Способ получения лекарственного средства с метионином и экстрактом куркумы в виде гранул с кишечнорастворимым покрытием системного действия
METHOD FOR PREPARING MEDICINE WITH METHIONINE AND TURMERIC EXTRACT IN GRANULAR TYPE WITH INTESTINAL SUSTAINABLE COATING OF SYSTEM ACTION

Способ получения лекарственного средства с метионином и экстрактом куркумы в виде гранул с кишечнорастворимым покрытием системного действия
Изобретение относится к медицине, в частности к фармации, касается разработки лекарственных препаратов в виде гранул с кишечнорастворимым покрытием системного, содержащих метионин и экстракт куркумы, и может быть использовано для системного лечения гепатозов.
Аналогами представленного изобретения являются препараты, содержащие метионин или S-аденозил-L-метионин. Метионин является серосодержащей незаменимой аминокислотой, необходимой для синтеза белков, участвующей в реакциях дезаминирования, метилирования, сульфотирования способствует образованию фосфолипидов [Биохимия: Учеб. для вузов, под ред. Е.С. Северина., 2003. 779 с.]. Препаратом, восполняющим дефицит S-аденозил-L-метионина, является «Гептрал» (Патент США 4990606, заявлен 30.05.1990, опубликован 05.02.1991), оказывающий холеретическое и холекинетическое действие, обладающий детоксикационными, регенерирующими, антиоксидантными, антифиброзирующими и нейропротективными свойствами. Недостатком является высокая стоимость лекарственного средства, что делает невозможным его использования у большинства социально значимых слоев населения РФ, имеющих заработную плату на уровне прожиточного минимума.
Описан препарат «Метиовит» (Патент RU 2105502; A23L 1/30, авторы: Прокопенко Ю.И., Удилов И.Г., Бурцев Д.В., Леонтьев Ю.В; подача заявки: 2002-07-02; публикация патента: 10.02.2004), содержащее в своем составе метионин 1,5-3,0, глюкозу 1,0-5,0, лимонную кислоту 5,0-5,5, янтарную кислоту 0,5-0,65 и автолизат пекарских дрожжей. «Метиовит» используется для: активации иммунной системы организма, ускорения восстановления организма в послеоперационный период и после лечения онкологических заболеваний, нормализации обмена веществ в комплексной терапии больных онкологическими заболеваниями, для умственной и энергетической активности, для выведения из организма радионуклидов, тяжелых металлов и др. токсических веществ. Недостатком является сложный технологический процесс. Другим препаратом, также имеющим сложный технологический цикл изготовления, является «Препарат инсулина, содержащий метионин» (Патент RU 2540485, авторы: Шнидерс Юлия (DE), Фюрст Кристиане (DE), Зифхе-Хенцлер Ферена (DE), Хаук Геррит (DE), Шеттле Изабель (DE), Хагендорф Анника (DE), Камм Вальтер (DE); подача заявки: 02.07. 2010; публикация патента: 10.02.2015).
Известны также препараты, содержащие куркумин в экстракте из корневищ куркумы (Curcuma longa L., С. domestica Val.) - многолетнего травянистого растения семейства имбирных (Zingiberaceae) [Aggarwal, В.В. Curcumin: the indian solid gold in health and disease / B.B. Aggarwal, C. Sundaram, N. Malani, H. Ichikawa // Advances in experimental medicine and biology. Vol. 595. Springer Publisher US, 2007.p. 1-75.]. Корневища содержат до 5% эфирного масла, богатого сесквитерпенами и тритерпенами [Hwa-Young Leel, Seung-Wook Kim, Geum-Hwa Lee, Min-Kyung Choi, Han-Wool Jung, Young-Jun Kim, Ho-Jeong Kwon and Han-Jung Chae. Lee et al. Turmeric extract and its active compound, curcumin, protect against chronic CCl4-induced liver damage by enhancing antioxidation». BMC Complementary and Alternative Medicine. 2016.V. 16. p. 316]. В корневищах найдены кетоны (куркумин, дигидрокуркумин, куркумон, бисдеметоксикуркумин, деметоксикуркумин, 1'-метил-1',2',3',6'-тетрагидроацетофенон), углеводороды и каприловая кислота [Geum-Hwa Lee, Hwa-Young Lee, Min-Kyung Choi, Hyung-Ryong Kim, Han-Jung Chae. Protective effect of Curcuma longa L. extract on CCl4-induced acute hepatic stress KFN International Symposium and Annual Meeting [], 2016. V. 10, C. 420-421;Esatbeyoglu, T. Curcumin-from molecule to biological function / T. Esatbeyoglu [et al.] // Angewandte Chemie (International Edition in English). - 2012. - Vol. 51, (22). p. 5308-5332].
