СПОСОБ ОЧИСТКИ ВОДЫ И МЕРЗЛОТНЫХ ПОЧВ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ ШТАММОМ БАКТЕРИЙ Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593
METHOD OF WATER AND PERMAFROST SOIL PURIFICATION FROM OIL AND OIL PRODUCTS BY STRAIN OF BACTERIA Pseudomonas panipatensis VKPM V-10593

Изобретение относится к охране окружающей среды, в частности к способам очистки воды и мерзлотных почв от нефтезагрязнений. Способ включает обработку почвы и воды препаратом на основе клеток штамма Pseudomonas pampatensis ВКПМ В-10593, способным к утилизации нефти и нефтепродуктов, что обеспечивает высокую эффективность реакций деструкции нефтяных углеводородов.
Изобретение позволяет за короткие сроки добиться высокой степени очистки почв и воды от нефти и нефтепродуктов.
Уровень изобретения
Известен способ ликвидации нефтяного загрязнения почвы, предусматривающий формирование аэрозольного облака, содержащего питательные вещества и микроорганизмы: либо бактерии родов Artrobacter, Nocardia, либо дрожжи Candida, либо актиномицеты Cladosporium (1. Патент USA 4136024 «Aerosol dispersion of microoeganisms to eliminate oil slicks», кл. С12N 1/26, 1979). Облако постепенно, за фиксированное время оседает на загрязненный участок почвы. Этого периода достаточно для увеличения численности микроорганизмов до величины, достаточной для деструкции нефтяного загрязнения.
К недостаткам этого способа можно отнести то, что нанесение действующего агента проводят аэрозольно. При нанесении действующего агента на нефтезагрязненный субстрат таким способом часть микроорганизмов рассеивается в воздухе, другая часть, осевшая на поверхность почвы, быстро погибает от высушивания и воздействия спектра солнечного света (УФ-лучей), приводящего к инактивированию ферментов клеток и разрушению ДНК микроорганизмов, что приводит к резкой потере активности препарата и влияет на качество очистки почв от нефтезагрязнений. Способ не предусматривает очистку воды от нефтезагрязнений.
3
Известен способ очистки почв и грунтов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, с использованием олеофильного биопрепарата на основе ассоциации нефтеокисляющих микроорганизмов - Rhodococcus erythropolis ИЭГМ 708 и Rhodococcus ruber ИЭГМ 327 и биосурфактанта-Rhodococcus, отличающийся тем, что производят первоначальную обработку сильнозагрязненной почвы/грунта до достижения уровня остаточных нефтепродуктов 5-10 вес.% и последующее добавление органического разрыхлителя, олеофильный биопрепарат вносят в количестве не менее 10 л на 0,5-1,0 м почвы/грунта по меньшей мере один раз в неделю в течение первого месяца и в дальнейшем по меньшей мере один раз в месяц до окончания цикла биоремедиации в сочетании с периодическим рыхлением и увлажнением и дополнительно производят фиторемедиацию - засев многолетними травами (2. Ившина И.Б., Костарев С.М., Куюкина М.С., Закшевская Л.В. Способ очистки почвы от загрязнений нефтью и нефтепродуктами. Патент RU 2193464, В09С 1/10, 2001.11.14).
Недостатком вышеописанного способа является использование твердожидкофазного биореактора и аэрируемых почвенных площадок в качестве первоначальной обработки сильнозагрязненной почвы. Такой метод снижения уровня загрязнения трудоемок и не применим при масштабных авариях и разливах нефти и нефтепродуктов.
Известен способ удаления гидрофобных ароматических примесей из почвы, заключающийся в обработке загрязненного материала органическими растворителями, взятыми в количестве 20-90% от массы материала, в который затем добавляют частицы пенополистирола в соотношении от 1:1 до 1:100. В результате происходит перераспределение примесей между материалом и пенополистиролом, который вместе с перешедшей в частицы частью примесей отделяют от очищенного материала (3. Composition and method for immobilizing organic compounds in hazardous wastes and soils. Патент USA 5242598, B09B 3/00, 27.10.1994).
