СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ ЛИНИЙ КЛЕТОК ПОЧКИ СОБАКИ МАЙДИН-ДЭРБИ (MDCK), ПОДДЕРЖИВАЮЩИХ РОСТ ВИРУСОВ ДЛЯ ВЫСОКИХ ТИТРОВ ЭТИХ КЛЕТОК В БИОРЕАКТОРЕ

1. Способ элиминирования контаминантов ДНК из вирусного препарата, включающий:
а. пропускание вирусного препарата через среды для аффинной хроматографии в условиях, при которых контаминанты ДНК не удерживаются в средах для аффинной хроматографии, а вирус, содержащийся в вирусном препарате, удерживается,
б. промывку сред для аффинной хроматографии для удаления контаминантов ДНК,
в. элюирование вируса, содержащегося в вирусном препарате, из сред для аффинной хроматографии.
2. Способ по п.1, в котором между стадиями (а) и (б) неспецифический эндонуклеазный препарат пропускают через среды для аффинной хроматографии.
3. Способ по п.2, где контаминанты ДНК устойчивы к неспецифической эндонуклеазе.
4. Способ по п.3, где ДНК контаминанты имеют длину приблизительно 12 т.п.о.
5. Способ по п.2, в котором после стадии (а) и до пропускания неспецифического эндонуклеазного препарата через среды для аффинной хроматографии, среды для аффинной хроматографии промывают.
6. Способ по п.5, где контаминанты ДНК устойчивы к неспецифической эндонуклеазе.
7. Способ по п.6, где контаминанты ДНК имеют длину приблизительно 12 т.п.о.
8. Способ по любому из пп.1-7, в котором вирусный препарат является препаратом вируса гриппа.
9. Способ по п.8, в котором препарат вируса гриппа включает адаптированный к холоду вирус гриппа.
10. Способ по п.9, в котором вирус гриппа является аттеньюированным и чувствительным к температуре.
11. Способ по п.8, в котором препарат вируса гриппа получают в клетках млекопитающих.
12. Способ по п.11, в котором клетки млекопитающих включают клетки почки собаки МАЙДИН-ДЭРБИ (MDCK).
13. Способ по п.8, среда для хроматографии является целлюлозной смолой, включающей эфир серной кислоты, связанный целлобиозой.
14. Способ по п.8, где вирусный препарат включает сахарозу и калий фосфат.
15. Способ по п.14, где вирусный препарат включает приблизительно 218 мМ сахарозы и приблизительно 11 мМ калий фосфата при величине рН 7,2.
16. Способ по п.8, где вирус элюируется из среды для хроматографии (в) буфером, который включает сахарозу, калий фосфат и приблизительно 1 М NaCl.
17. Способ по п.16, где буфер включает приблизительно 218 мМ сахарозы и приблизительно 11 мМ калий фосфата при величине рН 7,2.
18. Способ по п.8, где элюируемый из среды для хроматографии вирус (в) является живым вирусом гриппа.
19. Способ очистки вируса гриппа из клеточной культуры, включающий:
а. очистку собранного вирусного материала с помощью фильтрации;
б. концентрирование фильтрацией тангенциального потока (TFF), которое включает ультрафильтрацию и смену буфера посредством диафильтрации после
(а),
в. очистку посредством аффинной колоночной хроматографии и обработку неспецифической эндонуклеазой после (б), где обработку неспецифической эндонуклеазой и очистку с помощью аффинной колоночной хроматографии осуществляют в одно и то же время,
г. концентрирование посредством TFF после (в) и
д. стерилизацию посредством фильтрации после г.
20. Способ по п.19, где очистка на (а) включает применение фильтрации прямого потока (DFF).
21. Способ по п.20, где DFF включает применение по меньшей мере одной мембраны, имеющий размер пор от приблизительно 1,2 и до приблизительно 0,45 мкм.
22. Способ по любому из пп.19-21, где концентрация на б и г включает применение мембран, способных отсекать молекулярный вес 500 кДа (MWCO).
23. Способ по любому из пп.19-21, где (в) приводит к 5-кратной концентрации и по меньшей мере 5 двойных объемов буфера меняются.
24. Способ по любому из пп.19-21, где TFF на (г) включает ультрафильтрацию и замену буфера посредством диафильтрации.
25. Способ по п.24, где 8 двойных объемов буфера меняются.
26. Способ по любому из п.п.19-21, где фильтрация на (д) включает применение по меньшей мере одной мембраны, имеющей размер пор от приблизительно 0,45 до приблизительно 0,2 мкм.