СЕЛЕКТИВНЫЕ ИНГИБИТОРЫ ПРОТЕИНКИНАЗ
SELECTIVE PROTEIN KINASE INHIBITORS

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение касается соединений формулы I или их фармацевтически приемлемых солей, которые селективно модулируют, регулируют и/или ингибируют передачу сигнала, опосредуемую определенными нативными и/или мутантными протеинкиназами, вовлеченными в различные заболевания человека и животных, такие как заболевания, связанные с пролиферацией клеток, метаболические, аллергические и дегенеративные заболевания. Более конкретно, данные соединения являются мощными и селективными ингибиторами нативной и/или мутантной протеинкиназы c-kit.
Уровень техники
Протеинкиназы представляют собой белки рецепторного типа или нерецепторного типа, которые переносят терминальный остаток фосфата от АТФ к остаткам аминокислот в белках, таким как остатки тирозина, треонина, серина, обеспечивая, таким образом, активацию или инактивацию путей передачи сигнала. Известно, что эти белки вовлечены во многие клеточные механизмы, в случае нарушения которых возникают заболевания, такие как ненормальная клеточная пролиферация и миграция, а также воспаление.
2
3
4
2
3
На настоящий момент известно более 500 протеинкиназ. Это хорошо известные протеинкиназы Abl, Akt1, Akt2, Akt3, ALK, Alk5, A-Raf, Axl, B-Raf, Brk, Btk, Cdk2, Cdk4, Cdk5, Cdk6, CHK1, c-Raf-1, Csk, EGFR, EphAl, EphA2, EphB2, EphB4, Erk2, Fak, Fes, Fer, FGFR1, FGFR, FGFR, FGFR, Flt-3, Fms, Frk, Fyn, Gsk3α, Gsk3β, HCK, Her2/Erbb2, Her4/Erbb4, IGF1R, IKK beta, Irak4, Itk, Jakl, Jak2, Jak3, Jnk1, Jnk2, Jnk3, KDR, Kit, Lck, Lyn, MAP2K1, MAP2K2, MAP4K4, MAPKAPK2, Met, Mer, MNK1, MLK1, mTOR, p38, PDGFRα, PDGFRβ, PDPK1, PI3Kα, PI3Kβ PDKγ, PI3Kδ, Pim1, Pim2, Pim3, PKC alpha, PKC beta, PKC theta, Plk1, Pyk2, Ret, ROCK1, ROCK2, RON, Src, Stk6, Syk, TEC, Tie2, TrkA, TrkB, Tyk2, VEGFR1/Flt-1, VEGFR/Kdr, VEGFR/Flt-4, Yes и Zap70.
Абнормальные клеточные ответы, запускаемые через опосредуемые протеинкиназами события, вызывают множество заболеваний. Эти заболевания включают аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания, неврологические и нейродегенеративные заболевания, рак, сердечно-сосудистые заболевания, аллергии и астму, болезнь Альцгеймера и гормональные заболевания.
Тирозиновые киназы (тирозинкиназы) представляют собой белки рецепторного или нерецепторного типа, которые переносят терминальный остаток фосфата от АТФ к остаткам тирозина в белках, обеспечивая, таким образом, активацию или инактивацию путей передачи сигнала. Известно, что эти белки вовлечены во многие клеточные механизмы, в случае нарушения которых возникают заболевания, такие как абнормальная клеточная пролиферация и миграция, а также воспаление.
На настоящий момент известно около 58 рецепторных тирозинкиназ. Это хорошо известные рецепторы фактора роста эндотелия сосудов VEGF (Kim et al., Nature 362, pp. 841-844, 1993), рецепторы фактора роста тромбоцитов PDGF, c-kit, Flt-3 и семейство FLK. Эти рецепторы могут передавать сигналы другим тирозинкиназам, включая Src, Raf, Frk, Btk, Csk, Abl, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack, и т.д.
Среди рецепторов, обладающих тирозинкиназной активностью, c-kit представляет особенный интерес. Действительно, c-kit является ключевым рецептором, активирующим тучные клетки, которые, как доказано, являются прямо или косвенно вовлеченными во множество патологий, для которых Заявителями зарегистрированы WO 03/004007, WO 03/004006, WO 03/003006, WO 03/003004, WO 03/002114, WO 03/002109, WO 03/002108, WO 03/002107, WO 03/002106, WO 03/002105, WO 03/039550, WO 03/035050, WO 03/035049, US 60/359,652, US 60/359651 и US 60/449861, WO 04/080462, WO 05/039586, WO 06/135721, WO 07/089069, WO 07/124369, WO 08/137794, WO 08/063888, WO 08/011080, WO 09/109071, WO 10/096395.
Было установлено, что тучные клетки, присутствующие в тканях пациентов, вовлечены или вносят определенный вклад в генезис таких заболеваний, как аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит, воспалительные заболевания кишечника (inflammatory bowel diseases, IBD)), аллергические заболевания, остеопороз, раковые заболевания, такие как твердые опухоли, лейкемия и гастроинтестинальные стромальные опухоли (GIST), опухолевый ангиогенез, воспалительные заболевания, интерстициальный цистит, мастоцитоз, заболевания «трансплантат против хозяина», инфекционные заболевания, метаболические заболевания, фиброз, диабет и заболевания ЦНС. Было показано, что при таких заболеваниях тучные клетки участвуют в деструкции тканей путем высвобождения коктейля различных протеаз и медиаторов, таких как гистамин, нейтральные протеазы, медиаторы, образуемые из липидов (простагландины, тромбоксаны и лейкотриены) и различные цитокины (IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, TNF-α, GM-CSF, MIP-1a, MIP-1b, MIP-2 и IFN-γ).
Рецептор c-kit также может быть конститутивно активирован за счет мутаций, приводящих к ненормальной пролиферации клеток и развитию заболеваний, таких как мастоцитоз (мутация D816V) и различные виды рака, такие как GIST (c-kitΔ27, делеция в примембранном участке).
От шестидесяти до семидесяти процентов пациентов с острым миелолейкозом (AML) имеют бластные клетки (клетки-предшественники), которые экспрессируют c-kit, рецептор для фактора стволовых клеток (stem cell factor, SCF) (Broudy, 1997). SCF стимулирует рост гематопоэтических клеток-предшественников и действует как фактор выживания для бластных клеток AML. В некоторых случаях (от 1 до 2%) AML была описана мутация консервативного остатка в киназном домене (Kit816), приводящая к конститутивной активации c-kit (Beghini et al., 2000; Longley et al., 2001). Эта мутация (замена Asp на Val/Tyr), при которой белковый продукт приобретает новые патологические функции (gain of function mutation), была идентифицирована в тучных клетках клеточных линий лейкемии и в образцах, полученных от пациентов с мастоцитозом (Longley et al., 1996). Предварительные результаты показывают, что эта мутация экспрессируется в большинстве случаев системного мастоцитоза ([~60%], Р Dubreuil, AFIRMM, исследование проводится в настоящее время на примерно 300 пациентах).
Цель настоящего изобретения
Таким образом, основной целью настоящего изобретения является поиск сильнодействующих и селективных соединений, способных ингибировать протеинкиназу дикого типа и/или мутантную протеинкиназу, в особенности тирозинкиназу дикого типа и/или мутантную тирозинкиназу, и более конкретно, киназу c-kit дикого типа и/или мутантную c-kit.
В связи с настоящим изобретением мы обнаружили, что соединения формулы I являются сильнодействующими и селективными ингибиторами определенных протеинкиназ, таких как c-kit дикого типа и/или мутантная c-kit. Данные соединения являются хорошими кандидатами для лечения заболеваний, таких как аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания, разные виды рака и мастоцитоз.
Раскрытие изобретения
Был проведен скрининг соединений настоящего изобретения на их способность ингибировать протеинкиназу и в особенности тирозинкиназу, и более конкретно c-Kit и/или мутантную c-Kit (в особенности c-Kit D816V).
В первом воплощении целью настоящего изобретения являются соединения формулы I, которые могут быть представлены либо в форме свободных оснований веществ, либо их фармацевтически приемлемых солей:
где
А представляет собой пяти- или шестичленное гетероциклическое кольцо;
1
R это водород, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, тиоалкильная группа или алкокси группа;
2
R это галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), арильная группа, галоалкильная или алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенная, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности серой, кислородом или азотом, необязательно замещенная галоалкильной или алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также алкокси группа, тиоалкильная группа или галоалкокси группа; а также -COOR, -NRR',
2
2
-NR-CO-R', -CONRR', -SONRR' или -NR-SO-R', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, арильной группы, гетероарильной группы, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также гетероциклическая группа или солюбилизирующая группа;
3
3
R это водород, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), циано, алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, или алкокси группа; а также CF, -NRR',
2
-NR-CO-R', -CONRR', -SONRR', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности серой, кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также гетероциклическая группа или солюбилизирующая группа;
Q представляет собой О или S;
4
W представляет собой N или CR;
4
3
2
R это водород, циано, CF, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), тиоалкильная группа, алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенная, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности серой, кислородом или азотом, необязательно замещенная алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также алкокси группа или галоалкокси группа, солюбилизирующая группа, гетероцикл, -CO-NRR', -SO-NRR',
2
-NRR', -NR-CO-R' или -NR-SOR', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой или гетероциклической группой;
5
X представляет собой N или CR;
5
R это водород, циано, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, алкокси группа, -CO-OR, -CO-NRR', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности серой, кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой или гетероциклической группой.
2
2
2
В одном воплощении настоящее изобретение касается соединений формулы I или их фармацевтически приемлемых солей, где R это галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), арильная группа, галоалкильная или алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенная, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности серой, кислородом или азотом, необязательно замещенная галоалкильной или алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также алкокси группа, тиоалкильная группа или галоалкокси группа; а также -NRR', -NR-CO-R', -CONRR', -SONRR' или -NR-SO-R', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также гетероциклическая группа или солюбилизирующая группа.
Если не указано по-другому, приведенные ниже термины, используемые здесь, определяются следующим образом.
В используемом здесь значении термин "алкил" обозначает насыщенный линейный или разветвленный нециклический углеводород, содержащий от 1 до 10 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 6 атомов углерода, более предпочтительно от 1 до 4 атомов углерода. Представители насыщенных линейных алкилов включают метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил и н-децил; тогда как насыщенные разветвленные алкилы включают изопропил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, изопентил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 4-метилпентил, 2-метилгексил, 3-метилгексил,. 4-метилгексил, 5-метилгексил, 2,3-диметилбутил, 2,3-диметилпентил, 2,4-диметилпентил, 2,3-диметилгексил, 2,4-диметилгексил, 2,5-диметилгексил, 2,2-диметилпентил, 2,2-диметилгексил, 3,3-диметилпентил, 3,3-диметилгексил, 4,4-диметилгексил, 2-этилпентил, 3-этилпентил, 2-этилгексил, 3-этилгексил, 4-этилгексил, 2-метил-2-этилпентил, 2-метил-3-этилпентил, 2-метил-4-этилпентил, 2-метил-2-этилгексил, 2-метил-3-этилгексил, 2-метил-4-этилгексил, 2,2-диэтилпентил, 3,3-диэтилгексил, 2,2-диэтилгексил, 3,3-диэтилгексил и тому подобное. Алкильные группы, входящие в состав соединений настоящего изобретения, могут быть необязательно замещены одним или более заместителями. Алкильные группы, входящие в состав соединений настоящего изобретения, могут быть необязательно замещены солюбилизирующей группой.
В используемом здесь значении термин "арил" обозначает моноциклический или полициклический-ароматический радикал, включающий атомы углерода и водорода. Примеры подходящих арильных групп включают, но ими не ограничиваются, фенил, толил, антраценил, флуоренил, инденил, азуленил и нафтил, а также бензо-слитые карбоциклические остатки, такие как 5,6,7,8-тетрагидронафтил. Арильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или более заместителями. Арильные группы, входящие в состав соединений настоящего изобретения, могут быть необязательно замещены солюбилизирующей группой.
В используемом здесь значении термин "алкокси" относится к алкильной группе, как определено выше, которая присоединена к другому остатку через атом кислорода. Примеры алкокси групп включают метокси, изопропокси, этокси, трет-бутокси, и тому подобное. Алкокси группы могут быть необязательно замещены одним или более заместителями. Алкокси группы, входящие в состав соединений настоящего изобретения, могут быть необязательно замещены солюбилизирующей группой.
В используемом здесь значении термин "тиоалкил" относится к алкильной группе, как определено выше, которая присоединена к другому остатку через атом серы. Тиоалкильные группы могут быть необязательно замещены одним или более заместителями. Тиоалкильные группы, входящие в состав соединений настоящего изобретения, могут быть необязательно замещены солюбилизирующей группой.
В используемом здесь значении термин "гетероцикл" обозначает как гетероциклоалкильные группы, так и гетероарильные группы.
В используемом здесь значении термин "гетероциклоалкил" обозначает моноциклическую или полициклическую группу, имеющую, по меньшей мере, один гетероатом, выбираемый из О, N или S, и которая содержит от 2 до 11 атомов углерода, которая может быть насыщенной или ненасыщенной, но не является ароматической. Примеры гетероциклоалкильных групп включают (но ими не ограничиваются): пиперидинил, пиперазинил, 2-оксопиперазинил, 2-оксопиперидинил, 2-оксопирролидинил, 4-пиперидонил, пирролидинил, гидантоинил, валеролактамил, оксиранил, оксетанил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, тетрагидропиридинил, тетрагидропиримидинил, тетрагидротиопиранил сульфон, тетрагидротиопиранил сульфоксид, морфолинил, тиоморфолинил, тиоморфолинил сульфоксид, тиоморфолинил сульфон, 1,3-диоксолан, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил-2-он, тетрагидротиенил и тетрагидро-1,1-диоксотиенил. Как правило, моноциклические гетероциклоалкильные группы содержат от 3 до 7 атомов. Предпочтительными от 3- до 7-членными моноциклическими гетероциклоалкильными группами являются таковые, которые содержат в кольце 5 или 6 атомов. Гетероатом может быть замещен защитной группой, известной специалисту средней квалификации в данной области техники, например, водород при атоме азота может быть замещен трет-бутоксикарбонильной группой. Кроме того, гетероциклоалкильные группы могут быть необязательно замещены одним или более заместителями. Кроме того, точкой присоединения гетероциклического кольца к другой группе может быть либо атом углерода, либо гетероатом гетероциклического кольца. Под это определение подпадают только стабильные изомеры таких замещенных гетероциклических групп.
В используемом здесь значении термин "гетероарил" и подобные термины обозначают моноциклическое или полициклическое гетероароматическое кольцо, включающее атомы углерода в качестве членов кольца и один или более гетероатом в качестве членов кольца (такой, как например, кислород, сера или азот). Как правило, гетероарильная группа имеет от 1 до примерно 5 гетероатомов в качестве членов кольца и от 1 до примерно 14 атомов углерода в качестве членов кольца. Типичные гетероарильные группы включают пиридил, 1-оксо-пиридил, фуранил, бензо[1,3]диоксолил, бензо[1,4]диоксинил, тиенил, пирролил, оксазолил, имидазолил, тиазолил, изоксазолил, хинолинил, пиразолил, изотиазолил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, триазинил, триазолил, тиадиазолил, изохинолинил, индазолил, бензоксазолил, бензофурил, индолизинил, имидазопиридил, тетразолил, бензимидазолил, бензотиазолил, бензотиадиазолил, бензоксадиазолил, индолил, тетрагидроиндолил, азаиндолил, имидазопиридил, хиназолинил, пуринил, пирроло[2,3]пиримидинил, пиразоло[3,4]пиримидинил, имидазо[1,2-а]пиридил и бензо(b)тиенил. Гетероатом может быть замещен защитной группой, известной специалисту средней квалификации в данной области техники, например, водород при атоме азота может быть замещен трет-бутоксикарбонильной группой. Гетероарильные группы могут быть необязательно замещены одним или более заместителями. Кроме того, входящие в состав кольца атомы азота или серы могут быть окислены. В одном воплощении гетероароматическое кольцо выбирается из 5-8-членных моноциклических гетероарильных колец. Точкой присоединения гетероароматического или гетероарильного кольца к другой группе может быть либо атом углерода, либо гетероатом гетероароматического или гетероарильного кольца.
В используемом здесь значении термин "галоалкильная" обозначает алкильную группу, как определено выше, в которой один или более (включая все) радикалы водорода замещены на гало группы, где каждая гало группа независимо выбирается из -F, -Cl, -Br и -I. Термин "галометил" обозначает метил, в котором от одного до трех радикалов водорода заменено на гало группу. Типичные галоалкильные группы включают трифторметил, бромметйл, 1,2-дихлорэтил, 4-йодбутил, 2-фторпентил, и тому подобное. Галоалкильные группы могут быть необязательно замещены одним или более заместителями. Галоалкильные группы, входящие в состав соединений настоящего изобретения, могут быть необязательно замещены солюбилизирующей группой.
В используемом здесь значении термин "галоалкокси" обозначает алкокси группу, как определено выше, в которой один или более (включая все) радикалы водорода замещены на гало группы, где каждая гало группа независимо выбирается из -F, -Cl, -Br и -I. Типичные галоалкокси группы включают трифторметокси, бромметокси, 1,2-дихлорэтокси, 4-йодбутокси, 2-фторпентокси, и тому подобное. Галоалкокси группы могут быть необязательно замещены одним или более заместителями. Галоалкокси группы, входящие в состав соединений настоящего изобретения, могут быть необязательно замещены солюбилизирующей группой.
В используемом здесь значении термин «заместитель» или «замещенный» означает, что радикал водорода в соединении или в группе замещен на любую желаемую группу, которая является достаточно стабильной в реакционных условиях в незащищенной форме, или когда она защищена с использованием защитной группы. Примерами предпочтительных заместителей являются таковые, которые можно найти в представленных здесь иллюстративных соединениях и воплощениях, а также галоген; алкил, как определено выше; гидрокси; алкокси, как определено выше; нитро; тиол; тиоалкил, как определено выше; циано; галоалкил, как определено выше; галоалкокси, как определено выше; циклоалкил, который может быть моноциклическим или конденсированным или неконденсированным полициклическим (например, циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил) или солюбилизирующая группа.
