СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКОЙ И АНТИАТЕРОСКЛЕРОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ
AGENT POSSESSING HYPOLIPIDEMIC AND ANTIATHEROSCLEROTIC ACTIVITY

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано при лечении больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями, связанными с нарушениями обменных процессов.
Изобретение касается биологически активного соединения, а именно бензолсульфоната 1-метил-3-этил, 4,5(бис-N-метилкарбамоил)имидазолия (заявляемый препарат), расширяющего арсенал гиполипидемических и антиатеросклеротических средств.
Заявляемый препарат снижает уровень холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и уменьшает содержание холестерина в аорте. Способность к снижению уровня липидов сыворотки крови свидетельствует о выраженном гиполипидемическом действии. Уменьшение содержания холестерина в аорте и величины процента ее атеросклеротического поражения отражает антиатеросклеротическое действие заявляемого средства.
Заявляемый препарат проявляет гиполипидемическую активность на различных экспериментальных моделях дислипопротеинемии, обладает низкой токсичностью. Синтез его прост и доступен.
Проведенный фармакологический анализ показал, что заявляемый препарат, помимо улучшения липидных показателей в крови и аорте, понижает содержание холестерина и триглицеридов в печени, холестерина в надпочечниках, а также значительно уменьшает величину индекса атерогенности (расчетный показатель риска развития атеросклероза). По выраженности гиполипидемического действия заявляемый препарат близок известному липидснижающему препарату Гемфиброзилу и превосходит эффект других препаратов - Клофибрата и Пармидина.
Доклинические испытания заявляемого препарата - бензолсульфоната 1-метил-3-этил, 4,5(бис-N-метилкарбамоил)имидазолия - позволяют рекомендовать его в качестве гиполипидемического препарата при лечении дислипопротеинемии (ДЛП) атерогенного характера и/или антиатеросклеротического средства для лечения атеросклероза (АС) различной локализации.
Патогенез АС - хронического заболевания - сложен и до конца не выяснен [Климов А.Н. Мед. акад. ж-л, 2007; 1(7): 4-11; Нагорнев В.А. Патогенез атеросклероза. М.: СПб, 2006; Марцевич С.Ю. Атеросклероз. Клиническая значимость и возможность предупреждения. М., 2005; Аронов Д.М., Ахмеджанов Н.М., Гутковская Л.А. Росс. кардиол. ж. 2006; 3(59): 34-40]. АС представляет собой поражение артерий крупного и среднего калибра, характеризующееся увеличением проницаемости, отложением и накоплением во внутренней оболочке оксидизированных (перекисно-модифицированных) липопротеинов (ЛП) низкой плотности (ЛПНП), структурно-клеточными изменениями, реактивным разрастанием соединительной ткани с образованием атеросклеротических бляшек [Климов А.Н., Нагорнев В.А. Кардиология, 1993; 3: 5-10]. Развитию АС помимо метаболических нарушений артериальной стенки способствуют: гипоксия, экспрессия адгезивных, провоспалительных и ростовых факторов. Снижается синтез защитных субстанций (простациклин, оксид азота, гепарансульфат), а также фибринолитических и ряда других веществ. На поздних стадиях прогрессирования АС наблюдаются нарушения в свертывающей системе крови: происходит адгезия тромбоцитов, образуются тромбы, внезапно закупоривается просвет сосуда; возникают опасные сердечно-сосудистые катастрофы [Покровская Е.В., Грацианский Н.А., Ваулин Н.А., Деев А.Д. Кардиология 2004; 7: 40-45]. С прогрессированием АС и его осложнений - ишемической болезни сердца (ИБС), инфаркта миокарда (ИМ), инсульта, АС нижних конечностей, тесно связаны нарушения липидного и липопротеинового обмена [Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. ВНОК, М.: 2005; Литовский И.А., Гордиенко А.В. Атеросклероз и гипертоническая болезнь, 2013; Рагино Ю.И. и соавт. Атеросклероз 2014; 10(2), 15-23].
