Противовоспалительные и иммуномодулирующие свойства сесквитерпенового лактона арглабин при экспериментальном хроническом эндометрите

A. Zh. Abil’daeva, S. M. Adekenov

ANTI-INFLAMMATORY AND IMMUNE-STIMULATING PROPERTIES OF THE SESQUITERPENE LACTONE ARGLABIN ON THE CHRONIC ENDOMETRITIS MODEL

Institute of Phytochemistry MES RK, Karaganda, Kazakhstan

ABSTRACT

Arglabin at the dose of 10 mg/kg was shown to inhibit the inflammatory processes and to enhance the regeneration processes in the uterine endometrium. Therapeutic effect of Arglabin at 10 mg/kg dose is comparable with that of thy-maline. The stated concentration of Arglabin stimulates T-lymphocyte outflow from the T-dependant periarterial probe and phagocytosis processes in the spleen. Arglabin affects central chain of immunogenesis through the reduction of thymocyte amount in the cortical and medullar substances of thymus lobules.

Key words: regenration, phagocytosis, thymocytes, thymus.

А. Ж. Абшьдаева, С. М. Адекеное

ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА СЕСКВИТЕРПЕНОВОГО ЛАКТОНА АРГЛАБИН ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХРОНИЧЕСКОМ ЭНДОМЕТРИТЕ

Институт фитохимии МОН РК, Караганда, Казахстан

РЕЗЮМЕ

Установлено, что арглабин в дозе 10 мг/кг купирует воспалительные процессы, способствует усилению процессов регенерации в эндометрии матки. Терапевтический эффект арглабина в дозе 10 мг/кг сопоставим с эффектом тималина. Указанная концентрация арглабина стимулирует отток Т-лимфоцитов из Т-зависимой периар-териальной зоны и процессы фагоцитоза в селезенке. Влияние арглабина на центральное звено иммуногенеза проявляется снижением содержания тимоцитов в корковом и мозговом веществах долек тимуса.

Ключевые слова: регенерация, фагоцитоз, тимоциты, тимус.

лактон арглабин обладает иммуномодулирующими и противовоспалительными свойствами [1; 6].

В связи с этим представляет интерес изучить противовоспалительные свойства, а также особенности реактивности тимуса и селезенки при экспериментальном хроническом эндометрите в условиях применения арглабина.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования проведены на белых беспородных крысах-самках массой 180-200 г. Модель эндометрита воспроизводили следующим образом. В качестве антигена использовали 2%-ный вод-но-солевой экстракт ткани матки и яичника. Иммунизацию проводили по схеме: антиген с полным адъювантом Фрейнда (Дикфа) вводили в переднюю брюшную стенку в дозе 5 мг/кг (по белку), через 7 дней — в аналогичной дозе внутрибрюшинно, через 14 дней — внутривенно без стимулятора в дозе 3 мг/кг [4]. По окончании инициации модели эндометрита животные были разделены на труппы (я=8): 1-я группа,

ВВЕДЕНИЕ

В защите слизистых оболочек от инфекционных агентов большая роль принадлежит местным механизмам как неспецифическим, так и специфическим. Они являются первой линией защиты от проникающих патогенных агентов. Иммунная система слизистой оболочки половых органов может быть условно разделена на два участка: 1) индуктивный — лимфатические узлы малого таза; 2) эффекторный — слизистая оболочка половых органов. Пул иммунокомпетентных клеток, локализующихся в этих отделах, обеспечивает клеточные и гуморальные иммунные реакции в эф-фекторном участке. Следует отметить, что субпопуля-ционный спектр «местных» лимфоцитов как в норме, так, по-видимому, и при развитии локального иммунного ответа формируется при участии системных и центральных механизмов иммунитета. Однако последовательность вовлечения в воспалительный процесс центральных, системных звеньев иммунитета в настоящее время недостаточно изучена [2; 3].

В ходе ранее проведенных экспериментальных исследований нами установлено, что сесквитерпеновый

где в качестве терапевтического средства применяли арглабин в дозе 5 мг/кг; 2-я — арглабин в дозе 10 мг/кг; 3-я — тималин в дозе 10 мг/кг (сравнение); 4-я — контроль (без лечения). 5-ю группу составили интактные крысы. Препараты вводили внутрижелудочно в крахмальной слизи 1 раз в день на протяжении 2 нед.

