Сопоставление методов электрофореза, иммунотурбидиметрического измерения и фенотипирования альфа-1-антитрипсина для диагностики альфа-1-антитрипсиновой недостаточности

ванной фиброзной покрышкой менее склонны к разрыву, чем АСБ с высоким содержанием липидов и тонкой покрышкой. Сниженная степень сердечно-сосудистых событий у людей с высоким уровнем Zn может объясняться накоплением кальция и фиброза и, следовательно, уменьшением склонности к разрыву поражения.

Заключение. Таким образом, с увеличением ТКИМ ОСА снижается уровень Zn в сыворотке. Это ассоциируется с уменьшением уровня Zn в АСБ. Снижение концентрации Zn в волосах сопровождается снижением уровня Zn в биоптатах АСБ. Увеличению концентрации ММП-9 в сыворотке сопутствует снижение содержания Zn в АСБ. С ростом СССА повышаются уровни ММП-9 и ТИМП-1 в сыворотке.

ЛИТЕ РА Т У РА / REFERENCES

1. Romero J.R., Vasan R.S., Beiser A.S., Polak J.F., Benjamin E.J., Wolf P. A. et al. Association of carotid artery atherosclerosis with circulating biomarkers of extracellular matrix remodeling: the Framingham Offspring Study. J. Stroke.Cerebrovasc. Dis. 2008; 17 (6): 412-7.

2. Zitka O., Kukacka J., Krizkova S., Huska D., Adam V., Masarik M. et al. Matrix Metalloproteinases. Curr. Med. Chem. 2010; 17 (31): 3751-68.

3. Gaubatz J.W., Ballantyne C.M., Wasserman B.A., He M., Chambless L.E., Boerwinkle E. et al. Association of Circulating Matrix Metalloproteinases with Carotid Artery Characteristics: The ARIC Carotid

MRI Study. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2010; 30 (5): 1034-42.

4. Stadler N., Stanley N., Heeneman S., Vacata V., Daemen M.J., Bannon P.G. et al. Accumulation of Zinc in Human Atherosclerotic Lesions Correlates With Calcium Levels But Does Not Protect Against Protein Oxidation. Arterioscler.Thromb. Vasc. Biol. 2008; 28 (5): 1024-30.

5. Alvarez B., Ruiz C., Chacón P., Alvarez-Sabin J., Matas M. Serum values of metalloproteinase-2 and metalloproteinase-9 as related to unstable plaque and inflammatory cells in patients with greater than 70% carotid artery stenosis. J. Vasc. Surg. 2004; 40 (3): 469-5.

6. Cheng M., Hashmi S., Mao X., Zeng Q.T. Relationships of adiponec-tin and matrix metalloproteinase-9 to tissue inhibitor of metallopro-teinase-1 ratio with coronary plaque morphology in patients with acute coronary syndrome. Can. J. Cardiol. 2008; 24 (5): 385-90.

7. Ari E., Kaya Y., Demir H., Asicioglu E., Keskin S. The Correlation of Serum Trace Elements and Heavy Metals with Carotid Artery Atherosclerosis in Maintenance Hemodialysis Patients. Biol. Trace Elem. Res. 2011; 144 (1-3): 351-9.

8. Beattie J.H., Kwun I.S. Is zinc deficiency a risk factor for atherosclerosis? Br. J. Nutr. 2004; 91 (2): 177-81.

9. Hughes S., Samman S. The effect of zinc supplementation in humans on plasma lipids, antioxidant status and thrombogenesis. J. Am. Coll. Nutr. 2006; 25 (4): 285-91.

10. Vasto S., Mocchegiani E., Candore G., Listi F., Colonna-Romano G., Lio D. et al. Inflammation, genes and zinc in ageing and age-related diseases. Biogerontology. 2006; 7 (5-6): 315-27.

