Роль периферического бензодиазепинового рецептора в развитии злокачественных новообразований кожи

Лог-ранг теста, критериев %2, двухстороннего точного критерия Фишера.

Результаты. При изучении эффективности лечения больных сраваниваемых групп получена значимая статистическая разница между группами по всем оцениваемым критериям. Объективный ответ на проводимую цитостатистическую терапию достигнут у 70 % оперированных больных и у 40 % в группе без оперативного лечения. Разница в клиническом ответе опухоли между этими группами была также статистически значимой. В группе опе-

рированных клинический ответ достигнут у 88 % больных; без оперативного лечения - у 55 % больных. Общая 3-летняя выживаемость в группе оперированных больных была значительно выше по сравнению с неоперированными пациентами и составила 66 %, у пациентов без операции 3-летняя выживаемость составила 24 %.

Выводы. Программа комбинированного лечение РЯ является более эффективной по сравнению с проведением цикловой химиотерапии.

РОЛЬ ПЕРИФЕРИЧЕСКОГО БЕНЗОДИАЗЕПИНОВОГО РЕЦЕПТОРА В РАЗВИТИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ КОЖИ

Т.Г. Рукша

ГОУ ВПО «Красноярская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Актуальность. Периферический бензоди-азепиновый рецептор (ПБР) является внутриклеточным белком, принимающим участие в регуляции клеточной пролиферации, апоптоза и синтеза стероидных гормонов. Недавние исследования определили, что ПБР обладает способностью к полимеризации под воздействием ультрафиолетового излучения, что сопровождается изменением его функциональной активности. Таким образом, вероятно участие рецептора в развитии заболеваний кожи, ассоциированных с нарушением апоптоза и клеточной пролиферации и индуцируемых ультрафиолетовым излучением.

Цель исследования. Определить уровень экспрессии и конформационную стабильность ПБР в нормальных и опухолевых клетках кожи.

Материал и методы. Больные с базальноклеточным раком (п=139), плоскоклеточным раком кожи (п=31), меланомой кожи (п=34), здоровые добровольцы (п=14), клеточные линии: клетки плоскоклеточного рака кожи (А431), меланомы кожи (SK-MEL-2), нормальные кера-тиноциты человека ^НЕК), нормальные мела-ноциты (НЕМ). Биоптаты кожи фиксировались

в 10% нейтральном формалине с последующей заливкой в парафин. Иммуногистохимическое исследование с антителами к ПБР проводилось согласно стандартным протоколам, с использованием системы детекции Ready-to-Use (Novoc-astra) и диаминобензидина в качестве хромогена (BD). Определялось число ПБР+ клеток на 100 клеток эпидермиса в нормальной коже и количество ПБР+ клеток на 100 опухолевых клеток при злокачественных новообразованиях кожи. Иммуноцитохимическое исследование выполнялось с антителами к ПБР (Trevigen) и вторичными антителами, меченными FITC (Zymed Laboratories, Inc.).

Нормальные кератиноциты, нормальные меланоциты, клетки плоскоклеточного рака кожи и меланомы кожи облучались с помощью источника ультрафиолетового излучения с максимумом длины волны 302 нм (модель UVM-57 (San Gabriel) с фильтором Kodacel (Eastman Kodak Co.). Уровень экспрессии ПБР определялся с помощью иммуноблоттинга. Время облучения 30 с соответствовало дозе 120 Дж/м1, 60 с - 240 Дж/м1, 90 с - 360 Дж/м1, 120 с - 480 Дж/м1. Для подтверждения идентичного содержания белка в

каждом образце при проведении электрофореза в дальнейшем мембраны реинкубировались с антителами к GAPDH (глицеральдегидфосфат-дегидрогеназа) (1:10000, Trevigen Inc.).

Результаты. Было определено достоверное снижение экспрессии ПБР при всех исследуемых типах злокачественных новообразований по сравнению с нормальной кожей, регистрируемое как снижение числа ПБР+ клеток при базально-клеточной карциноме и меланоме кожи и как снижение интенсивности окраски ПБР+ клеток при плоскоклеточном раке кожи. В эксперименте на культурах клеток в малиг-низированных кератиноцитах и меланоцитах при иммуноцитохимическом исследовании определялось достоверное снижение числа ПБР+ клеток по сравнению с нормальными кератиноцитами и меланоцитами.

При иммуноблоттинге было определено преобладание полимерных форм рецептора в клетках плоскоклеточного рака кожи по сравнению с нормальными кератиноцитами. Воздействие ультрафиолетовым излучением вызывало разнонаправленный эффект в нормальных и малиг-низированных кератиноцитах: облучение в дозе 480Дж/м2 индуцировало снижение экспрессии ПБР в нормальных кератиноцитах и увеличение экспрессии рецептора в клетках плоскоклеточ-

ного рака кожи. В клетках меланомы кожи ПБР с помощью иммуноблоттинга выявлялся в виде мономера и полимеров с молекулярным весом 36 кДа, 54 кДа и 90 кДа. При ультрафиолетовом облучении в дозе 120Дж/м1 происходило исчезновение мономера ПБР, но появлялись полимеры рецептора с молекулярным весом 54 кДа и 90 кДа. Помимо этого, происходило увеличение уровня димера ПБР. Ультрафиолетовое облучение в дозе 240Дж/м1 также вызывало исчезновение мономера ПБР и увеличение уровня димера ПБР. Повышение дозы ультрафиолетового облучения до 480Дж/м1 вело к появлению мономера ПБР, снижению уровня димера и исчезновению полимеров рецептора с молекулярным весом 54 кДа и 90 кДа. Изменение соотношения мономер: полимеры ПБР напрямую коррелировало с интенсивностью клеточной пролиферации в клетках меланомы, определяемое по уровню включения бромодезоксиуридина, а также по уровню экспрессии PCNA.

Выводы. Проведенное исследование позволяет резюмировать, что при злокачественных новообразованиях кожи происходит изменение уровня экспрессии ПБР в коже. Ультрафиолетовое излучение вызывает ПБР-опосредованное изменение уровня клеточной пролиферации в клетках кожи.

ЭКСПРЕССИЯ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗ И ИХ ЭНДОГЕННЫХ ИНГИБИТОРОВ ПРИ РАКЕ ГОРТАНИ

О.В. Савенкова, Е.В. Клишо

ГУ «НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН», г. Томск

Актуальность. Исследование экспрессии металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов при плоскоклеточном раке в эпителиальных структурах гортани, имеющих разное гистологическое строение, а также в стромальных элементах опухоли имеет важное значение при прогнозировании течения заболевания.

Цель исследования. Определить экспрессию металлопротеиназ 1, 2, 9 и ингибиторов металлопротеиназ 1, 2 в различных опухолевых структурах и стромальных элементах при раке гортани.

Материал и методы. Проводилось иммуно-гистохимическое исследование операционного материала от 32 пациентов с раком гортани в возрасте от 43 до 75 лет (средний возраст - 60,2 года). Все пациенты получали предоперационную химиолучевую терапию. Исследовались: металлопротеиназа 9 (ММП9), металлопроте-иназа 1 (ММП1), тканевой ингибитор метал-лопротеиназы 1 (ТИМП1), металлопротеиназа 2 (ММП2), тканевой ингибитор металлопро-теиназы 2 (ТИМП2). Экспрессия маркеров в опухоли изучалась в шести типах опухолевых