ХИРУРГИЧЕСКИЙ ИЗОЛЯТОР
SURGICAL ISOLATION BOX

Область техники
Настоящее изобретение относится к хирургическому изолятору с поддержкой, пригодному для использования в хирургическом способе извлечения яиц из птиц в недоношенном состоянии для того, чтобы получать стерильные яйца из птиц.
Уровень техники изобретения
Первые хирургические изоляторы были разработаны для использования в гнотобиологии, где стерильные животные извлекались из их родителей кесаревым сечением и поступали непосредственно в асептическую среду.
Европейская патентная заявка № 01650109 относится к способу выращивания птицы в определенном незагрязненном состоянии. Способ этой заявки содержит выдерживание птицы как родительской птицы, хирургическое извлечение яйца в его скорлупе из родительской птицы до попадания яйца в клоакальную полость родительской птицы, инкубирование яйца и выведение цыпленка из яйца для получения несушки. Заявка относится также к производству птичьих яиц в определенном незагрязненном состоянии.
Настоящее изобретение относится к хирургическому изолятору и поддержке для использования в стерильном процессе получения яиц и птиц в определенном стерильном состоянии.
В этом описании изобретения термин «свободный от загрязнений/стерильный» используется широко и относится ко многим патогенам и инфекциям, которые могут переноситься птицами, в частности мясными птицами, такими как куры и индейки, широко используемыми для получения выводков птиц на откорм для производства яиц, пригодных к оплодотворению, для коммерческого производства и для производства яиц и мяса для потребления человеком. Кроме того, такие яйца и птицы используются для производства широкого спектра биологических веществ, включая вакцины, антитела, моноклональные антитела, фибробласты и протеины как для терапевтического, так и для профилактического использования на людях и животных. Кроме того, они используются экстенсивно для диагностических тестов и производства трансгенных яиц и птиц. Многие из этих видов использования требуют, чтобы яйца и/или птицы, полученные из них, были свободны или от всех, или от определенных загрязнений, таких как инфекции, включая разные виды паразитов, бактерий, микоплазмы, вирусы, ретровирусы, прионы, ДНК- и РНК-фрагменты. Иногда вирусы могут быть малыми вирусами, включая пикома- и парвовирусы. Некоторые виды бактерий, которыми яйца часто загрязняются, включают в себя клостридии и энтеробактерии. Имеется много непатогенных организмов, которые должны контролироваться. Аналогичным образом, нежелательны многие микроорганизмы, в число которых входят паразиты, аэробные и анаэробные бактерии, комменсальные разновидности, а также разновидности, ассоциируемые с кишками. Одновременно нежелательны микоплазмы, вирусы, вызывающие ретровирусы, прионы, грибки, дрожжи и плесень.
Поэтому термин «определенно свободный от загрязнения» или «стерильное состояние» может объединять в себе все указанное и быть гораздо шире, чем просто свободный от определенных патогенов. Например, обычное определение: свободный от специфичных патогенов (ССП), не является определенно свободным от некоторых вирусов, и, на самом деле, может иметь место загрязнение бактериями. Таким образом, для некоторых видов использования это может иметь существенное значение. Использование, предназначенное для яиц и птиц, будет определять, от каких загрязнений яйцо или птица должны быть свободны. Обычные стерильные и некоторые ССП яйца получаются посредством химической обработки свежих естественно отложенных яиц, включая дезинфекцию и антибиотики и помещение яиц в изоляторы. Такие естественно отложенные яйца забираются у отобранных родительских групп птиц. В то время как эти способы были относительно успешными при производстве ССП яиц, они не могут быть реально успешными при получении того, что называется свободными от загрязнений яйцами. Однако химикаты не могут устранить загрязнения, например, от бактерий, попавших в поры скорлупы яиц сразу после их откладки и до начала дезинфекции. Загрязнение яиц, являются ли они ССП или свободными от микробов или гнотобиотиков, приводит к несоответствию требованиям и во многих случаях к потере коммерческой ценности и полезности.
Сущность изобретения
Согласно первому аспекту изобретения обеспечиваются стерильный хирургический изолятор и поддержка для птицы, которые обеспечивают чистую от загрязнений атмосферу, в которой выполняются хирургические действия; они содержат:
изолятор, сделанный из стенок, по меньшей мере, с двумя перчаточными входами, твердое основание изолятора, которое создает операционную поверхность, и хирургический порт в твердом основании изолятора;
поддержку для получения и размещения птицы во время стерильной хирургической процедуры, имеющую открытое и закрытое положение;
причем поддержка позволяет стабильно размещать операционную поверхность птицы по отношению к операционной поверхности изолятора, так что оперируемая поверхность птицы может подвергаться операции через хирургический порт, и
где поддержка в закрытом положении обеспечивает полное и постоянное воздушное уплотнение, которое поддерживается между птицей на поддержке и хирургическим портом.
