Применение тонкослойной хроматографии для идентификации ЛХС-1208 в лекарственной форме

28

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

к-СЛЦ - до 74904 мг/л и l-СЛЦ - до 34784 мг/л. Пациентам выполняли селективную элиминацию СЛЦ с применением гемофильтра EMic2 и клиренсом к- и Х-СЛЦ 38 и 32 мл/мин соответственно, с одновременной противоопухолевой терапией в соответствии с принятыми стандартами.

Результаты. За время исследования пациентам было проведено от 5 до 38 сеансов гемодиализа (ГД) с использованием фильтров EMic2 с возможностью селективного удаления к- и l-СЛЦ. У ряда больных с клинически значимой гиперпарапротеинемией параллельно выполняли плазмофильтрацию с удалением до 1,5 л плазмы за 1 процедуру. Установлено, что в процессе 1 сеанса ГД удавалось удалить от 250 до 196000 мг СЛЦ. Максимальное количество СЛЦ, которое получалось элиминировать в ходе всего курса лечения, достигало 1090 г. Десяти пациентам удалось провести адекватную противоопухолевую терапию без редукции доз лекарственных средств. На фоне проводимой терапии у 8 больных с почечной недостаточностью был зарегистрирован значимый клинический и биохимический ответ, в том числе у 5 пациентов почечная функция восстановилась до диализ-независимой (I—II стадии по шкале RIFLE). У 9 пациентов на фоне сочетанной терапии отмечалось клинически значимое снижение концентрации СЛЦ.

Заключение. Экстракорпоральная детоксикация с селективной элиминацией СЛЦ при использовании фильтра EMiC2 позволяет достичь положительной динамики клинических и биохимических показателей, снизить уровень СЛЦ и оптимизировать уровень азотемии, что расширяет возможности адекватной противоопухолевой терапии.

Е.А. Губарева, А. В. Панченко, М.А. Майдин, Е.И. Федорос, М.Л. Тындык

СНИЖЕНИЕ ТОКСИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ХИМИОТЕРАПИИ НА ЭПИТЕЛИЙ ТОНКОЙ КИШКИ МЫШЕЙ С ПОМОЩЬЮ ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

ФГБУ«НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург

Введение. Препараты, используемые для химиотерапии (ХТ) злокачественных опухолей, оказывают токсическое действие на все пролиферирующие клетки организма. Слизистая оболочка тонкой кишки - наиболее быстро обновляющаяся ткань в организме человека, с чем связаны сопутствующие ХТ гастроинтестинальные побочные эффекты, в основе которых лежат гибель пролиферирующих клеток, потеря ворсинок и гибель крипт, сопровождаемая воспалительной реакцией. Препараты, используемые для снижения токсичности ХТ, не должны уменьшать эффективность цитостатика и способствовать росту опухолевых клеток. Перспективными в этом отношении являются природные вещества, относящиеся к полифенолам и обладающие антиоксидантным, противовоспалительным и противоопухолевым действием. Исследуемые препараты ВРС-1 и ВРС-2 содержат гуминовые вещества, обогащенные по-лифенольными соединениями, и микроэлементы.

Цель исследования — оценить выживаемость крипт тощей кишки мыши при терапии 5-фторурацилом

и профилактическом введении полифенольных препаратов ВРС-1 и ВРС-2.

Материалы и методы. Исследование проведено на 49 мышах-самцах SHR возрастом 2 мес. Животные были разделены на 4 группы, 3 из которых получили 5-ФУ (внутрибрю-шинно в дозе 30 мг/кг дважды с интервалом в 6 ч), 2 группы в течение 5 дней перед этим получали внутрижелудочно препараты ВРС-1 (0,885 мг/кг) и ВРС-2 (11,8 мг/кг). Контрольная группа получала растворитель в соответствующем режиме. На 5-е сутки после введения 5-ФУ всех животных подвергли эвтаназии. Мышей вскрывали и фиксировали в 10 % забуференном формалине тощую кишку, из различных участков которой затем вырезали кольца 4—5 мм и подвергали гистологической проводке. Далее на микротоме делали поперечные срезы толщиной 3—5 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином. Выживаемость крипт оценивали по методике Withers и Elkind (1970). Подсчитывали количество жизнеспособных крипт (не менее 10 клеток с базофиль-ным ядром, лежащих рядом) не менее чем на 6 поперечных срезах. Статистическую оценку полученных результатов проводили с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты. У всех мышей, получивших 5-ФУ, наблюдались гибель части крипт, укорочение или потеря ворсинок, хроническая воспалительная реакция в слизистой оболочке кишки. В контрольной группе среднее число крипт составило 135,91 ± 13,38, в группах 5-ФУ — 115,70 ± 13,42 (р = 7,087). Введение полифенольных препаратов статистически достоверно уменьшало степень повреждения кишечной слизистой оболочки по сравнению с группой, получавшей только цитостатик (ВРС-1: 126,03 ± 17,63; р = 0,0002; ВРС-2: 123,38 ± 15,99; р = 0,003).

