Исследование а-синуклеина в биоптатах подъязычных слюнных желез при болезни Паркинсона

НЕВРОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 3, 2016

DOI 10.18821/1560-9545-2016-21-3-152-157 КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И НАБЛЮДЕНИЯ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016 УДК 616.858-07:616.316.3-078.33

Худоерков Р.М.1, Воронков Д.Н.1, Богданов Р.Р.2, Соболев В.Б.1, Борисова С.Ю.2, Давыдов И.А.2, Никитин А.А.2, Котов С.В.2, Иллариошкин С.Н.

ИССЛЕДОВАНИЕ а-СИНУКЛЕИНА В БИОПТАТАХ ПОДЪЯЗЫЧНЫХ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ ПРИ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА

'ФГБНУ «Научный центр неврологии» РАН, 125367, Москва, Волоколамское шоссе, д. 80; 2ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, 129110, Москва, ул. Щепкина, д. 61/2

Введение. Молекулярным маркером болезни Паркинсона (БП) являются патологические агрегаты белка а-синуклеина в нейронах ЦНС и структурах периферической вегетативной нервной системы. До сегодняшнего дня, однако, прижизненные иммуноморфологические исследования на биопсийном материале у больных БП немногочисленны, а общее число изученных случаев остается небольшим.

Материалы и методы. В настоящей работе, используя иммуноферментный и иммунофлюоресцентный методы, мы изучали локализацию а-синуклеина и его фосфорилированной формы (a-Syn-p129), а также локализацию тирозинги-дроксилазы и ft-3-тубулина в нервных волокнах биопсийного материала ткани подъязычной железы у пациентов с БП и у неврологически здоровых лиц контрольной группы.

Результаты. Нервные волокна, иммунопозитивные к a-Syn-p129, выявили в 6 из 8 изученных случаев БП. При этом в 5 биопсиях локализация фосфорилированного а-синуклеина совпадала с локализацией тирозингидроксилазы, что свидетельствует о вовлечении в патологический процесс адренергических нервных окончаний слюнной железы. В контроле один случай был иммунонегативным на а-синуклеин, у а одного обследованного неврологически здорового человека a-Syn-p129 выявлялся в минимальной степени выраженности.

Заключение. Полученные результаты подтверждают возможность использования биопсии подъязычных слюнных желез с целью разработки нового метода иммуноморфологической диагностики БП.

Ключевые слова: болезнь Паркинсона, диагностика, биопсия слюнных желез, а-синуклеин, тирозингидроксила-за, иммуноморфология.

Для цитирования Худоерков Р.М., Воронков Д.Н., Богданов Р.Р., Соболев В.Б., Борисова С.Ю., Давыдов И.А., Никитин А.А., Котов С.В., Иллариошкин С.Н. Исследование а-синуклеина в биоптатах подъязычных слюнных желез при болезни Паркинсона. Неврологический журнал 2016; 21 (3): 152-157 (Russian). DOI 10.18821/1560-9545-2016-21-3-152-157. Для корреспонденции: Иллариошкин Сергей Николаевич - д-р мед.наук, проф., зам. директора по научной работе, рук. отдела исследований мозга ФГБНУ «Научный центр неврологии», 125367 Москва, Волоколамское шоссе, д. 80. e-mail: snillario@gmail.com

Khudoerkov R.M.1, Voronkov D.N.1, Bogdanov R.R.2, Sobolev V.B.1, Borisova S.Yu.2, Davydov 1.А.2, Nikitin А.А.2, Kotov S.V2, Illarioshkin S.N.1

STUDY OF а-SYNUCLEIN DEPOSITION IN THE SUBLINGUAL SALIVARY GLAND BIOPSY SLICES IN PARKINSON'S DISEASE

FSBI "Research Center of Neurology" of Russian Academy of Sciences, Moscow 125367, Russian Federation; 2M.F. Vladimirsky Moscow Regional Research and Clinical Institute, Moscow, Russian Federation

Introduction. Pathological aggregates of а-synuclein protein in neurons of the central and peripheral nervous system are the molecular markers of Parkinson's disease (PD). Until now, however, there are few immunological and morphological studies of biopsy materials from patients with PD in vivo and an overall amount of the studied cases remains insignificant. Materials and methods. In the study we used immunoenzyme and immunofluorescent methods for localization of а-synuclein and its phosphorylatedform (а-Syn-p129), as well as for detecting and localization of tyrosine hydroxylase and ft-3 tubulin, in nervous fibers of the biopsy material from the sublingual salivary gland tissue in patients with PD and neurologically healthy persons from control group.

