ПРОИЗВОДНЫЕ ФЕНИЛГУАНИДИНА
PHENYL-GUANIDINE DERIVATIVES

По данной заявке испрашивается приоритет предварительной заявки США №61/545804, поданной 11 октября 2011 года, которая включена в настоящее описание посредством ссылки.
Настоящее изобретение относится к новой группе производных фенилгуанидина для ингибирования Rac1, которые блокируют его взаимодействие с гуанозин обменными факторами (GEF), принадлежащими к семейству DBL, в качестве агентов для лечения быстрорастущих и/или резистентных опухолей, а также к процессу их получения, к включающим их фармацевтическим композициям и к их применению в терапии.
Уровень техники
Семейство Rho GTPаз представляет собой молекулярные переключатели, которые контролируют сигнальные пути, регулирующие реорганизацию актинового цитоскелета, экспрессию генов, развитие клеточного цикла, клеточное выживание и другие клеточные процессы. Наряду с другими функциями, они принимают участие в регуляции клеточного цикла и клеточного деления, являются также вовлеченными в секрецию, эндоцитоз, фагоцитоз, мембранный транспорт и апоптоз.
Семейство Rho белков представляет собой одно из трех важнейших ответвлений Ras суперсемейства. На долю Rho белков приходится приблизительно 30 процентов аминокислотной идентичности с Ras белками. По меньшей мере, 23 белка семейства Rho, характерные для млекопитающих, идентифицированы к настоящему времени, включая RhoA, Rac1 и Cdc42.
Опухолевые клетки, помимо того, что они характеризуются нерегулируемым разрастанием, показывают изменения их морфологических характеристик, и в случае метастаз они приобретают способность проходить через тканевые барьеры. Rho GTPазы играют важную роль в контролировании клеточной морфологии и подвижности.
Получение соединений, обладающих способностью специфически ингибировать активность Rho-GTPаз, предоставляет специфическое альтернативное решение в терапии рака.
Синтез и гербицидная активность некоторых производных гуанидина описаны в Chinese Journal of Chemistry, 2008, vol. 26(8), pp. 1481-1485.
Сущность изобретения
В настоящем изобретении предложены соединения, которые представляют собой высокоактивные и селективные ингибиторы Rho GTPазных клеточных белков. А именно, эти соединения могут применяться для ингибирования Rho-зависимого Rac1 GTPазного клеточного белка. Соответственно, эти ингибиторы могут быть использованы для лечения заболеваний, опосредованных характерными для млекопитающих Rac1 клеточными белками, т.e. они могут быть пригодными для лечения любого патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками.
Исходя из вышеизложенного, первый аспект настоящего изобретения касается соединения формулы (I)
или его соли, или любой из его стереоизомерных форм, или их смеси,
в которой:
1
1
1
4
3
2
3
2
1
1
R и R' независимо выбраны из группы, состоящей из H, (С-C)алкила, CF, F, Cl, Br, I, -CN, OH, NH, -OCH и NO; при условии, что, по меньшей мере, один из R и R' отличаются от H;
1
6
A представляет собой радикал, выбранный из прямого или разветвленного (C-C)алкила, или из одной из известных карбоциклических или гетероциклических кольцевых систем с 1-2 кольцами, в которых каждое из колец, образующих кольцевую систему,
2
содержит 5-7 членов, где каждый член независимо выбран из C, N, O, S, CH, CH, NH;
представляет собой насыщенное, частично ненасыщенное или ароматическое кольцо;
1
6
1
6
2
6
2
2
2
2
3
4
3
4
5
6
2
2
2
2
2
3
4
при этом A замещен одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, галогена, нитро, циано, прямого или разветвленного (C-C)алкила, галоген(C-C)алкила, прямого или разветвленного (C-C)алкенила, -OR, -COR, -COOR, -OC(O)R, -C(O)NRR, -NRR, -RNHR, -SR, -SO-R, -SO-R и -SONRR;
в которых
2
1
4
каждый R независимо представляет собой H или прямой, или разветвленный (C-C)алкил,
3
1
4
каждый R независимо представляет собой H или прямой, или разветвленный (C-C)алкил,
4
1
6
1
4
2
каждый R независимо представляет собой H, прямой или разветвленный (C-C)алкил, фенил, пиридин или хинолин; при этом кольцевая система фенила, пиридина или хинолина замещена одним или несколькими радикалами, выбранными из H, прямого или разветвленного (C-C)алкила и NH;
5
6
1
4
R и R независимо выбраны из H, прямого или разветвленного (C-C)алкила,
предназначенного для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками.
Этот первый аспект можно сформулировать как способ лечения патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1, у нуждающегося в этом субъекта, в особенности являющегося человеком, который включает в себя введение субъекту соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли вместе с фармацевтическими эксципиентами или носителями.
Альтернативно, этот первый аспект может быть сформулирован как применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения патологического состояния, опосредованного Rho-GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1.
Более предпочтительно, когда патологическое состояние, опосредованное Rac1, представляет собой быстрорастущую и/или резистентную опухоль.
Другой аспект изобретения касается фармацевтической композиции, которая включает в себя, по меньшей мере, одно соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов или носителей.
Предпочтительно, когда фармацевтическая композиция представляет собой противоопухолевую фармацевтическую композицию.
В другом аспекте предлагается соединение формулы II
или его соль, или любая из его стереоизомерных форм или их смесь, в которой:
A представляет собой радикал одной из известных карбоциклических или гетероциклических кольцевых систем с 1-2 кольцами,
в которых каждое из колец, образующих кольцевую систему,
2
содержит 5-7 членов, где каждый член независимо выбран из C, N, O, S, CH, CH, NH;
представляет собой насыщенное, частично ненасыщенное или ароматическое кольцо;
3
2
3
2
6
3
2
3
3
3
2
3
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
при этом A замещен одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, нитро, циано, метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, трет-бутила, -CF, -CHCF, прямого или разветвленного (C-C)алкенила, -OH, -OCH, -OCHCH, -COH, -COCH, -COOH, -COOCH, -COOCHCH, -OC(O)H, -OC(O)CH, -C(O)NH, -NH, -NHCH, -N(CH), -CHNH, -CHNHCH, -SH, -SO-CH, -SO-CH, -SONH, -SONHCH, -SONHCHCH, -SON(CH), -SON(CHCH), -SON(CHCHCH), -SON(CHCHCHCH) и -SON(CHCH(CH));
при условии, что соединение отличается от N-(4-метил-6-гидроксипиримидин-2-ил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидина, N-[4,6-бис(метил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина или N-[(4-метил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина.
Еще один другой аспект настоящего изобретения касается способа получения соединения формулы I, который включает в себя взаимодействие анилина формулы (III) с цианамидом формулы (IV):
,
1
1
в которых A, R и R' представляют собой такие, как определено выше.
Подробное описание изобретения
В соответствии с вариантом осуществления первого аспекта, настоящее изобретение относится к соединениям формулы I для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками, в которой A представляет собой кольцевую систему, выбираемую из
и при этом A замещена, как определено выше, или к их соли, или к любой из их стереоизомерных форм, или их смеси, и волнистая линия обозначает место присоединения кольца к сопряженному азоту. Более предпочтительно, когда A выбирают из группы, состоящей из радикала пиридина, пиримидина и фенила; и при этом A замещена, как определено выше, или к их соли, или к любой из их стереоизомерных форм, или их смеси.
В другом варианте осуществления изобретение относится к соединениям формулы I, предназначенным для лечения патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками, в которой A представляет собой кольцевую систему, выбираемую из
1
1
и при этом A замещена одним или несколькими радикалами, как определено выше, или к их соли, или к любой из их стереоизомерных форм, или их смеси, и волнистая линия обозначает место присоединения кольца к сопряженному азоту. В еще более предпочтительном варианте осуществления изобретения, настоящее изобретение относится к соединениям формулы I для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками, в которой R и R' представляют собой такие, как определено выше; A представляет собой кольцевую систему, выбираемую из
и при этом A замещена одним или несколькими радикалами, как определено выше, или к их соли, или к любой из их стереоизомерных форм, или их смеси, и волнистая линия обозначает место присоединения кольца к сопряженному азоту.
