Активность антибиотиков к культурам микроорганизмов, выделенных из погибших эмбрионов

Key words: wild, exotic and ornamental animals, nosological profile, noncontagious etiology, retrospective analysis, incidence rate.

References

1. Alshineckiy, M.V. Some diseases of felidaegastrointestinal tract / M.V. Alshmeckiy // Actual veterinary problems in zoos: materials. Int. a workshop. - Moscow, November 19-23, 2012 - P. 9-16.

2. Bokova, E.V. Hepatopathy of birds and its associated v syndromes / E.V. Bokova // Actual veterinary problems in zoos: materials. Int. a workshop. - Moscow, November 19-23, 2012 - P. 21-24.

3. Gerasimova, M.V. Statistical analysis of spread of digestive diseases in cattle with noncontagious etiology in the Amur region / M.V. Gerasimova, E.V. Kuryatova // Far Eastern Agricultural Bulletin -2017. -Vol. 1 (41). - P 35-39.

4. Ezhkov, V.O. Clinic and morphological features of metabolic disorders in farm and exotic birds and its correction by feed supplements in hens: abstract dis. ... Dr. Vet. Sciences: 06.02.01 / Vladimir Olegovich Ezhkov. - Moscow, 2008 - 33s.

5. Makarov, V.V. Development and implementation of modern methods and remedies of detection, therapy and prevention of infectious, invasive and noncontagious diseases of animals / V.V.Makarov // Veterinary pathology. - 2007. -Vol. 1 (20). - P. 187-199.

6. Ozdemirov, A.A. Gastrointestinal diseases of young cattle in the Caspian region of Russia / A.A. Ozdemirov, M.S. Anaev, S.A. Aygubova, D.M. Ramazanova // Veterinary pathology. - 2013. - Vol.2(44). -P. 19-21.

7. Osipova, N.I. Epizootic situation on zooanthroponosis diseases of the Russian Federation / N.I. Osipova// Veterinary Medicine Abstract journal. - 2004. -№ 3 - P. 1007.

8. Animals welfare strategy - M.: World Association of Zoos and Aquariums WAZA - 2005 - 88p.

9. Shanshin, N.V. Preventive and therapy measures of gastrointestinal and respiratory diseases in calve / N.V. Shanshin, TP. Evseeva, A.S. Kashin // Bulletin of Altai GAU. - 2003. -Ji»l.-P. 225-227.

10. Smith, K.N. Conservation partnerships between zoos and aquariums, federal and state agencies, and nongovernmental organizations / K.N. Smithet al. // Zoo Biology. -2007. -Vol. 26. - P. 471-486.

11. Swaisgood, R.R. Current status and future directions of applied behavioral research for animal welfare and conservation / R.R. Swaisgood // Applied Animal Behaviour Science - 2007. -Vol. 102 - P. 139-162.

12. Walker, M. Animal welfare science: recent publication trends and future research priorities / M.Walker, M.Diez-Leon, G.Mason // International Journal of Comparative Psychology. - 2014. -Vol.27. -P. 80-100.

УДК 619:615.281:579.62:636.5 DOI 10.33632/1998-698X.2019-5-53-59

АКТИВНОСТЬ АНТИБИОТИКОВ К КУЛЬТУРАМ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ПОГИБШИХ ЭМБРИОНОВ

Сунцова O.A. - кандидат ветеринарных наук, Задорожная М.В. - кандидат ветеринарных наук, Лыско С.Б. - кандидат ветеринарных наук, Портянко A.B.

Сибирский научно-исследовательский институт птицеводства - филиал ФГБНУ «Омский аграрный научный центр» (644555, Омская область, с. Морозовка, ул. 60 лет Победы, e-mail: sibniip@mail.ru).

