СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГРЯЗЕВОГО ЭКСТРАКТА ИЗ "ОЗЕРА "ЛЕЧЕБНОЕ" ДЛЯ УСИЛЕНИЯ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО И РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ
METHOD FOR MAKING OZERO LECHEBNOYE MUD EXTRACT FOR ENHANCING ANTIINFLAMMATORY AND WOUND HEALING ACTION

2
Изобретение относится к медицине и направлено на создание основ из биологически активных органических и неорганических веществ для последующей разработки пелоидсодержащих лекарственных препаратов с противовоспалительной и ранозаживляющей активностью. В качестве сырья используют среднесульфидные (FeS 0,15-0,3%) соленасыщенные (минерализация >250-400 г/дм) иловые грязи «Озера «Лечебное» Астраханской области.
Известен способ получения препарата из иловой лечебной грязи, который может быть принят за прототип, заключающийся в экстракции грязи водой в соотношении
1:2,5 в присутствии изотонической концентрации хлористого натрия, настаивании при комнатной температуре, отстаивании, стерилизации и фильтрации (И.А.Муравьев. Технология лекарств. М., Медицина, 1971, с.275). Однако известный способ не обеспечивает получение лечебной грязи с содержанием высокой концентрации биологически активных веществ и не обеспечивает получение фармакологически активного средства.
Целью изобретения является оптимизация способа получения экстрактов из грязи «Озера «Лечебное» для повышения специфической противовоспалительной и ранозаживляющей активности.
Техническим результатом является получение солянокислого грязевого экстракта, обладающего противовоспалительным и ранозаживляющим действием, превышающим по силе действия водный экстракт, полученный из аналогичного сырья.
Заявляемый способ характеризуется следующей совокупностью операций: экстракция нативной грязи с природной влажностью 38% водным (1:1) раствором соляной кислоты, трехкратной заливкой при соотношении 3-4 объема на 1 кг сырья при 25-30°C с энергичным перемешиванием до получения гомогенной суспензии. Фильтрацию мисцеллы осуществляют после 12 часового отстаивания при комнатной температуре. Отгонку воды проводят на роторном испарителе при t 50-60°C и остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. Полученный экстракт стерилизуют в течение 2-3 ч при 125-130°C. Из вышеперечисленных операций отличительным от прототипа является следующее: применение водного раствора соляной кислоты, трехкратная заливка при соотношении 3-4 объема.
Совокупность операций заявленного способа позволяет достигнуть повышения биологических свойств грязевого экстракта, что продемонстрировано в примерах по изучению противовоспалительной и ранозаживляющей активности.
Противовоспалительное действие нативного лекарственного средства в виде солянокислого экстракта изучалось в сравнении с водным экстрактом грязи в экспериментах на 40 крысах линии Wistar. Противовоспалительное действие экстракта оценивали по его влиянию на экссудативную фазу воспаления, вызванного подкожным в область спины введением 0,1 мл флогогенного агента - формалина (2% p-p) наркотизированным эфиром животным. После введения формалина каждый час отмечали размеры воспалительного очага. Обработку грязевым экстрактом в первые сутки проводили через 2 ч, 3 ч и 4 ч после индукции воспалительной реакции, последующие сутки в утренние (11.00) и вечерние часы (16.00). Измерение воспалительного инфильтрата проводили через 1 ч, 2 ч, 12 ч, 24 ч, 36 ч, 48 ч, 60 ч и 72 ч после первого нанесения исследуемого средства. Повязку с раствором грязевого экстракта фиксировали к спине животного лейкопластырем.
