РАСТИТЕЛЬНЫЙ СБОР "ЭУФРАЗИН", ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИОКСИДАНТНОЙ И НООТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
EUFRAZINE, MEDICINAL HERB TEA POSSESSING ANTIOXIDANT AND NOOTROPIC ACTIVITY

Описание изобретения
Изобретение относится к медицине, в частности к средствам из сырья растительного происхождения, и может быть применено, например, в качестве антиоксидантного и ноотропного средства в офтальмологии, для улучшения мозгового кровообращения и профилактики процессов старения организма.
В последние годы значительно возросла потребность в лекарственных растениях и фитопрепаратах. Актуальны вопросы создания лекарственных средств на основе индивидуального растительного сырья и растительных сборов. Применение средств из сырья растительного происхождения находит все большее распространение в различных областях медицины, в частности, в офтальмологии.
Известно «Офтальмологическое противовоспалительное средство» для использования противовоспалительной терапии глаза с аутоиммунными заболеваниями [патент РФ 2407528, А61К 31/35. Авторы: Шапкина Л.Д., Смирнов И.Е., Сорвачева Т.Н. и др.]. Средство содержит эктерицид, аскорбиновую кислоту, настой очанки лекарственной и другие компоненты.
Известно «Офтальмологическое лекарственное средство» [патент РФ 2104679, A61F 9/00, А61К 35/78. Авторы: Федоров С.Н., Миронова Э.М., Гришин Е.В.]. Средство на основе веществ растительного происхождения, представляющее экстракт бурых водорослей Phacophyta и глутаминовой кислоты.
Известно «Лекарственное средство, обладающее ноотропной активностью» [патент RU 2331432, А61К 36/739, А61К 36/53, А61К 36/65, А61К 36/704, А61К 36/28, А61Р 25/28. Авторы Николаев С.М., Дымшеева Л.Д., Николаева И.Г., Николаева Г.Г.]. Средство представляет собой 40% спиртовой экстракт из растительного сырья: сушеница топяная (трава), шлемник байкальский (корни), пятилистник кустарниковый (побеги), кровохлебка лекарственная (корневища и корни), пион уклоняющийся (корни), шиповник (плоды), горец птичий (трава) со степенью измельчения 1-3 мм. При этом экстракт получен при соотношении сырья и экстрагента 1:10 и температуре 18-20°C.
Наиболее близким является средство, обладающее антиоксидантной активностью, содержащее плоды черники «А MAKUI berry containing anti-oxidization constituent)) [Patent JP 2013107825 A (FINE CO LTD) 06.06.2013. Int. C1. A61K 36/00, A61K 36/18, A61P 39/06, A61P 71/18, A61K 8/97. Author: Sasaki, Yoshiharu].
В большинстве случаев развитие патологических изменений в структурах глаза обусловлено окислительным стрессом, т.е. нарушением баланса в системе образования свободных радикалов и антиоксидантной защиты. Проявление этого дисбаланса обусловлено дефицитом антиоксидантных резервов и ведет к возрастанию концентрации активных форм кислорода, последующей активации перекисного окисления липидов и повреждением тканей глаза [Richter С.Biophysical consequences of lipid peroxidation in membranes / C. Richter // Chem. Phys. Lipids. - 1987. - Vol. 44 (2-4) - P. 175-189].
При заболеваниях глаз - глаукома, катаракта, возрастная макулодистрофия и др. происходит нарушение гемодинамики в области глаз, поэтому для профилактики и лечения этих заболеваний используются средства, обладающие ноотропной активностью, усиливающие мозговой кровоток и улучшающие микроциркуляцию. Таким действием обладают препараты пирацетам, винпоцетин, из растительных средств препараты билобил, танакан, в состав которых входит экстракт гинкго билоба [Государственный реестр лекарственных средств по состоянию на 24.04.2014 [Электронный ресурс] URL: http://grls.rosminzdrav.ru].
Окислительный стресс и истощение антиоксидантных резервов организма является причиной многих серьезных заболеваний и процесса старения, в частности [Терешина Е.В. Старение, окислительный стресс и антиоксиданты/ Е.В. Терешина // Геронтология и гериатрия. - 2006. - №5. - С.38-48].
Многокомпонентные сборы обладают широким спектром фармакологического действия, мягко и гармонично воздействуют на все системы организма при минимальном количестве побочных эффектов в условиях длительного применения.
Цель изобретения - разработка растительного сбора, обладающего антиоксидантной и ноотропной активностью.