В соответствии с вариантом осуществления первого аспекта, настоящее изобретение относится к соединениям формулы I для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками, в которой A выбирают из метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, изо-бутила, втор-бутила или н-пентила, и при этом A замещена, как определено выше, или к их соли, или к любой из их стереоизомерных форм, или их смеси.
1
6
1
6
2
6
2
2
2
2
3
4
3
4
5
6
2
2
2
2
2
3
4
В другом варианте осуществления изобретение относится к соединениям формулы I для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками, при этом кольцевая система A такая, как определено в любом из вышеприведенных вариантов осуществления изобретения, замещена одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, нитро, циано, прямого или разветвленного (C-C)алкила, галоген-(C-C)алкила, прямого или разветвленного (C-C)алкенила, -OR, -COR, -COOR, -OC(O)R, -C(O)NRR, -NRR, -RNHR, -SR, -SO-R, -SO-R и -SONRR;
в которых
2
каждый R независимо представляет собой H, метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил или трет-бутил;
3
каждый R независимо представляет собой H, метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил или трет-бутил,
4
каждый R независимо представляет собой H, метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, трет-бутил, фенил, пиридин или хинолин;
2
в которых кольцевая система фенила, пиридина и хинолина замещена одним или несколькими радикалами, выбираемыми из H, метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, трет-бутила и NH;
5
6
R и R независимо выбраны из H, метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила или трет-бутила;
или к их соли, или к любой из их стереоизомерных форм, или их смеси.
3
2
3
2
6
3
2
3
3
3
2
3
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
В другом варианте осуществления изобретение относится к соединениям формулы I для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками, в которой кольцевая система A такова, как определено в любом из вышеприведенных вариантов осуществления изобретения, замещена одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, нитро, циано, метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, трет-бутила, -CF, -CHCF, прямого или разветвленного (C-C)алкенила, -OH, -OCH, -OCHCH, -COH, -COCH, -COOH, -COOCH, -COOCHCH, -OC(O)H, -OC(O)CH, -C(O)NH, -NH, -NHCH, -N(CH), -CHNH, -CHNHCH, -SH, -SO-CH, -SO-CH, -SONH, -SONHCH, -SONHCHCH, -SON(CH), -SON(CHCH), -SON(CHCHCH), -SON(CHCHCHCH) и -SON(CHCH(CH));
или к их соли, или к любой из их стереоизомерных форм, или их смеси.
1
1
3
2
1
1
1
3
1
Другой вариант осуществления изобретения относится к соединениям формулы I для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками, в которой R и R' независимо выбраны из H, CF, NH, метила, этила, F, Cl, Br, I и OH; или к их соли, или к любой из их стереоизомерных форм, или их смеси; при условии, что, по меньшей мере, один из R и R' представляет собой отличающийся от H. Предпочтительными являются такие соединения формулы I, в которых R представляет собой CF и R' представляет собой H.
Особо предпочтительными являются такие соединения формулы Ia
,
1
1
3
2
1
1
в которой R и R' независимо выбраны из H, CF, NH, метила, этила, F, Cl, Br, I и OH; при условии, что, если R представляет собой H, тогда R' отличается от H, и наоборот;
A представляет собой такие, как определено выше в любом из вариантов осуществления изобретения; или их соль, или любая из их стереоизомерных форм, или их смесь; для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками.
1
1
3
2
1
1
3
Также предпочтительными являются такие соединения формулы Ia, в которых R' представляет собой H, и R выбирают из CF, NH, метила и этила; которые являются особо предпочтительными в случае, когда R' представляет собой H, и R представляет собой CF; для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками.
В соответствии с конкретным вариантом осуществления этого первого аспекта, в изобретении предлагаются соединения формулы Ia для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками, в которой
1
1
3
2
1
1
R и R' независимо выбраны из H, CF, NH, метила, этила, F, Cl, Br, I и OH; при условии, что, когда R представляет собой H, тогда R' отличается от H, и наоборот;
A представляет собой радикал одной из известных гетероциклических кольцевых систем с 1-2 кольцами, в которых каждое из колец, образующих кольцевую систему,
2
содержит 5-7 членов, каждый член независимо выбран из C, N, O, S, CH, CH, NH;
представляет собой насыщенное, частично ненасыщенное или ароматическое кольцо;
3
2
3
2
6
3
2
3
3
3
2
3
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
при этом A замещен одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, нитро, циано, метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, трет-бутила, -CF, -CHCF, прямого или разветвленного (C-C)алкенила, -OH, -OCH, -OCHCH, -COH, -COCH, -COOH, -COOCH, -COOCHCH, -OC(O)H, -OC(O)CH, -C(O)NH, -NH, -NHCH, -N(CH), -CHNH, -CHNHCH, -SH, -SO-CH, -SO-CH, -SONH, -SONHCH, -SONHCHCH, -SON(CH), -SON(CHCH), -SON(CHCHCH), -SON(CHCHCHCH) и -SON(CHCH(CH));
или их соль или сольват, или любая из их стереоизомерных форм, или их смесь.
1
1
3
2
1
1
В соответствии с другим вариантом осуществления, в изобретении предлагаются соединения формулы Ia для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками, в которой R и R' независимо выбраны из H, CF, NH, метила и этила; при условии, что, когда R представляет собой H, тогда R' отличается от H, и наоборот;
A выбран из группы, состоящей из радикала пиримидина, пиридина, хинолина, имидазола, бензоимидазола и пиррола, где особо предпочтительными являются такие соединения, в которых A представляет собой радикал пиримидина;
3
2
3
2
6
3
2
3
3
3
2
3
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
при этом A замещен одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, нитро, циано, метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, трет-бутила, -CF, -CHCF, прямого или разветвленного (C-C)алкенила, -OH, -OCH, -OCHCH, -COH, -COCH, -COOH, -COOCH, -COOCHCH, -OC(O)H, -OC(O)CH, -C(O)NH, -NH, -NHCH, -N(CH), -CHNH, -CHNHCH, -SH, -SO-CH, -SO-CH, -SONH, -SONHCH, -SONHCHCH, -SON(CH), -SON(CHCH), -SON(CHCHCH), -SON(CHCHCHCH) и -SON(CHCH(CH));
или их соль, или любая из их стереоизомерных форм, или их смесь.
В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления, в изобретении предлагаются соединения формулы Ia для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками, в которой
1
1
3
2
1
1
R и R' независимо выбраны из H, CF, NH, метила и этила; при условии, что, по меньшей мере, один из R и R' отличается от H; и
3
2
3
2
6
3
2
3
3
3
2
3
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
A представляет собой фенил, замещенный одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, нитро, циано, метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, трет-бутила, -CF, -CHCF, прямого или разветвленного (C-C)алкенила, -OH, -OCH, -OCHCH, -COH, -COCH, -COOH, -COOCH, -COOCHCH, -OC(O)H, -OC(O)CH, -C(O)NH, -NH, -NHCH, -N(CH), -CHNH, -CHNHCH, -SH, -SO-CH, -SO-CH, -SONH, -SONHCH, -SONHCHCH, -SON(CH), -SON(CHCH), -SON(CHCHCH), -SON(CHCHCHCH) и -SON(CHCH(CH)); или их соль, или любая из их стереоизомерных форм, или их смесь.
В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления, в изобретении предлагаются соединения формулы Ia для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками, в которой
1
1
3
2
1
1
R и R' независимо выбраны из H, CF, NH, метила и этила; при условии, что, по меньшей мере, один из R и R' отличается от H; и
1
6
3
2
3
3
2
3
3
3
2
3
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
A представляет собой прямой или разветвленный (C-C)алкил, предпочтительно выбранный из метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, изо-бутила, втор-бутила или н-пентила, который замещен одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, нитро, циано, -CF, -CHCF, -OH, -OCH, -OCHCH, -COH, -COCH, -COOH, -COOCH, -COOCHCH, -OC(O)H, -OC(O)CH, -C(O)NH, -NH, -NHCH, -N(CH), -CHNH, -CHNHCH, -SH, -SO-CH, -SO-CH, -SONH, -SONHCH, -SONH CHCH, -SON(CH), -SON(CHCH), -SON(CHCHCH), -SON(CHCHCHCH) и -SON(CHCH(CH)); или их соль, или любая из их стереоизомерных форм, или их смесь.
