Биохимический анализ печени лесных мышей (Apodemus uralensis), отловленных в зоне Восточно-Уральского радиоактивного следа

Вестник Томского государственного университета. Биология. 2014. № 2 (26). С. 161-171

УДК 574.2 + 577.121 + 539.1.047

н.А. орехова

Институт экологии растений и животных УрО РАН, г. Екатеринбург, Россия

Биохимический анализ печени лесных мышей (Apodemus uralensis), отловленных в зоне Восточно-Уральского радиоактивного следа

Работа выполнена при поддержке Программы ориентированных фундаментальных исследований между Институтами УрО РАН и госкорпорациями РФ (проект № 12-4-002-ЯЦ).

Проведен биохимический анализ на содержание воды, гликогена, общих липидов, ядерных и цитоплазматических белков, ДНК и РНК печени лесных мышей, отловленных на фоновой (контрольной) территории и в зоне влияния ВосточноУральского радиоактивного следа (ВУРС; результат Кыштымскойрадиационной аварии 1957 г. на Южном Урале). В изучаемых выборках не созревших сеголеток изменчивость массы печени (от 480 до 1 400 мг) и составляющих ее компонентов положительно взаимосвязана с массой тела (от 12 до 23 г) и определяется варьированием возраста животных (от 2 до 4 месяцев). К числу механизмов, лежащих в основе возрастных изменений органа на ВУРСе, следует отнести менее выраженное, чем в контроле, участие гликоген- и ДНК-синтетических процессов в увеличении массы печени, усиление ее гидратации, накопления цитоплазматических белков, липидов и РНК как признаков активизации тканеспецифического метаболизма и наличия функционально более зрелых форм клеток. Эффекты радиационного воздействия рассматриваются в связи с онтогенетической изменчивостью скорости роста и дифференцировки ткани, сформированной в рамках эпигенетических траекторий развития организма.

Ключевые слова: зона ВУРСа; Apodemus uralensis; биохимический анализ; печень; онтогенетическая изменчивость.

Введение

Оценка воздействия последствий радиоактивного загрязнения окружающей среды на живые организмы является важной комплексной задачей современной биологии и медицины в связи с появлением обширных территорий, пострадавших в результате крупных аварий, выбросов радиоактивных веществ на объектах ядерного топливного цикла и испытаний ядерного оружия. Исследования на мелких млекопитающих, обитающих на загрязненных территориях, могут послужить отправной точкой для экстраполяции данных наблюдений на физиологию человека.

Структурно-функциональные оценки состояния печени рассматриваются многими авторами как неспецифические интегральные показатели био-

www.joumal.tsu/biology

логического действия на организм различных неблагоприятных факторов [1, 2]. В работах последних лет [3-5] показана высокая чувствительность гепатоцитов к повреждающему воздействию малых доз радиации в природной среде обитания мелких млекопитающих. Между тем практически отсутствуют данные по модификации возрастных изменений этого органа животных в условиях радиоактивного загрязнения. Исходя из этого целью данного исследования явилось изучение структурно-функциональных особенностей ткани печени, формирующихся под влиянием радиационного фактора (зона Восточно-Уральского радиоактивного следа - ВУРС), с учетом возрастной гетерогенности особей в популяции.

Материалы и методики исследования

Объектом исследования послужила малая лесная мышь (Apodemus uralen-sis Pallas, 1811) как доминирующий вид в фауне мелких грызунов территории ВУРСа. Животные отловлены в августе - октябре 2002-2010 гг. на участке головной части ВУРСа (55°46’ с.ш., 60°52’ в.д.) с плотностью загрязнения почвы по 90Sr от 6740 до 16690 кБк/м2, расположенном в 13 км от эпицентра Кыштымской аварии, и сопредельном к нему фоновом участке (55°48’ с.ш., 60°00’ в.д.), принятом за контроль с уровнем 90Sr 43,7 кБк/м2 [6]. Расстояние между участками отлова по прямой составляет около 8 км; доля мигрантов по радиометрическим данным - от 0 до 18%, что подтверждает относительную изоляцию облучаемых популяций грызунов зоны ВУРСа [7].

