СПОСОБ НОРМАЛИЗАЦИИ АНТИАГРЕГАЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ СОСУДИСТОЙ СТЕНКИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ С ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНОЙ АНЕМИЕЙ
METHOD OF NORMALISATION OF ANTIAGGREGATION ACTIVITY OF VASCULAR WALL IN NEW-BORN CALVES WITH IRON DEFICIENCY ANAEMIA

Изобретение относится к биологии и ветеринарии.
Ближайшим аналогом предлагаемого способа нормализации антиагрегационой активности сосудистой стенки (ААСС) у новорожденных телят с железодефицитной анемией является способ RU 2402901, в котором наряду с двоекратным с интервалом в 10 суток введением ферроглюкина применяются по сложной схеме инъекции фоспренила и крезацина, что позволяет нормализовать ААСС лишь через 13 дней от начала лечения. Необходимость длительного применения прототипа по сложной схеме дозирования метаболически значимых его компонентов существенно затрудняет его практическое использование по сравнению с более простым в применении заявленным способом, позволяющим быстро нормализовать ААСС у новорожденных телят с железодефицитной анемией уже через 3 суток после окончания 4 дневного лечения.
Есть сведения, что в качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяются гамавит - комплексный препарат, содержащий нуклеинат натрия и кислый гидролизат плаценты с добавлением среды 199 (Деева А.В., Салахова З.А., Лобова Т.П. и др. Повышение сохранности и продуктивности поросят при использовании фоспренила и гамавита. // Ветеринария. - 2006. - №4. - С.13-15) и крезацин - производное ароксиалкилкарбоновых кислот, оказывающих эффективное стимулирующее воздействие на живые организмы, повышая выживаемость животных в неблагоприятных и экстремальных условиях, стимулируя или нормализуя жизненные процессы (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы. Ветеринария, 2006, №11, с.49-51).
Однако никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, гамавита и крезацина, не применялся у новорожденных телят с железодефицитной анемией для нормализации у них ААСС.
Целью изобретения является нормализация ААСС у новорожденных телят с железодефицитной анемией.
Сущность заявляемого способа заключается в том, что для нормализации ААСС новорожденным телятам с железодефицитной анемией назначается ферроглюкин по 150 (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 4 дня, крезацин 5 мг/кг в сутки, включенный в схему выпаивания утром на четверо суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина и гамавит 0,05 мл/кг внутримышечно один раз в день, утром, в течение четырех суток, начиная одновременно с началом применения ферроглюкина и крезацина.
Способ позволяет нормализовать ААСС у новорожденных телят с железодефицитной анемией через 3 суток после окончания лечения. В последующем у данных телят ААСС стабильно находится на нормальном уровне, что позволяет существенно оздоровить поголовье телят, нормализовать привесы, уменьшить их патологическую отягощенность, сократить падеж и добиться высокого качества получаемой от них в последующем мясной и молочной продукции.
Заявляемый способ осуществляется следующим образом.
Антиагрегационная активность сосудистой стенки определяется по методу (Балуда В.П., Лукьянова Т.И., Балуда М.В. Метод определения антиагрегационной активности стенки сосудов человека. // Лабор. дело, 1983. - №6. - С.17-20). В основе этого метода лежит вычисление степени торможения агрегации тромбоцитов в плазме, полученной из крови после временной венозной окклюзии манжеткой сфигмоманометра, в котором на 3 минуты нагнетается давление на 10 мм рт.ст. выше систолического.
На сосуд, из которого еще не производился забор крови, накладывается манжетка сфигмоманометра и создается давление на 10 мм рт.ст. выше систолического. Через 3 минуты производится взятие 9 мл крови в 1 мл 3,8% раствора цитрата натрия. Ее немедленно центрифугируют 5 минут при 1000 оборотов/минуту для получения богатой тромбоцитами плазмы. Плазму отсасывают пипеткой и сразу же помещают в тающий лед, где хранят до начала исследований. Повторно пробу центрифугируют 20 минут при 3000 оборотов/минуту для получения бестромбоцитной плазмы (БТП). После подсчета количества тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме, полученной до венозного застоя (подробно описано ниже), ее разводят бедной тромбоцитами плазмой (БеТП), взятой до (1 проба) и после (2 проба) венозного застоя до концентрации 200000 тромбоцитов/мкл. Полученную смесь встряхивают и инкубируют 10 минут при 20-22°C. Затем проводят агрегацию тромбоцитов (AT) с коллагеном (разведение 1:2 основной суспензии) на стекле следующим способом (Шитикова А.С. В кн.: Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. Под ред. Н.Н. Петрищева, Л.П. Папаян. СПб.: 1999. С.49-52).
9
Кровь забирают с цитратом натрия 3,8% в соотношении 9:1, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, для получения богатой тромбоцитами плазмы. Часть плазмы отбирают, а оставшуюся центрифугируют при 3000 об/мин, в течение 20 мин, получая БеТП. БТП стандартизируют по числу тромбоцитов путем разбавления исходной БТП аутологичным образцом БеТП (полученной до венозного застоя - 1-я проба или после него - 2-я проба) до 200·10/л. Концентрация кровяных пластинок в исходной БТП подсчитывается в камере Горяева (в 50 больших квадратах). Объемы смешиваемых БТП и БеТП определяют по формуле
БеТП
БТП
V=V·[(N/200000)-1],
БеТП
V - объем бедной тромбоцитами плазмы,
БТП
V - объем богатой тромбоцитами плазмы,
N - счетная концентрация тромбоцитов в исходной БТП (клеток/мкл).