Бактериальные инфекции занимают ведущее место среди причин гибели птицы в промышленном птицеводстве. При этом преобладают смешанные инфекции, которые сложно диагностировать и лечить. Традиционно терапию таких болезней проводят с применением антибиотиков. Однако бесконтрольное их применение с нарушением сроков использования и режима дозирования, без учета чувствительности к ним всех этиологически значимых сочленов микробных ассоциаций приводит квее нарастающего проблеме антибиотикорезистентности у

бактериальных штаммов. Для предупреждения ее развития лечение бактериозов необходимо проводить с учетом чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Сотрудниками отдела ветеринарии Сибирского научно-исследовательского института птицеводства в опытах /тИгобыла изучена активность антибиотиков к 26 полевым штаммам бактерий, выделенным из погибших эмбрионов на птицефабриках Омской области и принадлежащих к 7 видам. Были испытаны 13 антибиотиков, относящихся по химическому составу к 5 группам и 15 комплексных препаратов. Проведенные исследования показали, что разные со-члены бактериальных ассоциаций обладают неодинаковой чувствительностью к одним и тем же антибактериальным препаратам. Наибольшей активностью обладают антибиотики из группы фторхинолонов и включающие их комплексные препараты (энрофлоксацин в сочетании с колистином и триметопримом), антибактериальные средства на основе доксициклина с линкомицином, а также с тремя и более действующими веществами. Низкую бактерицидную активность проявляют антибиотики из группы макролидов, флорфеникол и комплексы сульфаниламидов с триметопримом и амоксицшлин с гентамицином. Антибиотикорезистентность регистрировали у большинства тест-культур к одной, а у цитробактеров к двум фармакологическим группам. Наличие у микроорганизмов, выделенных из погибших эмбрионов, устойчивости к антибактериальным препаратам свидетельствует о вероятных погрешностях антибиотикотерапии родительского стада. В связи с этим определение чувствительности полевых штаммов бактерий к антибиотикам должно быть регулярным и плановым и учитываться при проведении лечебно-профилактических мероприятий в инкубатории на выводе и при дальнейшем выращивании птицы.

Ключевые слова: эмбрионы, бактериальные инфекции, условно-патогенная микрофлора, антибиотики, антибиотикорезистентность.

На протяжении многих десятилетий инфекционные болезни являются одними из основных факторов, препятствующих интенсивному развитию птицеводства. При этом ведущее место занимают бактериальные инфекции. Удельный вес павшей птицы из-за болезней бактериальной этиологии (колибактериоз, сальмонеллез, респираторный микоплазмоз и др.) составляет 83-97% от всех инфекционных болезней [4, 13]. В ранее благополучные хозяйства возбудители попадают с инфицированным инкубационным яйцом, суточным молодняком, завозимыми из неблагополучных хозяйств, в том числе и из-за рубежа [10].

В этиологии бактериальных инфекций существенную роль играют смешанные инфекции, при которых условно-патогенные микроорганизмы, действуя на организм птицы, усиливают вирулентные свойства друг друга [2, 8]. Такие инфекции сложно диагностировать и лечить. Экономический ущерб от них значителен и складывается из гибели эмбрионов и цыплят, снижения мясной и яичной продуктивности, конверсии корма, качества производимой продукции, увеличения выбраковки птицы, затрат на проведение лечебных и ветеринарно-санитарных мероприятий.

Основным способом борьбы с бактериальными болезнями птиц были и

остаются антибиотики, преимущественно широкого спектра действия [3, 6]. Российский рынок ветеринарных препаратов предлагает антимикробные препараты более 100 различных составов, относящиеся более чем к 15 разным группам [1]. По данным ВОЗ, объем антибиотиков, применяемых в ветеринарии для продуктивных животных и птиц, более чем в 2 раза превышает объем средств, применяемых в медицине [11]. И, несмотря на достижения современной ветеринарной науки в области альтернативных решений в лечении бактериозов, ужесточение требований к качеству продукции птицеводства на наличие в ней метаболитов антибиотиков, они остаются «препаратом выбора» при вспышках бактериальных инфекций. Часто это бывает оправданно: при грамотной антибиотикотерапии гибель птицы удается остановить в короткие сроки. Отечественный и зарубежный опыт применения химиопрепаратов в птицеводстве свидетельствует о том, что их применение позволяет улучшить экономии-ческие показатели при выращивании птицы [9]. Однако, не редки случаи, когда выбирая препарат из «того, что есть», мы не получаем ожидаемого результата, гибель птицы продолжается, убытки растут. Причиной тому антибиотикорезистентность микроорганизмов. Ее возникновению способствует применение

антибиотиков с профилактической целью, занижение и завышение терапевтической дозы, увеличение интервалов между введением препаратов, сокращение длительности курса лечения [7, 12]. В основе предупреждения распространения антибиотикорезистентных микроорганизмов лежит мониторинг чувствительности полевых штаммов бактерий к антимикробным препаратам.

