АНТИТЕЛА ПРОТИВ ТАУ-БЕЛКА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
ANTI-TAU PROTEIN ANTIBODIES AND METHODS OF USING SAID ANTIBODIES

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке США № 62/171,693, поданной 5 июня 2015 года, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте для любых целей.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0002] Настоящее изобретение относится к антителам против тау-белка и способам их применения.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Нейрофибриллярные клубки и нейропильные нити (NT) являются основными нейропатологическими признаками болезни Альцгеймера (AD). NT состоят из ассоциированного с микротрубочками тау-белка (Tau), подвергшегося посттрансляционным модификациям, в том числе фосфорилированию, и образованному за счет агрегации гиперфосфорилированных конформеров тау-белка. Данная патология является общей для болезни Альцгеймера и многих нейродегенеративных таупатий, в частности, для некоторых типов лобно-височной деменции (FTD). Тау-белок, по-видимому, играет важнейшую роль в угасании когнитивных способностей при БА и подобных нейродегенеративных таупатиях.
[0004] Терапевтические подходы, направленные на тау-белок, немногочисленны и в основном включают применение ингибиторов киназ, которые, как считается, усиливают фосфорилирование тау-белка до патологических уровней, и соединений, блокирующих агрегацию гиперфосфорилированного тау-белка в цитоплазме. Эти подходы характеризуются различными недостатками с точки зрения специфичности и эффективности. Существует потребность в дополнительных терапевтических агентах, воздействующих на патологические конформеры тау-белка, которые заведомо или предположительно вызывают нейродегенеративные расстройства.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0005] В соответствии с настоящим изобретением предложены антитела против тау-белка и способы их применения.
[0006] В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, связывающееся с тау-белком человека, причем указанное антитело связывается с мономерным тау-белком, олигомерным тау-белком, нефосфорилированным тау-белком и фосфорилированным тау-белком. В некоторых вариантах реализации антитело связывает эпитоп в пределах аминокислот 2-24 зрелого тау-белка человека. В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах реализации антитело является антителом человека, гуманизированным или химерным антителом. В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой фрагмент антитела, связывающий тау-белок человека. В некоторых вариантах реализации тау-белок человека содержит последовательность SEQ ID NO:2.
[0007] В некоторых вариантах реализации антитело содержит:
a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:12, 22, 282, 292 и 342; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:13, 23, 283, 293 и 343, и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:14, 24, 284, 294 и 344; или
b) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:72 и 302; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:73 и 303; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:74 и 304;
c) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:42; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:43; и HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:44;
d) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:62; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:63; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:64;
e) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:212; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:213; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:214;
f) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:32; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:33; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:34; или
g) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:52; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:53; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:54.
[0008] В некоторых вариантах реализации антитело содержит:
a) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:15, 25, 285, 295, 345 и 468-556; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:16, 26, 286, 296 и 346; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:17, 27, 287, 297 и 347;
b) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:75 и 305; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:76 и 306; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:77 и 307;
c) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:45; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:47;
d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:65; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:66; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:67;
e) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:215; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:216; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:217
f) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:35; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:37; или
g) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:55; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:56; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:57.
[0009] В некоторых вариантах реализации антитело содержит:
a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:12, 22, 282, 292 и 342; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:13, 23, 283, 293 и 343; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:14, 24, 284, 294 и 344; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:15, 25, 285, 295, 345 и 468-556; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:16, 26, 286, 296 и 346; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:17, 27, 287, 297 и 347;
b) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:72 и 302; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:73 и 303; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:74 и 304; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:75 и 305; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:76 и 306; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:77 и 307;
c) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:42; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:43; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:44; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:45; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:47;
d) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:62; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:63; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:64; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:65; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:66; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:67;
e) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:212; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:213; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:214; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:215; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:216; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:217;
f) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:32; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:33; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:34; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:35; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:37; или
g) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:52; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:53; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:54; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:55; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:56; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:57.
[0010] В некоторых вариантах реализации антитело содержит:
a) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности, выбранной из SEQ ID NO:10, 20, 280, 290 и 340;
b) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности, выбранной из SEQ ID NO:11, 21, 281, 291 и 341;
c) VH согласно варианту (а) и VL согласно варианту (b);
d) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности, выбранной из SEQ ID NO:70, 300 и 452-459;
e) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности, выбранной из SEQ ID NO:71, 301 и 460-467;
f) VH согласно варианту (d) и VL согласно варианту (e);
g) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:40;
h) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:41;
i) VH согласно варианту (g) и VL согласно варианту (h);
j) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:60;
k) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:61;
l) VH согласно варианту (j) и VL согласно варианту (k);
m) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:210;
n) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:211;
o) VH согласно варианту (m) и VL согласно варианту (n);
p) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:30;
q) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:31;
r) VH согласно варианту (p) и VL согласно варианту (q);
s) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:50;
t) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:51; или
u) VH согласно варианту (s) и VL согласно варианту (t).
[0011] В некоторых вариантах реализации антитело содержит:
a) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO:10, 20, 280, 290 и 340;
b) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO:11, 21, 281, 291 и 341;
c) VH согласно варианту (а) и VL согласно варианту (b);
d) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO:70, 300 и 452-459;
e) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO:71, 301 и 460-467;
f) VH согласно варианту (d) и VL согласно варианту (e);
g) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:40;
h) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:41;
i) VH согласно варианту (g) и VL согласно варианту (h);
j) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:60;
k) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:61;
l) VH согласно варианту (j) и VL согласно варианту (k);
m) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:210;
n) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:211;
o) VH согласно варианту (m) и VL согласно варианту (n);
p) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:30;
q) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:31;
r) VH согласно варианту (p) и VL согласно варианту (q);
s) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:50;
t) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:51; или
u) VH согласно варианту (s) и VL согласно варианту (t).
[0012] В некоторых вариантах реализации антитело содержит HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:342; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:343; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:344; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:345; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:346; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:347.
[0013] В некоторых вариантах реализации антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:340, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:341.
[0014] В некоторых вариантах реализации антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:348 или SEQ ID NO:602, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:349.
[0015] В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, связывающееся с тау-белком человека, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:348 или SEQ ID NO:602, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:349. В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, связывающееся с тау-белком человека, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:348, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:349. В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, связывающееся с тау-белком человека, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:602, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:349. В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, связывающееся с тау-белком человека, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:348 или SEQ ID NO:602, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:349. В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, связывающееся с тау-белком человека, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:348, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:349. В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, связывающееся с тау-белком человека, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:602, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:349.
[0016] В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, связывающееся с тау-белком человека, причем указанное антитело связывается с эпитопом в пределах аминокислот 19-33, 19-42, 28-44, 37-51, 100-114, 109-123, 118-132, 154-168, 172-177, 217-231 или 397-411 зрелого тау-белка человека.
[0017] В некоторых вариантах реализации антитело содержит:
a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:112; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:113; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:114;
b) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:132; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:133; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:134;
c) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:142; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:143; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:144;
d) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:152; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:153; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:154;
e) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164;
f) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:253; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:254;
g) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:272; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:273; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:274;
h) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:102; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:103; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:104;
i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:172; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:173; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:174;
j) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:192; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:193; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:194;
k) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:242; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:243; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:244;
l) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:82, 312, 322 и 332; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:83, 313, 323 и 333; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:84, 314, 324 и 334;
m) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:92; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:93; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94;
n) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:122; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:124;
o) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184;
p) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:202; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:203; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:204;
q) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:222; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:223; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:224;
r) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:232; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:233; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:234; или
s) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264.
[0018] В некоторых вариантах реализации антитело содержит:
a) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:115; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:116; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:117;
b) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:135; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:136; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:137;
c) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:145; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:146; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:147;
d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:155; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:156; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:157;
e) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:165; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:167;
f) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:255; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:256; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:257;
g) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:275; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:277;
h) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:105; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:106; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:107;
i) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:175; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:176; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:177;
j) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:195; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:196; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:197;
k) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:245; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:246; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:247;
l) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:85, 315, 325 и 335; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:86, 316, 326 и 336; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:87, 317, 327 и 337;
m) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:95; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:96; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97;
n) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:125; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:126; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:127;
o) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:185; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:186; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:187;
p) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:205; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:206; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:207;
q) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:225; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:226; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:227;
r) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:235; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:236; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:237; или
s) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:265; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267.
[0019] В некоторых вариантах реализации антитело содержит:
a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:112; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:113; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:114; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:115; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:116; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:117;
b) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:132; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:133; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:134; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:135; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:136; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:137;
c) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:142; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:143; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:144; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:145; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:146; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:147;
d) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:152; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:153; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:154; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:155; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:156; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:157;
e) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:165; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:167;
f) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:253; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:254; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:255; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:256; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:257; или
g) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:272; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:273; и HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:274; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:275; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276; HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:277;
h) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:102; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:103; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:104; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:105; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:106; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:107;
i) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:172; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:173; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:174; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:175; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:176; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:177;
j) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:192; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:193; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:194; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:195; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:196; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:197; или
k) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:242; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:243; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:244; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:245; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:246; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:247;
l) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:82, 312, 322 и 332; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:83, 313, 323 и 333; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:84, 314, 324 и 334; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:85, 315, 325 и 335; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:86, 316, 326 и 336; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:87, 317, 327 и 337;
m) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:92; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:93; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:95; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:96; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97;
n) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:122; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:124; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:125; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:126; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:127;
o) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:185; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:186; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:187;
p) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:202; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:203; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:204; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:205; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:206; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:207;
q) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:222; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:223; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:224; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:225; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:226; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:227;
r) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:232; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:233; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:234; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:235; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:236; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:237; или
s) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263; HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264; HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:265; HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266; и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267.
[0020] В некоторых вариантах реализации антитело содержит:
a) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:110;
b) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:111;
c) VH согласно варианту (а) и VL согласно варианту (b);
d) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:130;
e) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:131;
f) VH согласно варианту (d) и VL согласно варианту (e);
g) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:140;
h) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:141;
i) VH согласно варианту (g) и VL согласно варианту (h);
j) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:150;
k) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:151;
l) VH согласно варианту (j) и VL согласно варианту (k);
m) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:160;
n) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:161; или
o) VH согласно варианту (m) и VL согласно варианту (n);
p) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:250;
q) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:251;
r) VH согласно варианту (p) и VL согласно варианту (q);
s) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:270;
t) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:271;
u) VH согласно варианту (s) и VL согласно варианту (t).
v) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:100;
w) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:101; или
x) VH согласно варианту (v) и VL согласно варианту (w);
y) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:170;
z) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:171;
aa) VH согласно варианту (y) и VL согласно варианту (z);
bb) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:190;
cc) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:191;
dd) VH согласно варианту (bb) и VL согласно варианту (cc);
ee) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:240;
ff) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:241; или
gg) VH согласно варианту (ee) и VL согласно варианту (ff);
hh) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности, выбранной из SEQ ID NO:80, 310, 320, 330 и 446-451;
ii) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности, выбранной из SEQ ID NO:81, 311, 321, 331 и 442-445;
jj) VH согласно варианту (hh) и VL согласно варианту (ii);
kk) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:90;
ll) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:91;
mm) VH согласно варианту (kk) и VL согласно варианту (ll);
nn) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:120;
oo) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:121;
pp) VH согласно варианту (nn) и VL согласно варианту (oo);
qq) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:180;
rr) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:181;
ss) VH согласно варианту (qq) и VL согласно варианту (rr);
tt) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:200;
uu) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:201;
vv) VH согласно варианту (tt) и VL согласно варианту (uu);
ww) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:220;
xx) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:221;
yy) VH согласно варианту (ww) и VL согласно варианту (xx);
zz) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:230;
aaa) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:231;
bbb) VH согласно варианту (zz) и VL согласно варианту (aaa);
ccc) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:260;
ddd) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO:261; или
eee) VH согласно варианту (ccc) и VL согласно варианту (ddd).
[0021] В некоторых вариантах реализации антитело содержит:
a) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:110;
b) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:111;
c) VH согласно варианту (а) и VL согласно варианту (b);
d) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:130;
e) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:131;
f) VH согласно варианту (d) и VL согласно варианту (e);
g) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:140;
h) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:141;
i) VH согласно варианту (g) и VL согласно варианту (h);
j) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:150;
k) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:151;
l) VH согласно варианту (j) и VL согласно варианту (k);
m) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:160;
n) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:161; или
o) VH согласно варианту (m) и VL согласно варианту (n);
p) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:250;
q) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:251;
r) VH согласно варианту (p) и VL согласно варианту (q);
s) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:270;
t) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:271; или
u) VH согласно варианту (s) и VL согласно варианту (t)
v) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:100;
w) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:101; или
x) VH согласно варианту (v) и VL согласно варианту (w);
y) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:170;
z) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:171;
aa) VH согласно варианту (y) и VL согласно варианту (z);
bb) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:190;
cc) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:191;
dd) VH согласно варианту (bb) и VL согласно варианту (cc);
ee) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:240;
ff) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:241;
gg) VH согласно варианту (ee) и VL согласно варианту (ff);
hh) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO:80, 310, 320, 330 и 446-451;
ii) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO:81, 311, 321, 331 и 442-445;
jj) VH согласно варианту (hh) и VL согласно варианту (ii);
kk) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:90;
ll) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:91;
mm) VH согласно варианту (kk) и VL согласно варианту (ll);
nn) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:120;
oo) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:121;
pp) VH согласно варианту (nn) и VL согласно варианту (oo);
qq) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:180;
rr) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:181;
ss) VH согласно варианту (qq) и VL согласно варианту (rr);
tt) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:200;
uu) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:201;
vv) VH согласно варианту (tt) и VL согласно варианту (uu);
ww) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:220;
xx) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:221;
yy) VH согласно варианту (ww) и VL согласно варианту (xx);
zz) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:230;
aaa) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:231;
bbb) VH согласно варианту (zz) и VL согласно варианту (aaa);
ccc) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO:260;
ddd) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO:261; или
eee) VH согласно варианту (ccc) и VL согласно варианту (ddd).
[0022] В любом из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может являться антителом IgG1 или IgG4. В любом из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может являться антителом IgG4. В некоторых из таких вариантов реализации антитело содержит мутации M252Y, S254T и T256E. В любом из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может содержать мутацию S228P. В любом из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может содержать мутации S228P, M252Y, S254T и T256E. В любом из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может являться антителом IgG4, содержащим мутации S228P, M252Y, S254T и T256E. В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой фрагмент антитела. В любом из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может являться антителом IgG4, содержащим мутации S228P, M252Y, S254T и T256E и не содержащим С-концевого остатка лизина (des-K) константной области тяжелой цепи. Данный С-концевой лизин константной области тяжелой цепи может быть удален, например, во время очистки антитела или посредством рекомбинантного конструирования нуклеиновой кислоты, кодирующей данное антитело таким образом, что С-концевой лизин не кодируется.
D
[0023] В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, связывающееся с тау-белком человека, причем указанное антитело связывается с мономерным тау-белком, фосфорилированным тау-белком, нефосфорилированным тау-белком и олигомерным тау-белком с K менее 100 нМ, менее 75 нМ или менее 50 нМ. В некоторых вариантах реализации антитело связывает тау-белок яванского макака (SEQ ID NO:4).
[0024] В некоторых вариантах реализации предложена выделенная нуклеиновая кислота, причем указанная выделенная нуклеиновая кислота кодирует антитело, описанное в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации предложена клетка-хозяин, содержащая выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, описанное в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации предложен способ получения антитела, включающий культивирование клетки-хозяина в условиях, подходящих для продукции указанного антитела.
[0025] В некоторых вариантах реализации предложен иммуноконъюгат, содержащий выделенное антитело, описанное в настоящем документе, и терапевтический агент. В некоторых вариантах реализации предложен иммуноконъюгат, содержащий антитело, описанное в настоящем документе, и обнаружимую метку.
[0026] В некоторых вариантах реализации предложена фармацевтическая композиция, содержащая выделенное антитело, описанное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0027] В некоторых вариантах реализации предложен способ лечения заболевания, ассоциированного с тау-белком, включающий введение индивиду с заболеванием, ассоциированным с тау-белком, антитела, описанного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, описанное в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации заболевание, ассоциированное с тау-белком, представляет собой таупатию. В некоторых вариантах реализации таупатия представляет собой нейродегенеративную таупатию. В некоторых вариантах реализации таупатия выбрана из болезни Альцгеймера, бокового амиотрофического склероза, болезни Паркинсона, болезни Крейтцфельда-Якоба, деменции боксеров, синдрома Дауна, болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозита с включенными тельцами, прион-протеинцеребральной амилоидной ангиопатии, черепно-мозговой травмы, бокового амиотрофического склероза/сочетания паркинсонизма и деменции (комплекса Гуама), негуамской болезни двигательного нейрона с нейрофибриллярными клубками, деменции аргирофильных зерен, кортикобазальной дегенерации, диффузных нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, лобно-височной деменции, лобно-височной деменции с паркинсонизмом, сцепленной с 17 хромосомой, болезни Галлервордена-Шпатца, множественной системной атрофии, болезни Ниманна-Пика типа C, паллидо-понто-нигральной дегенерации, болезни Пика, прогрессирующего субкортикального глиоза, прогрессирующего надъядерного паралича, подострого склерозирующего панэнцефалита, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитического паркинсонизма и миотонической дистрофии. В некоторых вариантах реализации таупатия представляет собой болезнь Альцгеймера или прогрессирующий надъядерный паралич.
[0028] В некоторых вариантах реализации предложен способ сохранения или повышения емкости когнитивной памяти или замедления потери памяти у индивида, включающий введение антитела, описанного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, описанное в настоящем документе.
[0029] В некоторых вариантах реализации предложен способ снижения уровня тау-белка, нефосфорилированного тау-белка, фосфорилированного тау-белка или гиперфосфорилированного тау-белка у индивида, включающий введение антитела, описанного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, описанное в настоящем документе.
[0030] В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, описанное в настоящем документе, для применения в качестве лекарственного средства. В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, описанное в настоящем документе, для применения при лечении таупатии у индивида. В некоторых вариантах реализации таупатия представляет собой нейродегенеративную таупатию. В некоторых вариантах реализации таупатия выбрана из болезни Альцгеймера, бокового амиотрофического склероза, болезни Паркинсона, болезни Крейтцфельда-Якоба, деменции боксеров, синдрома Дауна, болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозита с включенными тельцами, прион-протеинцеребральной амилоидной ангиопатии, черепно-мозговой травмы, бокового амиотрофического склероза/сочетания паркинсонизма и деменции (комплекса Гуама), негуамской болезни двигательного нейрона с нейрофибриллярными клубками, деменции аргирофильных зерен, кортикобазальной дегенерации, диффузных нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, лобно-височной деменции, лобно-височной деменции с паркинсонизмом, сцепленной с 17 хромосомой, болезни Галлервордена-Шпатца, множественной системной атрофии, болезни Ниманна-Пика типа C, паллидо-понто-нигральной дегенерации, болезни Пика, прогрессирующего субкортикального глиоза, прогрессирующего надъядерного паралича, подострого склерозирующего панэнцефалита, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитического паркинсонизма и миотонической дистрофии. В некоторых вариантах реализации таупатия представляет собой болезнь Альцгеймера или прогрессирующий надъядерный паралич.
[0031] В некоторых вариантах реализации предложено выделенное антитело, описанное в настоящем документе, для применения при сохранении или повышении емкости когнитивной памяти или замедлении потери памяти у индивида. В некоторых вариантах реализации антитело, описанное в настоящем документе, предложено для применения при снижении уровня тау-белка, нефосфорилированного тау-белка, фосфорилированного тау-белка или гиперфосфорилированного тау-белка у индивида.
[0032] В некоторых вариантах реализации выделенное антитело, описанное в настоящем документе, предложено для получения лекарственного средства для лечения заболевания, ассоциированного с тау-белком, у индивида. В некоторых вариантах реализации заболевание, ассоциированное с тау-белком, представляет собой таупатию. В некоторых вариантах реализации таупатия представляет собой нейродегенеративную таупатию. В некоторых вариантах реализации таупатию выбирают из болезни Альцгеймера, бокового амиотрофического склероза, болезни Паркинсона, болезни Крейтцфельда-Якоба, деменции боксеров, синдрома Дауна, болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозита с включенными тельцами, прион-протеинцеребральной амилоидной ангиопатии, черепно-мозговой травмы, бокового амиотрофического склероза/сочетания паркинсонизма и деменции (комплекса Гуама), негуамской болезни двигательного нейрона с нейрофибриллярными клубками, деменции аргирофильных зерен, кортикобазальной дегенерации, диффузных нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, лобно-височной деменции, лобно-височной деменции с паркинсонизмом, сцепленной с 17 хромосомой, болезни Галлервордена-Шпатца, множественной системной атрофии, болезни Ниманна-Пика типа C, паллидо-понто-нигральной дегенерации, болезни Пика, прогрессирующего субкортикального глиоза, прогрессирующего надъядерного паралича, подострого склерозирующего панэнцефалита, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитического паркинсонизма и миотонической дистрофии. В некоторых вариантах реализации таупатия представляет собой болезнь Альцгеймера или прогрессирующий надъядерный паралич.
[0033] В некоторых вариантах реализации предложено применение антитела, описанного в настоящем документе, для получения лекарственного средства для сохранения или повышения емкости когнитивной памяти или замедления потери памяти у индивида.
[0034] В некоторых вариантах реализации предложен способ обнаружения нейрофибриллярных клубков, нейропильных нитей или дистрофических нейритов, включающий контакт образца с антителом, описанным в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации образец может представлять собой образец головного мозга, образец цереброспинальной жидкости или образец крови.
[0035] В любом из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, способ или применение может включать введение антитела, описанного в настоящем документе, в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным терапевтическим средством. Неограничивающие примеры других терапевтических средств включают неврологические лекарственные средства, кортикостероиды, антибиотики, противовирусные средства и другие терапевтические агенты. Такие другие терапевтические агенты включают другие антитела против тау-белка, антитела против бета-амилоида, антитела против бета-секретазы 1 (ʺBACE1ʺ) и ингибиторы бета-секретазы 1, но не ограничиваются ими.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0036] Фигура 1A-F. Связывание антител с гиперфосфорилированным тау-белком (pTau) сравнивали с нефосфорилированным тау-белком с помощью твердофазного ИФА. Результаты выражали в единицах оптической плотности (O.D.).
[0037] Фигура 2A-Е. Связывание антител с олигомерным тау-белком оценивали с с помощью твердофазного ИФА олиго- и мономерного бау-белка (monoTau). Результаты выражали в единицах оптической плотности (O.D.).
[0038] Фигура 3. Три протестированных антитела против любой формы тау-белка продемонстрировали связывание растворимого тау-белка в лизатах головного мозга доноров с болезнью Альцгеймера (БА) и соответствующих контрольных доноров с помощью анализа на основе вестерн-блоттинга (ВБ). Белковые экстракты лизатов головного мозга при БА и контрольных лизатов и шесть изоформ рекомбинантного тау-белка человека анализировали посредством электрофореза в ДСН-ПААГ и подвергали мембраны блоттингу с тремя антителами против любой формы тау-белка (37D3-H9, 94B2-C1 и 125B11-H3). Дорожки с образцами при БА помечены как AD18, AD24 и AD27, а дорожки с контрольными образцами помечены как C25 и C21. Дорожки с шестью изоформами рекомбинантного тау-белка человека помечены как лэддер hTau.
[0039] Фигура 4А-С. Антитела против любой формы тау-белка продемонстрировали связывание с растворимым тау-белком в лизатах головного мозга при БА и у соответствующих контрольных доноров с помощью твердофазного ИФА с захватом тау-белка. Представлены данные для трех антител против любой формы тау-белка (37D3-H9, 94B2-C1 и 125B11-H3). Результаты выражали в единицах оптической плотности (O.D.) в виде ʺсредние значения ± СОʺ, N=2.
[0040] Фигура 5. На сенсограммах показано связывание 37D3-H9 в форме Fab (левый график) и IgG (правый график) с мономерным тау-белком человека, ковалентно связанным с поверхностью чипа Biacore. Использовали модель связывания 1:1, показанную в виде наложения. По оси х обозначено время (в секундах). По оси y обозначены резонансные единицы (РЕ).
[0041] Фигура 6. На наложенных сенсограммах показано связывание образцов hu37D3-H9.v5 t=0 (левый график) и t=2 недели (правый график) с мономерным тау-белком человека в концентрациях 3,1, 6,3, 12,5, 25, 25, 50 и 100 нМ. Использовали модель связывания 1:1, также показанную на этой фигуре. По оси х обозначено время (в секундах). По оси y обозначены резонансные единицы (РЕ).
[0042] Фигура 7. Связывание hu37D3-H9.v5 и hu37D3-H9.v5 N28D с мономерным тау-белком по отдельности (на левом графике показан hu37D3-H9.v5, а на среднем - hu37D3-H9.v5 N28D) и в смеси при соотношении 1:1 (правый график). По оси х обозначено время (в секундах). По оси y обозначены резонансные единицы (РЕ).
[0043] Фигура 8A-D. Сродство, показатель стабильности и последовательности девяноста вариантов 37D3-H9, подвергавшихся скринингу на предмет возможного улучшения стабильности. Для ясности значения, полученные с использованием контрольного антитела, не подвергавшегося стрессу (hu37D3-H9.v5 hIgG1), проанализированные в начале, середине и конце каждого эксперимента, приведены в обеих секциях таблицы.
[0044] Фигура 9. Структурная модель Fv-области 37D3-H9 с показанными положениями остатков 28-33 (мотив NGNTYF) легкой цепи и относительными положениями остатков 28 и 33. Обратите внимание, что остаток 33, смутированный в hu37D3.v28.A4 в Leu, не находится вблизи от нестабильного остатка Asn-28. Точечной линией показана водородная связь между остатками Asn-28 и Tyr-32. Фигура получена с помощью пакета программного обеспечения MOE (Chemical Computing Group).
[0045] На Фигуре 10 показана фармакокинетика антитела 37D3-H9 против тау-белка у мышей после однократной внутривенной или внутрибрюшинной инъекции в дозировке 10 мг/кг.
[0046] На Фигуре 11 показана фармакокинетика hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P и hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE у яванских макаков после однократной в/в болюсной инъекции в дозе 1 мг/кг.
[0047] Фигура 12A-С. Связывание некоторых антител против тау-белка c фрагментами тау-белка. (A) Показано связывание некоторых антител против тау-белка с фрагментами тау-белка 1-15, 10-24, 19-33, 28-42, 37-51 и 46-60. (B) Связывание антитела 37D3-H9 mIgG2a с фрагментами тау-белка 10-44, 10-24, 2-24, 2-34 и полноразмерным тау-белком. (C) Связывание антитела hu37D3-H9.v5 hIgG1 с фрагментами тау-белка 10-44, 10-24, 2-24, 2-34 и полноразмерным тау-белком.
[0048] Фигура 13A-B. Влияние эффекторной функции на токсичность тау-белка в совместных культурах нейронов и микроглии. (A) Процент фрагментации MAP2 в совместных культурах, контактировавших с различными антителами и олигомерным тау-белком. (B) Изображения нейронов (верхние графики) и совместных культур нейронов и микроглии (нижние графики), контактировавших с различными антителами и олигомерным тау-белком.
[0049] Фигура 14. Уровни pTau212/214 в гиппокампе мышей после введения IgG2a против тау-белка 37D3-H9 дикого типа или DANG IgG2 37D3-H9 против тау-белка.
[0050] Фигура 15. Сравнение последовательностей тау-белка человека и яванского макака. Показан эпитоп антитела 37D3-H9.
[0051] На Фигуре 16 показана фармакокинетика антитела 94B2-C1 против тау-белка у мышей после однократной внутривенной или внутрибрюшинной инъекции в дозировке 10 мг/кг.
[0052] На Фигуре 17 показана фармакокинетика антитела 125B11-H3 против тау-белка у мышей после однократной внутривенной или внутрибрюшинной инъекции в дозировке 10 мг/кг.
[0053] На Фигуре 18 показано выравнивание вариабельных областей легких каппа 1-цепей hu37D3-H9.v1, hu37D3-H9.v39, hu37D3-H9.v40 и hu37D3-H9.v41.
[0054] На Фигуре 19А-B показана концентрация антитела в плазме (A) и ЦСЖ (B) у яванских макаков после однократной в/в инъекции указанного антитела в дозировке 50 мг/кг.
[0055] На Фигуре 20 показана концентрация общего тау-белка в плазме и концентрация антитела в плазме яванских макаков после однократной в/в инъекции указанного антитела в дозировке 50 мг/кг.
[0056] На Фигурах 21А-D показана концентрация антитела в различных областях головного мозга яванского макака через 2 дня и 10 дней после однократной в/в инъекции hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P (A) и hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE (B) в дозировке 50 мг/кг; средняя концентрация антитела в головном мозге (C); % концентрация антитела в головном мозге:плазме (D).
[0057] На Фигуре 22А-B показана концентрация антитела в головном мозге яванского макака в различные моменты времени после однократной в/в инъекции указанного антитела в дозировке 50 мг/кг, представленная на графике с логарифмической (А) и линейной (В) шкалой.
[0058] На Фигуре 23А-Е показана концентрация антитела в гиппокампе (A), мозжечке (B), фронтальной коре (С), ЦСЖ (D) и плазме (Е) яванских макаков в различные моменты времени после однократной в/в инъекции указанного антитела в дозировке 50 мг/кг.
[0059] На Фигуре 24А-B показаны средняя(А) и отдельные (В) концентрации общего тау-белка в плазме яванских макаков в зависимости от времени после однократной в/в инъекции указанного антитела в дозировке 50 мг/кг.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
I. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[0060] ʺАкцепторный каркас человекаʺ для целей настоящего изобретения представляет собой каркас, содержащий аминокислотную последовательность каркаса вариабельного домена легкой цепи (VL) или каркаса вариабельного домена тяжелой цепи (VH), выделенный из каркаса иммуноглобулина человека или консенсусной последовательности каркаса человека, как определено ниже. Акцепторный каркас человека, ʺполученный изʺ каркаса иммуноглобулина человека или консенсусной последовательности каркаса человека, может содержать совпадающую с ними аминокислотную последовательность или может содержать изменения аминокислотной последовательности. В некоторых вариантах реализации количество изменений аминокислотной последовательности составляет 10 или менее, 9 или менее, 8 или менее, 7 или менее, 6 или менее, 5 или менее, 4 или менее, 3 или менее или 2 или менее. В некоторых вариантах реализации изобретения последовательность VL-акцепторного каркаса человека идентична последовательности VL-каркаса иммуноглобулина человека или консенсусной последовательности каркаса человека.
D
[0061] ʺСродствоʺ относится к силе суммы нековалентных взаимодействий между одиночным сайтом связывания молекулы (например, антитела) и ее партнера по связыванию (например, антигена). Если не указано иное, в настоящем документе ʺсродство связыванияʺ относится к присущему молекуле сродству связывания, отражающему взаимодействие между членами пары связывающихся компонентов (например, антителом и антигеном) при их соотношении 1:1. Сродство молекулы X к ее партнеру Y в целом можно выразить константой диссоциации (K). Сродство можно измерять при помощи известных в данной области техники способов, в том числе описанных в настоящем документе. Конкретные иллюстративные и типовые варианты реализации измерения сродства связывания описаны ниже.
[0062] Антитело с ʺсозревшей аффинностьюʺ относится к антителу с одним или более изменениями в одной или более гипервариабельных областях (HVR) по сравнению с исходным антителом, которое не содержит таких изменений, причем такие изменения приводят к повышению сродства антитела к антигену.
D
-8
-8
-13
-9
-13
[0063] Термины ʺантитело против тау-белкаʺ или ʺантитело, связывающееся с тау-белкомʺ относятся к антителу, способному связывать тау-белок с достаточным сродством, так что указанное антитело можно использовать в качестве диагностического и/или терапевтического агента при адресном воздействии на тау-белок. В некоторых вариантах реализации степень связывания антитела против тау-белка с неспецифическим белком, не являющимся тау-белком, составляет менее приблизительно 10% связывания антитела с тау-белком при измерении, например, с помощью радиоиммуноанализа (РИА). В некоторых вариантах реализации антитело, связывающееся с тау-белком, обладает константой диссоциации (K), составляющей ≤ 1 мкМ, ≤ 100 нМ, ≤ 10 нМ, ≤ 1 нМ, ≤ 0,1 нМ, ≤ 0,01 нМ или ≤ 0,001 нМ, (например, 10 M или менее, например, от 10 M до 10 M, например, от 10 M до 10 M). В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка специфически связывается с эпитопом тау-белка, который является консервативным среди тау-белков различных видов животных. Термины ʺантитело против тау-белкаʺ и ʺантитело, связывающееся с тау-белкомʺ используются в настоящем документе взаимозаменяемо и относятся к антителу, связывающему мономерный тау-белок, олигомерный тау-белок и/или фосфорилированный тау-белок, если иное не указано явным образом. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка связывается с мономерным тау-белком, олигомерным тау-белком, нефосфорилированным тау-белком и фосфорилированным тау-белком с сопоставимым сродством, например, как при использовании антител, отличающихся друг от друга не более чем в 50 раз. В некоторых вариантах реализации антитело, связывающее мономерный тау-белок, олигомерный тау-белок, нефосфорилированный тау-белок и фосфорилированный тау-белок, называют ʺантителом против любой формы тау-белкаʺ.
[0064] Термин ʺантителоʺ в настоящем документе применяется в самом широком смысле и включает различные структуры антител, включая моноклональные антитела, поликлональные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител, при условии, что они проявляют желательную антигенсвязывающую активность, но не ограничивается ими.
2
[0065] Термин ʺфрагмент антителаʺ относится к молекуле, не являющейся интактным антителом, но содержащей фрагмент интактного антитела, связывающий антиген, с которым связывается интактное антитело. Примеры фрагментов антител включают Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')-фрагменты; диатела; линейные антитела; молекулы одноцепочечных антител (например, scFv); и полиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител, но не ограничиваются ими.
[0066] ʺАнтитело, которое связывается с тем же эпитопомʺ, что и эталонное антитело, относится к антителу, которое блокирует связывание эталонного антитела с его антигеном при конкурентном анализе на 50% или более, и, наоборот, эталонное антитело блокирует связывание антитела с его антигеном при конкурентном анализе на 50% или более. Типовой конкурентный анализ приведен в настоящем документе.
[0067] Термин ʺхимерноеʺ антитело относится к антителу, в котором фрагмент тяжелой и/или легкой цепи происходит из конкретного источника или вида, в то время как остальная часть тяжелой и/или легкой цепи происходит из другого источника или вида.
1
2
3
4
1
2
[0068] ʺКлассʺ антитела относится к типу константного домена или константной области, содержащейся в его тяжелой цепи. Существует пять основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них дополнительно делятся на подклассы (изотипы), например, IgG, IgG, IgG, IgG, IgA и IgA. Константные домены тяжелой цепи, соответствующие различным классам иммуноглобулинов, называются α, δ, ε, γ и μ, соответственно.
211
131
125
90
186
188
153
212
32
212
[0069] В данном контексте термин ʺцитотоксический агентʺ относится к веществу, ингибирующему или предотвращающему функционирование клеток и/или приводящему к гибели или разрушению клеток. Цитостатические агенты включают радиоактивные изотопы (например, At, I, I, Y, Re, Re, Sm, Bi, P, Pb и радиоактивные изотопы Lu), химиотерапевтические агенты или лекарственные вещества (например, метотрексат, адриамицин, алкалоиды барвинка (винкристин, винбластин, этопозид), доксорубицин, мелфалан, митомицин C, хлорамбуцил, даунорубицин или другие интеркалирующие агенты); ингибиторы роста; ферменты и их фрагменты, например, нуклеолитические ферменты; антибиотики; токсины, например, низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения, включая их фрагменты; и варианты и различные противоопухолевые или противораковые агенты, описанные ниже, но не ограничиваются ими.
[0070] Термин ʺэффекторные функцииʺ относится к тем видам биологической активности, присущей Fc-области антитела, которые изменяются в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антител включают: связывание C1q и комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC); связывание с рецептором Fc; антитело-зависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; подавление рецепторов поверхности клетки (например, рецептора B-клеток); и активацию B-клеток.
[0071] ʺЭффективное количествоʺ агента, например, фармацевтического состава, относится к количеству, эффективному в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения желательного терапевтического или профилактического результата.
Sequences of Proteins of Immunological Interest
[0072] В данном контексте термин ʺFc-областьʺ применяется для обозначения C-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит по меньшей мере фрагмент константной области. Термин включает Fc-области с нативными последовательностями и вариантные Fc-области. В некоторых вариантах реализации Fc-область тяжелой цепи IgG человека продолжается от Cys226 или от Pro230 до карбоксильного конца тяжелой цепи. Однако Fc-область может содержать или не содержать C-концевой лизин (Lys447). Если не указано иное, нумерация аминокислотных остатков в Fc-области или константной области соответствует системе нумерации, принятой в ЕС, также называемой ЕС-индексом, как описано в Kabat et al., , 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
[0073] Термин ʺкаркасʺ или ʺFRʺ относится к остаткам вариабельного домена, за исключением остатков гипервариабельной области (HVR). FR вариабельного домена обычно состоит из четырех FR-доменов: FR1, FR2, FR3 и FR4. Соответственно, последовательности HVR и FR в составе VH (или VL), как правило, определяются в следующей последовательности: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
[0074] В данном контексте термины ʺполноразмерное антителоʺ, ʺинтактное антителоʺ и ʺцелое антителоʺ являются взаимозаменяемыми и относятся к антителу, структура которого по существу аналогична структуре нативного антитела, или которое включает тяжелые цепи, содержащие Fc-область, описанную в настоящем документе.
[0075] Термины ʺклетка-хозяинʺ, ʺлиния клеток-хозяевʺ и ʺкультура клеток-хозяевʺ применяются как взаимозаменяемые и относятся к клеткам, в которые введена экзогенная нуклеиновая кислота, включая потомство таких клеток. Клетки-хозяева включают ʺтрансформантыʺ и ʺтрансформированные клеткиʺ, которые включают первично трансформированные клетки и полученное от них потомство, независимо от количества пересевов. Потомство может не быть полностью идентичным исходной клетке по содержанию нуклеиновых кислот, и может содержать мутации. Настоящее описание включает мутантное потомство, обладающее той же функцией или биологической активностью, которую наблюдали во время скрининга или отбора из первоначально трансформированных клеток.
[0076] ʺАнтитело человекаʺ представляет собой антитело, обладающее аминокислотной последовательностью, соответствующей последовательности антитела, продуцированного в организме человека или клетке человека или происходящее из нечеловеческого источника, использующего репертуар антител человека или другие последовательности, кодирующие антитело человека. Из этого определения антитела человека, в частности, исключено гуманизированное антитело, содержащее антигенсвязывающие остатки нечеловеческого происхождения.
Kuby Immunology
.,
J. Immunol.
th
[0077] Термин ʺвариабельная областьʺ или ʺвариабельный доменʺ относится к домену тяжелой или легкой цепи антитела, участвующему в связывании антитела с антигеном. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи (VH и VL, соответственно) нативного антитела обычно обладают аналогичной структурой, причем каждый домен содержит четыре консервативные каркасные области (FR) и три гипервариабельные области (HVR). (См., например, Kindt et al. , 6 ed., W. H. Freeman and Co., стр. 91 (2007).) Одного VH- или VL-домена может быть достаточно для придания антигенсвязывающей специфичности. Кроме того, антитела, которые связываются с конкретным антигеном, можно выделить, используя VH- или VL-домен антитела, связывающийся с антигеном, для скрининга библиотеки последовательностей, комплементарных VL- или VH-доменам, соответственно. Смнапример, Portolano et al., 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991).
of Proteins of Immunological Interest
. В
выше. В
выше
[0078] ʺКонсенсусный каркас человекаʺ является каркасом, представляющим наиболее распространенные аминокислотные остатки при отборе VL- или VH-каркасных последовательностей иммуноглобулина человека. Как правило, отбор VL- или VH-последовательностей иммуноглобулина человека осуществляют из подгруппы последовательностей вариабельного домена. Как правило, подгруппа последовательностей представляет собой подгруппу по Kabat et al., Sequences , Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3одном варианте реализации изобретения VL подгруппа представляет собой подгруппу каппа I по Kabat et al., одном из вариантов реализации изобретения VH подгруппа представляет собой подгруппу III по Kabat et al., .
[0079] ʺГуманизированноеʺ антитело относится к химерному антителу, содержащему аминокислотные остатки из HVR нечеловеческого происхождения и аминокислотные остатки из FR человека. В некоторых вариантах реализации гуманизированное антитело содержит практически все из по меньшей мере одного, а обычно - двух вариабельных доменов, в которых все или практически все HVR (например, CDR) соответствуют аналогичным участкам из антитела нечеловеческого происхождения, и все или практически все FR-области соответствуют последовательности антитела человека. В некоторых случаях гуманизированное антитело может содержать по меньшей мере фрагмент константной области антитела, происходящий из антитела человека. ʺГуманизированная формаʺ антитела, например, антитела нечеловеческого происхождения, относится к антителу, подвергшемуся гуманизации.
[0080] В данном контексте термин ʺгипервариабельная областьʺ или ʺHVRʺ относится к каждой из областей вариабельного домена антитела, обладающих гипервариабельными последовательностями (ʺобласти, определяющие комплементарностьʺ или ʺCDRʺ) и/или образующих структурно определенные петли (ʺгипервариабельные петлиʺ) и/или содержащих остатки, контактирующие с антигеном (ʺантигенные контактыʺ). Как правило, антитела содержат шесть HVR: три в VH (H1, H2, H3) и три в VL (L1, L2, L3). Типовые HVR, описанные в настоящем документе, включают:
J. Mol. Biol.
(а) гипервариабельные петли, находящиеся в области аминокислотных остатков 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) и 96-101 (H3) (Chothia and Lesk,  196:901-917 (1987));
, Sequences of Proteins of Immunological Interest
(b) CDR, находящиеся в области аминокислотных остатков 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2) и 95-102 (H3) (Kabat et al., 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991));
J. Mol. Biol.
(с) антигенные контакты, находящиеся в области аминокислотных остатков 27c-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (H2) и 93-101 (H3) (MacCallum et al. 262:732-745 (1996)); а также
(d) комбинации (a), (b) и/или (с), включая аминокислотные остатки HVR 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (H2), 93-102 (H3) и 94-102 (H3).
выше
[0081] Если не указано иное, остатки HVR и другие остатки в вариабельном домене (например, FR-остатки) в настоящем документе нумеруют по Kabat et al., .
[0082] ʺИммуноконъюгатʺ представляет собой антитело, конъюгированное с одной или более гетерологичными молекулами, включая цитотоксический агент, но не ограничиваясь им.
[0083] ʺИндивидʺ или ʺсубъектʺ представляет собой млекопитающее. Млекопитающие включают одомашненных животных (например, коров, овец, кошек, собак и лошадей), приматов (например, людей и приматов, не являющихся людьми, например, обезьян), кроликов и грызунов (например, мышей и крыс), но не ограничиваются ими. В некоторых вариантах реализации индивид или субъект является человеком.
J. Chromatogr. B
[0084] ʺВыделенное антителоʺ представляет собой антитело, отделенное от компонента своего природного окружения. В некоторых вариантах реализации антитело является очищенным до более чем 95% или 99% чистоты, определяемой, например, посредством электрофореза (например, электрофореза в ДСН-ПААГ, изоэлектрического фокусирования (ИЭФ), капиллярного электрофореза) или хроматографии (например, ионообменной или обращенно-фазной ВЭЖХ). Обзор способов оценки чистоты антител см., например, в работе Flatman et al., 848:79-87 (2007).
[0085] ʺВыделеннаяʺ нуклеиновая кислота представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, отделенную от компонентов своего природного окружения. Выделенная нуклеиновая кислота включает молекулу нуклеиновой кислоты, содержащуюся в клетках, обычно содержащих указанную молекулу нуклеиновой кислоты, однако указанная молекула нуклеиновой кислоты присутствует вне хромосомы или в области хромосомы, отличающейся от ее естественного местоположения в хромосоме.
[0086] ʺВыделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело против тау-белкаʺ относится к одной или более молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим тяжелые и легкие цепи антитела (или их фрагменты), включая такую(ие) молекулу(ы) нуклеиновой кислоты в составе одного вектора или отдельных векторов и такую(ие) молекулу(ы) нуклеиновой кислоты, присутствующую(ие) в одном или более местоположениях в клетке-хозяине.
[0087] В настоящем документе термин ʺмоноклональное антителоʺ относится к антителу, полученному из популяции практически однородных антител, т.е., отдельных антител, составляющих популяцию, которые являются идентичными и/или связывают один и тот же эпитоп, за исключением возможных вариантных антител, например, содержащих естественные мутации или возникающих во время продукции моноклонального антитела, причем такие варианты присутствуют в незначительных количествах. В отличие от препаратов поликлональных антител, которые обычно содержат различные антитела против различных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело из препарата моноклонального антитела направлено против одной детерминанты антигена. Таким образом, модификатор ʺмоноклональноеʺ указывает на то, что антитело получают из практически однородной популяции антител; его не следует интерпретировать как требование относительно продукции антитела с помощью какого-либо конкретного способа. Например, моноклональные антитела для применения согласно настоящему изобретению можно получить с помощью различных способов, включая гибридомный способ, методики рекомбинантных ДНК, методики фагового дисплея и способы с использованием трансгенных животных, полностью или частично содержащих локусы иммуноглобулина человека, но не ограничиваясь ими, причем такие способы и другие типовые способы получения моноклональных антител описаны в настоящем документе.