В исследование включено 115 особей в возрасте от 2 до 4 месяцев, не созревших и не размножающихся в год своего рождения, отличающихся замедленными темпами роста и развития (II тип онтогенеза) с общей продолжительностью жизни 13-14 месяцев. Принадлежность зверьков к этой группировке определяли по массе тела, состоянию зубной и генеративной систем [8, 9].

Для анализа структурных компонентов ткани исследовали содержание в печени общих липидов, воды, ядерных и цитоплазматических белков, гликогена и нуклеиновых кислот (ДНК, РНК). Орган взвешивали, гомогенизировали в трис-HCl (0,025моль/л) буферном растворе (рН = 7,4), содержащем 0,175 моль/л хлорида калия. Из приготовленного гомогената извлекали нуклеиновые кислоты (РНК и ДНК) путем щелочного (0,6 моль/л KOH) и кислотного (0,5 моль/л НСЮ4) гидролизов [10], липиды - с помощью смеси (2:1) этанол : петролейный эфир [11], гликоген - путем щелочного гидролиза с последующей обработкой гидролизата этанолом [12]. Выделение ядерных и цитоплазматических белков проводили методом дифференциального центрифугирования [13] с модификацией [14]. Для учета содержания воды в органах навески тканей подвергали тепловой обработке в сушильном шкафу при 105°С [11]. Количественный анализ проводили колориметрическими и спектрометрическими методами по качественной реакции: общих липидов -

с фосфованилиновым реагентом [15]; белка - с органическим красителем кумасси бриллиантовый голубой G250 [16]; РНК и ДНК - с дифениламином [17]; гликогена - с йодным реактивом [18].

Статистическая обработка полученных данных и построение графиков выполнены в программе Statsoft STATISTICA for Windows 7.0 с использованием регрессионного, дисперсионного и дискриминатного анализов [19], статистическая значимость установлена по t-критерию Стьюдента при p < 0,05.

Результаты исследования и обсуждение

Масса тела в изучаемых выборках варьирует от 12 до 23 г, что связано, прежде всего, с одновременным присутствием на участках отлова представителей различных когорт (весенних, летних и осенних), различающихся календарным возрастом - от 2 до 4 месяцев. Регрессионный анализ указывает на прямую зависимость массы печени от массы тела животных как в контроле (R2 = 0,67;p < 10-5), так и на ВУРСе (R2 = 0,69;p < 105). Статистически значимое увеличение у животных зоны ВУРСа значения коэффициента b} уравнения регрессии (ВУРС: 68,4±6,1; контроль: 47,1±4,3), графически выражающееся повышением угла наклона кривой к оси абсцисс (рис. 1), свидетельствует о более высокой интенсивности роста органа на радиоактивно загрязненной территории с возрастанием степени отклонения от «нормы» по мере увеличения массы (возраста) животных.

Рис. 1. Зависимость массы печени от массы тела животных, отловленных на контрольной и радиоактивно загрязненной (ВУРС) территориях /

Fig. 1. Dependence of the liver weight from the body weight of the animals trapped on the control (Контроль) and radioactively polluted territories (ВУРС).

Mean value and 95% confidence interval

В качестве клеточно-тканевых механизмов, обусловливающих увеличение массы печени, авторами [20-22] рассматриваются процессы пролиферации гепатоцитов, их полиплоидия, а также увеличение цитоплазматического объема за счет гидратации и накопления в клетках резервных питательных веществ в виде гликогена и липидов.

Установленная зависимость содержания структурных компонентов печени от массы тела (рис. 2) указывает на особенности в механизмах увеличения массы органа у животных из зоны ВУРСа. По мере роста животных зоны ВУРСа содержание цитоплазматических белков, РНК, воды и общих липидов в печени увеличивается в большей степени, чем в контроле, что подтверждается при сравнении коэффициентов by уравнений регрессии (таблица: b контроль < b ВУРС). Менее выраженный вклад в возрастную изменчивость органа вносит содержание ДНК, гликогена и ядерных белков: bx контроль > b ВУРС.

