ГЕТЕРОДИМЕРНЫЙ БЕЛОК IL-15 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ

1. Гетеродимерный белок IL (интерлейкин)-15, содержащий:
белок (I) и белок (II),
где указанный белок (I) пересобран и образован IL-15 или его вариантом, с первым вариантом Fc,
указанный белок (II) представляет собой второй вариант Fc или пересобран и образован IL-15Rα или его вариантом, со вторым вариантом Fc,
белок (I) и белок (II) образуют стабильный гетеродимерный белок посредством взаимодействия между первым вариантом Fc и вторым вариантом Fc.
2. Гетеродимерный белок IL-15 по п. 1, где последовательность IL-15 представляет собой SEQ ID NO: 1.
3. Гетеродимерный белок IL-15 по п. 1, где белок (II) представляет собой второй вариант Fc.
4. Гетеродимерный белок IL-15 по п. 1, где белок (II) пересобран и образован IL-15Rα или его вариантом, со вторым вариантом Fc.
5. Гетеродимерный белок IL-15 по п. 1, где вариант IL-15Rα представляет собой участок внеклеточного домена IL-15Rα или его функциональный фрагмент, где функциональный фрагмент предпочтительно представляет собой укороченную форму участка внеклеточного домена IL-15Rα, содержащую от 65 до 120 аминокислот, более предпочтительно укороченную форму, содержащую от 65 до 102 аминокислот.
6. Гетеродимерный белок IL-15 по п. 1, где последовательность варианта IL-15Rα выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2-7, более предпочтительно выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3-7.
7. Гетеродимерный белок IL-15 по п. 1, где:
первый вариант Fc выбран из Fc, модифицированного с образованием Knob, и Fc, модифицированного с образованием Hole; или второй вариант Fc выбран из Fc, модифицированного с образованием Hole, и Fc, модифицированного с образованием Knob;
когда первый вариант Fc представляет собой Fc, модифицированный с образованием Knob, второй вариант Fc представляет собой Fc, модифицированный с образованием Hole; или
когда второй вариант Fc представляет собой Fc, модифицированный с образованием Knob, первый вариант Fc представляет собой Fc, модифицированный с образованием Hole;
предпочтительно первый вариант Fc и второй вариант Fc связаны с С-концом IL-15 и IL-15Rα.
8. Гетеродимерный белок IL-15 по п. 1, где последовательность первого варианта Fc выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 29; и последовательность второго варианта Fc выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 29.
9. Гетеродимерный белок IL-15 по п. 1, где последовательность белка (I) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 14-17, предпочтительно SEQ ID NO: 14; последовательность белка (II) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18-25 и 34-37, предпочтительно выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23 и 34-37, более предпочтительно выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 34-37.
10. Гетеродимерный белок IL-15 по п. 1, где последовательность белка (I) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 30-31; последовательность белка (II) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 32-33.
11. Гетеродимерный белок IL-15 по п. 1, выбранный из группы, состоящей из следующих димерных белков 3-17, где димерные белки 3-17 пересобраны и образованы соответствующим белком (I) и белком (II), как показано ниже:
№
Белок (I)
Белок (II)
3
IL-15-Fc-Knob (SEQ ID No. 14)
Fc-Hole (SEQ ID No. 27)
4
IL-15-Fc-Hole (SEQ ID No. 15)
Fc-Knob (SEQ ID No. 26)
5
Fc-Knob-IL-15 (SEQ ID No. 16)
Fc-Hole (SEQ ID No. 27)
6
Fc-Hole-IL-15 (SEQ ID No. 17)
Fc-Knob (SEQ ID No. 26)
7
IL-15-Fc-Knob (SEQ ID No. 14)
IL-15Rα ECD-Fc-Hole (SEQ ID No. 19)
8
IL-15-Fc-Hole (SEQ ID No. 15)
IL-15Rα ECD-Fc-Knob (SEQ ID No. 18)
9
Fc-Knob-IL-15 (SEQ ID No. 16)
Fc-Hole-IL-15Rα ECD (SEQ ID No. 21)
10
Fc-Hole-IL-15 (SEQ ID No. 17)
Fc-Knob-IL-15Rα ECD (SEQ ID No. 20)
11
IL-15-Fc-Knob (SEQ ID No. 14)
IL-15Rα-sushi(77)-Fc-Hole (SEQ ID No. 23)
12
Fc-Knob(M)-IL-15 (SEQ ID No. 30)
Fc-Hole(M)-IL-15Rα-sushi(65) (SEQ ID No. 32)
13
IL-15-Fc-Knob(M) (SEQ ID No. 31)
IL-15Rα-sushi(65)-Fc-Hole(M) (SEQ ID No. 33)
14
IL-15-Fc-Knob (SEQ ID No. 14)
IL-15Rα-sushi(73)-Fc-Hole (SEQ ID No. 34)
15
IL-15-Fc-Knob (SEQ ID No. 14)
IL-15Rα-sushi(65)-Fc-Hole (SEQ ID No. 35)
16
IL-15-Fc-Knob (SEQ ID No. 14)
IL-15Rα-sushi(86)-Fc-Hole (SEQ ID No. 36)
17
IL-15-Fc-Knob (SEQ ID No. 14)
IL-15Rα-sushi(102)-Fc-Hole (SEQ ID No. 37)
12. Нуклеиновая кислота, кодирующая гетеродимерный белок IL-15 по любому из пп. 1-11.
13. ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 12.
14. Клетка-хозяин трансформированная указанным ДНК-вектором по п. 13.
15. Способ получения гетеродимерного белка IL-15 по любому из пп. 1-11, включающий:
культивирование клетки-хозяина по п. 14 в условиях, достаточных для экспрессии гетеродимерного белка IL-15 по любому из пп. 1-11, экспрессию и очистку гетеродимерного белка IL-15.
16. Фармацевтическая композиция, содержащая гетеродимерный белок IL-15 по любому из пп. 1-11 и фармацевтически приемлемый эксципиент, разбавитель или носитель.
17. Направленная молекула белка, содержащая гетеродимерный белок IL-15 по любому из пп. 1-11.
18. Способ стимуляции или ингибирования иммунного ответа у млекопитающего, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества гетеродимерного белка IL-15 по любому из пп. 1-11, или фармацевтической композиции по п. 16, или направленной молекулы белка по п. 17.
19. Применение гетеродимерного белка IL-15 по любому из пп. 1-11, или фармацевтической композиции по п. 16, или направленной молекулы белка по п. 17 для получения лекарственного средства для лечения опосредованных IL-15 заболеваний или расстройств.
20. Применение по п. 19, где:
заболевание или расстройство выбрано из группы, состоящей из инфекционного заболевания, рака, заболевания крови, воспалительного заболевания и аутоиммунного заболевания;
рак выбран из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака кожи, лимфомы, почечно-клеточной карциномы, рака печени, рака легкого, рака желудка и рака молочной железы;
инфекционное заболевание выбрано из группы, состоящей из инфекции вируса оспы, инфекции вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), бактериальной инфекции, грибковой инфекции и инфекции вируса гепатита В (HBV);
заболевание крови выбрано из группы, состоящей из анемии, острого миелоидного лейкоза, миелодиспластического синдрома и Т-клеточного лейкоза больших зернистых лимфоцитов;
аутоиммунное заболевание выбрано из группы, состоящей из рассеянного склероза, псориаза, ревматоидного артрита, гастрита и воспаления слизистой оболочки.
21. Применение по п. 19, где гетеродимерный белок IL-15 по любому из пп. 1-11, или фармацевтическую композицию по п. 16, или направленную молекулу белка по п. 17 вводят в комбинации с низкомолекулярным ингибитором или антителом, при этом низкомолекулярный ингибитор выбран из алкилирующего средства, а антитело выбрано из моноклонального антитела, более предпочтительно выбрано из антитела к CD20, PD1, PDL1 и Her2.
22. Применение белкового комплекса IL-15 по любому из пп. 1-11, или фармацевтической композиции по п. 16, или направленной молекулы белка по п. 17 для получения лекарственного средства для клеточной иммунотерапии, в частности, для получения лекарственного средства для иммунотерапии опухоли с помощью дендритных клеток (DC), цитокин-индуцированных киллеров (CIK), CIK, культивированных в присутствии дендритных клеток (DC-CIK), усиленных цитокин-индуцированных киллеров (ECIK), натуральных киллеров (NK), ракового антигена модифицированных Т-клеток (CAS-T), биспецифических антител модифицированных Т-клеток (BiAb-T), нативного T-клеточного рецептора модифицированных Т-клеток (TCR-T) и химерного антигенного рецептора модифицированных Т-клеток (CAR-T).