Поступила 09.04.15 Received 09.04.15

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015

УДК 616.154:577.152.344]-008.64-055.5/7-07

Первакова М.Ю.1, Эмануэль В.Л.1, Суркова Е.А.1, Мазинг А.В.1, Лапин С.В.1, Ковалева И.С.2, Сысоева С.Н.2

^поставление методов электрофореза, иммунотурбидиметрического измерения и фенотипирования альфа-1-антитрипсина для диагностики альфа-1-антитрипсиновой недостаточности

1ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Минздрава России, 197022, г. Санкт-Петербург; 2ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО», 125047, г. Москва

Качественный и количественный дефицит альфа-1-антитрипсина (А1АТ) является врожденным фактором предрасположенности к ряду состояний, включая хроническую обструктивную болезнь легких и первичную эмфизему, а также поражение печени. В данном исследовании проведена оценка анализа альфа-1-фракции (А1Ф) методом зонального электрофореза для выявления больных с альфа-1-антитрипсиновой недостаточностью (ААТН). Обследованы пациенты с пониженной (1-я группа) и нормальной (2-я группа) А1Ф на протеинограмме. Для проведения электрофореза использовалась система капиллярного электрофореза Capillaris-2 Flex Piercing (Sebia, Франция), а также система для электрофореза в агарозном геле SAS-1/SAS-2 (HelenaBiosciences, Великобритания). Для количественного определения А1АТ были использованы коммерческий набор Sentinel Diagnostics (Италия) и биохимический анализатор А15 (Biosystems, Испания). Результаты исследования показали, что снижение А1Ф на протеинограмме коррелировало с уменьшением концентрации А1АТ в сыворотке крови и с наличием его патологического фенотипа. Средние значения концентрации А1АТ в 1-й и 2-й группах составили 1148 и 1738 мг/л соответственно. Общая частота патологических фенотипов в 1-й группе составила 76,0% (19/25), что достоверно отличалось от показателей 2-й - 7,1%% (2/28). Таким образом, электрофорез протеинов сыворотки крови может быть достаточно информативен для первичного отбора больных, которым требуется обследование на наличие ААТН.

Ключевые слова: альфа-1-антитрипсин; альфа-1-антитрипсиновая недостаточность; фенотипирование; аль-фа-1-фракция; зональный электрофорез.

Для цитирования: Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 60 (10): 28-32. PervakovaM.Yu.1, Emanuel V.L.1, SurkovaE.A.1, MazingA.V.1, LapinS.V.J, KovalevaI.S.2, SysoevaS.N.2 THE COMPARISON OF TECHNIQUES OF ELECTROPHORESIS, IMMUNE TURBIDYNAMIC MEASUREMENT AND PHENOTYPING OF ALPHA-1-ANTITRYPSIN FOR DIAGNOSTIC OF ALPHA-1-ANTITRYPSIN INSUFFICIENCY

1The I.P. Pavlov first St. Petersburg state medical university, 197022 St. Petersburg, Russia2The independent laboratory INVITRO, 125047 Moscow, Russia

Для корреспонденции: Первакова Маргарита Юрьевна, margaritalerner@gmail.com For correspondence: Pervakova M.Yu., gelmargaritlerner@mail.com

The qualitative and quantitative deficiency of alpha-l-antitrypsin (A1AT) is an inherited factor of susceptibility to a number of conditions including chronic obstructive disease of lungs and primary emphysema and liver affection. The study was carried out to evaluate analysis of alpha-l-fraction (AlF) using zonal electrophoresis technique for detecting patients with alpha-l-antitrypsin insufficiency (AlATI). The patients with decreased (group I) and normal (group II) AlF on proteinogram. The electrophoresis was applied using the system of capillary electrophoresis Capillaris-2 Flex Piercing (Sebia, France) and also system for electrophoresis in agarose gel SAS-l/SAS-2 (Helena Biosciences, Great Britain). The commercial kit Sentinel diagnostics (Italy) and biochemical analyzer Al5 (Biosystems, Spain) were used for quantitative detecting of AlAT. The study results demonstrated that decreasing of AlF on proteinogram correlated with lessening of concentration of AlATI in blood .serum and with presence of its pathological phenotype. The average values of concentration of AlAT in group I and group II made up to ll48 and l738 mg/l correspondingly. The total rate of pathological phenotypes made up to 76% (l9/25) in group I that reliably differed from indicators in group II -7.l% (2/28). Thereby, electrophoresis ofproteins of blood serum can be sufficiently informative for primary selection ofpatients requiring examination for presence of AlATI.