Results. Positively stained with а-Syn-p129 nervous fibers were found in 6 of 8 cases of PD. In 5 cases the localization ofphosphorylated а-synuclein matched to the localization of tyrosine hydroxylase that suggests the involvement ofadrenergic nervous terminals of salivary gland in the pathological process. In the control group, one case was immune-negative, and another case was slightly а-Syn-p129-positive.

Conclusion. The received results confirm the possibility of using of sublingual salivary gland biopsy material for elaborating new method of immuno-morphological diagnosis of PD.

Keywords: Parkinson's disease, diagnostics, salivary gland biopsy, а-synuclein, tyrosine hydroxylase, immune-morphology. For citation: Khudoerkov R.M., Voronkov D.N., Bogdanov R.R., Sobolev V.B., Borisova S.Yu., Davydov I.A., Nikitin А.А., Kotov S.V., Illarioshkin S.N. Study of а-synuclein deposition in the sublingual salivary gland biopsy slices in Parkinson's disease. Nevrologicheskiy Zhurnal (Neurological Journal) 2016; 21 (3): 152-157 (Russian). DOI 10.18821/1560-9545-201621-3-152-157.

For correspondence: Illarioshkin Sergey Nickolaevich, MD, PhD Deputy Director for Academic affairs, the chief of the department of brain researches FSBI "Research Center of Neurology" of Russian Academy of Sciences, Moscow 125367, Russian Federation; 125367, Moscow, Volokolamsk highway (Volokolamskoe chaussee) 80; e-mail: snillario@gmail.com Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. Funding. The study had no sponsorship.

Received 17.08.15 Accepted 10.04.16

Введение

Болезнь Паркинсона (БП) представляет собой мультисистемное нейродегенеративное заболевание, по молекулярной природе входящее в группу синуклеинопатий [1, 2]. В норме а-синуклеин, ней-рональный белок с простой структурой, участвует в процессах везикулярного транспорта [3]. Около 1% случаев БП в популяции, преимущественно у лиц с семейной формой болезни и при раннем дебюте заболевания, обусловлено известными мутациями в гене а-синуклеина - SNCA [2, 4, 5]. Вместе с тем накопление а-синуклеина и формирование телец Леви в нигральных нейронах обнаруживается в большинстве случаев первичного паркинсонизма и считается основным патоморфологическим критерием заболевания. Следует отметить, что а-синуклеиновая патология может выявляться и при других формах нейро-дегенеративных заболеваний - деменции с тельцами Леви, болезни Альцгеймера, мультисистемной атрофии [6]. Предполагается, что при БП образование белковых агрегатов в нейронах - телец и нейритов Леви - возникает в результате нарушения функций убиквитин-протеасомной системы, играющей ведущую роль в обеспечении белкового гомеостаза в клетке [1, 3]. В последние годы было установлено, что у пациентов с БП тельца и нейриты Леви обнаруживают не только в дофаминергических структурах среднего мозга, но и в других отделах центральной и периферической нервной системы [6-8].

Для агрегированной формы а-синуклеина характерно фосфорилирование по остатку серина-129, что изменяет растворимость белка [3, 9]. Накопление а-синуклеина связано с нарушениями его пространственной структуры [10]. В экспериментах на культуре ткани и при анализе результатов имплантации дофаминовых нейронов больным БП была продемонстрирована возможность передачи патологической формы белка от нейрона к нейрону, что дает основания предполагать прионоподобную этиологию заболевания [2, 3, 11, 12].

