Связь промоторного полиморфизма гена коллагеназы-1 с развитием острой реакции «трансплантат против хозяина» при аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток

Медицинская Иммунология 2003, Т. 5, № 1-2, стр 101-106 © 2003, СПб РО РААКИ

Краткие сообщения

СВЯЗЬ ПРОМОТОРНОГО ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА КОЛПАГЕНАЗЫ-1 С РАЗВИТИЕМ ОСТРОЙ РЕАКЦИИ «ТРАНСПЛАНТАТ ПРОТИВ ХОЗЯИНА» ПРИ АЛЛОГЕННОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

Чухловин А.Б., Забелина Т.С., Зубаровская Л.С., Крегер Н.*, Афанасьев Б.В., Цандер А.*, Фезе Б.*

Отделение трансплантации костного мозга, Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.Павлова,

*Центр трансплантации костного мозга, университетская клиника Гамбург-Этгендорф,

Гамбург, Германия

Резюме. В последние годы были обнаружены многочисленные промоторные (регуляторные) мутации физиологически важных генов, которые часто встречаются в населении. Подобные аллельные варианты не влияют на структуру специфических белков, но могут существенно изменять интенсивность их синтеза, что может сопровождаться усилением предрасположенности к ряду аутоиммунных и злокачественных заболеваний. Так, полиморфизм промоторных участков генов ряда цитокинов связан с развитием многочисленных иммунопатологических состояний, в частности, реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ). Целью настоящей работы было исследование популяционной частоты промоторных вариантов типа «встав-ка-делеция» генов матриксной металлопротеиназы-1 (ММП-1) и ингибитора активатора плазминогена (ИАПГ-1). Вариант ММП-1 2G/2G отличается более высокой индуцибельностью и транскрипционной активностью. Исследована репрезентативная группа из 111 больных, леченных аллогенной трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) и контингент здоровых доноров. Для обоих генов нами отмечено классическое распределение аллелей как в европейской выборке доноров, так и в целом по группе больных. Гомозиготность (2G/2G) по гену ММП-1 встречалась значительно реже среди больных с острой РТПХ по сравнению с группой без РТПХ, тогда как наличие 2С/2С-аллеля у доноров при ТГСК было ассоциировано с более высокой частотой РТПХ (р<0,03). Сочетание менее индуцибельной ММП/IG у реципиента и «гиперактивной» MMn/2G у донора достоверно коррелировало с повышенным риском острой РТПХ (р<0,015).

Ключевые слова: трансплантация гемопоэтических стволовых клеток, острая РТПХ, ген коллагеназы-1.

Chukhlovin А.В., Zabelina T.S., Zoubarovskaya L.S., KroegerN., Afanasiev B.V., Zander A.R., Fehse B.

ASSOCIATION OF COLLAGENASE-1 (MMP-1) GENE PROMOTER POLYMORPHISM WITH

DEVELOPMENT OF ACUTE GRAFT-VERSUS-HOST DISEASE IN HEMATOPOIETIC

STEM CELL TRANSPLANTATION

Abstract. Since last years, a number of common promoter (regulatory) mutations was found for some physiologically active genes. These gene variants do not affect the structure of specific proteins, but may alter the rates of their production, thus causing predisposal for various autoimmune disorders and malignant diseases. For example, specific Адрес для переписки: promotor polymorphisms of some cytokine genes has been

Чухловин Алексей Борисович, дм.н., отделение трансплантации костного мозга, СПбГМУ им. акад.

associated with incidence and severity of graft-versus-host disease (GvHD) after allogeneic haematopoietic stem cell

КПавлова, улЛТолстого, д. 6/8,197089, С.-Петербург. transplantation. We studied promotor insertion/deletion

Тел.: (812) 234-46-25, факс: (812) 234-06-16

alleles ofplasminogen activator inhibitor-1

E-mail: chukh@mail.rcom.ru and matrixmetalloproteinase-1 (MMP-1 lG/2G)in 111

HSCT cases. Near-Mendelian distribution was noted for both genes among donors and patients. However, homozygous state for the hyperactive MMP-1/2G was significantly reduced in patients with acute GvHD as compared to GvHD-free patients whereas MMP- 1/2G presence in donor cells correlated with higher incidence of aGvHD

Введение

Среди сотен тысяч мутаций и генных вариантов, выявленных в геноме человека, большое значение имеет полиморфизм промоторных и интронных участков физиологически важных генов. Клинически актуальные варианты регуляторных мутаций встречаются у 10-40% населения. Они не затрагивают кодирующие нуклеотидные последовательности, но существенно изменяют транскрипционную активность генов и уровень синтеза специфических белков, что может усиливать предрасположенность к различным заболеваниям. Особенно детально изучены связи между полиморфизмом генов гемостаза, нарушениями тромбообразования и развитием атеросклероза [14]. В то же время большая группа аутоиммунных и аллергических заболеваний (кол-лагенозы, бронхиальная астма, миастения и др.) ассоциируется с полиморфизмом генов ключевых ци-токинов [1].

