Эндотелио- и кардиопротективные эффекты сочетаний резвератрола с основными антигипертензивными препаратами при экспериментальной эндотелиальной дисфункции

иммунной системы при хронической почечной недостаточности доминирует клеточный иммунодефицит. Однако если типичной для хронического пиелонефрита является количественная депрессия клеток с фенотипом CD16+CD56+, CD3+CD16+ [2], то маркером активной фазы хронического пиелонефрита у детей следует считать обнаруженное нами увеличение абсолютного и относительного содержания NK-лимфоцитов (CD16+CD56+). Известные данные о повышенной чувствительности В-клеток больных пиелонефритом к Т-супрессивным воздействиям [3], а также полученные нами факты о снижении концентрации 1дА и 1дМ у детей с обострением хронического пиелонефрита не позволяют выявить признаки системной гиперактивации В-звена иммунитета. Обнаруженное снижение 1дМ в клинической группе детей может свидетельствовать о наличии дефицита иммуноглобулинов первичного ответа [1], а снижение концентрации 1дА можно связать с высокой частотой респираторной инфекции (в 35% случаев) у обследуемых детей клинической группы. Повышение уровня ЦИК и концентрации 1дС указывает на возможную персистенцию антигенов в организме и повышенную антигенную стимуляцию и соответствует данным литературы о сохранении высоких уровней ЦИК даже в стадии клинической ремиссии заболевания [5, 12]. Одновременное возрастание 11_1р и ЦИК в периферической крови детей с обострением хронического пиелонефрита может быть обусловлено известной способностью ЦИК индуцировать секрецию провоспа-лительных цитокинов моноцитарно-макрофагальными клетками [11].

Наблюдаемое нами увеличение количества активно фагоцитирующих клеток, с одной стороны, и обнаруживаемая их функциональная недостаточность, с другой, можно считать достоверными и диагностически значимыми маркерами обострения хронического пиелонефрита у детей.

Результаты проведенного исследования не только определяют степень иммунных нарушений при обострении хронического пиелонефрита у детей, но и обуславливают целесообразность включения в их комплексную терапию элементов иммунотропной терапии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Быковский В. А, Зарубина С. А., Ольхова Е. Б. Эхографическая оценка фаз патоморфогенеза острого пиелонефрита // Мат. 1-го конгресса «Современные методы диагностики и лечения нефроурологических заболеваний у детей». - М., 1998. - С. 70.

2. Кляшева М. Н., Ваганова Д. Р. Комплексная оценка иммунного статуса больных хроническим пиелонефритом // Мат. межрегиональной научно-практ. конференции «Здоровье молодежи на рубеже XXI века». - Уфа, 2000. - С. 13-14.

3. Литвинов В., Черепахина Н, Санаев А. и соавт. Хронический пиелонефрит: особенности иммунопатогенеза и принципы клинической иммунодиагностики // Врач. - 2008. - № 1. - С. 12-17.

4. Нестерова И. В., Колесникова Н. В., Чудилова Г. А. Комплексное трехуровневое исследование системы нейтрофильных грануло-цитов с возможной диагностикой иммунодефицитных состояний при различной патологии. Методич. рекомендации, МЗРФ, № 96/11. - М., 1996. - 25 с.

5. Пекарева Н. А, Чупрова А. В., Горьенко О. М. и соавт. Им-мунопатогенетические особенности хронического пиелонефрита в стадии клинической ремиссии у детей // Проблемы клинической медицины. - 2006. - № 3 (7). - С. 110-113.

6. Приходько В. С., Яловчук А. В. Значение исследования активности нейтрофилов в обосновании патогенетической терапии детей, больных пиелонефритом // Тез. 4-го межд.конгресса «Иммунореабилитация в медицине» / 1п1 Joum. оп 1ттипоге11аЬ. - 1998. - № 8. - Р. 71.

7. Прищепова Е. В., Остапенко С. М., Остапенко В. А, Чеге-рова Т. И. Иммуноморфологические аспекты применения энтеросорбции в комплексном лечении пиелонефритов у детей // Эфферентная терапия. - 2000. - Т. 6. № 3. - С. 70-76.

8. Румянцев А. Ш., Гончарова Н. С. Этиология и патогенез пиелонефрита // Нефрология. - 2000. - Т. 4. № 3. - С. 40-52.

9. Смирнова Н. Н. Иммунорегуляторы в терапии хронического пиелонефрита у детей и подростков. - М., 2005. - 65 с.