Из отобранного объема стандартизированной плазмы на предметное стекло наносят 0,02 мл плазмы и другой пипеткой 0,02 мл р-ра индуктора коллагена в стандартной концентрации (разведение 1:2 основной суспензии). Стеклянной палочкой смешивают плазму с индукторами и включают секундомер. Смесь перемешивают так, чтобы жидкость занимала окружность диаметром около 2 см.
Покачивая стекло круговыми движениями в проходящем свете осветителя, на черном фоне следят через лупу за возникновением агрегатов. При появлении отчетливых агрегатов, просветлении раствора и прилипании части агрегатов к стеклу секундомер отключают, фиксируя время агрегации тромбоцитов.
Реакцию повторяют по 2-3 раза в 1-й и 2-й пробе, находя для каждой из них среднее арифметическое значение.
По степени торможения агрегации тромбоцитов после венозного застоя судят об антиагрегационной активности плазмы крови, обусловленной поступлением в кровоток простациклина из сосудистой стенки. Индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки (ИААСС) при исследовании AT на стекле рассчитывали по формуле
<mrow><mi>И</mi><mi>А</mi><mi>А</mi><mi>С</mi><mi>С</mi><mo>=</mo><mfrac><mrow><mi>в</mi><mi>р</mi><mi>е</mi><mi>м</mi><mi>я</mi><mtext> агрег</mtext><mtext>. </mtext><mi>т</mi><mi>р</mi><mi>о</mi><mi>м</mi><mi>б</mi><mi>о</mi><mi>ц</mi><mtext>. на  фоне  венозного  застоя </mtext></mrow><mrow><mtext>время агрег</mtext><mtext>. </mtext><mi>т</mi><mi>р</mi><mi>о</mi><mi>м</mi><mi>б</mi><mi>о</mi><mi>ц</mi><mo>.</mo><mtext>   без  венозного  застоя</mtext></mrow></mfrac></mrow>
Нормальными значениями для коллагена можно считать ИААСС 1,45-1,50.
В случае нарушения ААСС больным животным необходимо проводить лечение согласно заявленному способу, включающему ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 4 дня, крезацин 5 мг/кг в сутки в схеме выпаивания на 4 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, и гамавит 0,05 мл/кг внутримышечно один раз в день в течение четырех суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.
Применение заявленного комплекса нормализует ААСС у новорожденных телят с железодефицитной анемией через 3 суток после окончания лечения. Это является основой оздоровления стада, снижения падежа и залогом высокого качества получаемой мясной и молочной продукции от пролеченных с его помощью телят.
12
Пример 1. У новорожденного теленка №12 с анемией было выявлено нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 12,3 мкмоль/л, сидероциты 0,9%, при количестве гемоглобина 81,5 г/л, эритроцитов 4,00×10/л).
У теленка была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме с оценкой ИААСС.
У животного были выявлены выраженные признаки угнетения антиагрегационной функции сосудистой стенки - ИААСС составлял 1,09.
Теленку было назначено лечение: ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, включив его в схему выпаивания на 4 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, и гамавит внутримышечно, один раз в день утром 0,05 мл/кг, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.
12
Через 3 суток после завершения лечения признаки анемии купировались - сывороточное железо 22,9 мкмоль/л, сидероциты 7,1%, при количестве гемоглобина у него 121,3 г/л, эритроцитов 4,96×10/л, ИААСС составлял 1,49. Дальнейшее наблюдение за данным теленком не выявило отклонений от нормы в последующем, а ИААСС оставался в нормальных границах.
12
Пример 2. У новорожденного теленка №29 с анемией было выявлено нарушение эритропоэза с признаками снижения содержания железа в его организме (сывороточное железо 11,5 мкмоль/л, сидероциты 0,8%, при количестве гемоглобина у него 80,2 г/л, эритроцитов 3,98×10/л).
У теленка была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме с оценкой ИААСС.
У животного были выявлены выраженные признаки угнетения антиагрегационной функции сосудистой стенки - ИААСС составлял 1,05.
Теленку было назначено лечение: ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, включив его в схему выпаивания на 4 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, и гамавит внутримышечно, один раз в день утром 0,05 мл/кг, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.
12
Через 3 суток после завершения лечения признаки анемии купировались - сывороточное железо 23,0 мкмоль/л, сидероциты 7,0%, при количестве гемоглобина у него 120,6 г/л, эритроцитов 4,97×10/л, ИААСС составлял 1,52. Дальнейшее наблюдение за данным теленком не выявило отклонений от нормы в последующем, а ИААСС оставался в нормальных границах.
Применение заявленного способа успешно апробировано на 45 новорожденных телятах с железодефицитной анемией с достижением полной нормализации ААСС во всех случаях.