В ходе проведенного исследования установлено, что изучаемый солянокислый экстракт грязи оказывает выраженное угнетающее действие на экссудативную фазу воспалительного процесса (таблица 1). Через 1 ч и 2 ч после нанесения область индуцированного отека уменьшилась на 20 и 30% соответственно, тогда как на вторые сутки у 70% животных полностью исчезли признаки воспаления, у остальных 30% животных - площадь воспаления уменьшилась более чем на 50%. На 3 сутки наблюдения у 90% животных признаки воспалительной реакции полностью редуцировались. На 4 сутки все животные были здоровы, тогда как в контрольной группе и группе сравнения (водный грязевой экстракт) зона воспаления уменьшилась не более чем на 40-50% по сравнению с первым днем эксперимента. Таким образом, максимальный (100%) антифлогистический эффект проявляет солянокислый экстракт из грязи «Озера «Лечебное» уже к концу 2 суток развития воспалительной реакции.
Ранозаживляющее действие солянокислого грязевого экстракта в сравнении с водным его аналогом изучали в эксперименте на 40 крысах линии Wistar на модели химического (внутрикожное введение 0,3 мл 40% раствора формалина) ожога поверхностных тканей. Обработку грязевым экстрактом осуществляли по аналогии с серией экспериментов по изучению противовоспалительного действия экстракта. Об эффективности судили по времени (в сутках) клинического заживления ожогового дефекта (таблица 2).
Через 24 часа после введения химического индуктора поверхностных ожогов дефект кожи в виде воспалительного инфильтрата с некротическими изменениями, покрытыми фибринозным налетом. В контрольной группе животных, не подвергающихся обработке грязевым экстрактом, наблюдали медленное уменьшение размеров воспалительного инфильтрата, зоны дефекта и фибринозного налета, на 10 сутки у 20% животных отсутствовали признаки некротических изменений. В опытной группе животных уже на вторые сутки начала аппликаций солянокислого экстракта клиническая картина резко отличалась от группы животных с моделью ожога. На 4 сутки у 60% животных отмечали следующее: фибринозный налет незначительный, воспалительный инфильтрат и некротический дефект тканей отсутствовали. К 6 суткам у всех животных отсутствовали признаки ожога. В группе сравнения на 6 сутки у 40% животных, получавших аппликации водного экстракта отсутствовали признаки некроза; 100% ранозаживляющая эффективность водного экстракта проявилась на 9 сутки.
Таблица 1
Противовоспалительное действие экстрактов из грязи «Озера «Лечебное»