Согласно второму аспекту изобретения предлагается способ использования хирургического изолятора и поддержки в соответствии с любым из предшествующих пунктов формулы изобретения, где:
хирургический порт уплотнен первым слоем стерильной прозрачной адгезивной пленки;
операционная поверхность птицы очищена и стерилизована, а птица помещается на поддержку в ее открытом положении;
узкая полоска прозрачной адгезивной пленки помещается на стерильную поверхность птицы;
второй слой стерильной прозрачной адгезивной пленки помещается сверху на узкую полоску адгезивной пленки, и
поддержка переводится в закрытое положение для обеспечения закрепленного размещения операционной поверхности птицы, предпочтительно брюшка, по отношению к операционной поверхности хирургического изолятора;
причем первый адгезивный слой находится в контакте со вторым адгезивным слоем и между птицей и хирургическим изолятором создается полная воздушная изоляция.
Подробное описание изобретения
В общих терминах изобретение предоставляет хирургический изолятор и поддержку, а также средства для их использования в целях обеспечения свободной от загрязнений атмосферы, в которой может быть выполнена хирургическая процедура. Хирургическая процедура заключается в хирургическом извлечении из птицы недоношенного яйца в его скорлупе.
Клоачная полость - это принципиальная область загрязнения внутри птицы. Клоачная полость - это полость, связанная как с пищеварительным трактом, так и с репродуктивной системой птицы, в результате чего в клоачной полости могут присутствовать одновременно и яйцо и экскременты. Яйцо до попадания в клоачную полость свободно от загрязнений, однако, поскольку яичная скорлупа пористая, внешнее загрязнение, когда яйцо проходит из репродуктивной системы через клоачную полость, становится главной проблемой. Специальные способы требуются для извлечения его из родительской птицы с соблюдением стерильности, а затем в силу того, что оно извлечено преждевременно, требуются специальные способы для его успешной и последовательной инкубации и выведения.
Настоящее изобретение касается в особенности хирургического изолятора и поддержки в хирургических процедурах, причем недоношенное яйцо изымается в своей скорлупе из родительской птицы до выхода яйца в клоачную полость. Поскольку настоящее изобретение касается получения стерильного яйца, требуется, чтобы хирургический изолятор и поддержка обеспечивали стерильную среду для выполнения в них намеченных процедур.
Предпочтительно, чтобы хирургический изолятор имел стерильную газовую атмосферу.
В соответствии с одним из воплощений изобретения изолятор, пригодный для хирургических манипуляций, делается из стенок, которые могут быть гибкими, по меньшей мере, с двумя перчаточными входами для хирургических манипуляций, отдельного входа и твердого основания изолятора, приподнятого над землей. На основании изолятора напротив перчаточных входов имеется хирургический порт; предпочтительно, чтобы хирургический порт имел размеры приблизительно 200 мм х 300 мм.
Птицы доставляются и удерживаются посредством регулируемой поддержки из нержавеющей стали, которая поворотным образом прикреплена или шарнирно подвешена к нижней части основания изолятора под хирургическим портом.
Хирургический изолятор и соответствующее оборудование могут быть стерилизованы, используя комбинацию разных способов, включая нагрев, влажную среду (пар), радиацию и химические средства, такие как перекиси и/или йодный спиртовой раствор. Следует применять только те стерилизационные способы, которые не отражаются вредно на жизнеспособности эмбриона. Более того, для получения максимального избавления от бактерий и спор все хирургическое оборудование должно быть подвергнуто гамма-облучению.
Согласно предпочтительному воплощению изобретения хирургический изолятор должен быть тщательно вычищен, высушен, опрыскан спиртом (время экспозиции, по меньшей мере, 10 мин), высушен, дезинсектирован 2-5% объемным раствором гидроперекиси ацетила (время экспозиции, по меньшей мере, 20 мин).
Атмосфера в хирургическом изоляторе может быть очищена стерильным фильтрованным воздухом для того, чтобы избежать токсичности для эмбриона. Электрическое и другое оборудование, не пригодное для стерилизации паром, радиационным облучением или гидроперекисью ацетила, может быть стерилизовано посредством коммерческих систем на основе окиси этилена, применяя их один или, предпочтительно, два раза, каждый раз в течение 24 часов.
В соответствии с другим воплощением изобретения адгезивный прозрачный стерильный хирургический пластик или адгезивная пленка могут быть использованы для получения устойчивой воздушной изоляции между стерилизованной поверхностью птицы и изолятором.