2
z
2
z
2
z
2
z
2
2
z
2
2
z
В используемом здесь значении термин "солюбилизирующая" группа обозначает группу, которая обладает гидрофильными свойствами, достаточными для того, чтобы улучшить или увеличить растворимость в воде того соединения, в которое она введена, по сравнению с аналогичным соединением, в котором нет данной группы. Гидрофильные свойства могут быть достигнуты любым способом, таким как включение функциональных групп, которые ионизируются в условиях применения с образованием заряженных остатков (например, карбоновые кислоты, сульфоновые кислоты, фосфорные кислоты, амины, и т.д.); групп, которые несут постоянные заряды (например, четвертичные аммонийные группы); и/или гетероатомов или гетероатомных групп (например, О, S, N, NH, N-(CH)R, N-(CH)-C(O)R, N-(CH)-C(O)OR, N-(CH)-S(O)R, N-(CH)-S(O)OR, N-(CH)-C(O)NRR', где z представляет собой целое число от 0 до 6, R и R' каждый независимо выбирается из водорода, алкильной группы, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, и необязательно замещенной одним или более гетероатомами, такими как галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), кислород и азот; а также алкокси группы, содержащей от 1 до 10 атомов углерода; а также арильной и гетероарильной групп.
В некоторых воплощениях солюбилизирующая группа представляет собой гетероциклоалкил, который необязательно включает от 1 до 5 заместителей, которые могут сами по себе быть солюбилизирующими группами.
В конкретном воплощении солюбилизирующая группа имеет формулу:
2
2
z
2
z
2
z
2
z
2
2
z
2
2
z
2
где L выбирается из группы, состоящей из CH и N, М выбирается из группы, состоящей из -CH(R)-, -CH-, -О-, -S-, -NH-, -N(-(CH)-R)-, -N(-(CH)-C(O)R)-, -N(-(CH)-C(O)OR)-, -N(-(CH)-S(O)R)- -N(-(CH)-S(O)OR)- и -N(-(CH)-C(O)NRR')-, где z представляет собой целое число от 0 до 6, R и R' каждый независимо выбираются из водорода, алкильной группы, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, и необязательно замещенной одним или более гетероатомами, такими как галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), кислород и азот; а также алкокси группы, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, NRR' группы, где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, как определено выше, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной; а также арильной и гетероарильной групп, при условии, что L и М не являются обе одновременно группами CH и CH, соответственно.
1
6
1
6
3
6
1
6
1
6
В другом конкретном воплощении солюбилизирующая группа выбирается из группы, в которую входят морфолинил, пиперидинил, N-(C-C)алкилпиперидинил, в частности, N-метилпиперидинил и N-этилпиперидинил, N-(4-пиперидинил)пиперидинил, 4-(l-пиперидинил)пиперидинил, 1-пирролидинилпиперидинил, 4-морфолинопиперидинил, 4-(N-метил-1-пиперазинил)пиперидинил, пиперазинил, N-(C-C)алкилпиперазинил, в частности, N-метилпиперазинил и N-этилпиперазинил, N-(C-C)циклоалкилпиперазинил, в частности, N-циклогексилшгаеразинил, пирролидинил, N-(C-C)алкилпирролидинил, в частности, N-метилпирролидинил и N-этилпирролидинил, диазепинил, N-(C-C)алкилазепинил, в частности, N-метил азепинил и N-этилазепинил, гомопиперазинил, N-метилгомопиперазинил, N-этилгомопиперазинил, имидазолил, и тому подобное.
Среди соединений формулы I, в которых кольцо А определено выше, настоящее изобретение направлено на соединения следующей формулы II:
где:
кольцо А представляет собой пятичленное гетероциклическое кольцо;
1
R это водород, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, или алкокси группа;
2
2
R это галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), арильная группа, галоалкильная или алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенная, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенная галоалкильной или алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также алкокси группа или галоалкокси группа; а также -COOR, -NRR', -NR-CO-R', -CONRR' или -NR-SO-R', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, арильной группы, гетероарильной группы, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также гетероциклическая группа или солюбилизирующая группа;
3
3
R это водород, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), циано, алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, или алкокси группа; а также CF, -NRR', -NR-CO-R', -CONRR' группа, где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также гетероциклическая группа или солюбилизирующая группа;
Q представляет собой О или S;
4
W представляет собой N или CR;
4
3
2
2
R это водород, циано, CF, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенная, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенная алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также алкокси группа или галоалкокси группа, солюбилизирующая группа, гетероцикл, -CO-NRR', SO-NRR', -NRR', -NR-CO-R' или -NR-SOR', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой или гетероциклической группой;
5
X представляет собой N или CR;
5
R это водород, циано, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, алкокси группа, -CO-OR, -CO-NRR', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой или гетероциклической группой;
М представляет собой С или N;
2
7
7
V представляет собой CH, CR или NR;
7
R это водород или алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенная солюбилизирующей группой или гетероциклической группой;
8
8
9
Y представляет собой N, CR или CRR;
8
8
8
9
Z представляет собой N, NR, CR или CRR;
8
R это водород, алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, или алкокси группа;
9
R это водород или алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода.
2
2
В одном воплощении настоящее изобретение касается соединений формулы II или их фармацевтически приемлемых солей, где R это галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), арильная группа, галоалкильная или алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенная, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенная галоалкильной или алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также алкокси группа или галоалкокси группа; а также -NRR', -NR-CO-R', -CONRR' или -NR-SO-R', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также гетероциклическая группа или солюбилизирующая группа.
Примеры предпочтительных соединений приведенной выше формулы представлены ниже в таблице 1:
Среди соединений формулы I, в которых кольцо А определено выше, настоящее изобретение направлено на соединения следующей формулы III:
где:
кольцо А представляет собой шестичленное гетероциклическое кольцо;
1
R это водород, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, или алкокси группа;
2
2
R это галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), арильная группа, галоалкильная или алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенная, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенная галоалкильной или алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также алкокси группа или галоалкокси группа; а также -COOR, -NRR', -NR-CO-R', -CONRR' или -NR-SO-R', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, арильной группы, гетероарильной группы, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также гетероциклическая группа или солюбилизирующая группа;
3
3
R это водород, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), циано, алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, или алкокси группа; а также CF, -NRR', -NR-CO-R', -CONRR', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также гетероциклическая группа или солюбилизирующая группа;
Q представляет собой О или S;
4
W представляет собой N или CR;
4
3
2
2
R это водород, циано, CF, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенная, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенная алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также алкокси группа или галоалкокси группа, солюбилизирующая группа, гетероцикл, -CO-NRR', SO-NRR', -NRR', NR-CO-R' или NR-SOR', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой или гетероциклической группой;
5
X представляет собой N или CR;
5
R это водород, циано, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, алкокси группа, -CO-OR, -CO-NRR', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой или гетероциклической группой;
М представляет собой С или N;
2
7
7
V представляет собой N, CH, CR или NR;
7
R это водород, циано или алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенная солюбилизирующей группой или гетероциклической группой;
8
8
9
Y представляет собой N, CR или CRR;
8
8
9
Z представляет собой N, CR или CRR;
8
8
9
Т представляет собой N, С=O, CR или CRR;
8
R это водород, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), гидроксильная группа, алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, или алкокси группа;
9
R это водород или алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода.
В одном воплощении настоящее изобретение касается соединений с формулой III или их фармацевтически приемлемых солей, где
2
2
R это галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), арильная группа, галоалкильная или алкильная группа, содержащая от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенная, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенная галоалкильной или алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также алкокси группа или галоалкокси группа; а также -NRR', -NR-CO-R', -CONRR' или -NR-SO-R', где R и R' каждый независимо друг от друга выбираются из водорода, алкильной группы, необязательно замещенной, по меньшей мере, одним гетероатомом, в особенности кислородом или азотом, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от 1 до 10 атомов углерода, необязательно замещенной солюбилизирующей группой; а также гетероциклическая группа или солюбилизирующая группа.
Примеры предпочтительных соединений приведенной выше формулы представлены ниже в таблице 2:
В одном воплощении, которое может комбинироваться с другими воплощениями настоящего изобретения, настоящее изобретение относится к соединениям формулы I или к их фармацевтически приемлемым солям, где:
1
1
6
R это Н или (C-C)алкил;
2
R это Н;
галоген;
COOH;
1
6
10
11
1
4
10
11
1
4
1
4
1
4
10
11
(C-C)алкил, необязательно замещенный группой -NRR, OH или (C-C)алкокси, необязательно замещенный ОН, где R и R каждый независимо друг от друга означает Н или (C-С)алкил, необязательно замещенный амино, (C-С)алкиламино или ди(C-C)алкиламино; или R и R образуют вместе с атомом азота, к которому они присоединены, 5- или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин и морфолин;
1
6
1
4
(C-C)алкокси, необязательно замещенный ОН, (C-C)алкокси или группой
12
13
12
13
1
4
12
13
1
4
-NRR, где R и R каждый независимо друг от друга означает Н или (C-C)алкил; или R и R образуют вместе с атомом азота, к которому они присоединены, 5-или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин и морфолин, указанный гетероциклоалкил является необязательно замещенным 1-3 (C-C)алкилами;
14
14
1
4
группа -OR, где R означает 5- или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин и морфолин, указанный гетероциклоалкил является необязательно замещенным 1-3 (C-C)алкилами;
15
16
15
16
1
4
1
4
15
16
группа -CONRR, где R и R каждый независимо друг от друга означает Н или (C-C)алкил, необязательно замещенный (C-C)алкокси или 5- или 6-членным гетероциклоалкилом, содержащим 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, морфолин; или R и R образуют вместе с атомом азота, к которому они присоединены, 5- или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин и морфолин;
17
18
17
1
4
18
1
4
1
4
группа –NRR, где R означает Н или (C-C)алкил и R означает Н; (C-C)алкил, необязательно замещенный (C-C)алкокси; или 5- или 6-членный гетероарил, содержащий 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пиридин, пиримидин и тиазол;
19
20
19
1
4
20
1
4
1
4
1
4
1
4
группа -NRCOR, где R означает Н или (C-C)алкил и R означает Н или (C-C)алкил, необязательно замещенный амино, (C-C)алкиламино или ди(C-C)алкиламино или 5- или 6-членным гетероциклоалкилом, содержащим 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидином, пиперидином, пиперазином и морфолином, указанный гетероциклоалкил является необязательно замещенным 1-3 (C-C)алкилами; или
1
4
1
4
1
4
5- или 6-членный гетероциклоалкил или гетероарил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О и N, в частности, пиперидин и фуран, указанные гетероциклоалкил или гетероарил являются необязательно замещенными оксо группой или (C-C)алкилом, необязательно замещенным амино, (C-C)алкиламино или ди(C-C)алкил амино;
3
3
1
4
1
4
R означает H; циано; CF; галоген; (C-С)алкил; или (С-С)алкокси;
Q означает О или S, предпочтительно Q означает О;
21
21
W означает N или CR, где R означает Н;
галоген;
CN;
3
CF;
3
OCF;
1
4
(C-C)алкил, необязательно замещенный 5- или 6-членным гетероциклоалкилом, содержащим 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин и морфолин;
1
4
(С-С)алкокси;
2
n
22
22
1
4
22a
22b
22a
22b
1
4
1
4
группу -O(CH)R, где n равно 0, 1, 2 или 3 и R означает Н; (C-C)алкокси; группу -NRR, где R и R каждый независимо друг от друга означает Н или (C-C)алкил; или 5- или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин и морфолин, указанный гетероциклоалкил является необязательно замещенным 1-3 (C-C)алкилами;
23
24
23
24
1
4
1
4
24
группу -NRR, где R и R каждый независимо друг от друга означает Н или (C-C)алкил, необязательно замещенньш (C-C)алкокси; R может также представлять собой группу
2
1
4
23
24
1
4
-SO(C-C)алкил; или R и R образуют вместе с атомом азота, к которому они присоединены, 5- или 6-членный гетероциклоалкил или гетероарил, содержащие 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин, морфолин и пиразол, указанный гетероциклоалкил является необязательно замещенным 1-3 (C-C)алкилами;
25
25
1
4
1
4
X означает N или CR, где R означает Н; CN; (C-C)алкил; или группу -COO(C-C)алкил; и
4
1
4
1
4
1
4
А означает 5- или 6-членный гетероциклоалкил или гетероарил, содержащие 1-3 гетероатома, выбираемых из О и N, в частности, пиперидин, пиперазин, пирролидин, морфолин, имидазолидин, дигидроимидазол, триазол, дигидропиридин и тетрагидропиридин, указанные гетероциклоалкил или гетероарил являются необязательно замещенными 1-3 заместителями, выбираемыми из: оксо группы; галогена; (Q-C)алкила, необязательно замещенного амино, (C-C)алкиламино, ди(C-C)алкиламино или 5- или 6-членным гетероциклоалкилом, содержащим 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О и N, в частности, пиперидином; и (C-C)алкокси.
2
3
Среди этого семейства соединений таковые, в которых R, R и W являются такими, как определено ниже, являются предпочтительными:
2
R это Н;
галоген;
1
6
10
11
1
4
10
11
1
4
1
4
1
4
10
11
(C-C)алкил, необязательно замещенный группой -NRR или (C-С)алкокси, необязательно замещенным ОН, где R и R каждый независимо друг от друга означает Н или (C-C)алкил, необязательно замещенный амино, (C-C)алкиламино или ди(C-C)алкиламино; или R и R образуют вместе с атомом азота, к которому они присоединены, 5- или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин и морфолин;
1
6
1
4
(C-C)алкокси, необязательно замещенный ОН, (C-C)алкокси или группой
12
13
12
13
1
4
12
13
1
4
-NRR, где R и R каждый независимо друг от друга означает Н или (C-C)алкил; или R и R образуют вместе с атомом азота, к которому они присоединены, 5-или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин и морфолин, указанный гетероциклоалкил является необязательно замещенным 1-3 (C-C)алкилами;
14
14
1
4
группа -OR, где R означает 5- или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин и морфолин, указанный гетероциклоалкил является необязательно замещенным 1-3 (C-C)алкилами;
15
16
15
16
1
4
1
4
15
16
группа -CONRR, где R и R каждый независимо друг от друга означает Н или (C-C)алкил, необязательно замещенный (C-C)алкокси; или R и R образуют вместе с атомом азота, к которому они присоединены, 5- или 6-членный гетероциклоалкил содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин и морфолин;
17
18
17
1
4
18
1
4
1
4
группа -NRR, означает R это Н или (C-C)алкил и R означает Н; (C-C)алкил, необязательно замещенный (C-C)алкокси; или 5- или 6-членный гетероарил, содержащий 1-3 гетероатома, выбираемых из О и N, в частности, пиридин;
19
20
19
1
4
20
1
4
1
4
1
4
1
4
группа -NRCOR, где R означает Н или (C-C)алкил и R означает Н или (C-C)алкил, необязательно замещенный амино, (C-C)алкиламино или ди(C-C)алкиламино или 5- или 6-членным гетероциклоалкилом, содержащим 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидином, пиперидином, пиперазином и морфолином, указанный гетероциклоалкил является необязательно замещенным 1-3 (C-C)алкилами; или
1
4
1
4
1
4
5- или 6-членный гетероциклоалкил или гетероарил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О и N, в частности, пиперидин и фуран, указанные гетероциклоалкил или гетероарил являются необязательно замещенными оксо группой или (С-С)алкилом, необязательно замещенным амино, (C-C)алкиламино или ди(C-C)алкиламино;
3
3
1
4
1
4
R означает Н; CF; галоген; (C-C)алкил; или (C-C)алкокси;
21
21
W означает N или CR, где R означает
Н;
галоген;
CN;
3
CF;
3
OCF;
1
4
(C-C)алкил, необязательно замещенный 5- или 6-членным гетероциклоалкилом, содержащим 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О и N, в частности, пирролидином, пиперидином, пиперазином и морфолином;
1
4
(C-C)алкокси;
2
n
22
22
1
4
группу -O(CH)R, где n равно 0, 1 или 2 и R означает 5- или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин и морфолин, указанный гетероциклоалкил является необязательно замещенным 1-3 (C-C)алкилами;
23
24
23
24
1
4
1
4
23
24
1
4
группу -NRR, где R и R каждый независимо друг от друга означает Н или (C-C)алкил, необязательно замещенный (C-C)алкокси; или R и R образуют вместе с атомом азота, к которому они присоединены, 5- или 6-членный гетероциклоалкил или гетероарил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, S и N, в частности, пирролидин, пиперидин, пиперазин, морфолин и пиразол, указанный гетероциклоалкил является необязательно замещенным 1-3 (C-C)алкилами.
В другом воплощении, которое может комбинироваться с другими воплощениями настоящего изобретения, рассматриваются соединения формулы I или их фармацевтически приемлемые соли, где
1
1
4
R означает Н или (C-C)алкил;
2
1
4
1
4
1
4
12
13
12
13
1
4
12
13
15
16
15
16
1
4
R означает Н; (C-C)алкил, необязательно замещенный (C-C)алкокси; (C-C)алкокси, необязательно замещенный ОН или группой -NRR, где R и R каждый независимо друг от друга означает Н или (C-C)алкил или R и R образуют вместе с атомом азота, к которому они присоединены, 5- или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О, и N, в частности, морфолин; или группа -CONRR, где R и R каждый независимо друг от друга означает Н или (С-C)алкил;
3
1
4
R означает Н или (С-С)алкил;
Q означает О;
21
21
3
1
4
1
4
2
n
22
22
W означает N или CR, где R означает Н; OCF; (C-C)алкил; (С-С)алкокси; или группу -O(CH)R, где n равно 0, 1 или 2, предпочтительно n равно 2, и R означает 5- или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О и N, в частности, морфолин;
X означает N или CH; и
1
4
А означает 5- или 6-членный гетероциклоалкил или гетероарил, содержащий 1 или 2 атома азота, в частности, имидазолидин и дигидропиридин, указанные гетероциклоалкил или гетероарил являются необязательно замещенными 1-3 (C-C)алкилами.
Предпочтительные соединения настоящего изобретения выбираются из таковых, представленных в примерах 1-225, и их фармацевтически приемлемых солей.