Таким образом, более высокая интенсивность роста печени на загрязненной территории определяется, прежде всего, процессами гипертрофии цитоплазмы клеток за счет гидратации, накопления липидов и РНК. При этом менее выраженные по сравнению с контролем процессы биосинтеза ДНК и ядерных белков, гликогена свидетельствуют об ограничении участия пролиферации, полиплоидизации гепатоцитов и их гликоген-синтезирующей активности в увеличении массы печени.

Значение коэффициента b1 уравнений регрессии на базе зависимости содержания структурных компонентов печени (Y) от массы тела (X): результаты простой линейной регрессии Y = b+ bj • X /

Value of regression equations coefficient bv basing on dependence of the content of structural liver components (Y) from the body weight (X): results of simple linear regression Y = b0+ b; • X

Y Контроль / Control ВУРС / The EURT area

ь±ц t

Вода / Water 33,1±6,2 10,8 55,2±9,4 11,7

Цитоплазматические белки / Cytoplasmic proteins 5,5±1,1 9,8 12,0±1,4 15,7

Ядерные белки / Nucleoproteins 1,4±0,1 10,8 1,0±0,1 18,9

Гликоген / Glycogen 10,2±1,6 13,0 7,0±0,8 15,7

Общие липиды / Total lipids 1,8±0,5 7,0 5,2±0,8 11,9

ДНК/DNA 0,52±0,16 6,3 0,30±0,05 10,3

РНК/RNA 0,27±0,10 5,1 0,84±0,16 9,4

Примечание. В таблице приведено значение коэффициента bI его 95%-ный доверительный интервал (ц) /

Note. The table shows the value of the coefficient b its 95% confidence interval (ц).

Эти изменения отражают проявление у животных ВУРСа, согласно этапам онтогенеза [20-22], функционально более зрелых гепатоцитов, для ко-

Масса тела, г Масса тела, г

/Г ВУРС Л' Контроль

Рис. 2. Зависимость содержания структурных компонентов печени от массы тела животных, отловленных на контрольной и радиоактивно загрязненной (ВУРС) территориях /

Fig. 2. Dependence of the content of liver structural components (mg, on the ordinate axes) from the body weight (g, on the abscissa axis) of the animals trapped on the control and radioactively polluted territories: A - Water, mg/organ; B - Glycogen, mg/organ;

C - Cytoplasmic proteins, mg/organ; D - Total lipids, mg/organ;

E - Nucleoproteins, mg/organ; F - RNA, DNA, mg/organ

торых характерна более высокая насыщенность субклеточными компонентами в виде липидных капель, гидропических вакуолей, рибосомальных структур как результат активизации тканеспецифических функций. Рост отклонений от «нормы» по мере увеличения массы (возраста) животных (рис. 3) отражает значимость такого фактора, как время жизни организма в условиях радиоактивного загрязнения.

Рис. 3. Положение групп животных с различной массой тела (I, II, III) в пространстве двух дискриминантных канонических функций (DCF): 95%-ные эллипсоиды.

I - от 12,43 до 15,87 г; II - от 15,87 до 19,31 г; III - от 19,31 до 22,75 г. Дискриминантый анализ проведен по комплексу 7 исследованных биохимических показателей /

Fig. 3. Position of groups of animals with different body weight (I, II, III) in the space of two discriminant canonical functions (DCF): 95 percent ellipsoids.

I - 12.43-15.87 g; II - 15.87-19.31 g; III - 19.31-22.75 g.

Discriminant analysis was carried out basing on 7 studied biochemical parameters

Учитывая поливалентность грызунов с неспецифическим «триггер-механизмом» переключения развития со II типа онтогенеза на I тип, отличающийся укороченным (3-5 месяцев) жизненным циклом [8, 23], выявленные различия между контрольными и импактными животными следует рассматривать как онтогенетическую внутривидовую изменчивость в скорости роста и дифференцировки ткани [24].

