КОРМОВЫЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ
FODDER COMPOSITIONS FOR DOMESTIC ANIMALS

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННУЮ ЗАЯВКУ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно заявке PCT/US 2015/068193, поданной 30 декабря, 2015 года, содержимое которой включено в данный документ во всей полноте посредством ссылки.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0002] Домашние животные нуждаются в здоровом рационе и правильном усвоении пищи для дальнейшего развития и нормального самочувствия. Тем не менее, желудочно-кишечное расстройство зачастую нарушает нормальное пищеварение распространенных кормовых композиций для домашних животных. Некоторые из этих проблем могут быть весьма серьезными, например воспалительное заболевание кишечника (IBD) и другие хронические состояния пищеварения. IBD обычно сопровождается диареей, которая может быть крайне неприятна для домашнего животного, у которого имеется это состояние, или для хозяина домашнего животного, которому приходится убирать за домашним животным, особенно на постоянной основе.
[0003] Одним механизмом лечения IBD и улучшения воспалительного состояния у домашних животных является введение полезных средств, таких как лекарственные препараты, пребиотики, пробиотики и т.п. посредством традиционных кормовых композиций для домашних животных. Однако проблемой являлось обеспечение того, что эффективное средство доставится в целевой участок. Таким образом, существует потребность в кормовых композициях для домашних животных, которые могут контролировать высвобождение эффективного средства и обеспечить то, что эффективное средство доставится в целевой участок. Варианты осуществления настоящего изобретения предназначены для удовлетворения данных потребностей.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0004] В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусматривается кормовая композиция для домашних животных с контролируемым высвобождением, содержащая матрицу, которая содержит компонент, представляющий собой клетчатку, содержащий источник клетчатки с высокой растворимостью и источник клетчатки с низкой растворимостью, и источник полифенола; где матрица приспособлена для доставки источника полифенола в нижний отдел желудочно-кишечного (GI) тракта млекопитающих после потребления млекопитающим.
[0005] В других вариантах осуществления предусматривается способ получения кормовой композиции для домашних животных, включающий следующие стадии: экструдирование матричной композиции с образованием гранулы с контролируемым высвобождением, при этом матричная композиция содержит компонент, представляющий собой клетчатку, содержащий источник клетчатки с высокой растворимостью и источник клетчатки с низкой растворимостью, и источник полифенола; где матрица приспособлена обеспечивать недоступность источника полифенола для усвоения или абсорбции в верхнем отделе желудочно-кишечного (GI) тракта млекопитающих при потреблении млекопитающим; а также нанесение поверхностного покрытия на гранулу.
[0006] В еще одних дополнительных вариантах осуществления предусматривается способ лечения, предупреждения или облегчения симптома воспалительного заболевания, состояния или нарушения, например, воспалительного заболевания кишечника, у млекопитающего, предусматривающий введение любой из композиций, описанных в данном документе, млекопитающему, например, животному-компаньону, нуждающемуся в этом.
[0007] В некоторых вариантах осуществления предусматривается способ благотворного манипулирования кишечной микрофлорой млекопитающего, который предусматривает введение любой из композиций, описанных в данном документе млекопитающему, например, животному-компаньону, нуждающемуся в этом.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0008] На фигурах 1А, 1B и 1С показаны данные, демонстрирующие, что иллюстративная композиция по настоящему изобретению успешно обеспечивает доставку полифенолов в толстую кишку, где они метаболизируются постоянной кишечной микробиотой.
[0009] На фигурах 2А, 2В и 2С показаны данные, демонстрирующие, что иллюстративная композиция по настоящему изобретению обеспечивает повышенные уровни микробных постбиотиков в сыворотки крови.
[0010] На фигуре 3 представлена гистограмма, изображающая результаты сравнения показателей кала псовых между композицией по настоящему изобретению и сравнительной композицией.
[0011] На фигуре 4 изображены результаты качества кала, полученные из клинического экспериментального исследования с участием как здоровых псовых, так и псовых с IBD.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[0012] В некоторых вариантах осуществления кормовые композиции для домашних животных, изложенные в данном документе, обеспечивают мультифакториальную терапию, основанную на питательных пищевых факторах, которые (1) уменьшают аллергенность вследствие использования гидролизованных белков; (2) обеспечивают легко усваиваемые макроэлементы; (3) обеспечивают глутаминиловые аминокислоты, которые предоставляют промежуточные продукты метаболизма энтероцитам; (4) обеспечивают иммуномодуляторы, которые уменьшают воспалительные ответы; и (5) обеспечивают фракции микробной клеточной стенки, которые повышают толерантность к симбиотической биоте задней кишки. В других вариантах осуществления кормовые композиции для домашних животных повышают продуцирование микроорганизмами кишечника конечных продуктов метаболизма присутствующих в рационе полифенолов и/или повышает абсорбцию этих присутствующих в рационе полифенолов в большом кругу кровообращения.