Keywords: alpha-l-antitrypsin; alpha-l-antitrypsin insufficiency; phenotyping; alpha-l-fraction; zonal electrophoresis We are much obliged to the laboratory "The independent laboratory INVITRO" for presented samples and support of the actual study

Citation: KlinicheskayaLaboratornayaDiagnostika. 20l5; 60

Введение. Распространенное наследственное заболевание, обусловленное пониженной сывороточной концентрацией альфа-1 -антитрипсина (А1АТ) вследствие различных мутаций в гене Pi (Protease inhibitor), называют альфа-1-антитрипсиновой недостаточностью (ААТН). Клинически ААТН чаще всего проявляется в виде хронических неспецифических заболеваний легких с развитием эмфиземы, а также поражения печени и сосудов [1]. Первое упоминание об этом заболевании (дефицит А1АТ, или дефицит альфа-1-ингибитора) датируется 1963 г, когда С. Laurell и S. Eriksson обнаружили взаимосвязь между снижением альфа-1-фракции (А1Ф) на протеинограмме и клинической картиной легочной эмфиземы [2].

Альфа-1-ингибитор, или А1АТ, является основным компонентом А1Ф и представляет собой гликопротеин массой 52 кДа, который принадлежит к семейству ингибиторов сери-новых протеиназ и синтезируется преимущественно клетками печени. Наиболее значимой мишенью А1АТ является нейтро-фильная эластаза. Кроме того, А1АТ препятствует апоптозу, обладает антиоксидантным и антимикробным действием, является сигнальной молекулой, модулирующей локальный иммунный ответ [3, 4]. Структура молекулы А1АТ закодирована в гене SERPINA, или Pi (l4q31-32.3), с аллелей которого осуществляется кодоминантная экспрессия. Нормальной аллель-ной формой является PiM, а генотип А1АТ здорового человека обозначается как PiMM. Существует до 100 редких аллелей А1АТ; наиболее часто среди обусловливающих дефицитные состояния аллелей А1АТ, выявление которых имеет клиническое значение, встречаются PiZ и PiS [5, 6].

Средний возраст дебюта хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) у курящих пациентов с ААТН составляет 32-41 год [7]. Ведущей причиной смертности больных с ААТН является панацинарная эмфизема. Поражение печени характерно для носителей PiZ-аллеля и обусловлено нарушением секреции избыточно полимеризующихся молекул А1АТ внутри гепатоцитов. У носителей PiZ ААТН проявляется холестатическим синдромом в детском и молодом возрасте, у лиц старше 50 лет существует риск развития цирроза и гепатокарциномы. Более редкими клиническими проявлениями ААТН являются некротический панникулит, системный гранулематозный васкулит, поражение поджелудочной железы и целиакия [5, 8].

Существуют качественные и количественные методы лабораторной оценки А1АТ. Для количественного определения концентрации А1АТ в сыворотке крови применяются нефе-лометрические и турбидиметрические тесты. К качественным методам определения А1АТ относят генотипирование с помощью молекулярно-биологических технологий и молекулярное фенотипирование. Для анализа фенотипов А1АТ широкое распространение получил метод изоэлектрофоку-сирования (ИЭФ), который позволяет определять более 100 различных фенотипических вариантов А1АТ, не прибегая к дорогостоящему секвенированию полной последовательности гена Pi (14q31-32.3).