Данный процесс очень дорогостоящий и трудоемкий, в связи с чем и не нашедший практического применения.
Известен способ очистки нефтяного дистиллята, полученного микробиологической депарафинизацией нефти от продуктов метаболизма реагентной обработкой. В качестве реагентов используют ионообменные высокомолекулярные соединения, а перемешивание осуществляют в псевдосжиженном слое ферромагнитной насадки воздействием неоднородного вращающегося электромагнитного поля (4. Ксенофонтов Б.С., Аленьтева Е.С., Шкоп Я.Я., Козлова Л.И., Твердова О.Н., Бахметьева И.И., Михайлов И.А. Способ очистки нефтяного дистиллята. Патент RU 1474099, кл С02F 1/41, 23.04.1989).
Недостатком данного способа очистки нефтяного дистиллята является применение дорогостоящих ионообменных соединений, а также сложного оборудования.
Известны способы очистки воды от нефтезагрязнений штаммами Rhodococcus erythropolis, Rhodococcus luteus, Micrococcus flavus (5. Клющникова Т.М., Смирнова Г.Ф., Куберская С.Л., Слабоспицкая А.Т., Залевский B.C., Касаткина Т.П., Елисеева Г.С. Способ очистки подсланцевых сточных вод от нефтепродуктов. Патент SU 1493666, C12N 1/20, C02F 3/34, C12N 1/20, C12R 1/01, C12R 1/27, C02F 3/34, C02F 101/32, C02F 103/06, 15.07.1989), Flavobacterium tirrennicum (6. Новожилова М.И., Попова Л.Е., Недоводиева Т.П., Каламкарова Л.И. Штамм бактерий FLaVobacteRIUм тIRReNIcUм, используемый для очистки подсланевых и промышленных сточных вод от нефти и нефтепродуктов. Патент SU 1409594, C12N 1/20, C02F 3/34 C12N 1/20, C12R 1/20, C02F 3/34, C02F 101/32, 15.07.1988).
Недостатком способов является то, что они осуществляют деструкцию нефтепродуктов в воде, но неспособны осуществлять очистку почвы от нефти.
2
Известен способ очистки почв от загрязнений нефтью и нефтепродуктами, в котором в качестве биопрепарата используют консорциум нефтеокисляющих микроорганизмов Pseudomonas putida ПИ Ко-1, Pseudomonas fluorescens ПИ-896, Micrococcus sp. ПИ Ку-1, Burkholderia caryophylli Jap-3, Serratia odorifera Jap-1 при весовом соотношении от 3-12 мас.% каждого микроорганизма, при этом совместно с суспензией биопрепарата в загрязненную среду вводят ризоторфин в количестве 30-120 г/м (7. Саксон В.М., Кузнецов С.А., Бойкова И.В., Новикова И.И. Способ очистки почвы от загрязнений нефтью и нефтепродуктами. Патент RU 2191643, В09С 1/10, 2001.07.09), где ризоторфин - землеудобрительный препарат азотфиксирующих микроорганизмов.
2
Недостатком является то, что совместно с рабочей суспензией биопрепарата в загрязненную среду вводят ризоторфин в количестве 30-120 г/м, что приводит к удорожанию способа очистки почв от нефтезагрязнеий. Кроме того, ризоторфин не всегда доступен в случае непредвиденных аварийных разливов нефти и нефтепродуктов. Способ не предусматривает также и очистку воды от нефтезагрязнений.
Известны способы очистки почвы от нефтезагрязнений штаммами Acinetronacter sp. НВ-1 (8. Жиркова Н.А., Кобелев B.C., Холоденко В.П. ШТАММ БАКТЕРИЙ ACINETOBACTER SPECIES, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ВОДЫ И ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ. Патент RU 2077579); Acinetronacter sp. JN-2 (9. Ушков С.Б., Ильинская Н.В. ШТАММ ACINETOBACTER SPECIES, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ВОДЫ И ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ. Патент RU 2064017, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, 20.07.1996), Pseudomonas alcaligenes E7 (10. Ермоленко З.М., Холоденко В.П., Чугунов В.А. ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS ALCALIGENES E7, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ВОДЫ И ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ. Патент RU 2134723, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12N 1/20, C12R 1/38, 20.08.1999).