[0013] В некоторых вариантах осуществления кормовые композиции для домашних животных по настоящему изобретению содержит матрицу, которая содержит присутствующие в рационе компоненты, которые способны обеспечивать необходимый эффект иммунной оптимизации. В частности, композиции могут содержать матрицу, которая содержит источник инертной, не ферментируемой клетчатки, с которым химически или физически связаны полифенолы, таким образом, чтобы они не были доступны для усвоения или абсорбции в верхнем отделе желудочно-кишечного (GI) тракта. В некоторых вариантах осуществления эти связанные с клетчаткой полифенолы обходят верхний отдел GI тракта и попадают неповрежденными в толстую кишку животного. Считается, что микроорганизмы кишечника метаболизируют присутствующую в рационе клетчатку; и в процессе высвобождают связанные с клетчаткой полифенолы. Эти только что высвобожденные полифенолы также подвергаются микробному метаболизму, продуцируя небольшие биомолекулы под названием «постбиотики». Постбиотики поглощаются в пределах толстой кишки и распределяются с попаданием в кровоток, где они имеют плейотропные эффекты, включая иммуномодуляцию, которая способствует лечению IBD и уменьшает воспалительный ответ. Одним преимуществом использования источника клетчатки с низкой растворимостью (например, лигнина), который труднорастворим в нижнем отделе GI тракта млекопитающего, состоит в том, что он обеспечивает увеличение объема кала.
[0014] В некоторых вариантах осуществления матрица содержит фибриллярную сеть. В некоторых вариантах осуществления фибриллярная сеть содержит волокна, которые характеризуются различными значениями скорости растворения. В некоторых вариантах осуществления значения скорости растворения волокон являются рН-зависимыми. В некоторых вариантах осуществления значения скорости растворения являются зависимыми от температуры. В некоторых вариантах осуществления фибриллярная сеть содержит межфибриллярные пространства. В некоторых вариантах осуществления межфибриллярные пространства имеют размер, достаточный, чтобы обеспечить проникновение растворяющего средства в фибриллярную сеть.
[0015] Подразумевается, что используемый в данном документе термин «растворяющее средство» включает жидкость, материал или т.п., которые увеличивают скорость растворения матрицы, за счет чего облегчая высвобождение эффективного средства (например, источника полифенола).
[0016] В некоторых вариантах осуществления матрица содержит эффективное средство, которое связано с источником клетчатки. В некоторых вариантах осуществления эффективное средство может представлять собой любой ингредиент, для которого была бы необходима целенаправленная доставка в соответствии с настоящим изобретением.
[0017] В некоторых вариантах осуществления эффективное средство представляет собой источник полифенола. В некоторых вариантах осуществления, исходя из профиля растворимости матрицы с контролируемым высвобождением, источник полифенола практически недоступен для верхнего отдела GI тракта.
[0018] В некоторых вариантах осуществления предусматривается кормовая композиция для домашних животных с контролируемым высвобождением, содержащая матрицу, которая содержит компонент, представляющий собой клетчатку, содержащий источник клетчатки с высокой растворимостью и источник клетчатки с низкой растворимостью, и источник полифенола; где матрица приспособлена для доставки источника полифенола в нижний отдел желудочно-кишечного (GI) тракта млекопитающего после потребления млекопитающим. В некоторых вариантах осуществления весовое соотношение источника клетчатки с высокой растворимостью и источника клетчатки с низкой растворимостью составляет от приблизительно 1:20 до приблизительно 1:1. В других вариантах осуществления весовое соотношение источника клетчатки с высокой растворимостью и источника клетчатки с низкой растворимостью составляет от приблизительно 1:15 до приблизительно 1:2. В еще одних дополнительных вариантах осуществления предусматриваются композиции, где весовое соотношение источника клетчатки с высокой растворимостью и источника клетчатки с низкой растворимостью составляет от приблизительно 1:10 до приблизительно 1:3. В других вариантах осуществления предусматриваются композиции, где весовое соотношение источника клетчатки с высокой растворимостью и источника клетчатки с низкой растворимостью составляет от приблизительно 1:5 до приблизительно 1:3. Тогда как в других вариантах осуществления предусматриваются композиции, где весовое соотношение источника клетчатки с высокой растворимостью и источника клетчатки с низкой растворимостью составляет приблизительно 1:4. В некоторых вариантах осуществления весовое соотношение источника клетчатки с высокой растворимостью и источника клетчатки с низкой растворимостью составляет приблизительно 1:4,3.
