СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ПТИЦ ПРИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗЕ, ВЫЗВАННОМ SALMONELLA TYPHIMURIUM
METHOD OF TREATING SALMONELLA TYPHIMURIUM CAUSED SALMONELLOSIS IN BIRDS

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности, к разработке способа лечения сальмонеллеза птиц. Сальмонеллез является одной из самых распространенных бактериальных болезней птиц и наносит значительный ущерб, складывающийся из потерь от гибели птицы, снижения продуктивности, отставания в росте и развитии, снижения оплодотворяемости яиц, потери спортивных, служебных и декоративных качеств.
Известно, что серовариант Salmonella typhimurium (S.typhimurium), относящийся к серогруппе В, - является доминирующим возбудителем сальмонеллеза у уток, гусей (80-90%), голубей (98%). S. typhimurium является также одним из основных возбудителей сальмонеллеза индюков, перепелов, лебедей, фазанов, кур, вызывает сальмонеллез у телят, поросят, других животных и пищевые токсикоинфекции человека [2, 3, 5, 6].
Существующие способы лечения сальмонеллеза птиц предусматривают проведение общих ветеринарно-санитарных мероприятий и ориентированы на широкое применение антимикробных препаратов [2].
Известные способы малоэффективны, так как у сальмонелл отмечается широкий спектр антибиотикоустойчивости, а требования к экологическому качеству продукции птицеводства накладывают ограничения на применение антибиотиков [7].
Существующие вакцины против S.typhimurium птиц не являются лечебными препаратами, не ликвидируют инфекцию полностью, так как не устраняют сальмонеллоносительства [2].
Особенно остро стоит проблема лечения при заражении высокопородной птицы, склонной как к иммунодефицитным состояниям, так и к появлению аллергий на фоне антибиотикотерапии. Проблемным является также иммунологически толерантный молодняк.
Известен также способ лечения сальмонеллеза - птиц с применением активных бактериофагов. Они специфичны, лизируют бактериальную клетку-возбудителя, обеспечивают бактерицидный эффект, в отличие от антибиотиков, не нарушают естественную микрофлору. Фаги могут быть применены с первых дней жизни, не вызывают побочных эффектов и осложнений, экологически безопасны, т.к. после лизиса бактерий-мишеней (сальмонелл) они элиминируются.
Используемые в животноводстве фаговые препараты против сальмонеллеза не могут быть высокоэффективны птице, так как основными компонентами содержат фаги S.dublin, S.enteritidis, S.choleraesuis и S.typhimurium; последний - в невысокой концентрации с ограниченным спектром литической активности.
В промышленном птицеводстве для лечения и профилактики сальмонеллеза кур применяют сальмофаги энтеритидис и пуллорум, но только при инфицировании S.enteritidis и S.gallinarum-pullomm. Эти препараты не эффективны или слабоэффективны при лечении сальмонеллеза, вызванного S.typhi-murium у птиц[1].
Известен также пробиотический препарат Лактобифадол, обладающий лечебно-профилактическим эффектом при сальмонеллезе, эшерихиозе и других желудочно-кишечных болезнях млекопитающих животных и птицы, вызываемых патогенными и условно-патогенными бактериями [4, 8].
В задачу наших исследований входила разработка эффективного способа лечения сальмонеллеза птиц, вызванного Salmonella typhimurium, при повышении экологической безопасности и безвредности применения.