Технический результат изобретения - расширение ассортимента лекарственных средств растительного происхождения, обладающих антиоксидантной и ноотропной активностью, за счет использования широко распространенного растительного сырья, имеющего надежную и обеспеченную сырьевую базу, повышение фармакологической активности за счет многокомпонентности лекарственного средства и экспериментально обоснованного соотношения компонентов сбора.
Технический результат достигается тем, что растительный сбор содержит в своем составе:
очанку гребенчатую - Euphrasia pectinata Ten. (трава) - 30% (3 ч);
лабазник вязолистный - Filipendula ulmaria (L.) Maxim (цветки) - 20% (2 ч);
чернику обыкновенную - Vaccinium myrtillus L. (плоды) - 20% (2 ч);
мелиссу лекарственную - Melissa officinalis L. (трава) - 10% (1 ч);
шиповник коричный - Rosa majalis Herrm. (плоды) - 20% (2 ч).
Состав сбора и предложенное соотношение растительного сырья были обоснованы в результате экспериментальных фитохимических и фамакологических исследований.
Технология приготовления сбора «Эуфразин» заключается в том, что каждый вид лекарственного сырья измельчают отдельно: траву до размера частиц не более 7 мм, цветки и плоды - не более 3 мм. Затем необходимое количество ингредиентов взвешивают, тщательно смешивают до равномерной смеси и отсеивают от пыли через сито с диаметром отверстий 0,18 мм.
Для приготовления настоя 10 г сбора заливают 190 мл (с учетом рассчитанного коэффициента водопоглощения, равного 1,9) водой очищенной комнатной температуры, настаивают в инфундирном аппарате на кипящей водяной бане при частом перемешивании в течение 15 мин, затем охлаждают при комнатной температуре в течение 45 мин; процеживают (отжимая растительное сырье) и прибавляют воду до требуемого объема извлечения. В результате получают настой в соотношении сырье - экстрагент 1:10 [Государственная Фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е издание, доп. - М.: Медицина, 1987. - 400 с.].
Качественными аналитическими реакциями и хроматографическими исследованиями в составе сбора «Эуфразин» обнаружены флавониды - дигидрокверцетин, лютеолин, лютеолин-7-глюкозид, рутин, гиперозид;
фенолкарбоновые кислоты - галловая кислота, изоферуловая кислота, хлорогеновая кислота, цикориевая кислота, кофейная кислота, феруловая кислота; дубильные вещества - танин, эпигаллокатехингаллат, эпикатехин; кумарин.
Количественное содержание суммы флавоноидов проводили спектрофотометрическим методом, основанным на реакции комплексообразования флавоноидов с алюминия хлоридом в пересчете на рутин. Содержание в сборах суммы окисляемых веществ определяли перманганатометрическим методом, экстрактивных веществ по ГФ XI [Государственная Фармакопея СССР: вып.1. Общие методы анализа / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 с. ]. Количественное содержание антоцианов определяли спектрофотометрическим методом при длине волны 546 нм в пересчете на цианидин-3-О-глюкозид [Куркин В.А. Определение антоцианов в плодах черники обыкновенной / В.А. Куркин, Т.К. Рязанова // Фармация. - 2012. - №2. - С. 10-13].
В сборе «Эуфразин» содержится суммы флавоноидов 2,85%, суммы окисляемых веществ перманганатом калия 8,26%, антоцианов - 2,19%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой очищенной - 38%.
Оптимальное соотношение ингредиентов сбора было установлено по результатам изучения антиоксидантной активности 6 вариантов сбора (с разным соотношением компонентов) (табл.1) и их фитохимического исследования.
Антиоксидантную активность изучали в опытах in vitro (на сыворотке донорской крови).
Методика: к 1 мл тестируемого извлечения прибавляли 2 мл сыворотки донорской крови, 0,1 мл 0,5 М раствора сульфата меди (II), в качестве индуктора перекисного окисления липидов. Для сравнения использовали контроль без исследуемого извлечения и позитивный контроль, в котором ингибитором ПОЛ служил 0,05 М раствор этилендиаминтетраукскусной кислоты (ЭДТА). Полученные смеси после инкубирования в течение 24 часов при 37°C исследовали на содержание диеновых конъюгатов (ДК) и малонового диальдегида (МДА) [Шаварда А.Л. Антиоксидантная активность видов флоры Алтая / А.Л. Шаварда и [др.] // Растит. ресурсы. - 1998. - т. 34. - вып. 2. - С. 1-8].