[0019] В некоторых вариантах осуществления термины «клетчатка с высокой растворимостью» и «растворимая клетчатка» можно использовать взаимозаменяемо. В некоторых вариантах осуществления термины «клетчатка с низкой растворимостью» и «нерастворимая клетчатка» можно использовать взаимозаменяемо.
[0020] В некоторых вариантах осуществления источник клетчатки с высокой растворимостью включает овсяные отруби, виды гречневой крупы, гороховые отруби, ячмень, томатный жмых, цитрусовую пульпу, свекольную пульпу и комбинацию двух или более из них. В некоторых вариантах осуществления источник клетчатки с низкой растворимостью включает целлюлозный материал, клетчатку ореха-пекана или их комбинацию.
[0021] В некоторых вариантах осуществления источник полифенола имеет пищевое или растительное происхождение. В некоторых вариантах осуществления источник полифенола пищевого происхождения включает полифенол, полученный из фруктов или овощей. В некоторых вариантах осуществления источник полифенола включает флавоноид или фенол кислоту.
[0022] В некоторых вариантах осуществления источник полифенола предусматривает полифенол, выбранный из дегидроксирозмариновой кислоты, кумароилнепитрина, эупафолина, карнозола, скутелларина, кампферола, розмариновой кислоты, розманола, цирсимаритина, лютеолина, 6-метоксилютеолина, 7-эпирозманола, кверцетина, катехина, гесперидина, цианидина и комбинации двух или более из них.
[0023] В некоторых вариантах осуществления дополнительно предусматривается источник гидролизованного животного или растительного белка, характеризующегося аминокислотным профилем. В некоторых вариантах осуществления, источник гидролизованного животного или растительного белка включает куриную печень. В некоторых вариантах осуществления источник гидролизованного животного или растительного белка присутствует в активном содержимом в количестве от приблизительно 25 до приблизительно 45 вес. %.
[0024] В других вариантах осуществления композиции содержат источник омега-3, омега-6 или омега-9 жирных кислот. Некоторые варианты осуществления содержат рыбий жир с высоким содержанием докозагексаеноата. В некоторых вариантах осуществления активное содержимое рыбьего жира с высоким содержанием докозагексаеноата составляет от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,5 вес. %.
[0025] В еще одних дополнительных вариантах осуществления предусматриваются способы лечения, предупреждения или облегчения симптома воспалительного заболевания, состояния или нарушения, например, воспалительного заболевания кишечника, у млекопитающего, предусматривающие введение эффективного количества любой из композиций, описанных в данном документе.
[0026] В некоторых вариантах осуществления предусматриваются способы благотворного манипулирования кишечной микрофлорой млекопитающего, предусматривающие введение эффективного количества любой из композиций, описанных в данном документе, млекопитающему, нуждающемуся в этом.
[0027] В еще одних вариантах осуществления предусматривается способ получения кормовой композиции для домашних животных, включающий следующие стадии: экструдирование матрицы, содержащей компонент, представляющий собой клетчатку, который содержит источник клетчатки с высокой растворимостью и источник клетчатки с низкой растворимостью, и источник полифенола; нанесение поверхностного покрытия на гранулу; где матрица приспособлена для доставки источника полифенола в нижний отдел желудочно-кишечного (GI) тракта млекопитающего после потребления млекопитающим. В некоторых вариантах осуществления, поверхностное покрытие включает палатант.
[0028] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение направлено на композицию с контролируемым высвобождением для животных-компаньонов, которую могут перорально вводить ветеринар, хозяин животного или другое лицо, осуществляющее уход. Композиция по настоящему изобретению является жевательной, без значительных потерь свойств контролируемого высвобождения. В частности, преимущества, связанные с функциями контролируемого высвобождения в должной мере поддерживаются даже после жевания животным. Таким образом, следует понимать, что «жевательная» в контексте настоящего изобретения означает, что характеристики контролируемого высвобождения лекарственной формы являются, по сути, устойчивыми к жеванию.
[0029] Хотя композиции по настоящему изобретению в целом поддаются жеванию, настоящее изобретение предназначено для охватывания композиций, которые обеспечивают контролируемое высвобождение эффективного средства после проглатывания.