На основе экстракта куркумы разработаны и зарегистрированы биологически - активные добавки: капсулы «Куркумин Эвалар» показаниями к применению являются: для здоровья печени, суставов, повышения иммунитета. Недостатком данного изобретения является то, что оно является зарегистрированной биологически активной добавкой и клинических исследований, подтверждающих эффективность препарата «Куркумин Эвалар». Аналогом изобретения является препарат «Овесол» (Средство, обладающее гепатопротекторным, желчегонным и спазмолитическим действием (Патент RU 2326686: А61Р 1/16, A61K 36/906, A61K 36/899, A61K 36/534, A61K 36/28; подача заявки: 2007-03-14; публикация патента: 20.06.2008) содержащий: экстракт овса 150 мг, экстракт бессмертника 60 мг, экстракт мяты 30 мг, экстракт куркумы 13,25 мг (в том числе куркуминоиды, не менее 10 мг), применяемый в качестве «очищающего» средства для улучшения функционального состояния печени и желчевыводящих путей. Недостатком данного изобретения является то, что оно является зарегистрированной биологически активной добавкой и клинических исследований, подтверждающих эффективность препарата «Овесол» как лекарственного средства, не проводилось.
Прототипом изобретения являются «Фосфолипидные комплексы куркумина, обладающие улучшенной биодоступностью» (Патент RU 2450818», авторы: Джиори Андреа (IT), Франчески Федерико (IT); подача заявки: 2007-02-21; публикация патента: 20.05.2012). Изобретение относится к новым фосфолипидным комплексам куркумина или содержащим его экстрактам, обладающим улучшенной биодоступностью, однако авторами изобретения не заявлены холеретический, холекинетический, антиоксидантный эффекты, что является недостатком препарата и композиция «Composition comprising extract of Artemisia iwayomogi and Curcuma longa for treatment improvement or prevention of obesity-related disease and preparation method thereof» (Патент KR 20150126147 20150907, авторы: SON CHANG GUE [KR]; SEOL IN CHAN [KR]. Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей экстракты artemisia iwayomogi и curcuma longa в качестве активных ингредиентов для профилактики, улучшения или лечения заболеваний, связанных с ожирением, и способа их приготовления (https://ru.espacenet.com/publicationDetails/biblio?II=31&ND=3&adjacent=true&locale=ru_RU&FT=D&date=20170315&CC=KR&NR=20170029165A&KC=A).
Выбор состава лекарственной формы базировался на изучении биологической активности метионина и куркумы, участие их в реализации протективных механизмов защиты клеток печени и влияния на факторы антимикробной зашиты [Yongjae Kim, Yanghee You, Ho-Geun Yoon, Yoo-Hyun Lee, Kyungmi Kim, JeongminLee, Min Soo Kim, Jong-Choon Kim, Woojin Jun. Hepatoprotective effects of fermented Curcuma longa L. on carbon tetrachloride-induced oxidative stress in rats». «Food Chemistry» Volume 151(15), May 2014, p. 148-153], профиля высвобождения метионина и экстракта куркумы в буферные растворы и биорелевантные среды - система FaSSIF (1) (fasted state simulation intestinal fluid) и FeSSIF (2) (fed state simulation intestinal fluid), которые, соответственно, имитируют кишечный сок до и после еды [Методические рекомендации для разработчиков и производителей лекарственных средств по изучению сравнительной кинетики растворения дженерических лекарственных средств. Утв. Росздравнадзором, 2010. - М.: Ремедиум. 2010. С. 24-40]. В основу изобретения положена задача, заключающаяся в расширении арсенала отечественных лекарственных средств для лечения и профилактики токсических поражений печени; получение комбинации активных веществ, которые за счет потенцирования эффекта способствуют более эффективной терапии патологии печени.