Ведущей причиной развития АС является ДЛП атерогенного характера - длительное повышение в крови липопротеинов (ЛП) и липидов: триглицеридов (ТГ), общего холестерина (ХС), атерогенных ЛП низкой (ЛПНП) и ЛП очень низкой плотности (ЛПОНП), а также снижение антиатерогенных ЛП высокой плотности (ЛПВП). Липидный профиль больного АС характеризуется значительным увеличением уровней атерогенных ЛПНП и ЛПОНП и/или снижением концентрации антиатерогенных ЛПВП. ДЛП атерогенного характера у пациентов определяется в диагностических липидных центрах: оценивается характер липидного спектра крови, для чего используют классификацию от I до V типа, предложенную Фредриксоном. Этой классификацией руководствуются кардиологи и терапевты при назначении гиполипидемической терапии [Fredrickson D.S., Levy R.I., Lees R.S. New Engl J. Med. 1967; 276: 34-42; Кухарчук B.B., Бубнова М.Г., Кательницкая Л.И. и др. Кардиология, 2003; 5: 42-47].
Для профилактики и лечения АС необходима ранняя, интенсивная фармакотерапия с помощью эффективных гиполипидемических и/или антиатеросклеротических средств [European guidelines on Cardiovascular Disease Prevention in Clinical Practice. Eur. Heart J. 2003; 24(17): 1601-1610; The National Cholesterol Education Program. Expert Panel of detection, evaluation and treatment of high blood cholesterol in adults. JAMA 2001; 285: 2486-2497; ВНОК. Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. М., 2004].
Гиполипидемическая терапия
Лечение больных ДЛП и пациентов с АС осуществляется двумя путями: 1) за счет снижения ДЛП атерогенного характера и улучшения липидного профиля крови; 2) посредством улучшения метаболизма сосудистой стенки и уменьшения содержания липидных компонентов в бляшках [Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. 1999; Ю.А. Карпов, Е.В. Сорокин. Кардиология, 2005; 8: 4-7]. В качестве гиполипидемических средств для коррекции атерогенных ДЛП в клинике чаще всего используют две основные группы препаратов: фибраты (клофибрат, пробукол, гемфиброзил, безафибрат, фенофибрат) и статины (ловастатин, правастатин, флувастатин, симвастатин, аторвастатин и розувастатин) [С.Дж. Робинс. Коррекция липидных нарушений. Основные принципы и практическое осуществление терапевтических вмешательств. М., 2001: 108-109; Hanninghake D.B., Stein Е.А., Bays Н.Е. Coron. Artery Dis. 2004; 15: 115-123; Бубнова М.Г. Врач 2006; 10: 61-66]. Экспериментальные и клинические исследования клофибрата выявили у него ряд негативных побочных явлений, в частности гепатомегалию [Nassrin D., Ontko J. Atherosclerosis 1983; 49: 225-266]. Клофибрат является аналогом заявляемого препарата как лекарственного средства с гиполипидемическими свойствами [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13 изд., 1998; т. 1: 456]. Гемфиброзил применяют для снижения уровня ТГ, общего ХС, ЛПОНП в крови. Он вызывает сухость во рту, тошноту, рвоту, запоры, диарею [Видаль. Лекарственные препараты в России. 1995: с. 371]. Гемфиброзил является прототипом заявляемого препарата как гиполипидемического средства [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13 изд., 1998; т. 1: 457]. Терапия ДЛП статинами - длительная, иногда пожизненная, дорогая и не всем пациентам доступна. При выраженном липидснижающем действии ловастатина, правастатина, флувастатина, симвастатина, аторвастатина и розувастатина при длительном применении отмечены: мозговая патология, боли в мышцах, развитие рабдомиолиза [С.Дж. Робинс. Коррекция липидных нарушений. Основные принципы и практическое осуществление терапевтических вмешательств. М., 2001; Law M.R., Wald N.J., Rudnicka A.R. BMJ 2003; 326(7404): 1423-1438; Olsson A.G. Rosuvastatin. Science Press, 2004; 1-77; Машковский М.Д. Лекарственные средства. 15 изд-е, 2005; 467-471].
