СОСТАВ ДЛЯ ВВЕДЕНИЯ РНК

1. Фармацевтическая композиция, включающая:
(a) одноцепочечную РНК; и
(b) полиалкиленимин.
2. Композиция, включающая:
(a) одноцепочечную РНК; и
(b) полиалкиленимин,
для применения в качестве лекарственного препарата.
3. Композиция по п. 1 или 2, в которой молярное отношение числа атомов азота (N) в полиалкиленимине к числу атомов фосфора (P) в одноцепочечной РНК (соотношение N:P) составляет от 2,0 до 15,0, предпочтительно от 6,0 до 12,0.
4. Композиция, включающая:
(a) одноцепочечную РНК; и
(b) полиалкиленимин,
причем молярное отношение числа атомов азота (N) в полиалкиленимине к числу атомов фосфора (P) в одноцепочечной РНК (соотношение N:P) составляет от 2,0 до 15,0, предпочтительно от 6,0 до 12,0.
5. Композиция по любому из пп. 1-4, в которой ионная сила составляет 50 мМ или меньше, предпочтительно при этом концентрация одновалентных катионных ионов составляет 25 мМ или меньше, а концентрация двухвалентных катионных ионов составляет 20 мкМ или меньше.
6. Композиция, включающая:
(a) одноцепочечную РНК; и
(b) полиалкиленимин,
причем ионная сила составляет 50 мМ или меньше.
7. Композиция по п. 6, в которой концентрация одновалентных катионных ионов составляет 25 мМ или меньше, а концентрация двухвалентных катионных ионов составляет 20 мкМ или меньше.
8. Композиция по любому из пп. 1-7, которая предназначена для внутримышечного введения типа внутримышечной инъекции.
9. Композиция по любому из пп. 1-8, в которой одноцепочечная РНК и полиалкиленимин находятся в полиплексных частицах.
10. Композиция по любому из пп. 1-9, в которой полиалкиленимин имеет следующую общую формулу (I):
,
где R означает Н, ацил или группу по следующей общей формуле (II):
,
1
где R означает Н или группу по следующей общей формуле (III):
,
n, m и l выбраны независимо из целых чисел от 2 до 10; а
2
7
5
p, q и r - целые числа, причем сумма p, q и r такова, что средняя молекулярная масса полимера составляет от 1,5×10 до 10 Да, предпочтительно от 5000 до 10 Да, более предпочтительно от 10 000 до 40 000 Да, более предпочтительно от 15 000 до 30 000 Да, еще более предпочтительно от 20 000 до 25 000 Да.
11. Композиция по п. 10, в которой n, m и l выбраны независимо из 2, 3, 4 и 5, предпочтительно из 2 и 3.
1
12. Композиция по п. 10 или 11, в которой R означает H.
13. Композиция по любому из пп. 10-12, в которой R означает H или ацил.
14. Композиция по любому из пп. 1-13, в которой полиалкиленимин включает полиэтиленимин и/или полипропиленимин, предпочтительно полиэтиленимин.
15. Композиция по любому из пп. 1-14, в которой по меньшей мере 92% атомов N в полиалкиленимине являются протонируемыми.
16. Композиция по любому из пп. 1-15, дополнительно содержащая одну или несколько добавок.
17. Композиция по п. 16, в которой одна или несколько добавок выбраны из группы, состоящей из буферных веществ, сахаридов, стабилизаторов, криопротекторов, лиопротекторов и хелатирующих средств.
18. Композиция по п. 17, в которой буферные вещества включают по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислоты (HEPES), 3-морфолино-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (MOPSO), буферов на основе уксусной кислоты, ацетата и их аналогов, буферов на основе фосфорной кислоты и фосфата и буферов на основе лимонной кислоты и цитрата.
19. Композиция по п. 17 или 18, в которой сахариды включают по меньшей мере один, выбранный из группы, состоящей из моносахаридов, дисахаридов, трисахаридов, олигосахаридов и полисахаридов, предпочтительно из глюкозы, трегалозы и сахарозы.
20. Композиция по любому из пп. 17-19, в которой криопротекторы включают по меньшей мере один, выбранный из группы, состоящей из таких гликолей, как этиленгликоль, пропиленгликоль и глицерин.
21. Композиция по любому из пп. 17-20, в которой хелатирующее средство включает ЭДТА.
22. Композиция по любому из пп. 17-21, в которой липиды включают по меньшей мере один, выбранный из группы, состоящей из катионных липидов, нейтральных липидов и анионных липидов.
23. Композиция по любому из пп. 1-22, в которой композиция включает забуференную HEPES глюкозу (HBG) или забуференную HEPES трегалозу (HBT).
24. Композиция по любому из пп. 9-23, в которой z-средний размер частиц при измерении методом динамического рассеяния света составляет менее 200 нм, предпочтительно менее 150 нм и более предпочтительно менее 100 нм, а/или индекс полидисперсности частиц при измерении методом динамического рассеяния света составляет менее 0,5, предпочтительно менее 0,3 и более предпочтительно менее 0,2.