На основе вышеперечисленных методов неоднократно

предпринимались попытки создания оптимального алгоритма скрининга ААТН [9]. При этом данные исследований, в которых пациенты с ХОБЛ подвергались целенаправленному скринингу (т.е. учитывались такие факторы, как быстрое появление эмфиземы при отсутствии значительного воздействия факторов риска, пневмоторакс), существенно отличались от данных исследований, в которых когорта пациентов с ХОБЛ для скрининга ААТН подбиралась случайно. Таким образом, число лиц с дефицитными аллелями гена Pi при целенаправленном скрининге достигло 40% [10]. В то же время рутинный электрофорез может представлять собой сравнительно дешевый метод для скрининга ААТН. Нами была исследована применимость оценки А1Ф на протеинограмме при проведении электрофореза сывороточных белков для скрининга наличия дефектных форм А1АТ.

Материалы и методы. Из поступивших в лабораторию образцов сыворотки крови были отобраны две группы. Первую группу составили 25 образцов со снижением А1Ф < 2 г/л на протеинограмме при нормальном уровне альбумина и альфа-2-макроглобулина, что позволяло исключить другие причины снижения А1Ф.

Вторая группа состояла из 28 контрольных образцов сыворотки крови здоровых доноров с величиной А1Ф > 2 г/л и уровнями других белковых фракций, не выходящими за границы референсных значений.

Для зонального электрофореза использовали систему капиллярного электрофореза Capillaris-2 Flex Piercing (Sebia, Франция) и автоматизированную систему для агарозного электрофореза белков SAS1/SAS2 (Helena Biosciences, Великобритания).

В качестве методов сравнения проводили количественное измерение содержания А1АТ на биохимическом анализаторе А15 (Biosystems, Испания) методом иммунотурбидиметрии (Sentinel Diagnostics, Италия) и ИЭФ с иммунофиксацией с помощью оборудования для горизонтального электрофореза (Pharmacia, Швеция). После 10-минутной абсорбции образцов на поверхности агарозного геля в камере для электрофореза проводили ИЭФ при следующих параметрах: напряжение - 500 В, время - 30 мин, ток - 35 мА. Следующим этапом гель инкубировали во влажной камере с моноклональной антисывороткой к А1АТ. Завершающими этапами обработки геля являлись отмывка, блоттинг, окрашивание и высушивание в системе для обработки гелей SAS2 (Helena Biosciences, Великобритания).

Селективное окрашивание зон миграции А1АТ достигается с помощью иммунофиксации со специфической моно-клональной антисывороткой к А1АТ. В основе интерпретации результатов метода лежит сопоставление с контрольными образцами миграции различных аллельных форм А1АТ.

Примеры результатов ИЭФ и иммунофиксации А1АТ представлены на рис. 1.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью программного обеспечения GraphPad Prism 6.0. Данные проходили анализ на нормальность с помощью стандартных

?Ifi

1 2 3 4 5 6

Рис. 1. ИЭФ с иммунофиксацией. На дорожках отмечаются следующие фенотипы: 1 - PiMZ (нормальный М-аллель и мутантный 2-аллель, гетерозигота); 2 - PiMM (нормальный фенотип, гомозигота); 3 - PiMZ; 4 - PiMS (нормальный М-аллель и мутантный S-аллель, гетерозигота); 5 - PiZZ (мутантный Z-аллель, гомозигота); 6 - PiMZ.

статистических методов, в зависимости от формы распределения использовались подходящие параметрические и непараметрические методы обсчета данных. Для сравнения данных между собой использовался ROC-анализ (receiver-operator curve), который позволил проанализировать зависимость чувствительности и специфичности при различных значениях ре-ференсной границы. Данные в статье представлены как среднее значение выборки и стандартное отклонение (M ± SD).

Результаты и обсуждение. Мы сравнили уровни А1АТ в двух группах. Концентрация А1АТ в 1-й группе была достоверно ниже, чем во 2-й (1148 ± 321 и 1738 ± 291,2 мг/л соответственно; р < 0,0001) (рис. 2).

