СПОСОБЫ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ АЛЛЕРГИИ ПОСРЕДСТВОМ ВВЕДЕНИЯ АНТАГОНИСТА IL-4R
METHODS FOR PREVENTING OR TREATING ALLERGIES BY INTRODUCING AN IL-4R ANTAGONIST

[001]
Настоящая заявка содержит список последовательностей, который представлен в электронной форме в формате ASCII и, таким образом, включен в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. Указанная копия ASCII, созданная 18 августа 2017 года, имеет название SequenceList_28PCT.txt и имеет размер 11043 байт.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[002]
Настоящее изобретение относится к предупреждению и/или лечению аллергии и аллергических состояний. Более конкретно, изобретение относится к введению антагонистов рецептора интерлейкина-4 (IL-4R) для предупреждения или лечения аллергии у пациента.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[003]
Аллергия и аллергические заболевания являются серьезными медицинскими состояниями, последствия которых входят в диапазоне от не угрожающих жизни ответов, которые проходят с течением времени, до угрожающих жизни эффектов, таких как анафилаксия. Аллергические реакции могут быть результатом контакта или воздействия различных продуктов, таких как определенные продукты питания, яд насекомых, растительный материал (например, пыльца), химические вещества, лекарственные средства/медикаменты и перхоть животных. На патофизиологию аллергии влияет сложное взаимодействие между опосредуемой иммуноглобулином E (IgE) сенсибилизацией, иммунной системой и факторами внешней среды. Современные возможности лечения аллергии включают избегание контакта, фармакологическое лечение симптомов и профилактику с использованием аллерген-специфической иммунотерапии (SIT). К сожалению, эти современные стратегии лечения часто являются недостаточными, дорогостоящими, непрактичными или вовлекают значительный риск. Например, избегание аллергена не всегда является возможным и может оказывать отрицательное действие на качество жизни пациента и лица, осуществляющего уход. Иммунотерапевтические подходы, с другой стороны, вовлекают намеренное введение аллергена предрасположенным индивидуумов и, таким образом, в своей основе являются рискованными, имея потенциал к нежелательным тяжелым аллергическим реакциям или анафилаксии. Таким образом, в данной области существует неудовлетворенная потребность в новых терапевтических подходах, которые осуществляют предупреждение или лечение аллергии или аллергических ответов и снижают риск развития аллергического ответа.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[004]
Согласно некоторым аспектам, настоящее изобретение относится к способам предупреждения или лечения аллергии у индивидуума. Также включены способы уменьшения предрасположенности к аллергической реакции или уменьшения сенсибилизации аллергеном индивидуума. В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способам уменьшения уровней аллерген-специфических IgE в сыворотке у индивидуума. Способы по настоящему изобретению включают введение индивидууму, нуждающемуся в этом, фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество антагониста рецептора интерлейкина-4 (IL-4R). В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят подкожно в дозе 75-600 мг.
[005]
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам предупреждения или лечения аллергии, где предупреждение или лечение аллергии включает снижение уровня аллерген-специфического IgE. В некоторых вариантах осуществления у пациента происходит по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40% или по меньшей мере 50% снижение уровня аллерген-специфического IgE при введении антагониста IL-4R. В некоторых вариантах осуществления аллергическая реакция или предрасположенность индивидуума запускается сенсибилизацией аллергеном. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам снижения или устранения сенсибилизации аллергеном.
[006]
Dermatophagoides farinae
D. pteronyssinus
Malasezzia furfur
Pityrosporum orbiculare
В некоторых вариантах осуществления индивидуум является сенсибилизированным к аллергену, происходящему из одного или нескольких источников, включающих, но не ограничивающихся ими, ольху серую, черную гниль, бермудскую траву, бородавчатую березу, кошачью перхоть, кладоспорий, таракана (рыжего),  (клещ), , собачью перхоть, вяз, джонсонову траву, белый дуб, амброзию короткую, полынь горькую, тимофеевку (Phleum), ясень белый, кандиду белая, , , плесень, стафилококковый энтеротоксин A или стафилококковый энтеротоксин B. В некоторых вариантах осуществления индивидуум сенсибилизирован к аллергену, происходящему из продукта питания, выбранного из группы, состоящей из молочного продукта, рыбы, моллюсков, арахиса, лесного ореха, фруктов (например, дыни), яиц, пшеницы и сои.
[007]
Согласно определенным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения или предупреждения аллергии или уменьшения предрасположенности к аллергической реакции у индивидуума, где способы включают последовательное введение индивидууму от приблизительно 50 мг до приблизительно 600 мг антагониста IL-4R в качестве исходной дозы, а после этого одной или нескольких вторичных доз. В некоторых вариантах осуществления исходная доза и одна или несколько вторичных доз содержат в каждом случае от приблизительно 75 мг до приблизительно 300 мг антагониста IL-4R. В некоторых вариантах осуществления антагонист IL-4R вводят в качестве исходной дозы 400 мг или 600 мг, а затем вводят одну или несколько вторичных доз, где каждая вторичная доза содержит 200 мг или 300 мг. Согласно этому аспекту изобретения, фармацевтическую композицию можно вводить индивидууму с частотой дозирования, например, один раз в неделю, один раз в 2 недели, один раз в 3 недели или один раз в 4 недели. В одном варианте осуществления антагонист IL-4R вводят в исходной дозе 400 мг, а затем вводят одну или несколько вторичных доз, где каждая вторичная доза содержит 200 мг и вводится раз в неделю.
[008]
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способам лечения или предупреждения аллергии или снижения предрасположенности к аллергической реакции у индивидуума, где индивидуум имеет заболевание или нарушение, выбранное из группы, состоящей из атопического дерматита, астмы, аллергического ринита, эозинофильного эзофагита и пищевой аллергии. В одном варианте осуществления индивидуум имеет атопический дерматит от умеренного до тяжелого.
[009]
Примеры антагонистов IL-4R, которые можно использовать в контексте способов по настоящему изобретению, включают, например, низкомолекулярные химические ингибиторы IL-4R или его лигандов (IL-4 и/или IL-13), или биологические средства, которые нацелены на IL-4R или его лиганды. Согласно определенным вариантам осуществления, антагонист IL-4R представляет собой антигенсвязывающий белок (например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент), который связывает цепь IL-4Rα и блокирует передачу сигнала IL-4, IL-13, или как IL-4, так и IL-13. В одном варианте осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают IL-4R, содержат определяющие комплементарность областей (CDR) пар последовательностей вариабельной области тяжелой цепи (HCVR)/ вариабельной области тяжелой цепи (LCVR) SEQ ID NO: 1/2. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR тяжелой цепи (HCDR1), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, HCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, HCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDR легкой цепи (LCDR1), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, LCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и LCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. Одним таким типом антигенсвязывающего белка, который может использоваться в контексте способов по настоящему изобретению, является антитело против IL-4Rα, такое как дупилумаб.
[010]
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят индивидууму подкожно или внутривенно.
[011]
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят пациенту до, после или одновременно со вторым терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления второе терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из другого ингибитора IL-4R, ингибитора IgE, кортикостероида (например, местный кортикостероид или системный кортикостероид), нестероидного противовоспалительного средства (NSAID), антигистамина, системной иммунотерапии и IFNγ.
[012]
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению антагониста IL-4R по изобретению для получения лекарственного средства для лечения или уменьшения, или предупреждения аллергии или сенсибилизации аллергеном у пациента.
[013]
Другие варианты осуществления настоящего изобретения станут понятными после рассмотрения приведенного ниже подробного описания.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[014]
фиг.1
На представлены среднеквадратическое (LS) среднее значение процентного изменения показателей индекса тяжести и площади экземы (EASI) от исходного уровня до 16 недели и исследовании, описанном в примере 1. *P<0,0001 против плацебо; qw, один раз в неделю, SE, стандартная ошибка.
[015]
фиг.2
Напредставлено LS среднее значение процентного изменения максимальных еженедельных показателей по числовой оценочной шкале зуда (NRS) от исходного уровня до 16 недели в исследовании, описанном в примере 1. *P<0,01 против плацебо; LS, среднеквадратические значения.
[016]
фиг.3
На представлены сывороточные уровни регулируемого тимусом и активацией хемокина (TARC) от исходного уровня до 16 неделе в исследовании, описанном в примере 2. **P <0,001 против плацебо; DPL, дупилумаб; PBO, плацебо; qw, один раз в неделю; SE, стандартная ошибка.
[017] На фиг.4
представлены сывороточные уровни легочного регулируемого активацией хемокина (PARC) от исходного уровня до 16 недели в исследовании, описанном в примере 2. ***P<0,0001 против плацебо; DPL, дупилумаб; PBO, плацебо; qw, один раз в неделю; SE, стандартная ошибка.
[018]
фиг.5
Напредставлены сывороточные уровни периостина от исходного уровня до 16 недели в исследовании, описанном в примере 2. *P<0,01 против плацебо; DPL, дупилумаб; PBO, плацебо; qw, один раз в неделю; SE, стандартная ошибка.
[019]
фиг.6
Напредставлены сывороточные уровни общего IgE от исходного уровня до 16 недели в исследовании, описанном в примере 2. ***P <0,0001 против плацебо; DPL, дупилумаб; PBO, плацебо; qw, один раз в неделю; SE, стандартная ошибка.
[020]
фиг.7
Напоказано, что дупилумаб подавляет IgE, специфичные к широкому множеству аллергенов, в сыворотке после лечения в течение 16 недель, как описано в примере 2.
[021]
фиг.8
P
P
P
P
D. farinae
Dermatophagoides farinae
D. pteronyssinus
Dermatophagoides pteronyssinus
M. furfur
Malasezzia furfur
P.
orbiculare
Pityrosporum orbiculare
Напредставлено подавление IgE, специфичных к широкому множеству аллергенов, в сыворотке после введения в течение 16 недель плацебо, дупилумаба в дозе 100 мг каждые 4 недели (q4w) или дупилумаба в дозе 300 мг q4w, как описано в примере 2. *< 0,05, **< 0,01, < 0,001, < 0,0001 против плацебо. , ; , ; , ; ; ; энтеротоксин S. A/B, стафилококковый энтеротоксин A/B. интерквартильный размах: Q1, нижний квартиль; Q3, верхний квартиль.
[022]
фиг.9
P
P
P
P
D. farinae
Dermatophagoides farinae
D. pteronyssinus
Dermatophagoides pteronyssinus
M. furfur
Malasezzia furfur
P.
orbiculare
Pityrosporum orbiculare
Напредставлено подавление IgE, специфичных к широкому множеству аллергенов в сыворотке после лечения в течение 16 недель дупилумабом в дозе 200 мг каждые 2 недели (q2w), 300 мг q2w или 300 мг еженедельно (qw), как описано в примере 2. *< 0,05, **< 0,01, < 0,001, < 0,0001 против плацебо. , ; , ; , ; ; ; энтеротоксин S. A/B, стафилококковый энтеротоксин A/B. интерквартильный размах: Q1, нижний квартиль; Q3, верхний квартиль.
[023]
фиг.10
Staphylococcus aureus
Напредставлено содержание  в поврежденной коже пациентов с атопическим дерматитом в исследовании согласно примеру 3.
[024]
фиг.11
S. aureus
На представлено содержание  в поврежденной кожи пациентов с атопическим дерматитом в исследовании согласно примеру 3.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[025]
Перед описанием настоящего изобретения следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными описанными способами и экспериментальными условиями, поскольку такие способы и состояния могут варьироваться. Также следует понимать, что терминология, используемая в настоящем описании, предназначена только для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения, поскольку объем настоящего изобретения ограничивается только прилагаемой формулой изобретения.
[026]
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют то же значение, которое обычно подразумевает специалист в области, к которой относится настоящее изобретение. В рамках изобретения, термин "приблизительно", когда его используют применительно к конкретной указанной числовой величине, означает, что эта величина может отличаться от указанной величины не более чем на 1%. Например, в рамках изобретения, выражение "приблизительно 100" включает 99 и 101, и все величины между ними (например, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 и т.д.).
[027]
Хотя для применения настоящего изобретения на практике можно использовать любые способы и материалы, сходные или эквивалентные способам и материалам, описанным в настоящем описании, предпочтительные способы и материалы описаны в настоящем описании. Все публикации, упомянутые в настоящем описании, включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
[028]
Согласно определенным аспектам, настоящее изобретение включает способы предупреждения или лечения аллергии у индивидуума, где способы включают введение терапевтически эффективного количества антагониста IL-4R индивидууму, нуждающемуся в этом. В рамках изобретения, термины "лечить", "лечение" и т.п. означают смягчение симптомов аллергии, устранение причины симптомов аллергии либо на время, либо навсегда, или предупреждение или замедление появление симптомов аллергии у индивидуума. В рамках изобретения, термины "предупреждать", "предупреждение" и т.п. относятся к предупреждению развития аллергии, аллергической реакции или аллергического состояния. Этот термин, в рамках изобретения, также включает снижение или устранение сенсибилизации аллергеном для предупреждения аллергической реакции. В некоторых вариантах осуществления термин относится к снижению уровня сывороточного аллерген-специфического IgE по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40% или по меньшей мере на 50% по сравнению с исходным уровнем при введении антагониста IL-4R, предусматриваемом способами по настоящему изобретению.
