СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫХ РОДОВ И ВНУТРИУТРОБНОГО ИНФИЦИРОВАНИЯ ПЛОДА
METHOD FOR PREDICTING PREMATURE BIRTH AND INTRAUTERINE INFECTION

Изобретение относится к акушерству и, в частности, касается прогнозирования преждевременных родов и внутриутробного инфицирования плода.
По современным представлениям более 40% преждевременных родов происходят вследствие микробной инвазии амниотической полости, а при развитии преждевременной родовой деятельности до 30 недель роль вирусной и бактериальной инфекции достигает 80% (Shim SS, Romero R, Hong JS, Park CW, Jun JK, Kim BI, Yoon BH. Clinical significance of ihtra-amniotic inflammation in patients with preterm premature rupture of membranes. Am J Obstet Gynecol. 2004 Oct; 191(4): 1339-1145; 51; 69; Сидельникова В.М., Антонов А.Г. Преждевременные роды. Недоношенный ребенок. М., ГЭОТАР-Медиа, 2006).
Несмотря на разработку новых токолитических препаратов, частота преждевременных родов не имеет четкой тенденции к снижению и даже возрастает.
Оценить вероятность наступления преждевременных родов очень сложно. Поэтому прогнозирование преждевременных родов позволит вовремя начать патогенетическую превентивную терапию с целью профилактики реализации внутриутробной инфекции у плода.
Известно, что во время физиологически протекающей беременности происходит суппрессия адаптивного иммунитета, сопровождающаяся активацией врожденного иммунитета (Макаров О.В., Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Бахарева И.В., Ганковская О.А. Невынашивание беременности, инфекция, врожденный иммунитет, М., «ГЭОТАР-Медиа», 2007, стр.176). Специфическое иммунное равновесие в организме беременной женщины позволяет ограждать от иммунной агрессии генетически чужеродный плод, сохраняя при этом защиту от инфекционных агентов. В случае недостаточной активации врожденного иммунитета при беременности организм женщины становится более уязвимым для инфекции, что влечет за собой внутриутробное инфицирование плода и невынашивание беременности.
Таким образом, выявление дефектов в системе врожденного иммунитета может помочь не только в прогнозировании преждевременных родов, но и в выборе метода специфической коррекции.
Известен способ прогнозирования преждевременных родов инфекционного генеза путем определения экспрессии гена Toll-подобного рецептора-2 (TLR-2) в слизистой цервикального канала (Ганковская Л.В., Макаров О.В., Бахарева И.В., Ганковская О.А., Романовская В.В. Способ прогнозирования преждевременных родов, RU 2334233, 20.09.08.), однако данный способ требует забора эпителия слизистой оболочки цервикального канала, что может быть нежелательным при угрозе преждевременных родов. Этот способ принят за ближайший аналог.
Интерфероны (ИФН) - общее название, под которым в настоящее время объединяют ряд белков со сходными свойствами, образующиеся в клетках в ответ на на вирусную инфекцию. Благодаря интерферонам клетки становятся невосприимчивыми к вирусу. Наиболее изученным свойством интерферона является его способность препятствовать размножению вирусов.
Нами была поставлена задача поиска прогностических факторов для преждевременных родов и внутриутробного инфицирования плода. В качестве материала для исследования была использована венозная кровь 1 мл в связи с легкостью получения материала, отсутствия необходимости введения инструментов во влагалище, нежелательного при угрозе прерывания беременности.
Задача изобретения - усовершенствование способа прогнозирования преждевременных родов и внутриутробного инфицирования плода для определения оптимальной тактики ведения беременных группы высокого инфекционного риска.
Техническим результатом предлагаемого способа является повышение точности прогнозирования преждевременных родов с возможностью выбора адекватного профилактического лечения.
Технический результат достигается за счет определения способности клеток крови пациента к продукции интерферона (ИФН)-α и ИФН-γ, тестируемых биологическим методом.
