СПОСОБ УТОЧНЯЮЩЕЙ ДИАГНОСТИКИ ОБОСТРЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ
SPECIFYING DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR ACUTE EXACERBATION OF CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для уточняющей диагностики обострения хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
ХОБЛ является одной из ведущих причин заболеваемости и летальности в современном мире. Летальность от ХОБЛ занимает 4-е место среди всех причин смерти в общей популяции, что составляет около 4% в структуре общей летальности. Особенностью течения ХОБЛ, как и любой другой хронической патологии, являются обострения, каждое из которых усугубляет прогрессирование ХОБЛ, тем самым ускоряя и утяжеляя развитие ДН.
Критериями обострения ХОБЛ является клиническая симптоматика (усиление выраженности одышки и кашля, нарастание числа свистящих хрипов, увеличение продукции мокроты и повышение ее гнойности, появление заложенности в грудной клетке, появлением периферических отеков), ухудшение показателей ФВД и газов крови, снижение толерантности к физической нагрузке, возникающие внезапно и длящиеся не менее 2-х дней.
Однако довольно часто, особенно при тяжелом обострении ХОБЛ, наблюдается не увеличение выделения мокроты, а, наоборот, ее задержка, что делает невозможным оценить степень ее гнойности. Обострения могут начинаться постепенно, с невыраженной клинической симптоматикой, что затрудняет своевременное распознавание обострения. Кроме этого у большинства больных ХОБЛ имеется сочетанная внелегочная патология, чаще всего сердечно-сосудистые заболевания, которые нередко декомпенсируются на фоне обострений ХОБЛ, что, в свою очередь, ухудшает прогноз и затрудняет ведение данной категории пациентов.
Поэтому своевременная диагностика, купирование и профилактика обострений выходят на первый план при ведении больного с ХОБЛ.
Ближайшим аналогом является способ, предложенный в заявке № 97114285 с датой поступления 05.08.1997 г., по которому получен патент на изобретение № 2178176 от 10.01.2002 г.
Цель изобретения - ускорение и повышение точности способа уточняющей диагностики обострения ХОБЛ.
Способ основан на способности лимфоцитов и нейтрофилов образовывать in vitro аутологичные розетки.
Способ осуществляется следующим образом.
9
9
У обследуемого берут кровь из вены (3 мл) в пробирку с гепарином, на 1 мл крови 25 единиц гепарина. Кровь разводят раствором Хенкса в соотношении 1:1. На дно сухой пробирки наливают 3 мл градиента плотности р=1,077 г/мл. Для контроля жизнеспособности клетки окрашивали трипановым синим. Процент окрашенных клеток не превышал 3-4. Наслаивают разбавленную кровь на градиент плотности, не допуская перемешивания сред. Центрифугируют 40 минут при 1500 оборотах в минуту. После центрифугирования убирают надосадочную жидкость пипеткой и собирают верхнее кольцо, состоявшее из лимфоцитов, в сухую пробирку. Нижний слой плазмы, содержащий гранулоциты, собирают в другую пробирку. Добавляют раствор Хенкса до 5 мл, ресуспендируют и отмывают при 1500 оборотах в минуту 10 минут. Убирают надосадочную жидкость до 0,1 мл. Добавляют раствор Хенкса, чтобы получилась суспензия лимфоцитов в объеме 1 мл, гранулоцитов - 0,7 мл. Ресуспендируют. Подсчитывают клетки в камере Горяева и доводят до нужной концентрации (лимфоциты - 4,5×10/л, гранулоциты - 3,0×10/л). Переносят лимфоциты в бакпечатку, гранулоциты на покровное стекло и инкубируют 1 час при температуре 37°С в термостате. После инкубирования убирают надосадочную жидкость с гранулоцитов и добавляют к гранулоцитам лимфоциты. Инкубируют при температуре 37°С 1 час в термостате. Затем добавляют 1 каплю глютарового альдегида 3% и выдерживают в течение 5 минут при комнатной температуре. Убирают надосадочную жидкость. Мазки высушивают. Окрашивают по Маю-Грюнвальду. Высушивают при комнатной температуре. С помощью светового микроскопа определяют количество свободнолежащих лимфоцитов и розеткообразующих. Для повышения точности результатов подсчет ведут на 300 клеток в 3-х полях зрения с дальнейшим построением цитолейкограммы.