10. Тиктинский О. Л., Калинина С. Н. Пиелонефриты. - СПб: МАПО Медиа Пресс СПб, 1996. - 256 с.

11. Фрейдлин И. С., Кузнецова С. А. Иммунные комплексы и ци-токины // Медицинская иммунология. - 1999. - Т. 1. № 4. - С. 27-36.

12. Чулкова Е. Л. Циркулирующие иммунные комплексы в крови и моче при пиелонефрите у детей раннего возраста // Рос. пед. журнал. - 2001. - № 6. - С. 14-15.

Поступила 17.04.2009

В. И. КОЧКАРОВ

ЭHДOTEЛИO- И KAРДИOПРOTEKTИBHЫE }ttEKTbl COЧETAHИЙ РEЗBEРATРOЛA С OCHOBHЫMИ AHTИГИПEРTEHЗИBHЫMИ ПРEПAРATAMИ ПРИ ЭKCПEРИMEHTAЛЬHOй ЭHДOTEЛИAЛЬHOй ДИCФУHKЦИИ

Кафедра фармацевтической химии и фармакогнозии ГОУ ВПО «Белгородский государственный университет Федерального агентства образования», Россия, 3Q8Q15, г. Белгород ул. Победы, 85. E-mail: vla-kochkarov@yandex.ru

У лабораторных животных при моделировании дефицита оксида азота введением ингибитора NO-синтазы Ь^АМЕ изучались функциональные и биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции: коэффициент эндотелиальной дисфункции, миокардиальные нагрузочные пробы (адренореактивность, нагрузка сопротивлением), содержание нитрит-ионов сыворотки крови, экспрессию эндотелиальной NO-синтазы. Выявлена активизация эндотелио- и кардиопротективных эффектов эналаприла, лозартана, амлодипина, индапамида и небиволола при сочетанном их введении с резвератролом.

Ключевые слова: эндотелиальная дисфункция, резвератрол, антигипертензивные препараты.

Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009 УДК 611-018.74:615.256

Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009

V. I. KOCHKAROV

ENDOTHELIO- AND CARDIOPROTECTIVE EFFECTS COMBINATION REZVERATROLE OF ANTIHYPERTENSIVE MEDICINES GROUPS IN EXPERIMENTAL ENDOTHELIAL DYSFUNCTION

Department of pharmaceutical chemistry and farmakognosy Belgorod state university,

Russia, 308015, Belgorod, Victoria str. 85. E-mail: vla-kochkarov@yandex.ru

In laboratory animals in nitric oxide deficiency modelling introduction of NO-syntase inhibitor L-NAME functional and biochemical markers endothelial dysfunctions - factor endothelial dysfunctions, myocardial loading tests (adrenoreactivity, loading by resistance), the nitrite ions content in blood whey, expression endothelial NO-syntase investigated. Endothelio- and cardioprotective effects activization of enalapril, lozartan, amlodipine, indapamide and nebivolol is revealed in their introduction in combination with rezveratrole.

Keywords: endothelial dysfunction, resvereatrol, anthigipertension drags.

Весьма актуальной задачей современной кардиофармакологии является изыскание эндотелиотропных средств, поскольку именно эндотелию сосудов отводится ведущая патогенетическая роль в развитии сердечно-сосудистых заболеваний. Если принять во внимание тот факт, что основным механизмом, лежащим в основе эндотелиальной дисфункции (ЭД), является снижение образования и биодоступности оксида азота (NO), то, соответственно, одной из важных точек приложения терапевтического воздействия при ЭД является восстановление дефицита NO [2].

В связи с вышеизложенным целью настоящего исследования явилось изучение эндотелио- и кардиопротек-тивных свойств резвератрола в сочетании с основными антигипертензивными препаратами в условиях дисфункции эндотелия, вызванной блокадой фермента еNOS.

Материалы и методы исследований

Опыты выполнены на самцах белых нелинейных крыс массой 200-300 г. Ингибитор NO-синтазы N-нит-ро-1_-аргинин-метиловый эфир (L-NAME, Sigma) вводился внутрибрюшинно один раз в сутки в дозе 25 мг/ кг в объеме 1 мл/кг в течение 7 дней (n=10 животных). Животным интактной группы вводился физиологический раствор NaCl в том же объеме (n=10 животных).