[0088] Термин ʺсвободное антителоʺ относится к антителу, не конъюгированному с гетерологичной группой (например, цитотоксической группой) или радиоактивной меткой. Свободное антитело может присутствовать в фармацевтическом составе.
[0089] ʺНативные антителаʺ относятся к природным молекулам иммуноглобулина с различной структурой. Например, нативные IgG-антитела обычно представляют собой гетеротетрамерные гликопротеины с молекулярной массой около 150000 дальтон, состоящие из двух идентичных легких цепей и двух идентичных тяжелых цепей, связанных дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь от N-конца к C-концу содержит вариабельную область (VH), также называемую вариабельным тяжелым доменом или вариабельным доменом тяжелой цепи, а затем три константных домена (CH1, CH2 и CH3). Аналогично, каждая легкая цепь от N-конца к C-концу содержит вариабельную область (VL), также называемую вариабельным легким доменом или вариабельным доменом легкой цепи, а затем константный легкий домен (CL). В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена легкую цепь антитела можно отнести к одному из двух типов, называемых каппа (κ) и лямбда (λ).
[0090] Термин ʺвкладыш в упаковкуʺ относится к инструкциям, в обычном порядке вкладываемым в упаковки терапевтических продуктов для продажи, содержащие информацию о показаниях, применении, дозах, введении, комбинированной терапии, противопоказаниях и/или предостережениях, касающихся применения таких терапевтических продуктов.
[0091] ʺПроцент (%) идентичности аминокислотной последовательностиʺ по отношению к последовательностям эталонных полипептидов определяют как процентное содержание аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, идентичных аминокислотным остаткам в последовательности эталонного полипептида после выравнивания последовательностей и, при необходимости, введения разрывов для достижения максимальной процентной идентичности последовательностей без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательностей. Выравнивание для целей определения процентной идентичности аминокислотных последовательностей можно осуществить различными способами, известными специалистам в данной области техники, например, используя общедоступное компьютерное программное обеспечение, например, программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут определить соответствующие параметры выравнивания последовательностей, включая алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. В то же время все используемые для целей настоящего документа процентные значения идентичности аминокислотных последовательностей получены с применением компьютерной программы для сравнения последовательностей ALIGN-2. Компьютерная программа для сравнения последовательностей ALIGN-2 разработана компанией Genentech, Inc., а исходный код представлен в документации пользователя в Бюро по охране авторских прав США, Вашингтон, округ Колумбия, 20559, где зарегистрирован под номером регистрации авторского права США TXU510087. Программа ALIGN-2 находится в свободном доступе в Genentech, Inc., Саут-Сан-Франциско, Калифорния, или может быть скомпилирована из исходного кода. Программу ALIGN-2 следует компилировать для применения в операционной системе UNIX, включая цифровую версию UNIX V4. 0D. Все параметры сравнения последовательностей устанавливаются программой ALIGN-2 и остаются неизменными.
[0092] В случаях, когда ALIGN-2 используют для сравнения аминокислотных последовательностей, % идентичности аминокислотной последовательности данной аминокислотной последовательности A с, по сравнению с или относительно данной аминокислотной последовательности B (что можно переформулировать так, что данная аминокислотная последовательность A характеризуется или включает определенный % идентичности аминокислотной последовательности с, по сравнению с или относительно данной аминокислотной последовательности B) рассчитывают следующим образом:
100-кратное отношение X/Y
где X обозначает количество аминокислотных остатков, считающихся идентичными совпадениями при выравнивании А и В с помощью программы выравнивания последовательностей ALIGN-2, и где Y обозначает общее количество аминокислотных остатков в В. Следует принимать во внимание, что если длина аминокислотной последовательности A не равна длине аминокислотной последовательности B, % идентичности аминокислотной последовательности A по отношению к B не равен % идентичности аминокислотной последовательности B по отношению к А. Если не указано иное, все используемые в настоящем документе процентные значения идентичности аминокислотных последовательностей получены, как описано непосредственно в предыдущем абзаце с применением компьютерной программы ALIGN-2.
[0093] Термин ʺфармацевтический составʺ относится к препарату, который находится в форме, обеспечивающей эффективную биологическую активность активного ингредиента, содержащегося в нем, и не содержит дополнительных компонентов, являющихся неприемлемо токсичными для субъекта, которому должен быть введен состав.
[0094] ʺФармацевтически приемлемый носительʺ относится к ингредиенту в фармацевтическом составе, отличающемуся от активного ингредиента и являющемуся нетоксичным для субъекта. Фармацевтически приемлемый носитель включает буфер, вспомогательное вещество, стабилизатор или консервант, но не ограничивается ими.
[0095] В данном контексте термин ʺтау-белокʺ относится к любому нативному тау-белку из любого источника, относящегося к позвоночным, включая млекопитающих, например, приматов (например, людей) и грызунов (например, мышей и крыс), если не указано иное. Этот термин включает ʺполноразмерныйʺ непроцессированный тау-белок, а также любую форму тау-белка, полученную в результате процессинга в клетке. Данный термин также охватывает естественные варианты тау-белка, например, сплайс-варианты или аллельные варианты.
[0096] Термин ʺpTauʺ, используемый в настоящем документе, относится к тау-белку, в котором остатки серина, треонина или тирозина фосфорилированы протеинкиназой путем добавления ковалентно связанной фосфатной группы. В некоторых вариантах реализации pTau фосфорилирован по остатку серина или треонина. В некоторых вариантах реализации pTau фосфорилирован по остатку серина в положении 409 и/или по остатку серина в положении 404. В некоторых вариантах реализации pTau фосфорилирован по остатку серина в положении 409.
[0097] Термин ʺрастворимый тау-белокʺ в настоящем документе относится к белкам, состоящим из обоих полностью растворенных мономеров тау-белка/пептида или тауподобных пептидов/белков, или модифицированных или укороченных тау-пептидов/белков или других производных мономеров тау-белка/пептида и олигомеров тау-белка. ʺРастворимый тау-белокʺ исключает, в частности, нейрофибриллярные клубки (NFT).
in vitro
in vivo
[0098] Термин ʺнерастворимый тау-белокʺ в настоящем документе относится к множественным агрегированным мономерам тау-пептида или белка, или тауподобных пептидов/белков, или модифицированных или укороченных тау-пептидов/белков, или других производных тау-пептидов/белков, образующих олигомерные или полимерные структуры, которые являются нерастворимыми как в водной среде, так и в организме млекопитающего или человека, особенно - в головном мозге, но, в частности, относится к множественным агрегированным мономерам тау-белка или модифицированных или укороченных тау-пептидов/белков или их производных, нерастворимых в организме млекопитающего или человека, особенно - в головном мозге, соответственно. ʺНерастворимый тау-белокʺ включает, в частности, нейрофибриллярные клубки (NFT).
[0099] Термин ʺмономерный тау-белокʺ или ʺмономер тау-белкаʺ в настоящем документе относится к полностью солюбилизированным тау-белкам, не содержащим агрегированных комплексов в водной среде.
in vitro
in vivo
[00100] Термины ʺагрегированный тау-белокʺ, ʺолигомерный тау-белокʺ и ʺолигомер тау-белкаʺ в настоящем документе относятся к множественным агрегированным мономерам тау-пептидов или белков, или тауподобных пептидов/белков, или модифицированных или укороченных тау-пептидов/белков, или других производных тау-пептидов/белков, образующих олигомерные или полимерные структуры, нерастворимые или растворимые как в водной среде, так и в организме млекопитающего или человека, особенно - в головном мозге, но, в частности, относятся к множественным агрегированным мономерам тау-белка или модифицированных или укороченных тау-пептидов/белков или их производных, нерастворимых или растворимых в организме млекопитающего или человека, особенно - головном мозге, соответственно.
[00101] Термины ʺPTau PHFʺ, ʺPHFʺ и ʺпарные спиральные филаментыʺ в настоящем описании используют как синонимы, и они относятся к парам филаментов, свитым в спирали с видимой при электронной микроскопии периодичностью, равной 160 нм. Ширина варьируется в диапазоне 10-22 нм. PHF представляют собой преобладающие структуры в нейрофибриллярных клубках при болезни Альцгеймера (БА) и нейропильных нитях. PHF также можно наблюдать в некоторых, но не всех дистрофических нейритах, связанных с нейритическими бляшками. Основным компонентом PHF является гиперфосфорилированная форма ассоциированного с микротрубочками тау-белка. PHF может частично состоять из антипараллельных гиперфосфорилированных тау-белков, связанных дисульфидными связями. Тау-белок PHF может быть укорочен по C-концу на 20 аминокислотных остатков. Механизмы, лежащие в основе образования PHF, неясны, однако гиперфосфорилирование тау-белка может отделять его от микротрубочек, увеличивая растворимый пул тау-белка, из которого внутри нейронов могут образовываться PHF.
[00102] В настоящем документе термин ʺлечениеʺ (и его грамматические варианты, такие как ʺлечитьʺ или ʺвоздействоватьʺ) относится к клиническому вмешательству в попытке изменить естественную динамику состояния индивидуума, подвергаемого лечению, и может применяться как для профилактики, так для воздействия на ход клинической патологии. Желательные эффекты лечения включают предотвращение возникновения или возобновления заболевания, облегчение симптомов, уменьшение прямых или косвенных патологических последствий заболевания, предотвращение метастазирования, снижение скорости прогрессирования заболевания, улучшение или временное облегчение патологического состояния, а также ремиссию или улучшение прогноза, но не ограничиваются ими. В некоторых вариантах реализации антитела согласно настоящему изобретению применяют для задержки развития заболевания или замедления прогрессирования заболевания.
[00103] Термин ʺранняя болезнь Альцгеймераʺ или ʺранняя БАʺ в контексте настоящего документа (например, ʺпациент с диагнозом ранней БАʺ или ʺпациент, страдающий ранней БАʺ) включает пациентов с легким когнитивным нарушением, например, дефицитом памяти из-за БА, и пациентов с наличием биомаркеров БА, например, амилоид-положительных пациентов.
[00104] Термин ʺболезнь Альцгеймера легкой степени тяжестиʺ или ʺБА легкой степени тяжестиʺ в настоящем документе (например, ʺпациент с диагнозом БА легкой степени тяжестиʺ) относится к стадии БА, характеризующейся оценкой от 20 до 26 баллов по шкале MMSE.
[00105] Термин ʺболезнь Альцгеймера легкой или умеренной степени тяжестиʺ или ʺБА легкой или умеренной степени тяжестиʺ в настоящем документе относится как к легкой, так и к умеренной БА, и характеризуется оценкой от 18 до 26 баллов по шкале MMSE.
[00106] Термин ʺболезнь Альцгеймера умеренной степени тяжестиʺ или ʺБА умеренной степени тяжестиʺ в контексте настоящего документа (например, ʺпациент с диагнозом БА умеренной степени тяжестиʺ) относится к стадии БА, которая характеризуется оценкой от 18 до 19 баллов по шкале MMSE.
[00107] Термин ʺMMSEʺ относится к краткой шкале оценки психического статуса, обеспечивающей оценку в диапазоне от 1 до 30 баллов. См. Folstein, et al., 1975, J. Psychiatr. Res. 12:189-98. Оценки 26 баллов и ниже, как правило, считаются признаком дефицита. Чем ниже балльная оценка по шкале MMSE, тем больше у обследованного пациента выражен дефицит или ухудшение по сравнению с другим индивидом с более низкой оценкой. Увеличение оценки по шкале MMSE свидетельствует об улучшении состояния пациента, в то время как снижение оценки по шкале MMSE может означать ухудшение состояния пациента.
[00108] В настоящем документе термин ʺвекторʺ относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной обеспечивать репродукцию другой, связанной с ней нуклеиновой кислоты. Указанный термин включает вектор, находящийся в виде самореплицирующейся нуклеиновой кислоты, а также вектор, способный внедряться в геном клетки-хозяина, в которую его вводят. Некоторые векторы способны управлять экспрессией нуклеиновых кислот, с которыми они функционально связаны. Такие векторы в настоящем документе называют ʺэкспрессионными векторамиʺ.
II. КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ
[00109] В настоящем изобретении предложены антитела, связывающие тау-белок. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению, связывающее тау-белок, связывает мономерный тау-белок, олигомерный тау-белок, нефосфорилированный тау-белок и фосфорилированный тау-белок. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывается с эпитопом в пределах аминокислот 2-24 зрелого тау-белка человека. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывается с эпитопом в пределах аминокислот 2-24 тау-белка и связывает мономерный тау-белок, олигомерный тау-белок, нефосфорилированный тау-белок и фосфорилированный тау-белок. В некоторых вариантах реализации антитело связывает эпитоп тау-белка человека, содержащий или состоящий из последовательности AEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRK (SEQ ID NO:2). В некоторых вариантах реализации антитело связывает эпитоп тау-белка яванского макака, содержащий или состоящий из последовательности AEPRQEFDVMEDHAGTYGLGDRK (SEQ ID NO:4). В некоторых вариантах реализации антитело связывает эпитоп тау-белка человека, содержащий или состоящий из последовательности AEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRK (SEQ ID NO:2) и эпитоп тау-белка яванского макака, содержащий или состоящий из последовательности AEPRQEFDVMEDHAGTYGLGDRK (SEQ ID NO:4). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывается с эпитопом в пределах 19-33, 19-42, 37-51, 100-114, 118-132 или 172-177 аминокислот зрелого тау-белка человека. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывается с эпитопом в пределах 19-33, 19-42, 37-51, 100-114, 118-132 или 172-177 аминокислот тау-белка и связывает мономерный тау-белок, олигомерный тау-белок, нефосфорилированный тау-белок и фосфорилированный тау-белок.
[00110] Антитела согласно настоящему изобретению можно использовать, например, для диагностики или лечения нейродегенеративных заболеваний.
A. Примеры антител против тау-белка
[00111] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:12, 22, 282, 292 и 342; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:13, 23, 283, 293 и 343; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:14, 24, 284, 294 и 344; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:15, 25, 285, 295, 345 и 468-556; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:16, 26, 286, 296 и 346; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:17, 27, 287, 297 и 347.
[00112] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:342; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:343; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:344; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:345; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:346; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:347.
[00113] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:72 и 302; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:73 и 303; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:74 и 304; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:75 и 305; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:76 и 306; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:77 и 307.
[00114] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:82, 312, 322 и 332; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:83, 313, 323 и 333; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:84, 314, 324 и 334; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:85, 315, 325 и 335; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:86, 316, 326 и 336; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:87, 317, 327 и 337.
[00115] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:32; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:33; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:34; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:35; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:37.
[00116] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:42; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:43; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:44; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:45; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:47.
[00117] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:52; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:53; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:54; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:55; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:56; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:57.
[00118] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:62; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:63; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:64; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:65; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:66; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:67.
[00119] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:72; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:73; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:74; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:75; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:76; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:77.
[00120] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:82; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:83; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:84; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:85; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:86; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:87.
[00121] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:92; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:93; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:95; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:96; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97.
[00122] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:102; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:103; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:104; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:105; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:106; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:107.
[00123] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:112; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:113; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:114; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:115; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:116; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:117.
[00124] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:122; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:124; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:125; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:126; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:127.
[00125] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:132; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:133; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:134; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:135; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:136; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:137.
[00126] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:142; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:143; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:144; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:145; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:146; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:147.
[00127] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:152; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:153; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:154; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:155; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:156; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:157.
[00128] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:165; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:167.
[00129] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:172; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:173; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:174; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:175; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:176; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:177.
[00130] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:185; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:186; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:187.
[00131] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:192; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:193; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:194; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:195; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:196; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:197.
[00132] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:202; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:203; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:204; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:205; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:206; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:207.
[00133] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:212; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:213; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:214; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:215; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:216; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:217.
[00134] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:222; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:223; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:224; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:225; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:226; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:227.
[00135] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:232; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:233; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:234; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:235; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:236; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:237.
[00136] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:242; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:243; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:244; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:245; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:246; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:247.
[00137] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:253; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:254; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:255; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:256; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:257.
[00138] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:265; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267.
[00139] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:272; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:273; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:274; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:275; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:277.
[00140] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:282; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:283; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:284; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:285; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:286; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:287.
[00141] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:292; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:293; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:294; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:295; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:296; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:297.
[00142] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:302; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:303; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:304; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:305; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:306; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:307.
[00143] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:312; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:313; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:314; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:315; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:316; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:317.
[00144] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:322; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:323; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:324; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:325; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:326; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:327.
[00145] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:332; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:333; (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:334; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:335; (e) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:336; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:337.
[00146] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:12, 22, 282, 292 и 342; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:13, 23, 283, 293 и 343; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:14, 24, 284, 294 и 344. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:12, 22, 282, 292 и 342; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:13, 23, 283, 293 и 343; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:14, 24, 284, 294 и 344.
[00147] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:342; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:343; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:344. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:342; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:343; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:344.
[00148] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:72 и 302; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:73 и 303; и(c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:74 и 304. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:72 и 302; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:73 и 303; и(c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:74 и 304.
[00149] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:82, 312, 322 и 332; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:83, 313, 323 и 333; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:84, 314, 324 и 334. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:82, 312, 322 и 332; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:83, 313, 323 и 333; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:84, 314, 324 и 334.
[00150] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:32; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:33; и(c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:34. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:32; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:33; и(c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:34.
[00151] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:42; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:43; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:44. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:42; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:43; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:44.
[00152] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:52; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:53; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:54. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:52; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:53; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:54.
[00153] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:62; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:63; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:64. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:62; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:63; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:64.
[00154] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:72; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:73; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:74. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:72; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:73; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:74.
[00155] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:82; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:83; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:84. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:82; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:83; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:84.
[00156] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:92; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:93; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:92; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:93; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94.
[00157] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:102; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:103; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:104. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:102; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:103; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:104.
[00158] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:112; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:113; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:114. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:112; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:113; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:114.
[00159] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:122; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:124. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:122; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:124.
[00160] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:132; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:133; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:134. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:132; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:133; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:134.
[00161] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:142; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:143; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:144. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:142; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:143; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:144.
[00162] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:152; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:153; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:154. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:152; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:153; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:154.
[00163] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164.
[00164] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:172; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:173; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:174. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:172; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:173; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:174.
[00165] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184.
[00166] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:192; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:193; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:194. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:192; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:193; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:194.
[00167] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:202; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:203; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:204. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:202; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:203; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:204.
[00168] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:212; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:213; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:214. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:212; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:213; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:214.
[00169] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:222; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:223; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:224. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:222; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:223; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:224.
[00170] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:232; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:233; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:234. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:232; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:233; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:234.
[00171] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:242; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:243; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:244. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:242; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:243; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:244.
[00172] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:253; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:254. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:253; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:254.
[00173] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264.
[00174] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:272; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:273; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:274. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:272; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:273; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:274.
[00175] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:282; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:283; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:284. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:282; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:283; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:284.
[00176] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:292; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:293; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:294. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:292; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:293; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:294.
[00177] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:302; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:303; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:304. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:302; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:303; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:304.
[00178] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:312; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:313; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:314. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:312; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:313; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:314.
[00179] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:322; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:323; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:324. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:322; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:323; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:324.
[00180] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:332; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:333; и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:334. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:332; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:333; и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:334.
[00181] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:15, 25, 285, 295, 345 и 468-556; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:16, 26, 286, 296 и 346; и (с) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:17, 27, 287, 297 и 347. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:15, 25, 285, 295, 345 и 468-556; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:16, 26, 286, 296 и 346; и (с) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:17, 27, 287, 297 и 347.
[00182] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:345; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:346; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:347. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:345; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:346; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:347.
[00183] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:75 и 305; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:76 и 306; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:77 и 307. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:75 и 305; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:76 и 306; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:77 и 307.
[00184] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:85, 315, 325 и 335; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:86, 316, 326 и 336; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:87, 317, 327 и 337. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:85, 315, 325 и 335; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:86, 316, 326 и 336; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:87, 317, 327 и 337.
[00185] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:35; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:37. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:35; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:37.
[00186] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:45; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:47. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:45; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:47.
[00187] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:55; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:56; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:57. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:55; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:56; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:57.
[00188] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:65; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:66; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:67. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:65; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:66; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:67.
[00189] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:75; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:76; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:77. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:75; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:76; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:77.
[00190] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:85; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:86; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:87. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:85; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:86; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:87.
[00191] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:95; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:96; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:95; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:96; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97.
[00192] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:105; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:106; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:107. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:105; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:106; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:107.
[00193] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:115; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:116; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:117. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:115; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:116; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:117.
[00194] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:125; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:126; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:127. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:125; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:126; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:127.
[00195] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:135; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:136; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:137. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:135; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:136; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:137.
[00196] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:145; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:146; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:147. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:145; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:146; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:147.
[00197] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:155; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:156; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:157. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:155; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:156; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:157.
[00198] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:165; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:167. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:165; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:167.
[00199] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:175; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:176; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:177. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:175; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:176; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:177.
[00200] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:185; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:186; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:187. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:185; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:186; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:187.
[00201] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:195; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:196; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:197. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:195; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:196; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:197.
[00202] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:205; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:206; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:207. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:205; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:206; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:207.
[00203] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:215; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:216; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:217. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:215; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:216; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:217.
[00204] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:225; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:226; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:227. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:225; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:226; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:227.
[00205] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:235; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:236; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:237. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:235; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:236; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:237.
[00206] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:245; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:246; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:247. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:245; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:246; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:247.
[00207] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:255; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:256; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:257. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:255; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:256; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:257.
[00208] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:265; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:265; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267.
[00209] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:275; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:277. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:275; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:277.
[00210] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:285; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:286; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:287. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:285; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:286; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:287.
[00211] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:295; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:296; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:297. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:295; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:296; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:297.
[00212] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:305; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:306; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:307. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:305; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:306; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:307.
[00213] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:315; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:316; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:317. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:315; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:316; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:317.
[00214] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:325; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:326; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:327. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:325; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:326; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:327.
[00215] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит по меньшей мере одну, две или три HVR, выбранных из (а) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:335; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:336; и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:337. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:335; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:336; и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:337.
[00216] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:12, 22, 282, 292 и 342; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:13, 23, 283, 293 и 343; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:14, 24, 284, 294 и 344; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:15, 25, 285, 295, 345 и 468-556; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:16, 26, 286, 296 и 346; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:17, 27, 287, 297 и 347.
[00217] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:342; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:343; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:344; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:345; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:346; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:347.
[00218] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:72 и 302; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:73 и 303; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:74 и 304; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:75 и 305; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:76 и 306; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:77 и 307.
[00219] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:82, 312, 322 и 332; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:83, 313, 323 и 333; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:84, 314, 324 и 334; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:85, 315, 325 и 335; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:86, 316, 326 и 336; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:87, 317, 327 и 337.
[00220] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:32; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:33; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:34; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:35; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:37.
[00221] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:42; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:43; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:44; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:45; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:46; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:47.
[00222] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:52; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:53; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:54; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:55; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:56; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:57.
[00223] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:62; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:63; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:64; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:65; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:66; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:67.
[00224] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:72; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:73; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:74; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:75; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:76; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:77.
[00225] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:82; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:83; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:84; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:85; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:86; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:87.
[00226] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:92; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:93; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:95; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:96; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97.
[00227] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:102; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:103; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:104; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:105; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:106; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:107.
[00228] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:112; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:113; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:114; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:115; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:116; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:117.
[00229] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:122; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:124; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:125; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:126; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:127.
[00230] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:132; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:133; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:134; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:135; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:136; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:137.
[00231] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:142; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:143; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:144; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:145; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:146; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:147.
[00232] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:152; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:153; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:154; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:155; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:156; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:157.
[00233] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:165; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:167.
[00234] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:172; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:173; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:174; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:175; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:176; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:177.
[00235] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:182; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:183; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:184; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:185; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:186; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:187.
[00236] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:192; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:193; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:194; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:195; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:196; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:197.
[00237] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:202; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:203; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:204; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:205; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:206; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:207.
[00238] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:212; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:213; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:214; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:215; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:216; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:217.
[00239] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:222; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:223; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:224; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:225; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:226; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:227.
[00240] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:232; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:233; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:234; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:235; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:236; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:237.
[00241] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:242; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:243; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:244; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:245; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:246; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:247.
[00242] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:253; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:254; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:255; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:256; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:257.
[00243] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:265; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267.
[00244] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:272; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:273; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:274; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:275; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:277.
[00245] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:282; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:283; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:284; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:285; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:286; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:287.
[00246] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:292; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:293; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:294; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:295; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:296; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:297.
[00247] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:302; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:303; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:304; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:305; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:306; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:307.
[00248] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:312; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:313; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:314; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:315; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:316; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:317.
[00249] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:322; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:323; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:324; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:325; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:326; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:327.
[00250] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит (а) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:332; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:333; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:334; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:335; (e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:336; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:337.
[00251] В любом из вышеуказанных вариантов реализации антитело против тау-белка является гуманизированным. В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка содержит HVR согласно любому из вышеуказанных вариантов реализации и дополнительно содержит акцепторный каркас человека, например, каркас иммуноглобулина человека или консенсусный каркас человека.
[00252] В еще одном аспекте антитело против тау-белка содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), обладающую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO:10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330 или 340. В некоторых вариантах реализации VH-последовательность, обладающая по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью, содержит замены (например, консервативные замены), инсерции или делеции по сравнению с эталонной последовательностью, однако антитело против тау-белка, содержащее указанную последовательность, сохраняет способность связываться с тау-белком. В некоторых вариантах реализации заменены, вставлены и/или удалены в общей сложности от 1 до 10 аминокислот из SEQ ID NO:10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330 или 340. В некоторых вариантах реализации изобретения замены, инсерции или делеции присутствуют в областях, расположенных вне HVR (т.е. в FR). Антитело против тау-белка необязательно содержит последовательность VH из SEQ ID NO:10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330 или 340, в том числе посттрансляционные модификации указанной последовательности. В конкретном варианте реализации изобретения VH содержит одну, две или три HVR, выбранные из:(a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12, 22, 32, 42, 52, 62, 72, 82, 92, 102, 112, 122, 132, 142, 152, 162, 172, 182, 192, 202, 212, 222, 232, 242, 252, 262, 272, 282, 292, 302, 312, 322, 332 или 342, (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 100, 113, 123, 133, 143, 153, 163, 173, 183, 193, 203, 213, 223, 233, 243, 253, 263, 273, 283, 293, 303, 313, 323, 333 или 343, и (c) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14, 24, 34, 44, 54, 64, 74, 84, 94, 104, 114, 124, 134, 144, 154, 164, 174, 184, 194, 204, 214, 224, 234, 244, 254, 264, 274, 284, 294, 304, 314, 324, 334 или 344.
[00253] В еще одном аспекте антитело против тау-белка содержит последовательность вариабельного домена легкой цепи (VL), обладающую по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности по отношению к аминокислотной последовательности SEQ ID NO:11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121, 131, 141, 151, 161, 171, 181, 191, 201, 211, 221, 231, 241, 251, 261, 271, 281, 291, 301, 311, 321, 331 или 341. В некоторых вариантах реализации VL-последовательность, обладающая по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью, содержит замены (например, консервативные замены), инсерции или делеции по сравнению с эталонной последовательностью, однако антитело против тау-белка, содержащее указанную последовательность, сохраняет способность связываться с тау-белком. В некоторых вариантах реализации заменены, вставлены и/или удалены в общей сложности от 1 до 10 аминокислот из SEQ ID NO:11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121, 131, 141, 151, 161, 171, 181, 191, 201, 211, 221, 231, 241, 251, 261, 271, 281, 291, 301, 311, 321, 331 или 341. В некоторых вариантах реализации изобретения замены, инсерции или делеции присутствуют в областях, расположенных вне HVR (т.е. в FR). Антитело против тау-белка необязательно содержит последовательность VL из SEQ ID NO:11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121, 131, 141, 151, 161, 171, 181, 191, 201, 211, 221, 231, 241, 251, 261, 271, 281, 291, 301, 311, 321, 331 или 341, в том числе посттрансляционные модификации указанной последовательности. В конкретном варианте реализации изобретения VL содержит одну, две или три HVR, выбранные из:(a) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:15, 25, 35, 45, 55, 65, 75, 85, 95, 105, 115, 125, 135, 145, 155, 165, 175, 185, 195, 205, 215, 225, 235, 245, 255, 265, 275, 285, 295, 305, 315, 325, 335 или 345, (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 216, 226, 236, 246, 266, 266, 276, 286, 296, 306, 316, 326, 336 или 346, и (c) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207, 217, 227, 237, 247, 267, 277, 277, 287, 297, 307, 317, 327, 337 или 347.
[00254] В еще одном аспекте предложено антитело против тау-белка, содержащее VH согласно любому из вышеприведенных вариантов реализации и VL согласно любому из вышеприведенных вариантов реализации. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH- и VL-последовательности в SEQ ID NO:280 и SEQ ID NO:281, соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH- и VL-последовательности в SEQ ID NO:290 и SEQ ID NO:291, соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH- и VL-последовательности в SEQ ID NO:300 и SEQ ID NO:301, соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH- и VL-последовательности в SEQ ID NO:310 и SEQ ID NO:311, соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH- и VL-последовательности в SEQ ID NO:320 и SEQ ID NO:321, соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH- и VL-последовательности в SEQ ID NO:330 и SEQ ID NO:331, соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH- и VL-последовательности в SEQ ID NO:340 и SEQ ID NO:341, соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей.
[00255] В некоторых вариантах реализации предложено антитело против тау-белка, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:348 или SEQ ID NO:602, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:349. В некоторых вариантах реализации предложено антитело против тау-белка, причем указанное антитело состоит из тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO:348 или SEQ ID NO:602, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:349.
[00256] В дополнительном аспекте настоящего изобретения предложено антитело, связывающееся с тем же эпитопом, что и антитело против тау-белка, предложенное в настоящем документе. Например, в некоторых вариантах реализации предллжено антитело, связывающееся с тем же эпитопом, что и антитело, выбранное из 94B2-C1, 125B11-H3, 37D3-H9 и hu37D3-H9.v28.A4. В некоторых вариантах реализации предложено антитело, связывающееся с эпитопом в пределах фрагмента тау-белка, состоящего из аминокислот 2-24 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах реализации предложено антитело, связывающееся с эпитопом в пределах фрагмента тау-белка, состоящего из аминокислот 7-24 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах реализации предложено антитело, связывающееся с эпитопом в пределах фрагмента тау-белка, состоящего из аминокислот 7-20 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах реализации предложено антитело, связывающееся с эпитопом в пределах фрагмента тау-белка, состоящего из аминокислот 10-24 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах реализации предложено антитело, связывающееся с эпитопом в пределах фрагмента тау-белка, состоящего из аминокислот 7-21 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах реализации предложено антитело, связывающееся с эпитопом в пределах фрагмента тау-белка, состоящего из аминокислот 8-22 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах реализации предложено антитело, связывающееся с эпитопом в пределах фрагмента тау-белка, состоящего из аминокислот 11-25 SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах реализации предложено антитело, связывающееся с одним или более или всеми из следующих фрагментов тау-белка:2-24, 7-24, 7-20, 10-24, 7-21, 8-22 и 11-25. В некоторых вариантах реализации предложено антитело, связывающееся с пептидом, содержащим последовательность SEQ ID NO:593, однако не связывающееся с пептидом, содержащим последовательность SEQ ID NO:596 или SEQ ID NO:597.
2
[00257] В дополнительном аспекте настоящего изобретения антитело против тау-белка согласно любому из вышеупомянутых вариантов реализации является моноклональным антителом, включая химерное, гуманизированное антитело или антитело человека. В одном варианте реализации антитело против тау-белка представляет собой фрагмент антитела, например, Fv, Fab, Fab', scFv, диатело или F(ab') -фрагмент. В еще одном варианте реализации антитело представляет собой полноразмерное антитело, например, интактное антитело IgG1 или IgG4, или антитело, относящееся к другому классу или изотипу, как определено в настоящем документе.
[00258] В дополнительном аспекте антитело против тау-белка согласно любому из вышеупомянутых вариантов реализации может обладать любой из характеристик по отдельности или в комбинации, как описано в разделах 1-7 ниже.
1. Сродство антитела
D
-8
-8
-13
-9
-13
[00259] В некоторых вариантах реализации антитело, предложенное в настоящем документе, обладает константой диссоциации (K), составляющей ≤ 1 мкМ, ≤ 100 нМ, ≤ 10 нМ, ≤ 1 нМ, ≤ 0,1 нМ, ≤ 0,01 нМ или ≤ 0,001 нМ (например, 10M или менее, например, от 10M до 10M, например, от 10M до 10 M).
D
125

125

TM
TM
J. Mol. Biol.
Res
[00260] В некоторых вариантах реализации K измеряют с помощью анализа связывания антигена, меченного радиоактивной меткой (РИА). В некоторых вариантах реализации РИА выполняют с использованием Fab-версии исследуемого антитела и его антигена. Сродство связывания Fab с антигеном в растворе измеряют путем уравновешивания Fab с минимальной концентрацией (I)-меченого антигена в присутствии серии разведений немеченого антигена, с последующим захватом связанного антигена с помощью планшета с иммобилизованным антителом против Fab (см., например, Chen et al., 293:865-881(1999)). Для определения условий анализа многолуночные планшеты MICROTITER (Thermo Scientific) покрывали в течение ночи 5 мкг/мл антитела для захвата Fab (Cappel Labs) в 50 мМ растворе карбоната натрия (pH 9,6), а затем блокировали 2% (масс/об) раствором бычьего сывороточного альбумина в PBS в течение двух - пяти часов при комнатной температуре (приблизительно 23°C). В неадсорбирующем планшете (Nunc #269620) смешивали 100 пМ или 26 пМ [I]-антигена с последовательно разбавленными растворами исследуемых Fab (например, в соответствии с оценкой антител Fab-12 против ФРЭС в работе Presta et al., Cancer . 57:4593-4599 (1997)). Затем исследуемый Fab инкубировали в течение ночи; в то же время инкубирование могло продолжаться в течение более длительного периода (например, приблизительно 65 часов) для гарантии достижения равновесия. Затем смесь переносили на планшет для захвата и инкубировали при комнатной температуре (например, в течение часа). Затем удаляли раствор и восемь раз промывали планшет 0,1% полисорбатом-20 (TWEEN-20) в PBS. После высушивания планшетов добавляли 150 мкл сцинтиллятора (MICROSCINT-20; Packard) на лунку и производили подсчет планшетов на гамма-счетчике TOPCOUNT (Packard) в течение десяти минут. Концентрации каждого Fab, обеспечивавшие связывание, меньшее или равное 20% от максимального, отбирают для применения в конкурентном анализе связывания.
D
on
off
D
off
on.

TM

6
-1
-1
o
TM
N
N'-(
N
J. Mol. Biol.
[00261] В соответствии с еще одним вариантом реализации, K измеряют с использованием анализа BIACORE на основе поверхностного плазмонного резонанса. Например, анализ с использованием BIACORE-2000 или BIACORE-3000 (BIAcore, Inc., Пискатауэй, штат Нью-Джерси, США) выполняют при 25°C с чипами CM5 с иммобилизованным антигеном при ~10 резонансных единицах (РУ). В некоторых вариантах реализации биосенсорные чипы на основе карбоксиметилированного декстрана (CM5, BIAcore, Inc.) активируют гидрохлоридом -этил-3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) и -гидроксисукцинимидом (NHS) согласно инструкциям поставщика. Антиген разбавляют 10 мМ раствором ацетата натрия, pH 4,8, до 5 мкг/мл (~0,2 мкМ) и вводят при скорости потока 5 мкл/минуту, до достижения приблизительно 10 резонансных единиц (РУ) связанного белка. После введения антигена вводят 1 М раствор этаноламина для блокирования непрореагировавших групп. Для измерений кинетики двукратные серийные разведения Fab (от 0,78 нМ до 500 нМ) вводят в PBS с 0,05% поверхностно-активным веществом полисорбатом-20 (TWEEN-20) (PBST) при 25°С при скорости потока приблизительно 25 мкл/мин. Скорости ассоциации (k) и диссоциации (k) рассчитывали с помощью простейшей модели связывания Ленгмюра при соотношении один к одному (программное обеспечение BIACORE  Evaluation Software версии 3.2) путем одновременной аппроксимации сенсограмм ассоциации и диссоциации. Равновесную константу диссоциации (K) вычисляют как отношение k/k См., например, Chen et al., 293:865-881 (1999). Если скорость ассоциации согласно вышеописанному анализу поверхностного плазмонного резонанса превышает 10 M с, то ее можно определить с помощью методики гашения флуоресценции, измеряющей увеличение или снижение интенсивности испускания флуоресценции (возбуждение=295 нм; испускание=340 нм, полоса пропускания 16 нм) при 25C для 20 нМ раствора антител против антигена (в форме Fab) в PBS, pH 7,2, в присутствии возрастающих концентраций антигена, измеренных на спектрометре, например, на спектрофотометре с устройством остановки потока (Aviv Instruments) или спектрофотометре SLM-AMINCO 8000 серии (ThermoSpectronic) с перемешиваемой кюветой.
2. Фрагменты антител
2
2
Nat. Med.
The Pharmacology of Monoclonal Antibodies
in vivo
[00262] В некоторых вариантах реализации изобретения антитело, предложенное в настоящем документе, представляет собой фрагмент антитела. Фрагменты антитела включают Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab'), Fv и scFv-фрагменты и другие фрагменты, описанные ниже, но не ограничиваются ими. Обзор некоторых фрагментов антител см. в статье Hudson et al. 9:129-134 (2003). Обзор фрагментов scFv см., например, в работе Pluckthün, in , vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); см. также WO 93/16185; и патенты США № 5571894 и 5587458. Обсуждение Fab и F(ab')-фрагментов, содержащих остатки эпитопа связывания рецептора реутилизации и обладающих увеличенным периодом полужизни , см. в патенте США № 5869046.
Nat. Med.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
. Med
[00263] Диатела представляют собой фрагменты антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, которые могут быть двухвалентными или биспецифическими. См., например, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al., 9:129-134 (2003); и Hollinger et al., 90:6444-6448 (1993). Триатела и тетратела также описаны в публикации Hudson et al., Nat. 9:129-134 (2003).
см.,
[00264] Однодоменные антитела представляют собой фрагменты антител, полностью или частично содержащие вариабельный домен тяжелой цепи или полностью или частично содержащие вариабельный домен легкой цепи антитела. В некоторых вариантах реализации однодоменное антитело представляет собой однодоменное антитело человека (Domantis, Inc., Уолтем, штат Массачусетс, США; например, патент США № 6248516 B1).
E. coli
[00265] Фрагменты антител можно получить различными способами, включая протеолитический гидролиз интактного антитела, а также продукцию рекомбинантными клетками-хозяевами (например, или фагом), как описано в настоящем документе, но не ограничиваясь ими.
3. Химерные и гуманизированные антитела
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
[00266] В некоторых вариантах реализации антитело, предложенное в настоящем документе, представляет собой химерное антитело. Некоторые химерные антитела описаны, например, в патенте США № 4816567; и Morrison et al., , 81:6851-6855 (1984)). В одном примере химерное антитело содержит вариабельную область нечеловеческого происхождения (например, вариабельную область, происходящую от антитела мыши, крысы, хомяка, кролика или примата, не являющегося человеком, например, обезьяны) и константную область человека. В еще одном примере химерное антитело представляет собой антитело с ʺпереключенным классомʺ, в котором изменен класс или подкласс по сравнению с родительским антителом. Термин ʺхимерные антителаʺ включает антигенсвязывающие фрагменты таких антител.
[00267] В некоторых вариантах реализации химерное антитело является гуманизированным антителом. Как правило, антитело нечеловеческого происхождения гуманизируют с целью снижения иммуногенности для человека, сохраняя при этом специфичность и сродство исходного антитела нечеловеческого происхождения. Как правило, гуманизированное антитело содержит один или более вариабельных доменов, в которых HVR, например, CDR (или их фрагменты) происходят от антитела нечеловеческого происхождения, а FR (или их фрагменты) происходят от последовательностей антитела человека. В некоторых случаях гуманизированное антитело также может содержать по меньшей мере фрагмент константной области антитела человека. В некоторых вариантах реализации некоторые FR-остатки в гуманизированном антителе заменяют соответствующими остатками антитела нечеловеческого происхождения (например, антитела, из которого получены остатки HVR), например, с целью восстановления или улучшения специфичности или сродства антитела.
Front. Biosci.
et al., Nature
. Nat'l Acad. Sci. USA
et al
Methods
Mol. Immunol
Methods
Methods
Br. J. Cancer
[00268] Гуманизированные антитела и способы их изготовления рассмотрены, например, в публикации Almagro and Fransson, 13:1619-1633 (2008), и дополнительно описаны, например, в статьях Riechmann 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc86:10029-10033 (1989); патентах США № 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321 и 7,087,409; Kashmiri ., 36:25-34 (2005) (где описана пересадка областей, определяющих специфичность (SDR)); Padlan, . 28:489-498 (1991) (где описано ʺизменение поверхностиʺ); Dall'Acqua et al., 36:43-60 (2005) (где описана ʺперетасовка FRʺ); и Osbourn et al., 36:61-68 (2005) и Klimka et al., , 83:252-260 (2000) (где описан подход ʺнаправленного отбораʺ к перетасовке FR).
J. Immunol.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
J. Immunol.,
Front. Biosci.
J. Biol. Chem.
J. Biol. Chem.
[00269] Каркасные области человека, которые можно использовать для гуманизации, включают: каркасные области, выбранные с помощью методики ʺнаилучшего соответствияʺ (см., например, Sims et al. 151:2296 (1993)); каркасные области, происходящие от консенсусной последовательности антител человека конкретной подгруппы вариабельных областей легкой или тяжелой цепи (см., например, Carter et al. , 89:4285 (1992); и Presta et al. 151:2623 (1993)); зрелые (содержащие соматические мутации) каркасные области человека или эмбриональные каркасные области человека (см., например, Almagro and Fransson, 13:1619-1633 (2008)); и каркасные области, полученные при скрининге библиотек FR (см., например, Baca et al., 272:10678-10684 (1997) и Rosok et al., 271:22611-22618 (1996)), но не ограничиваются ими.
4. Антитела человека
Curr. Opin. Pharmacol
Curr. Opin. Immunol
[00270] В некоторых вариантах реализации изобретения антитело, предлагаемое в настоящем документе, представляет собой антитело человека. Антитела человека можно получить, используя различные методики, известные в данной области техники. Антитела человека в общих чертах описаны в статьях van Dijk and van de Winkel, . 5:368-74 (2001) и Lonberg, . 20:450-459 (2008).
Nat. Biotech
TM

[00271] Антитела человека можно получить путем введения иммуногена трансгенному животному, модифицированному с целью продукции интактных человеческих антител или интактных антител с человеческими вариабельными областями в ответ на антигенную стимуляцию. Такие животные, как правило, целиком или частично содержат локусы иммуноглобулинов человека, замещающие эндогенные локусы иммуноглобулинов или локализованные вне хромосом или случайным образом интегрированные в хромосомы животного. Как правило, у таких трансгенных мышей инактивированы эндогенные локусы иммуноглобулинов. Обзор способов получения антител человека из трансгенных животных см. в Lonberg, . 23:1117-1125 (2005). Кроме того, см., например, патент США № 6075181 и 6150584, в которых описана технология XENOMOUSE; патенте США № 5770429, в котором описана технология HuMab; патенте США № 7041870, в котором описана технология K-M MOUSE, и публикации заявки на патент США № US 2007/0061900, в которой описана технология VelociMouse). Вариабельные области человека из интактных антител, генерируемых такими животными, можно дополнительно модифицировать, например, путем объединения с другой константной областью человека.
J. Immunol.,
Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications
J. Immunol
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Xiandai Mianyixue
Histology and Histopathology
Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology
[00272] Антитела человека можно получить с помощью способов на основе гибридом. Описаны линии клеток миеломы человека и гетеромиеломы мыши-человека для продукции моноклональных антител человека. (См., например, Kozbor 133:3001 (1984); Brodeur et al., , pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); и Boerner et al., ., 147:86 (1991).) Антитела человека, полученные посредством технологии на основе B-клеточной гибридомы человека, также описаны в Li et al., , 103:3557-3562 (2006). Дополнительные способы включают, например, способы, описанные в патенте США № 7189826 (где описана продукция моноклональных IgM-антител человека гибридомной клеточной линией) и статье Ni, , 26(4):265-268 (2006) (где описаны гибридомы человека-человека). Технология на основе гибридомы человека (Trioma technology) также описана в статьях Vollmers and Brandlein, , 20(3):927-937 (2005) и Vollmers and Brandlein, , 27(3):185-91 (2005).
[00273] Антитела человека также можно получить путем выделения Fv-клона последовательностей вариабельного домена, выбранных из библиотек фагового дисплея человеческого происхождения. Такие последовательности вариабельного домена затем можно объединять с желательными константными доменами человека. Методики отбора антител человека из библиотек антител описаны ниже.