Проведен анализ частоты нормальных и патологических фенотипов А1АТ в исследуемых группах с помощью метода ИЭФ c иммунофиксацией (таблица). Общая частота патологических фенотипов в 1-й группе (со снижением А1Ф) составила 76,0% (19/25), что достоверно отличалось (%2, р < 0,0001) от показателей 2-й группы - 7,1% (2/28).

Для определения диагностической ценности измерения А1Ф и оценки концентрации А1АТ мы использовали ROC-анализ. Его результаты представлены на рис. 3.

Площадь под кривой для количественного измерения А1АТ составила 0,9375 и была практически одинакова с площадью под кривой при измерении А1Ф (0,9256). В то же время при заявленной производителем нижней границе референсных значений (900 мг/л) турбидиметрический тест А1АТ имеет чувствительность для выявления ААТН 23%. Количественная оценка по данным ROC-анализа А1Ф при нижней референсной границе 2 г/л обеспечивает чувствительность 95%.

При количественном определении А1АТ с использованием значения 1339 мг/л в качестве нижней референсной границы чувствительность метода составляет 80,95% при 100% специфичности.

Распределение нормальных и патологических фенотипов А1АТ у пациентов исследованных групп

Результаты корреляционного анализа результатов количественного анализа А1АТ и А1Ф представлены на рис. 4. Результаты обоих методов достоверно положительно коррелировали между собой (г = 0,7873;р < 0,0001).

Рутинный электрофорез белков сыворотки зарекомендовал себя как надежный и дешевый метод лабораторной диагностики различных состояний организма, в том числе и ААТН. В данной работе была проведена оценка электрофореза как метода первичного отбора пациентов с подозрением на дефицит А1АТ.

Для этого мы обследовали группу пациентов со снижением А1Ф на протеинограмме при нормальном уровне альбумина и альфа-2-макроглобулина и сравнили результаты с контрольной группой, где величина А1Ф находилась в референсном диапазоне и отсутствовали другие изменения протеинограммы. Мы обнаружили достоверную положительную корреляцию (г = 0,7873) между снижением А1Ф на протеинограмме и уменьшением концентрации А1АТ, полученной при турбиди-метрическом измерении, что делает электрофорез белков сыворотки крови приемлемым методом для скрининга ААТН.

Несмотря на то что данные, полученные при турбидиметри-ческом измерении концентрации А1АТ, коррелировали с результатами фенотипирования и протеинограммы, сам по себе этот метод не является достаточным для скрининга больных с мутант-ными формами А1АТ. Полученные значения у большинства лиц с мутациями были в пределах установленных производителем референсных значений, поэтому лабораториям, использующим количественные методы оценки А1АТ, следует самостоятельно рассчитывать референсный интервал. Кроме того, не следует забывать, что А1АТ является реактантом острой фазы и склонен повышаться в несколько раз при системном воспалении [6]. И наоборот, возможно снижение концентрации А1АТ, связанное с общей потерей белка или нарушением его синтеза при печеночной недостаточности, поэтому определение концентрации А1АТ с помощью турбидиметрии требует проведения дополнительных тестов. Несомненным преимуществом электрофореза является возможность комплексной оценки всех фракций протеинограм-мы, что позволяет учесть эти состояния. При ААТН уровень А1АТ в сыворотке крови может быть в пределах референсного диапазона. Возможны такие мутации гена Pi, которые существенно не влияют на количество самого белка, однако ведут к выраженному изменению его функциональной активности [11].

Анализ фенотипов А1АТ в 1-й и 2-й группах позволил обнаружить, что определенное снижение концентрации А1АТ, не связанное с общей потерей белка или снижением его синтеза в печени, часто сочетается с патологическим фенотипом молекулы.

