Активность НАДФН-оксидазы нейтрофильных лейкоцитов у больных хроническим генерализованным пародонтитом в сочетании с железодефицитной анемией

лантации // Современные проблемы науки и образования. -2013. - № 3. - С. 98-98.

12. Сирак С. В., Ибрагимов И. М., Кодзоков Б. А., Перико-ва М. Г. Способ субантральной аугментации кости для установки дентальных имплантатов при атрофии альвеолярного отростка верхней челюсти // Патент на изобретение RUS 2469675 09.11.2011.

13. Grimm dr. W. D, Ploger dr. M., Schau dr. I., Vukovic dr. M. A., Shchetinin E., Akkalaev A. B., Avanesian R. A., Sirak S. V. Complex, three-dimensional reconstruction of critical size defects following delayed implant placement using stem cell-containing subepithelial connective tissue graft and allogenic human bone blocks for horizontal alveolar bone augmentation: a case report as proof of clinical study principles // Медицинский вестник Северного Кавказа. - 2014. - Vol. 9. № 2 (34). - С. 131-133.

14. Grimm W. D, Ploger M., Schau I., Vukovic M. A., Shchetinin E, Akkalaev A. B., Arutunov A. V., Sirak S. V. Prefabricated 3d allogenic bone block in conjunction with stem cell-containing subepithelial connective tissue graft for horizontal alveolar bone augmentations case report as proof of clinical study principles // Медицинский вестник Северного Кавказа. - 2014. - Vol. 9. № 2 (34). - P. 175-178.

15. Grimm W. D., Dannan A., Giesenhagen B., Schau I., Varga G., Vukovic M. A., Sirak S. V. Translational research: palatal-derived ecto-mesenchymal stem cells from human palate: a new hope for alveolar bone and cranio-facial bone reconstruction //

International journal of stem cells. - 2014. - Vol. 7. № 1. -P. 23-29.

16. Misch C. E. Maxillary anterior single tooth implant esthetic health compromise // Int. j. dental symp. - 2005. - Vol. 3. - P. 49.

17. Mikhalchenko D. V., Poroshin A. V., Mikhalchenko V. F., Firsova I. V., Sirak S. V. Influence of transcranial electrostimulation on the osseointegration of dental implant in the experiment // Research journal of pharmaceutical, biological and chemical sciences. - 2014. - Vol. 5. № 5. - P. 705-711.

18. Sirak S. V., Arutyunov A. V., Shchetinin E. V., Sirak A. G., Akkalaev A. B., Mikhalchenko D. V. Clinical and morphological substantiation of treatment of odontogenic cysts of the maxilla // Research journal of pharmaceutical, biological and chemical sciences. - 2014. - Vol. 5. № 5. - P. 682-690.

19. Sirak S. V., Avanesyan R. A., Sirak A. G., Shchetinin E. V., Demurova M. K. Social composition and motivation of patients in applying for implant dental service // Research journal of pharmaceutical, biological and chemical sciences. - 2014. -Vol. 5. № 5. - P. 691-697.

20. Sirak S. V., Avanesyan R. A., Akkalaev A. B., Demurova M. K., Dyagtyar E. A., Sirak A. G. Microbiocenosis of oral cavity in patients with dental implants and over-dentures // Research journal of pharmaceutical, biological and chemical sciences. - 2014. -Vol. 5. № 5. - P. 698-704.

Поступила 16.10.2014

И. А. СЛАВИНСКИЙ, Л. А. СКОРИКОВА, О. В. ЦЫМБАЛОВ

АКТИВНОСТЬ НАДФН-ОКСИДАЗЫ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГЕНЕРАЛИЗОВАННЫМ ПАРОДОНТИТОМ В СОЧЕТАНИИ С ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНОЙ АНЕМИЕЙ

Кафедра пропедевтики и профилактики стоматологических заболеваний ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России, Россия, 350089, г. Краснодар, ул. Седина, 4. E-mail: Ivan.A.Slavinsky@gmail.com

У больных хроническим генерализованным пародонтитом в сочетании с железодефицитной анемией выявлена дисфункция нейтрофильных лейкоцитов, обусловленная снижением активности железосодержащих компонентов антибактериальных систем, в частности НАДФН-оксидазы. Стоматологическое лечение таких больных оказывается неэффективным без назначения препаратов железа.

Ключевые слова: пародонтит, нейтрофильные лейкоциты, НАДФН-оксидаза, железодефицитная анемия.

