Экспериментальное исследование безвредности комплексного антибактериального препарата Фк-1

ОПЫТ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ЭМУЛЬСИОННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ХЛАМИДИОЗА РОГАТОГО СКОТА

Евстифеев В.В., Хусаинов Ф.М., Барбарова Л.А., Хусаинова Г.И., Мифтахов Н.Р., Нигъматуллина Д.И.

Резюме

В работе изложены результаты испытания 3 вариантов инактивированных эмульсионных вакцин против хламидиоза рогатого скота, изготовленных на основе разных адъювантов.

Установлено, что все испытуемые адъюванты образуют стойкие эмульсии с хламидийным антигеном. Вакцины, изготовленные на их основе стерильны и безвредны для лабораторных животных. Однако в ходе эксперимента установлены существенные различия в вязкости, реактогенности и антигенной активности испытуемых биопрепаратов.

EXPERIENCE OF IMPROVEMENT OF AN INACTIVATED EMULSION VACCINE

AGAINST CHLAMYDIOSIS CATTLE

Evstifeev V.V., Khousainov F.M., Barbarova L.A., Khusainova G.I., Miftahov N.R., Nigmatullina D.I.

Summary

In work results of test of three options of inactivated emulsion vaccines against chlamydiosis of a cattle made on the basis of different adjuvant are stated.

It is established that all examinees adjuvant form resistant emulsions with a chlamydial antigen. Vaccines made on their basis are sterile and harmless to laboratory animals. However, during experiment essential distinctions in viscosity a reactogenicity and antigenic activity of examinees of biological preparation are established.

УДК 619:615.038:615.281

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БЕЗВРЕДНОСТИ КОМПЛЕКСНОГО АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА ФК-1

Жукова С.В. - м.н.с.; Востроилова Г.А. - д.б.н., зав. лабораторией; Ческидова Л.В. -к.в.н., с.н.с. Брюхова И.В. - к.в.н., н.с.; Беляев В.И. - д.б.н., н.с.; Шушлебин В.И. -

к.б.н., зав. лабораторией ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН», г.Воронеж, E-mail: vnivipat@mail.ru

Ключевые слова: препарат ФК-1, токсичность, белые крысы, биохимические показатели, закономерность.

Key words: preparation F^1, toxicity, white rats, biochemical indicators,

law.

Разработка новых антибактериальных препаратов для лечения желудочно-кишечных болезней молодняка является одним из перспективных направлений отечественной и зарубежной фармакологии. Многие из предложенных препаратов имеют узкую терапевтическую широту и высокий риск токсического влияния на организм животного, что ограничивает их применение.

При длительном воздействии различных токсических веществ в концентрациях, не вызывающих внешне обнаруживаемого эффекта, проявляются скрытые изменения ряда физиологических, биохимических показателей, функций отдельных органов и систем организма. Вмешиваясь в молекулярные механизмы функционирования биохимических систем, химические агенты изменяют процессы клеточного и тканевого гомеостаза, которые приводят к серьезным функциональным изменениям в деятельности всего организма (1). Поэтому доклинические испытания лекарственных средств являются обязательным и одним из важнейших этапов их создания.

Цель исследования. Доклиническое токсикологическое исследование препарата ФК-1, предложенного для лечения колибактериоза у молодняка сельскохозяйственных животных, при длительном введении подопытным животным, выявление наиболее чувствительных органов и систем организма, характера и степени патологических изменений в них. Изучение зависимости токсических эффектов от дозы препарата и длительности его применения.

Материалы и методы исследований. Эксперименты проводили на половозрелых нелинейных самцах белых крыс с массой тела 200-220 г в возрасте 4 мес. Животных содержали в виварии ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии в условиях 24-часового фоторежима (12 ч день:12 часов ночь, включение света в 7:00) при влажности воздуха 60±10 % и температуре 22±2 °С, при свободном доступе к воде и стандартному корму (гранулированный комбикорм). Все исследования проводили в утренние часы, согласно этическим принципам, изложенным в Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей.

Для проведения опыта по принципу аналогов было сформировано 4 группы крыс по 18 голов в каждой. Предварительное определение ЛД50 при подкожном введении крысам показало, что доза составляет 6743,2 мг/кг. Животным всех групп в течение 14 дней делали подкожные инъекции. Крысам I группы (контрольной) вводили стерильный физиологический раствор, особям II, III, IV групп - препарат ФК-1 в дозах

67,4 мг/кг (1/100 от ЛД50); 134,9 мг/кг (1/50 от ЛД50) и 337,2 мг/кг (1/20 от ЛД50) соответственно.