Антиатеросклеротическая терапия. Статины - симвастатин, аторвастатин и розувастатин используются также и для интенсивной терапии АС, уменьшая липидный компонент в атеросклеротических бляшках. Однако эти препараты могут оказывать негативные эффекты: поражают печень и почки, усугубляют развитие катаракты [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13 изд., 1998; т. 1: 458-460]. Другим антиатеросклеротическим средством является пармидин. Пармидин - специфический антибрадикининовый препарат для комплексного лечения АС [Рыженков В.Е и соавт. Фармакол. токсикол. 1976; 5: 558-559]. Как ангиопротектор он уменьшает содержание ХС и степень атеросклеротического поражения аорты. Пармидин является прототипом заявляемого препарата в качестве антиатеросклеротического средства [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 13 изд-е, 1998; т. 1: 448-449].
Сущностью изобретения является то, что заявляемый препарат - бензолсульфонат 1-метил-3-этил, 4,5(бис-N-метилкарбамоил)имидазолия - активно снижает уровень липидов и атерогенных ЛПНП сыворотки крови при моделировании ДЛП на животных разных видов и эффективен при экспериментальном холестериновом атеросклерозе у кроликов.
Найдено два принципиально новых свойства заявляемого препарата - гиполипидемическое и антиатеросклеротическое.
Доклиническое изучение гиполипидемического и антиатеросклеротического действия заявляемого препарата проведено в соответствии с действующими требованиями [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Ред. А.Н. Миронов. Ч. I, М., 2012: гл. 26, с. 445-452].
Установлено его гиполипидемическое действие при пероральном применении: он достоверно снижает уровень общего ХС и ТГ, увеличивает концентрацию ХС антиатерогенных ЛПВП в сыворотке крови, уменьшает содержание ХС и ТГ в печени. Заявляемый препарат угнетает липидоз в надпочечниках, уменьшая в них содержание ХС. По эффективности гиполипидемического действия заявляемый препарат близок к аналогу из группы фибратов - клофибрату, а также к прототипу - гемфиброзилу, но отличается от них более выраженной липидснижающей активностью.
Установлено также, что он обладает антиатеросклеротическим действием: уменьшает процент атеросклеротического поражения аорт у кроликов с экспериментальным АС, понижает липидную инфильтрацию аорты. Заявляемый препарат более выражено защищает аорту кроликов от поражения АС, чем клофибрат, и близок по действию к гиполипидемическому средству с антиатеросклеротическими свойствами - пармидину (прототип заявляемого препарата).
Бензолсульфонат 1-метил-3-этил, 4,5(бис-N-метилкарбамоил)имидазолия заявляется как средство для лечения атерогенной ДЛП и атеросклероза (АС) различной локализации.
Аналогичных соединений в России и за рубежом авторами не найдено.
50
50
Заявляемый препарат относится к малотоксичным соединениям. Авторам заявки не удалось определить его ЛД - dosis letalis при пероральном введении мелким лабораторным животным. Но определена доза, не вызывающая токсического действия: при пероральном введении мышам она составляет 15000 мг, крысам - 20000 мг. Введение больших доз вызывало технические трудности.
В предварительных опытах были использованы следующие дозы исследуемого препарата: 50, 100 и 500 мг/кг при пероральном введении половозрелым крысам-самцам, в условиях экспериментальных ДЛП: экспресс-модели - тритоновой ДЛП и хронической алиментарной ДЛП. Обнаружено, что минимальная доза заявляемого препарата 50 мг/кг не оказывает существенного влияния на липиды крови и печени в условиях вышеперечисленных моделей. Большая доза 500 мг/кг вызывает у крыс повышенную гиперемию печени. Доза 100 мг/кг, составляющая 1/200 часть от дозы, не оказывающей токсического действия, была выбрана авторами заявки как оптимально эффективная, поскольку у опытных животных не наблюдалось видимых побочных явлений.