8
3
7
3
8
3
Это достигается применением препарата Бактериофаг тифимуриум в комплексе с пробиотиком Лактобифадол. Предлагаемый способ отличается тем, что используют препарат Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза, содержащий суспензию высокоактивных штаммов бактериофагов Phagum Salmonella typhimurium №5 Т3-ДЕП с концентрацией 3,6×10 БОЕ/см, Phagum Salmonella typhimurium №8 ME - ДЕП с концентрацией 1,0×10 БОЕ/см, Phagum Salmonella typhimurium №9 MM-ДЕП - 1,4×10БОЕ/см, консервированный 1%-ным раствором хинозола в конечной концентрации в фаговом лизате - 0,01% орально индивидуально или групповым способом с питьевой нехлорированной водой в разведении 1:10-1:20 в дозе от 0,5 до 5 мл в зависимости от живой массы птицы каждые 12 часов первые 1-3 суток, затем - каждые 48 часов до выздоровления; одновременно применяют пробиотический препарат Лактобифадол с содержанием в 1 г 80 млн живых клеток бифидобактерий вида В.adolescentis и 1 млн лактобактерий вида L.acidophilum из расчета 0,4 г/кг массы в первые 10 суток лечения, далее 0,2 г/кг массы в течение 20 суток.
8
3
7
3
3
Бактериофаг тифимуриум специфичен к возбудителю S. typhimurium, содержит суспензию высокоактивных штаммов бактериофагов к Salmonella typhimurium Phagum Salmonella typhimurium №5 Т3-ДЕП с концентрацией 3,6×10 БОЕ/см, Phagum Salmonella typhimurium №8 MЁ - ДЕП с концентрацией 1,0×10 БОЕ/см, Phagum Salmonella typhimurium №9 MM-ДЕП - 1,4×10 БОЕ/см, выделенных Пименовым Н.В. и Чирковой И.В.
Штаммы депонированы в ФГУ ВГНКИ во «Всероссийской коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ВГКШМ-вет)» г.Москва, в частности:
1. Штамм бактериофага Salmonella typhimurium №8 MЁ предложен в качестве производственного для изготовления лечебно-профилактических препаратов, депонирован 16 октября 2007 г., регистрационный номер Phagum Salmonella typhimurium №8 MЁ-ДЕП.
2. Штамм бактериофага Salmonella typhimurium №5 ТЗ предложен в качестве производственного для изготовления лечебно-профилактических препаратов, депонирован 16 октября 2007 г., регистрационный номер Phagum Salmonella typhimurium №5 ТЗ-ДЕП.
3. Штамм бактериофага Salmonella typhimurium №9 MM предложен в качестве производственного для изготовления лечебно-профилактических препаратов, депонирован 16 октября 2007 г., регистрационный номер Phagum Salmonella typhimurium №9 ММ-ДЕП.
Препарат формируют путем смешивания указанных фагов в равных объемах в культуральной среде, консервированной хинозолом, 1%-ным раствором в конечной концентрации, в фаговом лизате - 0,01%.
Бактериофаг тифимуриум обладает лечебным и профилактическим эффектом, не дает осложнений при передозировке, санирует организм от сальмонеллоносительства, является перспективным компонентом комплексной системы профилактики сальмонеллезной инфекции.
Пробиотик Лактобифадол включает в 1 г 80 млн живых клеток бифидобактерий вида В.adolescentis и 1 млн лактобактерий L.acidophilum, которые характерны для микробиоценоза животных. Обладает свойствами синбиотика, штаммы устойчивы к широкому диапазону pH, желчи, имеют выраженную кислотообразующую, антагонистическую, ферментативную активность. Изготовлен методом контактно-сорбционной сушки биомассы, обеспечивающей максимальную сохранность биологических свойств микроорганизмов-доноров нормальной пристеночной микрофлоры.
Способ осуществляют следующим образом:
Больной птице после подтверждения диагноза вводят Бактериофаг тифимуриум: птице массой до 1 кг - 0,5 мл (голубям, перепелам, попугаям, канарейкам, цыплятам), птице массой 1-5 кг (фазанам, курам, уткам) - 1 мл, птице массой 5-10 кг (уткам, индоуткам, селезням, гусям, лебедям) - 3 мл, птице массой 10-20 кг (гусям, лебедям, индюкам) - 5 мл 1 раз в сутки. Молодняку голубей, перепелок - в дозе 0,25 мл. Препарат применяют перорально индивидуально или групповым способом с питьевой, кипяченой и остуженной до 25-30°С водой в разведении из расчета по объему 1:10-1:20 или из расчета разведения на 5-10 мл воды на 1 кг живой массы птицы. Не допускается для разведения хлорированная вода или обработанная и содержащая другие дезинфектанты. В течение трех часов до выпаивания препарата птицу выдерживают без поения.
