Способ прогнозирования угрозы выкидыша при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции путем определения в сыворотке крови эстрадиола и рецептора эстрогена альфа
METHOD FOR PREDICTING THE THREAT OF MISCARRIAGE DURING REACTIVATION OF LATENT CYTOMEGALOVIRUS INFECTION BY DETERMINING ESTRADIOL AND ESTROGEN RECEPTOR ALPHA IN BLOOD SERUM

Область применения: изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, а также к области научных исследований - патологической физиологии, и предназначено для прогнозирования угрозы выкидыша на ранних сроках при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции.
Уровень техники
В настоящее время сфера научных интересов исследователей и практических врачей в перинатальной охране плода сместилась к ранним срокам беременности - к первому триместру, так как именно в этот период происходят формирование фетоплацентарной системы, закладка органов и тканей плода, экстраэмбриональных структур, что в большинстве случаев определяет дальнейшее течение беременности [1, 5]. По данным ряда авторов, частота прерывания беременности в первом триместре составляет 50% [14]. Высокая частота угрозы прерывания на ранних сроках указывает на трудности, возникающие при ведении женщин с невынашиванием беременности, которые обусловлены многофакторностью этиологии и патогенетических механизмов заболевания, несовершенством применяемых диагностических методик и отсутствием адекватного подхода к терапии угрозы прерывания [1, 13, 15].
Причины невынашивания беременности разнообразны. Нередко невынашивание беременности связывают с инфекционным фактором, в частности с цитомегаловирусной инфекцией [16, 24]. Инфицирование цитомегаловирусом в ранние сроки беременности приводит к самопроизвольному прерыванию беременности (9,7%), угроза прерывания наблюдается у 36%, преждевременные роды у 30%, перинатальная заболеваемость 5,4% [7]. Механизмом данных патологий может являться патогенное действие вируса на фетоплацентарную систему. При этом наблюдается нарушение инвазии синцитиотрофобласта [37], гестационной трансформации трофобласта и ворсин хориона [8, 12], происходят деструктивные процессы вследствие активации процессов перекисного окисления липидов и медиаторов воспаления [2, 3], нарушения гормонального баланса [4, 10].
Большое значение в наступлении и поддержании нормальной беременности имеет адекватный уровень тропных и половых гормонов. Понимание и влияние на изменение уровня гормонов может привести к повышению возможностей в терапии репродуктивных потерь [11].
Эстроген является одним из наиболее важных репродуктивных стероидных гормонов, связанных с развитием плаценты и плода, который играет решающую роль в поддержании беременности, регулируя имплантацию, выработку связанных с беременностью гормонов и маточно-плацентарный кровоток [18, 22, 32]. Данный гормон стимулирует выработку сосудистого эндотелиального фактора роста и образование кровеносных сосудов, обеспечивая адекватное кровообращение матери и плода [25]. Заметное усиление биосинтеза эстрогенов плаценты наблюдалось на ранних сроках беременности, когда начинаются процессы ангиогенеза [19]. Помимо этого показано, что эстроген выполняет двоякую функцию в иммунной регуляции, поскольку модулирует иммунный ответ, индуцируя периферические Т-клетки для секреции провоспалительных цитокинов (IFN-g и IL-2) [36], а также способствует толерантности, индуцируя секрецию IL-10 [21]. Аутокринная роль плаценты в продукции эстрогена имеет решающее значение для дифференцировки клеток трофобласта [23].
Функция эстрогена опосредуется рецепторами эстрогена (ER), которые представляют собой группу белков, классифицируемых как ядерные рецепторы, входящие в состав факторов транскрипции, активируемых лигандом. Существует две формы ER, ERα и ERβ, которые кодируются соответственно ESR1 и ESR2 [27]. Было обнаружено, что экспрессия ESR1 в матке мышей намного выше, чем ESR2, что указывает на более важную роль ESR1 в невынашивании беременности [29]. В экспериментальных исследованиях показано, что блокировка рецептора эстрогена в результате перорального приема тамоксифена самкам шляпных обезьян приводила к торможению беременности в постовуляторный период [33].
По некоторым данным, недостаточная гормонально зависимая структурно-функциональная перестройка эндометрия не исключает возникновение дефектов имплантации, что в случае наступления беременности может привести к гибели эмбриона в ранние сроки [13].
Зарубежные исследователи утверждают, что изменение уровня эстрогена в сыворотке крови приводит к нарушению рецептивности эндометрия и снижению частоты наступления беременности [34]. Также сообщалось, что дефицит эстрогенов связан с высоким риском последующего выкидыша [28].
