ХЛОРИД-ИНДУЦИРУЕМАЯ ПРОКАРИОТИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ЭКСПРЕССИИ

1. Рекомбинантные бактерии, содержащие
а) по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, функционально связанную с прокариотическим хлорид-индуцируемым промотором и кодирующую по меньшей мере один гетерологичный фактор, оказывающий терапевтический и/или профилактический эффект у субъекта, предпочтительно после применения указанных рекомбинантных бактерий у указанного субъекта, причем указанный гетерологичный фактор независимо представляет собой гетерологичный полипептид или его комплекс, и
b) по меньшей мере один прокариотический регуляторный ген, контролирующий активность указанного хлорид-индуцируемого промотора,
причем указанный гетерологичный полипептид содержит по меньшей мере один эукариотический полипептид, по меньшей мере один его фрагмент или их комбинацию.
2. Рекомбинантная нуклеиновая кислота, содержащая
а) по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, функционально связанную с прокариотическим хлорид-индуцируемым промотором и кодирующую по меньшей мере один гетерологичный фактор, оказывающий терапевтический и/или профилактический эффект у субъекта, причем указанный гетерологичный фактор независимо представляет собой гетерологичный полипептид или его комплекс, и
b) по меньшей мере один прокариотический регуляторный ген, контролирующий активность указанного хлорид-индуцируемого промотора,
причем указанный гетерологичный полипептид содержит эукариотический полипептид, по меньшей мере один его фрагмент или их комбинацию.
3. Рекомбинантные бактерии по п. 1, отличающиеся тем, что указанная по меньшей мере одна нуклеотидная последовательность, функционально связанная с прокариотическим хлорид-индуцируемым промотором и кодирующая по меньшей мере один гетерологичный фактор и/или указанный по меньшей мере один прокариотический регуляторный ген, контролирующий активность указанного хлорид-индуцируемого промотора, независимо расположена на хромосоме и/или по меньшей мере одной плазмиде указанных рекомбинантных бактерий.
4. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1 или 3 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по п. 2, отличающиеся тем, что каждый из указанного хлорид-индуцируемого промотора и/или указанного по меньшей мере одного регуляторного гена не зависит от вида предпочтительно грамположительной или грамотрицательной бактерии.
5. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1 или 3, 4 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 4, отличающаяся тем, что указанный хлорид-индуцируемый промотор представляет собой PgadC вида бактерии таксономического порядка Lactobacillales, предпочтительно Lactococcus lactis.
6. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1 или 3, 4 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 4, отличающиеся тем, что указанный регуляторный ген кодирует gadR вида бактерий таксономического порядка Lactobacillales, предпочтительно Lactococcus lactis.
7. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1 или 3-6 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 4-6, отличающиеся тем, что указанный хлорид-индуцируемый промотор и указанный по меньшей мере один регуляторный ген расположены в хлорид-индуцируемой кассете для экспрессии генов, причем указанный хлорид-индуцируемый промотор расположен после указанного по меньшей мере одного регуляторного гена, а указанная хлорид-индуцируемая кассета для экспрессии генов контролирует транскрипцию по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере один гетерологичный фактор.
8. Рекомбинантные бактерии или рекомбинантная нуклеиновая кислота по п. 7, отличающиеся тем, что указанная хлорид-индуцируемая кассета для экспрессии генов содержит или состоит из нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 2 и контролирует транскрипцию по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере один гетерологичный фактор.
9. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3 или 7, 8 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 7-8, отличающиеся тем, что указанный по меньшей мере один гетерологичный фактор представляет собой гетерологичный полипептид или его комплекс, каждый из которых содержит по меньшей мере один эукариотический полипептид, по меньшей мере один его фрагмент или их комбинацию.
10. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3 или 7-9 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 7-9, отличающиеся тем, что указанный по меньшей мере один гетерологичный фактор выбран из группы, состоящей из полипептидных гормонов, факторов роста, цитокинов, хемокинов, ферментов, нейропептидов, антител, их предшественников, их фрагментов и их комбинаций, полученных из вида эукариот, предпочтительно вида млекопитающих, более предпочтительно человека.
11. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1 или 3-10, дополнительно содержащие по меньшей мере один инактивированный ген, кодирующий незаменимый белок, необходимый для жизнеспособности указанных рекомбинантных бактерий.
12. Рекомбинантные бактерии по п. 11, отличающиеся тем, что указанный ген, кодирующий незаменимый белок, инактивирован делецией указанного гена, мутацией указанного гена, сайленсингом указанного гена, опосредованным РНК-интерференцией (RNAi), трансляционным ингибированием указанного гена или их комбинацией.
13. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 4-10, дополнительно содержащая по меньшей мере один ген, кодирующий незаменимый белок, необходимый для жизнеспособности рекомбинантной бактерии.
14. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 11-12 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по п. 13, отличающиеся тем, что указанный по меньшей мере один ген, необходимый для жизнеспособности, выбран из группы, состоящей из аланинрацемазы (alr), тимидилатсинтазы (thyA), аспарагинсинтазы (asnH), ЦТФ-синтазы (pyrG), триптофансинтазы (trpBA) и их комбинаций.
15. Нуклеиновая кислота по любому из пп. 2, 4-10, 13 или 14, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная нуклеиновая кислота находится в форме плазмиды.
16. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12 или 14, содержащие по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту по любому из пп. 2, 4-10, 14 или 15.
17. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16, отличающиеся тем, что указанные рекомбинантные бактерии представляют собой непатогенные бактерии.
18. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12 или 14-17, отличающиеся тем, что указанные рекомбинантные бактерии представляют собой рекомбинантные бактерии, предпочтительно молочнокислые бактерии, более предпочтительно - виды Lactobacillus или Lactococcus.
Lactococcus lactis
Lactococcus lactis
19. Рекомбинантные бактерии по любому из п. 18, отличающиеся тем, что указанный вид Lactococcus представляет собой , предпочтительно  подвид cremoris.
20. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20 для применения в медицине.
21. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20 для применения при лечении предпочтительно хронической воспаленной раны.
22. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20 для применения при лечении опухоли, предпочтительно злокачественной опухоли.
23. Фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20 и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
24. Набор для применения в медицине, содержащий
а) рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20, способные экспрессировать по меньшей мере один гетерологичный фактор под контролем прокариотического хлорид-индуцируемого промотора, и
b) по меньшей мере один индуктор, содержащий хлорид-ионы.
25. Медицинское устройство, содержащее
а) рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20, способные экспрессировать по меньшей мере один гетерологичный фактор под контролем прокариотического хлорид-индуцируемого промотора.
26. Фармацевтическая композиция по п. 23 или набор по п. 24 или медицинское устройство по п. 25, отличающиеся тем, что указанные рекомбинантные бактерии находятся в растворе, заморожены или высушены, предпочтительно лиофилизированы или высушены распылением.
27. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 23 или 26 или набор по любому из пп. 24 или 26 или медицинское устройство по любому из пп. 25 или 26, отличающиеся тем, что указанные рекомбинантные бактерии разводят в жидкой, предпочтительно культуральной среде, содержащей хлорид-ионы.
28. Набор по любому из пп. 24, 26 или 27, отличающийся тем, что указанный набор представлен в виде комбинированного препарата для раздельного, последовательного или одновременного применения при лечении, предпочтительно хронической воспаленной раны.
29. Набор по любому из пп. 24, 26 или 28, отличающийся тем, что указанный набор представлен в виде комбинированного препарата для раздельного, последовательного или одновременного применения при лечении опухоли, предпочтительно злокачественной опухоли.
30. Применение среды для разведения, содержащей хлорид-ионы, для разведения рекомбинантных бактерий по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-19.