СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОГЕННОГО СТИМУЛЯТОРА ИЗ ЛИЧИНОК ТРУТНЕВОГО РАСПЛОДА ПЧЕЛ
METHOD OF MANUFACTURING BIOGENIC STIMULATOR FROM LARVAE OF DRONE BROOD OF BEES

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к препаратам для повышения общей резистентности и продуктивных качеств сельскохозяйственных животных.
Уровень техники
Известно, что в качестве субстратов используемых для приготовления тканевых препаратов большинство исследователей рекомендуют ткани с высокой активностью роста, а следовательно, и обмена веществ. Это эмбриональные ткани, плацента, семенники, кровь и др. [1, 3, 8].
Известен способ приготовления экстракта из плаценты по В.П. Филатову [3], включающий консервирование на холоде плаценты, отмывание от крови пятикратным погружением в дистиллированную воду, измельчение, разбавление дистиллированной водой в соотношении 1:10, нагревание на водяной бане до 80-90°С в течение 30 мин, охлаждение, фильтрацию, кипячение, фасовку и стерилизацию автоклавированием при 120°С в течение 60 мин.
Известен гидролизин ферментативный и способ его изготовления, отличающийся тем, что получают его ферментативным гидролизом с применением панкреатина и хлороформа. Сырьем служат свежие форменные элементы крови крупного рогатого скота [4].
Известен сухой биогенный стимулятор, изготовленный из эмбрионов животных, влажные ткани которых выдерживают при охлаждении по методике В.П.Филатова, а затем измельчают и высушивают в вакуумных аппаратах [3].
Известны лизаты (гистолизаты) - продукты кислотного или ферментативного гидролиза различных органов и тканей животных по методике академика М.П.Тушного [3, 6]. Получают их в условиях высокой температуры и повышенного давления.
Известна мазь для лечения открытых ран на основе продуктов пчеловодства, препарат содержит прополис, яичный желток, воду и отличается тем, что в качестве жирового продукта содержит сливочное или растительное масло (RU (11) 2082394 (13) С1, (51) 6 А61К 9/06, А61К 35/54, А61К 35/64) [9].
Недостатком данного изобретения является исключительно наружное применение данного вещества.
Известен биостимулятор - плацента, активное начало из плаценты женщин. Препарат изготавливается по новой технологии, без термообработки с использованием при стерилизации эффекта кавитации и вновь открытых химических реагентов (см. Новое поколение тканевых препаратов - ПАН [8] // «Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях». Международная конференция. Воронеж, 3-4 октября 2002 г. Материалы конференции. - Том 1. - Воронеж, 2000, - 295 с.).
Недостатками данного способа приготовления биостимулятора являются высокая стоимость, сложность и многоступенчатость приготовления.
В последние годы в качестве исходного субстрата для приготовления биогенных стимуляторов предлагаются органы и ткани не только млекопитающих, но также тканей моллюсков, рыб, крабов и насекомых. Нами ранее предложен препарат, в котором используются личинки пчел трутневого расплода [7] (RU 2006 112147/13) и способ его приготовления, включающий отбор личинок трутней, выдерживания личинок на холоде, измельчения их, разведения 0,09% раствором хлористого натрия 1:5, 5-кратное прогревание при 58-59°С с суточными интервалами, фильтрацию, внесение меда (20%) и консерванта (фенола или формалина - 0,3%), фасовку и вновь 5-кратное прогревание при 58-59°С с суточными интервалами. Препарат, приготовленный указанным выше способом, обладает высокой биологической активностью, но процесс его изготовления занимает много времени - только на тепловую обработку уходит более 10 суток. Целью данного изобретения является разработка нового способа изготовления биогенного стимулятора из личинок трутневого расплода.
Осуществление изобретения
Раскрытие изобретения
Целью изобретения является создание биологического стимулятора на основе тканей личинок трутневого расплода и разработка способов его изготовления. При этом использованы рациональные приемы, направленные как на снижение аллергенных свойств субстрата, с одновременным сохранением его исходных качеств, так и на уменьшение сроков изготовления препарата.