Радиационное воздействие, требующее функционально-метаболической активации жизненно важных физиологических систем, обусловливает укороченный период становления дефинитивных структур органа и их фиксацию на более ранних, чем в контроле, этапах онтогенеза. Установленный ранее факт увеличения на BУРСе доли особей I тина онтогенеза [25] и собственные результаты характеризуют эффекты хронического облучения как эпигенетический механизм переключения развития грызунов на более короткий жизненный цикл.

Заключение

Проведенный биохимический анализ печени лесных мышей (Apodemus uralensis), отловленных на фоновой (контрольной) территории и в зоне влияния Bосточно-Уральского радиоактивного следа, позволил установить структурно-функциональные изменения органа, формирующиеся нод влиянием радиационного фактора. Печень не созревших сеголеток зоны BУРСа в возрасте от 2 до 4 месяцев и массой тела от І2 до 23 г характеризуется более высокой, по сравнению с контролем, интенсивностью роста, обусловленной усилением гидратации, накопления цитоплазматических белков, липидов и РНК как признаков активизации тканеспецифического метаболизма и наличия функционально более зрелых форм клеток. Менее выраженные процессы биосинтеза ДНК и ядерных белков, гликогена указывают на ограничение участия пролиферации, полиплоидизации гепатоцитов и их гликоген-синтезирующей активности в увеличении массы печени. При этом степень отклонения от «нормы» структурно-функциональных характеристик органа по мере увеличения массы (возраста) животных возрастает. Bыявленные эффекты радиационного воздействия следует рассматривать как эпигенетический механизм переключения развития грызунов на более короткий жизненный цикл, обусловливающий увеличение скорости роста и дифференцировки ткани.

Литература

1. Орлова Е.В., Балыкин М.В., Габитов В.Х. Структурные изменения в печени собак нри

адаптации к высокогорью // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. І997. Т. І2З, № 6. С. 7І4-7І7.

2. Нерсесова Л.С., Газарянц М.Г., Мкртчян З.С. и др. Bлияние ионизирующей радиации

на ферментные активности и состояние ядерно-ядрышкового аппарата гепатоцитов крыс // Радиационная биология. Радиоэкология. 20ІЗ. Т. 53, № І. С. 55-62.

3. Шишкина Л.Н., Материй Л.Д., Кудяшева А.Г. и др. Структурно-функциональные

нарушения в печени диких грызунов из районов аварии на Чернобыльской АЭС // Радиобиология. І992. Т. 32, № І. С. І9-29.

4. Ustinova A.A., Ryabinin V.E. Adaptation effects in the 70th generation of mice from radionuclide-polluted territories in the South Urals, RUSSIA // International Journal of Environmental Studies. 2003. Vol. 60, № 5. P 463-467.

5. МосквитинаН.С., КохоновЕ.В. Некоторые показатели состояния животных из разных

популяций красной полевки (Clethrionomys rutilus Pall.) Горного Алтая // Bестник Томского государственного университета. Биология. 20І2. № 2(18). С. І86-І9З.

6. Molchanova I.V., Pozolotina V.N., Karavaeva E.N. et al. Radioactive inventories within the

East-Ural radioactive state reserve on the Southern Urals // Radioprotection. 2009. Vol. 44, № 5. P. 747-757.

7. Любашевский Н.М., Стариченко В.И. Адаптивная стратегия популяций грызунов

при радиоактивном и химическом загрязнении среды // Радиационная биология. Радиоэкология. 2010. Т. 50, № 4. С. 405-413.

8. Оленев Г.В. Альтернативные типы онтогенеза цикломорфных грызунов и их роль в

популяционной динамике: (экологический анализ) // Экология. 2002. № 5. С. 341-350.

9. Колчева Н.Е. Стертость зубов как критерий возраста малой лесной мыши при анализе

возрастной структуры популяции // Вестник Оренбургского государственного университета. 2009. Спецвыпуск. С. 77-80.

10. ТрудолюбоваМ.Г. Количественное определение РНК и ДНК в субклеточных фракциях клеток животных // Современные методы в биохимии / под ред. В.Н. Ореховича. М. : Медицина, 1977. С. 313-316.

11. Асатиани В.С. Методы биохимических исследований. М. : Медгиз, 1956. 461 с.