В связи с этим представляет интерес и анализ генного полиморфизма при острой реакции «трансплантат против хозяина» (ОРТПХ), которая является частым осложнением аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Ее развитие, зависит, главным образом, от небольших различий в наборе НЬА-антигенов донора и реципиента. Суть ОРТПХ как клинико-иммунологического феномена состоит в том, что в ходе приживления трансплантированных гемопоэтических клеток происходит миграция, внутритканевая инвазия и цито-токсическая атака аллореактивных Т-клеток донора на эпителиальные клетки больного, что ведет к острому воспалительному процессу в тканях кожи, кишечника и/или печени [И].

Несомненна сигнальная роль воспалительных цитокинов, в частности ТЫБ-а, 1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-10 в развитии ОРТПХ [10]. За последние годы достоверно установлено, что тяжелые формы ОРТПХ могут быть связаны с индивидуальным генетическим полиморфизмом в промоторных или интронных участках генов ТЫР-а, 1Ь-10,1Ь-6,1РЫ-у у реципиентов кроветворных клеток [6-9,16].

Наше внимание привлекли известные промотор-ные мутации генов, которые имеют отношение к инвазии эффекторных иммунных клеток в ткани-мишени при воспалительных процессах [17,20]. Так, ингибитор активатора плазминогена (ПАИ-1) обладает мощным антифибринолитическим эффектом, связывая плазминоген-активатор. Вариант 4С (де-леция гуанина в позиции - 675 этого гена) обусловливает усиление транскрипции этого гена, по срав-

нению с вариантом 5С. Сходным образом, наличие 2 С в положении -1607 гена матриксной металлопро-теиназы-1 (ММП-1, интерстициальная коллагена-за-1) обеспечивает дополнительный пункт связывания для фактора транскрипции Е1з, и, соответственно - повышенную индукцию данного гена [17]. Таким образом, гомозиготное состояние (2С/2С) гена ММП-1 связано с усиленной инвазией злокачественных клеток в ткани и повышенным риском рецидива опухолей [20].

Важен тот факт, что ПАИ-1 и ММП-1 влияют на различные, однако взаимосвязанные звенья внеклеточного протеолиза: ПАИ-1 является мощным ингибитором плазминоген-активатора и образования плазмина, тогда как про-ММП-1 активируется под влиянием плазмина и осуществляет первичную деградацию тканевого коллагена [12]. Кроме того, ключевые провоспалительные цитокины - 1Ь-1|3, ТЫБ-а и РБОР - являются естественными индукторами синтеза активной ММР-1 в фибробластах и моноцитах - основных популяциях, регулирующих обмен коллагена [2, 18]. Активация гена ММР-1 в фибробластах под действием 1Ь-1 происходит при связывании компонента ядерного фактора ЫР-кВ с промотором данного гена [19]. Как плазминоген, так и ММП-1 являются важными факторами миграции естественных киллеров (ЕК), что обусловливает их существенную роль в клеточных иммунных реакциях [3].

В настоящей работе мы исследовали частоту различных промоторных вариантов ММП-1 и ПАИ-1 у больных и доноров при ТГСК и выявили очевидную связь между наличием варианта 20/20 гена ММП-1 у больных и доноров, и риском развития оРТПХ - осложнения, во многом зависящего от способности инвазии аллоиммунных клеток донора в ткани больного.