[029]
Настоящее изобретение относится к способам, которые включают введение пациенту терапевтической композиции, содержащей антагонист IL-4R. В рамках изобретения, выражение "пациент" означает человека или не являющегося человеком животное, которое демонстрирует один или несколько симптомов или признаков аллергии или атопии, и/или у которого диагностирована аллергия на аллерген. В некоторых вариантах осуществления термин "пациент" включает индивидуумов, которые имеют повышенный риск развития аллергии или аллергического ответа на аллерген. В некоторых вариантах осуществления термин включает индивидуумов, которые демонстрируют сенсибилизацию одним или несколькими аллергенами. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению можно использовать для лечения индивидуумов, которые имеют повышенные уровни одного или нескольких сывороточных биомаркеров, включая, но не ограничиваясь ими, общий IgE, аллерген-специфический IgE, регулируемый тимусом и активацией хемокин (TARC), легочный регулируемый активацией хемокин (PARC), лактатдегидрогеназу (LDH) и периостин. Например, способы по настоящему изобретению включают введение антагониста IL-4R пациентам с повышенными уровнями аллерген-специфического IgE. Термины "индивидуум" и "пациент" используются в настоящем описании взаимозаменяемо.
[030]
В рамках изобретения, термины "аллергический ответ", "аллергическая реакция", "симптом аллергии" и т.п. включают один или несколько признаков или симптомов, выбранных из группы, состоящей из сыпи (например, крапивница), ангионевротического отека, ринита, астмы, рвоты, чихания, течения из носа, воспаления пазух, слезящихся глаз, свистящего дыхания, бронхоспазма, снижения максимальной скорости выдоха (PEF), желудочно-кишечного расстройства, покраснения, опухания губ, опухания языка, снижения кровяного давления, анафилаксии и дисфункции/недостаточности органа. "Аллергический ответ", "аллергическая реакция", "симптом аллергии" и т.д. также включают иммунологические ответы и реакции, например, такие как увеличенная продукция IgE и/или увеличенная продукция аллерген-специфических иммуноглобулинов.
[031]
Alstonia scholaris
Термин "аллерген", в рамках изобретения, включает любое вещество, химическое вещество, частицу или композицию, которые способны стимулировать аллергический ответ у предрасположенного индивидуума. Аллергены могут содержаться в или происходить из продукта питания, например, такого как молочные продукты (например, коровье молоко), яйца, сельдерей, кунжут, пшеница, соя, рыба, моллюски, сахара (например, сахара, присутствующие в мясе, такие как альфа-галактоза), арахис, другие бобовые (например, бобы, горох, соевые бобы и т.д.), и лесной орех. Альтернативно аллерген может содержаться в или происходить не из продукта питания, как например, в случае пыли (например, содержащей клеща домашней пыли), пыльцы, яда насекомых (например, яд пчел, ос, комаров, огненных муравьев и т.д.), плесени, шерсти животных, перхоти животных, шерстяной ткани, латекса, металлов (например, никель), бытовых чистящих средств, детергентов, медикаментов, косметических средств (например, духов и т.д.), лекарственных средств (например, пенициллин, сульфонамиды, салицилат, и т.д.), терапевтических моноклональных антител (например, цетуксимаб), амброзии, травы и березы. Иллюстративные аллергены пыльцы включают, например, пыльцу деревьев, такую как пыльца березы, пыльца кедра, пыльца дуба, пыльца ольхи, пыльца граба, пыльца конского каштана, пыльца ивы, пыльца тополя, пыльца платана, пыльца липы, пыльца оливы, пыльца можжевельника и пыльца . Другие примеры аллергенов могут быть найден в настоящем описании. Термины "аллерген" и "антиген" используются в настоящем описании взаимозаменяемо.
[032]
Согласно некоторым аспектам, настоящее изобретение относится к способам снижения предрасположенности к аллергической реакции у индивидуума, причем способы включают введение терапевтически эффективного количества антагониста IL-4R индивидууму, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах осуществления термин "индивидуум, нуждающийся в этом" включает индивидуума, предрасположенного к аллергической реакции или имеющего увеличенный риск развития аллергической реакции на аллерген. В некоторых вариантах осуществления индивидуум может иметь риск развития аллергии или аллергического ответа на аллерген вследствие сенсибилизации к указанному аллергену. Например, термин включает индивидуумов, которые демонстрируют увеличенные уровни сывороточного IgE, специфичного к одному или нескольким аллергеном ("сенсибилизация аллергеном"). В контексте настоящего изобретения термин "индивидуум, нуждающийся в этом", также включает индивидуумов, которые имеют заболевание или нарушение, выбранное из группы, состоящей из атопического дерматита, астмы, аллергического ринита, эозинофильного эзофагита и пищевой аллергии. Термин "индивидуум" также включает индивидуумов с повышенными уровнями сывороточных общих и аллерген-специфических IgE, или сывороточных хемокинов (например, CCL17 или CCL27), которые могут иметь повышенный риск развития аллергического ответа. Настоящее изобретение относится к способам снижения риска развития аллергии или аллергического ответа у предрасположенных индивидуумов.
[033]
Согласно некоторым аспектам, настоящее изобретение относится к способам снижения уровней сывороточных аллерген-специфических IgE у индивидуума, причем способы включают введение терапевтически эффективного количества антагониста IL-4R. В некоторых вариантах осуществления сывороточные уровни аллерген-специфических IgE снижаются по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40% или 50% по сравнению с исходным уровнем после введения антагониста IL-4R.
[034]
Способы обнаружения и/или количественного определения сывороточного биомаркера, такого как аллерген-специфический IgE или общий IgE, известны в данной области; наборы для количественного определения такого биомаркера доступны из различных коммерческих источников, а также различные коммерческие диагностические лаборатории предлагают услуги по количественному определению таких биомаркеров.
[035]
Например, Phadiatop™ представляет собой коммерчески доступный вариант теста сывороточных специфических или антиген-специфических IgE, предложенный для скрининга аллергической сенибилизации (Merrett et al 1987, Allergy 17: 409-416). Данный тест обеспечивает одновременное тестирование сывороточных специфических IgE к смеси соответствующих аллергенов, вызывающих общую ингаляционную аллергию. Данный тест дает качественный результат, либо положительный, либо отрицательный, в зависимости от полученного флуоресцентного ответа. Когда образец пациента дает флуоресцентный ответ, превышающий или равный ответу эталона, дается положительный результат теста. Образец пациента с более низким флуоресцентным ответом обеспечивает отрицательный результат теста. Настоящее изобретение относится к способам, включающим выбор индивидуума, который демонстрирует положительный результат теста, и введение индивидууму терапевтически эффективного количества антагониста IL-4R.
[036]
Настоящее изобретение также относится к способам определения того, является ли индивидуум подходящим индивидуумом, которому введение фармацевтической композиции, содержащей антагонист IL-4R, будет полезным. Например, если индивидуум перед введением фармацевтической композиции, содержащей антагонист IL-4R, имеет уровень сывороточного биомаркера (например, аллерген-специфический IgE), который означает сенсибилизацию аллергеном, то индивидуума, таким образом, определяют как подходящего индивидуума, которому введение фармацевтической композиции по изобретению (композиция, содержащая антитело против IL-4R) является полезным.
[037]
Согласно некоторым аспектам изобретения, предусматриваются способы предупреждения или лечения аллергии, которые включают: (a) выбор индивидуума, который имеет уровень IgE, специфичного по меньшей мере к одному аллергену до или во время лечения, который означает сенсибилизацию к аллергену; и (b) введение индивидууму фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество антагониста IL-4R. В некоторых вариантах осуществления пациента выбирают путем определения того, является ли уровень аллерген-специфического IgE повышенным. Уровень аллерген-специфического IgE определяют или измеряют путем получения образца от пациента для анализа биомаркеров, известного в данной области. В некоторых других вариантах осуществления пациента выбирают путем получения информации, касающейся повышенного уровня аллерген-специфического IgE, от пациента. В некоторых вариантах осуществления этого аспекта изобретения индивидуума выбирают, исходя из повышенного уровня IgE, или TARC, или периостина.
[038]
Как будет понятно специалисту в данной области, повышение или снижение уровня сывороточного биомаркера можно определять путем сравнения (i) уровня биомаркера, измеренного у индивидуума в заданный момент времени после введения антагониста IL-4R, с (ii) уровнем биомаркера, измеренным у пациента до введения антагониста IL-4R (т.е., "измерение на исходном уровне"). Заданный момент времени, когда количественно определяют биомаркер, может составлять, например, приблизительно 4 часов, 8 часов, 12 часов, 1 сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 7 суток, 8 суток, 9 суток, 10 суток, 15 суток, 20 суток, 35 суток, 40 суток, 50 суток, 55 суток, 60 суток, 65 суток, 70 суток, 75 суток, 80 суток, 85 суток, 100 суток, 150 суток или более после введения антагониста IL-4R.
[039]
Согласно некоторым конкретным вариантам осуществления настоящего изобретения, индивидуум может иметь снижение уровня сывороточного IgE, специфичного к одному или нескольким аллергенам, после введения фармацевтической композиции, содержащей антагонист IL-4R (например, антитело против IL-4R антитело). Например, приблизительно через 8 дней, 15 дней, 22 дня, 25 дней, 29 дней, 36 дней, 43 дня, 50 дней, 57 дней, 64 дня, 71 день, 85 дней или 112 дней после введения одной или нескольких доз фармацевтической композиции, содержащей приблизительно 75, 150, 200 или 300 мг антитела против hIL-4R (например, дупилумаб), индивидуум в соответствии с настоящим изобретением может демонстрировать снижение аллерген-специфического IgE, составляющее приблизительно 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% или более от исходного уровня (где "исходный уровень" определяют как уровень аллерген-специфического IgE у индивидуума непосредственно перед первым введением).
Антагонисты рецептора
интерлейкина-4
[040]
Способы по настоящему изобретению включают введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтической композиции, содержащей антагонист рецептора интерлейкина-4 (IL-4R). В рамках изобретения, "антагонист IL-4R" (также обозначаемый в настоящем описании как "ингибитор IL-4R", "антагонист IL-4Rα", "блокатор IL-4R", "блокатор IL-4Rα" и т.д.) представляет собой любой агент, который связывается или взаимодействует с IL-4Rα или лигандом IL-4R, и ингибирует или ослабляет нормальную биологическую сигнальную функцию рецептора IL-4 1 типа и/или 2 типа. IL-4Rα человека имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11. Рецептор IL-4 1 типа представляет собой димерный рецептор, содержащий цепь IL-4Rα и цепь γc. Рецептор IL-4 2 типа представляет собой димерный рецептор, содержащий цепь IL-4Rα и цепь IL-13Rα1. Рецепторы IL-4 1 типа взаимодействуют с IL-4 и стимулируются им, в то время как рецепторы IL-4 2 типа взаимодействуют с и стимулируются как IL-4, так и IL-13. Таким образом, антагонисты IL-4R, которые можно использовать в способах по настоящему изобретению, могут функционировать, блокируя опосредуемую IL-4 передачу сигнала, опосредуемую IL-13 передачу сигнала, или опосредуемую как IL-4, так и IL-13 передачу сигнала. Таким образом, антагонисты IL-4R по настоящему изобретению могут препятствовать взаимодействию IL-4 и/или IL-13 с рецептором типа 1 или типа 2.
[041]
Неограничивающие примеры категорий антагонистов IL-4R включают низкомолекулярные ингибиторы IL-4R, аптамеры против IL-4R, пептидные ингибиторы IL-4R (например, молекулы "пептидных антител"), "рецептор-антитела" (например, сконструированные молекулы, содержащие лиганд-связывающий домен в виде компонента IL-4R), и антитела или антигенсвязывающие фрагменты антител, которые специфически связываются с IL-4Rα человека. В рамках изобретения, антагонисты IL-4R также включают антигенсвязывающие белки, которые специфически связывают IL-4 и/или IL-13.