Повреждение периферического отдела вегетативной нервной системы при БП - характерный и ранний патологический признак БП [7]. Оно сопровождается развитием разнообразных недвигательных симптомов БП - нарушений перистальтики желудочно-кишечного тракта, гиперсаливации, дизурии, вегетативных кризов и др. [8]. Показано, что развитие вегетативных симптомов может опережать манифестацию двигательной фазы болезни более чем на десять лет [6, 13]. В связи с этим диагностика «периферических» проявлений БП, в том числе отражающих динамику накопления а-синуклеина в вегетативных нервных волокнах, является весьма актуальной. Разработкам методов обнаружения а-синуклеина в периферической нервной системе, клетках крови или в ликворе и использованию этого белка в качестве биомаркера БП в последнее время уделяется значительное внимание [14-16]. В то же время прижизненные иммуноморфо-логические исследования на биопсийном материале у больных БП немногочисленны, а общее число изученных случаев остается небольшим.

CLINICAL RESEARCHES AND CASE REPORTS

Целью настоящего исследования была отработка иммуноцитохимического метода выявления а-синуклеина в биопсийном материале ткани подъязычной железы для оценки возможности его использования в диагностике БП.

Материал и методы

Исследование проводили на образцах подъязычной железы, полученных у пациентов с клинически подтвержденной БП (n = 8) и от двух пациентов без неврологической патологии, проходивших лечение МОНИКИ им. М.В. Владимирского (неврологически здоровым пациентам биопсия проводилась в плановом порядке в связи с патологией ротовой полости).

Все обследованные пациенты имели типичную смешанную форму БП. Диагноз устанавливался согласно клинико-диагностическим критериям Банка головного мозга общества БП Великобритании [17]. Средний возраст пациентов составил 54,5 года (от 35 до 73 лет), средний возраст начала болезни - 48,5 года (от 34 до 63 лет). Двое пациентов были на 1-й (начальной) стадии заболевания по функциональной шкале Хен-Яр, по 3 пациента - на 2-й и 3-й стадии болезни.

Выбор для исследования подъязычной слюнной железы - одной из трех пар крупных слюнных желез - был основан на возможности проведения безопасной, малоинвазивной операции под местной анестезией с доступом из полости рта. Перед проведением биопсии все пациенты подписывали информированное согласие. Под аппликационной анестезией осуществляли катетеризацию выводного протока подчелюстной слюнной железы. Далее, ориентируясь на его локализацию, производили инфильтрацион-ную анестезию и разрез длиной 1-1,5 см, на 0,5-1 см латеральнее проекции протока на слизистую оболочку подъязычной области и параллельно ему. Производилось выделение части подъязычной слюнной железы и забор фрагмента около 5 мм. Слизистую оболочку ушивали 1-2 швами, их снятие проводили через 7 дней после биопсии. В послеоперационном периоде назначали местную антисептическую обработку полости рта; заживление проходило первичным натяжением.

Образцы биопсийного материала размером 3x3x3 мм фиксировали в 4% растворе формалина, приготовленном на фосфатном буфере, дегидратировали и заключали в парафиновые блоки. Отдельные фрагменты образцов пропитывали 30% раствором сахарозы для изготовления замороженных срезов. Парафиновые блоки раскладывали на срезы толщиной от 10 до 25 мкм на микротоме Leica SR-2000, для изготовления замороженных срезов использовали криотом Tissue Tek Cryo 3. Срезы помещали на стекла, покрытые адгезивной средой, и проводили их иммуногистохимическое окрашивание антителами к а-синуклеину (Sigma), фосфорилированному а-синуклеину (Wako), тирозингидроксилазе (Sigma) и бета-3-тубулину (Thermo Scientific).

Для выявления волокон периферической нервной системы, иннервирующих структуры подъязычной

КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И НАБЛЮДЕНИЯ

железы, использовали иммуногистохимическую реакцию на тирозингидроксилазу - ключевой фермент синтеза дофамина, обнаруживаемый в дофаминер-гических и адренергических нервных волокнах; для выявления специфичного для нейронов белка микро-торубочек использовали реакцию на бета-3-тубулин.

