Применение L-лизина тиазотата как активной основы лекарственных средств гепатопротекторного и детоксикационного действия
APPLICATION OF L-LYSINE TIAZOTOTATE AS AN ACTIVE BASIS FOR MEDICINES OF HEPATOPROTECTIVE AND DETOXICATIVE ACTION

Изобретение относится к фармации и медицине и касается лекарственных средств, которые используются для лечения токсических поражений и заболеваний печени различной этиологии.
Одной из актуальных проблем медицины является лечение и профилактика заболеваний печени, а также коррекция ее патологических состояний, вызванных гормональными и метаболическими нарушениями, воздействием вирусов, токсических веществ (алкоголь, лекарственные противотуберкулезные, противогрибковые препараты, нестероидные противовоспалительные средства и др.).
При выборе препаратов для назначения адекватной терапии заболеваний печени учитывают этиологию заболевания. Так, этиотропную терапию проводят для устранения патологического агента при таких заболеваниях, как, например, вирусные гепатиты. При патогенетической терапии осуществляется фармакологическая коррекция многофакторных звеньев патогенеза.
Арсенал лекарственных средств, применяемых в комплексной терапии заболеваний печени, достаточно широк. Однако сравнительно небольшая группа препаратов оказывает избирательное действие на печень, обладая при этом высокой эффективностью. И не всегда современный арсенал средств для гепатопротекторной терапии удовлетворяет всем требованиям клиницистов. Так, некоторые средства имеют побочные эффекты, что ограничивает их использование, также они не всегда обеспечивают достаточно высокую эффективность. Это делает поиск новых, более эффективных гепатопротекторных средств актуальной задачей современной фармацевтической химии и фармакологии.
В ассортимент лекарственных средств, применяемых для фармакотерапии токсических поражений печени, входят препараты растительного происхождения, фосфолипиды, витаминные препараты, комбинированные медикаменты, а также средства, содержащие в своем составе активные вещества синтетического происхождения.
Известным средством, которое широко используется в лечении заболеваний печени, является Эссенциале (https://www.piluli.kharkov.ua/drugs/drug/1083/).
Эссенциале является лекарственным средством растительного происхождения, и практически не имеет противопоказаний к применению, однако, тем не менее, может вызывать побочные эффекты, а именно, ощущение тошноты, вздутия или дискомфорта в животе; возникновение диареи; аллергию (кожная сыпь или покраснение, крапивная лихорадка, зуд, экзантема и прочее). Кроме этого, нельзя вводить препарат внутримышечно - это приведет к воспалению и раздражению кожных покровов в месте введения укола.
Также как гепатопротектор синтетического происхождения широко применяется препарат Тиотриазолин (морфолиния 3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетат). Тиотриазолин является наиболее близким веществом по структуре и активности к L-лизина тиазотату.
Тиотриазолин обладает выраженным мембраностабилизирующим действием. Тиотриазолин стабилизирует состав и текучесть мембран гепатоцитов, что способствует уменьшению проявлений цитолитического синдрома (выхода аминотрансфераз и других компонентов из гепатоцитов в кровь). Назначение Тиотриазолина больным с гепатитами В и С способствует улучшению клинической картины данных заболеваний (Визитная карточка украинской фармакологии: тиотриазолин (физиологические и клинические аспекты применения) // Газета «Новости медицины и фармации» 15(252) 2008. http://www.mif-ua.com/archive/article/5861).
Однако Тиотриазолин не оказывает достаточного защитного действия на митохондрии гепатоцитов, что важно, например, при лекарственном остром токсическом гепатите. Кроме этого, тиотриазолин при токсическом поражении печени может активировать анаэробный гликолиз, что усиливает лактат-ацидоз (Метаболитотропные препараты / Мазур И.А., Чекман И.С., Беленичев И.Ф., Горчакова Н.А., Волошин Н.А., Кучеренко Л.И. - АМЛ / Ассоциация Медицинская Литература ЗАО: Москва, 2007. - 304 с.; Матвеев А.В. Гепатопротекторы. - Симферополь: ИТ «Ариал», 2013. - 384 с.).
