Исследование цитотоксической активности экстракта аврана лекарственного и кверцетина на клеточной культуре рака шейки матки

88

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

вует об увеличении роли межмолекулярных белок-белковых взаимодействий, стабилизирующихся за счет формирования межмолекулярных ß-структур.

Заключение. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что избыток тяжелых или легких цепей в сыворотке крови приводит к их взаимодействию между собой, что проявляется в спектрах как увеличение доли межмолекулярных ß-структур. Однако данные инфракрасной спектроскопии не дают прямого ответа на вопрос о том, взаимодействуют ли «избыточные» моноклональные белки только между собой или же они могут также связываться с полноразмерными иммуноглобулинами. Мы предполагаем, что имеют место оба типа взаимодействия.

С.А. Полозкова, В.А. Горбунова, Н.Ф. Орел, А.Е. Кузьминов, А.С. Одинцова, Г.С. Емельянова, А.А. Маркович ЭФФЕКТИВНОСТЬ И ТОКСИЧНОСТЬ КОМБИНАЦИИ АРАНОЗЫ С ДОКСОРУБИЦИНОМ ПРИ МЕТАСТАТИЧЕСКИХ НЕЙРОЭНДОКРИННЫХ НЕОПЛАЗИЯХ

ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Введение. Нейроэндокринные неоплазии (НЭН) — новообразования, которые происходят из клеток диффузной эндокринной системы и способны продуцировать различные биологически активные вещества. Ограниченный спектр эффективных и доступных препаратов для лечения метастатических форм, их невысокая эффективность и проблема переносимости диктуют необходимость поиска и изучения новых эффективных режимов химиотерапии.

Цель исследования — оценить эффективность и безопасность режима химиотерапии араноза + доксорубицин в 1-4-й линиях лечения метастатических НЭН различной локализации.

Материалы и методы. В исследование были включены 26 больных с метастатическими НЭН различной локализации (панкреатические НЭН — у 13 пациентов, непанкреатические - у 12 и НЭН без выявленного первичного очага — у 1) в возрасте от 23 до 76 лет (медиана 48 лет), получивших режим араноза 500 мг/м2 внутривенно в 1-й и 2-й дни + доксорубицин 40 мг/м2 внутривенно на 3-й день, каждые 3—4 нед. Высокодифференцированные ней-роэндокринные опухоли (ВД НЭО) диагностированы у 21 пациента, низкодифференцированные нейроэндо-кринные карциномы (НД НЭК) — у 4 больных. В процессе исследования оценивали частоту объективного ответа (по шкале RECIST версия 1.0), биохимический ответ (нормализация/снижение на 50 % и более уровня хромогра-нина А), медиану выживаемости без прогрессирования (по методу Каплана — Майера) и токсичность (шкала NCI— CTCAE, версия 3.0).

Результаты. Суммарно 26 больным было проведено 163 курса химиотерапии. Объективный ответ зарегистрирован у 19 % (5/26) пациентов, из них у 4 больных диагностированы ВД НЭО поджелудочной железы и у 1 — НД НЭК тимуса; стабилизация опухолевого процесса — у 69 % (18/26); прогрессирование — у 12 % (3/26). У 63 % (12/19) пациентов зафиксирован биохимический ответ. Отдаленные результаты лечения оценены у 23 больных, у 3 проследить течение заболевания не удалось. Медиана выживае-

мости без прогрессирования составила 15 мес (95 % доверительный интервал 4,3—24). Из побочных явлений чаще всего отмечалась гематологическая токсичность — преимущественно I и II степени. Токсичность III—IV степени наблюдалась у 8 пациентов: тромбоцитопения — у 1, нейтропения — у 4, лейкопения — у 2 и гипербилирубине-мия — у 1.

Заключение. Применение режима араноза + доксорубицин при метастатических НЭН обеспечивает хороший контроль над ростом опухоли (88 %) и не сопровождается выраженной клинически значимой токсичностью.

