КОМБИНАЦИИ ДВОЙНЫХ МОДУЛЯТОРОВ IRS/STAT3 И АНТИТЕЛ К PD-1/PD-L1 ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА
COMBINATIONS OF DUAL MODULATORS IRS/STAT3 AND ANTIBODIES TO PD-1/PD-L1 FOR CANCER TREATMENT

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к способу лечения рака с применением комбинированной терапии, включающей двойной модулятор субстрата инсулинового рецептора (IRS) и сигнального трансдуктора и активатора транскрипции 3 (Stat3) в комбинации с антителом к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1) и/или антителом к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1). Комбинацию можно применять для повторной сенсибилизации опухоли, в которой может развиваться или уже развилась устойчивость к антителу к PD-1 и/или к PD-L1, благодаря усилению ответа опухоли на антитело к PD-1, превращению невосприимчивых опухолей в опухоли, в которых наблюдается ответ, и/или блокированию прогрессирования опухоли.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Science
Biochem. Pharm
FASEB J.
Mol. Pharmacol.
Science
J. Med. Chem.
Mol. Pharmacol.
267
40
6
45
242
32
45
Тирфостины представляют собой семейство ингибиторов протеинтирозинкиназ, разработанных для имитации субстрата тирозина, АТФ, и могут аллостерически ингибировать фермент (Levitzki et al., (1995), :1782-88; Levitzki et al., . (1990), :913-920; Levitzki et al., (1992), :3275-3282; патенты США № 5217999 и 5773476, Posner et al., (1994), :673-683). Фармакофорами в указанных тирфостинах, в частности тирфостинах типа бензилиден-малононитрила, являются гидрофильное катехоловое кольцо и более липофильный замещенный циано-винильный радикал. В исследованиях кинетики было показано, что некоторые тирфостиновые соединения являются эффективными конкурентными ингибиторами субстратов тирозина, при этом они действуют как неконкурентные ингибиторы в отношении участка связывания АТФ (Yaish et al.,  (1988), :933-935; Gazit et al.,  (1989), :2344-2352). Тем не менее, для многих тирфостинов показано конкурентное ингибирование в отношении как субстрата, так и участка связывания АТФ, либо смешанное конкурентное ингибирование (Posner et al., (1994), :673-683).
Cancer Res.
51
В группе, родственной тирфостинам, гидрофильное катехоловое кольцо было заменено на липофильные дихлор- или диметокси-фенильные группы, в результате чего были получены ингибиторы EGFR киназы, эффективные в диапазоне низких микромолярных концентраций (Yoneda et al.,  (1991), : 4430-4435). Указанные тирфостины дополнительно вводили бестимусным мышам, имеющим опухоли, совместно с моноклональными антителами к EGFR в субоптимальной дозе и добивались значительно усиленного подавления роста опухоли.
В публикации WO 2008/068751, созданной при участии некоторых авторов настоящего изобретения, описаны соединения, обладающие улучшенными свойствами ингибирования активации и передачи сигнала рецептора инсулиноподобного фактора роста 1 (IGF1R), рецептора фактора роста тромбоцитов (PDGFR), рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) и связанного с IGF1R инсулинового рецептора (IR).
В публикации WO 2009/147682, созданной при участии некоторых авторов настоящего изобретения, описаны соединения, действующие в качестве модуляторов сигнальной системы протеинкиназ (PK) и рецепторных киназ (RK). Кроме того, в WO 2009/147682 описаны способы получения таких соединений, фармацевтические композиции, включающие такие соединения, и способы применения указанных соединений и композиций, в частности, в качестве химиотерапевтических агентов для предупреждения и лечения нарушений, связанных с PK и RK, таких как метаболические, воспалительные, фиброзные и клеточные пролиферативные нарушения, в частности, рак.
В публикации WO 2012/117396, созданной при участии некоторых авторов настоящего изобретения, описаны комбинации соединений, описанных в WO 2008/068751 или WO 2009/147682, с противораковыми агентами для лечения рака.
В публикации WO 2016/125169, созданной при участии некоторых авторов настоящего изобретения, описаны комбинации соединений, описанных в WO 2008/068751 или WO 2009/147682, с (i) ингибитором эпидермального фактора роста (ингибитор EGFR) и антителом к EGFR; (ii) ингибитором мишени рапамицина у млекопитающих (mTOR); (iii) ингибитором митоген-активируемой протеинкиназы (MEK); (iv) ингибитором мутанта B-Raf; (v) иммунотерапевтическим агентом; и (vi) химиотерапевтическим агентом, для лечения рака.
В последние несколько десятилетий иммунотерапия стала важной составляющей при лечении некоторых типов рака. Задача иммунотерапии при раке заключается в обеспечении возможности для специфического распознавания и уничтожения раковых клеток иммунной системой пациента. Сигнальный трансдуктор и активатор транскрипции 3 (Stat3) часто активируется при раке и непосредственно участвует в формировании и поддержании иммуносупрессивной микросреды при раке, и играет ключевую роль в уклонении опухоли от иммунологического надзора.
Существует неудовлетворенная потребность в комбинациях, подходящих для лечения рака, предпочтительно, обеспечивающих по меньшей мере аддитивные терапевтические эффекты. Комбинации лекарственных средств из разных категорий можно применять для предупреждения или устранения появляющихся опухолей с лекарственной устойчивостью.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к лечению рака с применением комбинированной терапии, включающей двойной модулятор субстрата инсулинового рецептора (IRS) и сигнального трансдуктора и активатора транскрипции 3 (Stat3) в комбинации с антителом к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1). Комбинацию можно применять для повторной сенсибилизации опухоли, в которой может развиваться или уже развилась устойчивость к антителу к PD-1 и/или PD-L1, благодаря усилению ответа опухоли на антитело к PD-1 и/или антитело к PD-L1, превращению невосприимчивых опухолей в опухоли, в которых наблюдается ответ, и/или блокированию прогрессирования опухоли.
Описанные в настоящем документе соединения представляют собой модуляторы сигнальной системы субстрата инсулинового рецептора 1 (IRS1) и/или субстрата инсулинового рецептора 2 (IRS2). Соответственно, указанные соединения называют в настоящем документе «модуляторами IRS». В некоторых вариантах реализации соединения представляют собой ингибиторы IRS1 и/или IRS2. В дополнительных вариантах реализации соединения согласно изобретению представляют собой ингибиторы рецептора инсулиноподобного фактора роста 1 (IGF-1R). Таким образом, указанные соединения можно применять для подавления, лечения или предупреждения нарушений, связанных с сигнальной системой IGF-1R и/или IRS1 и/или IRS2, например, рака. В некоторых вариантах реализации соединения инициируют любой один или более из следующих процессов в любом порядке: (i) диссоциация IRS1 и/или IRS2 из клеточной мембраны; (ii) фосфорилирование серина в прямых субстратах IGF-1R, IRS1 и/или IRS2; и/или (iii) разрушение IRS1 и/или IRS2, что, таким образом, обеспечивает длительное действие, усиливающее ингибирующую активность указанных соединений. В других вариантах реализации соединения также являются ингибиторами связанного с IGF1R инсулинового рецептора (IR) или белков, для которых указанные PTK являются эффекторами или медиаторами, или белков, которые включены в путь сигнальной трансдукции, опосредованный PTK.
Соединения, описанные в настоящем документе, также являются модуляторами сигнального трансдуктора и активатора транскрипции 3 (Stat3). Соответственно, указанные соединения также называют в настоящем документе «модуляторами Stat3». В некоторых вариантах реализации соединения обеспечивают ингибирование фосфорилирования Stat3 в раковых клетках. Повышенный уровень фосфорилирования Stat3 обнаруживается при разных формах рака и раковых заболеваниях с лекарственной устойчивостью и приводит к повышенной выживаемости раковых клеток. Кроме того, лечение рака лекарственными средствами-ингибиторами PK неожиданно индуцирует фосфорилирование Stat3, что продемонстрировано в настоящем документе. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией или механизмом действия, полагают, что ингибирование активности Stat3 соединениями согласно настоящему изобретению может иметь синергизм с подобными лекарственными средствами-ингибиторами PK, которые в качестве побочного эффекта повышают регуляцию Stat3, может предупреждать приобретение устойчивости к подобным лекарственным средствам и может быть эффективным в отношении раковых заболеваний с лекарственной устойчивостью.
Благодаря двойному действию в отношении IRS и Stat3, соединения также называют в настоящем документе «двойными модуляторами IRS/Stat3».
Было обнаружено, что двойные модуляторы IRS и Stat3 можно применять для сенсибилизации опухоли к иммунотерапии, направленной на PD-1. Stat3 часто активируется при раке и непосредственно участвует в формировании и поддержании иммуносупрессивной микросреды при раке, и играет ключевую роль в уклонении опухоли от иммунологического надзора. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией или механизмом действия, полагают, что ингибирование фосфорилирования Stat3 соединениями согласно настоящему изобретению демаскирует опухоль для местной иммунной системы и делает ее восприимчивой к иммунотерапии с использованием антител к PD-1.

