Экспериментальная оценка возможности проникновения кишечных вирусов в мякоть овощей и фруктов с поверхности

32

МШ1У

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ВОЗМОЖНОСТИ ПРОНИКНОВЕНИЯ КИШЕЧНЫХ ВИРУСОВ В МЯКОТЬ ОВОЩЕЙ И ФРУКТОВ С ПОВЕРХНОСТИ

В.И. Сергевнин, И.В. Шицына, И.В. Николова, Е.В. Кудреватых, Ю.И. Ладейщикова, Е.В. Сармометов, И.Л. Подгорбунская

Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А. Вагнера, Центр гигиены и эпидемиологии в Пермском крае, Управление Роспотребнадзора по Пермскому краю

Целью настоящей работы явилась экспериментальная оценка возможности проникновения кишечных вирусов в мякоть овощей и фруктов с поверхности. Ранее авторами была выявлена значительная контаминация овощей и фруктов антигенами и РНК кишечных вирусов-возбудителей гепатита А, рота- и энтеровирусной инфекции, которые были обнаружены не только в кожуре овощей и фруктов, но и в мякоти плодов (помидоры, яблоки).

The aim of the present work is an experimental evaluation of the possibility of enteric vims infiltration in the pulp of fruits and vegetables from the surface. Earlier on the authors have detected substantial contamination of fruits and vegetables by antigens and RNA of enteric viruses - infectious hepatitis', rota- and enteroviral infections' causative agents, that were found not only in the rind of fruits and vegetables but also in its pulp (tomatoes, apples).

Ранее нами была выявлена значительная контаминация овощей и фруктов антигенами и РНК кишечных вирусов — возбудителей гепатита А, рота- и энтеровирусной инфекции [6]. При этом антигены и РНК вирусов были обнаружены не только на кожуре овощей и фруктов, но и в мякоти плодов (помидоры, яблоки). Известно, что вирусы могут проникать в мякоть овощных культур через корневую систему [1, 5]. Однако теоретически можно предположить и другой, пока что неизученный путь проникновения кишечных вирусов внутрь овощей и фруктов — через неповрежденную (не имеющую видимых повреждений) поверхность.

Целью настоящей работы явилась экспериментальная оценка возможности проникновения кишечных вирусов в мякоть овощей и фруктов с поверхности.

Для эксперимента было взято 26 помидоров и 26 яблок, выросших в личном хозяйстве на участке земли, на котором исключалось попадание в почву фекальных стоков. На наличие кишечных вирусов предварительно были взяты смывы с поверхности и мякоть 2-х помидоров и 2-х яблок партии. Далее поверхность 12 помидоров и 12 яблок была кон-таминирована вакцинным штаммом вируса полиомиелита (Sabin II, № 599), а поверхность других 12 помидоров и 12 яблок — эн-теровирусом ЕСН07, выделенным из сточных хозяйственно-бытовых вод. Выбор указанных вирусов в качестве модельных был обусловлен тем, что из числа кишечных они отличаются особенно высокой устойчивостью на объектах окружающей среды, в т. ч. на поверхности овощей [3].

Н№Т №(102) ЗУивО Я

Таблица 1. Результаты исследования мякоти помидоров и яблок, поверхность которых была инфицирована кишечными вирусами

Овощи и фрукты Тест-вирус Количество плодов, инфицированных с поверхности Количес выявлена инс тво плодов, у которых в мякоти 41К вирусов в сроки от момента цитирования поверхности

1 сутки 2 сутки 3 сутки 4 сутки 5 сутки 8 сутки Всего

абс. %±т

Помидоры Полиовирус 12 0 0 0 1 0 1 2 16,7 ± 10,7

Энтеровирус 12 0 0 0 2 2 2 6 50,0 ± 14,4

Всего 24 0 0 0 3 0 3 8 33,3 ±9,6

Яблоки Полиовирус 12 0 0 0 0 0 1 1 8,3 ±7,9

Энтеровирус 12 0 0 0 1 0 1 2 16,7 ± 10,7

Всего 24 0 0 0 1 0 2 3 12,5 ±6,7

Итого Полиовирус 24 0 0 0 1 0 2 3 12,5 ±6,7

Энтеровирус 24 0 0 0 3 2 3 8 33,3 ±9,6

Всего 48 0 0 0 4 2 5 11 22,9 ±6,1

Суспензию модельных вирусов с помощью стерильного тампона наносили на очерченную площадь поверхности помидоров и яблок размером 4 см2. После инфицирования овощи и фрукты помещали в 4 продезинфицированные ультрафиолетом картонные коробки, имеющие ячейки для каждого плода (по 12 плодов в коробке). Коробки экспонировали в течение 8 дней в холодильнике. Через 1, 2, 3, 4, 5 и 8 суток после инфицирования исследовали смывы с поверхности и мякоть помидоров и яблок на кишечные вирусы.