На 7-е, 14-е сутки и по окончании лечения животных из каждой группы под легким эфирным наркозом забивали декапитацией, взятый материал (матку, тимус и селезенку) фиксировали в 10%-ном формалине, заливали в парафин. Срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином по Ван-Гизону. При увеличении в 100 раз, используя сетку Автандилова на 100 точек, подсчитывали в эндометрии удельную плотность капилляров, коллагеновых волокон, фибробластов, в тимусе — удельную плотность тимоцитов и эпителиоре-тикулоцитов отдельно для коркового и мозгового вещества, в селезенке—удельную плотность Т-лимфоцитов в Т-зависимой периартериальной зоне [5].

Статистическая обработка экспериментальных данных проведена по общепринятым методам с вычислением средней арифметической и ее стандартной ошибки, коэффициента Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В группе животных, получавших тималин, отмечали положительное влияние на течение индуцированного эндометрита. Так, к 7-м суткам применения тима-лина при гистологическом исследовании зарегистрированы следующие изменения в тканях матки. Деструктивные и дистрофические процессы выражены слабее: менее выражены отек эндометрия, реже отмечается фрагментация коллагеновых волокон, больше клеточных элементов. Морфометрический анализ показал, что тималин значительно ускорял регенераторные процессы, количество фибробластов в поверхностном слое увеличивалось в 1,6 раз и в 1,2 раза — в глубоком слое эндометрия по сравнению с контрольной группой (табл. 1).

Таблица 1

Удельная плотность фибробластов поверхностного и глубокого слоев эндометрия, уел. ед.

Группа, Доза, Срок наблюдения

п=8 мг/кг 1-е сутки 7-е сутки 14-е сутки

Поверх- ностный слой Глубокий слой Поверх- ностный слой Глубокий слой Поверх- ностный слой Глубокий слой

Арглабин 5 16,9±0,3 7,бЗ±0,2 21,2±0Д* 17,9±0,5‘ 26,540,6’ 24,8±0А'

10 1б,9±0,3 7,бЗ±0,2 25,1±0,6* 1Я5±0,5' 31,5±1,2* 27.Ш/С

Тималин 10 1б,9±0,3 7,бЗ±0,2 27,5±0,5* 21,б±0,5’ 33,3±0,б* 30,б±0,б’

Йнгакгаые животные 40,0±0,6 33,7±0,5 40,0±0,б 33,7±0,5 40,0±0,6 33,7±0,5

Контроль — 16,йЯ),3 7,бЗ±0,2 18,4±0,5 12,6±0,3 21,7±0,4 17,8±0,4

* Достоверность различий с контролем р < 0,05.

При гистологическом исследовании зарегистрированы следующие изменения в тканях тимуса: дольки очень крупные, насыщенные клетками. При этом кор-

ковые отделы более богаты клетками, чем мозговые. Удельная плотность тимоцитов в корковом отделе равнялась 85,9±0,7 уел. ед., что было несколько ниже показателей животных контрольной группы (табл. 2). На основании этого можно предположить, что тималин оказал регулирующее действие, основанное на замедлении притока претимоцитов в тимус из красного костного мозга и/или усилении скорости созревания тимоцитов. В корковых отделах долек удельная плотность тимоцитов была в 2 раза больше, чем в мозговых, поэтому можно предположить, что тималин не только ускорил созревание тимоцитов, но и усилил их выведение из мозгового вещества, снизив этот показатель до уровня интакгных животных (табл. 2 и 3). При микроскопическом исследовании селезенки наблюдалось множество крупных фолликул с центром размножения, меньшим в сравнении с контрольной группой. Отмечено, что удельная плотность Т-лимфо-цитов в периартериальных зонах была ниже, чем в группе нелеченных животных, регистрировались полнокровные сосуды.

Таблица 2

Удельная плотность тимоцитов в корковом веществе дольки тимуса, уел. ед.

Группа, п=8 Доза, мг/кг Срок наблюдения

1-е сутки 7-е сутки 14-е сутки

Арглабин 5 85,8+0,9 80,0±0,8" 7б,б±1,3*

10 85,8±0,9 80,4±0,7* 74,8±0,9*

Тималин 10 85,8±0,9 85,9±0,7 81,8±0,9

Интактные — 65,3±0,9 65,3±0,9 65,3±0,9

Контроль — 85,8±0,9 88,3±1,2 86,0±1,1

* Достоверность различий с группой сравнения р < 0,05.

Таблица 3

Удельная плотность тимоцитов в мозговом веществе дольки тимуса, уел. ед.