В соответствии с принципами настоящего изобретения было продемонстрировано, что соединение формулы 4, которое является типовым соединением формулы (I), таким как описано в настоящем документе, в комбинации с пембролизумабом (Кейтруда (англ. Keytruda)), моноклональным антителом к PD-1, превращало невосприимчивые опухоли в опухоли, в которых наблюдался ответ, и блокировало прогрессирование опухоли в модели полученного у пациента ксенотрансплантата (PDX) с использованием иммунодефицитных мышей, которым имплантировали опухоль из образца рака пищевода, взятого для биопсии, при этом мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК), выделенные из крови этих же пациентов, вводили мышам путем инъекции в первый день лечения. При введении только Кейтруда или только соединения 4 ответ не наблюдался, и опухоли агрессивно прогрессировали, но при этом у мышей, которым одновременно вводили комбинацию Кейтруда и соединения 4, было продемонстрировано полное блокирование прогрессирования опухоли. Это подтверждает способность соединения преодолевать лекарственную устойчивость рака в отношении терапии антителом к PD-1.
Таким образом, в одном из вариантов реализации настоящее изобретение относится к фармацевтической комбинации, содержащей соединение, представленное структурой формулы (I), или его соли или гидраты и антитело к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитело к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинацию
где
1
2
3
5
6
16
16
1
4
каждый R, R, R, R и R независимо выбран из группы, состоящей из H, галогена, галогеналкила и OR, причем Rпредставляет собой H или C-C алкил;
4
R представляет собой H или CN; и
7
1
4
R представляет собой H или C-C алкил.
В некоторых вариантах реализации соединение представлено структурой любой из формул 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16. Структуры указанных соединений приведены ниже в подробном описании. Предпочтительная комбинация согласно настоящему изобретению содержит соединение формулы 4.
В другом варианте реализации настоящее изобретение относится к фармацевтической комбинации, содержащей соединение, представленное структурой формулы (I), или его соли или гидраты и антитело к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитело к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинацию
(II)
где
А представляет собой Н или CN;
1
2
3
4
1
1
1
4
1
4
каждый X, X, X и X независимо выбран из H, галогена, C-C алкила, галогеналкила и OR, причем R представляет собой H или C-C алкил; и
5
1
4
X представляет собой H или C-C алкил.
В некоторых вариантах реализации соединение представлено структурой любой из формул 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25. Структуры указанных соединений приведены ниже в подробном описании. Предпочтительная комбинация согласно настоящему изобретению содержит соединение формулы 20.
В другом варианте реализации настоящее изобретение дополнительно относится к способу сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитела к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинации, включающему стадию приведения опухоли в контакт с соединением, представленным структурой формулы (I) или (II), или его солями или гидратами в комбинации с антителом к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1) и/или антителом к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1).
В других вариантах реализации настоящее изобретение дополнительно относится к комбинации, содержащей соединение формулы (I) или (II) и антитело к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитело к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинацию, для применения для сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к PD-1.
Согласно настоящему изобретению предпочтительным соединением для применения в комбинациях согласно настоящему изобретению является соединение формулы 4. Таким образом, в другом варианте реализации настоящее изобретение относится к фармацевтической комбинации, содержащей соединение, представленное структурой формулы 4, или его соли или гидраты с антителом к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1) и/или к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1).
В другом варианте реализации настоящее изобретение дополнительно относится к способу сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитела к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинации, включающему стадию приведения опухоли в контакт с соединением, представленным структурой формулы 4, или его солями или гидратами в комбинации с антителом к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1) и/или к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1).
В других вариантах реализации настоящее изобретение дополнительно относится к комбинации, содержащей соединение формулы 4 и антитело к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитело к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинацию, для применения для сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к PD-1 и/или к PD-L1.
Структура соединения формулы 4 описана ниже:
.
4

В некоторых вариантах реализации антитело к PD-1, применяемое в комбинации с соединением, описанным выше, выбрано из группы, состоящей из пембролизумаба (Кейтруда), ниволумаба (Опдиво (англ. Opdivo)), пидилизумаба (CT-011, MDV9300, Medivation), AGEN-2034, AMP-224, BCD-100, BGBA-317, BI-754091, CBT-501, CC-90006, цемиплимаба, GLS-010, IBI-308, JNJ-3283, JS-001, MEDI-0680, MGA-012, MGD-013, PDR-001, PF-06801591, REGN-2810, SHR-1210, TSR-042, LZM-009 и ABBV-181. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.

В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения антитело к PD-1 представляет собой пембролизумаб (Кейтруда). Таким образом, предпочтительная комбинация согласно настоящему изобретению содержит соединение формулы 4 и пембролизумаб.

В некоторых вариантах реализации антитело к PD-L1, применяемое в комбинации с соединением, описанным выше, выбрано из группы, состоящей из дурвалумаба (Имфинзи™ (англ. Imfinzi™)), атезолизумаба (Тецентрик (англ. Tecentriq),MPDL3280A), авелумаба (Бавенсио (англ. Bavencio)), CX-072, BMS-936559, SHR-1316, M-7824, LY-3300054, FAZ-053, KN-035, CA-170, CK-301, CS-1001, HLX-10, MCLA-145, MSB-2311 и MEDI-4736. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
В некоторых вариантах реализации опухоль присутствует у пациента с раком, которому проводят иммунотерапию антителом к PD-1 и/или к PD-L1, или который является кандидатом для проведения такой иммунотерапии. В некоторых вариантах реализации опухоли у пациентов с раком устойчивы к лечению только антителом к PD-1 и/или к PD-L1. В настоящем документе предполагается, что соединение формулы (I) или (II), в частности, соединение 4, повторно сенсибилизирует опухоль к иммунотерапии с применением антитела к PD-1 и/или к PD-L1, благодаря усилению ответа опухоли на антитело к PD-1 и/или к PD-L1, превращению невосприимчивых опухолей в опухоли, в которых наблюдается ответ, и/или блокированию прогрессирования опухоли.
Комбинации согласно настоящему изобретению подходят для лечения разных типов рака. В частности, комбинации согласно настоящему изобретению обладают активностью в отношении рака головы и шеи (ГиШ), саркомы, множественной миеломы, рака яичника, рака молочной железы, рака почки, рака желудка, гемопоэтических раковых заболеваний, лимфомы, лейкоза, включая лимфобластный лейкоз, карциномы легкого, меланомы, глиобластомы, гепатокарциномы, рака предстательной железы, рака поджелудочной железы и рака толстой кишки. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Термин «комбинация» или «комбинированное лечение» в настоящем документе обозначает любую форму одновременного или параллельного лечения с использованием по меньшей мере двух разных терапевтических агентов. Предполагается, что указанный термин включает как одновременное проведение двух способов лечения, т.е. с использованием по существу одинаковых схем лечения, а также перекрывающееся введение в случае последовательных или чередующихся схем проведения способа лечения. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Комбинированная терапия является особенно предпочтительной, так как дозировка каждого агента, используемого при комбинированной терапии, может быть снижена по сравнению с монотерапией с использованием каждого из агентов, но при этом будет обеспечивать общий противораковый эффект. Соответственно, снижение дозировки каждого агента может приводить к уменьшению побочных эффектов. Комбинированная терапия может снижать развитие устойчивости к специфическому способу лечения рака и/или приводить к регрессии опухоли после приобретения ею устойчивости, что продемонстрировано в настоящем документе.
Соединение формулы (I) или (II) (например, соединение 4) и антитело к PD-1 и/или к PD-L1 можно вводить одновременно (в составе одной или раздельных лекарственных форм), или же их можно вводить последовательно в любом порядке. Введение также можно проводить согласно схемам чередующегося введения, например, сначала соединение формулы (I) или (II), затем антитело к PD-1 и/или к PD-L1, после чего дополнительную дозу соединения формулы (I) или (II), затем такое же или другое антитело к PD-1 и/или к PD-L1, и т.д. Все схемы введения, включая одновременное, последовательное и чередующееся введение, включены в настоящее изобретение, причем каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть обеспечены в любой форме, известной в данной области техники, например, в форме, подходящей для перорального введения (например, в форме раствора, суспензии, сиропа, эмульсии, дисперсии, таблетки, пилюли, капсулы, драже, гранул и порошка), для парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, внутриартериального, чрескожного, подкожного или интраперитонеального), местного введения (например, в форме мази, геля, крема), для введения путем ингаляции или введения в виде суппозитория. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Дополнительные варианты реализации и полный объем применимости настоящего изобретения станут понятны из подробного описания, приведенного далее в настоящем документе. Тем не менее, следует понимать, что подробное описание и конкретные примеры, хотя в них и указаны предпочтительные варианты реализации изобретения, приведены исключительно в качестве иллюстрации, так как разные изменения и модификации, не выходящие за рамки сущности и объема изобретения, будут понятны специалистам в данной области техники после изучения указанного подробного описания.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фигура 1.
