Векторы для экспрессии простатоассоциированных антигенов

1. Вектор С68, содержащий:
(а) нуклеотидную последовательность С68; и
(б) мультиантигенную конструкцию, которая содержит по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSA (простатоспецифический антиген), по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSCA (антиген стволовых клеток простаты), и по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSMA (простатоспецифический мембранный антиген).
2. Вектор С68 по п. 1, где нуклеотидная последовательность С68 представляет собой последовательность с SEQ ID NO: 57, в которой отсутствует по меньшей мере один ген, выбранный из группы, состоящей из генов Е1А, Е1В, Е2А, Е2В, Е3, Е4, L1, L2, L3, L4 и L5, где иммуногенный полипептид PSA содержит аминокислоты 27-263 из SEQ ID NO: 15 или аминокислоты 4-240 из SEQ ID NO: 17, где иммуногенный полипептид PSCA содержит аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 21 или аминокислоты 4-125 из SEQ ID NO: 21 и где иммуногенный полипептид PSMA выбран из группы, состоящей из:
1) полипептида, содержащего аминокислоты 15-750 из SEQ ID NO: 1;
2) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 3;
3) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 5;
4) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 7;
5) полипептида, содержащего аминокислоты 4-739 из SEQ ID NO: 9;
6) полипептида, содержащего аминокислоты 4-739 из SEQ ID NO: 3;
7) полипептида, содержащего аминокислоты 4-739 из SEQ ID NO: 5;
8) полипептида, содержащего аминокислоты 4-739 из SEQ ID NO: 7; и
9) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 9.
3. Вектор С68 по п. 2, где нуклеотидная последовательность С68 представляет собой последовательность с SEQ ID NO: 57, в которой отсутствуют гены Е1А, Е1В и Е3, и где мультиантигенная конструкция дополнительно содержит разделяющую последовательность между двумя нуклеотидными последовательностями, кодирующими два разных иммуногенных полипептида, и имеет структуру формулы (I):
где в формуле (I):
(1) РАА1 (простатоассоциированный антиген 1), РАА2 и РАА3 каждый представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSA, нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSCA, или нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSMA, при условии, что РАА1, РАА2 и РАА3 кодируют разные полипептиды РАА, и
(2) SS1 и SS2 представляют собой разделяющие последовательности и могут быть одинаковыми или разными.
4. Вектор С68 по п. 3, где разделяющие последовательности выбраны из последовательностей 2А-пептидов и участков внутренней посадки рибосомы (IRES).
5. Вектор С68 по п. 4, где последовательность 2А-пептида выбрана из группы, состоящей из последовательности 2А-пептида из вируса ящура (FMDV), вируса А, вызывающего ринит у лошадей (ERAV), вируса 1 болезни Тешена у свиней (PTV1), вируса энцефаломиокардита, варианта В (ЕМС-В), вируса энцефаломиокардита (EMCV), вируса мышиного энцефаломиелита Тейлора GD7 (TME-GD7), вируса В, вызывающего ринит у лошадей (ERBV), вируса Thosea asigna (TaV), вируса С дрозофилы (DrosC), вируса паралича сверчка (CrPV), вируса острого паралича пчел (ABPV), вируса инфекционного заболевания тутового шелкопряда (IFV), ротавируса свиней, ротавируса человека, TSR1 Т. brucei и апуриновой/апиримидиновой (АР) эндонуклеазы Т. cruzi; и где IRES (участок внутренней посадки рибосомы) представляет собой IRES из EMCV.
6. Вектор по п. 5, где РАА1 в формуле (I) представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSA, или нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSCA.
7. Вектор по п. 6, где
(1) РАА1 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSA;
(2) РАА2 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSCA или PSMA;
(3) SS1 представляет собой последовательность 2А-пептида и
(4) SS2 представляет собой последовательность 2А-пептида или IRES из EMCV.
8. Вектор С68 по п. 7, где последовательность 2А-пептида представляет собой последовательность 2А-пептида FMDV или последовательность 2А-пептида TaV.
9. Вектор С68 по п. 8, где
(1) нуклеотидная последовательность, кодирующая иммуногенный полипептид PSA, выбрана из группы, состоящей из: (а) нуклеотидной последовательности с SEQ ID NO: 18; (б) нуклеотидной последовательности с SEQ ID NO: 20; (в) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 10-720 из SEQ ID NO: 18; (г) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 1115-1825 из SEQ ID NO: 58; и (д) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 1106-1825 из SEQ ID NO: 58;
(2) нуклеотидная последовательность, кодирующая иммуногенный полипептид PSCA, выбрана из группы, состоящей из: (а) нуклеотидной последовательности с SEQ ID NO: 22; (б) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 10-372 из SEQ ID NO: 22; (в) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 1892-2257 из SEQ ID NO: 58; и (г) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 1886-2257 из SEQ ID NO: 58; и
(3) нуклеотидная последовательность, кодирующая иммуногенный полипептид PSMA, выбрана из группы, состоящей из: (а) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 43-2250 из SEQ ID NO: 2; (б) нуклеотидной последовательности с SEQ ID NO: 4; (в) нуклеотидной последовательности с SEQ ID NO: 6; (г) нуклеотидной последовательности с SEQ ID NO: 8; (д) нуклеотидной последовательности с SEQ ID NO: 10; (e) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 10-2217 из SEQ ID NO: 4; (ж) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 10-2217 из SEQ ID NO: 6; (з) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 10-2217 из SEQ ID NO: 8; (и) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 10-2217 из SEQ ID NO: 10; (к) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 2333-4543 из SEQ ID NO: 58; и (л) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотиды 2324-4543 из SEQ ID NO: 58.
