СИНТЕЗ ЛИРАГЛУТИДА

1. Способ получения лираглутида, включающий следующие стадии:
a) Загрузка С-концевого глицина на твердофазную подложку на основе смолы в присутствии связующего агента.
b) Кэппирование непрореагировавших функциональных сайтов.
α
c) Последовательное связывание N-защищенных аминокислот и аминокислот с защищенными боковыми цепями с получением остова лираглутида в присутствии связующего агента и неорганической соли.
d) Снятие защитной группы боковой цепи лизина.
e) Связывание глутаминовой кислоты и пальмитиновой кислоты с боковой цепью лизина в присутствии связующего агента и неорганической соли.
f) Неочищенный лираглутид получают посредством удаления защитных групп и отщепления пептида от смолы.
g) Возможно очистка неочищенного лираглутида.
2. Способ получения лираглудита по п. 1, включающий следующие стадии:
a) Загрузка С-концевого глицина на твердофазную подложку на основе смолы в присутствии связующего агента.
b) Кэппирование непрореагировавших функциональных сайтов проводили с использованием уксусного ангидрида и органического основания.
α
c) Последовательное связывание N-защищенных аминокислот и аминокислот с защищенными боковыми цепями с получением остова лираглутида в присутствии связующего агента и неорганической соли.
d) Снятие защитной группы боковой цепи лизина.
е) Последовательное связывание глутаминовой кислоты и пальмитиновой кислоты с боковой цепью лизина в присутствии связующего агента и неорганической соли.
f) Неочищенный лираглутид получают посредством удаления защитных групп и отщепления пептида от смолы.
g) Возможно очистка неочищенного лираглутида.
3. Способ получения лираглутида, включающий следующие стадии:
α
а) Связывание N-Fmoc-защищенного глицина (Fmoc-Gly-OH) с твердофазной подложкой на основе смолы в присутствии связующего агента.
α
b) Последовательное связывание N-защищенных аминокислот и аминокислот с защищенными боковыми цепями с получением остова лираглутида в присутствии связующего агента и неорганической соли.
c) Снятие защитной группы боковой цепи лизина.
t
d) Связывание боковой цепи пальмитоил-глутаминовой кислоты (Pal-Glu-OBu) с боковой цепью лизина в присутствии связующего агента и неорганической соли.
e) неочищенный лираглутид получают посредством удаления защитных групп и отщепления пептида от смолы.
f) возможно очистка неочищенного лираглутида.
4. Способ получения лираглутида по п. 3, включающий следующие стадии:
α
a) Связывание N-Fmoc-защищенного глицина (Fmoc-Gly-OH) с твердофазной подложкой на основе смолы в присутствии связующего агента.
α
b) Последовательное связывание N-защищенных аминокислот и аминокислот с защищенными боковыми цепями с получением остова лираглутида в присутствии связующего агента и неорганической соли.
c) Снятие метилтритильной защитной группы боковой цепи лизина с использованием TFA (трифторуксусная кислота) в дихлорметане.
t
d) Связывание боковой цепи пальмитоил-глутаминовой кислоты (Pal-Glu-OBu) с боковой цепью лизина в присутствии связующего агента HBTU (О-Бензотриазол-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат), COMU (1-Циано-2-этокси-2-оксоэтилиденаминоокси)диметиламино-морфолино-карбения гексафторфосфат), DEPBT (3-(Диэтоксифосфорилокси) 1,2,3-бензотриазин-4(3H)-он), DIC (1,3-диизопропилкарбодиимид) и добавок чистый оксим, HOBt (N-Гидроксибензотриазол) или их комбинации связующих агентов/добавок и неорганической соли.
e) Неочищенный лираглутид получают посредством удаления защитных групп и отщепления пептида от смолы.
f) Возможно очистка неочищенного лираглутида.
5. Способ получения лираглутида, включающий следующие стадии:
α
а) Связывание N-Fmoc-защищенного глицина (Fmoc-Gly-OH) с твердофазной подложкой на основе смолы в присутствии связующего агента.
α
b) Последовательное связывание N-защищенных аминокислот и аминокислот с защищенными боковыми цепями с получением остова лираглутида в присутствии связующего агента и неорганической соли.
c) Снятие защитной группы Fmoc каждой загруженной аминокислоты с использованием пиперидина в DMF (N,N'-Диметилформамид) или смеси пиперидин/DBU (1,8-Диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен)/DMF.
d) После каждой стадии снятия Fmoc-защиты стадия промывки с использованием HOBt в DMF.
e) Снятие метилтритильной защитной группы лизина
f
f) Связывание боковой цепи сложного эфира пальмитоил-глутаминовой кислоты (Pal-Glu-OBu) с боковой цепью лизина в присутствии связующего агента и неорганической соли.
g) Неочищенный лираглутид получают посредством удаления защитных групп и отщепления пептида от смолы.
h) Возможно очистка неочищенного лираглутида.