[0030] Используемый в данном документе термин «контролируемое высвобождение» относится к скорости высвобождения фармацевтически активного средства в зависимости от некоторого свойства лекарственной формы. Например, 1) целенаправленное высвобождение, где эффективное средство приспособлено для высвобождения в определенном месте в организме; 2) отстроченное высвобождение, где существует временная задержка после потребления композиции и перед началом высвобождения эффективного средства; и 3) пульсирующее высвобождение, где эффективное средство высвобождается в режиме мгновенного высвобождения или модифицированного высвобождения, например, целенаправленное или отстроченное, за которым следует другой период времени с очень незначительным высвобождением или без такового, за которым следует еще один период немедленного или модифицированного высвобождения и так далее; таким образом можно получить один или более импульсов высвобождения.
[0031] Как будет понятно специалистам в данной области техники, возможны другие профили доставки и считается, что все они находятся в пределах объема контролируемого высвобождения в целях настоящего изобретения.
[0032] В некоторых вариантах осуществления композиции с контролируемым высвобождением по настоящему изобретению предусматривают эффективное средство (например, полифенол) в форме частиц. В некоторых вариантах осуществления эффективное средство предусмотрено в форме частиц, которые имеют такой размер, что когда композиция пережевывается животным, эффективное средство (частица) не будет дополнительно измельчено до какой либо значительно степени.
[0033] В дополнение к конкретным способам, описанным в данном документе, композиции по настоящему изобретению могут быть получены с помощью разнообразных методик, известных специалистам в данной области техники.
[0034] В некоторых вариантах осуществления частицы имеют средний размер частиц, составляющий до приблизительно 5000 мкм; более предпочтительным является средний размер частиц от приблизительно 10 мкм до приблизительно 5000 мкм; еще более предпочтительным является средний размер частиц от приблизительно 50 мкм до приблизительно 2000 мкм; наиболее предпочтительным является средний размер частиц от приблизительно 100 мкм до приблизительно 1000 мкм. Специалисту в данной области техники будет понятно, что частицы могут быть любого размера и формы при условии, что они обеспечивают целенаправленную доставку, описанную в данном документе.
[0035] В дополнение к источникам клетчатки с высокой растворимостью и с низкой растворимостью, описанным в данном документе, дополнительный ингредиент, например, полимеры, можно применять для контроля высвобождения эффективного средства. Например, чувствительные к рН полимеры, которые обычно нерастворимы при низких значениях рН, например, значении рН от приблизительно 1 до приблизительно 5, которое, как правило, обнаружено в желудке, но растворимые при более высоких значениях рН, например, значении рН, составляющем более 5,5, которое обычно встречается в тонкой кишке. В частности, подходящие полимеры включают без ограничения гидроксипропилметилцеллюлозу, этилцеллюлозу, Eudragit RL100, Eudragit RS100, смесь Eudragit RL100/RS100, Eudragit S100, Eudragit NE30D, ацетат целлюлозы, ацетобутират целлюлозы, силикон, дисперсии этилцеллюлозы (коммерчески доступные как Aquacoat FMC и Surrelease (coloron).
[0036] Используемый в данном документе термин «животное-компаньон» относится к одомашненным животным. Животные-компаньоны исключают людей. Предпочтительно, животное представляет собой млекопитающее. Примеры животных-компаньонов включают без ограничения собак, котов и лошадей. Предпочтительные животные-компаньоны представляют собой собак и котов.
[0037] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения содержат «палатант» или «средство, улучшающее вкусовые качества». Используемый в данном документе термин «средство, улучшающее вкусовые качества» или «палатант» включает любую композицию, которая изменяет вкусовые качества композиции, в которую ее добавляют. Средства, улучшающие вкусовые качества, по настоящему изобретению могут быть на мясной основе или не на мясной основе полученные из мясных продуктов.
[0038] В некоторых вариантах осуществления, кормовая композиция для домашних животных обычно содержит гидролизованный животный или растительный белок, характеризующийся полноценным аминокислотным профилем (например, высушенная куриная печень), пептидилглутамин (например, Hyvital пшеничный глутамин PN), нерастворимую, инертную клетчатку, описанную в данном документе (клетчатка ореха-пекана, овес и целлюлоза), пробиотическую растворимую клетчатку, описанную в данном документе (например, свекольная пульпа), связанные с клетчаткой полифенолы, описанные в данном документе (например, клюквенный жмых, экстракт граната, экстракт зеленого чая), среднецепочечные триглицериды, рыбий жир с высоким содержанием докозагексаеноата, порошок корня имбиря, экстракт босвеллии пыльчатой и дрожжевой бета-глюкан.
[0039] В другом варианте осуществления кормовая композиция для домашних животных содержит компоненты, изложенные в таблице 1 ниже в указанных количествах, в пересчете на общий вес кормовой композиций для домашних животных.