В соответствии с предпочтительным воплощением хирургический порт, предпочтительно, изолируется прозрачным пластиком или адгезивной пленкой для обеспечения образования полного и устойчивого воздушного уплотнения стерилизованной поверхности птицы и отверстия в хирургическом изоляторе.
В соответствии с наиболее предпочтительным воплощением хирургический порт изолирован первым слоем стерильной адгезивной пленки; птица помещается на поддержке, и поверхность птицы стерилизуется; узкая полоска прозрачной адгезивной пленки помещается на стерильную поверхность птицы, второй слой, обычно больший по размеру, стерильной прозрачной адгезивной пленки накладывается сверху на узкую полоску адгезивной пленки, и поддержка поворачивается в закрытое положение для обеспечения закрепленного размещения птичьего брюшка по отношению к операционной поверхности хирургического изолятора; причем первый адгезивный слой находится в контакте со вторым адгезивным слоем и между птицей и хирургическим изолятором создается полная воздушная изоляция.
Адгезивная пленка должна накладываться на кожу птицы после полного удаления перьев, тщательной подготовки и стерилизации кожи и удаления поверхностных фибробластов и кожного жира (используются детергенты, спирт и органический йод).
Сохранение целостности пленки и упрощение хирургического доступа обеспечивается использованием поддержки, которая позволяет устойчиво размещать брюшко птицы по отношению к операционной поверхности хирургического изолятора.
В соответствии с другими воплощениями изобретения подтверждение целостности изоляции может быть получено использованием жидких тестовых веществ, таких как стерильный газ гелий, подающийся асептически в хирургический изолятор, и протечками, обнаруживаемыми снаружи посредством гелиевого детектора. Альтернативно могут использоваться стерильные индикаторные жидкости (такие как раствор йода), которые могут обнаруживаться визуальным наблюдением.
Предпочтительно, чтобы хирургическое извлечение яйца делалось быстро, в течение порядка 30 минут с момента эвтаназии, для того, чтобы избежать негативного воздействия на жизнеспособность эмбриона. Продолжительное воздействие наркоза или излишняя задержка между эвтаназией родительской птицы и извлечением яйца неблагоприятно влияет на жизнеспособность эмбриона.
В соответствии с еще дальнейшим воплощением изобретения хирургическая процедура извлечения недоношенного яйца из яичника птицы включает в себя: рассекание адгезивной пленки, рассекание кожи птицы, прохождение сквозь подкожную мускульную ткань и перитональные слои птицы. Яйцо может быть извлечено из птицы или с сохранением яичника (например, разжимом), или рассеканием яичника. Должны быть исключены все непосредственные контакты между жидкими формами стерилизационных жидкостей для того, чтобы избежать любого риска негативного воздействия на жизнеспособность эмбриона.
Альтернативно хирургическое извлечение состоит из:
проведения вскрытия брюшной полости рассеканием и выведения яйцевода птицы, зашитого с обоих концов;
поперечного надреза яйцевода далее шва;
извлечения яйца, находящегося в яйцеводе;
стерилизации яйцевода;
извлечения яйца и
стерилизаци яйца.
Используемая хирургическая процедура предотвращает загрязнение отходами кишок птицы и повреждение яйца. Во всех случаях используется асептическая технология.
Предпочтительно, чтобы птица была пожертвована посредством эвтаназии или была забита до того, как изымается яйцо в его скорлупе. Альтернативно птица может быть подвергнута эвтаназии. Женская родительская птица может быть или живой, или недавно забитой. Живые птицы сообразно этическим, легальным и жизненным соображениям в отношении птицы должны быть полностью бодрствующими, под действием седативных средств или анестезированы.
Согласно предпочтительному воплощению изобретения поддержка состоит из двух, главным образом, параллельных прутьев, задающих пространство для приема птицы. При пользовании поддержка открыта и птица помещается на поддержку. Предпочтительно, чтобы прутья были, главным образом, идентичными и образовывали острый угол под основанием изолятора. Птица сначала помещается головой на поддержку таким образом, чтобы операционная поверхность птицы (утроба и брюшко) была параллельна основанию изолятора. Хвостовая часть птицы опирается на прутья поддержки так, чтобы утроба и брюшко были расположены правильно. Расцепляющий механизм на поддержке затем закрывается, и тогда нижняя часть птицы становится параллельной основанию изолятора и хирургическому порту. После этого может быть проведена процедура извлечения недоношенного яйца. Перчаточные входы в станках изолятора обеспечивают доступ к нижней части и к операционной поверхности птицы.
