ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ПОЛИПЕПТИДНЫЕ КОНСТРУКЦИИ, ОБЛАДАЮЩИЕ ОГРАНИЧЕННЫМ СВЯЗЫВАНИЕМ С СD3, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Полиспецифическая полипептидная конструкция, содержащая первый компонент, содержащий Fc–область иммуноглобулина, и второй компонент, содержащий CD3–связывающую область, где:
первый и второй компоненты связаны линкером, где Fc–область расположена на N–конце относительно CD3–связывающей области; и
один или оба из первого и второго компонентов содержат антигенсвязывающий домен, который связывается с опухолеспецифическим антигеном (TAA).
2. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.1, отличающаяся тем, что CD3–связывающая область связывается с CD3 (CD3ε).
3. Полиспецифическая конструкция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что антигенсвязывающий домен расположен на аминоконце относительно Fc–области и/или расположен на карбокси–конце относительно CD3–связывающей области полиспецифической полипептидной конструкции.
4. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–3, отличающаяся тем, что первый компонент содержит первый антигенсвязывающий домен, и второй компонент содержит второй антигенсвязывающий домен, где каждый из антигенсвязывающих доменов связывается с опухолеспецифическим антигеном (ТАА).
5. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.4, отличающаяся тем, что первый антигенсвязывающий домен расположен на аминоконце относительно Fc–области полиспецифической конструкции, и второй антигенсвязывающий домен расположен на карбокси–конце относительно CD3–связывающей области полиспецифической конструкции.
6. Полиспецифическая полипептидная конструкция, содержащая по порядку от N–конца к C–концу:
первый антигенсвязывающий домен, который связывается с опухолеспецифическим антигеном (TAA);
Fc–область иммуноглобулина;
линкер;
CD3–связывающую область, которая связывается с CD3 (CD3ε); и
второй антигенсвязывающий домен, который связывается с опухолеспецифическим антигеном (TAA).
7. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–6, отличающаяся тем, что Fc–область представляет собой Fc–область человеческого IgG1, человеческого IgG2, человеческого IgG3 или человеческого IgG4 или представляет собой их иммунологически активный фрагмент.
8. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–7, отличающаяся тем, что Fc–область содержит:
полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, или последовательность аминокислот, которая имеет по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 1;
полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, или последовательность аминокислот, которая имеет по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 2;
полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4, или последовательность аминокислот, которая имеет по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 4; или
полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, или последовательность аминокислот, которая имеет по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 5.
9. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–8, отличающаяся тем, что Fc–область представляет собой гетеродимерную Fc–область.
10. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.9, отличающаяся тем, что один или оба полипептида Fc гетеродимерной Fc–области содержат по меньшей мере одну модификацию, способствующую гетеродимеризации, по сравнению с полипептидом гомодимерной Fc–области, необязательно по сравнению с полипептидом Fc, представленным в SEQ ID NO: 1, или его иммунологически активным фрагментом.
11. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.10, отличающаяся тем, что каждый из полипептидов Fc гетеродимерной Fc–области содержит модификацию «выступ–во–впадину» или содержит мутацию заряда для увеличения электростатической комплементарности полипептидов.
12. Полиспецифическая полипептидная конструкция по пп.10 и 11, отличающаяся тем, что первый Полипептид Fc гетеродимерной Fc–области содержит модификацию, выбранную из Thr366Ser, Leu368Ala, Tyr407Val и их комбинаций, и второй Полипептид Fc гетеродимерной Fc–области содержит модификацию T366W, и где необязательно первый и второй полипептиды Fc дополнительно содержат модификацию нецистеинового остатка до цистеинового остатка, где модификация первого полипептида находится в одном из положений Ser354 и Y349, а модификация второго полипептида Fc находится в другом положении из Ser354 и Y349.
13. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.11, отличающаяся тем, что аминокислотная модификация представляет собой мутацию заряда для повышения электростатической комплементарности полипептидов.
14. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–13, отличающаяся тем, что Fc–область содержит полипептид, содержащий модификацию Ile253Arg или His435Arg.
15. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–14, отличающаяся тем, что Fc–область содержит полипептид, содержащий по меньшей мере одну модификацию для усиления связывания FcRn.
16. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.15, отличающаяся тем, что модификация находится в положении, выбранном из группы, состоящей из Met252Y, Ser254T, Thr256E, Met428L, Met428V, Asn434S и их комбинаций.
17. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.9–16, отличающаяся тем, что первый полипептид гетеродимерной Fc–области содержит последовательность аминокислот, представленную в любой из SEQ ID NO: 82, 86, 94 или 96, и второй полипептид гетеродимерной Fc–области содержит последовательность аминокислот, представленную в любой из SEQ ID NO: 83, 87, 90, 92, 98 или 100.
18. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–17, отличающаяся тем, что Fc–область включает полипептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию, которая уменьшает эффекторную функцию и/или уменьшает связывание с эффекторной молекулой, выбранной из Fc–гамма–рецептора или C1q.
19. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.18, отличающаяся тем, что одна или более аминокислотных модификаций представляют собой делецию одного или более из Glu233, Leu234 или Leu235.
20. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.9–16, 18 и 19, отличающаяся тем, что первый полипептид гетеродимерной Fc–области содержит последовательность аминокислот, представленную в любой из SEQ ID NO: 84, 88, 95 или 97, и второй полипептид гетеродимерной Fc–области содержит последовательность аминокислот, представленную в любой из SEQ ID NO: 85, 89, 91, 93, 99 или 101.
21. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–20, отличающаяся тем, что CD3–связывающая область представляет собой антитело против CD3 или антигенсвязывающий фрагмент.
22. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.21, отличающаяся тем, что антитело против CD3 или антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL).
23. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–22, отличающаяся тем, что CD3–связывающая область является одновалентной.
24. Полиспецифическая полипептидная конструкция по пп.21–23, отличающаяся тем, что антитело против CD3 или антигенсвязывающий фрагмент не являются одноцепочечным антителом, необязательно, не являются одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFv).
25. Полиспецифическая полипептидная конструкция по пп.22–24, отличающаяся тем, что Fc представляет собой гетеродимерную Fc–область, а VH и VL, которые содержат антитело против CD3 или антигенсвязывающий фрагмент, связаны с противоположными полипептидами гетеродимерной Fc–области.
26. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–25, отличающаяся тем, что CD3–связывающая область не способна или по существу не способна связывать или рекрутировать CD3 до тех пор пока по меньшей мере один из антигенсвязывающих доменов связан с его TAA, необязательно, где по меньшей мере два из антигенсвязывающих доменов связаны с их TAA.
27. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–26, отличающаяся тем, что линкер представляет собой полипептидный линкер.
28. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–27, отличающаяся тем, что линкер представляет собой расщепляемый линкер.
29. Полиспецифическая полипептидная конструкция, содержащая первый компонент, содержащий гетеродимерную Fc–область, и второй компонент, содержащий антитело против CD3 или антигенсвязывающий фрагмент, содержащий вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), где:
VH и VL, которые содержит антитело против CD3 или антигенсвязывающий фрагмент, связаны с противоположными полипептидами гетеродимерной Fc–области;
первый и второй компоненты связаны расщепляемым линкером, где гетеродимерная Fc–область расположена на N–конце относительно антитела против CD3; и
один или оба из первого и второго компонентов содержат антигенсвязывающий домен, который связывается с опухолеспецифическим антигеном (TAA).
30. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.28 или 29, отличающаяся тем, что связывание CD3–связывающей области с CD3 существенно снижается, когда полиспецифическая полипептидная конструкция находится в нерасщепленном состоянии по сравнению с расщепленным состоянием.
31. Полиспецифическая полипептидная конструкция по пп.28–30, отличающаяся тем, что расщепляемый линкер представляет собой полипептид, который функционирует в качестве субстрата для протеазы.
32. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.31, отличающаяся тем, что протеаза продуцируется иммунной эффекторной клеткой, опухолью или клетками, присутствующими в микроокружении опухоли.
33. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.31 или 32, отличающаяся тем, что протеаза выбрана из матриптазы, матриксной металлопротеазы (ММР), гранзима В и их комбинаций.
34. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.33, отличающаяся тем, что протеаза представляет собой гранзим B.
35. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.28–34, отличающаяся тем, что расщепляемый линкер содержит аминокислотную последовательность общей формулы P4 P3 P2 P1 ↓ P1' (SEQ ID NO: 150), где P4 представляет собой аминокислоту I, L, Y, M, F, V или A; P3 представляет собой аминокислоту A, G, S, V, E, D, Q, N или Y; P2 представляет собой аминокислоту H, P, A, V, G, S или T; P1 представляет собой аминокислоту D или E; и P1' представляет собой аминокислоту I, L, Y, M, F, V, T, S, G или A, необязательно аминокислотную последовательность общей формулы P4 P3 P2 P1 ↓ P1' (SEQ ID NO: 151), где P4 представляет собой аминокислоту I или L; P3 представляет собой аминокислоту E; P2 представляет собой аминокислоту P или A; P1 представляет собой аминокислоту D; и Р1' представляет собой аминокислоту I, V, T, S или G.
36. Полиспецифическая полипептидная конструкция по пп.28–35, отличающаяся тем, что расщепляемый линкер содержит аминокислотную последовательность IEPDI (SEQ ID NO: 136), LEPDG (SEQ ID NO: 152, LEADT (SEQ ID NO: 137), IEPDG (SEQ). ID NO: 138), IEPDV (SEQ ID NO: 139), IEPDS (SEQ ID NO: 140), IEPDT (SEQ ID NO: 141) или LEADG (SEQ ID NO: 153); или.
37. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.28–36, отличающаяся тем, что расщепляемый линкер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22, 105–112, 136–141, 148, 150–153.
38. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.33, отличающаяся тем, что протеаза представляет собой матриптазу.
39. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.28–38, отличающаяся тем, что
расщепляемый линкер содержит последовательность P4QAR↓ (A/V) (SEQ ID NO: 154), где P4 представляет собой любую аминокислоту; необязательно последовательность RQAR (A/V) (SEQ ID NO: 155) или последовательность RQARV (SEQ ID NO: 156).
40. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.28–39, отличающаяся тем, что расщепляемый линкер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23, 154–156.
41. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.33, отличающаяся тем, что протеаза представляет собой ММР; необязательно MMP–2.
42. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.28–41, отличающаяся тем, что расщепляемый линкер имеет общую формулу P3 P2 P1 ↓ P1 '(SEQ ID NO: 157), где P3 представляет собой P, V или A; P2 представляет собой Q или D; P1 представляет собой A или N; и P1' представляет собой L, I или M, необязательно, общую формулу P3 P2 P1 ↓ P1' (SEQ ID NO: 158), где представляет собой P; P2 представляет собой Q или D; P1 представляет собой A или N; и P1' представляет собой L или I, необязательно последовательность PAGL (SEQ ID NO: 24).
43. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.28–42, отличающаяся тем, что расщепляемый линкер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22–31, 104–114, 117–118, 136–144, 148, 150–158.
44. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.25, отличающаяся тем, что полиспецифическая полипептидная конструкция содержит, по меньшей мере, (i) первый полипептид, содержащий первый полипептид Fc гетеродимерной Fc–области, линкер и домен VH антитела против CD3 или антигенсвязывающий фрагмент; и (ii) второй полипептид, содержащий второй полипептид Fc гетеродимерной Fc–области, линкер и домен VL антитела против CD3 или антигенсвязывающего фрагмента, где один или оба из первого и второго полипептида содержат, по меньшей мере, один антигенсвязывающий домен, который связывается с опухолеспецифическим антигеном (TAA).
45. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–44, отличающаяся тем, что один или более антигенсвязывающих доменов, которые связываются с TAA, приводит к одновалентному, двухвалентному, трехвалентному или четырехвалентному связыванию с TAA.
46. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.44 или 45, отличающаяся тем, что
по меньшей мере, один антигенсвязывающий домен расположен на аминоконце относительно Fc–области и/или на карбоксиконце относительно CD3–связывающей области одного из первого или второго полипептида полиспецифической полипептидной конструкции; или
по меньшей мере один антигенсвязывающий домен расположен на аминоконце относительно Fc–области полиспецифической конструкции, и второй антигенсвязывающий домен расположен на карбоксиконце относительно CD3–связывающей области полиспецифической конструкции.
47. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–46, отличающаяся тем, что антигенсвязывающий домен или независимо каждый из антигенсвязывающих доменов представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, выбранный из группы, состоящей из Fab–фрагмента, F(ab')2–фрагмента, Fv–фрагмента, scFv, scAb, dAb, однодоменного антитела с тяжелой цепью и однодоменного антитела с легкой цепью.
NAR
H
48. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.47, отличающаяся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой Fv, scFv, Fab, однодоменное антитело (sdAb), V или VH.
49. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.47 или 48, отличающаяся тем, что антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой Fab, и полиспецифическая полипептидная конструкция содержит:
(i) первый полипептид, содержащий первый полипептид Fc гетеродимерной Fc–области, линкер и домен VH антитела против CD3 или антигенсвязывающего фрагмента;
(ii) второй полипептид, содержащий второй полипептид Fc гетеродимерной Fc–области, линкер и домен VL антитела против CD3 или антигенсвязывающего фрагмента, и (iii) третий полипептид, содержащий VH–CH1 (Fd) или VL–CL Fab–фрагмента антитела, который связывается с опухолеспецифическим антигеном, где первый и/или второй полипептид дополнительно содержит другой из VH–CH1 (Fd) или VL–CL Fab–фрагмента антитела.
50. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.49, отличающаяся тем, что
только один из первого или второго полипептида содержит другой из VH–CH1 (Fd) или VL–CL Fab–фрагмента антитела; или
оба, первый или второй полипептид, содержат другой из VH–CH1 (Fd) или VL–CL Fab–фрагмента антитела.
51. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.49 или 50, отличающаяся тем, что
другой из VH–CH1 (Fd) или VL–CL Fab–фрагмента антитела расположен на аминоконце относительно Fc–области и/или на карбоксиконце относительно CD3–связывающей области одного из первого или второго полипептида полиспецифической полипептидной конструкции; или
другой из VH–CH1 (Fd) или VL–CL Fab–фрагмента антитела расположен на аминоконце относительно Fc–области первого полипептида или второго полипептида и на карбоксиконце относительно CD3–связывающей области другого из первого или второго полипептида.
52. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–51, отличающаяся тем, что антигенсвязывающий домен или независимо каждый из антигенсвязывающих доменов связывается с опухолевым антигеном, выбранным из 1–92–LFA–3, 5T4, альфа–4 интегрина, альфа–V интегрина, альфа4бета1 интегрина, альфа4бета7 интегрина, AGR2, анти–Lewis–Y, рецептора апелина J, APRIL, B7–H3, B7–H4, BAFF, BTLA, компонента комплемента C5, C–242, CA9, CA19–9, (Lewis а), Карбоангидразы 9, CD2, CD3, CD6, CD9, CD11a, CD19, CD20, CD22, CD24, CD25, CD27, CD28, CD30, CD33, CD38, CD40, CD40L, CD41, CD44, CD44v6, CD47, CD51, CD52, CD56, CD64, CD70, CD71, CD74, CD80, CD81, CD86, CD95, CD117, CD123, CD125, CD132, (IL–2RG), CD133, CD137, CD138, CD166, CD172A, CD248, CDH6, CEACAM5 (CEA), CEACAM6 (NCA–90), CLAUDIN–3, CLAUDIN–4, cMet, коллагена, Cripto, CSFR, CSFR–1, CTLA–4, CTGF, CXCL10, CXCL13, CXCR1, CXCR2, CXCR4, CYR61, DL44, DLK1, DLL3, DLL4, DPP–4, DSG1, EDA, EDB, EGFR, EGFRviii, рецептора эндотелина B (ETBR), ENPP3, EpCAM, EPHA2, EPHB2, ERBB3, F–протеина RSV, FAP, FGF–2, FGF8, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FLT–3, рецептора альфа фолата (FR α), GAL3ST1, G–CSF, G–CSFR, GD2, GITR, GLUT1, GLUT4, GM–CSF, GM–CSFR, рецепторов GP IIb/IIIa, Gp130, GPIIB/IIIA, GPNMB, GRP78, HER2/neu, HER3, HER4, HGF, hGH, HVEM, гиалуронидазы, ICOS, IFNальфа, IFNбета, IFNгамма, IgE, Рецептора IgE (FceRI), IGF, IGF1R, IL1B, IL1R, IL2, IL11, IL12, IL12p40, IL–12R, IL–12Rbeta1, IL13, IL13R, IL15, IL17, IL18, IL21, IL23, IL23R, IL27/IL27R (wsx1), IL29, IL–31R, IL31/IL31R, IL2R, IL4, IL4R, IL6, IL6R, рецептора инсулина, Jagged лигандов, Jagged 1, Jagged 2, KISS1–R, LAG–3, LIF–R, Lewis