КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ ЛАКТОФЕРРИНА В ДЕТСКИХ СМЕСЯХ С ПОМОЩЬЮ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИК-ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ВИЗУАЛИЗАЦИИ

1. Способ количественного измерения общего содержания лактоферрина в детской смеси, включающий следующие стадии:
a) приготовление раствора упомянутой детской смеси и смешивание его с восстанавливающим агентом для получения раствора образца детской смеси;
b) загрузку раствора образца детской смеси в полиакриламидный гель с додецилсульфатом натрия с получением загруженного геля;
c) нагревание раствора образца детской смеси при примерно 90-100°C в течение примерно 7-9 мин;
d) проведение электрофореза на загруженном геле;
e) следующее за электрофорезом окрашивание геля красителем кумасси бриллиантовым синим и дальнейшее обесцвечивание, в результате которого на геле остается только краситель, связанный с лактоферрином; и
f) следующее за окрашиванием и обесцвечиванием геля количественное измерение интенсивности инфракрасной флуоресценции красителя на геле при подходящей длине волны инфракрасного диапазона.
2. Способ по п.1, дополнительно включающий соотнесение измеренной инфракрасной флуоресценции красителя на геле с количеством лактоферрина с использованием данных, полученных для эталонных стандартов, и последующее вычисление концентрации лактоферрина в детской смеси путем деления определенного указанных образом количества лактоферрина на количество детской смеси, загруженной в гель.
3. Способ по п.2, в котором данные для эталонных стандартов получены путем:
a) приготовления ряда растворов, имеющих известные концентрации лактоферрина в некотором диапазоне;
b) смешивания данных растворов с восстанавливающим агентом для получения стандартных растворов;
c) загрузки каждого стандартного раствора в соответствующую ему ячейку полиакриламидного геля с додецилсульфатом натрия с получением загруженного геля;
d) нагревания стандартных растворов стандартов при примерно 90-100°C в течение примерно 7-9 мин;
e) проведения электрофореза в загруженном геле с использованием той же методики, что и для детской смеси;
f) следующее за электрофорезом окрашивание гелей красителем кумасси бриллиантовым синим и дальнейшее обесцвечивание, в результате которого на геле остается только краситель, связанный с лактоферрином; и
g) следующее за окрашиванием и обесцвечиванием геля количественное измерение инфракрасной флуоресценции красителя на каждом растворе стандарта на геле при той же длине волны флуоресценциии, которую использовали для геля, загруженного детской смесью.
4. Способ по п.1, в котором интенсивность инфракрасной флуоресценции измеряется при длине волны примерно 680-700 нм.
5. Способ по п.2, в котором интенсивность инфракрасной флуоресценции измеряется при длине волны примерно 680-700 нм.
6. Способ по п.3, в котором интенсивность инфракрасной флуоресценции измеряется при длине волны примерно 680-700 нм.
7. Способ по любому из пп.3-6, в котором стандартные растворы и раствор образца детской смеси дополнительно содержат буфер, который смешивают со стандартными растворами и с раствором детской смеси перед, после или одновременно с восстанавливающим агентом.
8. Способ по п.7, в котором буфер смешивают с восстанавливающим агентом до добавления буфера и восстанавливающего агента к стандартным растворам и к раствору детской смеси.
9. Способ по любому из пп.1-6 или 8, в котором детская смесь находится в форме порошка, и раствор детской смеси получают путем растворения этого порошка в воде.
10. Способ по п.7, в котором детская смесь находится в форме порошка, и раствор детской смеси получают путем растворения этого порошка в воде.
11. Способ количественного измерения общего содержания лактоферрина в детской смеси, включающий следующие стадии:
a) приготовление растворов стандартов, имеющих различные известные концентрации лактоферрина в приблизительном диапазоне 0,01-0,10 мг/мл, и раздельное смешивание каждого раствора стандарта с восстанавливающим агентом и буфером для получения стандартных растворов, имеющих концентрации лактоферрина приблизительно 0,005-0,075 мг/мл;
b) приготовление раствора упомянутой детской смеси и смешивание его с восстанавливающим агентом и буфером для получения раствора образца детской смеси;
c) приготовление полиакриламидного геля с додецилсульфатом натрия для каждого из стандартных растворов и раствора образца детской смеси и загрузку каждого такого раствора в соответствующую ему ячейку геля с получением загруженного геля;
d) нагревание раствора образца детской смеси и стандартных растворов при примерно 95°C в течение примерно 8 мин;
e) осуществление электрофореза на загруженном геле с использованием практически одинаковых уровней мощности и времени электрофореза для каждого раствора на геле;
f) следующее за электрофорезом окрашивание геля красителем кумасси бриллиантовым синим и дальнейшее обесцвечивание, в результате которого на геле остается только краситель, связанный с лактоферрином;
g) следующее за окрашиванием и обесцвечиванием геля количественное измерение инфракрасной флуоресценции красителя в каждой ячейке геля при длине волны, которая находится в диапазоне 680-700 нм, с помощью системы инфракрасной флуоресцентной визуализации; и,
h) сравнение измеренной инфракрасной флуоресценции красителя в ячейке геля, загруженного раствором образца детской смеси, с инфракрасной флуоресценцией красителя в ячейках, загруженных стандартными растворами, для определения концентрации лактоферрина в детской смеси.