Целью наших исследований было изучить активность антибиотиков к культурам микроорганизмов, выделенных из погибших эмбрионов на птицефабриках Омской области.

Материал и методы. Исследования проведены в отделе ветеринарии сельскохозяйственной птицы СибНИИП-филиал ФГЪНУ «Омский АНЦ». В опытах invito была изучена активность 13 антибиотиков, относящихся по химическому составу к 5 группам и 15 комплексных препаратов, применяемых на обследованных птицефабриках. В качестве тест-штаммов использовали 26 бактериальных культур 7 видов, выделенных из погибших эмбрионов шести птицеводческих хозяйств Омской области, в том числе S. aureus, Е. coli, Е. faecalis, Е. agglomerans, Р. aeruginosa, С. freundii, С. diversus. Указанные патогены были выделены в различных ассоциациях. Определение чувствительности выделенных микроорганизмов проводили методом серийных разведений [5]. Для приготовления суспензий тест-штаммов использовали чистые суточные агаровые культуры. Однотипные изолированные колонии переносили петлей в пробирки с жидкой питательной средой. Плотность суспензии доводили до 0,5 по

стандарту Мак-Фарланда, что соответствовало концентрации 1,5хЮ8КОЕ/мл.

Для инокуляции применяли суспензию микробных клеток, эквивалентную 0,5 по стандарту Мак-Фарланда, разведенную в 100 раз питательным бульоном до 10б КОЕ/мл. Результаты учитывали визуально в проходящем свете по определению наличия роста культур тест-штаммов в опытных и контрольных пробирках. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) антибактериального препарата устанавливали по наименьшей концентрации, которая подавляла видимый рост микроорганизмов.

Чувствительными считали культуры, для которых МПК < 12,5 мкг/мл, слабо чувствительными — МПК 12,5-50,0 мкг/мл, нечувствительными — МПК > 50,0 мкг/мл.

Результаты исследований. Проведенными исследованиями установлено, что наибольшей активностью к преимущественному большинству культур (70-100%) обладали антибиотики группы фторхинолонов и комплексные препараты на их основе (сочетания энрофлоксацина с колистина сульфатом и энрофлоксацина с триметопримом) (табл. 1).

Также на все исследованные патогены бактерицидно действовал комплекс докси-циклина и линкомицина, а также препараты с тремя и четырьмя действующими веществами.

Все тест-культуры были резистентны к препаратуТрисульфон и слабо чувствительны (40,0-50,0%) к другим препаратам на основе сульфаниламидов с триметопримом (Суль-теприм, Триметосульфат орале).

Таблица 1 - Активность антибактериальных препаратов к микроорганизмам, выделенным из погибших эмбрионов_

Фармакологическая группа Название препарата Производитель Действующее вещество Активность, %