Общетоксическое действие препарата оценивали по динамике массы тела животных при взвешивании один раз в неделю, а также по состоянию системы гомеостаза - по окончании курса инъекций и через 10 дней восстановительного периода. Определяли массу органов (печень, селезенка, сердце, легкие, почки, тимус, надпочечники, семенники), а также проводили их гистологическое изучение.

Фракции белка определяли электрофорезом в агарозном геле, концентрацию общего белка, липидов, триглицеридов - с использованием наборов фирмы «Витал» (Санкт-Петербург), концентрацию мочевины, фосфора, холестерина, глюкозы, креатинина, кальция, активность аспартат- и аланинаминотрасфераз (АсАТ и АлАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), у-глутамилтрансферазы (ГГТ) - на биохимическом анализаторе

«Hitachi-902».

Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакетов прикладных программ «Microsoft Excel», «Statistica 5,0». Достоверность отличий оценивали методом парных сравнений, используя t-критерий Стьюдента (2).

Результаты исследований. Проведенными исследованиями установлено, что многократное подкожное введение препарата ФК-1 не вызывает изменений в клиническом состоянии животных: поведение, аппетит, частота дыхания во всех опытных группах, как в период применения препарата, так и в течение 10 дней после окончания применения ФК-1 оставались в пределах нормы. За период наблюдения у животных IV опытной группы было отмечено незначительное размягчение стула, при этом фекалии оставались оформленными, в остальных опытных группах изменений не отмечалось. Нарушений в мочеиспускании не наблюдалось. Гибели животных в ходе опыта не было.

За период опыта достоверная разница в среднесуточном приросте живой массы крыс контрольной и опытных групп отсутствовала.

Относительные массы внутренних органов крыс, которым применяли препарат ФК-1 подкожно в изученных дозах в течение 14 дней, существенно не отличались от контроля (табл. 1).

При патоморфологических исследованиях внутренних органов подопытных животных во всех группах после многократного введения препарата, в сравнении с контрольной группой, различий не обнаружено.

Достоверных изменений в биохимических показателях крови животных II и III групп, по сравнению с показателями крыс в контроле, на 14 день опыта не установлено (табл. 2).

1. Относительные массы внутренних органов крыс при многократном подкожном применении препарата ФК-1

Внутренний орган Контроль Доза препарата мг/кг

67,4 134,9 337,2

Легкие 5,50±0,44 4,99±0,47 5,59±0,15 5,97±0,58

Сердце 3,27±0,11 3,27±0,05 3,49±0,38 3,36±0,12

Печень 34,7±0,27 34,9±2,75 33,4±3,94 35,2±2,41

Селезенка 3,56±0,33 3,28±0,11 3,22±0,43 3,09±0,23

Почки 6,08±0,23 6,08±0,30 6,37±0,28 5,94±0,54

Надпочечники 0,15±0,02 0,14±0,02 0,14±0,04 0,16±0,02

Тимус 2,05±0,28 2,19±0,33 1,95±0,16 1,89±0,32

Семенники 11,15±0,19 11,40±0,10 11,52±0,14 11,85±0,01

2. Биохимические показатели крови белых крыс при длительном

подкожном введении ФК-1

Показатели Контроль Дозы препарата, мг/кг

67,4 134,9 337,2

Общий белок, г/л 68,5±4,00 77,6±3,40 74,9±0,83 69,7±2,20

Альбумины, г/л 38,4±2,36 41,0±3,06 40,3±4,44 37,8±2,80

Глобулины, г/л - а 6,09±0,22 6,75±0,58 6,62±0,21 7,86±0,51*

- в 12,0±0,73 13,0±1,07 13,1±0,37 11,5±0,56

- Y 13,0±1,03 17,1± 1,56 14,9±0,65 12,6±0,41

Мочевина, мМ/л 5,41±0,19 4,88±0,28 5,53±0,46 6,18±0,21*

Креатинин, мкМУл 33,6±1,15 34,2±1,88 34,0±0,94 39,5±1,41*

Глюкоза, мМ/л 4,69±0,26 4,31±1,66 4,73±0,39 5,02±0,39

АлАт, Е/л 50,5±4,42 50,2±4,79 51,6±2,01 66,2±4,85*

АсАт, Е/л 128,3±2,36 125,0±1,60 133,0±8,04 186,3±10,6**

ЩФ, Е/л 300,3±31,3 280,6±17,5 298,0±27,6 305,8±34,0

ГГТ, Е/л 4,05±0,31 3,35±0,25 2,93±0,21 5,50±0,48*

Кальций, мМ/л 2,38±0,01 2,31±0,02 2,5±0,03 2,34±0,02

Фосфор, мМ/л 2,08±0,12 2,28±0,35 2,16±0,11 1,95±0,22

Холестерол, мМ/л 1,68±0,28 1,73±0,17 1,77±0,22 1,62±0,10

Общие липиды, г/л 1,42±0,37 1,46±0,49 1,38±0,12 1,46±0,08

Триглицериды, мМ/л 0,69±0,23 0,75±0,18 0,78±0,27 0,72±0,46

* - Р < 0,01; ** - Р < 0,001 по сравнению с контролем

В IV опытной группе отмечена тенденция к более напряженному функционированию гепатобиллиарной и мочевыделительной системы организма крыс.