Хирургический изолятор, в общем, имеет ограждение, окружающее поверхность рабочей области, имеющую перчаточные входы, области обзора и панель доступа в форме хирургического порта. Имеется также еще одна панель доступа, которая обеспечивает асептический перенос хирургически извлеченного яйца из хирургического изолятора в передаточный узел для последующей транспортировки в инкубационный изолятор.
Предпочтительно, чтобы извлечение яйца происходило во время до того, как яйцо естественным образом выходит через клоачную полость родительской птицы, и как можно ближе к этому времени.
Хирургически извлеченное яйцо затем может быть помещено в стерильный контейнер и изолировано. Контейнер должен позволять яйцу остыть, а также иметь подходящую конструкцию и размер для хранения яйца. Стерильный контейнер имеет объем приблизительно в 10 раз больше объема яйца, причем яйцо в нем поддерживается и защищается пластиковой рамкой.
Согласно другому воплощению изобретения может быть подтверждена стерильность всей хирургической процедуры. Это включает в себя сбор и оценку образцов, таких как микробиологические мазки (взятые как влажные мазки и немедленно помещенные в переносные средства) из яиц и репродуктивного тракта для выделения микроорганизмов, используя для этого культурную среду для бактерий, микоплазмы, вирусов и грибков, включая жидкие питательные размножающие среды в аэробных, анаэробных и микроанаэробных средах.
Как только стерильно извлеченное хирургическим путем яйцо получено, оно может быть затем инкубировано в стерильной среде и из него может быть выведена и выращена несушка.
В соответствии с изобретением для максимальной свободы от микроорганизмов яйца, предпочтительно, забираются асептически из родительской женской особи до того, как яйцо попадет в клоачную полость (если только они также не свободны от микробов или не стерильны), и жизненный цикл завершается в стерильном изоляторе. Жизненный цикл может завершиться вне изолятора, когда производятся ССП яйца и птицы.
Инфекционные организмы, которые могут контролироваться в рамках изобретения, включают в себя организмы, которые могут быть патогенными или не патогенными по отношению к соответствующим особям. К ним относятся особи птиц (типично цыплята, откормочная птица и индейки), люди и другие млекопитающие (типично собаки, кошки, лошади, рогатый скот, свиньи, овцы, козы, крысы и мыши). Для целей изобретения к микроорганизмам относятся паразиты, бактерии (включая анаэробные и аэробные виды, комменсальные виды и виды, ассоциирующиеся с кишками), микоплазмы, вирусы (включая ретровирусы), прионы, грибки, дрожжи, плесень и фрагменты ДНК и РНК.
Родительская птица - это птица, от которой получают хирургически извлеченное яйцо. Хирургически извлеченное яйцо затем инкубируется, и из него выводится несушка. Хирургически извлеченное яйцо и являющаяся результатом птица стерильны.
В одном воплощении изобретения родительская птица выбрана из группы похожих птиц, выращенных в тех же условиях.
В другом воплощении изобретения родительская птица выведена естественным образом в стерильной окружающей среде из группы птиц с похожим существующим незагрязненном состоянием.
В следующем воплощении изобретения родительская птица является одной из группы птиц, имеющих другое незагрязненное состояние, которая была получена соответствующей селекцией и естественным способом выведения в контролируемых условиях, а способ используется для получения птиц с различным незагрязненным состоянием.
Предпочтительно, чтобы несушка образовала часть группы, и после того, как несушки выведены, образчик из несушек отделяется и проверяется на определенные загрязнения для обеспечения критерия незагрязненной группы. В идеале, если определенный статус отсутствия загрязнений в несушке не достигается, то в этом способе несушка используется как родительская птица.
Предпочтительно, чтобы несушка выбиралась как однодневная птица.
В одном воплощении несушка изымается из стерильной окружающей среды для того, чтобы отложить яйца, которые, в свою очередь, вынашиваются для производства дальнейших несушек.
В другом воплощении несушка изымается из стерильной окружающей среды и питается кормом, содержащим обычную кишечную флору. Птицы, полученные этим методом, имеющие обычную кишечную флору, предпочтительно без птичьих и зоонозных патогенов, пригодны для потребления или для использования в пищевой промышленности.
Обычно птицей является курица.
Когда птица выведена от несушки со статусом отсутствия определенного загрязнителя и не является несушкой, то предпочтительно, чтобы выведенная так птица выкармливалась в стерильной атмосфере для последующего оплодотворения несушек с таким же или более низким незагрязненным статусом.
Согласно следующему аспекту изобретения изобретение обеспечивает способ получения яйца со статусом отсутствия определенного загрязнителя, состоящий в стерильной атмосфере в:
размещении несушки, имеющей такой же или лучший статус отсутствия загрязнения, в соответствии со способом изобретения;
использовании несушки для кладки яйца;
извлечении яйца в другой стерильный климат.