(
)

3

Соединение 4 в комбинации с пембролизумабом (Кейтруда) превращало невосприимчивые опухоли в опухоли, в которых наблюдался ответ, и блокировало прогрессирование опухоли в модели полученного у пациента ксенотрансплантата (PDX) с использованием иммунодефицитных мышей, которым имплантировали опухоль из образца рака пищевода, взятого для биопсии. Мышам дополнительно вводили иммунные клетки того же пациента (двойная аутологичная трансплантация) в первый день лечения. Мышам вводили (a) контроль (носитель) (◊); (b) Кейтруда (); (c) соединение 4 (Δ); или (d) Кейтруда + соединение 4○. Лечение начинали, когда средний размер опухоли составлял ~160 мм. При введении только Кейтруда или только соединения 4 ответ не наблюдался, и опухоли агрессивно прогрессировали, но при этом у мышей, которым одновременно вводили комбинацию Кейтруд и соединения 4, было продемонстрировано полное блокирование прогрессирования опухоли.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к лечению рака с применением комбинированной терапии, включающей двойной модулятор субстрата инсулинового рецептора (IRS) и сигнального трансдуктора и активатора транскрипции 3 (Stat3) в комбинации с антителом к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1) и/или с антителом к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1). Комбинацию можно применять для повторной сенсибилизации опухоли, в которой развилась устойчивость к антителу к PD-1 и/или PD-L1, благодаря усилению ответа опухоли на антитело к PD-1 и/или антитело к PD-L1, превращению невосприимчивых опухолей в опухоли, в которых наблюдается ответ, и/или блокированию прогрессирования опухоли.
PD-1, PD-L1 и антитела к PD-1 и PD-L1
Белок запрограммированной гибели клеток 1, также называемый PD-1, представляет собой рецептор клеточной поверхности, который играет важную роль для понижающей регуляции иммунной системы и усиления аутотолерантности, благодаря подавлению воспалительной активности T-клеток. Связывание лигандов PD-1, PD-L1 и PD-L2, с рецептором PD-1, присутствующим в T-клетках, подавляет пролиферацию T-клеток и выработку цитокинов. Повышающая регуляция лигандов PD-1 происходит в некоторых опухолях, а передача сигнала по этому пути может быть связана с подавлением иммунологического надзора активными T-клетками в отношении опухолей. Антитела к PD-1 связывают рецептор PD-1 и блокируют его взаимодействие с PD-L1 и PD-L3, что приводит к опосредованному по пути PD-1 подавлению иммунного ответа, включая противоопухолевый иммунный ответ.

В некоторых вариантах реализации антитело к PD-1, применяемое в комбинации с соединением, описанным выше, представляет собой пембролизумаб (Кейтруда). В других вариантах реализации антитело к PD-1, применяемое в комбинации с соединением, описанным выше, представляет собой ниволумаб (Опдиво). В других вариантах реализации антитело к PD-1, применяемое в комбинации с соединением, описанным выше, представляет собой пидилизумаб (Medivation).
Дополнительные антитела к PD-1 выбраны из группы, состоящей из AGEN-2034 (Agenus), AMP-224 (Medimmune), BCD-100 (Biocad), BGBA-317 (Beigene), BI-754091 (Boehringer Ingelheim), CBT-501 (Genor Biopharma), CC-90006 (Celgene), цемиплимаба (Regeneron Pharmaceuticals), дурвалумаб + MEDI-0680 (Medimmune), GLS-010 (Harbin Gloria Pharmaceuticals), IBI-308 (Eli Lilly), JNJ-3283 (Johnson & Johnson), JS-001 (Shanghai Junshi Bioscience Co.), MEDI-0680 (Medimmune), MGA-012 (MacroGenics), MGD-013 (Marcogenics), пазопаниба гидрохлорида + пембролизумаба (Novartis), PDR-001 (Novartis), PF-06801591 (Pfizer), REGN-2810 (Regeneron), SHR-1210 (Jiangsu Hengrui Medicine Co.), TSR-042 (Tesaro Inc.), LZM-009 (Livzon Pharmaceutical Group Inc) и ABBV-181 (AbbVie Inc). Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.

В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения антитело к PD-1 представляет собой пембролизумаб (Кейтруда).
В других вариантах реализации антитело к PD-L1, применяемое в комбинациях согласно настоящему изобретению, выбрано из группы, состоящей из дурвалумаба (MedImmune LLC), атезолизумаба (Hoffmann-La Roche Ltd, Chugai Pharmaceutical Co Ltd), авелумаба (Merck KGaA), CX-072 (CytomX Therapeutics Inc), BMS-936559 (ViiV Healthcare Ltd), SHR-1316 (Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd), M-7824 (Merck KGaA), LY-3300054 (Eli Lilly and Co), FAZ-053 (Novartis AG), KN-035 (AlphaMab Co Ltd), CA-170 (Curis Inc), CK-301 (TG Therapeutics Inc), CS-1001 (CStone Pharmaceuticals Co Ltd), HLX-10 (Shanghai Henlius Biotech Co Ltd), MCLA-145 (Merus NV), MSB-2311 (MabSpace Biosciences (Suzhou) Co Ltd) и MEDI-4736 (Medimmune).
В настоящем документе предполагается, что опухоль, которую лечат комбинацией согласно изобретению, присутствует у пациента с раком, которому проводят иммунотерапию антителом к PD-1 и/или к PD-L1, или который является кандидатом для проведения такой иммунотерапии. В некоторых вариантах реализации опухоли у пациентов с раком устойчивы к лечению только антителом к PD-1 и/или к PD-L1. Как продемонстрировано в настоящем документе, соединение формулы (I) или (II), например, соединение 4, повторно сенсибилизирует опухоль к иммунотерапии с применением антитела к PD-1 и/или к PD-L1, благодаря усилению ответа опухоли на антитело к PD-1 и/или к PD-L1, превращению невосприимчивых опухолей в опухоли, в которых наблюдается ответ, и/или блокированию прогрессирования опухоли. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Двойные модуляторы субстрата инсулинового рецептора (IRS)/сигнального трансдуктора и активатора транскрипции 3 (Stat3)
Любое соединение общей структуры формулы (I) или (II) или любое отдельное соединение, включенное в указанную формулу, можно применять в композициях и способах согласно настоящему изобретению:
Структура формулы (I) представлена ниже:
где
1
2
3
5
6
16
16
1
4
каждый R, R, R, R и R независимо выбран из группы, состоящей из H, галогена, галогеналкила и OR, причем Rпредставляет собой H или C-C алкил;
4
R представляет собой H или CN; и
7
1
4
R представляет собой H или C-C алкил;
и соли, гидраты и сольваты указанного соединения.
1
2
3
5
6
В других вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где по меньшей мере один из R, R, R, R и Rпредставляет собой галоген. Галоген может представлять собой F, Cl, Br или I, причем каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
1
2
3
5
6
В других вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где по меньшей мере один из R, R, R, R и Rпредставляет собой галогеналкил.
1
1
1
1
1
1
1
1
3
В одном из вариантов реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой H. В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой галоген. В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой галогеналкил. В одном конкретном варианте реализации R представляет собой F. В другом конкретном варианте реализации R представляет собой Cl. В другом конкретном варианте реализации R представляет собой Br. В другом конкретном варианте реализации R представляет собой I. В другом конкретном варианте реализации R представляет собой CF.
2
2
2
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой H. В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой галоген. В одном конкретном варианте реализации R представляет собой Br.
3
3
3
3
3
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой H. В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой галоген. В одном конкретном варианте реализации R представляет собой Cl. В другом конкретном варианте реализации R представляет собой Br. В другом конкретном варианте реализации R представляет собой I.
4
4
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой H. В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой CN.
5
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой H.
6
6
6
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой H. В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой галоген. В одном конкретном варианте реализации R представляет собой Br.
7
7
7
7
1
4
3
2
3
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой H. В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение формулы (I), где R представляет собой C-C алкил. В одном конкретном варианте реализации R представляет собой CH. В другом конкретном варианте реализации R представляет собой CHCH.
1
В одном из вариантов реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
1
2
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
2
3
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
3
4
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
4
5
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
5
6
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
6
7
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
7
8
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
8
9
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
9
10
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
10
11
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
11
12
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
12
13
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
13
14
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
14
15
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
15
16
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
16
Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
В другом варианте реализации соединение представлено структурой формулы (II):
(II)
где
А представляет собой Н или CN;
1
2
3
4
1
1
1
4
1
4
каждый X, X, X и X независимо выбран из H, галогена, C-C алкила, галогеналкила и OR, причем R представляет собой H или C-C алкил; и
5
1
4
X представляет собой H или C-C алкил;
включая соли, гидраты, сольваты, полиморфы, оптические изомеры, геометрические изомеры, энантиомеры, диастереомеры и смеси указанных соединений.
В некоторых вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы (II), где A представляет собой H.
В других вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы (II), где A представляет собой CN.
1
2
3
4
В других вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы (II), где по меньшей мере один из X, X, X и X представляет собой галоген. Галоген может представлять собой F, Cl, Br или I, причем каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
1
2
3
4
В других вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы (II), где каждый X, X, X и X представляет собой H или галоген, причем галоген предпочтительно представляет собой Cl, Br или I.