Резвератрол производства Greensyn™

(Guangzhou), Ltd КНР, вводили внутрибрюшинно в дозе 2 мг/кг/сут., которая была определена нами, учитывая максимальное его содержание в экстраординарных сортах вин (10 мкмоль/л, 600 мл/сут.). Согласно литературным данным, именно в этой дозе резвератрол проявляет максимальные эндотелио- и кардиотропные эффекты [5, 6, 7] (n=10 животных). Антигипертензивные препараты вводились внутри-желудочно в дозах: эналаприл - 0,5 мг/кг, лозартан -6 мг/кг, амлодипин - 0,5 мг/кг, индапамид - 2 мг/кг, небиволол - 0,5 мг/кг в сутки соответственно (n=10 в каждой группе животных). При сочетанном применении резвератрола с антигипертензивными препаратами использовались те же дозы и пути введения (n=10 в каждой группе животных).

Исследование показателей гемодинамики в группах животных проводили под наркозом (этаминал натрия 50 мг/кг), посредством введения в сонную артерию катетера регистрировали систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) с помощью датчика P23ID «Gould», США, АЦП L-154 и компьютерной программы «Bioshell».

Для оценки степени развития эндотелиальной дисфункции у экспериментальных животных и ее коррекции исследуемыми препаратами нами произведен расчет коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) [4].

Исследование сократимости миокарда после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании, посредством зондирования левого желудочка и регистрации на аппаратно-программном комплексе «ВювЬюП». Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы на адрено-реактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида 1,10'5моль/л из расчета 0,1 мл на 100 г) и нагрузку сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек. [1].

В качестве биохимических маркеров эндотелиальной дисфункции нами определялись уровень eNOS в аорте крыс и уровень суммарного нитрита в сыворотке крови крыс [3]. При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при р<0,05.

Результаты и их обсуждение

Моделирование патологии блокадой NO-синтазы, аналогом Ь-аргинина - 1_^АМЕ приводило к артериальной гипертензии (АГ) (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9 мм рт. ст.). Коррекция данной АГ монотерапией вышеуказанными препаратами, в том числе и резвератро-лом, в разной степени снижала АД, но ни в одном случае не приводила его уровень к целевым значениям. Вместе с тем результаты комбинированной терапии резвератрола с данными препаратами обнаружили положительное фармакодинамическое взаимодействие. Причем использование сочетаний резвератрола с ло-зартаном и резвератрола с амлодипином приводило значения АД к целевому уровню. Значения соответственно составили: САД - 144,1±4,9, ДАД - 117,2±3,4 и САД - 166,2±7,3, ДАД - 138,8±5,6 (табл. 1).

Как показали дальнейшие исследования, проведение функциональных проб с введением ацетилхолина (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссида (эндотелийнезависимая вазодилатация) и последующий расчет коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) [6] выявили объективную оценку вклада препаратов при коррекции этой модели патологии.

Данный показатель у животных с патологией составил 5,4±0,6, а в группе интактных животных - 1,1±0,1. Все изучаемые препараты в разной степени предотвращали развитие ЭД. КЭД в группе животных, получавших резвератрол

Таблица 1

Влияние эналаприла, лозартана, амлодипина, индапамида и небиволола в комбинации с резвератролом на показатели эндотелиальной дисфункции на фоне моделирования дефицита оксида азота введением L-нитро-аргинин-метилового эфира

Группы животных САД, мм рт. ст. ДАД, мм рт. ст. КЭД, отн. ед.

Интактные 137,7±3,7 101,9±4,3 1,1±0,1

L-NAME 190,3±6,7* 145,0±3,9* 5,4±0,6*

L-NAME+резвератрол 183,8±15,0* 140,0±8,3* 1,2±0,1**

L-NAME+эналаприл 183,9±11,4 138,9±7,0 3,3±0,1**

L-NAME+эналаприл+резвератрол 175,9±13,2** 132,6±10,6** 1,5±0,1**х

L-NAME+лозартан 192,2±10,5 138,2±2,4 2,3±0,3**

L-NAME+лозартан+резвератрол 144,1±4,9**х 117,2±3,4**х 1,8±0,2**х

L-NAME+амлодипин 186,3±15,2 131,1±7,0 2,1±0,3**

L-NAME+амлодипин+резвератрол 166,2±7,3**х 138,8±5,6**х 1,6±0,1**х

L-NAME+индапамид 191,4±10,0 140,4±2,4 3,3±0,4**

L-NAME+индапамид+резвератрол 166,5±7,5** 128,5±7,5** 2,2±0,1**

L-NAME +небиволол 170,1±7,3**х 125,9±4,7** 1,7±0,1**

L-NAME +небиволол + резвератрол 165,3±5,8 139,1±9,8 1,3±0,2**

Примечание: КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции; * - р < 0,05 в сравнении с группой интактных животных; ** - р<0,05 в сравнении с группой 1_^АМЕ, х - р < 0,05 в сравнении с монотерапией.