Несушка может затем использоваться для отложения яйца, которое может быть само по себе конечным продуктом, или из него может быть высижена птица, которая может образовать группу птиц со стерильным статусом или, если это не несушка, использоваться для оплодотворения несушки для достижения более низкого статуса по загрязнению.
Если оплодотворенные яйца используются для производства потомства или вторичных птиц, тогда из яиц может быть высижено, выращено, сохранено и выкормлено потомство или в обычной сельхозсистеме, или в изоляторе для контроля за попаданием микроорганизмов.
Следует понимать, что при определенных обстоятельствах, когда в качестве родительских птиц используются селектированные птицы, полученные несушки, на самом деле, не являются достаточно свободными от загрязнений, чтобы получить несушек требуемого качества. Может потребоваться выполнить те же шаги снова, используя яйца, полученные от таких несушек, и искусственно извлекая яйца из этих несушек для получения следующих несушек, с надеждой, что они будут свободными от загрязнений.
В самом деле, стерильность может быть и далее улучшена питанием несушек в стерильной атмосфере кормом, содержащим нормальную кишечную флору, или стерильным кормом. Предпочтительно давать птицам в стерильной атмосфере стерильный корм и воду. Альтернативно, нормальная флора может даваться до выведения цыплят или орально птице на этапе после выведения. Нормальная флора может быть без патогенов. Следует понимать, что когда птицы вывелись и они не являются несушками, то они далее сохраняются для последующего оплодотворения несушек. В этом случае вся группа может быть стерильной.
Было бы возможно в настоящем изобретении просто получать яйца для последующего использования. Когда яйца требуются в стерильном виде, первое, что надо сделать, инкубировать яйца, полученные от желательных родительских птиц. Затем, когда родительские птицы были проверены на отдельные загрязнители в качестве основания для получения статуса стерильного яйца, поместить эту несушку в другую стерильную среду и использовать эту несушку для откладывания яиц, которые будут иметь статус стерильных.
Еще одно последующее воплощение предоставляет способ инкубации и выведения цыплят из хирургически извлеченных яиц с дальнейшим разведением и выкармливанием потомства от последующих птиц.
Хирургически извлеченные яйца являются недоношенными, и их развитие, например гаструляция, может задержаться. Яйцам может также не хватать определенных свойств полностью созревших естественно отложенных яиц; например, на скорлупе может быть уменьшена надскорлупная оболочка, и может быть ухудшено образование пор в скорлупе. Скорлупа, ее поры и надскорлупная оболочка задают дыхательный газовый обмен и гидратацию развивающегося эмбриона. Таким образом, стандартная практика выведения цыплят из нормально отложенных яиц может не годиться для оптимальной жизнеспособности, и может потребоваться ее модификация для достижения высокого показателя по выведению здоровых птиц из хирургически извлеченных яиц. Когда их извлекают из родительской птицы, требуемые особые условия варьируют, например, образцы и стадию развития. Притом что изъятая птица содержится в особой свободной от загрязнений среде, ее разведение и выкармливание в здоровом и продуктивном состоянии требует приспособления к питательному составу диеты, особенно к органическим микроэлементам, таким как витамины, чтобы компенсировать потери, возникающие при стерилизации диеты и из-за непоступления комменсальных микроорганизмов.
Предпочтительно, чтобы яйца можно было охладить после извлечения из родительской птицы. Применительно к курам они затем могут храниться в непотревоженном виде, по меньшей мере, 24 часа, но не более 72 часов. Условия хранения могут быть в воздушной среде с высокой степенью фильтрации (HEPA) и для куриных яиц при температуре от 15 до 23°С и относительной влажности на уровне 50-70%, а также в отсутствие вибраций и неожиданных ударов.
В соответствии со следующим воплощением изобретения в первые 24 часа могут быть использованы стандартные инкубационные условия для яиц. После этого каждое яйцо должно тщательно контролироваться по потере веса, инкубационной температуре, относительной влажности и, если требуется, по респираторному газовому обмену, особенно по концентрации в воздухе углекислого газа и кислорода. Условия инкубации и выведения в соответствии с изобретением могут регулироваться. В идеале для 55-граммового хирургически извлеченного недоношенного яйца желательно иметь весовую потерю на уровне 0,4 г/день. Инкубационная температура приблизительно 37,2°С предпочтительна с 0-го до 18-го дня инкубации. А затем желательна температура 36,5°С до момента вылупления из яйца. Относительная влажность сначала может быть установлена на уровне 40%, но должна регулироваться, соответственно, ежедневно с учетом вентиляционного обмена и ежедневной весовой потери яйца до 18-го дня, когда относительная влажность должна быть увеличена до приблизительно 65%.