Локализацию и распределение а-синуклеина исследовали с помощью антител к его нефосфорилиро-ванной форме (а-Syn) и форме, фосфорилированной по остатку серина-129 (a-Syn-p129). Тепловую демаскировку антигена проводили по общепринятым рекомендациям: в микроволновой печи мощностью 600 Вт в течение 10 мин в цитратном буферном растворе (0,1 M, pH 6,0).

В работе применяли иммуноферментный и им-мунофлюоресцентный методы детекции связывания антител. Для иммуноферментного метода использовали набор Sigma EXTRAS и 3,3-диаминобензи-дин в качестве хромогена. Для иммуноферментного выявления двойной метки (мышиных и кроличьих антител) использовали набор Thermo Scientific MultiVision, основанный на полимерной системе детекции. Иммунофлюоресцентное окрашивание проводили с помощью вторичных кроличьих антител, выработанных к антителам мыши. Для выявления совместной локализации а-синуклеина и тирозин-гидроксилазы на одном срезе иммуногистохими-ческие реакции проводили на 10-30 срезах в каждом исследуемом случае. В качестве негативного контроля использовали окрашивание на срезах без обработки первичными антителами. Для морфологического контроля часть срезов окрашивали гематоксилином и эозином. Независимую оценку имму-ногистохимических препаратов осуществляли три исследователя.

Препараты исследовали и фотографировали под микроскопом Leica DMLB, оснащенном цифровой фотокамерой; локализацию иммунофлюоресцент-ной метки оценивали с помощью микроскопа Nicon Eclipse Ni-u c соответствующим набором фильтров.

Результаты

Структуры подъязычной железы, взятой в качестве биопсии, имели хорошую сохранность (рис. 1, а, см. на 3-й полосе обложки). В ткани железы наблюдали концевые секреторные отделы, выводные протоки железы и несколько типов ацинусов, большинство из них были смешанного типа, а часть -белкового и слизистого типа. Паренхима железы разделялась соединительнотканными перегородками, выявлялись миоэпителиальные клетки, в части материала обнаруживали лимфоидную ткань.

Иммуногистохимическое исследование показало, что антитела к P-3-тубулину связывались не только с нервными волокнами, иннервирующими железу, но и с клетками ацинусов и лимфатических узлов, что согласуется с результатами электронной базы данных Human Protein Atlas [18]. В связи с невозможностью надежной дифференцировки нервных окончаний в подъязычной железе с помощью Р-3-тубулина в дальнейших исследованиях эту реакцию не использовали. Экспрессию тирозингидроксилазы (рис. 1, г, д) наиболее достоверно обнаруживали в нервных сплетениях стенок крупных сосудов и в волокнах по ходу нервно-сосудистых пучков, а также в отдельных нервных волокнах паренхимы железы. Волокна, содержащие тирозингидроксилазу, часто были извитыми и имели варикозные утолщения.

Нефосфорилированный а-синуклеин (рис. 1 б) выявляли в ткани железы как в крупных нервных пучках, так и отдельных волокнах вокруг ацинусов железы, причем минимальное иммуноположитель-ное окрашивание наблюдали также в одном контрольном случае. Фосфорилированный а-синуклеин (см. рис. 1, в-д) в биопсийном материале пациентов с БП имел сходную локализацию с нефосфорилиро-ванной формой, однако его экспрессия была значительно ниже и, как правило, обнаруживалась лишь в крупных нервных пучках. Иммунофлюоресцентный метод давал сходные результаты, но в отличие от иммуноферментного метода он выявлял неспецифи-

Частота обнаружения фосфорилированного а-синуклеина в образцах биопсии ткани подъязычной слюнной железы у пациентов с БП

The frequency of phosphorylated а-synuclein revealing in biopsy material from the sublingual salivary gland tissue in patients with PD

Пол Возраст, годы Длительность заболевания, годы Стадия по шкале Хен-Яра Частота выявления a-Syn-p129 на срезах

M 63 5 3 +++

Ж 73 18 З ++

Ж б4 12 З +

M 38 2 1 Не выявлено

M З5 1 2 +

M 44 2 1 Не выявлено

M б5 2 2 ++

M 54 б 2 +

Примечание. Частота выявления позитивной реакции на а^уп-р129 обозначена знаком (+): + - указывает на наличие позитивной реакции в 1-2 срезах из 10, ++ - наличие позитивной реакции в 4-5 срезах из 10, +++ - наличие позитивной реакции в 9-10 срезах из 10.