25. Композиция по любому из пп. 9-24, в которой ζ-потенциал частиц составляет 20 мВ или больше, предпочтительно от 25 до 40 мВ.
26. Композиция по любому из пп. 23-25, в которой HBG включает 5% глюкозы (вес/объем) и 10 мМ HEPES, pH 7,1.
27. Композиция по любому из пп. 23-26, в которой HBT включает 10% трегалозы (вес/объем) и 10 мМ HEPES, pH 7,1.
28. Композиция по любому из пп. 9-27, в которой частицы являются нейтральными или положительно заряженными при физиологическом рН.
29. Композиция по любому из пп. 1-28, в которой одноцепочечная РНК представляет собой молекулу от 6000 до 15000 оснований, предпочтительно от 9000 до 12000 оснований.
30. Композиция по любому из пп. 1-29, в которой одноцепочечная РНК кодирует по меньшей мере один представляющий интерес белок.
31. Композиция по любому из пп. 1-30, в которой одноцепочечная РНК представляет собой репликон, предпочтительно самореплицирующуюся или самоамплифицирующуюся РНК.
32. Композиция по п. 31, в которой репликон может реплицироваться репликазой из альфавируса, причем репликон предпочтительно содержит 5′-последовательность распознавания репликации из альфавируса или её вариант и 3′-последовательность распознавания репликации из альфавируса или её вариант.
33. Композиция по любому из пп. 1-32, в которой одноцепочечная РНК содержит открытую рамку считывания, кодирующую представляющий интерес пептид или белок типа фармацевтически активного пептида или белка.
34. Композиция по любому из пп. 1-33 для применения в терапии.
35. Композиция по любому из пп. 1-34, которая представляет собой вакцинную композицию.
36. Применение композиции по любому из пп. 1-35 для введения РНК в клетки, в частности, для экспрессии РНК в клетках.
37. Применение по п. 36, в котором клетки представлены мышечными клетками.
38. Применение композиции по любому из пп. 1-35 для внутримышечного введения РНК.
39. Способ внутримышечного введения РНК, включающий стадию внутримышечного введения композиции по любому из пп. 1-35.
40. Замороженная, лиофилизованная или высушенная распылением композиция, включающая:
(a) одноцепочечную РНК; и
(b) полиалкиленимин,
причем композиция содержит криопротектор и/или лиопротектор, предпочтительно дисахарид типа трегалозы или полисахарид типа декстрана.
41. Композиция по п. 40, дополнительно содержащая хелатирующее средство типа ЭДТА.
42. Композиция по п. 40 или 41, которая получена из водной композиции, содержащей дисахарид в количестве 5-20% (вес/об.) и необязательно хелатирующее средство в концентрации от 80 мкМ до 10 мМ.
43. Композиция по п. 42, в которой водная композиция содержит трегалозу, HEPES и EDTA, как-то 10% трегалозы (вес/об.), 2,8 мМ HEPES, 80 мкМ EDTA, pH 7,1.
44. Водная композиция, получаемая путем оттаивания замороженной композиции по любому из пп. 40-43 либо восстановления лиофилизованной или высушенной распылением композиции по любому из пп. 40-43.
45. Способ получения замороженной, лиофилизованной или высушенной распылением композиции, включающий:
(i) приготовление водной композиции, содержащей одноцепочечную РНК, полиалкиленимин и криопротектор и/или лиопротектор, предпочтительно дисахарид типа трегалозы или полисахарид типа декстрана, и
(ii) замораживание, лиофилизацию или распылительную сушку композиции.
46. Способ по п. 45, в котором водная композиция дополнительно содержит хелатирующее средство типа ЭДТА.
47. Способ по п. 45 или 46, в котором водная композиция содержит дисахарид в количестве 5-20% (вес/об.) и необязательно хелатирующее средство в концентрации от 80 мкМ до 10 мМ.
48. Способ по любому из пп. 45-47, в котором водная композиция содержит трегалозу, HEPES и EDTA, как-то 10% трегалозы (вес/об.), 2,8 мМ HEPES, 80 мкМ EDTA, pH 7,1.
49. Применение криопротектора и/или лиопротектора, предпочтительно дисахарида типа трегалозы или полисахарида типа декстрана, для получения замороженной, лиофилизованной или высушенной распылением композиции, включающей:
(a) одноцепочечную РНК; и
(b) полиалкиленимин.
50. Применение по п. 49, в котором дисахарид используется в сочетании с хелатирующим средством типа ЭДТА.
51. Способ поточного изготовления РНК-полиплексных составов при помощи насосов непрерывного действия и смесительного устройства, в котором две водные жидкости смешиваются по каналам в миллиметровом или микрометровом диапазоне.