ЛЕЧЕНИЕ РАКА С ПОМОЩЬЮ ХИМЕРНОГО АНТИГЕННОГО РЕЦЕПТОРА К CD33

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая химерный антигенный рецептор (CAR), причем CAR содержит человеческий связывающий CD33 домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, и причем упомянутый CD33-связывающий домен содержит определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC CDR1), определяющую комплементарность область 2 тяжелой цепи (HC CDR2) и определяющую комплементарность область 3 тяжелой цепи (HC CDR3) в соответствии с любой аминокислотной последовательностью связывающего домена тяжелой цепи для CD33, приведенной в таблице 2 или 9.
2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, причем упомянутый человеческий связывающий CD33 домен дополнительно содержит определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC CDR1), определяющую комплементарность область 2 легкой цепи (LC CDR2) и определяющую комплементарность область 3 легкой цепи (LC CDR3) в соответствии с любой аминокислотной последовательностью связывающего домена тяжелой цепи для CD33, приведенной в таблице 2 или 9.
3. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 2, в которой упомянутые LC CDR1, LC CDR2 и LC CDR3 представляют собой последовательности LC CDR, приведенные в таблице 11, 13 или 4.
4. Выделенные молекулы нуклеиновой кислоты по пп. 1-3, причем упомянутые HC CDR1, HC CDR2 и HC CDR3 представляют собой последовательности HC CDR, приведенные в таблице 10, 12 или 3.
5. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-4, которая кодирует CAR, содержащий:
(i) аминокислотную последовательность любой вариабельной области легкой цепи, приведенную в таблице 2 или 9;
(ii) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности любой из вариабельных областей легкой цепи, приведенной в таблице 2 или 9; или
(iii) аминокислотную последовательность, идентичную на 95-99% аминокислотной последовательности любой из вариабельных областей легкой цепи, приведенной в таблице 2 или 9.
6. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-5, которая кодирует CAR, содержащий:
(i) аминокислотную последовательность любой вариабельной области тяжелой цепи, приведенную в таблице 2 или 9;
(ii) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности любой из вариабельных областей тяжелой цепи, приведенной в таблице 2 или 9: или
(iii) аминокислотную последовательность, идентичную на 95-99% аминокислотной последовательности любой из вариабельных областей тяжелой цепи, приведенной в таблице 2 или 9.
7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-6, которая кодирует CAR, содержащий аминокислотную последовательность любой вариабельной области легкой цепи, приведенную в таблице 2 или 9, и аминокислотную последовательность любой вариабельной области тяжелой цепи, приведенную в таблице 2 или 9.
8. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, причем кодируемый CD33-связывающий домен содержит:
(i) аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39-47, 57-65, 66-74 или 262-268;
(ii) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций в любой из SEQ ID NO: 39-47, 57-65, 66-74 или 262-268; или
(iii) аминокислотную последовательность, идентичную на 95-99% любой из SEQ ID NO: 39-47, 57-65, 66-74 или 262-268.
9. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, причем CD33-связывающий домен содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 255-261, или последовательность, идентичную ей на 95-99%.
10. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, причем кодируемый CAR включает в себя трансмембранный домен, который содержит трансмембранный домен белка, выбранного из группы, состоящей из альфа-, бета- или дзета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3-эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154.
11. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, причем:
(i) кодируемый трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 6, аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 6, или последовательность, идентичную на 95-99% аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 6; или
(ii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая трансмембранный домен, содержит последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 17, или последовательность, идентичную ей на 95-99%.
12. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, причем кодируемый CD33-связывающий домен соединен с трансмембранным доменом шарнирной областью.
13. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 12, причем:
(i) кодируемая шарнирная область содержит аминокислотную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 2 или последовательность, идентичную ей на 95-99%; или
(ii) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая шарнирную область, содержит нуклеотидную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 13 или последовательность, идентичную ей на 95-99%.
14. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, причем кодируемый костимулирующий домен представляет собой функциональный сигнальный домен, полученный из белка, выбранного из группы, состоящей из молекулы ГКГС класса I, белков-рецепторов ФНО, иммуноглобулин-подобных белков, цитокиновых рецепторов, интегринов, сигнальных лимфоцит-активирующих молекул (SLAM-белков), активирующих рецепторов NK-клеток, BTLA, рецептора толл-лиганда, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8-альфа, CD8-бета, IL2R-бета, IL2R-гамма, IL7R-альфа, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a и лиганда, который специфически связывается с CD83.
15. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 14, причем кодируемый костимулирующий домен содержит аминокислотную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 7, или аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 7, или последовательность, идентичную на 95-99% аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 7.
16. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 14, причем последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая костимулирующий домен, содержит нуклеотидную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 18 или последовательность, идентичную ей на 95-99%.
17. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, причем кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен из 4-1BB и/или функциональный сигнальный домен из CD3-дзета.
18. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, причем кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 7 и/или последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10; или аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10; или последовательность, идентичную на 95-99% аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10.
19. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, причем кодируемый внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 7 и последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, причем последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной рамке и в виде одной полипептидной цепи.
20. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, причем последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая внутриклеточный сигнальный домен, содержит последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 18, или последовательность, идентичную ей на 95-99%, и/или последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 20 или SEQ ID NO: 21, или последовательность, идентичную ей на 95-99%.
21. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, дополнительно содержащая лидерную последовательность, которая кодирует аминокислотную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 1.
22. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, которая кодирует CAR, содержащий:
(i) аминокислотную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 48-56;
(ii) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций в любой из SEQ ID NO: 48-56; или
(iii) аминокислотную последовательность, идентичную на 95-99% любой из SEQ ID NO: 48-56.
23. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, содержащая нуклеотидную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 75-83 или нуклеотидную последовательность, идентичную на 95-99% любой из SEQ ID NO: 75-83.
24. Выделенная полипептидная молекула, кодируемая молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-23.
25. Выделенный полипептид химерного антигенного рецептора (CAR), причем CAR содержит антитело или фрагмент антитела, который включает в себя человеческий связывающий CD33 домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий костимулирующий домен и/или первичный сигнальный домен, и причем упомянутый CD33-связывающий домен содержит определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HC CDR1), определяющую комплементарность область 2 тяжелой цепи (HC CDR2) и определяющую комплементарность область 3 тяжелой цепи (HC CDR3) в соответствии с любой аминокислотной последовательностью связывающего домена тяжелой цепи для CD33, приведенной в таблице 2 или 9.
26. Выделенный полипептид CAR по п. 25, в котором упомянутый человеческий связывающий CD33 домен дополнительно содержит определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LC CDR1), определяющую комплементарность область 2 легкой цепи (LC CDR2) и определяющую комплементарность область 3 легкой цепи (LC CDR3) в соответствии с любой аминокислотной последовательностью связывающего домена тяжелой цепи для CD33, приведенной в таблице 2 или 9.
27. Выделенный полипептид CAR по п. 26, в котором упомянутые LC CDR1, LC CDR2 и LC CDR3 представляют собой последовательности LC CDR, приведенные в таблице 11, 13 или 4.
28. Выделенный полипептид CAR по пп. 25-27, в котором упомянутые HC CDR1, HC CDR2 и HC CDR3 представляют собой последовательности HC CDR, приведенные в таблице 10, 12 или 3.
29. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-28, содержащий:
(i) аминокислотную последовательность любой вариабельной области легкой цепи, приведенную в таблице 2 или 9;
(ii) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности любой из вариабельных областей легкой цепи, приведенной в таблице 2 или 9; или
(iii) аминокислотную последовательность, идентичную на 95-99% аминокислотной последовательности любой из вариабельных областей легкой цепи, приведенной в таблице 2 или 9.
30. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-29, содержащий:
(i) аминокислотную последовательность любой вариабельной области тяжелой цепи, приведенную в таблице 2 или 9;
(ii) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности любой из вариабельных областей тяжелой цепи, приведенной в таблице 2 или 9: или
(iii) аминокислотную последовательность, идентичную на 95-99% аминокислотной последовательности любой из вариабельных областей тяжелой цепи, приведенной в таблице 2 или 9.
31. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-30, содержащий аминокислотную последовательность любой вариабельной области легкой цепи, приведенную в таблице 2 или 9, и аминокислотную последовательность любой вариабельной области тяжелой цепи, приведенную в таблице 2 или 9.
32. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-31, содержащий:
(i) любую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39-47, 57-65, 66-74 и 262-268;
(ii) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций в любой из SEQ ID NO: 39-47, 57-65, 66-74 или 262-268; или
(iii) аминокислотную последовательность, идентичную на 95-99% любой из SEQ ID NO: 39-47, 57-65, 66-74 или 262-268.
33. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-32, в котором трансмембранный домен содержит трансмембранный домен из белка, выбранного из группы, состоящей из альфа-, бета- или дзета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3-эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154.
34. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-33, в котором:
(i) трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 6,
(ii) аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 6, или
(iii) последовательность, идентичную на 95-99% аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 6.
35. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-34, в котором CD33-связывающий домен соединен с трансмембранным доменом шарнирной областью.
36. Выделенный полипептид CAR по п. 35, в котором шарнирная область содержит SEQ ID NO: 2 или последовательность, идентичную ей на 95-99%.
37. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-36, в котором костимулирующий домен представляет собой функциональный сигнальный домен, полученный из белка, выбранного из группы, состоящей из молекулы ГКГС класса I, белков-рецепторов ФНО, иммуноглобулин-подобных белков, цитокиновых рецепторов, интегринов, сигнальных лимфоцит-активирующих молекул (SLAM-белков), активирующих рецепторов NK-клеток, BTLA, рецептора толл-лиганда, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8-альфа, CD8-бета, IL2R-бета, IL2R-гамма, IL7R-альфа, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a и лиганда, который специфически связывается с CD83.
38. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-37, в котором костимулирующий домен содержит аминокислотную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 7, или аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 7, или последовательность, идентичную на 95-99% аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 7.
39. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-37, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен из 4-1BB и/или функциональный сигнальный домен из CD3-дзета.
40. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-39, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 7 и/или последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10; или аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10; или последовательность, идентичную на 95-99% аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 7 и/или аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10.
41. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-40, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 7 и последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, причем последовательности, содержащие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной рамке и в виде одной полипептидной цепи.
42. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-41, дополнительно содержащий лидерную последовательность, которая содержит аминокислотную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 1.
43. Выделенный полипептид CAR по любому из пп. 25-42, содержащий:
(i) аминокислотную последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 48-56;
(ii) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций в любой из SEQ ID NO: 48-56; или
(iii) аминокислотную последовательность, идентичную на 95-99% любой из SEQ ID NO: 48-56.
44. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR или CD33-связывающий домен по любому из предшествующих пунктов, причем вектор выбирают из группы, состоящей из ДНК-вектора, РНК-вектора, плазмиды, лентивирусного вектора, аденовирусного вектора или ретровирусного вектора.
45. Вектор по п. 44, дополнительно содержащий промотор EF-1, содержащий последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 11.
46. Клетка, например, иммунная эффекторная клетка, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-23, полипептид CAR по любому из пп. 24-43 или вектор по п. 44 или 45.
47. Способ производства клетки, например, иммунной эффекторной клетки, содержащий трансдукцию иммунной эффекторной клетки вектором по п. или 44, или 45.
48. Способ генерирования популяции сконструированных клеток с измененной РНК, содержащий введение транскрибированной in vitro РНК или синтетической РНК в клетку, причем РНК содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид CAR по любому из предшествующих пунктов
49. Способ обеспечения противоопухолевого иммунитета у млекопитающего, содержащий введение млекопитающему эффективного количества клеток, например, популяции иммунных эффекторных клеток, содержащих нуклеиновую кислоту CAR по любому из пп. 1-23 или полипептид CAR по любому из пп. 24-43.