Материалы и методы

Под нашим наблюдением находились 111 больных в возрасте от 2 до 59 лет, в том числе 37 с хроническим миелолейкозом, 19 с острым миелобласт-ным лейкозом, 21с острым миелобластным лейкозом, 15 с миеломной болезнью, 4 - с неходжкински-ми лимфомами, 6 с миелодиспластическим синдромом, 4 с апластической анемией и 5 - с другими гематологическими заболеваниями. Больным проводилась интенсивная химиолучевая терапия с последующей аллогенной ПГСК (60 - родственная от НЬА-идентичных доноров и 51 неродственная). Трансплантация костного мозга или периферичес-

ких стволовых клеток осуществлялась, соответственно, в 53 и 47% случаев. 86 больных получали инъекции антитимоцитарного глобулина (Fresenius, Германия) в рамках стандартного режима профилактики оРТПХ [21]. Клиническая реакция «трансплантат против хозяина» была диагностирована у 57 больных (51%). Степень тяжести РТПХ устанавливали по общепринятым клинически критериям (от I до IV степени согласно шкале Gluckman).

Геномную ДНК выделяли до трансплантации из лейкоцитов крови больных и доноров с применением набора QIAamp Blood Kit (QIAGEN, Германия). Тип промоторного полиморфизма генов ПАИ-1 (4G/5G) и ММП-1 (1G/2G) определяли с помощью аллель-специфической ДНК ПЦР. Специфические праймеры конструировали с помощью программы Primer Express (Applied Biosystems, Германия), причем искомый точечный полиморфизм располагали на З’-конце передних праймеров.

Были использованы следующие праймеры: nAH-l/5G:

FP, 5' agtctggacacgtggggg 3';

RP, 5' cactgtggagttatcaaagataacctc 3';

nAH-l/4G: FP, 5’ gagtctggacacgtgggga 3';

RP, 5' ctggaccacctccaggaaag 3';

ММП-1/lG: FP 5' gaaattgtagttaaataattagaaagat;

RP, 5’ aaaacatacagtggagaaacac;

MMP-1/2G: FP 5' aaattgtagttaaataattagaaagga 3’;

RP, 5’tggaagcatttattgaaaac 3’.

Реакционная смесь для ПЦР содержала следующие компоненты: 10х буфер Трис-БСА (ABGene, Германия); 2 mM MgCl2, смесь дезокси-нуклеотидов (MBI Fermentas, Каунас, Литва),

праймеры (от 0.05 до 0.3 рМ), ДHK-Taq полимераза (АВСепе, 0.2 и в пробе) и геномную ДНК (от 50 до 200 нг в пробе), в общем объеме 50 мкл. Условия ПЦР были следующими: 94°С, 5 мин; денатурация: 94°С, 30 с; отжиг: 67°С (ПАИ-1), 54°С (ММП-1/Ю), 51°С (ММП-1/2С), 30 с; элонгация: 72°С, 30 с (40 циклов); 72°С, 4 мин. Продукты ПЦР оценивали после электрофореза в 2% агарозном геле при окраске этидий-бромидом. Статистический анализ проводился путем непараметрического анализа (тест хи-квадрат), с помощью пакета программ \¥шэ1а1.

Результаты и обсуждение

Острая РТПХ наблюдалась примерно у 50% обследованных больных. Частота развития данной реакции в целом не зависела от возраста и пола. Применение немиелоаблативного режима кондиционирования также не сопровождалось достоверными изменениями частоты ОРТПХ. При переливании периферических стволовых клеток ОРТПХ наблюдалась несколько чаще, нежели при ТКМ (р=0,1). В то же время частота реакции при неродственной ТГСК была в 1,8 раза выше, чем в случаях внутрисемейной трансплантации (соответственно, 67% и 38%, р=0,003) что можно объяснить более выраженными различиями по минорным антигенам гистосовместимости в ситуации с неродственными донорами [11].

В целом частота промоторных аллелей ПАИ-1 и ММП-1 отвечала классическому распределению как среди доноров, так и по общей группе реципиентов

Табл.1. ОТНОСИТЕЛЬНАЯ ЧАСТОТА 16/20 АЛЛЕЛЕЙ ПРОМОТОРА ГЕНА ММП-1 В ГРУППАХ БОЛЬНЫХ С ОРТПХ, БЕЗ ОРТПХ И ИХ ДОНОРОВ

Осложнения: наличие или отсутствие Плазминоген активатор ингибитор-1

Группы Число случаев 5G/5G 5G/4G 4G/4G 1G/1G 1G/2G 2G/2G

Общая группа больных 111 30 47 34 J 1 62 18

Общая группа доноров 111 24 52 35 22 65 24

Больные ОРТПХ 57 12 28 17 19 33 5

(21%) (49%) (30%) (33%) (58%) (9%)*

Больные без ОРТПХ 54 18 19 17 12 29 13

(33%) (35%) (32%) (22%) (54%) (24%)*

Доноры больных с ОРТПХ 57 14 24 19 9 31 17

(25%) (42%) (33%) 16%) (54%) (30%)*

Доноры больных без ОРТПХ 54 10 28 16 13 34 7

(18%) (52%) (30%) (24%) (63%) (13%)*

' Статистические различия между соответствующими группами больных и доноров достоверны при р<0,03 (тест Хи-квадрат).