В особо предпочтительном варианте осуществления этого первого аспекта, изобретение относится к соединениям формулы I, которые выбираются из:
N-пиримидин-2-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (1);
N-(4-этил-6-метилпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (2);
N-(4-метил-6-пропилпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (3);
N-(4-изопропил-6-метилпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (4);
N-(4-бутил-6-метилпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (5);
N-(4-трет-бутил-6-метилпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (6);
N-(4,6-диаминопиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (7);
N-(4,6-дихлорпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (8);
N-(4,6-дифторпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (9);
N-[4-метил-6-(трифторметил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (10);
N-(4-циано-6-метилпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (11);
N-(5-метилпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (12);
N-(4-хлор-6-метилпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (13);
N-(4-фтор-6-метилпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (14);
N-(4-фторпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (15);
N-(5-фторпиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (16);
N-[4,6-бис(трифторметил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (17);
N-(4,6-дицианопиримидин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (18);
N-пиридин-2-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (19);
N-пиридин-3-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (20);
N-пиридин-4-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (21);
N-пиримидин-4-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (22);
N-пиримидин-5-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (23);
N-(4,6-диметилпиридин-2-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (24);
N-(3,5-диметилфенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (25);
N-(2,6-диметилпиридин-4-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (26);
N-фенил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (27);
2-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-диметилбензолсульфонамида (28);
2-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-диэтилбензолсульфонамида (29);
2-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-дипропилбензолсульфонамида (30);
2-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-дибутилбензолсульфонамида (31);
3-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-диметилбензолсульфонамида (32);
3-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-диэтилбензолсульфонамида (33);
3-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-дипропилбензолсульфонамида (34);
3-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-дибутилбензолсульфонамида (35);
4-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-диметилбензолсульфонамида (36);
4-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-диэтилбензолсульфонамида (37);
4-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-дипропилбензолсульфонамида (38);
4-[(имино{[2-(трифторметил)фенил]амино}метил)амино]-N,N-дибутилбензолсульфонамида (39);
N-(2-нитрофенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (40);
N-(3-нитрофенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (41);
N-(4-нитрофенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (42);
N-2-тиенил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (43);
N-3-тиенил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (44);
N-1H-пиррол-2-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (45);
N-1H-пиррол-3-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (46);
N-2-фурил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (47);
N-3-фурил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (48);
N-1,3-оксазол-2-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (49);
N-1,3-тиазол-2-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (50);
N-1H-имидазол-2-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (51);
N-изоксазол-5-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (52);
N-1H-бензимидазол-2-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (53);
N-(3,4-диметилизоксазол-5-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (54);
N-(2-аминофенил)-N'-(4,6-диметилпиримидин-2-ил)гуанидина (55);
N-(4,6-диметилпиримидин-2-ил)-N'-(3-этилфенил)гуанидина (56);
1-(4-(4-амино-2-метилхинолин-7-иламино)пиримидин-2-ил)-3-(2-(трифторметил)фенил)гуанидина (57);
N-(4-амино-2-метилхинолин-7-ил)-N'-[2-(трифторметил)фенил] гуанидина (58);
N-хинолин-7-ил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (59);
N-метил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (60);
N-этил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (61);
Н-пропил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (62);
N-бутил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (63);
N-(2-метилфенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (64) и
N-[4,6-бис(метил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (65).
Особо предпочтительные соединения формулы I представляют собой N-[4,6-бис(метил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (65), N-(3,5-диметилфенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (25), N-фенил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (27), N-(3-нитрофенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (41), N-[4-метил-6-(трифторметил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (10) и N-(2-метилфенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (64).
На всем протяжении настоящего описания под термином "лечение" подразумевается устранение, ослабление или нейтрализация причины, результатов воздействия или прогрессирования патологического состояния; и учитывается снижение скорости развития, прекращение скорости развития, нейтрализация патологического состояния, и излечение патологического состояния. Лечение как профилактическая мера (например, профилактика) также учитывается. Термин "лечение" включает комбинирование лечебных процедур и терапии медикаментами, при котором два или несколько лечебных процедур или медикаментов комбинируют, например, последовательно или одновременно. Примеры лечебных процедур и терапии медикаментами включают, но не ограничиваются только приведенными, химиотерапию (введение активных средств, включая, например, лекарства, антитела (например, как в случае иммунотерапии), пролекарства (например, как в случае фотодинамической терапии, GDEPT, ADEPT и др.); хирургическое вмешательство; лучевую терапию; и генную терапию. Для целей этого изобретения лечение включает, но не ограничивается только приведенным, облегчение, уменьшение интенсивности или устранение одного или нескольких симптомов патологического состояния; снижение распространения патологического состояния; стабилизацию (т.e. отсутствие усугубления) статуса патологического состояния; задержку или замедление прогрессирования патологического состояния; уменьшение интенсивности или временное облегчение статуса патологического состояния; и ремиссию патологического состояния (либо частичную, либо полную).
Как показано ниже, соединения формулы I представляют собой ингибиторы Rho GTPазного клеточного белка, а именно, Rac1 клеточного белка, которые пригодны для применения при лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазным клеточным белком, предпочтительно, патологического состояния, опосредованного Rac1 клеточным белком.
Термин "заболевание, опосредованное Rac1 клеточным белком", при использовании в контексте данного описания, имеет отношение к патологическому состоянию, при котором Rac1 клеточный белок и/или действие Rac1 является важным или необходимым, например, для начала, развития, экспрессии и др. этого патологического состояния.
В связи с тем, что Rho-GTPазные киназы, как известно, играют центральную роль в клеточном цикле, и, в частности, это касается Rac1, то в предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения те заболевания, патологические состояния и/или нарушения, которые могут быть предотвращены, улучшены или вылечены с помощью соединений настоящего изобретения, представляют собой пролиферативные заболевания. При заболевании рассматривается получение положительного результата от снижения активности Rho-GTPазы, в частности, активности Rac1, в том случае, если снижение активности Rac1 составляет, по меньшей мере, 10%, предпочтительно, по меньшей мере, 20%, предпочтительно, по меньшей мере, 30%, что приводит к положительной динамике, по меньшей мере, одного клинического показателя этого заболевания. Примерами таких показателей являются скорость пролиферации, которая, предпочтительно, снижается, клеточная дифференцировка, которая, предпочтительно, стимулируется и др.
Дополнительное предпочтение также заключается в том, что пролиферативные заболевания выбираются из группы, состоящей из предракового состояния; дисплазии; метаплазии; карцином желудочно-кишечного или колоректального тракта, печени, поджелудочной железы, почек, мочевого пузыря, предстательной железы, эндометрия, яичников, семенников, меланомы, диспластической слизистой оболочки полости рта, инвазивных раковых заболеваний ротовой полости, мелкоклеточного и немелкоклеточного рака легких, гормонозависимого рака молочной железы, гормононезависимого рака молочной железы, переходноклеточного и плоскоклеточного рака, неврологических злокачественных опухолей, включая нейробластому, глиомы, глиобластому, астроцитомы, остеосарком, сарком мягких тканей, гемангиом, эндокринологических опухолей, опухолей кроветворной системы, включая лейкемии, лимфомы, и других миелопролиферативных и лимфопролиферативных заболеваний, карцином in situ, гиперпластических патологических изменений, аденом, фибром, гистиоцитозов, хронических воспалительных пролиферативных заболеваний, сосудистых пролиферативных заболеваний и индуцированных вирусами пролиферативных заболеваний, кожных заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией кератиноцитов и/или Т клеток. Особо предпочтительные заболевания, поддающиеся лечению соединениями настоящего изобретения, представляют собой глиобластому, колоректальный рак, рак яичников, рак предстательной железы и рак желудка, и аденокарциномы, более предпочтительны инвазивные аденокарциномы.