Все варианты сборов снижают образование ДК в сравнении с контролем (вода очищенная) от 6,9 до 71,7% (табл.2). Извлечения вариантов сбора №2 и №6 снижают содержание ДК более чем на 50%.
В позитивном контроле (ЭДТА) содержание ДК составляло 3,42±0,35 мкмоль/мл. Извлечения сборов №2 и №6 значительно ингибируют образование ДК и превосходят позитивный контроль на 25,4 и 38,0% соответственно. Образование МДА в большей степени снижают сборы №2, 3, 6.
В извлечениях сбора №6 содержится наибольшее количество БАВ (флавоноидов, антоцианов, суммы окисляемых веществ перманганатом калия). Этот же сбор обладает высокой антиоксидантной активностью, данное соотношение компонентов нами выбрано, как базовое для составления рецептуры сбора «Эуфразин».
Ноотропную активность сбора оценивали по методикам: «открытое поле» (ОП); выработки условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ). В тесте ОП изучали поведенческую и познавательную активность животных (крыс). Сохранность памятного следа оценивали в тесте по выработке и сохранности УРПИ. Животные содержались на стандартном рационе питания при свободном доступе к воде и пище в условиях вивария. Исследования с животными проводились в соответствии с «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей».
В исследованиях ОП экспериментальные животные (крысы линии Wistar массой 180-200 г. ) получали настой сбора «Эуфразин» 1:10 в дозе 3 мл/кг, препаратом сравнения служил экстракт сухой гинкго билоба в дозе 200 мг/кг. [Государственный реестр лекарственных средств по состоянию на 24.04.2014 [Электронный ресурс] URL: http://grls.rosminzdrav.ru]. Вводимые дозы были адекватны терапевтическим.
Результаты исследований показали, что сбор «Эуфразин» изменяет ориентированно-исследовательскую активность и защитно-оборонительные поведенческие реакции, а так же эмоциональный статус животных (табл. 4). Общая двигательная активность под влиянием сбора увеличивается на 48,82% по сравнению с контролем и незначительно уступает по действию экстракту сухому гинкго билоба. Вертикальная активность животных под влиянием сбора увеличивается по сравнению с контролем на 107,69% и превосходит экстракт гинкго билоба. Сбор увеличивает исследовательскую активность (норковый рефлекс) по сравнению с контролем на 105,9% и значительно превосходит действие экстракта гинкго билоба в 3,5 раза.
Влияние препаратов на эмоциональное состояние крыс оценивалось по количеству дефекаций, грумингу и количеству эпизодов замирания.
Отмечено положительное влияние испытуемого сбора на уровень тревожности по снижению количества эпизодов замирания на 35,94% и дефекаций на 33,33% (по отношению к контрольной группе), снижение данных характеристик наблюдалось также в группе животных, получавших экстракт гинкго билоба на 28,13 и 26,67% соответственно. Кроме этого, снижение актов груминга свидетельствовало о снижении тревожности в группе, получавшей настой сбора «Эуфразин».
Сохранение памятного следа оценивали по сохранности УРПИ. Выработку УРПИ проводили при переходе животных в темную камеру, где они получали разряд электрического тока. Тест на воспроизведение УРПИ (на сохранение памятного следа) осуществляли через 24 ч после обучения, а также на 7 и 14 сутки после обучения. При оценке сохранности УРПИ учитывали время первого захода в темный отсек. Удлинение латентного периода (ЛП) захождения в темную камеру свидетельствовало об улучшении сохранения УРПИ.
На рисунке 1 представлены данные о сохранности УРПИ под воздействием настоя сбора «Эуфразин» и гинко билоба экстракта сухого.
Установлено, что при воспроизведении УРПИ через 24 ч после обучения (получение болевого раздражения в темном отсеке камеры) латентный период входа в темный отсек во всех исследуемых группах существенно не отличался. На седьмые сутки УРПИ в контрольной группе сохранился на 68,17%, под влиянием гинкго билоба - на 83,37%. Больше всего УРПИ сохраняется под влиянием настоя сбора «Эуфразин» (на 93,27%).
На 14 сутки отмечается та же динамика сохранности УРПИ. Настой сбора «Эуфразин» сохранил УРПИ на 14 сутки на 81,24%, экстракт гинкго билоба на 70,26%; контроль - только на 44,89%. Из чего следует, что настой сбора «Эуфразин» способствует сохранению памятного следа и превосходит экстракт гинкго билоба. Результаты фармакологических исследований показали, что настой сбора «Эуфразин» обладает ноотропной активностью.