[0040] Кормовые композиции для домашних животных, изложенные в данном документе, могут быть получены посредством экструдирования с образованием гранулообразной кормовой композиции для домашних животных. В некоторых вариантах осуществления измельченные исходные ингредиенты композиции экструдируют, а затем наносят поверхностное покрытие, содержащее палатант и/или питательное масло. В некоторых вариантах осуществления, гранулу посредством распыления с помощью барабанного смесителя покрывают композицией, содержащей палатант и/или питательное масло. В других вариантах осуществления гранулу покрывают с использованием методики вакуумного глазирования, где гранулу подвергают воздействию вакуума, а затем подвергают воздействию покрывающих материалов, после чего сброс вакуума направляет покрывающие материалы внутрь гранулы.
[0041] Настоящее изобретение далее будет описано в сочетании со следующими не ограничивающими примерами.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
[0042] Иллюстративную кормовую композицию для домашних животных (пример 1) получали так, как изложено в таблице 2 (ниже). Все количества представлены в весовых процентах в пересчете на общий вес кормовой композиции для домашних животных. Композицию составляли в соответствии со стандартами питания, установленными Американской ассоциацией государственных инспекторов по качеству кормов (AAFCO) и Национальным научно-исследовательским советом (NRC). Композицию получали посредством экструдирования, высушивали, а затем покрывали палатанами.
[0043] Для проверки эффективности композиции осуществляли протокол, одобренный IACUC (Комитет по содержанию и использованию лабораторных животных), который включает 13 псовых с IBD, вместе с 13 здоровыми контрольными животными, подобранными по возрасту, весу и полу. Псовых оценивали по биохимическому и клиническому здоровью, анализируя маркеры крови и маркеры фекалий. Исследование представляет собой продольное перекрестное исследование с участием как здоровых собак, так и собак с IBD, получающих каждый из рационов (пример 1 и контрольный рацион). Контрольный рацион кормовой композиции для домашних животных является коммерчески доступным под торговым названием Hill's i/d от Hill's Pet Nutrition, Inc. Рационы скармливали в течение четырех (4) недель, после того как все животные получали предварительный корм в течение одной (1) недели, в зависимости от того, какой рацион потребляли собаки перед включением в исследование. Тестирование затем проводили в исходный момент времени (рассматриваемая неделя 0; сразу же после предварительного корма в течение 1 недели), а также на неделе 4 (фаза 1) и неделе 8 (фаза 2).
[0044] Показатели кала оценивали по пятибалльной шкале, при этом 5 означает наиболее здоровый (твердый) кал. Кал дополнительно подвергали анализу по определению влажности и зольности, и золу подвергали анализу минерального состава. Биологически активные маркеры системного хронического воспаления также оценивали в сыворотке крови с помощью метаболомного скрининга. Уровень базофилов, циркулирующих в крови, также анализировали с помощью клинического оборудования. И наконец, качество кала также исследовали субъективно (показатель визуальной твердости) и объективно (осмолиты, органическая сухая масса).
[0045] Как показано в таблице 3 ниже, тестируемый рацион увеличивал число кала с показателями кала 5 относительно исходного и контрольного рациона.
[0046] Как показано в таблице 4 ниже, в отношении анализа по определению влажности и зольности, тестируемый рацион стабильно снижал влажность в образцах кала и увеличивал органическую сухую массу, и также в целом уменьшал уровни натрия и калия в фекалиях, что, как было показано, связанно с улучшением качества кала и уменьшением частоты возникновения диареи.
[0047] Как показано в таблице 5 ниже, в отношении оценки биологически активных маркеров воспаления, было показано, что тестируемый рацион снижает уровни различных фосфатидиловых арахидонатов, которые являются предшественниками провоспалительных простагландинов, таким образом, улучшая воспалительное состояние у собак с IBD.
* PA 1 = 1-арахидонил-ОР1 (20:4)
* PA 2 = пальмитоиларахидонилглицерофосфохолин (2)
* PA 3 = стеароиларахидонилглицерофосфохолин (2)
* PA 4 = стеароиларахидонилглицерофосфоэтаноламин (1)
* PA 5 = стеароиларахидонилглицерофосфоинозитол (2)
[0048] Используемое в данном документе выражение «относительный кратный уровень» относится к нормализованному уровню концентрации, который приводит значения для каждого образца к среднему для всех образцов.
[0049] Как показано в таблице 6 (ниже), в отношении уровней базофилов, тестируемый рацион увеличивал количество базофилов у собак с IBD, что может обеспечить иммунную нормализацию у этих животных.
[0050] Как изложено в таблице 7 ниже, в отношении анализа здоровья кишечника по маркерам фекалий, известно, что полиамины фекалий обеспечивают преимущества для здоровья кишечника, особенно при образовании in situ в кишечном тракте при помощи микроорганизмов кишечника, а не введения посредством рациона. Было показано, что тестируемый рацион увеличивает уровни полиаминов фекалий выше исходного уровня.
