Кластогенный и анеугенный эффекты действия ионизирующего излучения в лимфоцитах периферической крови онкологических больных в ходе нейтронной терапии

РАМН в рамках интеграционного проекта СО РАМН «Молекулярно-генетические механизмы формирования и прогрессии рака молочной железы: разработка критериев риска, прогноза клинического течения и чувствительности к химиотерапии на основании выявления информативных маркеров опухоли и организма». По показаниям в предоперационном периоде больным проводилось по 2-4 курса неоадъю-вантной химиотерапии. Анализ профиля метилирования был выполнен с использованием метилочипа GoldenGate Cancer Panel I (Illumina, США), включающего 1505 CpG-динуклеотидов в 807 генах. Для формирования групп, сходных по профилю метилирования, был применен кластерный анализ. Для выявления дифференциально метилированных CpG-сайтов использовался t-критерий для независимых выборок с предварительной нормализацией данных. Дифференциально метилированные CpG-сайты классифицировали по биологическим функциям согласно базе данных Gene Ontology.

Результаты. При проведении кластерного анализа была выявлена группа образцов с высокой степенью сродства по профилю метилирования, в которой представленность тканей с доброкачественными пролиферативными процессами и метастазами была значимо выше, чем в остальной выборке (p<0,001). В вышеу-

помянутую группу попали все ткани с доброкачественными пролиферативными процессами и метастазами (кроме одного), а также по одному образцу с РМЖ и условным контролем. Все остальные ткани с РМЖ и морфологически нормальным эпителием были распределены по всей выборке и показали относительно слабое сходство по профилю метилирования. При проведении анализа с использованием ^критерия был выявлен 261 CpG-сайт, уровень метилирования которых обусловливал четкое выделение кластера образцов с доброкачественными пролиферативными процессами и метастазами (FDR<0,01). Дифференциальное метилирование в исследуемом кластере наблюдалось в группах генов, ответственных за чувствительность к эстрадиолу, регулирующих овуляцию, циклазную активность, транспорт через ионные каналы и др.

Выводы. Полученные результаты демонстрируют высокое сродство образцов с доброкачественными пролиферативными процессами и метастазами по профилю метилирования ДНК, что, в свою очередь, может свидетельствовать о значительной роли и общности эпигенетических модификаций в раннем формировании клонов клеток с фенотипом доброкачественных пролиферативных процессов и метастазов.

КЛАСТОГЕННЫЙ И АНЕУГЕННЫЙ ЭФФЕКТЫ ДЕЙСТВИЯ

ионизирующего излучения в лимфоцитах

ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ В ХОДЕ НЕЙТРОННОЙ ТЕРАПИИ

Е.В. СМОЛЬНИКОВА1, А.А. МЕЛЬНИКОВ2, С.А. ВАСИЛЬЕВ3

ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет», г. Томск1, НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск2,

НИИ медицинской генетики СО РАМН, г. Томск3

Актуальность. Одним из перспективных направлений в лечении онкологических заболеваний является терапия быстрыми нейтронами. При этом актуальной остается проблема лучевых повреждений нормальных тканей. Одним из способов оценки степени такого повреждения является анализ цитогенетических нарушений

в лимфоцитах периферической крови онкологических больных.

Цель исследования - определение влияния нейтронной терапии на цитогенетические повреждения в здоровых тканях онкологических больных.

Материал и методы. В исследовании

использовали лимфоциты периферической крови 10 больных раком молочной железы и 4 больных с опухолями околоушной слюнной железы в ходе терапии быстрыми нейтронами с энергией 6,3 МэВ по заданным схемам лечения с разовой очаговой дозой (РОД) от 1,4 до 2,4 Гр. Для проведения анализа использовался наиболее перспективный в настоящее время подход - микроядерный тест в комбинации с флуоресцентной гибридизацией in situ (FISH) с панцентромерными ДНК-зондами. Данный метод позволяет в рамках одного анализа оценивать как отставание ацентрических фрагментов (центромеро-негативные микроядра -MnC-), так и потерю целых хроматид/хромосом (центромеро-позитивные микроядра - MnC+) в лимфоцитах периферической крови человека. Схема проведения исследования позволила оценить анеугенные и кластогенные эффекты быстрых нейтронов как в рамках одной фракции воздействия, так и в ходе всего курса лечения.

Результаты. В рамках одной фракции была показана значимая зависимость частоты MnC-(R=0 ,928, p<0,001), и нуклеоплазматических мостов (R=0,595, p=0,0247), соответствующих дицентрическим хромосомам, от РОД. При оценке динамики хромосомных нарушений в ходе прохождения нейтронной терапии было обнаружено значимое повышение частоты MnC-

(Я=0,91, р<0,001), МпС+ ^=0,90, р<0,001) и нуклеоплазматических мостов ^=0,90, р<0,001) в зависимости от накопленной дозы.

Выводы. Показано, что кластогенные эффекты ионизирующего излучения (центромеронегативные микроядра и нуклеоплазматические мосты) напрямую зависят как от дозы облучения в рамках одной фракции, так и от накопленной дозы в ходе всего курса нейтронной терапии. При этом анеугенные эффекты (центромеропозитивные микроядра) зависели лишь от суммарной эффективной дозы, что позволяет предполагать повышение окислительного стресса и развитие воспалительного ответа в качестве непрямых механизмов, опосредующих воздействие ионизирующего излучения на нормальные ткани человека. Было показано, что как до облучения, так и после каждой фракции воздействия быстрыми нейтронами отношение МпС-/МпС+ составляло 1-1,5. Таким образом, воздействие быстрыми нейтронами одинаково влияет на уровень МпС- и МпС+ в лимфоцитах периферической крови онкологических больных. Обнаруженная зависимость фиксируемых параметров от РОД и СОД позволяет рассматривать микроядерный тест в качестве перспективного метода анализа степени генетических повреждений здоровых тканей в ходе нейтронной терапии.

влияние латерализации функций головного мозга

НА ИММУННЫЙ ОТВЕТ У БОЛЬНЫХ РАКОМ жЕЛУДКА

А.С. СТЕНИНА, И.Г. СОЛОВЬЕВА, Д.Н. ЕГОРОВ, В.С. КОжЕВНИКОВ, В.В. АБРАМОВ, Т.Я. АБРАМОВА

НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск.

Актуальность. Рак желудка занимает второе место в мире в структуре онкологической заболеваемости и смертности. Известно, что нервная система способна оказывать модулирующие влияние на канцерогенез. По мере развития нейроиммунологии появились данные о влиянии структурно-функциональной асимметрии полушарий головного мозга (ФМА) на формирование иммунного ответа при многих заболеваниях. Целью настоящего исследования являлось определение наличия сопряженности

параметров ФМА и иммунологических показателей у больных раком желудка.

Материал и методы. Обследованы 74 больных раком желудка в дооперационном периоде при госпитализации в онкологическое отделение № 2 МКБ № 1 г. Новосибирска. План обследования: 1) параметры ФМА (по 4 парным функциям с помощью опросного метода и функциональных проб); 2) определение иммунологических показателей в периферической крови: относительное содержание субпопуля-