Анализ цитолейкограммы проводят следующим образом. Оценивают в процентном содержании количество свободнолежащих лимфоцитов и розеткообразующих - лимфоцит +1 гранулоцит (ЛСГ-1), лимфоцит +2 гранулоцита (ЛСГ-2), лимфоцит +3 гранулоцита. Вычисляют индекс розеткообразования (ИРО) - соотношение значений между ЛСГ-1, ЛСГ-2, ЛСГ-3 и свободнолежащими лимфоцитами и при увеличении ИРО ЛСГ-1 более 0,8, уменьшении ИРО ЛСГ-2 менее 0,11 у больных диагностируют обострение хронической обструктивной болезни легких.
Нами изучены особенности цитолейкограммы ЛСГ у больных ХОБЛ (без учета степени тяжести) при стабильном течении (1 группа) и при обострении (2 группа). По возрасту, полу, продолжительности заболевания, индексу курильщика группы были равноценны. Диагноз выставлялся на основании клинико-инструментальных методов обследования, согласно стандартам по диагностике и лечению больных ХОБЛ (2006 г.).
Полученные результаты, характеризующие особенности цитолейкограммы ЛСГ у больных ХОБЛ при стабильном течении и в период обострения представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы, у больных ХОБЛ при обострения, в отличие от группы больных со стабильным течением, достоверно (р<0,001) увеличиваются показатели ЛСГ-1, свидетельствующие о воспалительном процессе и достоверно (р<0,001) снижаются показатели ЛСГ-2, указывающие на наличие иммунодефицита, достоверно увеличивается ИРО ЛСГ-1 и уменьшается ИРО ЛСГ-2. Достоверных различий в содержании ЛСГ-3 не выявлено.
Разработанный способ диагностики позволяет получить достоверные данные в течение 4-х часов. Способ не требует особой стерильности, дефицитных реактивов, дорогостоящих приборов и прост в исполнении, экономичен и не имеет противопоказаний.
Таблица 1
Показатели гранулоцитосвязывающих лимфоцитов у больных ХОБЛ при стабильном течении и при обострении
Группа
п
Гранулоцитосвязывающие лимфоциты (М±m)%
СВЛ
ЛСГ-1
ЛСГ-2
ЛСГ-3
1 группа
23
56,48±0,55
30,46±0,34
9,47±0,40
0,63±0,75
ИРО
0,5
0,16
0,01
2 группа
25
53,25±0,55**
43,0±0,66****
6,12±0,25***
0,60±0,45▪
ИРО
0,8**
0,11**
0,01
Примечание: ▪*- показатель достоверности между группой ХОБЛ среднетяжелого течения при стабильном течении и группой ХОБЛ при обострении и контрольной группой; •р>0,05; **р<0,01, ***р<0,001 СВЛ - свободнолежащие лимфоциты; ЛСГ-1 - лимфоцит +1 гранулоцит), ЛСГ-2 - (лимфоцит +2 гранулоцита), ЛСГ-3 - (лимфоцит +3 гранулоцита); ИРО - индекс розеткообразования, ХОБЛ - хроническая обструктивная болезнь легких
Источники информации
1. Емельянов А.В. Диагностика и лечение обострений хронической обструктивной болезни легких // Русский медицинский журнал. - 2004. - Т. 13, № 4. - С.183-189.
2. Чучалин А.Г. Белая книга. Пульмонология. М., 2003. - С.67.
3. Georgupolos D, Antonisen NR. Symptoms and signs of COPD. In: Chemiak NS, ed. Chronic obstructive pulmonary disease. Philadelphia: Saunders, 1991. - P.357-363.
4. Стандарты по лечению и диагностике хронической обструктивной болезни легких: Пер. с англ. под ред. А.Г.Чучалина М., 2004.
5. Овчаренко С.И., Лещенко И.В. Современные проблемы диагностики хронической обструктивной болезни легких. Русский медицинский журнал. 2003. - № 4. - т.11. - С. 160-164.
6. Респираторная медицина. Руководство под редакцией акад. РАМН А.Г.Чучалина, том 1. М., «ГЗОТАР-Медиа», 2007. - С.616-632.