Эстрадиол - это форма эстрогенов в организме женщины, которая в зависимости от срока беременности синтезируется клетками трофобласта [20]. Эстрогены оказывают мощное воздействие на иммунные клетки и регулируют их пролиферацию, распределение и функцию в тканях матки [38], что необходимо для имплантации, развития плаценты и плода не только при физиологическом течении беременности, но и в условия материнской инфекции [30]. Было показано, что низкие концентрации эстрадиола способствуют ответам Th1 и клеточному иммунитету, а высокие концентрации данного гормона усиливают ответы Th2 и гуморальный иммунитет [35].
Действие эстрадиола на клетки-мишени и развитие эстрогенового ответа определяется рецептором эстрогена альфа (ЕRα), экспрессия которого установлена в репродуктивных тканях [22] и плаценте [26].
Следовательно, метаболизм и баланс половых гормонов играет важную роль в поддержании и развитии беременности. Как правило, основными эндокринными индексами, используемыми для оценки угрозы прерывания беременности, являются сывороточные уровни хорионического гонадотропина и пролактина. Так же связь между плодом и матерью в течение первого триместра контролируется эстрогеном и андрогеном [39]. Недавний метаанализ [31] подтвердил ценность измерения эстрадиола в прогнозировании исхода угрозы выкидыша.
Таким образом, недостаточная выработка эстрадиола и рецептора эстрагена α может являться одной из причин самопроизвольного прерывания беременности, так как данные соединения являются важными факторами эмбрионального развития.
Аналогами данного изобретения являются описанные в литературе методы лабораторного исследования, имеющие своей целью прогнозирование угрозы прерывания беременности. В настоящее время наиболее часто в клинической практике для верификации угрозы прерывания беременности используют определение в сыворотке крови прогестерона, хорионического гонадотропина, уровень α-2-микроглобулина [6], эстриола, плацентарного лактогена и интерлейкина 6 [17], а также исследование прогестерона, эстрадиола, хорионического гонадотропина и маркеров апоптоза: супероксиддисмутазы и ФАС-лиганда [5]. Несмотря на высокую информативность, данные методы не позволяют проводить интеграцию изучаемых показателей с инфекционной патологией.
На основании вышеописанных известных сведений, нами предложен способ прогнозирования угрозы выкидыша ранних сроков при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции.
Наиболее близким по техническому решению является способ, предложенный нами ранее [9], который позволяет прогнозировать угрозу выкидыша ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции по определению в крови содержания эстрадиола и фактора некроза опухолей α.
Несмотря на достоинства данного метода, в нем не учитывается эстрогеновый ответ, определяемый рецептором эстрогена α в прогнозировании угрозы выкидыша.
Указанные факторы могут быть устранены в заявленном способе.
Техническим результатом, достигаемым при осуществлении предлагаемого изобретения, является повышение точности прогнозирования угрозы выкидыша ранних сроков при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции.
Заявляемый технический результат достигается тем, что у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции, методом иммуноферментного анализа (ИФА) в сыворотке крови определяют содержание эстрадиола (E2) (пг/мл) с помощью стандартного набора реактивов «DRG» (USA) и рецептора эстрогена α (ERα) (нг/л) с использованием наборов «Cloud-Clon Corporation» (USA).
Полученные значения используют для вычисления прогностического индекса (ПИ), по формуле, разработанной с использованием метода дискриминантного анализа:
ПИ= -126,801- (0,146×Е2) + (18,352× ERα),
где ПИ - прогностический индекс дискриминантной функции, граничное значение которой (-1,421).
При ПИ равном или меньше граничного значения, прогнозируют угрозу выкидыша у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции в ранние сроки беременности. При ПИ больше граничного значения прогнозируют отсутствие угрозы выкидыша.
Новизна заявляемого способа заключается в определении с учетом значений эстрадиола и рецептора эстрогена α в сыворотке крови у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции в ранние сроки беременности прогностического индекса ПИ, по отношению которого к граничному значению дискриминантной функции прогнозируют угрозу выкидыша.
Ранее совокупность указанных признаков в прогнозировании угрозы выкидыша у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции в ранние сроки беременности не использовалась.