Технический результат, который может быть достигнут с помощью данного изобретения, заключается в получении нового и доступного стимулятора, применение которого способствует повышению гормонального фона, увеличению продуктивных качеств животных, сохранению приплода, улучшению показателей роста и развития животных. Достижение технического результата осуществляется применением предложенного нами ранее нового вида сырья - личинок трутневого расплода и нового способа (отличного от способа, описанного в заявке RU 2006112147/13) изготовления препарата. Способ включает охлаждение личинок на холоде при температуре 2-4°С в течение 4-6 суток, измельчение их, разбавление 0,9% раствором хлорида натрия (1:1), термическую обработку автоклавированием, фильтрацию, фасовку и заключительную стерилизацию автоклавированием.
Сущность предлагаемого способа изготовления препарата
Для приготовления препарата соты с живым здоровым трутневым расплодом возрастом 18-22 дня выдерживались в холодильнике при температуре 3-4°С в течение 5-6 дней, в этот период происходила медленная гибель расплода в соответствии с учением В.П.Филатова. В этот период в организме личинок происходит образование биологически активных веществ. Затем соты с расплодом вскрывали и отбирали личинок трутней одинакового размера, светло-серого цвета. После чего личинок трутней измельчали в стерильной лабораторной мельнице, разводили стерильным физиологическим раствором хлорида натрия с концентрацией 0,9% в пропорции 1:1 и автоклавировали при температуре внутри котла 120°С и давлении пара в рубашке 1,5 атмосферы в течение 1 часа. Затем массу отфильтровывали через 2 слоя марли в стерильную мерную посуду, доводили физиологическим раствором до первоначального объема, добавляли консервант - фенол или формалин (0,3% в препарате), разливали при соблюдении правил асептики и антисептики в подготовленные стерильные флаконы и герметично закупоривали их, затем выдерживали в автоклаве при температуре внутри котла 120°С и давлении пара в рубашке 1,5 атмосферы в течение 20 минут.
Примеры конкретного выполнения способа изготовления предлагаемого препарата
Пример 1. Для приготовления препарата соты с живым здоровым трутневым расплодом пчел выдерживались в холодильнике при температуре 3-4°С в течение 5-6 дней. Затем соты с расплодом вскрывали и отбирали личинки трутней одинакового размера, светло-серого цвета. Затем личинок трутней измельчали в стерильной лабораторной мельнице, разводили стерильным физиологическим раствором хлорида натрия с концентрацией 0,9% в пропорции 1:10 и выдерживали на водяной бане при температуре 70-80°С в течение 60 минут. Затем массу отфильтровывали через 2 слоя марли в стерильную мерную посуду, доводили физиологическим раствором до первоначального объема, добавляли консервант, до его концентрации в веществе 0,3%, разливали при соблюдении правил асептики и антисептики в подготовленные стерильные флаконы и герметично закупоривали их. При испытании на опытных животных нами были замечены многочисленные аллергические реакции, которые проявлялись появлением инфильтратов на месте инъекции, сыпью и в отдельных случаях отеком Квинке.
Пример 2. Аналогично примеру 1, но особенностью данной модификации является разведение стерильным физиологическим раствором хлорида натрия с концентрацией 0,9% в пропорции 1:10 и автоклавирование при температуре внутри котла 120°С и давлении пара в рубашке 1,5 атмосферы в течение 1 часа. Затем массу отфильтровывали через 2 слоя марли в стерильную мерную посуду, доводили физиологическим раствором до первоначального объема, добавляли консервант до его концентрации в веществе 0,3%, разливали при соблюдении правил асептики и антисептики в подготовленные стерильные флаконы и герметично закупоривали их. При использовании данной модификации препарата нам удалось избежать проявления аллергических реакций, но эффект от применения был незначительным, срок хранения препарата коротким.
