СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯ ХРЯЩА И АРТРИТА
METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATMENT OF CARTILAGE DAMAGE AND ARTHRITIS

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
Настоящая заявка содержит перечень последовательностей, который был подан в электронном виде в формате ASCII и включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Указанная ASCII-копия, созданная 26 октября 2017 года, имеет название PAT057513-WO-PCT_SL.txt и размер 95244 байта.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к способам и композициям для лечения повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) или артрита.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0001] Остеоартрит (ОА) представляет собой наиболее распространенное заболевание опорно-двигательной системы. В настоящее время им поражены примерно 40 миллионов американцев; согласно прогнозам в течение следующих двадцати лет это число возрастет до 60 миллионов в результате старения населения и увеличения продолжительности жизни, что сделает его четвертой по значимости причиной инвалидизации. ОА характеризуется медленным дегенеративным разрушением сустава, затрагивающим как суставной хрящ (содержащий клетки и матрикс, которые вырабатывают смазку и служат амортизатором для сустава), так и субхондральную кость, залегающую под суставным хрящом. ОА может считаться последствием различных этиологических факторов. Например, он может быть обусловлен аномальным биомеханическим стрессом или генетическими или приобретенными аномалиями суставного хряща или кости.
[0002] Повреждение сустава, например, острое поражение сустава, такое как разрыв мениска или связки, или внутрисуставной перелом, также может привести к артриту, например, к посттравматическому артриту. Поскольку суставной хрящ имеет ограниченную способность к восстановлению, даже небольшое невыявляемое повреждение зачастую может со временем ухудшиться и привести к возникновению ОА.
[0003] Хотя хирургические методики и регенеративная технология достигли некоторого прогресса в восстановлении хряща, замедлении дегенерации и улучшили восстановление повреждения сустава, например повреждения суставного хряща, существует постоянная потребность в улучшении композиций и способов регенерации хряща, лечения повреждения суставов, например повреждения суставного хряща, или ОА.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем изобретении предусмотрены способы и композиции для лечения артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) у субъекта (например, субъекта-человека) путем введения в сустав субъекта внутрисуставной дозы протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью.
В данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща у субъекта-человека путем введения в сустав субъекта-человека внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-200 мг полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, перечисленной в таблице 1, где полипептид содержит аминокислоту, которая представляет собой полярную аминокислоту, отличную от K или R, в положении 423, как определено со ссылкой на SEQ ID NO: 1, и полипептид характеризуется хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления у субъекта-человека имеется повреждение хряща. В некоторых вариантах осуществления у субъекта-человека имеется остеоартрит, травматический артрит или аутоиммунный артрит.
В некоторых вариантах осуществления аминокислота в полипептиде, которая соответствует положению 423 из SEQ ID NO: 1, представляет собой Q или S или подвергнута делеции. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит аминокислотную последовательность, перечисленную в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления полипептид состоит из аминокислотной последовательности, перечисленной в таблице 1.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща у субъекта-человека путем введения в сустав субъекта-человека внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-200 мг полипептида, содержащего SEQ ID NO: 17. В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща у субъекта-человека путем введения в сустав субъекта-человека внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-200 мг полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 17.
В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 0,2-100 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 0,2-60 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 0,2-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 2-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 10-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 20-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 40-60 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 0,2 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 2 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 10 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 20 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 60 мг.
В некоторых вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 вводят в сустав субъекта в виде однократной инъекции. В некоторых вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 вводят в сустав субъекта в виде многократных инъекций. В некоторых вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 вводят раз в две недели в течение периода времени, достаточного для лечения артрита или повреждения хряща. В некоторых вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 вводят раз в месяц в течение периода времени, достаточного для лечения артрита или повреждения хряща. В некоторых вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 вводят раз в неделю в течение периода времени, достаточного для лечения артрита или повреждения хряща.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно предусматривают осуществление хирургической процедуры на пораженном суставе у субъекта. Полипептид можно вводить до, во время или после хирургической процедуры.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно предусматривают дополнительную процедуру. Например, полипептид или композицию можно вводить в сочетании с любым из стимуляции костного мозга, замены хряща, имплантации аутологичных хондроцитов (ACI) или имплантации индуцированных матриксом аутологичных хондроцитов (MACI). В некоторых вариантах осуществления полипептид или композицию можно вводить в сочетании с ACI.
Также в данном документе предусмотрены композиции, содержащие приблизительно 0,2-200 мг полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, перечисленной в таблице 1, где полипептид содержит аминокислоту, которая представляет собой полярную аминокислоту, отличную от K или R, в положении 423, как определено со ссылкой на SEQ ID NO: 1, для применения в лечении артрита или повреждения хряща у субъекта-человека, где полипептид вводят внутрисуставно. Артрит может представлять собой остеоартрит, травматический артрит или аутоиммунный артрит.
В некоторых вариантах осуществления аминокислота в полипептиде, которая соответствует положению 423 из SEQ ID NO: 1, представляет собой Q или S или подвергнута делеции. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит аминокислотную последовательность, перечисленную в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления полипептид состоит из аминокислотной последовательности, перечисленной в таблице 1.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены композиции, содержащие приблизительно 0,2-200 мг полипептида, содержащего SEQ ID NO: 17, для применения в лечении артрита или повреждения хряща у субъекта-человека, где полипептид вводят внутрисуставно. В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены композиции, содержащие приблизительно 0,2-200 мг полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 17, для применения в лечении артрита или повреждения хряща у субъекта-человека, где полипептид вводят внутрисуставно.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены композиции, содержащие приблизительно 0,2-60 мг (например, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-55 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-45 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-55 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-45 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-60 мг, приблизительно 5-55 мг, приблизительно 5-50 мг, приблизительно 5-45 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-55 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-45 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-60 мг, приблизительно 15-55 мг, приблизительно 15-50 мг, приблизительно 15-45 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-55 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-45 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-60 мг, приблизительно 30-55 мг, приблизительно 30-50 мг, приблизительно 30-45 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-60 мг, приблизительно 35-55 мг, приблизительно 35-50 мг, приблизительно 35-45 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-55 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 40-45 мг, приблизительно 45-60 мг, приблизительно 45-55 мг, приблизительно 45-50 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 50-55 мг, приблизительно 55-60 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 41 мг, приблизительно 42 мг, приблизительно 43 мг, приблизительно 44 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 46 мг, приблизительно 47 мг, приблизительно 48 мг, приблизительно 49 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 51 мг, приблизительно 52 мг, приблизительно 53 мг, приблизительно 54 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 56 мг, приблизительно 57 мг, приблизительно 58 мг, приблизительно 59 мг, приблизительно 60 мг) полипептида, содержащего SEQ ID NO: 17, для применения в лечении артрита или повреждения хряща у субъекта-человека, где полипептид вводят внутрисуставно.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены композиции, содержащие приблизительно 0,2-60 мг (например, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-55 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-45 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-55 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-45 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-60 мг, приблизительно 5-55 мг, приблизительно 5-50 мг, приблизительно 5-45 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-55 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-45 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-60 мг, приблизительно 15-55 мг, приблизительно 15-50 мг, приблизительно 15-45 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-55 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-45 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-60 мг, приблизительно 30-55 мг, приблизительно 30-50 мг, приблизительно 30-45 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-60 мг, приблизительно 35-55 мг, приблизительно 35-50 мг, приблизительно 35-45 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-55 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 40-45 мг, приблизительно 45-60 мг, приблизительно 45-55 мг, приблизительно 45-50 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 50-55 мг, приблизительно 55-60 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 41 мг, приблизительно 42 мг, приблизительно 43 мг, приблизительно 44 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 46 мг, приблизительно 47 мг, приблизительно 48 мг, приблизительно 49 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 51 мг, приблизительно 52 мг, приблизительно 53 мг, приблизительно 54 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 56 мг, приблизительно 57 мг, приблизительно 58 мг, приблизительно 59 мг, приблизительно 60 мг) полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 17, для применения в лечении артрита или повреждения хряща у субъекта-человека, где полипептид вводят внутрисуставно.
Если не определено иное, все применяемые в данном документе технические и научные термины имеют то же значение, которое обычно понимают рядовые специалисты в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Хотя при осуществлении на практике настоящего изобретения можно применять способы и материалы, аналогичные или эквивалентные тем, которые описаны в данном документе, ниже описаны подходящие способы и материалы. Все публикации, заявки на патенты, патенты и другие литературные источники, упомянутые в данном документе, включены посредством ссылки во всей своей полноте. В случае расхождений настоящее описание, включая определения, будет иметь преимущественную силу. Кроме того, материалы, способы и примеры являются исключительно иллюстративными и не предполагаются как ограничивающие.
Подробности одного или нескольких вариантов осуществления настоящего изобретения изложены в прилагаемых графических материалах и описании ниже. Другие признаки, цели и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из описания и графических материалов, а также из формулы изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На ФИГ. 1 показан дизайн исследования для рандомизированного плацебо-контролируемого двойного слепого исследования первого применения препарата на человеке с однократной возрастающей дозой полипептида ANGPTL3 с SEQ ID NO: 17 у пациентов с первичным остеоартритом, у которых запланирована полная замена коленного сустава.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
В настоящем изобретении предусмотрены способы и композиции для лечения артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) у субъекта (например, субъекта-человека) путем введения в сустав субъекта внутрисуставной дозы протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью.
Определения
Специалист в данной области будет осознавать множество способов и материалов, аналогичных или эквивалентных описанным в данном документе, которые можно применять при осуществлении на практике настоящего изобретения. Следует отметить, что настоящее изобретение никоим образом не ограничено описанными способами и материалами.
[0004] Используемые в данном документе формы единственного числа включают отсылки к формам множественного числа, если контекст явно не предписывает иное.
Следует понимать, хотя это и не всегда прямо указано, что всем числовым обозначениям предшествует термин «приблизительно». Следовательно, если не указано противоположное, числовые параметры, изложенные в описании и формуле изобретения, представляют собой приблизительные величины, которые могут варьироваться в зависимости от требуемых свойств, которые должны быть получены согласно настоящему раскрытию. Термин «приблизительно», когда он касается измеряемого значения, подразумевают как охватывающий отклонения на +/-10%, более предпочтительно +/-5%, еще более предпочтительно +/-1% и еще более предпочтительно +/-0,1% от указанного значения. Например, термин «приблизительно», когда он касается рН, подразумевают как охватывающий отклонения на +/-0,3 от указанного значения рН.
[0005] "ANGPTL3" относится к ангиопоэтин-подобному белку 3, который является представителем семейства ангиопоэтин-подобных секретируемых факторов. Он экспрессируется преимущественно в печени и имеет характерную для ангиопоэтинов структуру, состоящую из сигнального пептида, N-терминального суперспирального домена (CCD) и С-терминального фибриноген (FBN)-подобного домена. Было показано, что ANGPTL3 связывает интегрины αV/β3, и для индукции адгезии эндотелиальных клеток и ангиогенеза in vivo было достаточно одного FBN-подобного домена (Camenisch et al., J. Biol. Chem. 277: 17281-17290, 2002). Эндогенный ANGPTL3 обычно расщепляется in vivo на амино-терминальный и карбокси-терминальный фрагменты.
[0006] Аминокислотная последовательность ANGPTL3 (номер доступа в GenBank NP_055310.1) приведена под SEQ ID NO: 1; а соответствующая ей полинуклеотидная последовательность приведена под SEQ ID NO: 2 (номер эталонной последовательности в NCBI NM_014495.3).
Препробелок ангиопоэтин-родственного белка 3 [Homo sapiens, NP_055310.1]
[0007] MFTIKLLLFIVPLVISSRIDQDNSSFDSLSPEPKSRFAMLDDVKILANGLLQLGHGLKDFVHKTKGQINDIFQKLNIFDQSFYDLSLQTSEIKEEEKELRRTTYKLQVKNEEVKNMSLELNSKLESLLEEKILLQQKVKYLEEQLTNLIQNQPETPEHPEVTSLKTFVEKQDNSIKDLLQTVEDQYKQLNQQHSQIKEIENQLRRTSIQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE (SEQ ID NO: 1)
[0008] Ангиопоэтин-подобный белок 3 Homo sapiens (ANGPTL3), кДНК [NM_014495.3]
--->
1    atatatagag ttaagaagtc taggtctgct tccagaagaa aacagttcca cgttgcttga
61   aattgaaaat caagataaaa atgttcacaa ttaagctcct tctttttatt gttcctctag
121  ttatttcctc cagaattgat caagacaatt catcatttga ttctctatct ccagagccaa
181  aatcaagatt tgctatgtta gacgatgtaa aaattttagc caatggcctc cttcagttgg
241  gacatggtct taaagacttt gtccataaga cgaagggcca aattaatgac atatttcaaa
301  aactcaacat atttgatcag tctttttatg atctatcgct gcaaaccagt gaaatcaaag
361  aagaagaaaa ggaactgaga agaactacat ataaactaca agtcaaaaat gaagaggtaa
421  agaatatgtc acttgaactc aactcaaaac ttgaaagcct cctagaagaa aaaattctac
481  ttcaacaaaa agtgaaatat ttagaagagc aactaactaa cttaattcaa aatcaacctg
541  aaactccaga acacccagaa gtaacttcac ttaaaacttt tgtagaaaaa caagataata
601  gcatcaaaga ccttctccag accgtggaag accaatataa acaattaaac caacagcata
661  gtcaaataaa agaaatagaa aatcagctca gaaggactag tattcaagaa cccacagaaa
721  tttctctatc ttccaagcca agagcaccaa gaactactcc ctttcttcag ttgaatgaaa
781  taagaaatgt aaaacatgat ggcattcctg ctgaatgtac caccatttat aacagaggtg
841  aacatacaag tggcatgtat gccatcagac ccagcaactc tcaagttttt catgtctact
901  gtgatgttat atcaggtagt ccatggacat taattcaaca tcgaatagat ggatcacaaa
961  acttcaatga aacgtgggag aactacaaat atggttttgg gaggcttgat ggagaatttt
1021 ggttgggcct agagaagata tactccatag tgaagcaatc taattatgtt ttacgaattg
1081 agttggaaga ctggaaagac aacaaacatt atattgaata ttctttttac ttgggaaatc
1141 acgaaaccaa ctatacgcta catctagttg cgattactgg caatgtcccc aatgcaatcc
1201 cggaaaacaa agatttggtg ttttctactt gggatcacaa agcaaaagga cacttcaact
1261 gtccagaggg ttattcagga ggctggtggt ggcatgatga gtgtggagaa aacaacctaa
1321 atggtaaata taacaaacca agagcaaaat ctaagccaga gaggagaaga ggattatctt
1381 ggaagtctca aaatggaagg ttatactcta taaaatcaac caaaatgttg atccatccaa
1441 cagattcaga aagctttgaa tgaactgagg caaatttaaa aggcaataat ttaaacatta
1501 acctcattcc aagttaatgt ggtctaataa tctggtatta aatccttaag agaaagcttg
1561 agaaatagat tttttttatc ttaaagtcac tgtctattta agattaaaca tacaatcaca
1621 taaccttaaa gaataccgtt tacatttctc aatcaaaatt cttataatac tatttgtttt
1681 aaattttgtg atgtgggaat caattttaga tggtcacaat ctagattata atcaataggt
1741 gaacttatta aataactttt ctaaataaaa aatttagaga cttttatttt aaaaggcatc
1801 atatgagcta atatcacaac tttcccagtt taaaaaacta gtactcttgt taaaactcta
1861 aacttgacta aatacagagg actggtaatt gtacagttct taaatgttgt agtattaatt
1921 tcaaaactaa aaatcgtcag cacagagtat gtgtaaaaat ctgtaataca aatttttaaa
1981 ctgatgcttc attttgctac aaaataattt ggagtaaatg tttgatatga tttatttatg
2041 aaacctaatg aagcagaatt aaatactgta ttaaaataag ttcgctgtct ttaaacaaat
2101 ggagatgact actaagtcac attgacttta acatgaggta tcactatacc ttatttgtta
2161 aaatatatac tgtatacatt ttatatattt taacacttaa tactatgaaa acaaataatt
2221 gtaaaggaat cttgtcagat tacagtaaga atgaacatat ttgtggcatc gagttaaagt
2281 ttatatttcc cctaaatatg ctgtgattct aatacattcg tgtaggtttt caagtagaaa
2341 taaacctcgt aacaagttac tgaacgttta aacagcctga caagcatgta tatatgttta
2401 aaattcaata aacaaagacc cagtccctaa attatagaaa tttaaattat tcttgcatgt
2461 ttatcgacat cacaacagat ccctaaatcc ctaaatccct aaagattaga tacaaatttt
2521 ttaccacagt atcacttgtc agaatttatt tttaaatatg attttttaaa actgccagta
2581 agaaatttta aattaaaccc atttgttaaa ggatatagtg cccaagttat atggtgacct
2641 acctttgtca atacttagca ttatgtattt caaattatcc aatatacatg tcatatatat
2701 ttttatatgt cacatatata aaagatatgt atgatctatg tgaatcctaa gtaaatattt
2761 tgttccagaa aagtacaaaa taataaaggt aaaaataatc tataattttc aggaccacag
2821 actaagctgt cgaaattaac gctgattttt ttagggccag aataccaaaa tggctcctct
2881 cttcccccaa aattggacaa tttcaaatgc aaaataattc attatttaat atatgagttg
2941 cttcctctat t (SEQ ID NO: 2)
<---
[0009]
[0010] "Полипептид ANGPTL3" относится к встречающемуся в природе белку ANGPTL3 или его фрагменту или варианту. Для целей настоящего изобретения нумерация аминокислоты, как правило, определяется со ссылкой на последовательность полноразмерного полипептида ANGPTL3 человека дикого типа (SEQ ID NO:1). Так, в вариантах осуществления, в которых полипептид по настоящему изобретению содержит только С-терминальную часть полноразмерного ANGPTL3 и не содержит N-терминальной части, хотя длина пептида составляет менее 460 аминокислот, нумерация положений основана на SEQ ID NO:1. Например, ссылка на положение 423 полипептида ANGPTL3 по настоящему изобретению относится к положению 423 из SEQ ID NO:1, даже несмотря на то, что длина самого полипептида ANGPTL3 по настоящему изобретению может составлять всего лишь 200 аминокислот. При определении аминокислоты в представляющей интерес последовательности, которая "соответствует" положению в эталонной последовательности, такой как SEQ ID NO:1, это осуществляют путем оптимального выравнивания последовательностей, например, с применением выравнивания CLUSTAL с параметрами по умолчанию или выравнивания BLAST 2 с параметрами по умолчанию, и сравнения последовательностей. Например, положение 423 в представляющей интерес последовательности, которое "определено со ссылкой на SEQ ID NO:1", или аминокислота, которая "соответствует" положению 423 из SEQ ID NO:1, означает аминокислоту, которая выравнивается с положением 423 из SEQ ID NO:1 при оптимальном выравнивании представляющей интерес последовательности с SEQ ID NO:1.