[0051] Данные, описанные в таблицах 3-7, демонстрируют, что иллюстративная композиция по настоящему изобретению (пример 1) может облегчать симптомы IBD посредством улучшения качества кала, биохимического профиля кала, циркулирующих маркеров биохимического и клеточного иммунного статуса, а также метаболитов фекалий, связанных со здоровьем кишечника.
Пример 2
[0052] Для определения иммунной оптимизации второй иллюстративной кормовой композиции для домашних животных проводили испытание по питанию. Иллюстративную кормовую композицию для домашних животных (пример 2) получали так, как изложено в таблице 8 ниже. Все количества представлены в весовых процентах в пересчете на общий вес кормовой композиции для домашних животных. Композицию составляли в соответствии со стандартами питания, установленными Американской ассоциацией государственных инспекторов по качеству кормов (AAFCO) и Национальным научно-исследовательским советом (NRC). Композицию получали посредством экструдирования, высушивали, а затем покрывали палатантом. Способ, используемый для изготовления композиции, описанный в таблице 8 (ниже), обеспечивает создание инновационной матрицы по настоящему изобретению.
[0053] Испытание по питанию осуществляли на 24 псовых в соответствии с протоколами IACUC. Проводили забор крови до и после потребления иллюстративной композиции по настоящему изобретению (пример 2) в течение шести (6) недель и осуществляли стимуляцию цельной крови ex vivo. В частности, цельную кровь отбирали у псовых, которые потребляли пример 2, и делили на два образца - один стимулировали с помощью бактериального эндотоксина для индукции острого воспалительного ответа, а второй параллельно инкубировали без какой-либо стимуляции. После 24 часов инкубации культивируемую кровь (со стимуляцией и без нее) подвергали анализу в отношении воспалительных цитокинов. Состояние без стимуляции обеспечивает опосредованную оценку базального воспаления, тогда как стимулированный образец указывает на способность реагировать на иммунную угрозу. Оптимизация достигается, когда потребление примера 2 увеличивает уровень воспалительных цитокинов в не стимулированном (базальном) образце. Цитокины измеряли посредством твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).
[0054] Как показано в таблицах 9 и 10 (ниже), потребление примера 2 увеличивает стимуляцию продуцирования цитокинов у животного-компаньона (например, псовых). Анализировали следующие цитокины: IL-12 (интерлейкин-12), IL-6 (интерлейкин-6), VEGF-A (фактор роста эндотелия сосудов), NGF (фактор роста нервов), SCF (фактор роста стволовых клеток), TNF-α (фактор некроза опухолей альфа), МСР-1 (моноцитарный хемоаттрактантный белок-1), INF-γ (интерферон гамма) и IL-10 (интерлейкин-10). Уровни шести из десяти измеренных цитокинов статистически повышены в стимулированной цельной крови псовых, которые потребили пример 2 в течение шести недель, относительно исходного уровня. Напротив, потребление рациона согласно примеру 2 субъектами практически не привело к изменениям продуцирования цитокинов в не стимулированной цельной крови. Это указывает на то, что, несмотря на увеличение примером 2 ответа на острую иммунную стимуляцию у псовых, он не увеличивает базальное воспаление.
Пример 3
[0055] Проводили два дополнительных эксперимента с целью определения продуцирования постбиотиков после потребления иллюстративных кормовых композиций для домашних животных по настоящему изобретению (примеры 2 и 3). Перечень ингредиентов для примера 2 изложен в данном документе выше в таблице 8; а перечень ингредиентов для примера 3 изложен в таблице 11 (ниже). Все количества представлены в весовых процентах в пересчете на общий вес кормовой композиции для домашних животных. Композиции составляли в соответствии со стандартами питания, установленными Американской ассоциацией государственных инспекторов по качеству кормов (AAFCO) и Национальным научно-исследовательским советом (NRC). Композиции могут быть экструдированы, высушены, а затем покрыты композицией, содержащей палатант. Аналогично примеру 2, способ, используемый для изготовления композиции, описанный в таблице 11, обеспечивает создание инновационной матрицы по настоящему изобретению.
[0056] В условиях экспериментов, описанных ниже, псовых кормили рационами в соответствии с протоколами IACUC.