Следующие соединения являются наиболее предпочтительными:
1-{4-[2-((5-Этоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-пиридин-2-ил}-имидазолидин-2-он;
1-{3-[2-((5-Этоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-5-метокси-фенил}-4,4-диметил-имидазолидин-2-он;
1-(3-{2-[5-(2-Гидрокси-этокси)-2-метил-фениламино]-оксазол-5-ил}-5-метил-фенил)-имидазолидин-2-он;
1-(4-{2-[5-(2-Гидрокси-этокси)-2-метил-фениламино]-оксазол-5-ил}-пиридин-2-ил)-имидазолидин-2-он;
1-(4-{2-[2-Метил-5-(2-морфолин-4-ил-этокси)-фениламино]-оксазол-5-ил}-пиридин-2-ил)-имидазолидин-2-он;
1-{4-[2-((5-Метоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-пиридин-2-ил}-4-метил-имидазолидин-2-он;
4-Метил-1-(4-{2-[2-метил-5-(2-морфолин-4-ил-этокси)-фениламино]-оксазол-5-ил}-пиридин-2-ил)-имидазолидин-2-он;
1-(3-Метил-5-{2-[2-метил-5-(2-морфолин-4-ил-этокси)-фениламино]-оксазол-5-ил}-фенил)-имидазолидин-2-он;
1-(4-{2-[2-Метил-5-(3-морфолин-4-ил-пропокси)-фениламино]-оксазол-5-ил}-пиридин-2-ил)-имидазолидин-2-он;
1-{3-[2-((5-Этоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-5-метокси-фенил}-имидазолидин-2-он;
1-(3-Метокси-5-{2-[2-метил-5-(2-морфолин-4-ил-этокси)-фениламино]-оксазол-5-ил}-фенил)-имидазолидин-2-он;
1-{3-[2-((5-Этоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-5-метокси-фенил}-4-метил-имидазолидин-2-он;
1-{3-трет-Бутокси-5-[2-((5-метоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-фенил}-имидазолидин-2-он;
1-(3-{2-[5-(2-Гидрокси-этокси)-2-метил-фениламино]-оксазол-5-ил}-5-метокси-фенил)-имидазолидин-2-он;
1-(3-Метокси-5-{2-[2-метил-5-(2-морфолин-4-ил-этокси)-фениламино]-оксазол-5-ил}-фенил)-4-метил-имидазолидин-2-он;
1-{3-Изопропокси-5-[2-((5-метоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-фенил}-имидазолидин-2-он;
1-(3-{2-[5-(2-Гидрокси-этокси)-2-метил-фениламино]-оксазол-5-ил}-5-изопропокси-фенил)-имидазолидин-2-он;
1-(3-Изопропокси-5-{2-[5-(2-метокси-этил)-2-метил-фениламино]-оксазол-5-ил}-фенил)-имидазолидин-2-он;
1-(3-(2-(2-Метил-5-(2-морфолиноэтокси)фениламино)оксазол-5-ил)-5-(трифторметокси)фенил)имидазолидин-2-он;
1-(3-(2-(5-Метокси-2-метилфениламино)оксазол-5-ил)-5-(трифторметокси)фенил)имидазолидин-2-он;
1-(3-{2-[5-(2-Гидрокси-этоксиметил)-2-метил-фениламино]-оксазол-5-ил}-5 -метил-фенил)-имидазолидин-2-он;
3-{5-[3-Изопропокси-5-(2-оксо-имидазолидин-1-ил)-фенил]-оксазол-2-иламино}-Н-(2-метокси-этил)-4-метил-бензамид;
1-(3-(2-(5-(Этоксиметил)-2-метилфениламино)оксазол-5-ил)-5-(трифторметокси)фенил)имидазолидин-2-он;
3-{3-[2-(3,5-Диметил-фениламино)-оксазол-5-ил]-5-трифторметокси-фенил}-4-метил-1Н-пиридин-2-он;
3-{3-[2-(3,5-Диметил-фениламино)-оксазол-5-ил]-5-метокси-фенил}-1Н-пиридин-2-он;
3-{3-[2-(3,5-Диметил-фениламино)-оксазол-5-ил]-5-изопропокси-фенил}-4-метил-1Н-пиридин-2-он;
4-[2-(5-(Этоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-4'-метил-1'Н-[2,3']бипиридинил-2'-он;
3-[3-[2-(3,5-Диметил-фениламино)-оксазол-5-ил]-5-(2-морфолин-4-ил-этокси)-фенил]-4-метил-1Н-пиридин-2-он;
4'-Метил-4-{2-[2-метил-5-(2-морфолин-4-ил-этокси)-фениламино]-оксазол-5-ил}-1'Н-[2,3']бипиридинил-2'-он;
4-[2-(3,5-Диметил-фениламино)-оксазол-5-ил]-4'-метил-6-(2-морфолин-4-ил-этокси)-1'Н-[2,3']бипиридинил-2'-он;
1-{3-[2-((5-Этоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-5-изопропокси-фенил}-имидазолидин-2-он;
4'-Метил-4-{2-[2-метил-5-(3-морфолин-4-ил-пропокси)-фениламино]-оксазол-5-ил}- 1'Н-[2,3']бипиридинил-2'-он; и
их фармацевтически приемлемые соли.
Соединения настоящего изобретения могут быть получены с использованием стандартных методов, как указано ниже.
Синтез производных аминооксазола проводили, начиная с реагирования ароматических альдегидов I с n-толуолсульфонилметил изоцианидом (TosMIC) для получения соответствующих арилзамещенных производных оксазола II с использованием метода Van Leusen et. al. (Tetrahedron Lett., 1972, 23, 2369) (Схема 1). Коммерчески недоступные альдегиды получали с использованием описанных в литературе методов введения альдегидной группы либо из соответствующего бромированного ароматического соединения с использованием органометаллического реагента и DMF, либо путем окисления соответствующего толуола согласно методу Frey et. al. (Tetrahedron Lett., 2001, 39, 6815).
Второе, эти соединения II были далее дополнительно функционализированы путем депротонирования оксазольного остатка с помощью подходящего органического основания и последующего электрофильного хлорирования для получения соединений 2-хлороксазола III. Прямая реакция нуклеофильного замещения соединений анилина IV (где R' представляет собой водород) в присутствии подходящего растворителя, такого как спирт, и при нагревании при повышенной температуре, должна, как правило, давать конечные целевые соединения V. Соединения V можно также получить путем реагирования соединений IV (где R' представляет собой ацетильную группу) и соединений III в присутствии гидрида натрия и подходящего растворителя, такого как тетрагидрофуран или диметилформамид (WO 2007/131953).
Схема 2 показывает синтез производных аминотиазола VIII, который вначале проводится путем реагирования ароматических альдегидов I с (метоксиметил)трифенилфосфоний хлоридом для получения соответствующих производных арилзамещенного енольного эфира VI с использованием реакции Виттига (Wittig reaction), описанной Iwao et. al. (J. Org. Chem. 2009, 74, 8143). Далее проводили циклизацию с енольным эфиром VI, производными тиомочевины VII и Н-бромсукцинимидом (NBS) с использованием метода Zhao et. al. {Tetrahedron Lett., 2001, 42,2101).
Далее настоящее изобретение иллюстрируется с помощью Примеров, которые представляют предпочтительные на данный момент воплощения, которые составляют часть настоящего изобретения, но которые никаким образом не могут быть использованы для ограничения рамок настоящего изобретения.
Осуществление изобретения
Примеры синтеза соединений
Настоящее изобретение будет более полно раскрыто путем ссылки на следующие примеры синтезов, но они не должны рассматриваться как ограничивающие рамки настоящего изобретения.
1
Общие замечания: Все используемые химикаты были химически чистыми (reagent grade) коммерчески доступными продуктами. Растворители были коммерчески доступными безводными химически чистыми и использовались без дополнительной очистки. За протеканием реакций следили с помощью тонкослойной хроматографии с использованием готовых пластинок с силикагелем 60F 254, Merck TLC, которые визуализировали под УФ светом. Линии на спектрах Н ЯМР обозначались как синглет (s), широкий синглет (br s), дублет (d), триплет (t), квадруплет (q) и мультиплет (m) и спектры ЯМР регистрировали с использованием Bruker Avance 300, или 360, или 400 МГц спектрометра. Масс-спектры определяли методом масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением (Electrospray Ionisation Mass Spectrometry (ESI MS)) в положительном варианте или методом масс-спектрометрии с химической ионизацией при атмосферном давлении (Atmospheric Pressure Chemical Ionization Mass Spectrometry (APCI MS)) в положительном варианте.
3
3
Методы LCMS: Метод 1. Этот метод применялся при работе на приборе ACQUITY Waters для жидкостной хроматографии ультравысокого разрешения (Ultra-high performance liquid chromatography (UPLC)), соединенном с TQD масс-спектрометром. Использовался следующий градиент: начало при t=0,0 мин 5% CHCN+0,1% Муравьиная кислота в Воде+0,1% Муравьиная кислота до t=0,5 мин; затем линейный градиент от t=0,5 мин до t=7,0 мин до достижения 100% CHCN+0,1% Муравьиная кислота; затем оставаясь в тех же условиях от t=7,0 мин до t=10,0 мин. Использовалась колонка Waters HSS С18 1,8 мкм, 2,1×50 мм. Прибором для детекции являлся тройной квадрупольный масс-спектрометр (TQD) с использованием ионизации электрораспылением ESI в положительном варианте.
3
3
3
Метод 2: Этот метод применялся при работе на приборе HPLC 2695 Alliance, Waters, соединенном с масс-спектрометром ZMD. Использовался следующий градиент: начало при t=0,0 мин при 0% CHCN+0,04% Муравьиная кислота в Воде (10 мМ); затем линейный градиент до t=3,1 мин до достижения 100% CHCN+0,04% Муравьиная кислота; затем оставаясь в тех же условиях до t=3,8 мин и снижаясь до t=4,8 мин до 0% CHCN+0,04% Муравьиная кислота в Воде. Использовалась колонка Sunfire 2,1×50 мм dp: 3,5 мкм.
Сокращения
AcCl
Ацетилхлорид
Al<sub>2</sub>O<sub>3</sub>
Гель окиси алюминия
APCI MS
Масс-спектрометр с химической ионизацией при атмосферном давлении (Atmospheric Pressure Chemical Ionization Mass Spectrometer)
BINAP
2,2'-Бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафталин
нBuLi
н-Бутиллитий
tBuONO
Трет-бутилнитрит
C<sub>2</sub>Cl<sub>6</sub>
Гексахлорэтан
CDCl<sub>3</sub>
Дейтерий-хлороформ
CH<sub>3</sub>I
Йодметан
mCPBA
3-Хлорпероксибензойная кислота
Davephos
2-дициклогексилфосфино-2'-(N,N-диметиламино)бифенил
DCM
Дихлорметан
DCE
1,2-дихлорэтилен
ДМФА
N,N-диметилформамид
ДМСО-d<sub>6</sub>
Гексадейтерий диметил сульфоксид
EDCI
1-Этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид
EI-MS
Масс-спектрометрия с ионизацией электронным ударом (Electron impact ionisation mass spectrometry)
ES-MS
Macc-спектрометрия с электрораспылением (Electrospray mass spectrometry)
Et<sub>2</sub>O
Диэтиловый эфир
EtOAc
Этилацетат
EtOH
Этанол
ч
Час(ы)
H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>
Перекись водорода
НОВТ
N-Гидроксибензотриазол
K<sub>2</sub>CO<sub>3</sub>
Карбонат калия
K<sub>3</sub>PO<sub>4</sub>
Трехзамещенный фосфат калия
KOtBu
Трет-Бутоксид калия
KSCN
Тиоцианат калия
LiHMDS
Литий Бис(триметилсилил)амид
MeOH
Метанол
MgSO<sub>4</sub>
Сульфат магния
мин
Минуты
NaH
Гидрид натрия
NaHCO<sub>3</sub>
Бикарбонат натрия
NaI
Йодид натрия
NaOH
Гидроксид натрия
NaOtBu
трет-бутоксид натрия
NaOEt
Этоксид натрия
NaOMe
Метоксид натрия
NBS
N-бромсукцинимид
NEt<sub>3</sub>
Триэтиламин
Pd<sub>2</sub>(dba)<sub>3</sub>
Трис(дибензилиденацетон)палладий (0)
Pd(PPh<sub>3</sub>)<sub>4</sub>
Тетракис(трифенилфосфин)палладий (0)
iPrOH
2-Пропанол
SiO<sub>2</sub>
Силикагель
SnCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O
Дигидрат хлорида олова (II)
TosMIC
n-Толуолсульфонилметил изоцианид
ТГФ
Тетрагидрофуран
Xantphos
4,5-Бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен
Пример 214
Подход, используемый для синтеза примера 214
Подход, используемый для синтеза интермедиата I-е
Синтез интермедиата I-а: 1,3-дибром-5-изопропокси-бензол
3
2
3
4
3
1
К раствору 60% дисперсии NaH в минеральном масле (1,89 г, 47,25 ммоль) в безводном ДМФА (20 мл) в инертной атмосфере по каплям добавляли при 0°C i-PrOH (3,62 мл, 47,25 ммоль). Смесь перемешивали при 0°C в течение 15 мин. Затем по каплям добавляли раствор 1,3-дибром-5-фтор-бензола (1,98 мл, 15,75 ммоль) в безводном ДМФА (20 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. По каплям добавляли насыщенный раствор NaHCO и неочищенный продукт экстрагировали EtO (2 раза), органический слой промывали насыщенным раствором NaHCO (3 раза), затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали для получения I-а в виде масла желтого цвета с количественным выходом. Н RMN (300 МГц, CDCl) δ 7,21 (t, J=1,4 Гц, 1Н), 6,97 (d, J=1,5 Гц, 2H), 4,61-4,40 (m, 1Н), 1,32 (d, J=6,0 Гц, 6H).
Синтез интермедиата I-b: 3-бром-5-изопропокси-бензальдегид
2
2
2
4
3
1
К раствору I-а (4,630 г, 15,75 ммоль) в безводном EtO (60 мл) в инертной атмосфере по каплям добавляли при -78°C раствор н-бутил лития в безводном EtO (6,3 мл, 15,75 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 0,5 ч. Затем по каплям добавляли безводный ДМФА (1,35 мл) при -78°C и температуре позволяли подняться до -40°C в течение 1,5 ч. Добавляли раствор HCl (3N), и неочищенный продукт экстрагировали EtO (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали для получения I-b в виде масла желтого цвета с выходом 82%. Н RMN (300 МГц, CDCl) δ 9,89 (s, 1Н), 7,54 (m, 1H), 7,29 (m, 2H), 4,60 (dt, J=12,1, 6,0 Гц, 1H), 1,36 (t, J=6,0 Гц, 6H).
Синтез интермедиата I-c: 5-(3-бром-5-изопропокси-фенил)-оксазол
2
3
4
3
1
К раствору I-b (6,925 г, 28,50 ммоль) в МеОН (125 мл) последовательно были добавлены KCO (11,811 г, 85,50 ммоль) и TosMIC (6,674 г, 34,20 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем удаляли растворитель при пониженном давлении, добавляли воду и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 5-30% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением 1-е в виде масла желтого цвета с выходом 86%. Н RMN (300 МГц, CDCl) δ 7,90 (s, 1Н), 7,34 (m, 2Н), 7,09 (m, 1Н), 7,00 (m, 1H), 4,56 (dt, J=12,1, 6,0 Гц, 1Н), 1,49-1,26 (m, 6Н).
Синтез интермедиата I-d: 5-(3-бром-5-изопропокси-фенил)-2-хлор-оксазол
2
6
4
3
1
К раствору I-c (6,921 г, 24,50 ммоль) в безводном ТГФ (130 мл) в инертной атмосфере по каплям добавляли при -78°C раствор LiHMDS в безводном THF (29 мл, 29,00 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 0,5 часа. Затем добавляли CCl (8,712 г, 36,75 ммоль) при -78°C, и реакционная смесь перемешивалась при комнатной температуре в течение 16 ч. Добавляли воду и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 0-20% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением I-d в виде масла желтого цвета с выходом 92%. Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 7,29 (t, J=1,5 Гц, 1Н), 7,27 (s, 1Н), 7,02 (d, J=1,4 Гц, 2Н), 4,57 (dt, J=12,1, 6,0 Гц, 1Н), 1,36 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).
Синтез интермедиата I-f: [5-(3-Бром-5-изопропокси-фенил)-оксазол-2-ил]-((5-этоксиметил)-2-метил-фенил)-амин
2
4
6
1
К раствору I-d (1,556 г, 4,915 ммоль) и I-е (0,812 г, 4,915 ммоль) в i-PrOH (45 мл) в инертной атмосфере по каплям добавляли раствор HCl в безводном EtO (0,98 мл, 0,98 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 16 ч. Затем растворитель удаляли при пониженном давлении и добавляли раствор NaOH (2,5 N). Неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 0-30% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением I-f в виде твердого вещества белого цвета с выходом 64%. Н RMN (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,30 (s, 1Н), 7,81 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,30 (s, 1Н), 7,16 (d, J=7,7 Гц, 1Н), 7,09 (d, J=1,4 Гц, 1Н), 7,00 (d, J=1,7 Гц, 1H), 6,94 (d, J=7,8 Гц, 1Н), 4,69 (dt, J=12,0, 5,9 Гц, 1H), 4,41 (s, 2Н), 3,47 (q, J=7,0 Гц, 2Н), 2,27 (s, 3H), 1,39 (s, 3H), 1,27 (d, J=6,0 Гц, 6Н), 1,14 (t, J=7,0 Гц, 3H).
Синтез интермедиата I-g: 4-этоксиметил-1-метил-2-нитро-бензол
4
3
1
К раствору NaOEt в безводном EtOH (45 мл, 114,90 ммоль) в инертной атмосфере добавляли 4-хлорметил-1-метил-2-нитро-бензол (7,0 г, 38,30 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Добавляли воду и удаляли этанол при пониженном давлении. Неочищенный продукт экстрагировали DCM (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали для получения I-g в виде масла коричневого цвета с выходом 96%. Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 7,95 (s, 1Н), 7,48 (d, J=7,8 Гц, 1Н), 7,31 (d, J=7,9 Гц, 1H), 4,52 (s, 2Н), 3,56 (q, J=7,0 Гц, 2Н), 2,57 (d, J=10,1 Гц, 3H), 1,26 (t, J=7,0 Гц, 3H).
Синтез интермедиата I-е: 5-этоксиметил-2-метил-фениламин.
1
3
К раствору I-g (7,21 г, 36,93 ммоль) в EtOH (238 мл) последовательно были добавлены Pd/C (2,432 г) и по каплям при 0°C моногидрат гидразина (4,84 мл, 99,71 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 2 ч. Затем горячую смесь фильтровали через целит и промывали EtOH. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением I-е в виде масла желтого цвета с количественным выходом. Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 6,99 (d, J=7,6 Гц, 1H), 6,67 (d, J=7,5 Гц, 2Н), 4,41 (s, 2Н), 3,52 (q, J=7,0 Гц, 3H), 2,18 (s, 3H), 1,04 (t, J=8,5 Гц, 3H).