[0011] Используемый в данном документе термин "протеазоустойчивый" относится к полипептиду, содержащему модификацию, которая делает полипептид менее восприимчивым к расщеплению под действием трипсиноподобной протеазы, чем соответствующий немодифицированный полипептид дикого типа.
[0012] Термины "пептид", "полипептид" и "белок" используются взаимозаменяемо и относятся к соединению, состоящему из аминокислотных остатков, ковалентно связанных пептидными связями. Белок или пептид должны содержать по меньшей мере две аминокислоты, а ограничение на максимальное количество аминокислот, которые может содержать последовательность белка или пептида, не установлено. Полипептиды предусматривают любой пептид или белок, содержащие две или более аминокислоты, соединенные друг с другом пептидными связями. Используемый в данном документе термин относится как к коротким цепям, которые также обычно понимаются в уровне техники, например, как пептиды, олигопептиды и олигомеры, так и к более длинным цепям, которые обычно упоминаются в уровне техники как белки, которых существует множество типов. Например, "полипептиды" предусматривают, среди прочего, биологически активные фрагменты, практически гомологичные полипептиды, олигопептиды, гомодимеры, гетеродимеры, варианты полипептидов, модифицированные полипептиды, производные, аналоги, слитые белки. Полипептид предусматривает природный пептид, рекомбинантный пептид или их комбинацию.
Термин "вариант" относится к полипептиду, который имеет практически идентичную аминокислотную последовательность с эталонным полипептидом, или кодируется практически идентичной нуклеотидной последовательностью и может характеризоваться одной или несколькими активностями эталонного полипептида. Например, вариант может характеризоваться приблизительно 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более высокой идентичностью последовательности с эталонным полипептидом, при этом сохраняя одну или несколько активностей эталонного полипептида.
[0013] Термин "аминокислота" относится к встречающимся в природе и синтетическим аминокислотам, а также к аналогам аминокислот и миметикам аминокислот, которые функционируют аналогично встречающимся в природе аминокислотам. Встречающиеся в природе аминокислоты представляют собой аминокислоты, кодируемые генетическим кодом, а также такие аминокислоты, которые были впоследствии модифицированы, например, гидроксипролин, γ-карбоксиглутамат и O-фосфосерин. Аналоги аминокислот относятся к соединениям, которые характеризуются такой же основной химической структурой, что и встречающаяся в природе аминокислота, то есть имеют α-углерод, который связан с водородом, карбоксильную группу, аминогруппу и R-группу, например, гомосерин, норлейцин, метионинсульфоксид, метионинметилсульфоний. Такие аналоги имеют модифицированные R-группы (например, норлейцин) или модифицированные пептидные остовы, но сохраняют такую же основную химическую структуру, что и встречающаяся в природе аминокислота. Кодируемые природным кодоном аминокислоты представляют собой 20 стандартных аминокислот (аланин, аргинин, аспарагин, аспарагиновая кислота, цистеин, глутамин, глутаминовая кислота, глицин, гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, пролин, серин, треонин, триптофан, тирозин и валин), а также пирролизин, пирролин-карбоксил-лизин и селеноцистеин.
[0014] "Консервативно модифицированные варианты" распространяются как на аминокислотные последовательности, так и на последовательности нуклеиновой кислоты. Применительно к конкретным последовательностям нуклеиновой кислоты, консервативно модифицированные варианты относятся к тем нуклеиновым кислотам, которые кодируют идентичные или фактически идентичные аминокислотные последовательности, или же, если нуклеиновая кислота не кодирует аминокислотную последовательность, они относятся к фактически идентичным последовательностям. Вследствие вырожденности генетического кода любой данный белок кодируется большим количеством функционально идентичных нуклеиновых кислот. Например, все из кодонов GCA, GCC, GCG и GCU кодируют аминокислоту аланин. Таким образом, в каждом положении, где кодон определяет аланин, кодон может быть изменен на любой из описанных соответствующих кодонов без изменения кодируемого полипептида. Такие вариации нуклеиновой кислоты являются "молчащими вариациями", которые представляют собой один вид консервативно модифицированных вариаций. Каждая полипептидная последовательность в данном документе, которая кодируется полинуклеотидом, охватывает каждую возможную молчащую вариацию нуклеиновой кислоты. Специалист в данной области будет осознавать, что каждый кодон в нуклеиновой кислоте (за исключением AUG, который обычно является единственным кодоном для метионина, и TGG, который обычно является единственным кодоном для триптофана) может быть модифицирован с получением функционально идентичной молекулы. Соответственно, каждая молчащая вариация нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, неявно определена в каждой описанной последовательности. Специалист в данной области будет осознавать, что отдельные замены, делеции или добавления, производимые в последовательности нуклеиновой кислоты, пептида, полипептида или белка, которые изменяют, добавляют или удаляют одну аминокислоту или небольшой процент аминокислот относительно исходной кодируемой аминокислотной последовательности, приводят к "консервативно модифицированному варианту", при этом такое изменение производит замену аминокислоты на химически аналогичную аминокислотную и/или полипептидную последовательность, за счет чего образуется структурно аналогичный белок, характеризующийся функциональной активностью, аналогичной исходному белку. Из уровня техники хорошо известны таблицы консервативных замен, обеспечивающих функционально аналогичные аминокислоты. Такие консервативно модифицированные варианты дополняют, а не исключают полиморфные варианты, межвидовые гомологи и аллели по настоящему изобретению.
[0015] Термин "консервативные аминокислотные замены" относится к (концептуальной или иной) замене аминокислоты из одной такой группы на другую аминокислоту из той же группы. Один пример замен основан на проведении анализа нормализованных частот аминокислотных изменений в соответствующих белках гомологичных организмов (см., например, Schulz, G. E. and R. H. Schirmer, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag). По результатам таких анализов можно определить группы аминокислот, где аминокислоты преимущественно заменяются друг на друга внутри группы и, следовательно, больше всего похожи друг на друга по своему воздействию на общую структуру белка (см., например, Schulz, G. E. and R. H. Schirmer, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag). Один пример набора групп аминокислот, определенных таким образом, включает: (i) группу заряженных аминокислот, состоящую из Glu и Asp, Lys, Arg и His; (ii) группу положительно заряженных аминокислот, состоящую из Lys, Arg и His; (iii) группу отрицательно заряженных аминокислот, состоящую из Glu и Asp; (iv) группу ароматических аминокислот, состоящую из Phe, Tyr и Trp; (v) группу аминокислот с азотсодержащим кольцом, состоящую из His и Trp; (vi) группу крупных алифатических неполярных аминокислот, состоящую из Val, Leu и Ile; (vii) группу слабополярных аминокислот, состоящую из Met и Cys; (viii) группу аминокислот с небольшим аминокислотным остатком, состоящую из Ser, Thr, Asp, Asn, Gly, Ala, Glu, Gln и Pro; (ix) группу алифатических аминокислот, состоящую из Val, Leu, Ile, Met и Cys; и (х) группу небольших гидроксиаминокислот, состоящую из Ser и Thr. Другими примерами консервативных замен, основанных на общих физических свойствах, являются замены в пределах следующих групп: 1) аланин (A), глицин (G); 2) аспарагиновая кислота (D), глутаминовая кислота (E); 3) аспарагин (N), глутамин (Q); 4) аргинин (R), лизин (K); 5) изолейцин (I), лейцин (L), метионин (M), валин (V); 6) фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W); 7) серин (S), треонин (T) и 8) цистеин (C), метионин (M) (см., например, Creighton, Proteins (1984)).
Термины "гомологичный" или "идентичность" относятся к идентичности последовательности субъединиц у двух полимерных молекул, например, у двух молекул нуклеиновой кислоты, таких как две молекулы ДНК или две молекулы РНК, или у двух молекул полипептидов. Если положение субъединицы в обеих из двух молекул занимает одна и та же мономерная субъединица, например, если положение в каждой из двух молекул ДНК занято аденином, то они являются гомологичными или идентичными по данному положению. Гомология между двумя последовательностями находится в прямой зависимости от количества совпадающих или гомологичных положений; например, если половина (например, пять положений в полимере длиной десять субъединиц) положений в двух последовательностях являются гомологичными, то эти две последовательности являются гомологичными на 50%; если 90% положений (например, 9 из 10) являются совпадающими или гомологичными, то две последовательности являются гомологичными на 90%. Процент "идентичности последовательности" можно определить путем сравнения двух оптимально выровненных последовательностей в пределах окна сравнения, при этом для оптимального выравнивания этих двух последовательностей фрагмент аминокислотной последовательности в окне сравнения может содержать добавления или делеции (например, гэпы или выступы) по сравнению с эталонной последовательностью (которая не содержит добавлений или делеций). Процент можно рассчитать путем определения количества положений, в которых в обеих последовательностях встречается идентичный аминокислотный остаток, с получением количества совпадающих положений, деления количества совпадающих положений на общее количество положений в окне сравнения и умножения результата на 100 с получением процента идентичности последовательностей. Результатом является процент идентичности рассматриваемой последовательности относительно запрашиваемой последовательности.
[0016] Два примера алгоритмов, которые подходят для определения процента идентичности последовательностей и сходства последовательностей, представляют собой алгоритмы BLAST и BLAST 2.0, которые описаны в Altschul et al. (1977) Nuc. Acids Res. 25:3389-3402, и Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410, соответственно. Программное обеспечение для осуществления анализов BLAST является общедоступным от Национального центра биотехнологической информации. На первом этапе данный алгоритм предусматривает идентификацию пар последовательностей с высоким показателем сходства (HSP) за счет идентификации коротких слов длиной W в запрашиваемой последовательности, которые либо совпадают, либо удовлетворяют некоторому пороговому баллу T с положительным значением при выравнивании со словом такой же длины в последовательности из базы данных. T известен под названием пороговый показатель соседних слов (Altschul et al., выше). Эти первоначальные совпадения соседних слов выступают в качестве "затравок" для начала поисков, чтобы найти более длинные HSP, содержащие их. Совпадения слов продлеваются в обоих направлениях вдоль каждой последовательности до тех пор, пока может увеличиваться суммарный показатель выравнивания. Суммарные показатели рассчитывают с применением, в случае нуклеотидных последовательностей, параметров M (вознаграждающий балл за пару совпадающих остатков; всегда >0) и N (штрафной балл за несовпадающие остатки; всегда <0). В случае аминокислотных последовательностей для подсчета суммарного показателя применяют матрицу замен. Продление совпадений слов в каждом направлении останавливается, когда суммарный показатель выравнивания уменьшается на величину X относительно своего максимального достигнутого значения; суммарный показатель стремится к нулю или ниже вследствие накопления одного или нескольких выравниваний остатков с отрицательными показателями; или достигается конец любой из последовательностей. Параметры W, T и X алгоритма BLAST определяют чувствительность и скорость выравнивания. В программе BLASTN (для нуклеотидных последовательностей) в качестве параметров по умолчанию применяется длина слова (W), составляющая 11, ожидание (E), составляющее 10, M=5, N=-4 и сравнение обеих нитей. В случае аминокислотных последовательностей в программе BLASTP в качестве параметров по умолчанию применяется длина слова, составляющая 3, и ожидание (E), составляющее 10, и матрица замен BLOSUM62 (см. Henikoff and Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915), выравнивания (B), составляющие 50, ожидание (E), составляющее 10, M=5, N=-4 и сравнение обеих нитей. Алгоритм BLAST также осуществляет статистический анализ сходства между двумя последовательностями (см., например, Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787). Одной мерой сходства, обеспечиваемой алгоритмом BLAST, является наименьшая суммарная вероятность (P (N)), которая предусматривает указание вероятности, при которой совпадение между двумя нуклеотидными или аминокислотными последовательностями происходит случайно. Например, нуклеиновая кислота считается схожей с эталонной последовательностью, если наименьшая суммарная вероятность при сравнении тестируемой нуклеиновой кислоты с эталонной нуклеиновой кислотой составляет менее приблизительно 0,2, более предпочтительно менее приблизительно 0,01 и наиболее предпочтительно менее приблизительно 0,001.
[0017] Термин "выделенная/выделенный" применительно к нуклеиновой кислоте или белку означает, что нуклеиновая кислота или белок являются очищенными до такой степени, что они фактически не содержат других клеточных компонентов, с которыми они ассоциированы в естественном состоянии. Зачастую они находятся в гомогенном или почти гомогенном состоянии. Они могут находиться как в сухом состоянии, так и в водном растворе. Степень чистоты и гомогенности можно определить с применением методик аналитической химии, которые известны и обычно применяются в данной области техники, например, с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, высокопроизводительной жидкостной хроматографии и т. д. Белок, который является преобладающим видом молекул, присутствующих в препарате, является практически полностью очищенным. В некоторых вариантах осуществления термин "очищенный" означает, что белок приводит к образованию фактически лишь одной полоски в электрофоретическом геле. Как правило, это означает, что белок характеризуется чистотой по меньшей мере 85%, более предпочтительно чистотой по меньшей мере 95% и наиболее предпочтительно чистотой по меньшей мере 99%.
Термин "субъект" относится к животному, человеку или отличному от человека животному, в отношении которого обеспечивают лечение согласно способам по настоящему изобретению. Предусматриваются ветеринарные и неветеринарные применения. Данный термин включает без ограничения млекопитающих, например, человека, других приматов, свиней, грызунов, таких как мыши и крысы, кроликов, морских свинок, хомяков, коров, лошадей, кошек, собак, овец и коз. К типичным субъектам относятся человек, сельскохозяйственные животные и домашние животные, такие как кошки и собаки.
Термин "лечить" или "лечение" относится как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мерам, при этом целью является предупреждение или замедление нежелательного физиологического изменения или нарушения. Для целей настоящего изобретения благоприятные или требуемые клинические результаты включают без ограничения выявляемое или невыявляемое ослабление симптомов, уменьшение степени выраженности заболевания, стабилизацию (т. е. отсутствие ухудшения) состояния заболевания, задержку или замедление прогрессирования заболевания, облегчение или смягчение болезненного состояния и ремиссию (либо частичную, либо полную).
Протеазоустойчивые полипептиды ANGPTL3 с хондрогенной активностью
[0018] Настоящее изобретение направлено на внутрисуставное введение субъекту (например, субъекту-человеку) протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью для лечения повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) или артрита. Протеазоустойчивые полипептиды ANGPTL3 с хондрогенной активностью были описаны в WO2014/138687, которая включена посредством ссылки во всей своей полноте.
[0019] Описываемые в данном документе полипептиды ANGPTL3 характеризуются хондрогенной активностью. Как определено в данном документе, хондрогенез или хондрогенная активность относятся к развитию хондроцитов из мезенхимальных стволовых клеток (MSC). Мезенхимальные стволовые клетки (MSC) присутствуют в суставном хряще взрослого человека и после выделения могут быть запрограммированы in vitro на дифференцировку в хондроциты и другие линии дифференцировки мезенхимальных клеток, а также могут применяться для регенерации хряща. Признаки хондрогенной активности включают без ограничения выработку хрящевого матрикса. Выработку хрящевого матрикса можно измерить по различным маркерам, например, таким как Sox9, коллаген II типа, или по продукции гликозаминогликана (GAG). В некоторых вариантах осуществления в качестве маркера выработки хрящевого матрикса измеряют экспрессию коллагена II типа. В некоторых вариантах осуществления в качестве маркера выработки хрящевого матрикса измеряют выработку GAG. В некоторых вариантах осуществления 3-кратное увеличение выработки GAG с экспрессией белков, специфических для хряща, указывает на положительную продукцию хрящевого матрикса.
[0020] Описываемые в данном документе полипептиды ANGPTL3 являются протеазоустойчивыми. Полипептид можно оценить в отношении протеазоустойчивости с применением любого известного анализа, в котором измеряют расщепление под действием сериновой протеазы, такой как трипсин. В некоторых вариантах осуществления протеаза, используемая для оценки подверженности протеолизу, представляет собой сериновую протеазу трипсин. Считается, что полипептид является протеазоустойчивым, если он характеризуется пониженной чувствительностью к трипсину в сравнении со своим аналогом дикого типа. Примером анализа является измерение количества расщепленного продукта, образуемого при воздействии на полипептид трипсином в течение некоторого периода времени в сравнении с соответствующим нативным пептидом человека. Расщепление можно измерить с применением любого известного анализа, например SDS PAGE или LCMS.
[0021] В иллюстративном анализе ограниченный протеолиз посредством трипсинолиза проводят путем инкубации 10 нг белка, подлежащего оценке, с трипсином при массовом соотношении 8000:1 (белок:трипсин) в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем реакцию трипсинолиза можно блокировать путем добавления уксусной кислоты с доведением рН реакционной смеси до 3,0. Затем подвергнутые блокированию образцы анализируют с помощью SDS-PAGE, например, на геле с 4-12% Tris-Bis, с выявлением белков, которые устойчивы к расщеплению, отделяя их от подвергаемых расщеплению белков по появлению фрагмента, который образуется при расщеплении трипсином. У протеазоустойчивых полипептидов продукт расщепления отсутствует или его количество снижено в сравнении с их аналогами дикого типа.
[0022] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, перечисленной в таблице 1, где полипептид содержит аминокислоту, которая представляет собой полярную аминокислоту, отличную от K или R, в положении 423, как определено со ссылкой на SEQ ID NO:1, и полипептид характеризуется хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, перечисленной в таблице 1, где аминокислотный остаток, соответствующий положению 423 из SEQ ID NO: 1, представляет собой Q или S или подвергнут делеции.
[0023] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID NO: 3-30, где полипептид содержит аминокислоту, которая представляет собой полярную аминокислоту, отличную от K или R, в положении 423, как определено со ссылкой на SEQ ID NO: 1, и полипептид характеризуется хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID NO: 3-30, где аминокислотный остаток, соответствующий положению 423 из SEQ ID NO: 1, представляет собой Q или S или подвергнут делеции.
