АНТИТЕЛА К ЧЕЛОВЕЧЕСКОМУ ЭРИТРОФЕРРОНУ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Анализ для обнаружения присутствия и/или измерения количества белка эритроферрона (ERFE) в образце, включающий:
контакт образца с первым антителом для образования комплекса первое антитело-ERFE;
и затем обнаружение присутствия и/или измерение количества второго антитела, связавшегося с комплексом первое антитело-ERFE, где первое антитело и второе антитело не одинаковы, и, таким образом, определение присутствия и/или количества белка ERFE в образце.
2. Анализ по п. 1, где анализ включает анализ ELISA.
3. Анализ по п. 1, где образец представляет собой образец сыворотки.
4. Анализ по п. 1, где первое и второе антитела специфически распознают полипептид ERFE, содержащий последовательность состоящий по существу или состоящий из последовательности, по меньшей мере, одной из SEQ ID NO: 1 и/или 3-16.
5. Анализ по п. 1, где первое антитело выбрано из моноклональных антител 9B12, 17A5, 17E5, 2D2, 4C1, 6H9, 7H4, 9C7, 14B2 и 14D9, или их ERFE-связывающего фрагмента.
6. Анализ по п. 1, где первое антитело представляет собой 4C1 или его ERFE-связывающий фрагмент.
7. Анализ по любому из пп. 1-6, где первым антителом покрывают твердую подложку.
8. Анализ по п. 7, где твердая подложка представляет собой планшет для ELISA.
9. Анализ по п. 1, где этап обнаружения включает контакт комплекса первое антитело-полипептид ERFE со вторым антителом, и где второе антитело является меченным.
10. Анализ по п. 9, где второе антитело представляет собой меченое детектирующее антитело, выбранное из 9B12, 17A5, 17E5, 2D2, 4C1, 6H9, 7H4, 9C7, 14B2 и 14D9
11. Анализ по п. 10, где второе антитело является 2D2.
12. Анализ по п. 9, где метка представляет собой биотин.
13. Анализ по п. 9, где метка представляет собой пероксидазу хрена.
14. Эритроферрон (ERFE)-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент, содержащие вариабельную область (VH) тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи (VL),
где VH содержит:
(i) аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:18;
(ii) аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:28;
(iii) аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:38;
(iv) аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:48; или
(v) аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:58; и
и VL содержит:
(vi) аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:23;
(vii) аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:33;
(viii) аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:43;
(ix) аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:53; или
(x) аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:63.
15. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент, где антитело содержит:
(i) одну, две, или все три CDR тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:19-21;
(ii) одну, две, или все три CDR легкой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:24-26;
(iii) одну, две, или все три CDR тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:29-31;
(iv) одну, две, или все три CDR легкой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:34-36;
(v) одну, две, или все три CDR тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:39-41;
(vi) одну, две, или все три CDR легкой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:44-46;
(vii) одну, две, или все три CDR тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:49-51;
(viii) одну, две, или все три CDR легкой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:54-56;
(ix) одну, две, или все три CDR тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:59-61; или
(x) одну, две, или все три CDR легкой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:64-66.
16. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14, содержащее аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 80% идентичности последовательности с VH из SEQ ID NO:18 и аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 80% идентичности последовательности с VL из SEQ ID NO:23.
17. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14 или 16, где VH имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 90% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:18.
18. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14 или 16, где VL имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 90% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:23.
19. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 15, где антитело содержит одну, две, или все три CDR тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:19-21 и одну, две, или все три CDR легкой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:24-26.
20. ERFE-связывающ антитело или его ERFE-связывающий фрагмент, по п. 14, содержащее аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 80% идентичности последовательности с VH из SEQ ID NO:28 и аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 80% идентичности последовательности с VL из SEQ ID NO:33.
21. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14 или 20, где VH имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 90% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:28.
22. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14 или 20, где VL имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 90% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:33.
23. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 15, где антитело содержит одну, две, или все три CDR тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:29-31 и одну, две, или все три CDR легкой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:34-36.
24. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14, содержащее аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 80% идентичности последовательности с VH из SEQ ID NO:38 и аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 80% идентичности последовательности с VL из SEQ ID NO:43.
25. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14 или 24, где VH имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 90% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:38.
26. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14 или 24, где VL имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 90% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:43.
27. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 15, где антитело содержит одну, две, или все три CDR тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:39-41 и одну, две, или все три CDR легкой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:44-46.
28. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14, содержащее аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 80% идентичности последовательности с VH из SEQ ID NO:48 и аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 80% идентичности последовательности с VL из SEQ ID NO:53.
29. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14 или 28, где VH имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 90% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:48.
30. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14 или 28, где VL имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 90% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:53.
31. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 15, где антитело содержит одну, две, или все три CDR тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:49-51 и одну, две, или все три CDR легкой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:54-56.
32. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14, содержащее аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 80% идентичности последовательности с VH из SEQ ID NO:58 и аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 80% идентичности последовательности с VL из SEQ ID NO:63.
33. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14 или 32, где VH имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 90% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:58.
34. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 14 или 32, где VL имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, с 90% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:63.
35. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по п. 15, где антитело содержит одну, две, или все три CDR тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:59-61 и одну, две, или все три CDR легкой цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:64-66.
36. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент, содержащие VH и VL, где VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:18, 28, 38, 48 или 58, и VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:23, 33, 43, 53 или 63.
37. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент, содержащие VH из SEQ ID NO: 18, 28, 38, 48 или 58 или VL из SEQ ID NO: 23, 33, 43, 53 или 63.
38. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент, содержащие CDRH1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 19, 29, 39, 49 или 59.
39. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент, содержащие CDRH2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 20, 30, 40, 50 или 60.
40. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент, содержащие CDRH3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 21, 31, 42, 52 или 62.
41. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент, содержащие CDRL1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 24, 34, 44, 54 или 64.
42. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент, содержащие CDRL2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 25, 35, 45, 55 или 65.
43. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент, содержащие CDRL3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 26, 36, 46, 56 или 66.
44. ERFE-связывающее антитело или его ERFE-связывающий фрагмент по любому из пп. 14-43, где антитело представляет собой химерное антитело, гуманизированное антитело или фрагмент антитела.
45. Анализ для обнаружения присутствия и/или измерения количества белка эритроферрона (ERFE) в образце, включающий:
приведение образца в контакт с первым антителом для образования комплекса первое антитело-ERFE, где первое антитело содержит антитело по любому из пп. 14-44;
и затем обнаружение присутствия и/или измерение количества второго антитела, связавшегося с комплексом первое антитело-ERFE, где второе антитело содержит антитело по любому из пп. 14-44, и где первое антитело и второе антитело не одинаковы,
посредством чего определяется присутствие и/или количество белка ERFE в образце.
46. Анализ по п. 45, где анализ включает анализ ELISA.
47. Анализ по п. 45, где образец представляет собой образец сыворотки.
48. Анализ по п. 45, где первое антитело специфически распознает полипептид ERFE, содержащий последовательность состоящий по существу или состоящий из последовательности, по меньшей мере, одной из SEQ ID NO: 1 и/или 3-16.
49. Анализ по любому из пп. 45-48, где первым антителом покрывают твердую подложку.
50. Анализ по п. 49, где твердая подложка представляет собой планшет для ELISA.
51. Анализ по п. 45, где этап обнаружения включает контакт комплекса первого антитела-полипептида ERFE со вторым антителом, и где второе антитело является меченым.
52. Анализ по п. 51, где метка представляет собой биотин.
53. Анализ по п. 51, где метка представляет собой пероксидазу хрена
54. Способ оценки эритропоэза у индивидуума с нарушением, связанным с ERFE или мионектином, включающий проведение на образце от индивидуума анализа по любому из пп. 1-13 или 45-53.
55. Способ по п. 54, где нарушение представляет собой талассемию.
56. Способ по п. 54, где нарушение представляет собой сердечно-сосудистое заболевание.
57. Способ оценки эритропоэза у индивидуума с нарушением, связанным с ERFE или мионектином, включающий обнаружение ERFE в образце от индивидуума при помощи антитела по любому из пп. 14-44.
58. Набор для сэндвич-варианта иммунологического анализа, включающий захватывающее антитело и детектирующее антитело, где:
(i) захватывающее антитело представляет собой 17A5, и детектирующее антитело представляет собой 2D2, 4C1 или 7H4;
(ii) захватывающее антитело представляет собой 2D2, и детектирующее антитело представляет собой 4C1, 7H4, 17A5 или 9B12;
(iii) захватывающее антитело представляет собой 4C1, и детектирующее антитело представляет собой 2D2, 7H4, 17A5 или 9B12;
(iv) захватывающее антитело представляет собой 7H4, и детектирующее антитело представляет собой 2D2, 4C1, 17A5 или 9B12;
(v) захватывающее антитело представляет собой 9B12, и детектирующее антитело представляет собой 2D2, 4C1, 17A5 или 7H4; или
(vii) захватывающее и детектирующее антитела представляют собой отдельные антитела по любому из пп. 14-44, где захватывающее и детектирующее антитела неодинаковы.
59. Набор по п. 58, где захватывающее антитело и детектирующее антитело являются различными антителами.
60. Набор по п. 58 или 59, где захватывающее антитело связано с твердой подложкой.
61. Набор по любому из пп. 58-60, где детектирующее антитело связано с меткой.
62. Набор по п. 61, где метка представляет собой биотин.
63. Набор по п. 61, где метка представляет собой пероксидазу хрена.
64. Набор по п. 62, дополнительно включающий стрептавидин-пероксидазу хрена.
65. Набор по любому из пп. 58-64, дополнительно включающий субстрат.
66. Набор по любому из пп. 58-65, дополнительно включающий инструкции для проведения анализа.