50
При экспериментальном исследовании специфического действия соединений на обмен липидов и ЛП было показано, что при пероральном введении заявляемого препарата в течение 14 дней в дозе 100 мг/кг контрольным крысам-самцам отмечалось снижение на 20% уровня общего ХС в сыворотке крови и печени. Этот эффект был близок действию препарата сравнения клофибрата, примененного в дозе 200 мг/кг также перорально. Следует подчеркнуть, что эффективная доза клофибрата составляет примерно 1/20 часть от ЛД, в то время как у заявляемого препарата подобная доза использована как 1/200 от дозы, не вызывающей токсического действия.
Материал и методы исследования
Изучение гиполипидемического и антиатеросклеротического действия заявляемого препарата на уровень липидов и ЛП у животных с экспериментальной ДЛП атерогенного характера проводили у крыс, морских свинок и кроликов, используя модели патологического состояния, согласно методическим рекомендациям Руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств. (Ч. I. М., 2012: 445-452). В соответствии с рекомендациями Всероссийского научного общества кардиологов (ВНОК, 2004) применяли унифицированные биохимические методики для определения липидов в крови. Уровень ХС в сыворотке крови крыс и кроликов определяли колориметрическим ферментативным методом (CHOD-PAP) с применением набора реагентов фирмы "Vital Diagnostics" на спектрофотометре СФ-26. Определение холестерина ЛПВП в сыворотке крови крыс и кроликов проводилось указанным выше методом с применением реактивов той же фирмы при длине волны 546 нм на СФ-26, после предварительного осаждения атерогенных ЛП гепарином в присутствии ионов марганца. Для определения ТГ в сыворотке крови крыс и кроликов применялся набор реактивов фирмы "Vital Diagnostics". Полученный хинонимин с максимумом поглощения 500 нм измеряли спектрофотометрически и оценивали пропорционально концентрации ТГ в пробе [Wahlfeld A.W. In: Methods of enzymatic analysis. Acad. Press, NY; 1974: 1831]. Содержание ХС в печени определяли, используя общепринятую цветную реакцию Либермана-Бурхарда, после экстракции навески печени смесью хлороформа с карбинолом [Bragdon G.H. In: Lipids and steroid hormons in clinical medicine. Ph. 1960: 6-10]. Содержание ТГ в печени определяли по методу Нэри и Фрингс (1973), модифицированному авторами, состоящему в замене сорбента (цеолитной смеси) окисью алюминия [Окуневич И.В., Сапронов Н.С., Инденбом М.Л. Хим.-фарм. ж. 1999; 11: 14-16]. Содержание общего ХС в аорте кроликов осуществляли колориметрически, используя реакцию Либермана-Бурхарда, после экстракции навески. Для приготовления хлороформного экстракта аорту растирали с кварцевым песком [Рыженков В.Е., Хромов-Борисов Н.В., Мосина И.В. Фармакол. токсикол. 1979; 6: 632-635]. Содержание ХС в надпочечниках определяли экстракционным методом, как указано выше, после гомогенизации навески ткани, экстракции ее хлороформом и применяя последующую реакцию Либермана-Бурхарда [Окуневич И.В., Рыженков В.Е. Пат. физиол. экспер. тер. 2002; 2: 14-18].
Результаты исследований гиполипидемической активности заявляемого препарата на экспериментальных моделях ДЛП.
Опыт 1. Модель тритоновой дислипопротеинемии (ДЛП) у крыс
Гиполипидемическую активность заявляемого препарата изучали на 60 крысах-самцах на экспресс-модели ДЛП, вызванной детергентом тритоном WR-1339 (225 мг/кг однократно, внутрибрюшинно). Эта модель характеризуется развитием стойкой гиперлипидемии - значительным увеличением уровня ХС и ТГ в крови у крыс (массой 250-300 г) по сравнению с содержанием этих показателей у интактных животных [Shurr Р.Е., Shultz Y.R. Lipids 1972; 7(1): 68-74].