12. Davidson M.B., Berliner J.A. Acute effects of insulin on carbohydrate metabolism in rat liver slices: independence from glucagon // Amer. J. Physiol. 1974. Vol. 227. P. 79-87.

13. Schneider C.W. Intracellular distribution of enzymes. l l l. The oxidation of octanoic acid by rat liver fractions // J. Biol. Chem. 1948. Vol. 176. P. 259-266.

14. Ильина Л.И. Белковый обмен в ядрах печени и тонкого кишечника при экспериментальной острой лучевой болезни // Медицинская радиология. 1958. Т. 3, № 5. С. 20-24.

15. Fletcher M.J. A colorimetric method for estimating serum triglycerides // J. Clin. Chim. Acta. 1968. Vol. 22, № 3. Р 393-397.

16. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principal of protein-dye binding // Anal. Biochem. 1976. Vol. 72. P. 248-254.

17. Токарева М.И., Селезнева И.С. Биохимия : в 3 ч. Екатеринбург : ГОУ ВПО УГТУ-УПИ, 2005. Ч. 2. С. 23.

18. ДанченкоЕ.О., ЧиркинА.А. Новый методический подход к определению концентрации гликогена в тканях и некоторые комментарии по интерпретации результатов // Судебно-медицинская экспертиза. 2010. № 3. С. 25-28.

19. Боровиков В. STATISTICA. Искусство анализа данных на компьютере: Для профессионалов. 2-е изд. СПб. : Питер, 2003. 688 с.

20. Саркисов Д.С. О некоторых особенностях регенерации внутренних органов у млекопитающих // Арх. анатомии, гистологии и эмбриологии. 1963. Т. 45, № 10. С. 3-12.

21. Бродский В.Я., Урываева И.В. Клеточная полиплоидия. Пролиферация и дифференцировка. М. : Наука, 1981. 217 с.

22. Романова Л.К. Регуляция восстановительных процессов. М. : МГУ, 176 с.

23. Кряжимский Ф.В. Механизм формирования альтернативных типов роста и выживаемость грызунов // Журнал общей биологии. 1989. Т. 50, № 4. С. 481-490.

24. Шмальгаузен И.И. Факторы эволюции. Теория стабилизирующего отбора. М. : Наука, 1968.

25. Grigorkina E.B., Olenev G.V. East urals radioactive trace: adaptive strategy of rodents’ population // Radioprotection. Vol. 46, № 6. Р. 437-443.

Поступила в редакцию 15.07.2013 г.;

повторно 19.01.2014 г.; принята 15.02.2014 г.

Орехова Наталья Александровна - канд. биол. наук, н.с. лаборатории популяционной радиобиологии Института экологии растений и животных УрО РАН (г. Екатеринбург, Россия). E-mail: naorekhova@mail.ru

Tomsk State University Journal of Biology. 2014. № 2 (26). P. 161-171

Natalia A. Orekhova

Laboratory of Population Radiobiology, Institute of Plant and Animal Ecology, Ural Branch of the Russian Academy of Sciences, Yekaterinburg, Russian Federation. E-mail: naorekhova@mail.ru

Biochemical analysis of liver in small wood mouse (Apodemus uralensis), trapped within the East-Urals radioactive trace

This work was supported by the Programme of interdisciplinary research between the Institute of UrB RAS and state-run corporations of the Russian Federation (project №°12-M-24-2016).