3000 -,

с

1_

2

¡5= 2000 -<

к

s j

о

А1Ф<2,0 г/л А1Ф22.0 г/л

Рис. 2. Результаты количественного определения А1АТ в 1-й и 2-й группах. Достоверные различия *р < 0,05, **р < 0,01, ***р < 0,001.

Группа PiMM PiMZ PiMS PiZZ PiMF Всего патологиче-

ских фенотипов

1-я 6 14 3 1 1 19/25

2-я 26 2 0 0 0 2/28

0 А ° ° е

оо-оо

100п

80

т 401

Б

о >. Т

201

-•- Концентрация А1АТ -о-Значения А1Ф

20 40 60 Специфичность,'

80

100

Рис. 3. Анализ ROC-кривых измерения концентрации А1АТ и оценки величины А1Ф на протеинограмме.

Результаты исследования указывают на то, что феноти-пирование следует проводить всем пациентам, у которых выявлено снижение А1Ф на протеинограмме. Нами впервые был использован метод ИЭФ и иммунофиксации для оценки распределения фенотипов А1АТ в отечественной популяции. Среди обследованных пациентов удалось определить основные патологические фенотипы А1АТ, включая те из них, которые обуславливают предрасположенность к ХОБЛ при наличии дополнительных факторов внешней среды (PiMZ), и фенотипы, ассоциированные с высоким риском развития клинической картины тяжелой ААТН (PiZZ).

При оценке результатов обращает на себя внимание высокая встречаемость MZ-фенотипа в обследованной группе. У лиц с MZ-фенотипом экспрессия А1АТ с М-аллеля частично компенсирует Z-мутацию другого аллеля. Однако последние исследования по уточнению прогностической значимости PiMZ-фенотипа, опубликованные в 2014 г, показывают, что, среди больных ХОБЛ у лиц с гетерозиготным PiMZ-фенотипом интенсивность обструкции дыхательных путей и чувствительность к факторам риска (сигаретному дыму) значительно выше [12]. Не менее важной является предрасположенность

2400-, 22002000 5 180016001400

s

Sc"

<

800

<D J

I 6000

400 2000

о-** • ».. *

П'

.*. -

• Нормальный фенотип О Мутантный фенотип

1

2 3

Величина А1Ф

Рис. 4. Взаимосвязь турбидиметрического определения концентрации А1АТ и оценки величины А1Ф методом электрофореза (г = 0,7873;р < 0,0001). РЗ - референсные значения.

всех носителей Z-аллеля к патологии печени. Доказано, что у носителей PiMZ-фенотипа существует склонность к образованию включений Z-форм А1АТ в гепатоцитах с последующим фиброзированием, причем интенсивность патологических изменений нарастает с возрастом [13]. Широкомасштабное исследование лиц с PiMZ-фенотипом, злоупотребляющих алкоголем, показало, что наличие данного фенотипа значительно усугубляет течение алкогольного поражения печени, пусть и по независимому патофизиологическому механизму [14]. Эти данные указывают на клиническую значимость идентификации фенотипа А1АТ у всех пациентов с ХОБЛ. Кроме того, накопление таких фенотипов в популяции увеличивает вероятность появления гомозигот и может учитываться при генетическом консультировании [15].

Выводы. Очевидно, что многие лица с заболеваниями легких являются недообследованными на предмет носитель-ства мутантных фенотипов А1АТ. В условиях распространения курения в популяции Российской Федерации получение информации о фенотипе А1АТ может иметь не только диагностическое, но и превентивное значение.

Электрофорез белков сыворотки крови оказался достаточно информативным методом выявления больных с ААТН и может использоваться для выявления лиц с выраженным дефицитом А1АТ. Несмотря на потенциальные преимущества иммунотурбидиметрического измерения концентрации А1АТ, необходимо уточнить референсные границы данного метода для диагностики ААТН. Наконец, для подтверждения диагноза ААТН при выявлении патологических результатов количественных методов следует использовать метод ИЭФ А1АТ.