[0024] В дополнительном варианте осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID NO: 3-18, где полипептид содержит аминокислоту, которая представляет собой полярную аминокислоту, отличную от K или R, в положении 423, как определено со ссылкой на SEQ ID NO: 1, и полипептид характеризуется хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, выбранной из любой из SEQ ID NO: 3-18, где аминокислотный остаток, соответствующий положению 423 из SEQ ID NO: 1, представляет собой Q или S или подвергнут делеции.
[0025] В дополнительном варианте осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с SEQ ID NO: 17, где полипептид содержит аминокислоту, которая представляет собой полярную аминокислоту, отличную от K или R, в положении 423, как определено со ссылкой на SEQ ID NO: 1, и полипептид характеризуется хондрогенной активностью. В дополнительном варианте осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с SEQ ID NO: 17, где аминокислотный остаток, соответствующий положению 423 из SEQ ID NO: 1, представляет собой Q или S или подвергнут делеции.
[0026] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей, перечисленных в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 3-30. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 3-18. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит SEQ ID NO: 17. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит SEQ ID NO: 18. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит SEQ ID NO: 37.
[0027] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из любой из последовательностей, перечисленных в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из любой из SEQ ID NO: 3-30. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из любой из SEQ ID NO: 3-18. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 состоит из SEQ ID NO: 17. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 состоит из SEQ ID NO: 18. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 состоит из SEQ ID NO: 37.
Таблица 1. Конструкции вариантов ANGPTL3
SEQIDNO
Конструкция
Последовательность
3
207KQ
IQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
4
207KS
IQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
5
225KQ
TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
6
225KS
TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
7
225ST
TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKTKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
8
226KQ
TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
9
226KS
TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
10
228KQ
FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
11
228KS
FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
12
228ST
FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAKTKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
13
233KQ
EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
14
233KS
EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
15
241KQ
GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
16
241KS
GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
17
242KQ
IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
18
242KS
IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
19
225-455KQ
TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
20
225-455KS
TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
21
226-455KQ
TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
22
226-455KS
TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
23
228-455KQ
FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
24
228-455KS
FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
25
233-455KQ
EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
26
233-455KS
EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
27
241-455KQ
GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
28
241-455KS
GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
29
242-455KQ
IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRAQSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
30
242-455KS
IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASSKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
31
207Kdel
IQEPTEISLSSKPRAPRTTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
32
225Kdel
TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
33
226Kdel
TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
34
228Kdel
FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
35
233Kdel
EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
36
241Kdel
GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
37
242Kdel
IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTDSESFE
38
225-455Kdel
TTPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
39
226-455Kdel
TPFLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
40
228-455Kdel
FLQLNEIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
41
233-455Kdel
EIRNVKHDGIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
42
241-455Kdel
GIPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
43
242-455Kdel
IPAECTTIYNRGEHTSGMYAIRPSNSQVFHVYCDVISGSPWTLIQHRIDGSQNFNETWENYKYGFGRLDGEFWLGLEKIYSIVKQSNYVLRIELEDWKDNKHYIEYSFYLGNHETNYTLHLVAITGNVPNAIPENKDLVFSTWDHKAKGHFNCPEGYSGGWWWHDECGENNLNGKYNKPRASKPERRRGLSWKSQNGRLYSIKSTKMLIHPTD
[0028]
[0029] Описываемые в данном документе полипептиды ANGPTL3 могут иметь по меньшей мере одну замену или делецию в С-терминальной части полипептида для придания полипептиду протеазоустойчивости. Замена или делеция происходят по остатку R или K, вследствие чего полипептиды характеризуются повышенной устойчивостью к протеазам, например, к трипсиноподобным протеазам. В протеазоустойчивом полипептиде ANGPTL3 любая аминокислота может замещать R или K, или остаток R или K может быть подвергнут делеции. В некоторых вариантах осуществления заменой является полярная аминокислота, например, H, N, Q, S, T, A или Y. В некоторых вариантах осуществления заменой является H, N, Q, S, T или Y. В некоторых вариантах осуществления заменой является S или Q. В некоторых вариантах осуществления заменой является Q. В некоторых вариантах осуществления заменой является S. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый пептид ANGPTL3 имеет аминокислоту в положении 423 со ссылкой на SEQ ID NO: 1, которая отличается от K или R. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислоту в положении 423 (со ссылкой на SEQ ID NO:1), которая представляет собой полярную аминокислоту, например, аминокислота в положении 423 (со ссылкой на SEQ ID NO:1) может представлять собой Q или S или другую полярную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 имеет Q в положении 423 (со ссылкой на SEQ ID NO:1). В других вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 имеет S в положении 423 (со ссылкой на SEQ ID NO:1). В некоторых вариантах осуществления в дополнение к замене в 423 (со ссылкой на SEQ ID NO:1) протеазоустойчивый пептид ANGPTL3 имеет замену другого R или K на С-конце SEQ ID NO:1 или ее варианта, где замена представляет собой полярную аминокислоту, отличную от R или K. В некоторых вариантах осуществления замена в положении 423 (со ссылкой на SEQ ID NO:1) представляет собой Q или S в протеазоустойчивом пептиде ANGPTL3. В некоторых вариантах осуществления аминокислота, соответствующая положению 423 из SEQ ID NO: 1, подвергнута делеции в протеазоустойчивом пептиде ANGPTL3.
[0030] В некоторых вариантах осуществления длина протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет 250 аминокислот или менее, и он содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 5-18.
[0031] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 представляет собой карбокси-терминальный (С-терминальный) фрагмент (например, по меньшей мере 100, 150, 200, 220 или 215 смежных аминокислот) белка ANGPTL3 человека, или он имеет последовательность, практически идентичную С-терминальному фрагменту последовательности белка ANGPTL3 человека, где полипептид сохраняет хондрогенную активность. В некоторых вариантах осуществления у протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 отсутствует по меньшей мере часть С-терминальной последовательности, например, отсутствуют 5, 10, 15 или 20 аминокислот из С-терминальной части SEQ ID NO:1 (т. е. отсутствуют 456-460, 451-460, 446-460 или 441-460 из SEQ ID NO:1).
[0032] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит смежные аминокислоты, соответствующие аминокислотным областям: аминокислоты 241-455 или 241-460 из SEQ ID NO:1; аминокислоты 242-455 или 242-460 из SEQ ID NO:1; аминокислоты 233-455 или 233-460 из SEQ ID NO:1; аминокислоты 228-455 или 228-460 из SEQ ID NO:1, аминокислоты 226-455 или 226-260 или аминокислоты 225-455 или 225-260 из SEQ ID NO:1, в которых аминокислота замещает остаток R или K, или остаток R или K подвергнут делеции. В некоторых вариантах осуществления замена или делеция находятся в положении 423, как определено со ссылкой на SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит смежные аминокислоты, соответствующие аминокислотным областям 207-455 или 207-460 SEQ ID NO:1, в которых аминокислота замещает остаток R или K, или остаток R или K подвергнут делеции. В некоторых вариантах осуществления замена или делеция находится в положении 423. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой полярную аминокислоту, например, H, N, Q, S, T, A или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой H, N, Q, S, T или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S или Q. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления аминокислотный остаток, соответствующий положению 423 из SEQ ID NO:1, подвергнут делеции.
[0033] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере на 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотами 240-454 из SEQ ID NO:1, аминокислотами 241-455 из SEQ ID NO:1 или аминокислотами 242-455 из SEQ ID NO:1 с заменой по аминокислоте, соответствующей положению 423 из SEQ ID NO:1, при этом заменяющая аминокислота представляет собой не R, и где полипептид характеризуется хондрогенной активностью. В других вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислоты 240-454 из SEQ ID NO:1, аминокислоты 241-455 из SEQ ID NO:1 или аминокислоты 242-455 из SEQ ID NO:1, при этом каждый полипептид содержит замену по аминокислоте, соответствующей положению 423 из SEQ ID NO:1, где заменяющая аминокислота представляет собой Q или S. В других вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислоты 240-454 из SEQ ID NO:1, аминокислоты 241-455 из SEQ ID NO:1 или аминокислоты 242-455 из SEQ ID NO:1, при этом каждый полипептид содержит делецию аминокислотного остатка, соответствующего положению 423 из SEQ ID NO:1.
[0034] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% или по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью с аминокислотами аминокислотами 242- 455 или 242-460 из SEQ ID NO:1; 241-455 или 241-460 из SEQ ID NO:1; аминокислотами 233-455 или 233-460 из SEQ ID NO:1; аминокислотами 228-455 или 228-460 из SEQ ID NO:1, аминокислотами 226-455 или 226-260 из SEQ ID NO:1 или аминокислотами 225-455 или 225-260 из SEQ ID NO:1, в которой аминокислота замещает R или K. В некоторых вариантах осуществления замена находится в положении 423. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой полярную аминокислоту, например, H, N, Q, S, T, A или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой H, N, Q, S, T или Y. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой S или Q. В некоторых вариантах осуществления замена представляет собой Q. В некоторых вариантах осуществления аминокислотный остаток, соответствующий положению 423 из SEQ ID NO:1, подвергнут делеции.
[0035] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 является пегилированным. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 слит с гетерологичным пептидом. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 слит с любым из человеческого сывороточного альбумина (HSA), константной области тяжелой цепи иммуноглобулина (Fc), полигистидина, глутатион-S-трансферазы (GST), тиоредоксина, белка А, белка G, мальтозосвязывающего белка (MBP) или фрагмента любого из вышеуказанных гетерологичных полипептидов. В конкретных вариантах осуществления гетерологичный полипептид слит с амино-терминальным концом протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3. В дополнительных или альтернативных вариантах осуществления гетерологичный полипептид слит с карбокси-терминальным концом протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3.
[0036] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит по меньшей мере одну неприродную аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления полипептид содержит 1, 2, 3, 4 или более неприродных аминокислот. Известны способы получения и введения в белок не встречающейся в природе аминокислоты. См., например, патенты США №№ 7083970 и 7524647. Из уровня техники известны общие принципы получения систем для ортогональной трансляции, которые подходят для получения белков, которые содержат одну или несколько требуемых неприродных аминокислот, а также общие способы получения систем для ортогональной трансляции. Например, см. международные публикации №№ WO 2002/086075, под названием "METHODS AND COMPOSITION FOR THE PRODUCTION OF ORTHOGONAL tRNA-AMINOACYL-tRNA SYNTHETASE PAIRS"; WO 2002/085923 под названием "IN VIVO INCORPORATION OF UNNATURAL AMINO ACIDS"; WO 2004/094593 под названием "EXPANDING THE EUKARYOTIC GENETIC CODE"; WO 2005/019415, поданную 7 июля 2004 года; WO 2005/007870, поданную 7 июля 2004 года; WO 2005/007624, поданную 7 июля 2004 года; WO 2006/110182, поданную 27 октября 2005 года, под названием "ORTHOGONAL TRANSLATION COMPONENTS FOR THE VIVO INCORPORATION OF UNNATURAL AMINO ACIDS" и WO 2007/103490, поданную 7 марта 2007 года, под названием "SYSTEMS FOR THE EXPRESSION OF ORTHOGONAL TRANSLATION COMPONENTS IN EUBACTERIAL HOST CELLS". Обсуждение систем для ортогональной трансляции, которые приводят к включению неприродных аминокислот, и способов их получения и применения см. также в Wang and Schultz, (2005) "Expanding the Genetic Code". Angewandte Chemie Int Ed 44: 34-66; Xie and Schultz, (2005) "An Expanding Genetic Code". Methods 36: 227-238; Xie and Schultz, (2005) "Adding Amino Acids to the Genetic Repertoire". Curr Opinion in Chemical Biology 9: 548-554; и Wang, et al., (2006) "Expanding the Genetic Code". Annu Rev Biophys Biomol Struct 35: 225-249; Deiters, et al, (2005) "In vivo incorporation of an alkyne into proteins in Escherichia coli". Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 15:1521-1524; Chin, et al., (2002) "Addition of p-Azido-L-phenylalanine to the Genetic Code of Escherichia coli". J Am Chem Soc 124: 9026-9027; и международную публикацию № WO2006/034332, поданную 20 сентября 2005 года. Дополнительные подробности находятся в патенте США № 7045337, № 7083970, № 7238510, № 7129333, № 7262040, № 7183082, № 7199222 и № 7217809.
[0037] "Не кодируемая природным кодоном аминокислота" относится к аминокислоте, которая не является одной из стандартных аминокислот или пиролизина, пирролин-карбоксилизина или селеноцистеина. Другими терминами, которые можно применять в качестве синонимов термина "не кодируемая природным кодоном аминокислота", являются "отличная от природной аминокислота", "неприродная аминокислота", "не встречающаяся в природе аминокислота" и различные варианты написания этих терминов. Термин "не кодируемая природным кодоном аминокислота" также включает без ограничения аминокислоты, которые возникают за счет модификации (например, посттрансляционных модификаций) кодируемой природным кодоном аминокислоты (включая без ограничения 20 стандартных аминокислот или пирролизин, пирролин-карбоксилизин и селеноцистеин), но сами по себе в природных условиях они не включаются в растущую полипептидную цепь трансляционным комплексом. Примеры таких не встречающихся в природе аминокислот включают без ограничения N-ацетилглюкозаминил-L-серин, N-ацетилглюкозаминил-L-треонин и O-фосфотирозин.
[0038] Не кодируемая природным кодоном аминокислота, как правило, характеризуется какой-либо структурой с какой-либо боковой цепью-заместителем, отличной от используемой в двадцати природных аминокислотах. Поскольку не кодируемые природным кодоном аминокислоты, как правило, отличаются от природных аминокислот только структурой боковой цепи, не кодируемые природным кодоном аминокислоты образуют амидные связи с другими аминокислотами, включая без ограничения природные или не кодируемые природным кодоном аминокислоты, таким же образом, каким они образуются во встречающихся в природе полипептидах. Однако, не кодируемые природным кодоном аминокислоты имеют группы боковых цепей, которые отличают их от природных аминокислот. Например, R необязательно предусматривает алкильную, арильную, ацильную, кето-группу, азидную, гидроксильную, гидразиновую, циано-группу, галогеновую, гидразидную, алкенильную, алкинильную, эфирную, тиоловую, селен-содержащую, сульфонильную, боратную, боронатную, фосфо-группу, фосфоновую, фосфиновую, гетероциклическую, еноновую, иминовую, альдегидную, сложноэфирную, тиокислотную, гидроксиламиновую, аминогруппу или т. п. или любую их комбинацию. Другие представляющие интерес не встречающиеся в природе аминокислоты, которые могут подходить для применения в настоящем изобретении, включают без ограничения аминокислоты, содержащие фотоактивируемый сшивающий линкер, спин-меченые аминокислоты, флуоресцентные аминокислоты, металло-связывающие аминокислоты металлсодержащие аминокислоты, радиоактивные аминокислоты, аминокислоты с новыми функциональными группами, аминокислоты, которые ковалентно или нековалентно взаимодействуют с другими молекулами, активируемые светом и/или изомеризуемые под действием света аминокислоты, аминокислоты, содержащие биотин или аналог биотина, гликозилированные аминокислоты, такие как замещенный сахаром серин, другие аминокислоты, модифицированные углеводами, кетосодержащие аминокислоты, аминокислоты, содержащие полиэтиленгликоль или полиэфир, аминокислоты, замещенные атомом тяжелого металла, химически расщепляемые и/или фоторасщепляемые аминокислоты, аминокислоты с удлиненными боковыми цепями по сравнению с природными аминокислотами, включая без ограничения полиэфиры или углеводороды с длинной цепью, включающие без ограничения более приблизительно 5 или более приблизительно 10 атомов углерода, углерод-связанные сахаросодержащие аминокислоты, редокс-активные аминокислоты, аминокислоты, содержащие аминотиокислоту, и аминокислоты, содержащие один или несколько токсичных фрагментов.
[0039] Иллюстративные не кодируемые природным кодоном аминокислоты, которые могут подходить для применения в настоящем изобретении и которые применимы для реакций с водорастворимыми полимерами, включают без ограничения аминокислоты, содержащие карбонильную, аминоокси-, гидразиновую, гидразидную, семикарбазидную, азидную и алкиновую реакционноспособные группы. В некоторых вариантах осуществления не кодируемые природным кодоном аминокислоты содержат сахаридный фрагмент. Примеры таких аминокислот включают N-ацетил-L-глюкозаминил-L-серин, N-ацетил-L-галактозаминил-L-серин, N-ацетил-L-глюкозаминил-L-треонин, N-ацетил-L-глюкозаминил-L-аспарагин и O-маннозаминил-L-серин. Примеры таких аминокислот также включают примеры, где встречающаяся в природе N- или O-связь между аминокислотой и сахаридом заменена на ковалентную связь, обычно не обнаруживаемую в природе, включая без ограничения алкеновую, оксимовую тиоэфирную, амидную и т. п. Примеры таких аминокислот также включают сахариды, обычно не обнаруживаемые во встречающихся в природе белках, такие как 2-дезоксиглюкоза, 2-дезоксигалактоза и т. п.
[0040] Другим типом модификации, которая может быть необязательно введена в полипептиды ANGPTL3 (например, в пределах полипептидной цепи или на любом из N- или С-концов), например, для увеличения периода полувыведения in vivo, является пегилирование или включение длинноцепочечных полимеров полиэтиленгликоля (PEG). Введение PEG или длинноцепочечных полимеров PEG увеличивает эффективную молекулярную массу полипептидов по настоящему изобретению, например, для предотвращения быстрой фильтрации в мочу. В некоторых вариантах осуществления остаток лизина в последовательности ANGPTL3 конъюгируют с PEG непосредственно или посредством линкера. Такой линкер может представлять собой, например, остаток Glu или ацильный остаток, содержащий тиольную функциональную группу для связывания с соответствующим образом модифицированной PEG-цепью. Альтернативный способ введения PEG-цепи заключается в том, чтобы сначала ввести остаток Cys на С-конце или по остаткам, подверженным воздействию растворителя, как, например, провести замещение остатков Arg или Lys. Затем данный остаток Cys сайт-специфическим образом прикрепляют к PEG-цепи, содержащей, например, малеимидную функциональную группу. Способы включения PEG или длинноцепочечных полимеров PEG хорошо известны из уровня техники (описаны, например, в Veronese, F. M., et al., Drug Disc. Today 10: 1451-8 (2005); Greenwald, R. B., et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 55: 217-50 (2003); Roberts, M. J., et al., Adv. Drug Deliv. Rev., 54: 459-76 (2002)), содержание которых включено в данный документ посредством ссылки. В настоящем изобретении также можно применять другие способы конъюгирования полимеров, известные из уровня техники. В некоторых вариантах осуществления в качестве полимерного конъюгата для полипептида ANGPTL3 вводится поли(2-метаккрилоилоксиэтилфосфорилхолин) (PMPC) (см., например, WO2008/098930; Lewis, et al., Bioconjug Chem., 19: 2144-55 (2008)). В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении с полипептидом ANGPTL3 можно применять фосфорилхолин-содержащий полимерный конъюгат. Специалист в данной области легко сознает, что можно использовать другие биосовместимые полимерные конъюгаты.
