СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОЗРАЧНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПОМОЩЬЮ ОПТИЧЕСКОГО МИКРОСКОПА

3
1. Способ получения прозрачных биологических препаратов для исследования с помощью оптического микроскопа, в котором биологическую (2) ткань осветляют путем электрофореза, погружая ткань в водно-щелочной электрофоретический раствор (23) и воздействуя на нее в электрофоретическом растворе электрическим полем, причем электрофоретический раствор содержит основание в концентрации от 5 до 100 моль/м и детергент в концентрации от 0,1 до 10%(вес./об.), отличающийся тем, что основание является буферным основанием, катионы которого имеют молекулярный вес по меньшей мере 50 Да, а детергент является неионным детергентом.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что неионный детергент по меньшей мере преимущественно состоит из по меньшей мере одного вещества, которое выбрано из группы, состоящей из: Tween 20, Tween 80, Triton X45, Triton X100, Triton X102, н-октил-бета-D-глюкапиранозид, октилфенолэтоксилат, Brij35 и Nonidet P40.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что неионный детергент по меньшей мере преимущественно состоит из по меньшей мере одного вещества, которое выбрано из группы, состоящей из: Tween 80, Triton X45, Triton X102, н-октил-бета-D-глюкапиранозид, Brij35 и Nonidet P40.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что неионный детергент по меньшей мере преимущественно состоит из по меньшей мере одного вещества, которое выбрано из группы, состоящей из Tween 80, Triton X102 и Nonidet P40.
3
3
5. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что электрофоретический раствор содержит буферное основание в концентрации от 10 до 50 моль/м или от 15 до 25 моль/м.
6. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что электрофоретический раствор содержит неионный детергент в концентрации от 0,5 до 1,5%(вес./об.).
7. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что молекулярный вес катионов буферного основания составляет по меньшей мере 100 Да.
8. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что буферное основание по меньшей мере преимущественно состоит из по меньшей мере одного вещества, которое выбрано из группы, состоящей из Tris, Bicine и BisTris.
9. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что максимальную температуру электрофоретического раствора в процессе электрофоретического осветления поддерживается в диапазоне 20-90°C, но ниже точки кипения электрофоретического раствора.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что максимальную температуру электрофоретического раствора во время электрофоретического осветления поддерживают в диапазоне 40-60°C.
11. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что значение pH электрофоретического раствора во время электрофоретического осветления поддерживают в диапазоне от 8 до 9.
12. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что во время электрофоретического осветления в электрофоретический раствор добавляют свежее буферное основание и/или свежий детергент.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что электрофоретический раствор непрерывно заменяют.
14. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что электрическую мощность, которая подается на электрофоретический раствор и погруженную в него ткань, во время электрофоретического осветления регулируют.
15. Способ по п. 12, отличающийся тем, что электрическую мощность удерживают на фиксированном значении по меньшей мере на части периода электрофоретического осветления.
16. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что во время электрофоретического осветления определяют электрическое сопротивление электрофоретического раствора и погруженной в него биологической ткани (2).
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что условия электрофоретического осветления изменяют, и/или электрофоретическое осветление заканчивают, когда электрическое сопротивление или его изменение во времени становится выше и/или ниже заданного предельного значения.
18. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что биологическую ткань (2) перед ее электрофоретическим осветлением
- фиксируют, и/или
- фиксируют формальдегидом, и/или
- промывают, и/или
- промывают водой, и/или
- промывают электрофоретическим раствором, и/или
- инкубируют в водно-щелочном растворе.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что при инкубации ткани в водно-щелочном растворе, перед ее электрофоретическом осветлении в щелочном водном электрофоретическом растворе соблюдается по меньшей мере один из следующих параметров:
- инкубация продолжается от 30 до 120 мин или от 45 мин до 90 мин;
- инкубация проводится при 20-50°C или при 35-40°C;
3
3
- водно-щелочной раствор имеет концентрацию щелочи от 50 до 2000 моль/м или от 100 до 1000 моль/м;
- водно-щелочной раствор содержит NaOH;
1-6
- водно-щелочной раствор содержит C-спирт в концентрации от 10 до 70 или от 40 до 60%(об/об);
- водно-щелочной раствор содержит этанол, и
- водно-щелочной раствор содержит детергент в концентрации от 0,1 до 10 или от 0,5 до 2%(вес./об.).
20. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что биологическую ткань (2) перед или после ее электрофоретического осветления в водно-щелочном электрофоретическом растворе инкубируют в водном растворе кислоты и затем в водном кислом электрофоретическом растворе подвергают действию электрического поля.
21. Способ по п. 20, отличающийся тем, что
- при инкубации ткани в водном растворе кислоты соблюдается по меньшей мере одна из следующих характеристик:
- инкубация продолжается от 30 до 120 мин или от 45 мин до 90 мин;
- инкубация проводится при 20-50°C или при 35-40°C;
3
3
- водный раствор кислоты имеет концентрацию протонов от 50 до 2000 моль/м или от 100 до 1000 моль/м;
- водный раствор кислоты содержит трихлоруксусную кислоту;
1-6
- водный раствор кислоты содержит C-спирт в концентрации от 10 до 70 или от 40 до 60%(об/об);
- водный раствор кислоты содержит этанол;
- водный раствор кислоты содержит детергент в концентрации от 0,1 до 10 или от 0,5 до 2%(вес./об.); и
- тем, что водный кислый электрофоретический раствор соответствует по меньшей мере одной из следующих характеристик:
3
- водный кислый электрофоретический раствор содержит буферную кислоту в концентрации от 5 до 100 моль/м и неионный детергент в концентрации от 0,1 до 10%(вес./об.), и
3
- водный кислый электрофоретический раствор содержит трихлоруксусную кислоту в концентрации от 10 до 50 моль/м и неионный детергент в концентрации от 0,5 до 2%(вес./об.).
22. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что биологическую ткань (2) после ее электрофоретического осветления
- инкубируют с антителом, и/или
- в растворе антитела подвергают действию электрического поля, и/или
- окрашивают красителем, и/или
- в растворе красителя подвергают действию электрического поля, и/или
- промывают органическим растворителем, и/или
- промывают ксилолом или дихлорметаном, и/или
- вводят в раствор с показателем преломления в интервале от n=1,4 до n=1,6.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что биологическую ткань (2) после ее электрофоретического осветления
- вводят в раствор с показателем преломления в интервале от n=1,4 до n=1,6, и/или
- вводят в раствор сахара или полиола с показателем преломления в интервале от n=1,4 до n=1,6.
24. Способ по п. 22, отличающийся тем, что биологическую ткань (2) после ее электрофоретического осветления
- обезвоживают в ряду спиртов с повышающейся концентрацией спирта, и/или
- вводят в органический растворитель с показателем преломления в интервале от n=1,4 до n=1,6, и/или
- вводят в метилсалицилат или раствор метилсалицилата с показателем преломления в интервале от n=1,4 до n=1,6.
25. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что
- ткань для электрофоретического осветления размещают в реакционной камере (4), которая содержит
- заполняемое электрофоретическим раствором реакционное пространство (5), образованное осесимметрично вокруг вертикальной оси (6) и имеющее зону утоньшения,
- открытый снизу кольцевой канал (17) в реакционном пространстве (5) ниже зоны утоньшения, который соединен с ведущим вверх газоотводным каналом (18),
- первый кольцеобразный электрод (10) внутри кольцевого канала (17) и/или в реакционном пространстве (5) ниже кольцевого канала (17) и
- второй кольцеобразный электрод (9) в реакционном пространстве (5) выше зоны утоньшения,
- причем первый и второй электроды (9, 10) на обоих выходах подсоединены к источнику постоянного напряжения (13), и
- причем ткань находится в уменьшенном живом сечении (16) реакционного пространства (5) в зоне утоньшения.