X, LIGHT, LRP4, LRRC26, Ly6G6D, LyPD1, MCSP, мезотелина, MRP4, MUC1, муцинf–16 (MUC16, CA–125), Na/K–АТФазы, NGF, никастрина, рецепторов Notch, Notch 1, Notch 2, Notch 3, Notch 4, NOV, OSM–R, OX–40, PAR2, PDGF–AA, PDGF–BB, PDGFRальфа, PDGFRбета, PD–1, PD–L1, PD–L2, фосфатидилсерина, P1GF, PSCA, PSMA, PSGR, RAAG12, RAGE, SLC44A4, фосфат сфингозина 1, STEAP1, STEAP2, TAG–72, TAPA1, TE M–8, TGFбета, TIGIT, TIM–3, TLR2, TLR4, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TMEM31, TNFальфа, TNFR, TNFRS12A, TRAIL–R1, TRAIL–R2, Трансферрина, рецептора трансферрина, TRK–A, TRK–B, uPAR, VAP1, VCAM–1, VEGF, VEGF–A, VEGF–B, VEGF–C, VEGF–D, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, VISTA, WISP–1, WISP–2 и WISP–3.
53. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–52, отличающаяся тем, что полиспецифическая полипептидная конструкция содержит по меньшей мере первый антигенсвязывающий домен и второй антигенсвязывающий домен, где первый антигенсвязывающий домен и второй антигенсвязывающий домен связываются с одним и тем же TAA.
54. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–53, отличающаяся тем, что полиспецифическая полипептидная конструкция содержит по меньшей мере первый антигенсвязывающий домен и второй антигенсвязывающий домен, где первый антигенсвязывающий домен и второй антигенсвязывающий домен связываются с разными TAA.
55. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.6–54, отличающаяся тем, что полиспецифическая полипептидная конструкция содержит первый связывающий пептид (LP1) между первым антигенсвязывающим доменом и Fc–областью и второй связывающий пептид (LP2) между CD3–связывающей областью и вторым антигенсвязывающим доменом, и где полиспецифическая полипептидная конструкция имеет структурное расположение от N–конца к C–концу следующим образом: первый антигенсвязывающий домен–LP1–Fc–область–линкер–CD3–связывающая область–LP2–второй антигенсвязывающий домен.
56. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.21–55, отличающаяся тем, что антитело против CD3 или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой Fv–фрагмент антитела.
57. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.56, отличающаяся тем, что Fv–фрагмент антитела содержит стабилизированный дисульфидом анти–CD3–связывающий Fv–фрагмент (dsFv).
58. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.21–57, отличающаяся тем, что антитело против CD3 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность TYAMN (SEQ ID NO: 16); VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность RIRSKYNNYATYYADSVKD (SEQ ID NO: 17); VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность HGNFGNSYVSWFAY (SEQ ID NO: 18), VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность RSSTGAVTTSNYAN (SEQ ID NO: 19); VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность GTNKRAP (SEQ ID NO: 20); и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность ALWYSNLWV (SEQ ID NO: 21).
59. Полиспецифическая полипептидная конструкция по п.57 или 58, отличающаяся тем, что dsFv антитела против CD3 содержит:
VH, имеющую аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 14 и 32–62, или последовательность, которая имеет по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности с любой из SEQ ID NO: 14 и 32–62; и
VL, имеющую аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 15 и 63–81, или последовательность, которая имеет по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности с любой из SEQ ID NO: 14 и 32–62.
60. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.57–59, отличающаяся тем, что анти–CD3 dsFv содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72.
61. Полиспецифическая полипептидная конструкция по любому из пп.1–60, отличающаяся тем, что полиспецифическая полипептидная конструкция конъюгирована с агентом, необязательно, где агент представляет собой терапевтический агент, противоопухолевый агент, токсин или его фрагмент, детектируемый фрагмент или диагностический агент.