Заявляемый препарат вводили крысам в дозе 100 мг/кг перорально двукратно (до введения и вместе с введением тритона WR-1339). Для сравнения применяли аналог заявляемого препарата - клофибрат в дозе 100 мг/кг и прототип заявляемого препарата гемфиброзил в дозе 50 мг/кг, оба перорально. Спустя 10 часов степень развития гиперлипидемии определяли по величине ХС и ТГ в сыворотке крови. В каждой группе было по 12 животных. Результаты представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, по сравнению со значительно повышенными в условиях тритоновой ДЛП липидами под влиянием заявляемого препарата наблюдается снижение в 2,4 раза уровней ХС и ТГ, что свидетельствует о его выраженном гиполипидемическом действии. Пероральное введение препаратов сравнения вызывает меньшие сдвиги: уровни ХС и ТГ снижаются в 1,4 раза (клофибрат) и в 2 раза (гемфиброзил). По липидснижающему действию заявляемый препарат близок гемфиброзилу и превосходит клофибрат.
Липидный и ЛП спектры крови экспериментальных животных-грызунов различаются: у кроликов ХС распределен по фракциям ЛП равномерно, а у крыс, в основном, содержится в антиатерогенных ЛПВП [Wilgram G.F. J. Exp. Med. 1959; 109(3): 293-309]. В связи с этим, крысы более устойчивы к индукции экспериментальной ДЛП, чем кролики. Для создания модели ДЛП у крыс необходимо добавлять к диете, содержащей ХС, такие дополнительные повреждающие агенты, как тиреоидсупрессорный агент 6-метил тиоурацил, натрия холат или витамин Д2 [Thomas W.A., Hartroft W.S. Circulation 1959; 19: 65-72].
Опыт 2. Хроническая алиментарная дислипопротеинемии (ДЛП) у крыс
Гиполипидемическое действие заявляемого препарата было подтверждено на хронической модели алиментарной ДЛП у крыс.
2
Эксперименты проведены на 60 крысах-самцах (массой 230-250 г) в условиях алиментарной ДЛП, характеризующейся повышенным уровнем липидов ХС и ТГ в сыворотке крови и печени, при одновременно сниженном содержании ХС антиатерогенных ЛПВП в крови. Эти нарушения были вызваны с помощью диеты, содержащей 7,5% ХС, 30% смеси животных жиров, прогретого подсолнечного масла (2:1) и 500.000 МИ витамина Д. Длительность проведения опыта составляла 24 дня. Особенность примененной диеты состоит в том, что на ее фоне возможно изучить не только гиполипидемический эффект нового соединения, но и, анализируя холестериновый индекс атерогенности (ИА), судить о его потенциальном антиатеросклеротическом действии.
Заявляемый препарат вводили 12 крысам перорально в дозе 100 мг/кг в течение 24 дней, на фоне специальной гиперхолестеринемической диеты (ГХС диеты). Для сравнения использовали аналог заявляемого препарата - клофибрат, и прототип - гемфиброзил, оба в дозе 100 мг/кг перорально. В сыворотке крови крыс определяли уровни общего ХС, ТГ и ХС ЛПВП. На основе этих показателей по общепринятой формуле Фридвальда ХС ЛПНП=ХС-(ХСлпвп+ТГ/2,2) рассчитывали ХС атерогенных ЛПНП. По формуле Климова (ХС-ХС ЛПВП)/ХС ЛПВП определяли величину холестеринового ИА. В печени тестировали содержание ХС и ТГ. Полученные результаты приведены в таблицах 2 и 3.
