Конструирование и внедрение в практику нового препарата для генной диагностики холеры

Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.

Инфекция и иммунитет

массой 2,5—3 кг разделены на 3 группы. Кроликов группы I иммунизировали монофагом с 0,5% биополимера, группы II — монофагом с ПАФ, группы III (контроль) — только монофагом. Динамику накопления антител определяли в реакции нейтрализации с антигеном-монофагом в концентрации пх107—пх108

Специфическая активность сывороток для I и II группы составила 1:600 и 1:500 соответственно. Активность сывороток без адъюванта, составила 1:300. Все полученные сыворотки были высокоспецифичны — не проявляли нейтрализующей активности в отношении других монофагов, входящих в состав бактериофага ctx-. Однако при применении полного адъюванта Фрейнда у всех животных (100%) на месте введения развивались глубокие дефекты кожного покрова и мышечной ткани, что увеличило срок иммунизации на одну неделю. Введение биополимера не приводило к негативным реакциям.

Выводы. Результаты исследований свидетельствуют о целесообразности использования адъю-вантов для получения высокоактивных сывороток к бактериофагам в низкой концентрации. При этом предпочтение отдается низкомолекулярному ацети-лированному биополимеру, который являясь менее реактогенным, позволяет получать активные антифаговые сыворотки.

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ЭТИОЛОГИЧЕСКОЙ РАСШИФРОВКИ ВСПЫШЕК ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ В РЕСПУБЛИКЕ ДАГЕСТАН

Э.Я. Омариева1, А.В. Милихина2

Управление Роспотребнадзора по Республике Дагестан; 2ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Дагестан», г. Махачкала

В последние годы расширились возможности использования современных методов исследования, в том числе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, при расшифровке этиологии вспышек острых кишечных инфекций и пищевых отравлений бактериальной и вирусной этиологии.

В 2011 г. (с 17 по 19 октября) зарегестрирована вспышка пищевой токсикоинфекции в производственной столовой аэропорта «Уйташ» в Республике Дагестан с числом пострадавших — 37 человек. Исследования проведены в соответствии с МУ 4.2.2746-10 «Порядок применения молекулярно-генетических методов при обследовании очагов острых кишечных инфекций с групповой заболеваемостью» методом ПЦР в режиме реального времени с использованием тест систем ООО ИнтерЛабСервис «Ампли-СенсОКИ-скрин—Fl» и для выявления патогенов в продуктах: «Ампли-Сенс Salmonella spp.—Fl.», «Ампли-Сенс Campilobacter spp.—Fl», «Ампли-Сенс Shigella spp. и EIEC—Fl», а также бактериологическим методом.

Всего исследовано 37 проб фекалий от больных, в том числе от 6 работников пищеблока, 17 проб продуктов, отобранных в очаге отравления, и 30 смывов с оборудования пищеблока столовой.

Скрининговые ПЦР-исследования показали следующие результаты. У 29 больных, у 4 сотрудников столовой в фекалиях и промывных водах обнаружена ДНК сальмонеллы (89,2%). Смывы с тушек кур (2 пробы), замороженный компот, хранивший-

ся вместе с тушками кур (17,6%), а также 2 смыва с разделочных досок пищеблока (6,7%) также дали положительные результаты ПЦР-исследований на сальмонеллы. В последующем, в бактериологической лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Дагестан» выделены и идентифицированы культуры Salmonella enteritidis. Региональный центр по диагностике ОКИ, ФГУН ЦНИИЭ, подтвердил полученные результаты исследований и определил принадлежность всех выделенных от больных и из внешней среды культур Salmonella enteritidis к фаготипу 1.

Вспышка пищевой токсикоинфекции в производственной столовой аэропорта «Уйташ» показала, что использование метода ПЦР позволяет в течение 5 часов ориентировочно расшифровать этиологию вспышки и упростить бактериологические исследования по выделению и идентификации культур.