Антитела к IL-4Rα и их антигенсвязывающие фрагменты
[042]
H
H
H
H
L
L
H
L
H
L
Согласно некоторым иллюстративным вариантам осуществления настоящего изобретения, антагонист IL-4R представляет собой антитело к IL-4Rα или его антигенсвязывающий фрагмент. Термин "антитело", в рамках изобретения, включает молекулы иммуноглобулинов, содержащие четыре полипептидных цепи: две тяжелых (H) цепи и две легких (L) цепи, соединенные между собой дисульфидными связями, а также их мультимеры (например, IgM). В типичном антителе каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (сокращенно обозначаемую в настоящем описании как HCVR или V) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи содержит три домена: C1, C2 и C3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (сокращенно обозначаемую в настоящем описании как LCVR или V) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи содержит один домен (C1). Области V и V могут быть далее подразделены на области гипервариабельности, называемые определяющими комплементарность областями (CDR), разделенные областями, которые являются более консервативными, называемыми каркасными областями (FR). Каждая V и V содержит три CDR и четыре FR, расположенных в следующем порядке от Т-конца к С-концу: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. В различных вариантах осуществления изобретения FR антитела против IL-4R (или его антигенсвязывающей части) может быть идентична последовательностям эмбрионального типа человека или может быть естественным образом или искусственно модифицированной. Аминокислотная консенсусная последовательность может быть определена посредством одновременного анализа двух или более CDR.
[043]
Термин "антитело", в рамках изобретения, также включает антигенсвязывающие фрагменты полных молекул антител. Термины "антигенсвязывающая часть" антитела, "антигенсвязывающий фрагмент" антитела и т.п., в рамках изобретения, включают любой встречающийся в природе, получаемый ферменативным путем, синтетический или сконструированный способами инженерии полипептид или гликопротеин, который специфически связывает антиген с образованием комплекса. Антигенсвязывающие фрагменты антитела могут быть образованы, например, из полных молекул антител с использованием любых стандартных способов, таких как протеолитическое расщепление или рекомбинантные способы генной инженерии, вовлекающие манипулирование и экспрессию ДНК, кодирующей вариабельные и необязательно константные домены антитела. Такая ДНК известна и/или легкодоступна, например, из коммерческих источников, библиотек ДНК (включая, например, библиотеки фаг-антитело), или может быть синтезирована. ДНК можно секвенировать и модифицировать химически или с использованием способов молекулярной биологии, например, для сообщения одному или нескольким вариабельным и/или константным доменам подходящей конфигурации или для внесения кодонов, образования остатков цистеина, модификации, добавления или удаления аминокислот, и т.д.
[044]
Неограничивающие примеры антигенсвязывающих фрагментов включают: (i) Fab-фрагменты; (ii) F(ab')2-фрагменты; (iii) Fd-фрагменты; (iv) Fv-фрагменты; (v) одноцепочечные молекулы Fv (scFv); (vi) dAb-фрагменты; и (vii) минимальные распознающие элементы, состоящие из аминокислотных остатков, которые имитируют гипервариабельную область антитела (например, выделенная определяющая комплементарность область (CDR), такая как пептид CDR3), или ограниченный пептид FR3-CDR3-FR4. Также выражение "антигенсвязывающий фрагмент", в рамках изобретения, охватывает другие сконструированные молекулы, такие как домен-специфические антитела, однодоменные антитела, антитела с удаленным доменом, химерные антитела, антитела с пересаженной CDR, диантитела, триантитела, тетраантитела, миниантитела, наноантитела (например, одновалентные наноантитела, двухвалентные наноантитела и т.д.), малые модульные иммунофармацевтические белки (SMIP) и вариабельные домены IgNAR акулы.
[045]
H
L
H
L
H
H
H
L
L
L
H
L
Антигенсвязывающий фрагмент антитела обычно содержит по меньшей мере один вариабельный домен. Вариабельный домен может иметь любой размер или аминокислотный состав и обычно содержит по меньшей мере одну CDR, которая находится рядом или в рамке считывания с одной или несколькими каркасными последовательностями. В антигенсвязывающих фрагментах, имеющих V-домен, связанный с V-доменом, домены V и V могут быть расположены относительно друг друга любым подходящим образом. Например, вариабельная область может быть димерной и может содержать димеры V-V, V-V или V-V. Альтернативно антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать монмерный домен V или V.
[046]
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
L
L
H
L
H
L
H
L
H
H
L
H
H
H
L
H
H
L
L
H
L
В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать по меньшей мере один вариабельный домен, ковалентно связанный по меньшей мере с одним константным доменом. Неограничивающие иллюстративные конфигурации вариабельных и константных доменов, которые могут находиться в антигенсвязывающем фрагменте антитела по настоящему изобретению, включают: (i) V-C1; (ii) V-C2; (iii) V-C3; (iv) V-C1-C2; (v) V-C1-C2-C3; (vi) V-C2-C3; (vii) V-C; (viii) V-C1; (ix) V-C2; (x) V-C3; (xi) V-C1-C2; (xii) V-C1-C2-C3; (xiii) V-C2-C3; и (xiv) V-C. В любой конфигурации вариабельных и константных доменов, включая любые из иллюстративных конфигураций, приведенных выше, вариабельные и константные домены могут быть либо прямо связаны друг с другом, либо могут быть связаны через полную или частичную шарнирную или линкерную область. Шарнирная область может состоять по меньшей мере из 2 (например, 5, 10, 15, 20, 40, 60 или более) аминокислот, которую обеспечивают гибкую или полугибкую связь между соседними вариабельными и/или константными доменами в одной полипептидной молекуле. Более того, антигенсвязывающий фрагмент антитела по настоящему изобретению может содержать гомодимер или гетеродимер (или другой мультмер) любой из конфигураций вариабельных и константных доменов, приведенных выше, связанных нековалентной связью друг с другом и/или с одним или несколькими мономерными доменами V или V (например, посредством дисульфидной связи(ей)).
[047]
2
et al
et al
J. Am. Chem. Soc
Epub
Dec. 4, 2012
Термин "антитело", в рамках изобретения, также включает мультиспецифические (например, биспецифические) антитела. Мультиспецифическое антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела, как правило, содержит по меньшей мере два различных вариабельных домена, где каждый вариабельный домен способен специфически связываться с отдельным антигеном или отличающимся эпитопом на одном и том же антигене. Любой формат мультиспецифического антитела может быть адаптирован для применения в контексте антитела или антигенсвязывающего фрагмента антитела по настоящему изобретению с использованием стандартных способов, доступных в данной области. Например, настоящее изобретение относится к способам, включающим применение биспецифических антител, где одно плечо иммуноглобулина является специфичным к IL-4Rα или его фрагменту, а другое плечо иммуноглобулина является специфичным к второй терапевтической мишени или конъюгировано с терапевтической частью. Иллюстративные биспецифические форматы, которые могут быть использованы в контексте настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, например, биспецифические форматы на основе scFv или диантитела, слитые конструкции IgG-scFv, Ig с двойным вариабельным доменом (DVD), квадрому, конструкции типа "выступов в полостях", общую легкую цепь (например, общая легкая цепь с "выступами в полостях" и т.д.), CrossMab, CrossFab, антитело-(затравку), лейциновую молнию, дуоантитело, IgG1/IgG2, Fab (DAF)-IgG двойного действия и биспецифические форматы Mab (см., например, Klein . 2012, mAbs 4:6, 1-11, и ссылки, цитированные в ней, для обзора вышеуказанных форматов). Биспецифические антитела также могут быть сконструированы с использованием конъюгации пептид/нуклеиновая кислота, например, где неприродные аминокислоты с независимой различающейся реактивностью используются для получения сайт-специфических конъюгатов антитело-олигонуклеотид, которые затем самостоятельно собираются в мультимерные комплексы с определенной композицией, валентностью и геометрией (см., например, Kazane ., . [:]).
[048]
in vitro,
in vivo
Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, могут представлять собой антитела человека. Термин "антитело человека", в рамках изобретения, включает антитела, имеющие вариабельные и константные области, происходящие из последовательностей иммуноглобулинов эмбрионального типа человека. Тем не менее, антитела человека по изобретению могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностью иммуноглобулинов эмбрионального типа человека (например, мутации, внесенные случайным или сайт-специфическим мутагенезом  или соматическая мутация ), например в CDR и, в частности, CDR3. Однако термин "антитело человека", в рамках изобретения, не включает антитела, в которых последовательности CDR, происходящие из последовательности эмбрионального типа другого вида млекопитающих, такого как мышь, пересажены в каркасные последовательности человека.
[049]
et al
in vitro
in vivo
in vivo
H
L
H
L
Антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, могут представлять собой рекомбинантные антитела человека. Термин "рекомбинантное антитело человека", в рамках изобретения, включает все антитела человека, которые получены, экспрессированы, созданы или выделены рекомбинантными способами, такие как антитела, экспрессируемые с использованием рекомбинантного экспрессирующего вектора, которым трансфицирована клетка-хозяин (подробно описано ниже), антитела, выделенные из рекомбинантной комбинаторной библиотеки антител человека (подробно описано ниже), антитела, выделенные из животного (например, мышь), которое является трансгенным по генам иммуноглобулинов человека (см., например, Taylor . (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) или антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные любыми другими способами, которые вовлекают соединение последовательностей генов иммуноглобулинов человека с другими последовательностями ДНК. Такие рекомбинантные антитела человека имеют вариабельные и константные области, происходящие из последовательностей иммуноглобулинов эмбрионального типа человека. Однако в некоторых вариантах осуществления такие рекомбинантные антитела человека подвергаются мутагенезу  (или, когда используют животное, трансгенное по последовательностям Ig человека, соматическому мутагенезу ) и, таким образом, аминокислотные последовательности областей V и V рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, хотя и происходят из последовательностей V и V эмбрионального типа человека и являются родственными им могут не существовать в природе в репертуаре антител эмбрионального типа человека .
[050]
D
Согласно определенным вариантам осуществления, антитела, используемые в способах по настоящему изобретению, специфически связывают IL-4Rα. Термин "специфически связывает" и т.п. означает, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образует комплекс с антигеном, который является относительно стабильным в физиологических условиях. Способы определения того, связывается ли антитело специфически с антигеном, хорошо известны в данной области и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и т.п. Например, антитело, которое "специфически связывает" IL-4Rα, как используют в контексте настоящего изобретения, включает антитела, которые связывают IL-4Rα или его часть с K менее чем приблизительно 1000 нМ, менее чем приблизительно 500 нМ, менее чем приблизительно 300 нМ, менее чем приблизительно 200 нМ, менее чем приблизительно 100 нМ, менее чем приблизительно 90 нМ, менее чем приблизительно 80 нМ, менее чем приблизительно 70 нМ, менее чем приблизительно 60 нМ, менее чем приблизительно 50 нМ, менее чем приблизительно 40 нМ, менее чем приблизительно 30 нМ, менее чем приблизительно 20 нМ, менее чем приблизительно 10 нМ, менее чем приблизительно 5 нМ, менее чем приблизительно 1 нМ, менее чем приблизительно 0,5 нМ, менее чем приблизительно 0,25 нМ, менее чем приблизительно 0,1 нМ или менее чем приблизительно 0,05 нМ, при измерении в анализе с использованием поверхностного плазмонного резонанса. Однако выделенное антитело, которое специфически связывается с IL-4Rα человека, может иметь перекрестную реактивность в отношении других антигенов, таких как молекулы IL-4Rα из других видов (не человека).
[051]
Согласно определенным иллюстративным вариантам осуществления настоящего изобретения, антагонист IL-4R представляет собой антитело против IL-4Rα или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащие вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), вариабельную область легкой цепи (LCVR) и/или определяющие комплементарность области (CDR), содержащие любую из аминокислотных последовательностей антител против IL-4R, как указано в патенте США № 7608693. В определенных иллюстративных вариантах осуществления антитело против IL-4Rα или его антигенсвязывающий фрагмент, которые можно использовать в контексте способов по настоящему изобретению, содержат определяющие комплементарность области тяжелой цепи (HCDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), содержащие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и определяющие комплементарность области легкой цепи (LCDR) вариабельной области легкой цепи (LCVR), содержащие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. Согласно определенным вариантам осуществления, антитело против IL-4Rα или его антигенсвязывающий фрагмент содержат три HCDR (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три LCDR (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий содержит HCVR, содержащую SEQ ID NO: 1, и LCVR, содержащую SEQ ID NO: 2. Согласно определенным иллюстративным вариантам осуществления, способы по настоящему изобретению включают применение антитела против IL-4R, содержащего аминокислотные последовательности HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 согласно SEQ ID NO: 3-4-5-6-7-8 (называемого и известного в данной области как "дупилумаб"), или его биоэквивалента. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают применение антитела против IL-4R, где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах осуществления антитело против IL-4R содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. Иллюстративное антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, представляет собой полностью человеческое антитело против IL-4R, известное как дупилумаб. Согласно определенным иллюстративным вариантам осуществления, способы по настоящему изобретению включают применение дупилумаба или его биоэквивалента. Термин "биоэквивалент", в рамках изобретения, относится к антителам против IL-4R или связывающим IL-4R белкам или их фрагментам, которые являются фармацевтическими эквивалентами или фармацевтическими альтернативами, скорость и/или степень всасывания которых не проявляет значительного отличия от дупилумаба при введении в той же молярной дозе в сходных экспериментальных условиях, как в однократной дозе, так и в многократных дозах. В контексте изобретения термин относится к антигенсвязывающим белкам, которые связываются с IL-4R, которые не имеют клинически значимых отличий от дупилумаба в отношении безопасности, чистоты и/или эффективности.