2
В других вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы (II), где X представляет собой H.
5
В других вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы (II), где X представляет собой H.
5
1
4
.
В других вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы (II), где X представляет собой C-C алкил
Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
17
В одном из вариантов реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
17
18
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
18
19
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
19
20
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
20
21
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
21
22
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
22
23
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
23
24
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
24
25
В другом варианте реализации соединение представляет собой соединение, представленное формулой :
.
25
20
Согласно настоящему изобретению предпочтительным соединением формулы (II) является соединение формулы .
A)
B)
C)
В других вариантах реализации соединение представляет собой любое из производных, описанных в  публикации международной патентной заявке PCT WO 2008/068751;  публикации международной патентной заявке PCT WO 2009/147682; или международной патентной заявке PCT WO 2012/090204. Содержание каждого из приведенных выше документов включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки так же, как и в случае, если бы они были полностью включены в настоящий документ.
Следует понимать, что включены все конформеры, геометрические изомеры, стереоизомеры, энантиомеры и диастереомеры любого соединения, описанного в настоящем документе, и их можно применять в комбинациях и способах, описанных в настоящей заявке.
Включены все стереоизомеры приведенных выше соединений как в виде смеси, так и в чистой или по существу чистой форме. Соединения могут содержать асимметричные центры при любом из атомов. Следовательно, соединения могут существовать в энантиомерной или диастереомерной форме или в виде их смесей. В настоящем изобретении предполагается применение любых рацематов (т.е. смесей, содержащих равные количества каждого из энантиомеров), энантиомерно обогащенных смесей (т.е. смесей, обогащенных одним из энантиомеров), чистых энантиомеров или диастереомеров или любых их смесей. Хиральные центры могут быть обозначены как R или S или R,S или d,D, l,L или d,l, D,L. Соединения, содержащие аминокислотные остатки, включают остатки D-аминокислот, L-аминокислот или рацемические производные аминокислот. Соединения, содержащие остатки сахаров, включают остатки D-сахаров, L-сахаров или рацемические производные сахаров. Остатки D-сахаров, которые встречаются в природе, являются предпочтительными. Кроме того, некоторые из соединений согласно изобретению содержат одну или более двойных связей. Предполагается, что в настоящее изобретение независимо в каждом случае включены все структурные и геометрические изомеры, включая цис-, транс-, E- и Z-изомеры.
Одно или более соединений согласно изобретению могут присутствовать в виде соли. Термин «соль» включает соли присоединения как основания, так и кислоты, включая, но не ограничиваясь ими, карбоксилатные соли или соли, образованные с атомами азота в аминах, и включают соли, полученные с использованием органических и неорганических анионов и катионов, обсуждаемых ниже. Кроме того, термин включает соли, образованные в результате стандартных кислотно-основных реакций основных групп (таких как аминогруппы) с органическими или неорганическими кислотами. Указанные кислоты включают хлороводородную, фтороводородную, трифторуксусную, серную, фосфорную, уксусную, янтарную, лимонную, молочную, малеиновую, фумаровую, пальмитиновую, холевую, памовую, слизевую, D-глутаминовую, D-камфорную, глутаровую, фталевую, винную, лауриновую, стеариновую, салициловую, метансульфокислоту, бензолсульфокислоту, сорбиновую, пикриновую, бензойную, коричную и подобные кислоты. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации изобретения.
J. Pharm. Sci.
66
Термин «органический или неорганический катион» относится к противоионам для аниона в соли. Противоионы включают, но не ограничиваются ими, щелочные и щелочноземельные металлы (такие как литий, натрий, калий, барий, алюминий и кальций); аммоний и моно-, ди- и триалкиламины, такие как триметиламин, циклогексиламин; и органические катионы, такие как дибензиламмоний, бензиламмоний, 2-гидроксиэтиламмоний, бис(2-гидроксиэтил)аммоний, фенилэтилбензиламмоний, дибензилэтилендиаммоний и подобные катионы. См., например, Berge et al.,  (1977), :1-19, содержание которой включено в настоящую заявку посредством ссылки.
В настоящее изобретение также включены сольваты соединений согласно настоящему изобретению и их солей. «Сольват» обозначает физический ассоциат соединения согласно изобретению с одной или более молекулами растворителя. Такой физический ассоциат образуется посредством выраженных в разной степени ионных и ковалентных связей, включая водородные связи. В определенных случаях возможно выделение сольвата. «Сольват» включает как сольваты в фазе раствора, так и выделяемые сольваты. Неограничивающие примеры подходящих сольватов включают этанолаты, метанолаты и т.д. «Гидрат» представляет собой сольват, в котором молекула растворителя представляет собой воду.
В настоящее изобретение также включены полиморфы соединений согласно настоящему изобретению и их солей. Термин «полиморф» относится к конкретному кристаллическому или аморфному состоянию вещества, которое может быть охарактеризовано конкретными физическими свойствами, такими как рентгеновская дифракция, ИК или рамановский спектры, температура плавления и т.д.
Не ограничиваясь какой-либо конкретной теорией или механизмом действия, полагают, что соединения согласно настоящему изобретению являются ингибиторами сигнальной системы PK, например, IGF-1R. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что указанные соединения, помимо ингибирования IGF-1R, также обеспечивают диссоциацию субстратов IGF-1R, IRS1/2, из клеточной мембраны, ингибируют фосфорилирование серина и/или разрушают белки IRS1/2. Эта активность приводит к продолжительному ингибированию путей IGF-1R и IR, подавлению роста разнообразных типов раковых клеток и высокоактивным противоопухолевым эффектам. По этой причине указанные соединения называют «модуляторами IRS». В некоторых вариантах реализации соединение формулы I представляет собой ингибитор сигнального пути инсулинового рецептора или рецептора инсулиноподобного фактора роста 1 (IGF-1R), и/или соединение формулы I взаимодействует с, воздействует на или ингибирует субстратный белок в пути, опосредованном IGF-1R. В некоторых вариантах реализации субстратный белок представляет собой субстрат инсулинового рецептора 1 (IRS1), субстрат инсулинового рецептора 2 (IRS2) или их комбинацию. В одном конкретном варианте реализации соединение формулы I представляет собой ингибитор киназы IGF-1R, который обеспечивает по меньшей мере одно из следующего: диссоциация IRS1 или IRS2 из клеточной мембраны, фосфорилирование IRS1 или IRS2 и/или разрушение IRS1 или IRS2, в любом порядке.
Соединения, описанные в настоящем документе, также являются модуляторами сигнального трансдуктора и активатора транскрипции 3 (Stat3). В некоторых вариантах реализации соединения обеспечивают ингибирование фосфорилирования Stat3 в раковых клетках. Повышенный уровень фосфорилирования Stat3 обнаруживается при разных формах рака и раковых заболеваниях с лекарственной устойчивостью и приводит к повышенной выживаемости раковых клеток. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией или механизмом действия, полагают, что ингибирование активности Stat3 может иметь синергизм с подобными лекарственными средствами-ингибиторами PK, которые в качестве побочного эффекта повышают регуляцию Stat3, может предупреждать приобретение устойчивости к подобным лекарственным средствам и может быть эффективным в отношении раковых заболеваний с лекарственной устойчивостью. Кроме того, Stat3 часто активируется при раке и непосредственно участвует в формировании и поддержании иммуносупрессивной микросреды при раке, и играет ключевую роль в уклонении опухоли от иммунологического надзора. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией или механизмом действия, полагают, что ингибирование фосфорилирования Stat3 демаскирует опухоль для местной иммунной системы и делает ее восприимчивой к иммунной системе.
Химические определения
:
1
4
«Алкильная» группа относится к любому насыщенному алифатическому углеводороду, включая линейные и разветвленные алкильные группы. В одном из вариантов реализации алкильная группа содержит 1-4 атомов углерода и обозначена в настоящем документе как C-C-алкил. Алкильная группа может быть незамещенной или замещена одной или более группами, выбранными из галогена, гидрокси, алкоксикарбонила, амидо, алкиламидо, диалкиламидо, нитро, амино, алкиламино, диалкиламино, карбоксила, тио и тиоалкила.
«Гидрокси»-группа относится к группе OH. «Алкокси»-группа относится к группе -O-алкил, где R представляет собой алкил, такой как определено выше.
2
«Амино»-группа относится к группе NH. Алкиламиногруппа относится к группе -NHR, где R представляет собой алкил, такой как определено выше. Диалкиламиногруппа относится к группе -NRR', где R и R' представляют собой алкил, такой как определено выше.
2
«Амидо»-группа относится к группе –C(O)NH. Алкиламидогруппа относится к группе -C(O)NHR, где R представляет собой алкил, такой как определено выше. Диалкиламидогруппа относится к группе -C(O)NRR', где R и R' представляют собой алкил, такой как определено выше.