We carried out a biochemical analysis of liver tissue for the contents of water, glycogen, total lipids, nuclear and cytoplasmic proteins, DNA and RNA in small wood mouse (Apodemus uralensis Pallas, 1811), trapped within natural and radioactivity habitat - the area of the East-Ural Radioactive Trace (EURT; The Kyshtym radiation accident in the South Urals in 1957) was carried out. The density of soil contamination by 90Sr on the areas of trapping was 43.7 kBq/m2 and 6740-16690 kBq/m2, respectively. In the studied samples of immature yearlings of type II ontogeny, variability of liver weight (from 480 to 1400 mg) and its constituent components is positively correlated with body weight (12 to 23 g) and is due to varying age groups of animals (from 2 to 4 months). A substantial increase in liver weight was found in the process of growth of animals within the EURT area as compared with control ones. The regression model describing the dependence of the structural components content of the liver, expressed in mg /organ, on body weight indicates particularly mechanisms morphogenesis of the organ in animals within the EURT area. The content of cytoplasmic proteins, RNA, water and total lipids of the liver in the process of animals growth within the EURT area is increased to a greater extent than in control, as follows by comparing the coefficients of regression equations b1 (b1 control <bl EURT). Less pronounced contribution to the age variability of the organ is made by the content of DNA, glycogen and nuclear proteins: (bj control > b1 EURT).Thus, the mechanisms underlying age-related changes in the liver on the EURT should include enhancing its hydration, accumulating cytoplasmic proteins, lipids and RNA as signs of tissue-specific metabolic activation and the presence of functionally more mature cell forms. Also, less pronounced, in comparison to control, processes of biosynthesis of DNA and nuclear proteins and glycogen indicate the confining proliferation, polyploidization and hepatocyte-synthesizing activity of glycogen in increasing the liver weight. The degree of deviation from the “norm” of structural and functional characteristics with increasing the weight (age) of animals increases, which reflects the importance of such factors as the lifetime of the organism in conditions of radioactive contamination.Taking into account the polyvalence of rodents with a nonspecific «trigger» mechanism of switching from the type II ontogeny with a total life duration of 13-14 months to the type I, featuring a shorter (3-5 months) lifecycle, revealed differences between control and impact animals are manifestations of a developmental intraspecific variation in the growth rate and differentiation of tissues.Radiation exposure, requiring functional metabolic activation of vital physiological systems, causes a shortened period of the definitive structures of the organ and their fixation on earlier, than in control, ontogeny stages. The identified

www.journal.tsu/biology

effects of radiation exposure should be considered as an epigenetic mechanism of switching rodents’ development to a shorter life cycle, conditioning an increase in the growth rate and differentiation of tissues.

The article contains 3 figures, 1 table, 25 ref.

Key words: the EURT area; Apodemus uralensis; biochemical analysis; liver; ontogenetic variability.

References

1. Orlova EV, Balykin MV, Gabitov VKh. Structural changes in dog liver during adaptation to

high altitude. Byulleten’eksperimental’noy biologii i meditsiny - Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 1997;123(6):619-622.

2. Nersesova LS, Gazaryanz MG, Mkrtchyan ZS, Meliksetian GO, Pogosian LG, Pogosian SA,

Pogosian LL, Karalova EM, Avetisian AS, Abroian LO, Karalian ZA, Akopian ZhI. Influence of ionizing radiation on enzymatic activity and state of nucleus-nucleolar apparatus in rat hepatocytes. Radiatsionnaia biologiia. Radioecologiia - Radiation Biology. Radioecology. 2013;53(1):55-62. In Russian

3. Shishkina LN, Materil LD, Kudiasheva AG, Zagorskaia NG, Taskaev AI. The structural-func-

tional disorders in the liver of wild rodents from areas of the accident at the Chernobyl Atomic Electric Power Station. Radiobiologiia - Radiobiology. 1992;32(1):19-29. In Russian

4. Ustinova AA, Ryabinin VE. Adaptation effects in the 70th generation of mice from radio-

nuclide-polluted territories in the South Urals, RUSSIA. International Journal of Environmental Studies. 2003;60(5):463-467. doi:10.1080/0020723032000093964

5. Moskvitina NS, Kohonov EV. Some health indicators of various red-backed vole (Clethrion-

omys rutilus Pall.) population groups of Gorny Altai. Vestnik Tomskogo gosudarstvennogo universiteta. Biologiya - Tomsk State University Journal of Biology. 2012;2(18):186-193. In Russian, English Summary

6. Molchanova IV, Pozolotina VN, Karavaeva EN, Mikhailovskaya LN, Antonova EV, An-

tonov KL. Radioactive inventories within the East-Ural radioactive state reserve on the Southern Urals. Radioprotection. 2009;44(5):747-757. doi: 10.7868/S086980311401010X

7. Lyubashevskiy NM, Starichenko VI. The adaptive strategy of rodents populations at ra-

dioactive and chemical environmental pollution. Radiation Biology. Radioecology. 2010;50(4):405-413. In Russian

8. Olenev GV. Alternative types of ontogeny in cyclomorphic rodents and their role in popula-

tion dynamics: an ecological analysis. Ekologiya. 2002;5:341-350.