5. Антитела, полученные из библиотек
Methods in Molecular Biology
J. Mol. Biol
Methods in Molecular Biology
J. Mol. Biol
J. Mol. Biol.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
J. Immunol. Methods
[00274] Антитела согласно настоящему изобретению можно выделить путем скрининга комбинаторных библиотек на предмет антител с желательной активностью или активностями. Например, в данной области техники известны различные способы получения библиотек фагового дисплея и скрининг таких библиотек на предмет антител, обладающих желательными характеристиками связывания. Такие способы рассмотрены, например, в публикации Hoogenboom et al. in 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) и дополнительно описаны, например, в статьях McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991); Marks et al., . 222:581-597 (1992); Marks and Bradbury, in 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., . 338(2):299-310 (2004); Lee et al., 340(5):1073-1093 (2004); Fellouse, 101(34):12467-12472 (2004); и Lee et al., 284(1-2):119-132 (2004).
Ann. Rev. Immunol.,
J,
in vitro
J. Mol. Biol
[00275] В некоторых способах на основе фагового дисплея репертуары VH- и VL-генов по отдельности клонируют посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) и случайным образом рекомбинируют в фаговых библиотеках, которые затем можно подвергать скринингу на предмет антиген-связывающего фага, как описано в статье Winter et al., 12:433-455 (1994). Фаг обычно отображает фрагменты антитела в виде одноцепочечных Fv-фрагментов (scFv) или Fab-фрагментов. Библиотеки из иммунизированных источников позволяют получить антитела с высоким сродством к иммуногену без необходимости конструирования гибридом. В качестве альтернативы, можно клонировать наивный репертуар (например, человека) для получения единого источника антител к широкому спектру чужеродных антигенов и аутоантигенов без иммунизации, как описано в статье Griffiths et al., EMBO 12:725-734 (1993). Наконец, наивные библиотеки можно также получить путем синтеза, клонируя сегменты V-генов стволовых клеток, не подвергавшиеся реаранжировке, и используя ПЦР-праймеры, содержащие случайные последовательности, для кодирования гипервариабельной области CDR3 и осуществления реаранжировки , как описано в статье Hoogenboom and Winter, ., 227:381-388 (1992). Патентные публикации, в которых описаны фаговые библиотеки антител человека, включают, например: патент США № 5750373 и патентные публикации США № 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 и 2009/0002360.
[00276] Антитела или фрагменты антител, выделенные из библиотек антител человека, в настоящем документе считаются антителами человека или фрагментами антител человека.
6. Полиспецифические антитела
[00277] В некоторых вариантах реализации антитело, предложенное в настоящем документе, представляет собой полиспецифическое антитело, например, биспецифическое антитело. Полиспецифические антитела представляют собой моноклональные антитела, которые содержат по меньшей мере два разных сайта специфического связывания. В некоторых вариантах реализации изобретения один из сайтов специфического связывания относится к тау-белку, а другой - к любому другому антигену. В некоторых вариантах реализации один из сайтов специфического связывания относится к тау-белку, а другой - к бета-амилоиду. В некоторых вариантах реализации биспецифические антитела могут связываться с двумя различными эпитопами тау-белка. Кроме того, для локализации цитотоксических агентов в области клеток, экспрессирующих тау-белок, можно применять биспецифические антитела. Биспецифические антитела можно получить в виде полноразмерных антител или фрагментов антител.
Nature
J.
Science
J. Immunol
Proc. Natl. Acad. Sci. USА
J. Immunol.,
J. Immunol.
[00278] Способы изготовления полиспецифических антител включают рекомбинантную совместную экспрессию двух пар тяжелая цепь - легкая цепь иммуноглобулина с различной специфичностью (см. Milstein and Cuello, 305:537 (1983)), WO 93/08829, и Traunecker et al., EMBO 10:3655 (1991)), и инженерию согласно стратегии ʺвыступ-во-впадинуʺ (см., например, патент США № 5731168). Полиспецифические антитела также можно получить с помощью конструирования электростатических направляющих эффектов для создания Fc-гетеродимерных молекул антител (WO 2009/089004A1); перекрестного сшивания двух или более антител или фрагментов (см., например, патент США № 4676980, и Brennan et al., , 229:81 (1985)); использования лейциновых молний для получения биспецифических антител (см., например, Kostelny et al., ., 148(5):1547-1553 (1992)); использования технологии ʺдиателʺ для изготовления биспецифических фрагментов антител (см. например, Hollinger et al., , 90:6444-6448 (1993)); и использования одноцепочечных Fv (sFv)-димеров (см., например, Gruber et al., 152:5368 (1994)); и получение триспецифических антител, описанное, например, в Tutt et al. 147:60 (1991).
[00279] Сконструированные антитела, содержащие три или более функциональных антигенсвязывающих сайтов, включая ʺантитела-осьминогиʺ, также включены в настоящий документ (см., например, US 2006/0025576A1).
[00280] В настоящем документе антитело или фрагмент также включает ʺFAb двойного действияʺ или ʺDAFʺ, содержащее антигенсвязывающий сайт, связывающийся с LgR5, а также еще одним, отличающимся от него, антигеном (см., например, US 2008/0069820).
7. Варианты антител
[00281] В некоторых вариантах реализации изобретения рассматриваются варианты аминокислотных последовательностей антител, предложенных в настоящем документе. Например, может быть желательным улучшение сродства и/или других биологических свойств антитела. Варианты аминокислотных последовательностей антитела можно получить путем внесения соответствующих модификаций в нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, или путем пептидного синтеза. Такие модификации включают, например, делеции и/или инсерции и/или замены остатков в аминокислотных последовательностях антитела. Для получения конечного конструкта можно внести любую комбинацию делеций, инсерций и замен при условии, что конечный конструкт обладает желательными характеристиками, например, связыванием с антигеном.
a) Варианты замен, инсерций и делеций
[00282] В некоторых вариантах реализации предлагаются варианты антител, содержащие одну или более аминокислотные замены. Сайты, представляющие интерес для заместительного мутагенеза, включают HVR и FR. Консервативные замены приведены в таблице 1 под заголовком ʺпредпочтительные заменыʺ. Более существенные изменения приведены в таблице 1 под заголовком ʺтипичные заменыʺ и подробно описаны ниже по отношению к классам боковой цепи аминокислот. В исследуемое антитело можно внедрить аминокислотные замены и исследовать продукты посредством скрининга на предмет желательной активности, например, сохранения/улучшения связывания антигена, снижения иммуногенности или улучшения ADCC или CDC.
ТАБЛИЦА 1
Первоначальныйостаток
Типовыезамены
Предпочтительныезамены
Ala (A)
Val; Leu; Ile
Val
Arg (R)
Lys; Gln; Asn
Lys
Asn (N)
Gln; His; Asp, Lys; Arg
Gln
Asp (D)
Glu; Asn
Glu
Cys (C)
Ser; Ala
Ser
Gln (Q)
Asn; Glu
Asn
Glu (E)
Asp; Gln
Asp
Gly (G)
Ala
Ala
His (H)
Asn; Gln; Lys; Arg
Arg
Ile (I)
Leu; Val; Met; Ala; Phe; норлейцин
Leu
Leu (L)
Норлейцин; Ile; Val; Met; Ala; Phe
Ile
Lys (K)
Arg; Gln; Asn
Arg
Met (M)
Leu; Phe; Ile
Leu
Phe (F)
Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr
Tyr
Pro (P)
Ala
Ala
Ser (S)
Thr
Thr
Thr (T)
Val; Ser
Ser
Trp (W)
Tyr; Phe
Tyr
Tyr (Y)
Trp; Phe; Thr; Ser
Phe
Val (V)
Ile; Leu; Met; Phe; Ala; норлейцин
Leu
Аминокислоты можно сгруппировать по общим свойствам боковой цепи:
(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) кислые: Asp, Glu;
(4) основные: His, Lys, Arg;
(5) остатки, влияющие на ориентацию цепи: Gly, Pro;
(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.
[00283] Неконсервативные замены приводят к замене представителя одного из этих классов на представителя другого класса.
[00284] Один тип вариантов, полученных путем замены, включает замену одного или более остатков гипервариабельной области исходного антитела (например, гуманизированного антитела или антитела человека). Как правило, полученный(е) вариант(ы), отобранные для дальнейшего исследования, характеризуются модификациями (например, улучшением) определенных биологических свойств (например, повышенным сродством, сниженной иммуногенностью) по сравнению с исходным антителом и/или в значительной степени сохраняют определенные биологические свойства исходного антитела. Типичный вариант, получаемый путем замены, представляет собой антитело с созревшим сродством, которое легко получить, например, с использованием методик созревания сродства на основе фагового дисплея, например, описанных в настоящем документе. Вкратце, один или несколько остатков HVR мутируют и вариантные антитела подвергают фаговому дисплею и скринингу на предмет конкретной биологической активности (например, сродства связывания).
Methods Mol. Biol
Methods in Molecular Biology
[00285] Модификации (например, замены) можно внести в HVR, например, для улучшения сродства антитела. Такие модификации можно внести в ʺгорячие точкиʺ HVR, т.е. остатки, кодируемые кодонами, с высокой частотой подвергающимися мутациям во время соматического созревания (см., например, Chowdhury, . 207:179-196 (2008)), и/или остатки, которые контактируют с антигеном, при этом полученный вариант VH или VL тестируют на сродство связывания. Созревание сродства путем конструирования и повторного отбора из вторичных библиотек описано, например, в Hoogenboom et al. in 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)). В некоторых вариантах реализации созревания сродства вносят разнообразие в вариабельные гены, выбранные для созревания, любым из различных способов (например, ПЦР пониженной точности, перетасовки цепей или олигонуклеотид-направленного мутагенеза). Затем создают вторичную библиотеку. После этого библиотеку подвергают скринингу с целью идентификации любых вариантов антител, обладающих желательным сродством. Еще один способ внесения разнообразия включает HVR-направленные подходы, в которых рандомизируют несколько остатков HVR (например, 4-6 остатков одновременно). Остатки HVR, участвующие в связывании антигена, можно специфически определить, например, с помощью мутагенеза с аланиновым сканированием или моделирования. В частности, мишенями часто являются CDR-H3 и CDR-L3.
[00286] В некоторых вариантах реализации изобретения замены, инсерции или делеции могут возникать в одной или более HVR при условии, что такие модификации по существу не снижают способность антитела к связыванию антигена. Например, в HVR можно ввести консервативные модификации (например, консервативные замены, как предложено в настоящем документе), которые не снижают сродство в значительной степени. Такие изменения могут быть, например, за пределами контактирующих с антигеном остатков в HVR. В некоторых вариантах реализации вариантов VH- и VL-последовательностей, предлагаемых выше, каждая HVR является немодифицированной или содержит не более одной, двух или трех аминокислотных замен.
Science
[00287] Подходящий способ для идентификации остатков или областей антитела, которые могут являться мишенями для мутагенеза, называется ʺаланин-сканирующим мутагенезомʺ, как описано в статье Cunningham and Wells (1989) , 244:1081-1085. В данном способе выявляют остаток или группу остатков-мишеней (например, заряженных остатков, например, arg, asp, his, lys и glu) и замещают их нейтральными или отрицательно заряженными аминокислотами (например, аланином или полиаланином) с целью определить, влияет ли это на взаимодействие антитела с антигеном. В аминокислотные положения, демонстрирующие функциональную чувствительность к первоначальной замене, можно ввести дальнейшие замены. В альтернативном или дополнительном варианте формируют кристаллическую структуру антиген-антитело для идентификации точек контакта между антителом и антигеном. Такие контактные остатки и соседние остатки можно подвергать направленному воздействию или исключать из кандидатов для замены. Варианты можно подвергать скринингу с целью определения наличия у них желательных свойств.
[00288] Инсерции в аминокислотную последовательность включают N- и/или C-концевые гибриды длиной от одного остатка до полипептидов, содержащих сто или более остатков, а также инсерции одного или множества аминокислотных остатков внутри последовательности. Примеры концевых инсерций включают антитело с N-концевым остатком метионина. Другие инсерционные варианты молекулы антитела включают присоединение к N- или C-концу антитела фермента (например, для ADEPT) или полипептида, что увеличивает период полужизни антитела в сыворотке.
b) Варианты гликозилирования
[00289] В некоторых вариантах реализации антитело, предложенное в настоящем документе, модифицируют с целью увеличения или уменьшения степени гликозилирования антитела. Добавление или делецию сайтов гликозилирования в антителе легко осуществить путем модификации аминокислотной последовательности, приводящей к созданию или удалению одного или более сайтов гликозилирования.
[00290] Если антитело содержит Fc-область, то можно модифицировать углевод, присоединенный к ней. Нативные антитела, продуцируемые клетками млекопитающих, обычно содержат разветвленный двуантенарный олигосахарид, обычно присоединенный с помощью N-связи к Asn297 в СН2-домене Fc-области. См., например, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997). Указанный олигосахарид может содержать различные углеводы, например, маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу и сиаловую кислоту, а также фукозу, присоединенную к GlcNAc в ʺстеблеʺ двухантенарной олигосахаридной структуры. В некоторых вариантах реализации можно выполнить модификации олигосахарида в антителе согласно настоящему изобретению с целью создания вариантов антител с определенными улучшенными свойствами.
J. Mol. Biol.
Biotech. Bioeng.
Arch. Biochem. Biophys.
et al
FUT8,
Biotech. Bioeng.
Biotechnol. Bioeng
[00291] В некоторых вариантах реализации изобретения предложены варианты антител, содержащие углеводную структуру с недостаточным количеством фукозы, присоединенной (непосредственно или косвенно) к Fc-области. Например, количество фукозы в таком антителе может составлять от 1% до 80%, от 1% до 65%, от 5% до 65% или от 20% до 40%. Количество фукозы определяют путем расчета среднего количества фукозы в углеводной цепи при Asn297 по отношению к сумме всех углеводных структур, присоединенных к Asn 297 (например, сложных гибридных структур с высоким содержанием маннозы), измеренной с помощью MALDI-TOF-масс-спектрометрии, как описано, например, в WO 2008/077546. Asn297 относится к остатку аспарагина, расположенного примерно в положении 297 в Fc-области (ЕС-нумерация остатков Fc-области); тем не менее, Asn297 также может быть расположен на расстоянии приблизительно ±3 аминокислот до или после положения 297, то есть, между положениями 294 и 300, учитывая незначительные вариации последовательности в антителах. Такие варианты фукозилирования могут обладать улучшенной ADCC-функцией. См., например, патентные публикации США № US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Примеры публикаций, связанных с ʺдефукозилированнымиʺ или ʺфукозодефицитнымиʺ вариантами антитела, включают: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. 87:614 (2004). Примеры линий клеток, способных продуцировать дефукозилированные антитела, включают клетки Lec13 CHO, дефектные по фукозилированию белков (Ripka et al. 249:533-545 (1986); патентная заявка США № US 2003/0157108 A1, Presta, L; и WO 2004/056312 A1, Adams ., особенно Пример 11), и линии клеток с нокаутом, например, клетки CHO с нокаутом гена альфа-1,6-фукозилтрансферазы (см., например, Yamane-Ohnuki et al. 87:614 (2004); Kanda, Y. et al., ., 94(4):680-688 (2006); и WO2003/085107).
et al
[00292] Кроме того, предложены варианты антител с олигосахаридами, разделенными пополам, например, в которых двухантенарный олигосахарид, присоединенный к Fc-области антитела, разделен по GlcNAc. Такие варианты антител могут характеризоваться сниженным фукозилированием и/или улучшенной ADCC-функцией. Примеры таких вариантов антител описаны, например, в WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); патент США № 6602684 (Umana et al.); и US 2005/0123546 (Umana .). Кроме того, предложены варианты антител с по меньшей мере одним остатком галактозы в олигосахариде, присоединенном к Fc-области. Такие варианты антител могут обладать улучшенной CDC-функцией. Такие варианты антител описаны, например, в WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); и WO 1999/22764 (Raju, S.).
c) Варианты Fc-области
[00293] В некоторых вариантах реализации изобретения в Fc-область антитела, предлагаемого в настоящем документе, можно ввести одну или более из аминокислотных модификаций, тем самым получая вариант Fc-области. Вариант Fc-области может содержать последовательность Fc-области человека (например, Fc-области IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека), содержащую аминокислотную модификацию (например, замену) в одном или более аминокислотных положениях.
in vivo
in vitro
in vivo
Annu. Rev. Immunol
in vitro
. Nat'l Acad. Sci. USA
. Nat'l Acad. Sci. USA
J. Exp. Med.
in vivo
. Nat'l Acad. Sci. USA
et al
J. Immunol. Methods
Blood
in vivo
'l. Immunol.

[00294] В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения рассмотрен вариант антитела, обладающий некоторыми, но не всеми эффекторными функциями, что делает его желательным кандидатом для вариантов применения, при которых важен период полужизни антитела , а некоторые эффекторные функции (например, комплемент и ADCC) не нужны или вредны. Для подтверждения снижения/ослабления CDC- и/или ADCC-активности можно выполнить анализ цитотоксичности и/или . Например, чтобы убедиться в отсутствии связывания антитела с FcγR (и, следовательно, отсутствии ADCC-активности) при сохранении способности связывания с FcRn можно выполнить анализ связывания Fc-рецептора (FcR). Основные опосредующие ADCC клетки - NK-клетки - экспрессируют только FcγRIII, в то время как моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Сводная информация об экспрессии FcR на кроветворных клетках приведена в Таблице 3 на странице 464 статьи Ravetch and Kinet, . 9:457-492 (1991)). Неограничивающие примеры анализа для оценки ADCC-активности исследуемой молекулы описаны в патенте США № 5500362 (см., например, Hellstrom, I. et al. Proc83:7059-7063 (1986)) и Hellstrom, I et al., Proc82:1499-1502 (1985); 5821337 (см. Bruggemann, M. et al., 166:1351-1361 (1987)). В альтернативном варианте можно использовать анализы, не связанные с использованием радиоактивных веществ (см., например, анализ цитотоксичности ACTI™ для проточной цитометрии без использования радиоактивных веществ (CellTechnology, Inc. Маунтин-Вью, штат Калифорния, США; и анализ цитотоксичности CytoTox 96 без использования радиоактивных веществ (Promega, Мэдисон, штат Висконсин, США). Эффекторные клетки, пригодные для такого анализа, включают мононуклеары периферической крови (МКПК) и естественные киллеры (NK). В альтернативном или дополнительном варианте ADCC-активность вещества, представляющего интерес, можно оценить , например, на животной модели, например, описанной в публикации Clynes et al. Proc95:652-656 (1998). Кроме того, можно выполнить анализ связывания C1q с целью подтверждения неспособности антитела связывать C1q и, следовательно, отсутствия CDC-активности. См., например, твердофазный ИФА связывания C1q и C3c в WO 2006/029879 и WO 2005/100402. Для оценки активации комплемента можно выполнить анализ CDC (см., например, Gazzano-Santoro . 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); и Cragg, M.S. and M. J. Glennie, 103:2738-2743 (2004)). Кроме того, можно определить связывание и выведение/период полужизни FcRn с использованием способов, известных в данной области техники (см., например, Petkova, S. B. et al., Int18(12):1759-1769 (2006)).
[00295] Антитела с пониженной эффекторной функцией включают антитела с заменой одного или более остатков 238, 265, 269, 270, 297, 327 и 329 Fc-области (патент США № 6737056). Такие Fc-мутанты включают Fc-мутантов с заменами в двух или более аминокислотных положениях 265, 269, 270, 297 и 327, включая так называемые Fc-мутанты ʺDANAʺ с заменой остатков 265 и 297 на аланин (патент США № 7332581).
J. Biol. Chem
[00296] Описаны некоторые варианты антител с улучшенным или уменьшенным связыванием с FcR. (См., например, патент США № 6737056; WO 2004/056312, и Shields et al., . 9(2):6591-6604 (2001).)
[00297] В некоторых вариантах реализации вариант антитела содержит Fc-область с одной или более аминокислотными заменами, улучшающими ADCC, например, заменами в положениях 298, 333 и 334 Fc-области (ЕС-нумерация остатков).
J. Immunol.
[00298] В некоторых вариантах реализации вносят изменения в Fc-область, что приводит к изменению (т.е. улучшению или снижению) связывания C1q и/или комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC), например, как описано в патенте США № 6194551, WO 99/51642 и Idusogie et al. 164:4178-4184 (2000).
J. Immunol.
J. Immunol
[00299] Антитела с увеличенным периодом полужизни и улучшенным связыванием с неонатальным Fc-рецептором (FcRn), который отвечает за передачу IgG матери плоду (Guyer et al., 117:587 (1976) и Kim et al., . 24:249 (1994)), описаны в US2005/0014934A1 (Hinton et al.). Указанные антитела содержат Fc-область с одной или более заменами, которые улучшают связывание Fc-области с FcRn. Такие варианты Fc включают варианты с заменами одного или более остатков Fc-области:238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 или 434, например, заменой остатка 434 Fc-области (патент США № 7371826).
Nature
[00300] Другие примеры вариантов Fc-области см. также в Duncan & Winter, 322:738-40 (1988); патенте США № 5648260; патенте США № 5624821; и заявке WO 94/29351, касающейся других примеров вариантов Fc-области.
d) Варианты антител, созданные путем введения цистеина
[00301] В некоторых вариантах реализации может быть желательным создание антител, сконструированных с использованием остатков цистеина, например, ʺthioMAbʺ, в которых один или более остатков антитела замещены остатками цистеина. В конкретных вариантах реализации изобретения замещенные остатки расположены в доступных сайтах антитела. В результате замещения указанных остатков цистеином в доступных участках антитела располагаются реакционноспособные тиольные группы, которые можно использовать для конъюгирования антитела с другими группами, например, лекарственными веществами или группами ʺлинкер-лекарственное веществоʺ с получением иммуноконъюгата, как дополнительно описано в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения можно заменить на цистеин один или более из следующих остатков: V205 (нумерация по Kabat) легкой цепи; A118 (ЕС-нумерация) тяжелой цепи; и S400 (ЕС-нумерация) Fc-области тяжелой цепи. Антитела, сконструированные с использованием остатков цистеина, можно получить, как описано, например, в патенте США № 7521541.
e) Производные антител
[00302] В некоторых вариантах реализации изобретения антитело, предложенное в настоящем документе, можно дополнительно модифицировать путем введения дополнительных небелковых фрагментов, известных в данной области техники и легко доступных. Фрагменты, пригодные для получения производных антитела, включают водорастворимые полимеры, но не ограничиваются ими. Неограничивающие примеры водорастворимых полимеров включают полиэтиленгликоль (ПЭГ), сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлозу, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, поли-1,3-диоксолан, поли-1,3,6-триоксан, сополимер этилена/малеинового ангидрида, полиаминокислоты (гомополимеры или случайные сополимеры) и декстран или поли(n-винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры пропиленгликоля, сополимеры пропиленоксида/этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин), поливиниловый спирт и их смеси, но не ограничиваются ими. Пропионовый альдегид полиэтиленгликоля может обладать преимуществами при производстве из-за его стабильности в воде. Указанный полимер может обладать любой молекулярной массой и быть разветвленным или неразветвленным. Количество молекул полимера, присоединенных к антителу, может меняться, и при присоединении более чем одного полимера они могут представлять собой одинаковые или разные молекулы. В целом, количество и/или тип полимеров, применяемых для получения производных, можно определить с учетом факторов, включающих конкретные свойства или функции антител, подлежащие улучшению, возможность применения производных антитела в терапии при определенных условиях и т.д., но не ограничивающихся этим.
. Natl. Acad. Sci. USA
[00303] В еще одном варианте реализации изобретения предлагаются конъюгаты антитела и небелкового фрагмента, которые можно селективно нагревать посредством облучения. В одном варианте реализации небелковый фрагмент представляет собой углеродную нанотрубку (Kam et al., Proc102:11600-11605 (2005)). Длина волны излучения может быть любой и включает длины волн, не повреждающие обычные клетки, но нагревающие небелковый фрагмент до температуры, вызывающей гибель клеток, расположенных поблизости от антитела с небелковым фрагментом.
B. Рекомбинантные методики и композиции
[00304] Антитела можно получить с использованием рекомбинантного методик и композиций, например, как описано в патенте США № 4816567. В некоторых вариантах реализации предложена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело против тау-белка, описанное в настоящем документе. Такая нуклеиновая кислота может кодировать аминокислотную последовательность, содержащую VL, и/или аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела (например, легкую и/или тяжелую цепи антитела). В дополнительном варианте реализации предложены один или более векторов (например, экспрессионных векторов), содержащих такую нуклеиновую кислоту. В дополнительном варианте реализации предложена клетка-хозяин, содержащая такую нуклеиновую кислоту. В одном из таких вариантов реализации клетка-хозяин содержит (например, трансформирована):(1) вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность, содержащую VL антитела, и аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела, или (2) первый вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность, содержащую VL антитела, и второй вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела. В некоторых вариантах реализации изобретения клетка-хозяин является эукариотической, например, клеткой яичника китайского хомяка (CHO) или лимфоидной клеткой (например, клетку Y0, NS0, Sp20). В некоторых вариантах реализации предложен способ получения антитела против тау-белка, причем указанный способ включает культивирование клетки-хозяина, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, предложенное выше, в условиях, пригодных для экспрессии антитела, и, в некоторых случаях, выделение антитела из клетки-хозяина (или среды, в которой культивируют клетку-хозяина).
[00305] Для рекомбинантной продукции антитела против тау-белка нуклеиновая кислота, кодирующая антитело, например, как описано выше, является выделенной и вставлена в один или более векторов для дальнейшего клонирования и/или экспрессии в клетке-хозяине. Такую нуклеиновую кислоту легко выделить и секвенировать с использованием общепринятых процедур (например, с использованием олигонуклеотидных зондов, способных специфически связываться с генами, кодирующими тяжелые и легкие цепи антитела).
Methods in Molecular Biology, Vol. 248
E. coli
[00306] Клетки-хозяева, пригодные для клонирования или экспрессии векторов, кодирующих антитело, включают прокариотические или эукариотические клетки, описанные в настоящем документе. Например, антитела можно продуцировать в бактериях, в частности, если гликозилирование и Fc-эффекторные функции не являются необходимыми. Экспрессию фрагментов антитела и полипептидов в бактериях см., например, в патентах США № 5648237, 5789199 и 5840523. (См. также Charlton, (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254, где описана экспрессия фрагментов антитела в ). После экспрессии антитела можно выделить из бактериальной биомассы в растворимую фракцию и подвергать дальнейшей очистке.
Nat. Biotech
. Biotech
[00307] В дополнение к прокариотам, хозяевами, пригодными для клонирования или экспрессии векторов, кодирующих антитело, являются эукариотические микроорганизмы, например, мицелиальные грибы или дрожжи, в том числе штаммы грибов и дрожжей с ʺгуманизированнымиʺ путями гликозилирования, которые позволяют получать антитело с частично или полностью человеческой моделью гликозилирования. См. Gerngross, . 22:1409-1414 (2004) и Li et al., Nat. 24:210-215 (2006).
Spodoptera frugiperda
[00308] Пригодные для экспрессии гликозилированного антитела клетки-хозяева также можно получить из многоклеточных организмов (беспозвоночных и позвоночных). Примеры клеток беспозвоночных включают клетки растений и насекомых. Выявлены многочисленные штаммы бакуловирусов, которые можно использовать в комбинации с клетками насекомых, особенно для трансфекции клеток .
.,
TM
[00309] Кроме того, в качестве хозяев можно использовать культуры клеток растений. Смнапример, патенты США № 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 и 6417429 (где описана технология PLANTIBODIES для продукции антител в трансгенных растениях)
J. Gen Virol
Biol. Reprod
N. Y. Acad. Sci
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Methods in Molecular Biology, Vol
248
-
[00310] Кроме того, в качестве хозяев можно использовать клетки позвоночных. Например, можно использовать линии клеток млекопитающих, адаптированные к росту в суспензии. Другие примеры подходящих линий клеток-хозяев млекопитающих представляют собой линию клеток почки обезьяны CV1, трансформированных SV40 (COS-7); эмбриональную линию клеток почки человека (клетки 293 или 293, как описано, например, в статье Graham et al., . 36:59 (1977)); клетки почки детеныша хомяка (BHK); клетки Сертоли мыши (клетки TM4, как описано, например, в статье Mather, . 23:243-251 (1980); клетки почки обезьяны (CV1); клетки почки африканской зеленой мартышки (VERO-76); клетки карциномы шейки матки человека (HELA); клетки почки собаки (MDCK; клетки печени крысы линии buffalo (BRL 3A); клетки легких человека (W138); клетки печени человека (Hep G2); клетки опухоли молочной железы мыши (MMT 060562); клетки TRI, как описано, например, в статье Mather et al. Annals . 383:44-68 (1982); клетки MRC 5; и клетки FS4. Другие подходящие линии клеток-хозяев млекопитающих включают клетки яичника китайского хомяка (СНО), в том числе клетки DHFR CHO (Urlaub et al., 77:4216 (1980)); и линии миеломных клеток, например, Y0, NS0 и Sp2/0. Обзор некоторых линий клеток-хозяев млекопитающих, пригодных для продукции антител, см., например, в Yazaki and Wu, . (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003).
C. Анализы
[00311] Антитела против тау-белка, предложенные в настоящем документе, можно идентифицировать, подвергать скринингу или исследованию их физические/химических свойств и/или биологической активности с помощью различных анализов, известных в данной области техники.
1. Анализы связывания и другие анализы
[00312] В одном аспекте исследуют антигенсвязывающую активность антитела согласно настоящему изобретению, например, с помощью известных способов, например, твердофазного ИФА, вестерн-блоттинга и т.д.
Methods in Molecular Biology
[00313] В еще одном аспекте для выявления антитела, конкурирующего с антителом, описанным в настоящем документе, за связывание с тау-белком, можно использовать конкурентные анализы. В некоторых вариантах реализации такое конкурирующее антитело связывается с тем же эпитопом (например, линейным или конформационным эпитопом), который связывают антитела 94B2-C1, 125B11-H3, 37D3-H9 или hu37D3-H9.v28.A4. Подробные типовые способы картирования эпитопа, с которым связывается антитело, представлены в Morris (1996) ʺEpitope Mapping Protocolsʺ in vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
Antibodies: A Laboratory Manual
[00314] В типичном конкурентном анализе иммобилизованный тау-белок (например, мономерный тау-белок) инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, связывающееся с тау-белком (например, любое из антител, описанных в настоящем документе, такое как hu37D3-H9.v28), и второе немеченое антитело, тестируемое на предмет способности конкурировать с первым антителом за связывание с тау-белком. Второе антитело может присутствовать в супернатанте гибридомы. В качестве контроля иммобилизованный тау-белок инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, но не содержащем второе немеченое антитело. После инкубирования в условиях, допускающих связывание первого антитела с тау-белком, удаляют избыток несвязанного антитела и измеряют количество метки, связанной с иммобилизованным тау-белком. Если количество метки, связанной с иммобилизованным тау-белком, существенно понижено в анализируемом образце по сравнению с контрольным образцом, то это указывает на то, что второе антитело конкурирует с первым антителом за связывание с тау-белком. См. Harlow and Lane (1988) ch. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
2. Анализы активности
in vivo
in vitro
[00315] В одном аспекте предложены анализы для идентификации антител против тау-белка (например, против любой формы тау-белка), обладающих биологической активностью. Биологическая активность может включать, например, связывание таких антител с множественными формами тау-белка (например, мономерным тау-белком, олигомерным тау-белком, нефосфорилированным тау-белком и фосфорилированным тау-белком) и снижение уровня тау-белка (например, общего тау-белка, общего растворимого тау-белка, растворимого нефосфорилированного тау-белка, растворимого фосфорилированного тау-белка, общего нерастворимого тау-белка, нерастворимого нефосфорилированного тау-белка, нерастворимого фосфорилированного тау-белка, гиперфосфорилированного тау-белка или парных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау-белок, в головном мозге, например, в коре головного мозга и/или гиппокампе). В настоящем изобретении также предложены антитела, обладающие такой биологической активностью и/или .
[00316] В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению тестируют на предмет такой биологической активности. Например, для обнаружения связывания антител против тау-белка в отделах головного мозга и, например, с нейрофибриллярными клубками в головном мозге трансгенных мышей можно использовать животную модель таупатии, например, тау-трансгенных мышей (например, P301L). Кроме того, животную модель таупатии, например, тау-трансгенных мышей (например, P301L), можно обработать антителами против тау-белка, и для оценки способности такой обработки снижать уровень тау-белка (например, общего тау-белка, общего растворимого тау-белка, растворимого фосфорилированного тау-белка, растворимого нефосфорилированного тау-белка, общего нерастворимого тау-белка, нерастворимого фосфорилированного тау-белка, нерастворимого нефосфорилированного тау-белка, гиперфосфорилированного тау-белка или парных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау-белок) в головном мозге мыши (например, в коре головного мозга и/или гиппокампе) можно использовать экспериментальные методики, известные в данной области техники.
D. Иммуноконъюгаты
[00317] В настоящем изобретении также предложены иммуноконъюгаты, содержащие антитело против тау-белка, описанное в настоящем документе, конъюгированное с одним или более терапевтическими агентами или радиоактивными изотопами.
211
131
125
90
186
188
153
212
32
212
[00318] В некоторых вариантах реализации изобретения иммуноконъюгат содержит антитело, описанное в настоящем документе и конъюгированное с радиоактивным атомом с образованием радиоконъюгата. Для получения радиоконъюгатов доступны разнообразные радиоактивные изотопы. Примеры включают At, I, I, Y, Re, Re, Sm, Bi, P, Pb и радиоактивные изотопы Lu. В случае если иммуноконъюгат применяют для обнаружения, он может содержать радиоактивный атом для сцинтиграфических исследований, например, tc99m или I123, или спиновую метку для визуализации с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (также известной как магнитно-резонансная визуализация, МРВ), например, иод-123, иод-131, индий-111, фтор-19, углерод-13, азот-15, кислород-17, гадолиний, марганец или железо.
Res
[00319] Конъюгаты антитела можно изготовить, используя разнообразные бифункциональные белок-связывающие агенты, например, N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP), сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (SMCC), иминотиолан (IT), бифункциональные производные имидоэфиров (например, диметиладипимидат HCl), активные эфиры (например, дисукцинимидилсуберат), альдегиды (например, глутаральдегид), бис-азидосоединения (например, бис-(p-азидобензоил)гександиамин), производные бис-диазония (например, бис-(p-диазонийбензоил)-этилендиамин), диизоцианаты (например, толуол-2,6-диизоцианат) и бис-активные соединения фтора (например, 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Например, рициновый иммунотоксин можно получить, как описано в работе Vitetta et al., Science 238:1098 (1987). 1-Изотиоцианатбензил-3-метилдиэтилентриаминпентауксусная кислота (MX-DTPA), меченая углеродом-14, представляет собой типичный хелатирующий агент для конъюгирования радионуклеотида с антителом. См. WO94/11026. Линкер может представлять собой ʺотщепляемый линкерʺ, облегчающий высвобождение цитотоксического лекарственного вещества в клетке. Например, можно использовать кислоточувствительный линкер, пептидазочувствительный линкер, фоточувствительный линкер, диметильный линкер или дисульфид-содержащий линкер (Chari et al., Cancer . 52:127-131 (1992); патент США № 5208020).
[00320] Под иммуноконъюгатами или ADC в настоящем документе непосредственно понимают такие конъюгаты, полученные с помощью перекрестно сшивающих реагентов, включая BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, сульфо-EMCS, сульфо-GMBS, сульфо-KMUS, сульфо-MBS, сульфо-SIAB, сульфо-SMCC и сульфо-SMPB и SVSB (сукцинимидил-(4-винилсульфон)бензоат), которые доступны для приобретения (например, в Pierce Biotechnology, Inc., Рокфорд, штат Иллинойс, США), но не ограничиваясь ими.
E. Способы и композиции для диагностики и обнаружения
[00321] В некоторых вариантах реализации изобретения любое из антител против тау-белка, предложенных в настоящем руководстве, можно применять для обнаружения наличия тау-белка в биологическом образце. В настоящем документе термин ʺобнаружениеʺ («детекция») охватывает количественное или качественное обнаружение. В некоторых вариантах реализации биологический образец содержит клетку или ткань, например, цереброспинальную жидкость, клетку или ткань головного мозга (например, коры головного мозга или гиппокампа) или кровь. В некоторых вариантах реализации биологический образец представляет собой цереброспинальную жидкость.
in vitro
in vivo
[00322] В некоторых вариантах реализации предложено антитело против тау-белка для применения в способе диагностики или обнаружения. В дополнительном аспекте предложен способ обнаружения наличия тау-белка в биологическом образце. В некоторых вариантах реализации способ включает приведение биологического образца в контакт с антителом против тау-белка, как описано в настоящем документе, в условиях, обеспечивающих связывание антитела против тау-белка с тау-белком, и обнаружение образования комплекса антитела против тау-белка с тау-белком. Такой способ можно осуществлять или . Затем комплекс, образованный антителом против тау-белка и тау-белком в тестируемом биологическом образце, можно сравнить с комплексом, образованным в контрольном биологическом образце (например, биологическом образце здорового субъекта или субъектов). Количество комплекса, образованного антителом против тау-белка и тау-белком в тестируемом биологическом образце, также можно количественно оценить и сравнить с количеством комплекса, образованного в контрольном биологическом образце (например, биологическом образце здорового субъекта или субъектов) или со средним количеством комплекса, заведомо образующегося у здоровых субъектов.
[00323] В некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка применяют для выбора субъектов, подходящих для лечения с помощью антитела против тау-белка, например, когда тау-белок является биомаркером для отбора пациентов. Например, в некоторых вариантах реализации антитело против тау-белка (например, против любых форм тау-белка) используется для обнаружения наличия заболевания или расстройства, связанного с тау-белком, у субъекта, или наличию высокого риска (или предрасположенности) к заболеванию или расстройству, связанному с тау-белком, у субъекта.
[00324] Типичные заболевания или расстройства, которые можно диагностировать с помощью антитела согласно настоящему изобретению, включают заболевания или расстройства, ассоциированные с тау-белком, и заболевания или расстройства, вызванные или ассоциированные с образованием нейрофибриллярных клубков или нейропильных нитей. В некоторых вариантах реализации заболевания или расстройства, которые можно диагностировать с помощью антитела согласно настоящему изобретению, включают заболевания или расстройства, ассоциированные с тау-белком, которые проявляются нарушением или потерей когнитивных функций, в том числе логического мышления, способности к принятию ситуационных решений, емкости памяти, обучаемости и/или специфической навигации. В частности, заболевания или расстройства, которые можно диагностировать с помощью антитела согласно настоящему изобретению, включают таупатии, например, нейродегенеративные таупатии. В некоторых вариантах реализации заболевание или расстройство, которое можно диагностировать с помощью антитела согласно настоящему изобретению, включают болезнь Альцгеймера, болезнь Крейтцфельда-Якоба, деменцию боксеров, синдром Дауна, болезнь Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозит с включенными тельцами, прион-протеинцеребральную амилоидную ангиопатию, черепно-мозговую травму, боковой амиотрофический склероз/сочетание паркинсонизма и деменции (комплекс Гуама), негуамскую болезнь двигательного нейрона с нейрофибриллярными клубками, деменцию аргирофильных зерен, кортикобазальную дегенерацию, диффузные нейрофибриллярные клубки с кальцификацией, лобно-височную деменцию, лобно-височную деменцию с паркинсонизмом, сцепленную с 17 хромосомой, болезнь Галлервордена-Шпатца, множественную системную атрофию, болезнь Ниманна-Пика типа C, паллидо-понто-нигральную дегенерацию, болезнь Пика, прогрессирующий субкортикальный глиоз, прогрессирующий надъядерный паралич, подострый склерозирующий панэнцефалит, деменцию с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитический паркинсонизм и миотоническую дистрофию, но не ограничиваются ими. В некоторых вариантах реализации расстройство, которое можно диагностировать с применением антитела согласно настоящему изобретению, представляет собой болезнь Альцгеймера (БА).
32
14
125
3
131
[00325] В некоторых вариантах реализации предложены меченые антитела против тау-белка. Метки включают метки или группы, обнаруживаемые прямым способом (например, флуоресцентные, хромофорные, электронно-плотные, хемилюминесцентные и радиоактивные метки), а также такие группы, как ферменты или лиганды, обнаруживаемые непрямым способом, например, с помощью ферментативной реакции или молекулярных взаимодействий, но не ограничиваются ими. Типичные метки включают радиоизотопы P, C, I, H иI, флуорофоры, такие как хелаты редкоземельных элементов или флуоресцеин и его производные, родамин и его производные, дансил, умбеллиферон, люциферазы, например, люциферазу светлячка и бактериальную люциферазу (патент США № 4737456), люциферин, 2,3-дигидрофталазиндионы, пероксидазу хрена (ПХ), щелочную фосфатазу, β-галактозидазу, глюкоамилазу, лизоцим, оксидазы углеводов, например, глюкозооксидазу, галактозооксидазу и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу, оксидазы гетероциклических соединений, такие как уриказа и ксантиноксидаза, в сочетании с ферментом, который использует пероксид водорода для окисления предшественника красителя, например, ПХ, лактопероксидазу или микропероксидазу, биотин/авидин, спиновые метки, метки-бактериофаги, стабильные свободные радикалы и т.п., но не ограничиваются ими.
F. Фармацевтические составы
Remington's Pharmaceutical Sciences
th

[00326] Фармацевтические составы антитела против тау-белка, описанные в настоящем документе, получают путем смешивания такого антитела, обладающего желательной степенью чистоты, с одним или более необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями и/или вспомогательными веществами (16 edition, Osol, A. Ed. (1980)), в виде лиофилизированных составов или водных растворов. Фармацевтически приемлемые носители, разбавители и вспомогательные вещества обычно являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях, и включают: стерильную воду, буферные вещества, например, фосфат, цитрат и другие органические соли; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (например, хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония; хлорид бензэтония; фенол; бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, например, метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол; и m-крезол); низкомолекулярные (содержащие менее 10 остатков) полипептиды; белки, например, сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, например, поливинилпирролидон; аминокислоты, например, глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, например, ЭДТА; углеводы, например, сахарозу, маннит, трегалозу или сорбит; солеобразующие противоионы, например, натрия; металлсодержащие комплексы (например, комплексы Zn-белок) и/или неионогенные ПАВ, например, полиэтиленгликоль (ПЭГ), но не ограничиваются ими. Примеры фармацевтически приемлемых носителей в настоящем документе дополнительно включают агенты, обеспечивающие внутритканевое распределение лекарственных средств, например, растворимые нейтрально-активные гликопротеины, содержащие гиалуронидазу (sHASEGP), например, растворимые гликопротеины PH-20 человека, содержащие гиалуронидазу, например, rHuPH20 (HYLENEX, Baxter International, Inc.). Некоторые типичные sHASEGP, в том числе rHuPH20, и способы их применения описаны в патентных публикациях США № 2005/0260186 и 2006/0104968. В одном из аспектов sHASEGP объединяют с одним или более дополнительными гликозаминогликаназами, например, хондроитиназами.
[00327] Типичные лиофилизированные составы антител описаны в патенте США № 6267958. Водные составы антитела включают составы, описанные в патенте США № 6171586 и WO2006/044908, причем последние составы содержат гистидин-ацетатный буфер.
[00328] Состав, описанный в настоящем документе, также может содержать более одного активного ингредиента, если это необходимо для лечения по конкретным показаниям, предпочтительно, ингредиенты с взаимодополняющими активностями, не оказывающие нежелательного действия друг на друга. Такие активные ингредиенты присутствуют в комбинации в количествах, эффективных для поставленной цели.
Remington's Pharmaceutical Science
th
[00329] Активные ингредиенты можно включить в микрокапсулы, полученные, например, с помощью методик коацервации или межфазной полимеризации, например, микрокапсулы гидроксиметилцеллюлозы или желатина и полиметилметакрилата, соответственно, в коллоидные системы доставки лекарств (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методики описаны в 16 edition, Osol, A. Ed. (1980).
[00330] Можно получать препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие антитело, причем указанные матрицы находятся в форме формованных изделий, например, пленок или микрокапсул.
in vivo
[00331] Композиции, предназначенные для применения , обычно являются стерильными. Стерильности легко достичь, например, путем фильтрации через мембраны для стерильной фильтрации.
G. Терапевтические способы и композиции
[00332] Любое из антител против тау-белка, предложенных в настоящем документе, можно применять в терапевтических способах.