[052]
et al
Am J Respir Crit Care Med., 181
Другие антитела против IL-4Rα, которые можно использовать в контексте способов по настоящему изобретению, включают, например, антитело, называемое и известное в данной области AMG317 (Corren ., 2010, (8):788-796), или MEDI 9314, или любое из антител против IL-4Rα, упоминаемых в патенте США № 7186809, патенте США № 7605237, патенте США № 7638606, патенте США № 8092804, патенте США № 8679487 или патенте США № 8877189.
[053]
Антитела против IL-4Rα, используемые в контексте способов по настоящему изобретению, могут иметь pH-зависимые характеристики связывания. Например, антитело против IL-4Rα для применения в способах по настоящему изобретению может демонстрировать сниженное связывание с IL-4Rα при кислых значениях pH по сравнению с нейтральным значением pH. Альтернативно антитело против IL-4Rα по изобретению может демонстрировать усиленное связывание с его антигеном в условиях кислого значения pH по сравнению с нейтральным значением pH. Выражение "кислое значение pH" включает значения pH менее чем приблизительно 6,2, например, приблизительно 6,0, 5,95, 5,9, 5,85, 5,8, 5,75, 5,7, 5,65, 5,6, 5,55, 5,5, 5,45, 5,4, 5,35, 5,3, 5,25, 5,2, 5,15, 5,1, 5,05, 5,0 или менее. В рамках изобретения, выражение "нейтральное значение pH" означает pH от приблизительно 7,0 до приблизительно 7,4. Выражение "нейтральное значение pH" включает значения pH приблизительно 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35 и 7,4.
[054]
D
D
D
D
В определенных случаях "сниженное связывание с IL-4Rα при кислых значениях pH по сравнению с нейтральным значением pH" выражают в значениях соотношения величины K связывания антитела с IL-4Rα при кислых значениях pH с величиной K связывания антитела с IL-4Rα при нейтральных значениях pH (или наоборот). Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент можно считать демонстрирующими "сниженное связывание с IL-4Rα при кислых значениях pH по сравнению с нейтральными значениями pH" для целей настоящего изобретения, если антитело или его антигенсвязывающий фрагмент демонстрирует соотношение K в кислых/нейтральных условиях приблизительно 3,0 или более. В определенных иллюстративных вариантах осуществления соотношение K в кислых/нейтральных условиях для антитела или антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению может составлять приблизительно 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5, 13,0, 13,5, 14,0, 14,5, 15,0, 20,0, 25,0, 30,0, 40,0, 50,0, 60,0, 70,0, 100,0 или более.
[055]
Антитела с характеристиками pH-зависимого связывания можно получать, например, посредством скрининга совокупности антител в отношении сниженного (или усиленного) связывания с конкретным антигеном при кислых значениях pH по сравнению с нейтральными значениями pH. Кроме того, модификации антигенсвязывающего домена на уровне аминокислот могут обеспечивать антитела с pH-зависимыми характеристиками. Например, путем замены одной или нескольких аминокислот в антигенсвязывающем домене (например, в CDR) на остаток гистидина может быть получено антитело со сниженным связыванием антигена при кислых значениях pH относительно нейтральных значений pH. В рамках изобретения, выражение "кислые значения pH" означает pH 6,0 или менее.
Фармацевтические композиции
[056]
Настоящее изобретение относится к способам, которые включают введение пациенту антагониста IL-4R, где антагонист IL-4R (например, антитело против IL-4R) содержится в фармацевтической композиции. Фармацевтические композиции по изобретению составляют с подходящими носителями, эксципиентами и другими средствами, которые обеспечивают подходящий транспорт, доставку, переносимость и т.д. Множество подходящих составов может быть найдено в справочнике, известном всем фармацевтическим химикам: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Эти составы включают, например, порошки, пасты, мази, желе, воски, масла, липиды, содержащие липиды (катионные или анионные) везикулы (такие как LIPOFECTIN™), ДНК-конъюгаты, безводные всасывающиеся пасты, эмульсии типа "масло в воде" и "вода в масле", эмульсии карбовакс (полиэтиленгликоли различной молекулярной массы), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие карбовакс. Также см. Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.
[057]
et al.
Pharmaceut. Res. 8
Доза антитела, вводимая пациенту, в соответствии со способами по настоящему изобретению, может варьироваться в зависимости от возраста и размера пациента, симптомов, состояний, пути введения и т.п. Дозу обычно вычисляют, исходя из массы тела и площади поверхности тела. В зависимости от тяжести состояния, можно корректировать частоту и длительность лечения. Эффективные дозировки и схемы введения фармацевтических композиций, содержащих антитела против IL-4R, могут быть определены эмпирически; например, можно проводить мониторинг прогресса пациента посредством периодической оценки и корректировать дозу соответствующим образом. Более того, можно проводить межвидовое масштабирование дозировок с использованием способов, хорошо известных в данной области (например, Mordenti , 1991, :1351). Конкретные иллюстративные дозы антител против IL4R и вовлекающие их режимы введения, которые можно использовать в контексте настоящего изобретения, описаны в настоящем описании.
[058]
Различные системы доставки известны и могут использоваться для введения фармацевтической композиции по изобретению, например, инкапсулирование в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, рекомбинантные клетки, способные экспрессировать мутантные вирусы, рецептор-опосредуемый эндоцитоз (см., например, Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432). Способы введения включают, но не ограничиваются ими, внутрикожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, подкожный, интраназальный, эпидуральный и пероральный пути. Композицию можно вводить любым удобным путем, например, путем инфузии или болюсной инъекции, посредством всасывания через эпителиальные или слизистые оболочки (например, слизистую оболочку полости рта, слизистую оболочку прямой кишки и кишечника и т.д.), и ее можно вводить вместе с другими биологически активными средствами.
[059]
Фармацевтическую композиция по настоящему изобретению можно доставлять подкожно или внутривенно с использованием стандартной иглы и шприца. Кроме того, что касается подкожной доставки, для доставки фармацевтической композиции по настоящему изобретению удобно использовать шприц-ручку. Такой шприц-ручка может быть многоразовым или одноразовым. В многоразовом шприце-ручке обычно используется сменная кассета, которая содержит фармацевтическую композицию. После введения всей фармацевтической композиции из кассеты и опустошения кассеты, пустую кассету можно без труда выбросить и заменить новой кассетой, которая содержит фармацевтическую композицию. Затем шприц-ручку можно вновь использовать. В одноразовом шприце-ручке отсутствует сменная кассета. Вместо этого одноразовый шприц-ручка выпускается предварительно заполненным фармацевтической композицией, содержащейся в резервуаре устройства. После опустошения резервуара с фармацевтической композицией все устройство выбрасывается.
[060]
Многочисленные многоразовые шприцы-ручки и шприцы для самоинъекции применимы для подкожной доставки фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Примеры включают, но не ограничиваются ими AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, Великобритания), шприц-ручку DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Швейцария), шприц-ручку HUMALOG MIX 75/25™, шприц-ручку HUMALOG™, шприц-ручку HUMALIN 70/30™ (Eli Lilly и Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II и III (Novo Nordisk, Copenhagen, Дания), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Дания), шприц-ручку BD™ (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ и OPTICLIK™ (Sanofi-Aventis, Frankfurt, Германия), среди прочих. Примеры одноразовых шприцов-ручек, применимых для подкожной доставки фармацевтической композиции по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются ими, шприц-ручку SOLOSTAR™ (Sanofi-Aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk) и KWIKPEN™ (Eli Lilly), шприц для самоинъекции SURECLICK™ (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Германия), EPIPEN (Dey, L.P.) и шприц-ручку HUMIRA™ (Abbott Labs, Abbott Park IL), среди прочих.
[061]
В определенных ситуациях фармацевтическую композицию можно доставлять в системе с контролируемым высвобождением. В одном варианте осуществления можно использовать насос (см. Langer, выше; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201). В другом варианте осуществления можно использовать полимерные материалы; см., Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida. В другом варианте осуществления систему с контролируемым высвобождением можно помещать вблизи мишени композиции, и, таким образом, требуется только часть системной дозы (см., например, Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, выше, vol. 2, pp. 115-138). Другие системы с контролируемым высвобождением рассмотрены в обзоре Langer, 1990, Science 249:1527-1533.
[062]
Инъекционные препараты могут включать дозированные формы для внутривенных, подкожных, внутрикожных и внутримышечных инъекций, капельных вливаний и т.д. Эти инъекционные препараты можно получать известными способами. Например, инъекционные препараты можно получать, например, путем растворения, суспендирования или эмульгирования антитела или его соли, описанных выше, в стерильной водной среде или масляной среде, обычно используемых для инъекций. В качестве водной среды для инъекций используют, например, физиологический солевой раствор, изотонический раствор, содержащий глюкозу и другие вспомогательные вещества и т.д., которые можно использовать в комбинации с подходящим солюбилизирующим средством, таким как спирт (например, этанол), многоатомный спирт (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль), неионное поверхностно-активное вещество [например, полисорбат 80, HCO-50 (полиоксиэтиленовый (50 моль) аддукт гидрогенизированного касторового масла)], и т.д. В качестве масляной среды используют, например, кунжутное масло, соевое масло и т.д., которые могут быть использованы в комбинации с солюбилизирующим средством, таким как бензилбензоат, бензиловый спирт и т.д. Инъекцией, приготовленной таким образом, можно заполнять соответствующую ампулу.
[063]
Преимущественно, фармацевтические композиции для перорального или парентерального применения, описанные выше, получают в виде дозированных форм в единичной дозе, пригодной для вмещения дозы активных ингредиентов. Такие дозированные формы в единичной дозе включают, например, таблетки, пилюли, капсулы, инъекции (ампулы), суппозитории и т.д.
[064]
Иллюстративные фармацевтические композиции, содержащие антитело против IL-4R, которые можно использовать в контексте настоящего изобретения, описаны, например, в патенте США № 8945559.
Дозировка
[065]
Количество антагониста IL-4R (например, антитела против IL-4R), вводимого индивидууму способами по настоящему изобретению, обычно представляет собой терапевтически эффективное количество. В рамках изобретения, выражение "терапевтически эффективное количество" означает количество антагониста IL-4R, которое приводит к одному или нескольким из: (a) предупреждения аллергии; (b) лечения или снижения тяжести аллергической реакции; (c) уменьшения уровня сывороточных аллерген-специфических IgE; (d) снижения сенсибилизации аллергеном; и/или (e) уменьшения предрасположенности к аллергической реакции.
[066]
В случае антитела против IL-4R, терапевтически эффективное количество может составлять от приблизительно 0,05 мг до приблизительно 600 мг, например, приблизительно 0,05 мг, приблизительно 0,1 мг, приблизительно 1,0 мг, приблизительно 1,5 мг, приблизительно 2,0 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 110 мг, приблизительно 120 мг, приблизительно 130 мг, приблизительно 140 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 160 мг, приблизительно 170 мг, приблизительно 180 мг, приблизительно 190 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 210 мг, приблизительно 220 мг, приблизительно 230 мг, приблизительно 240 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 260 мг, приблизительно 270 мг, приблизительно 280 мг, приблизительно 290 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 310 мг, приблизительно 320 мг, приблизительно 330 мг, приблизительно 340 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 360 мг, приблизительно 370 мг, приблизительно 380 мг, приблизительно 390 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 410 мг, приблизительно 420 мг, приблизительно 430 мг, приблизительно 440 мг, приблизительно 450 мг, приблизительно 460 мг, приблизительно 470 мг, приблизительно 480 мг, приблизительно 490 мг, приблизительно 500 мг, приблизительно 510 мг, приблизительно 520 мг, приблизительно 530 мг, приблизительно 540 мг, приблизительно 550 мг, приблизительно 560 мг, приблизительно 570 мг, приблизительно 580 мг, приблизительно 590 мг, или приблизительно 600 мг антитела против IL-4R. В некоторых вариантах осуществления индивидууму вводят 75 мг, 100 мг, 150 мг, 200 мг или 300 мг антитела против IL-4R.
[067]
Количество антагониста IL-4R, содержащееся в отдельных дозах, может быть выражено в значениях миллиграммов антитела на килограмм массы тела пациента (т.е. мг/кг). Например, антагонист IL-4R можно вводить пациенту в дозе от приблизительно 0,0001 до приблизительно 10 мг/кг массы тела пациента.