(табл.1). При анализе распределения аллелей ПАИ-

1 не отмечено существенных различий в их частоте у больных с ОРТПХ после ТГСК. Известно, что состояние гиперкоагуляции, выраженная активация системы фибринолиза и стимуляция продукции ПАИ-1 характерны для раннего посттрансплантаци-онного периода, особенно в связи с развитием веноокклюзионного синдрома [11]. Отсутствие связи между генотипом ПАИ-1 и частотой ОРТПХ предполагает минимальную роль данного физиологичес-

Рис.1. Относительная частота 2С/2С-промоторных мутаций матрикс-ной металлопротеиназы-1 (ММП-1) в группе больных после ТГСК с ОРТПХ или без нее и у их доноров (111 пар донор/реципиент). По оси абсцисс - группы больных или доноров (ось 1); наличие или отсутствие РТПХ (ось 2); по оси ординат - частота гомозиготности по аллелю 26.

О

Степень РТПХ (0-4) ГлУ*

Рис.2. Зависимость между генотипом ММП-1 26/26 и частотой проявления ОРТПХ различной степени. По абсциссе - степень тяжести РТПХ по Яисктап (ось 1); наличие или отсутствие гомозиготности по аллелю 26 (ось 2). По оси ординат - частота соответствующего генотипа, % от общего числа случаев.

кого механизма в развитии этого осложнения, связанного с более поздней фазой посттрансплантаци-онного периода.

В то же время, оценка соотношений аллелей ММП-1 выявила более значительные патогенетические связи. Из табл.1 и рис.1 видно, что лишь 5 из 57 больных оРТПХ были гомозиготными по ММП-

1 /2С, по сравнению с 13 из 54 (24%) в группе без клинической оРТПХ (р<0,03). В подгруппе больных, леченых АТГ, отмечена та же закономерность: гомозиготность по ММП- 1/2С обнаружена у 3 больных из 42 с ОРТПХ (7%), и у 11 из 44 - без ОРТПХ (р<0,025). В то же время в группе доноров отмечена противоположная закономерность: гомозиготное состояние по ММП-1/2С ассоциировалось с повышенным риском ОРТПХ у их реципиентов (р<0,03).

Далее, анализ индивидуальных и парных сочетаний аллелей ПАИ-1 и ММП-1 у доноров и реципиентов показал, что комбинация более активного 20-аллеля ММП-1 у донора с Ю-аллелем у реципиентов стволовых клеток была достоверно более частой в случаях ОРТПХ, нежели в отсутствии ОРТПХ. (соответственно, 79 и 55%, р<0,02).

Учитывая различия в риске ОРТПХ при род-ственнной и неродственной ТГСК, был проведен аналогичный расчет частоты вариантов ММП-1 в этих подгруппах, с учетом наличия или отсутствия ОРТПХ. Распределения Ю- и 2С-генотипа в этих выборках были практически такими же, как и в общем контингенте больных (данные не приводятся), что предполагает лишь минимальную роль изучаемого генного полиморфизма в повышении частоты ОРТПХ при неродственной ТГСК.

Нами был также проведен анализ возможной связи между генотипом ММП-1 и развитием ОРТПХ различной степени тяжести (рис.2). РТПХ 1-И степени наблюдалась лишь у больных с Ю-ва-риантом ММП-1, тогда как наличие генотипа 2в/

2 в, по-видимому, являтся протективным фактором (р=0,07).

В целом, представленные данные предполагают, что промоторный генотип ММП-1 играет определенную роль в развитии ОРТПХ после аллогенной ТГСК. Среди больных, гомозиготных по «гиперактивному» 2С-аллелю ММП, отмечалась меньшая частота ОРТПХ, тогда как наличие того же аллеля у их доноров способствовало появлению этого осложнения. Хотя количество пар донор/реципиент было относительно невелико, эти заключения основаны на статистически достоверных различиях. Наши результаты являются существенным дополнением к другим исследованиям, указывающим на связь промоторных вариантов других генов с развитием ОРТПХ [9, 16]. В дальнейшем комбинированный анализ промоторного полиморфизма по различным генам позволит, вероятно, более точно оценить риск появления ОРТПХ у больных.