Отбор смывов в ходе эксперимента с каждого плода проводили дважды. Первое исследование осуществляли для контроля эффективности заражения плодов, второе — для контроля отсутствия вирусов на поверхности после дезинфекционной обработки перед подготовкой проб мякоти.

Для удаления вирусов с поверхности плодов перед исследованием мякоти кожуру обрабатывали стерильной водой, а затем 5 раз 6 %-м раствором перекиси водорода отдельными тампонами и, кроме того, обжигали спиртом. Далее снимали кожуру и готовили пробу мякоти согласно методическим рекомендациям [2].

Смывы и мякоть исследовали методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) с помощью тест-системы «АмплиСенс Еп1егоута8-207» (ЦНИИ эпидемиологии) и на культуре ткани ИХ) [4]. При этом сначала исследовали в ПЦР пробы натив-

ного материала, далее мякоть обрабатывали хлороформом и антибиотиками и заражали культуру клеток. После заражения исследовали в ПЦР обогащенный материал — инфицированную культуру ткани, затем делали пассаж и определяли цитопатическое действие по деградации клеток.

Контрольные исследования смывов с поверхности неинфицированных помидоров и яблок, а также инфицированных плодов после дезинфекционной обработки их поверхности до исследования мякоти во всех случаях дали отрицательный результат. Напротив анализы смывов с кожуры искусственно инфицированных плодов выявили наличие экспериментальных вирусов в культуре клеток и их РНК — в ПЦР.

Результаты культурального исследования проб мякоти плодов во всех случаях оказались отрицательными. В то же время выделение РНК вирусов в ПЦР из мякоти наблюдалось достаточно часто. В целом из 48 поверхностно инфицированных овощей и фруктов 11 плодов, т. е. 22,9 %, оказались внутренне контаминиро-ванными РНК модельных вирусов (табл. 1). Количество помидоров, в мякоти которых была выделена вирусная РНК (33,3 ± 9,6 %), оказалось в 2,7 раза больше, чем яблок (12,5 ± 6,7 %). Чаще в мякоти плодов обнаруживали РНК эн-теровируса (в 33,3 ± 9,6 % случаев), чем РНК полиовируса (в 12,5 ± 6,7 %). Следует подчеркнуть, что в мякоти помидоров РНК полиовируса была выделена лишь на 4 и 8 сутки, РНК

и

МШ1У

энтеровируса — на 4, 5 и 8 сутки. В яблоках РНК полиовируса была обнаружена на 8 сутки, энтеровируса — на 4 и 8 сутки. При этом из 11 плодов, в мякоти которых обнаружена РНК кишечных вирусов, в 9 случаях (81,8%) последняя была выявлена в ПЦР из обогащенного материала и лишь в 1 случае (9,1 %) в ПЦР из нео-богащенного материала и в 1 случае (9,1 %) — одновременно в ПЦР из обогащенного и нео-богащенного материала.

Выявление РНК кишечных вирусов в мякоти инфицированных с поверхности помидоров и яблок свидетельствует о том, что проникновение кишечных вирусов внутрь овощей и фруктов через неповрежденную (не имеющую видимых повреждений) поверхность возможно. Вместе с тем выявление вирусной РНК в мякоти плодов главным образом лишь в пробах материала, обогащенного на культуре ткани, указывают на минимальное количество вирусных частиц, проникающих в плоды. Следовательно, эпидемиологическое значение вирусной контаминации мякоти овощей и фруктов с неповреж-

денной

поверхности, скорее всего, невелико.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Багдасарьян ЕА., Влодавец В.В., Дмитриева P.A., Ловцевич Е.Л. Основы санитарной вирусологии. М., 1977. 200 с.

2. Методические рекомендации по санитар-но-вирусологическому контролю объектов окружающей среды. М., 1982. 74 с.

3. Основы санитарной вирусологии. М., 1977. 189 с.

4. Санитарно-вирусологический контроль водных объектов: МУК 4.2.2029—05.

5. Спыну К.И. Энтеровирусы в окружающей

среде и их эпидемическая значимость,— Кишинев, 1991.252 с.

6. СергевнинВ.И., Подгорбунская И.Л., Сар-мометов Е.В. и др. Микробиологическая оценка контаминации овощей, фруктов и ягод возбудителями бактериальных, вирусных и протозойных инфекций //Здоровье населения и среда обитания. 2008. № 5. С. 25-27.

H№T IM (102) X