[0041] С полипептидами по настоящему изобретению можно осуществлять описанный в последнее время альтернативный подход для включения PEG или PEG-полимеров за счет включения неприродных аминокислот (как описано выше). В данном подходе используется разработанная пара тРНК/тРНК-синтетазы, и в плазмиде экспрессии она кодируется амбер-супрессорным кодоном (Deiters, A, et al. (2004). Bio-org. Med. Chem. Lett. 14, 5743-5). Например, в полипептиды по настоящему изобретению можно включить пара-азидофенилаланин, а затем провести их реакцию с PEG-полимером, содержащим ацетиленовый фрагмент, в присутствии восстанавливающего средства и ионов меди для облегчения протекания органической реакции, известной как "[3+2]циклоприсоединение Хьюсгена".
[0042] В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения также предусмотрены специфические мутации полипептида ANGPTL3, направленные на изменение гликозилирования полипептида. Такие мутации можно выбрать таким образом, чтобы они приводили к введению или устранению одного или нескольких сайтов гликозилирования, включая без ограничения сайты О- или N-гликозилирования. В определенных вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 характеризуется сайтами и паттернами гликозилирования, не измененными относительно встречающихся в природе белков ANGPTL3. В определенных вариантах осуществления вариант полипептида ANGPTL3 включает вариант гликозилирования, в котором количество и/или тип сайтов гликозилирования были изменены относительно встречающихся в природе белков ANGPTL3. В определенных вариантах осуществления вариант полипептида содержит большее или меньшее количество сайтов N-гликозилирования относительно нативного полипептида. Сайт N-гликозилирования характеризуется последовательностью: Asn-X-Ser или Asn-X-Thr, где аминокислотный остаток, обозначенный как X, может представлять собой любой аминокислотный остаток, за исключением пролина. Замена аминокислотных остатков с созданием данной последовательности обеспечивает возможность потенциального нового сайта для добавления N-связанной углеводной цепи. В качестве альтернативы замены, которые приводят к устранению данной последовательности, будут удалять существующую N-связанную углеводную цепь. В определенных вариантах осуществления предусмотрена перестройка N-связанных углеводных цепей, где устранены один или несколько сайтов N-гликозилирования (как правило, встречающиеся в природе) и созданы один или несколько новых сайтов N-гликозилирования.
™
6
[0043] В некоторых вариантах осуществления функциональные варианты или модифицированные формы полипептидов ANGPTL3 включают слитые белки из полипептида ANGPTL3 и одного или нескольких доменов для образования слияния. Хорошо известные примеры доменов для образования слияния включают без ограничения полигистидин, Glu-Glu, глутатион-S-трансферазу (GST), тиоредоксин, белок A, белок G, константную область тяжелой цепи иммуноглобулина (Fc), мальтозосвязывающий белок (MBP) и/или человеческий сывороточный альбумин (HSA). Домен для образования слияния или его фрагмент можно выбрать таким образом, чтобы он придавал требуемое свойство. Например, некоторые домены для образования слияния особенно применимы для выделения слитых белков с помощью аффинной хроматографии. Для целей аффинной очистки применяют соответствующие матрицы для аффинной хроматографии, такие как смолы, конъюгированные с глутатионом, амилазой и никелем или кобальтом. Многие из таких матриц доступны в форме "набора", такой как система очистки Pharmacia GST и система QLAexpress (Qiagen), которые применимы для использования с (HIS(SEQ ID NO: 44)) партнерами по слиянию. В качестве другого примера, домен для образования слияния можно выбрать таким образом, чтобы он облегчал выявление полипептидов ANGPTL3. Примеры таких доменов для выявления включают различные флуоресцентные белки (например, GFP), а также "эпитопные метки", которые обычно представляют собой короткие пептидные последовательности, специфическое антитело в отношении которых является доступным. Хорошо известные эпитопные метки, специфические моноклональные антитела в отношении которых являются общедоступными, включают FLAG, гемагглютинин вируса гриппа (HA) и метки c-myc. В некоторых случаях домены для образования слияния несут сайт расщепления протеазами, такими как фактор Ха или тромбин, что позволяет соответствующей протеазе частично расщеплять слитые белки и, тем самым, высвобождать из них рекомбинантные белки. Затем высвобожденные белки можно отделить от домена для образования слияния путем последующего хроматографического разделения. В определенных вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 слит с доменом, который стабилизирует полипептид ANGPTL3 in vivo (домен-"стабилизатор"). Под "стабилизацией" подразумевают все, что увеличивает период полувыведения из сыворотки, независимо от того, происходит ли это вследствие уменьшения разрушения, уменьшения клиренса почкой или другого фармакокинетического эффекта. Известно, что образование слияний с Fc-частью иммуноглобулина придает требуемые фармакокинетические свойства самым различным белкам. Аналогично, образование слияний с человеческим сывороточным альбумином может придавать требуемые свойства. Другие типы доменов для образования слияния, которые можно выбрать, включают мультимеризирующиеся (например, димеризирующиеся, тетрамеризирующиеся) домены и функциональные домены (которые при необходимости придают дополнительную биологическую функцию). Можно сконструировать слияния таким образом, что гетерологичный пептид слит с амино-концом полипептида ANGPTL3 и/или с карбокси-концом полипептида ANGPTL3.
Способ лечения и терапевтическое применение
В данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща у субъекта (например, субъекта-человека), предусматривающие введение в сустав субъекта (например, субъекта-человека) внутрисуставной дозы описываемого в данном документе протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью или композиции, содержащей протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 с хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления у субъекта имеется повреждение хряща. В некоторых вариантах осуществления у субъекта имеется артрит, например остеоартрит, травматический артрит или аутоиммунный артрит. В некоторых вариантах осуществления у пациента имеется артрит или поражение хряща. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума отсутствует артроз или поражение хряща, но имеется риск их развития.
В некоторых вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 вводят в соответствии со схемой дозирования, описываемой в данном документе. Схемы дозирования корректируют для обеспечения оптимального требуемого ответа (например, терапевтического ответа). Эффективные дозы и схемы дозирования полипептида ANGPTL3, применяемого в настоящем изобретении, зависят от заболевания или состояния, подлежащих лечению.
В некоторых вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 вводят в сустав субъекта (например, субъекта-человека) в виде однократной инъекции. В некоторых вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 вводят в сустав субъекта (например, субъекта-человека) в виде многократных инъекций. В некоторых вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 вводят раз в две недели в течение периода времени, достаточного для лечения артрита или повреждения хряща. В некоторых вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 вводят раз в месяц в течение периода времени, достаточного для лечения артрита или повреждения хряща. В некоторых вариантах осуществления полипептид ANGPTL3 вводят раз в неделю в течение периода времени, достаточного для лечения артрита или повреждения хряща.
Соответственно, в данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) у субъекта (например, субъекта-человека) путем введения в сустав субъекта внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-200 мг описываемого в данном документе протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью. Например, полипептид ANGPTL3 можно вводить внутрисуставно в дозе, составляющей приблизительно 0,2-200 мг, приблизительно 0,2-150 мг, приблизительно 0,2-120 мг, приблизительно 0,2-100 мг, приблизительно 0,2-90 мг, приблизительно 0,2-80 мг, приблизительно 0,2-70 мг, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-200 мг, приблизительно 2-150 мг, приблизительно 2-120 мг, приблизительно 2-100 мг, приблизительно 2-90 мг, приблизительно 2-80 мг, приблизительно 2-70 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 10-200 мг, приблизительно 10-150 мг, приблизительно 10-120 мг, приблизительно 10-100 мг, приблизительно 10-90 мг, приблизительно 10-80 мг, приблизительно 10-70 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 20-200 мг, приблизительно 20-150 мг, приблизительно 20-120 мг, приблизительно 20-100 мг, приблизительно 20-90 мг, приблизительно 20-80 мг, приблизительно 20-70 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 40-200 мг, приблизительно 40-150 мг, приблизительно 40-120 мг, приблизительно 40-100 мг, приблизительно 40-90 мг, приблизительно 40-80 мг, приблизительно 40-70 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 50-200 мг, приблизительно 50-150 мг, приблизительно 50-120 мг, приблизительно 50-100 мг, приблизительно 50-90 мг, приблизительно 50-80 мг, приблизительно 50-70 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 60-200 мг, приблизительно 60-150 мг, приблизительно 60-120 мг, приблизительно 60-100 мг, приблизительно 60-90 мг, приблизительно 60-80 мг, приблизительно 60-70 мг, приблизительно 70-200 мг, приблизительно 70-150 мг, приблизительно 70-120 мг, приблизительно 70-100 мг, приблизительно 70-90 мг, приблизительно 70-80 мг, приблизительно 80-200 мг, приблизительно 80-150 мг, приблизительно 80-120 мг, приблизительно 80-100 мг, приблизительно 80-90 мг, приблизительно 90-200 мг, приблизительно 90-150 мг, приблизительно 90-120 мг, приблизительно 90-100 мг, приблизительно 100-200 мг, приблизительно 100-150 мг, приблизительно 100-120 мг, приблизительно 120-200 мг, приблизительно 120-150 мг или приблизительно 150-200 мг.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) у субъекта (например, субъекта-человека) путем введения в сустав субъекта внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-60 мг описываемого в данном документе протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью. Например, полипептид ANGPTL3 можно вводить внутрисуставно в дозе, составляющей приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-55 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-45 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-55 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-45 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-60 мг, приблизительно 5-55 мг, приблизительно 5-50 мг, приблизительно 5-45 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-55 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-45 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-60 мг, приблизительно 15-55 мг, приблизительно 15-50 мг, приблизительно 15-45 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-55 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-45 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-60 мг, приблизительно 30-55 мг, приблизительно 30-50 мг, приблизительно 30-45 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-60 мг, приблизительно 35-55 мг, приблизительно 35-50 мг, приблизительно 35-45 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-55 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 40-45 мг, приблизительно 45-60 мг, приблизительно 45-55 мг, приблизительно 45-50 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 50-55 мг, приблизительно 55-60 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 41 мг, приблизительно 42 мг, приблизительно 43 мг, приблизительно 44 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 46 мг, приблизительно 47 мг, приблизительно 48 мг, приблизительно 49 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 51 мг, приблизительно 52 мг, приблизительно 53 мг, приблизительно 54 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 56 мг, приблизительно 57 мг, приблизительно 58 мг, приблизительно 59 мг или приблизительно 60 мг.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) у субъекта (например, субъекта-человека) путем введения в сустав субъекта внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-40 мг описываемого в данном документе протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью. Например, полипептид ANGPTL3 можно вводить внутрисуставно в дозе, составляющей приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг или приблизительно 40 мг.
В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 0,2-100 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 0,2-60 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 0,2-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 2-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 10-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 20-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 40-60 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 0,2 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 2 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 10 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 20 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 составляет приблизительно 60 мг.
[0044] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, перечисленной в таблице 1, где полипептид содержит аминокислоту, которая представляет собой полярную аминокислоту, отличную от K или R, в положении 423, как определено со ссылкой на SEQ ID NO:1, и полипептид характеризуется хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, перечисленной в таблице 1, где аминокислотный остаток, соответствующий положению 423 из SEQ ID NO: 1, представляет собой Q или S или подвергнут делеции.
[0045] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей, перечисленных в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из любой из последовательностей, перечисленных в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит SEQ ID NO: 17. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 состоит из SEQ ID NO: 17.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) у субъекта (например, субъекта-человека) путем введения в сустав субъекта внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-200 мг полипептида, содержащего SEQ ID NO: 17. Например, полипептид, содержащий SEQ ID NO: 17, можно вводить внутрисуставно в дозе, составляющей приблизительно 0,2-200 мг, приблизительно 0,2-150 мг, приблизительно 0,2-120 мг, приблизительно 0,2-100 мг, приблизительно 0,2-90 мг, приблизительно 0,2-80 мг, приблизительно 0,2-70 мг, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-200 мг, приблизительно 2-150 мг, приблизительно 2-120 мг, приблизительно 2-100 мг, приблизительно 2-90 мг, приблизительно 2-80 мг, приблизительно 2-70 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 10-200 мг, приблизительно 10-150 мг, приблизительно 10-120 мг, приблизительно 10-100 мг, приблизительно 10-90 мг, приблизительно 10-80 мг, приблизительно 10-70 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 20-200 мг, приблизительно 20-150 мг, приблизительно 20-120 мг, приблизительно 20-100 мг, приблизительно 20-90 мг, приблизительно 20-80 мг, приблизительно 20-70 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 40-200 мг, приблизительно 40-150 мг, приблизительно 40-120 мг, приблизительно 40-100 мг, приблизительно 40-90 мг, приблизительно 40-80 мг, приблизительно 40-70 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 50-200 мг, приблизительно 50-150 мг, приблизительно 50-120 мг, приблизительно 50-100 мг, приблизительно 50-90 мг, приблизительно 50-80 мг, приблизительно 50-70 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 60-200 мг, приблизительно 60-150 мг, приблизительно 60-120 мг, приблизительно 60-100 мг, приблизительно 60-90 мг, приблизительно 60-80 мг, приблизительно 60-70 мг, приблизительно 70-200 мг, приблизительно 70-150 мг, приблизительно 70-120 мг, приблизительно 70-100 мг, приблизительно 70-90 мг, приблизительно 70-80 мг, приблизительно 80-200 мг, приблизительно 80-150 мг, приблизительно 80-120 мг, приблизительно 80-100 мг, приблизительно 80-90 мг, приблизительно 90-200 мг, приблизительно 90-150 мг, приблизительно 90-120 мг, приблизительно 90-100 мг, приблизительно 100-200 мг, приблизительно 100-150 мг, приблизительно 100-120 мг, приблизительно 120-200 мг, приблизительно 120-150 мг или приблизительно 150-200 мг.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) у субъекта (например, субъекта-человека) путем введения в сустав субъекта внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-60 мг полипептида, содержащего SEQ ID NO: 17. Например, полипептид, содержащий SEQ ID NO: 17, можно вводить внутрисуставно в дозе, составляющей приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-55 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-45 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-55 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-45 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-60 мг, приблизительно 5-55 мг, приблизительно 5-50 мг, приблизительно 5-45 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-55 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-45 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-60 мг, приблизительно 15-55 мг, приблизительно 15-50 мг, приблизительно 15-45 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-55 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-45 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-60 мг, приблизительно 30-55 мг, приблизительно 30-50 мг, приблизительно 30-45 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-60 мг, приблизительно 35-55 мг, приблизительно 35-50 мг, приблизительно 35-45 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-55 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 40-45 мг, приблизительно 45-60 мг, приблизительно 45-55 мг, приблизительно 45-50 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 50-55 мг, приблизительно 55-60 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 41 мг, приблизительно 42 мг, приблизительно 43 мг, приблизительно 44 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 46 мг, приблизительно 47 мг, приблизительно 48 мг, приблизительно 49 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 51 мг, приблизительно 52 мг, приблизительно 53 мг, приблизительно 54 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 56 мг, приблизительно 57 мг, приблизительно 58 мг, приблизительно 59 мг или приблизительно 60 мг.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) у субъекта (например, субъекта-человека) путем введения в сустав субъекта внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-40 мг полипептида, содержащего SEQ ID NO: 17. Например, полипептид, содержащий SEQ ID NO: 17, можно вводить внутрисуставно в дозе, составляющей приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг или приблизительно 40 мг.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) у субъекта (например, субъекта-человека) путем введения в сустав субъекта внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-200 мг полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 17. Например, полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 17, можно вводить внутрисуставно в дозе, составляющей приблизительно 0,2-200 мг, приблизительно 0,2-150 мг, приблизительно 0,2-120 мг, приблизительно 0,2-100 мг, приблизительно 0,2-90 мг, приблизительно 0,2-80 мг, приблизительно 0,2-70 мг, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-200 мг, приблизительно 2-150 мг, приблизительно 2-120 мг, приблизительно 2-100 мг, приблизительно 2-90 мг, приблизительно 2-80 мг, приблизительно 2-70 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 10-200 мг, приблизительно 10-150 мг, приблизительно 10-120 мг, приблизительно 10-100 мг, приблизительно 10-90 мг, приблизительно 10-80 мг, приблизительно 10-70 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 20-200 мг, приблизительно 20-150 мг, приблизительно 20-120 мг, приблизительно 20-100 мг, приблизительно 20-90 мг, приблизительно 20-80 мг, приблизительно 20-70 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 40-200 мг, приблизительно 40-150 мг, приблизительно 40-120 мг, приблизительно 40-100 мг, приблизительно 40-90 мг, приблизительно 40-80 мг, приблизительно 40-70 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 50-200 мг, приблизительно 50-150 мг, приблизительно 50-120 мг, приблизительно 50-100 мг, приблизительно 50-90 мг, приблизительно 50-80 мг, приблизительно 50-70 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 60-200 мг, приблизительно 60-150 мг, приблизительно 60-120 мг, приблизительно 60-100 мг, приблизительно 60-90 мг, приблизительно 60-80 мг, приблизительно 60-70 мг, приблизительно 70-200 мг, приблизительно 70-150 мг, приблизительно 70-120 мг, приблизительно 70-100 мг, приблизительно 70-90 мг, приблизительно 70-80 мг, приблизительно 80-200 мг, приблизительно 80-150 мг, приблизительно 80-120 мг, приблизительно 80-100 мг, приблизительно 80-90 мг, приблизительно 90-200 мг, приблизительно 90-150 мг, приблизительно 90-120 мг, приблизительно 90-100 мг, приблизительно 100-200 мг, приблизительно 100-150 мг, приблизительно 100-120 мг, приблизительно 120-200 мг, приблизительно 120-150 мг или приблизительно 150-200 мг.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) у субъекта (например, субъекта-человека) путем введения в сустав субъекта внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-60 мг полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 17. Например, полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 17, можно вводить внутрисуставно в дозе, составляющей приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-55 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-45 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-55 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-45 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-60 мг, приблизительно 5-55 мг, приблизительно 5-50 мг, приблизительно 5-45 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-55 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-45 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-60 мг, приблизительно 15-55 мг, приблизительно 15-50 мг, приблизительно 15-45 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-55 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-45 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-60 мг, приблизительно 30-55 мг, приблизительно 30-50 мг, приблизительно 30-45 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-60 мг, приблизительно 35-55 мг, приблизительно 35-50 мг, приблизительно 35-45 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-55 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 40-45 мг, приблизительно 45-60 мг, приблизительно 45-55 мг, приблизительно 45-50 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 50-55 мг, приблизительно 55-60 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 41 мг, приблизительно 42 мг, приблизительно 43 мг, приблизительно 44 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 46 мг, приблизительно 47 мг, приблизительно 48 мг, приблизительно 49 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 51 мг, приблизительно 52 мг, приблизительно 53 мг, приблизительно 54 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 56 мг, приблизительно 57 мг, приблизительно 58 мг, приблизительно 59 мг или приблизительно 60 мг.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены способы лечения артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) у субъекта (например, субъекта-человека) путем введения в сустав субъекта внутрисуставной дозы, составляющей приблизительно 0,2-40 мг полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 17. Например, полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 17, можно вводить внутрисуставно в дозе, составляющей приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг или приблизительно 40 мг.