Как видно из таблицы 2, скармливание крысам ГХС диеты привела к развитию стойкой ДЛП, при этом в 2,3 раза снизилась концентрация ХС антиатерогенных ЛПВП. Уровни ХС, ТГ и расчетные величины содержания ХС атерогенных ЛПНП и холестеринового ИА значительно превышены, что является плохим прогнозом в отношении развития АС (таблица 2, группа 2). В этих условиях применение заявляемого препарата вызывает значительный гиполипидемический эффект: в сыворотке крови снижаются уровни ХС (в 1,7 раза) и ТГ (в 1,6 раза). Обнаружено достоверное увеличение в 1,5 раза концентрации ХС антиатерогенных ЛПВП. Показано, что стали меньше расчетные величины содержания ХС ЛПНП и холестеринового ИА. Эти факты отражают положительный прогноз в предупреждении развития АС при применении заявляемого препарата (таблица 2, группа 3).
Выявленное у заявляемого препарата свойство повышать концентрацию ХС антиатерогенных ЛПВП является важным. В тех же условиях применение аналога заявляемого препарата - клофибрата - не изменило уровень ХС и сниженную концентрацию ХС антиатерогенных ЛПВП. Использование гемфиброзила (прототипа заявляемого препарата) привело к существенному улучшению липидного спектра крови и свойственной ему способности значительно повышать ХС ЛПВП (таблица 2, группа 5).
Как видно из таблицы 3, применение заявляемого препарата вызвало выраженное уменьшение липидной инфильтрации печени, моделированной кормлением ГХС диетой: содержание ХС снизилось в 1,9 раза, ТГ - в 2,1 раза. Наблюдалось более низкое значение весового индекса печени по сравнению с гиперлипидемическими крысами, характеризующего защиту печени (таблица 3, группы 3). В условиях ДЛП клофибрат (аналог заявляемого препарата) проявил меньшую активность. При использовании клофибрата содержание ХС в печени не уменьшалось (таблица 3, группа 4). Кроме того, применение клофибрата способствовало увеличению весового индекса - относительной массы печени, что может свидетельствовать о гепатомегалическом эффекте (таблица 3, группа 4). Следует отметить, что в клинической практике применение клофибрата и других фибратов у больных ДЛП вызывает нарушение функций печени, внутрипеченочный холестаз, обострение желчно-каменной болезни [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 1998; 13 изд., Т. 1.: 455-456].
Таким образом, на модели хронической алиментарной дислипопротеинемии у крыс у заявляемого препарата обнаружено выраженное гиполипидемическое действие, превосходящее эффект его аналога - клофибрата - и близкое к действию его прототипа - гемфиброзила.
Опыт 3. Гиполипидемическое действие заявляемого препарата в эксперименте при моделировании хронической алиментарной ДЛП у морских свинок
Липидный профиль крови морских свинок по спектру распределения ХС в ЛП в сыворотке крови приближается к таковому у человека. В связи с этим, моделирование ДЛП на морских свинках предпочтительнее, чем на крысах [West k.l., Fernandez М.l. Cardiovasc. Drug Rev. 2004; 22(1): 55-77].
Алиментарная ДЛП индуцируется следующим образом: опытным животным перорально зондом вводится прогретая смесь 2%-ного пищевого ХС со свиным жиром и подсолнечным маслом (2:1) в течение 21-24 дней [Sapronov N.S., Khnychenko L.K., Okunevich I.V. Adv. Exp. Med. Biol. 2006, v. 583: 515-521].
Исследования проведены на 40 морских свинках-самцах массой 350-450 г. Заявляемый препарат вводили в дозе 100 мг/кг перорально вместе с введением ГХС диеты в течение 24 дней. Клофибрат (аналог) и гемфиброзил (прототип) заявляемого препарата применяли в дозе 100 мг/кг, оба перорально в тех же условиях.
Результаты данной серии опытов представлены в таблице 4.