Фторхинолоны Энроксил Словения энрофлоксацин 80,0

Энрофлокс Испания энрофлоксацин 100,0

Энрофлоксацин Польша энрофлоксацин 100,0

Макролиды* Спектра Тил Иордания тилмикозина фосфат 56,7

Тилмипул Россия тилмикозина фосфат 50,0

Фармазин Болгария тилозинатартрат 20,0

Пенициллины Ветримоксин Франция амоксициллина тригидрат 90,0

Амоксид Италия амоксициллина тригидрат 43,3

Полимиксины Полимиксин 5М Испания колистина сульфат 60,0

Колистим 6М Россия колистина сульфат 26,7

Спектра Кол Иордания колистина сульфат 33,3

Колистина сульфат Беларусь колистина сульфат 20,0

Хлорамфеникол Спектра флор-10 Иордания флорфеникол 43,3

Комплексные Колифлокс-фарм Китай энрофлоксацин колистина сульфат 76,7

Витроцил Нидерланды энрофлоксацин колистина сульфат 70,0

Энрофлон К Россия энрофлоксацин колистина сульфат 100,0

Энростин Россия энрофлоксацин колистина сульфат 100,0

Колихинол Россия энрофлоксацин колистина сульфат 100,0

Энроприм Россия энрофлоксацин триметоприм 100,0

Трифлон Украина энрофлоксацин триметоприм 80,0

Сультеприм Россия сульфадимезин триметоприм 40,0

Триметосульфаорале Италия сульфадиазин триметоприм 50,0

Трисульфон Словения сульфамонометоксин триметоприм 0,0

Долинк Россия доксициклина гидрохлорида линкомицина гидрохлорида 100,0

Юнимокс Гентамицин Малайзия амоксициллина тригидрат гентамицина сульфат 26,7

Бромколин-0 Россия линкомицина гидрохлорид колистина сульфат 60,0

Бровафом Украина колистина сульфат окситетрациклина гидрохлорид триметоприм 100,0

Ализерил Голландия эритромицина тиоцианатокситетрациклин а гидрохлорид стрептомицина сульфат колистина сульфат 100,0

Примечание: * активность данных препаратов определялась только к грамположительной микрофлоре в соответствии с инструкциями к ним.

Низкой бактерицидной активностью 56,7%), полимиксинов (20,0-60,0%),

обладали антибиотики групп макролидов (20,0- хлорамфеникола (43,3%), а также препараты

Амоксид (группа пенициллина) (43,3%) и Юнимокс Гентамицин (комплексный на основе амоксициллина тригидрата с гентамицина сульфатом) (26,7%). Рост от 74,1 до 90,0% культур подавляли Энроксил из группы фторхинолонов, Ветримоксин из группы пенициллинов, а также комплексные Колифлокс-фарм и Витроцил (фторхинолон с полимиксином), Трифлон из комплексных препаратов. На все виды патогенов (100,0%) действовали 9 препаратов: из группы фторхинолонов - Энрофлокс, Энрофлоксацин и комплексные - Энрофлон К, Энростин, Колихинол, Энроприм, Долинк, Ализерил, Бровафом. Разная бактерицидная активность препаратов с одинаковыми действующими

веществами, вероятно, зависит от производителя. Среди испытанных

антибиотиков 32% составляют препараты отечественного производства. При этом 55% из их числа обладают активностью ко всем испытанным культурам, а остальные подавляли рост 26,7-60,0% патогенов. На долю же импортных препаратов приходится 68%, из которых на все тест-культуры действует 21% препаратов, что свидетельствует об эффективности отечественных антибиотиков.

Анализируя чувствительность бактерий по видам, следует отметить, что большинство испытанных штаммов обладало абсолютной резистентностью к одной или двум группам антибиотиков (табл. 2).

Таблица 2 - Видовая чувствительность бактерий к антибиотикам разных фармакологических

групп

Фармакологическая группа Р. aeruginosa Е. coli С. freundii С. diversus Е. agglomerans S. aureus Е. faecalis

Фторхинолоны 100 100 100 100 - 100 83,3

Макролиды - - - - - 66,7 30

Пенициллины 0 33,3 0 0 100 100 100

Полимиксины 75 100 75 16,7 - 0 0

Хлорамфеникол - 50 0 0 0 100 66,7

Комплексные 83,3 63,3 77 50 100 97 71,4

Примечание: «-» исследования не проводились

При этом полирезистентными были культуры С. freundii и С. diversus, которые сохраняли жизнеспособность при взаимодействии с препаратами групп пенициллинов и хлорамфеникола. Кроме того, С. diversus был слабо чувствителен к полимиксинам и комплексным препаратам. Грампозитивная микрофлора была резистентной к полимиксинам и слабочувствительной к макролидам, тогда как грамнегативные резистентны к пенициллинам (за исключением Е. agglomerans) и хлорамфениколу.

Таким образом, из 28 исследованных антибиотиков только 9 препаратов полностью подавляли весь спектр исследованных микроорганизмов, из них 78% - комплексные; 10 действовали на 90-50% культур, а оставшиеся 9 были активны менее чем на 50% патогенов.