Синтез примера 214: 1-{3-[2-((5-Этоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-5-изопропокси-фенил}-имидазолидин-2-он
2
3
4
6
1
В закупоренной пробирке к раствору I-f (872 мг, 1,56 ммоль) в безводном диоксане (13 мл) последовательно были добавлены имидазолидин-2-он (674 мг, 7,84 ммоль), карбонат цезия (1,595 г, 4,90 ммоль), Pd(dba) (113 мг, 0,20 ммоль), и Xantphos (54 мг, 0,06 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 110°C в течение 16 ч. Добавляли воду, неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 50-100% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением соединения 214 в виде твердого вещества белого цвета с выходом 50%. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,26 (s, 1H), 7,81 (s, 1Н), 7,40 (s, 1Н), 7,29 (s, 1Н), 7,15 (d, J=7,7 Гц, 1H), 7,11 (t, J=2,0 Гц, 1Н), 7,01 (s, 1Н), 6,92 (d, J=1,1 Гц, 1Н), 6,78 (s, 1Н), 4,62 (dt, J=12,1, 6,0 Гц, 1Н), 4,41 (s, 2Н), 3,92-3,81 (m, 2Н), 3,53-3,34 (m, 4Н), 2,27 (s, 3H), 1,29 (s, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,14 (t, J=7,0 Гц, 3H).
+
(ESI+)m/z 451,2 (М+Н).
Время удерживания = 3,52 мин (метод 2).
Пример 215
Подход, используемый для синтеза примера 215
4
4
6
1
Синтез интермедиата II-а: 2-Бром-пиридин-4-карбальдегид оксим К раствору 2-бром-4-метилпиридина (10,0 г, 58,13 ммоль) в безводном ТГФ (60 мл) в инертной атмосфере последовательно были добавлены по каплям при -10°C трет-бутилнитрит (12,5 мл, 104,63 ммоль) и раствор КО/Bu в безводном ТГФ (88 мл, 87,20 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -10°C в течение 3 ч. Затем добавляли насыщенный раствор NHCl и добавляли раствор HCl (4N) до значения pH=6-7. Неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали для получения II-а в виде масла желтого цвета с выходом 90%. Неочищенный продукт был непосредственно использован на следующей стадии. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 12,47 (s, 1Н),8,49 (d, J=5,1 Гц, 1Н), 8,12 (s, 1Н), 7,90 (dd, J=5,1, 1,0 Гц, 1Н), 7,55 (s, 1Н).
Синтез интермедиата II-b: 2-Бром-пиридин-4-карбальдегид
4
6
1
К суспензии II-а (10,5 г, 52,23 ммоль) в воде (50 мл) последовательно были добавлены по каплям при -10°C концентрированный раствор HCl (50 мл) и раствор формальдегида (50 мл) в воде (37% по весу). Реакционную смесь перемешивали при -10°C в течение 4 ч. Затем добавляли раствор NaOH (2N) до значения pH=6-7. Неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали для получения II-b в виде масла коричневатого цвета с выходом 97%. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 10,03 (s, 1H), 8,68 (d, J=4,9 Гц, 1Н), 8,07 (s, 1Н), 7,84 (d, J=4,9 Гц, 1H).
Синтез интермедиата II-с: 2-Бром-4-оксазол-5-ил-пиридин
2
3
4
3
1
К раствору II-b (9,4 г, 50,53 ммоль) в МеОН (100 мл) последовательно были добавлены KCO (13,97 г, 101,06 ммоль) и TosMIC (14,80 г, 75,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем удаляли растворитель при пониженном давлении, добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Твердое вещество темно-коричневого цвета растирали в холодном эфире, фильтровали и дополнительно промывали эфиром для получения конечного продукта II-с в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета с выходом 73%. Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,42 (d, J=5,2 Гц, 1H), 8,02 (s, 1Н), 7,73 (s, 1Н), 7,60 (s, 1Н), 7,48 (dd, J=5,2, 1,3 Гц, 1Н).
Синтез интермедиата II-d: 2-Метилсульфанил-1Н-имидазол
4
6
1
К раствору 2-меркаптоимидазола (5,0 г, 49,93 ммоль) в воде (200 мл) добавляли NaOH (2,4 г, 59,91 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч. Затем добавляли ацетон (200 мл) и MeI (3,4 мл, 54,92 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем удаляли растворитель при пониженном давлении, добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (5 раз), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Твердое вещество оранжевого цвета растирали несколько раз в петролейном эфире и фильтровали с получением соединения II-d в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета с выходом 88%. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 12,16 (s, 1Н), 7,14 (s, 1Н), 6,91 (s, 1H), 2,50 (s, 3H).
Синтез интермедиата II-е: 2-(2-Метилсульфанил-имидазол-1-ил)-4-оксазол-5-ил-пиридин
2
3
4
6
1
В закупоренной пробирке были смешаны II-d (1,98 г, 17,33 ммоль), II-с (3,0 г, 13,33 ммоль), KCO (3,87 г, 27,99 ммоль:), CuI (253 мг, 1,33 ммоль), N,N'-диметилциклогексан-1,2-диамин (420 мкл, 2.66 ммоль) в безводном толуоле (19 мл). Реакционную смесь перемешивали при 110°C в течение 4 дней. Затем добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Твердое вещество коричневого цвета растирали в холодном эфире, фильтровали и дополнительно промывали эфиром для получения конечного продукта II-е в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета с выходом 70%. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,67 (s, 1Н), 8,60 (d, J=5,2 Гц, 1Н), 8,13 (s, 1Н), 7,97 (s, 1Н), 7,96 (s, 1Н), 7,70 (dd, J=5,2, 1,4 Гц, 1Н), 7,15 (d, J=1,5 Гц, 1Н), 2,52 (s, 3H).
Синтез интермедиата II-f: 2-(2-Метансульфонил-имидазол-1-ил)-4-оксазол-5-ил-пиридин
3
3
4
6
1
К раствору II-е (2,17 г, 7,83 ммоль) в DCM (260 мг) добавляли mCPBA (2,97 г, 17,23 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем добавляли насыщенный раствор NaHCO, и неочищенный продукт экстрагировали DCM (2 раза), органический слой промывали насыщенным раствором NaHCO (3 раза), водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 5-10% смеси MeOH/EtOAc в качестве элюента с получением II-f в виде твердого вещества с выходом 84%. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,69 (m, 2Н), 8,14 (s, 1Н), 8,06 (d, J=0,7 Гц, 1H), 8,00 (d, J=1,2 Гц, 1Н), 7,89 (dd, J=5,2, 1,5 Гц, 1Н), 7,38 (d, J=1,2 Гц, 1H), 3,53 (s, 3H).
Синтез интермедиата II-g: 2-(2-Метокси-имидазол-1-ил)-4-оксазол-5-ил-пиридин
4
6
1
К раствору II-f (600 мг, 2,07 ммоль) в безводном МеОН/ТГФ (1/1, 6 мл) добавляли при 0°C раствор NaOMe в МеОН (6,2 мл, 3,10 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 16 ч. Добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали для получения соединения II-g в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета с выходом 98%. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,66 (s, 1Н), 8,58 (d, J=5,3 Гц, 1H), 8,11 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,68 (dd, J=5,2, 1,4 Гц, 1H), 7,51 (d, J=1,9 Гц, 1H), 6,70 (d, J=1,9 Гц, 1H), 4,09 (s, 3H).
Синтез интермедиата II-h: 4-(2-Хлор-оксазол-5-ил)-2-(2-метокси-имидазол-1-ил)-пиридин
2
6
4
3
1
К раствору интермедиата II-g (366 мг, 1,51 ммоль) в безводном ТГФ (15 мл) в инертной атмосфере по каплям добавляли при -78°C раствор LiHMDS в безводном ТГФ (2,3 мл, 2,27 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 0,5 ч. Затем добавляли CCl (537 мг, 2,27 ммоль) при -78°C, и реакционная смесь перемешивалась при комнатной температуре в течение 16 часов. Добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 0-10% смеси MeOH/EtOAc в качестве элюента с получением интермедиата II-h в виде твердого вещества белого цвета с выходом 74%. Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,51 (dd, J=5,2, 0,8 Гц, 1Н), 7,95 (dd, J=1,4, 0,8 Гц, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,52 (d, J=1,9 Гц, 1H), 7,33 (dd, J=5,2, 1,5 Гц, 1H), 6,75 (d, J=2,0 Гц, 1H), 4,21 (s, 3H).
Синтез интермедиата II-l: 4-Метоксиметил-1-метил-2-нитро-бензол
4
3
1
К раствору NaOMe (1,6 г, 29,63 ммоль) в безводном МеОН (40 мл) в инертной атмосфере добавляли 4-хлорметил-1-метил-2-нитро-бензол (5,0 г, 26,94 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Добавляли воду, и EtOH удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт экстрагировали DCM (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали для получения интермедиата II-l в виде масла желтого цвета. Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 7,94 (s, 1Н), 7,47 (d, J=7,8 Гц, 1H), 7,32 (d, J=7,8 Гц, 1H), 4,48 (s, 2H), 3,41 (s, 3H), 2,58 (s, 3H).
Синтез интермедиата II-m: 5-Метоксиметил-2-метил-фениламин
2
2
2
4
6
1
К раствору интермедиата II-l (4,77 г, 26,32 ммоль) в EtOH/НО: 9/1 (150 мл) последовательно были добавлены SnCl⋅2HO (29,70 г, 131,60 ммоль) и по каплям 37% соляная кислота (15 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. EtOH удаляли при пониженном давлении, и к получившемуся водному раствору добавляли раствор NaOH (10N) до значения pH=6-7. Затем неочищенный продукт экстрагировали DCM (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 0-30% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением интермедиата II-m в виде масла желтого цвета. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 6,88 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 6,58 (s, J=17,6 Гц, 1Н), 6,41 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 4,80 (s, 2Н), 4,24 (s, 2Н), 3,23 (s, 3H), 2,03 (s, 3H).
Синтез интермедиата II-i: N-(5-Метоксиметил-2-метил-фенил)-ацетамид
3
4
6
1
К раствору II-m (2,0 г, 13,23 ммоль) в безводном DCM (45 мл) добавляли последовательно по каплям безводный NEt (2,3 мл, 15,88 ммоль) и при 0°C AcCl (1,0 мл, 14,55 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали DCM (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 50-80% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением интермедиата II-i в виде твердого вещества бледно-желтого цвета с выходом 88% в 3 стадии. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,27 (s, 1Н), 7,36 (s, 1Н), 7,16 (d, J=1,1 Гц, 1Н), 7,00 (d, J=1,6 Гц, 1Н), 4,34 (s, 2Н), 3,26 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,05 (s, 4Н).
Синтез интермедиата II-j: {5-[2-(2-Метокси-имидазол-1-ил)-пиридин-4-ил]-оксазол-2-ил}-(5-метоксиметил-2-метил-фенил)-амин
3
4
6
1
К раствору 60% дисперсии NaH в минеральном масле (237 мг, 6,16 ммоль) в безводном ДМФА (20 мл) по каплям добавляли при 0°C раствор интермедиата II-i (595 мг, 3,08 ммоль) в безводном ДМФА (20 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, и по каплям добавляли при 0°C раствор интермедиата II-h (852 мг, 3,08 ммоль) в безводном ДМФА (20 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при 0°C. Добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали насыщенным раствором NaHCO (3 раза), затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 0-20% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением интермедиата II-j в виде твердого вещества белого цвета с выходом 44%. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,65 (s, 1H), 8,45 (d, J=5,3 Гц, 1Н), 7,86 (s, 1Н), 7,79 (s, 1H), 7,72 (s, 1Н), 7,46 (dd, J=5,1, 3,6 Гц, 2Н), 7,21 (d, J=1,1 Гц, 1Н), 7,00 (d, J=7,7 Гц, 1Н), 6,68 (d, J=1,8 Гц, 1H), 4,38 (s, 2Н), 4,05 (s, 3H), 3,28 (s, 3H), 2,29 (s, 3H).
Синтез примера 215: 1-{4-[2-((5-Метоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-пиридин-2-ил}-1,3-дигидро-имидазол-2-он гидрохлорид
1
3
К раствору II-j (100 мг, 0,26 ммоль) в безводном диоксане (4 мл) по каплям добавляли при 0°C раствор HCl в безводном эфире (546 мкл, 0,55 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 2 ч и при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем удаляли растворитель при пониженном давлении, неочищенный продукт растирали в эфире и фильтровали с получением соединения 215 в виде твердого вещества белого цвета с выходом 57%. Н ЯМР (300 МГц, CDOD) δ 10,04-9,95 (m, 1Н), 9,46 (s, 1Н), 9,15 (s, 1H), 9,03 (d, J=4,6 Гц, 1H), 8,95-8,87 (m, 1H), 8,78 (d, J=7,8 Гц, 1H), 8,19 (d, J=3,2 Гц, 1H), 6,04 (s, 2H), 4,97 (s, 3H), 3,91 (s, 3H).
Пример 216
Подход, используемый для синтеза соединения 216
Синтез интермедиата III-а: 1-Бром-3-(2-метокси-винил)-бензол
4
4
3
1
К раствору (метоксиметил)трифосфоний хлорида (5,56 г, 16,21 ммоль) в безводном ТГФ (13 мл) в инертной атмосфере по каплям добавляли при 0°C раствор nBuLi в безводном ТГФ (22 мл, 21,62 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем по каплям добавляли при 0°C раствор 3-бромбензальдегида (2,0 г; 10,81 ммоль) в безводном ТГФ (20 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Добавляли насыщенный раствор NHCl, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 10-15% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением III-а в виде масла желтого цвета с выходом 66%. Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 7,79 (s, J= 1,5 Гц, 1Н), 7,48-7,24 (m, 5Н), 7,20-7,12 (m, 2Н), 7,06 (d, J=13,0 Гц, 1Н), 6,19 (d, J=7,0 Гц, 1Н), 5,75 (d, J=13,0 Гц, 1Н), 5,17 (d, J=7,0 Гц, 1Н), 3,82 (s, 3H), 3,71 (s, 3H).
Синтез интермедиата III-b: (5-Метокси-2-метил-фенил)-тиомочевина
2
3
6
1
К раствору KSCN (780 мг, 8,02 ммоль) в ацетоне (10 мл) по каплям добавляли при комнатной температуре раствор AcCl (900 мкл, 8,02 ммоль) в ацетоне (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при 50°C. Затем добавляли раствор 5-метокси-2-метиланилина (1,0 г, 7,29 ммоль) в ацетоне (10 мл), и реакционная смесь перемешивалась при 50°C в течение 15 мин. Добавляли воду, осадок фильтровали, дополнительно промывали водой и эфиром с получением твердого вещества белого цвета. Раствор этого вещества с KCO (2,0 г, 14,58 ммоль) в МеОН (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. МеОН удаляли при пониженном давлении и твердое вещество промывали водой и эфиром с получением III-b в виде твердого вещества белого цвета с выходом 78%. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,20 (s, 1Н), 7,13 (d, J=8,4 Гц, 1H), 6,81 (d, J=2,4 Гц, 1Н), 6,75 (dd, J=8,3, 2,6 Гц, 1Н), 3,71 (s, 3H), 2,10 (s, 3H).
Синтез интермедиата III-с: [5-(3-Бром-фенил)-тиазол-2-ил]-(5-метокси-2-метил-фенил)-амин
4
4
6
1
К раствору III-а (300 мг, 1,41 ммоль) в смеси диоксан/вода (1/1, 6 мл) добавляли NBS (276 мг, 1,55 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем добавляли III-b (277 мг, 1,41 ммоль), и реакционная смесь перемешивалась при 80°C в течение 16 ч. Добавляли воду и насыщенный раствор NHCl, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 0-35% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением III-с в виде твердого вещества бледно-желтого цвета с выходом 69%. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,48 (s, 1Н), 7,77-7,69 (m, 2Н), 7,54 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 7,46 (dd, J=7,6, 0,9 Гц, 1Н), 7,40 (dd, J=7,9, 1,0 Гц, 1Н), 7,30 (t, J=7,9 Гц, 1Н), 7,11 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 6,60 (dd, J=8,3, 2,5 Гц, 1Н), 3,71 (s, 3H), 2,19 (s, 3H).
Синтез примера 216: 1-{3-[2-(5-Метокси-2-метил-фениламино)-тиазол-5-ил]-фенил}-имидазолидин-2-он
2
3
4
6
1
В закупоренной пробирке к раствору III-с (200 мг, 0,53 ммоль) в безводном диоксане (10 мл) последовательно были добавлены 2-имидазолидинон (275 мг, 3,20 ммоль), карбонат цезия (432 мг, 1,33 ммоль), Pd(dba) (46 мг, 0,05 ммоль), 4,5-Xantphos (61 мг, 0,11 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 110°C в течение 16 ч. Добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (2 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 0-30% смеси MeOH/EtOAc в качестве элюента с получением соединения 216 в виде твердого вещества желтого цвета с выходом 41%. Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,36 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,63-7,56 (m, 2H), 7,37 (d, J=8,2 Гц, 1H), 7,29 (t, J=7,9 Гц, 1H), 7,15 (d, J=7,5 Гц, 1H), 7,11 (d, J=8,4 Гц, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,59 (dd, J=8,3, 2,6 Гц, 1H), 3,93-3,83 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,44-3,37 (m, 2H), 2,20 (s, 3H).
Пример 217
Подход, используемый для синтеза примера 217
Подход, используемый для синтеза интермедиата IV-a
Синтез интермедиата IV-c: 1-Ацетил-3-(4-метил-3-нитро-фенил)-тиомочевина
К раствору тиоцианата аммония (1,05 г, 13,85 ммоль) в ацетоне (21 мл) по каплям добавляли ацетилхлорид (0,90 мл, 12,70 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 40°C в течение 30 мин. Затем добавляли раствор 4-метил-3-нитроанилина (1,76 г, 11,54 ммоль) в ацетоне (7 мл), и реакционная смесь перемешивалась при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь выливали в ледяную воду, осадок фильтровали, дополнительно промывали водой и циклогексаном с получением соединения IV-c в виде твердого вещества коричневого цвета с выходом 50%. (300 МГц, ДМСО) δ 12,45 (s, 1Н), 11,53 (s, 1H), 8,38 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 7,69 (dd, J=8,3, 2,0 Гц, 1Н), 7,43 (d, J=8,3 Гц, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,09 (s, 3H).
Синтез интермедиата IV-d: (4-Метил-3-нитро-фенил)-тиомочевина
2
3
4
К раствору IV-c (873 мг, 3,45 ммоль) в метаноле (5 мл) добавляли KCO (953 мг, 6,90 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем удаляли растворитель при пониженном давлении, добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (дважды), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO, и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 0-50% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением соединения IV-d в виде твердого вещества желтого цвета с выходом 60%. (300 МГц, ДМСО) δ 9,95 (s, 1H), 8,28 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 8,00-7,70 (m, 3H), 7,42 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 2,47 (s, 3H).