Н.В. Полуконова1, Н.А. Наволокин1, Д.А. Мудрак1, А.И. Прилепский2, А.А. Широков2, А. Б. Бучарская1, Г.Н. Маслякова1

ИССЛЕДОВАНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТА АВРАНА ЛЕКАРСТВЕННОГО И КВЕРЦЕТИНА НА КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЕ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ

1ГБОУ ВПО «СГМУ им. В. И. Разумовского» Минздрава России, Саратов; ФГБУН ИБФРМРАН, Саратов

Цель исследования — сравнить цитотоксическую активность экстракта аврана лекарственного и отдельно входящего в его состав кверцетина в экспериментах in vitro.

Материалы и методы. Для исследования использован флавоноидсодержащий экстракт из сырья аврана лекарственного, полученный разработанным нами способом, химический состав которого описан ранее (количество кверцетина в сухом остатке экстрактивных веществ (получаемого из 10 г сухой травы аврана), установленное методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, составило не менее 350 мкг). Исследование проводили на клеточной культуре рака шейки матки HeLa из крио-банка коллекции клеточных культур Института цитологии РАН. Культивирование выполняли в пластиковых флаконах в среде RPMI-4 (10 % эмбриональной сыворотки, ген-тамицин, ампициллин, амфотерицин). Эксперименты проводили в культуральных планшетах. Контролем служили клетки в питательной среде без добавления экстракта, выросшие в течение суток. Анализировали следующие концентрации экстракта аврана: 24; 12; 6; 3; 1,5; 0,75; 0,375 мг/мл и кверцетина: 0,1584; 0,0792; 0,0396; 0,0198; 0,0099; 0,00495; 0,002475 мг/мл, соответствующие его содержанию в экстракте. В качестве красителя использовали йодистый пропидий, проникающий в клетки через поврежденные мембраны.

Результаты. При концентрации экстракта аврана 0,375 и 0,75 мг/мл процент погибших клеток достоверно увеличивается (p < 0,005) в 5—6 раз, а при дальнейшем увеличении концентрации в 2 раза (1,5 мг/мл) — в 11 раз. При минимальной из исследованных концентраций кверцетина (0,002475 мг/мл) процент погибших клеток достоверно меньше, чем в контрольной группе. С повышением концентрации кверцетина процент погибших клеток достоверно увеличивается в 2—4 раза.

Заключение. Таким образом, при низких концентрациях кверцетин проявляет протекторные свойства и уменьшает процент погибших клеток HeLa, при увеличении

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

89

концентрации с 0,0396 мг/мл процент погибших клеток увеличивается, не достигая при этом активности экстракта аврана. Следовательно, противоопухолевая активность экстракта аврана лекарственного, по-видимому, обусловлена не только содержанием в нем кверцетина. Необходимо проведение более детального анализа химического состава экстракта и дополнительных исследований по изучению противоопухолевой активности и других фракций, входящих в экстракт.

Н.В. Полуконова1, А. Б. Бучарская1, Н.А. Наволокин1, М.А. Барышникова2, Д.А. Хоченков2, Э.Ш. Соломко2, О.О. Рябая2, Т.Н. Маслякова1, А.Ю. Барышников2, Б.Н. Хлебцов3, Н.Г. Хлебцов3 ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ЗОЛОТЫХ НАНОСТЕРЖНЕЙ НА КЛЕТКИ КУЛЬТУРЫ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ SK-BR-3 1ГБОУ ВПО «СГМУ им. В. И. Разумовского» Минздрава России, Саратов;

2ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 3ФГБУН ИБФРМ РАН, Саратов

Введение. В ближайшем будущем золотые наночасти-цы могут стать эффективными терапевтическими агентами в лечении различных заболеваний, в том числе и онкологических. Важным условием применения в онкологии новых материалов, в частности золотых наностержней (ЗНС), является всестороннее изучение их влияния на опухолевые клетки.

Цель исследования — изучить влияние ЗНС через 24 ч в эксперименте на клеточной культуре рака молочной железы SK-BR-3.

Материалы и методы. В работе использовали раствор пегилированных ЗНС длиной 41 ± 8 нм и диаметром 10,2 ± 2 нм (концентрация золота 400 мкг/мл), синтезированных в лаборатории нанобиотехнологии ИБФРМ РАН. Использовали культуру опухолевых клеток человека — карциному молочной железы SK-BR-3. Анализировали клетки, окрашенные флуоресцентным красителем Hoechat, используя показатели: среднее число клеток в поле зрения, активность роста культуры, % клеток в митозе от общего числа, % клеток в апоптозе от общего числа, а также учитывали стадии митоза.