Таким образом, в настоящем изобретении также предлагаются активные соединения, которые представляют собой антипролиферативные средства. Термин "антипролиферативное средство", при использовании в настоящем описании, относится к соединению, которое лечит пролиферативное патологическое состояние (т.e., соединение, которое пригодно к использованию при лечении пролиферативного патологического состояния).
Термины "пролиферация клеток", "пролиферативное патологическое состояние", "пролиферативное нарушение" и "пролиферативное заболевание", используются поочередно в данном описании и имеют отношение к нежелательной или к неконтролируемой клеточной пролиферации излишних или аномальных клеток, которая неблагоприятна, к такой как, неопластический или гиперпластический нарост, будь то in vitro, или in vivo. Примеры пролиферативных патологических состояний включают, но не ограничиваются только здесь приведенными, доброкачественную, предраковую и злокачественную клеточную пролиферацию, и злокачественную опухолевую клеточную пролиферацию, включая, но не ограничиваясь только здесь приведенными, неоплазмы и опухолевые новообразования (например, гистиоцитома, глиома, астроцитома, остеома), злокачественные новообразования (например, рак легких, мелкоклеточный рак легких, рак желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, рак толстой кишки, карцинома молочной железы, карцинома яичника, рак предстательной железы, рак яичка, рак печени, рак почки, рак мочевого пузыря, рак поджелудочной железы, рак мозга, саркома, остеосаркома, саркома Капоши, меланома), лейкемии, псориаз, остеопатию, фибропролиферативные нарушения (например, соединительных тканей), и атеросклероз.
В качестве субъекта лечения может быть эукариотический организм, животное, позвоночное животное, млекопитающее, грызуны (например, морская свинка, хомяк, крыса, мышь), мышевидное животное (например, мышь), животное из семейства псовых (например, собака), животное из семейства кошачьих (например, кот), животное из семейства лошадиных (например, лошадь), примат, обезьяноподобное животное (например, мартышка или человекообразная обезьяна), макак (например, обезьяна-игрунка, павиан), человекообразная обезьяна (например, горилла, шимпанзе, орангутан, гиббон) или человек. Предпочтительно, когда субъектом для лечения является человек.
Кроме того, настоящее изобретение охватывает все возможные комбинации специфических и предпочтительных групп, вышеуказанных в данном описании.
Лечение, которому дано определение выше в данном описании, может применяться на практике как монотерапия или может включать, в дополнение к соединению изобретения, стандартное хирургическое вмешательство или лучевую терапию, или химиотерапию.
Также предлагается соединение формулы I для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rac1 клеточными белками, при этом лечение включает введение субъекту одновременно, последовательно или раздельно, по меньшей мере, одного соединения формулы I, как определено выше, и
i) одного или нескольких противоопухолевых препаратов, предпочтительно выбираемых из
гемцитабина, паклитаксела, доцетаксела, капецитабина, децитабина, карбоплатина, цисплатина, винорелбина, иринотекана, доксорубицина, дакарбазина, ритуксимаба или их производных;
ii) лучевую терапию;
iii) стандартное хирургическое вмешательство;
iv) или их смесей.
Далее, также предлагается способ лечения патологического состояния, опосредованного Rac1 клеточными белками, включающий введение одновременно, последовательно или раздельно в организм человека или животного, страдающего от такого патологического состояния, терапевтически эффективного количества, по меньшей мере, одного соединения формулы I, как определено выше, и
i) одного или нескольких противоопухолевых препаратов, предпочтительно выбираемых из
гемцитабина, паклитаксела, доцетаксела, капецитабина, децитабина, карбоплатина, цисплатина, винорелбина, иринотекана, доксорубицина, дакарбазина, ритуксимаба или их производных;
ii) лучевую терапию;
iii) стандартное хирургическое вмешательство;
iv) или их смесей.
Далее, предлагается применять комбинированный лекарственный препарат, включающий, по меньшей мере, одно соединение формулы I и
i) один или несколько противоопухолевых препаратов, предпочтительно выбираемых из
гемцитабина, паклитаксела, доцетаксела, капецитабина, децитабина, карбоплатина, цисплатина, винорелбина, иринотекана, доксорубицина, дакарбазина, ритуксимаба или их производных;
ii) лучевую терапию;
iii) стандартное хирургическое вмешательство;
iv) или их смесей;
для лечения патологического состояния, опосредованного Rac1 клеточными белками.
Альтернативно, предлагается соединение формулы I для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rac1 клеточными белками, в комбинированной терапии, которая включает применение соединения формулы I и
i) одного или нескольких противоопухолевых препаратов, предпочтительно выбираемых из
гемцитабина, паклитаксела, доцетаксела, капецитабина, децитабина, карбоплатина, цисплатина, винорелбина, иринотекана, доксорубицина, дакарбазина, ритуксимаба или их производных;
ii) лучевую терапию;
iii) стандартное хирургическое вмешательство;
iv) или их смесей.
Как указано выше, в настоящем изобретении также предлагаются новые соединения формулы II.
Отмечалось, что общая формула I охватывает такие соединения формулы II. Вследствие этого, соединения формулы II также пригодны для применения в лечении патологического состояния, опосредованного Rho GTPазными клеточными белками, в частности, Rac1 клеточными белками.
3
2
3
2
6
3
2
3
3
3
2
3
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
В соответствии с вариантом осуществления изобретения, предлагаются новые соединения формулы II, в которой A представляет собой фенил, замещенный одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, нитро, циано, метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, трет-бутила, -CF, -CHCF, прямого или разветвленного (C-C)алкенила, -OH, -OCH, -OCHCH, -COH, -COCH, -COOH, -COOCH, -COOCHCH, -OC(O)H, -OC(O)CH, -C(O)NH, -NH, -NHCH, -N(CH), -CHNH, -CHNHCH, -SH, -SO-CH, -SO-CH, -SONH, -SONHCH, -SONHCHCH, -SON(CH), -SON(CHCH), -SON(CHCHCH), -SON(CHCHCHCH) и -SON(CHCH(CH)); или их соль, или любая из их стереоизомерных форм, или их смеси.
Другой вариант осуществления изобретения относится к соединениям формулы II, в которой A представляет собой гетероциклическую кольцевую систему с 1-2 кольцами, в которых каждое из колец, образующих кольцевую систему,
2
содержит 5-7 членов, каждый член независимо выбран из C, N, O, S, CH, CH, NH;
представляет собой насыщенное, частично ненасыщенное или ароматическое;
3
2
3
2
6
3
2
3
3
3
2
3
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
при этом A замещен одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, нитро, циано, метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, трет-бутила, -CF, -CHCF, прямого или разветвленного (C-C)алкенила, -OH, -OCH, -OCHCH, -COH, -COCH, -COOH, -COOCH, -COOCHCH, -OC(O)H, -OC(O)CH, -C(O)NH, -NH, -NHCH, -N(CH), -CHNH, -CHNHCH, -SH, -SO-CH, -SO-CH, -SONH, -SONHCH, -SONHCHCH, -SON(CH), -SON(CHCH), -SON(CHCHCH), -SON(CHCHCHCH) и -SON(CHCH(CH)); или к их соли, или к любой из их стереоизомерных форм, или их смеси;
при условии, что соединение не может представлять собой N-(4-метил-6-гидрокси-пиримидин-2-ил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидин, N-[4,6-бис(метил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин или N-[(4-метил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин.
