Способ оценки подготовленности эмбрионов к выводу
METHOD FOR ASSESSING THE READINESS OF EMBRYOS FOR HATCHING

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к птицеводству, а именно к оценке подготовленности эмбрионов сельскохозяйственной птицы к выводу.
Инкубация - важное звено в структуре промышленного птицеводства. Скорость развития эмбрионов одного и того же вида птиц зависит от множества факторов: масса яйца, срок и условия хранения яиц до инкубации, направление продуктивности и возраст родительского стада, полноценность биохимического состава яйца, температурно-влажностный режим инкубации и т.д.. Поэтому в одной партии яиц скорость развития эмбрионов сильно варьирует.
Известен способ оценки развития куриного зародыша белоскорлупных яиц в первые сутки инкубации, предложенный профессором Орловым М.В. [Орлов М.В. Биологический контроль в инкубации. - Москва: Россельхозиздат, 1966, - 164 с.]. Автор оценивал куриные эмбрионы по времени появления бластодиска путем овоскопирования в первые часы после начала инкубации. При этом отмечалось, что зародыши, в которых бластодиск виден раньше, и дальше развивались более интенсивно. Процент вывода и выводимости из таких яиц был больше на 38,5%.
Известен способ оценки развития эмбрионов сельскохозяйственной птицы в контрольные дни инкубации, путем просвечивания яиц на овоскопе для контроля и своевременной корректировки параметров инкубации (температурно-влажностного режима, воздухообмена) с целью получения максимально возможного количества здорового молодняка. Для просмотра выбирают 2-3 контрольных лотка, взятых из разных зон инкубатора (верх, середина, низ). Принято проводить три просмотра яиц в следующие сроки инкубации (таблица 1).
При каждом просмотре присваивают категорию развития. К 1 и 2 категориям развития относят нормально развитых эмбрионов соответственно своему возрасту, к 3 и 4 - эмбрионов с отставанием в развитии. Чем больше в партии эмбрионов 1 категории, тем лучше будет вывод молодняка [Биологический контроль при инкубации яиц сельскохозяйственной птицы. Методические наставления / Дядичкина Л.Ф., Позднякова Н.С., Мелехина Т.А., Цилинская Т.В., Гура И.В., Шевяков А.Н., Хребтова Е.В, Ребракова Т.М., Силаева А.В. / ГНУ ВНИТИП Россельхозакадемии. - Сергиев Посад, 2014. - 171 с.; Инкубация яиц сельскохозяйственной птицы от А до Я: Энциклопедический справочник / Спиридонов И.П., Мальцев А.Б., Дымков А.Б. - Омск: Изд-во ИП Макшеевой Е.А., 2017. - 594 с.: ил.].
Однако данные способы не позволяют уточнить все нюансы развития эмбриона, особенно в возрасте, соответствующем переносу яиц на вывод. В этот период при просвечивании видно, что нормально развитый эмбрион занимает 2/3 яйца (темная часть яйца), 1/3 часть - это воздушная камера (светлая часть яйца). Например, просвечиванием невозможно установить на сколько втянулся желточный мешок. Как показала практика степень втягивания желточного мешка при внутреннем проклеве может колебаться от 60 до 95%, а при наружном - от 70 до 95%. Если скорлупа яйца толстая, либо имеет пятнистую (как у перепелов) или темную окраску то вероятность ошибки при оценке развития эмбрионов возрастает в разы!
В производственных условиях редко прибегают к вскрытию яиц с живыми зародышами. Однако такие вскрытия могут дать ценные сведения, так как позволяют видеть непосредственно зародыш и его оболочки во время инкубации и уточнить результаты просвечивания яиц.
Научные исследования в области инкубации затруднены влиянием большого количества факторов, помимо изучаемых, которые необходимо учитывать на этапе планирования проведения исследований. Для изучения развития эмбрионов необходима методика, максимально полно учитывающая все их особенности, в том числе при переносе яиц на вывод. В дни переноса яиц на вывод оптимальными показателями для оценки подготовленности эмбрионов являются наличие проклева и доля втягивания желточного мешка эмбрионом.