Заключение. Полифенольные препараты ВРС-1 и ВРС-2 являются перспективными средствами сопроводительной терапии пациентов, получающих цитостатики.

И. Д. Гулякин1, А. В Ланцова1, Е.В. Санарова1, Л.Л. Николаева1, Н.А. Оборотова1,2, Е.В. Игнатьева1, Н.А. Дмитричева1, И.В. Ярцева1, З.С. Шпрах1 ПРИМЕНЕНИЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЛХС-1208 В ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ

ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России, Москва

Введение. В лаборатории разработки лекарственных форм РОНЦ им. Н.Н. Блохина разработана лиофилизиро-ванная лекарственная форма (ЛФ) на основе ЛХС-1208 — соединения из класса индолокарбазолов. Для качественного анализа состава лиофилизированных ЛФ и их компонентов широко применяется метод хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ), отличающийся простотой и экс-прессностью. Данный метод предложен для идентификации действующего вещества в ЛФ ЛХС-1208.

Цель исследования. Идентификация ЛХС-1208 в лио-филизированной ЛФ методом ТСХ.

Материалы и методы. ЛХС-1208, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций, 9 мг (РОНЦ им. Н.Н. Блохина), пластины ПТСХ-АФ-В-УФ (Сорбфил, Россия); органические растворители. Содержимое флако-

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

29

на растворяли в 5 мл диметилформамида (ДМФА). На линию старта хроматографической пластины наносили по 5 мкл раствора препарата и растворов веществ-свидетелей (ЛХС-1208 и модельной смеси ЛФ, состоящей из ЛХС-1208 и повидона) в ДМФА. Пластину с нанесенными пробами подсушивали на воздухе в течение 30 мин, помещали в хро-матографическую камеру со смесью растворителей и хро-матографировали восходящим способом. Пластину подсушивали на воздухе до полного исчезновения запаха растворителей. Полученные хроматограммы не требовали дополнительной обработки какими-либо проявителями, поскольку активное вещество имеет интенсивную окраску, Хроматограмму оценивали по положению, совокупности величины и интенсивности окраски пятен ЛХС-1208 в пробе испытуемого раствора и пробах стандартных растворов.

Результаты. Из нескольких систем растворителей экспериментально была выбрана система бензол — спирт этиловый (1:1). Присутствие значительного количества пови-дона в единице ЛФ по сравнению с количеством основного вещества (600 и 9 мг соответственно) затрудняет разделение компонентов ЛФ, поэтому для более правильной идентификации активного вещества на пластины в качестве стандартных образцов веществ-свидетелей было предложено наносить пробы растворов в ДМФА субстанции ЛХС-1208 и модельной смеси ЛФ. При просмотре хро-матограмм в ультрафиолетовом свете в пробах ЛФ и модельной смеси помимо пятна ЛХС-1208 наблюдалось хорошо очерченное пятно на старте, соответствующее повидону.

Заключение. Проведены исследования для идентификации ЛХС-1208 методом ТСХ, по результатам которых подобран состав подвижной фазы.

Работа выполнена в рамках Государственного контракта № 13411.1008799.13.20от 24.06.2013 «Доклинические исследования инновационного лекарственного средства на основе производного ин-долокарбазола для лечения онкологических заболеваний».