При лечении сальмонеллеза, вызванного S.typhimurium длительность курса с применением бактериофага каждые 12 часов устанавливают индивидуально, исходя из тяжести эпизоотического процесса и используемых средств терапии. Основная схема применения: каждые 12 часов в первые 1-3 суток, затем - каждые 48 часов 2-3 введения.
Одновременно с бактериофагом с первых суток лечения больной птице назначают пробиотик Лактобифадол в лечебной дозе 0,4 г/кг массы ежедневно в течение 10 суток, далее 0,2 г/кг массы в течение 20 суток.
Применение бактериофагового препарата и Лактобифадола при необходиморсти можно сочетать с лечением эффективным антибиотиком.
Пример 1
Испытание эффективности препарата бактериофага тифимуриум и пробиотика Лактобифадола в остром опыте проводили на 30 цыплятах 14-дневного возраста в сентябре 2007 г. в виварии ФГОУ ВПО МГАВМиБ. Для этого были созданы три группы: две опытные (по 10 цыплят) и контрольная (10 цыплят), которых кормили и содержали по принципу аналогов.
Заражение цыплят всех групп проводили смесью из 2 изолятов S.typhimurium (с вирулентностью для белых мышей при подкожном инъецировании 4 тыс. микробных клеток) в одинаковом количестве каждого изолята орально в общей дозе 2 млн микробных клеток (дозу определяли, используя оптические стандарты мутности энтеробактерий).
После появления клинических признаков заболевания (потеря аппетита, одышка, угнетение, взъерошенность оперения, иногда - диарея) цыплятам первой опытной группы орально вводили Бактериофаг тифимуриум из расчета 0,5 мл при помощи автоматической пипетки-дозатора. Обработку проводили трижды с интервалом 12 часов, а затем с интервалом 48 часов еще 2 раза. За три часа до выпойки бактериофага тифимуриум цыплят выдерживали без поения. Суспензию Лактобифадола вводили ежедневно из расчета 0,4 г на 1 кг живой массы. Цыплятам второй опытной группы использовали стандартный метод лечения с использованием энрофлоксацина - энрофлон 10%-ный раствор в дозе 0,5 мл на 1 л воды 5 дней согласно временного наставления.
Цыплят контрольной группы бактериофагом тифимуриум не обрабатывали и инфицировали смесью культур S.typhimurium в тех же дозах, что и в опытных группах.
За птицей наблюдали 15 дней, после чего проводили убой. Бактериологическое исследование трупов павших и убитых цыплят проводили по схеме: посевы из паренхиматозных органов, крови сердца и красного костного мозга на МПА, МПБ, агар Эндо, висмут-сульфитный агар, окраска мазков-отпечатков и мазков растущих культур по Граму, реакция агглютинации с O-комплексными и О- и Н-агглютинирующими монорецепторными сальмонеллезными сыворотками. Результаты лабораторных испытаний представлены в таблице.
Эффективность применения Бактериофага тифимуриум и Лактобифадола в лабораторных условиях (n=10)
Группа
Всего, голов
Пало, голов
Сохранность, %
Цыплят, из органов которых выделена S typhimurium
голов
%
Опытная 1 (бактериофаг+Лактобифадол)
10
0
100
0
0
Опытная 2 (энрофлоксацин)
10
3
70
2
20
Контрольная
10
9
10
10
100
Проведенные исследования показали, что в контрольной группе летальность составила 90%. Все павшие цыплята имели характерные клинические признаки и патологоанатомические изменения: одышку, потерю аппетита, диарею, энтерит, ринит и др. При бактериологическом исследовании из печени с желчным пузырем, крови сердца, крови костного мозга, головного мозга, селезенки этих цыплят выделили S.typhimurium, обладающую характерными свойствами.
