СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА И ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ
METHOD OF DIFFERENTIATED DIAGNOSTICS OF CHRONIC VIRAL HEPATITIS AND LIVER CIRRHOSIS

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике во внутренних болезнях.
Известный лабораторный способ дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита и цирроза печени заключается в прижизненном морфологическом исследовании биоптатов печени (Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты в клинической практике. СПб, «ТЕЗА», 1996, с.31-32; The role of liver biopsy in chronic hepatitis C. Saadeh S., Cammell G., Corey W.D. et al. Hepatology, 2001, v. 33, p. 196-200; Nainon O., Xiq G., Vanghan G. Diagnosis of hepatitis a virus infection: a molecular approach. Clin. Microbiol. Rev., 2006, №19(1), p.63-79).
Недостатки способа диагностики: несмотря на высокую информативность, метод пункционной биопсии печени является трудоемким, достаточно травматичным, имеется техническая сложность получения материала и значительная вероятность развития тяжелых осложнений.
Технический результат: снижение травматичности, повышение доступности и простоты исполнения при высокой чувствительности, специфичности и эффективности.
Способ дифференциальной диагностики заключается в следующем: у больных количественно определяют активность фактора Виллебранда (vWF) в плазме крови на агрегометре 230 LA НПФ Биола (г.Москва) набором для количественного определения vWF фирмы НПО «Ренам» (г.Москва) с целью оценки наличия и степени повреждения эндотелия. Метод количественного определения vWF основан на его способности в присутствии антибиотика ристоцетина вызывать агглютинацию фиксированных и лиофильно высушенных тромбоцитов. Активность vWF в исследуемой плазме оценивается по вызываемой этой плазмой агглютинации стандартизованного препарата тромбоцитов. При значении vWF менее или равном 102% диагностируют хронический вирусный гепатит, при концентрации vWF более 102% - цирроз печени.
Способ осуществляют следующим образом: кровь из локтевой вены в количестве 4 мл забирают в вакуумную пробирку со стабилизатором цитратом натрия и центрифугируют для получения бедной тромбоцитами плазмы 15 мин при 3000 об/мин. После приготовления реагентов строят калибровочную кривую, построение которой проводится непосредственно перед проведением исследований. Для этого используется стандартная плазма без разведения и разведения в 2,5 и 10 раз цитратным солевым раствором. Построение калибровки осуществляется автоматически с помощью программы AGGRWB на агрегометре 230 LA НПФ Биола. В кювету для агрегометра вносят 0,25 мл суспензии фиксированных тромбоцитов и инкубируют 2 мин при 37°С. Затем кювету переносят в измерительное гнездо агрегометра и вносят 0,025 мл раствора ристоцетина. Через 1 мин включают режим измерения и еще через 1 мин добавляют 0,025 мл стандартной неразведенной плазмы. Измерения выполняют также в плазме, разведенной в 2,5 и 10 раз. Регистрацию проводят в течение 15 мин. Последующий расчет активности vWF в исследуемой плазме осуществляется автоматически с помощью программы AGGRWB. При значении vWF менее или равном 102% диагностируют хронический вирусный гепатит, при концентрации vWF более 102% - цирроз печени.
Примеры конкретного выполнения.
Пример 1. Больной Г. 50 лет, диагноз хронический гепатит С, фаза реактивации, анти - ВГС - с 1997 г. Эпиданамнез - донор с 1986 г. Жалобы на слабость. Объективно - печень у края реберной дуги, безболезненная, гладкая. Биохимическое исследование: АЛТ - 54 Ед/л, ACT - 44 Ед/л, общий билирубин - 13,7 мкмоль. По данным УЗИ - диффузные изменения в печени. Обнаружен HCV РНК, генотип 1b. Функциональная активность vWF в плазме крови 90%. Диагноз хронического вирусного гепатита С подтвержден.