Недостатком является то, что процесс утилизации резко замедляется при понижении температуры ниже +20°C, что затрудняет их использование в условиях Севера.
Большую эффективность в условиях низких положительных температур показал штамм Rhodococcus erythroplis E-15 (11. Коронелли Т.В., Аракелян Э.И., Комарова Т.И., Ильинский В.В. СПОСОБ ОЧИСТКИ ПОЧВ ОТ НЕФТЯНЫХ ЗАГРЯЗНЕНИЙ. Патент RU 2019527, C02F 3/34, Е02В 15/04, C09K 17/00, 15.09.1994), но процесс биодеградация нефти протекает при его использовании медленно, и эффективен только при добавлении нитроаммофоски или нитроаммофоски и натриевой селитры.
Известен способ, предусматривающий очистку как почвы, так и воды с использованием консорциума углеводородоокисляющих микроорганизмов, входящих в биопрепарат “Деворойл” (консорциум углеводородоокисляющих микроорганизмов Rhodococcus maris, Rhodococcus erythropolis, Pseudomonas stutzeri, Yarrowia lipolytica). Способ предусматривает при хранении суспензии микроорганизмов использование NaCI, биологически активных веществ (витамины) и осмопротекторов (бетаин) (12. Борзенков И.А., Беляев С.С., Ибатуллин P.P., Поспелов М.Е., Свитнев А.И. СПОСОБ ОЧИСТКИ ПОЧВЫ, ПРИРОДНЫХ И СТОЧНЫХ ВОД, ЗАГРЯЗНЕННЫХ НЕФТЬЮ И НЕФТЕПРОДУКТАМИ, С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОПРЕПАРАТОВ. Патент RU 2114071, C02F 3/34,1997.05.22).
Недостатком является то, что формой применения штаммов здесь является смесь лиофильно высушенных культур, что приводит к использованию энергоемких процессов изготовления биопрепарата и удорожанию процесса очистки.
Известен способ очистки мерзлотных почв от нефти спорообразующими бактериями Bacillus subtilis (13. Неустроев М.П., Тарабукина Н.П., Неустроев М.М., Сазонов Н.Н., Парникова С.И., Степанова A.M. СПОСОБ ОЧИСТКИ МЕРЗЛОТНЫХ ПОЧВ ОТ НЕФТИ СПОРООБРАЗУЮЩИМИ БАКТЕРИЯМИ BACILLUS SUBTILIS. Патент RU №2446900, В09С 1/10, 20.01.2012). Способ позволяет за 3 месяца очистить почву до 0,48%. Однако данный штамм подходит только для очистки почв от нефти в модельных опытах и не предусматривает очистку воды, в том числе от нефтепродуктов (дизельное топливо, газовый конденсат, масло моторное).
Близким к заявляемому способу является способ очистки нефтезагрязненных субстратов штаммом Pseudomonas putida 36 (14. Дядечко В.Н., Толстокорова Л.Е., Морозова Т.Н. Штамм @ @ 36, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов А.С. СССР N1076446, С12N 15/00, 28.02.1984), обладающий высокими характеристиками по биодеградации нефти и нефтепродуктов. Однако недостатком этого штамма является то, что он растет и утилизирует нефтепродукты лишь при сравнительно высокой температуре (+28 +30°C).
Задачей изобретения является получение способа очистки воды и мерзлотных почв не только от нефти, но также и от нефтепродуктов (дизельное топливо) в относительно короткие сроки, в широком диапазоне температур (от +8 до +30°C), при различных уровнях загрязнения.
