ВАРИАНТЫ С FC-ФРАГМЕНТОМ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К FCRК И ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ, ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ, К ОДНОМУ РЕЦЕПТОРУ FC-ФРАГМЕНТА

1. Вариант исходного полипептида, содержащего Fc-фрагмент, причем указанный вариант обладает повышенной аффинностью к рецептору FcRn и повышенной аффинностью, по меньшей мере, к одному рецептору Fc (FcR), выбранному из FcyRI (CD64), FcγRIIIa (CD16a) и FcγRIla (CD32a), по сравнению с таковой у исходного полипептида, отличающийся тем, что включает:
(i) четыре мутации 334N, 352S, 378V и 397M; и
(ii), по меньшей мере, одну мутацию, выбранную из 434Y, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T и 389K;
где нумерация соответствует нумерации индекса EU или эквиваленту в Kabat.
2. Вариант по п. 1, дополнительно включающий, по меньшей мере, одну мутацию (iii) в Fc-фрагменте, выбранную из Y296W, K290G, V240H, V240I, V240M, V240N, V240S, F241H, F241Y, L242A, L242F, L242G, L242H, L242I, L242K, L242P, L242S, L242T, L242V, F243L, F243S, E258G, E258I, E258R, E258M, E258Q, E258Y, V259C, V259I, V259L, T260A, T260H, T260I, T260M, T260N, T260R, T260S, T260W, V262S, V263T, V264L, V264S, V264T, V266L, S267A, S267Q, S267V, K290D, K290E, K290H, K290L, K290N, K290Q, K290R, K290S, K290Y, P291G, P291Q, P291R, R292I, R292L, E293A, E293D, E293G, E293M, E293Q, E293S, E293T, E294A, E294G, E294P, E294Q, E294R, E294T, E294V Q295I, Q295M, Y296H, S298A, S298R, Y300I, Y300V, Y300W, R301A, R301M, R301P, R301S, V302F, V302L, V302M, V302R, V302S, V303S, V303Y, S304T, V305A, V305F, V305I, V305L, V305R и V305S,
где нумерация соответствует нумерации индекса EU или эквиваленту в Kabat,
3. Вариант по п. 1 или 2, отличающийся тем, что он включает:
(i) четыре мутации 334N, 352S, 378V и 397M;
(ii), по меньшей мере, одну мутацию, выбранную из 434Y, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T и 389K; и
(iii) по меньшей мере, одну мутацию, выбранную из K290G и Y296W,
где нумерация соответствует нумерации индекса EU или эквиваленту в Kabat.
4. Вариант по одному из пп. 1-3, имеющий повышенную аффинность к рецептору FcRn по сравнению с аффинностью исходного полипептида с отношением, по меньшей мере, равным 2, предпочтительно более 5, более предпочтительно более 10, еще более предпочтительно более 15, особенно предпочтительно более 20, даже более особенно предпочтительно более 25, наиболее предпочтительно более 30.
5. Вариант по одному из пп. 1-4, имеющий повышенную аффинность, по меньшей мере, к одному рецептору Fc (FcR), выбранному из рецепторов FcγRI (CD64), FcγRIIIa (CD16a) и FcγRIIα (CD32a), по сравнению с таковой у исходного полипептида, с отношением, по меньшей мере, равным 2, предпочтительно более 5, более предпочтительно более 10, еще более предпочтительно более 15, особенно предпочтительно более 20, даже более особенно предпочтительно более 25, наиболее предпочтительно более 30.
6. Вариант по одному из пп. 1-5, отличающийся тем, что он продуцируется в эпителиальных клетках молочной железы трансгенных млекопитающих, не являющихся человеком.
7. Вариант по одному из пп. 1-6, отличающийся тем, что он продуцируется в трансгенных животных, отличных от человека, предпочтительно у трансгенных млекопитающих, отличных от человека.
8. Вариант по п. 7, отличающийся тем, что трансгенное животное, отличное от человека, представляет собой трансгенную козу.
9. Вариант по одному из пп. 1-8, отличающийся тем, что родительский полипептид содержит родительский Fc-фрагмент, который представляет собой Fc-фрагмент человека, предпочтительно Fc-фрагмент из IgG1 человека или IgG2 человека, более предпочтительно выбранный из последовательностей SEQ ID. NO: 1-10 и 14.
10. Вариант по одному из пп. 1-9, отличающийся тем, что выбран из выделенного Fc-фрагмента, последовательности, полученной из выделенного Fc-фрагмента, антитела, фрагмента антитела, включающего Fc-фрагмент, и гибридного белка, включающего Fc-фрагмент.
11. Вариант по одному из пп. 1-10, направленный против антигена, выбранного из опухолевого антигена, вирусного антигена, бактериального антигена, грибного антигена, токсина, мембранного или циркулирующего цитокина, мембранного рецептора.
12. Вариант по одному из пп. 1-11 для его применения в качестве лекарственного средства.
13. Вариант по одному из пп. 1-11 для его применения при лечении аутоиммунной или воспалительной патологии, предпочтительно выбранный из иммунологической тромбоцитопенической пурпуры, невромиелита зрительного нерва или болезни Девика и рассеянного склероза.
14. Фармацевтическая композиция, содержащая вариант по одному из пп. 1-13 и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый наполнитель.