Результаты. В контроле клетки культуры карциномы молочной железы человека SK-BR-3 имели четко очерченное ядро, в ряде случаев встречались митозы на разных стадиях до 5 в полях зрения. При воздействии ЗНС через 24 ч в культуре не наблюдали изменения количества клеток по сравнению с контролем, что свидетельствует об отсутствии как цитотоксического, так и стимулирующего рост культуры эффекта. Вместе с тем если в контроле наблюдали клетки в состоянии деления на стадиях мета- и анафазы, то при воздействии ЗНС выявлены клетки только в состоянии ранней профазы или поздней телофазы, что свидетельствует о возможном цитостатическом эффекте. Появления клеток в состоянии апоптоза также не было обнаружено.

Заключение. Таким образом, пегилированные ЗНС in vitro не оказывали цитотоксического воздействия на клетки карциномы молочной железы SK-BR-3. Перспективно

дальнейшее исследование противоопухолевой активности ЗНС при изменении условий и длительности эксперимента.

А. В. Пономарёв1, А.Е. Бармашов1, А.М. Дёмин2,

О.С. Бурова1, Н.В. Голубцова1, И.М. Лученко1,

М.А. Барышникова1, В.П. Краснов2

МАГНИТНАЯ СЕПАРАЦИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

СУПЕРПАРАМАГНИТНЫХ ЧАСТИЦ

С АНТИТЕЛАМИ ICO406 К CD117

1ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва;

2 ФГБУН «ИОС им. И. Я. Постовского УрО РАН»,

Екатеринбург

Введение. CD117 (С-kit) — трансмембранный протоон-когенный белок, относящийся к тирозинкиназным рецепторам III типа. CD117 встречается на многих типах опухолей человека, в частности в злокачественных новообразованиях желудочно-кишечного тракта, почки, остеосаркоме, меланоме. Был разработан метод иммобилизации антител ICO406 на магнитные наночастицы (МНЧ) на основе Fe3O4 для магнитной сепарации CD117+-популяций опухолевых клеток.

Цель исследования — подтвердить возможность использования синтезированных наноконъюгатов МНЧ и антител ICO406 для выделения CD117+-клеток.

Материалы и методы. Конъюгацию МНЧ и ICO406 проводили при использовании 1-этил-3- (3-диметилами-нопропил) карбодиимида в фосфатном буферном растворе (PBS). В результате были получены суспензии МНЧ в PBS (МНЧ-ICO406-1) и воде (МНЧ-!Ш406-2). Для проверки полученных в работе МНЧ использовали CD117+ клеточную линию меланомы человека mel Kor. К клеткам добавляли МНЧ-ICO406-1 и МНЧ-!Ш406-2. Смесь переносили в колонку MS Column на штативе MACS MultiStand, вставленную в магнит MiniMACS (Miltenyi Biotec). В качестве контроля использовали клетки без частиц. После выхода раствора из колонки ее снимали с магнита и смывали задержавшиеся в ней клетки PBS. Производили подсчет клеток, прошедших через колонку с магнитом и задержавшихся в колонке.

Результаты. Маркер CD117 был экпрессирован на 94 % клеток линии mel Kor. При проведении магнитной сепарации клетки, инкубированные с частицами МНЧ-ICO406—1, вышли из колонки с магнитом в количестве 5,7 %, а клетки, инкубированные с частицами МНЧ-ICO406—2, вышли в количестве 9,86 %. Клетки без магнитных частиц вышли из колонки с магнитом в количестве 96,1 %. Частицы состава МНЧ-ICO406—1 проявили выраженную способность к связыванию, с их помощью удалось выделить 100 % CD117+-клеток.

Заключение Суперпарамагнитные частицы, конъюгиро-ванные с антителами ICO406, позволяют выделять CD117+-популяцию клеток меланомы с достаточно высоким выходом. Процент клеток, связавшихся с МНЧ, соответствует проценту клеток, имеющих на своей поверхности CD117. Данный факт свидетельствует о высоком качестве частиц с иммобилизованными антителами, а также о надежности и эффективности иммуномагнитной сепарации с ними.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ(№ 14-03-00146-а) и УрО РАН(№ 15-21-3-6).