Благодарим лабораторию ООО «Независимая лаборатория ИНВИТРО» за предоставленные образцы и поддержку данного исследования.

ЛИТЕ РА Т У РА / REFERENCES

1. Буйкин С.В. Пузырев.В.П. Альфа-1-антитрипсиновая недостаточность. Перспективы скрининга. Сообщение 1. Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. 2004; 1: 92-97.

2. Fregonese L., Stolk J. Hereditary alpha-1-antitrypsin deficiency and its clinical consequences. Orphanet. J. RareDis. 2008; 3: 16.

3. Lockett A.D., Van Demark M., Gu Y., Schweitzer K.S., Sigua N., Kamocki K. et al. Effect of cigarette smoke exposure and structural modifications on the alpha-1 Antitrypsin interaction with caspases. Mol. Med. 2012; 18: 445-54.

4. Carroll T.P., O'Connor C.A., Reeves E.P., McElvaney N.G. Alpha-1 Antitrypsin Deficiency - A Genetic Risk Factor for COpD. Chronic Obstructive Pulmonary Disease - Current Concepts and Practice. 2012.

5. American Thoracic Society/European Respiratory Society statement: standards for the diagnosis and management of individuals with alpha-1 antitrypsin deficiency. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2003; 168(7): 818-900.

6. de Serres F., Blanco I. Role of alpha-1 antitrypsin in human health and disease. J. Intern. Med. 2014.

7. Brantly M.L., Paul L.D., Miller B.H., Falk R.T., Wu M., Crystal R.G. Clinical features and history of the destructive lung disease associated with alpha-1-antitrypsin deficiency of adults with pulmonary symptoms. Am. Rev. Respir. Dis. 1988. 138(2): 327-36.

8. Alpha 1-antitrypsin deficiency: memorandum from a wHO meeting. Bull. WorldHealth. Organ. 1997; 75(5): 397-415.

9. Miravitlles M., Herr C., Ferrarotti I., Jardi R., Rodriguez-Frias F., Luisetti M., Bals R. Laboratory testing of individuals with severe alpha1-antitrypsin deficiency in three European centres. Eur. Respir. J. 2010. 35(5): 960-8.

10. Beletic A., Dudvarski-Ilic A., Milenkovic B., Nagorni-Obradovic L., Ljujic M., Djordjevic V., Mirkovic D., Radojkovic D., Majkic-Singh N. Is an integrative laboratory algorithm more effective in detecting alpha-1-antitrypsin deficiency in patients with premature chronic obstructive pulmonary disease than AAT concentration based screening approach? Biochem. Med. (Zagreb). 2014; 24(2): 293-8.

11. London A., ed. Keren D.F. Protein electrophoresis in clinical diagnosis. 2003: 71-7.

12. Molloy K., Hersh C.P., Morris V.B., Carroll T.P., O'Connor C.A., Lasky-Su J.A., Greene C.M., O'Neill S.J., Silverman E.K., McElvaney N.G. Clarification of the risk of chronic obstructive pulmonary disease in alpha1-antitrypsin deficiency PiMZ heterozygotes. Am. J. Respir. Crit. Care Med 2014; 189(4): 419-27.

13. Fischer H.P., Ortiz-Pallardo M.E., Ko Y., Esch C., Zhou H. Chronic liver disease in heterozygous alphal-antitrypsin deficiency PiZ. J. Hepatol. 2000; 33(6): 883-92.

14. Goltz D., Hittetiya K., Vossing L.M., Kirfel J., Spengler U., Fischer H.P. alpha-Antitrypsin PiMZ heterozygosity has an independent aggravating effect on liver fibrosis in alcoholic liver disease. Virchows Arch 2014.

15. Gomez F.P., Rodriguez-Roisin R. Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD) guidelines for chronic obstructive pulmonary disease. Curr. Opin. Pulm. Med. 2002; 8(2): 81-6.