Пример 3. Аналогично примеру 1, но особенностью данной модификации является разведение стерильным физиологическим раствором хлорида натрия с концентрацией 0,9% в пропорции 1:1 и автоклавирование при температуре внутри котла 120°С и давлении пара в рубашке 1,5 атмосферы в течение 1 часа. Затем массу отфильтровывали через 2 слоя марли в стерильную мерную посуду, доводили физиологическим раствором до первоначального объема, добавляли консервант, до его концентрации в веществе 0,3%, разливали при соблюдении правил асептики и антисептики в подготовленные стерильные флаконы и герметично закупоривали их, затем выдерживали в автоклаве при температуре внутри котла 120°С и давлении пара в рубашке 1,5 атмосферы в течение 20 минут. Данная модификация является наиболее эффективной, т.к. концентрация активных веществ оптимальная, препарат безопасен для применения его на животных. Срок хранения препарата значительно увеличился.
Пример 4. Аналогично примеру 1, но способ заключается в охлаждении сот с живым здоровым трутневым расплодом пчел в холодильнике при температуре 3-4°С в течение 5-6 дней. Затем соты с расплодом вскрывали и отбирали личинки трутней одинакового размера, светло-серого цвета. Затем личинок трутней измельчали в стерильной лабораторной мельнице, разводили стерильным физиологическим раствором хлорида натрия с концентрацией 0,9% в пропорции 1:1 и автоклавировали при температуре внутри котла 120°С и давлении пара в рубашке 1,5 атмосферы в течение 1 часа. Затем массу отфильтровывали через 2 слоя марли в стерильную мерную посуду, доводили физиологическим раствором до первоначального объема, добавляли консервант, до его концентрации в веществе 0,3%, разливали при соблюдении правил асептики и антисептики в подготовленные стерильные флаконы и герметично закупоривали их, затем выдерживали в автоклаве при температуре внутри котла 120°С и давлении пара в рубашке 1,5 атмосферы в течение 40 минут. При дополнительном времени заключительного автоклавирования в веществе появился осадок и с многих флаконов были сорваны крышки.
Таким образом, оптимальным является способ изготовления, описанный в примере №3. При этом срок изготовления препарата сократился более чем на 10 дней; двукратное автоклавирование обеспечивает надежную стерильность препарата и безвредность, увеличивает срок его хранения.
Результаты испытания биогенного стимулятора из трутневого расплода на животных
Пример 1. При изготовлении экспериментальной партии препарата (по примеру №3 в описании способа изготовления) проведена биологическая проба на его безвредность. Проба проведена на лабораторных мышах и кроликах. При введении препарата внутримышечно, подкожно и внутрибрюшинно не отметили острой токсической реакции у животных, а также не установили пирогенного или аллергического действия препарата.
Пример 2. Для более полной и объективной оценки влияния биогенного стимулятора на рост, развитие поросят-сосунов и воспроизводительные качества свиноматок проведен научно-хозяйственный опыт на свиньях степного типа скороспелой мясной породы (табл.1).
Таблица 1
Влияние биогенного стимулятора на рост и развитие поросят-сосунов
Половозрастные группы
Количество голов
Доза, мл/кг
Кратность введения
Примечание
Поросята-сосуны
40
0,1
4-кратно, через 10 дней
Значительное увеличение массы гнезда в 2-х мес. возрасте. Высокие показатели живой массы и среднесуточных привесов. Снижение затрат кормов на 1 кг прироста живой массы. Высокая сохранность поросят как в возрасте 21 день, так и в 60 дней
После испытания препарата на поросятах нами были получены следующие сведения:
- подкожное введение стимулятора значительно повлияло на молочность свиноматок и массу гнезда в двухмесячном возрасте;
- на протяжении всего периода выращивания поросята проявляли положительную реакцию на введение в организм биологического стимулятора, они отличались лучшим ростом, развитием, имели высокие показатели живой массы и среднесуточных приростов (среднесуточный прирост массы тела у поросят опытных групп был выше на 40,7-98,9 г чем у контрольных поросят);
- применение биостимулятора способствовало увеличению сохранности поросят-сосунов на 5,5-10,4% по сравнению с контрольными группами;
- применение позволило сократить затраты кормов на единицу прироста живой массы.
Пример 3. Изучение влияния биогенного стимулятора из трутневого расплода на качественные и количественные показатели спермы хряков-производителей. Препарат вводили трехкратно с интервалами в 10 дней в дозе 0,1 мл на 1 кг, подкожно. Выявлено, что препарат способствует повышению объема эякулята в среднем на 72 мл, концентрации спермиев на 17 млн в 1 мл, общего числа спермиев в эякуляте на 35%.