В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 0,2-100 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 0,2-60 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 0,2-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 2-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 10-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 20-40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 40-60 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 0,2 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 2 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 10 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 20 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 40 мг. В некоторых вариантах осуществления внутрисуставная доза полипептида, содержащего или состоящего из SEQ ID NO: 17, составляет приблизительно 60 мг.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно предусматривают осуществление хирургической процедуры на пораженном суставе у субъекта. Полипептид или композицию можно вводить до, во время или после хирургической процедуры.
В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно предусматривают дополнительную процедуру. Например, полипептид или композицию можно вводить в сочетании с любым из стимуляции костного мозга, замены хряща, имплантации аутологичных хондроцитов (ACI) или имплантации индуцированных матриксом аутологичных хондроцитов (MACI). В некоторых вариантах осуществления полипептид или композицию можно вводить в сочетании с ACI.
[0046] Также предусмотрены композиции, содержащие описываемый в данном документе протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 с хондрогенной активностью, для применения в лечении артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща). Например, такие композиции могут содержать полипептид ANGPTL3, содержащий аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, перечисленной в таблице 1, где полипептид содержит аминокислоту, которая представляет собой полярную аминокислоту, отличную от K или R, в положении 423, как определено со ссылкой на SEQ ID NO:1, и полипептид характеризуется хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления такие композиции содержат полипептид ANGPTL3, содержащий аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, перечисленной в таблице 1, где аминокислотный остаток, соответствующий положению 423 из SEQ ID NO: 1, представляет собой Q или S или подвергнут делеции. В некоторых вариантах осуществления такие композиции содержат полипептид ANGPTL3, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей, перечисленных в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления такие композиции содержат полипептид ANGPTL3, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из любой из последовательностей, перечисленных в таблице 1.
[0047] Такие композиции могут содержать приблизительно 0,2-200 мг (например, 0,2-200 мг, приблизительно 0,2-150 мг, приблизительно 0,2-120 мг, приблизительно 0,2-100 мг, приблизительно 0,2-90 мг, приблизительно 0,2-80 мг, приблизительно 0,2-70 мг, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-200 мг, приблизительно 2-150 мг, приблизительно 2-120 мг, приблизительно 2-100 мг, приблизительно 2-90 мг, приблизительно 2-80 мг, приблизительно 2-70 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 10-200 мг, приблизительно 10-150 мг, приблизительно 10-120 мг, приблизительно 10-100 мг, приблизительно 10-90 мг, приблизительно 10-80 мг, приблизительно 10-70 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 20-200 мг, приблизительно 20-150 мг, приблизительно 20-120 мг, приблизительно 20-100 мг, приблизительно 20-90 мг, приблизительно 20-80 мг, приблизительно 20-70 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 40-200 мг, приблизительно 40-150 мг, приблизительно 40-120 мг, приблизительно 40-100 мг, приблизительно 40-90 мг, приблизительно 40-80 мг, приблизительно 40-70 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 50-200 мг, приблизительно 50-150 мг, приблизительно 50-120 мг, приблизительно 50-100 мг, приблизительно 50-90 мг, приблизительно 50-80 мг, приблизительно 50-70 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 60-200 мг, приблизительно 60-150 мг, приблизительно 60-120 мг, приблизительно 60-100 мг, приблизительно 60-90 мг, приблизительно 60-80 мг, приблизительно 60-70 мг, приблизительно 70-200 мг, приблизительно 70-150 мг, приблизительно 70-120 мг, приблизительно 70-100 мг, приблизительно 70-90 мг, приблизительно 70-80 мг, приблизительно 80-200 мг, приблизительно 80-150 мг, приблизительно 80-120 мг, приблизительно 80-100 мг, приблизительно 80-90 мг, приблизительно 90-200 мг, приблизительно 90-150 мг, приблизительно 90-120 мг, приблизительно 90-100 мг, приблизительно 100-200 мг, приблизительно 100-150 мг, приблизительно 100-120 мг, приблизительно 120-200 мг, приблизительно 120-150 мг, приблизительно 150-200 мг) описываемого в данном документе протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью.
[0048] В некоторых вариантах осуществления такие композиции содержат приблизительно 0,2-60 мг (например, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-55 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-45 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-55 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-45 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-60 мг, приблизительно 5-55 мг, приблизительно 5-50 мг, приблизительно 5-45 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-55 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-45 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-60 мг, приблизительно 15-55 мг, приблизительно 15-50 мг, приблизительно 15-45 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-55 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-45 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-60 мг, приблизительно 30-55 мг, приблизительно 30-50 мг, приблизительно 30-45 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-60 мг, приблизительно 35-55 мг, приблизительно 35-50 мг, приблизительно 35-45 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-55 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 40-45 мг, приблизительно 45-60 мг, приблизительно 45-55 мг, приблизительно 45-50 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 50-55 мг, приблизительно 55-60 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 41 мг, приблизительно 42 мг, приблизительно 43 мг, приблизительно 44 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 46 мг, приблизительно 47 мг, приблизительно 48 мг, приблизительно 49 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 51 мг, приблизительно 52 мг, приблизительно 53 мг, приблизительно 54 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 56 мг, приблизительно 57 мг, приблизительно 58 мг, приблизительно 59 мг, приблизительно 60 мг) описываемого в данном документе протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью.
[0049] В некоторых вариантах осуществления такие композиции содержат приблизительно 0,2-40 мг (например, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг) описываемого в данном документе протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью.
[0050] В некоторых вариантах осуществления предусмотрены композиции, содержащие полипептид, содержащий SEQ ID NO: 17, для применения в лечении артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща). В некоторых вариантах осуществления предусмотрены композиции, содержащие полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 17, для применения в лечении артрита или повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща).
[0051] Такие композиции могут содержать приблизительно 0,2-200 мг (например, 0,2-200 мг, приблизительно 0,2-150 мг, приблизительно 0,2-120 мг, приблизительно 0,2-100 мг, приблизительно 0,2-90 мг, приблизительно 0,2-80 мг, приблизительно 0,2-70 мг, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-200 мг, приблизительно 2-150 мг, приблизительно 2-120 мг, приблизительно 2-100 мг, приблизительно 2-90 мг, приблизительно 2-80 мг, приблизительно 2-70 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 10-200 мг, приблизительно 10-150 мг, приблизительно 10-120 мг, приблизительно 10-100 мг, приблизительно 10-90 мг, приблизительно 10-80 мг, приблизительно 10-70 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 20-200 мг, приблизительно 20-150 мг, приблизительно 20-120 мг, приблизительно 20-100 мг, приблизительно 20-90 мг, приблизительно 20-80 мг, приблизительно 20-70 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 40-200 мг, приблизительно 40-150 мг, приблизительно 40-120 мг, приблизительно 40-100 мг, приблизительно 40-90 мг, приблизительно 40-80 мг, приблизительно 40-70 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 50-200 мг, приблизительно 50-150 мг, приблизительно 50-120 мг, приблизительно 50-100 мг, приблизительно 50-90 мг, приблизительно 50-80 мг, приблизительно 50-70 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 60-200 мг, приблизительно 60-150 мг, приблизительно 60-120 мг, приблизительно 60-100 мг, приблизительно 60-90 мг, приблизительно 60-80 мг, приблизительно 60-70 мг, приблизительно 70-200 мг, приблизительно 70-150 мг, приблизительно 70-120 мг, приблизительно 70-100 мг, приблизительно 70-90 мг, приблизительно 70-80 мг, приблизительно 80-200 мг, приблизительно 80-150 мг, приблизительно 80-120 мг, приблизительно 80-100 мг, приблизительно 80-90 мг, приблизительно 90-200 мг, приблизительно 90-150 мг, приблизительно 90-120 мг, приблизительно 90-100 мг, приблизительно 100-200 мг, приблизительно 100-150 мг, приблизительно 100-120 мг, приблизительно 120-200 мг, приблизительно 120-150 мг, приблизительно 150-200 мг) полипептида, содержащего SEQ ID NO: 17.
[0052] В некоторых вариантах осуществления такие композиции содержат приблизительно 0,2-60 мг (например, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-55 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-45 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-55 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-45 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-60 мг, приблизительно 5-55 мг, приблизительно 5-50 мг, приблизительно 5-45 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-55 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-45 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-60 мг, приблизительно 15-55 мг, приблизительно 15-50 мг, приблизительно 15-45 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-55 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-45 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-60 мг, приблизительно 30-55 мг, приблизительно 30-50 мг, приблизительно 30-45 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-60 мг, приблизительно 35-55 мг, приблизительно 35-50 мг, приблизительно 35-45 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-55 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 40-45 мг, приблизительно 45-60 мг, приблизительно 45-55 мг, приблизительно 45-50 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 50-55 мг, приблизительно 55-60 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 41 мг, приблизительно 42 мг, приблизительно 43 мг, приблизительно 44 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 46 мг, приблизительно 47 мг, приблизительно 48 мг, приблизительно 49 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 51 мг, приблизительно 52 мг, приблизительно 53 мг, приблизительно 54 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 56 мг, приблизительно 57 мг, приблизительно 58 мг, приблизительно 59 мг, приблизительно 60 мг) полипептида, содержащего SEQ ID NO: 17.
В некоторых вариантах осуществления такие композиции содержат приблизительно 0,2-40 мг (например, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг) полипептида, содержащего SEQ ID NO: 17.
[0053] Такие композиции могут содержать приблизительно 0,2-200 мг (например, 0,2-200 мг, приблизительно 0,2-150 мг, приблизительно 0,2-120 мг, приблизительно 0,2-100 мг, приблизительно 0,2-90 мг, приблизительно 0,2-80 мг, приблизительно 0,2-70 мг, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-200 мг, приблизительно 2-150 мг, приблизительно 2-120 мг, приблизительно 2-100 мг, приблизительно 2-90 мг, приблизительно 2-80 мг, приблизительно 2-70 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 10-200 мг, приблизительно 10-150 мг, приблизительно 10-120 мг, приблизительно 10-100 мг, приблизительно 10-90 мг, приблизительно 10-80 мг, приблизительно 10-70 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 20-200 мг, приблизительно 20-150 мг, приблизительно 20-120 мг, приблизительно 20-100 мг, приблизительно 20-90 мг, приблизительно 20-80 мг, приблизительно 20-70 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 40-200 мг, приблизительно 40-150 мг, приблизительно 40-120 мг, приблизительно 40-100 мг, приблизительно 40-90 мг, приблизительно 40-80 мг, приблизительно 40-70 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 50-200 мг, приблизительно 50-150 мг, приблизительно 50-120 мг, приблизительно 50-100 мг, приблизительно 50-90 мг, приблизительно 50-80 мг, приблизительно 50-70 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 60-200 мг, приблизительно 60-150 мг, приблизительно 60-120 мг, приблизительно 60-100 мг, приблизительно 60-90 мг, приблизительно 60-80 мг, приблизительно 60-70 мг, приблизительно 70-200 мг, приблизительно 70-150 мг, приблизительно 70-120 мг, приблизительно 70-100 мг, приблизительно 70-90 мг, приблизительно 70-80 мг, приблизительно 80-200 мг, приблизительно 80-150 мг, приблизительно 80-120 мг, приблизительно 80-100 мг, приблизительно 80-90 мг, приблизительно 90-200 мг, приблизительно 90-150 мг, приблизительно 90-120 мг, приблизительно 90-100 мг, приблизительно 100-200 мг, приблизительно 100-150 мг, приблизительно 100-120 мг, приблизительно 120-200 мг, приблизительно 120-150 мг, приблизительно 150-200 мг) полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 17.
[0054] В некоторых вариантах осуществления такие композиции содержат приблизительно 0,2-60 мг (например, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-55 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-45 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-55 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-45 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-60 мг, приблизительно 5-55 мг, приблизительно 5-50 мг, приблизительно 5-45 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-55 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-45 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-60 мг, приблизительно 15-55 мг, приблизительно 15-50 мг, приблизительно 15-45 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-55 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-45 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-60 мг, приблизительно 30-55 мг, приблизительно 30-50 мг, приблизительно 30-45 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-60 мг, приблизительно 35-55 мг, приблизительно 35-50 мг, приблизительно 35-45 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-55 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 40-45 мг, приблизительно 45-60 мг, приблизительно 45-55 мг, приблизительно 45-50 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 50-55 мг, приблизительно 55-60 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 41 мг, приблизительно 42 мг, приблизительно 43 мг, приблизительно 44 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 46 мг, приблизительно 47 мг, приблизительно 48 мг, приблизительно 49 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 51 мг, приблизительно 52 мг, приблизительно 53 мг, приблизительно 54 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 56 мг, приблизительно 57 мг, приблизительно 58 мг, приблизительно 59 мг, приблизительно 60 мг) полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 17.
В некоторых вариантах осуществления такие композиции содержат приблизительно 0,2-40 мг (например, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг) полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 17.
Предусмотрено, что полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению можно применять для лечения любого типа повреждения суставного хряща (например, повреждения или поражения сустава), включая, например, повреждение, являющееся следствием травматического события или разрыва сухожилия или связки. В некоторых вариантах осуществления полипептиды, композиции и способы применяют для лечения повреждения сустава (например, повреждения суставного хряща). В конкретных вариантах осуществления повреждение сустава представляет собой травматическое поражение сустава (например, травматическое повреждение хряща). В других вариантах осуществления повреждение сустава или повреждение суставного хряща представляет собой повреждение, являющееся следствием возраста, или неактивности, или генетических факторов. В других вариантах осуществления повреждение сустава или повреждение суставного хряща представляет собой повреждение, являющееся следствием аутоиммунного нарушения. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению можно применять для лечения остеоартрита.
В некоторых вариантах осуществления полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению предусматривают способ стимуляции пролиферации хондроцитов и/или выработки хряща в хрящевых тканях, которые были повреждены, например, вследствие травматического поражения или хондропатии. В конкретных вариантах осуществления полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению применимы для лечения повреждения хряща в суставах (например, повреждения суставного хряща), например, на суставных поверхностях, например, позвоночнике, плече, локте, запястье, суставах пальцев, бедре, колене, лодыжке и суставах ступни. Примеры заболеваний или нарушений, полезный эффект в отношении которых может обеспечить лечение, включают остеоартрит, ревматоидный артрит, другие аутоиммунные заболевания или рассекающий остеохондрит. Кроме того, повреждение или разрушение хряща встречается как результат определенных генетических или метаболических нарушений, патология хряща зачастую наблюдается у человека при различных формах карликовости, и/или повреждение или разрушение хряща зачастую является результатом реконструктивной хирургии, поэтому полипептиды, композиции и способы будут применимой терапией для таких пациентов, независимо от того, используются ли они отдельно или в сочетании с другими подходами.
Дополнительно предусмотрено, что полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению можно применять для лечения различных нарушений хрящевой ткани и/или ассоциированных с ними симптомов или эффектов таких состояний. Иллюстративные состояния или нарушения, для лечения которых применяют описываемые в данном документе полипептиды, композиции и способы, включают без ограничения ревматоидный артрит, ювенильный хронический артрит, остеоартрит, дегенеративное заболевание межпозвонковых дисков, виды спондилоартропатии, синдром Элерса-Данлоса, системный склероз (склеродермию) или заболевание сухожилий.
В некоторых вариантах осуществления полипептиды и композиции по настоящему изобретению применяются путем прямой инъекции в синовиальную жидкость сустава или непосредственно в дефект хряща. Полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению также можно применять в сочетании с хирургической процедурой на пораженном суставе. Введение полипептида по настоящему изобретению можно осуществлять до, во время или в сочетании с и/или после хирургической процедуры. Например, полипептиды, композиции и способы по настоящему изобретению можно применять для размножения популяций хондроцитов в культуре для аутологичной или аллогенной имплантации хондроцитов. Хондроциты необязательно можно имплантировать с одновременным проведением лечения, заключающегося во введении полипептидов и композиций по настоящему изобретению. При проведении таких процедур, например, хондроциты можно собрать артроскопическим методом из непораженной, подвергающейся незначительной нагрузке зоны поврежденного сустава и можно культивировать in vitro необязательно в присутствии полипептидов и композиций по настоящему изобретению и/или других факторов роста для увеличения количества клеток перед трансплантацией. Затем размноженные культуры необязательно смешивают с полипептидами и композициями по настоящему изобретению и/или помещают в суставную щель или непосредственно в область дефекта. В определенных вариантах осуществления размноженные культуры (необязательно с полипептидами по настоящему изобретению) помещают в суставную щель суспендированными в матриксе или мембране. В других вариантах осуществления полипептиды и композиции по настоящему изобретению можно применять в комбинации с одним или несколькими периостальными или перихондриальными трансплантатами, которые содержат образующие хрящ клетки и/или помогают удерживать трансплантированные хондроциты или клетки-предшественники хондроцитов на своем месте. В некоторых вариантах осуществления полипептиды и композиции по настоящему изобретению применяют для восстановления повреждения хряща (например, повреждения суставного хряща) в сочетании с другими процедурами, включая без ограничения промывание полости сустава, стимуляцию костного мозга, абразивную артропластику, рассверливание субхондральной кости или создание микротрещин в проксимальной части субхондральной кости. Необязательно, после введения полипептидов и композиций по настоящему изобретению и роста хряща благоприятный эффект может обеспечить дополнительное хирургическое лечение для надлежащего оконтуривания новообразованной(-ых) поверхности(-ей) хряща.