I. A. SLAVINSKY, L. A. SKORIKOVA, О. V. TSYMBALOV

THE ACTIVITY OF NADPH-OXIDASE OF NEUTROPHILIC LEUKOCYTES IN PATIENTS WITH

CHRONIC GENERALIZED PERIODONTITIS IN AGGREGATE WITH IRON - DEFICIENCY ANEMIA

Chair of propaedeutics stomatology and preventive maintenance of stomatologic diseases of the Kuban state medical university, Russia, 350089, Krasnodar, Sedin str., 4. E-mail: Ivan.A.Slavinsky@gmail.com

In patients with chronic generalized periodontitis in aggregate with iron-deficiency anemia revealed dysfunction of neutrophilic leukocytes caused by decreased activity of iron-containing components of antibacterial systems, in particular of NADPH-oxidase. Dental treatment of these patients is ineffective without the use of iron preparations.

Key words: periodontitis, iron-deficiency anemia, neutrophilic leukocytes, NADPH-oxidase.

Пародонтит - заболевание опорно-удержи-вающего аппарата зуба, вызванное микробным налетом (бляшкой). В большинстве случаев пародонтит развивается из хронического катарального гингивита, и в отсутствие лечения заболевание прогрессирует. Заболевание характеризуется прогрессирующей деструкцией опорного аппарата зуба, включающего поверхностные ткани десны, пародонтальные связки, цемент корня и кость альвеолы [2]. Воспалительный процесс в пародонте возникает в ответ на воздействие повреждающих агентов, наиболее часто - патогенных микроорганизмов [6], инвазии которых способствуют сбои в иммунной системе организма, в частности дисфункция нейтрофильных лейкоцитов.

Функциональные возможности нейтрофилов крови и воспалительного очага зависят от состояния их антибактериальных систем, компоненты которых содержатся в цитоплазматической зернистости. Миелопероксидаза, НАДФН-оксидаза и катионный белок лактоферрин являются важнейшими компонентами антибактериальных систем нейтрофильных лейкоцитов, содержащими в своём составе железо. В физиологических условиях подавляющее большинство нейтрофилов находится в состоянии функционального покоя. Они не имеют морфологических признаков активации на светооптическом и электронно-микроскопическом уровнях [3]. Однако в ответ на стимулирующие факторы клетка в течение нескольких секунд способна переходить в активированное состояние. Это проявляется изменением метаболической активности фагоцитов и развитием респираторного взрыва [1]. Большая часть (или весь) кислород, потребляемый клеткой во время респираторного взрыва, расходуется на образование супероксидного аниона. Супероксидный анион быстро подвергается дисмутации с образованием перекиси водорода - известного бактерицидного вещества, эффективного против широкого спектра микроорганизмов [5].

Установлено, что фермент, катализирующий респираторный взрыв, - это мембрано-ассоцииро-ванная пиридиннуклеотид-оксидаза или НАДФН-оксидаза. НАДФН-оксидаза - мультиферментный комплекс, состоящий из мембранных и цитозоль-ных компонентов. В неактивизированном состоянии мембранные компоненты представлены фла-вопротеидом и цитохромом Ь558. Мембранные компоненты НАДФН-оксидазного комплекса лока-

лизованы в популяции специфических гранул нейтрофильных лейкоцитов [4]. Механизм действия фермента связан с восстановлением молекулярного кислорода до супероксидного аниона за счет переноса электронов цитохромом b558, который относится к гемопротеидам. Функционирование НАДФН-оксидазы в активированных фагоцитах приводит к генерации активных форм кислорода, которые, накапливаясь в фагоцитарной вакуоли, способствуют умерщвлению микроорганизмов. В работе H. Rosen с соавторами (2002) при исследовании химических реакций, протекающих в фаголизосоме нейтрофила, показано, что нитрование и хлорирование белков бактерий требуют присутствия НАДФН-оксидазы и не происходят в клетках с дефицитом этого фермента [7].

Многочисленные исследования показали тесную взаимосвязь патологии пародонта с заболеваниями крови, в частности железодефицитной анемией (ЖДА). При железодефицитных состояниях снижается резистентность организма к ин-фекционно-воспалительным заболеваниям, в том числе заболеваниям пародонта, что может быть обусловлено нарушением фагоцитарной и бактерицидной функций нейтрофильных лейкоцитов в условиях дефицита железа.

Цель исследования - сравнение показателей активности НАДФН-оксидазы у больных хроническим генерализованным пародонтитом с желе-зодефицитной анемией и с нормальным уровнем гемоглобина крови до и после лечения.