62. Полинуклеотид(ы), кодирующий полиспецифические полипептидные конструкции по любому из пп.1–61.
63. Полинуклеотид, кодирующий полипептидную цепь любой из полиспецифических полипептидных конструкций по любому из пп.1–61.
64. Полинуклеотид, содержащий первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую первый полипептид полиспецифической конструкции по любому из пп.1–61, и вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую второй полипептид полиспецифической конструкции, где первая и вторая последовательности нуклеиновых кислот разделены участком внутренней посадки рибосомы (IRES) или нуклеиновой кислотой, кодирующей саморасщепляющийся пептид или пептид, который вызывает пропуск рибосомы.
65. Полинуклеотид по п.64, отличающийся тем, что полиспецифическая полипептидная конструкция содержит третью полипептидную цепь, и полинуклеотид дополнительно содержит третью нуклеиновую кислоту, кодирующую третий полипептид полиспецифической конструкции, необязательно, где третья нуклеиновая кислота отделена от первого и/или второго полипептида с помощью участка внутренней посадки рибосомы (IRES) или нуклеиновой кислоты, кодирующей саморасщепляющийся пептид или пептид, который вызывает пропуск рибосомы, и/или третья последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана с тем же промотором, что и первая и/или вторая последовательность нуклеиновой кислоты.
66. Вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп.62–65.
67. Клетка, содержащая полинуклеотид или полинуклеотиды по любому из пп.62–65 или вектор по п.66.
68. Способ получения полиспецифической полипептидной конструкции, включающий введение в клетку полинуклеотида или полинуклеотидов по любому из пп.62–65 или вектора по п.66 и культивирование клетки в условиях для получения полиспецифической полипептидной конструкции.
69. Способ получения полиспецифической полипептидной конструкции, включающий культивирование клетки по п.67 в условиях, при которых полиспецифический полипептид продуцируется клеткой.
70. Полиспецифическая полипептидная конструкция, полученная способом по п.68 или 69.
71. Фармацевтическая композиция, содержащая полиспецифическую полипептидную конструкцию по любому из пп.1–61 и 70 и фармацевтически приемлемый носитель.
72. Способ стимулирования или индукции иммунного ответа, включающий контактирование клетки–мишени и Т–клетки с полиспецифической полипептидной конструкцией по любому из пп.1–61 и 70 или фармацевтической композицией по п.71, отличающийся тем, что указанная клетка–мишень экспрессирует опухолеспецифический антиген, распознаваемый полиспецифической полипептидной конструкцией.
73. Способ по п.72, отличающийся тем, что клетка–мишень представляет собой опухолевую клетку, экспрессирующую опухолеспецифический антиген (TAA).
74. Способ по п.72 или 73, отличающийся тем, что полиспецифическая полипептидная конструкция содержит расщепляемый линкер, который функционирует в качестве субстрата для протеазы, и индукция или стимулирование иммунного ответа усиливается в присутствии протеазы.
75. Способ по любому из пп.72–74, отличающийся тем, что протеаза выбрана из матриптазы, матриксной металлопротеазы (ММР), гранзима В и их комбинаций.
76. Способ по любому из пп.72–75, отличающийся тем, что контактирование осуществляется у пациента ex vivo, in vitro или in vivo.
77. Способ стимулирования или индукции иммунного ответа у пациента, причем способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества полиспецифической полипептидной конструкции по любому из пп.1–61 и 70 или фармацевтической композиции по п.71.
78. Способ по п.77, отличающийся тем, что иммунный ответ усиливается против опухоли или злокачественного новообразования.
79. Способ по любому из пп.72–78, отличающийся тем, что с помощью способа лечат заболевание или состояние у пациента.
80. Способ лечения заболевания или состояния у пациента, причем способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества полиспецифической полипептидной конструкции по любому из пп.1–61 и 70 или фармацевтической композиции по п.71.
81. Способ по п.79 или 80, отличающийся тем, что заболевание или состояние представляет собой опухоль или злокачественное новообразование.
82. Способ по любому из пп.76–81, отличающийся тем, что указанным пациентом является человек.