ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ МОНО- И ДИ-ПЭГ IL-10

1. Способ получения смеси моно- и дипегилированного IL-10, где по меньшей мере одна молекула ПЭГ ковалентно присоединена к по меньшей мере одному аминокислотному остатку по меньшей мере одной субъединицы IL-10, включающий
a) осуществление реакции белка IL-10 в концентрации от 1 мг/мл до 12 мг/мл с активированным ПЭГ-линкером, так чтобы отношение IL-10 к ПЭГ-линкеру составляло от 1:1 до 1:7,7, в присутствии от 0,75 мМ до 35 мМ восстанавливающего агента, при значении pH от примерно 5,0 до 7,4 и температуре от 5°С до 30°С в течение 12-15 ч; и
b) очистку смеси моно- и дипегилированного IL-10.
2. Способ по п.1, в котором ПЭГ-линкер выбран из группы, состоящей из ПЭГ-сукцинимидилкарбоната, ПЭГ-бутиральдегида, ПЭГ-пентальдегида, ПЭГ-амидопропиональдегида, ПЭГ-уретанопропиональдегида и ПЭГ-пропилальдегида.
3. Способ по п.2, в котором ПЭГ-линкер представляет собой ПЭГ-пропилальдегид.
4. Способ по п.1, в котором молекулярная масса ПЭГ, образующего ПЭГ-линкер, составляет от 5000 Да до 20000 Да.
5. Способ по п.4, в котором молекулярная масса ПЭГ, образующего ПЭГ-линкер, составляет 5000 Да.
6. Способ по п.1, в котором восстанавливающий агент выбран из группы, состоящей из боргидрида, цианоборгидрида натрия, аминоборана и пиколин-борана.
7. Способ по п.6, в котором восстанавливающий агент выбран из группы, состоящей из цианоборгидрида натрия и пиколин-борана.
8. Способ по п.1, в котором смесь моно- и ди-ПЭГ очищают при помощи хроматографии, выбранной из группы, состоящей из катионообменной хроматографии, анионообменной хроматографии, эксклюзионной хроматографии и хроматографии с гидрофобным взаимодействием.
9. Способ по п.8, в котором смесь моно- и ди-ПЭГ очищают при помощи эксклюзионной хроматографии.
10. Фармацевтическая композиция, включающая моно- и ди-ПЭГ-IL-10, полученный способом по п.1, и фармацевтически приемлемый носитель.
11. Способ получения смеси моно- и дипегилированного IL-10, где по меньшей мере одна молекула ПЭГ ковалентно присоединена к по меньшей мере одному аминокислотному остатку по меньшей мере одной субъединицы IL-10, включающий
a) осуществление реакции белка IL-10 в концентрации 7,5 мг/мл с активированным ПЭГ-линкером, так чтобы отношение IL-10 к ПЭГ-линкеру составляло 1:3,5, в присутствии 25 мМ восстанавливающего агента, при значении pH 6,3 и температуре 15°С в течение 15 ч; и
b) очистку смеси моно- и дипегилированного IL-10.
12. Способ по п.11, в котором ПЭГ-линкер выбран из группы, состоящей из ПЭГ-сукцинимидилкарбоната, ПЭГ-бутиральдегида, ПЭГ-пентальдегида, ПЭГ-амидопропиональдегида, ПЭГ-уретанопропиональдегида и ПЭГ-пропилальдегида.
13. Способ по п.12, в котором ПЭГ-линкер представляет собой ПЭГ-пропилальдегид.
14. Способ по п.11, в котором молекулярная масса ПЭГ, образующего ПЭГ-линкер, составляет от 5000 Да до 20000 Да.
15. Способ по п.14, в котором молекулярная масса ПЭГ, образующего ПЭГ-линкер, составляет 5000 Да.
16. Способ по п.11, в котором восстанавливающий агент выбран из группы, состоящей из боргидрида, цианоборгидрида натрия, аминоборана и пиколин-борана.
17. Способ по п.16, в котором восстанавливающий агент выбран из группы, состоящей из цианоборгидрида натрия и пиколин-борана.
18. Способ по п.11, в котором смесь моно- и ди-ПЭГ очищают при помощи хроматографии, выбранной из группы, состоящей из катионообменной хроматографии, анионообменной хроматографии, эксклюзионной хроматографии и хроматографии с гидрофобным взаимодействием.
19. Способ по п.18, в котором смесь моно- и ди-ПЭГ очищают при помощи эксклюзионной хроматографии.
20. Фармацевтическая композиция, включающая моно- и ди-ПЭГ-IL-10, полученный способом по п.11, и фармацевтически приемлемый носитель.