Фармацевтическая композиция
[0055] В данном документе также предусмотрены, например, фармацевтические композиции, содержащие один или несколько описываемых в данном документе протеазоустойчивых полипептидов ANGPTL3 с хондрогенной активностью. Такие композиции могут содержать один или несколько наполнителей или носителей, например, фармацевтически приемлемый наполнитель или носитель.
[0056] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, которые содержат терапевтически эффективное количество белка или пептида в смеси, составлены с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями или носителем, выбранными за соответствие требованиям способа введения, формы доставки и требуемой дозировки.
[0057] В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, содержащие протеазоустойчивые полипептиды ANGPTL3 с хондрогенной активностью, подходят для внутрисуставного введения.
Фармацевтические композиции могут находиться в различных формах. Они предусматривают, например, жидкие, полутвердые или твердые формы. Форма зависит от предполагаемого способа введения и терапевтического применения. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция представляет собой жидкий раствор, например, инъекционный раствор. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция представляет собой порошок, например, лиофилизат. Для хранения лиофилизированных фармацевтических композиций, как правило, не требуются особые условия, такие как хранение при низких температурах. Лиофилизация применима для разработки фармацевтических лекарственных продуктов, которые восстанавливают и вводят пациенту путем инъекции. Например, лиофилизированный лекарственный продукт можно восстановить непосредственно перед инъекцией путем добавления подходящего разбавителя для введения (например, стерильной воды).
[0058] В данном документе предусмотрены композиции, например фармацевтические композиции, содержащие приблизительно 0,2-200 мг описываемого в данном документе протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью. Например, такие композиции могут содержать приблизительно 0,2-200 мг, приблизительно 0,2-150 мг, приблизительно 0,2-120 мг, приблизительно 0,2-100 мг, приблизительно 0,2-90 мг, приблизительно 0,2-80 мг, приблизительно 0,2-70 мг, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-200 мг, приблизительно 2-150 мг, приблизительно 2-120 мг, приблизительно 2-100 мг, приблизительно 2-90 мг, приблизительно 2-80 мг, приблизительно 2-70 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 10-200 мг, приблизительно 10-150 мг, приблизительно 10-120 мг, приблизительно 10-100 мг, приблизительно 10-90 мг, приблизительно 10-80 мг, приблизительно 10-70 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 20-200 мг, приблизительно 20-150 мг, приблизительно 20-120 мг, приблизительно 20-100 мг, приблизительно 20-90 мг, приблизительно 20-80 мг, приблизительно 20-70 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 40-200 мг, приблизительно 40-150 мг, приблизительно 40-120 мг, приблизительно 40-100 мг, приблизительно 40-90 мг, приблизительно 40-80 мг, приблизительно 40-70 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 50-200 мг, приблизительно 50-150 мг, приблизительно 50-120 мг, приблизительно 50-100 мг, приблизительно 50-90 мг, приблизительно 50-80 мг, приблизительно 50-70 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 60-200 мг, приблизительно 60-150 мг, приблизительно 60-120 мг, приблизительно 60-100 мг, приблизительно 60-90 мг, приблизительно 60-80 мг, приблизительно 60-70 мг, приблизительно 70-200 мг, приблизительно 70-150 мг, приблизительно 70-120 мг, приблизительно 70-100 мг, приблизительно 70-90 мг, приблизительно 70-80 мг, приблизительно 80-200 мг, приблизительно 80-150 мг, приблизительно 80-120 мг, приблизительно 80-100 мг, приблизительно 80-90 мг, приблизительно 90-200 мг, приблизительно 90-150 мг, приблизительно 90-120 мг, приблизительно 90-100 мг, приблизительно 100-200 мг, приблизительно 100-150 мг, приблизительно 100-120 мг, приблизительно 120-200 мг, приблизительно 120-150 мг, приблизительно 150-200 мг протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью.
[0059] В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены композиции, например фармацевтические композиции, содержащие приблизительно 0,2-60 мг (например, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-55 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-45 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-55 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-45 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-60 мг, приблизительно 5-55 мг, приблизительно 5-50 мг, приблизительно 5-45 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-55 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-45 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-60 мг, приблизительно 15-55 мг, приблизительно 15-50 мг, приблизительно 15-45 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-55 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-45 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-60 мг, приблизительно 30-55 мг, приблизительно 30-50 мг, приблизительно 30-45 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-60 мг, приблизительно 35-55 мг, приблизительно 35-50 мг, приблизительно 35-45 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-55 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 40-45 мг, приблизительно 45-60 мг, приблизительно 45-55 мг, приблизительно 45-50 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 50-55 мг, приблизительно 55-60 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 41 мг, приблизительно 42 мг, приблизительно 43 мг, приблизительно 44 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 46 мг, приблизительно 47 мг, приблизительно 48 мг, приблизительно 49 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 51 мг, приблизительно 52 мг, приблизительно 53 мг, приблизительно 54 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 56 мг, приблизительно 57 мг, приблизительно 58 мг, приблизительно 59 мг, приблизительно 60 мг) описываемого в данном документе протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью.
[0060] В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены композиции, например фармацевтические композиции, содержащие приблизительно 0,2-40 мг (например, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг) описываемого в данном документе протеазоустойчивого полипептида ANGPTL3 с хондрогенной активностью.
[0061] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, перечисленной в таблице 1, где полипептид содержит аминокислоту, которая представляет собой полярную аминокислоту, отличную от K или R, в положении 423, как определено со ссылкой на SEQ ID NO:1, и полипептид характеризуется хондрогенной активностью. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, которая характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью или по меньшей мере 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с аминокислотной последовательностью, перечисленной в таблице 1, где аминокислотный остаток, соответствующий положению 423 из SEQ ID NO: 1, представляет собой Q или S или подвергнут делеции.
[0062] В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из последовательностей, перечисленных в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из любой из последовательностей, перечисленных в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 содержит SEQ ID NO: 17. В некоторых вариантах осуществления протеазоустойчивый полипептид ANGPTL3 состоит из SEQ ID NO: 17.
[0063] В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены композиции, например фармацевтические композиции, содержащие приблизительно 0,2-60 мг (например, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-55 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-45 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-55 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-45 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-60 мг, приблизительно 5-55 мг, приблизительно 5-50 мг, приблизительно 5-45 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-55 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-45 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-60 мг, приблизительно 15-55 мг, приблизительно 15-50 мг, приблизительно 15-45 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-55 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-45 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-60 мг, приблизительно 30-55 мг, приблизительно 30-50 мг, приблизительно 30-45 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-60 мг, приблизительно 35-55 мг, приблизительно 35-50 мг, приблизительно 35-45 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-55 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 40-45 мг, приблизительно 45-60 мг, приблизительно 45-55 мг, приблизительно 45-50 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 50-55 мг, приблизительно 55-60 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 41 мг, приблизительно 42 мг, приблизительно 43 мг, приблизительно 44 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 46 мг, приблизительно 47 мг, приблизительно 48 мг, приблизительно 49 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 51 мг, приблизительно 52 мг, приблизительно 53 мг, приблизительно 54 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 56 мг, приблизительно 57 мг, приблизительно 58 мг, приблизительно 59 мг, приблизительно 60 мг) полипептида, содержащего SEQ ID NO: 17.
[0064] В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены композиции, например фармацевтические композиции, содержащие приблизительно 0,2-60 мг (например, приблизительно 0,2-60 мг, приблизительно 0,2-55 мг, приблизительно 0,2-50 мг, приблизительно 0,2-45 мг, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-60 мг, приблизительно 2-55 мг, приблизительно 2-50 мг, приблизительно 2-45 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-60 мг, приблизительно 5-55 мг, приблизительно 5-50 мг, приблизительно 5-45 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-60 мг, приблизительно 10-55 мг, приблизительно 10-50 мг, приблизительно 10-45 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-60 мг, приблизительно 15-55 мг, приблизительно 15-50 мг, приблизительно 15-45 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-60 мг, приблизительно 20-55 мг, приблизительно 20-50 мг, приблизительно 20-45 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-60 мг, приблизительно 30-55 мг, приблизительно 30-50 мг, приблизительно 30-45 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-60 мг, приблизительно 35-55 мг, приблизительно 35-50 мг, приблизительно 35-45 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 40-60 мг, приблизительно 40-55 мг, приблизительно 40-50 мг, приблизительно 40-45 мг, приблизительно 45-60 мг, приблизительно 45-55 мг, приблизительно 45-50 мг, приблизительно 50-60 мг, приблизительно 50-55 мг, приблизительно 55-60 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 41 мг, приблизительно 42 мг, приблизительно 43 мг, приблизительно 44 мг, приблизительно 45 мг, приблизительно 46 мг, приблизительно 47 мг, приблизительно 48 мг, приблизительно 49 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 51 мг, приблизительно 52 мг, приблизительно 53 мг, приблизительно 54 мг, приблизительно 55 мг, приблизительно 56 мг, приблизительно 57 мг, приблизительно 58 мг, приблизительно 59 мг, приблизительно 60 мг) полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 17.
[0065] В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены композиции, например фармацевтические композиции, содержащие приблизительно 0,2-40 мг (например, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг) полипептида, содержащего SEQ ID NO: 17.
[0066] В некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены композиции, например фармацевтические композиции, содержащие приблизительно 0,2-40 мг (например, приблизительно 0,2-40 мг, приблизительно 0,2-35 мг, приблизительно 0,2-30 мг, приблизительно 0,2-25 мг, приблизительно 0,2-20 мг, приблизительно 0,2-15 мг, приблизительно 0,2-10 мг, приблизительно 0,2-5 мг, приблизительно 0,2-2 мг, приблизительно 2-40 мг, приблизительно 2-35 мг, приблизительно 2-30 мг, приблизительно 2-25 мг, приблизительно 2-20 мг, приблизительно 2-15 мг, приблизительно 2-10 мг, приблизительно 2-5 мг, приблизительно 5-40 мг, приблизительно 5-35 мг, приблизительно 5-30 мг, приблизительно 5-25 мг, приблизительно 5-20 мг, приблизительно 5-15 мг, приблизительно 5-10 мг, приблизительно 10-40 мг, приблизительно 10-35 мг, приблизительно 10-30 мг, приблизительно 10-25 мг, приблизительно 10-20 мг, приблизительно 10-15 мг, приблизительно 15-40 мг, приблизительно 15-35 мг, приблизительно 15-30 мг, приблизительно 15-25 мг, приблизительно 15-20 мг, приблизительно 20-40 мг, приблизительно 20-35 мг, приблизительно 20-30 мг, приблизительно 20-25 мг, приблизительно 25-60 мг, приблизительно 25-55 мг, приблизительно 25-50 мг, приблизительно 25-45 мг, приблизительно 25-40 мг, приблизительно 25-35 мг, приблизительно 25-30 мг, приблизительно 30-40 мг, приблизительно 30-35 мг, приблизительно 35-40 мг, приблизительно 0,2 мг, приблизительно 0,5 мг, приблизительно 1 мг, приблизительно 2 мг, приблизительно 3 мг, приблизительно 4 мг, приблизительно 5 мг, приблизительно 6 мг, приблизительно 7 мг, приблизительно 8 мг, приблизительно 9 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 11 мг, приблизительно 12 мг, приблизительно 13 мг, приблизительно 14 мг, приблизительно 15 мг, приблизительно 16 мг, приблизительно 17 мг, приблизительно 18 мг, приблизительно 19 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 21 мг, приблизительно 22 мг, приблизительно 23 мг, приблизительно 24 мг, приблизительно 25 мг, приблизительно 26 мг, приблизительно 27 мг, приблизительно 28 мг, приблизительно 29 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 31 мг, приблизительно 32 мг, приблизительно 33 мг, приблизительно 34 мг, приблизительно 35 мг, приблизительно 36 мг, приблизительно 37 мг, приблизительно 38 мг, приблизительно 39 мг, приблизительно 40 мг) полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 17.
[0067] В некоторых вариантах осуществления композиции дополнительно содержат углевод. В некоторых вариантах осуществления композиции дополнительно содержат буфер или буферный компонент. В некоторых вариантах осуществления композиции дополнительно содержат поверхностно-активное вещество, например полисорбат 80.
В некоторых вариантах осуществления описываемые в данном документе композиции содержат буфер или буферный компонент. Буферы хорошо известны как средства для контроля pH, применяемые не только в качестве средства для доставки лекарственного средства (например, полипептида) при физиологически совместимом pH (т. е. для улучшения переносимости), но и для обеспечения условий раствора, благоприятных для химической стабильности лекарственного средства (например, полипептида).
Неограничивающие примеры буферов, которые можно применять в описываемых в данном документе композициях, включают гистидиновый буфер, фосфатный буфер, глициновый буфер, ацетатный буфер, цитратный буфер, лактатный буфер, тартратный буфер или буфер на основе соляной кислоты. В некоторых вариантах осуществления описываемые в данном документе композиции включают буфер, выбранный из гистидинового буфера, фосфатного буфера, глицинового буфера или ацетатного буфера или их компонента. Предпочтительным буфером является гистидиновый буфер, а предпочтительным буферным компонентом является гистидин.
рН может иметь определяющее значение для получения оптимизированной композиции на основе белка, например, жидкой композиции на основе белка с повышенной стабильностью. Действие рН может проявляться в том, что оно воздействует на конформацию, и/или агрегацию, и/или разрушение, и/или реакционную способность белка. Предпочтительно рН составляет менее 7,0, более предпочтительно в диапазоне от приблизительно 5,0 до приблизительно 7,0, более предпочтительно от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,1, более предпочтительно приблизительно 5,8. В некоторых вариантах осуществления pH описываемой в данном документе композиции составляет от 5,5 до 6,1, например, приблизительно 5,5, приблизительно 5,6, приблизительно 5,7, приблизительно 5,8, приблизительно 5,9, приблизительно 6,0, приблизительно 6,1. Предпочтительно pH композиции составляет приблизительно 5,8.
В некоторых вариантах осуществления в композицию включен углевод. Углевод может вызывать большую компактизацию белка и, например, приводить к погружению или иному затруднению доступа к активному фрагменту. Это может увеличивать стабильность белка, например, за счет уменьшения агрегации белка.
В некоторых вариантах осуществления описываемые в данном документе композиции содержат углевод. Предпочтительным углеводом является сахароза. Другие предпочтительные углеводы, подходящие для применения, включают трегалозу, мальтозу, рафинозу, глюкозу, сорбит, декстран, циклодекстрин или маннит. Другие подходящие вещества, которые можно применять для стабилизации белка, включают углеводы, такие как лактоза и арабиноза; полиолы, такие как маннит, глицерин и ксилит; аминокислоты, такие как глицин, аргинин, лизин, гистидин, аланин, метионин и лейцин; и полимеры, такие как PEG, полоксомеры, декстран, полипропиленгликоль, полисахариды, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия, поливинилпирролидон (PVP), гидролизованный желатин и человеческий альбумин. В некоторых вариантах осуществления в описываемых в данном документе композициях применяют комбинацию из двух или более таких углеводов (например, сахарозы и трегалозы). Пригодность потенциального углевода для комбинации можно тестировать.
Поверхностно-активное вещество можно добавить в композицию для повышения стабильности белка, например, для уменьшения разрушения белка, например, вследствие образования поверхности контакта воздух/жидкость при встряхивании/транспортировке. Выбирают поверхностно-активное вещество, которое повышает стабильность белка, например, не вызывает разрушения белка в композиции. Подходящим для применения поверхностно-активным веществом, является, например, полисорбат 80.
ПРИМЕРЫ
Настоящее изобретение дополнительно описано в следующих примерах, которые не ограничивают объем настоящего изобретения, описанного в формуле изобретения.
Пример 1. Введение полипептидов ANGPTL3 пациентам-людям с первичным остеоартритом
Рандомизированное плацебо-контролируемое двойное слепое исследование первого применения препарата на человеке с однократной возрастающей дозой полипептида ANGPTL3 с SEQ ID NO: 17 у пациентов с первичным остеоартритом, у которых запланирована полная замена коленного сустава (TKR), продолжается в настоящее время.
На ФИГ. 1 показан дизайн исследования, который был разработан для оценки безопасности и переносимости полипептида ANGPTL3 после одной внутрисуставной (i.a.) инъекции в коленный сустав пациентов с первичным остеоартритом (ОА) перед его удалением при полной замене коленного сустава (TKR). Приблизительно 28 пациентов следует включить в семь когорт. В каждой когорте три пациента получают лечение полипептидом ANGPTL3 и один пациент получает лечение плацебо. Пациентам из когорты 1 вводили внутрисуставную инъекцию полипептида ANGPTL3 в дозе 0,2 мг/колено или плацебо приблизительно за 7 дней до проведения TKR. Пациентам из когорты 2 вводили внутрисуставную инъекцию полипептида ANGPTL3 в дозе 2 мг/колено или плацебо приблизительно за 7 дней до проведения TKR. Пациентам из когорты 3 вводили внутрисуставную инъекцию полипептида ANGPTL3 в дозе 10 мг/колено или плацебо приблизительно за 7 дней до проведения TKR. Пациентам из когорты 4 вводили внутрисуставную инъекцию полипептида ANGPTL3 в дозе 20 мг/колено или плацебо приблизительно за 7 дней до проведения TKR. Дозу и время введения до хирургической операции для когорт 5-7 выбирали на основе результатов анализа когорт 1-4. Пациентам из когорты 5 будут вводить внутрисуставную инъекцию полипептида ANGPTL3 в дозе 20 мг/колено или плацебо приблизительно за 2 часа до проведения TKR. Пациентам из когорты 6 будут вводить внутрисуставную инъекцию полипептида ANGPTL3 в дозе 20 мг/колено или плацебо приблизительно за 21 дня до проведения TKR. Пациентам из когорты 7 будут вводить внутрисуставную инъекцию полипептида ANGPTL3 в дозе 40 мг/колено или плацебо приблизительно за 7 дней до проведения TKR. Информация о популяции и демографических данных пациентов из когорт 1-4 показана в таблице 2 и таблице 3.
Начальная доза, составляющая 0,2 мг/колено, для пациента-человека была выбрана на основе данных о безопасности и эффективности, полученных в исследованиях с введением доз на крысах и собаках, и, ожидается, что она должна приводить к умеренному фармакологическому эффекту.