В предлагаемом способе изобретения используется впервые комбинация метионина и экстракта куркумы. Указанная задача решается тем, что средство, содержащее метионин и экстракт куркумы включены в гранулы, полученные смешением глюкозы, крахмала, метионина, экстракта куркумы 10%, поливинилового спирта 3%, поливинилпирролидона 5% и покрытые кишечнорастворимой оболочкой. Заявляемый способ позволяет расширить ассортимент лекарственных средств для лечения заболеваний печени и воспалительных заболеваний кишечника предоставить пациентам более доступное лечение заболеваний печени с использованием средства, обладающего антиоксидантной активностью. Для подтверждения антиоксидантной активности композиции были исследованы антиоксидантные свойства и состояние потенциала полуволны ионов, входящих в состав экстракта куркумы и метионина полярографическим методом. Потенциал полуволны является, таким образом, качественной характеристикой ионов в растворе данного фонового электролита, и определение потенциала полуволны составляет основу качественного полярофафического анализа [Хенце Г. Полярография и вольтамперометрия. Теоретические основы и аналитическая практика. / Г. Хенце; пер. с нем. А.В. Гармаша и А.И. Каменева. - М.: Бином. Лаборатория знаний, - 2008. - 284 с.; Полярография лекарственных препаратов. Миск-Мискиджьян С.П., Кравченюк Л.П Издательское объединение «Вища школа», 1976, 232 с], полученные результаты представлены в табл. 1.
Примечание: Ер, В-потенциал полуволны, АОА - общая антиоксидантная активность
Предлагаемый способ отличается от существующих тем, что при использовании композиции с с высокой степенью биодоступности экспериментально установлена, ее антиоксидантная активность, которая была достоверно выше чем антиоксидантная активность каждого из компонентов смеси в отдельности. Показано, что все объекты исследования отличаются антиоксидантной активностью, поскольку величина их Ер находится в пределах [-1,78, -1,85] В, что и доказывает антиоксидантную активность. В случае модельной смеси на основе метионина и экстракта куркумы показатели составляют - 1,84±0,013 В. Экспериментально доказано, что при сочетании компонентов (метионина и экстракта куркумы) их эффект усиливается и при этом не прослеживается прооксидантный эффект как модельной смеси, так и отдельных составляющих этой смеси. Полученные результаты дают основание полагать, что комбинация метионина и экстракта куркумы, оказывая антиоксидантный эффект, позволит оказать положительное воздействие на восстановление клеток печени при токсических поражениях, обеспечивая холеретический и холекинетический эффекты, усиливающийся за счет синергизма двух действующих веществ (метионина и экстракта куркумы). Нами предложен следующий механизм антиоксидантных эффектов заявляемой композиции, который состоит в том, что метионин представляет собой серосодержащую незаменимую аминокислоту, которая выполняет функцию донатора подвижных метильных групп для фосфолипидов. Метионин необходим для синтеза холина, недостаток которого провоцирует нарушения синтеза фосфолипидов из жиров и отложение нейтрального жира в печени и оказывает выраженное липотропное действие [Regulation of cell function by methionine oxidation and reduction Authors: Toshinori Hoshi, Stefan H. Heinemann, 2001]. Куркумин - главный полифенол, который входит в состав куркумы, обладает мощным антиоксидантным и противовоспалительным эффектом куркумы [Choiu JW, Wei НС, Chunk-Kuo. Preliminary study on the anti-oxidative components of some species grown in Taiwan. Nung Yeh Hua Hsuch Hui Chih 1983; 21:97-103, Moken Y., Xianping D, Yaoshu T. Studies on the chemical constituents of common turmeric (Curcuma longa). Zhongcoayoa 1984; 15:197-198.].
Куркумин нейтрализует свободные радикалы [Chandra D., Gupta S. Anti-inflammatory and anti-arthritic activity of volatile oil of Curcuma longa (Haldi). Ind J Med Res 1972; 60:138-142, Arora R., Basu N, Kapoor V, et al. Anti-inflammatory studies on Curcuma longa (turmeric). Ind J. Med Res 1971; 59:1289-1295, Mukhopadhyay A., Basu N., Ghatak N., et al. Anti-inflammatory and irritant activities of curcumin analogues in rats. Agents Actions 1982, 12:508-515.]. В комбинации метионина и куркумина обеспечивается потенцированное действие, что в клинической практике обеспечивает антиоксидантный, холеретический и холикинетический эффекты. Кроме того, предлагаемая лекарственная форма позволяет точно дозировать лекарственное средство, что исключает возможность передозировки и развития нежелательных побочных эффектов. Пример конкретного осуществления. Было исследовано влияние вспомогательных веществ на биофармацевтические показатели. Пример конкретного осуществления.
Пример 1.