[00333] В одном аспекте предложено антитело против тау-белка для применения в качестве лекарственного средства. В дополнительных аспектах предложено антитело против тау-белка для применения при лечении заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком. В некоторых вариантах реализации предложено антитело против тау-белка для применения при лечении заболеваний или расстройств, вызванных или ассоциированных с образованием нейрофибриллярных клубков или нейропильных нитей. В конкретных вариантах реализации предложено антитело против тау-белка для применения при лечении таупатии, например, нейродегенеративной таупатии. Типичные заболевания или расстройства, ассоциированные с тау-белком, которые можно лечить с применением антител против тау-белка, включают, без ограничения, болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз, болезнь Паркинсона, болезнь Крейтцфельда-Якоба, деменцию боксеров, синдром Дауна, болезнь Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозит с включенными тельцами, прион-протеинцеребральную амилоидную ангиопатию, черепно-мозговую травму, боковой амиотрофический склероз/сочетание паркинсонизма и деменции (комплекс Гуама), негуамскую болезнь двигательного нейрона с нейрофибриллярными клубками, деменцию аргирофильных зерен, кортикобазальную дегенерацию, диффузные нейрофибриллярные клубки с кальцификацией, лобно-височную деменцию, лобно-височную деменцию с паркинсонизмом, сцепленную с 17 хромосомой, болезнь Галлервордена-Шпатца, множественную системную атрофию, болезнь Ниманна-Пика типа C, паллидо-понто-нигральную дегенерацию, болезнь Пика, прогрессирующий субкортикальный глиоз, прогрессирующий надъядерный паралич, подострый склерозирующий панэнцефалит, деменцию с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитический паркинсонизм и миотоническую дистрофию. В некоторых вариантах реализации предложено антитело против тау-белка для применения при лечении болезни Альцгеймера (БА). В некоторых вариантах реализации предложено антитело против тау-белка для применения при лечении умеренной БА, легкой или умеренной БА, ранних стадий БА или продромальной БА. Кроме того, заболевания или расстройства, которые можно лечить с помощью антитела против тау-белка, включают заболевания или расстройства, которые проявляются нарушением или потерей когнитивных функций, в том числе логического мышления, способности к принятию ситуационных решений, емкости памяти, обучаемости и/или специфической навигации. В некоторых вариантах реализации предложено антитело против тау-белка для применения в способе лечения. В некоторых вариантах реализации изобретения предложено антитело против тау-белка для применения в способе лечения индивида с одним из вышеописанных заболеваний или расстройств, ассоциированных с тау-белком, включающем введение индивиду эффективного количества антитела против тау-белка. В одном из таких вариантов реализации способ дополнительно включает введение индивиду эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, например, как описано ниже.
[00334] В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению применяют для лечения индивида с балльной оценкой MMSE от 20 до 30, от 20 до 26, от 24 до 30, от 21 до 26, от 22 до 26, от 22 до 28, от 23 до 26, от 24 до 26 или от 25 до 26 баллов. В некоторых вариантах реализации балльная оценка MMSE у пациента составляет от 22 до 26 баллов. В настоящем документе балльная оценка MMSE между двумя числами включает числа, находящиеся на каждом конце указанного диапазона. Например, балльная оценка MMSE между 22 и 26 баллами включает балльные оценки MMSE, равные 22 и 26 баллам.
[00335] В некоторых вариантах реализации антитела согласно настоящему изобретению применяют для лечения индивида, являющегося ʺамилоид-положительнымʺ, например, пациента с отложениями тау-белка в головном мозге, типичными для расстройств, ассоциированных с тау-белком, например, пациента с тау-положительным результатом ПЭТ.
[00336] В дополнительных вариантах реализации изобретения предложено антитело против тау-белка для применения при снижении уровня тау-белка (например, общего тау-белка, общего растворимого тау-белка, растворимого фосфорилированного тау-белка, общего нерастворимого тау-белка, нерастворимого фосфорилированного тау-белка, гиперфосфорилированного тау-белка или парных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау-белок) у индивида. Например, такое снижение может произойти в головном мозге (например, коре головного мозга) и/или гиппокампе). В некоторых вариантах реализации изобретения предложено антитело против тау-белка для применения при снижении уровня фосфорилированного тау-белка. В некоторых вариантах реализации изобретения предложено антитело против тау-белка для применения при снижении уровня тау-белка (например, нерастворимого фосфорилированного тау-белка). В некоторых вариантах реализации предложено антитело против тау-белка для применения при снижении уровня гиперфосфорилированного тау-белка. В некоторых вариантах реализации изобретения предложено антитело против тау-белка для применения при снижении уровня парных спиральных филаментов (например, парных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау-белок) в ткани головного мозга (например, в коре головного мозга и/или гиппокампе). В некоторых вариантах реализации изобретения предложено антитело против тау-белка для применения в способе снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка, общего растворимого тау-белка, растворимого фосфорилированного тау-белка, общего нерастворимого тау-белка, нерастворимого фосфорилированного тау-белка, гиперфосфорилированного тау-белка или парных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау-белок) в головном мозге (например, коре головного мозга и/или гиппокампе) у индивида, включающем введение индивиду эффективного количества антитела против тау-белка с целью снижения уровня тау-белка. ʺИндивидʺ согласно любому из вышеописанных вариантов реализации является млекопитающим, предпочтительно человеком.
[00337] В некоторых вариантах реализации изобретения предложено антитело против тау-белка для применения при модуляции уровня тау-белка (например, общего тау-белка, общего растворимого тау-белка, растворимого фосфорилированного тау-белка, общего нерастворимого тау-белка, нерастворимого фосфорилированного тау-белка, гиперфосфорилированного тау-белка или парных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау-белок), например, в головном мозге (например, в коре головного мозга и/или гиппокампе) индивида.
[00338] В дополнительном аспекте настоящего изобретения предложено применение антитела против тау-белка при производстве или изготовлении лекарственного средства. В некоторых вариантах реализации лекарственное средство предназначено для лечения заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком. Заболевание или расстройство, ассоциированное с тау-белком, может представлять собой заболевание или расстройство, вызванное или ассоциированное с образованием нейрофибриллярных клубков или нейропильных нитей. В конкретных вариантах реализации лекарственное средство предназначено для лечения таупатии, например, нейродегенеративной таупатии. В конкретных вариантах реализации лекарственное средство предназначено для лечения заболеваний или расстройств, выбранных из группы, состоящей из: болезни Альцгеймера (БА), болезни Крейтцфельда-Якоба, деменции боксеров, синдрома Дауна, болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозита с включенными тельцами, прион-протеинцеребральной амилоидной ангиопатии, черепно-мозговой травмы, бокового амиотрофического склероза/сочетания паркинсонизма и деменции (комплекса Гуама), негуамской болезни двигательного нейрона с нейрофибриллярными клубками, деменции аргирофильных зерен, кортикобазальной дегенерации, диффузных нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, лобно-височной деменции, лобно-височной деменции с паркинсонизмом, сцепленной с 17 хромосомой, болезни Галлервордена-Шпатца, множественной системной атрофии, болезни Ниманна-Пика типа C, паллидо-понто-нигральной дегенерации, болезни Пика, прогрессирующего субкортикального глиоза, прогрессирующего надъядерного паралича, подострого склерозирующего панэнцефалита, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитического паркинсонизма и миотонической дистрофии. В некоторых вариантах реализации лекарственное средство предназначено для лечения БА. В некоторых вариантах реализации лекарственное средство предназначено для лечения заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком, которое проявляется нарушением или потерей когнитивной функции, например, логического мышления, способности к принятию ситуационных решений, емкости памяти, обучаемости и/или специфической навигации. В дополнительном варианте реализации лекарственное средство предназначено для применения в способе лечения одного из вышеперечисленных заболеваний (например, таупатии, например, БА), включающем введение индивиду с таким заболеванием эффективного количества лекарственного средства. В одном из таких вариантов реализации способ дополнительно включает введение индивиду эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, например, как описано ниже.
[00339] В дополнительном варианте реализации лекарственное средство предназначено для снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка, общего растворимого тау-белка, растворимого нефосфорилированного тау-белка, растворимого фосфорилированного тау-белка, общего нерастворимого тау-белка, нерастворимого фосфорилированного тау-белка, нерастворимого нефосфорилированного тау-белка, гиперфосфорилированного тау-белка или парных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау-белок). Например, такое снижение уровня тау-белка можно наблюдать в головном мозге (например, коре головного мозга) и/или гиппокампе) или цереброспинальной жидкости индивида. В некоторых вариантах реализации лекарственное средство предназначено для снижения уровня парных спиральных филаментов. В дополнительном варианте реализации лекарственное средство предназначено для применения в способе снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка, общего растворимого тау-белка, растворимого фосфорилированного тау-белка, общего нерастворимого тау-белка, нерастворимого фосфорилированного тау-белка, гиперфосфорилированного тау-белка или парных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау-белок) у индивида, включающем введение индивиду эффективного количества лекарственного средства с целью снижения уровня тау-белка. ʺИндивидʺ согласно любому из вышеописанных вариантов реализации является млекопитающим, предпочтительно человеком.
[00340] В дополнительном аспекте настоящего изобретения предложен способ для лечения заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком. Заболевание или расстройство, ассоциированное с тау-белком, которое можно лечить в соответствии со способами, предложенными в настоящем документе, включает заболевания или расстройства, вызванные или ассоциированные с образованием нейрофибриллярных клубков или нейропильных нитей. В конкретных вариантах реализации изобретения предложен способ лечения таупатии, например, нейродегенеративной таупатии. В специфических вариантах реализации изобретения предложен способ лечения заболевания или расстройства, выбранного из группы, состоящей из: болезни Альцгеймера, болезни Крейтцфельда-Якоба, деменции боксеров, синдрома Дауна, болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозита с включенными тельцами, прион-протеинцеребральной амилоидной ангиопатии, черепно-мозговой травмы, бокового амиотрофического склероза/сочетания паркинсонизма и деменции (комплекса Гуама), негуамской болезни двигательного нейрона с нейрофибриллярными клубками, деменции аргирофильных зерен, кортикобазальной дегенерации, диффузных нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, лобно-височной деменции, лобно-височной деменции с паркинсонизмом, сцепленной с 17 хромосомой, болезни Галлервордена-Шпатца, множественной системной атрофии, болезни Ниманна-Пика типа C, паллидо-понто-нигральной дегенерации, болезни Пика, прогрессирующего субкортикального глиоза, прогрессирующего надъядерного паралича, подострого склерозирующего панэнцефалита, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитического паркинсонизма и миотонической дистрофии. В некоторых вариантах реализации изобретения предложен способ лечения болезни Альцгеймера (БА). В конкретных вариантах реализации изобретения предложен способ лечения заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком, которое проявляется нарушением или потерей когнитивной функции, например, логического мышления, способности к принятию ситуационных решений, емкости памяти, обучаемости и/или специфической навигации. В некоторых вариантах реализации указанный способ включает введение индивиду с одним из вышеописанных заболеваний или расстройств эффективного количества антитела против тау-белка. В одном из таких вариантов реализации способ дополнительно включает введение индивиду эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, например, как описано ниже. В некоторых вариантах реализации указанный способ включает введение субъекту с одним из заболеваний, описанных в настоящем документе, эффективного количества антитела против тау-белка. В одном из таких вариантов реализации способ дополнительно включает введение индивиду эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, например, как описано ниже. ʺИндивидʺ в соответствии с любым из вышеописанных вариантов реализации может являться человеком.
[00341] В дополнительном аспекте изобретения предложен способ снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка, общего растворимого тау-белка, растворимого фосфорилированного тау-белка, общего нерастворимого тау-белка, нерастворимого фосфорилированного тау-белка, гиперфосфорилированного тау-белка или парных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау-белок) у индивида. Например, такое снижение уровня тау-белка можно наблюдать в головном мозге (например, коре головного мозга) и/или гиппокампе) или цереброспинальной жидкости индивида. В некоторых вариантах реализации изобретения предложен способ снижения уровня парных спиральных филаментов. В некоторых вариантах реализации указанный способ включает введение индивиду эффективного количества антитела против тау-белка с целью снижения уровня тау-белка. В некоторых вариантах реализации ʺиндивидʺ является человеком.
[00342] В некоторых аспектах изобретения предложен способ облегчения одного или более из симптомов заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком; или антитело против тау-белка или лекарственное средство, содержащее антитело против тау-белка, для облегчения одного или более из симптомов заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком (например, любого из заболеваний или расстройств, описанных в настоящем документе, например, БА). В некоторых аспектах изобретения предложен способ снижения количества симптомов или тяжести одного или более из симптомов заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком; или антитело против тау-белка или лекарственное средство, содержащее антитело против тау-белка, для снижения количества симптомов или тяжести одного или более из симптомов заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком (например, любого из заболеваний или расстройств, описанных в настоящем документе, например, БА). В конкретном варианте реализации симптом заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком, представляет собой нарушение когнитивной функции. В конкретном варианте реализации симптом заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком, представляет собой нарушение обучаемости и/или памяти. В конкретном варианте реализации симптом заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком, представляет собой потерю долговременной памяти. В конкретном варианте реализации симптом заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком, представляет собой деменцию. В некоторых вариантах реализации симптом заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком, представляет собой спутанность сознания, раздражимость, агрессию, эмоциональную лабильность или нарушение речи. В некоторых вариантах реализации симптом заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком, представляет собой нарушение или потерю одной или более из когнитивных функций, например, логического мышления, способности к принятию ситуационных решений, емкости памяти и/или обучаемости. Способы, предложенные в настоящем документе, включают введение некоторого количества (например, терапевтически эффективного количества) антитела против тау-белка индивиду (например, у которого проявляются один или более из симптомов заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком).
[00343] В конкретных аспектах изобретения предложен способ сохранения или увеличения емкости когнитивной памяти или замедления потери памяти, ассоциированной с заболеванием или расстройством, ассоциированным с тау-белком; или антитело против тау-белка или лекарственное средство, содержащее антитело против тау-белка, для сохранения или увеличения емкости когнитивной памяти или замедления потери памяти, ассоциированной с заболеванием или расстройством, ассоциированным с тау-белком (например, любым из заболеваний или расстройств, описанных в настоящем документе, например, БА). Способы, предложенные в настоящем документе, включают введение некоторого количества (например, терапевтически эффективного количества) антитела против тау-белка индивиду (например, у которого проявляются один или более из симптомов потери памяти или снижения емкости памяти).
[00344] В некоторых аспектах изобретения предложен способ снижения скорости прогрессирования заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком; или антитело против тау-белка или лекарственное средство, содержащее антитело против тау-белка, для снижения скорости прогрессирования заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком (например, любого из заболеваний или расстройств, описанных в настоящем документе, например, БА). Способы, предложенные в настоящем документе, включают введение некоторого количества (например, терапевтически эффективного количества) антитела против тау-белка индивиду (например, у которого проявляются один или более из симптомов заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком).
[00345] В некоторых аспектах изобретения предложен способ профилактики развития заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком; или антитело против тау-белка или лекарственное средство, содержащее антитело против тау-белка, для профилактики развития заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком (например, любого из заболеваний или расстройств, описанных в настоящем документе, например, БА). Способы, предложенные в настоящем документе, включают введение некоторого количества (например, терапевтически эффективного количества) антитела против тау-белка индивиду (например, подвергающегося риску заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком).
[00346] В некоторых аспектах изобретения предложен способ задержки развития заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком; или антитело против тау-белка или лекарственное средство, содержащее антитело против тау-белка, для задержки развития заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком (например, любого из заболеваний или расстройств, описанных в настоящем документе, например, БА). Способы, предложенные в настоящем документе, включают введение некоторого количества (например, терапевтически эффективного количества) антитела против тау-белка индивиду (например, у которого проявляются один или более из симптомов заболевания или расстройства, ассоциированного с тау-белком).
[00347] В дополнительном аспекте настоящего изобретения предложены фармацевтические составы, содержащие любое из антител против тау-белка, предложенных в настоящем документе, например, для применения в любом из вышеуказанных терапевтических способов. В некоторых вариантах реализации фармацевтический состав содержит любое из антител против тау-белка, предложенных в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель. В еще одном варианте реализации фармацевтический состав содержит любое из антител против тау-белка, предложенных в настоящем документе, и по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент, например, как описано ниже.
[00348] Антитела согласно настоящему изобретению можно применять при лечении по отдельности либо в комбинации с другими агентами. Например, антитело согласно настоящему изобретению можно вводить совместно по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим агентом.
[00349] Например, композицию в соответствии с настоящим изобретением можно вводить в комбинации с другими композициями, содержащими дополнительный терапевтический агент, например, биологически активное вещество или соединение, например, известное соединение, применяемое при медикаментозном лечении таупатий и/или амилоидозов, группы заболеваний и расстройств, ассоциированных с амилоидом или амилоидоподобным белком, например, белком β-амилоида, вовлеченным в болезнь Альцгеймера.
[00350] Как правило, другое биологически активное соединение может включать усилители переноса сигнала между нейронами, психотерапевтические лекарственные средства, ингибиторы ацетилхолинэстеразы, блокаторы кальциевых каналов, биогенные амины, транквилизаторы на основе бензодиазепинов, усилители синтеза, накопления или высвобождения ацетилхолина, агонисты постсинаптического рецептора ацетилхолина, ингибиторы моноаминоксидазы-А или -В, антагонисты рецептора N-метил-D-аспартатглутамата, нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, антиоксиданты и антагонисты серотонергического рецептора или другие терапевтические агенты. В частности, биологически активный агент или соединение может содержать по меньшей мере одно соединение, выбранное из антагонистов окислительного стресса, антиапоптозных соединений, хелаторов металлов, ингибиторов репарации ДНК, например, пирензепина и его метаболитов, 3-амино-1-пропансульфоновой кислоты (3APS), 1,3-пропандисульфоната (1,3PDS), активаторов секретаз, ингибиторов бета- и гамма-секретаз, тау-белков, антител против тау-белков (включая антитела, описанные в WO2012049570, WO2014028777, WO2014165271, WO2014100600, WO2015200806, US8980270 и US8980271, но не ограничиваясь ими), нейромедиатор, разрушители β-складчатой структуры, противовоспалительные вещества, атипичные нейролептики, например, клозапин, зипрасидон, рисперидон, арипипразол или оланзапин, или ингибиторы холинэстеразы (ChEIs), например, такрин, ривастигмин, донепезил и/или галантамин, и другие лекарственные средства и пищевые добавки, например, витамин В12, цистеин, предшественник ацетилхолина, лецитин, холин, препарат гинкго, ацетил-L-карнитин, идебенон, пропентофиллин или производное ксантина, совместно со связывающим пептидом в соответствии с настоящим изобретением, в том числе с антителами, в частности, с моноклональными антителами и их активными фрагментами, и, необязательно, с фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем, и/или вспомогательным веществом, а также инструкциями для лечения заболеваний.
[00351] В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению можно вводить в комбинации с неврологическим лекарственным средством. Такие неврологические лекарственные средства включают антитело или другое связывающееся соединение (в том числе низкомолекулярное соединение, пептид, аптамер или другое соединение, способное связываться с белком, но не ограничиваясь ими), специфически связывающееся с мишенью, выбранной из: бета-секретазы, пресенилина, белка-предшественника амилоида или их фрагментов, пептида бета-амилоида или его олигомеров или фибрилл, рецептора гибели клеток 6 (DR6), рецептора конечных продуктов расширенного гликозилирования (RAGE), паркина и хантингтина; антагониста рецептора NMDA (т.е. мемантина), средства, истощающего запасы моноаминов (т.е. тетрабеназина); эрголоида мезилата; противопаркинсонического антихолинергического средства (т.е. проциклидина, дифенгидрамина, тригексилфенидила, бензтропина, биперидена и тригексифенидила); противопаркинсонического дофаминергического средства (т.е. энтакапона, селегилина, прамипексола, бромокриптина, ротиготина, селегилина, ропинирола, разагилина, апоморфина, карбидопы, леводопы, перголида, толкапона и амантадина); тетрабеназина; противовоспалительного средства (включая нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (т.е. индометацин и другие соединения, перечисленные выше), но не ограничиваясь ими; гормона (т.е. эстрогена, прогестерона и лейпролида); витамина (т.е. фолата и никотинамида); димеболина; гомотаурина (т.е. 3-аминопропансульфоновой кислоты; 3APS); модулятора активности рецептора серотонина (т.е. ксалипродена); интерферона и глюкокортикоида или кортикостероида, но не ограничиваются ими. Термин ʺкортикостероидʺ включает флутиказон (включая флутиказона пропионат (FP)), беклометазон, будесонид, циклезонид, мометазон, флунизолид, бетаметазон и триамцинолон, но не ограничивается ими. ʺИнгаляционный кортикостероидʺ означает кортикостероид, который пригоден для доставки посредством ингаляции. Примерами ингаляционных кортикостероидов являются флутиказон, беклометазона дипропионат, буденозид, мометазона фуроат, циклезонид, флунизолид и триамцинолона ацетонид.

[00352] В некоторых вариантах реализации с антителом против тау-белка, предложенным в настоящем документе, можно вводить одно или более из антител против бета-амилоида. Неограничивающие примеры таких антител к против бета-амилоида включают соланезумаб, бапинейзумаб, адуканумаб, гантенерумаб и BAN-2401 (Biogen, Eisai Co., Ltd.). В некоторых вариантах реализации с антителом против тау-белка, предложенным в настоящем документе, можно вводить один или более из ингибиторов агрегации бета-амилоида. Неограничивающие типичные ингибиторы агрегации бета-амилоида включают ELND-005 (также известный под названием AZD-103 или сцилло-инозит), трамипросат и PTI-80 (Exebryl-1; ProteoTech). В некоторых вариантах реализации с антителом против тау-белка, предложенным в настоящем документе, можно вводить один или более из ингибиторов BACE. Неограничивающие примеры таких ингибиторов BACE включают E-2609 (Biogen, Eisai Co., Ltd.), AZD3293 (также известный как LY3314814; AstraZeneca, Eli Lilly & Co.), MK-8931 (верубецестат) и JNJ-54861911 (Janssen, Shionogi Pharma). В некоторых вариантах реализации с антителом против тау-белка, предложенным в настоящем документе, можно вводить один или более из ингибиторов тау-белка. Неограничивающие примеры таких ингибиторов тау-белка включают метилтиониний, LMTX (также известный как лейко-метилтиониний или Trx-0237; TauRx Therapeutics Ltd.), Rember™ (метиленовый синий или метилтиониния хлорид [MTC]; Trx-0014; TauRx Therapeutics Ltd), PBT2 (Prana Biotechnology) и PTI-51-CH3 (TauPro™; ProteoTech). В некоторых вариантах реализации с антителом против тау-белка, предложенным в настоящем документе, можно вводить одно или более из других антител против тау-белка. Неограничивающие примеры таких других антител против тау-белка включают BMS-986168 (Bristol-Myers Squibb) и C2N-8E12 (AbbVie, C2N Diagnostics, LLC). В некоторых вариантах реализации с антителом против тау-белка, предложенным в настоящем документе, можно вводить ингибитор общего неправильного фолдинга, например, NPT088 (NeuroPhage Pharmaceuticals).
[00353] В некоторых вариантах реализации композиция в соответствии с настоящим изобретением может содержать ниацин или мемантин совместно с химерным антителом или гуманизированным антителом в соответствии с настоящим изобретением, в том числе с антителами, в частности, с моноклональными антителами и их активными фрагментами, и, необязательно, с фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем и/или вспомогательным веществом.
[00354] В некоторых вариантах реализации предложены композиции, содержащие ʺатипичные нейролептикиʺ, например, клозапин, зипрасидон, рисперидон, арипипразол или оланзапин для лечения позитивных и негативных психотических симптомов, в том числе галлюцинаций, бреда, расстройств мышления (проявляющихся в выраженной несогласованности действий, нарушении планов, тангенциальности мышления), и эксцентричного или неорганизованного поведения, а также ангедонии, притупленного аффекта, апатии и социального отчуждения, совместно с химерным антителом или гуманизированным антителом в соответствии с настоящим изобретением или его активными фрагментами, и, необязательно, с фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем и/или вспомогательным веществом.
[00355] Другими соединениями, которые можно надлежащим образом применять в композициях в дополнение к химерному антителу или гуманизированному антителу в соответствии с настоящим изобретением, являются соединения, которые описаны, например, в заявке WO 2004/058258 (см., прежде всего, страницы 16 и 17), в том числе мишени терапевтических лекарственных средств (страницы 36-39), алкансульфоновые кислоты и алкансерные кислоты (страницы 39-51), ингибиторы холинэстеразы (страницы 51-56), антагонисты рецептора NMDA (страницы 56-58), эстрогены (страницы 58-59), нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (страницы 60-61), антиоксиданты (страницы 61-62), агонисты рецепторов, активируемых пероксисомальными пролифераторами (PPAR) (страницы 63-67), агенты, снижающие уровень холестерина (страницы 68-75); ингибиторы амилоида (страницы 75-77), ингибиторы образования амилоида (страницы 77-78), хелаторы металлов (страницы 78-79), нейролептики и антидепрессанты (страницы 80-82), пищевые добавки (страницы 83-89) и соединения, повышающие доступность биологически активных веществ в головном мозге (смотри страницы 89-93) и пролекарственные препараты (страницы 93 и 94); указанный документ включен в настоящее описание посредством ссылки, особенно соединения, упомянутые на вышеуказанных страницах.
[00356] Такие комбинированные терапевтические средства, отмеченные выше, охватывают комбинированное введение (при включении двух или более терапевтических агентов в один и тот же или отдельные составы), а также раздельное введение; в последнем случае введение антитела согласно настоящему изобретению может происходить до, одновременно и/или после введения дополнительного терапевтического агента или агентов. В некоторых вариантах реализации введение антитела против тау-белка и введение дополнительного терапевтического агента происходит с интервалом приблизительно один месяц, или приблизительно одна, две или три недели, или приблизительно один, два, три, четыре, пять или шесть дней.
[00357] Антитело согласно настоящему изобретению (и любое дополнительное терапевтическое средство) можно вводить любым подходящим способом, включающим парентеральное, внутрилегочное, интраназальное введение и, при необходимости местного лечения, введение в очаг заболевания. Парентеральные вливания включают внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение. Введение дозы можно осуществлять любым подходящим способом, например, с помощью инъекций, например, внутривенных или подкожных инъекций, частично в зависимости от того, является ли введение кратким или хроническим. В настоящем документе рассмотрены различные схемы применения, включая одно- или многократные введения в различные моменты времени, болюсное введение и импульсную инъекцию, но не ограничиваясь ими.
[00358] Антитела согласно изобретению следует составлять, дозировать и вводить в соответствии с надлежащей медицинской практикой. Факторы, которые следует учитывать в данном контексте, включают конкретное расстройство, подлежащее лечению, конкретное млекопитающее, подвергаемое лечению, клиническое состояние отдельно взятого пациента, причину расстройства, область доставки агента, способ введения, схему введения и другие факторы, известные практикующим врачам. Комбинирование антитела с одним или более агентами, применяемыми в настоящее время для профилактики или лечения рассматриваемого нарушения, является необязательным, но возможным. Эффективное количество таких других агентов зависит от количества антитела, присутствующего в составе, вида расстройства или лечения, и других факторов, обсуждавшихся выше. Как правило, другие агенты применяют в тех же дозах и посредством того же пути введения, как описано в данном документе, или в дозах, составляющих от приблизительно 1 до 99% дозировок, описанных в настоящем документе, или в любой дозе и посредством любого пути введения, эмпирически/клинически считающихся пригодными.
[00359] Доза антитела согласно изобретению, пригодная для профилактики или лечения заболевания (при применении в качестве монотерапии или в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими агентами), зависит от типа заболевания, подлежащего лечению, типа антитела, тяжести и течения заболевания, введения антитела в профилактических или терапевтических целях, предыдущей терапии, истории болезни пациента и его реакции на антитело, и усмотрения лечащего врача. Антитело пригодно для введения пациенту однократно или в несколько приемов. В зависимости от вида и тяжести заболевания, первоначальная предполагаемая дозировка антитела для введения пациенту, например, посредством одного или более раздельных введений или непрерывного вливания, составляет от приблизительно 1 мкг/кг до 15 мг/кг (например, 0,1 мг/кг - 10 мг/кг). Типичная ежедневная доза может находиться в диапазоне от приблизительно 1 мкг/кг до 100 мг/кг или более в зависимости от вышеупомянутых факторов. При повторном введении в течение нескольких дней или дольше, в зависимости от состояния, лечение обычно следует продолжать до желательного подавления симптомов заболевания. Одна типичная доза антитела должна составлять от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг. Так, пациенту можно ввести одну или более из доз, составляющих приблизительно 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг или 10 мг/кг (или любую их комбинацию). Такие дозы можно вводить с перерывами, например, каждую неделю или каждые три недели (например, таким образом, что пациент получает от приблизительно двух до приблизительно двадцати, или, например, приблизительно шесть доз антитела). Можно вводить начальную повышенную нагрузочную дозу, а затем - одну или более пониженные дозы. В то же время можно применять другие схемы лечения. Ход лечения можно контролировать с помощью обычных методик и анализов.
[00360] Следует понимать, что любой из вышеуказанных составов или терапевтических способов можно реализовать с применением иммуноконъюгата согласно настоящему изобретению вместо или в дополнение к антителу против тау-белка.
H. Изделия
[00361] В еще одном аспекте изобретения предложено изделие, содержащее материалы, пригодные для лечения, профилактики и/или диагностики расстройств, описанных выше. Изделие включает контейнер и этикетку или вкладыш в упаковку, вложенный или связанный с контейнером. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы, пакеты с растворами для внутривенного введения и т.д. Контейнеры могут быть изготовлены из различных материалов, например, стекла или пластмассы. Контейнер содержит композицию, эффективно применяемую при лечении, профилактике и/или диагностике патологического состояния отдельно или в комбинации с другой композицией, и может иметь стерильное входное отверстие (например, контейнер может представлять собой пакет с раствором для внутривенного введения или флакон с пробкой, прокалываемой иглой для подкожной инъекции). По меньшей мере один активный агент в композиции является антителом согласно настоящему изобретению. На этикетке или на вкладыше в упаковку указано, что композиция используется для лечения выбранного патологического состояния. Кроме того, изделие может содержать (a) первый контейнер с содержащейся в нем композицией, причем композиция содержит антитело согласно настоящему изобретению; и (b) второй контейнер с содержащейся в нем композицией, причем композиция включает дополнительное цитотоксическое или иное терапевтическое средство. В данном варианте реализации изобретения изделие может дополнительно содержать вкладыш в упаковку, в котором указано, что композиции можно применять для лечения конкретного патологического состояния. В качестве альтернативы или дополнения, изделие может дополнительно содержать второй (или третий) контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, например, бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), физиологический раствор с фосфатным буфером, раствор Рингера и раствор декстрозы. Оно может дополнительно содержать другие материалы, желательные с коммерческой и потребительской точки зрения, в том числе другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.
[00362] Следует понимать, что любое из указанных выше изделий может содержать иммуноконъюгат согласно настоящему изобретению вместо антитела против тау-белка или в дополнение к нему.
III. ПРИМЕРЫ
[00363] Ниже приведены примеры способов и композиций согласно настоящему изобретению. Следует понимать, что учитывая общее описание, представленное выше, можно осуществить различные другие варианты реализации настоящего изобретения.
Пример 1: Получение тау-белка для иммунизации
Получение мономерного рекомбинантного тау-белка
.,
E. coli
[00364] Рекомбинантный конструкт изоформы 2N4R тау-белка человека (аминокислоты 2-441) объединили с N-концевым His-маркером для облегчения очистки и оценки характеристик. Смнапример, Фигуру 15. Гибридный конструкт клонировали в векторе pET52b (Novagen) и экспрессировали в . Клетки собирали и лизировали в денатурирующих условиях с использованием 7 M хлорида гуанидиния в течение ночи при 4°С и перемешивании. Остатки клеток осаждали при 40000 об/мин в течение 1 часа. Рекомбинатный белок с His-маркером выделяли посредством никель-аффинной хроматографии (аффинная смола Ni-Sepharose excel, GE Healthcare Life Sciences) с последующей эксклюзионной хроматографией (смола Superdex 200, GE Healthcare Life Sciences) при денатурирующих условиях. Хлорид гуанидиния удаляли диализом выделенного белка в 20 мМ MES, 50 мМ NaCl и 1 мМ TCEP при pH 6,8. Затем удаляли His-маркер с помощью протеазы TEV, после чего выполняли окончательную очистку посредством катионнообменной хроматографии (колонка Mono S, GE Healthcare Life Sciences) с целью удаления отщепленного His-маркера. Буфер для очистки содержал 0,1% тритон x-114 (об./об.) для удаления эндотоксинов. Очищенный протеин диализовали в PBS с 1 мМ TCEP. Чистоту и мономерность анализировали с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ и SEC-MALLS. Идентичность подтверждали масс-спектрометрией. Концентрацию белка определяли по УФ-поглощению при длине волны 280 нм. Конечный продукт не содержал эндотоксинов (< 0,5 ЭЕ/мл), согласно кинетическому анализу с лизатом амебоцитов Limulus (LAL).
Получение фосфорилированного тау-белка
2
[00365] Фосфорилированный тау-белок получили с использованием конструкта 2-441 тау-белка, полученного с использованием способа, описанного выше. Белковый конструкт фосфорилировали с помощью 0,5 мкМ киназы PKA (Life Technologies), фосфорилирующей, среди прочих остатков, серин-409. Реакционную смесь инкубировали с 1 мМ АТФ, 5 мМ MgCl при комнатной температуре в течение 72 часов. Фосфорилирование подтверждали масс-спектрометрией. Для удаления киназы использовали эксклюзионную хроматографию (Superdex 75, GE Healthcare Life Sciences). Чистоту, мономерность и уровень эндотоксинов в препарате фосфорилированного белка анализировали в основном в соответствии с вышеприведенным описанием.
Олигомеризация мономерного тау-белка in vitro
[00366] Олигомерный тау-белок получили с использованием конструкта 2-441 мономерного тау-белка. Мономерный белок вначале диализовали в 20 мМ N, N-бис-(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфоновую кислоту (BES), 25 мМ NaCl, рН 7,4, с последующей олигомеризацией с использованием 75 мкМ арахидоновой кислоты (Cayman Chemicals) и 18 кДа гепарина (Sigma Aldrich) в эквимолярной концентрации с белком при 37°C в течение 3 суток. Олигомеризацию подтверждали анализом флуоресценции с тиофлавином Т, динамическим светорассеянием (DLS) и аналитической эксклюзионной хроматографией. Олигомерный тау-белок в некоторых случаях называли ʺолиго-тау-белкомʺ.
Пример 2: Получение антител против тау-белка
Способы
Получение гибридом
Salmonella minnesota
туберкулезной палочки
[00367] Самок мышей C57BL/6JOlaHsd (C57BL/6) и BALB/c OlaHsd (Balb/c) дикого типа (Harlan, США) получили в возрасте 9 недель. Мышей с нокаутом гена тау-белка (B6.129-Mapttm1Hnd/J; The Jackson Laboratory, США) получили в возрасте 6 и 9 недель. Вакцинацию начали в возрасте 12-15 недель. Мышей вакцинировали олигомеризованным тау-белком человека. Перед вакцинацией олиго-тау-белок смешивали с одним из двух адъювантов, использованных в данном исследовании: системой адъювантов Ribi Adjuvant System (Ribi; Sigma-Aldrich, Швейцария) в концентрации 50% (об./об.), или комбинацией одноцепочечных синтетических ДНК-олигодезоксинуклеотидов CpG (CpG; Microsynth, Швейцария) и гидроксида алюминия (Al; Brenntag, Швейцария). Адъювант Ribi представлял собой 2% эмульсию сквалена типа ʺмасло в водеʺ, содержащую монофосфориллипид А (выделенный из ) и синтетический трегалозодикариномиколат (выделенный из фактора жгутикообразования ) в скваленовом масле, 0,2% Tween-80 и воду.
.
[00368] Мышей вакцинировали путем подкожной (п/к) инъекции, за исключением групп D и G, которые получили комбинацию внутрибрюшинного (в/б) введения и введения в область скакательного сустава. Мышам в группе D вводили 50 мкг олиго-тау-белка в/б и 10 мкг олиго-тау-белка в область скакательного сустава. Мышам в группе G вводили 8 мкг олиго-тау-белка в/б и 2 мкг олиго-тау-белка в область скакательного сустава. Смтаблицу 2.
Для вакцинации с применением CpG и Al (CpG/Al) в качестве адьюванта каждая 200-мкл инъекция содержала 60 мкл (30 нмоль) CpG, 1 мг Al и 50 мкг олиго-тау-белка. Мышам всех исследуемых групп выполняли инъекции в 0, 14, 35 и 56 сутки. Мышей, использованных для слияния с миеломными клетками (Nanotools, Германия), дополнительно вакцинировали тремя ежедневными вторичными инъекциями олиго-тау-белка (50 мкг на в/б инъекцию) без добавления адъюванта.
Таблица 2. Мыши и протоколы вакцинации
Исследуемая группа
Линия мышей
Общая доза олиго-тау-белка (мкг/инъекцию)
Адьювант
Путь вакцинации
A
C57BL/6
50
CpG/Al
п/к
B
C57BL/6
50
Ribi
п/к
C
Balb/c
50
CpG/Al
п/к
D
Balb/c
60
CpG/Al
область скакательного сустава+в/б
E
Balb/c
5
CpG/Al
п/к
F
Balb/c
50
Ribi
п/к
G
Нокаут гена тау-белка
10
Ribi
область скакательного сустава+в/б
[00369] Мышей обескровливали и умерщвляли через день после последней из трех вторичных инъекций, спленоциты сливали с миеломными клетками, получая гибридомы, продуцирующие антитела.
Выбор гибридом для субклонирования
[00370] Для слияния клеток мышей разделили на три группы, выполнив в общей сложности 10 экспериментов по слиянию (2 в одной группе, четыре во второй группе и четыре - в третьей группе) и получив 299 гибридом. Жизнеспособные гибридомы культивировали в селективной среде с сывороткой, лучшие гибридомы селектировали для субклонирования, применяя твердофазный ИФА для обнаружения связывания полноразмерного тау-белка человека и олиго-тау-белка, как описано ниже. После ограничивающего разбавления окончательные гибридомы культивировали в бессывороточной среде; среду стабильных колоний собирали для скрининга и отбора антител.
Скрининговый твердофазный ИФА
[00371] Выполняли сбор бессывороточной надосадочной жидкости стабильных гибридом. Надосадочную жидкость, содержащую антитела, представляющие интерес, подвергали скринингу с применением твердофазного ИФА с целью исследования свойств антител и отбора антител для дальнейшей разработки. Твердофазный ИФА использовали для определения следующих свойств: связывания с полноразмерным тау-белком человека (flTau; SignalChem, Канада), связывания с гиперфосфорилированным flTau (Genentech, США), сравнения связывания с олигомерным и мономерным препаратами flTau и связывания с эпитопом(ами) тау-белка для некоторых антител. Вкратце, 96-луночные планшеты MaxiSorp для твердофазного ИФА (Nunc, Дания) покрывали одной из мишеней, указанных в таблице 3.
Таблица 3. Мишени, использованные для скринингового твердофазного ИФА.
Анализ
Схема твердофазного ИФА
Мишень
Связывание с flTau
Прямой твердофазный ИФА
Полноразмерный тау-белок человека (flTau), иммобилизованный в концентрации 1 мкг/мл
Связывание с pTau
Прямой твердофазный ИФА
Полноразмерный тау-белок человека, фосфорилированный <i>in vitro</i> с использованием 4 киназ (GSK3β, Cdk5, РКА и CK1δ; гиперфосфорилированный тау-белок, или pTau), очищенный и иммобилизованный в концентрации 1 мкг/мл
Картирование эпитопа
Прямой твердофазный ИФА
Биотинилированные 15-членные пептиды, перекрывающие область из 441 аминокислоты (АК) тау-белка человека со сдвигом 9 АК и перекрыванием 6 АК, иммобилизованные в концентрации 10 мкг/мл на 96-луночный планшет со стрептавидином
Связывание с олиго-тау-белком
Твердофазный ИФА с захватом
Биотинилированный олигомерный и мономерный flTau с AVI-маркером, захватываемый в растворе тестируемыми иммобилизованными антителами против IgG
[00372] Иммобилизацию выполняли в течение ночи в физиологическом растворе с фосфатным буфером (PBS) при 4°C. Планшеты тщательно промывали 0,05% Tween-20/PBS и блокировали 1% бычьим сывороточным альбумином (БСА) в 0,05% Tween-20/PBS в течение 1 ч при 37°C. Антитело, содержащееся в надосадочной жидкости гибридомы, добавляли к указанным разведениям и инкубировали в течение 2 ч при 37°C, после чего планшеты промывали, как описано ранее.
[00373] Для прямого твердофазного ИФА добавляли вторичные антитела против IgG мыши, конъюгированные с ЩФ (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Великобритания), при разведении 1/6000 в 0,05% Tween-20/PBS на 2 ч при 37 °С. После последней промывки планшеты инкубировали с раствором гексагидрата р-нитрофенилфосфата динатрия (PNPP; Sigma-Aldrich, Швейцария) (субстрата фосфатазы) и считывали при 405 нм с использованием планшет-ридера для твердофазного ИФА (Tecan, Швейцария). Результаты выражали в единицах оптической плотности (O.D.).
[00374] Для твердофазного ИФА с захватом олиго- и моно-тау-белка антитела, содержавшиеся в бессывороточной стерильной надосадочной жидкости гибридом, иммобилизовали на планшетах с иммобилизованным антителом против IgG при 500-кратном разведении, а затем инкубировали с олиго- или моно-тау-белком, сайт-специфически биотинилированным через AVI-маркер. Инкубирование мишени начали при концентрации 5 мкг/мл, а затем разбавили в 8 или 16 раз. Для количественной оценки сигнала на планшет-ридере (Tecan, Швейцария) использовали стрептавидин-ПХ и субстрат ABTS. Результаты выражали в единицах оптической плотности (O.D.).
Оценки сродства
[00375] Сродство неочищенных антител в бессывороточной надосадочной жидкости гибридом оценивали посредством поверхностного плазмонного резонанса с использованием прибора Biacore Т-100 (GE Healthcare, Великобритания). Антитела иммобилизовали на чип биосенсора с антителами против IgG и использовали flTau (SignalChem, Канада) в качестве анализируемого вещества-мишени. Анализ кинетики выполняли с использованием модели Ленгмюра 1:1.
Анализ на основе электрофореза в ДСН-ПААГ и вестерн-блоттинга
[00376] Связывание отобранных антител против любых форм тау-белка с тау-белком в головном мозге человека анализировали путем вестерн-блоттинга (WB), используя лизаты головного мозга трех доноров с БА и трех контрольных доноров соответствующего возраста без БА (Tissue Solutions, Великобритания). Лизаты обработали, получив растворимую фракцию тау-белка, не содержавшую детергента. Обработанные лизаты загрузили в гели с 4-12% бис-трисом (Novex, Life Technologies, Швейцария), перенесли на ПВДФ-мембраны Immobilon и выполнили блоттинг с тестируемыми антителами и с вторичным антителом козы IRDye 800CW против антител мыши (Li-Cor, США).
Твердофазный ИФА с использованием лизатов головного мозга человека
[00377] Для оценки связывания выбранных антител с неденатурированным тау-белком человека в лизатах головного мозга при БА и контрольных лизатах головного мозга антитела из надосадочной жидкости гибридом, а также отрицательные и положительные контрольные антитела иммобилизовали на 96-луночном планшете, как описано выше. Затем выполняли захват и обнаружение тау-белка в растворимых лизатах головного мозга человека от субъектов при БА или контрольных субъектов соответствующего возраста (400 мкг/мл белка, все образцы получены из Tissue Solutions, Великобритания) с использованием поликлонального антитела кролика против любых форм тау-белка (Abcam, Великобритания), а затем - конъюгата ʺантитело против Fcγ-фрагмента IgG кролика-ЩФʺ (Jackson ImmunoResearch, США). Лизаты головного мозга мыши с нокаутом гена тау-белка использовали в качестве отрицательного контрольного образца. Планшеты инкубировали с раствором субстрата фосфатазы pNPP (Sigma-Aldrich) и считывали при длине волны 405 нм с использованием планшет-ридера для твердофазного ИФА (Tecan, Швейцария). Результаты выражали в единицах оптической плотности (O.D.).
Секвенирование антител гибридом
[00378] Лизаты клеток гибридом отправили в Antitope (Antitope, Великобритания) для секвенирования генов вариабельной области. Вкратце, ОТ-ПЦР проводили с использованием пулов вырожденных праймеров для сигнальных последовательностей мыши вместе с праймерами константной области для каждого гена вариабельной области тяжелой цепи (VH) IgG, VH IgM, вариабельной области легкой каппа- (KVL) и λ-VL цепей Ig. мРНК V-области тяжелой цепи амплифицировали с использованием набора из шести пулов вырожденных праймеров (HA-HF), специфичных по отношению к сигнальным последовательностям VH, вместе с IgM или IgG-специфическими праймерами константной области. мРНК V-области легкой цепи амплифицировали с использованием набора из восьми пулов вырожденных праймеров, специфичных по отношению к сигнальным последовательностям, семь из которых были специфичны по отношению к каппа-кластеру (КА-KG) и один - к λ-кластеру (LA), вместе с праймерами константной области κ- или λ-цепи. ПЦР-продукты, полученные в результате успешной амплификации, очищали, клонировали в клонирующем векторе ʺTAʺ (pGEM-T Easy, Promega), трансформированном в E.coli, и секвенировали отдельные колонии. Нуклеотидные и аминокислотные последовательности VH- и VL-областей антител определили в последовательностях 27 гибридом, продуцирующих антитела.