2
2
Доза, составляющая 20 мг/колено, для пациента-человека была выбрана на основе объема синовиальной жидкости сустава и растворимости полипептида ANGPTL3 с SEQ ID NO: 17 в синовиальной жидкости сустава, а также результатов исследований с введением внутрисуставных доз на собаках. По оценкам, площадь хряща в колене собаки составляет 196 мм; в то же время, по оценкам, площадь хряща в колене человека составляет 1215 мм. Исходя из результатов исследований с введением внутрисуставных доз на собаках доза, составляющая 20 мг/колено, характеризуется приемлемым резервом безопасности.
В ходе промежуточного анализа, охватывающего всех пациентов из когорт 1-4 до визита с проведением хирургической операции TKR, все конечные точки безопасности (включая нежелательные явления CTC-AE, физикальное обследование, показатели жизненно важных функций, ЭКГ, лабораторное исследование безопасности и боль, измеряемую с применением KOOS) измеряли вплоть до 7 дней после введения дозы включительно. Не сообщалось о каких-либо неблагоприятных эффектах, которые предположительно были связаны с лечением.
Подводя итог, в когортах 1-4 не наблюдали никаких значимых данных, связанных с проблемами безопасности. Иммуногенность не наблюдали в случае 16 пациентов, которым вводили полипептид ANGPTL3 с SEQ ID NO: 17.
Поскольку протестированная доза, составляющая 20 мг/колено, в когорте 4 хорошо переносилась всеми подвергнутыми лечению пациентами (N=3) без каких-либо специфических проблем, связанных с безопасностью, в случае когорты 7 запланировали дополнительное повышение дозы до 40 мг/колено. На основе результатов исследований токсичности на собаках и крысах (см. таблицу 4) предполагаемое системное воздействие при дозе 40 мг/колено все еще будет ассоциировано с достаточным резервом безопасности. В дополнение к высокому резерву системной безопасности причина включения дозы, составляющей 40 мг/колено, также основана на (i) результатах доклинических фармакологических исследований, которые обосновывают необходимость изучения безопасности потенциально более эффективной дозы полипептида ANGPTL3 с SEQ ID NO: 17; (ii) благоприятном профиле безопасности полипептида ANGPTL3 с SEQ ID NO: 17 вплоть до дозы, составляющей 20 мг/колено, без каких-либо продемонстрированных на сегодняшний день неблагоприятных эффектов, связанных с лекарственным средством; (iii) локальном резерве безопасности для хряща по результатам исследований на собаках (см. таблицу 5).
Таблица 2. Популяция пациентов
Популяция
0,2 мг/коленоN=3
2 мг/коленоN=3
10 мг/коленоN=3
20 мг/коленоN=4*
Плацебо**N=5*
Рандомизированные
3 (100,0)
3 (100,0)
3 (100,0)
4 (100,0)
5 (100,0)
Группа анализа безопасности
3 (100,0)
3 (100,0)
3 (100,0)
3 (75,0)
4 (80,0)
Группа PK-анализа
3 (100,0)
3 (100,0)
3 (100,0)
3 (75,0)
4 (80,0)
Группа анализа биомаркеров
3 (100,0)
3 (100,0)
3 (100,0)
3 (75,0)
4 (80,0)
*По одному субъекту в каждой из группы дозы 20 мг/колено и группы плацебо были рандомизированы, но отозвали свое согласие до введения дозы.
Таблица 3. Демографические данные пациентов
Параметр
0,2 мг/ коленоN=3
2 мг/ коленоN=3
10 мг/ коленоN=3
20 мг/ коленоN=3
Плацебо **N=4
ВсесубъектыN=16
Пол
Мужчина
2 (67%)
2 (67%)
0
1 (33%)
1 (25%)
6 (38%)
Женщина
1 (33%)
1 (33%)
3 (100%)
2 (67%)
3 (75%)
10 (63%)
Возраст (лет)
Среднее (SD)
57,7 (7,23)
63,3 (3,79)
67,7 (2,08)
68,0 (5,20)
60,3 (9,22)
63,2 (6,86)
Размах
53-66
59-66
66-70
65-74
51-73
51-74
Вес (кг)
Среднее (SD)
92,4 (25,14)
82,2 (1,60)
70,1 (18,52)
110,0 (21,21)
98,2 (11,73)
91,1 (20,18)
Размах
64-113
81-84
54-91
91-133
85-113
54-133
Рост (см)
Среднее (SD)
170,6 (10,18)
174,5 (3,21)
159,4 (6,85)
169,3 (12,02)
168,2 (15,57)
168,4 (10,67)
Размах
160-180
171-178
152-165
160-183
146-182
146-183
BMI (кг/м<sup>2</sup>)
Среднее (SD)
31,9 (8,97)
27,0 (0,80)
27,3 (5,16)
38,1 (2,30)
35,1 (5,22)
32,1 (6,30)
Размах
22-39
27-28
24-33
35-40
29-40
22-40
Таблица 4. Резерв системной безопасности
Вид
NOAEL*(мг/кг/день)
HED# (мг/кг/день)
Резерв системнойбезопасности при дозе0,2 мг/колено
Резерв системной безопасности при дозе20 мг/колено
Резерв системнойбезопасности при дозе40 мг/колено
Крыса
50
8,06
2820
28,2
14,1
Собака
20
11,1
3880
38,8
19,4
*NOAEL=уровень, при котором не наблюдали никаких неблагоприятных эффектов#HED=эквивалентная человеческая доза
Таблица 5. Резерв локальной безопасности
Вид
NOAEL*(мг/колено)
Ткань
Резерв локальнойбезопасности при дозе0,2 мг/колено
Резерв локальной безопасности при дозе20 мг/колено
Резерв локальнойбезопасности при дозе40 мг/колено
Собака
4
Синовиальная жидкость
140
1,40
0,70
Собака
4
Хрящ
124
1,24
0,62
*NOAEL=уровень, при котором не наблюдали никаких неблагоприятных эффектов
Если не определено иное, технические и научные термины, применяемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в области техники, к которой относится настоящее изобретение.
Если не указано иное, все способы, стадии, методики и манипуляции, которые конкретно не описаны подробно, можно было осуществлять и осуществляли широко известным способом, как будет ясно специалисту в данной области. Например, снова сделана ссылка на стандартные руководства и общий уровень техники, упоминаемый в данном документе, а также на дополнительные литературные источники, цитируемые в данном документе. Если не указано иное, каждый из литературных источников, цитируемых в данном документе, включен посредством ссылки во всей своей полноте.
Пункты формулы изобретения являются неограничивающими и представлены ниже.
Хотя конкретные аспекты и пункты формулы изобретения были подробно раскрыты в данном документе, это было выполнено в качестве примера лишь в целях иллюстрации, и не предназначено для ограничений с точки зрения объема прилагаемой формулы изобретения или объема объекта формулы изобретения с любым соответствующим дальнейшим применением. В частности, авторы настоящего изобретения подразумевают, что различные замены, изменения и модификации могут быть выполнены в настоящем изобретении без отклонения от сути и объема настоящего изобретения, определяемого формулой изобретения. Считается, что выбор исходного материала в виде нуклеиновой кислоты, представляющего интерес клона или типа библиотеки, является обычным делом для рядового специалиста в данной области, располагающего сведениями об аспектах, описанных в данном документе. Считается, что другие аспекты, преимущества и модификации находятся в пределах объема следующей формулы изобретения. Специалистам в данной области будут понятны многие эквиваленты конкретных аспектов настоящего изобретения, описанного в данном документе, или путем проведения всего лишь обычных экспериментов они будут способны установить такие эквиваленты. Предусмотрено, что такие эквиваленты охвачены следующей формулой изобретения. Изменение объема пункта формулы изобретения в позднее поданных соответствующих заявках может быть обусловлено ограничениями патентных законов различных стран и не должно пониматься как отказ от объекта формулы изобретения.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> NOVARTIS AG
<120> СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЯ ХРЯЩА И АРТРИТА
<130> PAT057513-WO-PCT
<140>
<141>
<150> 62/560,301
<151> 2017-09-19
<150> 62/421,534
<151> 2016-11-14
<160> 44
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 460
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Phe Thr Ile Lys Leu Leu Leu Phe Ile Val Pro Leu Val Ile Ser
5                   10                  15
Ser Arg Ile Asp Gln Asp Asn Ser Ser Phe Asp Ser Leu Ser Pro Glu
20                  25                  30
Pro Lys Ser Arg Phe Ala Met Leu Asp Asp Val Lys Ile Leu Ala Asn
35                  40                  45
Gly Leu Leu Gln Leu Gly His Gly Leu Lys Asp Phe Val His Lys Thr
50                  55                  60
Lys Gly Gln Ile Asn Asp Ile Phe Gln Lys Leu Asn Ile Phe Asp Gln
65                  70                  75                  80
Ser Phe Tyr Asp Leu Ser Leu Gln Thr Ser Glu Ile Lys Glu Glu Glu
85                  90                  95
Lys Glu Leu Arg Arg Thr Thr Tyr Lys Leu Gln Val Lys Asn Glu Glu
100                 105                 110
Val Lys Asn Met Ser Leu Glu Leu Asn Ser Lys Leu Glu Ser Leu Leu
115                 120                 125
Glu Glu Lys Ile Leu Leu Gln Gln Lys Val Lys Tyr Leu Glu Glu Gln
130                 135                 140
Leu Thr Asn Leu Ile Gln Asn Gln Pro Glu Thr Pro Glu His Pro Glu
145                 150                 155                 160
Val Thr Ser Leu Lys Thr Phe Val Glu Lys Gln Asp Asn Ser Ile Lys
165                 170                 175
Asp Leu Leu Gln Thr Val Glu Asp Gln Tyr Lys Gln Leu Asn Gln Gln
180                 185                 190
His Ser Gln Ile Lys Glu Ile Glu Asn Gln Leu Arg Arg Thr Ser Ile
195                 200                 205
Gln Glu Pro Thr Glu Ile Ser Leu Ser Ser Lys Pro Arg Ala Pro Arg
210                 215                 220
Thr Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp
225                 230                 235                 240
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
245                 250                 255
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
260                 265                 270
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
275                 280                 285
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
290                 295                 300
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
305                 310                 315                 320
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
325                 330                 335
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
340                 345                 350
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
355                 360                 365
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
370                 375                 380
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
385                 390                 395                 400
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
405                 410                 415
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Lys Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu
420                 425                 430
Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys
435                 440                 445
Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
450                 455                 460
<210> 2
<211> 2951
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2
atatatagag ttaagaagtc taggtctgct tccagaagaa aacagttcca cgttgcttga       60
aattgaaaat caagataaaa atgttcacaa ttaagctcct tctttttatt gttcctctag      120
ttatttcctc cagaattgat caagacaatt catcatttga ttctctatct ccagagccaa      180
aatcaagatt tgctatgtta gacgatgtaa aaattttagc caatggcctc cttcagttgg      240
gacatggtct taaagacttt gtccataaga cgaagggcca aattaatgac atatttcaaa      300
aactcaacat atttgatcag tctttttatg atctatcgct gcaaaccagt gaaatcaaag      360
aagaagaaaa ggaactgaga agaactacat ataaactaca agtcaaaaat gaagaggtaa      420
agaatatgtc acttgaactc aactcaaaac ttgaaagcct cctagaagaa aaaattctac      480
ttcaacaaaa agtgaaatat ttagaagagc aactaactaa cttaattcaa aatcaacctg      540
aaactccaga acacccagaa gtaacttcac ttaaaacttt tgtagaaaaa caagataata      600
gcatcaaaga ccttctccag accgtggaag accaatataa acaattaaac caacagcata      660
gtcaaataaa agaaatagaa aatcagctca gaaggactag tattcaagaa cccacagaaa      720
tttctctatc ttccaagcca agagcaccaa gaactactcc ctttcttcag ttgaatgaaa      780
taagaaatgt aaaacatgat ggcattcctg ctgaatgtac caccatttat aacagaggtg      840
aacatacaag tggcatgtat gccatcagac ccagcaactc tcaagttttt catgtctact      900
gtgatgttat atcaggtagt ccatggacat taattcaaca tcgaatagat ggatcacaaa      960
acttcaatga aacgtgggag aactacaaat atggttttgg gaggcttgat ggagaatttt     1020
ggttgggcct agagaagata tactccatag tgaagcaatc taattatgtt ttacgaattg     1080
agttggaaga ctggaaagac aacaaacatt atattgaata ttctttttac ttgggaaatc     1140
acgaaaccaa ctatacgcta catctagttg cgattactgg caatgtcccc aatgcaatcc     1200
cggaaaacaa agatttggtg ttttctactt gggatcacaa agcaaaagga cacttcaact     1260
gtccagaggg ttattcagga ggctggtggt ggcatgatga gtgtggagaa aacaacctaa     1320
atggtaaata taacaaacca agagcaaaat ctaagccaga gaggagaaga ggattatctt     1380
ggaagtctca aaatggaagg ttatactcta taaaatcaac caaaatgttg atccatccaa     1440
cagattcaga aagctttgaa tgaactgagg caaatttaaa aggcaataat ttaaacatta     1500
acctcattcc aagttaatgt ggtctaataa tctggtatta aatccttaag agaaagcttg     1560
agaaatagat tttttttatc ttaaagtcac tgtctattta agattaaaca tacaatcaca     1620
taaccttaaa gaataccgtt tacatttctc aatcaaaatt cttataatac tatttgtttt     1680
aaattttgtg atgtgggaat caattttaga tggtcacaat ctagattata atcaataggt     1740
gaacttatta aataactttt ctaaataaaa aatttagaga cttttatttt aaaaggcatc     1800
atatgagcta atatcacaac tttcccagtt taaaaaacta gtactcttgt taaaactcta     1860
aacttgacta aatacagagg actggtaatt gtacagttct taaatgttgt agtattaatt     1920
tcaaaactaa aaatcgtcag cacagagtat gtgtaaaaat ctgtaataca aatttttaaa     1980
ctgatgcttc attttgctac aaaataattt ggagtaaatg tttgatatga tttatttatg     2040
aaacctaatg aagcagaatt aaatactgta ttaaaataag ttcgctgtct ttaaacaaat     2100
ggagatgact actaagtcac attgacttta acatgaggta tcactatacc ttatttgtta     2160
aaatatatac tgtatacatt ttatatattt taacacttaa tactatgaaa acaaataatt     2220
gtaaaggaat cttgtcagat tacagtaaga atgaacatat ttgtggcatc gagttaaagt     2280
ttatatttcc cctaaatatg ctgtgattct aatacattcg tgtaggtttt caagtagaaa     2340
taaacctcgt aacaagttac tgaacgttta aacagcctga caagcatgta tatatgttta     2400
aaattcaata aacaaagacc cagtccctaa attatagaaa tttaaattat tcttgcatgt     2460
ttatcgacat cacaacagat ccctaaatcc ctaaatccct aaagattaga tacaaatttt     2520
ttaccacagt atcacttgtc agaatttatt tttaaatatg attttttaaa actgccagta     2580
agaaatttta aattaaaccc atttgttaaa ggatatagtg cccaagttat atggtgacct     2640
acctttgtca atacttagca ttatgtattt caaattatcc aatatacatg tcatatatat     2700
ttttatatgt cacatatata aaagatatgt atgatctatg tgaatcctaa gtaaatattt     2760
tgttccagaa aagtacaaaa taataaaggt aaaaataatc tataattttc aggaccacag     2820
actaagctgt cgaaattaac gctgattttt ttagggccag aataccaaaa tggctcctct     2880
cttcccccaa aattggacaa tttcaaatgc aaaataattc attatttaat atatgagttg     2940
cttcctctat t                                                          2951
<210> 3
<211> 253
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 3
Ile Gln Glu Pro Thr Glu Ile Ser Leu Ser Ser Lys Pro Arg Ala Pro
5                   10                  15
Arg Thr Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His
20                  25                  30
Asp Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His
35                  40                  45
Thr Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His
50                  55                  60
Val Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His
65                  70                  75                  80
Arg Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys
85                  90                  95
Tyr Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys
100                 105                 110
Ile Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu
115                 120                 125
Glu Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu
130                 135                 140
Gly Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly
145                 150                 155                 160
Asn Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr
165                 170                 175
Trp Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser
180                 185                 190
Gly Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly
195                 200                 205
Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Gln Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly
210                 215                 220
Leu Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr
225                 230                 235                 240
Lys Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
245                 250
<210> 4
<211> 253
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 4
Ile Gln Glu Pro Thr Glu Ile Ser Leu Ser Ser Lys Pro Arg Ala Pro
5                   10                  15
Arg Thr Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His
20                  25                  30
Asp Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His
35                  40                  45
Thr Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His
50                  55                  60
Val Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His
65                  70                  75                  80
Arg Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys
85                  90                  95
Tyr Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys
100                 105                 110
Ile Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu
115                 120                 125
Glu Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu
130                 135                 140
Gly Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly
145                 150                 155                 160
Asn Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr
165                 170                 175
Trp Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser
180                 185                 190
Gly Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly
195                 200                 205
Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly
210                 215                 220
Leu Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr
225                 230                 235                 240
Lys Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
245                 250
<210> 5
<211> 236
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 5
Thr Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp
5                   10                  15
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
20                  25                  30
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
35                  40                  45
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
50                  55                  60
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
65                  70                  75                  80
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
85                  90                  95
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
100                 105                 110
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
115                 120                 125
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
130                 135                 140
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
145                 150                 155                 160
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
165                 170                 175
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
180                 185                 190
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Gln Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu
195                 200                 205
Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys
210                 215                 220
Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
225                 230                 235
<210> 6
<211> 236
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 6
Thr Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp
5                   10                  15
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
20                  25                  30
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
35                  40                  45
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
50                  55                  60
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
65                  70                  75                  80
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
85                  90                  95
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
100                 105                 110
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
115                 120                 125
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
130                 135                 140
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
145                 150                 155                 160
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
165                 170                 175
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
180                 185                 190
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu
195                 200                 205
Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys
210                 215                 220
Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
225                 230                 235
<210> 7
<211> 236
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 7
Thr Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp
5                   10                  15
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
20                  25                  30
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
35                  40                  45
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
50                  55                  60
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
65                  70                  75                  80
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
85                  90                  95
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
100                 105                 110
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
115                 120                 125
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
130                 135                 140
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
145                 150                 155                 160
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
165                 170                 175
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
180                 185                 190
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Lys Thr Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu
195                 200                 205
Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys
210                 215                 220
Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
225                 230                 235
<210> 8
<211> 235
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 8
Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly
5                   10                  15
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
20                  25                  30
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
35                  40                  45
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
50                  55                  60
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
65                  70                  75                  80
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
85                  90                  95
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
100                 105                 110
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
115                 120                 125
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
130                 135                 140
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
145                 150                 155                 160
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
165                 170                 175
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
180                 185                 190
Asn Lys Pro Arg Ala Gln Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
195                 200                 205
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
210                 215                 220
Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
225                 230                 235
<210> 9
<211> 235
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 9
Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly
5                   10                  15
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
20                  25                  30
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
35                  40                  45
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
50                  55                  60
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
65                  70                  75                  80
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
85                  90                  95
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
100                 105                 110
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
115                 120                 125
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
130                 135                 140
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
145                 150                 155                 160
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
165                 170                 175
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
180                 185                 190
Asn Lys Pro Arg Ala Ser Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
195                 200                 205
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
210                 215                 220
Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
225                 230                 235
<210> 10
<211> 233
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 10
Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro
5                   10                  15
Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met
20                  25                  30
Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp
35                  40                  45
Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly
50                  55                  60
Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly
65                  70                  75                  80
Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile
85                  90                  95
Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys
100                 105                 110
Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu
115                 120                 125
Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn
130                 135                 140
Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys
145                 150                 155                 160
Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp
165                 170                 175
Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys
180                 185                 190
Pro Arg Ala Gln Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys
195                 200                 205
Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile
210                 215                 220
His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
225                 230
<210> 11
<211> 233
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 11
Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro
5                   10                  15
Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met
20                  25                  30
Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp
35                  40                  45
Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly
50                  55                  60
Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly
65                  70                  75                  80
Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile
85                  90                  95
Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys
100                 105                 110
Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu
115                 120                 125
Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn
130                 135                 140
Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys
145                 150                 155                 160
Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp
165                 170                 175
Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys
180                 185                 190
Pro Arg Ala Ser Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys
195                 200                 205
Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile
210                 215                 220
His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
225                 230
<210> 12
<211> 233
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 12
Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro
5                   10                  15
Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met
20                  25                  30
Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp
35                  40                  45
Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly
50                  55                  60
Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly
65                  70                  75                  80
Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile
85                  90                  95
Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys
100                 105                 110
Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu
115                 120                 125
Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn
130                 135                 140
Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys
145                 150                 155                 160
Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp
165                 170                 175
Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys
180                 185                 190
Pro Arg Ala Lys Thr Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys
195                 200                 205
Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile
210                 215                 220
His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
225                 230
<210> 13
<211> 228
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 13
Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr
5                   10                  15
Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro
20                  25                  30
Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser
35                  40                  45
Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn
50                  55                  60
Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu
65                  70                  75                  80
Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn
85                  90                  95
Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr
100                 105                 110
Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu
115                 120                 125
His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn
130                 135                 140
Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe
145                 150                 155                 160
Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys
165                 170                 175
Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Gln Ser
180                 185                 190
Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg
195                 200                 205
Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser
210                 215                 220
Glu Ser Phe Glu
225
<210> 14
<211> 228
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 14
Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr
5                   10                  15
Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro
20                  25                  30
Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser
35                  40                  45
Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn
50                  55                  60
Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu
65                  70                  75                  80
Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn
85                  90                  95
Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr
100                 105                 110
Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu
115                 120                 125
His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn
130                 135                 140
Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe
145                 150                 155                 160
Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys
165                 170                 175
Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Ser
180                 185                 190
Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg
195                 200                 205
Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser
210                 215                 220
Glu Ser Phe Glu
225
<210> 15
<211> 220
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 15
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
5                   10                  15
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
20                  25                  30
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
35                  40                  45
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
50                  55                  60
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
85                  90                  95
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
100                 105                 110
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
115                 120                 125
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
130                 135                 140
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
145                 150                 155                 160
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
165                 170                 175
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Gln Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu
180                 185                 190
Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys
195                 200                 205
Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
210                 215                 220
<210> 16
<211> 220
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 16
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
5                   10                  15
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
20                  25                  30
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
35                  40                  45
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
50                  55                  60
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
85                  90                  95
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
100                 105                 110
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
115                 120                 125
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
130                 135                 140
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
145                 150                 155                 160
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
165                 170                 175
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu
180                 185                 190
Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys
195                 200                 205
Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
210                 215                 220
<210> 17
<211> 219
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 17
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
5                   10                  15
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
20                  25                  30
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
35                  40                  45
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
50                  55                  60
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
65                  70                  75                  80
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
85                  90                  95
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
100                 105                 110
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
115                 120                 125
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
130                 135                 140
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
145                 150                 155                 160
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
165                 170                 175
Asn Lys Pro Arg Ala Gln Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
180                 185                 190
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
195                 200                 205
Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
210                 215
<210> 18
<211> 219
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 18
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
5                   10                  15
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
20                  25                  30
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
35                  40                  45
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
50                  55                  60
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
65                  70                  75                  80
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
85                  90                  95
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
100                 105                 110