50. Способ по п. 49, в котором клетка представляет собой аутологичную T-клетку или аллогенную T-клетку.
51. Способ лечения млекопитающего, имеющего заболевание, ассоциированное с экспрессией CD33, содержащий введение млекопитающему эффективного количества клеток, например, популяции иммунных эффекторных клеток, содержащих нуклеиновую кислоту CAR по любому из пп. 1-23 или полипептид CAR по любому из пп. 24-43.
52. Способ по п. 51, в котором заболевание, ассоциированное с экспрессией CD33, представляет собой:
(i) рак, или злокачественную опухоль, или предраковое состояние, выбранное из одного или нескольких из миелодисплазии, миелодиспластического синдрома или предлейкоза, или
(ii) не связанный с раком симптом, ассоциированный с экспрессией CD33.
53. Способ по п. 51 или 52, в котором заболевание представляет собой гематологический рак.
54. Способ по любому из пп. 51-53, в котором заболевание представляет собой острый лейкоз, выбранный из одного или нескольких из острого миелоидного лейкоза (ОМЛ); миелодиспластического синдрома; миелопролиферативных новообразований; хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ); или новообразования из бластных плазмацитоидных дендритных клеток, или их комбинации.
55. Способ по любому из пп. 51-54, в котором клетку, например, популяцию иммунных эффекторных клеток, вводят в комбинации с одним или несколькими из:
(i) средства, которое повышает эффективность клетки, содержащей нуклеиновую кислоту CAR или полипептид CAR;
(ii) средства, которое ослабляет один или несколько побочных эффектов, ассоциированных с введением клетки, содержащей нуклеиновую кислоту CAR или полипептид CAR; или
(iii) средства, которое лечит заболевание, ассоциированное с CD33.
56. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-23, выделенная молекула полипептида CAR по любому из пп. 24-43, вектор по п. или 44, или 45, или клетка по п. 46 для использования в качестве лекарственного средства.
57. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-23, выделенная молекула полипептида CAR по любому из пп. 24-43, вектор по п. или 44, или 45 или клетка по п. 46 для использования в лечении заболевания, ассоциированного с экспрессией CD33.
58. Клетка, например, популяция иммунных эффекторных клеток, по п. 46, дополнительно экспрессирующая ингибирующую молекулу, которая содержит первый полипептид, который содержит по меньшей мере часть ингибирующей молекулы, ассоциированной со вторым полипептидом, который содержит положительный сигнал от внутриклеточного сигнального домена.
59. Клетка по п. 58, в которой ингибирующая молекула содержит первый полипептид, который содержит по меньшей мере часть PD1, и второй полипептид, содержащий костимулирующий домен и первичный сигнальный домен.
60. Способ по п. 55, в котором средство представляет собой ингибитор mTOR, и субъекту вводят низкую иммуностимулирующую дозу ингибитора mTOR, например, RAD001 или рапамицина.
61. Способ по п. 60, в котором ингибитор mTOR вводят в течение продолжительности времени, достаточной для уменьшения доли PD-1-положительных T-клеток, увеличения доли PD-1-отрицательных T-клеток или увеличения отношения PD-1-отрицательные T-клетки/PD-1-положительные T-клетки в периферической крови субъекта или в препарате T-клеток, выделенных из субъекта.
62. Способ кондиционирования субъекта перед клеточной трансплантацией, содержащий введение субъекту эффективного количества клеток, содержащих молекулу нуклеиновой кислоты CAR по любому из пп. 1-23 или полипептид CAR по любому из пп. 24-43.
63. Способ по п. 62, в котором клеточная трансплантация представляет собой трансплантацию стволовых клеток, например, трансплантацию гематопоэтических стволовых клеток, или трансплантацию костного мозга.
64. Способ по п. или 62, или 63, в котором кондиционирование субъекта перед клеточной трансплантацией содержит уменьшение количества CD33-экспрессирующих клеток у субъекта, например, CD33-экспрессирующих нормальных клеток или CD33-экспрессирующих раковых клеток.