ческое связывание вторичных антител с отдельными клеточными элементами подъязычной железы. Выраженных отличий при использовании замороженных и парафиновых срезов нами обнаружено не было. При рабочих разведениях первичных антител - а^уп-р129 1:1000 и 1:2000 - результаты окрашивания не различались.

При окрашивании на а^уп-р129 (см. таблицу) продукт реакции локализовался как по ходу всего волокна, так и в виде глыбок или точечных скоплений. Отдельные тонкие нервные волокна, иммунопози-тивные на а^уп-р129 или тирозингидроксилазу, в паренхиме железы выявлялись лишь на некоторых препаратах, в особенности на толстых срезах. В связи с этим при оценке локализации а-синуклеина информативным было признано в первую очередь исследование иннервации стенок крупных сосудов, проходящих в подъязычной железе, и крупных пучков нервных волокон, расположенных вблизи сосудов, а также определение локализации продукта реакции по ходу нервного волокна, расположенного продольно плоскости среза. С целью надежного выявления фосфорилированного а-синуклеина в нервных волокнах и исключения неспецифического окрашивания, связанного с эндогенной активностью щелочной фосфатазы (служившей ферментной меткой для вторичных антител), проводили совместное выявление на одном срезе а^уп-р129 и тирозинги-дроксилазы: их совместная локализация является свидетельством накопления а-синуклеина в адренер-гических нервных волокнах.

У пациентов с БП в 5 наблюдениях из 8 в нервных волокнах обнаружили совместную локализацию ти-розингидроксилазы и а^уп-р129, при этом нервные волокна, иммунопозитивные к а^уп-р129, выявили в 6 случаях из 8. Минимальная частота выявления окрашивания нервных волокон на а^уп-р129 (один срез из 10), была зарегистрирована у двух пациентов, а максимальная составила 10 срезов из 10 (см. таблицу). У двух пациентов в ранней стадии БП (стадия 1 по Хен-Яру) реакцию на а^уп-р129 не обнаружили.

В контроле один случай был иммунонегатив-ным, а у второго неврологически здорового человека а^уп-р129 выявлялся в двух срезах из 25 (т. е. с минимальной частотой).

Обсуждение

Поиск новых информативных маркеров болезней центральной и периферической нервной системы, в том числе в ранней стадии, признается сегодня одной из наиболее значимых «точек роста» в неврологии [19]. У пациентов с экстрапирамидной патологией такие биомаркеры могут иметь большое значение для дифференциальной диагностики БП с эссенциальным тремором [20] и другими фенотипи-чески сходными заболеваниями, что принципиально влияет на тактику лечения и прогноз [2, 21, 22]. В настоящей работе проведено изучение нейронального а-синуклеина в структурах периферической нервной системы в качестве возможного дополнительного диагностического теста у пациентов с БП.

CLINICAL RESEARCHES AND CASE REPORTS

Проведенное иммуноморфологическое исследование показало, что фосфорилированный и нефос-форилированный а-синуклеин в подъязычной железе пациентов с БП обнаруживается в нервных волокнах, относящихся преимущественно к норадренер-гическому типу, и выявляется в основном в крупных нервно-сосудистых пучках. По результатам анализа биопсий у 6 из 8 пациентов с БП было подтверждено накопление а-Syn-p129 в периферической нервной системе, а отсутствие такого накопления имело место лишь в двух наиболее ранних случаях заболевания.