В более предпочтительном варианте осуществления, в настоящем изобретении предложены соединения формулы II, в которой A выбран из группы, состоящей из радикалов пиримидина, пиридина, хинолина, имидазола, бензоимидазола и пиррола;
3
2
3
2
6
3
2
3
3
3
2
3
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
при этом A замещен одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, нитро, циано, метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, трет-бутила, -CF, -CHCF, прямого или разветвленного (C-C)алкенила, -OH, -OCH, -OCHCH, -COH, -COCH, -COOH, -COOCH, -COOCHCH, -OC(O)H, -OC(O)CH, -C(O)NH, -NH, -NHCH, -N(CH), -CHNH, -CHNHCH, -SH, -SO-CH, -SO-CH, -SONH, -SONHCH, -SONHCHCH, -SON(CH), -SON(CHCH), -SON(CHCHCH), -SON(CHCHCHCH) и -SON(CHCH(CH)); или их соль, или любая из их стереоизомерных форм, или их смесь;
при условии, что соединение не может представлять собой N-(4-метил-6-гидрокси-пиримидин-2-ил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидин, N-[4,6-бис(метил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин или N-[(4-метил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин.
3
2
3
2
6
3
2
3
3
3
2
3
3
2
2
3
3
2
2
2
2
3
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
2
Особо предпочтительными являются такие соединения II, в которых присутствует радикал пиримидина; представляющий собой радикал A, замещенный одним или несколькими радикалами, выбранными из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, нитро, циано, метила, этила, н-пропила, изо-пропила, н-бутила, трет-бутила, -CF, -CHCF, прямого или разветвленного (C-C)алкенила, -OH, -OCH, -OCHCH, -COH, -COCH, -COOH, -COOCH, -COOCHCH, -OC(O)H, -OC(O)CH, -C(O)NH, -NH, -NHCH, -N(CH), -CHNH, -CHNHCH, -SH, -SO-CH, -SO-CH, -SONH, -SONHCH, -SONH CHCH, -SON(CH), -SON(CHCH), -SON(CHCHCH), -SON(CHCHCHCH) и -SON(CHCH(CH)); или их соль, или любая из их стереоизомерных форм, или их смесь;
при условии, что соединение не может представлять собой N-(4-метил-6-гидрокси-пиримидин-2-ил)-N'-(2-трифторметилфенил)гуанидин, N-[4,6-бис(метил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин или N-[(4-метил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин.
Соединения N-(3,5-диметилфенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (25), N-фенил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (27), N-(3-нитрофенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (41), N-[4-метил-6-(трифторметил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (10) и N-(2-метилфенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (64) представляют собой конкретные примеры предпочтительных соединений формулы II.
В том случае, когда соединения, в соответствии с настоящим изобретением, представлены в форме солей, они представляют собой, предпочтительно, фармацевтически приемлемые соли. Такие соли включают фармацевтически приемлемые соли, образованные добавлением кислоты, фармацевтически приемлемые соли, образованные добавлением основания, фармацевтически приемлемые соли металла, соли аммония и соли алкиламмония.
В дополнение к солевым формам, в настоящем изобретении предложены соединения, которые находятся в форме пролекарств. Пролекарства соединений, описанные в этом документе, представляют собой такие соединения, которые непосредственно после введения субъекту претерпевают химическое превращение посредством метаболических или химических процессов с получением соединения формулы (I) и/или его соли и/или его сольвата. Пролекарство представляет собой фармакологически активное или пассивное соединение, которое химически модифицируется in vivo посредством физиологического действия, такого как гидролиз, метаболическая биотрансформация и им подобные, в соединение этого изобретения после введения пролекарства пациенту. В дополнение к этому, пролекарства могут быть превращены в соединения настоящего изобретения с помощью химических или биохимических способов вне организма в условиях ex vivo. Например, пролекарства можно медленно превратить в соединения настоящего изобретения, если поместить их в содержимое слоя трансдермального пластыря с подходящим ферментом. Возможность применения и технологические приемы, задействованные в изготовлении и применении пролекарств, хорошо известны специалисту в данной области техники.
Все стереоизомеры соединений настоящего изобретения, такие, например, которые могут существовать благодаря наличию асимметрических углеродов у любых заместителей, включая энантиомерные формы (которые могут существовать даже при отсутствии асимметрических углеродов) и диастереоизомерные формы, рассматриваются и находятся в рамках предпочтительных вариантов осуществления изобретения. Также индивидуальные стереоизомеры, которые могут быть, например, практически свободными от других изомеров или могут быть в смеси, например, как рацематы, или со всеми другими выделенными стереоизомерами, подразумеваются охваченными рамками настоящего изобретения.
Определенные соединения настоящего изобретения могут существовать в несольватированных формах, а также и в сольватированных формах, включающих гидратные формы, и рассматриваются как охватываемые рамками настоящего изобретения. Определенные соединения настоящего изобретения могут существовать в виде многочисленных кристаллических или аморфных форм. Вообще говоря, все физические формы являются равноценными для применений, предусмотренных настоящим изобретением, и их следует рассматривать в рамках настоящего изобретения.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, которая включает в свой состав соединение настоящего изобретения (или его фармацевтически приемлемую соль), в соответствии с формулой II, и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей. Носители должны быть "фармацевтически приемлемые" в смысле совместимости с другими ингредиентами композиции и отсутствия вредности для принимающего их пациента.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим в свой состав, по меньшей мере, одно соединение формулы II, как определено в этом документе, по меньшей мере, одно или несколько дополнительных терапевтически активных веществ и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей.
Термин "фармацевтически приемлемые" при использовании в данном описании, имеет отношение к соединениям, веществам, композициям и/или готовым лекарственным формам, которые, в рамках результатов тщательной медицинской оценки, являются пригодными для применения в контакте с тканями субъекта (например, человека) без превышения нормы по токсичности, по чувствительности к раздражающему воздействию, по аллергической реакции или без других проблем или осложнений, при соизмеримости с допустимым соотношением польза/риск. Каждый носитель, эксципиент и др., также должен быть "приемлемым", в смысле совместимости с другими ингредиентами лекарственной формы. Подходящие носители, эксципиенты и др. можно найти в стандартных фармацевтических руководствах.
Термин "терапевтически эффективное количество", при использовании в данном описании, относится к такому количеству активного соединения или вещества, композиции или готовой лекарственной формы, включающей активное вещество, которое эффективно для того, чтобы вызвать некоторый желательный терапевтический эффект.
Соединения настоящего изобретения могут быть введены в лекарственной форме с любой фармацевтической композицией, характерные особенности которой, как известно, будут зависеть от характерных особенностей активного вещества и способа его введения. Любой способ введения может использоваться, например, оральное, парентеральное, назальное, окулярное, ректальное и топическое введение. Специалист в данной области техники будет устанавливать, принимая во внимание существующие познания, обязательные параметры и вспомогательные вещества - эксципиенты.
Соединения настоящего изобретения могут применяться, по существу, аналогичным способом, как и другие известные противоопухолевые средства, для лечения (как химиопрофилактически, так и терапевтически) различных злокачественных опухолевых заболеваний. Противоопухолевая доза, которую следует вводить, будь то одноразовая доза, многократная доза или суточная доза, конечно же, будет изменяться в зависимости от того, какое конкретное соединение применяется, в зависимости от выбранного способа введения, массы тела и площади поверхности тела реципиента, типа опухоли и физического состояния пациента, и стадии заболевания, и ряда других факторов. Дозировка, которую следует соблюдать при введении, не является предметом обсуждения для определения границ нормы, но, как обычно, будет установлено эффективное количество или базовое значение молярного эквивалента для фармакологически активной свободной формы, полученной из дозированной лекарственной формы в результате метаболического высвобождения активного лекарственного вещества, необходимое для достижения ожидаемых от него фармакологических и физиологических воздействий. Квалифицированный доктор, будучи специалистом в области лечения злокачественных новообразований, способен установить подходящие лечебные протоколы для эффективного введения соединений при предпочтительных вариантах осуществления изобретения. Типичный пример подходящего диапазона дозировок представляет собой значения от, приблизительно, 0,01 мг/кг до, приблизительно, 100 мг/кг в сутки, которые могут быть введены в виде одноразовой дозы или раздельными дозами.
Также объемом изобретения охватывается процесс получения соединения формулы I, как описано выше, который включает реагирование анилина формулы (III) с цианамидом формулы (IV):
,
1
1
в которых A, R и R' представляют собой такие, как определено в п. 1 Формулы изобретения.
