Метод локальной флуоресцентной спектроскопии в диагностике патологических изменений культи резецированного бронха у больных раком легкого после комбинированного лечения

адекватно и в более ранние сроки оценить эф- и, соответственно, спланировать дальнейшую

фективность проводимого курса химиотерапии тактику лечения.

МЕТОД ЛОКАЛЬНОЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ В ДИАГНОСТИКЕ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ КУЛЬТИ РЕЗЕЦИРОВАННОГО БРОНХА У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЛЕГКОГО после комбинированного лечения

Н.В. ПОЛЯКОВА1, В.А. ЕВТУшЕНКО1, Н.Н. БУЛГАКОВА2, О.В. ЧЕРЕМИСИНА1

НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск1 ИОФ РАН им. А.М. Прохорова, г. Москва2

Актуальность. Рак легкого занимает лидирующие позиции в структуре онкологической заболеваемости и смертности в большинстве индустриально развитых стран. Несмотря на постоянное совершенствование методов лечения, прогноз у данной группы пациентов остается неблагоприятным. Традиционными методами оценки эффекта лечения рака легкого и выявления рецидива опухоли являются рентгенологическое и эндоскопическое исследования. Среди методов раннего выявления рака перспективным на сегодняшний день является аутофлуоресцентная диагностика (АФД). АФД основана на различиях в интенсивности и спектральном составе собственной флуоресценции здоровой и патологически измененной ткани. Одним из способов исследования аутофлуоресценции (АФ) слизистой оболочки бронхов является метод локальной флуоресцентной спектроскопии (ЛФС), который позволяет получать количественную информацию при измерениях спектров лазер-индуцированной аутофлуоресценции биологических тканей.

Цель исследования - повысить эффективность ранней диагностики патологических изменений в культе резецированного бронха у больных, получивших комбинированное лечение по поводу рака легкого.

Материал и методы. Проведено динамическое наблюдение за 68 больными, получившими комбинированное лечение по поводу немелкоклеточного рака легкого. Всем пациентам в послеоперационном периоде с целью раннего выявления патологических изменений в культе резецированного бронха проводилась традици-

онная фибробронхоскопия, которая дополнялась измерением лазер-индуцированной аутофлуоресценции слизистой оболочки бронхов методом ЛФС. После проведения спектральнофлуоресцентных измерений выполнялся забор материала слизистой оболочки бронхиального дерева для морфологического исследования.

Результаты. При обследовании больных раком легкого после комбинированного лечения в слизистой оболочке культи резецированного бронха было выявлено: в 3 случаях - рецидив рака, в 40 - воспаление слизистой оболочки, при этом хроническое воспаления отмечались у 34, острое - у 6 пациентов, в 12 наблюдениях патологических изменений не отмечалось. При проведении ЛФС в патологически не измененной слизистой оболочке культи резецированного бронха регистрировалась интенсивная аутофлуоресценция, значения спектральнофлуоресцентного диагностического параметра Df были стабильны и варьировали в пределах Df от 0,8 до 1,0. В участках слизистой оболочки с признаками острого воспаления наблюдалось достоверное падение интенсивности АФ в максимуме спектра и возрастание параметра Df по отношению к показателям в нормальной слизистой оболочке. В случаях диагностированного рецидива злокачественной опухоли в культе резецированного бронха, регистрировалось резкое падение интенсивности АФ относительно здоровой слизистой оболочки и возрастание величины спектрально-флуоресцентного диагностического параметра Df более 1,4.

Выводы. Проведенное исследование АФ слизистой оболочки культи резецированного

бронха методом локальной флуоресцентной в показателях АФ при раке, остром воспалении

спектроскопии выявило достоверные отличия и нормальной слизистой оболочке.

АНАЛИЗ СТАТУСА МЕТИЛИРОВАНИЯ ГЕНА ОПУХОЛЕВОЙ СУПРЕССИИ ГЕНА RARp2 В ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ДНК КРОВИ ПРИ РАКЕ ЛЕГКОГО

А.А. ПОНОМАРЕВА1, Т.Э. СКВОРЦОВА2, А.Ю. ДОБРОДЕЕВ1

НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск1 Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, г. Новосибирск

Актуальность. Рак легких (РЛ) занимает одно из ведущих мест в структуре общей летальности от онкологических заболеваний. Важнейшим условием успешного лечения РЛ является обнаружение опухолевого процесса на ранних стадиях. Известно, что инактивация ряда генов опухолевой супрессии в результате аберрантного гиперметилирования их промоторных областей является одним из наиболее распространенных и ранних событий, приводящих к опухолевому перерождению клеток. С высокой частотой в опухолевой ткани при раке легкого выявлено аберрантное метилирование гена RARP2 (в 80% случаев). Обнаружение эпигенетических изменений в циркулирующих ДНК (цирДНК) плазмы/сыворотки, идентичных изменениям ДНК в клетках опухоли (Fleischhacker M. et al.. 2007), открывает большие возможности для разработки чувствительных методов ранней малоинвазивной диагностики рака легких. Недавние исследования показали, что использование цирДНК, связанных с поверхностью форменных элементов клеток крови в ПЦР, специфичной к метилированию (метПЦР), повышает чувствительность метода выявления ДНК-онкомаркеров по сравнению с использованием цирДНК плазмы (Skvortsova T. et al., 2006; Kolesnikova E. et al., 2008).

Цель исследования - сравнительный анализ в норме и при раке легкого уровня метилирования гена RARP2 во внеклеточных ДНК в различных фракциях крови методом количественной метил-специфичной ПЦР в реальном времени.

Материал и методы. В работе использованы образцы крови здоровых индивидуумов и боль-

2

ных раком легкого. Кровь разделяли на плазму и клетки крови, фракцию внДНК, связанных с клеточной поверхностью, получали последовательной обработкой клеток фосфатным буфером, содержащим ЭДТА, и раствором трипсина. Уровень метилирования гена опухолевой супрессии RARP2 оценивали методом ПЦР.

Результаты. Показано, что метилированные формы промоторов генов RARP2 могут быть детектированы в 75-84% случаев в опухолевой ткани и плазме крови у больных раком легкого и в 23% случаев в ткани и плазме крови у индивидуумов, не обнаруживающих симптомов развития онкозаболеваний (Hsu H.S. et al., 2007; Brait M. et al., 2009). В силу этого необходимым условием создания методов анализа, позволяющих диагностировать рак, является не только качественная, но и количественная оценка уровня метилирования промоторных областей генов в норме и при развитии злокачественных опухолей. Методом количественной ПЦР нами показано, что уровень метилирования гена RARP2 в цирДНК крови достоверно выше при раке легкого, чем в норме. При этом количество метилированных форм гена RARP2 в цирДНК в плазме и цирДНК, связанных с клеточной поверхностью, представлено в соотношении 1:1.

Выводы. Полученные данные свидетельствуют о том, что определение уровня метилирования последовательностей генов опухолевой супрессии в циркулирующих ДНК крови может быть использовано для поиска и верификации новых диагностических ДНК-маркеров, ассоциированных с развитием РЛ.