Состав на одну капсулу с гранулами:
Метионин 0,1 г
Экстракт куркумы 70% 2,9 г
Поливинилпирролидон (ПВП) 5% - 0,33 мл.
Поливиниловый спирт (ПВС) 3% - 0,2 мл.
Крахмал 0,5 г
Глюкоза 0,5 г
Технология изготовления.
Смешивали по 0,5 г крахмала и глюкозы, добавляли 0,1 г метионина, повторно тщательно перемешивали. В полученную смесь частями вводили 3,5 мл спиртового экстракта куркумы и 3% раствора ПВП при постоянном растирании. К высушенной смеси добавляли в качестве формообразователя 3% раствор поливинилового спирта и протирали через сито размером d 1,0 для получения гранул округлой формы. После высушивания их обрабатывали водным раствором коллидона 3% (пятикратное нанесение оболочки) и высушивали.
Пример 2.
Состав на одну капсулу с гранулами:
Метионин 0,1 гр.
Экстракт куркумы 70% - 2,9 г.
Поливинилпирролидон 5% - 0,33 мл.
Поливиниловый спирт 3% - 0,2 мл
Крахмал 0,5 г
Глюкоза 1,0 г
Технология изготовления.
В ступке смешивали по 0,5 г. крахмала и глюкозы, добавляли 0,1 г. метионина, тщательно перемешивали. В полученную смесь частями вводили 3,5 мл. спиртового экстракта куркумы и 0,33 мл. 5% раствора ПВП при постоянном растирании. К высушенной смеси добавляли в качестве формообразователя 0,2 мл. 3% раствора поливинилового спирта и протирали через сито размером d 1,0 для получения гранул округлой формы. После высушивания их обрабатывали водным раствором коллидона 3% (пятикратное нанесение оболочки) и высушивали.
Пример 3.
Состав на одну капсулу с гранулами:
Метионин 0,1 г
Экстракт куркумы 70% 2,9 г
Натрия карбоксиметилцеллюлоза 3% - 0,26 мл.
Поливиниловый спирт 3% - 0,33 мл.
Крахмал 0,5 г
Глюкоза 0,5 г
Технология изготовления.
В ступке смешивали по 0,5 гр. крахмала и глюкозы, добавляли 0,1 гр. метионина, тщательно перемешивали. В полученную смесь частями вводили 2,9 гр. спиртового экстракта куркумы и 0,26 мл. 3% раствор натрия корбоксиметилцеллюлозы при постоянном растирании. К высушенной смеси добавляли в качестве формообразователя 0,33 мл. 3% раствора поливинилового спирта, происходила адгезия. В отличие от примера 1 и 2 данный пример 3 не удовлетворяет фармакотехнологическим критериям
Пример 4.
Состав на одну капсулу с гранулами:
Метионин 0,1 г
Экстракт куркумы 70% 2,9 г
Натрия карбоксиметилцеллюлоза 3% - 0,26 мл.
Поливиниловый спирт 3% - 0,33 мл.
Крахмал 0,5 г
Глюкоза 1,0 г
Технология изготовления.
Смешивали по 0,5 гр. крахмала и 1,0 гр. глюкозы, добавляли 0,1 гр. метионина, тщательно перемешивали. В полученную смесь частями вводили 2,9 гр. спиртового экстракта куркумы и 0,26 мл. 3% раствор натрия корбоксиметилцеллюлозы при постоянном растирании. К высушенной смеси добавляли в качестве формообразователя 0,33 мл. 3% раствора поливинилового спирта, происходила адгезия. В отличие от примера 1 и 2 данный пример 4 не удовлетворяет фармакотехнологическим критериям. Поскольку составы 3 и 4 не отвечали технологическим параметрам (наблюдалась адгезия), то их дальнейшие биофармацевтические исследования не проводились.
Для оценки высвобождения активных действующих веществ использовали спектрофотометрический метод по реакции с раствором нингидрина (метионин) [А.В. Симонян, А.А. Саламатов, Ю.С. Покровская, А.А. Аванесян. Использование нингидриновой реакции для количественного определения α-аминокислот в различных объектах: Методические рекомендации. - Волгоград., 2007], а также по реакции образования розоцианина (экстракт куркумы).
Биофармацевтические исследования проводили в условиях теста «Растворение» [Государственный стандарт качества лекарственных средств. Общая фармакопейная статья «Растворение». - М., 2004. - 20 с.] на приборе «Вращающая корзинка». Время отбора проб составляло 15, 30, 45 и 60 минут. Результаты представлены на фигуре 1.