Следует отметить, что общие методики представлены таким образом, что они относятся к получению соединения, имеющего точно не установленную стереохимию. И все-таки, такие методики представляют собой обычно применяемые для таких соединений с определенной стереохимией, например, для соединений, в которых стереохимия при хиральном центре представляет собой (S) или (R). Кроме того, соединения, обладающие одной стереохимией (например, (R)), часто могут использоваться для получения таких соединений, которые обладают противоположной стереохимией (т.e., (S)), посредством применения хорошо известных способов, например, инверсии. То же самое применимо и для Z/E энантиомеров.
1
6
1
6
Термин "(C-C)алкил" при использовании в данном описании относится к разветвленной или прямой насыщенной углеводородной цепи, имеющей от 1 до 6 углеродных атомов, связанных с водородами. Предпочтительно, когда "(C-C)алкил" представляет собой незамещенную группу, выбираемую из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, изобутила, втор-бутила и трет-бутила.
1
6
1
6
1
6
1
6
Термин "(C-C)-алкокси" при использовании в данном описании относится к разветвленной или прямой насыщенной углеводородной цепи, имеющей от 1 до 6 углеродных атомов, связанных с водородами, (т.e. (C-C)алкильные группы, как определено выше, связаны с кислородом, отсюда и (C-C)алкил-O). Предпочтительно, когда "(C-C)-алкокси" представляет собой незамещенную группу, выбираемую из метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, втор-бутокси и трет-бутокси.
Термин "галоген" понимается как включающий фтор, хлор, бром и иод.
Везде, в описании и формуле изобретения, слово "включать" и вариации этого слова, не предназначены для исключения других технических характеристик, добавок, компонентов и стадий. Дополнительные объекты, преимущества и характеристики изобретения будут очевидными для того, кто является специалистом в данной области техники, в результате изучения описания или они могут быть освоены при практическом осуществлении изобретения.
Нижеприведенные примеры и чертежи представлены в качестве иллюстрации, и они не предназначены для ограничения настоящего изобретения. К тому же изобретение распространяется на все возможные комбинации конкретных и предпочтительных вариантов осуществления изобретения, описанных в данном документе.
Краткое описание чертежей
На Фиг. 1 показано антипролиферативное действие соединений (65) и (25) на LN229 (A), MDA-MB-231 (B) и F3II (C).
На Фиг. 2 показано воздействие соединения (65) на Rac-Tiam комплекс.
На Фиг. 3 показано исследование подавления соединениями (65) и (25) клеток LN229 человеческой глиобластомы. Вестерн-блоттинг анализ показал уровни активации внутриклеточного Rac порядка 10 мкΜ.
На Фиг. 4 показаны уровни фосфорилирования PAK после обработки соединением (65) при различных дозах.
На Фиг. 5 показана реорганизация актинового цитоскелета у клеток LN229 человеческой глиобластомы.
На Фиг. 6 показано исследование Trans-well трансмембранной миграции клеток LN229 человеческой глиобластомы.
**
На Фиг. 7 показано воздействие соединения (65) на клеточный цикл клеток LN229 человеческой глиобластомы. Р<0,001 ANOVA с Dunnett's тестом множественного сравнения.
На Фиг. 8 показано антипролиферативное действие соединений (65), (25), (27), (41) и (64) на клетки LN229 человеческой глиобластомы.
*
На Фиг. 9 показано антиметастатическое действие соединения (25) на F311 клетки. Результаты трех независимых экспериментов представлены вместе. P<0,05 Mann-Whitney тест.
Примеры
1
13
Все реагенты были коммерчески доступными. Точки плавления определяли на Electrothermal IA9000 Series (при температурном градиенте 1°C/мин) без коррекции. Хроматографические очистки осуществляли на приборе колоночной флэш-хроматографии Teledyne Isco CombiFlash Companion, оснащенном сменными колонками Redisep, используя в качестве мобильной фазы смеси растворителей с возрастающей полярностью. H и C ЯМР-спектры регистрировали на Bruker ADVANCE DPX-400. Микроанализ выполняли с помощью UNYMFOR (CONICET-FCEyN). Масс-спектры низкого разрешения регистрировали на приборе Shimadzu QP2010. ИК-спектры регистрировали на приборе Nicolet Impact 400.
Пример 1. Получение N-(3,5-диметилфенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (25)
Озаглавленное соединение получали в соответствии с нижеприведенным способом:
2
4
Эквимолярное количество соединений хлоргидрата 3,5-диметиланилина (126 мг, 0,80 ммоль) и N-(2-(трифторметил)фенил)цианамида (149 мг, 0,80 ммоль) в виде раствора в абсолютном этаноле (2,5 мл) нагревали с обратным холодильником до кипения при перемешивании в течение 16 ч. Водный раствор NaOH (0,5 M, 2,2 мл) добавляли до достижения pH 9. Смесь экстрагировали дихлорметаном (3×3 мл). Органические фазы сушили с помощью NaSO и фильтровали. Растворитель упаривали, получая 225 мг (выход 92%) озаглавленного соединения. Неочищенный продукт подвергали очистке посредством колоночной хроматографии, элюируя смесью гексан:этилацетат с градиентом (1:4-0:10) в присутствии 0,01% триэтиламина, получая 138 мг (выход 56%) чистого соединения (25) в виде твердого вещества белого цвета, Т.пл. 127єC.
1
13
-1
+
+
3
3
3
16
16
3
3
H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ 7,63 (д, J=6,5 Гц, 1H), 7,44 (м, 1H), 7,08 (м, 2H), 6,84 (с, 2H), 6,77 (с, 1H), 4,27 (ca, 2H), 2,28 (с, 6H). C ЯМР (100 MГц, CDCl) δ 149,43, 147,59, 139,12, 132,79, 126,90 (кв., J=5 Гц), 125,97, 125,31, 124,39 (кв., J=272 Гц), 123,79 (кв., J=29 Гц), 122,12, 120,36, 21,28. ИК (см), 3476, 3372, 1648, 1560, 1316. МS (m/z, относительная интенсивность) 307 (M, 23), 238 (M-CF, 6), 121 (100). Элементный анализ: Рассчитано для CHFN: %C, 62,35; %H, 5,07; %N, 13,24. Найдено: %C, 62,53; %H, 5,25; %N, 13,67.
Соединения (27), (41) и (64) получали аналогичным путем, реагированием соответствующего анилина с соответствующим цианамидом.
N-фенил-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (27).
1
13
-1
+
+
3
3
3
14
12
3
3
2
Выход: 66%. Твердое вещество белого цвета, Т.пл.=108-109°C. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ 7,62 (д, J=6,5 Гц, 1H), 7,44 (м, 1H), 7,30-7,21 (м, 4H), 7,08 (м, 2H), 4,92 (сa, 2H). C ЯМР (100 MГц, CDCl) δ 149,12, 147,04, 139,40, 132,86, 129,42, 126,94 (кв., J=5 Гц), 125,18, 124,34 (кв., J=272 Гц), 124,23, 123,79 (кв., J=29 Гц), 122,55, 122,37. ИК (см), 3379, 1647, 1549, 1318. МS (m/z, относительная интенсивность) 279 (M, 26), 210 (M-CF, 7), 93 (100). Элементный анализ: Рассчитано для CHFN•0,25HO: %C, 59,26; %H, 4,44; %N, 14,81. Найдено: %C, 59,68; %H, 4,14; %N, 14,42.
N-(3-нитрофенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (41).
1
13
-1
+
+
3
3
3
3
Выход: 60%. Твердое вещество желтого цвета. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ 8,16 (с, 1H), 7,87 (д, J=7,9 Гц, 1H), 7,70 (м, 1H), 7,66 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,50 (т, J=7,7 Гц, 1H), 7,45 (т, J=7,9 Гц, 1H), 7,21-7,14 (м, 2H), 4,18 (ca, 2H). C ЯМР (100 MГц, CDOD CDCl) δ 148,48, 148,29, 146,28, 142,09, 132,35, 128,96, 126,28 (кв., J=5 Гц), 125,25, 124,45, 123,98 (кв., J=272 Гц), 123,15 (кв., J=29 Гц), 122,02, 115,98, 113,96. ИК (см), 3437, 3336, 1656, 1520, 1318, 1105. МS (m/z, относительная интенсивность) 324 (M, 75), 255 (M-CF, 48), 138 (100).