Заключение. Антибиотики обладают различной активностью к разным сочленам бактериальных ассоциаций. Наибольшей

активностью к культурам, выделенным из погибших эмбрионов на птицефабриках Омской области, обладали препараты из группы фторхинолонов (Энрофлокс, Энрофлоксацин) и комплексные препараты, содержащие в качестве действующего вещества энрофлоксацин с колистина сульфатом (Энрофлон К, Энростин, Колихинол), энрофлоксацин с триметопримом (Энроприм), доксициклина гидрохлорид с линкомицина гидрохлоридом (Долинк), а также поликомпонентные антибиотики (Бровафом, Ализерил). Наличие значительного количества резистентных и полирезистентных культур свидетельствует о передаче их от родителей потомству и вероятных погрешностях антибиотикотерапии родительского стада. Для предупреждения распространения анти-биотикорезистентности и повышения эффективности терапии бактериозов определение чувствительности полевых штаммов бактерий к антибиотикам необходимо проводить

регулярно и учитывать при проведении выводе и при дальнейшем выращивании

лечебно-профилактических мероприятий на птицы.

Литература

1. Анганова, Е.В. Проблема антибиотикорезистентности возбудителей инфекционных болезней животных и птиц / Е.В. Ангановаи др. // Вестник АПК Ставрополья. - 2017. - № 2(26). - С. 55-58.

2. Гофман, А.А. Бактериальные ассоциации при респираторных инфекциях птиц /А.А. Гофман и др. // XVI Сатпаевские чтения: материалы Междунар. науч.конф. молодых ученых, магистрантов, студентов и школьников. -Павлодар, 2016. - С. 228-232.

3. Джавадов, Э.Д. Антибиотики в птицеводстве: альтернативные методы профилактики заболеваний и лечения птицы /Э.Д. Джавацов и др. //Птицеводство. - 2017. - № 11. - С. 41-46.

4. Капитонова, Е.А. Современное состояние и проблемы применения антибиотиков в сельском хозяйстве / Е.А. Капитонова и др. //Ученые записки УО ВГАВМ. - 2011. - Том. 47, Вып. 2. - С. 284-288.

5. Лыско, С.Б. Резистентность к энрофлоксацину и возможность её преодоления / С.Б. Лыско, Л.М. Кашковская, М.И. Сафарова// Птицеводство. - 2016. - № 10. - С. 37-41.

Лыско, С.Б. Эффективность применения антибактериальных препаратов на птицеводческих предприятиях / С.Б. Лыско и др. // Инновационные пути развития животноводства XXI века:материалы науч.-практ. (заочной) конф. с Междунаручаст. -Омск, 2015. - С. 115-120.

6. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2004. -91 с.

7. Портянко, А.В. Возбудители кишечных инфекций цыплят-бройлеров и их резистентность к антибиотикам / А.В. Портянко, С.Б. Лыско // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2018. - Том. 224 (2). - С. 156-161.

8. Портянко, А.В. Мониторинг заразных болезней птиц в Омской области / А.В. Портянко и др. // Птицеводство. - 2017. - №9. - С. 34-38.

9. Соколов, В.Д. Теория и практика группового применения лекарственных средств в птицеводстве / В.Д. Соколов, НЛ. Андреева // FarmAnimals. - 2012. - № 1 (1). - С. 62-64.

10. Фисинин, В.И. Обеспечение биобезопасности в птицеводстве / В.И. Фисинин// Сфера: Птицепром. - 2017. - № 1. С. - 58-60.

11. Щепеткина, С.В. Первопроходцы, или «Antibioticfree» на Белгородчине / С.В. Щепеткина // Био.-2019.-№3.-С. 8-12.

12. Яковлев, С.С. Текущая эпизоотическая ситуация в птицеводстве России и биобезопасность птицеводческой продукции [Электронный ресурс] / С.С. Яковлев // http://zhukov-vet.rmdoc/birdAHKOBneB.pdf (дата обращения 23.04.2019).

THE ACTIVITY OF ANTIBIOTICS ТО CULTURES OF MICROORGANISMS ISOLATED FROM

DEAD EMBRYOS

Suntsova O.A. - Candidate ofVeterinary Sciences, Zadorozhnaya M.V. - Candidate of Veterinary Sciences, Lysko S B. - Candidate ofVeterinary Sciences, Portyanko A.V.