Способ содержит следующие приемы:
- у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции в сыворотке крови, взятой из локтевой вены утром натощак, методом ИФА определяют содержание эстрадиола (Е2) с помощью стандартного набора реактивов «DRG» (USA);
- измеряют концентрацию рецептора эстрогена α (ERα) методом ИФА с использованием наборов «Cloud-Clon Corporation» (USA);
- с помощью дискриминантного уравнения определяют прогностический индекс ПИ= -126,801- (0,146×Е2) + (18,352× ERα),
где ПИ - прогностический индекс дискриминантной функции, граничное значение которого (-1,421);
- определяют угрозу выкидыша: при ПИ равной или меньше граничного значения, прогнозируют угрозу выкидыша у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции в ранние сроки беременности, при ПИ больше граничного значения - прогнозируют отсутствие угрозы выкидыша.
Вероятность правильного прогноза составляет 82%.
Эффективность метода подтверждается следующими клиническими примерами.
Пример 1.
Беременная Д., 23 г., находилась на стационарном лечении в гинекологическом отделении Городской клинической больницы (г. Благовещенск). Поступила с болями внизу живота и кровянистыми выделениями из половых путей. Гинекологический анамнез осложнен: 1 медицинский аборт без осложнений. Проведен анализ крови на TORCH-инфекции, содержание эстрадиола, рецептора эстрогена α, УЗИ органов малого таза. По ИФА выявлены антитела IgM к цитомегаловирусу, титр антител IgG составил 1600, индекс авидности - 90%.
По УЗИ: в полости матки плодное яйцо с эмбрионом 7 недель 5 дней. Сердцебиение определяется. Гипертонус по задней стенке матки. Внутренний зев сомкнут. Ниже плодного яйца гематома небольших размеров (отслойка ворсинчатого хориона).
Диагноз: беременность 7-8 недель. Угрожающий самопроизвольный выкидыш. Реактивация латентной цитомегаловирусной инфекции.
По заявленному способу при лабораторном исследовании сыворотки крови получены следующие показатели: содержание эстадиола - 570,0 пг/мл; рецептора эстрогена α - 9,40 нг/л. Прогностический индекс, рассчитанный по формуле, составил (-37,511), что свидетельствовало о высоком риске угрозы выкидыша, в связи с чем пациентка отнесена в группу риска по реализации невынашивания в ранние сроки.
На третий день стационарного лечения усилились боли внизу живота и кровянистые выделения из половых путей. Выставлен диагноз самопроизвольный выкидыш в ходу при сроке 8 недель беременности.
Прогноз по заявленному способу подтвердился.
Пример 2
. Беременная И., 22 л., находилась на стационарном лечении в гинекологическом отделении Городской клинической больницы (г. Благовещенск). Гинекологический анамнез осложнен: 1 медицинский аборт без осложнений. Проведен анализ сыворотки крови на TORCH-инфекции, содержание эстрадиола, рецептора эстрогена α, УЗИ органов малого таза.
По ИФА титр антител IgG - 800, индекс авидности - 92%. Диагноз: Беременность 7 недель. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, латентная стадия.
По УЗИ: в полости матки плодное яйцо с эмбрионом 7 недель 2 дня. Сердцебиение определяется. Внутренний зев сомкнут.
По заявленному способу при лабораторном исследовании сыворотки крови получены следующие показатели: содержание эстрадиола - 830,0 пг/мл, рецептора эстрогена α - 19,80 нг/л. Прогностический индекс, рассчитанный по формуле, составил - (115). Отсутствие угрозы выкидыша на ранних сроках.
Прогноз по заявленному способу подтвердился.
Приведенные примеры наглядно показывают точность прогнозирования угрозы выкидыша на ранних сроках у женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции.
Способ прошел клиническую апробацию. С его помощью проведено прогнозирование угрозы выкидыша у 50 беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции. Правильный прогноз определялся в 82% случаев, что подтверждает высокую эффективность заявляемого способа.
Используемые источники
1. Джабиева А.А., Джабиев А.В., Ордиян И.М. Исходы беременности и родов у женщин с угрозой прерывания в первом триместре // Вестник РУДН, серия Медицина, 2012. №6. С. 66-77.
2. Ишутина Н.А., Дорофиенко Н.Н. Пероксидация липидов при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2014. Вып. 54. С. 66-69.
3. Ишутина Н.А., Дорофиенко Н.Н., Андриевская И.А. Малоновый диальдегид и фактор некроза опухолей α в периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2015. Вып. 55. С. 78-81.
4. Ишутина Н.А., Луценко М.Т., Андриевская И.А. Роль холестерола и эстрадиола в развитии плацентарной недостаточности при цитомегаловирусной инфекции в III триместре гестации // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2017. Вып. 65. С. 54-58.