Термин «галоген» или «галоген-» в настоящем документе отдельно или в составе другой группы относится к хлору, брому, фтору и йоду. Термин «галогеналкил» относится к алкильной группе, в которой часть или все атомы водорода независимо заменены на галогеновую группу, включая, но не ограничиваясь ими, трихлорметил, трибромметил, трифторметил, трииодметил, дифторметил, хлордифторметил, пентафторэтил, 1,1-дифторэтил, бромметил, хлорметил, фторметил, йодметил и т.д.
in vivo
in vivo
В объем настоящего изобретения включены пролекарства соединений, описанных в настоящем документе. Термин «пролекарство» определяет соединения, которые быстро превращаются  в любое из соединений, представленных формулой I, например, в результате гидролиза в крови. Таким образом, термин «пролекарство» относится к предшественнику любого из соединений согласно настоящему изобретению, который является фармацевтически приемлемым. Пролекарство может быть неактивным при введении субъекту, но превращается  в активное соединение. Применение пролекарств особенно предпочтительно для облегчения введения соединений. Пролекарство соединения часто обеспечивает преимущества растворимости, совместимости с тканями или задержки высвобождения в организме млекопитающего.
Лечение рака
В одном из вариантов реализации настоящее изобретение относится к способу сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитела к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинации, включающему стадию приведения опухоли в контакт с соединением, представленным структурой формулы (I), или его солями или гидратами в комбинации с антителом к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1) и/или антителом к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1).
В другом варианте реализации настоящее изобретение относится к способу сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитела к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинации, включающему стадию приведения опухоли в контакт с соединением, представленным структурой формулы (II), или его солями или гидратами в комбинации с антителом к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1) и/или антителом к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1).
В других вариантах реализации настоящее изобретение дополнительно относится к комбинации, содержащей соединение формулы (I) и антитело к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитело к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинацию, для применения для сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к PD-1 и/или к PD-L1.
В других вариантах реализации настоящее изобретение дополнительно относится к комбинации, содержащей соединение формулы (II) и антитело к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитело к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинацию, для применения для сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к PD-1 и/или к PD-L1.
Согласно настоящему изобретению предпочтительным соединением для применения в комбинациях согласно настоящему изобретению является соединение формулы 4. Таким образом, в другом варианте реализации настоящее изобретение дополнительно относится к способу сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитела к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинации, включающему стадию приведения опухоли в контакт с соединением, представленным структурой формулы 4, или его солями или гидратами в комбинации с антителом к PD-1 и/или к PD-L1.
В других вариантах реализации настоящее изобретение дополнительно относится к комбинации, содержащей соединение формулы 4 и антитело к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитело к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинацию, для применения для сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к PD-1 и/или к PD-L1.
Другим предпочтительным соединением согласно настоящему изобретению для применения в комбинациях согласно настоящему изобретению является соединение формулы 20. Таким образом, в другом варианте реализации настоящее изобретение дополнительно относится к способу сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитела к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинации, включающему стадию приведения опухоли в контакт с соединением, представленным структурой формулы 20, или его солями или гидратами в комбинации с антителом к PD-1 и/или к PD-L1.
В других вариантах реализации настоящее изобретение дополнительно относится к комбинации, содержащей соединение формулы 20 и антитело к белку запрограммированной гибели клеток 1 (PD-1), антитело к лиганду белка запрограммированной гибели клеток 1 (PD-L1) или их комбинацию, для применения для сенсибилизации опухоли к иммунотерапии с применением антитела к PD-1 и/или к PD-L1.
В некоторых вариантах реализации опухоль присутствует у пациента с раком, которому проводят иммунотерапию, или который является кандидатом для проведения иммунотерапии.

Согласно настоящему изобретению предпочтительными являются комбинации пембролизумаба (Кейтруда) и соединения формулы 4.

Другими предпочтительными комбинациями согласно настоящему изобретению являются комбинации пембролизумаба (Кейтруда) и соединения формулы 20.
Термин «рак» в настоящем документе относится к нарушению, при котором популяция клеток становится, в разной степени, невосприимчивой к механизмам контроля, которые обычно управляют пролиферацией и дифференцировкой. Рак относится к разным типам злокачественных новообразований и опухолей, включая первичные опухоли и метастазы опухолей. Неограничивающими примерами раковых заболеваний, которые можно лечить комбинациями согласно настоящему изобретению, являются рак мозга, яичника, колоректальный рак, рак поджелудочной железы, головы и шеи, пищевода, предстательной железы, почки, мочевого пузыря, молочной железы, легкого, полости рта и кожи.
Комбинации согласно настоящему изобретению подходят для лечения разных типов рака. В частности, комбинации согласно настоящему изобретению обладают активностью в отношении рака головы и шеи (ГиШ), саркомы, множественной миеломы, рака яичника, рака молочной железы, рака почки, рака желудка, гемопоэтических раковых заболеваний, лимфомы, лейкоза, включая лимфобластный лейкоз, карциномы легкого, меланомы, глиобластомы, гепатокарциномы, рака поджелудочной железы, рака пищевода, рака предстательной железы и рака толстой кишки. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Другими примерами раковых заболеваний являются: карциномы, саркомы, миеломы, лейкозы, лимфомы и опухоли смешанного типа. Конкретные категории опухолей включают лимфопролиферативные нарушения, рак молочной железы, рак яичника, рак предстательной железы, рак шейки матки, рак эндометрия, рак кости, рак печени, рак желудка, рак толстой кишки, рак поджелудочной железы, рак щитовидной железы, рак головы и шеи, рак центральной нервной системы, рак периферической нервной системы, рак кожи, рак почки, а также метастазы всех вышеперечисленных заболеваний. Конкретные типы опухолей включают печеночноклеточную карциному, гепатому, гепатобластому, рабдомиосаркому, карциному пищевода, карциному щитовидной железы, ганглиобластому, фибросаркому, миксосаркому, липосаркому, хондросаркому, остеогенную саркому, хордому, ангиосаркому, эндотелиосаркому, опухоль Юинга, лейомиосаркому, рабдотелиосаркому, инвазивную протоковую карциному, папиллярную аденокарциному, меланому, плоскоклеточную карциному, базальноклеточную карциному, аденокарциному (высоко дифференцированную, умеренно дифференцированную, слабо дифференцированную или недифференцированную), почечноклеточную карциному, гипернефрому, гипернефроидную аденокарциному, карциномы желчных протоков, хориокарциному, семиному, эмбриональную карциному, опухоль Вильмса, опухоль яичек, карциному легкого, включая мелкоклеточную, немелкоклеточную и крупноклеточную карциному легкого, карциному мочевого пузыря, глиому, астроцитому, медуллобластому, краниофарингиому, эпендимому, пинеалому, ретинобластому, нейробластому, карциному толстой кишки, карциному прямой кишки, гемопоэтические злокачественные образования, включая все типы лейкозов и лимфом, включая: острый миелогенный лейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, лейкоз из тучных клеток, множественную миелому, миелоидную лимфому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому и гепатокарциному. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Термин «лечение рака» в контексте настоящего изобретения включает по меньшей мере одно из следующего: снижение скорости роста рака (т.е. рост рака продолжается, но с меньшей скоростью); прекращение роста рака, т.е. стабилизацию роста опухоли, а в предпочтительных случаях уменьшение или снижение размера опухоли. Термин также включает уменьшение числа метастазов, уменьшение числа новых образующихся метастазов, замедление прогрессирования рака от одной стадии к другой и снижение ангиогенеза, вызванного раком. В наиболее предпочтительных случаях опухоль полностью устраняется. Кроме того, в этот термин включено продление периода выживаемости субъекта, которого лечат, продление периода прогрессирования заболевания, регрессии опухоли и т.д. Следует понимать, что термин «лечение рака» также относится к ингибированию пролиферации злокачественных (раковых) клеток, включая образование опухоли, первичные опухоли, прогрессирование опухоли или метастазы опухоли. Термин «ингибирование пролиферации» в отношении раковых клеток может дополнительно относиться к снижению по меньшей мере одного из следующего: количества клеток (вследствие гибели клеток, которая может происходить по некротическому, апоптотическому или любому другому типу гибели клеток или их комбинации) по сравнению с контролем; к снижению скорости роста клеток, то есть общее количество клеток может увеличиваться, но в меньшем количестве или с меньшей скоростью, по сравнению с увеличением количества в контроле; к снижению инвазивности клеток (например, при определении в исследовании с использованием мягкого агара) по сравнению с контролем, даже если их общее количество не изменилось; к изменению от менее дифференцированного типа клеток к более дифференцированному типу клеток; к замедлению неопластической трансформации; или, в качестве альтернативы, к замедлению прогрессирования раковых клеток от одной стадии к другой.
В настоящем документе термин «введение» относится к приведению в контакт с комбинацией согласно настоящему изобретению. Введение можно проводить в клетки или тканевые культуры или в живые организмы, например, человеку. В одном из вариантов реализации настоящее изобретение включает введение комбинаций согласно настоящему изобретению субъекту, представляющему собой человека.