Применение с лечебной целью бактериофагового препарата в сочетании с пробиотиком Лактобифадол обеспечило выраженный лечебный эффект при непосредственном заражении вирулентными изолятами S.typhimurium в высоких дозах. Сохранность цыплят при таком способе лечения составила 100%, сроки выздоровления 3-5 дней, а сальмонеллоносительства на 15 сутки не было установлено.
Сочетанное применение Бактериофага тифимуриум и Лактобифадола более эффективно по сравнению с традиционной схемой лечения энрофлоксацином, так как в опытной группе 2 летальность составила 30%, а скрытое носительство 20%.
Пример 2. Терапевтическая эффективность Бактериофага тифимуриум и пробиотика Лактобифадол на голубятнях в Подольском и Домодедовском районах Московской области.
Клиническая картина сальмонеллеза у голубей проявлялась взъерошенностью оперения, угнетением, одышкой, потерей координации движения, потерей способности к полету, иногда - «вертячкой», отказом от корма; помет становился жидким серого и зеленого цвета с примесью крови и слизи; у некоторых голубей проявлялся ринит. Диагноз был подтвержден бактериологическими исследованиями и методом молекулярной диагностики (ПЦР).
В сентябре 2006 года в двух голубятнях в п.Поливанове Подольского района Московской области (всего 175 голубей: пермские, гривуны, свердловские, синие) болезнь выявили при заболеваемости 14,3% и ежедневной гибели 3 голубей (1,7%). При этом вспышка была отмечена на фоне применения байтрила. Выделенная S.typhimurium обладала высокой чувствительностью к клафорану, средней - к ампициллину, низкой - к энрофлоксацину, ципрофлоксацину, доксициллину, резистентностью - к азитромицину, гентамицину, эритромицину, тетрациклину, мономицину, оксициллину, линкомицину. Проведенный курс терапии бактериофагом тифимуриум в дозе 0,5 мл на голубя при групповой выпойке с водой в разведении 1 к 20 трижды с интервалом 48 часов и дачей с кормом Лактобифадола в дозе 0,4 г/кг в течение 10 дней, далее в дозе 0,2 г/кг массы еще в течение месяца остановили развитие заболеваемости и гибели птицы. С 3-х суток после начала лечения состояние заболевших голубей улучшилось, появилась активность, восстановился аппетит. Консистенция помета постепенно нормализовалась, его цвет к 4-6 суткам стал светло-коричневым. Через 14 суток при бактериологическом исследовании смывов из клоаки больных и других голубей из исследуемых голубятен п.Поливанове (всего 47 проб - 27,3%) бактерии рода Salmonella не выделялись. При контрольных исследованиях в ПЦР через 30 дней - положительных результатов не было в 20 пробах крови из оздоровленных голубятен. В период наблюдения 6 месяцев рецидивов сальмонеллеза не отмечали.
50
В голубятне г.Домодедово (150 голубей: почтовые) вспышка сальмонеллеза возникла в осенний период 2005 года. При этом заболеваемость среди молодняка 2-3-месячного возраста, полученного от основных самок, составила 100%, заболеваемость среди всех голубей - 80% (120 из 150) с летальностью 65% (78 из 120 голубей) при полной гибели молодняка в течение 22-дневного периода. Клинически болезнь проявлялась в виде водянистых фекалий серого цвета, иногда с примесью зелени и крови, быстрой потери живой массы, дегидратации, уменьшения мышечной массы в области киля (голуби «сохли»), угнетения. В 19 случаях (15,8%) - в виде нервных явлений: дрожь, - запрокидывание головы, «вертячка». До применения Бактериофага и Лактобифадола владелец выпаивал птице энрофлон и бактисубтил, что ослабило развитие эпизоотического процесса, но не остановило инфекцию. Из трупов голубей выделили высоковирулентный изолят S.typhimurium (LD для белых мышей массой 12-16 г - 5495 кл. при подкожном инъецировании), обладающий низкой чувствительностью и резистентностью к 28 тестируемым антибиотикам, кроме имипенема. Применение последнего не представляется возможным для птиц из-за необходимости внутривенного введения.