3
3
3
3
2+
+
6
Из приведенных примеров и анализа фигуры 1 видно, что максимальное высвобождение наблюдается из состава 2. Данное соотношение компонентов состава 2 обеспечивает соответствие фармакотехнологическим и биофармацевтическим параметрам. оптимальным по технологическим и фармакологическим параметрам. Оптимальный состав 2 содержит в качестве вспомогательного вещества поливинилпирролидона и соотношение вспомогательных веществ 1:2, при котором происходит максимальное высвобождение активных веществ из лекарственной формы и образуются ровные гранулы [Валидация аналитических методик для производителей лекарств. Типовое руководство предприятия по производству лекарственных средств, подготовленное Федеральным союзом фармпроизводителей Германии (ВАН). Пер. Аладышевой Ж.И. и Спицкого О.Р. Под ред. Береговых В.В. - М., - 2008. - 70 с.]. Для оценки антиоксидантной активности лекарственного средства состава 2 была проанализирована антиоксидантная активность нейтрофильных гранулоцитов периферической крови здоровых доноров мужского пола без вредных привычек в возрасте 26±5,0 лет, забранная после подписания донорами добровольного информированного согласия, натощак, утром. Для выделения нейтрофильных гранулоцитов периферической крови использовали двойной градиент фиколл-урографин с=1,077 г/см и с=1,119 г/см. На первом этапе создавали двойной градиент фиколл-урографина, для чего сначала в пробирку вносили раствор фиколл-урографина, имеющий плотность с=1,119 г/см, затем на него аккуратно наслаивали раствор фиколла с плотностью с=1,077 г/см. Гепаринизированную кровь наслаивали на двойной градиент фиколл-урографина, центрифугировали 45 мин при 3000 об/мин. После центрифугирования получали кольца мононуклеарных клеток (верхнее) и нейтрофильных гранулоцитов (нижнее). Полученное кольцо мононуклеарных клеток в удаляли, «нейтрофильное кольцо» отбирали и переносили в чистую пробирку, содержащую питательную среду-раствор Хенкса, свободную от ионов Са и Mg2. Клетки дважды отмывали, центрифугируя 10 мин при 1500 об/мин. Количество нейтрофильных гранулоцитов в клеточной суспензии подсчитывали в счетной камере Горяева с использованием прижизненной окраски раствором трипанового синего в 3% уксусной кислоте. Для достижения концентрации 5⋅10 Нейтрофильных гранулоцитов/мл клеточную суспензию разводили раствором Хенкса.
Определение активности каталазы проводили на модели нейтрофильных гранулоцитов периферичекой крови по реакции с аммония молибдатом. Для этого в опытную пробирку отмеряли 2 мл свежеприготовленного 0,03% раствора перекиси водорода, 100 мкл выделенной суспензии нейтрофильных гранулоцитов, выделенных из периферической крови и раствор испытуемого средства. В пробирку сравнения вместо раствора лекарственного средства прибавляли в том же объеме воду очищенную. В контрольный раствор отмеряли 2,1 мл воды очищенной и 100 мкл суспензиинейтрофильных гранулоцито. В качестве холостой пробы использовали раствор, состоящий из 2 мл 0,03% раствора пероксида водорода и 0,2 мл воды очищенной. Подготовленные таким образом растворы инкубировали при 37°С в течение 10 минут, а затем, в каждую пробирку добавляли по 1 мл 4% раствора аммония молибдата. Интенсивность окраски измеряли спектрофотометрически при 410 нм относительно контрольной пробы. Определение проводили параллельно: для водного раствора метионина, спиртового экстракта куркумы и разработанного состава лекарственной формы, выбранного для дальнейших испытаний. Результаты представлены в таблице 2.
Таким образом, данное лекарственное средство (2) содержащее на одну капсулу с гранулами: Метионин 0,1 гр. Экстракт куркумы 70% -2,9 г. Поливинилпирролидон 5% - 0,33 мл. Поливиниловый спирт 3% - 0,2 мл Крахмал 0,5 г. Глюкоза 1,0 г - позволяет расширить арсенал отечественных лекарственных средств для лечения и профилактики гепатозов, получение комбинации активных веществ, которые за счет потенцирования эффекта способствуют более эффективной терапии патологии печени. Новое лекарственное средство для перорального применения в форме гранул с кишечнорастворимым покрытием, обладает высокой степенью биодоступности и обеспечивается максимальное поступление действующих веществ из желудочно-кишечного тракта в кровоток, расширение его лечебного действия за счет антиоксидантной активности.