«Терапевтическое» лечение представляет собой лечение, которое проводят субъекту, у которого отмечаются признаки патологии, для снижения или устранения указанных признаков. «Терапевтически эффективное количество» представляет собой количество соединения или композиции, которое является достаточным для обеспечения благоприятного действия у субъекта, которому вводят соединение или композицию.
Термин «после прекращения лечения» в настоящем документе обозначает период после прекращения лечения выбранным лекарственным средством. Например, согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения двойной модулятор IRS/Stat3 (например, соединение формулы (I) или (II)) вводят совместно (последовательно или одновременно) с любым из комбинированных способов лечения, описанных в настоящем документе, в течение желаемого периода времени. Затем лечение (всеми соединениями) прекращают и отслеживают опухоли в течение желаемого периода времени. Предполагается, что двойные модуляторы IRS/Stat3 согласно настоящему изобретению могут предотвращать или задерживать повторное появление опухоли после прекращения лечения любым из описанных в настоящем документе комбинированных лекарственных средств в большей степени, чем любое из указанных лекарственных средств, вводимых по отдельности.
Термин «лечение опухоли, у которой развилась устойчивость» к определенному противораковому лекарственному средству, или «предупреждение приобретения опухолью устойчивости» к определенному противораковому лекарственному средству имеет любое одно или более из следующих значений: (i) устойчивость опухоли была приобретена или развилась в результате лечения указанным противораковым лекарственным средством; (ii) устойчивость опухоли была приобретена или развилась в результате лечения другими противораковыми лекарственными средствами; или (iii) у опухоли имелась первичная устойчивость к указанному противораковому лекарственному средству.
Комбинированная терапия может обеспечивать терапевтические преимущества с учетом различий токсичности, связанной с двумя отдельными способами лечения. Например, введение одного соединения может вызывать определенную токсичность, которая не наблюдается для другого соединения, и наоборот. Таким образом, указанные различия токсичности могут позволить проводить каждый способ лечения в дозе, при которой токсичность отсутствует или является минимальной, в результате при указанной комбинированной терапии обеспечивается терапевтическая доза в отсутствие токсичности компонентов каждого из используемых в комбинации агентов. Кроме того, если терапевтический эффект, достигаемый в результате комбинированного лечения, усилен или является синергическим, т.е. значительно превышает суммарный терапевтический эффект, то доза каждого из агентов может быть понижена еще больше, что, таким образом, снижает связанную с ним токсичность в еще большей степени.
Science
282
Термины «синергический», «кооперированный» и «супераддитивный» и их разнообразные грамматические формы используют в настоящем документе взаимозаменяемо. Взаимодействие между двойным модулятором IRS/Stat3 и антителом к PD-1 и/или к PD-L1 рассматривают как синергическое, кооперированное или супераддитивное, если наблюдаемый эффект (например, цитотоксичность) при совместном присутствии лекарственных средств превышает сумму отдельных эффектов каждого лекарственного средства при их отдельном введении. В одном из вариантов реализации наблюдаемый комбинированный эффект лекарственных средств значительно превышает сумму отдельных эффектов. Термин «значительно» означает, что наблюдаемый р<0,05. Один из неограничивающих способов подсчета эффективности комбинированного лечения включает использование аддитивной модели Блисса (Cardone et al.  (1998), : 1318-1321), в которой применяется следующая формула: Ebliss = EA + EB - EA × EB, где EA и EB соответствуют парциальному ингибированию при использовании только лекарственного средства A и только лекарственного средства B в конкретных концентрациях. Если измеренное в эксперименте парциальное ингибирование равно Ebliss, то комбинация обеспечивает аддитивный терапевтический эффект. Если измеренное в эксперименте парциальное ингибирование превышает Ebliss, то комбинация обеспечивает синергический терапевтический эффект.
Фармацевтические композиции
Хотя компоненты комбинаций согласно настоящему изобретению можно вводить отдельно, предполагается, что компоненты вводят в виде фармацевтических композиций, дополнительно содержащих по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество. Каждый из компонентов можно вводить в составе отдельной фармацевтической композиции, или комбинацию можно вводить в составе одной фармацевтической композиции.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть получены с возможностью введения разнообразными способами, включая пероральный, ректальный, чрескожный, парентеральный (подкожный, интраперитонеальный, внутривенный, внутриартериальный, чрескожный и внутримышечный), местный, интраназальный или с использованием суппозиториев. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения. Подобные композиции получены способом, хорошо известным в области фармацевтики, и содержат в качестве активного ингредиента по меньшей мере одно соединение согласно настоящему изобретению, такое как описано выше в настоящем документе, и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество или носитель. Термин «фармацевтически приемлемый» обозначает одобрение регулирующим органом или федеральным правительством или правительством штата или указание в Фармакопее США или в другой общепризнанной фармакопее для применения у животных, а более конкретно, у человека.
При получении фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению активный ингредиент обычно смешивают с носителем или вспомогательным веществом, который(-ое) может представлять собой твердый, полутвердый или жидкий материал. Композиции могут иметь форму таблеток, пилюль, капсул, драже, гранул, порошков, пастилок, саше, крахмальных капсул, эликсиров, суспензий, дисперсий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей (в твердой или жидкой среде), мазей, содержащих, например, вплоть до 10% по массе активного соединения, мягких и твердых желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных инъекционных растворов и стерильно упакованных порошков. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Носители могут представлять собой любые традиционно используемые материалы и ограничены только физико-химическими факторами, такими как растворимость и отсутствие реакционной активности в отношении соединения согласно изобретению, и способом введения. Выбор носителя определяется конкретным способом, применяемым для введения фармацевтической композиции. Некоторые примеры подходящих носителей включают лактозу, глюкозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду и метилцеллюлозу. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения. Составы могут дополнительно включать смазывающие агенты, такие как тальк, стеарат магния и минеральное масло; смачивающие агенты, поверхностно-активные вещества, эмульгаторы и суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил- и пропилгидроксибензоаты; подсластители; вкусоароматические добавки, красители, буферные агенты (например, ацетаты, цитраты или фосфаты), разрыхлители, увлажняющие агенты, антибактериальные агенты, антиоксиданты (например, аскорбиновую кислоту или бисульфит натрия), хелатообразующие агенты (например, этилендиаминтетрауксусную кислоту) и агенты для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия. Другие фармацевтические носители могут представлять собой стерильные жидкости, такие как вода и масла, включая масла минерального, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.д., полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители. Вода является предпочтительным носителем, если фармацевтическую композицию вводят внутривенно. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина также можно применять в качестве жидких носителей, в частности, для инъекционных растворов. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Для получения твердых композиций, таких как таблетки, основной(-ые) активный(-е) ингредиент(-ы) смешивают с фармацевтическим вспомогательным веществом для получения твердой предварительной композиции, содержащей гомогенную смесь соединения согласно настоящему изобретению. Называя указанные предварительные композиции гомогенными, понимают, что активный ингредиент равномерно распределен по композиции, и, таким образом, композиция может быть легко разделена на стандартные лекарственные формы с равной эффективностью, такие как таблетки, пилюли и капсулы. Затем указанный твердый предварительный состав делят на стандартные лекарственные формы описанных выше типов, содержащие, например, от примерно 0,1 мг до примерно 2000 мг, от примерно 0,1 мг до примерно 500 мг, от примерно 1 мг до примерно 100 мг, от примерно 100 мг до примерно 250 мг и т.д. активного(-ых) ингредиента(-ов) согласно настоящему изобретению.
Для получения фармацевтических композиций можно применять любые способы. Твердые лекарственные формы могут быть получены путем влажного гранулирования, сухого гранулирования, прямого прессования и т.д. Твердые лекарственные формы согласно настоящему изобретению могут содержать покрытие или обработаны иным образом для обеспечения лекарственной формы, обладающей преимуществом долгосрочного действия. Например, таблетка или пилюля может содержать внутренний дозируемый и внешний дозируемый компоненты, причем последний образует оболочку вокруг первого. Два компонента могут быть разделены кишечнорастворимым слоем, который препятствует распаданию в желудке и обеспечивает прохождение внутреннего компонента в неповрежденной форме в двенадцатиперстную кишку или задерживает его высвобождение. Для указанных кишечнорастворимых слоев или покрытий можно применять разные материалы, и подобные материалы включают ряд полимерных кислот и смеси полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Жидкие формы, в которые могут быть включены композиции согласно настоящему изобретению, для перорального введения или введения путем инъекции включают водные растворы, подходящие ароматизированные сиропы, водные или масляные суспензии и ароматизированные эмульсии с пищевыми маслами, такими как хлопковое масло, кунжутное масло, кокосовое масло или арахисовое масло, а также эликсиры и подобные фармацевтические наполнители. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Композиции для ингаляции или инсуффляции включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях или их смесях и порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как описано выше. В одном из вариантов реализации композиции вводят путем вдыхания через рот или нос для местного или системного эффекта. Композиции в фармацевтически приемлемых растворителях можно распылять с использованием инертных газов. Распыляемые растворы можно вдыхать непосредственно из распыляющего устройства, или же распыляющее устройство может быть присоединено к лицевому защитному экрану или к аппарату искусственной вентиляции легких с положительным перемежающимся давлением. Композиции в виде раствора, суспензии или порошка можно вводить перорально или интраназально из устройств, которые доставляют состав соответствующим образом.