Результаты эксперимента статистически обрабатывались методами для малой выборки с определением средней величины (М) и ошибки (m). Степень достоверности результатов исследований (Р) оценивали с помощью параметрического критерия t-Стьюдента для малой выборки. Различия между данными контроля и опыта считали значимыми при вероятности 95% (Р≤0,05).
Литература
1. Государственная Фармакопея СССР: вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 с.
2. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е издание, доп. - М.: Медицина, 1987. - 400 с.
3. Государственный реестр лекарственных средств по состоянию на 24.04.2014 [Электронный ресурс] URL: http://grls.rosminzdrav.ru.
4. Куркин В.А. Определение антоцианов в плодах черники обыкновенной / В.А. Куркин, Т.К. Рязанова // Фармация. - 2012. - №2. - С. 10-13.
5. Терешина Е.В. Старение, окислительный стресс и антиоксиданты/ Е.В. Терешина // Геронтология и гериатрия. - 2006. - №5. - С. 38-48.
6. Шаварда А.Л. Антиоксидантная активность видов флоры Алтая / А.Л. Шаварда и [др.] // Растит. ресурсы. - 1998. - т. 34. - вып. 2. - С. 1-8.
7. Richter С. Biophysical consequences of lipid peroxidation in membranes/ C. Richter // Chem. Phys. Lipids. - 1987. - Vol. 44 (2-4) - P. 175-189.
Таблица 1
Варианты сбора с различным соотношением компонентов
Компоненты сбора
Соотношение компонентов сбора, %
I
II
III
IV
V
VI
Очанка гребенчатая
20
30
40
20
30
30
Лабазник вязолистный
20
30
10
40
30
20
Черника обыкновенная
20
10
20
20
10
20
Мелисса лекарственная
20
10
10
10
20
10
Шиповник
20
20
20
10
10
20
Итого
100
100
100
100
100
100
Таблица 2
Антиоксидантная активность сбора «Эуфразин»
Препарат
ДК
МДА
Содержание в мкмоль/мл
Ингибирование,в %
Содержание в мкмоль/мл
Ингибирование, в%
К
ПК
К
ПК
Сбор№1
6,88±0,47
6,9
-
3,08±0,30
77,8
53,8
Сбор №2
2,55±0,23
65,6
25,4
2,50±0,28
81,7
62,5
Сбор №3
5,43±0,21
26,5
-
2,62±0,25
80,8
60,7
Сбор №4
4,58±0,15
38,0
-
4,10±0,19
70,0
38,4
Сбор №5
6,45±0,60
12,7
-
2,79±0,32
79,6
58,1
Сбор №6
2,12±0,13
71,7
38,0
2,66±0,16
80,6
60,1
Контроль (вода очищенная)
7,39±0,47
13,68±10,8
Позитивный контроль (ЭДТА)
3,42±0,35
6,66±0,75
Примечание: К-контроль (вода очищенная); ПК-позитивный контроль (ЭДТА).
Таблица 3
Количественное содержание флавоноидов, антоцианов и окисляемых веществ в извлечениях, полученных из сборов №1-№6
Вариант сбора
Содержание в извлечении, в %
Сумма флавоноидов
Сумма антоцианов
Окисляемые вещества
№1
0,36±0,01
0,22±0,01
0,45±0,01
№2
0,57±0,02
0,12±0,01
0,50±0,02
№3
0,35±0,02
0,22±0,01
0,37±0,01
№4
0,55±0,01
0,21±0,01
0,63±0,02
№5
0,62±0,03
0,10±0,01
0,50±0,02
№6
0,64±0,02
0,22±0,01
0,68±0,02
Таблица 4
Влияние настоя (1:10) сбора «Эуфразин» и экстракта гинкго билоба на ориентировочно-исследовательское поведение и эмоциональную реакцию у белых крыс в тесте «открытое поле»
Показатели
Группы животных
Контрольная (вода очищенная)
Настой сбора 1:10 (3 мл/кг)
Гинкго билоба экстракт сухой (200 мг/кг)
Общая двигательная активность
47,93±2,57
71,33±4,51*
82,27±4,96*
Вертикальная активность
4,33±0,22
9,00±0,95*
7,53±0,83*
Норковый рефлекс
3,53±0,28
7,60±0,44*
4,73±0,33*
Дефекации
1,00±0,25
0,67±0,19*
0,73±0,19*
Груминг
4,53±0,26
4,07±0,37
3,47±0,33*
Замирание
4,27±0,41
2,73±0,46*
3,07±0,47*
Введение препаратов per os
*-достоверность по отношению к контролю при р≤0,05