Список литературы
1. Биохимия: Учеб. для вузов, Под ред. Е.С. Северина., 2003. 779 с. ISBN 5-9231-0254-4
2. Валидация аналитических методик для производителей лекарств. Типовое руководство предприятия по производству лекарственных средств, подготовленное Федеральным союзом фармпроизводителей Германии (ВАН). Пер. Аладышевой Ж.И. и Спицкого О.Р. Под ред. Береговых В.В. - М., - 2008. - 70 с.
3. Государственный стандарт качества лекарственных средств. Общая фармакопейная статья «Растворение». - М., 2004. - 20 с.
3. Методические рекомендации для разработчиков и производителей лекарственных средств по изучению сравнительной кинетики растворения дженерических лекарственных средств (Утв. Росздравнадзором, 2010). - М.: Ремедиум. 2010. С. 24.
4. Полярография лекарственных препаратов. М и с к - Мискиджьян С.П., Кравченюк Л.П Издательское объединение «Вища школа», 1976, 232 с.
5. Симонян А.В., Саламатов А.А., Покровская Ю.С., Аванесян. Использование нингидриновой реакции для количественного определения α-аминокислот в различных объектах: Методические рекомендации. - Волгоград, 2007
6. Хенце Г. Полярография и вольтамперометрия. Теоретические основы и аналитическая практика. / Г. Хенце; пер. с нем. А.В. Гармаша и А.И. Каменева. - М.: Бином. Лаборатория знаний, - 2008. - 284 с.
7. Aggarwal, В.В. Curcumin: the indian solid gold in health and disease / B.B. Aggarwal, C. Sundaram, N. Malani, H. Ichikawa // Advances in experimental medicine and biology: Vol. 595 / В.B. Aggarwal, Y. - J. Surh, S. Shishodia. - Springer Publisher US, 2007. - P. 1-75.
8. Choiu JW, Wei HC, Chunk-Kuo. Preliminary study on the anti-oxidative components of some species grown in Taiwan. Nung Yeh Hua Hsuch Hui Chih 1983; 21:97-103, Moken Y, Xianping D, Yaoshu T. Studies on the chemical constituents of common turmeric (Curcuma longa). Zhongcoayoa 1984; 15:197-198.
9. Chandra D, Gupta S. Anti-inflammatory and anti-arthritic activity of volatile oil of Curcuma longa (Haldi). Ind J Med Res 1972; 60:138-142, Arora R, Basu N, Kapoor V, et al. Anti-inflammatory studies on Curcuma longa (turmeric). Ind J Med Res 1971; 59:1289-1295, Mukhopadhyay A, Basu N, Ghatak N, et al. Anti-inflammatory and irritant activities of curcumin analogues in rats. Agents Actions 1982, 12:508-515.
10. Esatbeyoglu, T. Curcumin - from molecule to biological function / T. Esatbeyoglu [et al.] // Angewandte Chemie (International Edition in English). - 2012. - Vol. 51, №22. - P. 5308-5332.
11. Hwa-Young Lee, Seung-Wook Kim, Geum-Hwa Lee, Min-Kyung Choi, Han-Wool Jung, Young-Jun Kim, Ho-Jeong Kwon, Han-Jung Chae,- Lee et al. Turmeric extract and its active compound, curcumin, protect against chronic CCl4-induced liver damage by enhancing antioxidation». BMC Complementary and Alternative Medicine. 2016. V. 16. p. 316
12. Geum-Hwa Lee, Hwa-Young Lee, Min-Kyung Choi, Hyung-Ryong Kim, Han-Jung Chae Protective effect of Curcuma longa L. extract on CCl4-induced acute hepatic stress. 2016 KFN International Symposium and Annual Meeting [], 2016.V. 10, 420-421
13. Toshinori Hoshi, Stefan H. Regulation of cell function by methionine oxidation and reduction Authors: Heinemann, 2001
14. Yongjae Kim, Yanghee You, Ho-Geun Yoon, Yoo-Hyun Lee, Kyungmi Kim, JeongminLee, Min Soo Kim, Jong-Choon Kim, Woojin Jun. «Hepatoprotective effects of fermented Curcuma longa L. on carbon tetrachloride-induced oxidative stress in rats. Food Chemistry V. 151(15) May. 2014, P. 148-153.