Таблица 2

Влияние эналаприла, лозартана, амлодипина, индапамида и небиволола в комбинации с резвератролом на функциональные и биохимические показатели при моделирования дефицита оксида азота введением L-нитро-аргинин-метилового эфира

Группы животных АДр еNOS, в % от контроля NO total, мкМоль x ’

Интактные 199,2±8,3 72,9±3,8 114,1±10,5

L-NAME 247,3±4,8* 21,4±4,7* 61,2±8,5*

L-NAME+резвератрол 211,9±12,3** 30,2±3,6** 107,2±5,3 **

L-NAME +эналаприл 216,2±10,8** 42,2±3,6** 67,8±7,3

L-NAME+эналаприл+резвератрол 210,9±13,6**х 39,1±3,3** 97,6±7,5**х

L-NAME+лозартан 242,7±4,7 43,3±3,8** 68,9±5,5

L-NAME+лозартан+резвератрол 208,4±7,5**х 37,3±3,5**х 88,5±6,3х

L-NAME+амлодипин 201,3±14,4** 45,7±6,7** 61,3±3,7**

L-NAME+амлодипин+резвератрол 201,0± 12,5** 49,8±5,3** 73,7±8,1**

L-NAME+индапамид 254,8±7,3 30,5±3,2 57,3±2,7

L-NAME+индапамид+резвератрол 217,3±8,9**х 35,7±3,6** 65,9±4,7**

L-NAME +небиволол 206,6±15,6** 51,7±3,5** 99,1±7,7**

L-NAME +небиволол +резвератрол 215,4±14,2** 50,7±3,2** 112,8±5,5**

Примечание: АДр - данные пробы на адренореактивность представлены в абсолютных значениях; eNOS - экспрессия эндотелиальной NO-синтазы; NO)< total - концентрация нитрит-ионов в сыворотке крови; * - при р<0,05 в сравнении с интактной группой; ** - при р<0,05 в сравнении с группой L-NAME-дефицита NO; х - р<0,05 в сравнении с монотерапией.

в дозе 2 мг/кг, был равен практически таковому у группы антигипертензивных препаратов, что выражается в боль-

интактных животных - 1,2±0,1. Следует отметить также, шем снижении КЭД, чем при монотерапии (табл. 1).

что при использовании комбинированного лечения резве- Максимальное снижение КЭД при лечении рез-

ратрол усиливает эндотелиотропные эффекты основных вератролом объясняется тем, что ведущим звеном

Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009

УДК 616.833.53-009.7-08:615.82]-06 Кубанский научный медицинский вестник № 3 (108) 2009

при данной модели патологии является нитроксидерги-ческая система, которая и является точкой приложения этого фитостильбена.

В дальнейшем согласно протоколу исследований нами было проведено изучение функционального состояния миокарда с помощью нагрузочных проб.

Проба на адренореактивность у животных с Ц^АМЕ-индуцированным дефицитом оксида азота на фоне применения монотерапии и комбинаций резвератрола с ан-тигипертензивными препаратами обнаружила снижение максимальных цифр левожелудочкового давления. Однако сравнительный анализ показал, что достоверные значения наблюдаются при использовании комбинаций резвератрола с лозартаном и индапамидом по сравнению с монотерапией этими препаратами. У интактных животных - 199,2±8,3, у животных с Ц^АМЕ-индуциро-ванным дефицитом оксида азота - 247,3±4,8, резверат-рол - 211,9±12,3, лозартан - 242,7±4,7, лозартан + резве-ратрол - 208,4±7,5, индапамид - 254,8±7,3, индапамид + резвератрол - 217,3±8,9 (табл. 2).

При проведении пробы на нагрузку сопротивлением сочетанное использование резвератрола оказалось предпочтительнее монотерапии. Значение ЛЖД к 25-й секунде пережатия восходящей аорты в группе с моделированием Ц^АМЕ-индуцированного дефицита N0 составило 66,0±2,3% по отношению к 5-й секунде, тогда как у интактных животных - 83,6±2,1%. Наилучшей эффективностью обладали сочетания резвератрола с энала-прилом (89,1±4,3%) и лозартаном (81,7±6,2%). Значения остальных групп животных занимали промежуточное положение между интактными и животными с патологией.