Поступила 27.05.15 Received 27.05.15

цитология

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015 УДК 618.11-006.04-074

Долгова Д.Р., Генинг Т.П., Абакумова Т.В., Антонеева И.И., Бутов А.А., Корчагина И.А., Тузеева А.Ю., Фомина А.В.

способ уточняющей диагностики прогрессирующих форм рака

яичников

ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет», 432017, г. Ульяновск

Рак яичников - наиболее частая причина смерти от злокачественных новообразований у женщин. При этом не существует патогномоничных симптомов, позволяющих с достаточной степенью достоверности диагностировать стадию процесса. Последнее же является определяющим не только при выборе схемы лечения, но и для соотнесения предполагаемых результатов лечения с экономическими факторами в целях оценки эффективности затрат при ведении таких больных. Целью исследования была разработка способа уточняющей диагностики прогрессирующих форм рака яичников на основе оценки окислительной модификации белков в плазме крови. У100 пациенток с первичным раком яичников (III и IV стадии по FIGO) в плазме крови по стандартизированным методикам определен 21 показатель: абсолютное количество лейкоцитов, абсолютное и относительное количество нейтрофилов, продукты окислительной модификации белков основного и кетонного характера (при длинах волн 356, 370, 430, 530 нм), Her-2/neu, CA-125, матриксные металлопротеиназы 2 и 9 в сыворотке крови и нейтрофилах, интерлейкин-6 (ИЛ-6), ИЛ-10, ИЛ-1в, интерферон-у, фактор некроза опухоли а, малоновый диальдегид, каталаза, глутатионтрансфераза, глутатионредукта-за. Для каждого параметра с помощью метода наименьших квадратов проведена аппроксимация относительных частот плотностью распределения Рэлея. Построены функции отношения правдоподобия и определены для каждого показателя интервалы на каждой стадии. Достоверность аппроксимации подтверждена при проверке гипотезы соответствия практических значений параметров теоретическому закону плотности распределения критерием Пирсона. Полученные результаты позволяют утверждать, что уровень окислительной модификации белков может служить достоверным показателем для дифференциальной диагностики III и IV стадий рака яичников.

Ключевые слова: рак яичников; диагностика; окислительная модификация белков.

Для цитирования: Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 60 (10): 32-36. DolgovaD.R., Gening T.P., Abakumova T.V., AntoneevaI.I., ButovA.A., KorchaginaI.A., TuzeevaA.Yu., FominaA.V. THE MODE OF CLARIFYING DIAGNOSTIC OF PROGRESSING FORMS OF OVARIAN CARCINOMA

The Ulyanovsk state university, 432017 Ulyanovsk, Russia

The ovarian carcinoma is the most frequent cause of death because of malignant neoplasms in women. At that, there is no pathognomonic symptoms permitting diagnosing stage of process with sufficient degree of confidence. This is a determinative not only for choosing treatment regimen but also for correlation of expected results of treatments with economic factors with purpose to evaluate cost effectiveness under monitoring of these patients. The study was carried out to develop mode of clarifying diagnostic of progressing forms of ovarian carcinoma on the basis of evaluation of oxidative modification of proteins in blood plasma. In 100 female patients with primary ovarian carcinoma (stage III andIV according FIGO) in blood plasma 21 indicators were determined in blood plasma using standardized techniques: absolute number of leukocytes, absolute and relative number of neutrophils, products of oxidative modification ofproteins of basic and ketonic character (under wavelength of356, 370, 430, 530 nm), Her-2/neu, CA-125, matrix metalloproteinase 2 and 9in blood serum and neutrophils, interleukin-6, interleukin-10, interleukin-1p, interferon-y, tumor necrosis factor-a, malonic dialdehyde, catalase, glutathione transferase, glutathione reductase. The least squares method was applied to every parameter to approximate relative rates by density of Rayleigh distribution. For

Для корреспонденции: Генинг Татьяна Петровна, Naum-53@yandex.ru For correspondence: Gening T.P., Naum-53@yandex.ru