Пример 2. Больная Щ. 25 лет, диагноз хронический гепатит С в фазе реактивации, анти ВГС положительные. Эпиданамнез - половой контакт. Объективно - печень по краю реберной дуги, безболезненная, гладкая. Биохимическое исследование: АЛТ - 51,1 Ед/л, ACT - 32,3 Ед/л, общий билирубин - 13,7 мкмоль/л. По данным УЗИ - незначительные диффузные изменения в печени. Обнаружен HCV РНК, генотип 3а. Функциональная активность vWF в плазме крови 95%. Диагноз хронического вирусного гепатита С подтвержден.
Пример 3. Больной Я. 61 год, диагноз цирроз печени в исходе хронического гепатита В, стадия выраженных клинических проявлений, портальная гипертензия, асцит. HBsAg положительный. Жалобы на слабость, кровоточивость десен, периодическое повышение температуры тела. Объективно - гепатомегалия +3 см, плотная, бугристая; спленомегалия +1 см, отеки на нижних конечностях, телеангиэктазии, асцит. Биохимическое исследование: АЛТ - 53,4 Ед/л, ACT - 82 Ед/л, общий билирубин - 37,4 мкмоль/л, щелочная фосфатаза - 133 Ед, тимоловая проба - 12,7 Ед. По данным инструментальных исследований - гепатоспленомегалия, асцит, признаки портальной гипертензии. Функциональная активность vWF в плазме крови 118%. Диагноз цирроза печени подтвержден.
Пример 4. Больной Г. 54 года, диагноз цирроз печени в исходе хронического гепатита С, стадия декомпенсации, портальная гипертензия, асцит. Анти - ВГС с 2001 г. Жалобы на слабость, снижение аппетита, увеличение живота, снижение диуреза. Объективно - гепатомегалия, асцит, отеки на нижних конечностях, телеангиэктазии. Биохимическое исследование: АЛТ - 34,5 Ед/л, ACT - 55,8 Ед/л, общий билирубин - 32,7 мкмоль/л, тимоловая проба - 3,9 Ед. По данным инструментальных исследований - гепатоспленомегалия, асцит, признаки портальной гипертензии. Функциональная активность vWF в плазме крови 124%. Диагноз цирроза печени подтвержден.
Данные статистики определения количественной активности vWF в плазме крови больных хроническим вирусным гепатитом С и циррозом печени в сравнении с группой практически здоровых лиц представлены в таблице.
Сравнительный анализ vWF в группах больных хроническим гепатитом С, циррозом печени и в группе практически здоровых лиц (М±δ)
Показатели
Контрольная группа n=20
Больные ХГС n=40
Больные ЦП n=25
Р1
Р2
Р3
vWF, %
80,11±2,77
102,1±4,75
120±4,86
0,003
0,0001
0,01
Примечание: Р1 - достоверность отличий в группах здоровых и больных хроническим гепатитом С; Р2 - достоверность отличий в группах здоровых и больных циррозом печени; Р3-достоверность отличий в группе больных хроническим гепатитом С и группе пациентов с циррозом печени.
Операционные характеристики лабораторного теста количественного определения активности vWF в плазме крови больных хроническим вирусным гепатитом С и циррозом печени с целью их дифференциации по степени повреждения эндотелия: диагностическая чувствительность (ДЧ) составила 70%, диагностическая специфичность (ДС) - 73%, диагностическая эффективность - 75%. Точка разделения для больных хроническим вирусным гепатитом и циррозом печени по концентрации vWF при построении кумулятивных кривых зарегистрирована на уровне 102%. Соответственно, при концентрации vWF менее или равно 102% диагностируют хронический вирусный гепатит, при уровне vWF более 102% - цирроз печени.
Положительный эффект от использования предлагаемого способа дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита и цирроза печени по количественной активности vWF с целью оценки степени повреждения эндотелия заключается в его простоте, доступности, нетравматичности, отсутствии осложнений, информативности, чувствительности и специфичности.