Решение поставленной задачи достигается путем внесения в загрязненные нефтью или нефтепродуктами (дизельное топливо, газовый конденсат, масло моторное) воду и мерзлотные почвы микробного препарата на основе штамма бактерий Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593, который может быть использован для очистки почв и водоемов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами в широком диапазоне температур (от +8 до +30°C).
9
3
Технический результат изобретения достигается использованием микробной суспензии штамма бактерий Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 с титром 1·10 микробных клеток/см.
Происхождение штамма
Штамм Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 выделен из воды открытого водоема (озеро Халы-Балы, село Чапчылган, Амгинский район. Республика Саха (Якутия)), загрязненного арктическим дизельным топливом, с пробы, отобранной с глубины 10 см, в удалении 1 м от берега.
Штамм идентифицирован и депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосПИИГенетика (ВКПМ) (Москва, 1-й Дорожный пр., д.1) под регистрационным номером ВКПМ В-10593.
Штамм характеризуется следующими признаками.
Культурально-морфологические признаки: грамотрицательные подвижные палочки размером 2,0-3,0.0,6-0,8 мкм. Спор и капсул не образуют. В мазках располагаются беспорядочно, одиночно или короткими цепочками (по 2-3).
На питательном агаре на основе гидролизата рыбной муки (масс.%: гидролизат рыбной муки - 1,2; пептон ферментативный - 1,2; натрий хлористый - 0,6; агар - 1,0; вода дистиллированная остальное; pH 7,1-7,5) и на мясопептонном агаре (масс.%: ферментативный пептон 1,0; натрий хлористый - 0,5; агар - 1,0; вода мясная - остальное, pH 7,0-7,2) через 24 часа штамм формирует дискообразные, влажные, пастообразной консистенции S колонии сероватого или грязно-голубоватого цвета диаметром 1,5-5 мм, легко снимающиеся с агара. При температуре выше +20°C штамм образует диффундирующий пигмент зеленого цвета, который при температуре +4°C может теряться и восстанавливаться при температуре от +20°C.
На среде Эндо (масс.%: панкреатический гидролизат рыбной муки - 1,2; экстракт пекарских дрожжей - 0,1; натрий хлористый - 0,34; сульфит натрия - 0,08; натрий фосфорнокислый двухзамещенный - 0,05; фуксин основной - 0,02; лактоза - 1,0; агар - 1,0; вода дистиллированная - остальное) при pH 7,4±2 образует круглые с голубым оттенком колонии 0,5-3,0 мм в диаметре, выпуклые, гладкие, с более плотным центром и плоским краем, блестящие, полупрозрачные, со временем приобретающие матовую поверхность.
На среде Сабуро (масс.%): гидролизат рыбной муки - 1,0; панкреатический гидролизат казеина - 1,0; дрожжевой экстракт - 0,2; натрия фосфат однозамещенный - 0,2; D-глюкоза - 4,0; агар - 1,0; вода дистиллированная - остальное, при pH 6,0±3 образует круглые с сероватым оттенком колонии 1,0-5,0 мм в диаметре, выпуклые, гладкие, блестящие, непрозрачные, через 24-72 ч приобретающие матовую поверхность и зеленый пигмент.
3
4
2
2
4
На минеральной среде Мюнца с нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо), (масс.%): KNO - 0,4; MgSO·7HO - 0,08; NaCl - 0,1; KHPO - 0,14; KH2PO4 - 0,06; агар - 2,0; нефть или дизельное топливо - 1,0; вода дистиллированная - остальное; pH - 7,2, растет в виде влажных непрозрачных голубоватых колоний диаметром 1-2 мм.
В мясопептонном бульоне (масс.%): ферментативный пептон - 1,0; натрий хлористый - 0,5; вода мясная - остальное; pH 7,0-7,2, растет в виде диффузного помутнения.