Эксперимент А. Оценка фекалий
[0057] Псовых кормили контрольным рационом или рационом, состоящим из примера 2 в течение шести (6) недель в условиях перекрестного исследования. Субъекты принимали участие в фазе предварительного кормления, потребляя обеспечивающий жизнедеятельность рацион (Hill's Science Diet Canine Adult, коммерчески доступный от Hill's Pet Nutrition, Inc.) в течение трех (3) недель перед потреблением иллюстративной композиции по настоящему изобретению (пример 2). Измерение исходного уровня проводили по завершению фазы предварительного кормления. Контрольный рацион содержит более низкие уровни присутствующих в рационе источников связанных с клетчаткой полифенолов и общего содержания клетчатки, и клетчатка имеет преимущественно нерастворимую форму.
[0058] Для оценки способности примера 2 обеспечивать целенаправленную доставку полифенола в толстую кишку, образцы фекалий псовых, которых кормили контрольным рационом, и псовых, которых кормили примером 2, анализировали в отношении различия в уровнях полифенолов и полифеноловых метаболитов. Результаты мультифакторного анализа профилей полифенолов и метаболитов показаны на фигурах 1А и 1B, где на оси X изображена серия полифенолов и их метаболитов, а на оси Y нанесены относительные уровни каждого из них, обнаруженных в фекалиях на исходном уровне (фигура 1А); и после потребления тестируемого рациона, содержащего композицию из примера 2 (фигура 1B). Проводили анализ обогащения сигнальных путей по относительным уровням полифенолов и метаболитов (фигура 1С), с кластером пищевых/растительных компонентов, который показал статистическое увеличение у собак, которых кормили тестируемым рационом, по сравнению с исходным уровнем. Как демонстрируют данные, сравнение относительных уровней фекальных полифенолов и постбиотиков указывает на то, что рацион, состоящий из примера 2, увеличивает нацеливание этих биологически активных средств на толстую кишку более эффективно, чем рацион, состоящий из коммерчески доступного высококачественного обеспечивающего жизнедеятельность псовых рациона, который не включал комбинацию признаков по настоящему изобретению.
Эксперимент В. Оценка сыворотки крови
[0059] Псовых кормили контрольным рационом или рационом, состоящим из примера 3, в течение 13 последовательных недель без пересечения. Периода предварительного кормления не было. Контрольный рацион содержит более низкие уровни присутствующих в рационе источников связанных с клетчаткой полифенолов, чем экспериментальный рацион и подобран по общему содержанию клетчатки, но клетчатка была в значительной мере в нерастворимой форме.
[0060] Сыворотку крови от одних и тех же субъектов в моменты времени, соответствующие отбору фекалий, также анализировали в отношении таких же метаболомических структур. В частности, образцы сыворотки крови анализировали в отношении различия в уровнях метаболитов микробных полифенолов и их конъюгированных форм, образующихся в ходе фазы II детоксикации. Результаты мультифакторного анализа профилей полифенолов и метаболитов показаны на фигурах 2A и 2B, где на оси X изображена серия выделенных из сыворотки крови (не)конъюгированных микробных метаболитов полифенолов, а на оси Y нанесены относительные уровни каждого из метаболитов, обнаруженных в сыворотке крови на исходном уровне (фигура 2А) и после потребления тестируемого рациона, содержащего композицию из примера 3 (фигура 2B). Проводили анализ обогащения сигнальных путей по относительным уровням выделенных из сыворотки крови (не)конъюгированных микробных метаболитов полифенолов (см. фигуру 2С), с кластером пищевых/растительных компонентов, который показал статистическое увеличение у собак, которых кормили тестируемым рационом, по сравнению с исходным уровнем. Как демонстрируют данные, сравнение относительных уровней полифенолов и постбиотиков в сыворотки крови указывает на то, что рацион, состоящий из примера 3, увеличивает нацеливание этих биологически активных средств на толстую кишку более эффективно, чем рацион, состоящий из коммерчески доступного высококачественного обеспечивающего жизнедеятельность псовых рациона, который не включал комбинацию признаков по настоящему изобретению.
Эксперимент С. Постбиотики микробного происхождения
[0061] Уровни постбиотиков в сыворотки крови микробного происхождения оценивали у псовых, которых кормили иллюстративной композицией по настоящему изобретению (пример 3), которая содержит матрицу с контролированным высвобождением по настоящему изобретению, и сравнительной композицией, которая содержит матрицу с контролированным высвобождением по настоящему изобретению. Образцы сыворотки крови псовых, которых кормили сравнительной композицией и примером 3 в течение 13 недель анализировали в отношении различий в уровнях микробных метаболитов полифенолов и конъюгированных форм, образующихся в ходе фазы II детоксикации. Проводили анализ обогащения сигнальных путей по относительным уровням в сыворотки крови (не)конъгированных микробных метаболитов полифенолов. Результаты указывают на то, что бактериальные метаболиты определенных пищевых компонентов образовались в большем количестве в сыворотке крови псовых, которых кормили примером 3 по сравнению с псовыми, которых кормили сравнительной композицией. Данные результаты дополнительно демонстрируют способность композиции по настоящему изобретению обеспечивать целевую доставку эффективного средства, например, полифенола.