Выпойку бактериофага тифимуриум в неблагополучной голубятне проводили согласно разработанной и использованной в лабораторном эксперименте схеме. Обработку проводили трижды с интервалом 12 часов, затем еще трижды с интервалом 48 часов. Лактобифадол давали в дозе 0,4 г/кг массы в течение первых 10 дней лечения, далее в -дозе 0,2 г/кг массы еще в течение 20 суток. Параллельно в голубятне провели дезинфекцию 4%-ным раствором хлорамина.
Случаи гибели голубей прекратились со вторых суток предложенного и примененного способа лечения. Фекалии в течении 3-4 дней приобрели естественную консистенцию и цвет, голуби начали активно потреблять корм (зерно, мука). Восстановление живой массы отмечалось к 20-30 дню после прекращения диареи. При бактериологических исследованиях смывов из клоаки от 50 голубей бактерий рода Salmonella не выделяли.
Пример 3. Терапевтическая эффективность Бактериофага тифимуриум и пробиотика Лактобифадол на фазанах и утках передвижного частного зоопарка «Ташир».
Заболеваемость уток, фазанов и других птиц сальмонеллезом наблюдали в частном передвижном зоопарке (вольеры в автофургонах, приписанных к государству Армения) в ноябре 2005 г. Взрослая птица имела матовое взъерошенное оперение, угнетение. У фазанов 4-5 месяцев отмечали периодически жидкий помет зеленого цвета, отставание в росте. Клиническая картина острого заболевания проявлялась преимущественно у молодых фазанов и характеризовалась повышением температуры тела до 42,5-43,0°С, угнетением, понижением аппетита, взъерощенностью оперения. Из 28 фазанов разных пород типичную клиническую картину заболевания отмечали у 6(21%). 2 фазана 3-месячного возраста пали. S.typhimurium выделяли из смывов клоаки всех фазанов. Диагноз был подтвержден бактериологическими исследованиями и методом молекулярной диагностики (ПЦР).
В вольерах содержались также утки, которые положительно реагировали в ПЦР на сальмонеллез. При бактериологическом исследовании у них из клоаки в 100% случаев выделена S.typhimurium. В 25-40-дневном возрасте среди утят отмечалась инфекция с развивитием унетения, анорексии, повышения температуры до 43,5-44°С, диареи и гибели (пали 5 утят из 8).
Выпойку Бактериофага тифимуриум против сальмонеллеза проводили групповым способом всей птице зоопарка из расчета: перепелам - по 0,5 мл препарата, фазанам, уткам - по 1 мл, селезням, павлинам - по 3 мл, гусям, лебедям - по 5 мл трижды д. с интервалом 12 часов, четвертую и пятую выпойки - через 48 часов. Препарат растворяли в воде из расчета 1:20. За три часа предварительно птицу оставляли без поения. Лактобифадол давали ежедневно всей птице в течение 10 дней в дозе 0,4 г/кг массы, далее в течение 20 дней в дозе 0,2 г/кг массы.
На 3 сутки после начала лечения состояние птицы улучшилось, температура нормализовалась, восстановился аппетит, помет оформился и приобрел серо-коричневую окраску. Гибель птицы больше не отмечали. При бактериологическом анализе смывов из клоаки у всех фазанов, уток, перепелов и павлинов зоопарка, проведенном через 15 суток, бактерий рода Salmonella не выделяли.