Биохимический анализ препарата имеет важное значение как показатель его качества. По данным многих ученых целый ряд соединений обладает высоким биологическим потенциалом и может обусловливать основную биостимулирующую функцию препарата. К таким веществам, прежде всего, относятся аминокислоты. Аминокислотный состав препарата показан в таблице 2.
Таблица 2
Аминокислотный состав биогенного стимулятора из личинок пчел трутневого расплода
Аминокислоты
мг %
Заменимые
Аспарагиновая кислота
16
Серии
8
Глютаминовая кислота
41
Алании
12
Тиразин
6
Всего
83
Незаменимые
Треонин
7
Глицин
13
Валин
9
Метионин
1
Изолейцин
11
Лейцин
11
Фенилаланин
4
Гистидин
6
Лизин
10
Аргинин
6
Всего
78
Для характеристики биологической ценности данного препарата пользуются таким понятием как аминокислотный индекс, который определяет аминокислотную полноценность, он равен соотношению незаменимых аминокислот к заменимым. В биологически полноценных веществах он колеблется в пределах 1, аминокислотный индекс образцов препарата (изготовленного по примеру №3 в описании способа) равен 78/83=0,94.
Такие аминокислоты, присутствующие в препарате, как метионин, гистидин и глютаминовая кислота, включены в фармакопейные списки как самостоятельные иммуностимуляторы и ростостимулирующие вещества (Фармакология, Мозгов И.Е.; 1979).
Помимо аминокислот в препарате содержится еще одна важная группа биологически активных веществ - гормонов.
Таблица 3
Содержание гормонов в биогенном стимуляторе из трутневого расплода пчел
Наименование гормонов
Количество
Ат к ТГ
0,09
ФСГ (фолликулостимулирующий гормон), мМЕ/мл
1,7
Свободный Т4 (L-тироксин), пмоль/л
0,1
ЛГ (лютеинизирующий гормон), мМЕ/мл
2,5
Прогестерон, нмоль/л
9,5
Тестостерон, нмоль/л
14,5
Кортизол, нмоль/л
0,01
Пролактин, мМЕ/мл
75,0
СТГ (соматотропный гормон), мМЕ/л
12,0
ДГЭАс (дегидроэпиандростерон), мкг/мл
0,1
АКТГ (адренокортикотропный гормон), пг/мг
1,0
Соматотропный гормон (СТГ) стимулирует гуморальные и клеточные иммунные реакции, усиливает синтез белка в клетках (Д.Н.Лазарева, Е.К.Алехин. Стимуляторы иммунитета. М.: Медицина, 1985, - с.132-133). Кортизон и АКТГ играют большую роль в обеспечении адаптационно-трофических процессов в организме животных, что особенно важно для молодняка, находящегося под действием постоянно меняющихся условий среды (Костин А.П. Физиология сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1974, с.249-251).
Химический состав биогенного стимулятора из трутневого расплода
Общая влага, %
Зола, %
Азот, %
Протеин, %
Жир, %
Ph
98,17
0,76
0,50
3,125
0,31
7,0
Количественный состав препарата
В 100 мл препарата входит:
- 50 мл биологически активной массы из личинок трутневого расплода пчел;
- 49,7 мл раствора хлорида натрия 0,9%;
- 0,3 мл консерванта.
Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:
- использованное при приготовлении препарата вещество ранее не применялось в таком составе (50% вместо 20%);
- биостимулятор обладает эффектом тканевой терапии, белковой гидролизатотерапии, органотерапии, неспецифической протеинотерапии;
- сокращение сроков изготовления препарата в 5 раз.
Способ приготовления позволяет не только получить препарат с эффектом тканевой и других видов терапии, но и позволяет сохранить полезные свойства:
- качественный аминокислотный и гормональный состав, высокие стимулирующие показатели;
- использование нового вида сырья в соотношении 1:1;
- значительное сокращение сроков изготовления препарата, повышение его безвредности, увеличение сроков хранения;
- уменьшение объема (мл) доз в 2 раза и кратности инъекций.