Пример 4
[0062] Иллюстративную кормовую композицию для домашних животных (пример 4) получали так, как изложено в таблице 12 (ниже). Все количества представлены в весовых процентах в пересчете на общий вес кормовой композиции для домашних животных. Композицию составляли в соответствии со стандартами питания, установленными AAFCO и NRC.
[0063] Проводили клиническое экспериментальное исследование с участием как здоровых псовых, так и псовых, страдающих от заболевания раздраженного кишечника (IBD). Кал собирали после четырех (4) недель потребления либо контрольного (сравн. пр. I), либо тестируемого рациона (пример 4). Кал подвергали визуальной оценке по шкале питания для домашних животных Hill's от 1 до 5, где 1 указывает на водянистый стул, а 5 указывает на хорошо сформированный твердый кал. На гистограмме, изображенной на фигуре 3, показаны средние значения двух показателей кала для каждой собаки при потреблении композиции согласно сравн. пр. I (сплошная серая часть столбиков гистограммы) или потреблении композиции согласно примеру 4 (заштрихованная часть столбиков гистограммы). В области более высоких значений столбиков гистограммы преобладал кал собак, которых кормили композицией согласно примеру 4, тогда как более низкие показатели кала чаще наблюдались у собак, которые потребляли композицию согласно сравн. пр. I. В частности, хотя численно меньше, низкие показатели указывают на возможность желудочно-кишечного расстройства и могут вызывать беспокойство у лиц, осуществляющих уход. Факт, что все показатели кала, составляющие 3 и ниже, наблюдали у собак, потребляющих композицию согласно сравн. пр. 1 указывает на потенциал композиций согласно примеру 4 уменьшать и исправлять низкие показатели кала и предоставлять гарантии лицам, осуществляющим уход за псовыми.
Пример 5
[0064] Иллюстративную кормовую композицию для домашних животных (пример 5) получали так, как изложено в таблице 13 (ниже). Все количества представлены в весовых процентах в пересчете на общий вес кормовой композиции для домашних животных. Композицию составляли в соответствии со стандартами питания, установленными AAFCO и NRC.
[0065] Проводили клиническое экспериментальное исследование с участием как здоровых псовых, так и псовых, страдающих от заболевания раздраженного кишечника (IBD). Кал собирали после четырех (4) недель потребления либо контрольного (сравн. пр. II) либо тестируемого рациона (пример 5). Кал подвергали визуальной оценке по шкале питания для домашних животных Hill's от 1 до 5, где 1 указывает на водянистый стул, а 5 указывает на хорошо сформированный твердый кал. Как свидетельствуют данные, описанные на фигуре 4, рацион, содержащий инновационную комбинацию ингредиентов по настоящему изобретению (пример 5), демонстрирует клинически значимое улучшение качества кала по сравнению с качеством калом, полученным в результате использования рациона, который не содержит инновационную комбинацию ингредиентов по настоящему изобретению (сравн. пр. II).
[0066] В частности, на фигуре 4 показано в виде столбиков, соотношение показателей кала, полученного от здоровых собак (столбики 1 и 2 слева) и собак с IBD (столбики 3 и 4 слева) при потреблении сравн. пр. II (столбики 1 и 3) или примера 5 (столбики 2 и 4). Чем больше визуальная часть столбца заполнена, тем больше соотношение связанных показателей кала, которые выражены в здоровом состоянии при использовании этого рациона.
[0067] Результаты, проиллюстрированные на фигуре 4, также предоставлены в табличном формате ниже (таблица 14).
[0068] Хотя в вышеуказанном описании было раскрыто несколько вариантов осуществления настоящего изобретения, специалистам в данной области техники будет понятно, что много модификаций и другие варианты осуществления настоящего изобретения придут на ум в отношении настоящего изобретения, с возможностью получить выгоду от данных, представленных в вышеуказанном описании и соответствующих графических материалах. Таким образом, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными вариантами осуществления, раскрытыми в данном документе выше, и что многие модификации и другие варианты осуществления предназначены для включения в объем прилагаемой формулы изобретения. Более того, хотя конкретные термины используются в данном документе, так же как и в следующей далее формуле изобретения, они использованы только в общем и описательном смысле, и не предназначены для ограничения ни описываемого изобретения, ни следующей далее формулы изобретения.