Siberian Research Institute of Poultry Farming - a Branch of the Federal State Budgetary Scientific Institution «Omsk Agricultural Research Center.

farms of the Omsk Region and belonging to 7 species. 13 antibiotics belonging to 5 groups by chemical composition and 15 complex drugs were tested. Studies have shown that different co-members of bacterial associations have different sensitivities to the same antibacterial drugs. The most active are antibiotics from the group of fluoroquinolones and complex drugs including them (enrofloxacin in combination with colistin and trimethoprim), doxycycline-based antibacterial agents with lincomycin, as well as with three or more active substances. Antibiotics from the group of macrolides, florfenicol and sulfanilamide complexes with trimethoprim and amoxicillin with gentamicin show low bactericidal activity. Antibiotic resistance was recorded in the majority of test cultures to one, and in citrobacteria to two pharmacological groups. The presence in microorganisms isolated from dead embryos, resistance to antibacterial drugs indicates the probable errors of antibiotic therapy of the parent herd. In this regard, determination of sensitivity of field strains of bacteria to antibiotics should be regular and planned and taken into account when conducting therapeutic and preventive measures in the hatchery at the hatch and during further breeding of poultry.

Keywords: embryos, bacterial infections, conditionally pathogenic microflora, antibiotics, antibiotic resistance

References

1. Anganova, E.V. The problem of antibiotic resistance of pathogens of infectious diseases of animals and birds / E.V. Anganova et al. // Bulletin of the agricultural industry of Stavropol. - 2017. - No. 2 (26). - S. 55-58.

2. Hoffman, A.A. Bacterial associations in respiratory infections of birds / A.A. Hoffman and others // XVI Satpayev readings: materials of the Intern, scientific conf. young scientists, undergraduates, students and schoolchildren. - Pavlodar, 2016 .- P. 228-232.

3. Javadov, E.D. Antibiotics in poultry farming: alternative methods for the prevention of diseases and treatment of birds / E.D. Javadov et al. // Poultry farming. - 2017. - No. 11. - P. 41-46.

4. Kapitonova, E.A. The current state and problems of the use of antibiotics in agriculture / E.A. Kapitonova et al. // Scientific notes of UO VGAVM. - 2011. - T. 47. - №. 2. - P. 284-288.

5. Lysko, S.B. Resistance to enrofloxacin and the possibility of overcoming it / S.B. Lysko, L.M. Kashkovskaya, M.I. Safarova // Poultry farming. - 2016. - No. 10. - P. 37-41.

Lysko, S.B. The effectiveness of the use of antibacterial drugs in poultry enterprises / S.B. Lysko et al. // Innovative ways of development of livestock farming of the XXI century: materials of scientific and practical, (correspondence) conf. with the International Partnership. -Omsk, 2015 .- P. 115-120.

6. Determination of the sensitivity of microorganisms to antibacterial drugs. Guidelines - M .: Federal Center for Hygiene and Epidemiology of Rospotrebnadzor, 2004. -91 p.

7. Portyanko, A.V. The causative agents of intestinal infections of broiler chickens and their resistance to antibiotics / A.V. Portyanko, S.B. Lysko // Scientific notes of the Kazan State Academy of Veterinary Medicine named after N.E. Bauman. - 2018. - T. 224 (2). - P. 156-161.

8. Portyanko, A.V. Monitoring of infectious diseases of birds in the Omsk region / A.V. Portyanko et al. // Poultry farming. - 2017. - No. 9. - P. 34-38.

9. Sokolov, V.D. Theory and practice of group use of drugs in poultry farming / V.D. Sokolov, N.L. Andreeva//Farm Animals. -2012. - No. 1 (1). - P. 62-64.

10. Fisinin, V.I. Ensuring biosafety in poultry farming / V.I. Fisinin // Field: Poultry industry. - 2017. -No. 1,-P.-58-60.

11. Shchepetkina, S.V. Pioneers, or "Antibioticfree" in Belgorod region / S.V. Shchepetkina // Bio. -2019. -№. 3,- P. 8-12.

12. Yakovlev, S.S. The current epizootic situation in poultry farming in Russia and the biosafety of poultry products [Electronic resource] / S.S. Yakovlev // http://zhukov-vet.ru >doc / bird / Yakovlev.pdf (accessed April 23,2019).