9. Kolcheva NE. Tooth wear as a criterion of Sylvaemus uralensis age during the analysis of the

population age structure. Vestnik Orenburg State University. 2009;Spec. Iss. (Part I):77-80. In Russian

10. Trudolyubova MG. Kolichestvennoe opredelenie RNK i DNK v subkletochnykh fraktsiyakh kletok zhivotnykh [Quantitative determination of DNA and RNA in subcellular fractions of animal cells]. Sovremennye metody v biokhimii [In: Modern methods in biochemistry], Orekhovich VN, editor. Moscow: Medicine; 1977. p.313-316. In Russian

11. Asatiani VS. Metody biokhimicheskikh issledovaniy [Methods of biochemical research]. Moscow: Medgiz; 1956. 461 p. In Russian

12. Davidson MB, Berliner JA. Acute effects of insulin on carbohydrate metabolism in rat liver slices: independence from glucagon. Amer J. Physiol. 1974;227:79-87.

13. Schneider CW. Intracellular distribution of enzymes. III. The oxidation of octanoic acid by rat liver fractions. J. Biol. Chem. 1948;176:259-266.

14. Ilina LI. Belkovyy obmen v yadrakh pecheni i tonkogo kishechnika pri eksperimental’noy ostroy luchevoy bolezni [Protein metabolism in the nuclei of liver and small intestine in

experimental acute radiation sickness]. Meditsinskaia radiologiia. 1958;3(5):20-24. In Russian

15. Fletcher MJ. A colorimetric method for estimating serum triglycerides. J. Clin. Chim. Acta. 1968;22(3):393-397.

16. Congdon RW, Muth GW, Splittgerber AG. The binding interaction of Coomassie Blue with protein. Analytical Biochemistry.1993;213(2):407-413. Available at: http://dx.doi. org/10.1006/abio.1993.1439

17. Tokarev MI, Seleznev IS. Biokhimiya [Biochemistry]. In three parts. Part 2. Ekaterinburg: GOU VPO UGTU-UPI; 2005. p.23. in Russian

18. Danchenko EO, Chirkin AA. A new approach to the determination of glycogen concentration in various tissues and comments on the interpretation of its results. Sud Med Ekspert. 2010;3:25-28. In Russian

19. Borovikov V. STATISTICA. Art of data analysis on PC: For professionals. Saint Petersburg: Piter; 2003. 688 p. In Russian

20. Liozner LD. Organ regeneration. A study of developmental biology in mammals. Carlson BM, editor. Moscow: Institute of Experimental Biology, Academy of Medical Sciences of the USSR; 1974. 330 p.

21. Brodskiy VY, Uryvaeva IV. Genome multiplication in growth and development. Biology of polyploid and polytene cells. Cambridge: University Press; 1985. 305 p.

22. Romanova LK. Regulyatsiya vosstanovitel’nykh protsessov [Regulation of regenerative processes]. Moscow: Moscow State University; 1984. 176p. In Russian

23. Kryazhimskii FV Mekhanizm formirovaniya al’ternativnykh tipov rosta i vyzhivaemost’ gryzunov [Mechanism of formation of alternate growth types and rodent survival]. Zhurnal Obshchei Biologii. 1989;50(4):481-490. In Russian

24. Shmalgausen II. Faktory evolyutsii. Teoriya stabiliziruyushchego otbora [Factors of evolution. Theory of stabilizing selection]. Moscow: Nauka; 1968. 452 p. In Russian

25. Grigorkina EB, Olenev GV. East-Urals radioactive trace: adaptive strategy of rodents’ population. Radioprotection. 2011;46(6):437-443.

Received 15 July 2013;

Revised 19 January 2014;

Accepted 15 February 2014