Результаты
Выбор гибридом для субклонирования
[00379] Гибридомы, полученные в каждом из трех циклов слияния (в общей сложности 299 гибридом, полученных из десяти слияний), первоначально анализировали на предмет связывания с flTau, причем отобранные гибридомы дополнительно анализировали на предмет связывания с pTau и олигомеризованным тау-белком. Цель исследования заключалась в отборе антител, в равной степени хорошо связывающих тау-белок и тау-белок с посттрансляционными модификациями, например, фосфорилированный или олигомерный тау-белок. Для этого гибридомы анализировали с целью отбора лучших свойств по отношению к любым формам тау-белка. Для определения области связывания антитела и конкретного эпитопа тау-белка вначале определяли область связывания с использованием различных фрагментов тау-белка, а затем - библиотеки 15-членных перекрывающихся пептидов тау-белка, охватывающих полную последовательность самой длинной изоформы тау-белка человека, содержащую 441 аминокислоту (АК). Группу антител, связывающихся с заранее определенными областями тау-белка, намеренно исключили из эксперимента с целью максимизации связывания с различными формами тау-белка, содержащими посттрансляционные модификации, и всеми шестью различными изоформами тау-белка человека, присутствующими у людей.
[00380] Три серии слияния позволили получить 133 субклонированных стабильных гибридом, которые подвергли скринингу для выявления лучших свойств по отношению к любым формам тау-белка. Комбинацию различных скрининговых анализов использовали для снижения количества гибридом, продуцирующих антитела, обладающие свойствами, предпочтительными для антител против любых форм тау-белка. Для сравнения связывания с flTau и pTau проанализировали 90 гибридом и отобрали 24 гибридомы, показанные на Фигуре 1A-F. Поскольку начальный скрининг выполняли с использованием фрагментов тау-белка с целью избежать отбора антител, связывающихся с областями тау-белка, заведомо характеризующимся высокой плотностью остатков, подвергающихся фосфорилированию при болезни Альцгеймера (БА) и других таупатиях, большинство протестированных антител связывались как с flTau, так и с pTau с аналогичными свойствами связывания, согласно данному твердофазному ИФА.
[00381] В некоторых вариантах реализации желательно, чтобы антитело против любых форм тау-белка связывало мономерные и олигомерные формы тау-белка без явного предпочтения по отношению к какому-либо из них. Схему твердофазного ИФА с захватом разработали с целью определения связывания антител как с мономерными, так и с олигомерными формами flTau. Твердофазный ИФА в режиме захвата сохранял олигомерную конформацию заранее олигомеризованного тау-белка и мономерное состояние моно-тау-белка лучше, чем в режиме прямого твердофазного ИФА с иммобилизацией мишеней на планшете для твердофазного ИФА.
[00382] Выполнили каждый вариант анализа, непосредственно сравнивая связывание двух форм тау-белка со всеми 90 тестируемыми антителами. Антитела, заведомо характеризующиеся предпочтительным связыванием с олиго-тау-белком или не различающие указанные две формы тау-белка, использовали в качестве контрольных антител при каждом варианте анализа. Результаты для 18 гибридом показаны на Фигуре 2A-E.
[00383] Картирование эпитопов имеет важное значение для отбора антител с хорошими свойствами по отношению к любым формам тау-белка, поскольку позволяет исключить антитела, связывающиеся с областями с высокой плотностью потенциальных остатков pTau (Ser, Thr и Tyr). Связывание со всеми шестью изоформами тау-белка человека также использовали в качестве критерия отбора антител против любых форм тау-белка. Эпитопы, обеспечивающие связывание первоначально отобранных антител с любыми формами тау-белка, проверяли и определяли с повышенной точностью, используя библиотеку из 49 пептидов, длина каждого из которых составляла 15 аминокислот (АК), охватывающих полноразмерный тау-белок человека с перекрытием 6 АК остатков и смещением 9 АК. Нумерация остатков была основана на самой длинной изоформе тау-белка человека (441 АК). Неочищенные антитела использовали при высоком разбавлении (1/10) для проверки связывания или отсутствия связывания со всеми пептидами. Скрининг антител 112 гибридом, ранее отобранных с помощью твердофазного ИФА, продемонстрировал связывание с 20 различными эпитопами тау-белка (таблица 4).
Таблица 4. Эпитопы тау-белка для антител
Антитело
Эпитоп тау-белка (АК)
Антитело
Эпитоп тау-белка (АК)
14F5-D9
1-15
30A1-C9
73-87
94B2-B12
1-15
30A1-D11
73-87
94B2-C1
1-15
28F5-G8
82-96
10A1-A6
10-24
28F5-H8
82-96
10A1-D8
10-24
33G9-A11
100-114
11E10-B8
10-24
33G9-B9
100-114
17G12-C11
10-24
52F2-E12
100-114
17G12-D5
10-24
52F2-E8
100-114
19H6-A1
10-24
52F6-B3
100-114
19H6-F7
10-24
52F6-F11
100-114
19H6-G8
10-24
56D3-C8
100-114
37D3-H12
10-24
56D3-E9
100-114
37D3-H9
10-24
70B10-B6B2
100-114
37E8-B4
10-24
70B10-B6G12
100-114
37E8-C2
10-24
78E4-D11
100-114
3A4-H4
10-24
78E4-G4
100-114
3H10-E12(A)
10-24
30G1-B2
109-123
3H10-G12
10-24
30G1-C11
109-123
44B7-A9
10-24
49G10-F4
109-123
44B7-B1
10-24
49G10-H1
109-123
54C1-H11
10-24
65B1-A2
109-123
61E7-B11
10-24
65B1-A7
109-123
61H10-B4
10-24
73H6-B8
109-123
61H10-H3
10-24
113F5-A8
109-123
127G7-A5
10-24
113F5-F7
109-123
127G7-E7
10-24
125B11-H3
109-123
115A4-A3
10-24
26C1-B11
118-132
115A4-B1
10-24
26C1-C8
118-132
125B11-B6
10-24
74H10-A3
118-132
73C8-A5
10-24
74H10-C3
118-132
73C8-G4
10-24
78F3-B2
118-132
76B4-D9
10-24
78F3-E7C6
118-132
76B4-H7
10-24
78F3-E7H7
118-132
123E9-B3
19-33
126H12-G6
136-150
15C6-A7
19-33
126H12-H7
136-150
19F8-B1
19-33
22G7-C9
154-168
24A11-D5
19-33
22G7-G9
154-168
63H3-B2
19-33
111B8-C4
163-177
63H3-D8
19-33
111B8-F10
163-177
64B9-E11
19-33
66F5-A1
172-177
64B9-F12
19-33
66F5-F2
172-177
45D2-C9
19-33
71H8-A1
190-204
45D2-F4
19-33
71H8-D6
190-204
72E12-B2
19-33
83E10-D10
190-204
72G10-A7
19-33
83E10-D6
190-204
72G10-B6
19-33
126F11-B3
217-231
123E9-A1
19-42
126F11-G11
217-231
19F8-C11
19-42
93A8-C9
397-411
7A11-C12
19-42
93A8-D2
397-411
89F4-A2
28-42
89F4-A1
28-44
12A10-E8
37-51
55E7-B12
37-51
72E12-H9
37-51
55E7-F11
37-51
30D12-B5
64-78
21C1-D8
64-78
21C1-G6
64-78
30D12-F6
64-78
31A3-A4
64-78
31A3-A7
64-78
77D1-D2
64-78
77D1-E6
64-78
D
D
D
[00384] Измерения сродства к flTau выполнили для 46 антител посредством ППР на приборе Biacore с определением K. Измерение сродства на Biacore выполняли путем иммобилизации антител на чипе с антителами против IgG и используя flTau в качестве целевого анализируемого соединения. Результаты для 32 антител приведены в таблице 5, причем антитела отсортированы по сродству к flTau. Среди исследованных на предмет сродства к flTau антител 22 антитела обладали сродством лучше 20 нМ, из них 14 антител обладали K ниже 5 нМ, а антитело 37D3-H9 обладало K (сродством), равной 1 нМ.
Таблица 5: Сродство к flTau
Антитело
K<sub>D</sub>(нМ)
Антитело
K<sub>D</sub>(нМ)
37D3-H9
1
3A4-H4
7,8
54C1-H11
1,5
52F6-F11
8,4
123E9-A1
1,8
3A4-A12
10,1
94B2-C1
1,9
44B7-B1
14,7
24A11-D5
2
3H10-E12
19,4
113F5-F7
2,4
10A1-D8
19,6
89F4-A1
2,9
52F2-E8
26
19F8-B1
2,9
19H6-F7
39
61E7-C4
3,3
34H4-F5
43
126F11-G11
4,2
19H6-A1
56
26C1-C8
4,3
34H4-B10
69
93A8-D2
4,3
17G12-C11
118
37E8-B4
4,4
45H12-C4
139
61E7-B11
4,8
17G12-D5
161
125B11-H3
6
61H10-H3
177
54C1-C3
6,8
11E10-C3
399
[00385] Для проверки связывания выбранных антител ко всем шести изоформам тау-белка человека выполнили электрофорез в ДСН-ПААГ с лэддером на основе рекомбинантного тау-белка, содержащим все шесть изоформ, и вестерн-блоттинг (WB) с использованием трех выбранных антител против тау-белка. Все три антитела против любых форм тау-белка связывали все шесть изоформ тау-белка (Фигура 3). Кроме того, гомогенаты головного мозга трех субъектов с БА и двух контрольных субъектов соответствующего возраста одновременно анализировали с целью сравнения. Как и ожидалось на основе картируемых эпитопов, все три антитела, протестированные в данном анализе, продемонстрировали связывание со всеми шестью изоформами тау-белка. Различие, наблюдавшееся в картине полос у субъектов-людей с БА и контрольных доноров, может отражать большую степень фосфорилирования и/или ДСН-стабильные агрегаты тау-белка, которые, как ожидается, должны присутствовать у субъектов с БА.
[00386] Образцы от людей с болезнью Альцгеймера (БА) и контрольные образцы дополнительно анализировали посредством твердофазного ИФА с захватом в неденатурирующих условиях с целью проверки связывания с тау-белком в головном мозге людей. Образцы лизатов двух субъектов с БА и двух контрольных субъектов соответствующего возраста без БА, обработанные для выделения растворимого тау-белка, анализировали в 8 разведениях, тестируя три антитела (Фигура 4А-С).
[00387] Последовательности вариабельной цепи антитела определили для 27 гибридом (Antitope, Великобритания). Белковые последовательности некоторых вариабельных доменов и гипервариабельных областей (HVR) тяжелых и легких цепей показаны в таблице последовательностей.
Пример 3: Исследование характеристик антител против тау-белка
[00388] Тяжелые и легкие цепи антитела конструировали посредством синтеза генов и субклонирования полученной ДНК в экспрессионных векторах млекопитающих для IgG2a мыши (тяжелая цепь) и каппа-цепи (легкой цепи) мыши. Антитела экспрессировали в клетках СНО или 293T путем временной совместной трансфекции плазмид для тяжелой цепи и легкой цепи и очищали с использованием аффинной смолы MabSelectSure (GE Healthcare Life Sciences). Очищенные рекомбинантные антитела подвергали скринингу на предмет связывания с мономерным тау-белком на приборе Biacore T200 для поверхностного плазмонного резонанса с использованием набора для захвата IgG мыши и чипа Series S CM5. Антитела в формате mIgG2a, разбавленные 10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,05% Tween-20 (буфером для анализа, HBSP) захватывали в течение 30 или 45 секунд в концентрации 1 мкг/мл (антитела 26C1, 94B2-C1, 52F6-F11.v1, 52F6-F11.v2, 11E10-B8, 55E7-F11, 125B11-H3, 123E9-A1, 30G1-B2, 66F5-A1, 89F4-A1, 93A8-D2 и 126F11-G11) или в течение 70 или 150 секунд в концентрации 0,1 мкг/мл (антитела 19H6-F7, 3A4-H4, 54C1-H11 и 37D3-H9) при скорости потока 10 мкл/мин. Связывание мономера тау-белка в HBSP отслеживали при 25°C, скорости потока 30 мкл/мин и концентрациях 16, 31, 63, 125, 125, 250 и 500 нМ для антител 26C1 и 94B2; 16, 31, 63, 125, 125, 250, 500 и 1000 нМ для антител 52F6-F11.v1 и 52F6-F11.v2; 6, 19, 56, 56, 167 и 500 нМ для антител 11E10-B8, 55E7-F11 и 125B11-H3; 5, 16, 49, 148, 148, 444, 1333 и 4000 нМ для антител 123E9-A1, 30G1-B2, 66F5-A1, 89F4-A1, 93A8-D2 и 126F11-G11; 0,4, 1,6, 6,3, 2,5, 100 и 400 нМ для 19H6-F7; и 0,2, 0,8, 4, 4, 20 и 100 нМ для 3A4-H4, 54C1-H11 и 37D3-H9. Время ассоциации и диссоциации отслеживали в течение 180-480 секунд и 300-600 секунд, соответственно. Антитело 37D3-H9 отобрали для дальнейшего анализа из-за высокого сродства (таблица 6) и отсутствия мотивов гликозилирования NXS/T в CDR.
D
Таблица 6: K (нМ) антител мыши к мономеру тау-белка человека. Данные представляют собой результат использования модели связывания 1:1.
Антитело
K<sub>D</sub> (нМ)
k<sub>on</sub> (1/Mс)
k<sub>off</sub> (1/с)
26C1
17
4 × 10<sup>4</sup>
7 × 10<sup>-4</sup>
94B2-C1
6
5 × 10<sup>4</sup>
3 × 10<sup>-4</sup>
54C1-H11
0,6
3 × 10<sup>5</sup>
2 × 10<sup>-4</sup>
3A4-H4
12
3 × 10<sup>4</sup>
3 × 10<sup>-4</sup>
37D3-H9
1,6
1 × 10<sup>5</sup>
1 × 10<sup>-4</sup>
19H6-F7
10
2 × 10<sup>5</sup>
2 × 10<sup>-3</sup>
11E10-B8
108
2 × 10<sup>5</sup>
2 × 10<sup>-2</sup>
55E7-F11
171
2 × 10<sup>5</sup>
4 × 10<sup>-2</sup>
125B11-H3
5
5 × 10<sup>4</sup>
3 × 10<sup>-4</sup>
123E9-A1
52
4 × 10<sup>5</sup>
2 × 10<sup>-2</sup>
30G1-B2
20
4 × 10<sup>5</sup>
8 × 10<sup>-3</sup>
66F5-A1
105
8 × 10<sup>4</sup>
8 × 10<sup>-3</sup>
89F4-A1
27
3 × 10<sup>5</sup>
7 × 10<sup>-3</sup>
93A8-D2
6
3 × 10<sup>5</sup>
2 × 10<sup>-3</sup>
126F11-G11
3
2 × 10<sup>6</sup>
4 × 10<sup>-3</sup>
52F6-F11.v1
15
5 × 10<sup>4</sup>
7 × 10<sup>-4</sup>
52F6-F11.v2
5
7 × 10<sup>4</sup>
4 × 10<sup>-4</sup>
37D3-H9 демонстрировало авидность при связывании с тау-белком
-4
-5
[00389] Мономерный тау-белок человека ковалентно присоединяли к чипу Biacore Series S CM5 с использованием набора Biacore Amine Coupling Kit (GE Life Sciences), что приводило к иммобилизации до уровня приблизительно 128 РЕ. Прямое связывание 37D3-H9 с Fab и IgG форматами отслеживали с использованием экспериментального формата кинетики в течение одиночного цикла с пятью периодами ассоциации по 300 с и концентраций антитела 1, 2, 4, 8 и 16 нМ (IgG) или 5, 10, 20, 40 и 80 нМ (Fab). Диссоциацию отслеживали в течение 7200 секунд (Fab) или 14400 секунд (IgG). Значение скорости диссоциации рассчитывали путем аппроксимации модели связывания 1:1 по отношению к данным. Рассчитанные скорости диссоциации составляли 5,0×10 для Fab 37D3-H9 и 1,1×10 для IgG 37D3-H9 (45-кратное различие). На Фигуре 5 показано различие скоростей диссоциации Fab (левый график) и IgG (правый график), что указывало на демонстрацию авидности IgG 37D3-H9.
Пример 4: Гуманизация антител против тау-белка
[00390] Антитело 37D 3-H9 гуманизировали путем пересадки CDR антитела и выбранных каркасных остатков вариабельной области на консенсусный каркас антитела человека (Dennis, M.S. (2010). CDR repair: A novel approach to antibody humanization. In Current Trends in Monoclonal Antibody Development and Manufacturing, S. J. Shire, W. Gombotz, K. Bechtold-Peters and J. Andya, eds. (Springer, New York), pp. 9-28). Оценивали пересадку на консенсусный каркас VH3, Vκ2 и Vκ1. Пересадка тяжелой цепи включала остаток антитела мыши в положении 49 (система нумерации по Kabat). Пересадка Vκ2 включала остатки антитела мыши в положениях 2 и 4 каркаса. Пересадка Vκ1 включала остатки антитела мыши в положениях 2, 4 и 43 каркаса. Гуманизированные варианты сконструировали путем синтеза генов и субклонирования в экспрессионных векторах млекопитающих для IgG1 или IgG4 и каппа-цепи человека. Антитела экспрессировали путем совместной трансфекции плазмид тяжелой и легкой цепи в клетки CHO и очищали с использованием аффинной смолы MabSelect Sure. Гуманизированные варианты подвергли скринингу на предмет сродства к мономеру тау-белка человека с использованием набора Biacore для захвата IgG человека, чипа Series S CM5 и прибора Biacore T200. Антитела разбавляли до 2 мкг/мл и захватывали в течение 15 секунд при скорости 10 мкл/мин. Ассоциацию и диссоциацию 100, 33, 11 и 3,7 нМ мономера тау-белка человека в 10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,05%, Tween-20 (буфер для анализа, HBSP) отслеживали в течение 180 и 600 секунд, соответственно, при скорости потока 30 мкл/мин. К результатам применили модель связывания 1:1 (таблица 7).
Таблица 7: Скрининг сродства гуманизированных вариантов мономерного тау-белка человека
Вариант антитела
Каркас легкой цепи
K<sub>D</sub> (нМ)
hu37D3-H9.v1
Каппа1
4,1
hu37D3-H9.v2
Каппа1
5,6
hu37D3-H9.v3
Каппа1
8,8
hu37D3-H9.v4
Каппа1
8,2
hu37D3-H9.v5
Каппа-2
1,9
hu37D3-H9.v6
Каппа-2
3,5
hu37D3-H9.v7
Каппа-2
27,0
hu37D3-H9.v8
Каппа-2
10,2
hu37D3-H9.v9
Каппа-2
13,2
hu37D3-H9.v10
Каппа-2
14,3
hu37D3-H9.v11
Каппа-2
74,8
hu37D3-H9.v12
Каппа-2
21,6
hu37D3-H9.v13
Каппа-2
9,0
hu37D3-H9.v14
Каппа-2
10,8
hu37D3-H9.v15
Каппа-2
19,0
hu37D3-H9.v16
Каппа-2
27,2
hu37D3-H9.v17
Каппа-2
8,1
hu37D3-H9.v18
Каппа-2
13,4
hu37D3-H9.v19
Каппа-2
55,7
hu37D3-H9.v20
Каппа-2
36,9
hu37D3-H9.v21
Каппа-2
38,1
hu37D3-H9.v22
Каппа-2
36,6
hu37D3-H9.v23
Каппа-2
81,1
hu37D3-H9.v24
Каппа-2
56,6
[00391] Варианты антитела hu37D3-H9.v1, hu37D3-H9.v2, hu37D3-H9.v5 и hu37D3-H9.v6 в дальнейшем исследовали посредством поверхностного плазмонного резонанса с дополнительными концентрациями антитела и более длительным временем ассоциации/диссоциации. Эти варианты анализировали в расширенном диапазоне концентраций мономера тау-белка человека (1,2, 3,7, 11,1, 11,1, 33,3, 100 нМ) и при увеличенной продолжительности ассоциации (300 секунд) и диссоциации (1200 секунд). К результатам применили модель связывания 1:1 (таблица 8).
Таблица 8: Подробный анализ кинетики связывания отобранных вариантов с тау-белком человека посредством поверхностного плазмонного резонанса
Вариант антитела
Каркас легкой цепи
K<sub>D</sub> (нМ)
hu37D3-H9.v1
Каппа1
1,1 нМ, 1,0 нМ
hu37D3-H9.v2
Каппа1
1,2 нМ
hu37D3-H9.v5
Каппа-2
0,8 нМ
hu37D3-H9.v6
Каппа-2
1,4 нМ
. Опубликованную
et al
J. Biol. Chem
[00392] В некоторые антитела IgG4 включали мутацию YTE (M252Y/S254T/T256E). Описано, что мутации домена связывания рецептора Fc новорожденных (FcRn), например, M252Y, S254T и T256E (YTE) увеличивали связывание с FcRn и тем самым увеличивали время полужизни антител. Смпатентную заявку США № 2003/0190311 и Dall'Acqua ., . 281:23514-23524 (2006).
[00393] Антитело 125B11-H3 гуманизировали с использованием консенсусных каркасов VH3 и Vκ1. Пересадка тяжелой цепи включала остатки антитела мыши в положении 78 (система нумерации по Kabat). Пересадка Vκ1 включала остатки антитела мыши в положениях 43 и 87 каркаса. Легкую цепь 113F5-F7 также гуманизировали с использованием каркаса Vκ1 и дополнительных остатков антитела мыши в положениях 43 и87. Гуманизированные варианты тяжелых цепей (125B11) и легких цепей (125B11 и 113F5-F7) совместно трансфицировали в нескольких комбинациях и очищали в 96-луночном формате, как описано выше. Затем гуманизированные варианты подвергли скринингу на предмет сродства к мономеру тау-белка человека с использованием набора Biacore для захвата IgG человека, чипа Series S CM5 и прибора Biacore T200. Антитела разбавляли до 2 мкг/мл и захватывали в течение 15 секунд при скорости 10 мкл/мин. Ассоциацию и диссоциацию 0, 100 и 500 нМ мономера тау-белка человека в HBSP отслеживали в течение 180 и 300 секунд, соответственно, при скорости потока 40 мкл/мин. К результатам применили модель связывания 1:1 (таблица 9).
Таблица 9: Скрининг гуманизированных вариантов 125B11-H3 и 113F5-F7 посредством поверхностного плазмонного резонанса
K<sub>D</sub> при скрининге (нМ)
Гуманизированный вариант тяжелой цепи 125B11
HC1
HC2
HC3
HC4
HC5
HC6
Гуманизированный вариант легкой цепи 125B11
LC1
16, 19
18
18
15
85
-
LC2
20
20
19
14
-*
NT
LC3
21
23
20
15
-
-
LC4
23
22
20
17
>100
>100
Гуманизированный вариант легкой цепи 113F5-F7
LC1
57
61
54
44
-
-
LC2
67
68
55
47
-
-
LC3
61
64
54
47
>100
-
LC4
71
77
65
51
-
-
* Минимальное связывание с мономером тау-белка;
NT=не тестировали.
[00394] Варианты hu125B11.v17 (HC3+LC1), hu125B11.v26 (HC4+LC2) и hu125B11.v28 (HC4+LC4) отобрали для анализа кинетики с высоким разрешением на основании скрининга сродства (таблица 10). Антитело 94B2-C1 гуманизировали с использованием каркасов VH1 и Vκ2. Пересадка тяжелой цепи также включала остатки антитела мыши в положении 28, 29, 67, 69, 71 и 73 (система нумерации по Kabat). Пересадка Vκ2 включала остатки антитела мыши в положениях 2, 36 и 46 каркаса. Комбинации восьми тяжелых цепей и восьми легких цепей экспрессировали, очищали и подвергли скринингу посредством поверхностного плазмонного резонанса (ППР), как описано выше для 125B11. Результаты ППР-скрининга представлены в таблице 11. Вариант hu94B2.v105 (вариант тяжелой цепи 94B2.HC1, вариант легкой цепи 94B2.LC13) отобрали для подробного ППР-исследования (таблица 11).
Таблица 10: Кинетические данные для отобранных гуманизированных вариантов антител против тау-белка
Антитело
Изотип
K<sub>D</sub>(нМ)
k<sub>on</sub>(1/Mс)
k<sub>off</sub>(1/с)
hu125B11.v17
hIgG1
10,5
0,8 × 10<sup>5</sup>
0,8 × 10<sup>-3</sup>
hu125B11.v26
hIgG1
9,5
0,7 × 10<sup>5</sup>
0,7 × 10<sup>-3</sup>
hu125B11.v28
hIgG1
10,2
0,7 × 10<sup>5</sup>
0,7 × 10<sup>-3</sup>
hu94B2.v105
hIgG1
3,7
0,8 × 10<sup>5</sup>
0,3 × 10<sup>-3</sup>
Таблица 11: Скрининг гуманизированных вариантов 94B2 посредством поверхностного плазмонного резонанса
K<sub>D</sub> при скрининге (нМ)
Гуманизированный вариант легкой цепи 94B2:
LC9
LC10
LC11
LC12
LC13
LC14
LC15
LC16
Гуманизированный вариант тяжелой цепи 94B2:
HC1
3,8*
<sup></sup>
91,5
<sup></sup>
4,1<sup></sup>
<sup></sup>
104,0
<sup></sup>
HC2
5,7
<sup></sup>
89,6
<sup></sup>
7,4
NT
99,6
<sup></sup>
HC3
2,0
<sup></sup>
69,3
<sup></sup>
3,8
<sup></sup>
64,1
<sup></sup>
HC4
61,9
<sup></sup>
<sup></sup>
<sup></sup>
64,1
<sup></sup>
<sup></sup>
<sup></sup>
HC5
2,7
<sup></sup>
62,6
<sup></sup>
4,0
<sup></sup>
72,6
<sup></sup>
HC6
0,9
<sup></sup>
70,1
<sup></sup>
3,0
<sup></sup>
74,1
<sup></sup>
HC7
52,9
<sup></sup>
<sup></sup>
<sup></sup>
57,8
<sup></sup>
<sup></sup>
<sup></sup>
HC8
1,0
<sup></sup>
44,3
<sup></sup>
2,4
<sup></sup>
51,5
<sup></sup>
* Среднее по n=3 повторностям;
hu94B2.v105;
Наблюдали минимальное связывание с мономером тау-белка;
NT=не тестировали.
Пример 5: Анализ стабильности гуманизированных антител против тау-белка
Идентификация химической нестабильности
28
29
30
28
29
30
[00395] Образцы антител подвергались термической стрессовой обработке, чтобы имитировать стабильность в течение срока годности продукта. Образцы диализовали с заменой буфера в 20 мМ ацетатный буфер, pH 5,5 или фосфатный буфер, рН 7,4, и разбавляли до концентрации 1 мг/мл. Один мл образца подвергали стрессовой обработке при 40°С в течение 2 недель, а второй хранили при -70°С в качестве контроля. Затем оба образца гидролизовали с использованием трипсина для получения пептидов, которые можно было анализировать с использованием жидкостной хроматографии (ЖХ) - масс-спектрометрии (МС). Для каждого пептида из образца были получены время удерживания (с помощью ЖХ), а также точная масса с высоким разрешением и информация об ионной фрагментации пептида (информация об аминокислотной последовательности) (с помощью МС). Для пептидов, представляющих интерес (нативных и модифицированных пептидных ионов), получили хроматограммы экстрагированных ионов (XIC) из наборов данных в окне ±10 м.Д.; пики интегрировали для определения площади. Относительный процент модификации рассчитывали для каждого образца по формуле ʺ(площадь модифицированного пептида) разделить на (площадь модифицированного пептида плюс площадь нативного пептида) умножить на 100ʺ. Затем эти относительные процентные показатели сравнивали в контрольном (t=0) и подвергавшемся стрессу (t=2 недели) образцах. Показанные процентные показатели отражали результат вычитания контрольного (t=0) значения из значения после стресса (t=2 недели). Анализ дезамидирования антител hu37D3-H9.v1 и hu37D3-H9.v5 привел к наблюдению, что последовательность NGN (нумерация по Kabat) в пределах CDR-1 легкой цепи была подвержена дезамидированию. Увеличение для дезамидированной последовательности NGN составило 16,5% для hu37D3-H9.v1 и 11% для hu37D3-H9.v5.
Влияние дезамидирования антитела на связывание с антигеном
28
28
28
29
D
D
[00396] Для оценки влияния дезамидирования N на сродство к тау-белку человека было желательно получить два образца с четко различным статусом дезамидирования N. Hu37D3-H9.v5 hIgG4. S228P инкубировали при температуре 40°C в течение двух недель в концентрации 1 мг/мл в физиологическом растворе с фосфатным буфером, рН 7,4. Дезамидирование мотива NG измеряли с помощью ЖХ-МС/МС. Усиление дезамидирования в образце после стресса (t=2 недели) составило 43,1% по сравнению с образцом, не подвергавшимся стрессу (t=0). Антитела, подвергавшиеся и не подвергавшиеся стрессу, анализировали на предмет связывания с тау-белком посредством поверхностного плазмонного резонанса (Biacore) с использованием набора GE Biacore для захвата IgG человека и чипа Series S CM5. hIgG разбавляли до 2 мкг/мл 10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,05% Tween 20 (буфер для анализа, HBSP) и выполняли захват при скорости потока 10 мкл/мин в течение 15 секунд (образец t0) или 17 секунд (образец t2). Данные о кинетике собирали для мономера тау-белка человека, введенного в концентрации 0, 3,1, 6,3, 12,5, 25, 25, 50 и 100 нМ в HBSP при скорости потока 30 мкл/мин, продолжительности фазы ассоциации 300 с и фазы диссоциации - 1800 с. Между циклами поверхность регенерировали с использованием 30-секундной инъекции 3 M хлорида магния при скорости 10 мкл/мин. Модель связывания 1:1 аппроксимировали с использованием настроек прибора по умолчанию, включая локальную аппроксимацию параметра ʺRIʺ. Результаты, показанные на Фигуре 6 и в таблице 12, демонстрируют, что хотя в данном эксперименте уровень иммобилизации антитела после стресса выше, чем для антитела, не подвергавшегося стрессу, амплитуда сигнала связывания тау-белка (представленная величиной параметра Rmax) была заметно ниже. После нормировки значения Rmax по различиям в уровне захвата оказалось, что образец после стресса (t=2 недели) демонстрировал приблизительно половинную связывающую способность по отношению к общему тау-белку по сравнению с образцом, не подвергавшимся стрессу (на что указывало 56% снижение нормированного Rmax). Рассчитанное сродство, по-видимому, не изменилось: в данном анализе разность K между образцами ʺt=0ʺ и ʺt=2 неделиʺ составила менее 2% (K=0,7 нМ для t=0 и t=2 недели). Эти результаты согласовывались с тем, что образец ʺt=2 неделиʺ содержал значительно уменьшенную популяцию антитела с высоким сродством.
Таблица 12: Относительное связывание образцов hu37D3-H9.v5, подвергавшихся и не подвергавшихся стрессу, с мономерным тау-белком, измеренное посредством поверхностного плазмонного резонанса
Образец hu37D3-H9.v5 hIgG4.S228P
Уровень лиганда (РЕ)
Rmax (РЕ)
Нормированный Rmax(= Rmax/уровень лиганда)
Изменение нормированного Rmax
Контроль (t=0)
102,9
47,7
0,46
Н/О
После стресса (t=2 недели)
146,8
30,2
0,21
- 56%
Влияние дезамидирования антитела на связывание с антигеном и расчет ʺнормированного Rmaxʺ
J. Chromat
28
28
[00397] С учетом ожиданий, что дезамидирование аспарагина приводит к образованию аспарагиновой кислоты и изоаспарагиновой кислоты (Bischoff R.& Kolbe H.V.J. (1994). . 5, 662, p261-278), анализировали влияние замены Nна D (вариант hu37D3-H9.v5 N28D) на сродство к мономеру тау-белка человека. Сродство оценивали при 25° C с помощью прибора Biacore T200, набора GE Biacore для захвата IgG человека и чипа CM5 Series S. hIgG разбавляли до 2 мкг/мл 10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,05% Tween 20 (буфер для анализа, HBSP) и выполняли захват при скорости потока 10 мкл/мин в течение 22 секунд. Данные о кинетике собирали для мономера тау-белка человека, введенного в концентрации 0, 6,3, 12,5, 25, 25, 50, 100, 200 и 400 нМ в HBSP при скорости потока 30 мкл/мин, продолжительности фазы ассоциации 300 с и фазы диссоциации - 600 с. Между циклами поверхность регенерировали с использованием 30-секундной инъекции 3 M хлорида магния при скорости 10 мкл/мин. При анализе кинетики по полученным данным аппроксимировали модель связывания 1:1 и рассчитывали сродство hu37D3-H9.v5 и hu37D3-H9.v5.3 (также называемого в настоящем документе hu37D3-H9.v5 N28D). Параметры, использованные для аппроксимации модели связывания 1:1, включали настройки прибора по умолчанию для локальной аппроксимации параметра ʺRIʺ. Результаты показаны на Фигуре 7 и в таблице 13.
D
-9
-9
28
28
28
28
[00398] Рассчитанная K для варианта hu37D3-H9.v5 N28D составила 160×10 M по сравнению с 1,5×10 M (среднее, n=4, определение в рамках одного эксперимента) для hu37D3-H9.v5, проанализированного в тех же условиях. Таким образом, преобразование N в D приводит к >100-кратному снижению сродства. Учитывая сравнительно низкое сродство и сравнительно быструю кинетику варианта N28D hu37D3-H9.v5, авторы изобретения решили, что при анализе кинетики смеси вариантов N и D будет доминировать популяция с более высоким сродством, и что на присутствие вариантов с пониженным сродством может указывать снижение нормированного Rmax. Для проверки этого соображения профили связывания вариантов антитела hu37D3-H9.v5 и hu37D3-H9.v5 N28D с тау-белком сравнили с профилем связывания смеси двух данных антител в равных количествах. По сравнению с чистым hu37D3-H9.v5 смесь hu37D3-H9.v5 и hu37D3-H9.v5 N28D 1:1 привела к 45% снижению нормированного Rmax (таблица 13). Авторы изобретения пришли к выводу, что изменения нормированного Rmax после теплового стресса может указывать на сокращение популяции антитела с высоким сродством в образце после стресса. Авторы изобретения полагали, что изменения нормированного Rmax можно использовать для скрининга вариантов hu37D3-H9 на предмет улучшенной стабильности.
Таблица 13: Изменения нормированного Rmax, наблюдаемые при тепловом стрессе hu37D3-H9.v5 и после смешивания hu37D3-H9.v5 с ожидаемым продуктом дезамидирования hu37D3-H9.v5 N28D
Образец
K<sub>D</sub>(нМ)
Rmax(РЕ)
Снижение нормированного Rmax по сравнению с эталоном
Комментарии
hu37D3-H9.v5hIgG1
1,5 ± 0,2
76,1 ± 0,4
Эталон
Среднее +/- стандартное отклонение для четырех анализов в пределах одного эксперимента
hu37D3-H9.v5 N28DhIgG1
160
81,0
4%
hu37D3-H9.v5 иhu37D3-H9.v5 N28DhIgG1
2,0
46,4
45%
Два антителасмешали в соотношении 1:1
hu37D3-H9.v5hIgG4.S228P, t=0
1,5
68,8
3%
Контроль дляобразца после стресса
hu37D3-H9.v5hIgG4.S228P, t=2 недели
1,5
33,4
54%
образца после стресса
*Нормированный Rmax=Rmax (РЕ)/уровень лиганда (РЕ); Нормированный Rmax для эталонного антитела=0,33 (среднее значение по четырем определениям в рамках одного эксперимента, стандартное отклонение <0,01).
Оптимизация и отбор антител
28
29
30
31
[00399] С помощью Biacore выполнили оценку девяноста вариантов 37D3-H9 с целью сравнения их функциональной стабильности при наличии двухнедельного периода теплового стресса (40° C) или без него. Эти варианты включали большинство одиночных мутаций мотива NGNT, двойных мутантов, содержащих мутацию G29A, двойные мутации Asn-28 и Tyr-32, способные функционально заменить их на остатки, соединенные водородными связями, а также все возможные перестановки остатков 2, 4, 33 и 93, а также остатков, присутствующих в исходном антителе 37D3-H9 или соответствующих остатков эмбрионального варианта. Кроме того, протестировали мутации в контексте остатка 1 (Asp или Glu), который не оказывал влияния на сродство или стабильность остатка Asn-28.
D
[00400] Антитела экспрессировали путем временной трансфекции клеток Expi293 в 96-луночном формате и автоматизированной очистки на жидкостной системе Tecan freedom EVO 200 с 500-мкл головкой MCA96. Вкратце, IgG в 1 мл культуры захватывали, используя пользовательские колонки-наконечники, содержавшие 20 мкл смолы MabSelect SuRe (Glygen Corp & GE Healthcare). После промывки 1 X PBS (рН 7,4) IgG элюировали в 160 мкл 50 мМ фосфорной кислоты (рН 3) и нейтрализовали 12 мкл 20 X PBS (рН 11). Колонки-наконечники MabSelect SuRe наконечник колонны очищали 0,1 М NaOH и регенерировали 1 X PBS (рН 7,4), что позволяло использовать их до 15 раз подряд. Очищенные антитела в 96-луночном формате нормировали до концентрации 0,1 мг/мл с использованием роботизированной жидкостной системы Hamilton Star. Образцы ʺдо стрессаʺ хранились при температуре приблизительно 4 °C, а образцы ʺпосле стрессаʺ инкубировали при 40°C в течение двух недель в аппарате для ПЦР. Функциональную стабильность вариантов сравнивали посредством кинетических экспериментов с использованием поверхностного плазмонного резонанса и препаратов антител ʺдо стрессаʺ и ʺпосле стрессаʺ. Оценку антител выполняли с использованием чипа CM5 Series S для захвата антител человека, набора GE Biacore для захвата IgG человека и прибора Biacore T200. Антитела, разбавленные до 2 мкг/мл, иммобилизовали при времени инъекции 15 секунд и скорости потока 10 мкл/мин. Связывание с мономером тау-белка в концентрации 0 нМ, 26,5 нМ и 265 нМ при 25°C и скорости потока 40 мкл/мин отслеживали в течение фазы ассоциации продолжительностью 180 секунд с последующей фазой диссоциации продолжительностью 300 секунд. Образцы анализировали в 10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,05% Tween 20 (HBSP) с использованием формата кинетики с множественными циклами. Данные анализировали с использованием программного обеспечения BIAevaluation, выполняя аппроксимацию модели связывания 1:1. Полученные значения сродства (K) приведены на Фигуре 8А-D. Кроме того, рассчитывали индекс стабильности, исходя из соображения, что антитела с ухудшенным сродством (вследствие, например дезамидирования ключевых остатков), должны вносить равный вклад в уровень захвата IgG (ʺуровень лигандаʺ), но меньший вклад в измеряемое связывание тау-белка, и что это должно отражаться в экспериментально полученном значении Rmax. Для учета изменений количества каждого захваченного антитела Rmax нормировали по уровню захвата антител (измеряемому как ʺуровень лигандаʺ, количество единиц ответа при захвате антитела). Таким образом, нормированный Rmax рассчитывали как отношение экспериментального значения Rmax (единицы=РЕ) к ʺуровню лигандаʺ (показателю оценки, представляющему собой количество РЕ, зарегистрированное на этапе захвата hIgG, единицы=РЕ), а индекс стабильности в данном случае рассчитывали как отношение нормированного Rmax (после стресса) к нормированному Rmax (до стресса).
28
29
30
[00401] Отобранные антитела экспрессировали путем временной трансфекции клеток CHO и очищали. Эти антитела затем подвергали стрессу в течение двух недель в концентрации 1 мг/мл и анализировали дезамидирование посредством ЖХ-МС/МС с использованием RCM-триптического пептидного картирования с восстановлением DTT, кэпированием IAA и гидролизом при рН 8,2. Результаты (таблица 14) показали, что вариант hu37D3-H9.v28.A4 обладал пониженной подверженностью дезамидированию мотива NGN. Снижение дезамидирования hu37D3-H9.v28.A4 было неожиданным, поскольку остатки не находятся в непосредственной близости от остатка Asn-28 (Фигура 9), и неясно, каким образом мутация F33L могла стабилизировать Asn-28.
Таблица 14: Стабильность вариантов hu37D3-H9.v28.A4 в стресс-тестах по отношению к дезамидированию
Антитело
Условия теплового стресса
Усиление дезамидированияN<sup>28</sup>G<sup>29</sup>N<sup>30</sup> легкой цепи
hu37D3-H9.v1
hIgG1
40°C в ацетатном буфере, pH 5,5
16,5%
hu37D3-H9.v5
hIgG1
40°C в ацетатном буфере, pH 5,5
11%
hu37D3-H9.v28.A4
hIgG1
40°C в ацетатном буфере, pH 5,5
N<sup>28</sup>:2,8%N<sup>30</sup>:0,2%
37°C в PBS pH 7,4
N<sup>28</sup>:5,3%N<sup>30</sup>:Н/О
hIgG4.S228P.YTE
40°C в ацетатном буфере, pH 5,5
N<sup>28</sup>:0%N<sup>30</sup>:0%
37°C в PBS pH 7,4
N<sup>28</sup>:10,4%N<sup>30</sup>:2,0%
Пример 6: Отбор и исследование характеристик гуманизированного антитела против тау-белка
Отбор и исследование характеристик антитела: связывание с тау-белком человека
[00402] Сродство отобранных антител оценивали при 25°C с помощью прибора Biacore T200, набора GE Biacore для захвата IgG человека и чипа CM5 Series S. hIgG разбавляли до 0,25 мкг/мл 10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,05% Tween 20 (буфер для анализа, HBSP) и выполняли захват при скорости потока 10 мкл/мин в течение 150 секунд. Данные о кинетике собирали для мономера тау-белка человека, введенного в концентрации 0, 0,4, 1,2, 3,7, 11, 11, 33 и 100 нМ в HBSP при скорости потока 30 мкл/мин, продолжительности фазы ассоциации 300 с и фазы диссоциации - 600 с. Между циклами поверхность регенерировали с использованием двух последовательных 30-секундных инъекций 3 M MgCl при скорости 10 мкл/мин. Данные аппроксимировали согласно модели связывания 1:1 (таблица 15).
Таблица 15: Кинетические данные для отобранных гуманизированных вариантов антител против тау-белка
Антитело
Изотип
K<sub>D</sub>(нМ)
k<sub>on</sub>(1/Mс)
k<sub>off</sub>(1/с)
hu37D3-H9.v28.A4
hIgG1
1,5
6,9 × 10<sup>5</sup>
1,1 × 10<sup>-3</sup>
hu37D3-H9.v5
hIgG1
1,0
7,5 × 10<sup>5</sup>
0,8 × 10<sup>-3</sup>
hu37D3-H9.v5
hIgG4.S228P
1,3
7,1 × 10<sup>5</sup>
0,9 × 10<sup>-3</sup>
hu37D3-H9.v1
hIgG4.S228P
2,0
6,7 × 10<sup>5</sup>
1,3 × 10<sup>-3</sup>
Исследование характеристик антител: связывание с тау-белком человека в формате hIgG4.S228P.YTE
[00403] Сродство оценивали при 25° C с помощью прибора Biacore T200, набора GE Biacore для захвата FAb человека и чипа CM5 Series S. hIgG разбавляли до 0,5 мкг/мл 10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,05% Tween 20 (буфер для анализа, HBSP) и выполняли захват при скорости потока 10 мкл/мин в течение 180 секунд. Данные о кинетике собирали для мономера тау-белка человека, введенного в концентрации 0, 0,4, 1,2, 3,7, 11, 11, 33 и 100 нМ в HBSP при скорости потока 30 мкл/мин, продолжительности фазы ассоциации 300 с и фазы диссоциации - 600 с. Между циклами поверхность регенерировали с использованием двух последовательных 60-секундных инъекций 10 мM глицина (pH 2,1). Данные аппроксимировали согласно модели связывания 1:1. Данные о кинетике представлены в таблице 16.
Таблица 16: Кинетика связывания hu37D3-H9.v28.A4 hIgG4.S228P.YTE с мономерным тау-белком человека при анализе с использованием поверхностного плазмонного резонанса
Антитело
Препарат антител
K<sub>D</sub>(нМ)
k<sub>on</sub>(1/Mс)
k<sub>off</sub>(1/с)
hu37D3-H9.v28.A4hIgG4.S228P.YTE
Преп. 1
1,4
6 × 10<sup>5</sup>
9 × 10<sup>-4</sup>
Преп. 2
1,4
6 × 10<sup>5</sup>
9 × 10<sup>-4</sup>
Исследование характеристик антител: связывание с тау-белком яванского макака
[00404] Сродство оценивали при 25° C с помощью прибора Biacore T200, набора GE Biacore для захвата IgG человека и чипа CM5 Series S. hIgG разбавляли до 2 мкг/мл 10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,05% Tween 20 (буфер для анализа, HBSP) и выполняли захват при скорости потока 10 мкл/мин в течение 15 секунд. Данные о кинетике собирали для мономера тау-белка человека, введенного в как минимум пяти различных ненулевых концентрациях от 1,2 и 100 нМ в одной повторности по концентрации. Кинетику оценивали при скорости потока 30 мкл/мин, продолжительности фазы ассоциации 300 секунд и продолжительности фазы диссоциации 600 секунд. Между циклами выполняли 30-секундную регенерирующую инъекцию 3 M хлорида магния при скорости 10 мкл/мин. Результаты аппроксимировали согласно модели связывания 1:1. Данные о кинетике представлены в таблице 17.