Диагностический потенциал иммуногистохи-мической оценки а-синуклеина в периферических тканях при БП является предметом оживленных дискуссий [7, 16, 23]. В ряде работ при БП показана высокая частота выявления фосфорилированого а-синуклеина в аутопсийном и биопсийном материале слюнных желез [14, 24], кожи [25] и кишечника [8, 23]. Патологическое накопление а-синуклеина в тканях слюнных желез отмечено и при другой классической синуклеинопатии - деменции с тельцами Леви [26]. У пациентов с БП агрегаты а-синуклеина обнаруживали как в дофаминергических, так и в холинергических вегетативных нервных окончаниях [27]. При данном заболевании описаны и другие патоморфологические изменения в периферической нервной системе - изменение количества и извитости нервных окончаний, снижение экспрессии ряда нейрональных маркеров [25]. По-видимому, выявляемые иммуногистохимическими, гистохимическими и морфологическими методами изменения в периферической нервной системе при БП на стадии, предшествующей двигательным нарушениям, могут служить важным критерием для своевременной постановки диагноза или отнесения пациента к группе риска.

Данные литературы о частоте выявления а-Syn-p129 в нервных волокнах в биопсийном материале, взятом у пациентов с БП, различаются в зависимости от объекта исследования. Наименьшее число синуклеинпозитивных включений было обнаружено Е. Folgoas и соавт. [24] в биоптатах малых слюнных желез; в работах Т. Beach и соавт. [14] и К. Tredici и соавт. [28] показана значительно более высокая чувствительность иммуногистохимического метода при исследования подчелюстной железы. Негативные результаты биопсий, полученные в ряде работ [24], можно частично объяснить малым объемом исследованного материала или особенностями распределения агрегатов а-синуклеина в периферической нервной системе в зависимости от характера заболевания. Мы предполагаем, что отмеченные расхождения могут быть связаны с различной плотностью иннервации исследуемых структур и сложностью идентификации единичных нервных волокон на тонких срезах, что отмечено и другими авторами [28]. В связи с этим крайне важной представляется совместная оценка локализации а-синуклеина и других ней-роспецифических белков на одном срезе, что и было выполнено в настоящем исследовании.

КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И НАБЛЮДЕНИЯ

При иммуногистохимическом анализе a-Syn-p129 следует также обращать внимание на возможность получения ложнопозитивного результата, что связывают в первую очередь с усилением фосфорилиро-вания a-синуклеина при нормальном старении [1]. Действительно, положительную реакцию на фосфо-рилированный a-синуклеин наблюдали примерно в трети случаев при исследовании аутопсийного материала мозга пожилых пациентов (78-84 года) без неврологической патологии [1]. Прогностическое значение этих находок до конца не ясно, поскольку известно, что фосфорилированный a-синуклеин в небольшой концентрации иногда обнаруживается и в мозге здоровых людей [9]. Влияние на результат исследования могут оказывать специфичность используемых антител и возможность их связывания с нефосфорилированным белком. Так, показано, что нефосфорилированная форма a-синуклеина в периферической нервной системе достаточно распространена [29], что подтверждается и нашим исследованием. В связи с этим маркерная роль нефос-форилированного a-синуклеина при исследовании периферических тканей не может быть признана сколь-нибудь незначимой [7].

Согласно нашим предварительным данным, в норме накопление a-Syn-p129 в структурах периферической нервной системы отсутствует или (у отдельных лиц) может иметь минимальную выраженность. С учетом достаточно высокой частоты выявления в популяции так называемой случайной болезни телец Леви (т. е. случаев выявления телец Леви при аутопсии в качестве неожиданной находки у лиц без признаков паркинсонизма), достигающей 10% в возрастной группе старше 60 лет [30], логично предположить возможность обнаружения такого состояния и в одном из наших контрольных случаев. Для уточнения роли выявляемой a-синуклеиновой патологии у неврологически здоровых лиц требуются дальнейшие исследования с набором более репрезентативных групп обследуемых.

Таким образом, полученные в проведенном исследовании результаты подтверждают данные литературы о накоплении фосфорилированного a-синуклеина в периферических нервных окончаниях у больных БП и свидетельствуют о возможности прижизненного морфологического исследования биопсийного материала слюнных желез с целью оценки нейроде-генеративных изменений в периферической нервной системе больных паркинсонизмом.

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

ЛИТЕРАТУРА

2. Иллариошкин С.Н. Современные представления об этиологии болезни Паркинсона. Неврологический журнал. 2015; 20

(4): 4-13.

5. Иллариошкин С.Н. Паркинсонизм с ранним началом. Нервные болезни. 2006; (3): 14-20.