Как видно из таблицы, под влиянием ГХС диеты наблюдается повышение содержания липидов в крови и печени. В сыворотке крови уровни ХС и ТГ возросли в 5 раз и 9 раз соответственно, в 3,6 раза снизилась концентрация ХС антиатерогенных ЛПВП. В связи с этим, рассчитанный по формуле (ХС-ХС ЛПВП)/ХС ЛПВП, холестериновый ИА увеличился в 22,6 раза по сравнению с интактными животными. Произошел значительный липидоз в печени (увеличение содержания ХС и ТГ) и было отмечено повышение ХС аорте (таблица 4, группа 2). В условиях алиментарной ДЛП у морских свинок применение заявляемого препарата оказало достоверное гиполипидемическое действие на содержание липидов в крови. Так, в сыворотке крови уровень ХС снизился в 2,2 раза, ТГ - в 9,4 раза, в 1,7 раза повысилась сниженная в условиях ДЛП концентрация ХС антиатерогенных ЛПВП. В связи с этим, в 4 раза оказалась сниженной расчетная величина холестеринового ИА, свидетельствующая о положительном прогнозе в отношении риска развития АС (таблица 4, группа 3).
Под влиянием заявляемого препарата за счет его значительного гиполипидемического действия в 2,1 раза снизилось содержание ХС в аорте, что предполагает наличие у данного соединения потенциальных защитных свойств в отношении аорты (таблица 4, группа 3). В результате лечения заявляемым препаратом достоверно уменьшился липидоз печени (снижение содержания ХС в 1,6 раза и ТГ - в 1,8 раза) по сравнению с группой гиперлипидемических животных, не получавших лечения (таблица 4, группы 3 и 2). Эти полученные данные оказались близки по эффективности к результатам гиполипидемического действия гемфиброзила (прототип заявляемого препарата). Из таблицы видно, что при введении гемфиброзила наблюдалось улучшение липидного спектра крови, снижение содержания липидов в печени и концентрации ХС в аорте (таблица 4, группа 5). В тех же условиях моделирования использование клофибрата (аналога заявляемого соединения) не оказало влияния на ТГ в сыворотке крови и в печени, содержание ХС в аорте, а также не увеличило сниженную концентрацию ХС антиатерогенных ЛПВП (таблица 4, группа 4).
Таким образом, на модели хронической алиментарной ДЛП у морских свинок у заявляемого препарата обнаружено выраженное гиполипидемическое действие, близкое по действию в сравнении с гемфиброзилом (прототип) и превышающее по эффективности клофибрат (аналог).
Антиатеросклеротическое действие заявляемого препарата
Опыт 4. Модель экспериментального алиментарного (холестеринового) атеросклероза (АС) у кроликов
В хроническом опыте на модели холестеринового АС использовали 50 кроликов-самцов (массой 3,0-3,5 кг). Их разделили на 5 групп: 1 группа - интактные кролики, 2, 3, 4 и 5 группы - подопытные кролики, получавшие ГХС диету (0,5 г/кг ХС в 5%-ном прогретом подсолнечном масле) в течение 3 месяцев. Животным 3 группы дополнительно вводили заявляемый препарат, а кроликам 5 группы его аналог - клофибрат, оба в дозе 100 мг/кг перорально. Пармидин (прототип) применяли в дозе 50 мг/кг (кролики 4 группы). После 3-х месяцев в конце срока животных выводили из эксперимента, получали кровь, выделяли печень и надпочечники, извлекали аорту. В крови определяли общий ХС, ХС ЛПВП, ТГ. Расчетным путем анализировали содержание ХС ЛПНП и величину ИА. В печени определяли содержание ХС и ТГ, в надпочечниках - ХС. В аорте тестировали содержание ХС и степень атеросклеротического поражения аорты в процентах. Данные, полученные в опыте с моделированным алиментарным АС у кроликов, представлены в таблицах 5 и 6.