Таблица 17: Сродство гуманизированных антител против тау-белка к мономерному тау-белку яванского макака
Антитело
Уровень лиганда (РЕ)
Rmax (РЕ)
K<sub>D</sub> (нМ)
k<sub>on</sub> (1/Mс)
k<sub>off</sub> (1/с)
hu37D3.v28.A4
113,9
62,6
0,7
17 × 10<sup>5</sup>
1 × 10<sup>-3</sup>
hu37D3.v28.F1
126,9
61,2
1,3
12 × 10<sup>5</sup>
2 × 10<sup>-3</sup>
hu37D3.v28.A12
162,6
85,2
1,0
17 × 10<sup>5</sup>
2 × 10<sup>-3</sup>
hu37D3.v29.2
168,6
86,0
1,4
17 × 10<sup>5</sup>
2 × 10<sup>-3</sup>
hu37D3-H9.v5
125,1
55,5
0,6
15 × 10<sup>5</sup>
1 × 10<sup>-3</sup>
hu37D3-H9.v1
130,2
51,7
0,8
20 × 10<sup>5</sup>
1 × 10<sup>-3</sup>
[00405] Гуманизированные антитела hu37D3.v28.A4 и hu37D3.v28.F1 также связывались с фосфорилированным тау-белком (pTau).
Пример 7: Фармакокинетика антитела против тау-белка.
in vivo
[00406] Для оценки фармакокинетики антитела 37D3-H9 mIgG2a против тау-белка находящимся в сознании мышам C57BL/6 однократно вводили внутривенную (в/в) или внутрибрюшинную (в/б) болюсную инъекцию в дозе 10 мг/кг. В различные моменты времени вплоть до 28 дней после введения дозы собирали образцы плазмы с целью определения концентрации антитела против тау-белка.
[00407] Концентрации введенного антитела в плазме мыши измеряли посредством универсального твердофазного ИФА, используя иммобилизованное антитело мыши против muIgG2a с последующим добавлением образцов плазмы, начиная с разведения 1:100, и заканчивая добавлением конъюгата ʺантитело мыши против muIgG2a-биотинʺ, а затем стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена, с целью обнаружения. Анализ характеризовался калибровочной кривой в диапазоне 1,56-200 нг/мл и пределом обнаружения 0,16 мкг/мл. Результаты менее указанного предела обнаружения регистрировали как ʺменее регистрируемого значения (LTR)ʺ.
[00408] На Фигуре 10 показаны результаты фармакокинетического анализа антитела 37D3-H9 mIgG2a против тау-белка. Воздействие и выведение антитела 37D3-H9 mIgG2a против тау-белка у мышей C57BL/6 дикого типа были аналогичны указанным параметрам изотипического контрольного антитела, причем выведение составляло 6,31 мл/сутки/кг.
in vivo
[00409] Для оценки фармакокинетики антитела 94B2-C1 mIgG2a против тау-белка и антитела 125B11-H3 mIgG2a против тау-белка находящимся в сознании мышам C57BL/6 однократно вводили в/б болюсную инъекцию антитела в дозе 10 мг/кг. В различные моменты времени вплоть до 28 дней после введения дозы собирали образцы плазмы с целью определения концентрации антитела против тау-белка.
[00410] Концентрации введенного антитела в плазме мыши измеряли посредством универсального твердофазного ИФА, используя иммобилизованное антитело мыши против muIgG2a с последующим добавлением образцов плазмы, начиная с разведения 1:100, и заканчивая добавлением конъюгата ʺантитело мыши против muIgG2a-биотинʺ, а затем стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена, с целью обнаружения. Анализ характеризовался калибровочной кривой в диапазоне 0,78-100 нг/мл и пределом обнаружения 0,078 мкг/мл. Концентрации также измеряли посредством специфического твердофазного ИФА, используя иммобилизованный рекомбинантный тау-белок с последующим добавлением образцов плазмы, начиная с разведения 1:10, и заканчивая добавлением антитела козы против mIgG2a, конъюгированного с пероксидазой хрена, с целью обнаружения. Анализ характеризовался калибровочной кривой в диапазоне 0,078-10 нг/мл и пределом обнаружения 0,0008 мкг/мл. Результаты менее указанного предела обнаружения регистрировали как ʺменее регистрируемого значения (LTR)ʺ.
.
in vivo
.
[00411] Результаты этих экспериментов приведены на Фигурах 16 и 17. Воздействие и выведение антитела 94B2 mIgG2a против тау-белка у мышей C57BL/6 дикого типа были аналогичны соответствующим параметрам изотипического контрольного антитела при стандартном анализе концентраций, однако при использовании специфического анализа воздействие было более низким, а выведение более быстрым. СмФигуру 16. Выведение, определяемое при стандартном анализе, составляло 4,06 мл/сутки/кг, а при специфическом анализе - 7,53 мл/сутки/кг. Эти результаты показывают, что антитело может со временем подвергаться изменениям , которые нарушают его способность распознавать свою мишень. Воздействие и выведение антитела 125B11-H3 mIgG2a против тау-белка у мышей C57BL/6 дикого типа были аналогичны соответствующим параметрам изотипического контрольного антитела, независимо от вида анализа, используемого для получения концентраций. СмФигуру 17. Выведение, определяемое при стандартном анализе, составляло 4,96 мл/сутки/кг, а при специфическом анализе - 4,90 мл/сутки/кг.
[00412] В таблице 18 показаны фармакокинетические параметры для антител 37D3-H9, 94B2-C1 и 125B11-H3 против тау-белка у мышей.
Таблица 18: Фармакокинетические параметры антител против тау-белка
Способвведения
Анализ
Смакс(мкг/мл)
ППКinf (мкг/мл*сутки)
CL или CL/F(мл/сут/кг)
37D3-H9
в/вв/б
СтандартныйСтандартный
185107
15901680
6,316,76
94B2-C1
в/бв/б
СтандартныйСпецифичный
151141
24601330
4,064,91
125B11-H3
в/бв/б
СтандартныйСпецифичный
127151
20202040
4,964,90
in vivo
Macaca fascicularis
[00413] Для оценки фармакокинетики антител hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P и hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE находящимся в сознании яванским макакам () вводили однократную в/в болюсную инъекцию в дозе 1 мг/кг. В различные моменты времени вплоть до 49 дней после введения дозы собирали образцы плазмы с целью определения концентрации антитела против тау-белка.
[00414] Концентрации введенного антитела в плазме обезьяны измеряли посредством стандартного твердофазного ИФА, используя иммобилизованное антитело овцы против IgG человека с последующим добавлением образцов плазмы, начиная с разведения 1:100, и заканчивая добавлением антитела козы против IgG человека, конъюгированного с пероксидазой хрена, с целью обнаружения. Анализ характеризовался калибровочной кривой в диапазоне 0,156-20 нг/мл и пределом обнаружения 0,02 мкг/мл. Результаты менее указанного предела обнаружения регистрировали как ʺменее регистрируемого значения (LTR)ʺ.
[00415] На Фигуре 11 показаны результаты фармакокинетического анализа hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P и hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE. На рисунке 11 каждый набор данных представляет собой данные для одного животного; линии представляют собой средние значения для всех животных в группе антитела и анализа. В таблице 19 показаны фармакокинетические параметры hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P и hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE у яванских макаков.
Таблица 19: Фармакокинетические параметры hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P и hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE у яванских макаков.
Антитело
Анализ
Смакс(мкг/мл)
ППКinf(сут*мкг/мл)
CL(мл/сут/кг)
Vss(мл/кг)
Антитело hlgG4 против gD
Стандартный
34,6
386
2,66
55,5
hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P
СтандартныйСпецифичный
35,7 ± 2,5935,4 ± 1,37
559 ± 209419 ± 89,9
1,97 ± 0,7432,47 ± 0,581
71,9 ± 16,060,8 ± 3,49
hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P.YTE
СтандартныйСпецифичный
34,5 ± 5,2333,5 ± 2,72
578 ± 43,5520 ± 39,0
1,74 ± 0,1251,93 ± 0,139
60,5 ± 1,8756,5 ± 4,90
Пример 8: Дальнейшее исследование эпитопов антитела против тау-белка
см.,
[00416] После сравнения связывания 37D3-H9 с биотинилированным мономерным тау-белком и биотинилированным пептидом (MAPT_10-24) также выполнили оценку связывания 37D3-H9 с дополнительными биотинилированными пептидами. 96-луночные планшеты Nunc maxisorp покрывали нейтравидином, разбавленным до 2 мкг/мл 50 мМ натрий-карбонатным буфером, рН 9,6, при 4°С в течение >12 часов. Все дальнейшие этапы инкубирования выполняли при комнатной температуре. После покрытия планшеты блокировали блокирующим буфером Superblock™ (PBS) (Thermo Fisher Scientific) в течение двух часов, затем тщательно промывали PBS с 0,05% полисорбатом 20. Затем лунки подвергали воздействию биотинилированных пептидов тау-белка (таблица 20) или биотинилированного мономерного тау-белка с Avi-маркером в концентрации 1 мкг/мл в течение одного часа и промывали, как на предыдущих этапах. Пептиды синтезировали с использованием стандартных Fmoc-реакций твердофазного синтеза (например, Fmoc solid phase peptide synthesis: A practical approach; Chan, W.C., White, P.D., Eds.; Oxford University Press: New York, 2000). Антитела 37D3-H9 mIgG2a и hu37D3-H9.v5 hIgG1, последовательно разбавленные с концентрации 500 нМ до 50 пМ 90% блокирующим буфером Superblock™ (PBS), подвергали связыванию с лунками, покрытыми биотинилированным тау-белком, в течение 90 минут. Лунки промывали, как описано ранее, и обнаруживали связанное антитело с использованием вторичного антитела, конъюгированного с пероксидазой (Invitrogen/Life Technologies), разбавленного 1/1000 блокирующим буфером Superblock™ (антитела кролика против IgG мыши или антителом козы против IgG человека (H+L), соответственно). Через двадцать минут лунки промывали, как описано ранее, и за счет двухкомпонентного субстрата TMB Microwell 2-Component Substrate (KPL) развивался сигнал. Реакцию останавливали путем добавления 1 М фосфорной кислоты и измеряли поглощение при длине волны 450 нм с помощью планшет-ридера SpectraMax M2.
Таблица 20: Последовательности пептидов
Последовательность MAPT
Последовательность пептида
SEQ ID NO:
MAPT(10-24)
VMEDHAGTYGLGDRK
592
MAPT(2-24)
AEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRK
593
MAPT(2-34)
AEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQD
594
MAPT(10-44)
VMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLK
595
.
.
[00417] Результаты описанного эксперимента представлены на Фигуре 12. На Фигуре 12А показано связывание каждого из указанных антител с указанными пептидами. Антитела 37D3-H9 и 94B2-C1 продемонстрировали сильное связывание с фрагментом 10-24 в указанном эксперименте, а антитело 94B2-C1 также продемонстрировало сильное связывание с фрагментом 1-15. Антитела 19F8-C11 и 123E9-A1 продемонстрировали сильное связывание с фрагментом 19-33, а антитело 89F4-A1 продемонстрировало сильное связывание с фрагментами 28-42 и 37-51. СмФигуру 12А. Антитела 37D3-H9 mIgG2a и hu37D3-H9.v5 hIgG1 продемонстрировали сильное связывание с фрагментами 2-24 и 2-34 тау-белка и более слабое связывание с фрагментом 10-24. СмФигуры 12B и 12C. Эти результаты показывают, что антитела 37D3-H9 mIgG2a и hu37D3-H9.v5 hIgG1 связывают эпитоп тау-белка в пределах аминокислот 2-24 зрелого белка.
[00418] В эксперименте по замещению посредством сканирования аланином обнаружили, что мутации Y18A и L20A нарушали связывание антитела мыши 37D3-H9 с фрагментом тау-белка (фрагмент 2-21), что указывало на то, что данное антитело контактирует с этими остатками тау-белка. С использованием серии 15-членных пептидов со смещением обнаружили, что антитело мыши 37D3-H9 демонстрировало аналогичное связывание с фрагментом 9-23 и фрагментом 10-24, а также умеренное связывание с фрагментами 7-21, 8-22 и 11-25.
Пример 9: Исследование характеристик гуманизированных антител 37D3-H9 на основе клеток
Способы
Первичные культуры гиппокампа и микроглии и совместная культура гиппокампа и микроглии
[00419] Диссоциированные первичные нейроны гиппокампа получили из 16-17-дневных эмбрионов мышей C57BL/6Н дикого типа. Клетки высевали на 8-луночные стекла, покрытые PDL/ламинином (Biocoat, 354688 Corning), из расчета 25000 клеток/лунку. Клетки покрывали и поддерживали в NbActiv4 (BrainBits), половину среды заменяли два раза в неделю. Рекомбинатный тау-белок и антитела наносили на культуру после 18 делений клеток.
2
[00420] Для получения культуры микроглии отделяли кору и гиппокамп мышей C57BL/6Н через 1-2 после рождения и культивировали в 10% FBS в среде DMEM в культуральных колбах площадью 225 ммв течение 10-12 дней. Культуральные колбы аккуратно встряхивали для диссоциации микроглии; клетки в 10% FBS в среде DMEM пересевали на 8-луночные стекла, покрытые PDL/ламинином, из расчета 30000 клеток/лунку для визуализации или 48-луночные планшеты без покрытия (3548, Corning) из расчета 100000 клеток/лунку для анализа цитокинов. Через 4-5 часов после покрытия клетки переключали на бессывороточную среду DMEM с низким содержанием глюкозы и поддерживали в течение ночи до обработки рекомбинантным тау-белком и антителами.
2
[00421] Совместные культуры клеток гиппокампа и микроглии Сопредседатель получали путем пересева микроглии, диссоциированной с 225 мм культуральных колб, на 8-луночные стекла с 18-DIV первичными нейронами гиппокампа (12500 клеток микроглии и 25000 нейронов на лунку). Совместные культуры обрабатывали рекомбинантным тау-белком и антителом через 4 часа после посева микроглии.
Обработка рекомбинантным тау-белком и антителами in vitro
o
[00422] Для 18-DIV культур нейронов гиппокампа или совместных культур гиппокампа и микроглии рекомбинантный олигомерный тау-белок человека и антитела (по 500 нМ в соотношении 1:1) или контрольные материалы предварительно инкубировали в среде для культивирования нейронов (кондиционированная среда 18-DIV культуры гиппокампа: свежая NbActiv4 1:1) в течение 1 часа при 37C, а затем их добавляли к клеткам. Клетки инкубировали со смесью тау-белка и антитела или контрольного материала в среде в течение 72 часов (культура гиппокампа) или 48 часов (совместная культура гиппокампа и микроглии). Клетки трижды промывали PBS перед фиксацией.
[00423] Для культур микроглии рекомбинантный олигомерный тау-белок человека и антитела или контрольные материалы предварительно инкубировали в концентрации по 125 нМ (иммуногистохимия/визуализация) или по 250 нМ (анализ цитокинов) в среде DMEM с низким содержанием глюкозы в отсутствие сыворотки в течение 1 часа при 37°C перед добавлением к клеткам. Для иммуногистохимии/визуализации клетки инкубировали со смесью тау-белка и антитела или контрольного материала в течение 10 минут и трижды промывали PBS перед фиксацией. Для анализа цитокинов клетки инкубировали со смесью тау-белка и антитела или контрольного материала в течение 24 часов, и среду из каждой лунки собирали для анализа цитокинов.
Иммуногистохимия, визуализация и количественное определение
[00424] Клетки фиксировали 4% параформальдегидом в PBS в течение 15 мин и пермеабилизовали 0,1% тритоном X-100 в PBS в течение 10 минут. 10% сыворотку осла использовали для блокирования; клетки инкубировали с первичными антителами в PBS в течение ночи при 4°C, а затем с вторичными антителами против соответствующих видов антител, полученных у осла, мечеными флуорофором Alexa (Invitrogen). Использованные первичные антитела представляли собой антитела против тау-белка (DAKO), антитела кролика против N-концевой области тау-белка человека, охватывающей аминокислоты 11-24, антитело против MAP2 (ab5392, Abcam) и антитело против Iba-1 (ab5076, Abcam). На стекла наносили Prolong Gold DAPI (P36935, Invitrogen) и покровные стекла № 1.
[00425] Конфокальную флуоресцентную визуализацию выполняли с помощью LSM780 (Carl Zeiss, Inc.) и программного обеспечения Zen 2010 (Carl Zeiss, Inc.). Для визуализации культур гиппокампа и совместных культур гиппокампа и микроглии получали изображения серии из 5 срезов по оси z с интервалом 0,98 мкм с использованием объектива Plan Apochromat 20x/0,8 M27. Для анализа фрагментации MAP2 сформировали проекцию серии изображений с максимальной интенсивностью по оси z и анализировали изображения с использованием Metamorph (Molecular Devices, Саннивейл, штат Калифорния, США). Для снижения уровня шума использовали медианный фильтр и обратную фильтрацию по ближайшему соседнему элементу. Длину нейритов и тела клетки анализировали с помощью модуля разрастания нейритов с последующей морфологической обработкой. Фрагменты менее 15 пикселей (6,225 мкм) нормировали по общей длине сигнала для оценки степени фрагментации MAP2.
[00426] Микроглию визуализировали с помощью объектива α-Plan Apochromat 100x/1,46 M27. Количественное определение поглощения рекомбинантного тау-белка в клетках выполняли с помощью Image J (1.43u, 64-разрядная версия, National Institute of Health). ROI области клеток отображали вручную, используя сигнал Iba-1 в качестве эталона. Площадь и комплексную интенсивность иммунореактивности тау-белка в ROI измеряли с целью получения иммунореактивности тау-белка, нормированной по площади. Все анализы выполняли без учета условий эксперимента.
Результаты
[00427] Результаты эксперимента представлены на Фигуре 13. Как показано на Фигуре 13А, антитела с полноценной эффекторной функцией не обладали протективными средствами против токсического действия тау-белка в совместной культуре нейронов и микроглии. На Фигуре 13B показаны изображения совместных культур нейронов и микроглии, контактировавшие с олигомерным тау-белком и антителами (нижний график). Антитело 37D3-H9 hIgG4 и hu37D3-H9 hIgG1 (N297G), не обладающее эффекторной функцией, обладало защитными свойствами против токсического действия тау-белка, в то время как 37D3-H9 hIgG1 не обладало ими.
Пример 10: Дозозависимое снижение патологического действия тау-белка у мышей Tau Tg после введения 37D3-H9 IgG2a или 37D3-H9 IgG2a DANG
in vivo
[00428] Трансгенных мышей, экспрессирующих тау-белок P301L человека под контролем промотора Thy1 (Tau P301L-Tg), поддерживали на фоне C57BL/6Н (Charles River). Мышей Tau P301L-Tg и однопометных мышей дикого типа распределяли в экспериментальные группы и раз в неделю внутрибрюшинно (в/б) вводили им IgG2a-контроль (антитело против gp120) в дозе 30 мг/кг, антитело 37D3-H9 WT IgG2a против тау-белка в дозе 3, 10 или 30 мг/кг, антитело 37D3-H9 DANG IgG2a в дозе 3, 10 или 30 мг/кг. DANG относится к мутациям D265A/N297G в IgG2a, нарушающим эффекторные функции. Все растворы для введения антител получали на основе 10 мМ гистидина (pH 5,8), 6% сахарозы, 0,02% Tween 20 в концентрации 10 мг/мл. Лечение начали в возрасте 13 недель. Группы мышей в исследовании содержали самцов, распределенных на 3 когорты. Кроме того, ткани 3 мышей TauP301L-Tg собирали в возрасте 3 месяцев, не подвергая этих мышей лечению, с целью определения исходного уровня патологии на момент начала лечения.
[00429] Для сбора тканей мышей анестезировали 2,5% трибромэтанолом (0,5 мл на 25 г массы тела) и выполняли транскардиальную перфузию PBS. У животных извлекали головной мозг и разрезали его пополам. Правые полушария фиксировали в 4% параформальдегиде в течение ночи при 4°С, а затем переносили в физиологический раствор с фосфатным буфером перед иммуногистохимической обработкой. Левые полушария дополнительно разрезали на льду, а затем замораживали при -80°C для биохимического анализа. У всех мышей с хвостов срезали шерсть для подтверждения генотипов.
[00430] Полушария головного мозга многократно включали в желатиновый матрикс, используя блоки MultiBrain (NeuroScience Associates, Ноксвилл, штат Теннесси, США) и получали корональные срезы толщиной 25 мкм. В пределах каждого блока положение головного мозга рандомизировали относительно генотипа и лечения. Свободно плавающие срезы полушарий головного мозга отдельных мышей или блоков MultiBrain окрашивали, как описано ранее (Le Pichon et al., 2013, PLoS One, 8(4): e62342), но с промывкой в PBS вместо физиологического раствора с трис-буфером и инкубированием основного антитела при 4°С вместо комнатной температуры. Первичное антитело представляло собой антитело кролика против pTau212/214 (полученное собственными силами; 0,01 мкг/мл). Во избежание интенсивного окрашивания фона в случае первичных антител мыши, специфичных по отношению к подтипу, авторы изобретения использовали соответствующее вторичное антитело, специфичное по отношению к данному подтипу (например, биотинилированное антитело против IgG3 мыши, Bethyl А90-111B).
поглощение=-log(интенсивность пропущенного света/интенсивность падающего света))
[00431] Иммунохимически окрашенные препараты визуализировали с помощью системы сканирования всего препарата Leica SCN400 (Leica Microsystems; Буффало-Гров, штат Иллинойс, США) при 200-кратном увеличении с разрешением 0,5 мкм/пиксель. Области, представлявшие интерес (ROI), отображали вручную на 4 соответствующих уровнях гиппокампа на каждое животное, и выполняли автоматизированную количественную оценку окрашивания на этих ROIs с помощью двух конечных показателей, описанных ниже. Все виды анализа изображений выполняли без учета генотипа и экспериментальной группы. Для анализа областей положительных пикселей с целью количественного определения ИГХ-окрашивания анализировали цифровые изображения участков мозга, меченых антителами, как описано ранее (Le Pichon et al., 2013). Процент окрашенной области рассчитывали путем нормировки общего количества положительных пикселей к общей области пикселей в ROI. Комплексную интенсивность рассчитывали с использованием закона Бугера-Ламберта-Бэра (только для площади положительных пикселей.
[00432] Результаты этого эксперимента показаны на Фигуре 14. Введение антитела 37D3-H9 WT IgG2a против тау-белка или антитела 37D3-H9 DANG IgG2a против тау-белка привело к дозозависимому снижению pTau212/214 в гиппокампе.
Пример 11: Варианты 37D3-H9 с гуманизированной каппа-1 областью
28
[00433] Гуманизированные варианты антитела на основе hu37D3-H9.v1, содержащие легкую каппа-1 цепь, получили и проверили на предмет стабильности N. Выравнивание вариабельной области легкой цепи трех протестированных вариантов с hu37D3-H9.v1 показано на Фигуре 18. Три варианта отличались друг от друга по вариабельной области легкой цепи: hu37D3.v39 содержало мутацию F33L, hu37D3.v40 содержало мутацию G29T, а hu37D3.v41 содержало мутацию N30Q.
[00434] Образцы антител подвергались термической стрессовой обработке следующим образом. Образцы диализовали с заменой буфера на 20 мМ ацетат гистидина, 240 мМ сахарозу (рН 5,5) и разбавляли до концентрации 1 мг/мл. Один мл образца подвергали стрессовой обработке при 40°С в течение 2 недель, а второй хранили при -70°С в качестве контроля. Затем оба образца гидролизовали с использованием трипсина для получения пептидов, которые можно было анализировать с использованием жидкостной хроматографии (ЖХ) - масс-спектрометрии (МС). Для каждого пептида из образца были получены время удерживания (с помощью ЖХ), а также точная масса с высоким разрешением и информация об ионной фрагментации пептида (информация об аминокислотной последовательности) (с помощью МС). Для пептидов, представляющих интерес (нативных и модифицированных пептидных ионов), получили хроматограммы экстрагированных ионов (XIC) из наборов данных в окне ±10 м.д.; пики интегрировали для определения площади. Относительный процент модификации рассчитывали для каждого образца по формуле (площадь модифицированного пептида) разделить на (площадь модифицированного пептида плюс площадь нативного пептида) умножить на 100. Затем эти относительные процентные показатели сравнивали в контрольном (t=0) и подвергавшемся стрессу (t=2 недели) образцах. Показанные процентные показатели отражали результат вычитания контрольного (t=0) значения из значения после стресса (t=2 недели). Результаты представлены в таблице 21. Результаты продемонстрировали, что мутация F33L эффективно снижала дезамидирование в гуманизированной легкой каппа-1 цепи.
Таблица 21 - Стабильность вариантов hu37D3-H9.v 1в стресс-тестах по отношению к дезамидированию
Антитело
Усиление дезамидированияN<sup>28</sup>G<sup>29</sup>N<sup>30</sup> легкой цепи
hu37D3.v39
hIgG4.S228P.YTE
N<sup>28</sup>:2,7%N<sup>30</sup>: Существенного усиления не обнаружено
hu37D3.v40
hIgG4.S228P.YTE
N<sup>28</sup>:12,1%N<sup>30</sup>:3,9%
hu37D3.v41
hIgG4.S228P.YTE
N<sup>28</sup>:6,0%N<sup>30</sup>: Остаток замещен на глутамин
[00435] Сродство гуманизированного антитела измеряли при 25°C с помощью прибора Biacore T200, набора GE Biacore для захвата IgG человека и чипа CM5 Series S. Антитела разбавляли до 1 мкг/мл HBSP (10 мМ HEPES pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,05% Tween 20) и выполняли захват при скорости потока 10 мкл/мин в течение 180 секунд. Данные о кинетике собирали для мономера тау-белка человека, введенного в концентрации 1,2, 3,7, 11, 33 и 100 нМ в HBSP с использованием технологии кинетики одиночного цикла при скорости потока 30 мкл/мин. Каждую концентрацию мономера тау-белка вводили на 3 минуты, диссоциацию отслеживали в течение десяти минут. Между циклами поверхность регенерировали с использованием двух последовательных минутных инъекций 10 мM глицина (pH 2,1). Данные аппроксимировали согласно модели связывания 1:1 с помощью программного обеспечения BIAEvaluation. Каждое антитело дважды проанализировали в течение эксперимента; данные в таблице 22 приведены в формате среднее значение ± диапазон.
Таблица 22: Сродство вариантов hu37D3:H9.v1 по отношению к мономерному тау-белку
K<sub>D</sub> (нМ)
k<sub>on</sub> (1/Mс)
K<sub>off</sub> (1/с)
hu37D3.v1 hIgG1
2,3 ± 0,3
6 ± 0,5 x10<sup>5</sup>
1 ± 0,1 x10<sup>-3</sup>
hu37D3.v1 hIgG4
2,3 ± 0,3
6 ± 0,2 x10<sup>5</sup>
1 ± 0,1 x10<sup>-3</sup>
hu37D3.v39 hIgG4.YTE
1,9 ± 0,2
6 ± 0,6 x10<sup>5</sup>
1 ± 0,02 x10<sup>-3</sup>
hu37D3.v40 hIgG4.YTE
4,4 ± 0,5
8 ± 0,9 x10<sup>5</sup>
3 ± 0,02 x10<sup>-3</sup>
hu37D3.v41 hIgG4.YTE
5,4 ± 0,3
9 ± 1,2 x10<sup>5</sup>
5 ± 0,3 x10<sup>-3</sup>
Пример 12: Фармакокинетика и фармакодинамика hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P и hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE у яванских макаков
in vivo
Macaca fascicularis
[00436] Для оценки фармакокинетики и фармакодинамики антител hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P и hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE пяти находящимся в сознании яванским макакам () на группу вводили однократную в/в болюсную инъекцию в дозе 50 мг/кг в первой фазе. В качестве контроля использовали hIgG4 против gD в такой же дозе 50 мг/кг. В различные моменты времени вплоть до 35 дней после введения дозы собирали образцы плазмы и ЦСЖ с целью определения концентраций антител против тау-белка. После последнего отбора проб животных оставляли восстанавливаться в течение 63-64 дней до начала второй фазы. Во второй фазе 15 животных после первой фазы, а также 3 дополнительных животных разделили на две группы; первой группе (n=9) вводили антитело hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P, а второй группе (n=9) - антитело hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE; дозировка обоих антител составляла 50 мг/кг. Головной мозг 4 или 5 животных в каждой группе собирали через 2 дня и 10 дней после введения.
[00437] Концентрацию антител IgG4 человека в плазме, ЦСЖ и гомогенате головного мозга яванского макака (описано ниже) измеряли посредством твердофазного ИФА с использованием иммобилизованного антитела овцы против IgG человека с адсорбированным антителом обезьяны, с последующим добавлением образцов плазмы, начиная с разведения 1: 100, образцов ЦСЖ, начиная с разведения 1:20, или образцов гомогената головного мозга, начиная с разведения 1:10, и заканчивая добавлением антитела козы против IgG человека с адсорбированным антителом обезьяны, конъюгированного с пероксидазой хрена, с целью обнаружения. Окрашивание развивалось при использовании 3,3',5,5'-тетраметилбензидина и нейтрализовывалось при использовании 1 M фосфорной кислоты. Образцы считывали при длине волны 450/620 нм. Анализ характеризовался калибровочной кривой в диапазоне 0,156-20 нг/мл и пределом обнаружения 0,02 мкг/мл для плазмы, 0,003 мкг/мл для ЦСЖ и 0,002 мкг/мл для гомогената головного мозга. Результаты менее указанной концентрации регистрировали как ʺменее регистрируемого значения (LTR)ʺ.
[00438] Результаты фармакокинетического анализа приведены на Фигуре 19А (плазма) и 19В (ЦСЖ) и в таблицах 23 и 24. Животных с подозрением на наличие антител против терапевтического антитела (ATA+) исключали из анализа. Эти данные показывают, что внедрение мутаций YTE в Fc-область hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P замедляло скорость выведения антитела из периферической крови и ЦСЖ приблизительно в два раза.
макс
Таблица 23: Расчетные значения выведения из плазмы и C в виде ʺсреднее значение (± СО) после однократного болюсного в/в введения
Антитело
Выведение из плазмы (мл/сут/кг)
C<sub>макс</sub> (мкг/мл)
Антитело hlgG4 против gD
1,67 ± 0,415
1950 ± 174
hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P
2,09 ± 0,229
1970 ± 144
hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE
1,12 ± 0,233
1850 ± 156
макс
Таблица 24: Расчетные значения C в ЦСЖ в виде ʺсреднее значение (± СО) после однократного болюсного в/в введения
Антитело
C<sub>макс</sub> (мкг/мл)
Антитело hlgG4 против gD
1,39 ± 0,751
hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P
0,910 ± 0,552
hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE
2.51 ± 1,93
[00439] Концентрации антител в головном мозге на 2 и 10 день после инъекции определяли следующим образом. Ткани головного мозга взвешивали и затем гомогенизировали в 1% NP-40 в физиологическом растворе с фосфатным буфером, содержащем таблетки смеси ингибиторов протеаз cOmplete™, Mini без ЭДТА. Затем гомогенизированные образцы головного мозга встряхивали при 4°С в течение 1 часа перед центрифугированием при 14000 об/мин в течение 20 минут. Надосадочную жидкость отделяли для измерения концентрации антитела в головном мозге посредством твердофазного ИФА, как описано выше. Результаты этого эксперимента приведены на Фигурах 21A-D. Концентрация антитела hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE в головном мозге и соотношение концентраций антитела hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE в головном мозге и плазме были выше, чем для антитела hu37D3.v28.A4 hIgG4.S228P.
2
[00440] Кроме того, определяли фармакодинамический ответ в плазме. Концентрацию общего тау-белка в плазме с KЭДТА определяли с помощью электрохемилюминесцентного (ЭСЛ) иммуноанализа (Roche Professional Diagnostics (RPD), Пенцберг, Германия). Иммуноанализ Elecsys прошел валидацию для количественного определения общего тау-белка в ЦСЖ человека, и из-за сходства между тау-белком человека и яванского макака считался приемлемым для измерения тау-белка яванского макака в ЦСЖ и плазме. Данный анализ позволял захватывать и определять аминокислоты 159-224 тау-белка человека и яванского макака (эта область присутствует во всех известных изоформах, независимо от состояния фосфорилирования). Нижний предел обнаружения (НПО) данного анализа составлял 1,01 пг/мл. Анализ допускает присутствие до 15,0 мг/мл hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE.
[00441] Результаты фармакодинамического анализа приведены на Фигуре 20. После исключения животных с подозрением на ATA+ и еще одного животного без исходных значений каждая группа содержала 3 животных. Как ни странно, в первый день введения уровень тау-белка в плазме в большей степени повышался у животных, получавших вариант YTE по сравнению с вариантом без YTE. Кроме того, этот результат не поддавался прогнозированию на основании фармакокинетического ответа (рисунок 20), поскольку ФК была аналогична между этими вариантами в ранние моменты времени. Более надежный ответ поддерживался у животных, получавших вариант YTE в течение всего периода пробоотбора.
Пример 13: Фармакокинетика и фармакодинамика hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE в головном мозге яванских макаков
Macaca fascicularis
[00442] Для оценки фармакокинетики антитела в головном мозге двенадцати находящимся в сознании яванским макакам () на группу вводили однократную в/в болюсную инъекцию hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE в дозе 50 мг/кг. В качестве контроля использовали hIgG4 против gD в такой же дозе 50 мг/кг. В различные моменты времени вплоть до 42 дней после введения дозы собирали образцы плазмы с целью определения концентраций антитела против тау-белка. Кроме того, в различное время вплоть до 42 дней умертвили 2 обезьян и определили концентрации антитела в головном мозге и ЦСЖ.
[00443] Концентрацию антитела в основном определяли, как описано в примере 12.
[00444] На Фигуре 22А-B показана концентрация антитела в головном мозге яванского макака в различные моменты времени после введения, представленная на графике с логарифмической (А) и линейной (В) шкалой.
В таблице 25 показаны параметры концентрации в головном мозге.
Таблица 25: Расчетные значения ФК-параметров в головном мозге в виде ʺсреднее значение (± СО)ʺ после однократного болюсного в/в введения
Группа
Смакс(мкг/мл)
ППКall(сут*мкг/мл)
Антитело hlgG4 против gD
0,175±0,02
4,26±0,35
hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE
0,12.±0,03
3,88±0,89
Антитело hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE продемонстрировало увеличение концентрации в головном мозге в конечный момент времени по сравнению с антителом против gD.
[00445] Кроме того, определили концентрацию антител в различных областях головного мозга, включая гиппокамп, мозжечок и лобную кору. Результаты данного анализа представлены на Фигуре 23А-C и в таблицах 26-28.
Таблица 26: Расчетные средние значения ФК-параметров в гиппокампе после однократного болюсного в/в введения
Группа
Смакс
ППКall
(мкг/мл)
(сут*мкг/мл)
Антитело hlgG4 против gD
0,159
3,95
hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE
0,087
2,87
Таблица 27: Расчетные средние значения ФК-параметров в мозжечке после однократного болюсного в/в введения
Группа
Смакс
ППКall
(мкг/мл)
(сут*мкг/мл)
Антитело hlgG4 против gD
0,196
4,30
hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE
0,139
4,56
Таблица 28: Расчетные средние значения ФК-параметров во фронтальной коре после однократного болюсного в/в введения
Группа
Смакс
ППКall
(мкг/мл)
(сут*мкг/мл)
Антитело hlgG4 против gD
0,17
4,65
hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE
0,138
4,22
.
[00446] Результаты этого эксперимента продемонстрировали воздействие антитела hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE в различных областях головного мозга после однократной в/в инъекции. Общее воздействие в головном мозге было сопоставимо в двух данных группах, однако аналогично наблюдениям в плазме, наблюдали двукратное увеличение концентрации антител в головном мозге в последний момент времени у животных, получавших антитело hu37D3.V28.a4 hIgG4-S228P.YTE, по сравнению с антителом против gD. СмФигуру 23. Эти результаты указывают на поддержание (терминальных) концентраций выше минимума в головном мозге после введения антитела YTE.
[00447] Кроме того, определяли концентрацию антител в ЦСЖ и плазме с течением времени. Результаты данного анализа представлены на Фигурах 23D (ЦСЖ) и 23Е (плазма) и в таблицах 29 и 30.
Таблица 29: Расчетные средние значения ФК-параметров в ЦСЖ после однократного болюсного в/в введения
Группа
Смакс(мкг/мл)
ППКall(сут*мкг/мл)
Антитело hlgG4 против gD
1,270
18,400
hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE
3,980
21,100
Таблица 30: Расчетные средние значения ФК-параметров в плазме после однократного болюсного в/в введения
Группа
Смакс(мкг/мл)
TмаксДень
ППКall(сут*мкг/мл)
Окончание эксперимента(день 43)мкг/мл
Антитело hlgG4 против gD
0,175±0,02
2
4,26±0,35
36,3±14,1
hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE
0,12.±0,03
3
3,88±0,89
89,4±42,3
.
[00448] Аналогично фармакокинетике в плазме и головном мозге, в последний момент времени у животных, получавших антитело hu37D3.V28.a4 hIgG4-S228P.YTE, по сравнению с антителом против gD имело место двукратное увеличение концентрации антитела в ЦСЖ. СмФигуру 23.
[00449] Оценку фармакодинамики антитела hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE и контрольного антитела в плазме после однократного в/в введения в дозе 50 мг/кг выполнили, используя собранные образцы плазмы яванских макаков. Количественную оценку уровня тау-белка в плазме выполнили с помощью иммуноанализа Elecsys, обсуждавшегося в примере 12.
[00450] Результаты фармакодинамического анализа приведены на Фигуре 24A-B. На Фигуре 24A показана средняя концентрация общего тау-белка в плазме, нормированная по исходному уровню. На Фигуре 24B показана концентрация общего тау-белка в плазме отдельных обезьян, использованных в данном исследовании, нормированная по исходному уровню. Аналогично результатам, полученным в примере 12, введение антитела hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE привело к значительному повышению уровня тау-белка в плазме. Безотносительно к каким-либо конкретным теоретическим представлениям, эти данные показывают, что hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE связывается с тау-белком в головном мозге, и, следовательно, происходит выведение тау-белка из головного мозга на периферию. Эти результаты согласуются с воздействием hu37D3.v28.A4 hIgG4-S228P.YTE на мишени в головном мозге.
[00451] Хотя настоящее изобретение подробно описано посредством иллюстрации и примера для ясности понимания, не следует считать, что описание и примеры ограничивают рамки изобретения. Описания всех патентов и научной литературы, приведенные в настоящем документе, явным образом полностью включены в настоящий документ посредством ссылки.