Было обследовано 40 беременных, поступивших в родильный дом с диагнозом «Угроза преждевременных родов» в сроках 28-32 недели беременности, у которых было выявлено носительство урогенитальных инфекций, и 20 здоровых небеременных женщин (контроль). Из 40 женщин основной группы 20 родили преждевременно, остальные 20 благополучно доносили беременность до срока. При изучении интерфероновой реакции лейкоцитов были получены следующие результаты. Способность к продукции ИФН-α у беременных, родивших преждевременно, была выше, чем у здоровых беременных (35,5±11,6 Ед/мл по сравнению с 25,5±5,4 Ед/мл). Способность к продукции ИФН-γ у беременных, родивших преждевременно, напротив была понижена (5,1±2,4 Ед/мл и 14,9=11,6 Ед/мл, соответственно, p<0,05 по критерию Манна-Уитни). Соотношение титров ИФН-α и ИФН-γ, таким образом, у беременных, родивших преждевременно, в среднем составило 9,7±3,2 по сравнению с 3,2±1,4 у родивших в срок, p<0,05 по критерию Манна-Уитни. Полученные данные позволяют использовать полученные цифровые соотношения титров ИФН-α и ИФН-γ для прогнозирования преждевременных родов и внутриутробного инфицирования плода.
Способ осуществляли следующим образом. Венозную кровь беременных в сроках 28-32 недели получали путем пункции локтевой вены. Далее индивидуально определяли способность к продукции ИФН-α и ИФН-γ биологическим методом тестирования ИФН статуса пациента (Ершов Ф.И., Григорян С.С., Готовцева Е.П. Интерфероновый статус в норме и при различных заболеваниях. // В кн.: Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии. - М. - 1996. - С. 135-146.). Далее подсчитывали соотношение активности ИФН-α и ИФН-γ. При соотношении активности более 5 прогнозировали преждевременные роды.
Заявленный способ поясняется на следующих конкретных примерах.
Пример 1 (носитель урогенитальной инфекции, преждевременные роды)
Беременная М., 30 лет, с диагнозом: I преждевременные роды в сроке 33-34 недели. Дефект плаценты. Эпидуральная анестезия. Ручное обследование стенок полости матки. Эпизиотомия. Осмотр родовых путей. Эпизиорафия.
На учете в ЖК состояла с 9 недель беременности. Соматические заболевания: хр. тонзиллит (ремиссия). Менструальная функция с 14 лет, регулярная через 28 дней по 5 дней. При обследовании методом ИФА амбулаторно во время беременности выявлено носительство ВПГ и ЦМВ. Данная беременность 3-я, наступила самопроизвольно, в анамнезе 2 медицинских аборта без осложнений. Беременность осложнилась ОРВИ с повышением температуры до 38°С в первом триместре угрозой выкидыша. Поступила в стационар в сроке 32 недели беременности с диагнозом «Угроза преждевременных родов». При поступлении взята кровь для исследования ИФН статуса с определением продукции ИФН-α и ИФН-γ. Несмотря на проведение сохраняющей терапии, в сроке 33-34 недель развилась родовая деятельность. Роды проведены под эпидуральной анестезией. Продолжительность родов 5 часов 20 минут, безводный промежуток 3 часа. Родилась живая недоношенная девочка 1980 г, 45 см, с оценкой по шкале Апгар на 1 минуте 7 баллов, на 5 минуте 8 баллов. Ребенок находился в детском отделении с диагнозом «СДР, гипоксически-ишемическое поражение ЦНС. Церебральная гипоксия 1 степени. Недостаточность питания». Женщина выписана на 5 сутки после проведения курса антибактериальной терапии. Ребенок переведен на второй этап выхаживания.