N-(2-метилфенил)-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидин (64).
1
13
-1
+
+
3
3
3
3
Выход: 87%. Твердое вещество белого цвета, Т.пл.=129°C. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ 7,84 (д, J=7,9 Гц, 0,5H), 7,62 (д, J=7,8 Гц, 1H), 7,58 (д, J=7,9 Гц, 0,5H), 7,48 (м, 1,5H), 7,33 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,23-7,10 (м, 3,5H), 4,34 (сa, 2H), 2,29 (с, 3H). C ЯМР (100 MГц, CDOD-CDCl) δ 158,08, 151,61, 146,84, 137,71, 136,55, 134,10, 133,18, 132,83, 131,26, 127,12, 127,06 (кв., J=5 Гц), 126,44, 126,32, 124,61 (кв., J=29 Гц), 124,60 (кв., J=272 Гц), 124,31, 123,06, 17,52. ИК (см), 3438, 3409, 1645, 1592, 1316. МS (m/z, относительная интенсивность) 293 (M, 35), 224 (M-CF, 6), 107 (100).
*
Сигналы двух конформеров регистрируются.
1
Получение N-[4,6-бис(метил)пиримидин-2-ил]-N'-[2-(трифторметил)фенил]гуанидина (65) осуществляли нижеприведенным способом, описанным в Chin. J. Chem. 2008, 1481.
1
1
1
1
13
-1
+
3
3
3
14
15
3
5
14
14
3
5
2
.
Цианогуанидин (10 г, 0,12 моль), ацетилацетон (17,2 мл, 0,17 моль) обрабатывали 2M NaOH (5,7 мл) в воде (74 мл). Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 18 ч. Смесь охлаждали вплоть до комнатной температуры и затем до 0°C при перемешивании в течение 2 ч. Закристаллизовавшееся твердое вещество отделяли и сушили при 50°C, получая 14,2 г твердого вещества розового цвета. Неочищенное твердое вещество перекристаллизовывали из этанола, получая 10,2 г (выход 58%) N-(4,6-диметилпиримидин-2-ил)цианамида в виде твердого вещества белого цвета: Т.пл. 230-231°C, (лит.. 230-231єC), H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 6,43 (с, 1H), 4,36 (ушир.с, 1H), 3,26 (с, 6H). Это промежуточное соединение реагировало с эквимолярным количеством 2-(трифторметил)анилина гидрохлорида (13,6 г, 69,12 ммоль) при кипячении смеси с обратным холодильником в этаноле (150 мл) в течение 20 ч. Смесь оставляли до достижения ею комнатной температуры и значение pH доводили до 12-13 посредством добавления 0,5M NaOH водного раствора (45 мл). Полученное твердое вещество отделяли и перекристаллизовывали из смеси этанол:вода (1:1), в результате получая 5,4 г чистого соединения (65) в виде кристаллического твердого вещества белого цвета: Т.пл.=161-162°C (лит. 149-151°C). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ 7,63 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,45 (т, J=7,6 Гц, 1H), 7,08 (м, 2H), 6,57 (с, 1H), 2,35 (с, 6H). C ЯМР (100 MГц, CDCl) δ 149,43, 147,59, 139,12, 132,79, 126,90 (кв., J=5 Гц), 125,97, 125,31, 124,39 (кв., J=272 Гц), 123,79 (кв., J=29 Гц), 122,12, 120,36, 21,28ИК (см): 3443, 3213, 1662. Масс-спектрометрия высокого разрешения (ионизация электрораспылением) (HRMS (ESI)): рассчитано для CHFN (MH): 310,1274, найдено: 310,1265. Элементный анализ: Рассчитано для CHFN•0,2HO: %C, 53,74; %H, 4,64; %N, 22,38. Найдено: %C, 54,03; %H, 4,57; %N, 21,98.
1-(4-метил-6-(трифторметил)пиримидин-2-ил)-3-(2-трифторметил)фенил)гуанидин (10):
1
13
-1
+
+
+
3
3
3
14
11
6
5
Это соединение было получено согласно методике, описанной для соединения (65), с использованием 1,1,1-трифтор-2,4-пентандиона вместо 2,4-пентандиона (Chin. J. Chem. 2008, 1481). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ 7,67 (д, J=6,5 Гц, 1H), 7,51 (т, J=7,7 Гц, 1H), 7,19 (м, 2H), 6,96 (с, 1H), 2,43 (с, 3H). C ЯМР (100 MГц, CDCl) δ 171,23, 60,05, 155,21, 150,63, 146,03, 132,79, 126,97 (кв., J=5 Гц), 125,52, 123,96 (кв., J=272 Гц), 123,21 (м), 120,30 (кв., J=275 Гц), 108,48, 24,30. ИК (см): 3492, 3311, 1668, 1557, 1316. МS (m/z, относительная интенсивность) 363 (M, 91), 362 (M-H, 100), 294 (M-CF, 92). Элементный анализ: Рассчитано для CHFN: %C, 46,29, %H, 3,05, %N, 19,27. Найдено: %C, 46,32, %H, 3,04, %N, 18,98.
Пример 2. Исследование пролиферации
Клетки поддерживались в монослойной культуре с соответствующей питательной средой, дополненной 5% фетальной бычьей сывороткой (FBS), предварительно инактивированной нагреванием, 2 мM глутамином и 80 мг/мл гентамицином.
Клетки обрабатывали в течение 72 часов, в присутствии FBS 10%, различными дозами соединений в 96 лунках при плотности 2500 клеток/в лунке. Клеточный рост оценивался посредством MTT теста, для проведения которого к клеточным монослоям добавляли MTT, инкубировали и ресуспендировали в ДМСО. В конечном итоге число клеток определяли, измеряя численное значение поглощения при 570 нм.
Соединение (65) в качестве типичного примера соединений, ингибирующих Rac1, в соответствии с настоящим изобретением тестировали в исследованиях пролиферации, которые выполняли на нижеприведенных клеточных линиях злокачественных новообразований: F3II (мышиная карцинома молочной железы), 3LL (мышиная карцинома легкого), LN229 (человеческая глиобластома), MCF7 (человеческая карцинома молочной железы), H125 (человеческая карцинома легкого), PC3 (человеческая аденокарцинома предстательной железы) и MDA-MB-231 (человеческая карцинома молочной железы).
50
50
50
Уровень пролиферации определяли после 72-часовой (ч) инкубации соединения (65) в различных концентрациях (200 мкМ, 100 мкМ, 50 мкМ, 25 мкМ и 1 мкΜ) в присутствии 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), с целью определения 50% ингибирующей концентрации (IC). Концентрацию, вызывающую 50%-ое ингибирование (IC), определяли по уравнению нелинейной регрессии GraphPad Prism5. Представленные результаты соответствуют среднему значению из трех независимых экспериментов. Значения IC представлены в Таблице 1.
50
Другие соединения, в соответствии с формулой I, также были протестированы на LN229 клетках. Значения IC (мкМ), полученные при этом, представлены в Таблице 2.
50
Соединение (25) также было протестировано на F3II и MDA-MB-231 клетках. Значения IC (мкМ), полученные при этом, представлены в Таблице 3.
На Фиг. 1 показаны кривые зависимости доза-эффективность ответной реакции для соединений (65) и (25) при воздействии на пролиферативную способность трех клеточных линий злокачественных новообразований: (A) F3II (мышиная карцинома молочной железы), (B) LN229 (человеческая глиобластома), (C) MDA-MB-231 (человеческая карцинома молочной железы).