Комбинированные способы терапии
[068]
Способы по настоящему изобретению, согласно определенным вариантам осуществления, включают введение индивидууму одного или нескольких дополнительных терапевтических средств в комбинации с антагонистом IL-4R. В рамках изобретения, выражение "в комбинации с" означает, что дополнительные терапевтические средства вводят до, после или одновременно с фармацевтической композицией, содержащей антагонист IL-4R. Термин "в комбинации с" также включает последовательное или одновременное введение антагониста IL-4R и второго терапевтического средства.
[069]
Например, при введении "до" фармацевтической композиции, содержащей антагонист IL-4R, дополнительное терапевтическое средство можно вводить приблизительно за 72 часа, приблизительно за 60 часов, приблизительно за 48 часов, приблизительно за 36 часов, приблизительно за 24 часа, приблизительно за 12 часов, приблизительно за 10 часов, приблизительно за 8 часов, приблизительно за 6 часов, приблизительно за 4 часа, приблизительно за 2 часа, приблизительно за 1 час, приблизительно за 30 минут, приблизительно за 15 минут или приблизительно за 10 минут до введения фармацевтической композиции, содержащей антагонист IL-4R. При введении "после" фармацевтической композиции, содержащей антагонист IL-4R, дополнительное терапевтическое средство можно вводить приблизительно через 10 минут, приблизительно через 15 минут, приблизительно через 30 минут, приблизительно через 1 час, приблизительно через 2 часа, приблизительно через 4 часа, приблизительно через 6 часов, приблизительно через 8 часов, приблизительно через 10 часов, приблизительно через 12 часов, приблизительно через 24 часа, приблизительно через 36 часов, приблизительно через 48 часов, приблизительно через 60 часов или приблизительно через 72 часа после введения фармацевтической композиции, содержащей антагонист IL-4R. Введение "одновременно" или с фармацевтической композицией, содержащей антагонист IL-4R, означает, что дополнительное терапевтическое средство вводят индивидууму в отдельной дозированной форме в пределах менее чем 5 минут (до, после или одновременно) от введения фармацевтической композиции, содержащей антагонист IL-4R, или вводят индивидууму в одном комбинированном дозированном составе, содержащем как дополнительное терапевтическое средство, так и антагонист IL-4R.
[070]
Дополнительное терапевтическое средство может представлять собой, например, другой антагонист IL-4R, антагонист IL-1 (включая, например, антагонист IL-1, как указано в US 6927044), антагонист IL-6, антагонист IL-6R (включая, например, антитело против IL-6R, как указано в US 7582298), антагонист IL-13, антагонист фактора некроза опухоли (TNF), антагонист IL-8, антагонист IL-9, антагонист IL-17, антагонист IL-5, антагонист IgE, антагонист CD48, антагонист IL-31 (в том числе, например, как указано в US 7531637), антагонист тимического стромального лимфопоэтина (TSLP) (в том числе, например, как указано в US 2011/027468), антибиотики на основе интерферона-гамма (IFNγ), местные кортикостероиды, такролимус, пимекролимус, циклоспорин, азатиоприн, метотрексат, кромолин натрий, ингибиторы протеаз, системные кортикостероиды, системную иммунотерапию, антигистамины или их комбинации. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию, содержащую антагонист IL4R, вводят индивидууму совместно с не фармацевтической терапией, такой как терапия ультрафиолетовым (УФ) излучением.
Режимы введения
[071]
Настоящее изобретение относится к способам, включающим введение индивидууму фармацевтической композиции, содержащей антагонист IL-4R, с частотой дозирования приблизительно четыре раза в неделю, два раза в неделю, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в пять недель, один раз в шесть недель, один раз в восемь недель, один раз в двенадцать недель или менее часто при условии достижения терапевтического ответа. В некоторых вариантах осуществления, вовлекающих введение фармацевтической композиции, содержащей антитело против IL-4R, можно использовать дозирование один раз в неделю в количестве приблизительно 75 мг, 150 мг, 200 мг или 300 мг.
[072]
Согласно определенным вариантам осуществления настоящего изобретения, индивидууму можно вводить несколько доз антагониста IL-4R в течение заданного периода времени. Способы согласно этому аспекту изобретению включают последовательное введение индивидууму множества доз антагониста IL-4R. В рамках изобретения, "введение последовательно" означает, что каждую дозу антагониста IL-4R вводят индивидууму в разные моменты времени, например, в разные дни, разделенные заданным интервалом (например, часы, сутки, недели или месяцы). Настоящее изобретение относится к способам, которые включают последовательное введение пациенту однократной первоначальной дозы антагониста IL-4R, а затем одной или нескольких вторичных доз антагониста IL-4R, и необязательно одной или нескольких третичных доз антагониста IL-4R.
[073]
Термины "первоначальная доза", "вторичные дозы" и "третичные дозы" относятся к временной последовательности введения антагониста IL-4R. Таким образом, "первоначальная доза" представляет собой дозу, которую вводят в начале режима лечения (также называемая "исходной дозой "); "вторичные дозы" представляют собой дозы, которые вводят после начальной дозы; и "третичные дозы" представляют собой дозы, которые вводят после вторичных доз. Первоначальная, вторичные и третичные дозы могут содержать одно и то же количество антагониста IL-4R, однако, как правило, могут отличаться друг от друга с точки зрения частоты введения. Однако в некоторых вариантах осуществления количество антагониста IL-4R, содержащееся в первоначальной, вторичной и/или третичной дозах, различается (например, скорректировано в сторону увеличения или уменьшения в зависимости от ситуации) в ходе лечения. В некоторых вариантах осуществления одну или несколько (например, 1, 2, 3, 4 или 5) доз вводят в начале режима лечения в качестве "нагрузочных доз", за которыми следуют последующие дозы, которые вводят реже (например, "поддерживающие дозы"). Например, антагонист IL-4R можно вводить пациенту с AD в нагрузочной дозе приблизительно 400 мг или приблизительно 600 мг, за которой следует одна или несколько поддерживающих доз, составляющих от приблизительно 75 мг до приблизительно 300 мг. В одном варианте осуществления первоначальная доза и одна или несколько вторичных доз в каждом случае включает от 50 мг до 600 мг антагониста IL-4R, например, от 100 мг до 400 мг антагониста IL-4R, например, 100 мг, 150 мг, 200 мг, 250 мг, 300 мг, 400 мг или 500 мг антагониста IL-4R. В некоторых вариантах осуществления первоначальная доза и одна или несколько вторичных доз в каждом случае содержит одно и то же количество антагониста IL-4R. В других вариантах осуществления первоначальная доза содержит первое количество антагониста IL-4R, и одна или несколько вторичных доз в каждом случае содержит второе количество антагониста IL-4R. Например, первое количество антагониста IL-4R может быть в 1,5x, 2x, 2,5x, 3x, 3,5x, 4x или 5x или более больше, чем второе количество антагониста IL-4R.
[074]
В одном иллюстративном варианте осуществления настоящего изобретения каждую вторичную и/или третичную дозу вводят через 1-14 (например, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½ или более) недель после непосредственно предшествующей дозы. Выражение "непосредственно предшествующая доза", в рамках изобретения, означает в случае последовательных многократных введений дозу антагониста IL-4R, которую вводят пациенту до введения следующей дозы последовательно без промежуточных доз.
[075]
Способы согласно этому аспекту изобретения могут включать введение пациенту любого количества вторичных и/или третичных доз антагониста IL-4R. Например, в некоторых вариантах осуществления пациенту вводят только одну вторичную дозу. В других вариантах осуществления пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) вторичных доз. Аналогично, в некоторых вариантах осуществления пациенту вводят только одну третичную дозу. В других вариантах осуществления пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) третичных доз.
[076]
В вариантах осуществления, вовлекающих множество вторичных доз, каждую вторичную дозу можно вводить с той же частотой, что и другие вторичные дозы. Например, каждую вторичную дозу можно вводить пациенту через 1-2 недели после непосредственно предшествующей дозы. Аналогично, в вариантах осуществления, вовлекающих множество третичных дозы, каждую третичную дозу можно вводить с той же частотой, что и другие третичные дозы. Например, каждую третичную дозу можно вводить пациенту через 2-4 недели после непосредственно предшествующей дозы. Альтернативно частота, с которой пациенту вводят вторичные и/или третичные дозы, может варьироваться в ходе режима лечения. Частоту введения также можно корректировать в ходе лечения врач в зависимости от потребностей конкретного пациента после клинического обследования.
ПРИМЕРЫ
[077]
Следующие примеры приведены для предоставления специалистам в данной области полного раскрытия и описания того, как получать и применять способы и композиции по изобретению, и они не предназначены для ограничения объема того, что авторы изобретения считают их изобретением. Были предприняты усилия для обеспечения точности использованных чисел (например, количества, температура, и т.д.), однако следует учитывать некоторые экспериментальные погрешности и отклонения. Если нет иных указаний, части представляют собой части по массе, молекулярная масса представляет собой среднюю молекулярную массу, температура приведена в градусах Цельсия и давление является атмосферным или близким к нему.
[078] Пример 1: Клиническое испытание для исследования эффективности дупилумаба у взрослых пациентов с AD от умеренного до тяжелого
Схема и задачи исследования
[079]
Это исследование представляло собой 32-недельное рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование в параллельных группах для оценки безопасности, эффективности, профиля биомаркеров, функциональных концентраций и иммуногенности дупилумаба, вводимого каждую неделю в течение 16 последовательных недель взрослым пациентам с AD от умеренного до тяжелого. Дупилумаб представляет собой полностью человеческое антитело против IL-4R, содержащее тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, содержащую SEQ ID NO: 1/2; и последовательности CDR тяжелой и легкой цепей, содержащие SEQ ID NO: 3-8.
[080]
Подходящих для включения пациентов случайным образом распределяли в соотношении 1:1 для подкожного (п/к) введения дупилумаба или п/к введения плацебо. Рандомизацию стратифицировали по тяжести заболевания (умеренный AD против тяжелого). После получения информированного согласия пациентов оценивали в отношении пригодности для включения в исследование при скрининговом посещении. Пациенты, которые удовлетворяли критериям пригодности для включения, проходили оценку на 1 сутки/исходную оценку, их подвергали рандомизации, а затем им вводили нагрузочную дозу (400 мг п/к исследуемого лекарственного средства) с последующими еженедельными инъекциями исследуемого лекарственного средства (200 мг п/к) с 1 недели по 15 неделю. В это время пациентам проводили еженедельную оценку, в основном при посещениях клиники, но в некоторых случаях по телефону. В зависимости от предпочтений и способностей пациента, пациентов и/или лиц, осуществляющих уход, обучали исследовательском центре инъецировать исследуемое лекарственное средство при первых 5 посещениях для лечения (посещения 2, 3, 4, 5 и 6), а затем исследуемое лекарственное средство вводилось им вне клиники в моменты, соответствующие посещениям 7, 9, 11, 13 и 15, что требовало только контакта по телефону. Оценку безопасности, лабораторных показателей и клинического эффекта проводили во время специальных посещений клиники. В конце периода лечения на 16 неделе после последней дозы исследуемого лекарственного средства происходило посещение, когда оценивали первичные результаты. Посещения для наблюдения происходили каждые 2 недели с 18 по 32 недели. Посещение, соответствующее концу исследования, происходило на 32 неделе.
[081]
При необходимости пациентам проводиласьтерапия спасения от AD (медикаментозная и/или фототерапия). Пациенты, которым требовалась терапия спасения, прекращали исследуемое лечение, но продолжали наблюдаться, следуя схеме оценки в исследовании. Перед проведением любой терапии спасения получали показатели эффективности (например, IGA, EASI и т.д.).
[082]
Взятие образцов для исследования клинической химии и гематологии, концентрации лекарственного средства и антител против лекарственного средства проводили в различные моменты времени в ходе исследования. Кроме того, получали 1 образец для анализа ДНК и несколько образцов для анализа РНК.
[083]
Распределениелечения проводилось случайным образом во избежание предвзятости при распределении пациентов в конкретную группу лечения и для минимизации систематических различий между группами в отношении исходных переменных, которые могут повлиять на исход. Схема двойного слепого исследования была предназначена для минимизации какой-либо потенциальной предвзятости в клинической оценке и сообщенных пациентами результатах ввиду знания исследователем или пациентом о распределении для лечения. Группа плацебо обеспечивала надежный контроль каких-либо видимых эффектов исследуемого лечения. Пациентам, распределенным в группу дупилумаба, вводили 200 мг один раз в неделю (qw) после нагрузочной дозы 400 на 1 сутки. Исследуемое лечение проводили в течение 16 недель, чтобы стабилизировать системные концентрации функционального дупилумаба. После лечения всех пациентов наблюдали в течение 16 недель (т.е. приблизительно 5 периодов полужизни), чтобы убедиться, что выведение дупилумаба было практически полным (концентрации в плазме ниже нижнего предела количественного определения) перед последним посещением в исследовании.