Представленные данные указывают на то, что роль ММП-1 в патогенезе ОРТПХ заслуживает дальнейшего изучения. Как известно, ММП-1 (синоним: интерстициальная коллагеназа) расщепляет коллаген типа I и III, фибрин и другие факторы свертывания, а также ряд других белков межклеточного матрикса, что является ключевым фактором инвазивного и метастатического роста злокачественных клеток [13]. Показана также стимуляция секреции ММП-1 в нормальных моноцитах посредством ТОТа и СМ-СБР [2]. Следовательно, как фибробласты реципиента, так и донорские моноциты могут быть источником ММП-1 в период приживления трансплантата и заселения периферических тканей больного. Аналогичным образом, можно ожидать, что и нормальные иммунные клетки (Т-лимфоциты и НК) могут использовать этот механизм для усиленного проникновения в ткани [3, 5]. Известно, что как ЕК, так и цитотоксические Т-клетки донора реализуют эф-фекторную фазу ОРТПХ [11]. Таким образом, наличие «гиперактивного» 20-аллеля у донора при его отсутствии у реципиента может обусловить клеткам донора более высокую инвазивность и преимущество в выживании по отношению к аналогичным клеткам реципиента, тем самым повышая риск развития ОРТПХ. Представляют интерес экспериментальные данные об ингибировании ММП-1 циклоспорином А - препаратом, который обычно применяют для профилактики РТПХ [4]. Таким образом, лучшее понимание механизмов, лежащих в основе ОРТПХ, будет способствовать созданию новых препаратов для лечения этого тяжелого посттрансплантационного состояния.

Выводы

1. Частоты полиморфных аллелей генов ПАИ-1 и ММП-1 не различались существенно в общих популяциях доноров и реципиентов гемопоэтических стволовых клеток.

2. При наличии острой реакции «трансплантат против хозяина» после аллогенной ТГСК существенно повышена частота аллеля Ю гена ММП-1 у больных, и «гиперактивного» аллеля 2в у их доноров. Гомозиготность реципиентов по аллелю 2в/ 2в ММП-1 является протективным фактором при ОРТПХ.

3. Совокупность полученных данных свидетельствует о значении фактора инвазивности донорских клеток в генезе ОРТПХ у человека.

Список литературы

1. Сенников С.В., Силков А.Н., Козлов В.А. Аллельные варианты и изоформы цитокинов в диаг-

ностике и патогенезе иммунопатологических состояний. // Иммунология. - 2002. - Т.23.- №4.-С. 243-250.

2. Ardans JA, Blum A, Mangan PR, Wientroub S, Cannon III RO, Wahl LM. Raloxifene- mediated increase in matrix metalloproteinase-1 production in activated monocytes. Arterioscl.Thromb.Vasc.Biol. 2001; 21(8): 1265-1268.

3. Al-Atrash G, Kitson R.P., Xue Y., Goldfarb R.H. Cooperation of urokinase plasminogen activator and matrix metalloproteinases in NK cell invasion. // In Vivo. - 2000. - Vol.14. - P.565-70.

4. Bolzani G., Della Colletta R., Martelli Jun. H., Graner E. Cyclosporin A inhibits production of matrix metalloproteinases by gingival fibroblasts. // Peri-odont. Res. - 2000. - Vol.35.- P.51-58.

5. Burger D., Rezzonico R., Li J.M., Modoux C., Pierce R.A., Welgus H.G., Dayer J.M. Imbalance between interstitial collagenase and tissue inhibitor of metalloproteinase 1 in synoviocytes and fibroblasts upon direct contact with stimulated T lymphocytes: involvement of membrane-associated cytokines. // Ar-thr. Rheum. - 1998. - Vol.41. - P.1748-1759.

6. Cavet J., Middleton P.G., Segall М., Noreen H., Davies S.М., Dickinson A.M. Recipient tumor necrosis factor-alpha and interleukin-10 gene polymorphisms associate with early mortality and acute graft-versus-host disease severity in HLA-matched sibling bone marrow transplants. // Blood. - 1999. - Vol 94. - №11. - P.3941-3946.