Возрастание активности аланинаминотрасферазы обычно рассматривается в качестве показателя степени токсического поражения печени и повреждения плазматической мембраны, также как и активность ГГТ (особенно чувствительна к гепатотоксическим воздействиям). На 14 день эксперимента у крыс IV опытной группы достоверно возрастала активность таких ферментов, как аспартатаминтрансфераза и аланинаминотрасфераза (на 45,2 и 31,1% по сравнению с контролем), а также глутамилтрансферазы (на 35,8%).

Также отмечено достоверное увеличение содержания в сыворотке крови креатинина (на 17,6%), мочевины (на 14,2%), а-глобулинов (на 29,1%) по сравнению с контролем, что свидетельствует о возросшей нагрузке на почки.

Тем не менее, колебания величин этих показателей оставались в пределах физиологической нормы для крыс на протяжении всего опыта.

Выводы. Анализируя результаты определения биохимических показателей крови белых крыс при подкожном применении препарата ФК-1 в течение 14 дней, можно констатировать, что препарат в дозах 67,4 и 134,9 мг/кг не оказывает отрицательного воздействия на их величины. Применение препарата ФК-1 в дозе 337,2 мг/кг оказывает влияние на функции печени и почек, вызывая изменение соответствующих биохимических показателей сыворотки крови. Однако эти изменения не сказываются на интегральных показателях клинического состояния и относительной массе внутренних органов животных, и являются обратимыми, так как через 10 дней после отмены препарата отличия между подопытными и контрольными крысами отсутствуют.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Кавешникова С.В. Биохимические особенности крови крыс линии Вистар в постнатальном онтогенезе при интоксикации их оксидами азота / С.В. Кавешникова, В.М. Иванов // Вестник Ставропольского государственного университета. - 2011. - №74. - С. 100105. 2. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М.:Высшая школа, 1990. - 344 с.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БЕЗВРЕДНОСТИ КОМПЛЕКСНОГО АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА ФК-1

Жукова С.В., Востроилова Г.А., Ческидова Л.В., Брюхова И.В., Беляев В.И., Шушлебин В.И.

Резюме

Препарат ФК-1 при подкожном применении в течение 14 дней в дозах 67,4 и 134,9 мг/кг не оказывает отрицательного воздействия на биохимические показатели крови белых крыс. При длительном (14 дней) применении в дозе 337,2 мг/кг оказывает влияние на функции печени и почек, вызывая изменение соответствующих биохимических показателей

сыворотки крови. Однако эти изменения являются обратимыми, так как через 10 дней после отмены препарата отличия между подопытными и контрольными крысами отсутствуют.

EXPERIMENTAL RESEACH OF HARMLESSNESS A COMPLEX ANTIBACTERIAL

PREPARATION

Zhukova S.V., Vostroilova G.A., Cheskidova L.V., Bryukhova I.V., Belyaev V.I., Shushlebin V.I.

Summary

Preparation ФК-1 at hypodermic application within 14 days at doses of

67,4 and 134,9 mg/kg has no negative influence on blood biochemical indicators of white rats. During a long time application (14 days) at dose of 337,2 mg/kg preparation F^1 influences liver and kidneys functions, causing changes in corresponding biochemical indicators of serum. However these changes were reversible because 10 days after cancellation of a preparation there was no difference between experimental and control groups.

УДК 619:615.281:616.34-002:636.2-082.35

АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО ПРЕПАРАТА ФК-1 ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ТЕЛЯТ

Жукова С.В. - м.н.с.; Панина Т.А. - м.н.с.; Востроилова Г.А. - д.б.н., зав. лабораторией; Ермакова Т.И. - к.б.н., ученый секретарь ГНУ «Всероссийский научноисследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН», г.Воронеж, E-mail: vnivipat@mail.ru

Ключевые слова: комплексный препарат, антимикробная

активность, колибактериоз, телята.

Key words: a complex preparation, antimicrobic activity, colibacteriosis,

calfs.

Желудочно-кишечные и респираторные болезни телят и поросят широко распространены в крупных животноводческих хозяйствах. При этом потери среди молодняка животных в первые несколько недель после рождения составляют от 10 до 50%. Гибель новорожденных животных обусловлена воздействием на организм патогенной и условно-патогенной микрофлоры (5).

В современном животноводстве лечебные и профилактические мероприятия играют огромную роль, так как возросла доля заболеваний со