Известно биологически активное соединение лизиний 3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетат (L-лизина тиазотат), проявляющий нейропротективное, ноотропное, кардиопротективное, эндотелиотропное, противоишемическое, антиоксидантное, противовоспалительное и противогипоксическое действие, обладающий низкой токсичностью (патент Российской Федерации №2370492, МПК C07D 249/12 (2006.01), A61K 31/41 (2006.01) Опубл. 20.10.2009, бюл. №29).
В доступной нам литературе не найдено сведений, которые бы подтверждали свойства указанного вещества проявлять гепатопротективное и детоксикационное действие, а также не найдено упоминаний об использовании L-лизина тиазотата в какой-либо схеме лечения токсических поражений и заболеваний печени.
В основу изобретения поставлена задача получения средства, которое проявляет гепатопротекторные и детоксикационные свойства, имеет более высокую эффективность по сравнению с уже известными препаратами аналогичного действия и является малотоксичным.
Поставленная задача решается тем, что в качестве активной основы лекарственных средств гепатопротекторного и детоксикационного действия используют L-лизина тиазотат (запатентованное название - Ангиолин).
Согласно данным, которые мы получили при проведении наших исследований, Ангиолин проявляет более высокую гепатопротективную и детоксицируюшую активность по сравнению с референс-препаратом Эссенциале и по сравнению с тиотриазолином - наиболее близким к Ангиолину соединением по структуре и действию.
Также в результате наших исследований выявлено, что острая токсичность Ангиолина в 2 раза ниже, чем у Тиотриазолина (токсичность Ангиолина при парентеральном введении составляет 9000 мг/кг, а токсичность Тиотриазолина при парентеральном введении составляет 3750 мг/кг).
Суть изобретения поясняется следующими примерами результатов исследований.
Пример 1. Гепатопротективная и детоксикационная активность Ангиолина при парентеральном введении на модели острого лекарственного гепатита
Опыты выполнены на 50 белых беспородных крысах обоего пола, массой 160-170 г, полученных из питомника Института фармакологии и токсикологии АМН Украины. Острый лекарственный гепатит моделировали (Венгеровский А.И. Гепатопротективное и антиоксидантное действие экстракта солянки холмовой при парацетамоловом гепатите у крыс // Хим-фарм. журн. - 2010. - Т. 44, №3. - С. 29-31) введением внутрижелудочно парацетамола в дозе 2500 мг/кг на протяжении 2 дней (1 раз в день) После введения парацетамола внутрибрюшинно вводили Ангиолин на протяжении 10 суток (2,5% р-р) в дозе 50 мг/кг и референс-препараты Тиотриазолин (2,5% р-р, «Артериум», Украина), 50 мг/кг и Эссенциале (250 мг/5 мл, A. Nattermann & Cie. GmbH, Германия), 1 мл/кг. Ежедневно регистрировали летальность. На 12 сутки эксперимента через 1 час после инъекции препаратов животных тестировали по длительности тиопенталового сна, для определения детоксицирующей функции печени. Для этого животным всех групп вводили внутрибрюшинно тиопентал-натрия (40 мг/кг). По окончании теста животных (при признаках пробуждения) выводили из эксперимента путем декапитации. В сыворотке крови определяли активность аспартатаминотрасферразы (АсТ) и аланинаминотрасферазы (АлТ) в качестве биохимических маркеров повреждения гепатоцитов для оценки мембраностабилизирующей и гепатопротективной активности препаратов. В цитоплазматической фракции гомогената печени определяли содержание маркера оксидативного стресса - нитротирозина для оценки антиоксидантной активности препаратов. В митохондриальной фракции печени определяли активность малатдегидрогеназы (МДГ), в целом гомогенате - АТФ в качестве показателей энергетического обмена для оценки гепатопротективной и энерготропной активности препаратов. Моделирование острого лекарственного гепатита приводило к гибели 20% животных (табл. 1). У выживших животных наблюдалось угнетение детоксицирующей функции печени (увеличение длительности тиопеталового сна на 72,2%) (табл. 1). В сыворотке крови наблюдалось повышение активности АсТ на 161,2% и АлТ на 230%, что свидетельствовало о повреждении гепатоцитов (табл. 2). В печени крыс с лекарственным гепатитом регистрировали увеличение на 120% нитротирозина, что свидетельствовало об активации оксидативного стресса.
