно способствует мобилизации ЭПК из костного мозга в кровоток у пациентов с ХСН. Одним из эффектов интрамио-кардиального введения клеток является улучшение перфузии, следовательно, васкуляризации миокарда, и стимуляции неоангиогенеза путем паракринно-го воздействия продуцируемых цитокинов и факторов роста. Введенные в миокард клетки могут, кроме ЭПК, содержать мезенхимные мультипотентные стромальные клетки, моноцитарные клетки, которые вместе с ЭПК стимулируют не только неоваскуляри-зацию миокарда, но и уменьшают воспаления, воздействуют на ремоделирование миокарда и в итоге способствуют улучшению функционального состояния сердечной мышцы. Остается добавить, что использование в качестве источника аутогенных ЭПК периферической крови пациентов с ХСН обладает явными технологическими преимуществами перед другими тканевыми источниками их получения.

11. Powell T.M., Paul J.D., Hill J.M. et al. Granulocyte colony-stimulating factor mobilizes functional endothelial progenitor cells in patients with coronary artery disease. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2005; 25: 296-301.

12. Koyanagi M., Bushoven P., Iwasaki M. et al. Notch signaling contributes to the expression of cardiac markers in human circulating progenitor cells. Circ. Res. 2007; 101: 1139-45.

13. Manginas A., Goussetis E., Koutelou M. et. al. Pilot study to evaluate the safety and feasibility of intracoronary CD133+ and CD133- CD34+ cell therapy in patients with nonviable anterior myocardial infarction. Catheter Cardiovasc. Interv. 2007; 69: 773-81.

14. Tse H., Siu C., Zhu S. et al. Paracrine effects of direct intramyocardial implantation of bone marrow derived cells to enhance neovascularization in chronic ischaemic myocardium. Eur. J. Heart Fail. 2007; 9: 747-53.

15. Martin-Rendon E., Brunskill S.J., Hyde C.J. et al. Autologous bone marrow stem cells to treat acute myocardial infarction: a systematic review. Eur. Heart J. 2008; 29: 1807-18.

16. Arshed AJ., Quyyumi E., Waller KJ. et al. CD34+ cell infusion after ST elevation myocardial infarction is associated with improved perfusion and is dose dependent. Amer. Heart J. 2011; 161: 98-105.

17. Gnecchi M., Zhang Z., Ni A. et al. Paracrine mechanisms in adult stem cell signaling and therapy. Circ. Res. 2008; 103: 1204-19.

18. Latini R., Brines M., Fiordaliso F. Do non-hemopoietic effects of erythropoietin play a beneficial role in heart failure? Heart Fail. Rev. 2008; 13: 415-23.

19. Dunlay S.M., Weston S.A., Redfield M.M. et al. Tumor necrosis factor-alpha and mortality in heart failure: a community study. Circulation 2008; 118: 625-31.

Поступила 01.06.2011