[084]
Основной задачей исследования была оценка эффективности дупилумаба по сравнению с плацебо у взрослых пациентов с AD от умеренного до тяжелого.
[085]
Вторичными задачами исследования были: (1) оценить безопасность дупилумаба по сравнению с плацебо; (2) оценить концентрацию дупилумаба и (3) оценить потенциальный ответ на дупилумаб в виде антител против лекарственного средства по сравнению с плацебо у взрослых пациентов с AD от умеренного до тяжелого.
[086]
Задачами исследования были: (1) оценка эффекта дупилумаба на эпидермальную гиперплазию; (2) оценка фармакодинамического (PD) эффекта дупилумаба на биомаркеры с течением времени; и (3) оценка прогностического значения регулируемого тимусом и активацией хемокина (TARC) для ответа EASI.
[087]
Целевая выборка включала взрослых с AD от умеренного до тяжелого, которая недостаточно контролировалась лекарственными средствами для местного применения или где местное лечение было нецелесообразным (вследствие, например, побочных эффектов или риска безопасности). Подходящих для включения пациентов случайным образом распределяли в соотношении 1:1 для подкожного (п/к) введения дупилумаба или п/к введения плацебо. Рандомизацию стратифицировали по тяжести заболевания (умеренный AD против тяжелого). Пациентам вводили нагрузочную дозу (400 мг п/к) исследуемого лекарственного средства на 1 сутки, а затем проводили инъекции раз в неделю исследуемого лекарственного средства (200 мг п/к) с 1 недели по 15 неделю. Пациенты должны были наносить смягчающее средство для местного применения два раза в сутки с суток -7 по сутки 8. Оценку безопасности, лабораторных показателей и клинического эффекта проводили во время специальных посещений клиники. Взятие образцов для клинической химии и гематологии, определения концентрации лекарственного средства и антител против лекарственного средства проводили в различные моменты времени на протяжении исследования. Кроме того, получали 1 образец для анализа ДНК и несколько образцов для анализа РНК. Последнее посещение в исследовании происходило на 16 неделе через 1 неделю после последней дозы исследуемого лекарственного средства, когда проводили оценку первичных результатов. Посещения для наблюдения происходили каждые 2 недели с 18 недели по 32 неделю. Последнее посещение в исследовании происходило на 32 неделе.
[088]
Первичным результатом исследования было процентное изменение показателя EASI от исходного уровня до 16 недели. Вторичные результаты включали: (1) долю пациентов, достигших IGA 0 (отсутствует) или 1 (практически отсутствует) на 16 неделе; (2) долю пациентов, достигших уменьшения показателя IGA ≥2 на 16 неделе; (3) абсолютное и процентное изменение от исходного уровня показателей зуда (NRS и категорийная шкала из 4-точек); (4) абсолютное изменение показателей EASI от исходного уровня до 16 недели; (5) абсолютное и процентное изменение показателей SCORAD от исходного уровня до 16 недели; (6) долю пациентов, достигших EASI-50, EASI-75 и EASI-90 (50, 75 и 90% снижение показателя EASI от исходного уровня) на 16 неделе; (7) долю пациентов, достигших SCORAD-50, SCORAD-75 и SCORAD-90 (50, 75 и 90% снижение показателя SCORAD от исходного уровня) на 16 неделе; (8) абсолютное и процентное изменение показателей POEM от исходного уровня; (9) изменения от исходного уровня компонентов GISS (эритема, инфильтрация/образование папул, экскориация и лихенификация); (10) изменение совокупного показателя GISS от исходного уровня; (11) встречаемость TEAE от исходного уровня до 32 недели; и (12) сывороточные концентрации дупилумаба с течением времени от исходного уровня до 32 неделю.
[089]
Конечные результаты исследования включают: (1) долю пациентов с гистологическим ответом, состоящим из значительно сниженной эпидермальной гиперплазии поврежденной кожи, и определяемым как снижение ≥40% от исходного уровня толщины эпидермиса и/или обратное изменение экспрессии K16 согласно иммуногистохимии; (2) изменение TARC от исходного уровня до 16 недели; (3) изменение IgE от исходного уровня до 16 недели; (4) изменение аллерген-специфического IgE к 16 неделе; и (5) корреляцию исходного уровня TARC и IgE с ответом EASI.
Отбор пациентов
[090]
Целевая выборка включала взрослых с AD от умеренного до тяжелого, которая недостаточно контролировалась лекарственными средствами для местного применения или где местное лечение было нецелесообразным (вследствие, например, побочных эффектов или риска безопасности).
[091]
Критерии включения:
Пациент должен был удовлетворять следующим критериям включения в исследование: (1) мужчина или женщина, 18 лет или старше; (2) хронический AD, который присутствовал в течение по меньшей мере 3 лет перед скрининговым посещением; (3) показатель EASI ≥12 при скрининговом посещении и ≥16 при посещении исходного уровня; (4) показатель IGA≥3 (по шкале 0-4 IGA) при скрининговом посещении и при посещении исходного уровня; (5) Вовлечение в AD≥10% BSA при скрининговом посещении и при посещении исходного уровня; (6) пациенты с документированным недавним анамнезом (в пределах 6 месяцев до скринингового посещения) недостаточного ответа на амбулаторное лечение местными лекарственными средствами или для которых в местное лечение было иным образом нецелесообразным (например, вследствие значимых побочных эффектов или рисков безопасности) [для цели этого протокола недостаточный ответ представлял собой неуспех в достижении и/или поддержании ремиссии или состояния низкой активности заболевания (например, IGA от 0=отсутствует до 2=мягкий) несмотря на лечение местными кортикостероидами от средней до высокой эффективности (±местные ингибиторы кальциневрина в соответствующих случаях]. Для оценки недостаточности ответа на интенсивное лечение местное лечение применяли каждые сутки в течение по меньшей мере 28 суток или в течение максимального периода времени, рекомендованного информацией о назначении продукта (например, 14 дней для сверхмощных местных кортикостероидов), в зависимости от того, какой период был короче. После интенсивного ежедневного лечения недостаточность ответа определяли, исходя из неуспеха поддержания состояния низкой активности заболевания, несмотря на применение местных лекарственных средств по менее интенсивной поддерживающей схеме (т.е. 2 дня в неделю). Учитывалось наличие важных побочных эффектов или рисков безопасности, которые перевешивали потенциальную пользу лечения (например, реакции гиперчувствительности, значительная атрофия кожи, системные эффекты и т.д., или их угроза), при оценке исследователем или лечащим врачом пациента. Надлежащая документация включала современные карты, в которых регистрировалось назначение местных кортикостероидов и/или местных ингибиторов кальциневрина и исход лечения, документацию исследователя на основе общения с лечащим врачом пациента или медицинский анамнез, предоставленный пациентом в случае, когда другие формы документации были недоступны (например, пациент не наблюдался у врача по поводу AD в течение последних 6 месяцев)]; (7) пациенты должны применять стабильную дозу местного смягчающего средства (увлажнитель) два раза в сутки в течение по меньшей мере 7 суток до посещения исходного уровня; (8) желание и возможность осуществить все клинические посещения и связанные с исследованием процедуры; (9) способность понять и заполнить связанные с исследованием опросники; и (10) предоставление подписанного информированного согласия.
[092]
Критерии исключения:
in situ
Ниже приведены критерии исключения для исследования: (1) предшествующее участие в клиническом испытании с дупилумабом; (2) лечение исследуемым лекарственным средством в пределах 8 недель или в пределах 5 периодов полужизни (если известно), в зависимости от того, что дольше, перед посещением исходного уровня; (3) следующие способы лечения в пределах 4 недель до посещения исходного уровня, или любое состояние, которое по мнению исследователя потребует такого лечения(ий) в ходе первых 4 недель исследуемого лечения - системные кортикостероиды, иммуносупрессоры/иммуномодуляторы (например, циклоспорин, микофенолат-мофетил, IFNγ, ингибиторы Janus-киназы (JAK), азатиоприн или метотрексат), или фототерапия от AD; (4) лечение местными кортикостероидами, такролимусом и/или пимекролимусом в пределах 1 недели перед посещением исходного уровня; (5) лечение следующими биологическими средствами: любые истощающие клетки средства, включая, но не ограничиваясь ими, ритуксимаб: в пределах 6 месяцев до посещения исходного уровня или пока количество лимфоцитов и CD 19+ лимфоцитов не вернется к норме, в зависимости от того, что дольше; инфликсимаб, адалимумаб, голимумаб, цертолизумаб пегол, апатацепт, этанерцепт, анакинра: в пределах 16 недель до посещения исходного уровня по любым показаниям или в пределах 5 лет по дерматологическим показаниям, другие биологические средства: в пределах 5 периодов полужизни (если известно) или 16 недель, в зависимости от того, что дольше, перед посещением исходного уровня; (6) начало лечения AD назначенными увлажнителями или увлажнителями, содержащими добавки, такие как церамид, гиалуроновая кислота, мочевина или филагрин в ходе периода скрининга (пациенты могут продолжать использовать стабильные дозы таких увлажнителей, если они начали их принимать до скринингового посещения); (7) регулярное посещение (более 2 посещений в неделю) вертикального солярия/салона для загара в пределах 4 недель до посещения исходного уровня; (8) запланированное или ожидаемое применение запрещенных лекарственных средств и процедур в ходе исследуемого лечения; (9) лечение живой (ослабленной) вакциной в пределах 12 недель перед посещением исходного уровня; (10) хроническая или острая инфекция, требующая лечения системными антибиотиками, противовирусными средствами, противопаразитарными средствами, антипротозойными средствами или противогрибковыми средствами в пределах 4 недель перед скрининговым посещением, или поверхностные инфекции кожи в пределах 1 недели перед скрининговым посещением; (11) известная или предполагаемая иммуносупрессия, включая инвазивные оппортунистические инфекции в анамнезе (например, туберкулез, гистоплазмоз, листериоз, кокцидиоидомикоз, пнеумоцитоз, аспергиллез), несмотря на разрешение инфекции, или иные рецидивирующие инфекции с аномальной частотой, или длительные инфекции, указывающие на иммунодефицит; (12) известная инфекция вирусом иммунодефицита человека (HIV) в анамнезе или серопозитивная реакция на ВИЧ при скрининговом посещении; (13) положительный или неопределимый поверхностный антиген гепатита B (HBsAg), антитело против корового антигена гепатита B (HBcAb), или антитело против гепатита C при скрининговом посещении; (14) повышенные уровни трансаминаз (ALT и/или AST) более чем в 3 раза выше верхней границы нормы (>3×ULN) при скрининговом посещении; (15) клинический эндопаразитоз в анамнезе в пределах 12 месяцев перед посещением исходного уровня, отличный подвергаемого лечению вагинального трихомоноза; (16) наличие сопутствующих заболеваний кожи, которые могут препятствовать оценке в исследовании; (17) злокачественная опухоль в анамнезе в пределах 5 лет перед посещением исходного уровня, за исключением полностью вылеченной карциномы шейки матки  и полностью вылеченной и разрешенной неметастазирующей плоскоклеточной или базально-клеточной карциномы кожи; (18) незлокачественные лимфопролиферативные нарушения в анамнезе; (19) высокий риск паразитарной инфекции, такой как проживание или недавнее путешествие (в пределах 12 месяцев перед посещением исходного уровня) в области, эндемические для эндопаразитозов, где обстоятельства указывали на контакт с паразитами (например, длительное пребывание, сельская местность или трущобы, отсутствие водопроводной воды, употребление неприготовленной, недоваренной или иной потенциально зараженной пищи, близкий контакт с носителями и векторами и т.д.), если последующая медицинская оценка (например, исследование стула, анализ крови и т.д.) не исключила возможность паразитарной инфекции/инфестации; (20) пристрастие к алкоголю или наркотикам в анамнезе в пределах 2 лет перед скрининговым посещением; (21) тяжелое сопутствующее заболевание(я), которое может неблагоприятно повлиять на участие пациента в исследовании. Примеры включают, но не ограничиваются ими, пациентов с небольшой предполагаемой продолжительностью жизни, пациентов с неконтролируемым диабетом (HbA1c ≥9%), пациентов с сердечно-сосудистыми состояниями (например, сердечная недостаточность стадии III или IV согласно классификации New York Heart Association), тяжелые состояния почек (например, пациенты на диализе), состоянии печени и желчевыводящих путей (например, класс B или C по Чайлд-Пю), неврологические состояния (например, демиелинизирующие заболевания), активные значительные аутоиммунные заболевания (например, волчанка, воспалительное заболевание кишечника, ревматоидный артрит и т.д.), другие тяжелые эндокринологические, желудочно-кишечные, метаболические, легочные или лимфатические заболевания; (22) любое другое медицинское или психологическое состояние, включая значимые лабораторные аномалии при скрининге, которые указывают на новое и/или недостаточно понятное заболевание, могут представлять необоснованный риск для исследуемого пациента в результате его/ее участия в данном клиническом испытании, могут сделать участие пациента ненадежным или препятствуют оценке в исследовании. Оно включает гиперчувствительность к местным анестетикам, нарушения свертываемости, лечение антикоагулянтами или другие состояния, которые могут сделать процедуру биопсии нецелесообразной; (23) планируемая значительная хирургическая операция в ходе участия пациента в исследовании; (24) беременные или кормящие женщины или женщины, планирующие забеременеть или кормить грудью в ходе исследования; и (25) женщины, нежелающие осуществлять адекватную контрацепцию в случае детородного возраста и наличия половой активности.