7. Cavet J, Dickinson AM, Norden J, Taylor PR, Jackson GH, Middleton PG. Interferon-gamma and interleukin-6 gene polymorphisms associate with graft-versus-host disease in HLA-matched sibling bone marrow transplantation.Blood 2001 Sep 1;98(5): 1594-600.

8. Cullup H„ Dickinson A.M., Jackson G.H., Taylor P.R., Cavet J., Middleton P.G. Donor interleukin 1 receptor antagonist genotype associated with acute graft -versus-host disease in human leukocyte antigen-matched sibling allogenic transplants. // Br. J. Haematol. - 2001,- Vol.113 .- P. 807-813.

9. Dickinson AM, Cavet J, Cullup H, Wang XN, Sviland L, Middleton PG. GvHD risk assessment in hematopotetic stem cell transplantation: role of cytokine gene polymorphisms and in vitro human skin explant model. Hum Immunol 2001 Nov; 62(ll):1266-76.

10. Ferrara J.L. Pathogenesis of acute graft-versus-host disease: cytokines and cellular effectors. //J He-matother. Stem. Cell Res.- 2000 .- Vol.9 .- P.299-306.

11. Goker H., Haynedaroglu I.C., Chao N.J. Acute graft-vs-host disease: pathobiology and management. // Exper. Hematol. - 2001. - Vol.29 .- P.259-277.

12. Hiraoka N., Allen E., Apel I.J., Gyetko M.R., Weiss S.J. Matrix metalloproteinases regulate neovascularization by acting as pericellular fibrinolysins. // Cell. - 1998 . - Vol.95.- P.365-77.

13. Johansson N., Ahonen M., Kahari V.M. Matrix metalloproteinases in tumor invasion. // Cell. Mol. Life.Sci. - 2000. - Vol.57.- №1P.5-15.

14. Lane D.A., Grant P.J. Role of hemostatic gene polymorphisms in venous and arterial thrombotic disease. // Blood .- 2000. - Vol.95 .- p. 1517-32.

15. Nikkola J., Vihinen P., Veajkova T., Hanna-Kemppinen M., Kahari V.-M., Pyrhonen S. High expression levels of collagenase-1 and stromelysin-1 correlate with shorter disease survival in human metastatic melanoma. // Int. J. Cancer. - 2002 .- Vol.97 .- №4 .-P.432-438.

16. Takahashi H, Furukawa T, Hashimoto S, Suzuki N, Kuroha T, Yamazaki F, Inano K, Takahashi M, Aizawa Y, Koike T.Contribution of TNF-alpha and IL-10 gene polymorphisms to graft-versus-host disease following allo-hematopoietic stem cell transplantation. Bone Marrow Transplant 2000 Dec;26(12):1317-23.

17. Rutter J.L., Mitchell T.I., Buttice G., Meyers J., Gusella J.F., Ozelius L.J., Brinckerhoff C.E.. A single nucleotide polymorphism in the matrix metalloproteinase-1 promoter creates an Ets binding site and augments transcription. // Cancer Res. - 1998 Vol. 58.- P.5321-5325.

18. Sasaki M, Kashima M, Ito T, Watanabe A, Izumiyama N, Sano M, Kagaya M, Shioya T, Miura M. Differential regulation of metalloproteinase production, proliferation and chemotaxis of human lung fibroblasts by PDGF, interleukin- lbeta and TNF-alpha. Mediators Inflamm 2000;9(3-4): 155-60.

19. Vincenti MP, Coon Cl, Brinckerhoff CE. Nuclear factor kappaB/p50 activates an element in the distal matrix metalloproteinase 1 promoter in interleukin-1 beta-stimulated synovial fibroblasts. Arthritis Rheum 1998 Nov;41(ll):1987-94.

20. Ye S., Dhillon S., Turner S.J., Bateman A.C., Theaker М., Pickering R.M., Day I., Howell W.M. Invasiveness of cutaneous melanoma is influenced by matrix metalloproteinase 1 gene polymorphism. // Cancer Res. - 2001. - Vol.61. - P. 1296-1298

21. Zander A.R., Zabelina Т., Kroger N., Renges H., Kruger W., Loliger C., Diirken M„ Stockschlader М., de Wit М., Wacker-Backhaus G., Bielack S., Jaburg N., Russmann B., Erttmann R., Kabisch H. Use of a five-agent GvHD prevention regimen in recipients of unrelated donor marrow. // Bone Marrow Transplant.- 1999 .- Vol.23 .-P.889-893.

поступила в редакцию 18.11.2002 принята к печати 30.12.2002