КОНСТРУИРОВАНИЕ И ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ НОВОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ГЕННОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ

H.А. Осина, Т.В. Бугоркова, В.Е. Куклев,

А.С. Абдрашитова, И.В. Шульгина, О.А. Лобовикова, С.А. Щербакова, В.В. Кутырев

ФКУЗ Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», г. Саратов

Одним из перспективных направлений в совершенствовании генной диагностики холеры является разработка новых препаратов, направленных не только на детекцию эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов в биологическом материале и объектах окружающей среды, но и одновременно на характеристику вибрионов по таксономическому положению (принадлежность к О1, О139 серогруп-пам, биовар).

Нами сконструирован «Набор реагентов для выявления и ускоренной идентификации ДНК Vibrio cholerae методом мультилокусной полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов (Ген Vibrio cholerae — идентификация — РЭФ)», который может быть использован:

I. для определения эпидемической значимости выделенных культур холерных вибрионов; 2. для дифференцирования V. cholerae О1 серогруппы классического и эльтор биоваров; 3. для идентификации V. cholerae О139 серогруппы; 4. для индикации возбудителей холеры в биологическом материале и объектах окружающей среды. Для решения первой задачи предусмотрено проведение амплификации с реакционной смесью «ctx-tcp», содержащей праймеры, комплементарные ctxA и tcpA генам, второй задачи — с реакционной смесью «О1-биовар», включающей праймеры, подобранные на основе wbeN и hlyA генов, третьей — с реакционной смесью «О139», в состав которой входят праймеры фланкирующие фрагмент wbfR гена, а для последней — со всеми реакционными смесями, но в отдельных пробирках.

С целью внедрения набора в практику здравоохранения были проведены его технические и медицинские испытания. Установлено, что чувствительность препарата при исследовании чистых культур составила 1 х 104 м.к./мл в 100% случаях, 1 х 103 м.к./мл в 95,7% случаях, 1 х 102 м.к./мл в 50% случаях; при исследовании искусственно контаминированных проб

2012, Т. 2, № 1-2

Современное лабораторное обеспечение.

биологического материала и объектов окружающей среды — 1 х 104 м.к./мл в 100% случаях, 1 х 103 м.к./ мл в 90% случаях; специфичность — 100%; воспроизводимость — 100%. В соответствии с полученными результатами набор реагентов «Ген Vibrio cholerae — идентификация — РЭФ» может быть рекомендован для внедрения в практику здравоохранения.

Работа выполнена в рамках НИР «Разработка современных средств диагностики геморрагической лихорадки Денге, трахомы, лепры, гельминтозов и других забытых тропических болезней, актуальных для стран Центральной Азии (2009—2012 гг.)».

ОСТРЫЕ КИШЕЧНЫЕ ИНФЕКЦИИ СРЕДИ НАСЕЛЕНИЯ СЕВЕРНОГО АДМИНИСТРАТИВНОГО ОКРУГА ГОРОДА МОСКВЫ

Е.М. Осипова, Л.В. Черкасова

Филиал ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» в САО г. Москвы, Москва

Актуальность проблемы острых кишечных инфекций (ОКИ) обусловлена тем, что данная группа инфекционных заболеваний устойчиво сохраняет одно из ведущих мест среди инфекционной заболеваемости населения округа, а также в последние годы имеет тенденцию к росту.

Острые кишечные инфекции наносят не только ущерб здоровью людей, но и существенный экономический ущерб. Так, только за 2010 год в округе было израсходовано более 119 млн рублей на лечение больных острыми кишечными заболеваниями, ежегодно регистрируются и летальные случаи от кишечных инфекций.

По данным последних лет (2005—2010 гг.) в структуре инфекционной заболеваемости (без гриппа и ОРЗ) населения САО острые кишечные инфекции составляют от 16,5% (2005 г.) до 41% (2010 г.) среди совокупного населения и от 12,7% (2005 г.) до 34,0% (2008 г.) и имеют тенденцию к увеличению, как среди совокупного населения, так и детского.

Высокий уровень заболеваемости населения округа характерен для большинства нозологических форм из группы кишечных инфекций, причем уровень таких заболеваний, как сальмонел-лез, острые кишечные инфекции установленной и неустановленной этиологии, выше по сравнению с московскими показателями, как среди совокупного населения, так и особенно детского.