Физиолого-биохимические признаки: штамм является аэробом. Быстро (в течение 24-72 часов) растет на питательных средах с добавлением гидролизата рыбной муки, при температуре от +8°C до +41°C. Оптимум роста +30°C. Растет при pH 6,0-8,0. Растет в солевой среде с добавлением 0,1-2,0% NaCl. Обладает оксидазной и каталазной активностью. В качестве источника углерода потребляет ацетат и цитрат. Восстанавливает нитраты. Денитрификационная активность отсутствует. Не гидролизует желатин. Обладает уреазной активностью. Не гидролизует крахмал. Лецитиназу не образует. Индолоотрицателен. Окисляет мальтозу и D-глюкозу. Не ферментирует глицерин, инозит, маннит, рамнозу, сорбит, раффинозу, арабинозу. Не окисляет сахарозу, маннит, ксилозу, арабинозу, фруктозу, галактозу. Не нуждается в дополнительных факторах роста.
Штамм устойчив к бензилпенициллину, фуразолидону, метранидазолу, амоксициллину, ампициллину, амоксиклаву, каотиму, пефлоксацину, амосину, чувствителен к мозивару, цефатаксиму, цефтриаксону; умеренно чувствителен к оксациллину, полимиксину, левомицетину.
Штамм невирулентный, нетоксичный, нетоксигенный (проверка проведена на белых мышах).
Штамм может поддерживаться регулярными пересевами (1 раз в 10-14 дней) на скошенном мясопептонном агаре или храниться в лиофилизированном состоянии в ампулах при температуре +4°C.
Штамм бактерий может быть получен в лаборатории №2 Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук (ИПНГ СО РАН), по адресу: 677980, Республика Саха (Якутия), г. Якутск, ул. Октябрьская, 1.
Способ поясняется следующими примерами.
Пример 1. Получение бактериальной суспензии на основе штамма Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593.
9
3
Штамм бактерий Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 выращивают на мясопептонном агаре (масс.%: ферментативный пептон - 1,0; натрий хлористый - 0,5; агар - 1,0; вода мясная - остальное, рН 7,0-7,2) при температуре +30 +37°C в течение 48 часов, затем смывают в 0,9% растворе NaCl и получают бактериальную суспензию с титром 1·10 микробных клеток/см по оптическому стандарту ГИСК им. A.M. Тарасевича.
Полученную таким образом бактериальную суспензию на основе клеток штамма Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 используют для очистки почв и воды от нефти и нефтепродуктов (дизельного топлива).
Пример 2. Определение нефтеокисляющей активности штамма Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593.
9
3
3
3
3
3
4
2
2
4
2
4
Бактериальную суспензию на основе штамма Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 с титром 1·10 микробных клеток/см, полученную способом, описанным в примере 1, вносят в минерализованную водную среду следующего состава (г/дм): KNO - 4,0; MgSO·7HO - 0,8; NaCl - 1,0; KHPO - 1,4; KHPO - 0,6; агар-20,0; вода дистиллированная - 1,0 дм, загрязненную нефтью или нефтепродуктами в количестве 1000 мг на 100,0 см среды и экспонируют при температурах +8°С; +20°С; +30°С и +37°С в качалочных условиях в течение 5 суток.
Биодеградацию нефти и нефтепродуктов определяют спектрометрическим методом с использованием концентратомера «ИКН-025» (15. ФР.1.31.2007.03234 МВИ 01.02.117. Методика выполнения измерений массовой концентрации нефтепродуктов в питьевых, природных и сточных водах ИК-спектрометрическим методом с использованием концентратомера «ИКН-025»).
Данные эксперимента показывают, что уже на пятый день при температуре +8°C деградировало 79,6% нефти и 40,0% дизельного топлива; при +20°C - 94,5% нефти и 48,5% дизельного топлива; при +30°C - 96,4% нефти и 67,7% дизельного топлива (таблица 1).
Таблица 1
Степень утилизации нефти и нефтепродуктов под влиянием бактериальной суспензии на основе штамма Psendomonas panipatensis ВКПМ В-10593
t°C (+)
Нефть
Дизельное топливо
До опыта, мг
Через 5 суток, мг
Деструкция, %
До опыта, мг
Через 5 суток, мг
Деструкция, %
30
1000,0
35,62
96,43
1000,0
322,96
67,70
20
1000,0
54,15
94,59
1000,0
514,18
48,58
8
1000,0
203,96
79,60
1000,0
599,54
40,05
Контроль
1000,0
1000,0
0,0
1000,0
1000,0
0,0
Пример 3. Очистка водопроводной воды от нефти бактериальной суспензией на основе штамма Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593.