10. Вектор С68 по п. 3, где в формуле (I):
(1) РАА1 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSA, и содержит нуклеотиды 1115-1825 из SEQ ID NO: 58 или содержит нуклеотиды 1106-1114 из SEQ ID NO: 58;
(2) РАА2 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSCA, и содержит нуклеотиды 1892-2257 из SEQ ID NO: 58 или содержит нуклеотиды 1886-2257 из SEQ ID NO: 58;
(3) РАА3 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую иммуногенный полипептид PSMA, и содержит нуклеотиды 2333-4543 из SEQ ID NO: 58 или содержит нуклеотиды 2324-4543 из SEQ ID NO: 58;
(4) SS1 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую Т2А (2А-пептид TaV); и
(5) SS2 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую F2A (2А-пептид вируса ящура).
11. Вектор С68 по п. 1, где мультиантигенная конструкция содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность с SEQ ID NO: 60 или SEQ ID NO: 64.
12. Вектор C68 по п. 1, где мультиантигенная конструкция содержит нуклеотидную последовательность с SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66 или вырожденный вариант нуклеотидной последовательности с SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66.
13. Вектор C68 по п. 11 или 12, дополнительно содержащий промотор CMV.
14. Вектор С68 по п. 1, содержащий нуклеотидную последовательность с SEQ ID NO: 58, нуклеотиды 9-34811 из SEQ ID NO: 58 или нуклеотидную последовательность с SEQ ID NO: 63.
15. Композиция, содержащая вектор С68 по любому из пп. 1-14.
16. Клетка, содержащая вектор С68 по любому из пп. 1-14.
17. Фармацевтическая композиция, содержащая вектор по любому из пп. 1-14 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
18. Способ лечения рака предстательной железы у человека, включающий введение человеку эффективного количества фармацевтической композиции по п. 17.
19. Способ по п. 18, дополнительно включающий введение человеку эффективного количества иммуномодулятора.
20. Способ по п. 18, дополнительно включающий введение человеку (а) эффективного количества по меньшей мере одного ингибитора супрессорных клеток иммунной системы и (б) эффективного количества по меньшей мере одного усилителя эффекторных клеток иммунной системы.
21. Способ по п. 20, где ингибитор супрессорных клеток иммунной системы выбран из группы, состоящей из ингибитора протеинкиназы, ингибитора циклооксигеназы-2 (СОХ-2) и ингибитора фосфодиэстеразы типа 5 (PDE5), и где усилитель эффекторных клеток иммунной системы выбран из группы, состоящей из ингибитора цитотоксического Т-лимфоцитарного антигена-4 (CTLA-4), агониста CD40, агониста toll-подобного рецептора (TLR), агониста 4-1ВВ, агониста ОХ40, агониста индуцированного глюкокортикоидами рецептора фактора некроза опухолей (GITR), антагониста белка 1 программируемой клеточной смерти (PD-1) и антагониста лиганда 1 PD-1 (PD-L1).
22. Способ по п. 21, где
(1) ингибитор протеинкиназы выбран из группы, состоящей из иматиниба, сорафениба, лапатиниба, зактима, МР-412, дазатиниба, лестауртиниба, сунитиниба малата, акситиниба, эрлотиниба, гефитиниба, босутиниба, темсиролимуса и нилотиниба;
(2) ингибитор CTLA-4 выбран из группы, состоящей из ипилимумаба и тремелимумаба;
(3) агонист CD40 представляет собой антитело к CD40, выбранное из группы, состоящей из G28-5, mAb89, ЕА-5, S2C6, СР870893 и дацетузумаба; и
(4) агонист TLR представляет собой CpG-олигонуклеотид, выбранный из группы, состоящей из CpG 24555, CpG 10103, CpG7909 и CpG1018.
23. Способ по п. 22, где ингибитор супрессорных клеток иммунной системы представляет собой ингибитор протеинкиназы, выбранный из группы, состоящей из сорафениба, дазатиниба, иматиниба, акситиниба и сунитиниба малата, и где усилитель эффекторных клеток иммунной системы представляет собой тремелимумаб.
24. Способ по п. 22, где ингибитор супрессорных клеток иммунной системы представляет собой ингибитор протеинкиназы, выбранный из группы, состоящей из сорафениба, дазатиниба, иматиниба, акситиниба и сунитиниба малата, и где усилитель эффекторных клеток иммунной системы представляет собой CpG-олигонуклеотид, выбранный из группы, состоящей из CpG24555, CpG10103, CpG7909 и CpG1018.