Н.Н. Турина1. Т.Ю. Егорова1, С. Г. Фомина1, Д. В. Новиков1, Н.В. Красногорова1, А. Д. Перенков1, А. В. Калугин1, А.Ю. Барышников2, В. В. Новиков1 ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ АЛЬТЕРНАТИВНЫХ ФОРМ мРНК MUC1 В ОПУХОЛЕВЫХ ОЧАГАХ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

1ФТАОУ ВО «ННГУ им. Н.И. Лобачевского», Нижний Новгород; 2ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Введение. Ген MUC1 экспрессируется в эпителиальных клетках. В раковых клетках происходят транскрипционные и посттранскрипционные изменения MUC1, приводящие к метаболическому перепрограммированию клетки. В настоящее время описано образование 78 изоформ в результате сплайсинга мРНК MUC1. Наиболее часто обнаруживаются изоформы с выпадением региона тандемных повторов (MUC1-X, — Y, — Z) и изоформа без трансмембранного региона (MUC1-Seq). К настоящему моменту функциональное значение изоформ MUC1 остается неизученным. Однако известно, что повышенная экспрессия MUC1-Seq и MUC1-Y регистрируется при воспалении слюнных и слезных желез.

Цель исследования — изучение связи экспрессии альтернативных форм мРНК MUC1 в опухолевых очагах рака

молочной железы (РМЖ) с маркером воспаления интер-лейкином-32 (ИЛ-32).

Материалы и методы. Материалом для исследования послужили 40 образцов опухолевых очагов от больных РМЖ. Материалы предоставлены РОНЦ им. Н.Н. Блохи-на. Методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) выявляли 3 группы изоформ мРНК МиС1 с использованием специфичных праймеров. В 1-ю группу входили изоформы с добавлением лишних аминокислот в М-терминальную часть белка (МИС1-А, МиС1-В, МиС1-С, МиС1-Б); 2-я группа содержала изо-формы с выпадением аминокислот из региона тандемных повторов (МИС1-Х, МИС1-У, МИС1-г); 3-я группа - изо-форму без трансмембранного региона (МИС1-8ед) и классическую форму мРНК (МиО-Яер). Результаты реакции оценивали электрофорезом нуклеиновых кислот в агароз-ном геле в присутствии бромида этидия. Уровень мРНК ИЛ-32 оценивали методом ОТ-ПЦР в реальном времени относительно мРНК р2-микроглобулина.

Результаты. Экспрессия альтернативных форм мРНК МиС11-й группы наблюдалась в 84 % образцов (27 из 32), 2-й группы — в 25 % образцов (8 из 32), экспрессия мРНК МИС1-Яер регистрировалась в 62,5 % образцов (20 из 32), а мРНК МИС1-8ед — во всех исследованных образцах. Ранее нами было установлено, что экспрессия мРНК МИС1 в опухолевых очагах РМЖ коррелирует с экспрессией ИЛ-32. При сравнении частот обнаружения изоформ мРНК МИС1 с уровнями мРНК ИЛ-32 показано, что при РМЖ не наблюдается зависимости между экспрессией изоформ мРНК МиС1 и изменением уровня мРНК ИЛ-32.

Заключение. Таким образом, в клетках опухолей молочной железы воспалительные процессы, опосредованные ИЛ-32, не связаны с экспрессией исследуемых альтернативных форм мРНК МиС1.

И. В. Гусев1. В. П. Сокуренко2, Е.А. Маслюкова2, А.В. Мешечкин2, М.А. Коровина1, Л.И. Корытова2, Н.Д. Олтаржевская1

ПРИМЕНЕНИЕ СТРУКТУРИРОВАННЫХ ГИДРОГЕЛЕВЫХ МАТЕРИАЛОВ «КОЛЕГЕЛЬ-ДИСК» ДЛЯ НАПРАВЛЕННОГО ТРАНСПОРТА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ ХИМИОЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ ООО «КОЛЕТЕКС», Москва;

2ФГБУРНЦРХТМинздрава России, Санкт-Петербург

Введение. Получены высокоструктурированные гидро-гелевые диски «Колегель-диск» на основе биополимера-радиопротектора альгината натрия с различными препаратами (цитостатические, радиомодифицирующие (5-фторурацил), антисептические (диоксидин, деринат) и др.) для направленного подведения к очагу поражения у онкологических больных.

Цель исследования — применение гидрогелевых материалов «Колегель-диск» для направленного подведения введенных в них препаратов к очагу поражения у онкологических больных при химиолучевой терапии для уменьшения резорбции опухоли и в качестве материалов сопровождения для улучшения качества жизни больных и снижения нежелательных побочных эффектов лечения.