Материалы и методы исследования

Было обследовано 35 больных с генерализованным пародонтитом на кафедре пропедевтики и профилактики стоматологических заболеваний Кубанского государственного медицинского университета и в стоматологической поликлинике № 3 г. Краснодара. Всех пациентов разделили на 2 группы: 1-я группа - 19 больных с хроническим генерализованным пародонтитом легкой и средней степени тяжести и нормальным уровнем гемоглобина крови; 2-я группа - 16 больных с хроническим генерализованным пародонтитом легкой и средней степени тяжести и железодефи-цитной анемией. Для сравнения цитохимических показателей исследованы нейтрофильные лейкоциты 42 здоровых людей без признаков патологии пародонта (контрольная группа). Активность НАДФН-оксидазы определяли посредством НСТ-теста. Для компьютерного анализа изоб-

ражения применяли телевизионную систему «MagiScop» с программными пакетами «Magisoft» и «ВидеоТест». Измеряемые параметры изображения - площадь и оптическая плотность. Для оценки результатов компьютерной морфомет-рии изображения нами использован вычисляемый критерий - интегральный цитохимический показатель (ИЦП). Он представляет собой произведение суммарной площади продукта цитохимической реакции в клетке на его оптическую плотность, определяемую методом сканирования изображения. Этот критерий учитывает как интенсивность цитохимической реакции, так и распространенность ее продукта в клетке. ИЦП является выражением строго количественной характеристики интенсивности цитохимической реакции на основе высокочувствительного оптико-структурного компьютерного анализа. Он характеризует общую активность фермента или общее содержание вещества в клетке.

Результаты исследования и их обсуждение

У здоровых людей активность НАДФН-окси-дазы имела ИЦП 6,17±0,07 отн. ед., оптическую плотность 0,27±0,01 отн. ед. при суммарной площади 22,86±0,26 мкм2 (табл. 1).

В крови больных хроническим генерализованным пародонтитом без железодефицитной анемии до лечения активность НАДФН-оксида-зы была повышена в 2,5 раза (р<0,001): ИЦП -15,40±0,25 отн. ед., оптическая плотность -0,31 ±0,01 отн. ед. при суммарной площади 49,68±0,99 мм2. Через месяц после начала комплексного пародонтологического лечения активность НАДФН-оксидазы снизилась в 2,0 раза (р<0,001), ИЦП - 7,76±0,18 отн. ед., оптическая плотность - 0,28±0,01 отн. ед. при суммарной площади 27,73±0,66 мкм2.

Тем не менее полной нормализации показателей мы не наблюдали, активность фермента статистически значимо отличалась от нормальной (у лиц контрольной группы): в 1,3 раза выше (р<0,01).

У больных хроническим генерализованным пародонтитом с железодефицитной анемией был

обнаружен значительно изменённый уровень показателей функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов. Уровень активности НАДФН-оксидазы в этой группе был снижен (р<0,001) в 2,6 раза и имел следующие значения: ИЦП - 2,35±0,08 отн. ед., оптическая плотность - 0,19±0,01 отн. ед., при суммарной площади 12,36±0,18 мкм2.

Пациентам этой группы также был проведен курс комплексного пародонтологического лечения, однако в нейтрофилах крови больных за время лечения активность железосодержащих НАДФН-оксидазы изменилась несущественно (табл. 2) и осталась в 2,3 раза ниже, чем у лиц контрольной группы (р<0,001). Все больные были направлены на лечение у врачей - терапевтов и гематологов с назначением препаратов железа и повторное стоматологическое лечение.

Через 4 месяца после лечения препаратами железа в крови больных выявлены выраженные изменения показателей функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов в направлении их нормализации. При сравнении с данными, полученными до начала лечения, установлено, что активность НАДФН-оксидазы увеличилась в 3,1 раза (р<0,001).

По сравнению с показателями контрольной группы здоровых людей активность НАДФН-окси-дазы была снижена в 1,2 раза (р<0,01), что было схоже с показателями, которые были установлены после лечения больных пародонтитом без ЖДА.

Таким образом, результаты исследования указывают на выраженное изменение показателей функционально-метаболической активности ней-трофильных лейкоцитов крови при хроническом генерализованном пародонтите. У больных с нормальным уровнем гемоглобина крови до лечения активность НАДФН-оксидазы была повышена в 2,5 раза (р<0,001), а к концу лечения показатели нормализовались, хотя и оставались выше, чем в контрольной группе.