Таблица последовательностей
SEQ ID NO
Описание
Последовательность
2
Эпитоп тау-белка человека (2-24)
AEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRK
4
Эпитоп тау-белка яванского макака (2-24)
AEPRQEFDVMEDHAGTYGLGDRK
10
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 37D3-H9
EVQLVESGGD LAKPGGSLKL SCTASGLIFR SYGMSWVRQT PDKRLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMSSLKSED TAMYYCANSY SGAMDYWGQG TSVTVSS
11
Вариабельная область легкой цепи (VL) 37D3-H9
DDLLTQTPLS LPVSLGDPAS ISCRSSQSIV HSNGNTYFEW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYCFQGSLVP WTFGGGTKLE IK
12
HVR-H1 37D3-H9
SYGMS
13
HVR-H2 37D3-H9
TINSGGTYTYYPDSVKG
14
HVR-H3 37D3-H9
SYSGAMDY
15
HVR-L1 37D3-H9
RSSQSIVHSNGNTYFE
16
HVR-L2 37D3-H9
KVSNRFS
17
HVR-L3 37D3-H9
FQGSLVPWT
20
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 37D3-H9b
EVQLVESGGD LAKPGGSLKL SCTASGLIFR SYGMSWVRQT PDKRLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMSSLKSED TAMYYCANSY SGAMDYWGQG TSVTVSS
21
Вариабельная область легкой цепи (VL) 37D3-H9b
EDLLTQTPLS LPVSLGDPAS ISCRSSQSIV HSNGNTYFEW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYCFQGSLVP WTFGGGTKLE IK
22
HVR-H1 37D3-H9b
SYGMS
23
HVR-H2 37D3-H9b
TINSGGTYTYYPDSVKG
24
HVR-H3 37D3-H9b
SYSGAMDY
25
HVR-L1 37D3-H9b
RSSQSIVHSNGNTYFE
26
HVR-L2 37D3-H9b
KVSNRFS
27
HVR-L3 37D3-H9b
FQGSLVPWT
30
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 11E10-B8
EVQLVESGGD LVKPGGSLKL SCAASGFTFR SYGMSWVRQT PDKRLEWVAT ISGGGSYTYY PDSVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMSSLKSED TAMYYCAVSY DGAMDYWGQG TSVTVSS
31
Вариабельная область легкой цепи (VL) 11E10-B8
DVLMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGL YYCFQGSHVP WTFGGGTKLE IK
32
HVR-H1 11E10-B8
SYGMS
33
HVR-H2 11E10-B8
TISGGGSYTYYPDSVKG
34
HVR-H3 11E10-B8
SYDGAMDY
35
HVR-L1 11E10-B8
RSSQSIVHSNGNTYLE
36
HVR-L2 11E10-B8
KVSNRFS
37
HVR-L3 11E10-B8
FQGSHVPWT
40
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 54C1-H11 и 61E7-C4
EVQLVESGGD LVKPGGSLKV SCVASGFTFR SYGMSWVRQT PDKRLDWVAT ISSGGNYTYY PDSVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMSSLKSED TAMYYCASSY SGAMDYWGQG TSVTVSS
41
Вариабельная область легкой цепи (VL) 54C1-H11 и 61E7-C4
DTVMTQSPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPK LLIYTVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYCFQGSHVP WTFGGGTKLE IK
42
HVR-H1 54C1-H11 и 61E7-C4
SYGMS
43
HVR-H2 54C1-H11 и 61E7-C4
TISSGGNYTYYPDSVKG
44
HVR-H3 54C1-H11 и 61E7-C4
SYSGAMDY
45
HVR-L1 54C1-H11 и 61E7-C4
RSSQSIVHSNGNTYLE
46
HVR-L2 54C1-H11 и 61E7-C4
TVSNRFS
47
HVR-L3 54C1-H11 и 61E7-C4
FQGSHVPWT
50
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 3A4-H4
EVQLVESGGD LVKPGGSLKL SCAASGFTFS SYGMSWVRQT PDKRLEWVAT ISSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMSSLKSED TAMYFCATSY DGAMDYWGQG TSVTVSS
51
Вариабельная область легкой цепи (VL) 3A4-H4
DVLMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQNIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYCFQGTLVP WTFGGGTKLE IK
52
HVR-H1 3A4-H4
SYGMS
53
HVR-H2 3A4-H4
TISSGGTYTYYPDSVKG
54
HVR-H3 3A4-H4
SYDGAMDY
55
HVR-L1 3A4-H4
RSSQNIVHSNGNTYLE
56
HVR-L2 3A4-H4
KVSNRFS
57
HVR-L3 3A4-H4
FQGTLVPWT
60
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 19H6-F7
EVQLVESGGD LVKPGGSLKL SCAASGFTFS SYGMSWVRQT PDKRLEWVAT ISSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMSSLKSED TAMYYCAPSY DGAMDYWGQG TSVTVSS
61
Вариабельная область легкой цепи (VL) 19H6-F7
DVLMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYCFQGSLVP WTFGGGTKLE IK
62
HVR-H1 19H6-F7
SYGMS
63
HVR-H2 19H6-F7
TISSGGTYTYYPDSVKG
64
HVR-H3 19H6-F7
SYDGAMDY
65
HVR-L1 19H6-F7
RSSQSIVHSNGNTYLE
66
HVR-L2 19H6-F7
KVSNRFS
67
HVR-L3 19H6-F7
FQGSLVPWT
70
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 94B2-C1
EVQLQQSGPE LVKPGASMKI SCKASGYSLT GYTMNWVKQS HGKNLEWIGL ISPYNGVTSY NQKFKGKATL TVDKSSNTAY MELLSLTFED SAVYYCARQG AYWGQGTLVT VSA
71
Вариабельная область легкой цепи (VL) 94B2-C1
DVVMTQTPLT LSVTIGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW LLQRPGQSPK RLIYLVSKLD SGVPDRFTGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYCWQGTHFP WTFGGGTKLE IK
72
HVR-H1 94B2-C1
GYTMN
73
HVR-H2 94B2-C1
LISPYNGVTSYNQKFKG
74
HVR-H3 94B2-C1
QGAY
75
HVR-L1 94B2-C1
KSSQSLLDSDGKTYLN
76
HVR-L2 94B2-C1
LVSKLDS
77
HVR-L3 94B2-C1
WQGTHFPWT
80
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 125B11-H3
EVKLEESGGG LVQPGGSMKL SCVASRFIFS NYWMNWVRQS PEKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDDSKSS VYLQMNNLRA EDTGIYYCTG GTTYWGQGTT LTVSS
81
Вариабельная область легкой цепи (VL) 125B11-H3
DIVMTQSQKF LSTSVGDRVN ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GQSPGLLIYS ASIRYTGVPD RFTGNGSGTD FTLTISDMQS EDLADYFCQQ FRTYPYTFGG GTKLEIK
82
HVR-H1 125B11-H3
NYWMN
83
HVR-H2 125B11-H3
QIRLKSDNYA THYAESVKG
84
HVR-H3 125B11-H3
GTTY
85
HVR-L1 125B11-H3
KASQNVGTAVA
86
HVR-L2 125B11-H3
SASIRYT
87
HVR-L3 125B11-H3
QQFRTYPYT
90
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 113F5-F7
EVKLEESGGG LVQPGGSMRL SCVASEFTFS NYWMNWIRQS PEKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDASNFS VYLQMNNLRA EDTGIYYCTG GTSYWGQGTT LTVSS
91
Вариабельная область легкой цепи (VL) 113F5-F7
DIVMTQSQKI MSTSVGDRVS ITCKASQNVG TAVAWYQQRP GHSPKLLIYS ASRRFSGVPD RFTGSGSGTD FTLTIINVQS EDLADYFCQQ FSTYPYTFGV GTKLEIK
92
HVR-H1 113F5-F7
NYWMN
93
HVR-H2 113F5-F7
QIRLKSDNYATHYAESVKG
94
HVR-H3 113F5-F7
GTSY
95
HVR-L1 113F5-F7
KASQNVGTAVA
96
HVR-L2 113F5-F7
SASRRFS
97
HVR-L3 113F5-F7
QQFSTYPYT
100
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 26C1-B11
EVHLQQSGAE LVRSGASVKL SCTASGFNIK DYYMYWVKQR PEQGLEWIGW IDPENGDTEY FPKFQGKATM TADTSSKTAY LQLSSLTSED TAVYYCNAWR ARATNSALDY WGQGTSVTVS S
101
Вариабельная область легкой цепи (VL) 26C1-B11
DVVMTQTPLT LSVTIGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW LLRRPGQSPK RLIYLVSKLD SGVPDRFTGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYCWQGTHFP WTFGGGTKLE IK
102
HVR-H1 26C1-B11
DYYMY
103
HVR-H2 26C1-B11
WIDPENGDTE YFPKFQG
104
HVR-H3 26C1-B11
WRARATNSAL DY
105
HVR-L1 26C1-B11
KSSQSLLDSD GKTYLN
106
HVR-L2 26C1-B11
LVSKLDS
107
HVR-L3 26C1-B11
WQGTHFPWT
110
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 26C1-C8
EVHLQQSGAE LVRSGASVKL SCTASGFNIK DYYMYWVKQR PEQGLEWIGW IDPENGDTEY FPKFQGKATM TADTSSKTAY LQLSSLTSED TAVYYCNAWR ARATNSALDY WGQGTSVTVS S
111
Вариабельная область легкой цепи (VL) 26C1-C8
DVVMTQTPLT LSVTIGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW LLRRPGQSPK RLIYLVSKLD SGVPDRFTGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYCWQGTHFP WTFGGGTKLE IK
112
HVR-H1 26C1-C8
DYYMY
113
HVR-H2 26C1-C8
WIDPENGDTE YFPKFQG
114
HVR-H3 26C1-C8
WRARATNSAL DY
115
HVR-L1 26C1-C8
KSSQSLLDSD GKTYLN
116
HVR-L2 26C1-C8
LVSKLDS
117
HVR-L3 26C1-C8
WQGTHFPWT
120
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 30G1-B2
QVQLQQSGAE LVRPGASVTL SCKASGYTFT DYEMYWVKQT PVHGLEWIGA IDPETGDTAY NQKFKGKATL TADKSSNTAY MELRSLTSED SAVYYCIRQY GNWFPYWGQG TLVTVSA
121
Вариабельная область легкой цепи (VL) 30G1-B2
DVVMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSLV HANGNTYLHW FLQKPGLSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGG GSGTDFTLKI TRLEAEDLGV YFCSQSTHVP FTFGSGTKLE IK
122
HVR-H1 30G1-B2
DYEMY
123
HVR-H2 30G1-B2
AIDPETGDTAYNQKFKG
124
HVR-H3 30G1-B2
QYGNWFPY
125
HVR-L1 30G1-B2
RSSQSLVHANGNTYLH
126
HVR-L2 30G1-B2
KVSNRFS
127
HVR-L3 30G1-B2
SQSTHVPFT
130
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 66F5-A1
QVQLQQSGAE LVRPGASVTL SCKASGYTFI DYEMNWVKQT PVHGLEWIGA IDPENGGTAY NQKFKGKAIV TADKSSSTAY MELRSLTSED SAVYYCSGPH FDYWGQGTTL TVSS
131
Вариабельная область легкой цепи (VL) 66F5-A1
DIVMTQSPSS LAMSVGQKVT MSCKSSQSLL NSSTQKNYLA WYQQKPGQSP KLLVYFASTR ESGVPDRFIG SGSGTDFTLT ISSVQAEDLA DYFCQQHYST PYTFGGGTKL EIK
132
HVR-H1 66F5-A1
DYEMN
133
HVR-H2 66F5-A1
AIDPENGGTA YNQKFKG
134
HVR-H3 66F5-A1
PHFDY
135
HVR-L1 66F5-A1
KSSQSLLNSS TQKNYLA
136
HVR-L2 66F5-A1
FASTRES
137
HVR-L3 66F5-A1
QQHYSTPYT
140
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 123E9-A1
EVQLQQSGPE LVKPGASVKM SCKASGYTFT DYYMKWVKQS HGKSLEWIGD IDPNNGGTSY NQKFKGKATL TVDKSSSTAY MQLNSLTSED SAVYYCARSA GFGDSFSFWG LGTLVTVSA
141
Вариабельная область легкой цепи (VL) 123E9-A1
DVLMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGF YYCFQGSHVP PTFGGGTKLE IK
142
HVR-H1 123E9-A1
DYYMK
143
HVR-H2 123E9-A1
DIDPNNGGTSYNQKFKG
144
HVR-H3 123E9-A1
SAGFGDSFSF
145
HVR-L1 123E9-A1
RSSQSIVHSNGNTYLE
146
HVR-L2 123E9-A1
KVSNRFS
147
HVR-L3 123E9-A1
FQGSHVPPT
150
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 15C6-A7
EVQLQQSGPE LVKPGASVMM TCKASGYTFT DYYMKWVKQS NGKSLEWIGD LDPYTGGANY NQKFKGKATL TVDKSSSTAY MHLNSLTSED SAVYYCARSR GYGDSFAYWG QGTLVTVSA
151
Вариабельная область легкой цепи (VL) 15C6-A7
DVLMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQNIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDKFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YFCFQGSHVP PTFGGGTKLE IK
152
HVR-H1 15C6-A7
DYYMK
153
HVR-H2 15C6-A7
DLDPYTGGAN YNQKFKG
154
HVR-H3 15C6-A7
SRGYGDSFAY
155
HVR-L1 15C6-A7
RSSQNIVHSN GNTYLE
156
HVR-L2 15C6-A7
KVSNRFS
157
HVR-L3 15C6-A7
FQGSHVPPT
160
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 19F8-B1
EVQLQQSGPE LVKPGASVKM SCKASGYTFT DYYMKWVKQS HGKSLEWIGD LNPNNGGTLY NQKFKGQATL TVDKSSSTAY MQFNSLTSED SAVYYCARSA GYGDSFAYWG QGTLVTVSA
161
Вариабельная область легкой цепи (VL) 19F8-B1
DVLMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQNIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGI YFCFQGSHVP PTFGGGTKLE IK
162
HVR-H1 19F8-B1
DYYMK
163
HVR-H2 19F8-B1
DLNPNNGGTL YNQKFKG
164
HVR-H3 19F8-B1
SAGYGDSFAY
165
HVR-L1 19F8-B1
RSSQNIVHSN GNTYLE
166
HVR-L2 19F8-B1
KVSNRFS
167
HVR-L3 19F8-B1
FQGSHVPPT
170
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 24A11-D5
EVQLQQSGPE LVKPGASVKM SCKASGYTFT DYYMKWVKQS HGKSLEWIGD LNPKNGGIIY NQKFKGQATL TVDKSSSTAY MQLNSLTSED SAVFYCARSG GYGDSFAYWG QGTLVTVSA
171
Вариабельная область легкой цепи (VL) 24A11-D5
DVLMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQNIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGI YFCFQGSHVP PTFGGGTKLE IK
172
HVR-H1 24A11-D5
DYYMK
173
HVR-H2 24A11-D5
DLNPKNGGII YNQKFKG
174
HVR-H3 24A11-D5
SGGYGDSFAY
175
HVR-L1 24A11-D5
RSSQNIVHSN GNTYLE
176
HVR-L2 24A11-D5
KVSNRFS
177
HVR-L3 24A11-D5
FQGSHVPPT
180
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 126F11-G11
EVQLQQSGAE LVRPGASVKL SCTASGFNIK DDYMHWVKQR PEQGLEWIGW IDPENGDTEY ASKFQGKATI TTDTSSNTAY LQLSSLTSED TAVYYCLDFA YGYWGQGTTL TVSS
181
Вариабельная область легкой цепи (VL) 126F11-G11
DVLMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYCFQGSHVP PAFGGGTKLE IK
182
HVR-H1 126F11-G11
DDYMH
183
HVR-H2 126F11-G11
WIDPENGDTE YASKFQG
184
HVR-H3 126F11-G11
FAYGY
185
HVR-L1 126F11-G11
RSSQSIVHSN GNTYLE
186
HVR-L2 126F11-G11
KVSNRFS
187
HVR-L3 126F11-G11
FQGSHVPPA
190
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 89F4-A1
EVQLVESGGG LVQPKGSLKL SCAASGFTFN TYAMNWVRQA PGKGLEWVAR IRSKSNNYAA YFADSVKDRF TISRDDSQTM LYLQMNNLKS EDTAMYYCVS GGNYVPFAYW GQGTLVTVSA
191
Вариабельная область легкой цепи (VL) 89F4-A1
NIMMTQSPSS LAVSAGEKVT MSCKSSQSVF YSSEQRNYLA WYQQKPGQSP KLLISWASTR ESGVPDRFTG SGSGTDFTLT ISSVQGEDLA VYYCHQYLSS FTFGSGTKLE IK
192
HVR-H1 89F4-A1
TYAMN
193
HVR-H2 89F4-A1
RIRSKSNNYA AYFADSVKD
194
HVR-H3 89F4-A1
GGNYVPFAY
195
HVR-L1 89F4-A1
KSSQSVFYSS EQRNYLA
196
HVR-L2 89F4-A1
WASTRES
197
HVR-L3 89F4-A1
HQYLSSFT
200
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 93A8-D2
EVQLQQSGPV LVKPGASVKM SCKASGYTFT DYYVNWVKQS HGKGLEWIGL INPNNGRTSY NQNFNDKATL TVDKSSSTAF MDLNSLTSED SAVYYCTREG GTGYWGQGTT LSVSS
201
Вариабельная область легкой цепи (VL) 93A8-D2
DVVMTQTPLT LSVTIGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW LLQRPGQSPR RLIYLVSKLD SGVPDRFTGS GSGTDFTLKI SRVAAEDLGV YYCWQGTHFP RTFGGGTKLE IK
202
HVR-H1 93A8-D2
DYYVN
203
HVR-H2 93A8-D2
LINPNNGRTSYNQNFND
204
HVR-H3 93A8-D2
EGGTGY
205
HVR-L1 93A8-D2
KSSQSLLDSDGKTYLN
206
HVR-L2 93A8-D2
LVSKLDS
207
HVR-L3 93A8-D2
WQGTHFPRT
210
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 14F5-D9
EVKLVESGGG LVQPGGSLRL SCATSGFTFS DFYMEWVRQS PGKRLEWIAA SKNKANDYTT EYNASVKDRF FVSRDTSQSI LYLQMNALRA EDTAIYYCAR DALGTVFAYW GQGTLVTVSA
211
Вариабельная область легкой цепи (VL) 14F5-D9
DVVMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSLV HSNGNTYLHW YLQKPGQSPK LLIYKVFNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YFCSQSTLVP LTFGAGTKLE LK
212
HVR-H1 14F5-D9
DFYME
213
HVR-H2 14F5-D9
ASKNKANDYT TEYNASVKD
214
HVR-H3 14F5-D9
DALGTVFAY
215
HVR-L1 14F5-D9
RSSQSLVHSN GNTYLH
216
HVR-L2 14F5-D9
KVFNRFS
217
HVR-L3 14F5-D9
SQSTLVPLT
220
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 73H6-B8
QVQLKESGPG LVAPSQSLSI TCTISGFSLT SYGVHWVRQP PGKGLEWLVV IWSDGSTTYN SALKSRLSIS KDNSKSQVFL KMNSLQTDDT AMYYCARQGG FITTAYYAMD YWGQGTSVTV SS
221
Вариабельная область легкой цепи (VL) 73H6-B8
DIVMSQSPSS LAVSAGEKVT MSCKSSQSLL NSRTRKNYLA WYQQKPGQSP KLLIYWASTR ESGVPDRFTG SGSGTDFTLT ISSVQAEDLA VYYCKQSYNL YTFGGGTKLE IK
222
HVR-H1 73H6-B8
SYGVH
223
HVR-H2 73H6-B8
VIWSDGSTTY NSALKS
224
HVR-H3 73H6-B8
QGGFITTAYY AMDY
225
HVR-L1 73H6-B8
KSSQSLLNSR TRKNYLA
226
HVR-L2 73H6-B8
WASTRES
227
HVR-L3 73H6-B8
KQSYNLYT
230
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 22G7-C9
QIQLVQSGPE LKKPGETVKI SCKASGYTFT DCSIHWVKQA PGEGLKWMGW INTETGEPSY ADDFKGRFAF SLETSASTAF LQINNLKSED TASYFCGTAY YRYDGALDYW GQGTSVTVSS
231
Вариабельная область легкой цепи (VL) 22G7-C9
DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCRASQSVS TSSYSYMHWF QQKPGQPPKL LIKYASNLES GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEEEDTATY YCQHSWELPW TFGGGTKLEI K
232
HVR-H1 22G7-C9
DCSIH
233
HVR-H2 22G7-C9
WINTETGEPS YADDFKG
234
HVR-H3 22G7-C9
AYYRYDGALD Y
235
HVR-L1 22G7-C9
RASQSVSTSS YSYMH
236
HVR-L2 22G7-C9
YASNLES
237
HVR-L3 22G7-C9
QHSWELPWT
240
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 7A11-C12
QIQLVQSGPD LKKPGETVKI SCKASGYTFT NYGMNWVKQA PGKGLKWMGW INTNTGEPTY AEEFKGRFAF SLETSASTAY LQIDNLKNED TATYFCARGT VSFPYWGQGT LVTVSA
241
Вариабельная область легкой цепи (VL) 7A11-C12
DVVMSQTPLS LPVSLGDHAS ISCRSSQNLV HSDGNTYLHW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YFCSQSTHVI FTFGSGTKLE IK
242
HVR-H1 7A11-C12
NYGMN
243
HVR-H2 7A11-C12
WINTNTGEPT YAEEFKG
244
HVR-H3 7A11-C12
GTVSFPY
245
HVR-L1 7A11-C12
RSSQNLVHSD GNTYLH
246
HVR-L2 7A11-C12
KVSNRFS
247
HVR-L3 7A11-C12
SQSTHVIFT
250
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 12A10-E8
QIQLVQSGPE LKKPGETVKI SCKASGYTFT NYGMNWVKQA PGKGLKWMGW INMYTGEPTY GDDFKGRFVF SLETSVSTVY LQINNLKKED TATFFCARGG RPDYWGQGTS VTVSS
251
Вариабельная область легкой цепи (VL) 12A10-E8
DVLMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPK LLIYKVFNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI NRVEAEDLGV YYCLQGSHVP YTFGGGTKLE IK
252
HVR-H1 12A10-E8
NYGMN
253
HVR-H2 12A10-E8
WINMYTGEPT YGDDFKG
254
HVR-H3 12A10-E8
GGRPDY
255
HVR-L1 12A10-E8
RSSQSIVHSN GNTYLE
256
HVR-L2 1 2A10-E8
KVFNRFS
257
HVR-L3 12A10-E8
LQGSHVPYT
260
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 55E7-F11
EVKLEESGGG LVQPGGSMKL SCVASGFTFS NYWMNWVRQS PEKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDDSKSS VYLQMNNLRA EDTGIYYCAG YFYGGYFDVW GTGTTVTVSS
261
Вариабельная область легкой цепи (VL) 55E7-F11
ELVLTQSPTT MAASPGKKIT ITCSASSSIS SNYLHWYQQK PGFSPKLLIY RTSNLASGVP ARFSGSGSGT SYSLTIGTME AEDVATYYCQ QGSSLPFTFG SGTKLEIK
262
HVR-H1 55E7-F11
NYWMN
263
HVR-H2 55E7-F11
QIRLKSDNYA THYAESVKG
264
HVR-H3 55E7-F11
YFYGGYFDV
265
HVR-L1 55E7-F11
SASSSISSNY LH
266
HVR-L2 55E7-F11
RTSNLAS
267
HVR-L3 55E7-F11
QQGSSLPFT
270
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 52F6-F11
QVQLQQSGTE LAKPGASVKL SCKASGYTFT HYWMHWIKQR PGQGLEWIGY IYPTNDYTKY NQNFRDKATL TADESSNSAY MQLNSLTYED SAVYYCARAG NRVFDFWGQG TTLTVSS
271
Вариабельная область легкой цепи (VL) 52F6-F11
QAVVTQESAL TTSPGETVTL TCRSSTGAVT TSNFANWVQE KPDHLFTGLI GGTNNRAPGV PARFSGSLIG DKAALTITGA QTEDEAIYFC ALWYSNLWVF GGGTKLTVL
272
HVR-H1 52F6-F11
HYWMH
273
HVR-H2 52F6-F11
YIYPTNDYTK YNQNFRD
274
HVR-H3 52F6-F11
AGNRVFDF
275
HVR-L1 52F6-F11
RSSTGAVTTS NFAN
276
HVR-L2 52F6-F11
GTNNRAP
277
HVR-L3 52F6-F11
ALWYSNLWV
280
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3-H9.v1
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSS
281
Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3-H9.v1
EDQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRSSQSIV HSNGNTYFEW YQQKPGKSPK LLIYKVSNRF SGVPSRFSGS GSGTDFTLTI SSLQPEDFAT YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IK
282
HVR-H1 Hu37D3-H9.v1
SYGMS
283
HVR-H2 Hu37D3-H9.v1
TINSGGTYTYYPDSVKG
284
HVR-H3 Hu37D3-H9.v1
SYSGAMDY
285
HVR-L1 Hu37D3-H9.v1
RSSQSIVHSNGNTYFE
286
HVR-L2 Hu37D3-H9.v1
KVSNRFS
287
HVR-L3 Hu37D3-H9.v1
FQGSLVPWT
288
Тяжелая цепь Hu37D3-H9.v1 IgG1
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP SSKSTSGGTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTQTYIC NVNHKPSNTK VDKKVEPKSC DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
289
Легкая цепь Hu37D3-H9.v1 IgG1
EDQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRSSQSIV HSNGNTYFEW YQQKPGKSPK LLIYKVSNRF SGVPSRFSGS GSGTDFTLTI SSLQPEDFAT YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC
290
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3-H9.v5
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSS
291
Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3-H9.v5
EDVLTQTPLS LPVTPGQPAS ISCRSSQSIV HSNGNTYFEW YLQKPGQSPQ LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IK
292
HVR-H1 Hu37D3-H9.v5
SYGMS
293
HVR-H2 Hu37D3-H9.v5
TINSGGTYTYYPDSVKG
294
HVR-H3 Hu37D3-H9.v5
SYSGAMDY
295
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5
RSSQSIVHSNGNTYFE
296
HVR-L2 Hu37D3-H9.v5
KVSNRFS
297
HVR-L3 Hu37D3-H9.v5
FQGSLVPWT
300
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu94B2.v105
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSLT GYTMNWVRQA PGQGLEWIGL ISPYNGVTSY NQKFKGRATL TVDKSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARQG AYWGQGTLVT VSS
301
Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu94B2.v105
DIVMTQTPLS LPVTPGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW LLQKPGQSPQ RLIYLVSKLD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCWQGTHFP WTFGQGTKVE IK
302
HVR-H1 Hu94B2.v105
GYTMN
303
HVR-H2 Hu94B2.v105
LISPYNGVTSYNQKFKG
304
HVR-H3 Hu94B2.v105
QGAY
305
HVR-L1 Hu94B2.v105
KSSQSLLDSDGKTYLN
306
HVR-L2 Hu94B2.v105
LVSKLDS
307
HVR-L3 Hu94B2.v105
WQGTHFPWT
310
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) hu125B11.v17
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASRFIFS NYWMNWVRQA PGKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDDSKNT LYLQMNSLRA EDTAVYYCTG GTTYWGQGTL VTVSS
311
Вариабельная область легкой цепи (VL) hu125B11.v17
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GKSPKLLIYS ASIRYTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYFCQQ FRTYPYTFGQ GTKVEIK
312
HVR-H1 hu125B11.v17
NYWMN
313
HVR-H2 hu125B11.v17
QIRLKSDNYATHYAESVKG
314
HVR-H3 hu125B11.v17
GTTY
315
HVR-L1 hu125B11.v17
KASQNVGTAVA
316
HVR-L2 hu125B11.v17
SASIRYT
317
HVR-L3 hu125B11.v17
QQFRTYPYT
320
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) hu125B11.v26
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASRFIFS NYWMNWVRQA PGKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDNSKNT LYLQMNSLRA EDTAVYYCTG GTTYWGQGTL VTVSS
321
Вариабельная область легкой цепи (VL) hu125B11.v26
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASIRYTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYFCQQ FRTYPYTFGQ GTKVEIK
322
HVR-H1 hu125B11.v26
NYWMN
323
HVR-H2 hu125B11.v26
QIRLKSDNYATHYAESVKG
324
HVR-H3 hu125B11.v26
GTTY
325
HVR-L1 hu125B11.v26
KASQNVGTAVA
326
HVR-L2 hu125B11.v26
SASIRYT
327
HVR-L3 hu125B11.v26
QQFRTYPYT
330
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) hu125B11.v28
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASRFIFS NYWMNWVRQA PGKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDNSKNT LYLQMNSLRA EDTAVYYCTG GTTYWGQGTL VTVSS
331
Вариабельная область легкой цепи (VL) hu125B11.v28
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASIRYTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ FRTYPYTFGQ GTKVEIK
332
HVR-H1 hu125B11.v28
NYWMN
333
HVR-H2 hu125B11.v28
QIRLKSDNYATHYAESVKG
334
HVR-H3 hu125B11.v28
GTTY
335
HVR-L1 hu125B11.v28
KASQNVGTAVA
336
HVR-L2 hu125B11.v28
SASIRYT
337
HVR-L3 hu125B11.v28
QQFRTYPYT
340
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3-H9.v28.A4
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSS
341
Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3-H9.v28.A4
DDVLTQTPLS LPVTPGQPAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPQ LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IK
342
HVR-H1 Hu37D3-H9.v28.A4
SYGMS
343
HVR-H2 Hu37D3-H9.v28.A4
TINSGGTYTYYPDSVKG
344
HVR-H3 Hu37D3-H9.v28.A4
SYSGAMDY
345
HVR-L1 Hu37D3-H9.v28.A4
RSSQSIVHSNGNTYLE
346
HVR-L2 Hu37D3-H9.v28.A4
KVSNRFS
347
HVR-L3 Hu37D3-H9.v28.A4
FQGSLVPWT
348
Тяжелая цепь Hu37D3-H9.v28.A4 IgG4-S228P.YTE
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTKTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLYI TREPEVTCVV VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLGK
602
Тяжелая цепь Hu37D3-H9.v28.A4 IgG4-S228P.YTE des-K
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTKTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLYI TREPEVTCVV VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLG
349
Легкая цепь Hu37D3-H9.v28.A4 IgG4-S228P.YTE
DDVLTQTPLS LPVTPGQPAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPQ LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC
442
hu125B11-H3.LC1
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GKSPKLLIYS ASIRYTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYFCQQ FRTYPYTFGQ GTKVEIK
443
hu125B11-H3.LC2
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASIRYTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYFCQQ FRTYPYTFGQ GTKVEIK
444
hu125B11-H3.LC3
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GKSPKLLIYS ASIRYTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ FRTYPYTFGQ GTKVEIK
445
hu125B11-H3.LC4
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASIRYTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ FRTYPYTFGQ GTKVEIK
446
hu125B11-H3.HC1
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASRFIFS NYWMNWVRQA PGKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDDSKNT VYLQMNSLRA EDTAVYYCTG GTTYWGQGTL VTVSS
447
hu125B11-H3.HC2
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASRFIFS NYWMNWVRQA PGKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDNSKNT VYLQMNSLRA EDTAVYYCTG GTTYWGQGTL VTVSS
448
hu125B11-H3.HC3
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASRFIFS NYWMNWVRQA PGKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDDSKNT LYLQMNSLRA EDTAVYYCTG GTTYWGQGTL VTVSS
449
hu125B11-H3.HC4
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASRFIFS NYWMNWVRQA PGKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDNSKNT LYLQMNSLRA EDTAVYYCTG GTTYWGQGTL VTVSS
450
hu125B11-H3.HC5
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASRFIFS NYYMNWVRQA PGKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDDSKNT VYLQMNSLRA EDTAVYYCTG GTTYWGQGTL VTVSS
451
hu125B11-H3.HC6
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASRFIFS NYFMNWVRQA PGKGLEWVAQ IRLKSDNYAT HYAESVKGRF TISRDDSKNT VYLQMNSLRA EDTAVYYCTG GTTYWGQGTL VTVSS
452
Hu94B2.HC1
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSLT GYTMNWVRQA PGQGLEWIGL ISPYNGVTSY NQKFKGRATL TVDKSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARQG AYWGQGTLVT VSS
453
Hu94B2.HC2
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSLT GYTMNWVRQA PGQGLEWIGL ISPYNGVTSY NQKFKGRVTL TVDKSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARQG AYWGQGTLVT VSS
454
Hu94B2.HC3
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSLT GYTMNWVRQA PGQGLEWIGL ISPYNGVTSY NQKFKGRATI TVDKSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARQG AYWGQGTLVT VSS
455
Hu94B2.HC4
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSLT GYTMNWVRQA PGQGLEWIGL ISPYNGVTSY NQKFKGRATL TRDKSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARQG AYWGQGTLVT VSS
456
Hu94B2.HC5
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSLT GYTMNWVRQA PGQGLEWIGL ISPYNGVTSY NQKFKGRATL TVDTSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARQG AYWGQGTLVT VSS
457
Hu94B2.HC6
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSLT GYTMNWVRQA PGQGLEWIGL ISPYNGVTSY NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARQG AYWGQGTLVT VSS
458
Hu94B2.HC7
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSLT GYTMNWVRQA PGQGLEWIGL ISPYNGVTSY NQKFKGRVTI TRDKSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARQG AYWGQGTLVT VSS
459
Hu94B2.HC8
EVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSLT GYTMNWVRQA PGQGLEWIGL ISPYNGVTSY NQKFKGRVTI TVDTSTSTAY LELSSLRSED TAVYYCARQG AYWGQGTLVT VSS
460
Hu94B2.LC9
DVVMTQTPLS LPVTPGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW LLQKPGQSPQ RLIYLVSKLD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCWQGTHFP WTFGQGTKVE IK
461
Hu94B2.LC10
DVVMTQTPLS LPVTPGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW LLQKPGQSPQ LLIYLVSKLD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCWQGTHFP WTFGQGTKVE IK
462
Hu94B2.LC11
DVVMTQTPLS LPVTPGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW YLQKPGQSPQ RLIYLVSKLD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCWQGTHFP WTFGQGTKVE IK
463
Hu94B2.LC12
DVVMTQTPLS LPVTPGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW YLQKPGQSPQ LLIYLVSKLD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCWQGTHFP WTFGQGTKVE IK
464
Hu94B2.LC13
DIVMTQTPLS LPVTPGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW LLQKPGQSPQ RLIYLVSKLD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCWQGTHFP WTFGQGTKVE IK
465
Hu94B2.LC14
DIVMTQTPLS LPVTPGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW LLQKPGQSPQ LLIYLVSKLD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCWQGTHFP WTFGQGTKVE IK
466
Hu94B2.LC15
DIVMTQTPLS LPVTPGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW YLQKPGQSPQ RLIYLVSKLD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCWQGTHFP WTFGQGTKVE IK
467
Hu94B2.LC16
DIVMTQTPLS LPVTPGQPAS ISCKSSQSLL DSDGKTYLNW YLQKPGQSPQ LLIYLVSKLD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCWQGTHFP WTFGQGTKVE IK
468
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.1
RSSQSIVHSNANTYFE
469
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.2
RSSQSIVHSSGNTYFE
470
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.3
RSSQSIVHSDGNTYFE
471
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.4
RSSQSIVHSQGNTYFE
472
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.5
RSSQSIVHSEGNTYFE
473
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.6
RSSQSIVHSAGNTYFE
474
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.7
RSSQSIVHSNGDTYFE
475
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.8
RSSQSIVHSNGQTYFE
476
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.9
RSSQSIVHSNGETYFE
477
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.10
RSSQSIVHSNGATYFE
478
HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.11
RSSQSIVHSNGSTYFE
479
HVR-L1 Hu37D3.v28
RSSQSIVHSNGNTYFE
480
HVR-L1 Hu37D3.v28.A2
RSSQSIVHSNGNTYFE
481
HVR-L1 Hu37D3.v28.A4
RSSQSIVHSNGNTYLE
482
HVR-L1 Hu37D3.v28.A6
RSSQSIVHSNGNTYLE
483
HVR-L1 Hu37D3.v28.A8
RSSQSIVHSNGNTYFE
484
HVR-L1 Hu37D3.v28.A10
RSSQSIVHSNGNTYFE
485
HVR-L1 Hu37D3.v28.A12
RSSQSIVHSNGNTYLE
486
HVR-L1 Hu37D3.v28.A14
RSSQSIVHSNGNTYLE
487
HVR-L1 Hu37D3.v28.A16
RSSQSIVHSNGNTYFE
488
HVR-L1 Hu37D3.v28.A18
RSSQSIVHSNGNTYFE
489
HVR-L1 Hu37D3.v28.A20
RSSQSIVHSNGNTYLE
490
HVR-L1 Hu37D3.v28.A22
RSSQSIVHSNGNTYLE
491
HVR-L1 Hu37D3.v28.A24
RSSQSIVHSNGNTYFE
492
HVR-L1 Hu37D3.v28.A26
RSSQSIVHSNGNTYFE
493
HVR-L1 Hu37D3.v28.A28
RSSQSIVHSNGNTYLE
494
HVR-L1 Hu37D3.v28.A30
RSSQSIVHSNGNTYLE
495
HVR-L1 Hu37D3.v28.B1
RSSQSIVHSIGNTFFE
496
HVR-L1 Hu37D3.v28.B2
RSSQSIVHSMGNTFFE
497
HVR-L1 Hu37D3.v28.B3
RSSQSIVHSQGNTWFE
498
HVR-L1 Hu37D3.v28.B4
RSSQSIVHSQGNTHFE
499
HVR-L1 Hu37D3.v28.B6
RSSQSIVHSDGNTRFE
500
HVR-L1 Hu37D3.v28.B7
RSSQSIVHSDGNTKFE
501
HVR-L1 Hu37D3.v28.B8
RSSQSIVHSEGNTRFE
502
HVR-L1 Hu37D3.v28.C1
RSSQSIVHSNNNTYFE
503
HVR-L1 Hu37D3.v28.C2
RSSQSIVHSNDNTYFE
504
HVR-L1 Hu37D3.v28.D1
RSSQSIVHANGNTYFE
505
HVR-L1 Hu37D3.v28.E1
RSSQSIVNSNGNTYFE
506
HVR-L1 Hu37D3.v28.E2
RSSQSIVQSNGNTYFE
507
HVR-L1 Hu37D3.v28.E3
RSSQSIVDSDGNTYFE
508
HVR-L1 Hu37D3.v28.F1
RSSQSIVHSNTNTYFE
509
HVR-L1 Hu37D3.v28.F2
RSSQSIVHTNGNTYFE
510
HVR-L1 Hu37D3.v28.F3
RSSQSIVHTNANTYFE
511
HVR-L1 Hu37D3.v28.51
RSSQSIVHSHGNTYFE
512
HVR-L1 Hu37D3.v28.52
RSSQSIVHSKGNTYFE
513
HVR-L1 Hu37D3.v28.53
RSSQSIVHSRGNTYFE
514
HVR-L1 Hu37D3.v28.54
RSSQSIVHSLGNTYFE
515
HVR-L1 Hu37D3.v28.55
RSSQSIVHSNQNTYFE
516
HVR-L1 Hu37D3.v28.56
RSSQSIVHSNYNTYFE
517
HVR-L1 Hu37D3.v28.57
RSSQSIVHSNFNTYFE
518
HVR-L1 Hu37D3.v29.1
RSSQSIVHSNGDTYFE
519
HVR-L1 Hu37D3.v29.2
RSSQSIVHSNGQTYFE
520
HVR-L1 Hu37D3.v29.3
RSSQSIVHSNGETYFE
521
HVR-L1 Hu37D3.v29.4
RSSQSIVHSNGATYFE
522
HVR-L1 Hu37D3.v29.5
RSSQSIVHSNGHTYFE
523
HVR-L1 Hu37D3.v29.6
RSSQSIVHSNGKTYFE
524
HVR-L1 Hu37D3.v29.7
RSSQSIVHSNGLTYFE
525
HVR-L1 Hu37D3.v29.8
RSSQSIVHSNADTYFE
526
HVR-L1 Hu37D3.v29.9
RSSQSIVHSNAQTYFE
527
HVR-L1 Hu37D3.v29.10
RSSQSIVHSNAETYFE
528
HVR-L1 Hu37D3.v29.11
RSSQSIVHSNAATYFE
529
HVR-L1 Hu37D3.v29.12
RSSQSIVHSNAHTYFE
530
HVR-L1 Hu37D3.v29.13
RSSQSIVHSNAKTYFE
531
HVR-L1 Hu37D3.v29.14
RSSQSIVHSNALTYFE
532
HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.1
RSSQSIVHSGGNTYFE
533
HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.2
RSSQSIVHSTGNTYFE
534
HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.3
RSSQSIVHSVGNTYFE
535
HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.4
RSSQSIVHSLGNTYFE
536
HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.5
RSSQSIVHSIGNTYFE
537
HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.6
RSSQSIVHSPGNTYFE
538
HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.7
RSSQSIVHSFGNTYFE
539
HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.8
RSSQSIVHSYGNTYFE
540
HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.9
RSSQSIVHSHGNTYFE
541
HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.10
RSSQSIVHSKGNTYFE
542
HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.11
RSSQSIVHSRGNTYFE
543
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.1
RSSQSIVHSNAGTYFE
544
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.2
RSSQSIVHSNAVTYFE
545
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.3
RSSQSIVHSNAITYFE
546
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.4
RSSQSIVHSNAPTYFE
547
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.5
RSSQSIVHSNAFTYFE
548
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.6
RSSQSIVHSNAYTYFE
549
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.7
RSSQSIVHSNARTYFE
550
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.8
RSSQSIVHSNANVYFE
551
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.9
RSSQSIVHSNANIYFE
552
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.10
RSSQSIVHSNANPYFE
553
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.11
RSSQSIVHSNANFYFE
554
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.12
RSSQSIVHSNANYYFE
555
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.13
RSSQSIVHSNANNYFE
556
HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.14
RSSQSIVHSNANRYFE
557
Пептид 7-24 тау-белка человека
EFEVMEDHAGTYGLGDRK
558
Пептид 7-20 тау-белка человека
EFEVMEDHAGTYGL
560
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3.v39
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSS
561
Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3.v39
EDQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRSSQSIV HSNGNTYLEW YQQKPGKSPK LLIYKVSNRF SGVPSRFSGS GSGTDFTLTI SSLQPEDFAT YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IK
562
HVR-H1 Hu37D3.v39
SYGMS
563
HVR-H2 Hu37D3.v39
TINSGGTYTYYPDSVKG
564
HVR-H3 Hu37D3.v39
SYSGAMDY
565
HVR-L1 Hu37D3.v39
RSSQSIVHSNGNTYLE
566
HVR-L2 Hu37D3.v39
KVSNRFS
567
HVR-L3 Hu37D3.v39
FQGSLVPWT
568
Тяжелая цепь Hu37D3.v39 IgG4-S228P.YTE
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTKTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLYI TREPEVTCVV VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLGK
569
Легкая цепь Hu37D3.v39 IgG4-S228P.YTE
EDQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRSSQSIV HSNGNTYLEW YQQKPGKSPK LLIYKVSNRF SGVPSRFSGS GSGTDFTLTI SSLQPEDFAT YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC
570
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3.v40
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSS
571
Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3.v40
EDQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRSSQSIV HSNTNTYFEW YQQKPGKSPK LLIYKVSNRF SGVPSRFSGS GSGTDFTLTI SSLQPEDFAT YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IK
572
HVR-H1 Hu37D3.v40
SYGMS
573
HVR-H2 Hu37D3.v40
TINSGGTYTYYPDSVKG
574
HVR-H3 Hu37D3.v40
SYSGAMDY
575
HVR-L1 Hu37D3.v40
RSSQSIVHSNTNTYFE
576
HVR-L2 Hu37D3.v40
KVSNRFS
577
HVR-L3 Hu37D3.v40
FQGSLVPWT
578
Тяжелая цепь Hu37D3.v40 IgG4-S228P.YTE
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTKTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLYI TREPEVTCVV VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLGK
579
Легкая цепь Hu37D3.v40 IgG4-S228P.YTE
EDQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRSSQSIV HSNTNTYFEW YQQKPGKSPK LLIYKVSNRF SGVPSRFSGS GSGTDFTLTI SSLQPEDFAT YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC
580
Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3.v41
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSS
581
Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3.v41
EDQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRSSQSIV HSNGQTYFEW YQQKPGKSPK LLIYKVSNRF SGVPSRFSGS GSGTDFTLTI SSLQPEDFAT YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IK
582
HVR-H1 Hu37D3.v41
SYGMS
583
HVR-H2 Hu37D3.v41
TINSGGTYTYYPDSVKG
584
HVR-H3 Hu37D3.v41
SYSGAMDY
585
HVR-L1 Hu37D3.v41
RSSQSIVHSNGQTYFE
586
HVR-L2 Hu37D3.v41
KVSNRFS
587
HVR-L3 Hu37D3.v41
FQGSLVPWT
588
Тяжелая цепь Hu37D3.v41 IgG4-S228P.YTE
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTKTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLYI TREPEVTCVV VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLGK
589
Легкая цепь Hu37D3.v41 IgG4-S228P.YTE
EDQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRSSQSIV HSNGQTYFEW YQQKPGKSPK LLIYKVSNRF SGVPSRFSGS GSGTDFTLTI SSLQPEDFAT YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC
590
Тяжелая цепь Hu37D3-H9.v1 IgG4-S228P
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTKTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLGK
591
Легкая цепь Hu37D3-H9.v1 IgG4
EDQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRSSQSIV HSNGNTYFEW YQQKPGKSPK LLIYKVSNRF SGVPSRFSGS GSGTDFTLTI SSLQPEDFAT YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC
592
MAPT(10-24)
VMEDHAGTYGLGDRK
593
MAPT(2-24)
AEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRK
594
MAPT(2-34)
AEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQD
595
MAPT(10-44)
VMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLK
596
MAPT(2-24)Y18A
AEPRQEFEVMEDHAGTAGLGDRK
597
MAPT(2-24)L20A
AEPRQEFEVMEDHAGTYGAGDRK
598
hu113F5-F7.LC1
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GKSPKLLIYS ASRRFSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYFCQQ FSTYPYTFGQ GTKVEIK
599
hu113F5-F7.LC2
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASRRFSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYFCQQ FSTYPYTFGQ GTKVEIK
600
hu113F5-F7.LC3
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GKSPKLLIYS ASRRFSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ FSTYPYTFGQ GTKVEIK
601
hu113F5-F7.LC4
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQNVG TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASRRFSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ FSTYPYTFGQ GTKVEIK
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  AC IMMUNE SA
GENENTECH, INC.