Площадь воспалительного инфильтрата (мм) после индукции формалином воспалительной реакции
№ особи
1 час
2 часа
3 часа
4 часа
12 часов
24 часа
36 часов
48 часов
Модель воспаления (0,1 мл 2% р-ра формалина подкожно в область спины)
1
1.4×0.5
1.6×0.5
1.6×0.5
1.6×0.5
1.0×0.7
0.9×0.6
0.8×0.5
0.7×0.5
2
0.5×1.8
1.0×1.8
1.0×1.8
1.0×1.8
0.8×0.8
0.7×0.7
0.6×0.6
0.5×0.6
3
2.0×1.0
2.0×1.5
2.0×1.5
2.0×1.5
0.5×0.5
0.4×0.4
0.3×0.3
0.2×0.3
4
1.6×1.0
1.8×1.3
1.8×1.3
1.8×1.3
0.5×0.5
0.4×0.4
0.3×0.3
0.2×0.3
5
1.8×1.0
2.0×1.3
2.0×1.3
2.0×1.3
0.3×0.3
0.2×0.2
0.1×0.1
Отсутствие признаков воспаления
6
1.5×1.5
2.0×1.5
2.0×1.5
2.0×1.5
0.2×0.2
0.1×0.2
0.1×0.1
7
2.0×1.0
2.0×1.3
2.0×1.3
2.0×1.3
0.6×0.3
0.5×0.2
0.4×0.1
0.3×0.1
8
1.7×1.0
2.0×1.2
2.0×1.2
2.0×1.2
0.8×0.5
0.7×0.4
0.6×0.3
0.5×0.2
Опыт:
модель воспаления (0,1 мл 2% р-ра формалина подкожно в область спины) + обработка солянокислым грязевым экстрактом (по схеме указанной в тексте)
После каждого измерения на зону воспаления, предварительно втирая, нанесен экстракт грязи
1
1.8×1.2
1.8×1.5
1.5×1.3
1.3×1.1
Отсутствие признаков воспаления
Отсутствие признаков воспаления
Отсутствие признаков воспаления
Отсутствие признаков воспаления
2
1.5×1.0
1.8×1.1
1.5×0.9
1.3×0.7
3
0.5×0.5
1.0×1.0
0.8×0.9
0,7×0.8
4
2.0×1.2
2.2×1.5
1.8×1.3
1.6×1.1
5
2.0×0.7
2.1×1.5
1.7×1.3
1.5×1.1
6
1.8×0.7
1.9×1.0
1.6×0.8
1.4×0.7
7
1.5×0.7
1.8×1.5
1.5×1.3
1.3×1.1
8
2.0×1.5
2.2×2.0
1.8×1.6
1.6×1.4
0.1×0.1
9
1.5×0.7
2.2×1.0
1.8×0.9
1.6×0.7
0.2×0.2
0.1×0.1
10
2.0×1.5
2.0×1.7
1.7×1.4
1.5×1.3
0.4×0.3
0.3×0.2
0.2×0.1
Опыт:
модель воспаления (0,1 мл 2% р-ра формалина подкожно в область спины) + обработка водным грязевым экстрактом (по схеме указанной в тексте)
После каждого измерения на зону воспаления, предварительно втирая, нанесен экстракт грязи
1
2.0×1.5
2.0x1.6
1.6×0.5
1.6×0.5
0.6×0.5
0.5×0.4
0.3×0.4
0.3×0.2
2
2.0×1.5
2.2×1.7
1.0×1.8
1.0×1.8
0.5×0.5
0.4×0.4
0.3×0.4
0.3×0.2
3
1.0×1.0
1.7×1.0
2.0×1.5
2.0×1.5
0.5×0.7
0.4×0.5
0.4×0.5
0.4×0.3
4
2.1×2.0
2.3×2.2
1.8×1.3
1.8×1.3
0.5×0.4
0.4×0.4
0.3×0.4
0.3×0.3
5
2.0×1.2
2.0×1.6
2.0×1.3
2.0×1.3
0.2×0.4
0.2×0.4
Отсутствие признаков воспаления
Отсутствие признаков воспаления
6
1.5×0.7
2.0×1.4
2.0×1.5
2.0×1.5
0.6×0.4
0.4×0.4
0.3×0.4
7
1.3×1.0
2.0×1.5
2.0×1.3
2.0×1.3
0.5×0.5
0.3×0.3
0.3×0.3
0.3×0.3
8
1.5×1.0
1.7×1.2
2.0×1.2
2.0×1.2
0.2×0.2
0.2×0.2
0.2×0.2
0.2×0.2
9
1.2×0.7
1.5×1.2
2.0×1.3
2.0×1.3
0.6×0.7
0.4×0.5
0.3×0.5
0.3×0.3
10
2.0×1.0
2.0×1.3
2.0×1.2
2.0×1.2
0.3×0.4
0.3×0.3
0.3×0.3
0.3×0.2
Таблица 2
Ранозаживляющее действие экстрактов из грязи «Озера «Лечебное»