5. Камилова М.Я., Арабова С.У., Рахматуллоева Д.М., Гулакова Д.М. Изменения уровней маркеров апоптоза и гормонального фона у женщин с угрозой прерывания беременности //Известия Академии наук республики Таджикистан. Отделение биологических и медицинских наук. 2015. №2 (190). С. 85-87.
6. Способ прогнозирования невынашивания беременности: пат. № 2002135161А RU / авторы: В.И. Краснопольский, О.Ф. Серова, В.А. Туманова, Н.В. Зароченцева, Л.Н. Липовенко, Т.Н. Мельник, И.В. Бакотина, А.П. Лазарев; заявитель: Государственное учреждение Здравоохранения Московский областной научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии; заяв. 20.12.2004; опубл. 10.05.2006.
7. Кытикова О.Ю., Новгородцева Т.П., Петрова К.К. Патофизиологические механизмы повреждающего действия цитомегаловирусной инфекции при беременности //Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2017. Вып. 66. С. 98-107.
8. Луценко М.Т. Цитомегаловирусная инфекция // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2012. Вып. 44. С. 131-136.
9. Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание в первом триместре гестации эстрадиола на фоне увеличения в периферической крови TNFα: пат. № 2502073 С1 RU / авторы и заявители: М.Т. Луценко, И.А. Андиевская; патентообладатель Федеральное государственное бюджетное учреждение «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» Сибирского отделения РАМН; заяв. 31.07.2012; опубл. 20.12.2013. Бюл. 35
10. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Довжикова И.В. Образование дегидроэпиандростерона сульфата во время беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией. Архив патологии. 2012. №74(1). С. 46-47.
11. Лызикова Ю.А., Зиновкин Д.А. Локальный и системный гормональный дисбаланс у пациенток с хроническим эндометритом // Проблемы здоровья и экологии. 2018. №2 . С. 24-28.
12. Милованов А.П. Патология системы мать-плацента-плод. М.: Медицина, 1999. 446 с.
13. Сидельникова В.М. Невынашивание беременности: современный взгляд на проблему // Акушерство и гинекология. 2007. №5. С. 24-27.
14. Радзинский В.Е., Оразмурадова А.А. Ранние сроки беременности. М.: Status Praesens; 2008. 448 с.
15. Радзинский В.Е., Князев С.А., Оразмурадова Л.Д. Биоценозы гениталий при угрожающем невынашивании и преждевременных родах // Вестник РУДН, серия Медицина, 2009. №6. С. 364-373.
16. Чешик С.Г., Кистенева Л.Б. Цитомегаловирусная инфекция и спонтанные аборты у женщин в I и II триместрах беременности // Вопросы вирусологии. 2016. №61(2). С. 74-78.
17. Способ прогнозирования угрозы прерывания беременности с ранних сроков гестации: пат. № 2285926 С2 RU / авторы и заявители: Г.Н. Чистякова; патентообладатель: Уральский НИИ охраны материнства и младенчества; заяв. 19.01.2005; опубл. 20.10.2006. Бюл. 29.
18. Albrecht E.D., Aberdeen G.W., Pepe G.J. The role of estrogen in the maintenance of primate pregnancy // Am J Obstet Gynecol. 2000. Vol.182. P. 432-438. doi: 10.1016/S0002-9378(00)70235-3.
19. Albrecht E.D., Pepe G.J. Estrogen regulation of placental angiogenesis and fetal ovarian development during primate pregnancy // The International Journal of Developmental Biology. 2010. Vol.54, №2-3. P. 397-407.
+
+
+
.
20. Cao W., Xu W., Chen T. et al. CD4CD25FoxP3 regulatory T cells and cytokines interact with estradiol in cases of missed abortion // Exp Ther Med 2014. 7(2). P. 417-422.
21. Cohen-Solal J.F., Jeganathan V., Grimaldi C.M., et al. Sex hormones and SLE: Influencing the fate of autoreactive B cells // Curr Top Microbiol Immunol. 2006. Vol. 305. P. 67-88.
22. Corbo R.M., Ulizzi L., Piombo L., Martinez-Labarga C., De Stefano G.F., Scacchi R. Estrogen receptor alpha polymorphisms and fertility in populations with different reproductive patterns // Molecular Human Reproduction.2007. Vol. 13б №8. P. 537-540.