ADOLFSSON, Oskar
AYALON, Gai
HOTZEL, Isidro
DICARA, Danielle
<120>  АНТИТЕЛА ПРОТИВ ТАУ-БЕЛКА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
<130>  01147-0006-00PCT
<140>  PCT/US16/35409
<141>  02.06.2016
<150>  US 62/171 693
<151>  05.06.2015
<160>  602
<170>  Версия PatentIn 3.5
<210>  1
<211>  456
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<220>
<221>  прочее
<223>  Последовательность тау-белка человека
<400>  1
Met His His His His His His Gly Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Ser
1               5                   10                  15
Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr
20                  25                  30
Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His Gln
35                  40                  45
Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu Gln
50                  55                  60
Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp
65                  70                  75                  80
Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val Asp
85                  90                  95
Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu Ile
100                 105                 110
Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro Ser
115                 120                 125
Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Ala Arg Met Val Ser
130                 135                 140
Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Gly Ala
145                 150                 155                 160
Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro Gly
165                 170                 175
Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro Pro
180                 185                 190
Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp
195                 200                 205
Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg
210                 215                 220
Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys Lys
225                 230                 235                 240
Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser
245                 250                 255
Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val Lys
260                 265                 270
Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly Gly
275                 280                 285
Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys Lys Leu Asp Leu Ser Asn Val Gln Ser
290                 295                 300
Lys Cys Gly Ser Lys Asp Asn Ile Lys His Val Pro Gly Gly Gly Ser
305                 310                 315                 320
Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys
325                 330                 335
Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val
340                 345                 350
Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys
355                 360                 365
Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn Lys
370                 375                 380
Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys
385                 390                 395                 400
Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly
405                 410                 415
Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile
420                 425                 430
Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser
435                 440                 445
Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu
450                 455
<210>  2
<211>  23
<212>  БЕЛОК
<213>  Homo sapiens
<220>
<221>  прочее
<223>  Эпитоп тау-белка человека (2-24)
<400>  2
Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr
1               5                   10                  15
Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys
20
<210>  3
<211>  456
<212>  БЕЛОК
<213>  Macaca fascicularis
<220>
<221>  прочее
<223>  Последовательность тау-белка яванского макака
<400>  3
Met His His His His His His Gly Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Ser
1               5                   10                  15
Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Asp Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr
20                  25                  30
Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Glu Gly Tyr Thr Met Leu Gln
35                  40                  45
Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu Gln
50                  55                  60
Thr Pro Ala Glu Asp Gly Ser Glu Glu Leu Gly Ser Glu Thr Ser Asp
65                  70                  75                  80
Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val Asp
85                  90                  95
Glu Arg Ala Pro Gly Glu Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Met Glu Ile
100                 105                 110
Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro Ser
115                 120                 125
Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Ala Arg Met Val Ser
130                 135                 140
Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Gly Ala
145                 150                 155                 160
Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro Gly
165                 170                 175
Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro Pro
180                 185                 190
Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp
195                 200                 205
Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg
210                 215                 220
Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Ala Arg Glu Pro Lys Lys
225                 230                 235                 240
Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser
245                 250                 255
Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val Lys
260                 265                 270
Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly Gly
275                 280                 285
Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys Lys Leu Asp Leu Ser Asn Val Gln Ser
290                 295                 300
Lys Cys Gly Ser Lys Asp Asn Ile Lys His Val Pro Gly Gly Gly Ser
305                 310                 315                 320
Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys
325                 330                 335
Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val
340                 345                 350
Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys
355                 360                 365
Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn Lys
370                 375                 380
Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys
385                 390                 395                 400
Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly
405                 410                 415
Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile
420                 425                 430
Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser
435                 440                 445
Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu
450                 455
<210>  4
<211>  23
<212>  БЕЛОК
<213>  Macaca fascicularis
<220>
<221>  прочее
<223>  Эпитоп тау-белка яванского макака (2-24)
<400>  4
Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Asp Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr
1               5                   10                  15
Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys
20
<210>  5
<400>  5
000
<210>  6
<400>  6
000
<210>  7
<400>  7
000
<210>  8
<400>  8
000
<210>  9
<400>  9
000
<210>  10
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 37D3-H9
<400>  10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Ala Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  11
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 37D3-H9
<400>  11
Asp Asp Leu Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  12
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 37D3-H9
<400>  12
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  13
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 37D3-H9
<400>  13
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  14
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 37D3-H9
<400>  14
Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  15
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 37D3-H9
<400>  15
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  16
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 37D3-H9
<400>  16
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  17
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 37D3-H9
<400>  17
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  18
<400>  18
000
<210>  19
<400>  19
000
<210>  20
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 37D3-H9b
<400>  20
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Ala Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  21
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 37D3-H9b
<400>  21
Glu Asp Leu Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  22
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 37D3-H9b
<400>  22
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  23
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 37D3-H9b
<400>  23
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  24
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 37D3-H9b
<400>  24
Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  25
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 37D3-H9b
<400>  25
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  26
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 37D3-H9b
<400>  26
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  27
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 37D3-H9b
<400>  27
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  28
<400>  28
000
<210>  29
<400>  29
000
<210>  30
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 11E10-B8
<400>  30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Val Ser Tyr Asp Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  31
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 11E10-B8
<400>  31
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  32
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 11E10-B8
<400>  32
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  33
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 11E10-B8
<400>  33
Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  34
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 11E10-B8
<400>  34
Ser Tyr Asp Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  35
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 11E10-B8
<400>  35
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  36
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 11E10-B8
<400>  36
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  37
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 11E10-B8
<400>  37
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  38
<400>  38
000
<210>  39
<400>  39
000
<210>  40
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 54C1-H11 и 61E7-C4
<400>  40
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Asp Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Ser Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  41
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 54C1-H11 и 61E7-C4
<400>  41
Asp Thr Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  42
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 54C1-H11 и 61E7-C4
<400>  42
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  43
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 54C1-H11 и 61E7-C4
<400>  43
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  44
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 54C1-H11 и 61E7-C4
<400>  44
Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  45
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 54C1-H11 и 61E7-C4
<400>  45
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  46
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 54C1-H11 и 61E7-C4
<400>  46
Thr Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  47
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 54C1-H11 и 61E7-C4
<400>  47
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  48
<400>  48
000
<210>  49
<400>  49
000
<210>  50
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 3A4-H4
<400>  50
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85                  90                  95
Ala Thr Ser Tyr Asp Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  51
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 3A4-H4
<400>  51
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Thr Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  52
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 3A4-H4
<400>  52
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  53
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 3A4-H4
<400>  53
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  54
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 3A4-H4
<400>  54
Ser Tyr Asp Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  55
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 3A4-H4
<400>  55
Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  56
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 3A4-H4
<400>  56
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  57
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 3A4-H4
<400>  57
Phe Gln Gly Thr Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  58
<400>  58
000
<210>  59
<400>  59
000
<210>  60
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 19H6-F7
<400>  60
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Pro Ser Tyr Asp Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  61
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 19H6-F7
<400>  61
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  62
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 19H6-F7
<400>  62
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  63
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 19H6-F7
<400>  63
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  64
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 19H6-F7
<400>  64
Ser Tyr Asp Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  65
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 19H6-F7
<400>  65
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  66
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 19H6-F7
<400>  66
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  67
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 19H6-F7
<400>  67
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  68
<400>  68
000
<210>  69
<400>  69
000
<210>  70
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 94B2-C1
<400>  70
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100                 105                 110
Ala
<210>  71
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 94B2-C1
<400>  71
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  72
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 94B2-C1
<400>  72
Gly Tyr Thr Met Asn
1               5
<210>  73
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 94B2-C1
<400>  73
Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  74
<211>  4
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 94B2-C1
<400>  74
Gln Gly Ala Tyr
1
<210>  75
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 94B2-C1
<400>  75
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>  76
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 94B2-C1
<400>  76
Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser
1               5
<210>  77
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 94B2-C1
<400>  77
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Trp Thr
1               5
<210>  78
<400>  78
000
<210>  79
<400>  79
000
<210>  80
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 125B11-H3
<400>  80
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Arg Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  81
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 125B11-H3
<400>  81
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Leu Ser Thr Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Asn Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gly Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50                  55                  60
Asn Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Met Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105
<210>  82
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 125B11-H3
<400>  82
Asn Tyr Trp Met Asn
1               5
<210>  83
<211>  19
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 125B11-H3
<400>  83
Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Gly
<210>  84
<211>  4
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 125B11-H3
<400>  84
Gly Thr Thr Tyr
1
<210>  85
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 125B11-H3
<400>  85
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala Val Ala
1               5                   10
<210>  86
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 125B11-H3
<400>  86
Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr
1               5
<210>  87
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 125B11-H3
<400>  87
Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr Thr
1               5
<210>  88
<400>  88
000
<210>  89
<400>  89
000
<210>  90
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 113F5-F7
<400>  90
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Met Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ala Ser Asn Phe Ser
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  91
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 113F5-F7
<400>  91
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Ile Met Ser Thr Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly His Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Arg Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ile Asn Val Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Ser Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Val Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105
<210>  92
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 113F5-F7
<400>  92
Asn Tyr Trp Met Asn
1               5
<210>  93
<211>  19
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 113F5-F7
<400>  93
Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Gly
<210>  94
<211>  4
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 113F5-F7
<400>  94
Gly Thr Ser Tyr
1
<210>  95
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 113F5-F7
<400>  95
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala Val Ala
1               5                   10
<210>  96
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 113F5-F7
<400>  96
Ser Ala Ser Arg Arg Phe Ser
1               5
<210>  97
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 113F5-F7
<400>  97
Gln Gln Phe Ser Thr Tyr Pro Tyr Thr
1               5
<210>  98
<400>  98
000
<210>  99
<400>  99
000
<210>  100
<211>  121
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 26C1-B11
<400>  100
Glu Val His Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Phe Pro Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Lys Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Asn Ala Trp Arg Ala Arg Ala Thr Asn Ser Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100                 105                 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  101
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 26C1-B11
<400>  101
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Arg Arg Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  102
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 26C1-B11
<400>  102
Asp Tyr Tyr Met Tyr
1               5
<210>  103
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 26C1-B11
<400>  103
Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Phe Pro Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  104
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 26C1-B11
<400>  104
Trp Arg Ala Arg Ala Thr Asn Ser Ala Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210>  105
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 26C1-B11
<400>  105
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>  106
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 26C1-B11
<400>  106
Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser
1               5
<210>  107
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 26C1-B11
<400>  107
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Trp Thr
1               5
<210>  108
<400>  108
000
<210>  109
<400>  109
000
<210>  110
<211>  121
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 26C1-C8
<400>  110
Glu Val His Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Ser Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Phe Pro Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ser Lys Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Asn Ala Trp Arg Ala Arg Ala Thr Asn Ser Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100                 105                 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  111
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 26C1-C8
<400>  111
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Arg Arg Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  112
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 26C1-C8
<400>  112
Asp Tyr Tyr Met Tyr
1               5
<210>  113
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 26C1-C8
<400>  113
Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Phe Pro Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  114
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 26C1-C8
<400>  114
Trp Arg Ala Arg Ala Thr Asn Ser Ala Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210>  115
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 26C1-C8
<400>  115
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>  116
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 26C1-C8
<400>  116
Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser
1               5
<210>  117
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 26C1-C8
<400>  117
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Trp Thr
1               5
<210>  118
<400>  118
000
<210>  119
<400>  119
000
<210>  120
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 30G1-B2
<400>  120
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Glu Met Tyr Trp Val Lys Gln Thr Pro Val His Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Ala Ile Asp Pro Glu Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ile Arg Gln Tyr Gly Asn Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210>  121
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 30G1-B2
<400>  121
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ala
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Leu Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Thr Arg Leu Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85                  90                  95
Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  122
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 30G1-B2
<400>  122
Asp Tyr Glu Met Tyr
1               5
<210>  123
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 30G1-B2
<400>  123
Ala Ile Asp Pro Glu Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  124
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 30G1-B2
<400>  124
Gln Tyr Gly Asn Trp Phe Pro Tyr
1               5
<210>  125
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 30G1-B2
<400>  125
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ala Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1               5                   10                  15
<210>  126
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 30G1-B2
<400>  126
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  127
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 30G1-B2
<400>  127
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Phe Thr
1               5
<210>  128
<400>  128
000
<210>  129
<400>  129
000
<210>  130
<211>  114
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 66F5-A1
<400>  130
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr
20                  25                  30
Glu Met Asn Trp Val Lys Gln Thr Pro Val His Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Ala Ile Asp Pro Glu Asn Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Ile Val Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ser Gly Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100                 105                 110
Ser Ser
<210>  131
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 66F5-A1
<400>  131
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20                  25                  30
Ser Thr Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln
85                  90                  95
His Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210>  132
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 66F5-A1
<400>  132
Asp Tyr Glu Met Asn
1               5
<210>  133
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 66F5-A1
<400>  133
Ala Ile Asp Pro Glu Asn Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  134
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 66F5-A1
<400>  134
Pro His Phe Asp Tyr
1               5
<210>  135
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 66F5-A1
<400>  135
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Ser Thr Gln Lys Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>  136
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 66F5-A1
<400>  136
Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210>  137
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 66F5-A1
<400>  137
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr
1               5
<210>  138
<400>  138
000
<210>  139
<400>  139
000
<210>  140
<211>  119
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 123E9-A1
<400>  140
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Asp Ile Asp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ser Ala Gly Phe Gly Asp Ser Phe Ser Phe Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210>  141
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 123E9-A1
<400>  141
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Phe Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  142
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 123E9-A1
<400>  142
Asp Tyr Tyr Met Lys
1               5
<210>  143
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 123E9-A1
<400>  143
Asp Ile Asp Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  144
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 123E9-A1
<400>  144
Ser Ala Gly Phe Gly Asp Ser Phe Ser Phe
1               5                   10
<210>  145
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 123E9-A1
<400>  145
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  146
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 123E9-A1
<400>  146
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  147
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 123E9-A1
<400>  147
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Pro Thr
1               5
<210>  148
<400>  148
000
<210>  149
<400>  149
000
<210>  150
<211>  119
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 15C6-A7
<400>  150
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Met Met Thr Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Asp Leu Asp Pro Tyr Thr Gly Gly Ala Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ser Arg Gly Tyr Gly Asp Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210>  151
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 15C6-A7
<400>  151
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Lys Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  152
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 15C6-A7
<400>  152
Asp Tyr Tyr Met Lys
1               5
<210>  153
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 15C6-A7
<400>  153
Asp Leu Asp Pro Tyr Thr Gly Gly Ala Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  154
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 15C6-A7
<400>  154
Ser Arg Gly Tyr Gly Asp Ser Phe Ala Tyr
1               5                   10
<210>  155
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 15C6-A7
<400>  155
Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  156
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 15C6-A7
<400>  156
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  157
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 15C6-A7
<400>  157
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Pro Thr
1               5
<210>  158
<400>  158
000
<210>  159
<400>  159
000
<210>  160
<211>  119
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 19F8-B1
<400>  160
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Asp Leu Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Phe Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ser Ala Gly Tyr Gly Asp Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210>  161
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 19F8-B1
<400>  161
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  162
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 19F8-B1
<400>  162
Asp Tyr Tyr Met Lys
1               5
<210>  163
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 19F8-B1
<400>  163
Asp Leu Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  164
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 19F8-B1
<400>  164
Ser Ala Gly Tyr Gly Asp Ser Phe Ala Tyr
1               5                   10
<210>  165
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 19F8-B1
<400>  165
Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  166
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 19F8-B1
<400>  166
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  167
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 19F8-B1
<400>  167
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Pro Thr
1               5
<210>  168
<400>  168
000
<210>  169
<400>  169
000
<210>  170
<211>  119
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 24A11-D5
<400>  170
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Asp Leu Asn Pro Lys Asn Gly Gly Ile Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Phe Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ser Gly Gly Tyr Gly Asp Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210>  171
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 24A11-D5
<400>  171
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  172
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 24A11-D5
<400>  172
Asp Tyr Tyr Met Lys
1               5
<210>  173
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 24A11-D5
<400>  173
Asp Leu Asn Pro Lys Asn Gly Gly Ile Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  174
<211>  10
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 24A11-D5
<400>  174
Ser Gly Gly Tyr Gly Asp Ser Phe Ala Tyr
1               5                   10
<210>  175
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 24A11-D5
<400>  175
Arg Ser Ser Gln Asn Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  176
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 24A11-D5
<400>  176
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  177
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 24A11-D5
<400>  177
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Pro Thr
1               5
<210>  178
<400>  178
000
<210>  179
<400>  179
000
<210>  180
<211>  114
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 126F11-G11
<400>  180
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Thr Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Leu Asp Phe Ala Tyr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100                 105                 110
Ser Ser
<210>  181
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 126F11-G11
<400>  181
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  182
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 126F11-G11
<400>  182
Asp Asp Tyr Met His
1               5
<210>  183
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 126F11-G11
<400>  183
Trp Ile Asp Pro Glu Asn Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Ser Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210>  184
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 126F11-G11
<400>  184
Phe Ala Tyr Gly Tyr
1               5
<210>  185
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 126F11-G11
<400>  185
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  186
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 126F11-G11
<400>  186
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  187
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 126F11-G11
<400>  187
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Pro Ala
1               5
<210>  188
<400>  188
000
<210>  189
<400>  189
000
<210>  190
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 89F4-A1
<400>  190
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Ala Tyr Phe Ala Asp
50                  55                  60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Thr Met
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Val Ser Gly Gly Asn Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115                 120
<210>  191
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 89F4-A1
<400>  191
Asn Ile Met Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Tyr Ser
20                  25                  30
Ser Glu Gln Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Val Gln Gly Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85                  90                  95
Tyr Leu Ser Ser Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  192
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 89F4-A1
<400>  192
Thr Tyr Ala Met Asn
1               5
<210>  193
<211>  19
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 89F4-A1
<400>  193
Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Ala Tyr Phe Ala Asp Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Asp
<210>  194
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 89F4-A1
<400>  194
Gly Gly Asn Tyr Val Pro Phe Ala Tyr
1               5
<210>  195
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 89F4-A1
<400>  195
Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Tyr Ser Ser Glu Gln Arg Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>  196
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 89F4-A1
<400>  196
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210>  197
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 89F4-A1
<400>  197
His Gln Tyr Leu Ser Ser Phe Thr
1               5
<210>  198
<400>  198
000
<210>  199
<400>  199
000
<210>  200
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 93A8-D2
<400>  200
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Tyr Val Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Leu Ile Asn Pro Asn Asn Gly Arg Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50                  55                  60
Asn Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65                  70                  75                  80
Met Asp Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Arg Glu Gly Gly Thr Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Ser
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  201
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 93A8-D2
<400>  201
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Ala Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  202
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 93A8-D2
<400>  202
Asp Tyr Tyr Val Asn
1               5
<210>  203
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 93A8-D2
<400>  203
Leu Ile Asn Pro Asn Asn Gly Arg Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe Asn
1               5                   10                  15
Asp
<210>  204
<211>  6
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 93A8-D2
<400>  204
Glu Gly Gly Thr Gly Tyr
1               5
<210>  205
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 93A8-D2
<400>  205
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>  206
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 93A8-D2
<400>  206
Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser
1               5
<210>  207
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 93A8-D2
<400>  207
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Arg Thr
1               5
<210>  208
<400>  208
000
<210>  209
<400>  209
000
<210>  210
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 14F5-D9
<400>  210
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe
20                  25                  30
Tyr Met Glu Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Ala Ala Ser Lys Asn Lys Ala Asn Asp Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Ala
50                  55                  60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Phe Val Ser Arg Asp Thr Ser Gln Ser Ile
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ala Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg Asp Ala Leu Gly Thr Val Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115                 120
<210>  211
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 14F5-D9
<400>  211
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Phe Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85                  90                  95
Thr Leu Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100                 105                 110
<210>  212
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 14F5-D9
<400>  212
Asp Phe Tyr Met Glu
1               5
<210>  213
<211>  19
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 14F5-D9
<400>  213
Ala Ser Lys Asn Lys Ala Asn Asp Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Ala Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Asp
<210>  214
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 14F5-D9
<400>  214
Asp Ala Leu Gly Thr Val Phe Ala Tyr
1               5
<210>  215
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 14F5-D9
<400>  215
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1               5                   10                  15
<210>  216
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 14F5-D9
<400>  216
Lys Val Phe Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  217
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 14F5-D9
<400>  217
Ser Gln Ser Thr Leu Val Pro Leu Thr
1               5
<210>  218
<400>  218
000
<210>  219
<400>  219
000
<210>  220
<211>  122
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 73H6-B8
<400>  220
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1               5                   10                  15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Ile Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Val Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65                  70                  75                  80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Gln Gly Gly Phe Ile Thr Thr Ala Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  221
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 73H6-B8
<400>  221
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20                  25                  30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85                  90                  95
Ser Tyr Asn Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  222
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 73H6-B8
<400>  222
Ser Tyr Gly Val His
1               5
<210>  223
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 73H6-B8
<400>  223
Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1               5                   10                  15
<210>  224
<211>  14
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 73H6-B8
<400>  224
Gln Gly Gly Phe Ile Thr Thr Ala Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1               5                   10
<210>  225
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 73H6-B8
<400>  225
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210>  226
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 73H6-B8
<400>  226
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210>  227
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 73H6-B8
<400>  227
Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Tyr Thr
1               5
<210>  228
<400>  228
000
<210>  229
<400>  229
000
<210>  230
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 22G7-C9
<400>  230
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Cys
20                  25                  30
Ser Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Lys Trp Met
35                  40                  45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Ser Tyr Ala Asp Asp Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe
65                  70                  75                  80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys
85                  90                  95
Gly Thr Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  231
<211>  111
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 22G7-C9
<400>  231
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20                  25                  30
Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85                  90                  95
Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  232
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 22G7-C9
<400>  232
Asp Cys Ser Ile His
1               5
<210>  233
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 22G7-C9
<400>  233
Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Ser Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  234
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 22G7-C9
<400>  234
Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly Ala Leu Asp Tyr
1               5                   10
<210>  235
<211>  15
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 22G7-C9
<400>  235
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser Ser Tyr Ser Tyr Met His
1               5                   10                  15
<210>  236
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 22G7-C9
<400>  236
Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1               5
<210>  237
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 22G7-C9
<400>  237
Gln His Ser Trp Glu Leu Pro Trp Thr
1               5
<210>  238
<400>  238
000
<210>  239
<400>  239
000
<210>  240
<211>  116
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 7A11-C12
<400>  240
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20                  25                  30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35                  40                  45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Ile Asp Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Thr Val Ser Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ala
115
<210>  241
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 7A11-C12
<400>  241
Asp Val Val Met Ser Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp His Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Leu Val His Ser
20                  25                  30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85                  90                  95
Thr His Val Ile Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  242
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 7A11-C12
<400>  242
Asn Tyr Gly Met Asn
1               5
<210>  243
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 7A11-C12
<400>  243
Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Glu Glu Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  244
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 7A11-C12
<400>  244
Gly Thr Val Ser Phe Pro Tyr
1               5
<210>  245
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 7A11-C12
<400>  245
Arg Ser Ser Gln Asn Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His
1               5                   10                  15
<210>  246
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 7A11-C12
<400>  246
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  247
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 7A11-C12
<400>  247
Ser Gln Ser Thr His Val Ile Phe Thr
1               5
<210>  248
<400>  248
000
<210>  249
<400>  249
000
<210>  250
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 12A10-E8
<400>  250
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20                  25                  30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35                  40                  45
Gly Trp Ile Asn Met Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Gly Asp Asp Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Thr Ser Val Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Lys Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Gly Arg Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  251
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 12A10-E8
<400>  251
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Phe Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Asn Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly
85                  90                  95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  252
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 12A10-E8
<400>  252
Asn Tyr Gly Met Asn
1               5
<210>  253
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 12A10-E8
<400>  253
Trp Ile Asn Met Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Gly Asp Asp Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  254
<211>  6
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 12A10-E8
<400>  254
Gly Gly Arg Pro Asp Tyr
1               5
<210>  255
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 12A10-E8
<400>  255
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  256
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 12A10-E8
<400>  256
Lys Val Phe Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  257
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 12A10-E8
<400>  257
Leu Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr
1               5
<210>  258
<400>  258
000
<210>  259
<400>  259
000
<210>  260
<211>  120
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 55E7-F11
<400>  260
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Ala Gly Tyr Phe Tyr Gly Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr
100                 105                 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  261
<211>  108
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 55E7-F11
<400>  261
Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Thr Met Ala Ala Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Lys Lys Ile Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn
20                  25                  30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Phe Ser Pro Lys Leu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Gly Thr Met Glu
65                  70                  75                  80
Ala Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Ser Leu Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105
<210>  262
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 55E7-F11
<400>  262
Asn Tyr Trp Met Asn
1               5
<210>  263
<211>  19
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 55E7-F11
<400>  263
Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Gly
<210>  264
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 55E7-F11
<400>  264
Tyr Phe Tyr Gly Gly Tyr Phe Asp Val
1               5
<210>  265
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 55E7-F11
<400>  265
Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn Tyr Leu His
1               5                   10
<210>  266
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 55E7-F11
<400>  266
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1               5
<210>  267
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 55E7-F11
<400>  267
Gln Gln Gly Ser Ser Leu Pro Phe Thr
1               5
<210>  268
<400>  268
000
<210>  269
<400>  269
000
<210>  270
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) 52F6-F11
<400>  270
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20                  25                  30
Trp Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Thr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Gln Asn Phe
50                  55                  60
Arg Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Asn Ser Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Tyr Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ala Gly Asn Arg Val Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100                 105                 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210>  271
<211>  109
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) 52F6-F11
<400>  271
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20                  25                  30
Asn Phe Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly
35                  40                  45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe
50                  55                  60
Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65                  70                  75                  80
Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85                  90                  95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100                 105
<210>  272
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 52F6-F11
<400>  272
His Tyr Trp Met His
1               5
<210>  273
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 52F6-F11
<400>  273
Tyr Ile Tyr Pro Thr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Gln Asn Phe Arg
1               5                   10                  15
Asp
<210>  274
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 52F6-F11
<400>  274
Ala Gly Asn Arg Val Phe Asp Phe
1               5
<210>  275
<211>  14
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 52F6-F11
<400>  275
Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Phe Ala Asn
1               5                   10
<210>  276
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 52F6-F11
<400>  276
Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro
1               5
<210>  277
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 52F6-F11
<400>  277
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val
1               5
<210>  278
<400>  278
000
<210>  279
<400>  279
000
<210>  280
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3-H9.v1
<400>  280
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  281
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3-H9.v1
<400>  281
Glu Asp Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  282
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 Hu37D3-H9.v1
<400>  282
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  283
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 Hu37D3-H9.v1
<400>  283
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  284
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 Hu37D3-H9.v1
<400>  284
Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  285
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v1
<400>  285
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  286
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 Hu37D3-H9.v1
<400>  286
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  287
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 Hu37D3-H9.v1
<400>  287
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  288
<211>  447
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Тяжелая цепь Hu37D3-H9.v1 IgG1
<400>  288
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210                 215                 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225                 230                 235                 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245                 250                 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260                 265                 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275                 280                 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290                 295                 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305                 310                 315                 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325                 330                 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340                 345                 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355                 360                 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370                 375                 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385                 390                 395                 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405                 410                 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420                 425                 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435                 440                 445
<210>  289
<211>  219
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Легкая цепь Hu37D3-H9.v1 IgG1
<400>  289
Glu Asp Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115                 120                 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130                 135                 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                 150                 155                 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180                 185                 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195                 200                 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215
<210>  290
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3-H9.v5
<400>  290
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  291
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3-H9.v5
<400>  291
Glu Asp Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  292
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 Hu37D3-H9.v5
<400>  292
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  293
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 Hu37D3-H9.v5
<400>  293
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  294
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 Hu37D3-H9.v5
<400>  294
Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  295
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5
<400>  295
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  296
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 Hu37D3-H9.v5
<400>  296
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  297
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 Hu37D3-H9.v5
<400>  297
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  298
<400>  298
000
<210>  299
<400>  299
000
<210>  300
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu94B2.v105
<400>  300
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100                 105                 110
Ser
<210>  301
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu94B2.v105
<400>  301
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  302
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 Hu94B2.v105
<400>  302
Gly Tyr Thr Met Asn
1               5
<210>  303
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 Hu94B2.v105
<400>  303
Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  304
<211>  4
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 Hu94B2.v105
<400>  304
Gln Gly Ala Tyr
1
<210>  305
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu94B2.v105
<400>  305
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>  306
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 Hu94B2.v105
<400>  306
Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser
1               5
<210>  307
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 Hu94B2.v105
<400>  307
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Trp Thr
1               5
<210>  308
<400>  308
000
<210>  309
<400>  309
000
<210>  310
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: вариабельная область тяжелой цепи (VH) hu125B11.v17
<400>  310
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  311
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: вариабельная область легкой цепи (VL) hu125B11.v17
<400>  311
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  312
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-H1 hu125B11.v17
<400>  312
Asn Tyr Trp Met Asn
1               5
<210>  313
<211>  19
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-H2 hu125B11.v17
<400>  313
Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Gly
<210>  314
<211>  4
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-H3 hu125B11.v17
<400>  314
Gly Thr Thr Tyr
1
<210>  315
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-L1 hu125B11.v17
<400>  315
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala Val Ala
1               5                   10
<210>  316
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-L2 hu125B11.v17
<400>  316
Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr
1               5
<210>  317
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-L3 hu125B11.v17
<400>  317
Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr Thr
1               5
<210>  318
<400>  318
000
<210>  319
<400>  319
000
<210>  320
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: вариабельная область тяжелой цепи (VH) hu125B11.v26
<400>  320
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  321
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: вариабельная область легкой цепи (VL) hu125B11.v26
<400>  321
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  322
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-H1 hu125B11.v26
<400>  322
Asn Tyr Trp Met Asn
1               5
<210>  323
<211>  19
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-H2 hu125B11.v26
<400>  323
Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Gly
<210>  324
<211>  4
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-H3 hu125B11.v26
<400>  324
Gly Thr Thr Tyr
1
<210>  325
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-L1 hu125B11.v26
<400>  325
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala Val Ala
1               5                   10
<210>  326
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-L2 hu125B11.v26
<400>  326
Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr
1               5
<210>  327
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-L3 hu125B11.v26
<400>  327
Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr Thr
1               5
<210>  328
<400>  328
000
<210>  329
<400>  329
000
<210>  330
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: вариабельная область тяжелой цепи (VH) hu125B11.v28
<400>  330
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  331
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: вариабельная область легкой цепи (VL) hu125B11.v28
<400>  331
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  332
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-H1 hu125B11.v28
<400>  332
Asn Tyr Trp Met Asn
1               5
<210>  333
<211>  19
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-H2 hu125B11.v28
<400>  333
Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Gly
<210>  334
<211>  4
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-H3 hu125B11.v28
<400>  334
Gly Thr Thr Tyr
1
<210>  335
<211>  11
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-L1 hu125B11.v28
<400>  335
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala Val Ala
1               5                   10
<210>  336
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-L2 hu125B11.v28
<400>  336
Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr
1               5
<210>  337
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: HVR-L3 hu125B11.v28
<400>  337
Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr Thr
1               5
<210>  338
<400>  338
000
<210>  339
<400>  339
000
<210>  340
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3-H9.v28.A4
<400>  340
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  341
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3-H9.v28.A4
<400>  341
Asp Asp Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  342
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 Hu37D3-H9.v28.A4
<400>  342
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  343
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 Hu37D3-H9.v28.A4
<400>  343
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  344
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 Hu37D3-H9.v28.A4
<400>  344
Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  345
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v28.A4
<400>  345
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  346
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 Hu37D3-H9.v28.A4
<400>  346
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  347
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 Hu37D3-H9.v28.A4
<400>  347
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  348
<211>  444
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Тяжелая цепь Hu37D3-H9.v28.A4H9.v28.A4-S228P.YTE
<400>  348
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210                 215                 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225                 230                 235                 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val
245                 250                 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275                 280                 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290                 295                 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305                 310                 315                 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325                 330                 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340                 345                 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355                 360                 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370                 375                 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385                 390                 395                 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405                 410                 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420                 425                 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435                 440
<210>  349
<211>  219
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Легкая цепь Hu37D3-H9.v28.A4H9.v28.A4-S228P.YTE
<400>  349
Asp Asp Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115                 120                 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130                 135                 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                 150                 155                 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180                 185                 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195                 200                 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215
<210>  350
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Контроль без стресса (среднее, n = 9)
<400>  350
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  351
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5
<400>  351
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  352
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5.1
<400>  352
Glu Asp Leu His Ser Asn Ala Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  353
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5.2
<400>  353
Glu Asp Leu His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  354
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5.3
<400>  354
Glu Asp Leu His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  355
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5.4
<400>  355
Glu Asp Leu His Ser Gln Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  356
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5.5
<400>  356
Glu Asp Leu His Ser Glu Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  357
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5.6
<400>  357
Glu Asp Leu His Ser Ala Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  358
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5.7
<400>  358
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  359
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5.8
<400>  359
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Gln Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  360
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5.9
<400>  360
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Glu Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  361
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5.10
<400>  361
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Ala Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  362
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v5.11
<400>  362
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Ser Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  363
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28
<400>  363
Asp Asp Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  364
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A2
<400>  364
Asp Asp Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His
1               5                   10
<210>  365
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A4
<400>  365
Asp Asp Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Leu
1               5                   10
<210>  366
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A6
<400>  366
Asp Asp Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1               5                   10
<210>  367
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A8
<400>  367
Asp Asp Met His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  368
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A10
<400>  368
Asp Asp Met His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His
1               5                   10
<210>  369
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A12
<400>  369
Asp Asp Met His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Leu
1               5                   10
<210>  370
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A14
<400>  370
Asp Asp Met His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1               5                   10
<210>  371
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A16
<400>  371
Asp Val Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  372
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A18
<400>  372
Asp Val Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His
1               5                   10
<210>  373
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A20
<400>  373
Asp Val Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Leu
1               5                   10
<210>  374
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A22
<400>  374
Asp Val Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1               5                   10
<210>  375
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A24
<400>  375
Asp Val Met His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  376
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A26
<400>  376
Asp Val Met His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe His
1               5                   10
<210>  377
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A28
<400>  377
Asp Val Met His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Leu
1               5                   10
<210>  378
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.A30
<400>  378
Asp Val Met His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1               5                   10
<210>  379
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.B1
<400>  379
Asp Asp Leu His Ser Ile Gly Asn Thr Phe Phe Leu
1               5                   10
<210>  380
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.B2
<400>  380
Asp Asp Leu His Ser Met Gly Asn Thr Phe Phe Leu
1               5                   10
<210>  381
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.B3
<400>  381
Asp Asp Leu His Ser Gln Gly Asn Thr Trp Phe Leu
1               5                   10
<210>  382
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.B4
<400>  382
Asp Asp Leu His Ser Gln Gly Asn Thr His Phe Leu
1               5                   10
<210>  383
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.B6
<400>  383
Asp Asp Leu His Ser Asp Gly Asn Thr Arg Phe Leu
1               5                   10
<210>  384
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.B7
<400>  384
Asp Asp Leu His Ser Asp Gly Asn Thr Lys Phe Leu
1               5                   10
<210>  385
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.B8
<400>  385
Asp Asp Leu His Ser Glu Gly Asn Thr Arg Phe Leu
1               5                   10
<210>  386
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.C1
<400>  386
Asp Asp Leu His Ser Asn Asn Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  387
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.C2
<400>  387
Asp Asp Leu His Ser Asn Asp Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  388
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.D1
<400>  388
Asp Asp Leu His Ala Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  389
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Контроль без стресса (среднее, n = 9)
<400>  389
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  390
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.E1
<400>  390
Asp Asp Leu Asn Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  391
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.E2
<400>  391
Asp Asp Leu Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  392
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.E3
<400>  392
Asp Asp Leu Asp Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  393
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.F1
<400>  393
Asp Asp Leu His Ser Asn Thr Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  394
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.F2
<400>  394
Asp Asp Leu His Thr Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  395
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.F3
<400>  395
Asp Asp Leu His Thr Asn Ala Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  396
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.51
<400>  396
Glu Asp Leu His Ser His Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  397
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.52
<400>  397
Glu Asp Leu His Ser Lys Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  398
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.53
<400>  398
Glu Asp Leu His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  399
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.54
<400>  399
Glu Asp Leu His Ser Leu Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  400
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.55
<400>  400
Asp Asp Leu His Ser Asn Gln Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  401
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.56
<400>  401
Asp Asp Leu His Ser Asn Tyr Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  402
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v28.57
<400>  402
Asp Asp Leu His Ser Asn Phe Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  403
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.1
<400>  403
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  404
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.2
<400>  404
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Gln Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  405
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.3
<400>  405
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Glu Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  406
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.4
<400>  406
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Ala Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  407
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.5
<400>  407
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly His Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  408
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.6
<400>  408
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Lys Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  409
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.7
<400>  409
Glu Asp Leu His Ser Asn Gly Leu Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  410
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.8
<400>  410
Glu Asp Leu His Ser Asn Ala Asp Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  411
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.9
<400>  411
Glu Asp Leu His Ser Asn Ala Gln Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  412
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.10
<400>  412
Glu Asp Leu His Ser Asn Ala Glu Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  413
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.11
<400>  413
Glu Asp Leu His Ser Asn Ala Ala Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  414
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.12
<400>  414
Glu Asp Leu His Ser Asn Ala His Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  415
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.13
<400>  415
Glu Asp Leu His Ser Asn Ala Lys Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  416
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3.v29.14
<400>  416
Glu Asp Leu His Ser Asn Ala Leu Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  417
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v30.1
<400>  417
Asp Asp Leu His Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  418
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v30.2
<400>  418
Asp Asp Leu His Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  419
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v30.3
<400>  419
Asp Asp Leu His Ser Val Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  420
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v30.4
<400>  420
Asp Asp Leu His Ser Leu Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  421
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v30.5
<400>  421
Asp Asp Leu His Ser Ile Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  422
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v30.6
<400>  422
Asp Asp Leu His Ser Pro Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  423
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v30.7
<400>  423
Asp Asp Leu His Ser Phe Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  424
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v30.8
<400>  424
Asp Asp Leu His Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  425
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v30.9
<400>  425
Asp Asp Leu His Ser His Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  426
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v30.10
<400>  426
Asp Asp Leu His Ser Lys Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  427
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v30.11
<400>  427
Asp Asp Leu His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  428
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.1
<400>  428
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Gly Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  429
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.2
<400>  429
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Val Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  430
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.3
<400>  430
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Ile Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  431
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.4
<400>  431
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Pro Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  432
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.5
<400>  432
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Phe Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  433
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.6
<400>  433
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Tyr Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  434
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.7
<400>  434
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Arg Thr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  435
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.8
<400>  435
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Asn Val Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  436
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.9
<400>  436
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Asn Ile Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  437
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.10
<400>  437
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Asn Pro Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  438
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.11
<400>  438
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Asn Phe Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  439
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.12
<400>  439
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Asn Tyr Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  440
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.13
<400>  440
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Asn Asn Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  441
<211>  12
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu37D3-H9.v31.14
<400>  441
Asp Asp Leu His Ser Asn Ala Asn Arg Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>  442
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu125B11-H3.LC1
<400>  442
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  443
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu125B11-H3.LC2
<400>  443
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  444
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu125B11-H3.LC3
<400>  444
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  445
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu125B11-H3.LC4
<400>  445
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Ile Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Arg Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  446
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu125B11-H3.HC1
<400>  446
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  447
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu125B11-H3.HC2
<400>  447
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  448
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu125B11-H3.HC3
<400>  448
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  449
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu125B11-H3.HC4
<400>  449
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  450
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu125B11-H3.HC5
<400>  450
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  451
<211>  115
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu125B11-H3.HC6
<400>  451
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Ile Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210>  452
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.HC1
<400>  452
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100                 105                 110
Ser
<210>  453
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.HC2
<400>  453
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100                 105                 110
Ser
<210>  454
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.HC3
<400>  454
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100                 105                 110
Ser
<210>  455
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.HC4
<400>  455
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Arg Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100                 105                 110
Ser
<210>  456
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.HC5
<400>  456
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100                 105                 110
Ser
<210>  457
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.HC6
<400>  457
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100                 105                 110
Ser
<210>  458
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.HC7
<400>  458
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100                 105                 110
Ser
<210>  459
<211>  113
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.HC8
<400>  459
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Leu Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gln Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100                 105                 110
Ser
<210>  460
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.LC9
<400>  460
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  461
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.LC10
<400>  461
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  462
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.LC11
<400>  462
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  463
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.LC12
<400>  463
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  464
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.LC13
<400>  464
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  465
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.LC14
<400>  465
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  466
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.LC15
<400>  466
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  467
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Hu94B2.LC16
<400>  467
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20                  25                  30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85                  90                  95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  468
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.1
<400>  468
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  469
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.2
<400>  469
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  470
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.3
<400>  470
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  471
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.4
<400>  471
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Gln Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  472
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.5
<400>  472
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Glu Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  473
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.6
<400>  473
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ala Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  474
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.7
<400>  474
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  475
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.8
<400>  475
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Gln Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  476
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.9
<400>  476
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Glu Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  477
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.10
<400>  477
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Ala Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  478
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v5.11
<400>  478
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Ser Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  479
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28
<400>  479
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  480
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A2
<400>  480
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  481
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A4
<400>  481
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  482
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A6
<400>  482
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  483
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A8
<400>  483
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  484
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A10
<400>  484
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  485
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A12
<400>  485
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  486
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A14
<400>  486
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  487
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A16
<400>  487
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  488
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A18
<400>  488
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  489
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A20
<400>  489
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  490
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A22
<400>  490
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  491
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A24
<400>  491
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  492
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A26
<400>  492
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  493
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A28
<400>  493
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  494
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.A30
<400>  494
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  495
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.B1
<400>  495
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ile Gly Asn Thr Phe Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  496
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.B2
<400>  496
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Met Gly Asn Thr Phe Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  497
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.B3
<400>  497
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Gln Gly Asn Thr Trp Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  498
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.B4
<400>  498
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Gln Gly Asn Thr His Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  499
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.B6
<400>  499
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asp Gly Asn Thr Arg Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  500
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.B7
<400>  500
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asp Gly Asn Thr Lys Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  501
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.B8
<400>  501
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Glu Gly Asn Thr Arg Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  502
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.C1
<400>  502
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Asn Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  503
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.C2
<400>  503
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Asp Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  504
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.D1
<400>  504
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ala Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  505
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.E1
<400>  505
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Asn Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  506
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.E2
<400>  506
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  507
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.E3
<400>  507
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Asp Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  508
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.F1
<400>  508
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Thr Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  509
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.F2
<400>  509
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Thr Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  510
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.F3
<400>  510
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Thr Asn Ala Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  511
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.51
<400>  511
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser His Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  512
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.52
<400>  512
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Lys Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  513
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.53
<400>  513
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  514
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.54
<400>  514
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Leu Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  515
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.55
<400>  515
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gln Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  516
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.56
<400>  516
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Tyr Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  517
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v28.57
<400>  517
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Phe Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  518
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.1
<400>  518
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  519
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.2
<400>  519
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Gln Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  520
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.3
<400>  520
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Glu Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  521
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.4
<400>  521
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Ala Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  522
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.5
<400>  522
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly His Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  523
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.6
<400>  523
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Lys Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  524
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.7
<400>  524
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Leu Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  525
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.8
<400>  525
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Asp Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  526
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.9
<400>  526
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Gln Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  527
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.10
<400>  527
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Glu Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  528
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.11
<400>  528
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Ala Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  529
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.12
<400>  529
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala His Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  530
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.13
<400>  530
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Lys Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  531
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v29.14
<400>  531
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Leu Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  532
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.1
<400>  532
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  533
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.2
<400>  533
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Thr Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  534
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.3
<400>  534
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Val Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  535
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.4
<400>  535
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Leu Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  536
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.5
<400>  536
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ile Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  537
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.6
<400>  537
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Pro Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  538
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.7
<400>  538
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Phe Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  539
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.8
<400>  539
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  540
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.9
<400>  540
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser His Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  541
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.10
<400>  541
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Lys Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  542
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v30.11
<400>  542
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Arg Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  543
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.1
<400>  543
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Gly Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  544
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.2
<400>  544
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Val Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  545
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.3
<400>  545
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Ile Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  546
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.4
<400>  546
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Pro Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  547
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.5
<400>  547
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Phe Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  548
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.6
<400>  548
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Tyr Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  549
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.7
<400>  549
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Arg Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  550
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.8
<400>  550
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Asn Val Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  551
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.9
<400>  551
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Asn Ile Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  552
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.10
<400>  552
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Asn Pro Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  553
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.11
<400>  553
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Asn Phe Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  554
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.12
<400>  554
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Asn Tyr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  555
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.13
<400>  555
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Asn Asn Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  556
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3-H9.v31.14
<400>  556
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Ala Asn Arg Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  557
<211>  18
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Пептид 7-24 тау-белка человека
<400>  557
Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr Tyr Gly Leu Gly Asp
1               5                   10                  15
Arg Lys
<210>  558
<211>  14
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Пептид 7-20 тау-белка человека
<400>  558
Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr Tyr Gly Leu
1               5                   10
<210>  559
<400>  559
000
<210>  560
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3.v39
<400>  560
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  561
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3.v39
<400>  561
Glu Asp Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  562
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 Hu37D3.v39
<400>  562
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  563
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 Hu37D3.v39
<400>  563
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  564
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 Hu37D3.v39
<400>  564
Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  565
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v39
<400>  565
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  566
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 Hu37D3.v39
<400>  566
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  567
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 Hu37D3.v39
<400>  567
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  568
<211>  444
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Тяжелая цепь Hu37D3.v39 IgG4-S228P.YTE
<400>  568
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210                 215                 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225                 230                 235                 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val
245                 250                 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275                 280                 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290                 295                 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305                 310                 315                 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325                 330                 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340                 345                 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355                 360                 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370                 375                 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385                 390                 395                 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405                 410                 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420                 425                 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435                 440
<210>  569
<211>  219
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Легкая цепь Hu37D3.v39 IgG4-S228P.YTE
<400>  569
Glu Asp Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115                 120                 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130                 135                 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                 150                 155                 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180                 185                 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195                 200                 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215
<210>  570
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3.v40
<400>  570
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  571
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3.v40
<400>  571
Glu Asp Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Thr Asn Thr Tyr Phe Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  572
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 Hu37D3.v40
<400>  572
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  573
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 Hu37D3.v40
<400>  573
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  574
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 Hu37D3.v40
<400>  574
Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  575
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v40
<400>  575
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Thr Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  576
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 Hu37D3.v40
<400>  576
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  577
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 Hu37D3.v40
<400>  577
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  578
<211>  444
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Тяжелая цепь Hu37D3.v40 IgG4-S228P.YTE
<400>  578
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210                 215                 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225                 230                 235                 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val
245                 250                 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275                 280                 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290                 295                 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305                 310                 315                 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325                 330                 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340                 345                 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355                 360                 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370                 375                 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385                 390                 395                 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405                 410                 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420                 425                 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435                 440
<210>  579
<211>  219
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Легкая цепь Hu37D3.v40 IgG4-S228P.YTE
<400>  579
Glu Asp Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Thr Asn Thr Tyr Phe Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115                 120                 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130                 135                 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                 150                 155                 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180                 185                 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195                 200                 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215
<210>  580
<211>  117
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область тяжелой цепи (VH) Hu37D3.v41
<400>  580
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  581
<211>  112
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Вариабельная область легкой цепи (VL) Hu37D3.v41
<400>  581
Glu Asp Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Gln Thr Tyr Phe Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  582
<211>  5
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H1 Hu37D3.v41
<400>  582
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  583
<211>  17
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H2 Hu37D3.v41
<400>  583
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  584
<211>  8
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-H3 Hu37D3.v41
<400>  584
Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  585
<211>  16
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L1 Hu37D3.v41
<400>  585
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Gln Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  586
<211>  7
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L2 Hu37D3.v41
<400>  586
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  587
<211>  9
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: HVR-L3 Hu37D3.v41
<400>  587
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  588
<211>  444
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Тяжелая цепь Hu37D3.v41 IgG4-S228P.YTE
<400>  588
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210                 215                 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225                 230                 235                 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val
245                 250                 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275                 280                 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290                 295                 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305                 310                 315                 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325                 330                 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340                 345                 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355                 360                 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370                 375                 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385                 390                 395                 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405                 410                 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420                 425                 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435                 440
<210>  589
<211>  219
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Легкая цепь Hu37D3.v41 IgG4-S228P.YTE
<400>  589
Glu Asp Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Gln Thr Tyr Phe Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115                 120                 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130                 135                 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                 150                 155                 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180                 185                 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195                 200                 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215
<210>  590
<211>  444
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Тяжелая цепь Hu37D3-H9.v1 IgG4
<400>  590
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210                 215                 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225                 230                 235                 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245                 250                 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275                 280                 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290                 295                 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305                 310                 315                 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325                 330                 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340                 345                 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355                 360                 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370                 375                 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385                 390                 395                 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405                 410                 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420                 425                 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435                 440
<210>  591
<211>  219
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Легкая цепь Hu37D3-H9.v1 IgG4
<400>  591
Glu Asp Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115                 120                 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130                 135                 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                 150                 155                 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180                 185                 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195                 200                 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215
<210>  592
<211>  15
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: MAPT(10-24)
<400>  592
Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys
1               5                   10                  15
<210>  593
<211>  23
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: MAPT(2-24)
<400>  593
Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr
1               5                   10                  15
Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys
20
<210>  594
<211>  33
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: MAPT(2-34)
<400>  594
Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr
1               5                   10                  15
Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His Gln
20                  25                  30
Asp
<210>  595
<211>  35
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: MAPT(10-44)
<400>  595
Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp
1               5                   10                  15
Gln Gly Gly Tyr Thr Met His Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala
20                  25                  30
Gly Leu Lys
35
<210>  596
<211>  23
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: MAPT(2-24)Y18A
<400>  596
Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr
1               5                   10                  15
Ala Gly Leu Gly Asp Arg Lys
20
<210>  597
<211>  23
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: MAPT(2-24)L20A
<400>  597
Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr
1               5                   10                  15
Tyr Gly Ala Gly Asp Arg Lys
20
<210>  598
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu113F5-F7.LC1
<400>  598
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Arg Arg Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Ser Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  599
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu113F5-F7.LC2
<400>  599
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Arg Arg Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Ser Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  600
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu113F5-F7.LC3
<400>  600
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Arg Arg Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  601
<211>  107
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Синтетический конструкт: hu113F5-F7.LC4
<400>  601
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Ala
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Arg Arg Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ser Thr Tyr Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  602
<211>  443
<212>  БЕЛОК
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический конструкт: Тяжелая цепь Hu37D3-H9.v28.A4 IgG4-S228P.YTE des-K
<400>  602
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210                 215                 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225                 230                 235                 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val
245                 250                 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275                 280                 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290                 295                 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305                 310                 315                 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325                 330                 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340                 345                 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355                 360                 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370                 375                 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385                 390                 395                 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405                 410                 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420                 425                 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435                 440
<---