Другой состав, подходящий для композиций и способов согласно настоящему изобретению, применяется в устройствах чрескожной доставки («пластырях»). Указанные чрескожные пластыри можно применять для обеспечения непрерывной или периодической инфузии контролируемых количеств соединений согласно настоящему изобретению. Конструкция и применение чрескожных пластырей для доставки фармацевтических агентов хорошо известны в данной области техники.
В еще одном варианте реализации композицию получают для местного введения, например, в виде мази, геля, капель или крема. Для местного введения на поверхности тела с использованием, например, кремов, гелей, капель, мазей и т.д., препараты соединений согласно настоящему изобретению можно получать и наносить в физиологических приемлемом разбавителе совместно с фармацевтическим носителем или без него. Настоящее изобретение можно применять местно или чрескожно для лечения рака, например, меланомы. Адъюванты для местных форм или форм на гелевой основе могут включать, например, карбоксиметилцеллюлозу натрия, полиакрилаты, блоксополимеры полиоксиэтилена-полиоксипропилена, полиэтиленгликоль и древесные спирты. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
Альтернативные составы включают интраназальные распыляемые препараты, липосомные составы, составы с замедленным высвобождением, помпы, доставляющие лекарственные средства в организм (включая механические или осмотические помпы), составы с контролируемым высвобождением и т.д., известные в данной области техники.
Композиции предпочтительно получают в стандартной лекарственной форме. Термин «стандартные лекарственные формы» относится к физически дискретным формам, которые подходят в качестве единичных дозировок для субъекта-человека и других млекопитающих, причем каждая форма содержит предварительно определенное количество активного(-ых) материала(-ов), рассчитанное для обеспечения желаемого терапевтического эффекта, совместно с подходящим фармацевтическим вспомогательным веществом.
При получении состава может требоваться измельчение активного ингредиента для обеспечения соответствующего размера частиц перед объединением с другими ингредиентами. Если активное соединение по существу не растворимо, то его обычно измельчают до частиц с размером менее 200 меш. Если активный ингредиент по существу растворим в воде, то размер частиц обычно регулируют измельчением для обеспечения по существу однородного распределения в состава, например, примерно до 40 меш.
Может быть желательным местное введение фармацевтической композиции согласно изобретению в участок, в котором необходимо лечение; оно может быть обеспечено, например, без ограничений, путем местной инфузии во время хирургии, инфузии в печень через питающие ее кровеносные сосуды совместно с хирургией или без нее, местного введения, например, совместно с перевязкой раны после хирургии, путем инъекции, с использованием катетера, с использованием суппозитория или с использованием имплантата, где имплантат изготовлен из пористого, непористого или гелеобразного материала. Согласно некоторым вариантам реализации введение можно проводить путем прямой инъекции, например, через шприц, в участок опухоли или раковой или предраковой ткани.
Соединения также можно вводить любым подходящим способом, например, путем инфузии или инъекции болюса, всасывания через эпителиальную выстилку (например, через слизистую оболочку полости рта, слизистую оболочку прямой кишки и кишечника и т.д.), и можно вводить совместно с другими терапевтически активными агентами. Введение может быть местным или системным. Кроме того, может быть желательным введение фармацевтических композиций согласно изобретению в центральную нервную систему любым подходящим способом, включая внутрижелудочковую и интратекальную инъекцию; внутрижелудочковая инъекция может быть проведена при помощи внутрижелудочкового катетера, например, присоединенного к резервуару. Также можно применять внутрилегочное введение, например, с использованием ингалятора или небулайзера и состава совместно с агентом, образующим аэрозоль.
Соединение согласно настоящему изобретению может быть доставлено в системе с немедленным высвобождением или с контролируемым высвобождением. В одном из вариантов реализации можно применять инфузионную помпу для введения соединения согласно изобретению, такую как помпа, используемая для доставки химиотерапевтических средств к конкретным органам или в опухоли (см. Buchwald et al., 1980, Surgery 88: 507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321: 574). В одном из вариантов реализации соединение согласно изобретению вводят в комбинации с биоразлагаемым биосовместимым полимерным имплантатом, который высвобождает соединение в течение контролируемого периода времени в выбранный участок. Примеры полимерных материалов включают, но не ограничиваются ими, полиангидриды, сложные полиортоэфиры, полигликолевую кислоту, полимолочную кислоту, полиэтиленвинилацетат, их сополимеры и смеси. В еще одном варианте реализации система с контролируемым высвобождением может быть размещена поблизости от терапевтической мишени, и, таким образом, требуется введение только части от системной дозы.
Кроме того, иногда фармацевтические композиции могут быть получены с возможностью парентерального введения (путем подкожной, внутривенной, внутриартериальной, чрескожной, интраперитонеальной или внутримышечной инъекции) и могут включать водные и неводные изотонические стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, которые делают состав изотоничным с кровью предполагаемого потребителя, и водные и неводные стерильные суспензии, которые включают суспендирующие агенты, агенты, повышающие растворимость, загустители, стабилизаторы и консерванты. Масла, такие как минеральные, животные, растительные или синтетические масла, и мыла, такие как соли жирных кислот с щелочными металлами, аммонием и триэтаноламином, и подходящие детергенты также можно применять для парентерального введения. Вышеуказанные составы также можно применять для прямой внутриопухолевой инъекции. Кроме того, для минимизации или устранения раздражения в месте инъекции композиции могут содержать одно или более неионогенных поверхностно-активных веществ. Подходящие поверхностно-активные вещества включают сложные эфиры полиэтиленсорбитана и жирных кислот, такие как сорбитана моноолеат, и высокомолекулярные аддукты этиленоксида с гидрофобным основанием, полученным путем конденсации пропиленоксида с пропиленгликолем.
Парентеральные составы могут быть обеспечены в одноразовых или многоразовых герметичных контейнерах, таких как ампулы и пробирки, и могут храниться в высушенном замораживанием (лиофилизированном) состоянии, требующем исключительно добавления стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекции, непосредственно перед применением. Инъекционные растворы и суспензии для немедленного введения могут быть получены из стерильных порошков, гранул и таблеток типов, описанных выше и известных в данной области техники. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант реализации настоящего изобретения.
ex-vivo
В качестве альтернативы, комбинации согласно настоящему изобретению можно применять при гемодиализе, таком как лейкофорез, и в других схожих способах, например, отбирают кровь у пациента разными способами, такими как диализ через колонку/половолоконную мембрану, картридж и т.д., обрабатывают двойным модулятором IRS/Stat3 и/или дополнительным противораковым агентом  и возвращают в организм пациента, проходящего лечение. Подобные способы лечения хорошо известны и описаны в данной области техники. См., например, Kolho et al. (J. Med. Virol. 1993, 40(4):318-21); Ting et al. (Transplantation, 1978, 25(1):31-3); содержание которых включено в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылок.
Дозы и режимы введения
Лечение двойным модулятором IRS/Stat3 и антителом к PD-1 и/или к PD-L1 можно проводить последовательно в любом порядке, одновременно или в виде комбинации указанных способов. Например, двойной модулятор IRS/Stat3 можно вводить до, после или во время введения антитела к PD-1 и/или к PD-L1. Например, может быть выбран общий период лечения двойным модулятором IRS/Stat3. Антитело к PD-1 и/или к PD-L1 можно вводить до начала лечения двойным модулятором IRS/Stat3 или после завершения лечения двойным модулятором IRS/Stat3. Кроме того, антитело к PD-1 и/или к PD-L1 можно вводить в течение периода введения двойного модулятора IRS/Stat3, но его необязательно следует вводить в течение всего периода лечения. В другом варианте реализации режим лечения включает предварительное лечение антителом к PD-1 и/или к PD-L1 или двойным модулятором IRS/Stat3 и последующее введение другого агента или агентов. Также включены чередующиеся последовательности введения. Чередующееся введение включает введение двойного модулятора IRS/Stat3 и другого антитела к PD-1 и/или к PD-L1 поочередно, например, сначала двойной модулятор IRS/Stat3, затем антитело к PD-1 и/или к PD-L1, после этого двойной модулятор IRS/Stat3 и т.д.