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
115                 120                 125
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
130                 135                 140
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
145                 150                 155                 160
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
165                 170                 175
Asn Lys Pro Arg Ala Ser Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
180                 185                 190
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
195                 200                 205
Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
210                 215
<210> 19
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 19
Thr Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp
5                   10                  15
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
20                  25                  30
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
35                  40                  45
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
50                  55                  60
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
65                  70                  75                  80
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
85                  90                  95
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
100                 105                 110
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
115                 120                 125
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
130                 135                 140
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
145                 150                 155                 160
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
165                 170                 175
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
180                 185                 190
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Gln Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu
195                 200                 205
Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys
210                 215                 220
Met Leu Ile His Pro Thr Asp
225                 230
<210> 20
<211> 231
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 20
Thr Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp
5                   10                  15
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
20                  25                  30
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
35                  40                  45
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
50                  55                  60
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
65                  70                  75                  80
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
85                  90                  95
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
100                 105                 110
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
115                 120                 125
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
130                 135                 140
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
145                 150                 155                 160
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
165                 170                 175
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
180                 185                 190
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu
195                 200                 205
Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys
210                 215                 220
Met Leu Ile His Pro Thr Asp
225                 230
<210> 21
<211> 230
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 21
Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly
5                   10                  15
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
20                  25                  30
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
35                  40                  45
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
50                  55                  60
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
65                  70                  75                  80
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
85                  90                  95
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
100                 105                 110
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
115                 120                 125
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
130                 135                 140
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
145                 150                 155                 160
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
165                 170                 175
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
180                 185                 190
Asn Lys Pro Arg Ala Gln Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
195                 200                 205
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
210                 215                 220
Leu Ile His Pro Thr Asp
225                 230
<210> 22
<211> 230
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 22
Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly
5                   10                  15
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
20                  25                  30
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
35                  40                  45
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
50                  55                  60
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
65                  70                  75                  80
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
85                  90                  95
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
100                 105                 110
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
115                 120                 125
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
130                 135                 140
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
145                 150                 155                 160
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
165                 170                 175
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
180                 185                 190
Asn Lys Pro Arg Ala Ser Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
195                 200                 205
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
210                 215                 220
Leu Ile His Pro Thr Asp
225                 230
<210> 23
<211> 228
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 23
Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro
5                   10                  15
Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met
20                  25                  30
Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp
35                  40                  45
Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly
50                  55                  60
Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly
65                  70                  75                  80
Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile
85                  90                  95
Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys
100                 105                 110
Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu
115                 120                 125
Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn
130                 135                 140
Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys
145                 150                 155                 160
Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp
165                 170                 175
Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys
180                 185                 190
Pro Arg Ala Gln Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys
195                 200                 205
Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile
210                 215                 220
His Pro Thr Asp
225
<210> 24
<211> 228
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 24
Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro
5                   10                  15
Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met
20                  25                  30
Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp
35                  40                  45
Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly
50                  55                  60
Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly
65                  70                  75                  80
Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile
85                  90                  95
Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys
100                 105                 110
Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu
115                 120                 125
Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn
130                 135                 140
Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys
145                 150                 155                 160
Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp
165                 170                 175
Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys
180                 185                 190
Pro Arg Ala Ser Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys
195                 200                 205
Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile
210                 215                 220
His Pro Thr Asp
225
<210> 25
<211> 223
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 25
Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr
5                   10                  15
Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro
20                  25                  30
Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser
35                  40                  45
Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn
50                  55                  60
Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu
65                  70                  75                  80
Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn
85                  90                  95
Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr
100                 105                 110
Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu
115                 120                 125
His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn
130                 135                 140
Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe
145                 150                 155                 160
Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys
165                 170                 175
Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Gln Ser
180                 185                 190
Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg
195                 200                 205
Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile His Pro Thr Asp
210                 215                 220
<210> 26
<211> 223
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 26
Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr
5                   10                  15
Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro
20                  25                  30
Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser
35                  40                  45
Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn
50                  55                  60
Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu
65                  70                  75                  80
Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn
85                  90                  95
Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr
100                 105                 110
Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu
115                 120                 125
His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn
130                 135                 140
Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe
145                 150                 155                 160
Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys
165                 170                 175
Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Ser
180                 185                 190
Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg
195                 200                 205
Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile His Pro Thr Asp
210                 215                 220
<210> 27
<211> 215
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 27
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
5                   10                  15
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
20                  25                  30
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
35                  40                  45
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
50                  55                  60
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
85                  90                  95
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
100                 105                 110
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
115                 120                 125
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
130                 135                 140
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
145                 150                 155                 160
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
165                 170                 175
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Gln Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu
180                 185                 190
Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys
195                 200                 205
Met Leu Ile His Pro Thr Asp
210                 215
<210> 28
<211> 215
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 28
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
5                   10                  15
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
20                  25                  30
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
35                  40                  45
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
50                  55                  60
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
85                  90                  95
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
100                 105                 110
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
115                 120                 125
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
130                 135                 140
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
145                 150                 155                 160
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
165                 170                 175
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu
180                 185                 190
Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys
195                 200                 205
Met Leu Ile His Pro Thr Asp
210                 215
<210> 29
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 29
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
5                   10                  15
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
20                  25                  30
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
35                  40                  45
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
50                  55                  60
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
65                  70                  75                  80
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
85                  90                  95
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
100                 105                 110
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
115                 120                 125
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
130                 135                 140
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
145                 150                 155                 160
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
165                 170                 175
Asn Lys Pro Arg Ala Gln Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
180                 185                 190
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
195                 200                 205
Leu Ile His Pro Thr Asp
210
<210> 30
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 30
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
5                   10                  15
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
20                  25                  30
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
35                  40                  45
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
50                  55                  60
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
65                  70                  75                  80
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
85                  90                  95
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
100                 105                 110
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
115                 120                 125
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
130                 135                 140
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
145                 150                 155                 160
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
165                 170                 175
Asn Lys Pro Arg Ala Ser Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
180                 185                 190
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
195                 200                 205
Leu Ile His Pro Thr Asp
210
<210> 31
<211> 252
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 31
Ile Gln Glu Pro Thr Glu Ile Ser Leu Ser Ser Lys Pro Arg Ala Pro
5                   10                  15
Arg Thr Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His
20                  25                  30
Asp Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His
35                  40                  45
Thr Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His
50                  55                  60
Val Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His
65                  70                  75                  80
Arg Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys
85                  90                  95
Tyr Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys
100                 105                 110
Ile Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu
115                 120                 125
Glu Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu
130                 135                 140
Gly Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly
145                 150                 155                 160
Asn Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr
165                 170                 175
Trp Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser
180                 185                 190
Gly Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly
195                 200                 205
Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu
210                 215                 220
Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys
225                 230                 235                 240
Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
245                 250
<210> 32
<211> 235
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 32
Thr Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp
5                   10                  15
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
20                  25                  30
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
35                  40                  45
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
50                  55                  60
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
65                  70                  75                  80
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
85                  90                  95
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
100                 105                 110
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
115                 120                 125
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
130                 135                 140
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
145                 150                 155                 160
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
165                 170                 175
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
180                 185                 190
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
195                 200                 205
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
210                 215                 220
Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
225                 230                 235
<210> 33
<211> 234
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 33
Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly
5                   10                  15
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
20                  25                  30
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
35                  40                  45
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
50                  55                  60
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
65                  70                  75                  80
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
85                  90                  95
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
100                 105                 110
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
115                 120                 125
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
130                 135                 140
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
145                 150                 155                 160
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
165                 170                 175
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
180                 185                 190
Asn Lys Pro Arg Ala Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp
195                 200                 205
Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu
210                 215                 220
Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
225                 230
<210> 34
<211> 232
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 34
Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro
5                   10                  15
Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met
20                  25                  30
Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp
35                  40                  45
Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly
50                  55                  60
Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly
65                  70                  75                  80
Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile
85                  90                  95
Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys
100                 105                 110
Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu
115                 120                 125
Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn
130                 135                 140
Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys
145                 150                 155                 160
Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp
165                 170                 175
Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys
180                 185                 190
Pro Arg Ala Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys Ser
195                 200                 205
Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile His
210                 215                 220
Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
225                 230
<210> 35
<211> 227
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 35
Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr
5                   10                  15
Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro
20                  25                  30
Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser
35                  40                  45
Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn
50                  55                  60
Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu
65                  70                  75                  80
Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn
85                  90                  95
Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr
100                 105                 110
Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu
115                 120                 125
His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn
130                 135                 140
Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe
145                 150                 155                 160
Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys
165                 170                 175
Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Lys
180                 185                 190
Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu
195                 200                 205
Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu
210                 215                 220
Ser Phe Glu
225
<210> 36
<211> 219
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 36
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
5                   10                  15
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
20                  25                  30
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
35                  40                  45
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
50                  55                  60
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
85                  90                  95
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
100                 105                 110
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
115                 120                 125
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
130                 135                 140
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
145                 150                 155                 160
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
165                 170                 175
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
180                 185                 190
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
195                 200                 205
Leu Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
210                 215
<210> 37
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 37
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
5                   10                  15
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
20                  25                  30
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
35                  40                  45
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
50                  55                  60
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
65                  70                  75                  80
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
85                  90                  95
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
100                 105                 110
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
115                 120                 125
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
130                 135                 140
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
145                 150                 155                 160
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
165                 170                 175
Asn Lys Pro Arg Ala Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp
180                 185                 190
Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu
195                 200                 205
Ile His Pro Thr Asp Ser Glu Ser Phe Glu
210                 215
<210> 38
<211> 230
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 38
Thr Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp
5                   10                  15
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
20                  25                  30
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
35                  40                  45
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
50                  55                  60
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
65                  70                  75                  80
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
85                  90                  95
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
100                 105                 110
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
115                 120                 125
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
130                 135                 140
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
145                 150                 155                 160
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
165                 170                 175
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
180                 185                 190
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
195                 200                 205
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
210                 215                 220
Leu Ile His Pro Thr Asp
225                 230
<210> 39
<211> 229
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 39
Thr Pro Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly
5                   10                  15
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
20                  25                  30
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
35                  40                  45
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
50                  55                  60
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
65                  70                  75                  80
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
85                  90                  95
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
100                 105                 110
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
115                 120                 125
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
130                 135                 140
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
145                 150                 155                 160
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
165                 170                 175
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
180                 185                 190
Asn Lys Pro Arg Ala Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp
195                 200                 205
Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu
210                 215                 220
Ile His Pro Thr Asp
225
<210> 40
<211> 227
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 40
Phe Leu Gln Leu Asn Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro
5                   10                  15
Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met
20                  25                  30
Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp
35                  40                  45
Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly
50                  55                  60
Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly
65                  70                  75                  80
Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile
85                  90                  95
Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys
100                 105                 110
Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu
115                 120                 125
Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn
130                 135                 140
Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys
145                 150                 155                 160
Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp
165                 170                 175
Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys
180                 185                 190
Pro Arg Ala Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys Ser
195                 200                 205
Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile His
210                 215                 220
Pro Thr Asp
225
<210> 41
<211> 222
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 41
Glu Ile Arg Asn Val Lys His Asp Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr
5                   10                  15
Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro
20                  25                  30
Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser
35                  40                  45
Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn
50                  55                  60
Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu
65                  70                  75                  80
Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn
85                  90                  95
Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr
100                 105                 110
Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu
115                 120                 125
His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn
130                 135                 140
Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe
145                 150                 155                 160
Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys
165                 170                 175
Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Lys
180                 185                 190
Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu
195                 200                 205
Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu Ile His Pro Thr Asp
210                 215                 220
<210> 42
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 42
Gly Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr
5                   10                  15
Ser Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val
20                  25                  30
Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg
35                  40                  45
Ile Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr
50                  55                  60
Gly Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Tyr Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu
85                  90                  95
Asp Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly
100                 105                 110
Asn His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn
115                 120                 125
Val Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp
130                 135                 140
Asp His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly
145                 150                 155                 160
Gly Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys
165                 170                 175
Tyr Asn Lys Pro Arg Ala Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser
180                 185                 190
Trp Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met
195                 200                 205
Leu Ile His Pro Thr Asp
210
<210> 43
<211> 213
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 43
Ile Pro Ala Glu Cys Thr Thr Ile Tyr Asn Arg Gly Glu His Thr Ser
5                   10                  15
Gly Met Tyr Ala Ile Arg Pro Ser Asn Ser Gln Val Phe His Val Tyr
20                  25                  30
Cys Asp Val Ile Ser Gly Ser Pro Trp Thr Leu Ile Gln His Arg Ile
35                  40                  45
Asp Gly Ser Gln Asn Phe Asn Glu Thr Trp Glu Asn Tyr Lys Tyr Gly
50                  55                  60
Phe Gly Arg Leu Asp Gly Glu Phe Trp Leu Gly Leu Glu Lys Ile Tyr
65                  70                  75                  80
Ser Ile Val Lys Gln Ser Asn Tyr Val Leu Arg Ile Glu Leu Glu Asp
85                  90                  95
Trp Lys Asp Asn Lys His Tyr Ile Glu Tyr Ser Phe Tyr Leu Gly Asn
100                 105                 110
His Glu Thr Asn Tyr Thr Leu His Leu Val Ala Ile Thr Gly Asn Val
115                 120                 125
Pro Asn Ala Ile Pro Glu Asn Lys Asp Leu Val Phe Ser Thr Trp Asp
130                 135                 140
His Lys Ala Lys Gly His Phe Asn Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Gly
145                 150                 155                 160
Trp Trp Trp His Asp Glu Cys Gly Glu Asn Asn Leu Asn Gly Lys Tyr
165                 170                 175
Asn Lys Pro Arg Ala Ser Lys Pro Glu Arg Arg Arg Gly Leu Ser Trp
180                 185                 190
Lys Ser Gln Asn Gly Arg Leu Tyr Ser Ile Lys Ser Thr Lys Met Leu
195                 200                 205
Ile His Pro Thr Asp
210
<210> 44
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетическая
метка 6xHis"
<400> 44
His His His His His His
5
<---