Подходящая обстановка для вылупившихся цыплят, выращиваемых птиц, несушек и репродуктивно активных птиц - это изолятор с твердыми стенками, имеющий высокую степень фильтрации воздуха (НЕРА). Воздух поддерживается при положительном давлении и с обменом с короткими интервалами (например, 10 раз/час для взрослых птиц, принимая во внимание объем изолятора и плотность заселения), площадь на одну курицу - 0,2-0,4 м на птицу, перчатки на входном отверстии защищаются от порчи птицами, а температура воздуха и освещение регулируются для обеспечения условий, схожих с теми, в которых содержатся обычные куры такого же вида и этапов жизненного существования.
Выращивание и выкармливание птицы в здоровом и продуктивном состоянии, в то время как поддерживается специальная незараженная или стерильная среда, требует специальной диеты для компенсации недостатка определенных питательных веществ, обычно производимых в обычной среде, например, загрязнителями, обнаруживаемыми в кишках или на коже птицы.
Понятно, что это изобретение применимо ко всем особям птиц и пресмыкающихся, включая, но не ограничиваясь, кур, индеек, перепелов, уток, гусей, цесарок, фазанов, куропаток, попугаев и тетеревов.
Изобретение будет более понятно из следующего описания фигур и примеров.
Фиг.1 показывает хирургический изолятор и поддержку в соответствии с изобретением.
На фиг.2 схематически представлен способ изобретения, использующий хирургический изолятор и поддержку, которые показаны на фиг.1.
На фиг.1 показан хирургический изолятор и поддержка для птицы в соответствии с изобретением. Этот изолятор создает свободную от загрязнений атмосферу, в которой происходит хирургическая процедура. Изолятор (1) включает в себя изолятор, собранный из гибких стенок с, по меньшей мере, двумя перчаточными входами (не показаны), твердое основание изолятора (2), которое создает операционную поверхность, и хирургический порт (3) на основании изолятора. Хирургический порт образует апертуру, через которую лицо, проводящее операцию, может иметь доступ к операционной поверхности птицы. К основанию изолятора прикрепляется поддержка (4) для принятия и размещения птицы во время стерильной хирургической процедуры. Поддержка крепится поворотным образом или подвешивается, как показано, на шарнире (5) к нижней части основания изолятора под хирургическим портом. Хирургический порт приспособлен для приема птицы на опору и для обеспечения полной и устойчивой воздушной изоляции, которая поддерживается между птицей на поддержке и хирургическим портом во время операции. Апертура хирургического порта закрывается, предпочтительно, стерильной адгезивной пленкой (показана в лючке). Эта стерильная адгезивная пленка обеспечивает устойчивую воздушную изоляцию. Поддержка обеспечивает также то преимущество, что она позволяет устойчиво размещать брюшко птиц по отношению к операционной поверхности хирургического изолятора.
На фиг.2 схематично показан способ использования опоры в соответствии с изобретением.
На фиг.2а показан хирургический изолятор (1) не в пользовании и в закрытом положении, который имеет основание изолятора (2), хирургический порт и адгезивную пленку (3), поддержку (4) и шарнир (5). Поддержка находится в закрытом положении. Хирургический порт (3) изолирован первым слоем стерильной прозрачной адгезивной пленки.
На фиг.2b показан хирургический изолятор в открытом положении, так что курица может быть помещена на поддержку. Курица размещается сначала головой на поддержке, и операционная поверхность птицы ощипывается и стерилизуется. Воздушная изоляция между птицей и изолятором может быть проверена до и после операции, используя стерильные жидкие тестовые материалы, которые запускаются в хирургический изолятор для обнаружения внешних протечек.
На фиг.2с показана вторая стерильная адгезивная пленка, накладываемая на стерилизуемую нижнюю часть курицы. Предпочтительно, чтобы тонкая полоска прозрачной адгезивной пленки (не показано) накладывалась на стерильную поверхность птицы. Второй слой стерильной прозрачной адгезивной пленки накладывается сверху на узкую полоску адгезивной пленки. На этом этапе поддержка поворачивается в закрытое положение для обеспечения устойчивого размещения брюшка птицы по отношению к операционной поверхности хирургического изолятора. Брюшко птицы должно быть параллельно основанию хирургического изолятора для облегчения хирургических действий; ножки должны удерживаться в полностью гибком положении, а клоачная полость должна быть изолирована.
