Способ коррекции микроциркуляции в плаценте асиалированным эритропоэтином при ADMA-подобной модели преэклампсии
METHOD OF PLACENTAL MICROCIRCULATION CORRECTION BY ASIALIZED ERYTHROPOIETIN IN ADMA-LIKE MODEL OF PREECLAMPSIA

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.
Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции нарушения микроциркуляции в плаценте с помощью рекомбинантного эритропоэтина (RU № 2466462, публ. 10.11.2012), включающий воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным с 14 по 20 сутки беременности внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг, а для коррекции моделируемой патологии вводят подкожно рекомбинантный эритропоэтин в дозе 50 МЕ/кг на 7, 10, 13, 16, 19 сутки беременности.
Недостатком указанного способа является то, что связываясь с гомодимерным рецептором эритропоэтин может активировать эритропоэз, что приводит к нарушению реологических свойств крови и является нежелательным явлением при ишемии (Enhancement of ventricular-subventricular zone-derived neurogenesis and oligodendrogenesis by erythropoietin and its derivatives  / N. Kaneko, E. Kako, K. Sawamoto // Front Cell Neurosci. – 2013.; Erythropoietin: recent developments in the treatment of spinal cord injury /  S. Carelli, G. Marfia, A. Maria Di Giulio).
Данный факт обуславливает невозможность повышения дозы эритропоэтина при его низкой эффективности. Поэтому результаты коррекции микроциркуляции при ADMA-подобной модели патологии у беременных животных с использованием рекомбинантного эритропоэтина неудовлетворительны.
Одним из направлений устранения этого недостатка, является создание производных эритропоэтина с коротким периодом жизни.  Для активации цитопротекторных эффектов эритропоэтину достаточно связаться с гетеродимерным рецептором на короткое время (5 минут). Для активации эритропоэза необходимо длительное постоянное нахождение эритропоэтина на гомодимерном рецепторе (Enhancement of ventricular-subventricular zone-derived neurogenesis and oligodendrogenesis by erythropoietin and its derivatives [Text] / N. Kaneko, E. Kako, K. Sawamoto // Front Cell Neurosci. – 2013; Erythropoietin: recent developments in the treatment of spinal cord injury [Text] /  S. Carelli, G. Marfia, A. Maria Di Giulio [et al.] // Neurol Res Int. - 2011; The use of erythropoietin and its derivatives to treat spinal cord injury [Text] / A. Mofidi, A. Bader, S. Pavlica [et al.] // Mini Rev Med Chem. – 2011).
Однако, не смотря на очевидные предпосылки, вопрос об эффективности исследуемого производного в связи с изменением его времени жизни остается неоднозначным. Это связано с тем, что в различных тканях и органах метаболические, регуляторные и другие процессы имеют свои не только временные, но и другие особенности. Плацента представляет собой динамично развивающийся орган со сложным сочетанием процессов органогенеза и апоптоза. Кроме этого изменение пространственной структуры, массы и заряда так же оставляют открытым вопрос о проницаемости его через тканевые барьеры (и в частности фетоплацентарный).
В связи с выше изложенным, задачей изобретения является создание более эффективного способа коррекции нарушений микроциркуляции при ADMA-подобной модели преэклампсии, включающего использование асиалированного эритропоэтина (ООО «Протеиновый контур»), обладающего коротким периодом полувыведения.
Поставленная задача решается с помощью предлагаемого способа в котором на фоне моделирования преэклампсии в эксперименте внутрибрюшинным введением беременным самкам крыс линии Wistar в течение 7 суток ADMA-подобного блокатора эндотелиальной NO-синтазы - N-нитро-L-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится коррекция нарушений микроциркуляции подкожным введением асиалированного эритропоэтина в дозировке 2,4 мкг/кг 1раз в день с 10 по 20  сутки беременности. Это приводит к выраженной коррекции микроциркуляции в плаценте при моделируемой патологии. Данный эффект связан с выраженным противоишемическим и антиоксидантным действием асиалированного эритропоэтина.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на белых беременных крысах самках линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 дней (с 14 по 20 день беременности). Асиалированный эритропоэтин вводится подкожно с 10 по 20  сутки беременности в дозировке 2,4 мкг/кг 1р/день.
На 21 день беременности под наркозом измеряли микроциркуляцию в плаценте. Исследование микроциркуляции в плаценте проводили с помощью оборудования компании Biopac systems: полиграф MP100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) LDf100C и датчиком TSD144. Регистрация результатов ЛДФ производилась программой Acqknowledge версии 3.8.1, значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕд).
При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при p<0,05.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.
Блокада NO-синтазы, вызванная 7-дневным введением L-NAME беременным крысам, приводила к нарушению микроциркуляции в плаценте, о чем свидетельствует снижение ее величины с 492,8±21,07  ПЕд у интактных беременных животных до 211,8±6,03 ПЕд (р<0,05) в группе контроля. Подкожное введение асиалированного эритропоэтина в дозировке 2,4 мкг/кг 1р/день с 10 по 20  сутки беременности  на фоне ADMA-подобной модели преэклампсии у беременных крыс также приводило к достоверному повышению уровня микроциркуляции в плаценте до 443,2±22,96 ПЕд, что  выше, чем у животных в группе с введением L-NAME (р<0,05), и несущественно ниже чем у животных в интактной группе.
Таким образом, полученные результаты убедительно свидетельствуют о выраженной коррекции нарушения микроциркуляции в плаценте в условиях воспроизводимой нами ADMA подобной модели преэклампсии у беременных крыс асиалированным эритропоэтином. Влияние асиалированного эритропоэтина на показатели артериального давления и микроциркуляцию приведены в таблице 1.
Таблица 1.