У больных хроническим генерализованным пародонтитом в сочетании с ЖДА активность

Таблица 1

Активность НАДФН-оксидазы нейтрофильных лейкоцитов крови у больных хроническим генерализованным пародонтитом без железодефицитной анемии

НАДФН-оксидаза п Площадь суммарная (мкм2) Оптическая плотность (отн. ед.) ИЦП (отн. ед.) Р от КГ

X ±т X ±т X ±т

До лечения 19 49,68 0,99 0,31 0,01 15,40 0,25 < 0,001

После стоматологического лечения 19 27,73 0,66 0,28 0,01 7,76 0,18 < 0,001

Таблица 2

Активность НАДФН-оксидазы нейтрофильных лейкоцитов крови у больных хроническим генерализованным пародонтитом с железодефицитной анемией

НАДФН-оксидаза n Площадь суммарная (мкм2) Оптическая плотность (отн. ед.) ИЦП (отн. ед.) Р от КГ

X ±m X ±m X ±m

До лечения 16 12,36 0,18 0,19 0,01 2,35 0,08 < 0,001

После стоматологического лечения 16 12,67 0,19 0,21 0,01 2,66 0,08 < 0,001

После гематологического лечения 16 24,92 0,25 0,29 0,01 7,23 0,12 < 0,01

НАДФН-оксидазы обнаружила инверсию - снижение (вместо повышения) по сравнению с нейтро-филами здоровых людей в 2,6 раза. Стоматологическое лечение никак не повлияло на активность фермента, результаты не показали статистически значимых изменений и остались на низком уровне. После лечения больных препаратами железа выявлено возрастание активности НАДФН-окси-дазы - в 3,1 раза, которая достигла уровня аналогичных показателей у больных без ЖДА.

Эти данные указывают на выраженную дисфункцию нейтрофильных лейкоцитов у больных железодефицитом и необходимость их комплексного лечения не только врачами-стоматологами, но и гематологами, терапевтами.

ЛИТЕРАТУРА

1. Герасимов И. Г. Неоднородность нейтрофилов в фагоцитозе и респираторном взрыве // Клин. лаб. диагностика. -2004. - № 6. - С. 34-36.

2. Грудянов А. И. Заболевания пародонта. - М. : МИА, 2009. - 336 с.

3. Сапрыкин В. П., Кузнецов С. Л. Морфологические варианты нейтрофильных гранулоцитов крови практически здоровых людей // Морфология. - 2001. - Т. 120. № 6. - С. 37-41.

4. Ambruso D. R., Cusack N., Thurman G. NADPH oxidase activity of neutrophil specific granules: requirements for cytosolic components and evidence of assembly during cell activation // Mol. genet. metab. - 2004. - V. 81. № 4. - P. 313-321.

5. Freudenstein-Dan A., Gold D, Fishelson Z. Killing of schistosomes by elastase and hydrogen peroxide: implications for leukocyte-mediated schistosome killing // J. parasitol. - 2003. -V. 89. № 6. - P. 1129-1135.

6. MuellerH. P. Periodontology. - 2004. - P. 256.

7. Rosen H, Crowley J. R, Heinecke J. W. Human neutrophils use the myeloperoxidase-hydrogen peroxide-chloride system to chlorinate but not nitrate bacterial proteins during phagocytosis // J. biol. chem. - 2002. - V. 277. № 34. - P. 463-468.

Поступила 08.11.2014

А. Г. СЛУГИНА1, Д. В. БАЛИН2, А. А. СЕРИКОВ1, А. К. ИОРДАНИШВИЛИ

ПРИМЕНЕНИЕ ПЕПТИДНЫХ БИОРЕГУЛЯТОРОВ ПРИ ХИРУРГИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКИХ ПЕРИАПИКАЛЬНЫХ ОЧАГОВ ОДОНТОГЕННОЙ ИНФЕКЦИИ У ЛЮДЕЙ ПОЖИЛОГО И СТАРЧЕСКОГО ВОЗРАСТА

Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова, Россия, 194044, г. Санкт-Петербург, ул. акад. Лебедева, 6; 2Национальный медико-хирургический центр имени Н. И. Пирогова, Россия, 105203, г. Москва, ул. Первомайская Нижняя, 70. E-mail: mdgrey@bk.ru

Статья посвящена анализу клинического исследования по действию пептидного биорегулятора «карталакс», выпускаемого Санкт-Петербургским институтом биорегуляции и геронтологии, на течение репаративного остеоге-неза челюстей после хирургического лечения хронических периапикальных одонтогенных очагов инфекции у людей старших возрастных групп. С помощью клинических и рентгенологических методов исследования авторами доказана эффективность действия данного препарата на репаративный остеогенез у людей старших возрастных групп. Авторы делают вывод, что использование биорегулирующей терапии необходимо для нивелированиия