6. Способ получения лираглутида по п. 5, включающий следующие стадии:
α
a) Связывание N-Fmoc-защищенного глицина (Fmoc-Gly-OH) с твердофазной подложкой на основе смолы в присутствии связующего агента.
α
b) Последовательное связывание N-защищенных аминокислот и аминокислот с защищенными боковыми цепями с получением остова лираглутида в присутствии связующего агента и неорганической соли.
c) Снятие защитной группы Fmoc каждой загруженной аминокислоты с использованием пиперидина в DMF или смеси пиперидин/DBU/DMF.
d) После каждой стадии снятия Fmoc-защиты стадия промывки с использованием HOBt в DMF.
е) Снятие метилтритильной защитной группы боковой цепи лизина с использованием HFIP (1,1,1,3,3,3-Гексафтор-2-пропанол)/TES (Триэтилсилан)/TFE (Трифторэтанол)/MDC (дихлорметан).
t
f) Связывание боковой цепи пальмитоил-глутаминовой кислоты (Pal-Glu-OBu) с боковой цепью лизина в присутствии связующего агента и неорганической соли.
g) Неочищенный лираглутид получают посредством удаления защитных групп и отщепления пептида от смолы.
h) Возможно очистка неочищенного лираглутида.
7. Способ получения лираглутида, включающий следующие стадии:
α
a) Связывание N-Fmoc-защищенного глицина (Fmoc-Gly-OH) с твердофазной подложкой на основе смолы в присутствии связующего агента.
α
b) Последовательное связывание N-защищенных аминокислот и аминокислот с защищенными боковыми цепями с получением остова лираглутида в присутствии связующего агента и неорганической соли.
c) Снятие защитной группы Fmoc каждой загруженной аминокислоты с использованием пиперидина в DMF или смеси пиперидин/DBU/DMF.
d) После каждой стадии снятия Fmoc-защиты стадия промывки с использованием HOBt в DMF.
e) Снятие метилтритильной защитной группы лизина.
f) Последовательное связывание защищенной глутаминовой кислоты и пальмитиновой кислоты с боковой цепью лизина в присутствии связующего агента и неорганической соли.
g) Неочищенный лираглутид получают посредством удаления защитных групп и отщепления пептида от смолы.
h) Возможно очистка неочищенного лираглутида.
8. Способ получения лираглутида по п. 7, включающий следующие стадии:
α
a) Связывание N-Fmoc-защищенного глицина (Fmoc-Gly-OH) с твердофазной подложкой на основе смолы в присутствии связующего агента.
α
b) Последовательное связывание N-защищенных аминокислот и аминокислот с защищенными боковыми цепями с получением остова лираглутида в присутствии связующего агента и неорганической соли.
c) Снятие защитной группы Fmoc каждой загруженной аминокислоты с использованием пиперидина в DMF или смеси пиперидин/DBU/DMF.
d) После каждой стадии снятия Fmoc-защиты стадия промывки с использованием HOBt в DMF.
е) Снятие метилтритильной защитной группы лизина с использованием HFIP/TES/TFE/MDC.
f) Последовательное связывание защищенной γ-глутаминовой кислоты и пальмитиновой кислоты с боковой цепью лизина в присутствии связующего агента и неорганической соли.
g) Неочищенный лираглутид получают посредством удаления защитных групп и отщепления пептида от смолы.
h) Возможно очистка неочищенного лираглутида.
9. Способ получения лираглутида по любому из предшествующих пунктов, включающий связующие агенты, выбранные из HBTU, COMU, DEPBT, DIC или любой их комбинации.
10. Способ получения лираглутида по любому из предшествующих пунктов, включающий связующие добавки, выбранные из чистого оксима, HOBt или их любой комбинации.
11. Способ получения лираглутида, включающий связывание Вос-гистидина с использованием смеси связующих агентов, выбранной из HBTU-чистый оксим, COMU-чистый оксим, DEPBT-чистый оксим или DIC-чистый оксим.
12. Способ получения лираглутида по п. 11, включающий связывание Вос-гистидина с использованием DEPBT-чистый оксим.
13. Способ получения лираглутида, включающий снятие метилтритильной защитной группы лизина с использованием HFIP/TES/TFE/MDC.
14. Способ получения лираглутида, включающий связывание аминокислот 9-13 с использованием повышенной температуры.
15. Способ получения лираглутида по п. 14, включающий связывание аминокислот 9-13 при температуре 30-45°С.