Наиболее близким к заявленному изобретению является вскрытие яиц с живыми зародышами в дни биологического контроля (независимо от вида птицы), в том числе при переносе яиц на вывод. Для вскрытия берут пробу в 10 яиц. При изучении 36-48-часовых зародышей яйца, предназначенные для вскрытия, на 10-15 минут оставляют в горизонтальном положении, чтобы желток и расположенный на нем зародыш всплыли к верху. Перед вскрытием на тупом конце яйца (над воздушной камерой) острым концом ножниц прокалывают скорлупу. Сбоку яйца делают второй прокол и ножницами вырезают отверстие диаметром 3,0-3,5 см. При этом конец ножниц вводят под скорлупу не более чем на 2-3 мм. После удаления срезанной части скорлупы изучают положение и длину зародыша; диаметр сосудистого поля, измеренный вдоль тела зародыша; количество пар сомитов. Для лучшего изучения зародыша его снимают с желтка следующим образом. Кольцо из фильтровальной бумаги, с диаметром внутреннего отверстия, совпадающим с диаметром сосудистого поля, помещают на бластодерму, предварительно удалив с желтка белок. По наружному краю бумажного кольца ножницами обрезают бластодерму, осторожно снимают и переносят все ложечкой в чашку Петри с водой и отмывают желток. Бумажное кольцо с бластодиском переносят на предметное стекло и рассматривают под лупой. Вскрытие яиц с живыми зародышами на более поздних стадиях инкубации проводят для контроля за их ростом [Орлов М.В. Биологический контроль в инкубации // Под общ. ред. И.П. Кривопишина. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Россельхозиздат, 1987. - С. 77-79.].
Однако, данная методика не предусматривает оценки подготовленности эмбрионов к выводу по стадии проклева и доле втягивания желточного мешка эмбрионом.
При проведении исследований по изучению влияния факторов, способных изменить скорость развития эмбрионов и продолжительность инкубации для сравнения подопытных групп необходима методика оценки развития эмбрионов максимально полно учитывающая все нюансы, с использованием вскрытия яйца и внимательного изучения самого эмбриона, а также статистического анализа полученных данных.
Техническим результатом является оценка подготовленности эмбрионов к выводу по стадии проклева и доле втягивания желточного мешка эмбрионом.
Технический результат способа оценки подготовленности эмбрионов к выводу включает проведение вскрытия яиц в день переноса их на вывод с визуальной оценкой по стадии проклева по 3-х бальной шкале и доле втягивания желточного мешка эмбрионом по 10-ти бальной шкале, с расчетом их средних арифметических, оценку подготовленности эмбрионов к выводу рассчитывают по формуле:
ср.ар.
ср.ар.
ОПЭ=П+ВЖМ
где ОПЭ - оценка подготовленности эмбрионов к выводу;
ср.ар.
П - средняя арифметическая по баллам по стадии проклева;
ср.ар.
ВЖМ - средняя арифметическая по баллам по доле втягивания желточного мешка эмбрионом.
Предлагаемый нами способ позволяет проводить сравнительный статистический анализ подопытных групп по стадии проклева и доле втягивания желточного мешка эмбрионами, например, перепелиными, для оценки их подготовленности к выводу.
Способ оценки подготовленности эмбрионов к выводу заключается в следующем:
Для оценки отбирают путем овоскопирования, например, перепелиных яиц с живыми эмбрионами не менее 30 штук из каждой группы, что обеспечивает репрезентативность выборки [Плохинский Н.А. Руководство по биометрии для зоотехников / М.: Колос, 1969. - 256 с. с ил.].
Затем проводят внешний осмотр каждого яйца на наличие наружного проклева. Если наружный проклев не обнаружен, то срезают крышечку с тупого полюса яйца, стараясь не задеть эмбрион, через полученное отверстие определяют есть ли внутренний проклев. Выставляют оценку в баллах: 0 баллов - нет проклева; 1 балл - внутренний проклев; 2 балла - наружный проклев.
Для определения доли втягивания желточного мешка в брюшную полость эмбрион извлекают из яйца, осторожно разрезав скорлупу от тупого до острого полюса яйца и раскрыв ее, потянув за два образовавшихся края и помещают его в чашку Петри. У извлеченного эмбриона сразу же осматривают часть желточного мешка, не втянутого в брюшную полость, зрительно определяют и запоминают его размер. Это важно сделать сразу и осторожно, так как из-за сокращения мышц брюшной стенки желточный мешок может частично втянуться, а при неаккуратном обращении с эмбрионом даже его незначительное сдавливание может привести к частичному выходу желточного мешка наружу. Далее ножницами аккуратно вскрывают брюшную стенку эмбриона возле переднего угла киля, ножницы вводят до пупочного кольца стараясь не повредить желточный мешок, брюшную стенку разрезают, желточный мешок вынимают и помещают в чашку Петри. Долю втянутого желточного мешка определяют, ориентируясь на его общий размер за минусом размера той его части, которая находилась вне эмбриона при его извлечении из яйца (желточные мешки птенцов одной и той же партии очень сильно варьируют по размеру, поэтому важно определить какую долю занимает не втянутая часть от этого конкретного желточного мешка).
Используют 10-ти бальную шкалу:
1 балл - весь желточный мешок либо 9/10 частей не втянуто
2 балла - 8/10 частей не втянуто
3 балла - 7/10 частей не втянуто
4 балла - 6/10 частей не втянуто
5 балла - 5/10 частей не втянуто
6 баллов - 4/10 частей не втянуто
7 баллов - 3/10 частей не втянуто
8 баллов - 2/10 частей не втянуто
9 баллов - 1/10 частей не втянута
10 баллов - весь желточный мешок втянут
Меньшее количество баллов в шкале дает большую погрешность в оценке подготовленности эмбрионов к выводу.