Синтез интермедиата IV-e: (4-Метил-3-нитро-фенил)-тиазол-2-ил-амин
4
К суспензии IV-d (377 мг, 1,79 ммоль) в EtOH (7 мл) добавляли раствор хлорацетальдегида (1,41 г, 17,93 ммоль) в воде {50% по весу) и КНСОз (539 мг, 5,37 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 16 ч. Затем удаляли растворитель при пониженном давлении, добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (3 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO, и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 0-70% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением соединения IV-e в виде твердого вещества желтого цвета с выходом 40%. (300 МГц, ДМСО) δ 10,58 (s, 1Н), 8,55 (d, J=2,4 Гц, 1Н), 7,69 (dd, J=8,4, 2,4 Гц, 1Н), 7,41 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 7,33 (d, J=3,7 Гц, 1Н), 7,00 (d, J=3,7 Гц, 1Н), 2,45 (s, 3H).
Синтез интермедиата IV-f: 4-Метил-III-тиазол-2-ил-бензол-1,3-диамин
2
2
4
К раствору IV-e (737 мг, 3,13 ммоль) в смеси EtOH/DCM: (30/13 мл) последовательно были добавлены SnCl⋅2HO (3,54 г, 15,65 ммоль) и по каплям 37% соляная кислота (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. EtOH удаляли при пониженном давлении, и к получившемуся водному раствору добавляли раствор NaOH (10N) до значения pH=6-7. Затем неочищенный продукт экстрагировали DCM (дважды), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 0-30% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением интермедиата IV-f в виде масла желтого цвета с выходом 95%. (300 МГц, ДМСО) δ 9,74 (s, 1Н), 7,18 (d, J=3,7 Гц, 1Н), 6,90 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 6,85-6,77 (m, 2Н), 6,66 (dd, J=8,0, 2,0 Гц, 1H), 4,83 (brs, 2Н), 1,99 (s, 3H).
Синтез интермедиата IV-a: N-[5-(Ацетил-тиазол-2-ил-амино)-2-метил-фенил]-ацетамид
3
4
К раствору IV-f (610 мг, 2,97 ммоль) и NaHCO (2,50 г, 29,71 ммоль) в безводном DCE (10 мл), по каплям добавляли при 0°C актилхлорид (0,634 мл, 8,91 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 5 ч. Затем добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали DCM (3 раза), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 30% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением интермедиата IV-a в виде твердого вещества желтого цвета с выходом 75%. (300 МГц, ДМСО) δ 9,39 (s, 1Н), 7,54 (d, J=1,7 Гц, 1Н), 7,40-7,32 (m, 2Н), 7,29 (d, J=3,6 Гц, 1H), 7,13 (dd, J=7,9, 1,9 Гц, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,07 (s,3H), 1,99 (s,3H).
Синтез интермедиата IV-b: N-{3-[5-(3-Бром-5-изопропокси-фенил)-оксазол-2-иламино]-4-метил-фенил}-N-тиазол-2-ил-ацетамид
3
4
К раствору 60% дисперсии NaH в минеральном масле (83 мг, 2,08 ммоль) в безводном ДМФА (3 мл) по каплям добавляли при 0°C раствор интермедиата IV-a (300 мг, 1,04 ммоль) в безводном ДМФА (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, и добавляли по каплям при 0°C раствор интермедиата I-d (328 мг, 1,04 ммоль) в безводном ДМФА (3 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Добавляли воду, и неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (дважды), органический слой промывали насыщенным раствором NaHCO (3 раза), затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 0-35% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением интермедиата IV-b в виде твердого вещества бежевого цвета с выходом 46%. (300 МГц, ДМСО) δ 9,63 (s, 1Н), 8,08 (d, J=2,1 Гц, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,47 (d, J=2,2 Гц, 1H), 7,45 (d, J=2,5 Гц, 1H), 7,42 - 7,38 (m, 2H), 7,19 (t, J=2,0 Гц, 1H), 7,15 (dd, J=7,9, 2,2 Гц, 1H), 7,11 (t, J=2,0 Гц, 1H), 4,78 (septuplet, J=5,8 Гц, 1H), 2,49 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,37 (d, J=6,0 Гц, 6H).
Синтез примера 217: 1-(3-Изопропокси-5-{2-[2-метил-5-(тиазол-2-иламино)-фениламино]-оксазол-5-ил}-фенил)-имидазолидин-2-он
2
3
4
В закупоренной пробирке к раствору IV-b (219 мг, 0,42 ммоль) в безводном диоксане (5 мл) последовательно были добавлены имидазолидин-2-он (286 мг, 3,36 ммоль), карбонат цезия (162 мг, 0,50 ммоль), Pd(dba) (11 мг, 0,01 ммоль), и Xantphos (24 мг, 0,04 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 110°C в течение 16 ч. Добавляли воду, неочищенный продукт экстрагировали EtOAc (дважды), органический слой промывали водой, затем насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO и концентрировали. Конечный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием 50-100% смеси EtOAc/циклогексан в качестве элюента с получением соединения 217 в виде твердого вещества бежевого цвета с выходом 49%. (300 МГц, ДМСО) δ 10,12 (brs, 1Н), 9,25 (s, 1H), 8,04 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 7,42 (s, 1Н), 7,38 (dd, J=8,3, 2,1 Гц, 1H), 7,25 (brs, 1Н), 7,19 (d, J=3,7 Гц, 1H), 7,15 (t, J=1,9 Гц, 1Н), 7,10 (d, J=8,4 Гц, 1H), 7,01 (s, 1Н), 6,85 (d, J=3,6 Гц, 1Н), 6,81 (s, 1Н), 4,61 (m, 1Н), 3,84 (m, 2Н), 3,38 (m, 2Н), 2,23 (s, 3H), 1,27 (d, J=6,0 Гц, 6Н).
+
(ESI+) m/z 491 (М+Н)
Время удерживания = 3,13 мин (метод 2)
Пример 218
Подход, используемый для синтеза примера 218
Подход, используемый для синтеза интермедиата V-h
Синтез интермедиата V-a: 4-Метил-пиридин-2-ол
2
4
2
4
6
1
Интермедиат V-a был получен с использованием метода Adger et al, в J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 1988, p 2791-2796. В колбу объемом 1 л, содержащую воду (240 мл), добавляли концентрированную HSO (32 мл) и охлаждали до 0°C, а затем в одну порцию добавляли 2-амино-4-пиколин (30 г, 277 ммоль). По каплям в течение 1 часа добавляли раствор NaNO (20,6 г, 299 ммоль) в воде (40 мл) так, чтобы температура внутри колбы никогда не поднималась выше 5°C. Реакционная смесь перемешивалась при 0°C в течение 1 часа, затем нагревалась до 95°C и через 15 мин инкубации при этой температуре охлаждалась до комнатной температуры. Раствор доводили до значения pH 6-7 добавлением 50% водного раствора NaOH (экзотермический процесс) и экстрагировали, пока он оставался горячим, EtOAc (4×120 мл). Объединенные органические фракции высушивали (MgSO), фильтровали и упаривали для получения в виде твердого кристаллического вещества бежевого цвета (24,5 г, 81%) интермедиата V-a. H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 11,31 (s, 1Н), 7,23 (d, J=6,1 Гц, 1Н), 6,10 (s, 1Н), 6,00 (dd, J=6,1, 1,2 Гц, 1Н), 2,10 (s, 3H).
Синтез интермедиата V-b: 3-Бром-4-метил-пиридин-2-ол
2
4
1
К раствору 4-метил-пиридин-2-ола V-a (25 г, 229 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (350 мл) и EtOAc (680 мл) добавляли NBS (37,4 г, 210 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Значение pH смеси доводили до pH 8 водным раствором аммиака и экстрагировали смесь EtOAc. Отделенные органические слои промывали смесью 1:1 HO/солевой раствор, затем высушивали (MgSO), фильтровали и выпаривали с последующей очисткой колоночной хроматографией на силикагеле (1-4% смесь EtOH/DCM) для получения желаемого продукта V-b в виде твердого вещества белого цвета (8,66 г). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11,90 (s, 1Н), 7,32 (d, J=6,6 Гц, 1H), 6,19 (d, J=6,6 Гц, 1Н), 2,25 (s, 3H).
Синтез интермедиата V-c: 3-Бром-2-метокси-4-метил-пиридин
2
3
2
3
1
К раствору 3-бром-4-метил-2-пиридона V-b (2,20 г, 11,7 ммоль) в DCM (80 мл) добавляли MeI (7,29 мл, 117 ммоль) и AgCO (6,47 г, 23,5 ммоль). Колбу закупоривали и содержимое перемешивали в атмосфере аргона в течение 6 дней. Реакционную смесь фильтровали и очищали колоночной хроматографией (SiO, 10% EtOAc в циклогексане) для получения желаемого продукта V-c в виде прозрачного маловязкого масла (1,83 г, 80%). Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 7,94 (d, J=5,0 Гц, 1Н), 6,77 (d, J=5,1 Гц, 1Н), 4,00 (s, 3H), 2,39 (s, 3H).
Синтез интермедиата V-d: 2-Метокси-4-метил-3-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2] диоксаборолан-2-ил)-пиридин
2
4
2
3
1
В сухую закупоренную пробирку вносили в атмосфере аргона 3-бром-2-метокси-4-метилпиридин V-c (813 мг, 4,02 ммоль), бис(пинаколато)дибор (1,12 г, 4,41 ммоль), PdCl(dppf):DCM (146 мг, 0,20 ммоль), KOAc (1,18 г, 12,0 ммоль) и безводный ДМФА (10 мл). Через 1,5 ч при 100°C смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли дополнительную порцию катализатора (75 мг, 0,092 ммоль). Пробирку закупоривали, и смесь перемешивали при 100°C в течение ночи. Смесь охлаждали, растворитель выпаривали, и смесь растворяли в DCM и затем промывали водой. Отделенные органические слои высушивали (MgSO), фильтровали и выпаривали перед последующей очисткой с помощью колоночной хроматографии (SiO, 10%-20% EtOAc в циклогексане) для получения интермедиата V-d в виде маловязкого масла желтого цвета (2,14g, 51%). Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,00 (d, 5,3 Гц, 1Н), 6,65 (d, J=5,3 Гц, 1Н), 3,89 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 1,40 (d, J=11,1 Гц, 12Н).
Синтез интермедиата V-e: 2'-Метокси-4'-метил-4-оксазол-5-ил-[2,3']бипиридинил
3
4
2
4
2
3
1
В высушенную в печи колбу в атмосфере аргона вносили 2-бром-4-оксазол-5-ил-пиридин (Интермедиат II-с, 461 мг, 2,07 ммоль), 2-метокси-4-метил-3-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-пиридин V-d (510 мг, 2,07 ммоль), KPO (2,82 г, 13,3 ммоль), Pd(OAc) (51 мг, 0,225 ммоль), Davephos (89 мг, 0,225 ммоль) в iPrOH (5 мл) и воду (3 мл). Через 40 мин при 100°C смесь охлаждали до комнатной температуры, разводили водой и экстрагировали EtOAc, и затем промывали солевым раствором. Органические фазы высушивали (MgSO), фильтровали и выпаривали перед последующей очисткой с помощью колоночной хроматографии (SiO, 30%-100% EtOAc в циклогексане) для получения желаемого продукта V-e в виде твердого вещества грязно-белого цвета (240 мг, 43%). H ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,78 (d, J=4,8 Гц, 1Н), 8,10 (d, J=4,8 Гц, 1Н), 8,01 (s, 1Н), 7,59 (d, J=4,9 Гц, 2Н), 7,51 (d, J=4,9 Гц, 1Н), 6,86 (d, J=4,9 Гц, 1H), 3,88 (s, 3H), 2,16 (s, 3H).
Синтез интермедиата V-f: 4-(2-Хлор-оксазол-5-ил)-4'-метил-1'Н-[2,3']бипиридинил-2'-он
2
6
2
6
1
4-(2-Хлор-оксазол-5-ил)-4,-метил-1'Н-[2,3']бипиридинил-2'-он V-f был получен, как описано выше для I-d из 4'-метил-4-оксазол-5-ил-1'Н-[2,3']бипиридинил-2'-она V-e (467 мг, 1,74 ммоль) с использованием LiHMDS (1М в THF, 2,62 мл, 2,62 ммоль) и CCl (496 мг, 2,10 ммоль) в безводном ТГФ. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (SiO; элюция 30%-50% EtOAc в циклогексане) для получения интермедиата V-f в виде твердого вещества белого цвета (261 мг, 50%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,76 (d, J=5,3 Гц, 1Н), 8,12 (d, J=4,4 Гц, 2H), 7,70 (s, 1H), 7,64 (dd, J=5,2, 1,7 Гц, 1H), 7,00 (d, J=5,2 Гц, 1H), 3,78 (s, 3H), 2,06 (s, 3H).
Синтез интермедиата V-h: 4-(3-Бром-пропокси)-1-метил-2-нитро-бензол
2
3
4
2
3
1
Раствор 4-метил-3-нитрофенола (1,00 г, 6,53 ммоль) в ДМФА (6 мл) обрабатывали KCO (0,903 г, 6,53 ммоль) и 1,3-дибромпропаном (6,63 мл, 65,3 ммоль) и нагревали до 100°C в течение 2,5 ч. Охлажденную смесь разводили водой и экстрагировали DCM. Объединенные органические фазы высушивали (MgSO), фильтровали и выпаривали перед последующей очисткой с помощью колоночной хроматографии (SiO; элюция 20% EtOAc в циклогексане) для получения желаемого продукта V-h в виде маловязкого масла желтого цвета (1,05 г, 59%). Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 7,52 (d, J=2,7 Гц, 1H), 7,23 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 7,06 (dd, J=8,5, 2,7 Гц, 1Н), 4,14 (t, J=5,8 Гц, 2Н), 3,60 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 2,53 (s, 3H), 2,40 - 2,24 (m, 2Н).
Синтез интермедиата V-i: 4-[3-(4-Метил-3-нитро-фенокси)-пропил]-морфолин
2
3
4
2
3
1
Раствор 4-(3-бром-пропокси)-1-метил-2-нитро-бензола V-h (500 мг, 1,82 ммоль) в безводном диоксане (30 мл) обрабатывали KCO (1,01 г, 7,28 ммоль) и морфолином (319 мкл, 3,65 ммоль) и нагревали до 100°C в течение 6 ч. Охлажденную смесь разводили водой и экстрагировали DCM. Объединенные органические фазы высушивали (MgSO), фильтровали и выпаривали перед последующей очисткой с помощью колоночной хроматографии (SiO; элюция 2% EtOH в DCM) для получения желаемого продукта в виде масла желто-оранжевого цвета V-i (356 мг, 70%). Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 7,51 (d, J=2,7 Гц, 1H), 7,21 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 7,05 (dd, J=8,5, 2,7 Гц, 1H), 4,06 (t, J=6,3 Гц, 2Н), 3,79-3,66 (m, 4Н), 2,49 (dt, J=9,0, 5,1 Гц, 9Н), 2,07-1,88 (m, 2Н).
Синтез интермедиата V-g: 2-Метил-5-(3-морфолин-4-ил-пропокси)-фениламин
2
2
3
4
3
1
Раствор 4-[3-(4-метил-3-нитро-фенокси)-пропил]-морфолина V-i (350 мг, 1,25 ммоль) в 90% EtOH (15 мл) обрабатывали SnCl⋅HO (1,58 г, 6,24 ммоль) и концентрированной HCl (1,04 мл, 12,5 ммоль) и нагревали до рефлюкса в течение 1 ч. Охлажденный раствор концентрировали при пониженном давлении и доводили pH до значения pH=8 насыщенным раствором NaHCO, затем экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы высушивали (MgSO), фильтровали и выпаривали для получения желаемого продукта V-g в виде вязкого масла желтого цвета (306 мг, 98%). H ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 6,92 (d, J=8,8 Гц, 1Н), 6,30-6,24 (m, 2Н), 3,96 (t, J=6,3 Гц, 2Н), 3,76-3,69 (m, 4Н), 3,58 (s, 2Н), 2,57-2,42 (m, 6Н), 2,09 (s, 3H), 1,93 (dt, J=13,3, 6,5 Гц, 3H).
Синтез примера 218: 4'-Метил-4-{2-[2-метил-5-(3-морфолин-4-ил-пропокси)-фениламино]-оксазол-5-ил}-1'Н-[2,3']бипиридинил-2'-он
1
+
+
Раствор 4-(2-хлор-оксазол-5-ил)-4'-метил-1'Н-[2,3']бипиридинил-2'-она V-f (50 мг, 0,159 ммоль) в iPrOH (4 мл) обрабатывали 2-метил-5-(3-морфолин-4-ил-пропокси)-фениламином V-g (48 мг, 0,191 ммоль) и HCl (2М в эфире, 120 мкл, 0.240 ммоль) и нагревали до рефлюкса в течение 18 ч. Раствор дополнительно обрабатывали 150 мкл HCl (2М в эфире, 150 мкл, 0,300 ммоль) и нагревали дополнительно в течение 2 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, затем растворитель выпаривали при пониженном давлении. Остаток обрабатывали эфиром и белый осадок фильтровали для получения соединения 218 (31 мг, 39%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11,62 (s, 1H), 9,40 (s, 1H), 8,55 (d, J=5,3 Гц, 1Н), 7,73 (s, 1Н), 7,55-7,48 (m, 2Н), 7,38 (dd, J=5,2, 1,7 Гц, 1Н), 7,29 (d, J=6,7 Гц, 1Н), 7,03 (d, J=8,8 Гц, 1H), 6,52 (dd, J=8,3, 2,5 Гц, 1H), 6,13 (d, J=6,7 Гц, 1Н), 3,92 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 3,56-3,44 (m, 4Н), 2,40-2,25 (m, 6Н), 2,16 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,86-1,75 (m, 2Н). ESIMS m/z 502 (М+Н). Время удерживания = 1,76 мин (метод 1).
Пример 219
Подход, используемый для синтеза примера 219
Синтез интермедиата VI-а: 5-(3-Бром-фенил)-оксазол
2
3
3
1
5-(3-Бром-фенил)-оксазол VI-а был получен, как описано для интермедиата 1-е с использованием 3-Бром-бензальдегида (10 г, 54 ммоль), TosMIC (12,7 г, 65 ммоль) и KCO (8,97 г,) в МеОН с получением желаемого интермедиата VI-а в виде твердого вещества коричневатого цвета (12,1 г, 100%).Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 7,92 (s, 1Н), 7,80 (s, 1H), 7,57 (d, J=7,7 Гц, 1Н), 7,46 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7,37 (s, 1Н), 7,29 (d, J=7,9 Гц, 1H).