Как видно из таблицы 5, моделирование алиментарного АС у кроликов сопровождалось созданием мощной ДЛП в сыворотке крови по сравнению с интактными животными: в 25 раз увеличился уровень ХС и в 16 раз - ТГ, в 4 раза уменьшилась концентрация ХС антиатерогенных ЛПВП сыворотки крови (таблица 5, группа 2). Увеличились величины содержания ХС атерогенных ЛПНП и холестеринового ИА, что свидетельствует о плохом прогнозе риска развития АС (таблица 4, группа 2). Наблюдался выраженный липидоз в органах - многократное накопление липидов в печени, ХС в аорте и надпочечниках (таблица 6, группа 2). Увеличение ХС в надпочечниках - органах гипофизарно-адреналовой системы - дополнительно характеризует степень нарушения липидного обмена. Планиметрическое изучение аорт показало выраженное атеросклеротическое действие ГХС диеты, что отразилось в большом количестве атеросклеротических поражений как многослойного, так и диффузного характера. В аортах гиперлипидемических кроликов наблюдалось значительное увеличение содержания ХС и атеросклеротического поражения аорт (таблица 6, группа 2).
В условиях развившейся ДЛП и алиментарного АС введение заявляемого препарата способствовало улучшению липидного профиля крови и снижению липидной инфильтрации печени, уменьшению содержания ХС надпочечников и ХС аорты (таблицы 5 и 6, группа 3). Было обнаружено, что в сыворотке крови уровень ХС снизился в 2,3 раза, ТГ - в 2,6 раза, при этом показатель величины ХС ЛПВП не изменился. Расчетные величины содержания ХС ЛПНП и холестеринового ИА были значительно ниже, чем у кроликов в группе 2, получавших только ГХС диету. Эти показатели свидетельствуют о выраженном гиполипидемическом действии тестируемого соединения и характеризуют положительный прогноз в риске развития атеросклеротического процесса. Под влиянием заявляемого препарата липидная инфильтрация печени была также значительно снижена: содержание ХС и ТГ уменьшилось в 2,2 и 1,8 раза соответственно, кроме того, содержание ХС в надпочечниках было в 1,6 раза ниже, по сравнению с гиперлипидемическими кроликами (таблица 6, группа 3).
Антиатеросклеротическое действие заявляемого препарата выразилось в уменьшении липидоза аорты и степени поражения ее стенки АС: содержание ХС аорты снизилось в 2,6 раза, а величина атеросклеротического поражения - в 4 раза по сравнению с животными без лечения (таблица 6, группы 3 и 2).
Обнаруженные антиатеросклеротические свойства заявляемого препарата оказались выше, чем у пармидина (прототипа), у которого был отмечен защитный эффект в отношении аорты, однако процент поражения аорт был в 2 раза больше, чем у заявляемого препарата (таблица 6, группа 4). При отсутствии гиполипидемического действия противоатеросклеротический эффект клофибрата (аналога) был выражен в еще меньшей степени - процент поражения аорт был в 2,9 раза ниже, чем у заявляемого препарата (таблица 6, группа 5).
Таким образом, в опытах на кроликах с алиментарным холестериновым атеросклерозом было установлено выраженное гиполипидемическое и антиатеросклеротическое действие заявляемого препарата, превосходящее аналогичные эффекты прототипа - пармидина, и аналога заявляемого соединения - клофибрата.
В результате проведенного исследования установлено:
1. В опытах на крысах и морских свинках с индуцированной дислипопротеинемией обнаружено выраженное гиполипидемическое действие заявляемого препарата - бензолсульфоната 1-метил-3-этил, 4,5(бис-N-метилкарбамоил)имидазолия - на липиды сыворотки крови и липиды печени.
2. Заявляемый препарат в опытах на крысах обладает способностью восстанавливать пониженный уровень холестерина антиатерогенных липопротеинов высокой плотности в крови.
3. В опытах на кроликах с алиментарным холестериновым атеросклерозом показано выраженное гиполипидемическое и антиатеросклеротическое действие заявляемого препарата - снижение содержания холестерина в аорте и величины процента атеросклеротического поражения аорты у экспериментальных животных.
4. Низкая токсичность заявляемого препарата и эффективность при пероральном применении в небольшой дозе указывают на перспективность использования его в качестве гиполипидемического и антиатеросклеротического средства для лечения дислипопротеинемии атерогенного характера и атеросклероза различной локализации.