На фиг.2d показана поддержка в закрытом положении, таком, что стерильная адгезивная пленка хирургического порта и адгезивная пленка на птице входят в контакт, чтобы образовать устойчивую воздушную изоляцию внутри хирургического изолятора и создать стерильную поверхность, на которой можно проводить операцию. Когда первый адгезивный слой на порте находится в контакте со вторым адгезивным слоем на птице, создается полная воздушная изоляция между птицей и хирургическим изолятором.
Воздушная изоляция между птицей и хирургическим изолятором может быть проверена до и после операции, используя стерильные жидкие материалы, которые вводятся в хирургический изолятор для обеспечения обнаружения протечек.
Пример 1
Способ
Пятьдесят взрослых женских особей кур и пять мужских особей с известным ССП статусом содержались на выбранной диете, и им было позволено питаться натуральным образом. Временные параметры снесения яиц (кладки яиц) регистрировались индивидуально по каждой женской особи в течение двух недель. Точное время дня (время L), когда яйцо сносилось, было рассчитано для каждой женской особи. Было рассчитано время дня L-3 часа, и период между временем L-3 и L назначался в качестве временного промежутка для извлечения яйца.
Этот интервал был тем временем, когда выполнялась хирургическая лапаротомия (чревосечение) для извлечения наиболее развитого яйца у каждой птицы.
Для этой процедуры птицы подвергались эвтаназии посредством смещения шейных позвонков и вскоре после этого обрабатывались. Птицы погружались в дезинфекционный раствор на 5 минут. Перья удалялись из брюшной области и с брюшка, а обнажившаяся кожа стерилизовалась 50% спиртовым раствора йода, нагретым до 37°С. Затем каждая птица была помещена в специально приспособленный хирургический изолятор, стерилизованный 5% раствором гидроперекиси ацетила и имеющий стерильные инструменты и 500 мл флакон, содержащий йод в спирте. Птица накрывалась стерильной хирургической салфеткой, и стерильный входной порт изолятора помещался затем сверху салфетки. Делалось лапаротомическое рассекание, и яйцевод (обычно яичник) был перевязан с обеих сторон яйца с помощью шовных материалов. Яйцевод затем перерезался далее каждого шва от яйца, и яйцевод, содержащий яйцо, удалялся из брюшка женской особи. Затем заключенное в яичнике яйцо помещалось в спиртовой раствор йода на пять минут, после чего находящееся в яйцеводе яйцо перемещалось через входной порт от хирургического изолятора в принимающий изолятор. В принимающем изоляторе яйцевод разрезался, яйцо извлекалось, протиралось дезинфицирующим раствором и передавалось в изолятор, приспособленный для инкубации. В день вылупления из яйца живые цыплята забирались из изолятора высиживания для выращивания групп молоденьких кур. Куры выращивались на коммерческой диете, стерилизованной радиацией. На 18-й день пять цыплят забирались из каждого изолятора выращивания, подвергались эвтаназии и из них брались образцы на бактериологический анализ по аэробным и анаэробным культурам. Образцами были печень, селезенка, кровь сердца, вагина/клоачная полость, слепая кишка и маленькие образцы продуктов пищеварения из желудочно-кишечного тракта и экскрементов.
Результаты
Жизнеспособные куры были выведены успешно из искусственно извлеченных яиц (выведение >50%, чаще 90%). Никаких анаэробных или аэробных бактерий не было выделено из образцов, взятых из кур.
Заключение
Установлен безопасный и высокоэффективный способ искусственного получения стерильных оплодотворенных яиц из кур. Яйца были жизнеспособными и произвели жизнеспособных стерильных цыплят, которые успешно содержались в изоляторах.
Пример 2
Серия дополнительных исследований была проведена в соответствии с примером 1. В этом примере были оценены предполагаемые параметры, которые влияют на стерильность и жизнеспособность хирургически извлеченных оплодотворенных яиц. Оценки, сделанные в исследованиях, и полученные результаты представлены ниже.
Результаты выявили параметры, являющиеся критичными контрольными точками, требуемыми для последовательного получения стерильных яиц высокой жизнеспособности. Высокая жизнеспособность определяется как величина >50% от вылупившихся и чуть >80% от достигших половой зрелости цыплят.
Пример 2А
Влияние различных технических способов стерилизации оборудования, включая изолятор и инструменты. Оценка включает воздействие типов, количества и времени облучения, а также химических стерилизующих веществ (перекись водорода, галогенные жидкости, спирт) в жидкой и паровой фазе при различных температурах и времени действия моющего яйца раствора или без него на жизнеспособность и стерильность эмбриона.
Результаты
Воздействие на хирургически извлеченные яйца спиртом или спиртовым раствором йода при температуре 20°, 32° или 36°С, а также гиперперекисью ацетила (2-5% объемным раствором) снижает процент выведения цыплят с 60-100% (контроль) до 13-89%.