Синтез интермедиата VI-b: 2-Метокси-3-(3-оксазол-5-ил-фенил)-1,2-дигидро-пиридин
3
4
2
3
4
2
3
1
Смесь 5-(3-бром-фенил)-оксазола VI-а (1,33 г, 5,94 ммоль), 2-метокси-3-пиридинилборной кислоты (1,00 г, 6,53 ммоль), Pd(PPh) и KCO (1,81 г, 13,1 ммоль) в ТГФ (20 мл) и воде (10 мл) нагревали до рефлюкса в течение 4 ч. Смесь охлаждали, затем разводили водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы высушивали (MgSO), фильтровали и остаток очищали колоночной хроматографией (SiO; элюция 30% EtOAc в циклогексане) для получения желаемого продукта VI-b в виде масла коричневого цвета, которое кристаллизуется при хранении (1,37 g, 91%). Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,18 (dd, J=1,8, 5,0 Гц, 1Н), 7,91 (s, 1Н), 7,81 (s, 1H), 7,64 (d, J=6,9 Гц, 2Н), 7,53-7,44 (m, 2Н), 7,37 (s, 1H), 6,99 (dd, J=5,0, 7,2 Гц, IK), 3,97 (s, 3H).
Синтез интермедиата VI-c: 3-[3-(2-Хлор-оксазол-5-ил)-фенил]-2-метокси-1,2-дигидро-пиридин
2
6
2
3
1
3-[3-(2-Хлор-оксазол-5-ил)-фенил]-2-метокси-пиридин VI-c был получен, как описано выше для интермедиата I-d из 2-метокси-3-(3-оксазол-5-ил-фенил)-пиридина (1,37 г, 5,43 ммоль), LiHMDS (1М в ТГФ, 5,97 мл, 5,97 ммоль) и CCl (1,54 г, 6,52 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) с получением желаемого продукта VI-c в виде твердого вещества белого цвета после очистки колоночной хроматографией (SiO; элюция 10%-30% раствором EtOAc в циклогексане) (1,24 г, 84%). Н ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,20 (dd, J=5,0, 1,9 Гц, 1Н), 7,76 (t, J=1,6 Гц, 1Н), 7,63 (dd, J=7,3, 2,0 Гц, 1Н), 7,59-7,45 (m, 3H), 7,31 (s, 1Н), 6,99 (dd, J=7,3, 5,0 Гц, 1Н), 3,99 (s, 3H).
Синтез примера 219: 3-{3-[2-(3,5-диметокси-фениламино)-оксазол-5-ил]-фенил}-1Н-пиридин-2-он
3
6
1
+
+
3-{3-[2-(3,5-диметокси-фениламино)-оксазол-5-ил]-фенил}-1Н-пиридин-2-он 219 был получен, как описано выше для интермедиата I-f из 3-[3-(2-хлор-оксазол-5-ил)-фенил]-2-метокси-пиридина VI-c (40 мг, 0,150 ммоль) с использованием 3,5-диметоксианилина (29 мг, 0,190 ммоль) и HCl (2М в эфире, 120 мкл, 0,23 ммоль) в iPrOH (4 мл). Неочищенную реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении, и остаток обрабатывали насыщенным раствором NaHCO и EtOAc. Преципитат образовывался из двухфазной смеси, его отфильтровывали и высушивали с получением соединения 219 в виде твердого вещества бежевого цвета (19 мг, 33%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 11,86 (s, 1Н), 10,35 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,70 (dd, J=2,0, 6,9 Гц, 1Н), 7,60-7,41 (m, 5Н), 6,89 (d, J=2,0 Гц, 2Н), 6,32 (t, J=6,7 Гц, 1Н), 6,13 (s, 1Н), 3,73 (s, 6Н). ESI MS m/z 390 (М+Н). Время удерживания=3,45 мин (метод 1).
Пример 220
Подход, используемый для синтеза примера 220
Синтез интермедиата VII-а: 2-Фтор-4-формил-бензонитрил
4
2
3
1
Раствор 4-бром-2-фторбензонитрила (5,00 г, 25 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) при -10°C в атмосфере аргона обрабатывали раствором хлорида изопропилмагния (2М в ТГФ, 15,0 мл, 30,0 ммоль), добавляемым по каплям, с последующим перемешиванием при этой температуре в течение 3 ч. Добавляли по каплям раствор N-формилпиперидина (3,89 г, 35,0 ммоль) в безводном ТГФ (15 мл), и смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры с последующим перемешиванием в течение 1,5 ч. Полученный раствор обрабатывали 4М водным раствором HCl (250 мл каждого) и органические фазы экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы высушивали (MgSO), фильтровали и выпаривали, после чего очищали остаток колоночной хроматографией (SiO; элюция 30% - 50% раствором EtOAc в циклогексане) для получения 2-фтор-4-формил-бензонитрила VII-а в виде твердого вещества бледно-желтого цвета (2,73 г, 73%).Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 10,07 (d, J=1,7 Гц, 1Н), 7,90-7,79 (m, 2H), 7,74 (dd, J=8,5, 0,8 Гц, 1H).
Синтез интермедиата VII-b: 2-Фтор-4-оксазол-5-ил-бензонитрил
2
3
3
1
5-(3-Бром-фенил)-оксазол VII-b был получен, как описано для интермедиата 1-е с использованием 2-Фтор-4-формил-бензонитрила VII-а (2 г, 13,43 ммоль), TosMIC (2,85 г, 14,77 ммоль) и KCO (2,41 г, 1,86 ммоль) в МеОН (40 мл) с получением желаемого интермедиата VII-b в виде твердого вещества желтого цвета (1,46 г, 58%). Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 7,94 (s, 1H), 7,62 (dd, J=8,0, 6,5 Гц, 1Н), 7,52 - 7,37 (m, 3H).
Синтез интермедиата VII-c: 2-(3-Метил-2-оксо-2Н-пиридин-1-ил)-4-оксазол-5-ил-бензонитрил
3
4
2
6
1
Раствор 3-метил-1Н-пиридин-2-она (1,43 г, 13,1 ммоль) в абсолютном EtOH (100 мл) обрабатывали КОН (735 мг, 13,1 ммоль) и нагревали до рефлюкса при интенсивном перемешивании в течение 2 ч, после чего охлаждали до комнатной температуры и выпаривали растворитель при пониженном давлении. Твердый остаток оранжевого цвета растворяли в безводном ДМФА (100 мл), обрабатывали 2-фтор-4-оксазол-5-ил-бензонитрилом VII-b (2,24 г, 11,9 ммоль) и перемешивали при 100°C в течение 3 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении, остаток обрабатывали насыщенным раствором NaHCO и экстрагировали DCM. Объединенные органические фазы высушивали (MgSO), фильтровали и выпаривали, и остаток очищали колоночной хроматографией (SiO, элюция 50% EtOAc в циклогексане) с получением желаемого интермедиата VII-c в виде твердого вещества грязно-белого цвета (2,55 г, 77%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,62 (s, 1H), 8,15 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 8,04 (s, 2Н), 7,99 (dd, J=8,1, 1,6 Гц, 1Н), 7,62 (dd, J=6,9, 1,1 Гц, 1H), 7,49 (d, J=6,6 Гц, 1Н), 6,34 (t, J=6,8 Гц, 1Н), 2,07 (s, 3H).
Синтез интермедиата VII-d: 4-(2-Хлор-оксазол-5-ил)-2-(3-метил-2-оксо-2Н-пиридин-1 -ил)-бензонитрил
2
6
4
2
6
1
Раствор 2-(3-метил-2-оксо-2Н-пиридин-1-ил)-4-оксазол-5-ил-бензонитрила VII-c (2,55 г, 9,19 ммоль) в безводном перегнанном ТГФ (160 мл) при -78°C в атмосфере аргона был обработан добавленным по каплям LiHMDS (1М в ТГФ, 11,0 мл, 11,0 ммоль) с получением мутной суспензии желтого цвета. Через 1 ч при этой температуре добавляли CCl (3,26 г, 13,8 ммоль) в одну порцию и смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры. Эту смесь обрабатывали водой и экстрагировали DCM. Объединенные органические фазы высушивали (MgSO), фильтровали и выпаривали, и остаток очищали колоночной хроматографией (SiO; элюция 50% EtOAc в циклогексане) с получением желаемого продукта VII-d в виде твердого вещества розового цвета (1,51 г, 52%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 8,16 (d, J=8,2 Гц, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,02 (d, J=1,4 Гц, 1Н), 7,96 (dd, J=8,1, 1,5 Гц, 1Н), 7,61 (d, J=6,9 Гц, 1Н), 7,49 (d, J=6,7 Гц, 1Н), 6,35 (t, J=6,8 Гц, 1Н), 2,07 (s, 3H).
Синтез интермедиата VII-е: N-(5-этоксиметил-2-метил-фенил)-ацетамид
1
3
N-(5-этоксиметил-2-метил-фенил)-ацетамид VII-е был получен, как описано для интермедиата II-i с использованием 5-этоксиметил-2-метил-фениламина I-е (5 г, 30,26 ммоль), безводного триэтиламина (12,23 мл), DCM (60 мл) и AcCl (4,32 мл) с получением желаемого интермедиата VII-е в виде твердого вещества белого цвета (5,39 г, 86%). Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 7,69 (s, 1H), 7,15 (d, J=7,7 Гц, 1H), 7,07 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 4,46 (s, 2Н), 3,53 (q, J=7,0 Гц, 2Н), 2,23 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 1,23 (t, J=7,0 Гц, 3H).
Синтез примера 220: 4-[2-((5-Этоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-2-(3-метил-2-оксо-2Н-пиридин-1-ил)-бензонитрил
4
2
6
1
Смесь N-(5-этоксиметил-2-метил-фенил)-ацетамида VII-е (74 мг, 0,361 ммоль), безводного ТГФ (3 мл) и NaH (60% в масле, 29 мг, 0,722 ммоль) перемешивалась в атмосфере аргона при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем по каплям добавляли суспензию 4-(2-хлор-оксазол-5-ил)-2-(3-метил-2-оксо-2Н-пиридин-1-ил)-бензонитрила VII-d (75 мг, 0,241 ммоль) в безводном ТГФ (3 мл) при 0°C с последующим нагреванием до комнатной температуры в течение 2 ч. Смесь обрабатывали водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы высушивали (MgSO), фильтровали и выпаривали, и остаток очищали колоночной хроматографией (SiO; элюция 50% EtOAc в циклогексане) с получением желаемого продукта 220 в виде твердого вещества розового цвета (61 мг, 56%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,55 (s, 1H), 8,05 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 7,83-7,68 (m, 4Н), 7,61 (d, J=6,7 Гц, 1Н), 7,48 (d, J=6,6 Гц, 1H), 7,18 (d, J=7,8 Гц, 1Н), 6,97 (d, J=7,4 Гц, 1H), 6,33 (t, J=6,8 Гц, 1H), 4,41 (s, 2H), 3,46 (q, J=7,0 Гц, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,06 (d,J=7,1 Гц, 3H), 1,12 (t, J=7,0 Гц, 3H).
Пример 221
Подход, используемый для синтеза примера 221
Синтез интермедиата VIII-а: 3-Бром-5-оксазол-5-ил-пиридин
2
3
1
5-(3-Бром-фенил)-оксазол VIII-а был получен, как описано для интермедиата I-c с использованием 2-5-бром-пиридин-3-карбальдегида (0,260 г, 1,4 ммоль), TosMIC (0,273 г, 1,54 ммоль) и KCO (0,580 г, 4,2 ммоль) в МеОН (15 мл) с получением желаемого интермедиата VIII-а в виде твердого вещества бежевого цвета (0,16 г, 50%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8,95 (s, 1Н), 8,70 (s, 1Н), 8,59 (s, 1Н), 8,43 (s, 1Н), 7,95 (s, 1H).
Синтез интермедиата VIII-b: 5'-Охазол-5-ил-[1,3']бипиридинил-2-он
2
3
6
1
В высушенную в печи закупоренную пробирку, содержащую раствор 3-бром-5-оксазол-5-ил-пиридина VIII-а (1,00 г, 4,44 моль) в дегазированном 1,4-диоксане (20 мл), добавляли 2-гидроксипиридин (507 мг, 5,33 ммоль), KCO (1,23 г, 1,78 ммоль), CuI (169 мг, 0,899 ммоль) и rac-tranc-N,N'-диметилциклогексан диамин (280 мкл, 1,78 ммоль). Пробирку заполняли аргоном и закупоривали, затем нагревали на масляной бане при 120°C в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали и отфильтрованный осадок промывали 1,4-диоксаном. Смесь выпаривали, и остаток очищали колоночной хроматографией (2%-5% EtOH в DCM) с получением желаемого продукта VIII-b в виде твердого вещества бежевого цвета (752 мг, 71%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,06 (s, 1H), 8,68 (s, 1Н), 8,60 (s, 1Н), 8,29 (s, 1Н), 7,95 (s, 1Н), 7,80 (dd, J=6,8, 1,6 Гц, 1Н), 7,57 (ddd, J=8,8, 6,6, 1,9 Гц, 1Н), 6,54 (d, J=9,2 Гц, 1Н), 6,39 (t, J=6,7 Гц, 1H).
Синтез интермедиата VIII-c: 5'-(2-Хлор-оксазол-5-ил)-[1,3']бипиридинил-2-он
2
6
2
3
1
5'-(2-Хлор-оксазол-5-ил)-[1,3']бипиридинил-2-он VIII-c был получен, как описано выше для I-d из 5'-оксазол-5-ил-[1,3']бипиридинил-2-она VIII-d (740 мг, 3,09 ммоль) с использованием LiHMDS (1M в THF, 4,64 мл, 4,64 ммоль) и CCl (1,10 г, 4,64 ммоль) в безводном ТГФ. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (SiO; элюция 2%-5% EtOH в DCM) для получения желаемого продукта VIII-c в виде твердого вещества белого цвета (393 мг, 47%). Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,91 (s, 1Н), 8,61 (s, 1H), 8,06 (t, J=2,2 Гц, 1H), 7,50-7,42 (m, 2H), 7,35 (dd, J=6,9, 1,9 Гц, 1H), 6,70 (d, J=9,3 Гц, 1H), 6,34 (td, J=6,8, 1,2 Гц, 1H).
Синтез примера 221: 5'-[2-(5-Метокси-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-[1,3']бипиридинил-2-он
2
3
+
+
5'-[2-(5-Метокси-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-[1,3']бипиридинил-2-он 221 был получен, как описано выше для I-f из 5'-(2-Хлор-оксазол-5-ил)-[1,3']бипиридинил-2-она VIII-c (68 мг, 0,250 ммоль), и 5-метокси-2-метиланилина (35 мг, 0,250 ммоль) в iPrOH (3 мл) с получением титульного соединения 221 после колоночной хроматографии (SiO; элюция 2%-5% EtOH в DCM) в виде твердого вещества оранжевого цвета (28 мг, 30%). (300 МГц, CDCl) δ 8,83 (d, J=1,9 Гц, 1Н), 8,45 (d, J=2,3 Гц, 1Н), 7,93 (t, J=2,1 Гц, 1H), 7,73 (d, J=2,4 Гц, 1Н), 7,41 (m, 1H), 7,34 (m, 1Н), 7,30 (s, 1H), 7,07 (d, J=8,3 Гц, 1H), 6,78 (s, 1H), 6,68 (d, J=9,3 Гц, 1H), 6,55 (dd, J=8,3, 2,5 Гц, 1Н), 6,30 (t, J=5,6 Гц, 1Н), 3,81 (s, 3H), 2,25 (s, 3H). ESI MS m/z 375 (М+Н). Время удерживания = 2,99 мин (метод 1).
Пример 222
Синтез примера 222: 3-{3-[2-(3,5-диметокси-фениламино)-оксазол-5-ил]-фенил}-1-(2-диметиламино-этил)-1 Н-пиридин-2-он
2
3
4
2
3
1
+
+
Смесь 3-{3-[2-(3,5-диметокси-фениламино)-оксазол-5-ил]-фенил}-1Н-пиридин-2-она 219 (39 мг, 0,10 ммоль), (2-хлор-этил)-диметил-амин гидрохлорида (17,5 мг, 0,11 ммоль), KCO (31 мг, 0,22 ммоль) и йодида калия (19 мг, 0,11 ммоль) в ДМФА (4 мл) нагревали при 50°C в течение 16 ч. После выпаривания DMF смесь обрабатывали водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы высушивали (MgSO), фильтровали и выпаривали, и остаток очищали колоночной хроматографией (AlO; элюция 1% EtOH в DCM) с получением желаемого продукта 222 в виде твердого вещества желтого цвета (23 мг, 50%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 10,32 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,72 (d, J=6,7 Гц, 1Н), 7,66 (dd, J=6,9, 1,6 Гц, 1H), 7,58-7,31 (m, 4Н), 6,90 (s, 1Н), 6,89 (s, 1Н), 6,35 (t, J=6,8 Гц, 1Н), 6,13 (s, 1Н), 4,07 (t, J=6,3 Гц, 2Н), 3,73 (s, 6Н), 2,55 (t, J=6,3 Гц, 2Н), 2,20 (s, 6Н). ESIMS m/z 461 (М+Н). Время удерживания = 2,90 мин (метод 1).
Пример 223
Подход, используемый для синтеза примера 223
Синтез интермедиата IX-а: 2-Бром-4-(2-хлор-оксазол-5-ил)-пиридин
2
6
3
1
2-Бром-4-(2-хлор-оксазол-5-ил)-пиридин IX-а был получен, как описано для Примера I-d, с использованием 2-Бром-4-оксазол-5-ил-пиридина (450 мг, 2 ммоль), LiHMDS (2,2 мл, 2,2 ммоль) и CCl (568 мг, 2,4 ммоль) в ТГФ с получением интермедиата IX-а в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета (465 мг, 90%). Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,43 (d, J=5,1 Гц, 1Н), 7,68 (s, 1Н), 7,53 (s, 1Н), 7,46-7,36 (m, 1Н).
Синтез интермедиата IX-b: [5-(2-Бром-пиридин-4-ил)-оксазол-2-ил]-(5-этоксиметил-2-метил-фенил)-амин
1
3
[5-(2-Бром-пиридин-4-ил)-оксазол-2-ил]-(5-этоксиметил-2-метил-фенил)-амин IX-b был получен, как описано для Примера 220, с использованием интермедиата VII-e (169 мг, 0,65 ммоль), N-(5-этоксиметил-2-метил-фенил)-ацетамида (162 мг, 0,78 ммоль) и NaH (65 мг, 1,6 ммоль) в ДМФА с получением интермедиата IX-b в виде твердого вещества желтого цвета (162 мг, 64%). Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,32 (d, J=5,1 Гц, 1Н), 7,94 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,32 (d, J=5,2 Гц, 1H), 7,21 (d, J=7,6 Гц, 1H), 7,06 (d, J=7,7 Гц, 1H), 6,91 (s, 1H), 4,54 (s, 2H), 3,58 (q, J=7,0 Гц, 2H), 2,34 (s, 3H), 1,27 (t, J=7,0 Гц, 3H).