Группа, п=8 Доза, мг/кг СрОк наблюдения

1-е сутки 7-е сутки 14-е сутки

Арглабин 5 48,0±0,7 43,3±0,б 44,2+0,5

10 48,0±0,7 41,9±0,9" 40,7±0,7*

Тималин 10 48,0±0,7 43,4±0,б 42,3±0,б

Интактные — 44,2+0,5 44,2+0,5 44,2±0,5

Контроль — 48,0+0,7 46,8±0,5 47,2+0,7

* Достоверность различий с группой сравнения р < 0,05.

К 7-м суткам в группе животных, где применяли арглабин в дозе 5 мг/кг, при гистологическом исследовании матки отмечалось появление новообразованных капилляров и фибробластов, строящих коллагеновые волокна. При этом количество фибробластов в отличие

от контроля в поверхностном (21,2+0,4 уел. ед.) и глубоком (17,9+0,5 уел. ед.) слоях эндометрия было больше в 1,2 и 1,4 раза соответственно (см. табл. 1). Данные результаты свидетельствовали, что введение арг-лабина в дозе 5 мг/кг способствовало ускорению развития репаративных процессов в тканях матки. При микроскопическом исследовании тимуса — дольки крупные, четко различима граница коркового и мозгового веществ. Насыщенность тимоцитами коркового вещества значительно выше, чем мозгового, и составляет соответственно 80,0±0,8 и 43,3±0,6 уел. ед. Сопоставляя эти данные с показателями в группе сравнения, можно предположить, что характер воздействия арглабина аналогичен влиянию тималина, но при этом несколько эффектнее. Удельная плотность тимоцитов в мозговом веществе долек достигала тех же цифр, что и в группе, где применяли тималин. Так же, как и в группе препарата сравнения, отмечалось формирование телец Гассаля. При микроскопическом исследовании селезенки выявлено множество фолликул без четко выраженных центров размножения. Удельная плотность Т-лимфоцитов в периартериаль-ной зоне по сравнению с контрольной группой снизилась до 49,4±0,8 уел. ед., что практически не отличалось от аналогичных показателей в группе, получавшей тималин.

К 14-м суткам арглабин в дозе 5 мг/кг способствовал устранению патологических изменений в тканях матки: явления отека не наблюдались, дезорганизация, соединительной ткани отмечалась редко в виде небольших локальных участков в поверхностном слое матки, который подвергался большему разрушению. Количество фибробластов поверхностного и глубокого слоев увеличилось в 1,3-1,4 раза соответственно по сравнению с контрольной группой. В отличие от группы животных с эндометритом удельная плотность капилляров глубокого и поверхностного слоев уменьшилась в 1,2 раза. При гистологическом исследовании тимуса показано, что дольки крупные, корковое вещество больше насыщено тимоцитами, чем мозговое. Эффект снижения тимоцитов продолжал наблюдаться в корковых отделах, а в мозговом веществе, напротив, количество тимоцитов слегка повысилось (см. табл. 2 и 3). Наблюдалось усиленное формирование телец Гассаля. Относительно 7-х суток в селезенке отмечалось снижение удельной плотности Т-лимфоцитов в периартери-альной зоне. В красной пульпе увеличился объем мак-рофагально-лимфоцитарных скоплений. На основании этих данных можно предположить, что арглабин в дозе 5 мг/кг стимулировал отток Т-лимфоцитов из Т-зависи-мой периартериальной зоны и стимулировал процессы фагоцитоза, которые протекают в селезенке и в норме, в связи с чем мы наблюдали приток макрофагов и увеличение объема лимфоцитарно-макрофагальных инфильтратов в красной пульпе.

Таким образом, арглабин в дозе 5 мг/кг действует достаточно эффективно на центральное звено иммуногенеза, снижая содержание тимоцитов в корковом и мозговом веществах долек тимуса.

Применение арглабина в дозе 10 мг/кг в терапии индуцированного хронического эндометрита заметно купировало активность патологического процесса в тканях матки. Уже на 7-е сутки в опытной группе при микроскопическом исследовании матки отмечалось значительное уменьшение отека, разволокнения и фрагментации коллагеновых волокон. Введение арглабина в дозе 10 мг/кг значительно ускоряло регенераторные процессы, т. к. количество фибробластов увеличивалось в 1,5 раза в поверхностном слое и в 1,2 раза в глубоком слое эндометрия по сравнению с контрольной группой.