Воздействие гиперперекисью ацетила более 5 минут снижает процент выведения на 0-29%.
Пример 2В
Влияние времени (от нуля до 180 минут) между эвтаназией и извлечением яйца на жизнеспособность и легкость хирургических действий, на выведение цыплят и стерильность.
Результаты
Стерильность 100%.
Хирургические операции все труднее проводить после 30 минут; процент выведения цыплят <30% после 60 минут.
Пример 2С
Влияние различных типов и способов применения адгезивных пленок для создания воздушной изоляции между родительской птицей и хирургическим изолятором; способы тестирования изолирования; устройства для размещения птицы во время хирургических действий для оптимизации образования изоляции и хирургических манипуляций.
Результаты
Очищение и стерилизация кожи - важные действия для получения устойчивой изоляции между пленкой и кожей птицы.
Требуется использование, по меньшей мере, двух слоев пленки: один приклеенный к птице и другой - к хирургическому порту хирургического изолятора с адгезивным слоем, обращенным к птице.
Брюшко птицы должно быть расположено параллельно основанию хирургического изолятора для облегчения хирургических манипуляций; ножки удерживаются в полностью гибком положении, клоачная полость изолирована.
Пример 3
Пример 3А
Влияние разницы во времени между ожидаемым сроком созревания яйца и хирургическим извлечением яйца из родительской птицы на жизнеспособность и стерильность яйца, а также на хирургические манипуляции.
Результаты
Выводимость:
контроль (естественно отложенные яйца): выводимость - 85-100%; стерильность - 85-100%;
яйца, извлеченные из яичника в течение 30 мин после анестезии или эвтаназии: выводимость - 13-40%, стерильность - 80-100%;
яйца, извлеченные из яичника спустя 60 мин после эвтаназии: выводимость - 14%, стерильность - 80-92%.
Легкость хирургических манипуляций:
контроль - не применялся;
30 минут - хорошо, ткань легко поднимается;
60 минут - трудно, ткань трудно поднимать/раннее трупное окоченение.
Пример 3B
Влияние способа определения созревания яйца по сроку в сравнении со способом прощупывания и в сравнении с комбинацией этих способов на пропорцию получения яиц с полностью сформировавшейся скорлупой и яиц с мягкой скорлупой на жизнеспособность (обычно живые цыплята в момент вылупления) и на легкость хирургических манипуляций.
Результаты
Только временное определение: мягкая скорлупа и отсутствие подходящих яиц для извлечения - 8-71%; жизнеспособность - 13-50%; стерильность - 75-100%; легкость хирургических манипуляций - переменная.
Только прощупывание: мягкая скорлупа и отсутствие подходящих для извлечения яиц - 13-71%; жизнеспособность - 13-54%; стерильность - 89-100%; легкость хирургических манипуляций - хорошая.
Комбинация временного определения с прощупыванием: мягкая скорлупа и отсутствие подходящих для извлечения яиц - 10-23%; жизнеспособность - 14-57%; стерильность - 92-100%; легкость хирургических манипуляций - хорошая.
Пример 3С
Влияние антибиотиков (например, орально вводимых фторхинолонов) на устранение трансовариальных бактериальных и микоплазменных инфекций и на жизнеспособность и стерильность эмбрионов и последующих цыплят.
Результаты
Без антибиотиков жизнеспособность - 22-60% и стерильность - 86-92%.
С антибиотиками жизнеспособность - 13-57% и стерильность 89-100%.
Пример 3D
Влияние времени хранения до инкубации (0-5 дней) и условий (температура, влажность, ориентация яйца, вентиляция, вибрация), инкубационных условий (температура, влажность, вентиляция, ориентация, потеря веса), условий обращения и выведения на жизнеспособность эмбриона.
Результаты
Время хранения 0, 1-3, 4-5 дней - выводимость 90, 90 и 60% соответственно. Температура, вентиляция/вибрация для хранения в течение 3 дней: 25°С с вибрацией/вентиляцией; приблизительно 20°С и без вибрации/вентиляции: выводимость 60% и 80% соответственно.
Ориентация и потеря веса: яйца на боку, потеря веса 7,8%; яйца по преимуществу вертикально, потеря веса 10,-13,1%: выводимость - 30% и 80-90% соответственно.
Заключение
Как ожидалось, для широкого диапазона исследованных параметров был получен широкий спектр результатов по жизнеспособности и стерильности. Результаты выявили параметры, являющиеся критичными точками контроля, которые необходимо соблюдать для постоянного получения стерильных яиц с высокой жизнеспособностью. Высокая жизнеспособность определяется на уровне >50% от выводимости и порядка >80% от особей, достигших половой зрелости.