23. Gambino Y.P., Maymó J.L., Pérez-Pérez A., et al. 17Beta-estradiol enhances leptin expression in human placental cells through genomic and nongenomic actions // Biology of Reproduction. 2010. Vol. 83, №1. P. 42-51.
24. Giakoumelou S, Wheelhouse N, Cuschieri K, Entrican G, Howie SE, Horne AW. The role of infection in miscarriage // Hum Reprod Update. 2016. Vol. 22(1). P. 116-33. doi: 10.1093/humupd/dmv041.
25. Hildebrandt V.A., Babischkin J.S., Koos R.D., et al. Developmental regulation of vascular endothelial growth/permeability factor messenger ribonucleic acid levels in and vascularization of the villous placenta during baboon pregnancy // Endocrinology. 2001.Vol. 142. P. 2050-2057.
26. Kumar P., Kamat A., Mendelson C.R. Estrogen receptor α (ERα) mediates stimulatory effects of estrogen on aromatase (CYP19) gene expression in human placenta // Molecular Endocrinology. 2009. Vol. 23(6). P. 784-793.
27. Koehler K.F., Helguero L.A., Haldosén L.A., Warner M., Gustafsson J.A. Reflections on the discovery and significance of estrogen receptor beta // Endocr Rev. 2005. Vol.26. P. 465-478. doi: 10.1210/er.2004-0027.
28. Lam S.Y., Baker H.W., Evans J.H., Pepperell R.J. Factors affecting fetal loss in induction of ovulation with gonadotropins: increased abortion rates related to hormonal profiles in conceptual cycles // Am J Obstet Gynecol. 1989. Vol.160. P. 621-628. doi: 10.1016/S0002-9378(89)80043-2.
29. Lemmen J.G., Broekhof J.L., Kuiper G.G., Gustafsson J.A, van der Saag P.T., van der Burg B., et al. Expression of estrogen receptor alpha and beta during mouse embryogenesis // Mech Dev. 1999. Vol. 81. P.163-167. doi: 10.1016/S0925-4773(98)00223-8.
30. Littauer E.Q., Skountzou I. Hormonal Regulation of Physiology, Innate Immunity and Antibody Response to H1N1 Influenza Virus Infection During Pregnancy // Front Immunol. 2018. Vol. 29(9). P. 2455.
31. Pillai R.N., Konje J.C., Tincello D.G., Potdar N. Role of serum biomarkers in the prediction of outcome in women with threatened miscarriage: a systematic review and diagnostic accuracy meta-analysis // Hum Reprod Update. 2016. № 22. P. 228-239.
32. Pineda B., Hermenegildo C., Tarín J.J., Laporta P., Cano A., García-Pérez M.A. Alleles and haplotypes of the estrogen receptor alpha gene are associated with an increased risk of spontaneous abortion // Fertility and Sterility. 2010. Vol. 93, №6. P.1809-1815.
33. Ravindranath N., Moudgal N.R. Use of tamoxifen, an antioestrogen, in establishing a need for oestrogen in early pregnancy in the bonnet monkey (Macaca radiata) // Journal of Reproduction and Fertility. 1987. Vol.81, №2. P. 327-336.
34. Requena A., Cruz M., Meseguer M., Garcia-Velasco J. High progesterone levels in women with high ovarian response do not affect clinical outcomes: a retrospective cohort study // Reproductive Biology and Endocrinology. 2014. Vol.12, №1. P. 69.
35. Straub R.H. The complex role of estrogens in inflammation // Endocr Rev.2007. Vol. 28. P. 521-574.
36. Tanriverdi F., Silveira L.F., Maccoll G.S., Bouloux P.M. The hypothalamic-pituitary-gonadal axis: Immune function and autoimmunity // J Endocrinol. 2003. Vol. 176. P. 293-304.
37. Tao L., Suhua C., Juanjuan C., Zongzhi Y., Juan X., Dandan Z. In vitro study on human cytomegalovirus affecting early pregnancy villous EVT's invasion function // Virol. J. 2011, №8. P. 114. doi: 10.1186/1743-422X-8-114.
.
38. Tai P., Wang J., Jin H. et al. Induction of regulatory T cells by physiological level estrogen // J Cell Physiol 2008. 214(2). P. 456-464.
39. Xu Q., Chen J., Wei Z., Brandon T.R., Zava D.T., Shi Y.E., Cao Y. Sex Hormone Metabolism and Threatened Abortion // Med Sci Monit. 2017 №23. P. 5041-5048. doi: 10.12659/msm.904500.