Синтез примера 223: 4'-[2-(5-Этоксиметил-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-3,4,5,6-тетрагидро-[1,2']бипиридинил-2-он
2
3
2
3
1
+
+
Смесь интермедиата IX-b (51 мг, 0,13 ммоль), 8-валеролактама (16 мг, 0,16 ммоль), карбоната цезия (60 мг, 0,18 ммоль), Pd(dba) (4 мг, 0,004 ммоль) и XantPhos (7 мг, 0,012 ммоль) в диоксане (2,5 мл) нагревалась до рефлюкса в течение 1 ч, пока не осталось исходного материала (за реакцией следили с помощью ТСХ). Реакционную смесь затем выпаривали, и неочищенное масло хроматографировали (SiO, элюция 1-10% EtOH в DCM) с получением примера 223 в виде твердого вещества желтого цвета (22 мг, 42%). Н ЯМР (300 МГц, CDCl) δ 8,39 (d, J=5,3 Гц, 1Н), 7,99 (s, 1Н), 7,94 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,25-7,12 (m, 3H), 7,05 (d, J=7,6 Гц, 1H), 4,54 (s, 2Н), 4,02-3,89 (m, 2Н), 3,57 (q, J=6,9 Гц, 2Н), 2,69-2,56 (m, 2Н), 2,34 (s, 3H), 2,02-1,89 (m, 4Н), 1,26 (t, J=7,0 Гц, 3H). ESIMS m/z 407 (М+Н). Время удерживания = 3,48 мин (метод 1).
Пример 224
Синтез примера 224: 1-{4-[2-((5-Этоксиметил)-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-пиридин-2-ил}-тетрагидро-пиримидин-2-он
2
3
4
2
6
1
Смесь интермедиата IX-b (50 мг, 0,13 ммоль), М,№-триметиленмочевины (130 мг, 1,3 ммоль), карбоната цезия (46 мг, 0,14 ммоль), Pd(dba) (4 мг, 0,004 ммоль) и XantPhos (7 мг, 0,012 ммоль) в диоксане (2,5 мл) нагревали до рефлюкса в течение 1 часа 30 минут. Реакционную смесь затем выпаривали, растворяли в этилацетате, промывали несколько раз водой, высушивали над. MgSO и концентрировали. Неочищенное масло хроматографировали (SiO, элюция 1-10% EtOH в DCM) с получением примера 224 в виде твердого вещества желто-оранжевого цвета (16 мг, 31%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,54 (s, 1Н), 8,28 (d, J=5,2 Гц, 1Н), 7,99 (s, 1Н), 7,79 (s, 1Н), 7,66 (s, 1Н), 7,24-7,10 (m, 2Н), 7,00-6,86 (m, 2Н), 4,41 (s, 2Н), 3,92-3,80 (m, 2Н), 3,47 (q, J=6,9 Гц, 2Н), 3,26 -3,19 (m, 2Н), 2,27 (s, 3H), 2,03-1,80 (m, 2Н), 1,14 (t, J=7,0 Гц, 3H).
Пример 225
Подход, используемый для синтеза примера 225
Синтез интермедиата Х-а: 5-(3-Нитро-фенил)-оксазол
2
3
6
1
Интермедиат X-а был получен, как описано для Примера I-c, с использованием 3-нитробензальдегида (4 г, 26 ммоль), TosMIC (5,7 г, 29 ммоль) и KCO (4,4 г, 32 ммоль) в МеОН с получением интермедиата Х-а в виде твердого вещества желтого цвета (4,7 г, 93%). Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,56 (s, 1Н), 8,50 (t, J=1,9 Гц, 1Н), 8,21 (ddd, J=8,2, 2,3, 1,0 Гц, 1Н), 8,17 (ddd, J=7,8, 1,6, 1,0 Гц, 1Н), 7,99 (s, 1H), 7,78 (t, J=8,0 Гц, 1Н).
Синтез интермедиата Х-b: 2-Хлор-5-(3-нитро-фенил)-оксазол
2
6
6
1
Интермедиат Х-b был получен, как описано для Примера I-d, с использованием интермедиата X-а (3,2 г, 17 ммоль), LiHMDS (20,2 мл, 20 ммоль) и CCl (4,78 г, 20 ммоль) в ТГФ с получением желаемого интермедиата Х-b в виде твердого вещества желтого цвета (3,13 г, 82%). Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d) δ 8,48 (d, J=1,5 Гц, 1Н), 8,24 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 8,14 (d, J=7,8 Гц, 1H), 8,09 (d, J=1,9 Гц, 1Н), 7,80 (td, J=8,1, 1,9 Гц, 1Н).
Синтез интермедиата X-с: 4-Метил-N3-[5-(3-нитро-фенил)-оксазол-2-ил]-бензол-1,3-диамин
1
6
Интермедиат Х-с был получен, как описано для Примера 220, с использованием интермедиата Х-b (448 мг, 2 ммоль), N-(5-амино-2-метил-фенил)-ацетамида (394 мг, 2,4 ммоль) и NaH (160 мг, 4 ммоль) в ТГФ с получением интермедиата Х-с в виде твердого вещества оранжевого цвета (236 мг, 64%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,17 (s, 1Н), 8,32 (s, 1Н), 8,07 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 8,00 (d, J=7,7 Гц, 1Н), 7,72 (m, 2Н), 7,11 (s, 1Н), 6,82 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 6,24 (d, J=7,4 Гц, 1Н), 4,91 (s, 2Н), 2,11 (s, 3H).
Синтез интермедиата X-d: N-{4-Метил-3-[5-(3-нитро-фенил)-оксазол-2-иламино]-фенил}-2-пирролидин-1-ил-ацетамид
3
4
6
1
Смесь интермедиата X-с (226 мг, 0,72 ммоль), 1-пирролидинилуксусной кислоты гидрохлорида (158 мг, 0,94 ммоль), 1-гидроксибензотриазол гидрата (148 мг, 1,1 ммоль), H-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид гидрохлорида (252 мг, 1,3 ммоль) и NEt (360 мкл, 2,6 ммоль) в ДМФА (15 мл) перемешивалась при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь затем выпаривали, разводили этилацетатом, промывали водой, высушивали над MgSO и концентрировали до минимального объема для начала кристаллизации. Титульное соединение затем собирали фильтрованием с получением интермедиата X-d в виде твердого вещества желтого цвета (224 мг, 72%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,66 (s, 1Н), 9,43 (s, 1Н), 8,35 (s, 1Н), 8,03 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 7,89 (d, J=7,9 Гц, 1H), 7,70 (m, 2Н), 7,04 (s, 1H), 6,89 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 6,26 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 3,24 (s, 2Н), 2,63-2,54 (m, 4Н), 2,22 (s, 3H), 1,76-1,69 (m, 4Н).
Синтез интермедиата X-е: N-{3-[5-(3-Амино-фенил)-оксазол-2-иламино]-4-метил-фенил}-2-пирролидин-1-ил-ацетамид
2
2
4
2
3
6
1
Смесь интермедиата X-d (220 мг, 0,52 ммоль), SnCl⋅HO (590 мг, 2,6 ммоль) и концентрированной соляной кислоты (735 мкл, 5,2 ммоль) в смеси этанол/вода (9 мл/1 мл) перемешивалась при 40°C в течение 4 ч. Реакционную смесь затем выпаривали, разводили этилацетатом и водным раствором NaOH. Водный слой дважды экстрагировали этилацетатом, затем комбинированные органические слои промывали водой, высушивали над MgSO, и концентрировали. Неочищенное масло хроматографировали (AlO, элюция 0,5% EtOH в DCM) с получением интермедиата Х-е в виде твердого вещества желто-бежевого цвета (147 мг, 72%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,68 (s, 1Н), 9,40 (s, 1Н), 8,21 (s, 1H), 7,95 (d, J=7,8 Гц, 1Н), 7,88 (d, J=7,3 Гц, 1Н), 7,56 (s, 1H), 7,32 (s, 1Н), 7,05 (s, 1Н), 6,91 (d, J=7,3 Гц, 1H), 6,19 (d, J=7,6 Гц, 1H), 4,85 (s, 2Н), 3,28 (s, 2Н), 2,67-2,56 (m, 4Н), 2,23 (s, 3H), 1,78-1,68 (m, 4Н).
Синтез примера 225: N-(3-{5-[3-(2,6-диоксо-пиперидин-1-ил)-фенил]-оксазол-2-иламино}-4-метил-фенил)-2-пирролидин-1-ил-ацетамид
2
3
4
2
3
6
1
К раствору интермедиата X-е (70 мг, 0,18 ммоль) в безводном ТГФ (4 мл) в атмосфере аргона при 0°C добавляли глутаровый ангидрид (20 мг, 0,18 ммоль) в несколько порций. Смесь перемешивали при окружающей температуре в течение 1 ч, затем нагревали до рефлюкса в течение ночи. Образовавшееся твердое вещество собирали фильтрацией, затем промывали ТГФ и диэтиловым эфиром с получением твердого вещества белого цвета (52 мг), которое обрабатывали безводным 1,2-дихлорэтаном (8 мл) с SOCl (30 мкл, 0,4 ммоль) в течение 10 мин. Смесь нагревали до рефлюкса в течение, по меньшей мере, 4 ч, пока не был превращен весь исходный материал, затем разводили DCM, промывали водным раствором NaHCO и водой, высушивали над MgSO, и концентрировали. Остаток хроматографировали (AlO, элюция 0,5-1% EtOH в DCM) с получением соединения 225 в виде твердого вещества бежевого цвета (23 мг, 45%). Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d) δ 9,96 (s, 1Н), 9,64 (s, 1Н), 9,27 (d, J=12,2 Гц, 1Н), 8,03 (d, J=10,9 Гц, 1H), 7,94 (s, 1Н), 7,54-7,46 (m, 1H), 7,35-7,27 (m, 3H), 7,10 (d, J=8,2 Гц, 1H), 3,23 (s, 2Н), 2,69 (t, J=6,5 Гц, 4Н), 2,63-2,56 (m, 4Н), 2,23 (s, 3H), 2,12 (m, 2Н), 1,74 (s, 4Н).
В другом воплощении настоящее изобретение касается фармацевтической композиции, содержащей соединение, как определено выше.
Такая фармацевтическая композиция может быть адаптирована для перорального введения и может быть приготовлена с использованием фармацевтически приемлемых носителей, хорошо известных в данной области техники, в подходящих дозировках. Такие носители позволяют приготовить фармацевтические композиции в виде таблеток, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, густых суспензий, суспензий и тому подобное для приема пациентом внутрь. В дополнение к активным ингредиентам эти фармацевтические композиции могут содержать пригодные фармацевтически приемлемые носители, включающие наполнители и вспомогательные вещества, которые облегчают превращение активных соединений в композиции, которые могут применяться в фармацевтике. Дополнительные детали по способам приготовления и введения можно найти в последнем издании Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co., Easton, Pa.).
Композиция настоящего изобретения может также иметь форму фармацевтической или косметической композиции для местного применения.
Такие композиции могут быть представлены в форме геля, пасты, мази, крема, лосьона, жидкой суспензии, водных, водно-спиртовых или масляных растворов, или дисперсий типа лосьона или сыворотки, безводных или липофильных гелей или эмульсий жидкой или полутвердой консистенции типа молока, полученных диспергированием жирной фазы в водной фазе или наоборот, или суспензий или эмульсий мягкой, полужесткой консистенции типа крема или геля, или альтернативно в виде микроэмульсий, микрокапсул, микрочастиц или везикулярных дисперсий ионного и/или неионного типа. Такие композиции готовятся согласно стандартным методам.
Композиция согласно настоящему изобретению включает любой ингредиент, обычно применяемый в дерматологии и косметике. Она может включать, по меньшей мере, один ингредиент, выбираемый из гидрофильных или липофильных желирующих агентов, гидрофильных или липофильных активных агентов, консервантов, смягчающих веществ, увеличивающих вязкость полимеров, увлажнителей, сурфактантов, предохраняющих веществ, антиоксидантов, растворителей и наполнителей, антиоксидантов, растворителей, отдушек, наполнителей, экранирующих агентов, бактерицидных веществ, поглотителей запахов и красителей.
В качестве масел, которые могут применяться в настоящем изобретении, могут быть отмечены минеральные масла (жидкий парафин), растительные масла (жидкая фракция масла ши (масляного дерева), подсолнечное масло), животные жиры, синтетические масла, силиконовые масла (циклометикон) и фторированные масла. В качестве жировых субстанций могут также применяться жирные спирты, жирные кислоты (стеариновая кислота) и воска (парафин, карнаубский воск, пчелиный воск).
В качестве эмульгаторов в настоящем изобретении могут применяться глицеролы, полисорбаты, глицериды и ПЭГи (полиэтиленгликоли).
В качестве гидрофильных желирующих агентов могут быть отмечены полимеры карбоксивинила (карбомеры), акриловые сополимеры, такие как сополимеры акрилат/алкилакрилат, полиакриламиды, полисахариды, такие как гидроксипропилцеллюлоза, глины и натуральные смолы (камеди), и в качестве липофильных желирующих агентов могут быть отмечены модифицированные глины, такие как бентоны, соли металлов жирных кислот, такие как стеараты алюминия и гидрофобная окись кремния, или, альтернативно этому, этилцеллюлоза и полиэтилен.
В качестве гидрофильных активных агентов могут применяться белки или гидролизаты белков, аминокислоты, полиолы, мочевина, аллантоин, сахара и производные Сахаров, витамины, крахмал и растительные экстракты, в частности, таковые из алоэ.
В качестве липофильных активных агентов могут применяться ретинол (витамин А) и его производные, токоферол (витамин Е) и его производные, незаменимые жирные кислоты, церамиды и незаменимые эфирные масла. Данные агенты при применении добавляют свойства дополнительного увлажнения или смягчения кожи.
Кроме того, в композицию может включаться сурфактант для обеспечения более глубокого проникновения соединения, способного угнетать тучные клетки, такого как ингибитор тирозиинкиназы, предпочтительно, ингибитор c-kit.
Среди предлагаемых ингредиентов настоящее изобретение включает агенты, усиливающие проникновение, выбираемые, например, из группы, состоящей из минерального масла, воды, этанола, триацетина, глицерина и пропиленгликоля, склеивающие агенты, выбираемые, например, из группы, состоящей из полиизобутилена, поливинилацетата и поливинилалкоголя, и загустители.
11
Химические методы повышения местной абсорбции лекарств хорошо известны в данной области техники. Например, соединения с усиливающими проникновение свойствами включают лаурилсульфат натрия (Dugard, P.Н. and Sheuplein, R.J., "Effects of Ionic Surfactants on the Permeability of Human Epidermis: Electrometric Study," J. Ivest. Dermatol., V. 60, pp. 263-69, 1973), лауриламиноксид (Johnson et. al., US 4,411,893), азон (azone) (Rajadhyaksha, US 4,405,616 и 3,989,816) и децилметилсульфоксид (Sekura, D.L. and Scala, J., "The Percutaneous Absorption of Alkylmethyl Sulfides," Pharmacology of the Skin, Advances In Biology of Skin, (Appleton-Century Craft) V. 12, pp. 257-69, 1972). Было установлено, что увеличение полярности головной группы в амфотерных молекулах увеличивает повышающие проникновение свойства, но за счет увеличения их раздражающих кожу свойств (Cooper, Е.R. and BeRer, В., "Interaction of Surfactants with Epidermal Tissues: Physiochemical Aspects," Surfactant Science Series, V. 16, Reiger, M.M. ed. (Marcel Dekker, Inc.) pp. 195-210, 1987).
Второй класс химических усилителей обычно называют сорастворителями. Эти вещества абсорбируются поверхностью кожи сравнительно легко и путем разных механизмов обеспечивают увеличение проницаемости некоторых лекарств. Этанол (Gale et. al., U.S. Pat. No. 4,615,699 и Campbell et. al., U.S. Pat. Nos. 4,460,372 и 4,379,454), диметилсульфоксид (US 3,740,420 и 3,743,727, и US 4,575,515) и производные глицерина (US 4,322,433) представляют собой некоторые примеры соединений, которые демонстрируют способность увеличивать абсорбцию различных соединений.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут также предназначаться для введения в виде аэрозольных форм доставки к целевым областям дыхательных путей пациента.
Приборы и методологии для доставки аэрозольных форм композиций лекарств раскрываются в Патенте US 5,906,202. Композиции предпочтительно представляют собой растворы, например, водные растворы, спиртовые растворы, водно-спиртовые растворы, солевые растворы, коллоидные суспензии и микрокристаллические суспензии. Например, частички аэрозоля включают активный ингредиент, упоминавшийся выше, и носитель (например, фармацевтически активное лекарство для дыхательных путей и носитель), данные частички формируются при вдувании композиции через насадку, которая предпочтительно изготавливается в форме гибкой пористой мембраны. Размер частичек является достаточно маленьким для того, чтобы после формирования они оставались суспендированными в воздухе в течение достаточно длительного времени для того, чтобы пациент мог вдохнуть эти частички в свои легкие.
Настоящее изобретение включает в себя системы, описанные в Патенте US 5,556,611:
- жидкие газовые системы (сжиженный газ применяется в качестве движущей силы (например, низкокипящие FCHC (фторированные/хлорированные углеводороды) или пропан, бутан) в контейнере под давлением;
- аэрозольные суспензии (частицы активного вещества суспендированы в твердой форме в жидкой фазе, являющейся движущей силой);
- газовые системы под давлением (применяется сжатый газ, такой как азот, углекислый газ, закись азота, воздух).
Таким образом, согласно настоящему изобретению фармацевтическая композиция готовится таким образом, что активное вещество растворяется или диспергируется в подходящей нетоксической среде, и указанный раствор или дисперсия измельчаются до состояния аэрозоля, то есть, очень мелко распределяются в газовом носителе. Это является технически возможным, например, в форме аэрозольных баллончиков с газом-носителем, аэрозольных насосов или других приспособлений, которые сами по себе известны для распыления жидкостей и измельченных твердых веществ, и которые, в частности, обеспечивают точную индивидуальную дозировку.
Таким образом, настоящее изобретение также направлено на аэрозольные устройства, включающие данное соединение, как определено вьппе, и такую композицию, предпочтительно, с дозирующим клапаном.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут также предназначаться для внутриназального введения.
Применяемые для этой цели фармацевтически приемлемые носители для введения соединения на слизистые поверхности носа являются хорошо известными специалисту средней квалификации в данной области техники. Эти носители описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences" 16th edition, 1980, Ed. By Arthur Osol, раскрытие которого является включенным в настоящее изобретение путем отсылки.