Исследуемое лечение
[093]
Пациентам вводили подкожную нагрузочную дозу 400 мг дупилумаба на 1 сутки, а затем 200 мг еженедельно (qw) с 1 недели по 15 неделю. Пациентам в группе плацебо вводили нагрузочную дозу на 1 сутки, а затем еженедельную подкожную дозу плацебо с 1 недели по 15 неделю. Пациенты должны были наносить местное смягчающее средство два раза в сутки с суток -7 по сутки 8.
Процедуры и оценка
[094]
Эффективность дупилумаба в этой выборке оценивали с помощью показателей тяжести заболевания AD, опросников о качестве жизни (QOL), оценки зуда и сообщенных пациентом результатов. Показатели тяжести AD включали ассоциированные с AD клинические параметры, такие как индекс площади и тяжести экземы (EASI), общая оценка исследователем (IGA), числовая шкала оценки зуда (NRS), площадь поверхности тела (BSA), оценка зуда 5-D, шкала оценки атопического дерматита (SCORAD), пациент-ориентированная мера экземы (POEM) и общая оценка отдельных признаков (GISS), которые описаны в публикации патентной заявки США № US2014/0072583 (включенной в настоящее описание в полном объеме). Опросник о качестве жизни (QOL) включал общую оценку пациентом статуса заболевания, дерматологический индекс качества жизни (DLQI), POEM, EQ-5D, Itchy QoL и госпитальную шкалу тревожности и депрессии (HADS), описанную в US2014/0072583 (включенной в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме). Также проводили тесты барьерной функции кожи, получали фотографии области AD и образцы мазка кожи для диагностического анализа микробиома. Безопасность дупилумаба в этой популяции оценивали путем оценки TEAE, подробного сбора медицинского анамнеза, путем физикального обследования, определения основных показателей жизнедеятельности, электрокардиограммы (ЭКГ) и клинического лабораторного тестирования. Информацию о сопутствующих лекарственных средствах и процедурах собирали от момента информированного согласия до конца исследования. Полученные с помощью слепого метода данные безопасности получали регулярно. Проводили взятие образцов крови для определения концентрации лекарственного средства и уровней антител против дупилумаба в заданные моменты времени. Получали образцы для исследования и образцы для диагностического анализа биомаркеров. Также получали биоптаты кожи для диагностического анализа биомаркеров.
Статистический анализ
[095]
Первичные и вторичные непрерывные переменные анализировали с использованием модели ковариационного анализа (ANCOVA) с лечением, рандомизационной стратой (умеренный против тяжелого) и соответствующими конечными величинами относительно исходного уровня в качестве ковариат. Данные эффективности считались отсутствующими после терапии спасения или после прекращения пациентом участия в исследовании. Затем все отсутствующие величины вводили с использованием способа переноса данных последнего наблюдения (LOCF). EASI и NRS зуда сообщали в качестве среднеквадратического (LS) среднего значения (стандартная ошибка [SE]) процентных изменений от исходного уровня до 16 недели, полученного с использованием подхода LOCF.
Результаты
[096]
Распределение пациентов и исходные характеристики:
54 пациента случайным образом распределяли в группу плацебо (n=27) или дупилумаба 200 мг qw (n=27). Исходные демографические и клинические характеристики были сбалансированными между группами лечения (таблица 1). Более 75% пациентов использовали предшествующие лекарственные средства, включая антигистамины, местные кортикостероиды (групп I, II и III, по эффективности), и лекарственные средства от обструктивных заболеваний дыхательных путей. Более высокая доля пациентов в группе плацебо использовала кортикостероиды, чем пациенты в группе дупилумаба.
Таблица 1: Исходные демографические данные пациентов и клинические характеристике по группам лечения
<b>Переменная</b>
<b>Плацебо (n=27)</b>
<b>Дупилумаб, 200 мг (n=27)</b>
Возраст, средний (IQR), лет
43 (20, 82)
35 (18, 71)
Мужской пол, n (%)
14 (51,9)
16 (59,3)
Продолжительность AD, среднее значение ± SD, лет
35,4 ± 16,3
26,3 ± 17,21
BSA, среднее значение ± SD, %
54,5 ± 26,91
53,8 ± 29,72
Показатель EASI (0-72), среднее значение ± SD
34,2 ± 14,59
33,4 ± 15,41
Общий показатель SCORAD (0-103), среднее значение ± SD
65,1 ± 13,36
64,2 ± 17,67
Максимальный показатель NRS зуда (0-10), среднее значение ± SD
7,4 ± 2,04
7,1 ± 2,42
Показатель IGA (0-4), n (%)
Показатель=3 (умеренный)
13 (48,1)
14 (51,9)
Показатель=4 (тяжелый)
14 (51,9)
13 (48,1)
[097]
Эффективность:
P
P=
Лечение дупилумабом значительно улучшало (снижало) показатели EASI от исходного уровня до 16 недели по сравнению с плацебо (SE): - 75,2% (8,15) vs -5,8% (8,16); < 0,0001 (фиг.1). Максимальный еженедельный NRS зуда также значительно снижался от исходного уровня до 16 неделе при лечении дупилумабом по сравнению с плацебо (SE): -51,5% (10,2) против -6,3% (10,0); 0,0027 (фиг.2). Более высокая доля пациентов в группе дупилумаба [14/27 (51,9%)] достигла снижения IGA ≥ 2 баллов к 16 неделе по сравнению с группой плацебо [1/27 (3,7%)]. 37% пациентов в группе дупилумаба достигли показателя 0 (отсутствует) или 1 (практически отсутствует) к 16 неделе по сравнению с отсутствием таких пациентов в группе плацебо. Доли пациентов, которые достигли снижения их показателя EASI к 16 неделе были значительно более высокими в группе дупилумаба, чем в группе плацебо, о чем свидетельствуют доли пациентов с EASI-50 (21/27 [77,8%] для дупилумаба против 6/27 [22,2%] для плацебо, p<0,0001), EASI-75 (18/27 [66,7%] для дупилумаба против 4/27 [14,8%] для плацебо, p=0,0001), и EASI-90 (9/27 [33,3%] для дупилумаба против 0/27 [0%] для плацебо, p=0,0011). LS среднее значение (±SE) процентного изменения показателя SCORAD от исходного уровня до 16 недели согласовывалось с изменением абсолютного среднего значения SCORAD (˗54,8 ± 5,40% для дупилумаба против ˗8,2 ± 5,41%, p<0,0001). Доли пациентов, которые достигли 50% снижения SCORAD (SCORAD˗50) к 16 неделе были более высокими в группе дупилумаба, чем в группе плацебо (15/27[55,6%] для дупилумаба против 2/27 [7,4%] для плацебо, p=0,0002). Группа дупилумаба продемонстрировала LS среднее значение (±SE) процентного снижения от исходного уровня вовлечения BSA от исходного уровня до 16 недели 69,0 ± 12,61%, в то время как группа плацебо продемонстрировала увеличение 13,6 ± 12,61%.
[098]
Безопасность:
Дупилумаб был безопасным и хорошо переносимым, и имел приемлемый профиль безопасности. 23/27 (85,2%) пациентов в группе дупилумаба и 24/27 (88,9%) пациентов в группе плацебо имели по меньшей мере 1 TEAE. Серьезные TEAE сообщались 3/27 (11,1%) пациентов в группе плацебо и ни одно не было сообщено в группе дупилумаба. Тяжесть большинства TEAE была мягкой или умеренной. Частые TEAE (согласно Medical Dictionary for Regulatory Activities [MedDRA] Preferred Term) включали назофарингит (дупилумаб: 3/27 [11,1%] пациентов; плацебо: 5/27 [18,5%] пациентов), инфекция верхних дыхательных путей (4/27 [14,8%] и 4/27 [14,8%], соответственно), вирусная инфекция верхних дыхательных путей (3/27 [11,1%] и 2/27 [7,4%], соответственно) и реакции области инъекции (согласно MedDRA High Level Term; 5/27 [18,5%] и 1/27 [3,7%], соответственно).
Пример 2: Анализ биомаркеров
A. Исследование A
[099]
В исследовании "A" сывороточные биомаркеры количественно определяли в образцах из клинического испытания, вовлекающего индивидуумов с атопическим дерматитом (AD) от умеренного до тяжелого. Индивидуумам с AD вводили 16 еженедельных доз либо дупилумаба (200 мг), либо плацебо; пациентам в группе дупилумаба вводили нагрузочную дозу 400 мг на 1 сутки. Ассоциированные с AD сывороточные биомаркеры, такие как регулируемый тимусом и активацией хемокин (TARC), легочный регулируемый активацией хемокин (PARC), периостин, лактатдегидрогеназа (LDH), эозинофилы, общий IgE и антиген-специфический IgE, описаны в публикации патентной заявки США № US2014/0072583 (включенной в качестве ссылки в полном объеме).
[0100]
S. aureus
Сывороточные биомаркеры количественно определяли в различные моменты времени между скринингом и 32 неделей, и они включали: сывороточный TARC (набор Human CCL17/TARC Quantikine ELISA; R&D Systems, Minneapolis, MN, США) и периостин (Human Periostin/OSF-2 DuoSet 15 Plate; R&D Systems). Общий IgE и аллерген-специфические IgE в сыворотке определяли с помощью анализа ImmunoCap (ImmunoCAPR Fluorescent Enzyme Immunoassay; Thermo Scientific, Uppsala, Швеция). Панель аллерген-специфических IgE была получена для основных аэроаллергенов для данного региона вместе с IgE против энтеротоксинаA и B. Для аллерген-специфического IgE нижний предел количественного определения представлял собой 0,10 кЕ/л; уровень ≥0,35 кЕ/л считался признаком сенсибилизации аллергеном.
[0101]
Диагностические переменные, такие как сывороточные биомаркеры TARC, PARC, периостин и общий IgE, наносили на график в качестве средних значений (SE) процентных изменений от исходного уровня; содержание антигенспецифических IgE сообщалось в качестве срединного (интерквартильный размах [IQR]) процентного изменения от исходного уровня. После терапии спасения данные считались отсутствующими. В переменные не вносили поправку на множественность и, таким образом, представлены номинальные значения p.
Таблица 2: Показатели биомаркеров исходного уровня
<b>Переменная</b>
<b>Плацебо (n=27)</b>
<b>Дупилумаб, 200 мг (n=27)</b>
Сывороточный TARC, среднее значение (SD), пг/мл
11360 (24670)
7722 (13590)
Сывороточный PARC, среднее значение (SD), нг/мл
206 (188)
168 (127)
Сывороточный периостин, среднее значение (SD), нг/мл
147 (100)
154 (117)
Сывороточный общий IgE, среднее значение (SD), МЕ/мл
5641 (4706)
3868 (4248)
TARC, регулируемый тимусом и активацией хемокин; SD, стандартное отклонение; PARC, легочный регулируемый активацией хемокин
[0102]
В таблице 2 представлены исходные показатели биомаркеров в обеих группах лечения. Наблюдали быстрое и значимое снижение сывороточных уровней TARC, PARC и периостина (фиг.3-5) в случае лечения дупилумабом по сравнению с плацебо. Сывороточные уровни общего IgE устойчиво снижались в ходе периода лечения, демонстрируя значительное снижение на 16 неделе в группе дупилумаба по сравнению с плацебо (фиг.6).
[0103]
Dermatophagoides farinae
D. pteronyssinus
Malasezzia furfur
Pityrosporum orbiculare
Среднее и срединное снижение уровня антигенспецифических IgE от исходного уровня от 1 недели до конца исследования (32 неделя) отмечалось для индуцированных IgE в отношении всех протестированных панелей аллергенов, которые содержали ольху серую, черную гниль, бермудскую траву, бородавчатую березу, кошачью перхоть, кладоспорий, таракана (рыжего),  (клещ), , собачью перхоть, вяз, джонсонову траву, белый дуб, амброзию короткую, полынь горькую, тимофеевку (Phleum), ясень белый, кандиду белая, , , плесень, стафилококковый энтеротоксин A или стафилококковый энтеротоксин B. Дупилумаб на значимом уровне подавлял широкий диапазон сывороточных аллеген-специфических IgE по сравнению с плацебо (фиг.7; срединное исходное значение (IQR) и срединное процентное изменение (IQR) от исходного уровня до 16 недели).