Проведенные исследования показали эффективность способа лечения сальмонеллеза птиц, вызванного S.typhimurium. Бактериофагом тифимуриум и пробиотиком Лактобифадол.
Такой способ лечения позволяет:
а) с помощью видоспецифичного бактериофагового препарата лизировать бактериальную клетку-возбудителя, обеспечивая без применения антибиотика бактерицидный эффект;
б) применять фаги с первых дней жизни, поскольку они элиминируются после лизиса бактерий-мишеней (сальмонелл), не вызывают побочных эффектов, аллергий и других осложнений;
в) добиваться неспецифического терапевтического эффекта за счет двух видов бактерий, входящих в пробиотический препарат Лактобифадол (лакто- и бифидобактерии), которые относятся к доминирующим по численности и физиологической значимости родам резидентной микрофлоры кишечника птицы. Они обладают выраженной антагонистической активностью в отношении гнилостной, патогенной и условно-патогенной микрофлоры, что обеспечено синтезом лизоцима, интерферонов, перекиси водорода, органических кислот, других антагонистических механизмов, включая конкурентную адгезию на слизистой кишечника и иммуномодулирующие эффекты;
г) получить более выраженный терапевтический эффект без последующего скрытого сальмонеллоносительства за счет специфического воздействия на возбудителя Бактериофага тифимуриум и неспецифического терапевтического действия пробиотика Лактобифадол, что обеспечивает эффективное воздействие на разные мишени патологического процесса, приводит к суммарному терапевтическому эффекту и подтверждается результатами лечения.
Предложенный способ апробирован с положительным результатом в сентябре 2007 г. в виварии ФГОУ ВПО МГАВМиБ на цыплятах 14-дневного возраста; в сентябре 2006 года в двух голубятнях поселка Поливанове Подольского района Московской области на голубях пород пермские, гривуны, свердловские, синие; на почтовых голубях в городе Домодедово Московской области в октябре-ноябре 2005 года; в ноябре 2005 г. в городе Москве в частном передвижном зоопарке «Ташир» (Армения) на фазанах, утках, перепелах и павлинах.
Предложенный способ найдет применение для оздоровления птицеводческих хозяйств, питомников, вольеров и голубятен, неблагополучных по сальмонеллезу, вызванному S.typhimurium, позволит резко сократить и ликвидировать сальмонеллез птиц, получать здоровый приплод, поголовье и улучшить качество мяса птицы.
Источники информации
1. Ганюшкин В.Л. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии. - Ульяновск, 1988. - 84 с.
2. Гусев В.В. Сальмонеллезная инфекция у голубей. / Гусев Вал. В., Гусев Вик. // «Птицеводство» №5; 2003. - С.48-53
3. Гусев В.В. Разработка технологии производства вакцины против сальмонеллеза голубей. Дис. на степ. канд. биол. наук. - Оболенск, 2005 г. - С.48-53).
4. Данилевская Н.В. Метод селективной деконтаминации и бактериотерапии с использованием пробиотического препарата лактобифадол при выращивании цыплят-бройлеров. / Данилевская Н.В., Субботин В.В. // Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве. Матер. Межд. науч. - практ. конф. - СПб., 2004. - С.237-238.
5. Куриленко А.Н., Пименов Н.В., Ленев С.В. и др. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур. - М. МГАВМиБ., 2002 г. - 35 с.
6. Осидзе Д.Ф. Биологические и химиотерапевтические средства профилактики и лечения заболеваний продуктивных животных. / Сб. ст. ВГНКИ., 1983. - 122 с.
7. Пименов Н.В. Антибиотикорезистентность сальмонелл, выделенных от домашних голубей. / Пименов Н.В., Данилевская Н.В. // «Ветеринария». - 2006. - №9. С.20-24.
8. Субботин В.В Применение пробиотического препарата лактобифадол при откорме бройлеров. / Субботин В.В., Данилевская Н.В. // «Ветеринария и кормление», 2004, №1. С.11-13.