Примечание: * - p<0,05 по отношению к контрольной группе
+
- p<0,05 по отношению к группе Эссенциале
- p<0,05 по отношению к группе Тиотриазолина
Примечание: * - p<0,05 по отношению к контрольной группе
+
- p<0,05 по отношению к группе Эссенциале
* - p<0,05 по отношению к группе Тиотриазолина
В митохондриях печени крыс с лекарственным гепатитом регистрировали угнетение активности МДГ на 60% на фоне снижения в гомогенате печени концентрации АТФ на 51.8%, что свидетельствовало о повреждении митохондрий гепатоцитов и торможении их энергопродуцируюшей функции.
Как видно из данных, представленных в таблицах 1 и 2, курсовое парентеральное введение раствора Ангиолина (50 мг/кг) крысам с острым лекарственным гепатитом оказывало достоверное детоксикационное, гепатопротективное, мембраностабилизирующее, антиоксидантное и энерготропное действие. Так, в группе животных, получавших Ангиолин, наблюдалась 100% выживаемость (в группе Эссенциале - 90% выживаемость). Введение Ангиолина повышало детоксикационную функцию печени (уменьшение длительности тиопенталового сна на 44%). По этому показателю Ангиолин достоверно превосходит Тиотриазолин (34,7%) и Эссенциале (20,4%). Введение Ангиолина оказывало защитное действие в отношении мембран гепатоцитов - снижение активности АсТ на 53,6% и АлТ на 70%. По влиянию на эти показатели Ангиолин достоверно превосходит Эссенциале. Введение Ангиолина крысам с острым лекарственным гепатитом приводит к достоверному снижению нитротирозина на 46,7%, что свидетельствует об антиоксидантной активности препарата. По силе антиоксидантного действия Ангиолин достоверно превосходит как Тиотриазолин, так и Эссенциале. Введение Ангиолина приводило к повышению уровня АТФ в печени крыс с лекарственным гепатитом на 69,2% и повышению активности МДГ в митохондриях на 209,5%, что свидетельствует об энерготропном действии препарата. По силе энерготропного действия Ангиолин достоверно превосходит как Тиотриазолин, так и Эссенциале.
Пример 2. Гепатопротективная активность Ангиолина при внутрижелудочном введении на модели острого токсического гепатита
4
4
Опыты выполнены на 50 белых беспородных крысах обоего пола, массой 160-170 г, полученных из питомника Института фармакологии и токсикологии АМН Украины. Острый токсический гепатит моделировали введением внутрижелудочно с помощью металлического зонда 50% раствора четыреххлористого углерода (CCl) на оливковом масле 5 мл/кг в течение 4 суток (Стефанов А.В. Доклинические исследования лекарственных средств. - Киев: Авиценна, 2002. - 568 с.; Миронов А.Н., Бунатян Н.Д. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. - Москва: ФГБУ НЦЭСМП, 2012. - 944 с). После введения CCl на протяжении 10 суток внутрижелудочно с помощью металлического зонда вводили Ангиолин в дозе 100 мг/кг и референс-препараты Тиотриазолин (таблетки, «Артериум», Украина), 100 мг/кг и Эссенциале (капсулы по 300 мг, A. Nattermann & Cie. GmbH, Германия), 200 мг/кг. Ежедневно регистрировали летальность. На 14 сутки эксперимента через 1 час после инъекции препаратов животных тестировали по длительности тиопенталового сна, для определения детоксицирующей функции печени. Для этого животным всех групп вводили внутрибрюшинно тиопент-натрия (40 мг/кг). По окончании теста животных (при признаках пробуждения) выводили из эксперимента путем декапитации. В сыворотке крови определяли активность аспартатаминотрасферразы (АсТ) и аланинаминотрасферазы (АлТ) в качестве биохимических маркеров повреждения гепатоцитов для оценки