B. Исследование B
[0104]
В "исследовании B" сывороточные биомаркеры количественно определяли в образцах из клинического испытания, вовлекающего индивидуумов с AD от умеренной до тяжелой. Индивидуумов с AD случайным образом распределяли в соотношении 1:1:1:1:1:1 для проведения лечения в течение 16 недель подкожным введением плацебо еженедельно; или дупилумаба 100 мг каждые 4 недели (q4w), 300 мг q4w, 200 мг каждые 2 недели (q2w), 300 мг q2w, или 300 мг еженедельно (qw). Пациенты в группах дозы 300 мг получали нагрузочную дозу 600 мг, в то время как пациенты в группах доз 200 и 100 мг получали 400 мг на 1 сутки. После 16-недельного периода лечения следовал период наблюдения безопасности в течение 16 недель (общий период исследования 32 недели). Ассоциированные с AD сывороточные биомаркеры, такие как регулируемый тимусом и активацией хемокин (TARC), легочный регулируемый активацией хемокин (PARC), периостин, лактатдегидрогеназа, эозинофилы, общий IgE и антиген-специфический IgE, описаны в публикации патентной заявки США № US2014/0072583 (включенной в качестве ссылки в полном объеме).
[0105]
Сывороточные биомаркеры, которые количественно определяли в различные моменты времени между скринингом и 32 неделей, включали: сывороточный TARC (набор Human CCL17/TARC Quantikine ELISA; R&D Systems, Minneapolis, MN, США); сывороточный периостин (Human Periostin/OSF-2 DuoSet 15 Plate; R&D Systems); LDH (Roche Modular and Cobas Analyzers (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN, США); количество эозинофилов, определенное в качестве части дифференциального подсчета количества клеток; и общий IgE и антигенспецифические IgE в сыворотке (измеренные с помощью анализа ImmunoCap (ImmunoCAPR Fluorescent Enzyme Immunoassay; Thermo Scientific, Phadia AB, Uppsala, Швеция).
[0106]
Для аллерген-специфического IgE нижняя граница количественного определения (LLQ) составляла 0,10 кЕ/л; уровень ≥0,35 кЕ/л считался признаком сенсибилизации аллергеном.
[0107]
Среднее процентное изменение сывороточных биомаркеров TARC, периостина и LDH, и срединное процентное изменение общего IgE и аллерген-специфических IgE сравнивали на 16 недели для каждого режима дозирования дупилумаба против плацебо с использованием анализа ковариат с исходной величиной в качестве ковариаты.
[0108]
S. aureus
Для дупилумаба против плацебонаблюдалиснижение от исходного уровня до 16 недели множества антиген-специфических IgE в сыворотке, включая IgE, специфичные к энтеротоксинам (фиг.8 и 9).
Пример 3: Колонизация кожи
Staphylococcus aureus
[0109]
S. aureus
S. aureus
S. aureus
S. aureus
S. aureus
S. aureus
Анализмикробной колонизации кожи проводили для образцов, полученных от индивидуумов, которые участвовали в клиническом испытании дупилумаба. Индивидуумам с атопическим дерматитом (AD) от умеренного до тяжелого вводили 16 еженедельных доз либо дупилумаба (200 мг), либо плацебо; пациентам в группе дупилумаба вводили нагрузочную дозу 400 мг на 1 сутки. Колонизацию и инфицирование определяли на поврежденной и неповрежденной коже при AD между скринингом и 32 неделей. Мазки кожи (предварительно увлажненной буфером Tris-EDTA) собирали с предварительно измеренных областей кожи (~10 см × 10 см) и тестировали в отношении присутствия . Бактериальные клетки, содержавшиеся в мазке, лизировали и тотальную геномную ДНК очищали. Содержание -специфической ДНК femA в общей бактериальной геномной ДНК определяли с использованием количественной ПЦР в реальном времени (кПЦР). Относительное количество колониеобразующих единиц (rCFU) определяли с использованием стандартной кривой, полученной для геномной ДНК из известного количества CFU . Содержание  сообщалось в качестве срединного (интерквартильный размах [IQR]) процентного изменения от исходного уровня. После терапии спасения данные считались отсутствующими. В переменные не вносили поправку на множественность и, таким образом, предоставлены номинальные значения p.
[0110]
S. aureus
P=
S. aureus
Дупилумаб значимо снижал содержание в поврежденной коже при AD (срединное % изменение от исходного уровня до 16 недели по сравнению с плацебо [0,0125; Таблица 3]), и наблюдалось общее снижение от исходного уровня на 16 неделе среднего содержания по сравнению с плацебо (фиг.10).
Таблица 3: Содержание
S.aureus
в поврежденной и неповрежденной коже при AD после лечения в течение 16 недель
Плацебо qw (n=27)
Дупилумаб, 200 мг qw (n=27)
Исходное срединное значение (Q1,Q3), rCFU/площадь
Срединное % изменение (Q1,Q3), rCFU/площадь
Исходное срединное значение (Q1,Q3), rCFU/площадь
Срединное % изменение (Q1,Q3), rCFU/площадь
Поврежденная кожи при AD
1289 (239,0, 16149,0)
-49 (-87,7, 635,8)
1630 (287,3, 15442,5)
-99 (-99,9, -94,1)*
Неповрежденная кожа при AD
166 (101,2, 4755,6)
-11 (-90,7, 1063,4)
374 (84,8, 3146,4)
-89 (-97,5, -21,6)
*P<0,05 против плацебо; Q1, нижний квартиль интерквартильного размаха; Q3, верхний квартиль интерквартильного размаха; rCFU, относительное количество колониеобразующих единиц; qw, один раз в неделю.
[0111]
S. aureus
P=
В неповрежденной при AD коже группа дупилумаба продемонстрировала численно большее снижение содержания по сравнению с плацебо (срединное % изменение от исходного уровня до 16 недели [таблица 3; 0,9865]) и общее срединное снижение от исходного уровня на 16 неделе по сравнению с плацебо (фиг.11).
Пример 4: Дупилумаб улучшает симптомы круглогодичного аллергического ринита (PAR) у пациентов с неконтролируемой персистирующей астмой с сопутствующим PAR
[0112]
2
Aspergillus fumigatus
D. farinae
D. pteronyssinus
P
P
P
Дупилумаб, моноклональное антитело против рецептора α интерлейкина (IL)-4, ингибирует передачу сигнала IL-4 и IL-13, ключевых пусковых факторов воспаления 2 типа. В пилотном испытании фазы 2b (NCT01854047) дупилумаб улучшал объем форсированного выдоха за 1 секунду, уменьшал тяжелые обострения астмы, улучшал качество жизни и в основном хорошо переносился у пациентов с неконтролируемой персистирующей астмой, несмотря на применение ингалируемых кортикостикоидов в дозе от умеренной до высокой плюс агонисты β длительного действия (ICS+LABA). Этот апостериорный анализ исследует эффект дупилумаба на общий показатель теста для оценки исхода болезней носа и околоносовых пазух (SNOT-22), а также индивидуальных показателей, обычно ассоциированных с аллергическим ринитом (заложенность носа, течение из носа, чихание и постназальное стекание слизи) у пациентов с круглогодичным аллергическим ринитом (PAR), частым сопутствующим астме заболеванием. PAR определяют по присутствуют специфического IgE≥0,35 кЕ/л против круглогодичных антигенов (, кошачья перхоть, , , собачья перхоть, рыжий таракан или черный таракан) при включении в исследование. Вследствие возможных искажающих эффектов пациентов с сопутствующим назальным полипозом исключали из анализа. Данные сообщаются для популяции с намерением лечиться, которой вводили плацебо и какой-либо из режимов дупилумаба 200 или 300 мг каждые 2 недели [q2w], в настоящее время находящейся на фазе 3 испытания (NCT02414854). Конечные результаты представляли собой изменение от исходного уровня до 24 недели общего показателя SNOT-22, а также отдельных показателей, постназального стекания слизи, заложенности носа, течения из носа и чихания. Из 392 пациентов, которым вводили дупилумаб (200 или 300 мг q2w) или плацебо, 241 (61%) имели PAR. У пациентов с PAR дупилумаб 300 мг q2w продемонстрировал значительное улучшение общего показателя SNOT-22 (LS среднее отличие -5,98 [95% CI, от -10,45 до -1,51], =0,009 против плацебо) и всех 4 ассоциированных с аллергическим ринитом симптомов, как определено выше, относительно плацебо (заложенность носа: -0,60 [95% CI, от -0,96 до -0,25]; течение из носа: -0,67 [95% CI, от -1,04 до -0,31]; чихание: -0,55 [95% CI, от -0,89 до -0,21]; и постназальное стекание слизи: -0,49 [95% CI, от -0,83 до -0,16]; все  < 0,01 против плацебо); дупилумаб 200 мг q2w продемонстрировал численное, но не значимое статистически снижение общего показателя SNOT-22 (-1,82 [95% CI, от -6,46 до 2,83], =0,443), а также 4 ассоциированных с аллергическим ринитом симптомов. Не наблюдали отличий относительно плацебо у пациентов без PAR общего показателя SNOT-22 и 4 ассоциированных с аллергическим ринитом симптомов. В заключение, дупилумаб 300 мг q2w значительно улучшает синоназальные симптомы у пациентов с неконтролируемой персистирующей астмой и сопутствующим PAR.
[0113]
Объем настоящего изобретения не ограничивается конкретными вариантами осуществления, описанными в настоящем описании. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к модификациям, описанным в настоящем описании, станут понятными специалистам в данной области из предшествующего описания и прилагаемых чертежей. Предполагается, что такие модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
Sanofi Biotechnology
<120> СПОСОБЫ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ АЛЛЕРГИИ ПОСРЕДСТВОМ
ВВЕДЕНИЯ АНТАГОНИСТА IL-4R
<130> 0431.28PCT
<160> 11
<170> FastSEQ для Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 124
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCVR
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1                     5                    10                    15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20                    25                    30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                    40                    45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                    55                    60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                    70                    75                    80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                    90                    95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100                    105                    110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115                    120
<210> 2
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCVR
<400> 2
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1                 5                    10                    15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20                    25                    30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35                    40                    45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50                    55                    60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                    70                    75                    80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85                    90                    95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                    105                    110
<210> 3
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR1
<400> 3
Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr Ala
1                 5
<210> 4
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR2
<400> 4
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr
1                 5
<210> 5
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR3
<400> 5
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
1                 5                    10                    15
Asp Val
<210> 6
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR1
<400> 6
Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ile Gly Tyr Asn Tyr
1                 5                    10
<210> 7
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR2
<400> 7
Leu Gly Ser
1
<210> 8
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR3
<400> 8
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr
1                 5
<210> 9
<211> 451
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HC
а.к. 1-124: HCVR
а.к. 125-451: HC константная
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1                 5                    10                    15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20                    25                    30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                    40                    45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                    55                    60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                    70                    75                    80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                    90                    95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100                    105                    110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115                    120                    125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130                    135                    140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145                    150                    155                    160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165                    170                    175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180                    185                    190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195                    200                    205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210                    215                    220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
225                    230                    235                    240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245                    250                    255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260                    265                    270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275                    280                    285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290                    295                    300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305                    310                    315                    320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325                    330                    335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340                    345                    350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355                    360                    365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370                    375                    380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385                    390                    395                    400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405                    410                    415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420                    425                    430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435                    440                    445
Ser Leu Gly
450
<210> 10
<211> 219
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LC
а.к. 1-112: LCVR
а.к. 113-219: LC константная
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1                 5                    10                    15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20                    25                    30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35                    40                    45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50                    55                    60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                    70                    75                    80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85                    90                    95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                    105                    110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115                    120                    125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130                    135                    140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                    150                    155                    160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                    170                    175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180                    185                    190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195                    200                    205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                    215
<210> 11
<211> 207
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> hIL-4R-альфа
<400> 11
Met Lys Val Leu Gln Glu Pro Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile
1                 5                    10                    15
Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu
20                    25                    30
Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr
35                    40                    45
Cys Ile Pro Glu Asn Asn Gly Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu
50                    55                    60
Met Asp Asp Val Val Ser Ala Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala
65                    70                    75                    80
Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val
85                    90                    95
Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp
100                    105                    110
Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu
115                    120                    125
Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro
130                    135                    140
Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg
145                    150                    155                    160
Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val
165                    170                    175
Arg Ala Trp Ala Gln Cys Tyr Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro
180                    185                    190
Ser Thr Lys Trp His Asn Ser Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gln His
195                    200                    205
<---