3
3
3
9
3
3
В эксикатор объемом 5,0 дм вносят 3,0 дм водопроводной воды и 30,0 см бактериальной суспензии на основе штамма Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 с титром 1·10 микробных клеток/см, полученной по примеру 1. Для создания нефтяной пленки в емкости добавляют 30000 мг сырой неочищенной нефти. В качестве контроля используют воду в количестве 3,0 дм с добавлением 30000 мг нефти и без внесения бактериальной суспензии.
Эксперимент проводят в течение 2-х месяцев, поддерживая температуру воды в пределе +20±1°C.
Степень деградации нефти определяют с помощью концентратомера «ИКН-025» (15. ФР.1.31.2007.03234 МВИ 01.02.117. Методика выполнения измерений массовой концентрации нефтепродуктов в питьевых, природных и сточных водах ИК-спектрометрическим методом с использованием концентратомера «ИКН-025»).
Полученные результаты показали, что в водопроводной воде деструкция нефти при добавлении препарата на основе штамма Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 за 2 месяца составила 98,33% (таблица 2).
Таблица 2
Динамика деструкции нефти в водопроводной воде после внесения препарата на основе штамма Psendomonas panipatensis ВКПМ В-10593
Вариант опыта
Количество нефти до внесения клеток штамма, мг
Количество нефти через 2 месяца после внесения клеток штамма, мг
Степень утилизации нефти, %
Вода + нефть + клетки штамма Pseudomonas panipatensis В-10593
30000
499,6
98,33
Вода + нефть
30000
30000
0,0
Пример 4. Очистка мерзлотной почвы от нефтепродуктов штаммом Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593.
9
3
На территории аварийного разлива нефтепродуктов (арктического дизельного топлива) проведен эксперимент по очистке мерзлотной почвы от нефтепродукта с помощью бактериальной суспензии на основе штамма Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 с титром 1·10 микробных клеток/см, приготовленной по примеру 1.
3
2
Бактериальную суспензию на основе клеток штамма Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593 вносили в почву, загрязненную дизельным топливом, из расчета 1,0 дмпрепарата на 1 м загрязненной почвы, с глубиной загрязнения до 20 см. Почву тщательно перемешивали и экспонировали в течение 2 месяцев. Для контроля образцы почвы отбирали перед внесением препарата и через 2 месяца после внесения препарата.
Содержание нефтепродуктов в почве определяли гравиметрическим методом, в соответствии с 16. РД 52.18.647-2003. Методические указания определения массовой доли нефтепродуктов в почвах. Методика измерений гравиметрическим методом.
Результаты исследований показывают, что через 2 месяца деструкция дизельного топлива составила 91,71% (таблица 3).
Таблица 3
Деструкция дизельного топлива в почве обработанной бактериальной суспензией на основе клеток штамма Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593
Вариант опыта
Содержание НП, мг/кг
Деструкция
до внесения штамма
после внесения штамма
НП через 2 месяца, %
Почва + дизельное топливо + Pseudomonas panipatensis ВКПМВ-10593
18351
1521
91,71
Контроль
25823
21247
17,80
Таким образом, подтверждается высокая степень очистки не только почв, но также и воды от нефти и нефтепродуктов предлагаемым способом.
Заявляемый способ может быть использован в различных природно-климатических зонах.
Способ дает возможность очистить субстраты (почву и воду), загрязненные нефтью и нефтепродуктами, за 2 месяца.
Способ экологически безопасный и экономически выгодный, поскольку основой его является обработка загрязненных нефтью и нефтепродуктами субстратов препаратом на основе непатогенных клеток штамма Pseudomonas panipatensis ВКПМ В-10593.