Из полученных баллов, как по стадии проклева, так и по доле втягивания желточного мешка эмбрионом, вычисляют средние арифметические значения:
ар
1
2
n
Х=(Х+Х+…+X)/n
ар
где Х - среднее арифметическое;
1
n
X-X - результаты конкретных измерений;
n - общее количество измерений.
Общая оценка производится суммированием баллов по стадии проклева и доле втягивания желточного мешка эмбрионом. Таким образом, чем выше балл, тем лучше эмбрион подготовлен к выводу.
ср.ар.
ср.ар.
ОПЭ=П+ВЖМ
где ОПЭ - оценка подготовленности эмбриона к выводу;
ср.ар.
П - средняя арифметическая по баллам по стадии проклева;
ср.ар.
ВЖМ - средняя арифметическая по баллам по доле втягивания желточного мешка эмбрионом.
Пример конкретного выполнения
Известно, что возраст родительского стада оказывает влияние на продолжительность инкубации, так как у более старых несушек в момент снесения яйца эмбрион находится на более поздней стадии развития, чем у молодых несушек [Забудский Ю.И. Репродуктивная функция у гибридной сельскохозяйственной птицы. Сообщение III. Влияние возраста родительского стада (обзор) // Сельскохозяйственная биология. - 2016. - Т. 51. - №4. - С. 436-449].
Из данных таблицы 2 видно, что при увеличении возраста родительского стада увеличивается средняя масса яиц на 0,05-1,05 г (0,38-8,06%), абсолютная и относительная масса 15,5-суточного эмбриона - на 0,043-0,619 г (0,58-8,29%) и 0,23-0,43% соответственно. Достоверная разность отмечена в группах 98- и 126-дневных перепелок-несушек в сравнении с 266-дневными (Р<0,05-0,01).
Проведенная оценка подготовленности эмбрионов к выводу показала, что чем старше перепелки-несушки, тем более подготовлены к выводу на 15,5 сутки инкубации эмбрионы. Так, наименьшее количество баллов по стадии проклева и доле втягивания желточного мешка эмбрионами получено в группе 98-дневных перепелок-несушек, а к 266-дневному возрасту оценки увеличились на 0,22 и 1,33 балла, суммарная оценка соответственно - на 1,55 балла.
При увеличении возраста перепелок-несушек с 98 до 266 дней период инкубации сократился на 19 часов за счет более раннего начала вывода на 12 часов и уменьшения окна вывода на 7 часов. В результате средний час вылупления сократился на 5 часов 48 минут.
Хорошие результаты инкубации получены в группах перепелок-несушек 126- и 210-дневного возраста (таблица 3).
Не смотря на лучшую оплодотворенность яиц от более молодой птицы, выводимость яиц и вывод молодняка в группе 98-дневных перепелок-несушек ниже на 3,71-4,25% и 3,26-3,79% за счет большего количества отходов инкубации категории «эмбрионы замершие до 48 часов инкубации» - на 0,37-0,38%, «кровное кольцо яйца» - на 0,39-0,40%, «замершие 4-15,5 сутки» - 0,43-0,47%, «задохлики» - на 1,54-1,60% и «слабые и калеки» - на 0,72-1,07%. В группе перепелок-несушек выводимость яиц и вывод молодняка были ниже в сравнении с группами 126- и 210-дневного возраста на 2,95-3,49% и 2,93-3,46% за счет большего количества отходов инкубации категории «неоплодотворенные» - на 0,30-0,36%, «эмбрионы замершие до 48 часов инкубации» - на 0,67-0,68%, «кровное кольцо яйца» - на 0,33-0,34%, «замершие 4-15,5 сутки» - 0,31-0,35%, «задохлики» - на 0,64-0,70% и «слабые и калеки» - на 0,67-1,02%.
Таким образом, по результатам инкубации лучшими оказались группы 126- и 210-дневных перепелок-несушек, а наибольшую оценку по подготовленности эмбрионов к выводу на 15,5 сутки инкубации получили перепелки-несушки 266-дневного возраста.
Для установления причин увеличения количества отходов инкубации при лучшем развитии эмбрионов перепелов необходимы дополнительные исследования. Возможно требуется корректировка качества кормления и режима инкубации с увеличением возраста птицы.
Анализ результатов исследований должен быть всесторонним, для понимания полноты влияния изучаемых факторов на развитие эмбриона, что и позволяет сделать способ оценки подготовленности эмбрионов, например, перепелов, к выводу.
Осуществление способа позволит более полно оценить подготовленность эмбрионов к выводу по таким показателям как стадия проклева и доля втягивания желточного мешка для сравнительного статистического анализа подопытных групп при проведении научных исследований. Данный способ применим ко всем видам сельскохозяйственной птицы.