Пример 3. Ингибирование уровней Rac1 активации (подавление)
Это исследование заключается в определении ингибирующей способности соединений изобретения в отношении уровней внутриклеточного активного Rac1 (Rac-GTP). Для определения уровней Rac-GTP использовали исследования "подавления", которые основаны на конформационном связывании Rac-GTP с p21 доменом PAK1 белка, который представляет собой непосредственный эффектор Rac-GTP (Wanf H. et al.; J. Biol. Che. 2002, 277: 4541-4550).
Соединения (65) и (25) тестировали с целью определить их ингибирующую способность на взаимодействие Rac-Tiam. Таким образом, осаждающую способность Tiam по отношению к рекомбинантному GST-Rac определяли в присутствии соединения (65). Фигура 2 демонстрирует воздействие соединения (65) на Rac-Tiam комплекс. Показано ослабление взаимодействия Rac с активатором в присутствии соединения (65) в Вестерн-блоттинг анализе против Tiam1 в сравнении с контролем.
Ингибирующее воздействие соединений (25) и (65) на уровни внутриклеточного активного Rac определяли по (Rac-GTP) посредством исследования "подавления".
2
LN229 клетки (человеческой глиобластомы) высевали в 6-луночные диски скопления клеточной культуры и выдерживали в отсутствие FBS в течение 48 часов (выращивание клеток на минимальной среде). После этого их обрабатывали соединениями (25) и (65) и их стимулировали в течение 15 минут с помощью эпидермального фактора роста EGF (100 нг/мл), промывали солевым фосфатным буфером (PBS) при низкой температуре и получали лизат в буфере, содержащем 8 мг белка слияния GST-PBD, 20 нM Tris-HCl, pH 7,5, 1 нM DTT, 5 мM MgCl, 150 мM NaCl, 0,5% NP-40, 5 мM β-глицерофосфат и ингибиторы протеазы (5 мкг/мл 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонилфторид, 5 мкг/мл леупептин, 5 мкг/мл апротинин и 1 мкг/мл пепстатин A). Лизаты центрифугировали при 14000Чg (4°C, 10 мин) и затем инкубировали с глутатион-агарозными шариками (GAB, Amersham Pharmacia), предварительно оснащенными GST-Pak, при 4°C в течение 1 часа. После промывки шарики GAB кипятили в течение 5 минут в загрузочном буфере. Образцы разделяли в 12% SDS-полиакриламидном геле и электропереносом помещали на PVDF мембрану для проведения их дальнейшего анализа методом "Вестерн-блоттинг", используя анти-Raс1 антитела (Sigma). Общие уровни Rac анализировали аналогичным путем в аликвотах, взятых из клеточного лизата.
На Фиг. 3 показано ингибиторное воздействие соединений (25) и (65) на уровни внутриклеточного активного Rac при 10 мкΜ.
Согласно нижеследующему, воздействие соединения (65) на активацию PAK1 исследовалось. Клетки, выращенные на минимальной среде в течение 48 часов, обрабатывали соединением (65) в течение 1 часа, и они были активированы с помощью EGF 100 нг/мл. Фигура 4 показывает уменьшение фосфорилирования PAK с ростом концентрации соединения (65).
Воздействие соединения (65) на полимеризацию актиновых волокон исследовали посредством иммунофлуоресценции с конъюгированным фалоидином, с флуорохромом AlexaFluor (Invitrogen). Клетки LN229 человеческой глиобластомы выращивались на минимальной среде в течение 24 часов, обрабатывались соединением (65) в течение 1 часа и стимулировались с помощью EGF. Как и ожидалось, EGF индуцировал полимеризацию актиновых волокон в необработанных клетках, в то время как клетки, обработанные соединением (65), демонстрировали уменьшение уровней внутриклеточного фибриллярного актина и признаки диффундирования в клеточной цитоплазме (c.f. фигура 5). Достоверные признаки клеточных пограничных слоев наблюдали во всех клетках из-за кортикальных актиновых меток.
Пример 4. Антимиграционное воздействие
Подвижность клеток представляет собой ключевой процесс в инвазии и в процессах метастазов опухоли, и она с большой точностью регулируется с помощью семейства Rho-GTPаз, в частности, с помощью Rac. Это исследование заключается в определении антимиграционного воздействия соединения (65) на клетки LN229 человеческой глиобластомы.
Клеточную миграцию in vitro определяли с помощью trans-well миграционного анализа, при котором клетки LN229, предварительно обработанные соединением (65) в различных концентрациях (10 мкΜ, 50 мкΜ и 100 мкΜ) и в отсутствие сыворотки помещали на верхний слой проницаемой для клеток мембраны на trans-well пластине. По истечении инкубационного периода продолжительностью 24 часа клетки мигрировали через 8 мкм поры мембраны в нижний слой.
На Фиг. 6 демонстрируется, что все обработки существенно уменьшали клеточную миграцию доза-зависимым образом.
Пример 5. Воздействие на клеточный цикл
Воздействие соединения (65) на клеточный цикл изучали с помощью проточной цитометрии. Известно, что Rac1 GTPаза имеет отношение к транскрипции молекул, таких как циклин D1, который требуется для продвижения от G1 фазы к S фазе. Ингибирование Rac1 вызывает задержку клетки в G0-G1 фазе.
LN229 клетки, синхронизированные в G0-G1 фазе и простимулированные в течение 24 часов с помощью FBS, обрабатывали соединением (65). Фигура 7 демонстрирует, что в присутствии 50 мкΜ соединения (65), 60% клеточной популяции находится в G0-G1 фазе, в то время как в контроле показано, что только 25% клеточной популяции находится в этой фазе. В связи с этим, следовательно, показано, что соединение (65) задерживает опухолевые клетки в G0-G1 фазе в доза-зависимом образе действия.
Приме 6. Антипролиферативное исследование
Антипролиферативное воздействие соединений (65), (25), (27), (41) и (64) тестировали на клетках LN229 человеческой глиобластомы (c.f. фигура 8).
Клетки поддерживали в надлежащем состоянии в виде монослойной культуры в соответствующей питательной среде, дополненной 5% фетальной бычьей сывороткой (FBS), предварительно инактивированной нагреванием, 2 мM глутамином и 80 мг/мл гентамицином.
Клетки обрабатывали в течение 72 часов, в присутствии FBS 10%, различными дозами соединений в 96 лунках при плотности 2500 клеток/лунка. Клеточный рост оценивался посредством MTT теста, для проведения которого к клеточным монослоям добавляли MTT, инкубировали и ресуспендировали в ДМСО. В конечном итоге число клеток определяли, измеряя численное значение поглощения при 570 нм.
Пример 7. Антиметастатическое воздействие соединения (25) на клетки F3II карциномы молочной железы
5
Использовали свободных от специфической патогенной микрофлоры самок BALB/c инбредных мышей, полученных от фирмы UNLP (Buenos Aires, Argentina), возраста 8-10 недель и со средней массой 20 г. Они помещались в пластиковых клетках, содержались при стандартных условиях, имели неограниченный доступ к пище, необходимой для грызунов, и к воде. В установленный день 0 эксперимента в латеральную хвостовую вену мышам без анестезии вводили инъекцию клеток F3II карциномы молочной железы в концентрации 2Ч10 жизнеспособных клеток/0,3 мл среды DMEM/мышь. В день 21 животных умерщвляли посредством смещения шейных позвонков и подвергали вскрытию. Для исследования наличия легочных метастаз легкие извлекали, фиксировали в растворе Боуина и определяли количество узелков на поверхности, используя препаровальную лупу.
Для изучения воздействия соединения (25) на метастатическое легочное образование колоний опухолевыми клетками мышам вводили его инъекции интраперитониально с суточной дозой 25 мг/кг массы тела в дни с 0 до 21. Результаты представлены на фигуре 9. У мышей, ежедневно подвергаемых лечению соединением (25) в дозировке (25 мг/кг/сутки) наблюдалось существенное уменьшение, почти на 35%, образования метастатических легочных колоний опухолевых клеток.
Как и ожидалось, соединение (25) хорошо переносимо для взрослых самок BALB/c мышей. Во всех случаях лечение не вызывало заметных изменений в массе тела животного а сравнении с контрольной группой.