Среди острых кишечных инфекций от 75,1 до 80,7% как у взрослых, так и у детей приходится на ОКИ неустановленной этиологии; 7,3—16,7% — на ОКИ установленной этиологии. Причем, если среди совокупного населения ОКИ установленной этиологии составляют от 7,3 до 9,8%, то среди детей от 13,5 до 16,7%. Наибольший вес в этиологической структуре ОКИ установленной этиологии составляет вирусная инфекция, среди которой преобладает ротавирусная инфекция. До 90% этой инфекции регистрируется у детей от 1 года до 6 лет включительно.

Как показывает корреляционный анализ, заболеваемость жителей округа острыми кишечными инфекциями связана с санитарным состоянием пищевых объектов округа и качеством реализуемых в них пищевых продуктов, соблюдением дезинфекционного режима на предприятиях.

РАССЛЕДОВАНИЕ ВСПЫШКИ ПТИ

Н.А. Остапенко1, Р.М. Батыршин1, М.Г. Соловьева1, О.Д. Шутко2, И.И. Козлова2

Управление Роспотребнадзора по Ханты-Мансийскому автономному округу-Югре, г. Ханты-Мансийск; ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Ханты-Мансийском автономном округе-Югре», г. Ханты-Мансийск

В профилактике вспышек инфекционных заболеваний важную роль играет своевременная расшифровка патогена, вызвавшего заболевание. В Ханты-Мансийском автономном округе-Югре ежегодно регистрируется 30 до 40 случаев групповых заболеваний с числом пострадавших до 600 человек. Этиологияпочти 20% вспышек остается не установленной, что не позволяет установить причины отравления и соответственно провести профилактическую работу.

В г. Ханты-Мансийске 14 января 2012 г. среди учащихся одной из школ зарегистрировано 70 случаев пищевой токсикоинфекции. В клинической картине доминировали головная боль, схваткообразные боли в животе, рвота, у части детей — повышение температуры тела до 38 градусов и жидкий стул. Дети почувствовали себя плохо на уроке, через 20—40 минут после школьного завтрака. Были госпитализированы в инфекционное отделение 30 человек, остальные получали амбулаторное лечение. Заболевание протекало в легкой форме, через день все дети были выписаны с диагнозом «ПТИ, вызванное стафилококком». Диагноз был установлен на основании клинической картины и обнаружения в промывных водах 15 детей золотистого стафилококка.

В ходе проведенного расследования с применением когортного метода, установлено, что причиной отравления явилось употребление в пищу молочных глазированных сырков, выданных детям на завтрак (пораженность детей, употреблявших сырок в 5,3 раза выше, чем не употреблявших, хи-квадрат — 29,5). При лабораторных исследованиях, проведенных на пищеблоке, золотистый стафилококк обнаружен в суточных пробах и полуфабрикатах. В сырках, подозреваемых в качестве фактора передачи, обнаружена высокая концентрация БГКП, но стафилококк не выделен.

Пробы пищевых продуктов, а также культуры стафилококка, выделенные от больных, были направлены в ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора (г. Оболенск). В результате проведенного анализа установлено, что между штаммами, выделенными от 13 больных (10 генотипов) отсутствует генетическое родство. В глазированных сырках обнаружены значительные концентрации энте-робактерий — от 2,7 х 104 до 1,22 х 105 КОЕ/грамм. Таким образом, роль стафилококка как этиологической причины вспышки была исключена.

Согласно заключению ФБУН ГНЦ ПМБ «возможной причиной заболевания учащихся явилось токсическое действие эндотоксина (ЛПС), образовавшегося при лизисе большого количества бактериальных клеток энтеробактерий, в первую очередь E. coli, в желудке и последующим их всасыванием в тонком кишечнике».

Полученные результаты свидетельствуют о грубых нарушениях как в процессе производства, так и хранения указанного продукта. Таким образом, участие в эпидемиологическом расследовании