10. Иллариошкин С.Н. Конформационные болезни мозга. М.: Янус-К; 2003.

19. Суслина З.А., Иллариошкин С.Н., Пирадов М.А. Неврология и нейронауки - прогноз развития. Анналы клинической и экспериментальной неврологии. 2007; 1 (1): 5-9.

21. Карпова Е.А., Иванова-Смоленская И.А., Иллариошкин С.Н., Маркова Е.Д., Черникова Л.А., Тимербаева С.Л. Динамика основных симптомов болезни Паркинсона на фоне терапии пронораном. Неврологический журнал. 2003; 8 (2): 49-52.

22. Иллариошкин С.Н., Иванова-Смоленская И.А., Загоровская Т.Е. Семилетний опыт применения мирапекса у больных с различными формами первичного паркинсонизма. Журнал неврологии и психиатрии имени С.С. Корсакова. 2006; 106 (11): 26-32.

REFERENCES

1. Jellinger K.A. Lewy body-related a-synucleinopathy in the aged human brain. J. Neural. Transm. (Vienna). 2004; 111 (10-11): 1219-35.

2. Illarioshkin S.N. Modern view on etiology of Parkinson's disease. Nevrologicheskiy zhurnal. 2015; 20

3. Gallegos S., Pacheco C., Peters C., Opazo C.M., Aguayo L.G. Features of alpha-synuclein that could explain the progression and irreversibility of Parkinson's disease. Front. Neurosci. 2015; (9): 59.

4. Nuytemans K., Theuns J., Cruts M., Van Broeckhoven C. Genetic etiology of Parkinson disease associated with mutations in the SNCA, PARK2, PINK1, PARK7, and LRRK2 genes: A mutation update. Hum. Mutat. 2010; 31: 763-80.

5. Illarioshkin S.N. Parkinsonism with early onset. Nervnye bolez-ni. 2006;

6. Dickson D.W. Parkinson's disease and parkinsonism: neuropathology. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 2012; 2 (PII): a009258.

7. Braak H., Vos R., Bohl J., Tredici D. Gastric alpha-synuclein im-munoreactive inclusions in Meissner's and Auerbach's plexuses in cases staged for Parkinson's disease-related brain pathology. Neurosci. Lett. 2006; 396: 67-72.

8. Beach T.G., Adler C.H., Sue L.I., Vedders L., Lue L., White Iii C.L. et al. Multi-organ distribution of phosphorylated alpha-synuclein histopathology in subjects with Lewy body disorders. Acta Neuropathol. 2010; 119 (6): 689-702.

9. Walker D.G., Lue L.F., Adler C.H., Shill H.A., Caviness J.N., Sabbagh M.N. et al. Changes in properties of serine 129 phos-phorylated a-synuclein with progression of Lewy-type histopa-thology in human brains. Exp. Neurol. 2013; 240: 190-204.

10. Illarioshkin S.N. Conformational Diseases of Brain [Konformatsionnye bolezni mozga]. Moscow: Yanus-K; 2003.

11. Desplats P., Lee H.J., Bae E.J., Patrick C., Rockenstein E., Crews L. et al. Inclusion formation and neuronal cell death through neuron-to-neuron transmission of alpha-synuclein. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2009; 106 (31): 13 010-5.

12. Kurowska Z., Englund E., Widner H., Lindvall O., Li J.Y., Brun-din P. Signs of degeneration in 12-22-year old grafts of mesen-cephalic dopamine neurons in patients with Parkinson's disease. J. Parkinsons Dis. 2011; 1 (1): 83-92.

13. Abbott R.D., Petrovitch H., White L.R., Masaki K.H., Tanner C.M., Curb J.D. et al. Frequency of bowel movements and the future risk of Parkinson's disease. Neurology. 2001; 57 (3): 45662.

14. Beach T.G., Adler C.H., Dugger B.N., Serrano G., Hidalgo J., Henry-Watson J. et al. Submandibular gland biopsy for the diagnosis of Parkinson disease. J. Neuropath. Exp. Neurol. 2013; 72 (2): 130-6.