Результаты проведенных нагрузочных проб указывают на сохранение значительного миокардиального резерва у животных, леченных комбинацией резверат-рола с антигипертензивными препаратами, по сравнению с монотерапией.

Исследование биохимических маркеров в сериях экспериментальных животных подтвердило увеличение эндотелиопротективной активности препаратов при сочетанном использовании с резвератролом.

Показатель экспрессии еN0S под воздействием указанных препаратов основных антигипертензивных групп достоверно увеличивался, в наибольшей степени у амлодипина и небиволола (табл. 2).

Концентрация нитрит-ионов (NOX total) наиболее значимо увеличивалась в группе с резвератролом, комбинаций резвератрола с эналаприлом, лозартаном и небиво-лолом, а в остальных группах прирост был ниже.

Следует отметить, что совокупность полученных функциональных и биохимических результатов подтвердила механизм реализации эндотелиопротектив-ного действия резвератрола, который связан с активацией фермента еNOS. Резвератрол в дозе 2 мг/кг проявляет выраженное эндотелио- и кардиопротек-тивное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота. Сочетанное применение рез-вератрола с эналаприлом, лозартаном, амлодипином, индапамидом и небивололом при данной модели патологии выявило положительное фармакодинамическое взаимодействие.

ЛИТЕРАТУРА

1. Гурбанов К. К. Сравнительная оценка антиишемического действия верапамила на разных моделях ишемии миокарда / К. К. Гурбанов, Г. В. Ковалев, А. А. Паперно // Фармакология и токсикология. - 1991. - Т. 54, № 4. - С. 21-23.

2. Марков Х. М. Молекулярные механизмы дисфункции сосудистого эндотелия // Кардиология. - 2005. - Т. 45, № 12. - С. 62-80.

3. Метельская В. А. Возможности лабораторной оценки NO-продуцирующей функции эндотелия // Клинич. и лаб. диагностика. - 2004. - № 9. - С. 86.

4. Покровский М. В. Методические подходы для количественной оценки развития эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуци-рованной модели дефицита оксида азота в эксперименте / М. В. Покровский, В. И. Кочкаров, Т. Г. Покровская и др. // Кубанский научный медицинский вестник. - Краснодар, 2006. - № 10. - С. 72-77.

5. Jager U. Relaxant effect of trans-resveratrol on isolated porcine coronary arteries / U. Jager, H. Nguyen-Duong // Arzneimittelforschung. -1999. - Vol. 49. - P. 207-211.

6. Leikert J. F. Red Wine Polyphenols Enhance Endothelial Nitric Oxide Synthase Expression and Subsequent Nitric Oxide Release From Endothelial Cells / J. F. Leikert, T. R. Rathel, P. Wohlfart // Circulation. - 2002. - Vol. 106, № 13. - P. 1614-1617.

7. Naderali E. K. Resveratrol induces vasorelaxation of mesenteric and uterine arteries from female guinea-pigs / E. K. Naderali, P. J. Doyle, G. Williams // Clin. Sci. - 2000. - Vol. 98 - P. 537-543.

Поступила 27.03.2009

В. И. КРЕМИС

ОСОБЕННОСТИ ВОЗНИКНОВЕНИЯ ПОБОЧНЫХ РЕАКЦИЙ И ОСЛОЖНЕНИЙ РЕГИОНАРНЫХ БЛОКАД В ПРОЦЕССЕ ЛЕЧЕНИЯ ВЕРТЕБРОГЕННОЙ ПОЯСНИЧНОЙ БОЛИ

Медико-санитарная часть Управления ФСБ России по Краснодарскому краю (стационар), Россия, 353451, Краснодарский край, г. Анапа, ул. Трудящихся, 2, тел. (86133) 22982

Проведенное обследование и лечение больных вертеброгенными люмбоишиалгиями и компрессионными радикулопа-тиями Ц и S1: 88 пациентов основной группы методом регионарных блокад - эпидуральной фармакотерапии (26 человек) и паравертебральных корешковых блокад (62 человека); 40 пациентов контрольной группы, получавших НПВС и локальную инъекционную терапию с использованием глюкокортикостероидов и анестетиков, - показало, что побочные эффекты и осложнения при использовании данного метода незначительны и при соблюдении технологии возникают крайне редко.

Ключевые слова: побочные реакции регионарных блокад, осложнения эпидуральной фармакотерапии, осложнения паравертебральных корешковых блокад.