15. Способ получения варианта исходного полипептида, содержащего Fc-фрагмент, причем указанный вариант, обладающий повышенной аффинностью к рецептору FcRn и повышенной аффинностью, по меньшей мере, к одному рецептору Fc (FcR), выбранному из рецепторов FcγRI (CD64), FcγRIIIa (CD16a) и FcγRIla (CD32a) по сравнению с таковой исходного полипептида, отличается тем, что включает:
(i) четыре мутации 334N, 352S, 378V и 397M; и
(ii), по меньшей мере, одну мутацию, выбранную из числа 434Y, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T и 389K;
где нумерация соответствует нумерации индекса EU или эквиваленту в Kabat, причем указанный способ включает экспрессию указанного варианта в эпителиальных клетках молочной железы трансгенных млекопитающих, не являющихся человеком, или указанный способ включает экспрессию указанного варианта в клетках млекопитающих в культуре.
16. Способ получения варианта исходного полипептида, содержащего Fc-фрагмент по п. 15, отличающийся тем, что указанный вариант дополнительно включает, по меньшей мере, одну мутацию (iii) в Fc-фрагменте, выбранную из числа Y296W, K290G, V240H, V240I, V240M, V240N, V240S, F241H, F241Y, L242A, L242F, L242G, L242H, L242I, L242K, L242P, L242S, L242T, L242V, F243L, F243S, E258G, E258I, E258R, E258M, E258Q, E258Y, V259C, V259I, V259L, T260A, T260H, T260I, T260M, T260N, T260R, T260S, T260W, V262S, V263T, V264L, V264S, V264T, V266L, S267A, S267Q, S267V, K290D, K290E, K290H, K290L, K290N, K290Q, K290R, K290S, K290Y, P291G, P291Q, P291R, R292I, R292L, E293A, E293D, E293G, E293M, E293Q, E293S, E293T, E294A, E294G, E294P, E294Q, E294R, E294T, E294V, Q295I, Q295M, Y296H, S298A, S298R, Y300I, Y300V, Y300W, R301A, R301M, R301P, R301S, V302F, V302L, V302M, V302R, V302S, V303S, V303Y, S304T, V305A, V305F, V305I, V305L, V305R и V305S,
где нумерация соответствует нумерации индекса EU или эквиваленту в Kabat.
17. Способ получения варианта полипептида, содержащего Fc-фрагмент по п. 15 или 16, включающий стадии:
а) получения последовательности ДНК, содержащей последовательность, кодирующую вариант, последовательность, кодирующую промотор казеина млекопитающего или промотор сыворотки млекопитающего, и последовательность, кодирующую сигнальный пептид, обеспечивающий секрецию указанного варианта;
b) введения последовательности ДНК, полученной в а), в эмбрион млекопитающего, не являющегося человеком, для получения трансгенного млекопитающего, не являющегося человеком, экспрессирующего вариант, кодируемый указанной последовательностью ДНК, полученной в а), в молочной железе; и
в) извлечения варианта в молоке, продуцированном трансгенным млекопитающим, не являющимся человеком, полученным на b).
18. Способ получения варианта полипептида, содержащего Fc-фрагмент, по одному из пп. 15-17, в котором трансгенное млекопитающее, отличное от человека, выбрано из крупного рогатого скота, свиней, коз, овец и грызунов, предпочтительно из козы, мыши, свиньи, кролика, овцы и коровы.
19. Способ получения варианта полипептида, содержащего Fc-фрагмент по п. 15 или 16, включающий стадии:
а) получения последовательности ДНК, кодирующей вариант;
b) введения последовательности ДНК, полученной в а), в клетки млекопитающих во транзиторной или стабильной культуре;
c) экспрессии варианта из клеток, полученных в b), и
d) извлечения варианта в культуральной среде.
20. Последовательность ДНК, содержащая ген, кодирующий вариант исходного полипептида, содержащий Fc-фрагмент, причем указанный вариант, обладающий повышенной аффинностью к рецептору FcRn и повышенной аффинностью, по меньшей мере, к одному рецептору Fc (FcR), выбранного из рецепторов FcγRI (CD64), FcγRIIla (CD16α) и FcγRIla (CD32α) относительно таковой у исходного полипептида, отличается тем, что включает:
(i) четыре мутации 334N, 352S, 378V и 397M; и
(ii), по меньшей мере, одну мутацию, выбранную из числа 434Y, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T и 389K;
где нумерация соответствует нумерации индекса EU или эквиваленту в Kabat, причем указанная последовательность ДНК необязательно включает последовательность, кодирующую сигнальный пептид, обеспечивающий секрецию указанного варианта.
21. Последовательность ДНК, содержащая ген, кодирующий вариант исходного полипептида, включающего Fc-фрагмент по п. 20, где указанный вариант дополнительно включает, по меньшей мере, одну мутацию (iii) в Fc-фрагменте, выбранную из числа Y296W, K290G, V240H, V240I, V240M, V240N, V240S, F241H, F241Y, L242A, L242F, L242G, L242H, L242I, L242K, L242P, L242S, L242T, L242V, F243L, F243S, E258G, E258I, E258R, E258M, E258Q, E258Y, V259C, V259I, V259L, T260A, T260H, T260I, T260M, T260N, T260R, T260S, T260W, V262S, V263T, V264L, V264S, V264T, V266L, S267A, S267Q, S267V, K290D, K290E, K290H, K290L, K290N, K290Q, K290R, K290S, K290Y, P291G, P291Q, P291R, R292I, R292L, E293A, E293D, E293G, E293M, E293Q, E293S, E293T, E294A, E294G, E294P, E294Q, E294R, E294T, E294V, Q295I, Q295M, Y296H, S298A, S298R, Y300I, Y300V, Y300W, R301A, R301M, R301P, R301S, V302F, V302L, V302M, V302R, V302S, V303S , V303Y, S304T, V305A, V305F, V305I, V305L, V305R и V305S,
где нумерация соответствует нумерации индекса EU или эквиваленту в Kabat.