15. Adler C.H., Dugger B.N., Hinni M.L., Lott D.G., Driver-Dunck-

ley E., Hidalgo J. et al. Submandibular gland needle biopsy for the diagnosis of Parkinson disease. Neurology. 2014; 82 (10): 858-64.

16. Malek N., Swallow D., Grosset K., Anichtchik O., Spillantini M., Grosset D. Alpha-synuclein in peripheral tissues and body fluids as a biomarker for Parkinson's disease - a systematic review. Acta Neurol. Scand. 2014; 130: 59-72.

17. Gibb W.R., Lees A.J. The relevance of the Lewy body to the pathogenesis of idiopathic Parkinson's disease. J. Neurol. Neu-rosurg. Psychiatry. 1988; 51: 745-52.

18. Ponten F., Jirstrom K., Uhlen M. The Human Protein Atlas - a tool for pathology. J. Pathol. 2008; 216: 387-93.

19. Suslina Z.A., Illarioshkin S.N., Piradov M.A. Neurology and neurosciences - prognosis of the development. Annaly kliniches-koy i eksperimental'noy nevrologii. 2007; 1

20. Illarioshkin S.N., Ivanova-Smolenskaya I.A., Markova E.D., Miklina N.I., Klyushnikov S.A., Rakhmonov R.A. et al. Molecular genetic analysis of essential tremor. Russian Journal of Genetics. 2002; 38 (12): 1447-51.

21. Karpova E.A., Ivanova-Smolenskaya I.A., Illarioshkin S.N., Markova E.D., Chernikova L.A., Timerbaeva S.L. Dynamics of the main symptoms of Parkinson's disease on the therapy with pronoran. Nevrologicheskiy zhurnal. 2003; 8

22. Illarioshkin S.N., Ivanova-Smolenskaya I.A., Zagorovskaya T.B. A seven-year experience of the use of mirapex in patients with different forms of primary parkinsonism. Zhurnal nevrologii i psikhiatrii imeni S.S. Korsakova. 2006; 106

CLINICAL RESEARCHES AND CASE REPORTS

23. Lebouvier T., Tasselli M., Paillusson S., Pouclet H., Neunlist M., Derkinderen P. Biopsable neural tissues: toward new biomarkers for Parkinson's disease. Front. Psychiatry. Neurodegener. Dis. 2010; 128: 1-6.

24. Folgoas E., Lebouvier T., Leclair-Visonneau L., Cersosimo M.G., Barthelaix A., Derkinderen P. et al. Diagnostic value of minor salivary glands biopsy for the detection of Lewy pathology. Neurosci. Lett. 2013; 551: 62-4.

25. Doppler K., Ebert S., Ûçeyler N., Trenkwalder C., Ebentheuer J., Volkmann J. et al. Cutaneous neuropathy in Parkinson's disease: a window into brain pathology. Acta Neuropathol. 2014; 128: 99-109.

26. Beach T.G., Adler C.H., Serrano G., Sue L.I., Walker D.G., Dug-ger B.N. et al. Prevalence of submandibular gland synucleinopa-thy in Parkinson's disease, dementia with Lewy bodies and other Lewy body disorders. J. Parkinsons Dis. 2016; 6 (1): 153-63.

27. Wang N., Gibbons C.H., Lafo J., Freeman R. a-Synuclein in cutaneous autonomic nerves. Neurology. 2013; 81: 1604-10.

28. Tredici K., Hawkes C., Ghebremedhin E., Braak H. Lewy pathology in the submandibular gland of individuals with incidental Lewy body disease and sporadic Parkinson's disease. Acta Neuropathol. 2010; 119: 703-13.

29. Böttner M., Zorenkov D., Hellwig I., Barrenschee M., Harde J., Fricke T. et al. Expression pattern and localization of alpha-synu-clein in the human enteric nervous system. Neurobiol. Dis. 2012; 48 (3): 474-80.

30. Iacono D., Geraci-Erck M., Rabin M.L., Adler C.H., Serrano G., Beach T.G. et al. Parkinson disease and incidental Lewy body disease: Just a question of time? Neurology. 2015; 85 (19): 1670-9.