50
2
2
Определение продукции ИФН проводили в трех повторностях в 96-луночных круглодонных планшетах, в которые вносили по 20 мкл цельной крови (независимо от формулы крови) в 160 мкл среды RPMI-1640 (ПанЭко, Москва), содержащая 2 мМ L-глутамина, 50 мкМ 2-меркаптоэтанола (Serva, США), 160 мкг/мл гентамицина, 10 млМ HEPES буфера, 10% инактифированной ТЭС (с глютамином и антибиотиками). В определенной последовательности вносили среду RPMI-1640, затем вирус болезни Ньюкасла (ВБН) в дозе 4-6 lg ТЦИД (тканевая цитопатическая доза) для определения титров ИФН-α или один из стандартных митогенов (стафилококковый энтеротоксин А-СЭА в дозе 1-7 мкг/мл, фитогемагглютинин - ФГА в дозе 5 мкг/мл, конканавалин А-КонА в дозе 250 мкг/мл) для определения титров ИФН-γ. Планшеты инкубировали 24 час в СO-инкубаторе при 37°С. Через 24 часа инкубации в СO-инкубаторе при 37°С надосадочная жидкость тестировались на наличие ИФН методом биологического титрования.
50
Титрование ИФН проводили в 96-луночных плоскодонных планшетах с культурой диплоидных фибробластов человека (ДФЧ), выращенных в ростовой среде до образования монослоя. В качестве индикаторного тест-вируса использовали вирус энцефаломиокардита мышей (ВЭМК). За единицу активности ИФН (Ед/мл) принимали величину, обратную его максимальному разведению, которая защищала 50% клеток от цитопатического действия 100 ТЦД вируса.
У данной пациентки показатель индуцированной продукции ИФН-α составил 40 Ед/мл, а ИФН-γ - 2 Ед/мл. Соотношение ИФН-α/ИФН-γ=20 (более 5 - преждевременные роды)
Пример 2 (носитель УГИ, срочные роды)
Беременная П., 31 года, с диагнозом: II срочные роды. Осмотр родовых путей.
На учете в ЖК состояла с 10 недель беременности. Соматические заболевания: хр. холецистит (ремиссия). Менструальная функция с 13 лет, регулярная через 30 дней по 5 дней. При обследовании методом ИФА амбулаторно во время беременности выявлено носительство ВПГ и ЦМВ. Данная беременность 4-я, в анамнезе 1 срочные роды без особенностей и 2 медицинских аборта без осложнений. Беременность протекала без осложнений. Роды начались самопроизвольно. Продолжительность родов 6 часов, безводный промежуток 2 часа. Родился живой доношенный мальчик 2970 г, 50 см, с оценкой по шкале Апгар на 1 минуте 8 баллов, на 5 минуте 9 баллов. Ребенок выписан вместе с матерью на 4 сутки после родов.
У данной пациентки показатель способности к продукции ИФН-α составил 40 Ед/мл, а ИФН-γ - 32 Ед/мл. Соотношение ИФН-α/ИФН-γ=1,25 (менее 5 - своевременные роды).
Пример 3 (здоровая беременная, контрольная группа)
Беременная Ж., 22 лет, с диагнозом: III срочные роды. Осмотр родовых путей.
На учете в ЖК состояла с 11 недель беременности. Соматические заболевания: в. оспа, краснуха, хр. пиелонефрит. Менструальная функция с 13 лет, регулярная через 28 дней по 5 дней. При обследовании методом ИФА инфекций не обнаружено. Данная беременность 4-я, наступила самопроизвольно, в анамнезе 2 срочных родов без особенностей и 1 медикаментозный аборт без осложнений. Беременность осложнилась токсикозом 1 половины, анемией. Поступила в стационар в сроке 38-39 недель беременности в родах. Продолжительность родов 5 часов 10 минут, безводный промежуток 2 часа. Родилась живая доношенная девочка 3210 г, 50 см, с оценкой по шкале Апгар на 1 минуте 8 баллов, на 5 минуте 9 баллов. Ребенок выписан вместе с матерью на 4 сутки.
У данной пациентки показатель способности к продукции ИФН-α составил 40 Ед/мл, а ИФН-γ - 16 Ед/мл. Соотношение ИФН-α/ИФН-γ=2,5 (менее 5 - своевременные роды).
Предложенный способ удобен в применении и высоко информативен. Заявленное изобретение позволит осуществлять прогнозирование преждевременных родов и отбор пациенток для профилактической терапии с помощью конкретного критерия. Использование данного изобретения будет способствовать более объективному прогнозированию преждевременных родов и выявлению отклонений в работе иммунной системы для подбора таргетной терапии.