мембраностабилизирующей и гепатопротективной активности препаратов. В цитоплазматической фракции гомогената печени определяли содержание маркера оксидативного стресса - нитротирозина для оценки антиоксидантной активности препаратов. В митохондриальной фракции печени определяли активность малатдегидрогеназы (МДГ), в целом гомогенате - АТФ в качестве показателей энергетического обмена для оценки гепатопротективной и энерготропной активности препаратов. Моделирование острого токсического гепатита приводило к гибели 30% животных (табл. 3). У выживших животных наблюдалось угнетение детоксикационной функции печени (увеличение длительности тиопеталового сна на 102,6%) (табл. 3). В сыворотке крови наблюдалось повышение активности АсТ на 210,3% и АлТ на 248,8%, что свидетельствовало о повреждении гепатоцитов (табл. 4). В печени крыс с токсическим гепатитом регистрировали увеличение на 170,7% нитротирозина, что свидетельствовало об активации оксидативного стресса.
Примечание: * - p<0,05 по отношению к контрольной группе
+
- p<0,05 по отношению к группе Эссенциале
Примечание: * - p<0,05 по отношению к контрольной группе
+
- p<0,05 по отношению к группе Эссенциале
# - p<0,05 по отношению к группе Тиотриазолина
В митохондриях печени крыс с токсическим гепатитом регистрировали угнетение активности МДГ на 62,2% на фоне снижения в гомогенате печени концентрации АТФ на 62,9%, что свидетельствовало о повреждении митохондрий гепатоцитов и торможении их энергопродуцируюшей функции.
Как видно из данных, представленных в таблицах 3 и 4, курсовое внутрижелудочное введение Ангиолина (100 мг/кг) крысам с острым токсическим гепатитом оказывало достоверное детоксикационное, гепатопротективное, мембраностабилизирующее, антиоксидантное и энерготропное действие. Так, в группе животных, получавших Ангиолин, наблюдалась 100% выживаемость (в группе Эссенциале - 70% выживаемость). Введение Ангиолина повышало детоксикационную функцию печени (уменьшение длительности тиопенталового сна на 50%). По этому показателю Ангиолин достоверно превосходит Эссенциале (14,7%). Введение Ангиолина оказывало защитное действие в отношении мембран гепатоцитов - снижение активности АсТ на 45,9% и АлТ на 64,8%. По влиянию на эти показатели Ангиолин достоверно превосходит Эссенциале. Введение Ангиолина крысам с острым токсическим гепатитом приводит к достоверному снижению нитротирозина на 47,5%, что свидетельствует об антиоксидантой активности препарата. По силе антиоксидантного действия Ангиолин достоверно превосходит как Тиотриазолин, так и Эссенциале. Введение Ангиолина приводило к повышению уровня АТФ в печени крыс с токсическим гепатитом на 66,7% и повышению активности МДГ в митохондриях на 190%, что свидетельствует об энерготропном действии препарата. По силе энерготропного действия Ангиолин достоверно превосходит как Тиотриазолин, так и Эссенциале.
Таким образом, у известного средства - L-лизина тиазотата (Ангиолин)-нами выявлено новое свойство - проявлять гепатопротективное и детоксикационные свойства. По активности Ангиолин достоверно превышает препараты сравнения - Эссенциале и Тиотриазолин. По токсичности Ангиолин относится к V классу токсичности (практически нетоксичные вещества). Использование предлагаемого изобретения позволяет создать высокоэффективные малотоксичные лекарственные средства, содержащие в качестве активного действующего вещества L-лизина тиазотат (Ангиолин), для лечения токсических поражений печени и коррекции патологических состояний гепато-биллиарной системы.