in vitro
in vitro
Количество соединения, которое будет эффективным при лечении конкретного нарушения или состояния, включая рак, зависит от природы нарушения или состояния и может быть определено стандартными клиническими способами. Кроме того, необязательно можно проводить исследования , которые помогут выявить оптимальные диапазоны дозировок. Точная применяемая доза состава также зависит от способа введения и прогрессирования заболевания или нарушения и должна быть выбрана в соответствии с суждениями практикующего врача и условиями для каждого конкретного пациента. Предпочтительная дозировка находится в диапазоне 0,01-1000 мг/кг массы тела, от 0,1 мг/кг до 100 мг/кг, от 1 мг/кг до 100 мг/кг, от 10 мг/кг до 75 мг/кг, 0,1-1 мг/кг и т.д. (Неограничивающие) количества двойного модулятора IRS/Stat3 и антитела к PD-1 и/или к PD-L1 включают 0,1 мг/кг, 0,2 мг/кг, 0,5 мг/кг, 1 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг, 50 мг/кг, 60 мг/кг, 75 мг/кг и 100 мг/кг. В качестве альтернативы, вводимое количество может быть измерено и выражено как молярность вводимого соединения. В качестве иллюстрации, но не ограничения, двойной модулятор IRS/Stat3 (например, соединение любой из формул I, II, III, IV) можно вводить в количестве в диапазоне 0,1-10 мМ, например, 0,1, 0,25, 0,5, 1 и 2 мМ. В качестве альтернативы, вводимое количество может быть измерено и выражено в мг/мл, мкг/мл или нг/мл. В качестве иллюстрации, но не ограничения, антитело к PD-1 и/или к PD-L1 можно вводить в количестве от 1 нг/мл до 100 мг/мл, например, 1-1000 нг/мл, 1-100 нг/мл, 1-1000 мкг/мл, 1-100 мкг/мл, 1-1000 мг/мл, 1-100 мг/мл и т.д. Эффективные дозы могут быть определены экстраполяцией кривых зависимости доза-ответ, полученных для биоисследований или систем или животных моделей. Если наблюдается синергический эффект, то общая доза каждого из компонентов может быть понижена, таким образом, побочные эффекты, отмечаемые субъектом, могут быть значительно ослаблены, но при этом, тем не менее, все равно достигается достаточный противораковый эффект.
В одном из вариантов реализации при комбинированной терапии количество каждого из ее компонентов снижается в 2 раза, т.е. каждый компонент вводят в виде половинной дозы по сравнению с терапией только этим агентом, и при этом достигается такой же или схожий терапевтический эффект. В другом варианте реализации при комбинированной терапии количество каждого из ее компонентов снижается в 5, 10, 20, 50 или 100 раз.
Режим введения зависит от ряда факторов, таких как раковое заболевание, которое лечат, тяжесть и прогрессирование, категория пациента, его возраст, масса тела и т.д. Например, композиции согласно изобретению можно принимать один раз в день, два раза в день, три раза в день, раз в неделю или раз в месяц. Кроме того, введение может быть непрерывным, т.е. ежедневным, или периодическим. Термины «периодический» или «периодически» в настоящем документе обозначают прекращение и возобновление как с регулярными, так и с нерегулярными интервалами. Например, периодическое введение может представлять собой введение от одного до шести дней в неделю, или оно может обозначать циклическое введение (например, ежедневное введение в течение от двух до восьми недель подряд, затем период отдыха без введения вплоть до одной недели), или же оно может обозначать введение через день. Разные компоненты комбинации можно вводить независимо друг от друга согласно разным режимам введения.
Следующие примеры представлены для более полной иллюстрации определенных вариантов реализации изобретения. Тем не менее, их не следует рассматривать как ограничивающие каким-либо образом широкий объем изобретения. Специалист в данной области техники сможет легко предложить множество изменений и модификаций на основе принципов, описанных в настоящем документе, не выходя за рамки объема изобретения.
РАЗДЕЛ ПОДРОБНОГО ОПИСАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЧАСТИ
Пример 1: Комбинация соединения 4 с пембролизумабом (Кейтруда
) превращает невосприимчивые опухоли в опухоли, в которых наблюдается ответ, и блокирует прогрессирование опухоли

Экспериментальная система
:
Полученный у пациента ксенотрансплантат (PDX) взятого для биопсии образца аденокарциномы пищеводно-желудочного перехода подкожно (п.к.) имплантировали мышам NodScid. В первый день лечения мышам путем внутривенной инъекции вводили мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) того же пациента (двойная аутологичная трансплантация).
- Свежий взятый для биопсии образец первичной аденокарциномы пищеводно-желудочного перехода человека подкожно (п.к.) имплантировали мышам NSG (P0).
- Подкожная имплантация взятого для биопсии образца первичной опухоли человека мышам NodScid.
3
3
Выделяли опухоль (P3) у мышей, измеряли, нарезали на небольшие фрагменты по 1-2 мм и переносили в пробирку gentleMACS, содержащую стерильный солевой раствор. Разводили солевым раствором до достижения отношения 1,5 мм объем опухоли/100 мкл солевого раствора. Проводили диссоциацию в образце с использованием gentleMACS Octo Dissociator. Собирали диссоциированную опухолевую ткань шприцем 18G и вводили инъекцию (примерно 1,5 мм объем опухоли/100 мкл солевого раствора каждой мыши) под кожу самцам мышей NOD.CB17-Prkdcscid/J (NodScid). Ежедневно наблюдали животных и отслеживали любой дискомфорт и потерю подвижности.
- Выделение МКПК человека
МКПК человека выделяли из проб гепаринизированной венозной крови того же пациента с аденокарциномой пищевода способом центрифугирования в градиенте плотности с использованием Ficol Histopaque (Sigma). Вкратце, гепаринизированную кровь осторожно послойно вводили в среду LSM в отношении 2:1 (например, 10 мл крови на 10 мл фиколла) и центрифугировали при 800 g в течение 10 минут при КТ (настройки центрифуги: колебательный ротор, тормоз отключен). Осторожно откачивали белый слой, соответствующий МКПК, и асептически переносили в стерильные центрифужные пробирки. Затем дважды промывали суспензию клеток для разбавления возможного остатка Ficol, добавляя 10 мл ФБР, и центрифугировали при 600g в течение 10 минут. Повторно суспендировали сгусток клеток в 0,5 мл ФБР и подсчитывали число клеток с использованием трипанового синего и гемоцитометра. Оценивали общее число клеток и число жизнеспособных клеток. Отделяли клетки для криоконсервации в отфильтрованном стерильном 10% растворе ДМСО/ЭБС, помещали в предварительно охлажденный до 4°C контейнер Mr. Frosty, выдерживали при -80°C в течение ночи, а затем переносили и хранили при -80°C. В день инъекции размораживали клетки, дважды промывали для разбавления возможного остатка ДМСО, добавляя ФБР, и центрифугировали (600g в течение 10 минут, КТ) и подсчитывали число жизнеспособных клеток.
3
- Опухоли развивались более чем у 90% мышей, которым проводили инъекцию, лечение начинали через 7 дней, когда средний размер опухоли достигал примерно 160 мм (день 0).
- Способы лечения:
Инъекцию МКПК (2,1M жизнеспособных клеток/мышь) вводили 12 мышам в день 0, а через 2 часа проводили следующее лечение:
1. Контроль (20% HPbCD) 50 мкл, в.в. на 0, 5 и 11 день
3 мыши
2. Соединение 4 70 мг/кг, в.в., на 0, 5 и 11 день
3 мыши
3. Кейтруда 6 мг/кг, и.п., на 0, 5 и 11 день
3 мыши
4. Кейтруда 6 мг/кг, и.п. + соединение 4 70 мг/кг, в.в., на 0, 5 и 11 день
3 мыши
*Кейтруда вводили через ~4 часа после соединения 4
Лечение в каждой из групп лечения 1-4 начинали одновременно.
2
- Измеряли длину (l) и ширину (w) опухолей 4-5 раз в неделю и вычисляли объем опухоли следующим образом: v=lw/2. На графиках представлен средний объем опухоли и стандартные ошибки. Мышей оценивали 5 раз в неделю и взвешивали по меньшей мере два раза в неделю.
- Умерщвляли мышей на 18 день и отбирали опухоли для анализа.
- Проводили параллельный эксперимент с PDX аденокарциномы пищеводно-желудочного перехода без МКПК пациента, и скорость прогрессирования опухолей в контрольной группе была схожа со скоростью прогрессирования в контрольной группе в присутствии МКПК.
Результаты

Проводили исследование в модели полученного у пациента ксенотрансплантата (PDX) с использованием иммунодефицитных мышей, которым имплантировали опухоли из образца рака пищевода, взятого для биопсии, мышам дополнительно вводили иммунные клетки того же пациента (двойная аутологичная трансплантация). Как показано, на фигуре 1, при введении только Кейтруда или только соединения 4 ответ не наблюдался, и опухоли агрессивно прогрессировали, но при этом у мышей, которым вводили комбинацию Кейтруда и соединения 4, было продемонстрировано полное блокирование прогрессирования опухоли (подавление роста опухоли = 98%, коэффициент p = 0,002). Таким образом, соединение 4 в комбинации с Кейтруда превращало невосприимчивые опухоли в опухоли, в которых наблюдался ответ, и блокировало прогрессирование опухоли в иммуноонкологической доклинической модели.
Несмотря на то, что были проиллюстрированы и описаны определенные варианты реализации изобретения, должно быть очевидным, что изобретение не ограничено вариантами реализации, описанными в настоящем документе. Специалистам в данной области техники будут понятны многочисленные модификации, изменения, вариации, замещения и эквиваленты, не выходящие за рамки сущности и объема настоящего изобретения, описанных в последующей формуле изобретения.