Использование арглабина в дозе 10 мг/кг значительно купировало активность патологического процесса в центральных органах иммунитета. При микроскопическом исследовании тимуса отмечались крупные дольки с четко различимой границей коркового и мозгового веществ. Удельная плотность тимоцитов коркового и мозгового веществ (соответственно 80,4±0,7 и 41,9±0,9 уел. ед.) не отличалась от аналогичных показателей животных, у которых арглабин применяли в дозе 5 мг/кг, однако достоверно отличалась от цифр группы сравнения. В мозговом веществе отмечалось формирование большого количества эпителиальных телец. При микроскопическом исследовании селезенки красная пульпа содержала крупные лимфоцитарно-макрофагальные очаги. Судя по полученным данным, арглабин в дозе 10 мг/кг более эффективно стимулирует отток Т-лимфоцитов из Т-зави-симой зоны, чем арглабин в дозе 5 мг/кг и тималин.

К 14-м суткам арглабин в дозе 10 мг/кг, а также препарат сравнения тималин в целом оказали сопоставимый эффект и способствовали полному восстановлению структур тканей матки: явления отека и дезорганизации соединительной ткани отсутствовали. Выявлялись хорошо выраженные регенераторные процессы: вокруг новообразованной капиллярной сети располагалась масса фибробластов, синтезирующих межклеточное вещество. Для этого срока исследования характерной являлась разнонаправленная реакция тимоцитов коркового и мозгового веществ тимуса. Несмотря на то, что удельная плотность тимоцитов в корковом веществе снизилась, этот показатель значительно выше, чем у интактных животных, а в мозговом веществе удельная плотность тимоцитов была ниже, чем у интактных животных. Отмечалось усиленное формирование телец Гассаля. Таким образом, на 14-е сутки эффект арглабина в дозе 10 мг/кг явился более выраженным, чем арглабина в дозе 5 мг/кг, что проявилось в уменьшении количества тимоцитов в корковом и мозговом отделах, причем в последнем — до цифр ниже нормы. По-видимому, арглабин в дозе 10 мг/кг обладает способностью вызывать усиленную миграцию клеток из мозгового вещества. При микроскопическом исследовании селезенка богата клетками, относительно 7-х суток количество фолликулов и их размеры несколько меньше, реактивные центры в них плохо выражены. Удельная плотность Т-лимфоцитов в периартериальной зоне была несколько выше показателей препарата сравнения и арглабина в дозе 5 мг/кг.

Таким образом, на основании полученных данных можно предположить, что применение арглабина в дозе 10 мг/кг купировало воспалительные процессы, а также способствовало усилению процессов регенерации в эндометрии матки. Терапевтический эффект арглабина в дозе 10 мг/кг сопоставим с эффектом ти-малина. Можно считать, что в обоих случаях происходят аналогичные по скорости и объему процессы стихания воспалительных явлений и регенерации эндометрия. Морфологические исследования селезенки показали, что арглабин в дозе 10 мг/кг стимулировал отток Т-лимфоцитов из Т-зависимой периартериаль-ной зоны и стимулировал процессы фагоцитоза, в связи с чем мы наблюдали приток макрофагов и увеличение объема лимфоцитарно-макрофагальных инфильтратов в красной пульпе. Арглабин в дозе 10 мг/кг действует достаточно эффективно на центральное звено иммуногенеза, снижая содержание тимоцитов в корковом и мозговом веществах долек тимуса.

ЛИТЕРАТУРА

1. Абшъдаева А. Ж., Жангабылов Н. С., Пак Р. Н„ Адекеное С. М. Противовоспалительные, противоопу-

холевые и цитотоксические свойства сесквитерпено-вого лактона арглабина. В кн.: Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения. — СПб., 2002. — С. 333-335.

2. Воробьев А. А. Иммуномодуляторы: принципы классификации и стратегия применения в медицине И Вестник РАМН. — 2003. — № 4. — С. 3-6.

3. Дергачева Т. И, Шурлыгина А. В., Старкова Е. В. Субпопуляционный состав лимфоцитов регионарных лимфатических узлов и селезенки при экспериментальном воспалении внутренних половых органов у крыс-самок // Иммунология. — 2000. — № 5. — С. 17-19.

4. Старкова Е. П. Экспериментальный аллергический эндометрит // Здравоохранение Белоруссии. — 1987.—№8. —С. 60-61.

5. Хэм А., КормакД. Гистология. — М., 1983. — Т.

2. —254 с.

6. Abil’daeva A. J., Рак R. N., Adekenov S. М. Assessment for the effect arglabin NBA-test of blood phagocytes // 5th International symposium on the chemistry of natural compounds. — Tashkent, 2003. — C. 291.