Площадь некротического дефекта (мм) после индукции формалином химического ожога
№ особи
1 сутки
2 сутки
3 сутки
4 сутки
5 сутки
6 сутки
7 сутки
8 сутки
9 сутки
10 сутки
Модель химического ожога (0,3 мл 40% р-ра формалина внутрикожно в область спины)
1
1.2×1.2
1.5×1.2
1.3×1.2
1.2×1.2
1.0×1.0
1.0×0.8
0.9×0.7
0.8×0.6
0.7×0.5
0.6×0.5
2
1.1×1.6
1.3×1.6
1.1×1.6
1.1×1.6
0.9×1.4
0.9×0.8
0.8×0.8
0.7×0.7
0.6×0.6
0.5×0.6
3
1.7×1.1
1.7×1.1
1.7×1.0
1.7×1.1
1.3×0.7
0.7×0.6
0.5×0.5
0.4×0.4
0.3×0.3
0.2×0.3
4
1.6×1.1
1.6×1.1
1.6×1.0
1.6×1.1
1.2×0.8
0.7×0.6
0.5×0.5
0.4×0.4
0.3×0.3
0.2×0.3
5
1.8×1.1
2.0×1.1
1.7×1.0
1.8×1.1
1.1×0.8
0.5×0.5
0.3×0.3
0.2×0.2
0.1×0.1
Отсутствие признаков некроза тканей
6
1.3×1.3
1.5×1.3
1.3×1.3
1.3×1.3
1.2×0.5
0.6×0.4
0.2×0.2
0.1×0.2
0.1×0.1
7
1.8×1.1
1.8×1.1
1.6×1.1
1.8×1.1
1.5×0.6
0.7×0.5
0.6×0.3
0.5×0.2
0.4×0.1
0.3×0.1
8
1.6×1.0
1.8×1.0
1.6×1.0
1.6×1.0
1.3×0.7
0.7×0.6
0.6×0.5
0.5×0.4
0.5×0.3
0.4×0.2
Опыт:
Модель химического ожога (0,3 мл 40% р-ра формалина внутрикожно в область спины) + обработка солянокислым грязевым экстрактом (по схеме указанной в тексте)
После каждого измерения на зону дефекта, предварительно втирая, нанесен экстракт грязи
1
1.1×1.2
1.0×0.8
0.8×0.6
Отсутствие признаков некроза тканей
Отсутствие признаков некроза тканей
Отсутствие признаков некроза тканей
2
1.1×1.6
0.9×0.8
0.7×0.7
3
1.7×1.0
0.7×0.6
0.4×0.4
4
1.6×1.0
0.7×0.6
0.4×0.4
5
1.4×1.0
0.5×0.5
0.2×0.2
6
1.3×1.3
0.6×0.4
0.1×0.2
7
1.6×1.1
0.7×0.5
0.5×0.2
0.3×0.1
8
1.6×1.0
0.7×0.6
0.5×0.4
0.3×0.2
0.1×0.1
9
1.5×0.7
0.5×0.5
0.2×0.2
0.2×0.1
0.2×0.1
10
1.4×1.2
0.6×0.4
0.1×0.2
0.1×0.2
0.1×0.2
Опыт:
Модель химического ожога (0,3 мл 40% р-ра формалина внутрикожно в область спины) + обработка водным грязевым экстрактом (по схеме указанной в тексте)
После каждого измерения на зону дефекта, предварительно втирая, нанесен экстракт грязи
1
1.2×1.2
1.3×1.2
1.2×1.2
1.0×1.0
1.0×0.8
0.5×0.7
Отсутствие признаков некроза тканей
Отсутствие признаков некроза тканей
Отсутствие признаков некроза тканей
2
1.1×1.6
1.1×1.6
1.1×1.6
0.9×1.4
0.9×0.8
0.4×0.6
3
1.7×1.1
1.7×1.0
1.7×1.1
1.3×0.7
0.7×0.6
Отсутствие признаков некроза тканей
4
1.5×1.1
1.6×1.0
1.6×1.1
1.2×0.8
0.7×0.6
5
1.6×1.1
1.7×1.0
1.8×1.1
1.1×0.8
0.5×0.5
6
1.3×1.3
1.3×1.3
1.3×1.3
1.2×0.5
0.6×0.4
7
1.5×1.1
1.6×1.1
1.8×1.1
1.5×0.6
0.7×0.5
0.6×0.3
0.2×0.2
8
1.6×1.0
1.6×1.0
1.6×1.0
1.3×0.7
0.7×0.6
0.6×0.5
0.7×0.7
9
1.2×1.2
1.3×1.2
1.2×1.2
1.0×1.0
1.0×0.8
0.9×0.7
0.5×0.2
0.3×0.1
10
1.1×1.6
1.1×1.6
1.1×1.6
0.9×1.4
0.9×0.8
0.8×0.8
0.5×0.4
0.4×0.2