СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТЕРОИДНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ВОССТАНОВЛЕНИЕМ ОКСОСТЕРОИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ИЛИ ОКИСЛЕНИЕМ ГИДРОКСИСТЕРОИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГИДРОКСИСТЕРОИДНОЙ ДЕГИДРОГЕНАЗЫ

1. Способ энантиоселективного ферментативного восстановления соединений, имеющих стероидную структуру (ABCD), включая один или несколько гетероатомов, одну или несколько двойных связей и/или ароматическое звено в циклической структуре, и содержащих по меньшей мере одну оксо-группу в положении 3, 7, 11, 12 или 17 стероидной циклической системы или в α-положении какого-либо углеродного остатка на стероидном скелете (=оксостероидное соединение),
причем оксостероидное соединение восстанавливают гидроксистероидной дегидрогеназой в присутствии кофактора NADH или NADPH, отличающийся тем, что
a) оксостероидное соединение находится в реакционной смеси в концентрации ≥50 г/л,
X
Y
X
Y
общ
b) окисленный кофактор NAD или NADP, образуемый гидроксистероидной дегидрогеназой, непрерывно восстанавливается через окисление вторичного спирта общей формулы RRCHOH, где R, R независимо друг от друга означают водород, разветвленный или неразветвленный C1-C8-алкил, и C≥ 3, или через окисление C4-C6-циклоалканола, и
X
Y
c) для окисления вторичного спирта общей формулы RRCHOH или циклоалканола используют дополнительную оксидоредуктазу/спиртовую дегидрогеназу.
отличающийся тем, что
2. Способ по п.1,  в качестве оксостероидного соединения используют соединение общей формулы I
в которой означают:
1
R водород, метильная группа, гидрокси-группа или оксо-группа,
2
R водород, метильная группа, гидрокси-группа или оксо-группа,
3
R водород, гидрокси-группа, оксо-группа или метильная группа,
4
R водород или гидрокси-группа,
5
10
10
R водород, остаток -COR, где R представляет собой незамещенную или замещенную гидрокси-группой C1-C4-алкильную группу или замещенную или незамещенную C1-C4-карбоксиалкильную группу,
4
5
или R и R вместе означают оксо-группу,
6
R водород, метильная группа, гидрокси-группа или оксо-группа,
7
R водород, метильная группа, гидрокси-группа или оксо-группа,
8
R водород, метильная группа или галогенид, и
9
R водород, метильная группа, гидрокси-группа, оксо-группа или галогенид,
1
2
4
5
6
8
9
5
10
где по меньшей мере одно из R, R, R+R, R, R или R означают оксо-группу, или R является остатком -COR, и структурный элемент
означает бензольное кольцо или C6-кольцо с 0, 1 или 2 двойными связями C-C.
X
Y
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что в качестве вторичного спирта общей формулы RRCHOH используют 2-пропанол, 2-бутанол, 2-пентанол, 4-метил-2-пентанол, 2-гексанол, 2-гептанол, 5-метил-2-гексанол или 2-октанол, а в качестве циклического спирта - циклогексанол.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что его осуществляют в водно-органической двухфазной системе.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что дополнительно используют органический растворитель, как например диэтиловый эфир, трет-бутилметиловый эфир, диизопропиловый эфир, дибутиловый эфир, этилацетат, бутилацетат, гептан, гексан или циклогексан.
3
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что TTN (total turn over number=моли восстановленного оксостероидного соединения на моль используемого кофактора) составляет ≥10.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что по меньшей мере 50% использованного оксостероидного соединения восстанавливается до гидроксистероидного соединения в течение 2-96 ч.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве оксостероидного соединения используют кетолитохоловую кислоту (формула II)
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве оксостероидного соединения используют дексаметазон (формула III)
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве оксостероидного соединения используют 4-андростен-3,17-дион (формула IV)
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве оксостероидного соединения используют 1,4-андростадиен-3,17-дион (формула V)
12. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве оксостероидного соединения используют эстрон (формула VI)
13. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве оксостероидного соединения используют прегненолон (формула VII)
14. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве оксостероидного соединения используют кортизон (формула VIII)
15. Способ ферментативного окисления соединений, которые имеют стероидную структуру (ABCD), включая один или несколько гетероатомов, одну или несколько двойных связей и/или ароматическое звено в циклической структуре, и содержат по меньшей мере одну гидрокси-группу в положении 3, 7, 11, 12 или 17 стероидной циклической системы или в α-положении какого-либо углеродного остатка на стероидном скелете (=гидроксистероидное соединение)
причем гидроксистероидное соединение окисляют гидроксистероидной дегидрогеназой в присутствии кофактора NAD или NADP, отличающийся тем, что
a) гидроксистероидное соединение находится в реакционной смеси в концентрации ≥50 г/л,
X
Y
x
γ
общ
b) восстановленный кофактор NADH или NADPH, образуемый гидроксистероидной дегидрогеназой, непрерывно регенерируется через восстановление кетосоединения общей формулы RRCO, где R, R независимо друг от друга означают водород, разветвленный или неразветвленный C1-C8-алкил, и C≥ 3, или через восстановление C4-C6-циклоалканона, и
X
Y
c) для восстановления кетосоединения общей формулы RRCO или циклоалканона используют дополнительную оксидоредуктазу/спиртовую дегидрогеназу.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что в качестве гидроксистероидного соединения используют соединение общей формулы I
в которой означают:
1
R водород, метильная группа, гидрокси-группа или оксо-группа,
2
R водород, метильная группа, оксо-группа или гидрокси-группа,
3
R водород, гидрокси-группа, оксо-группа или метильная группа,
4
R водород или гидрокси-группа,
5
10
10
R водород, остаток -COR, где R представляет собой незамещенную или замещенную гидрокси-группой C1-C4-алкильную группу или замещенную или незамещенную C1-C4-карбоксиалкильную группу,
4
5
или R и R вместе означают оксо-группу,
6
R водород, метильная группа, оксо-группа или гидрокси-группа,
7
R водород, метильная группа, оксо-группа или гидрокси-группа,
8
R водород, метильная группа или галогенид, и
9
R водород, метильная группа, гидрокси-группа, оксо-группа или галогенид,
1
2
4
6
7
8
9
причем по меньшей мере одно из R, R, R, R, R, R или R означает гидрокси-группу, а структурный элемент
означает бензольное кольцо или C6-кольцо с 0, 1 или 2 двойными связями C-C.
X
Y
17. Способ по п.15 или 16, отличающийся тем, что в качестве кетона общей формулы RRCO используют ацетон, 2-бутанон, 2-пентанон, 4-метил-2-пентанон, 2-гексанон, 2-гептанон, 5-метил-2-гексанон или 2-октанон, а в качестве циклоалканона используется циклогексанон.
18. Способ по п.15, отличающийся тем, что его осуществляют в водно-органической двухфазной системе.
19. Способ по п.18, отличающийся тем, что дополнительно применяют органический растворитель, как например диэтиловый эфир, трет-бутилметиловый эфир, диизопропиловый эфир, дибутиловый эфир, этилацетат, бутилацетат, гептан, гексан или циклогексан.
3
20. Способ по п.15, отличающийся тем, что TTN (total turn over number=моли окисленного гидроксистероидного соединения на моль используемого кофактора) составляет ≥10.
21. Способ по п.15, отличающийся тем, что по меньшей мере 50% используемого гидроксистероидного соединения окисляется до оксостероидного соединения в течение 2-96 ч.