Выбор подходящих носителей зависит от конкретного типа введения, который предполагается применять. Для введения через верхние дыхательные пути композиция может готовиться в виде раствора, например, в воде или изотоническом растворе, забуференном или незабуференном, или как суспензия для внутриназального введения в виде капель или спрея. Предпочтительно, такие растворы или суспензии являются изотоническими по отношению к носовым секретам и с примерно сходным значением pH, например, от примерно pH 4,0 до примерно pH 7,4 или от pH 6,0 до pH 7,0. Буферы должны быть физиологически совместимыми и включают, просто для примера, фосфатные буферы. Например, типичное противоотечное средство для носа описано как забуференное до значения pH примерно 6,2 (Remington's, Id. at page 1445). Естественно, специалист средней квалификации в данной области техники может легко определить подходящий солевой состав и значение pH для безвредного водного носителя для назального введения и/или введения через верхние дыхательные пути.
Стандартные внутриназальные носители включают назальные гели, кремы, пасты или мази с вязкостью, например, от примерно 10 до примерно 3000 сПз, или от примерно 2500 до 6500 сПз, или выше, и могут также применяться для обеспечения более длительного контакта с поверхностями слизистых оболочек носа. Такие композиции с вязкими носителями могут основываться, просто для примера, на алкилцеллюлозах и/или других биосовместимых носителях с высокой вязкостью, хорошо известных в данной области техники (смотри, например, Remington's, cited supra). Предпочтительной алкилцеллюлозой является, например, метилцеллюлоза в диапазоне концентраций от примерно 5 до примерно 1000 или более мг на 100 мл носителя. Более предпочтительно, концентрация метилцеллюлозы составляет, просто для примера, от примерно 25 до примерно 1000 мг на 100 мл носителя.
Другие ингредиенты, такие как известные в данной области техники консерванты, красители, смазывающие или придающие вязкость минеральные или растительные масла, отдушки, натуральные или синтетические растительные экстракты, такие как ароматические масла, и увлажнители или усилители вязкости, такие как, например, глицерин, также могут включаться в композиции для придания им дополнительной вязкости, удержания влаги и обеспечения приятной консистенции и запаха. Для назального введения растворов или суспензий согласно настоящему изобретению в данной области техники доступны различные устройства для получения капель, мелких капелек и спреев.
Другим объектом настоящего изобретения является дозатор для введения отмеренной стандартной дозы, включающий пипетку или устройство для распыления, содержащий раствор или суспензию для доставки лекарства в виде капель или спрея, и содержащий одну или несколько доз лекарства, которое необходимо вводить. Настоящее изобретение также включает набор, содержащий одну или более доз соединения в сухом виде вместе с любыми необходимыми солями и/или буферными агентами, консервантами, красителями и тому подобное, готовый для приготовления раствора или суспензии путем добавления необходимого количества воды.
Другой аспект настоящего изобретения направлен на применение указанного соединения для изготовления лекарственного средства. Другими словами, настоящее изобретение включает способ лечения заболевания, связанного с абнормальной регуляцией передачи сигнала тирозинкиназой c-kit, включающий введение эффективного количества соединения, как определено выше, млекопитающему, которое нуждается в таком лечении.
Более конкретно, целью настоящего изобретения является способ лечения заболевания, выбираемого из аутоиммунных заболеваний, аллергических заболеваний, остеопороза, разных видов рака, таких как GIST, опухолевого ангиогенеза, воспалительных заболеваний, воспалительных заболеваний кишечника (IBD), интерстициального цистита, мастоцитоза, инфекционных заболеваний, метаболических заболеваний, фиброза, диабета и заболеваний ЦНС, включающий введение эффективного количества соединения, как определено выше, млекопитающему, которое нуждается в таком лечении.
Описанные выше соединения являются пригодными для изготовления лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с нарушенной регуляцией передачи сигнала с участием c-kit, которые включают, но ими не ограничиваются:
- неопластические заболевания, такие как мастоцитоз, мастоцитома собак, твердые опухоли, гастроинтестинальная стромальная опухоль человека ("GIST"), мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких, острый миелоцитарный лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, миелодиспластический синдром, хроническая гранулоцитная лейкемия, колоректальные карциномы, карцинома желудка, гастроинтестинальная стромальная опухоль, раковые заболевания семенников, глиобластомы, твердые опухоли и астроцитомы.
- опухолевый ангиогенез.
- метаболические заболевания, такие как диабет и его хронические осложнения; ожирение; диабет II типа; гиперлипидемии и дислипидемии; атеросклероз; гипертония; и сердечнососудистые заболевания.
- аллергические заболевания, такие как астма, аллергический ринит, аллергический синусит, анафилактический синдром, крапивница, ангионевротический отек (болезнь Квинке), атопический дерматит, аллергический контактный дерматит, узелковая эритема, экссудативная многоформная эритема, кожный некрозный венулит и воспаления кожи при укусах насекомых или заражении кровососущими паразитами.
- интерстициальный цистит.
- потеря костной массы (остеопороз).
- воспалительные заболевания, такие как ревматоидный артрит, конъюнктивит, ревматоидный (анкилозирующий) спондилит, остеоартрит, подагрический артрит и другие артритные состояния.
- аутоиммунные заболевания, такие как рассеянный склероз, псориаз, воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Крона (гранулематозная болезнь), ревматоидный артрит и полиартрит, местная и системная склеродерма, системная красная волчанка, дискоидная красная волчанка, кожная красная волчанка, дерматомиозит (болезнь Вагнера), полимиозит, синдром Шегрена, узелковый панартерит, аутоиммунная энтеропатия, а также пролиферативный гломерулонефрит.
- заболевание «трансплантат против хозяина» или отторжение трансплантата при трансплантации любого органа, включая почки, поджелудочную железу, печень, сердце, легкие и костный мозг.
- другие аутоиммунные заболевания, охватываемые настоящим изобретением, это активный хронический гепатит и синдром хронической усталости.
- заболевания, связанные с образованием субэпидермальных волдырей, такие как пузырчатка (пемфигус).
- васкулит.
- ВИЧ инфекцию.
- заболевания, связанные с дисфункцией меланоцитов, такие как гипермеланоз, развивающийся при дисфункции меланоцитов, включающий лентигиноз, солнечные и старческие веснушки (пигментные пятна), предраковый меланоз Дюбрея, родимые пятна и злокачественные меланомы. В этой связи настоящее изобретение включает применение соединений, определенных выше, для производства лекарства или косметической композиции для отбеливания кожи человека.
- заболевания ЦНС, такие как психиатрические заболевания, мигрень, боль, потеря памяти и дегенерация нервных клеток. Более конкретно, способ согласно настоящему изобретению является пригодным для лечения следующих заболеваний: депрессия, включая дистимическое расстройство, циклотимическое расстройство, биполярная депрессия, тяжелая или "меланхолическая" депрессия, атипичная депрессия, стойкая депрессия, сезонная депрессия, анорексия, булимия, предменструальный синдром, постменопаузный синдром, другие синдромы, такие как умственная заторможенность и снижение концентрации внимания, пессимистическое волнение, тревожное возбуждение, самоуничижение, снижение либидо, боль, включая острую боль, послеоперационную боль, хроническую боль, ноцицептивную боль, боль, связанную с раковым заболеванием, невропатичекую боль, психогенный болевой синдром, тревожные заболевания, включая тревожность, связанную с гипервентиляцией легких и сердечными аритмиями, заболевания типа фобий, обсессивно-компульсивное расстройство, посттравматическое стрессовое расстройство, острое стрессовое расстройство, генерализованное тревожное расстройство, психиатрические критические состояния, такие как приступы паники, включая психоз, бредовые заболевания, конверсионные заболевания, фобии, мании, белую горячку, диссоциативные эпизоды, включая диссоциативную амнезию, диссоциативную фугу и диссоциативное раздвоение личности, деперсонализацию, кататонию, конвульсии, тяжелые психиатрические расстройства, включая суицидальное поведение, самопренебрежение, буйное или агрессивное поведение, травму, пограничное расстройство личности, и острый психоз, шизофрению, включая параноидную шизофрению, гебефреническую шизофрению, кататоническую шизофрению и недифференцированный тип шизофрении,
- нейродегенеративные заболевания, включая болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, прионные заболевания, заболевание моторных нейронов (MND) и амиотрофический латеральный склероз (ALS).
- расстройства, вызванные употреблением [психоактивных] веществ, как здесь определено, включая, но ими не ограничиваясь, привыкание к чрезмерному употреблению лекарств, наркоманию, лекарственную зависимость, наркозависимость, синдром отмены и передозировку.
- Ишемию головного мозга.
- Фиброз.
- мышечную дистрофию Дюшена.
В отношении мастоцитоза, настоящее изобретение предлагает применение соединений, как определено выше, для лечения различных категорий заболевания, которые могут быть классифицированы следующим образом:
Категория I состоит из двух подкатегорий (IA и IB). Категория IA включает заболевания, при которых инфильтрация тучных клеток четко локализована в коже. Эта категория представляет собой наиболее частую форму заболеваний и включает:
i) пигментную крапивницу, наиболее распространенную форму кожного мастоцитоза, особенно распространенную у детей, ii) диффузный кожный мастоцитоз, iii) солитарную мастоцитому и iv) некоторые редкие подтипы, например, буллезный, эритродермический и телеангиэктатический мастоцитоз. Эти формы характеризуются своим прекрасным прогнозом со спонтанными ремиссиями у детей и очень вялым течением у взрослых. Продолжительность жизни (длительность выживания) при этой форме заболевания обычно сравнима с таковой в нормальной популяции и переход в другую форму мастоцитоза происходит редко. Категория IB включает медленнотекущее системное заболевание (SM), затрагивающее или не затрагивающее кожу. Эти формы гораздо более обычны для взрослых, чем для детей. Течение болезни часто вялое, но иногда могут появляться признаки агрессивного или злокачественного мастоцитоза, что приводит к прогрессивному нарушению функции органов.
Категория II включает мастоцитоз с ассоциированным гематологическим расстройством, такой как миелопролиферативный или миелодиспластический синдром или острый лейкоз. Эти злокачественные мастоцитозы обычно не затрагивают кожу. Развитие болезни зависит, главным образом, от типа ассоциированного гематологического расстройства, что и влияет на прогноз.
Категория III представлена агрессивным системным мастоцитозом, при котором обычной является массовая инфильтрация абнормальных тучных клеток во многие органы. У пациентов, которые страдают от этого агрессивного типа течения болезни, более выражены характеристики периферической крови, указывающие на миелопролиферативное расстройство. Течение болезни может быть очень быстрым, подобным таковому при остром лейкозе, хотя некоторые пациенты могут демонстрировать более длительное время выживания.
И наконец, Категория IV мастоцитоза включает тучноклеточный (базофильный) лейкоз, характеризующийся наличием циркулирующих тучных клеток и предшественников тучных клеток, которые составляют более 10% лейкоцитов. Этот тип заболевания, вероятно, является наиболее редким типом лейкоза у человека и имеет очень плохой прогноз, подобный прогнозу при быстро прогрессирующем варианте злокачественного мастоцитоза. Тучноклеточный лейкоз может возникнуть либо de novo, либо как последняя стадия пигментной крапивницы или системного мастоцитоза.
Настоящее изобретение также включает способ, как это определено, лечения рецидивных бактериальных инфекций, возвратных инфекций после бессимптомных периодов, таких как бактериальный цистит. Более конкретно, настоящее изобретение может применяться для лечения инфекций, вызываемых экспрессирующими FimH бактериями, такими как Грамотрицательные энтеробактерии, включая Е. coli, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens, Citrobactor freudii и Salmonella typhimurium.
В этом способе лечения бактериальной инфекции является необходимым отдельное, последовательное или совместное введение, по меньшей мере, одного антибиотика, выбираемого из бацитрацина, цефалоспоринов, пенициллинов, аминогликозидов, тетрациклинов, стрептомицинов и макролидных антибиотиков, таких как эритромицин; фторхинолов, актиномицина, сульфонамидов и триметоприма.
В одном предпочтительном воплощении настоящее изобретение направлено на способ лечения неопластических заболеваний, таких как мастоцитоз, мастоцитома собак, твердые опухоли, гастроинтестинальная стромальная опухоль человека ("GIST"), мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких, острый миелоцитарный лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, миелодиспластический синдром, хроническая гранулоцитная лейкемия, колоректальные карциномы, карцинома желудка, гастроинтестинальная стромальная опухоль, раковые заболевания семенников, глиобластомы и астроцитомы, включающий введение соединения, как здесь определено, человеку или млекопитающему, в особенности собакам и кошкам, которые нуждаются в таком лечении.
В одном другом предпочтительном воплощении настоящее изобретение направлено на способ лечения аллергических заболеваний, таких как астма, аллергический ринит, аллергический синусит, анафилактический синдром, крапивница, ангионевротический отек (болезнь Квинке), атопический дерматит, аллергический контактный дерматит, узелковая эритема, экссудативная многоформная эритема, кожный некрозный венулит и воспаления кожи при укусах насекомых или заражении кровососущими паразитами, включающий введение соединения, как здесь определено, человеку или млекопитающему, в особенности собакам и кошкам, которые нуждается в таком лечении.
В еще одном предпочтительном воплощении настоящее изобретение направлено на способ лечения воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, конъюнктивит, ревматоидный (анкилозирующий) спондилит, остеоартрит, подагрический артрит и другие артритные состояния, включающий введение соединения, как здесь определено, человеку, который нуждается в таком лечении.
В еще одном предпочтительном воплощении настоящее изобретение направлено на способ лечения аутоиммунных заболеваний, таких как рассеянный склероз, псориаз, воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Крона (гранулематозная болезнь), ревматоидный артрит и полиартрит, местная и системная склеродерма, системная красная волчанка, дискоидная красная волчанка, кожная красная волчанка, дерматомиозит (болезнь Вагнера), полимиозит, синдром Шегрена, узелковый панартерит, аутоиммунная энтеропатия, а также пролиферативный гломерулонефрит, включающий введение соединения, как здесь определено, человеку, который нуждается в таком лечении.
В еще одном предпочтительном воплощении настоящее изобретение направлено на способ лечения заболевания «трансплантат против хозяина» или отторжения трансплантата при трансплантации любого органа, включая почки, поджелудочную железу, печень, сердце, легкие и костный мозг, включающий введение соединения, как здесь определено, человеку, который нуждается в таком лечении.
В еще одном дополнительном воплощении соединения настоящего изобретения или их фармацевтически приемлемые соли могут вводиться в комбинации с одним или более другими фармацевтическими агентами в количествах, достаточных для обеспечения терапевтического эффекта. В одном осуществлении воплощения совместное введение соединений настоящего изобретения и другого агента(ов) производится одновременно. В другом осуществлении воплощения совместное введение соединений настоящего изобретения и другого агента(ов) производится последовательно. В еще одном осуществлении воплощения совместное введение соединений настоящего изобретения и другого агента(ов) производится с интервалом в течение определенного периода времени.
Примеры анализа ингибирования TK in vitro
Процедуры измерения C-Kit дикого типа (WT) и мутантной C-Kit (D816V)
- Анализ пролиферации
Колориметрический анализ пролиферации и жизнеспособности клеток (реагент CellTiter-Blue, приобретенный у Promega, каталожный №G8081) был проведен на клеточных линиях BaF3 Kit WT или Kit D816, а также на клеточных линиях мастоцитомы и тучноклеточной лейкемии человека и мышей.
4
Ex
Em
Клетки в количество 2.10 клеток/50 мкл на лунку были высажены в 96-луночные планшеты. Обработку начинали добавлением 2X раствора соединения в сериальных ½ разведениях в диапазоне концентраций от 0 до 10 мкМ. После инкубации в течение 48 часов при 37°C в каждую лунку добавляли по 10 мкл реагента CellTiter-Blue в ½ разведении, и планшеты возвращали в инкубатор еще на 4 часа. Интенсивность флуоресценции реагента CellTiter-Blue пропорциональна числу живых клеток. Данные регистрировали (544/590) с использованием ридера для планшетов POLARstar OMEGA microplate reader (BMG LabteckSarl). Уровень фона в контрольных лунках без клеток использовался в качестве нулевой пробы. Положительный контроль измерений соответствовал пролиферации клеток в отсутствие обработки соединениями (100% пролиферация). Каждый опыт ставился в трех повторностях. Результаты выражались в процентах от значения пролиферации, полученного в отсутствие обработки.
Все соединения готовили в виде 20 мМ сток-раствора в ДМСО и сохраняли при -80°C. Разведения соединений готовили с использованием свежей среды перед каждым экспериментом. Контроль на действие ДМСО был включен в каждый эксперимент.
- Клетки
Kit WT человека и Kit D816V человека происходят из IL-3-зависимых лимфоидных клеток мыши Ba/F3 proB. Тогда как клетки Ba/F3 Kit WT стимулировали 250 нг/мл рекомбинантным SCF мыши, клетки, экспрессирующие Kit D816V, являются независимыми от цитокинов для их роста. Клеточные линии FMA3 и Р815 являются клетками мастоцитомы, экспрессирующими эндогенные мутантные формы Kit, а именно, с делецией рамки считывания в примембранном кодирующем участке рецептора мыши -кодонов от 573 до 579 (FMA3) и с активирующей мутацией D814Y в киназном домене (Р815). Линия лейкозных тучных клеток человека НМС-1 экспрессирует две одиночные точечные мутации в гене c-Kit, V560G в примембранном домене и D816V в киназном домене.
- Иммунопреципитация и Вестерн-блоттинг:
6
Для каждого измерения лизировали 5.10 клеток Ba/F3 и полученных из Ba/F3 клеток, экспрессирующих разные мутантные формы c-kit, и проводили иммунопреципитацию, как описано ранее (Beslu et al., 1996). Вкратце, клеточные лизаты иммунопреципитировали с использованием иммуносыворотки кролика, направленной на цитоплазматический домен либо против KIT мыши (Rottapel et al., 1991), либо против KIT человека (Santa Cruz). Гибридизацию при Вестерн-блоттинге проводили с использованием антител 4G10 против фосфотирозина (UBI), использовалась соответствующая иммуносыворотка кролика против KIT или антитела, направленные против сигнальных молекул. Затем мембраны инкубировали либо с конъюгированными с пероксидазой хрена антителами козы против IgG мыши, либо с конъюгированными с пероксидазой хрена антителами козы против IgG кролика (Immunotech). Интересующие белки затем визуализировали путем инкубации с реагентом ECL (Amersham).
Результаты эксперимента
Экспериментальные результаты для различных соединений согласно настоящему изобретению, полученные с использованием описанных выше методов, представлены в таблице 3.
Авторы настоящего изобретения обнаружили очень эффективное ингибирование протеинкиназы, и более конкретно нативной и/или мутантной c-kit, классом соединений формулы I настоящего изобретения. Приведенные в таблице 3 соединения разумно обобщают класс соединений формулы I.